CN1566054A

CN1566054A - 白藜芦醇低聚茋类化合物及其制法和其药物组合物与用途

Info

Publication number: CN1566054A
Application number: CN 03147932
Authority: CN
Inventors: 林茂; 程桂芳; 李小妹; 姚春所; 李靖
Original assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Current assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Priority date: 2003-06-27
Filing date: 2003-06-27
Publication date: 2005-01-19
Anticipated expiration: 2023-06-27
Also published as: CN100342862C

Abstract

本发明涉及新的白藜芦醇低聚茋类化合物，其制备方法，含有它们的药物组合物，及其作为药物，尤其是作为治疗类风湿性关节炎、哮喘、过敏性炎症的药物的用途。

Description

白藜芦醇低聚茋类化合物及其制法和其药物组合物与用途

技术领域

本发明涉及白藜芦醇低聚茋类化合物，它们的制备方法，含有它们的药物组合物，和在制备治疗类风湿性关节炎、哮喘、过敏性炎症的药物中的应用。

背景技术

低聚茋类(oligomer stilbene)为一类颇为新颖而结构复杂的化合物，它们的结构特征多以白藜芦醇单体或其类似物(如1、7)以不同的聚合方式共存在同一种植物中。该类化合物极性大、类型多、分离困难，结构鉴定也有一定难度。90年代至今国内外对这类化合物研究达到高潮，据不完全统计，目前这类化合物已分得近200多种，通常以2-4个单体聚合，最高的聚合度已达到8度。这类聚合物的药理活性往往强于它们的单体化合物，且多具有较强的抗细菌、抗真菌、抗氧化、抗炎等活性，对蛋白激酶C、环氧酶生成有较强的抑制作用。同时对抗肿瘤及抗艾滋病等也有较强的活性。经研究某些化合物在抗炎方面的作用强于已知药3个数量级。而对以上活性成分的体内作用研究较少，并且不够深入。主要原因这类化合物不易大量分离得到，所得微量成分只能供体外试验。若用人工全合成的方法制备，目前有一定困难。

TNFα抑制剂为目前抗炎免疫药物研究领域中一个较新的研究方向，是具有抗肿瘤活性的一类化合物，并能调节炎症反应。通过调节血液内皮细胞以提高各种粘附分子的含量，进而调节白细胞的粘附及渗出，在免疫及炎症反应中发挥重要的作用。这类化合物与哮喘、皮炎、肠炎、类风湿性关节炎、艾滋病、多发性硬化(如心脑血管动脉硬化)等疾病有关，并在病理发展过程中起着重要的作用。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一类新的白藜芦醇低聚茋类化合物。

本发明的另一目的在于提供制备新的白藜芦醇低聚茋类化合物的方法，包括从植物中提取和人工合成。

本发明一方面涉及一种药物组合物，其包括药物有效剂量的，作为活性成份的新的白藜芦醇低聚茋类化合物及制药领域中常用的载体。

本发明的另一目的在于提供一种新的白藜芦醇低聚茋类化合物在制备治疗类风湿性关节炎、抗哮喘、抗过敏的药物中的应用。

本发明还涉及大子买麻藤(Gnetum Montanum f.megalocarpum)有效部位群提取物及其制备方法：

(1)大子买麻藤(Gnetum Montanum f.megalocarpum)粉碎，用乙醇多次回流提取，提取液减压浓缩，得粗浸膏；

(2)粗提物分别用石油醚回流脱脂多次，脱脂后的浸膏用丙酮回流提取多次。浓缩丙酮溶解部分，聚酰胺拌样，装柱，用30％-80％乙醇充分洗脱。收集30％-80％乙醇部分浓缩，为大子买麻藤有效部分，其中含有大子买麻藤素B。

本发明的一种白藜芦醇低聚茋类化合物，如通式(I)所示，是白藜芦醇类似物单体聚合而成的2-4度的聚合体及其全甲醚、脱氢化合物。

白藜芦醇类似物单体

表-1茋类化合物单体

取代基

No. 名称

R1 R2 R3

a 白藜芦醇(resveratol) H H H

异丹叶大黄素

b OCH₃ H H

(isorhapontigenin)

10-异戊烯基白藜芦醇

c H 异戊烯基 H

(10-isopentenyl-resveratrol)

12，-异戊烯基白藜芦醇

d H H 异戊烯基

(12-isopentenyl-resveratrol)

优选的白藜芦醇低聚茋类化合物包括：

大子买麻藤素B(gnetumontanin B，化合物1)

顺式葡萄藤戊素(cis-ε-viniferin，化合物2)

双氧化白藜芦醇甲素(化合物7)

6b，14b-去氢双白藜芦醇(化合物8)

双异丹叶大黄丙素(化合物9)

三聚异丹叶大黄甲素(化合物10)

四聚异丹叶大黄甲素(化合物11)

双异戊烯基白藜芦醇甲素(化合物12)

双异戊烯基白藜芦醇乙素(化合物13)

异-二聚茋甲素(化合物14)

异-三聚茋甲素(化合物15)

7，8-脱氢-全甲醚射干乙素(7，8位为双键，化合物16)

全甲醚射干乙素(化合物17)

全甲醚葡萄滕戊素(化合物18)

根据本发明还涉及化合物1与2的衍生物，这种衍生物系指分别从天然界中获得的白藜芦醇低聚茋类似物，如双高白藜芦醇甲素(7)等从天然得到的低聚茋类化合物与以下列各种单体[白藜芦醇(a)、异丹叶大黄素(b)、10-异戊烯基-白藜芦醇(c)、12-异戊烯基-白藜芦醇(d)]为原料，通过氧化剂、紫外光照等用人工的方法，合成成各种不同聚合方式的白藜芦醇低聚茋类衍生物。例如化合物8-13。

本发明的化合物可以从植物中提取或经人工半合成获得。

本发明还涉及大子买麻藤乙素(gnetumontanin B，1)和顺式葡萄藤戊素(cis-ε-viniferin，2)的制备方法，包括如下步骤：

(1)大子买麻藤(Gnetum montanum f.megalocarpum)的植株，包括根、茎、叶，优选是大子买麻藤的茎，磨粉后以极性有机溶剂提取，优选是低级醇或醇水混合物，低级醇包括甲醇，乙醇，丙醇，更优选是95％酒精水溶液，提取的温度是从室温到提取溶剂回流的温度，优选是在溶剂回流的状态下，提取的次数是1-6次，优选是3-5次，更优选是4次。

(2)提取后减压蒸馏除溶剂，所得粗浸膏再进行索氏提取，分别以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇洗脱。

(3)乙酸乙酯部分进一步经硅胶柱层析，优选使用140-180目的硅胶，再用氯仿-甲醇梯度洗脱(30∶1，20∶1，15∶1，12∶1，10∶1，9∶1，8∶1，6∶1，5∶1，4∶1)，分成A-H共八个部分。

(4)H部分44g经硅胶柱层析，优选使用140-180目的硅胶，用环己烷-丙酮梯度洗脱(1∶1，1∶1.5，1∶2，1∶2.5，1∶3，1∶4)分成六部分(H1-H6)。

(5)H4部分经中压柱层析，甲醇-水(3.5∶6.5)洗脱得到大子买麻藤乙素。

(6)H2部分经中压柱层析，甲醇-水(4∶6)洗脱得到顺式葡萄藤戊素。

本发明的化合物可以用白藜芦醇类似物单体聚合制备而成。聚合是使用的氧化剂选自FeCl₃、K₃Fe(CN)₆、H₂O₂、H₂O₂/辣椒酶；或使用紫外光照。

本发明的全甲醚化合物可以用白藜芦醇低聚茋类化合物在无水碳酸钾存在的条件下和硫酸二甲酯反应制得。

本发明涉及顺式葡萄藤戊素和6b，14b-去氢双白藜芦醇的制备方法，包括如下步骤：

(1)取白藜芦醇溶于甲醇，在搅拌情况下逐步滴入FeCl₃水溶液，室温搅拌48小时后蒸去甲醇并以适量水稀释，乙酸乙脂提取，提取液合并，减压浓缩，该浓缩物经硅胶柱层析，以环己烷/丙酮(3∶1-2∶1)混合溶剂洗脱得葡萄藤戊素(ε-viniferin)；

(2)上述葡萄藤戊素(ε-viniferin)置入石英园底瓶中，加入无水乙醇，紫外光(254nm，200w)照射2.5小时，反应停止后蒸去乙醇，残留物以Rp-18反相低压柱层析；

(3)以甲醇/水(4∶6-6∶5)洗脱，得顺式葡萄藤戊素；

(4)以甲醇/水(4∶6-6∶5)洗脱，得6b，14b-去氢双白藜芦醇。

本发明涉及双异丹叶大黄丙素、三聚异丹叶大黄甲素和四聚异丹叶大黄甲素的制备方法，包括如下步骤

(1)异丹叶大黄素和FeCl₃·6H₂O反应，反应水液以乙酸乙脂提取至无色，合并提取液，干燥，减压浓缩至干，得总反应物；

(2)上述反应物，溶于少量乙醇，并与硅胶H(10-40um)拌和待干后，填装于硅胶柱顶进行柱层析，以氯仿-甲醇-正己烷-水(7.5∶1.1∶1.0∶0.08)洗脱、收集、合并为I-IX部分；

(3)VIII部分以反相Rp-18低压柱层析，以甲醇-水(65∶35)流动相洗脱，收集1-16分，第13-14分合并，浓缩后得双异丹叶大黄丙素；

(4)VI部分，以反相Rp-18低压柱层析，以甲醇-水(155∶145)流动相洗脱，收集洗脱液浓缩后得三聚异丹叶大黄甲素；

(5)IX部分，先以硅胶柱层析，以氯仿-乙酸乙脂-丙酮-醋酸(600∶150∶300∶75∶2.5)混合溶剂洗脱，收集22份，第4份浓缩后得四聚异丹叶大黄甲素。

本发明涉及异戊烯基白藜芦醇甲素的制备方法，是12-异戊烯基白藜芦醇和FeCl₃·6H₂O反应，再经分离纯化制得。

本发明涉及异戊烯基白藜芦醇乙素的制备方法，是10-异戊烯基白藜芦醇和FeCl₃·6H₂O反应，再经分离纯化制得。

本发明涉及异-二聚茋甲素及异-三聚茋甲素的制备方法，白藜芦醇和异丹叶大黄素和FeCl3·6H2O反应再分离纯化制得。

本发明涉及7，8-脱氢-全甲醚射干乙素的制备方法，全甲醚射干乙素用2，5-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)脱氢制得。

根据本发明还涉及含有作为活性成份的本发明的提取物或化合物和常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1-95重量％的本发明提取物或化合物。

本发明化合物的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明的提取物或化合物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。

本发明提取物或化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等，优选口服。

本发明提取物或化合物或含有它的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射和皮内注射等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。

本发明提取物或化合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。其它载体如聚丙烯酸树脂类、脂质体，水溶性载体如PEG4000和PEG6000、PVP等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

例如为了将给药单元制成胶囊，将有效成分本发明提取物或化合物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。

例如，将本发明提取物或化合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。

本发明提取物或化合物、药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明化合物组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。本发明化合物的每天的合适剂量范围本发明的提取物或化合物的用量为0.001-150mg/Kg体重，优选为0.01-100mg/Kg体重，更优选为0.01-60mg/Kg体重，最优选为0.1-10mg/Kg体重。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药这受限于给药医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。

本发明对植物中含量少活性强的微量成分用人工仿生半合成的方法，制备该类化合物，从而获得足量的化合物供药用。

白藜芦醇类单体在植物中分布较广，含量较高。本发明可以充分利用天然资源，首先从天然界中分离得到白藜芦醇类单体，然后以人工半合成的方法获得白藜芦醇低聚茋类化合物。通过实践，这种从富含二苯乙烯植物中提取单体，然后进一步仿生聚合生成活性更强、药理作用更广的低聚茋及其衍生物的设想是可行的并获得成功，也为本专利的主要发明成果，而国外从事这类系统的合成或半合成研究工作很少。

肿瘤坏死因子α(TNFα)主要由单核巨噬细胞分泌，在炎症中起重要作用，为诱发皮肤炎症反应、引起过敏变态反应等慢性炎性疾病，为类风湿性关节炎与TNFα关系密切。本发明的化合物对小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子生成抑制作用。

具体实施方式

实施例1.大子买麻藤有效部位群提取物的制备：

大子买麻藤(Gnetum Montanum f.megalocarpum)茎10kg粉碎后分别用5倍量、4倍量、4倍量，95％乙醇回流2小时，提取3次，提取液减压浓缩，得粗浸膏874克。粗提物分别用3倍量石油醚回流脱脂2次，每次1小时，脱脂后的浸膏用3倍量丙酮回流提取4次，每次各1小时。浓缩丙酮溶部分，按1∶2的倍数，30～60目聚酰胺拌样，1∶5装柱，用30％-80％乙醇充分洗脱。收集30％-80％乙醇部分浓缩，为大子买麻藤有效部分提取物44.2g。

实施例2.大子买麻藤乙素(gnetumontanin B，1)的制备：

大子买麻藤(Gnetum montanum f.megalocarpum)茎(10Kg)，磨粉后以95％酒精回流提取四次，减压蒸馏除溶剂，所得粗浸膏(870g)索氏提取，分别以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇洗脱。乙酸乙酯部分(200g)进一步经硅胶柱层析(140-180目)，氯仿-甲醇梯度洗脱(30∶1，20∶1，15∶1，12∶1，10∶1，9∶1，8∶1，6∶1，5∶1，4∶1)，分成A-H共八个部分。H部分(44g)经硅胶柱层析(140-180目)，环己烷-丙酮梯度洗脱(1∶1，1∶1.5，1∶2，1∶2.5，1∶3，1∶4)分成六部分(H₁-H₆)。H₄部分(0.2g)经中压柱层析，甲醇-水(3.5∶6.5)洗脱得到化合物1(31mg)。

化合物1为浅黄色无定型粉末，[α]²² _D：-16.0°(c0.10，MeOH)；UV(MeOH)：λ_max(logε)＝206(4.90)，285(4.21)，310(4.19)nm；IR(KBr)：ν_max＝3329，1604，1514，1456，1338，1263，1159，1005，978，835cm^-1；FABMS m/z＝712[M]⁺，HR-ESIMS：m/z＝713.2005[M+H]⁺(calcd.for C₄₂H₃₃O₁₁，713.2017)；¹H(300MHz)和¹³C(75MHz)NMR数据，见表-2。

表-2化合物1的¹H-NMR和¹³C-NMR数据^a

No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C

1a 120.5 1b 115.2 1c 129.9

2a 155.6 2b 160.1 2c 7.48d(8.7) 128.7

3a 6.48d(2.1) 103.3 3b 116.4 3c 6.89d(8.7) 116.3

4a 158.6 4b 155.6 4c 158.1

6.36dd

5a (8.1，2.1) 107.3 5b 6.42d(8.1) 109.2 5c 6.89d(8.7) 116.3

6a 6.99d(8.1) 127.5 6b 7.13d(8.1) 128.6 6c 7.48d(8.7) 128.7

7a 5.80d(2.7) 89.8 7b 5.74d(5.4) 89.8 7c 7.13d(6.5) 129.0

8a 4.44d(2.7) 54.6 8b 4.78d(5.4) 54.2 8c 7.00d(6.5) 126.8

9a 146.9 9b 146.2 9c 141.0

10a 6.34d(2.4) 107.0 10b 6.30d(2.1) 106.9 10c 6.63d(1.2) 107.9

11a 159.2 11b 159.3 11c 155.3

12a 6.26t(2.4) 101.6 12b 6.25t(2.1) 101.8 12c 115.5

13a 159.2 13b 159.3 13c 163.2

14a 6.34d(2.4) 107.0 14b 6.30d(2.1) 106.9 14c 6.75d(1.2) 99.2

a所得¹H-和¹³C-NMR数据分别为300MHz和75MHz，氘代丙酮为溶剂测定。

实施例3.双氧化白藜芦醇甲素(bis-oxyresveratrol，7)的制备：

大子买麻藤(Gnetum montanum f.megalocarpum)茎(10Kg)，磨粉后以95％酒精回流提取四次，减压蒸馏除溶剂，所得粗浸膏(870g)索氏提取，分别以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇洗脱。乙酸乙酯部分(200g)进一步经硅胶柱层析(140-180目)，氯仿-甲醇梯度洗脱(30∶1，20∶1，15∶1，12∶1，10∶1，9∶1，8∶1，6∶1，5∶1，4∶1)，分成A-H共八个部分。H部分(44g)经硅胶柱层析(140-180目)，环己烷-丙酮梯度洗脱(1∶1，1∶1.5，1∶2，1∶2.5，1∶3，1∶4)分成六部分(H₁-H₆)。H₂部分(0.23g)经中压柱层析，甲醇-水(4∶6)洗脱得到化合物7(45mg)。

化合物7为浅黄色无定型粉末；[α]²² _D：+17.0°(c0.10，MeOH)；UV(MeOH)：λ_max(logε)＝206(4.77)，283(413)，324(4.03)nm；IR(KBr)：ν_max＝3313，1614，1516，1456，1306，1157，1099，1066，999，974，835cm^-1；FABMS m/z 486[M]⁺；HR-FABMS m/z 487.1394[M+H]⁺(calcd.for C₂₈H₂₃O₈，487.1393)；¹H(300MHz)和¹³C(75MHz)NMR数据，参见表-3。

表-3化合物7的¹H-和¹³C-NMR数据

No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C

1a 120.9 1b 117.5

2a 156.2 2b 157.1

3a 6.50brs 103.6 3b 6.50brs 103.7

4a 159.0 4b 159.3

5a 6.33dd(8.4，2.1) 107.4 5b 6.44dd(8.4，2.4) 108.6

6a 7.07d(8.4) 128.0 6b 7.47d(8.4) 128.5

7a 5.78d(3.6) 89.2 7b 7.43d(16.5) 124.5

8a 4.46d(3.6) 54.5 8b 7.03d(16.5) 126.6

9a 147.1 9b 142.0

10a 6.30d(2.4) 107.1 10b 6.61brs 107.7

11a 159.4 11b 155.7

12a 6.24t(2.4) 101.8 12b 115.5

13a 159.4 13b 163.6

14a 6.30d(2.4) 107.1 14b 6.72brs 99.3

所得¹H-和¹³C-NMR数据分别为300MHz和75MHz，氘代丙酮为溶剂测定。

实施例4.顺式葡萄藤戊素(cis-ε-viniferin，2)的制备：

化合物2由人工仿生半合成而得。以白藜芦醇单体为起始原料，在氧化剂FeCl₃作用下得到中间体葡萄藤戊素(ε-viniferin)，然后用紫外灯(200W)照射后，经Rp-18反相柱层析纯化而得，收率：25％。

葡萄藤戊素(ε-viniferin)的合成：取白藜芦醇(从虎杖中制得，纯度95％以上)1.03g(0.0045mol)溶于10ml甲醇，在搅拌情况下逐步滴入FeCl₃(0.0046mol)水溶液10ml，室温搅拌48小时后蒸去甲醇并以适量水稀释，乙酸乙脂提取，提取液合并，减压浓缩，该浓缩物经硅胶(硅胶H，140-180目)柱层析，以环己烷/丙酮(3∶1-2∶1)混合溶剂洗脱得葡萄藤戊素(ε-viniferin)(310mg)，收率：30.2％。

化合物2的合成：取上述葡萄藤戊素(ε-viniferin)100mg(0.044mol)，置入50ml石英园底瓶中，加入无水乙醇20ml，紫外光(254nm，200w)照射2.5小时，反应停止后蒸去乙醇，残留物以Rp-18反相低压柱层析，以甲醇/水(4∶6-6∶5)洗脱，得化合物2(25mg)，收率：25％。

化合物2为棕黑色无定型粉末；FABMS m/z：454(M⁺)，C₂₈H₂₂O₆；UVλ_max ^EtOH(nm)：276(3.22)，225(sh)(3.76)；IR(KBr)ν(cm^-1)：3346，2924，2854，1697，1608，1514，1444，1338，1238，1120，999，833。¹HNMR，¹³C NMR见表-4。

表-4化合物2的¹H-NMR和¹³C-NMR数据

No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C

1a 136.4 11a 158.9 7b 6.24d(12.3) 130.5

2a 7.05d(8.7) 127.6 12a 6.20t(2.1) 101.1 8b 6.02d(12.3) 125.4

3a 6.80d(8.7) 115.1 13a 158.9 9b 132.9

4a 157.5 14a 6.03d(2.) 106.1 10b 119.3

5a 6.80d(8.7) 115.1 1b 128.7 11b 161.8

6a 7.05d(8.7) 127.6 2b 7.01d(8.7) 130.3 12b 6.28brs 95.9

7a 5.27d(5.7) 93.5 3b 6.66d(8.7) 115.4 13b 158.7

8a 3.98d(5.7) 56.3 4b 157.0 14b 6.28brs 107.7

9a 146.4 5b 6.66d(8.7) 115.4

10a 6.03d(2.1) 106.1 6b 7.01d(8.7) 130.3

实施例5.6b，14b-去氢双白藜芦醇(6b，14b-dehydro-bis-resveratrol，8)的制备：

取实施3中的中间体葡萄藤戊素(ε-viniferin)100mg(0.044mol)，置入50ml石英园底瓶中，加入无水乙醇20ml，紫外光(254nm，200W照射3.5小时，反应停止后蒸去乙醇，残留物以Rp-18反相低压柱层析以甲醇/水(4∶6-6∶5)洗脱，得化合物8(25mg)，收率：25％。

化合物8为棕色无定形粉末，FABMS m/z：452(M+)，C₂₈H₂₀O₆；UVλ_max ^EtOH(nm)：265(4.21)，347(3.54)，360(3.50)，381(3.58)；IR(KBr)ν(cm^-1)：3350，2932，2860，1697，1608，1516，1445，1340，1234，1125。¹HNMR，¹³CNMR见表-5。

表-5化合物8的¹H-NMR和¹³C-NMR数据

No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C

1a 133.6s 1b 132.3s

2a 6.88d(7.8) 127.7d 2b 133.7s

3a 6.48d(7.8) 115.8d 3b 8.85d(3.0) 112.8d

4a 159.3s 4b 159.1s

5a 6.48d(7.8) 115.8d 5b 6.70dd(8.7，3.0) 115.2d

6a 6.88d(7.8) 127.7d 6b 7.27d(8.7) 130.0d

7a 5.12d(6.0) 94.2d 7b 7.12d(8.7) 128.9d

8a 4.34d(6.0) 57.4d 8b 6.72d(8.7) 120.4d

9a 147.8s 9b 125.6s

10a 5.79d(2.1) 106.5d 10b 114.4s

11a 159.5s 11b 156.9s

12a 5.86t(2.1) 101.8d 12b 6.46s 97.1d

13a 159.5s 13b 158.0s

14a 5.79d(2.1) 106.5d 14b 114.6s

OH 9.33(brs，OH)， 8.15(brs，OH)， 8.06(brs，OH)，7.78(brs，2×OH)

所得¹H-和¹³C-NMR数据分别为500MHz和125MHz，氘代丙酮为溶剂测定。

实施例6.双异丹叶大黄丙素(bis-isorhapontigenin C，9)的制备：

取异丹叶大黄素(从大叶买麻藤中制得，纯度95％以上)5.0g(0.015mol)溶于丙酮20ml，在冰浴中逐滴加入1.1％FeCl₃·6H2O(4g，0.015mol)水液30ml，在搅拌情况下通入氮气，室温反应36小时。低温蒸去丙酮，水液以乙酸乙脂提取至无色，合并提取液，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得总反应物5.0g。

取上述反应物5.0g，溶于少量乙醇，并与硅胶H(10-40um)拌和待干后，填装于硅胶柱顶进行柱层析，以氯仿-甲醇-正己烷-水(7.5∶1.1∶1.0∶0.08)洗脱、收集、合并为I-IX部分。

取部分VIII以反相Rp-18低压柱层析，以甲醇-水(65∶35)流动相洗脱，收集1-16分，第13-14分合并，浓缩后得化合物9(27mg)。

化合物9为浅黄色无定型粉末，UVλ_max ^EtOH(nm)(logε)：285(4.10)，335(sh)(4.14)；IR(KBr)ν_max cm^-1：3418，1604，1515，1451，1273，1158，960，870；EI-MS(m/z)：514(M⁺)；元素分析：C₃₀H₂₆O₈，计算值：C60.67％，H5.26％)，实测值：C67.28％，H4.62％；¹H NMR和¹³C NMR见表-6。

表-6化合物9的¹H-NMR和¹³C-NMR数据(δin ppm and Jin Hz)^*

No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C

1a 134.1 1b 130.3

2a 6.55d(1.6) 108.6 2b 6.79-6.81m 115.8

3a 147.5 3b 147.4

4a 148.4 4b 148.5

5a 6.56d(8.2) 115.5 5b 6.79-6.81m 115.8

6a 6.49dd(1.6，8.2) 121.5 6b 6.79-6.81m 119.2

7a 4.55d(5.6) 58.0 7b 6.57，d，(16.6) 134.0

8a 5.40d(5.6) 94.2 8b 5.54，d，(16.6) 122.0

9a 146.9 9b 133.1

10a 6.17d(2.1) 106.8 10b 119.8

11a 159.7 11b 162.5

12a 6.04，t(2.1) 101.7 12b 6.54，brs 91.2

13a 159.7 13b 159.7

14a 6.17，d(2.1) 106.8 14b 6.97，brs 110.3

OCH₃ 3.80s 56.0 OCH₃ 3.69s 56.2

实施例7.三聚异丹叶大黄甲素，(tri-isorhapontigenin A，10)的制备：

取上述实施5中部分VI，以反相Rp-18低压柱层析，以甲醇-水(155∶145)流动相洗脱，收集洗脱液浓缩后得化合物10(17mg)。

化合物10为浅黄色无定型粉末，UVλ_max ^EtOH(nm)：285，330；IR(KBr)ν_max cm^-1：3419，1603，1516，1275，1123，960，870；EI-MS(m/z)：770(M⁺)，C₄₅H₃₈O₁₂；¹H NMR和¹³C NMR见表-7。

表-7化合物10的¹H-NMR和¹³C-NMR数据(δin ppm and Jin Hz)

No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C

1a 131.5 1b 141.9 1c 127.9

2a 6.71d(1.5) 110.1 2b 6.43d(1.8) 110.1 2c 6.92d(1.8) 110.4

3a 147.6 3b 147.6 3c 147.6

4a 147.4 4b 146.7 4c 146.7

5a 6.45d(8.3) 115.2 5b 6.59d(8.3) 115.4 5c 6.59d(8.3) 115.7

6a 6.55-6.58m 117.8 6b 6.64dd(1.8，8.3) 117.8 6c 6.55-6.58m 119.3

7a 5.24d(6.0) 93.3 7b 5.13brs 90.8 7c 6.83d16.3 130.4

8a 4.52d(6.0) 55.0 8b 4.24brs 55.2 8c 5.56d16.3 121.1

9a 145.6 9b 131.7 9c 134.2

10a 6.00brs 105.3 10b 117.1 10c 120.2

11a 158.9 11b 160.3 11c 160.5

12a 5.91t(2.1) 101.2 12b 6.15d(2.1) 95.3 12c 6.53brs 96.5

13a 158.9 13b 159.0 13c 147.4

14a 6.00brs 105.3 14b 5.93d2.1 106.5 14c 6.27brs 103.5

OCH₃ 3.56s 55.5 OCH₃ 3.59s 55.5 OCH3 3.54s 55.3

实施例8.四聚异丹叶大黄甲素(tetra-isorhapontigenin A，11)的制备：

取上述实施5中部分IX，先以硅胶柱层析，以氯仿-乙酸乙脂-丙酮-醋酸(600∶150∶300∶75∶2.5)混合溶剂洗脱，收集22份，第4份浓缩后得化合物11(18mg)。

化合物11为棕色无定型粉末，UVλ_max ^EtOH(nm)(logε)：280(4.47)，310(sh)(4.17)，IRν_max(KBr)cm^-1：3398.4，1602.8，1514.0，1463.9，1272.9，1153.4，1029.9，840.9；FTMS(M⁺+H+K)m/z：1068；¹HNMR和¹³C NMR见表-8.

表-8化合物11的¹H-NMR和¹³C-NMR数据(δin ppm and Jin Hz)

No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C

1a 137.9 1c 130.7

2a 6.57d(2.0) 111.9 2c 6.45d(2.0) 109.7

3a 145.4 3c 146.8

4a 147.8 4c 145.2

5a 5.70d(8.0) 115.0 5c 6.70d(8.0) 115.5

6a 6.34dd(8.0，2.0) 119.8 6c 6.49dd(8.0，2.0) 120.0

7a 4.22brs 56.7 7c 6.08d(16.5) 133.7

8a 3.02brs 59.9 8c 6.04d(16.5) 126.6

9a 9c 133.7

10a 6.03m 105.4 10c 119.6

11a 159 11c 160.2

12a 6.16t(2.0) 100.9 12c 6.37 97.5

13a 159 13c

14a 6.03m 105.4 14c 122.9

1b 135.8 1d 133.7

2b 6.68brs 114.7 2d 6.94d(2.0) 110.3

3h 3d 144.6

4b 4d 147.7

5b 6.52d(8.0) 114.5 5d 6.80d(8.0) 115.5

6b 6.73d(8.0) 123.2 6d 6.75d(8.0) 119.7

7b 4.18d(12.5) 53.6 7d 5.22d(8.0) 94.2

8b 4.63d(12.5) 54.8 8d 4.40d(8.0) 58.4

9b 9d 146.4

10b 123.6 10d 6.03m 106.9

11b 155.2 11d 159

12b 6.39brs 102.6 12d 6.09t(2.0) 101.3

13b 157.1 13d 159

14b 5.89brs 106.0 14d 6.03m 106.9

3a-OCH₃ 3.56s 55.8 3c-OCH₃ 3.73s 55.9

3b-OCH₃ 3.48s 55.5 3d-OCH₃ 3.77s 56.2

实施例9.异戊烯基白藜芦醇甲素(bis-isopreprol-resveratrol A，12)的制备：

中间体12-异戊烯基白藜芦醇(6)的合成：

白藜芦醇(从虎杖中得到，纯度＞95％)15.3g(0.067mol)，溶于300ml无水乙醇，冰浴搅拌下，加入KOH3.76g(0.067mol，溶于100ml无水乙醇)溶液，继续搅拌2小时后，缓慢滴加溴代异戊烯9.65g(0.065mol)(约30分钟加完)。室温继续搅拌7小时，保持反应液PH7～8。反应完后，将反应液倒入冰水中，盐酸调PH值约为3。乙酸乙酯充分萃取，合并，减压浓缩，得16g反应物。该反应物经硅胶(200～300目)柱层析，环己烷-乙酸乙酯(8∶1，7∶1，6∶1，5∶1梯度洗脱)，再经硅胶(200～300目)柱层析环己烷-丙酮(9∶1)洗脱，得化合物6(81mg)，收率：0.41％。

化合物6为浅黄色粉末，EI-MS m/z 296，符合分子式C₁₉H₂₀O₃，¹H-NMR数据见表-9。

表-9化合物6的¹H-NMR数据

No. ¹H No. ¹H

1 11

2 7.37d(8.4) 12

3 6.81d(8.4) 13

4 14 6.58

5 6.81d(8.4) 1′ 3.34d(7.2)

6 7.37d(8.4) 2′ 5.29t(7.2)

7 6.81d(16.8) 3′

8 6.90d(16.8) 4′ 1.75s^*

9 5′ 1.63s^*

10 6.58s

^*数据可以互换

所列¹H-NMR数据为300MHz氘代丙酮为溶剂测定。

化合物12的合成：

取化合物6，74mg(0.25mol)溶于5ml丙酮，冰浴、搅拌，通氮气下缓慢滴加FeCl₃·6H₂O 67.6mg(0.25mol)的5ml水溶液。冰浴下搅拌反应1小时，再继续于室温下搅拌。5天后，停止反应，减压蒸除丙酮，所余水溶液用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯层，无水硫酸钠干燥过夜。过滤，浓缩，得乙酸乙酯萃取物90mg。经硅胶柱层析(200～300目)，石油醚-丙酮(4.5∶1，4∶1，3∶1，2.5∶1，2∶1，1.5∶1，1∶1)梯度洗脱。分得化合物12(2.5mg)，收率：3.4％(从6到12的收率)。

化合物12为黄绿色粉末，FAB-MS m/z 590，符合分子式C₃₈H₃₈O₆，¹H-和¹³C-NMR数据见表-10。

表-10化合物12的¹H-和¹³C-NMR数据

No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C

1a 135.4 1b 130.2

2a 7.26d(8.7) 128.0 2b 7.21d(8.1) 127.2

3a 6.85d(8.7) 114.5 3b 6.78d(8.1) 114.3

4a 158.2 4b 158.5

5a 6.85d(8.7) 114.5 5b 6.78d(8.1) 114.3

6a 7.26d(8.7) 128.0 6b 7.21d(8.1) 127.2

7a 5.52d(5.7) 93.0 7b 6.76d(16.5) 129.6

8a 4.61d(5.7) 56.5 8b 6.98d(16.5) 133.2

9a 145.5 9b 130.1

10a 6.59s 106.3 10b 119.8

11a 159.3 11b 161.5

12a 115.6 12b 117.3

13a 159.3 13b 159.1

14a 6.59s 106.3 14b 6.73s 9805

1′ 3.34d(6.9) 24.5 1″ 3.36d(6.6) 25.1

2′ 5.20t(6.9) 124.6 2″ 5.29d(6.6) 124.2

3′ 128.2 3″ 128.0

4′ 1.78s 17.4 4″ 1.60s 17.6

5′ 1.78s 25.2 5″ 1.60s 25.0

实施例10.异戊烯基白藜芦醇乙素(bis-isopreprol-resveratrol B，13)的制备：

中间体10-双异戊烯基白藜芦醇(5)的合成：

白藜芦醇15.3g(0.067mol)，溶于300ml无水乙醇，冰浴搅拌下，加入3.76g KOH(0.067mol)(溶于100ml无水乙醇)溶液，继续搅拌2小时后，缓慢滴加9.65g(0.065mol)溴代异戊烯(约30分钟加完)。室温继续搅拌7小时，保持反应液PH7～8。反应完后，将反应液倒入冰水中，盐酸调PH值约为3。乙酸乙酯充分萃取，合并，减压浓缩，得16g反应物。该反应物经硅胶(200～300目)柱层析，环己烷-乙酸乙酯(8∶1，7∶1，6∶1，5∶1梯度洗脱)，再经硅胶(200～300目)柱层析环己烷-乙酸乙酯(3∶1)洗脱，得化合物5(1.8g)，收率：9.06％。

化合物5为无色粉末，FAB-MS m/z 297[M+H]⁺，符合分子式C₁₉H₂₀O₃，¹H-和¹³C-NMR数据见表-11。

表-11化合物5的¹H-和¹³C-NMR数据

No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C

1 129.7 11 156.1

2 7.40d(8.7) 128.0 12 6.35d(2.1) 101.9

3 6.84d(8.7) 115.8 13 156.2

4 157.4 14 6.64d(2.1) 103.6

5 6.84d(8.7) 115.8 1′ 3.42d(6.9) 24.3

6 7.40d(8.7) 128.0 2′ 5.13t(6.9) 124.7

7 6.88d(16.2) 129.5 3′ 128.0

8 7.20d(16.2) 124.2 4′ 1.79s^* 17.4

9 138.6 5′ 1.63s^* 25.2

10 117.7

^*数据可以互换

化合物13的合成

取化合物13，1.006g(0.0034mol)溶于85ml丙酮，冰浴、搅拌，通氮气下缓慢滴加FeCl₃·6H₂O，919mg(0.0034mol)的45ml水溶液。冰浴下搅拌反应1小时，再继续于室温下搅拌。5天后，停止反应，减压蒸除丙酮，所余水溶液用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯层，无水硫酸钠干燥过夜。过滤，浓缩，得乙酸乙酯萃取物1.3g。经硅胶柱层析(200～300目)，石油醚-丙酮(4.5∶1，4∶1，3∶1，2.5∶1，2∶1，1.5∶1，1∶1)梯度洗脱。分得化合物13(132mg)，收率：0.13％。

化合物13为浅黄色粉末，FAB-MS m/z 590，符合分子式C₃₈H₃₈O₆，¹H-和¹³C-NMR数据见表-12。

表-12化合物13的¹H-和¹³C-NMR数据

No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C

1a 135.2 1b 129.9

2a 7.24d(8.4) 128.1 2b 7.21d(8.7) 127.1

3a 6.82d(8.4) 115.2 3b 6.79d(8.7) 114.8

4a 158.3 4b 159.0

5a 6.82d(8.4) 115.2 5b 6.79d(8.7) 114.8

6a 7.24d(8.4) 128.1 6b 7.21d(8.7) 127.1

7a 5.54d(5.7) 93.2 7b 6.79d(16.2) 129.8

8a 4.57d(5.7) 56.8 8b 7.01d(16.2) 132.1

9a 144.9 9b 138.6

10a 118.1 10b 119.8

11a 156.1 11b 160.7

12a 6.30d(2.1) 101.8 12b 6.42s 99.8

13a 157.0 13b 156.5

14a 6.61d(2.1) 103.4 14b 117.5

1′ 3.31d(6.0) 25.1 1″ 3.45d(5.7) 24.6

2′ 5.23t(6.0) 125.6 2″ 5.11t(5.7) 124.8

3′ 127.8 3″ 128.0

4′ 1.80s 17.0 4″ 1.67s 17.5

5′ 1.80s 25.1 5″ 1.67s 25.3

实施例11.异-二聚茋甲素(14)及异-三聚茋甲素(15)的制备：取白藜芦醇(从虎杖中提取，纯度＞95％)9.12g(0.04mol)和异丹叶大黄素(从大子买麻藤中提取，纯度＞95％)5.16g(0.02mol)于250ml圆底瓶，加80ml丙酮溶解，电磁搅拌下滴加32.4g的FeCl₃·6H₂O(0.12mol，溶于30ml水)，电磁搅拌反应48小时。减压蒸去丙酮，以EtOAc/H₂O(乙酸乙酯/水)萃取5次，乙酸乙酯层合并，浓缩，得深褐色粗膏17.7g。所得粗膏经硅胶(140～180目)柱层析，环己烷-丙酮(3∶1，2.5∶1)洗脱，得：化合物14(720mg)，收率：5.04％；化合物15(217mg)，收率：1.52％。

化合物14为浅绿色无定型粉末，FAB-MS m/z 485[M+H]⁺，符合分子式C₂₉H₂₄O₇；化合物15为灰绿色无定型粉末，FAB-MS m/z 741[M+H]⁺，符合分子式C₄₄H₃₆O₁₁。化合物14和化合物15的¹H和¹³C-NMR数据见表-13。

表-13化合物14和化合物15的¹H和¹³C-NMR数据

14 15 15

No. No.

¹H ¹³C ¹H ¹³C ¹H ¹³C

1a 129.0 128.6 1c 133.5

2a 7.13d(8.7) 128.1 7.09d(8.4) 128.0 2c 6.87d(1.5) 109.3

3a 6.72d(8.7) 115.7 6.69d(8.4) 115.9 3c 146.3

4a 157.9 157.7 4c 147.7

5a 6.72d(8.7) 115.7 6.69d(8.4) 115.9 5c 6.82brs 115.4

6a 7.13d(8.7) 128.1 7.09(8.4) 128.0 6c 6.82d(1.5) 118.2

7a 6.89d(16.5) 129.4 6.88d(15.9) 130.4 7c 5.38d(5.4) 93.9

8a 6.67d(16.5) 122.6 6.61d(15.9) 122.1 8c 4.64d(5.4) 56.7

9a 135.7 135.1 9c 146.9

10a 119.1 120.9 10c 6.12d(2.1) 106.2

11a 161.8 161.3 11c 159.4

12a 6.33d(2.1) 96.1 6.28d(1.8) 96.5 12c 6.11t(2.1) 101.7

13a 159.0 158.9 13c 159.4

14a 6.73d(2.1) 103.5 6.64d(1.8) 103.7 14c 6.12d(2.1) 106.2

1b 133.4 132.9

2b 6.97brs 109.6 6.53d(1.8) 109.7

3b 147.8 146.7

4b 146.9 146.6

5b 6.8d(1.2) 115.1 6.53d(8.4) 114.9

6b 6.8d(1.2) 118.8 6.06dd(8.4，1.8) 118.7

1.8)

7b 5.41d(5.7) 93.4 5.16d(1.8) 92.0

8b 4.49d(5.7) 56.5 4.43d(1.8) 49.7

9b 146.7 142.8

10b 6.25s 106.3 118.2

11b 159.2 161.7

12b 6.25s 101.3 6.30d(1.8) 95.7

13b 159.2 159.5

14b 6.25s 106.3 6.05d(1.8) 107.0

OCH₃ 55.6 55.6

55.4

实施例12.白藜芦醇低聚茋类全甲醚化物(permethoxy-resveratrol，17，18)的制备：

射干素B(大子买麻藤中提得，纯度＞95％)140mg(0.27mmol)，溶于25ml无水丙酮，搅拌下加入无水碳酸钾(K₂CO₃)1.5g(0.011mol)。再缓慢滴加硫酸二甲酯(Me₂SO₄)200mg(1.58mmol)液体，水浴加热回流，反应4小时。反应液冷却后，滤除K₂CO₃，浓缩至小体积，搅拌下倾入140ml水中，充分沉淀后，抽滤悬浮液，得化合物17(116mg)，收率：72.93％。

化合物17，浅黄色无定型粉末，FAB-MS m/z 584，符合分子式C₃₅H₃₆O₈，¹H-NMR中：δ5.55(1H，d，J＝9.0Hz，H-7b)，4.54(1H，d，J＝9.0Hz，H-8b)；6.34～7.26(13H，m，芳氢和烯氢)；3.74(2×OCH₃)，3.81(2×OCH₃)，3.85(1×OCH₃)，3.88(1×OCH₃)，3.99(1×OCH₃)。

取(E)-ε-verniferin 100mg(0.22mmol)和无水碳酸钾1.5g(0.11mol)，溶于20ml无水丙酮，电磁搅拌下向此悬浮液中滴加硫酸二甲酯(Me₂SO₄)138mg(1.095mmol)，室温搅拌6小时后，滤除K₂CO₃，浓缩至干，浓缩物经硅胶柱层析得化合物18(64mg)，收率：55.45％。

化合物18，FAB-MS：523(M⁺-1)，分子式C₃₃H₃₂O₆。UVλ_max ^EtOH(nm)，321(4.23)，225(sh)，4.56；IR(KBr)ν(cm^-1)：2929，1606，1580，1512，1462，1304，1248，1132，1034，960，829；其¹H-和¹³C-NMR数据见表-14。

表-14化合物18的¹H-和¹³C-NMR数据

No. ¹H ¹³C No. ¹H ¹³C

1a 135.5 1b 130.2

2a 7.26d(8.7) 128.0 2b 7.21d(8.7) 127.2

3a 6.85d(8.7) 114.2 3b 6.77d(8.7) 114.1

4a 159.9 4b 159.9

5a 6.85d(8.7) 114.2 5b 6.77d(8.7) 114.1

6a 7.26d(8.7) 128.0 6b 7.21d(8.7) 127.2

7a 5.52d(6.0) 93.0 7b 6.74d(16.5) 129.6

8a 4.61d(6.0) 56.5 8b 6.95d(16.5) 133.3

9a 146.5 9b 130.2

10a 6.42d(2.1) 106.2 10b 120.4

11a 161.7 11b 161.7

12a 6.33t(2.1) 102.3 12b a6.75d(3.0) 95.1

13a 161.7 13b 161.7

14a 6.42d(2.1) 106.2 14b b6.40d(3.0) 98.6

实施例13.7，8-脱氢-全甲醚射干乙素(7，8-dehydro-permethoxyshegansu B，16)的制备：实施例11中化合物17(97mg，0.166mmol)，溶于10ml无水二氧六环。电磁搅拌下加入2，5-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)66.3mg(0.292mmol)的5ml无水二氧六环溶液，回流反应6小时，蒸除溶剂，CHCl₃/H₂O充分萃取，氯仿层浓缩至干，得化合物16(75mg)，收率：77.59％。

化合物16，为浅黄色无定型粉末，FAB-MS m/z 582，符合分子式C₃₅H₃₄O₈，其¹H-NMR数据见表-15。

表-15化合物16的¹H-和¹³C-NMR数据

No. ¹H No. ¹H

1a 1b

2a 7.19brs 2b 7.20d(1.8)

3a 3b

4a 4b

5a 5b 6.83d(8.4)

6a 7.03brs 6b 7.34dd(8.4，1.8)

7a 6.98d(16.2) 7b

8a 7.14d(16.2) 8b

9a 9b

10a 7.26brs 10b 6.67d(2.4)

11a 11b

12a 6.53t(2.1) 12b 6.39t(2.4)

13a 13b

14a 7.26brs 14b 6.67d(2.4)

OCH₃ 3.72(1×OCH₃)，3.80(2×OCH₃)，3.83(2×OCH₃)，3.90(1×OCH₃)，4.14(1×OCH₃)

实施例14药物组合物的制备

取化合物8-18(任选一种)50g，加入糊精247.5g，硬脂酸镁2.5g，充分拌匀后，按胶囊制备法制成1000粒，填装于250mg胶囊，使每粒含化合物8-18(任选一种)50mg。

实施例15药物组合物的制备

取实施例1的大子买麻藤有效部位群提取物100g，加入糊精147.5g，硬脂酸镁2.5g，充分拌均匀后，按胶囊制备法制成1000粒，填装于250mg胶囊，使每粒含大子买麻藤有效部位群100mg，其总聚茋含量＞50％。

药理实验部份

实验例1

化合物对小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子生成抑制作用。

实验目的：肿瘤坏死因子α(TNFα)主要由单核巨噬细胞分泌，在炎症中起重要作用，为诱发皮肤炎症反应、引起过敏变态反应等慢性炎性疾病，为类风湿性关节炎与TNFα关系密切。研究化合物对TNFα生成抑制作用，将为发现抗炎药物先导化合物和作用机理提供新的途径和实验依据。

实验方法：小鼠腹腔巨噬细胞在ConA刺激下生成TNFα，以L929作为靶细胞，结晶紫法测定TNFα，该法有较好的专一性和较高的灵敏度，以样品对L929细胞杀伤百分率表示样品TNFα含量。

具体方法为：

1.小鼠腹腔巨噬细胞的制备，给药及培养：小鼠(C57BL/6，雄性，6-8周龄)，i.p.3％巯基乙醇酸钠培养液1ml，4d后断头处死，用磷酸缓冲液(PBS)无菌洗出腹腔巨噬细胞，用BPMI-1640培养液洗涤细胞两次，计数，调整细胞浓度为2×10⁶个·ml^-1，加入24孔板，每孔1ml，于37℃，5％CO₂培养箱中培养24小时，用PBS洗去未粘附细胞，每孔再加入含样品的RPMI-1640培养液1ml，或不含样品的阴性对照，培养0.5小时后，分别加入脂多糖(LPS，10mg·ml^-1)，继续培养6小时，收集上清液，用LPS透析12小时，再用RPMI-1640培养液平衡12小时，-20℃冻存备用。

2.L929细胞结晶紫染色法测样品TNFα活性和抑制率，L929细胞长满单层后用0.025％胰酶消化，重悬细胞于含10％NBS的RPMI-1640培养液中，调细胞浓度为3×10⁵个·ml^-1，加入96孔培养板中，每孔100μl，加2μg·ml^-1放射菌素D液100μl，RPMI-1640液或待测样品100μl，37℃，5％CO₂下培养20h，去上清液，每孔加0.5％结晶紫液200μl，染色10min，流水洗去细胞外结晶紫，常温干燥仪加10％SDS100μl，测吸收度A₅₇₀值，以RPMI-1640液孔为对照，细胞毒百分率表示样品所含TNFα活性，抑制百分率表示化合物对小鼠腹腔巨噬细胞产生TNFα的抑制程度，以抑制百分率表示：

数据处理：数据以X±S表示，显著性测定用t检验。

实验结果：

化合物1与2在10^-5mol·L^-1浓度下对ConA刺激的小鼠腹腔巨噬细胞产生的TNFα有明显的抑制作用，抑制率分别为58.1％和51.4％，P值均小于0.01。结果见表-16：

表-16化合物1，2对ConA刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNFα生成抑制作用：

化合物浓度(mol·L^-1) 对TNFα生成抑制率(％)

1 10^-5 58.1

2 10^-5 51.4

Claims

1、大子买麻藤有效部位群提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)粉碎大子买麻藤，用乙醇回流提取，提取液减压浓缩，得粗浸膏；

(2)粗提物分别用石油醚回流脱脂，脱脂后的浸膏用丙酮回流提取，浓缩丙酮溶解部分，聚酰胺拌样，装柱，用30％-80％乙醇充分洗脱，收集30％-80％乙醇部分浓缩，为大子买麻藤有效部分，其中含有大子买麻藤素B。

2、一种权利要求1所述的方法制备的大子买麻藤有效部位提取物。

3、一种白藜芦醇低聚茋类化合物，其特征在于：是通式(I)所示的白藜芦醇类似物单体聚合而成的2-4度的聚合体及其全甲醚、脱氢化合物

其中，

R1选自H、OCH₃，

R2选自H、异戊烯基，

R3选自H、异戊烯基。

4、根据权利要求3的化合物，其特征在于，所述的化合物选自

大子买麻藤素B

顺式葡萄藤戊素

双氧化白藜芦醇甲素

6b，14b-去氢双白藜芦醇

双异丹叶大黄丙素

三聚异丹叶大黄甲素

四聚异丹叶大黄甲素

双异戊烯基白藜芦醇甲素

双异戊烯基白藜芦醇乙素

异-二聚茋甲素

异-三聚茋甲素

7，8-脱氢-全甲醚射干乙素

全甲醚射干乙素

全甲醚葡萄滕戊素。

5、制备权利要求3的化合物的方法，其特征在于，用的白藜芦醇类似物单体聚合制备。

6、根据权利要求5的制备方法，其特征在于，所述的聚合是使用的氧化剂选自FeCl₃、K₃Fe(CN)₆、H₂O₂、H₂O₂/辣椒酶。

7、根据权利要求5的制备方法，其特征在于，所述的聚合是使用紫外光照。

8、根据权利要求3的全甲醚化合物的制备方法，其特征在于，白藜芦醇低聚茋类化合物在无水碳酸钾存在的条件下和硫酸二甲酯反应制得。

9、大子买麻藤乙素和双氧化白藜芦醇甲素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)大子买麻藤酒精回流提取，减压蒸馏除溶剂，所得粗浸膏索氏提取，分别以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇洗脱；

(2)乙酸乙酯部分进一步经硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱(30∶1，20∶1，15∶1，12∶1，10∶1，9∶1，8∶1，6∶1，5∶1，4∶1)，分成A-H共八个部分；

(3)H部分经硅胶柱层析，环己烷-丙酮梯度洗脱(1∶1，1∶1.5，1∶2，1∶2.5，1∶3，1∶4)分成六部分(H₁-H₆)；

(4)H₄部分经中压柱层析，甲醇-水(3.5∶6.5)洗脱得到大子买麻藤乙素；

(5)H₂部分经中压柱层析，甲醇-水(4∶6)洗脱得到双氧化白藜芦醇甲素。

10、顺式葡萄藤戊素和6b，14b-去氢双白藜芦醇的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取白藜芦醇和FeCl₃水溶液反应，乙酸乙脂提取，提取液合并，减压浓缩，该浓缩物经硅胶柱层析，以环己烷/丙酮(3∶1-2∶1)混合溶剂洗脱得葡萄藤戊素；

(2)取上述葡萄藤戊素用紫外光(254nm，200w)照射，蒸去溶剂，残留物以Rp-18反相低压柱层析；

(3)以重量比4∶6-6∶5的甲醇/水洗脱，得顺式葡萄藤戊素；

(4)以重量比4∶6-6∶5的甲醇/水洗脱，得6b，14b-去氢双白藜芦醇。

11、双异丹叶大黄丙素、三聚异丹叶大黄甲素和四聚异丹叶大黄甲素的制备方法，其特征在于：包括如下步骤

(1)异丹叶大黄素和FeCl₃·6H₂O反应，反应水液以乙酸乙脂提取，合并提取液，干燥，减压浓缩至干，得总反应物；

(2)上述反应物，溶于少量乙醇，并与硅胶H(10-40um)拌和待干后，填装于硅胶柱顶进行柱层析，以重量比为的7.5∶1.1∶1.0∶0.08的氯仿-甲醇-正己烷-水洗脱、收集、合并为I-IX部分；

(3)VIII部分以反相Rp-18低压柱层析，以重量比例为65∶35甲醇-水流动相洗脱，收集1-16分，第13-14分合并，浓缩后得双异丹叶大黄丙素；

(4)VI部分，以反相Rp-18低压柱层析，以重量比例为155∶145的甲醇-水流动相洗脱，收集洗脱液浓缩后得三聚异丹叶大黄甲素；

(5)IX部分，先以硅胶柱层析，以其重量比例为600∶150∶300∶75∶2.5的氯仿-乙酸乙脂-丙酮-醋酸混合溶剂洗脱，收集第4份浓缩后得四聚异丹叶大黄甲素。

12、异戊烯基白藜芦醇甲素的制备方法，其特征在于：12-异戊烯基白藜芦醇和FeCl₃·6H₂O反应，再经分离纯化制得。

13、异戊烯基白藜芦醇乙素的制备方法，其特征在于：10-异戊烯基白藜芦醇和FeCl₃·6H₂O反应，再经分离纯化制得。

14、异-二聚茋甲素及异-三聚茋甲素的制备方法，其特征在于：白藜芦醇和异丹叶大黄素和FeCl₃·6H₂O反应再分离纯化制得。

15、7，8-脱氢-全甲醚射干乙素的制备方法，其特征在于：全甲醚射干乙素用2，5-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌脱氢制得。

16、权利要求2的所述的大子买麻藤(Gnetum Montanum f.megalocarpum)有效部位在制备治疗类风湿性关节炎、哮喘、过敏性炎症的药物中的应用。

17、权利要求3的所述的化合物在制备治疗类风湿性关节炎、哮喘、过敏性炎症的药物中的应用。

18、一种药物组合物，其特征在于，含有药物有效剂量的如权利要求3所述的任一化合物，及药用载体。

19、根据权利要求18的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物可以是片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。

20、一种药物组合物，其特征在于，含有药物有效剂量的如权利要求2所述的提取物，及药用载体。