CN112220920A - 一种重组新型冠状病毒疫苗组合物 - Google Patents

一种重组新型冠状病毒疫苗组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN112220920A
CN112220920A CN202011195131.1A CN202011195131A CN112220920A CN 112220920 A CN112220920 A CN 112220920A CN 202011195131 A CN202011195131 A CN 202011195131A CN 112220920 A CN112220920 A CN 112220920A
Authority
CN
China
Prior art keywords
leu
thr
ser
val
asn
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202011195131.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112220920B (zh
Inventor
刘海涛
宋玉娇
李佳黛
周晨亮
张玲莉
刘革
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Zerun Biotech Co Ltd
Original Assignee
Shanghai Zerun Biotech Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Zerun Biotech Co Ltd filed Critical Shanghai Zerun Biotech Co Ltd
Priority to CN202011195131.1A priority Critical patent/CN112220920B/zh
Publication of CN112220920A publication Critical patent/CN112220920A/zh
Priority to PCT/CN2021/124364 priority patent/WO2022089233A1/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112220920B publication Critical patent/CN112220920B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种重组新型冠状病毒（SARS‑CoV‑2）疫苗组合物，该疫苗组合物包含具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的重组刺突蛋白。所述疫苗组合物进一步包含药学上可接受的载体，例如铝佐剂联合CpG ODN佐剂。该疫苗组合物在小鼠中显示优异的免疫原性，能诱导机体产生高滴度的偏向于Th1的抗体反应和高水平的细胞免疫反应。动物模型实验显示，该疫苗组合物可以诱导高滴度的中和抗体，并显著降低肺和鼻甲组织内部的病毒载量。

Description

一种重组新型冠状病毒疫苗组合物
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体而言，本发明涉及一种重组新型冠状病毒疫苗组合物。
背景技术
新冠肺炎（COVID-19）是由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染引起的呼吸道疾病。截止到2020年10月20日，全球范围内已有超过4000万人感染，超过110万人因感染SARS-CoV-2病毒而死亡。新冠肺炎在全球范围内的大流行已经对人类的健康和经济发展带来了巨大的影响。因此，迫切需要寻求一种途径遏制病毒的传播。疫苗是一种有效且经济的消灭SARS-CoV-2病毒的方式。根据世界卫生组织（WHO）统计，目前已经有多达42种不同类型的候选疫苗成功地进入了临床试验。
SARS-CoV-2属于β属B亚群，是一种有包膜的单股正链RNA病毒。该病毒属还包含SARS-CoV和MERS-CoV，它们都是通过病毒颗粒表面的刺突蛋白（Spike，S蛋白）与宿主细胞表面受体结合而感染宿主。刺突蛋白作为病毒颗粒表面唯一的蛋白，最易受到免疫系统产生的特异性中和性抗体的攻击。目前研究表明，人体感染SARS-CoV-2后，可以诱导出大量的针对刺突蛋白的中和性抗体，并且体外实验证明这些中和性抗体可以阻止病毒侵染宿主细胞。这也是前期针对SARS-CoV和MERS-CoV的疫苗研发中，选择刺突蛋白作为抗原的主要原因。
通常，单独蛋白作为疫苗的抗原成分时，其免疫原性较弱，需要辅加佐剂以增强疫苗的效果。铝佐剂是一种安全的传统佐剂，已有的研究结果认为铝佐剂的主要作用为抗原仓储缓释作用、增强抗原的递呈、增强2型辅助性T细胞（T helper cells 2，Th2）介导的适应性免疫应答、增强机体固有免疫应答和激活补体作用等。针对SARS-CoV-2疫苗，诱导机体产生倾向于Th2的免疫应答有引起疫苗诱导的病情加重（Vaccine-associated enhancedrespiratory disease, VAERD）的潜在风险。CpG ODN作为一种Toll样受体9（TLR9）的激动剂，通过激活下游天然免疫反应通路，诱导I型干扰素和炎症因子表达，从而增强体液免疫和细胞免疫反应。研究表明，CpG ODN主要诱导机体产生倾向于Th1的免疫应答，因此在疫苗中联合使用CpG ODN可能有助于降低潜在的VAERD风险。CpG ODN作为疫苗佐剂的安全性已在临床上得到验证。CpG 1018用于Dynavax公司的乙肝疫苗（Heplisav-B），已经于2017年在美国获批上市。
发明内容
因此，本发明提供了一种重组新型冠状病毒疫苗组合物，该疫苗组合物含有重组刺突蛋白。为了还原自然条件下刺突蛋白在病毒表面的三聚体结构，同时通过三聚体化增加抗原免疫原性，本发明通过基因工程改造，去除了刺突蛋白的跨膜区和C端囊膜内段，同时在蛋白C端加入了一个有助于蛋白三聚体化的结构域，因此也称该重组刺突蛋白为SΔTM蛋白（以下简称“rS蛋白”）。在一些优选的实施方式中，所述rS蛋白具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。
本发明提供的重组新型冠状病毒疫苗组合物还包含药学上可接受的载体。在一些优选的实施方式中，所述载体为铝佐剂联合CpG ODN佐剂。在进一步的实施方式中，所述铝佐剂为氢氧化铝。在进一步的实施方式中，所述CpG ODN佐剂为CpG 7909。在进一步的实施方式中，所述载体为氢氧化铝联合CpG 7909。
在一些优选的实施方式中，本发明的疫苗组合物含有5μg-100μg/0.5ml的重组刺突蛋白（即rS蛋白）。在一个优选的实施方式中，rS蛋白的含量为25μg-100μg/0.5ml。
在一些优选的实施方式中，铝佐剂的含量在100μg-600μg/0.5ml之间。在一个优选的实施方式中，铝佐剂的含量在250μg-500μg/0.5ml之间。在一个优选的实施方式中，本发明的疫苗组合物含有250μg-500μg/0.5ml的氢氧化铝。
在一些优选的实施方式中，CpG ODN佐剂的含量在50μg-1200μg/0.5ml之间。在一个优选的实施方式中，CpG ODN佐剂的含量在125μg-500μg/0.5ml之间。在一个优选的实施方式中，本发明的疫苗组合物含有125μg-500μg/0.5ml的CpG 7909。
有益效果：本发明提供的重组新型冠状病毒疫苗可以在小鼠模型中诱导出高滴度的偏向于Th1的抗体反应和高水平的细胞免疫反应。同时，包含联合佐剂的疫苗诱导的免疫反应显著优于不加佐剂的重组刺突蛋白以及只加铝佐剂或者只加CpG ODN佐剂的疫苗诱导的免疫反应。除此之外，叙利亚黄金仓鼠上的保护效力研究显示，该疫苗可以诱导高滴度的中和抗体，并且明显降低肺和鼻甲组织内部的病毒载量，说明该疫苗对新型冠状病毒具有良好的免疫保护效果。
本发明的其它方面根据本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
附图说明
图1. 不同佐剂组合的疫苗诱导的血清IgG抗体水平比较图；
图2. 不同佐剂组合的疫苗诱导的基于野生型活病毒的中和抗体水平比较图；
图3. 不同佐剂组合的疫苗诱导的IgG抗体亚型的分布比较图；
图4. 不同佐剂组合的疫苗诱导的细胞免疫反应水平比较图；
图5. 剂量配比实验各组疫苗诱导的血清IgG抗体水平比较图；
图6. 剂量配比实验各组疫苗诱导的基于假病毒的中和抗体水平比较图；
图7. 叙利亚黄金仓鼠第二次免疫后14天中和抗体滴度水平；
图8. 叙利亚黄金仓鼠攻毒7天后肺和鼻甲组织的病毒载量。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明。需要指出的是以下实施例仅是范例性的，并不对本发明的权利要求所限定的保护范围构成任何限制。
实施例1：疫苗组合物的制备
为了研究本发明所提供的疫苗组合物的技术效果，本发明人制成了以下多种疫苗组合物制剂（0.5ml/剂），每种组合物均含有rS蛋白、氢氧化铝佐剂和／或CpG 7909。具体配制方法为：先将CpG 7909样品吸附到氢氧化铝佐剂上，制备成不同比例的CpG 7909/氢氧化铝佐剂（w/w）吸附样品（此处氢氧化铝佐剂的含量实质上为铝元素的含量）；然后向该CpG 7909／氢氧化铝佐剂样品中加入不同浓度的rS蛋白原液。上述制剂充分混合后，如果不立即施用，则储存于2-8°C。具体比例如表1所示。
表1：各疫苗组合物的组成成分
Figure DEST_PATH_IMAGE001
实施例2：比较不同佐剂组合的新型冠状病毒疫苗在BALB/c小鼠模型上的免疫学评价
1. 小鼠分组以及动物免疫策略
对48只SPF级雌性BALB/c小鼠（6-8周龄）进行分组。每组8只或10只小鼠，共5组。组别信息具体见表2。根据表2分组情况对小鼠进行免疫，免疫方式为肌肉注射小鼠大腿内侧，注射体积为50μl／剂／只（1/10人拟用剂量）。每只小鼠共免疫2次，免疫间隔为3周。
表2：比较不同佐剂组合实验中BALB/c小鼠分组情况
Figure 782681DEST_PATH_IMAGE002
2．疫苗诱导的抗体反应检测
在第二次免疫后两周分别对各组小鼠进行采血，分离血清。通过ELISA检测血清中针对rS蛋白的IgG抗体滴度（图1）；通过基于野生型活病毒的中和实验检测血清中和抗体滴度（图2）；通过抗体分型检测血清中IgG2a和IgG1抗体亚型的分布（图3）。其中*代表p<0.05；**代表p<0.01；***代表p<0.001；****代表p<0.0001；LOD代表检测下限。
与对照组（组别1）相比，各组别小鼠第二次免疫后两周的血清均能检测到一定水平的针对rS蛋白的IgG，且抗体滴度由高到低依次为双佐剂组、单独CpG 7909组、单独铝佐剂组、不含佐剂组。各组别基于野生型活病毒的中和抗体水平的趋势与血清中针对rS蛋白的IgG抗体水平一致，rS蛋白联合双佐剂组诱导的中和抗体滴度最高。除此之外，rS蛋白联合双佐剂组诱导的针对rS蛋白的IgG抗体的亚型偏向于IgG2a。
3．疫苗诱导的细胞免疫反应检测
第二次免疫后两周每组处死5只小鼠，取其脾脏制备单细胞悬液，通过胞内细胞因子染色实验技术特异性地检测免疫后小鼠脾脏细胞经多肽刺激后的CD4+ T细胞和CD8+ T细胞分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的能力（图4）。结果表明：rS蛋白联合双佐剂组可以诱导脾脏细胞分泌较高水平的IFN-γ、IL-2和TNF-α，其次是rS蛋白联合单独铝佐剂组；与之相比，rS蛋白联合单独CpG 7909组诱导的细胞免疫反应较弱，而单独rS蛋白组几乎检测不到细胞免疫反应。除此之外，脾脏细胞中分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的细胞主要是CD4+ T细胞。
基于以上结果，rS蛋白联合双佐剂作为本发明的疫苗中的组分显著优于rS蛋白联合单独铝佐剂或者单独CpG 7909或者不联合任何佐剂。
实施例3：比较不同剂量配比的新型冠状病毒疫苗在BALB/c小鼠模型上的免疫学评价
1. 小鼠分组以及动物免疫策略
对140只SPF级雌性BALB/c小鼠（6-8周龄）进行分组。每组10只，共14组。组别信息具体见表3。根据表3分组情况对小鼠进行免疫，免疫方式为肌肉注射小鼠大腿内侧，注射体积为50μl／剂／只（1/10人拟用剂量）。每只小鼠共免疫2次，免疫间隔为3周。
表3：比较剂量配比实验中BALB/c小鼠分组情况
Figure DEST_PATH_IMAGE003
2．疫苗诱导的抗体反应检测
在第二次免疫后两周分别对各组小鼠进行采血，分离血清。通过ELISA检测血清中针对rS蛋白的IgG抗体滴度（图5）；通过基于假病毒的中和实验检测血清中和抗体滴度（图6）。其中LOD代表检测下限。
双佐剂对照组未检测出抗原特异性的结合抗体；除5.0μg rS蛋白/50μg氢氧化铝佐剂组别结合抗体水平相对较低之外，其他组别都诱导出较高水平的结合抗体滴度。从基于假病毒中和实验检测的各组别小鼠血清中和抗体滴度的结果来看，0.5μg rS蛋白/50μg氢氧化铝佐剂/50μg CpG 7909组别和5.0μg rS蛋白/50μg氢氧化铝佐剂组别诱导的中和抗体滴度相对较低，其他组别都诱导出较高水平的中和抗体滴度。当抗原剂量和CpG 7909剂量不变时，氢氧化铝佐剂剂量为50μg时略微优于25μg，但是组别之间无显著性差异。当氢氧化铝佐剂剂量和CpG 7909剂量分别为50μg不变时，随着抗原剂量的增加，中和抗体滴度随之增加。当rS蛋白剂量为5.0μg以及氢氧化铝佐剂剂量为50μg不变时，CpG 7909剂量为25μg时优于剂量为50μg或者12.5μg；且当CpG 7909剂量降为0μg时，中和抗体滴度显著下降。
实施例4：重组新型冠状病毒疫苗在叙利亚金黄仓鼠模型中对SARS-CoV-2的保护效力
实验分为两组，分别为对照组和疫苗组。对照组后腿肌肉注射100μg氢氧化铝佐剂／100μg CpG 7909，疫苗组后腿肌肉注射10μg rS蛋白／100μg氢氧化铝佐剂／100μg CpG 7909，注射体积均为100μl。每只叙利亚金黄仓鼠免疫2次，免疫间隔为3周。第二次免疫后2周，采血并分离血清，检测基于野生型活病毒的中和抗体滴度。第二次免疫后3周，仓鼠经麻醉后通过鼻腔（i.n.）攻毒105 TCID50 SARS-CoV-2。攻毒后7天，处死全部仓鼠，解剖取肺和鼻甲组织，用于病毒载量测定（qRT-PCR）。
疫苗组叙利亚金黄仓鼠在第二次免疫后两周诱导出强烈的中和抗体反应，抗体滴度达2300。与之相比，对照组叙利亚金黄仓鼠的血清的抗体滴度位于检测下限（LOD）（图7）。攻毒后7天，对照组叙利亚金黄仓鼠的肺组织病毒载量为106.3拷贝/ml，鼻甲组织的病毒载量为104.9拷贝/ml。疫苗组叙利亚金黄仓鼠的肺组织病毒载量为103.3拷贝/ml，与对照组相比，病毒载量下降3.0lg值（p < 0.01）；鼻甲组织的病毒载量为103.9拷贝/ml，与对照组相比，病毒载量下降1.0lg值（p < 0.01, 图8）。以上结果表明，该疫苗对新型冠状病毒具有良好的免疫保护效果。
SEQ ID NO：1的氨基酸序列如下：
QCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPGGSGSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDPPEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKWPGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFL
<110> 上海泽润生物科技有限公司
<120> 一种重组新型冠状病毒疫苗组合物
<130> CPCH2062640N
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1229
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn
290 295 300
Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr
305 310 315 320
Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser
325 330 335
Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr
340 345 350
Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly
355 360 365
Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala
370 375 380
Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly
385 390 395 400
Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe
405 410 415
Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val
420 425 430
Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu
435 440 445
Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser
450 455 460
Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln
465 470 475 480
Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg
485 490 495
Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys
500 505 510
Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe
515 520 525
Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys
530 535 540
Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr
545 550 555 560
Asp Ala Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro
565 570 575
Cys Ser Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser
580 585 590
Asn Gln Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro
595 600 605
Val Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser
610 615 620
Thr Gly Ser Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala
625 630 635 640
Glu His Val Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly
645 650 655
Ile Cys Ala Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Gly Gly Ser Gly
660 665 670
Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala
675 680 685
Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn
690 695 700
Phe Thr Ile Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys
705 710 715 720
Thr Ser Val Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys
725 730 735
Ser Asn Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg
740 745 750
Ala Leu Thr Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val
755 760 765
Phe Ala Gln Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe
770 775 780
Gly Gly Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser
785 790 795 800
Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala
805 810 815
Asp Ala Gly Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala
820 825 830
Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu
835 840 845
Pro Pro Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu
850 855 860
Leu Ala Gly Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala
865 870 875 880
Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile
885 890 895
Gly Val Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn
900 905 910
Gln Phe Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr
915 920 925
Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln
930 935 940
Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile
945 950 955 960
Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Pro Pro Glu Ala
965 970 975
Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln
980 985 990
Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser
995 1000 1005
Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln
1010 1015 1020
Ser Lys Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser
1025 1030 1035
Phe Pro Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr
1040 1045 1050
Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile
1055 1060 1065
Cys His Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val
1070 1075 1080
Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu
1085 1090 1095
Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys
1100 1105 1110
Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu
1115 1120 1125
Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe
1130 1135 1140
Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly
1145 1150 1155
Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu
1160 1165 1170
Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln
1175 1180 1185
Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Gly Ser Gly
1190 1195 1200
Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys
1205 1210 1215
Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu
1220 1225

Claims (8)

1.一种重组新型冠状病毒疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包含具有SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的重组刺突蛋白。
2.如权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物含有5-100μg/0.5ml，优选地25-100μg/0.5ml的重组刺突蛋白。
3.如权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物进一步包含药学上可接受的载体。
4.如权利要求3所述的疫苗组合物，其特征在于，所述药学上可接受的载体为铝佐剂联合CpG ODN佐剂。
5.如权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于，所述铝佐剂为氢氧化铝。
6.如权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物含有100-600μg/0.5ml，优选地250-500μg/0.5ml的铝佐剂。
7.如权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于，所述CpG ODN佐剂为CpG 7909。
8.如权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物含有50-1200μg/0.5ml，优选地125-500μg/0.5ml的CpG ODN佐剂。
CN202011195131.1A 2020-10-30 2020-10-30 一种重组新型冠状病毒疫苗组合物 Active CN112220920B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011195131.1A CN112220920B (zh) 2020-10-30 2020-10-30 一种重组新型冠状病毒疫苗组合物
PCT/CN2021/124364 WO2022089233A1 (zh) 2020-10-30 2021-10-18 重组刺突蛋白及其制备方法和用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011195131.1A CN112220920B (zh) 2020-10-30 2020-10-30 一种重组新型冠状病毒疫苗组合物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112220920A true CN112220920A (zh) 2021-01-15
CN112220920B CN112220920B (zh) 2023-06-13

Family

ID=74122616

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011195131.1A Active CN112220920B (zh) 2020-10-30 2020-10-30 一种重组新型冠状病毒疫苗组合物

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112220920B (zh)

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113304257A (zh) * 2021-04-15 2021-08-27 浙江天元生物药业有限公司 一种双佐剂新型冠状病毒灭活疫苗的制备方法及应用
CN113476600A (zh) * 2021-07-09 2021-10-08 海南大学 Avc-29作为疫苗佐剂的用途以及含有该佐剂的疫苗组合物
CN114316071A (zh) * 2021-12-29 2022-04-12 浙江大学 一种重组腮腺炎病毒颗粒、组合物及其用途
WO2022089233A1 (zh) * 2020-10-30 2022-05-05 上海泽润生物科技有限公司 重组刺突蛋白及其制备方法和用途
US11389528B2 (en) 2020-06-10 2022-07-19 Sichuan Clover Biopharmaceuticals, Inc Coronavirus vaccine compositions, methods, and uses thereof
CN115073565A (zh) * 2022-06-13 2022-09-20 华素生物科技(北京)有限公司 重组新型冠状病毒s蛋白三聚体及其制备方法与应用
WO2022228560A1 (zh) * 2021-04-30 2022-11-03 华普生物技术(江苏)股份有限公司 人工合成的含CpG单链脱氧寡核苷酸在疫苗中的应用
WO2022238689A1 (en) 2021-05-11 2022-11-17 Oxford Vacmedix UK Limited Vaccine formulation comprising recombinant overlapping peptides and native prtoeins
US11547673B1 (en) 2020-04-22 2023-01-10 BioNTech SE Coronavirus vaccine
WO2023165435A1 (zh) * 2022-03-01 2023-09-07 上海泽润生物科技有限公司 重组刺突蛋白及其制备方法和用途
US11878055B1 (en) 2022-06-26 2024-01-23 BioNTech SE Coronavirus vaccine

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009085025A2 (en) * 2007-06-19 2009-07-09 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
CN111662389A (zh) * 2020-06-05 2020-09-15 广州中医药大学(广州中医药研究院) 一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物
CN111671890A (zh) * 2020-05-14 2020-09-18 苏州大学 一种新型冠状病毒疫苗及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009085025A2 (en) * 2007-06-19 2009-07-09 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
CN111671890A (zh) * 2020-05-14 2020-09-18 苏州大学 一种新型冠状病毒疫苗及其应用
CN111662389A (zh) * 2020-06-05 2020-09-15 广州中医药大学(广州中医药研究院) 一种SARS-CoV-2的融合蛋白及其疫苗组合物

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11925694B2 (en) 2020-04-22 2024-03-12 BioNTech SE Coronavirus vaccine
US11547673B1 (en) 2020-04-22 2023-01-10 BioNTech SE Coronavirus vaccine
US11389528B2 (en) 2020-06-10 2022-07-19 Sichuan Clover Biopharmaceuticals, Inc Coronavirus vaccine compositions, methods, and uses thereof
WO2022089233A1 (zh) * 2020-10-30 2022-05-05 上海泽润生物科技有限公司 重组刺突蛋白及其制备方法和用途
CN113304257A (zh) * 2021-04-15 2021-08-27 浙江天元生物药业有限公司 一种双佐剂新型冠状病毒灭活疫苗的制备方法及应用
WO2022228560A1 (zh) * 2021-04-30 2022-11-03 华普生物技术(江苏)股份有限公司 人工合成的含CpG单链脱氧寡核苷酸在疫苗中的应用
WO2022238689A1 (en) 2021-05-11 2022-11-17 Oxford Vacmedix UK Limited Vaccine formulation comprising recombinant overlapping peptides and native prtoeins
CN113476600B (zh) * 2021-07-09 2023-05-30 海南大学 Avc-29作为疫苗佐剂的用途以及含有该佐剂的疫苗组合物
CN113476600A (zh) * 2021-07-09 2021-10-08 海南大学 Avc-29作为疫苗佐剂的用途以及含有该佐剂的疫苗组合物
CN114316071A (zh) * 2021-12-29 2022-04-12 浙江大学 一种重组腮腺炎病毒颗粒、组合物及其用途
CN114316071B (zh) * 2021-12-29 2024-03-08 浙江大学 一种重组腮腺炎病毒颗粒、组合物及其用途
WO2023165435A1 (zh) * 2022-03-01 2023-09-07 上海泽润生物科技有限公司 重组刺突蛋白及其制备方法和用途
CN115073565A (zh) * 2022-06-13 2022-09-20 华素生物科技(北京)有限公司 重组新型冠状病毒s蛋白三聚体及其制备方法与应用
CN115073565B (zh) * 2022-06-13 2023-02-21 华素生物科技(北京)有限公司 重组新型冠状病毒s蛋白三聚体及其制备方法与应用
US11878055B1 (en) 2022-06-26 2024-01-23 BioNTech SE Coronavirus vaccine

Also Published As

Publication number Publication date
CN112220920B (zh) 2023-06-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112220920B (zh) 一种重组新型冠状病毒疫苗组合物
Zhao et al. Airway memory CD4+ T cells mediate protective immunity against emerging respiratory coronaviruses
KR101792684B1 (ko) 불활성화된 치쿤구니야 바이러스 균주를 포함하는 백신 조성물
AU2010249330B2 (en) Vaccines against Herpes Simplex Virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
TWI620574B (zh) 口蹄疫合成胜肽緊急疫苗
KR102034234B1 (ko) 대상포진 백신 조성물
KR20220019846A (ko) B형 간염 바이러스에 대한 백신
ES2351489T3 (es) Vacunas mejoradas.
CA3160755A1 (en) Treatment of diseases related to hepatitis b virus
Olivera et al. Protective cellular immune response against hepatitis C virus elicited by chimeric protein formulations in BALB/c mice
Guo et al. A pathogen-like antigen-based vaccine confers immune protection against SARS-CoV-2 in non-human primates
Jin et al. Induction of potent cellular immune response in mice by hepatitis C virus NS3 protein with double‐stranded RNA
Wang et al. Immunization with recombinant Erns-LTB fusion protein elicits protective immune responses against bovine viral diarrhea virus
RU2748643C2 (ru) Слитый белок
US20080085261A1 (en) Vaccine Adjuvant
CN113248575B (zh) 一种针对SARS-CoV-2的重组蛋白疫苗及其制备方法
CA3222356A1 (en) Compositions and methods to increase coronavirus immune response
WO2023023591A1 (en) Development of mosaic vaccines against foot and mouth disease virus serotype o
EP2370100B1 (en) Peptide adjuvants
KR20040022423A (ko) 아쥬반트로서 제１형 ｉｆｎ을 포함하는 백신 및 이와관련된 방법
KR20230022160A (ko) 사이토메갈로바이러스의 gB와 펜타머의 융합 단백질 및 당해 융합 단백질을 포함하는 백신
WO2021216560A2 (en) Vaccine compositions for sars-related coronaviruses and methods of use
Alvarez-Lajonchere et al. Advances in DNA immunization against hepatitis C virus infection: Opportunities and challenges
Zhan et al. Enhancement of humoral immunity in mice by coupling pUCpGs10 and aluminium to the HCV recombinant immunogen
TWI272104B (en) Immunization against flavivirus

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
CB03 Change of inventor or designer information
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Liu Haitao

Inventor after: Song Yujiao

Inventor after: Li Jiadai

Inventor after: Zhou Chenliang

Inventor after: Zhang Lingli

Inventor after: Liu Ge

Inventor before: Liu Haitao

Inventor before: Song Yujiao

Inventor before: Li Jiadai

Inventor before: Zhou Chenliang

Inventor before: Zhang Lingli

Inventor before: Liu Ge

SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant