KR100281265B1 - 신규한 스핀고당지질 및 그의 사용 - Google Patents

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KR100281265B1
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다추오 히가
다케노리 나토리
야스히코 고에주카
가즈히로 모토키
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마나배 게이사꾸
기린비이루 가부시키가이샤
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Abstract

즉, 본 발명에 의한 신규한 스핀고당지질은 다음식(Ι)로 표시되는 화합물이다.
식 중, R1은 R2 및 R5는 H 또는 특정의 단당이고,
R3 및 R6는 H 또는 OH 이고,
R4는 H, OH 또는 특정의 단당이고,
X는 19 내지 23의 어느 정수이다.
R7은 하기의 기(a) 내지 (g)의 어느것이다.
(a) -(CH2)11-CH3(b) -(CH2)12-CH3
(c) -(CH2)13-CH3(d) -(CH2)9-CH(CH3)2
(e) -(CH2)10-CH(CH3)2(f) -(CH2)11-CH(CH3)2
(g) -(CH2)11-CH(CH3)2-C2H5
또한, 본 발명은 상기의 스핀고당지질을 유효성분으로 함유하는 의약, 특히 항종양제, 골수세포 증식 촉진제 및 면역 부활제에 관한 것이다.

Description

[발명의 명칭]
신규한 스핀고당지질 및 그의 사용
[발명의 상세한 설명]
[기술분야]
본 발명은 높은 항종양활성, 골수세포 증식촉진 활성 및 면역부활 활성을 갖는 신규한 스핀고당지질 및 그의 용도에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 본 발명은 의약품의 분야에 있어서, 항종양제, 골수세포 증식 촉진제 및 면역 부활제로서 사용되는 신규의 스핀고당지질인 것으로 용해시의 용해성이 개량된 스핀고당지질, 및 그의 스핀고당지질을 함유한 의약 조성물 및 항종양제, 골수세포 증식 촉진제 및 면역 부활제에 관한 것이다.
[배경기술]
항종양 활성을 갖는 스핀고당지질로서는 일본특개평1-93562호, 일본특개평5-59081호, 일특개평5-9193호 및 WO93-05055호의 각 공보에 보고되어있고, 특히 WO93/09055호 공보에 기재의 스핀고당지질은 현저한 항종양활성 및 면역부활 활성을 갖는 화합물이다.
그렇지만, 이들의 모두는 세라미드 부분에 단당이 1개 결합된 세레브로시드이고, 물에 대한 용해성이 극히 낮다. 예를 들면, 이들의 화합물의 주사제로서 임상 응용하는 경우에는 약학상 허용되는 계면활성제 등을 사용하여 현탁 또는 용해하는 것이 필요하다. 그리고, 계면활성제로서는 예를 들면 폴리솔베이트(튜인)류의 사용이 고려된다. 그러나, 폴리솔베이트류를 혈관 내에 투여하는 경우, 혈관 자극 작용이 나타나거나, 사람에 투여하는 경우에는 심박출량의 증가 및 말초혈관 저항상의 감소 등이 공지(Jornal of the Amerikan College of Toxicoloty, vol.3, No.5, 1-82(1984))되어 있으며, 이들은 고농도의 폴리솔베이트를 용해보조제로서 사용한 경우의 부작용이 고려된다. 더욱이, 본 발명 화합물은 항종양제, 골수세포 증식 촉진제, 면역 부활제로서의 사용을 목적으로 하는 것이지만, 폴리 솔베이트류는 면역계에 대하여 제1차 항체 반응을 억제하고(Bryant R. L. et al., Arch. Allergy Appl. Immunol., vol 59, 69-74(1974)) 및 암의 전이를 촉진시킴(Kiricuta I., et al., Rev. Roum. Embryol. Cytol. Ser. Cyto1., vol. 8, 29-32,(1971))이 공지되어 있어, 폴리솔베이트류는 본 발명 화합물의 사용 목적과 전혀 반대의 작용을 갖는다.
또한, 다른 용해 보조제로서 알려진 폴리에틸렌글리콜의 부작용으로서는 유산애시도시스(乳酸acidosis), 용혈, 부정맥 등이 공지되고(Speth P.A.J., et al., Therapeutic Drug Monitoring, vol.9, 255-258(1987)), 디메틸포름아미드 또는 디메틸아세트아미드는 간 장해를 일으키는 것으로 공지되어 있다.(Gerald L., et al., Drug and Chemical Toxicology, vol.9 147-170(1986)).
상술 된 예는 수종의 용해 보조제의 부작용의 예가 있으나, 다른 용해 보조제에 있어서도 부작용이 공지되어 있다.
이상으로부터, 예를들면 폴리솔베이트등의 계면활성제의 사용량을 매우 감소시키면 임상 응용의 경우에 환자의 안전을 확보하기 때문에 약제를 보다 유효하게 사용하기 위하여 필수적이다. 이 관점으로부터 스핀고당지질을 임상 응용하기 위하여 보다 수용성을 높이는 것에 대해서 큰 요망이 있어왔다.
또한, 상기의 모든 화합물도 본 발명자 등이 아는 바에 있어서, 항종양제, 골수세포 증식 촉진제 및 면역 부활제로서 실용화된 예는 없다. 더욱이, 화학 물질의 생리 활성은 그의 화학 구조에 의존하는 것이 크고, 항종양활성, 골수세포 증식 촉진활성 및 면역부활 활성을 갖는 신규한 화합물에 대해서 부단의 요구가 있어왔다.
[발명의 개시]
본 발명은 상기의 요구에 응하기 위해, 물에 대한 용해성이 증가 개선되고, 항종양, 골수세포 증식 촉진제 및 면역 부활제로서 실용성이 있는 신규한 화합물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자들은 특정의 화학 구조를 갖는 스핀고당지질이 항종양활성, 골수세포 증식 촉진활성 및 면역부활 활성을 갖는 것과 또한 이 화합물이 종래 공지되어 있는 세레브로시드 보다도 우수한 수용성을 갖는 것을 발견하고, 또 이 종류의 화합물을 합성하여서 이런 종류의 화합물도 동일한 활성을 갖는 것을 발견하였고, 이 지식을 기초로 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 본 발명에 의한 신규한 스핀고당지질은 다음식(Ι)로 표시되는 화합물이다.
식 중, R1은 H 또는이다.
R2는 H,또는이다.
R3및 R6는 각각 H 또는 OH이다.
R4는 H, OH 또는이다.
R5는 H, OH 또는이다.
단, R1, R2, R4및 R5의 적어도 하나는 글리코실이다.
X는 19 내지 23의 어느 정수이다.
R7은 하기의 기(a) 내지 (g)의 어느것이다.
(a) -(CH2)11-CH3(b) -(CH2)12-CH3
(c) -(CH2)13-CH3(d) -(CH2)9-CH(CH3)2
(e) -(CH2)10-CH(CH3(f) -(CH2)11-CH(CH3)2
(g) -(CH2)11-CH(CH3)2-C2H5
또한 본 발명은 식(Ι)로 표시되는 상기 화합물의 사용, 구체적으로는 의약조성물 및 항종양제, 골수세포 증식 촉진제 및 면역 부활제에 관한 것이다.
즉, 본 발명에 의한 의약 조성물은 상기 식(Ι)로 표시되는 스핀고당지질을 유효 성분으로서 함유하는 것이다.
또한, 본 발명에 의한 항종양제, 골수세포 증식 촉진제 및 면역 부활제는 상기 식(Ι)으로 표시되는 스핀고당지질을 유효 성분으로 함유하는 것이다.
또한, 본 발명은 상기 화합물의 유효량을 종양 억제, 골수세포 증식 또는 면역 부활을 필요로 하는 환자에 투여하는 것을 특징으로 하는 치료 방법에 관한 것이다.
[도면의 간단한 설명]
제1(a)도∼제1(c)도는 본 발명의 스핀고당지질의 바람직한 구체적인 화합물의 화학 구조를 나타내는 구조식 도면이다.
제2(a)도 및 제2(b)도는 당류(리키소스)를 출발 물질로 식(Ι)로 표시되는 화합물을 합성하는 경우의 바람직한 예의 반응경로도이다.
[발명을 실시하기 위한 최량의 형태]
[스핀고당지질]
본 발명에 의한 스핀고당지질은 식(Ι)로 표시되는 것이면 상기한 것으로 통하게 되며, 바람직한 화합물의 당 부분의 결합 양식의 구조는 다음식(1) -(5)에 의하여 분류할 수 있다.
(1) GalNAcpα1→3Galp(2←1αGlcp)α1→1Cer
(2) Galfβ1→3Galpα1→1Cer
(3) Galpα1→6Glcpα1→1Cer
(4) Galpα1→6Glcpα1→1Cer
(5) Glcpα1→4Glcpα1→1Cer
또한, 본 발명 화합물의 바람직한 태양은 다음식(Ⅱ) 및 (Ⅲ)으로 표시되는 스핀고당지질이다.
(식 중, R1이 OH의 경우 R2는 H이고, R1이 H 경우 R2는 OH이고,
R3가 OH의 경우 R4는 H이고, R3이 H의 경우 R4는 OH이고,
R5는 H 또는 OH이고,
X는 19 내지 23의 어느 정수이고,
Y는 11 내지 13의 어느 정수이다.)
(식 중, R1이 OH의 경우 R2는 H이고, R1이 H의 경우 R2는 OH이고,
R3는 H 또는 OH이고,
X는 19 내지 23의 어느 정수이고,
Y는 11내지 13의 어느 정수이다.)
본 발명의 더욱 바람직한 태양으로는 식(Ι) 중, R1, R2 및 R6가 H이고, R3가 H 또는 OH이고, R4 및 R5의 어느 한쪽이 상기의 당이고, R7이 기(a)∼(c)의 어느 화합물이다.
식(Ι)로 표시되는 본 발명의 스핀고당지질의 바람직한 구체예는 하기의 화합물 1 내지 17, 및 화합물 31, 33, 35이고, 화합물 31, 33, 35가 보다 바람직하다(각 화합물의 구조식은 제1(a)도 내지 제1(c)도에 나타내 있다).
[화합물 1]
O-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-1,3,4-헥사데칸트리올
[화합물 2]
O-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-1,3,4-헵타데칸트리올
[화합물 3]
O-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-16-메틸-1,3,4-헥사데칸트리올
[화합물 4]
O-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-1,3,4-옥타데칸트리올
[화합물 5]
O-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-16-메틸-1,3,4-헵타데칸트리올
[화합물 6]
O-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시펜타코사노일〕-1,3,4-옥타데칸트리올
[화합물 7]
O-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시헥사코사노일〕-16-메틸-1,3,4-헵타데칸트리올
[화합물 8]
O-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시헥사코사노일〕-1,3,4-옥타데칸트리올
[화합물 9]
O-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시헥사코사노일〕-16-메틸-1,3,4-옥타데칸트리올
[화합물 10]
O-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시도코사노일〕-1,3,4-헥사데칸트리올
[화합물 11]
O-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시트리코사노일〕-1,3,4-헥사데칸트리올
[화합물 12]
O-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-1,3,4-헥사데칸트리올
[화합물 13]
O-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-15-메틸-1,3,4-헥사데칸트리올
[화합물 14]
O-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-1,3,4-헵타데칸트리올
[화합물 15]
O-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-16-메틸-1,3,4-헵타데칸트리올
[화합물 16]
O-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-1,3,4-옥타데칸트리올
[화합물 17]
O-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-17-메틸-1,3,4-옥타데칸트리올
[화합물 31]
O-β-D-가락토피라노실)-(1→6)-O-α-D-글루코피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-헥사코사노일-1,3,4-옥타데칸트리올
[화합물 33]
O-β-D-가락토피라노실)-(1→6)-O-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-헥사코사노일-1,3,4-옥타데칸트리올
[화합물 35]
O-β-D-글루코피라노실)-(1→4)-O-α-D-글루코피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-헥사코사노일-1,3,4-옥타데칸트리올
[본 발명 화합물의 제조방법]
본 발명에 의한 화합물, 즉 상기 식(Ι)로 표시되는 스핀고당지질은 유사 화합물의 화학수식에 의해서 유도하는 것과, 스핀고당지질을 합성함에 필요한 각종의 일반적 화학반응을 조합시킨 합성 수단에 의해 완전 합성하는 것과 혹은 해면동물로부터의 추출에 의해 얻는 것도 가능하다.
ⅰ) 화학합성에 의한 방법
화학합성 수단으로 본 발명 스핀고당지질을 얻는 방법으로서는 합목적적인 임의의 방법을 이요할 수가 있으나, 예를 들면 아그리컬쳐랄 앤드 바이올로지컬 케미스트리(Agricaltural and Biological Chemistry), 54권, 3호, 663페이지, 1990년에 기재의 방법을 준용할 수가 있다.
이와 같은 합성법의 바람직한 예로서, 일본특개평5-9193호 공보에 기재된 반응경로의 방법, 혹은 WO93/05055호 공보(PCT/JP92/00561명세서)의 제1도 내지 제4도에 기재된 합성 경로의 방법을 준용하여 상기 식(Ι)로 표시된 스핀고당지질을 합성할 수 있다.
본 발명의 스핀고당지질은 구체적으로는 예를 들면 제2도(a 및 b)에 표시된 반응 경로식의 방법에 따라서 완전 합성하는 것이 가능하다. 이 반응 경로식에서는 구체적인 본 발명의 화합물(화합물31, 33 및 35)로서 표시되지만, 다른 식(Ι)으로 표시되는 화합물도 이의 방법에 준해서 합성할 수 있다.
이 방법은 당류를 출발 물질로서 이용한 방법이고, 예를 들면, 리비히 아날렌 데아 케미(Liebigs Annalen der Chemie), 663페이지(1988년)에 기재의 방법을 준용할 수 있다.
상기 반응 경로식의 방법에 있어서는 후기 실험예에 상술되어 있으나, 그의 개요는 하기와 같이 설명할 수가 있다(또한, 반응 경로도에 있어서, 다음과 같은 생략 기호가 사용되고 있다. Bn : 벤질, Tr : 트리칠, Ms : 메탄술포닐).
이 반응 경로도의 반응은 당류(D-리키소스)를 출발 물질로 사용하고, 이것을 보호한 후, 스핀고신의 장쇄부분보다 탄소수의 5개 적은 탄화수소 화합물을 결합하고(화합물 20), 적당한 보호 후, 아지드화, 환원 아미드화를 거쳐 세라미드의 카르본산 부분을 결합시켜서 세라미드 부분을 형성하고(화합물 29), 이것에 글리코실화 반응에 의해서 대응의 당을 결합시켜 탈 보호하는 것으로 목적의 본 발명 스핀고당지질(화합물31, 33, 35)을 얻을 수가 있다.
원료로 되는 당류로서는 D-리키소스의 이외에 D-가락토스 등을 이용할 수 있다. 또한, 출발 물질로서의 당류 대신에 L-세린 등의 아미노산을 이용 할 수 있다.
상기 반응 경로에 있어서, 수산기의 보호, 탄화수소 화합물의 당 화합물에의 결합, 아지드화, 아미드화, 글리코실화등의 반응은 통상의 방법에 따라서 실시할 수 있다.
상기의 예에서는 수산기의 보호기로서 벤질기 및 트리페닐메틸기를 이용하고 있으나, 벤조일기 등의 합목적적인 임의의 것을 이용할 수 있다.
이 반응 경로도 중에서 아미드화에 대해서는 많은 방법이 공지되어 있으며 카본 산을 이용하는 대신에 산클로라이드나 산무수물도 이용할 수 있다.
카본산에 의한 반응은 적당한 축합제의 존재하에서의 축합반응이 있다. 여기서 이용하는 축합제로서는 디시클로헥실카르보디이미드(DCC), 2-에톡시-1-에톡시카르보닐-1,2-디히드로퀴놀린(EEDQ), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드(WSC), 클로르탄산에스테르류, 오늄염류 등이 적절하다. 반응을 신속하게 진행시키기 위하여서는 트리에틸아민, 피리딘, N-메틸몰포린, 디메틸아닐린, 4-디메틸아미노피리딘, N-메틸피레리딘 또는 N-메틸피롤리딘 등의 유기염기를 가한다. 용매로서는 반응에 관여하지 않는 불활성 용매이면 임의의 것도 좋다.
산클로라이드에 의한 반응은 일반적으로 용매의 존재하에서 형편 좋게 진행한다. 반응은 통상, 적절한 용매를 사용하여 행하지만, 반응 속도가 느린 경우에는 무용매 상태에서 행하여, 반응을 빠르게 진행시킬 수 있다. 용매로서는 반응에 관여하지 않는 불활성 용매 이면 임의의 것도 좋다. 반응 속도가 느린 경우에는 트리에틸아민, 피리딘, N-메틸몰포린, 디메틸아닐린 또는 4-디메틸아미노피리딘 등의 유기염기를 첨가하여 빠르게 진행시킨다.
산무수물에 의한 반응은 적당한 염기의 존재하에서 행하는 것이 바람직하다. 여기서 사용하는 염기로서는 트리에틸아민, 피리딘 등으로 통상 이들은 용매의 역할을 겸하여 사용된다.
또한, 글리코실화에 의해서도 많은 반응법, 예를 들면 유기합성화학, 38권, 5호, 473페이지(1980년); 유기합성화학, 41권 1, 8호, 701페이지(1983년); 또는 퓨아 앤드 어플라이드 케미스트리(Pure and Applied Chemistry), 61권, 7호, 1257페이지(1989년), 파마시아, 27권, 1호, 50페이지(1991년)등의 총설에 기재된 방법이 알려져 있으며, 본 발명 화합물의 제조에 있어서는 상기의 어느 방법을 사용할 수 있다.
글리코실화에 있어서, 삼당을 갖는 본 발명 화합물의 제조의 경우에는 상기 반응 경로에 의해 이당류의 대신에 필요한 삼당류를 반응시키면 좋다. 글리코실화에 사용되는 이러한 올리고당으로서는 시판의 것의 또는 단당 또는 다당에서 올리고 당을 얻는 통상의 방법에 의해 얻는 것을 사용하면 좋다.
상기의 합성법은 세라미드에 당을 결합시키는 것으로부터 보호기를 제거시키지만, 리비히 아날렌 데아 케미, 669페이지, 1988년에 기재에 의해 장쇄 염기에 먼저 당을 결합시켜, 그의 후에 아미노기를 유도하여 아미드화하고, 셀레브로시드를 완성시키는 방법도 가능하다.
상술된 바와 같이 제2도의 반응 경로에서는 구체적인 본 발명 화합물(화합물31, 33 및 35)에 대해서 나타내고 있으나, 이외의 식(Ι)으로 표시되는 화합물도 그의 방법에 준해서 합성할 수 있다.
ⅱ) 해면동물로부터 얻는 방법
해면동물로부터 얻는 방법은 기본적으로는 해면동물의 채집 공정, 추출공정 및 제조공정으로 이루어진다. 채집공정에 의한 해면동물의 바람직한 예로서는 스테이릿싸 풀라벨리포르미스(Stylissa Fulabelliformis) 혹은 아겔라스 악시세라(Agelas axisera)를 들 수 있고, 이것은 예를 들면 오키나 와켄 미아코시마(沖繩縣宮古島) 혹은 가고시마켄 오오미오오시마(麗兒島縣奄美對島)의 바다에서 채집할 수 있다.
추출 공정에 있어서는 통상 스핀고당지질의 추출에 이용되는 수법, 바람직하기로는 유기용매(예를 들면 메탄올, 바람직하게는 메탄올과 디클로로메탄의 혼합용매 등)에 의해 추출을 이용할 수 있고, 또 정제 공정에 있어서는 통상 스핀고당지질의 정제에 이용되는 수법, 예를 들면 각종의 분획법(용해도의 차이를 이용한 분별법, 분배율의 차이를 이용한 분배법 등) 또는 각종 크로마토그래피(흡착 크로마토그래피, 분배 크로마토그래피 등)을 적절히 이용할 수 있다. 이것의 구체적인 바람직한 예로서는 일본 특개평5-9193호 공보 및 제93/05055호 공보(PCT/JP92/00561명세서)에 상술되어 있다.
[본 발명의 화합물의 용도]
식(ⅰ)로 표시되는 본 발명의 화합물은 하기의 생리활성, 즉 항종양활성, 골수세포 증식 촉진활성 및 면역부활 활성을 갖는 다는 점에서 유용된다. 또한, 과거에 알려져 있는 면역계에 작용하는 제암제, 예를 들면 시이타게의 자실체(子實體)에서 추출하여 얻어진 항종양성 다당체인 렌치난(이하, 짧게 「렌지난」이라 칭함), 수에히로다케 균사체에서 추출하여 얻은 다당체인 시조후이란(이하, 짧게 「시조후이란」이라 칭함), 스토렙토콕크스 피오게네스(A군 3형) Su 주(株) 페니실린 처리 동결 건조분말인 피시바닐(중외제약주식회사) (이하, 짧게 「피시바닐」이라 칭함)과 비교하여도 이들의 생리 활성이 충분하게 강한 점에 있어서 유용하다. 또한, 일본특개평5-9193호 공보 및 WO93/05055호 공보에 기재의 스핀고당지질과 동일한 항종양활성, 골수세포 증식 촉진활성 및 면역부활 활성을 나타내고, 더욱이 이들의 용도를 목적으로 하여 작출된 상기 양 공보에 기재의 스핀고당지질과 비교하여 수용성이 비상하게 높은 점에서 정제화로 할 때에 유용하다.
1)항종양 활성
본 발명 화합물은 후기 실험예 4에 나타난 바와 같이 마우스에 피하 이식한 P388마우스 백혈병 세포 및 B16 마우스메라노이마 세포에 대해 항종양 활성을 나타낸다.
2)골수세포 증식 촉진활성
본 발명 화합물은 후기 실험예 5에 기재된 바와 같이 in vitro에서 마우스 골수세포 증식 촉진 작용을 나타낸다.
3)면역 부활 활성
본 발명 화합물은 후기 실험예 6에 나타난 바와 같이 in vitro에서 마우스 비장 임파구 증식 촉진 작용 및 마우스 임파구 혼합 배양반응(MLR)에 대한 활성화 작용을 나타낸다.
4)방사선 방호 작용
본 발명 화합물은 후기 실시예 7에 나타난 바와 같이 치사량 방사선 조사 마우스에 대해 연명 효과를 나타낸다. 이와 같은 효과는 상기 골수세포 증식 촉진 활성을 간접적으로 나타내고 있다.
5)수용성의 향상
본 발명 화합물은 후기 실험예 8에 나타난 바와 같이 같은 세라미드 부분을 갖고 당 부분이 1당의 화합물과 비교하여, 물에 용해되는 것에 필요한 계면활성제의 양을 1/100이하로 감소시키는 것이 가능하다.
6)폴리솔베이트의 면역 부활 활성에 주는 영향
후기 실험예 9에 나타난 바와 같이 고농도(0.1%, 0.01%)의 폴리솔리베이트 20은 마우스 비장 임파구의 증식을 억제하고, 또한, 본 발명 화합물의 면역부활 활성을 억제하지만, 폴리솔베이트 20의 양을 감소시킴으로써, 면역부활 활성이 회복하는 것이 나타나게 된다.
또한, 상기 1), 2) 및 5)로 언급되는 실험예 4, 5 및 8에 있어서 일특개평5-9193호 및 전기 WO93/05055에 개시된 일반식에 포함되는 스핀고당지질이며 단당이 결합된 화합물(2S, 3S, 4R)-1-(α-D-가락토피라노실옥시)-2-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일아미도〕-3,4-헵타데칸디올(이하, 화합물a라고도 함) 및 (2S, 3S, 4R)-1-(α-D-가락토피라노실옥시)-2-헥사코사노일아미노-3,4-옥타데칸디올(이하, 화합물b라고도 함)을 비교 화합물로서 이용한다.
7)항종양제 골수세포 증식 촉진제 및 면역 부활제
이와 같이 본 발명 화합물은 우수한 항종양활성, 골수세포 증식 촉진 활성 및 면역부활 활성을 나타내는 것이 명확하게 된다. 따라서, 본 발명 화합물은 항종양제(메라노이마 등의 고형암이나 백혈병등의 혈액암 등의 치료용), 골수세포 증식 촉진제(면역 이상에 의한 혈구감소증 또는 암화학요법 또는 방사선요법 등의 부작용에 의한 혈구감소 등의 치료용) 및 면역 부활제(각종 암, 각종 감염증 및 후천성 면역부전 증후군 등의 치료용)로서 사용할 수 있다. 항종양제, 골수세포증식촉진제 및 면역 부활제로서의 본 발명 화합물은 합목적적인 임의의 투여 경로로 또한 채용 투여 경로에 의해 결정되는 제형으로 투여할 수 있다. 약제로서는 제약상 허용되는 담체 또는 희석제로 희석되는 형태가 보통이다.
본 발명 화합물을 항종양제, 골수세포 증식 촉진제 및 면역 부활제로서 사용되는 경우는 인간 또는 포유동물에 경구적으로 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 예를 들면, 본 발명 화합물을 적당한 주사용 용제(예를 들면 주사용 증류수 등)에 용해, 또는 현탁시켜 정맥주사, 근육주사, 또는 피하주사 등에 의해서 투여할 수 있다. 또한, 적당한 담체 또는 희석제(예를 들면 전분, 자당(蔗糖), 유당(乳糖), 탄산칼슘 등 통상 이 종류의 목적으로 사용되는 임의의 화합물) 또는 활택제(예를 들면 스테아리산, 안식향산나트륨, 붕산, 실리카, 폴리에틸렌글리콜 등 통상의 이 각종의 목적에 이용되는 임의의 화합물)등의 제약성분을 첨가하여 분말, 정제, 과립제, 캅셀, 트로이치, 드라이시럽 등의 형태로 성형 시켜 경구 투여할 수 있다.
본 발명 화합물의 투여량은 동물 시험의 결과 및 개개의 상황을 감안하여, 연속적 또는 간헐적으로 투여하게 되고 총투여량이 일정량을 넘어서지 않도록 정하게 된다. 구체적인 투여량은 투여 방법, 환자, 또는 피처리 동물의 상황, 예를 들면 연령, 체중, 성별, 감수성, 식이, 투여시간, 병용하는 약제, 환자 또는 그의 병기의 정도에 따라서 변화하는 것을 말할 나위도 없고 또 일정의 조건에 의한 적량과 투여 회수는 상기의 지침을 기초로 하여 전문의의 적량 결정 시험에 의해서 결정된다,
식(Ι)으로 표시되는 본 발명 화합물은 항종양작용, 골수세포 증식 촉진 작용 및 면역부활 작용을 갖는 것으로부터 BRM(Biological Response Modifiers)로 분류된 약제이다(Oldham, R. K., Natl. Cancer Inst., 70, 789-796(1983)). 여기서, 일본에서 상시되어 있는 BRM인 렌치난 및 시조후이란의 예를 기초로 하여 본 발명 화합물의 인간에 대한 투여량의 예측을 행하였다. 우선 렌치난 몇 시조후이란의 마우스 및 인간에 대한 투여량은 문헌적 검토로부터 다음의 표에 나타냈다.
즉, 마우스에 대한 투여량이 Amg이고, 인간에 대한 투여량은 Amg/body인 것으로 표시된다. 이 예에 따르면 본 발명의 화합물은 후기 실험예 4에 나타난 바와 같이 마우스에 대해 0.1㎎/kg 정맥 투여에 의해서 의의가 있는 항종양활성을 나타내는 것으로부터, 예를 들면 인간에 정맥내 투여하는 경우에는 0.1㎎/body 전후의 투여량이 추정된다. 그러나, BRM의 인간에 대한 투여량의 결정은 특히 어려우므로 저 용량으로부터 trial을 처음으로 MTD(최대 내용량)으로 도달하기까지의 각종의 저 용량을 검토할 필요가 있는 것이 Oldham(Oldham R. K., J. Biol. Response Mod., vol. 4, 117-128(1985))에 보다 상세하게 되어 있는 것으로부터 실제의 투여량 결정은 전문의의 신중한 재량에 의해서 행하는 것이 필요하다.
이하는 본 발명을 실험예에 의해서 더욱 구체적으로 설명하는 것으로 이 실험예에 의해 본 발명은 한정되지 않는다.
[실험예 1]
[조제]
오키나와켄 미야코시마(沖繩縣宮古島)의 바다에서 채집한 해면동물 스테이릿싸 풀라벨리포르미스(Stylissa Fulabelliformis) 2.0㎏을 호모지니어스하게 동결 건조를 행하였다(420.3g). 이것을 추출 용매로서 클로로포름-메탄올(1 : 1), 메탄올, 뜨거운 메탄올 각각 1리터로 차례로 24시간 추출하고, 각 추출물을 합쳐서 감압하 건고한 갈색의 추출물을 얻었다(59.09g). 이것을 물 2리터와 크로로포름 1리터로 분배, 수층은 n-부탄올 1리터로 3회 추출하여 클로로포름층과 합쳐서 건조하여 갈색의 잔류물을 얻었다(23.25g). 이 잔류물을 실리카겔컬럼크로마토그래피(와코겔 C-200, 200g)로 용출용매로 클로로포름 : 메탄올 : 물의 비율 9 : 1 : 0.1 내지 8 : 2 : 0.2로 변화시키면서 분리하였다. 활성 프랙션(1.3883g)을 토요펄HW-40컬럼크로마토그래피(클로로포름 : 메탄올 = 1 : 1)로 분리한 활성 프랙션을 얻었다(1.1625g). 이것을 다시 상기와 동일한 조건에서 실리카겔컬럼크로마토그래피로 부여하여 순상 박층 크로마토그래피-상단-스폿트를 표시한 활성프락션을 얻었다(303.9㎎). 이것을 피리딘 2㎖에 용해하고 역상 고속 액체 크로마토그래피 〔HPLC, 캅셀팩 C18, SG-120, 10ø×250mm(자생당주식회사), 97%메탄올, 5㎖/분〕로 계속 반송 분리하여 무색의 분말인 본 발명의 화합물(1)(14.3㎎), (2)(19.0㎎), (3)(25.0㎎), (4)(73.1㎎), (5)(26.5㎎), (6)(25.7㎎), (7)(19.0㎎), (8)(11.6㎎), (9)(6.8㎎)을 각각 31.31분, 38.25분, 43.26분, 48.70분, 52.97분, 57.45분, 62.78분, 67.47분, 73.02분의 각 보유 시간으로 얻었다.
화합물(1) 내지 (9)는 이하의 스펙트라 데이터를 나타내었다.
선광도 : 〔α〕D24= + 110.1°(피리딘 중, c = 1.0).
고분해능 FABMS분석 : 1181.7935〔(M-H)-, 이론치1181.7893, C60H113N2O20로서, 오차4.2mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3370, 2920, 2850, 1645, 1535, 1470, 1040.
융점 : 175.5-177.0℃
[화합물 (2)]
선광도 : 〔α〕D24= + 93.4°(피리딘 중, c = 0.76).
고분해능 FABMS분석 : 1195.8073〔(M-H)-, 이론치1195.8050, C61H115N2O20로서, 오차2.3mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3370, 2920, 2850, 1645, 1535, 1470, 1040.
융점 : 177.0-179.0℃
[화합물 (3)]
선광도 : 〔α〕D24= + 107.2°(피리딘 중, c = 1.0).
고분해능 FABMS분석 : 1209.8273〔(M-H)-, 이론치1209.8207, C62H117N2O20로서, 오차6.7mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3370, 2920, 2850, 1645, 1535, 1470, 1040.
융점 : 179.5-183.0℃
[화합물 (4)]
선광도 : 〔α〕D24= + 107.4°(피리딘 중, c = 1.0).
고분해능 FABMS분석 : 1209.8192〔(M-H)-, 이론치1209.8207, C62H117N2O20로서, 오차-1.5mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3370, 2920, 2850, 1645, 1535, 1470, 1040.
융점 : 183.0-184.5℃
[화합물 (5)]
선광도 : 〔α〕D24= + 112.2°(피리딘 중, c = 1.0).
고분해능 FABMS분석 : 1223.8352〔(M-H)-, 이론치1223.8363, C63H119N2O20로서, 오차1.1mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3370, 2920, 2850, 1645, 1535, 1470, 1040.
융점 : 188.0-189.5℃
[화합물 (6)]
선광도 : 〔α〕D24= + 117.0°(피리딘 중, c = 1.0).
고분해능 FABMS분석 : 1223.8298〔(M-H)-, 이론치1223.8363, C63H119N2O20로서, 오차-6.5mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3370, 2920, 2850, 1645, 1535, 1470, 1040.
융점 : 183.0-185.0℃
[화합물 (7)]
선광도 : 〔α〕D24= + 118.9°(피리딘 중, c = 1.0).
고분해능 FABMS분석 : 1237.8533〔(M-H)-, 이론치1237.8520, C64H121N2O20로서, 오차1.3mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3370, 2920, 2850, 1645, 1535, 1470, 1040.
[화합물 (8)]
선광도 : 〔α〕D24= + 119.0°(피리딘 중, c = 1.0).
고분해능 FABMS분석 : 1237.8492〔(M-H)-, 이론치1237.8520, C64H121N2O20로서, 오차-2.8mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3370, 2920, 2850, 1645, 1535, 1470, 1040.
융점 : 184.5-186.5℃
[화합물 (9)]
선광도 : 〔α〕D24= + 103.2°(피리딘 중, c = 0.68).
고분해능 FABMS분석 : 1251.8708〔(M-H)-, 이론치1251.8676, C65H123N2O20로서, 오차3.2mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3370, 2920, 2850, 1645, 1535, 1470, 1040.
융점 : 190.5-191.5℃
[실험예 2]
[조제]
오끼나와현 미야코시마의 바다에서 수집한 해면 동물 아겔라스. 아시세라(Agelas axisera)을 균일하게 해서 동결건조했다(951g). 그것을 추출 용매로서 클로로포름-메탄올(1 : 1) 2리터에서 24시간 추출해서, 추출물을 감압하에서 건조하여 고형화한 갈색의 엑기스를 얻었고(232g), 그것을 물 2리터와 초산에틸 2리터로 분배하고, 초산에틸 층을 건조고형화하여 갈색의 잔류물을 얻었고(65.0g) 또한 중간층을 27.8g 얻었다. 잔류물은 90% 메탄올 2리터와 n-헥산 2리터로 분배하고, 90% 메탄올 층을 건조고형화해서 갈색의 잔류물을 얻었다(53.7g). 중간층과 90% 메탄올 층은 실리카겔 크로마토그래피-(와코겔C-200, 500g)에서 용출용매로서 클로로포름 : 메탄올 : 물의 비율을 9 : 1 : 0.1 내지 8 : 2 : 0.2로 변화시켜 분리했다. 활성프랙션(5.06)을 세파덱스 LH-20칼럼 크로마토그래피-(클로로포름 : 메탄올 = 1 : 1)로 해서 분리해 활성 프랙션을 얻었다(3.91g). 그것을 다시 실리카겔크로마토그래피-(와코겔C-200, 100g)에서 용출용매로서 클로로포름 : 메탄올 : 물의 비율을 9 : 1 : 0.1 내지 8 : 2 : 0.2로 변화시켜 분리해서 활성 프랙션(2.76g)을 얻었다. 이것 중 1.30g을 피리딘 2㎖에 용해해서 역상고속액체 크로마토그래피-〔HPLC, D-ODS-5, S-5, 120A, 20ø×250mm(주식회사와이엠시이), 99%메탄올, 10㎖/분〕에서 반복하여 분리해서 무색의 분말인 본 발명의 화합물(10) (30.3㎎), (11) (55.9㎎), (12) (245.7㎎), (13) (49.2㎎), (14)(115.4㎎), (15) (61.2㎎), (16) (55.0㎎), (17) (30.1㎎)을 각각 30.5분, 36.0분, 43.1분, 46.2분, 50.7분, 56.4분, 58.9분, 63.5분의 보유 시간에서 얻었다.
화합물 (10) 내지 (17)은 하기의 스펙트라를 나타냈다.
[화합물 (10)]
선광도 : 〔α〕D23= + 25.1°(피리딘 중, c = 1.06).
고분해능 FABMS분석 : 950.6779〔(M-H)-, 계산치950.6786, C50H96NO15로서, 오차30.7mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3400, 2950, 2870, 1645, 1535, 1475, 1080.
융점 : 127.0-130.0℃
[화합물 (11)]
선광도 : 〔α〕D23= + 27.3°(피리딘 중, c = 2.96).
고분해능 FABMS분석 : 964.6963〔(M-H)-, 계산치964.6942, C51H98NO15로서, 오차2.1mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3400, 2950, 2870, 1645, 1535, 1475, 1080.
융점 : 138.5-142.0℃
[화합물 (12)]
선광도 : 〔α〕D23= + 27.7°(피리딘 중, c = 2.07).
고분해능 FABMS분석 : 978.7120〔(M-H)-, 계산치978.7093, C52H100NO15로서, 오차2.7mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3400, 2950, 2870, 1645, 1535, 1475, 1080.
융점 : 126.0-131.0℃
[화합물 (13)]
선광도 : 〔α〕D23= + 45.1°(피리딘 중, c = 2.14).
고분해능 FABMS분석 : 992.7269〔(M-H)-, 계산치992.7249, C53H102NO15로서, 오차2.0mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3400, 2950, 2870, 1645, 1535, 1475, 1080.
융점 : 147.0-150.0℃
[화합물 (14)]
선광도 : 〔α〕D23= + 34.0°(피리딘 중, c = 2.96).
고분해능 FABMS분석 : 992.7285〔(M-H)-, 계산치992.7249, C53H102NO15로서, 오차3.6mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3400, 2950, 2870, 1645, 1535, 1475, 1080.
융점 : 138.0-142.5℃
[화합물(15)]
선광도 : 〔α〕D23= + 35.2°(피리딘 중, c = 3.19).
고분해능 FABMS분석 : 1006.7430〔(M-H)-, 계산치1006.7406, C54H104NO15로서, 오차2.4mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3400, 2950, 2870, 1645, 1535, 1475, 1080.
융점 : 125.0-129.5℃
[화합물 (16)]
선광도 : 〔α〕D23= + 34.6°(피리딘 중, c = 2.41).
고분해능 FABMS분석 : 1006.7430〔(M-H)-, 계산치1006.7406, C54H104NO15로서, 오차2.4mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3400, 2950, 2870, 1645, 1535, 1475, 1080.
융점 : 125.0-129.0℃
[화합물 (17)]
선광도 : 〔α〕D23= + 39.5°(피리딘 중, c = 1.14).
고분해능 FABMS분석 : 1020.7537〔(M-H)-, 계산치1020.7562, C55H106NO15로서, 오차2.5mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3400, 2950, 2870, 1645, 1535, 1475, 1080.
융점 : 124.5-128.0℃
[실험예 3]
[합성에 의한 제조]
본 발명 화합물의 합성법과 그의 물리화학적 성질은 하기와 같다.(합성법에 대하여는 제2도의 반응경로식을 참조했다)
[화합물18의 합성]
D-Lyxose 20g(0.133몰)에 염화칼슘으로 탈수한 아세톤 300㎖을 넣어 현탁시키고, 진한황산 0.05㎖을 가해, 실온에서 18시간 교반했다. 모레큘라-시부즈4A, 10.0g을 첨가해 중화했다. 여과하여, 잔류물은 아세톤으로 충분히에서 세척했다. 세척액을 모아 감압 농축했고, 정제는 행하지 않고 다음의 반응에 이용했다.
[화합물 19의 합성]
상기 반응에서 얻은 화합물 18의 모든 염화메틸 168㎖에 용해하고 피리딘 10.0㎖, 염화메틸 39.0g을 가해, 32℃에서 4시간 교반했다. 에탄올 7.8㎖을 투입해 교반한 후에 포화염화암모니움 수용액으로 세척했다. 다시, 포화탄화수소나트륨 수용액, 포화식염수의 순서로 세척했다. 감압 농축해서 얻어진 시럽에 초산에틸 20㎖을 가해 용해하고, 이것에 헥산 40㎖을 천천히 여과해서, 헥산/초산에틸 = 8/1의 혼합액으로 세척했다. 1차결정 44.4g, 모액으로부터 2차 결정 5.6g을 얻었다. 수득율은 86.8%였다.
[화합물 20의 합성]
1-브롬트리데칸 96.4g에 트리페닐포스핀 96.0g을 가해 140℃에서 4.5시간 교반했다. 천천히 가열시켜, 이곳에 테트라히드로퓨란 500㎖을 가해 용해시켰다. 0℃로 냉각해서, 2.5N n-부틸리튬용액을 146.4㎖을 적하해서 15분간 교반했다. 이것에 화합물19의 테트라히드로퓨란 용액 79g/150㎖을 가했다. 천천히 실온으로 만든 다음 18시간 교반했다. 감압농축 후에, 헥산/메탄올/물 = 10/7/3의 혼합액 1000㎖을 가하고, 다시 포화염화암모니움 수용액을 40㎖첨가하여 분액했다. 메탄올/물층은 헥산 500㎖로 재추출했다. 얻어진 전체 핵산층은 무수황산마그네슘으로 건조한 후에, 감압 농축해서, 진공펌프에서 감압하 잘 건조하여, 시럽상의 화합물 20의 조정제물을 얻었다. 이 이상 정제하지 않고 다음 반응에 이용했다.
[화합물 21의 합성]
상기 반응에서 얻어진 화합물 20의 전량에 염화메틸렌 600㎖, 피리딘 200㎖을 가하고, 염화메탄술포닐 16.95㎖을 가해서, 31℃에서 24시간 교반했다. 에탄올 13㎖를 가해, 실온에서 1시간 교반한 후에 감압 농축했다. 헥산/메탄올/물 = 10/7/3의 혼합액 1000㎖을 가하여 분액했다. 메탄올/물 층은 헥산 200㎖로 3회 반복하여 추출했다. 얻어진 전체의 헥산층은 무수황산마그네슘으로 건조한 후에, 감압농축하고 진공펌프로 감압하여 건조해서 시럽상의 화합물 21의 조정제물을 얻었다. 이 이상 정제하지 않고, 다음의 반응에 이용했다.
[화합물 22의 합성]
이전 공정에서 얻은 화합물 21의 전체 양에 염화메틸렌 900㎖, 메탄올 600㎖을 가하여 녹였다. 이것에 진한 염산 124㎖을 가하고, 실온에서 5시간 교반했다. 탄산수소나트륨을 가해 중화하고, 여과했다. 초산에틸로 잔사를 세정하고, 여액과 합해서 가압농축했다. 잔사에 초산에틸을 첨가하여 포화식염수로 세척했다. 물층은 초산에틸로 3회 반복해서 추출했고, 얻어진 전체의 초산에틸층은 무수황산마그네슘으로 건조한 후에 감압농축했다. 헥산으로부터 결정화하였다. 1차결정 41.0g, 2차결정 9.40g을 얻었다. 3단계에서의 통산 수득율 70.0%.
[화합물 23의 합성]
화합물 22의 24.2g을 테트라히드로퓨란 224㎖에 녹였고, 이것에 5% 팔라듐-황산바륨 2.44g을 가했다. 수소가스로 반응용기 내부를 치환하고, 수소분위기하 실온에서 20시간 교반했다. 60℃의 클로로포름/메탄올 = 1 : 1의 혼합액으로 세정했다. 여액, 세정액을 합해서 감압 농축한 후, 초산에틸로 결정화했다. 결정은 헥산으로 잘 세정했다. 1차결정 21.5g, 2차결정 0.64g을 얻었다. 수득율은 91.3%.
[화합물 24의 합성]
화합물 23의 8.94g(22.5mmol)을 건조한 DMF 72㎖에 녹이고, 이것에 NaN3을 2.93g 가했다. 오일중탕을 95℃로 하여, 4시간 가열 교반했다. TLC(헥산 : 아세톤 = 3 : 2)로 원료소실을 확인한 후에, 반응 용액을 감압 농축했다. 농축잔사에 초산에틸을 가하고 물세척했다. 물층은 동량의 초산에틸로 수회 추출했다. 초산에틸층을 합해서 포화식염수로 세척하고 무수황산마그네슘으로 건조한 후, 감압 농축하고, 다음에 진공펌프로 흡인하여 잘 건조했다. 정제는 행하지 않고, 다음 반응에 이용하였다.
[화합물 25의 합성]
상기 반응에서 얻은 분체 전체의 양에 디클로로메탄 45㎖을 가하고, 다시 TrCl을 7.53g 가했다. 이어서, 피리딘 14㎖를 가하여, 실온에서 16시간 교반했다. TLC(헥산 : 초산에틸 = 2 : 1)로 원료소실을 확인한 후에, 에탄올을 1.8㎖ 가해서 반응을 정지하고, 이때부터 30분 교반했다. 반응액은 포화탄산수소나트륨 수용액, 포화식염수로 차례로 세척하고, 무수황산마그네슘으로 건조했다. 감압농축한 후에, 얻은 시럽을 실리카겔칼럼(헥산 : 초산에틸 = 10 : 1)으로 정제했다. 화합물 25의 수량은 6.93g이었다. 수득율 52%.
[화합물 26의 합성]
시럽 상태의 화합물 25의 21.73g을 디메틸포름아미드 200㎖에 녹이고, 이것에 60% 수소화나트륨 3.57g을 소량씩 가했다. 실온에서 40분 교반한 후, 빙냉하에 브롬화벤질 9.71㎖(1.05등량)을 적하하고, 천천히 실온으로 한 다음 2시간 30분동안 교반했다. TLC(헥산 : 초산에틸 = 10 : 1)로 원료소실을 확인한 후, 반응액에 얼음조각을 첨가하해서 반응을 정지시켰다. 반응액에 물 50㎖를 가하여 초산에틸로 3회 추출했다. 초산에틸층은 포화 식염수로 3회 세척하고, 무수황산마그네슘으로 건조한 후, 감압농축했다. 얻어진 시럽은 실리카겔칼럼(헥산 : 초산에틸 = 100 : 1)으로 정제하였다. 화합물 26의 수량은 23.97g이었다.(수득율 84.4%)
[화합물 27의 합성]
원료 26의 25.35g(33.14mmol)에 1-프로판올 200㎖, 메탄올 25㎖을 가하여 용해하였다. 이것에 개미산암모늄 16.72g, 10%팔라듐탄소 1.0g 가해 실온에서 16시간 교반했다. 원료의 소실과 목적물의 생성을 TLC(헥산 : 아세톤 = 3 : 1)로 확인한 후에, 초산에틸 50㎖을 반응액에 첨가하고 셀라이트 여과했다. 초산에틸로 세척한 후에, 감압농축했다. 농축잔사에 초산에틸을 첨가해서 포화NaHCO3수용액으로 2회 세척했다. 물층은 초산에틸로 재추출했고 초산에틸층은 합하여 포화식염수로 세척했다. 무수황산 마그네슘으로 건조한 후에 감압 농축하고, 톨루엔과 공비(共沸)하였다. 이어서 진공펌프로 충분히 건조하고 정제는 하지 않고 다음 반응에 이용했다.
[화합물 28의 합성]
이전 반응에서 얻은 시럽상의 화합물 27의 전량에 염화메틸렌 250㎖을 가해서 용해하고, 이것에 세로틴산 12.49g, WSC염산염 7.13g을 첨가했다. 오일중탕으로 가온하여, 약 50℃에서 2시간 환류했다. TLC(헥산 : 아세톤 = 3 : 1)로 원료의 잔류물 존재를 확인하기 위해 세로틴산 620㎎, WSC염산염 360㎎을 가하고 다시 1시간 가열 환류했다. 실온까지 냉각하고, 반응액을 0.5 규정-염산수용액, 포화식염수, 포화중조수용액, 포화식염수의 순서로 세척했다. 무수황산 마그네슘으로 건조한 후, 감압 농축하고, 이어서 진공펌프에서 충분히 건조하고 정제는 하지 않고 다음 반응에 이용하였다.
[화합물 29의 합성]
이전의 반응에서 얻은 시럽상태의 화합물 28의 전체양에 염화메틸 120㎖, 메탄올 30㎖를 가해서 녹였다. 이곳에 10% 염산-메탄올용액 3.0㎖을 적하하고 실온에서 약 2시간 교반했다. 반응종결을 TLC(헥산 : 아세톤 = 3 : 1)로 확인하고, 반응액에 탄산수소나트륨을 첨가해서 중화했다.
셀라이트여과한 후, 포화식염수로 2회 세척하고 무수황산 마그네슘으로 건조하고 이어서 감압농축했다. 톨루엔으로 함께 끓이고, 아세톤을 가해서 가열용해한 후, 0℃로 보존하여 백색침전을 얻었다. 수득량 22.2g. 3단계의 통산 수율 76.6%.
[화합물 30의 합성]
화합물 29의 289.0㎎(0.33mmol)에 염화제1주석 147.0㎎(0.78mmol), 과염소산은(銀) 160.8㎎(0.78mmol) 및 모레큘라시브-4A 600g을 첨가하고, 테트라히드로퓨란 7.5㎖로 현탁해서 실온에서 30분간 교반했다. -10℃까지 냉각한 후, 테트라히드로퓨란 3㎖로 용해시킨 α-6-0-(테트라-0-벤질갈락토피라노실)-2, 3, 4-트리-0-벤질글루코피라노실 플로라이드 643.6㎎(0.66mM)을 첨가해서 천천히 실온으로 만든 다음 2시간 교반했다. 반응액을 셀라이트 여과후에 건조하고, 실리카겔칼럼 크로마토그래피로 정제하여(아세톤 : n-헥산 = 3 : 17) 화합물30(129)을 33.7㎎(5.6%) 얻었다.
[화합물 31의 합성]
화합물 30의 31.4㎎을 초산에틸 1.5㎖에 용해하여 팔라듐-흑 40㎎을 첨가해서 수소기류하 실온에서 16시간 교반했다. 반응액을 셀라이트여과하고, 실리카겔칼럼 크로마토그래피로 정제하여(클로로포름 : 메탄올 : 물 = 9 : 1 : 0.1) 화합물31을 13.0㎎(74.3%) 얻었다.
선광도 : 〔α〕D23= + 82.7°(피리딘 중, c = 0.03).
고분해능 FABMS분석 : 1018.7719〔(M-H)-, 계산치1018.7776, C56H108NO14로서, 오차5.7mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3400, 2950, 2870, 1645, 1535, 1475, 1080.
융점 : 133.0-136.5℃
[화합물 32의 합성]
화합물 29의 102.5㎎(0.12mmol)에 염화제1주석 52.0㎎(0.27mmol), 과염소산은 56.8㎎(0.27mmol) 및 모레큘라시브-4A 500g을 첨가하고, 테트라히드로퓨란 2㎖로 현탁해서 실온에서 1시간 교반했다. -10℃까지 냉각한 후 2㎖의 테트라히드로퓨란으로 용해한 α-6-0-(테트라-0-벤질갈락토피라노실)-2, 3, 4-트리-0-벤질글루코피라노실 플로라이드 227.5㎎(0.23mM)을 첨가해서 천천히 실온으로 만든 다음 16시간 교반했다. 반응액을 셀라이트 여과후에 건조하여 실라카겔칼럼 크로마토그래피로 정제하여(초산에틸 : n-헥산 = 3 : 17) 화합물32(141)를 67.5㎎(31.6%) 얻었다.
[화합물 33의 합성]
화합물 32의 61.5㎎을 초산에틸 2㎖에 용해시킨 팔라듐-흑 60㎎을 첨가해 수소기류하 실온에서 16시간 교반했다. 반응액을 셀라이트 여과하고, 실리카겔칼럼 크로마트그래피로 정제하여(클로로포름 : 메탄올 : 물 = 9 : 1 : 0.1) 화합물33을 20.8㎎(60.7%) 얻었다.
선광도 : 〔α〕D23= + 75.0°(피리딘 중, c = 1.07).
고분해능 FABMS분석 : 1018.7703〔(M-H)-, 계산치1018.7776, C56H108NO14로서, 오차7.3mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3400, 2950, 2870, 1645, 1535, 1475, 1080.
융점 : 127.0-131.0℃
[화합물 34의 합성]
화합물 29의 350.6㎎(0.40mmol)에 염화제1주석 189.2㎎(1.00mmol), 과염소산은 206.9㎎(1.00mmol) 및 모레큘라시브-4A 2.5g을 첨가하고, 테트라히드로퓨란 3㎖로 현탁해 실온에서 1시간 교반했다. -10℃까지 냉각한 후 2㎖의 테트라히드로퓨란에 용해된 α-4-0-(테트라-0-벤질갈락토피라노실)-2, 3, 6-트리-0-벤질글루코피라노실 플로라이드 778.4㎎(0.80mM)을 첨가해서 천천히 실온으로 만든 다음 16시간 교반했다. 반응액을 셀라이트여과 후에 건조하여 고형화하고, 실리카겔칼럼 크로마토그래피에서 정제한(염화 에틸 : n-헥산 = 1 : 9) 화합물34(168)를 95.0㎎(13.0%) 얻었다.
[화합물 35의 합성]
화합물 34의 95.0㎎을 초산에틸 3㎖에 녹인 팔라듐-흑 42㎎을 첨가해서 수소기류하 실온에서 16시간 교반했다. 반응액을 셀라이트 여과하여 화합물35를 50.7㎎(95.8%) 얻었다.
선광도 : 〔α〕D23= + 60.1°(피리딘 중, c = 0.6).
고분해능 FABMS분석 : 1018.7719〔(M-H)-, 계산치1018.7776, C56H108NO14로서, 오차5.7mMU〕
적외흡수스펙트라 : (KBr, cm-1) 3400, 2950, 2870, 1645, 1535, 1475, 1080.
융점 : 145.0-148.5℃
[실험예 4]
[본 발명 화합물의 항종양성활성]
ⅰ) 본 발명 화합물의 피하이식시킨 P388마우스 백혈병 세포에 대한 항종양 효과
일본 에스엘시-주식회사에서 구입한 6주령 메스의 CDF1마우스를 1그룹을 5마리로 해서 실험을 수행했다. P388 마우스 백혈병 세포 1×106개/마우스를 마우스의 등(背) 부분 피하에 이식(이식일을 0일(日))하고, 이식 후 1, 5 및 9일에 매체(10㎖/kg) 또는 매체에 용해된 각 화합물(0.1㎎/kg)을 정맥내에 투여하고, 생존일수를 관찰했다. 또한 렌치난 및 피스바닐은 1, 3, 5, 7일에 정맥내 투여하고, 시조후이란은 1내지 9일에 피하 투여했다. 그리고 만-화이텐니(Mann-Whiteney) 검정에 의해 의미있는 차이 검정을 행하였다.
표1에 이것의 결과를 나타냈다.
[표 1]
표 1에 나타난 바와 같이, 마우스백혈병 P388을 피하에 이식한 마우스에 대해서, 화합물 11, 12를 제거한 모든 화합물은 의미 있는 생존기간 연장 작용(항종양 작용)을 나타낸 다는 것이 명확하게 되었다. 한편, 렌치난, 시조후이란 및 피시바닐로는 생존기간 연장 작용은 관찰되지 않았다. 이상의 결과로부터 이 실험계에 있어서 화합물11, 12를 제거한 본 발명 화합물은 모두 시판되는 렌치난, 시조후이란, 피시바닐보다 강한 항종양 효과를 보여주었다. 또한 구성 당(糖)이 1당의 화합물(2S, 3S, 4R)-1-(α-D-갈락토피라노실옥시)-2-헥사코사노실아미노-3, 4-옥타데카네디올(화합물b)을 합성해서, 이것의 항종양활성을 검사한 것으로, 화합물31, 33, 35는 대략 화합물b와 같은 현저한 항종양 활성을 나타낸 것도 밝혀졌다.
ⅱ) 본 발명 화합물을 피하이식한 B16 마우스 메라노이마 세포에 대한 항종양 효과
일본 에스엘시-주식회사에서 구입한 6주령 메스의 BDF1마우스를 1그룹 6마리로 실험을 수행했다. B16마우스 메라노이마 세포를 1×106개/마우스 등부분 피하에 이식(이식일을 0일)하고, 이식 후 1일, 5일 및 9일에 0.1㎎/kg의 각 시료를 꼬리(尾) 정맥내에 투여했다. 피하의 종양 체적〔(가로×세로×높이)/2〕을 8, 12, 16 및 20일에 측정해서, 각 샘플의 종양증식 억제율(TGIR)을 구했다. TGIR은 조절그룹의 종양체적을 C, 샘플 투여군의 종양체적을 T로 해서 하기의 식으로 구하였다.
TGIR(%) = (1 -T/C) × 100
하기의 표에는 20일 동안의 실험중에서 최대의 TGIR을 나타냈다. 그리고 각회 실험마다 점선으로 분리했다.
모든 화합물이 현저한 조양증식 억제 작용을 나타냈다.
[실험예 5]
[본 발명 화합물의 골수세포 증식 촉진 활성]
[본 발명 화합물의 시험관내(in vitro) 마우스 골수세포 증식 촉진 활성]
일본 에스엘시-주식회사에서 구입한 6주령 메스의 BDF1마우스를 사용해서 실험을 수행했다. 마우스의 대퇴골에서 종래의 방법으로 골수세포를 취하여 10% FCS RPMI 1640에 부유시켜서, Lympholite M 위에 두껍게 입혀서, 원심분리로 단구획분을 얻었다, 이 단구획분을 1×106개/㎖로 되도록 10% FCS RPMI 1640에 부유시켰다. 둥근바닥 96구멍 플레이트를 이용하고, 상기 세포 부유액 100㎕/구멍 및 최종적으로 표2에 나타낸 농도가 되도록 조제한 매체 또는 샘플(10㎕/구멍)을 첨가해 4일동안, 37℃, 5% CO2의 조건하에서 배양했다, 그리고,3H-사이미딘(3H-TdR) 0.5uCi/구멍을 첨가했다. 6시간 후에 세포의 하베스트를 행해 핵내에 취입된3H-TdR양을 액체 신틸레이션카운터로 측정했다. 시료 첨가 그룹의 매체 첨가 그룹에 대한3H-TdR 도입하는 비율(%)을 구해, 시험관내 마우스 골수세포 증식 촉진 활성화유로 하였다.
그 결과를 표2에 나타내었다.
[표 2]
표 2에 나타났듯이, 모든 화합물이 0.1㎍/㎖의 농도에서는 현저한3H-TdR의 도입촉진 작용을 나타냈다. 이상의 결과로부터, 전체의 본 발명 화합물은 강한 골수 세포 증식 촉진활성이 있음을 나타내었다.
[실시예 6]
[본 발명 화합물의 면역부활 활성]
ⅰ) 본 발명 화합물의 시험관내 마우스 비장 림파구 증식 촉진 작용
일본 에스엘시-주식회사에서 구입한 6주령 메스의 BDF1마우스를 사용해서 실험을 수행했다. 마우스로부터 비장을 취해서 슬라이드글라스를 사용해서 비장세포를 편 후 NH4CL로서 용혈시켰다. 용혈 후의 비장세포를 10% FCS RPMI 1640로 2×106개/㎖로 되도록 부유시켰다. 둥근바닥 96구멍 플레이트를 이용하여, 상기 세포 부유액 100㎕/구멍 및 최종적으로 표 3에 나타낸 농도가 되도록 조제한 매체 또는 샘플(10㎕/구멍)을 첨가해 2일간, 37℃, 5% CO2의 조건하에서 배양했다, 여기에서3H-사이미딘(3H-TdR) 0.5uCi/구멍을 첨가했다. 6시간 후에 세포의 하베스트를 행해 핵내에 도입된3H-TdR양을 액체 신틸레이션카운터로 측정했다. 시료 첨가 그룹의 매체 첨가 그룹에 대한3H-TdR 도입하는 비율(%)을 구하여, 시험관내 마우스 비장 임파구 증식 촉진화율로 하였다.
그 결과를 표 3에 나타내었다.
[표 3]
표 3에 나타난 바와 같이, 전체의 본 발명 화합물은 10ng/㎖ 내지 1㎍/㎖의 농도에서 현저한3H-TdR 의 도입촉진 작용을 나타냈다. 이 앗세이계는 미토겐(mitogen)에 의한 임파구의 유약화(幼若化) 반응을 검토하는 계인것으로부터 본 발명 화합물은 모두 강력한 림파구 유약화성이 있다는 것을 판명했다(야다쥰히토(矢田純一), 후지와라미치오츠도(原道夫), 신규의 림파구 기능 검색법, 중외의약사(1990)). 더욱이, 하기ⅱ)에서 나타냈듯이, 전체의 본 발명 화합물은 현저한 MLR(mixed lympocyte culture reaction) 활성 증강 작용을 나타낸다는 것도 확인되었다.
ⅱ) 본 발명 화합물의 림파구 혼합 배양 반응(MLR) C57BL/6마우스에서 비장세포를 조제한 마이토마이신 C 50㎍/㎖로 30분 처리했다. 이것을 표적 세포로 BALB/C 마우스의 비장세포를 반응세포로 했다. 상술한 비장세포를 10% FCS RPMI 1640을 배지로 해서 각각 2×106개/㎖로 제조했다. 둥근바닥 96구멍 플레이트를 사용하여, 상기 양 세포 각 50㎕/구멍 및 샘플(10㎕/구멍)을 첨가해 42시간 동안, 37℃, 5% CO2의 조건하에서 배양을 이행한 후,3H-사이미딘(3H-TdR ) 0.5uCi/구멍을 첨가했다. 이어서 8시간 후에 세포의 하베스트를 수행하여 액체 신틸레이션카운터로3H-TdR 의 취입을 측정하고, 시료 첨가 그룹의 조절그룹에 대한3H-TdR 취입하는 비율(%)을 구해, MLR 활성화율을 구했다.
그 결과는 하기의 표에 나타내었다.
[실험예 7]
[본 발명 화합물의 방사선 장해 방호 작용]
[치사선양의 방사선 조사에 대한 연명효과]
일본 에스엘시-주식회사에서 구입한 6주령메스의 BDF1마우스를 1그룹 10마리로 해서 실험을 했다. 9Gy의 X선의 전신조사(X선 발생장치, 일입, MBR-1520R)을 수행해서, 조사일을 0일로 했다. 0, 4 및 8일에 각 샘플을 0.1㎎/kg 꼬리 정맥내에 투여하여 생사를 40일 동안 관찰했다.
이 결과를 하기의 표에 나타냈다. 그리고 각회 실험마다 점선으로 분리했다.
모든 화합물이 치사량의 방사선에 대한 현저한 연명효과가 인정되었다.
[실험예 8]
[본 발명 화합물의 수용성]
구성 당이 1당의 WO93/05055에 포함되는 상기 화합물a 및 b를 합성했다. 본 발명 화합물 4, 31, 33과 화합물a 및 b의 각 1㎎을 표 4에 나타낸 각 농도의 폴리솔베이트 20수용액 1㎖에서 용해한 경우의 성상을 눈으로 관찰했다. 이 결과를 표 4에 나타내었다.
[표 4]
Ｏ : 용해
× : 용해않됨(백탁)
표 4에서 화합물 4, 31, 33으로 대표되는 본 발명 화합물을 사용함으로서, 이 화합물을 물에 용해하는 경우에 필요한 폴리솔베이트 20의 양을 구성 당이 1당으로, 화합물 4, 31, 33과 같은 항종양활성(표1)을 나타낸 화합물b를 물에 용해하는데 필요한 폴리솔베이트 20의 양의 1/100까지 감소할 수 있다는 것이 판명됐다.
[실험예 9]
[폴리솔베이트의 면역부활 활성에 미치는 영향]
실시예 8에서 제조한 화합물 33의 1㎎을 10% 혹은 0.1% 폴리솔베이트 20의 1㎖에 용해한 샘플, 화합물b의 1㎎을 10% 폴리솔베이트 20의 1㎖에 용해한 샘플, 혹은 10% 및 0.1% 폴리솔베이트 20을 멸균여과하여, 표 5에 나타난 바와 같이 PBS에 10배 희석을 차례로 수행함으로서 샘플을 제조하여, 실험예 6에 나타낸 실험을 행했다.
또한, 화합물b의 1㎎의 0.1% 폴리솔베이트에는 용해될 수 없었기 때문에 실험은 수행되지 않았다.
[표 5]
측정치는 3구멍의 평균치를 나타냈다.
표 5에서 나타냈듯이, 0.1% 내지 0.01%의 폴리솔베이트 20을 첨가하는 것은 0.001%이하의 솔베이트 20을 첨가하는 경우와 비교해서, 마우스 비장 림파구의3H-TdR의 도입을 확실하게 억제시켰다.
또한, 화합물33과 화합물b의 10㎍/㎖(0.1% 폴리솔베이트 20) 및 1㎍/㎖(0.01% 폴리솔베이트 20)의 농도에서는 0.1㎍/㎖(0.001% 폴리솔베이트 20)의 농도의 것과 비교해서,3H-TdR 의 도입 양도 억제시키는 경우가 판명 되었다.
이상의 결과에서, 고농도(0.01% 이상)의 폴리솔베이트 20은 마우스 비장 림파구의 증식을 억제하고, 또한 본 발명 화합물의 면역 부활 작용도 억제하는 경우가 밝혀지게 되었다.
그래서, 화합물33을 용해할 때, 폴리솔베이트 20의 양을 1/100으로 감소시킨 샘플을 제조하고, 같은 방법의 실험을 수행하여, 화합물33은 10㎍/㎖(0.001% 폴리솔베이트20)의 농도에서는 현저한3H-TdR 도입 촉진 작용을 보여주었다.
이상의 결과에서, 용해하는데 사용하는 폴리솔베이트 20의 양을 감소시킴으로서, 본 화합물의 면역 부활 활성을 회복시키는 것이 판명됐다.
상기에서 상술한 실험예 4 내지 8의 결과를 종합하면 하기와 같게 된다.
화합물11, 12을 제거한 본 발명 화합물은 렌치난, 시조후이란, 피시바닐에 비교해서 강항 항종양 효과를 나타내고, 특개평5-9193호, WO93/05055호 공보에 기재된 일반식에 속하는 스핑고당지질인 상기 화합물b와 대략 동등하게 현저한 항종양 작용을 보여지는 것이 판명되었다(표1).
또한 본 발명 화합물은 현저한 골수세포 증식 촉진 작용(표2) 또는 현저한 면역부활 작용을 나타내고, 그 활성의 강도는 상기 화합물b의 스핑고당지질과 대략 동등하다는 것도 판명되었다.
그래서, 표 4에 나타냈듯이, 본 발명 화합물을 물에 용해하는데 필요한 용해보조제(예를 들면, 폴리솔베이트류)의 양은 특개평5-9193호, WO93/05055호 공보에 기재된 일반식에 속하는 스핑고당지질인 상기 화합물a 또는 b를 물에 용해하는데 필요한 용해보조제의 양의 1/100에도 좋은 결과를 나타내었다.
그래서, 고농도의 폴리솔베이트 20의 보여지는 세포증식 억제 작용 및 또는 면역부활 활성에 대한 억제 작용이라고 하는 고농도의 폴리솔베이트 20의 부작용과 관계되는 작용은 폴리솔베이트 20의 양을 감소시키는 것으로 해결할 수 있다는 것도 밝혀졌다.
수용성이 낮은 화합물의 주사제로의 응용은 상술한 용해보조제의 부작용등에 의해 매우 어려운 것이지 현상황이다. 또한, 용해보조제의 양을 감소시켜 현탁액으로 된다면, 혈관내 및 척추내에 투여할 수 없기(제12 개정 일본 약처방 해설서(1991년), 제A119 ∼A136 페이지) 때문에 투여경로가 한정되는 결점도 있다.
상술했듯이, 본 발명 화합물은 상술한 화합물a 및 b에 대표적인 당이 1당의 스핑고당지질과 대략 동등한 생물 활성을 나타내고, 또한 이런 스핑고당지질을 주사제로서 응용함으로서 생기는 문제점을 해결할 수 있는 화합물인 것이 판명되었다.
즉 말하자면, 본 발명 화합물은 특개평5-9193호,WO93/05055호 공보에서 기재한 스핑고당지질과 비교해서, 주사제로서 응용하는 것에 용해보조제의 부작용을 크게 감축하는 점, 및 투여경로의 선택폭을 감소하지 않아도 좋다라는 점이 유용하다.
[실험예 10]
[제제예]
[예1 주사제]
본발명화합물 1㎎
폴리솔베이트 1㎎
주사용제유수 적량
계 1㎖
상기의 처방에 따라서, 각 화합물을 주사용 증류수에 용해시켜 무균여과 후에 바이알 또는 앰플로 충진하여 주사제로 한다.
[예2 정제]
(1)본발명화합물 1㎎
(2)유당 80㎎
(3)토우모로코시 전분 30㎎
(4)히드록시 프로필 셀룰로스 3㎎
(5)스테아린산 마그네슘 1㎎
계 115㎎
상기의 처방에 따라서, 화합물(1) 내지 (5)를 혼합하고, 조립하고, 타정용 과립으로 만든다. 이 과립에(5)를 가하여 균일한 분체로서 타정기에 의해 압축성형한다.
[산업상의 이용가능성]
본 발명 화합물은 높은 항종양활성, 골수세포 증식 촉진 활성 및 면역 부활 활성이 있는 신규한 스핑고당지질이고, 항종양제, 골수세포 증식 촉진제 및 면역부활제로서 유용하다.

Claims (8)

  1. 다음식(Ι)로 표시되는 스핀고당지질.
    식 중, R1은 H 또는이다.
    R2는또는이다
    R3및 R6는 각각 H 또는 OH 이다.
    R4는 H, OH,또는이다.
    R5는 H,또는이다.
    단, R1, R2, R4및 R5의 적어도 하나가 글리코실이다. X는 19 내지 23의 어느 정수이다. R7은 하기의 기(a) 내지(g)의 어느 것이다. (a) -(CH2)11-CH3(b) -(CH2)12-CH3(c) -(CH2)13-CH3(d) -(CH2)9-CH(CH3)2(e) -(CH2)10-CH(CH3)2(f) -(CH2)11-CH(CH3)2(g) -(CH2)11-CH(CH3)2-C2H5
  2. 제1항에 있어서, 다음식(Ⅱ)로 표시되는 스핀고당지질.
    (식 중, R1이 OH 의 경우 R2는 H이고, R1이 H의 경우 R2는 OH이고, R3가 OH 의 경우 R4는 H이고, R3이 H의 경우 R4는 OH이고, R5는 H 또는 OH이고, X는 19 내지 23의 어느 정수이고, Y는 11 내지 13의 어느 정수이다.)
  3. 제1항에 있어서, 다음식(Ⅲ)으로 표시되는 스핀고당지질.
    (식 중, R1이 OH 의 경우 R2는 H이고, R1이 H의 경우 R2는 OH이고, R3는 H 또는 OH이고, X는 19 내지 23의 어느 정수이고, Y는 11 내지 13의 어느 정수이다.)
  4. 제1항에 있어서, 다음의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 스핀고당지질. 화합물 1 : 0-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-1,3,4-헥사데칸트리올 화합물 2 : 0-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-1,3,4-헵타데칸트리올 화합물 3 : 0-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-16-메틸-1,3,4-헥사데칸트리올 화합물 4 : 0-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-1,3,4-옥타데칸트리올 화합물 5 : 0-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시펜타코사노일〕-16-메틸-1,3,4-헵타데칸트리올 화합물 6 : 0-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시펜타코사노일〕-1,3,4-옥타데칸트리올 화합물 7 : 0-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시헥사코사노일〕-16-메틸-1,3,4-헵타데칸트리올 화합물 8 : 0-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시헥사코사노일〕-1,3,4-옥타데칸트리올 화합물 9 : 0-(N-아세틸-2-아미노-2-데옥시-α-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-〔α-D-글루코피라노실-(1→2)〕-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시헥사코사노일〕-16-메틸-1,3,4-옥타데칸트리올 화합물 10 : 0-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시도코사노일〕-1,3,4-헥사데칸트리올 화합물 11 : 0-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시트리코사노일〕-1,3,4-헥사데칸트리올 화합물 12 : 0-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시테트라코사노일〕-1,3,4-헥사데칸트리올 화합물 13 : 0-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시도코사노일〕-15-메틸-1,3,4-헥사데칸트리올 화합물 14 : 0-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시도코사노일〕-1,3,4-헵타데칸트리올 화합물 15 : 0-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시도코사노일〕-16-메틸-1,3,4-헵타데칸트리올 화합물 16 : 0-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시도코사노일〕-1,3,4-옥타데칸트리올 화합물 17 : 0-β-D-가락토피라노실)-(1→3)-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-〔(R)-2-히드록시도코사노일〕-17-메틸-1,3,4-옥타데칸트리올 화합물 31 : 0-β-D-가락토피라노실)-(1→6)-0-α-D-글루토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-헥사코사노일-1,3,4-옥타데칸트리올 화합물 33 : 0-β-D-가락토피라노실)-(1→6)-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-헥사코사노일-1,3,4-옥타데칸트리올 화합물 35 : 0-β-D-글루토피라노실)-(1→4)-0-α-D-글루코피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-헥사코사노일-1,3,4-옥타데칸트리올
  5. 제4항에 있어서, 다음의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 스핀고당지질. 화합물31 : 0-β-D-가락토피라노실)-(1→6)-0-α-D-글루토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-헥사코사노일-1,3,4-옥타데칸트리올 화합물 33 : 0-β-D-가락토피라노실)-(1→6)-0-α-D-가락토피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-헥사코사노일-1,3,4-옥타데칸트리올 화합물35 : 0-β-D-글루토피라노실)-(1→4)-0-α-D-글루코피라노실-(1→1)-(2S,3S,4R)-2-아미노-N-헥사코사노일-1,3,4-옥타데칸트리올
  6. 유효성분으로 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 기재된 화합물을 함유하는 항종양제.
  7. 유효성분으로 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 기재된 화합물을 함유하는 골수세포 증식 촉진제.
  8. 유효성분으로 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 기재된 화합물을 함유하는 면역부활제.
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