TWI235146B

TWI235146B - Method of stabilizing reduced coenzyme q10 and method of acidic crystallization

Info

Publication number: TWI235146B
Application number: TW091115494A
Authority: TW
Inventors: Yasuyoshi Ueda; Shiro Kitamura; Takahiro Ueda
Original assignee: Kaneka Corp
Priority date: 2001-07-16
Filing date: 2002-07-12
Publication date: 2005-07-01
Also published as: DE60235089D1; ATE455086T1; CN1525951A; JPWO2003008363A1; KR20040018464A; WO2003008363A1; US20040197418A1; AU2002318516B2; US7169590B2; EP1415973A1; EP1415973A4; CA2453135A1; CN1254462C; EP1415973B1; AU2002318516A2; JP4149917B2

Description

A7 1235146 ____B7_____ 五、發明說明（/ ) 〔技術領域〕本發明係關於還原型輔酶Q1()之安定化方法及結晶化方法。還原型輔酶Qh，相較於氧化型輔酶Q!〇，係顯示較高的經口吸收性，而能應用於食品、營養機能食品、特定保健用食品、營養輔助劑、營養劑、動物用藥、飮料、飼料、化粧品、醫藥品、治療藥、預防藥等。〔背景技術〕還原型輔酶Q1()，已知例如藉合成、發酵、從天然物萃取等以往公知的方法來獲得輔酶Q1()後，藉層析法來濃縮流出液中的還原型輔酶Q1G區，藉此等方法來製得（日本專利特開平10 - 109933號公報）。依該公報之記載，這時，可將上述還原型輔酶Q!。中所含之氧化型輔酶Q1()用氫硼化鈉、亞連二硫酸鈉（連二亞硫酸鈉）等一般的還原劑實施還原後，藉層析法來進行濃縮；或令上述還原劑作用於既存的高純度輔酶Q1()(氧化型）中來製得還原型輔酶Q10。然而，如此般所得之還原型輔酶Q1()，不一定能以高純度的狀態來取得，例如容易取得的形態爲含有以氧化型輔酶Q1Q爲首的雜質之低純度結晶、半固狀或油狀物。如此般’在還原反應下，就算是獲得完全或幾乎不含氧化型輔酶Q1(>之還原型輔酶Q1q之反應混合物，仍極難獲得高品質的還原型輔酶Q1()之結晶。又’還原型輔酶Q1q，易被分子氧氧化成氧化型輔酶 Q10。在工業規模之製造上，要完全除去氧相當困難，且各操作所需時間係實驗室規模的製造上所無法相比之極長時 ____3___ 本紙張尺度適用中國國豕標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂： A7 1235146 _____Β7___________ 五、發明說明（1 ) 間，因此所殘存的氧會產生極大影響。該氧化，和難除去性的氧化型輔酶Qh之附帶產生及混入製品中所造成之產率、品質面的問題有直接關聯。如此般，如何將還原型輔酶Qio安定化、亦即如何防護其遭受氧化乃非常重要的課題，但由於目前爲止還沒有市售的還原型輔酶Qi〇,故幾乎沒有任何硏究是關於如何安定何持還原型輔酶Qn之方法等。只有WO01/52822A1 提到使用還原劑之安定化方法及組成物。〔發明之摘述〕本發明係有鑑於上述問題，其目的係提供一簡便的還原型輔酶Q1()之安定化方法，並提供出能簡便且高效率地製得高品質的還原型輔酶Q1()之結晶化方法。本發明人等，爲解決上述問題經深入硏究的結果發現出，還原型輔酶Q1Q在少量強酸之存在下，能使其對分子氧之氧化極度的安定化，且藉由在強酸狀態下結晶化，能以氧化型輔酶Q1()之伴隨產生最小化的狀態來製得高品質的還原型輔酶Q1()結晶，而達到本發明之完成。亦即，本發明之還原型輔酶Q1Q之安定化方法，其特徵在於，藉由使還原型輔酶Q1()和含強酸之溶劑接觸來進行處理，以防護還原型輔酶Q1()遭受分子氧的氧化。又本發明之還原型輔酶Q1q之結晶化方法，其特徵在於，使還原型輔酶Q1q在含強酸之溶劑中結晶化。〔發明之詳細揭示〕以下詳細說明本發明。 _____ 4__ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ! !丨丨丨訂------ *5^邊 A7 1235146 B7 五、發明說明（3 ) 本發明中，爲抑制分子氧所造成之從還原型輔酶Q10 氧化成氧化型輔酶Qi〇而取得高品質的還原型輔酶Q1(>結晶，或爲了安定地理還原型輔酶，係使用強酸。上述強酸並沒有特別的限制，例如較佳爲在水溶液中 pKa爲2.5以下者，更佳爲2.0以下，特佳爲ι·5以下，再佳爲1.0以下。當強酸爲硫酸般之多價酸時，上述pKa値代表數値最小之第1段的値。強酸之具體例可列舉如硫酸、氯化氫（含鹽酸）、磷酸等的無機酸；甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸等的磺酸，三氟醋酸、三氯醋酸等的羧酸等有機酸等等。其中較佳爲硫酸、氯化氫、磷酸等的無機酸，基於後述之結晶化後使該強酸蒸發之觀點等，最佳爲氯化氫。強酸之用量雖依強酸之種類會有不同，但普通只要觸媒量以上即可，相對於還原型輔酶Qiq1莫耳，較 0·1臭耳％以上，更佳爲1莫耳％以上。上限雖沒有特^ 限制，但考慮到經濟性等，較佳爲1000莫耳％以下、爲1〇〇莫耳％以下。，更佳觸亦i發明中，藉由使還原型輔酶Qi0和含強酸之溶劑接觸來進fr處理，可防護其受分子氧之氧化，又，= 醒輔酶Q,。在*麵之麵φ進行結晶化^遊質_原型_Q1。結晶。 τ獲㈣品別的ί劑巾之_題雖㈣關齡有，，並沒有特艮疋，但相對於溶劑重量之強酸莫耳量，鲂、 0.1mm〇i/kg μ μ ^ 較佳爲 8义上’更佳爲lmm〇l/kg以上。又，卜上述強酸

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A7 1235146 五、發明說明（f ) ，在達成防護氧化之目的後，視需要，可藉中和、蒸發、分液、洗淨等來除去，考慮到這點，當然基於使用目的及所得效果，較佳爲使用必須最小量。上述還原型輔酶Q!0和含強酸的溶劑進行接觸，或還原型輔酶Q1Q在含強酸的溶劑中進行結晶化時，可形成均一系或不均一系。系之具體例可列舉如：還原型輔酶Q10 、強酸、溶劑所組成之均一液相，含還原型輔酶Q1()之有機溶劑和含強酸之水相所組成之不均一相，還原型輔酶 Q1〇相和含強酸之水相所組成之不均一相等等。當然，還原型輔酶Qio和強酸之接觸效率高的系，較適用於氧化防護〇本發明可使用之溶劑並沒有特別的限制，可列舉烴類、脂肪酸酯類、醚類、醇類、脂肪酸類、酮類、氮化合物類(含腈類、醯胺類）、硫化合物類、水等。作爲烴類，並沒有特別的限制，可舉例如脂肪族烴、芳香族烴、鹵化烴等。較佳爲脂肪族烴、芳香族烴，更佳爲脂肪族烴。作爲脂肪族烴，不拘環狀、非環狀、飽和、不飽和，通常是使用碳數3〜20，較佳爲碳數5〜12者。基於結晶化產率的觀點特佳爲非環狀的脂肪族烴。作爲其具體例，可舉例如丙烷、丁烷、異丁烷、戊烷、2 -甲基丁烷、環戊烷、2 -戊烯、己烷、2 -甲基戊烷、 2,2-二甲基丁烷、2,3 -二甲基丁烷、甲基環戊烷、環己烷、1 -己烯、環己烯、庚烷、2 -甲基己烷、3 -甲基己烷 6 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線< A7 1235146 五、發明說明（y ) 、2,3 -二甲基戊烷、2,4-二甲基戊烷、甲基環己烷、1 -庚烯、辛烷、2,2,3 -三甲基戊烷、乙基環己烷、1 -辛烯、壬烷、2,2,5 -三甲基己烷、1 -壬烯、癸烷、1 -癸烯、對S烷、十一碳烷、十二碳烷等等。其中，較佳爲碳數5〜8之飽和脂肪族烴，較佳爲使用碳數5之戊烷、2-甲基丁烷、環戊烷(稱戊烷類）；碳數6 之己烷、2 -甲基戊烷、2,2-二甲基丁烷、2,3-二甲基丁烷、甲基環戊烷、環己烷(稱己烷類）；碳數7之庚烷、2-甲基己烷、3 -甲基己烷、2,3-二甲基戊烷、2,4-二甲基戊烷、甲基環己烷(稱庚烷類）；碳數8之辛烷、2,2,3 -三甲基戊烷、異辛烷、乙基環己烷（稱辛烷類）；以及其等之混合物。特別是上述庚類，其防護還原型輔酶Q1()受氧化之效果有特高的傾向故更佳；基於結晶化產率的觀點最佳爲庚院。作爲芳香族烴並沒有特別的限制，通常是使用碳數 6〜20、較佳爲碳數6〜12、更佳爲碳數7〜10者。具體例可列舉出：苯、甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯、乙基苯、異丙苯、均三甲苯、蔡滿、丁基苯、對傘花烴、環己基苯、二乙基苯、戊基苯、二戊基苯、十二烷基苯、苯乙烯等等。較佳爲甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯、乙基苯、異丙苯、均三甲苯、萘滿、丁基苯、對傘花烴、環己基苯、二乙基苯、戊基苯。更佳爲甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯、異丙苯、萘滿，最佳爲異丙苯。 7 __ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公爱1 " (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 1235146 五、發明說明（έ ) 鹵化烴不拘環狀、非環狀、飽和、不飽和，並沒有特別的限制，但以使用非環狀者爲佳。較佳爲氯化烴、氟化烴，更佳爲氯化烴。又，可使用碳數1〜6、較佳爲碳數 1〜4、更佳爲碳數1〜2者。其具體例可舉例如··二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，1 -二氯乙烷、1，2-二氯乙烷、1，1，1 -三氯乙烷、l，l，2 -三氯乙烷、1，U，2-四氯乙烷、1，1，2,2-四氯乙烷、五氯乙烷、六氯乙烷、1，1-二氯乙烯、1,2 -二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、1，2-二氯丙院、1，2,3 -二氯丙院、氯苯、 1，1，1，2-四氟乙烷等等。較佳爲二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，1 -二氯乙烷、 1，2 -二氯乙烷、1，1，1 -三氯乙烷、1，1，2-三氯乙烷、1，1 -二氯乙烯、1，2-二氯乙烯、三氯乙烯、氯苯、一四氟乙烷。更佳爲二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烯、三氯乙烯、氯苯、1，1，1，2 -四氟乙烷。作爲脂肪酸酯類並沒有特別的限制，可舉例如：丙酸酯、乙酸酯、甲酸酯等。較佳爲乙酸酯、甲酸酯，更佳爲乙酸酯。作爲酯基並沒有特別的限制，可舉例如碳數1〜8 之烷基酯或芳烷基酯等，較佳爲碳數之院基酯，更佳爲碳數1〜4之烷基酯。作爲丙酸酯可舉例如丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丁酯、丙酸丁酯、丙酸異戊酯等。作爲乙酸酯可舉例如：乙酸甲_、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸骞丁酯、乙酸第二丁酯 8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公复）^---- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -----訂------I-- 1235146 A7 ______B7_ 五、發明說明（η ) 、乙酸戊酯、乙酸異戊酯、乙酸第二己酯、乙酸環己酯、乙酸苄酯等。較佳爲乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、乙酸第二丁酯、乙酸戊酯、乙酸異戊酯、乙酸第二己酯、乙酸環己酯。更佳爲乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯，最佳爲乙酸乙酯。作爲甲酸酯可舉例如甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸異丙酯、甲酸丁酯、甲酸異丁酯、甲酸第二丁酯、甲酸戊酯等。較佳爲甲酸甲醋、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸丁酯、甲酸異丁酯、甲酸戊酯，最佳爲甲酸乙酯。作爲醚類，不拘環狀或非環狀，又不拘飽和或不飽和，並沒有特別的限制，但使用飽和者爲較佳。通常是使用碳數3〜2〇、較佳爲碳數4〜η、更佳爲碳數4〜8者。具體例可舉例如：二乙基醚、甲基特丁基醚、二丙基醚、一異丙基醚、一丁基醚、二己基醚、乙基乙烯醚、丁基乙烯醚、苯甲醚、苯乙醚'丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二噁烷、呋喃、2-甲基呋喃、四氫呋喃、四氫毗喃、乙二醇二甲基醚、乙二醇二乙基醚、乙二醇二丁基醚、乙二醇單甲基醚、乙二醇單乙基醚、乙二醇單丁基醚等等。較佳爲二乙基醚、甲基特丁基醚、二丙基醚、二異丙基醚、二丁基醚、二己基醚、苯甲醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二噁烷、2-甲基呋喃、四氫呋喃、四氫毗喃、乙二醇二甲基醚、乙二醇二乙基醚、乙二醇二丁基醚、乙二醇單甲基醚、乙二醇單乙基醚。更佳爲二乙基醚 ___9 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐)— 〜 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 1235146 _____Β7____ 五、發明說明（习）、甲基特丁基醚、苯甲醚。最佳爲甲基特丁基醚。作爲醇類，不拘環狀或非環狀，又不拘飽和或不飽和，並沒有特別的限制，但以使用飽和者爲較佳。通常是使用碳數1〜20、較佳爲碳數1〜12、更佳爲碳數1〜6。其中較佳爲碳數1〜5之1價醇、碳數2〜5之2價醇、碳數3之3 價醇。作爲1價醇，可舉例如：甲醇、乙醇、1 _丙醇、2 -丙醇、1- 丁醇、2 - 丁醇、異丁醇、特丁醇、1-戊醇、2 -戊醇、3_戊醇、2 -甲基—1 — 丁醇、異戊醇、特戊醇、 3 -甲基-2- 丁醇、新戊醇、1 一己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2 -戊醇、2 -乙基-1 一丁醇、1 一庚醇、2 -庚醇、3 -庚醇、1 -辛醇、2 -辛醇、2 -乙基-1 -己醇、 1 -壬醇、1 -癸醇、1 -十一烷醇、1 -十二烷醇、烯丙醇、丙炔醇、苄醇、環己醇、1 -甲基環己醇、2 -甲基環己醇、3-甲基環己醇、4-甲基環己醇等等。較佳爲甲醇、乙醇、1-丙醇、2 -丙醇、1- 丁醇、2 -丁醇、異丁醇、特丁醇、1 -戊醇、2 -戊醇、3 -戊醇、 2 -甲基-1 - 丁醇、異戊醇、特戊醇、3 -甲基-2 - 丁醇、新戊醇、1-己醇、2 -甲基-1-戊醇、4 -甲基- 2 -戊醇、2 -乙基-1 - 丁醇、環己醇。更佳爲甲醇、乙醇、1 -丙醇、2 -丙醇、1 - 丁醇、2 - 丁醇、異丁醇、特丁醇、1 -戊醇、2 -戊醇、3 -戊醇、2 -甲基-1- 丁醇、異戊醇、特戊醇、3 -甲基-2 - 丁醇、新戊醇。再佳爲甲醇、乙醇、1 -丙醇、2 -丙醇、1 - 丁醇、2 - 丁醇、異丁醇、2- __ 10 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1235146 A7 _B7_ 五、發明說明（？）甲基-1 - 丁醇、異戊醇。最佳爲乙醇。作爲2價醇，可舉例如：1，2-乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，2- 丁二醇、1，3- 丁二醇、1，4- 丁二醇、2,3 - 丁二醇、1，5 -戊二醇等等。較佳爲1，2-乙二醇、 1，2-丙二醇、1，3-丙二醇，最佳爲1，2-乙二醇。作爲3價醇，可使用例如丙三醇等。作爲脂肪酸類，例如可列舉甲酸、乙酸、丙酸等，較佳爲甲酸、乙酸，最佳爲乙酸。作爲酮類並沒有特別的限制，可使用碳數3〜6者。其具體例，可舉例如丙酮、甲基乙基酮、甲基丁基酮、甲基異丁基酮等。較佳爲丙酮、甲基乙基酮，最佳爲丙酮。作爲腈類，不拘環狀或非環狀，又不拘飽和或不飽和，並沒有特別的限制，但以使用飽和者爲較佳。通常是使用碳數2〜20、較佳爲碳數2〜12、更佳爲碳數2〜8者。作爲其具體例可舉例如：乙腈、丙腈、丙二腈、丁腈、異丁腈、丁二腈、戊腈、戊二腈、己腈、庚基氰化物、辛基氰化物、^院腈、十二院腈、十三垸腈、十五院腈、十八烷腈、氯乙腈、溴乙腈、氯丙腈、溴丙腈、甲氧基乙腈、氰基酯酸甲酯、氰基醋酸乙酯、甲苯腈、苄腈、氯苄腈、溴苄腈、氰基苯甲酸、硝基苄腈、茴香腈、肽腈、溴甲苯腈、甲基氰基苯甲酸鹽、甲氧基苄腈、乙醯苄腈、萘腈、聯苯腈、苯基丙腈、苯基丁腈、甲基苯基乙腈、二苯基乙腈、萘基乙腈、硝基苯基乙腈、氯苄基氰化物、環丙烷腈、環己烷腈、環庚烷腈、苯基環己烷腈、甲苯環己 11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -^1 ϋ ϋ H ϋ n^eJ« ϋ n ϋ ϋ ϋ A7 1235146 _ ___B7 _ 五、發明說明（，。）烷腈等等。較佳爲乙腈、丙腈、丁腈、異丁腈、丁二腈、戊腈、氯丙腈、氰基酯酸甲酯、氰基醋酸乙酯、甲苯腈、苄腈，更佳爲乙腈、丙腈、丁腈、異丁腈，最佳爲乙腈。作爲除腈類外之氮化合物類’可列舉如：硝基甲烷、三乙胺、吡啶、甲醯胺、N_甲基甲醯胺、N，N-二甲基甲醯胺、N，N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯烷酮等。作爲硫化合物類，例如可列舉二甲亞硼、環丁硼等。上述溶劑中，較佳爲使用醇類、酮類、氮化合物類(含腈類、醯胺類）、水，更佳爲碳數1〜3之醇類、丙酮、乙腈、或水。在使用醇、或醇和水之混合溶劑時，可使本發明之效果發揮到極大。使用乙醇和水之混合溶劑的情形，作爲乙醇和水的比例，相對於乙醇和水的合計量乙醇較佳爲80w/w%以上，更佳爲90w/w%以上，再佳爲91 w/w%以上，更佳爲 92w/w%以上，特佳爲93w/w%以上。其上限較佳爲99.5 w/w%，更佳爲99 w/w%，再佳爲98 w/w%，特佳爲97 w/w%。通常適當的實施範圍爲90〜99.5w/w%，最適當的實施範圍爲93〜97w/w%。溶劑中還原型輔酶Q1()之濃度並沒有特別的限制，但基於還原型輔酶Qh有溶液濃度越高越不易被氧化的傾向，故還原型輔酶Q1()重量相對該溶劑之重量，較佳爲 1 w/w%以上，更佳爲以2w/w%以上的濃度來處理或進行結晶化，而更具效果。上限雖沒有特別的限定，但基於實際 ______ _12____ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1235146 B7 五、發明說明（I丨） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 操作性的觀點係取400w/w%以下，較佳爲2〇〇W/W%以下’ 更佳爲l〇〇w/w%以下，特佳爲50w/w%以下。又，本發明中處理還原型輔酶Qi〇之操作並沒有特別的限制，可列舉如萃取、水洗、濃縮、管柱層析等’這些操作中還原型輔酶Qi〇之氧化能受到適當的防護。 J吉晶化所用的溶劑可列舉和上述相同者’如前述般較佳爲醇類、酮類、氮化物合物(含腈類、醯胺類）、水。作爲適當的溶劑，具體而言有乙醇等之碳數1〜3的醇類、丙酮、乙腈或水，最佳爲乙醇、或乙醇/水之混合溶劑。又，使用醇類及/或酮類的情形，當共存有少量水時’ 不僅前述之安定化，同時能適當減低還原型輔酶Qiq之溶解性而獲得高產率，並改善漿料特性’特別値得注目的是可大幅改善固液分離性(過濾性）。水和醇類及/或酮類之比例，雖依溶劑種類會有不同而無法一槪而論，例較佳爲，相對於水和醇類及/或酮類之合計量，醇及嗣之合計爲90w/w%以上，更佳爲91 w/w%W 上，再佳爲92w/w%以上，特佳爲93w/w%以上。其上限較佳爲99.5w/w%，更佳爲99w/w%，再佳爲98w/w%，特佳爲97w/w%。通常適當的實施範圍爲90〜99.5w/w%，最適當的實施範圍爲93〜97w/w%。本發明之還原型輔酶Qi〇之結晶化’可單獨或適當組合冷卻、濃縮、溶劑取代、弱溶劑的使用等一般的結晶化操作來實施。特別是，較佳爲使用或倂用冷卻操作(冷卻結晶析出）。 13 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) A7 1235146 _ B7 _ 五、發明說明（fZ ) 又，本發明之還原型輔酶Qn之結晶化，針對精製結晶析出特別的有效，其可一倂除去以往公知的方法所得、或後述還原方法等所製造出之含有還原型輔酶Qh>之反應液或萃取液中所含雜質。藉此，可從母液中除去共存的雜質，特別是除去通常不容易除去之構造類似的類化合物(具體而言有還原型輔酶Q9、還原型輔酶Q8、還原型輔酶Q7 等）。醇類及/或酮類乃除去上述構造類似的化合物特別有效的溶劑。當然，把上述精製結晶析出當作再精製還原型輔酶QlO結晶之再結晶法也非常有效。還原型輔酶Q1()之結晶化溫度，由於依結晶化溶劑或結晶化方法會有不同，並無法一槪而論，但較佳爲25°C以下，更佳爲20°C以下，再佳爲15t以下，特佳爲l〇°C以下。下限較佳爲系之固化溫度，通常適當的實施範圍爲 0〜25〇C 〇爲了使各種雜質之混入還原型輔酶Q1(>中成爲最小化、又爲獲得良好特性的漿料，結晶析出時，較佳爲控制每單位時間的結晶析出量。較佳之單位時間的結晶析出量，例如控制在每單位時間能結晶析出全結晶析出量之約50% 量之速度以下(即最大爲50%量/時間），較佳爲每單位時間能結晶析出全結晶析出量之約25%量之速度以下(即最大爲 25%量/時間）。又，冷卻結晶析出時，其冷卻速度通常爲約 40°C/時間以下，較佳爲約20°C/時間以下。還原型輔酶Q1()之結晶化較佳爲在強制流動下實施。爲抑制過飽和的形成，而順利地進行核化、結晶成長，或 14 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 1235146 ____B7 _ 五、發明說明（〇 ) 基於高品質之觀點，每單位容積之攪拌所需動力，通常爲約0.01kW/m3以上，較佳爲約O.lkW/m3以上，更佳爲約 0.3kW/m3以上的流動。上述強制流動，通常是藉攪拌葉片之轉動來實施，但只要能獲得該流動則不一定要使用攪拌葉片，例如可利用液體循環之方法等。在進行結晶化時，爲抑制過飽和之形成而順利地進行核化、結晶成長，較佳爲添加種晶。結晶化濃度，雖依結晶化溶劑及結晶化方法會有不同，並無法一槪而論，但相對於結晶化終了時結晶化溶劑之重量，還原型輔酶Qw之重量較佳爲約15w/w%以下，更佳爲約13 w/w%以下，再佳爲約10 w/w%以下。基於生產性之觀點，其下限通常爲約lw/w%，較佳爲約2 w/w%。通常適當的實施範圍爲5〜10w/w%。如此所得之還原型輔酶Q1()之結晶，較佳爲例如藉由離心分離、加壓過濾、減壓過濾等來實施固液分離，再視需要進行濾餅洗淨，而以濕體的形態來取得。又，進一步將濕體置入內部經非活性氣體取代之減壓乾燥器(真空乾燥器），於減壓下乾燥，而能以乾體的形態來取得；而以乾體的形態來取得爲較佳。上述還原型輔酶Qio之結晶化中，爲除去結晶化時所用之強酸，可採用的方法有：在結晶化後用鹼(例如氫氧化鈉等鹼金屬氫氧化物）中和強酸之方法；或使用氯化氫等揮發性的強酸，在結晶化後使該強酸蒸發之方法等。結晶化後用鹼(例如氫氧化鈉等的鹼金屬氫氧化物，氫 15 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 1235146 五、發明說明（~ ) 氧化鎂等的鹼土類金屬氫氧化物’碳酸鈉等的鹼金屬碳酸鹽，碳酸氫鈉等的鹼金屬碳酸氫鹽等)來中和強酸時，爲了從母液溶解除去中和所伴隨產生之鹽類’在進行結晶之分離時，較佳爲在系中共存有用來溶解除去上述鹽類之水。 —般可藉由在水共存下結晶化、或在進行結晶分離時添加水等來達成。本發明，藉由在脫氧環境氣氛下、具體而言在非活性氣體氣氛下、減壓下及/或沸騰下實施’可進一步提高氧化 P方止/效果。較佳爲至少在非活性氣體氣氛下實施。非活性氣體可列舉氮氣、碳酸氣、氦氣、氬氣、氫氣等，較佳爲氮氣。其次，針對適於本發明使用之還原型輔酶之合成法、亦即從氧化型輔酶Q1Q還原成還原型輔酶Qio之反應作說明。本發明所使用之還原型輔酶Qi〇，如前述般可爲合成、發酵、萃取自天然物等而按照公知方法所得者，較佳爲，將既有的高純度輔酶Qi〇等之氧化型輔酶Qn、或氧化型輔酶Qio和還原型輔酶Qi0之混合物，藉由用一般的還原劑實施還原來製得。首先’針對將氧化型輔酶Qiq還原之方法作說明。由於還原型輔酶Qio易遭受分子氧之氧化而伴生氧化型輔酶Qio，故作爲還原過程之溶劑’較佳爲使用對還原型輔酶Q1Q具有高氧化防護作用之溶劑。該溶劑較佳爲使用擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中之至少1種，最 16 _ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-1 I I n i_i n n 一-OJ· ϋ ·ϋ *ϋ ϋ I I I I 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1235146 A7 p.__B7___ 五、發明說明（iJT ) 佳爲烴類。上述溶劑中，較佳爲考慮沸點、粘性等的性質來作選疋。例如，所具備的沸點（1大氣壓下，約3〇〜15〇它）係可適當進行提昇龍度之加溫，且額赌測之乾燥除去及結晶析出過濾時的溶劑回收，又所具備的熔點（約20r 以下，較佳爲約10°c以下，更佳爲約以下)係在室溫下處理時或冷卻至室溫以下時仍不易固化，又具備低粘性(2〇 °C下約l〇cp以下等）。基於工業之作業上的觀點，較佳爲常溫下不易揮發者，例如沸點約80°c以上者，更佳爲沸點約90°C以上者。上述溶劑中，作爲還原反應之溶劑，特佳爲使用和水相溶性低的溶劑，其能將後述之還原劑和來自還原劑之雜質從水相萃取除去，而有助於高效率的精製、取得還原型輔酶Qi〇。還原型輔酶Q1()有溶液濃度越高越不易被氧化的傾向。由於還原型輔酶Qi〇對上述溶劑顯示高溶解性，故在這點上述溶劑係適用於氧化防護。爲防護還原型輔酶Q10之氧化之較佳濃度，視溶劑種類等的不同雖無法一槪而論，但還原型輔酶Q1G對該溶劑之濃度，通常爲lw/w%以上，較佳爲2w/w%以上。上限雖沒有特別的限定，但基於實際操作性的觀點係取400w/w%以下，較佳爲200w/w%以下，更佳爲l〇〇w/w%以下，特佳爲50w/w%以下。因此，藉由使用上述溶劑，不想要之氧的副反應，經由還原過程會形成最小化。 17 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 1235146 ___B7__ 五、發明說明（A ) 還原反應，可在上述溶劑中，使用氫化金屬化合物、鐵(金屬或鹽形態的鐵）' 鋅(金屬形態的鋅）、連二亞硫酸類、抗壞血酸類等作爲還原劑來實施。作爲氫化金屬化合物並沒有特別的限制，例如可舉氫化硼鈉、氫化鋰鋁等。上述氫化金屬化合物的用量，依氫化金屬化合物種類之不同無法一槪而論，通常爲理論氫當量之1〜3倍量。使用鐵或鋅之還原，通常是用酸來實施。酸並沒有特別的限制，可舉例如醋酸等的脂肪酸，甲磺酸等的磺酸，鹽酸和硫酸等的無機酸等。較佳爲無機酸，更佳爲硫酸。鐵之用量沒有特別的限制，相對於氧化型輔酶Q1()之加入重量，例如爲約1/5重量以上。其上限雖沒有特別的限制，但基於經濟性的觀點等，係採約2倍重量以下。鐵不拘金屬鐵的形態，也能使用硫酸鐵(II)等鹽的形態。辞之用量沒有特別的限制，相對於氧化型輔酶Q1Q之加入重量，例如爲約1/10重量以上。其上限雖沒有特別的限制，但基於經濟性的觀點等，係採約2倍重量以下。連二亞硫酸類並沒有特別的限制，通常爲連二亞硫酸之鹽類。連二亞硫酸之鹽類並沒有特別的限制，較佳爲鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽、銨鹽等，更佳爲鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等的鹼金屬鹽，最佳爲鈉鹽。連二亞硫酸之用量沒有特別的限制，相對於氧化型輔酶Q1()之加入重量，例如爲約1/5重量以上，較佳爲約2/5 重量以上，更佳爲約3/5重量以上。雖過多也不致產生問 18 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1235146 A7 ___B7_______ 五、發明說明（ιΠ ) 題，但基於經濟性的觀點等，係採約2倍重量以下，較佳爲同重量以下。因此，適當的實施範圍爲約2/5重量〜約相同重量的範圍。抗壞血酸類並沒有特別的限制，不限於抗壞血酸’例如可舉rhamno -抗壞血酸、arabo _抗壞血酸、gluco -抗壞血酸、fuco -抗壞血酸、glucohepto -抗壞血酸、xylo -抗壞血酸、galacto -抗壞血酸、gulo -抗壞血酸alio -抗壞血酸、erythro -抗壞血酸、6 -脫氧抗壞血酸等的抗壞血酸類；又亦可爲其等之酯體或鹽類。具體而言，可舉例如 L-抗壞血酸、L -抗壞血酸十六烷酯、L -抗壞血酸十八烷酯、D - ambo-抗壞血酸等。在製造還原型輔酶Q1()時，雖上述任一抗壞血酸類均可使用，但考慮到和生成之還原型輔酶Q1Q之分離容易性等的觀點，在上述抗壞血酸類中，較佳爲使用水溶性者，基於取得容易性、價格等之觀點，更佳爲L -抗壞血酸、D - arabo -抗壞血酸等的單體〇上述抗壞血酸之用量並沒有特別的限制，只要是能將氧化輔酶Qio轉換成還原型輔酶Q1()之有效量即可，相對於氧化型輔酶Qio，通常爲1倍莫耳量以上，較佳爲1_2倍旲耳量以上。其上限沒有特別的限制，考慮經濟性時，通常爲10倍莫耳量以下，較佳爲5倍莫耳量以下，更佳爲3 倍莫耳量以下。上述還原劑中，基於還原能力、產率、品質之觀點，較佳爲鋅、連二亞硫酸類、抗壞血酸類，特佳爲連二亞硫 19 $張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）〜----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-ϋ n ·ϋ I n 一-eJ· ϋ ϋ ·ϋ ϋ 11 ϋ· I A7 1235146 _____B7_ 五、發明說明（你）酸類(具體而言爲連二亞硫酸鹽）、抗壞血酸類。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 還原反應中，可適當的倂用前述之醇類及/或水。水，特別適用於還原劑爲鐵、鋅、連二亞硫酸類的情形。使用氫化金屬化合物和抗壞血酸類來當作還原劑時，可使用醇類。水、醇類之倂用，可發揮水、醇類之特性，而提昇反應速度和反應產率等。以下詳細說明較佳的還原方法。使用連二亞硫酸類之還原較佳爲，使用水、和擇自上述烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中至少一種有機溶劑(較佳爲烴類，更佳爲脂肪族烴，其中較佳爲庚烷類，特別是庚烷)所組成之混合溶劑系來實施。這時，反應時之pH，基於產率等之觀點，通常爲PH7以下，較佳爲pH3〜7，更佳爲pH3〜6。pH可用酸(例如鹽類和硫酸等之無機酸）、鹼( 例如氫氧化鈉等的鹼金屬氫氧化物)來作調整。使用連二亞硫酸類之還原中，水的用量沒有特別的限制’只要是能適度溶解還原劑之連二亞硫酸類之量即可，例如，連二亞硫酸類對水的重量，通常調整爲30w/w%以下，較佳爲20w/w%以下。又，基於生產性等之觀點，通常爲lw/w%以上，較佳爲5w/w%以上，更佳爲l〇w/w%以上。使用抗壞血酸類之還原，在上述烴類、脂肪酸酯類、醚類、腈類中，特別是和水相溶性高的溶劑之醚類、腈類中之至少1種，具體而言可使用四氫呋喃、二噁烷、乙腈等來實施。以使用前述之醇類及/或酮類(較佳爲，和水相 ____ 20 _ __ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1235146 五、發明說明（i?) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 溶性高之醇類及/或酮類(具體而言，醇類爲碳數1〜5、較佳爲碳數1〜4、更佳爲碳數1〜3之1價或2價(較佳爲1價)醇 ’酮類爲丙酮、甲基乙基酮等)爲特佳。亦即，使用抗壞血酸類之還原中，較佳爲使用醇類及/或水溶性有機溶劑。又，基於製造還原型輔酶Q1Q時可促進反應之觀點(例如，降低反應溫度、縮短反應時間等），可在鹼性物質或亞硫酸氫鹽等的具有反應促進效果之添加劑共存下來實施。上述鹼性物質並沒有特別的限制，例如不拘無機化合物、有機化合物均可使用。無機化合物並沒有特別的限制，可舉例如金屬（較佳爲鹼金屬、鹼土金屬等）的氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽、銨等。其代表者可舉例如氫氧化鈉等的鹼金屬氫氧化物、碳酸鈉等的鹼金屬碳酸鹽、碳酸氫鈉等的鹼金屬碳酸氫鹽、碳酸鎂等的鹼土類金屬碳酸鹽等等。有機化合物並沒有特別的限制，可舉例如三乙胺等的胺等。鹼性物質中，較佳爲金屬(較佳爲鹼金屬、鹼土類金屬等）之碳酸鹽、碳酸氫鹽、銨等的無機化合物，三乙胺等的胺等之有機化合物，即屬弱鹼性物質者（弱鹼或弱鹼性) 。更佳爲上述弱鹼性的無機化合物。亞硫酸氫鹽，例如可舉亞硫酸氫鈉等的鹼金屬亞硫酸氫鹽等。添加劑的量，只要是能發揮所期待程度的反應促進效果之量（有效量）即可，並沒有特別的限制，同時考慮經濟性時，相對於抗壞血酸類，通常爲20倍莫耳量以下，較佳爲10倍莫耳量以下，更佳爲5倍莫耳量以下，再佳爲2倍 21 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1235146 A7 _ B7__ 五、發明說明（y ) 莫耳量以下。下限並沒有特別的限制，通常爲〇.〇1产莫耳量以上，較佳爲〇·〇5倍莫耳量以上，更佳爲0el倍^^量以上，再佳爲0.2倍莫耳量以上。還原反應，較佳爲在強制流動下來實施。每單位容^ 之攪拌所需動力，通常爲約0.01kW/m3以上，Λ 較佳爲約 O.lkW/m3以上，更佳爲約〇.3kW/m3以上。上述骀〜观制流動，通常是藉攪拌葉片之轉動來實施，但只要能壤得該流動則不一定要使用攪拌葉片，例如可利用液體循壤之等〇還原溫度，會因還原劑的種類和量而有不同，並無法一槪而論。例如，在使用連二亞硫酸類進行還原時，=常爲100°c以下，較佳爲80°c以下，更佳爲60°c以下。^限爲系之固化溫度。因此，還原通常是在0〜、_ 佳爲0〜80°C左右、更佳爲0〜60°C左右來實施。使用抗壞血酸類之還原中，通常爲30°C以上，較佳爲4(TC以上，更佳爲50°C以上。上限爲系之沸點。因此，還原通常是在 30〜150°C左右、較佳爲40〜120°C左右、更佳爲50〜1〇〇。(3 左右來實施。反應濃度並沒有特別的限制，相對於溶劑重量，氧化型輔酶Q1()之重量較佳約lw/w%以上、更佳爲3w/w%以上、再佳爲10w/w%以上、特佳爲15w/w%以上。上限並沒有特別的限制，普通約60w/w%以下、較佳爲50w/w%以下、更佳爲40w/w%以下、特佳爲30w/w%以下。因此，反應濃度一般在約1〜60w/w%、較佳爲約3〜50w/w%、更佳爲約本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

22 __ 1235146 a7 _____ 五、發明說明（y| ) 10〜40w/w%下來實施。還原反應，通常可在48小時以內、較佳爲24小時以內、更佳爲10小時以內、再佳爲5小時以內完成。從如此般所得之還原反應液中，採取含有所產生的還原型輔酶Qh之有機相，視需要(較佳爲），例如用水或食鹽水等來反覆進行有機相之水洗，可完全除去夾雜物。特別是在使用連二亞硫酸類作爲還原劑時，爲完全除去來自連二亞硫酸類之夾雜物或使水相之pH安定化，較佳爲實施反覆水洗。又，爲獲得含有所要的還原型輔酶Q1G之溶液，視需要可將還原反應液濃縮、實施溶劑取代。上述還原反應及後處理最好在脫氧環境氣氛下來實施，令人吃驚的是發現到，特別是使用連二亞硫酸類之還原反應，能大幅提昇還原反應產率並減少還原劑用量。脫氧環境氣氛，可藉由利用非活性氣體之取代、減壓、沸騰或其等的組合來達成。至少利用非活性氣體之取代、即使用非活性氣體環境氣氛是合適的。非活性氣體可舉例如氮氣、氦氣、氣、氫氣、碳酸氣等，較佳爲氮氣。以上，依據本發明，藉由使用上述強酸，在還原型輔酶之結晶化過程中，可使不理想之氧所產生的副反應形成最小化。又，藉由在強酸的存在下處理還原型輔酶 QiO，可防護其遭受分子氧的氧化，而使還原型輔酶Q10安定化，故能良好的實施萃取、水洗、濃縮、管柱層析等的操作。本發明之結晶化方法所得之還原型輔酶Q1Q結晶，其 23 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 1235146 ____Β7___ 五、發明說明（Ρ) 品質極高，還原型輔酶QW氧化型輔酶Qi〇之重量比98/2 以上、較佳爲99/1以上是可期待的。〔用以實施本發明之最佳形態〕以下列舉實施例來對本發明作更詳細的說明’但本發明並不限於該等實施例中。又，實施例中還原型輔酶Qio 之純度、還原型輔酶Q!。和氧化型輔酶Q!。之重量比係依下述HPLC分析來求得，但所得還原型輔酶Q1()之純度並非用來規定本發明的純度之界限値。同樣地，還原型輔酶 Q1〇和氧化型輔酶Qi〇之重量比也不是用來規定其上限値。 (HPLC分析條件）管柱：SYMMETRY C18(Waters 製），250mm(長度）， 4.6mm(內徑），移動相：C2H5OH : CH3OH=4 : 3(v : v)，檢測波長：210nm，流速：lml/min，還原型輔酶Qi〇之保持時間：9_1分，氧化型輔酶。之保持時間：13.3分。 (實施例1) 使100g氧化型輔酶Q!。(純度99.4%)於25t溶解於 l〇〇g庚烷。邊攪拌(攪拌所需動力0.3kW/m3)，邊緩慢添加將還原劑之連二亞硫酸鈉(純度75%以上）10g溶解於100ml 水而成之水溶液，於25t進行還原反應。2小時後，自反應液除去水相，用在飽和食鹽水100g添加0.1N鹽酸2g而成之洗淨液來對庚烷相進行6次水洗。以上所有的操作都在氮環境氣氛下實施。將該庚烷相於減壓下進行溶劑取代 ’ g周製成還原型輔酶Q1Q之l%(w/w)乙醇溶液。分別注入100g之該乙醇溶液，將表1所記載之各強 I紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公f ) _ ' ~ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 1235146 _B7_ 五、發明說明（A) 酸添加成相對乙醇爲l〇〇mm〇l/kg且相對還原型輔酶Q10爲 lOOOmol%，在空氣中攪拌(又關於氯化氫，係添加12N鹽酸）。24小時後乙醇溶液中還原型輔酶Q1Q/氧化型輔酶Q10 之重量比顯示於表1。又，爲比較起見，一倂顯示出添加醋酸(相對乙醇爲l〇〇mm〇l/kg)的情形、及未添加酸的情形表1 R 氯化氫 98.7/1.3 硫酸 98.8/1.2 甲磺酸 97.8/2.2 醋酸 59.0/41.0 對照(未添加酸） 54.0/46.0 R :還原型輔酶Q1()/氧化型輔酶Q1Q之重量比 (實施例2) 藉由和實施例1同樣的方法來取得還原型輔酶Q1()之庚烷溶液。將該庚烷溶液在減壓下進行溶劑取代，調製成還原型輔酶Q1()之l%(w/w)二甲基甲醯胺溶液。分別注入l〇〇g之該二甲基甲醯胺溶液，將表2所記載之各強酸添加成相對二甲基甲醯胺爲100mm〇l/kg且相對還原型輔酶Q1Q爲lOOOmol%，在空氣中攪拌(又關於氯化氫，係添加12N鹽酸）。24小時後二甲基甲醯胺溶液中還原型輔酶Q1Q/氧化型輔酶Q1Q之重量比顯示於表2。又，爲比較起見，一倂顯示出添加醋酸（相對二甲基甲醯胺爲 25 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 1235146 _B7_ 五、發明說明（4) 100mmol/kg)的情形、及未添加酸的情形。表2 R 氯化氫 99.2/0.8 硫酸 99.4/0.6 甲磺酸 99.0/1.0 醋酸 65.0/35.0 對照(未添加酸） 75.1/24.9 R :還原型輔酶Q1Q/氧化型輔酶Q1()之重量比 (實施例3) 在和實施例1同樣的方法所得之還原型輔酶Q1()之 l%(w/w)乙醇溶液100g中，將12N的鹽酸(氯化氫)添加成 100mm〇l/kg(相對乙醇）且相對還原型輔酶Q1G爲lOOOmol% ，於氮環境氣氛下攪拌。24小時後，乙醇溶液中還原型輔酶Q1G/氧化型輔酶Q!。之重量比爲99.4/0.6。 (實施例4) 在和實施例1同樣的方法所得之還原型輔酶Q1〇之 l%(w/w)乙醇溶液100g中，添加1N的鹽酸lg(換算成氯化氫，相對乙醇爲l〇mmol/kg且相對還原型輔酶Q1G爲 lOOmol%)，於空氣中攪拌。24小時後，乙醇溶液中還原型輔酶Qi〇/氧化型輔酶Qio之重量比爲98.7/1.3。 (實施例5) 在和實施例1同樣的方法所得之還原型輔酶Qio之 l%(w/w)乙醇溶液100g中，添加0.1N的鹽酸lg(換算成氯 26 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 1235146 ____B7____ 五、發明說明（A ) 化氫，相對乙醇爲lmmol/kg且相對還原型輔酶Q1G爲 lOmol%)，於空氣中攪拌。24小時後，乙醇溶液中還原型輔酶Qi〇/氧化型輔酶Qw之重量比爲98·7/1·3。 (實施例6) 在和實施例1同樣的方法所得之還原型輔酶Qio之 l%(w/w)乙醇溶液100g中，添加0.01N的鹽酸lg(換算成氯化氫，相對乙醇爲O.lmmol/kg且相對還原型輔酶Q10爲 lmol%)，於空氣中攪拌。24小時後，乙醇溶液中還原型輔酶Q1G/氧化型輔酶Q!g之重量比爲98·5/1·5。 (實施例7) 藉由和實施例1同樣的方法取得還原型輔酶Q1Q之庚烷相。將該庚烷溶液在減壓下進行溶劑取代，取得還原型輔酶Q1G之7%(w/w)乙醇溶液。在該乙醇溶液中添加1N鹽酸1.4g(換算成氯化氫，相對乙醇爲10mm〇l/kg且相對還原型輔酶Q1Q爲l2mol%)，邊於空氣中攪拌(攪拌所需動力爲 0.3kW/m3)，邊冷卻至2°C，獲得白色漿料。將所得漿料實施減壓過濾，依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥（20〜40°C，1〜30mmHg)，獲得9.5g白色的乾燥結晶( 有效產率95莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Ql()/氧化型輔酶Q1G之重量比爲99.1/〇.9，還原型輔酶Q1G之純度爲 98.9% 〇 (實施例8) 在結晶化時，除取代1N鹽酸而添加0.01N鹽酸1.4g( 27 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4 x 297公麓)- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丨:·裝

ii ϋ n 1 ϋ ϋ n^OJ· I ϋ .1 ϋ ϋ H A7 1235146 五、發明說明（纠） Ο (實施例11) 藉由和實施例i同樣的方法取得還原型輔酶Q10之庚烷相。將該庚烷溶液在減壓下進行溶劑取代，使用5%含水乙醇來取彳守is原型輔酶Qio之7%(w/w)乙醇溶液。在該乙醇溶液中添加1N鹽酸1.4g(換算成氯化氫，相對乙醇爲 10mm〇l/kg且相對還原型輔酶q1g爲l2m〇1%)，邊於空氣中攪拌(攪拌所需動力爲0.3kW/m3)，邊冷卻至2^，獲得白色漿料。將所得漿料實施減壓過濾(過爐性比實施例7良好），依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨（洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥 (20〜40°C，1〜30mmHg)，獲得9.7g白色的乾燥結晶（有效產率97莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Qi()/氧化型輔酶 Q10之重量比爲99·1/〇·9，還原型輔酶Q1Q之純度爲98.9% 〇 (實施例12) 除在氮環境氣氛下進行結晶化以外，係進行和實施例 11同樣的操作，獲得白色乾燥結晶9.7g(有效產率97莫耳 %)。所得結晶之還原型輔酶Q1G/氧化型輔酶Q1Q之重量比爲99.5/0.5，還原型輔酶。之純度爲"·3%。 (實施例13) 除所使用之氧化型輔酶Q1G之純度爲98.4%(含氧化型輔酶Q9l.〇〇%、氧化型輔酶Q80.3〇%、氧化型輔酶 Q70.〇4%)以外，和實施例1同樣的，取得還原型輔酶Q!o 29 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ϋ n n^OJ· n ϋ ϋ n ·ϋ n ϋ ·%- A7 1235146 ____B7___ 五、發明說明) (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 之庚烷相(含氧化型輔酶Q91.00%、氧化型輔酶Q80.30%、氧化型輔酶Q70.04%)。將該庚烷溶液在減壓下進行溶劑取代，取得還原型輔酶Q1G之7%(w/w)乙醇溶液。在該乙醇溶液中添加1N鹽酸1.4g(換算成氯化氫，相對乙醇爲 10mmol/kg且相對還原型輔酶Q1G爲12mol%)，邊於空氣中攪拌(攪拌所需動力爲〇.3kW/m3)，邊冷卻至2°C，獲得白色漿料。將所得漿料實施減壓過濾，依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°C，1〜30mmHg)，獲得9.5g白色的乾燥結晶(有效產率95莫耳％，含還原型輔酶Q90·52%，除去率48% ;未檢測出還原型輔酶Q8及還原型輔酶Q?)。所得結晶之還原型輔酶Q!。/氧化型輔酶Q10之重量比爲".1/0.9，還原型輔酶（^1()之純度爲98.9%。 (實施例14) %- 在100g乙醇中，添加l〇g氧化型輔酶Q1G、6g之L -抗壞血酸、3g碳酸氫鈉，於78°C攪拌，進行還原反應。3 小時後，冷卻至50°C，在反應液中加入l〇〇g庚烷、100g 脫氣水，冷卻至25°C。除去水層後，進一步用脫氣後的飽和食鹽水100g對庚烷相進行6次水洗。將該庚烷溶液在減壓下進行溶劑取代，使用5%含水乙醇來取得還原型輔酶 Qio之7%(w/w)乙醇溶液。在該乙醇溶液中添加1N鹽酸 l.4g(換算成氯化氫，相對乙醇爲10mm〇l/kg且相對還原型輔酶Q1Q爲12mol%)，邊於空氣中攪拌（攪拌所需動力爲 (h3kW/m3)，邊冷卻至2它，獲得白色漿料。將所得漿料實 30 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） A7 1235146 五、發明說明（4) 施減壓過濾，依冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°C，1〜30mmHg)，獲得9.5g白色的乾燥結晶（有效產率95莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶q1q/氧化型輔酶Q!。之重量比爲".I/O.9，還原型輔酶Q1G之純度爲 98.9%。 (實施例15) 藉由和實施例1同樣的方法，取得還原型輔酶q10之庚烷溶液。將該庚烷溶液在減壓下進行溶劑取代，取得還原型輔酶Q1Q之7%(w/w)丙酮溶液。在該丙酮溶液中添加 1N鹽酸1.4g(換算成氯化氫，相對乙醇爲10mm〇1/kg且相對還原型輔酶Q1q爲12mol%)，邊於空氣中攪拌(攪拌所需動力爲0.3kW/m3)，邊冷卻至2〇C，獲得白色漿料。將所得漿料實施減壓過濾，依冷丙酮、冷水、冷丙酮的順序來洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2。〇濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°C，1〜30mmHg)，獲得9.4g白色的乾燥結晶(有效產率94莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶qi〇/氧化型輔酶Q1G之重量比爲".VO·7，還原型輔酶qig之純度爲 99·0% 〇 (比較例2) 結晶化時，取代1N鹽酸而添加水1.4g，除此外係進行和實施例11同樣的操作，取得9.7g白色的乾燥結晶(有效產率97莫耳。/。）。所得結晶之還原型輔酶qiq/氧化型輔酶Q!。之重量比爲97·4/2·6，還原型輔酶Ql。之純度爲 31 t紙張尺度g中國國家標準（CNS)^^ (21〇 χ 297 — -- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 1235146 —--—_ _B7_____ 五、發明說明（3。） 97.2% 〇 (參考例1) 在表3所示之各種溶劑20g中，於25°C下溶解lg之還原型輔酶Q1q(還原型輔酶Q1()/氧化型輔酶Qio之重量比爲99·6/0·4)。在大氣中，於25°C攪拌24小時後，測定液中之還原型輔酶Q!。/氧化型輔酶Q1G之重量比，其結果顯於表3。表3 溶劑 R 庚烷 99.1/0.9 己烷 98.7/1.3 甲苯 98.8/1.2 氯仿 98.9/1.1 醋酸乙酯 98.9/1.1 甲基特丁基醚 98.6/1.4 四氫呋喃 98.5/1.5 R :還原型輔酶Q1()/氧化型輔酶Q1()之重量比 (參考例2) 在表4所示之各種溶劑l〇〇g中，於35°C下溶解lg之還原型輔酶Q1G(還原型輔酶Q1Q/氧化型輔酶Q1Q之重量比爲99.6/0.4)。在大氣中，於35°C攪拌24小時後，測定液中之還原型輔酶Q1Q/氧化型輔酶Q1Q之重量比，其結果顯於表4。 32 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-^1 ^1 ϋ ϋ ·ϋ n 一一aJ« I ϋ ϋ ϋ n n I %- 1235146 A7 tw 發明說明（y) 表4 迦丨J R 庚烷 96.7/3.3 醋酸乙酯 96.4/3.6 乙腈 96.0/4.0 R :還原型輔酶Q1G/氧化型輔酶Q1Q之重量比〔產業上之可利用性〕本發明由於具備上述構成，實爲一適於工業規模生產之方法，能簡便且富效率的製得高品質的還原型輔酶Q10 33 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1·裝

I n ϋ ϋ ϋ n^OJa 1 n l 1 ·ϋ ϋ *ϋ I %-

Claims

A8SSS 1235146 六、申請專利範圍方法’其中，該溶劑係乙醇、或乙醇/水之混合溶劑。 10、如申請專利範圍第9項之還原型輔酶q1q之安定 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 化方法’其中，乙醇/水之混合溶劑中乙醇比例爲 90〜99_5w/w% 〇 11、如申請專利範圍第1或第2項之還原型輔酶Qi〇之安定化方法，其中，還原型輔酶Q1()對溶劑的濃度爲 lw/w%以上。 12、如申請專利範圍第1或第2項之還原型輔酶Qi〇之安定化方法，其中，處理還原型輔酶q1g之操作，係擇自卒取、水洗、濃縮及管柱層析所構成群中之至少一種。 13、如申請專利範圍第丨或第2項之還原型輔酶Qi〇之安定化方法’其中，係在脫氧環境氣氛下處理還原型輔酶 QlO。 14、一種還原型輔酶Q1()之結晶化方法，其特徵在於，係使還原型輔酶Q1()在含強酸之溶劑中結晶化。 15、如申請專利範圍第14項之還原型輔酶qiq之結晶化方法’其中’該強酸係在水溶液中之pKa爲2.5以下者〇 16、如申請專利範圍第14或第15項之還原型輔酶 Q1〇之結晶化方法，其中，該強酸爲無機酸。 17、如申請專利範圍第14或第15項之還原型輔酶 Q1〇之結晶化方法，其中，該強酸的使用量，相對於還原型輔酶Qi〇l莫耳爲0.1莫耳％以上。 18、如申請專利範圍第14或第15項之還原型輔酶 2 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(21〇 X 297公釐） A8B8C8D8 1235146 六、申請專利範圍 QlO之結晶化方法，其中，該溶劑中之強酸濃度，換算成相封於丨谷劑重量之強酸莫耳量，係〇· 1 mmol/kg以上。 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 19、如申請專利範圍第14或第15項之還原型輔酶 Q10之結晶化方法，其中，該溶劑係擇自烴類、脂肪酸酯類、醚類、醇類、脂肪酸類、酮類、氮化合物類、硫化合物類、及水所構成群中之至少一種。 2〇、如申請專利範圍第19項之還原型輔酶Q1Q之結晶化方法，其中，該溶劑係擇自醇類、嗣類、氮化合物類、及水所構成群中之至少一種。 21、如申請專利範圍第20項之還原型輔酶Ql()之結晶化方法，其中，該溶劑係擇自碳數1〜3的醇類、丙酮、乙腈、及水所構成群中之至少一種。 22、如申請專利範圍第21項之還原型輔酶q1q之結晶化方法，其中，該溶劑係乙醇、或乙醇/水之混合溶劑。 23、如申請專利範圍第22項之還原型輔酶q1q之結晶化方法，其中，該乙醇/水之混合溶劑中之乙醇比例爲 90〜99.5w/w%。 24、如申請專利範圍第14或第15項之還原型輔酶 Qio之結晶化方法，其中，係從母液中除去雜質。 25、如申請專利範圍第24項之還原型輔酶Ql()之結晶化方法，其中，所除去的雜質，係擇自還原型輔酶q.9、還原型輔酶Qs、及還原型輔酶q7所構成群中之至少一種。 26、如申請專利範圍第14或第15項之還原型輔酶 Q1〇之結晶化方法，其中，該結晶化濃度，換算成還原型輔 3 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐） 1235146 B8 C8 D8 六、申請專利範圍酶Ql〇之重量對結晶化終了時結晶化溶劑的重量，係 lw/w%以上。 27、如申請專利範圍第26項之還原型輔酶Q1()之結晶化方法，其中，該結晶化濃度，換算成還原型輔酶Q1()之重量對結晶化終了時結晶化溶劑的重量，係5〜10w/w°/〇以上。 28、如申請專利範圍第14或第15項之還原型輔酶 Q10之結晶化方法，其中，係使用揮發性強酸來作爲強酸，且在還原型輔酶Q1Q之結晶化後使該強酸揮發。 29、如申請專利範圍第14或第15項之還原型輔酶 Q10之結晶化方法，其中，在結晶化後，係用鹼來中和強酸〇 30、如申請專利範圍第29項之還原型輔酶Q1q之結晶化方法，其中，該鹼，係鹼金屬氫氧化物、鹼土類金屬氫氧化物、鹼金屬碳酸鹽、或鹼金屬碳酸氫鹽。 31、如申請專利範圍第29項之還原型輔酶Q1q之結晶化方法，其中，在分離還原型輔酶Qh之結晶時’係在系中共存有用來溶解、除去中和所產生之鹽類的水。 32、如申請專利範圍第14或第15項之還原型輔酶 Q10之結晶化方法，其係在脫氧環境氣氛下進行。 4 $氏張尺度適用中國國家標準(CNS)Α4規格(210 X 297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 訂 123 5 If 94 年月日i A7 B7 五、發明說明（換算成氯化氫，相對乙醇爲〇.lmmol/kg且相對還原型輔酶 Q10爲lmol%)外，係進行和實施例7同樣的操作，獲得白色乾燥結晶9.5g(有效產率95莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶Qi〇/氧化型輔酶Qw之重量比爲99.0/1.0，還原型輔酶 Q1〇之純度爲98.9%。 (實施例9) 除在氮環境氣氛下進行結晶化以外，係進行和實施例 7同樣的操作，獲得白色乾燥結晶9.5g(有效產率95莫耳 %)。所得結晶之還原型輔酶Q1()/氧化型輔酶Q!。之重量比爲"·5/0·5，還原型輔酶Q1G之純度爲99.3%。 (實施例10) 藉由和實施例9同樣的方法，取得還原型輔酶Q]〇之白色漿料。將所得漿料用5%碳酸氫鈉溶液中和，實施減壓過濾，將濕結晶以冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序洗淨(洗淨所用之冷溶劑溫度爲2°C)濕結晶，藉由將濕結晶實施減壓乾燥(20〜40°C，1〜30mmHg)，獲得9.5g白色的乾燥結晶（有效產率95莫耳°/〇)。所得結晶之還原型輔酶qiq/氧化型輔酶Q!g之重量比爲99·5/〇·5，還原型輔酶q1g之純度爲 99.3%。 . (比較例1) 結晶化時’係取代1Ν鹽酸而添加水ug，除此外係進行和實施例7同樣的操作，獲得白色乾燥結晶9.5g(有效產率95莫耳％)。所得結晶之還原型輔酶qi()/氧化型輔酶 Q!o之重量比爲97·4/2·6，還原型輔酶q1g之純度爲97.2% 28 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公g ) --------------------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 123 514d 修正 I補充 ‘94 L、申請專利範圍 B8 C8 D8 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1、一種還原型輔酶Q1Q之安定化方法，其特徵在於，藉由使還原型輔酶Qi()和含強酸之溶劑接觸來進行處理，以防護還原型輔酶qiq遭受分子氧的氧化。 2、如申請專利範圍第1項之還原型輔酶Q1()之安定化方法’其中，該強酸係在水溶液中之pKa爲2.5以下者。 3、如申請專利範圍第1或第2項之還原型輔酶Q10之安定化方法，其中，該強酸爲無機酸。 4、如申請專利範圍第1或第2項之還原型輔酶Q1〇之女疋化方法’其中，該強酸的使用量，相對於還原型輔酶 Qi〇l莫耳爲0.1莫耳％以上。 5、如申請專利範圍第1或第2項之還原型輔酶Q1〇之安定化方法’其中，該溶劑中之強酸濃度，換算成相對於 i谷劑重里之強酸莫耳量，係O.lmmol/kg以上。 6、如申請專利範圍第1或第2項之還原型輔酶Q1〇之安定化方法’其中，該溶劑係擇自烴類、脂肪酸酯類、酸類、醇類、脂肪酸類、酮類、氮化合物類、硫化合物類、及水所構成群中之至少一種。 7、如申請專利範圍第6項之還原型輔酶Q1()之安定化方法’其中’該溶劑係擇自醇類、酮類、氮化合物類、及水所構成群中之至少一種。 8、如申請專利範圍第7項之還原型輔酶Q1Q之安定化方法’其中，該溶劑係擇自碳數1〜3的醇類、丙酮、乙睛、及水所構成群中之至少一種。 9、如申請專利範圍第8項之還原型輔酶Q1()之安定化本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公變)