CN111662389A - 一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物 - Google Patents

一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN111662389A
CN111662389A CN202010507986.7A CN202010507986A CN111662389A CN 111662389 A CN111662389 A CN 111662389A CN 202010507986 A CN202010507986 A CN 202010507986A CN 111662389 A CN111662389 A CN 111662389A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fusion protein
rbd
cov
sars
mfc
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010507986.7A
Other languages
English (en)
Inventor
刘中秋
廖国超
柯昌文
戚笑笑
柯碧霞
杨得盈
吴鹏
卢琳琳
冯潜
王彩艳
李自波
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou University Of Chinese Medicine Guangzhou Institute Of Chinese Medicine
Guangzhou University of Chinese Medicine
Original Assignee
Guangzhou University Of Chinese Medicine Guangzhou Institute Of Chinese Medicine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou University Of Chinese Medicine Guangzhou Institute Of Chinese Medicine filed Critical Guangzhou University Of Chinese Medicine Guangzhou Institute Of Chinese Medicine
Priority to CN202010507986.7A priority Critical patent/CN111662389A/zh
Publication of CN111662389A publication Critical patent/CN111662389A/zh
Priority to PCT/CN2020/130222 priority patent/WO2021243974A1/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6056—Antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种SARS‑CoV‑2的融合蛋白及其疫苗组合物。本发明的融合蛋白及含该融合蛋白制备的疫苗组合物克服了亚单位疫苗的免疫原性差等缺点；能诱导针对SARS‑CoV‑2的特异性免疫反应，达到抑制SARS‑CoV‑2的复制、抑制SARS‑CoV‑2的转播或阻止SARS‑CoV‑2普通株和变异株在其宿主体内定居的目的，所述融合蛋白及含该融合蛋白的疫苗组合物，能有效预防和/或治疗新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID‑19)。该融合蛋白可利用基因工程技术进行大量重组表达，耗时短且可便于大规模生产。

Description

一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物。
背景技术
新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2，SARS-CoV-2)引起人肺炎的病毒性传染病。人感染了冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等；严重者可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。这种新出现的传染病在世界各地迅速传播，截至2020年4月，全世界已有300多万例，造成20多万人死亡，COVID-19已成为一个严峻的公共卫生问题。虽然SARS-CoV-2严重危害人类的健康，但是目前还没有治疗和预防COVID-19的具体药物。因此，迫切需要开发安全有效的SARS-CoV-2疫苗来预防COVID-19。
目前，全球范围内SARS-CoV-2疫苗的研发正快速进行中；世界范围内，有几种SARS-CoV-2疫苗已进入临床第一阶段试验，如mRNA-1273疫苗(Moderna)、Ad5-nCoV疫苗(CanSino Biologicals)、INO-4800疫苗(Inovio)、LV-SMENP-DC疫苗(深圳市免疫基因治疗研究院)和pathogen-specific aAPC疫苗(深圳市免疫基因治疗研究院)等。其中，mRNA疫苗具有高效、快速的开发能力和低成本的生产潜力，在预防传染病方面具有广阔的应用前景，但体内给药的不稳定性和低效率常常影响和制约着mRNA疫苗的进一步开发。作为第三代疫苗的病毒载体疫苗因其具有瞬时表达和高转导效率的优点而被广泛使用，但生产过程中存在严重问题。DNA疫苗可以诱导更广泛的免疫应答类型，但外源性DNA的引入可能导致宿主基因组的改变或诱导免疫耐受。此外，Eun Kim等人设计和生产的微针阵列(MNA)递送SARS-CoV-2亚单位疫苗，已被证明能够引起有效的特异性抗体反应。目前每种疫苗策略都有其优点和缺点，所有用于SARS-CoV-2预防的新疫苗还待进一步综合评估其免疫增强的有效性和安全性。
研究人员发现SARS-CoV-2表面刺突糖蛋白受体结合区(receptor-bindingdomain,RBD)可直接与功能细胞受体血管紧张素转换酶2(ACE2)结合，在病毒进入功能细胞受体和发病过程中起着重要作用；因此，SARS-CoV-2的RBD蛋白可作为开发SARS-CoV-2病毒抑制剂和亚单位疫苗的一个有吸引力的靶点。但是小分子量的SARS-CoV-2RBD(～21KDa)具有免疫原性差，不能诱导细胞毒性T淋巴细胞反应，诱导产生的免疫反应持续时间较短，需要多次接种等缺点，不适合单独制备成疫苗。因此，如何提高亚单位疫苗的有效性与安全性是急需解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种融合蛋白，该融合蛋白包括严重急性呼吸综合征冠状病毒2抗原性蛋白和免疫球蛋白Fc片段，利用该融合蛋白与佐剂配置得到的疫苗组合物，可达到抑制SARS-CoV-2的复制、抑制SARS-CoV-2的转播或阻止SARS-CoV-2普通株和变异株在其宿主体内定居的目的，从而能有效预防和/或治疗新型冠状病毒肺炎。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种融合蛋白，所述融合蛋白包括严重急性呼吸综合征冠状病毒2抗原性蛋白和免疫球蛋白Fc片段。
作为本发明所述的融合蛋白的优选实施方式，所述严重急性呼吸综合征冠状病毒2抗原性蛋白包括S蛋白片段中RBD中和表位。
作为本发明所述的融合蛋白的优选实施方式，所述RBD中和表位的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
作为本发明所述的融合蛋白的优选实施方式，所述的免疫球蛋白Fc片段包括鼠源IgG、IgA、IgD、IgE、IgM中至少一种的免疫球蛋白Fc片段。
作为本发明所述的融合蛋白的优选实施方式，所述的鼠源IgG选自鼠源IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3的至少一种。
作为本发明所述的融合蛋白的优选实施方式，所述免疫球蛋白Fc片段的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
作为本发明所述的融合蛋白的优选实施方式，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQID No.3所示。
本发明还提供了一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包括所述的融合蛋白，还包括免疫学和药学上接受的载体或佐剂。
作为本发明所述的疫苗组合物的优选实施方式，所述佐剂包括铝佐剂、弗氏佐剂、单磷酰脂质A、RIBI佐剂系统、α-半乳糖神经酰胺类似物佐剂中的至少一种。
另外，本发明还提供所述的疫苗组合物在制备预防和/或治疗新型冠状病毒肺炎的药物中的应用。
本发明的有益效果：
(1)将SARS-CoV-2的RBD蛋白结合到鼠源免疫球蛋白Fc域得到融合蛋白RBD-mFc，并加入佐剂制成疫苗组合物，不仅可以增加疫苗的溶解度、稳定性，延长疫苗在体内半衰期；还促进选择性吸收并诱导针对SARS-CoV-2的特异性免疫反应，达到抑制SARS-CoV-2的复制、抑制SARS-CoV-2的转播或阻止SARS-CoV-2普通株和变异株在其宿主体内定居的目的，从而能有效预防和/或治疗新型冠状病毒肺炎；
(2)本发明的疫苗组合物可通过基因工程手段对疫苗组合物的组分即所述的融合蛋白进行大量重组表达，不仅耗时短，还可便于大规模生产。
附图说明
图1是本发明实施例1-2的融合蛋白疫苗RBD-mFc和含该融合蛋白的疫苗组合物RBD-mFc/Al与RBD-mFc/FA诱导小鼠产生的抗体IgG免疫活性评价图。
图2是本发明实施例1-2的融合蛋白疫苗RBD-mFc和含该融合蛋白的疫苗组合物RBD-mFc/Al与RBD-mFc/FA诱导小鼠产生的抗体IgG亚型免疫活性评价图。
图3是本发明实施例1-2的融合蛋白疫苗RBD-mFc和含该融合蛋白的疫苗组合物RBD-mFc/Al与RBD-mFc/FA诱导小鼠产生的抗体中和实验免疫活性评价图。
图4是本发明实施例1-2的融合蛋白疫苗RBD-mFc和含该融合蛋白的疫苗组合物RBD-mFc/Al与RBD-mFc/FA诱导小鼠产生的细胞因子IFN-γ评价图。
图5是本发明实施例1-2的融合蛋白疫苗RBD-mFc和含该融合蛋白的疫苗组合物RBD-mFc/Al与RBD-mFc/FA诱导小鼠产生的细胞因子IL-4评价图。
图6是本发明实施例1-2的融合蛋白疫苗RBD-mFc和含该融合蛋白的疫苗组合物RBD-mFc/Al与RBD-mFc/FA诱导小鼠产生的抗体血清特异性识别转染了ACE2载体的人肾上皮细胞系293T的流式细胞实验评价图。
具体实施方式
为更清楚地表述本发明的技术方案，下面结合具体实施例进一步说明，但不能用于限制本发明，此仅是本发明的部分实施例。
术语融合蛋白：融合蛋白(fusion protein)有两种不同的含义，一种是通过DNA重组技术得到的两个基因重组后的表达产物，将两个不同的蛋白质连成一个大分子；另一种是通过化学方法连接。
序列表：
(1)SEQ ID No.1：严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)中S蛋白片段中RBD中和表位的氨基酸序列；
(2)SEQ ID No.2：鼠免疫球蛋白IgG中Fc蛋白的氨基酸序列；
(3)SEQ ID No.3：融合蛋白RBD-mFc的氨基酸序列；
(4)SEQ ID No.4：融合蛋白RBD-mFc的核苷酸序列。
实施例1：融合蛋白RBD-mFc的制备、鉴定及含量测定
根据NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov)报道的COVID-19病毒(GeneI D:43740578)中S蛋白片段中RBD中和表位的基因序列(氨基酸序列如SEQ I D No.1所示)，以及鼠免疫球蛋白IgG中Fc蛋白的基因序列(氨基酸序列如S EQ ID No.2所示)，通过基因工程手段制备融合蛋白。
(1)COVID-19抗原性蛋白RBD和mFc融合蛋白的克隆构建及鉴定
全合成RBD-mFc的核苷酸序列(核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，氨基酸序列如SEQID No.3所示)，并在该基因5'-端和3'-端引入特异性酶切位点BamHI和XhoI，将哺乳动物细胞表达载体PCDNA3.1和RBD-mFc基因，同时用BamHI和XhoI双酶切，酶切后进行10g/L琼脂糖凝胶电泳，并经过凝胶回收纯化试剂盒将酶切产物进行纯化，将两者酶切纯化的产物按照3∶1的摩尔比混合，用T4DNA连接酶连接1h，用低温CaCl2制备的E.coli DH5α感受态细菌转化，然后涂布于含氨苄青霉素的LB固体培养基中。次日，随机挑取10个单菌落，分别接种于0.5mL含氨苄青霉素的LB培养液中，37℃下150r/min振荡3h。取1μL作为模板以通用引物进行菌落PCR鉴定，如果结果经琼脂糖凝胶电泳显示大小正确则用质粒提取试剂盒提取质粒DNA。测序采用Sanger双脱氧链终止法，对引物所在序列的两端进行测定，测序工作由广州艾基生物工程公司完成，构建得到序列正确的重组表达质粒PCDNA3.1-RBD-mFc。
(2)RBD-mFc蛋白在Expi293F悬浮型细胞中的表达
转染前，将3×106Expi293F细胞接种于30mL Expi293F表达培养基中，于5％CO2、37℃、120r/min条件下持续培养数小时，当细胞密度达3.5×106/mL时，将80μLExpiFectamine293转染试剂加入1.5mL培养基中混匀，室温孵育5分钟。将30μg表达质粒加入1.5mL培养基中混匀，然后将孵育好的转染试剂与培养基的混合物加入质粒与培养基的混合物中轻轻混匀，室温孵育25分钟，最后缓慢加入细胞培养瓶中。培养16小时后，在上述细胞培养瓶中分别加入150μL转染增强剂1和1.5mL转染增强剂2(具体步骤参见赛默飞公司试剂盒Expi293TM Expression System Kit(Cat.No.A14635))，培养72小时后收集细胞进行RBD-mFc表达量的鉴定。
(3)RBD-mFc蛋白表达量的鉴定
取步骤(4)中添加转染增强剂后培养72h的细胞培养液50μL，4℃、12000r/min离心5分钟，用含有还原剂的蛋白上样缓冲液制样并电泳；电泳结束后，用湿转方法将蛋白转移到经甲醇激活的PVDF膜上；转膜后，用5％脱脂牛奶对PVDF膜室温摇床封闭1小时，分别用抗Gc兔多抗(1∶5000)和StrepⅡ-tag(HRP)抗体(1∶30000)与封闭后的PVDF室温孵育1.5小时；用TBST清洗PVDF膜3次，每次10分钟；以1∶20000的比例加入羊抗兔二抗(HRP)室温孵育1h；用TBST清洗PVDF膜3次，每次10分钟；最后利用Western印迹显色液进行显色。对RBD-mFc蛋白在Expi293F细胞中表达量的鉴定。我们确定转染后72小时为收取细胞上清的最佳时间。
(4)RBD-mFc蛋白的纯化及鉴定
在确定最佳细胞上清收获时间后，利用MabSelect SuRe LX亲和柱对收获后的细胞上清进行纯化，同时在纯化过程中收取目的蛋白的洗脱峰、柱前和柱后，进行SDS-PAGE分析，在收取的洗脱峰中获得了纯度较好的RBD-mFc蛋白。用BCA方法测定的纯化后RBD-mFc蛋白浓度为0.7mg/mL。最后纯化后的RBD-mFc蛋白进行了蛋白印迹鉴定。
实施例2：亚单位疫苗的制备
(1)使用PBS缓冲盐溶液将实施例1制备的RBD-mFc融合蛋白进行稀释，并充分混匀，得到重组的融合蛋白的含量为10μg/mL的疫苗RBD-mFc。
(2)使用PBS缓冲盐溶液将实施例1制备的RBD-mFc融合蛋白进行稀释，并加入铝佐剂充分混匀，得到重组的融合蛋白的含量为10μg/mL的疫苗组合物RBD-mFc/Al；
(3)使用PBS缓冲盐溶液将实施例1制备的RBD-mFc融合蛋白进行稀释，并加入完全弗氏佐剂，搅拌使其成为白色乳剂，即得到重组的融合蛋白的含量为10μg/mL的疫苗组合物完全福氏佐剂RBD-mFc/FA(RBD-mFc/CFA)；使用PBS缓冲盐溶液将实施例1制备的RBD-mFc融合蛋白进行稀释，并加入非完全弗氏佐剂，搅拌使其成为白色乳剂，即得到融合蛋白的含量为10μg/mL的疫苗组合物不完全福氏佐剂RBD-mFc/FA(RBD-mFc/IFA)。
实施例3：ELISA免疫分析
(1)小鼠免疫
取6-8周龄的C57BL/6小鼠20只，随机分为4组，每组5只，采用一次初始免疫和二次增强免疫方案，分别在第0和28天注射制备的疫苗，每只每次注射量0.1mL。
RBD-mFc组：第0和28天肌肉注射实施例2所制备的疫苗RBD-mFc；
RBD-mFc/Al组：第0和28天肌肉注射实施例2所制备的疫苗组合物RBD-mFc/Al；
RBD-mFc/FA组：第0天肌肉注射实施例2所制备的疫苗组合物完全福氏佐剂RBD-mFc/FA(RBD-mFc/CFA)；第28天肌肉注射实施例2所制备的疫苗组合物不完全福氏佐剂RBD-mFc/FA(RBD-mFc/IFA)。
Control组：为空白对照组，注射相同剂量的pH7.4的PBS溶液。
第28天、42天取血，每只小鼠取血取0.1mL到0.2mL，在0℃放置60分钟，4000转/分钟离心15分钟，取上层清亮血清用于ELISA检测分析，并在第42天对小鼠进行安乐死，取脾脏制成单细胞混悬液用于后续ELISPOT实验。
(2)ELISA免疫分析
用0.1M碳酸盐缓冲液(pH 9.6)将RBD-His(广州环球基因工程有限公司采用人工合成的方法制备而成)配置成0.33μg/mL溶液，以每孔100μL的量加入96孔板，放入4℃孵育过夜；第二天放入37℃培养箱孵育1小时；用PBST(PBS+0.1％吐温20)洗板3次，每孔加入300μL洗液；洗板后加入2％脱脂奶粉，每孔加入250μL，37℃孵育1小时；用PBST洗板3次。分别在每个孔中加入一次免疫或二次免疫的小鼠血清(1:300)，每孔加入100μL，放置在37℃培养箱孵育1个小时；洗板3次后；分别在一次免疫或二次免疫的小鼠血清组加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的IgG，在二次免疫的小鼠血清组加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的IgG1、IgG2b、IgG2c与IgG3，每孔加入100μL，室温孵育1小时；洗板3次。加入TMB溶液，每孔加入100μL，室温避光显色20分钟。加入0.5M H2SO4溶液终止显色，每孔加100μL，酶标仪检测吸光度，检测波长为450nm，570nm作为背景波长。
结果如图1所示，将吸光度(OD值)相对于不同亚单位疫苗作图，本发明实施例2中的亚单位融合蛋白疫苗RBD-mFc及其疫苗组合物RBD-mFc/Al与RBD-mFc/FA，在小鼠体内均能诱导产生高滴度的IgG抗体，其中加弗氏佐剂组RBD-mFc/FA效果最好。
如图2所示，将吸光度(OD值)相对于不同亚型抗体作图，RBD-mFc/Al和RBD-mFc/FA免疫的小鼠显著增强了IgG1和IgG2b的分泌，表明RBD-mFc可以同时诱导Th2和Th1免疫反应并产生强效的抗体。
实施例4：抗体中和实验
将Vero E6细胞(2×104细胞/孔)接种到96孔板中，在37℃和5％CO2下培养过夜，直到形成单层。将SARS-CoV-2的100TCID50与连续4倍稀释的实施例3步骤(1)中制备得到的小鼠抗血清混合，在37℃孵育一小时，将血清样品在56℃加热30分钟，随后加入与Vero E6细胞混合。在每种测定中，感染了100TCID50SARS-CoV-2的细胞为阳性对照，而无病毒的细胞为阴性对照，然后在感染后第3天记录CPE(细胞病变效应)。通过Reed-Muench法计算了完全抑制孔的50％CPE的用RBD-mFc融合蛋白接种的血清的中和效价。
中和抗体(NA)滴度越高，说明病毒复制水平越低，对病毒感染的防护能力越强。如图3所示，疫苗组合物RBD-mFc/FA诱导的抗体血清的中和抗体滴度显著高于其他疫苗，表明在弗氏佐剂的作用下，融合蛋白疫苗RBD-mFc可产生强效的体液免疫应答，其诱导产生的抗体血清具有较强的中和活性，并保护细胞免受SARS-CoV-2感染。
实施例5：ELISPOT实验
采用ELISPOT试剂盒检测细胞因子。96孔板预包被anti-mouse IFN-γ或者IL-4。将不含FBS(胎牛血清)的RPMI-1640(200μL/孔)添加到每个孔中以激活单克隆抗体，室温下孵育2小时，弃掉培养基，将接种了疫苗的和对照组的脾细胞接种于板中(2.5×105细胞/孔)，同时加入10μg/mL的RBD-His，每组做3个副孔，在37℃和5％CO2环境下培养24小时。在4℃温度下，用冰冷的双蒸水溶解细胞10分钟；1×洗涤缓冲液洗板6次；加入生物素化的anti-mouse IFN-γ或IL-4抗体(1:100)，在37℃下孵育一小时。洗板后加入链霉亲和素-辣根过氧化物酶(1:100)，孵育1h。洗板后，添加3-氨基-9-乙基咔唑(100μL/孔)。加入AEC可以在37℃的黑暗环境中形成斑点，持续30分钟，然后用dd H2O停止反应并风干板。用显微镜计数分泌的IFN-γ和分泌IL-4的T细胞的斑点。
结果如图4与图5所示，与对照组相比，接种RBD-mFc/Al的小鼠在第42天导致INF-γ和IL-4点数量分别是空白组的3.33倍和7.35倍，说明在铝佐剂的作用下，RBD-mFc可以同时诱导产生Th1和Th2免疫反应；此外，RBD-mFc/FA和RBD-mFc诱导产生的INF-γ多于产生IL-4，表明不同的佐剂对RBD-mFc诱导的免疫作用有显著的影响。
实施例6：流式细胞实验
将人肾上皮细胞系293T用人ACE2载体转染48h，分离并用HBSS洗涤细胞3次，计数使293T/ACE2 1.0×106细胞/管，将小鼠血清(1:10稀释)加入到293T/ACE2细胞中，然后加入1μg/mL RBD-His蛋白，在冰上孵育1h。用HBSS洗涤3次后，加入anti-His-FITC，在冰上避光孵育1h，用HBSS洗涤3次后通过流式细胞仪检测平均荧光强度。
结果如图6所示，与Positive control(阳性对照组)相比，亚单位疫苗RBD-mFc及疫苗组合物RBD-mFc/FA和RBD-mFc/Al的峰图明显向左移，接近于Negative control组(阴性对照组)，Control组(空白血清)峰图明显右移，与Positive control组相近，说明亚单位疫苗RBD-mFc及疫苗组合物RBD-mFc/FA和RBD-mFc/Al的小鼠血清在1：10稀释时有效阻断了RBD与ACE2/293T细胞的结合，而对照的空白血清在相同稀释度下没有抑制作用。
综上所述，蛋白RBD结合到免疫球蛋白Fc域得到融合蛋白制得的亚单位疫苗RBD-mFc，及在该融合蛋白中加入佐剂制成的疫苗组合物；可以促进选择性吸收并诱导针对SARS-CoV-2的特异性免疫反应，达到抑制SARS-CoV-2的复制、抑制SARS-CoV-2的转播或阻止SARS-CoV-2普通株和变异株在其宿主体内定居的目的。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州中医药大学（广州中医药研究院）
<120> 一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物
<160> 4
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 1
Met Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn
1 5 10 15
Ser Phe Thr Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn
20 25 30
Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe
35 40 45
Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala
50 55 60
Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys
65 70 75 80
Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val
85 90 95
Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala
100 105 110
Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp
115 120 125
Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser
130 135 140
Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser
145 150 155 160
Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala
165 170 175
Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro
180 185 190
Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro
195 200 205
Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr
210 215 220
Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val
225 230 235 240
Asn Phe
<210> 2
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 2
Ala Asp Asp Asp Asp Lys Ala Val Pro Arg Asp Ser Gly Cys Lys Pro
1 5 10 15
Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
20 25 30
Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys
35 40 45
Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp
50 55 60
Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu
65 70 75 80
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met
85 90 95
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser
100 105 110
Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly
115 120 125
Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln
130 135 140
Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe
145 150 155 160
Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu
165 170 175
Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe
180 185 190
Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn
195 200 205
Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr
210 215 220
Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 3
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 3
Met Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn
1 5 10 15
Ser Phe Thr Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn
20 25 30
Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe
35 40 45
Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala
50 55 60
Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys
65 70 75 80
Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val
85 90 95
Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala
100 105 110
Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp
115 120 125
Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser
130 135 140
Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser
145 150 155 160
Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala
165 170 175
Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro
180 185 190
Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro
195 200 205
Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr
210 215 220
Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val
225 230 235 240
Asn Phe Ala Asp Asp Asp Asp Lys Ala Val Pro Arg Asp Ser Gly Cys
245 250 255
Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe
260 265 270
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val
275 280 285
Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe
290 295 300
Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro
305 310 315 320
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro
325 330 335
Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val
340 345 350
Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr
355 360 365
Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys
370 375 380
Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp
385 390 395 400
Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro
405 410 415
Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser
420 425 430
Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala
435 440 445
Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His
450 455 460
His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 4
<211> 1431
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 4
atggtgaatc tgaccaccag aacccagctg ccccctgcct acacaaattc cttcacaagg 60
gtgcagccta ccgagagcat cgtgagattc cctaatatca ccaacctgtg tcccttcggc 120
gaggtgttca atgccaccag atttgccagc gtgtacgcct ggaacaggaa gagaatcagc 180
aactgcgtgg ccgactactc cgtgctgtac aactccgcca gcttcagcac ctttaagtgc 240
tacggcgtga gccccaccaa gctgaacgat ctgtgcttca caaatgtgta cgccgatagc 300
ttcgtgatca gaggcgacga ggtgaggcag atcgcccctg gccagacagg caagatcgcc 360
gattacaact acaagctgcc cgatgacttc acaggctgcg tgatcgcctg gaatagcaac 420
aacctggaca gcaaggtggg cggcaactac aactacctgt acaggctgtt cagaaagagc 480
aacctgaagc cctttgagag ggacatcagc accgagatct accaggccgg cagcacaccc 540
tgtaatggcg tggagggctt taactgctac tttcccctgc agtcctacgg ctttcagcct 600
accaatggcg tgggctacca gccctacaga gtggtggtgc tgtccttcga gctgctgcac 660
gcccccgcca ccgtgtgtgg acctaagaag tccaccaacc tggtgaagaa taagtgtgtg 720
aattttgccg acgacgacga taaggccgtg cctagagata gcggctgtaa gccttgtatc 780
tgtacagtgc ctgaggtgtc cagcgtgttt atcttccccc ccaagcccaa ggatgtgctg 840
acaatcaccc tgacccccaa ggtgacatgc gtggtggtgg atatctccaa ggacgacccc 900
gaggtgcagt tctcctggtt cgtggacgat gtggaggtgc acacagccca gacacagcct 960
agggaggagc agttcaactc cacctttaga agcgtgagcg agctgcccat catgcaccag 1020
gactggctga acggcaagga gtttaagtgt agggtgaata gcgccgcctt ccccgcccct 1080
atcgagaaga ccatcagcaa gacaaagggc agacccaagg cccctcaggt gtacaccatc 1140
cctcccccta aggagcagat ggccaaggac aaggtgagcc tgacatgtat gatcacagat 1200
ttctttcccg aggacatcac agtggagtgg cagtggaatg gccagcccgc cgagaactac 1260
aagaataccc agcccatcat ggacaccgac ggctcctact tcgtgtacag caagctgaac 1320
gtgcagaaga gcaactggga ggccggcaac acctttacct gcagcgtgct gcacgagggc 1380
ctgcacaacc accacaccga gaagagcctg tcccacagcc ctggcaagtg a 1431

Claims (10)

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括严重急性呼吸综合征冠状病毒2抗原性蛋白和免疫球蛋白Fc片段。
2.根据权利要求1所述融合蛋白，其特征在于，所述严重急性呼吸综合征冠状病毒2抗原性蛋白包括S蛋白片段中RBD中和表位。
3.根据权利要求2所述融合蛋白，其特征在于，所述RBD中和表位的氨基酸序列如SEQID No.1所示。
4.根据权利1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的免疫球蛋白Fc片段包括鼠源IgG、IgA、IgD、IgE、IgM中至少一种的免疫球蛋白Fc片段。
5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于，所述的鼠源IgG选自鼠源IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3的至少一种。
6.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc片段的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
7.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo.3所示。
8.一种疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包括权利要求1-7任一所述的融合蛋白，还包括免疫学和药学上接受的载体或佐剂。
9.根据权利要求8所述的疫苗组合物，其特征在于，所述佐剂包括铝佐剂、弗氏佐剂、单磷酰脂质A、RIBI佐剂系统、α-半乳糖神经酰胺类似物佐剂中的至少一种。
10.权利要求8-9任一所述的疫苗组合物在制备预防和/或治疗新型冠状病毒肺炎的药物中的应用。
CN202010507986.7A 2020-06-05 2020-06-05 一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物 Pending CN111662389A (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010507986.7A CN111662389A (zh) 2020-06-05 2020-06-05 一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物
PCT/CN2020/130222 WO2021243974A1 (zh) 2020-06-05 2020-11-19 一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010507986.7A CN111662389A (zh) 2020-06-05 2020-06-05 一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111662389A true CN111662389A (zh) 2020-09-15

Family

ID=72386943

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010507986.7A Pending CN111662389A (zh) 2020-06-05 2020-06-05 一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN111662389A (zh)
WO (1) WO2021243974A1 (zh)

Cited By (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112220920A (zh) * 2020-10-30 2021-01-15 上海泽润生物科技有限公司 一种重组新型冠状病毒疫苗组合物
CN112798795A (zh) * 2020-12-11 2021-05-14 贵州美鑫达医疗科技有限公司 用于检测阻断分析物的测定
CN112851824A (zh) * 2021-02-09 2021-05-28 浙江大学 一种融合蛋白及其在制备新型冠状病毒亚单位疫苗中的应用
CN113321739A (zh) * 2021-02-04 2021-08-31 广东克冠达生物医药科技有限公司 一种covid-19亚单位疫苗及其制备方法与应用
CN113336857A (zh) * 2021-04-02 2021-09-03 深圳市众循精准医学研究院 一种新型新冠病毒亚单位疫苗及其构建方法
WO2021243974A1 (zh) * 2020-06-05 2021-12-09 广州中医药大学(广州中医药研究院) 一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物
WO2021243417A1 (en) * 2020-06-05 2021-12-09 Centenary Institute Of Cancer Medicine And Cell Biology Immunogenic formulations
CN114196701A (zh) * 2021-11-17 2022-03-18 浙江迪福润丝生物科技有限公司 一种sars-cov-2的二价重组新城疫病毒载体及相应疫苗株和制备方法
CN114262718A (zh) * 2021-12-28 2022-04-01 武汉爱博泰克生物科技有限公司 一种人源Ly6d重组蛋白细胞分泌表达方法及应用
WO2022092828A1 (ko) * 2020-10-28 2022-05-05 에스케이바이오사이언스 주식회사 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 백신 조성물
WO2022103797A1 (en) * 2020-11-10 2022-05-19 Massachusetts Institute Of Technology Engineered protein for rapid, efficient capture of pathogen-specific antibodies
WO2022105880A1 (zh) * 2020-11-20 2022-05-27 北京震旦鼎泰生物科技有限公司 融合基因及一种重组新型冠状病毒高效免疫dna疫苗及其构建方法和应用
WO2022121322A1 (zh) * 2020-12-10 2022-06-16 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 一种新型冠状病毒的重组亚单位疫苗及其应用
WO2022133547A1 (en) * 2020-12-23 2022-06-30 The University Of Melbourne Coronavirus vaccine
CN114716560A (zh) * 2021-01-04 2022-07-08 中国医学科学院基础医学研究所 一种人乳头瘤病毒18型嵌合蛋白及其用途
WO2022171904A1 (en) 2021-02-15 2022-08-18 Livingmed Biotech S.R.L. Genetically modified clostridium strains expressing recombinant antigens and uses thereof
WO2022178545A1 (en) * 2021-02-19 2022-08-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Novel compositions of matter comprising stabilized coronavirus antigens and their use
WO2022206222A1 (zh) * 2021-03-31 2022-10-06 国药中生生物技术研究院有限公司 一种新型冠状病毒s-rbd三聚体蛋白疫苗、其制备方法和应用
WO2023002433A1 (en) * 2021-07-22 2023-01-26 Engeneic Molecular Delivery Pty Ltd Compositions and vaccines for treating and/or preventing coronavirus variant infections and methods of using the same
US20230144457A1 (en) * 2021-10-27 2023-05-11 Akebia Therapeutics, Inc. Methods for treating viral infections, organ injury, and related conditions
CN117467668A (zh) * 2020-11-25 2024-01-30 苏州大学 抗严重急性呼吸系统综合征ii型冠状病毒sars-cov-2的中和抗体

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101098710A (zh) * 2004-06-02 2008-01-02 纽约血液中心 产生高度有效抗体的sars疫苗和方法
CN111217917A (zh) * 2020-02-26 2020-06-02 康希诺生物股份公司 一种新型冠状病毒SARS-CoV-2疫苗及其制备方法
CN111333704A (zh) * 2020-02-24 2020-06-26 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所 新型冠状病毒covid-19疫苗、制备方法及其应用
CN111533809A (zh) * 2020-04-21 2020-08-14 中国科学院武汉病毒研究所 针对新型冠状病毒的亚单位疫苗及应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111662389A (zh) * 2020-06-05 2020-09-15 广州中医药大学(广州中医药研究院) 一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101098710A (zh) * 2004-06-02 2008-01-02 纽约血液中心 产生高度有效抗体的sars疫苗和方法
CN111333704A (zh) * 2020-02-24 2020-06-26 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所 新型冠状病毒covid-19疫苗、制备方法及其应用
CN111217917A (zh) * 2020-02-26 2020-06-02 康希诺生物股份公司 一种新型冠状病毒SARS-CoV-2疫苗及其制备方法
CN111533809A (zh) * 2020-04-21 2020-08-14 中国科学院武汉病毒研究所 针对新型冠状病毒的亚单位疫苗及应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GU H.J.等: "Rapid adaptation of SARS-CoV-2 in BALB/c mice:novel mouse model for vaccine efficacy", 《BIORXIV》 *
ZENG X.等: "Isolation of a human monoclonal antibody specific for the receptor binding domain of SARS-CoV-2 using a competitive phage biopanning strategy", 《ANTIBODY THERAPEUTICS》 *

Cited By (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021243974A1 (zh) * 2020-06-05 2021-12-09 广州中医药大学(广州中医药研究院) 一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物
WO2021243417A1 (en) * 2020-06-05 2021-12-09 Centenary Institute Of Cancer Medicine And Cell Biology Immunogenic formulations
WO2022092828A1 (ko) * 2020-10-28 2022-05-05 에스케이바이오사이언스 주식회사 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 백신 조성물
US12076393B2 (en) 2020-10-28 2024-09-03 Sk Bioscience Co., Ltd. Vaccine composition for prevention or treatment of SARS-coronavirus-2 infection
CN112220920A (zh) * 2020-10-30 2021-01-15 上海泽润生物科技有限公司 一种重组新型冠状病毒疫苗组合物
WO2022103797A1 (en) * 2020-11-10 2022-05-19 Massachusetts Institute Of Technology Engineered protein for rapid, efficient capture of pathogen-specific antibodies
WO2022105880A1 (zh) * 2020-11-20 2022-05-27 北京震旦鼎泰生物科技有限公司 融合基因及一种重组新型冠状病毒高效免疫dna疫苗及其构建方法和应用
CN117467668A (zh) * 2020-11-25 2024-01-30 苏州大学 抗严重急性呼吸系统综合征ii型冠状病毒sars-cov-2的中和抗体
WO2022121322A1 (zh) * 2020-12-10 2022-06-16 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 一种新型冠状病毒的重组亚单位疫苗及其应用
CN112798795A (zh) * 2020-12-11 2021-05-14 贵州美鑫达医疗科技有限公司 用于检测阻断分析物的测定
WO2022133547A1 (en) * 2020-12-23 2022-06-30 The University Of Melbourne Coronavirus vaccine
CN114716560B (zh) * 2021-01-04 2024-02-02 中国医学科学院基础医学研究所 一种人乳头瘤病毒18型嵌合蛋白及其用途
CN114716560A (zh) * 2021-01-04 2022-07-08 中国医学科学院基础医学研究所 一种人乳头瘤病毒18型嵌合蛋白及其用途
CN116143938A (zh) * 2021-02-04 2023-05-23 广东珩达生物医药科技有限公司 一种covid-19亚单位疫苗及其制备方法与应用
CN113321739A (zh) * 2021-02-04 2021-08-31 广东克冠达生物医药科技有限公司 一种covid-19亚单位疫苗及其制备方法与应用
CN116143938B (zh) * 2021-02-04 2023-11-10 广东克冠达医药科技有限公司 一种covid-19亚单位疫苗及其制备方法与应用
CN112851824A (zh) * 2021-02-09 2021-05-28 浙江大学 一种融合蛋白及其在制备新型冠状病毒亚单位疫苗中的应用
WO2022171904A1 (en) 2021-02-15 2022-08-18 Livingmed Biotech S.R.L. Genetically modified clostridium strains expressing recombinant antigens and uses thereof
WO2022178545A1 (en) * 2021-02-19 2022-08-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Novel compositions of matter comprising stabilized coronavirus antigens and their use
WO2022206222A1 (zh) * 2021-03-31 2022-10-06 国药中生生物技术研究院有限公司 一种新型冠状病毒s-rbd三聚体蛋白疫苗、其制备方法和应用
CN113336857A (zh) * 2021-04-02 2021-09-03 深圳市众循精准医学研究院 一种新型新冠病毒亚单位疫苗及其构建方法
WO2023002433A1 (en) * 2021-07-22 2023-01-26 Engeneic Molecular Delivery Pty Ltd Compositions and vaccines for treating and/or preventing coronavirus variant infections and methods of using the same
US20230144457A1 (en) * 2021-10-27 2023-05-11 Akebia Therapeutics, Inc. Methods for treating viral infections, organ injury, and related conditions
CN114196701B (zh) * 2021-11-17 2023-10-10 浙江迪福润丝生物科技有限公司 一种sars-cov-2的二价重组新城疫病毒载体及相应疫苗株和制备方法
CN114196701A (zh) * 2021-11-17 2022-03-18 浙江迪福润丝生物科技有限公司 一种sars-cov-2的二价重组新城疫病毒载体及相应疫苗株和制备方法
CN114262718A (zh) * 2021-12-28 2022-04-01 武汉爱博泰克生物科技有限公司 一种人源Ly6d重组蛋白细胞分泌表达方法及应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021243974A1 (zh) 2021-12-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111662389A (zh) 一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物
CN116143938B (zh) 一种covid-19亚单位疫苗及其制备方法与应用
CN110951756A (zh) 表达SARS-CoV-2病毒抗原肽的核酸序列及其应用
CN108624601B (zh) 酵母表达的柯萨奇病毒a10病毒样颗粒及其应用
WO2022257237A1 (zh) 一种新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽抗原及其特异性中和抗体和应用
CN107384944B (zh) 酵母表达的柯萨奇病毒a6病毒样颗粒及其应用
CN116019906A (zh) 新型冠状病毒免疫原性组合物、其制备方法和应用
WO2022003119A1 (en) Cross-reactive coronavirus vaccine
WO2021042947A1 (zh) 微环dna疫苗设计及应用
JP2021529538A (ja) 重症熱性血小板減少症候群（ｓｆｔｓ）ウイルス感染疾患の予防または治療用ワクチン組成物
CN118146319B (zh) 一种vzv重组蛋白及其制备方法和应用
CN111548395A (zh) 一种口蹄疫病毒二价多表位重组病毒样颗粒及其应用
CN108503696B (zh) 一种酵母细胞表达的寨卡病毒亚单位疫苗
Chen et al. Extract from Agaricus blazei Murill can enhance immune responses elicited by DNA vaccine against foot-and-mouth disease
WO2023160654A1 (zh) 一种可诱导广谱中和活性重组多组分新冠病毒三聚体蛋白疫苗的制备及应用
CN111514287A (zh) 甲型流感通用型dna疫苗及其制备方法和应用
CN114853906B (zh) 一种重组森林脑炎病毒的融合蛋白和重组森林脑炎病毒细菌样颗粒疫苗及它们的应用
CN113151331B (zh) SARS-ConV-2病毒S蛋白膜外BD端结构域高靶向性重组蛋白及其亚单位疫苗
CN114437236A (zh) 一种重组非洲猪瘟病毒多表位融合蛋白、制备及其应用
CN115322247A (zh) 一种新型冠状病毒受体结合区电荷突变体抗原及应用
KR102680105B1 (ko) 코로나19 바이러스 및 인플루엔자 h1n1 바이러스에 대한 바이러스 유사입자 및 이의 용도
Li et al. Immunogenicity and Antigenicity of the Ectodomain of Rabies Virus Glycoprotein Stably Expressed in HEK293T Cells
CN105198982B (zh) 基于il-6的抗原表位及其应用
RU2628693C1 (ru) РЕКОМБИНАНТНЫЙ ГЕН L1HPV16, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pQE-L1/16, БЕЛОК L1HPV16 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
CN117003888B (zh) 一种产肠毒素大肠杆菌抗原多表位融合蛋白及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200915

RJ01 Rejection of invention patent application after publication