CN117106938A - 一种用于检测阴道炎病原体的试剂、试剂盒及应用 - Google Patents

一种用于检测阴道炎病原体的试剂、试剂盒及应用 Download PDF

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Abstract

本申请公开了一种用于检测阴道炎病原体的试剂、试剂盒及应用，所述阴道炎病原体包括阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫中的至少其一，所述试剂包括用于检测阴道加德纳菌的第一引物探针组、用于检测念珠菌的第二引物探针组和用于检测阴道毛滴虫的第三引物探针组中的至少其一。本申请的第一引物探针组能够特异性检测阴道加德纳菌，第二引物探针组能够特异性检测多种分型的念珠菌，第三引物探针组能够特异性检测阴道毛滴虫，三种引物探针组针对各自靶标的检测特异性好，抗干扰性强，不易与待测样本中可能存在的定植菌或其他病原体有交叉反应，也避免待测样本中干扰物质抑制PCR扩增，且对多种阴道炎病原体的覆盖度高，极大程度上提升了检测准确性。

Description

一种用于检测阴道炎病原体的试剂、试剂盒及应用
技术领域
本申请涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种用于检测阴道炎病原体的试剂、试剂盒及应用。
背景技术
阴道炎是妇科的常见病和多发病，感染复发率高，严重影响广大育龄妇女身心健康。目前中国约有6.67亿女性，成年女性约4亿人，阴道炎发病率约50％，复发率约30％，而细菌性阴道炎、念珠菌性阴道炎和滴虫性阴道炎是临床上最常见的三种阴道炎。
细菌性阴道炎(bacterial vaginitis，BV)是由于正常菌群减少，以高浓度的阴道加德纳菌(GV)、各种厌氧菌及人型支原体替代了正常、健康的阴道乳酸杆菌，而引起的一种临床疾病。在细菌学上表现为正常菌群(乳酸杆菌)减少、厌氧菌群(阴道加德纳菌、嗜血杆菌等)增加的临床症候群。阴道加德纳菌是细菌性阴道病的常见致病菌，是引起尿道炎、子宫内膜炎、子宫颈上皮不典型增生的致病菌。
念珠菌性阴道炎(vul vovaginal candidiasis，VVC)是第二种常见的阴道炎，常见程度仅次于细菌性阴道病。念珠菌性阴道炎主要由念珠菌(CA)中的白色念珠菌等感染所致，分为白色念珠菌和非白念珠菌性阴道炎。近年来，非白念珠菌(光滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、乳酒念珠菌等)所占比例有所上升。四分之三的成年女性在其一生当中会至少经历一次VVC感染，40％～45％的会经历第二次，接近5％的成年女性人群忍受复发的痛苦，且经常是交叉感染。
滴虫性阴道炎(trichomonasvaginitis，TV)是由阴道毛滴虫所引起的妇科常见病。阴道毛滴虫是寄生在人体阴道及泌尿道的具有鞭毛的真核生物种。阴道毛滴虫感染是一种普遍的非病毒的生殖道感染性疾病，也是目前最为流行的性传播疾病之一。
目前，阴道感染常用的检测方法和技术手段为显微镜镜检法、干化学酶法和聚合酶链式反应法；其中，镜检法主观性较强，对检验人员经验要求高，检查敏感性和特异性较低，尤其是对BV及混合感染检测，更易造成漏检、误检；而干化学酶法灵敏度和结果的准确度又较低；聚合酶链式反应法采用实时荧光定量核酸扩增(real time qPCR)技术进行检测，其主要优点是检测速度快，检测灵敏度高，以便捷地对阴道炎病原体进行高效检测，但在检测临床样本时，容易受到样本中的定植菌等其他病原体以及干扰物质的影响，对于一些不常见的菌种也容易发生漏检或者误检，检测特异性和检测灵敏度以及检测覆盖度无法得到协同兼顾，导致检测结果不准。
发明内容
针对上述现有技术中存在的问题，本申请提供了一种用于检测阴道炎病原体的试剂、试剂盒及应用，针对靶标的检测特异性好，抗干扰性强，不易受到待测样本中定植菌或其他病原体或干扰物质的影响，提升检测准确性。所述技术方案如下：
本申请提供了一种用于检测阴道炎病原体的试剂，所述阴道炎病原体包括阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫中的至少其一，其特征在于，所述试剂包括用于检测阴道加德纳菌的第一引物探针组、用于检测念珠菌的第二引物探针组和用于检测阴道毛滴虫的第三引物探针组中的至少其一；
所述第一引物探针组包括如SEQ ID NO.1所示的第一上游引物、如SEQ ID NO.2所示的第一下游引物和如SEQ ID NO.3所示的第一探针；
所述第二引物探针组包括如SEQ ID NO.4所示的第二上游引物、如SEQ ID NO.5所示的第二下游引物和如SEQ ID NO.6所示的第二探针；
所述第三引物探针组包括如SEQ ID NO.7所示的第三上游引物、如SEQ ID NO.8所示的第三下游引物和如SEQ ID NO.9所示的第三探针。
进一步地，所述试剂包括所述第一引物探针组、所述第二引物探针组和第三引物探针组。
进一步地，所述试剂中的第一探针的5'端、第二探针的5'端和第三探针的5'端分别采用不同的荧光基团进行标记，所述荧光基团包括Cy5荧光基团、VIC荧光基团、FAM荧光基团与ROX荧光基团中的至少一种；
所述试剂中的第一探针的3'端、第二探针的3'端和第三探针的3'端分别采用淬灭基团进行标记，所述淬灭基团包括DABCYL淬灭基团、TAMRA淬灭基团、MGB淬灭基团和BHQ淬灭基团中的至少一种。
本申请还提供了一种试剂盒，包括qPCR预混液与如上任一项所述的用于检测阴道炎病原体的试剂。
进一步地，所述试剂盒用于阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫的共同检测。
进一步地，所述试剂盒能够检出待测样本中的白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌和乳酒念珠菌中的至少一种。
进一步地，所述试剂盒满足下述特征中的至少其一：
第一上游引物、第一下游引物和第一探针中至少其一的浓度为90～120μg/mL；
第二上游引物、第二下游引物和第二探针中至少其一的浓度为90～120μg/mL；
第三上游引物、第三下游引物和第三探针中至少其一的浓度为90～120μg/mL。
进一步地，所述试剂盒包括：
进一步地，所述试剂盒满足下述特征中的至少其一：
所述试剂盒针对阴道加德纳菌的最低检测限为100CFU/mL；
所述试剂盒针对念珠菌的最低检测限为200CFU/mL；
所述试剂盒针对阴道毛滴虫的最低检测限为100个/mL。
本申请还提供了一种如上任一项所述的用于检测阴道炎病原体的试剂或如上任一项所述的试剂盒在检测阴道炎病原体中的应用，所述阴道炎病原体包括阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫中的至少其一。
实施本申请，具有如下有益效果：
1、本申请的第一引物探针组能够特异性检测阴道加德纳菌，第二引物探针组能够特异性检测多种分型的念珠菌，第三引物探针组能够特异性检测阴道毛滴虫，三种引物探针组针对各自靶标的检测特异性好，不易与待测样本中可能存在的定植菌或其他病原体有交叉反应，从而避免检测出假阳性；同时，各个引物探针组的抗干扰性强，避免待测样本中的干扰物质抑制PCR扩增而导致的假阴性；并且，该用于检测阴道炎病原体的试剂对多种阴道炎病原体的覆盖度高，包容性好，不易发生漏检，从而极大程度上提升了检测准确性。
2、本申请中的第二引物探针组针对念珠菌的覆盖度高，不仅能够检出较为常见的白色念珠菌，还能够检出包括光滑念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌和乳酒念珠菌等在内的非白色念珠菌，检测覆盖度得到了大大提升，包容性好，不易发生漏检。
3、本申请的第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组能够在一次检测中对阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫进行共检以及鉴别，避免多次重复检测，大大提升检测效率，使患者能够更快速地得到针对性治疗；并且，在共同检测过程中，第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组中的多种引物之间不会相互干扰，不会影响各自PCR扩增的稳定进行，能够大大提升阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫共检时的检测准确性和检测可靠性。
附图说明
为了更清楚地说明本申请的技术方案，下面将对实施例中所使用的附图作简单的介绍，其中相同的零部件用相同的附图标记表示。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它附图。
图1为本申请采用第一引物探针组检测阴道加德纳菌的检测结果；
图2为本申请采用第二引物探针组检测念珠菌的检测结果；
图3为本申请采用第三引物探针组检测阴道毛滴虫的检测结果；
图4为本申请中采用包括第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组对阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫进行共检的检测结果。
具体实施方式
下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请的一部分实施例，而不是全部的实施例，因此不能理解为对本申请的限制。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
需要说明的是，本申请的描述中，对于以下定义的术语，除非在权利要求书或本说明书中的其他地方给出一个不同的定义，否则应当应用这些定义。所有数值无论是否被明确指示，在此均被定义为由术语“约”修饰。术语“约”大体上是指一个数值范围，本领域的普通技术人员将该数值范围视为等同于所陈述的值以产生实质上相同的性质、功能、结果等。由一个低值和一个高值指示的一个数值范围被定义为包括该数值范围内包括的所有数值以及该数值范围内包括的所有子范围。
需要说明的是，本申请的说明书和权利要求书及附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的对象在适当情况下可以互换，以便本申请的实施例能够以除了下述图示或下述描述以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、或产品固有的其它步骤或单元。
混合性阴道炎(mixed vaginitis)是两种或两种以上的致病微生物导致的阴道炎症，相较于单一阴道炎症，混合性阴道炎的诊治更加困难，目前临床上常见的混合性阴道炎是念珠菌性阴道炎(VVC)合并细菌性阴道病(BV)感染以及滴虫性阴道炎合并细菌性阴道病(BV)感染；混合性阴道炎临床表现多样且不典型，故在一次检测中进行鉴别诊断非常重要；使用多重荧光PCR可以方便地实现对多种不同阴道炎病原体的同时检测，但使用多重荧光PCR检测临床样本时，往往会面临如下问题：
1)引物间相互干扰：各靶标单独扩增时性能良好，但组合起来相互间有影响导致性能下降，故当样本中同时存在两种或三种病原体时，它们的扩增可能有相互干扰；
2)念珠菌有多种型别，包括白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌和乳酒念珠菌等，引物/探针的覆盖度不够，导致包容性不佳，容易发生漏检；
3)阴道中有大量的定植菌和其它病原体，引物/探针的特异性不好，容易有交叉反应，得到假阳性结果；
4)阴道炎病原体的检测，一般使用阴道拭子，样本中的干扰物质可能抑制PCR反应，导致假阴性的结果。
为了解决上述多重荧光PCR检测过程中所面临问题中的至少其一，本申请提供了一种用于检测阴道炎病原体的试剂及试剂盒，该试剂包括用于检测阴道加德纳菌的第一引物探针组、用于检测念珠菌的第二引物探针组和用于检测阴道毛滴虫的第三引物探针组中的至少其一，其中，第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组中各个引物序列和各个探针序列如表1所示；该第一引物探针组针对阴道加德纳菌的特异性好，灵敏度高，第二引物探针组针对念珠菌的特异性好且灵敏度高，第三引物探针组针对阴道毛滴虫的特异性好且灵敏度高，在检测过程中，第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组均不易受到待测样本中定植菌等其他病原体以及干扰物质的影响，检测准确性高。
表1用于检测阴道炎病原体的试剂中引物和探针的序列
具体地，该用于检测阴道炎病原体的试剂中包括第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组中的至少其二，当待测样本中存在两类阴道炎病原体时，能够同时检测出两类不同种类的阴道炎病原体，大大提高检测效率，便于针对混合性阴道炎的鉴别诊断，且两组引物探针组之间无相互干扰，当待测样本中同时存在多种病原体时，各自的扩增不会相互干扰，检测准确性高。
在一些实施例中，该用于检测阴道炎病原体的试剂包括第一引物探针组和第二引物探针组，以对阴道加德纳菌和念珠菌进行共同检测；在另一些实施例中，该用于检测阴道炎病原体的试剂包括第一引物探针组和第三引物探针组，以对阴道加德纳菌和阴道毛滴虫进行共同检测；在其他实施例中，该用于检测阴道炎病原体的试剂包括第二引物探针组和第三引物探针组，以对念珠菌和阴道毛滴虫进行共同检测。
在一些优选实施例中，该用于检测阴道炎病原体的试剂中包括第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组，以实现对阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫的共检，通过一次检测即可准确检测出阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫的阳性或者阴性，并鉴别出待测样本中的病毒种类，特异性好，包容性好，抗干扰能力强，检测高效可靠，准确性高；并且，三组引物探针组的特异性均十分优异，不易与待测样本中的定植菌和其他病原体产生交叉反应，从而避免假阳性结果；此外，也不易受到待测样本中的干扰物质的影响，避免干扰物质抑制PCR扩增反应而导致的假阴性结果，大大提升检测准确性；当待测样本中同时存在阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫三类阴道炎病原体时，通过该用于检测阴道炎病原体的试剂进行检测，能够在一次检测过程中鉴别诊断，且在同一PCR扩增体系中进行PCR扩增反应时，三组引物探针组之间无相互干扰，各自的扩增不会相互干扰，检测准确性和检测效率都得到了极大的提升，使患者能够及时得到针对性的治疗。
具体地，该用于检测阴道炎病原体的试剂中采用的第一探针的5'端、第二探针的5'端和第三探针的5'端分别采用不同的荧光基团进行标记，第一探针的3'端、第二探针的3'端和第三探针的3'端分别采用淬灭基团进行标记，以有效区分不同引物探针组对应的检测结果，避免混淆和误检；其中，荧光基团包括Cy5荧光基团、VIC荧光基团、FAM荧光基团与ROX荧光基团中的至少一种，淬灭基团包括DABCYL淬灭基团、TAMRA淬灭基团、MGB淬灭基团和BHQ淬灭基团中的至少一种；需要说明的是，荧光基团和淬灭基团并不限于上述列举的荧光基团和淬灭基团，还可以包括其他荧光基团和淬灭基团，只要能够有效区分不同探针的荧光基团和淬灭基团都可以在本说明书的保护范围之内。
本申请还提供一种试剂盒，包括qPCR预混液(qPCR mix)与上述的引物探针组合物，其中，qPCR mix是一种即用型混合物，包含有除引物和模板以外的所有组分，用于qPCR过程中核酸的扩增和检测；在本申请中，该qPCR mix包含有除第一引物探针组、第二引物探针组、第三引物探针组和模板以外的所有组分，用于阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫中至少其一的荧光PCR扩增。
具体地，在一个优选实施例中，该试剂盒中包括第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组，可以选择单独采用第一引物探针组单独检测阴道加德纳菌，也可以选择单独采用第二引物探针组检测念珠菌，还可以选择单独采用第三引物探针组检测阴道毛滴虫；进一步地，可以用于上述三种阴道炎病原体中其中两种的共检，例如，阴道加德纳菌和念珠菌的共检。
具体地，在一个优选实施例中，该试剂盒用于阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫的共同检测，能够通过一次检测准确检测出阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫的阳性或者阴性，并鉴别出待测样本中的病毒种类，特异性好，灵敏度高，抗干扰能力强，检测效率快，检测准确性高。
具体地，该试剂盒中的第二引物探针组对念珠菌具有优异的检测覆盖度，能够有效检出待测样本中的白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌和乳酒念珠菌中的至少一种；当待测样本中存在任意一种念珠菌或者任意几种念珠菌共同存在时，该第二引物探针组均能够有效检出念珠菌，对念珠菌的包容性好，不易发生漏检，提升检测准确性。
具体地，在一些可选实施例中，该试剂盒中第一上游引物、第一下游引物和第一探针中至少其一的浓度为90～120μg/mL；可以理解地，第一上游引物、第一下游引物和第一探针的浓度可以为90～120μg/mL中的任意点值，示例性地，可以为90μg/mL，100μg/mL，110μg/mL，120μg/mL等，第一上游引物、第一下游引物和第一探针的浓度可选为相同或不同；使用时可以移取预设用量的第一上游引物、第一下游引物和第一探针进行检测，方便快捷。
在一些可选实施例中，试剂盒中第二上游引物、第二下游引物和第二探针中至少其一的浓度为90μg/mL～120μg/mL，即第二上游引物、第二下游引物和第二探针的浓度可以为90μg/mL～120μg/mL中的任意点值，在此不做枚举；在一些可选实施例中，试剂盒中第三上游引物、第三下游引物和第三探针中至少其一的浓度为90μg/mL～120μg/mL。
具体地，该试剂盒中存储有预设用量的用于检测阴道炎病原体的试剂和qPCRmix；在该试剂盒的单次检测过程中，每种上游引物的预设用量为0.01μL～2μL，每种下游引物的预设用量为0.01μL～2μL，每种探针的预设用量为0.01μL～1.5μL，其中，每个预设用量可选为上述对应范围中的任意点值，此处不做枚举。
具体地，在一个可选实施例中，在单次检测过程中，试剂盒包括5μL～15μL的qPCRmix；可以理解地，该qPCR mix的用量可以为5μL～15μL中的任意点值，示例性地，可以为5μL，8μL，10μL，12μL，15μL等。
可选地，该试剂盒还包括纯化水，纯化水是包括且仅包括氧化氢的纯净物，提升试剂盒的使用便利性，也避免外界环境污染试剂盒而影响检测结果。
具体地，在一些可选实施例中，试剂盒用于阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫的共同检测，该试剂盒包括以下用量的组分：
具体地，该试剂盒采用PCR扩增反应对阴道炎病原体进行检测，该PCR扩增反应包括预变性阶段、变性阶段和退火阶段，则该PCR扩增反应的预设条件包括下述条件中的至少其一：
预变性阶段的预变性温度为95～99℃；
变性阶段的变性温度为95～99℃；
退火阶段的退火温度为50～65℃；
该PCR扩增的循环个数为30～50个。
可以理解地，上述预设条件中的温度可选为一个点值，例如预变性温度为97℃；也可选为一个数值范围，例如预变性温度为96.5℃～97.5℃，以维持温度的动态稳定，维持PCR扩增反应的稳定进行。
在本申请中，最低检测限(Limit of Detection，LOD)是指在特定实验条件下，能够被检出的病原体靶标序列的最小含量或最小浓度；该试剂盒针对阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫灵敏度都较高，最低检测限较低，其中，该试剂盒针对阴道加德纳菌的最低检测限为100CFU/mL，该试剂盒针对念珠菌的最低检测限为200CFU/mL，该试剂盒针对阴道毛滴虫的最低检测限为100个/mL，检测灵敏度高，检测结果准确性和可靠性好。
本申请还提供了一种如上所述的用于检测阴道炎病原体的试剂或试剂盒在检测阴道炎病原体中的应用，该阴道炎病原体包括阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫中的至少其一，特异性强，包容性好，不易受到干扰，检测效率和检测准确性都能够得到极大的提升。
下面结合具体实施例对本申请的技术方案进行详细介绍。
实施例1
本实施例采用如表1所示核苷酸序列的用于检测阴道炎病原体的试剂，其中，以FAM荧光基团标记第一探针的5’端，以MGB淬灭基团标记其3’端；以VIC荧光基团标记第二探针的5’端，以MGB淬灭基团标记其3’端；以ROX荧光基团标记第三引物探针组探针的5’端，以MGB淬灭基团标记其3’端。
基于上述试剂配制如下表2和表3所示的四种反应体系，分别进行单靶标检测和多靶标检测的对比，验证单靶标和多靶标之间的抗干扰性验证；其中，待测样本由混合样本经过磁珠法核酸提取得到，该混合样本包括5.0×104CFU/mL的阴道加德纳菌、5.0×104CFU/mL的念珠菌和5.0×104个/mL的阴道毛滴虫；四种反应体系包括采用第一引物探针组对阴道加德纳菌进行单靶标检测的第一反应体系，采用第二引物探针组对念珠菌进行单靶标检测的第二反应体系，采用第三引物探针组对阴道毛滴虫进行单靶标检测的第三反应体系，采用第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组进行多靶标检测的第四反应体系。
表2检测过程采用的单靶标反应体系
表3检测过程采用的多靶标反应体系
其中，引物/探针可以在任意有相关合成业务的公司合成，如Thermo、Takara、AG、生工等；2×qPCR mix可以用常规商售的qPCR mix，如Thermo、Takara、Meridian、诺唯赞等，也可以由实验人员自行配制；逆转录酶可以用常规商售逆转录酶，如Thermo、Takara、AG、诺唯赞等。
在上述四种反应体系中，PCR扩增反应的预设条件如下表4所示。
表4PCR扩增反应的预设条件
其中，采用第一反应体系的检测结果如图1所示，采用第二反应体系的检测结果如图2所示，采用第三反应体系的检测结果如图3所示，采用第四反应体系的检测结果如图4所示；可见，各组引物探针组单独使用和组合使用时，各检测靶标的PCR扩增曲线没有明显变化，说明本申请提供的用于检测阴道炎病原体的试剂中，第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组在PCR扩增过程中不会相互干扰，性能优异。
在荧光PCR扩增中，反应体系中的靶标序列经过多次扩增后，其数量会随着反应周期数的增加而逐渐增加，当靶标序列数量达到一定程度时，荧光信号会超过设定的阈值线，此时就可以记录下该循环周期数，并称之为循环数阈值(Cycle Threshold Value，Ct)，Ct值越小，表示反应体系中靶标序列越丰富，扩增速度越快，并且，通过计算样本间Ct值差异能够推断不同样本中靶标序列数量的相对差异；变异系数CV又称标准差率，是衡量样本中各个检测值变异程度的一个统计量，反映了单位均值上的离散程度，变异系数越小，精密度越高；则进一步地，对比单靶标检测和多靶标检测的Ct值如下表5所示。
表5单靶标检测和多靶标检测的检测结果Ct值
通过对比可知，三组引物探针组单独使用和组合使用时，其靶标CT值几乎没有差别，即在不同反应体系中，针对各种病原体靶标序列的检出数量几乎没有差别，说明第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组在PCR扩增过程中相互之间不会干扰，抗干扰性好。
实施例2
采用如表1中所示的核苷酸序列，配制如表3所示的反应体系，验证该试剂盒针对阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫的灵敏性。
首先，验证该试剂盒针对阴道加德纳菌的灵敏性；采用不同来源地的阴道加德纳菌菌株3株，使用阴性样本将其稀释至1600CFU/mL，再将该浓度的产物依次进行2倍梯度稀释，得到800CFU/mL、400CFU/mL、200CFU/mL、100CFU/mL、50CFU/mL、25CFU/mL、12.5CFU/mL的稀释产物，使用苏州创澜生物科技有限公司的核酸提取试剂盒(磁珠法)进行核酸提取后进行检测；重复检测每个浓度的稀释产物20次，其中至少19次检测结果为阳性所对应的最低浓度为阴道加德纳菌的最低检测限。
表6针对阴道加德纳菌的最低检测限的检测结果
针对阴道加德纳菌的检测结果如表6所示，可见，该试剂中的第一引物探针组能够有效检出不同来源地的阴道加德纳菌阳性样本，其中，重复检测每个浓度的稀释产物20次，其中至少19次检测结果为阳性的最低浓度为100CFU/mL，即该试剂盒针对阴道加德纳菌的最低检测限为100CFU/mL，该试剂盒针对阴道加德纳菌的检测灵敏度高。
其次，验证该试剂盒针对念球菌的灵敏性；采用不同来源、不同型别的念珠菌菌株18株(白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌及乳酒念珠菌各3株)，使用阴性样本将上述菌株稀释至1600CFU/mL，再将该浓度的产物进行2倍梯度稀释，得到800CFU/mL、400CFU/mL、200CFU/mL、100CFU/mL、50CFU/mL、25CFU/mL、12.5CFU/mL的稀释产物，使用苏州创澜生物科技有限公司的核酸提取试剂盒(磁珠法)进行核酸提取后进行检测；重复检测每个浓度的稀释产物20次，将至少19次检测结果为阳性时对应的最低浓度作为念珠菌的最低检测限。
表7针对念珠菌的最低检测限的检测结果
针对念珠菌的检测结果如表7所示，可见，该试剂中的第二引物探针组能够有效检出不同来源地、不同型别的念珠菌阳性样本，其中，重复检测每个浓度的稀释产物20次，其中至少19次检测结果为阳性的最低浓度为200CFU/mL，即该试剂盒针对念珠菌的最低检测限为200CFU/mL，该试剂盒针对念珠菌的检测灵敏度高。
再次，验证该试剂盒针对阴道毛滴虫的灵敏性；取不同来源的阴道毛滴虫菌株3株，使用阴性样本稀释至800个/mL，再将该浓度的产物进行2倍梯度稀释，得到400个/mL、200个/mL、100个/mL、50个/mL、25个/mL、12.5个/mL、6.25个/mL的稀释产物，使用苏州创澜生物科技有限公司的核酸提取试剂盒(磁珠法)进行核酸提取后进行检测；重复检测每个浓度的稀释产物20次，其中至少19次检测结果为阳性所对应的最低浓度为阴道毛滴虫的最低检测限。
表8针对阴道毛滴虫的最低检测限的检测结果
针对阴道毛滴虫的检测结果如表8所示，可见，该试剂中的第三引物探针组能够有效检出不同来源地、阴道毛滴虫阳性样本，其中，重复检测每个浓度的稀释产物20次，其中至少19次检测结果为阳性的最低浓度为100个/mL，即该试剂盒针对阴道毛滴虫的最低检测限为100个/mL，该试剂盒针对阴道毛滴虫的检测灵敏度高。
实施例3
采用如表1中所示的核苷酸序列，配制如表3所示的反应体系，在表4所示的预设条件下验证该试剂盒针对阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫的包容性。
使用20份来源于不同地域的阴道加德纳菌样本，将样本稀释到1×LOD浓度(200CFU/mL)，重复检测20次，验证该试剂盒对最低检测限浓度下的阴道加德纳菌的包容性；另外，将样本稀释到2×LOD浓度(400CFU/mL)，重复检测10次，计算Ct值的CV，验证其包容性和精密度。
表9该试剂盒针对阴道加德纳菌样本及其在最低检测限浓度下的包容性验证结果
样本/菌株编号 来源地 检测限 精密度
YB-GV-001 A省 20/20 0.61％
YB-GV-002 A省 20/20 0.68％
YB-GV-003 A省 20/20 0.38％
YB-GV-004 A省 20/20 0.52％
YB-GV-005 B省 20/20 0.41％
YB-GV-006 B省 20/20 0.38％
YB-GV-007 B省 20/20 0.81％
YB-GV-008 B省 20/20 0.50％
YB-GV-009 D省 20/20 1.37％
YB-GV-010 D省 20/20 0.63％
YB-GV-011 D省 20/20 0.92％
YB-GV-012 D省 20/20 0.57％
YB-GV-013 F省 20/20 0.62％
YB-GV-014 F省 20/20 0.61％
YB-GV-015 G省 20/20 0.71％
YB-GV-016 G省 20/20 0.68％
YB-GV-017 D省 20/20 0.79％
YB-GV-018 D省 20/20 0.54％
YB-GV-019 H省 20/20 0.55％
YB-GV-020 H省 20/20 0.51％
如表9中的验证结果所示，其中，将20份阴道加德纳菌样本稀释到1×LOD浓度(200CFU/mL)，重复检测20次的结果均为阳性，说明该试剂及具有其的试剂盒即使对最低检测限浓度下的阴道加德纳菌也具有很好的包容性；另外，将20份阴道加德纳菌样本稀释到2×LOD浓度(400CFU/mL)，重复检测10次的结果均为阳性，计算得到Ct值的CV也均小于5％，说明该试剂及试剂盒对不同地域的阴道加德纳菌具有很好的包容性。
使用36份来源于不同地域的念珠菌样本(白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌及乳酒念珠菌各6例)，将样本稀释到1×LOD浓度(200CFU/mL)，重复检测20次，验证该试剂盒对最低检测限浓度下的念珠菌的包容性；另外，将样本稀释到2×LOD浓度(400CFU/mL)，重复检测10次，计算Ct值的CV，验证其包容性和精密度。
表10该试剂盒针对念珠菌样本及其在最低检测限浓度下的包容性验证结果
如表10中的验证结果所示，其中，将36份念珠菌样本/菌株稀释到1×LOD浓度(200CFU/mL)，重复检测20次的结果均为阳性，说明该试剂盒即使对最低检测限浓度下的念珠菌也具有很好的包容性；另外，将36份念珠菌样本/菌株稀释到2×LOD浓度(400CFU/mL)，重复检测10次的结果均为阳性，计算得到Ct值的CV也均小于5％，说明该试剂及试剂盒对多种不同型别的念珠菌具有很好的包容性。
使用20份来源于不同地域的阴道毛滴虫样本，将样本稀释到1×LOD浓度(100个/mL)，重复检测20次，验证该试剂盒对最低检测限浓度下的阴道毛滴虫的包容性；另外，将样本稀释到2×LOD浓度(200个/mL)，重复检测10次，计算Ct值的CV，验证其包容性和精密度。
表11该试剂盒针对阴道毛滴虫样本及其在最低检测限浓度下的包容性验证结果
如表11中的验证结果所示，其中，将20份阴道毛滴虫样本稀释到1×LOD浓度(100个/mL)，重复检测20次的结果均为阳性，说明该试剂及具有其的试剂盒即使对最低检测限浓度下的阴道毛滴虫也具有很好的包容性；另外，将20份阴道毛滴虫样本稀释到2×LOD浓度(200个/mL)，重复检测10次的结果均为阳性，计算得到Ct值的CV也均小于5％，说明该试剂及试剂盒对不同地域的阴道毛滴虫具有很好的包容性。
实施例4
采用如表1中所示的核苷酸序列，配制如表3所示的反应体系，在表4所示的预设条件下进行该试剂盒针对阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫的特异性验证，验证该用于检测阴道炎病原体的试剂及试剂盒在PCR扩增过程中与呼吸道中常见病原体的交叉反应。
表12该用于检测阴道炎病原体的试剂及试剂盒的特异性验证结果
验证结果如表12所示，可见，本实施例的第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组均与呼吸道中常见病原体没有交叉反应，不会得到假阳性结果，第一引物探针组、第二引物探针组和第三引物探针组均具有强特异性。
实施例5
采用如表1中所示的核苷酸序列，配制如表3所示的反应体系，在表4所示的预设条件下进行该试剂盒针对阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫的抗干扰能力验证，验证阴道中常见的干扰物质是否抑制该用于检测阴道炎病原体的试剂及试剂盒的PCR扩增过程。
其中，干扰物质的验证浓度为样本中理论可能的最高浓度，使用t检验对比加入干扰物质前后的Ct值，计算显著性概率(P值)，若分析结果P＞0.05，说明加入干扰物质前后，Ct值没有显著性差异，即该干扰物质对检测结果没有干扰，验证条件及验证结果如下表所示。
表13本实施例的用于检测阴道炎病原体的试剂的抗干扰能力验证结果
根据表13中的验证结果可知，计算得到的P值均大于0.05，代表在样本中添加上述干扰物质前后，Ct值均无明显变化，说明本实施例的用于检测阴道炎病原体的试剂的PCR扩增反应不受阴道中常见干扰物质的抑制，本申请中用于检测阴道炎病原体的试剂及试剂盒具有良好的抗干扰能力。
需要说明的是，本说明书中的各个实施例均采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似的部分互相参见即可。
以上所描述的仅为本申请的一些实施例而已，并不用于限制本申请，本行业的技术人员应当了解，本申请还会有各种变化和改进，任何依照本申请所做的修改、等同替换和改进都落入本申请所要求的保护的范围内。

Claims (10)

1.一种用于检测阴道炎病原体的试剂，所述阴道炎病原体包括阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫中的至少其一，其特征在于，所述试剂包括用于检测阴道加德纳菌的第一引物探针组、用于检测念珠菌的第二引物探针组和用于检测阴道毛滴虫的第三引物探针组中的至少其一；
所述第一引物探针组包括如SEQ ID NO.1所示的第一上游引物、如SEQ ID NO.2所示的第一下游引物和如SEQ ID NO.3所示的第一探针；
所述第二引物探针组包括如SEQ ID NO.4所示的第二上游引物、如SEQ ID NO.5所示的第二下游引物和如SEQ ID NO.6所示的第二探针；
所述第三引物探针组包括如SEQ ID NO.7所示的第三上游引物、如SEQ ID NO.8所示的第三下游引物和如SEQ ID NO.9所示的第三探针。
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述试剂包括所述第一引物探针组、所述第二引物探针组和第三引物探针组。
3.根据权利要求1-2任一项所述的试剂，其特征在于，所述试剂中的第一探针的5'端、第二探针的5'端和第三探针的5'端分别采用不同的荧光基团进行标记，所述荧光基团包括Cy5荧光基团、VIC荧光基团、FAM荧光基团与ROX荧光基团中的至少一种；
所述试剂中的第一探针的3'端、第二探针的3'端和第三探针的3'端分别采用淬灭基团进行标记，所述淬灭基团包括DABCYL淬灭基团、TAMRA淬灭基团、MGB淬灭基团和BHQ淬灭基团中的至少一种。
4.一种试剂盒，其特征在于，包括qPCR预混液与如权利要求1-3任一项所述的用于检测阴道炎病原体的试剂。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫的共同检测。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒能够检出待测样本中的白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌和乳酒念珠菌中的至少一种。
7.根据权利要求4-6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒满足下述特征中的至少其一：
第一上游引物、第一下游引物和第一探针中至少其一的浓度为90～120μg/mL；
第二上游引物、第二下游引物和第二探针中至少其一的浓度为90～120μg/mL；
第三上游引物、第三下游引物和第三探针中至少其一的浓度为90～120μg/mL。
8.根据权利要求4-6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
9.根据权利要求4-6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒满足下述特征中的至少其一：
所述试剂盒针对阴道加德纳菌的最低检测限为100CFU/mL；
所述试剂盒针对念珠菌的最低检测限为200CFU/mL；
所述试剂盒针对阴道毛滴虫的最低检测限为100个/mL。
10.一种如权利要求1-3任一项所述的用于检测阴道炎病原体的试剂或如权利要求4-9任一项所述的试剂盒在检测阴道炎病原体中的应用，所述阴道炎病原体包括阴道加德纳菌、念珠菌和阴道毛滴虫中的至少其一。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115873849A (zh) * 2023-01-09 2023-03-31 昆明理工大学 同步检测16种女性生殖道病原体的引物探针组合物
CN117467799A (zh) * 2023-12-27 2024-01-30 江苏美克医学技术有限公司 念珠菌属、加德纳杆菌和阴道毛滴虫多重检测的引物探针组合、试剂盒及应用

Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992007096A1 (en) * 1990-10-19 1992-04-30 Microprobe Corporation Mehods and pharmaceutical kits useful for detecting microorganisms associated with vaginal infections
CN101405411A (zh) * 2006-01-23 2009-04-08 斯蒂鲁斯全球解决方案有限公司 高通量检测生物样品中微生物的存在
US20120004113A1 (en) * 2008-11-25 2012-01-05 Goodgene Inc. Dna chip, kit for detecting or genotyping bacteria causing sexually transmitted diseases, genotyping antibacterial drug resistance and detecting or genotyping method using the same
US20120034637A1 (en) * 2009-03-10 2012-02-09 Zeyu Wang Detection of trichomonas and candida
CN103958988A (zh) * 2011-09-23 2014-07-30 韩国科学技术院 用于诊断泌尿生殖感染性疾病的dna芯片
KR20140099798A (ko) * 2013-02-05 2014-08-13 (주)다이오진 리퀴드 비드 어레이와 다중중합효소연쇄반응법을 이용한 성전파 질환 원인균 검출 방법
CN105420360A (zh) * 2015-12-09 2016-03-23 广州和实生物技术有限公司 一种阴道炎病原体基因即时检测试剂盒
US20180291431A1 (en) * 2015-04-24 2018-10-11 Becton, Dickinson And Company Multiplex detection of vulvovaginal candidiasis, trichomoniasis and bacterial vaginosis
CN108660254A (zh) * 2018-05-30 2018-10-16 杭州千基生物科技有限公司 生殖道病原体核酸检测引物、探针、试剂盒及检测方法
CN108779499A (zh) * 2016-01-04 2018-11-09 简·探针公司 用于检测念珠菌属物种的方法和组合物
CN110343780A (zh) * 2019-07-12 2019-10-18 中生方政生物技术股份有限公司 加德纳杆菌、白色念珠菌和阴道毛滴虫多重检测的引物、探针组、试剂盒及检测方法
CN113558675A (zh) * 2021-07-22 2021-10-29 清华大学 采样拭子快速检测方法及拭子采样全集成分析系统
CN113755615A (zh) * 2021-09-15 2021-12-07 中国医学科学院皮肤病医院(中国医学科学院皮肤病研究所) 一种快速检测阴道病原微生物的多重pcr试剂盒制作方法
CN114480694A (zh) * 2022-04-18 2022-05-13 北京起源聚禾生物科技有限公司 阴道微生态检测引物探针组合及试剂盒
US20220205020A1 (en) * 2020-12-30 2022-06-30 Roche Molecular Systems, Inc. Compositions and methods for detection of bacteria and fungi associated with bacterial and candida vaginosis
CN115873849A (zh) * 2023-01-09 2023-03-31 昆明理工大学 同步检测16种女性生殖道病原体的引物探针组合物
CN116042902A (zh) * 2023-01-30 2023-05-02 上海仁度生物科技股份有限公司 一种同时检测六种念珠菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒及其专用引物和探针

Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992007096A1 (en) * 1990-10-19 1992-04-30 Microprobe Corporation Mehods and pharmaceutical kits useful for detecting microorganisms associated with vaginal infections
CN101405411A (zh) * 2006-01-23 2009-04-08 斯蒂鲁斯全球解决方案有限公司 高通量检测生物样品中微生物的存在
US20120004113A1 (en) * 2008-11-25 2012-01-05 Goodgene Inc. Dna chip, kit for detecting or genotyping bacteria causing sexually transmitted diseases, genotyping antibacterial drug resistance and detecting or genotyping method using the same
US20120034637A1 (en) * 2009-03-10 2012-02-09 Zeyu Wang Detection of trichomonas and candida
CN103958988A (zh) * 2011-09-23 2014-07-30 韩国科学技术院 用于诊断泌尿生殖感染性疾病的dna芯片
KR20140099798A (ko) * 2013-02-05 2014-08-13 (주)다이오진 리퀴드 비드 어레이와 다중중합효소연쇄반응법을 이용한 성전파 질환 원인균 검출 방법
US20180291431A1 (en) * 2015-04-24 2018-10-11 Becton, Dickinson And Company Multiplex detection of vulvovaginal candidiasis, trichomoniasis and bacterial vaginosis
CN105420360A (zh) * 2015-12-09 2016-03-23 广州和实生物技术有限公司 一种阴道炎病原体基因即时检测试剂盒
CN108779499A (zh) * 2016-01-04 2018-11-09 简·探针公司 用于检测念珠菌属物种的方法和组合物
CN108660254A (zh) * 2018-05-30 2018-10-16 杭州千基生物科技有限公司 生殖道病原体核酸检测引物、探针、试剂盒及检测方法
CN110343780A (zh) * 2019-07-12 2019-10-18 中生方政生物技术股份有限公司 加德纳杆菌、白色念珠菌和阴道毛滴虫多重检测的引物、探针组、试剂盒及检测方法
US20220205020A1 (en) * 2020-12-30 2022-06-30 Roche Molecular Systems, Inc. Compositions and methods for detection of bacteria and fungi associated with bacterial and candida vaginosis
CN113558675A (zh) * 2021-07-22 2021-10-29 清华大学 采样拭子快速检测方法及拭子采样全集成分析系统
CN113755615A (zh) * 2021-09-15 2021-12-07 中国医学科学院皮肤病医院(中国医学科学院皮肤病研究所) 一种快速检测阴道病原微生物的多重pcr试剂盒制作方法
CN114480694A (zh) * 2022-04-18 2022-05-13 北京起源聚禾生物科技有限公司 阴道微生态检测引物探针组合及试剂盒
CN115873849A (zh) * 2023-01-09 2023-03-31 昆明理工大学 同步检测16种女性生殖道病原体的引物探针组合物
CN116042902A (zh) * 2023-01-30 2023-05-02 上海仁度生物科技股份有限公司 一种同时检测六种念珠菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒及其专用引物和探针

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MARKUS SCHMITT等: "Bead-based multiplex sexually transmitted infection profiling", 《J INFECT》, vol. 69, no. 2, 9 May 2014 (2014-05-09), pages 123 - 33, XP028859793, DOI: 10.1016/j.jinf.2014.04.006 *
向华国等: "多重PCR-反向线点杂交技术在检测女性念珠菌和阴道毛滴虫感染中的应用", 《中国皮肤性病学杂志》, vol. 23, no. 8, 15 August 2009 (2009-08-15), pages 529 - 531 *
李娅等: "阴道感染三种病原菌多重PCR检测方法的建立及其应用研究", 《现代检验医学杂志》, vol. 31, no. 2, 15 March 2016 (2016-03-15), pages 42 - 45 *
田丽君等: "多重PCR对难治性阴道炎的诊断价值", 《包头医学》, no. 3, 30 September 2007 (2007-09-30), pages 129 - 130 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115873849A (zh) * 2023-01-09 2023-03-31 昆明理工大学 同步检测16种女性生殖道病原体的引物探针组合物
CN115873849B (zh) * 2023-01-09 2024-04-05 昆明理工大学 同步检测16种女性生殖道病原体的引物探针组合物
CN117467799A (zh) * 2023-12-27 2024-01-30 江苏美克医学技术有限公司 念珠菌属、加德纳杆菌和阴道毛滴虫多重检测的引物探针组合、试剂盒及应用
CN117467799B (zh) * 2023-12-27 2024-04-09 江苏美克医学技术有限公司 念珠菌属、加德纳杆菌和阴道毛滴虫多重检测的引物探针组合、试剂盒及应用

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