WO2010006498A1 - 还原型辅酶q10的制备方法 - Google Patents

还原型辅酶q10的制备方法 Download PDF

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WO2010006498A1
WO2010006498A1 PCT/CN2009/000398 CN2009000398W WO2010006498A1 WO 2010006498 A1 WO2010006498 A1 WO 2010006498A1 CN 2009000398 W CN2009000398 W CN 2009000398W WO 2010006498 A1 WO2010006498 A1 WO 2010006498A1
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coenzyme
reduced coenzyme
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oxidized
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任雷
任乔
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Ren Lei
Ren Qiao
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/66—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing the quinoid structure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/22—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group aromatic

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing reduced coenzyme Q10, and more particularly to a method for producing reduced coenzyme Q10 using an enzymatic conversion method.
  • Coenzyme Q10 also known as ubiquinone 10
  • ubiquinone 10 is a fat-soluble hydrazine. It is an orange-yellow crystal at room temperature, has a melting point of 48 ° C, is odorless and tasteless, and its structure is similar to vitamin K because of its side chain at the six positions of the mother nucleus.
  • the polyisoprene group has a degree of polymerization of 10), which is an anthraquinone compound having the following structural formula:
  • the physiological function of reduced coenzyme Q10 is mainly derived from the redox properties of sulfhydryl groups and the physical properties of isoprene-like side chains. It has two main functions in human body, one is obvious anti-fat. The quality of peroxidation, the second is the role of nutrients in the process of conversion into energy in the granules. Its anthracycline acts as an electron and proton in the oxidative respiratory chain. This effect is not only essential for all life forms, but also the key to the formation of sputum. It is a natural antioxidant and cell metabolism activator of the cell itself. It has the function of protecting and restoring the structure of the biofilm and stabilizing the membrane potential. It is a non-specific immunopotentiator for the body. It is currently used clinically for the adjuvant treatment of diseases such as heart disease and hepatitis.
  • the two main roles in the body are the reduced form of coenzyme Q10, so
  • the reduced coenzyme Q10 is a direct action, especially the natural reduced coenzyme Q10.
  • the reduced coenzyme Q10 is easily oxidized by molecular oxygen, which cannot be achieved in industrial scale production.
  • the reduced coenzyme Q10. is a two-electron reductant of oxidized coenzyme Q10 and is white crystal.
  • a method of reducing a coenzyme Q10 by a reducing agent to form a reduced coenzyme Q10 (such as WO 01/52822 Al) is known.
  • the reduced coenzyme Q10 produced by using such a chemical reducing agent has a problem of molecular oxygen oxidation when used in health foods, beverages, cosmetics, medicines and the like. There is no commercial reduced coenzyme Q10 yet. At the same time, there is no real solution to how to protect and stabilize the reduced coenzyme Q10.
  • the object of the present invention is to provide a method for preparing reduced coenzyme Q10 by enzymatic conversion method, which is a pure natural product, which is safe and reliable.
  • the present invention adopts the following technical scheme: a method for preparing reduced coenzyme Q10, the method comprising the following steps: 1 oxidation of coenzyme Q10 raw material for acidification; 2 reduction of phosphorylation oxidation by biological reductase Type coenzyme Q10; 3 extracts reduced coenzyme Q10 in the reducing reaction.
  • the reaction equation for the above steps is as follows:
  • the preparation method of the bioreductase in the above step 2 is as follows:
  • the bioreductase prepared by the above method has good reducing performance with phosphorylated oxidized coenzyme Q10, and the yield of reduced coenzyme Q10 is improved.
  • photosynthetic bacteria or Rhodobacter sphaeroides are used.
  • the disrupted cell body is an ultrasonic cell disruptor.
  • the method of the above step (3) is as follows: after precipitation at 35 ° (: ⁇ 45 ° C water bath for 1 to 2 hours, using a refrigerated centrifuge at 1 ° C ⁇ 3 ° C, 10000 ⁇ 15000 rpm / After centrifugation for 10 to 30 minutes, the supernatant was discarded and dialyzed against phosphate buffer.
  • Sepharos 4B is added and stirred, and the mixture is washed three times with a phosphate buffer solution, adjusted to pH 8.5 with sodium hydroxide, and dissociated; and the filtered liquid is lyophilized with a freeze dryer to obtain the biological reductase.
  • the above method provides a method for purifying a bioreductase to increase the purity of the bioreductase.
  • the step of phosphorylating the oxidized coenzyme Q10 in the above step 1 is: dissolving the oxidized coenzyme Q10 in a phosphate buffer at a temperature of 28 ° C to 45 ° C, according to the weight of the oxidized coenzyme Q10 Add 2 to 10% of phosphate or any of the phosphate salts and stir for 10 to 120 minutes.
  • the above technical solution provides a method for phosphorylating oxidized coenzyme Q10, which has the characteristics of simple operation.
  • the pH of the above phosphate buffer solution is 6.0 to 8.2.
  • the extraction method of the above step 3 is as follows: membrane pressure filtration reaction product extraction product, vacuum concentration of the product, water addition to the concentrate, crystallization at a temperature of 2 ° C to 10 ° C, freeze drying Crystalline, that is, the reduced coenzyme Q10 was obtained.
  • the above technical solution provides a method for extracting reduced coenzyme Q10, which is extracted by the above method to increase the yield of reduced coenzyme Q10.
  • the membrane pressure of the membrane pressure filtration described above is 0.1 MP to 0.8 MP.
  • the present invention is based on the above technical scheme, and the natural coenzyme is used to convert the oxidized coenzyme Q10 to produce the reduced coenzyme Q10, and the reduced coenzyme Q10 can be produced on a large scale without a specific protective environment.
  • the reduced coenzyme Q10 produced has the following specific content, -*
  • the reduced coenzyme Q10 material retains its original properties in a phosphate buffer solution of pH 6.0 to 8.2, and can be stored at 50 ° C or lower for 2 years or more.
  • the coenzyme Q10 is a true water-soluble substance. Can be used as an injection.
  • Figure 1 is a HPLC chromatogram of the reduced coenzyme Q10 prepared according to the present invention.
  • a method for preparing a biological reductase using bacteria :
  • Schizosaccharomyces Promb (Saccharomyces cerevisiae) 2. Preparation of fermentation broth: 0.3 g of beef extract, 1.0 g of peptone, 0.5 g of NaCl, 100 ml of water, pH 7.0 ⁇ 7.2, add water to the beaker, weigh Take beef extract, peptone and NaCl, and heat to dissolve, adjust the pH to 7.0 ⁇ 7.2. Dispensing, tampon, high pressure steam sterilization.
  • the preparation of fermentation broth beef cream 0.3 g, peptone 1.0 g, sodium chloride 0.5 g, 1.5 grams of agar, 100 ml of water.
  • the culture solution was collected and centrifuged for 20 minutes in a centrifuge at 6000 rpm.
  • the cells after centrifugation were disrupted by an ultrasonic cell crusher, and 200 ml of 3% by weight of saline was added and allowed to stand for 1 hour.
  • the supernatant was taken, 500 ml of 50% by weight of sulfuric acid amine was added, and the mixture was heated in a 40-inch water bath for 1.5 hours, and centrifuged at 2 ° C, 12,000 rpm for 20 minutes using a refrigerated centrifuge. The supernatant was discarded and dialyzed against 300 ml of phosphate buffer.
  • the mixture was stirred by adding 100 ml of Sepharos 4B, washed three times with 200 ml of phosphate buffer, adjusted to pH 8.5 with sodium hydroxide, and dissociated.
  • the filtered liquid was lyophilized with a freeze dryer to obtain 80 mg of bioreductase.
  • oxidized coenzyme Q10 as a raw material, it is converted into a pure natural (ie, natural) reduced coenzyme Q10 by the action of bioreductase.
  • Oxidation-type coenzyme Q10 is phosphorylated, and 250 g of oxidized coenzyme Q10 is dissolved in 1000 ml of phosphate buffer (pH 7.4) at 37 °C. According to 5% by weight of oxidized coenzyme Q10, 12.5 g of phosphate was added and stirred for 30 minutes.
  • bioreductase was prepared in accordance with the methods of Examples 1 to 3 described above.
  • the prepared phosphorylated oxidized coenzyme Q10 is added to the reactor at 37 ° C to 60 ° C, 80 mg of the prepared bioreductase is added, and stirred for 10 to 30 minutes;
  • Membrane pressure filtration using 0.5mp, filtering at 30 ° C, the filtrate is placed at 2 ° C More than 5 hours;
  • the filtrate is concentrated at 35 ° C under a vacuum of 200 Pa;
  • the concentrate is added to 1000 ml of water for 3 times and crystallized at 2 ° C. 7.
  • the crystals are dried in a freeze dryer to obtain 248.2 g, and the purity of the finished product is 99.4%; after detection, the presence of non-oxidized coenzyme Q10 is detected.
  • the reduced coenzyme Q10 prepared in Example 4 was measured by HPLC.
  • the peak time is 8.974min.
  • the measured spectrum is shown in Figure 1.

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Description

还原型辅酶 Q10的制备方法 技术领域
本发明涉及还原型辅酶 Q10的制备方法， 尤其涉及使用酶转化 法制备还原型辅酶 Q10的方法。
背景技术
辅酶 Q10又名泛醌 10， 是一种脂溶性醌， 在室温下是橙黄色结 晶物， 熔点 48°C， 无臭无味， 其结构类似于维生素 K， 因其母核六位 上的侧链 (聚异戊二烯基的聚合度为 10而得名），是一种醌类化合物， 结构式如下：
Figure imgf000003_0001
它的另一种形式为还原型辅酶 Q10生理功能主要来源于醌基的 氧化还原特性和类异戊二烯侧链的物理特性，其在人体主要有两个作 用，一是有明显的抗脂质过氧化作用，二是营养物质在线粒体内转化 为能量的过程中起重要的作用。其醌环在氧化呼吸链中起传递电子和 质子的作用，这种作用不仅是所有生命形式必不可少的，而且还是形 成 ΑΤΡ的关键。它是细胞自身的天然抗氧化剂和细胞代谢激活剂，具 有保护和恢复生物膜结构的完整性，稳定膜电位作用，是肌体的非特 异性免疫增强剂。 目前临床应用于心脏病， 肝炎等疾病的辅助治疗。
在肌体内起上述 2个主要作用的是辅酶 Q10的还原型， 所以生 产还原型辅酶 Q10是直接的作用， 特别是天然的还原型辅酶 Q10。 但是还原型辅酶 Q10容易被分子氧氧化， 在工业规模生产还不能达 成。 此外还原型辅酶 Q10.是氧化型辅酶 Q10的二电子还原体， 为白 色结晶。 已知用还原剂将氧化型辅酶 Q10还原方法生成还原型辅酶 Q10的方法 (如 WO01/52822Al)。 但是使用这种化学还原剂所生产的 还原型辅酶 Q10在用于保健食品， 饮料， 化妆品， 药品等时存在着 分子氧氧化的问题。至今还没有商业化还原型辅酶 Q10。 同时， 怎么 保护和稳定还原型辅酶 Q10, 还没有一个真正的解决办法。
另外， 现有的生产还原型辅酶 Q10 的方法上存在着大量使用化 学还原剂或者添加保护剂添加剂，有机溶剂等。用于药品食品化妆品 等组合， 无疑首先是对环境的污染， 其次用于人体是否安全， 可靠显 然存在有大量问题。特别是这些还原剂，保护剂等的组合对人体的危 害远大于辅酶 Q10的正性作用。
发明内容
为了解决上述的还原型辅酶 Q10制备存在的技术问题， 本发明 的目的是提供一种使用酶转化法制备还原型辅酶 Q10 的方法， 该方 法制备得到的产品为纯天然品， 安全可靠。
为了实现上述的目的， 本发明采用了以下的技术方案： 还原型辅酶 Q10 的制备方法， 该方法包括以下的步骤： ①氧化 型辅酶 Q10原料进行磯酸化； ②通过生物还原酶还原磷酸化的氧化 型辅酶 Q10; ③提取还原反应物中的还原型辅酶 Q10。上述步骤的反 应方程式如下：
Figure imgf000005_0001
作为优选， 上述的步骤②中的生物还原酶的制备方法如下：
( 1 )选择含有辅酶 Q10的细菌、 酵母菌或真菌进行培养；
(2)破碎细胞体， 用 30%〜70%重量百分比浓度的硫酸胺沉淀；
(3 ) 分离沉淀物、 透析得到所述生物还原酶。
采用上述的方法制备得到的生物还原酶与磷酸化的氧化型辅酶 Q10具有良好的还原性能， 提高了还原型辅酶 Q10的得率。
作为优选， 上述的步骤 （1 )选用光合菌或红极毛杆菌。
作为优选， 上述的步骤（2)破碎细胞体采用超声波细胞破碎机。 作为优选， 上述的步骤（3 ) 的方法如下： 沉淀后在 35° (：〜 45°C 水浴 1〜2小时， 用冷冻离心机在 1°C〜3°C， 10000〜15000转 /分钟 的条件下离心 10〜30分钟， 弃上清， 加入磷酸缓冲液透析。
作为再优选， 透析后加入 Sepharos 4B搅拌， 用磷酸缓冲液分三 次清洗， 加氢氧化钠调 PH8.5, 解离； 过滤后的液体用冷冻干燥机冻 干， 得所述的生物还原酶。 上述的方法提供生物还原酶的精制方法， 提高生物还原酶的纯度。 作为优选， 上述的步骤①中氧化型辅酶 Q10进行磷酸化的步骤 是： 在 28°C〜45°C的条件下， 将氧化型辅酶 Q10溶解在磷酸缓冲液 中， 按照氧化型辅酶 Q10重量的 2〜 10%加入磷酸脂或者任何一种磷 酸脂盐类，搅拌 10〜120分钟。上述的技术方案提供了一种氧化型辅 酶 Q10磷酸化的方法， 该方法具有操作简便的特点。
作为再优选， 上述的磷酸缓冲液的 PH值为 6.0〜8.2。
作为优选，上述的步骤③的提取方法如下：膜压过滤反应物提取 生成物， 对生成物进行真空浓缩， 浓縮液中加入水， 在 2°C〜10°C温 度条件下结晶， 冷冻干燥结晶物， 即得到所述的还原型辅酶 Q10。上 述的技术方案提供了提取还原型辅酶 Q10 的方法， 通过上述的方法 提取， 提高了还原型辅酶 Q10的得率。
作为再优选， 上述的膜压过滤的膜压为 0.1MP〜0.8MP。
本发明是由于采用了以上的技术方案，以天然生物酶转化氧化型 辅酶 Q10来生产还原型辅酶 Q10， 不需要特定保护环境下就可以大 规模生产还原型辅酶 Q10。 所生产的还原型辅酶 Q10具有以下的特 占、、- *
①稳定， 不被空气中的分子氧以及化合物中的氧分子氧化。 还原 型辅酶 Q10原料在 PH6.0〜8.2的磷酸缓冲液中保持原有的性 质， 也可在 50°C以下的条件下保存 2年以上。
②纯天然产品， 没有还原剂的残留物， 也没有任何抗氧化剂， 保 护剂等化学制品。 用于食品， 药品， 化妆品， 安全可靠。
③原料磷酸化后既得辅酶 Q10是一种真正意义上的水溶性物质， 可用作于针剂。
附图说明
图 1为本发明制备得到的还原型辅酶 Q10的 HPLC图谱。
具体实施方式
实施例 1
利用细菌制备生物还原酶的方法：
一、选种： 显微镜下红假单胞光合菌， 菌体形态， 为短杆或圆卵 形， 宽为 0.5-0.9微米， 长 1.2-2.0微米。牙芽胞， 无荚膜， 单极鞭毛， 可运动的健康菌种。
二、 配制发酵液： 5.5克磷酸二氢钠， 1.5克 DL苹果酸， 2.0克 乙酸钠， 2.0克氢氧化钠， 1.0克氯化铵， 0.25克氯化镁， 0.05克氯化 钙， 3.5克葡萄糖溶于 1.0升蒸馏水， 搅拌均勾。测定 PH应于 6.5-7.0 间。
三、取 250毫升三角瓶 10只，每只灭菌后注入 100毫升培养液， 接种后密封。 放置在 32°C的光照培养箱中培养 72小时， 取出。
四、 收集培养液， 用 6000转 /分钟的离心机离心 20分钟。 离心 后的菌体用超声波细胞破碎机破碎， 加入 3%重量百分比浓度的盐水 200毫升静置 1小时。取上清液， 加入 500毫升的 50%重量百分比浓 度的硫酸胺， 40°C水浴 1.5小时， 用冷冻离心机在 4°C， 12000转 /分 钟条件下离心 20分钟。 弃上清， 加入 300毫升磷酸缓冲液透析。 加 入 100毫升 Sepharos 4B搅拌， 用 200毫升磷酸缓冲液分三次清洗， 加氢氧化钠调 PH8.5， 解离。过滤后的液体用冷冻干燥机冻干， 得 80 毫克生物还原酶。
实施例 2
利用酵母菌制备生物还原酶的方法
一、 选种： Schizosaccharomyces Promb(粟酒裂殖酵母) 二、 配制发酵液： 牛肉膏 0.3克、 蛋白胨 1.0克、 NaCl O.5克、 水 100毫升， 调 pH 7.0〜7.2在烧杯中加水， 称取牛肉膏、蛋白胨和 NaCl, 加热溶化后， 调节 pH值至 7.0〜7.2。 分装， 加棉塞， 高压蒸 汽灭菌即成。
三、取 250毫升三角瓶 10只，每只灭菌后注入 100毫升培养液， 接种后密封。 放置在 35°C的光照培养箱中培养 72小时， 取出。
四、 收集培养液， 用 6000转 /分钟的离心机离心 20分钟。 离心 后的菌体用超声波细胞破碎机破碎， 加入 3%重量百分比浓度的盐水 200毫升静置 1小时。取上清液， 加入 500毫升的 50%重量百分比浓 度的硫酸胺， 40°C水浴 1.5小时， 用冷冻离心机在 5°C， 12000转 /分 钟条件下离心 20分钟.弃上清， 加入 300毫升磷酸缓冲液透析。 加入 100毫升 Sepharos 4B搅拌， 用 200毫升磷酸缓冲液分三次清洗， 加 氢氧化钠调 PH8.5 , 解离。 过滤后的液体用冷冻干燥机冻干， 得 80 毫克生物还原酶。
实施例 3
利用真菌制备生物还原酶的方法
一、 选种 ： Enophytic ( 内生多节胞菌）
二、配制发酵液：牛肉膏 0.3克 ，蛋白胨 1.0克，氯化钠 0.5克， 琼脂 1.5克， 水 100毫升。
三、 取 250毫升三角瓶 10只，每只灭菌后注入 100毫升培养液， 接种后密封。 放置在 36°C的光照培养箱中培养 72小时， 取出。
四、 收集培养液， 用 6000转 /分钟的离心机离心 20分钟.离心后 的菌体用超声波细胞破碎机破碎，加入 3%重量百分比浓度的盐水 200 毫升静置 1小时。取上清液，加入 500毫升 50%重量百分比浓度的硫 酸胺， 40Ό水浴 1.5小时， 用冷冻离心机在 2°C， 12000转 /分钟条件 下离心 20分钟。 弃上清， 加入 300毫升磷酸缓冲液透析。 加入 100 毫升 Sepharos 4B搅拌， 用 200毫升磷酸缓冲液分三次清洗， 加氢氧 化钠调 PH8.5, 解离。 过滤后的液体用冷冻干燥机冻干， 得 80毫克 生物还原酶。
实施例 4
使用氧化型辅酶 Q10为原料， 在生物还原酶的作用下， 转化成 纯天然 (即天然品）还原型辅酶 Q10。
一、 氧化型辅酶 Q10磷酸化， 在 37°C的条件下， 将 250克氧化 型辅酶 Q10溶解在 1000毫升磷酸缓冲液中 (PH7.4)。按照氧化型辅酶 Q10重量的 5%加 12.5克磷酸脂， 搅拌 30分钟。
二、 按照上述的实施例 1〜3的方法制备生物还原酶待用。
三、 在 37°C〜 60°C的条件下， 将制备好的磷酸化氧化型辅酶 Q10, 加入反应器中， 加入 80mg制备的生物还原酶， 搅拌 10〜30分 钟；
四、 膜压过滤： 采用 0.5mp， 在 30°C条件下过滤， 滤液放置 2°C 中 5小时以上；
五、 滤过液放在 35°C， 200Pa的真空度条件下浓缩；
六、 浓缩物加入 1000ml水洗 3次， 在 2°C条件下结晶； 七、 结晶体在冷冻干燥机中干燥得 248.2g， 成品纯度 99.4%; 经 检测， 无氧化型辅酶 Q10的存在。
测试例 1
取实施例 4制备得到的还原型辅酶 Q10， 采用 HPLC方法测定。 设备： 岛津 S-lOAvp 波长： 275nm
流动相： 乙醇： 甲醇 = 1： l (v: V)
柱子： 十八烷基硅胶柱； 长 ：180mm 内经： 3.2mm
称取还原型辅酶 Q10
20mg， 溶于乙醇至 100ml， 进样量 20ul， 外标三点法计算含量。
出峰时间 8.974min。 测定的图谱如图 1所示。

Claims

权利要求书
1. 还原型辅酶 Q10的制备方法，其特征在于该方法包括以下的步骤： ①氧化型辅酶 Q10原料进行磷酸化； ②通过生物还原酶还原磷酸 化的氧化型辅酶 Q10; ③提取还原反应物中的还原型辅酶 Q10。
2. 根据权利要求 1所述的还原型辅酶 Q10的制备方法， 其特征在于 步骤②中的生物还原酶的制备方法如下：
( 1 )选择含有辅酶 Q10的细菌、 酵母菌或真菌进行培养；
(2)破碎细胞体， 用 30%〜70%重量百分比浓度的硫酸胺沉淀；
(3 ) 分离沉淀物、 透析得到所述生物还原酶。
3. 根据权利要求 2所述的还原型辅酶 Q10的制备方法，其特征在于： 步骤（1 )选用光合菌或红极毛杆菌。
4. 根据权利要求 2所述的还原型辅酶 Q10的制备方法，其特征在于： 步骤（2)破碎细胞体采用超声波细胞破碎机。
5. 根据权利要求 2或 3或 4所述的还原型辅酶 Q10的制备方法， 其 特征在于步骤 （3 ) 的方法如下： 沉淀后在 35 〜 45°C水浴 1〜2 小时， 用冷冻离心机在 rC〜3°C， 10000〜15000转 /分钟的条件 下离心 10〜30分钟， 弃上清， 加入磷酸缓冲液透析。
6. 根据权利要求 5所述的还原型辅酶 Q10的制备方法，其特征在于： 透析后加入 Sepharos 4B搅拌， 用磷酸缓冲液分三次清洗， 加氢 氧化钠调 PH8. 5, 解离； 过滤后的液体用冷冻干燥机冻干， 得所 述的还原酶。
7. 根据权利要求 1或 2所述的还原型辅酶 Q10的制备方法， 其特征 在于步骤①中氧化型辅酶 Q10进行磷酸化的步骤是：在 28°C〜45 °C的条件下， 将氧化型辅酶 Q10溶解在磷酸缓冲液中， 按照氧化 型辅酶 Q10重量的 2〜10%加入磷酸脂或者任何一种磷酸脂盐类， 搅拌 10〜： 120分钟。
8. 根据权利要求 7所述的还原型辅酶 Q10的制备方法，其特征在于： 磷酸缓冲液的 PH值为 6.0〜8.2。
9. 根据权利要求 1或 2所述的还原型辅酶 Q10的制备方法， 其特征 在于步骤③的提取方法如下： 膜压过滤反应物提取生成物， 对生 成物进行真空浓缩， 浓缩液中加入水， 在 2°C〜10°C温度条件下 结晶， 冷冻干燥结晶物， 即得到所述的还原型辅酶 Q10。
10.根据权利要求 9所述的还原型辅酶 Q10的制备方法，其特征在于： 膜压过滤的膜压为 0.1MP〜0.8MP。
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