CN1525951A - 还原型辅酶q10的稳定方法及酸性结晶方法 - Google Patents

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Abstract

一种有效生产还原型辅酶Q10的方法，该还原型辅酶Q10具有优异的性能，可用在食品、营养功能食品、特定保健食品、营养补剂、滋补品、动物药、饮料、饲料、化妆品、药品、药剂、预防药剂等中。该方法适于工业生产。即，通过使辅酶Q10与含强酸的溶剂接触可以在不因分子氧使其氧化的状态下处理还原型辅酶Q10。另外，通过在强酸存在下的结晶，可以使辅酶Q10转化为晶体，并且使作为副产品的氧化型辅酶Q10的生成最小化，从而可以使还原型辅酶Q10具有优异的性能。

Description

还原型辅酶Q10的稳定方法及酸性结晶方法
技术领域
本发明涉及还原型辅酶Q10的稳定方法和结晶方法。还原型辅酶Q10与氧化型辅酶Q10相比具有更高的口服吸收性，并且是可用作优质食品、营养功能食品、特定保健食品、营养补剂、滋补品、动物药、饮料、饲料、化妆品、药品、药剂、预防药剂等中的成分的化合物。
背景技术
众所周知，可以用下述方法制备还原型辅酶Q10：用传统方式，如合成、发酵或从天然产品中提取的方式生产辅酶Q10，然后浓缩用色谱法得到的含还原型辅酶Q10的洗脱液部分(JP-平-10-109933-A)。在这种情况下，如上述专利所述，可以用传统的还原剂如硼氢化钠或连二亚硫酸钠(硫代硫酸钠)将还原型辅酶Q10中含有的氧化型辅酶Q10还原后再进行色谱浓缩，也可以用上述还原剂与现存的高纯度辅酶Q10反应来制备还原型辅酶Q10。
但是，如此得到的还原型辅酶Q10不能总处于高纯度状态，而是可能成为低纯度晶体、半固体或含有杂质如氧化型辅酶Q10的油状产品。因此，即使在还原反应中得到不含或很少含氧化型辅酶Q10的还原型辅酶Q10的反应产品，也很难得到高质量的还原型辅酶Q10晶体。
再者，分子氧易于将还原型辅酶Q10氧化成氧化型辅酶Q10。工业化生产与实验室制备不同，完全脱除氧非常困难，另外，单个操作都需要很长时间，因此，残留的氧会产生非常大的副作用。因为几乎不可能除去的氧化型辅酶Q10的形成及其对产品的掺杂，使得所述的氧化与产率和质量问题直接相关。
因此，一项非常重要的任务是使还原型辅酶Q10稳定，即，保护其不被氧化。但是截至目前，市场上还没有出现商品级还原型辅酶Q10，因此很少有人知道如何稳定地保护还原型辅酶Q10。只发现WO01/52822A1中描述了在稳定方法和组合物中使用还原剂。
发明概述
鉴于此，为了得到高质量的还原型辅酶Q10，本发明的目的是提供一种简易的稳定还原型辅酶Q10的方法和一种简易而有效的结晶方法。
为了达到上述目的，本发明的发明人进行了深入研究，结果发现：在少量强酸存在下，还原型辅酶Q10非常稳定，不会被分子氧氧化，另外，当在强酸存在下结晶还原型辅酶Q10时，可以得到其高质量的晶体，并且使作为副产品的氧化型辅酶Q10的生成最小化。这些发现导致本发明的完成。
因此，本发明提供一种稳定还原型辅酶Q10的方法，该方法包括使还原型辅酶Q10与含强酸的溶剂接触，以此处理还原型辅酶Q10，从而保护其不被分子氧氧化。本发明还提供一种还原型辅酶Q10的结晶方法，该方法包括使还原型辅酶Q10在含强酸的溶剂中结晶。
发明详述
下面详述本发明。
根据本发明，用强酸得到高质量的还原型辅酶Q10晶体或稳定地处理还原型辅酶Q10，同时抑制分子氧将还原型辅酶Q10氧化成氧化型辅酶Q10。
对强酸没有特别限定，例如，优选其在水溶液中的pKa值不大于2.5，更优选不大于2.0，甚至更优选不大于1.5，最优选不大于1.0。当强酸是多价酸如硫酸时，pKa值指的是一级离解时的值，此时的值最小。
作为强酸的具体例子，可以提及无机酸，如硫酸、氯化氢(包括盐酸)和磷酸；有机酸，如甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸类的磺酸，三氟乙酸、三氯乙酸类的羧酸等。其中，无机酸如硫酸、氯化氢和磷酸是优选的，从下面要谈及的结晶后强酸的挥发性考虑，氯化氢是最优选的。
强酸的用量取决于强酸的种类，但是一般来说，催化量或更大的量就足够了。因此，对于每摩尔还原型辅酶Q10来说，强酸的用量优选不小于0.1mol％，更优选不小于1mol％。对其上限没有特别限定，但是，特别是从经济方面考虑，优选不大于1000mol％，更优选不大于100mol％。
当根据本发明使还原型辅酶Q10与含强酸的溶剂接触而处理还原型辅酶Q10时，可以保护其不被分子氧氧化。当使还原型辅酶Q10在含强酸的溶剂中结晶时，可以得到高质量的还原型辅酶Q10晶体。
因为强酸在溶剂中的浓度可以随强酸种类变化，所以对其浓度没有特别限定，以相对于溶剂重量的强酸摩尔量表示的浓度优选不低于0.1mmol/kg，更优选不低于1mmol/kg。对其上限没有特别限定，但是，从经济等方面考虑，上限优选是100mmol/kg，达到保护还原型辅酶Q10不被氧化的目的后，在一些情况下可以将强酸脱除，例如，通过中和法、蒸发法、相分离法或洗涤法将强酸脱除。鉴于此，当然优选根据用途和要达到的效果使用必要和最少量的强酸。
在使还原型辅酶Q10与含强酸的溶剂接触或使还原型辅酶Q10在含强酸的溶剂中结晶时，该体系可以是均相或多相。作为上述体系的典型例子，可以提及由还原型辅酶Q10、强酸和溶剂构成的均质液相；由含还原型辅酶Q10的有机溶剂相和含强酸的水相组成的多相液态体系；由油状还原型辅酶Q10相和含强酸的水相组成的非均质液相。当然，能够高度有效地使还原型辅酶Q10与强酸接触的体系更适用于保护其不受氧化。
对用于本发明的溶剂没有特别限定，其包括烃、脂肪酸酯、醚、醇、脂肪酸、酮、含氮化合物(包括腈、酰胺等)、含硫化合物、水等。
对烃没有特别限定，但是可以提及的例子有脂肪烃、芳香烃、卤代烃等。优选脂肪烃和芳香烃，更优选脂肪烃。
对脂肪烃没有特别限定，可以是环状或非环状，或者饱和或者不饱和。但是，它们一般含3-20个碳原子，优选5-12个碳原子。从结晶率方面考虑，更优选无环脂肪烃。
作为具体的例子，例如可以提及丙烷、丁烷、异丁烷、戊烷、2-甲基丁烷、环戊烷、2-戊烯、己烷、2-甲基戊烷、2，2-二甲基丁烷、2，3-二甲基丁烷、甲基环戊烷、环己烷、1-己烯、环己烯、庚烷、2-甲基己烷、3-甲基己烷、2，3-二甲基戊烷、2，4-二甲基戊烷、甲基环己烷、1-庚烯、辛烷、2，2，3-三甲基戊烷、异辛烷、乙基环己烷、1-辛烯、壬烷、2，2，5-三甲基己烷、1-壬烯、癸烷、1-癸烯、萜烷、十一烷、十二烷等。
其中，更优选具有5-8个碳原子的饱和脂肪烃，优选使用具有5个碳原子的戊烷、2-甲基丁烷和环戊烷(称为“戊烷类”)；具有6个碳原子的己烷、2-甲基戊烷、2，2-二甲基丁烷、2，3-二甲基丁烷、甲基环戊烷、环己烷(称为“己烷类”)；具有7个碳原子的庚烷、2-甲基己烷、3-甲基己烷、2，3-二甲基戊烷、2，4-二甲基戊烷、甲基环己烷(称为“庚烷类”)；具有8个碳原子的辛烷、2，2，3-三甲基戊烷、异辛烷、乙基环己烷(称为“辛烷类”)；以及它们的混合物。特别优选上述庚烷类，因为它们具有非常高的保护还原型辅酶Q10免受氧化的作用，从结晶率方面考虑，最优选庚烷。
对芳香烃没有特别限定，但是它们一般含有6-20个碳原子，优选6-12个碳原子，更优选7-10个碳原子。作为具体例子，例如可以提及苯、甲苯、二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、乙苯、枯烯、1，3，5-三甲基苯、四氢化萘、丁基苯、对甲基异丙基苯、环己基苯、二乙基苯、戊基苯、二戊基苯、十二烷基苯、苯乙烯等。优选甲苯、二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、乙苯、枯烯、1，3，5-三甲基苯、四氢化萘、丁基苯、对甲基异丙基苯、环己基苯、二乙基苯和戊基苯，更优选甲苯、二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、枯烯和四氢化萘，最优选枯烯。
对卤代烃没有特别限定，可以是环状或非环状，或者饱和或者不饱和。但是一般来说，优选使用无环卤代烃。通常更优选氯代烃和氟代烃，甚至更优选氯代烃。还优选使用含1-6个碳原子、优选1-4个碳原子、更优选1-2个碳原子的卤代烃。
作为具体例子，例如可以提及二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烷、1，1，1-三氯乙烷、1，1，2-三氯乙烷、1，1，1，2-四氯乙烷、1，1，2，2-四氯乙烷、五氯乙烷、六氯乙烷、1，1-二氯乙烯、1，2-二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、1，2-二氯丙烷、1，2，3-三氯丙烷、氯苯、1，1，1，2-四氟乙烷等。
优选二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烷、1，1，1-三氯乙烷、1，1，2-三氯乙烷、1，1-二氯乙烯、1，2-二氯乙烯、三氯乙烯、氯苯和1，1，1，2-四氟乙烷。更优选二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烯、三氯乙烯、氯苯和1，1，1，2-四氟乙烷。
对脂肪酸酯没有特别限定，但是作为例子可以提及丙酸酯、乙酸酯、甲酸酯等。优选乙酸酯和甲酸酯，更优选乙酸酯。对其酯官能团没有特别限定，但一般优选具有1-8个碳原子的烷基或芳烷基，更优选具有1-6个碳原子的烷基，甚至更优选具有1-4个碳原子的烷基。
作为丙酸酯，例如可以提及丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丁酯、丙酸异戊酯等。
作为乙酸酯，例如可以提及乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、乙酸仲丁酯、乙酸戊酯、乙酸异戊酯、乙酸仲己酯、乙酸环己酯、乙酸苄酯等。优选乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、乙酸仲丁酯、乙酸戊酯、乙酸异戊酯、乙酸仲己酯和乙酸环己酯。更优选乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯和乙酸异丁酯。最优选乙酸乙酯。
作为甲酸酯，例如可以提及甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸异丙酯、甲酸丁酯、甲酸异丁酯、甲酸仲丁酯、甲酸戊酯等。优选甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸丁酯、甲酸异丁酯和甲酸戊酯，最优选甲酸乙酯。
对醚没有特别限定，可以是环状或非环状，或者饱和或者不饱和。但一般优选使用饱和醚。一般使用含3-20个碳原子，优选4-12个碳原子，更优选4-8个碳原子的醚。
作为具体例子，例如可以提及二乙基醚、甲基叔丁基醚、二丙基醚、二异丙基醚、二丁基醚、二己基醚、乙基乙烯基醚、丁基乙烯基醚、茴香醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二氧杂环乙烷、呋喃、2-甲基呋喃、四氢呋喃、四氢吡喃、乙二醇二甲基醚、乙二醇二乙基醚、乙二醇二丁基醚、乙二醇单甲基醚、乙二醇单乙基醚、乙二醇单丁基醚等。
优选二乙基醚、甲基叔丁基醚、二丙基醚、二异丙基醚、二丁基醚、二己基醚、茴香醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二氧杂环乙烷、2-甲基呋喃、四氢呋喃、四氢吡喃、乙二醇二甲基醚、乙二醇二乙基醚、乙二醇二丁基醚、乙二醇单甲基醚和乙二醇单乙基醚。更优选二乙基醚、甲基叔丁基醚、茴香醚、二氧杂环乙烷、四氢呋喃、乙二醇单甲基醚和乙二醇单乙基醚。甚至更优选二乙基醚、甲基叔丁基醚、茴香醚等，最优选甲基叔丁基醚。
对醇没有特别限定，可以是环状或非环状，或者饱和或者不饱和。但一般优选使用饱和醇。一般优选含1-20个碳原子的一元醇，更优选含1-12个碳原子的一元醇，甚至更优选含1-6个碳原子的一元醇，进一步更优选含1-5个碳原子的一元醇。含2-5个碳原子的二元醇和含3个碳原子的三元醇是优选的。
作为一元醇，例如可以提及甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊醇、1-己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1-丁醇、1-庚醇、2-庚醇、3-庚醇、1-辛醇、2-辛醇、2-乙基-1-己醇、1-辛醇、1-癸醇、1-十一烷醇、1-十二烷醇、烯丙醇、炔丙醇、苯甲醇、环己醇、1-甲基环己醇、2-甲基环己醇、3-甲基环己醇、4-甲基环己醇等。
优选甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊醇、1-己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1-丁醇和环己醇。更优选甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇和新戊醇。甚至更优选甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、2-甲基-1-丁醇和异戊醇。最优选乙醇。
作为二元醇，例如可以提及1，2-乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，2-丁二醇、1，3-丁二醇、1，4-丁二醇、2，3-丁二醇、1，5-戊二醇等。优选1，2-乙二醇、1，2-丙二醇和1，3-丙二醇，最优选1，2-乙二醇。
作为三元醇，例如可以优选使用甘油等。
作为脂肪酸，例如可以提及甲酸、乙酸、丙酸等。优选甲酸和乙酸，最优选乙酸。
对酮没有特别限定，一般优选使用具有3-6个碳原子的酮。作为具体例子，例如可以提及丙酮、甲基乙基酮、甲基丁基酮、甲基异丁基酮等。优选丙酮和甲基乙基酮，最优选丙酮。
对腈没有特别限定，可以是环状或非环状，或者饱和或者不饱和。但一般优选使用饱和腈。一般使用含2-20个碳原子、优选2-12个碳原子、更优选2-8个碳原子的腈。
作为具体例子，例如可以提及乙腈、丙腈、丙二腈、丁腈、异丁腈、丁二腈、戊腈、戊二腈、己腈、庚基氰、辛基氰、十一烷腈、十二烷腈、十三烷腈、十五烷腈、硬脂腈、氯乙腈、溴乙腈、氯丙腈、溴丙腈、甲氧基乙腈、氰基乙酸甲酯、氰基乙酸乙酯、苄基腈、氰苯、氯苄腈、溴苄腈、氰基苯甲酸、硝基苄腈、茴香腈、邻苯二甲腈、溴甲苯腈、氰基苯甲酸甲酯、甲氧基苄腈、乙酰基苄腈、萘甲腈、联苯腈、苯基丙腈、苯基丁腈、甲基苯基乙腈、联苯乙腈、萘基乙腈、硝基苯基乙腈、氯苄基氰、环丙烷腈、环己烷腈、环庚烷腈、苯基环己烷腈、甲苯基环己烷腈等。
优选乙腈、丙腈、丁二腈、丁腈、异丁腈、戊腈、氰基乙酸甲酯、氰基乙酸乙酯、氰苯、苄基腈和氯丙腈。更优选乙腈、丙腈、丁腈和异丁腈，最优选乙腈。
作为不是腈的含氮化合物，例如可以提及硝基甲烷、乙腈、三乙胺、吡啶、甲酰胺、N-甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等。
作为含硫化合物，例如可以提及二甲基亚砜、环丁砜等。
在上述溶剂中，优选使用醇、酮、含氮化合物(包括腈、酰胺)和水，更优选使用含1-3个碳原子的醇、丙酮、乙腈和水。当使用乙醇或由乙醇和水构成的混合溶剂时，本发明的作用可得到最大发挥。
当使用由乙醇和水构成的混合溶剂时，乙醇和水的比例优选是使相对于乙醇和水总量的乙醇量不低于80w/w％，更优选不低于90w/w％，甚至更优选不低于91w/w％，进一步更优选不低于92w/w％，最优选不低于93w/w％。其上限优选是99.5w/w％，更优选99w/w％，甚至更优选98w/w％，最优选97w/w％。一般来说，为了实现本发明，合适的乙醇比例为90-99.5w/w％，93-97w/w％更为合适。
对溶剂中还原型辅酶Q10的浓度没有特别限定。因为较高浓度的溶液具有更高的抗氧化性，但是，为了更有效地进行处理或结晶，以还原型辅酶Q10的重量比溶剂重量表示的浓度优选不低于1w/w％，更优选不低于2w/w％。对其上限没有特别限定，从实际操作性方面考虑，优选是400w/w％，更优选200w/w％，甚至更优选100w/w％，最优选50w/w％。
在实施本发明时，对还原型辅酶Q10的处理作业没有特别限定，但是，其中包括提取、用水洗涤、浓缩、柱色谱等，用这些操作可有利地保护还原型辅酶Q10不被氧化。
现在说明本发明的结晶方法。
结晶用溶剂可以是上述任何溶剂。如上所述，优选使用醇、酮、含氮化合物(包括腈、酰胺)和水。特别优选的溶剂是含1-3个碳原子的醇如乙醇、丙酮、乙腈和水。最优选乙醇或由乙醇和水构成的混合溶剂。
当使用存在有少量水的醇和/或酮时，不仅能够达到上述稳定化的效果，而且能够有利地降低还原型辅酶Q10的溶解度，从而可以得到很高的产率，另外，可以改善浆液性能，特别值得注意的是，还可以明显改善固-液分离性能(过滤性能)。
水与醇和/或酮的比例可以随溶剂种类而改变，因此不能作出绝对性的规定。但是，相对于水和醇和酮总量的醇和酮的总量优选不低于90w/w％，更优选不低于91w/w％，甚至更优选不低于92w/w％，最优选不低于93w/w％。其上限优选是99.5w/w％，更优选99w/w％，甚至更优选98w/w％，最优选97w/w％。一般来说，实施本发明时的比例可以是90-99.5w/w％，最优选93-97w/w％。
可以单独或组合使用传统结晶方法对本发明的还原型辅酶Q10进行结晶，这些传统结晶方法的例子有冷却结晶、浓缩结晶、溶剂取代结晶和使用不良溶剂的结晶。特别优选冷却法(冷却结晶法)或冷却法与其它一些结晶法的组合。
在对本发明的还原型辅酶Q10进行结晶时，能够非常有效地在纯化和结晶还原型辅酶Q10的同时脱除反应混合物中或用传统方法得到的或用下述还原法等方法生产的含还原型辅酶Q10的提取物中含有的杂质。这样就可以将共存的杂质，特别是具有类似结构但通常不易除去的同类化合物(具体来说是还原型辅酶Q9、还原型辅酶Q8、还原型辅酶Q7等)脱除到母液中。醇和/或酮还是特别有效的脱除所述具有类似结构的同类化合物的溶剂。不用说，可以利用上述纯化和结晶方法作为将还原型辅酶Q10晶体进行再结晶的方法。
还原型辅酶Q10的再结晶温度可以随结晶溶剂种类和/或结晶方法而改变，因此不能作出绝对性的规定。优选不高于25℃，更优选不高于20℃，进一步更优选不高于15℃，特别优选不高于10℃。其下限优选是体系的固化温度。一般优选在0-25℃下进行结晶。
在结晶过程中，为了使得到的还原型辅酶Q10中混入的各种杂质最小化，或者说为了得到具有良好性能的浆液，可以控制单位时间内结晶出的晶体量。优选的结晶率不高于在单位时间内结晶出要得到的晶体总量的50％的结晶率(50％/hr)，更优选不高于在单位时间内结晶出要得到的晶体总量的25％的结晶率(25％/hr)。通过冷却造成的结晶冷却速度优选不大于40℃/hr，更优选不大于20℃/hr。
优选在强制流动的条件下对还原型辅酶Q10进行结晶。为了防止过度饱和情况的发生，从而使晶核形成和晶体的生长平稳进行，另外，从得到高质量产品方面考虑，一般通过搅拌形成流动，单位体积的搅拌功率一般不低于约0.01kW/m3，优选不低于约0.1kW/m3，更优选不低于约0.3kW/m3。一般通过转动搅拌叶片提供强制流动。但是，如果用其它方法可以得到上述流动，则不一定使用搅拌叶片。例如，可以利用基于液体循环的方法。
在进行结晶时，优选加入晶种，从而可以防止过度饱和情况的发生，使晶核形成和晶体的生长能够平稳进行。
结晶浓度可以随结晶溶剂种类和/或结晶方法而改变，因此不能作出绝对性的规定。但是，当用结晶完成时还原型辅酶Q10的重量比溶剂的重量表示结晶浓度时，优选不大于15w/w％，更优选不大于13w/w％，甚至更优选不大于10w/w％。从生产率方面考虑，其下限优选是1w/w％，更优选2w/w％。一般来说，可以在5-10w/w％的浓度下有利地进行结晶。
如此得到的还原型辅酶Q10晶体可以回收为湿产品，例如用离心分离、压滤或真空过滤法，如果需要还可以进行滤饼洗涤。还可以用下述方法将它们回收为干燥产品：将湿产品加入内部用惰性气体吹扫的减压干燥机(真空干燥机)，在减压下干燥。优选回收为干燥形式。
当用上述方法对还原型辅酶Q10结晶时，例如可以用下述方法将结晶步骤中使用的强酸在结晶后除去：包括结晶后用碱(如：碱金属氢氧化物如氢氧化钠)中和强酸的方法，或包括用挥发性强酸如氯化氢作为强酸及结晶后蒸发强酸的方法。
在结晶后用碱(如：碱金属氢氧化物如氢氧化钠；碱土金属氢氧化物如氢氧化镁；碱金属碳酸盐如碳酸钠；碱金属碳酸氢盐如碳酸氢钠等)中和强酸的情况下，为了溶解在中和母液时作为副产品形成的盐以除去这种盐，还优选使水共存在体系中，用于在晶体分离情况下溶解并除去这种盐。一般来说，这可以通过如在水存在下进行结晶或在晶体分离情况下加入水来实现。
本发明优选在缺氧气氛中，特别是在减压的惰性气氛中和/或在沸腾条件下进行，这样可以进一步提高抑制氧化效果。本发明优选至少在惰性气氛中进行。惰性气体包括氮气、二氧化碳气体、氦气、氩气、氢气等。但优选氮气。
下面说明适用于本发明的合成还原型辅酶Q10的方法，即，将氧化型辅酶Q10还原成还原型辅酶Q10的方法。
可以用传统方法如前面提到的合成法、发酵法或从天然来源中提取的方法等得到适用于本发明的还原型辅酶Q10。优选通过还原氧化型辅酶Q10得到，例如用传统还原剂还原任何一种现有的高纯度辅酶Q10或氧化型辅酶Q10和还原型辅酶Q10的混合物。首先说明氧化型辅酶Q10的还原法。
因为还原型辅酶Q10易于被分子氧氧化，得到作为副产品的氧化型辅酶Q10，所以优选用具有很高的保护其不被氧化性能的溶剂作为还原步骤中的溶剂。在上述溶剂中，优选使用的溶剂至少是选自烃类、脂肪酸酯类、醚类和腈类的一种。最优选烃类溶剂。
在从上述溶剂中选择要使用的溶剂时，要优先考虑诸如沸点、粘度等性能(例如，溶剂的沸点应当允许适当加热以增加溶解度且有利于通过干燥从湿产品中脱除溶剂和从结晶滤出液中回收溶剂(1atm下的沸点约为30-150℃)，熔点是在室温下处理时及冷却至室温或更低温度时几乎不会固化(不高于约20℃，优选不高于约10℃，更优选不高于约0℃)，和低粘度(在20℃下的粘度不高于约10cp))。从工业操作方面考虑，优选在常温下很少挥发的溶剂；例如，一般来说，优选沸点不低于约80℃的溶剂，更优选沸点不低于约90℃的溶剂。
在上述溶剂中，作为还原反应中的溶剂，特别优选使用和水的混合性低的溶剂。还原反应中的溶剂通过萃取下述还原剂和/或来自还原剂的杂质并将其脱除的方式有效促进还原型辅酶Q10的纯化和制取。
溶解状态的还原型辅酶Q10会随其浓度的增加而具有更高的抗氧化性。还原型辅酶Q10在上述溶剂中高度溶解，同样，上述溶剂也适用于保护其不被氧化。从保护其不被氧化的角度考虑，还原型辅酶Q10的优选浓度随溶剂种类的变化最大，因此不能作出绝对性的规定。但一般来说，还原型辅酶Q10在上述溶剂中的浓度不低于1w/w％，优选不低于2w/w％。对其上限没有特别限定，从实际操作性方面考虑，一般是400w/w％，优选200w/w％，更优选100w/w％，甚至更优选50w/w％。
因此，在还原步骤中通过使用上述溶剂可以使不希望的涉及氧的副反应最小化。
例如，可以用下述物质作为还原剂在上述溶剂中进行还原反应：金属氢化物、铁(金属铁或盐形式的铁)、锌(金属锌)、连二亚硫酸或其盐、或抗坏血酸或与其相关的化合物。
对金属氢化物没有特别限定，但是其中包括硼氢化钠、氢化锂铝等。金属氢化物的用量可以随其种类而改变，因此不能作出绝对性的规定。但一般来说，其用量是理论上氢当量的1-3倍时可以有利地进行还原反应。
用铁或锌进行还原反应时，一般使用酸。对酸没有特别限定，但是其中包括脂肪酸如乙酸、磺酸如甲磺酸、无机酸如盐酸和硫酸等。优选无机酸，更优选硫酸。
对铁的用量没有特别限定，但是举例来说，基于加入的氧化型辅酶Q10重量的约1/5的用量适合进行该反应。对其上限没有特别限定，从经济方面考虑，约为上述加入重量的两倍。铁不仅可以以金属铁的形式使用，而且可以以盐的形式使用，如硫酸铁(II)等。
对锌的用量没有特别限定，但是举例来说，基于加入的氧化型辅酶Q10重量的约1/10的用量适合进行该反应。对其上限没有特别限定，从经济方面考虑，约为上述加入重量的两倍。
对连二亚硫酸或其盐没有特别限定，但一般使用连二亚硫酸的盐形式。对连二亚硫酸的盐没有特别限定，但其优选种类包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐等。更优选如锂盐、钠盐和钾盐的碱金属盐，最优选钠盐。
对连二亚硫酸或其盐的用量没有特别限定，但一般不小于基于加入的氧化型辅酶Q10重量的约1/5，优选不小于约2/5，更优选不小于约3/5。在不造成特殊麻烦的情况下可以使用更大的量。但是，从不利于经济方面考虑，其用量不能超过上述加入重量的大约两倍。一般来说，其用量在上述加入重量的约2/5至约等于上述加入重量的范围内时都能够有利地进行该反应。
对抗坏血酸或与其相关的化合物没有特别限定，举例来说，不仅包括抗坏血酸，而且还包括鼠李抗坏血酸、阿拉伯糖型抗坏血酸、葡糖型抗坏血酸、藻糖型抗坏血酸、葡庚糖抗坏血酸、木糖型抗坏血酸、半乳糖型抗坏血酸、古洛糖型抗坏血酸、别抗坏血酸、赤型抗坏血酸、6-脱氧抗坏血酸及与其相关的化合物，还可以是这些抗坏血酸的酯形式或盐形式。还可以是左旋型、右旋型或外消旋型。其具体例子可以提及左旋抗坏血酸、棕榈酸左旋抗坏血酸酯、硬脂酸左旋抗坏血酸酯、右旋阿拉伯糖型抗坏血酸等。在生产还原型辅酶Q10时，可以适当使用任意一种上述抗坏血酸或与其相关的化合物。但是，从与产生的还原型辅酶Q10的分离性等方面考虑，在上述抗坏血酸或与其相关的化合物中特别优选水溶性物质。从易购、价格等方面考虑，最优选游离形式的左旋抗坏血酸、右旋阿拉伯糖型抗坏血酸等。
对上述抗坏血酸或与其相关的化合物的用量没有特别限定，但可以是将氧化型辅酶Q10转化成还原型辅酶Q10的有效量。其基于每摩尔氧化型辅酶Q10的用量不小于1mol，优选不小于1.2mol。对其上限没有特别限定，从经济方面考虑，其基于每摩尔氧化型辅酶Q10的上限用量一般是10mol，优选5mol，更优选3mol。
在上述还原剂种类中，从还原性能、产率、质量等方面考虑，优选锌、连二亚硫酸及其盐、抗坏血酸或与其相关的化合物，特别优选连二亚硫酸或其盐(具体来说是连二亚硫酸盐)、抗坏血酸或与其相关的化合物。
在实施本发明时，如上所述，可以适当使用醇和/或水。特别是当用铁、锌或连二亚硫酸或其盐作为还原剂时，水是优选的。当用金属氢化物或抗坏血酸或与其相关的化合物作为还原剂时，可以结合使用醇。水和醇的结合使用既显示出水的特点又显示出醇的特点，有助于改善反应速率和产率等。
下面详述优选的还原方法。
优选在由水和至少一种选自上述烃、脂肪酸酯、醚和腈的有机溶剂(在这些有机溶剂中，优选烃，更优选脂肪烃，进一步更优选庚烷类，特别优选庚烷)构成的混合溶剂体系中用连二亚硫酸或其盐进行还原反应。在这种情况下，从产率等方面考虑，一般在pH不高于7，优选在pH为3-7，更优选pH为3-6的条件下进行该反应。可以用酸(例如，无机酸如盐酸或硫酸)或碱(例如，碱金属氢氧化物如氢氧化钠)调节pH。
在用连二亚硫酸或其盐进行的还原反应中，对水的量没有特别限定，但是水的量可以是适当的能够使一定量的还原剂，即连二亚硫酸或其盐溶解在其中的量。因此，例如一般可以建议将连二亚硫酸或其盐相对于水重量的量调节为不大于30w/w％，优选不大于20w/w％。从生产率等方面考虑，建议将其量调节为不小于1w/w％，优选不小于5w/w％，更优选不小于10w/w％。
用上述抗坏血酸或与其相关的化合物进行还原反应时，可以使用和水的混合性特别高的选自上述烃、脂肪酸酯、醚和腈的溶剂，特别是和水高度混溶的醚和腈，更具体地说是四氢呋喃、二氧杂环乙烷、乙腈等。特别优选使用上述醇和/或酮(优选和水高度混溶的醇和/或酮(特别是具有1-5个碳原子，优选1-4个碳原子，更优选1-3个碳原子的一元醇或二元醇(优选一元醇)和/或诸如丙酮、甲基乙基酮等的酮))。即，在用抗坏血酸或与其相关的化合物进行还原反应时，优选使用醇和/或水溶性有机溶剂。另外，从在生产还原型辅酶Q10中促进反应方面考虑(例如，降低反应温度或缩短反应时间)，还可以在具有促进反应效应的添加剂存在下进行还原反应，这些添加剂的例子有碱性物质或连二亚硫酸。
对碱性化合物没有特别限定，可以是无机化合物或有机化合物。对无机化合物没有特别限定，但是其中包括金属(优选碱金属、碱土金属等)的氢氧化物、碳酸盐和碳酸氢盐、氨等。其典型的例子可以提及碱金属氢氧化物如氢氧化钠，碱金属的碳酸盐如碳酸钠，碱金属的碳酸氢盐如碳酸氢钠，碱土金属的碳酸盐如碳酸镁等。对有机化合物没有特别限定，但是其中包括胺类如三乙胺等。在上述碱性物质中，特别优选使用弱碱性物质(弱碱)如金属(优选碱金属、碱土金属等)碳酸盐和碳酸氢盐，氨等无机化合物，胺类如三乙胺等有机化合物。更优选上述弱碱性无机化合物。
作为连二亚硫酸的例子，优选碱金属的连二亚硫酸盐如连二亚硫酸钠等。
对上述添加剂的用量没有特别限定，但是可以是使添加剂促进反应的效应达到一定程度的量(有效量)。但是，从经济方面考虑，其基于每摩尔抗坏血酸或与其相关的化合物的量一般不大于20mol，优选不大于10mol，更优选不大于5mol，特别优选不大于2mol。对其下限没有特别限定，其基于每摩尔抗坏血酸或与其相关的化合物的下限一般是0.01mol，优选0.05mol，更优选0.1mol，特别优选0.2mol。
在实施本发明时，优选在强制流动的条件下进行还原反应。单位体积需要的产生这种流动的搅拌功率一般不低于约0.01kW/m3，优选不低于约0.1kW/m3，更优选不低于约0.3kW/m3。一般通过转动搅拌叶片产生上述强制流动。但是，如果用其它方法可以得到上述流动，则不一定使用搅拌叶片。例如，可以利用基于液体循环的方法。
还原反应的温度可以随还原剂的种类和/或用量而变化，因此不能作出绝对性的规定。例如，在用连二亚硫酸或其盐进行的还原反应中，还原反应的温度一般是100℃或更低，优选80℃或更低，更优选60℃或更低。其下限是该体系的固化温度。因此，可以在约0-100℃，优选约0-80℃，更优选约0-60℃的温度下有利地进行还原反应。在用抗坏血酸或与其相关的化合物进行的还原反应中，还原反应的温度一般是30℃或更高，优选40℃或更高，更优选50℃或更高。其上限是该体系的沸点。因此，可以在约30-150℃，优选约40-120℃，更优选约50-100℃的温度下有利地进行还原反应。
对反应浓度没有特别限定，但是氧化型辅酶Q10的重量与溶剂的重量比一般不小于约1w/w％，优选不小于3w/w％，更优选不小于10w/w％，甚至更优选不小于15w/w％。对其上限没有特别限定，但一般不高于60w/w％，优选不高于50w/w％，更优选不高于40w/w％，甚至更优选不高于30w/w％。因此，一般来说，在约1-60w/w％，优选约3-50w/w％，更优选约10-40w/w％的反应浓度下能够有利地进行反应。
一般在48小时内，优选在24小时内，更优选在10小时内，甚至更优选在5小时内完成还原反应。
从如此得到的还原反应混合物中回收含产品还原型辅酶Q10的有机相，如果需要(优选)，还可以用水、盐水等重复洗涤有机相以完全除去杂质。具体来说，当用上述连二亚硫酸或其盐作为还原剂时，要求用水重复洗涤，这样可以完全除去来自连二亚硫酸或其盐的杂质和/或可以稳定含水相的pH。另外，为了得到需要的含还原型辅酶Q10的溶液，如果需要，可以将还原反应混合物浓缩和/或溶剂取代。
非常优选在缺氧气氛中进行还原反应和后处理。具体来说，惊奇的发现是，在用连二亚硫酸或其盐进行的还原反应中，这种气氛非常有利于改善还原反应的产率和减少还原剂的用量。可以用惰性气体置换、减压、蒸煮或这些手段相结合得到这种缺氧气氛。优选至少用惰性气体进行置换，即采用惰性气体气氛。作为惰性气体的例子，可以提及氮气、氦气、氩气、氢气、二氧化碳气体等。但优选氮气。
根据本发明的以上描述，通过使用强酸可以使在还原型辅酶Q10的结晶步骤中不希望的涉及氧的副反应最小化。另外，在强酸存在下可以保护还原型辅酶Q10不被分子氧氧化，从而可以稳定处理还原型辅酶Q10，因此可以成功地进行诸如抽提、用水洗涤、浓缩和柱色谱的操作。
用本发明的结晶方法得到的还原型辅酶Q10晶体具有非常高的质量，还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比有望不低于98/2，优选不低于99/1。
本发明的具体实施方案
下面的实施例进一步详细说明本发明。但是，这些实施例决不限定本发明的保护范围。在这些实施例中，用下面规定的HPLC分析法测定还原型辅酶Q10的纯度及还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比。但是，测定的还原型辅酶Q10的纯度值决不限定本发明可以得到的纯度值。同样，得到的还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比决不表示该比值的上限。
(HPLC的条件)
柱：SYMMETRY C18(Waters的产品)，250mm(长度)，4.6mm(内径)；流动相：C2H5OH∶CH3OH＝4∶3(v/v)；检测波长：210 nm；流速：1ml/min；还原型辅酶Q10的滞留时间：9.1min；氧化型辅酶Q10的滞留时间：13.3min。
实施例1
在25℃，将10g氧化型辅酶Q10(纯度为99.4％)溶解在100g庚烷中。在搅拌(搅拌所需功率为0.3kW/m3)的同时，向其中慢慢加入用下述方法制备的水溶液：将10g作为还原剂的连二亚硫酸钠(纯度至少是75％)加入100ml水中，使其溶解。在25℃进行还原反应。2小时后从反应混合物中脱除含水相，用向100g饱和盐水中加入2g的0.1N盐酸制备的洗涤液将庚烷相洗涤6次。上述操作均在氮气气氛中进行。在减压条件下对上述庚烷溶液进行溶剂取代，制得还原型辅酶Q10的1w/w％乙醇溶液。
将乙醇溶液分成多份，每份100g，将表1中所示的强酸加入各个份中，其基于每千克乙醇的量是100mmol，其相对于还原型辅酶Q10的量是1000mol％，将得到的混合物在空气中搅拌(使用氯化氢时，以12N盐酸的形式加入)。表1示出24小时后测定的乙醇溶液中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比。为了对比，表1中还示出加入乙酸(每千克乙醇加入100mmol乙酸)和没有加入任何酸时得到的结果。
表1
 R
氯化氢硫酸甲磺酸  98.7/1.398.8/1.297.8/2.2
乙酸参比(没有加入酸)  59.0/41.054.0/46.0
R：还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比
实施例2
用与实施例1同样的方式制备还原型辅酶Q10的庚烷溶液。在减压条件下对庚烷溶液进行溶剂取代后制备1w/w％的还原型辅酶Q10的二甲基甲酰胺溶液。将二甲基甲酰胺溶液分成多份，每份100g，将表2中所示的强酸加入各个份中，其基于每千克二甲基甲酰胺的量是100mmol，其相对于还原型辅酶Q10的量是1000mol％，将得到的混合物在空气中搅拌(使用氯化氢时，以12N盐酸的形式加入)。表2示出24小时后测定的二甲基甲酰胺溶液中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比。为了对比，表2中还示出加入乙酸(每千克乙醇加入100mmol乙酸)和没有加入任何酸时得到的结果。
表2
 R
氯化氢硫酸甲磺酸  99.2/0.899.4/0.699.0/1.0
乙酸参比(没有加入酸)  65.0/35.075.1/24.9
R：还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比
实施例3
向用与实施例1同样的方式制备的100g的1w/w％的还原型辅酶Q10的乙醇溶液中加入12N盐酸，其量以氯化氢表示为100mmol/kg(相对于乙醇)，其相对于还原型辅酶Q10的量是1000mol％，将混合物在氮气气氛中搅拌。24小时后乙醇溶液中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是99.4/0.6。
实施例4
向用与实施例1同样的方式制备的100g的1w/w％的还原型辅酶Q10的乙醇溶液中加入1g的1N盐酸(其量以氯化氢表示为10mmol/kg乙醇，其相对于还原型辅酶Q10的量是100mol％)，将混合物在空气中搅拌。24小时后乙醇溶液中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是98.7/1.3。
实施例5
向用与实施例1同样的方式制备的100g的1w/w％的还原型辅酶Q10的乙醇溶液中加入1g的0.1N盐酸(其量以氯化氢表示为1mmol/kg乙醇，其相对于还原型辅酶Q10的量是10mol％)，将混合物在空气中搅拌。24小时后乙醇溶液中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是98.7/1.3。
实施例6
向用与实施例1同样的方式制备的100g的1w/w％的还原型辅酶Q10的乙醇溶液中加入1g的0.01N盐酸(其量以氯化氢表示为0.1mmol/kg乙醇，其相对于还原型辅酶Q10的量是1mol％)，将混合物在空气中搅拌。24小时后乙醇溶液中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是98.5/1.5。
实施例7
用与实施例1同样的方式得到含还原型辅酶Q10的庚烷相。在减压条件下对庚烷溶液进行溶剂取代后制备7w/w％的还原型辅酶Q10的乙醇溶液。向乙醇溶液中加入1.4g的1N盐酸(其量以氯化氢表示为10mmol/kg乙醇，其相对于还原型辅酶Q10的量是12mol％)，在空气中搅拌(搅拌功率要求是0.3kW/m3)的同时将混合物冷却至2℃。从而得到白色浆液。将得到的浆液减压过滤，依次用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗涤湿晶体(用于洗涤的冷溶剂温度是2℃)。然后将湿晶体减压干燥(20-40℃，1-30mmHg)，得到9.5g干燥的白色晶体(分离出的产品产率是95mol％)。在得到的晶体中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是99.1/0.9，还原型辅酶Q10的纯度是98.9％。
实施例8
重复实施例7的程序，只是在结晶时不是加入1N盐酸，而是加入1.4g的0.01N盐酸(其量以氯化氢表示为0.1mmol/kg乙醇，其相对于还原型辅酶Q10的量是0.1mol％)，得到9.5g干燥的白色晶体(分离出的产品产率是95mol％)。在得到的晶体中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是99.0/1.0，还原型辅酶Q10的纯度是98.9％。
实施例9
重复实施例7的程序，只是结晶是在氮气气氛中进行，得到9.5g干燥的白色晶体(分离出的产品产率是95mol％)。在得到的晶体中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是99.5/0.5，还原型辅酶Q10的纯度是99.3％。
实施例10
用与实施例9同样的方式得到含还原型辅酶的白色浆液。用5％的碳酸氢钠溶液将得到的浆液中和，然后减压过滤。依次用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗涤湿晶体(用于洗涤的冷溶剂温度是2℃)。将洗涤后的湿晶体减压干燥(20-40℃，1-30mmHg)，得到9.5g干燥的白色晶体(分离出的产品产率是95mol％)。在得到的晶体中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是99.5/0.5，还原型辅酶Q10的纯度是99.3％。
对比实施例1
重复实施例7的程序，只是在结晶时不是加入1N盐酸，而是加入1.4g水，得到9.5g干燥的白色晶体(分离出的产品产率是95mol％)。在得到的晶体中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是97.4/2.6，还原型辅酶Q10的纯度是97.2％。
实施例11
用与实施例1同样的方式得到含还原型辅酶Q10的庚烷相。在减压条件下用含水量为5％的乙醇对庚烷溶液进行溶剂取代后制备7w/w％的还原型辅酶Q10溶液。向乙醇溶液中加入1.4g的1N盐酸(其量以氯化氢表示为10mmol/kg乙醇，其相对于还原型辅酶Q10的量是12mol％)，在空气中搅拌(搅拌功率要求是0.3kW/m3)的同时将混合物冷却至2℃，从而得到白色浆液。将得到的浆液减压过滤(与实施例7相比具有更好的过滤性)，依次用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗涤湿晶体(用于洗涤的冷溶剂温度是2℃)。然后将湿晶体减压干燥(20-40℃，1-30mmHg)，得到9.7g干燥的白色晶体(分离出的产品产率是97mol％)。在得到的晶体中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是99.1/0.9，还原型辅酶Q10的纯度是98.9％。
实施例12
重复实施例11的程序，只是结晶是在氮气气氛中进行，得到9.7g干燥的白色晶体(分离出的产品产率是97mol％)。在得到的晶体中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是99.5/0.5，还原型辅酶Q10的纯度是99.3％。
实施例13
用与实施例1同样的方式得到含还原型辅酶Q10的庚烷相(含1.00％的还原型辅酶Q9、0.30％的还原型辅酶Q8和0.04％的还原型辅酶Q7)，只是氧化型辅酶Q10的纯度是98.4％(含1.00％的氧化型辅酶Q9、0.30％的氧化型辅酶Q8和0.04％的氧化型辅酶Q7)。在减压条件下对该庚烷溶液进行溶剂取代，得到7w/w％的还原型辅酶Q10在乙醇中的溶液。向该乙醇溶液中加入1.4g的1N盐酸(其量以氯化氢表示为10mmol/kg乙醇，其相对于还原型辅酶Q10的量是12mol％)，在空气中搅拌(搅拌功率要求是0.3kW/m3)的同时将混合物冷却至2℃。从而得到白色浆液。将得到的浆液减压过滤，依次用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗涤湿晶体(用于洗涤的冷溶剂温度是2℃)。然后将湿晶体减压干燥(20-40℃，1-30mmHg)，得到9.5g干燥的白色晶体(含0.52％的还原型辅酶Q9，脱除百分率是48％；没有检测到还原型辅酶Q8和还原型辅酶Q7)(分离出的产品产率是95mol％)。在得到的晶体中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是99.1/0.9，还原型辅酶Q10的纯度是98.9％。
实施例14
将10g氧化型辅酶Q10、6g左旋抗坏血酸和3g碳酸氢钠加入100g乙醇，在78℃的温度下通过搅拌进行还原反应。3小时后将反应混合物冷却至50℃，向混合物中加入100g庚烷和100g脱气水，将混合物冷却至25℃。除去含水层，再用100g脱气饱和盐水将庚烷相洗涤6次。在减压条件下对庚烷溶液进行溶剂取代，得到7w/w％的还原型辅酶Q10在乙醇中的溶液。向该乙醇溶液中加入1.4g的1N盐酸(其量以氯化氢表示为10mmol/kg乙醇，其相对于还原型辅酶Q10的量是12mol％)，在空气中搅拌(搅拌功率要求是0.3kW/m3)的同时将混合物冷却至2℃，从而得到白色浆液。将得到的浆液减压过滤，依次用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗涤湿晶体(用于洗涤的冷溶剂温度是2℃)。然后将湿晶体减压干燥(20-40℃，1-30mmHg)，得到9.5g干燥的白色晶体(分离出的产品产率是95mol％)。在得到的晶体中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是99.1/0.9，还原型辅酶Q10的纯度是98.9％。
实施例15
用与实施例1同样的方式得到还原型辅酶Q10的庚烷溶液。在减压条件下对庚烷溶液进行溶剂取代，制得还原型辅酶Q10的7w/w％丙酮溶液。向该丙酮溶液中加入1.4g的1N盐酸(其量以氯化氢表示时对应于10mmol/kg丙酮，其相对于还原型辅酶Q10的量是12mol％)，在空气中搅拌(搅拌功率要求是0.3kW/m3)的同时将混合物冷却至2℃。从而得到白色浆液。将得到的浆液减压过滤，依次用冷丙酮、冷水和冷丙酮洗涤湿晶体(用于洗涤的冷溶剂温度是2℃)。然后将湿晶体减压干燥(20-40℃，1-30mmHg)，得到9.4g干燥的白色晶体(分离出的产品产率是94mol％)。在得到的晶体中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是99.3/0.7，还原型辅酶Q10的纯度是99.0％。
对比实施例2
重复实施例11的程序，只是在结晶时不是加入1N盐酸，而是加入1.4g水，得到9.7g干燥的白色晶体(分离出的产品产率是97mol％)。在得到的晶体中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是97.4/2.6，还原型辅酶Q10的纯度是97.2％。
参考实施例1
在25℃的温度下，将1g还原型辅酶Q10(还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是99.6/0.4)溶解在20g表3所示的每一种溶剂中。在25℃的空气搅拌24小时后，测定每一种溶液中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比。测定结果示于表3。
表3
溶剂  R
庚烷己烷甲苯氯仿乙酸乙酯甲基叔丁基醚四氢呋喃  99.1/0.998.7/1.398.8/1.298.9/1.198.9/1.198.6/1.498.5/1.5
R：还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比
参考实施例2
在35℃的温度下，将1g还原型辅酶Q10(还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比是99.6/0.4)溶解在100g表4所示的每一种溶剂中。在35℃的空气搅拌24小时后，测定每一种溶液中还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比。测定结果示于表4。
表4
溶剂  R
庚烷乙酸乙酯乙腈  96.7/3.396.4/3.696.0/4.0
R：还原型辅酶Q10/氧化型辅酶Q10的重量比
工业实用性
具有上述构成的本发明是适用于工业化规模的生产方法，能够以便利和有效的方式得到高质量的还原型辅酶Q10。

Claims (32)

1、一种稳定还原型辅酶Q10的方法，该方法包括使还原型辅酶Q10与含强酸的溶剂接触，以此处理还原型辅酶Q10，从而保护还原型辅酶Q10不被分子氧氧化。
2、根据权利要求1的方法，其中，强酸在水溶液中的pKa值不大于2.5。
3、根据权利要求1或2的方法，其中，强酸是无机酸。
4、根据权利要求1-3任一的方法，其中，对于每摩尔还原型辅酶Q10来说，强酸的用量不小于0.1mol％。
5、根据权利要求1-4任一的方法，其中，以相对于溶剂重量的强酸摩尔量表示的强酸在溶剂中的浓度不低于0.1mmol/kg。
6、根据权利要求1-5任一的方法，其中，溶剂包括选自烃、脂肪酸酯、醚、醇、脂肪酸、酮、含氮化合物、含硫化合物和水中的至少一种。
7、根据权利要求6的方法，其中，溶剂包括选自醇、酮、含氮化合物和水中的至少一种。
8、根据权利要求7的方法，其中，溶剂包括选自含1-3个碳原子的醇、丙酮、乙腈和水中的至少一种。
9、根据权利要求8的方法，其中，溶剂是乙醇或由乙醇和水构成的混合溶剂。
10、根据权利要求9的方法，其中，在由乙醇和水构成的混合溶剂中，乙醇的比例是90-99.5w/w％。
11、根据权利要求1-10任一的方法，其中，还原型辅酶Q10在溶剂中的浓度不低于1w/w％。
12、根据权利要求1-11任一的方法，其中，对还原型辅酶Q10的处理作业包括选自提取、用水洗涤、浓缩和柱色谱中的至少一种。
13、根据权利要求1-12任一的方法，其中，对还原型辅酶Q10的处理是在缺氧气氛中进行的。
14、一种使还原型辅酶Q10结晶的方法，该方法包括使还原型辅酶Q10在含强酸的溶剂中结晶。
15、根据权利要求14的方法，其中，强酸在水溶液中的pKa值不小于2.5。
16、根据权利要求14或15的方法，其中，强酸是无机酸。
17、根据权利要求14-16任一的方法，其中，对于每摩尔还原型辅酶Q10来说，强酸的用量不小于0.1mol％。
18、根据权利要求14-17任一的方法，其中，以相对于溶剂重量的强酸摩尔量表示的强酸在溶剂中的浓度不低于0.1mmol/kg。
19、根据权利要求14-18任一的方法，其中，溶剂包括选自烃、脂肪酸酯、醚、醇、脂肪酸、酮、含氮化合物、含硫化合物和水中的至少一种。
20、根据权利要求19的方法，其中，溶剂包括选自醇、酮、含氮化合物和水中的至少一种。
21、根据权利要求20的方法，其中，溶剂包括选自含1-3个碳原子的醇、丙酮、乙腈和水中的至少一种。
22、根据权利要求21的方法，其中，溶剂是乙醇或由乙醇和水构成的混合溶剂。
23、根据权利要求22的方法，其中，在由乙醇和水构成的混合溶剂中，乙醇的比例是90-99.5w/w％。
24、根据权利要求14-23任一的方法，其中，将一种或多种杂质脱除到母液中。
25、根据权利要求24的方法，其中，要脱除的杂质包括选自还原型辅酶Q9、还原型辅酶Q8和还原型辅酶Q7中的至少一种。
26、根据权利要求14-25任一的方法，其中，用结晶完成时还原型辅酶Q10的重量比结晶溶剂的重量表示的结晶浓度不低于1w/w％。
27、根据权利要求26的方法，其中，用结晶完成时还原型辅酶Q10的重量比结晶溶剂的重量表示的结晶浓度是5-10w/w％。
28、根据权利要求14-27任一的方法，其中，用挥发性强酸作为强酸，将还原型辅酶Q10结晶后将挥发性强酸蒸发掉。
29、根据权利要求14-27任一的方法，其中，结晶后用碱中和强酸。
30、根据权利要求29的方法，其中，碱是碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐或碱金属碳酸氢盐。
31、根据权利要求29或30的方法，其中，在分离还原型辅酶Q10晶体时，使水在体系中共存，以溶解和除去中和时形成的盐。
32、根据权利要求14-31任一的方法，其中，结晶过程是在缺氧气氛中进行的。
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