JP7377313B2 - リポ蛋白コレステロールの定量方法、定量試薬及び定量キット - Google Patents
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Description
[1]リポ蛋白を含む被検試料中のリポ蛋白コレステロールを、定量試薬を用いて定量するリポ蛋白コレステロールの定量方法であって、前記定量試薬が、定量対象となるリポ蛋白以外のリポ蛋白中のコレステロールを消去する工程を行うための第一試薬と、定量対象となるリポ蛋白中のコレステロールを測定する工程を行うための第二試薬を含み、前記被検試料中又は前記第一試薬中にリン脂質を添加することを含み、前記リン脂質が、定量されるコレステロールを含むリポ蛋白とは異なるリポ蛋白質である、定量方法。
[2]前記リン脂質が高密度リポ蛋白質(HDL)である[1]に記載の方法。
[3]前記リポ蛋白がトリグリセリドリッチリポ蛋白(TRL)又はsmall, dense LDLである[1]に記載の方法。
[4]リポ蛋白を含む被検試料中のリポ蛋白コレステロールを、定量試薬を用いて定量するリポ蛋白コレステロールの定量方法であって、前記定量試薬が、定量対象となるリポ蛋白以外のリポ蛋白中のコレステロールを消去する工程を行うための第一試薬と、定量対象となるリポ蛋白中のコレステロールを測定する工程を行うための第二試薬を含み、前記被検試料中又は前記第一試薬中にリン脂質を添加することを含み、前記リポ蛋白がトリグリセリドリッチリポ蛋白(TRL)である、定量方法。
[5]リポ蛋白を含む被検試料中のリポ蛋白コレステロールを、定量試薬を用いて定量するリポ蛋白コレステロールの定量方法であって、前記定量試薬が、定量対象となるリポ蛋白以外のリポ蛋白中のコレステロールを消去する工程を行うための第一試薬と、定量対象となるリポ蛋白中のコレステロールを測定する工程を行うための第二試薬を含み、前記被検試料中又は前記第一試薬中にリン脂質を添加することを含み、前記リポ蛋白がsmall, dense LDLである、定量方法。
[6][1]~[5]のいずれかに記載の方法に用いられるリポ蛋白中のコレステロールの定量試薬であって、前記第一試薬がリン脂質を含有する定量試薬。
[7][1]~[5]のいずれかに記載の方法に用いられるリポ蛋白コレステロールの定量キットであって、前記第一試薬及び前記第二試薬を含み、前記第一試薬がリン脂質を含む定量キット。
ロールエステル)及び遊離型コレステロールがある。本発明において単に「コレステロー
ル」という場合にはこれらの両者を包含する。
市販のHDL濃縮液(BRT社)を、HDL-C濃度が約50mg/dLになるように生理食塩水で希釈した希釈液A、およびHDL-C濃度が約100mg/dLになるように生理食塩水で希釈した希釈液Bを調製した。
PIPES,pH6.8 50mmol/L
コレステロールエステラーゼ 2U/mL
コレステロールオキシダーゼ 2U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル[HLB:12.8] 0.25%(w/v)
PIPES,pH6.8 50mmol/L
4-アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 20単位/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル 0.5%(w/v)
検体3μLに第一試薬を150μL加え、37℃で5分間反応させ、次いで、第二試薬を50μL加えて5分間反応させた後に、反応吸光度を主波長600nm、副波長700nmで測定した。
図1に示したように、生理食塩水を用いて調製された希釈系列1に比べ、HDLを含む希釈液A又は希釈液Bを用いて調製された希釈系列2および希釈系列3の方が良好な希釈直線性を示した。
ヒト血清2を、生理食塩水を用いて下記表4の通りに5段階希釈した希釈系列4、実施例1に記載の希釈液Bを用いて下記表5の通りに5段階希釈した希釈系列5を調製した。
検体3μLに第一試薬を150μL加え、37℃で5分間反応させ、次いで、第二試薬を50μL加えて5分間反応させた後に、反応吸光度を主波長600nm、副波長700nmで測定した。
図2に示したように、生理食塩水を用いて調製された希釈系列4に比べ、HDLを含む希釈液Bを用いて調製された希釈系列5の方が良好な希釈直線性を示した。
以下の第一試薬(TRL-C試薬1-2)、第二試薬(TRL-C試薬2)からなるTRL-C測定用試薬を調製した。
PIPES,pH6.8 50mmol/L
コレステロールエステラーゼ 2U/mL
コレステロールオキシダーゼ 2U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル[HLB:12.8] 0.25%(w/v)
HDL濃縮液 2mg/dL(HDL-C)
PIPES,pH6.8 50mmol/L
4-アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 20単位/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル 0.5%(w/v)
以下の第一試薬(TRL-C試薬1-3)、第二試薬(TRL-C試薬2)からなるTRL-C測定用試薬を調製した。
PIPES,pH6.8 50mmol/L
コレステロールエステラーゼ 2U/mL
コレステロールオキシダーゼ 2U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル[HLB:12.8] 0.25%(w/v)
HDL濃縮液 3mg/dL(HDL-C)
PIPES,pH6.8 50mmol/L
4-アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 20単位/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル 0.5%(w/v)
図3-1~図3-3に示したように、HDLを含まないTRL-C試薬を使用して測定した場合に比べ、HDLを含むTRL-C試薬を使用して測定した場合の方が良好な希釈直線性を示した。
以下の第一試薬(TRL-C試薬1-4)、第二試薬(TRL-C試薬2)からなるTRL-C測定用試薬を調製した。
PIPES,pH6.8 50mmol/L
コレステロールエステラーゼ 2U/mL
コレステロールオキシダーゼ 2U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル[HLB:12.8] 0.25%(w/v)
リン脂質(ホスファチジルコリン(PC)) 400mg/dL
PIPES,pH6.8 50mmol/L
4-アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 20単位/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル 0.5%(w/v)
以下の第一試薬(TRL-C試薬1-5)、第二試薬(TRL-C試薬2)からなるTRL-C測定用試薬を調製した。
PIPES,pH6.8 50mmol/L
コレステロールエステラーゼ 2U/mL
コレステロールオキシダーゼ 2U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル[HLB:12.8] 0.25%(w/v)
リン脂質(ホスファチジルコリン(PC)) 800mg/dL
PIPES,pH6.8 50mmol/L
4-アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 20単位/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル 0.5%(w/v)
以下の第一試薬(TRL-C試薬1-6)、第二試薬(TRL-C試薬2)からなるTRL-C測定用試薬を調製した。
PIPES,pH6.8 50mmol/L
コレステロールエステラーゼ 2U/mL
コレステロールオキシダーゼ 2U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル[HLB:12.8] 0.25%(w/v)
リン脂質(ホスファチジルコリン(PC)) 1600mg/dL
PIPES,pH6.8 50mmol/L
4-アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 20単位/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル 0.5%(w/v)
以下の第一試薬(TRL-C試薬1-7)、第二試薬(TRL-C試薬2)からなるTRL-C測定用試薬を調製した。
PIPES,pH6.8 50mmol/L
コレステロールエステラーゼ 2U/mL
コレステロールオキシダーゼ 2U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル[HLB:12.8] 0.25%(w/v)
リン脂質(リゾホスファチジルコリン(LPC)) 400mg/dL
PIPES,pH6.8 50mmol/L
4-アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 20単位/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル 0.5%(w/v)
以下の第一試薬(TRL-C試薬1-8)、第二試薬(TRL-C試薬2)からなるTRL-C測定用試薬を調製した。
PIPES,pH6.8 50mmol/L
コレステロールエステラーゼ 2U/mL
コレステロールオキシダーゼ 2U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル[HLB:12.8] 0.25%(w/v)
リン脂質(リゾホスファチジルコリン(LPC)) 800mg/dL
PIPES,pH6.8 50mmol/L
4-アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 20単位/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル 0.5%(w/v)
以下の第一試薬(TRL-C試薬1-9)、第二試薬(TRL-C試薬2)からなるTRL-C測定用試薬を調製した。
PIPES,pH6.8 50mmol/L
コレステロールエステラーゼ 2U/mL
コレステロールオキシダーゼ 2U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル[HLB:12.8] 0.25%(w/v)
リン脂質(リゾホスファチジルコリン(LPC)) 1600mg/dL
PIPES,pH6.8 50mmol/L
4-アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 20単位/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル 0.5%(w/v)
図4-1~図4-7に示したように、リン脂質を含まないTRL-C試薬を使用して測定した場合に比べ、リン脂質を含むTRL-C試薬を使用して測定した場合の方が良好な希釈直線性を示した。
以下の第一試薬(TRL-C試薬1-10)、第二試薬(TRL-C試薬2)からなるTRL-C測定用試薬を調製した。
PIPES,pH6.8 50mmol/L
コレステロールエステラーゼ 2U/mL
コレステロールオキシダーゼ 2U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル[HLB:12.8] 0.25%(w/v)
リン脂質様界面活性剤(LIPIDURE BL206(日油社)) 0.25%(w/v)
PIPES,pH6.8 50mmol/L
4-アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 20単位/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル 0.5%(w/v)
以下の第一試薬(TRL-C試薬1-11)、第二試薬(TRL-C試薬2)からなるTRL-C測定用試薬を調製した。
PIPES,pH6.8 50mmol/L
コレステロールエステラーゼ 2U/mL
コレステロールオキシダーゼ 2U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル[HLB:12.8] 0.25%(w/v)
リン脂質様界面活性剤(LIPIDURE BL1002(日油社)) 0.25%(w/v)
PIPES,pH6.8 50mmol/L
4-アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 20単位/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル 0.5%(w/v)
以下の第一試薬(TRL-C試薬1-12)、第二試薬(TRL-C試薬2)からなるTRL-C測定用試薬を調製した。
PIPES,pH6.8 50mmol/L
コレステロールエステラーゼ 2U/mL
コレステロールオキシダーゼ 2U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル[HLB:12.8] 0.25%(w/v)
リン脂質様界面活性剤(LIPIDURE SF08(日油社)) 0.25%(w/v)
PIPES,pH6.8 50mmol/L
4-アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 20単位/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル 0.5%(w/v)
以下の第一試薬(TRL-C試薬1-13)、第二試薬(TRL-C試薬2)からなるTRL-C測定用試薬を調製した。
PIPES,pH6.8 50mmol/L
コレステロールエステラーゼ 2U/mL
コレステロールオキシダーゼ 2U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル[HLB:12.8] 0.25%(w/v)
リン脂質様界面活性剤(LIPIDURE SF16(日油社)) 0.25%(w/v)
PIPES,pH6.8 50mmol/L
4-アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 20単位/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル 0.5%(w/v)
図5-1~図5-5に示したように、リン脂質様界面活性剤を含まないTRL-C試薬を使用して測定した場合に比べ、リン脂質様界面活性剤を含むTRL-C試薬を使用して測定した場合の方が良好な希釈直線性を示した。
Claims (7)
- リポ蛋白を含む被検試料中のリポ蛋白コレステロールを、定量試薬を用いて定量するリポ蛋白コレステロールの定量方法であって、
前記定量試薬が、定量対象となるリポ蛋白以外のリポ蛋白中のコレステロールを消去する工程を行うための第一試薬と、定量対象となるリポ蛋白中のコレステロールを測定する工程を行うための第二試薬を含み、
前記被検試料中又は前記第一試薬中にリン脂質を添加することを含み、
前記リン脂質が、定量されるコレステロールを含むリポ蛋白とは異なるリポ蛋白質である、定量方法。 - 前記リン脂質が高密度リポ蛋白質(HDL)である請求項1記載の方法。
- 前記リポ蛋白がトリグリセリドリッチリポ蛋白(TRL)又はsmall, dense LDLである請求項1記載の方法。
- リポ蛋白を含む被検試料中のリポ蛋白コレステロールを、定量試薬を用いて定量するリポ蛋白コレステロールの定量方法であって、
前記定量試薬が、定量対象となるリポ蛋白以外のリポ蛋白中のコレステロールを消去する工程を行うための第一試薬と、定量対象となるリポ蛋白中のコレステロールを測定する工程を行うための第二試薬を含み、
前記被検試料中又は前記第一試薬中にリン脂質を添加することを含み、
前記リポ蛋白がトリグリセリドリッチリポ蛋白(TRL)である、定量方法。 - リポ蛋白を含む被検試料中のリポ蛋白コレステロールを、定量試薬を用いて定量するリポ蛋白コレステロールの定量方法であって、
前記定量試薬が、定量対象となるリポ蛋白以外のリポ蛋白中のコレステロールを消去する工程を行うための第一試薬と、定量対象となるリポ蛋白中のコレステロールを測定する工程を行うための第二試薬を含み、
前記被検試料中又は前記第一試薬中にリン脂質を添加することを含み、
前記リポ蛋白がsmall, dense LDLである、定量方法。 - 請求項1~5のいずれか1項に記載の方法に用いられるリポ蛋白中のコレステロールの定量試薬であって、前記第一試薬がリン脂質を含有する定量試薬。
- 請求項1~5のいずれか1項に記載の方法に用いられるリポ蛋白コレステロールの定量キットであって、前記第一試薬及び前記第二試薬を含み、前記第一試薬がリン脂質を含む定量キット。
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