JP2001106637A - サイトカイン産生能評価方法、サイトカイン産生能回復剤組成物、その製造方法及び用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 バシディオマイセテスに属する菌類の培養に
よる、ヒト単核球細胞のサイトカイン産生能回復剤組成
物、その製造方法、その組成物を含有する健康食品及び
医薬品を提供する。 【解決手段】 植物組織原料の存在下でバシディオマイ
セテス（Basidiomycetes）に属する菌を撹拌通気培養し
た後、固形分を除去し、ついで液体部分を乾燥して得ら
れる、ヒト単核球細胞を刺激剤の存在下で培養し産生放
出されるサイトカインを定量することにより評価される
サイトカイン産生能回復剤組成物、その製造方法、その
組成物を含有する健康食品及び医薬品。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、サイトカイン産生
能評価方法、ヒト単核球細胞のサイトカイン産生能を回
復させる組成物、その製造方法、及びその組成物を含む
健康食品並びに医薬品に関する。

【０００２】

【背景技術】バシディオマイセテス（Basidiomycetes）
に属する菌の培養物は、免疫増強・賦活、マクロファー
ジ活性化（グリコリシスの亢進）、抗腫瘍等の作用、い
わゆる生物応答修飾剤（ＢＲＭ;Biological Responce M
odifiers）としての性質を示すことが知られている。こ
の作用には、ヒトが前記培養物を摂取した時にヒト自ら
の生体内で産生される、インターフェロン・ガンマ（Ｉ
ＦＮ−γ）やインターロイキン１２（ＩＬ−１２）その
他のサイトカインが関与していることが明らかとなって
いる。

【０００３】バシディオマイセテスに属する菌類は一般
にキノコ菌として知られるが、その子実体であるいわゆ
るキノコ類は古くから健康に良い食品として知られ、近
年ではサルノコシカケ、スエヒロタケ、あるいはシイタ
ケなどの菌糸体成分を用いた抗癌剤等も開発され、実際
に使用されるに至っている。

【０００４】バシディオマイセテスに属する菌を培養す
る方法としては、植物繊維質素材、例えば米糠、ふす
ま、稲わら、バガス等や、マルトース、ペプトン、酒石
酸アンモニウム、水等の成分からなる培地にバシディオ
マイセテスに属する菌、例えばシイタケ菌などを植菌
し、ｐＨを調整して２０〜３０℃で撹拌しつつ約２週間
程度通気培養する方法が一般に知られている。通常、こ
の培養終了後に全体（培地、培養物、培養生成物等を含
む培養系全体）を固液分離して液体部を回収し、更にこ
の液体部を適宜の手段で乾燥し、適宜の製剤等にする方
法が取られており、ＢＲＭとしての作用を持つ成分は上
記の過程で製剤中に移行すると考えられている。従っ
て、ヒトは上記製剤を摂取することにより、前記サイト
カインに基く様々な効果が期待できる。

【０００５】ＮＫ（ナチュラル・キラー）細胞を活性化
するＩＬ−１２はキラーＴ細胞（腫瘍細胞に特異的な細
胞障害活性を持つ）をも増殖・活性化し、更にそのキラ
ーＴ細胞の活性化を促進するＩＦＮ−γの産生増強作用
を持つことが知られている。そのため現在では、ＩＬ−
１２はヒトの癌治療において臨床的に有用な物質とされ
ている。

【０００６】ＩＬ−１２は分子量約７０ｋＤａ（ｐ７
０）の糖たんぱく質で、各々分子量４０ｋＤａ（ｐ４
０）、３５ｋＤａ（ｐ３５）の、互いに相同性のない二
つのサブユニットから構成された異型二量体であり、ｐ
４０、ｐ３５は単独では前記のような活性を示さない
が、ｐ７０はナイーブＴ細胞（Ｔｈ０）からのＴｈ１細
胞への分化を促進し、その結果キラーＴ細胞を増殖・活
性化すると言われている。

【０００７】近年、ＩＬ−１２は遺伝子組換により大量
に生産されるようになり（レコンビナントＩＬ−１
２）、これを人体に投与して癌腫瘍細胞の増殖抑制ない
し消失を図ろうとする試験等も広く行なわれている。し
かし、レコンビナントＩＬ−１２は感受性が低いなどの
理由で大量投与が必要であり、その結果発熱、食欲不振
その他の様々な副作用を伴うため、実用上には大きな問
題があると言われている。

【０００８】癌患者あるいは癌にかかり易いヒトでは、
血清中のＩＬ−１２の量は健常者に比べ減少していると
言われる。そのためＩＬ−１２を外部からヒトに補給
し、血清中のＩＬ−１２の量を健常者なみに戻そうとす
るのが、前記したレコンビナントＩＬ−１２のヒトへの
投与の試みの基本にある考え方である。

【０００９】また、ヒトにＩＬ−１２誘導作用を有する
と言われる食品等の物質を経口的または非経口的に投与
してヒト生体内にＩＬ−１２を生成させ、それにより癌
腫瘍細胞の消失を図る、との考え方や提案もある。この
方法によるならば、異常な免疫反応等に起因する副作用
もなく、ヒト生体内に自ら生成されたＩＬ−１２は前記
レコンビナントＩＬ−１２とは異なって感受性は高いた
め、副作用の心配も全くない理想的な方法と考えられ
る。

【００１０】しかしヒトに対して、前記したようなＩＬ
−１２の外部からの補給、またはＩＬ−１２誘導作用を
持つと言われる物質の投与等の方法を試みた上でその血
液を採取し分析してみても、その血清からはＩＬ−１２
を信頼性のある数値として検出することはできない。そ
の理由は、血清中に含まれるＩＬ−１２（この場合はｐ
７０型）は、通常の臨床検査での分析の検出限界（7.8
ｐｇ／ｍｌ）以下の数値であるためである。従って、前
記の補給ないし投与のいずれの方法によった場合でも、
生体内のＩＬ−１２の実際の量を測定することは不可能
である。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の課題
は、バシディオマイセテス（Basidiomycetes）に属する
菌の培養物のサイトカインの産生能を評価する新たな方
法を開発し、その方法で評価したサイトカイン産生能に
優れたバシディオマイセテス（Basidiomycetes）に属す
る菌の培養物及びその製造方法を提供することにある。
さらに、本発明の他の課題は、前記ヒト単核球細胞のサ
イトカイン産生能に優れた培養物を含有する食品及び医
薬品を提供することにある。

【００１２】

【課題を解決するための手段】本発明者は、食品や医薬
品のサイトカインの産生能を評価する方法として、血液
から分離したヒト単核球細胞を刺激剤の存在下で培養
し、産生放出されるサイトカインを定量することが有効
であることを見出し、この方法により植物組織原料の存
在下でバシディオマイセテス（Basidiomycetes）に属す
る菌を撹拌通気培養し、固形分を除去した液体部分中に
ヒト単核球細胞のサイトカイン産生能回復能に優れた成
分が存在することを確認して本発明を完成した。

【００１３】すなわち、本発明は、以下のヒト単核球細
胞のサイトカイン産生能回復剤組成物、その製造方法、
健康食品及び医薬品、並びに食品または医薬品のサイト
カイン産生能評価方法に関する。 １）植物組織原料の存在下でバシディオマイセテス（Ba
sidiomycetes）に属する菌を撹拌通気培養した後、固形
分を除去し、ついで液体部分を乾燥して得られるヒト単
核球細胞のサイトカイン産生能回復剤組成物。 ２）バシディオマイセテス（Basidiomycetes）に属する
菌がレンチナス・エドデス（Lentinus edodes）である
前記１に記載のヒト単核球細胞のサイトカイン産生能回
復剤組成物。 ３）サイトカインがインターフェロン・ガンマ（ＩＦＮ
−γ）である前記１または２に記載のサイトカイン産生
能回復剤組成物。 ４）サイトカインがインターロイキン１２（ＩＬ−１
２）である前記１または２に記載のサイトカイン産生能
回復剤組成物。

【００１４】５）植物組織原料の存在下でバシディオマ
イセテスに属する菌を撹拌通気培養した後固形分を除去
し、次いで液体部分を乾燥することを特徴とするヒト単
核球細胞のサイトカイン産生能回復剤組成物の製造方
法。 ６）バシディオマイセテス（Basidiomycetes）に属する
菌がレンチナス・エドデス（Lentinus edodes）である
前記５に記載のヒト単核球細胞のサイトカイン産生能回
復剤組成物の製造方法。 ７）サイトカインがインターフェロン・ガンマ（ＩＦＮ
−γ）である前記５または６に記載のサイトカイン産生
能回復剤組成物の製造方法。 ８）サイトカインがインターロイキン１２（ＩＬ−１
２）である前記５または６に記載のサイトカイン産生能
回復剤組成物の製造方法。

【００１５】９）前記１乃至４のいずれかに記載のサイ
トカイン産生能回復剤組成物を含有する健康食品。 １０）前記１乃至４のいずれかに記載のサイトカイン産
生能回復剤組成物を含有する医薬品。 １１）バシディオマイセテス（Basidiomycetes）に属す
る菌の培養物のサイトカインの産生能を評価する方法に
おいて、血液から分離したヒト単核球細胞を刺激剤の存
在下で培養し、産生放出されるサイトカインを定量する
ことを特徴とするサイトカインの産生能の評価方法。

【００１６】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
サイトカイン産生能回復剤組成物は、植物組織原料の存
在下でバシディオマイセテス（Basidiomycetes）に属す
る菌を培養した培養液と菌糸体との混合液中から抽出さ
れる成分を含有することを特徴とする。菌種および培養
条件、抽出条件、及び健康食品あるいは医薬品としての
剤形等の詳細は以下の通りである。

【００１７】（１）菌種 本発明に用いるバシディオマイセテス（Basidiomycete
s）に属する菌の例としては、例えば、レンチナス・エ
ドデス（Lentinus edodes，シイタケ）、アガリクス・
ビスポラス（Agaricus bisporus，マッシュルーム）、
グリフォラ・フロンドサ（Grifola frondosa，マイタ
ケ）、フォリオタ・ナメコ（Pholiota nameko，ナメ
コ）、プリュロタス・オストレアタス（Pleurotus ostr
eatus，ヒラタケ）、フラムリナ・ヴェラチペス（Flamm
ulina velutipes，エノキタケ）、ゴノデルマ・ルシダ
ム（Gonoderma lucidum，マンネンタケ）、アウリカラ
リア・アウリカラ（Auricularia auricula，キクラ
ゲ）、ゴノデルマ・アパラナタム（Gonoderma applanal
um，コフキサルノコシカケ）、コリオラス・ルシダム
（Corioluslucidum，カワラタケ）、グリフォラ・アン
ベラッタ（Grifola umbellate，チョレイマイタケ）、
シゾフィラム・コミュネ（Schizphyllum commune，スエ
ヒロタケ）、ヴォルヴァリエラ・ヴォルヴァセアエ（Vo
lvariella volvaceae，フクロタケ）等があげられる。
これらは単独で、または数種類組み合わせて用いること
ができる。これらの中でもレンチナス・エドデス（Lent
inus edodes，シイタケ）及びグリフォラ・フロンドサ
（Grifola frondosa，マイタケ）が好ましい。

【００１８】（２）培養条件 本発明においては、上記の菌を植物組織原料の存在下に
おいて培養する。植物組織原料は、植物組織に由来する
ものであれば特に制限されず、おがくず等を用いること
も可能であるが、草本類植物由来の材料、例えば、米
糠、ふすま、バガス、とうもろこしの根茎、稲わら、麦
わら、大豆かす等が好ましい。これらは単独で用いても
よいし、複数を組み合わせて用いてもよい。かかる原料
を用いることにより、効率的に有効成分を得ることがで
きる。これらの原料において熱水に溶解する成分が特に
有用であり、従って、熱水で抽出した抽出液が好適に用
いられる。

【００１９】培地には、上記植物組織原料の他に各種の
炭素源あるいは窒素源を添加してもよい。炭素源の例と
しては、ブドウ糖、ショ類、マルトース、サッカロー
ス、上白糖、黒糖、糖蜜、廃糖蜜、マルツエキス等が挙
げられる。窒素源の例としては、肉エキス、ペプトン、
グルテンミール、大豆粉、乾燥酵母、酵母エキス、硫酸
アンモニウム、酒石酸アンモニウム塩、尿素等が挙げら
れる。その他、必要に応じて、ナトリウム塩、マグネシ
ウム塩、マンガン塩、鉄塩、カルシウム塩、リン酸塩等
の無機塩類や、イノシトール、ビタミンＢ１塩酸塩、Ｌ
−アスパラギン、ビオチン等のビタミン類を添加しても
よい。培養は、通常の中温菌の培養に準じればよく、ｐ
Ｈ２〜６、１０〜４５℃、好ましくは１５〜３０℃の温
度で行なう。培養を継続する時間は、菌の量や植物組織
原料の形態にもよるが、通常は４〜２０日間、好ましく
は６〜１２日間程度である。

【００２０】（３）抽出 本発明のサイトカイン産生能回復作用を有する有効成分
は、以上のようにして得られた培養液と菌糸体との混合
液から抽出することにより得られる。抽出は、上記混合
物にセルラーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、ペクチナ
ーゼ、キチナーゼ等の酵素を加え、至適温度条件にて２
〜２０時間反応を行なって菌体を破砕し、その後、加熱
処理して酵素反応を失活させ、該処理物から遠心分離等
により菌糸体残渣を除去して行なう。得られる液体部分
に本発明の有効成分が含有されている。上記のようにし
て得られる有効成分が含有液を濃縮、さらに凍結乾燥等
により乾燥して粉末状の本発明の組成物を得ることがで
きる。有効成分の具体的な構造等は不明であるが、置換
基を有する多糖類を主成分とし、その他に、植物組織原
料由来の物質、菌糸体由来の物質、菌の代謝産物等を含
有し、これらが相乗的に作用しているものと考えられ
る。

【００２１】バシディオマイセテス（Basidiomycetes）
に属する菌として、レンチナス・エドデス（Lentinus e
dodes，シイタケ）を使用して得られた本発明の培養抽
出物（凍結乾燥品）のｐＨ値（１０ｗ／ｗ％水溶液）は
3.7〜4.5、Ｂｒｉｘ値（１０ｗ／ｗ％水溶液）は9.8〜1
0.8であった。主要成分の含有割合を表−１に示す。

【表１】表−１ 成 分 含有量 水分 3.0％以下 蛋白質 11.0〜14.0％ 脂質 0.5〜 2.5％ 炭水化物 74.0〜81.0％ 灰分 6.5〜 8.5％ナトリウム 0.8〜 1.5％

【００２２】本発明の培養抽出物を経口的ないし非経口
的にヒトに投与した場合、その単核球細胞のＩＦＮ−γ
及びＩＬ−１２のサイトカイン産生能を安定的に回復さ
せる効果を奏する。

【００２３】本明細書でいうサイトカインとは、ＩＦＮ
−γ及びＩＬ−１２を指し、サイトカイン産生能の回復
とは、前記サイトカインをヒトの生体自身が産生し得る
潜在的能力を、ヒト健常人のレベルにまで回復する、と
いう意味である。

【００２４】前記したとおり、血清中のＩＬ−１２等の
実際の量の測定は不可能であるが、ＩＬ−１２等のサイ
トカインを産生できる潜在的能力を測定し、これを数値
として表現することは可能である。本発明では、このサ
イトカイン産生能をもって、本発明の培養抽出物のヒト
への投与に対する効果を判定する。

【００２５】本発明において、サイトカイン産生能の回
復はヒト単核球に対して効果を奏することが確認された
が、単核球以外でもサイトカインを産生し得る細胞に対
して同様の効果を奏することが予測される。

【００２６】（４）剤形および処方 本発明では、こうして得られた培養抽出物、すなわち乾
燥粉末を必要により食品添加助材、また薬理学的、製剤
学的に認容される製造助剤などの適宜の助材を用いて、
顆粒、カプセル、マイクロカプセル状の健康食品に加工
することができる。更にこれらを各種の固形製剤、ある
いは液状製剤等の医薬品原料として利用することができ
る。また、注射剤、軟膏、座薬等、非経口投与剤の原料
とすることもできる。

【００２７】製造助材の例としては、ショ糖、でんぷ
ん、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、グルコ
ース、セルロース、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム
等の賦形剤の他、慣用の結合剤、崩壊剤、滑沢剤、保存
剤、安定化剤、分散剤、希釈剤、香料、甘味料等が挙げ
られる。経口投与剤および非経口投与剤のいずれも可能
である。

【００２８】経口投与剤としては、散剤、顆粒剤、カプ
セル剤、マイクロカプセル剤、錠剤、トローチ剤などの
固形製剤、あるいはドリンク剤、シロップ剤、エリキシ
ル剤などの液状製剤とすることができる。また、非経口
投与剤としては注射剤、軟膏剤あるいは座薬等とするこ
とができる。

【００２９】本発明の培養抽出物、あるいはこれを原料
とする製剤の経口または非経口によるヒトへの投与量
は、投与する対象の年令、体重および症状、剤形等によ
っても増減されるが、一般的には薬剤0.01〜１０ｇ、好
ましくは0.5〜５ｇを１日当りの投与量として、１日１
〜４回投与される。

【００３０】本発明においてサイトカイン産生能は、ヒ
トから採取した血液から単核球を分離し、これにＰＨＡ
（フィトヘマグルチニン）等の物質を加えて刺激を与
え、この刺激を受けてヒト単核球細胞が産生・放出した
ＩＦＮ−γ及びＩＬ−１２のサイトカインを定量した数
値から求めることができる。この数値はヒトの単核球細
胞がサイトカインを産生し得る潜在的能力を示すもので
あり、この数値を基準とする数値、例えば健常人の数
値、あるいは本発明の培養抽出物投与前の数値と比較す
ることによって、前記潜在的能力を判定することができ
る。

【００３１】具体的には、本発明の培養抽出物、または
これを原料とする製剤を投与して採取したヒトの末梢血
から単核球を分離・採取し、これに培地を加えてそのリ
ンパ球数を調整（１×１０⁶個／ｍｌ）した後、これに
ＰＨＡを加えて培養し、次いでその刺激により単核球が
産生・放出したＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、
ＩＬ−１８等のサイトカインを、ELISA法を用いて測定
するものである。この測定は通常、各種の測定キットを
用いて行なわれる。

【００３２】前記測定においては、単核球細胞の刺激を
行なう物質（マイトジェン）の種類、濃度、調整するリ
ンパ球数等が測定結果に影響する。これらの条件は下記
に基いて選ばれる。まず、マイトジェンとしては上記Ｐ
ＨＡ以外にＰＭＡ（酢酸ミリスチン酸ホルボール、Phob
ol 12-Myristate 13-Acetate）、ＰＭＡ＋ロノマイシン
（lonomycin）、ＬＰＳ（リポ多糖類、lipopolysacchar
ide）、ＰＷＭ（アメリカヤマゴボウ・マイトジェン、P
oke weed mitogen）等が挙げられるが、ＰＨＡを用いる
のが最も好ましい。また通常用いられるＰＨＡ濃度は0.
1〜１００μｇ／ｍｌであるが、好ましくは１〜２０μ
ｇ／ｍｌが良い。調整リンパ球数は通常0.5×１０⁵〜１
×１０⁷個／ｍｌ、好ましくは１×１０⁶個／ｍｌであ
る。

【００３３】前記測定結果の数値は、同じ検査を行なっ
た健常人の数値（基準値）、あるいは本発明の培養抽出
物の投与前のヒトの数値を比較して判定される。数値の
差が健常人に近い程、本発明の培養抽出物投与前後の数
値の開きが大きい程、サイトカイン産生能の回復の効果
は大きいと判定される。

【００３４】健常なヒトに本発明の培養抽出物を投与し
たとき、前記測定数値が投与前の数値を上回る。この場
合には、サイトカイン産生能が投与前よりも向上したも
のと解すことができ、本発明の培養抽出物は疾病の治療
に効果を発揮するばかりでなく、ヒトの健康維持・向上
に役立つことが明らかである。

【００３５】

【実施例】以下、実施例及び試験例を挙げて本発明を説
明するが、下記の記載により本発明は何ら限定されるも
のではない。

【００３６】実施例１：ガラスシャーレを用い、固体培
地（マルトース１％、ぺプトン0.2％、酒石酸アンモニ
ウム0.2％、寒天1.5％）において培養保存したシイタケ
（Lentinus edodes）から菌を接種し、液体培地８リッ
トル（米糠１５０ｇに８００ｍｌの水を加え１２０℃１
５分間加熱した後、ろ過した抽出液にマルトース１０
ｇ、ぺプトン2.5ｇ、酒石酸アンモニウム2.0ｇを加え適
当量の水を加える。ｐＨ4.0）を入れた１０リットル培
養瓶に植菌し、２０℃で７日間通気培養した。ついで、
この培養液８リットルを同組成の液体培地３００リット
ルを入れた培養タンクに接種し２３℃で９日間通気下に
て穏やかに撹拌し、培養を行なった。上記培養により得
られた培養液と菌糸体との混合物を９０℃に加熱し、ア
ミラーゼ８ｇを加え３時間反応を行なった後、６０℃ま
で冷却し、セルラーゼ１５ｇ、プロテアーゼ１５ｇを加
え、５５℃で１０時間反応を行なった。１２０℃、２０
分間加熱して、酵素を失活させた。該培養処理物から遠
心分離により菌糸体残渣を除去し抽出液を得た。抽出液
中の固形分の濃度は2.5重量％であった。上記抽出工程
で得られた抽出液を、減圧下で１０倍に濃縮し、濃縮液
を得、ついで凍結乾燥して淡黄色の粉末（試料−１）を
得た。

【００３７】実施例２：グリフォラ・フロンドサ（Grif
ola frondosa，マイタケ）を用いたこと以外は、実施例
１と同じ条件で培養及び培養後の酵素剤・米糠の水抽出
液処理を行ない、本発明の培養抽出物（試料−２）を得
た。

【００３８】試験例：実施例１〜２で得た発明品試料１
及び２を健常人２名及び癌患者２名に対して、3.0ｇ／
日（無水物換算）の経口投与を連日続け、それぞれ２ケ
月後、５ケ月後に血液を採取して単核球のサイトカイン
産生能を測定した。 （１）健常人−１（男性、５５才）：試料−１ （２）健常人−２（女性、５９才）：試料−２ （３）肝細胞癌に罹患したヒト−１（女性、６５才）：
試料−１ （４）胃癌、胆嚢癌に罹患したヒト−１（女性、７４
才）：試料−２

【００３９】サイトカイン産生能の測定は、以下の方法
で行なった。 （１）単核球の分離調整と培養 ヘパリンを加えたヒト末梢血をＰＢＳ（Phosphate Buff
ered Saline）で２倍に希釈して混和した後、Ficoll-Co
nray液（比重1.077）上に静かに載せ、４００Ｇで２０
分遠心分離して採取した単核球層を洗浄（ＰＢＳとの混
和、遠心分離を繰返す）した後、１０％ＦＢＳ（Fetal
BovineSerum）を加えたRPMI-1640培地を加え、リンパ球
数を１×１０⁶個／ｍｌとなるように調整した。得られ
た細胞浮遊液２００μｌに、濃度２０μｇ／ｍｌのＰＨ
Ａ（フィトヘマグルチニン、DIFCO社製）を加え、９６
穴マイクロプレートで５％ＣＯ₂存在下で３７℃で２４
時間培養し、上清を採取して測定試料とした。

【００４０】（２）サイトカインの測定 ＩＬ−１２は、R&D SYSTEMS社製のキットを用いたELISA
法により測定した。具体的には各WELLにそれぞれAssay
Diluent RD1Fを５０μｌ、標準、測定試料を２００μｌ
ずつ分注した後、室温に静置して２時間反応させた。次
いで、ＨＲＰ（Horse Radish Peroxidase）標識抗ＩＬ
−１２抗体を２００μｌずつ加えて２時間室温で静置
し、各WELL内の反応液を除去して３回洗浄した後、発色
基質溶液を２００ｍｌずつ加えて２０分間室温に静置し
てから、酵素反応停止溶液を５０ｍｌずつ加えて、紫外
吸光分析装置（和光純薬工業製）により５５０ｎｍを対
照として各WELLの４５０ｎｍの吸光度（Ｅmax）を測定
した。ＩＦＮ−γは、バイオソース（BIOSOURCE）社製
キットを用いたELISA法により測定した。各WELLに標準
及び２倍に希釈した測定試料を５０μｌずつ分注し、全
WELLにＨＲＰ標識抗ＩＦＮ−γ抗体を５０μｌずつ加え
て振とうしながら室温で２時間反応させた後、WELL内の
反応液を除去して３回洗浄して発色基質２００μｌずつ
を加え、振とうしながら１５分間反応させ、次いで酵素
反応停止溶液を５０μｌずつ加えてから、紫外吸光分析
装置（和光純薬工業製）により６３０ｎｍを対照として
各WELLの４５０ｎｍ及び４９０ｎｍの吸光度（Ｅmax）
を測定した。

【００４１】結果：下記の表のとおりである。 （１）試料−１を投与した健常人−１（男性、５５才）

【表２】 表−２ 投与前 投与２ケ月後 投与５ケ月後 ＩＦＮ−γ産生能 18.4 44.1 52.5 ＩＬ−１２産生能 21.3 52.4 55.3

【００４２】（２）試料−２投与した健常人−２（女
性、５９才）

【表３】 表−３ 投与前 投与２ケ月後 投与５ケ月後 ＩＦＮ−γ産生能 15.2 58.2 59.0 ＩＬ−１２産生能 22.8 49.5 45.5

【００４３】（３）試料−１を投与した肝細胞癌に罹患
したヒト（女性、６５才）

【表４】 表−４ 投与前 投与２ケ月後 投与５ケ月後 ＩＦＮ−γ産生能 5.2 14.8 53.2 ＩＬ−１２産生能 7.8＞ 21.3 45.1

【００４４】（４）試料−２を投与した胃癌及び胆嚢癌
に罹患したヒト（女性、７４才）

【表５】 表−５ 投与前 投与２ケ月後 投与５ケ月後 ＩＦＮ−γ産生能 5.2 19.0 62.0 ＩＬ−１２産生能 7.8＞ 31.6 52.3

【００４５】考察： （１）本発明の培養抽出物（試料−１及び２）ではサイ
トカイン産生能はヒトへの投与後、特に癌患者で数値が
着実に上昇しサイトカイン産生能の回復効果が明らかに
認められる。

【００４６】（２）サイトカイン産生能を示す数値は健
常人でも投与後は上昇しており、これは健常人の癌に対
する罹患の可能性が低下しているものと考えられるの
で、本発明の培養抽出物は健常人の健康維持効果を持つ
ものと言うことができる。

【００４７】（３）前記の肝細胞癌に罹患した６５才女
性は癌の進展著しく、進行度４と判定され、手術不可能
の状態で抗癌剤投与、放射線治療等も実施していなかっ
た。このヒトに試料−１の投与を開始して約５ケ月を経
過した後、ＣＴ検査で肝臓全体の約３／４を占めていた
癌が１／４に縮小し、一般肝機能生化学検査でも改善が
認められた。単核球のＩＬ−１２産生能は7.8ｐｇ／ｍ
ｌ以下であったものが45.1ｐｇ／ｍｌまで上昇し、ＩＦ
Ｎ−γ産生能も5.2から53.2に上昇した。

【００４８】（４）前記の胃癌及び胆嚢癌に罹患した７
４才女性は癌発見当時より癌進行が著しく手術不可能で
あり、癌の圧迫のため流動食のみの摂取が可能であっ
た。抗癌剤投与や放射線治療等は実施しておらず、前記
試料−２のみ経管栄養チューブで投与したところ、7.8
ｐｇ／ｍｌ以下であったＩＬ−１２産生能の数値が約２
週間後には26.9ｐｇ／ｍｌまで上昇していた。更に約４
週で癌圧迫による胃の狭窄症状は消失し、固形物の摂取
が可能となった。約８週後、胆嚢腫瘍は消失し、胃癌は
約１／３に縮小した。

【００４９】

【発明の効果】本発明により植物組織原料の存在下で培
養されるバシディオマイセテス（Basidiomycetes）に属
する菌の培養抽出物は本発明のサイトカイン産生能によ
り評価されるヒトの単核球細胞のサイトカイン産生能を
回復させる上、更にこれを向上させる効果があるので、
癌に罹患した患者の治療に有効であり、また健常人にあ
っても癌罹患を予防して身体を健康に維持する効果を奏
する。従って本発明の培養抽出物は癌治療を目的とする
医薬、あるいはヒトの健康維持を目的とする食品等の原
料として有用である。本発明の培養抽出物の原料である
バシディオマイセテスに属する菌類は人類の長い間の食
経験のある菌類であるから、極めて安全性の高いものと
言うことができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｚ Ｆターム(参考） 2G045 AA40 BB20 CA20 CB20 CB21 DA36 HA05 4B018 LE03 MD85 MF06 MF13 4C088 AA02 AA08 AC16 BA05 CA11 CA25 MA52 NA14 ZB09 ZB26 ZC21 ZC78

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 植物組織原料の存在下でバシディオマイ
   セテス（Basidiomycetes）に属する菌を撹拌通気培養し
   た後、固形分を除去し、ついで液体部分を乾燥して得ら
   れるヒト単核球細胞のサイトカイン産生能回復剤組成
   物。
2. 【請求項２】 バシディオマイセテス（Basidiomycete
   s）に属する菌がレンチナス・エドデス（Lentinus edod
   es）である請求項１に記載のヒト単核球細胞のサイトカ
   イン産生能回復剤組成物。
3. 【請求項３】 サイトカインがインターフェロン・ガン
   マ（ＩＦＮ−γ）である請求項１または２に記載のサイ
   トカイン産生能回復剤組成物。
4. 【請求項４】 サイトカインがインターロイキン１２
   （ＩＬ−１２）である請求項１または２に記載のサイト
   カイン産生能回復剤組成物。
5. 【請求項５】 植物組織原料の存在下でバシディオマイ
   セテスに属する菌を撹拌通気培養した後固形分を除去
   し、次いで液体部分を乾燥することを特徴とするヒト単
   核球細胞のサイトカイン産生能回復剤組成物の製造方
   法。
6. 【請求項６】 バシディオマイセテス（Basidiomycete
   s）に属する菌がレンチナス・エドデス（Lentinus edod
   es）である請求項５に記載のヒト単核球細胞のサイトカ
   イン産生能回復剤組成物の製造方法。
7. 【請求項７】 サイトカインがインターフェロン・ガン
   マ（ＩＦＮ−γ）である請求項５または６に記載のサイ
   トカイン産生能回復剤組成物の製造方法。
8. 【請求項８】 サイトカインがインターロイキン１２
   （ＩＬ−１２）である請求項５または６に記載のサイト
   カイン産生能回復剤組成物の製造方法。
9. 【請求項９】 請求項１乃至４のいずれかに記載のサイ
   トカイン産生能回復剤組成物を含有する健康食品。
10. 【請求項１０】 請求項１乃至４のいずれかに記載のサ
    イトカイン産生能回復剤組成物を含有する医薬品。
11. 【請求項１１】 バシディオマイセテス（Basidiomycet
    es）に属する菌の培養物のサイトカインの産生能を評価
    する方法において、血液から分離したヒト単核球細胞を
    刺激剤の存在下で培養し、産生放出されるサイトカイン
    を定量することを特徴とするサイトカインの産生能の評
    価方法。