CN1313620C - 脂质测定方法以及其中所用的试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种脂质测定方法，其特征在于在有机硅化合物存在的条件下测定血液成分中含有的脂质，以及用于该方法中的测定试剂。该方法可产生用于直接方法的特定条件，同时满足诸如不影响测定的精确度、不给测定设备增添负担以及容易实现的要求。
Description
技术领域
本发明涉及通过利用少量样本的简单操作有效地分别测定特定脂蛋白部分中的脂质成分的方法。本发明还涉及用于该方法的试剂。
背景技术
活体中的主要脂质即胆固醇、甘油三酯和磷脂与脱辅基蛋白质结合形成血液中的脂蛋白。根据脂蛋白的物理特性将脂蛋白划分为乳糜微粒、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等。在这些脂蛋白中，已知LDL是一种导致动脉硬化的病因因素，而HDL则表现出抗-动脉硬化作用。
对血液中的总胆固醇和总甘油三酯进行测定的目的是为了预防缺血性心脏病或评估对缺血性心脏病的治疗效果。流行病学研究已经证明了LDL中的胆固醇水平与动脉硬化的发生率正相关，而HDL中的胆固醇水平与动脉硬化的发生率负相关。已经认识到了了解每种脂蛋白部分如LDL和HDL的变化情况的重要性。目前，对脱辅基蛋白质B和脱辅基蛋白质A-I(形成各种脂蛋白的蛋白质组分)或每种脂蛋白质部分中的胆固醇进行测定。
如上所述，作为测定血液中的脂质成分的方法，可以给出测定包含在所有脂蛋白中的特定脂质的总量如总胆固醇和总甘油三酯的方法以及测定特定脂蛋白如LDL、HDL等中的胆固醇的方法。
在这些方法中，前一个方法是在同时采用了作用于待测脂质成分的酶和能使所述脂质成分与所述酶发生反应的条件的基础上进行的，而不考虑脂蛋白的类型(例如具有低的脂蛋白选择性的表面活性剂如Triton X-100)。该方法能够测定所有脂蛋白中的待测脂质成分。
另一方面，后一个方法是在同时采用了作用于待测脂质成分的酶和能使所述酶仅与特定脂蛋白中的待测脂质成分发生反应的特定条件的基础上进行的。该方法能够测定特定脂蛋白部分中的待测脂质成分。
按照常规，通过利用超速离心、电泳、凝胶过滤、采用沉淀剂进行沉淀(沉淀方法)等手段从样本中分离待测脂蛋白的方法(该方法在下文中被称作“分部分离方法”)已经确立了这些特定条件。
近几年，已经研究出多种不需要利用分部分离方法就能确立特定条件的方法(该方法在下文中被称作“直接方法”)。这种方法包括在测定HDL胆固醇的过程中利用胆汁酸与每种脂蛋白部分的不同反应时间的方法(日本专利公开号016720/1994)，在非待测脂蛋白保持聚集的条件下使待测脂蛋白与酶发生反应的方法(日本专利申请公开号242110/1994)，采用糖化合物的方法(日本专利2653755)，采用修饰酶的方法(日本专利2600065)，采用不溶解脂蛋白的表面活性剂的方法(日本专利2799835)，通过酶预反应去除非待测脂蛋白中的胆固醇的方法(日本专利申请公开号000299/1997)，采用角叉藻聚糖的方法(日本专利申请公开号121895/1997)，采用具有脂蛋白选择性的表面活性剂的方法(日本专利申请公开号056395/1999)，采用杯芳烃的方法(WO98/59068)和采用磷化合物的方法(日本专利申请公开号116400/2000)。
由于与涉及复杂操作的沉淀方法相比，某些直接法方法操作简单，所以这些直接方法在实践中被用于日常的临床测定。然而，即使是已付诸实践的直接方法也存在着问题。例如，向试剂中添加沉淀剂的方法存在着问题：聚集物干扰测定精确度，和对测量设备造成损坏诸如沉淀剂与用于冲洗测量设备的碱性去污剂的反应产物堵塞管道。采用修饰酶的方法存在着诸如酶修饰过程中需要工艺控制(质量控制)和费用增高这样的问题。
因此，本发明的目的是提供一种采用能够确立直接方法所采用的特定条件的物质来测定血液等中的脂质成分的方法，其既不影响测定精确度，又不会损坏测定设备，同时满足诸如容易实施等其它条件。
发明内容
为了实现上述目的，本发明人进行了广泛深入的研究并以如下方法完成了本发明。对于测定特定待测脂蛋白中的脂质成分如HDL胆固醇，即使在没有沉淀剂和修饰酶存在的情况下，也能够通过向试剂中加入一种有机硅化合物并将待测样本与以胆固醇作为底物的酶进行混合来特异选择性地测定单独的HDL胆固醇。
具体地说，本发明提供了一种脂质测定方法，其特征在于在有机硅化合物和一种用于测定的试剂的存在下进行测定。
附图说明
图1是用于显示通过实施例2中所述的本发明方法或采用不含本发明的有机硅化合物的试剂的对照方法得到的血清样本中HDL胆固醇的检测结果与通过沉淀方法获得的结果之间的相关性的图，其中A图显示与对照方法的相关性，B图显示与本发明的方法的相关性。
图2是用于显示通过实施例3A或3B中所述的本发明方法或采用不含本发明的有机硅化合物的试剂的对照方法得到的血清样本中HDL胆固醇的检测结果与通过沉淀方法获得的结果之间的相关性的图，其中A、B和C图分别显示与对照方法、实施例3A的方法和实施例3B的方法的相关性。
图3是用于显示通过实施例4中所述的本发明方法或采用不含本发明的有机硅化合物的试剂的对照方法得到的血清样本中HDL胆固醇的检测结果与通过沉淀方法获得的结果之间的相关性的图，其中A图显示与对照方法的相关性，B图显示与本发明的方法的相关性。
本发明及优选实施方案的详述
本发明的方法包括在有机硅化合物存在的情况下利用测定脂质的已知试剂来测定脂质。
硅氧烷及其衍生物可以作为本发明中的有机硅化合物。硅氧烷是含有有机基团如烷基或芳基的聚合物。所述聚合物包含通常被称为聚硅氧烷的-(Si-O)n-，即由与氧原子键合的硅原子所组成的硅氧烷单元的重复结构。硅氧烷的性质随着分子结构的不同而不同。粘度、挥发性以及其它特性随着聚合度、侧链的类型、交联度等的变化而变化。存在有液状硅氧烷、脂状硅氧烷、橡胶状硅氧烷和树脂状硅氧烷。这些硅氧烷及其衍生物可以以硅氧烷的分类名商购得到，例如高聚合硅氧烷、环状硅氧烷、烷基硅氧烷、含硅表面活性剂、改性硅油等。改性硅油是其中引入了有机基团的硅油。根据所引入的有机基团，所述的改性硅油可分为氨基改性硅油、环氧改性硅油、羧基改性硅油、聚醚改性硅油、烷基改性硅油等。根据结构，改性硅油可分为侧链硅油、双末端硅油、单末端硅油和侧链双末端硅油。为了达到本发明的目的，可以单独使用这些硅氧烷及其衍生物或将其中的两种或多种结合起来使用。厂商印制了记载有机硅产品的特性等内容的产品目录。参照这些产品目录可以选择出待用的具体有机硅化合物。
在测定目标脂质的过程中，本发明的有机硅化合物既可以与样本和用于测定目标脂质的试剂同时加入也可以在加入用于测定目标脂质的试剂之前与样本进行混合。或者，目标脂质可以通过以下步骤进行测定：首先制备样本与一部分用于测定目标脂质的试剂的混合物，然后将含有本发明的有机硅化合物的剩余部分试剂加到所述混合物中。
对于在加入用于测定目标脂质的试剂后检测目标脂质的方法没有特别的限制。例如可以是采用过氧化物酶与显色剂的组合的分光光度分析法和直接检测辅酶和过氧化氢的方法。
在本发明中用于样本的有机硅化合物的用量随着待测脂质的类型、样本的性质、所用试剂的类型、是否存在下文所述表面活性剂或甘油，或者表面活性剂或甘油的用量等的不同而不同。尽管应通过实验来选择最适条件，有机硅化合物的常规用量为约0.0001-5％，该百分含量为质量百分含量(下文中简称作“％”)，更优选地为约0.001-5％。
优选将上述直接方法应用于本发明，也就是说，优选利用本发明的有机硅化合物与用于直接方法的试剂相结合。例如，当与不溶解脂蛋白的表面活性剂(日本专利2799835)或对脂蛋白具有选择性的表面活性剂(日本专利申请公开号056395/1999)联用时，本发明的有机硅化合物能够增强这些表面活性剂的性能。
另外，有可能通过加入表面活性剂、甘油等而对本发明的有机硅化合物进行乳化从而调节水溶解性。
对表面活性剂没有特别的限制，可以使用任何阴离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂、阳离子型表面活性剂和两性表面活性剂。实例包括烷基醚羧酸盐、N-酰基氨基酸的盐、磷酸烷基酯、N-酰基牛磺酸酯、磺酸盐(酯)、烷基硫酸盐、聚氧乙烯烷基醚硫酸盐、乙酸甜菜碱、咪唑啉、烷基铵盐、酰胺、多元醇脂肪酸酯、烷基甘油醚及其脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、甘油酯、聚甘油酯、聚氧乙烯甘油酯、失水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧失水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯羊毛脂、聚氧乙烯羊毛脂醇、聚氧乙烯蜂蜡衍生物、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯甾醇、聚氧乙烯氢化甾醇、聚乙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚、乙二胺的聚氧乙烯聚氧丙烯缩合物、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯烷基胺、蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酰胺、聚氧乙烯烷基苯基甲醛缩合物、聚氧乙烯烷基醚磷酸、聚氧乙烯烷基醚磷酸盐等等。
可以将这些表面活性剂单独或以两种或多种相结合的形式加入到测定系统中。这些表面活性剂的组合和用量随着硅氧烷及其衍生物的类型、所用表面活性剂的类型等情况的不同而不同。尽管应通过实验来选择最适条件，测定系统中表面活性剂的常规浓度为约0.0001-5％，而且更优选地为约0.001-5％。
除了表面活性剂外，聚合物乳化剂如丙烯酸-甲基丙烯酸烷基酯共聚物和羧基烯类聚合物、有机溶剂如乙醇、对检测特异性不产生不利影响的硅氧烷及其衍生物等也可以被用来调节水溶解性。
待用本发明方法检测的脂质可以是活生物体内存在的任何脂质，特别优选的脂质是形成脂蛋白的那些如胆固醇、甘油三酯和磷脂。
任何以目标脂质作为底物的酶均可用于本发明测定脂质的方法中。例如，在《临床诊断方法概要》第三十版(Kanehara and Co.、Ltd.，1993)中记载的用于测定胆固醇、甘油三酯和磷脂的常用酶可用于本发明中而且被包括在本发明的保护范围内。
当测定这些脂质当中的胆固醇时，可以不受限制地使用测定胆固醇的常用酶如胆固醇脱氢酶、胆固醇氧化酶和胆固醇酯酶。这些酶可以是那些来源于微生物、动物或植物的酶或者可以是由遗传工程技术制备的酶。可以使用经化学修饰的酶也可以使用未被修饰的酶。
这些酶可以任选地与辅酶、检测酶或显色剂等进行联用。作为辅酶，可以给出烟酰胺腺嘌呤二核苷酸等实例。作为检测酶，可以给出过氧化物酶等实例。作为显色剂，可以给出Trinder试剂、氨基安替比林等实例。
可以单独或将两种或多种检测酶相结合的形式来使用检测酶。用量随着酶的不同而不同。尽管没有特别的限制，酶的用量为0.001-100单位/毫升，更优选0.1-100单位/毫升。
有利地是，本发明的方法可通过采用由适当配制上述有机硅化合物、用于检测脂质的酶、显色剂、辅酶等而制备得到的脂质测定试剂来进行实施。根据需要，可以添加对特定脂蛋白具有亲合力的试剂，包括其它酶如过氧化氢酶、盐、调节pH的缓冲剂、表面活性剂、防腐剂、蛋白如白蛋白、抗体、抗生素、皂苷、凝集素和聚阴离子，添加的限度以不对检测特异性产生不利影响以及特定脂蛋白不发生聚集为准。
作为缓冲剂，可以使用任何缓冲剂如Good缓冲剂、磷酸、Tris缓冲剂和邻苯二甲酸盐，只要所述缓冲剂能够建立起使得反应溶液的pH保持在4-10的范围内的缓冲条件就行。尽管没有特别的限制，可采用的用量范围为0.0005-2mol/L，优选地是0.01-1mol/L。在实际过程中，应适当考虑所用酶的特性、试剂中含有的其它成分等因素通过实验来选择最适条件。
以下给出了有利于实施本发明方法的脂质测定试剂的具体实例：
(HDL-胆固醇测定试剂)
(1)有机硅化合物
(2)胆固醇酯酶
(3)胆固醇氧化酶
(4)过氧化物酶
(5)显色剂(4-氨基安替比林和二磺丁基间甲苯胺等)
*可以任选地添加具有脂蛋白选择性的表面活性剂和其它添加剂。
(LDL-胆固醇测定试剂)
(第一试剂)
(1)有机硅化合物
(2)胆固醇酯酶
(3)胆固醇氧化酶
(4)过氧化物酶
(5)通过结合而产生颜色的两种化合物中的任意一种(例如4-氨基安替比林)
*可以任选地添加具有脂蛋白选择性的表面活性剂和其它添加剂。
(第二试剂)
(6)通过结合而产生颜色的两种化合物中的另外一种(例如二磺丁基间甲苯胺)
(7)对脂蛋白选择性低的表面活性剂。
实施例
本发明将通过实施例的方式加以更详细的说明，但这些实施例不应当被解释为对本发明的限制。
实施例1
使用通过超速离心制备的HDL和LDL部分作为样本来证实本发明的效果。具有下述组成的试剂被用于测定在HDL和LDL部分中的胆固醇。
(第一试剂)
PIPES缓冲溶液(pH6.5) 50mmol/L
4-氨基安替比林 0.5mmol/L
(第二试剂)
PIPES缓冲溶液(pH6.5) 50mmol/L
胆固醇酯酶 1unit/ml
胆固醇氧化酶 1unit/ml
二磺丁基间甲苯胺 1.0mmol/L
过氧化物酶 5unit/ml
有机硅化合物 1％
(所有物质均由Nippon Unicar有限公司生产)。
采用了Hitachi 7170自动分析仪。向2.4μl的样本中加入240μl的第一试剂。五分钟后，加入80μl的第二试剂。分别在加入第二试剂之前即刻以及加入后5分钟测定600nm波长下的吸光度。将两次测量值之差作为样本的吸光度。作为对照，使用含有1％Triton X-100取代本发明有机硅化合物的试剂作为第二试剂，Triton X-100对脂蛋白的选择性低。
确定利用各含有不同的有机硅化合物的试剂作为第二试剂测定的相对样本吸光度，假定利用含有Triton X-100的第二试剂测定的样本吸光度为100。计算出对于LDL的相对样本吸光度与对于HDL的相对样本吸光度的比值。结果见表1
。
表1
| 加入的成分 | 对于HDL的相对吸光度 | 对于LDL的相对吸光度 | 相对吸光度的比值(LDL/HDL) |
| 有机硅化合物1(NUC-Silicon L7002) | 23 | 1 | 0.04 |
| 有机硅化合物2(NUC-Silicon L7604) | 94 | 9 | 0.10 |
| 有机硅化合物3(NUC-Silicon FZ2118) | 49 | 15 | 0.31 |
| 有机硅化合物4(NUC-Silicon FZ2162) | 14 | 7 | 0.50 |
| 有机硅化合物5(NUC-Silicon FZL2163) | 49 | 16 | 0.33 |
| 表面活性剂(Triton X-100) | 100 | 100 | 1.00 |
当利用含有本发明有机硅化合物的第二试剂进行测定时，相对吸光度的LDL/HDL比值落在0.04-0.5范围内。该结果表明本发明的有机硅化合物确立了特定的条件，在该条件下HDL中的胆固醇与酶之间的反应比起LDL中的胆固醇与酶之间的反应占有优势。
实施例2
使用20份含有脂蛋白的血清样本证实本发明的效果。具有下述组成的试剂被用于测定。
(第一试剂)
Bis-Tris缓冲溶液(pH6.0) 50mmol/L
胆固醇氧化酶 1unit/ml
过氧化物酶 1.25unit/ml
二磺丁基间甲苯胺 0.5mmol/L
氟芬那酸 150μmol/L
(第二试剂)
Bis-Tis缓冲溶液(pH6) 50mmol/L
胆固醇酯酶 1.5unit/ml
(Asahi Kasei公司)
4-氨基安替比林 1.0mmol/L
Emulgen B-66 1.5％
有机硅化合物 0.001％
(NUC-Silicon L720，由Nippon Unicar有限公司生产)。
采用了Hitachi 7170自动分析仪。向2.4μl的样本中加入240μl的第一试剂。五分钟后，加80μl的第二试剂。分别在加入第二试剂之前即刻以及加入第二试剂之后5分钟测定600nm波长下的吸光度，从而由所述吸光度值之间的差值确定HDL胆固醇浓度(两点法)。将已知浓度的对照血清作为校准物质。作为对照，将不含本发明有机硅化合物的试剂用作第二试剂。
同时，利用购买到的沉淀试剂盒(由Daiichi Pure Chemicals有限公司生产的HDL-C·2试剂盒)测定血清样本中的HDL胆固醇浓度。比较相关系数和回归方程式，取沉淀方法中试剂的值作为X轴，实施例中的测定值作为Y。结果见表2和图1。
表2 单位：mg/dL
| 样本 | 沉淀方法 | 对照 | 本发明的方法 |
| 1234567891011121314151617181920 | 83.283.272.769.868.168.362.361.156.954.452.752.349.045.643.339.839.532.332.266.9 | 81.475.270.464.067.665.560.059.056.249.351.852.548.048.140.939.841.333.033.868.2 | 84.477.471.364.768.366.360.859.156.549.253.252.648.448.141.139.940.732.733.568.3 |
| 相关系数 | - | 0.989 | 0.989 |
| 斜率 | - | 0.891 | 0.935 |
| 截距 | - | 4.8 | 2.8 |
与利用不含本发明有机硅化合物的第二试剂测定的结果相比，利用含有本发明有机硅化合物的第二试剂测定的结果表现出改进的斜率和截距。该结果表明本发明的有机硅化合物确立了特定的条件，在该条件下HDL中的胆固醇与酶之间的反应比起LDL中的胆固醇与酶之间的反应占有优势，由此具有脂蛋白选择性的表面活性剂的特性得到了进一步的改善。
实施例3
除了将含有脂蛋白的26份血清样本用作样本以及将NET-SG-60A(实施例3A)或NET-SG-60C(实施例3B)(两者的浓度均为0.05％，由Nihon Surfactant Kogyo KK.生产)用作第二试剂中的本发明有机硅化合物外，以与实施例2中相同的条件证实本发明的效果。结果见表3和图2。
表3 单位：mg/dL
| 样本 | 沉淀方法 | 对照 | 本发明的方法 | |
| 实施例3A | 实施例3B | |||
| 1234567891011121314151617181920212223242526 | 44.549.348.869.767.266.440.328.645.346.841.741.155.652.662.232.748.247.441.153.344.075.359.437.150.636.9 | 47.851.151.172.466.969.142.232.447.948.244.145.059.256.262.235.948.349.245.154.846.078.261.739.755.040.9 | 46.750.951.072.767.969.142.230.846.648.143.342.758.655.363.034.848.549.645.054.245.879.560.539.353.040.4 | 47.051.150.973.667.569.142.230.546.648.243.043.659.256.162.335.049.249.045.054.345.980.161.239.653.540.3 |
| 相关系数 | - | 0.995 | 0.997 | 0.996 |
| 斜率 | - | 0.963 | 1.006 | 1.015 |
| 截距 | - | 4.3 | 1.8 | 1.5 |
与利用不含本发明有机硅化合物的第二试剂测定的结果相比，利用含有本发明有机硅化合物的第二试剂测定的结果表现出改进的斜率和截距。该结果表明本发明的有机硅化合物确立了特定的条件，在该条件下HDL中的胆固醇与酶之间的反应比起LDL中的胆固醇与酶之间的反应占有优势，由此具有脂蛋白选择性的表面活性剂的特性得到了进一步的改善。
实施例4
除了将含有脂蛋白的30份血清样本用作样本以及将KF-700(浓度为0.08％，由Shin-Etsu Chemical有限公司生产)用作第二试剂中的本发明有机硅化合物外，以与实施例2中相同的条件证实本发明的效果。结果见表4和图3。
表4
| 样本 | 沉淀方法 | 对照 | 本发明的方法 |
| 123456789101112131415161718192021222324252627282930 | 98.695.087.484.080.476.674.271.869.263.660.060.859.858.655.855.854.452.049.048.645.043.445.044.642.041.838.038.437.035.0 | 98.794.587.984.782.679.076.674.670.667.663.864.763.260.959.760.058.356.353.849.548.247.146.847.044.043.042.341.138.537.0 | 98.295.089.484.581.879.276.174.170.067.464.263.962.961.359.259.157.154.652.848.847.546.646.045.842.942.040.939.937.236.0 |
| 相关系数 | - | 0.997 | 0.997 |
| 斜率 | - | 0.963 | 0.988 |
| 截距 | - | 4.7 | 2.7 |
与利用不含本发明有机硅化合物的第二试剂测定的结果相比，利用含有本发明有机硅化合物的第二试剂测定的结果表现出改进的斜率和截距。该结果表明本发明的有机硅化合物确立了特定的条件，在该条件下HDL中的胆固醇与酶之间的反应比起LDL中的胆固醇与酶之间的反应占有优势，由此具有脂蛋白选择性的表面活性剂的特性得到了进一步的改善。
实施例5
除了将含有脂蛋白的20份血清样本用作样本以及将表5中所列的有机硅化合物用在第二试剂中以外，以与实施例2中相同的条件证实本发明的效果。在表5中，实施例5A-5D的有机硅化合物被用于配制第二试剂，配制之前先将这些化合物溶解在乙醇中，至浓度达到10％。实施例5E和5F的有机硅化合物被用于配制第二试剂，配制之前先将这些化合物与SH8400(由Dow Corning Toray Silicone有限公司生产的改性硅油)一起混合溶解在乙醇中，使各自浓度分别达到10％。结果见表6。
表5
| 实施例 | 有机硅化合物* |
| 5A | BY11-030(0.03％) |
| 5B | BY22-008M(0.05％) |
| 5C | SH-244(0.03％) |
| 5D | SH-245(0.05％) |
| 5E | DC345(0.02％) |
| 5F | SH200C-2cs(0.02％) |
*全部由Dow Corning Toray Silicone有限公司生产(贴第23页的表6)
表6 单位：mg/dL
| 样本 | 沉淀方法 | 对照 | 本发明的方法 | |||||
| 实施例5A | 实施例5B | 实施例5C | 实施例5D | 实施例5E | 实施例5F | |||
| 1234567891011121314151617181920 | 90.481.477.974.472.069.968.065.465.359.958.757.956.254.052.751.850.049.443.041.1 | 92.083.181.577.972.970.867.270.466.762.860.761.258.555.655.352.151.152.346.143.9 | 93.083.182.678.274.071.168.870.366.862.460.661.657.155.655.452.452.152.544.743.2 | 94.584.382.079.276.071.469.371.067.163.360.962.157.857.355.552.752.451.944.944.0 | 93.282.882.278.573.171.168.669.666.162.761.361.257.656.354.952.650.551.745.543.4 | 94.782.882.679.274.271.969.271.867.963.661.761.659.155.755.753.252.052.345.443.7 | 93.085.982.878.575.071.469.670.568.262.660.762.058.656.755.653.151.752.044.843.8 | 92.783.582.978.074.270.768.469.967.262.060.461.657.455.655.352.452.152.344.243.5 |
| 相关系数 | - | 0.995 | 0.996 | 0.996 | 0.996 | 0.996 | 0.997 | 0.996 |
| 斜率 | - | 0.989 | 1.021 | 1.038 | 1.017 | 1.029 | 1.037 | 1.023 |
| 截距 | - | 2.81 | 0.99 | 0.54 | 1.15 | 1.15 | 0.56 | 0.82 |
与利用不含本发明有机硅化合物的第二试剂测定的结果相比，利用含有本发明有机硅化合物的第二试剂测定的结果表现出特别改进的截距。该结果表明本发明的有机硅化合物确立了特定的条件，在该条件下HDL中的胆固醇与酶之间的反应比起LDL中的胆固醇与酶之间的反应占有优势，由此具有脂蛋白选择性的表面活性剂的特性得到了进一步的改善。
工业实用性
通过利用本发明的方法不需要进行预处理如离心而由简单操作就能有效地定量测定特定部分中的脂质(例如胆固醇)。另外，由于所述方法通过仅使用少量样本的简单方法就能进行特异性测定，所以该方法可应用于多种类型的自动分析仪。因此该方法在临床诊断领域中极其有用。高度的脂蛋白选择性特别改进了截距和斜率，从而提供了对微小脂蛋白选择性进行调控的优势。
Claims (10)
1.一种测定血液成分中的脂质的方法，其特征在于在有机硅化合物存在以及无沉淀剂存在的条件下使以待测脂质为底物的酶与包含在特定脂蛋白中的脂质反应，并且其中通过乳化调节有机硅化合物的水溶性。
2.如权利要求1所述的方法，其中有机硅化合物是硅氧烷和/或硅氧烷的衍生物。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述硅氧烷或衍生物选自高聚合硅氧烷、环状硅氧烷、含硅表面活性剂和改性硅油。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述脂质是胆固醇、甘油三酯或磷脂。
5.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述包含在特定脂蛋白中的脂质是HDL-胆固醇。
6.如权利要求1所述的方法，其中在具有脂蛋白选择性的表面活性剂存在的条件下使酶作用于脂蛋白中的脂质。
7.一种用于测定HDL-胆固醇的试剂，其含有(1)有机硅化合物，(2)胆固醇酯酶，(3)胆固醇氧化酶，(4)过氧化物酶，和(5)显色剂。
8.如权利要求7所述的试剂，其进一步含有具有脂蛋白选择性的表面活性剂。
9.用于测定LDL-胆固醇的试剂盒，其包括：
第一试剂与第二试剂，所述第一试剂含有(1)有机硅化合物，(2)胆固醇酯酶，(3)胆固醇氧化酶，(4)过氧化物酶，和(5)通过结合产生颜色的两种化合物中的一种；所述第二试剂含有(6)通过结合产生颜色的两种化合物中的另外一种，和(7)对脂蛋白选择性低的表面活性剂。
10.如权利要求9所述的用于测定LDL-胆固醇的试剂盒，其中所述第一试剂进一步含有具有脂蛋白选择性的表面活性剂。
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