CN1124963A

CN1124963A - 新型(神经)鞘糖脂及其用途

Info

Publication number: CN1124963A
Application number: CN94192355A
Authority: CN
Inventors: 比嘉辰雄; 名取威德; 肥靖彦; 元木一宏
Original assignee: Kirin Brewery Co Ltd
Current assignee: Kirin Pharma KK; Kirin Holdings Co Ltd
Priority date: 1993-04-15
Filing date: 1994-04-14
Publication date: 1996-06-19
Anticipated expiration: 2014-04-14
Also published as: EP0694558A4; AU6513094A; EP0694558A1; JP4020958B2; ATE176237T1; CA2160566A1; KR100281265B1; DE69416306T2; TW295588B; US5780441A; AU683653B2; DE69416306D1; CA2160566C; EP0694558B1; WO1994024142A1; CN1045302C

Abstract

本发明涉及下式(I)所示的(神经)鞘糖脂：式中R₁、R₂和R₅是H或特定的单糖，R₃和R₆是H或OH，R₄是H、OH或特定的单糖，X是19～23的任何一个整数，R₇是下列基团(a)～(g)中的任何一个：

(a)-(CH₂)₁₁-CH₃

(b)-(CH₂)₁₂-CH₃

(c)-(CH₂)₁₃-CH₃

(d)-(CH₂)₉-CH(CH₃)₂

(e)-(CH₂)₁₀-CH(CH₃)₂

(f)-(CH₂)₁₁-CH(CH₃)₂

(g)-(CH₂)₁₁-CH(CH₃)-C₂H₅

本发明还涉及含有上述(神经)鞘糖脂作为有效成分的医药混合物，特别是抗肿瘤剂、骨髓细胞增殖促进剂和免疫赋活剂。

Description

新型(神经)鞘糖脂及其用途

技术领域

本发明涉及具有高抗肿瘤活性、骨髓细胞增殖促进活性和免疫赋活活性的新型(神经)鞘糖脂及其用途。更详细地说，本发明涉及医药领域中作为抗肿瘤剂、骨髓细胞增殖促进剂及免疫赋活剂使用的新型鞘糖脂这样一种溶解时有更高溶解度的鞘糖脂，含有这种鞘糖脂的医药组合物以及抗肿瘤剂、骨髓细胞增殖促进剂和免疫赋活剂。

技术背景

作为具有抗肿瘤活性的鞘糖脂，在特开平1一93562号、特开平5-59081号、特开平5-9193号和WO 93/05055号等专利公报中均有报告，特别是WO 93/05055号公报中所述的鞘糖脂是具有显著抗肿瘤活性和免疫赋活活性的化合物。

然而，这些终究是在神经酰胺部分结合了一个单糖的脑苷类，在水中的溶解度极低。例如，这样的化合物作为注射剂临床应用时必须用药物上可接受的表面活性剂等悬浮或溶解在水中。而作为表面活性剂，要考虑使用诸如缩聚山梨糖醇油酸酯(吐温)类。但是，缩聚山梨糖醇油酸酯类如果经血管内给药则有血管剌激作用，而且在对人体给药的情况下，已知会增大心脏供血量和减少末梢血管阻力等(Journal of the American College of Toxicology，Vol.3，No.5，1-82(1984))，这些被认为是高浓度缩聚山梨糖醇油酸酯作为溶解助剂使用时的副作用。此外，本发明化合物是以作为抗肿瘤剂、骨髓细胞增殖促进剂、免疫赋活剂使用为目的，但已知缩聚山梨糖醇油酸酯类会抑制免疫系统的初次抗体应答(Bryant R.L.et al.，Arch.Allergy Appl.Immunol.，Vol.59，69-74(1979))，也会促进癌的转移(Kiricuta I.，et al.，Rev.Roum.Embryol.Cytol.Ser.Cytol.，Vol.8，29-32(1971))，可见缩聚山梨糖醇油酸酯类所起的作用与本发明化合物的使用目的完全背道而驰。

此外，作为其它溶解助剂已知的聚乙二醇，也已知有乳酸酸中毒、溶血、脉博无规则等副作用(Speth P.A.J.，et al.，TherapeuticDrug Monitoring，Vol.9，255-258(1987))，而二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺也已知会引起肝障碍(Gerald L.，et al.，Drug andChemical Toxicology，vol.9，147-170(1986))。

上述实例是数种溶解助剂的副作用实例，但其它溶解助剂也已知有副作用。

上述情况表明，最大限度减少诸如缩聚山梨糖醇油酸酯等表面活性剂的使用量，是确保临床应用时患者的安全和更有效地使用药剂所必需的。根据这种观点，可以说对于进一步提高鞘糖脂临床应用时的水溶性有很高的需求。

而且，就本发明者所知，上述任何一种化合物也还不是作为抗肿瘤剂、骨髓细胞增殖促进剂和免疫赋活剂的实用化实例。此外，化学物质的生理活性在很大程度上浓赖于其化学结构，因而可以说对具有抗肿瘤活性、骨髓细胞增殖促进剂和免疫赋活活性的新型化合物有不断的需求。

发明公开

本发明就是针对上述需求，以提供进一步改善在水中的溶解性、具有作为抗肿瘤剂、骨髓细胞增殖促进剂和免疫赋活剂的实用性的新型化合物为目的的。

本发明者等人发现，具有特定化学结构的鞘糖脂有抗肿瘤活性、骨髓细胞增殖促进活性和免疫赋活活性，而且这类化合物有比已知脑苷更优异的水溶性，进而合成了这些鞘糖脂的类似化合物，发现这些类似化合物也具有同样的活性，直至以这些知识为基础完成了本发明。

这就是说，按照本发明的新型鞘糖脂是下式(I)所示的化合物。

式中R₁是H或R₂是H、

R₃和R₆各自是H或OH；R₄是H、OH或

R₅是H或X是19～23的任何一个整数；R₇是下列基团(a)～(g)中的任何一个：(a)-(CH₂)₁₁-CH₃(b)-(CH₂)₁₂-CH₃(c)-(CH₂)₁₃-CH₃

(d)-(CH₂)₉-CH(CH₃)₂

(e)-(CH₂)₁₀-CH(CH₃)₂

(f)-(CH₂)₁₁-CH(CH₃)₂

(g)-(CH₂)₁₁-CH(CH₃)-C₂H₅

本发明还涉及式(I)所示上述化合物的使用，具体地说，涉及医药组合物以及抗肿瘤剂、骨髓细胞增殖促进剂和免疫赋活剂。

这就是说，按照本发明的医药组合物是含有上述式(I)所示鞘糖脂作为有效成分的。

而且，按照本发明的抗肿瘤剂、骨髓细胞增殖促进剂和免疫赋活剂也是含有上述式(I)所示鞘糖脂作为有效成分的。

此外，本发明也涉及以用有效量的上述化合物对有必要进行肿瘤抑制、骨髓细胞增殖或免疫赋活的患者给药为特征的治疗方法。

附图简单说明

图1(a～c)是表示本发明鞘糖脂的较好具体化合物的化学结构的结构式图。

图2(a和b)是以糖类(来苏糖)作为起始物质合成式(I)所示化合物情况下较好的实例的反应路线图。

实施本发明的最佳方式

鞘糖脂

如上所述，按照本发明的鞘糖脂就是式(I)所示的那种，较好化合物的糖部分结合方式的结构可以按下式(1)～(5)那样分类。(1)GalNAc_pα1→3Gal_p(2←1αGlc_p)α1→1Cer(2)Gal_fβ1→3Gal_pα1→1Cer(3)Gal_pα1→6Glc_pα1→1Cer(4)Gal_pα1→6Gal_pα1→1Cer(5)Glc_pα1→4Glc_pα1→1Cer

而且，本发明化合物的较好形式是下式(II)和(III)所示的鞘糖脂。

(式中R₁是OH时R₂是H，R₁是H时R₂是OH；

R₃是OH时R₄是H，R₃是H时R₄是OH；

R₃是H或OH；

X是19～23的任何一个整数；

Y是11～13的任何一个整数。)

(式中R₁是OH时R₂是H，R₁是H时R₂是OH；

R₃是H或OH；

X是19～23的任何一个整数；

Y是11～13的任何一个整数。)

本发明化合物的更好的形式是式(I)中R₁、R₂和R₆均为H、R₃为H或OH、R₄和R₅中任意一个为上述的糖、R₇为基团(a)～(c)中任何一个的化合物。

式(I)所示的本发明鞘糖脂的较好具体实例是下列化合物1～17和化合物31、33、35，化合物31、33、35是更好的(各化合物的结构式如图1(a)～(c)所示)。

化合物1：O-(N-乙酰-2-氨基-2-脱氧-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→3)-O-[α-D-葡糖吡喃糖基-(1→2)]-O-α-D-半乳糖吡喃糖基-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十四烷酰]-1，3，4-十六烷三醇

化合物2：O-(N-乙酰-2-氨基-2-脱氧-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→3)-O-[α-D-葡糖吡喃糖基-(1→2)]-O-α-D-半乳糖吡喃糖基-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十四烷酰]-1，3，4-十七烷三醇

化合物3：O-(N-乙酰-2-氨基-2-脱氧-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→3)-O-[α-D-葡糖吡喃糖基-(1→2)]-O-α-D-半乳糖吡喃糖基-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十四烷酰]-16-甲基-1，3，4-十七烷三醇

化合物4：O-(N-乙酰-2-氨基-2-脱氧-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→3)-O-[α-D-葡糖吡喃糖基-(1→2)]-O-α-D-半乳糖吡喃糖基-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十四烷酰]-1，3，4-十八烷三醇

化合物5：O-(N-乙酰-2-氨基-2-脱氧-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→3)-O-[α-D-葡糖吡喃糖基-(1→2)]-O-α-D-半乳糖吡喃糖基-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十五烷酰]-16-甲基-1，3，4-十七烷三醇

化合物6：O-(N-乙酰-2-氨基-2-脱氧-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→3)-O-[α-D-葡糖吡喃糖基-(1→2)]-O-α-D-半乳糖吡喃糖基-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十五烷酰]-1，3，4-十八烷三醇

化合物7：O-(N-乙酰-2-氨基-2-脱氧-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→3)-O-[α-D-葡糖吡喃糖基-(1→2)]-O-α-D-半乳糖吡喃糖基-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十六烷酰]-16-甲基-1，3，4-十七烷三醇

化合物8：O-(N-乙酰-2-氨基-2-脱氧-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→3)-O-[α-D-葡糖吡喃糖基-(1→2)]-O-α-D-半乳糖吡喃糖基-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十六烷酰]-1，3，4-十八烷三醇

化合物9：O-(N-乙酰-2-氨基-2-脱氧-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→3)-O-[α-D-葡糖吡喃糖基-(1→2)]-O-α-D-半乳糖吡喃糖基-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十六烷酰]-16-甲基-1，3，4-十八烷三醇

化合物10：O-β-D-半乳糖呋喃糖基-(1→3)-O-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十二烷酰]-1，3，4-十六烷三醇

化合物11：O-β-D-半乳糖呋喃糖基-(1→3)-O-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→1)-(2S，3S，4R)-2氨基-N-[(R)-2-羟基二十三烷酰]-1，3，4-十六烷三醇

化合物12：O-β-D-半乳糖呋喃糖基-(1→3)-O-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十四烷酰]-1，3，4-十六烷三醇

化合物13：O-β-D-半乳糖呋喃糖基-(1→3)-O-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十四烷酰]-15-甲基-1，3，4-十六烷三醇

化合物14：O-β-D-半乳糖呋喃糖基-(1→3)-O-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十四烷酰]-1，3，4-十七烷三醇

化合物15：O-β-D-半乳糖呋喃糖基-(1→3)-O-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十四烷酰]-16-甲基-1，3，4-十七烷三醇

化合物16：O-β-D-半乳糖呋喃糖基-(1→3)-O-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十四烷酰]-1，3，4-十八烷三醇

化合物17：O-β-D-半乳糖呋喃糖基-(1→3)-O-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十四烷酰]-17-甲基-1，3，4-十八烷三醇

化合物31：O-α-D-半乳糖吡喃糖基-(1→6)-O-α-D-葡糖吡喃糖基)-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-二十六烷酰-1，3，4-十八烷三醇

化合物33：O-α-D-半乳糖吡喃糖基-(1→6)-O-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-二十六烷酰-1，3，4-十八烷三醇

化合物35：O-α-D-葡糖吡喃糖基-(1→4)-O-α-D-葡糖吡喃糖基)-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-二十六烷酰-1，3，4-十八烷三醇。

本发明化合物的制造方法

按照本发明的化合物即上述式(I)所示的鞘糖脂，可以通过类似化合物的化学改性衍生，也可以借助于由合成鞘糖脂所需的各种-般化学反应组成的化学合成手段进行全合成，还可以通过从海绵动物中提取得到。

i)化学合成方法

作为借助于化学合成手段得到本发明鞘糖脂的方法，可以采用能达到目的的任意方法，例如，可以参照Agricultural and BiologicalChemistry第54卷第3期第663页(1990年)所述的方法。

作为这类合成方法的较好实例，参照特开平5-9193号公报所述反应路线的方法或者WO 93/05055号公报(PCT/JP 92/00561说明书)图1～4中所述合成路线的方法，就可以合成上述式(I)所示的鞘糖脂。

具体地说，本发明鞘糖脂可以诸如按照图2(a和b)所示反应路线的方法进行全合成。这条反应路线是具体针对本发明化合物(化合物31、33和35)的。但式(I)所示的其它化合物也可以参照这种方法合成。

这种方法是用糖类作为起始物质的方法，例如，可以参照LiebigsAnnalen der Chemie p 663(1988)上所述的方法。

关于上述反应路线的方法，在以下实验例中有详细描述，其概要可以说明如下(在反应路线图中还使用了下列缩略符号：Bn，苄基；Tr，三苯甲基；Ms，甲磺酰)。

这条反应路线的方法是用糖类(D-来苏糖)作为起始物质，将其保护后与比鞘氨醇的长链部分短5个碳的烃类结合(化合物20)，适当保护后叠氮化、还原，经过酰胺化与神经酰胺的羧酸部分结合而形成神经酰胺部分(化合物29)，对此进行葡糖基化反应而与对应的糖结合，脱保护，就可以得到最终的本发明鞘糖脂(化合物31、33、35)。

作为原料的糖类，除D-来苏糖外，还可以使用D-半乳糖等。还可以使用L-丝氨酸等氨基酸代替糖类作为起始物质。

在上述反应路线中，羟基的保护、烃化合物与糖化合物的结合、叠氮化、酰胺化、葡糖基化等反应，可以按照通常的方法实施。

在上述实例中，作为羟基的保护基，使用了苄基和三苯甲基，但也可以使用苯甲酰基等适用的任意基团。

在这个反应路线图中，关于酰胺化已知有很多反应方法，也可以用酰氯或酸酐代替羧酸进行反应。

利用羧酸的反应，是在适当缩合剂存在下的缩合反应。这里使用的缩合剂，较好是二环己基碳化二亚胺(DCC)，2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氢化喹啉(EEDQ)，1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺(WSC)，氯碳酸酯类，鎓盐等。为了使反应快速进行，可以添加三乙胺、吡啶、N-甲基吗啉、二甲基苯胺、4-二甲氨基吡啶、N-甲基哌啶或N-甲基吡咯烷等有机碱。作为溶剂，可以使用与反应无关的任何一种惰性溶剂。

利用酰氯的反应，一般能在溶剂存在下顺利进行。反应通常用适当溶剂进行，但在反应速度慢的情况下，采用无溶剂状态可以使反应迅速进行。作为溶剂，只要是与反应无关的惰性溶剂，任意一种均可。在反应速度慢的情况下，通过添加三乙胺、吡啶、N-甲基吗啉、二甲基苯胺或者4-二甲胺基吡啶等有机碱，就能快速进行。

利用酸酐的反应，较好在适当的碱存在下进行。这里使用的碱，是三乙胺、吡啶等，通常这些碱还兼备溶剂的作用。

此外，关于葡糖基化，也有许多反应方法，例如，有机合成化学第38卷第5期第473页(1980年)、有机合成化学第41卷第8期第701页(1983年)、或者Pure and Applied Chemistry第61卷第7期第1257页(1989年)、Pharmacia第27卷第1期第50页(1991年)等总论中所述的方法是已知的，在本发明化合物的制造中可以使用上述任何一种方法。

在葡糖基化中，在制造具有三糖的本发明化合物的情况下，也可以用必要的三糖类代替上述反应路线中的二糖类。作为葡糖化中所用的这些寡糖，可以使用市售品，或者借助于从单糖或多糖得到寡糖的通常方法所得到的制品。

上述合成方法是在神经酰胺上与糖结合后去掉保护基，但也可以像Liebigs Annalen der Chemie第669页(1988年)上所述的那样，先在长链碱上与糖结合，然后使氨基衍生而酰胺化，进而完成脑苷的方法。

如上所述，图2的反应路线图是具体地针对本发明化合物(化合物31、33和35)的，但式(I)所示的其它化合物也可以参照这种方法来合成。

ii)从海绵动物提取的方法

从海绵动物提取的方法基本上由海绵动物采集过程、提取过程和精制过程组成。作为采集过程中海绵动物的较好实例，可以列举

(Stylissa fulabelliformis)或(Agelas axisera)，这些可以从诸如冲绳县宫古岛或鹿儿岛县奄美大岛的海中采集到。

在提取过程中，通常可以用鞘糖脂提取中所采用的方法、较好是有机溶剂(例如甲醇、较好是甲醇与二氯甲烷的混合溶剂等)法提取，而在精制过程中，通常可以适当使用鞘糖脂精制中所采用的方法，例如各种分级法(利用溶解度差的分步法，利用分配率差的分配法等)或各种色谱法(吸附色谱法，鉴别色谱法等)。这些方法的具体较好实例详见特开平5-9193号公报和WO 93/ 05055号公报(PCT/JP92/00561明细书)。

本发明化合物的用途

式(I)所示的本发明化合物由于具有下列生理活性，即抗肿瘤活性、骨髓细胞增殖促进活性和免疫赋活活性，因而在这些方面是有用的。而且，即使与过去已知的、作用于免疫系统的抗癌剂，例如从香蕈子实体中提取得到的抗肿瘤性多糖体蘑菇多糖(以下简称“蘑菇多糖”)、从扇蕈(スェヒロタケ)菌丝体中提取得到的多糖体シゾフィラン(以下简称“シゾフィラン”)、酿脓链球菌(A群3型)Su株青霉素处理冻干粉末ピシバニ-ル(中外制药(株))(以下简称“ピシバニ-ル”)比较，这些化合物的生理活性也更加强烈，因而更有用。此外，显示出与特开平5-9193号公报和WO 93/05055号公报所述鞘糖脂相同的抗肿瘤活性、骨髓细胞增殖促进活性和免疫赋活活性，进而与以这些用途为目的而提出的上述两公报中所述的鞘糖脂比较而言水溶性非常高，因而在制作制剂时有用。

1)抗肿瘤活性

本发明化合物，如以下实验例4所示，对于小鼠皮下移植的P388小鼠白血病细胞和B16小鼠黑素瘤显示出抗肿瘤活性。

2)骨髓细胞增殖促进活性

本发明化合物，如以下实验例5所示，显示出离体小鼠骨髓细胞增殖促进作用。

3)免疫赋活活性

本发明化合物，如以下实验例6所示，显示出离体小鼠脾脏淋巴球增殖促进作用和对小鼠淋巴球混合培养反应(MLR)的活化作用。

4)射线防护作用

本发明化合物，如以下实验例7所示，对受到致死量射线照射的小鼠显示出延长寿命的效果。这样的效果间接表现为上述的骨髓细胞增殖促进活性。

5)水溶性提高

本发明化合物，如以下实验例8所示，与同样具有酰胺部分而糖部分为单糖的化合物比较而言，在水中溶解所需的表面活性剂数量可以减少到1/100以下。

6)缩聚山梨糖醇油酸酯对免疫赋活活性的影响

如以下实验例9所示，高浓度(0.1、0.01％)的缩聚山梨糖醇油酸酯20会抑制小鼠脾脏淋巴球的增殖，而且也会抑制本发明化合物的免疫赋活活性，但通过减少缩聚山梨糖醇油酸酯20的用量，可以显示出恢复免疫赋活活性。

此外，在上述1)、2)和5)提及的实验例4、5和8中，也使用特开平5-9193号和上述WO 93/05055中公开的通式中所包含的鞘糖脂这样一些结合了单糖的化合物，即(2S，3S，4R)-1-(α-D-半乳糖吡喃糖基氧)-2-[(R)-2-羟基二十四烷酰氨基]-3，4-十七烷二醇(以下称为化合物a)和(2S，3S，4R)-1-(α-D-半乳糖吡喃糖基氧)-2-二十六烷酰氨基-3，4-十八烷二醇(以下称为化合物b)，作为比较化合物。

7)抗肿瘤剂、骨髓细胞增殖促进剂和免疫赋活剂

这样，显而易见的是，本发明化合物显示出优异的抗肿瘤活性、骨髓细胞增殖促进活性和免疫赋活活性。因而，本发明化合物可以作为抗肿瘤剂(用于治疗黑素瘤等固形癌或白血病等血癌，等)、骨髓细胞增殖促进剂(用于治疗由免疫异常引起的血球减少症，或者由于癌症化学疗法或放射疗法等的副作用而引起的血球减少症)和免疫赋活剂(用于治疗各种癌、各种感染病症和获得性免疫缺陷症候群等)使用。作为抗肿瘤剂、骨髓细胞增殖促进剂和免疫赋活剂的本发明化合物，可以用适用的任意给药路线以及由所采用给药路线决定的剂型给药。作为药剂，一般是用药物上可接受的载体乃至稀释剂稀释的形态。

在使用本发明化合物作为抗肿瘤剂、骨髓细胞增殖促进剂和免疫赋活剂使用的情况下，可以对人或哺乳动物经口或非经口给药。例如，可以把本发明化合物溶解或悬浮在适当的注射用溶剂(例如注射用蒸馏水等)中，借助于静脉注射、肌肉注射或皮下注射等给药。还可以添加适当载体或稀释剂(例如淀粉、蔗糖、乳糖、碳酸钙等通常用于这种目的的任意化合物)或润滑剂(例如硬脂酸、苯甲酸钠、硼酸、二氧化硅、聚乙二醇等通常用于这种目的的任意化合物)等制药成分，制成粉剂、锭剂、颗粒剂、胶囊剂、糖锭剂、干糖浆等形态经口给药。

本发明化合物的给药量要考虑动物试验的结果和各种情况，在连续或间歇给药时总给药量不超过一定量这样来确定。具体给药量当然要因给药方法、患者或被处理动物的状况如年龄、体重、性别、敏感性、食谱、给药时间、并用药剂、患者或其病情而异，而在一定条件下的适当给药量和给药次数则必须根据上述准则由专门医生确定适当给药量的试验来决定。

式(I)所示的本发明化合物由于具有抗肿瘤作用、骨髓细胞增殖促进作用和免疫赋活作用，因而属于BRM(生物反应改性剂)类药剂(Oldham，R.K.，Natl.Cancer Inst.，70，789-796(1983))。因此，以日本市售BRM的磨菇多糖和シゾフィラン实例为基础，进行了本发明化合物对人的给药量的预测。首先，蘑菇多糖和シゾフィラン对小鼠和人的给药量的文献检索结果如下表所示。

对小鼠的给药量对人的给药量

蘑菇多糖 1～2 mg/kg 1) 1～2mg/人体²)

シゾフィラン 10～50mg/kg3) 40mg/人体⁴)

1)Taguchi T.et al.，Biotherapy.2，509-521(1988)

2)Ochiai T.，et al.，Biotherapy.3，1275-1378(1989)

3)Furue H.，Medical Immunology，12，65-77(1986)

4)Furue H.，et al.，Jpn.J.Cancer Chemother.，12，1272-1276(1985)

即，如果对小鼠的给药量是A mg/kg，则对人的给药量可表示成A mg/人体。按照这个实例，本发明化合物，如以下实验例4中所示，对小鼠以0.1mg/kg经静脉内给药便显示出显著的抗肿瘤活性，由此推断，在诸如对人经静脉内给药的情况下，其给药量为0.1mg/人体左右。但是，BRM对人的给药量的确定是极其困难的，必须从低用量开始试验，探讨直至达到MTD(最大耐受量)的各种用量，Oldham(Oldham R.K.，J.Biol.Response Mod.，vol.4，117-128(1985))已对此做了描述。因此，实际给药量的决定必须由专门医生经慎重考虑才能做出。

以下用实验例进一步具体说明本发明，但本发明不受这种实验例限制。

实验例1：制备

从冲绳县宫古岛海中采集的海绵动物Stylissa fulabelliformis2.0kg经匀浆后冻干(420.3g)。此物质用萃取溶剂氯仿-甲醇(1∶1)、甲醇、热甲醇各1升依次萃取24小时，将各萃取物合并，减压干燥，得到褐色提取物(ェキス)(59.09g)。此提取物分配在2升水和1升氯仿中，水层用正丁醇1升萃取3次，与氯仿层合并，干燥，得到褐色残留物(23.25g)。此残留物用硅胶柱色谱法(ヮコ-ゲルC-200，200g)分离，作为洗脱溶剂，氯仿∶甲醇∶水的比值从9∶1∶0.1改变为8∶2∶0.2。活性级分(1.3883g)用トョパ-ルHW-40柱色谱法(氯仿∶甲醇＝1∶1)分离，得到活性级分(1.1625g)。此级分再次在与上述相同的条件下进行硅胶柱色谱法分离，得到了在正相薄层色谱上显示单一色斑的活性级分(303.9mg)。此级分溶解在2ml吡啶中，用逆相高速液体色谱法[HPLC、カプセルパックC18，SG-120、φ10×250ml(资生堂(株))，97％甲醇，5ml/min]反应分离，得到了无色粉末状的本发明化合物(1)(14.3mg)、(2)(19.0mg)、(3)(25.0mg)、(4)(73.1mg)、(5)(26.5mg)、(6)(25.7mg)、(7)(19.0mg)、(8)(11.6mg)、(9)(6.8mg)保留时间分别为31.31分、38.25分、43.26 分、48.70分、52.97分、57.45分、62.78分、67.47分、73.02分化合物(1)～(9)显示下列谱学数据化合物(1)旋光度：[α]_D ²⁴＝＋110.1°(吡啶中、c＝1.0)。

高分辨率FABMS分析：1181.7935[(M-H)，理论值1181.7893，化学式C₆₀H₁₁₃N₂O₂₀、误差4.2mMU]红外吸收光谱：(KBr、cm^-1)3370，2920，2850，1645，1535，1470，1040。熔点：175.5-177.0℃¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.61(1H，d，J＝9.2Hz)，8.49(1H，d，J＝9.2Hz)，5.61(1H，d，J＝4.3Hz)，5.60(1H，d，J＝3.7Hz)，5.51(1H，d，J＝3.7Hz)，5.30(1H，dd，J＝3.7，11.0Hz)，5.07(1H，m)，5.02(1H，m)，4.96(1H，dd，J＝3.7，10.4Hz)，4.85(1H，dd，J＝3.1，11.0Hz)，4.77(1H，dd，J＝3.1，10.4Hz)，4.74(1H，m)，4.66(1H，m)，4.64(1H，dd，J＝3.7，7.9Hz)，4.55(1H，t，J＝9.2Hz)，4.45-4.51(3H，m)，4.43(1H，m)，4.39(1H，bt，J＝6.1Hz)，4.35(1H，dd，J＝5.5，10.4Hz)，4.26(1H，dd，J＝7.9，12.8Hz)，4.10-4.22(5H，m)，4.04(1H，dd，J＝3.7，9.8Hz)，3.95(1H，t，J＝9.2Hz)，2.14(2H，m)，2.04(3H，s)，1.83-2.00(3H，m)，1.59-1.76(3H，m)，1.14-1.42(56H，m)，0.85(6H，m)。¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)175.5(s)，171.7(s)，96.8(d)，96.1(d)，94.1(d)，75.5(d)，75.2(d)，74.1(d)，73.6(d)，72.7(d)，72.6(d)，72.5(d)，72.3(d)，72.1(d)，71.9(d)，70.2(d)，70.1(d)，70.1(d)，67.7(t)，65.6(d)，63.1(t)，63.0(t)，62.3(t)，51.3(d)，51.2(d)，35.4(t)，33.5(t)，32.2(t)，32.1(t)，30.4(t)，30.2(t)，30.1(t)，30.0(t)，29.9(t)，29.7(t)，29.6(t)，26.6(t)，26.0(t)，23.1(q)，23.0(t)，14.3(q)。

化合物(2)

旋光度：[α]_D ²⁴＝+93.4°(吡啶中、c＝0.76)。

高分辨率FABMS分析：1195.8073[(M-H)，理论值1195.8050，化学式C₆₁H₁₁₅N₂O₂₀、误差2.3mMU]红外吸收光谱：(KBr、cm^-1)3370，2920，2850，1645，1535，1470，1040。

熔点：177.0-179.0℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.61(1H，d，J＝9.2Hz)，8.49(1H，d，J＝9.2Hz)，5.61(2H，m)，5.51(1H，d，J＝3.7Hz)，5.30(1H，m)5.08(1H，m)，5.02(1H，m)，4.96(1H，dd，J＝3.7，10.4Hz)，4.85(1H，dd，J＝3.1，11.0Hz)，4.77(1H，dd，J＝3.1，10.4Hz)，4.74(1H，m)，4.66(1H，m)，4.64(1H，m)，4.54(1H，t，J＝9.2Hz)，4.42-4.51(4H，m)，4.40(1H，bt，J＝6.1Hz)，4.34(1H，dd，J＝5.5，10.4Hz)，4.25(1H，dd，J＝7.9，12.8Hz)，4.10-4.22(5H，m)，4.04(1H，dd，J＝3.7，9.8Hz)，3.95(1H，t，J＝9.2Hz)，2.14(2H，m)，2.04(3H，s)，1.84-2.00(3H，m)，1.59-1.76(3H，m)，1.14-1.44(58H，m)，0.85(6H，m)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)175.5(s)，171.7(s)，96.8(d)，96.1(d)，94.1(d)，75.5(d)，75.2(d)，74.1(d)，73.6(d)，72.7(d)，72.6(d)，72.5(d)，72.3(d)，72.1(d). 71.9(d)，70.2(d)，70.1(d)，70.1(d)，67.7(t)，65.6(d)，63.1(t)，63.0(t)，62.3(t)，51.3(d)，51.2(d)，35.4(t)，33.5(t)，32.2(t)，32.1(t)，30.4(t)，30.2(t)，30.1(t)，30.0(t)，29.9(t)，29.7(t)，29.6(t)，26.6(t)，26.0(t)，23.1(q)，23.0(t)，14.3(q)。

化合物(3)

旋光度：[α]_D ²⁴＝+107.2°(吡啶中、c＝1.0)。

高分辨率FABMS分析：1209.8273[(M-H)^-，理论值1209.8207，化学式C₆₂H₁₁₇N₂O₂₀、误差6.7mMU]

红外吸收光谱：(KBr，cm^-1)3370，2920，2850，1645，1535，1470，1040。

熔点：179.5-183.0℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.61(1H，d，J＝9.2Hz)，8.49(1H，d，J＝9.2Hz)，5.61(2H，m)，5.51(1H，d，J＝3.7Hz)，5.30(1H，dd，J＝3.7，11.0Hz)，5.06(1H，m)，5.03(1H，m)，4.98(1H，dd，J＝3.7，10.4Hz)，4.87(1H，dd，J＝3.1，11.0Hz)，4.81(1H，dd，J＝3.1，10.4Hz)，4，75(1H，m)，4.68(1H，m)，4.66(1H，dd，J＝3.7，7.9Hz)，4.40-4.60(6H，m)，4.35(1H，dd，J＝5.5，10.4Hz)，4.10-4.32(6H，m)，4.04(1H，dd，J＝3.7，9.8Hz)，3.95(1H，t，J＝9.2Hz)，2.14(2H，m)，2.09(3H，s)，1.85-2.02(3H，m)，1，61-1.78(3H，m)，1.14-1.42(57H，m)，0.85-0.91(9H，m)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)175.9(s)，172.4(s)，96.8(d)，96.1(d)，94.1(d)，75.3(d)，75.2(d)，74.2(d)，73.7(d)，72.9(d)，72.7(d)，72.7(d)，72.4(d)，72.2(d)，71.8(d)，70.3(d)，70.1(d)，70.0(d)，67.9(t)，65.6(d)，63.3(t)，63.2(t)，62.5(t)，51.4(d)，51.2(d)，39.5(t)，35.5(t)，33.2(t)，32.3(t)，30.6(t)，30.5(t)，30.3(t)，30.2(t)，30.1(t)，29.8(t)，28.4(d)，27.9(t)，26.8(t)，26.1(t)，23.2(q)，23.1(t)，23.0(q)，14.5(q)。

化合物(4)

旋光度：[α]_D ²⁴＝+107.4°(-吡啶中、c＝1.0)。

高分辨率FABMS分析：1209.8192[(M-H)^-，理论值1209.8207，化学式C₆₂H₁₁₇N₂O₂₀、误差-1.5mMU]红外吸收光谱：(KBr、cm^-1)3370，2920，2850，1645，1535，1470，1040。

熔点：183.0-184.5℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.61(1H，d，J＝9.2Hz)，8.49(1H，d，J＝9.2Hz)，5.61(2H，m)，5.51(1H，d，J＝3.7Hz)，5.30(1H，dd，J＝3.7，11.0Hz)，5.07(1H，m)，5.02(1H，m)，4.96(1H，dd，J＝3.7，10.4Hz)，4.85(1H，dd，J＝3.1，11.0Hz)，4.78(1H，dd，J＝3.1，10.4Hz)，4.74(1H，m)，4.62-4.69(2H.m).4.55(1H，t，J＝9.2Hz)，4.45-4.51(4H，m)，4.42(1H，bt，J＝6.1Hz)，4.35(1H，dd，J＝5.5，10.4Hz)，4.27(1H，m)，4.10-4.22(5H，m)，4.04(1H，dd，J＝3.7，9.8Hz)，3.95(1H，t，J＝9.2Hz)，2.14(2H，m)，2.07(3H，s)，1.83-2.00(3H，m)，1.59-1.76(3H，m)，1.14-1.42(60H，m)，0.87(6H，m)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)175.7(s)，172.0(s)，96.8(d)，96.1(d)，94.1(d)，75.3(d)，75.3(d)，74.1(d)，73.7(d)，72.8(d)，72.6(d)，72.6(d)，72.3(d)，72.2(d)，71.8(d)，70.3(d)，70.1(d)，70.0(d)，67.8(t)，65.6(d)，63.2(t)，63.1(t)，62.4(t)，51.4(d)，51.2(d)，35.4(t)，33.4(t)，32.3(t)，32.2(t)，30.5(t)，30.3(t)，30.2(t)，30.1(t)，30.0(t)，29.7(t)，29.7(t)，26.7(t)，26.0(t)，23.2(q)，23.1(t)，14.4(q)。

化合物(5)

旋光度：[α]_D ²⁴＝+112.2°(吡啶中、c＝1.0)。

高分辨率FABMS分析：1223.8352[(M-H)-，理论值1223.8363，化学式C₆₃H₁₁₉N₂O₂₀、误差1.1mMU]红外吸收光谱：(KBr、cm^-1)3370，2920，2850，1645，1535，1470，1040。

熔点：188.0-189.5℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.61(1H，d，J＝9.2Hz)，8.49(1H，d，J＝9.2Hz)，5.61(2H，m)，5.52(1H，d，J＝3.7Hz)，5.30(1H，dd，J＝3.7，11.0Hz)5.07(1H，m)，5.02(1H，m)，4.98(1H，dd，J＝3.7，10.4Hz)，4.87(1H，dd，J＝3.1，11.0Hz)，4.81(1H，dd，J＝3.1，10.4Hz)，4.75(1H，m)，4.68(1H，m)，4.66(1H，dd，J＝3.7，7.9Hz)，4.42-4.58(6H，m)，4.36(1H，dd，J＝5.5，10.4Hz)，4.29(1H，dd，J＝7.9，12.8Hz)，4.10-4.26(5H，m)，4.07(1H，dd，J＝3.7，9.8Hz)，3.92(1H，t，J＝9.2Hz)，2.16(2H，m)，2.09(3H，s)，1.83-2.02(3H，m)，1.60-1.77(3H，m)1，10-1.46(59H，m)，0.85-0.91(9H，m)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)176.0(s)，172.5(s)，96.8(d)，96.1(d)，94.1(d)，75.3(d)，75.3(d)，74.2(d)，73.6(d)，72.9(d)，72.7(d)，72.7(d)，72.4(d)，72.3(d)，71.8(d)，70.3(d)，70.1(d)，70.1(d)，67.9(t)，65.6(d)，63.3(t)，63.2(t)，62.5(t)，51.4(d)，51.2(d)，39.5(t)，35.5(t)，33.2(t)，32.3(t)，30.6(t)，30.5(t)，30.3(t)，30.2(t)，30.1(t)，29.9(t)，29.8(t)，28.4(d)，27.9(t)，26.8(t)，26.1(t)，23.2(q)，23.1(t)，23.0(q)，14.5(q)。

化合物(6)

旋光度：[α]_D ²⁴＝+117.0°(吡啶中、c＝1.0)。

高分辨率FABMS分析：1223.8298[(M-H)-，理论值1223.8363，化学式C₆₃H₁₁₉N₂O₂₀误差-6.5mMU]

红外吸收光谱：(KBr、cm^-1)3370，2920，2850，1645，1535，1470，1040。

熔点：183.0-185.0℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.61(1H，d，J＝9.2Hz)，8.49(1H，d，J＝9.2Hz)，5.61(2H，m)，5.52(1H，d，J＝3.7Hz)，5.30(1H，dd，J＝3.7，11.0Hz)，5.08(1H，m)，5.03(1H，m)，4.98(1H，dd，J＝3.7，10.4Hz)，4.87(1H，dd，J＝3.1，11.0Hz)，4.80(1H，dd，J＝3.1，10.4Hz)，4.75(1H，m)，4.68(1H，m)，4.66(1H，dd，J＝3.7，7.9Hz)，4.40-4.58(6H，m)， 4.36(1H，dd，J＝5.5，10.4Hz)，4.28(1H，dd，J＝7.9，12.8Hz)，4.10-4.25(5H，m)，4.06(1H，dd，J＝3.7，9.8 H z)，3.92(1H，t，J＝9.2Hz)，2.15(2H，m)，2.08(3H，s)，1.85-2.01(3H，m)，1.59-1.78(3H，m)，1.16-1.48(62H，m)，0.87(6H，m)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)175.7(s)，172.0(s)，96.8(d)，96.1(d)，94.1(d)，75.4(d)，75.3(d)，74.1(d)，73.6(d)，72.8(d)，72.7(d)，72.6(d)，72.3(d)，72.2(d)，71.8(d)，70.3(d)，70.1(d)，70.0(d)，67.8(t)，65.6(d)，63.2(t)，63.1(t)，62.4(t)，51.3(d)，51.2(d)，35.4(t)，33.4(t)，32.2(t)，32.2(t)，30.5(t)，30.3(t)，30.2(t)，30.1(t)，30.1(t)，30.1(t)，30.0(t)，29.7(t)，29.7(t)，26.7(t)，26.0(t)，23.1(q)，23.0(t)，14.4(q)。

化合物(7)

旋光度：[α]_D ²⁴＝+118.9°(吡啶中、c＝1.0)。

高分辨率FABMS分析：1237.8533[(M-H)^-，理论值1237.8520，化学式C₆₄H₁₂₁N₂O₂₀、误差1.3mMU]红外吸收光谱：(KBr、cm^-1)3370，2920，2850，1645，1535，1470，1040。

H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.61(1H，d，J＝9.2Hz)，8.49(1H，d，J＝9.2Hz)，5.61(1H，d，J＝4.3Hz)，5.60(1H，d，J＝3.7Hz)，5.51(1H，d，J＝3.7Hz)，5.30(1H，dd，J＝3.7，11.0Hz)，5.07(1H，m)，5.02(1H，m)，4.96(1H，m)，4.86(1H，m)，4.78(1H，m)，4.4(1H，m)，4.67(1H，m)，4.64(1H，m)，4.55(1H，t，J＝9.2Hz)，4.42-4.51(4H，m)，4.39(1H，m)，4.35(1H，dd，J＝5.5，10.4Hz)，4.26(1H，m)，4.10-4.22(5 H，m)，4.04(1H，dd，J＝3.7，9.8Hz)，3.94(1H，t，J＝9.2Hz)，2.16(2H，m)，2.06(3H，s)，1.85-2.01(3H，m)，1.59-1.79(3H，m)，1.12-1.45(61H，m)，0.83-0.89(9H，m)。

化合物(8)

旋光度：[α]_D ²⁴＝+119.0°(吡啶中、c＝1.0)。

高分辨率FABMS分析：1237，8492[(M-H)^-，理论值1237.8520，化学式C₆₄H₁₂₁N₂O₂₀误差-2.8mMU]

红外吸收光谱：(KBr、cm¹)3370，2920，2850，1645，1535，1470，1040。

熔点：184.5-186.5℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.61(1H，d，J＝9.2Hz)，8.49(1H，d，J＝9.2Hz)，5.62(2H，m)，5.55(1H，d，J＝3.7Hz)，5.31(1H，dd，J＝3.7，11.0Hz)，5.06(2H，m)，5.00(1H，dd，J＝3，7，10.4Hz)，4.88(1H，dd，J＝3.1，11.0Hz)，4.83(1H，dd，J＝3.1，10.4Hz)，4.76(1H，m)，4.70(1H，m)，4.69(1H，m)，4.47-4.59(6H，m)，4.38(1H，dd，J＝5.5，10.4Hz)，4.10-4.34(6H，m)，4.08(1H，dd，J＝3.7，9.8Hz)，3.92(1H，t，J＝9.2Hz)，2.16(2H，m)，2.12(3H，s)，1.85-2.05(3H，m)，1.64-1.78(3H，m)1.20-1.48(64H，m)，0.89(6H，m)。

化合物(9)

旋光度：[α]_D ²⁴＝+103.2°(吡啶中、c＝0. 68)。

高分辨率FABMS分析：1251.8708[(M-H)^-，理论值1251.8676，化学式C₆₅H₁₂₃N₂O₂₀、误差3.2mMU]

熔点：190.5-191.5℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.61(1H，d，J＝9.2Hz)，8.49(1H，d，J＝9.2Hz)，5.61(1H，d，J＝4.3Hz)，5.60(1H，d，J＝3.7Hz)，5.51(1H，d，J＝3.7Hz)，5.30(1H，dd，J＝3.7，11.0Hz)，4.99-5.06(2H，m)，4.96(1H，dd，J＝3.7，10.4Hz)4.85(1H，dd，J＝3.1，11.0Hz)，4.77(1H，dd，J＝3.1，10.4Hz)，4.74(1H，m)，4.66(1H，m)，4.64(1H，dd，J＝3.7，7.9Hz)，4.55(1H，t，J＝9.2Hz)，4.45-4.51(3H，m)，4.45(1H，m)，4.43(1H，m)，4.35(1H，m)，4.26(1H，m)，4.10-4.22(5H，m)，4.06(1H，dd，J＝3.7，9.8Hz)，3.99(1H，t，J＝9.2Hz)，2.14(2H，m)，2.02(3H，s)，1.83-2.00(3H，m)，1.59-1.76(3H，m)，1.81-1.45(63H，m)，0.81-0.89(9H，m)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)175.4(s)，171.4(s)，96.8(d)，96.2(d)，94.1(d)，75.5(d)，75.2(d)，74.1(d)，73.6(d)，72.7(d)，72.5(d)，72.5(d)，72.2(d)，72.0(d)，72.0(d)，70.1(d)，70.1(d)，70.1(d)，67.8(t)，65.6(d)，62.9(t)，62.9(t)，62.3(t)，51.2(d)，51.2(d)，36.9(t)，35.3(t)，34.6(d)，33.2(t)，32.1(t)，30.4(t)，30.2(t)，30.0(t)，30.0(t)，29.9(t)，29.7(t)，29.6(t)，27.4(t)，26.6(t)，25.9(t)，23.0(q)，22.9(t)，19.4(q)，14.3(q)，11.6(q)。

实验例2：制备

从冲绳县宫古岛海中采集的海绵动物Agelas axisera经匀浆后冻干(951g)。此物质用萃取溶剂氯仿-甲醇(1∶1)2升萃取24小时，萃取物减压干燥，得到褐色萃取物(232g)，后者在2升水和2升乙酸乙酯中分配，乙酸乙酯层干燥后得到褐色残留物(65.0g)，还得到中间层27.8g。残留物在2升90％甲醇和2升正己烷中分配，90％甲醇层干燥得到褐色残留物(53.7g)。中间层和90％甲醇层用硅胶柱色谱法(ヮコ-ゲルC-200，500g)分离，洗脱溶剂氯仿∶甲醇∶水的比值从9∶1∶0.1改变至8∶2∶0.2。活性级分(5.06g)用セファデックスLH-20柱色谱法(氯仿∶甲醇＝1∶1)分离，得到活性级分(3.91g)。此级分再次用硅胶柱色谱法(ヮコ-ゲルC-200,100g)分离，洗脱溶剂氯仿∶甲醇∶水的比值从9∶1∶0.1改变至8∶2∶0.2，得到活性级分(2.76g)。其中1.30g溶解在2ml吡啶中，用逆相高速液体色谱法[HPLC，D-ODS-5，S-5，120A，20×250mm((株)ヮィェムシィ)，99％甲醇，10ml./min]反复分离，得到无色粉末的本发明化合物

(10)(30.3mg)、(11)(55.9mg)、(12)(245.7mg)、(13)(49.2mg)、(14)(115.4mg)、(15)(61.2mg)、(16)(55.0 mg)、(17)(30.1mg)保留时间分别为30.5分、36.0分、43.1分、46.2分、50.7分、56.4分、58.9分、63.5分。

化合物(10)-(17)显示下列谱学数据

化合物(10)

旋光度：[α]_D ²³＝+25.1°(吡啶中、c＝1.06)。

高分辨率FABMS分析：950.6779[(M-H)^-计算值950.6786，化学式C₅₀H₉₆NO₁₅、误差0.7mMU]

红外吸收光谱：(KBr、cm^-1)3400，2950，2870，1645，1535，1475，1080。

熔点：127.0-130.0℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％，35℃)：δ(ppm)8.47(1H，d，J＝9.2Hz)，5.87(1H，bs)，5.44(1H，d，J＝3.7Hz)，5.19(1H，m)，4.93(1H，m)，4.84(1H.m)，4.78(1H，bs)，4.68(1H，d，J＝3.1Hz)，4.62(1H，dd，J＝3.7.9.8Hz)，4.57(2H，m)，4.41(2H，m)，4.25-4.32(5H，m)，4.22(1H，dd，J＝5.5，6.1Hz)，4.17(1H，dd，J＝6.7，9.1Hz)，2.23(1H，m)，2.14(1H，m)，1.97(1H，m)，1.88(2H，m)，1.58-1.76(3H，m)，1.14-1.45(52H，m)，0.83(6H，t，J＝7.3Hz)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)175.3(s)，110.7(d)，100.9(d)，85.6(d)，82.4(d)，78.7(d)，78.6(d)，76.0(d)，72.3(d)，72.3(d)，72.2(d)，72.1(d)，70.2(d)，68.4(d)，68.1(t)，64.1(t)，62.4(t)，50.6(d)，35.3(t)，33.9(t)，32.0(t)，30.3(t)，30.1(t)，29.9(t)，29.8(t)，29.8(t)，29.5(t)，29.5(t)，26.3(t)，25.7(t)，22.8(t)，14.2(q)。

化合物(11)

旋光度：[α]_D ²³＝+27.3°(吡啶中、c＝2.96)。

高分辨率FABMS分析：964.6963[(M-H)^-，计算值964.6942，化学式C₅₁H₉₈NO₁₅、误差2.1mMU]

熔点：138.5-142.0℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.50(1H，d，J＝9.2Hz)，5.87(1H，s)，5.42(1H，d，J＝3.7Hz)，5.18(1H，m)，4.93(1H，dd，J＝3.7，4.9Hz)，4.84(1H，dd，J＝3.0，5.5Hz)，4.78(1H，bs)，4.66(1H，d，J＝3.7Hz)，4.51(1H，dd，J＝3.7，9.8Hz)，4.57(1H，dd，J＝3.7，8.0Hz)，4.53(1H，dd，J＝4.9，10.4Hz)，4.41(2H，m)，4.25-4.32(5H，m)，4.21(1H，dd，J＝4.2，5.2Hz)，4.17(1H，dd，J＝7.3，14.0Hz)，2.21(1H，m)，2.13(1H，m)，1.94(1H，m)，1.85(2H，m)，1.57-1.74(3H，m)，1.10-1.45(54H，m)，0.83(6H，t，J＝7.3Hz)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：(ppm)175.4(s)，110.7(d)，100.9(d)，85.7(d)，82.3(d)，78.7(d)，78.6(d)，75.9(d)，72.3(d)，72.3(d)，72.3(d)，72.1(d)，70.1(d)，68.4(d)，68.1(t)，64.0(t)，62.4(t)，50.7(d)，35.3(t)，33.9(t)，32.0(t)，30.3(t)，30.1(t)，29.9(t)，29.9(t)，29.8(t)，29.8(t)，29.5(t)，29.5(t)，26.3(t)，25.7(t)，22.8(t)，14.2(q)。

化合物(12)

旋光度：[α]_D ²³＝+27.7°(吡啶中、c＝2.07)。

高分辨率FABMS分析：978.7120[(M-H)^-，计算值978.7093，化学式C₅₂H₁₀₀NO₁₅、误差2.7mMU]

熔点：126.0-131.0℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％，37℃)：δ(ppm)8.50(1H，d，J9.2Hz)，5.91(1H，s)，5.46(1H，d，J＝3.7Hz)，5.20(1H，m)，4.96(1H，m)，4.87(1H，m)，4.82(1H，bs)，4.71(1H，bs)，4.65(1H，dd，J＝3.7，9.8Hz)，4.60(1H，m)，4.58(1H，dd，J＝4.9，10.4Hz)，4.44(2H，m)，4.27-4.36(5H，m)，4.24(1H，m)，4.19(1H，dd，J＝4.3，11.0Hz)，2.25(1H，m)，2.18(1H，m)，2.00(1H，m)，1.90(2H，m)，1.64-1.80(3H，m)，1.19-1.50(56H，m)，0.88(6H，t，J＝6.7Hz)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％，37℃)：δ(ppm)175.6(s)，110.9(d)，101.1(d)，86.1(d)，82.5(d)，78.9(d)，78.8(d)，76.2(d)，72.6(d)，72.5(d)，72.5(d)，72.4(d)，70.4(d)，68.7(d)，68.4(t)，64.2(t)，62.6(t)，51.0(d)，35.5(t)，34.1(t)，32.2(t)，30.5(t)，30.2(t)，30.1(t)，30.0(t)，29.7(t)，29.6(t)，26.5(t)，25.9(t)，23.0(t)，14.3(q)。

化合物(13)

旋光度：[α]_D ²³＝+45.1°(吡啶中、c＝2.14)。

高分辨率FABMS分析：992.7269[(M-H)^-，计算值992.7249，化学式C₅₃H₁₀₂NO₁₅、误差2.0mMU]

熔点：147.0-150.0℃

¹H-核核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.52(1H，d，J＝9.2Hz)，5.90(1H，s)，5.42(1H，d，J＝4.2Hz)，5.19(1H，m)，4.95(1H，dd，J＝3.6，49Hz)，4.86(1H，dd，J＝3.1，4.9Hz)，4.81(1H，bs)，4.68(1H，d，J＝3.1Hz)，4.63(1H，dd，J＝3.7，10.4Hz)，4.59(1H，dd，J＝3.7，7.9Hz)，4.55(1H，dd，J＝4.9，10.4Hz)，4.43(2H，m)，4.25-4.33(5H，m)，4.23(1H，dd，J＝3.1，6.1Hz)，4.16(1H，dd，J＝3.1，6.7Hz)，2.22(1H，m)，2.14(1H，m)，1.96(1H，m)，1.87(2H，m)，1.57-1.74(3H，m)，1.05-1.43(55H，m)，0.82(9H，m)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)175.8(s)，111.0(d)，101.1(d)，85.9(d)，82.7(d)，78.9(d)，78.9(d)，76.0(d)，72.6(d)，72.6(d)，72.6(d)，72.4(d)，70.4(d)，68.8(d)，68.4(t)，64.3(t)，62.7(t)，51.0(d)，39.5(t)，35.6(t)，34.0(t)，32.3(t)，30.6(t)，30.4(t)，30.4(t)，30.2(t)，30.1(t)，29.8(t)，28.4(d)，27.9(t)，26.6(t)，26.0(t)，23.1(t)，23.0(q)，14.5(q)。

化合物(14)

旋光度：[α]_D ²³＝+34.0°(吡啶中、c＝2.96)。

高分辨率FABMS分析：992.7285[(M-H)^-，计算值992.7249，化学式C₅₃H₁₀₂NO₁₅、误差3.6mMU]

熔点：138.0-142.5℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.51(1H，d，J＝9.1Hz)，5.88(1H，s)，5.44(1H，d，J＝3.7Hz)，5.19(1H，m)，4.94(1H，dd，J＝3.6，5.4Hz)，4.86(1H，m)，4.79(1H，bs)，4.67(1H，d，J＝3.1Hz)，4.62(1H，dd，J＝3.7，9.8Hz)，4.57(1H，dd，J＝3.7，8.0Hz)，4.54(1H，dd，J＝4.9，11.0Hz)，4.40(2H，m)，4.24-4.33(5H，m)，4.22(1H，m)，4.14(1H，dd，J＝7.3.13.4Hz)，2.22(1H，m)，2.14(1H，m)，1.95(1H，m)，1.87(2H，m)，1.57-1.74(3H，m)，1.05-1.43(58H，m)，0.82(6H，t，J＝6.7Hz)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)175.2(s)，110.7(d)，101.1(d)，86.0(d)，82.6(d)，78.9(d)，78.7(d)，76.4(d)，72.5(d)，72.5(d)，72.4(d)，72.3(d)，70.4(d)，68.5(d)，68.3(t)，64.4(t)，62.7(t)，50.7(d)，35.6(t)，34.3(t)，32.1(t)，30.4(t)，30.2(t)，30.0(t)，30.0(t)，29.9(t)，29.9(t)，29.6(t)，29.6(t)，26.4(t)，25.8(t)，22.9(t)，14.3(q)。

化合物(15)

旋光度：[α]_D ²³＝+35.2°(吡啶中、c＝3.19)。

高分辨率FABMS分析：1006.7430[(M-H)^-，计算值1006.7406，化学式C₅₄H₁₀₄NO₁₅、误差2.4mMU]

红外吸收光谱：(KBr、cm^-1)3400.2950，2870，1645，1535，1475，1080。

熔点：125.0-129.5℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.51(1H，d，J＝9.2Hz)，5.89(1H，s)，5.41(1H，d，J＝4.3Hz)，5.17(1H，m)，4.94(1H，dd，J＝3.6，5.4Hz)，4.85(1H，m)，4.80(1H，bs)，4.67(1H，d，J＝3.1Hz)，4.62(1H，dd，J＝4.2，9.8Hz)，4.59(1H，dd，J＝3.7，7.9Hz)，4.55(1H，dd，J＝4.9，10.4Hz)，4.38-4.44(2H，m)，4.25-4.33(5H，m)，4.21(1H，dd，J＝3.1，6.1Hz)，4.15(1H，dd，J＝3.1，6.7Hz)，2.20(1H，m)，2.13(1H，m)，1.94(1H，m)，1.87(2H，m)，1.57-1.74(3H，m)，1.05-1.43(57H，m)，0.81(9H，m)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)175.4(s)，110.7(d)，100.8(d)，85.6(d)，82.3(d)，78.6(d)，78.6(d)，75.6(d)，72.2(d)，72.2(d)，72.2(d)，72.1(d)，70.1(d)，68.4(d)，68.0(d)，63.9(t)，62.3(t)，50.7(d)，39.1(t)，35.3(t)，33.7(t)，31.9(t)，30.2(t)，30.0(t)，29.9(t)，29.4(t)，28.0(d)，27.5(t)，26.3(t)，25.7(t)，22.8(t)，22.6(q)，14.1(q)。

化合物(16)

旋光度：[α]_D ²³＝+34.6°(吡啶中、c＝2.41)。

熔点：125.0-129.0℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.51(1H，d，J＝9.1Hz)，5.88(1H，s)，5.41(1H，d，J＝3.7Hz)，5.16(1H，m)，4.93(1H，dd，J＝3.6，5.4Hz)，4.84(1H，m)，4.79(1H，bs)，4.67(1H，d，J＝3.1Hz)，4.61(1H，dd，J＝3.7，9.8Hz)，4.58(1H，dd，J＝3.7，8.0Hz)，4.53(1H，dd，J＝4.9，11.0Hz)，4.40(2H，m)，4.24-4.33(5H，m)，4.21(1H，m)，4.14(1H，dd，J＝7.3，13.4Hz)，2.20(1H，m)，2.12(1H，m)，1.95(1H，m)，1.86(2H，m)，1.57-1.74(3H，m)，1.05-1.43(60H，m)，0.82(6H，m)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)175.1(s)，110.7(d)，101.1(d)，86.0(d)，82.6(d)，78.9(d)，78.7(d)，76.4(d)，72.5(d)，72.5(d)，72.4(d)，72.2(d)，70.4(d)，68.5(d)，68.3(t)，64.3(t)，62.7(d)，50.6(d)，35.5(t)，34.3(t)，32.1(t)，30.4(t)，30.1(t)，30.0(t)，29.9(t)，29.9(d)，29.9 (t)，29.6(t)，29.6(t)，26.4(t)，25.8(t)，22.9(t)，14.2(q)。

化合物(17)

旋光度：[α]_D ²³＝+39.5°(吡啶中、c＝1.14)。

高分辨率FABMS分析：1020.7537[(M-H)^-，计算值1020.7562，化学式C₅₅H₁₀₆NO₁₅、误差2.5mMU]

熔点：124.5-128.0℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.51(1H，d，J＝9.2Hz)，5.90(1H，s)，5.45(1H，d，J＝3.7Hz)，5.20(1H，m)，4.96(1H，dd，J＝3.1，5.5Hz)，4.87(1H，dd，J＝3.0，5.5Hz)，4.80(1H，bs)，4.69(1H，d，J＝3.0Hz)，4.64(1H，dd，J＝3.6，9.8Hz)，4.59(1H，dd，J＝3.7，8.0Hz)，4.56(1H，dd，J＝4.9，10.4Hz)，4.39-4.46(2H，m)，4.25-4.33(5H，m)，4.23(1H，dd，J＝3.6，6.1Hz)，4.16(1H，dd，J＝7.9，14.6Hz)，2.22(1H，m)，2.14(1H，m)，1.96(1H，m)，1.89(2H，m)，1.57-1.74(3H，m)，1.02-1.46(59H，m)，0.82(9H，m)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)175.4(s)，110.7(d)，100.9(d)，85.7(d)，82.4(d)，78.6(d)，78.6(d)，75.8(d)，72.3(d)，72.3(d)，72.3(d)，72.2(d)，70.1(d)，68.4(t)，68.1(t)，64.0(t)，62.4(t)，50.7(d)，39.1(t)，35.3(t)，33.8(t)，32.0(t)，30.3(t)，30.1(t)，29.9(t)，29.9(t)，28.1(d)，27.6(t)，26.3(t)，25.7(t)，22.8(t)，22.7(t)，14.2(q)。

实验例3：用合成法制备

本发明化合物的合成法及其物理化学性质如下所述(关于合成法，请参照图2的反应路线)。

化合物18的合成

20g(0.133mol)D-来苏糖悬浮于300ml用氯化钙脱水的丙桐中，加0.05ml浓硫酸，在室温搅拌18小时。加10.0g分子筛4A，中和。过滤，残留物用丙酮充分洗涤。合并洗液，减压浓缩，不进行精制，用于以下反应。

化合物19的合成

上述反应得到的化合物18全部溶于168ml二氯甲烷中，添加10.0ml吡啶、39.0g三苯甲基氯，在32℃搅拌4小时。加入7.8ml乙醇搅拌后，用饱和氯化铵水溶液洗涤。进一步依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤。减压浓缩得到的糖浆中加入20ml乙酸乙酯溶解，向其中缓缓加入40ml己烷，稍呈浑浊时加入晶核，在0℃放置。得到的结晶过滤，用己烷/乙酸乙酯＝8/1的混合液洗涤。得到初次结晶44.4g，从母液得到二次结晶5.6g。收率为86.8％。

m.p.174～176℃、

FD-MS＝432(C₂₇H₂₈O₅；MW＝432.19)、

IR(cm^-1，KBr)3530，3400，3050，2950，2880，1600，1490，1450，1375，1215，1070；

¹H-NMR(500MHz/CDCl₃)：δ(ppm)7.48(6H，d，J＝7.3Hz)，7.29(6H，t，J＝7.3Hz)，7.22(3H，t，J＝7.3Hz)，5.38(1H，d，J＝2.4Hz)，4.75(1H，dd，J＝5.5Hz，3.7Hz)，4.59(1H，d，J＝6.1Hz)，4.32-4.34(1H，m)，3.43(1H，dd，J＝4.9Hz，9.8Hz)，3.39(1H，dd，6.7Hz，9.8Hz)，2.33(1H，d，J＝2.4Hz)，1.29(3H，s)，1.28(3H，s)。

化合物20的合成

在96.4g 1-溴十三烷中添加96.0g三苯膦，在140℃搅拌4.5小时。缓缓放热，向其中添加500ml四氢呋喃使之溶解。冷却至0℃，滴加146.4ml 2.5N正丁基锂溶液，搅拌15分钟。向其中添加化合物19的四氢呋喃溶液(79g/150ml)。边缓缓回到室温边搅拌18小时。减压浓缩后，加1000ml己烷/甲醇/水＝10/7/3的混合液，进一步加40ml饱和氯化铵水溶液，分液。甲醇/水层再次用500ml己烷萃取。所得到的全部己烷层用无水硫酸镁干燥后，减压浓缩，在用真空泵减压下充分干燥，得到糖浆状化合物20的粗精制物。此化合物不再进一步精制，用于以下反应。

化合物21的合成

在以上反应得到的全部化合物20中添加600ml二氯甲烷、200ml吡啶，再添加16.95ml甲磺酰氯，在31℃搅拌24小时。添加13ml乙醇，在室温搅拌1小时后，减压浓缩。添加1000ml己烷/甲醇/水＝10/7/3的混合液，分液。甲醇/水层再用200ml己烷萃取三次。得到的全部己烷层用无水硫酸镁干燥后，减压浓缩，在真空泵减压下充分干燥，得到糖浆状化合物21的粗精制物。此化合物不再进一步精制，用于以下反应。

化合物22的合成

上述工艺得到的全部化合物21中添加900ml二氯甲烷、600ml甲醇，使之溶解。向其中添加124ml浓盐酸，在室温搅拌5小时。加入碳酸氢钠中和、过滤。用乙酸乙酯洗涤残渣，合并滤液，减压浓缩。残留物中加入乙酸乙酯，用饱和食盐水洗涤。水层再用乙酸乙酯萃取三次，得到的全部乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥后，减压浓缩。用己烷进行结晶。得到一次结晶41.0g，二次结晶9.40g。三个阶段的总收率是70.0％。

m.p.66～67℃、

FD-MS＝377(M-H₂O)⁺，(C₁₉H₃₈O₆S，Mw＝394.57)，IR(cm^-1，KBr)3500，3350，2920，2850，1465，1440，1355，1330，1160，1030，930；

¹H-NMR(500MHz/CDCl₃＋D₂O^-1滴)；E/Z混合物(3∶7)：δ(ppm)5.86(0.3H，dt，J＝7.3Hz，14.7Hz)，5.77(0.7H，dt，J＝7.3Hz.10.4Hz)，5.55(0.3H，br.dd，J＝7.3Hz，14.7Hz)，5.49(0.7H，br.t，J＝9.8Hz)，4.9]-4.97(1H，m)，4.51(0.7H，br.t，J＝9.8Hz)，4.11(0.3H，br.t，J＝7.3Hz)，3.94-4.03(2H，m)，3.67-3.73[1H(3.70，dd，J＝3.1Hz，6.7Hz)，(3.69，dd，J＝3.1Hz，7.3Hz)]，3.20(2.1H，s)，3.19(0.9H，s)，2.05-2.22(2H，m)，1.22-1.43(20H，m)，0.88(3H.t，J＝6.7Hz)。

化合物23的合成

24.4g化合物22溶解在244ml氢呋喃中，向其中添加2.44g5％钯-硫酸钡。用氢气置换反应器内部(空气)，在氢气氛围下，在室温搅拌20小时。用200ml 60℃氯仿/甲醇＝1∶1的混合液稀释后，用氟镁石过滤，残渣用氯仿/甲醇＝1∶1的混合液洗涤。滤液、洗液合并，减压浓缩后，用乙酸乙酯进行结晶。晶体用己烷充分洗涤。得到一次结晶21.5g，二次结晶0.64g。收率91.3％。

m.p.124～126℃、

FD-MS＝397(C₁₉H₄₀O₆S，Mw396.59)，

[α]_D ²³＝+7.52°(c＝1.50，C₅H₅N)，

IR(cm^-1，KBr)3500，3380，3220，2920，2850，1470，1430，1360，1330，1165，1095，930；

¹H-NMR(500MHz/CDCl₃－CD₃OD＝1∶1)：δ(ppm)4.93-4.96(1H，m)，3.91(1H，dd，J＝6.7Hz，12.2Hz)，3.85(1H，dd，J＝4.9Hz，12.2Hz)，3.54-3.60(1H，m)，3.50(1H，dd，J＝1.8Hz.8.5Hz)，3.19(3H，s)，1.75-1.83(1H，m)，1.53-1.62(1H，m)，1.21-1.45(24H，m)，0.89(3H，t，J＝6.7Hz)。

化合物24的合成

8.94g(22.5mmol)化合物23溶解在72ml干燥二甲基甲酰胺(DMF)中，向其中添加2.93g NaN₃。用油浴加热至95℃，加热搅拌4小时。用薄层色谱法(TLC)(己烷∶丙酮＝3∶2)确认原料消失后，将反应溶液减压浓缩。向浓缩残留物中添加乙酸乙酯，用水洗涤。水层用同量的乙酸乙酯再次萃取。合并乙酸乙酯层，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后，减压浓缩，然后用真空泵抽气充分干燥。不进行精制，直接用于以下反应。

化合物25的合成

上述反应得到的全部粉末中添加45ml二氯甲烷，再添加7.53gTrCl(三苯甲基氯)。然后添加14ml吡啶，在室温搅拌16小时。用薄层色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)确认原料消失后，加1.8ml乙醇使反应终止，就这样再搅拌30分钟。反应液依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化铵水溶液、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥。减压浓缩后，得到的糖浆用硅胶柱(己烷∶乙酸乙酯＝10∶1)精制。得到6.93g化合物25(收率52％)。

FD-MS＝585(C₃₇H₅₁N₃O₃，Mw＝585.82)，

[α]_D ²³＝+11.86(c＝0.86，CHCl₃)，

IR(cm^-1，薄膜)3425，2924，2854，2098，1491，1466，1448，1267，1223，1074，1034，

¹H-NMR(500MHz，CDCl₃＋D₂O-1滴)：δ(ppm)7.24-7.61(15H，m)，3.62-3.66(2H，m)，3.51-3.57(2H，m)，3.42(1H，dd，J＝6.0Hz，J＝10.4Hz)，1.23-1.56(26H，m)，0.88(3H，t，J＝6.7Hz)

化合物26的合成

21.73g糖浆状化合物25溶解在200ml二甲基甲酰胺中，向其中徐徐添加3.57g60％氢化钠。在室温搅拌40分钟后，用冰冷却，滴加9.71ml(1.05等量)苄基溴，边缓缓回升至室温，边搅拌2小时30分钟。用薄层色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝10∶1)确认原料消失后，向反应液中滴加冰片，使反应停止。向反应液中加50ml水，用乙酸乙酯萃取三次。乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸镁干燥后，减压浓缩。得到的糖浆用硅胶柱(己烷∶乙酸乙酯＝100∶1)精制。得到23.97g化合物26(收率84.4％)。

FD-MS＝738(M-N₂)⁺，(C₅₁H₆₃N₂O₃，Mw＝766.07)

[α]_D ²³＝+9.75°(c＝0.97，CH.Cl₃)，

IR(cm^-1，薄膜)3062，3031，2925，2854，2096，1492，1465，1450；

¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)7.07-7.48(25H，m)，4.57(1H，d，J＝11.0Hz)，4.44(1H，d，J＝11.0Hz)，4.41(2H，s)，3.73-3.79(1H，m)，3.46-3.56(2H，m)，3.37(1H，dd，J＝8.6Hz，J＝10.4Hz)，1.20-1.64(26H，m)，0.88(3H，t，J＝6.7Hz)。

化合物27的合成

向25.35g(33.14mmol)原料化合物26中添加200ml 1-丙醇和25ml甲醇，使之溶解。向其中添加16.72g甲酸铵和1.0g 10％钯-炭，在室温搅拌16小时。用薄层色谱法(己烷∶丙酮＝3∶1)确认原料消失并生成目标化合物后，向反应液中添加50ml乙酸乙酯，用氟镁石过滤。用乙酸乙酯洗脱后，减压浓缩。向浓缩残渣中添加乙酸乙酯，用饱和NaHCO₃水溶液洗涤2次。水层再次用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯层，用饱和食盐水洗涤。用无水硫酸镁干燥后，减压浓缩，用甲苯共沸。然后用真空泵充分干燥，不进行精制，用于以下反应。

化合物28的合成

在上个反应得到的全部糖浆状化合物27中添加250ml二氯甲烷使之溶解，向其中添加12.49g蜡酸和7.13g WSC盐酸盐。在油浴中加温，达到约50℃，回流2小时。用薄层色谱法(己烷∶丙酮＝3∶1)确认还残存原料，因而添加620mg蜡酸和360mgWSC盐酸盐，再加热回流1小时。冷却至室温，反应液依次用0.5当量盐酸水溶液、饱和食盐水、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤。用无水硫酸镁干燥后，减压浓缩，然后用真空泵充分干燥，不进行精制就用于以下反应。

化合物29的合成

在上一个反应得到的全部糖浆状化合物28中，添加120ml二氯甲烷、30ml甲醇，使之溶解。向其中滴加3.0ml 10％盐酸甲醇溶液，在室温搅拌2小时。用薄层色谱法(己烷∶丙酮＝3∶1)确认反应结束后，向反应液中添加碳酸氢钠使之中和。经氟镁石过滤后，用饱和食盐水洗涤2次，用无水硫酸镁干燥，然后减压浓缩。与甲苯共沸，加入丙酮，加热溶解后在0℃保存，得到白色沉淀，收量22.2g。三个阶段的总收率为76.6％。

m.p.＝75～76.5℃、

FD-MS＝876(C₅₈H₁₀₁NO₄；Mw＝876.43)、

[α]_D ²³＝-29.7°(c＝0.675，CHCl₃)，

IR(cm^-1，KBr)3334，2918，2850，1637，1618，1548，1469，1103，1052

¹H-NMR(500MHz，CDCl₃)：δ(ppm)7.30-7.47(10H，m)，6.07(1H，d，J＝7.9Hz)，4.72(1H，d，J＝11.6Hz)，4.66(1H，d，J＝11.6Hz)，4.61(2H，d，J＝11.6Hz)，4.24-4.32(1H，m)，4.45(1H，d，J＝11.6Hz)，4.00(1H，dt，Jt＝7.3Hz，Jd＝4.3Hz)，3.67-3.72(2H，m)，3.61(1H，ddd，J＝4.3Hz，J＝11.6Hz，J＝8.6Hz)，3.05(1H，dd，J＝4.3Hz，J＝8.5Hz)，1.94-2.05(2H，m)，1.15-1.69(72H，m)，0.88(6H，t，J＝6.1Hz)。

化合物30的合成

在289.0mg(0.33mmol)化合物29中添加147.0mg(0.78mmol)氯化亚锡、160.8mg(0.78mmol)过氯酸银和600mg分子筛-4A，在7.5ml四氢呋喃中悬浮，在室温搅拌30分钟。冷却至-10℃后添加溶解在3ml四氢呋喃中的643.6mg(0.66mN)α-6-O-(四-O-苄基半乳糖吡喃糖基)-2，3，4-三-O-苄基葡糖吡喃糖基氟，徐徐回升到室温后搅拌2小时。反应液用氟镁石过滤、干燥、用硅胶柱色谱法(丙酮∶正己烷＝3∶17)精制，得到33.7mg化合物30(129)(5.6％)。

¹H-NMR(CDCl₃；500MHz)：δ(ppm)7.14-7.38(45H，m)，5.87(1H，d，J＝8.6Hz)，5.01(1H，d，J＝3.7Hz)，4.35-4.94(19H，m)，4.22(1H，m)，4.03(1H，dd，J＝3.7，9.8Hz)，3.86-3.94(5H，m)，3.84(1H，dd，J＝3.1，6.7Hz)，3.73-3.82(3H，m)，3.67(2H，m)，3.46-3.55(3H，m)，3.33(1H.dd，J＝3.7，9.8Hz)，1.95(1H，m)，1.91(1H，m)，1.64(2H，m)，1.48(2H，m)，1.10-1.34(68H，m)，0.88(6H，t，J＝6.7Hz)。

化合物31的合成

把31.4mg化合物30溶解在1.5ml乙酸之酯中，加入40mg钯黑，在氢气流下于室温搅拌16小时。反应液用氟镁石过滤，用硅胶柱色谱法(氯仿∶甲醇∶水＝9∶1∶0.1)精制，得到13.0mg(74.3％)化合物31。

旋光度：[α]_D ²³＝+82.7°(吡啶中、c＝0.03)。

高分辨率FABMS分析：1018.7719[(M-H)^-，计算值1018.7776，化学式C₅₆H₁₀₈NO₁₄、误差5.7mMU]

红外吸收光谱ル：(KBr、cm^-1)3400，2950，2870，1645，1535，1475，1080。

熔点：133.0-136.5℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.39(1H，d，J＝8.6Hz)，5.39(2H，d，J＝3.7Hz)，5.11(1H，m)，4.62(1H，dd，J＝5.3，10.4Hz)，4.57(1H，dd，3.7，9.3Hz)，4.53(1H，t，J＝6.0Hz)，4.48(2H，m)，4.45(1H，dd，J＝3.1，6.7Hz)，4.37-4.44(3H，m)，4.32(2H，m)，4.23(2H，m)，4.18(1H，d，J＝9.0Hz)，4.02(2H，m)，2.35(2H，m)，2.15(1H，m)，1.65-1.86(4H，m)，1.56(1H，m)，1.02-1.38(66H，m)，0.79(6H，t，J＝6.7Hz)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)173.6(s)，100.7(d)，100.6(d)，76.4(d)，75.5(d)，73.4(d)，72.6(d)，72.4(d)，72.4(d)，72.0(d)，71.7(d)，71.1(d)，70.8(d)，68.0(t)，67.5(t)，62.7(t)，51.5(d)，36.8(t)，34.3(t)，32.2(t)，30.4(t)，30.2(t)，30.1(t)，30.1(t)，29.9(t)，29.8(t)，29.8(t)，29.6(t)，26.5(t)，26.4(t)，23.0(t)，14.3(q)。

化合物32的合成

在102.5mg(0.12mmol)化合物29中添加52.0mg(0.27mmol)氯化亚锡、56.8mg(0.27mmol)过氯酸银和500mg分子筛4A，悬浮在2ml四氢呋喃中，在室温搅拌1小时。冷却至-10℃后，添加溶解在2ml四氢呋喃中的227.5mg(0.23mM)α-6-O-(四-O-苄基葡糖吡喃糖基)-2，3，4-三-O-苄基半乳糖吡喃糖基氟，徐徐回升到室温后搅拌16小时。反应液经氟镁石过滤后干燥，用硅胶柱色谱法(乙酸乙酯∶正己烷＝3∶17)精制，得到67.5mg化合物32(141)(31.6％)。

¹H-NMR(CDCl₃；500MHz)：δ(ppm)7.14-7.38(45H，m)，6.05(1H，d，J＝8.6Hz)，4.33-4.91(20H，m)，4.22(1H，m)，4.03(3H，m)，3.90-3.97(6H，m)3.5(1H，dd，J＝2.5，6.8Hz)，3.80(1H，d，J＝5.4，8.5Hz)，3.70(1H，dd，J＝4.8，9.7Hz)，3.60(1H，dd，J＝8.6，8.8Hz)，3.45-3.55(3H，m)，1.95(1H，m)，1.87(1H，m)，1.62(2H，m)，1.48(2H，m)，1.10-1.34(68H，m)，0.88(6H，t，J＝6.7Hz)。

化合物33的合成

61.5mg化合物32溶解在2ml乙酸乙酯中，添加60mg钯黑，在氢气流下于室温搅拌16小时。反应液用氟镁石过滤，用硅胶柱色谱法(氯仿∶甲醇∶水＝9∶1∶0.1)精制，得到20.8mg(60.7％)化合物33。

旋光度：[α]_D ²³＝+75.0°(吡啶中、c＝1.07)。

高分辨率FABMS分析：1018.7703[(M-H)^-，计算值1018.7776，化学式C₅₆H₁₀₈NO₁₄、误差7.3mMU]

熔点：127.0-131.0℃

¹H-核磁共振谱(500MH、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.52(1H，d，J＝8.6Hz)，5.48(2H，m)，5.19(1H，m)，4.69(1H，dd，J＝4.8，10.3Hz)，4.66(2H，m)，4.54-4.63(4H，m)，4.46-4.55(2H，m)，4.36-4.46(3H，m)，4.22-4.36(4H，m)，2.46(2H，m)，2.24(1H，m)，1.90(2H，m)，1.81(2H，m)，1.67(1H，m)，1.12-1.45(66H，m)，0.86(6H，t，J＝6.7Hz)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)173.7(s)，101.0(d)，100.9(d)，76.3(d)，72.7(d)，72.6(d)，71.7(d)，71.4(d)，71.0(d)，70.7(d)，70.7(d)，70.5(d)，70.3(d)，68.1(t)，67.8(t)，62.5(t)，51.6(d)，36.9(t)，34.3(t)，32.2(t)，30.5(t)，30.2(t)，30.1(t)，30.1(t)，30.0(t)，29.9(t)，29.8(t)，29.6(t)，26.5(t)，26.5(t)，23.0(t)，14.3(q)。

化合物34的合成

在350.6mg(0.40mmol)化合物29中添加189.2mg(1.00mmol)氯化亚锡、206.9mg(1.00mmol)过氯酸银和2.5g分子筛4A，悬浮在3ml四氢呋喃中，在室温搅拌1小时。冷却至-10℃后，添加溶解在2ml四氢呋喃中的778.4mg(0.80mM)α-4-O-(四-O-苄基葡糖吡喃糖基)-2，3，6-三-O-苄基葡糖吡喃糖基氟，徐徐回升至室温后搅拌16小时。反应液经氟镁石过滤后干燥，用硅胶柱色谱法(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶9)精制，得到95.0mg(13.0％)化合物34(168)。

¹H-NMR(CDCl₃：500MHz)：δ(ppm)7.14-7.41(45H，m)，6.11(1H，d，J＝8.6Hz)，5.73(1H，d，J＝3.7Hz)，5.05(1H，d，J＝11.6Hz)，4.43-4.94(17H，m)，4.33(1H，d，J＝11.6Hz)，4.26(1H，m)，4.12(1H，t，J＝9.2Hz)，4.07(1H，t，J＝9.2Hz)，3.98(2H，m)，3.95(1H，m)，3.92(1H，m)，3.87(1H，dd，J＝3.1，7.3Hz)，3.82(1H，dd，J＝4.3，11.0Hz)，3.76(1H，m)，3.70(1H，m)，3.66(1H，m)，3.65(1H，m)，3.52-3.62(3H，m)，3.44(1H，bd，J＝10.4Hz)，2.08(1H，m)，2.03(1H，m)，1.74(1H，m)，1.68(1H，m)，1.59(2H，m)，1.10-1.45(68H，m)，0.94(6H，t，J＝6.7Hz)。

化合物35的合成

95.0mg化合物34溶解在3ml乙酸乙酯中，加42mg钯黑，在氢气流下于室温搅拌16小时。反应液经氟镁石过滤后得到50.7mg(95.8％)化合物35。

旋光度：[α]_D ²³＝+60.1°(吡啶中、c＝0.6)。

熔点：145.0-148.5℃

¹H-核磁共振谱(500MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)8.49(1H，d，J＝8.6Hz)，5.85(1H，d，J＝3.1Hz)，5.48(1H，d，J＝3.7Hz)，5.20(1H，m)，4.44-4.65(5H，m)，4.40(1H，m，4.22-4.36(6H，m)，4.08-4.22(3H，m)，4.04(1H，dd，J＝3.1，9.8Hz)，2.41(2H，t，J＝7.3Hz)，2.25(1H，m)，1.70-1.95(4H，m)，1.64(1H，m)，1.05-1.48(66H，m)，0.86(6H，t，J＝6.1Hz)。

¹³C-核磁共振谱(125MHz、重吡啶＋重水1％)：δ(ppm)173.3(s)，103.3(d)，100.7(d)，81.7(d)，76.6(d)，75.5(d)，75.3(d)，74.8(d)，74.6(d)，73.0(d)，72.9(d)，72.4(d)，71.9(d)，68.3(t)，62.7(t)，61.7(t)，51.2(d)，36.8(t)，34.4(t)，32.2(t)，30.5(t)，30.2(t)，30.1(t)，30.1(t)，30.0(t)，29.9(t)，29.9(t)，29.8(t)，29.7(t)，26.5(t)，26.4(t)，23.0(t)，14.4(q)。

实验例4：本发明化合物的抗肿瘤活性

i)本发明化合物对皮下移植的P388小鼠白血病细胞的抗肿瘤效

果

从日本ェスルェルシ-公司购入的6周龄雌性CDF₁小鼠，以5只一组进行实验。在小鼠背部皮下移植1×10⁶个P388小鼠白血病细胞/小鼠(移植日为0日)，移植后第1、5和9日，介质(10ml/kg)或溶解在介质中的各化合物(0.1mg/kg)经静脉内给药，进行生存日数观察。此外，蘑菇多糖和ピシバニ-ル也在第1、3、5、7、9日经静脉内给药，シゾフィラン在第1～9日经皮下给药。然后，用Mann-Whiteney检定进行显著差异检定。

其结果列在表1中。

表1对P388白血病细胞系的寿命延长效果化合物用量生存日数

(mg/kg) 平均±标准偏差 T/C(％)介质 - 12.8±0.4 100

1 0.1 15.3±0.8** 120

2 0.1 15.8±0.5** 123

3 0.1 15.0±0** 117

4 0.1 15.2±0.5** 119

5 0.1 15.2±1.1** 119

6 0.1 15.8±1.1** 123

7 0.1 15.8±0.9** 123

8 0.1 16.0±0.7** 125

9 0.1 16.4±1.8** 128

10 0.1 13.8±0.4** 108

11 0.1 13.4±0.5** 105

12 0.1 13.8±0.8** 108

13 0.1 14.6±0.5** 114

14 0.1 13.8±0.4** 108

15 0.1 14.0±0** 109

16 0.1 14.8±0.8** 116

17 0.1 14.8±0.8** 116

31 0.1 14.6±0.5** 114

33 0.1 15.0±0.7** 117

35 0.1 14.8±1.3** 116

b 0.1 15.6±0.5** 122蘑菇多糖 1 13.6±0.5 106蘑菇多糖 2 13.2±0.8 103シゾフィラン1 13.2±0.8 103シゾフィラン10 12.6±0.5 98ビシバニ-ル 1KE/小鼠 13.6±0.9 106*： p＜0.05 Mann-Whitney检定**：P＜0.01

如表1所示，可以看出，对于进行了小鼠白血病P388细胞系皮下移植的小鼠来说，除化合物11和12外，所有化合物都显示出显著的生存时间延长作用(抗肿瘤作用)。另一方面，对蘑菇多糖、シゾフィラン和ピシバニ-ル则没有观察到生存时间延长作用。以上结果表明，在这个实验系统中，除化合物11和12外，本发明化合物都显示出比市售蘑菇多糖、シゾフィラン和ピシバニ-ル更强的抗肿瘤效果。此外，还合成了其构成糖为单糖的化合物，即(2S，3S，4R)-1-(α-D-半乳糖吡喃糖基氧)-2-二十六烷酰胺基-3，4-十八烷二醇(化合物b)，考察了其抗肿瘤活性，也发现化合物31、33和35显示出与化合物b差不多同样显著的抗肿瘤活性。

ii)本发明化合物对皮下移植的B16小鼠黑素瘤细胞的抗肿瘤效果。

从日本ェスェルシ-公司购入的6周龄雌性BDF₁小鼠，以6只一组进行实验。给每只小鼠背部皮下移植1×10⁶个B16小鼠黑素瘤细胞(移植日为第0日)，移植后第1、5和9日，0.1mg/kg的各试样经尾静脉内给药。在第8、12、16和20目测定皮下肿瘤体积[(长径×短径×高度)/2]，求出各样品的肿瘤增殖抑制率(TGIR)。TGIR是以对照组的肿瘤体积为C、样品给药组的肿瘤体积为T时从下式求出的：

TGIR(％)＝(1-T/C)×100

下表中表示20天试验中最大的TGIR。此外，每批各次试验都用点线分开。化合物 TGIR(％)

1 71.4

2 82.6

3 66.8

4 84.0

5 86.8

6 91.2

7 78.1

8 78.4

9 74.8

所有化合物都显示出显著的肿瘤增殖抑制作用。

实验例5：本发明化合物的骨髓细胞增殖促进活性

本发明化合物的离体小鼠骨髓细胞增殖促进活性

用从日本ェスェルシ-公司购入的6周龄雌性BDF₁小鼠进行实验。用普通方法从小鼠的大腿骨中取出骨髓细胞，悬浮在10％FCSRPMI 1640中，在LympholiteM上形成重层，用离心法得到单球级分。液这种单球级分以1×10⁶个/ml的浓度悬浮在10％ FCS RPMI 1640中，用圆底96穴试板，每穴加100μl上述细胞悬浮液，添加最终调制成如表2中所示浓度的介质或样品(10μl/穴)，在37℃、5％CO₂的条件培养4天。然后添加³H-胸苷(³H-TdR)，0.5μCi/穴。6小时后进行细胞收获，用液体闪烁计数管测定摄入核内的³H-TdR数量。求出试样添加组相对于介质添加组的³H-TdR摄入比率(％)，以此作为离体小鼠骨髓细胞增殖促进活性化率。

其结果列于表2。

表2对离体骨髓细胞增殖的作用

³H-TdR摄入量(相对于对照组的％)

浓度(μg/ml)化合物 10^-1 10^-21 211 1332 268 2763 314 1384 512 1635 330 2836 431 1427 451 4788 240 1679 286 9110 286 14711 410 28112 381 37813 546 39514 838 65915 501 29116 325 29617 592 109831 296 59433 214 76335 223 148b 381 438

如表2中所示，所有化合物在至少0.1μg/ml的浓度都显示出显著的³H-TdR摄入促进作用。以上结果表明，本发明的化合物全部具有强的骨髓细胞增殖促进活性。

实验例6：本发明化合物的免疫赋活活性

i)本发明化合物的离体小鼠脾脏淋巴球增殖促进作用

用从日本ェスェルシ-公司购入的6周龄雌性BDF₁小鼠进行实验。从小鼠中取出脾脏，用载玻片把脾脏细胞拆解后，用NH₄Cl溶血。溶血后的脾脏细胞悬浮在10％ FCS RPMI 1640中，配成2×10⁶个细胞/ml。有圆底96穴试板，每穴加100μl上述细胞悬浮液，并添加最终调制成如表3中所示浓度的介质或样品(10μl/穴)，在37℃，5％CO₂的条件下培养2天。然后添加³H-胸苷(³H-TdR)，0.5μCi/穴。6小时后进行细胞收获，用液体闪烁计数管测定摄入核内的³H-TdR数量。求出试样添加组相对于介质添加组的³H-TdR摄入比率(％)，以此作为离体小鼠脾脏淋巴球增殖促进化率。

其结果表示在表3中。

表3对离体小鼠脾脏淋巴球增殖的作用

³H-TdR摄入量(相对于对照组的％)

浓度(μg/ml)化合物 10⁰ 10^-1 10^-2 10^-31 843 738 332 1842 890 735 508 2703 815 704 397 2584 792 692 395 3255 889 764 612 5926 883 979 649 5437 927 1082 705 5938 997 1318 1321 6099 902 924 1305 51310 509 375 277 10211 646 1012 858 11612 509 982 772 11313 788 1473 1769 22714 640 1116 1725 25215 845 1893 1417 39416 740 1365 1336 70217 781 1804 1747 76731 615 1347 1135 74433 954 1810 1811 151435 431 874 803 538

如表3中所示，本发明化合物在10ng/ml～1μg/ml的浓度时全都显示出显著的³H-TdR摄入促进作用。这种试验系统由于是探讨促细胞分裂剂引起的淋巴球幼若化反应的系统，因而表明本发明化合物全部具有强大的淋巴球幼若化性(矢田纯一、藤原道夫，新リンパ球机能检索法，中外医学社(1990))。此外，如以下ii)所示，也确认本发明化合物全部显示出显著的MLR(淋巴细胞混合培养反应)活性增强作用。

ii)本发明化合物的淋巴细胞混合培养反应(MLR)

制备C57BL/6小鼠的脾脏细胞，用50μg/ml丝裂霉素C处理30分钟。以此作为靶细胞，以BALB/C小鼠的脾脏细胞作为反应细胞。用10％ FCS RPMI 1640作为培养基，把上述脾脏细胞各自配制成2×106个/ml。用圆底96穴试板，加上述两种细胞各50μl/穴和样品(10μl/穴)，在37℃、5％ CO₂的条件下进行42小时培养后，添加³H-胸苷(³H-TdR)0.5μCi/穴。然后，8小时且进行细胞收获，用液体闪烁计数管测定³H-TdR的摄入量，求出试样添加组相对于对照组的³H-TdR摄入比率(％)，以此作为MLR活性化率。

其结果列于下表中。

MLR活性化率(％)化合物 1×10⁰ 1×10^-1(μg/ml)1 222 1422 213 1583 210 1384 209 1635 189 1766 228 1947 234 1958 286 2329 247 20510 174 13211 225 25812 203 18713 276 24814 261 23215 295 25316 274 26217 283 24231 206 19633 302 25135 165 133

所有化合物都显示出显著的MLR活性化作用。

实验例7：本发明化合物的射线屏蔽防护作用

对致死量放射线照射的寿命延长效果

从日本ェスェルシ-公司购入的6周龄雌性BDF₁小鼠，以10只一组进行实验。进行9Gy的X射线全身照射(X射线发生装置，日立公司，MBR-1520R)，以照射日为第0日。在第0、4和8日，各样品以0.1mg/kg经尾静脉内给药，观察40天中的生死情况。

其结果列于下表中。此外，每批各次试验都用点线分开。

存活只数

化合物 10 15 20 25 30 35 40(日)

对照 10 5 2 1 0 0 0

化合物1 10 9 7 6 6 6 6

化合物2 10 10 10 9 9 9 9

化合物3 10 6 5 5 5 5 5

化合物4 10 8 8 6 5 5 5

化合物5 10 8 7 7 7 7 7

化合物6 10 10 8 8 8 8 8

对照 9 7 0 0 0 0 0

化合物7 10 8 6 3 3 3 3

化合物8 8 4 3 2 2 2 2

化合物9 10 8 5 3 3 3 3

可以认为，这些化合物对致死量放射线照射都有显著的寿命延长效果。

实验例8：本发明化合物的水溶性

合成了构成糖为单糖、WO 93/05055中所含的上述化合物a和b。本发明化合物4、31、33和化合物a与b各1mg，溶解在1ml表4所示各浓度的缩聚山梨糖醇油酸酯(吐温)20水溶液中，用目测法观察溶解时的性状。其结果表示在表4中。

表4水溶性比较

吐温20浓度	化合物a	化合物b	化合物4	化合物31	化合物33
吐温20浓度	化合物a	化合物b	化合物4	化合物31	化合物33	10％	○	○	○	○	○
5％	○	×	○	○	○	10％	○	○	○	○	○
5％	○	×	○	○	○	2.5％	×	×	○	○	○
1％	×	×	○	○	○	2.5％	×	×	○	○	○
1％	×	×	○	○	○	0.1％	×	×	○	○	○
0％	×	×	×	×	×	0.1％	×	×	○	○	○

○：溶解

×：不溶解(白浊)

从表4断定，通过使用化合物4，31和33所代表的本发明化合物，使这些化合物溶解在水中时所需吐温20的数量可以减少到其构成糖为单糖、显示出与化合物4、31和33同等抗肿瘤活性(表1)的化合物b溶解在水中时所需吐温20的数量的1/100。

实验例9：缩聚山梨糖醇油酸酯(吐温)对免疫赋活活性的影响

实验例8中配制的1mg化合物33溶于1ml 10％或0.1％吐温20的样品，1mg化合物b溶于1ml 10％吐温20的样品，或者10％和0.1％吐温20灭菌过滤、像表5中所示那样用PBS依次稀释10倍来配制样品，进行实验例6中所示的实验。

此外，由于1mg化合物b不溶解于0.1％吐温中，所以没有进行实验。

表5

化合物/稀释倍率	³H-TdR摄入量(cpm)
	³H-TdR摄入量(cpm)				10²	10³	10⁴	10⁵
	10％PS20b(10％PS20)33(10％PS20)	203201119	8901830018447	18682443924671	10²	10³	10⁴	10⁵	21862555521677
0.1％PS2033(0.1％PS20)	10％PS20b(10％PS20)33(10％PS20)	203201119	8901830018447	18682443924671	177424213	179423332	187126249	191023653	21862555521677

测定值用3穴平均值表示

如表5所示，添加0.1％和0.01％吐温20，与添加0.001％以下吐温20时相比，明显抑制小鼠脾脏淋巴球的³H-TdR摄入量。

此外，化合物33和b的10μg/ml(0.1％吐温20)和1μg/ml(0.01％吐温20)等浓度，与0.1μg/ml(0.001％吐温20)浓度的情况下相比，也显示出对³H-TdR摄入量的抑制作用。

以上结果表明，高浓度(0.01％以上)吐温20抑制小鼠脾脏淋巴球的增殖，进而也抑制本发明化合物的免疫赋活作用。

在此，化合物33溶解时配制了吐温20用量减少至1/100的样品，当进行同样的实验时，化合物33即使在10μg/ml(0.001％吐温20)的浓度也显示出显著的³H-TdR摄入促进作用。

以上结果表明，通过减少溶解时吐温20的用量，可以恢复本化合物的免疫赋活活性。

上述实验例4～8的结果归纳如下。

判明了，除化合物11和12外，本发明化合物显示出比蘑菇多糖、シゾフィラン和ピシバニ-ル更强的抗肿瘤效果，也显示出与作为特开平5-9193号、WO 93/05055号公报所述通式中包含的(神经)鞘糖脂的上述化合物b几乎同样显著的抗肿瘤作用(表1)。

而且也判明了，本发明化合物显示出显著的骨髓细胞增殖促进作用(表2)和显著的免疫赋活作用，其活性的强度与上述化合物b的鞘糖脂大致相同。

进而还判明了，如表4中所示，本发明化合物在水中溶解时所需的溶解助剂(例如缩聚山梨糖醇油酸酯类)用量，仅为作为特开平5-9193号、WO 93/05055号公报所述通式中包含的(神经)鞘糖脂的上述化合物a和b在水中溶解时所需的溶解助剂用量的1/100。

而且，说到高浓度缩聚山梨糖醇油酸酯20显示的细胞增殖抑制作用和对免疫赋活活性的抑制作用，考虑了高浓度缩聚山梨糖醇油酸酯20的副作用的作用可以通过减少缩聚山梨糖醇油酸酯20的用量来解决，这也是显而易见的。

水溶性低的化合物在注射剂中的应用，目前由于如上所述的溶解助剂的副作用而非常困难。而且，如果减少溶解助剂用量而制成悬浊液，则由于不能经血管内和经脊髓内给药(第12改正日本药局方解说书(1991年)，第A119～A136页)，有限定给药路线这样的缺点。

如上所述，判明了本发明化合物是显示出与如上所述化合物a和b代表的、构成糖为单糖的鞘糖脂大致相同的生物活性而且也能解决这些鞘糖脂作为注射剂应用时产生的问题的化合物。

这就是说，本发明化合物与特开平5-9193号和WO 93/05055号公报中所述的鞘糖脂比较，当作为注射剂应用时，可以大大减轻溶解助剂的副作用，而且也不会减少给药途径的选择范围，因而更加有用。

实验例10：制剂例

例1注射剂

本发明化合物 1mg

缩聚山梨糖醇油酸酯 1mg

注射用蒸馏水适量

合计 1ml

按照上述处方，把各化合物溶解在注射用蒸馏水中，无菌过滤后装入小试管或安瓿中作为注射剂。

例2锭剂

(1)本发明化合物 1mg

(2)乳糖 80mg

(3)玉米淀粉 30mg

(4)羟丙基纤维素 3mg

(5)硬脂酸镁 1mg

合计 115mg

按照上述处方，把化合物(1)～(5)混合，造粒、制成打锭用颗粒。在这种颗粒中加入(5)，使之成为均匀粉末，在打锭机上压缩成形，制成锭剂。

工业上应用的可能性

本发明化合物是具有高抗肿瘤活性、骨髓细胞增殖促进活性和免疫赋活活性的新型(神经)鞘糖脂，可用作抗肿瘤剂、骨髓细胞增殖促进剂和免疫赋活剂。

Claims

1.下式(I)所示的(神经)鞘糖脂：

式中R₁是H或

R₂是H、

R₃和R₅各自是H或OH；R₄是H、OH或

R₅是H或X是19～23的任何一个整数：R₇是下列基团(a)～(g)中的任何一个：(a)-(CH₂)₁₁-CH₃(b)-(CH₂)₁₂-CH₃(c)-(CH₂)₁₃-CH₃(d)-(CH₂)₉-CH(CH₃)₂(e)-(CH₂)₁₀-CH(CH₃)₂(f)-(CH₂)₁₁-CH(CH₃)₂(g)-(CH₂)₁₁-CH(CH₃)-C₂H₅

2.下式(II)所示的、权利要求1所述的(神经)鞘糖脂：

式中R₁为OH时R₂是H，R₁为H时R₂是OH

R₃为OH时R₄是H，R₃为H时R₄是OH

R₃是H或OH

X是19～23的任何一个整数；

Y是11～13的任何一个整数。

3.下式(III)所示的、权利要求1所述的(神经)鞘糖脂：

式中R₁为OH时R₂是H，R₁为H时R₂是OH；

R₃是H或OH；

X是19～23的任何一个整数：

Y是11～13的任何一个整数。

4.按照权利要求1的(神经)鞘糖脂，选自由下列化合物组成的一组：

化合物5：O-(N-乙酰-2-氨基-2-脱氧-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→3)-O-[α-D-葡糖吡喃糖基-(1→2)]-O-α-D-半乳糖吡喃糖基-(1→1)-(2S，3S，4R)- 2氨基-N-[(R)-2-羟基二十五烷酰]-16-甲基-1，3，4-十七烷三醇

化合物8：O-(N-乙酰-2-氨基-2-脱氧-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→3)-O-[α-D-葡糖吡喃糖基-(1→2)]-O-α-D-半乳糖吡喃糖基-(1→1)-(2S，3S，4R)-2氨基-N-[(R)-2-羟基二十六烷酰]-1，3，4-十八烷三醇

化合物11：O-β-D-半乳糖呋喃糖基-(1→3)-O-α-D-半乳糖吡喃糖基)-(1→1)-(2S，3S，4R)-2-氨基-N-[(R)-2-羟基二十三烷酰]-1，3，4-十六烷三醇

5.按照权利要求4的(神经)鞘糖脂，选自由下列化合物组成的-组：

6.含有以权利要求1～5中任何一项所述化合物作为有效成分的医药组合物。

7.含有以权利要求1～5中任何一项所述化合物作为有效成分的抗肿瘤剂。

8.含有以权利要求1～5中任何一项所述化合物作为有效成分的骨髓细胞增殖促进剂。

9.含有以权利要求1～5中任何一项所述化合物作为有效成分的免疫赋活剂。

10.肿瘤抑制方法，其特征是，以有效量的权利要求1～5中任何一项所述化合物对有必要进行肿瘤抑制的患者给药。

11.骨髓细胞增殖方法，其特征是，以有效量的权利要求1～5中任何一项所述化合物对有必要进行骨髓细胞增殖的患者给药。

12.免疫赋活方法，其特征是，以有效量的权利要求1～5中任何一项所述化合物对有必要进行免疫赋活的患者给药。

13.权利要求1～5中任何一项所述的(神经)鞘糖脂用于制造抗肿瘤剂的用途。

14.权利要求1～5中任何一项所述的(神经)鞘糖脂用于制造骨髓细胞增殖促进剂的用途。

15.权利要求1～5中任何一项所述的(神经)鞘糖脂用于制造免疫赋活剂的用途。