CN110951756A - 表达SARS-CoV-2病毒抗原肽的核酸序列及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了表达SARS‑CoV‑2病毒抗原肽的核酸序列及其应用,核酸序列为SEQ ID NO.:1、SEQ ID NO.:2或其具有至少90%同源性的序列。本发明一些实例的核酸序列,可以在人体细胞中有效表达,产生相应的多肽,诱导产生相应的免疫保护反应,有望开发为SARS‑CoV‑2疫苗。
Description
技术领域
本发明涉及一种优化的冠状病毒S蛋白及其应用,特别涉及表达SARS-CoV-2病毒抗原肽的核酸序列及其应用。
背景技术
SARS-CoV-2病毒会导致2019冠状病毒病(COVID-19),严重情况下,COVID-19会导致人类死亡。新型冠状病毒SARS-CoV-2的潜伏期可长达14天,部分病例潜伏期具有传染性,另有一些病毒携带者没有表现出任何明显症状。SARS-CoV-2较强的传染性和较长的潜伏期。
COVID-19作为一种新型疾病,出现时间短,人们对其认识较为有限。日前尚无有效的治疗药物。做好预防,阻断病毒的传播是控制疫情的关键。接种疫苗作为一种有效消除传染病的不可替代的手段。因此,快速研制出能够提升群体免疫水平并阻断病毒传播的预防疫苗已成为我国当前最为紧迫的重大需求。已公布的十几个SARS-CoV-2病毒基因组比对的结果显示病毒之间的差异非常小,目前还没发现发生变异。因此,如果SARS-CoV-2疫苗研发成功,必将能在很大程度上抑制新疫情的暴发。
SARS-CoV-2的全序列如NC_045512.2所示,该序列的21563..25384核酸为刺突蛋白(Spike protein,S)的编码序列。S蛋白是病毒粒子的一种主要结构蛋白,在介导病毒粒子与宿主细胞受体的结合以及诱导中和抗体中起重要作用,是理想的疫苗抗原。S蛋白含有两个亚基,S1和S2。病毒侵染病毒时,S1与宿主细胞受体ACE2结合后,经宿主细胞蛋白酶切后,S1与S2脱离,加速S2与细胞膜的融合。以S蛋白为抗原的疫苗,包括核酸疫苗,亚单位疫苗和病毒载体疫苗,其S蛋白的表达水平、蛋白结构决定了疫苗的有效性。
实验表明SARS-CoV-2的刺突蛋白S基因在常用的亚单位疫苗表达细胞,如人肾细胞HEK293的表达水平很低。因此如果以原始的S密码子来表达为抗原,其疫苗可能无效或是效价很低,不足以抵抗病毒的感染。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能表达对新型冠状病毒SARS-CoV-2引起免疫原性的多肽的核酸序列及其应用。
本发明所采取的技术方案是:
本发明的第一个方面,提供:
一种能表达对新型冠状病毒SARS-CoV-2引起免疫原性的多肽的核酸序列,所述核酸序列包含以下核酸序列中的至少一条:
a)核酸序列SEQ ID NO:1;或
b)核酸序列SEQ ID NO:2;或
c)与SEQ ID NO:1具有至少90%,优选95%、98%、99%序列相同性的核酸序列。
在一些实例中,所述多肽:
可在人体中诱导免疫应答;或
产生生物报告分子;或
用于检测的分子;或
能调节基因功能;或
成为治疗性分子。
本发明的第二个方面,提供:
一种表达载体,所述的载体含有本发明第一方面的核酸序列。
在一些实例中,所述的载体为病毒载体。
在一些实例中,所述的病毒载体为腺病毒载体。
本发明的第三个方面,提供:
一种表达细胞,所述表达细胞可基于本发明第一方面的核酸序列表达多肽。
本发明的第四个方面,提供:
一种核酸组合物,所述核酸组合物包括本发明第一方面的核酸序列。
在一些实例中,所述核酸组合物还包括药学上可接受的佐剂、载体、稀释剂或赋形剂中的至少一种。
本发明的有益效果是:
本发明一些实例的核酸序列,可以在人体细胞中有效表达,产生相应的多肽,诱导产生相应的免疫保护反应,有望开发为SARS-CoV-2疫苗。
附图说明
图1是分别转染等剂量pVAX-NB1,pVAX-NB2和pVAX-NB4后S蛋白的表达结果;
图2是pVAX-NB1和pVAX-NB2 DNA疫苗免疫小鼠的血清的抗体水平。
具体实施方式
SARS-CoV-2的刺突蛋白(Spike protein,S)的氨基酸序列如YP_009724390.1所示,记为NB1。
真核细胞转录的mRNA前体能够通过不同剪接方式(选择不同的剪接位点组合)产生不同的mRNA剪接异构体的过程,最终导致同一个基因序列产生的不同的蛋白质。这对蛋白的表达是非常不利的。发明人通过对野生型的天然核酸序列进行密码子优化,同时基于自有技术去除潜在的可变剪切位点,保证了蛋白表达的唯一性,减少了蛋白后续纯化的难度。优化得到的核酸序列记为NB2,其具体序列如SEQ ID NO:1所示:
ATGTTCGTGTTTCTGGTGCTGCTGCCTCTGGTGAGCTCCCAGTGCGTGAACCTGACCACAAGGACCCAGCTGCCACCTGCCTATACCAATAGCTTCACACGGGGCGTGTACTATCCCGACAAGGTGTTTAGATCTAGCGTGCTGCACTCCACCCAGGATCTGTTTCTGCCTTTCTTTTCTAACGTGACATGGTTCCACGCCATCCACGTGTCCGGCACCAATGGCACAAAGCGGTTCGACAATCCAGTGCTGCCCTTTAACGATGGCGTGTACTTCGCCTCCACCGAGAAGTCTAACATCATCAGAGGCTGGATCTTTGGCACCACACTGGACAGCAAGACCCAGTCCCTGCTGATCGTGAACAATGCCACAAACGTGGTCATCAAGGTGTGCGAGTTCCAGTTTTGTAATGATCCCTTCCTGGGCGTGTACTATCACAAGAACAATAAGTCTTGGATGGAGAGCGAGTTTAGGGTGTATTCCTCTGCCAACAATTGCACCTTTGAGTACGTGAGCCAGCCTTTCCTGATGGACCTGGAGGGCAAGCAGGGCAATTTCAAGAACCTGAGGGAGTTCGTGTTTAAGAATATCGATGGCTACTTCAAGATCTACTCCAAGCACACACCAATCAACCTGGTGCGCGACCTGCCACAGGGCTTCTCTGCCCTGGAGCCACTGGTGGATCTGCCCATCGGCATCAACATCACCCGGTTTCAGACACTGCTGGCCCTGCACAGAAGCTACCTGACCCCAGGCGACAGCTCCTCTGGATGGACAGCAGGAGCTGCCGCCTACTATGTGGGCTATCTGCAGCCCCGCACCTTCCTGCTGAAGTACAACGAGAATGGCACCATCACAGACGCAGTGGATTGCGCCCTGGACCCCCTGTCTGAGACCAAGTGTACACTGAAGAGCTTTACAGTGGAGAAGGGCATCTACCAGACCAGCAACTTCAGGGTGCAGCCAACAGAGTCCATCGTGCGCTTTCCCAATATCACCAACCTGTGCCCTTTTGGCGAGGTGTTCAATGCCACACGCTTCGCCAGCGTGTACGCCTGGAATAGGAAGCGCATCTCCAACTGCGTGGCCGACTATTCTGTGCTGTACAACAGCGCCTCCTTCTCTACCTTTAAGTGTTATGGCGTGAGCCCCACCAAGCTGAATGATCTGTGCTTTACAAACGTGTACGCCGATTCCTTCGTGATCAGGGGCGACGAGGTGCGCCAGATCGCACCAGGACAGACCGGCAAGATCGCAGACTACAATTATAAGCTGCCTGACGATTTCACAGGCTGCGTGATCGCCTGGAACTCTAACAATCTGGATAGCAAAGTGGGCGGCAACTACAATTATCTGTACCGGCTGTTTAGAAAGTCTAATCTGAAGCCATTCGAGCGGGACATCTCCACCGAGATCTACCAGGCCGGCTCTACACCCTGCAATGGCGTGGAGGGCTTTAACTGTTATTTCCCTCTGCAGTCCTACGGCTTCCAGCCAACCAACGGCGTGGGCTATCAGCCCTACAGAGTGGTGGTGCTGTCTTTTGAGCTGCTGCACGCACCTGCAACCGTGTGCGGCCCAAAGAAGAGCACAAATCTGGTGAAGAACAAGTGCGTGAACTTCAACTTCAACGGACTGACCGGCACAGGCGTGCTGACCGAGAGCAACAAGAAGTTCCTGCCATTTCAGCAGTTCGGCAGGGACATCGCAGATACCACAGACGCCGTGCGCGACCCTCAGACCCTGGAGATCCTGGACATCACACCATGTTCCTTCGGCGGCGTGTCTGTGATCACCCCAGGCACCAATACATCCAACCAGGTGGCCGTGCTGTATCAGGACGTGAATTGCACAGAGGTGCCCGTGGCAATCCACGCAGATCAGCTGACCCCTACATGGCGGGTGTACTCTACCGGCAGCAACGTGTTCCAGACAAGAGCCGGATGCCTGATCGGAGCAGAGCACGTGAACAATAGCTATGAGTGCGACATCCCTATCGGCGCCGGCATCTGTGCCTCCTACCAGACCCAGACAAACTCCCCAAGGAGAGCCCGGTCTGTGGCCAGCCAGTCCATCATCGCCTATACCATGAGCCTGGGCGCCGAGAACAGCGTGGCCTACTCCAACAATTCTATCGCCATCCCTACCAACTTCACAATCAGCGTGACCACAGAGATCCTGCCAGTGAGCATGACCAAGACATCCGTGGACTGCACCATGTATATCTGTGGCGATTCCACAGAGTGTTCTAACCTGCTGCTGCAGTACGGCTCCTTTTGCACCCAGCTGAATAGAGCCCTGACAGGCATCGCCGTGGAGCAGGACAAGAACACCCAGGAGGTGTTCGCCCAGGTGAAGCAGATCTACAAGACACCACCCATCAAGGACTTTGGCGGCTTCAACTTCAGCCAGATCCTGCCCGATCCTAGCAAGCCATCCAAGCGGTCTTTTATCGAGGACCTGCTGTTCAACAAGGTGACCCTGGCCGATGCCGGCTTCATCAAGCAGTATGGCGATTGTCTGGGCGACATCGCCGCCAGAGACCTGATCTGCGCCCAGAAGTTTAATGGCCTGACCGTGCTGCCTCCACTGCTGACAGATGAGATGATCGCACAGTACACCTCTGCCCTGCTGGCCGGCACCATCACAAGCGGATGGACATTCGGCGCAGGAGCCGCCCTGCAGATCCCCTTTGCCATGCAGATGGCCTATCGGTTCAACGGCATCGGCGTGACCCAGAATGTGCTGTACGAGAACCAGAAGCTGATCGCCAATCAGTTTAACAGCGCCATCGGCAAGATCCAGGACTCTCTGAGCTCCACCGCCAGCGCCCTGGGCAAGCTGCAGGATGTGGTGAATCAGAACGCCCAGGCCCTGAATACACTGGTGAAGCAGCTGTCTAGCAACTTCGGCGCCATCTCCTCTGTGCTGAATGACATCCTGAGCCGGCTGGACAAGGTGGAGGCAGAGGTGCAGATCGACCGGCTGATCACCGGCAGACTGCAGTCCCTGCAGACCTACGTGACACAGCAGCTGATCAGGGCAGCAGAGATCAGGGCCTCTGCCAATCTGGCCGCCACAAAGATGAGCGAGTGCGTGCTGGGACAGTCCAAGAGGGTGGACTTTTGCGGCAAGGGCTATCACCTGATGAGCTTCCCACAGTCCGCCCCTCACGGAGTGGTGTTTCTGCACGTGACCTACGTGCCAGCCCAGGAGAAGAACTTCACCACAGCCCCCGCCATCTGTCACGATGGCAAGGCCCACTTTCCTAGGGAGGGCGTGTTCGTGAGCAACGGCACCCACTGGTTTGTGACACAGCGCAATTTCTACGAGCCACAGATCATCACCACAGACAATACCTTCGTGTCCGGCAACTGCGACGTGGTCATCGGCATCGTGAACAATACAGTGTATGATCCTCTGCAGCCAGAGCTGGACTCTTTTAAGGAGGAGCTGGATAAGTACTTCAAGAATCACACCAGCCCCGACGTGGATCTGGGCGACATCTCTGGCATCAATGCCAGCGTGGTGAACATCCAGAAGGAGATCGACAGACTGAACGAGGTGGCCAAGAATCTGAACGAGAGCCTGATCGATCTGCAGGAGCTGGGCAAGTATGAGCAGTACATCAAGTGGCCCTGGTATATCTGGCTGGGCTTCATCGCCGGCCTGATCGCCATCGTGATGGTGACCATCATGCTGTGCTGTATGACAAGCTGCTGTTCCTGCCTGAAGGGCTGCTGTTCTTGTGGCAGCTGCTGTAAGTTTGATGAGGACGATTCCGAGCCTGTGCTGAAGGGCGTGAAGCTGCACTACACCTAA(SEQ ID NO.:1)。
为了降低基因的GC含量,发明人在NB2基础上进一步将密码子优化,合成的序列命名为NB4,具体序列如SEQ ID NO:2所示:
ATGTTTGTCTTCCTGGTGCTGCTGCCTCTGGTCTCTTCTCAGTGTGTGAACCTGACCACCAGGACACAGCTGCCTCCTGCTTACACCAACTCCTTCACACGGGGCGTCTACTACCCTGACAAGGTCTTCAGGTCCTCTGTGCTGCACTCCACACAAGACCTGTTCCTGCCATTCTTCTCCAACGTGACCTGGTTCCATGCCATCCATGTCTCTGGCACCAATGGCACCAAGAGGTTCGACAACCCTGTGCTGCCATTCAACGACGGCGTCTACTTTGCCTCCACCGAGAAGTCCAACATCATCAGGGGCTGGATCTTTGGCACCACCCTGGACTCCAAGACCCAGTCCCTGCTGATTGTGAACAATGCCACCAACGTGGTGATCAAAGTCTGCGAGTTCCAGTTCTGCAATGACCCATTCCTGGGCGTCTACTACCACAAGAACAACAAGTCCTGGATGGAGTCTGAGTTCAGGGTCTACTCCTCTGCCAACAACTGCACCTTTGAATATGTCTCCCAGCCATTCCTGATGGACCTGGAGGGCAAGCAGGGCAACTTCAAGAACCTGAGGGAGTTCGTCTTCAAGAACATCGACGGCTACTTCAAGATCTACTCCAAGCACACACCCATTAATCTCGTCCGGGATCTGCCTCAGGGCTTCTCTGCCCTGGAGCCCCTGGTGGACCTGCCCATTGGCATCAACATCACACGCTTTCAGACCCTGCTGGCTCTGCACCGGTCTTACCTGACACCTGGCGACTCCTCCTCTGGCTGGACAGCTGGCGCTGCTGCCTACTATGTCGGCTACCTGCAGCCTAGGACCTTCCTGCTGAAGTACAATGAGAATGGCACCATCACAGATGCTGTGGACTGTGCCCTGGACCCCCTGTCTGAGACCAAGTGCACCCTGAAGTCCTTCACAGTCGAGAAGGGCATCTACCAGACCTCCAACTTCCGGGTGCAGCCCACAGAGTCCATTGTCAGGTTCCCCAACATCACCAACCTGTGCCCATTTGGCGAGGTCTTCAATGCCACACGCTTTGCCTCTGTCTATGCCTGGAACAGGAAGAGGATCTCCAACTGTGTGGCTGACTACTCTGTGCTGTACAACTCTGCCTCCTTCTCCACATTTAAGTGCTATGGCGTCTCCCCCACCAAGCTGAATGACCTGTGCTTCACCAATGTCTATGCTGACTCCTTTGTGATCCGGGGCGATGAAGTTAGGCAGATTGCCCCTGGCCAGACAGGCAAGATTGCTGACTACAACTACAAGCTGCCTGATGACTTCACCGGCTGTGTGATTGCCTGGAACTCCAACAACCTGGACTCTAAAGTTGGCGGCAACTACAACTACCTGTACAGGCTGTTCAGGAAGTCCAACCTGAAGCCATTTGAGAGGGACATCTCCACAGAGATCTACCAGGCTGGCTCCACCCCATGCAATGGCGTGGAGGGCTTCAACTGCTACTTCCCCCTGCAATCCTATGGCTTCCAACCCACCAATGGCGTGGGCTACCAGCCATACAGGGTGGTGGTGCTGTCCTTTGAGCTGCTGCATGCCCCTGCCACCGTCTGTGGCCCCAAGAAGTCCACCAACCTCGTGAAGAACAAATGTGTGAACTTCAACTTCAACGGCCTGACAGGCACAGGCGTGCTGACAGAGTCCAACAAGAAGTTCCTGCCATTCCAACAGTTTGGCAGGGACATTGCTGACACCACCGATGCTGTCAGGGACCCCCAGACCCTGGAGATCCTGGACATCACCCCATGCTCCTTTGGCGGCGTCTCTGTGATCACCCCTGGCACCAACACCTCTAATCAAGTCGCTGTGCTGTACCAGGACGTGAACTGCACAGAGGTTCCTGTGGCCATCCATGCTGACCAGCTGACCCCCACCTGGAGGGTCTACTCCACCGGCTCCAATGTCTTCCAAACACGGGCTGGCTGCCTGATTGGCGCTGAGCATGTGAACAACTCCTATGAGTGTGACATCCCCATTGGCGCTGGCATCTGTGCCTCCTACCAAACCCAGACCAACTCCCCTCGGAGGGCTCGCTCTGTGGCTTCTCAGTCTATCATTGCCTACACCATGTCCCTGGGCGCTGAGAACTCTGTGGCCTACTCCAACAACTCCATTGCCATCCCCACCAACTTCACCATCTCTGTGACCACCGAGATCCTGCCTGTCTCCATGACCAAGACCTCTGTGGACTGCACCATGTACATCTGTGGCGACTCCACAGAGTGCTCCAACCTGCTGCTGCAGTATGGCTCCTTCTGCACCCAACTGAACAGGGCCCTGACAGGCATTGCTGTGGAGCAGGACAAGAACACCCAGGAGGTCTTTGCCCAAGTCAAGCAGATCTACAAGACCCCCCCCATCAAGGACTTTGGCGGCTTCAACTTCTCCCAAATCCTGCCTGACCCATCCAAGCCATCCAAGAGGTCCTTCATTGAGGACCTGCTGTTCAACAAGGTTACCCTGGCTGATGCTGGCTTCATCAAGCAGTATGGCGACTGCCTGGGCGACATTGCTGCCAGGGACCTGATCTGTGCCCAAAAGTTCAATGGCCTGACAGTGCTGCCCCCCCTGCTGACCGATGAGATGATTGCCCAGTACACATCTGCTCTGCTGGCTGGCACAATCACCTCTGGCTGGACCTTTGGCGCTGGCGCTGCCCTGCAAATCCCATTTGCCATGCAAATGGCCTACAGGTTCAATGGCATTGGCGTGACCCAGAACGTGCTGTATGAGAACCAGAAGCTGATTGCCAACCAGTTCAACTCTGCCATTGGCAAGATCCAGGACTCCCTGTCCTCCACCGCCTCTGCCCTGGGCAAGCTGCAGGATGTGGTGAACCAGAATGCCCAGGCCCTGAACACCCTGGTGAAGCAGCTGTCCTCCAACTTTGGCGCCATCTCCTCTGTGCTGAATGACATCCTGTCCCGGCTGGACAAGGTGGAGGCTGAGGTGCAGATTGACAGGCTGATCACAGGCAGGCTGCAGTCCCTGCAAACCTATGTGACCCAGCAGCTGATCAGGGCTGCTGAGATCAGGGCCTCTGCCAACCTGGCTGCCACCAAGATGTCTGAATGTGTGCTGGGCCAGTCCAAGAGGGTGGACTTCTGTGGCAAGGGCTACCATCTGATGTCCTTCCCCCAATCTGCCCCCCATGGCGTGGTCTTCCTGCATGTGACCTATGTGCCTGCTCAGGAGAAGAACTTCACCACAGCCCCTGCCATCTGCCATGATGGCAAGGCCCACTTCCCTCGGGAGGGCGTCTTTGTCTCCAATGGCACCCACTGGTTTGTGACCCAGAGGAACTTCTATGAGCCTCAGATCATCACCACAGACAACACCTTTGTCTCTGGCAACTGTGATGTGGTGATTGGCATTGTGAACAACACAGTCTATGACCCCCTGCAGCCTGAGCTGGACTCCTTCAAAGAGGAGCTGGACAAGTACTTCAAGAACCACACCTCCCCTGATGTGGACCTGGGCGACATCTCTGGCATCAATGCCTCTGTGGTGAACATCCAGAAGGAGATTGACAGGCTGAATGAGGTGGCCAAGAACCTGAATGAGTCCCTGATTGACCTGCAAGAGCTGGGCAAGTATGAGCAGTACATCAAGTGGCCATGGTACATCTGGCTGGGCTTCATTGCTGGCCTGATTGCCATTGTGATGGTGACCATCATGCTGTGCTGCATGACCTCCTGCTGCTCCTGCCTGAAAGGCTGCTGCTCCTGTGGCTCCTGCTGCAAGTTTGATGAGGATGACTCTGAGCCTGTGCTGAAGGGCGTGAAGCTGCACTACACCTAATAA(SEQ ID NO.:2)。
下面结合实验,进一步说明本发明的技术方案。
基因表达载体的pVAX-NB1,pVAX-NB2和pVAX-NB4构建:
分别以NB1和NB2为模板,以NB1-F和NB1-R为引物PCR扩增获得NB1片段,以NB2-F和NB2-R为引物PCR扩增获得NB2片段,以NB4-F和NB4-R为引物扩增获得NB4片段后,再分别以各CMV-R和BGH-F为引物,以本公司已有的pVAX质粒为模板,PCR扩增各载体质粒骨架pVAX后,采用同源重组酶(Exnase)分别与NB1,NB2和NB4片段进行体外二片段重组,得到pVAX-NB1,pVAX-NB2和pVAX-NB4。
检测Spike基因表达:
按照常规方法,利用阳离子脂质体,分别将2.5ug的pVAX-NB1,pVAX-NB2和pVAX-NB4转染法转染293细胞,转染48小时后,收集细胞,按照常规的WesternBlot方法处理样品,并进行蛋白检测(图1)。可以看出,pVAX-NB1样品中没有检测到S蛋白的表达,而经过密码子优化的pVAX-NB2和pVAX-NB4样品中能够观察到S蛋白的表达,pVAX-NB4的S蛋白表达量约为pVAX-NB2的2~3倍。说明NB4的序列具有意料之外的效果。
DNA疫苗免疫原性动物实验:
分别将S的表达质粒pVAX-NB1 和pVAX-NB2的DNA以100ug/只的剂量,肌肉注射,配方为:100ug质粒DNA加10%葡萄糖至200ul,按照说明书,加10ul的Turbofect(Thermosfisher)混合,肌注小鼠。免疫14天后,眼眶取血,采用酶联免疫吸附测定(ELISA),以新冠病毒的S蛋白为抗原检测血清中的抗体水平。具体操作为:
1)96孔板,每孔加100ul的 PBS和50ng S蛋白,4℃过夜,16-18小时;
2)吸掉上清,PBST洗一遍,加入200ul 5%脱脂牛奶室温封闭2h;
3)PBST洗2次;
4)加样:加入100ul稀释后的血清样品,37℃孵育2h,用PBST洗5次;
5)加酶标抗体:加入100ul稀释后 HRP标记IgM或IgG二抗,37℃孵育2h;
6)PBST洗6-8次;
7)加底物液显色:加入100ul TMB显色;
8)终止反应:加入50ul 1M硫酸终止反应;
9)结果判定:测OD值,OD值控制在0.1-4。
实验结果表明,只有NB2能够诱异小鼠产生抗体(图2)。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州恩宝生物医药科技有限公司
<120> 表达SARS-CoV-2病毒抗原肽的核酸序列及其应用
<130> SARS-CoV-2
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 3822
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
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ttcaacttca acggactgac cggcacaggc gtgctgaccg agagcaacaa gaagttcctg 1680
ccatttcagc agttcggcag ggacatcgca gataccacag acgccgtgcg cgaccctcag 1740
accctggaga tcctggacat cacaccatgt tccttcggcg gcgtgtctgt gatcacccca 1800
ggcaccaata catccaacca ggtggccgtg ctgtatcagg acgtgaattg cacagaggtg 1860
cccgtggcaa tccacgcaga tcagctgacc cctacatggc gggtgtactc taccggcagc 1920
aacgtgttcc agacaagagc cggatgcctg atcggagcag agcacgtgaa caatagctat 1980
gagtgcgaca tccctatcgg cgccggcatc tgtgcctcct accagaccca gacaaactcc 2040
ccaaggagag cccggtctgt ggccagccag tccatcatcg cctataccat gagcctgggc 2100
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agcgtgacca cagagatcct gccagtgagc atgaccaaga catccgtgga ctgcaccatg 2220
tatatctgtg gcgattccac agagtgttct aacctgctgc tgcagtacgg ctccttttgc 2280
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aaggagatcg acagactgaa cgaggtggcc aagaatctga acgagagcct gatcgatctg 3600
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atcgccggcc tgatcgccat cgtgatggtg accatcatgc tgtgctgtat gacaagctgc 3720
tgttcctgcc tgaagggctg ctgttcttgt ggcagctgct gtaagtttga tgaggacgat 3780
tccgagcctg tgctgaaggg cgtgaagctg cactacacct aa 3822
<210> 2
<211> 3825
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
atgtttgtct tcctggtgct gctgcctctg gtctcttctc agtgtgtgaa cctgaccacc 60
aggacacagc tgcctcctgc ttacaccaac tccttcacac ggggcgtcta ctaccctgac 120
aaggtcttca ggtcctctgt gctgcactcc acacaagacc tgttcctgcc attcttctcc 180
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atcaggggct ggatctttgg caccaccctg gactccaaga cccagtccct gctgattgtg 360
aacaatgcca ccaacgtggt gatcaaagtc tgcgagttcc agttctgcaa tgacccattc 420
ctgggcgtct actaccacaa gaacaacaag tcctggatgg agtctgagtt cagggtctac 480
tcctctgcca acaactgcac ctttgaatat gtctcccagc cattcctgat ggacctggag 540
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tctgccctgg agcccctggt ggacctgccc attggcatca acatcacacg ctttcagacc 720
ctgctggctc tgcaccggtc ttacctgaca cctggcgact cctcctctgg ctggacagct 780
ggcgctgctg cctactatgt cggctacctg cagcctagga ccttcctgct gaagtacaat 840
gagaatggca ccatcacaga tgctgtggac tgtgccctgg accccctgtc tgagaccaag 900
tgcaccctga agtccttcac agtcgagaag ggcatctacc agacctccaa cttccgggtg 960
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ttcaacttca acggcctgac aggcacaggc gtgctgacag agtccaacaa gaagttcctg 1680
ccattccaac agtttggcag ggacattgct gacaccaccg atgctgtcag ggacccccag 1740
accctggaga tcctggacat caccccatgc tcctttggcg gcgtctctgt gatcacccct 1800
ggcaccaaca cctctaatca agtcgctgtg ctgtaccagg acgtgaactg cacagaggtt 1860
cctgtggcca tccatgctga ccagctgacc cccacctgga gggtctactc caccggctcc 1920
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tgctcctgcc tgaaaggctg ctgctcctgt ggctcctgct gcaagtttga tgaggatgac 3780
tctgagcctg tgctgaaggg cgtgaagctg cactacacct aataa 3825
Claims (8)
1.一种能表达对新型冠状病毒SARS-CoV-2引起免疫原性的多肽的核酸序列,所述核酸序列包含以下核酸序列中的至少一条:
(a)核酸序列SEQ ID NO:1;或
(b)核酸序列SEQ ID NO:2;或
(c)与SEQ ID NO:1具有至少90%序列相同性的核酸序列。
2.根据权利要求1所述的核酸序列,其特征在于,所述多肽:
可在人体中诱导免疫应答;或
产生生物报告分子;或
用于检测的分子;或
能调节基因功能;或
成为治疗性分子。
3.一种表达载体,其特征在于,所述的载体含有权利要求1所述的核酸序列。
4.根据权利要求3所述的表达载体,其特征在于:所述的载体为病毒载体。
5.根据权利要求4所述的表达载体,其特征在于:所述的病毒载体为腺病毒载体。
6.一种表达细胞,其特征在于:所述表达细胞可基于权利要求1所述的核酸序列表达多肽。
7.一种核酸组合物,其特征在于:所述核酸组合物包括权利要求1所述的核酸序列。
8.根据权利要求7所述的核酸组合物,其特征在于:还包括药学上可接受的佐剂、载体、稀释剂或赋形剂中的至少一种。
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