TW202217314A - 含有ｔａｒｃ之組成物及ｔａｒｃ之保存穩定性之提昇方法 - Google Patents

Abstract

本發明之課題在於，提供一種保存穩定性較高之含有TARC之組成物。  本發明藉由一種組成物，可解決上述課題，上述組成物係含有TARC（Thymus and activation-regulated chemokine，胸腺活化調節趨化因子）者，其包含TARC、及具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物，且為液狀。

Description

含有TARC之組成物及TARC之保存穩定性之提昇方法

本發明係關於一種含有TARC之組成物。更詳細而言，本發明係關於一種可長期穩定地保存TARC之組成物。又，本發明係關於一種TARC之測定方法及套組、TARC之保存穩定性之提昇方法、以及TARC之吸附防止劑。

胸腺活化調節趨化因子（Thymus and activation-regulated chemokine，以下有時稱為TARC）係C-C趨化因子配體17（CCL17），係具有白血球遷移作用之趨化因子之一種。TARC將作為淋巴球之一的Th2細胞吸引至病變部位，使得IgE產生或嗜酸性球之浸潤、活化。如此，使過敏反應亢進，藉此，TARC使異位性皮膚炎之症狀加重（非專利文獻1）。

對於異位性皮膚炎之炎症，重要的是快速且確實地使其鎮靜。TARC與其他用作表示異位性皮膚炎之病情之指標的血清IgE值、末梢血液嗜酸性球數、血清LDH值相比，與異位性皮膚炎之嚴重程度之一致性良好，更敏銳地反映病情（非專利文獻2）。因此，藉由使用TARC作為生物標記，於選擇或改變針對異位性皮膚炎之治療藥時，可客觀且快速地掌握嚴重程度，判定效果。

為了對生物試樣中之被測定成分進行定量，必須使用校正用試樣。校正用試樣係於內部標準或濃度校正用基準（校準物）等用途中使用之包含被測定成分之試樣。為了獲得準確之定量值，要求對時間經過或溫度穩定之校正用試樣。自操作之簡便性之觀點而言，校正用試樣較佳為有流動性之溶液之狀態（以下有時稱為「液狀」）。於該情形時，作為對校正用試樣而言理想之事項，可例舉：維持生物學活性（例如：對特異抗體之抗原性；對抗體或凝集素等所具有之特異性結合對象之結合活性；肽激素等所具有之生理活性、酵素活性；作為用於支持上述各活性之蛋白質之立體結構等）、防止吸附於容器上、維持防腐能力等。

作為意欲用於免疫學測定方法之、校正用試樣之以液狀保存之方法，已知有：使校正用試樣與酪蛋白及/或乳清蛋白共存而穩定抗原之方法（專利文獻1）、使校正用試樣與膽汁酸醯胺（bile acid amide）衍生物共存而穩定胰島素之方法（專利文獻2）、使校正用試樣與螯合劑共存而穩定可溶性介白素-2受體（sIL-2R）之方法（專利文獻3）。必須根據被穩定物質之性質研究穩定方法，但目前尚未對TARC之液狀校正用試樣進行詳細研究。  [先前技術文獻]  [專利文獻]

[專利文獻1]日本特開平08-005634  [專利文獻2]日本特開平08-012593  [專利文獻3]日本特開2010-230660  [非專利文獻]

[非專利文獻1]J Allergy Clin Immunol 107: 535-541, 2001  [非專利文獻2]日本皮膚科學會雜誌 116 (1): 27-39, 2006

[發明所欲解決之課題]

本發明之目的在於，提供一種保存穩定性較高之含有TARC之組成物。  [解決課題之技術手段]

本發明人等嘗試製作保存穩定性較高之含有TARC之組成物。繼而，發現於將TARC添加至包含具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之溶液之情形時，TARC之穩定性提昇。本發明係基於此種見解者。  具體而言，本發明如下。  ＜1＞一種組成物，其係含有TARC（胸腺活化調節趨化因子）者，其包含TARC、及具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物，且為液狀。  ＜2＞如＜1＞所記載之組成物，其係用於測定TARC之校正用試樣溶液。  ＜3＞如＜1＞或＜2＞所記載之組成物，其填充於保存容器。  ＜4＞如＜3＞所記載之組成物，其中，保存容器為塑膠或玻璃。  ＜5＞如＜1＞至＜4＞中任一項所記載之組成物，其中，TARC之濃度相對於上述組成物為10 pg/mL～1 μg/mL。  ＜6＞如＜1＞至＜5＞中任一項所記載之組成物，其中，上述聚合物之濃度相對於上述組成物為0.001質量%～5質量%。  ＜7＞如＜1＞至＜6＞中任一項所記載之組成物，其中，上述聚合物之重量平均分子量為1000～2000000。  ＜8＞如＜1＞至＜7＞中任一項所記載之組成物，其中，於TARC之濃度相對於上述組成物為500 pg/mL之情形時，於37℃於塑膠容器中保存28天後之TARC之殘存率為80%以上。  ＜9＞如＜1＞至＜8＞中任一項所記載之組成物，其中，於TARC之濃度相對於上述組成物為500 pg/mL之情形時，於4℃於塑膠容器中保存28天後之TARC之殘存率為80%以上。  ＜10＞如＜1＞至＜9＞中任一項所記載之組成物，其中，於TARC之濃度相對於上述組成物為500 pg/mL之情形時，於10℃於玻璃容器中保存12小時後之TARC之殘存率為30%以上。  ＜11＞如＜1＞至＜10＞中任一項所記載之組成物，其中，上述聚合物之重量平均分子量為10000～70000。  ＜12＞一種TARC之測定方法，其使用＜1＞至＜11＞中任一項所記載之組成物。  ＜13＞一種TARC之測定套組，其包含＜1＞至＜11＞中任一項所記載之組成物。  ＜14＞一種TARC之保存穩定性之提昇方法，其包括使TARC與包含具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之溶液相接觸之步驟。  ＜15＞如＜14＞所記載之TARC之保存穩定性之提昇方法，其包括進行調整以使上述TARC之濃度相對於上述溶液為10 pg/mL～1 μg/mL之步驟。  ＜16＞如＜14＞或＜15＞所記載之TARC之保存穩定性之提昇方法，其中，上述聚合物之濃度相對於上述溶液為0.001質量%～5質量%。  ＜17＞如＜14＞至＜16＞中任一項所記載之TARC之保存穩定性之提昇方法，其中，上述聚合物之重量平均分子量為10000～70000。  ＜18＞一種吸附防止劑，其係防止包含TARC之溶液中之TARC吸附於容器者，其含有具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物作為有效成分。  ＜19＞如＜18＞所記載之吸附防止劑，其中，上述包含TARC之溶液中之TARC之濃度相對於上述溶液為10 pg/mL～1 μg/mL。  ＜20＞如＜18＞或＜19＞所記載之吸附防止劑，其係以上述聚合物之濃度相對於上述溶液為0.001質量%～5質量%之方式使用。  ＜21＞如＜18＞至＜20＞中任一項所記載之吸附防止劑，其中，上述聚合物之重量平均分子量為10000～70000。  [發明之效果]

根據本發明，可提供一種保存穩定性較高之含有TARC之組成物、尤其是含有TARC之校正用試樣。因此，根據本發明，可準確地對生物試樣中之TARC進行定量，可準確地掌握異位性皮膚炎之嚴重程度。

（TARC）  於本說明書中，「TARC」意指胸腺活化調節趨化因子（CCL17）。TARC係具有白血球遷移作用之趨化因子之一種。TARC具有如下功能：將作為淋巴球之一的Th2細胞吸引至病變部位，而使IgE產生或嗜酸性球浸潤、活化。藉由使用TARC作為生物標記，於選擇或改變針對異位性皮膚炎之治療藥時，可客觀且快速地掌握嚴重程度。

TARC之測定可使用公知之方法、例如免疫學方法進行。作為免疫學方法，可例舉ELISA、酵素免疫測定法、表面電漿子共振法、乳膠凝集免疫測定法（LTIA）、化學發光免疫測定法、電化學發光免疫測定法、螢光抗體法、放射免疫測定法、西方印漬術、免疫層析法（immunochromatography）、及高效液相層析法（HPLC法）等。

作為本發明之組成物所含之TARC，可使用市售者，亦可使用親自製作或精製者。作為本發明之組成物所含之TARC，可使用於試管內製作者，亦可使用自生物提取者。

（TARC之濃度）  作為本發明之組成物所含之TARC之濃度，若考慮TARC之穩定性，則相對於組成物，較佳為10 pg/mL～1 μg/mL，更佳為50 pg/mL～500 ng/mL，進而較佳為100 pg/mL～100 ng/mL，最佳為100 pg/mL～50 ng/mL，但並不限定於以上。

（具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物）  於本發明之組成物中，具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物（以下有時僅稱為聚合物）並無特別限定，只要構成單體具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼即可。  作為具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物，可為2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼單獨之聚合物，亦可為2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼與其他單體之共聚物。其他單體可具有疏水性側鏈、親水性側鏈、陰離子性側鏈、陽離子性側鏈、或氫鍵性側鏈。亦可具有疏水性側鏈及親水性側鏈兩者。

2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼與其他單體之構成比根據使用之單體之結構等而不同，通常相對於共聚物，2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼之含量較佳為5莫耳%以上。

具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物例如可使用按照或依據日本特開2004-189678所示之公知之合成方法所製得者。2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼單體例如由日油股份有限公司銷售，業者可使其與任意之單體聚合，而製造具有所需性質之聚合物。又，例如可使用由日油股份有限公司銷售之LIPIDURE（註冊商標）系列，較佳為作為診斷藥領域製品銷售之LIPIDURE-BL系列，但並不限定於此。LIPIDURE-BL系列係使2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼單體與各種單體共聚所得之聚合物。較佳為使其與具有親水性基之單體共聚所得之LIPIDURE-BL100系列、使其與具有疏水性基之單體共聚所得之LIPIDURE-BL200系列、使其與具有負電荷之單體共聚所得之LIPIDURE-BL300系列、使其與具有正電荷之單體共聚所得之LIPIDURE-BL400系列、使其與具有氫鍵性基之單體共聚所得之LIPIDURE-BL700系列、使其與具有疏水性基之單體共聚所得之LIPIDURE-BL800系列、LIPIDURE-BL1000系列、LIPIDURE-BL1100系列、LIPIDURE-BL1200系列、LIPIDURE-BL1300系列。進而，更佳為LIPIDURE（註冊商標）-BL103、LIPIDURE（註冊商標）-BL203、LIPIDURE（註冊商標）-BL206（分子量約30萬）、LIPIDURE（註冊商標）-BL405、LIPIDURE（註冊商標）-BL502、LIPIDURE（註冊商標）-BL702、LIPIDURE（註冊商標）-BL802、LIPIDURE（註冊商標）-BL1002、LIPIDURE（註冊商標）-BL1201（分子量約40萬）、或LIPIDURE（註冊商標）-BL1301。

具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之重量平均分子量並無特別限定，只要可獲得期望之性能即可。關於具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之重量平均分子量及單體比，業者可參考日油股份有限公司製造之Lipidure-BL系列，根據目的選擇。  重量平均分子量之下限例如為1000，較佳為2000，更佳為5000，最佳為10000。重量平均分子量之上限例如為2000000，較佳為1000000，進而較佳為700000，進而較佳為100000，最佳為70000。重量平均分子量可藉由凝膠滲透層析法等方法進行測定。

具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物可單獨使用1種，亦可組合任意2種以上使用。除具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物以外，亦可添加陽離子性界面活性劑或陰離子性界面活性劑等界面活性劑。  於本發明之組成物中，具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物與TARC之添加順序並無特別限定，只要可獲得本發明之效果即可。

（具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之濃度）  於本發明之組成物中，關於具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之濃度，若考慮TARC之穩定性，則相對於組成物，較佳為0.0001質量%～5質量%，更佳為0.001質量%～5質量%，進而較佳為0.01質量%～5質量%，最佳為0.01質量%～1質量%，但並不限定於以上。

（保存容器）  本發明之組成物較佳為填充於保存容器。保存容器之材質並無特別限定，只要可獲得本發明之效果且可密封即可，至少與組成物相接觸之部分之一部分或全部為塑膠[例如，烯烴系樹脂、苯乙烯系樹脂、丙烯酸系樹脂、聚酯系樹脂、聚碳酸酯系樹脂、氟樹脂、含氯樹脂（聚氯乙烯等）、聚醯胺系樹脂、聚縮醛系樹脂、聚苯醚系樹脂（改質聚苯醚等）、聚芳酯、聚碸、聚醯亞胺系樹脂、纖維素系樹脂（乙酸纖維素等）、烴系樹脂（包含鹵素原子取代品）等]、金屬（鋁等）、玻璃等。其中，自校正用試樣之製造、運輸、保管之觀點而言，較佳為塑膠或玻璃，塑膠之中，較佳為烯烴系樹脂，更佳為聚丙烯。

保存容器可由單一之材質或由2種以上之材質所構成，較佳為由單一之材質所構成。保存容器可包含容器本體部分及蓋。於該情形時，容器本體部分與蓋可由不同之材質所構成。又，保存容器、尤其是本體部分較佳為具有可自外部看到內容液之程度之透明性。  作為保存容器之形態，硬質型或軟質型均可，可例示安瓿、小瓶、軟袋、注射型容器、玻璃瓶等。自易使用性及TARC之穩定性之觀點而言，保存容器較佳為包含容器本體部分及蓋部分之塑膠製滴眼瓶之形態、尤其是圓筒狀之滴眼瓶之形態。又，自易使用性及TARC之穩定性之觀點而言，保存容器較佳為玻璃製安瓿、或包含玻璃製容器本體部分及蓋之形態尤其是包含圓筒狀之玻璃容器及橡膠製蓋之形態。

（組成物）  本發明之組成物於TARC之測定中可用作校正用試樣溶液。於本說明書中，校正用試樣溶液意指用於準確地進行被測定物質之測定且以一定濃度含有被測定物質之試樣溶液，包括標準物質、校準物、對照物、及內部標準物質等。作為本發明之組成物之供給之形態，可例舉將TARC與具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物混合於溶劑中所得之預先製成溶液狀態之形態。  再者，於TARC之測定方法中「使用組成物」意指為了準確地進行TARC之測定而使用組成物，例如，意指將包含TARC之液狀組成物用作校正用試樣溶液（標準物質、校準物、對照物、及內部標準物質等）。

本發明之組成物之pH例如為4.0～9.5、5.0～9.0、6.0～8.5、6.5～8.0、或7.0～8.0。  pH之調整可使用業者周知之pH調整用試劑、例如氫氧化鈉或鹽酸等進行。

本發明之組成物之組成並無特別限制，只要不損害本發明之效果即可。若藉由免疫學測定方法對TARC進行測定，則不損害本發明之效果，且不妨礙抗原抗體反應、用於檢測出生物素-抗生物素蛋白之標記反應、酶反應等構成測定體系之反應之全部或一部分即可。可根據目的適當選擇免疫學測定方法中通常使用之各種成分使用，例如：乙酸、檸檬酸、磷酸、PBS（磷酸緩衝生理鹽水）、HEPES、MES、Tris、甘胺酸、硼酸、碳酸或古德氏緩衝液（Good’s buffer）等各種緩衝液；促進抗原抗體反應之成分（聚乙二醇、聚乙烯吡咯啶酮等高分子等）；醣蛋白質或肽（BSA、酪蛋白等）；胺基酸；鹽類（氯化鈉、氯化鉀等）；醣類（蔗糖、環糊精等）；防腐劑（疊氮化鈉、ProClin300等）等。較佳為使用pH為6.5～8.0之PBS。

於本說明書中，「保存穩定性之提昇」或「保存穩定性提昇」意指，包含TARC之溶液中所含之大部分TARC在較長時間內維持不分解，不改變結構或不吸附於容器之狀態，因此，該溶液中之TARC之初始值與保存後之測定值不存在較大差異。  更具體而言，「保存穩定性之提昇」或「保存穩定性提昇」可意指，例如包含濃度為10 pg/mL～1 μg/mL之TARC之溶液中所含之80%以上之TARC於37℃在28天內維持不分解，不改變結構或不吸附於容器之狀態，因此，於37℃於塑膠製容器中保存28天後之該溶液中之TARC之測定值為初始值之80%以上。  又，「保存穩定性之提昇」或「保存穩定性提昇」可意指，例如包含濃度為10 pg/mL～1 μg/mL之TARC之溶液中所含之80%以上之TARC於4℃在28天內維持不分解，不改變結構或不吸附於容器之狀態，因此，於4℃於塑膠製容器中保存28天後之該溶液中之TARC之測定值為初始值之80%以上。  又，「保存穩定性之提昇」或「保存穩定性提昇」可意指，例如包含濃度為10 pg/mL～1 μg/mL之TARC之溶液中所含之30%以上之TARC於10℃在12小時內維持不分解，不改變結構或不吸附於容器之狀態，因此，於10℃於玻璃製容器中保存12小時後之該溶液中之TARC之測定值為初始值之30%以上。

（用於進行TARC之測定之生物試樣）  作為用於進行TARC之測定之生物試樣，並無特別限定，可進行TARC之測定即可，較佳為使用血液、血清、或血漿。生物試樣可視需要適當實施預處理。生物試樣較佳為自人類採集之生物試樣。

（TARC之測定套組）  於本發明之TARC之測定套組中，藉由使用本發明之組成物，可簡便且準確地進行TARC之測定。作為TARC之測定套組，例如可例舉使用免疫學方法之套組。本發明之TARC之測定套組可包含用於藉由免疫學方法測定人體內之TARC之濃度之試劑。作為免疫學方法，可例舉ELISA、酵素免疫測定法、表面電漿子共振法、乳膠凝集免疫測定法（LTIA）、化學發光免疫測定法、電化學發光免疫測定法、螢光抗體法、放射免疫測定法、西方印漬術、免疫層析法、及高效液相層析法（HPLC法）等。  本發明之TARC之測定套組可用於在選擇異位性皮膚炎之治療方法或藥、以及判定治療效果時，掌握異位性皮膚炎之嚴重程度。

此外，本發明之TARC之測定套組亦可包含使用說明書等。TARC之測定套組亦可包含任意之構成要素、例如緩衝劑、穩定劑、檢體稀釋液、pH調整劑、反應容器等。

（TARC之保存穩定性之提昇方法）  本發明之TARC之保存穩定性之提昇方法包括使TARC與包含具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之溶液相接觸之步驟。可於將具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物添加至溶液中後，添加TARC，亦可於將TARC添加至溶液中後，添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物。溶液較佳為PBS、HEPES、MES、CHES及Tris等緩衝液。更佳為使用pH為6.5～8.0之PBS。

（TARC之濃度）  於本發明之TARC之保存穩定性之提昇方法中，作為溶液所含之TARC之濃度，若考慮TARC之穩定性，則較佳為10 pg/mL～1 μg/mL，更佳為50 pg/mL～500 ng/mL，進而較佳為100 pg/mL～100 ng/mL，最佳為100 pg/mL～50 ng/mL，但並不限定於以上。

（具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物）  於本發明之TARC之保存穩定性之提昇方法中，具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物並無特別限定，只要具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單體即可。  作為具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物，可為2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼單獨之聚合物，亦可為2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼與其他單體之共聚物。其他單體可具有疏水性側鏈、親水性側鏈、陰離子性側鏈、陽離子性側鏈、或氫鍵性側鏈。亦可具有疏水性側鏈及親水性側鏈兩者。

2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼與其他單體之構成比根據使用之單體之結構等而不同，2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼之含量較佳為5莫耳%以上。

具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物可使用按照或依據公知之合成方法所製得者，亦可使用市售品、例如日油股份有限公司製造之LIPIDURE（註冊商標）系列。較佳為LIPIDURE-BL系列，更佳為LIPIDURE（註冊商標）-BL103、LIPIDURE（註冊商標）-BL203、LIPIDURE（註冊商標）-BL206（分子量約30萬）、LIPIDURE（註冊商標）-BL405、LIPIDURE（註冊商標）-BL502、LIPIDURE（註冊商標）-BL702、LIPIDURE（註冊商標）-BL802、LIPIDURE（註冊商標）-BL1002、LIPIDURE（註冊商標）-BL1201（分子量約40萬）、或LIPIDURE（註冊商標）-BL1301。

具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之重量平均分子量並無特別限定，只要可獲得期望之性能即可。該分子量之下限例如為1000，較佳為2000，更佳為5000，最佳為10000。該分子量之上限例如為2000000，較佳為1000000，進而較佳為700000。重量平均分子量可藉由凝膠滲透層析法等方法進行測定。

具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物例如可使用按照或依據日本特開2004-189678所示之公知之合成方法所製得者。2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼單體例如由日油股份有限公司銷售，業者可藉由使其與任意之單體聚合，而製造具有所需性質之聚合物。又，例如可使用由日油股份有限公司銷售之LIPIDURE（註冊商標）系列，較佳為作為診斷藥領域製品銷售之LIPIDURE-BL系列，但並不限定於此。LIPIDURE-BL系列係使2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼單體與各種單體共聚所得之聚合物。較佳為使其與具有親水性基之單體共聚所得之LIPIDURE-BL100系列、使其與具有疏水性基之單體共聚所得之LIPIDURE-BL200系列、使其與具有負電荷之單體共聚所得之LIPIDURE-BL300系列、使其與具有正電荷之單體共聚所得之LIPIDURE-BL400系列、使其與具有氫鍵性基之單體共聚所得之LIPIDURE-BL700系列、使其與具有疏水性基之單體共聚所得之LIPIDURE-BL800系列、LIPIDURE-BL1000系列、LIPIDURE-BL1100系列、LIPIDURE-BL1200系列、LIPIDURE-BL1300系列。進而，更佳為LIPIDURE（註冊商標）-BL103、LIPIDURE（註冊商標）-BL203、LIPIDURE（註冊商標）-BL206（分子量約30萬）、LIPIDURE（註冊商標）-BL405、LIPIDURE（註冊商標）-BL502、LIPIDURE（註冊商標）-BL702、LIPIDURE（註冊商標）-BL802、LIPIDURE（註冊商標）-BL1002、LIPIDURE（註冊商標）-BL1201（分子量約40萬）、或LIPIDURE（註冊商標）-BL1301。

（TARC之吸附防止劑）  本發明之TARC之吸附防止劑包含具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物。可於使包含TARC之溶液與保存容器相接觸之前，於保存容器中添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物，亦可提前於包含TARC之溶液中添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物作為吸附防止劑，再將其添加至保存容器中。

接下來，例舉實施例對本發明具體地進行說明，然而，該等並未限定本發明之範圍。再者，實施例中使用之添加劑之製品名、成分名及經銷商如下。  ・Lipidure-BL系列，日油股份有限公司製造  ・Acetamin（註冊商標）24 成分名：椰油胺乙酸鹽（cocamine acetate），花王股份有限公司  ・Emanon（註冊商標）1112 成分名：聚乙二醇單月桂酸酯，花王股份有限公司  ・Brij（註冊商標）35 成分名：聚氧乙烯月桂醚，岸田化學股份有限公司  ・Triton（註冊商標）X-100 成分名：聚乙二醇單對異辛基苯基醚，岸田化學股份有限公司  ・MEGA-9 成分名：正壬醯基-N-甲基-D-還原葡糖胺，同仁化學研究所股份有限公司  ・CHAPS 成分名：3-[(3-膽醯胺丙基)二甲胺基]丙磺酸鹽（3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]propanesulfonate），同仁化學研究所股份有限公司  [實施例]

≪實施例1：玻璃小瓶中之保存穩定性試驗結果≫  對於玻璃小瓶中之TARC之保存穩定性進行試驗。試驗方法及評價方法如下。作為保存液，使用以下組成之溶液。  ・PBS（pH7.2）  ・1質量% BSA  ・添加劑（濃度、製品名、種類記載於表1中）

（1）保存條件  將0.5 mL各濃度之TARC之液狀保存液分注於玻璃容器中，於10℃保存12小時。作為對照，將分注於玻璃容器前之試樣亦用於測定。關於TARC之濃度，以500 pg/mL、2000 pg/mL、及10000 pg/mL進行試驗。

（2）測定方法  藉由使用2種抗體之乳膠免疫比濁法進行測定。以下，示出試劑之組成及測定方法。使用第一試劑及第二試劑，藉由日立自動分析裝置進行測定。 ・第一試劑 100 mM MOPS-NaOH（pH7.5） 500 mM NaCl 0.5% BSA ・第二試劑 抗人類TARC單株抗體致敏乳膠（2種） 5 mM MOPS-NaOH（pH7.0） 再者，抗人類TARC單株抗體使用市售之TARC抗原，藉由業者周知之方法獲得。市售之TARC抗原有：CCL17, thymus and activation regulated chemokine（Shenandoah Biotechnology, Inc.）、CCL17/TARC, Human（LifeSpan Biosscience, Inc.）、Human TARC（CCL17）（Abeomics, Inc.）。進而，藉由業者周知之方法選定可對TARC抗原進行夾心式測定之單株抗體之組合。抗人類TARC單株抗體致敏乳膠係參考日本特開2017-181377中記載之方法來製備。  首先，於各濃度之TARC之液狀保存液2.4 μL中，各添加120 μL第一試劑，於37℃加溫5分鐘。其後，各添加40 μL第二試劑並攪拌。其後，於主波長570 nm、副波長800 nm對5分鐘之吸光度變化進行測定。使用對濃度已知之標準物質進行測定所得之校準曲線，將所測定之吸光度之變化量換算成TARC濃度。

（3）TARC殘存率（%）之算出  關於在10℃保存12小時後之各TARC液狀保存液之TARC濃度，使用下述式算出TARC殘存率（%）。

TARC殘存率（%）＝於玻璃容器中於10℃保存12小時後之各TARC液狀保存液之TARC濃度（pg/mL）/分注於玻璃容器前之TARC液狀保存液之TARC濃度（pg/mL）×100

（4）將於各條件下使用之添加劑、濃度示於表1中，將評價結果示於表2中。再者，TARC殘存率（%）係基於3次實驗之平均值算出。

[表1]

於各條件下使用之添加劑之濃度、製品名及種類
條件	添加劑
濃度（質量%）	製品名	共聚之單體所具有之側鏈之性質
1	-	無	無
2	0.01%	Lipidure-BL206	疏水性側鏈
3	0.05%
4	0.1%
5	0.5%
6	1.0%
7	0.1%	Lipidure-BL103	親水性側鏈
8	0.1%	Lipidure-BL405	陰離子性側鏈
9	0.1%	Lipidure-BL502	陽離子性側鏈
10	0.1%	Lipidure-BL702	氫鍵性側鏈
11	0.1%	Lipidure-BL802	疏水性、氫鍵性側鏈
12	0.1%	Lipidure-BL1002	疏水性側鏈
13	0.1%	Lipidure-BL1201	疏水性側鏈
14	0.1%	Lipidure-BL1301	疏水性側鏈
15	0.1% 0.01%	Lipidure-BL206 Acetamin 24	併用Lipidure-BL206與陽離子性界面活性劑

[表2]  評價結果（於10℃保存12小時之情形時之TARC殘存率（%））

條件	TARC 500 pg/mL樣本	TARC 2000 pg/mL樣本	TARC 10000 pg/mL樣本
1	0.0	5.2	10.2
2	30.1	72.5	70.9
3	33.9	67.1	70.2
4	60.3	83.6	81.6
5	77.3	80.7	82.1
6	76.9	82.1	80.9
7	68.0	89.4	88.8
8	32.3	51.3	51.9
9	89.7	100.8	99.2
10	48.5	76.9	81.9
11	50.4	73.0	75.5
12	73.2	81.7	88.2
13	57.9	77.5	76.4
14	74.6	81.4	85.2
15	83.1	96.6	98.7

於TARC濃度為500 pg/mL之情形時，於不添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之條件1下，經過12小時後之殘存率為0.0%，所有TARC吸附於玻璃容器上，或結構發生變化。與此相對，於添加0.01、0.05%之作為具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物的Lipidure-BL206之條件2、3下，殘存率為30.1、33.9%，得到改善。進而於添加0.1%之Lipidure-BL206之條件4下，殘存率為60.3%，於添加0.5%、1.0%之Lipidure-BL206之條件5、6下，殘存率為75%以上，得到大幅改善。又，同樣，於添加0.1%之具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物且具有各種側鏈結構之化合物之條件7～14下，TARC殘存率為32.3%～89.7%，與條件1相比得到大幅改善。  於TARC濃度為2000 pg/mL、10000 pg/mL之情形時，亦同樣地對TARC殘存率進行評價。於不添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之條件1下，經過12小時後之殘存率為5.2%、10.2%，與此相對，於本發明中發現之條件2～14下，TARC殘存率為51.3%～100.8%，得到大幅改善。由以上可知，只要是具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物，不論共聚之單體所具有之側鏈之性質如何，TARC殘存率均得到改善。  進而，於將具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之Lipidure-BL206與陽離子性界面活性劑併用之條件15下，同樣，與條件1相比，TARC殘存率得到大幅改善。又，與單獨使用相同濃度之Lipidure-BL206之條件4相比，併用界面活性劑之情形時獲得TARC殘存率更高之結果。  由以上可知，藉由使具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物與TARC共存，於玻璃小瓶中保存時之TARC之保存穩定性得到改善。認為其原因在於，於條件2～15下，藉由添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物，可防止TARC吸附於容器之壁面，或可抑制保存中之TARC之結構變化。進而可知，藉由將任意之界面活性劑與具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物併用，可獲得更高之效果。

≪實施例2：塑膠製滴眼瓶中之保存穩定性試驗結果≫  對於塑膠製滴眼瓶中之TARC之保存穩定性進行試驗。試驗方法及評價方法如下。

（1）保存條件  將0.5 mL各濃度之TARC之液狀保存液分注於塑膠製滴眼瓶中，於37℃保存28天、或於4℃保存28天。關於TARC之濃度，以500 pg/mL、2000 pg/mL、及10000 pg/mL進行試驗。

（2）測定方法  藉由與實施例1相同之方法進行測定。

（3）TARC殘存率（%）之算出  關於在37℃保存28天、或於4℃保存28天後之各TARC之液狀保存液之TARC之濃度，使用下述式算出TARC殘存率（%）。

TARC殘存率（%）＝於滴眼瓶中於37℃保存28天、或於4℃保存28天後之各TARC液狀保存液之TARC濃度（pg/mL）/剛製備之TARC液狀保存液之TARC濃度（pg/mL）×100

（4）於與表1相同之條件下實施研究，將評價結果示於表3、4中。再者，TARC殘存率（%）係使用3次實驗之平均值算出。

[表3]  評價結果（於37℃保存28天之情形時之TARC殘存率（%））

條件	TARC 500 pg/mL樣本	TARC 2000 pg/mL樣本	TARC 10000 pg/mL樣本
1	47.2	86.4	87.3
2	94.8	97.4	91.5
3	88.5	98.0	93.9
4	92.6	94.9	95.5
5	84.9	94.6	91.6
6	90.2	88.8	88.3
7	90.3	94.5	94.9
8	90.7	100.6	97.9
9	89.0	95.8	93.3
10	96.1	97.2	95.3
11	88.2	97.5	96.8
12	91.2	91.9	100.7
13	87.9	102.4	94.9
14	92.5	92.6	92.5
15	83.9	93.0	93.7

於TARC濃度為500 pg/mL之情形時，於不添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之條件1下，經過28天後之殘存率為47.2%。另一方面，於添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之條件2～15下，殘存率為83.9～96.1，維持較高值。同樣，於TARC濃度為2000 pg/mL、10000 pg/mL之情形時，與不添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之條件1相比，於添加本案中發現之具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之條件2～15下，TARC殘存率得到改善。認為其原因在於，於條件2～15下，藉由添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物，可防止TARC吸附於容器之壁面，或可抑制保存中之TARC之結構變化。

[表4]  評價結果（於4℃保存28天之情形時之TARC殘存率（%））

條件	TARC 500 pg/mL樣本	TARC 2000 pg/mL樣本	TARC 10000 pg/mL樣本
1	65.7	86.6	92.6
2	88.6	98.4	97.4
3	88.9	97.8	100.3
4	93.8	100.3	99.8
5	88.5	95.6	102.0
6	87.4	96.7	100.7
7	95.3	97.6	100.9
8	96.6	97.0	101.4
9	82.1	97.7	99.1
10	92.2	96.5	99.6
11	81.1	95.4	101.1
12	87.3	97.2	100.9
13	83.1	99.0	101.0
14	95.7	95.8	101.1
15	88.4	94.3	97.8

於TARC濃度為500 pg/mL之情形時，於不添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之條件1下，經過28天後之殘存率為65.7%，為較低之結果。另一方面，於添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之條件2～15下，殘存率為81.1～96.6%，維持較高值。同樣，於TARC濃度為2000 pg/mL、10000 pg/mL之情形時，與不添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之條件1相比，於添加本案中發現之具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之條件2～15下，TARC殘存率得到改善。認為其原因在於，於條件2～15下，藉由添加具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物，可防止TARC吸附於容器之壁面，或可抑制保存中之TARC之結構變化。

≪比較例1：玻璃小瓶中之保存穩定性試驗結果≫  對於玻璃小瓶中之TARC之保存穩定性進行試驗。作為保存液，使用以下組成之溶液。  ・PBS（pH7.2）  ・1質量% BSA  ・界面活性劑（濃度、製品名、種類記載於表5中）  除使用界面活性劑作為添加劑、及將保存時間設為6小時以外，按照與實施例1相同之步序進行實驗。

[表5]

於各條件下使用之添加劑之濃度、製品名及種類
條件	界面活性劑
濃度（質量%）	製品名	種類
1	-	無	無
16	0.01%	Emanon 1112	非離子性	聚乙二醇脂肪酸酯型
17	0.01%	Brij35	非離子性	醇型
18	0.01%	TritonX-100	非離子性	烷基酚型
19	0.01%	MEGA-9	非離子性	糖醯胺（sugar amide）型
20	0.01%	CHAPS	兩性	膽汁酸型

[表6]  評價結果（於10℃保存6小時之情形時之TARC殘存率（%））

條件	TARC 500 pg/mL樣本	TARC 2000 pg/mL樣本	TARC 10000 pg/mL樣本
1	4.4	42.7	65.4
16	4.1	49.9	69.2
17	1.4	51.9	74.5
18	7.8	52.5	72.8
19	0.6	50.9	69.4
20	3.9	48.6	69.2

於TARC濃度為500 pg/mL之情形時，於不添加界面活性劑之條件1下，經過6小時後之殘存率為4.4%，大部分TARC吸附於玻璃容器，或結構發生變化。與此相對，於添加具有特定結構之非離子性界面活性劑、或兩性界面活性劑之條件16～20下，經過6小時後之殘存率為0.6%～7.8，與不添加界面活性劑之條件1相比，殘存率未得到改善。同樣，於TARC濃度為2000 pg/mL、10000 pg/mL之情形時，與不添加界面活性劑之條件1相比，於添加具有特定結構之非離子性界面活性劑、或兩性界面活性劑之條件16～20下，TARC殘存率未得到改善。  因此，認為具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物與比較例1中使用之具有特定結構之非離子性界面活性劑及兩性界面活性劑相比，具有更好之TARC之保存穩定性之提昇效果。尤其是條件20係添加專利文獻2中所示之化合物，然而，於所研究之所有TARC濃度下，未見保存穩定性之提昇效果。  [產業上之可利用性]

根據本發明，可提供一種保存穩定性較高之含有TARC之組成物、尤其是含有TARC之校正用試樣。

無

無

Claims (20)

1. 一種組成物，其係含有TARC（Thymus and activation-regulated chemokine，胸腺活化調節趨化因子）者，  其包含TARC、及  具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物，且  為液狀。
2. 如請求項1之組成物，其係用於測定TARC之校正用試樣溶液。
3. 如請求項1或2之組成物，其填充於保存容器。
4. 如請求項3之組成物，其中，保存容器為塑膠或玻璃。
5. 如請求項1至4中任一項之組成物，其中，TARC之濃度相對於上述組成物為10 pg/mL～1 μg/mL。
6. 如請求項1至5中任一項之組成物，其中，上述聚合物之濃度相對於上述組成物為0.001質量%～5質量%。
7. 如請求項1至6中任一項之組成物，其中，上述聚合物之重量平均分子量為1000～2000000。
8. 如請求項1至7中任一項之組成物，其中，於TARC之濃度相對於上述組成物為500 pg/mL之情形時，於37℃於塑膠容器中保存28天後之TARC之殘存率為80%以上。
9. 如請求項1至8中任一項之組成物，其中，於TARC之濃度相對於上述組成物為500 pg/mL之情形時，於4℃於塑膠容器中保存28天後之TARC之殘存率為80%以上。
10. 如請求項1至9中任一項之組成物，其中，於TARC之濃度相對於上述組成物為500 pg/mL之情形時，於10℃於玻璃容器中保存12小時後之TARC之殘存率為30%以上。
11. 如請求項1至10中任一項之組成物，其中，上述聚合物之重量平均分子量為10000～70000。
12. 一種TARC之測定方法，其使用請求項1至11中任一項之組成物。
13. 一種TARC之測定套組，其包含請求項1至11中任一項之組成物。
14. 一種TARC之保存穩定性之提昇方法，其包括使TARC與包含具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物之溶液相接觸之步驟。
15. 如請求項14之TARC之保存穩定性之提昇方法，其包括進行調整以使上述TARC之濃度相對於上述溶液為10 pg/mL～1 μg/mL之步驟。
16. 如請求項14或15之TARC之保存穩定性之提昇方法，其中，上述聚合物之濃度相對於上述溶液為0.001質量%～5質量%。
17. 如請求項14至16中任一項之TARC之保存穩定性之提昇方法，其中，上述聚合物之重量平均分子量為10000～70000。
18. 一種吸附防止劑，其係防止包含TARC之溶液中之TARC吸附於容器者，其含有具有2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼作為構成單位之聚合物作為有效成分。
19. 如請求項18之吸附防止劑，其中，上述包含TARC之溶液中之TARC之濃度相對於上述溶液為10 pg/mL～1 μg/mL。
20. 如請求項18或19之吸附防止劑，其中，上述聚合物之重量平均分子量為10000～70000。