CZ401799A3 - Glykokonjugáty 20(S)-camptothecinu, způsob jejich výroby, jejich použití a léčiva tyto látky obsahující - Google Patents
Glykokonjugáty 20(S)-camptothecinu, způsob jejich výroby, jejich použití a léčiva tyto látky obsahující Download PDFInfo
- Publication number
- CZ401799A3 CZ401799A3 CZ19994017A CZ401799A CZ401799A3 CZ 401799 A3 CZ401799 A3 CZ 401799A3 CZ 19994017 A CZ19994017 A CZ 19994017A CZ 401799 A CZ401799 A CZ 401799A CZ 401799 A3 CZ401799 A3 CZ 401799A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- camptothecin
- formula
- denotes
- amino acid
- glycoconjugates
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 47
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 title claims abstract description 31
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 3
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 claims description 84
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 35
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 31
- -1 peptidyl camptothecin Chemical compound 0.000 claims description 27
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 18
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 17
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 claims description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 5
- 125000002813 thiocarbonyl group Chemical group *C(*)=S 0.000 claims 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 claims 1
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 abstract 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 abstract 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 100
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 99
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 87
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 49
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 239000000047 product Substances 0.000 description 24
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 21
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 15
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 125000003301 D-leucyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CC(C)C 0.000 description 12
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 12
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 10
- LDPYPPYGHWOOOX-RDVVHMHSSA-N (2r,3s,4r,5r,6s)-2-(4-aminophenoxy)-4-methoxy-6-methyloxane-3,5-diol Chemical compound O[C@H]1[C@H](OC)[C@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC1=CC=C(N)C=C1 LDPYPPYGHWOOOX-RDVVHMHSSA-N 0.000 description 9
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 9
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 8
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 8
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 8
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 8
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methylphenyl)sulfonylbutane-1,4-dione Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)C(C(=O)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 7
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 6
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 6
- 125000003625 D-valyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)C(C)C 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 4
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 4
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- ZWZVWGITAAIFPS-UHFFFAOYSA-N thiophosgene Chemical compound ClC(Cl)=S ZWZVWGITAAIFPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 3
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- FIWILGQIZHDAQG-UHFFFAOYSA-N NC1=C(C(=O)NCC2=CC=C(C=C2)OCC(F)(F)F)C=C(C(=N1)N)N1N=C(N=C1)C1(CC1)C(F)(F)F Chemical compound NC1=C(C(=O)NCC2=CC=C(C=C2)OCC(F)(F)F)C=C(C(=N1)N)N1N=C(N=C1)C1(CC1)C(F)(F)F FIWILGQIZHDAQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N ethyl (e)-3-[3-amino-2-cyano-1-[(e)-3-ethoxy-3-oxoprop-1-enyl]sulfanyl-3-oxoprop-1-enyl]sulfanylprop-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C\SC(=C(C#N)C(N)=O)S\C=C\C(=O)OCC NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- XTEGVFVZDVNBPF-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1,5-disulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=C1S(O)(=O)=O XTEGVFVZDVNBPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(1h-imidazol-3-ium-5-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BLCJBICVQSYOIF-UHFFFAOYSA-N 2,2-diaminobutanoic acid Chemical compound CCC(N)(N)C(O)=O BLCJBICVQSYOIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropan-1-one Chemical group CC(C)(C)[C]=O YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 2-(3,5-diphenyl-1h-tetrazol-1-ium-2-yl)-4,5-dimethyl-1,3-thiazole;bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1N1N(C=2C=CC=CC=2)N=C(C=2C=CC=CC=2)[NH2+]1 NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPSXGPCFLAGJOM-UHFFFAOYSA-M 2-tert-butyl-5-methyl-1,2-oxazol-2-ium;perchlorate Chemical compound [O-]Cl(=O)(=O)=O.CC1=CC=[N+](C(C)(C)C)O1 MPSXGPCFLAGJOM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002672 4-bromobenzoyl group Chemical group BrC1=CC=C(C(=O)*)C=C1 0.000 description 1
- 125000000242 4-chlorobenzoyl group Chemical group ClC1=CC=C(C(=O)*)C=C1 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010051779 Bone marrow toxicity Diseases 0.000 description 1
- 101100126625 Caenorhabditis elegans itr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182819 D-leucine Natural products 0.000 description 1
- 102000003915 DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000323 DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- GKQLYSROISKDLL-UHFFFAOYSA-N EEDQ Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)OCC)C(OCC)C=CC2=C1 GKQLYSROISKDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004442 acylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011717 athymic nude mouse Methods 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 231100000366 bone marrow toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical class OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001728 carbonyl compounds Chemical class 0.000 description 1
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001244 carboxylic acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- JGFBRKRYDCGYKD-UHFFFAOYSA-N dibutyl(oxo)tin Chemical compound CCCC[Sn](=O)CCCC JGFBRKRYDCGYKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043279 diisopropylamine Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 125000001207 fluorophenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950003188 isovaleryl diethylamide Drugs 0.000 description 1
- CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-N isoxazole Chemical class C=1C=NOC=1 CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000009546 lung large cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 1
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 1
- 150000002668 lysine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- UHAAFJWANJYDIS-UHFFFAOYSA-N n,n'-diethylmethanediimine Chemical compound CCN=C=NCC UHAAFJWANJYDIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013421 nuclear magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- MUMZUERVLWJKNR-UHFFFAOYSA-N oxoplatinum Chemical compound [Pt]=O MUMZUERVLWJKNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003232 p-nitrobenzoyl group Chemical group [N+](=O)([O-])C1=CC=C(C(=O)*)C=C1 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005544 phthalimido group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000612 phthaloyl group Chemical group C(C=1C(C(=O)*)=CC=CC1)(=O)* 0.000 description 1
- 229910003446 platinum oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000007142 ring opening reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Glykonjugáíy 20(S)-camptothecinu, ve kterýchje 3-Omethylovaná
β-L-fruktosová stavebníjednotka připojena přes
thiomočovinou modifikovaný peptidový spacer s 20-
hydroxylovou skupinou derivátu camptothecinu, obecného
vzorce I, ve kterémmají substituenty specifické významy.
Způsob výroby těchto sloučenin ajejich použití v léčivech,
obzvláště v souvislosti s rakovinnými onemocněními.
Description
Oblast techniky
Vynález se týká glykokonjugátů 20(S)-camptothecinu, ve kterých je 3-0-methylovaná β-L-fruktosová stavební jednotka připojena přes thiomočovinou modifikovaný peptidový spacer s 20-hydroxylovou skupinou derivátu camptothecinu. Dále se týká způsobu výroby těchto sloučenin a jejich použití v léčivech, obzvláště v souvislosti s rakovinnými onemocněními.
Dosavadní stav techniky
20(S)-camptothecin je pentacyklický alkaloid, který byl isolován v roce 1966 Vallem a kol. (J. Am. Chem. Soc. 88, 3888 (1966)). Má vysoký protinádorový účinný potenciál v různých testech in-vitro a in-vivo, bohužel realisace nadějného potenciálu v klinické praxi ztroskotala na problémech s toxicitou a rozpustností.
Otevřením E3-kruhu laktonu a tvorbou sodné soli byla získána ve vodě rozpustná sloučenina, která je v rovnovážném stavu s formou s uzavřeným kruhem, závislém na pH .
OH « 9
Klinické studie však dosud nevedly k úspěchu.
Asi o 20 let později bylo zjištěno, že biologická aktivita se vztahuje na inhibici enzymu topoisomerasy I . Od té doby se výzkumné aktivity pro nalezení přijatelných in-vivo účinných drivátů camptothecinu opět zesílily.
Pro zlepšení rozpustnosti ve vodě byly popsány soli derivátů camptothecinu s modifikovaným A-kruhem a B-kruhem, jakož i 20-O-acyl-deriváty s ionisovatelnými skupinami (Vishnuvajjala a kol. US 4 943 579). Poslední koncept prodrugu byl později převeden také na modifikované deriváty camptothecinu (Váni a kol. VO 9602546). Popisované 20-0-acyl-prodrugy mají ovšem in-vivo velmi krátký poločas rozpadu a velmi rychle se štěpí na základní jednotku.
Podstata vynálezu
Ve VO 9631532 Al jsou popsána cukry modifikovaná cytostatika, u nichž spojení různých cytotoxický nebo cytostaticky aktivních sloučenin s například regioselektivně modifikovanými uhlohydrátovými jednotkami přes určitý spacer vede ke zlepšení nádorové selektivity. Ze zde široce popsaných kombinací uhlohydrátů, spacerů a účinných látek bylo nyní překvapivě zjištěno, že připojení v poloze 3 modifikovaných β-L-fruktosových stavebních jednotek přes thiomočovinou modifikovaný peptidový spacer, sestávající z jedné stericky náročné nepolární a jedné basické aminokyseliny, na 20-hydroxylovou skupinu 20(S)-camptothecinu vede k obzvláště výhodným konjugátům s následujícími vlastnostmi.
Esteru podobným připojením zbytku nosiče na 20-hydroxylovou skupinu se stabilisuje laktonový kruh v camptothecinové části, důležitý pro účinek.
Specielní konstelací dipeptidového spaceru mají konjugáty v extracelulárním mediu a v krvi ve srovnání s podobnými konjugáty s jinými spacery, popsanými již ve VO 9631532 ještě podstatně zlepšenou stabilitu. Obzvláště jsou konjugáty podle předloženého vynálezu stabilnější než 20-O-acyl-prodrugy camptothecinu, popsané v US 4 943 579 .
Konjugáty podle předloženého vynálezu jsou ve srovnání s podobnými konjugáty z VO 9631532 lépe rozpustné.
Konjugáty podle předloženého vynálezu vykazují invitro vysokou aktivitu proti nádorovým buněčným liniím a nádorovým xenograftům.
Konjugáty podle předloženého vynálezu vykazují in-vivo po i.v.-aplikaci excelentní terapeutickou účinnost přes mnoho dávkových stupňů vůči různým nádorům.
Mají ve srovnání s uváděným toxophorem podstatně vyšší přijatelnost a nádorovou selektivitu obzvláště se zřetelem na toxicitu vůči kostní dřeni.
Předmětem předloženého vynálezu jsou glykokonjugáty camptothecinu obecného vzorce I
ve kterém
Rl značí stericky náročný nepolární postranní řetězec aminokyseliny a
R značí basický postranní řetězec aminokyseliny, jakož i jejich soli, stereoisomery a směsi stereoisomerů.
Výhodné jsou glykokonjugáty camptothecinu obecného vzorce I , ve kterém
| R1 | značí | rozvětvený alkylový | zbytek s až 4 | uhlíkovými |
| atomy | a | |||
| R2 | značí | zbytek vzorce -(Cl·^) | a v n-R , přičemž | |
| NH | ||||
| -3 | r,—NH | X —NH, NH2 | ||
| R3 | značí skupinu -NH2 , | h N nebo | a |
n značí číslo 1 až 4
Obzvláště výhodné jsou glykokonjugáty camptothecinu obecného vzorce I , ve kterém
RJ značí alkylový zbytek vzorců
CH,
CH,
CH,
CH,
CH, nebo
CH,
R2 značí zbytek vzorců -(CH2)2~NH2 , -(ϋΗ2)β-ΝΗ2 ,
-(ch2)4-nh2 ,
NH
-CH/ N
NH
A, f neb° -<ch2)3-nh^ nh2 ·
Camptothecinové stavební jednotky se mohou vyskytovat ve 20(R)-konfiguraci nebo 20(S)-konfiguraci nebo jako směs obou stereoisomerních forem, přičemž výáhodná je 20(S)-konfigurace .
aminokyseliny se mohou vyskytovat v L- nebo D-konfiguraci nebo jako směs D- a L-formy.
Výraz aminokyseliny označuje obzvláště v přírodě se vyskytující α-aminokyseliny, zahrnuje ale kromě toho také jejich homology, isomery a deriváty. Jak příklad isomerů je možno uvést enantiomery. Deriváty mohou být například aminokyseliny opatřené ochrannými skupinami.
Pod pojmem aminokyseliny se stericky náročnými po6 stranními řetězci se rozumí takové aminokyseliny, jejichž postranní řetězce mají v β-poloze nebo gama-poloze rozvětvení, jako příklady je možno uvést valin a isoleucin, popřípadě leucin.
Jako typické příklady aminokyselin s nepolárními postranními řetězci je možno uvést alanin, valin, leucin, isoleucin, prolin, tryptofan, fenylalanin a methionin.
Jako typické příklady aminokyselin s basickými porstranními řetězci je možno uvést lysin, arginin, histidin, ornithin a kyselinu diaminomáselnou.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu se vyskytují výhodně ve formě svých solí. Všeobecně je zde možno uvést soli s organickými nebo anorganickými kyselinami.
Ke kyselinám, které se mohou adovat, patří výhodně halogenovodíkové kyseliny, jako je například kyselina chlorovodíková a kyselina bromovodíková, obzvláště kyselina chlorovodíková, dále kyselina fosforečná, kyselina dusičná, kyselina sírová, monofunkční a bifunkční karboxylové kyseliny a hydroxykarboxylové kyseliny, jako je například kyselina octová, kyselina trifluoroctová, kyselina maleinová, kyselina malonová, kyselina šťavelová, kyselina glukonová, kyselina jantarová, kyselina fumarová, kyselina vinná, kyselina citrónová, kyselina sorbová a kyselina mléčná, jakož i sulfonové kyseliny, jako je například kyselina p-toluensulfonová, kyselina 1,5-naftalendisulfonová nebo kyselina camfersulfonová.
Glykokonjugáty podle předloženého vynálezu se mohou například vyrobit spojením 20(S)-camptothecinu s aktivovaný« · • * * * » · ι · • * · · · · *···♦· • · · · « · * · ···«··· 4 · « · mi karboxylovými komponentami, které samy mohou představovat části chráněných aminokyselin, peptidů nebo uhlohydráty modifikovaných peptidů.
Výhodně se provádí výstavba glykokonjugátu sekvenčně, počínaje acylací 20(S)-camptothecinu s N-chráněnou karboxyl-aktivovanou stavební jednotkou nepolární stericky náročné aminokyseliny ve vhodném rozpouštědle, popřípadě za přítomnosti base, pomocí obvyklých metod. Potom se pomocí známých metod selektivně ochranná skupina aminoskupiny odštěpí. Dále se v případě potřeby připojí vhodně chráněná stavební jednotka basické aminokyseliny, načež se popřípadě za získání ochranné skupiny postranního řetězce na a-aminofunkci deblokuje. V závěrečném kroku se provede spojení se zbytkem uhlohydrátu převedením p-amino-fenyl-3-0-methyl-p-L-fukopyranosidu na odpovídající isothiokyanát a následujícím spojením s deblokovanou α-aminoskupinou peptidyl-camptothecinu. Popřípadě ještě přítomné ochranné skupiny postranních řetězců se odštěpí a volné aminoskupiny se popřípadě převedou na vhodnou amoniovou sůl.
Předmětem předloženého vynálezu tedy je způsob výroby glykokonjugátů obecného vzorce I
ve kterém
Rl značí stericky náročný nepolární postranní řetězec aminokyseliny a v R značí basický postranní řetezec aminokyseliny, jakož i jejich solí, jehož podstata spočívá v tom, že se nechá reagovat isothiokyanát vzorce II
s peptidyl-camptothecinem obecného vzorce III , nesoucím popřípadě v postranním řetězci ochrannou skupinu,
ve kterém má
RJ výše uvedený význam a • · · · • * · · · · · • · · « ’ . 9
R má význam výše uvedeného basického zbytku R , který kromě toho může na basické skupině nést v chemii peptidů obvyklou ochrannou skupinu, na glykokonjugát obecného vzorce IV
O
Och3
9 ’ ve kterém mají R a R výše uvedený význam, a popřípadě přítomné ochranné skupiny aminoskupin postranních řetězců se pomocí obvyklých metod odstraní a získané sloučeniny se popřípadě převedou na požadované soli.
Možné je také jiné pořadí reakčních kroků při stavbě cílové sloučeniny. Tak se může také podle rovněž výhodné varianty provedení spojit p-isothiokyanáto-fenyl-3-0-methyl-p-L-fukosid také nejprve s popřípadě vhodně chráněnou terminální basickou aminokyselinou a tato stavební jednotka se potom nechá reagovat s volnou aminoskupinou konjugátu aminokyseliny z 20(S)-cymtothecinu a nepolární, stericky náročné aminokyseliny. Popřípadě přítomné ochranné skupiny postranních řetězců se odštěpí a volná aminoskupina se popřípadě převede na vhodnou amoniovou sůl • « ·
Předmětem předloženého vynálezu je tedy alternativní způsob výroby glykokonjugátů obecného vzorce I nebo jejich solí, jehož podstata spočívá v tom, že se nechá reagovat isothiokyanát vzorce II
s popřípadě vhodně chráněnou terminální basickou aminokyselinou obecného vzorce V (V) ve kterém značí R basický postranní řetězec aminokyseliny, jejíž basická skupina může být chráněná, na konjugát aminokyseliny obecného vzorce VI
COOH
R' (VI) ve kterém má R výše uvedený význam,
2’ • ·
• · · · ······· ·· tato se potom nechá reagovat s konjugátem aminokyseliny obecného vzorce VII
ve kterém má výše uvedený význam, ochranné skupiny postranních řetězců se odštěpí a získané sloučeniny se popřípadě převedou na vhodnou sůl.
Obzvláště po připojení první aminokyseliny na camptothecin mohou vznikat směsi diastereomerů. Čisté diastereomery sloučenin podle předloženého vynálezu se dají vyrobit výše uvedeným způsobem, například tak, že se po připojení první aminokyselinové stavební jednotky na camptothecin a následuj ícím odštěpení ochranných skupin diastereomery dělí vhodným způsobem. Z diastereomerně čisté mezisloučeniny se může výše popsaným způsobem vyrobit diastereomerně čistá cílová sloučenina.
Směs diastereomerů cílové sloučeniny se může také obvyklým způsobem dělit na jednotlivé diastereomery.
Reakce se mohou provádět při různých poměrech tlaků a teplot, například 0,05 až 0,2 MPa , popřípadě -3%0 °C až 100 °C , ve vhodných rozpouštědlech, jako je dimethylformamid (DMF), tetrahydrofuran (THF), dichlormethan, chloroform, nižší alkoholy, acetonitril, dioxan, voda nebo směsi uvedených rozpouštědel. Zpravidla je výhodné provádět reakce v dimethylformamidu, dichlormethanu nebo ve směsi tetrahydrofuranu a dichlormethanu při teplotě místnosti a za noermálního tlaku.
Pro aktivaci karboxylových skupin přicházejí v úvahu kopulační reagencie, známé z chemie peptidů, jaké jsou například popsané v publikaci Jakubke, Jeschkeit, Aminosáuren, Peptide, Proteine, Verlag Chemie 1982 nebo Tetrahedr. Lett. 34, 6705 (1993). Výhodné jsou například anhydridy karboxylových kyselin, chloridy kyselin nebo směsné anhydridy.
Dále je pro aktivaci karboxylových skupin vhodná tvorba aduktů s karbodiimidy, například N,N’-diethylkarbodiimid, N,N’-diisopropylkarbodíímid, N,N’-dicyklohexylkarbodiimid, N-(3-dimethylaminopropyl)-N’-ethyl-karbodiimidhydrochlorid a N-cyklohexyl-N’-(2-morfolinoethyl)-karbodiimid-metho-p-sulfonát, nebo karbonylovými sloučeninami, jako je karbonyldiimidazol, nebo 1,2-oxazoliovými sloučeninami, jako je 2-ethyl-5-fenyl-l,2-oxazolium-3-sulfát a 2-terc.-butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorát, nebo acylaminosloučeninami, jako je 2-ethoxy-l-ethoxykarbonyl-l,2-dihydrochinolin, nebo anhydridem kyseliny propanfosfonové, nebo isobutylesterem kyseliny chlormravenčí, nebo benzotriazolyloxy-tris-(dimethylamino)-fosfonium-hexafluorofosfátem, nebo 1-hydroxybenzotriazol- nebo N-hydroxysukcinimidesterem.
Dále se mohou aminokyselinové komponenty používat také ve formě Leusscheho anhydridu.
Jako base se může například použít triethylamin, ethyl-diisopropylamin, pyridin, N,Ν-dimethylaminopyridin nebo j iné.
♦ « • · * · · • · ······· ·· ··
Jako ochranné skupiny pro třetí funkce aminokyselin se mohou použít v chemii peptidů známé ochranné skupiny, například typu urethanů, alkylů, acylů, esterů nebo amidů.
Ochranné skupiny aminoskupin jsou v rámci předloženého vynálezu v chemii peptidů obvykle používané ochranné skupiny aminoskupin.
K těmto patří výhodně benzyloxykarbonylová skupina,
3,4-dimethoxybenzyloxykarbonylová skupina, 3,5-dimethoxybenzyloxykarbonylová skupina, 2,4-dimethoxybenzyloxykarbonylová skupina, 4-ethoxybenzyloxykarbonylová skupina, 4nitrobenzyloxykarbonylová skupina, 2-nitrobenzyloxykarbonylová skupina, 2-nitro-4,5-dimethoxybenzyloxykarbonylová skupina, methoxykarbonylová skupina, ethoxykarbonylová skupina, terč.-butoxykarbonylová skupina (Boc), allyloxykarbonylová skupina, vinyloxykarbonylová skupina, 3,4,5-trimethoxybenzyloxykarbonylová skupina, ftaloylová skupina, 2,2,2-trichlorethoxykarbonylová skupina, 2,2,2-trichlor-terc.-butoxykarbonylová skupina, menthyloxykarbonylová skupina, 4-nitrofenoxykarbonylová skupina, fluorenyl-9-methoxykarbonylová skupina (Fmoc), formylová skupina, acetylová skupina, propionylová skupina, pivaloylová skupina, 2-chloracetylová skupina, 2-bromacetylová skupina, 2,2,2-trifluoracetylová skupina, 2,2,2-trichloracetylová skupina, benzoylová skupina, benzylová skupina, 4-chlorbenzoylová skupina, 4-brombenzoylová skupina, 4-nitrobenzoylová skupina, ftalimidoskupina, isovaleroylová skupina, benzyloxymethylenová skupina, 4-nitrobenzylová skupina, 2,4-dinitrobenzylová skupina, 4-nitrofenylová skupina nebo 2-nitrofenylsulfenylová skupina. Obzvláště výhodné jsou skupiny Fmoc a Boc.
Výhodné ochranné skupiny karboxylových skupin jsou lineární nebo rozvětvené až C^-alkylestery.
Odštěpování ochranných skupin v odpovídajících reakčních krocích se může provádět například pomocí kyseliny nebo base, hydrogenolyticky nebo jinak reduktivně.
Glykokonjugáty podle předloženého vynálezu vykazují jak in-vitro, tak in-vivo překvapivě silnou protinádorovou účinnost vůči různým nádorům, obzvláště vůči plicním nádorům, nádorům prsu, nádorům slinivky, melanomu a nádorům tlustého střeva, spojenou s velkou selektivitou vůči nemaligním buňkám.
Jsou tedy vhodné pro ošetření rakovinných onemocnění a sice jak v humání, tak také ve veterinární medicíně.
Předmětem předloženého vynálezu jsou také farmaceutické přípravky, které vedle netoxických, inertních a farmaceuticky vhodných nosičů obsahují jednu nebo více sloučenin podle předloženého vynálezu nebo z jedné nebo více účinných látek podle předloženého vynálezu sestávají, jakož i způsob výroby těchto přípravků.
Účinné látky podle předloženého vynálezu se mohou vyskytovat popřípadě v jedné nebo více výše uvedených nosných látek také v mikroenkapsulované formě.
Terapeuticky účinné sloučeniny by měly být ve výše uvedených farmaceutických přípravcích přítomné v koncentraci asi 0,1 až 99,5 % hmotnostních, výhodně 0,5 až 95 % hmotnostních, vztaženo na celkovou směs.
Výše uváděné farmaceutické přípravky mohou kromě • · · · · ·· · · • » · · · · ···· • ·· * 9 · 9 9 ······ • · · · ·· · · ·· · · ······· · · » » sloučenin podle předloženého vynálezu obsahovat také další farmaceutické účinné látky.
Všeobecně se jak v humání, tak také ve veterinární medicíně ukázalo jako výhodné pro dosažení požadovaných výsledků podávat účinnou látku podle předloženého vynálezu v celkovém množství asi 0,5 až asi 500 mg/kg , výhodně 5 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti za 24 hodin, popřípadě ve formě více jednotlivých dávek. Jednotlivá dávka obsahuje účinnou látku nebo účinné látky podle předloženého vynálezu výhodně v množství asi 1 až 80 mg/kg , obzvláště 3 až 30 mg/kg tělesné hmotnosti.
Biologické testy
1. Test inhibice růstu pro stanovení cytotoxických vlastností :
Humání buněčné linie tlustého střeva SV 480 a HT 29 (ATCC-Nr.CCL 228 a HBT 38) , jakož i buněčná linie myšího melanomu B16F10 (CRL 6475) se dají do Rouxovy misky do media RPMI 1640 za přídavku 10 % FCS . Potom se trypsinuje a v RPMI plus 10 % FCS se kultivuje až do počtu buněk 50000 buněk/ml pro SV 480 a HT 29 a 20000 buněk pro B16F10. Buněčná suspense se nanese na mikrotitrační desku s 96 miskami v množství 100 μΐ suspense/misku a inkubuje se po dobu jednoho dne při teplotě 37 °C pod oxidem uhličitým. Potom se přidá dalších 100 μΐ RPMI media a 1 μΐ DMSO se zkoušenými substancemi. Růst se zjišťuje po 6 dnech. K tomu se do každé misky přidá 25 μΐ roztoku MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolinbromid) s výchozí koncentrací 5 mg/ml vody. Inkubuje se po dobu 5 hodin pod oxidem uhličitým při teplotě 37 °C . Potom se medium odsaje a do každé misky se přidá 100 μΐ isopropylalkoholu. Po třicetiminutovém třepání se 100 μΐ vody se měří extinkce při 595 nm pomocí Multiplate Readeru (Bio.) 3550-UV .
Cytotoxický účinek je uveden v následující tabulce 1 jako hodnota IC^q pro buněčné linie SV 480 , HT 29 a B16F10 .
Tabulka 1
| Příklad | IC50/nM SV 480 | IC5„/nM HT 29 | IC50/nM B16F10 | |
| 20(S)-camptothecin | 10 | 5 | 20 | |
| př. | 1 | 70 | 40 | 200 |
| v pr . | 2 | 100 | 40 | 300 |
| př. | 3 | 100 | 20 | 500 |
| Př· | 4 | 100 | 20 | 500 |
| př. | 5 | 80 | 50 | 200 |
| př. | 6 | 60 | 30 | 300 |
| př. | 7 | 80 | 30 | 20 |
| Př· | 8 | 200 | 100 | 800 |
| Př- | 9 | 200 | 70 | 400 |
| Př. | 10 | 100 | 50 | 300 |
• · · · · · · • · · · ······· ·· · ·
2. Hematopoetická aktivita glykokonjugátu ve srovnání s odpovídající účinnou látkou.
Materiál a metody :
Buňky kostní dřeně se vypláchnou z femuru myší. 10$ buněk se inkubuje v mediu McCoy 5A (0,3 % agar) společně s rekombinantním muriním GM-CSF (Genzyme; Stammzellen-Kolonienbildung) a substancemi (10-^ až 100 pg/ml) při teplotě 37 °C a Ί % oxidu uhličitého. Po 7 dnech se spočítají kolonie (< 50 buněk) a klustery (17 až 50 buněk).
Výsledky :
Jak je znázorněno v tabulce 2 , vykazují zkoušené glykokonjugáty vůči odpovídající účinné látce drasticky sníženou inhibici proliferace buněk kostní dřeně.
Tabulka ί
Inhibice CSF-indukované proliferace buněk kostní dřeně myší
| Příklad | IC5Q [ng/ml] |
| 20(S)-camptothecin | 0,05 |
| př. 1 | 15 |
| př. 2 | 30 |
| př. 3 | 15 |
| př. 4 | 15 |
| př. 5 | 20 |
| př. 6 | 10 |
| př. 7 | 8 |
| př. 8 | 45 |
| př. 9 | 15 |
| př. 10 | 30 |
3. In-vivo inhibice růstu nádoru v modelu lysých myší
Materiál :
Pro všechny in-vivo-experimenty pro zkoumání inhibice růstu nádoru se použily athymické lysé myši (kmen NMRI nu/nu). Zvolený velkobuněčný plicní karcinom LXFL 529 byl vyvíjen sériovým pasážováním v lysých myších. Lidský původ nádoru byl doložen isoenzymatickými a imunohistochemickými • · metodami .
Experimentální stavba :
Nádor byl subcutáně implantován do obou slabin lysých myší nu/nu o stáří 6 až 8 týdnů. Ošetření se startuje v závislosti na době zdvojení, pokud nádory dosáhnou průměru 5 až 7 mm. Myši se přiřadí do ošetřované skupiny a kontrolní skupiny (5 myči pro skupinu s 8 až 10 vyhodnotitelnými nádory) randomisací. Jednotlivé nádory kontrolní skupiny rostou všechny progresivně.
Velikost nádorů se měří ve dvou rozměrech pomocí posuvného měřítka. Objem nádoru, který dobře koreluje s počtem buněk, se potom použije pro všechna vyhodnocení. Objem se počítá podle vzorce délka x šířka x šířka / 2 ([a x b ]/2 , přičemž a a b značí dva navzájem kolmé průměry).
Hodnoty relativního objemu nádoru (RTV) se pro každý jednotlivý nádor vypočtou dělením velikosti nádoru ve dni X velikosti nádoru ve dni 0 (doba randomisace) Střední hodnoty RTV se potom použijí pro další vyhodnocení.
Inhibice objemu nádoru (relativní objem nádoru testovaná skupina/kontrolní skupina x 100 , T/C v %) byla koncovou měřenou hodnotou.
Ošetření :
Aplikace sloučenin se provádí například ve dni 0, a 2 po randomisací intravenosně (i.v.) , přičemž celková dávka na den se rozdělí na dvě dávky.
• ·
Výsledky :
Terapeutická účinnost glykokonjugátů podle předloženého vynálezu z příkladu 1 a 2 je příkladně znázorněna na velkobuněčných humáních plicních nádorech LXFL 529 . Terapie se vede při maximálně tolerovatelné dávce (MTD) a při 1/2 MTD do kompletní až podstatné remissi nádoru. Excelentní účinek je možno demonstrovat také na jiných nádorech.
VBýsledky jsou uvedené v následující tabulce 3 • Β 99 ♦ · a · • · ·* * · A « · • 9 · · t · e *
Tabulka3
| Terapie | dávka [mg/kg/ den] | doba přežití [dny] | počet nádorů | opt. T/C (%) | relativní tělesná hmotnost k 7. dni [% dne 0] |
| kontrola | - | 7 >28 >28 >28 >28 | 8 | 100 | 104 |
| 1 | 16 | >28 >28 >28 >28 >28 | 10 | 0 (den 28) | 95 |
| 1 | 8 | 0 >28 >28 >28 >28 | 8 | 0 (den 14) | 95 |
| 2 | 32 | >28 >28 >28 20 1 | 8 | 0 (den 21) | 98 |
| 2 | 16 | >28 >28 >28 >28 >28 | 8 | 3,3 (den 28) | 103 |
• ·>
• »
Dlouhotrvající kompletremise sloučeniny z příkladu 1 v oblasti dávky 16 až 8 mg/kg a závislost účinku na dávce je znázorněna v dalším experimentu s terapií ve dni 1 až 3
1. v. na obr. 1 .
4. Hydrolytická stabilita
Sloučeniny podle předloženého vynálezu z příkladu 1,
2, 8 a 9 se rozpustí ve vodě a vykazují po stání při teplotě místnosti po dobu 24 hodin v HPLC uvolňování camptothecinu podstatně pod 1 % v procentech plochy.
Při rozpuštění 10 μΜ sloučenin z příkladu 1 a 2 v RPMI-mediu plus 10 % FCS a ve 30% lidské krvi v PBS pufru dochází po čtyřiadvacetihodinovém stání k uvolňování camtothecinu pouze pod 5 % .
Metody :
HPLC System Hewlett Packard HP 1050
| Sloupec : | Nucleosil 120-5 C 18 Nagel; Germany) | 250 mm x 4 mm (Macherey & |
| Eluent : | A : 0,01 m KH2PO4 ve | vodě (H2=Mili-Pore grade) |
| B : 80 % acetonitril/20 % eluent A | ||
| Tok : | 1,2 ml | |
| Gradient | ' x0 ' % B - t^Q : | 100 % B |
| t^^ 100 % B - T4-7 | : 20 % B | |
| Detekce : | 240 nm nebo 370 nm . | |
| 5. Stabilisace laktonu |
Glykokonjugáty podle předloženého vynálezu z příkladů 1, 2, 8 a 9 se rozpustí ve směsi 80 % vody a 20 % aceto23 nitrilu a hodnota pH se upraví 2 ekvivalenty hydroxidu sodného na 9 . Po jednohodinovém stání při teplotě místnosti je otevření laktonového kruhu pod 5 % (detekce výše uvedenou metodou).
Příklady provedení vynálezu
Uhlohydrátový edukt
I) p-aminofenyl-3-0-methyl-p-L-fukopyranosid:
och3
I.a) p-nitrofenyl-3-0-methyl-p-L-fukopyranosid:
6g (21mmol) p-nitrofenyl-p-L-fukopyranosidu ve 300 ml absolutního methylalkoholu se smísí se 7,48 g (31,5 mmol) dibutylcínoxidu a zahřívá se po dobu 2 hodin k varu pod zpětným chladičem. Potom se reakční směs zahustí, získaný zbytek se usuší a potom se vyjme do 300 ml dimethylformamidu. Po přídavku 15,7 ml methyljodidu se vsázka míchá po dobu 40 hodin při teplotě 70 °C , rozpouštědlo se potom ve vakuu odpaří a získaný zbytek se vyjme do 300 ml dichlormethanu. Suspense se přefiltruje, zbylý roztok se znovu odpaří a podrobí se mžikové chronatografii (dichlormethan/ methylalkohol 99 : 1). Po zahuštění se získá 3,82 g (61 %) konečného produktu.
I) p-aminofenyl-3-0-methyl-P-L-fukopyranosid:
• ·
3,81 g (12,73 mmol) p-nitrofenyl-3-0-methyl-p-L-fukopyranosidu se rozpustí v methylalkoholu a po přídavku oxidu platičitého se hydrogenuje ve vodíkové atmosféře při nepatrném přetlaku. Po odfiltrování katalysátoru a vysrážení pomocí diethyletheru se získají 3 g (88 %) cílového produktu [DC: dichlormethan/methylalkohol 9:1,
Rf = 0,53].
Peptidyl-camptothecin-edukty :
II) 20(S)-20-0-[NePsil°n-[fluorenyl-9-methoxykarbonyl]-L-lysyl-L/D-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát:
II)L 20(S)-20-0-[NePsil°n-[fluorenyl-9-methoxykarbonyl]-L-lysyl-L-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát:
II)D 20 (S) -20-0- [NePsz*-l°n- [ f luorenyl-9-methoxykarbonyl ] -L-lysyl-D-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát:
II.a) 20(S)-20-0-[N-(terc-butoxykarbonyl)- -L/D-leucyl]-camptothecin
Suspense lOg (28,7 mmol) 20(S)-camtothecinu ve 250 ml absolutního dimethylformamidu se za míchání smísí s 11,1 g (43 mmol) anhydridu kyseliny N-(terc-butoxykarbonyl) -leucin-N-karboxylové as 1 g 4-(N,N-dimethylamino-pyridinu. Po šestnáctihodinovém zpracování v ultrazvukové lázni při teplotě místnosti se přidá dalších 3,7 g anhydridu kyseliny N-(terc-butoxykarbonyl)-leucin-N-karboxylové a reakční směs se ponechá další 2 hodiny při teplotě místnosti. Potom se oddělí nerozpuštěný camptothecin a filtrát se ve vakuu zahustí. Získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie [petrolether/ethylacetát 1 : 1 —> 1 : 4].
Získá se takto 13,55 g cílové sloučeniny Ha) (84 %) [DC: acetonitril, R^ = 0,47] .
II.b) 20(S)-20-0-L/D-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát:
II.b)L 20(S)-20-0-L-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát:
II.b)D 20(S)-20-0-D-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát:
Roztok sloučeniny II.a (13,55 g, 24,1 mmol) ve směsi 100 ml dichlormethanu a 40 ml bezvodé kyseliny trifluoroctové se míchá po dobu 30 minut při teplotě místnosti. po zahuštění ve vakuu na malý objem se produkt vysráží diethyletherem a důkladně se diethyletherem promyje. Při chromatografii na tenké vrstvě (acetonitril/voda 20 : 1) je patrná dvojitá skvrna s hodnotami R_j? 0,4 a 0,32 (výtěžek 9,5 g (68 %)).
Vícenásobným srážením ze směsi dichlormethan/methylalkohol pomocí diethyletheru se může směs rozdělit na obě jednotlivé komponenty II.b)L a II.b)D . Obě formy se jeví jako diastereomery, které dávají nepatrně rozdílná ^H-NMR-spektra :
Polární diastereomer :
400-MHz-1H-NMR(CD2C12/CD3OD 1:1):5 s C-H(B-kruh) 8,63 ppm s C-H(D-kruh) 7,4 ppm
Nepolární diastereomer :
4OO-MHz-1H-NMR(CD2C12/CD3OD 1:1):5 s C-H(B-kruh) 8,60 ppm s C-H(D-kruh) 7,32 ppm.
V dalších stupních se může použít jak směs obou forem, • · · · tak také jednotlivé vyčištěné diastereomerně čisté formy.
II.c) 20(S)-20-0-[Nal^a-(terč.-butoxykarbonyl)-NePsil°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-lysyl-L/D-leucyl]-camptothecin :
II.c)L 20(S)-20-0-[Nalfa-(terč.-butoxykarbonyl)-NePsilon-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-lysyl-L-leucyl]-camptothecin :
II.c)D 20 (S)-20-0- [Nalfa- (terč . - butoxykarbonyl) -NePs-*-^on-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-lysyl-D-leucyl]-camptothecin :
25,6 g (54,6 mmol) Na-'_^a-(terč .-butoxykarbonyl)_NePsl-*-on-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-lysinu a 11,1 g (82 mmol) 1-hydroxy-lH-benzotriazolu se rozpustí v 500 ml dimethylformamidu a po přídavku 12,6 g (1,2 ekvivalentu) N-ethyl-N’-(dimethyl-aminopropyl)-karbodiimid hydrochloridu se míchá po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti. Potom se přidá sloučenina Il.b) (26,2 g, 0,83 ekvivalentu) a 7,83 ml (1 ekvivalent) ethyl-diisopropylaminu a reakční směs se míchá dalších 16 hodin při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu a čištění pomocí mžikové chromatografie (petrolether/ethylacetát 1 : 2 -> ethylacetát) se získá cílová sloučenina (43,5 g, 87 %) (DC : acetonitril, Rf = 0,44) .
Stejně je možno také v dalších příkladech zcela analogicky provádět také s každou s vyčištěných chromatografřeky čistých forem ve Il.b).
II) 20(S)-20-0-[NePsilon-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-lysyl-L/D-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát:
II)L 20(S)-20-0-[NePsilon-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-lysyl-L-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát:
II) D 20(S)-20-0-[NePsil°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-lysyl-D-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát:
Sloučenina II.c) (43,3 g, 47,5 mmol) se vyjme do 150 ml dichlormrthanu a smísí se s 50 ml kyseliny trifluoroctové, načež se získaný roztok míchá po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti. Po zahuštění na malý objem ve vakuu se produkt vysráží přídavkem diethyletheru, přičemž se získá 39,4 g (90 %) cílové sloučeniny (DC: acetonitril/voda 10 : 1, Rf = 0,35) .
III) 20(S)-20-0-(L-histidyl-L/D-valyl)-camptothecin, trifluoracetát :
III.a) 20(S)-20-0-[N-(terč.-butoxykarbonyl)-L/D-valyl]-camptothecin :
Suspense 10 g (28,7 mmol) 20(S)-camptothecinu v 500 ml absolutního dimethylformamidu se za míchání smísí s 21,5 g (3 ekvivalenty) anhydridu kyseliny N-(terč.-butoxy-karbonyl)-valin-N-karboxylové as 1 g 4-(N,N-dimethylamino)-pyridinu. Po 16 hodinách zpracování v ultrazvukové lázni při teplotě místnosti se oddělí zbytkový nerozpuštěný camptothecin a filtrát se ve vakuu zahustí. Získaný zbytek se čistí pomocí mžikové chromatografie (petrolether/ethylacetát 1 : 3 -> ethylacetát) , přičemž se získá 11,65 g (73 %) cílové sloučeniny (DC : acetonitril, - 0,44) . Když se • · · stejná reakce provádí namísto v dimethylformamidu v dichlormethanu za varu pod zpětným chladičem, tak je silně zvýhodněna tvorba diastereoisomeru s L-konfigurací valinové stavební jednotky.
III
III
III
b)
b)L
b)D
20(S)-20-0-L/D-valyl-camptothecin,
20(S)-20-0-L-valyl-camptothecin,
20(S)-20-0-D-valyl-camptothecin, trifluoracetát :
trifluoracetát :
trifluoracetát :
Roztok sloučeniny III.a) (11,65 g, 21 mmol) ve směsi 100 ml dichlormethanu a 100 ml bezvodé kyseliny trifluoroctové se míchá po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu na malý objem se produkt vysráží diethyletherem a dobře se diethyletherem promyje. Produkt se potom ještě vysráží ze směsi dichlormethanu a methylalkoholu diethyletherem a isoluje se jako směs diastereomerních forem. Výtěžek činí 10,9 g (92 %) (DC : acetonitril/voda 20 : 1 , Rf = 0,31 a 0,39) . Vyšší vyčištění neplárního diastereomeru s L-konfigurací valinové stavební jednotky je v tomto stupni možné krystalisací z methylalkoholu :
g získaného produktu s obohaceným nepolárním diastereomerem se rozpustí v 80 ml methylalkoholu, ochladí se na teplotu 0 °C a v desetimililitrových krocích se mísí s diethyletherem. Po přídavku celkem 60 ml diethyletheru se vysrážený produkt odsaje a usuší. Získá se takto 4,6 g (58 %) čistého nepolárního diastereomeru s L-konfigurací valinových stavebních jednotek. Dodatečné sráženi matečného roztoku diethyletherem poskytne dalších 730 mg (9 %) frakce produktu s poměrem diastereomerů 1 : 18 .
V dalších reakcích se může použít jak směs diastereo• · merů, tak také vyčištěný nepolární nebo polární diastereomer. Reakce probíhají zcela analogicky.
III.c) 20(S)-20-0-[N-(terč.-butoxykarbonyl)L-histidyl-L/D-valyl]-camptothecin :
III.c)L 20(S)-20-0-[N-(terč.-butoxykarbonyl)L-histidyl-L-valyl]-camptothecin :
III.c)D 20(S)-20-O-[N-(terč.-butoxykarbonyl)L-histidyl-D-valyl]-camptothecin :
5,95 g (23,3 mmol) N-(terč.-butoxykarbonyl)-L-histidinu a 4,73 g 1-hydroxy-lH-benzotriazol hydrátu se rozpustí ve 200 ml dimethylformamidu. Po přídavku 5,38 g N-ethyl-N’-(dimethylaminopropyl)-karbodiimid hydrochloridu se reakční směs míchá po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti, načež se přidá sloučenina Ill.b) (10,9 g, 19,44 mmol) a 6,7 ml ethyl-diisopropylamínu a směs se míchá po dobu dalších 16 hodin při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu a čištění pomocí mžikové chromatografie (acetonitril/voda 50 : 1 —> 20 : 1 se získá cílová sloučenina (DC : acetonitril/voda 10 : 1 , Rj? = 0,42) , která se nechá ihned dále reagovat.
III) 20(S)-20-0-(L-histidyl-L/D-valyl)-camptothecin, bis-trifluoracetát :
III)L 20(S)-20-0-(L-histidyl-L-valyl)-camptothecin, bis-trifluoracetát :
III)D 20(S)-20-0-(L-histidyl-D-valyl)-camptothecin, bis-trifluoracetát :
Sloučenina III.c) se vyjme do 100 ml dichlormethanu a smísí se s 50 ml bezvodé kyseliny trifluoroctové, načež se získaný roztok míchá po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Po zahuštění na malý objem ve vakuu se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získá se takto 13,05 g (83 %) cílové sloučeniny (DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2 , = 0,2) .
IV) 20(S)-20-0-[NePsilon(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-D-lysyl-L/D-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát :
IV)L 20(S)-20-0-[NePsil°n(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-D-lysyl-L-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát :
IV) D 20(S)-20-0-[NePsil°n(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-D-lysyl-D-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát :
Syntesa této sloučeniny probíhá zcela analogicky jako výroba diastereomerní sloučeniny II . Ve stupni II.c) se použije namísto Na’*’^a-(terč .-butoxykarbonyl)-NePs^^on-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-lysinu odpovídající D-isomer (DC : acetonitril/voda 10 : 1 , R^ = 0,4) .
V) 20(S)-20-0-[NePsil°n(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-ornithyl-L/D-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát :
V)L 20(S)-20-0-[NePsil°n(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-ornithyl-L-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát :
V)D 20(S)-20-0-[NePsil°n(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-ornithyl-D-leucyl]-camptothecin, trifluoracetát :
Syntesa této sloučeniny probíhá zcela analogicky jako výroba odpovídající lysinové sloučeniny II . Ve stupni II.c) se použije namísto N3^3-(terč .-butoxykarbonyl)_NePsil°n_ (fluorenyl-9-methoxykarbonyl) -L-lysinu N3^3- (terč . -butoxykarbonyl) -NePsϊ-*-θη- (f luorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-ornithin (DC : acetonitril/voda 20 : 1 , = 0,125).
VI) 20(S)-20-0-(L-arginyl-L/D-leucyl)-camptothecin, tri-trifluoracetát :
VI)L 20(S)-20-0-(L-arginyl-L-leucyl)-camptothecin, tri-trifluoracetát :
VI)D 20(S)-20-0-(L-arginyl-D-leucyl)-camptothecin, tri-trifluoracetát :
VI.a) 20(S)-20-0-(tri-terc.-butoxykarbonyl-L-arginyl-L/D-leucyl)-camptothecin
VI.a)L 20(S)-20-O-(tri-terc.-butoxykarbonyl-L-arginy1-L-leucyl)-camptothecin
VI.a)D 20(S)-20-0-(tri-terc.-butoxykarbonyl-L-arginyl-D-leucyl)-camptothecin
200 mg (0,42 mmol) tri-terc.-butoxykarbonyl-L-argininu a 80 mg 1-hydroxy-lH-benzotrizol hydrátu se rozpustí ve 20 ml dimethylformamidu. Po přídavku 97 mg N-ethyl-N’-(dimethylaminopropyl)-karbodiimid hydrochloridu se reakční směs míchá po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti, načež se přidá sloučenina Il.b) (200 mg, 0,35 mmol) a 217 μΐ ethyldiisopropylaminu a míchá se po dobu dalších 3 hodin při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu a zpracování • · s vodou s ezíská cílová sloučenina (DC : acetonitril/voda 5 : 1 : 0,2 , = 0,77) , která se ihned nechá dále reagovat .
VI) 20(S)-20-0-(L-arginyl-L/D-leucyl)-camptothecin, tri-trifluoracetát
VI) L 20(S)-20-0-(L-arginyl-L-leucyl)-camptothecin, tri-trifluoracetát
VI) D 20(S)-20-0-(L-arginyl-D-leucyl)-camptothecin, tri-trifluoracetát
0,35 mmol sloučeniny z VI.a) se míchá v 10 ml dichlormethanu s 5 ml bezvodé kyseliny trifluoroctové po dobu 2 hodin při teplotě místnosti, načež se reakční směs zahustí a dvakrát se vysráží ze směsi dichlormethanu a methylalkoholu diethyletherem. Získá se takto 280 mg (82 %) cílové sloučeniny (DC : acetonitril/voda 10 : 3 : 1,5 ,
Rf = 0,42) .
VII) L 20(S)-20-0-[NePs^l°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-lysyl-L-valyl]-camptothecin, trifluoracetát
VII. a) L 20(S)-20-0- [Na^^a- (terč. - butoxykarbonyl) -NePs-*-l°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-lysyl-L-valyl]-camptothecin
10,02 g (21,4 mmol) N-(terc-butoxykarbonyl)-N-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-lysinu a 4,4g (32,1 mmol) 1-hydroxy-lH-benzotriazol hydrátu se rozpustí ve 400 ml dimethylformamidu a po přídavku 4,92 g (1,2 ekvivalentu) N-ethyl-N’-(dimethylaminopropyl)-karbodiimid hydrochloridu • · · · se reakční směs míchá po dobu 30 minut při teplotě 0 °C. Potom se přidá 10 g (17,8 mmol) nepolárního diastereomeru III.b)L sloučeniny Ill.b) a 9,2 ml (3 ekvivalenty) ethyl-diisopropylaminu a reakční směs se míchá po dobu dalších 16 hodin při teplotě místnosti. Po zahuštění ve vakuu se získaný zbytek míchá po dobu 30 minut s 500 ml vody a odsaje se. Produkt se vyjme do 400 ml dichlormethanu, zbytková voda se odstraní, roztok se zakoncentruje na 200 ml a potom se vysráží 800 ml diethyletheru. Sraženina se odsaje a promyje se diethyletherem, přičemž se získá 14,712 g cílové sloučeniny (92 %) (DC : acetonitril,
Rf = 0,6).
VII)L 20(S)-20-0-[N-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-L-lysyl-L-valyl]-camptothecin, trifluoracetát
Sloučenina VII.a)L (14,65 g, 16,3 mmol) se vyjme do 300 ml dichlormethanu a při teplotě 0 °C se smísí s 50 ml bezvodé kyseliny trifluoroctové, načež se získaný roztok míchá po dobu 2 hodin za chlazení ledem. po zahuštění na malý objem ve vakuu se produkt vysráží přídavkem diethyletheru. Získá se takto 13,8 g (93 %) cílové sloučeniny (DC : acetonitril/voda 10 : 1 , Rf = 0,35 ).
Příklad 1
20(S)-20-0-{Na-^a[0-(3-0-methyl-β-L-fukopyranosyl)-4-hydroxygeny lamino- thiokarbonyl ]-L-lysyl-L/D-leucyl}-camptothecin, hydrochlorid
1. a) 20(S)-20-0-{Na^^a[O-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-NePsil°n-[fluorenyl-9-methoxykarbonyl]-L-lysyl-L/D-leucyl}-camptothecin:
Roztok 9,82 g (36,5 mmol) p-aminofenyl-3-0-methyl-p-L-fukopyranosidu (příklad 1) v 500 ml směsi dioxanu a vody 1:1 se za míchání smísí se 3,94 ml thiofosgenu (1,4 ekvivalentu) . Po 10 minutách se smísí se 4 ekvivalenty ethyldiisopropylaminu, zahustí se ve vakuu a získaný zbytek se ve vakuu suší po dobu jedné hodiny za vakua olejové vývěvy. získaný isothiokyanát se rozpustí v 500 ml absolutního dimethylformamidu a smísí se se 30,4 g (32,8 mmol) sloučeniny II a se 22,6 ml ethyldiisopropylaminu. Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se rozmíchá s vodou. Produkt se čistí pomocí mžikové chromatografie (acetonitril -> acetonitril/voda 30 : 1) . Produkt se vysráží ze směsi dichlormethanu a methylalkoholu diethyletherem a potom se diethyletherem promyje. Získá se takto 28,7 g (78 %) cílového produktu (DC : acetonitril/ voda 10 : 1 , Rf = 0,44) .
1.b) 20-0-{Nalfa[0-(3-0-methyl-β-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-L-lysyl-L/D-leucyl}-camptothecin :
28,6 g (25,5 mmol) konjugátu l.a) se ve 200 ml dimethylformamidu smísí s 5 ml piperidinu. Po dvouhodinovém míchání při teplotě místnosti se směs zahustí a získaný zbytek se dvakrát digeruje s dichlormethanem a potom se smísí s diethaletherem. Potom se vyjme do směsi dimethylformamidu a dichlormethanu a vysráží se diethyletherem am tento proces čištění se dvakrát opakuje. Produkt se potom odsaje a promyje se diethyletherem, přičemž se získá 19,5 g (85 %) produktu (DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2 , R^ = 0,3) .
1) 20(S)-20-0-{Na^^a[0-(3-O-methyl-β-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-L-lysyl-L/D-leucyl}-camptothecin, hydrochlorid :
g (11,1 mmol) sloučeniny z příkladu l.b) se vyjkme do 100 ml vody, smísí se s 11,1 ml (1 ekvivalent)
N kyseliny chlorovodíkové a lyofilisuje se, načež se produkt několikrát vysráží diethyletherem ze směsi dichlormethanu a methylalkoholu. Výtěžek činí 9,15 g (88 %) (DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2,
Rf = 0,3) .
Příklad 2
20(S)-20-0-{N-[0-(3-0-methyl-β-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-L-histidyl-L/D-valyl}-camptothecin, hydrochlorid :
O
Roztok 7,14 g (26,5 mmol) p-aminofenyl-3-0-methyl-p-L-fukopyranosidu (uhlohydrátový edukt) ve 300 ml směsi dioxanu a vody 1 : 1 se za míchání smísí se 2,86 ml thiofosgenu (1,4 ekvivalentu) , po 10 minutách se smísí se 4 ekvivalenty ethyldiisopropylaminu, potom se zahustí ve vakuu a získaný zbytek se suší po dobu jedné hodiny za vakua olejové vývěvy. Získaný isothiokyanát se rozpustí v 500 ml absolutního dimethylformamidu a smísí se se 17,45 g (22 mmol) sloučeniny III , jakož i se 22,7 ml ethyl-díisopropylaminu. Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, potom se zahustí ve vakuu a získaný zbytek se vyjme do vody. Hodnota pH se potom upraví pomocí 1 N vodného hydroxidu sodného na 7,8 a produkt se odsaje. Získaný zbytek se po sušení za vysokého vakua dvakrát přesráží diethyletherem ze směsi dichlormethanu a methylalkoholu a promyje se diethyletherem. Získá se takto 17,97 g (91 %) cílového produktu, který se potom převede pomocí 1 ekvivalentu 0,1 N vodné kyseliny chlorovodíkové na hydrochlorid (DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2 , Rf = 0,36) (FAB-MS : m/z = 896 (M+H+)).
• ·
Příklad 3
20(S)-20-0-{Nal^a-[O-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-D-lysyl-D-leucyl}-camptothecin, hydrochlorid:
HC1 H2N
Syntesa se provádí zcela analogicky jako je popsáno v příkladě 1 , přičemž se vychází z eduktů I a IV.)D a od stupně 20-0-leucyl-camptothecinu II.b) se použije polární diastereomer II.b)D . (DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5:1:0,2, = 0,31) (FAB-MS . m/z = 901 = m +
H+).
Příklad 4 (S)-20-0 - {N3·!^a- [0- (3-0-methyl-P-L-fukopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-L-ornithyl-D-leucyl}-camptothecin, hydrochlorid:
• · · • · · · · * · · * ·· ·· · · · tu • · · · · · · • · · «·····« · · ··
Syntesa se provádí zcela analogicky jako je popsáno v příkladě 1 , přičemž se vychází z eduktů I a V.)D a od stupně 20-0-leucyl-camptothecinu II.b) se použije polární diastereomer II.b)D s D-Leu-konfigurací . (DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2 , = 0,25) .
Příklad 5 (S)-20-0- {Na^a- [0- (3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-L-arginyl-D-leucyl}-camptothecin ;
NH2 «* »· * » « <
• · *· « · · « · • « · « · · · · » < • ι « » « »
Roztok 73 mg (0,27 mmol) p-aminofenyl-3-0-methyl-β-L-fukopyranosidu (edukt I) ve 20 ml směsi dioxanu a vody 1 : 1 se za míchání smísí se 30 μΐ thiofosgenu (1,4 ekvivalentu). Po 10 minutách se smísí se 4 ekvivalenty ethyldiisopropylaminu, reakční směs se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se za vakua olejové vývěvy suší po dobu jedné hodiny. Získaný isothiokyanát se rozpustí ve 20 ml absolutního dimethylformamidu a smísí se se 175 mg (0,18 mmol) sloučeniny VI.)D a 620 μΐ ethyldiisopropylaminu.
Pro syntesu sloučeniny VI.)D se zde použil od stupně 20-0-leucyl-camptothecinu Il.b) polární diastereomer II.b)D. Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, potom se ve vakuu zahustí a získaný zbytek se rozmíchá s dichlormethanem. Tento se potom vysráží diethyletherem ze směsi dichlormethanu a methylalkoholu a sraženina se promyje diethyletherem. Potom se lyofilisuje ze směsi dioxanu a vody a znovu se krystalisuje ze směsi dichlormethanu a methylalkoholu pomocí diethyletheru. Získá se takto 154 mg (90 %) cílového produktu (DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2 , Rf = 0,39) (FAB-MS : m/z = 929 = M+H+).
Příklad 6
20(S)-20-0-{Nal^a-[0-(3-0-methyl-β-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-L-lysyl-D-leucyl}-camptothecin, hydrochlorid ;
♦ ·
Syntesa se provádí zcela analogicky jako je popsáno v příkladě 1 , přičemž se od stupně 20-O-leucyl-camptothecinu Il.b) použije polární diastereomer II.b)D s D-Leu-konfigurací .
Alternativně se může sloučenina z příkladu 1 například rozdělit také pomocí preparativní HPLC na jednotlivé isomerní formy.
Podmínky :
Dělící sloupec : Macherey & Nagel 250 x 21 mm Nucleosil 100-7 C 18 AB
Pohyblivá fáze A : H20 + 0,1 M KH2PO4
Pohyblivá fáze B : acetonitril/voda 4 : 1 + 0,02 M KH2PO4
Tok : 10 ml/min
Inj.-objem : 1500 μΐ
Gradient : 0 až 30 % B až 30 • ·
| 20 | až | 90 |
| 22 | až | 90 |
| 24 | až | 30 |
| Vlnová délka : | 215 | nm |
Po HPLC-dělení se odpovídající frakce lyofilisují a zbytek se potom několikrát sráží ze směsi dichlormethanu a methylalkoholu diethyletherem. Potom se nastaví hodnota pH na 8 až 9 , přefiltruje se a zbytek se převede pomocí 0,1 N kyseliny chlorovodíkové na hydrochlorid.
V ^H-NMR-spektru vykazují isomery z příkladů 6 a 7 různé chemické posuny, obzvláště pro oba singuletty aromatických H-atomů v camtothecin-B-kruhu, popřípadě D-kruhu.
Diastereomer s D-leucinem :
400-MHz-1H-NMR(CD2C12/CD3OD 1:1):δ s C-H(B-kruh) 8,52 ppm s C-H(D-kruh) 7,42 ppm (FAB-MS : m/z = 901 = M+H+) .
Příklad 7
20(S)-20-0-{Na^^a-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-L-lysyl-L-leucyl}-camptothecin, hydrochlorid :
• ·
Syntesa se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 1 , přičemž se od stupně 20-0-leucyl-camptothecinu Il.b) použije nepolární diastereomer II.b)L s L-Leu-konfigurací .
Alternativně se může sloučenina z příkladu 1 například rozdělit také pomocí preparativní HPLC na jednotlivé isomerní formy.
Podmínky jsou stejné, jaké jsou uvedené v příkladě 6.
Po HPLC-dělení se odpovídající frakce lyofilisují a zbytek se potom několikrát sráží ze směsi dichlormethanu a methylalkoholu diethyletherem. Potom se nastaví hodnota pH na 8 až 9 , přefiltruje se a zbytek se převede pomocí 0,1 N kyseliny chlorovodíkové na hydrochlorid.
V ^H-NMR-spektru vykazují isomery z příkladů 6 a 7 různé chemické posuny, obzvláště pro oba singuletty aromatických H-atomů v camtothecin-B-kruhu, popřípadě D-kruhu.
« ·
Diastereomer s L-leucinem :
400-MHz-1H-NMR(CD2C12/CD3OD 1:1):5 s C-H(B-kruh) 8,6 ppm s C-H(D-kruh) 7,35 ppm (FAB-MS : m/z = 901 = M+H+)
Příklad 8
20(S)-20-0-{Na^^a-[0-(3-0-methyl-P~L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-L-lysyl-L-valyl}-camptothecin, hydrochlorid :
Sloučenina se vyrobí v nepolární sérii, když se vychází ze sloučeniny VII)L , analogicky jako je popsáno v příkladě 1 .
Poměr diastereomerů se může zjistit analytickou HPLC. Další čištění diastereomerů s L-konfigurací valinu (>
: 1) je možno dosáhnout popřípadě krystalisací z methyl• * • · · · • · · · · • · · · β · · ·
| alkoholu. | |
| Podmínky HPLC : | |
| Dělící sloupec : | Macherey & Nagel 250 x 4 mm Nucleosil 100-7 C 18 AB |
| Pohyblivá fáze A | : H20 + 0,1 M KH2PO4 |
| Pohyblivá fáze B Tok : 1 ml/min | : acetonitril/voda 4:1+ 0,02 M KH2PO4 |
| Inj.-obj em : 15 | μ1· |
V ^H-NMR-spektru vykazuje čistý diastereomer pouze sadu signálů, například pro oba sínguletty aromatických H-atomů v camtothecin-B-kruhu, popřípadě D-kruhu.
400-MHz-1H-NMR(CD2C12/CD3OD 1:1):5 s C-H(B-kruh) 8,55 ppm s C-H(D-kruh) 7,35 ppm (FAB-MS : m/z = 887 - M+H+)
Je možná rovněž alternativní cesta stavby sloučeniny z příkladu 8 . Při tom se uhlohydrátová jednotka z příkladu 1 spojí nejprve s derivátem lysinu s chráněným postranním řetězcem.
8a) y[alfa_[0-(3-0-methyl^-L-fukopyranosyl)-4-hydroxyfenylamino-thiokarbonyl]-NePsil°n-[fluorenyl-9-methoxykarbonyl]-L-lysin
Roztok 6,8 g (25,3 mmol) p-aminofenyl-3-0-methyl-β-L-fukopyranosidu (příklad 1) V 600 ml směsi dioxanu a vody 1:1 se za míchání smísí se 2,72 ml thiofosgenu (1,4 ekvivalentu) Po 10 minutách se přidá 26 ml ethyl45 • · · · · · • · * · · · · • · · · · · ·· · » ···«··· diisopropylaminu, reakční směs se míchá po dobu 5 minut při teplotě místnosti a potom se ve vakuu zahustí na objem 150 ml, načež se přidá 800 ml dichlormethanu a fáze se oddělí. Organická fáze se dvakrát promyje vodou, vysuší se pomocí bezvodého síranu sodného a zahustí se. Získaný zbytek se rozmíchá se 200 ml methyl-terč.-butyletheru a 200 ml petroletheru a odsaje se. Získá se takto 7,26 g (92 %) isothiokyanátu.
2,92 g (9,4 mmol) získaného isothiokyanátu se rozpustí ve 200 ml směsi dioxanu a vody 1:1 a smísí se se 3,11 g (0,9 ekvivalentu) NePsil°n-(fluorenyl-9-methoxykarbonyl)-lysinu a se 3,2 ml ethyl-diisopropylaminu. Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, ve vakuu se zahustí a získaný zbytek se vyjme do vody. Upravením hodnoty pH pomocí 1 N kyseliny chlorovodíkové na 2 se produkt vysráží a po 30 minutách se odsaje. Získaný zbytek se suspenduje v dichlormethanu a rozpouštědlo se dvakrát odsaje. Po vícenásobném promytí diethyletherem a petroletherem se získá 5,3 g (92 %) cílového produktu (DC : acetonitril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2,
Rf = 0,69) .
8b) 20 (S) -20-0 - {Na-'-^?a- [0- (3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl) -4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-NePsil°n-[fluorenyl- 9-methoxykarbonyl]-L-lysin-L-vály1}-camptothecin
1,2 g (1,76 mmol) Nalfa-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-NePsllon-[fluorenyl-9-methoxykarbonyl]-L-lysinu (příklad 8a) a 675 mg (1,2 mmol) sloučeniny III.b)L se rozpustí v 50 ml dimethylf ormamidu , směs se ochladí na teplotu 0 °C a potom se smísí se 346 mg (1,8 mmol) N-ethyl-N’-(dimethylaminopro* · pyl)-karbodiimid hydrochloridu a za míchání se nechá přes noc stoupnout teplota na teplotu místnosati. Rozpouštědlo se potom ve vakuu odpaří a získaný zbytek se rozmíchá s vodou. Čistí se pomocí mžikové chromatografie na silikagelu, přičemž se startuje s acetonitrilem jako pohyblivou fází a později se přejde na směs acetonitril/voda 50 : 1 . Po zahuštění odpovídajících frakcí se získá 1,06 g (76 %) cílového produktu (DC : acetonitril/voda 20 : 1 , R^ = 0,34) .
Deblokace a následující převedení na hydrochlorid se provádí analogicky jako je popsáno v příkladě 1 .
Příklad 9
20(S)-20-0-{Nalfa-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-L-histidyl-L-valyl}-camptothecin, hydrochlorid :
Sloučenina se vyrobí analogicky, jako je popsáno v příkladě 2 , přičemž se vychází z nepolárního diastereo• ·
• · · · · • · · · · · · • · · · · · ·· · · ······ meru 20-0-valyl-camptothecin, trifluoracetátu (III.b)L).
Poměr diastereomerů se může zjistit analytickou HPLC.
Další čištění nepolárního diastereomerů s L-konfigurací valinu (> 20 : 1) je možno dosáhnout popřípadě krystalisací z methylalkoholu.
Podmínky HPLC :
Dělící sloupec : Macherey & Nagel 250 x 4 mm Nucleosil 100-7 C 18 AB
Pohyblivá fáze A : H2O + 0,1 Μ KH2PO4
Pohyblivá fáze B : acetonitril/voda 4 : 1 + 0,02 Μ KH2PO4 Tok : 1 ml/min
Inj.-obj em : 15 μ1.
V ^H-NMR-spektru vykazuje čistý diastereomer pouze sadu signálů, například pro oba singuletty aromatických H-atomů v camtothecin-B-kruhu, popřípadě D-kruhu.
Diastereomer s L-valinem :
400-MHz-1H-NMR(CD2C12/CD3OD 1:1):5 s C-H(B-kruh) 8,58 ppm (překryto CH arom. histidinu) s C-H(D-kruh) 7,35 ppm (DC : acetonitiril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2, Rf = 0,36) (FAB-MS : m/z = 896 = M+H+) .
A Q ······ ··»<··· — 4+ ο — ···· ·· · • · 9 9 9 9 9 9 9 9 9 * · ··
Příklad 10
20(S)-20-0-{Nab^a-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbony1]-L-arginyl-L-leucyl}-camptothecin :
Produkt se vyrobí analogicky jako je popsáno v příkladě 5 . Při tom se na stupni 20-0-leucyl-camptothecinu Il.b) použije nepolární diastereomer II.b)L .
(DC : acetonitiril/voda/ledová kyselina octová 5 : 1 : 0,2, Rf = 0,4) (FAB-MS : m/z = 929 = M+H+) .
Za HPLC-podmínek, uváděných v příkladech 8 a 9 , se mohou odlišit diastereomery z příkladů 5 a 10 .
Claims (9)
- PATENTOVÉ NÁROKY1.Glykokonjugáty camptothecinu obecného vzorce I ve kterémRl značí stericky náročný nepolární postranní řetězec aminokyseliny aR značí basický postranní řetězec aminokyseliny, jakož i jejich soli, stereoisomery a směsi stereoisomerů.
- 2. Glykokonjugáty camptothecinu podle nároku 1 obecného vzorce 1 , ve kterémR1 značí rozvětvený alkylový zbytek s až 4 uhlíkovými • ·- 50 at omy aΊ 3 značí zbytek vzorce -(CH2)n-R , přičemžR; značí skupinu -NH2 ,NH NH z ý ΛN nebo NH NH2 a n značí číslo 1 až 4 , jakož i jejich soli, stereoisomery a směsi stereoisomerů.
- 3. Glykokonjugáty camptothecinu podle nároku 1 obecného vzorce I , ve kterémR1 značí rozvětvený alkylový zbytek vzorcůCHCH,CH,CH, neboCH,CH,R^ značí zbytek vzorců ,NH neboNH-(CH2)4-NH2 , .-CH< N-(CH2)—NH NH jakož i jejich soli, stereoisomery a směsi stereoisomerů.
- 4. Způsob výroby glykokonjugátů obecného vzorce I ve kterémRl značí stericky náročný nepolární postranní řetězec aminokyseliny aR značí basický postranní řetězec aminokyseliny, jakož i jejich solí, vyznačující se tím, že se nechá reagovat isothiokyanát vzorce II ch3 s peptidyl-camptothecinem obecného vzorce III , nesoucím popřípadě v postranním řetězci ochrannou skupinu, • 4 4 4 4 44 44 444 4 4 4 4 4 444 44 4444444 44 44 (Hi) ve kterém má R^· výše uvedený význam aR má význam výše uvedeného basického zbytku R , který kromě toho může na basické skupině nést v chemii peptidů obvyklou ochrannou skupinu, na glykokonjugát obecného vzorce IVO1 2 ’ ve kterem maj1 R a R výše uvedený význam, • · · · • · · · • · · · • « · · a popřípadě přítomné ochranné skupiny aminoskupin postranních řetězců se pomocí obvyklých metod odstraní a získané sloučeniny se popřípadě převedou na požadované solí.
- 5. Způsob výroby glykokonjugátů obecného vzorce I nebo jejich solí, vyznačující se tím, že se nechá reagovat isothiokyanát vzorce IICH3 s popřípadě vhodně chráněnou terminální basickou aminokyselinou obecného vzorce V h2n^cooh (V) ve kterém značí R basický postranní řetězec aminokyseliny, jejíž basická skupina může být chráněná, na konjugát aminokyseliny obecného vzorce VIA. Λ.,N R HOMeCOOH (VI)- 54 ve kterém má R výše uvedený význam, tato se potom nechá reagovat s konjugátem obecného vzorce VII aminokyseliny (VII) ve kterém má výše uvedený význam, ochranné skupiny postranních řetězců se popřípadě odštěpí a získané sloučeniny se popřípadě převedou na vhodnou sůl.
- 6. Glykokonjugát camptothecinu podle nároku 1 obecného vzorce I , kterým je 20(S)-20-0-{Na^^a-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-L-lysyl-L-valyl}-camptothecin vzorce a jeho soli.
- 7. Glykokonjugát camptothecinu podle nároku 1 obecného vzorce I , kterým je 20(S)-20-0-{Nal^a-[0-(3-0-methyl-p-L-fukopyranosyl)-4-hydroxy-fenylamino-thiokarbonyl]-L-histidyl-L-valyl}-camptothecin vzorce a j eho soli.
- 8. Použití glykokonjugátů obecného vzorce I podle nároku1 pro výrobu léčiv.
- 9. Léčivo, vyznačující se tím, že obsahuje glykokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1 .Relativní objem nádoru (%)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ19994017A CZ401799A3 (cs) | 1998-05-04 | 1998-05-04 | Glykokonjugáty 20(S)-camptothecinu, způsob jejich výroby, jejich použití a léčiva tyto látky obsahující |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ19994017A CZ401799A3 (cs) | 1998-05-04 | 1998-05-04 | Glykokonjugáty 20(S)-camptothecinu, způsob jejich výroby, jejich použití a léčiva tyto látky obsahující |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ401799A3 true CZ401799A3 (cs) | 2000-05-17 |
Family
ID=5467565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19994017A CZ401799A3 (cs) | 1998-05-04 | 1998-05-04 | Glykokonjugáty 20(S)-camptothecinu, způsob jejich výroby, jejich použití a léčiva tyto látky obsahující |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ401799A3 (cs) |
-
1998
- 1998-05-04 CZ CZ19994017A patent/CZ401799A3/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6156754A (en) | Glycoconjugates of modified camptothecin derivatives (A-or B-ring linkage) | |
| JP6539729B2 (ja) | ペプチド−薬物複合体 | |
| US6492335B1 (en) | Glycoconjugates from modified camptothecin derivatives (20-O-linkage) | |
| TW201004647A (en) | Novel dual targeting antitumoural conjugates | |
| US6506734B1 (en) | 20(S) camptothecin glycoconjugates | |
| US20020173468A1 (en) | Modified cytostatic agents | |
| JP2006520741A (ja) | 生物医学的及び医学的使用のための新規な両親媒性（ａｍｐｉｐｈｉｌｉｃ）フッ素化炭化水素分子ベクター | |
| CA2676105A1 (en) | The tetracyclic anthraquinones possessing anti-cancer effect | |
| CA3193485A1 (en) | Peptidic conjugates of sn38 useful in the treatment of cancer | |
| EP1235595B1 (en) | Integrin-mediated drug targeting | |
| CZ401799A3 (cs) | Glykokonjugáty 20(S)-camptothecinu, způsob jejich výroby, jejich použití a léčiva tyto látky obsahující | |
| CA2366632A1 (en) | Method for producing glyco-conjugates of 20(s)-camptothecin | |
| RU2184122C2 (ru) | Гликоконъюгаты 20(s)-камптотецина | |
| DE19815812A1 (de) | Modifizierte Cytostatika | |
| WO2001058932A1 (de) | Glycokonjugate von cytostatika | |
| US20020173452A1 (en) | Cytostatic-glycoconjugates having specifically cleavable linking units | |
| KR20010012558A (ko) | 20(ｓ) 캄프토테신 당결합체 | |
| DE19813137A1 (de) | Glycokonjugate von 20(S)-Camptothecin | |
| DE19801037A1 (de) | Glycokonjugate von 20(S)-Camptothecin | |
| WO1998015573A1 (de) | 20-o-verknüpfte glycokonjugate von camptothecin | |
| MXPA99002650A (en) | Glycoconjugates of modified camptothecin derivatives (a- or b-ring linkage) | |
| IL119334A (en) | Carbohydrate modified cytostatics and medicaments containing them |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |