CN1780906A - 担子菌、担子菌提取组合物、保健食品和免疫强化剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供了担子菌，其是一种具有极好免疫强化作用等的新蘑菇，以及提供了担子菌提取组合物，和使用该担子菌提取组合物的保健食品和免疫强化剂。担子菌没有担子形成潜力。特别地，担子菌是担子菌－X：FERM BP－10011。用包含选自水和亲水溶剂中至少一种溶剂的提取溶剂来从它们提取担子菌提取组合物。

Description

担子菌、担子菌提取组合物、保健食品和免疫强化剂

技术领域

本发明涉及担子菌，其是一种新的蘑菇(蘑菇和其它真菌在本文中统称为蘑菇)并具有诸如免疫调节作用的特性，以及提供了担子菌提取组合物、以及使用了担子菌提取组合物的保健食品和免疫强化剂。

背景技术

蘑菇自古以来即被用作具有独特风味和气味的食物原料。它们也用作具有生理功能激活作用的中草药，如增强免疫力、抗微生物活性、控制生物节律、并预防衰老、或用作某些类型疾病的民间药物。进行的研究涉及蘑菇的药理学成分，从而发现了显示出抗菌和抗病毒活性、强心活性、降低血糖活性、降低胆固醇活性、抗血栓活性、和抗高血压活性的成分。

已提出了组合物可用作药物、保健食品等，而且组合物包括了脱水产品的混合物或两种或更多蘑菇的提取物，所述蘑菇选自担子菌类中的可食用蘑菇，尤其是Lentinus edodes(Berk.)Sing.，Pleurotus ostreatus(Jacq.ex Fr.)Quel.，Pholiota nameko(T.Ito)S.Ito et Imai，Grifola frondosa，Flammulina velutipes(Curt.ex Fr.)Sing.，和Hypsizigus marmoreus(参见日本专利申请公开No.1999-152230)。

近年来，伞菌属(Blazei murill)(下文中称作伞菌属蘑菇)、裂蹄木层孔菌(Phellinus linteus)(Berk.et Curt)Tehg(下文中称作mesimacobu)等由于具有抗癌活性而引起了人们的关注。

例如，已经提出了高产量培养诸如mesimacobu的木层孔菌属蘑菇的方法(参见日本专利申请公开No.1999-262329)、培养mesimacobu菌丝体来获得大量mesimacobu菌丝体的方法(参见日本专利申请公开No.2001-178448)、以及用超声波高效提取伞菌属蘑菇所含成分的方法(参见日本专利申请公开No.2001-278805)。

如上所述，由于具有抗癌活性等而使各种蘑菇引起了关注。然而，它们并未确证有效，而且期望具有更好效果的蘑菇出现。

发明内容

根据上述情况完成了本发明。本发明的目的是提供担子菌，其是一种具有极好免疫强化作用等的新蘑菇，以及本发明提供了担子菌提取组合物、和使用了担子菌提取组合物的保健食品和免疫强化剂。

为了实现以上目的，本发明的第一个方面在于担子菌，其特征在于其没有担子形成潜力。

本发明的第二个方面在于第一个方面的担子菌，其特征在于担子菌是担子菌-X FERM BP-10011。

本发明的第三个方面在于担子菌提取组合物，其特征在于用包含选自水和亲水溶剂中至少一种溶剂的提取溶剂从担子菌中提取，所述担子菌没有担子形成潜力。

本发明的第四个方面在于第三个方面的担子菌提取组合物，其特征在于担子菌是担子菌-X FERM BP-10011。

本发明的第五个方面在于第三个或第四个方面的担子菌提取组合物，其特征在于通过加热和提取来获得担子菌提取组合物。

本发明的第六个方面在于第三至第五个方面的任一个方面的担子菌提取组合物，其特征在于通过加压和提取来获得担子菌提取组合物。

本发明的第七个方面在于保健食品，其特征在于其包含作为活性成分的提取自没有担子形成潜力的担子菌的担子菌提取组合物。

本发明的第八个方面在于第七个方面的保健食品，其特征在于担子菌是担子菌-X FERM BP-10011。

本发明的第九介方面在于第七个方面或第八个方面的保健食品，其特征在于保健食品是选自饮料形式、点心形式、浓缩提取物形式、粉末、颗粒、片剂、和胶囊的形式。

本发明的第十个方面在于免疫强化剂，其特征在于其包含作为活性成分的提取自没有担子形成潜力的担子菌的担子菌提取组合物。

本发明的第十一个方面在于第十个方面的免疫强化剂，其特征在于担子菌是担子菌-X FERM BP-10011。

本发明的第十二个方面在于包含菌丝体的可食用的担子菌，所述的菌丝体是通过培养第一或第二方面的担子菌形成的。

上述本发明的担子菌-X包含大量多糖(β-D-葡聚糖)，并有高抗氧化活性、OH基团消除活性，和免疫调节作用。该生物体优选在用于保健食品和免疫强化剂时，能预期显示出药理学功效，如预防衰老。

附图说明

图1显示了在测试实施例1中测量的结果图。

图2显示了在测试实施例2中测量的结果图。

图3显示了在测试实施例3中测量的结果图。

图4显示了在测试实施例4中的给药方式示意图。

图5显示了在测试实施例4中测量的结果图。。

实施本发明的最佳方式

尽管观察到了鸟嘴状过程(钳形)，但是本发明所称的担子菌为一种担子菌，其具有这样的性质，即其没有担子形成潜力。在这些方面，该担子菌不同于其它担子菌。即，甚至在培养时，担子菌也不形成担子，仅形成菌核(菌丝体)。

该担子菌是从自然界微生物筛选而获得的。其分离并作为担子菌-X(登记号：FERM BP-10011)而保藏于国际专利生物体保藏机构，国家先进工业科学技术研究所。

本发明所述的生物体不形成分生孢子，即没有无性传代。

即，当该生物体培养在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上时，培养的菌丝呈钳形、光滑，但不形成分生孢子，不形成子实体。当观察菌落表面的形状和颜色时，菌落中形成了浅粉色菌丝体。如果从接种位置环形生长的菌落中形成了许多菌丝体，菌丝体会通过菌丝束相互连接。菌落背部颜色为浅粉色。

当该生物体培养在葡萄糖-干酵母琼脂培养基上时，培养的菌丝呈钳形、光滑，但不形成分生孢子，不形成子实体。当观察菌落表面的形状和颜色时，菌落中形成了浅粉色到白色的菌丝体。以接种位置为中心形成了厚度5至6mm的菌丝体。菌落背部颜色为浅粉色到白色。

例如，本发明生物体的最佳生长条件为pH 5.0至6.0，温度22至26℃。例如，生长范围为pH 4.0至7.5，温度5至30℃。

本发明所述的生物体担子菌可由普通方法培养，而其培养方法并不局限于此。

本发明的担子菌提取组合物可以是提取自培养担子菌而获得的菌丝体的任何细胞内容物，而提取方法并不局限于此。要从菌丝体高效提取细胞内容物，优选破坏细胞壁，如通过冷冻菌丝体，如果需要，融化冷冻体，然后通过搅拌器等工具压碎它们，随后提取。提取方法并不局限于此，但提取优选于室温，或在加热条件下、或加压，用水、低级醇等，或者进一步包括酸、碱或其它添加剂的提取溶剂来进行。一般而言，压碎的产物在热水中慢慢煮沸提取，或者压碎的产物与水或醇、或包含碱的水混合加压提取，如以100MPa至700MPa的等级加压，优选300MPa至600MPa。

将会描述在热水中提取的实例。例如，冷冻的担子菌-X菌丝体在室温解冻，用搅拌器压碎。例如，压碎的担子菌-X菌丝体与用作提取溶剂的水的比例设为1∶5。例如，将50g压碎的担子菌-X菌丝体置于玻璃瓶中，加入250ml水，用盖子盖上玻璃瓶。盘底铺毛巾，将水浇在毛巾上，将充满压碎菌丝体的玻璃瓶置于毛巾上，接着加热沸腾。沸腾后，持续加热90分钟。冷却后，固液分离从而获得担子菌-X提取物。例如，提取物的pH为6.3至6.5。

必要时浓缩所得提取物，从而获得担子菌提取组合物。浓缩提取物并不受限制但可以如以下方式进行：

将所得担子菌-X提取物移入烧杯，加热并蒸发浓缩。此时，提取物显示出浅米色至褐色，并开始剧烈冒泡。然而，继续进一步蒸发浓缩，在如浓缩提取物变成pH 4.9、密度1.25g/cm³的焦油状时完成浓缩。浓缩提取物发出酱油般的气味。其时在该点，来自担子菌-X菌丝体的浓缩提取物的产率平均为12％。

冷却时，由此获得的浓缩提取物变得非常粘。因此，浓缩提取物需要在浓缩完成的同时转移进入储存容器。实际上优选冷却转移进入储存容器的浓缩提取物，然后储存在冷冻或冰冻状态。

本发明的担子菌提取组合物可用于保健食品或药物，如免疫强化剂，以饮料、点心、浓缩提取物、粉末、颗粒、片剂、或胶囊的形式。加入担子菌提取组合物的量可以按需根据应用来设定，其并不受限制。

另外，培养本发明所述生物体担子菌获得的菌丝体可用于食用目的，其有极好的味道和感官感觉。

本发明的担子菌在培养时根据其培养所在环境来形成菌丝体。即，当担子菌培养于预定形状的容器中时，能得到容器形状的菌丝体。因此，能获得易用于食用目的的可食用的担子菌。所得可食用担子菌可用作生的食品原料，或可以冷冻或干燥状态用作食品原料，但优选用作生原料或冷冻原料。

关于培养方法，如前述通过普通方法能培养担子菌，而培养方法不局限于此。例如，琼脂培养基、锯屑培养基、或液体培养基，其添加了合适的营养源并灭菌，用本发明的生物体所培养的菌株或生物体种子液无菌接种，并在合适的温度条件下培养接种物，由此可获得担子菌-X的菌丝体。

烹调用作食品原料的可食用担子菌的方法并不局限于此。然而，可以与普通蘑菇相同的各种方式烹调可食用担子菌，如炖、煎、烤、炸，而不受任何限制。由于可食用担子菌带来极好的感官感受而且没有特有的味道，它可广泛用在各种制成的食品中。

毫无疑问，可以设想食用可食用担子菌能达到食用担子菌提取组合物一样的效果。

具体实施方式

现在将参考以下提供的实施例来更具体的描述本发明。实施例1至4为担子菌-X的培养实例，而实施例5至9为提取实例。

实施例1.菌丝体分离

(1)制备培养基

根据表1所示的配方制备PSA和PDA培养基。每种培养基分装于试管或锥形烧瓶中。然后使用硅盖(或棉花塞)，塞住的容器在高压锅中于121℃进行高压蒸汽灭菌20分钟。然后，灭菌后趁热倾斜试管以形成斜面培养基。另一方面，让锥形烧瓶直立形成平面培养基。

表1

PSA培养基	PDA培养基
		煮沸20分钟的200g马铃薯提取物	煮沸20分钟的200g马铃薯提取物
20g蔗糖	20g葡萄糖
		15g琼脂	15g琼脂
总量1升	总量1升

(2)菌丝体分离

较大的担子菌-X菌丝体手工破碎，用经过火焰灭菌并冷却的解剖刀将担子菌-X部分切片。用经过火焰灭菌并冷却的镊子将担子菌-X薄片各自接种到(1)的PSA和PDA斜面培养基上。该步骤在无菌箱或超净台中在无菌条件下进行。

(3)培养

在温箱中24℃培养接种物，在24至48小时中发现产生了生物体。生物体产生之后，继续于24℃培养。菌丝在琼脂培养基上生长14天。

实施例2.在锯屑培养基上培养产生菌丝体

(1)培养生物体种子液

向1升锯屑、15g脱脂糠、15g麦麸和5g SANPEARL(菌丝活化剂，Nippon纸业)中加水，剧烈搅动混合物。调节该培养混合物使之在紧抓时有水渗出(混合物中的含水量：约70％)，由此制备锯屑培养基。将该培养基装入锥形烧瓶中，用硅盖盖上。然后，将锥形烧瓶在高压锅中于121℃进行高压蒸汽灭菌40分钟。灭菌后24小时，在无菌箱中通过无菌操作，将实施例1中斜面培养基上培养的担子菌-X菌丝接种到锯屑培养基中。用灭菌的三角刀切下斜面培养基的一部分来进行接种使得不对菌丝造成损伤。接种密度为锯屑培养基表面积的20至30％。接种物于24℃培养，3天内(最迟5天内)产生生物体。过了30天后，锥形烧瓶中的锯屑培养基中长满了生物体。

(3)产生菌丝体

用与(1)中相同的方式制备锯屑培养基。将该培养基置于聚丙烯瓶中，塞住，在高压锅中于121℃进行高压蒸汽灭菌40分钟。灭菌后24小时，无菌处理后在无菌箱中通过无菌操作，将(1)中培养的生物体种子液接种于聚丙烯瓶中的锯屑培养基中。接种密度是使锯屑培养基表面几乎被接种物覆盖。接种物于24℃培养，48小时内产生生物体。过了60天后，聚丙烯瓶中的锯屑培养基全部长满了菌丝。又过了40至50天后，菌丝扩散到了聚丙烯瓶的内壁上，形成菌丝束。进一步继续培养时，形成了菌丝体。

实施例3.在液体培养基上培养产生菌丝体

将马铃薯(200g)切成1平方厘米大小，用纯水煮沸，接着加热20分钟。冷却后，固液分离，将蒸馏水加入到所得的马铃薯沥出物和20g蔗糖中以达到1升的总量，由此制备液本培养基。该液体培养基以各5ml的量分装于试管中。用硅盖盖位试管，灭菌(于121℃用高压蒸汽灭菌20分钟或于100℃用气压蒸汽灭菌8小时)。然后，无菌处理后在无菌箱中通过无菌操作接种液体培养基，使得实施例1中斜面培养基上培养的担子菌-X的较低端薄片接触液体培养基。接种物于24℃培养时，48小时内产生生物体。经过进一步培养，与液体培养基接触形成了菌丝体。

实施例4.在琼脂培养基上培养产生菌丝体

将马铃薯(200g)切成1平方厘米大小，用纯水煮沸，接着加热20分钟。冷却后，固液分离，将蒸馏水加入到所得的马铃薯沥出物、20g蔗糖和1g(0.1％)琼脂中以达到1升的总量，由此制备琼脂培养基。通常，要制备琼脂培养基，加入1.5至2.0％琼脂(根据1升最终的培养基要15至20g)，而加入0.1％琼脂使培养后菌丝体和琼脂培养基容易分离，并保持液体培养基的物理强度，这是因为担子菌-X薄片倾向于从液体培养基中沉淀出来。该0.1％琼脂培养基以各5ml的量分装于试管中。用硅盖盖住试管，然后于121℃用高压蒸汽灭菌20分钟。然后，将实施例1中斜面培养基上培养的担子菌-X切片，无菌处理后在无菌箱中通过无菌操作接种到0.1％琼脂培养基中。接种物于24℃培养时，48小时内产生生物体。经过进一步培养，形成了菌丝体。

实施例5.通过煎煮制备浓缩的担子菌-X提取组合物

要使菌丝细胞壁破碎并使细胞内容物容易滤出，冷冻或冰冻新鲜担子菌-X的菌丝体。室温融化冰冻的担子菌-X菌丝体，并用搅拌器压碎。将压碎的担子菌-X菌丝体(50g)置于玻璃瓶中，加入250ml水，用盖子盖上玻璃瓶。盘底铺毛巾，将水浇在毛巾上，将充满压碎菌丝体的玻璃瓶置于毛巾上，接着加热沸腾。沸腾后，持续加热90分钟。冷却后，固液分离从而获得担子菌-X提取组合物。提取物的pH为6.3至6.5。

将所得担子菌-X提取组合物移入烧杯，通过加热蒸发浓缩。提取组合物显示出浅米色至褐色，并开始剧烈冒泡。然而，继续进一步蒸发浓缩，在浓缩提取组合物变成pH 4.9、密度1.25g/cm³的焦油状时完成浓缩。浓缩担子菌-X提取物发出酱油般的气味。其时在该点，来自担子菌-X菌丝体的浓缩担子菌-X提取组合物的产率平均为12％。担子菌-X提取组合物在其冷却时变得很粘。因此，在浓缩完成的同时，将浓缩物转移进入储存容器，冷却后，储存在冷冻或冰冻状态。

实施例6.通过煎煮制备担子菌-X提取组合物

要使菌丝细胞壁破碎并使细胞内容物容易滤出，冷冻或冰冻新鲜担子菌-X的菌丝体。然后在室温融化冰冻的担子菌-X菌丝体。

融化后将担子菌-X菌丝体(20g湿重)称重，切成0.5平方厘米大小，置于烧杯中。加入100ml水后，烧杯中的内容物在90℃缓慢蒸煮，煮沸溶液直至剩下原始总量的一半。然后，加水恢复原始总量。纱布过滤混合物以除去固体。然后，封存滤出液并储存在冰箱中以用作实施例6的担子菌-X提取组合物。

实施例7.通过高压处理制备担子菌-X提取组合物

将用与实施例6中相同方式处理的担子菌-X菌丝体(20g湿重)装入乙烯袋，并加入100ml水。然后，将乙烯袋减压抽气并密封。将乙烯袋置于超高压设备(产自Kobe钢铁；能在700MPa下进行处理)中，用400MPa液体静压处理10分钟。纱布过滤处理的混合物，滤出液储存在冷冻状态下以用作实施例7的担子菌-X提取组合物。

实施例8.通过高压处理制备担子菌-X提取组合物

用与实施例7中相同方式制备组合物，不同之处在于在600Ma液体静压下处理，该组合物用作实施例8的担子菌-X提取组合物。

实施例9.通过高压处理制备担子菌-X提取组合物

用与实施例8中相同方式制备组合物，不同之处在于用100ml 0.1％KCl水溶液代替100ml水，该组合物用作实施例9的担子菌-X提取组合物。

测试实施例1.测量活性氧(羟基基团)消除活性

利用H₂O₂/UV作为羟基基团产生源并将二甲基吡咯啉-N-氧化物(DMPO)作为旋转陷波器，通过ESR(电子旋转共振)测量消除羟基基团的活性。

将DMPO(400mM)和20mM过氧化氢加入到恒定量的实施例6至9中每一种担子菌-X提取组合物中，加入纯水以达到300μl总量。混合物用245nm波长的UV(带宽20nm)照射，观察所得DMPO羟基基团加成产物的ESR信号。根据信号强度的改变，确定了提取组合物的羟基基团消除活性。结果如图1所示。

如图1所示，担子菌-X提取组合物的量越大，羟基基团消除率变得越高。实施例7获得了最高的羟基基团消除率，该实施例涉及通过在水溶剂中以400MPa高压处理而提取。

测试实施例2.测量活性氧(超氧化物阴离子基团)消除活性

利用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统作为超氧化物阴离子基团产生源并将DMPO作为旋转陷波器，根据旋转陷波法通过ESR(电子旋转共振)测量消除超氧化物阴离子基团的活性。

将DMPO(0.3mM)、0.5mM次黄嘌呤和1mM二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)加入到恒定量的实施例6至9中每一种担子菌-X提取组合物中，加入0.2M PBS以达到300μl总量。以0.1单位/ml的浓度加入黄嘌呤氧化酶，观察所得DMPO-OOH(DMPO的超氧化物阴离子基团加成产物)的ESR信号。根据信号强度的改变，确定了提取组合物的消除活性。结果如图2所示。

如图2所示，提取组合物的量越大，超氧化物阴离子基团消除率变得越高。实施例7获得了最高的超氧化物阴离子基团消除率，该实施例涉及通过在水溶液中以400MPa高压处理而提取。这些结果与测试实施例1的结果相似。

测试实施例3.测量活性氧(羟基基团)消除活性

利用Fenton反应作为羟基基团产生源并将DMPO作为旋转陷波器，通过ESR旋转陷波法测量消除羟基基团的活性。

将二甲基吡咯啉N-氧化物(DMPO)(20mM)、10mM过氧化氢和0.1mM FeSO₄加入到恒定量(10或20μl)的以在实施例6相同条件下煎煮提取干燥的伞菌(块菌产物，日本)而得的提取物、以在实施例6相同条件下煎煮提取干燥的reishi蘑菇(Ganoderma lucidum(leyss.ex Fr)Karst.；块菌产物，日本)而得的提取物、和实施例6至9中每一种担子菌-X提取组合物中的每一种中。进一步加入纯水以达到300μl总量，所得的混合物用作测定样品。根据添加FeSO₄后一分钟DMPO-OH(DMPO的羟基基团加成产物)信号强度的改变，确定了消除活性。结果如图3所示。

如图3所示，涉及通过煎煮提取的实施例6没有成功评估出具体的消除活性，因为实施例6的提取物在低浓度时与铁离子相互作用，reishi蘑菇提取物也一样，这造成增加而不是消除DMPO-OH信号。当实施例6的提取物在以对信号产生最低影响的高浓度使用，并与其它提取物比较时，实施例6的提取物显示出与伞菌提取物相当的消除活性。涉及高压处理而提取的实施例7至9比伞菌和reishi蘑菇得到更高的消除活性。

测试实施例4.测量免疫调节作用

使用的小鼠是CLEA日本C3H/HeJ小鼠。C3H/HeJ小鼠在衰老时会显出退化的免疫力。在本研究中，“退休鼠”(20至30周龄)被用作老年鼠。实施例5的浓缩担子菌-X提取组合物被用作担子菌-X。对于该测定，来自St.Marianna大学药学院医药科学研究所第3学部应用药学实验室的副教授Akira Yanagawa参与合作并进行了无偿的工作。

将退休鼠分成10只鼠的组，并分成每日一次以0.2ml剂量给予担子菌-X提取组合物的担子菌-X治疗组，和每日一次接受0.2ml生理盐水的对照组。用胃管连续14天口服给予担子菌-X或生理盐水。

治疗开始后十天，0.1ml 10％用磷酸缓冲生理盐水(PBS)稀释的羊红血细胞(SRBC)(即，细胞计数2×108)腹膜内给予小鼠。过了4.5天后，去除鼠脾细胞，并用Jerne法计数空斑形成细胞(PFC)。PFC计数与对照组的作比较。对照组的PFC计数测量结果如表2所示，担子菌-X治疗组的PFC计数测量结果如表3所示。担子菌-X或生理盐水和SRBC的给药方式示意图如图4所示。测定结果如图5所示。

表2

编号	细胞悬液中的细胞计数(×106个细胞/ml)	接种于皮氏培养皿的细胞悬液(ml)	PFC(/皮氏培养皿)	PFC(/106个细胞)
							个数	平均	SD
				1	31	0.2				0	0
2	51.25	0.03	10.33				6.72
				3	59.75	0.03				198.98	110.98
4	53.65	0.03	150.68				93.59
				5	76.15	0.03				162.54	71.13
								75.399	62.98075
				6	42	0.2				0	0
7	62.65	0.03	148.76				79.13
				8	26.25	0.03				126.36	160.36
9	38.25	0.03	203.42				177.12
				10	63.45	0.03				104.64	54.96

*PFC/皮氏培养皿/(接种于皮氏培养皿的细胞悬液×细胞悬液中的细胞计数)＝PFC个数

表3

编号	细胞悬液中的细胞计数(×106个细胞/ml)	接种于皮氏培养皿的细胞悬液(ml)	PFC(/皮氏培养皿)	PFC(/106个细胞)
							个数	平均	SD
				1	20	0.03				263.33	438.88
2	30.75	0.2	8078.4				1077.12
				3	55.25	0.2				4125.6	373.36
4	41.5	0.03	483				387.95
				5	32	0.03				565.33	588.89
								1345.9	1495.324
				6	43.5	0.03				826.34	633.21
7	62	0.2	6236.42				502.9
				8	53.45	0.03				7326.6	4567.77
9	36.5	0.2	9236.6				1265.53
				10	79.75	0.03				8672	3626.39

如表2和3所示，担子菌-X治疗组显示PFC值为1345.9而且SD值为1495.324，其约为对照组的20倍，对照组显示PFC平均值为75.399而且SD值为62.98075。根据斯氏T检验中等量分布的两侧检验显示担子菌-X显著增加了PFC计数，其P＝0.023363(p＜0.05)。

本研究的实验证实浓缩的担子菌-X提取组合物相对于用生理盐水的对照组，显著增加了PFC计数。使用C3H/HeJ小鼠的PFC实验方法为通常使用的方法，其用作标准的筛选方法以测试免疫调节潜力。在年老鼠中PFC计数的增加显示浓缩的担子菌-X提取组合物增强了缺乏免疫时的免疫活性。

测试实施例5.癌症患者中免疫活性参数的进程

在用实施例5的浓缩担子菌-X提取组合物治疗期间监视癌症患者(病例1至病例6)中免疫活性参数的进程，从而调查浓缩的担子菌-X提取组合物的免疫强化效果。对于本研究，来自St.Marianna大学药学院医药科学研究所第3学部应用药学实验室的副数授Akira Yanagawa参与合作并进行了无偿的工作。

具体来说，将1ml纯水加入1ml浓缩的担子菌-X提取组合物中，并且每日在每餐后口服给药该混合物3次。该治疗持续3周。

对于免疫活性参数，在治疗前后以双盲为基础，让BML(BML公司)测量以下项目。结果如表4至15所示。患癌症的6个病人都出现不同的癌症下疳。由于计算这六个患者的平均值没有意义，因此枚举这些患者个体的值。

对于NK细胞：

两种颜色(表示NK细胞的活性估计值)

CD57+CD16+(％)NK活性 中等

CD57+CD16-(％)NK活性 微弱

CD57-CD16+(％)NK活性 强

CD57-CD16-(％)

对于全活化的NK细胞计数：

CD3+HLA-DR+(％)活化的CD3细胞

除此之外，白细胞分类计数中的白细胞计数、淋巴细胞(％)和淋巴细胞计数也进行了测量。另外，要求合作的患者在治疗期间每天记录症状的变化。

病例1.2000年7月，对乙状结肠癌患者进行全乙状结肠切除术。2002年，在对腔壁瘢痕疝手术期间确认有复发的癌。然后，经常发生肠梗阻。

表4

NK细胞系统

两种颜色(NK细胞的活性估计值)

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗后(LC)
			CD57+CD16+(％)NK活性 中等	6.6％(149)	8.0％(250)
CD57+CD16-(％)NK活性 微弱	17.6％(396)	17.6％(549)
			CD57-CD16+(％)NK活性 强	4.6％(104)	4.1％(128)
CD57-CD16-(％)	71.2％	70.3％

表5

对于全活化的NK细胞计数

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗后(LC)
			CD3+HLA-DR+(％)活化的CD3细胞	9.9％(223)	10.6％(331)

在病例1中，相对于治疗前水平，具有中等和微弱NK细胞活性的淋巴细胞显著增加。具有强NK活性的CD57-CD16+细胞显示治疗后的值为4.1％，明显显示出百分比降低。然而，实际淋巴细胞计数从104增加到128。关于作为测定完整NK细胞谱对象的CD3+HLA-DR+细胞，治疗后的值为10.6％(331)，显示出相对于9.9％(223)的治疗前值的增加。

病例2.在1999年10月进行了左乳腺癌全切除术。然后，癌复发了并在当时转移到肺、骨、脑和脑膜。即使在对脑膜扩散进行放射性治疗后，头盖神经麻痹使患者卧床不起。脊髓转移也造成进行性右上肢麻痹。对于终末期癌来说身体组织状况是非常差的。

表6

NK细胞系统

两种颜色(作为NK细胞的活性估计值)

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗后(LC)
			CD57+CD16+(％)NK活性 中等	12.6％(136)	9.4％(111)
CD57+CD16-(％)NK活性 微弱	5.76％(62)	6.8％(80)
			CD57-CD16+(％)NK活性 强	9.4％(102)	7.0％(83)
CD57-CD16-(％)	72.3％	76.8％

表7

对于全活化的NK细胞计数

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗后(LC)
			CD3+HLA-DR+(％)活化的CD3细胞	5.7％(62)	3.6％(43)

在病例2中，没有观察到浓缩担子菌-X提取组合物对NK细胞的影响。

病例3.在2001年8月，粘质囊腺癌和两侧转移的卵巢肿瘤需要进行切除。然后，癌的腹膜扩散和癌性炎症造成了大量腹积水。当前，由于癌症晚期，患者卧床不起。

表8

NK细胞系统

两种颜色(作为NK细胞的活性估计值)

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗后(LC)
			CD57+CD16+(％)NK活性 中等	5.5％	5.8％
CD57+CD16-(％)NK活性 微弱	21.8％	16.0％
			CD57-CD16+(％)NK活性 强	7.7％	6.8％
CD57-CD16-(％)	65.0％	71.4％

表9

对于全活化的NK细胞计数

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗后(LC)
			CD3+HLA-DR+(％)活化的CD3细胞	15.5％	13.1％

在病例3中，观察到了具有中等NK活性的CD57+CD16+淋巴细胞的轻微上升。

病例4.在2001年，对肺癌(鳞状细胞癌，T2N3M0)进行了化疗和放疗。然后，进行了左肺完全切除手术。2002年，转移的脑肿瘤(肺癌的脑转移)迫使进行了转移脑肿瘤切除术。然而，同年发生了多发性脑转移并发症。

表10

NK细胞系统

两种颜色(作为NK细胞的活性估计值)

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗后(LC)
			CD57+CD16+(％)NK活性 中等	5.3％	2.6％
CD57+CD16-(％)NK活性 微弱	1.1％	0.6％
			CD57-CD16+(％)NK活性 强	8.8％	5.9％
CD57-CD16-(％)	84.8％	90.9％

表11

对于全活化的NK细胞计数

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗后(LC)
			CD3+HLA-DR+(％)活化的CD3细胞	5.2％	4.7％

在该患者中，没有观察到浓缩担子菌-X提取组合物对NK细胞的增加作用。

病例5.在2001年10月，发现肺癌(腺癌)。诊断时，观察到转移到了右颈淋巴结，上腔静脉综合征更使向门淋巴结的转移复杂化。治疗包括右颈区域60Gy的放射和化疗(CBDCA+TAy 4个疗程)。上腔静脉仍完全阻塞，而且并发了癌性肋膜炎。尽管频繁向肺腔给药，但是减少的损伤只是轻微的。另外，最近通过CT确证了向脑部的转移。

表12

NK细胞系统

两种颜色(作为NK细胞的活性估计值)

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗后(LC)
			CD57+CD16+(％)NK活性 中等	12.1％(256)	17.5％(431)
CD57+CD16-(％)NK活性 微弱	36.5％(773)	44.6％(1099)
			CD57-CD16+(％)NK活性 强	4.3％(91)	6.0％(148)
CD57-CD16-(％)	47.0％	31.9％

表13

对于全活化的NK细胞计数

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗后(LC)
			CD3+HLA-DR+(％)活化的CD3细胞	22.2％(469)	32.3％(796)

在该病例中，所有NK细胞参数都增加了，口服给药浓缩担子菌-X提取组合物增加了NK细胞活性和NK细胞数量。该病例被认为是有极好反应的病例。

病例6.在2002年7月，发现了胃癌(胃腔中的Borrmann I型胃癌)。然而，患者不希望进行手术，进入了癌症晚期状态。

表14

NK细胞系统

两种颜色(作为NK细胞的活性估计值)

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗后(LC)
			CD57+CD16+(％)NK活性 中等	30.1％	30.9％
CD57+CD16-(％)NK活性 微弱	7.8％	7.1％
			CD57-CD16+(％)NK活性 强	6.2％	6.7％
CD57-CD16-(％)	55.9％	55.3％

表15

对于全活化的NK细胞计数

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗后(LC)
			CD3+HLA-DR+(％)活化的CD3细胞	9.9％	9.1％

在该病例中，CD57-CD16+(％)(NK活性强)和CD57+CD16+(％)(NK活性中等)增加。

甚至在晚期癌症患者中，出现了两种类型，仍旧能正常日常生活的患者和晚期阶段卧床不起的患者。浓缩担子菌-X提取组合物在摄取时，即使在前面的患者，即患有晚期癌症能进行日常生活的患者中也能预计可获得显著增强免疫力(增加NK细胞)的效果。在另一方面，猜想在癌症的病理发现和浓缩担子菌-X提取组合物之间有一些关联。在腺癌患者中，如病例1的结肠癌(腺癌)、病例3的粘质囊腺癌(一种类型的腺癌)、病例5的肺癌(腺癌)、和病例6的胃癌(腺癌)，在用浓缩担子菌-X提取组合物治疗后观察到了NK细胞参数的一些动向。然而，病例4同样是肺癌的案例，但病理诊断为带有鳞状细胞癌。在该患者中，浓缩担子菌-X提取组合物对于任何NK动态参数没有影响。

测试实施例6.癌症患者中免疫活性参数的进程(8个月治疗)

测试实施例5的病例3和病例1中，接着测试实施例5，1ml浓缩担子菌-X提取组合物和1ml纯水的混合物每日每餐后口服给药3次。在超过6个月治疗后的免疫学参数进程如表16和17所示。

病例3

表16

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗3周后(LC)	治疗8个月后(LC)
				WBC计数	3,100	3,000	2,900
RBC计数	3,420,000	3,340,000	3,430,000
				Hb	11.6	11.1	10.4
Ht	34.7	33.5	32.6
				CD57+CD16+(％)NK活性 中等	5.5％	5.8％	3.1％
CD57+CD16-(％)NK活性 微弱	21.8％	16.0％	13.4％
				CD57-CD16+(％)NK活性 强	7.7％	6.8％	5.3％
CD3+HLA-DR+(％)活化的CD3细胞	15.5％	13.1％	31.6％

在本患者中，中等至强的NK活性显示了晚期癌症的发展。

淋巴细胞逐渐减少。在另一方面，活化的淋巴细胞在3周治疗后没有显著的改变，但在8个月内增加至31.6％。因此，观察到了淋巴细胞(活化的)的增加与LAK(淋巴因子活化杀伤细胞)治疗后的相似。

病例1

表17

	治疗前(淋巴细胞计数：LC)	治疗3周后(LC)	治疗8个月后(LC)
				WBC计数	7,800	7,500	14,400
RBC计数	4,170,000	3,720,000	3,760,000
				Hb	11.5	10.1	9.1
Ht	35.0	30.5	28.9
				CD57+CD16+(％)NK活性 中等	6.6％(149)	8.0％(250)	5.0％
CD57+CD16-(％)NK活性 微弱	17.6％(396)	17.6％(549)	26.6％
				CD57-CD16+(％)NK活性 强	4.6％(104)	4.1％(128)	2.9％
CD3+HLA-DR+(％)活化的CD3细胞	9.9％(223)	10.6％(331)	22.7％

在本患者中，具有中等NK活性的CD57+CD16+在口服给药3周后增加了。而且，具有微弱NK活性的CD57+CD16-在口服给药8个月后增加了。另外，活化的CD3细胞在3周治疗后增加到10.6％，在8个月治疗后达到22.7％。

总之，相对于治疗前，NK活性在治疗后轻微增加。

值得注意的发现是CD3+HLA-DR+细胞，活化的T淋巴细胞标记，在口服给药后显著增加了。该结果通常是在LAK治疗后才能观察到的，毫无疑问，它被认为是担子菌-X提取组合物超乎寻常的结果。

在接受担子菌-X提取组合物长期治疗的患者中，活化的淋巴细胞显著增加与LAK治疗后所观察到的相似，尽管这只是2个患者中的结果。基于该发现，对于更多数量的患者的进一步研究似乎是必要的。然而担子菌-X提取组合物被认为有增加活化的T淋巴细胞和将免疫系统引导向排除晚期癌症患者的癌的潜力。

实施例10

按照以下菜谱使用可食用担子菌来烹调食物。在所有的食品中，可食用担子菌的感官感受是令人满意的，其味道好并和食物搭配得好。

1.意大利面

只要在橄榄油中微微煎炸刚刚煮过的意大利面和切片的可食用担子菌。然后，优选用诸如盐或胡椒粉的调味品来调味该混合物。烹饪好可食用担子菌，食物即成了。

2.比萨饼

将生的可食用担子菌薄片排在比萨饼生面团上，洒上奶酪，炉中烘烤该组合物。一旦奶酪均匀融化后，食物即成了。

3.炸调了味的肉或鱼

鸡肉或鱼肉预先用酱油或调味日本甜米酒调味。预先调味的鸡肉或鱼肉上撒上Erythronium japonicum淀粉，并稍沾打碎的蛋液。然后将切片的生的可食用担子菌均匀地压在鸡肉或鱼肉上，然后在油中炸处理过的鸡肉或鱼肉。一旦可食用担子菌变脆，食物即成了。

4.煎蛋卷

打碎鸡蛋，用诸如盐或胡椒粉的调味品以期望的方式调味。加入精细切割的生的可食用担子菌，接着进一步搅拌。然后将含有其它物料的打碎的蛋液浇在足以使油轻微冒烟热度的煎锅中。搅动打碎的蛋液使之不变成固体，关闭火焰。当鸡蛋表面用煎锅余热使之固化的时候，滚动鸡蛋材料。当其表面呈黄褐色而且内部五分熟时，食物即成了。

工业实用性

如上所述，本发明可提供担子菌，其是一种具有极好免疫强化作用的新蘑菇，以及提供担子菌提取组合物和使用该担子菌提取组合物的保健食品和免疫强化剂，及可食用担子菌。

微生物的叙述

保藏机构名称：国际专利生物体保藏机构，国家先进工业科学技术研究所

保藏机构地址：日本Ibaragi县Tsukuba市Higashi 1-1-1 Chuo Dai-6(邮政编码305-8566)

在保藏机构的保藏日期：2003年2月27日

保藏机构在保藏时指定的登记号：FERM BP-10011

保藏人姓名：Y.Tsuno，Mycology Techno Kabushiki Kaisha的代表人

保藏人地址：日本Niigata县Niigata市Bandai 4-3-20(邮政编码950-0088)

保藏的微生物在2003年2月27日保存在本国国家先进工业科学技术研究所的国际专利生物体保藏机构(登记号：FERM P-19241)，并在2004年4月15日转移到国际保藏机构(登记号：FERM BP-10011)。

有关微生物特征的其它信息

微生物类型：霉菌

分类学位置：担子菌，菌核(菌丝体)未识别物种

培养条件：

培养基名称…马铃薯葡萄糖琼脂培养基

培养基组成…200g马铃薯沥出物，20g葡萄糖，每1000ml培养基20g琼脂

培养基pH值…5.6

培养基灭菌条件…121℃，高压锅中20分钟

培养温度…24℃

培养时间…5天

氧气需求…好氧

培养方法…好氧

光线需求…不必需

传代培养条件…间隔3个月转移，储存于5℃温度的黑暗阴冷处

储存条件：

冻干保存…否

L-干燥保存…否

冷冻(约-80℃)保存…否

如果以上方法不可用则储存…传代培养保存(间隔3个月转移，储存于5℃温度的黑暗阴冷处)

孢子(分生孢子)形成：无

Claims (12)

1.担子菌，其特征在于其没有担子形成潜力。

2.权利要求1所述的担子菌，其特征在于所述的担子菌是担子菌-X FERMBP-10011。

3.担子菌提取组合物，其特征在于用包含选自水和亲水溶剂中至少一种溶剂的提取溶剂从担子菌中提取，所述担子菌没有担子形成潜力。

4.权利要求3所述的担子菌提取组合物，其特征在于所述的担子菌是担子菌-X FERM BP-10011。

5.权利要求3或4所述的担子菌提取组合物，其特征在于通过加热和提取来获得担子菌提取组合物。

6.权利要求3至5之任一项所述的担子菌提取组合物，其特征在于通过加压和提取来获得担子菌提取组合物。

7.保健食品，其特征在于其包含提取自没有担子形成潜力的担子菌的担子菌提取组合物作为活性成分。

8.权利要求7所述的保健食品，其特征在于所述的担子菌是担子菌-X FERMBP-10011。

9.权利要求7或8所述的保健食品，其特征在于保健食品是选自饮料形式、点心形式、浓缩提取物形式、粉末、颗粒、片剂、和胶囊的形式。

10.免疫强化剂，其特征在于其包含提取自没有担子形成潜力的担子菌的担子菌提取组合物作为活性成分。

11.权利要求10所述的免疫强化剂，其特征在于所述的担子菌是担子菌-XFERM BP-10011。

12.包含菌丝体的可食用的担子菌，所述的菌丝体是通过培养权利要求1或2的担子菌形成的。

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