CN1633446A - 用作丙型肝炎病毒ns3－丝氨酸蛋白酶抑制剂的新型肽 - Google Patents

Abstract

本发明公开了具有HCV蛋白酶抑制活性的新型化合物以及制备所述化合物的方法。在另一实施方案中，本发明公开了包含所述化合物的药用组合物以及将其用于治疗HCV蛋白酶相关性疾病的方法。

Description

用作丙型肝炎病毒NS3-丝氨酸蛋白酶抑制剂的新型肽

                      发明领域

本发明涉及新型丙型肝炎病毒(“HCV”)蛋白酶抑制剂、含有一种或多种所述抑制剂的药用组合物、制备所述抑制剂的方法以及应用所述抑制剂治疗丙型肝炎和相关疾病的方法。本发明具体公开了作为HCV NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶抑制剂的新型肽化合物。本发明的优先权基于于2000年7月21日申请的美国专利申请顺序号60/220,108和于2000年7月19日申请的美国专利申请顺序号09/908,955。

                      发明背景

丙型肝炎病毒(HCV)为一种(+)-有义单链RNA病毒，它为非甲非乙型肝炎(NANBH)的主要病原体，尤其是血液相关性NANBH(BB-NANBH)(参见国际专利申请公布号WO 89/04669和欧洲专利申请公布号EP 381 216)。NANBH不同于其它类型的病毒诱导性肝疾病，例如甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丁型(δ)肝炎病毒(HDV)、巨细胞病毒(CMV)和埃-巴二氏病毒(EBV)、以及不同于其它形式的肝病，例如酒精中毒性肝疾病和原发性胆汁性肝硬化。

最近，已经鉴定、克隆和表达出了多肽加工和病毒复制所必需的HCV蛋白酶(参见例如美国专利号5,712,145)。这种约3000个氨基酸的多蛋白自氨基末端至羧基末端包含核壳蛋白(C)、包膜蛋白(E1和E2)以及几种非结构蛋白(NS1、2、3、4a、5a和5b)。NS3为约68kda的蛋白，由HCV基因组约1893个核苷酸编码，并且具有2个不同的结构域：(a)由约200个N-末端氨基酸组成的丝氨酸蛋白酶结构域；和(b)蛋白C-末端RNA依赖性ATP酶结构域。由于蛋白质序列、整体三维结构和催化机制的相似性，认为NS3蛋白酶是胰凝乳蛋白酶家族的一个成员。其它胰凝乳蛋白酶样酶有弹性蛋白酶、Xa因子、凝血酶、胰蛋白酶、纤溶酶、尿激酶、tPA和PSA。HCV NS3丝氨酸蛋白酶与所述多肽(多蛋白)于NS3/NS4a、NS4a/NS4b、NS4b/NS5a和NS5a/NS5b接点水解有关，因此在病毒复制期间负责生成四种病毒蛋白。这使HCV NS3丝氨酸蛋白酶成为抗病毒化学治疗的令人关注的目标。

已经确定约6kda多肽的NS4a蛋白是NS3丝氨酸蛋白酶活性的辅因子。NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶对NS3/NS4a接点的自动裂解在分子内(即顺式)进行，而其它的切割位点在分子间(即反式)进行。

对HCV蛋白酶的天然切割位点的分析揭示，P1存在半胱氨酸，而P1’存在丝氨酸，并且这些残基在NS4a/NS4b、NS4b/NS5a和NS5a/NS5b接点中是严格保守的。NS3/NS4a接点包含P1的苏氨酸和P1’的丝氨酸。推定NS3/NS4a上的Cys→Thr取代解释该接点需要顺式而不是反式加工。参见例如Pizzi等(1994) Proc.Natl.Acad.Sci (USA)91：888-892，Failla等(1996) Folding & Design  1：35-42。NS3/NS4a切割位点也比其它位点更耐受诱变。参见例如Kollykhalov等(1994) J.Virol. 68：7525-7533。还发现，切割位点上游区的酸性残基是有效裂解所需要的。参见例如Komoda等(1994) J.Virol.68：7351-7357。

已报道的HCV蛋白酶抑制剂包括抗氧化剂(参见国际专利申请公布号WO 98/14181)、某些肽类和肽类似物(参见国际专利申请公布号WO 98/17679，Landro等(1997) Biochem. 36：9340-9348，Ingallinella等(1998) Biochem. 37：8906-8914，Llinàs-Brunet等(1998) Bioorg.Med. Chem.Lett. 8：1713-1718)、基于70-氨基酸多肽水蛭蛋白酶抑制剂c的抑制剂(Martin等(1998) Biochem. 37：11459-11468，选自人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂(hPSTI-C3)和小体所有组成成分(MBip)的抑制剂亲和性(Dimasi等(1997) J.Virol， 71：7461-7469)，cV_HE2(“camelized”可变区抗体片段)(Martin等(1997) Protein Eng. 10：607-614)和α1-抗胰凝乳蛋白酶(ACT)(Elzouki等)(1997) J.Hepat.27：42-28)。最近公开了设计用来选择性破坏丙型肝炎病毒RNA的核酶(参见 BioWorld Today 9(217)：4(1998年11月10日))。

另外参见1998年4月30日公开的PCT公布号WO 98/17679(Vertex Pharmaceuticals Incorporated)、1998年5月28日公开的WO98/22496(F.Hoffmann-La Roche AG)和1999年2月18日公开的WO99/07734(Boehringer Ingelheim Canada Ltd)。

HCV与肝硬化有关，而且诱发肝细胞癌。目前HCV感染者的预后很差。由于缺乏免疫性或者与HCV感染有关的豁免性(remission)，HCV感染比起其它形式的肝炎更难以治疗。目前的资料表明，肝硬化诊断后四年的存活率小于50％。诊断为患有局灶性可切除性肝细胞癌的患者的五年存活率为10-30％，而局灶性不可切除性肝细胞癌的患者的五年存活率小于1％。

参见A.Marchett等Synlett， S1，1000-1002(1999)，它介绍了HCVNS3蛋白酶抑制剂的二环类似物的合成，其中所公开的化合物的结构式如下：

另参见W.Han等Bioorganic & medicinal Chem.Lett，(2000) 10，711-713，它介绍了某些包含烯丙基和乙基官能团的α-酮酰胺类、α-酮酯类以及α-二酮类的制备。

另参见WO 00/09558(受让人：Boehringer Ingelheim Limited；2000年2月24日公开)，它公开了下式的肽衍生物：

其中各单元在其文中作了定义。该系列的示例性化合物为：

另参见WO 00/09543(受让人：Boehringer Ingelheim Limited；2000年2月24日公布)，它公开了下式的肽衍生物：

其中各种单元在其文中作了定义。该系列的示例性化合物为：

丙型肝炎的当前疗法包括干扰素-α(INF _α )以及使用利巴韦林和干扰素的联合疗法。参见例如Beremguer等(1998) Proc.Assoc.Am.. Physicians  110(2)：98-112。这些疗法存在低持续应答率并时常发生副作用的缺陷。参见例如Hoofnagle等(1997) N.Engl.J.Med. 336：347。目前，对于HCV感染没有疫苗可用。

等待批准以及共同等待批准的美国专利申请序列号60/194,607(2000年4月5日申请)、序列号60/198,204(2000年4月19日申请)、序列号60/220,110(2000年7月21日申请)、序列号60/220,109(2000年7月21日申请)、序列号60/220,107(2000年7月21日申请)、序列号60/254,869(2000年12月12日申请)以及序列号60/220,101(2000年7月21日申请)，它们公开了作为丙型肝炎病毒NS-3丝氨酸蛋白酶抑制剂的各种类型的肽和/或其它化合物。

需要针对HCV感染的新的治疗药物和治疗方法。因此，本发明一个目的是提供有效治疗、预防或改善丙型肝炎的一种或多种症状的化合物。

本发明的另一个目的是提供治疗、预防或改善丙型肝炎的一种或多种症状的方法。

本发明的再一个目的是提供使用本发明化合物调节丝氨酸蛋白酶活性、特别是HCV NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶活性的方法。

本发明的又一个目的是提供使用本发明化合物调节HCV多肽加工的方法。

                      发明概述

在本发明的许多实施方案中，本发明提供一类新型HCV蛋白酶抑制剂、包含一种或多种化合物的药用组合物、包含一种或多种所述化合物的药物制剂的制备方法以及治疗、预防或者改善丙型肝炎的一种或多种症状的方法。还提供调节HCV多肽与HCV蛋白酶相互作用的方法。本发明提供的化合物中，优选抑制HCV NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶活性的化合物。本申请公开一种化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体或前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物具有下式I的通用结构：

                         式I

其中：

Y选自以下基团：烷基、烷基-芳基、杂烷基、杂芳基、芳基-杂芳基、烷基-杂芳基、环烷基、烷氧基、烷基-芳氧基、芳氧基、杂芳氧基、杂环烷氧基、环烷氧基、烷基氨基、芳基氨基、烷基-芳基氨基、芳基氨基、杂芳基氨基、环烷基氨基和杂环烷基氨基，前提是Y可以任选被X¹¹或X¹²取代；

X¹¹为烷基、链烯基、链炔基、环烷基、环烷基-烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂芳基、烷基杂芳基或杂芳基烷基，前提是X¹¹还可以任选被X¹²取代；

X¹²为羟基、烷氧基、芳氧基、硫代基、烷硫基、芳硫基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷基亚磺酰氨基、芳基亚磺酰氨基、羧基、烷氧羰基、酰胺基、烷氧羰基氨基、烷氧羰基氧基、烷基脲基、芳基脲基、卤素、氰基或硝基，前提是所述烷基、烷氧基和芳基还可以任选被独立选自X¹²的部分取代；

R¹为-C(O)R⁵或-B(OR)₂，其中R⁵为H、-OH、-OR⁸、-NR⁹R¹⁰、-CF₃、-C₂F₅、-C₃F₇、-CF₂R⁶、-R⁶或-C(O)R⁷，其中R⁷为H、-OH、-OR⁸、-CHR⁹R¹⁰或-NR⁹R¹⁰，其中R⁶、R⁸、R⁹和R¹⁰独立选自以下基团：H、烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、环烷基、环烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、-[CH(R^1′)]_pC(O)OR¹¹、-[CH(R^1′)]_pC(O)NR¹²R¹³、-[CH(R^1′)]_pS(O₂)R¹¹、-[CH(R^1′)]_pC(O)R¹¹、-[CH(R^1′)]_pCH(OH)R¹¹、-CH(R¹)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)OR¹¹、

-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)NR¹²R¹³、

-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)R′、

-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)N(H)CH(R^3′)C(O)OR¹¹、

-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)N(H)CH(R^3′)C(O)NR¹²R¹³、

-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)N(H)CH(R^3′)C(O)N(H)CH(R^4′)C(O)OR¹¹

-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)N(H)CH(R^3′)C(O)N(H)CH(R^4′)C(O)NR¹²R¹³

-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)N(H)CH(R^3′)C(O)N(H)CH(R^4′)C(O)N(H)CH(R^5′)C(O)OR¹¹和

-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)N(H)CH(R^3′)C(O)N(H)CH(R^4′)C(O)N(H)CH(R^5′)C(O)NR¹²R¹³，其中R^1′、R^2′、R^3′、R^4′、R^5′、R¹¹、R¹²、

R¹³和R′独立选自以下基团：H、烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、环烷基、烷基-芳基、烷基-杂芳基、芳基-烷基和杂芳烷基；

Z选自O、N、C(H)或C(R)；

W可以存在或者不存在，当W存在时，W选自C(＝O)、C(＝S)、C(＝N-CN)或S(O₂)；

Q可以存在或者不存在，当Q存在时，Q为C(H)、N、P、(CH₂)_p、(CHR)_p、(CRR′)_p、O、NR、S或SO₂；当Q不存在时，M可以存在或不存在；当Q和M不存在时，A直接连接到L；

A为O、CH₂、(CHR)_p、(CHR-CHR′)_p、(CRR′)_p、N(R)、S、S(O₂)或化学键；

E为CH、N、CR或朝向A、L或G的双键；

G可以存在或不存在，当G存在时，G为(CH₂)_p、(CHR)_p或(CRR′)_p；

当G不存在时，则J存在并且E直接连接到G连接的式I碳原子上；

J可以存在或不存在，当J存在时，J为(CH₂)_p、(CHR)_p或(CRR′)_p、S(O₂)、N(H)、N(R)或O；当J不存在时，则G存在并且E直接连接到J连接的式I所示氮原子上；

L可以存在或不存在，当L存在时，L为C(H)、C(R)、O、S或N(R)；当L不存在时，则M可以存在或不存在；当M存在而L不存在时，则M直接独立连接到E，并且J直接独立连接到E；

M可以存在或不存在，当M存在时，M为O、NR、S、S(O₂)、(CH₂)_p、(CHR)_p(CHR-CHR′)_p或(CRR′)_p；

p为数字0-6；且

R、R′、R²、R³和R⁴可以相同或不同，并且独立选自以下基团：H；C₁-C₁₀烷基；C₂-C₁₀链烯基；C₃-C₈环烷基；C₃-C₈杂环烷基、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、酯、羧酸、氨基甲酸酯、脲、酮、醛、氰基、硝基、卤素；(环烷基)烷基和(杂环烷基)烷基，其中所述环烷基由3-8个碳原子和0-6个氧、氮、硫或磷原子组成，并且所述烷基具有1-6个碳原子；芳基；杂芳基；烷基-芳基；以及烷基-杂芳基；

其中所述烷基、杂烷基、链烯基、杂链烯基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基部分可任选进行化学上适当的取代，所述术语“取代”指任选并且化学上适当的被1个或多个选自以下的部分取代：烷基、链烯基、链炔基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、卤素、羟基、硫代基、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、酯、羧酸、氨基甲酸酯、脲、酮、醛、氰基、硝基、亚磺酰氨基、亚砜、砜、磺酰脲、酰肼和异羟肟酸酯。

进一步，其中式I中所述N-C-G-E-L-J-N单元为五元或六元环结构，前提是：当所述N-C-G-E-L-J-N单元为五元环结构，或当式I中包括N、C、G、E、L、J、N、A、Q和M的双环结构为五元环结构时，则所述五元环结构没有羰基作为环的一部分。

在式I各部分的上述定义中，各部分的优选基团如下：

R¹的优选定义为-C(O)R⁵，其中R⁵为H、-OH、-C(O)OR⁸或-C(O)NR⁹R¹⁰，其中R⁸、R⁹和R¹⁰的定义同上。R¹的更优选部分为-C(O)C(O)NR⁹R¹⁰，其中R⁹为H，R¹⁰为H、-R¹⁴、-[CH(R^1′)]_pC(O)OR¹¹、-[CH(R^1′)]_pC(O)NR¹²R¹³、-[CH(R^1′)]_pS(O₂)R¹¹、-[CH(R^1′)]_pS(O₂)NR¹²R¹³、-[CH(R^1′)]_pC(O)R¹¹、-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)OR¹¹、-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)NR¹²R¹³或-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)(R′)，其中R¹⁴为H、烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、环烷基、烷基-芳基、烷基-杂芳基、芳基-烷基、链烯基、链炔基或杂芳烷基。

在上述R¹⁰基团中，R¹⁰优选部分为：H、-R¹⁴、-CH(R^1′)C(O)OR¹¹、-CH(R^1′)CH(R^1′)C(O)OR¹¹、-CH(R^1′)C(O)NR¹²R¹³、-CH(R^1′)CH(R^1′)C(O)NR¹²R¹³、-CH(R^1′)CH(R^1′)S(O₂)R¹¹、-CH(R^1′)CH(R^1′)S(O₂)NR¹²R¹³、-CH(R^1′)CH(R^1′)C(O)R¹¹、-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)OR¹¹、-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)NR¹²R¹³或-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)(R′)，其中R^1′为H或烷基，R^2′为苯基、取代的苯基、杂原子-取代的苯基、苯硫基、环烷基、哌啶基或吡啶基。

更优选部分为：R^1′为H，R¹¹为H、甲基、乙基、烯丙基、叔丁基、苄基、α-甲基苄基、α，α-二甲基苄基、1-甲基环丙基或1-甲基环戊基；

R′为羟基甲基或-CH₂C(O)NR¹²R¹³，其中

NR¹²R¹³选自以下基团：

和

其中U⁶为H、OH或CH₂OH；

R¹⁴优选自以下基团：H、Me、Et、正丙基、甲氧基、环丙基、正丁基、1-丁-3-炔基、苄基、α-甲基苄基、苯乙基、烯丙基、1-丁-3-烯基、OMe、环丙基甲基；

R^2′优选独立选自以下的基团：

其中：

U¹和U²可以相同或不同并且选自以下基团：H、F、CH₂COOH、CH₂COOMe、CH₂CONH₂、CH₂CONHMe、CH₂CONMe₂、叠氮基、氨基、羟基、取代的氨基、取代的羟基；

U³和U⁴可以相同或不同并且选自O和S；

U⁵选自以下部分：烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂烷基磺酰基、杂芳基磺酰基、烷基羰基、芳基羰基、杂烷基羰基、杂芳基羰基、烷氧羰基、芳氧基羰基、杂芳氧基羰基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、杂芳基氨基羰基或其组合；

R²优选部分为：

和

R³优选部分为：

其中R³¹＝OH或O-烷基；

Y¹⁹选自以下部分：

Y²⁰选自以下部分：

R³的其它部分包括：

其中R⁵¹＝H、-COCH₃、-COOtBu或-CONHtBu。

R³的最优选部分为：

一些其它优选部分为：Z为N，R⁴为H，W为C(＝O)。此外，R⁴不存在时，式I中Z-C-R³部分可以为以下结构：

和

Y的优选部分为：

其中：

Y¹¹选自H、COOH、COOEt、OMe、Ph、OPh、NHMe、NHAc、NHPh、CHMe₂、1-三唑基、1-咪唑基和NHCH₂COOH；

Y¹²选自H、COOH、COOMe、OMe、F、Cl或Br；

Y¹³选自以下部分：

Y¹⁴选自MeS(O₂)、Ac、Boc、iBoc、Cbz或Alloc；

Y¹⁵和Y¹⁶独立选自烷基、芳基、杂烷基和杂芳基；

Y¹⁷为-CF₃、-NO₂、-C(O)NH₂、-OH、-C(O)OCH₃、-OCH₃、-OC₆H₅、-C₆H₅、-C(O)C₆H₅、-NH₂或-C(O)OH；

Y¹⁸为-C(O)OCH₃、-NO₂、-N(CH₃)₂、F、-OCH₃、-CH₂C(O)OH、-C(O)OH、-S(O₂)NH₂或-NHCOCH₃。

Y可以更优选为：

其中：

Y¹⁷＝CF₃、NO₂、CONH₂、OH、NH₂或COOH；

Y¹⁸＝F、COOH；

Y的更加优选部分为：

如式I所示的以下单元：

为环结构，它可以为五元或六元环结构。当此环为五元环时，本发明要求五元环不包含羰基基团作为环结构的一部分。优选五元环结构为：

其中R和R′定义同上。优选的五元环结构为：

其中R²⁰选自以下部分：

此外，所述五元环与其相邻的两个环外羰基一起可以表示如下：

在本发明情况下，R²¹和R²²可以相同或不同并且独立选自以下部分：

以下五元环结构：

的一些优选实例如下：

此外，式I中的以下单元：

可以表示为以下结构 b和 c：

b的优选定义为：

在 c中，G和J独立选自以下基团：(CH₂)_p、(CHR)_p、(CHR-CHR′)_p和(CRR′)_p；A和M独立选自以下基团：O、S、SO₂、NR、(CH₂)_p、(CHR)_p、(CHR-CHR′)_p和(CRR′)_p；Q为CH₂、CHR、CRR′、NH、NR、O、S、SO₂、NR、(CH₂)_p、(CHR)_p和(CRR′)_p。

c的优选定义为：

其中n＝0-4

当环结构如下图示时：

其最优选的实例如下：

以下单元：

的一些更优选部分为：

除非另有定义，否则本发明使用的所有科技术语具有本发明所属领域的技术人员通常理解的相同含义。因此，例如术语烷基(包括烷氧基的烷基部分)指由具有1-8个、优选1-6个碳原子的直链或支链饱和烃除去一个原子后获得的单价基团；

芳基-表示具有6-14个碳原子且具有至少1个苯型环的碳环基团，碳环基团的所有可取代的芳香族碳原子均可作为连接点。优选芳基包括苯基、1-萘基、2-萘基和茚满基，尤其是苯基和取代的苯基；

芳烷基-表示含有芳基并通过低级烷基连接的部分；

烷基芳基-表示含有低级烷基并通过芳基连接的部分；

环烷基-表示具有3-8个、优选5个或6个碳原子的饱和碳环，其任选被取代；

杂环-表示(除以下定义的杂芳基以外)具有至少1个插入碳环结构(由1个环或者2个稠环组成，其中每个环为5元、6元或7元环且可具有或者不具有不含离域π电子的双键)的O、S和/或N原子的饱和及不饱和环状有机基团，其环结构具有2-8个、优选3-6个碳原子，例如2-或3-哌啶基、2-或3-哌嗪基、2-或3-吗啉基、或者2-或3-硫代吗啉基；

卤素-表示氟、氯、溴和碘；

杂芳基-表示具有至少1个插入碳环结构的O、S和/或N原子且具有足够数量的离域π电子以提供芳族性质的环状有机基团，其中芳族杂环具有2-14个、优选4或5个碳原子，例如2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基、2-呋喃基或3-呋喃基、2-噻吩基或3-噻吩基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基、2-咪唑基或4-咪唑基、2-嘧啶基、4-嘧啶基或5-嘧啶基、2-吡嗪基、或者3-哒嗪基或4-哒嗪基等。优选杂芳基为2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基；所述杂芳基也可被任选取代。此外，如上所述，除有特别定义，术语“取代或未取代的”或“任选取代的”是指相关部分任选被属于R¹²或R¹³的部分进行化学上适当的取代。本发明使用的“前体药物”为药物前体化合物，它在给予患者后在体内通过一些化学或生理过程(例如前体药物在生理pH或酶作用下转换成需要的药物形式)释放出药物。

本发明还包括式I化合物及其前体药物的互变异构体、旋转异构体、对映异构体和其它旋光异构体，及其药学上可接受的盐、溶剂合物和衍生物。

本发明的又一特征是包含作为活性成分的式I化合物(或其盐、溶剂合物或异构体)和药学上可接受的载体或赋形剂的药用组合物。

本发明还提供制备式I化合物的方法以及治疗诸如HCV、AIDS(获得性免疫缺陷综合征)的疾病及相关疾病的方法。所述治疗方法包括给予患有一种或多种所述疾病的患者治疗有效量的式I化合物或者包含式I化合物的药用组合物。

还公开了式I化合物在制备治疗HCV、AIDS和相关疾病的药物中的用途。

还公开了治疗丙型肝炎病毒相关性疾病的方法，该方法包括给予有效量的一种或多种本发明化合物。

还公开了调节丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶活性的方法，该方法包括使HCV蛋白酶与一种或多种本发明化合物接触。

还公开了治疗、预防或改善丙型肝炎的一种或多种症状的方法，该方法包括给予有效量的一种或多种本发明化合物。HCV蛋白酶为NS3或NS4a蛋白酶。本发明化合物抑制所述蛋白酶。它们还调节丙型肝炎(HCV)多肽的加工。

                优选实施方案的详细描述

在一个实施方案中，本发明公开了作为HCV蛋白酶抑制剂、尤其是HCV NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶抑制剂的式I化合物或其药学上可接受的衍生物，其各种定义见上文。

具有优良的HCV蛋白酶抑制活性的本发明代表性化合物与它们的活性一并列于下表1-5(K_i ^*值范围为纳摩尔，nM)。几种化合物以及补充的化合物另外在权利要求书中公开。

表1：化合物和HCV蛋白酶连续检测结果

化合物的实施例编号	Ki*范围
		1	C
2	C
		3	C
4	C
		5	C
6	C
		7	C
8	C
		9	C
10	C
		11	C
12	C
		13	C
14	C
		15	C
16	C
		17	C
18	C
		19	C
20	C
		21	C
22	C
		23	C
24	C
		25	C
26	C
		27	C
28	C
		29	C
30	C
		31	C
32	C
		33	C
34	C
		35	C
36	C
		37	C

38	C
		39	C
40	C
		41	C
42	C
		43	C
44	C
		45	C
46	C
		47	C
48	C
		49	C
50	C
		51	C
52	C
		53	C
54	C
		55	C
56	C
		57	C
58	C
		59	C
60	C
		61	C
62	C
		63	C
64	C
		65	C
66	C
		67	C
68	B
		69	C
70	C
		71	B
72	C
		73	B
74	C
		75	C
76	A
		77	B
78	A
		79	C
80	A
		81	C

82	A
		83	B
84	C
		85	C
86	8
		87	B
88	A
		89	B
90	C
		91	C
92	C
		93	C
94	C
		95	C
96	C
		97	C
98	B
		99	B
100	A
		101	A
102	C
		103	C
104	C
		105	C
106	C
		107	B
108	A
		109	A
110	A
		111	A
112	A
		113	B
114	A
		115	B
116	A
		117	A
118	A
		119	A
120	A
		121	B
122	B
		123	A
124	B
		125	B

126	B
		127	A
128	A
		129	A
130	8
		131	A
132	A
		133	A
134	B
		135	A
136	A
		137	A
138	A
		139	A
140	B
		141	A
142	A
		143	B
144	8
		145	C
146	A
		147	A
148	B
		149	A
150	A
		151	A
152	A
		153	A
154	A
		155	B
156	B
		157	B
158	C
		159	B
160	A
		161	A
162	A
		163	C
164	A
		165	C
166	B
		167	A
168	C
		169	B

170	B
		171	A
172	A
		173	A
174	A
		175	A
176	B
		177	B
178	A
		179	A
180	B
		181	A
182	B
		183	A
184	A
		185	A
186	A
		187	A
188	A
		189	B
190	B
		191	B
192	A
		193	A
194	B
		195	A
196	B
		197	A
198	A
		199	A
200	A
		201	B
202	A
		203	B
204	B
		205	B
206	B
		207	B
208	A
		209	A
210	A
		211	A
212	A
		213	B

214	B
		215	B
216	B
		217	C
218	A
		219	A
220	A
		221	A
222	A
		223	B
224	C
		225	C
226	A
		227	A
228	C
		229	A
230	A
		231	A
232	C
		233	C
234	C
		235	C
236	B
		237	C
238	A
		239	C
240	A
		241	C
242	B
		243	C
244	B
		245	C
246	B
		247	A
248	A
		249	C
250	C
		251	B
252	C
		253	C
254	B
		255	B
256	A
		257	C

258	A
		259	A
260	C
		261	C
262	A
		263	B
264	B
		265	C
266	B
		267	A
268	C
		269	A
270	C
		271	A
272	C
		273	C
274	C
		275	C
276	A
		277	B
278	A
		279	B
280	A
		281	C
282	C
		283	C
284	C
		285	C
286	C
		287	C
288	B
		289	B
290	C
		291	C
292	C
		293	C
294	C
		295	C
296	B
		297	C
298	C
		299	B
300	B
		301	C

302	C
		303	B
304	C
		305	C
306	C
		307	B
308	B
		309	C
310	C
		311	C
312	C
		313	B
314	A
		315	B
316	B
		317	A
318	A
		319	A
320	A
		321	C
322	C
		323	C
324	C
		325	A
326	A
		327	C
328	B
		329	B
330	A
		331	A
332	A
		333	B
334	B
		335	B
336	A
		337	A
338	C
		339	A
340	C
		341	C
342	C
		343	A
344	C
		345	C

346	C
		347	B
348	B
		349	C
350	C
		351	C
352	C
		353	C
354	C
		355	C
356	A
		357	A
358	C
		359	A
360	B
		361	B
362	C

HCV连续检测的Ki^*范围：

类别A＝1-100nM；类别B＝101-1000nM；类别C＞1000nM。

一些类型的本发明化合物以及合成不同类型的本发明式I化合物的方法列于下面，接着用示意图说明，之后是示例性的实施例。

          

(R＝叔丁基，X＝NH₂)

(R＝异丁基，X＝NH₂)

(R＝叔丁基，X＝OX)

(R＝三氯乙基，X＝OH)

(X＝O^tBu)                                                         (X＝OH)

(X＝OH)                                                            (X＝O^tBu)

                                                                     (X＝NH₂)

                                                                     (X＝NHMe)

                                                                     (X＝NMe₂)

                                                                    (X＝NH₂)

                                                                    (X＝NMe₂)

                                                                    (X＝NHMe)

                                                                    (X＝OH)

                  (X＝O^tBu)

                  (X＝OH)

                  (X＝NH₂)

                  (X＝NMe₂)

(X＝O^tBu)                                                       (R＝叔丁基)

(X＝OH)                                                           (R＝异丁基)

(X＝NH₂)

(X＝NMe₂)

(X＝NMeOMe)

                                                             (X＝Me，Y＝CH₂Me)

                                                             (X＝OAc，Y＝Me)

根据它们的结构，本发明化合物可与有机酸或无机酸、或者有机碱或无机碱形成药学上可接受的盐。用于此类盐形成的合适的酸的实例为盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲磺酸和本领域技术人员熟知的其它的矿物酸以及羧酸类。对于与碱形成盐的合适碱为例如NaOH、KOH、NH₄OH、氢氧化四烷基铵等。

在另一实施方案中，本发明提供包含作为活性成分的本发明肽的药用组合物。药用组合物通常还包含药学上可接受的载体稀释剂、赋形剂或载体(本发明统称为载体材料)。由于它们的HCV抑制活性，所述药用组合物具有治疗丙型肝炎和相关疾病的用途。

在另一实施方案中，本发明公开了制备包含作为活性成分的本发明化合物的药用组合物的方法。在本发明的药用组合物和方法中，活性成分一般以与适合的载体材料的混合物给药，根据需要的给药形式适当地选择载体材料，即口服片剂、胶囊剂(固体填充、半固体填充或液体填充)、使用时配制用粉剂、口服凝胶剂、酏剂、可分散颗粒剂、糖浆剂、混悬剂等，并且符合常规制药实践。举例来说，对于以片剂或胶囊剂形式口服给药，活性药物成分可与任何口服无毒性的药学上可接受的惰性载体组合，例如乳糖、淀粉、蔗糖、纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、滑石粉、甘露糖醇、乙醇(液体形式)等。此外，当要求或者需要时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺和到混合物中。粉剂和片剂也可包含约5％至约95％的本发明组合物。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖、玉米甜味剂、天然及合成树胶如阿拉伯树胶、藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇和蜡。可用于上述剂型的润滑剂实例有硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、瓜尔胶等。

合适的情况下也可包含甜味剂、矫味剂和防腐剂。下面更详细地讨论以上提及的一些术语，即崩解剂、稀释剂、润滑剂、粘合剂等。

另外，本发明的组合物可配制成持续释放形式，从而控制任何一种或者多种成分或活性成分的释放速率，以达到最优化的治疗效果即HCV抑制活性等。持续释放的合适剂型包括多层片剂，它包含多层不同崩解速率或者控释聚合物基质，活性成分浸渍在聚合物基质中，加工成片剂形式，或者包含所述浸渍或囊化多孔聚合物基质的胶囊剂。

液态制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂。可列举的实例有用于胃肠外注射的水溶液剂或者水-丙二醇溶液剂或者加入甜味剂和遮光剂(pacifiers)的口服溶液剂、混悬剂和乳剂。液态制剂还可包括鼻内给药的溶液剂。

适于吸入的气雾制剂可包括溶液剂和粉末形式的固体，它们可以与药学上可接受的载体例如惰性压缩气体(如氮气)联合应用。

制备栓剂时，首先熔融低熔点的蜡，例如脂肪酸甘油酯(如可可脂)的混合物，并且通过搅拌或者类似的混合使活性成分均匀分散于其中。然后将熔融的均匀混合物倾入到适当大小的模具中，使之冷却并由此固化。

也包括这样的固态制剂：可在临用前配制成口服或胃肠外给药的液态制剂。所述液态制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂。

本发明化合物也可透皮给药。透皮给药的组合物可采用乳膏剂、洗剂、气雾剂和/或乳剂形式，并且作为用于此目的的本领域常规技术，所述组合物可包含在骨架型或者贮库型透皮贴剂中。

本发明化合物优选口服、静脉内或皮下给药。

药用制剂优选单位剂型。在所述剂型中，制剂细分为包含适量活性成分的适当大小的单位剂量，例如包含达到所需目的的有效量。

根据特定的应用，单位剂量制剂中的本发明活性成分剂量通常可以不同或调整，从约1.0毫克到约1,000毫克，优选从约1.0毫克到约950毫克，更优选从约1.0毫克到约500毫克，一般为约1毫克到约250毫克。实际使用剂量可根据患者的年龄、性别、体重以及所治疗的病情严重程度而变化。所述技术是本领域技术人员众所周知的。

通常，包含活性成分的人用口服剂型可以每天给药1次或2次。给药量和给药频率需要根据主治医师的判断进行调节。口服给药的一般推荐日剂量范围从约1.0毫克/天到约1,000毫克/天，可以一次或分次给药。

一些有用的术语说明如下：

胶囊剂-指特殊容器或者包封物，它们由甲基纤维素、聚乙烯醇、或变性明胶或淀粉制成，用于保持或容纳包含活性成分的组合物。硬壳胶囊一般由相对高强度的明胶骨架和猪皮明胶的掺合物制成。胶囊本身可包含少量染料、不透明剂、增塑剂和防腐剂。

片剂-指包含活性成分及合适稀释剂的压制或模制固体剂型。通过压缩混合物或经湿法制粒、干法制粒或压缩获得的颗粒制备片剂。

口服凝胶剂-指活性成分分散于或溶于亲水性半固体基质中。

使用时配制用粉剂指包含活性成分和合适稀释剂的粉末掺合物，它可用水或果汁混悬。

稀释剂-指通常构成组合物或者剂型的主要部分的物质。合适的稀释剂包括糖类，例如乳糖、蔗糖、甘露糖醇和山梨醇；从小麦、玉米、大米和马铃薯获得的淀粉；以及纤维素，例如微晶纤维素。组合物中稀释剂含量可占总组合物的重量百分比从约10％到约90％，优选约25％到约75％，更优选约30％到约60％，甚至更优选约12％到约60％。

崩解剂-指加入到组合物中以便促使其分开(崩解)并释放出药物的物质。合适的崩解剂包括淀粉；“冷水可溶性”改性淀粉，例如羧甲基淀粉钠；天然和合成树胶类，如槐树豆胶、卡拉雅胶、瓜尔胶、西黄蓍胶和琼脂；纤维素衍生物，如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠；微晶纤维素和交联微晶纤维素如交联羧甲基纤维素钠；藻酸盐如藻酸和藻酸钠；粘土如膨润土；以及泡腾混合物。组合物中崩解剂含量可占组合物的重量百分比从约2％到约15％，更优选约4％到约10％。

粘合剂-指使粉末粘合或者“胶着”在一起并使它们粘聚形成颗粒的物质，因此在配制中用作“胶粘剂”。粘合剂增加稀释剂或增量剂已有的粘性强度。合适的粘合剂包括糖类如蔗糖；从小麦、玉米、大米和马铃薯获得的淀粉；天然树胶类如阿拉伯树胶、明胶和西黄蓍胶；海藻衍生物如藻酸、藻酸钠和藻酸钙铵；纤维素材料如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠和羟丙基甲基纤维素；聚乙烯吡咯烷酮；以及无机物例如硅酸镁铝。组合物中粘合剂含量可占组合物的重量百分比从约2％到约20％，更优选从约3％到约10％，甚至更优选从约3％到约6％。

润滑剂-指加入到剂型中以便在其被压制后通过减少摩擦或磨损使片剂、颗粒剂等自模具或者冲模中脱出的物质。合适的润滑剂包括金属硬脂酸盐如硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸钾；硬脂酸；高熔点蜡；以及水溶性润滑剂，例如氯化钠、苯甲酸钠、乙酸钠、油酸钠、聚乙二醇和d’l-亮氨酸。润滑剂通常在压制前的最后步骤加入，因为它们必须存在于颗粒的表面并介于颗粒与压片机组件之间。组合物中润滑剂含量可占组合物重量百分比从约0.2％到约5％，优选约0.5％到约2％，更优选从约0.3％到约1.5％。

助流剂(glident)-防止结块并改善颗粒的流动性以使流动平滑均匀的物质。合适的助流剂包括二氧化硅和滑石粉。组合物中助流剂含量可占组合物的总重量百分比从约0.1％到约5％，优选从约0.5％到约2％。

着色剂-使组合物或者剂型着色的赋形剂。所述赋形剂可包括食品级染料和吸附到合适吸附剂(例如粘土或氧化铝)上的食品级染料。着色剂含量可占组合物的重量百分比从约0.1％到约5％，优选从约0.1％到约1％。

生物利用度-指与标准物或者对照物相比，给药剂型的活性药物成分或者治疗部分被吸收进入体循环的速率和程度。

片剂的常规制备方法是人们已知的。所述方法包括干法例如直接压片和对压缩生产的颗粒压片，或者湿法或其它特殊方法。其它给药形式例如胶囊剂、栓剂等的常规制备方法也是人们熟知的。

本发明的另一个实施方案公开了上文公开的药用组合物在治疗疾病例如丙型肝炎等中的用途。该方法包括给予患有一种或多种这样的疾病并需要这种治疗的患者治疗有效量的本发明药用组合物。

在另一实施方案中，本发明化合物可以用于治疗人类HCV，其治疗模式可以是单一疗法或联合疗法(例如双重联合、三重联合等)，例如联合应用抗病毒药和/或免疫调节药。所述抗病毒药和/或免疫调节药实例包括利巴韦林(Schering-Plough Corporation，Madison，NewJersey)和Levovirin^TM(ICN Pharmaceuticals，Costa Mesa，California)、VP50406^TM(Viropharma，Incorporated，Exton，Pennsylvania)、ISIS 14803^TM(ISIS Pharmaceuticals，Carlsbad，California)、Heptazyme^TM(RibozymePharmaceuticals，Boulder，Colorado)、VX 497^TM(Vertex Pharmaceuticals，Cambridge，Massachusetts)、Thymosin^TM(SciClone Pharmaceuticals，SanMateo，California)、Maxamine^TM(Maxim Pharmaceuticals，San Diego，California)、霉考酚酸莫酯(Hoffman-LaRoche，Nutley，New Jersey)、干扰素(例如干扰素-α，聚乙二醇-干扰素α缀合物)等。“聚乙二醇-干扰素α缀合物”为共价连接的干扰素α分子和聚乙二醇分子。聚乙二醇-干扰素α缀合物的实例包括干扰素α-2a(Roferon^TM，Hoffman La-Roche，Nutley，New Jersey)(其形式为聚乙二醇化干扰素α-2a(例如销售商品名为Pegasys^TM))、干扰素α-2b(Intron^TM，Schering-Plough Corporation)(其形式为聚乙二醇化干扰素α-2b(例如销售商品名为PEG-Intron^TM))、干扰素α-2c(Berofor Alpha^TM，Boehringer Ingelheim，Ingelheim，Germany)或通过测定天然存在的干扰素α的共有序列定义的共有干扰素(Infergen^TM，Amgen，Thousand Oaks，California)。

如前所述，本发明还包括本发明化合物的互变异构体、旋转异构体、对映异构体和其它立体异构体。因此，本领域技术人员知道，本发明的一些化合物可能存在适当的异构体形式。这样的变化形式考虑在本发明范围内。

本发明另一个实施方案公开了本发明公开的化合物的制备方法。所述化合物可通过本领域已知的几种技术制备。代表性的示例方法在以下反应流程中概述。应当理解，虽然以下的示例性流程介绍了少量代表性本发明化合物的制备，但是适当替代任何天然及非天然氨基酸将会形成基于所述替代的所需化合物。这样的变化已考虑在本发明范围内。

在以下流程、制备和实施例的说明中所使用的缩写如下：

THF：四氢呋喃

DMF：N，N-二甲基甲酰胺

EtOAc：乙酸乙酯

AcOH：乙酸

HOOBt：3-羟基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮

EDCl：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

NMM：N-甲基吗啉

ADDP：1，1’-偶氮二羰二哌啶

DEAD：偶氮二羧酸二乙酯

MeOH：甲醇

EtOH：乙醇

Et₂O：乙醚

DMSO：二甲基亚砜

HOBt：N-羟基苯并三唑

PyBrOP：六氟磷酸溴-三-吡咯烷基磷鎓

DCM：二氯甲烷

DCC：1，3-二环己基碳二亚胺

TEMPO：2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基

Phg：苯基甘氨酸

Chg：环己基甘氨酸

Bn：苄基

Bzl：苄基

Et：乙基

Ph：苯基

iBoc：异丁氧羰基

iPr：异丙基

^tBu或Bu^t：叔丁基

Boc：叔丁氧羰基

Cbz：苄氧基羰基

Cp：环戊二烯基

Ts：对甲苯磺酰基

Me：甲基

HATU：六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓

DMAP：4-N，N-二甲氨基吡啶

Bop：六氟磷酸1-苯三唑氧基三(二甲氨基)鏻

通用制备流程：

以下流程介绍中间体结构单元的合成方法：

                        流程1

                             流程2

                             流程3

                             流程4

                             流程5

                             流程6

                             流程7

                             流程8

其中

和

                             流程9

其中

和

                             流程10

                             流程11

                             流程12

                             流程13

                             流程14

                             流程15

                             流程16

                             流程17

                             流程18

                             流程19

                             流程20

中间体的制备：

制备实施例1

步骤A： 化合物(1.1)

向化合物(1.08)(3.00g，12.0mmol(S.L.Harbeson等 J.Med.Chem.37(18)(1994)2918-2929)的DMF(15mL)和CH₂Cl₂(15mL)的搅拌溶液中在-20℃加入HOOBt(1.97g，12.0mmol)、N-甲基吗啉(4.0mL，36.0mmol)和EDCl(2.79g，14.5mmol)，搅拌10分钟，然后加入HCl·H₂N-Gly-OBn(2.56g，13.0mmol)。将所得溶液在-20℃搅拌2小时，冷藏保存过夜，然后浓缩至干，接着用EtOAc(150mL)稀释。然后，将EtOAc溶液用饱和NaHCO₃、H₂O、5％H₃PO₄、盐水洗涤两次，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干，得到化合物(1.09)(4.5g，94％)。LRMS m/z MH⁺＝395.1。

步骤B： 化合物(1.1)

将化合物(1.09)(7.00g，17.8mmol)的无水乙醇(300mL)溶液在室温、氢气氛下并在Pd-C(300mg，10％)存在下进行搅拌。反应进度通过tlc监测。2小时后，混合物通过硅藻土垫过滤，所得溶液经真空浓缩，得到化合物(1.1)(5.40g，定量)。LRMS m/z MH⁺＝305.1。

制备实施例2

步骤A   化合物(1.3)

将以上制备实施例1步骤B的化合物(1.1)(1eq.)、化合物(1.2)(Novabiochem，第04-12-5147号)(1.03eq.)、HOOBt(1.03eq.)、N-甲基吗啉(2.2eq.)和二甲基甲酰胺(70mL/g)的混合物在-20℃进行搅拌。加入EDCl(1.04eq.)，然后将反应物搅拌48小时。将反应混合物倾入到5％KH₂PO₄水溶液中，用乙酸乙酯(2×)萃取。合并的有机层依次用冷的5％K₂CO₃水溶液、5％KH₂PO₄水溶液、盐水洗涤，有机层经无水MgSO₄干燥。过滤混合物，然后蒸发，真空干燥滤液，残余物用Et₂O-己烷研磨，过滤，得到标题化合物(1.3)(收率86％)，C₂₅H₃₉N₃O₇(493.60)，质谱(FAB)M+1＝494.3。

步骤B   化合物(1.4)

将制备实施例2步骤A的化合物(1.3)(3.0g)用4N HCl/二噁烷(36mL)处理，在室温下搅拌7分钟。将混合物倾入到1.5L冷(5℃)己烷中并进行搅拌，然后保持低温0.5小时。混合物在干燥空气中抽滤，将收集的固体进一步干燥，得到标题化合物(1.4)(2.3g，收率88％)，C₂₀H₃₁N₃O₅·HCl，H¹ NMR(DMSO-d₆/NaOD)δ7.38(m，5H)，5.25(m，1H)，4.3-4.1(m，1H)，3.8(m，2H)，3.4-3.3(m，被D₂O屏蔽)，1.7-1.1(m，4H)，1.35(s，9H)，0.83(m，3H)。

制备实施例3

化合物(1.5)

按照以下制备实施例7步骤A基本相同的方法，对制备实施例2步骤A的化合物(1.3)进行处理，得到化合物(1.5)。

制备实施例4

化合物(1.6)

按照制备实施例2步骤B基本相同的方法，对制备实施例3的化合物(1.5)进行处理，得到化合物(1.6)。

制备实施例5

步骤A   化合物(2.09)

向二甲胺盐酸盐(1.61g，19.7mmol)、N-Boc-苯基甘氨酸、化合物(2.08)(4.50g，17.9mmol，Bachem Co.#A-2225)、HOOBt(3.07g，18.8mmol)和EDCl(4.12g，21.5mmol)的无水DMF(200mL)和CH₂Cl₂(150mL)溶液中在-20℃加入NMM(5.90mL，53.7mmol)。在上述温度搅拌30分钟后，将反应混合物保存在冰箱中过夜(18h)。然后升温至室温，加入EtOAc(450mL)、盐水(100mL)和5％H₃PO₄(100mL)。分离各层后，有机层用5％H₃PO₄(100mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(2×150mL)、水(150mL)和盐水(150mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，然后真空浓缩，得到白色固体化合物(2.09)(4.86g)，无需进一步纯化就可直接使用。

步骤B   化合物(2.1)

将制备实施例5步骤A的化合物(2.09)(4.70g，粗品)溶于4N HCl(60mL，240mmol)中，所得溶液在室温下搅拌。反应进度通过TLC监测。4小时后，真空浓缩上述溶液，得到白色固体化合物(2.1)，无需进一步纯化就可直接用于下一步反应中。LRMS m/z MH⁺＝179.0。

制备实施例6

步骤A   化合物(2.2)

按照制备实施例2步骤A基本相同的方法，用苯基甘氨酸N，N-二甲基酰胺盐酸盐代替苯基甘氨酸叔丁酯盐酸盐，制备化合物(2.2)。质谱(FAB)M+1＝465.3。

步骤B   化合物(2.3)

使步骤A的化合物(2.2)(1.85g)与4N HCl/二噁烷(50mL)在室温下反应1小时。混合物在20℃水浴中真空蒸发，用异丙醚研磨，过滤，干燥，得到化合物(2.3)(1.57g，收率98％)，C₁₈H₂₈N₄O₄·HCl，质谱。(FAB)M+1＝365.3

制备实施例7

步骤A   化合物(2.4)

将制备实施例5步骤A的化合物(2.2)(2.0g)的二氯甲烷(60mL)溶液用二甲基亚砜(3.0mL)和2，2-二氯乙酸(0.70mL)处理。将搅拌混合物冷却至5℃，然后加入1M二环己基碳二亚胺/二氯甲烷溶液(8.5mL)。除去冷却浴，搅拌混合物22小时。然后加入2-丙醇(0.5mL)，再搅拌1小时。过滤混合物，依次用冰冷的0.1N NaOH(50mL)、冰冷的0.1N HCl(50mL)、5％KH₂PO₄水溶液、饱和盐水洗涤。有机溶液经无水硫酸镁干燥，然后过滤。蒸发滤液，然后经硅胶色谱纯化(洗脱时用乙酸乙酯)，得到化合物(2.3)(1.87g，收率94％)，C₂₃H₃₄N₄O₆，质谱(FAB)M+1＝463.3。

步骤B   化合物(2.5)

按照制备实施例2步骤B基本相同的方法，制备化合物(2.5)。

制备实施例8

步骤A   化合物(3.1)

在烧瓶中混合N-Cbz-羟脯氨酸甲酯(Bachem Biosciences，Incorporated，King of Prussia，Pennsylvania)、化合物(3.01)(3.0g)、甲苯(30mL)和乙酸乙酯(30mL)。将混合物剧烈地搅拌，然后加入NaBr/水溶液(1.28g/5mL)。向此溶液中加入2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基自由基(TEMPO，17mg，Aldrich Chemicals，Milwaukee，Wisconsin)。将搅拌混合物冷却至5℃，然后在0.5小时内滴加制备好的氧化剂溶液[市售漂白剂Clorox(18mL)、NaHCO₃(2.75g)和水配制成40mL]。向此溶液中加入2-丙醇(0.2mL)。分离有机层，水层用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取液，先用2％硫代硫酸钠洗涤，然后用饱和盐水洗涤。有机溶液经无水MgSO₄干燥，过滤，然后真空蒸发滤液，得到适合下一步反应用的浅黄色树胶状物(2.9g，收率97％)，C₁₄H₁₅NO₅(277.28)，质谱(FAB)M+1＝278.1。

步骤B   化合物(3.2)

将上述步骤A的化合物(3.1)(7.8g)溶于二氯甲烷(100mL)中，冷却至15℃。向该混合物中先加入1，3-丙二硫醇(3.1mL)，接着加入新蒸馏的三氟化硼-乙醚溶液(3.7mL)。将混合物在室温下搅拌18小时。在剧烈搅拌的同时，小心地加入K₂CO₃/水溶液(2g/30mL)，接着加入饱和NaHCO₃(10mL)。使有机层与水层(pH～7.4)分开，依次用水(10mL)、盐水洗涤。有机溶液经无水MgSO₄干燥，过滤，真空蒸发。残余物经硅胶色谱纯化(洗脱时先用甲苯，再用梯度的己烷-Et₂O(2∶3至0∶1))，得到褐色油状物(7.0g，收率68％)，C₁₇H₂₁NO₄S₂(367.48)，质谱(FAB)M+1＝368.1。

步骤C   化合物(3.3)

将以上步骤B的化合物(3.2)(45g)的乙腈(800mL)溶液立刻在20℃用新蒸馏的碘代三甲基硅烷(53mL)处理。将反应物搅拌30分钟，然后倾入到新制备的二碳酸二叔丁酯(107g)、乙醚(150mL)和二异丙基乙胺(66.5mL)溶液中。将混合物再搅拌30分钟，然后用己烷(2×500mL)洗涤。将乙酸乙酯(1000mL)加入到下面的乙腈层，然后将此层用10％KH₂PO₄水溶液(2×700mL)和盐水洗涤。滤液在25℃的水浴中真空蒸发，再溶解于新的乙酸乙酯(1000mL)，然后依次用0.1N HCl、0.1N NaOH、10％KH₂PO₄水溶液和盐水洗涤。有机溶液经无水MgSO₄干燥，过滤，真空蒸发。残余物(66g)在硅胶(2kg)上经色谱纯化(洗脱时先用己烷(2L)，然后用Et₂O/己烷(55∶45，2L)，再用Et₂O(2L))，得到橙色树胶状物，静置时它缓慢地结晶出来(28g，收率69％)，C₁₄H₂₃NO₄S₂(333.46)，质谱(FAB)M+1＝334.1。

步骤D   化合物(3.4)

以上步骤C的化合物(3.3)(11g)的二噁烷(150mL)溶液在20℃用1N LiOH水溶液(47mL)处理，搅拌30小时。在30℃水浴中真空浓缩混合物至一半的体积。将残留物用水(300mL)稀释，用Et₂O(2×200mL)萃取。将水层用12N HCl(3-4mL)酸化至pH～4，用乙酸乙酯萃取，然后用盐水洗涤。有机溶液经无水MgSO₄干燥，过滤，然后真空蒸发，得到化合物(3.4)(8.1g，78％)，C₁₃H₂₁NO₄S₂(319.44)，质谱(FAB)M+1＝320.1。

步骤E   化合物(3.5)

向以上步骤C的化合物(3.3)(1g)的二噁烷(5mL)溶液中加入4NHCl-二噁烷溶液(50mL)。将混合物剧烈地搅拌1小时。在25℃的水浴中真空蒸发混合物。残余物用Et₂O研磨，然后过滤，得到标题化合物(0.76g，收率93％)，C₉H₁₅NO₂S₂·HCl(269.81)，质谱(FAB)M+1＝234.0。

制备实施例9

步骤A   化合物(3.6)

按照制备实施例8步骤B基本相同的方法，用乙二硫醇代替丙二硫醇，得到化合物(3.6)。

步骤B   化合物(3.7)

按照制备实施例8步骤C基本相同的方法，用化合物(3.6)代替化合物(3.2)，得到产物化合物(3.7)。

步骤C   化合物(3.8)

按照制备实施例8步骤D基本相同的方法，用化合物(3.7)代替化合物(3.3)，得到产物化合物(3.8)。

步骤D   化合物(3.9)

按照制备实施例8步骤E基本相同的方法，用化合物(3.7)代替化合物(3.3)，得到产物化合物(3.9)。

制备实施例10

步骤A   化合物(4.1)

按照制备实施例2步骤A基本相同的方法，制备化合物(4.1)C₃₃H₄₈N₄O₉S₂(708.89)。

步骤B   化合物(4.2)

按照制备实施例2步骤B基本相同的方法，制备化合物(4.2)，质谱(FAB)M+1＝609.3。

步骤C   化合物(4.3)

按照制备实施例2步骤A基本相同的方法，制备化合物(4.3)，C₄₁H₆₁N₅O₁₀S₂(708.89)，质谱(FAB)M+1＝709.3。

步骤D   化合物(4.4)

按照制备实施例7步骤A基本相同的方法，制备化合物(4.4)。

制备实施例11

步骤A   化合物(4.5)

按照制备实施例2步骤A基本相同的方法，制备化合物(4.5)。

步骤B   化合物(4.6)

按照制备实施例2步骤B基本相同的方法，制备化合物(4.6)。

步骤C   化合物(4.7)

按照制备实施例2步骤A基本相同的方法，使制备实施例12的化合物(4.9)与以上步骤B的化合物(4.6)反应，得到化合物(4.7)。

步骤D   化合物(4.8)

按照制备实施例7步骤A基本相同的方法，制备化合物(4.8)。

制备实施例12

化合物(4.9)

          

           (4.01)      (4.02)      (4.9)

L-环己基甘氨酸(4.02)(1.0eq.)、二甲基甲酰胺(20mL/g)和二异丙基乙胺(1.1eq.)的溶液在5℃用氯甲酸异丁酯(4.01)(1.1eq.)处理。除去冷却浴，将其搅拌6小时。将反应混合物倾入到5％KH₂PO₄水溶液中，用乙酸乙酯(2×)萃取。合并的有机层依次用冷的5％K₂CO₃水溶液、5％KH₂PO₄水溶液、盐水洗涤，有机层经无水MgSO₄干燥。过滤混合物，真空蒸发滤液，如果需要，残余物经色谱纯化，否则残余物用Et₂O-己烷研磨，过滤，得到标题化合物(4.9)，C₁₃H₂₃NO₄(257.33)。

制备实施例13

化合物(13.1)

    

      (4.01)       (13.02)           (13.1)

按照制备实施例12基本相同的方法，用L-O-苄基苏氨酸(13.02)(Wang等，J.Chem.Soc.，Perkin Trans. 1，(1997)No.5，621-624.)代替L-环己基甘氨酸(4.02)，制备化合物(13.1)C₁₆H₂₃NO₅(309.36)，质谱(FAB)M+1＝310.2。

制备实施例14

使制备实施例11步骤D的化合物(4.8)(1.0g)与无水三氟乙酸-二氯甲烷(1∶1，50mL)溶液反应2小时。将溶液用二甲苯(100mL)稀释，真空蒸发。将残余物用Et₂O研磨，过滤，得到标题化合物(5.1)(0.9g)，C₃₇H₅₃N₅O₉S₂(775.98)，质谱(FAB)M+1＝776.5。

步骤B   化合物(5.2)

按照制备实施例2步骤A基本相同的方法，使化合物(5.1)与氨(0.5M 1，4-二噁烷溶液)反应，得到标题化合物(5.2)C₃₇H₅₄N₆O₈S₂(774.99)，质谱(FAB)M+1＝775.4。

制备实施例15

将制备实施例14步骤A的化合物(5.1)(0.15g)、N，N-二甲胺(0.12mL的2M THF溶液)、二甲基甲酰胺(10mL)和PyBrOP偶合试剂(0.11g)的混合物冷却至5℃，然后加入二异丙基乙胺(DIEA或DIPEA，0.12mL)。混合物在低温下搅拌1分钟，然后在室温下搅拌6小时。将反应混合物倾入到冷的5％H₃PO₄水溶液(50mL)中，用乙酸乙酯(2×)萃取。合并的有机层依次用冷的5％K₂CO₃水溶液、5％KH₂PO₄水溶液、盐水洗涤。有机溶液经无水MgSO₄干燥，过滤，真空蒸发。残余物经硅胶色谱纯化(洗脱时用MeOH-CH₂Cl₂洗脱)，得到标题化合物(5.3)，C₃₉H₅₈N₆O₈S₂(803.05)，质谱(FAB)M+1＝803.5。

制备实施例16

步骤A   化合物(6.2)

按照制备实施例2步骤A基本相同的方法，使化合物(6.1)羟脯氨酸苄酯盐酸盐与制备实施例12的化合物(4.9)反应，得到标题化合物(6.2)C₂₅H₃₆N₂O₆(460.56)，质谱(FAB)M+1＝461.2。

步骤B   化合物(6.3)

按照制备实施例8基本相同的方法，制备化合物(6.3)C₂₅H₃₄N₂O₆(458.55)，质谱(FAB)M+1＝459.2。

步骤C   化合物(6.4)

将步骤B的化合物(6.3)(1g)、10％Pd/C(0.05g)和EtOH(100mL)的混合物在1个大气压H₂气氛下搅拌6小时。将混合物过滤，然后真空蒸发至干，得到标题化合物(6.4)(0.77g)，C₁₈H₂₈N₂O₆(368.42)，质谱(FAB)M+1＝369.2。

制备实施例17

步骤A   化合物(7.1)

按照制备实施例2步骤A基本相同的方法，使制备实施例16步骤C的化合物(6.4)与制备实施例6步骤B的化合物(2.3)反应，得到化合物(7.1)，C₃₆H₅₄N₆O₉(714.85)，质谱(FAB)M+1＝715.9。

步骤B   化合物(7.2)

化合物(7.1)按照制备实施例7步骤A基本相同的方法反应，得到化合物(7.2)，C₃₆H₅₂N₆O₉(712.83)，质谱(FAB)M+1＝713.5。

步骤C   化合物(7.3)

按照制备实施例8步骤B基本相同的方法，使以上步骤B的化合物(7.2)与1，4-丁二硫醇反应，得到标题化合物(7.3)，C₄₀H₆₀N₆O₈S₂(817.07)，质谱(FAB)M+1＝817.5。

利用上述方法制备附表2至表6中的化合物。作为至此所有表格(表1-6)以及本说明书中的实施例和流程的总注释：在实施例和表格中化学结构化合价不够的任何开端氮原子是指NH，为末端氮时指-NH₂。同样，在实施例和表中化学结构化合价不够的任何开端氧原子是指-OH，化合价不够的任何开端碳原子适宜用-H填补。

固相合成：

固相偶合反应的一般方法

合成是在反应容器中完成，容器由在底部装配有聚丙烯滤板(frit)的聚丙烯注射针筒构成。Fmoc-保护的氨基酸在标准固相技术下偶合。每个反应容器中装有100mg的初始Fmoc-Sieber树脂(大约0.03mmol)。树脂用每份2mL的DMF洗涤(2次)。用2mL 20％v/v的哌啶的DMF溶液处理20分钟，除去Fmoc保护基团。树脂用每份2mL的DMF洗涤(4次)。偶合在DMF(2mL)中完成，使用0.1mmol Fmoc-氨基酸、0.1mmol HATU[六氟膦酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓]和0.2mmol DIPEA(N，N-二异丙基乙胺)。振荡2小时后，排干反应容器，将树脂用每份2mL的DMF洗涤(4次)。用下一个Fmoc-氨基酸或封端基团重复偶合循环过程。

固相Dess-Martin氧化的一般方法

合成是在反应容器中进行，容器由在底部装配有聚丙烯滤板的聚乙烯注射针筒构成。结合在树脂上的羟基化合物(大约0.03mmol)用0.12mmol Dess-Martin全碘烷(periodinane)和0.12mmol t-BuOH的2mL DCM溶液处理4小时。树脂用每份2mL的20％v/v iPrOH的DCM溶液、THF、50％v/v THF水溶液(4次)、THF(4次)和DCM(4次)洗涤。

制备实施例18

N-Fmoc-2’，3’-二甲氧基苯基甘氨酸的制备   化合物(901)

向氰化钾(1.465g，22.5mmol)和碳酸铵(5.045g，52.5mmol)的水(15mL)溶液中加入2，3-二甲氧基苯甲醛901A(2.5g，15mmol)的乙醇(15mL)溶液。将反应物混合物在40℃加热24小时。减压蒸发使溶液体积减至10mL。加入浓盐酸(15mL)，得到为白色沉淀的化合物901B。经过滤分离出化合物901B(2.2g，9.3mmol)。将化合物901B溶于10％w/w氢氧化钠水溶液(15mL)中，所得溶液回流加热24小时。加入浓盐酸，调节pH值至中性(pH 7)。将所得包含化合物901C的溶液减压蒸发。将残余物溶于5％w/w碳酸氢钠水溶液(150mL)中。溶液在冰浴中冷却至0℃，并在0℃加入1，4-二噁烷(30mL)和碳酸9-芴基甲基琥珀酰亚胺酯(2.7g，8mmol)的1，4-二噁烷(30mL)溶液。将反应混合物升温至室温，在室温下搅拌24小时。减压蒸去1，4-二噁烷。用乙醚洗涤水溶液。加入浓盐酸调节pH值至酸性(pH 1)。加入乙酸乙酯，有机层用水和盐水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥。减压蒸去溶剂，得到所需的白色泡沫状固体化合物901(3.44g，7.9mmol)。MS(LCMS-电喷雾)434.1MH⁺。

制备实施例19

化合物(801)

向在干冰-丙酮浴中冷却至-30℃的N-Fmoc-苯基丙氨酸801A(5g，12.9mmol)的无水DCM(22mL)溶液中，依次加入N-甲基吡咯烷(1.96mL，16.1mmol)和氯甲酸甲酯(1.2mL，15.5mmol)。反应混合物在-30℃搅拌1小时，加入N，O-二甲基羟胺盐酸盐(1.51g，15.5mol)和N-甲基吡咯烷(1.96mL，16.1mmol)的无水DCM(8mL)溶液。让反应混合物升温至室温，并在室温下搅拌过夜。加入甲苯，有机层用稀盐酸、碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥。减压蒸去溶剂，得到化合物801B(4g，9.29mmol)。

向在干冰-丙酮浴中冷却至-20℃的Red-Al(6.28mL，21.4mmol)的无水甲苯(8mL)溶液中，加入化合物801B(4g，9.29mmol)的无水甲苯(12mL)溶液。将反应混合物在-20℃搅拌1.5小时。有机层用稀盐酸、碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥。减压蒸去溶剂，粗产物801C无需进一步纯化可直接用于下一步反应中。

向化合物801C(大约9.29mmol)的己烷(15mL)溶液中依次加入氰化钾(24mg，0.37mmol)和叔丁基碘化铵(34mg，0.092mmol)的水(4mL)溶液以及丙酮氰醇(1.27mL，13.9mmol)。将反应混合物在室温下搅拌24小时。加入乙酸乙酯，有机层用水和盐水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥。减压蒸去溶剂，得到化合物801D(2.4g，6.03mmol)。

向化合物801D(2.4g，6.03mmol)的1，4-二噁烷(11mL)溶液中加入浓盐酸(11mL)。将反应混合物在80℃加热3小时。加入乙酸乙酯(25mL)和水(25mL)。有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥。减压蒸去溶剂，得到所需白色泡沫状固体化合物801(2g，4.8mmol)。MS(LCMS-电喷雾)418.1MH⁺。

流程8

实施例(301J)：

流程8   化合物(301J)

按照固相偶合反应的一般方法，从100mg Fmoc-Sieber树脂(0.03mmol)开始，制备结合在树脂上的化合物301B、301C、301D、301E、301F和301G。按照固相Dess-Martin氧化的一般方法，将结合在树脂上的化合物301G氧化成结合在树脂上的化合物301H。将结合在树脂上的化合物301H用4mL 2％v/v TFA的DCM溶液处理5分钟。将滤液加入到1mL AcOH中，溶液经真空离心浓缩，得到化合物301J(0.0069g，收率29％)。MS(LCMS-电喷雾)771.2MH⁺。

利用上文详细说明的固相合成技术和以下式I化合物的各种官能团部分，制备表3中的化合物：

-W-：

Y-W-：

-R⁴：

-Z-：

-R³：

-R²：

-R¹：

-R⁵：

-R⁷：

-R⁹：

-R¹⁰：

-R^1′：

-R^2′：

表3.固相合成制备的化合物

制备的其它化合物及其活性(Ki^*)范围在所附的表4、表5和表6中列出。制备表4、表5和表6中化合物的方法概述如下：

I) 表4、表5和表6化合物的中间体的合成：

实施例I.4，4-二甲基脯氨酸甲酯(H-Pro(4，4-diMe)-OMe)的合成

步骤1.N-叔丁氧羰基-4-甲基-L-焦谷氨酸叔丁酯(Boc-PyroGlu(4-甲 基)-OtBu)的合成：

在-78℃，边搅拌边向N-叔丁氧羰基-焦谷氨酸叔丁酯(11.5g，40mmol)的THF(200mL)溶液中，在5分钟内滴加1M六甲基二硅叠氮化(disilazide)锂的THF(42mL，42mmol)溶液。30分钟后，加入甲基碘(3.11mL，50mmol)。再在-78℃经过2小时后，除去冷却浴，加入50％饱和氯化铵水溶液(200mL)。将溶液搅拌20分钟，然后用乙醚(3×200mL)萃取。合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。残余物经色谱纯化(1∶1乙酸乙酯/己烷)，得到Boc-PyroGlu(4-甲基)-OtBu(10.6g，35.4mmol，88％)的异构体混合物(2∶1顺式∶反式)。

步骤2.N-叔丁氧羰基-4，4-二甲基-L-焦谷氨酸叔丁酯(Boc-PyroGlu(4，4- 二甲基)-OtBu)的合成：

在-78℃，边搅拌边向N-叔丁氧羰基-4-甲基-L-焦谷氨酸叔丁酯(1.2g，4.0mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液，在5分钟内滴加1M六甲基二硅叠氮化锂的四氢呋喃(4.4mL，4.4mmol)溶液。30分钟后，加入甲基碘(0.33mL，5.2mmol)。再在-78℃经过3小时后，除去冷却浴，加入50％饱和氯化铵水溶液(40mL)。将溶液搅拌20分钟，然后用乙醚(2×50mL)萃取。合并的有机层用水(2×25mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(2×25mL)、盐水(50mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩，得到Boc-PyroGlu(4，4-二甲基)-OtBu(0.673g，54％)。

步骤3.N-叔丁氧羰基-4，4-二甲基脯氨酸叔丁酯(Boc-Pro(4，4-二甲基)- OtBu)的合成

改进已知方法：Pedregal，C.；Ezquerra，J.；Escribano，A.；Carreno，M.C.；Garcia Ruano，J.L.Tetrahedron Letters 1994，35(13)，2053-2056)。

在-78℃，边搅拌边向N-叔丁氧羰基-4，4-二甲基焦谷氨酸叔丁酯(2.0mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中，在5分钟内滴加1M三乙基硼氢化锂的四氢呋喃溶液(2.4mL，2.4mmol)。30分钟后，除去冷却浴，加入饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)。将反应混合物浸入冰/水浴中，加入30％过氧化氢水溶液(10滴)。将溶液在0℃搅拌20分钟，然后真空浓缩反应混合物，以除去四氢呋喃。将水溶液用水(10mL)稀释，用二氯甲烷(3×40mL)萃取。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。将残余物溶于二氯甲烷(20mL)和三乙基硅烷(310μL，2.0mmol)中，然后冷却至-78℃，滴加三氟化硼-乙醚溶液(270μL，2.13mmol)。继续搅拌30分钟，此时再加入三乙基硅烷(310μL，2.0mmol)和三氟化硼-乙醚溶液(270μL，2.13mmol)。在-78℃再搅拌2小时后，除去冷却浴，加入饱和碳酸氢钠水溶液(4mL)。5分钟后，混合物用二氯甲烷(3×40mL)萃取。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩，得到Boc-Pro(4，4-二甲基)-OtBu。

步骤4.4，4-二甲基脯氨酸(H-Pro(4，4-二甲基)-OH)的合成：

将N-叔丁氧羰基-4，4-二甲基脯氨酸叔丁酯的二氯甲烷(5mL)和三氟乙酸(5mL)溶液在室温下搅拌5小时。将溶液浓缩，高真空下干燥，所得产物无需纯化就可直接用于下一步骤。

步骤5.N-叔丁氧羰基4，4-二甲基脯氨酸(Boc-Pro(4，4-二甲基)-OH)的 合成：

向4，4-二甲基脯氨酸三氟乙酸盐(1.5mmol)的二噁烷(7mL)、乙腈(12mL)和二异丙基乙胺(700μL，4mmol)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(475mg，2.18mmol)的乙腈(5mL)溶液。在室温下搅拌12小时后，将溶液真空浓缩，溶于饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)中，然后用乙醚(3×40mL)洗涤。水层用柠檬酸酸化至pH＝3，然后用二氯甲烷(3×40mL)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。

步骤6.4，4-二甲基脯氨酸甲酯盐酸盐(HCl·H-Pro(4，4-二甲基)-OMe)的 合成：

向Boc-Pro(4，4-diMe)-OH(0.5g，2.06mmol)的无水甲醇(8ml)溶液中滴加亚硫酰氯(448μl，6.18mmol)，将反应物在室温下搅拌6小时。将反应混合物浓缩至得到无定形固体(377mg，95％)。

实施例II.合成N-叔丁氧羰基-4-烷基-4-甲基脯氨酸的一般方法：

其中R基团为烯丙基和苄基的化合物按照以下步骤1-4合成：

步骤1.N-叔丁氧羰基-4-烷基-4-甲基-L-焦谷氨酸叔丁酯的合成：

在-78℃，边搅拌边向N-叔丁氧羰基-4-甲基-L-焦谷氨酸叔丁酯(10.2g，mmol)(参见实施例I步骤1)的四氢呋喃(170mL)溶液中，在5分钟内滴加1M六甲基二硅叠氮化锂的四氢呋喃(37.5mL，37.5mmol)溶液。40分钟后，加入烷基卤(61.4mmol)。在-78℃再经过3小时后，除去冷却浴，加入50％饱和氯化铵水溶液(200mL)。将溶液搅拌20分钟，然后用乙醚(2×200mL)萃取。合并的有机层用己烷(150mL)稀释，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)、水(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。残余物经快速色谱纯化(用含20％乙酸乙酯的己烷)，得到纯N-叔丁氧羰基-4-烷基-4-甲基-L-焦谷氨酸叔丁酯。

步骤2.N-叔丁氧羰基-4-烷基-4-甲基脯氨酸叔丁酯的合成：

改进已知方法：Pedregal，C.；Ezquerra，J.；Escribano，A.；Carreno，M.C.；Garcia Ruano，J.L.Tetrahedron Letters(1994)35(13)，2053-2056)。

在-78℃，边搅拌边向N-叔丁氧羰基-4-烷基-4-甲基焦谷氨酸叔丁酯(16.6mmol)的四氢呋喃(40mL)溶液中，在10分钟内滴加1M三乙基硼氢化锂的四氢呋喃(20mL，20mmol)溶液。120分钟后，让冷却浴升温至-25℃，此时加入饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)。将反应混合物浸入冰/水浴中，加入30％过氧化氢水溶液(4mL)。将溶液在0℃搅拌10分钟，然后将反应混合物真空浓缩，以除去四氢呋喃。将水溶液用水(300mL)稀释，用二氯甲烷(3×200mL)萃取。将有机层干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。将残余物溶于二氯甲烷(100mL)和三乙基硅烷(2.6mL，mmol)中，然后冷却至-78℃，滴加三氟化硼-乙醚溶液(2.2mL，mmol)。继续搅拌1小时，此时再加入三乙基硅烷(2.6mL，mmol)和三氟化硼-乙醚溶液(2.2mL，mmol)。在-78℃再搅拌4小时后，除去冷却浴，加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)和水(150mL)。5分钟后，混合物用二氯甲烷(3×200mL)萃取。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。

步骤3.4-烷基-4-甲基脯氨酸的合成：

将N-叔丁氧羰基-4-烷基-4-甲基脯氨酸叔丁酯的二氯甲烷(5mL)和三氟乙酸(5mL)溶液在室温下搅拌5小时。加入甲苯，将溶液浓缩，然后在高真空下干燥。

步骤4.N-叔丁氧羰基4-烷基-4-甲基脯氨酸的合成：

向4-烷基-4-甲基脯氨酸三氟乙酸盐(1.5mmol)的二噁烷(7mL)、乙腈(12mL)和二异丙基乙胺(700μL，4mmol)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(475mg，2.18mmol)的乙腈(5mL)溶液。在室温下搅拌12小时后，将溶液真空浓缩，溶于饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)，然后用乙醚(3×40mL)洗涤。水相用1N盐酸酸化至pH＝3，然后用二氯甲烷(3×40mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。残余物经快速色谱纯化(使用1∶1乙酸乙酯/己烷和1％乙酸)。

实施例III.N-叔丁氧羰基4-丙基-4-甲基脯氨酸的合成：

将N-叔丁氧羰基-4-烯丙基-4-甲基脯氨酸(400mg，1.48mmol)(参见实施例II步骤4)和10％披钯碳(400mg)的甲醇(20mL)溶液在50psi氢化4小时。将混合物过滤并浓缩。

实施例IV.Boc-4-环己基脯氨酸的合成：

市售的Boc-4-苯基脯氨酸(750mg)和5％披Rh碳(750mg)的甲醇(15mL)溶液在50psi氢化24小时。将混合物过滤并浓缩，得到730mg产物。

实施例V：芴基甲氧羰基-脯氨酸(4-螺环戊烷)-羧酸的制备：

步骤1.Boc-焦谷氨酸(4-烯丙基)-叔丁酯的合成：

向市售的N-Boc-叔丁基焦谷氨酸酯(10g，35.1mmol)的THF(175ml)冷却(-78℃)溶液中在5分钟内加入六甲基二硅叠氮化锂(36.8mL，36.8mmol)。继续搅拌30分钟。将烯丙基溴(6.1ml，70.2mmol)的THF(39mL)溶液滴加到第一种溶液中。在-78℃经过2小时后，反应物中缓慢地加入饱和氯化铵(50mL)溶液猝灭。反应混合物用乙酸乙酯稀释，分离各层。有机层经硫酸钠干燥并浓缩。经快速柱色谱纯化(使用2∶8乙酸乙酯∶己烷)，得到产物(6g，53％)。NMRδppm(CDCl3)：5.7(m，1H)，5.1(dd，2H)，4.4(m，1H)，2.6(m，2H)，2.4(m，1H)，1.8-2.2(m，1H)，1.45(s，9H)，1.4(s，9H)。

步骤2.N-Boc-焦谷氨酸(4，4-二烯丙基)-叔丁酯的合成：

将以上步骤1获得的N-Boc-焦谷氨酸(4-烯丙基)-叔丁酯(2.68g，8.24mmol)在同样条件下用烯丙基溴进行第二次烷基化。经快速色谱纯化(使用15∶85乙酸乙酯∶己烷)，得到2.13g澄清油状产物(71％)。

步骤3.Boc-脯氨酸(4，4-二烯丙基)-叔丁酯的合成：

步骤a：向Boc-PyroGlu(4，4-二烯丙基)-叔丁酯(2.13g，5.83mmol)的四氢呋喃(14ml)冷却(-78℃)溶液中在5分钟内加入三乙基硼氢化锂(1M的四氢呋喃溶液，7.29ml，7.29mmol)。在-78℃经过2小时后，将反应物升温至0℃，缓慢地加入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)和30％过氧化氢(20滴)猝灭。继续搅拌20分钟。减压除去四氢呋喃，剩余的粘稠白色残余物用水(80ml)稀释，用二氯甲烷萃取三次。将有机层干燥，过滤并浓缩，所得产物无需纯化就可直接用于下一步骤。

步骤b)：向在步骤(a)获得的产物的二氯甲烷(14ml)溶液中加入三乙基硅烷(931μl，5.83mmol)，接着加入三氟化硼-乙醚溶液(776μl，6.12mmol)。30分钟后，再加入三乙基硅烷(931μl，5.83mmol)和三氟化硼-乙醚溶液(776μl，6.12mmol)，将反应物在-78℃搅拌3小时，此时缓慢地加入饱和碳酸氢钠溶液和水猝灭。反应混合物用二氯甲烷萃取，将有机层干燥，过滤并浓缩。经快速柱色谱纯化(使用15％乙酸乙酯的己烷)，得到1.07无色油状物(57％)。NMRδppm(CDCl3)：5.7-5.8(m，2H)，5.1(m，4H)，4.1-4.2(2dd’s，1H旋转异构体)，3.5-3.3(dd，1H)和3.2(dd，1H)旋转异构体，2.2-2.0(m，5H)，1.7(m，1H)，1.46(s，9H)，1.43(s，9H)。

步骤4.Boc-脯氨酸(4-螺环戊烯)-叔丁酯的合成：

向Boc-脯氨酸(4，4-二烯丙基)-叔丁酯(1.07g，3.31mmol)的二氯甲烷(66ml)溶液中加入5％二氯双(三环己基膦基)亚苄基钌IV(Grubbs催化剂)，将混合物回流加热1.5小时。浓缩反应混合物，残余物经快速柱色谱纯化(用含15％乙酸乙酯的己烷)。得到黄色油状物(0.57g，53％)。NMRδppm(CDCl3)：5.56(bs，2H)，4.2和4.1(t，1H，旋转异构体)，3.2-3.5(m，2H)，2.2-2.5(m，5H)，1.9(dd，1H)1.47和1.46(2s’s，9H，旋转异构体)，1.45和1.44(2s’s，9H，旋转异构体)。

步骤5.Boc-脯氨酸(4-螺环戊烷)-叔丁酯的合成：

将Boc-脯氨酸(4-螺环戊烯)-叔丁酯(1.12g)的甲醇(18ml)、水(4ml)和乙酸(4ml)溶液置于Parr振荡器中，在35psi并在10％披钯碳(300mg)存在下氢化3小时。滤出催化剂，浓缩滤液至无色油状物(1.26g)。NMRδppm(CDCl3)：4.1和4.2(t，1H，旋转异构体，3.4(d，1H)，3.2(d，1H)，2.1(m，1H)，1.9(m，1H)，1.6-1.7(m，10H)，1.5(3s’s，18H，旋转异构体)。

步骤6.Fmoc-脯氨酸(4-螺环戊烷)-羧酸的合成：

将Boc-脯氨酸(4-螺环戊烷)-叔丁酯(1.26，3.9mmol)用二氯甲烷(10ml)和三氟乙酸(15ml)处理3小时。浓缩反应混合物，将获得的黄色油状物溶于水(6ml)中。分次加入溶于二噁烷(6ml)的芴基甲基琥珀酰碳酸酯(1.45g，4.3mmol)，接着加入碳酸钾(2.16g，15.6mmol)。将反应物搅拌18小时后浓缩。残余物用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)稀释，然后用乙醚(3×10ml)洗涤。将水层用1N硫酸氢钠溶液酸化至pH～1后，用乙酸乙酯萃取。有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到淡棕色泡沫状物(1.3g，100％)。

实施例VI.Boc-Pro(4t-NH(Fmoc))-OH的合成：

步骤1.N ^α -叔丁氧羰基-顺式-4-氯-L-脯氨酸苄酯的合成

将市售的N-叔丁氧羰基-反式-4-羟基-脯氨酸(8.79g，38mmol)、碳酸钾(13.0g，94mmol)、苄基溴(4.5ml，38mmol)和二甲基甲酰胺(150mL)的混合物搅拌18小时。加入乙酸乙酯(100mL)后过滤。加入1MHCl(100mL)使白色混浊滤液变澄清。分离各层，水层再用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机层用水(2×50mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。将甲苯加入到粗制的苄基酯中，将溶液过滤后再浓缩。加入二氯甲烷(70mL)和四氯化碳(70mL)，接着加入三苯基膦(21.11g，80mmol)。将反应混合物搅拌10小时，用乙醇(7mL)猝灭，再搅拌5小时。将溶液浓缩至约100ml，然后加入二氯甲烷(40mL)，接着边搅拌边加入乙醚(200mL)。将溶液冷却4小时，过滤并浓缩，得到黄褐色油状物，经快速色谱纯化(使用乙醚/己烷/二氯甲烷2∶2∶1)，得到为白色固体的标题化合物(9.13g，26.9mmol，71％)。

步骤2.N ^α -叔丁氧羰基-反式-4-叠氮基-L-脯氨酸苄酯的合成：

将N^α-叔丁氧羰基-顺式-4-氯-L-脯氨酸苄酯(9.0g，26.5mmol)和叠氮化钠(7.36g，113mmol)的二甲基甲酰胺(270mL)溶液在75℃加热2天。加入水(100mL)，反应混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有机层用水(3×50mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。油状物经快速色谱纯化(使用乙酸乙酯/己烷1∶1)，得到标题化合物(8.59g，24.8mmol，94％)。

步骤3.Boc-Pro(4t-NH(Fmoc))-OH的合成：

N-α-叔丁氧羰基-反式-4-叠氮基-L-脯氨酸苄酯(8.59g，24.8mmol)和10％披钯碳(900mg)在乙醇(500mL)中的混合物用Parr氢化装置于50psi氢化14小时。将混合物过滤并浓缩，溶于甲醇(60mL)中，再过滤并浓缩，得到无色油状物。将油状物溶于包含碳酸钠(5.31g，50.1mmol)的水(53mL)中，在40分钟内加入芴基甲基琥珀酰碳酸酯(8.37g，29.8mmol)的二噁烷(60mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌17小时，然后浓缩除去二噁烷，用水(200mL)稀释。溶液用乙醚(3×100mL)洗涤。加入柠檬酸(小心！发泡！)和水(100mL)调节水溶液的pH至2。混合物用二氯甲烷(400mL，100mL，100mL)萃取，将合并的有机层干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到标题化合物。

实施例VII.N-叔丁氧羰基-4-反式-(N-芴基甲氧羰基氨基甲基)-L-脯氨 酸(Boc-Pro(4t-MeNHFmoc)-OH)的合成：

步骤1.叔丁氧羰基顺式-4-羟基-L-脯氨酸苄酯(Boc-Pro(4-cis-OH)- OBn)的合成：

向顺式-羟基-L-脯氨酸(5g，38.1mmol)的苯(45mL)和苄醇(45mL)混合物中加入一水合对甲苯磺酸(7.6g，40.0mmol)。将反应混合物在125℃加热20小时，同时用Dean-Stark捕集器除去水(2ml)。趁热过滤溶液，然后加入乙醚(150ml)。让溶液在室温下冷却3小时，然后在4℃冷却3小时。收集所得固体，用乙醚(100mL)洗涤，真空干燥1小时，得到13.5g白色固体。将固体溶于二噁烷(40mL)和二异丙基乙胺(7.6mL)，然后在5分钟内加入二碳酸二叔丁酯(10g，45.8mmol)，同时用冰浴保持恒定的反应温度。在室温下经过10小时后，将反应混合物倾入到冷水(200mL)中，用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。合并的有机层用水(3×100mL)和饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。粗产物经快速色谱纯化(使用40-60％乙酸乙酯的己烷)，得到标题化合物(10.04g，31.24mmol，82％)。

步骤2.N-叔丁氧羰基顺式-4-甲磺酰氧基-L-脯氨酸苄酯(Boc-Pro(4- cis-OMs)-OBn)的合成：

向Boc-Pro(4-cis-OH)-OBn(8.45g，26.3mmol)的吡啶(65mL)溶液中在0℃于7分钟内滴加甲磺酰氯(3.4mL，44mmol)。将反应混合物在2小时内升温至室温，然后搅拌过夜。在15分钟内加入10％水的吡啶(20mL)溶液，浓缩反应混合物。将残余物溶于水，用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。合并的有机层用水(2×50mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。将所得残余物溶于甲苯(100mL)中并浓缩，以除去痕量吡啶。真空干燥残余物30分钟，得到标题化合物(10.7g，102％)，无需纯化就可直接用于下一步骤。

步骤3.N-叔丁氧羰基-反式-4R-氰基-L-脯氨酸苄酯(Boc-Pro(4-trans- CN)-OBn)：

将Boc-Pro(4-cis-OMs)-OBn(10.7g，26.3mmol)和四丁基氰化铵(15.0g，56mmol)的二甲基甲酰胺(100mL)溶液在油浴中于55℃加热28小时。冷却后，加入水(150mL)，混合物用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。合并的有机层用水(3×100mL)和饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。将所得残余物经快速色谱纯化(使用1∶1乙醚/己烷，然后用乙酸乙酯/己烷重结晶)，得到标题化合物(2.40g，7.26mmol，28％)。

步骤4.N-叔丁氧羰基-4-反式-(N-芴基甲氧羰基氨基甲基)-L-脯氨酸 (Boc-Pro(4t-MeNHFmoc)-OH)：

以上步骤3的化合物(2.31g，7mmol)、水(10mL)、甲醇(85mL)和10％披钯碳(700mg)的混合物用Parr氢化装置在50psi氢化11小时。过滤并浓缩混合物。将水(15mL)和碳酸钠(1.5g，14.2mmol)加入到残余物中。在5分钟内加入芴基甲基琥珀酰碳酸酯(2.36g，7.0mmol)的二噁烷(17mL)溶液，在室温下连续搅拌28小时。真空浓缩反应物至体积为15mL，加入水(100mL)。溶液用乙醚(3×75mL)洗涤。加入柠檬酸(约20g，小心！发泡！)和水(100mL)调节水溶液的pH至2。混合物用二氯甲烷(4×100mL)萃取，将合并的有机层干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。粗产物包含一种必须经3步纯化的主要杂质。将粗产物溶于二氯甲烷(50mL)和三氟乙酸(50mL)中，搅拌5小时后浓缩。残余物用制备型反相HPLC纯化。将纯4-(N-芴基甲氧羰基氨基甲基)脯氨酸三氟乙酸盐(1.887g，3.93mmol)溶于二噁烷(10mL)、乙腈(20mL)和二异丙基乙胺(1.4mL，8mmol)。向反应混合物中加入二碳酸二叔丁酯(1.1g，5mmol)的二噁烷(5mL)溶液。在搅拌18小时后，加入柠檬酸(小心：发泡！)和水(100mL)调节溶液的pH至2。混合物用乙酸乙酯(3×150mL)萃取，合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。将粗产物溶于饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)，然后用乙醚(3×75mL)洗涤。水层中加入柠檬酸调节pH＝3，然后用二氯甲烷(4×100mL)萃取。将合并的有机层干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到标题化合物(1.373g，2.94mmol，42％)。

实施例VIII.3，4-亚异丙基脯氨醇的合成：

步骤1.环丙烷化反应(Tetrahedron Lett.1993.34(16)2691和2695)：

在0℃，边搅拌边向异丙基三苯基碘化鏻(4.14g，9.58mmol)的四氢呋喃(60mL)溶液中，在5分钟内加入正丁基锂(1.6M的己烷溶液，5.64mL，9.02mmol)。30分钟后，在10分钟内加入烯酰胺((5R，7S)-5-苯基-5，6，7，7a-四氢-6-氧杂pyrrolizin-3-酮)(1.206g，6.0mmol)(有关合成烯酰胺原料，参见J.Org.Chem.1999， 64(2)，547)的四氢呋喃(40mL)溶液。再经过10分钟后，除去冷却浴，将反应混合物在室温下搅拌4小时。将反应物倾入到水(400mL)中，用乙醚(400mL)和乙酸乙酯(2×400mL)萃取。将合并的有机萃取液经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到所需的粗产物。残余物经快速色谱纯化(洗脱时用3∶5∶2乙酸乙酯/己烷/二氯甲烷)，得到纯环丙烷化产物(750mg，3.08mmol，51％)。

步骤2.3，4-亚异丙基脯氨醇(P[3，4-(diMe-环丙基)]-醇)的合成(J.Org. Chem.(1999)64(2)，330)的合成：

将以上步骤1获得的产物(1.23g，5.06mmol)和氢化锂铝(1.0M的THF溶液，15mL，15mmol)的混合物回流加热5小时。冷却至0℃后，在15分钟内滴加饱和硫酸钠水溶液(1.5mL)小心地猝灭残留的氢化铝。混合物用乙酸乙酯(40mL)稀释，然后通过硅藻土过滤。滤液经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗制的N-苄基氨基醇(1.25g)，无需进一步纯化就可直接用于下一步骤。粗制的N-苄基氨基醇(1.25g，5.06mmol)的1∶1乙酸/乙酸乙酯(30mL)溶液与10％Pd/C(1g)用Parr氢化装置在50psi氢化16小时。过滤反应混合物以除去碳载催化剂，浓缩滤液。将残余物溶于水(30mL)，用50％NaOH调节pH至13。混合物用乙醚(3×60mL)萃取。合并的萃取液经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗制的氨基醇(485mg，3.43mmol)。该产物无需进一步纯化就可直接用于下一步骤。

实施例IX.iBoc-G(Chx)-Pro(3，4-亚异丙基)-羧酸的合成：

步骤1.异丁氧羰基-环己基甘氨酸(iBoc-G(Chx)-OH)的合成：

向市售的环己基甘氨酸盐酸盐(15g，77.4mmol)的乙腈(320ml)和水(320ml)溶液中加入碳酸钾。将氯甲酸异丁酯(11.1ml，85.1mmol)在15分钟内加入澄清的溶液中，搅拌反应物17小时。减压除去乙腈，残留的水层用乙醚(100ml)萃取两次。然后用6N盐酸酸化水层至pH为1，用二氯甲烷(3×300ml)萃取。有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到18.64g(94％)为白色固体的产物。

步骤2.异丁氧羰基-环己基甘氨酰基-3，4-亚异丙基脯氨酸(iBoc- G(Chx)-P[3，4-(diMe-环丙基)]-OH)的合成：

a)偶合步骤

向iBoc-G(Chx)-OH(890mg，3.45mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入HATU(1.33g，3.5mmol)、HOAt(476mg，3.5g)，然后加入二异丙基乙胺(2.5mL，14mmol)。2分钟后，加入3，4-亚异丙基脯氨醇(485mg，3.43mmol)，将反应混合物搅拌过夜。加入饱和碳酸氢钠水溶液后用乙醚和乙酸乙酯萃取。将合并的有机层干燥，过滤并浓缩。残余物经快速色谱纯化(洗脱时用1∶1乙酸乙酯/己烷)，得到纯二肽醇iBoc-G(Chx)-3，4-亚异丙基脯氨醇(870mg，2.3mmol，67％)。

b)琼斯氧化步骤

在0℃，边搅拌边向二肽醇iBoc-G(Chx)-3，4-亚异丙基脯氨醇(100mg，0.26mmol)的丙酮(2mL)溶液中，在5分钟内滴加琼斯试剂(300μL)。[琼斯试剂：用三氧化铬(13.4g)和浓硫酸(11.5mL)用水稀释至总体积为50mL制备]。在0℃搅拌3小时后，加入异丙醇(500μL)，再继续搅拌10分钟。反应混合物用水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(3×70mL)萃取。将合并的有机层干燥，过滤并浓缩，得到二肽iBoc-G(Chx)-3，4-亚异丙基脯氨酸(100mg，0.25mmol，96％)。

实施例X.N-Cbz-3，4-桥亚甲基脯氨酸的合成：

步骤1.N-苄基-3，4-桥亚甲基脯氨醇的合成：

将亚苄基原料(J.Org.Chem.1999，64(2)，547)(4.6g，21.4mmol)和氢化锂铝(1.0M的THF溶液，64mL，64mmol)混合物回流加热5小时。冷却至0℃后，在15分钟内滴加饱和硫酸钠水溶液(5mL)小心地猝灭残留的氢化铝。混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，然后通过硅藻土过滤。滤液经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗制的N-苄基氨基醇(3.45g)，其无需进一步纯化就可直接用于下一步骤。

步骤2.N-苄氧基羰基-3，4-桥亚甲基脯氨醇(CBz-P(3，4-CH2)-醇)的合 成：

粗制的N-苄基氨基醇(3g，14.76mmol)的甲醇(120mL)和浓HCl(1.5mL)溶液用10％Pd/C(300mg)在50psi氢化16小时。将反应混合物过滤，以除去碳载催化剂，浓缩滤液。将残余物溶于水/二噁烷(100mL)，加入二异丙基乙胺(3.2mL)。加入氯甲酸苄酯(2.76mL，16.2mmol)，搅拌反应物过夜。将反应混合物浓缩，溶于1M HCl(100mL)，用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。残余物经快速色谱纯化(使用1∶3乙酸乙酯/己烷)，得到N-Cbz-3，4-桥亚甲基脯氨醇(2.4g)。

步骤3.N-苄氧基羰基-3，4-桥亚甲基脯氨酸(CBz-P(3，4-CH2)-OH)的合 成：

在0℃，边搅拌边向N-Cbz-3，4-桥亚甲基脯氨醇(2.2g，8.90mmol)的丙酮(68mL)溶液中，在5分钟内滴加琼斯试剂(6.6mL)。[琼斯试剂：三氧化铬(13.4g)和浓硫酸(11.5mL)用水稀释至总体积为50mL制备]。在0℃搅拌3小时后，加入异丙醇(11mL)，再继续搅拌10分钟。反应混合物用水(400mL)稀释，用乙酸乙酯(3×500mL)萃取。合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到N-Cbz-3，4-桥亚甲基脯氨酸(2.25g，96％)

实施例XI.Boc-(6S-乙酯基桥亚甲基)脯氨酸的合成：

按照公开的方法合成标题化合物：Marrinozzi，M.；Nataini，B.；Ni，M.H.；Costantino，G.；Pellicciari R.IL Farmaco(1995)50(5)，327-331。

实施例XII.Boc-3-吗啉羧酸的合成：

按照公开的方法合成标题化合物：Kogami Y.，Okawa，K.Bull.Chem.Soc.Jpn.(1987)60，2963-2965。

实施例XIII.N-叔丁氧羰基2-氮杂-3S-羟基羰基-[2，2，2]-二环辛烷的合 成：

粗制的2-氮杂-2-(1-苯乙基)-3S-甲氧羰基-[2，2，2]-二环辛-5-烯(10mmol)(Tetrahedron(1992)48(44)9707-9718)和10％披钯碳(1g)的甲醇(30mL)溶液用12N HCl酸化，然后用Parr氢化装置在50psi氢化16小时。过滤反应混合物，以除去碳载催化剂，浓缩滤液。将残余物溶于浓HCl，搅拌过夜。将溶液浓缩，再溶于乙腈(50mL)。加入二异丙基乙胺(3.5mL)和二碳酸二叔丁酯(1g)。将反应混合物搅拌24小时，然后浓缩。将残余物溶于CH₂Cl₂和5％硫酸水溶液。反应混合物用CH₂Cl₂萃取，浓缩合并的有机层。将残余物溶于10％饱和碳酸氢钠，用乙醚(2×)洗涤，用5％硫酸水溶液酸化。水层用乙酸乙酯(2×)萃取。将合并的乙酸乙酯层干燥，过滤并浓缩，得到N-叔丁氧羰基2-氮杂-3S-羟基羰基-[2，2，2]-二环辛烷(650mg)。

实施例XIV.异丁氧羰基-环己基甘氨酰基-4，4-二甲基脯氨酸(iBoc- G(Chx)-P(4，4-二甲基)-OH)的合成：

步骤1.iBoc-G(Chx)-P(4，4-二甲基)-OMe的合成：

向iBoc-G(Chx)-OH(实施例IX步骤1.)(377mg，1.95mmol)的乙腈(7mL)溶液中依次加入HCl·HN-Pro(4，4-二甲基)-OMe(实施例I步骤6)(377mg，1.95mmol)、N-羟基苯并三唑(239mg，1.75mmol)、TBTU(845mg，2.63mmol)和二异丙基乙胺(1.35mL，7.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应混合物浓缩，残留的残余物溶于乙酸乙酯。有机层用每份10ml的饱和碳酸氢钠溶液、1N盐酸溶液和盐水洗涤两次。有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色固体(612mg，79％)。

步骤2.iBoc-G(Chx)-P(4，4-二甲基)-OH的合成：

以上步骤1获得的甲酯(612mg，1.54mmol)的甲醇(6ml)溶液在2M氢氧化锂(1.16ml)存在下皂化3小时。减压除去甲醇，残余物用乙酸乙酯稀释，用1N盐酸酸化至pH＝2。分离各层，有机层用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。

实施例XV.L-苯基甘氨酸二甲基酰胺的合成

步骤1.N-苄氧基羰基-L-苯基甘氨酸二甲基酰胺(CBz-Phg-NMe2)的合 成：

将N-苄氧基羰基-L-苯基甘氨酸(25g，88mmols)溶于THF(800mL)中并冷却至-10℃。加入N-甲基吗啉(9.7mL，88mmols)和氯甲酸异丁酯(11.4mL，88.0mmols)，将混合物搅拌1分钟。加入二甲胺(100mL，2M的THF溶液)，让反应物升温至室温。过滤混合物，真空浓缩滤液，得到为黄色油状物的N-苄氧基羰基-L-苯基甘氨酸二甲基酰胺(32.5g)。

步骤2.L-苯基甘氨酸二甲基酰胺(H-Phg-NMe2)的合成：

将以上获得的N-苄氧基羰基-L-苯基甘氨酸二甲基酰胺(32.5g)溶于甲醇(750ml)中，加入10％活性披钯碳(3.3g)。此混合物用Parr装置在35psi氢气氛下氢化2小时。过滤反应混合物，真空除去溶剂，残余物用甲醇-己烷重结晶，得到为灰白色固体的苯基甘氨酸二甲基酰胺(26g)。通过HPLC分析2，3，4，6-四-O-乙酰基吡喃葡萄糖基硫代异氰酸酯衍生物，测定此产物的对映异构体(ee)＞99％。

实施例XVI.(1-甲基环己基)甘氨酸的合成：

步骤1.1-甲基-1-羟甲基环己烷

在0℃，向1-甲基-1-羟基羰基环己烷(10g，70mmol)的四氢呋喃(300mL)溶液中，在90分钟内加入1M乙硼烷的四氢呋喃(200mL，200mmol)溶液。除去冷却浴，将反应混合物在室温下搅拌2天。在冷却下，在90分钟内缓慢地加入饱和硫酸氢钠(10mL)猝灭残留硼烷。再加入饱和硫酸氢钠(200mL)，搅拌20分钟后除去水层。有机层用水和饱和氯化钠洗涤，干燥，过滤并浓缩。残余物经快速色谱纯化(使用含20％乙醚的己烷)，得到1-甲基-1-羟甲基环己烷(6.17g，48mmol，69％)。

步骤2.1-甲基环己基甲醛：

在0℃，向1-甲基-1-羟甲基环己烷(6.17g，48mmol)和三乙胺(20.1mL，144mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液中，在15分钟内加入吡啶三氧化硫络合物(22.9g，144mmol)的二甲基亚砜(150mL)溶液。在2小时内将冷却浴升温至室温，此时将反应混合物倾入到冰盐水(400mL)中。分离各层，水层用二氯甲烷(200mL)萃取。合并的有机层用己烷(600mL)稀释，然后用1M HCl(2×150mL)、饱和氯化钠(2×100mL)洗涤，干燥，过滤并浓缩。残余物经快速色谱纯化，得到1-甲基环己基甲醛(1.77g，13.8mmol，29％)。

步骤3.N-甲酰基-N-葡萄糖基-1-甲基环己基-叔丁基酰胺的合成：

合成2，3，4-三-O-新戊酰--D-阿拉伯糖基胺按照公开的方法进行(Kunz.H.；Pfrengle，W.；Ruck，K.；Wilfried，S.Synthesis(1991)1039-1042)。

在-30℃，向1-甲基环己基甲醛(1.17g，8.34mmol)、2，3，4-三-O-新戊酰--D-阿拉伯糖基胺(8.3g，20.7mmol)、甲酸(850μL，22.2mmol)和叔丁基胩(2.4mL，21.2mmol)的四氢呋喃(170mL)溶液中加入0.5M氯化锌的四氢呋喃(41mL，20.57mmol)溶液。将溶液在-20℃搅拌3天，然后浓缩。残余物用CH₂Cl₂(500mL)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(2×500mL)、水(500mL)洗涤。将有机层干燥，过滤并浓缩，得到澄清油状物。经快速色谱纯化(含20％乙酸乙酯的己烷)，得到纯产物(4.3g，6.6mmol，33％)。

步骤4.(1-甲基环己基)甘氨酸的合成：

将以上步骤3获得产物(4.3g，6.6mmol)的二氯甲烷(30mL)和饱和无水甲醇的HCl(30mL)溶液搅拌过夜。浓缩溶液，将残余物溶于水(100mL)，然后用戊烷(2×100mL)洗涤。浓缩水层，将残余物溶于6N HCl(50mL)，回流加热30小时。浓缩溶液，得到粗制的(1-甲基环己基)甘氨酸盐酸盐(790mg，3.82mmol，58％)。

实施例XVII.(4，4-二甲基环己基)甘氨酸的合成：

步骤1.4，4-二甲基环己酮的合成：

将4，4-二甲基环己-2-烯-1-酮(12mL，91.2mmol)和Degussa型10％披钯碳(2g)的混合物在40psi氢化18小时。将混合物过滤并浓缩(¹HNMR显示比例为5∶3的酮和醇混合物)。将混合物溶于丙酮(400mL)，冷却至0℃。在30分钟内加入琼斯试剂(40mL)，然后除去冷却浴。2天后，蒸去过量的丙酮，将所得残余物溶于水和乙醚中。乙醚层用水洗涤至无色，干燥，过滤并浓缩，得到4，4-二甲基环己酮(7.4g，58.6mmol，64％)。

步骤2.4，4-二甲基环己基甲醛的甲基烯醇醚的合成：

在0℃，向甲氧基甲基三苯基氯化鏻(8.6g)的四氢呋喃(125mL)溶液中，在10分钟内加入正丁基锂(1.6M的己烷溶液，14.3mL)。30分钟后，将反应混合物冷却至-78℃，在20分钟内加入4，4-二甲基环己酮(2.45g，19.1mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液。1小时后除去冷却浴，将反应物缓慢地升温至0℃。反应物用饱和氯化铵(50mL)、乙酸乙酯(100mL)和己烷(100mL)稀释。有机层用水和盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。将残余物与己烷(70mL)一起搅拌10分钟，过滤。浓缩滤液，经色谱纯化(使用含25％乙酸乙酯的己烷)，得到标题化合物(1.925g，12.5mmol，65％)。

步骤3：4，4-二甲基环己基甲醛：

将4，4-二甲基环己基甲醛的甲基烯醇醚(1.925g，12.5mmol)(以上步骤II)、四氢呋喃(100mL)和6M HCl(20mL)的溶液在室温下搅拌4小时。反应混合物用己烷、乙醚、盐水和水稀释。将有机层干燥，过滤并浓缩，得到4，4-二甲基环己基甲醛(1.0g，7.1mmol，57％)。

步骤4.N-甲酰基-N-葡萄糖基-4，4-二甲基环己基-叔丁基酰胺的合成：

在-30℃，向4，4-二甲基环己基甲醛(1.17g，8.34mmol)、2，3，4-三-O-新戊酰-α-D-阿拉伯糖基胺(3.43g，8.55mmol)、甲酸(350μL，9.17mmol)和叔丁基胩(990μL，8.76mmol)的THF(70mL)溶液中加入0.5M氯化锌的四氢呋喃(17mL，8.5mmol)溶液。将溶液在-20℃搅拌2天，然后浓缩。残余物用二氯甲烷(200mL)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(2×200mL)、水(200mL)洗涤。将有机层干燥，过滤并浓缩，得到澄清油状物。经快速色谱纯化(含20％乙酸乙酯的己烷)，得到纯产物(2.1g，3.3mmol，39％)。

步骤5.(4，4-二甲基环己基)甘氨酸的合成：

将以上步骤4获得的Ugi产物(2.1g，3.3mmol)的二氯甲烷(20mL)和饱和无水甲醇的HCl(20mL)的溶液搅拌过夜。浓缩溶液，将残余物溶于水(100mL)，然后用戊烷(2×100mL)洗涤。浓缩水层，将残余物溶于6N HCl(40mL)并回流加热30小时。浓缩溶液，得到粗制的(1-甲基环己基)甘氨酸盐酸盐(300mg，1.36mmol，41％)。

实施例XVIII.Boc-nVal-(CHOH)-Gly-OH的合成：

步骤1.Boc-正缬氨醇的制备：

向冷却至0℃的Boc-正缬氨酸(25.0g，0.115mol)的四氢呋喃(461mL)溶液中，滴加硼烷/四氢呋喃络合物(461mL 1.0M的四氢呋喃溶液)。在0℃经过1小时后，将溶液在1.5小时内升温至室温。TLC指示反应完成。加入甲醇猝灭反应。浓缩溶液，得到泡沫浆状标题化合物(22.56g，96％)。产物的TLC显示，得到满意的纯度。R_f＝0.34(40％乙酸乙酯/己烷)。

步骤2.Boc-正缬氨醛的制备：

向Boc-正缬氨醇(7.77g，38mmol)的无水二甲基亚砜(153mL)和甲苯(153mL)溶液中加入EDC(73.32g，382mmol)。将溶液冷却至0℃后，滴加二氯乙酸(15.8mL，191mmol)。加入完毕后，将反应物搅拌15分钟。将溶液在2小时内升温至室温。浓缩反应混合物以除去甲苯，然后溶于乙酸乙酯中。溶液依次用1N硫酸氢钠、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗制的Boc-正缬氨醛，将其直接用于下一步骤。TLC R_f＝0.84(40％乙酸乙酯/己烷)。

步骤3.Boc-nVal-(CHOH)-Gly-OEt的合成：

向粗制的Boc-正缬氨醛(4.18g，20.77mmol)的二氯甲烷(83mL)溶液中加入异氰基乙酸乙酯(2.72ml，24.93mmol)和吡啶(6.72ml，83.09mmol)。将溶液冷却至0℃后，滴加三氟乙酸(4.15ml，41.54mmol)。搅拌1小时后，将溶液在室温下搅拌18小时，同时将反应混合物在无盖容器中在室温下蒸发除去溶剂。将反应混合物浓缩，然后溶于乙酸乙酯。溶液依次用1N硫酸氢钠、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤后浓缩。残余物经快速色谱纯化(洗脱时用20％-40％乙酸乙酯/己烷)，得到2.8g为黄色浆状物的标题化合物。用低分辨率质谱证实存在所需要的产物(MH⁺333)。

步骤4.Boc-nVal-(CHOH)-Gly-OH的合成：

将获得的产物(Boc-nVal-(CHOH)-Gly-OEt)(1.52g，4.70mmol)溶于乙醇(23ml)，用1N氢氧化锂(18.81ml)在室温下皂化2小时。将反应混合物用Dowex^50 WX8离子交换树脂酸化至pH≌2，搅拌20分钟后过滤。将树脂用乙醇和水充分洗涤，浓缩合并的滤液，得到白色泡沫状物(0.48g，33％)。

实施例XVIV.(2R，3S，4S，5S)-N-CBz-3-氨基-2-羟基-4，5亚甲基-己酸叔 丁酯的合成：

步骤1：

在-78℃，向溶于THF(50mL)的二乙氧基膦酰乙酸叔丁酯(4.7mL，20mmol)溶液中加入1.6M正丁基锂的己烷(12.4mL)溶液。30分钟后，在10分钟内加入(1S，2S)-2-甲基环丙基甲醛(1g，12mmol)(Barrett，A.G.M.；Doubleday，W.W.；Kasdorf，K.；Tustin，G.J.，J.Org.Chem.(1996)61，3280)的乙醚(100mL)溶液。将反应混合物升温至0℃达2小时，然后升温至6℃达12小时。反应物用饱和氯化铵(20mL)猝灭，分离有机层，用50mL盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到3.5g澄清油状物。经快速色谱纯化(含20％乙酸乙酯的己烷)，得到纯的不饱和叔丁酯(1.4g)。

步骤2：

向氨基甲酸苄酯(3.55g，23.5mmols)的正丙醇(24mL)溶液中加入氢氧化钠(900mg，22.7mmol)的水(48mL)溶液，接着加入次氯酸叔丁酯(2.57mL，22.7mmol)。15分钟后，将反应物冷却至0℃，加入(DHQ)₂PHAL(350mg，0.45mmol)的正丙醇(24mL)溶液，接着加入上述不饱和叔丁酯(1.4g)的正丙醇(48mL)溶液。最后加入锇酸钾(110mg，0.30mmol)的水(2mL)溶液，溶液即刻形成深绿色，持续4小时。6小时后，加入饱和硫酸钠(50mL)，混合物用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。经快速色谱纯化(含20％乙酸乙酯的己烷)，得到所需要的cBz保护的氨基叔丁酯白色固体(316mg)。

步骤3：

将CBz保护的氨基叔丁酯(316mg，0.9mmol)和32mg 10％披钯碳在9mL甲醇中的混合物氢化8小时。将混合物过滤并浓缩，得到为澄清油状物的游离胺(195mg)。

实施例XX.1R，氯甲酸2-二甲基丙酯的合成：

向市售的2R-羟基-3-甲基丁烷(410mg，4.65mmol)中加入20％碳酰氯的甲苯(1mL，2mmol)溶液。将溶液搅拌6小时，产生氯甲酸酯(2mmol)，将它立即直接与需要的胺反应。按照同样的方法合成S-异构体。

II)HCV抑制剂的代表性液相合成

实施例XXI.iBoc-G(Chx)-Pro(4，4-二甲基)-Leu-(CO)-Gly-Phg-二甲基 酰胺的液相合成：

步骤1.叔丁氧羰基-亮氨醛(Boc-Leu-CHO)的合成：

向市售的(Advanced Chem Tech)Boc-L-亮氨醇(0.78g，3.6mmol)的无水二氯甲烷(17.5ml)溶液中加入三乙胺(2ml，14.36mmol)，将混合物冷却至0℃。加入二甲基亚砜(17.5ml)，接着加入吡啶三氧化硫络合物(2.3g，14.36mmol)，将反应物搅拌2小时。用TLC(使用1∶1乙酸乙酯∶己烷)确认反应完成。浓缩反应混合物，残余物用乙酸乙酯稀释。乙酸乙酯层用1M盐酸(2×75ml)洗涤，接着用饱和碳酸氢钠溶液(2×75ml)和盐水(75ml)洗涤。将有机层干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到775mg产物。

步骤2.Boc-2-羟基-3-氨基-5-甲基己酰基-甘氨酸乙酯(Boc-Leu- (CHOH)-Gly-OEt)的合成：

向Boc-亮氨醛(0.77g，3.59mmol)的无水二氯甲烷(24ml)溶液中加入无水吡啶(1.16ml，14.36mmol)和异氰基乙酸乙酯(0.4ml，4.66mmol)。将反应混合物冷却至0℃，在2分钟内加入三氟乙酸(0.55ml，7/18mmol)。将反应混合物盖住，在4℃搅拌4天，在室温下搅拌1天。反应混合物用二氯甲烷(350ml)稀释，用每份75ml的1M盐酸、饱和碳酸氢钠和盐水各洗涤2次。将有机层干燥，过滤并浓缩。所得残余物在2”×6”硅胶柱经快速色谱纯化(先使用含10％乙酸乙酯的己烷(800ml)、接着使用1∶1乙酸乙酯∶己烷(800ml))。将对应于产物的流分合并，浓缩，得到980mg(79％)产物。

步骤3.Boc-Leu-(CHOH)-Gly-OH的合成：

向Boc-Leu-(CHOH)-Gly-Oet(0.98g，2.83mmol)的乙醇(11.3ml)溶液中加入2M氢氧化锂(4.25ml)，将反应物在室温下搅拌5小时。减压除去乙醇，水层用乙酸乙酯稀释。有机层用1M盐酸洗涤，接着用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩，得到775mg(86％)白色固体产物。

步骤4.Boc-Leu-(CHOH)-Gly-Phg-二甲基酰胺的合成：

向Boc-Leu-(CHOH)-Gly-OH(0.37g，1.18mmol)的乙腈(23ml)溶液中依次加入苯基甘氨酸二甲基酰胺(实施例XV步骤2获得)、EDC(0.34g，1.76mmol)、N-羟基苯并三唑(HOBt)(0.18g，1.18mmol)和二异丙基乙胺(DIEA)(0.82ml，4.7mmol)，将反应物在室温下搅拌18小时。浓缩反应混合物，残余物用乙酸乙酯稀释，依次用每份75ml的1M盐酸、饱和碳酸氢钠和盐水各洗涤两次。然后将有机层干燥，过滤并浓缩。粗产物在2”×6”硅胶柱经快速色谱纯化，洗脱时先使用4∶1乙酸乙酯∶己烷(700ml)、接着使用乙酸乙酯(1000ml)和含10％甲醇的二氯甲烷(600ml)。将对应于产物的流分合并，浓缩，得到445mg(80％)白色固体。

步骤5.H-Leu-(CHOH)-Gly-Phg-二甲基酰胺三氟乙酸盐的合成：

向Boc-Leu-(CHOH)-Gly-Phg-二甲基酰胺(70mg，0.146mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液中加入三氟乙酸(1ml)，将反应物在室温下搅拌1小时。将反应混合物浓缩，无需进一步纯化就可直接用于下一步骤。

步骤6.iBoc-G(Chx)-Pro(4，4-二甲基)-Leu-(CHOH)-Gly-Phg-二甲基酰 胺的合成：

向iBoc-G(Chx)-P(4，4-diMe)-OH(实施例XIV步骤2)(53mg，0.148mmol)的乙腈(3ml)溶液中依次加入TFA·2HN-Leu(CHOH)-Gly-Phg-NMe2(61mg，0.148mmol)、N-羟基苯并三唑(HOBt)(23mg，0.148mmol)、TBTU(71.5mg，0.222mmol)和二异丙基乙胺(103μl，0.593mmol)。将反应物在室温下搅拌18小时，浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯，然后用1M盐酸(2×5ml)、饱和碳酸氢钠溶液(2×5ml)和盐水(2×5ml)洗涤。将有机层干燥，过滤并浓缩。产物(100mg)无需进一步纯化就可直接用于下一步骤。

步骤7.iBoc-G(Chx)-Pro(4，4-二甲基)-Leu-(CO)-Gly-Phg-二甲基酰胺的 合成：

向iBoc-G(Chx)-Pro(4，4-二甲基)-Leu-(CHOH)-Gly-Phg-二甲基酰胺(30mg，0.04mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液中加入市售的Dess-Martin试剂(Omega Chemical Company Inc.)(67.8mg，0.16mmol)，将反应物在室温下搅拌90分钟。浓缩反应混合物，将残余物在5％硫代硫酸钠中搅拌。然后将其用二氯甲烷稀释，分离各层。有机层用硫代硫酸钠(4×3ml)洗涤，接着用水和盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物溶于己烷和异丙醇中，在正相Kromasil 5硅胶柱上(Phenomenex，250×21.20mm，孔径100埃，胶粒5μm)用HPLC纯化，用含0-25％异丙醇的己烷进行30分钟梯度洗脱(25ml/分钟)。将对应于产物的流分合并，浓缩。冷冻干燥，以除去水，得到6.7mg白色粉末。用低分辨率质谱确认所需要的物质(MH⁺＝741.4)。

III)固相合成：

固相合成可用于小量生产本发明的某些化合物。与常规固相合成肽一样，用于固相合成肽基酮酰胺的反应釜包括一个反应容器，反应容器至少有一面可渗透溶剂以及溶解的试剂，但不能渗透所选粒径的合成树脂。这样的反应釜包括带有烧结玻璃滤板的玻璃固相反应容器、带有滤板的聚丙烯管或柱、或者由Irori Inc.，San Diego CA生产的Kans^TM反应器。反应釜类型根据所需要的固相树脂体积进行选择，不同类型的反应釜可用在合成的不同阶段。下面的方法将在接下来的实施例中引用：

方法A：偶合反应：向悬浮在N-甲基吡咯烷(NMP)(10-15mL/克树脂)的树脂中加入Fmoc氨基酸(2eq)、HOAt(2eq)、HATU(2eq)和二异丙基乙胺(4eq)。让混合物反应4-48小时。将反应物排出，树脂依次用二甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲醇、二氯甲烷和乙醚(用10-15mL溶剂/克树脂)洗涤。然后真空干燥树脂。

方法B：去除Fmoc保护：Fmoc-保护的树脂用20％哌啶的二甲基甲酰胺(10mL试剂/g树脂)处理30分钟。将反应物排出，树脂依次用二甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲醇、二氯甲烷和乙醚(10mL溶剂/克树脂)洗涤。

方法C：去除Boc保护：Boc-保护的树脂用1∶1的二氯甲烷和三氟乙酸混合物处理20-60分钟(10mL溶剂/克树脂)。将反应物排出，树脂依次用二氯甲烷、二甲基甲酰胺、5％二异丙基乙胺的二甲基甲酰胺溶液、二甲基甲酰胺、二氯甲烷和二甲基甲酰胺(10mL溶剂/克树脂)洗涤。

方法D：缩氨基脲水解：将树脂悬浮于由三氟乙酸∶丙酮酸∶二氯甲烷∶水9∶2∶2∶1组成的裂解混合物(10mL/g树脂)达2小时。将反应物排出，此步骤再重复3次。树脂依次用二氯甲烷、水和二氯甲烷洗涤，真空干燥。

方法E：HF裂解：经干燥的肽-nVal(CO)-G-O-PAM树脂(50mg)置于装有一根小型搅拌棒的HF容器中。加入清除剂苯甲醚(总体积的10％)。在谷氨酸和半胱氨酸氨基酸存在下，还加入苯硫基甲烷(10％)和1，2-乙二硫醇(0.2％)。然后将HF容器安装在HF仪器(ImmunoDynamics)，系统用氮气吹洗5分钟。然后将其用干冰/异丙醇浴冷却至-70℃。20分钟后，蒸馏HF至所需体积(10mL HF/g树脂)。让反应物在0℃继续反应1.5小时。后处理包括用氮气除去所有HF。然后将二氯甲烷加入到树脂中，搅拌此混合物5分钟。接着加入20％的乙酸水溶液(4mL)。搅拌20分钟后，树脂用多孔漏斗过滤，减压除去二氯甲烷。残余物和混合物用己烷(2×)洗涤，以除去清除剂。同时，将树脂浸泡在1mL甲醇中。将水层(20％HOAc)再加入树脂中，将混合物搅拌5分钟后过滤。减压除去甲醇，冷冻干燥水层。然后将肽溶于10-25％甲醇(含有0.1％三氟乙酸)，用反相HPLC纯化。

实施例XXII：丙型肝炎抑制剂(iBoc-G(Chx)-P(4t-NHSO2Ph)-nV- (CO)-G-G(Ph)-NH2)的代表性固相合成

步骤1.Fmoc-nV-(dpsc)-Gly-OH的合成：

A)异氰基乙酸烯丙酯的合成(以下的步骤a-b)：

a)异氰基乙酸钾盐的合成：

将异氰基乙酸乙酯(96.6ml，0.88mol)滴加到乙醇(1.5L)和氢氧化钾(59.52g，1.0mol)的冷却溶液中。将反应物缓慢地升温至室温。2小时后，用玻璃漏斗滤出沉淀产物，用几份冷却乙醇洗涤。如此获得的异氰基乙酸的钾盐经过真空干燥，得到金黄褐色固体(99.92g，91.8％)。

b)异氰基乙酸烯丙酯的合成：

向溶于乙腈(810ml)的步骤a产物(99.92g，0.81mol)中加入烯丙基溴(92ml，1.05mol)。回流加热4小时后，得到深褐色溶液。将反应混合物浓缩，残余物溶于乙醚(1.5L)，用水(500ml)洗涤三次。将有机层干燥，过滤并浓缩，得到深褐色浆状物。粗产物在7mmHg(98℃)下经真空蒸馏纯化，得到澄清的油状物(78.92g，78％)。NMRδppm(CDCl₃)：5.9(m，1H)，5.3(m，2H)，4.7(d，2H)，4.25(s，2H)。

B)9-芴基甲氧羰基-正缬氨醛的合成(以下步骤a-c)：

a)9-芴基甲氧羰基-L-正缬氨酸甲酯(Fmoc-nVal-OMe)的合成：

向市售的Fmoc-正缬氨酸(25g，73.75mmol)的无水甲醇(469ml)冷却溶液中，在1小时内加入亚硫酰氯(53.76ml，737.5mmol)。TLC(使用乙酸乙酯，1小时后)确认反应完成(R_f＝0.85)。将反应混合物浓缩，残余物溶于乙酸乙酯。有机层用每份200ml的饱和碳酸氢钠、盐水洗涤几次。将有机层干燥，过滤并浓缩，得到定量收率的白色固体Fmoc-norVal-OMe(26.03g)。NMRδppm(CD₃OD)：7.7(m，2H)，7.6(m，2H)，7.4(m，2H)，7.3(m，2H)，4.3(m，2H)，4.1(m，2H)，3.7(s，3H)，1.7(m，1H)，1.6(m，1H)，1.4(m，2H)，0.95(t，3H)。

b)9-芴基甲氧羰基-正缬氨醇(Fmoc-nValinol)的合成：

向Fmoc-nVal-OMe(26.03g，73.75mmol)的四氢呋喃(123ml)和甲醇(246ml)溶液中加入氯化钙(16.37g，147.49mmol)。将反应混合物冷却至0℃，分几批加入硼氢化钠(11.16g，294.98mmol)。向获得的粘稠糊状物中加入甲醇(500ml)，将反应物在室温下搅拌90分钟。TLC(使用2∶3乙酸乙酯∶己烷)确认反应完成(R_f＝0.25)。反应通过缓慢加入0℃的100ml水猝灭。减压除去甲醇，保留的水相用乙酸乙酯稀释。有机层用水(3×500ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(3×500ml)和盐水(500ml)洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色固体(21.70g，90.5％)。NMRδppm(CD₃OD)：7.8(m，2H)，7.7(m，2H)，7.4(m，2H)，7.3(m，2H)，4.3-4.5(m，2H)，4.2(m，1H)，3.6(s，1H)，3.5(s，2H)，1.5(m，1H)，1.3-1.4(m，3H)，0.99(m，3H)。

c)9-芴基甲氧羰基-正缬氨醛(Fmoc-nVal-CHO)的合成：

向Fmoc-正缬氨醇(21.70g，66.77mmol)的二氯甲烷(668ml)溶液中加入三乙胺(37.23ml，267mmol)，将溶液冷却至0℃。将吡啶三氧化硫络合物(42.51g，267mmol)的二甲基亚砜(96ml)悬浮液加入到上述的冷却溶液中。1小时后，TLC(使用2∶3乙酸乙酯∶己烷)确认反应完成。减压除去二氯甲烷，将残余物溶于乙酸乙酯中，用水(2×50ml)、1N饱和硫酸氢钠(2×50ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(2×50ml)和盐水(50ml)洗涤。浓缩有机层，得到白色固体。获得理论收率(21.57g)，反应物无需进一步纯化就可直接用于下一步骤。

C)二苯基甲基氨基脲(dpsc)三氟乙酸盐的合成(以下的步骤a-b)：

a)Boc-氨基脲-4-基二苯基甲烷的合成

向羰基二咪唑(16.2g，0.10mol)的二甲基甲酰胺(225ml)溶液中在30分钟内滴加肼基甲酸叔丁酯(13.2g，0.100mol)的二甲基甲酰胺(225ml)溶液。在接下来的30分钟内加入二苯基甲胺(18.3g，0.10mol)。将反应物在室温下搅拌1小时。加入水(10ml)后将混合物减压浓缩至约150ml。将此溶液倾入到水(500ml)中，用乙酸乙酯(400ml)萃取。乙酸乙酯相用每份75ml的1N HCl、H₂O、饱和碳酸氢钠溶液和氯化钠各洗涤2次，用硫酸镁干燥。将混合物过滤并浓缩溶液，得到白色泡沫状产物29.5g(收率85％)。所得产物可以用乙酸乙酯/己烷重结晶纯化，但是上述产物纯度足以直接用于下一步骤：mp142-143℃。¹H NMR(CDCl₃)d 1.45(s，9H)，6.10(dd，2H)，6.42(s，1H)，6.67(bs，1H)，7.21-7.31(m，10H)。C₁₉H₂₃N₃O₃的分析计算值：C，66.84；H，6.79；N，12.31。实测值：C，66.46；H，6.75；N；12.90。

b)二苯基甲基氨基脲(dpsc)三氟乙酸盐的合成

Boc-氨基脲-4-基二苯基甲烷(3.43g，10mmol)的二氯甲烷(12.5ml)溶液在室温下用三氟乙酸(12.5ml)处理，搅拌30分钟。将溶液滴加到75ml乙醚中，通过过滤收集所得固体(2.7g，80％)。mp 182-184℃。¹H NMR(CD₃OD)d 6.05(s，1H)，7.21-7.35(m，10H)。¹³C NMR(CD₃OD)d 57.6，118.3(q，CF₃)，126.7，127.9，141.6，156.9，160.9(q，CF₃CO₂H)。

D)Fmoc-nVal-(CHOH)-Gly-O烯丙基的合成：

向Fmoc-nVal-CHO(步骤1B)(5.47g，16.90mmol)的二氯甲烷(170ml)溶液中加入异氰基乙酸烯丙酯(步骤1A)(2.46ml，20.28mmol)和吡啶(5.47ml，67.61mmol)。将反应混合物冷却至0℃，滴加三氟乙酸(3.38ml，33.80mmol)。将反应物在0℃搅拌1小时，然后在室温下搅拌48小时。TLC(使用乙酸乙酯)确认反应完成。将反应混合物浓缩并经快速色谱纯化(使用含20％-70％乙酸乙酯的己烷)。将含有所需产物的流分合并，浓缩，得到白色泡沫物(6.88g，87.3％)。TLC(使用1∶1乙酸乙酯/己烷)显示出一个斑点(R_f＝0.37)。NMRδppm(CD₃OD)：7.8(m，2H)，7.65(m，2H)，7.4(m，2H)，7.3(m，2H)，5.9(m，1H)，5.1-5.4(m，2H)，4.55-4.65(m，2H)，4.3-4.4(m，2H)，4.15-4.25(m，1H)，4.01(s，1H)，3.9-4.0(m，3H)，1.5-1.6(m，2H)，1.35-1.45(m，3H)，0.9(m，3H)。

E)Fmoc-nVal-(CO)-Gly-O烯丙基的合成：

向Fmoc-nVal-(CHOH)-Gly-O烯丙基(步骤D)(5.01g，10.77mmol)的二甲基亚砜(100ml)和甲苯(100ml)溶液中加入EDC(20.6g，107.7mmol)。将反应混合物冷却至0℃，滴加二氯乙酸(4.44ml，53.83mmol)。反应物在0℃搅拌15分钟，然后在室温下搅拌1小时。再冷却至0℃后，加入水(70ml)，减压除去甲苯。残余物用乙酸乙酯稀释，先用饱和碳酸氢钠溶液、再用1N硫酸氢钠和盐水各洗涤几次。有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。获得理论收率4.99g，反应物无需进一步纯化就可直接用于下一步骤。TLC(使用1∶1乙酸乙酯/己烷)显示出一个斑点(R_f＝0.73)。

F)Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-O烯丙基的合成：

向Fmoc-nVal-(CO)-Gly-O烯丙基(步骤E)(4.99g，10.75mmol)的乙醇(130ml)和水(42ml)溶液中依次加入二苯基甲基氨基脲(dpsc)三氟乙酸盐(步骤1C)(7.6g，21.5mmol)和乙酸钠·3H₂O(1.76g，12.9mmol)。将反应混合物回流加热90分钟。反应的完成用薄层色谱法用1∶1乙酸乙酯∶己烷确认。减压除去乙醇，残余物溶于乙酸乙酯，用1N硫酸氢钠(2×10ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(2×10ml)洗涤、接着用盐水(2×10ml)洗涤。将有机层干燥，过滤并浓缩。所得残余物经快速色谱纯化(含20％到50％乙酸乙酯的己烷)，得到白色固体(5.76g，78％)。TLC(使用50∶50乙酸乙酯/己烷)显示出两个斑点(顺式异构体和反式异构体)，R_f＝0.42和0.50。

G)Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-OH的合成：

向Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-O烯丙基(步骤1G)(4.53g，6.59mmol)的四氢呋喃(300ml)溶液中先加入双甲酮(4.62g，32.97mmol)，然后加入四(三苯基膦)合钯(O)催化剂(0.76g，0.66mmol)。90分钟后，TLC(使用9∶1二氯甲烷∶甲醇)确认反应完成。将反应混合物浓缩，残余物溶于乙酸乙酯，用每份50ml的0.1M磷酸二氢钾洗涤三次。然后有机层用50ml亚硫酸氢钠处理，将两相体系搅拌15分钟。分离各相，此步骤再重复两次。将有机层干燥，浓缩，经快速柱色谱纯化(先使用含20％-100％乙酸乙酯的己烷，然后使用9∶1二氯甲烷∶甲醇)。将对应于纯产物的流分合并，浓缩，得到白色固体(3.99g，94％)。TLC(使用9∶1二氯甲烷∶甲醇)显示出两个斑点(顺式异构体和反式异构体)。NMRδppm(CD₃OD)：7.75(m，2H)，7.6(m，3H)，7.2-7.4(m，14H)，6.1-6.2(m，1H)，4.25-4.4(m，2H)，4.1-4.2(m，2H)，3.85(s，2H)，1.6-1.8(m，2H)，1.3-1.5(m，2H)，0.95(t，3H)。

步骤2.H-Phg-MBHA树脂的合成：

将市售的MBHA树脂(2.6g，1.12mmol/g，2.91mmol)转移到250ml配置了氮气入口的烧结固相反应容器。将其用每份30ml的二氯甲烷、甲醇、二甲基甲酰胺和二氯甲烷充分洗涤，按照方法A将其与市售的Fmoc-Phg-OH(2.17g，5.82mmol)偶合18小时，反应效率为99.82％。然后按照方法B，对树脂进行Fmoc脱保护。对少量试样的茚三酮定性分析呈现深蓝色的树脂和溶液，表明反应成功。

步骤3.H-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA树脂的合成：

按照方法A，使步骤II获得的树脂(2.6g，0.8mmol/g，2.91mmol)与Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-O烯丙基(步骤1G)(5.82mmol，3.77g)反应。18小时后，用茚三酮定量分析显示偶合效率为99.91％。按照方法B，对树脂进行Fmoc脱保护。对少量试样的定性茚三酮分析呈现深蓝色的树脂和溶液，表明反应成功。

步骤4.Boc-Pro(4t-NHFmoc)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA树脂的合成：

将化合物H-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA树脂(以上的步骤3)(600mg，0.8mmol/g，0.67mmol)转移到滤板型聚丙烯管中，按照方法A与Boc-Pro(4t-NHFmoc)-OH(实施例VI步骤3)(610mg，1.34mmol)偶合。18小时后，用茚三酮定量分析偶合效率为99.96％。

步骤5.Boc-Pro(4t-NH₂)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA树脂的合成：

将前一步骤获得的树脂(Boc-Pro(4t-NHFmoc)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA树脂)按照方法B进行Fmoc脱保护。对小量等分样品的茚三酮定性分析呈现深蓝色的树脂和溶液，表明反应成功。

步骤6.Boc-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA树脂的合成：

向悬浮于NMP(2ml)的前一步骤获得的树脂(Boc-Pro(4t-NH₂)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA树脂)(0.2g，0.22mmol)中，加入2，4，6-三甲基吡啶(0.24ml，1.79mmol)和苯磺酰氯，将反应物振荡18小时。排出溶剂，树脂用每份2ml的二氯甲烷、甲醇、二甲基甲酰胺和二氯甲烷充分洗涤。茚三酮定性分析显示无色的珠粒和溶液，表明反应成功。

步骤7.Fmoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA树脂的合成：

将前一步骤获得的树脂(Boc-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA树脂)按照方法C进行Boc脱保护。然后按照方法A偶合Fmoc-G(Chx)(0.17g，0.45mmol)。18小时后，茚三酮定性分析显示无色珠粒，茚三酮定量分析显示偶合效率为99.79％。

步骤8.iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA树脂的合成：

将上一步获得的树脂(Fmoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA树脂)按照方法B进行Fmoc脱保护。对小量等分样品的茚三酮分析呈现深蓝色的树脂和溶液，表明反应成功。向悬浮于2ml NMP的树脂(0.2g，0.22mmol)中，加入氯甲酸异丁酯(0.12ml，0.90mmol)，接着加入二异丙基乙胺(0.31ml，1.79mmol)，将反应混合物在室温下振荡18小时。茚三酮定性分析显示无色的珠粒和溶液，表明反应成功。

步骤9.iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(CO)-Gly-Phg-MBHA树脂的合成：

将前一步骤的化合物(iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA树脂)(200mg)按照方法D进行缩氨基脲水解。

步骤10.iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(CO)-Gly-Phg-NH₂的合成：

将前一步骤的树脂(iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(CO)-Gly-Phg-MBHA树脂)(100mg)置于HF裂解条件(方法E)，得到所需的粗产物。粗产物用HPLC纯化(2.2×25cm反相柱，包括由孔径300埃的10微米硅胶粒组成的C-18树脂，洗脱时用梯度20-50％乙腈的水)。分析型HPLC(4.6×250mm反相柱，包含由孔径300埃的5微米硅胶粒组成的C-18树脂，洗脱时用25-75％乙腈(包含0.1％三氟乙酸))在13.5分钟显示一个峰。用低分辨率质谱确认所需要的物质(MH+826.4)。

IV.用液相合成制备另外的化合物：

制备本发明另外的化合物的典型方法如下，用这样的方法制备的化合物列于表5和表6中。

实施例XXIII：  式XXIII化合物的制备：

步骤1.

在氮气氛下，将酮亚胺(ketimime)XXIIIa(50g，187.1mmol)的无水THF(400mL)搅拌溶液冷却至-78℃，用1M K-^tBuO(220mL，1.15当量)的THF溶液处理。将反应混合物升温至0℃，搅拌1小时，用溴甲基环丁烷(28mL，249mmol)处理。将反应混合物在室温下搅拌48小时，真空浓缩。将残余物溶于Et₂O(300mL)，用HCl水溶液(2M，300mL)处理。将所得溶液在室温下搅拌5小时，用Et₂O(1L)萃取。水层用NaOH(50％水溶液)碱化至pH～12-14，用CH₂Cl₂(3×300mL)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩，得到无色油状的纯胺(XXIIIb，18g)。

步骤2.

胺XXIIIb(18g，105.2mmol)的CH₂Cl₂(350mL)溶液在0℃用二碳酸二叔丁酯(23g，105.4mmol)处理，在室温下搅拌12小时。在完成反应后(TLC)，将反应混合物真空浓缩，残余物溶于THF/H₂O(200ml，1∶1)，用LiOH·H₂O(6.5g，158.5mmol)处理，在室温下搅拌3小时。将反应混合物浓缩，碱性水层用Et₂O萃取。水层用浓盐酸酸化至pH～1-2，用CH₂Cl₂萃取。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩，得到无色粘性油状物XXIIIc，无需进一步纯化就可直接用于下一步骤。

步骤3.

酸XXIIIc(15.0g，62mmol)的CH₂Cl₂(250mL)溶液用BOP试剂(41.1g，93mmol)、N-甲基吗啉(27mL)、N，O-二甲基羟胺盐酸盐(9.07g，93mmol)处理，在室温下搅拌过夜。将反应混合物用1N HCl水溶液(250mL)稀释，然后分离各层，水层用CH₂Cl₂(3×300ml)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩，经色谱纯化(SiO₂，乙酸乙酯/己烷2∶3)，得到无色固体酰胺XXIIId(15.0g)。

步骤4.

酰胺XXIIId(15g，52.1mmol)的无水THF(200mL)溶液在0℃滴加LiAlH₄(1M，93mL，93mmol)溶液进行处理。将反应混合物在室温下搅拌1小时，在0℃用KHSO₄溶液(10％水溶液)小心地猝灭，搅拌0.5小时。反应混合物用HCl水溶液(1M，150mL)稀释，用CH₂Cl₂(3×200mL)萃取，合并的有机层用HCl水溶液(1M)、饱和NaHCO₃、盐水洗涤，干燥(MgSO₄)。将混合物过滤并真空浓缩，得到无色粘性油状物XXIIIe(14g)。

步骤5.

醛XXIIIe(14g，61.6mmol)的CH₂Cl₂(50mL)溶液用Et₃N(10.73mL，74.4mmol)和丙酮氰醇(10.86g，127.57mmol)处理，在室温下搅拌24小时。将反应混合物真空浓缩，用HCl水溶液(1M，200mL)稀释，用CH₂Cl₂(3×200mL)萃取。合并的有机层用H₂O、盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，真空干燥，经色谱纯化(SiO₂，乙酸乙酯/己烷1∶4)，得到无色液体XXIIIf(10.3g)。

步骤6.

HCl^*饱和的甲醇溶液(其制备是在0℃通入HCl气体至CH₃OH(700ml))用上述氰醇XXIIIf处理，回流加热24小时。将反应物真空浓缩，得到XXIIIg，无需进一步纯化就可直接用于下一步骤。

^*或者也可使用通过加入AcCl到无水甲醇而制备的6M HCl。

步骤7.

上述胺盐酸盐XXIIIg的CH₂Cl₂(200mL)溶液用Et₃N(45.0mL，315mmol)和Boc₂O(45.7g，209mmol)在-78℃处理。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜，用HCl(2M，200mL)稀释，萃取入CH₂Cl₂，将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩，经色谱纯化(乙酸乙酯/环己烷1∶4)，得到羟基酯XXIIIh。

步骤8.

上述甲酯XXIIIh(3g，10.5mmol)的THF/H₂O(1∶1)溶液用LiOH·H₂O(645mg，15.75mmol)处理，在室温下搅拌2小时。反应混合物用HCl水溶液(1M，15mL)酸化，真空浓缩。真空干燥残余物。

上述酸的CH₂Cl₂(50mL)和DMF(25mL)溶液用NH₄Cl(2.94g，55.5mmol)、EDCl(3.15g，16.5mmol)、HOOBt(2.69g，16.5mmol)和NMM(4.4g，44mmol)处理。将反应混合物在室温下搅拌3天。真空除去溶剂，残余物用HCl水溶液(250mL)稀释，用CH₂Cl₂萃取。合并的有机层用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩，得到XXIIIi，将其直接用于下一步骤。

(或者还可使XXIIIf(4.5g，17.7mmol)与H₂O₂水溶液(10mL)、LiOH·H₂O(820mg，20.8mmol)于0℃在50mL CH₃OH中反应0.5小时直接得到XXIIIi)

步骤9.

将前一步骤获得的XXIIIi的溶液溶于4N HCl的二噁烷溶液，在室温下搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩，得到固体XXIIIj，无需进一步纯化就可直接用于下一步骤。

步骤10.

氨基酯XXIIII按照R.Zhang和J.S.Madalengoitia(J.Org.Chem.1999，64，330)的方法制备，只是不使Boc保护的氨基酸与HCl的甲醇溶液反应而切下Boc基团。

商品氨基酸Boc-Chg-OH XXIIIk(Senn chemicals，6.64g，24.1mmol)和胺盐酸盐XXIIII(4.5g，22mmol)的CH₂Cl₂(100mL)溶液在0℃用BOP试剂处理，在室温下搅拌15小时。将反应混合物真空浓缩，然后用1M HCl水溶液稀释，萃取入EtOAc(3×200mL)。合并的有机层用饱和NaHCO₃(200mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩，经色谱纯化(SiO₂，乙酸乙酯/环己烷3∶7)，得到无色固体XXIIIm(6.0g)。

步骤11.

甲酯XXIIIm(4.0g，9.79mmol)的THF/H₂O(1∶1)溶液用LiOH·H₂O(401mg，9.79mmol)处理，在室温下搅拌3小时。反应混合物用HCl水溶液酸化，真空浓缩，得到游离酸。

酸(1.5g，3.74mmol)的DMF/CH₂Cl₂(1∶1 50mL)溶液用胺XXIIIj(772mg，3.74mmol)、EDCl(1.07g，5.61mmol)、HOOBt(959mg，5.61mmol)和NMM(2.15mL，14.96mmol)在-10℃处理。将反应混合物在0℃搅拌48小时，真空浓缩。残余物用1M HCl水溶液稀释，用CH₂Cl₂萃取，合并的有机层用NaHCO₃水溶液、HCl水溶液、盐水萃取，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩，得到黄褐色固体XXIIIn(2.08g)。

步骤12.

酰胺XXIIIn(2.08g，3.79mmol)的甲苯和DMSO(1∶1 20mL)溶液在0℃用EDCl(7.24g，37.9mmol)和二氯乙酸(2.42g，19.9mmol)处理，在室温下搅拌4小时。反应混合物用CH₂Cl₂稀释，用饱和NaHCO₃和盐水洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩，然后经色谱纯化(SiO₂，丙酮/己烷3∶7)，得到无色固体XXIII。

实施例XXIV  式XXIV化合物的制备：

步骤1.

将Boc-tert-Lue XXIVa(Fluka，5.0g 21.6mmol)的无水CH₂Cl₂/DMF(50mL，1∶1)溶液冷却至0℃，用胺XXIIII(5.3g，25.7mmol)、NMM(6.5g，64.8mmol)和BOP试剂(11.6g，25.7mmol)处理。将反应物在室温下搅拌24小时，用HCl水溶液(1M)稀释，用CH₂Cl₂萃取。合并的有机层用HCl(水溶液，1M)、饱和NaHCO₃、盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩，经色谱纯化(SiO₂，丙酮/己烷1∶5)，得到无色固体XXIVb。

步骤2.

将甲酯XXIVb(4.0g，10.46mmol)溶液溶于HCl(4M二噁烷溶液)，在室温下搅拌3小时。将反应混合物真空浓缩，得到用于下一步骤的胺盐酸盐。

将上述胺盐酸盐(397mg，1.24mmol)的CH₂Cl₂(10mL)溶液冷却至-78℃，用异氰酸叔丁酯(250mg，2.5mmol)处理，在室温下搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩，残余物用HCl水溶液(1M)稀释，用CH₂Cl₂萃取。合并的有机层用HCl水溶液(1M)、饱和NaHCO₃和盐水洗涤。将有机层干燥，过滤并真空浓缩，残余物经色谱纯化(SiO₂，丙酮/环己烷1∶4)，得到无色固体XXIVc。

步骤3.

甲酯XXIVc(381mg，1.0mmol)的THF/H₂O(1∶1，5mL)溶液用LiOH·H₂O(62mg，1.5mmol)处理，在室温下搅拌3小时。将反应混合物用HCl水溶液酸化，真空浓缩，得到游离酸。

酸(254.9mg，0.69mmol)的DMF/CH₂Cl₂(1∶1，5.0mL)溶液用胺XXIIIj(159mg，0.763mmol)、EDCl(199mg，1.04mmol)、HOOBt(169.5mg，1.04mmol)和NMM(280mg，2.77mmol)在-20℃处理。将反应混合物在-20℃搅拌48小时，真空浓缩。残余物用1M HCl水溶液稀释，用EtOAc萃取，合并的有机层用NaHCO₃水溶液、HCl水溶液、盐水萃取，干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩，得到黄褐色固体XXIVd(470mg)。

步骤4.

酰胺XXIVd(470mg，0.9mmol)的甲苯和DMSO(1∶1 20mL)溶液在0℃用EDCl(1.72g，9.0mmol)和二氯乙酸(0.37mL，4.5mmol)处理，在0℃搅拌4小时。将反应混合物用CH₂Cl₂稀释，然后用饱和NaHCO₃和盐水洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩，经色谱纯化(SiO₂，丙酮/己烷3∶7)，得到无色固体XXIV。

实施例XXV  式XXV化合物的制备：

步骤1.

Fmoc-甘氨酸(Bachem，2.0g，6.87mmol)的CH₂Cl₂(20mL)溶液用2-苯基-2-丙醇(Aldrich，3.36g，24.7mmol)、DCC(1M的CH₂Cl₂溶液，8.24mL)、DMAP(167mg，1.37mmol)处理，在室温下搅拌24小时。将反应混合物真空浓缩，用Et₂O(100mL)稀释。过滤除去固体，滤液用饱和NaHCO₃洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩，经色谱纯化(SiO₂，乙酸乙酯/环己烷1∶5)，得到为无色粘性液体的酯XXVc(1.1g)。

步骤2.

XXVc的CH₂Cl₂(16.0mL)溶液用哌啶(4.0mL)处理，在室温下搅拌0.5小时。将反应混合物真空浓缩，经色谱纯化(SiO₂，丙酮/己烷1∶10至1∶1)，得到无色液体胺XXVd(420mg)。

步骤3.

甲酯XXIVc(381mg，1.0mmol)的THF/H₂O(1∶1，5mL)溶液用LiOH·H₂O(62mg，1.5mmol)处理，在室温下搅拌3小时。将反应混合物用HCl水溶液酸化，真空浓缩，得到游离酸。

酸(2.0g，5.5mmol)的DMF/CH₂Cl₂(1∶1，40.0ml)溶液在-10℃用胺XXIIIg(1.51g，6.8mmol)、EDCl(1.57g，8.25mmol)、HOOBt(1.41g，8.25mmol)和NMM(2.5g，24.7mmol)处理。反应混合物在0℃搅拌48小时，真空浓缩。残余物用1M HCl水溶液(100mL)稀释，用CH₂Cl₂(3×100mL)萃取。合并的有机层用NaHCO₃水溶液、HCl水溶液、盐水萃取，干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩，得到黄褐色固体XXVe(3.17g)，无需任何纯化就可直接使用。

步骤4.

甲酯XXVe(2.5g，4.66mmol)的THF/H₂O/CH₃OH(1∶1∶1，60mL)溶液用LiOH·H₂O(200mg，4.87mmol)处理，在室温下搅拌4小时。反应混合物用HCl水溶液酸化，真空浓缩，得到游离酸。

酸(200.0mg，0.38mmol)的DMF/CH₂Cl₂(1∶1，6.0mL)溶液在-10℃用胺XXVd(78mg，0.4mmol)、EDCl(105mg，0.55mmol)、HOOBt(95mg，0.55mmol)和NMM(150mg，1.48mmol)处理。将反应混合物在0℃搅拌48小时，真空浓缩。残余物用1M HCl水溶液(30mL)稀释，用CH₂Cl₂(3×30mL)萃取。合并的有机层用NaHCO₃水溶液(2×30mL)、HCl水溶液、盐水(30mL)萃取，干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩，得到黄褐色固体XXVf(240mg)。

步骤5.

XXVf(240mg，0.28mmol)的CH₂Cl₂(10mL)溶液用Dess-Martin试剂(Omega，242mg，0.56mmol)处理，在室温下搅拌2小时。在氧化反应完成后(TLC，丙酮/己烷1∶4)，将反应混合物用饱和NaHCO₃(20mL)和Na₂S₂O₃(10％水溶液，20mL)稀释。将反应混合物搅拌30分钟，用CH₂Cl₂(3×30mL)萃取。合并的有机层用饱和NaHCO₃、盐水萃取，干燥(MgSO₄)，过滤，真空浓缩，经色谱纯化(SiO₂，丙酮/己烷1∶5)，得到无色固体XXV(122mg)。

实施例XXVI  式XXVI化合物的制备：

步骤1：

N-Boc-3，4-脱氢脯氨酸XXVIa(5.0g，23.5mmol)、二碳酸二叔丁酯(7.5g，34.4mmol)和4-N，N-二甲氨基吡啶(0.40g，3.33mmol)的乙腈(100mL)搅拌溶液在室温下加入三乙胺(5.0mL，35.6mmol)。所得溶液在此温度下搅拌18小时，然后将其真空浓缩。深褐色残余物经快速色谱纯化(洗脱时用10-25％乙酸乙酯/己烷)，得到浅黄色油状产物XXVIb(5.29g，84％)。

步骤2：

脱氢脯氨酸XXVIb(10.1g，37.4mmol)、苄基三乙基氯化铵(1.60g，7.02mmol)的氯仿(120mL)搅拌溶液在室温下加入50％氢氧化钠水溶液(120g)。在此温度下剧烈搅拌24小时后，将黑色混合物用CH₂Cl₂(200mL)和乙醚(600mL)稀释。分离各层后，水溶液用CH₂Cl₂/Et₂O(1∶2，3×600mL)萃取。将有机溶液干燥(MgSO₄)，浓缩。残余物经快速柱色谱纯化(使用5-20％乙酸乙酯/己烷)，得到9.34g(71％)灰白色固体XXVIc。

步骤3：

将XXVIc(9.34g，26.5mmol)的CH₂Cl₂(25mL)和CF₃CO₂H(50mL)溶液在室温下搅拌4.5小时，然后真空浓缩，得到褐色残余物，无需进一步纯化就可直接用于 步骤4。

步骤4.

将商品浓盐酸(4.5mL)加入 步骤3残余物的甲醇(70mL)溶液中，所得混合物在油浴中升温至65℃。18小时后，将混合物真空浓缩，得到褐色油XXVIe，无需进一步纯化就可直接用于 步骤5。

步骤5：

向 步骤4的脯氨酸甲酯XXVIe、商品N-Boc-环己基甘氨酸XXVIf(10.2g，40.0mmol)和[六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓](HATU)(16.0g，42.1mmol)的DMF(200mL)搅拌溶液中在0℃加入二异丙基乙胺(18.0mL，104mmol)。在冰浴中过夜(18h)后升温至室温，将反应混合物用EtOAc(600mL)、5％H₃PO₄(150mL)和盐水(150mL)稀释。有机溶液用5％H₃PO₄(150mL)、饱和NaHCO₃(2×200mL)洗涤，然后干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩。残余物经快速柱色谱纯化(使用5-20％乙酸乙酯/己烷)，得到3.84g(32％，三步)灰白色固体XXVIg。

步骤6：

甲酯XXVIg(5.87g，13.1mmol)和LiOH(1.65g，39.3mmol)的THF/MeOH/H₂O(1∶1∶1，90mL)溶液在室温下搅拌4小时。减压除去甲醇和THF。水溶液用1N HCl水溶液(50mL)酸化至pH～2，用固体氯化钠饱和，然后将其用EtOAc(3×150mL)萃取。将有机溶液合并，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩，得到白色固体XXVIh(5.8g，定量)。

步骤7：

所需要的产物XXIIIi按照实施例XXIII步骤11的方法制备。

步骤8：

所需要的产物XXVI按照实施例XXIII步骤12的方法制备。

实施例XXVII：  式XXVII化合物的制备：

步骤1

所需要的产物XXVIIa按照实施例XXIII步骤9的方法制备。

步骤2

所需要的产物XXVIIb按照实施例XXIV步骤2的方法制备。

步骤3

所需要的产物XXVII按照实施例XXIII步骤12的方法制备。

实施例XXVIII：  式XXVIII化合物的制备：

步骤1：

中间体XXVIIIb按照实施例XXIII步骤3-6的方法制备。

步骤2：

实施例XXIV步骤2的酸(XXVIIIc)(0.7g)与以上步骤1的产物(0.436g)、HATU(0.934g)和DIPEA(1.64mL)按照前述实施例IX步骤2a的方法反应，得到0.66g所需要的产物XXVIIId。

步骤3：

使步骤2的产物(0.5g)与Dess-Martin试剂(1g)按照前述实施例XX步骤7的方法反应。经快速柱色谱纯化(40％EtOAc，己烷，硅胶)，得到0.35g产物XXVIIIe。质谱(LCMS)522(M+H⁺)。

步骤4：

将步骤4产物(0.3g)加入到1/1 H₂O/MeOH溶液(20mL)和NaHCO₃固体(242mg，5当量)中。在室温下搅拌18小时后，将反应物用EtOAc稀释，分离各层。水层用1.0N HCl酸化至pH 2，用EtOAc萃取。EtOAc层用盐水洗涤，然后经MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩，得到为白色粉末的产物XXVIIIf(0.26g)。质谱(LCMS)508(M+H⁺)。

步骤5：

将步骤5产物(0.15g)溶于CH₂Cl₂，使其与HATU(0.137g)、NH₄Cl(0.08g，5当量)和DIPEA(0.53mL)反应。在室温下2小时后，反应物用EtOAc稀释，先用10％柠檬酸溶液、再用饱和NaHCO₃溶液洗涤。EtOAc层用盐水洗涤，然后经MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩，得到粗制混合物。经快速柱色谱纯化(30％丙酮，己烷，硅胶)，得到所需要的产物XXVIII(0.096g)。质谱(LCMS)507(M+H⁺)。

实施例XXIX：  式XXIX化合物的制备：

步骤1：

向原料醛(4.0g)的CH₂Cl₂(75mL)溶液(0℃)中加入乙酸(2.0当量，2.15mL)，接着加入异氰基乙酸甲酯(1.1当量，1.9mL)。然后将反应物逐渐升温至室温。18小时(过夜)后，反应物用EtOAc稀释，然后用饱和NaHCO₃溶液洗涤。EtOAc层用盐水洗涤，然后经MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩，得到粗制混合物。经快速柱色谱纯化(30-40％EtOAc，己烷，硅胶)，得到产物XXIXa(4.5g)。

步骤2：

向XXIXa(4.4g)的THF(100mL)溶液(0℃)中加入26mL(2.2当量)的1.0N LiOH溶液。将反应物在此温度下搅拌2小时，然后升温至室温。2小时后，反应混合物用1.0N HCl溶液酸化至pH 2。加入EtOAc，分离各层。EtOAc层用盐水洗涤，然后经MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩，得到产物XXIXb(3.7g)。

步骤3：

使酸XXIXb与实施例XV的胺按照实施例XXI步骤4介绍的方法反应。然后将所得中间体用HCl按照实施例XXIII步骤9介绍的方法处理，得到产物XXIXc。

步骤4：

将酸XXVIIIc(2.43g)溶于CH₂Cl₂，使其与胺XXIXc(2.47g)、HATU(2.5g)和DIPEA(5.8mL)按照前面实施例IX步骤2a介绍的方法反应，经快速柱色谱纯化(4％MeOH，CH₂Cl₂，硅胶)，得到所需要的产物XXIXd(4.35g)。质谱(LCMS)727(M+H⁺)。

步骤5：

使步骤4产物(4.2g)与Dess-Martin试剂(6.4g)按照制备实施例XX步骤7介绍的方法反应。经快速柱色谱纯化(100％EtOAc，硅胶)，得到3g最终产物XXIX。质谱(LCMS)725(M+H⁺)。

实施例XXX：  式XXX化合物的制备：

步骤1：

使2-(三氟甲基)丙-2-醇(1.28g)与N，N-二琥珀酰亚胺基碳酸酯(3.84g)和Et₃N(4.2mL)的无水CH₃CN(50mL)溶液反应18小时。将混合物用EtOAc(200mL)稀释，过滤。滤液用NaHCO₃、盐水洗涤，然后经MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩，得到粗制混合物。经快速柱色谱纯化(50％EtOAc，己烷，硅胶)，得到所需要的产物XXXa(0.3g)。

步骤2：

实施例XXIX的产物(0.3g)用100mL 4.0N HCl的二噁烷溶液处理。1小时后，加入200mL Et₂O，将所得沉淀滤出，真空干燥，得到为白色粉末的产物XXXb(0.27g)。质谱(LCMS)625(M-HCl+H⁺)。

步骤3：

向XXXb(0.05g)的CH₂Cl₂(5mL)室温溶液中加入DIPEA(0.040mL)、XXXa(1.5当量，0.030g)，接着加入1粒DMAP晶体。30分钟后，将反应物用EtOAc(20mL)稀释，然后依次用1.5N HCl、NaHCO₃、盐水洗涤。EtOAc层经MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩，得到粗制混合物。经制备型色谱纯化(40％丙酮，己烷，硅胶)，得到所需要的产物XXX(0.044g)。质谱(LCMS)779(M+H⁺)。

实施例XXXI：  式XXXI化合物的制备：

步骤1：

向XXXb(0.05g)的CH₂Cl₂(5mL)溶液在室温下加入DIPEA(0.040mL)和异氰酸叔丁酯(1.2当量，0.01mL)。18小时后，将反应物用EtOAc(20mL)稀释，然后用1.5N HCl、NaHCO₃和盐水洗涤。EtOAc层经MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩，得到粗制混合物。经制备型色谱纯化(100％EtOAc，硅胶)，得到最终产物XXXI(0.021g)。质谱(LCMS)724(M+H⁺)。

实施例XXXII：  式XXXII化合物的制备：

步骤1：

按照制备实施例XXX步骤2中介绍的方法，对实施例XXVIII的产物进行处理，得到产物XXXIIa。质谱(LCMS)407(M-HCl+H⁺)。

步骤2：

使胺XXXIIa与XXXa按照制备实施例XXX步骤3中介绍的方法反应，得到所需要的产物XXXII。质谱(LCMS)508(M+H⁺)。

实施例XXXIII：  式XXXIII化合物的制备：

步骤1：

使胺XXXHa与异氰酸叔丁酯按照实施例XXXI步骤1中介绍的方法反应，得到产物XXXIII。质谱(LCMS)561(M+H⁺)。

实施例XXXIV：  式XXXIV化合物的制备：

步骤1：

向酯(6.0g)和分子筛(5.2g)的无水二氯甲烷(35mL)混合物中加入吡咯烷(5.7mL，66.36mmoL)。所得褐色浆状物在N₂气氛、室温下搅拌24小时，过滤，然后用无水CH₃CN洗涤。将合并的滤液浓缩，得到所需要的产物。

步骤2：

向前一步骤产物的CH₃CN(35mL)溶液中加入无水K₂CO₃、甲基烯丙基氯(2.77g，30.5mmol)、NaI(1.07g，6.7mmoL)。将所得浆状物在室温下、N₂气氛下搅拌24小时。加入50mL冰水，接着加入2N KHSO₄溶液直到pH为1。加入EtOAc(100mL)，搅拌混合物0.75小时。收集合并的有机层，然后用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，蒸发，得到所需要的产物。

步骤3：

将前一步骤产物(2.7g，8.16mmoL)溶于二噁烷(20mL)，用新制备的1N LiOH(9mL)处理。反应混合物在室温下、N₂气氛下搅拌20小时。将反应混合物溶于EtOAc，然后用H₂O洗涤。将合并的水层冷却至0℃，用1N HCl酸化至pH 1.65。混浊的混合物用EtOAc(2×100mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩，得到所需要的酸(3.40g)。

步骤4：

向NaBH(OAc)₃(3.93g，18.5mmoL)的CH₂Cl₂(55mL)悬浮液中加入前一步骤产物的无水CH₂Cl₂(20mL)和乙酸(2mL)溶液。将所得浆状物在室温下搅拌20小时。将冰水(100mL)加入到上述浆状物中，搅拌半小时。分离有机层，过滤，干燥并蒸发，得到所需要的产物。

步骤5：

前一步骤产物(1.9g)的MeOH(40mL)溶液用过量的CH₂N₂/Et₂O溶液处理，搅拌过夜。将反应混合物浓缩至干，得到粗制的残余物。将残余物经硅胶色谱纯化(洗脱时用梯度乙酸乙酯/己烷)，得到1.07g纯的所需产物。

步骤6：

前一步骤的产物(1.36g)的无水CH₂Cl₂(40mL)溶液用BF₃.Me₂O(0.7mL)处理。将反应混合物在环境温度下搅拌20小时，用饱和NaHCO₃(30mL)猝灭，搅拌1/2小时。分离有机层，合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩，得到粗制的残余物。将残余物经硅胶色谱纯化(洗脱时用梯度乙酸乙酯/己烷)，得到0.88g所需要的化合物。

步骤7：

向前一步骤产物(0.92g)的MeOH(30mL)溶液中在室温下加入10％Pd/C(0.16g)，然后在环境温度、1个大气压下氢化。将反应混合物搅拌4小时并浓缩至干，得到所需要的化合物。

步骤8：

所需要的产物按照实施例XXIII步骤10的方法制备。

步骤9：

所需要的酸产物按照实施例XXIV步骤3的方法制备。

步骤10：

所需要的产物XXXIV按照实施例XXIX步骤4-5的方法制备。

实施例XXXV：式XXXV化合物的制备：

步骤1：

膦酸三乙酯(44.8g)的THF(30mL)溶液在0℃用1M二(三甲硅烷基酰胺)钠的THF溶液(200mL)处理。所得混合物在室温下搅拌0.5小时，然后冷却至0℃。滴加1，4-环己二酮缩乙二醇(15.6g)的THF(50mL)溶液，将所得溶液在室温下搅拌18小时。然后将反应混合物冷却至0℃，用冷柠檬酸水溶液处理，混合物用EtOAc萃取。萃取液用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，然后用盐水洗涤；然后经无水Na₂SO₄干燥，过滤，将滤液蒸发。残余物经硅胶色谱纯化(洗脱时用梯度CH₂Cl₂/EtOAc)，得到标题化合物(21g)，收率92％。质谱(FAB)227.3(M+H⁺)。

步骤2：

将前一步骤产物(20g)溶于EtOH(150mL)，在1atm氢气氛下用10％Pd/C处理3天。过滤混合物，将滤液蒸发，得到标题化合物(20.3g)，收率100％。质谱(FAB)229.2(M+H⁺)。

步骤3：

将前一步骤产物(20g)溶于MeOH(150mL)，用LiOH(3.6g)的水(50mL)溶液处理。将混合物搅拌18小时，真空浓缩。将残余物溶于冷水(100mL)，所得溶液用5N HCl酸化至pH 2-3，所得混合物用EtOAc萃取。萃取液经无水Na₂SO₄干燥，过滤，将滤液蒸发，得到标题化合物(17.1g)，收率97％。质谱(FAB)201.2(M+H⁺)。

步骤4：

1.将前一步骤产物(3.0g)溶于Et₂O(150mL)，用Et₃N(2.1mL)处理，所得溶液冷却至-78℃。滴加新戊酰氯(1.85mL)，再搅拌0.25小时后，将反应物在0.75小时内升温至0℃，然后再次冷却至-78℃，得到用于第二部分反应的混合酸酐溶液。

2.将(S)-4-苄基-2-噁唑烷酮(2.66g)的THF(22mL)溶液冷却至-78℃，滴加1.6M正丁基锂的己烷溶液(9.38mL)。在此温度下再搅拌0.33小时后，将溶液通过套管转移到第一部分的冷溶液中。将混合物在-78℃搅拌，然后升温至0℃，在此温度下搅拌0.5小时。分离有机层，水层用Et₂O萃取，合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，将滤液蒸发。残余物经硅胶色谱纯化(洗脱时用梯度己烷/乙酸乙酯(9∶1))，得到标题化合物(5.0g)，收率93％。质谱(FAB)360.4(M+H⁺)。

步骤5：

将前一步骤产物(2.7g)溶于THF(25mL)，冷却至-78℃，通过套管转移到-78℃的0.5M二(三甲硅烷基)氨基钾/甲苯(16.5mL)的THF(25mL)溶液，所得溶液在-78℃搅拌0.75小时。向此溶液中通过套管加入预冷至-78℃的trisyl叠氮化物(3.01g)的THF(25mL)溶液。1.5分钟后，反应物用乙酸(1.99mL)猝灭，将反应物升温至室温，然后搅拌16小时。反应物用EtOAc(300mL)稀释，然后用5％NaCl水溶液洗涤。水相用EtOAc萃取，合并的有机相用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，然后用盐水洗涤；经无水Na₂SO₄干燥，过滤，将滤液蒸发。残余物经硅胶色谱纯化(洗脱时用乙酸乙酯/己烷(1∶3))，得到标题化合物(2.65g)，收率88％。

步骤6：

将前一步骤产物(11.4g)溶于95％甲酸(70mL)，在70℃、搅拌下加热0.5小时。真空蒸发溶液，将残余物溶于EtOAc。溶液用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，然后用盐水洗涤；再经无水Na₂SO₄干燥，过滤，将滤液蒸发。残余物经硅胶色谱纯化，得到标题化合物(8.2g)。

步骤7：

将前一步骤产物(8.2g)溶于CH₂Cl₂(16mL)，用三氟化(二乙氨基)硫(DAST，7.00mL)在室温下处理3小时。将反应物倾入到冰/水(200cc)中，用CH₂Cl₂萃取。萃取液用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，然后用盐水洗涤；再经无水Na₂SO₄干燥，过滤，将滤液蒸发。残余物经硅胶色谱纯化(洗脱时用乙酸乙酯/己烷(15∶85))，得到标题化合物(4.5g)，收率52％。

步骤8：

将前一步骤产物(3.7g)溶于冷却至0℃的THF(150mL)和水(48mL)的混合物中，依次用30％H₂O₂(3.95mL)、LiOH·H₂O(0.86g)处理。将混合物在0℃搅拌1小时，然后用Na₂SO₃(5.6g)的水(30mL)溶液猝灭，接着用0.5N NaHCO₃(100mL)溶液猝灭。将混合物真空浓缩至1/2体积，用水(至500mL)稀释，用CH₂Cl₂(4×200mL)萃取。水相用5N HCl酸化至pH 1-2，用EtOAc(4×200mL)萃取。萃取液用盐水洗涤；然后经无水Na₂SO₄干燥，过滤，将滤液蒸发，得到标题化合物(1.95g)，收率91％，将其直接用于下一步骤。

步骤9：

将前一实施例产物(2.6g)溶于Et₂O(50mL)，滴加CH₂N₂的Et₂O溶液进行处理直到溶液保持黄色。将溶液搅拌18小时，然后真空蒸发，得到标题化合物(2.8)，将其直接用于下一步骤。

步骤10：

将前一步骤产物(1.95g)溶于MeOH(150mL)，先用甲酸(1.7mL)处理，再在1atm氢气氛下用10％Pd/C(3.3g，Degussa E101型)处理1.5小时。将混合物过滤，蒸发滤液，得到为甲酸盐的标题化合物(2.1g)，将其直接用于下一步骤。

步骤11：

将前一步骤产物(2.1g)溶于1，4-二噁烷(100mL)，加入二碳酸二叔丁酯(1.9g)，接着加入二异丙基乙胺(2.9mL)。将溶液搅拌18小时，真空浓缩。残余物用5％KH₂PO₄水溶液处理，混合物用EtOAc萃取。萃取液用盐水洗涤；然后经无水MgSO₄干燥，过滤，将滤液蒸发。残余物经硅胶色谱纯化(洗脱时用梯度CH₂Cl₂/Et₂O)，得到标题化合物(2.5g)，收率99％。质谱(FAB)307.9(M+H⁺)。

步骤12：

将前一步骤产物(2.5g)溶于1，4-二噁烷(35mL)，用1M LiOH水溶液(17mL)处理，搅拌2小时。混合物用冰/水(125cc)猝灭，混合物用3N HCl酸化至pH 3-4，用EtOAc萃取。萃取液经无水MgSO₄干燥，过滤，将滤液蒸发，得到标题化合物(2.3g)，收率96％。质谱(FAB)294.0(M+H⁺)。

步骤13：

所需要的产物按照实施例XXIII步骤10的方法制备。

步骤14：

所需的酸产物按照实施例XXIV步骤3的方法制备。

步骤15：

所需的酸产物按照实施例XXIX步骤4的方法制备。

实施例XXXVI.  式XXXVI化合物和式XXXVIII化合物的制备：

式XXXVI化合物和式XXXVIII化合物按照以下流程以及利用述制备实施例11至15制备。

式XXXVIb化合物用式XXXVIa化合物按照以下的已知方法制备：

向化合物XXXVIa(6.58g，22mmol)的100mL MeOH溶液中加入10％Pd/C(0.8g)和对甲苯磺酸(4.2g)。将反应混合物在室温下氢化过夜。反应混合物通过硅藻土过滤，然后用过量MeOH洗涤。将合并的滤液真空浓缩，得到树胶状的标题化合物XXXVIb。按照以上流程的路线并根据制备实施例11-15将XXXVIb转变成XXXVI和XXXVII。

实施例XXXVIII.式XXXVIII化合物的制备：

式XXXVIII化合物利用以下的流程并按照上述制备实施例11至15制备。

实施例XXXIX.式XXXIX化合物的合成

步骤1：

在-78℃，将磺酰氯XXXIXa溶液(按照H.Mcklwain(J.Chem.Soc1941，75)的方法制备)滴加到1.1.当量的叔丁基甲胺和三乙胺的混合物中，在室温下搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩，经色谱纯化(SiO₂，己烷/丙酮4∶1)，得到为无色油状物的磺酰胺XXXIXb。

步骤2：

将Cbz-保护的胺XXXIXb溶液溶于甲醇，用5mol％的Pd/C(5％w/w)处理，在60psi氢化。反应混合物通过硅藻土垫过滤，真空浓缩，得到游离胺XXXIXc，其在放置时固化。

步骤3：

羟基磺酰胺XXXIXd用合成XXVf的同样方法合成，只是用XXXIXc取代胺XXVd。粗制的反应混合物直接用于下一反应。

步骤4：

使用Dess Martin试剂，按照合成XXV(步骤5)的方法将羟基酰胺XXXIXd氧化成化合物XXXIX。粗制混合物经色谱纯化(SiO₂，丙酮/己烷3∶7)，得到无色固体XXXIX。

实施例XXXX  式XXXX化合物的合成

步骤1

XXXXa按照前面XXXII步骤1中介绍的方法反应，得到步骤1的产物XXXXb，质谱(LCMS)421(M-HCl+H⁺)。

步骤2

将Et₃N(1.4mL)和二苯氧基磷酰迭氮(2.2mL)加入到羧酸XXXXc的甲苯(13mL)溶液中。将反应物在室温下搅拌30分钟，然后回流过夜。18小时后，将反应物冷却至室温，得到步骤2的XXXXd产物，将其直接作为0.7M的甲苯溶液。

                   步骤3

按照前面实施例XXXIII中介绍的方法，使制备实施例XXXX步骤1的产物XXXXb与制备实施例XXXX步骤2的产物XXXXd反应，得到XXXX。质谱(LCMS)560(M+H⁺)。

实施例XXXXI  式XXXXI化合物的制备

步骤4

按照前面制备实施例12化合物4.1中介绍的方法，使制备实施例XXXX步骤1的产物XXXXb与根据J.Org.Chem.，1977，42，143制备的氯甲酸酯XXXXIa反应，得到XXXXI。质谱(LCMS)561(M+H⁺)。

实施例XXXXII  式XXXXII化合物的制备

步骤1

向经搅拌并冷却(丙酮/干冰浴)的原料亚胺XXXXIIa(3.679g)的乙醚(50ml)溶液中加入1.6M甲基锂的乙醚(12.6ml)溶液。让反应混合物在2小时内升温至室温。加入饱和NaHCO₃，约搅拌30分钟后，分离有机相。然后将其用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并真空浓缩至干。粗产物经硅胶色谱纯化(2％乙酸乙酯的正己烷)，得到所需要的产物XXXXIIb(0.3g)。

步骤2

向经搅拌并冷却(冰浴)的步骤1的产物XXXXIIb(0.3g)溶液中加入1.0N NaOH(1.38ml)，接着加入(Boc)₂O。将反应混合物在室温下搅拌～20小时，此后让其在乙酸乙酯(50ml)和水(10ml)之间分配。分离乙酸乙酯相，用盐水洗涤并经无水Na₂SO₄干燥。真空蒸发至干，得到所需要的NBoc衍生物XXXXIIc(0.660g)，无需进一步纯化就可直接用于下一步骤。

步骤3

将步骤2的XXXXIIc产物的甲醇(10ml)溶液在Pd(OH)₂存在下氢化，直到薄层色谱显示不存在原料。通过过滤除去Pd(OH)₂，用甲醇洗涤。将合并的滤液和洗涤液真空浓缩至干，得到固体，将其溶于甲醇，用1.0N HCl的乙醚处理。约2小时后，将反应混合物真空蒸发至干，得到为白色固体的XXXXIId即所需要的胺盐酸盐(0.2g)。

步骤4

向经搅拌并冷却(冰浴)的步骤C产物XXXXIId(0.1g)的CH₂Cl₂(6ml)溶液中加入饱和NaHCO₃溶液(4ml)，接着加入光气(0.64ml)。将反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后在室温下搅拌1小时。分离有机相，经无水MgSO₄干燥并真空浓缩至干，得到所需要的异氰酸酯XXXXIIe(0.0611g)。

步骤5

使步骤5的产物XXXXIIe与制备实施例XXXX的XXXXb按照前面实施例XXXIII中介绍的方法反应，得到XXXXII。质谱(LCMS)574(M+H⁺)。

实施例XXXXIII  式XXXXIII化合物的制备

步骤1

边搅拌边向冷却(冰浴)的4-羟基-2-丁酮(8.81g)XXXXIIIa的CH₂Cl₂(100ml)溶液中加入苯甲酰氯(14.76g)，接着加入吡啶(16.15ml)和DMAP(0.01g)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用乙酸乙酯(～200ml)稀释。溶液用CuSO₄水溶液、NH₄Cl水溶液和盐水洗涤。然后有机相经无水MgSO₄干燥并蒸发至干。产物经硅胶柱色谱纯化(5％-15％乙酸乙酯的正己烷)，得到XXXXIIIb(16.3g；84.9％)。

步骤2

向步骤1的产物XXXXIIIb(16.3g)的CH₂Cl₂(150ml)溶液中加入DAST(26.1ml)，将反应混合物在室温下搅拌～72小时。然后将混合物滴加到冷的饱和Na₂CO₃溶液(150ml)。混合物用乙酸乙酯(～200ml)稀释，搅拌～30分钟后，分离有机相；用盐水洗涤并经无水MgSO₄干燥。真空浓缩并经硅胶色谱纯化(4％乙酸乙酯的正己烷)，得到XXXXIIIc(14.6g；80.4％)。

步骤3

向步骤2的产物XXXXIIIc(4g)的无水乙醚(150ml)溶液中加入冷却(冰浴)的EtMgCl(28ml)。将反应混合物在冷却浴中搅拌～6小时，此后将其倾入到用冰冷却的饱和NH₄Cl水溶液中。分离有机层，用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥并真空浓缩至干。将残余物溶于CH₂Cl₂(100ml)，用Dess-Martin试剂(15.8g)处理。在室温下搅拌1小时后，加入Ph₃P＝CHCOO^tBu(10.54g)。继续搅拌～20小时。加入乙酸乙酯(～200ml)，接着加入饱和Na₂S₂O₃和饱和NaHCO₃(200ml；1/1)的混合物，然后搅拌～10分钟。分离有机层，依次用饱和NaHCO₃和盐水洗涤。洗涤的有机相经无水MgSO₄干燥并真空蒸发至干，得到所需要的粗产物。

使用步骤2的产物(10.6g)，重复上述反应。将来自这两个反应的最终粗产物合并，经硅胶色谱纯化(10％CH₂Cl₂的正己烷)，得到XXXXIIId(7.93g；57％)。

                     步骤4

将氨基甲酸苄酯(8.92g)溶于正丙醇(79ml)中。边搅拌边向所得溶液中加入新制备的NaOH(2.33g)的水(145ml)溶液，接着加入次氯酸叔丁酯(6.57ml)。向所得混合物(DHQ)₂PHAL(0.742g)中加入正丙醇(66ml)，接着加入XXXXIIId(19.05mmol)。然后加入锇催化剂K₂OsO₂(OH)₂，将反应混合物在室温下搅拌1小时。

使用XXXXIIId(19.36mmol)，重复上述反应。将这两种反应物合并，然后用乙酸乙酯(500ml)稀释。将混合物与水(100ml)一起振荡，分离有机相，用水、盐水洗涤，最后经无水MgSO₄干燥。真空蒸发，得到粗产物，经硅胶色谱纯化(10％-20％乙酸乙酯的正己烷)，得到纯的所需产物(3g)，为XXXXIIIe和XXXXIIIf的混合物。

步骤5

步骤4的产物XXXXIIIf和XXXXIIIe的CH₂Cl₂(50ml)搅拌溶液用三氟乙酸(50ml)处理。4小时后，将反应混合物真空浓缩至干。将残余物溶于10％Na₂CO₃水溶液中，溶液用乙醚洗涤，水相用2MH₂SO₄酸化至pH～1.5。用乙酸乙酯萃取酸性溶液，然后经无水MgSO₄干燥并真空蒸发，得到所需要的产物(2.6g)，为XXXXIIIg和XXXXIIIh的混合物。

步骤6

向步骤5的产物(1g)的CH₂Cl₂(50ml)溶液中加入HATU(1.43g)、NH₄Cl(0.842g)和DMSO(5.59ml)。将反应混合物在室温下搅拌～20小时，用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO₃和盐水洗涤。然后有机相经无水MgSO₄干燥并真空浓缩至干，得到粗产物。经硅胶色谱纯化(10％正己烷的乙酸乙酯)，其中一个流分得到纯的所需产物XXXXIIIi(0.205g)。

步骤7

向步骤6的产物XXXXIIIi(0.205g)的乙醇(15ml)溶液中加入10％Pd/C催化剂。将所得悬浮液氢化，直到薄层色谱显示原料完全耗尽(～3小时)。通过过滤除去催化剂，用乙醇洗涤。将合并的滤液和洗涤液真空蒸发至干，得到所需要的产物XXXXIIIj(0.164g)。

步骤8

按照实施例XXVIII和XXXIII同样的方法，将XXXXIIIj转变成XXXIII。

实施例XXXXIV  式XXXXIV化合物的制备

步骤1

在0℃，在氮气氛下，将丙二酸乙酯XXXXIVa(5.4ml；36mmol)加入到NaH(1.44g 60％矿物油分散体；0.9eq.)的无水四氢呋喃(THF；60ml)中，然后将混合物在室温下搅拌30分钟。加入苄基·2-溴乙基醚(8.5ml；40mmol)，然后将反应物回流24小时。冷却后，让反应物在EtOAc和稀HCl(约1M)之间分配。分离有机层，干燥(MgSO₄)并浓缩，得到残余物。

将前述残余物溶于无水THF(100ml)中，在氮气氛下，加入氢化锂铝(LAH；66ml 1.0M溶液)，然后将所得混合物在室温下搅拌4小时，加入EtOAc，接着加入稀HCl。分离有机层，用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并浓缩。粗制的反应产物经硅胶柱色谱纯化(用EtOAc∶己烷(70∶30)作为洗脱液)，得到为无色油状物的所需要的二醇XXXXIVb(3.59g)。

步骤2

将对甲苯磺酰氯(1.12g；5.9mmol)加入到二醇XXXXIVb(1.00g；4.9mmol)的二氯甲烷(15ml)和吡啶(1.18ml；14.6mmol)的混合物中，然后将所得混合物在室温下搅拌过夜(约16小时)。让反应混合物在EtOAc和稀HCl水溶液之间分配。分离有机相，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)并减压浓缩。残余物经硅胶柱色谱纯化(用EtOAc∶己烷(30∶70)作为洗脱液)，得到i)二甲苯磺酸酯(0.291g)，ii)所需要的一甲苯磺酸酯XXXXIVc(1.02g)和iii)回收的二醇(0.27g)。

步骤3

将一甲苯磺酸酯XXXXIVc(1.0g；2.8mmol)的无水二甲基甲酰胺(DMF；3ml)加入到NaH(0.333g 60％矿物油分散体；8.3mmol)的DMF(13ml)悬浮液中，将所得混合物在室温下搅拌3小时。让反应混合物在EtOAc和水之间分配。分离有机相，用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并浓缩，得到残余物，经硅胶柱色谱纯化(用EtOAc∶己烷(1∶5)作为洗脱液)，得到所需要的为无色油状物的氧杂环丁烷XXXXIVd(0.37g)。

步骤4

将10％Pd-C(0.10g)和苄基醚XXXXIVd(0.33g)的甲醇(10ml)悬浮液在氢气氛下(气球)放置1小时。反应混合物通过硅藻土垫过滤，所得固体用甲醇充分洗涤。将合并的滤液减压浓缩。得到为无色油状物的XXXXIVe(0.17g)，无需纯化就可直接用于后续方法。

步骤5

将Dess-Martin periodinane(0.658g；0.16mmol)加入到醇XXXXIVe(0.144g；1.4mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中，在室温下搅拌1小时，然后加入正膦(0.637g；0.16mmol)。将所得反应混合搅拌约16小时，然后让其在EtOAc和水之间分配。分离有机相，干燥(MgSO₄)并减压浓缩。残余物经硅胶柱色谱纯化(使用EtOAc∶己烷；1∶5)，得到为无色油状物的酯XXXXIVf(0.131g)。

步骤6

将氨基甲酸苄酯(0.657g；4.3mmol)溶于正丙醇(6ml)中。加入氢氧化钠水溶液(0.171g；4.3mmol，11ml水)，接着加入次氯酸叔丁酯(0.49ml；约4.3mmol)和(DHQ)₂PHAL(0.056g)的正丙醇(5ml)溶液。将所得混合物放在水浴中并将其搅拌5分钟。然后加入烯烃XXXXIVf(0.326g；1.4mmol)，接着加入锇酸钾二水合物(0.021g)。将所得反应混合物搅拌3小时，然后加入EtOAc。分离水层，用EtOAc洗涤。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并减压浓缩。残余物经硅胶柱色谱纯化(使用EtOAc∶己烷(7∶3)作为洗脱液)，得到α-羟基酯XXXXIVg(0.367g)，所得酯含有约20％不需要的β-羟基酯。

步骤7

将碳酸钾(0.100g)加入到约2g苄基酯XXXXIVg(污染有少量的氨基甲酸苄酯)的甲醇(30ml)溶液中。将所得混合物在室温下搅拌2小时，然后让其在EtOAc和水之间分配。分离有机相，用盐水洗涤，干燥并减压浓缩。残余物经硅胶柱色谱纯化(使用EtOAc∶己烷(7∶3))，得到所需要的酯XXXXIVh(1.02g)。

步骤8

将10％Pd-C(0.030g)和氨基甲酸苄酯XXXXIVh(0.090g)的甲醇(5ml)悬浮液在氢气氛下(气球)放置1小时。反应物通过硅藻土垫过滤，所得固体用甲醇充分洗涤。合并的滤液减压浓缩，得到可立即使用的中间体胺(0.050g)。

向胺(0.050g；0.28mmol)和羧酸XXXXIVi(0.121g；0.31mmol)的二氯甲烷(3ml)混合物中先加入BOP试剂(0.131g；0.31mmol)，接着加入三乙胺(0.130ml；0.93mmol)，将所得混合物搅拌4小时，然后让其在稀HCl水溶液(约1M)和EtOAc之间分配。分离有机相，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)并减压浓缩。残余物经硅胶柱色谱纯化(使用EtOAc作为洗脱液)，得到为白色固体的甲基酯XXXXIVj(0.107g)。

步骤9

将碳酸钾(0.054g；0.39mmol)加入到酯XXXXIVj(0.107g；0.19mmol)的甲醇(3ml)和水(1ml)混合物中，将所得反应物搅拌16小时，然后让其在EtOAc和水之间分配。分离有机相，用盐水洗涤，干燥并浓缩，得到酸XXXXIVk(0.099g)。

步骤10

将三乙胺(0.035ml；0.25mmol)加入到羧酸XXXXIVk(0.041g；0.08mmol)、盐酸盐(0.023g；0.08mmol)和BOP试剂(0.037g；0.08mmol)的二氯甲烷(3ml)混合物中，将所得混合物在室温下搅拌4小时。让所得反应物在EtOAc和稀HCl水溶液(1M)之间分配。分离有机相，用饱和碳酸氢钠水溶液、水洗涤，干燥并减压浓缩。

用前述方法获得的残余物溶于二氯甲烷(3ml)中，然后加入Dess-Martin periodinane(0.065g；0.15mmol)，将混合物在室温下搅拌2小时。让反应物在5％亚硫酸钠水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、水之间分配，干燥并减压浓缩。残余物经硅胶柱色谱纯化(使用CH₂Cl₂∶MeOH20∶1作为洗脱液)，得到α-酮基酰胺XXXXIV(0.021g)。FABMS：MH⁺，767.4。

实施例XXXXVI  式XXXXVI化合物的制备

步骤1

将醛XXIIIe(0.626g，2.75mmol)、TOSMIC(1.63g，8.27mmol)和CH₃COOH(0.48mL，8.27mmol)的无水CH₂Cl₂(15mL)溶液在室温下搅拌36小时。将反应混合物真空浓缩并经色谱纯化(SiO₂，EtOAc/己烷2∶3)，得到0.90g(68％)无色固体XXXXVIa。

MS(ES)m/z，相对强度965[(2M+1)⁺，30]，483[(M+1)⁺，53]，427(60)，383(100)，365(71)，272(64)。

步骤2

将XXXXVIa(0.9g，1.86mmol)的HCl(30mL，6 M的CH₃OH溶液，通过将乙酰氯加入到CH₃OH中而制备，0℃)溶液在室温下搅拌过夜。真空浓缩反应混合物，将其直接用于下一步骤。

MS(ES)m/z，相对强度681[(2M+1)⁺，26]，341[(M+1)⁺，100]，180(40)。

步骤3

使用XXIVc(134mg，0.36mmol)和胺XXXXVIb(120mg，0.32mmol)，按照实施例XXIV步骤3中介绍的方法，完成XXXXVIc的合成，得到产物XXXXVIc，无需纯化就可用于进一步氧化反应。

MS(ES)m/z，相对强度690[(M+1)⁺，100]，591(27)，537(18)，513(27)，478(63)，438(18)，414(60)，268(27)。

步骤4

使用醇XXXXVIc(219mg，0.32mmol)、EDCI(609mg，3.2mmol)和Cl₂CHCOOH(131μL，1.59mmol)，按照实施例XXIV步骤4中介绍的方法，通过氧化完成XXXXVI的合成，经色谱纯化(SiO₂，丙酮/己烷3∶7)，得到无色固体产物XXXXVI(117mg，53％，经二步)。

MS(ES)m/z，相对强度688[(M+1)⁺，32]，589(81)，476(100)。

                   中间体的合成

实施例XXXXVII  式XXXXVII中间体的制备

步骤1

在-78℃，向酮XXXXVIIa(4.93g，12.8mmol)的无水THF(100mL)中加入六甲基二硅叠氮化锂(LiHMDS)(17.0mL，17.0mmol)溶液。将所得溶液在该温度下搅拌1小时，然后加入丙酮(1.51mL，20.5mmol)和BF₃Et₂O(2.60mL，20.5mmol)的THF(15mL)溶液。再搅拌4小时后，先加入5％H₃PO₄(20mL)，然后加入饱和氯化铵溶液(200mL)和乙醚(200mL)。分离各层，水层用乙醚(2×200mL)萃取。将合并的有机溶液干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩。粗产物经快速色谱纯化(使用20-50％EtOAc/己烷)，得到1.84g XXXXVIIb(33％)和3.26g原料XXXXVIIa。

步骤2

在-78℃，向酮XXXXVIIb(0.94g，2.13mmol)的无水THF(20mL)溶液中加入LiAlH₄的THF(2.6mL，2.6mmol)溶液，将反应混合物搅拌40分钟，然后加入KHSO₄溶液(1.0M，16mL)。让混合物升温至室温，然后向其中加入EtOAc(100mL)和水(50mL)。分离各层后，水层用EtOAc(2×50mL)萃取。将合并的有机溶液干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩。粗产物经快速色谱纯化(使用30-100％EtOAc/己烷)，得到0.49g XXXXVIIc(52％)和0.18g(19％)XXXXVIId。

步骤3

将XXXXVIIc(103mg，0.232mmol)、三苯基膦(120mg，0.456mmol)和偶氮二羧酸二乙酯(0.055mL，0.349mmol)的无水CH₂Cl₂(5mL)溶液在室温下搅拌18小时。真空浓缩后，混合物经快速柱色谱纯化(使用10-30％EtOAc/己烷)，得到24mg(24％)XXXXVIIe。

步骤4

将XXXXVIIe的EtOH溶液在室温下、在10％Pd-C催化剂中催化，得到XXXXVII。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体XXXXVII，合成表6描述的多种抑制剂。

实施例XXXXVIII  式XXXXVIII中间体的制备

步骤1

向5g(22mmol)N-Boc-脱氢脯氨酸甲酯XXXXVIIIa中加入25mg NaF和2g甲苯。在110℃，在1小时内通过注射泵加入1.6当量(35mmol，8.75g)TMS氟磺酰基二氟乙酸酯(TFDA)。2小时后，使反应物冷却至室温。向所得混合物中加入NMO(6.8g，50mmol)、丙酮(50mL)、H₂O(25mL)和OsO₄(0.015M的H₂O，1mol％，0.44mmol，28mL)。将反应物在室温下搅拌过夜，然后用EtOAc稀释，用H₂O和盐水洗涤。有机层经MgSO₄干燥，过滤并浓缩至干。经快速柱色谱纯化(10EtOAc，己烷，硅胶)，得到产物XXXXVIII(0.76g)。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体XXXXVIII，合成表6描述的多种抑制剂。

实施例IL  式IL中间体的制备

步骤1.(1R，3S)-2，2-二甲基-3-(2-氧代丙基)环丙烷乙酸

将0.55L叔丁醇、1.1L水、100mL 3-蒈烯ILa(Aldrich ChemicalCo.)和490g NaIO₄的混合物用2.2g氯化物钌水合物处理。或者，将经剧烈搅拌的混合物加热后冷却2小时，以维持温度为35-40℃。或者，将经剧烈搅拌的混合物加热后再冷却1小时，以维持温度为40-50℃。然后将经剧烈搅拌的混合物再加热1/2小时，以维持温度为50-55℃。然后将混合物冷却至30℃，在布氏漏斗上过滤，沉淀用700mL异丙醚洗涤。滤液的含水部分用900mL EtOAc-己烷(2∶1)萃取，将萃取液与滤液的含乙醚部分混合。合并的有机层用300mL 20％NaCl水溶液洗涤，然后用含36g NaOH的2.2L水溶液萃取。冷却的含水萃取液用100mL 12N HCl酸化，然后用Et₂O(3×800mL)萃取。萃取液用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥并真空蒸发，得到98g(88％)树胶状标题化合物ILb。H¹NMR(CDCl₃)δ2.39(m，2)，2.28(m，2)，2.19(s，3)，1.1.12(s，3)，0.90(m，2)，0.63(s，3)。

步骤2.(1R，3S)-甲基-2，2-二甲基-3-(2-氧代丙基)环丙烷乙酸

将98g以上步骤的产物ILb和0.55L DMF用98g Cs₂CO₃处理。将混合物搅拌10分钟，加入41.5mL MeI，将所得混合物在40℃搅拌1小时。将混合物冷却并在布氏漏斗上过滤。滤液用2.5L 18％NaCl水溶液猝灭，分离有机层，水溶液用Et₂O-己烷(1∶1；2×1L)萃取。将合并的有机层和萃取液用水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并真空蒸发，得到91g(86％)粘稠油状标题化合物ILc。H¹NMR(CDCl₃)δ3.67(s，3)，2.3(m，4)，2.17(s，3)，1.12(s，3)，0.97(m，2)，0.91(s，3)。

步骤3.(1R，3S)-甲基3-(乙酸基甲基)-2，2-二甲基环丙烷乙酸

将91g以上步骤的产物ILc和0.7L 1，1，2-三氯乙烷的溶液用165g 70％间氯过氧苯甲酸处理。将混合物在环境温度下搅拌1小时，然后用油浴加热，以保持反应温度为65-70℃达1小时，然后在75℃再加热1小时。将混合物冷却，在布氏漏斗上过滤，滤饼用新的三氯乙烷洗涤。将合并的滤液和洗涤液真空浓缩至0.5L，残余物用2.5L己烷-Et₂O(3∶1)稀释。有机溶液用3.5％K₂CO₃水溶液-盐水(3∶1；8×0.9L)重复洗涤，然后用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并真空蒸发，得到98g(100％)粘稠油状标题化合物ILd。H¹NMR(CDCl₃)δ4.1-3.9(m，2)，3.68(s，3)，2.34(d，2)，2.04(s，3)，1.12(s，3)，1.04(m，2)，1.00(s，3)。

步骤4.(1R，3S)-甲基3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丙烷乙酸

将98g以上步骤的产物ILd和1L甲醇的溶液用19g K₂CO₃处理，将混合物在30℃搅拌1小时。真空浓缩混合物，以除去0.6L甲醇，残余物用冷的10％KH₂PO₄水溶液猝灭，混合物用EtOAc萃取。萃取液用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤并真空蒸发，得到70g(89％)树胶状标题化合物ILe。H¹NMR(CDCl₃)δ3.80(q，1)，3.73(s，3)，3.52(m，1)，2.68(d d，1)，2.23(d d，1)，1.09(s，3)，1.1-0.9(m，2)，0.98(s，3)。

步骤5.(1S，6R)-7，7-二甲基-3-氧杂二环[4.1.0]庚-4-酮

将70g以上步骤的产物ILe和1.1L二甲苯的溶液用30.8g DBU处理。将溶液加热至温和回流达18小时，除去蒸馏液中的甲醇。将溶液冷却，先用冷的1N HCl洗涤，再用盐水洗涤；经无水MgSO₄干燥，过滤并真空蒸发。残余物经色谱纯化(在600g硅胶上，使用梯度CH₂Cl₂至1∶10 EtOAc-CH₂Cl₂)，得到54g(94％)油状标题化合物ILf。H¹NMR(CDCl₃)δ4.71(d d，1)，4.04(d d，1)，2.75(d d，1)，2.16(d d，1)，1.16(s，3)，1.25(m，1)，1.12(s，3)。

步骤6.(1S，6R，5E)-7，7-二甲基-3-氧杂二环[4.1.0]庚-4，5-二酮，5-肟

将42g以上步骤的产物ILf和300mL无水甲苯的溶液用102mL90％亚硝酸叔丁酯处理。或者将搅拌混合物按需加热并冷却，在30-35℃，在20分钟内分6次加入45g叔丁醇钾。然后加入180mL无水甲醇，将温度升高至40℃，并在40℃继续搅拌2.5小时。将混合物冷却，用冷的1.1L 10％水溶液和20mL 12N HCl猝灭，然后用EtOAc-甲苯(3∶1)萃取。萃取液用5％NaHCO₃水溶液洗涤，然后用盐水洗涤；经无水MgSO₄干燥，过滤并真空蒸发。残余物(25g)经色谱纯化(在150g硅胶上，使用梯度CH₂Cl₂至35∶65 EtOAc-CH₂Cl₂)，得到15g(29％)油状标题化合物ILg。H¹NMR(CDCl₃)δ4.82(d d，1)，4.55(d d，1)，2.40(d，1)，1.49(m，1)，1.27(s，3)，1.18(s，3)。

步骤7.

将18g以上步骤的产物ILg和400mL EtOAc的溶液用32g二碳酸二叔丁酯(Boc₂O)和2.0g 10％披钯碳处理。将混合物在2.5atm氢化18小时，过滤，蒸发滤液，得到36g混有Boc₂O的标题化合物，无需纯化可直接用于下一步骤。所得部分经色谱纯化，得到纯的标题化合物：H¹NMR(DMSO-d₆)δ7.28(d，NH)，4.76-4.64(m，2)，4.44(d，1)，1.40(s，9)，1.24(m，1)，1.11(m，2)，1.07(s，3)，0.99(s，3)。

步骤8.(1R，3S)-甲基α(S)-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-3-(羟甲基)-2，2-二甲基环丙烷乙酸

将35 g以上步骤的产物混合物ILh和350mL无水甲醇的溶液用12g磨碎的无水K₂CO₃处理。将混合物剧烈搅拌2小时，用25℃浴真空浓缩，然后用0.6L 10％KH₂PO₄水溶液猝灭。所得溶液用EtOAc-己烷(95∶5；2×200mL)萃取，萃取液用盐水洗涤，经无水MgSO₄干燥，过滤，真空浓缩滤液，得到ILi 22g(70％)的标题化合物，为两种差向异构体的树胶状混合物，α-S/α-R之比为8∶2，对于本发明目的而言无需进行分离。所得部分经色谱纯化(使用Et₂O-己烷(60∶40))，得到纯的α-S-差向异构体的标题化合物：H¹NMR(CDCl₃)δ5.2(br s，1)，4.05(br s，1)，3.81(m，1)，3.76(s，3)，3.65(m，1)，1.43(s，9)，1.14(s，3)，1.06(s，3)，1.05(m，1)，0.86(m，1)。旋光性：[α]_D ²⁵-62.9°(c＝1，MeOH)。元素分析：理论值C 58.52，H 8.77，N 4.87；实测值C 58.48，H8.75，N 5.10。

进一步洗脱，得到α-R-差向异构体的标题化合物：H¹NMR(CDCl₃)δ4.95(br d，1)，4.03(m，1)，3.82(m，1)，3.78(s，3)，3.71(m，1)，1.44(s，9)，1.13(m，1)，1.10(s，3)，1.08(s，3)，0.86(m，1)。旋光性：[α]_D ²⁵-32.8°(c＝1，MeOH)。元素分析：理论值C 58.52，H 8.77，N 4.87；实测值C58.46，H 8.69，N 4.74。

步骤9.(1R，5S)-6，6-二甲基-，3-氮杂二环[3.1.0]己烷-2(S)，3-二羧酸3-(1，1-二甲基乙基)2-甲基酯

将21.6g三苯基膦和250mL无水THF的溶液冷却至-10℃，然后滴加16.2g偶氮二羧酸二异丙酯进行处理，同时将反应温度升高至+5℃。再搅拌5分钟后，混合物用19.7g以上步骤的产物混合物ILi的35mL THF溶液处理。再搅拌10分钟后，将混合物回流加热3小时，冷却并真空蒸发。将残余物转移到装有总共450mL甲醇-水(1∶1)的分液漏斗中，两相混合物用己烷(7×225mL)萃取。合并的萃取液先用20mL甲醇-水(1∶1)洗涤，然后用盐水洗涤；经无水Na₂SO₄干燥，过滤，真空蒸发滤液。将残余物溶于400mL己烷中，通过30g硅胶垫吸滤，硅胶垫再用210mL EtOAc-己烷(1∶9)洗涤。真空蒸发合并的滤液，得到12.8g(69％)标题化合物ILj，为两种差向异构体的树胶状混合物，污染有少量的二异丙基二羧酸肼，但仍适合于后续反应。

以上步骤的纯的S-差向异构体按同样方式进行处理，得到标题化合物的S-差向异构体：H¹NMR(CDCl₃)δ4.21和4.09(s+s，1)，3.75(s，3)，3.65(m，1)，3.41(m，1)，1.44和1.39(s+s，9)，1.38(m，2)，1.03(s，3)，0.98和0.97(s+s，3)。元素分析：理论值C 62.43，H.8.61，N 5.20；实测值C 61.82，H 8.67，N 5.15。

以上步骤的R-差向异构体按同样方式进行处理，得到标题化合物的纯的R-差向异构体：H¹NMR(CDCl₃)δ4.49和4.30(d+d，1)，3.62(s，3)，3.59(m，1)，3.42(m，1)，1.65(m，1)，1.45和1.39(s+s，9)，1.36(m，1)，1.10(s，3)，0.99(s，3)。

步骤10.

将14.5g以上步骤的产物混合物ILj和270mL 1，4-二噁烷的溶液用135mL 1M LiOH水溶液处理，将混合物在80℃加热4小时。将混合物冷却，真空浓缩至1/2体积，用200mL水稀释，用己烷萃取。将水层冷却并用9ml 12N HCl的50mL 10％KH₂PO₄水溶液处理，然后用EtOAc萃取。萃取液用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，真空蒸发滤液，得到10.8g(78％)树胶状标题化合物IL，PMR显示化学非对映异构体纯度＞90％，并且适合于后续反应：H¹NMR(CDCl₃)δ4.20和4.11(s+s，1)，3.62(m，1)，3.44(m，1)，1.68和1.45(d+unk，1)，1.46和1.40(s+s，9)，1.45(m buried under 1.46，1)，1.07(s+s，□□＝2Hz，3)，0.99和0.95(s+s，3)。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体IL，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例L  式L中间体的制备

步骤1

在Ar气氛下，在室温下，边搅拌边向La(10.0g，50.0mmole)、2-[(三甲基甲硅烷基)甲基]-2-丙烯-1-基乙酸酯(22.0g，118mmole)和亚磷酸三异丙酯(18.6g，89.2mmole)的甲苯(50ml)的混合物中加入乙酸钯(II)(2.5g，11mmole)。将其加热至120℃(油浴)达13小时。冷却至室温后，经快速色谱纯化(CH₂Cl₂∶己烷＝4∶1)，得到9.55g Lb(75％)。[□]²⁵＝+132°(CHCl₃)。HRMS(FAB)对于C₁₆H₁₈NO₂(MH⁺)的计算值：256.1338；实测值：256.1340。

步骤2

在0℃，向Lb(2g，7.8mmol)的无水THF(50ml)溶液中分次加入LAH(1.13g，28.9mmol)。将混合物回流6小时后，冷却至0℃。向反应物中小心地加入2ml H₂O、2ml 15％NaOH和6ml H₂O。通过过滤除去固体，浓缩滤液经色谱纯化(2％MeOH的CH₂Cl₂)，得到1.33g Lc(70％)。HRMS(FAB)对于C₁₆H₂₂NO(MH⁺)的计算值：244.1701；实测值：244.1697。

步骤3

将化合物Lc(1.33g，5.46mmol)和10％披钯碳(1.3gram)的乙酸(20ml)混合物在60psi氢化3天。滤出催化剂，真空浓缩滤液。将残余物溶于20ml 4N HCl的二噁烷中，将溶液蒸发至干。得到1.04g(100％)化合物L，为两种差向异构体的1∶1混合物。HRMS(FAB)对于C₉H₁₈NO(MH⁺)的计算值：156.1388；实测值：156.1390。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体L，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LI  式LI中间体的制备

步骤1

化合物Lb(2.6g，10.2mmol)的CH₂Cl₂(30ml)和ⁱPrOH(10ml)混合物在-78℃臭氧化，直到颜色一直为淡蓝色(约40分钟)。加入二甲硫(10ml)，将溶液在室温下搅拌过夜。真空除去溶剂，让残余物在水和EtOAc之间分配。有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩。经快速色谱纯化(2％MeOH的CH₂Cl₂)，得到2.32g LIa(77％)。MS(MH+，FAB)＝257。

步骤2

向LIa(0.86g，3.35mmol)的无水CH₂Cl₂(30ml)溶液中在室温下加入三氟化(二甲氨基)硫(甲基DAST，2.23g，16.8mmol)。将溶液在室温下搅拌2天。将其小心地加入到冰和饱和NaHCO₃的混合物中，用EtOAc萃取。EtOAc溶液用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩。残余物经色谱纯化(0.8％MeOH的CH₂Cl₂)，得到LIb(0.82g，88％)。HRMS(FAB)对于C₁₅H₁₆NO₂F₂(MH⁺)的计算值：280.1149；实测值：280.1152。

步骤3

按照有关制备L(Lb-L)中介绍的同样方法，使用0.44g LIb，得到0.31g LI(92％，分二步)。HRMS(FAB)对于C₈H₁₄NOF₂(MH⁺)的计算值：178.1043；实测值：178.1042。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LI，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LII  式LII中间体的制备

步骤1

将化合物Lb(3.74g，14.7mmol)的CH₂Cl₂(30ml)溶液在-78℃臭氧化，直到颜色一直为淡蓝色(约60分钟)。将其用N₂吹扫5分钟，然后加入到冷的NaBH₄(4.44g，117mmol)的50ml EtOH/H₂O(1∶1)溶液中。将其在室温下搅拌12小时，然后用EtOAc萃取2次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩。残余物经色谱纯化(2％MeOH的CH₂Cl₂)，得到LIIa(2.19g，58％)。HRMS(FAB)对于C₁₅H₁₈NO₃(MH⁺)的计算值：260.1287；实测值：260.1283。

步骤2

向LIIa(2.18g，8.40mmol)的无水吡啶(50ml)溶液中加入甲苯磺酰氯(3.2g，16.8mmol)和N，N-二甲氨基吡啶(1.03g，8.40mmol)。将其在室温下搅拌3天，然后真空浓缩。让残余物在3％柠檬酸和EtOAc之间分配。有机层再次用3％柠檬酸洗涤，接着用盐水洗涤。除去溶剂后，残余物经色谱纯化，得到LIIb(2.54g，73％)。HRMS(FAB)对于C₂₂H₂₄SNO₅(MH⁺)的计算值：414.1375；实测值：414.1378。

步骤3

按照有关制备L(Lb-L)中介绍的同样方法，使用2.53g LIIb，得到1.03g LII(95％，分二步)。HRMS(FAB)对于C₈H₁₆NO(MH+)的计算值：142.1232；实测值：142.1233。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LII，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LIII  式LIII中间体的制备

步骤1

向7.84mmol二乙基锌(1N的己烷溶液)的无水CH₂Cl₂(30ml)溶液中在0℃滴加三氟乙酸(0.893g，7.84mmol)。搅拌20分钟后，在20分钟内加入二碘甲烷(2.10g，7.84mmol)，然后加入Lb(1g，3.92mmol)的5ml CH₂Cl₂。除去冰浴，将混合物在室温下搅拌14小时。反应物用饱和NH₄Cl猝灭，用EtOAc萃取。EtOAc溶液先用饱和Na₂SO₄洗涤，然后用盐水洗涤并真空浓缩。残余物经色谱纯化，得到LIIIa(4.61g，73％)。HRMS(FAB)对于C₁₇H₂₀NO₂(MH⁺)的计算值：270.1494；实测值：270.1497。

步骤2

将三氟乙酸(TFA，10ml)在室温下加入到LIIIa(4.6g，17.1mmol)的THF(20ml)和H₂O(20ml)溶液中。搅拌过夜后，真空除去溶剂。让残余物在饱和NaHCO₃和EtOAc之间分配。水相用EtOAc反萃取5次。合并的有机相经Na₂SO₄干燥并浓缩。残余物经色谱纯化，得到LIIIb(3.1g，100％)。HRMS(FAB)对于C₁₀H₁₆NO₂(MH⁺)的计算值：182.1181；实测值：180.1182。

步骤3

将LAH(1.76g，46.3mmol)在0℃分几次加入到LIIIb的无水THF(50ml)中。将混合物回流6小时，然后冷却至0℃。向反应物中小心地加入2ml H₂O、2ml 15％NaOH和6ml H₂O。通过过滤除去固体，浓缩滤液经色谱纯化(30％MeOH的CH₂Cl₂，含有1％NH₄OH)，得到0.39g LIIIc(71％)。HRMS(FAB)对于C₁₀H₁₈NO(MH⁺)的计算值：168.1388；实测值：168.1389。

步骤4

向LIIIc(0.5g，2.99mmol)、LIIId(0.69g，2.99mmol)和HATU(1.14g，3mmol)的无水DMF(20ml)混合物中在0℃加入N，N-二异丙基乙胺(1ml，5.89mmol))。将其在室温下搅拌3小时。让反应混合物在H₂O和EtOAc之间分配。有机层依次用3％柠檬酸、饱和NaHSO₄和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩。得到足够纯的产物LIIIe(0.978g，86％)，可直接用于下一步骤。HRMS(FAB)对于C₂₁H₃₇N₂O₄(MH⁺)的计算值：381.2910；实测值：381.2749。

步骤5

向LIIIe(0.49g，1.29mmol)的丙酮(20ml)溶液中在0℃加入琼斯试剂(2ml 2.5M溶液，5mmol)。将其在0℃搅拌20分钟，然后在室温下搅拌30小时。向该混合物中依次加入EtOAc(50ml)、无水Na₂SO₄(3g)、硅藻土(2g)和ⁱPrOH(1ml)。将其剧烈搅拌20分钟。滤出固体。滤液用3％柠檬酸洗涤，经Na₂SO₄干燥并真空浓缩。残余物经色谱纯化(3％MeOH的CH₂Cl₂，0.5％乙酸)，得到LIII(0.48g，94％)。HRMS(FAB)对于C₂₁H₃₅N₂O₅(MH⁺)的计算值：395.2546；实测值：395.2543。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LIII，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LIV  式LIV中间体的制备

步骤1

将溶于含有PtO₂(1g)的溶剂AcOH(10ml)和EtOAc(20ml)的混合物中的化合物LIIIe(0.41g，1.08mmol)在一个大气压的H₂下氢化3小时。通过过滤除去催化剂，真空浓缩滤液，得到LIV(0.41g，100％)。HRMS(FAB)对于C₂₁H₃₉N₂O₅(MH+)的计算值：383.2910；实测值：383.2906。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LIV，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LV  式LV中间体的制备

步骤1

将双(三甲基甲硅烷基)氨基钾(158ml 0.5M的甲苯溶液；79mmol)加入到环丙基三苯基溴化鏻(33.12g；86.4mmol)的无水四氢呋喃(130ml)的搅拌悬浮液中，在氮气氛下，将所得橙色混合物在室温下搅拌1小时，然后加入醛LVa(9.68g；42.2mmol)的THF(8ml)溶液。将反应物在氮气氛下回流2小时。冷却后，加入甲醇、乙醚和Rochelles盐。分离有机相，用盐水洗涤，干燥并减压浓缩。粗制的反应产物经硅胶柱色谱纯化(使用EtOAc-己烷(1∶99)至EtOAc-己烷(5∶95))，得到为黄色油状物的烯烃LVb(8.47g)。

步骤2

在室温下，通过将14.2ml乙酰氯滴加到冷甲醇溶液中，将所得溶液稀释至200ml，制备1M HCl和MeOH/MeOAc溶液。

将氨基甲酸酯LVb(9.49g；37.5mmol)溶于甲醇(12ml)中，加入到1M HCl的MeOH/MeOAc(150ml)溶液中，同时在冰浴中冷却。将所得混合物在该温度下保持1小时，然后除去冰浴，在室温下继续搅拌过夜。减压除去挥发物，得到黄色油状物，无需纯化就可直接用于下一步骤。

将所得黄色油状物溶于THF(30ml)和MeOH(20ml)的混合物中，用三乙胺(15ml；108mmol)处理，直到所得溶液的pH等于9-10。置于冰浴中后，混合物用N-Boc-Gly-OSu(11.22g；41mmol)处理。除去冰浴，将反应物在室温下搅拌1小时。减压除去挥发物，残余物经硅胶柱色谱纯化(使用甲醇(1-3％)的二氯甲烷)，得到所需要的酰胺LVc(9.09g)。

步骤3

将醇LVc(9.09g；33.6mmol)溶于丙酮(118.5ml)中，然后用2，2-二甲氧基丙烷(37.4ml；304mmol)和BF₃:Et2O(0.32ml；2.6mmol)处理，将所得混合物在室温下搅拌5.5小时。反应溶液用几滴三乙胺处理，减压除去挥发物。残余物经硅胶柱色谱纯化(使用5-25％EtOAc的己烷)，得到N，O-缩醛LVd(8.85g)。

步骤4

将氨基甲酸酯LVd(8.81g；28.4mmol)溶于乙腈(45ml)中，然后将所得溶液在氮气氛下冷却至-40℃。加入吡啶(6.9ml；85.3mmol)，再加入nitrosium tetrafluoroborate(6.63g；56.8mmol)，将所得反应混合物保持在0℃以下，直到TLC显示不存在原料(约2.25h.)。加入吡咯烷(20ml；240mmol)，除去冷却浴，在室温下继续搅拌1小时，然后减压除去挥发物。使残余物快速通过硅胶垫，得到黄色油状物。

将所得黄色油状物溶于无水苯(220ml)中，加入乙酸钯(0.317g；1.41mmol)，然后将所得混合物在氮气氛下加热回流1.5小时。冷却后，减压除去挥发物，深色残余物经硅胶柱色谱纯化(使用EtOAc-己烷(1∶4))，得到i)反式-吡咯烷酮LVe(1.94g)，还得到ii)顺式-吡咯烷酮LVf(1.97g)。

步骤5

将新制备的1M HCl的MeOAc/MeOH(10ml；如上所述)加入到N，O-缩醛LVe并在室温下搅拌1小时。减压除去挥发物，残余物经硅胶柱色谱纯化(使用0-4％MeOH的二氯甲烷作为洗脱液)，得到所需要的为黄色油状物的醇LVg(1.42g)。

步骤6

向内酰胺LVg(1.29g；8.44mmol)的无水四氢呋喃(55ml)溶液中加入氢化锂铝(2.40g；63.2mmol)，将所得混合物回流8小时。冷却后，先加入水，再加入15％NaOH水溶液，所得混合物通过硅藻土垫过滤，所得固体用THF和MeOH充分洗涤。减压除去溶剂，将残余物再溶于二氯甲烷，干燥并减压浓缩，得到吡咯烷，无需纯化就可直接使用。

在氮气氛下，将Hunigs碱(4.5ml；25.8mmol)于-60℃加入到N-Boc-L-tert-Leu-OH(1.76g；7.6mmol)、粗制的吡咯烷和HATU(2.89g；7.6mmol)的无水二氯甲烷(50ml)溶液中。让所得反应物缓慢升温至室温过夜。加入EtOAc，所得黄色溶液用稀HCl水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、水、盐水洗涤。将有机层干燥并减压浓缩。残余物经硅胶柱色谱纯化(使用EtOAc∶己烷(1∶3))，得到所需要的酰胺LVh(2.00g)。

步骤7

将醇LVh(2.00g；5.67mmol)溶于丙酮(116ml)中，在冰浴中冷却10分钟。然后将所得溶液加入到冷却的琼斯试剂(14.2ml；约2mmol/ml)中，将所得混合物在5℃搅拌0.5小时，除去冷却浴。将反应物在室温下再搅拌2小时，然后加入到硫酸钠(28.54g)、硅藻土(15g)的EtOAc(100ml)溶液中。1分钟后，加入异丙醇(15ml)，再搅拌10分钟后过滤。减压浓缩滤液，得到褐色油状物，将其溶于EtOAc中。所得溶液用水、3％柠檬酸水溶液、盐水洗涤，干燥并浓缩，得到所需要的为白色固体的羧酸LV(1.64g)。

请注意：另一方面，按照上述方法，可以合成具有良好收率的XXIVc-酸、XXVIg-酸、XXVIIc。按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LV，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LVI  式LVI中间体的制备

按照下文中公开的方法完成LVIa的合成：Bailey，J，H.；Cherry，D，T.；Crapnell，K，M.；Moloney，M.G.；Shim，S.B.；Bamford，M.J.；Lamont，R.B.Tetrahedron(1997)，53，11731。按照LIII(步骤2至步骤5)同样的方法，将其转变成LVI。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LVI，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LVII中间体式LVII的制备

步骤1

向TFA(22.6mL，305mmol)、水(120mL)和[双(三氟乙酸基)碘]苯(131g，305mmol)的乙腈(600mL)的搅拌溶液中加入环丁基甲基酮LVIIa(15.0g，153mmol)。将所得溶液加热至回流并搅拌4小时。真空除去乙腈。加入水(120mL)，混合物用乙醚(2×500mL)萃取。将合并的有机溶液干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩。粗产物经快速色谱纯化(使用30％Et₂O/己烷)，得到8.82g LVIIb(51％)。

步骤2

向LVIIb(1.4g，12.3mmol)、乙酸酐(1.3mL，13.5mmol)和三乙胺(3.4mL，24.5mmol)的CH₂Cl₂(50mL)溶液中加入DMAP(0.67g，5.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后加入5％H₃PO₄(50mL)。分离各层后，水层用CH₂Cl₂(2×50mL)萃取。将合并的有机溶液干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩，得到2.0g粗产物LVIIc。

步骤3

将LVIIc(1.9g，12.2mmol)和DAST(三氟化(二乙氨基)硫，3.0mL，22.3mmol)的混合物加热至50℃并搅拌2小时。然后将混合物缓慢地倾入到冰水(50mL)中，用乙醚(3×50mL)萃取。将合并的有机溶液干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩。粗产物经快速色谱纯化(使用10-40％Et₂O/己烷)，得到0.62g LVIId(29％)和0.68g原料LVIIc。

步骤4

将LVIId(3.10g，17.4mmol)和氢氧化锂(0.84g，34.8mmol)的水(10mL)溶液的混合物在室温下剧烈搅拌6小时，然后将其用水(50mL)稀释，用乙醚(3×60mL)萃取。将合并的有机溶液干燥(MgSO₄)，过滤并小心地真空浓缩，得到2.68g粗产物LVIIe。

步骤5

将化合物LVIIe和Dess-Martin试剂的CH₂Cl₂溶液在室温下搅拌1小时，然后加入Ph₃P＝CHCO₂Bn，再继续搅拌20小时。加入乙醚，接着加入饱和NaS₂O₃和饱和NaHCO₃溶液。15分钟后，分离各层。有机溶液用饱和NaHCO₃和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩。粗产物经快速色谱纯化，得到所需要的产物LVIIf。

步骤6

用适量的试剂，如上所述(步骤4，实施例XXXXIII)制备化合物LVIIg。

步骤7

LVIIg经10％Pd/C的MeOH溶液催化氢化，然后用Boc₂O的NaHCO₃/THF/水溶液处理，得到LVIIh。

步骤8

按照前面介绍的方法(步骤5，实施例XXVIII)，将LVIIh转变成化合物LVIIi。

步骤9

按照前面介绍的方法(步骤9，实施例XXIII)，将LVIIi转变成化合物LVII。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LVII，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LVIII  式LVIII中间体的制备

步骤1

向化合物LVIIIa[有关LVIIIa的制备，参见J.Ramnauth和E.Lee-Ruff，Can.J.Chem.，2001，79，114-120](3g)的二氯甲烷(75mL)溶液中缓慢地加入DAST(三氟化(二乙氨基)硫，9.1mL)，将反应物在室温下搅拌过夜。边搅拌边将混合物缓慢地倾入到冰/饱和碳酸氢钠溶液(100/200mL)中。加入200mL二氯甲烷，分离有机层，用冷的饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)并浓缩。经柱色谱纯化(5/95EtOAc/己烷)，得到2.59g LVIIIb。

步骤2

将化合物LVIIIb(3.42g)溶于THF/MeOH(1/1，50mL)中。向所得溶液中加入碳酸钾(1.97g)的水(25mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后在冰箱(-10℃)保存过夜。当TLC显示LVIIIb完全耗尽时，将反应混合物在3小时内升温至室温。向反应混合物中加入盐水(100mL)，用乙醚(3×100mL)萃取。将乙醚层合并，干燥(Na₂SO₄)并浓缩，得到残余物(2.77g)，无需进一步纯化就可直接使用。

将如此获得的残余物溶于CH₂Cl₂/DMSO(6/1，140mL)中。向所得溶液中加入(三苯基亚膦基)乙酸苄酯(11.7g)，然后小心地加入Dess-Martin’s Periodinane(12.09g，分三等份加入)。将反应混合物在室温下搅拌4小时，用冷的碳酸氢钠溶液(200mL)猝灭，然后用CH₂Cl₂(100mL)稀释。分离CH₂Cl₂层，用10％Na₂S₂O₃溶液(125mL)、NaHCO₃溶液(125mL)、水(125mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并浓缩。残余物经柱色谱纯化(使用50/50 CH₂Cl₂/己烷)，得到所需要的化合物LVIIIc(2.25g)。

步骤3

用适量的试剂，如上所述(步骤4，实施例XXXXIII)制备化合物LVIIId。

步骤4

LVIIId经10％Pd/C的MeOH溶液催化氢化，然后用Boc₂O的NaHCO₃/THF/水处理，得到LVIIIe。

步骤5

按照前面介绍的方法(步骤5，实施例XXVIII)，将LVIIIe转变成化合物LVIIIf。

步骤6

按照前面介绍的方法(步骤9，实施例XXIII)，将LVIIIF转变成化合物LVIII。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LVIII，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LIX  式LIX中间体的制备

步骤1

使市售的N-Boc保护的甘氨酸LIXa与实施例XV的胺XV按照前面实施例XXI步骤4中介绍的方法反应。然后所得中间体按照前面实施例XXIII步骤9中介绍的方法用HCl处理，得到产物LIXb。

步骤2

可以使酸LVIIIe(得自前面)与LIXb按照前面实施例XXI步骤4中介绍的方法反应。所得中间体可以按照前面实施例XXIII步骤9中介绍的方法用HCl处理，得到产物LIX。

按照制备实施例XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LIX，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LX  式LX中间体的制备

步骤1

使酸LVIIh(得自前面)与LIXb按照前面实施例XXI步骤4中介绍的方法反应。然后所得中间体按照前面实施例XXIII步骤9中介绍的方法用HCl处理，得到产物LX。

按照制备实施例XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LIX，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LXI  式LXI中间体的制备

步骤1

向硝基乙酸甲酯LXIa(3g)的苯(15mL)溶液中加入二甲氧基丙烷(6.2mL)和乙酸酐(4.87mL)。将混合物回流过夜。浓缩反应混合物。使其再次经受上述条件。将残余物浓缩后溶于EtOAc(100mL)中，用冷的饱和碳酸氢钠溶液(3×75mL)、盐水(100mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并浓缩。

将上述残余物溶于MeOH(150mL)中。加入Boc₂O(6g)和10％Pd/C(150mg)。用充满氢气的气球使混合物氢化。24小时后，再加入一些10％Pd/C，重复上述程序。然后反应混合物通过硅藻土过滤，浓缩并经柱色谱纯化(使用5/95至10/90 EtOAc/己烷)，得到2.2gLXIb。

步骤2

采用上述将XXVIg转变成XXVIh的方法(参见实施例XXVI)，使用定量的LXI，制备化合物LXIb。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LVIII，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LXII  式LXII中间体的制备

步骤1：

丁烯醇LXIIa按照前面制备实施例XXXXIII步骤1中介绍的方法反应，得到产物LXIIb。

步骤2：

向5.3g(30mmol)步骤1的产物LXIIb中加入25mg NaF。在110℃，在2小时内通过注射泵加入1.6当量(48mmol，12g)的TMS氟磺酰基二氟乙酸(TFDA)。2小时后，使反应物冷却至室温。经快速柱色谱纯化(3％EtOAc，己烷，硅胶)，得到步骤2的产物LXIIc(4.93g)。

步骤3：

按照前面制备XXXXIII步骤3中介绍的方法，对步骤2的产物LXIIc(1g)进行处理，得到步骤3的产物LXIId(0.89g)。

步骤4：

按照前面制备XXXXIII步骤4中介绍的方法，对步骤3的产物LXIId(3.2g)进行处理，得到产物LXIIe(1.4g)。

步骤5：

依次按照前面制备实施例XXXXIII步骤5、步骤6和步骤7介绍的方法，对步骤4的产物LXIIe(0.54g)进行处理，得到产物LXIIf(0.24g)。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LXII，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LXIII  式LXIII中间体的制备

步骤1：

向环丁酮(15g，214mmol)的THF(100mL)溶液(-78℃)中滴加烯丙基镁化氯(2.0M的THF溶液，1.1当量，118mL)。1小时后，通过加入冰和HCl 1.0N(100mL)终止反应。所得混合物用乙酸乙酯(～200ml)稀释，分离有机相；用盐水洗涤并经无水MgSO₄干燥。真空浓缩并经硅胶色谱纯化(10％乙酸乙酯的正己烷)，得到产物LXIIIb(21g)。

步骤2：

向步骤1的产物LXIIIb(11.2g)的CH₂Cl₂(200mL)溶液(-78℃)中通入臭氧，直到观察到的颜色一直为蓝色(1小时后)。停止加入臭氧，将N₂通入反应混合物达10分钟。加入Me₂S(10当量，7.3mL)，然后将反应逐渐升温至室温过夜。

18小时后，加入Ph₃P＝CHCOO^tBu(40g)。继续搅拌～24小时。真空蒸发，得到粗产物，经硅胶色谱纯化(10％乙酸乙酯的正己烷)，得到产物LXIIIc，为异构体(6.65g反式异构体)和(1.9g顺式烯烃)的混合物。

步骤3：

向步骤2的产物LXIIIc(0.21g)的CH₂Cl₂(3mL)溶液(0℃)中加入DAST(1.1当量.，0.135mL)。15分钟后，通过加入冷的饱和Na₂CO₃溶液(150ml)终止反应。所得混合物用乙酸乙酯(～10ml)稀释，搅拌～30分钟后，分离有机相；用盐水洗涤并经无水MgSO₄干燥。真空浓缩并经硅胶色谱纯化(5％-10％CH₂Cl₂的正己烷)，得到LXIIId(0.1g；47％)。

步骤4：

按照前面制备XXXXIII步骤4中介绍的方法，对步骤3的产物LXIIId(3.5g)进行处理，得到产物LXIIIe和LXIIIf的混合物(3.25g)。

步骤5：

依次按照前面制备实施例XXXXIII步骤5、步骤6和步骤7中介绍的方法，对步骤4的产物(LXIIIe+LXIIIf)(2.3g)进行处理，得到产物LXIII(0.47g)。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LXII，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LXIV  式LXIV中间体的制备

步骤1：

“反式异构体”

按照前面制备实施例XXXXIII步骤4中介绍的方法，对产物LXIIIc(1.36g)进行处理，得到产物LXIVa和LXIVb的混合物(1.3g)。

步骤2：

步骤1的产物(LXIVa+LXIVb)(1.2g)的CH₂Cl₂(40ml)的搅拌溶液用三氟乙酸(40ml)处理。45分钟后，将反应混合物真空浓缩至干。残余物经硅胶色谱纯化(2％MeOH的CH₂Cl₂)，得到产物LXIVc和LXIVd的混合物(0.97g)。

步骤3：

向步骤2的产物(LXIVc+LXIVd)(0.4g)中加入30mL NH₃(2.0M的MeOH溶液)。4小时后，将反应混合物真空浓缩至干。残余物经制备型硅胶色谱(100％CH₃CN)，得到所需要的产物LXIVe(0.3g)。

步骤4：

按照前面制备实施例XXXXIII步骤7中介绍的方法，对步骤3的产物LXIVe(0.054g)进行处理，得到产物LXIV(0.032g)。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LXII，合成表6中描述的多种抑制剂。

实施例LXV  式LXV中间体的制备

步骤1：

向低聚甲醛LXVa(12g，400mmol)和1-溴-1，1-二氟p2-烯LXVb(6.3g，40mmol)的DMF(100mL)溶液(室温)中加入In(0)(6.5g，57mmol)和LiI(0.4g，3mmol)。将所得浆液在室温下搅拌48小时。48小时后，反应物通过硅藻土垫过滤。滤液用EtOAc(250mL)稀释，先用H₂O(3次)洗涤，然后用盐水洗涤。分离有机层，最后经无水MgSO₄干燥。真空蒸发，得到产物LXVc，所得产物可直接用于下一步骤。

步骤2：

使步骤1的产物LXVc(4g，37mmol)按照前面制备实施例XXXXIII步骤1中介绍的方法反应，经硅胶色谱纯化(10％-50％CH₂Cl₂的正己烷)后，得到产物LXVd(4.3g)。

步骤3：

向步骤2的产物LXVd(3.8g)的乙醇(30ml)溶液中加入10％Pd/C催化剂(0.76g)。将所得悬浮液氢化，直到NMR实验显示原料完全耗尽(约4小时)。通过硅藻土垫过滤除去催化剂，用乙醇洗涤。将合并的滤液和洗涤液真空蒸发至干，得到所需要的产物LXVe(3.8g)。

步骤4：

按照前面XXXXIII步骤3中介绍的方法，对步骤3的产物LXVe(3.4g)进行处理，得到产物LXVf(2.5g)。

步骤5：

按照前面制备实施例XXXXIII步骤4中介绍的方法，对步骤4的产物LXVf(2g)进行处理，经硅胶色谱纯化(30％EtOAc的正己烷)后，得到LXVg(0.27g)和LXVh(0.26g)。

步骤6：

依次按照前面制备实施例XXXXIII步骤5、步骤6和步骤7中介绍的方法，对步骤5的产物LXVg(0.17g)进行处理，得到产物LXV(0.025g)。

按照制备实施例XXIII、XXIV、XXVIII、XXIX和XXXX中概述的方法，使用中间体LXV，合成表6中描述的多种抑制剂。非对映异构体的分离：按照本领域技术人员已知的方法，采用色谱法(SiO₂)或HPLC(YMC二醇柱)，并用己烷/CH₂Cl₂/异丙醇/CH₃CN＝85/7.5/6.5/1作为溶剂，分离出由于酮酰胺的α-中心而产生的非对映异构体。

HCV蛋白酶抑制活性试验：

分光光度分析：按照R.Zhang等(Analytical Biochemistry， 270(1999)268-275，其公开内容通过引用结合到本文中)介绍的方法，对本发明化合物进行HCV丝氨酸蛋白酶的分光光度分析。基于蛋白酶解显色酯底物的分析适合于连续监测HCV NS3蛋白酶活性。底物衍生自其C末端羧基被4个不同发色醇(3-硝基苯酚或4-硝基苯酚、7-羟基-4-甲基-香豆素或4-苯基偶氮酚)之一酯化的NS5A-NS5B连接序列(Ac-DTEDVVX(Nva)(其中X＝A或P)的P侧。下面介绍这些新的分光光度性酯底物的合成、表征和在高通量筛选中的应用，并且详细介绍HCV NS3蛋白酶抑制剂的动力学评价。

材料和方法：

材料：分析用有关缓冲液的化学试剂得自Sigma ChemicalCompany(St.Louis，Missouri)。肽合成试剂得自Aldrich Chemicals、Novabiochem(San Diego，California)、Applied Biosystems(Foster City，California)和Perseptive Biosystems(Framingham，Massachusetts)。肽采用人工合成，或者用自动ABI 43lA型合成仪(Applied Biosystems)合成。LAMBDA 12型UV/VIS分光计得自Perkin Elmer(Norwalk，Connecticut)，96孔UV板得自Corning(Corning，New York)。预热板(prewarming block)得自USA Scientific(Ocala，Florida)，96孔板涡旋器得自Labline Instruments (Melrose Park，Illinois)。Spectramax Plus微量滴定板读数仪(带有单色计)得自Molecular Devices(Sunnyvale，California)。

酶制备：使用以前公开的方法(D.LSali等，Biochemistry，37(1998)3392-3401)制备重组HCV NS3/NS4A异源二聚体蛋白酶(菌株1a)。蛋白浓度使用通过氨基酸分析预先标定的重组HCV蛋白酶标准品按照Biorad染料方法测定。开始分析前，采用Biorad Bio-Spin P-6预填充柱将酶贮存缓冲液(50mM磷酸钠pH 8.0，300mM氯化钠，10％甘油，0.05％月桂基麦芽糖苷和10mM DTT)更换为检测缓冲液(25mMMOPS pH 6.5，300mM氯化钠，10％甘油，0.05％月桂基麦芽糖苷，5μMEDTA和5μM DTT)。

底物合成与纯化：根据R.Zhang等(同上)报道合成底物，合成开始时用标准方法(K.Barlos等，Int.J.Pept. Protein Res， 37(1991)，513-520)使Fmoc-Nva-OH锚定在2-氯三苯甲基氯树脂上。随后或者人工进行或者采用自动ABI 431型肽合成仪，利用Fmoc化学装配肽。N-乙酰化且完全保护的肽片段经过10％乙酸(HOAc)和10％三氟乙醇(TFE)的二氯甲烷(DCM)溶液处理30分钟，或者经过2％三氟乙酸(TFA)的DCM溶液处理10分钟后与树脂断开。共沸蒸发合并的滤液和DCM洗涤液(或者重复用碳酸钠水溶液萃取)，以除去裂解时使用的酸。DCM相经硫酸钠干燥后蒸发。

所述酯底物用标准酸-醇偶合方法(K.Holmber等，Acta Chem.Scand， B33.(1979)410-412)装配。将肽片段溶解于无水吡啶(30-60mg/ml)中，向其中加入10摩尔当量发色团和催化量(0.1eq.)的对甲苯磺酸(pTSA)。加入二环己基碳二亚胺(DCC，3eq.)启动偶合反应。用HPLC监测产物形成，证实在室温下反应12-72小时后反应完毕。吡啶溶剂通过真空蒸发除去，进一步与甲苯共沸蒸发除去。肽酯用95％TFA的DCM溶液脱保护2小时，用无水乙醚萃取3次以去除过量的发色团。脱保护底物在C3或C8柱上通过反相HPLC纯化(用30％-60％乙腈梯度洗脱(用6个柱体积))。HPLC纯化后的总收率约20-30％。电喷雾离子化质谱证实分子量。底物以干粉形式干燥保藏。

底物及产物光谱：用pH 6.5检测缓冲液获得底物和相应的发色团产物的光谱。利用多个稀释度以1-cm比色杯于最优非高峰波长(3Np和HMC为340nm，PAP为370nm，4-Np为400nm)检测消光系数。最优非高峰波长的定义为：底物和产物之间产生最大吸光度分数差异((产物OD-底物OD)/底物OD)的波长。

蛋白酶分析：在96孔微量滴定板中用200μl反应混合物于30℃进行HCV蛋白酶分析。对NS3/NS4A异源二聚体优化检测缓冲条件(25mM MOPS pH 6.5，300mM NaCl，10％甘油，0.05％月桂基麦芽糖苷，5μMEDTA和5μM DTT)(D.L.Sali等，同上)。通常，将150μl的缓冲剂、底物和抑制剂的混合物加入各孔中(DMSO终浓度≤4％v/v)，让其于30℃预温育约3分钟。然后用50μl在检测缓冲液中的蛋白酶预热溶液(12nM，30℃)启动反应(终体积为200μl)。用配备有单色器的Spectromax Plus微量滴定板读数仪(采用截止滤光片型板读数仪可获得可接受的结果)，在合适波长(3Np和HMC为340nm，PAP为370nm，4-Np为400nm)在检测时间(60分钟)范围内监测各板的吸光度变化。相对于用作非酶水解对照的无酶空白，在合适波长监测Nva和发色团之间的酯键的蛋白酶剪切。在30倍底物浓度范围内(约6-200μM)评价底物动力学参数。用线性回归确定初速度，采用非线性回归分析(Mac Curve Fit 1.1，K.Raner)用实验数据拟合Michaelis-Menten方程，获得动力学常数。计算酶变率(k_cat)，假定酶具有完全活性。

抑制剂和灭活剂的评价：对竞争性抑制剂Ac-D-(D-Gla)-L-I-(Cha)-C-OH(27)、Ac-DTEDVVA(Nva)-OH和Ac-DTEDVVP(Nva)-OH，根据用于竞争性抑制动力学的重排Michaelis-Menten方程：v_o/v_i＝1+[l]_o/(K_i ^*(1+[S]_o/K_m))，其中v_o为非抑制初速度，v_i为存在任何已知抑制剂浓度([l]_o)抑制剂的初速度，[S]_o为所使用的底物浓度；用v_o/v_i对抑制剂浓度([I]_o)作图，实验测定固定浓度酶和底物的抑制常数。用线性回归拟合获得的数据，用获得的斜率1/(K_i ^*(1+[S]_o/K_m)计算K_i ^*值。

在以上各表中给出了获得的本发明不同化合物的K_i ^*值，其中的化合物按照K_i ^*值范围的顺序排列。根据上述试验结果，技术人员显而易见的是，本发明化合物具有良好的NS3-丝氨酸蛋白酶抑制剂作用。

尽管结合上述具体实施方案阐明了本发明，但是本发明的许多替代、改进及其它变化方案对本领域普通技术人员是显而易见的。所有这样的替代、改进及变化方案均属于本发明实质及范畴。

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表2

表4

表4

表4

表4

表4

表4

表4

表4

表4

表4

表4

表4

表4

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表5

表6

Claims (66)

1.一种化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物具有式I所示的通用结构：

                          式I

其中：

Y选自以下基团：烷基、烷基-芳基、杂烷基、杂芳基、芳基-杂芳基、烷基-杂芳基、环烷基、烷氧基、烷基-芳氧基、芳氧基、杂芳氧基、杂环烷氧基、环烷氧基、烷基氨基、芳基氨基、烷基-芳基氨基、芳基氨基、杂芳基氨基、环烷基氨基和杂环烷基氨基，前提是Y可以任选被X¹¹或X¹²取代；

X¹¹为烷基、链烯基、链炔基、环烷基、环烷基-烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂芳基、烷基杂芳基或杂芳基烷基，前提是X¹¹还可以任选被X¹²取代；

X¹²为羟基、烷氧基、芳氧基、硫代基、烷硫基、芳硫基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷基亚磺酰氨基、芳基亚磺酰氨基、羧基、烷氧羰基、酰胺基、烷氧羰基氨基、烷氧羰基氧基、烷基脲基、芳基脲基、卤素、氰基或硝基，前提是所述烷基、烷氧基和芳基还可以任选被独立选自X¹²的部分取代；

R¹为-C(O)R⁵；

R⁵为H、-OH、-C(O)OR⁸、-C(O)NR⁹R¹⁰；

Z选自O、N、C(H)或C(R)；

W可以存在或者不存在，如果W存在，则W选自C(＝O)、C(＝S)、C(＝N-CN)或S(O₂)；

Q可以存在或者不存在，当Q存在时，Q为C(H)、N、P、(CH₂)_p、(CHR)_p、(CRR′)_p、O、NR、S或SO₂；当Q不存在时，M可以存在或者不存在；当Q和M不存在时，A直接连接到L；

A为O、CH₂、(CHR)_p、(CHR-CHR)_p、(CRR′)_p、N(R)、S、S(O₂)或化学键；

E为CH、N、CR或朝向A、L或G的双键；

G可以存在或者不存在，当G存在时，G为(CH₂)_p、(CHR)_p或(CRR′)_p；当G不存在时，J存在并且E直接连接到G连接的式I碳原子上；

J可以存在或者不存在，当J存在时，J为(CH₂)_p、(CHR)_p或(CRR′)_p、S(O₂)、N(H)、N(R)或O；当J不存在时，G存在并且E直接连接到连接J的式I所示氮原子上；

L可以存在或者不存在，当L存在时，L为C(H)、C(R)、O、S或N(R)；当L不存在时，则M可以存在或者不存在；如果M存在而L不存在，则M直接独立连接到E，并且J直接独立连接到E；

M可以存在或者不存在，当M存在时，M为O、NR、S、S(O₂)、(CH₂)_p、(CHR)_p(CHR-CHR′)_p或(CRR′)_p；

p为数字0-6；且

R、R′、R²、R³和R⁴可以相同或不同，并且独立地选自H；C₁-C₁₀烷基；C₂-C₁₀链烯基；C₃-C₈环烷基；C₃-C₈杂环烷基、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、酯、羧酸、氨基甲酸酯、脲、酮、醛、氰基、硝基、卤素；(环烷基)烷基和(杂环烷基)烷基，其中所述环烷基由3-8个碳原子和0-6个氧原子、氮原子、硫原子或磷原子组成，并且所述烷基具有1-6个碳原子；芳基；杂芳基；烷基-芳基；以及烷基-杂芳基；

其中所述烷基、杂烷基、链烯基、杂链烯基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基部分可任选进行化学上适当的取代，所述术语“取代”指任选并且化学上适当的被一个或多个选自以下的部分取代：烷基、链烯基、链炔基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环基、卤素、羟基、硫代基、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、酯、羧酸、氨基甲酸酯、脲、酮、醛、氰基、硝基、亚磺酰氨基、亚砜、砜、磺酰脲、酰肼和异羟肟酸酯；

进一步，其中所述式I中的N-C-G-E-L-J-N单元为五元或六元环结构，前提是：当所述N-C-G-E-L-J-N单元为五元环结构，或当式I中包括N、C、G、E、L、J、N、A、Q和M的双环结构为五元环结构时，则所述五元环结构没有羰基作为所述环的一部分。

2.权利要求1的化合物，其中R¹为-C(O)C(O)NR⁹R¹⁰；

R⁹为H；

R¹⁰为H、-R¹⁴、-[CH(R^1′)]_pC(O)OR¹¹、-[CH(R^1′)]_pC(O)NR¹²R¹³、-[CH(R^1′)]_pS(O₂)R¹¹、-[CH(R^1′)]_pS(O₂)NR¹²R¹³、-[CH(R^1′)]_pC(O)R¹¹、-CH(R^1′)C(O)N(H)C(H)(R^2′)C(O)OR¹¹、-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)CONR¹²R¹³或-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)(R′)，其中R¹⁴为H、烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、环烷基、烷基-芳基、烷基-杂芳基、芳基-烷基、链烯基、链炔基或杂芳烷基。

3.权利要求2的化合物，其中R¹⁰为H、-R¹⁴、-CH(R^1′)C(O)OR¹¹、-CH(R^1′)CH(R^1′)C(O)OR¹¹、-CH(R^1′)C(O)NR¹²R¹³、-CH(R^1′)CH(R^1′)C(O)NR¹²R¹³、-CH(R^1′)CH(R^1′)S(O₂)R¹¹、-CH(R^1′)CH(R^1′)S(O₂)NR¹²R¹³、-CH(R^1′)CH(R^1′)C(O)R¹¹、-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)OR¹¹、-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)C(O)NR¹²R¹³或-CH(R^1′)C(O)N(H)CH(R^2′)(R′)，其中R^1′为H或烷基，而R^2′为苯基、取代的苯基、杂原子取代的苯基、苯硫基、环烷基、哌啶基或吡啶基。

4.权利要求3的化合物，其中R^1′为H。

5.权利要求4的化合物，其中R¹¹为H、甲基、乙基、烯丙基、叔丁基、苄基、α-甲基苄基、α，α-二甲基苄基、1-甲基环丙基或1-甲基环戊基；

R′为羟基甲基或-CH₂C(O)NR¹²R¹³；

R^2′独立地选自：

其中：

U¹和U²可以相同或不同，并且选自H、F、-CH₂C(O)OH、-CH₂C(O)OMe、-CH₂C(O)NH₂、-CH₂C(O)NHMe、-CH₂C(O)NMe₂、叠氮基、氨基、羟基、取代的氨基、取代的羟基；

U³和U⁴可以相同或不同，并且选自O和S；

U⁵选自烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂烷基磺酰基、杂芳基磺酰基、烷基羰基、芳基羰基、杂烷基羰基、杂芳基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、杂芳氧基羰基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、杂芳基氨基羰基或其组合；

且NR¹²R¹³选自：

和

其中U⁶为H、OH或CH₂OH，且

R¹⁴选自：H、Me、Et、正丙基、甲氧基、环丙基、正丁基、1-丁-3-炔基、苄基、α-甲基苄基、苯乙基、烯丙基、1-丁-3-烯基、OMe和环丙基甲基。

6.权利要求5的化合物，其中R³选自：

其中R⁵¹＝H、COCH₃、COOtBu或CONHtBu；

其中R³¹＝OH或O-烷基；

Y¹⁹选自以下部分：

且Y²⁰选自以下部分：

7.权利要求6的化合物，其中R³为：

8.权利要求6的化合物，其中Z为N，且R⁴为H。

9.权利要求8的化合物，其中W为C＝O。

10.权利要求9的化合物，其中Y选自以下部分：

其中：

Y¹¹选自H、-C(O)OH、-C(O)OEt、-OMe、-Ph、-OPh、-NHMe、-NHAc、-NHPh、-CH(Me)₂、1-三唑基、1-咪唑基和NHCH₂COOH；

Y¹²选自H、-C(O)OH、-C(O)OMe、-OMe、F、Cl和Br；

Y¹³选自以下部分：

Y¹⁴为MeS(O₂)-、-Ac、-Boc、-iBoc、-Cbz或-Alloc；

Y¹⁵和Y¹⁶可以相同或不同，并且独立地选自烷基、芳基、杂烷基和杂芳基；

Y¹⁷为-CF₃、-NO₂、-C(O)NH₂、-OH、-C(O)OCH₃、-OCH₃、-OC₆H₅、-C₆H₅、-C(O)C₆H₅、-NH₂或-C(O)OH；且

Y¹⁸为-C(O)OCH₃、-NO₂、-N(CH₃)₂、F、-OCH₃、-C(H₂)C(O)OH、-C(O)OH、-S(O₂)NH₂或-N(H)C(O)CH₃。

11.权利要求10的化合物，其中Y选自：

其中：

Y¹⁷为CF₃、NO₂、CONH₂、OH、NH₂或COOH；

Y¹⁸为F、COOH。

12.权利要求11的化合物，其中Y选自：

13.权利要求12的化合物，其中L和M不存在，而J直接连接到E。

14.权利要求12的化合物，其中L、J和M不存在，而E直接连接到N。

15.权利要求12的化合物，其中G和M不存在。

16.权利要求12的化合物，其中所述部分：

是

17.权利要求16的化合物，其中结构 a选自以下结构：

18.权利要求16的化合物，其中结构 a是：

其中R²⁰选自以下结构：

19.权利要求16的化合物，其中结构 a是：

其中R²¹和R²²可以相同或不同，并且独立地选自以下结构：

20.权利要求16的化合物，其中结构 a选自以下结构：

21.权利要求12的化合物，其中：

是

其中Q可以存在或者不存在，如果Q不存在，则M直接连接到A。

22.权利要求21的化合物，其中结构 b选自以下结构：

23.权利要求12的化合物，其中：

是

其中G和J可以相同或不同，并且独立地选自(CH₂)_p、(CHR)_p、(CHR-CHR′)_p和(CRR′)_p；

A和M可以相同或不同，并且独立地选自O、S、S(O₂)、N(R)、(CH₂)_p、(CHR)_p、(CHR-CHR′)_p和(CRR′)_p；且

Q为CH₂、CH(R)、C(RR′)、N(H)、N(R)、O、S、S(O₂)、N(R)、(CH₂)_p、(CHR)_p或(CRR′)_p。

24.权利要求23的化合物，其中结构 c选自以下结构：

和

其中n＝0-4

25.权利要求12的化合物，其中：

选自以下结构：

26.权利要求25的化合物，其中：

选自以下结构：

27.权利要求25的化合物，其中：

选自以下结构：

28.权利要求1的化合物，其中R²为以下部分：

29.一种药用组合物，所述组合物包含作为活性成分的至少一种权利要求1的化合物。

30.权利要求29的药用组合物，所述组合物用于治疗HCV相关性疾病。

31.权利要求29的药用组合物，所述组合物还包含药学上可接受的载体。

32.权利要求31的药用组合物，所述组合物还包含至少一种抗病毒药物。

33.权利要求32的药用组合物，所述组合物还包含干扰素。

34.权利要求33的药用组合物，其中所述抗病毒药物为利巴韦林，而所述干扰素为α-干扰素或聚乙二醇化干扰素。

35.一种治疗HCV相关性疾病的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的患者一种药用组合物，所述组合物包含治疗有效量的至少一种权利要求1的化合物。

36.权利要求35的方法，其中所述给药为口服或皮下给药。

37.权利要求1的化合物在制备用于治疗HCV相关性疾病的药物中的用途。

38.一种制备用于治疗HCV相关性疾病的药用组合物的方法，所述方法包括使至少一种权利要求1的化合物与药学上可接受的载体密切接触。

39.一种具有HCV蛋白酶抑制活性的化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物选自具有下列结构的化合物：

40.一种用于治疗HCV相关性疾病的药用组合物，所述组合物包含治疗有效量的一种或多种权利要求39的化合物和药学上可接受的载体。

41.权利要求40的药用组合物，所述组合物还包含抗病毒药物。

42.权利要求41的药用组合物，所述组合物还包含干扰素或聚乙二醇-干扰素α缀合物。

43.权利要求42的药用组合物，其中所述抗病毒药物为利巴韦林，而所述干扰素为α-干扰素。

44.一种治疗丙型肝炎病毒相关性疾病的方法，所述方法包括给予有效量的一种或多种权利要求39的化合物。

45.一种调节丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶活性的方法，所述方法包括使HCV蛋白酶与一种或多种权利要求39的化合物接触。

46.一种治疗、预防或改善一种或多种丙型肝炎症状的方法，所述方法包括给予有效量的一种或多种权利要求39的化合物。

47.权利要求46的方法，其中所述HCV蛋白酶为NS3/NS4a蛋白酶。

48.权利要求46的方法，其中所述一种或多种化合物抑制HCVNS3/NS4a蛋白酶。

49.一种调节丙型肝炎病毒(HCV)多肽加工的方法，所述方法包括在加工所述多肽的条件下使包含HCV多肽的组合物与一种或多种权利要求39的化合物接触。

50.权利要求6的化合物，其中R³为：

51.一种具有HCV蛋白酶抑制活性的化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物是具有下列结构的化合物：

52.一种具有HCV蛋白酶抑制活性的化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物是具有下列结构的化合物：

53.一种具有HCV蛋白酶抑制活性的化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物是具有下列结构的化合物：

54.一种具有HCV蛋白酶抑制活性的化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物是具有下列结构的化合物：

55.一种具有HCV蛋白酶抑制活性的化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物是具有下列结构的化合物：

56.一种具有HCV蛋白酶抑制活性的化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物是具有下列结构的化合物：

57.一种具有HCV蛋白酶抑制活性的化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物是具有下列结构的化合物：

58.一种具有HCV蛋白酶抑制活性的化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物是具有下列结构的化合物：

59.一种具有HCV蛋白酶抑制活性的化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物是具有下列结构的化合物：

60.一种具有HCV蛋白酶抑制活性的化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物是具有下列结构的化合物：

61.一种具有HCV蛋白酶抑制活性的化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，以及所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物是具有下列结构的化合物：

62.一种药用组合物，所述组合物包含作为活性成分的一种化合物，或者所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体或前体药物，或者所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物选自下列化合物：

63.权利要求62的药用组合物，所述组合物还包含抗病毒药物。

64.权利要求63的药用组合物，所述组合物还包含干扰素或聚乙二醇-干扰素α缀合物。

65.权利要求64的药用组合物，其中所述抗病毒药物为利巴韦林，而所述干扰素为α-干扰素。

66.一种治疗HCV相关性疾病的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的患者一种药用组合物，所述组合物包含治疗有效量的一种化合物，或者所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、外消旋体和前体药物，或者所述化合物或所述前体药物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物选自下列化合物：