CN109856132A - 一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，包括：外壳上壳，设置于外壳上壳上的加样孔，外壳下壳，设置于外壳下壳的外壳检测孔，设置于外壳下壳上的底板，设置于底板上的底板检测孔，设置于底板检测孔上端的反应层，设置于反应层上的沉淀层，设置于沉淀层上的全血分离层，设置于加样孔下并覆盖全血分离层的扩散膜；本发明从配方和结构上改进测试卡，使得测试卡与本公司研发的干式生化分析仪配套使用的检测结果与医院检验结果匹配性好，本发明使用简单，无需专业人士操作。

Description

一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡及其制备 方法

技术领域

本发明涉及检测领域，特别是一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡及其制备方法。

背景技术

高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)主要是由肝脏合成，由磷脂、载脂蛋白、胆固醇和少量脂肪酸组成，主要生理功能是转运磷脂和胆固醇。高密度脂蛋白是一种抗动脉粥样硬化的脂蛋白，是冠心病的保护因子。能促进外周组织中胆固醇的消除，防止动脉粥样硬化的危险。高密度脂蛋白分子所携的胆固醇，是逆向转运的内源性胆固醇酯，将其运入肝脏，再清除出血液。高密度脂蛋白从细胞膜上摄取胆固醇，经卵磷脂胆固醇酰基转移酶催化而成胆固醇酯，然后再将携带的胆固醇酯转移到极低密度脂蛋白和低密度脂蛋白上。高密度脂蛋白含有人胆固醇总量的20％～30％。

血浆高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平与冠心病的发生呈负相关，它主要通过促进胆固醇逆向转运(reversecholesterol transport，RCT)、抗氧化、抗炎等机制来实现抗动脉粥样硬化我国成年男性HDL-C多在1.16-1.42mmol/L,(45-55mg/dl)，女性较高，多在1.29-1.55mmol/L(50-60mg/dl)。正常人HDL-C约占TC的25％-30％。常用生化试剂参考范围：0.91-2.17mmol/L。HDL可将胆固醇从周围组织(包括动脉粥样斑块)转运到肝脏进行再循环或以胆酸的形式排泄，这一过程称为胆固醇逆向转运。HDL通过介导胆固醇的逆向转运，一方面清除了动脉管壁胆固醇，抑制新生斑块生长；另一方面在降低胆固醇的同时，增加斑块的稳定性，抑制斑块破裂，降低心血管事件的危险性，所以检测高密度脂蛋白胆固醇检测是有必要的，通过了解或控制高密度脂蛋白胆固醇的量，从而降低冠心病发生的概率。

高密度脂蛋白胆固醇的检测现在主要都是采用湿化学法，用试剂盒配套大生化分析仪进行检测，时间久，操作复杂，专业人士操作。给用户或病人带来一些不便用。而干法检测现在几家公司有相关的产品，但是都是总胆固醇和甘油三酯一起检测的，所以造成了资源浪费，价格更高的现象，本发明解决这样的问题。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡及其制备方法，本发明从配方和结构上改进测试卡，使得测试卡与干式生化分析仪配套使用能快速定量检测人或动物体内全血、血清/血浆、其它体液中高密度脂蛋白胆固醇的含量；检测结果与医院检验结果匹配性好，本发明使用简单，无需专业人士操作。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，包括：外壳上壳，设置于外壳上壳上的加样孔，外壳下壳，设置于外壳下壳的外壳检测孔，设置于外壳下壳上的底板，设置于底板上的底板检测孔，设置于底板检测孔上端的反应层，设置于反应层上的沉淀层；

反应层上的反应液包括：5-50KU/L的胆固醇酯酶，5-50KU/L的胆固醇氧化酶，5-50KU/L抗坏血酸氧化酶，5-50KU/L的过氧化物酶，0.1-10g/L显色物质，10-200g/L稳定剂，1-100g/L成膜剂，0.1-10g/L表面活性剂，0.1-1M缓冲液；

沉淀层上的沉淀液包括：1-100g/L硫酸葡萄聚糖，1-100g/L硫酸镁，0.1-1M缓冲液。

前述的一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，沉淀层上设置有全血分离层，加样孔下设置有覆盖全血分离层的扩散膜。

前述的一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，成膜剂包括：0.1％-5％聚乙烯醇，0.1％-5％的聚乙烯吡咯烷酮，0.1％-5％的硫酸葡聚糖，0.1％-5％羟乙基纤维素，0.1％-5％羟甲基纤维素，0.1％-5％羟丙基纤维素，0.1％-5％壳聚糖，0.1％-5％环糊精中的一种或几种的组合。

前述的一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，稳定剂包括：蛋白类稳定剂，多糖类稳定剂，聚乙二醇稳定剂中的一种或几种的组合。

前述的一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，表面活性剂包括：tween-20,tween-80,tritonX-100,triton X-405,Emulgen B66,OP-10中的一种或几种的组合。

前述的一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，显色物质包括：0.01％-1％的N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-贰甲基苯胺钠盐，3,3',5,5'-四甲基联苯胺，N,N-双(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二钠盐，N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-贰甲基苯胺钠盐，N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐，苯醌中的一种或几种的组合。

前述的一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，缓冲液为Ph值为6-8的磷酸缓冲液。

一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡的制备方法，包括：

步骤一：按照如下配方配制反应液，配方包括：5-50KU/L的胆固醇酯酶，5-50KU/L的胆固醇氧化酶，5-50KU/L抗坏血酸氧化酶，5-50KU/L的过氧化物酶，0.1-10g/L显色物质，10-200g/L稳定剂，1-100g/L成膜剂，0.1-10g/L表面活性剂，0.1-1M缓冲液；搅拌一小时后待用；

步骤二：按照如下配方配制沉淀液，配方包括：1-100g/L硫酸葡萄聚糖，1-100g/L硫酸镁，0.1-1M缓冲液；搅拌两小时后待用；

步骤三：制作反应层：将反应层浸泡在反应液中1-10min后取中，25-50度环境下干燥10-60min后待用；

步骤四：制作沉淀层：将沉淀层浸泡在沉淀液中1-10min后取中，25-50度环境下干燥10-60min后待用；

步骤五：取外壳上壳，外壳下壳，底板，反应层，沉淀层，全血分离膜和扩散膜层；再将底板，反应层，沉淀层，全血分离膜和扩散膜层按顺序叠放在外壳下壳中，再将外壳上壳盖紧，得到测试卡成品。

本发明的有益之处在于：

本发明从配方和结构上改进测试卡，使得测试卡与干式生化分析仪配套使用能快速定量检测人或动物体内全血、血清/血浆、其它体液中高密度脂蛋白胆固醇的含量，本发明使用简单，无需专业人士操作，适合各个药店，门诊，研究所，社区医院，宠物医院，检验中心或其他政府普查性检查；

用本发明的测试卡的检测结果医院值相比，R平方值为0.99，说明与医院检验结果匹配性好。

附图说明

图1是本发明的一种实施例的分解示意图；

图2是本发明的一种实施例的截面示意图；

图3是本发明的成品1的测试值与医院值的线性关系；

图4是本发明的成品2的测试值与医院值的线性关系；

图5是本发明的成品3的测试值与医院值的线性关系；

图6是本发明的成品4的测试值与医院值的线性关系。

图中附图标记的含义：

100外壳下壳，101外壳检测孔，200底板，201底板检测孔，300反应层，400沉淀层，500全血分离层，600扩散膜，700外壳上壳，701加样孔。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。

如图1、2所示，一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，包括：外壳上壳700，设置于外壳上壳700上的加样孔701，外壳下壳100，设置于外壳下壳100的外壳检测孔101，设置于外壳下壳100上的底板200，设置于底板200上的底板检测孔201，设置于底板检测孔201上端的反应层300，设置于反应层300上的沉淀层400，设置于沉淀层400上的全血分离层500，设置于加样孔701下并覆盖全血分离层500的扩散膜600。作为一种实施例，外壳可以选塑料材质，底板200可以选用PET材质或PVC材质的单面胶；反应层300可以选用纤维素膜或尼绒膜；沉淀层400可以选用玻纤膜，滤纸或尼绒膜；全血分离层500可以选用多孔径的纤维素膜；扩散膜600可以选用尼绒膜。

样品滴入加样孔701内后，经过扩散膜600匀速渗入全血分离层500，经过全血分离层500后，红细胞滞留在全血分离层500上方，血清透过全血分离层500达到沉淀层400和反应层300上进行反应。

反应层300上的反应液包括：5-50KU/L的胆固醇酯酶，5-50KU/L的胆固醇氧化酶，5-50KU/L抗坏血酸氧化酶，5-50KU/L的过氧化物酶，0.1-10g/L显色物质，1-100g/L成膜剂，0.1-10g/L表面活性剂，0.1-1M缓冲液；

沉淀层400上的沉淀液包括：1-100g/L硫酸葡萄聚糖，1-100g/L硫酸镁，0.1-1M缓冲液。

作为一种实施例，成膜剂包括：0.1％-5％聚乙烯醇，0.1％-5％的聚乙烯吡咯烷酮，0.1％-5％的硫酸葡聚糖，0.1％-5％羟乙基纤维素，0.1％-5％羟甲基纤维素，0.1％-5％羟丙基纤维素，0.1％-5％壳聚糖，0.1％-5％环糊精中的一种或几种的组合。

作为一种实施例，稳定剂包括：蛋白类稳定剂，多糖类稳定剂，聚乙二醇稳定剂中的一种或几种的组合。蛋白类有：牛血清白蛋白、酪蛋白等；多糖类有：蔗糖、海藻糖、甘露醇等；聚乙二醇类有：聚乙二醇10000、聚乙二醇6000、聚乙二醇1000等。

作为一种实施例，表面活性剂包括：tween-20,tween-80,tritonX-100,triton X-405,Emulgen B66,OP-10中的一种或几种的组合。

作为一种实施例，显色物质包括：0.01％-1％的N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-贰甲基苯胺钠盐，3,3',5,5'-四甲基联苯胺，N,N-双(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二钠盐，N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-贰甲基苯胺钠盐，N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐，苯醌中的一种或几种的组合。

作为一种实施例，缓冲液为Ph值为6-8的磷酸缓冲液。

一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡的制备方法，包括：

步骤一：按照如下配方配制反应液，配方包括：5-50KU/L的胆固醇酯酶，5-50KU/L的胆固醇氧化酶，5-50KU/L抗坏血酸氧化酶，5-50KU/L的过氧化物酶，5-50KU/L的过氧化物酶，0.1-10g/L显色物质，10-200g/L稳定剂，1-100g/L成膜剂，0.1-10g/L表面活性剂，0.1-1M缓冲液；搅拌一小时后待用；

步骤二：按照如下配方配制沉淀液，配方包括：1-100g/L硫酸葡萄聚糖，1-100g/L硫酸镁，0.1-1M缓冲液；搅拌两小时后待用；

步骤三：制作反应层300：将反应层300浸泡在反应液中1-10min后取中，25-50度环境下干燥10-60min后待用；

步骤四：制作沉淀层400：将沉淀层400浸泡在沉淀液中1-10min后取中，25-50度环境下干燥10-60min后待用；

步骤五：取外壳上壳700，外壳下壳100，底板200，反应层300，沉淀层400，全血分离膜和扩散膜600层；再将底板200，反应层300，沉淀层400，全血分离膜和扩散膜600层按顺序叠放在外壳下壳100中，再将外壳上壳700盖紧，得到测试卡成品。

实验验证部分：

按照如下实施例的方法制得成品1，成品2，成品3，成品4。

实施例1

成品1的制作方法包括以下步骤：

步骤一：配制试剂A:将5KU胆固醇酯酶，10KU胆固醇氧化酶，5KU抗坏血酸氧化酶，5KU的过氧化物酶，1g的聚乙烯醇，5g牛血清白蛋白,5g海澡糖，5g聚乙烯吡咯烷酮,1gtritonX-100,1g N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-贰甲基苯胺钠盐,2g4-氨基安替比林加入到1L 0.1MPh值为6.0的的磷酸缓冲液中搅拌一小时后待用；

步骤二：配制试剂B：将20g硫酸葡萄聚糖，20g硫酸镁加入1L 0.1M Ph值为6.0的的磷酸缓冲液中搅拌两小时后待用；

步骤三：反应层300制作：将反应层300浸泡在试剂A中5min后取中，50度环境下干燥10min后待用；反应层300选用纤维素膜；

步骤四，沉淀层400制作：将沉淀层400浸泡在试剂B中5min后取中，50度环境下干燥10min后待用；沉淀层400选用玻纤膜；

步骤五，取外壳上壳700，外壳下壳100，底板200，反应层300，沉淀层400，全血分离膜和扩散膜600层，外壳选用塑料外壳，底板200选用PET材质的单面胶；全血分离层500选用多孔径的纤维素膜；扩散膜600选用尼绒膜；再将底板200，反应层300，沉淀层400，全血分离膜和扩散膜600层按顺序叠放在外壳下壳100中，再将外壳上壳700盖紧，得到测试卡成品2。

实施例2

成品2的制作方法包括以下步骤：

步骤一：配制试剂A:将15KU胆固醇酯酶，25KU胆固醇氧化酶，20KU抗坏血酸氧化酶，10KU的过氧化物酶，5g的聚乙烯醇，10g牛血清白蛋白,20g海澡糖，10g聚乙烯吡咯烷酮,2gtritonX-100,3g N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-贰甲基苯胺钠盐,2g4-氨基安替比林加入到1L 0.2MPh值为6.0的的磷酸缓冲液中搅拌一小时后待用；

步骤二：配制试剂B：将50g硫酸葡萄聚糖，50g硫酸镁加入1L 0.1M Ph值为6.0的的磷酸缓冲液中搅拌两小时后待用；

3.步骤三：反应层300制作：将反应层300浸泡在试剂A中5min后取中，35度环境下干燥30min后待用；反应层300选用纤维素膜；

步骤四，沉淀层400制作：将沉淀层400浸泡在试剂B中5min后取中，35度环境下干燥30min后待用；沉淀层400选用玻纤膜；

步骤五，取外壳上壳700，外壳下壳100，底板200，反应层300，沉淀层400，全血分离膜和扩散膜600层；，外壳选用塑料外壳，底板200选用PET材质的单面胶；全血分离层500选用多孔径的纤维素膜；扩散膜600选用尼绒膜；再将底板200，反应层300，沉淀层400，全血分离膜和扩散膜600层按顺序叠放在外壳下壳100中，再将外壳上壳700盖紧，得到测试卡成品2。

实施例3

成品3的制作方法包括以下步骤：

步骤一：配制试剂A:将40KU胆固醇酯酶，40KU胆固醇氧化酶，40KU抗坏血酸氧化酶，40KU的过氧化物酶，50g的聚乙烯醇，50g牛血清白蛋白,50g海澡糖，50g聚乙烯吡咯烷酮,5gtritonX-100,6g N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-贰甲基苯胺钠盐,2g4-氨基安替比林加入到1L 1MPh值为6.0的的磷酸缓冲液中搅拌一小时后待用；

步骤二：配制试剂B：将75g硫酸葡萄聚糖，75g硫酸镁加入1L 0.1M Ph值为6.0的的磷酸缓冲液中搅拌两小时后待用；

3.步骤三：反应层300制作：将反应层300浸泡在试剂A中10min后取中，25度环境下干燥50min后待用；反应层300选用纤维素膜；

步骤四，沉淀层400制作：将沉淀层400浸泡在试剂B中10min后取中，25度环境下干燥50min后待用；沉淀层400选用玻纤膜；

步骤五，取外壳上壳700，外壳下壳100，底板200，反应层300，沉淀层400，全血分离膜和扩散膜600层；，外壳选用塑料外壳，底板200选用PET材质的单面胶；全血分离层500选用多孔径的纤维素膜；扩散膜600选用尼绒膜；再将底板200，反应层300，沉淀层400，全血分离膜和扩散膜600层按顺序叠放在外壳下壳100中，再将外壳上壳700盖紧，得到测试卡成品2。

实施例4：

对比成品的制作方法包括以下步骤：

步骤一：配制试剂A:将15KU胆固醇酯酶，25KU胆固醇氧化酶，20KU抗坏血酸氧化酶，10KU的过氧化物酶，5g的聚乙烯醇，10g牛血清白蛋白,20g海澡糖，10g聚乙烯吡咯烷酮,2gtritonX-100,3g N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-贰甲基苯胺钠盐,2g4-氨基安替比林加入到1L 0.2MPh值为6.0的的磷酸缓冲液中搅拌一小时后待用；

步骤二：反应层300制作：将反应层300浸泡在试剂A中5min后取中，35度环境下干燥30min后待用；反应层300选用纤维素膜；

步骤三，取外壳上壳700，外壳下壳100，底板200，反应层300沉淀层400，全血分离膜和扩散膜600层；，外壳选用塑料外壳，底板200选用PET材质的单面胶；全血分离层500选用多孔径的纤维素膜；扩散膜600选用尼绒膜；再将底板200，反应层300沉淀层400，全血分离膜和扩散膜600层按顺序叠放在外壳下壳100中，再将外壳上壳700盖紧，得到测试卡成品4。

实施例4与其他三个实施例相比缺少沉淀层400。

将成品1、2、3、4的测试卡进行评价，评价方法为与医院结果进行比对。

将以上做的测试卡与自制的本公司研发的干式生化分析仪DBM-101测试，随机抽取有梯度的20个静脉血样品进行测试，然后与医院值相比进行评价。

成品1的数据结果见下表1和图3所示；

表1自制成品测试值与医院值的对比数据

结果分析：用成品1与本公司研发的干式生化分析仪DBM-101配合进行测试，随机抽取有梯度的20个静脉血样品进行测试，然后与医院值相比，R平方值为0.958，说明检测结果与医院检验结果匹配性好。

成品2的数据结果见下表2和图4所示：

表2自制成品测试值与医院值的对比数据

结果分析：用成品2与本公司研发的干式生化分析仪DBM-101配合进行测试，随机抽取有梯度的20个静脉血样品进行测试，然后与医院值相比，R平方值为0.99，说明检测结果与医院检验结果匹配性很好。

成品3的数据结果见下表3和图5

表3自制成品测试值与医院值的对比数据

结果分析：用成品3与本公司研发的干式生化分析仪DBM-101配合进行测试，随机抽取有梯度的20个静脉血样品进行测试，然后与医院值相比，R平方值为0.968，说明检测结果与医院检验结果匹配性好。

成品4的数据结果见下表4和图6

表4自制成品测试值与医院值的对比数据

结果分析：用成品4与本公司研发的干式生化分析仪DBM-101配合进行测试，随机抽取有梯度的20个静脉血样品进行测试，然后与医院值相比，结果无线性。沉淀层将高密度胆固醇和低密度胆固醇分离开，只能让高密度胆固醇渗透到反应层；说明沉淀层对高密度脂蛋白胆固醇的检测起到关键作用。

本发明提供一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡及其制备方法，本发明从配方和结构上改进测试卡，使得测试卡与干式生化分析仪配套使用能快速定量检测人或动物体内全血、血清/血浆、其它体液中高密度脂蛋白胆固醇的含量；检测结果与医院检验结果匹配性好，本发明使用简单，无需专业人士操作。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。

Claims (8)

1.一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，其特征在于，包括：外壳上壳，设置于外壳上壳上的加样孔，外壳下壳，设置于所述外壳下壳的外壳检测孔，设置于所述外壳下壳上的底板，设置于所述底板上的底板检测孔，设置于底板检测孔上端的反应层，设置于所述反应层上的沉淀层；

所述反应层上的反应液包括：5-50KU/L的胆固醇酯酶，5-50KU/L的胆固醇氧化酶，5-50KU/L抗坏血酸氧化酶，5-50KU/L的过氧化物酶，0.1-10g/L显色物质，10-200g/L稳定剂，1-100g/L成膜剂，0.1-10g/L表面活性剂，0.1-1M缓冲液；

所述沉淀层上的沉淀液包括：1-100g/L硫酸葡萄聚糖，1-100g/L硫酸镁，0.1-1M缓冲液。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，其特征在于，所述沉淀层上设置有全血分离层，加样孔下设置有覆盖所述全血分离层的扩散膜。

3.根据权利要求1所述的一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，其特征在于，所述成膜剂包括：0.1％-5％聚乙烯醇，0.1％-5％的聚乙烯吡咯烷酮，0.1％-5％的硫酸葡聚糖，0.1％-5％羟乙基纤维素，0.1％-5％羟甲基纤维素，0.1％-5％羟丙基纤维素，0.1％-5％壳聚糖，0.1％-5％环糊精中的一种或几种的组合。

4.根据权利要求1所述的一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，其特征在于，所述稳定剂包括：蛋白类稳定剂，多糖类稳定剂，聚乙二醇稳定剂中的一种或几种的组合。

5.根据权利要求1所述的一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，其特征在于，所述表面活性剂包括：tween-20,tween-80,tritonX-100,triton X-405,EmulgenB66,OP-10中的一种或几种的组合。

6.根据权利要求1所述的一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，其特征在于，所述显色物质包括：0.01％-1％的N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-贰甲基苯胺钠盐，3,3',5,5'-四甲基联苯胺，N,N-双(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二钠盐，N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-贰甲基苯胺钠盐，N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐，苯醌中的一种或几种的组合。

7.根据权利要求1所述的一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡，其特征在于，所述缓冲液为Ph值为6-8的磷酸缓冲液。

8.一种用于检测样本中高密度脂蛋白胆固醇的测试卡的制备方法，其特征在于，包括：

步骤一：按照如下配方配制反应液，配方包括：5-50KU/L的胆固醇酯酶，5-50KU/L的胆固醇氧化酶，5-50KU/L抗坏血酸氧化酶，5-50KU/L的过氧化物酶，0.1-10g/L显色物质，1-100g/L成膜剂，10-200g/L稳定剂，0.1-10g/L表面活性剂，0.1-1M缓冲液；搅拌一小时后待用；

步骤二：按照如下配方配制沉淀液，配方包括：1-100g/L硫酸葡萄聚糖，1-100g/L硫酸镁，0.1-1M缓冲液；搅拌两小时后待用；

步骤三：制作反应层：将反应层浸泡在反应液中1-10min后取中，25-50度环境下干燥10-60min后待用；

步骤四：制作沉淀层：将沉淀层浸泡在沉淀液中1-10min后取中，25-50度环境下干燥10-60min后待用；

步骤五：取外壳上壳，外壳下壳，底板，反应层，沉淀层，全血分离膜和扩散膜层；再将底板，反应层，沉淀层，全血分离膜和扩散膜层按顺序叠放在外壳下壳中，再将外壳上壳盖紧，得到测试卡成品。