CN109715791B - 蛋白酶变体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本文公开了可用于清洁应用和清洁方法的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体。一个实施例涉及一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体和包含一种或多种此类变体的一种或多种清洁组合物，所述变体包括芽孢杆菌属物种的一种或多种枯草杆菌蛋白酶多肽变体。

Description

蛋白酶变体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请涉及并要求于2016年5月3日提交的美国临时专利申请序列号62/331,282的优先权权益，将该临时专利申请通过援引以其全文并入本文。
本文公开了可用于清洁应用和清洁方法的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体。一个实施例涉及一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体和包含一种或多种此类变体的一种或多种清洁组合物，所述变体包括芽孢杆菌属物种(Bacillus sp.)的一种或多种枯草杆菌蛋白酶多肽变体。
以电子方式提交的序列表的引用
作为ASCII文本文件(名称：NB41117WOPCT_ST25；大小：895KB；创建于2017年5月2日)与本申请一起以电子方式提交的序列表的内容形成本申请的一部分，并且通过援引以其全文并入本文。
蛋白酶(也称为朊酶)是指具有分解其他蛋白质的能力的酶蛋白质。蛋白酶具有通过在形成蛋白质的肽或多肽链中将氨基酸连接在一起的肽键的水解来开始蛋白质分解代谢以进行蛋白水解的能力。蛋白酶作为蛋白质消化酶的这种活性被称为蛋白水解活性。存在用于测量蛋白水解活性的许多众所周知的方法(Kalisz,"Microbial Proteinases[微生物朊酶],"在Fiechter(编辑)，Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology [生化工程/生物技术进展],(1988)中)。例如，蛋白水解活性可以通过分析各个蛋白酶水解商业底物的能力的对比试验来确定。可用于分析蛋白酶或蛋白水解活性的示例性底物包括但不限于二甲基酪蛋白(西格玛公司(Sigma)C-9801)、牛胶原(西格玛公司(Sigma)C-9879)、牛弹性蛋白(西格玛公司(Sigma)E-1625)和牛角蛋白(ICN生物医学公司(ICNBiomedical)902111)。使用这些底物的比色测定是本领域熟知的(参见例如WO 99/34011和美国专利号6,376,450，这两者都通过援引并入本文)。
丝氨酸蛋白酶属于羰基水解酶亚群，其包含具有广泛特异性和生物学功能的不同类别的酶。已经对丝氨酸蛋白酶(例如枯草杆菌蛋白酶)进行了大量研究，这主要归因于它们在清洁和饲料应用中的有用性。尽管已经开发了许多有用的变体蛋白酶来解决与这些应用有关的需求，但是仍然需要改善的蛋白酶。
一个实施例提供了分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：78-X206A/D/F/G/H/M/N/P/R/S/Y、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-206、X78N-X206F/M/Y、X78G-X206D/F/H/M/N/P/R/Y、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X206A/D/F/G/H/M/N/P/R/S/Y、18-X78N、X18K/R-X78N、18-X87R、X18K/R-X87R、18-X206L/Y、X18K/R-X206L/Y、24-X87R、X24F/L/P/R-X87R、24-X206Y、X24F/L/P-206、X24F/L/P-X206Y、X24F/L/P-X209W、40-78、X40E-78、40-X78G、X40E-X78G、40-87、X40E-87、40-X87R、X40E-X87R、40-129、40-X129Q、X40E-129、X40E-X129Q、40-130、40-X130A、X40E-130、X40E-X130A、40-206、X40E-206、40-X206Y、X40E-X206Y、X78N-87、X78N-X87D/R、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-87、X78G-X87D/R/T、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X87R、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-129、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X129Q、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X130A、X78G-X130A/Q、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-130、78-X249N/R、X78N-249、X78N-X249N/R、87-X206L/Y、X87D/R-X206L/Y、87-X209W、X87D/R-X209W、87-X213A、X87D/R-213、X87D/R-X213A、X87R-X249N/R、129-X206Y、X129Q-X206Y、129-X249N/R、X129Q-249、X129Q-X249N/R、130-X206Y、X130A-X206R/Y、130-X249N/R、X130A-249、X130A-X249N/R、X206Y-209、X206Y-X209W、206-X213A、X206L/Y-213、X206L/Y-X213A、X206L/Y-249、X206L/Y-X249N/R、X209W-213、X209W-X213A、X209W-249、X209W-X249N/R、18-24-78、X18K/R-24-78、18-X24F/L/P/R-78、18-24-X78N、X18K/R-24-X78N、18-X24F/L/P/R-X78N、X18K/R-X24F/L/P/R-78、X18K/R-X24F/L/P/R-X78N、18-24-87、X18K/R-24-87、18-X24F/L/P/R-87、18-24-X87D/R、X18K/R-24-X87D/R、18-X24F/L/P/R-X87D/R、X18K/R-X24F/L/P/R-87、X18K/R-X24F/L/P/R-X87D/R、18-24-129、X18K/R-24-129、18-X24F/L/P/R-129、18-24-X129Q、X18K/R-X24F/L/P/R-129、X18K/R-24-X129Q、18-X24F/L/P/R-X129Q、X18K/R-X24F/L/P/R-X129Q、18-24-130、18-X24F/L/P/R-130、18-24-X130A、X18K/R-24-130、X18K/R-X24F/L/P/R-130、X18K/R-24-X130A、18-X24F/L/P/R-X130A、X18K/R-X24F/L/P/R-X130A、18-24-206、18-24-X206L/Y、18-X24F/L/P/R-206、X18K/R-24-206、X18K/R-24-X206L/Y、18-X24F/L/P/R-X206L/Y、X18K/R-X24F/L/P/R-206、X18K/R-X24F/L/P/R-X206L/Y、18-24-209、18-24-X209W、18-X24F/L/P/R-209、X18K/R-24-209、X18K/R-24-X209W、18-X24F/L/P/R-X209W、X18K/R-X24F/L/P/R-209、X18K/R-X24F/L/P/R-X209W、18-78-87、18-X78N-87、18-78-X87D/R、X18K/R-78-87、X18K/R-X78N-87、X18K/R-78-X87D/R、18-X78N-X87D/R、X18K/R-X78N-X87D/R、18-78-129、18-X78N-129、18-78-X129Q、X18K/R-78-129、X18K/R-X78N-129、X18K/R-78-X129Q、18-X78N-X129Q、X18K/R-X78N-X129Q、18-78-130、18-X78N-130、18-78-X130A、X18K/R-78-130、X18K/R-X78N-130、X18K/R-78-X130A、18-X78N-X130A、X18K/R-X78N-X130A、18-78-206、18-78-X206L/Y、18-X78N-206、X18K/R-78-206、18-X78N-X206L/Y、X18K/R-X78N-206、X18K/R-78-X206L/Y、X18K/R-X78N-X206L/Y、18-78-209、18-X78N-209、18-78-X209W、X18K/R-78-209、X18K/R-78-X209W、18-X78N-X209W、X18K/R-X78N-209、X18K/R-X78N-X209W、18-78-213、18-X78N-213、18-78-X213A、X18K/R-78-213、18-X78N-X213A、X18K/R-X78N-213、X18K/R-78-X213A、X18K/R-X78N-X213A、18-78-249、18-78-X249N/R、18-X78N-249、X18K/R-78-249、18-X78N-X249N/R、X18K/R-X78N-249、X18K/R-78-X249N/R、X18K/R-X78N-X249N/R、18-87-129、X18K/R-87-129、18-X87D/R-129、18-87-X129Q、18-X87D/R-X129Q、X18K/R-87-X129Q、X18K/R-X87D/R-129、X18K/R-X87D/R-X129Q、18-87-130、X18K/R-87-130、18-X87D/R-130、18-87-X130A、18-X87D/R-X130A、X18K/R-87-X130A、X18K/R-X87D/R-130、X18K/R-X87D/R-X130A、18-87-206、X18K/R-87-206、18-X87D/R-206、18-87-X206L/Y、18-X87D/R-X206L/Y、X18K/R-87-X206L/Y、X18K/R-X87D/R-206、X18K/R-X87D/R-X206L/Y、18-87-209、X18K/R-87-209、18-X87D/R-209、18-87-X209W、18-X87D/R-X209W、X18K/R-X87D/R-209、X18K/R-87-X209W、X18K/R-X87D/R-X209W、18-X87D/R-213、18-87-X213A、18-X87D/R-X213A、X18K/R-X87D/R-213、X18K/R-87-X213A、X18K/R-X87D/R-X213A、18-87-249、X18K/R-87-249、18-X87D/R-249、18-87-X249N/R、18-X87D/R-249N/R、18K/R-X87D/R-249、18K/R-87-X249N/R、18K/R-X87D/R-X249N/R、18-129-130、X18K/R-129-130、18-X129Q-130、18-129-X130A、X18K/R-X129Q-130、X18K/R-129-X130A、18-X129Q-X130A、X18K/R-X129Q-X130A、18-129-206、X18K/R-129-206、18-X129Q-206、18-129-X206L/Y、X18K/R-X129Q-206、X18K/R-129-X206L/Y、18-X129Q-X206L/Y、X18K/R-X129Q-X206L/Y、18-129-209、X18K/R-129-209、18-X129Q-209、18-129-X209W、X18K/R-X129Q-209、X18K/R-129-X209W、18-X129Q-X209W、X18K/R-X129Q-X209W、18-129-213、X18K/R-129-213、18-X129Q-213、18-129-X213A、X18K/R-X129Q-213、X18K/R-129-X213A、18-X129Q-X213A、X18K/R-X129Q-X213A、18-129-249、X18K/R-129-249、18-X129Q-249、18-129-X249N/R、X18K/R-X129Q-249、X18K/R-129-X249N/R、18-X129Q-X249N/R、X18K/R-X129Q-X249N/R、18-130-206、X18K/R-130-206、18-X130A-206、18-130-X206L/Y、X18K/R-X130A-206、X18K/R-130-X206L/Y、18-X130A-X206L/Y、X18K/R-X130A-X206L/Y、18-130-209、X18K/R-130-209、18-X130A-209、18-130-X209W、X18K/R-X130A-209、X18K/R-130-X209W、18-X130A-X209W、X18K/R-X130A-X209W、18-130-213、X18K/R-130-213、18-X130A-213、18-130-X213A、X18K/R-X130A-213、X18K/R-130-X213A、18-X130A-X213A、X18K/R-X130A-X213A、18-130-249、X18K/R-130-249、18-X130A-249、18-130-X249N/R、X18K/R-X130A-249、X18K/R-130-X249N/R、18-X130A-X249N/R、X18K/R-X130A-X249N/R、18-206-209、18-206-X209W、18-X206L/Y-209、18K/R-206-209、18-X206L/Y-X209W、X18K/R-X206L/Y-209、X18K/R-206-X209W、X18K/R-X206L/Y-X209W、18-206-213、X18K/R-206-213、18-206L/Y-213、18-206-X213A、X18K/R-X206L/Y-213、X18K/R-206-X213A、18-X206L/Y-X213A、X18K/R-X206L/Y-X213A、18-206-249、X18K/R-206-249、18-206L/Y-249、18-206-X249N/R、X18K/R-X206L/Y-249、X18K/R-206-X2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并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
另一个实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含选自以下的两个或更多个取代：(i)3-8、3-40、3-78、3-87、3-118、3-128、3-129、3-130、3-210、3-211、3-215、3-217、3-261、3-262、8-40、8-76、8-87、8-118、8-128、8-210、8-215、8-261、18-78、18-87、18-118、18-206、24-87、24-206、24-209、24-213、24-222、40-76、40-87、40-118、40-128、40-210、40-215、40-217、40-261、76-210、76-211、76-213、76-215、76-217、76-249、76-261、76-262、78-87、78-118、78-210、78-213、78-222、78-249、87-206、87-209、87-213、87-215、87-217、87-222、87-249、87-261、118-206、118-209、118-210、118-211、118-213、118-215、118-217、118-222、118-249、118-261、118-262、128-209、128-210、128-215、128-217、128-261、129-206、129-209、130-206、130-209、206-213、206-249、209-213、209-249、210-217、210-261、213-222、213-249、215-261、222-249、及其组合；(ii)3-76-118、18-24-206、18-24-209、18-24-213、18-24-249、18-87-209、18-118-209、18-206-209、18-209-213、18-209-222、18-209-249、18-213-249、24-76-78、24-76-87、24-76-118、24-76-209、24-76-222、24-76-249、24-78-87、24-78-118、24-78-206、24-78-209、24-78-222、24-78-249、24-87-118、24-87-209、24-87-222、24-87-249、24-118-209、24-118-222、24-118-249、24-206-209、24-206-249、24-209-213、24-209-222、24-209-249、24-213-249、24-222-249、76-78-118、76-78-87、76-78-129、76-78-130、76-78-206、76-78-209、76-78-222、76-78-249、76-87-118、76-87-206、76-87-209、76-87-249、76-118-128、76-118-206、76-118-209、76-118-222、76-118-249、76-209-222、76-209-249、78-87-118、78-87-129、78-87-130、78-87-206、78-87-209、78-87-222、78-87-249、78-118-129、78-118-209、78-118-222、78-118-249、78-129-130、78-209-222、78-209-249、78-222-249、87-118-206、87-118-209、87-118-249、87-206-209、87-209-222、87-209-249、87-222-249、118-209-213、118-209-222、118-209-249、118-222-249、206-209-249、209-213-222、209-213-249、209-222-249、及其组合；(iii)X3V-X8V、X3V-X40E、X3V-X78G/N、X3V-X87D、X3V-X118R、X3V-X128R、X3V-X129Q、X3V-X130A、X3V-X210I、X3V-X211P、X3V-X215K、X3V-X217K、X3V-X261I、X3V-X262Q、X8V-X40E、X8V-X76D、X8V-X87D、X8V-X118R、X8V-X128R、X8V-X210I、X8V-X215K、X8V-X261I、X18R-X78N、X18R-X87R、X18R-X118R、X18R-X206L、X24R-S78N、X24R-X87D/R、X24R-X206L/Y、X24R-X209W、X24R-X213A、X24R-X222Q、X40E-X76D、X40E-X87D/R、X40E-X118R、X40E-X128R、X40E-X210I、X40E-X215K、X40E-X217K、X40E-X261I、X76D-X87D、X76D-X128R、X76D-X206F/R/M/Y、X76D-X210I、X76D-X211P、X76D-X213A、X76D-X215K、X76D-X217K、X76D-X249R、X76D-X261I、X76D-X262Q、X78G-X206F/L/M/Y、X78G-X210I、X78G-X261I、X78G/N-X87D/R、X78G/N-X118R、X78G/N-X128L、X78G/N-X129Q、X78G/N-X130A、X78N-X213A、X78N-X222Q、X78N-X249R、X87D-X118R、X87D-X128L/R、X87D-X129Q、X87D-X130A、X87D/R-X209W、X87D-X210I、X87D-X215K、X87D-X217K、X87D/R-X222Q、X87D/R-X249R、X87R-X206F/L/M/R/Y、X87R-X213A、X87D/R-X261I、X118R-X128R、X118R-X206F/M/L/R/Y、X118R-X209W、X118R-X210II、X118R-X211P、X118R-X213A、X118R-X215K、X118R-X217K、X118R-X222Q、X118R-X249R、X118R-X261I、X118R-X262Q、X128L-X206F/L/M/R/Y、X128L-X209W、X128R-P210I、X128R-A215K、X128R-L217K、X128R-N261I、X129Q-X206F/L/M/R/Y、X129Q-X209W、X130A-X206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、X206L/Y-X213A、X206L/Y-X222Q、X206L/Y-X249R、X209W-X213A、X209W-X222Q、X209W-X249R、X210I-X217K、X210I-X261I、X213A-X222Q、X213A-X249R、X215K-X261I、X222Q-X249R、及其组合；(iv)X3V-X76D-X118R、X18R-X24R-X206L/Y、X18R-X24R-X209W、X18R-X24R-X213A、X18R-X24R-X249R、X18R-X87D/R-X209W、X18R-X118R-X209W、X18R-X206L/Y-X209W、X18R-X206L/Y-X249R、X18R-X209W-X213A、X18R-X209W-X222Q、X18R-X209W-X249R、X18R-X213A-X249R、X24R-X76D-X78G/N、X24R-X76D-X87D/R、X24R-X76D-X118R、X24R-X76D-X209W、X24R-X76D-X222Q、X24R-X76D-X249R、X24R-X78G/N-X87D/R、X24R-X78G/N-X118R、X24R-X78G/N-X206L/Y、X24R-X78G/N-X209W、X24R-X78G/N-X222Q、X24R-X78G/N-X249R、X24R-X87D/R-X118R、X24R-X87D/R-X209W、X24R-X87D/R-X222Q、X24R-X87D/R-X249R、X24R-X118R-X209W、X24R-X118R-X222Q、X24R-X118R-X249R、X24R-X206L-X209W、X24R-X206L/Y-X249R、X24R-X209W-X213A、X24R-X209W-X222Q、X24R-X209W-X249R、X24R-X213A-X249R、X24R-X222Q-X249R、X76D-X78G/N-X87D/R、X76D-X78G/N-X118R、X76D-X78G/N-X129Q、X76D-X78G/N-X130A、X76D-X78G/N-X206L、X76D-X78G/N-X209W、X76D-X78G/N-X222Q、X76D-X78G/N-X249R、X76D-X87D/R-X118R、X76D-X87D/R-X206L/Y、X76D-X87D/R-X209W、X76D-X87D/R-X249R、X76D-X118R-X128R、X76D-X118R-X206L/Y、X76D-X118R-X209W、X76D-X118R-X222Q、X76D-X118R-X249R、X76D-X209W-X222Q、X76D-X209W-X249R、X78G/N-X87D/R-X118R、X78G/N-X87D/R-X129Q、X78G/N-X87D/R-X130A、X78G/N-X87D/R-X206L/Y、X78G/N-X87D/R-X209W、X78G/N-X87D/R-X222Q、X78G/N-X87D/R-X249R、X78G/N-X118R-X129Q、X78G/N-X118R-X209W、X78G/N-X118R-X222Q、X78G/N-X118R-X249R、X78G/N-X129Q-X130A、X78G/N-X209W-X222Q、X78G/N-X209W-X249R、X78G/N-X222Q-X249R、X87D/R-X118R-X206L、X87D/R-X118R-X209W、X87D/R-X118R-X249R、X87D/R-X206L/Y-X209W、X87D/R-X209W-X222Q、X87D/R-X209W-X249R、X87D/R-X222Q-X249R、X118R-X209W-X213A、X118R-X209W-X222Q、X118R-X209W-X249R、X118R-X222Q-X249R、X206L-X209W-X249R、X209W-X213A-X222Q、X209W-X213A-X249R、X209W-X222Q-X249R、及其组合；(v)S3V-I8V、S3V-P40E、S3V-S78G/N、S3V-S87D、S3V-G118R、S3V-S128R、S3V-P129Q、S3V-S130A、S3V-P210I、S3V-G211P、S3V-A215K、S3V-L217K、S3V-N261I、S3V-L262Q、I8V-P40E、I8V-N76D、I8V-S87D、I8V-G118R、I8V-S128R、I8V-P210I、I8V-A215K、I8V-N261I、N18R-S78N、N18R-S87R、N18R-G118R、N18R-Q206L、S24R-S78N、S24R-S87D/R、S24R-Q206L/Y、S24R-Y209W、S24R-T213A、S24R-M222Q、P40E-N76D、P40E-S87D/R、P40E-G118R、P40E-S128R、P40E-P210I、P40E-A215K、P40E-L217K、P40E-N261I、N76D-S87D、N76D-P210I、N76D-S128R、N76D-Q206F/R/M/Y、N76D-P210I、N76D-G211P、N76D-T213A、N76D-A215K、N76D-L217K、N76D-H249R、N76D-N261I、N76D-L262Q、S78G-Q206F/L/M/Y、S78G-P210I、S78G-N261I、S78G/N-S87D/R、S78G/N-G118R、S78G/N-S128L、S78G/N-P129Q、S78G/N-S130A、S78N-T213A、S78N-M222Q、S78N-H249R、S87D-G118R、S87D-S128L/R、S87D-P129Q、S87D-S130A、S87D/R-Y209W、S87D-P210I、S87D-A215K、S87D-L217K、S87D/R-M222Q、S87D/R-H249R、S87R-Q206F/L/M/R/Y、S87R-T213A、S87D/R-N261I、G118R-S128R、G118R-Q206L/R/Y、G118R-Y209W、G118R-P210I、G118R-G211P、G118R-T213A、G118R-L217K、G118R-M222Q、G118R-H249R、G118R-N261I、G118R-L262Q、S128L-Q206F/L/M/R/Y、S128L-Y209W、S128R-P210I、S128R-A215K、S128R-L217K、S128R-N261I、P129Q-Q206F/L/M/R/Y、P129Q-Y209W、S130A-Q206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-M222Q、Q206L/Y-H249R、Y209W-T213A、Y209W-M222Q、Y209W-H249R、P210I-L217K、P210I-N261I、T213A-M222Q、T213A-H249R、A215K-N261I、M222Q-H249R、及其组合；或(vi)S3V-N76D-G118R、N18R-S24R-Q206L/Y、N18R-S24R-Y209W、N18R-S24R-T213A、N18R-S24R-H249R、N18R-S87D/R-Y209W、N18R-G118R-Y209W、N18R-Q206L/Y-Y209W、N18R-Q206L/Y-H249R、N18R-Y209W-T213A、N18R-Y209W-M222Q、N18R-Y209W-H249R、N18R-T213A-H249R、S24R-N76D-S78G/N、S24R-N76D-S87D/R、S24R-N76D-G118R、S24R-N76D-Y209W、S24R-N76D-M222Q、S24R-N76D-H249R、S24R-S78G/N-S87D/R、S24R-S78G/N-G118R、S24R-S78G/N-Q206L、Y209W S24R-S78G/N-Y209W、S24R-S78G/N-M222Q、S24R-S78G/N-H249R、S24R-S87D/R-G118R、S24R-S87D/R-Y209W、S24R-S87D/R-M222Q、S24R-S87D/R-H249R、S24R-G118R-Y209W、S24R-G118R-M222Q、S24R-G118R-H249R、S24R-Q206L/Y-Y209W、S24R-Q206L/Y-H249R、S24R-Y209W-T213A、S24R-Y209W-M222Q、S24R-Y209W-H249R、S24R-T213A-H249R、S24R-M222Q-H249R、N76D-S78G/N-S87D/R、N76D-S78G/N-G118R、N76D-S78G/N-P129Q、N76D-S78G/N-S130A、N76D-S78G/N-Q206L、N76D-S78G/N-Y209W、N76D-S78G/N-M222Q、N76D-S78G/N-H249R、N76D-S87D/R-G118R、N76D-S87D/R-Q206L/Y、N76D-S87D/R-Y209W、N76D-S87D/R-H249R、N76D-G118R-S128R、N76D-G118R-Q206L/Y、N76D-G118R-Y209W、N76D-G118R-M222Q、N76D-G118R-H249R、N76D-Y209W-M222Q、N76D-Y209W-H249R、S78G/N-S87D/R-G118R、S78G/N-S87D/R-P129Q、S78G/N-S87D/R-S130A、S78G/N-S87D/R-Q206L/Y、S78G/N-S87D/R-Y209W、S78G/N-S87D/R-M222Q、S78G/N-S87D/R-H249R、S78G/N-G118R-P129Q、S78G/N-G118R-Y209W、S78G/N-G118R-M222Q、S78G/N-G118R-H249R、S78G/N-P129Q-S130A、S78G/N-Y209W-M222Q、S78G/N-Y209W-H249R、S78G/N-M222Q-H249R、S87D/R-G118R-Q206L、S87D/R-G118R-Y209W、S87D/R-G118R-H249R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Y209W-H249R、S87D/R-Y209W-M222Q、S87D/R-M222Q-H249R、G118R-Y209W-T213A、G118R-Y209W-M222Q、G118R-Y209W-H249R、G118R-M222Q-H249R、Q206L/Y-Y209W-H249R、Y209W-T213A-M222Q、Y209W-T213A-H249R、Y209W-M222Q-H249R、及其组合；并且其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
仍然另一个实施例涉及一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的一个、两个、三个、四个、五个或六个位置处的取代：76、87、118、128、129、和130；X76D、X87D/R/T、X118A/R/V、X128K/L/R、X129Q/R、和X130A/Q；或N76D、S87D/R/T、G118A/R/V、S128K/L/R、P129Q/R和S130A/Q，上述取代与在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代组合：(i)1、3、8、9、16、18、20、22、24、28、40、42、43、44、56、77、78、82、88、89、99、100、101、103、104、108、116、120、124、127、147、150、158、159、160、166、185、188、194、204、206、209、210、211、212、213、215、216、217、218、222、232、235、241、243、245、246、248、249、251、252、254、256、259、261、262、268、270、和271；(ii)X1V、X3I/T/V、X8V、X9G、X16T、X18K/R、X20E/R、X22L/W、X24F/L/P/R、X28T、X40E、X42I、X43R/S/Y、X44V、X56P、X77D、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/T/V/W/Y、X82D、X88S、X89H、X99N、X100S、X101F/G/H/Q/T/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116L/M、X120R、X124M、X127S/T、X147I、X150T、X158E/T/V、X159D、X160Q、X166D/N、X185Y、X188D、X194D/P、X204D、X206A/D/F/G/H/L/M/N/P/R/S/Y、X209W、X210I、X211P、X212D、X213A、X215K/V、X216Y、X217K、X218S、X222L/Q/S、X232V、X235T、X241K、X243S、X245R、X246V、X248D、X249N/R、X251R、X252I、X254T、X256P、X259G、X261I、X262Q、X268A、X270P/T、和X271D；或(iii)A1V、S3I/T/V、I8V、S9G、A16T、N18K/R、G20E/R、T22L/W、S24F/L/P/R、V28T、P40E、L42I、N43R/S、I44V、S56P、N77D、S78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/T/V/W/Y、L82D、A88S、E89H、S99N、G100S、S101F/G/H/Q/T/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116L/M、H120R、L124M、G127S/T、V147I、V150T、A158E/T/V、G159D、S160Q、S166D/N、N185Y、S188D、A194D/P、N204D、Q206A/D/F/G/H/L/M/N/P/R/S/Y、Y209W、P210I、G211P、S212D、T213A、A215K/V、S216Y、L217K、N218S、M222L/Q/S、A232V、K235T、W241K、N243S、Q245R、I246V、N248D、H249N/R、K251R、N252I、A254T、S256P、S259G、N261I、L262Q、V268A、A270P/T、和E271D；其中X是任何氨基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
仍然另外的实施例涉及一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个或更多个位置处的取代：S3V-S78N、N18R-G20R、N18R-S24R、N18R-N43R、N18R-R45T、N18R-H249R、G20R-N43R、G20R-R45T、G20R-H249R、T22L-S24F、T22L-S78N、T22L-S166D、T22L-T213A、S24R/F-S78N、S24R-N43R、S24R-Y209W、S24F-S166D、S24R/F-T213A、S24R-H249R、S24R-M222Q、N43R-Y209W、N43R-H249R、N43R-R45T、R45T-H249R、S78G/N-Q206Y/F、S78N-S166D、S78N-T213A、S101A-S188D、S101A-P210I、S101A-A232V、S103A-S188D、S103A-P210I、S103A-A232V、V104I-S188D、V104I-P210I、V104I-A232V、S166D-T213A、S188D-P210I、S188D-A232V、S188D-Q245R、P210I-A232V、A232V-Q245R、Q206Y-T213A、Q206L/Y-M222Q、Q206L-H249R、M222Q-H249R、Y209W-M222Q、T213A-H249R、Y209W-H249R、及其组合；其中所述在两个或更多个位置处的取代进一步与选自以下的一个或多个取代组合：76、87、118、128、129、和130；X76D、X87R、X118R、X128L、X129Q、和X130A；或N76D、S87R、G118R、S128L、P129Q和S130A；其中X是任何氨基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
甚至另外的实施例涉及一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含选自以下的两个或更多个取代：S3V-N76D、S24R-N76D、S24R-G118R、S24R-H249R、N76D-S78G、N76D-S78N、N76D-Q206L、N76D-Y209W、N76D-M222Q、S78N-Q206L、S78N-Y209W、N76D-S78N-Y209W、N76D-S78N-Q206L、N76D-Q206L-Y209W、及其组合；其中所述在两个或更多个位置处的取代进一步与选自以下的一个或多个取代组合：(i)A1V、S3I/T/V、I8V、S9G、A16T、N18K/R、G20E/R、T22L/W、S24F/L/P/R、V28T、P40E、L42I、N43R/S、I44V、S56P、N77D、S78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/T/V/W/Y、L82D、A88S、E89H、S99N、G100S、S101F/G/H/Q/T/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116L/M、H120R、L124M、G127S/T、V147I、V150T、A158E/T/V、G159D、S160Q、S166D/N、N185Y、S188D、A194D/P、N204D、Q206A/D/F/G/H/L/M/N/P/R/S/Y、Y209W、P210I、G211P、S212D、T213A、A215K/V、S216Y、L217K、N218S、M222L/Q/S、A232V、K235T、W241K、N243S、Q245R、I246V、N248D、H249N/R、K251R、N252I、A254T、S256P、S259G、N261I、L262Q、V268A、A270P/T、和E271D；(ii)S3T/V、I8V、N18R、T22W、S24R、V28T、P40E、N43S、S78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/T/V/W/Y、E89H、S99N、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116M、L124M、G127T、V147I、V150T、A158E/T、G159D、S166D、S188D、A194D/P、Q206A/D/F/G/H/L/M/N/P/R/S/Y、Y209W、P210I/L、G211P、S212D、T213A、A215V、L217K、M222Q/S、A232V、K235T、N243S、Q245R、I246V、H249N/R、N261I、L262Q、A270T、和E271D；(iii)S3V、I8V、S24R、P40E、N76D、S78G/N、S87D/R、G118R、S128L/R、P129Q、S130A、Q206F/L/M/Y、Y209W、P210I、T213A、A215K、L217K、M222Q、H249R、和N261I；(iv)I8V、P40E、S87D/R、S128L/R、P129Q、S130A、P210I、T213A、A215K、L217K、和N261I；(v)S3V、N18R、S24R、P40E、S78G/N、G127T、S166D/N、Q206L/R/Y、Y209W、P210I、G211P、T213A、L217K、M222Q/S、H249N/R、N261I、和L262Q；或(vi)S3V、N18R、S24R、S78G/N、Q206L/R/Y、和H249N/R；其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
又甚至另外的实施例涉及一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含选自以下的氨基酸取代的组合：N18R-S87R-G118R-S166N-N204D-Q206L-Y209W；N18R-S24R-L42I-G118R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-Y209W-T213A-H249R；N18R-S24R-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206Y-Y209W-T213A-H249R；S24R-S87D-G118R-Y209W-T213A-H249R；S9G-N18R-S24R-N76D-G118R-S166N-Q206L-H249R；N18R-G118R-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；S24R-S87R-S166N；N18R-S24R-S87R-Q206L-Y209W-T213A；N18R-S24R-G118R-A158V-Y209W；N18R-S24R-S87D-Q206L-Y209W-M222Q-H249R；N18R-S24R-S87R-G127T；S24R-S166N-Y209W-T213A；N76D-S78N-G118R-Y209W-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-Y209W-H249R-S259G；N18R-S24R-S87D-N185Y-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；S24R-G118R-G127T-Y209W；A1V-N18R-S24R-S56P-G127T-Q206L-Y209W；S87R-Y209W；N18R-S87D-Y209W-M222Q-H249R；N18R-S24R-G118R-S128L-P129Q-S130A-S166D-Y209W-T213A；S87D-S166D-T213A-H249R；N18R-S24P-S87D-S166N-Q206L-Y209W-M222Q-H249R；N76D-S166N-Y209W-T213A-H249R；S24R-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-G118R-Q206L-Y209W；N18R-S24R-S166D-Q206Y-H249R-A254T；N18R-S24R-S78N-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-G118R-G127T-Y209W；S24R-N76D-G118R-S166N-Q206L-Y209W；S24R-N76D-S87R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18K-S87R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-S87R-Y209W；N18R-S78N-G118R-Y209W-T213A-M222Q-H249R-A270P；N18R-S166N-Y209W-T213A-M222Q；N76D-S78N-S87R-S103P-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-N243S；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249N；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-S99N-G118R-S128L-P129Q-S130A-A158T-Q206L-I246V-H249R；S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N76D-S78N-G118R-Q206L-H249R；N18R-I44V-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-G118R-Q206L；A16T-N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-K235T；S24R-N76D-S78N-Q206L-H249R；S24R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A；S24R-N76D-S78N-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-A270T；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-M222Q-H249R；N76D-S78N-S87R-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-Q206L-K251R；N76D-S78N-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A；N76D-S78N-H120R-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-G20E-N76D-S78N-G118R-H249R；S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A；N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；S24R-N76D-S78N-G118R-Q206L；N18R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-V268A；N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-N218S-M222Q-H249R；N18R-S24R-N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A；N18R-S24R-N76D-S78N-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-H249R；N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-M222Q；S24R-N76D-S87R-Q206Y-T213A-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S87D-Q206L-Y209W-T213A-H249R；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-M222Q；S24R-N76D-S78N-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-P129Q-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S130A-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；G20R-S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；G20R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-Y209W-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-N116L-G118R-Y209W-M222Q；G20R-S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-N116L-G118R-Y209W-M222Q；N18R-N76D-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-Y209W-H249R；N18R-S87D-S166N-Q206L-Y209W；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-Y209W-T213A；N18R-S24R-S166D-Q206Y-H249R；S24R-S78N-S87R-S166D-Q206L-Y209W-H249R；S3V-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-S101V-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-G127T-P129R-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-S212D；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-S166D-Q206L；S3V-N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-T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0A-A194P-E271D；P40E-N76D-S78G-G118R-S128R-Q206Y-L262Q；S3V-P40E-N76D-G118R-G211P-L217K-N261I；I8V-P40E-N76D-S78G-G118R-Q206Y-L217K；S3V-I8V-N76D-S78G-S87D-G118R-P210I-A215K-N252I；S3V-P40E-N76D-G118R-S160Q-P210I-L217K-N261I；I8V-N76D-S78G-G118R-S160Q-Q206Y-N252I-N261I；I8V-P40E-N76D-G118R-P210I-A215K-N261I；I8V-P40E-N76D-S78G-G118R-Q206Y-P210I-A215K-N261I；S3V-N76D-G118R-S160Q-G211P-A215V-L262Q；S3V-N76D-S87D-G118R-S128R-P210I-G211P-N261I-L262Q；S3V-P40E-N76D-G118R-Q206Y-P210I-G211P-A215K-N261I；I8V-P40E-N76D-S78G-G118R-G211P-L217K-N252I-N261I；S3V-P40E-N76D-S87D-G118R-S128R-P210I-L217K-N261I；S3V-P40E-N76D-G118R-S160Q-P210I-W241K-L262Q；I8V-N76D-S78G-G118R-P210I-A215V-N261I；N76D-S78G-S87D-G118R-P210I-A215V-L217K-N261I-L262Q；S3V-P40E-N76D-S78G-G118R-Q206Y-L217K；S3V-P40E-N76D-S78G-G118R-S128L-P129Q-S130A-L217K；S3V-P40E-N76D-S78G-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206Y-P210I-A215V-L217K；N76D-S78N-S87D-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206Y；S3V-P40E-N76D-S78G-G118R-S128L-P129Q-S130A-A215K-N261I；S3V-N76D-S87D-G118R-S128L-P129Q-S130A-P210I-L217K；N76D-S87R-G118R-S128K-V150T-L217K；N76D-S78N-S87R-G118R-S128K-V150T-L217K；N76D-S78N-S87R-G118R-S128K-V150T；S3V-N76D-S78G-S87D-G118A-S166N-A194P-Q206M-P210I-N218S-N248D-N261I-L262Q；S3V-N76D-S78G-S87T-S101Q-G118A-S130Q-S166N-A194P-P210I-N218S-N248D-S256P-N261I；S3V-N76D-S78G-S87D-S101Q-G118A-Q206M-P210I-L217K-N218S-M222Q-N248D-S256P；和S24L-N76D-S78N-S87D-A88S-G118R-Q206Y-Y209W-H249R；其中所述变体具有蛋白水解活性并且所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
在仍另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:14具有70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。在另一个实施例中，当与亲本或基准蛋白酶相比时，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自：改善的蛋白酶活性、改善的洗涤剂清洁性能和改善的洗涤剂热稳定性。
另一个实施例涉及一种组合物，所述组合物包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体，前提条件是所述组合物不是自动餐具洗涤组合物。在又其他的实施例中，所述洗涤剂组合物是自动餐具洗涤剂组合物、衣物组合物、和/或手洗(手动)餐具洗涤组合物。另外的实施例涉及一种清洁需要清洁的物品或表面的方法，其中所述方法包括使所述物品或表面与本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体或一种或多种组合物接触。仍另外的实施例提供了一种分离的核酸序列，其包含编码本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体的多核苷酸序列；包含所述分离的核酸序列的表达载体；和/或包含所述表达载体的重组宿主细胞。
图1提供了迟缓芽孢杆菌(B.lentus)枯草杆菌蛋白酶GG36的成熟氨基酸序列(SEQID NO:1)和解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)枯草杆菌蛋白酶BPN'的成熟氨基酸序列(SEQ ID NO:2)的比对。
除非本文另有说明，否则本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体可通过常用于分子生物学、微生物学、蛋白质纯化、蛋白质工程、蛋白质和DNA测序、重组DNA领域和工业酶使用和开发中的常规技术制备和使用。本文提供的任何标题是为了方便读者而提供的，而不是意在受限于将说明书作为一个整体阅读后即显而易见的各种实施例。本文提供的任何定义应在作为一个整体的说明书的背景中进行解释。除非上下文另有明确指示，否则如本文所使用的，单数术语“一个/一种(a/an)”和“该/所述(the)”包括复数引用。除非本文另外指明，否则核酸从左向右以5'至3'方向书写；氨基酸序列都从左向右以氨基到羧基方向书写。本文使用的每个数值范围包括落入此类较宽数值范围内的每一较窄数值范围，如同此类较窄数值范围在此全部明确写出一样。
本文所述的每种蛋白酶变体的每个氨基酸位置根据解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)中的相应氨基酸位置的编号进行编号，如通过图1中GG36序列(SEQ ID NO:2)与BPN’序列的比对所测定的。例如，每个枯草杆菌蛋白酶变体(其中所述亲本蛋白酶是GG36)中的每个氨基酸取代的起始氨基酸将如所述GG36亲本序列所示，而不是如BPN'序列所示。即，参考BPN'序列以鉴定所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体中包含的每个取代的位置(起始氨基酸除外)。因此，给定的氨基酸序列(例如本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸序列)可以使用下文所述的比对算法(例如BLAST、MUSCLE、或CLUSTAL)与BPN’序列进行比对，并且与BPN’序列中的氨基酸残基比对(优选最佳比对)的给定氨基酸序列中的氨基酸残基可以常规地通过参考枯草杆菌蛋白酶BPN’序列中的相应氨基酸残基来进行编号。
使用以下命名法中的一种或多种描述本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸取代：位置或起始氨基酸:位置:一个或多个取代的氨基酸。对仅一个位置的提及涵盖可以存在于亲本或基准分子中在该位置处的任何起始氨基酸，以及此类起始氨基酸可以被其取代的任何氨基酸(即，经取代的氨基酸必须排除此类亲本或基准分子的起始氨基酸)。对经取代的氨基酸的提及可以进一步表示为由斜线(“/”)分开的若干个经取代的氨基酸。例如，X130A/N-209-213代表三个氨基酸取代组合，其中X是在位置130处的可以被丙氨酸(A)或天冬酰胺(N)取代的任何起始氨基酸；209代表任何起始氨基酸可以被不是起始氨基酸的氨基酸取代的位置；并且213代表任何起始氨基酸可以被不是起始氨基酸的氨基酸取代的位置。通过另外的实例，S101F/G/H/T/V代表在位置101处的五个可能的取代，其中该起始氨基酸丝氨酸(S)可以被苯丙氨酸(F)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、苏氨酸(T)、或缬氨酸(V)取代。
“枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin和Subtilisin protease)”是指如在MEROPS-肽酶数据库中描述的S8丝氨酸蛋白酶家族的任何成员(Rawlings等人，MEROPS:the peptidasedatabase[MEROPS：肽酶数据库],Nucl.Acids Res.[核酸研究]，数据库第34期，D270-272(2006))。如其中所述，肽酶家族S8含有丝氨酸内肽酶枯草杆菌蛋白酶及其同源物(Biochem.J.[生物化学杂志]290:205-218(1993))。许多芽孢杆菌属物种(Bacillusspecies或Bacillus sp.)分泌大量枯草杆菌蛋白酶。
“蛋白酶变体”、“变体蛋白酶”和“枯草杆菌蛋白酶变体”是指氨基酸序列与参比蛋白酶(可以是亲本或基准蛋白酶)的氨基酸序列在一种或多种氨基酸上不同(例如通过一个或多个氨基酸取代、缺失、和/或添加)的蛋白酶。可以使用本领域熟知的和/或本文描述的方法测定这样的变体的蛋白水解活性。
“芽孢杆菌属”包括如本领域技术人员已知的“芽孢杆菌”属内的所有物种，包括但不限于：例如枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、迟缓芽孢杆菌、短芽孢杆菌(B.brevis)、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌(B.clausii)、耐盐芽孢杆菌(B.halodurans)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)、凝结芽孢杆菌(B.coagulans)、环状芽孢杆菌(B.circulans)、灿烂芽孢杆菌(B.lautus)和苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)。人们认识到芽孢杆菌属继续经历分类学重组。因此，该属旨在包括已重新分类的物种，包括但不限于：例如嗜热脂肪芽孢杆菌(现在称为“嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)”)的生物体。在氧气存在下的抗性内生孢子的产生被认为是芽孢杆菌属的定义性特性，尽管这个特征也适用于最近命名的脂环酸芽孢杆菌属、双芽孢杆菌属(Amphibacillus)、硫胺素芽孢杆菌属(Aneurinibacillus)、厌氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus)、短芽孢杆菌属、线性杆菌属(Filobacillus)、薄壁芽孢杆菌属(Gracilibacillus)、喜盐芽孢杆菌属(Halobacillus)、类芽孢杆菌属、需盐芽孢杆菌属(Salibacillus)、耐热芽孢杆菌属(Thermobacillus)、脲芽孢杆菌属(Ureibacillus)和枝芽孢杆菌属(Virgibacillus)。
在本文中可互换使用的“多核苷酸”和“核酸”是指在链中共价键合的任何长度的核苷酸单体的聚合物。DNA(脱氧核糖核酸)(包含脱氧核糖核苷酸的多核苷酸)和RNA(核糖核酸)(核糖核苷酸聚合物)是具有不同生物功能的多核苷酸或核酸的实例。多核苷酸或核酸包括但不限于：单链、双链或三链的DNA、基因组DNA、cDNA、RNA、DNA-RNA杂合体或包含嘌呤碱和嘧啶碱的聚合物。以下是多核苷酸的非限制性实例：基因、基因片段、染色体片段、表达的一个或多个序列标签(EST)、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转移RNA(tRNA)、核糖体RNA(rRNA)、核酶、互补DNA(cDNA)、重组多核苷酸、分支的多核苷酸、质粒、载体、任何序列的分离的DNA、任何序列的分离的RNA、核酸探针和引物。在一些实施例中，多核苷酸包含经修饰的核苷酸，例如经甲基化的核苷酸和核苷酸类似物、尿嘧啶、其他糖和连接基团(例如氟核糖和硫醇盐)、和核苷酸分支。在具体实施例中，核苷酸序列被非核苷酸组分打断。
“载体”是指用于将一个或多个核酸或者一个或多个多核苷酸引入或转移到靶细胞或靶组织中的核酸构建体或多核苷酸构建体。典型地，载体用于将外源DNA引入另一个细胞或组织中。载体通常包含作为转基因的DNA序列、以及用作载体“骨架”的较大的多核苷酸序列。典型地，载体用于将遗传信息(例如插入的转基因)转移到靶细胞或组织，以便在该靶细胞或靶组织中分离、增殖或表达该插入转基因。载体包括但不限于质粒、克隆载体、噬菌体、病毒(例如病毒载体)、黏粒、表达载体、穿梭载体、和盒。典型地，载体包括复制起点、多克隆位点和可选择标记。典型地，将载体插入靶细胞的过程被称为转染。典型地，用病毒载体转染细胞被称为转导。在一个实施例中，本文所述的一种或多种载体包含有效地连接到合适的前导序列(例如分泌、信号肽序列等)的、编码本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体(例如，前体或成熟枯草杆菌蛋白酶变体)的DNA序列，该前导序列能够在合适的宿主中实现DNA序列的表达。
“表达盒”或“表达载体”是指重组或合成产生的用于在靶细胞中表达目的核酸的核酸构建体或载体(例如外源核酸或转基因)。典型地，目的核酸表达目的蛋白质。典型地，表达载体或表达盒包含驱动或促进外源核酸表达的启动子核苷酸序列。典型地，表达载体或表达盒还包括允许靶细胞中特定核酸转录的其他的指定核酸元件。重组表达盒可以整合在质粒、染色体、线粒体DNA、质体DNA、病毒或核酸片段中。一些表达载体具有在宿主细胞或宿主细胞的基因组中整合并表达异源DNA片段的能力。许多原核和真核表达载体是可商购的。从掺入表达载体的核酸序列中选择用于表达蛋白质的合适的表达载体在本领域技术人员的知识范围内。
DNA构建体是可以被引入靶细胞或靶组织中的人工构建的核酸区段。典型地，DNA构建体包含已被亚克隆进载体中的、编码目的蛋白质的核苷酸序列的DNA插入。载体可以包含用于在细菌中生长的细菌抗性基因和用于在生物体中表达目的蛋白质的启动子。DNA可以通过PCR或任何其他本领域技术人员已知的一种或多种合适的技术在体外产生。在一些实施例中，DNA构建体包含目的核酸序列。在一些实施例中，序列有效地连接到另外的元件，例如控制元件(例如，启动子等)。DNA构建体可以进一步包含可选择标记，并且可以进一步包含由同源盒侧接的进入序列。构建体可以包含添加到末端的其他非同源序列(例如填充序列或侧翼序列)。在一些实施例中，序列的末端是封闭的这样使得DNA构建体形成闭合的环。使用本领域熟知的技术掺入DNA构建体中的目的核酸序列可以是野生型、突变型或经修饰的核酸。在一些实施例中，DNA构建体包含一个或多个与宿主细胞染色体同源的核酸序列。在其他实施例中，DNA构建体包含一个或多个非同源核苷酸序列。一旦在体外装配了DNA构建体，则可将其用于例如：1)将异源序列插入宿主细胞的所希望的靶序列中；2)诱变宿主细胞染色体的区域(即用异源序列置换内源序列)；3)使靶基因缺失；和/或4)将复制质粒引入宿主中。在本文中“DNA构建体”与“表达盒”可互换使用。
“质粒”是指能够独立于染色体DNA进行复制的染色体外DNA分子。质粒是双链的(ds)，可以是环状的，并且通常被用作克隆载体。
当在将核酸序列引入细胞中的上下文中使用时，“引入”是指适合于将所述核酸序列转移到细胞中的任何方法。这样的引入方法包括但不限于原生质体融合、转染、转化、电穿孔、接合和转导(参见例如，Ferrari等人，“Genetics”[遗传学],在：Hardwood等人(编辑),Bacillus[芽孢杆菌],Plenum Publishing Corp.[普莱南出版公司],第57-72页[1989]中)。
当将核酸置于与另一个核酸序列的功能关系中时，该核酸与该另一个核酸序列“有效地连接”。例如，如果启动子影响编码序列的转录，启动子或增强子有效地连接到核苷酸编码序列。如果核糖体结合位点被定位以便促进编码序列的翻译，该核糖体结合位点可以有效地连接到编码序列。典型地，“有效地连接的”DNA序列是连续的。然而，增强子不需要是连续的。通过在方便的限制位点处连接来实现连接。如果此类位点不存在，则可以按照常规实践使用合成的寡核苷酸衔接子或接头。
“基因”是指多核苷酸(例如DNA区段)，其编码多肽并且包括编码区之前和之后的区域，以及个体编码区段(外显子)之间的间插序列(内含子)。
在用于指细胞时，“重组”典型地表明细胞已经通过引入异源核酸序列而被修饰，或者细胞衍生自经过如此修饰的细胞。例如，重组细胞可以包含在天然(非重组)形式的细胞中不以相同形式存在的基因，或者重组细胞包含天然基因(发现于细胞的天然形式中)，但是该天然基因已经被修饰并且重新引入细胞中。重组细胞可以包含细胞内源的核酸，该核酸已经被修饰而不从细胞中除去该核酸。此类修饰包括通过基因取代、位点特异性突变以及本领域普通技术人员已知的相关技术获得的那些。重组DNA技术包括用于在体外生产重组DNA并且将该重组DNA转移到其可以被表达或传播的细胞中从而生产重组多肽的技术。多核苷酸或核酸的“重组”(recombination、recombining和recombined)通常是指装配或组合两个或更多个核酸或多核苷酸链或片段以产生新的多核苷酸或核酸。重组多核苷酸或核酸有时被称为嵌合体。当核酸或多肽是人造的或工程改造的、或源自人造的或工程改造的蛋白质或核酸时，就说核酸或多肽是“重组的”。
核酸或基因“扩增”是指特定DNA序列不成比例地复制的过程，使得扩增的核酸或基因以比最初存在于基因组中的更高的拷贝数存在。在一些实施例中，通过在药物(例如，抑制型酶的抑制剂)存在下生长来选择细胞导致编码在所述药物存在下生长所需的基因产物的内源基因的扩增或者编码该核酸或基因产物或两者的外源(即输入)序列的扩增。扩增是涉及模板特异性的核酸复制的特殊情况。它与非特异性模板复制(即，依赖于模板但不依赖于特异性模板的复制)形成对比。模板特异性在此区别于复制(即，合适的多核苷酸序列的合成)的保真度和核苷酸(核糖核酸或脱氧核糖核酸)特异性。模板特异性经常根据“靶标”特异性来描述。就靶序列被查找以从其他核酸中分选出来而言，所述靶序列是“靶标”。已经设计了主要用于这种分选的扩增技术。
“引物”是指无论是纯化的限制性消化物中天然存在的还是经合成而产生的寡核苷酸(核苷酸残基的聚合物)，当将其置于以下条件下时能作为合成起始点，所述条件诱导与核酸链互补的引物延伸产物的合成(即，在核苷酸和诱导剂例如DNA聚合酶存在下并在合适的温度和pH下)。引物优选是单链以用于最大效率的扩增，但是可替代地可以是双链。如果是双链，引物首先经过处理以分离其双链，然后再用于制备延伸产物。在一个方面，引物是寡脱氧核糖核苷酸。引物必须足够长，以在诱导剂存在下引发延伸产物的合成。引物的准确长度取决于多个因素，包括温度、引物来源和方法的使用。
“探针”是指典型地能与另一目的寡核苷酸杂交的寡核苷酸，无论是在纯化的限制性消化中天然存在还是以合成、重组或通过PCR扩增产生的。探针可以是单链或双链的。探针可用于检测、鉴定和分离特定基因序列。
“靶标”当用于提及聚合酶链式反应时，是指由用于聚合酶链式反应的引物所界定的核酸区域。因此，试图从其他核酸序列分选“靶标”。核苷酸“区段”是靶核酸序列内的核酸区域。
“聚合酶链式反应”(PCR)是指USPN 4,683,195、4,683,202和4,965,188的方法，其包括用于在不进行克隆或纯化的情况下增加基因组DNA混合物中靶序列的区段浓度的方法。所述用于扩增靶序列的过程在本领域中是公知的。
“扩增试剂”是指除引物、核酸模板和扩增酶之外的扩增所需的那些试剂(例如脱氧核糖核苷酸三磷酸、缓冲液等)。通常，将扩增试剂以及其他反应组分放置并包含在反应容器中(试管，微孔等)中。
“限制性内切核酸酶”或“限制性酶”是指能够在称为限制性位点的特定核苷酸序列处或附近切割双链或单链DNA的酶(例如，细菌酶)。包含所述限制性位点的核苷酸序列被给定的限制性内切核酸酶或限制酶识别和切割，并且通常是插入DNA片段的位点。可以将限制性位点工程化为表达载体或DNA构建体。
“同源重组”是指在相同或几乎相同核苷酸序列位点处的两个DNA分子或配对染色体之间的DNA片段的交换。在一些实施例中，染色体整合是同源重组。
如果在其天然状态下或当通过本领域技术人员已知的方法操纵时，核酸或多核苷酸可以被转录和/或翻译以生产所需多肽，那么认为该核酸或多核苷酸“编码”该多肽。这样的核酸的反义链也被认为编码该序列。如本领域所知，DNA序列可以通过RNA聚合酶转录以产生RNA序列，而RNA序列可以通过逆转录酶逆转录以产生DNA序列。
“宿主菌株”或“宿主细胞”是指对于包含感兴趣的DNA序列的表达载体或表达盒而言合适的宿主。目的DNA序列可以在宿主菌株或宿主细胞中表达目的蛋白质。
“蛋白质”或“多肽”包含氨基酸残基的聚合序列。术语“蛋白质”和“多肽”在本文中可互换地使用。由于遗传密码的简并性，一个或多个核苷酸序列可以编码本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体。
“前导序列”或“前导肽序列”是指在信号肽序列与成熟蛋白酶序列之间的、蛋白酶的分泌所必需的氨基酸序列。前导序列或前导肽序列的切割产生成熟的活性蛋白酶。
“信号序列”或“信号肽”是指可以参与蛋白质的成熟形式或前体形式的分泌或定向转运的氨基酸残基序列。典型地，信号序列位于前体或成熟蛋白序列的N-末端。信号序列可以是内源的或外源的。一个示例性外源信号序列包含来自枯草芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶的信号序列(其与来自迟缓芽孢杆菌(ATCC 21536)的枯草杆菌蛋白酶的信号序列的其余部分融合)的前七个氨基酸残基。成熟蛋白中一般不存在信号序列。典型地，在蛋白质转运后，信号序列通过信号肽酶从蛋白质切割。
“成熟”形式的蛋白质、多肽或肽是指没有信号肽序列和前导肽序列的蛋白质、多肽或肽的功能形式。
“前体”形式的蛋白质或肽是指具有有效地连接到该蛋白质的氨基或羧基末端的前导序列的成熟形式的蛋白质。前体还可以具有有效地连接到前导序列的氨基末端的“信号”序列。前体还可以具有涉及翻译后活性的另外的多核苷酸(例如，从其切割的多核苷酸以留下成熟形式的蛋白质或肽)。
“野生型”是指天然的氨基酸序列或核酸序列或天然存在的序列。
“同源基因”是指来自不同的、但通常相关的物种的成对基因，这些基因彼此对应并且彼此相同或非常相似。该术语涵盖通过物种形成(即，新物种的发育)(例如，直系同源基因)分离的基因、以及通过遗传复制分离的基因(例如，旁系同源基因)。
“同源性”是指序列相似性或同一性，同一性优先。同源性可以通过氨基酸序列比对来确定，例如，使用程序(例如BLAST、MUSCLE、或CLUSTAL)。其他技术描述于例如Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.[应用数学进展]2:482(1981)；Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443(1970)；以及Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]85:2444(1988)。BLAST描述于以下文献中：Altschul等人，“Gapped BLAST and PSI BLAST a new generation of protein databasesearch programs[Gapped BLAST和PSI BLAST，新一代蛋白数据库搜索程序]”，NucleicAcids Res.[核酸研究],25(17):3389-402(1997)；Altschul等人，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215:403-410,(1990)；以及Karlin等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]90:5873-5787(1993)。用于进行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information)公开获得。MUSCLE描述于：RobertC.Edgar,“MUSCLE:multiple sequence alignment with high accuracy and highthroughput[MUSCLE：具有高精度和高通量的多序列比对]”，Nucl.Acids Res.[核酸研究],32(5):1792-1797(2004)。用于进行MUSCLE分析的软件可从生物物质有限公司(BiomattersLtd.)获得。CLUSTAL W比对算法描述于：Thompson等人，Nucleic Acids Res[核酸研究],22:4673-4680(1994)。CLUSTAL W算法的默认参数包括：空位开放罚分＝10.0；空位延伸罚分＝0.05；蛋白质权重矩阵＝BLOSUM系列；DNA权重矩阵＝IUB；延迟发散序列％＝40；空位分隔距离＝8；DNA转换权重＝0.50；列表亲水残基＝GPSNDQEKR；使用负性矩阵＝关；切换特殊残基罚分＝开；切换亲水罚分＝开；以及切换结束空位分隔罚分＝关。在CLUSTAL算法中，包括在任一末端发生的缺失。例如，500个氨基酸的多肽的任一末端(或多肽内)具有5个氨基酸缺失的变体相对于“参比”多肽具有99％(495/500个相同残基×100)的百分比序列同一性。这样的变体将被与该多肽具有“至少99％的序列同一性”的变体所涵盖。
本领域技术人员可以容易地获得本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体序列与亲本或基准序列的氨基酸序列同一性百分比。可以通过比对序列以直接比较序列信息来确定目的序列共有的氨基酸同一性百分比，例如通过使用BLAST、MUSCLE或CLUSTAL等程序。例如，主题序列与查询序列的氨基酸序列同一性百分比可以通过对两个序列进行最佳比对和在比较长度上对两个最佳比对序列进行比较来计算。确定在最佳比对中在两个序列中存在相同残基的位置数，从而提供匹配位置数，然后将匹配位置数除以比较长度(除非另外指明，该长度是查询序列的长度)的总位置数。所得数字乘以100，以产生主题序列与查询序列的氨基酸序列同一性百分比。
“最佳的比对”或“最佳地比对的”是指给出最高百分比同一性得分的两个(或更多个)序列的比对。例如，两个蛋白质序列的最佳比对可以通过手动比对序列使得每个序列中最大数目的相同氨基酸残基一起进行比对、或者通过使用本文所述或本领域已知的软件程序或方法来实现。在一个示例性方面，当使用定义的参数(例如定义的氨基酸取代矩阵，空位存在罚分(也称为空位开放罚分)和空位延伸罚分)进行比对，从而达到该对序列可能的最高相似性得分时，两个多肽序列被认为是“最佳比对”。BLOSUM62评分矩阵(Henikoff和Henikoff,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]89(22):10915(1992))经常用作多肽序列比对算法(例如BLASTP)中的默认评分取代矩阵。对比对序列之一引入单个氨基酸空位采取空位存在罚分，并且对空位中的每个残基位置采取空位延伸罚分。所采用的示例性比对参数是：BLOSUM62评分矩阵，空位存在罚分＝11，且空位延伸罚分＝1。比对分数由每条序列的比对开始和结束的氨基酸位置(例如比对窗口)，以及任选由一条或两条序列中一个空位或多个空位的插入来限定以实现可能的最高相似性分数。
当核酸或多核苷酸部分或完全地与其他组分(例如但不限于，如其他蛋白质、核酸、细胞等)分离时，该核酸或多核苷酸是“分离的”。类似地，当多肽、蛋白质或肽部分或完全地与其他组分(例如但不限于，如其他蛋白质、核酸、细胞等)分离时，该多肽、蛋白质或肽是“分离的”。以摩尔计，在组合物中分离的种类比其他种类更丰富。例如，分离的种类可以包含存在的所有大分子种类的至少约50％、70％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％(以摩尔计)。优选地，将目的种类纯化至基本均一性(即，通过常规检测方法不能在组合物中检测到污染物种类)。可以使用本领域熟知的许多技术例如蛋白质或核酸样品的琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳，接着通过染色后可视化来确定纯度和均一性。如果需要，可以使用高分辨率技术例如高效液相色谱法(HPLC)或类似方法来纯化物质。
“纯化的”如应用于核酸或多肽时通常表示基本上不含其他组分的核酸或多肽，如通过本领域熟知的分析技术确定的(例如，纯化的多肽或多核苷酸在电泳凝胶、色谱洗脱液和/或经历密度梯度离心的培养基中形成离散的带)。例如，在电泳凝胶中产生基本上一条带的核酸或多肽是“纯化的”。纯化的核酸或多肽是至少约50％纯的，通常是至少约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或更加纯的(例如，在摩尔基础上按重量计的百分比)。在一个实施例中，含有本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体和/或多核苷酸的酶组合物可通过应用本领域熟知的纯化或富集技术针对所述变体或多核苷酸进行富集。基本上纯的本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体和/或多核苷酸通常将包含特定组合物中所有大分子种类的按重量计至少约55％、60％、70％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高(以摩尔计)。
“组合诱变”是指其中产生参比核酸序列的核酸变体的文库的方法。在这些文库中，变体含有选自预定义的一组突变的一个或多个突变。该方法还提供了引入随机突变的方法，该突变不是预定义的一组突变的成员。一些这样的方法包括，例如，列于USPN 6,582,914并体现于可商购的试剂盒(例如，
Figure BDA0001852231980000461
多定点诱变试剂盒(Stratagene公司))中的那些。
“修饰的核酸序列”和“修饰的基因”在此处可互换使用，是指包括天然存在的(即野生型)核酸序列的缺失、插入或中断的核酸序列。在一些实施例中，修饰的核酸序列的表达产物是截短的蛋白质(例如，如果修饰是序列的缺失或中断)。在一些实施例中，截短的蛋白质保留了生物学活性。在可替代的实施例中，修饰的核酸序列的表达产物是延长的蛋白质(例如包含在核酸序列中的插入的修饰)。在一些实施例中，核酸序列中的核苷酸插入导致截短的蛋白质(例如，当插入导致终止密码子形成时)。因此，插入可导致截短的蛋白质或延长的蛋白质(作为表达产物)。
“热稳定性”是指蛋白酶在例如蛋白水解、水解和/或清洁过程中普遍存在的条件下在给定的时间段内暴露于改变的温度后保留的酶活性的量。改变的温度包括温度升高或降低。在一个实施例中，在一种或多种洗涤剂组分(例如，表面活性剂、螯合剂、助洗剂等)和/或一种或多种水硬度的存在下测定热稳定性。
“清洁性能”是指蛋白酶在蛋白水解、水解和/或清洁过程中普遍存在的条件下显示的清洁活性。在一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体或者一种或多种参比蛋白酶的清洁性能可通过对物品或表面上的一种或多种酶敏感性污渍(例如由食物、草、血液、奶或蛋类蛋白引起的污渍)使用一种或多种清洁测定来确定。变体或参比蛋白酶的清洁性能可以通过使在物品或表面上的污渍经受一个或多个标准洗涤条件并且通过使用各种色谱、分光光度计或其他定量方法来评估污渍除去的程度来确定。示例性清洁测定和方法包括但不限于例如在WO99/34011和US 6,605,458中描述的那些，以及包括在下面所展示的实例中的那些清洁性测定和方法。清洁性能可以通过在各种关于酶敏感性污渍(例如草、血液、奶、墨水或蛋)的清洁测定中(如通过标准洗涤循环条件后的一般分光光度法或分析方法所确定的)对本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体与参比枯草杆菌蛋白酶进行比较来确定。
本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体或参比蛋白酶的“清洁有效量”是指在特定清洁组合物中达到希望的酶活性水平的蛋白酶的量。此类有效量可以由本领域普通技术人员容易地确定，并且基于许多因素，例如所使用的特定蛋白酶、清洁应用、清洁组合物的具体组成、以及是否需要液体或干燥(例如，颗粒、棒状)组合物等。
“清洁辅助材料”是指除了本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体之外包含在清洁组合物中的任何液体、固体或气体物质。在一个实施例中，清洁组合物包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体以及一种或多种清洁辅助材料。典型地，取决于清洁组合物的具体类型和形式(例如液体、颗粒、粉末、棒状、糊状、喷雾、片剂、凝胶、或泡沫组合物)来选择每种清洁辅助材料。优选地，每种清洁辅助材料与本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体相容。
“清洁组合物”是指用于从待清洁的物体、物品或表面去除化合物(例如，不希望的化合物)的任何组合物，这些待清洁的物体、物品或表面包括但不限于例如织物、织物物品、餐具物品、食具物品、玻璃器皿物品、接触镜、其他固体底物、头发(香波)(包括人或动物毛发)、皮肤(肥皂或乳膏)、牙齿(漱口水、牙膏)、物品或物体的表面(例如，硬表面，诸如像桌子、桌面、墙、家具物品、地板、天花板、非餐具物品、非食具物品等的硬表面)、接触镜等。该术语涵盖为所希望的清洁组合物的特定类型和产品的形式(例如液体、凝胶、颗粒、或喷雾组合物)选择的任何材料和/或添加的化合物，只要该组合物与该组合物中使用的蛋白酶和一种或多种其他酶相容即可。通过考虑待清洁的表面、物体、物品或织物，以及所希望的组合物形式而容易地进行清洁组合物的具体选择。清洁组合物包括用于工业和机构以及家庭清洁的组合物。
清洁组合物包括适合于清洁、漂白、消毒和/或灭菌任何物体、物品和/或表面的任何组合物。此类组合物包括但不限于例如液体和/或固体组合物(包括清洁或洗涤剂组合物)，例如像液体、片剂、凝胶、颗粒、单位剂量和/或固体组合物；细织物洗涤剂组合物；硬表面清洁组合物，例如像玻璃、木材、陶瓷和金属台面和窗户；地毯清洁剂；炉灶清洁剂；织物清新剂；织物柔顺剂；衣物增效清洁或洗涤剂组合物；衣物添加剂清洁组合物；衣物预去污(pre-spotter)清洁组合物；和餐具洗涤组合物，包括手洗或手动餐具洗涤组合物(例如“手洗”或“手动”餐具洗涤剂)和自动餐具洗涤组合物(例如“自动餐具洗涤剂”)。
清洁组合物包括例如颗粒或粉末形式的通用的或重垢洗涤剂，特别是清洁洗涤剂；液体、颗粒、凝胶、固体、片剂、单位剂量或糊剂形式的通用洗涤剂，特别是所谓的重垢液体(HDL)洗涤剂或重垢粉末洗涤剂(HDD)类型；液体精细织物洗涤剂；手洗或手动餐具洗涤剂，包括高起泡类型的那些；自动餐具洗涤剂、或餐具或食具洗涤剂，包括用于家庭和机构使用的各种片剂、粉末、固体、颗粒、液体、凝胶和漂洗助剂类型；液体清洁和消毒剂，包括抗菌手洗类型、清洁棒、漱口水、假牙清洁剂、洗车香波、地毯香波、浴室清洁剂；用于人类和其他动物的毛发香波和/或毛发染发剂；沐浴露和泡沫浴和金属清洁剂；以及清洁助剂，例如漂白添加剂和“去污棒”或预处理类型。在一些实施例中，颗粒组合物是处于“致密(compact)”形式；在一些实施例中，液体组合物是处于“浓缩”形式。
“织物清洁组合物”是指手洗和机洗衣物洗涤剂组合物，其包括衣物添加剂组合物和适合用于带有污渍的织物(例如衣服、亚麻制品和其他纺织材料)的浸泡和/或预处理的组合物。织物清洁组合物包括用于工业和机构以及家庭清洁的组合物。
当组合物针对旨在用于清洁弄脏的或脏的物体的洗涤介质中使用时，使用“洗涤剂组合物”。
“漂白”是指将材料(例如织物、衣物、浆等)或表面处理持续足够长的时间和/或在适当的pH和/或温度条件下处理，以实现该材料的增白(即变白)和/或清洁。适合于漂白的化学品的实例包括但不限于例如ClO2、H2O2、过酸、NO2等。
本文公开了一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体，包括，例如但不限于丝氨酸蛋白酶变体和枯草杆菌蛋白酶变体，其特别适用于各种清洁应用并可用于各种清洁应用。一个实施例涉及一种或多种分离的、重组的、基本上纯的和/或非天然存在的枯草杆菌蛋白酶变体。另外的实施例涉及一种或多种具有酶活性的枯草杆菌蛋白酶变体。在另一个实施例中，该酶活性是蛋白水解活性。在仍另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体是芽孢杆菌属物种枯草杆菌蛋白酶变体。
另一个实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：78-X206A/D/F/G/H/M/N/P/R/S/Y、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-206、X78N-X206F/M/Y、X78G-X206D/F/H/M/N/P/R/Y、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X206A/D/F/G/H/M/N/P/R/S/Y、18-X78N、X18K/R-X78N、18-X87R、X18K/R-X87R、18-X206L/Y、X18K/R-X206L/Y、24-X87R、X24F/L/P/R-X87R、24-X206Y、X24F/L/P-206、X24F/L/P-X206Y、X24F/L/P-X209W、40-78、X40E-78、40-X78G、X40E-X78G、40-87、X40E-87、40-X87R、X40E-X87R、40-129、40-X129Q、X40E-129、X40E-X129Q、40-130、40-X130A、X40E-130、X40E-X130A、40-206、X40E-206、40-X206Y、X40E-X206Y、X78N-87、X78N-X87D/R、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-87、X78G-X87D/R/T、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X87R、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-129、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X129Q、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X130A、X78G-X130A/Q、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-130、78-X249N/R、X78N-249、X78N-X249N/R、87-X206L/Y、X87D/R-X206L/Y、87-X209W、X87D/R-X209W、87-X213A、X87D/R-213、X87D/R-X213A、X87R-X249N/R、129-X206Y、X129Q-X206Y、129-X249N/R、X129Q-249、X129Q-X249N/R、130-X206Y、X130A-X206R/Y、130-X249N/R、X130A-249、X130A-X249N/R、X206Y-209、X206Y-X209W、206-X213A、X206L/Y-213、X206L/Y-X213A、X206L/Y-249、X206L/Y-X249N/R、X209W-213、X209W-X213A、X209W-249、X209W-X249N/R、18-24-78、X18K/R-24-78、18-X24F/L/P/R-78、18-24-X78N、X18K/R-24-X78N、18-X24F/L/P/R-X78N、X18K/R-X24F/L/P/R-78、X18K/R-X24F/L/P/R-X78N、18-24-87、X18K/R-24-87、18-X24F/L/P/R-87、18-24-X87D/R、X18K/R-24-X87D/R、18-X24F/L/P/R-X87D/R、X18K/R-X24F/L/P/R-87、X18K/R-X24F/L/P/R-X87D/R、18-24-129、X18K/R-24-129、18-X24F/L/P/R-129、18-24-X129Q、X18K/R-X24F/L/P/R-129、X18K/R-24-X129Q、18-X24F/L/P/R-X129Q、X18K/R-X24F/L/P/R-X129Q、18-24-130、18-X24F/L/P/R-130、18-24-X130A、X18K/R-24-130、X18K/R-X24F/L/P/R-130、X18K/R-24-X130A、18-X24F/L/P/R-X130A、X18K/R-X24F/L/P/R-X130A、18-24-206、18-24-X206L/Y、18-X24F/L/P/R-206、X18K/R-24-206、X18K/R-24-X206L/Y、18-X24F/L/P/R-X206L/Y、X18K/R-X24F/L/P/R-206、X18K/R-X24F/L/P/R-X206L/Y、18-24-209、18-24-X209W、18-X24F/L/P/R-209、X18K/R-24-209、X18K/R-24-X209W、18-X24F/L/P/R-X209W、X18K/R-X24F/L/P/R-209、X18K/R-X24F/L/P/R-X209W、18-78-87、18-X78N-87、18-78-X87D/R、X18K/R-78-87、X18K/R-X78N-87、X18K/R-78-X87D/R、18-X78N-X87D/R、X18K/R-X78N-X87D/R、18-78-129、18-X78N-129、18-78-X129Q、X18K/R-78-129、X18K/R-X78N-129、X18K/R-78-X129Q、18-X78N-X129Q、X18K/R-X78N-X129Q、18-78-130、18-X78N-130、18-78-X130A、X18K/R-78-130、X18K/R-X78N-130、X18K/R-78-X130A、18-X78N-X130A、X18K/R-X78N-X130A、18-78-206、18-78-X206L/Y、18-X78N-206、X18K/R-78-206、18-X78N-X206L/Y、X18K/R-X78N-206、X18K/R-78-X206L/Y、X18K/R-X78N-X206L/Y、18-78-209、18-X78N-209、18-78-X209W、X18K/R-78-209、X18K/R-78-X209W、18-X78N-X209W、X18K/R-X78N-209、X18K/R-X78N-X209W、18-78-213、18-X78N-213、18-78-X213A、X18K/R-78-213、18-X78N-X213A、X18K/R-X78N-213、X18K/R-78-X213A、X18K/R-X78N-X213A、18-78-249、18-78-X249N/R、18-X78N-249、X18K/R-78-249、18-X78N-X249N/R、X18K/R-X78N-249、X18K/R-78-X249N/R、X18K/R-X78N-X249N/R、18-87-129、X18K/R-87-129、18-X87D/R-129、18-87-X129Q、18-X87D/R-X129Q、X18K/R-87-X129Q、X18K/R-X87D/R-129、X18K/R-X87D/R-X129Q、18-87-130、X18K/R-87-130、18-X87D/R-130、18-87-X130A、18-X87D/R-X130A、X18K/R-87-X130A、X18K/R-X87D/R-130、X18K/R-X87D/R-X130A、18-87-206、X18K/R-87-206、18-X87D/R-206、18-87-X206L/Y、18-X87D/R-X206L/Y、X18K/R-87-X206L/Y、X18K/R-X87D/R-206、X18K/R-X87D/R-X206L/Y、18-87-209、X18K/R-87-209、18-X87D/R-209、18-87-X209W、18-X87D/R-X209W、X18K/R-X87D/R-209、X18K/R-87-X209W、X18K/R-X87D/R-X209W、18-X87D/R-213、18-87-X213A、18-X87D/R-X213A、X18K/R-X87D/R-213、X18K/R-87-X213A、X18K/R-X87D/R-X213A、18-87-249、X18K/R-87-249、18-X87D/R-249、18-87-X249N/R、18-X87D/R-249N/R、18K/R-X87D/R-249、18K/R-87-X249N/R、18K/R-X87D/R-X249N/R、18-129-130、X18K/R-129-130、18-X129Q-130、18-129-X130A、X18K/R-X129Q-130、X18K/R-129-X130A、18-X129Q-X130A、X18K/R-X129Q-X130A、18-129-206、X18K/R-129-206、18-X129Q-206、18-129-X206L/Y、X18K/R-X129Q-206、X18K/R-129-X206L/Y、18-X129Q-X206L/Y、X18K/R-X129Q-X206L/Y、18-129-209、X18K/R-129-209、18-X129Q-209、18-129-X209W、X18K/R-X129Q-209、X18K/R-129-X209W、18-X129Q-X209W、X18K/R-X129Q-X209W、18-129-213、X18K/R-129-213、18-X129Q-213、18-129-X213A、X18K/R-X129Q-213、X18K/R-129-X213A、18-X129Q-X213A、X18K/R-X129Q-X213A、18-129-249、X18K/R-129-249、18-X129Q-249、18-129-X249N/R、X18K/R-X129Q-249、X18K/R-129-X249N/R、18-X129Q-X249N/R、X18K/R-X129Q-X249N/R、18-130-206、X18K/R-130-206、18-X130A-206、18-130-X206L/Y、X18K/R-X130A-206、X18K/R-130-X206L/Y、18-X130A-X206L/Y、X18K/R-X130A-X206L/Y、18-130-209、X18K/R-130-209、18-X130A-209、18-130-X209W、X18K/R-X130A-209、X18K/R-130-X209W、18-X130A-X209W、X18K/R-X130A-X209W、18-130-213、X18K/R-130-213、18-X130A-213、18-130-X213A、X18K/R-X130A-213、X18K/R-130-X213A、18-X130A-X213A、X18K/R-X130A-X213A、18-130-249、X18K/R-130-249、18-X130A-249、18-130-X249N/R、X18K/R-X130A-249、X18K/R-130-X249N/R、18-X130A-X249N/R、X18K/R-X130A-X249N/R、18-206-209、18-206-X209W、18-X206L/Y-209、18K/R-206-209、18-X206L/Y-X209W、X18K/R-X206L/Y-209、X18K/R-206-X209W、X18K/R-X206L/Y-X209W、18-206-213、X18K/R-206-213、18-206L/Y-213、18-206-X213A、X18K/R-X206L/Y-213、X18K/R-206-X213A、18-X206L/Y-X213A、X18K/R-X206L/Y-X213A、18-206-249、X18K/R-206-249、18-206L/Y-249、18-206-X249N/R、X18K/R-X206L/Y-249、X18K/R-206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基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：78-X206A/D/F/G/H/M/N/P/R/S/Y、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-206、X78N-X206F/M/Y、X78G-X206D/F/H/M/N/P/R/Y、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X206A/D/F/G/H/M/N/P/R/S/Y、18-X78N、X18K/R-X78N、18-X87R、X18K/R-X87R、18-X206L/Y、X18K/R-X206L/Y、24-X87R、X24F/L/P/R-X87R、24-X206Y、X24F/L/P-206、X24F/L/P-X206Y、X24F/L/P-X209W、40-78、X40E-78、40-X78G、X40E-X78G、40-87、X40E-87、40-X87R、X40E-X87R、40-129、40-X129Q、X40E-129、X40E-X129Q、40-130、40-X130A、X40E-130、X40E-X130A、40-206、X40E-206、40-X206Y、X40E-X206Y、X78N-87、X78N-X87D/R、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-87、X78G-X87D/R/T、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X87R、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-129、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X129Q、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X130A、X78G-X130A/Q、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-130、78-X249N/R、X78N-249、X78N-X249N/R、87-X206L/Y、X87D/R-X206L/Y、87-X209W、X87D/R-X209W、87-X213A、X87D/R-213、X87D/R-X213A、X87R-X249N/R、129-X206Y、X129Q-X206Y、129-X249N/R、X129Q-249、X129Q-X249N/R、130-X206Y、X130A-X206R/Y、130-X249N/R、X130A-249、X130A-X249N/R、X206Y-209、X206Y-X209W、206-X213A、X206L/Y-213、X206L/Y-X213A、X206L/Y-249、X206L/Y-X249N/R、X209W-213、X209W-X213A、X209W-249、X209W-X249N/R、18-24-78、X18K/R-24-78、18-X24F/L/P/R-78、18-24-X78N、X18K/R-24-X78N、18-X24F/L/P/R-X78N、X18K/R-X24F/L/P/R-78、X18K/R-X24F/L/P/R-X78N、18-24-87、X18K/R-24-87、18-X24F/L/P/R-87、18-24-X87D/R、X18K/R-24-X87D/R、18-X24F/L/P/R-X87D/R、X18K/R-X24F/L/P/R-87、X18K/R-X24F/L/P/R-X87D/R、18-24-129、X18K/R-24-129、18-X24F/L/P/R-129、18-24-X129Q、X18K/R-X24F/L/P/R-129、X18K/R-24-X129Q、18-X24F/L/P/R-X129Q、X18K/R-X24F/L/P/R-X129Q、18-24-130、18-X24F/L/P/R-130、18-24-X130A、X18K/R-24-130、X18K/R-X24F/L/P/R-130、X18K/R-24-X130A、18-X24F/L/P/R-X130A、X18K/R-X24F/L/P/R-X130A、18-24-206、18-24-X206L/Y、18-X24F/L/P/R-206、X18K/R-24-206、X18K/R-24-X206L/Y、18-X24F/L/P/R-X206L/Y、X18K/R-X24F/L/P/R-206、X18K/R-X24F/L/P/R-X206L/Y、18-24-209、18-24-X209W、18-X24F/L/P/R-209、X18K/R-24-209、X18K/R-24-X209W、18-X24F/L/P/R-X209W、X18K/R-X24F/L/P/R-209、X18K/R-X24F/L/P/R-X209W、18-78-87、18-X78N-87、18-78-X87D/R、X18K/R-78-87、X18K/R-X78N-87、X18K/R-78-X87D/R、18-X78N-X87D/R、X18K/R-X78N-X87D/R、18-78-129、18-X78N-129、18-78-X129Q、X18K/R-78-129、X18K/R-X78N-129、X18K/R-78-X129Q、18-X78N-X129Q、X18K/R-X78N-X129Q、18-78-130、18-X78N-130、18-78-X130A、X18K/R-78-130、X18K/R-X78N-130、X18K/R-78-X130A、18-X78N-X130A、X18K/R-X78N-X130A、18-78-206、18-78-X206L/Y、18-X78N-206、X18K/R-78-206、18-X78N-X206L/Y、X18K/R-X78N-206、X18K/R-78-X206L/Y、X18K/R-X78N-X206L/Y、18-78-209、18-X78N-209、18-78-X209W、X18K/R-78-209、X18K/R-78-X209W、18-X78N-X209W、X18K/R-X78N-209、X18K/R-X78N-X209W、18-78-213、18-X78N-213、18-78-X213A、X18K/R-78-213、18-X78N-X213A、X18K/R-X78N-213、X18K/R-78-X213A、X18K/R-X78N-X213A、18-78-249、18-78-X249N/R、18-X78N-249、X18K/R-78-249、18-X78N-X249N/R、X18K/R-X78N-249、X18K/R-78-X249N/R、X18K/R-X78N-X249N/R、18-87-129、X18K/R-87-129、18-X87D/R-129、18-87-X129Q、18-X87D/R-X129Q、X18K/R-87-X129Q、X18K/R-X87D/R-129、X18K/R-X87D/R-X129Q、18-87-130、X18K/R-87-130、18-X87D/R-130、18-87-X130A、18-X87D/R-X130A、X18K/R-87-X130A、X18K/R-X87D/R-130、X18K/R-X87D/R-X130A、18-87-206、X18K/R-87-206、18-X87D/R-206、18-87-X206L/Y、18-X87D/R-X206L/Y、X18K/R-87-X206L/Y、X18K/R-X87D/R-206、X18K/R-X87D/R-X206L/Y、18-87-209、X18K/R-87-209、18-X87D/R-209、18-87-X209W、18-X87D/R-X209W、X18K/R-X87D/R-209、X18K/R-87-X209W、X18K/R-X87D/R-X209W、18-X87D/R-213、18-87-X213A、18-X87D/R-X213A、X18K/R-X87D/R-213、X18K/R-87-X213A、X18K/R-X87D/R-X213A、18-87-249、X18K/R-87-249、18-X87D/R-249、18-87-X249N/R、18-X87D/R-249N/R、18K/R-X87D/R-249、18K/R-87-X249N/R、18K/R-X87D/R-X249N/R、18-129-130、X18K/R-129-130、18-X129Q-130、18-129-X130A、X18K/R-X129Q-130、X18K/R-129-X130A、18-X129Q-X130A、X18K/R-X129Q-X130A、18-129-206、X18K/R-129-206、18-X129Q-206、18-129-X206L/Y、X18K/R-X129Q-206、X18K/R-129-X206L/Y、18-X129Q-X206L/Y、X18K/R-X129Q-X206L/Y、18-129-209、X18K/R-129-209、18-X129Q-209、18-129-X209W、X18K/R-X129Q-209、X18K/R-129-X209W、18-X129Q-X209W、X18K/R-X129Q-X209W、18-129-213、X18K/R-129-213、18-X129Q-213、18-129-X213A、X18K/R-X129Q-213、X18K/R-129-X213A、18-X129Q-X213A、X18K/R-X129Q-X213A、18-129-249、X18K/R-129-249、18-X129Q-249、18-129-X249N/R、X18K/R-X129Q-249、X18K/R-129-X249N/R、18-X129Q-X249N/R、X18K/R-X129Q-X249N/R、18-130-206、X18K/R-130-206、18-X130A-206、18-130-X206L/Y、X18K/R-X130A-206、X18K/R-130-X206L/Y、18-X130A-X206L/Y、X18K/R-X130A-X206L/Y、18-130-209、X18K/R-130-209、18-X130A-209、18-130-X209W、X18K/R-X130A-209、X18K/R-130-X209W、18-X130A-X209W、X18K/R-X130A-X209W、18-130-213、X18K/R-130-213、18-X130A-213、18-130-X213A、X18K/R-X130A-213、X18K/R-130-X213A、18-X130A-X213A、X18K/R-X130A-X213A、18-130-249、X18K/R-130-249、18-X130A-249、18-130-X249N/R、X18K/R-X130A-249、X18K/R-130-X249N/R、18-X130A-X249N/R、X18K/R-X130A-X249N/R、18-206-209、18-206-X209W、18-X206L/Y-209、18K/R-206-209、18-X206L/Y-X209W、X18K/R-X206L/Y-209、X18K/R-206-X209W、X18K/R-X206L/Y-X209W、18-206-213、X18K/R-206-213、18-206L/Y-213、18-206-X213A、X18K/R-X206L/Y-213、X18K/R-206-X213A、18-X206L/Y-X213A、X18K/R-X206L/Y-X213A、18-206-249、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N/R、X78N-X130A-249、X78N-130-X249N/R、78-X130A-X249N/R、X78N-X130A-X249N/R、78-206-209、X78N-206-209、78-X206L/Y-209、78-206-X209W、X78N-X206L/Y-209、X78N-206-X209W、78-X206L/Y-X209W、X78N-X206L/Y-X209W、78-206-213、X78N-206-213、78-X206L/Y-213、78-206-X213A、X78N-X206L/Y-213、X78N-206-X213A、78-X206L/Y-X213A、X78N-X206L/Y-X213A、78-206-249、78-206-X249R/N、78-X206L/Y-249、X78N-206-249、X78N-206-X249N/R、78-X206L/Y-X249N/R、X78N-X206L/Y-249、X78N-X206L/Y-X249N/R、78-209-213、78-X209W-213、78-209-X213A、X78N-209-213、X78N-X209W-213、X78N-209-X213A、78-X209W-X213A、X78N-X209W-X213A、78-209-249、78-X209W-249、78-209-X249N/R、X78N-209-249、78-X209W-X249N/R、X78N-X209W-249、X78N-209-X249N/R、X78N-X209W-X249N/R、78-213-249、78-X213A-249、X78N-213-249、78-213-X249N/R、X78N-X213A-249、X78N-213-X249N/R、78-X213A-X249N/R、X78N-X213A-X249N/R、87-129-130、X87D/R-129-130、87-X129Q-130、87-129-X130A、X87D/R-X129Q-130、X87D/R-129-X130A、87-X129Q-X130A、X87D/R-X129Q-X130A、87-129-206、X87D/R-129-206、87-X129Q-206、87-129-X206L/R/Y、X87D/R-X129Q-206、X87D/R-129-X206L/R/Y、87-X129Q-X206L/R/Y、X87D/R-X129Q-X206L/R/Y、87-129-209、X87D/R-129-209、87-X129Q-209、87-129-X209W、X87D/R-X129Q-209、X87D/R-129-X209W、87-X129Q-X209W、X87D/R-X129Q-X209W、87-129-213、X87D/R-129-213、87-X129Q-213、87-129-X213A、X87D/R-X129Q-213、X87D/R-129-X213A、87-X129Q-X213A、X87D/R-X129Q-X213A、87-129-249、X87D/R-129-249、87-X129Q-249、87-129-X249N/R、X87D/R-X129Q-249、X87D/R-129-X249N/R、87-X129Q-X249N/R、X87D/R-X129Q-X249N/R、87-130-206、X87D/R-130-206、87-X130A-206、87-130-X206L/R/Y、X87D/R-X130A-206、X87D/R-130-X206L/R/Y、87-X130A-X206L/R/Y、X87D/R-X130A-X206L/R/Y、87-130-209、X87D/R-130-209、87-X130A-209、87-130-X209W、X87D/R-X130A-209、X87D/R-130-X209W、87-X130A-X209W、X87D/R-X130A-X209W、87-130-213、X87D/R-130-213、87-X130A-213、87-130-X213A、X87D/R-X130A-213、X87D/R-130-X213A、87-X130A-X213A、X87D/R-X130A-X213A、87-130-249、X87D/R-130-249、87-X130A-249、87-130-X249N/R、X87D/R-X130A-249、X87D/R-130-X249N/R、87-X130A-X249N/R、X87D/R-X130A-X249N/R、87-206-209、X87D/R-206-209、87-X206L/Y-209、87-206-X209W、X87D/R-X206L/Y-209、X87D/R-206-X209W、87-X206L/Y-X209W、X87D/R-X206L/Y-X209W、87-206-213、87-X206L/Y-213、87-206-X213A、X87D/R-206-213、X87D/R-X206L/Y-213、X87D/R-206-X213A、87-X206L/Y-X213A、X87D/R-X206L/Y-X213A、87-206-249、87-X206L/Y-249、87D/R-206-249、87-209-X249N/R、X87R-206-X249N/R、X87D/R-X206L/Y-249、87-X206L/Y-X249N/R、X87R-X206L/Y-X249N/R、87-209-213、X87D/R-209-213、87-X209W-213、87-209-X213A、X87D/R-X209W-213、X87D/R-209-X213A、87-X209W-X213A、X87D/R-X209W-X213A、87-209-249、87-X209W-249、87-209-X249N/R、X87D/R-209-249、X87D/R-X209W-249、87-X209W-X249N/R、X87R-209-X249N/R、X87D/R-X209W-X249N/R、87-213-249、87-X213A-249、X87D/R-213-249、87-213-X249N/R、X87D/R-X213A-249、X87D/R-213-X249N/R、87-X213A-X249N/R、X87D/R-X213A-X249N/R、129-130-X206R/Y、X129Q-130-X206R/Y、129-X130A-X206R/Y、X129Q-X130A-X206R/Y、129-130-213、X129Q-130-213、129-X130A-213、129-130-X213A、X129Q-X130A-213、X129Q-130-X213A、129-X130A-X213A、X129Q-X130A-X213A、129-130-249、X129Q-130-249、129-X130A-249、129-130-X249N/R、X129Q-X130A-249、X129Q-130-X249N/R、129-X130A-X249N/R、X129Q-X130A-X249N/R、129-X206Y-209、X129Q-X206Y-209、129-X206Y-X209W、X129Q-X206Y-X209W、129-206-213、129-X206L/Y-213、129-206-X213A、X129Q-206-213、X129Q-X206L/Y-213、X129Q-206-X213A、129-X206L/Y-X213A、X129Q-X206L/Y-X213A、129-206-249、129-X206L/Y-249、129-206-X249N/R、X129Q-206-249、X129A-X206L/Y-249、X129Q-206-X249N/R、129-X206L/Y-X249N/R、X129Q-X206L/Y-X249N/R、129-209-213、129-X209W-213、129-209-X213A、X129Q-209-213、X129Q-X209W-213、X129Q-209-X213A、129-X209W-X213A、X129Q-X209W-X213A、129-209-249、129-X209W-249、129-209-X249N/R、X129Q-209-249、X129Q-X209W-249、X129Q-209-X249N/R、129-X209W-X249N/R、X129Q-X209W-X249N/R、129-213-249、129-X213A-249、129-213-X249N/R、X129Q-213-249、X129Q-X213A-249、129-X213A-X249R、X129Q-213-X249N/R、X129Q-X213A-X249N/R、130-X206Y-209、X130A-X206Y-209、130-X206Y-X209W、X130A-X206Y-X209W、130-206-213、130-X206L/Y-213、130-206-X213A、X130A-206-213、X130A-X206L/Y-213、X130A-206-X213A、130-X206L/Y-X213A、X130A-X206L/Y-X213A、130-206-249、130-X206L/Y-249、130-206-X249N/R、X130A-206-249、X130A-X206L/Y-249、X130A-206-X249N/R、130-X206L/Y-X249N/R、X130A-X206L/Y-X249N/R、130-209-213、130-X209W-213、130-209-X213A、X130A-209-213、X130A-X209W-213、X130A-209-X213A、130-X209W-X213A、X130A-X209W-X213A、130-209-249、130-X209W-249、130-209-X249N/R、X130A-209-249、X130A-X209W-249、X130A-209-X249N/R、130-X209W-X249N/R、X130A-X209W-X249N/R、130-213-249、130-X213A-249、130-213-X249N/R、X130A-213-249、X130A-X213A-249、130-X213A-X249R、X130A-213-X249N/R、X130A-X213A-X249N/R、130-209-249、130-X209W-249、130-209-X249N/R、X130A-209-249、X130A-X209W-249、X130A-209-X249N/R、130-X209W-X249N/R、X130A-X209W-X249N/R、206-209-213、206-X209W-213、206-209-X213A、X206L/Y-209-213、206-X209W-X213A、X206L/Y-X209W-213、X206L/Y-209-X213A、X206L/Y-X209W-X213A、206-209-249、206-X209W-249、206-209-X249N/R、X206L/Y-209-249、X206L/Y-X209W-249、206-X209W-X249N/R、X206L/Y-209-X249N/R、X206L/Y-X209W-X249N/R、206-213-249、206-X213A-249、206-213-X249N/R、X206L/Y-213-249、X206L/Y-X213A-249、X206L/Y-213-X249N/R、206-X213A-X249N/R、X206L/Y-X213A-X249N/R、209-213-249、X209W-213-249、209-X213A-249、209-213-X249N/R、X209W-X213A-249、X209W-213-X249N/R、209-X213A-X249N/R、X209W-X213A-X249N/R、及其组合；其中X是任何氨基酸，所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)1、3、8、9、16、20、22、28、42、43、44、56、76、77、82、88、89、99、100、101、103、104、108、116、118、120、124、127、128、147、150、158、159、160、166、185、188、194、204、210、211、212、215、216、217、218、222、232、235、241、243、245、246、248、251、252、254、256、259、261、262、268、270、和271；(ii)X1V、X3I/T/V、X8V、X9G、X16T、X20E/R、X22L/W、X28T、X42I、X43R/S/Y、X44V、X56P、X76D、X77D、X82D、X88S、X89H、X99N、X100S、X101F/G/H/Q/T/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116L/M、X118A/R/V、X120R、X124M、X127S/T、X128K/L/R、X147I、X150T、X158E/T/V、X159D、X160Q、X166D/N、X185Y、X188D、X194D/P、X204D、X210I/L、X211P、X212D、X215K/V、X216Y、X217K、X218S、X222L/Q/S、X232V、X235T、X241K、X243S、X245R、X246V、X248D、X251R、X252I、X254T、X256P、X259G、X261I/N、X262Q、X268A、X270P/T、和X271D；或(iii)A1V、S3I/T/V、I8V、S9G、A16T、G20E/R、T22L/W、V28T、L42I、N43R/S/Y、I44V、S56P、N76D、N77D、L82D、A88S、E89H、S99N、G100S、S101F/G/H/Q/T/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116L/M、G118A/R/V、H120R、L124M、G127S/T、S128K/LR、V147I、V150T、A158E/T/V、G159D、S160Q、S166D/N、N185Y、S188D、A194D/P、N204D、P210I/L、G211P、S212D、A215K/V、S216Y、L217K、N218S、M222L/Q/S、A232V、K235T、W241K、N243S、Q245R、I246V、N248D、K251R、N252I、A254T、S256P、S259G、N261I/N、L262Q、V268A、A270P/T、和E271D；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。甚至仍另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：78-X206A/D/F/G/H/M/N/P/R/S/Y、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-206、X78N-X206F/M/Y、X78G-X206D/F/H/M/N/P/R/Y、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X206A/D/F/G/H/M/N/P/R/S/Y、18-X78N、X18K/R-X78N、18-X87R、X18K/R-X87R、18-X206L/Y、X18K/R-X206L/Y、24-X87R、X24F/L/P/R-X87R、24-X206Y、X24F/L/P-206、X24F/L/P-X206Y、X24F/L/P-X209W、40-78、X40E-78、40-X78G、X40E-X78G、40-87、X40E-87、40-X87R、X40E-X87R、40-129、40-X129Q、X40E-129、X40E-X129Q、40-130、40-X130A、X40E-130、X40E-X130A、40-206、X40E-206、40-X206Y、X40E-X206Y、X78N-87、X78N-X87D/R、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-87、X78G-X87D/R/T、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X87R、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-129、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X129Q、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X130A、X78G-X130A/Q、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-130、78-X249N/R、X78N-249、X78N-X249N/R、87-X206L/Y、X87D/R-X206L/Y、87-X209W、X87D/R-X209W、87-X213A、X87D/R-213、X87D/R-X213A、X87R-X249N/R、129-X206Y、X129Q-X206Y、129-X249N/R、X129Q-249、X129Q-X249N/R、130-X206Y、X130A-X206R/Y、130-X249N/R、X130A-249、X130A-X249N/R、X206Y-209、X206Y-X209W、206-X213A、X206L/Y-213、X206L/Y-X213A、X206L/Y-249、X206L/Y-X249N/R、X209W-213、X209W-X213A、X209W-249、X209W-X249N/R、18-24-78、X18K/R-24-78、18-X24F/L/P/R-78、18-24-X78N、X18K/R-24-X78N、18-X24F/L/P/R-X78N、X18K/R-X24F/L/P/R-78、X18K/R-X24F/L/P/R-X78N、18-24-87、X18K/R-24-87、18-X24F/L/P/R-87、18-24-X87D/R、X18K/R-24-X87D/R、18-X24F/L/P/R-X87D/R、X18K/R-X24F/L/P/R-87、X18K/R-X24F/L/P/R-X87D/R、18-24-129、X18K/R-24-129、18-X24F/L/P/R-129、18-24-X129Q、X18K/R-X24F/L/P/R-129、X18K/R-24-X129Q、18-X24F/L/P/R-X129Q、X18K/R-X24F/L/P/R-X129Q、18-24-130、18-X24F/L/P/R-130、18-24-X130A、X18K/R-24-130、X18K/R-X24F/L/P/R-130、X18K/R-24-X130A、18-X24F/L/P/R-X130A、X18K/R-X24F/L/P/R-X130A、18-24-206、18-24-X206L/Y、18-X24F/L/P/R-206、X18K/R-24-206、X18K/R-24-X206L/Y、18-X24F/L/P/R-X206L/Y、X18K/R-X24F/L/P/R-206、X18K/R-X24F/L/P/R-X206L/Y、18-24-209、18-24-X209W、18-X24F/L/P/R-209、X18K/R-24-209、X18K/R-24-X209W、18-X24F/L/P/R-X209W、X18K/R-X24F/L/P/R-209、X18K/R-X24F/L/P/R-X209W、18-78-87、18-X78N-87、18-78-X87D/R、X18K/R-78-87、X18K/R-X78N-87、X18K/R-78-X87D/R、18-X78N-X87D/R、X18K/R-X78N-X87D/R、18-78-129、18-X78N-129、18-78-X129Q、X18K/R-78-129、X18K/R-X78N-129、X18K/R-78-X129Q、18-X78N-X129Q、X18K/R-X78N-X129Q、18-78-130、18-X78N-130、18-78-X130A、X18K/R-78-130、X18K/R-X78N-130、X18K/R-78-X130A、18-X78N-X130A、X18K/R-X78N-X130A、18-78-206、18-78-X206L/Y、18-X78N-206、X18K/R-78-206、18-X78N-X206L/Y、X18K/R-X78N-206、X18K/R-78-X206L/Y、X18K/R-X78N-X206L/Y、18-78-209、18-X78N-209、18-78-X209W、X18K/R-78-209、X18K/R-78-X209W、18-X78N-X209W、X18K/R-X78N-209、X18K/R-X78N-X209W、18-78-213、18-X78N-213、18-78-X213A、X18K/R-78-213、18-X78N-X213A、X18K/R-X78N-213、X18K/R-78-X213A、X18K/R-X78N-X213A、18-78-249、18-78-X249N/R、18-X78N-249、X18K/R-78-249、18-X78N-X249N/R、X18K/R-X78N-249、X18K/R-78-X249N/R、X18K/R-X78N-X249N/R、18-87-129、X18K/R-87-129、18-X87D/R-129、18-87-X129Q、18-X87D/R-X129Q、X18K/R-87-X129Q、X18K/R-X87D/R-129、X18K/R-X87D/R-X129Q、18-87-130、X18K/R-87-130、18-X87D/R-130、18-87-X130A、18-X87D/R-X130A、X18K/R-87-X130A、X18K/R-X87D/R-130、X18K/R-X87D/R-X130A、18-87-206、X18K/R-87-206、18-X87D/R-206、18-87-X206L/Y、18-X87D/R-X206L/Y、X18K/R-87-X206L/Y、X18K/R-X87D/R-206、X18K/R-X87D/R-X206L/Y、18-87-209、X18K/R-87-209、18-X87D/R-209、18-87-X209W、18-X87D/R-X209W、X18K/R-X87D/R-209、X18K/R-87-X209W、X18K/R-X87D/R-X209W、18-X87D/R-213、18-87-X213A、18-X87D/R-X213A、X18K/R-X87D/R-213、X18K/R-87-X213A、X18K/R-X87D/R-X213A、18-87-249、X18K/R-87-249、18-X87D/R-249、18-87-X249N/R、18-X87D/R-249N/R、18K/R-X87D/R-249、18K/R-87-X249N/R、18K/R-X87D/R-X249N/R、18-129-130、X18K/R-129-130、18-X129Q-130、18-129-X130A、X18K/R-X129Q-130、X18K/R-129-X130A、18-X129Q-X130A、X18K/R-X129Q-X130A、18-129-206、X18K/R-129-206、18-X129Q-206、18-129-X206L/Y、X18K/R-X129Q-206、X18K/R-129-X206L/Y、18-X129Q-X206L/Y、X18K/R-X129Q-X206L/Y、18-129-209、X18K/R-129-209、18-X129Q-209、18-129-X209W、X18K/R-X129Q-209、X18K/R-129-X209W、18-X129Q-X209W、X18K/R-X129Q-X209W、18-129-213、X18K/R-129-213、18-X129Q-213、18-129-X213A、X18K/R-X129Q-213、X18K/R-129-X213A、18-X129Q-X213A、X18K/R-X129Q-X213A、18-129-249、X18K/R-129-249、18-X129Q-249、18-129-X249N/R、X18K/R-X129Q-249、X18K/R-129-X249N/R、18-X129Q-X249N/R、X18K/R-X129Q-X249N/R、18-130-206、X18K/R-130-206、18-X130A-206、18-130-X206L/Y、X18K/R-X130A-206、X18K/R-130-X206L/Y、18-X130A-X206L/Y、X18K/R-X130A-X206L/Y、18-130-209、X18K/R-130-209、18-X130A-209、18-130-X209W、X18K/R-X130A-209、X18K/R-130-X209W、18-X130A-X209W、X18K/R-X130A-X209W、18-130-213、X18K/R-130-213、18-X130A-213、18-130-X213A、X18K/R-X130A-213、X18K/R-130-X213A、18-X130A-X213A、X18K/R-X130A-X213A、18-130-249、X18K/R-130-249、18-X130A-249、18-130-X249N/R、X18K/R-X130A-249、X18K/R-130-X249N/R、18-X130A-X249N/R、X18K/R-X130A-X249N/R、18-206-209、18-206-X209W、18-X206L/Y-209、18K/R-206-209、18-X206L/Y-X209W、X18K/R-X206L/Y-209、X18K/R-206-X209W、X18K/R-X206L/Y-X209W、18-206-213、X18K/R-206-213、18-206L/Y-213、18-206-X213A、X18K/R-X206L/Y-213、X18K/R-206-X213A、18-X206L/Y-X213A、X18K/R-X206L/Y-X213A、18-206-2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249N/R、X78N-X130A-249、X78N-130-X249N/R、78-X130A-X249N/R、X78N-X130A-X249N/R、78-206-209、X78N-206-209、78-X206L/Y-209、78-206-X209W、X78N-X206L/Y-209、X78N-206-X209W、78-X206L/Y-X209W、X78N-X206L/Y-X209W、78-206-213、X78N-206-213、78-X206L/Y-213、78-206-X213A、X78N-X206L/Y-213、X78N-206-X213A、78-X206L/Y-X213A、X78N-X206L/Y-X213A、78-206-249、78-206-X249R/N、78-X206L/Y-249、X78N-206-249、X78N-206-X249N/R、78-X206L/Y-X249N/R、X78N-X206L/Y-249、X78N-X206L/Y-X249N/R、78-209-213、78-X209W-213、78-209-X213A、X78N-209-213、X78N-X209W-213、X78N-209-X213A、78-X209W-X213A、X78N-X209W-X213A、78-209-249、78-X209W-249、78-209-X249N/R、X78N-209-249、78-X209W-X249N/R、X78N-X209W-249、X78N-209-X249N/R、X78N-X209W-X249N/R、78-213-249、78-X213A-249、X78N-213-249、78-213-X249N/R、X78N-X213A-249、X78N-213-X249N/R、78-X213A-X249N/R、X78N-X213A-X249N/R、87-129-130、X87D/R-129-130、87-X129Q-130、87-129-X130A、X87D/R-X129Q-130、X87D/R-129-X130A、87-X129Q-X130A、X87D/R-X129Q-X130A、87-129-206、X87D/R-129-206、87-X129Q-206、87-129-X206L/R/Y、X87D/R-X129Q-206、X87D/R-129-X206L/R/Y、87-X129Q-X206L/R/Y、X87D/R-X129Q-X206L/R/Y、87-129-209、X87D/R-129-209、87-X129Q-209、87-129-X209W、X87D/R-X129Q-209、X87D/R-129-X209W、87-X129Q-X209W、X87D/R-X129Q-X209W、87-129-213、X87D/R-129-213、87-X129Q-213、87-129-X213A、X87D/R-X129Q-213、X87D/R-129-X213A、87-X129Q-X213A、X87D/R-X129Q-X213A、87-129-249、X87D/R-129-249、87-X129Q-249、87-129-X249N/R、X87D/R-X129Q-249、X87D/R-129-X249N/R、87-X129Q-X249N/R、X87D/R-X129Q-X249N/R、87-130-206、X87D/R-130-206、87-X130A-206、87-130-X206L/R/Y、X87D/R-X130A-206、X87D/R-130-X206L/R/Y、87-X130A-X206L/R/Y、X87D/R-X130A-X206L/R/Y、87-130-209、X87D/R-130-209、87-X130A-209、87-130-X209W、X87D/R-X130A-209、X87D/R-130-X209W、87-X130A-X209W、X87D/R-X130A-X209W、87-130-213、X87D/R-130-213、87-X130A-213、87-130-X213A、X87D/R-X130A-213、X87D/R-130-X213A、87-X130A-X213A、X87D/R-X130A-X213A、87-130-249、X87D/R-130-249、87-X130A-249、87-130-X249N/R、X87D/R-X130A-249、X87D/R-130-X249N/R、87-X130A-X249N/R、X87D/R-X130A-X249N/R、87-206-209、X87D/R-206-209、87-X206L/Y-209、87-206-X209W、X87D/R-X206L/Y-209、X87D/R-206-X209W、87-X206L/Y-X209W、X87D/R-X206L/Y-X209W、87-206-213、87-X206L/Y-213、87-206-X213A、X87D/R-206-213、X87D/R-X206L/Y-213、X87D/R-206-X213A、87-X206L/Y-X213A、X87D/R-X206L/Y-X213A、87-206-249、87-X206L/Y-249、87D/R-206-249、87-209-X249N/R、X87R-206-X249N/R、X87D/R-X206L/Y-249、87-X206L/Y-X249N/R、X87R-X206L/Y-X249N/R、87-209-213、X87D/R-209-213、87-X209W-213、87-209-X213A、X87D/R-X209W-213、X87D/R-209-X213A、87-X209W-X213A、X87D/R-X209W-X213A、87-209-249、87-X209W-249、87-209-X249N/R、X87D/R-209-249、X87D/R-X209W-249、87-X209W-X249N/R、X87R-209-X249N/R、X87D/R-X209W-X249N/R、87-213-249、87-X213A-249、X87D/R-213-249、87-213-X249N/R、X87D/R-X213A-249、X87D/R-213-X249N/R、87-X213A-X249N/R、X87D/R-X213A-X249N/R、129-130-X206R/Y、X129Q-130-X206R/Y、129-X130A-X206R/Y、X129Q-X130A-X206R/Y、129-130-213、X129Q-130-213、129-X130A-213、129-130-X213A、X129Q-X130A-213、X129Q-130-X213A、129-X130A-X213A、X129Q-X130A-X213A、129-130-249、X129Q-130-249、129-X130A-249、129-130-X249N/R、X129Q-X130A-249、X129Q-130-X249N/R、129-X130A-X249N/R、X129Q-X130A-X249N/R、129-X206Y-209、X129Q-X206Y-209、129-X206Y-X209W、X129Q-X206Y-X209W、129-206-213、129-X206L/Y-213、129-206-X213A、X129Q-206-213、X129Q-X206L/Y-213、X129Q-206-X213A、129-X206L/Y-X213A、X129Q-X206L/Y-X213A、129-206-249、129-X206L/Y-249、129-206-X249N/R、X129Q-206-249、X129A-X206L/Y-249、X129Q-206-X249N/R、129-X206L/Y-X249N/R、X129Q-X206L/Y-X249N/R、129-209-213、129-X209W-213、129-209-X213A、X129Q-209-213、X129Q-X209W-213、X129Q-209-X213A、129-X209W-X213A、X129Q-X209W-X213A、129-209-249、129-X209W-249、129-209-X249N/R、X129Q-209-249、X129Q-X209W-249、X129Q-209-X249N/R、129-X209W-X249N/R、X129Q-X209W-X249N/R、129-213-249、129-X213A-249、129-213-X249N/R、X129Q-213-249、X129Q-X213A-249、129-X213A-X249R、X129Q-213-X249N/R、X129Q-X213A-X249N/R、130-X206Y-209、X130A-X206Y-209、130-X206Y-X209W、X130A-X206Y-X209W、130-206-213、130-X206L/Y-213、130-206-X213A、X130A-206-213、X130A-X206L/Y-213、X130A-206-X213A、130-X206L/Y-X213A、X130A-X206L/Y-X213A、130-206-249、130-X206L/Y-249、130-206-X249N/R、X130A-206-249、X130A-X206L/Y-249、X130A-206-X249N/R、130-X206L/Y-X249N/R、X130A-X206L/Y-X249N/R、130-209-213、130-X209W-213、130-209-X213A、X130A-209-213、X130A-X209W-213、X130A-209-X213A、130-X209W-X213A、X130A-X209W-X213A、130-209-249、130-X209W-249、130-209-X249N/R、X130A-209-249、X130A-X209W-249、X130A-209-X249N/R、130-X209W-X249N/R、X130A-X209W-X249N/R、130-213-249、130-X213A-249、130-213-X249N/R、X130A-213-249、X130A-X213A-249、130-X213A-X249R、X130A-213-X249N/R、X130A-X213A-X249N/R、130-209-249、130-X209W-249、130-209-X249N/R、X130A-209-249、X130A-X209W-249、X130A-209-X249N/R、130-X209W-X249N/R、X130A-X209W-X249N/R、206-209-213、206-X209W-213、206-209-X213A、X206L/Y-209-213、206-X209W-X213A、X206L/Y-X209W-213、X206L/Y-209-X213A、X206L/Y-X209W-X213A、206-209-249、206-X209W-249、206-209-X249N/R、X206L/Y-209-249、X206L/Y-X209W-249、206-X209W-X249N/R、X206L/Y-209-X249N/R、X206L/Y-X209W-X249N/R、206-213-249、206-X213A-249、206-213-X249N/R、X206L/Y-213-249、X206L/Y-X213A-249、X206L/Y-213-X249N/R、206-X213A-X249N/R、X206L/Y-X213A-X249N/R、209-213-249、X209W-213-249、209-X213A-249、209-213-X249N/R、X209W-X213A-249、X209W-213-X249N/R、209-X213A-X249N/R、X209W-X213A-X249N/R、及其组合；其中X是任何氨基酸，所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)3、8、22、28、43、76、89、99、101、103、104、108、116、118、124、127、128、147、150、158、159、166、188、194、210、211、212、215、217、222、232、235、243、245、246、261、262、270、和271；(ii)X3T/V、X8V、X22W、X28T、X43S、X76D、X89H、X99N、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116M、X118R、X124M、X127T、X128L、X147I、X150T、X158E/T、X159D、X166D、X188D、X194D/P、X210I/L、X211P、X212D、X215V、X217K、X222Q/S、X232V、X235T、X243S、X245R、X246V、X261I、X262Q、X270T、和X271D；或(iii)S3T/V、I8V、T22W、V28T、N43S、N76D、E89H、S99N、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116M、G118R、L124M、G127T、S128L、V147I、V150T、A158E/T、G159D、S166D、S188D、A194D/P、P210I/L、G211P、S212D、A215V、L217K、M222Q/S、A232V、K235T、N243S、Q245R、I246V、N261I、L262Q、A270T、和E271D；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。甚至仍另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：78-X206A/D/F/G/H/M/N/P/R/S/Y、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-206、X78N-X206F/M/Y、X78G-X206D/F/H/M/N/P/R/Y、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X206A/D/F/G/H/M/N/P/R/S/Y、18-X78N、X18K/R-X78N、18-X87R、X18K/R-X87R、18-X206L/Y、X18K/R-X206L/Y、24-X87R、X24F/L/P/R-X87R、24-X206Y、X24F/L/P-206、X24F/L/P-X206Y、X24F/L/P-X209W、40-78、X40E-78、40-X78G、X40E-X78G、40-87、X40E-87、40-X87R、X40E-X87R、40-129、40-X129Q、X40E-129、X40E-X129Q、40-130、40-X130A、X40E-130、X40E-X130A、40-206、X40E-206、40-X206Y、X40E-X206Y、X78N-87、X78N-X87D/R、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-87、X78G-X87D/R/T、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X87R、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-129、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X129Q、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X130A、X78G-X130A/Q、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-130、78-X249N/R、X78N-249、X78N-X249N/R、87-X206L/Y、X87D/R-X206L/Y、87-X209W、X87D/R-X209W、87-X213A、X87D/R-213、X87D/R-X213A、X87R-X249N/R、129-X206Y、X129Q-X206Y、129-X249N/R、X129Q-249、X129Q-X249N/R、130-X206Y、X130A-X206R/Y、130-X249N/R、X130A-249、X130A-X249N/R、X206Y-209、X206Y-X209W、206-X213A、X206L/Y-213、X206L/Y-X213A、X206L/Y-249、X206L/Y-X249N/R、X209W-213、X209W-X213A、X209W-249、X209W-X249N/R、18-24-78、X18K/R-24-78、18-X24F/L/P/R-78、18-24-X78N、X18K/R-24-X78N、18-X24F/L/P/R-X78N、X18K/R-X24F/L/P/R-78、X18K/R-X24F/L/P/R-X78N、18-24-87、X18K/R-24-87、18-X24F/L/P/R-87、18-24-X87D/R、X18K/R-24-X87D/R、18-X24F/L/P/R-X87D/R、X18K/R-X24F/L/P/R-87、X18K/R-X24F/L/P/R-X87D/R、18-24-129、X18K/R-24-129、18-X24F/L/P/R-129、18-24-X129Q、X18K/R-X24F/L/P/R-129、X18K/R-24-X129Q、18-X24F/L/P/R-X129Q、X18K/R-X24F/L/P/R-X129Q、18-24-130、18-X24F/L/P/R-130、18-24-X130A、X18K/R-24-130、X18K/R-X24F/L/P/R-130、X18K/R-24-X130A、18-X24F/L/P/R-X130A、X18K/R-X24F/L/P/R-X130A、18-24-206、18-24-X206L/Y、18-X24F/L/P/R-206、X18K/R-24-206、X18K/R-24-X206L/Y、18-X24F/L/P/R-X206L/Y、X18K/R-X24F/L/P/R-206、X18K/R-X24F/L/P/R-X206L/Y、18-24-209、18-24-X209W、18-X24F/L/P/R-209、X18K/R-24-209、X18K/R-24-X209W、18-X24F/L/P/R-X209W、X18K/R-X24F/L/P/R-209、X18K/R-X24F/L/P/R-X209W、18-78-87、18-X78N-87、18-78-X87D/R、X18K/R-78-87、X18K/R-X78N-87、X18K/R-78-X87D/R、18-X78N-X87D/R、X18K/R-X78N-X87D/R、18-78-129、18-X78N-129、18-78-X129Q、X18K/R-78-129、X18K/R-X78N-129、X18K/R-78-X129Q、18-X78N-X129Q、X18K/R-X78N-X129Q、18-78-130、18-X78N-130、18-78-X130A、X18K/R-78-130、X18K/R-X78N-130、X18K/R-78-X130A、18-X78N-X130A、X18K/R-X78N-X130A、18-78-206、18-78-X206L/Y、18-X78N-206、X18K/R-78-206、18-X78N-X206L/Y、X18K/R-X78N-206、X18K/R-78-X206L/Y、X18K/R-X78N-X206L/Y、18-78-209、18-X78N-209、18-78-X209W、X18K/R-78-209、X18K/R-78-X209W、18-X78N-X209W、X18K/R-X78N-209、X18K/R-X78N-X209W、18-78-213、18-X78N-213、18-78-X213A、X18K/R-78-213、18-X78N-X213A、X18K/R-X78N-213、X18K/R-78-X213A、X18K/R-X78N-X213A、18-78-249、18-78-X249N/R、18-X78N-249、X18K/R-78-249、18-X78N-X249N/R、X18K/R-X78N-249、X18K/R-78-X249N/R、X18K/R-X78N-X249N/R、18-87-129、X18K/R-87-129、18-X87D/R-129、18-87-X129Q、18-X87D/R-X129Q、X18K/R-87-X129Q、X18K/R-X87D/R-129、X18K/R-X87D/R-X129Q、18-87-130、X18K/R-87-130、18-X87D/R-130、18-87-X130A、18-X87D/R-X130A、X18K/R-87-X130A、X18K/R-X87D/R-130、X18K/R-X87D/R-X130A、18-87-206、X18K/R-87-206、18-X87D/R-206、18-87-X206L/Y、18-X87D/R-X206L/Y、X18K/R-87-X206L/Y、X18K/R-X87D/R-206、X18K/R-X87D/R-X206L/Y、18-87-209、X18K/R-87-209、18-X87D/R-209、18-87-X209W、18-X87D/R-X209W、X18K/R-X87D/R-209、X18K/R-87-X209W、X18K/R-X87D/R-X209W、18-X87D/R-213、18-87-X213A、18-X87D/R-X213A、X18K/R-X87D/R-213、X18K/R-87-X213A、X18K/R-X87D/R-X213A、18-87-249、X18K/R-87-249、18-X87D/R-249、18-87-X249N/R、18-X87D/R-249N/R、18K/R-X87D/R-249、18K/R-87-X249N/R、18K/R-X87D/R-X249N/R、18-129-130、X18K/R-129-130、18-X129Q-130、18-129-X130A、X18K/R-X129Q-130、X18K/R-129-X130A、18-X129Q-X130A、X18K/R-X129Q-X130A、18-129-206、X18K/R-129-206、18-X129Q-206、18-129-X206L/Y、X18K/R-X129Q-206、X18K/R-129-X206L/Y、18-X129Q-X206L/Y、X18K/R-X129Q-X206L/Y、18-129-209、X18K/R-129-209、18-X129Q-209、18-129-X209W、X18K/R-X129Q-209、X18K/R-129-X209W、18-X129Q-X209W、X18K/R-X129Q-X209W、18-129-213、X18K/R-129-213、18-X129Q-213、18-129-X213A、X18K/R-X129Q-213、X18K/R-129-X213A、18-X129Q-X213A、X18K/R-X129Q-X213A、18-129-249、X18K/R-129-249、18-X129Q-249、18-129-X249N/R、X18K/R-X129Q-249、X18K/R-129-X249N/R、18-X129Q-X249N/R、X18K/R-X129Q-X249N/R、18-130-206、X18K/R-130-206、18-X130A-206、18-130-X206L/Y、X18K/R-X130A-206、X18K/R-130-X206L/Y、18-X130A-X206L/Y、X18K/R-X130A-X206L/Y、18-130-209、X18K/R-130-209、18-X130A-209、18-130-X209W、X18K/R-X130A-209、X18K/R-130-X209W、18-X130A-X209W、X18K/R-X130A-X209W、18-130-213、X18K/R-130-213、18-X130A-213、18-130-X213A、X18K/R-X130A-213、X18K/R-130-X213A、18-X130A-X213A、X18K/R-X130A-X213A、18-130-249、X18K/R-130-249、18-X130A-249、18-130-X249N/R、X18K/R-X130A-249、X18K/R-130-X249N/R、18-X130A-X249N/R、X18K/R-X130A-X249N/R、18-206-209、18-206-X209W、18-X206L/Y-209、18K/R-206-209、18-X206L/Y-X209W、X18K/R-X206L/Y-209、X18K/R-206-X209W、X18K/R-X206L/Y-X209W、18-206-213、X18K/R-206-213、18-206L/Y-213、18-206-X213A、X18K/R-X206L/Y-213、X18K/R-206-X213A、18-X206L/Y-X213A、X18K/R-X206L/Y-X213A、18-206-2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13A-249、X209W-213-X249N/R、209-X213A-X249N/R、X209W-X213A-X249N/R、及其组合；其中X是任何氨基酸，所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)1、3、8、9、16、20、22、28、42、43、44、56、76、77、82、88、100、101、103、104、108、116、118、120、124、127、128、147、150、158、159、160、166、185、194、204、210、211、212、215、216、217、218、222、232、241、245、248、251、252、254、256、259、261、262、268、270、271；(ii)X1V、X3I/V、X8V、X9G、X16T、X20E/R、X22L/W、X28T、X42I、X43R/Y、X44V、X56P、X76D、X77D、X82D、X88S、X100S、X101G/H/Q/T/V、X103A、X104I、X108S、X116L/M、X118A/R/V、X120R、X124M、X127S/T、X128K/L/R、X147I、X150T、X158E/V、X160Q、X166D/N、X185Y、X194D/P、X204D、X210I、X211P、X212D、X215K/V、X216Y、X217K、X218S、X222Q/S、X232V、X241K、X245R、X248D、X251R、X252I、X254T、X256P、X259G、X261I、X262Q、X268A、X270P、和X271D；或(iii)A1V、S3I/V、I8V、S9G、A16T、G20E/R、T22L/W、V28T、L42I、N43R/Y、I44V、S56P、N76D、N77D、L82D、A88S、G100S、S101G/H/Q/T/V、S103A、V104I、A108S、N116L/M、G118A/R/V、H120R、L124M、G127S/T、S128K/LR、V147I、V150T、A158E/V、S160Q、S166D/N、N185Y、A194D/P、N204D、P210I、G211P、S212D、A215K/V、S216Y、L217K、N218S、M222Q/S、A232V、W241K、Q245R、N248D、K251R、N252I、A254T、S256P、S259G、N261I、L262Q、V268A、A270P、和E271D；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。甚至仍另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：78-X206A/D/F/G/H/M/N/P/R/S/Y、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-206、X78N-X206F/M/Y、X78G-X206D/F/H/M/N/P/R/Y、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X206A/D/F/G/H/M/N/P/R/S/Y、18-X78N、X18K/R-X78N、18-X87R、X18K/R-X87R、18-X206L/Y、X18K/R-X206L/Y、24-X87R、X24F/L/P/R-X87R、24-X206Y、X24F/L/P-206、X24F/L/P-X206Y、X24F/L/P-X209W、40-78、X40E-78、40-X78G、X40E-X78G、40-87、X40E-87、40-X87R、X40E-X87R、40-129、40-X129Q、X40E-129、X40E-X129Q、40-130、40-X130A、X40E-130、X40E-X130A、40-206、X40E-206、40-X206Y、X40E-X206Y、X78N-87、X78N-X87D/R、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-87、X78G-X87D/R/T、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X87R、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-129、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X129Q、X78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-X130A、X78G-X130A/Q、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-130、78-X249N/R、X78N-249、X78N-X249N/R、87-X206L/Y、X87D/R-X206L/Y、87-X209W、X87D/R-X209W、87-X213A、X87D/R-213、X87D/R-X213A、X87R-X249N/R、129-X206Y、X129Q-X206Y、129-X249N/R、X129Q-249、X129Q-X249N/R、130-X206Y、X130A-X206R/Y、130-X249N/R、X130A-249、X130A-X249N/R、X206Y-209、X206Y-X209W、206-X213A、X206L/Y-213、X206L/Y-X213A、X206L/Y-249、X206L/Y-X249N/R、X209W-213、X209W-X213A、X209W-249、X209W-X249N/R、18-24-78、X18K/R-24-78、18-X24F/L/P/R-78、18-24-X78N、X18K/R-24-X78N、18-X24F/L/P/R-X78N、X18K/R-X24F/L/P/R-78、X18K/R-X24F/L/P/R-X78N、18-24-87、X18K/R-24-87、18-X24F/L/P/R-87、18-24-X87D/R、X18K/R-24-X87D/R、18-X24F/L/P/R-X87D/R、X18K/R-X24F/L/P/R-87、X18K/R-X24F/L/P/R-X87D/R、18-24-129、X18K/R-24-129、18-X24F/L/P/R-129、18-24-X129Q、X18K/R-X24F/L/P/R-129、X18K/R-24-X129Q、18-X24F/L/P/R-X129Q、X18K/R-X24F/L/P/R-X129Q、18-24-130、18-X24F/L/P/R-130、18-24-X130A、X18K/R-24-130、X18K/R-X24F/L/P/R-130、X18K/R-24-X130A、18-X24F/L/P/R-X130A、X18K/R-X24F/L/P/R-X130A、18-24-206、18-24-X206L/Y、18-X24F/L/P/R-206、X18K/R-24-206、X18K/R-24-X206L/Y、18-X24F/L/P/R-X206L/Y、X18K/R-X24F/L/P/R-206、X18K/R-X24F/L/P/R-X206L/Y、18-24-209、18-24-X209W、18-X24F/L/P/R-209、X18K/R-24-209、X18K/R-24-X209W、18-X24F/L/P/R-X209W、X18K/R-X24F/L/P/R-209、X18K/R-X24F/L/P/R-X209W、18-78-87、18-X78N-87、18-78-X87D/R、X18K/R-78-87、X18K/R-X78N-87、X18K/R-78-X87D/R、18-X78N-X87D/R、X18K/R-X78N-X87D/R、18-78-129、18-X78N-129、18-78-X129Q、X18K/R-78-129、X18K/R-X78N-129、X18K/R-78-X129Q、18-X78N-X129Q、X18K/R-X78N-X129Q、18-78-130、18-X78N-130、18-78-X130A、X18K/R-78-130、X18K/R-X78N-130、X18K/R-78-X130A、18-X78N-X130A、X18K/R-X78N-X130A、18-78-206、18-78-X206L/Y、18-X78N-206、X18K/R-78-206、18-X78N-X206L/Y、X18K/R-X78N-206、X18K/R-78-X206L/Y、X18K/R-X78N-X206L/Y、18-78-209、18-X78N-209、18-78-X209W、X18K/R-78-209、X18K/R-78-X209W、18-X78N-X209W、X18K/R-X78N-209、X18K/R-X78N-X209W、18-78-213、18-X78N-213、18-78-X213A、X18K/R-78-213、18-X78N-X213A、X18K/R-X78N-213、X18K/R-78-X213A、X18K/R-X78N-X213A、18-78-249、18-78-X249N/R、18-X78N-249、X18K/R-78-249、18-X78N-X249N/R、X18K/R-X78N-249、X18K/R-78-X249N/R、X18K/R-X78N-X249N/R、18-87-129、X18K/R-87-129、18-X87D/R-129、18-87-X129Q、18-X87D/R-X129Q、X18K/R-87-X129Q、X18K/R-X87D/R-129、X18K/R-X87D/R-X129Q、18-87-130、X18K/R-87-130、18-X87D/R-130、18-87-X130A、18-X87D/R-X130A、X18K/R-87-X130A、X18K/R-X87D/R-130、X18K/R-X87D/R-X130A、18-87-206、X18K/R-87-206、18-X87D/R-206、18-87-X206L/Y、18-X87D/R-X206L/Y、X18K/R-87-X206L/Y、X18K/R-X87D/R-206、X18K/R-X87D/R-X206L/Y、18-87-209、X18K/R-87-209、18-X87D/R-209、18-87-X209W、18-X87D/R-X209W、X18K/R-X87D/R-209、X18K/R-87-X209W、X18K/R-X87D/R-X209W、18-X87D/R-213、18-87-X213A、18-X87D/R-X213A、X18K/R-X87D/R-213、X18K/R-87-X213A、X18K/R-X87D/R-X213A、18-87-249、X18K/R-87-249、18-X87D/R-249、18-87-X249N/R、18-X87D/R-249N/R、18K/R-X87D/R-249、18K/R-87-X249N/R、18K/R-X87D/R-X249N/R、18-129-130、X18K/R-129-130、18-X129Q-130、18-129-X130A、X18K/R-X129Q-130、X18K/R-129-X130A、18-X129Q-X130A、X18K/R-X129Q-X130A、18-129-206、X18K/R-129-206、18-X129Q-206、18-129-X206L/Y、X18K/R-X129Q-206、X18K/R-129-X206L/Y、18-X129Q-X206L/Y、X18K/R-X129Q-X206L/Y、18-129-209、X18K/R-129-209、18-X129Q-209、18-129-X209W、X18K/R-X129Q-209、X18K/R-129-X209W、18-X129Q-X209W、X18K/R-X129Q-X209W、18-129-213、X18K/R-129-213、18-X129Q-213、18-129-X213A、X18K/R-X129Q-213、X18K/R-129-X213A、18-X129Q-X213A、X18K/R-X129Q-X213A、18-129-249、X18K/R-129-249、18-X129Q-249、18-129-X249N/R、X18K/R-X129Q-249、X18K/R-129-X249N/R、18-X129Q-X249N/R、X18K/R-X129Q-X249N/R、18-130-206、X18K/R-130-206、18-X130A-206、18-130-X206L/Y、X18K/R-X130A-206、X18K/R-130-X206L/Y、18-X130A-X206L/Y、X18K/R-X130A-X206L/Y、18-130-209、X18K/R-130-209、18-X130A-209、18-130-X209W、X18K/R-X130A-209、X18K/R-130-X209W、18-X130A-X209W、X18K/R-X130A-X209W、18-130-213、X18K/R-130-213、18-X130A-213、18-130-X213A、X18K/R-X130A-213、X18K/R-130-X213A、18-X130A-X213A、X18K/R-X130A-X213A、18-130-249、X18K/R-130-249、18-X130A-249、18-130-X249N/R、X18K/R-X130A-249、X18K/R-130-X249N/R、18-X130A-X249N/R、X18K/R-X130A-X249N/R、18-206-209、18-206-X209W、18-X206L/Y-209、18K/R-206-209、18-X206L/Y-X209W、X18K/R-X206L/Y-209、X18K/R-206-X209W、X18K/R-X206L/Y-X209W、18-206-213、X18K/R-206-213、18-206L/Y-213、18-206-X213A、X18K/R-X206L/Y-213、X18K/R-206-X213A、18-X206L/Y-X213A、X18K/R-X206L/Y-X213A、18-206-2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13A-249、X209W-213-X249N/R、209-X213A-X249N/R、X209W-X213A-X249N/R、及其组合；其中X是任何氨基酸，所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)3、76、101、103、104、118、127、128、166、210、217、222、和261；(ii)X3V X76D、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X118R、X127T、X128L/R、X166D/N、X210I、X217K、X222Q/S、和X261I；或(iii)S3V、N76D、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、G118R、G127T、S128L/R、S166D/N、P210I、L217K、M222Q/S、和N261I；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
又另一个实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：78-X206L/Y、X78N-206、X78N-X206L/Y、18-X78N、X18K/R-X78N、18-X87R、X18K/R-X87R、18-X206L/Y、X18K/R-X206L/Y、24-X87R、X24F/P/R-X87R、24-X206L/Y、X24F/P/R-206、X24F/P/R-X206L/Y、24-X209W、X24F/P/R-X209W、X78N-87、X78N-X87D/R、78-X129Q、X78N-X129Q、78-X130A、X78N-130、X78N-209、78-X209W、X78N-X209W、78-X249N/R、X78N-249、X78N-X249N/R、87-X206L/Y、X87D/R-X206L/Y、87-X209W、X87D/R-X209W、87-X213A、X87D/R-213、X87D/R-X213A、X87R-X249N/R、129-X206L/Y、X129Q-206、X129Q-X206L/Y、129-X209W、X129Q-X209W、129-X249N/R、X129Q-249、X129Q-X249N/R、130-X206L/Y、X130A-206、X130A-X206L/Y、130-X209W、X130A-X209W、130-X249N/R、X130A-249、X130A-X249N/R、206-X209W、X206L/Y-209、X206L/Y-X209W、206-X213A、X206L/Y-213、X206L/Y-X213A、X206L/Y-249、X206L/Y-X249N/R、X209W-213、X209W-X213A、X209W-249、X209W-X249N/R、18-24-78、X18K/R-24-78、18-X24F/P/R-78、18-24-X78N、X18K/R-24-X78N、18-X24F/P/R-X78N、X18K/R-X24F/P/R-78、X18K/R-X24F/P/R-X78N、18-24-87、X18K/R-24-87、18-X24F/P/R-87、18-24-X87D/R、X18K/R-24-X87D/R、18-X24F/P/R-X87D/R、X18K/R-X24F/P/R-87、X18K/R-X24F/P/R-X87D/R、18-24-129、X18K/R-24-129、18-X24F/P/R-129、18-24-X129Q、X18K/R-X24F/P/R-129、X18K/R-24-X129Q、18-X24F/P/R-X129Q、X18K/R-X24F/P/R-X129Q、18-24-130、18-X24F/P/R-130、18-24-X130A、X18K/R-24-130、X18K/R-X24F/P/R-130、X18K/R-24-X130A、18-X24F/P/R-X130A、X18K/R-X24F/P/R-X130A、18-24-206、18-24-X206L/Y、18-X24F/P/R-206、X18K/R-24-206、X18K/R-24-X206L/Y、18-X24F/P/R-X206L/Y、X18K/R-X24F/P/R-206、X18K/R-X24F/P/R-X206L/Y、18-24-209、18-24-X209W、18-X24F/P/R-209、X18K/R-24-209、X18K/R-24-X209W、18-X24F/P/R-X209W、X18K/R-X24F/P/R-209、X18K/R-X24F/P/R-X209W、18-78-87、18-X78N-87、18-78-X87D/R、X18K/R-78-87、X18K/R-X78N-87、X18K/R-78-X87D/R、18-X78N-X87D/R、X18K/R-X78N-X87D/R、18-78-129、18-X78N-129、18-78-X129Q、X18K/R-78-129、X18K/R-X78N-129、X18K/R-78-X129Q、18-X78N-X129Q、X18K/R-X78N-X129Q、18-78-130、18-X78N-130、18-78-X130A、X18K/R-78-130、X18K/R-X78N-130、X18K/R-78-X130A、18-X78N-X130A、X18K/R-X78N-X130A、18-78-206、18-78-X206L/Y、18-X78N-206、X18K/R-78-206、18-X78N-X206L/Y、X18K/R-X78N-206、X18K/R-78-X206L/Y、X18K/R-X78N-X206L/Y、18-78-209、18-X78N-209、18-78-X209W、X18K/R-78-209、X18K/R-78-X209W、18-X78N-X209W、X18K/R-X78N-209、X18K/R-X78N-X209W、18-78-213、18-X78N-213、18-78-X213A、X18K/R-78-213、18-X78N-X213A、X18K/R-X78N-213、X18K/R-78-X213A、X18K/R-X78N-X213A、18-78-249、18-78-X249N/R、18-X78N-249、X18K/R-78-249、18-X78N-X249N/R、X18K/R-X78N-249、X18K/R-78-X249N/R、X18K/R-X78N-X249N/R、18-87-129、X18K/R-87-129、18-X87D/R-129、18-87-X129Q、18-X87D/R-X129Q、X18K/R-87-X129Q、X18K/R-X87D/R-129、X18K/R-X87D/R-X129Q、18-87-130、X18K/R-87-130、18-X87D/R-130、18-87-X130A、18-X87D/R-X130A、X18K/R-87-X130A、X18K/R-X87D/R-130、X18K/R-X87D/R-X130A、18-87-206、X18K/R-87-206、18-X87D/R-206、18-87-X206L/Y、18-X87D/R-X206L/Y、X18K/R-87-X206L/Y、X18K/R-X87D/R-206、X18K/R-X87D/R-X206L/Y、18-87-209、X18K/R-87-209、18-X87D/R-209、18-87-X209W、18-X87D/R-X209W、X18K/R-X87D/R-209、X18K/R-87-X209W、X18K/R-X87D/R-X209W、18-X87D/R-213、18-87-X213A、18-X87D/R-X213A、X18K/R-X87D/R-213、X18K/R-87-X213A、X18K/R-X87D/R-X213A、18-87-249、X18K/R-87-249、18-X87D/R-249、18-87-X249N/R、18-X87D/R-249N/R、18K/R-X87D/R-249、18K/R-87-X249N/R、18K/R-X87D/R-X249N/R、18-129-130、X18K/R-129-130、18-X129Q-130、18-129-X130A、X18K/R-X129Q-130、X18K/R-129-X130A、18-X129Q-X130A、X18K/R-X129Q-X130A、18-129-206、X18K/R-129-206、18-X129Q-206、18-129-X206L/Y、X18K/R-X129Q-206、X18K/R-129-X206L/Y、18-X129Q-X206L/Y、X18K/R-X129Q-X206L/Y、18-129-209、X18K/R-129-209、18-X129Q-209、18-129-X209W、X18K/R-X129Q-209、X18K/R-129-X209W、18-X129Q-X209W、X18K/R-X129Q-X209W、18-129-213、X18K/R-129-213、18-X129Q-213、18-129-X213A、X18K/R-X129Q-213、X18K/R-129-X213A、18-X129Q-X213A、X18K/R-X129Q-X213A、18-129-249、X18K/R-129-249、18-X129Q-249、18-129-X249N/R、X18K/R-X129Q-249、X18K/R-129-X249N/R、18-X129Q-X249N/R、X18K/R-X129Q-X249N/R、18-130-206、X18K/R-130-206、18-X130A-206、18-130-X206L/Y、X18K/R-X130A-206、X18K/R-130-X206L/Y、18-X130A-X206L/Y、X18K/R-X130A-X206L/Y、18-130-209、X18K/R-130-209、18-X130A-209、18-130-X209W、X18K/R-X130A-209、X18K/R-130-X209W、18-X130A-X209W、X18K/R-X130A-X209W、18-130-213、X18K/R-130-213、18-X130A-213、18-130-X213A、X18K/R-X130A-213、X18K/R-130-X213A、18-X130A-X213A、X18K/R-X130A-X213A、18-130-249、X18K/R-130-249、18-X130A-249、18-130-X249N/R、X18K/R-X130A-249、X18K/R-130-X249N/R、18-X130A-X249N/R、X18K/R-X130A-X249N/R、18-206-209、18-206-X209W、18-X206L/Y-209、18K/R-206-209、18-X206L/Y-X209W、X18K/R-X206L/Y-209、X18K/R-206-X209W、X18K/R-X206L/Y-X209W、18-206-213、X18K/R-206-213、18-206L/Y-213、18-206-X213A、X18K/R-X206L/Y-213、X18K/R-206-X213A、18-X206L/Y-X213A、X18K/R-X206L/Y-X213A、18-206-249、X18K/R-206-249、18-206L/Y-249、18-206-X249N/R、X18K/R-X206L/Y-249、X18K/R-206-X249N/R、18-X206L/Y-X249N/R、X18K/R-X206L/Y-X249N/R、18-209-213、18-X209W-213、X18K/R-209-213、18-209-X213A、18-X209W-X213A、X18K/R-X209W-213、X18K/R-209-X213A、X18K/R-X209W-X213A、18-209-249、18-X209W-249、X18K/R-209-249、18-209-X249N/R、18-X209W-X249N/R、18K/R-X209W-249、X18K/R-209-X249N/R、X18K/R-X209W-X249N/R、18-213-X249N/R、X18K/R-X213A-249、X18K/R-213-X249N/R、18-X213A-X249N/R、X18K/R-X213A-X249N/R、24-78-87、24-78-X87D/R、24-X78N-87、X24F/P/R-78-87、24-X78N-X87D/R、X24R/P/F-78-X87D/R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3A、206-209-249、206-X209W-249、206-209-X249N/R、X206L/Y-209-249、X206L/Y-X209W-249、206-X209W-X249N/R、X206L/Y-209-X249N/R、X206L/Y-X209W-X249N/R、206-213-249、206-X213A-249、206-213-X249N/R、X206L/Y-213-249、X206L/Y-X213A-249、X206L/Y-213-X249N/R、206-X213A-X249N/R、X206L/Y-X213A-X249N/R、209-213-249、X209W-213-249、209-X213A-249、209-213-X249N/R、X209W-X213A-249、X209W-213-X249N/R、209-X213A-X249N/R、X209W-X213A-X249N/R、及其组合；其中X是任何氨基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。又另一个实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：78-X206L/Y、X78N-206、X78N-X206L/Y、18-X78N、X18K/R-X78N、18-X87R、X18K/R-X87R、18-X206L/Y、X18K/R-X206L/Y、24-X87R、X24F/P/R-X87R、24-X206L/Y、X24F/P/R-206、X24F/P/R-X206L/Y、24-X209W、X24F/P/R-X209W、X78N-87、X78N-X87D/R、78-X129Q、X78N-X129Q、78-X130A、X78N-130、X78N-209、78-X209W、X78N-X209W、78-X249N/R、X78N-249、X78N-X249N/R、87-X206L/Y、X87D/R-X206L/Y、87-X209W、X87D/R-X209W、87-X213A、X87D/R-213、X87D/R-X213A、X87R-X249N/R、129-X206L/Y、X129Q-206、X129Q-X206L/Y、129-X209W、X129Q-X209W、129-X249N/R、X129Q-249、X129Q-X249N/R、130-X206L/Y、X130A-206、X130A-X206L/Y、130-X209W、X130A-X209W、130-X249N/R、X130A-249、X130A-X249N/R、206-X209W、X206L/Y-209、X206L/Y-X209W、206-X213A、X206L/Y-213、X206L/Y-X213A、X206L/Y-249、X206L/Y-X249N/R、X209W-213、X209W-X213A、X209W-249、X209W-X249N/R、18-24-78、X18K/R-24-78、18-X24F/P/R-78、18-24-X78N、X18K/R-24-X78N、18-X24F/P/R-X78N、X18K/R-X24F/P/R-78、X18K/R-X24F/P/R-X78N、18-24-87、X18K/R-24-87、18-X24F/P/R-87、18-24-X87D/R、X18K/R-24-X87D/R、18-X24F/P/R-X87D/R、X18K/R-X24F/P/R-87、X18K/R-X24F/P/R-X87D/R、18-24-129、X18K/R-24-129、18-X24F/P/R-129、18-24-X129Q、X18K/R-X24F/P/R-129、X18K/R-24-X129Q、18-X24F/P/R-X129Q、X18K/R-X24F/P/R-X129Q、18-24-130、18-X24F/P/R-130、18-24-X130A、X18K/R-24-130、X18K/R-X24F/P/R-130、X18K/R-24-X130A、18-X24F/P/R-X130A、X18K/R-X24F/P/R-X130A、18-24-206、18-24-X206L/Y、18-X24F/P/R-206、X18K/R-24-206、X18K/R-24-X206L/Y、18-X24F/P/R-X206L/Y、X18K/R-X24F/P/R-206、X18K/R-X24F/P/R-X206L/Y、18-24-209、18-24-X209W、18-X24F/P/R-209、X18K/R-24-209、X18K/R-24-X209W、18-X24F/P/R-X209W、X18K/R-X24F/P/R-209、X18K/R-X24F/P/R-X209W、18-78-87、18-X78N-87、18-78-X87D/R、X18K/R-78-87、X18K/R-X78N-87、X18K/R-78-X87D/R、18-X78N-X87D/R、X18K/R-X78N-X87D/R、18-78-129、18-X78N-129、18-78-X129Q、X18K/R-78-129、X18K/R-X78N-129、X18K/R-78-X129Q、18-X78N-X129Q、X18K/R-X78N-X129Q、18-78-130、18-X78N-130、18-78-X130A、X18K/R-78-130、X18K/R-X78N-130、X18K/R-78-X130A、18-X78N-X130A、X18K/R-X78N-X130A、18-78-206、18-78-X206L/Y、18-X78N-206、X18K/R-78-206、18-X78N-X206L/Y、X18K/R-X78N-206、X18K/R-78-X206L/Y、X18K/R-X78N-X206L/Y、18-78-209、18-X78N-209、18-78-X209W、X18K/R-78-209、X18K/R-78-X209W、18-X78N-X209W、X18K/R-X78N-209、X18K/R-X78N-X209W、18-78-213、18-X78N-213、18-78-X213A、X18K/R-78-213、18-X78N-X213A、X18K/R-X78N-213、X18K/R-78-X213A、X18K/R-X78N-X213A、18-78-249、18-78-X249N/R、18-X78N-249、X18K/R-78-249、18-X78N-X249N/R、X18K/R-X78N-249、X18K/R-78-X249N/R、X18K/R-X78N-X249N/R、18-87-129、X18K/R-87-129、18-X87D/R-129、18-87-X129Q、18-X87D/R-X129Q、X18K/R-87-X129Q、X18K/R-X87D/R-129、X18K/R-X87D/R-X129Q、18-87-130、X18K/R-87-130、18-X87D/R-130、18-87-X130A、18-X87D/R-X130A、X18K/R-87-X130A、X18K/R-X87D/R-130、X18K/R-X87D/R-X130A、18-87-206、X18K/R-87-206、18-X87D/R-206、18-87-X206L/Y、18-X87D/R-X206L/Y、X18K/R-87-X206L/Y、X18K/R-X87D/R-206、X18K/R-X87D/R-X206L/Y、18-87-209、X18K/R-87-209、18-X87D/R-209、18-87-X209W、18-X87D/R-X209W、X18K/R-X87D/R-209、X18K/R-87-X209W、X18K/R-X87D/R-X209W、18-X87D/R-213、18-87-X213A、18-X87D/R-X213A、X18K/R-X87D/R-213、X18K/R-87-X213A、X18K/R-X87D/R-X213A、18-87-249、X18K/R-87-249、18-X87D/R-249、18-87-X249N/R、18-X87D/R-249N/R、18K/R-X87D/R-249、18K/R-87-X249N/R、18K/R-X87D/R-X249N/R、18-129-130、X18K/R-129-130、18-X129Q-130、18-129-X130A、X18K/R-X129Q-130、X18K/R-129-X130A、18-X129Q-X130A、X18K/R-X129Q-X130A、18-129-206、X18K/R-129-206、18-X129Q-206、18-129-X206L/Y、X18K/R-X129Q-206、X18K/R-129-X206L/Y、18-X129Q-X206L/Y、X18K/R-X129Q-X206L/Y、18-129-209、X18K/R-129-209、18-X129Q-209、18-129-X209W、X18K/R-X129Q-209、X18K/R-129-X209W、18-X129Q-X209W、X18K/R-X129Q-X209W、18-129-213、X18K/R-129-213、18-X129Q-213、18-129-X213A、X18K/R-X129Q-213、X18K/R-129-X213A、18-X129Q-X213A、X18K/R-X129Q-X213A、18-129-249、X18K/R-129-249、18-X129Q-249、18-129-X249N/R、X18K/R-X129Q-249、X18K/R-129-X249N/R、18-X129Q-X249N/R、X18K/R-X129Q-X249N/R、18-130-206、X18K/R-130-206、18-X130A-206、18-130-X206L/Y、X18K/R-X130A-206、X18K/R-130-X206L/Y、18-X130A-X206L/Y、X18K/R-X130A-X206L/Y、18-130-209、X18K/R-130-209、18-X130A-209、18-130-X209W、X18K/R-X130A-209、X18K/R-130-X209W、18-X130A-X209W、X18K/R-X130A-X209W、18-130-213、X18K/R-130-213、18-X130A-213、18-130-X213A、X18K/R-X130A-213、X18K/R-130-X213A、18-X130A-X213A、X18K/R-X130A-X213A、18-130-249、X18K/R-130-249、18-X130A-249、18-130-X249N/R、X18K/R-X130A-249、X18K/R-130-X249N/R、18-X130A-X249N/R、X18K/R-X130A-X249N/R、18-206-209、18-206-X209W、18-X206L/Y-209、18K/R-206-209、18-X206L/Y-X209W、X18K/R-X206L/Y-209、X18K/R-206-X209W、X18K/R-X206L/Y-X209W、18-206-213、X18K/R-206-213、18-206L/Y-213、18-206-X213A、X18K/R-X206L/Y-213、X18K/R-206-X213A、18-X206L/Y-X213A、X18K/R-X206L/Y-X213A、18-206-249、X18K/R-206-249、18-206L/Y-249、18-206-X249N/R、X18K/R-X206L/Y-249、X18K/R-206-X249N/R、18-X206L/Y-X249N/R、X18K/R-X206L/Y-X249N/R、18-209-213、18-X209W-213、X18K/R-209-213、18-209-X213A、18-X209W-X213A、X18K/R-X209W-213、X18K/R-209-X213A、X18K/R-X209W-X213A、18-209-249、18-X209W-249、X18K/R-209-249、18-209-X249N/R、18-X209W-X249N/R、18K/R-X209W-249、X18K/R-209-X249N/R、X18K/R-X209W-X249N/R、18-213-X249N/R、X18K/R-X213A-249、X18K/R-213-X249N/R、18-X213A-X249N/R、X18K/R-X213A-X249N/R、24-78-87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213、206-X209W-X213A、X206L/Y-X209W-213、X206L/Y-209-X213A、X206L/Y-X209W-X213A、206-209-249、206-X209W-249、206-209-X249N/R、X206L/Y-209-249、X206L/Y-X209W-249、206-X209W-X249N/R、X206L/Y-209-X249N/R、X206L/Y-X209W-X249N/R、206-213-249、206-X213A-249、206-213-X249N/R、X206L/Y-213-249、X206L/Y-X213A-249、X206L/Y-213-X249N/R、206-X213A-X249N/R、X206L/Y-X213A-X249N/R、209-213-249、X209W-213-249、209-X213A-249、209-213-X249N/R、X209W-X213A-249、X209W-213-X249N/R、209-X213A-X249N/R、X209W-X213A-X249N/R、及其组合；其中X是任何氨基酸，所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)1、3、9、16、20、22、28、42、43、44、56、76、77、99、100、101、103、104、108、116、118、120、124、127、128、150、158、159、166、185、188、194、204、212、217、218、222、232、235、243、245、246、251、254、259、268、和270，(ii)X1V、X3T/V、X9G、X16T、X20E/R、X22L、X28T、X42I、X43R/S、X44V、X56P、X76D、X77D、X99N、X100S、X101F/G/H/T/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116L/M、X118R/V、X120R、X124M、X127T、X128L、X150T、X158E/T/V、X159D、X166D/N、X185Y、X188D、X194D、X204D、X212D、X217K、X218S、X222L/Q/S、X232V、X235T、X243S、X245R、X246V、X251R、X254T、X259G、X268A、和X270P/T，或(iii)A1V、S3T/V、S9G、A16T、G20E/R、T22L、V28T、L42I、N43R/S、I44V、S56P、N76D、N77D、S99N、G100S、S101F/G/H/T/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116L/M、G118R/V、H120R、L124M、G127T、S128L、V150T、A158E/T/V、G159D、S166D/N、N185Y、S188D、A194D、N204D、S212D、L217K、N218S、M222L/Q/S、A232V、K235T、N243S、Q245R、I246V、K251R、A254T、S259G、V268A、和A270P/T；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。仍又另一个实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：78-X206L/Y、X78N-206、X78N-X206L/Y、18-X78N、X18K/R-X78N、18-X87R、X18K/R-X87R、18-X206L/Y、X18K/R-X206L/Y、24-X87R、X24F/P/R-X87R、24-X206L/Y、X24F/P/R-206、X24F/P/R-X206L/Y、24-X209W、X24F/P/R-X209W、X78N-87、X78N-X87D/R、78-X129Q、X78N-X129Q、78-X130A、X78N-130、X78N-209、78-X209W、X78N-X209W、78-X249N/R、X78N-249、X78N-X249N/R、87-X206L/Y、X87D/R-X206L/Y、87-X209W、X87D/R-X209W、87-X213A、X87D/R-213、X87D/R-X213A、X87R-X249N/R、129-X206L/Y、X129Q-206、X129Q-X206L/Y、129-X209W、X129Q-X209W、129-X249N/R、X129Q-249、X129Q-X249N/R、130-X206L/Y、X130A-206、X130A-X206L/Y、130-X209W、X130A-X209W、130-X249N/R、X130A-249、X130A-X249N/R、206-X209W、X206L/Y-209、X206L/Y-X209W、206-X213A、X206L/Y-213、X206L/Y-X213A、X206L/Y-249、X206L/Y-X249N/R、X209W-213、X209W-X213A、X209W-249、X209W-X249N/R、18-24-78、X18K/R-24-78、18-X24F/P/R-78、18-24-X78N、X18K/R-24-X78N、18-X24F/P/R-X78N、X18K/R-X24F/P/R-78、X18K/R-X24F/P/R-X78N、18-24-87、X18K/R-24-87、18-X24F/P/R-87、18-24-X87D/R、X18K/R-24-X87D/R、18-X24F/P/R-X87D/R、X18K/R-X24F/P/R-87、X18K/R-X24F/P/R-X87D/R、18-24-129、X18K/R-24-129、18-X24F/P/R-129、18-24-X129Q、X18K/R-X24F/P/R-129、X18K/R-24-X129Q、18-X24F/P/R-X129Q、X18K/R-X24F/P/R-X129Q、18-24-130、18-X24F/P/R-130、18-24-X130A、X18K/R-24-130、X18K/R-X24F/P/R-130、X18K/R-24-X130A、18-X24F/P/R-X130A、X18K/R-X24F/P/R-X130A、18-24-206、18-24-X206L/Y、18-X24F/P/R-206、X18K/R-24-206、X18K/R-24-X206L/Y、18-X24F/P/R-X206L/Y、X18K/R-X24F/P/R-206、X18K/R-X24F/P/R-X206L/Y、18-24-209、18-24-X209W、18-X24F/P/R-209、X18K/R-24-209、X18K/R-24-X209W、18-X24F/P/R-X209W、X18K/R-X24F/P/R-209、X18K/R-X24F/P/R-X209W、18-78-87、18-X78N-87、18-78-X87D/R、X18K/R-78-87、X18K/R-X78N-87、X18K/R-78-X87D/R、18-X78N-X87D/R、X18K/R-X78N-X87D/R、18-78-129、18-X78N-129、18-78-X129Q、X18K/R-78-129、X18K/R-X78N-129、X18K/R-78-X129Q、18-X78N-X129Q、X18K/R-X78N-X129Q、18-78-130、18-X78N-130、18-78-X130A、X18K/R-78-130、X18K/R-X78N-130、X18K/R-78-X130A、18-X78N-X130A、X18K/R-X78N-X130A、18-78-206、18-78-X206L/Y、18-X78N-206、X18K/R-78-206、18-X78N-X206L/Y、X18K/R-X78N-206、X18K/R-78-X206L/Y、X18K/R-X78N-X206L/Y、18-78-209、18-X78N-209、18-78-X209W、X18K/R-78-209、X18K/R-78-X209W、18-X78N-X209W、X18K/R-X78N-209、X18K/R-X78N-X209W、18-78-213、18-X78N-213、18-78-X213A、X18K/R-78-213、18-X78N-X213A、X18K/R-X78N-213、X18K/R-78-X213A、X18K/R-X78N-X213A、18-78-249、18-78-X249N/R、18-X78N-249、X18K/R-78-249、18-X78N-X249N/R、X18K/R-X78N-249、X18K/R-78-X249N/R、X18K/R-X78N-X249N/R、18-87-129、X18K/R-87-129、18-X87D/R-129、18-87-X129Q、18-X87D/R-X129Q、X18K/R-87-X129Q、X18K/R-X87D/R-129、X18K/R-X87D/R-X129Q、18-87-130、X18K/R-87-130、18-X87D/R-130、18-87-X130A、18-X87D/R-X130A、X18K/R-87-X130A、X18K/R-X87D/R-130、X18K/R-X87D/R-X130A、18-87-206、X18K/R-87-206、18-X87D/R-206、18-87-X206L/Y、18-X87D/R-X206L/Y、X18K/R-87-X206L/Y、X18K/R-X87D/R-206、X18K/R-X87D/R-X206L/Y、18-87-209、X18K/R-87-209、18-X87D/R-209、18-87-X209W、18-X87D/R-X209W、X18K/R-X87D/R-209、X18K/R-87-X209W、X18K/R-X87D/R-X209W、18-X87D/R-213、18-87-X213A、18-X87D/R-X213A、X18K/R-X87D/R-213、X18K/R-87-X213A、X18K/R-X87D/R-X213A、18-87-249、X18K/R-87-249、18-X87D/R-249、18-87-X249N/R、18-X87D/R-249N/R、18K/R-X87D/R-249、18K/R-87-X249N/R、18K/R-X87D/R-X249N/R、18-129-130、X18K/R-129-130、18-X129Q-130、18-129-X130A、X18K/R-X129Q-130、X18K/R-129-X130A、18-X129Q-X130A、X18K/R-X129Q-X130A、18-129-206、X18K/R-129-206、18-X129Q-206、18-129-X206L/Y、X18K/R-X129Q-206、X18K/R-129-X206L/Y、18-X129Q-X206L/Y、X18K/R-X129Q-X206L/Y、18-129-209、X18K/R-129-209、18-X129Q-209、18-129-X209W、X18K/R-X129Q-209、X18K/R-129-X209W、18-X129Q-X209W、X18K/R-X129Q-X209W、18-129-213、X18K/R-129-213、18-X129Q-213、18-129-X213A、X18K/R-X129Q-213、X18K/R-129-X213A、18-X129Q-X213A、X18K/R-X129Q-X213A、18-129-249、X18K/R-129-249、18-X129Q-249、18-129-X249N/R、X18K/R-X129Q-249、X18K/R-129-X249N/R、18-X129Q-X249N/R、X18K/R-X129Q-X249N/R、18-130-206、X18K/R-130-206、18-X130A-206、18-130-X206L/Y、X18K/R-X130A-206、X18K/R-130-X206L/Y、18-X130A-X206L/Y、X18K/R-X130A-X206L/Y、18-130-209、X18K/R-130-209、18-X130A-209、18-130-X209W、X18K/R-X130A-209、X18K/R-130-X209W、18-X130A-X209W、X18K/R-X130A-X209W、18-130-213、X18K/R-130-213、18-X130A-213、18-130-X213A、X18K/R-X130A-213、X18K/R-130-X213A、18-X130A-X213A、X18K/R-X130A-X213A、18-130-249、X18K/R-130-249、18-X130A-249、18-130-X249N/R、X18K/R-X130A-249、X18K/R-130-X249N/R、18-X130A-X249N/R、X18K/R-X130A-X249N/R、18-206-209、18-206-X209W、18-X206L/Y-209、18K/R-206-209、18-X206L/Y-X209W、X18K/R-X206L/Y-209、X18K/R-206-X209W、X18K/R-X206L/Y-X209W、18-206-213、X18K/R-206-213、18-206L/Y-213、18-206-X213A、X18K/R-X206L/Y-213、X18K/R-206-X213A、18-X206L/Y-X213A、X18K/R-X206L/Y-X213A、18-206-249、X18K/R-206-249、18-206L/Y-249、18-206-X249N/R、X18K/R-X206L/Y-249、X18K/R-206-X249N/R、18-X206L/Y-X249N/R、X18K/R-X206L/Y-X249N/R、18-209-213、18-X209W-213、X18K/R-209-213、18-209-X213A、18-X209W-X213A、X18K/R-X209W-213、X18K/R-209-X213A、X18K/R-X209W-X213A、18-209-249、18-X209W-249、X18K/R-209-249、18-209-X249N/R、18-X209W-X249N/R、18K/R-X209W-249、X18K/R-209-X249N/R、X18K/R-X209W-X249N/R、18-213-X249N/R、X18K/R-X213A-249、X18K/R-213-X249N/R、18-X213A-X249N/R、X18K/R-X213A-X249N/R、24-78-8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-213、78-130-X213A、X78N-X130A-213、X78N-130-X213A、78-X130A-X213A、X78N-X130A-X213A、78-130-249、X78N-130-249、78-X130A-249、78-130-X249N/R、X78N-X130A-249、X78N-130-X249N/R、78-X130A-X249N/R、X78N-X130A-X249N/R、78-206-209、X78N-206-209、78-X206L/Y-209、78-206-X209W、X78N-X206L/Y-209、X78N-206-X209W、78-X206L/Y-X209W、X78N-X206L/Y-X209W、78-206-213、X78N-206-213、78-X206L/Y-213、78-206-X213A、X78N-X206L/Y-213、X78N-206-X213A、78-X206L/Y-X213A、X78N-X206L/Y-X213A、78-206-249、78-206-X249R/N、78-X206L/Y-249、X78N-206-249、X78N-206-X249N/R、78-X206L/Y-X249N/R、X78N-X206L/Y-249、X78N-X206L/Y-X249N/R、78-209-213、78-X209W-213、78-209-X213A、X78N-209-213、X78N-X209W-213、X78N-209-X213A、78-X209W-X213A、X78N-X209W-X213A、78-209-249、78-X209W-249、78-209-X249N/R、X78N-209-249、78-X209W-X249N/R、X78N-X209W-249、X78N-209-X249N/R、X78N-X209W-X249N/R、78-213-249、78-X213A-249、X78N-213-249、78-213-X249N/R、X78N-X213A-249、X78N-213-X249N/R、78-X213A-X249N/R、X78N-X213A-X249N/R、87-129-130、X87D/R-129-130、87-X129Q-130、87-129-X130A、X87D/R-X129Q-130、X87D/R-129-X130A、87-X129Q-X130A、X87D/R-X129Q-X130A、87-129-206、X87D/R-129-206、87-X129Q-206、87-129-X206L/Y、X87D/R-X129Q-206、X87D/R-129-X206L/Y、87-X129Q-X206L/Y、X87D/R-X129Q-X206L/Y、87-129-209、X87D/R-129-209、87-X129Q-209、87-129-X209W、X87D/R-X129Q-209、X87D/R-129-X209W、87-X129Q-X209W、X87D/R-X129Q-X209W、87-129-213、X87D/R-129-213、87-X129Q-213、87-129-X213A、X87D/R-X129Q-213、X87D/R-129-X213A、87-X129Q-X213A、X87D/R-X129Q-X213A、87-129-249、X87D/R-129-249、87-X129Q-249、87-129-X249N/R、X87D/R-X129Q-249、X87D/R-129-X249N/R、87-X129Q-X249N/R、X87D/R-X129Q-X249N/R、87-130-206、X87D/R-130-206、87-X130A-206、87-130-X206L/Y、X87D/R-X130A-206、X87D/R-130-X206L/Y、87-X130A-X206L/Y、X87D/R-X130A-X206L/Y、87-130-209、X87D/R-130-209、87-X130A-209、87-130-X209W、X87D/R-X130A-209、X87D/R-130-X209W、87-X130A-X209W、X87D/R-X130A-X209W、87-130-213、X87D/R-130-213、87-X130A-213、87-130-X213A、X87D/R-X130A-213、X87D/R-130-X213A、87-X130A-X213A、X87D/R-X130A-X213A、87-130-249、X87D/R-130-249、87-X130A-249、87-130-X249N/R、X87D/R-X130A-249、X87D/R-130-X249N/R、87-X130A-X249N/R、X87D/R-X130A-X249N/R、87-206-209、X87D/R-206-209、87-X206L/Y-209、87-206-X209W、X87D/R-X206L/Y-209、X87D/R-206-X209W、87-X206L/Y-X209W、X87D/R-X206L/Y-X209W、87-206-213、87-X206L/Y-213、87-206-X213A、X87D/R-206-213、X87D/R-X206L/Y-213、X87D/R-206-X213A、87-X206L/Y-X213A、X87D/R-X206L/Y-X213A、87-206-249、87-X206L/Y-249、87D/R-206-249、87-209-X249N/R、X87R-206-X249N/R、X87D/R-X206L/Y-249、87-X206L/Y-X249N/R、X87R-X206L/Y-X249N/R、87-209-213、X87D/R-209-213、87-X209W-213、87-209-X213A、X87D/R-X209W-213、X87D/R-209-X213A、87-X209W-X213A、X87D/R-X209W-X213A、87-209-249、87-X209W-249、87-209-X249N/R、X87D/R-209-249、X87D/R-X209W-249、87-X209W-X249N/R、X87R-209-X249N/R、X87D/R-X209W-X249N/R、87-213-249、87-X213A-249、X87D/R-213-249、87-213-X249N/R、X87D/R-X213A-249、X87D/R-213-X249N/R、87-X213A-X249N/R、X87D/R-X213A-X249N/R、129-130-206、X129Q-130-206、129-X130A-206、129-130-X206L/Y、X129Q-X130A-206、X129Q-130-X206L/Y、129-X130A-X206L/Y、X129Q-X130A-X206L/Y、129-130-209、X129Q-130-209、129-X130A-209、129-130-X209W、X129Q-X130A-209、X129Q-130-X209W、129-X130A-X209W、X129Q-X130A-X209W、129-130-213、X129Q-130-213、129-X130A-213、129-130-X213A、X129Q-X130A-213、X129Q-130-X213A、129-X130A-X213A、X129Q-X130A-X213A、129-130-249、X129Q-130-249、129-X130A-249、129-130-X249N/R、X129Q-X130A-249、X129Q-130-X249N/R、129-X130A-X249N/R、X129Q-X130A-X249N/R、129-206-209、X129Q-206-209、129-X206L/Y-209、129-206-X209W、X129Q-X206L/Y-209、X129Q-206-X209W、129-X206L/Y-X209W、X129Q-X206L/Y-X209W、129-206-213、129-X206L/Y-213、129-206-X213A、X129Q-206-213、X129Q-X206L/Y-213、X129Q-206-X213A、129-X206L/Y-X213A、X129Q-X206L/Y-X213A、129-206-249、129-X206L/Y-249、129-206-X249N/R、X129Q-206-249、X129A-X206L/Y-249、X129Q-206-X249N/R、129-X206L/Y-X249N/R、X129Q-X206L/Y-X249N/R、129-209-213、129-X209W-213、129-209-X213A、X129Q-209-213、X129Q-X209W-213、X129Q-209-X213A、129-X209W-X213A、X129Q-X209W-X213A、129-209-249、129-X209W-249、129-209-X249N/R、X129Q-209-249、X129Q-X209W-249、X129Q-209-X249N/R、129-X209W-X249N/R、X129Q-X209W-X249N/R、129-213-249、129-X213A-249、129-213-X249N/R、X129Q-213-249、X129Q-X213A-249、129-X213A-X249R、X129Q-213-X249N/R、X129Q-X213A-X249N/R、130-206-209、X130A-206-209、130-X206L/Y-209、130-209-X209W、X130A-X206L/Y-209、X130A-206-X209W、130-X206L/Y-X209W、X130A-X206L/Y-X209W、130-206-213、130-X206L/Y-213、130-206-X213A、X130A-206-213、X130A-X206L/Y-213、X130A-206-X213A、130-X206L/Y-X213A、X130A-X206L/Y-X213A、130-206-249、130-X206L/Y-249、130-206-X249N/R、X130A-206-249、X130A-X206L/Y-249、X130A-206-X249N/R、130-X206L/Y-X249N/R、X130A-X206L/Y-X249N/R、130-209-213、130-X209W-213、130-209-X213A、X130A-209-213、X130A-X209W-213、X130A-209-X213A、130-X209W-X213A、X130A-X209W-X213A、130-209-249、130-X209W-249、130-209-X249N/R、X130A-209-249、X130A-X209W-249、X130A-209-X249N/R、130-X209W-X249N/R、X130A-X209W-X249N/R、130-213-249、130-X213A-249、130-213-X249N/R、X130A-213-249、X130A-X213A-249、130-X213A-X249R、X130A-213-X249N/R、X130A-X213A-X249N/R、130-209-249、130-X209W-249、130-209-X249N/R、X130A-209-249、X130A-X209W-249、X130A-209-X249N/R、130-X209W-X249N/R、X130A-X209W-X249N/R、206-209-213、206-X209W-213、206-209-X213A、X206L/Y-209-213、206-X209W-X213A、X206L/Y-X209W-213、X206L/Y-209-X213A、X206L/Y-X209W-X213A、206-209-249、206-X209W-249、206-209-X249N/R、X206L/Y-209-249、X206L/Y-X209W-249、206-X209W-X249N/R、X206L/Y-209-X249N/R、X206L/Y-X209W-X249N/R、206-213-249、206-X213A-249、206-213-X249N/R、X206L/Y-213-249、X206L/Y-X213A-249、X206L/Y-213-X249N/R、206-X213A-X249N/R、X206L/Y-X213A-X249N/R、209-213-249、X209W-213-249、209-X213A-249、209-213-X249N/R、X209W-X213A-249、X209W-213-X249N/R、209-X213A-X249N/R、X209W-X213A-X249N/R、及其组合；其中X是任何氨基酸，所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)3、28、43、76、99、100、101、103、104、108、116、118、124、127、128、150、158、159、166、188、194、212、217、222、232、235、243、245、246、和270；(ii)X3T/V、X28T、X43S、X76D、X99N、X100S、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116M、X118R、X124M、X127T、X128L、X150T、X158E/T、X159D、X166D、X188D、X194D、X212D、X217K、X222Q/S、X232V、X235T、X243S、X245R、X246V、和X270T，或(iii)S3V/T、V28T、N43S、N76D、S99N、G100S、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116M、G118R、L124M、G127T、S128L、V150T、A158E/T、G159D、S166D、S188D、A194D、S212D、L217K、M222Q/S、A232V、K235T、N243S、Q245R、I246V、和A270T；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ IDNO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。甚至仍又另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：78-X206L/Y、X78N-206、X78N-X206L/Y、18-X78N、X18K/R-X78N、18-X87R、X18K/R-X87R、18-X206L/Y、X18K/R-X206L/Y、24-X87R、X24F/P/R-X87R、24-X206L/Y、X24F/P/R-206、X24F/P/R-X206L/Y、24-X209W、X24F/P/R-X209W、X78N-87、X78N-X87D/R、78-X129Q、X78N-X129Q、78-X130A、X78N-130、X78N-209、78-X209W、X78N-X209W、78-X249N/R、X78N-249、X78N-X249N/R、87-X206L/Y、X87D/R-X206L/Y、87-X209W、X87D/R-X209W、87-X213A、X87D/R-213、X87D/R-X213A、X87R-X249N/R、129-X206L/Y、X129Q-206、X129Q-X206L/Y、129-X209W、X129Q-X209W、129-X249N/R、X129Q-249、X129Q-X249N/R、130-X206L/Y、X130A-206、X130A-X206L/Y、130-X209W、X130A-X209W、130-X249N/R、X130A-249、X130A-X249N/R、206-X209W、X206L/Y-209、X206L/Y-X209W、206-X213A、X206L/Y-213、X206L/Y-X213A、X206L/Y-249、X206L/Y-X249N/R、X209W-213、X209W-X213A、X209W-249、X209W-X249N/R、18-24-78、X18K/R-24-78、18-X24F/P/R-78、18-24-X78N、X18K/R-24-X78N、18-X24F/P/R-X78N、X18K/R-X24F/P/R-78、X18K/R-X24F/P/R-X78N、18-24-87、X18K/R-24-87、18-X24F/P/R-87、18-24-X87D/R、X18K/R-24-X87D/R、18-X24F/P/R-X87D/R、X18K/R-X24F/P/R-87、X18K/R-X24F/P/R-X87D/R、18-24-129、X18K/R-24-129、18-X24F/P/R-129、18-24-X129Q、X18K/R-X24F/P/R-129、X18K/R-24-X129Q、18-X24F/P/R-X129Q、X18K/R-X24F/P/R-X129Q、18-24-130、18-X24F/P/R-130、18-24-X130A、X18K/R-24-130、X18K/R-X24F/P/R-130、X18K/R-24-X130A、18-X24F/P/R-X130A、X18K/R-X24F/P/R-X130A、18-24-206、18-24-X206L/Y、18-X24F/P/R-206、X18K/R-24-206、X18K/R-24-X206L/Y、18-X24F/P/R-X206L/Y、X18K/R-X24F/P/R-206、X18K/R-X24F/P/R-X206L/Y、18-24-209、18-24-X209W、18-X24F/P/R-209、X18K/R-24-209、X18K/R-24-X209W、18-X24F/P/R-X209W、X18K/R-X24F/P/R-209、X18K/R-X24F/P/R-X209W、18-78-87、18-X78N-87、18-78-X87D/R、X18K/R-78-87、X18K/R-X78N-87、X18K/R-78-X87D/R、18-X78N-X87D/R、X18K/R-X78N-X87D/R、18-78-129、18-X78N-129、18-78-X129Q、X18K/R-78-129、X18K/R-X78N-129、X18K/R-78-X129Q、18-X78N-X129Q、X18K/R-X78N-X129Q、18-78-130、18-X78N-130、18-78-X130A、X18K/R-78-130、X18K/R-X78N-130、X18K/R-78-X130A、18-X78N-X130A、X18K/R-X78N-X130A、18-78-206、18-78-X206L/Y、18-X78N-206、X18K/R-78-206、18-X78N-X206L/Y、X18K/R-X78N-206、X18K/R-78-X206L/Y、X18K/R-X78N-X206L/Y、18-78-209、18-X78N-209、18-78-X209W、X18K/R-78-209、X18K/R-78-X209W、18-X78N-X209W、X18K/R-X78N-209、X18K/R-X78N-X209W、18-78-213、18-X78N-213、18-78-X213A、X18K/R-78-213、18-X78N-X213A、X18K/R-X78N-213、X18K/R-78-X213A、X18K/R-X78N-X213A、18-78-249、18-78-X249N/R、18-X78N-249、X18K/R-78-249、18-X78N-X249N/R、X18K/R-X78N-249、X18K/R-78-X249N/R、X18K/R-X78N-X249N/R、18-87-129、X18K/R-87-129、18-X87D/R-129、18-87-X129Q、18-X87D/R-X129Q、X18K/R-87-X129Q、X18K/R-X87D/R-129、X18K/R-X87D/R-X129Q、18-87-130、X18K/R-87-130、18-X87D/R-130、18-87-X130A、18-X87D/R-X130A、X18K/R-87-X130A、X18K/R-X87D/R-130、X18K/R-X87D/R-X130A、18-87-206、X18K/R-87-206、18-X87D/R-206、18-87-X206L/Y、18-X87D/R-X206L/Y、X18K/R-87-X206L/Y、X18K/R-X87D/R-206、X18K/R-X87D/R-X206L/Y、18-87-209、X18K/R-87-209、18-X87D/R-209、18-87-X209W、18-X87D/R-X209W、X18K/R-X87D/R-209、X18K/R-87-X209W、X18K/R-X87D/R-X209W、18-X87D/R-213、18-87-X213A、18-X87D/R-X213A、X18K/R-X87D/R-213、X18K/R-87-X213A、X18K/R-X87D/R-X213A、18-87-249、X18K/R-87-249、18-X87D/R-249、18-87-X249N/R、18-X87D/R-249N/R、18K/R-X87D/R-249、18K/R-87-X249N/R、18K/R-X87D/R-X249N/R、18-129-130、X18K/R-129-130、18-X129Q-130、18-129-X130A、X18K/R-X129Q-130、X18K/R-129-X130A、18-X129Q-X130A、X18K/R-X129Q-X130A、18-129-206、X18K/R-129-206、18-X129Q-206、18-129-X206L/Y、X18K/R-X129Q-206、X18K/R-129-X206L/Y、18-X129Q-X206L/Y、X18K/R-X129Q-X206L/Y、18-129-209、X18K/R-129-209、18-X129Q-209、18-129-X209W、X18K/R-X129Q-209、X18K/R-129-X209W、18-X129Q-X209W、X18K/R-X129Q-X209W、18-129-213、X18K/R-129-213、18-X129Q-213、18-129-X213A、X18K/R-X129Q-213、X18K/R-129-X213A、18-X129Q-X213A、X18K/R-X129Q-X213A、18-129-249、X18K/R-129-249、18-X129Q-249、18-129-X249N/R、X18K/R-X129Q-249、X18K/R-129-X249N/R、18-X129Q-X249N/R、X18K/R-X129Q-X249N/R、18-130-206、X18K/R-130-206、18-X130A-206、18-130-X206L/Y、X18K/R-X130A-206、X18K/R-130-X206L/Y、18-X130A-X206L/Y、X18K/R-X130A-X206L/Y、18-130-209、X18K/R-130-209、18-X130A-209、18-130-X209W、X18K/R-X130A-209、X18K/R-130-X209W、18-X130A-X209W、X18K/R-X130A-X209W、18-130-213、X18K/R-130-213、18-X130A-213、18-130-X213A、X18K/R-X130A-213、X18K/R-130-X213A、18-X130A-X213A、X18K/R-X130A-X213A、18-130-249、X18K/R-130-249、18-X130A-249、18-130-X249N/R、X18K/R-X130A-249、X18K/R-130-X249N/R、18-X130A-X249N/R、X18K/R-X130A-X249N/R、18-206-209、18-206-X209W、18-X206L/Y-209、18K/R-206-209、18-X206L/Y-X209W、X18K/R-X206L/Y-209、X18K/R-206-X209W、X18K/R-X206L/Y-X209W、18-206-213、X18K/R-206-213、18-206L/Y-213、18-206-X213A、X18K/R-X206L/Y-213、X18K/R-206-X213A、18-X206L/Y-X213A、X18K/R-X206L/Y-X213A、18-206-249、X18K/R-206-249、18-206L/Y-249、18-206-X249N/R、X18K/R-X206L/Y-249、X18K/R-206-X249N/R、18-X206L/Y-X249N/R、X18K/R-X206L/Y-X249N/R、18-209-213、18-X209W-213、X18K/R-209-213、18-209-X213A、18-X209W-X213A、X18K/R-X209W-213、X18K/R-209-X213A、X18K/R-X209W-X213A、18-209-249、18-X209W-249、X18K/R-209-249、18-209-X249N/R、18-X209W-X249N/R、18K/R-X209W-249、X18K/R-209-X249N/R、X18K/R-X209W-X249N/R、18-213-X249N/R、X18K/R-X213A-249、X18K/R-213-X249N/R、18-X213A-X249N/R、X18K/R-X213A-X249N/R、24-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-209-213、206-X209W-X213A、X206L/Y-X209W-213、X206L/Y-209-X213A、X206L/Y-X209W-X213A、206-209-249、206-X209W-249、206-209-X249N/R、X206L/Y-209-249、X206L/Y-X209W-249、206-X209W-X249N/R、X206L/Y-209-X249N/R、X206L/Y-X209W-X249N/R、206-213-249、206-X213A-249、206-213-X249N/R、X206L/Y-213-249、X206L/Y-X213A-249、X206L/Y-213-X249N/R、206-X213A-X249N/R、X206L/Y-X213A-X249N/R、209-213-249、X209W-213-249、209-X213A-249、209-213-X249N/R、X209W-X213A-249、X209W-213-X249N/R、209-X213A-X249N/R、X209W-X213A-X249N/R、及其组合；其中X是任何氨基酸，所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)76、101、103、104、118、127、128、166、和222，(ii)X76D、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X118R、X127T、X128L、X166D/N和X222Q/S，或(iii)N76D、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、G118R、G127T、S128L、S166D/N、和M222Q/S；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
另一个实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：S78N-Q206F/M/Y、S78G-Q206D/F/H/M/N/P/R/Y、N18K/R-S78N、N18K/R-S87R、N18K/R-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S87R、S24F/L/P-Q206L/Y、S24F/L/P/R-Q206Y、S24F/L/P-Y209W、P40E-S78G、P40E-S87R、P40E-P129Q、P40E-S130A、S78N-S87D/R、S78G-S87D/R/T、S78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-S87R、S78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-P129Q、S78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-S130A、S78G-S130A/Q、S78N-H249N/R、S87D/R-Q206L/R/Y、S87D/R-Y209W、S87D/R-T213A、S87R-H249N/R、P129Q-Q206RY、P129Q-H249N/R、S130A-Q206R/Y、S130A-H249N/R、Q206Y-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-H249N/R、Y209W-T213A、Y209W-H249N/R、N18K/R-S24F/L/P/R-S78N、N18K/R-S24F/L/P/R-S87D/R、N18K/R-S24F/L/P/R-P129Q、N18K/R-S24F/L/P/R-S130A、N18K/R-S24F/L/P/R-Q206L/Y、N18K/R-S24F/L/P/R-Y209W、N18K/R-S78N-S87D/R、N18K/R-S78N-P129Q、N18K/R-S78N-S130A、N18K/R-S78N-Q206L/Y、N18K/R-S78N-Y209W、N18K/R-S78N-T213A、N18K/R-S78N-H249N/R、N18K/R-S87D/R-P129Q、N18K/R-S87D/R-S130A、N18K/R-S87D/R-Q206L/Y、N18K/R-S87D/R-Y209W、N18K/R-S87D/R-T213A、N18K/R-S87D/R-H249、N18K/R-P129Q-S130A、N18K/R-P129Q-Q206L/Y、N18K/R-P129Q-209、N18K/R-P129Q-T213A、N18K/R-P129Q-H249N/R、N18K/R-S130A-Q206L/Y、N18K/R-S130A-Y209W、N18K/R-S130A-T213A、N18K/R-S130A-H249N/R、N18K/R-Q206L/Y-Y209W、N18K/R-Q206L/Y-T213A、N18K/R-Q206L/Y-H249N/R、N18K/R-Y209W-T213A、N18K/R-Y209W-H249N/R、N18K/R-T213A-H249N/R、S24F/L/P/R-S78N-S87D/R、S24F/L/P-S78N-P129Q、S24F/L/P-S78N-S130A、S24F/L/P-S78N-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S78N-Q206Y、S24F/L/P-S78N-Y209W、S24F/L/P/R-S78N-T213A、S24F/L/P/R-S78N-H249N/R、S24F/L/P/R-S87D/R-P129Q、S24F/L/P/R-S87D/R-S130A、S24F/L/P/R-S87D/R-Q206L/Y、S24F/L/P/R-87D/R-Y209W、S24F/L/P/R-S87D/R-T213A、S24F/L/P/R-S87D/R-H249、S24F/L/P-P129Q-S130A、S24F/L/P-P129Q-Q206L/Y、S24F/L/P/R-P129Q-Q206Y、S24F/L/P-P129Q-Y209W、S24F/L/P/R-P129Q-T213A、S24F/L/P/R-P129Q-H249N/R、S24F/L/P-S130A-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S130A-Q206Y、S24F/L/P-S130A-Y209W、S24F/L/P/R-S130A-T213A、S24F/L/P/R-S130A-H249N/R、S24F/L/P-Q206L/Y-Y209W、S24F/L/P/R-Q206Y-Y209W、S24F/L/P/R-Q206L/Y-T213A、S24F/L/P/R-Q206L/Y-H249N/R、S24F/L/P/R-Y209W-T213A、S24F/L/P/R-Y209W-H249N/R、S78N-S87D/R-P129Q、S78N-S87D/R-S130A、S78N-S87D/R-Q206L/Y、S78N-S87D/R-Y209W、S78N-S87D/R-T213A、S78N-S87D/R-H249N/R、S78N-P129Q-Q206Y、S78N-P129Q-T213A、S78N-P129Q-H249N/R、S78N-S130A-Q206Y、S78N-S130A-T213A、S78N-S130A-H249N/R、S78N-Q206L/Y-T213A、S78N-Q206L/Y-H249N/R、S78N-Y209W-T213A、S78N-Y209W-H249N/R、S78N-T213A-H249N/R、S87D/R-P129Q-S130A、S87D/R-P129Q-Q206L/R/Y、S87D/R-P129Q-Y209W、S87D/R-P129Q-T213A、S87D/R-P129Q-H249N/R、S87D/R-S130A-Q206L/R/Y、S87D/R-S130A-Y209W、S87D/R-S130A-T213A、S87D/R-S130A-H249N/R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Q206L/Y-T213A、87D/R-Q206L/Y-H249N/R、S87D/R-Y209W-T213A、S87D/R-Y209W-H249N/R、S87D/R-T213A-H249N/R、P129Q-S130A-Q206R/Y、P129Q-S130A-T213A、P129Q-S130A-H249N/R、P129Q-Q206Y-Y209W、P129Q-Q206L/Y-T213A、P129Q-Q206L/Y-H249N/R、P129Q-Y209W-T213A、P129Q-Y209W-H249N/R、P129Q-T213A-H249N/R、S130A-Q206Y-Y209W、S130A-Q206L/Y-T213A、S130A-Q206L/Y-H249N/R、S130A-Y209W-T213A、S130A-Y209W-H249N/R、S130A-T213A-H249N/R、S130A-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-Y209W-T213A、Q206L/Y-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-T213A-H249N/R、Y209W-T213A-H249N/R、及其组合；并且其中所述变体具有蛋白水解活性并且所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。仍然另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：S78N-Q206F/M/Y、S78G-Q206D/F/H/M/N/P/R/Y、N18K/R-S78N、N18K/R-S87R、N18K/R-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S87R、S24F/L/P-Q206L/Y、S24F/L/P/R-Q206Y、S24F/L/P-Y209W、P40E-S78G、P40E-S87R、P40E-P129Q、P40E-S130A、S78N-S87D/R、S78G-S87D/R/T、S78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-S87R、S78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-P129Q、S78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-S130A、S78G-S130A/Q、S78N-H249N/R、S87D/R-Q206L/R/Y、S87D/R-Y209W、S87D/R-T213A、S87R-H249N/R、P129Q-Q206RY、P129Q-H249N/R、S130A-Q206R/Y、S130A-H249N/R、Q206Y-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-H249N/R、Y209W-T213A、Y209W-H249N/R、N18K/R-S24F/L/P/R-S78N、N18K/R-S24F/L/P/R-S87D/R、N18K/R-S24F/L/P/R-P129Q、N18K/R-S24F/L/P/R-S130A、N18K/R-S24F/L/P/R-Q206L/Y、N18K/R-S24F/L/P/R-Y209W、N18K/R-S78N-S87D/R、N18K/R-S78N-P129Q、N18K/R-S78N-S130A、N18K/R-S78N-Q206L/Y、N18K/R-S78N-Y209W、N18K/R-S78N-T213A、N18K/R-S78N-H249N/R、N18K/R-S87D/R-P129Q、N18K/R-S87D/R-S130A、N18K/R-S87D/R-Q206L/Y、N18K/R-S87D/R-Y209W、N18K/R-S87D/R-T213A、N18K/R-S87D/R-H249、N18K/R-P129Q-S130A、N18K/R-P129Q-Q206L/Y、N18K/R-P129Q-209、N18K/R-P129Q-T213A、N18K/R-P129Q-H249N/R、N18K/R-S130A-Q206L/Y、N18K/R-S130A-Y209W、N18K/R-S130A-T213A、N18K/R-S130A-H249N/R、N18K/R-Q206L/Y-Y209W、N18K/R-Q206L/Y-T213A、N18K/R-Q206L/Y-H249N/R、N18K/R-Y209W-T213A、N18K/R-Y209W-H249N/R、N18K/R-T213A-H249N/R、S24F/L/P/R-S78N-S87D/R、S24F/L/P-S78N-P129Q、S24F/L/P-S78N-S130A、S24F/L/P-S78N-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S78N-Q206Y、S24F/L/P-S78N-Y209W、S24F/L/P/R-S78N-T213A、S24F/L/P/R-S78N-H249N/R、S24F/L/P/R-S87D/R-P129Q、S24F/L/P/R-S87D/R-S130A、S24F/L/P/R-S87D/R-Q206L/Y、S24F/L/P/R-87D/R-Y209W、S24F/L/P/R-S87D/R-T213A、S24F/L/P/R-S87D/R-H249、S24F/L/P-P129Q-S130A、S24F/L/P-P129Q-Q206L/Y、S24F/L/P/R-P129Q-Q206Y、S24F/L/P-P129Q-Y209W、S24F/L/P/R-P129Q-T213A、S24F/L/P/R-P129Q-H249N/R、S24F/L/P-S130A-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S130A-Q206Y、S24F/L/P-S130A-Y209W、S24F/L/P/R-S130A-T213A、S24F/L/P/R-S130A-H249N/R、S24F/L/P-Q206L/Y-Y209W、S24F/L/P/R-Q206Y-Y209W、S24F/L/P/R-Q206L/Y-T213A、S24F/L/P/R-Q206L/Y-H249N/R、S24F/L/P/R-Y209W-T213A、S24F/L/P/R-Y209W-H249N/R、S78N-S87D/R-P129Q、S78N-S87D/R-S130A、S78N-S87D/R-Q206L/Y、S78N-S87D/R-Y209W、S78N-S87D/R-T213A、S78N-S87D/R-H249N/R、S78N-P129Q-Q206Y、S78N-P129Q-T213A、S78N-P129Q-H249N/R、S78N-S130A-Q206Y、S78N-S130A-T213A、S78N-S130A-H249N/R、S78N-Q206L/Y-T213A、S78N-Q206L/Y-H249N/R、S78N-Y209W-T213A、S78N-Y209W-H249N/R、S78N-T213A-H249N/R、S87D/R-P129Q-S130A、S87D/R-P129Q-Q206L/R/Y、S87D/R-P129Q-Y209W、S87D/R-P129Q-T213A、S87D/R-P129Q-H249N/R、S87D/R-S130A-Q206L/R/Y、S87D/R-S130A-Y209W、S87D/R-S130A-T213A、S87D/R-S130A-H249N/R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Q206L/Y-T213A、87D/R-Q206L/Y-H249N/R、S87D/R-Y209W-T213A、S87D/R-Y209W-H249N/R、S87D/R-T213A-H249N/R、P129Q-S130A-Q206R/Y、P129Q-S130A-T213A、P129Q-S130A-H249N/R、P129Q-Q206Y-Y209W、P129Q-Q206L/Y-T213A、P129Q-Q206L/Y-H249N/R、P129Q-Y209W-T213A、P129Q-Y209W-H249N/R、P129Q-T213A-H249N/R、S130A-Q206Y-Y209W、S130A-Q206L/Y-T213A、S130A-Q206L/Y-H249N/R、S130A-Y209W-T213A、S130A-Y209W-H249N/R、S130A-T213A-H249N/R、S130A-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-Y209W-T213A、Q206L/Y-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-T213A-H249N/R、Y209W-T213A-H249N/R、及其组合；其中所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)1、3、8、9、16、20、22、28、42、43、44、56、76、77、82、88、89、99、100、101、103、104、108、116、118、120、124、127、128、147、150、158、159、160、166、185、188、194、204、210、211、212、215、216、217、218、222、232、235、241、243、245、246、248、251、252、254、256、259、261、262、268、270、和271；(ii)X1V、X3I/T/V、X8V、X9G、X16T、X20E/R、X22L/W、X28T、X42I、X43R/S/Y、X44V、X56P、X76D、X77D、X82D、X88S、X89H、X99N、X100S、X101F/G/H/Q/T/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116L/M、X118A/R/V、X120R、X124M、X127S/T、X128K/L/R、X147I、X150T、X158E/T/V、X159D、X160Q、X166D/N、X185Y、X188D、X194D/P、X204D、X210I/L、X211P、X212D、X215K/V、X216Y、X217K、X218S、X222L/Q/S、X232V、X235T、X241K、X243S、X245R、X246V、X248D、X251R、X252I、X254T、X256P、X259G、X261I/N、X262Q、X268A、X270P/T、和X271D；或(iii)A1V、S3I/T/V、I8V、S9G、A16T、G20E/R、T22L/W、V28T、L42I、N43R/S/Y、I44V、S56P、N76D、N77D、L82D、A88S、E89H、S99N、G100S、S101F/G/H/Q/T/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116L/M、G118A/R/V、H120R、L124M、G127S/T、S128K/LR、V147I、V150T、A158E/T/V、G159D、S160Q、S166D/N、N185Y、S188D、A194D/P、N204D、P210I/L、G211P、S212D、A215K/V、S216Y、L217K、N218S、M222L/Q/S、A232V、K235T、W241K、N243S、Q245R、I246V、N248D、K251R、N252I、A254T、S256P、S259G、N261I/N、L262Q、V268A、A270P/T、和E271D；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。甚至仍然另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：S78N-Q206F/M/Y、S78G-Q206D/F/H/M/N/P/R/Y、N18K/R-S78N、N18K/R-S87R、N18K/R-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S87R、S24F/L/P-Q206L/Y、S24F/L/P/R-Q206Y、S24F/L/P-Y209W、P40E-S78G、P40E-S87R、P40E-P129Q、P40E-S130A、S78N-S87D/R、S78G-S87D/R/T、S78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-S87R、S78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-P129Q、S78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-S130A、S78G-S130A/Q、S78N-H249N/R、S87D/R-Q206L/R/Y、S87D/R-Y209W、S87D/R-T213A、S87R-H249N/R、P129Q-Q206RY、P129Q-H249N/R、S130A-Q206R/Y、S130A-H249N/R、Q206Y-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-H249N/R、Y209W-T213A、Y209W-H249N/R、N18K/R-S24F/L/P/R-S78N、N18K/R-S24F/L/P/R-S87D/R、N18K/R-S24F/L/P/R-P129Q、N18K/R-S24F/L/P/R-S130A、N18K/R-S24F/L/P/R-Q206L/Y、N18K/R-S24F/L/P/R-Y209W、N18K/R-S78N-S87D/R、N18K/R-S78N-P129Q、N18K/R-S78N-S130A、N18K/R-S78N-Q206L/Y、N18K/R-S78N-Y209W、N18K/R-S78N-T213A、N18K/R-S78N-H249N/R、N18K/R-S87D/R-P129Q、N18K/R-S87D/R-S130A、N18K/R-S87D/R-Q206L/Y、N18K/R-S87D/R-Y209W、N18K/R-S87D/R-T213A、N18K/R-S87D/R-H249、N18K/R-P129Q-S130A、N18K/R-P129Q-Q206L/Y、N18K/R-P129Q-209、N18K/R-P129Q-T213A、N18K/R-P129Q-H249N/R、N18K/R-S130A-Q206L/Y、N18K/R-S130A-Y209W、N18K/R-S130A-T213A、N18K/R-S130A-H249N/R、N18K/R-Q206L/Y-Y209W、N18K/R-Q206L/Y-T213A、N18K/R-Q206L/Y-H249N/R、N18K/R-Y209W-T213A、N18K/R-Y209W-H249N/R、N18K/R-T213A-H249N/R、S24F/L/P/R-S78N-S87D/R、S24F/L/P-S78N-P129Q、S24F/L/P-S78N-S130A、S24F/L/P-S78N-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S78N-Q206Y、S24F/L/P-S78N-Y209W、S24F/L/P/R-S78N-T213A、S24F/L/P/R-S78N-H249N/R、S24F/L/P/R-S87D/R-P129Q、S24F/L/P/R-S87D/R-S130A、S24F/L/P/R-S87D/R-Q206L/Y、S24F/L/P/R-87D/R-Y209W、S24F/L/P/R-S87D/R-T213A、S24F/L/P/R-S87D/R-H249、S24F/L/P-P129Q-S130A、S24F/L/P-P129Q-Q206L/Y、S24F/L/P/R-P129Q-Q206Y、S24F/L/P-P129Q-Y209W、S24F/L/P/R-P129Q-T213A、S24F/L/P/R-P129Q-H249N/R、S24F/L/P-S130A-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S130A-Q206Y、S24F/L/P-S130A-Y209W、S24F/L/P/R-S130A-T213A、S24F/L/P/R-S130A-H249N/R、S24F/L/P-Q206L/Y-Y209W、S24F/L/P/R-Q206Y-Y209W、S24F/L/P/R-Q206L/Y-T213A、S24F/L/P/R-Q206L/Y-H249N/R、S24F/L/P/R-Y209W-T213A、S24F/L/P/R-Y209W-H249N/R、S78N-S87D/R-P129Q、S78N-S87D/R-S130A、S78N-S87D/R-Q206L/Y、S78N-S87D/R-Y209W、S78N-S87D/R-T213A、S78N-S87D/R-H249N/R、S78N-P129Q-Q206Y、S78N-P129Q-T213A、S78N-P129Q-H249N/R、S78N-S130A-Q206Y、S78N-S130A-T213A、S78N-S130A-H249N/R、S78N-Q206L/Y-T213A、S78N-Q206L/Y-H249N/R、S78N-Y209W-T213A、S78N-Y209W-H249N/R、S78N-T213A-H249N/R、S87D/R-P129Q-S130A、S87D/R-P129Q-Q206L/R/Y、S87D/R-P129Q-Y209W、S87D/R-P129Q-T213A、S87D/R-P129Q-H249N/R、S87D/R-S130A-Q206L/R/Y、S87D/R-S130A-Y209W、S87D/R-S130A-T213A、S87D/R-S130A-H249N/R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Q206L/Y-T213A、87D/R-Q206L/Y-H249N/R、S87D/R-Y209W-T213A、S87D/R-Y209W-H249N/R、S87D/R-T213A-H249N/R、P129Q-S130A-Q206R/Y、P129Q-S130A-T213A、P129Q-S130A-H249N/R、P129Q-Q206Y-Y209W、P129Q-Q206L/Y-T213A、P129Q-Q206L/Y-H249N/R、P129Q-Y209W-T213A、P129Q-Y209W-H249N/R、P129Q-T213A-H249N/R、S130A-Q206Y-Y209W、S130A-Q206L/Y-T213A、S130A-Q206L/Y-H249N/R、S130A-Y209W-T213A、S130A-Y209W-H249N/R、S130A-T213A-H249N/R、S130A-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-Y209W-T213A、Q206L/Y-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-T213A-H249N/R、Y209W-T213A-H249N/R、及其组合；其中所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)3、8、22、28、43、76、89、99、101、103、104、108、116、118、124、127、128、147、150、158、159、166、188、194、210、211、212、215、217、222、232、235、243、245、246、261、262、270、和271；(ii)X3T/V、X8V、X22W、X28T、X43S、X76D、X89H、X99N、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116M、X118R、X124M、X127T、X128L、X147I、X150T、X158E/T、X159D、X166D、X188D、X194D/P、X210I/L、X211P、X212D、X215V、X217K、X222Q/S、X232V、X235T、X243S、X245R、X246V、X261I、X262Q、X270T、和X271D；或(iii)S3T/V、I8V、T22W、V28T、N43S、N76D、E89H、S99N、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116M、G118R、L124M、G127T、S128L、V147I、V150T、A158E/T、G159D、S166D、S188D、A194D/P、P210I/L、G211P、S212D、A215V、L217K、M222Q/S、A232V、K235T、N243S、Q245R、I246V、N261I、L262Q、A270T、和E271D；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。仍然另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：S78N-Q206F/M/Y、S78G-Q206D/F/H/M/N/P/R/Y、N18K/R-S78N、N18K/R-S87R、N18K/R-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S87R、S24F/L/P-Q206L/Y、S24F/L/P/R-Q206Y、S24F/L/P-Y209W、P40E-S78G、P40E-S87R、P40E-P129Q、P40E-S130A、S78N-S87D/R、S78G-S87D/R/T、S78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-S87R、S78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-P129Q、S78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-S130A、S78G-S130A/Q、S78N-H249N/R、S87D/R-Q206L/R/Y、S87D/R-Y209W、S87D/R-T213A、S87R-H249N/R、P129Q-Q206RY、P129Q-H249N/R、S130A-Q206R/Y、S130A-H249N/R、Q206Y-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-H249N/R、Y209W-T213A、Y209W-H249N/R、N18K/R-S24F/L/P/R-S78N、N18K/R-S24F/L/P/R-S87D/R、N18K/R-S24F/L/P/R-P129Q、N18K/R-S24F/L/P/R-S130A、N18K/R-S24F/L/P/R-Q206L/Y、N18K/R-S24F/L/P/R-Y209W、N18K/R-S78N-S87D/R、N18K/R-S78N-P129Q、N18K/R-S78N-S130A、N18K/R-S78N-Q206L/Y、N18K/R-S78N-Y209W、N18K/R-S78N-T213A、N18K/R-S78N-H249N/R、N18K/R-S87D/R-P129Q、N18K/R-S87D/R-S130A、N18K/R-S87D/R-Q206L/Y、N18K/R-S87D/R-Y209W、N18K/R-S87D/R-T213A、N18K/R-S87D/R-H249、N18K/R-P129Q-S130A、N18K/R-P129Q-Q206L/Y、N18K/R-P129Q-209、N18K/R-P129Q-T213A、N18K/R-P129Q-H249N/R、N18K/R-S130A-Q206L/Y、N18K/R-S130A-Y209W、N18K/R-S130A-T213A、N18K/R-S130A-H249N/R、N18K/R-Q206L/Y-Y209W、N18K/R-Q206L/Y-T213A、N18K/R-Q206L/Y-H249N/R、N18K/R-Y209W-T213A、N18K/R-Y209W-H249N/R、N18K/R-T213A-H249N/R、S24F/L/P/R-S78N-S87D/R、S24F/L/P-S78N-P129Q、S24F/L/P-S78N-S130A、S24F/L/P-S78N-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S78N-Q206Y、S24F/L/P-S78N-Y209W、S24F/L/P/R-S78N-T213A、S24F/L/P/R-S78N-H249N/R、S24F/L/P/R-S87D/R-P129Q、S24F/L/P/R-S87D/R-S130A、S24F/L/P/R-S87D/R-Q206L/Y、S24F/L/P/R-87D/R-Y209W、S24F/L/P/R-S87D/R-T213A、S24F/L/P/R-S87D/R-H249、S24F/L/P-P129Q-S130A、S24F/L/P-P129Q-Q206L/Y、S24F/L/P/R-P129Q-Q206Y、S24F/L/P-P129Q-Y209W、S24F/L/P/R-P129Q-T213A、S24F/L/P/R-P129Q-H249N/R、S24F/L/P-S130A-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S130A-Q206Y、S24F/L/P-S130A-Y209W、S24F/L/P/R-S130A-T213A、S24F/L/P/R-S130A-H249N/R、S24F/L/P-Q206L/Y-Y209W、S24F/L/P/R-Q206Y-Y209W、S24F/L/P/R-Q206L/Y-T213A、S24F/L/P/R-Q206L/Y-H249N/R、S24F/L/P/R-Y209W-T213A、S24F/L/P/R-Y209W-H249N/R、S78N-S87D/R-P129Q、S78N-S87D/R-S130A、S78N-S87D/R-Q206L/Y、S78N-S87D/R-Y209W、S78N-S87D/R-T213A、S78N-S87D/R-H249N/R、S78N-P129Q-Q206Y、S78N-P129Q-T213A、S78N-P129Q-H249N/R、S78N-S130A-Q206Y、S78N-S130A-T213A、S78N-S130A-H249N/R、S78N-Q206L/Y-T213A、S78N-Q206L/Y-H249N/R、S78N-Y209W-T213A、S78N-Y209W-H249N/R、S78N-T213A-H249N/R、S87D/R-P129Q-S130A、S87D/R-P129Q-Q206L/R/Y、S87D/R-P129Q-Y209W、S87D/R-P129Q-T213A、S87D/R-P129Q-H249N/R、S87D/R-S130A-Q206L/R/Y、S87D/R-S130A-Y209W、S87D/R-S130A-T213A、S87D/R-S130A-H249N/R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Q206L/Y-T213A、87D/R-Q206L/Y-H249N/R、S87D/R-Y209W-T213A、S87D/R-Y209W-H249N/R、S87D/R-T213A-H249N/R、P129Q-S130A-Q206R/Y、P129Q-S130A-T213A、P129Q-S130A-H249N/R、P129Q-Q206Y-Y209W、P129Q-Q206L/Y-T213A、P129Q-Q206L/Y-H249N/R、P129Q-Y209W-T213A、P129Q-Y209W-H249N/R、P129Q-T213A-H249N/R、S130A-Q206Y-Y209W、S130A-Q206L/Y-T213A、S130A-Q206L/Y-H249N/R、S130A-Y209W-T213A、S130A-Y209W-H249N/R、S130A-T213A-H249N/R、S130A-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-Y209W-T213A、Q206L/Y-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-T213A-H249N/R、Y209W-T213A-H249N/R、及其组合；其中所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：i)1、3、8、9、16、20、22、28、42、43、44、56、76、77、82、88、100、101、103、104、108、116、118、120、124、127、128、147、150、158、159、160、166、185、194、204、210、211、212、215、216、217、218、222、232、241、245、248、251、252、254、256、259、261、262、268、270、271；(ii)X1V、X3I/V、X8V、X9G、X16T、X20E/R、X22L/W、X28T、X42I、X43R/Y、X44V、X56P、X76D、X77D、X82D、X88S、X100S、X101G/H/Q/T/V、X103A、X104I、X108S、X116L/M、X118A/R/V、X120R、X124M、X127S/T、X128K/L/R、X147I、X150T、X158E/V、X160Q、X166D/N、X185Y、X194D/P、X204D、X210I、X211P、X212D、X215K/V、X216Y、X217K、X218S、X222Q/S、X232V、X241K、X245R、X248D、X251R、X252I、X254T、X256P、X259G、X261I、X262Q、X268A、X270P、和X271D；或(iii)A1V、S3I/V、I8V、S9G、A16T、G20E/R、T22L/W、V28T、L42I、N43R/Y、I44V、S56P、N76D、N77D、L82D、A88S、G100S、S101G/H/Q/T/V、S103A、V104I、A108S、N116L/M、G118A/R/V、H120R、L124M、G127S/T、S128K/LR、V147I、V150T、A158E/V、S160Q、S166D/N、N185Y、A194D/P、N204D、P210I、G211P、S212D、A215K/V、S216Y、L217K、N218S、M222Q/S、A232V、W241K、Q245R、N248D、K251R、N252I、A254T、S256P、S259G、N261I、L262Q、V268A、A270P、和E271D；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。甚至仍然另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：S78N-Q206F/M/Y、S78G-Q206D/F/H/M/N/P/R/Y、N18K/R-S78N、N18K/R-S87R、N18K/R-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S87R、S24F/L/P-Q206L/Y、S24F/L/P/R-Q206Y、S24F/L/P-Y209W、P40E-S78G、P40E-S87R、P40E-P129Q、P40E-S130A、S78N-S87D/R、S78G-S87D/R/T、S78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-S87R、S78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-P129Q、S78A/C/E/F/H/I/K/L/M/P/Q/R/T/V/W/Y-S130A、S78G-S130A/Q、S78N-H249N/R、S87D/R-Q206L/R/Y、S87D/R-Y209W、S87D/R-T213A、S87R-H249N/R、P129Q-Q206RY、P129Q-H249N/R、S130A-Q206R/Y、S130A-H249N/R、Q206Y-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-H249N/R、Y209W-T213A、Y209W-H249N/R、N18K/R-S24F/L/P/R-S78N、N18K/R-S24F/L/P/R-S87D/R、N18K/R-S24F/L/P/R-P129Q、N18K/R-S24F/L/P/R-S130A、N18K/R-S24F/L/P/R-Q206L/Y、N18K/R-S24F/L/P/R-Y209W、N18K/R-S78N-S87D/R、N18K/R-S78N-P129Q、N18K/R-S78N-S130A、N18K/R-S78N-Q206L/Y、N18K/R-S78N-Y209W、N18K/R-S78N-T213A、N18K/R-S78N-H249N/R、N18K/R-S87D/R-P129Q、N18K/R-S87D/R-S130A、N18K/R-S87D/R-Q206L/Y、N18K/R-S87D/R-Y209W、N18K/R-S87D/R-T213A、N18K/R-S87D/R-H249、N18K/R-P129Q-S130A、N18K/R-P129Q-Q206L/Y、N18K/R-P129Q-209、N18K/R-P129Q-T213A、N18K/R-P129Q-H249N/R、N18K/R-S130A-Q206L/Y、N18K/R-S130A-Y209W、N18K/R-S130A-T213A、N18K/R-S130A-H249N/R、N18K/R-Q206L/Y-Y209W、N18K/R-Q206L/Y-T213A、N18K/R-Q206L/Y-H249N/R、N18K/R-Y209W-T213A、N18K/R-Y209W-H249N/R、N18K/R-T213A-H249N/R、S24F/L/P/R-S78N-S87D/R、S24F/L/P-S78N-P129Q、S24F/L/P-S78N-S130A、S24F/L/P-S78N-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S78N-Q206Y、S24F/L/P-S78N-Y209W、S24F/L/P/R-S78N-T213A、S24F/L/P/R-S78N-H249N/R、S24F/L/P/R-S87D/R-P129Q、S24F/L/P/R-S87D/R-S130A、S24F/L/P/R-S87D/R-Q206L/Y、S24F/L/P/R-87D/R-Y209W、S24F/L/P/R-S87D/R-T213A、S24F/L/P/R-S87D/R-H249、S24F/L/P-P129Q-S130A、S24F/L/P-P129Q-Q206L/Y、S24F/L/P/R-P129Q-Q206Y、S24F/L/P-P129Q-Y209W、S24F/L/P/R-P129Q-T213A、S24F/L/P/R-P129Q-H249N/R、S24F/L/P-S130A-Q206L/Y、S24F/L/P/R-S130A-Q206Y、S24F/L/P-S130A-Y209W、S24F/L/P/R-S130A-T213A、S24F/L/P/R-S130A-H249N/R、S24F/L/P-Q206L/Y-Y209W、S24F/L/P/R-Q206Y-Y209W、S24F/L/P/R-Q206L/Y-T213A、S24F/L/P/R-Q206L/Y-H249N/R、S24F/L/P/R-Y209W-T213A、S24F/L/P/R-Y209W-H249N/R、S78N-S87D/R-P129Q、S78N-S87D/R-S130A、S78N-S87D/R-Q206L/Y、S78N-S87D/R-Y209W、S78N-S87D/R-T213A、S78N-S87D/R-H249N/R、S78N-P129Q-Q206Y、S78N-P129Q-T213A、S78N-P129Q-H249N/R、S78N-S130A-Q206Y、S78N-S130A-T213A、S78N-S130A-H249N/R、S78N-Q206L/Y-T213A、S78N-Q206L/Y-H249N/R、S78N-Y209W-T213A、S78N-Y209W-H249N/R、S78N-T213A-H249N/R、S87D/R-P129Q-S130A、S87D/R-P129Q-Q206L/R/Y、S87D/R-P129Q-Y209W、S87D/R-P129Q-T213A、S87D/R-P129Q-H249N/R、S87D/R-S130A-Q206L/R/Y、S87D/R-S130A-Y209W、S87D/R-S130A-T213A、S87D/R-S130A-H249N/R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Q206L/Y-T213A、87D/R-Q206L/Y-H249N/R、S87D/R-Y209W-T213A、S87D/R-Y209W-H249N/R、S87D/R-T213A-H249N/R、P129Q-S130A-Q206R/Y、P129Q-S130A-T213A、P129Q-S130A-H249N/R、P129Q-Q206Y-Y209W、P129Q-Q206L/Y-T213A、P129Q-Q206L/Y-H249N/R、P129Q-Y209W-T213A、P129Q-Y209W-H249N/R、P129Q-T213A-H249N/R、S130A-Q206Y-Y209W、S130A-Q206L/Y-T213A、S130A-Q206L/Y-H249N/R、S130A-Y209W-T213A、S130A-Y209W-H249N/R、S130A-T213A-H249N/R、S130A-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-Y209W-T213A、Q206L/Y-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-T213A-H249N/R、Y209W-T213A-H249N/R、及其组合；其中所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)3、76、101、103、104、118、127、128、166、210、217、222、和261；(ii)X3VX76D、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X118R、X127T、X128L/R、X166D/N、X210I、X217K、X222Q/S、和X261I；或(ii)S3V、N76D、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、G118R、G127T、S128L/R、S166D/N、P210I、L217K、M222Q/S、和N261I；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
又甚至另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：S78N-Q206L/Y、N18K/R-S78N、N18K/R-S87R、N18K/R-Q206L/Y、S24F/P/R-S87R、S24F/P/R-Q206L/Y、S24F/P/R-Q206L/Y、S24F/P/R-Y209W、S78N-S87D/R、S78N-P129Q、S78N-S130A、S78N-Y209W、S78N-H249N/R、S78N-H249N/R、S87D/R-Q206L/Y、S87D/R-Y209W、S87D/R-T213A、S87R-H249N/R、P129Q-Q206L/Y、P129Q-Y209W、P129Q-H249N/R、S130A-Q206L/Y、S130A-Y209W、S130A-H249N/R、Q206L/Y-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-H249N/R、Y209W-T213A、Y209W-H249N/R、N18K/R-S24F/P/R-S78N、N18K/R-S24F/P/R-S87D/R、N18K/R-S24F/P/R-P129Q、N18K/R-S24F/P/R-S130A、N18K/R-S24F/P/R-Q206L/Y、N18K/R-S24F/P/R-Y209W、N18K/R-S78N-S87D/R、N18K/R-S78N-P129Q、N18K/R-S78N-S130A、N18K/R-S78N-Q206L/Y、N18K/R-S78N-Y209W、N18K/R-S78N-T213A、N18K/R-S78N-H249N/R、N18K/R-S87D/R-P129Q、N18K/R-S87D/R-S130A、N18K/R-S87D/R-Q206L/Y、N18K/R-S87D/R-Y209W、N18K/R-S87D/R-T213A、N18K/R-S87D/R-H249、N18K/R-P129Q-S130A、N18K/R-P129Q-Q206L/Y、N18K/R-P129Q-209、N18K/R-P129Q-T213A、N18K/R-P129Q-H249N/R、N18K/R-S130A-Q206L/Y、N18K/R-S130A-Y209W、N18K/R-S130A-T213A、N18K/R-S130A-H249N/R、N18K/R-Q206L/Y-Y209W、N18K/R-Q206L/Y-T213A、N18K/R-Q206L/Y-H249N/R、N18K/R-Y209W-T213A、N18K/R-Y209W-H249N/R、N18K/R-T213A-H249N/R、S24F/P/R-S78N-S87D/R、S24F/P/R-S78N-P129Q、S24F/P/R-S78N-S130A、S24F/P/R-S78N-Q206L/Y、S24F/P/R-S78N-Y209W、S24F/P/R-S78N-T213A、S24F/P/R-S78N-H249N/R、S24F/P/R-S87D/R-P129Q、S24F/P/R-S87D/R-S130A、S24F/P/R-S87D/R-Q206L/Y、S24F/P/R-87D/R-Y209W、S24F/P/R-S87D/R-T213A、S24F/P/R-S87D/R-H249、S24F/P/R-P129Q-S130A、S24F/P/R-P129Q-Q206L/Y、S24F/P/R-P129Q-Y209W、S24F/P/R-P129Q-T213A、S24F/P/R-P129Q-H249N/R、S24F/P/R-S130A-Q206L/Y、S24F/P/R-S130A-Y209W、S24F/P/R-S130A-T213A、S24F/P/R-S130A-H249N/R、S24F/P/R-Q206L/Y-Y209W、S24F/P/R-Q206L/Y-T213A、S24F/P/R-Q206L/Y-H249N/R、S24F/P/R-Y209W-T213A、S24F/P/R-Y209W-H249N/R、S78N-S87D/R-P129Q、S78N-S87D/R-S130A、S78N-S87D/R-Q206L/Y、S78N-S87D/R-Y209W、S78N-S87D/R-T213A、S78N-S87D/R-H249N/R、S78N-P129Q-S130A、S78N-P129Q-Q206L/Y、S78N-P129Q-Y209W、S78N-P129Q-T213A、S78N-P129Q-H249N/R、S78N-S130A-Q206L/Y、S78N-S130A-Y209W、S78N-S130A-T213A、S78N-S130A-T213A、S78N-S130A-H249N/R、S78N-Q206L/Y-T213A、S78N-Q206L/Y-H249N/R、S78N-Y209W-T213A、S78N-Y209W-H249N/R、S78N-T213A-H249N/R、S87D/R-P129Q-S130A、S87D/R-P129Q-Q206L/Y、S87D/R-P129Q-Y209W、S87D/R-P129Q-T213A、S87D/R-P129Q-H249N/R、S87D/R-S130A-Q206L/Y、S87D/R-S130A-Y209W、S87D/R-S130A-T213A、S87D/R-S130A-H249N/R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Q206L/Y-T213A、87D/R-Q206L/Y-H249N/R、S87D/R-Y209W-T213A、S87D/R-Y209W-H249N/R、S87D/R-T213A-H249N/R、P129Q-S130A-Q206L/Y、P129Q-S130A-Y209W、P129Q-S130A-T213A、P129Q-S130A-H249N/R、P129Q-Q206L/Y-Y209W、P129Q-Q206L/Y-T213A、P129Q-Q206L/Y-H249N/R、P129Q-Y209W-T213A、P129Q-Y209W-H249N/R、P129Q-T213A-H249N/R、S130A-Q206L/Y-Y209W、S130A-Q206L/Y-T213A、S130A-Q206L/Y-H249N/R、S130A-Y209W-T213A、S130A-Y209W-H249N/R、S130A-T213A-H249N/R、S130A-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-Y209W-T213A、Q206L/Y-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-T213A-H249N/R、Y209W-T213A-H249N/R、及其组合；其中所述变体具有蛋白水解活性并且所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。另一个实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：S78N-Q206L/Y、N18K/R-S78N、N18K/R-S87R、N18K/R-Q206L/Y、S24F/P/R-S87R、S24F/P/R-Q206L/Y、S24F/P/R-Q206L/Y、S24F/P/R-Y209W、S78N-S87D/R、S78N-P129Q、S78N-S130A、S78N-Y209W、S78N-H249N/R、S78N-H249N/R、S87D/R-Q206L/Y、S87D/R-Y209W、S87D/R-T213A、S87R-H249N/R、P129Q-Q206L/Y、P129Q-Y209W、P129Q-H249N/R、S130A-Q206L/Y、S130A-Y209W、S130A-H249N/R、Q206L/Y-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-H249N/R、Y209W-T213A、Y209W-H249N/R、N18K/R-S24F/P/R-S78N、N18K/R-S24F/P/R-S87D/R、N18K/R-S24F/P/R-P129Q、N18K/R-S24F/P/R-S130A、N18K/R-S24F/P/R-Q206L/Y、N18K/R-S24F/P/R-Y209W、N18K/R-S78N-S87D/R、N18K/R-S78N-P129Q、N18K/R-S78N-S130A、N18K/R-S78N-Q206L/Y、N18K/R-S78N-Y209W、N18K/R-S78N-T213A、N18K/R-S78N-H249N/R、N18K/R-S87D/R-P129Q、N18K/R-S87D/R-S130A、N18K/R-S87D/R-Q206L/Y、N18K/R-S87D/R-Y209W、N18K/R-S87D/R-T213A、N18K/R-S87D/R-H249、N18K/R-P129Q-S130A、N18K/R-P129Q-Q206L/Y、N18K/R-P129Q-209、N18K/R-P129Q-T213A、N18K/R-P129Q-H249N/R、N18K/R-S130A-Q206L/Y、N18K/R-S130A-Y209W、N18K/R-S130A-T213A、N18K/R-S130A-H249N/R、N18K/R-Q206L/Y-Y209W、N18K/R-Q206L/Y-T213A、N18K/R-Q206L/Y-H249N/R、N18K/R-Y209W-T213A、N18K/R-Y209W-H249N/R、N18K/R-T213A-H249N/R、S24F/P/R-S78N-S87D/R、S24F/P/R-S78N-P129Q、S24F/P/R-S78N-S130A、S24F/P/R-S78N-Q206L/Y、S24F/P/R-S78N-Y209W、S24F/P/R-S78N-T213A、S24F/P/R-S78N-H249N/R、S24F/P/R-S87D/R-P129Q、S24F/P/R-S87D/R-S130A、S24F/P/R-S87D/R-Q206L/Y、S24F/P/R-87D/R-Y209W、S24F/P/R-S87D/R-T213A、S24F/P/R-S87D/R-H249、S24F/P/R-P129Q-S130A、S24F/P/R-P129Q-Q206L/Y、S24F/P/R-P129Q-Y209W、S24F/P/R-P129Q-T213A、S24F/P/R-P129Q-H249N/R、S24F/P/R-S130A-Q206L/Y、S24F/P/R-S130A-Y209W、S24F/P/R-S130A-T213A、S24F/P/R-S130A-H249N/R、S24F/P/R-Q206L/Y-Y209W、S24F/P/R-Q206L/Y-T213A、S24F/P/R-Q206L/Y-H249N/R、S24F/P/R-Y209W-T213A、S24F/P/R-Y209W-H249N/R、S78N-S87D/R-P129Q、S78N-S87D/R-S130A、S78N-S87D/R-Q206L/Y、S78N-S87D/R-Y209W、S78N-S87D/R-T213A、S78N-S87D/R-H249N/R、S78N-P129Q-S130A、S78N-P129Q-Q206L/Y、S78N-P129Q-Y209W、S78N-P129Q-T213A、S78N-P129Q-H249N/R、S78N-S130A-Q206L/Y、S78N-S130A-Y209W、S78N-S130A-T213A、S78N-S130A-T213A、S78N-S130A-H249N/R、S78N-Q206L/Y-T213A、S78N-Q206L/Y-H249N/R、S78N-Y209W-T213A、S78N-Y209W-H249N/R、S78N-T213A-H249N/R、S87D/R-P129Q-S130A、S87D/R-P129Q-Q206L/Y、S87D/R-P129Q-Y209W、S87D/R-P129Q-T213A、S87D/R-P129Q-H249N/R、S87D/R-S130A-Q206L/Y、S87D/R-S130A-Y209W、S87D/R-S130A-T213A、S87D/R-S130A-H249N/R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Q206L/Y-T213A、87D/R-Q206L/Y-H249N/R、S87D/R-Y209W-T213A、S87D/R-Y209W-H249N/R、S87D/R-T213A-H249N/R、P129Q-S130A-Q206L/Y、P129Q-S130A-Y209W、P129Q-S130A-T213A、P129Q-S130A-H249N/R、P129Q-Q206L/Y-Y209W、P129Q-Q206L/Y-T213A、P129Q-Q206L/Y-H249N/R、P129Q-Y209W-T213A、P129Q-Y209W-H249N/R、P129Q-T213A-H249N/R、S130A-Q206L/Y-Y209W、S130A-Q206L/Y-T213A、S130A-Q206L/Y-H249N/R、S130A-Y209W-T213A、S130A-Y209W-H249N/R、S130A-T213A-H249N/R、S130A-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-Y209W-T213A、Q206L/Y-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-T213A-H249N/R、Y209W-T213A-H249N/R、及其组合；其中所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)1、3、9、16、20、22、28、42、43、44、56、76、77、99、100、101、103、104、108、116、118、120、124、127、128、150、158、159、166、185、188、194、204、212、217、218、222、232、235、243、245、246、251、254、259、268、和270，(ii)X1V、X3T/V、X9G、X16T、X20E/R、X22L、X28T、X42I、X43R/S、X44V、X56P、X76D、X77D、X99N、X100S、X101F/G/H/T/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116L/M、X118R/V、X120R、X124M、X127T、X128L、X150T、X158E/T/V、X159D、X166D/N、X185Y、X188D、X194D、X204D、X212D、X217K、X218S、X222L/Q/S、X232V、X235T、X243S、X245R、X246V、X251R、X254T、X259G、X268A、和X270P/T，或(iii)A1V、S3T/V、S9G、A16T、G20E/R、T22L、V28T、L42I、N43R/S、I44V、S56P、N76D、N77D、S99N、G100S、S101F/G/H/T/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116L/M、G118R/V、H120R、L124M、G127T、S128L、V150T、A158E/T/V、G159D、S166D/N、N185Y、S188D、A194D、N204D、S212D、L217K、N218S、M222L/Q/S、A232V、K235T、N243S、Q245R、I246V、K251R、A254T、S259G、V268A、和A270P/T；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。又另一个实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：S78N-Q206L/Y、N18K/R-S78N、N18K/R-S87R、N18K/R-Q206L/Y、S24F/P/R-S87R、S24F/P/R-Q206L/Y、S24F/P/R-Q206L/Y、S24F/P/R-Y209W、S78N-S87D/R、S78N-P129Q、S78N-S130A、S78N-Y209W、S78N-H249N/R、S78N-H249N/R、S87D/R-Q206L/Y、S87D/R-Y209W、S87D/R-T213A、S87R-H249N/R、P129Q-Q206L/Y、P129Q-Y209W、P129Q-H249N/R、S130A-Q206L/Y、S130A-Y209W、S130A-H249N/R、Q206L/Y-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-H249N/R、Y209W-T213A、Y209W-H249N/R、N18K/R-S24F/P/R-S78N、N18K/R-S24F/P/R-S87D/R、N18K/R-S24F/P/R-P129Q、N18K/R-S24F/P/R-S130A、N18K/R-S24F/P/R-Q206L/Y、N18K/R-S24F/P/R-Y209W、N18K/R-S78N-S87D/R、N18K/R-S78N-P129Q、N18K/R-S78N-S130A、N18K/R-S78N-Q206L/Y、N18K/R-S78N-Y209W、N18K/R-S78N-T213A、N18K/R-S78N-H249N/R、N18K/R-S87D/R-P129Q、N18K/R-S87D/R-S130A、N18K/R-S87D/R-Q206L/Y、N18K/R-S87D/R-Y209W、N18K/R-S87D/R-T213A、N18K/R-S87D/R-H249、N18K/R-P129Q-S130A、N18K/R-P129Q-Q206L/Y、N18K/R-P129Q-209、N18K/R-P129Q-T213A、N18K/R-P129Q-H249N/R、N18K/R-S130A-Q206L/Y、N18K/R-S130A-Y209W、N18K/R-S130A-T213A、N18K/R-S130A-H249N/R、N18K/R-Q206L/Y-Y209W、N18K/R-Q206L/Y-T213A、N18K/R-Q206L/Y-H249N/R、N18K/R-Y209W-T213A、N18K/R-Y209W-H249N/R、N18K/R-T213A-H249N/R、S24F/P/R-S78N-S87D/R、S24F/P/R-S78N-P129Q、S24F/P/R-S78N-S130A、S24F/P/R-S78N-Q206L/Y、S24F/P/R-S78N-Y209W、S24F/P/R-S78N-T213A、S24F/P/R-S78N-H249N/R、S24F/P/R-S87D/R-P129Q、S24F/P/R-S87D/R-S130A、S24F/P/R-S87D/R-Q206L/Y、S24F/P/R-87D/R-Y209W、S24F/P/R-S87D/R-T213A、S24F/P/R-S87D/R-H249、S24F/P/R-P129Q-S130A、S24F/P/R-P129Q-Q206L/Y、S24F/P/R-P129Q-Y209W、S24F/P/R-P129Q-T213A、S24F/P/R-P129Q-H249N/R、S24F/P/R-S130A-Q206L/Y、S24F/P/R-S130A-Y209W、S24F/P/R-S130A-T213A、S24F/P/R-S130A-H249N/R、S24F/P/R-Q206L/Y-Y209W、S24F/P/R-Q206L/Y-T213A、S24F/P/R-Q206L/Y-H249N/R、S24F/P/R-Y209W-T213A、S24F/P/R-Y209W-H249N/R、S78N-S87D/R-P129Q、S78N-S87D/R-S130A、S78N-S87D/R-Q206L/Y、S78N-S87D/R-Y209W、S78N-S87D/R-T213A、S78N-S87D/R-H249N/R、S78N-P129Q-S130A、S78N-P129Q-Q206L/Y、S78N-P129Q-Y209W、S78N-P129Q-T213A、S78N-P129Q-H249N/R、S78N-S130A-Q206L/Y、S78N-S130A-Y209W、S78N-S130A-T213A、S78N-S130A-T213A、S78N-S130A-H249N/R、S78N-Q206L/Y-T213A、S78N-Q206L/Y-H249N/R、S78N-Y209W-T213A、S78N-Y209W-H249N/R、S78N-T213A-H249N/R、S87D/R-P129Q-S130A、S87D/R-P129Q-Q206L/Y、S87D/R-P129Q-Y209W、S87D/R-P129Q-T213A、S87D/R-P129Q-H249N/R、S87D/R-S130A-Q206L/Y、S87D/R-S130A-Y209W、S87D/R-S130A-T213A、S87D/R-S130A-H249N/R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Q206L/Y-T213A、87D/R-Q206L/Y-H249N/R、S87D/R-Y209W-T213A、S87D/R-Y209W-H249N/R、S87D/R-T213A-H249N/R、P129Q-S130A-Q206L/Y、P129Q-S130A-Y209W、P129Q-S130A-T213A、P129Q-S130A-H249N/R、P129Q-Q206L/Y-Y209W、P129Q-Q206L/Y-T213A、P129Q-Q206L/Y-H249N/R、P129Q-Y209W-T213A、P129Q-Y209W-H249N/R、P129Q-T213A-H249N/R、S130A-Q206L/Y-Y209W、S130A-Q206L/Y-T213A、S130A-Q206L/Y-H249N/R、S130A-Y209W-T213A、S130A-Y209W-H249N/R、S130A-T213A-H249N/R、S130A-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-Y209W-T213A、Q206L/Y-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-T213A-H249N/R、Y209W-T213A-H249N/R、及其组合；其中所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)3、28、43、76、99、100、101、103、104、108、116、118、124、127、128、150、158、159、166、188、194、212、217、222、232、235、243、245、246、和270；(ii)X3T/V、X28T、X43S、X76D、X99N、X100S、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116M、X118R、X124M、X127T、X128L、X150T、X158E/T、X159D、X166D、X188D、X194D、X212D、X217K、X222Q/S、X232V、X235T、X243S、X245R、X246V、和X270T，或(iii)S3V/T、V28T、N43S、N76D、S99N、G100S、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116M、G118R、L124M、G127T、S128L、V150T、A158E/T、G159D、S166D、S188D、A194D、S212D、L217K、M222Q/S、A232V、K235T、N243S、Q245R、I246V、和A270T；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。又仍另一个实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含在选自以下的两个或更多个位置处的氨基酸取代的组合：S78N-Q206L/Y、N18K/R-S78N、N18K/R-S87R、N18K/R-Q206L/Y、S24F/P/R-S87R、S24F/P/R-Q206L/Y、S24F/P/R-Q206L/Y、S24F/P/R-Y209W、S78N-S87D/R、S78N-P129Q、S78N-S130A、S78N-Y209W、S78N-H249N/R、S78N-H249N/R、S87D/R-Q206L/Y、S87D/R-Y209W、S87D/R-T213A、S87R-H249N/R、P129Q-Q206L/Y、P129Q-Y209W、P129Q-H249N/R、S130A-Q206L/Y、S130A-Y209W、S130A-H249N/R、Q206L/Y-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-H249N/R、Y209W-T213A、Y209W-H249N/R、N18K/R-S24F/P/R-S78N、N18K/R-S24F/P/R-S87D/R、N18K/R-S24F/P/R-P129Q、N18K/R-S24F/P/R-S130A、N18K/R-S24F/P/R-Q206L/Y、N18K/R-S24F/P/R-Y209W、N18K/R-S78N-S87D/R、N18K/R-S78N-P129Q、N18K/R-S78N-S130A、N18K/R-S78N-Q206L/Y、N18K/R-S78N-Y209W、N18K/R-S78N-T213A、N18K/R-S78N-H249N/R、N18K/R-S87D/R-P129Q、N18K/R-S87D/R-S130A、N18K/R-S87D/R-Q206L/Y、N18K/R-S87D/R-Y209W、N18K/R-S87D/R-T213A、N18K/R-S87D/R-H249、N18K/R-P129Q-S130A、N18K/R-P129Q-Q206L/Y、N18K/R-P129Q-209、N18K/R-P129Q-T213A、N18K/R-P129Q-H249N/R、N18K/R-S130A-Q206L/Y、N18K/R-S130A-Y209W、N18K/R-S130A-T213A、N18K/R-S130A-H249N/R、N18K/R-Q206L/Y-Y209W、N18K/R-Q206L/Y-T213A、N18K/R-Q206L/Y-H249N/R、N18K/R-Y209W-T213A、N18K/R-Y209W-H249N/R、N18K/R-T213A-H249N/R、S24F/P/R-S78N-S87D/R、S24F/P/R-S78N-P129Q、S24F/P/R-S78N-S130A、S24F/P/R-S78N-Q206L/Y、S24F/P/R-S78N-Y209W、S24F/P/R-S78N-T213A、S24F/P/R-S78N-H249N/R、S24F/P/R-S87D/R-P129Q、S24F/P/R-S87D/R-S130A、S24F/P/R-S87D/R-Q206L/Y、S24F/P/R-87D/R-Y209W、S24F/P/R-S87D/R-T213A、S24F/P/R-S87D/R-H249、S24F/P/R-P129Q-S130A、S24F/P/R-P129Q-Q206L/Y、S24F/P/R-P129Q-Y209W、S24F/P/R-P129Q-T213A、S24F/P/R-P129Q-H249N/R、S24F/P/R-S130A-Q206L/Y、S24F/P/R-S130A-Y209W、S24F/P/R-S130A-T213A、S24F/P/R-S130A-H249N/R、S24F/P/R-Q206L/Y-Y209W、S24F/P/R-Q206L/Y-T213A、S24F/P/R-Q206L/Y-H249N/R、S24F/P/R-Y209W-T213A、S24F/P/R-Y209W-H249N/R、S78N-S87D/R-P129Q、S78N-S87D/R-S130A、S78N-S87D/R-Q206L/Y、S78N-S87D/R-Y209W、S78N-S87D/R-T213A、S78N-S87D/R-H249N/R、S78N-P129Q-S130A、S78N-P129Q-Q206L/Y、S78N-P129Q-Y209W、S78N-P129Q-T213A、S78N-P129Q-H249N/R、S78N-S130A-Q206L/Y、S78N-S130A-Y209W、S78N-S130A-T213A、S78N-S130A-T213A、S78N-S130A-H249N/R、S78N-Q206L/Y-T213A、S78N-Q206L/Y-H249N/R、S78N-Y209W-T213A、S78N-Y209W-H249N/R、S78N-T213A-H249N/R、S87D/R-P129Q-S130A、S87D/R-P129Q-Q206L/Y、S87D/R-P129Q-Y209W、S87D/R-P129Q-T213A、S87D/R-P129Q-H249N/R、S87D/R-S130A-Q206L/Y、S87D/R-S130A-Y209W、S87D/R-S130A-T213A、S87D/R-S130A-H249N/R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Q206L/Y-T213A、87D/R-Q206L/Y-H249N/R、S87D/R-Y209W-T213A、S87D/R-Y209W-H249N/R、S87D/R-T213A-H249N/R、P129Q-S130A-Q206L/Y、P129Q-S130A-Y209W、P129Q-S130A-T213A、P129Q-S130A-H249N/R、P129Q-Q206L/Y-Y209W、P129Q-Q206L/Y-T213A、P129Q-Q206L/Y-H249N/R、P129Q-Y209W-T213A、P129Q-Y209W-H249N/R、P129Q-T213A-H249N/R、S130A-Q206L/Y-Y209W、S130A-Q206L/Y-T213A、S130A-Q206L/Y-H249N/R、S130A-Y209W-T213A、S130A-Y209W-H249N/R、S130A-T213A-H249N/R、S130A-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-Y209W-T213A、Q206L/Y-Y209W-H249N/R、Q206L/Y-T213A-H249N/R、Y209W-T213A-H249N/R、及其组合；其中所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)76、101、103、104、118、127、128、166、和222，(ii)X76D、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X118R、X127T、X128L、X166D/N和X222Q/S，或(iii)N76D、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、G118R、G127T、S128L、S166D/N、和M222Q/S；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。另一个实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含选自以下的两个或更多个取代：(i)3-8、3-40、3-78、3-87、3-118、3-128、3-129、3-130、3-210、3-211、3-215、3-217、3-261、3-262、8-40、8-76、8-87、8-118、8-128、8-210、8-215、8-261、18-78、18-87、18-118、18-206、24-87、24-206、24-209、24-213、24-222、40-76、40-87、40-118、40-128、40-210、40-215、40-217、40-261、76-210、76-211、76-213、76-215、76-217、76-249、76-261、76-262、78-87、78-118、78-210、78-213、78-222、78-249、87-206、87-209、87-213、87-215、87-217、87-222、87-249、87-261、118-206、118-209、118-210、118-211、118-213、118-215、118-217、118-222、118-249、118-261、118-262、128-209、128-210、128-215、128-217、128-261、129-206、129-209、130-206、130-209、206-213、206-249、209-213、209-249、210-217、210-261、213-222、213-249、215-261、222-249、及其组合；(ii)3-76-118、18-24-206、18-24-209、18-24-213、18-24-249、18-87-209、18-118-209、18-206-209、18-209-213、18-209-222、18-209-249、18-213-249、24-76-78、24-76-87、24-76-118、24-76-209、24-76-222、24-76-249、24-78-87、24-78-118、24-78-206、24-78-209、24-78-222、24-78-249、24-87-118、24-87-209、24-87-222、24-87-249、24-118-209、24-118-222、24-118-249、24-206-209、24-206-249、24-209-213、24-209-222、24-209-249、24-213-249、24-222-249、76-78-118、76-78-87、76-78-129、76-78-130、76-78-206、76-78-209、76-78-222、76-78-249、76-87-118、76-87-206、76-87-209、76-87-249、76-118-128、76-118-206、76-118-209、76-118-222、76-118-249、76-209-222、76-209-249、78-87-118、78-87-129、78-87-130、78-87-206、78-87-209、78-87-222、78-87-249、78-118-129、78-118-209、78-118-222、78-118-249、78-129-130、78-209-222、78-209-249、78-222-249、87-118-206、87-118-209、87-118-249、87-206-209、87-209-222、87-209-249、87-222-249、118-209-213、118-209-222、118-209-249、118-222-249、206-209-249、209-213-222、209-213-249、209-222-249、及其组合；(iii)X3V-X8V、X3V-X40E、X3V-X78G/N、X3V-X87D、X3V-X118R、X3V-X128R、X3V-X129Q、X3V-X130A、X3V-X210I、X3V-X211P、X3V-X215K、X3V-X217K、X3V-X261I、X3V-X262Q、X8V-X40E、X8V-X76D、X8V-X87D、X8V-X118R、X8V-X128R、X8V-X210I、X8V-X215K、X8V-X261I、X18R-X78N、X18R-X87R、X18R-X118R、X18R-X206L、X24R-S78N、X24R-X87D/R、X24R-X206L/Y、X24R-X209W、X24R-X213A、X24R-X222Q、X40E-X76D、X40E-X87D/R、X40E-X118R、X40E-X128R、X40E-X210I、X40E-X215K、X40E-X217K、X40E-X261I、X76D-X87D、X76D-X128R、X76D-X206F/R/M/Y、X76D-X210I、X76D-X211P、X76D-X213A、X76D-X215K、X76D-X217K、X76D-X249R、X76D-X261I、X76D-X262Q、X78G-X206F/L/M/Y、X78G-X210I、X78G-X261I、X78G/N-X87D/R、X78G/N-X118R、X78G/N-X128L、X78G/N-X129Q、X78G/N-X130A、X78N-X213A、X78N-X222Q、X78N-X249R、X87D-X118R、X87D-X128L/R、X87D-X129Q、X87D-X130A、X87D/R-X209W、X87D-X210I、X87D-X215K、X87D-X217K、X87D/R-X222Q、X87D/R-X249R、X87R-X206F/L/M/R/Y、X87R-X213A、X87D/R-X261I、X118R-X128R、X118R-X206F/M/L/R/Y、X118R-X209W、X118R-X210II、X118R-X211P、X118R-X213A、X118R-X215K、X118R-X217K、X118R-X222Q、X118R-X249R、X118R-X261I、X118R-X262Q、X128L-X206F/L/M/R/Y、X128L-X209W、X128R-P210I、X128R-A215K、X128R-L217K、X128R-N261I、X129Q-X206F/L/M/R/Y、X129Q-X209W、X130A-X206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、X206L/Y-X213A、X206L/Y-X222Q、X206L/Y-X249R、X209W-X213A、X209W-X222Q、X209W-X249R、X210I-X217K、X210I-X261I、X213A-X222Q、X213A-X249R、X215K-X261I、X222Q-X249R、及其组合；(iv)X3V-X76D-X118R、X18R-X24R-X206L/Y、X18R-X24R-X209W、X18R-X24R-X213A、X18R-X24R-X249R、X18R-X87D/R-X209W、X18R-X118R-X209W、X18R-X206L/Y-X209W、X18R-X206L/Y-X249R、X18R-X209W-X213A、X18R-X209W-X222Q、X18R-X209W-X249R、X18R-X213A-X249R、X24R-X76D-X78G/N、X24R-X76D-X87D/R、X24R-X76D-X118R、X24R-X76D-X209W、X24R-X76D-X222Q、X24R-X76D-X249R、X24R-X78G/N-X87D/R、X24R-X78G/N-X118R、X24R-X78G/N-X206L/Y、X24R-X78G/N-X209W、X24R-X78G/N-X222Q、X24R-X78G/N-X249R、X24R-X87D/R-X118R、X24R-X87D/R-X209W、X24R-X87D/R-X222Q、X24R-X87D/R-X249R、X24R-X118R-X209W、X24R-X118R-X222Q、X24R-X118R-X249R、X24R-X206L-X209W、X24R-X206L/Y-X249R、X24R-X209W-X213A、X24R-X209W-X222Q、X24R-X209W-X249R、X24R-X213A-X249R、X24R-X222Q-X249R、X76D-X78G/N-X87D/R、X76D-X78G/N-X118R、X76D-X78G/N-X129Q、X76D-X78G/N-X130A、X76D-X78G/N-X206L、X76D-X78G/N-X209W、X76D-X78G/N-X222Q、X76D-X78G/N-X249R、X76D-X87D/R-X118R、X76D-X87D/R-X206L/Y、X76D-X87D/R-X209W、X76D-X87D/R-X249R、X76D-X118R-X128R、X76D-X118R-X206L/Y、X76D-X118R-X209W、X76D-X118R-X222Q、X76D-X118R-X249R、X76D-X209W-X222Q、X76D-X209W-X249R、X78G/N-X87D/R-X118R、X78G/N-X87D/R-X129Q、X78G/N-X87D/R-X130A、X78G/N-X87D/R-X206L/Y、X78G/N-X87D/R-X209W、X78G/N-X87D/R-X222Q、X78G/N-X87D/R-X249R、X78G/N-X118R-X129Q、X78G/N-X118R-X209W、X78G/N-X118R-X222Q、X78G/N-X118R-X249R、X78G/N-X129Q-X130A、X78G/N-X209W-X222Q、X78G/N-X209W-X249R、X78G/N-X222Q-X249R、X87D/R-X118R-X206L、X87D/R-X118R-X209W、X87D/R-X118R-X249R、X87D/R-X206L/Y-X209W、X87D/R-X209W-X222Q、X87D/R-X209W-X249R、X87D/R-X222Q-X249R、X118R-X209W-X213A、X118R-X209W-X222Q、X118R-X209W-X249R、X118R-X222Q-X249R、X206L-X209W-X249R、X209W-X213A-X222Q、X209W-X213A-X249R、X209W-X222Q-X249R、及其组合；(v)S3V-I8V、S3V-P40E、S3V-S78G/N、S3V-S87D、S3V-G118R、S3V-S128R、S3V-P129Q、S3V-S130A、S3V-P210I、S3V-G211P、S3V-A215K、S3V-L217K、S3V-N261I、S3V-L262Q、I8V-P40E、I8V-N76D、I8V-S87D、I8V-G118R、I8V-S128R、I8V-P210I、I8V-A215K、I8V-N261I、N18R-S78N、N18R-S87R、N18R-G118R、N18R-Q206L、S24R-S78N、S24R-S87D/R、S24R-Q206L/Y、S24R-Y209W、S24R-T213A、S24R-M222Q、P40E-N76D、P40E-S87D/R、P40E-G118R、P40E-S128R、P40E-P210I、P40E-A215K、P40E-L217K、P40E-N261I、N76D-S87D、N76D-P210I、N76D-S128R、N76D-Q206F/R/M/Y、N76D-P210I、N76D-G211P、N76D-T213A、N76D-A215K、N76D-L217K、N76D-H249R、N76D-N261I、N76D-L262Q、S78G-Q206F/L/M/Y、S78G-P210I、S78G-N261I、S78G/N-S87D/R、S78G/N-G118R、S78G/N-S128L、S78G/N-P129Q、S78G/N-S130A、S78N-T213A、S78N-M222Q、S78N-H249R、S87D-G118R、S87D-S128L/R、S87D-P129Q、S87D-S130A、S87D/R-Y209W、S87D-P210I、S87D-A215K、S87D-L217K、S87D/R-M222Q、S87D/R-H249R、S87R-Q206F/L/M/R/Y、S87R-T213A、S87D/R-N261I、G118R-S128R、G118R-Q206L/R/Y、G118R-Y209W、G118R-P210I、G118R-G211P、G118R-T213A、G118R-L217K、G118R-M222Q、G118R-H249R、G118R-N261I、G118R-L262Q、S128L-Q206F/L/M/R/Y、S128L-Y209W、S128R-P210I、S128R-A215K、S128R-L217K、S128R-N261I、P129Q-Q206F/L/M/R/Y、P129Q-Y209W、S130A-Q206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-M222Q、Q206L/Y-H249R、Y209W-T213A、Y209W-M222Q、Y209W-H249R、P210I-L217K、P210I-N261I、T213A-M222Q、T213A-H249R、A215K-N261I、M222Q-H249R、及其组合；或(vi)S3V-N76D-G118R、N18R-S24R-Q206L/Y、N18R-S24R-Y209W、N18R-S24R-T213A、N18R-S24R-H249R、N18R-S87D/R-Y209W、N18R-G118R-Y209W、N18R-Q206L/Y-Y209W、N18R-Q206L/Y-H249R、N18R-Y209W-T213A、N18R-Y209W-M222Q、N18R-Y209W-H249R、N18R-T213A-H249R、S24R-N76D-S78G/N、S24R-N76D-S87D/R、S24R-N76D-G118R、S24R-N76D-Y209W、S24R-N76D-M222Q、S24R-N76D-H249R、S24R-S78G/N-S87D/R、S24R-S78G/N-G118R、S24R-S78G/N-Q206L、Y209W S24R-S78G/N-Y209W、S24R-S78G/N-M222Q、S24R-S78G/N-H249R、S24R-S87D/R-G118R、S24R-S87D/R-Y209W、S24R-S87D/R-M222Q、S24R-S87D/R-H249R、S24R-G118R-Y209W、S24R-G118R-M222Q、S24R-G118R-H249R、S24R-Q206L/Y-Y209W、S24R-Q206L/Y-H249R、S24R-Y209W-T213A、S24R-Y209W-M222Q、S24R-Y209W-H249R、S24R-T213A-H249R、S24R-M222Q-H249R、N76D-S78G/N-S87D/R、N76D-S78G/N-G118R、N76D-S78G/N-P129Q、N76D-S78G/N-S130A、N76D-S78G/N-Q206L、N76D-S78G/N-Y209W、N76D-S78G/N-M222Q、N76D-S78G/N-H249R、N76D-S87D/R-G118R、N76D-S87D/R-Q206L/Y、N76D-S87D/R-Y209W、N76D-S87D/R-H249R、N76D-G118R-S128R、N76D-G118R-Q206L/Y、N76D-G118R-Y209W、N76D-G118R-M222Q、N76D-G118R-H249R、N76D-Y209W-M222Q、N76D-Y209W-H249R、S78G/N-S87D/R-G118R、S78G/N-S87D/R-P129Q、S78G/N-S87D/R-S130A、S78G/N-S87D/R-Q206L/Y、S78G/N-S87D/R-Y209W、S78G/N-S87D/R-M222Q、S78G/N-S87D/R-H249R、S78G/N-G118R-P129Q、S78G/N-G118R-Y209W、S78G/N-G118R-M222Q、S78G/N-G118R-H249R、S78G/N-P129Q-S130A、S78G/N-Y209W-M222Q、S78G/N-Y209W-H249R、S78G/N-M222Q-H249R、S87D/R-G118R-Q206L、S87D/R-G118R-Y209W、S87D/R-G118R-H249R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Y209W-H249R、S87D/R-Y209W-M222Q、S87D/R-M222Q-H249R、G118R-Y209W-T213A、G118R-Y209W-M222Q、G118R-Y209W-H249R、G118R-M222Q-H249R、Q206L/Y-Y209W-H249R、Y209W-T213A-M222Q、Y209W-T213A-H249R、Y209W-M222Q-H249R、及其组合；并且其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。仍另一个实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含选自以下的两个或更多个取代：(i)3-8、3-40、3-78、3-87、3-118、3-128、3-129、3-130、3-210、3-211、3-215、3-217、3-261、3-262、8-40、8-76、8-87、8-118、8-128、8-210、8-215、8-261、18-78、18-87、18-118、18-206、24-87、24-206、24-209、24-213、24-222、40-76、40-87、40-118、40-128、40-210、40-215、40-217、40-261、76-210、76-211、76-213、76-215、76-217、76-249、76-261、76-262、78-87、78-118、78-210、78-213、78-222、78-249、87-206、87-209、87-213、87-215、87-217、87-222、87-249、87-261、118-206、118-209、118-210、118-211、118-213、118-215、118-217、118-222、118-249、118-261、118-262、128-209、128-210、128-215、128-217、128-261、129-206、129-209、130-206、130-209、206-213、206-249、209-213、209-249、210-217、210-261、213-222、213-249、215-261、222-249、及其组合；(ii)3-76-118、18-24-206、18-24-209、18-24-213、18-24-249、18-87-209、18-118-209、18-206-209、18-209-213、18-209-222、18-209-249、18-213-249、24-76-78、24-76-87、24-76-118、24-76-209、24-76-222、24-76-249、24-78-87、24-78-118、24-78-206、24-78-209、24-78-222、24-78-249、24-87-118、24-87-209、24-87-222、24-87-249、24-118-209、24-118-222、24-118-249、24-206-209、24-206-249、24-209-213、24-209-222、24-209-249、24-213-249、24-222-249、76-78-118、76-78-87、76-78-129、76-78-130、76-78-206、76-78-209、76-78-222、76-78-249、76-87-118、76-87-206、76-87-209、76-87-249、76-118-128、76-118-206、76-118-209、76-118-222、76-118-249、76-209-222、76-209-249、78-87-118、78-87-129、78-87-130、78-87-206、78-87-209、78-87-222、78-87-249、78-118-129、78-118-209、78-118-222、78-118-249、78-129-130、78-209-222、78-209-249、78-222-249、87-118-206、87-118-209、87-118-249、87-206-209、87-209-222、87-209-249、87-222-249、118-209-213、118-209-222、118-209-249、118-222-249、206-209-249、209-213-222、209-213-249、209-222-249、及其组合；(iii)X3V-X8V、X3V-X40E、X3V-X78G/N、X3V-X87D、X3V-X118R、X3V-X128R、X3V-X129Q、X3V-X130A、X3V-X210I、X3V-X211P、X3V-X215K、X3V-X217K、X3V-X261I、X3V-X262Q、X8V-X40E、X8V-X76D、X8V-X87D、X8V-X118R、X8V-X128R、X8V-X210I、X8V-X215K、X8V-X261I、X18R-X78N、X18R-X87R、X18R-X118R、X18R-X206L、X24R-S78N、X24R-X87D/R、X24R-X206L/Y、X24R-X209W、X24R-X213A、X24R-X222Q、X40E-X76D、X40E-X87D/R、X40E-X118R、X40E-X128R、X40E-X210I、X40E-X215K、X40E-X217K、X40E-X261I、X76D-X87D、X76D-X128R、X76D-X206F/R/M/Y、X76D-X210I、X76D-X211P、X76D-X213A、X76D-X215K、X76D-X217K、X76D-X249R、X76D-X261I、X76D-X262Q、X78G-X206F/L/M/Y、X78G-X210I、X78G-X261I、X78G/N-X87D/R、X78G/N-X118R、X78G/N-X128L、X78G/N-X129Q、X78G/N-X130A、X78N-X213A、X78N-X222Q、X78N-X249R、X87D-X118R、X87D-X128L/R、X87D-X129Q、X87D-X130A、X87D/R-X209W、X87D-X210I、X87D-X215K、X87D-X217K、X87D/R-X222Q、X87D/R-X249R、X87R-X206F/L/M/R/Y、X87R-X213A、X87D/R-X261I、X118R-X128R、X118R-X206F/M/L/R/Y、X118R-X209W、X118R-X210II、X118R-X211P、X118R-X213A、X118R-X215K、X118R-X217K、X118R-X222Q、X118R-X249R、X118R-X261I、X118R-X262Q、X128L-X206F/L/M/R/Y、X128L-X209W、X128R-P210I、X128R-A215K、X128R-L217K、X128R-N261I、X129Q-X206F/L/M/R/Y、X129Q-X209W、X130A-X206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、X206L/Y-X213A、X206L/Y-X222Q、X206L/Y-X249R、X209W-X213A、X209W-X222Q、X209W-X249R、X210I-X217K、X210I-X261I、X213A-X222Q、X213A-X249R、X215K-X261I、X222Q-X249R、及其组合；(iv)X3V-X76D-X118R、X18R-X24R-X206L/Y、X18R-X24R-X209W、X18R-X24R-X213A、X18R-X24R-X249R、X18R-X87D/R-X209W、X18R-X118R-X209W、X18R-X206L/Y-X209W、X18R-X206L/Y-X249R、X18R-X209W-X213A、X18R-X209W-X222Q、X18R-X209W-X249R、X18R-X213A-X249R、X24R-X76D-X78G/N、X24R-X76D-X87D/R、X24R-X76D-X118R、X24R-X76D-X209W、X24R-X76D-X222Q、X24R-X76D-X249R、X24R-X78G/N-X87D/R、X24R-X78G/N-X118R、X24R-X78G/N-X206L/Y、X24R-X78G/N-X209W、X24R-X78G/N-X222Q、X24R-X78G/N-X249R、X24R-X87D/R-X118R、X24R-X87D/R-X209W、X24R-X87D/R-X222Q、X24R-X87D/R-X249R、X24R-X118R-X209W、X24R-X118R-X222Q、X24R-X118R-X249R、X24R-X206L-X209W、X24R-X206L/Y-X249R、X24R-X209W-X213A、X24R-X209W-X222Q、X24R-X209W-X249R、X24R-X213A-X249R、X24R-X222Q-X249R、X76D-X78G/N-X87D/R、X76D-X78G/N-X118R、X76D-X78G/N-X129Q、X76D-X78G/N-X130A、X76D-X78G/N-X206L、X76D-X78G/N-X209W、X76D-X78G/N-X222Q、X76D-X78G/N-X249R、X76D-X87D/R-X118R、X76D-X87D/R-X206L/Y、X76D-X87D/R-X209W、X76D-X87D/R-X249R、X76D-X118R-X128R、X76D-X118R-X206L/Y、X76D-X118R-X209W、X76D-X118R-X222Q、X76D-X118R-X249R、X76D-X209W-X222Q、X76D-X209W-X249R、X78G/N-X87D/R-X118R、X78G/N-X87D/R-X129Q、X78G/N-X87D/R-X130A、X78G/N-X87D/R-X206L/Y、X78G/N-X87D/R-X209W、X78G/N-X87D/R-X222Q、X78G/N-X87D/R-X249R、X78G/N-X118R-X129Q、X78G/N-X118R-X209W、X78G/N-X118R-X222Q、X78G/N-X118R-X249R、X78G/N-X129Q-X130A、X78G/N-X209W-X222Q、X78G/N-X209W-X249R、X78G/N-X222Q-X249R、X87D/R-X118R-X206L、X87D/R-X118R-X209W、X87D/R-X118R-X249R、X87D/R-X206L/Y-X209W、X87D/R-X209W-X222Q、X87D/R-X209W-X249R、X87D/R-X222Q-X249R、X118R-X209W-X213A、X118R-X209W-X222Q、X118R-X209W-X249R、X118R-X222Q-X249R、X206L-X209W-X249R、X209W-X213A-X222Q、X209W-X213A-X249R、X209W-X222Q-X249R、及其组合；(v)S3V-I8V、S3V-P40E、S3V-S78G/N、S3V-S87D、S3V-G118R、S3V-S128R、S3V-P129Q、S3V-S130A、S3V-P210I、S3V-G211P、S3V-A215K、S3V-L217K、S3V-N261I、S3V-L262Q、I8V-P40E、I8V-N76D、I8V-S87D、I8V-G118R、I8V-S128R、I8V-P210I、I8V-A215K、I8V-N261I、N18R-S78N、N18R-S87R、N18R-G118R、N18R-Q206L、S24R-S78N、S24R-S87D/R、S24R-Q206L/Y、S24R-Y209W、S24R-T213A、S24R-M222Q、P40E-N76D、P40E-S87D/R、P40E-G118R、P40E-S128R、P40E-P210I、P40E-A215K、P40E-L217K、P40E-N261I、N76D-S87D、N76D-P210I、N76D-S128R、N76D-Q206F/R/M/Y、N76D-P210I、N76D-G211P、N76D-T213A、N76D-A215K、N76D-L217K、N76D-H249R、N76D-N261I、N76D-L262Q、S78G-Q206F/L/M/Y、S78G-P210I、S78G-N261I、S78G/N-S87D/R、S78G/N-G118R、S78G/N-S128L、S78G/N-P129Q、S78G/N-S130A、S78N-T213A、S78N-M222Q、S78N-H249R、S87D-G118R、S87D-S128L/R、S87D-P129Q、S87D-S130A、S87D/R-Y209W、S87D-P210I、S87D-A215K、S87D-L217K、S87D/R-M222Q、S87D/R-H249R、S87R-Q206F/L/M/R/Y、S87R-T213A、S87D/R-N261I、G118R-S128R、G118R-Q206L/R/Y、G118R-Y209W、G118R-P210I、G118R-G211P、G118R-T213A、G118R-L217K、G118R-M222Q、G118R-H249R、G118R-N261I、G118R-L262Q、S128L-Q206F/L/M/R/Y、S128L-Y209W、S128R-P210I、S128R-A215K、S128R-L217K、S128R-N261I、P129Q-Q206F/L/M/R/Y、P129Q-Y209W、S130A-Q206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-M222Q、Q206L/Y-H249R、Y209W-T213A、Y209W-M222Q、Y209W-H249R、P210I-L217K、P210I-N261I、T213A-M222Q、T213A-H249R、A215K-N261I、M222Q-H249R、及其组合；或(vi)S3V-N76D-G118R、N18R-S24R-Q206L/Y、N18R-S24R-Y209W、N18R-S24R-T213A、N18R-S24R-H249R、N18R-S87D/R-Y209W、N18R-G118R-Y209W、N18R-Q206L/Y-Y209W、N18R-Q206L/Y-H249R、N18R-Y209W-T213A、N18R-Y209W-M222Q、N18R-Y209W-H249R、N18R-T213A-H249R、S24R-N76D-S78G/N、S24R-N76D-S87D/R、S24R-N76D-G118R、S24R-N76D-Y209W、S24R-N76D-M222Q、S24R-N76D-H249R、S24R-S78G/N-S87D/R、S24R-S78G/N-G118R、S24R-S78G/N-Q206L、Y209W S24R-S78G/N-Y209W、S24R-S78G/N-M222Q、S24R-S78G/N-H249R、S24R-S87D/R-G118R、S24R-S87D/R-Y209W、S24R-S87D/R-M222Q、S24R-S87D/R-H249R、S24R-G118R-Y209W、S24R-G118R-M222Q、S24R-G118R-H249R、S24R-Q206L/Y-Y209W、S24R-Q206L/Y-H249R、S24R-Y209W-T213A、S24R-Y209W-M222Q、S24R-Y209W-H249R、S24R-T213A-H249R、S24R-M222Q-H249R、N76D-S78G/N-S87D/R、N76D-S78G/N-G118R、N76D-S78G/N-P129Q、N76D-S78G/N-S130A、N76D-S78G/N-Q206L、N76D-S78G/N-Y209W、N76D-S78G/N-M222Q、N76D-S78G/N-H249R、N76D-S87D/R-G118R、N76D-S87D/R-Q206L/Y、N76D-S87D/R-Y209W、N76D-S87D/R-H249R、N76D-G118R-S128R、N76D-G118R-Q206L/Y、N76D-G118R-Y209W、N76D-G118R-M222Q、N76D-G118R-H249R、N76D-Y209W-M222Q、N76D-Y209W-H249R、S78G/N-S87D/R-G118R、S78G/N-S87D/R-P129Q、S78G/N-S87D/R-S130A、S78G/N-S87D/R-Q206L/Y、S78G/N-S87D/R-Y209W、S78G/N-S87D/R-M222Q、S78G/N-S87D/R-H249R、S78G/N-G118R-P129Q、S78G/N-G118R-Y209W、S78G/N-G118R-M222Q、S78G/N-G118R-H249R、S78G/N-P129Q-S130A、S78G/N-Y209W-M222Q、S78G/N-Y209W-H249R、S78G/N-M222Q-H249R、S87D/R-G118R-Q206L、S87D/R-G118R-Y209W、S87D/R-G118R-H249R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Y209W-H249R、S87D/R-Y209W-M222Q、S87D/R-M222Q-H249R、G118R-Y209W-T213A、G118R-Y209W-M222Q、G118R-Y209W-H249R、G118R-M222Q-H249R、Q206L/Y-Y209W-H249R、Y209W-T213A-M222Q、Y209W-T213A-H249R、Y209W-M222Q-H249R、及其组合；其中所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)1、3、8、9、16、20、22、28、42、43、44、56、76、77、82、88、89、99、100、101、103、104、108、116、118、120、124、127、128、147、150、158、159、160、166、185、188、194、204、210、211、212、215、216、217、218、222、232、235、241、243、245、246、248、251、252、254、256、259、261、262、268、270、和271；(ii)X1V、X3I/T/V、X8V、X9G、X16T、X20E/R、X22L/W、X28T、X42I、X43R/S/Y、X44V、X56P、X76D、X77D、X82D、X88S、X89H、X99N、X100S、X101F/G/H/Q/T/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116L/M、X118A/R/V、X120R、X124M、X127S/T、X128K/L/R、X147I、X150T、X158E/T/V、X159D、X160Q、X166D/N、X185Y、X188D、X194D/P、X204D、X210I/L、X211P、X212D、X215K/V、X216Y、X217K、X218S、X222L/Q/S、X232V、X235T、X241K、X243S、X245R、X246V、X248D、X251R、X252I、X254T、X256P、X259G、X261I/N、X262Q、X268A、X270P/T、和X271D；或(iii)A1V、S3I/T/V、I8V、S9G、A16T、G20E/R、T22L/W、V28T、L42I、N43R/S/Y、I44V、S56P、N76D、N77D、L82D、A88S、E89H、S99N、G100S、S101F/G/H/Q/T/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116L/M、G118A/R/V、H120R、L124M、G127S/T、S128K/LR、V147I、V150T、A158E/T/V、G159D、S160Q、S166D/N、N185Y、S188D、A194D/P、N204D、P210I/L、G211P、S212D、A215K/V、S216Y、L217K、N218S、M222L/Q/S、A232V、K235T、W241K、N243S、Q245R、I246V、N248D、K251R、N252I、A254T、S256P、S259G、N261I/N、L262Q、V268A、A270P/T、和E271D；并且其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。又仍另一个实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含选自以下的两个或更多个取代：(i)3-8、3-40、3-78、3-87、3-118、3-128、3-129、3-130、3-210、3-211、3-215、3-217、3-261、3-262、8-40、8-76、8-87、8-118、8-128、8-210、8-215、8-261、18-78、18-87、18-118、18-206、24-87、24-206、24-209、24-213、24-222、40-76、40-87、40-118、40-128、40-210、40-215、40-217、40-261、76-210、76-211、76-213、76-215、76-217、76-249、76-261、76-262、78-87、78-118、78-210、78-213、78-222、78-249、87-206、87-209、87-213、87-215、87-217、87-222、87-249、87-261、118-206、118-209、118-210、118-211、118-213、118-215、118-217、118-222、118-249、118-261、118-262、128-209、128-210、128-215、128-217、128-261、129-206、129-209、130-206、130-209、206-213、206-249、209-213、209-249、210-217、210-261、213-222、213-249、215-261、222-249、及其组合；(ii)3-76-118、18-24-206、18-24-209、18-24-213、18-24-249、18-87-209、18-118-209、18-206-209、18-209-213、18-209-222、18-209-249、18-213-249、24-76-78、24-76-87、24-76-118、24-76-209、24-76-222、24-76-249、24-78-87、24-78-118、24-78-206、24-78-209、24-78-222、24-78-249、24-87-118、24-87-209、24-87-222、24-87-249、24-118-209、24-118-222、24-118-249、24-206-209、24-206-249、24-209-213、24-209-222、24-209-249、24-213-249、24-222-249、76-78-118、76-78-87、76-78-129、76-78-130、76-78-206、76-78-209、76-78-222、76-78-249、76-87-118、76-87-206、76-87-209、76-87-249、76-118-128、76-118-206、76-118-209、76-118-222、76-118-249、76-209-222、76-209-249、78-87-118、78-87-129、78-87-130、78-87-206、78-87-209、78-87-222、78-87-249、78-118-129、78-118-209、78-118-222、78-118-249、78-129-130、78-209-222、78-209-249、78-222-249、87-118-206、87-118-209、87-118-249、87-206-209、87-209-222、87-209-249、87-222-249、118-209-213、118-209-222、118-209-249、118-222-249、206-209-249、209-213-222、209-213-249、209-222-249、及其组合；(iii)X3V-X8V、X3V-X40E、X3V-X78G/N、X3V-X87D、X3V-X118R、X3V-X128R、X3V-X129Q、X3V-X130A、X3V-X210I、X3V-X211P、X3V-X215K、X3V-X217K、X3V-X261I、X3V-X262Q、X8V-X40E、X8V-X76D、X8V-X87D、X8V-X118R、X8V-X128R、X8V-X210I、X8V-X215K、X8V-X261I、X18R-X78N、X18R-X87R、X18R-X118R、X18R-X206L、X24R-S78N、X24R-X87D/R、X24R-X206L/Y、X24R-X209W、X24R-X213A、X24R-X222Q、X40E-X76D、X40E-X87D/R、X40E-X118R、X40E-X128R、X40E-X210I、X40E-X215K、X40E-X217K、X40E-X261I、X76D-X87D、X76D-X128R、X76D-X206F/R/M/Y、X76D-X210I、X76D-X211P、X76D-X213A、X76D-X215K、X76D-X217K、X76D-X249R、X76D-X261I、X76D-X262Q、X78G-X206F/L/M/Y、X78G-X210I、X78G-X261I、X78G/N-X87D/R、X78G/N-X118R、X78G/N-X128L、X78G/N-X129Q、X78G/N-X130A、X78N-X213A、X78N-X222Q、X78N-X249R、X87D-X118R、X87D-X128L/R、X87D-X129Q、X87D-X130A、X87D/R-X209W、X87D-X210I、X87D-X215K、X87D-X217K、X87D/R-X222Q、X87D/R-X249R、X87R-X206F/L/M/R/Y、X87R-X213A、X87D/R-X261I、X118R-X128R、X118R-X206F/M/L/R/Y、X118R-X209W、X118R-X210II、X118R-X211P、X118R-X213A、X118R-X215K、X118R-X217K、X118R-X222Q、X118R-X249R、X118R-X261I、X118R-X262Q、X128L-X206F/L/M/R/Y、X128L-X209W、X128R-P210I、X128R-A215K、X128R-L217K、X128R-N261I、X129Q-X206F/L/M/R/Y、X129Q-X209W、X130A-X206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、X206L/Y-X213A、X206L/Y-X222Q、X206L/Y-X249R、X209W-X213A、X209W-X222Q、X209W-X249R、X210I-X217K、X210I-X261I、X213A-X222Q、X213A-X249R、X215K-X261I、X222Q-X249R、及其组合；(iv)X3V-X76D-X118R、X18R-X24R-X206L/Y、X18R-X24R-X209W、X18R-X24R-X213A、X18R-X24R-X249R、X18R-X87D/R-X209W、X18R-X118R-X209W、X18R-X206L/Y-X209W、X18R-X206L/Y-X249R、X18R-X209W-X213A、X18R-X209W-X222Q、X18R-X209W-X249R、X18R-X213A-X249R、X24R-X76D-X78G/N、X24R-X76D-X87D/R、X24R-X76D-X118R、X24R-X76D-X209W、X24R-X76D-X222Q、X24R-X76D-X249R、X24R-X78G/N-X87D/R、X24R-X78G/N-X118R、X24R-X78G/N-X206L/Y、X24R-X78G/N-X209W、X24R-X78G/N-X222Q、X24R-X78G/N-X249R、X24R-X87D/R-X118R、X24R-X87D/R-X209W、X24R-X87D/R-X222Q、X24R-X87D/R-X249R、X24R-X118R-X209W、X24R-X118R-X222Q、X24R-X118R-X249R、X24R-X206L-X209W、X24R-X206L/Y-X249R、X24R-X209W-X213A、X24R-X209W-X222Q、X24R-X209W-X249R、X24R-X213A-X249R、X24R-X222Q-X249R、X76D-X78G/N-X87D/R、X76D-X78G/N-X118R、X76D-X78G/N-X129Q、X76D-X78G/N-X130A、X76D-X78G/N-X206L、X76D-X78G/N-X209W、X76D-X78G/N-X222Q、X76D-X78G/N-X249R、X76D-X87D/R-X118R、X76D-X87D/R-X206L/Y、X76D-X87D/R-X209W、X76D-X87D/R-X249R、X76D-X118R-X128R、X76D-X118R-X206L/Y、X76D-X118R-X209W、X76D-X118R-X222Q、X76D-X118R-X249R、X76D-X209W-X222Q、X76D-X209W-X249R、X78G/N-X87D/R-X118R、X78G/N-X87D/R-X129Q、X78G/N-X87D/R-X130A、X78G/N-X87D/R-X206L/Y、X78G/N-X87D/R-X209W、X78G/N-X87D/R-X222Q、X78G/N-X87D/R-X249R、X78G/N-X118R-X129Q、X78G/N-X118R-X209W、X78G/N-X118R-X222Q、X78G/N-X118R-X249R、X78G/N-X129Q-X130A、X78G/N-X209W-X222Q、X78G/N-X209W-X249R、X78G/N-X222Q-X249R、X87D/R-X118R-X206L、X87D/R-X118R-X209W、X87D/R-X118R-X249R、X87D/R-X206L/Y-X209W、X87D/R-X209W-X222Q、X87D/R-X209W-X249R、X87D/R-X222Q-X249R、X118R-X209W-X213A、X118R-X209W-X222Q、X118R-X209W-X249R、X118R-X222Q-X249R、X206L-X209W-X249R、X209W-X213A-X222Q、X209W-X213A-X249R、X209W-X222Q-X249R、及其组合；(v)S3V-I8V、S3V-P40E、S3V-S78G/N、S3V-S87D、S3V-G118R、S3V-S128R、S3V-P129Q、S3V-S130A、S3V-P210I、S3V-G211P、S3V-A215K、S3V-L217K、S3V-N261I、S3V-L262Q、I8V-P40E、I8V-N76D、I8V-S87D、I8V-G118R、I8V-S128R、I8V-P210I、I8V-A215K、I8V-N261I、N18R-S78N、N18R-S87R、N18R-G118R、N18R-Q206L、S24R-S78N、S24R-S87D/R、S24R-Q206L/Y、S24R-Y209W、S24R-T213A、S24R-M222Q、P40E-N76D、P40E-S87D/R、P40E-G118R、P40E-S128R、P40E-P210I、P40E-A215K、P40E-L217K、P40E-N261I、N76D-S87D、N76D-P210I、N76D-S128R、N76D-Q206F/R/M/Y、N76D-P210I、N76D-G211P、N76D-T213A、N76D-A215K、N76D-L217K、N76D-H249R、N76D-N261I、N76D-L262Q、S78G-Q206F/L/M/Y、S78G-P210I、S78G-N261I、S78G/N-S87D/R、S78G/N-G118R、S78G/N-S128L、S78G/N-P129Q、S78G/N-S130A、S78N-T213A、S78N-M222Q、S78N-H249R、S87D-G118R、S87D-S128L/R、S87D-P129Q、S87D-S130A、S87D/R-Y209W、S87D-P210I、S87D-A215K、S87D-L217K、S87D/R-M222Q、S87D/R-H249R、S87R-Q206F/L/M/R/Y、S87R-T213A、S87D/R-N261I、G118R-S128R、G118R-Q206L/R/Y、G118R-Y209W、G118R-P210I、G118R-G211P、G118R-T213A、G118R-L217K、G118R-M222Q、G118R-H249R、G118R-N261I、G118R-L262Q、S128L-Q206F/L/M/R/Y、S128L-Y209W、S128R-P210I、S128R-A215K、S128R-L217K、S128R-N261I、P129Q-Q206F/L/M/R/Y、P129Q-Y209W、S130A-Q206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-M222Q、Q206L/Y-H249R、Y209W-T213A、Y209W-M222Q、Y209W-H249R、P210I-L217K、P210I-N261I、T213A-M222Q、T213A-H249R、A215K-N261I、M222Q-H249R、及其组合；或(vi)S3V-N76D-G118R、N18R-S24R-Q206L/Y、N18R-S24R-Y209W、N18R-S24R-T213A、N18R-S24R-H249R、N18R-S87D/R-Y209W、N18R-G118R-Y209W、N18R-Q206L/Y-Y209W、N18R-Q206L/Y-H249R、N18R-Y209W-T213A、N18R-Y209W-M222Q、N18R-Y209W-H249R、N18R-T213A-H249R、S24R-N76D-S78G/N、S24R-N76D-S87D/R、S24R-N76D-G118R、S24R-N76D-Y209W、S24R-N76D-M222Q、S24R-N76D-H249R、S24R-S78G/N-S87D/R、S24R-S78G/N-G118R、S24R-S78G/N-Q206L、Y209W S24R-S78G/N-Y209W、S24R-S78G/N-M222Q、S24R-S78G/N-H249R、S24R-S87D/R-G118R、S24R-S87D/R-Y209W、S24R-S87D/R-M222Q、S24R-S87D/R-H249R、S24R-G118R-Y209W、S24R-G118R-M222Q、S24R-G118R-H249R、S24R-Q206L/Y-Y209W、S24R-Q206L/Y-H249R、S24R-Y209W-T213A、S24R-Y209W-M222Q、S24R-Y209W-H249R、S24R-T213A-H249R、S24R-M222Q-H249R、N76D-S78G/N-S87D/R、N76D-S78G/N-G118R、N76D-S78G/N-P129Q、N76D-S78G/N-S130A、N76D-S78G/N-Q206L、N76D-S78G/N-Y209W、N76D-S78G/N-M222Q、N76D-S78G/N-H249R、N76D-S87D/R-G118R、N76D-S87D/R-Q206L/Y、N76D-S87D/R-Y209W、N76D-S87D/R-H249R、N76D-G118R-S128R、N76D-G118R-Q206L/Y、N76D-G118R-Y209W、N76D-G118R-M222Q、N76D-G118R-H249R、N76D-Y209W-M222Q、N76D-Y209W-H249R、S78G/N-S87D/R-G118R、S78G/N-S87D/R-P129Q、S78G/N-S87D/R-S130A、S78G/N-S87D/R-Q206L/Y、S78G/N-S87D/R-Y209W、S78G/N-S87D/R-M222Q、S78G/N-S87D/R-H249R、S78G/N-G118R-P129Q、S78G/N-G118R-Y209W、S78G/N-G118R-M222Q、S78G/N-G118R-H249R、S78G/N-P129Q-S130A、S78G/N-Y209W-M222Q、S78G/N-Y209W-H249R、S78G/N-M222Q-H249R、S87D/R-G118R-Q206L、S87D/R-G118R-Y209W、S87D/R-G118R-H249R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Y209W-H249R、S87D/R-Y209W-M222Q、S87D/R-M222Q-H249R、G118R-Y209W-T213A、G118R-Y209W-M222Q、G118R-Y209W-H249R、G118R-M222Q-H249R、Q206L/Y-Y209W-H249R、Y209W-T213A-M222Q、Y209W-T213A-H249R、Y209W-M222Q-H249R、及其组合；其中所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)3、8、22、28、43、76、89、99、101、103、104、108、116、118、124、127、128、147、150、158、159、166、188、194、210、211、212、215、217、222、232、235、243、245、246、261、262、270、和271；(ii)X3T/V、X8V、X22W、X28T、X43S、X76D、X89H、X99N、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116M、X118R、X124M、X127T、X128L、X147I、X150T、X158E/T、X159D、X166D、X188D、X194D/P、X210I/L、X211P、X212D、X215V、X217K、X222Q/S、X232V、X235T、X243S、X245R、X246V、X261I、X262Q、X270T、和X271D；或(iii)S3T/V、I8V、T22W、V28T、N43S、N76D、E89H、S99N、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116M、G118R、L124M、G127T、S128L、V147I、V150T、A158E/T、G159D、S166D、S188D、A194D/P、P210I/L、G211P、S212D、A215V、L217K、M222Q/S、A232V、K235T、N243S、Q245R、I246V、N261I、L262Q、A270T、和E271D；并且其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含选自以下的两个或更多个取代：(i)3-8、3-40、3-78、3-87、3-118、3-128、3-129、3-130、3-210、3-211、3-215、3-217、3-261、3-262、8-40、8-76、8-87、8-118、8-128、8-210、8-215、8-261、18-78、18-87、18-118、18-206、24-87、24-206、24-209、24-213、24-222、40-76、40-87、40-118、40-128、40-210、40-215、40-217、40-261、76-210、76-211、76-213、76-215、76-217、76-249、76-261、76-262、78-87、78-118、78-210、78-213、78-222、78-249、87-206、87-209、87-213、87-215、87-217、87-222、87-249、87-261、118-206、118-209、118-210、118-211、118-213、118-215、118-217、118-222、118-249、118-261、118-262、128-209、128-210、128-215、128-217、128-261、129-206、129-209、130-206、130-209、206-213、206-249、209-213、209-249、210-217、210-261、213-222、213-249、215-261、222-249、及其组合；(ii)3-76-118、18-24-206、18-24-209、18-24-213、18-24-249、18-87-209、18-118-209、18-206-209、18-209-213、18-209-222、18-209-249、18-213-249、24-76-78、24-76-87、24-76-118、24-76-209、24-76-222、24-76-249、24-78-87、24-78-118、24-78-206、24-78-209、24-78-222、24-78-249、24-87-118、24-87-209、24-87-222、24-87-249、24-118-209、24-118-222、24-118-249、24-206-209、24-206-249、24-209-213、24-209-222、24-209-249、24-213-249、24-222-249、76-78-118、76-78-87、76-78-129、76-78-130、76-78-206、76-78-209、76-78-222、76-78-249、76-87-118、76-87-206、76-87-209、76-87-249、76-118-128、76-118-206、76-118-209、76-118-222、76-118-249、76-209-222、76-209-249、78-87-118、78-87-129、78-87-130、78-87-206、78-87-209、78-87-222、78-87-249、78-118-129、78-118-209、78-118-222、78-118-249、78-129-130、78-209-222、78-209-249、78-222-249、87-118-206、87-118-209、87-118-249、87-206-209、87-209-222、87-209-249、87-222-249、118-209-213、118-209-222、118-209-249、118-222-249、206-209-249、209-213-222、209-213-249、209-222-249、及其组合；(iii)X3V-X8V、X3V-X40E、X3V-X78G/N、X3V-X87D、X3V-X118R、X3V-X128R、X3V-X129Q、X3V-X130A、X3V-X210I、X3V-X211P、X3V-X215K、X3V-X217K、X3V-X261I、X3V-X262Q、X8V-X40E、X8V-X76D、X8V-X87D、X8V-X118R、X8V-X128R、X8V-X210I、X8V-X215K、X8V-X261I、X18R-X78N、X18R-X87R、X18R-X118R、X18R-X206L、X24R-S78N、X24R-X87D/R、X24R-X206L/Y、X24R-X209W、X24R-X213A、X24R-X222Q、X40E-X76D、X40E-X87D/R、X40E-X118R、X40E-X128R、X40E-X210I、X40E-X215K、X40E-X217K、X40E-X261I、X76D-X87D、X76D-X128R、X76D-X206F/R/M/Y、X76D-X210I、X76D-X211P、X76D-X213A、X76D-X215K、X76D-X217K、X76D-X249R、X76D-X261I、X76D-X262Q、X78G-X206F/L/M/Y、X78G-X210I、X78G-X261I、X78G/N-X87D/R、X78G/N-X118R、X78G/N-X128L、X78G/N-X129Q、X78G/N-X130A、X78N-X213A、X78N-X222Q、X78N-X249R、X87D-X118R、X87D-X128L/R、X87D-X129Q、X87D-X130A、X87D/R-X209W、X87D-X210I、X87D-X215K、X87D-X217K、X87D/R-X222Q、X87D/R-X249R、X87R-X206F/L/M/R/Y、X87R-X213A、X87D/R-X261I、X118R-X128R、X118R-X206F/M/L/R/Y、X118R-X209W、X118R-X210II、X118R-X211P、X118R-X213A、X118R-X215K、X118R-X217K、X118R-X222Q、X118R-X249R、X118R-X261I、X118R-X262Q、X128L-X206F/L/M/R/Y、X128L-X209W、X128R-P210I、X128R-A215K、X128R-L217K、X128R-N261I、X129Q-X206F/L/M/R/Y、X129Q-X209W、X130A-X206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、X206L/Y-X213A、X206L/Y-X222Q、X206L/Y-X249R、X209W-X213A、X209W-X222Q、X209W-X249R、X210I-X217K、X210I-X261I、X213A-X222Q、X213A-X249R、X215K-X261I、X222Q-X249R、及其组合；(iv)X3V-X76D-X118R、X18R-X24R-X206L/Y、X18R-X24R-X209W、X18R-X24R-X213A、X18R-X24R-X249R、X18R-X87D/R-X209W、X18R-X118R-X209W、X18R-X206L/Y-X209W、X18R-X206L/Y-X249R、X18R-X209W-X213A、X18R-X209W-X222Q、X18R-X209W-X249R、X18R-X213A-X249R、X24R-X76D-X78G/N、X24R-X76D-X87D/R、X24R-X76D-X118R、X24R-X76D-X209W、X24R-X76D-X222Q、X24R-X76D-X249R、X24R-X78G/N-X87D/R、X24R-X78G/N-X118R、X24R-X78G/N-X206L/Y、X24R-X78G/N-X209W、X24R-X78G/N-X222Q、X24R-X78G/N-X249R、X24R-X87D/R-X118R、X24R-X87D/R-X209W、X24R-X87D/R-X222Q、X24R-X87D/R-X249R、X24R-X118R-X209W、X24R-X118R-X222Q、X24R-X118R-X249R、X24R-X206L-X209W、X24R-X206L/Y-X249R、X24R-X209W-X213A、X24R-X209W-X222Q、X24R-X209W-X249R、X24R-X213A-X249R、X24R-X222Q-X249R、X76D-X78G/N-X87D/R、X76D-X78G/N-X118R、X76D-X78G/N-X129Q、X76D-X78G/N-X130A、X76D-X78G/N-X206L、X76D-X78G/N-X209W、X76D-X78G/N-X222Q、X76D-X78G/N-X249R、X76D-X87D/R-X118R、X76D-X87D/R-X206L/Y、X76D-X87D/R-X209W、X76D-X87D/R-X249R、X76D-X118R-X128R、X76D-X118R-X206L/Y、X76D-X118R-X209W、X76D-X118R-X222Q、X76D-X118R-X249R、X76D-X209W-X222Q、X76D-X209W-X249R、X78G/N-X87D/R-X118R、X78G/N-X87D/R-X129Q、X78G/N-X87D/R-X130A、X78G/N-X87D/R-X206L/Y、X78G/N-X87D/R-X209W、X78G/N-X87D/R-X222Q、X78G/N-X87D/R-X249R、X78G/N-X118R-X129Q、X78G/N-X118R-X209W、X78G/N-X118R-X222Q、X78G/N-X118R-X249R、X78G/N-X129Q-X130A、X78G/N-X209W-X222Q、X78G/N-X209W-X249R、X78G/N-X222Q-X249R、X87D/R-X118R-X206L、X87D/R-X118R-X209W、X87D/R-X118R-X249R、X87D/R-X206L/Y-X209W、X87D/R-X209W-X222Q、X87D/R-X209W-X249R、X87D/R-X222Q-X249R、X118R-X209W-X213A、X118R-X209W-X222Q、X118R-X209W-X249R、X118R-X222Q-X249R、X206L-X209W-X249R、X209W-X213A-X222Q、X209W-X213A-X249R、X209W-X222Q-X249R、及其组合；(v)S3V-I8V、S3V-P40E、S3V-S78G/N、S3V-S87D、S3V-G118R、S3V-S128R、S3V-P129Q、S3V-S130A、S3V-P210I、S3V-G211P、S3V-A215K、S3V-L217K、S3V-N261I、S3V-L262Q、I8V-P40E、I8V-N76D、I8V-S87D、I8V-G118R、I8V-S128R、I8V-P210I、I8V-A215K、I8V-N261I、N18R-S78N、N18R-S87R、N18R-G118R、N18R-Q206L、S24R-S78N、S24R-S87D/R、S24R-Q206L/Y、S24R-Y209W、S24R-T213A、S24R-M222Q、P40E-N76D、P40E-S87D/R、P40E-G118R、P40E-S128R、P40E-P210I、P40E-A215K、P40E-L217K、P40E-N261I、N76D-S87D、N76D-P210I、N76D-S128R、N76D-Q206F/R/M/Y、N76D-P210I、N76D-G211P、N76D-T213A、N76D-A215K、N76D-L217K、N76D-H249R、N76D-N261I、N76D-L262Q、S78G-Q206F/L/M/Y、S78G-P210I、S78G-N261I、S78G/N-S87D/R、S78G/N-G118R、S78G/N-S128L、S78G/N-P129Q、S78G/N-S130A、S78N-T213A、S78N-M222Q、S78N-H249R、S87D-G118R、S87D-S128L/R、S87D-P129Q、S87D-S130A、S87D/R-Y209W、S87D-P210I、S87D-A215K、S87D-L217K、S87D/R-M222Q、S87D/R-H249R、S87R-Q206F/L/M/R/Y、S87R-T213A、S87D/R-N261I、G118R-S128R、G118R-Q206L/R/Y、G118R-Y209W、G118R-P210I、G118R-G211P、G118R-T213A、G118R-L217K、G118R-M222Q、G118R-H249R、G118R-N261I、G118R-L262Q、S128L-Q206F/L/M/R/Y、S128L-Y209W、S128R-P210I、S128R-A215K、S128R-L217K、S128R-N261I、P129Q-Q206F/L/M/R/Y、P129Q-Y209W、S130A-Q206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-M222Q、Q206L/Y-H249R、Y209W-T213A、Y209W-M222Q、Y209W-H249R、P210I-L217K、P210I-N261I、T213A-M222Q、T213A-H249R、A215K-N261I、M222Q-H249R、及其组合；或(vi)S3V-N76D-G118R、N18R-S24R-Q206L/Y、N18R-S24R-Y209W、N18R-S24R-T213A、N18R-S24R-H249R、N18R-S87D/R-Y209W、N18R-G118R-Y209W、N18R-Q206L/Y-Y209W、N18R-Q206L/Y-H249R、N18R-Y209W-T213A、N18R-Y209W-M222Q、N18R-Y209W-H249R、N18R-T213A-H249R、S24R-N76D-S78G/N、S24R-N76D-S87D/R、S24R-N76D-G118R、S24R-N76D-Y209W、S24R-N76D-M222Q、S24R-N76D-H249R、S24R-S78G/N-S87D/R、S24R-S78G/N-G118R、S24R-S78G/N-Q206L、Y209W S24R-S78G/N-Y209W、S24R-S78G/N-M222Q、S24R-S78G/N-H249R、S24R-S87D/R-G118R、S24R-S87D/R-Y209W、S24R-S87D/R-M222Q、S24R-S87D/R-H249R、S24R-G118R-Y209W、S24R-G118R-M222Q、S24R-G118R-H249R、S24R-Q206L/Y-Y209W、S24R-Q206L/Y-H249R、S24R-Y209W-T213A、S24R-Y209W-M222Q、S24R-Y209W-H249R、S24R-T213A-H249R、S24R-M222Q-H249R、N76D-S78G/N-S87D/R、N76D-S78G/N-G118R、N76D-S78G/N-P129Q、N76D-S78G/N-S130A、N76D-S78G/N-Q206L、N76D-S78G/N-Y209W、N76D-S78G/N-M222Q、N76D-S78G/N-H249R、N76D-S87D/R-G118R、N76D-S87D/R-Q206L/Y、N76D-S87D/R-Y209W、N76D-S87D/R-H249R、N76D-G118R-S128R、N76D-G118R-Q206L/Y、N76D-G118R-Y209W、N76D-G118R-M222Q、N76D-G118R-H249R、N76D-Y209W-M222Q、N76D-Y209W-H249R、S78G/N-S87D/R-G118R、S78G/N-S87D/R-P129Q、S78G/N-S87D/R-S130A、S78G/N-S87D/R-Q206L/Y、S78G/N-S87D/R-Y209W、S78G/N-S87D/R-M222Q、S78G/N-S87D/R-H249R、S78G/N-G118R-P129Q、S78G/N-G118R-Y209W、S78G/N-G118R-M222Q、S78G/N-G118R-H249R、S78G/N-P129Q-S130A、S78G/N-Y209W-M222Q、S78G/N-Y209W-H249R、S78G/N-M222Q-H249R、S87D/R-G118R-Q206L、S87D/R-G118R-Y209W、S87D/R-G118R-H249R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Y209W-H249R、S87D/R-Y209W-M222Q、S87D/R-M222Q-H249R、G118R-Y209W-T213A、G118R-Y209W-M222Q、G118R-Y209W-H249R、G118R-M222Q-H249R、Q206L/Y-Y209W-H249R、Y209W-T213A-M222Q、Y209W-T213A-H249R、Y209W-M222Q-H249R、及其组合；其中所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)1、3、8、9、16、20、22、28、42、43、44、56、76、77、82、88、100、101、103、104、108、116、118、120、124、127、128、147、150、158、159、160、166、185、194、204、210、211、212、215、216、217、218、222、232、241、245、248、251、252、254、256、259、261、262、268、270、271；(ii)X1V、X3I/V、X8V、X9G、X16T、X20E/R、X22L/W、X28T、X42I、X43R/Y、X44V、X56P、X76D、X77D、X82D、X88S、X100S、X101G/H/Q/T/V、X103A、X104I、X108S、X116L/M、X118A/R/V、X120R、X124M、X127S/T、X128K/L/R、X147I、X150T、X158E/V、X160Q、X166D/N、X185Y、X194D/P、X204D、X210I、X211P、X212D、X215K/V、X216Y、X217K、X218S、X222Q/S、X232V、X241K、X245R、X248D、X251R、X252I、X254T、X256P、X259G、X261I、X262Q、X268A、X270P、和X271D；或(iii)A1V、S3I/V、I8V、S9G、A16T、G20E/R、T22L/W、V28T、L42I、N43R/Y、I44V、S56P、N76D、N77D、L82D、A88S、G100S、S101G/H/Q/T/V、S103A、V104I、A108S、N116L/M、G118A/R/V、H120R、L124M、G127S/T、S128K/LR、V147I、V150T、A158E/V、S160Q、S166D/N、N185Y、A194D/P、N204D、P210I、G211P、S212D、A215K/V、S216Y、L217K、N218S、M222Q/S、A232V、W241K、Q245R、N248D、K251R、N252I、A254T、S256P、S259G、N261I、L262Q、V268A、A270P、和E271D；并且其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。又另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含选自以下的两个或更多个取代：(i)3-8、3-40、3-78、3-87、3-118、3-128、3-129、3-130、3-210、3-211、3-215、3-217、3-261、3-262、8-40、8-76、8-87、8-118、8-128、8-210、8-215、8-261、18-78、18-87、18-118、18-206、24-87、24-206、24-209、24-213、24-222、40-76、40-87、40-118、40-128、40-210、40-215、40-217、40-261、76-210、76-211、76-213、76-215、76-217、76-249、76-261、76-262、78-87、78-118、78-210、78-213、78-222、78-249、87-206、87-209、87-213、87-215、87-217、87-222、87-249、87-261、118-206、118-209、118-210、118-211、118-213、118-215、118-217、118-222、118-249、118-261、118-262、128-209、128-210、128-215、128-217、128-261、129-206、129-209、130-206、130-209、206-213、206-249、209-213、209-249、210-217、210-261、213-222、213-249、215-261、222-249、及其组合；(ii)3-76-118、18-24-206、18-24-209、18-24-213、18-24-249、18-87-209、18-118-209、18-206-209、18-209-213、18-209-222、18-209-249、18-213-249、24-76-78、24-76-87、24-76-118、24-76-209、24-76-222、24-76-249、24-78-87、24-78-118、24-78-206、24-78-209、24-78-222、24-78-249、24-87-118、24-87-209、24-87-222、24-87-249、24-118-209、24-118-222、24-118-249、24-206-209、24-206-249、24-209-213、24-209-222、24-209-249、24-213-249、24-222-249、76-78-118、76-78-87、76-78-129、76-78-130、76-78-206、76-78-209、76-78-222、76-78-249、76-87-118、76-87-206、76-87-209、76-87-249、76-118-128、76-118-206、76-118-209、76-118-222、76-118-249、76-209-222、76-209-249、78-87-118、78-87-129、78-87-130、78-87-206、78-87-209、78-87-222、78-87-249、78-118-129、78-118-209、78-118-222、78-118-249、78-129-130、78-209-222、78-209-249、78-222-249、87-118-206、87-118-209、87-118-249、87-206-209、87-209-222、87-209-249、87-222-249、118-209-213、118-209-222、118-209-249、118-222-249、206-209-249、209-213-222、209-213-249、209-222-249、及其组合；(iii)X3V-X8V、X3V-X40E、X3V-X78G/N、X3V-X87D、X3V-X118R、X3V-X128R、X3V-X129Q、X3V-X130A、X3V-X210I、X3V-X211P、X3V-X215K、X3V-X217K、X3V-X261I、X3V-X262Q、X8V-X40E、X8V-X76D、X8V-X87D、X8V-X118R、X8V-X128R、X8V-X210I、X8V-X215K、X8V-X261I、X18R-X78N、X18R-X87R、X18R-X118R、X18R-X206L、X24R-S78N、X24R-X87D/R、X24R-X206L/Y、X24R-X209W、X24R-X213A、X24R-X222Q、X40E-X76D、X40E-X87D/R、X40E-X118R、X40E-X128R、X40E-X210I、X40E-X215K、X40E-X217K、X40E-X261I、X76D-X87D、X76D-X128R、X76D-X206F/R/M/Y、X76D-X210I、X76D-X211P、X76D-X213A、X76D-X215K、X76D-X217K、X76D-X249R、X76D-X261I、X76D-X262Q、X78G-X206F/L/M/Y、X78G-X210I、X78G-X261I、X78G/N-X87D/R、X78G/N-X118R、X78G/N-X128L、X78G/N-X129Q、X78G/N-X130A、X78N-X213A、X78N-X222Q、X78N-X249R、X87D-X118R、X87D-X128L/R、X87D-X129Q、X87D-X130A、X87D/R-X209W、X87D-X210I、X87D-X215K、X87D-X217K、X87D/R-X222Q、X87D/R-X249R、X87R-X206F/L/M/R/Y、X87R-X213A、X87D/R-X261I、X118R-X128R、X118R-X206F/M/L/R/Y、X118R-X209W、X118R-X210II、X118R-X211P、X118R-X213A、X118R-X215K、X118R-X217K、X118R-X222Q、X118R-X249R、X118R-X261I、X118R-X262Q、X128L-X206F/L/M/R/Y、X128L-X209W、X128R-P210I、X128R-A215K、X128R-L217K、X128R-N261I、X129Q-X206F/L/M/R/Y、X129Q-X209W、X130A-X206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、X206L/Y-X213A、X206L/Y-X222Q、X206L/Y-X249R、X209W-X213A、X209W-X222Q、X209W-X249R、X210I-X217K、X210I-X261I、X213A-X222Q、X213A-X249R、X215K-X261I、X222Q-X249R、及其组合；(iv)X3V-X76D-X118R、X18R-X24R-X206L/Y、X18R-X24R-X209W、X18R-X24R-X213A、X18R-X24R-X249R、X18R-X87D/R-X209W、X18R-X118R-X209W、X18R-X206L/Y-X209W、X18R-X206L/Y-X249R、X18R-X209W-X213A、X18R-X209W-X222Q、X18R-X209W-X249R、X18R-X213A-X249R、X24R-X76D-X78G/N、X24R-X76D-X87D/R、X24R-X76D-X118R、X24R-X76D-X209W、X24R-X76D-X222Q、X24R-X76D-X249R、X24R-X78G/N-X87D/R、X24R-X78G/N-X118R、X24R-X78G/N-X206L/Y、X24R-X78G/N-X209W、X24R-X78G/N-X222Q、X24R-X78G/N-X249R、X24R-X87D/R-X118R、X24R-X87D/R-X209W、X24R-X87D/R-X222Q、X24R-X87D/R-X249R、X24R-X118R-X209W、X24R-X118R-X222Q、X24R-X118R-X249R、X24R-X206L-X209W、X24R-X206L/Y-X249R、X24R-X209W-X213A、X24R-X209W-X222Q、X24R-X209W-X249R、X24R-X213A-X249R、X24R-X222Q-X249R、X76D-X78G/N-X87D/R、X76D-X78G/N-X118R、X76D-X78G/N-X129Q、X76D-X78G/N-X130A、X76D-X78G/N-X206L、X76D-X78G/N-X209W、X76D-X78G/N-X222Q、X76D-X78G/N-X249R、X76D-X87D/R-X118R、X76D-X87D/R-X206L/Y、X76D-X87D/R-X209W、X76D-X87D/R-X249R、X76D-X118R-X128R、X76D-X118R-X206L/Y、X76D-X118R-X209W、X76D-X118R-X222Q、X76D-X118R-X249R、X76D-X209W-X222Q、X76D-X209W-X249R、X78G/N-X87D/R-X118R、X78G/N-X87D/R-X129Q、X78G/N-X87D/R-X130A、X78G/N-X87D/R-X206L/Y、X78G/N-X87D/R-X209W、X78G/N-X87D/R-X222Q、X78G/N-X87D/R-X249R、X78G/N-X118R-X129Q、X78G/N-X118R-X209W、X78G/N-X118R-X222Q、X78G/N-X118R-X249R、X78G/N-X129Q-X130A、X78G/N-X209W-X222Q、X78G/N-X209W-X249R、X78G/N-X222Q-X249R、X87D/R-X118R-X206L、X87D/R-X118R-X209W、X87D/R-X118R-X249R、X87D/R-X206L/Y-X209W、X87D/R-X209W-X222Q、X87D/R-X209W-X249R、X87D/R-X222Q-X249R、X118R-X209W-X213A、X118R-X209W-X222Q、X118R-X209W-X249R、X118R-X222Q-X249R、X206L-X209W-X249R、X209W-X213A-X222Q、X209W-X213A-X249R、X209W-X222Q-X249R、及其组合；(v)S3V-I8V、S3V-P40E、S3V-S78G/N、S3V-S87D、S3V-G118R、S3V-S128R、S3V-P129Q、S3V-S130A、S3V-P210I、S3V-G211P、S3V-A215K、S3V-L217K、S3V-N261I、S3V-L262Q、I8V-P40E、I8V-N76D、I8V-S87D、I8V-G118R、I8V-S128R、I8V-P210I、I8V-A215K、I8V-N261I、N18R-S78N、N18R-S87R、N18R-G118R、N18R-Q206L、S24R-S78N、S24R-S87D/R、S24R-Q206L/Y、S24R-Y209W、S24R-T213A、S24R-M222Q、P40E-N76D、P40E-S87D/R、P40E-G118R、P40E-S128R、P40E-P210I、P40E-A215K、P40E-L217K、P40E-N261I、N76D-S87D、N76D-P210I、N76D-S128R、N76D-Q206F/R/M/Y、N76D-P210I、N76D-G211P、N76D-T213A、N76D-A215K、N76D-L217K、N76D-H249R、N76D-N261I、N76D-L262Q、S78G-Q206F/L/M/Y、S78G-P210I、S78G-N261I、S78G/N-S87D/R、S78G/N-G118R、S78G/N-S128L、S78G/N-P129Q、S78G/N-S130A、S78N-T213A、S78N-M222Q、S78N-H249R、S87D-G118R、S87D-S128L/R、S87D-P129Q、S87D-S130A、S87D/R-Y209W、S87D-P210I、S87D-A215K、S87D-L217K、S87D/R-M222Q、S87D/R-H249R、S87R-Q206F/L/M/R/Y、S87R-T213A、S87D/R-N261I、G118R-S128R、G118R-Q206L/R/Y、G118R-Y209W、G118R-P210I、G118R-G211P、G118R-T213A、G118R-L217K、G118R-M222Q、G118R-H249R、G118R-N261I、G118R-L262Q、S128L-Q206F/L/M/R/Y、S128L-Y209W、S128R-P210I、S128R-A215K、S128R-L217K、S128R-N261I、P129Q-Q206F/L/M/R/Y、P129Q-Y209W、S130A-Q206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-M222Q、Q206L/Y-H249R、Y209W-T213A、Y209W-M222Q、Y209W-H249R、P210I-L217K、P210I-N261I、T213A-M222Q、T213A-H249R、A215K-N261I、M222Q-H249R、及其组合；或(vi)S3V-N76D-G118R、N18R-S24R-Q206L/Y、N18R-S24R-Y209W、N18R-S24R-T213A、N18R-S24R-H249R、N18R-S87D/R-Y209W、N18R-G118R-Y209W、N18R-Q206L/Y-Y209W、N18R-Q206L/Y-H249R、N18R-Y209W-T213A、N18R-Y209W-M222Q、N18R-Y209W-H249R、N18R-T213A-H249R、S24R-N76D-S78G/N、S24R-N76D-S87D/R、S24R-N76D-G118R、S24R-N76D-Y209W、S24R-N76D-M222Q、S24R-N76D-H249R、S24R-S78G/N-S87D/R、S24R-S78G/N-G118R、S24R-S78G/N-Q206L、Y209W S24R-S78G/N-Y209W、S24R-S78G/N-M222Q、S24R-S78G/N-H249R、S24R-S87D/R-G118R、S24R-S87D/R-Y209W、S24R-S87D/R-M222Q、S24R-S87D/R-H249R、S24R-G118R-Y209W、S24R-G118R-M222Q、S24R-G118R-H249R、S24R-Q206L/Y-Y209W、S24R-Q206L/Y-H249R、S24R-Y209W-T213A、S24R-Y209W-M222Q、S24R-Y209W-H249R、S24R-T213A-H249R、S24R-M222Q-H249R、N76D-S78G/N-S87D/R、N76D-S78G/N-G118R、N76D-S78G/N-P129Q、N76D-S78G/N-S130A、N76D-S78G/N-Q206L、N76D-S78G/N-Y209W、N76D-S78G/N-M222Q、N76D-S78G/N-H249R、N76D-S87D/R-G118R、N76D-S87D/R-Q206L/Y、N76D-S87D/R-Y209W、N76D-S87D/R-H249R、N76D-G118R-S128R、N76D-G118R-Q206L/Y、N76D-G118R-Y209W、N76D-G118R-M222Q、N76D-G118R-H249R、N76D-Y209W-M222Q、N76D-Y209W-H249R、S78G/N-S87D/R-G118R、S78G/N-S87D/R-P129Q、S78G/N-S87D/R-S130A、S78G/N-S87D/R-Q206L/Y、S78G/N-S87D/R-Y209W、S78G/N-S87D/R-M222Q、S78G/N-S87D/R-H249R、S78G/N-G118R-P129Q、S78G/N-G118R-Y209W、S78G/N-G118R-M222Q、S78G/N-G118R-H249R、S78G/N-P129Q-S130A、S78G/N-Y209W-M222Q、S78G/N-Y209W-H249R、S78G/N-M222Q-H249R、S87D/R-G118R-Q206L、S87D/R-G118R-Y209W、S87D/R-G118R-H249R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Y209W-H249R、S87D/R-Y209W-M222Q、S87D/R-M222Q-H249R、G118R-Y209W-T213A、G118R-Y209W-M222Q、G118R-Y209W-H249R、G118R-M222Q-H249R、Q206L/Y-Y209W-H249R、Y209W-T213A-M222Q、Y209W-T213A-H249R、Y209W-M222Q-H249R、及其组合；其中所述变体具有蛋白水解活性，并且所述变体的氨基酸序列进一步包含选自以下的一个或多个取代：(i)3、76、101、103、104、118、127、128、166、210、217、222、和261；(ii)X3V X76D、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X118R、X127T、X128L/R、X166D/N、X210I、X217K、X222Q/S、和X261I；或(ii)S3V、N76D、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、G118R、G127T、S128L/R、S166D/N、P210I、L217K、M222Q/S、和N261I；并且其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
仍另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的一个、两个、三个、四个、五个或六个位置处的取代：76、87、118、128、129、和130；X76D、X87D/R/T、X118A/R/V、X128K/L/R、X129Q/R、和X130A/Q；或N76D、S87D/R/T、G118A/R/V、S128K/L/R、P129Q/R和S130A/Q，上述取代与在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代组合：(i)1、3、8、9、16、18、20、22、24、28、40、42、43、44、56、77、78、82、88、89、99、100、101、103、104、108、116、120、124、127、147、150、158、159、160、166、185、188、194、204、206、209、210、211、212、213、215、216、217、218、222、232、235、241、243、245、246、248、249、251、252、254、256、259、261、262、268、270、和271；(ii)X1V、X3I/T/V、X8V、X9G、X16T、X18K/R、X20E/R、X22L/W、X24F/L/P/R、X28T、X40E、X42I、X43R/S/Y、X44V、X56P、X77D、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/T/V/W/Y、X82D、X88S、X89H、X99N、X100S、X101F/G/H/Q/T/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116L/M、X120R、X124M、X127S/T、X147I、X150T、X158E/T/V、X159D、X160Q、X166D/N、X185Y、X188D、X194D/P、X204D、X206A/D/F/G/H/L/M/N/P/R/S/Y、X209W、X210I、X211P、X212D、X213A、X215K/V、X216Y、X217K、X218S、X222L/Q/S、X232V、X235T、X241K、X243S、X245R、X246V、X248D、X249N/R、X251R、X252I、X254T、X256P、X259G、X261I、X262Q、X268A、X270P/T、和X271D；或(iii)A1V、S3I/T/V、I8V、S9G、A16T、N18K/R、G20E/R、T22L/W、S24F/L/P/R、V28T、P40E、L42I、N43R/S、I44V、S56P、N77D、S78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/T/V/W/Y、L82D、A88S、E89H、S99N、G100S、S101F/G/H/Q/T/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116L/M、H120R、L124M、G127S/T、V147I、V150T、A158E/T/V、G159D、S160Q、S166D/N、N185Y、S188D、A194D/P、N204D、Q206A/D/F/G/H/L/M/N/P/R/S/Y、Y209W、P210I、G211P、S212D、T213A、A215K/V、S216Y、L217K、N218S、M222L/Q/S、A232V、K235T、W241K、N243S、Q245R、I246V、N248D、H249N/R、K251R、N252I、A254T、S256P、S259G、N261I、L262Q、V268A、A270P/T、和E271D；其中X是任何氨基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。又仍另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个、三个、四个、五个或六个位置处的取代：76、87、118、128、129、和130；X76D、X87D/R、X118R/V、X128L、X129Q、和X130A；或N76D、S87D/R、G118R/V、S128L、P129Q和S130A，上述取代与在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代组合：(i)1、3、9、16、18、20、22、24、28、42、43、44、56、77、78、99、100、101、103、104、108、116、120、124、127、150、158、159、166、185、188、194、204、206、209、212、213、217、218、222、232、235、243、245、246、249、251、254、259、268、和270；(ii)X1V、X3T/V、X9G、X16T、X18K/R、X20E/R、X22L、X24F/P/R、X28T、X42I、X43R/S、X44V、X56P、X77D、X78N、X99N、X100S、X101F/G/H/T/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116L/M、X120R、X124M、X127T、X150T、X158E/T/V、X159D、X166D/N、X185Y、X188D、X194D、X204D、X206L/Y、X209W、X212D、X213A、X217K、X218S、X222L/Q/S、X232V、X235T、X243S、X245R、X246V、X249N/R、X251R、X254T、X259G、X268A、和X270P/T；或(iii)A1V、S3T/V、S9G、A16T、N18K/R、G20E/R、T22L、S24F/P/R、V28T、L42I、N43R/S、I44V、S56P、N77D、S78N、S99N、G100S、S101F/G/H/T/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116L/M、H120R、L124M、G127T、V150T、A158E/T/V、G159D、S166D/N、N185Y、S188D、A194D、N204D、Q206L/Y、Y209W、S212D、T213A、L217K、N218S、M222L/Q/S、A232V、K235T、N243S、Q245R、I246V、H249N/R、K251R、A254T、S259G、V268A、和A270P/T；其中X是任何氨基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。甚至另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的一个、两个、三个、四个、五个或六个位置处的取代：76、87、118、128、129、和130；X76D、X87D/R/T、X118A/R/V、X128K/L/R、X129Q/R、和X130A/Q；或N76D、S87D/R/T、G118A/R/V、S128K/L/R、P129Q/R和S130A/Q，上述取代与在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代组合：(i)3、18、24、40、78、101、103、104、127、166、206、209、210、211、213、217、222、249、261、和262；(ii)X3V、X18R、X24R、X40E、X78G/N、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X127T、X166D/N、X206L/R/Y、X209W、X210I、X211P、X213A、X217K、X222Q/S、X249N/R、X261I、和X262Q；或(iii)S3V、N18R、S24R、P40E、S78G/N、G127T、S166D/N、Q206L/R/Y、Y209W、P210I、G211P、T213A、L217K、M222Q/S、H249N/R、N261I、和L262Q；其中X是任何氨基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。仍又另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个、三个、四个、五个或六个位置处的取代：76、87、118、128、129、和130；X76D、X87D/R、X118R/V、X128L、X129Q、和X130A；或N76D、S87D/R、G118R/V、S128L、P129Q和S130A，上述取代与在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代组合：(i)18、24、78、101、103、104、127、166、206、209、213、222、和249；(ii)X18R、X24R、X78N、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X127T、X166D/N、X206L/Y、X209W、X213A、X222Q/S、和X249N/R；或(iii)N18R、S24R、S78N、S166D/N、Q206L、Y209W、T213A、M222Q/S、和H249N/R；其中X是任何氨基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。又甚至另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在以下每个位置处的取代：76、87、118、128、129、和130；X76D、X87R、X118R、X128L、X129Q、和X130A；或N76D、S87R、G118R、S128L、P129Q和S130A，上述取代与在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代组合：(i)3、8、18、22、24、28、40、43、78、89、99、101、103、104、108、116、124、127、147、150、158、159、166、188、194、206、209、210、211、212、213、215、217、222、232、235、243、245、246、249、261、262、270、和271；(ii)X3T/V、X8V、X18R、X22W、X24R、X28T、X40E、X43S、X78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/T/V/W/Y、X89H、X99N、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116M、X124M、X127T、X147I、X150T、X158E/T、X159D、X166D、X188D、X194D/P、X206A/D/F/G/H/LM/N/P/R/S/Y、X209W、X210I/L、X211P、X212D、X213A、X215V、X217K、X222Q/S、X232V、X235T、X243S、X245R、X246V、X249N/R、X261I、X262Q、X270T、和X271D；或(iii)S3T/V、I8V、N18R、T22W、S24R、V28T、P40E、N43S、S78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/T/V/W/Y、E89H、S99N、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116M、L124M、G127T、V147I、V150T、A158E/T、G159D、S166D、S188D、A194D/P、Q206A/D/F/G/H/L/M/N/P/R/S/Y、Y209W、P210I/L、G211P、S212D、T213A、A215V、L217K、M222Q/S、A232V、K235T、N243S、Q245R、I246V、H249N/R、N261I、L262Q、A270T、和E271D；其中X是任何氨基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。甚至仍又另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在以下每个位置处的取代：76、87、118、128、129、和130；X76D、X87R、X118R、X128L、X129Q、和X130A；或N76D、S87R、G118R、S128L、P129Q和S130A，上述取代与在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代组合：(i)3、18、24、28、43、78、99、100、101、103、104、108、116、124、127、150、158、159、166、188、194、206、209、212、213、217、222、232、235、243、245、246、249、和270；(ii)X3T/V、X18R、X24R、X28T、X43S、X78N、X99N、X100S、X101F/G/V、X103A/D/P、X104I、X108S、X116M、X124M、X127T、X150T、X158E/T、X159D、X166D、X188D、X194D、X206L、X209W、X212D、X213A、X217K、X222Q/S、X232V、X235T、X243S、X245R、X246V、X249N/R、和X270T；或(iii)S3V/T、N18R、S24R、V28T、N43S、S78N、S99N、G100S、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116M、L124M、G127T、V150T、A158E/T、G159D、S166D、S188D、A194D、Q206L、Y209W、S212D、T213A、L217K、M222Q/S、A232V、K235T、N243S、Q245R、I246V、H249N/R、和A270T；其中X是任何氨基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。甚至又仍另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在以下每个位置处的取代：76、87、118、128、129、和130；X76D、X87R、X118R、X128L、X129Q、和X130A；或N76D、S87R、G118R、S128L、P129Q和S130A，上述取代与在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代组合：(i)3、18、24、78、206、和249；(ii)X3V、X18R、X24R、X78G/N、X206L/R/Y、和X249N/R；或(iii)S3V、N18R、S24R、S78G/N、Q206L/R/Y、和H249N/R；其中X是任何氨基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。仍另外的实施例提供了一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在以下每个位置处的取代：76、87、118、128、129、和130；X76N、X87R、X118R、X128L、X129Q、和X130A；或N76D、S87D/R、G118R、S128L、P129Q和S130A，上述取代与在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代组合：(i)18、24、78、206、和249；(ii)X18R、X24R、X78N、X206L、和X249N/R；或(iii)N18R、S24R、S78N、Q206L、和H249N/R；其中X是任何氨基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
在另一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体进一步包含在选自以下的两个或更多个位置处的取代：(i)3-8、3-40、3-78、3-87、3-118、3-128、3-129、3-130、3-210、3-211、3-215、3-217、3-261、3-262、8-40、8-76、8-87、8-118、8-128、8-210、8-215、8-261、18-78、18-87、18-118、18-206、24-87、24-206、24-209、24-213、24-222、40-76、40-87、40-118、40-128、40-210、40-215、40-217、40-261、76-210、76-211、76-213、76-215、76-217、76-249、76-261、76-262、78-87、78-118、78-210、78-213、78-222、78-249、87-206、87-209、87-213、87-215、87-217、87-222、87-249、87-261、118-206、118-209、118-210、118-211、118-213、118-215、118-217、118-222、118-249、118-261、118-262、128-209、128-210、128-215、128-217、128-261、129-206、129-209、130-206、130-209、206-213、206-249、209-213、209-249、210-217、210-261、213-222、213-249、215-261、222-249、及其组合；(ii)3-76-118、18-24-206、18-24-209、18-24-213、18-24-249、18-87-209、18-118-209、18-206-209、18-209-213、18-209-222、18-209-249、18-213-249、24-76-78、24-76-87、24-76-118、24-76-209、24-76-222、24-76-249、24-78-87、24-78-118、24-78-206、24-78-209、24-78-222、24-78-249、24-87-118、24-87-209、24-87-222、24-87-249、24-118-209、24-118-222、24-118-249、24-206-209、24-206-249、24-209-213、24-209-222、24-209-249、24-213-249、24-222-249、76-78-118、76-78-87、76-78-129、76-78-130、76-78-206、76-78-209、76-78-222、76-78-249、76-87-118、76-87-206、76-87-209、76-87-249、76-118-128、76-118-206、76-118-209、76-118-222、76-118-249、76-209-222、76-209-249、78-87-118、78-87-129、78-87-130、78-87-206、78-87-209、78-87-222、78-87-249、78-118-129、78-118-209、78-118-222、78-118-249、78-129-130、78-209-222、78-209-249、78-222-249、87-118-206、87-118-209、87-118-249、87-206-209、87-209-222、87-209-249、87-222-249、118-209-213、118-209-222、118-209-249、118-222-249、206-209-249、209-213-222、209-213-249、209-222-249、及其组合；(iii)X3V-X8V、X3V-X40E、X3V-X78G/N、X3V-X87D、X3V-X118R、X3V-X128R、X3V-X129Q、X3V-X130A、X3V-X210I、X3V-X211P、X3V-X215K、X3V-X217K、X3V-X261I、X3V-X262Q、X8V-X40E、X8V-X76D、X8V-X87D、X8V-X118R、X8V-X128R、X8V-X210I、X8V-X215K、X8V-X261I、X18R-X78N、X18R-X87R、X18R-X118R、X18R-X206L、X24R-S78N、X24R-X87D/R、X24R-X206L/Y、X24R-X209W、X24R-X213A、X24R-X222Q、X40E-X76D、X40E-X87D/R、X40E-X118R、X40E-X128R、X40E-X210I、X40E-X215K、X40E-X217K、X40E-X261I、X76D-X87D、X76D-X128R、X76D-X206F/R/M/Y、X76D-X210I、X76D-X211P、X76D-X213A、X76D-X215K、X76D-X217K、X76D-X249R、X76D-X261I、X76D-X262Q、X78G-X206F/L/M/Y、X78G-X210I、X78G-X261I、X78G/N-X87D/R、X78G/N-X118R、X78G/N-X128L、X78G/N-X129Q、X78G/N-X130A、X78N-X213A、X78N-X222Q、X78N-X249R、X87D-X118R、X87D-X128L/R、X87D-X129Q、X87D-X130A、X87D/R-X209W、X87D-X210I、X87D-X215K、X87D-X217K、X87D/R-X222Q、X87D/R-X249R、X87R-X206F/L/M/R/Y、X87R-X213A、X87D/R-X261I、X118R-X128R、X118R-X206F/M/L/R/Y、X118R-X209W、X118R-X210II、X118R-X211P、X118R-X213A、X118R-X215K、X118R-X217K、X118R-X222Q、X118R-X249R、X118R-X261I、X118R-X262Q、X128L-X206F/L/M/R/Y、X128L-X209W、X128R-P210I、X128R-A215K、X128R-L217K、X128R-N261I、X129Q-X206F/L/M/R/Y、X129Q-X209W、X130A-X206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、X206L/Y-X213A、X206L/Y-X222Q、X206L/Y-X249R、X209W-X213A、X209W-X222Q、X209W-X249R、X210I-X217K、X210I-X261I、X213A-X222Q、X213A-X249R、X215K-X261I、X222Q-X249R、及其组合；(iv)X3V-X76D-X118R、X18R-X24R-X206L/Y、X18R-X24R-X209W、X18R-X24R-X213A、X18R-X24R-X249R、X18R-X87D/R-X209W、X18R-X118R-X209W、X18R-X206L/Y-X209W、X18R-X206L/Y-X249R、X18R-X209W-X213A、X18R-X209W-X222Q、X18R-X209W-X249R、X18R-X213A-X249R、X24R-X76D-X78G/N、X24R-X76D-X87D/R、X24R-X76D-X118R、X24R-X76D-X209W、X24R-X76D-X222Q、X24R-X76D-X249R、X24R-X78G/N-X87D/R、X24R-X78G/N-X118R、X24R-X78G/N-X206L/Y、X24R-X78G/N-X209W、X24R-X78G/N-X222Q、X24R-X78G/N-X249R、X24R-X87D/R-X118R、X24R-X87D/R-X209W、X24R-X87D/R-X222Q、X24R-X87D/R-X249R、X24R-X118R-X209W、X24R-X118R-X222Q、X24R-X118R-X249R、X24R-X206L-X209W、X24R-X206L/Y-X249R、X24R-X209W-X213A、X24R-X209W-X222Q、X24R-X209W-X249R、X24R-X213A-X249R、X24R-X222Q-X249R、X76D-X78G/N-X87D/R、X76D-X78G/N-X118R、X76D-X78G/N-X129Q、X76D-X78G/N-X130A、X76D-X78G/N-X206L、X76D-X78G/N-X209W、X76D-X78G/N-X222Q、X76D-X78G/N-X249R、X76D-X87D/R-X118R、X76D-X87D/R-X206L/Y、X76D-X87D/R-X209W、X76D-X87D/R-X249R、X76D-X118R-X128R、X76D-X118R-X206L/Y、X76D-X118R-X209W、X76D-X118R-X222Q、X76D-X118R-X249R、X76D-X209W-X222Q、X76D-X209W-X249R、X78G/N-X87D/R-X118R、X78G/N-X87D/R-X129Q、X78G/N-X87D/R-X130A、X78G/N-X87D/R-X206L/Y、X78G/N-X87D/R-X209W、X78G/N-X87D/R-X222Q、X78G/N-X87D/R-X249R、X78G/N-X118R-X129Q、X78G/N-X118R-X209W、X78G/N-X118R-X222Q、X78G/N-X118R-X249R、X78G/N-X129Q-X130A、X78G/N-X209W-X222Q、X78G/N-X209W-X249R、X78G/N-X222Q-X249R、X87D/R-X118R-X206L、X87D/R-X118R-X209W、X87D/R-X118R-X249R、X87D/R-X206L/Y-X209W、X87D/R-X209W-X222Q、X87D/R-X209W-X249R、X87D/R-X222Q-X249R、X118R-X209W-X213A、X118R-X209W-X222Q、X118R-X209W-X249R、X118R-X222Q-X249R、X206L-X209W-X249R、X209W-X213A-X222Q、X209W-X213A-X249R、X209W-X222Q-X249R、及其组合；或(v)S3V-I8V、S3V-P40E、S3V-S78G/N、S3V-S87D、S3V-G118R、S3V-S128R、S3V-P129Q、S3V-S130A、S3V-P210I、S3V-G211P、S3V-A215K、S3V-L217K、S3V-N261I、S3V-L262Q、I8V-P40E、I8V-N76D、I8V-S87D、I8V-G118R、I8V-S128R、I8V-P210I、I8V-A215K、I8V-N261I、N18R-S78N、N18R-S87R、N18R-G118R、N18R-Q206L、S24R-S78N、S24R-S87D/R、S24R-Q206L/Y、S24R-Y209W、S24R-T213A、S24R-M222Q、P40E-N76D、P40E-S87D/R、P40E-G118R、P40E-S128R、P40E-P210I、P40E-A215K、P40E-L217K、P40E-N261I、N76D-S87D、N76D-P210I、N76D-S128R、N76D-Q206F/R/M/Y、N76D-P210I、N76D-G211P、N76D-T213A、N76D-A215K、N76D-L217K、N76D-H249R、N76D-N261I、N76D-L262Q、S78G-Q206F/L/M/Y、S78G-P210I、S78G-N261I、S78G/N-S87D/R、S78G/N-G118R、S78G/N-S128L、S78G/N-P129Q、S78G/N-S130A、S78N-T213A、S78N-M222Q、S78N-H249R、S87D-G118R、S87D-S128L/R、S87D-P129Q、S87D-S130A、S87D/R-Y209W、S87D-P210I、S87D-A215K、S87D-L217K、S87D/R-M222Q、S87D/R-H249R、S87R-Q206F/L/M/R/Y、S87R-T213A、S87D/R-N261I、G118R-S128R、G118R-Q206L/R/Y、G118R-Y209W、G118R-P210I、G118R-G211P、G118R-T213A、G118R-L217K、G118R-M222Q、G118R-H249R、G118R-N261I、G118R-L262Q、S128L-Q206F/L/M/R/Y、S128L-Y209W、S128R-P210I、S128R-A215K、S128R-L217K、S128R-N261I、P129Q-Q206F/L/M/R/Y、P129Q-Y209W、S130A-Q206F/L/M/R/Y、S130A-Y209W、Q206L/Y-T213A、Q206L/Y-M222Q、Q206L/Y-H249R、Y209W-T213A、Y209W-M222Q、Y209W-H249R、P210I-L217K、P210I-N261I、T213A-M222Q、T213A-H249R、A215K-N261I、M222Q-H249R、及其组合；或(vi)S3V-N76D-G118R、N18R-S24R-Q206L/Y、N18R-S24R-Y209W、N18R-S24R-T213A、N18R-S24R-H249R、N18R-S87D/R-Y209W、N18R-G118R-Y209W、N18R-Q206L/Y-Y209W、N18R-Q206L/Y-H249R、N18R-Y209W-T213A、N18R-Y209W-M222Q、N18R-Y209W-H249R、N18R-T213A-H249R、S24R-N76D-S78G/N、S24R-N76D-S87D/R、S24R-N76D-G118R、S24R-N76D-Y209W、S24R-N76D-M222Q、S24R-N76D-H249R、S24R-S78G/N-S87D/R、S24R-S78G/N-G118R、S24R-S78G/N-Q206L、Y209W S24R-S78G/N-Y209W、S24R-S78G/N-M222Q、S24R-S78G/N-H249R、S24R-S87D/R-G118R、S24R-S87D/R-Y209W、S24R-S87D/R-M222Q、S24R-S87D/R-H249R、S24R-G118R-Y209W、S24R-G118R-M222Q、S24R-G118R-H249R、S24R-Q206L/Y-Y209W、S24R-Q206L/Y-H249R、S24R-Y209W-T213A、S24R-Y209W-M222Q、S24R-Y209W-H249R、S24R-T213A-H249R、S24R-M222Q-H249R、N76D-S78G/N-S87D/R、N76D-S78G/N-G118R、N76D-S78G/N-P129Q、N76D-S78G/N-S130A、N76D-S78G/N-Q206L、N76D-S78G/N-Y209W、N76D-S78G/N-M222Q、N76D-S78G/N-H249R、N76D-S87D/R-G118R、N76D-S87D/R-Q206L/Y、N76D-S87D/R-Y209W、N76D-S87D/R-H249R、N76D-G118R-S128R、N76D-G118R-Q206L/Y、N76D-G118R-Y209W、N76D-G118R-M222Q、N76D-G118R-H249R、N76D-Y209W-M222Q、N76D-Y209W-H249R、S78G/N-S87D/R-G118R、S78G/N-S87D/R-P129Q、S78G/N-S87D/R-S130A、S78G/N-S87D/R-Q206L/Y、S78G/N-S87D/R-Y209W、S78G/N-S87D/R-M222Q、S78G/N-S87D/R-H249R、S78G/N-G118R-P129Q、S78G/N-G118R-Y209W、S78G/N-G118R-M222Q、S78G/N-G118R-H249R、S78G/N-P129Q-S130A、S78G/N-Y209W-M222Q、S78G/N-Y209W-H249R、S78G/N-M222Q-H249R、S87D/R-G118R-Q206L、S87D/R-G118R-Y209W、S87D/R-G118R-H249R、S87D/R-Q206L/Y-Y209W、S87D/R-Y209W-H249R、S87D/R-Y209W-M222Q、S87D/R-M222Q-H249R、G118R-Y209W-T213A、G118R-Y209W-M222Q、G118R-Y209W-H249R、G118R-M222Q-H249R、Q206L/Y-Y209W-H249R、Y209W-T213A-M222Q、Y209W-T213A-H249R、Y209W-M222Q-H249R、及其组合。
又另一个实施例涉及一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个或更多个位置处的取代：(i)S3V-S78N、N18R-G20R、N18R-S24R、N18R-N43R、N18R-R45T、N18R-H249R、G20R-N43R、G20R-R45T、G20R-H249R、T22L-S24F、T22L-S78N、T22L-S166D、T22L-T213A、S24R/F-S78N、S24R-N43R、S24R-Y209W、S24F-S166D、S24R/F-T213A、S24R-H249R、S24R-M222Q、N43R-Y209W、N43R-H249R、N43R-R45T、R45T-H249R、S78G/N-Q206Y/F、S78N-S166D、S78N-T213A、S101A-S188D、S101A-P210I、S101A-A232V、S103A-S188D、S103A-P210I、S103A-A232V、V104I-S188D、V104I-P210I、V104I-A232V、S166D-T213A、S188D-P210I、S188D-A232V、S188D-Q245R、P210I-A232V、A232V-Q245R、Q206Y-T213A、Q206L/Y-M222Q、Q206L-H249R、M222Q-H249R、Y209W-M222Q、T213A-H249R、Y209W-H249R、及其组合；(ii)S3V-S78N-S87R、S3V-S78N-G118R、N18R-S24R-N76D、N18R-N76D-H249R、S24R-N43R-N76D、S24R-N76D-H249R、S24F-S78N-G118R、S24F-G118R-S166D、S78N-G118R-S166D、T22L-S24F-G118R、T22L-S78N-G118R、T22L-G118R-S166D、T22L-G118R-T213A、S24F-G118R-T213A、S78N-G118R-T213A、N18R-G20R-N76D、N18R-N43R-N76D、N18R-R45T-N76D、G20R-N76D-H249R、G20R-N43R-N76D、G20R-R45T-N76D、S24R-Y209W-G118R、S24R-G118R-M222Q、S24R-G118R-H249R、N43R-G118R-Y209W、N43R-R45T-N76D、N43R-N76D-H249R、R45T-N76D-H249R、N76D-S101A-S188D、N76D-S101A-P210I、N76D-S101A-A232V、N76D-S103A-S188D、N76D-S103A-P210I、N76D-S103A-A232V、N76D-V104I-S188D、N76D-V104I-P210I、N76D-V104I-A232V、N76D-S188D-P210I、N76D-S188D-A232V、N76D-P210I-A232V、N76D-Q206Y-T213A、N76D-S24R-Q206Y、N76D-S24R-M222Q、N76D-Q206Y-M222Q、N76D-T213A-H249R、N76D-T213A-M222Q、N76D-M222Q-H249R、N76D-S78N-S87R、N76D-S78N-G118R、N76D-S78N-S128L、N76D-S78N-P129Q、N76D-S78N-S130A、N76D-S87R-Q206L、N76D-G118R-Q206L、N76D-S128L-Q206L、N76D-P129Q-Q206L、N76D-S130A-Q206L、N76D-Q206L-H249R、S78G-S87R-Q206Y/F、S78G-G118R-Q206Y/F、S78N-G118R-Y209W、S78N-S87D-G118R、S78N-S87D-Q206Y、S87D-Y209W-G118R、S87D-G118R-M222Q、S87D-G118R-H249R、G118R-Q206L-M222Q、G118R-Y209W-M222Q、G118R-M222Q-H249R、Y209W-G118R-M222Q、Y209W-G118R-H249R、及其组合；或(iii)S3V-S78N-S87R-G118R、S3V-N76D-S78N-G118R-P129Q、N18R-S24R-N76D-H249R-N18R-S24R-N76D-S78N-Q206L、S24F-S78N-G118R-S166D、S24R-N76D-S78N-Q206L-H249R、S24R-S78N-G118R-Q206L-M222Q、S24R-N43R-G118R-Y209W、T22L-S24F-S78N-G118R-S166D-T213A、N18R-G20R-N43R-R45T-N76D-H249R、N76D-S101A-S103A-V104I-S188D-P210I-A232V-Q245R、G20R-S24R-N43R-N76D、N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A、N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L、N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L、S24R-N76D-S87R-Q206Y-T213A-M222Q-H249R、S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-M222Q-H249R、N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Y209W、N76D-S78N-S87D-Q206Y、和S78G-S87R-G118R-Q206Y/F；其中所述在两个或更多个位置处的取代进一步与选自以下的一个或多个取代组合：76、87、118、128、129、和130；X76D、X87R、X118R、X128L、X129Q、和X130A；或N76D、S87R、G118R、S128L、P129Q和S130A；其中X是任何氨基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
甚至另外的实施例涉及一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含在选自以下的两个或更多个位置处的取代：(i)N18R-G20R、N18R-S24R、N18R-N43R、N18R-R45T、N18R-H249R、G20R-N43R、G20R-R45T、G20R-H249R、T22L-S24F、T22L-S78N、T22L-S166D、T22L-T213A、S24R/F-S78N、S24R-Y209W、S24F-S166D、S24R/F-T213A、S24R-H249R、S24R-M222Q、N43R-H249R、N43R-R45T、R45T-H249R、S78N-S166D、S78N-Q206L、S78N-Y209W、S78N-T213A、S101A-S188D、S101A-P210I、S101A-A232V、S103A-S188D、S103A-P210I、S103A-A232V、V104I-S188D、V104I-P210I、V104I-A232V、S166D-T213A、S188D-P210I、S188D-A232V、S188D-Q245R、P210I-A232V、A232V-Q245R、Q206Y-T213A、Q206Y-M222Q、M222Q-H249R、Y209W-M222Q、T213A-H249R、Y209W-H249R、及其组合；或(ii)N18R-S24R-N76D、N18R-N76D-H249R、S24R-N76D-H249R、S24F-S78N-G118R、S24F-G118R-S166D、S78N-G118R-S166D、T22L-S24F-G118R、T22L-S78N-G118R、T22L-G118R-S166D、T22L-G118R-T213A、S24F-G118R-T213A、S78N-G118R-T213A、N18R-G20R-N76D、N18R-N43R-N76D、N18R-R45T-N76D、G20R-N76D-H249R、G20R-N43R-N76D、G20R-R45T-N76D、N43R-R45T-N76D、N43R-N76D-H249R、R45T-N76D-H249R、N76D-S101A-S188D、N76D-S101A-P210I、N76D-S101A-A232V、N76D-S103A-S188D、N76D-S103A-P210I、N76D-S103A-A232V、N76D-V104I-S188D、N76D-V104I-P210I、N76D-V104I-A232V、N76D-S188D-P210I、N76D-S188D-A232V、N76D-P210I-A232V、N76D-Q206Y-T213A、N76D-S24R-Q206Y、N76D-S24R-M222Q、N76D-Q206Y-M222Q、N76D-T213A-H249R、N76D-T213A-M222Q、N76D-M222Q-H249R、N76D-S78N-S87R、N76D-S78N-G118R、N76D-S78N-S128L、N76D-S78N-P129Q、N76D-S78N-S130A、N76D-S87R-Q206L、N76D-G118R-Q206L、N76D-S128L-Q206L、N76D-P129Q-Q206L、N76D-S130A-Q206L、S24R-Y209W-G118R、S24R-G118R-M222Q、S24R-G118R-H249R、Y209W-G118R-M222Q、Y209W-G118R-H249R、S78N-S87D-G118R、S87D-Y209W-G118R、S87D-G118R-M222Q、S87D-G118R-H249R、G118R-Y209W-M222Q、G118R-M222Q-H249R、及其组合；其中所述在两个或更多个位置处的取代进一步与以下每个位置处的一个或多个取代组合：76、87、118、128、129、和130；X76N、X87R、X118R、X128L、X129Q、和X130A；或N76D、S87D/R、G118R、S128L、P129Q和S130A；其中X是任何氨基酸，并且所述变体具有蛋白水解活性；并且进一步地，其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
另外的实施例涉及一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含如下氨基酸序列，该氨基酸序列包含选自以下的两个或更多个取代：S3V-N76D、S24R-N76D、S24R-G118R、S24R-H249R、N76D-S78G、N76D-S78N、N76D-Q206L、N76D-Y209W、N76D-M222Q、S78N-Q206L、S78N-Y209W、N76D-S78N-Y209W、N76D-S78N-Q206L、N76D-Q206L-Y209W、及其组合；其中所述在两个或更多个位置处的取代进一步与选自以下的一个或多个取代组合：(i)A1V、S3I/T/V、I8V、S9G、A16T、N18K/R、G20E/R、T22L/W、S24F/L/P/R、V28T、P40E、L42I、N43R/S、I44V、S56P、N77D、S78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/T/V/W/Y、L82D、A88S、E89H、S99N、G100S、S101F/G/H/Q/T/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116L/M、H120R、L124M、G127S/T、V147I、V150T、A158E/T/V、G159D、S160Q、S166D/N、N185Y、S188D、A194D/P、N204D、Q206A/D/F/G/H/L/M/N/P/R/S/Y、Y209W、P210I、G211P、S212D、T213A、A215K/V、S216Y、L217K、N218S、M222L/Q/S、A232V、K235T、W241K、N243S、Q245R、I246V、N248D、H249N/R、K251R、N252I、A254T、S256P、S259G、N261I、L262Q、V268A、A270P/T、和E271D；(ii)S3T/V、I8V、N18R、T22W、S24R、V28T、P40E、N43S、S78A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/T/V/W/Y、E89H、S99N、S101F/G/V、S103A/D/P、V104I、A108S、N116M、L124M、G127T、V147I、V150T、A158E/T、G159D、S166D、S188D、A194D/P、Q206A/D/F/G/H/L/M/N/P/R/S/Y、Y209W、P210I/L、G211P、S212D、T213A、A215V、L217K、M222Q/S、A232V、K235T、N243S、Q245R、I246V、H249N/R、N261I、L262Q、A270T、和E271D；(iii)S3V、I8V、S24R、P40E、N76D、S78G/N、S87D/R、G118R、S128L/R、P129Q、S130A、Q206F/L/M/Y、Y209W、P210I、T213A、A215K、L217K、M222Q、H249R、和N261I；(iv)I8V、P40E、S87D/R、S128L/R、P129Q、S130A、P210I、T213A、A215K、L217K、和N261I；(v)S3V、N18R、S24R、P40E、S78G/N、G127T、S166D/N、Q206L/R/Y、Y209W、P210I、G211P、T213A、L217K、M222Q/S、H249N/R、N261I、和L262Q；或(vi)S3V、N18R、S24R、S78G/N、Q206L/R/Y、和H249N/R；其中所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
又甚至另外的实施例涉及一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含选自以下的氨基酸取代的组合：N18R-S87R-G118R-S166N-N204D-Q206L-Y209W；N18R-S24R-L42I-G118R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-Y209W-T213A-H249R；N18R-S24R-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206Y-Y209W-T213A-H249R；S24R-S87D-G118R-Y209W-T213A-H249R；S9G-N18R-S24R-N76D-G118R-S166N-Q206L-H249R；N18R-G118R-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；S24R-S87R-S166N；N18R-S24R-S87R-Q206L-Y209W-T213A；N18R-S24R-G118R-A158V-Y209W；N18R-S24R-S87D-Q206L-Y209W-M222Q-H249R；N18R-S24R-S87R-G127T；S24R-S166N-Y209W-T213A；N76D-S78N-G118R-Y209W-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-Y209W-H249R-S259G；N18R-S24R-S87D-N185Y-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；S24R-G118R-G127T-Y209W；A1V-N18R-S24R-S56P-G127T-Q206L-Y209W；S87R-Y209W；N18R-S87D-Y209W-M222Q-H249R；N18R-S24R-G118R-S128L-P129Q-S130A-S166D-Y209W-T213A；S87D-S166D-T213A-H249R；N18R-S24P-S87D-S166N-Q206L-Y209W-M222Q-H249R；N76D-S166N-Y209W-T213A-H249R；S24R-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-G118R-Q206L-Y209W；N18R-S24R-S166D-Q206Y-H249R-A254T；N18R-S24R-S78N-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-G118R-G127T-Y209W；S24R-N76D-G118R-S166N-Q206L-Y209W；S24R-N76D-S87R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18K-S87R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-S87R-Y209W；N18R-S78N-G118R-Y209W-T213A-M222Q-H249R-A270P；N18R-S166N-Y209W-T213A-M222Q；N76D-S78N-S87R-S103P-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-N243S；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249N；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-S99N-G118R-S128L-P129Q-S130A-A158T-Q206L-I246V-H249R；S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N76D-S78N-G118R-Q206L-H249R；N18R-I44V-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-G118R-Q206L；A16T-N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-K235T；S24R-N76D-S78N-Q206L-H249R；S24R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A；S24R-N76D-S78N-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-A270T；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-M222Q-H249R；N76D-S78N-S87R-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-Q206L-K251R；N76D-S78N-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A；N76D-S78N-H120R-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-G20E-N76D-S78N-G118R-H249R；S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A；N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；S24R-N76D-S78N-G118R-Q206L；N18R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-V268A；N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-N218S-M222Q-H249R；N18R-S24R-N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A；N18R-S24R-N76D-S78N-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-H249R；N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-M222Q；S24R-N76D-S87R-Q206Y-T213A-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S87D-Q206L-Y209W-T213A-H249R；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-M222Q；S24R-N76D-S78N-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-P129Q-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S130A-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；G20R-S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；G20R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-Y209W-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-N116L-G118R-Y209W-M222Q；G20R-S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-N116L-G118R-Y209W-M222Q；N18R-N76D-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-Y209W-H249R；N18R-S87D-S166N-Q206L-Y209W；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-Y209W-T213A；N18R-S24R-S166D-Q206Y-H249R；S24R-S78N-S87R-S166D-Q206L-Y209W-H249R；S3V-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-S101V-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-G127T-P129R-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-S212D；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-S166D-Q206L；S3V-N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-T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ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。仍另外的实施例涉及一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含选自以下的氨基酸取代的组合：N18R-S87R-G118R-S166N-N204D-Q206L-Y209W；N18R-S24R-L42I-G118R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-Y209W-T213A-H249R；N18R-S24R-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206Y-Y209W-T213A-H249R；S24R-S87D-G118R-Y209W-T213A-H249R；S9G-N18R-S24R-N76D-G118R-S166N-Q206L-H249R；N18R-G118R-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；S24R-S87R-S166N；N18R-S24R-S87R-Q206L-Y209W-T213A；N18R-S24R-G118R-A158V-Y209W；N18R-S24R-S87D-Q206L-Y209W-M222Q-H249R；N18R-S24R-S87R-G127T；S24R-S166N-Y209W-T213A；N76D-S78N-G118R-Y209W-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-Y209W-H249R-S259G；N18R-S24R-S87D-N185Y-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；S24R-G118R-G127T-Y209W；A1V-N18R-S24R-S56P-G127T-Q206L-Y209W；S87R-Y209W；N18R-S87D-Y209W-M222Q-H249R；N18R-S24R-G118R-S128L-P129Q-S130A-S166D-Y209W-T213A；S87D-S166D-T213A-H249R；N18R-S24P-S87D-S166N-Q206L-Y209W-M222Q-H249R；N76D-S166N-Y209W-T213A-H249R；S24R-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-G118R-Q206L-Y209W；N18R-S24R-S166D-Q206Y-H249R-A254T；N18R-S24R-S78N-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-G118R-G127T-Y209W；S24R-N76D-G118R-S166N-Q206L-Y209W；S24R-N76D-S87R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18K-S87R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-S87R-Y209W；N18R-S78N-G118R-Y209W-T213A-M222Q-H249R-A270P；N18R-S166N-Y209W-T213A-M222Q；N76D-S78N-S87R-S103P-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-N243S；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249N；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-S99N-G118R-S128L-P129Q-S130A-A158T-Q206L-I246V-H249R；S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N76D-S78N-G118R-Q206L-H249R；N18R-I44V-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-G118R-Q206L；A16T-N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-K235T；S24R-N76D-S78N-Q206L-H249R；S24R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A；S24R-N76D-S78N-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-A270T；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-M222Q-H249R；N76D-S78N-S87R-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-Q206L-K251R；N76D-S78N-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A；N76D-S78N-H120R-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-G20E-N76D-S78N-G118R-H249R；S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A；N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；S24R-N76D-S78N-G118R-Q206L；N18R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-V268A；N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-N218S-M222Q-H249R；N18R-S24R-N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A；N18R-S24R-N76D-S78N-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-H249R；N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-M222Q；S24R-N76D-S87R-Q206Y-T213A-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S87D-Q206L-Y209W-T213A-H249R；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-M222Q；S24R-N76D-S78N-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-P129Q-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S130A-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；G20R-S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；G20R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-Y209W-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-N116L-G118R-Y209W-M222Q；G20R-S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-N116L-G118R-Y209W-M222Q；N18R-N76D-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-Y209W-H249R；N18R-S87D-S166N-Q206L-Y209W；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-Y209W-T213A；N18R-S24R-S166D-Q206Y-H249R；S24R-S78N-S87R-S166D-Q206L-Y209W-H249R；S3V-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-S101V-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-G127T-P129R-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-S212D；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-S166D-Q206L；S3V-N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R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S128R-P129Q-S130A-A215V-E271D；T22W-N76D-S78N-S87R-G118R-S128R-P129Q-S130A-A194P-E271D；P40E-N76D-S78G-G118R-S128R-Q206Y-L262Q；S3V-P40E-N76D-G118R-G211P-L217K-N261I；I8V-P40E-N76D-S78G-G118R-Q206Y-L217K；S3V-I8V-N76D-S78G-S87D-G118R-P210I-A215K-N252I；S3V-P40E-N76D-G118R-S160Q-P210I-L217K-N261I；I8V-N76D-S78G-G118R-S160Q-Q206Y-N252I-N261I；I8V-P40E-N76D-G118R-P210I-A215K-N261I；I8V-P40E-N76D-S78G-G118R-Q206Y-P210I-A215K-N261I；S3V-N76D-G118R-S160Q-G211P-A215V-L262Q；S3V-N76D-S87D-G118R-S128R-P210I-G211P-N261I-L262Q；S3V-P40E-N76D-G118R-Q206Y-P210I-G211P-A215K-N261I；I8V-P40E-N76D-S78G-G118R-G211P-L217K-N252I-N261I；S3V-P40E-N76D-S87D-G118R-S128R-P210I-L217K-N261I；S3V-P40E-N76D-G118R-S160Q-P210I-W241K-L262Q；I8V-N76D-S78G-G118R-P210I-A215V-N261I；N76D-S78G-S87D-G118R-P210I-A215V-L217K-N261I-L262Q；S3V-P40E-N76D-S78G-G118R-Q206Y-L217K；S3V-P40E-N76D-S78G-G118R-S128L-P129Q-S130A-L217K；S3V-P40E-N76D-S78G-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206Y-P210I-A215V-L217K；N76D-S78N-S87D-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206Y；S3V-P40E-N76D-S78G-G118R-S128L-P129Q-S130A-A215K-N261I；S3V-N76D-S87D-G118R-S128L-P129Q-S130A-P210I-L217K；N76D-S87R-G118R-S128K-V150T-L217K；N76D-S78N-S87R-G118R-S128K-V150T-L217K；N76D-S78N-S87R-G118R-S128K-V150T；S3V-N76D-S78G-S87D-G118A-S166N-A194P-Q206M-P210I-N218S-N248D-N261I-L262Q；S3V-N76D-S78G-S87T-S101Q-G118A-S130Q-S166N-A194P-P210I-N218S-N248D-S256P-N261I；S3V-N76D-S78G-S87D-S101Q-G118A-Q206M-P210I-L217K-N218S-M222Q-N248D-S256P；和S24L-N76D-S78N-S87D-A88S-G118R-Q206Y-Y209W-H249R，其中所述变体具有蛋白水解活性并且所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
又仍另外的实施例涉及一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含选自以下的氨基酸取代的组合：N76D-S78N-S87R-S103P-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-N243S；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249N；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-S99N-G118R-S128L-P129Q-S130A-A158T-Q206L-I246V-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-K235T；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-A270T；N18R-S24R-N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-M222Q；S3V-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-S101V-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-S212D；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-S166D-Q206L；S3V-N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-T213A；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-A232V-Q245R；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-G159D-S188D-Q206L-A232V-Q245R；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Y209W；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-Y209W；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-M222S；S3T-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；V28T-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-A108S-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-N116M-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-L124M-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-V150T-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-A194D-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-A158E-Q206L；V28T-N76D-S78N-S87R-S101F-G118R-S128L-P129Q-S130A-A194D-Q206L；S24R-V28T-N43S-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-A158E-Q206L；S24R-V28T-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-A194D-Q206L；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-T213A；N76D-S78N-S87R-S103D-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；S24R-V28T-N76D-S78N-S87R-S101V-A108S-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-T213A-L217K；和S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-L217K；其中所述变体具有蛋白水解活性并且所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。甚至又仍另外的实施例涉及一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含选自以下的氨基酸取代的组合：N76D-S78N-S87R-S103P-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-N243S；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249N；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-S99N-G118R-S128L-P129Q-S130A-A158T-Q206L-I246V-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-K235T；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-A270T；N18R-S24R-N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-M222Q；S3V-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-S101V-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-S212D；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-S166D-Q206L；S3V-N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-T213A；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-A232V-Q245R；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-G159D-S188D-Q206L-A232V-Q245R；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Y209W；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-Y209W；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-M222S；S3T-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；V28T-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-A108S-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-N116M-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-L124M-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-V150T-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-A194D-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-A158E-Q206L；V28T-N76D-S78N-S87R-S101F-G118R-S128L-P129Q-S130A-A194D-Q206L；S24R-V28T-N43S-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-A158E-Q206L；S24R-V28T-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-A194D-Q206L；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-T213A；N76D-S78N-S87R-S103D-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；S24R-V28T-N76D-S78N-S87R-S101V-A108S-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-T213A-L217K；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-L217K；S3V-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A；S3V-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Y209W；N76D-S78G-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78G-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206Y；S3V-N76D-S78G-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；S3V-N76D-S78G-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206M；S3V-N76D-S78G-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206M；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206Y；S3V-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；S3V-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206M；S3V-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206Y；P40E-N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A；I8V-P40E-N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A；P40E-N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-P210I；P40E-N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-G211P；P40E-N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-N261I；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-P210I；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Y209W-L262Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-P210I-L262Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-V147I-A194P-A215V-E271D；T22W-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-V147I-A194P-A215V；T22W-N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-V147I-A215V-E271D；N76D-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-L217K；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-L217K；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-V150T；N76D-S78G-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-P210L；N76D-S87R-E89H-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206Y；S3V-N76D-S87R-E89H-G118R-S128L-P129Q-S130A-P210L；N76D-S78Q-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206D；N76D-S78T-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206D；N76D-S78V-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206D；N76D-S78W-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206D；N76D-S78Y-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206D；N76D-S78A-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78C-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78E-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78F-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78H-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78K-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78L-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78M-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78Q-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78T-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78W-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78Y-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206F；N76D-S78C-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206G；N76D-S78M-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206G；N76D-S78C-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206H；N76D-S78E-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206H；N76D-S78F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ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
另一个实施例涉及一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含选自以下的氨基酸取代的组合：N18R-S24R-N76D-S78N-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-Q206L-H249R；S24F-S78N-G118R-S166D；T22L-S24F-S78N-G118R-S166D-T213A；S24R-N76D-S87R-Q206Y-T213A-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S87D-Q206L-Y209W-T213A-H249R；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-M222Q；S24R-N76D-S78N-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-P129Q-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S130A-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；G20R-S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；G20R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-Y209W-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-N116L-G118R-Y209W-M222Q；G20R-S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-N116L-G118R-Y209W-M222Q；N18R-N76D-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-Y209W-H249R；N18R-S87D-S166N-Q206L-Y209W；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-Y209W-T213A；N18R-S24R-S166D-Q206Y-H249R；S24R-S78N-S87R-S166D-Q206L-Y209W-H249R；N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-G127T-P129R-Q206L；S3V-S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101V-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-S212D-M222Q-H249R；S3V-S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-G127T-Y209W-T213A-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-Y209W-M222Q-A232V-Q245R-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-Y209W-H249R；S3V-S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-Y209W-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-G127T-Y209W-T213A-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101T-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101H-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-P129Q-Y209W-M222Q-H249R；N76D-S78N-S87D-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-H249R；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q-H249R；N76D-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-Y209W-H249R；N76D-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-Y209W；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-M222S-H249R；N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-H249R；N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-M222S-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-T213A；S24R-V28T-N76D-S78N-S87D-S101V-A108S-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；S24R-V28T-N76D-S78N-S87D-S101V-N116M-G118R-S128L-P129Q-S130A-A158E-Q206L；S3V-S24R-N76D-S78N-S87R-G100S-S101V-G118R-Q206L-L217K；N76D-N77D-S78N-S87R-G118R-Q206L-T213A；S24R-N76D-S78N-S87D-G100S-S101V-N116M-G118R-L124M-S128L-P129Q-S130A-A194D-Q206L；S24R-V28T-N76D-S78N-S87R-G118V-S128L-P129Q-S130A-Q206L-T213A-L217K；S3V-S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-H249R；S3V-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-H249R；S3I-N43Y-L82D-G127S-S216Y-L217K-S256P；G127S-S216Y；S3V-I8V-P40E-N76D-S87D-G118R-S128R-A215K-N261I；S3V-I8V-P40E-N76D-G118R-S128R-P210I-N261I；S3V-P40E-N76D-S87D-G118R-S128R-P210I-L217K；S3V-N76D-G118R-S128R；S3V-N76D-S87D-G118R-S128R；S3V-N76D-G118R-S128R-P210I；S3V-N76D-G118R-S128R-N261I；S3V-P40E-N76D-G118R；S3V-P40E-N76D-G118R-S128R；S3V-I8V-P40E-N76D-G118R-S128R；S3V-P40E-N76D-S87D-G118R-S128R；S3V-P40E-N76D-G118R-S128R-S160Q；S3V-P40E-N76D-G118R-S128R-P210I；S3V-P40E-N76D-G118R-S128R-G211P；S3V-P40E-N76D-G118R-S128R-A215K；S3V-P40E-N76D-G118R-S128R-L217K；S3V-P40E-N76D-G118R-S128R-N261I；S3V-P40E-N76D-G118R-S128R-L262Q；S3V-I8V-P40E-N76D-G118R；S3V-P40E-N76D-S87D-G118R；S3V-P40E-N76D-G118R-S160Q；S3V-P40E-N76D-G118R-Q206Y；S3V-P40E-N76D-G118R-P210I；S3V-P40E-N76D-G118R-G211P；S3V-P40E-N76D-G118R-A215K；S3V-P40E-N76D-G118R-L217K；S3V-P40E-N76D-G118R-N261I；S3V-P40E-N76D-G118R-L262Q；S3V-N76D-G118R-S128R-G211P；S3V-N76D-G118R-S128R-L262Q；T22W-N76D-S78N-S87R-G118R-S128R-P129Q-S130A-V147I-A194P-A215V-E271D；N76D-S78N-S87R-G118R-S128R-P129Q-S130A；N76D-S78N-S87R-G118R-S128R-P129Q-S130A-V147I-A194P-A215V；N76D-S78N-S87R-G118R-S128R-P129Q-S130A-V147I-A194P-E271D；T22W-N76D-S78N-S87R-G118R-S128R-P129Q-S130A-A215V-E271D；T22W-N76D-S78N-S87R-G118R-S128R-P129Q-S130A-A194P-E271D；P40E-N76D-S78G-G118R-S128R-Q206Y-L262Q；S3V-P40E-N76D-G118R-G211P-L217K-N261I；I8V-P40E-N76D-S78G-G118R-Q206Y-L217K；S3V-I8V-N76D-S78G-S87D-G118R-P210I-A215K-N252I；S3V-P40E-N76D-G118R-S160Q-P210I-L217K-N261I；I8V-N76D-S78G-G118R-S160Q-Q206Y-N252I-N261I；I8V-P40E-N76D-G118R-P210I-A215K-N261I；I8V-P40E-N76D-S78G-G118R-Q206Y-P210I-A215K-N261I；S3V-N76D-G118R-S160Q-G211P-A215V-L262Q；S3V-N76D-S87D-G118R-S128R-P210I-G211P-N261I-L262Q；S3V-P40E-N76D-G118R-Q206Y-P210I-G211P-A215K-N261I；I8V-P40E-N76D-S78G-G118R-G211P-L217K-N252I-N261I；S3V-P40E-N76D-S87D-G118R-S128R-P2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N18R-S24R-S166D-Q206Y-H249R-A254T；N18R-S24R-S78N-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-G118R-G127T-Y209W；S24R-N76D-G118R-S166N-Q206L-Y209W；S24R-N76D-S87R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18K-S87R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-S87R-Y209W；N18R-S78N-G118R-Y209W-T213A-M222Q-H249R-A270P；N18R-S166N-Y209W-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N76D-S78N-G118R-Q206L-H249R；N18R-I44V-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-G118R-Q206L；A16T-N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；S24R-N76D-S78N-Q206L-H249R；S24R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A；S24R-N76D-S78N-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-M222Q-H249R；N76D-S78N-S87R-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-Q206L-K251R；N76D-S78N-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A；N76D-S78N-H120R-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-G20E-N76D-S78N-G118R-H249R；S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A；N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；S24R-N76D-S78N-G118R-Q206L；N18R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-V268A；和N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-N218S-M222Q-H249R，其中所述变体具有蛋白水解活性并且所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。另外的实施例涉及一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含选自以下的氨基酸取代的组合：N18R-S24R-N76D-S78N-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-Q206L-H249R；S24F-S78N-G118R-S166D；T22L-S24F-S78N-G118R-S166D-T213A；S24R-N76D-S87R-Q206Y-T213A-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S87D-Q206L-Y209W-T213A-H249R；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-M222Q；S24R-N76D-S78N-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-P129Q-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S130A-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S128L-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-M222Q；N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；G20R-S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；G20R-N43R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-Y209W-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Q206L-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S87R-N116L-G118R-Y209W-M222Q；G20R-S24R-N43R-N76D-S78N-S87R-N116L-G118R-Y209W-M222Q；N18R-N76D-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-Y209W-H249R；N18R-S87D-S166N-Q206L-Y209W；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-Y209W-T213A；N18R-S24R-S166D-Q206Y-H249R；S24R-S78N-S87R-S166D-Q206L-Y209W-H249R；N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-P129Q-Q206L；N76D-S78N-S87R-G118R-G127T-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-S87R-S101G-S103A-V104I-G118R-G127T-P129R-Q206L；S3V-S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101V-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-S212D-M222Q-H249R；S3V-S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-G127T-Y209W-T213A-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-Y209W-M222Q-A232V-Q245R-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-Y209W-H249R；S3V-S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-Y209W-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101G-S103A-V104I-G118R-G127T-Y209W-T213A-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101T-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-S101H-G118R-Y209W-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-P129Q-Y209W-M222Q-H249R；N76D-S78N-S87D-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-H249R；S24R-N76D-S78N-S87R-G118R-Y209W-M222Q-H249R；N76D-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-Y209W-H249R；N76D-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-Y209W；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-M222S-H249R；N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-H249R；N76D-S78N-S87D-G118R-Y209W-M222S-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-M222Q-H249R；S24R-N76D-S78N-S87D-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-T213A；S24R-V28T-N76D-S78N-S87D-S101V-A108S-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；S24R-V28T-N76D-S78N-S87D-S101V-N116M-G118R-S128L-P129Q-S130A-A158E-Q206L；S3V-S24R-N76D-S78N-S87R-G100S-S101V-G118R-Q206L-L217K；N76D-N77D-S78N-S87R-G118R-Q206L-T213A；S24R-N76D-S78N-S87D-G100S-S101V-N116M-G118R-L124M-S128L-P129Q-S130A-A194D-Q206L；S24R-V28T-N76D-S78N-S87R-G118V-S128L-P129Q-S130A-Q206L-T213A-L217K；N18R-S87R-G118R-S166N-N204D-Q206L-Y209W；N18R-S24R-L42I-G118R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-Y209W-T213A-H249R；N18R-S24R-S87R-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206Y-Y209W-T213A-H249R；S24R-S87D-G118R-Y209W-T213A-H249R；S9G-N18R-S24R-N76D-G118R-S166N-Q206L-H249R；N18R-G118R-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；S24R-S87R-S166N；N18R-S24R-S87R-Q206L-Y209W-T213A；N18R-S24R-G118R-A158V-Y209W；N18R-S24R-S87D-Q206L-Y209W-M222Q-H249R；N18R-S24R-S87R-G127T；S24R-S166N-Y209W-T213A；N76D-S78N-G118R-Y209W-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-Y209W-H249R-S259G；N18R-S24R-S87D-N185Y-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；S24R-G118R-G127T-Y209W；A1V-N18R-S24R-S56P-G127T-Q206L-Y209W；S87R-Y209W；N18R-S87D-Y209W-M222Q-H249R；N18R-S24R-G118R-S128L-P129Q-S130A-S166D-Y209W-T213A；S87D-S166D-T213A-H249R；N18R-S24P-S87D-S166N-Q206L-Y209W-M222Q-H249R；N76D-S166N-Y209W-T213A-H249R；S24R-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-G118R-Q206L-Y209W；N18R-S24R-S166D-Q206Y-H249R-A254T；N18R-S24R-S78N-Q206L-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-G118R-G127T-Y209W；S24R-N76D-G118R-S166N-Q206L-Y209W；S24R-N76D-S87R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18K-S87R-Y209W-T213A-M222Q-H249R；N18R-S24R-S87R-Y209W；N18R-S78N-G118R-Y209W-T213A-M222Q-H249R-A270P；N18R-S166N-Y209W-T213A-M222Q；S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N76D-S78N-G118R-Q206L-H249R；N18R-I44V-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N76D-S78N-G118R-Q206L；A16T-N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；S24R-N76D-S78N-Q206L-H249R；S24R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A；S24R-N76D-S78N-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-M222Q-H249R；N76D-S78N-S87R-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-Q206L-K251R；N76D-S78N-Q206L-H249R；N18R-S24R-N76D-S78N-S87R-Q206L；N18R-S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A；N76D-S78N-H120R-Q206L-H249R；N18R-N76D-S78N-S87R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；N18R-G20E-N76D-S78N-G118R-H249R；S24R-N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A；N76D-S78N-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206L-H249R；S24R-N76D-S78N-G118R-Q206L；N18R-N76D-S78N-S128L-P129Q-S130A-Q206L-V268A；和N18R-N76D-S78N-S87R-Q206L-N218S-M222Q-H249R，其中所述变体具有蛋白水解活性并且所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
在另一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体进一步包含选自以下的一个或多个取代、插入和/或缺失：V4I、S9R、A15T、K27R、*36D、V68A、*97E、A98S、S99A/D/E/G/V、G100A、S101D/E/M/R、V104Y/N、S106A、H120D/N、N123S、G160D、Y167A、R170S、G195E、V199M、V205I、L217D、N218D、K235L、Q236H、N252K、T274A、和在位置99和100之间插入的D，其中所述变体具有蛋白水解活性并且所述变体的每个氨基酸位置根据SEQ ID NO:2中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN'序列中的相应氨基酸位置进行编号，如通过比对所述变体氨基酸序列与所述BPN'氨基酸序列所确定的。
另一个实施例涉及一种或多种分离的、重组的、基本上纯的和/或非天然存在的枯草杆菌蛋白酶变体。在仍另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有酶活性。在又另一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有蛋白水解活性。在一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:1、SEQID NO:2、或SEQ ID NO:14具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于氨基酸序列同一性。在甚至又另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％氨基酸序列同一性。在仍另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。在又仍另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:2具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。在甚至又仍另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:2具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％氨基酸序列同一性。在另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:14具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。在一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:14具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。在另一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。在仍另一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:1具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。在又另一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ IDNO:2具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。在又仍另一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:14具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。在甚至仍又另一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:14具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。在仍又另一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。在甚至另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQID NO:1具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。在又仍甚至另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:2具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。在甚至另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:14具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或小于100％氨基酸序列同一性。
在另一个实施例中，当与亲本或基准蛋白酶相比时，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自：改善的蛋白酶活性、改善的洗涤剂清洁性能和改善的洗涤剂热稳定性。在一个实施例中，当与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、和/或SEQ ID NO:14相比时，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自：改善的蛋白酶活性、改善的洗涤剂清洁性能和改善的洗涤剂热稳定性。在另外的实施例中，当与SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:2相比时，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自：改善的蛋白酶活性、改善的洗涤剂清洁性能和改善的洗涤剂热稳定性。在仍另外的实施例中，当与SEQ ID NO:1相比时，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自：改善的蛋白酶活性、改善的洗涤剂清洁性能和改善的洗涤剂热稳定性。在又另外的实施例中，当与SEQ ID NO:2相比时，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自：改善的蛋白酶活性、改善的洗涤剂清洁性能和改善的洗涤剂热稳定性。在又甚至仍另外的实施例中，当与SEQ ID NO:14相比时，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自：改善的蛋白酶活性、改善的洗涤剂清洁性能和改善的洗涤剂热稳定性。
在一个实施例中，与亲本或基准蛋白酶相比，本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体经过更长的洗涤期会更稳定。在另一个实施例中，与亲本或基准蛋白酶相比，本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体经过短且冷的或者长且热的洗涤循环会更稳定。在一个实施例中，一种或多种改善的性质是：(i)改善的蛋白酶活性，并且所述变体针对脱脂奶底物具有PI>1；(ii)改善的清洁性能，并且所述变体具有蛋黄样本(swatch)清洁PI>1；(iii)改善的热稳定性，并且所述变体具有稳定性PI>1；和(iv)改善的热稳定性，并且任选地，当在50℃、59℃、和/或61℃测量时，所述变体具有残留活性≥10％。在仍又另外的实施例中，一种或多种改善的性质是：(i)改善的蛋白酶活性，并且所述变体针对脱脂奶底物具有PI>1；(ii)改善的清洁性能，并且所述变体具有蛋黄样本清洁PI>1；和/或(iii)改善的热稳定性，并且所述变体具有稳定性PI>1。在甚至另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有改善的蛋白酶活性，其中所述变体针对脱脂奶底物具有PI>1。在仍甚至另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有改善的清洁性能，其中所述变体具有蛋黄样本清洁PI>1。在另一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有改善的热稳定性，其中所述变体具有稳定性PI>1。在另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有改善的热稳定性，其中任选地，当在50℃、59℃和/或61℃测量时，所述变体具有残留活性≥10％。在另一个实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有改善的蛋白酶活性，其中所述变体针对脱脂奶底物具有PI>1，并且所述PI根据实例1的蛋白酶活性测定法测量。在另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有改善的清洁性能，其中所述变体具有蛋黄样本清洁PI>1，并且所述PI根据实例1的洗涤剂测定中的清洁性能测量。在甚至另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有改善的热稳定性，其中所述变体具有稳定性PI>1，并且所述PI根据实例1的洗涤剂测定中的热稳定性测量。在又甚至仍另外的实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体具有改善的热稳定性，其中当在实例1中描述的衣物洗涤剂测定中的热稳定性中，在50℃、59℃和/或61℃测量时，所述变体具有残留活性≥10％。
一个实施例涉及一种或多种分离的、非天然存在的和/或重组的核酸序列，所述核酸序列包含编码本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体的多核苷酸序列。本文所述的一种或多种核酸序列可以通过使用任何合适的合成、操作和/或分离技术或其组合来产生。
例如，可以使用标准核酸合成技术(例如像固相合成技术)产生本文所述的一种或多种多核苷酸序列。在这样的技术中，典型地合成高达50个或更多个核苷酸碱基的片段，然后连接(例如通过酶或化学连接方法或聚合酶介导的重组方法)以基本上形成任何希望的连续核酸序列。本文所述的核酸的合成也可以通过化学合成使用例如经典的亚磷酰胺方法(其描述于例如Beaucage等人，Tetrahedron Letters[四面体快报]22:1859-69(1981))或者例如如通常在自动合成方法中实施的方法(Matthes等人，EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]3:801-05(1984))来促进(或可替代地实现)。本文所述的核酸还可以通过使用自动DNA合成仪来产生。可以从各种商业来源订购定制的核酸(例如，米德兰认证试剂公司(Midland Certified Reagent Co.)(mcrc@oligos.com)、大美国基因公司(GreatAmerican Gene Co.)(genco.com)、操纵子技术公司(Operon Technologies Inc.)(阿拉米达，加利福尼亚州)和DNA2.0(门洛帕克，加利福尼亚州))。用于合成核酸的其他技术和相关原理描述于例如，Itakura等人，Annu.Rev.Biochem.[生物化学年鉴]53:323(1984)和Itakura等人，Science[科学]198:1056(1984)。
重组DNA技术可用于修饰本文所述的一种或多种核酸序列，所述技术包括例如限制性内切核酸酶消化、连接、逆转录和cDNA产生，以及聚合酶链反应(例如PCR)。有用的重组DNA技术的技术和与其相关的原理描述于：Sambrook等人，(1989)，“Molecular Cloning:ALaboratory Manual[分子克隆：实验室手册]”，Cold Spring Harbor Press[冷泉港出版社],及其第三版(2001)；Ausubel等人，(1994-1999)，“Current Protocols in MolecularBiology[分子生物学当前方案]”，Wiley Interscience Publishers[威利国际科学出版社]；以及Berger和Kimmel，“Guide to Molecular Cloning Techniques[分子克隆技术指南]”Methods in Enzymol.[酶学方法],第152卷，学术出版社公司(Acad.Press,Inc.)。
本文所述的核苷酸还可以通过使用一个或多个可以杂交至或PCR-扩增编码本文所述的一个或多个枯草杆菌蛋白酶变体的多核苷酸的寡核苷酸探针来筛选cDNA文库(使用本领域通常使用的诱变技术产生，包括本文所述的那些)而获得。用于筛选和分离cDNA克隆和PCR扩增程序的方法是本领域技术人员熟知的并且描述于例如Berger、Sambrook、和Ausubel(同上)中。本文所述的核酸序列还可以通过例如已知的诱变方法改变天然存在的多核苷酸主链(例如，编码亲本蛋白酶的主链)来获得。
通常通过表达质粒表达载体，本文所述的一种或多种分离的、非天然存在的和/或重组核酸序列可用于重组产生(例如，表达)本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体。因此，另外的实施例涉及一个或多个：分离的或重组的载体，该载体包含本文所述的一种或多种多核苷酸；分离的或重组的表达载体或表达盒，该表达载体或表达盒包含本文所述的一种或多种多核苷酸；分离的、基本上纯的、或重组的DNA构建体，该构建体包含本文所述的一种或多种多核苷酸；分离的或重组的细胞，该细胞包含本文所述的一种或多种多核苷酸；包含如下细胞的细胞培养物，该细胞包含本文所述的一种或多种多核苷酸；细胞培养物，其包含本文所述的一种或多种多核苷酸；和/或如下组合物，该组合物包含一种或多种载体、多核苷酸序列、表达载体、表达盒、DNA构建体、细胞、细胞培养物或其任何组合或混合物。
另一个实施例涉及如下表达载体，该表达载体包含一种或多种分离的、非天然存在的和/或重组的核酸序列，所述核酸序列包含编码本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体的多核苷酸序列。另外的实施例涉及如下表达载体，该表达载体包含一种或多种含有如下多核苷酸序列的核酸序列，所述多核苷酸序列编码本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体。在仍另外的实施例中，本文所述的一种或多种多核苷酸序列与有效基因表达所需的一个或多个核酸区段(例如，与编码本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体的多核苷酸有效地连接的启动子)有效地连接。载体可以包括转录终止子和/或选择基因，例如能够通过在含有抗微生物剂的培养基中生长来实现质粒感染的宿主细胞的连续培养维持的抗生素抗性基因。
表达载体可以衍生自质粒或病毒DNA，或在可替代实施例中，含有两者的元件。Harwood和Cutting(编辑)，“Molecular Biological Methods for Bacillus[针对芽孢杆菌属的分子生物学方法]”，约翰威利父子公司(John Wiley&Sons)(1990)描述了示例性载体，所述载体包括但不限于，例如pXX、pC194、pJH101、pE194和pHP13，以及适合于枯草芽孢杆菌的复制性质粒。示例性载体进一步描述于例如Perego,M.,“Integrational Vectorsfor Genetic Manipulations in Bacillus subtilis[用于枯草芽孢杆菌中的基因操作的整合载体]”(1993)以及A.L.Sonenshein、J.A.Hoch、和R.Losick(编辑)，“Bacillussubtilis and other Gram-positive bacteria:biochemistry,physiology andmolecular genetics[枯草芽孢杆菌和其他革兰氏阳性菌：生物化学、生理学和分子遗传学]”，美国微生物协会(American Society for Microbiology)中。
仍另外的实施例涉及一种或多种重组细胞，该重组细胞包含含有本文所述的一种或多种多核苷酸的一种或多种载体(例如表达载体或DNA构建体)。将一些此类重组细胞用所述一个或多个载体转化或转染。此类细胞典型地被称为宿主细胞。一些此类细胞包含细菌细胞，包括但不限于例如芽孢杆菌属细胞，例如像枯草芽孢杆菌细胞。另外的实施例涉及包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体的重组细胞。
对于表达和产生本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体的细胞，在适于表达所述枯草杆菌蛋白酶的条件下，将一种或多种表达载体转化到细胞中，所述一种或多种表达载体包含编码一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体的多核苷酸的一个或多个拷贝。在一个实施例中，将本文所述的一种或多种多核苷酸序列(以及载体中包含的其他序列)整合到宿主细胞的基因组中。在另一个实施例中，包含本文所述的一种或多种多核苷酸序列的一种或多种质粒载体仍然是细胞内的自主染色体外元件。在另外的实施例中，编码所述一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体的多核苷酸构建体存在于能够将编码所述枯草杆菌蛋白酶变体的多核苷酸整合入细菌染色体中并且任选地扩增其的整合载体上。
在一些实施例中，本文所述的多核苷酸的转录通过如下启动子来实现，该启动子是所选前体蛋白酶的野生型启动子。在一些其他实施例中，启动子与前体蛋白酶是异源的，但是在宿主细胞中具有功能。用于细菌宿主细胞的合适的启动子的实例包括但不限于例如amyE、amyQ、amyL、pstS、sacB、pSPAC、pAprE、pVeg、和pHpaII；和嗜热脂肪芽孢杆菌麦芽糖淀粉酶基因的启动子、解淀粉芽孢杆菌(BAN)淀粉酶基因的启动子、枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的启动子、克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的启动子、短小芽孢杆菌木糖苷酶基因的启动子、苏云金芽孢杆菌cryIIIA的启动子、和地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因的启动子。另外的启动子包括但不限于A4启动子，噬菌体λPR或PL启动子，以及大肠杆菌lac、trp或tac启动子。
本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体可以在任何合适的革兰氏阳性微生物(包括细菌和真菌)的宿主细胞中产生。在一些实施例中，宿主菌株是重组菌株，其中编码目的多肽的多核苷酸已经被引入宿主中。例如，在一些实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体在真菌和/或细菌来源的宿主细胞中生产。在一些实施例中，这些宿主细胞是芽孢杆菌属细胞、链霉菌属细胞、埃希氏菌属细胞或曲霉属细胞。在一些实施例中，所述一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体由芽孢杆菌属宿主细胞产生。芽孢杆菌属物种宿主细胞的实例包括，但不限于，例如，地衣芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、短芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌。可用于产生本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体的示例性芽孢杆菌属宿主菌株示于USPN 5,264,366和4,760,025(RE 34,606)中。
在一些实施例中，枯草芽孢杆菌宿主细胞被用于生产本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体。许多枯草芽孢杆菌菌株是已知的，包括但不限于例如1A6(ATCC 39085)、168(1A01)、SB19、W23、Ts85、B637、PB1753至PB1758、PB3360、JH642、1A243(ATCC 39,087)、ATCC 21332、ATCC 6051、MI113、DE100(ATCC 39,094)、GX4931、PBT 110、和PEP 211菌株。参见例如Hoch等人，Genetics[遗传学]73:215-228(1973)；Palva等人，Gene[基因]19:81-87(1982)；Fahnestock和Fischer,J.Bacteriol.[细菌学杂志],165:796-804(1986)；以及Wang等人，Gene[基因]69:39-47(1988)。还参见USPN 4,450,235和4,302,544，以及EP0134048。
在一些实施例中，芽孢杆菌属宿主细胞是包含以下基因中的一个或多个的突变或缺失的芽孢杆菌属物种：degU、degS、degR和degQ。在一个实施例中，突变是在degU基因中，并且在另一个实施例中，该突变是degU(Hy)32。参见例如Msadek等人，J.Bacteriol.[细菌学杂志]172:824-834(1990)和Olmos等人，Mol.Gen.Genet.[分子遗传和基因组学]253:562-567(1997)。在一些实施例中，芽孢杆菌属宿主包括在以下中的突变或缺失：scoC4(参见例如，Caldwell等人，J.Bacteriol.[细菌学杂志]183:7329-7340(2001))；spoIIE(参见例如，Arigoni等人，Mol.Microbiol.[分子微生物学]31:1407-1415(1999))；和/或oppA或opp操纵子的其他基因(参见例如，Perego等人，Mol.Microbiol.[分子微生物学]5:173-185(1991))。在一些实施例中，这些突变单独发生，而在其他实施例中，存在突变的组合。另外，可使用包含内源蛋白酶基因的一个或多个突变和/或缺失的芽孢杆菌属宿主细胞。
用于将本文所述的一种或多种核酸或多核苷酸序列引入芽孢杆菌属细胞的合适方法描述于例如Ferrari等人，“Genetics[遗传学]”,Harwood等人(编辑)，芽孢杆菌属,Plenum Publishing Corp.[普莱南出版公司](1989)；Saunders等人，J.Bacteriol.[细菌学杂志],157:718-726(1984)；Hoch等人，J.Bacteriol.[细菌学杂志],93:1925-1937(1967)；Mann等人，Current Microbiol.[现代微生物学],13:131-135(1986)；和Holubova,Folia,Microbiol.[微生物学],30:97(1985)；Chang等人，Mol.Gen.Genet.[分子遗传和基因组学],168:11-115(1979)；Vorobjeva等人，FEMS Microbiol.Lett.[FEMS微生物学快报],7:261-263(1980)；Smith等人，Appl.Env.Microbiol.[应用与环境微生物学],51:634(1986)；Fisher等人，Arch.Microbiol.[微生物学文献集],139:213-217(1981)；以及McDonald,J.，Gen.Microbiol.[普通微生物学杂志],130:203(1984)。此类合适的方法包括，例如，原生质体转化和中板集合、转导和原生质体融合。例如，可以使用转化方法来将包含编码本文所述的枯草杆菌蛋白酶的核酸的DNA构建体或载体引入宿主细胞。示例性转化方法包括质粒标记物拯救转化，其涉及通过携带部分同源的驻留质粒的感受态细胞摄取供体质粒。此类方法描述于例如Contente等人，Plasmid[质粒]2:555-571(1979)；Haima等人，Mol.Gen.Genet.[分子遗传和基因组学]223:185-191(1990)；Weinrauch等人，J.Bacteriol.[细菌学杂志]154:1077-1087(1983)；以及Weinrauch等人，J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:1205-1211(1987)中。
在一些实施例中，用包含编码本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体的核酸的DNA构建体或载体直接转化宿主细胞(即，在引入宿主细胞之前，中间细胞不用于扩增或以其他方式处理DNA构建体或载体)。将本文所述的DNA构建体或载体引入宿主细胞包括本领域已知的用于将核酸序列引入宿主细胞而不插入质粒或载体中的物理和化学方法。此类方法包括但不限于例如氯化钙沉淀、电穿孔、裸DNA、和脂质体。在另外的实施例中，DNA构建体或载体与质粒共转化而不插入质粒。在进一步的实施例中，通过本领域已知的方法从经改变的芽孢杆菌属菌株中缺失选择标记(参见例如，Stahl等人，J.Bacteriol.[细菌学杂志]158:411-418(1984)；以及Palmeros等人，Gene[基因]247:255-264(2000))。
在一些实施例中，将本文所述的一种或多种转化的细胞在允许表达本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体的培养条件下在常规营养培养基中培养。在另外的实施例中，从细胞培养物中回收宿主细胞表达的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体。另一个实施例涉及生产本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体的方法，该方法包括在有利于生产所述变体的条件下在培养基中培养重组宿主细胞和从该培养基中回收所述变体，该重组宿主细胞包含重组表达载体，该重组表达载体包含编码本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体的核酸。本领域技术人员已知用于产生本文所述的一种或多种变体的合适培养条件，例如温度、pH等。示例性培养条件描述于例如Hopwood(2000)“Practical Streptomyces Genetics[实用链霉菌属遗传学]”，John Innes Foundation[约翰·内斯基金会],诺维奇，英国；和Hardwood等人，“Molecular Biological Methods for Bacillus[芽孢杆菌属的分子生物学方法]”，约翰威利公司(John Wiley)(1990)。另一个实施例提供了一种或多种培养物(例如，细胞培养物)，其包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体或核酸序列。
用于培养细胞的培养基可以包含适合于宿主细胞生长的任何常规培养基，例如基本培养基或含有适当补充剂的复合培养基。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的配方(例如，在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)的目录中)来制备。在一些实施例中，将本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体分泌到培养基中。在其他实施例中，通过常规方法从培养基中回收枯草杆菌蛋白酶变体，所述方法包括但不限于，例如，通过离心或过滤将细胞与培养基分离；通过盐的方式(例如硫酸铵)沉淀上清液或滤液的蛋白质性组分；和色谱纯化(例如，离子交换、凝胶过滤、亲和力等)。
在另外的实施例中，本文所述的载体或DNA构建体可以进一步包含编码纯化促进结构域的核酸序列，以促进枯草杆菌蛋白酶变体的纯化(参见例如，Kroll,D.J.等人，DNACell Biol.[DNA细胞生物学],12:441-53(1993))。此类纯化促进结构域包括但不限于例如金属螯合肽，例如允许在固定化金属上纯化的组氨酸-色氨酸模块(Porath J.,ProteinExpr.Purif.[蛋白表达与纯化],3:263-281(1992))；允许在固定化免疫球蛋白上纯化的蛋白质A结构域；以及在FLAGS延伸/亲和纯化系统中使用的结构域(英姆纳克斯公司(ImmunexCorp.)，华盛顿州西雅图)。在纯化结构域和异源蛋白之间包含的可切割的接头序列例如因子XA或肠激酶(英杰公司(Invitrogen)，圣地亚哥，加利福尼亚州)还可用于促进纯化。
在一个实施例中，所述一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体可用于清洁应用，例如但不限于清洁餐具物品、食具物品、织物和具有硬表面的物品(例如，桌子、桌面、墙、家具物品、地板、天花板的硬表面)。另一个实施例涉及一种组合物，所述组合物包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体，前提条件是所述组合物不是自动餐具洗涤组合物。在一些实施例中，所述组合物是清洁组合物，条件是该组合物不是自动餐具洗涤组合物。在其他实施例中，所述组合物是洗涤剂组合物，条件是该组合物不是自动餐具洗涤组合物。在又其他实施例中，该组合物选自衣物洗涤剂组合物、自动餐具洗涤组合物、手洗(手动)餐具洗涤剂组合物、硬表面清洁组合物、眼镜清洁组合物、和个人护理清洁组合物。在仍其他的实施例中，该组合物是衣物洗涤剂组合物、自动餐具洗涤组合物、或手洗(手动)餐具洗涤剂组合物。在甚至仍其他的实施例中，该组合物是衣物洗涤剂组合物、或手洗(手动)餐具洗涤剂组合物。在一些实施例中，所述组合物包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体以及赋形剂、辅助材料、和/或其他酶中的一种或多种。
示例性衣物洗涤剂组合物包括但不限于例如液体和粉末衣物洗涤剂组合物。示例性硬表面清洁组合物包括但不限于例如用于清洁非餐具物品、非食具物品、桌子、桌面、家具物品、墙、地板和天花板的硬表面的组合物。示例性硬表面清洁组合物描述于例如USPN6,610,642、6,376,450、和6,376,450中。示例性个人护理组合物包括但不限于用于清洁假牙、牙齿、头发、接触镜和皮肤的组合物。这样的口腔护理组合物的示例性组分包括在例如US 6,376,450中描述的那些。
除非另外指出，本文提供的所有组分或组合物水平参考该组分或组合物的活性水平给出，并且不包括可能存在于可商购的来源中的杂质，例如残余溶剂或副产品。酶组分重量是基于总的活性蛋白。除非另外指明，所有百分比和比率均按重量计算。除非另外指明，所有百分比和比率均基于总组合物计算。
示例性辅助材料包括但不限于一种或多种碱性来源、抗晦暗剂和/或抗腐蚀剂、抗结块剂、抗氧化剂、抗再沉积剂、抗收缩剂、抗皱剂、漂白剂、漂白活化剂、漂白增效剂、漂白催化剂、上蓝剂、增亮剂、助洗剂、载体、催化剂、螯合剂、黏土污垢去除剂、着色剂、颜色点缀剂、沉积助剂、分散剂、染料、染料转移抑制剂、酶活化剂、酶稳定剂、织物调理剂、织物柔软剂、填料、荧光剂、杀真菌剂、杀菌剂、过氧化氢、可水解表面活性剂、助水溶剂、石灰皂分散剂、掩蔽剂、荧光增亮剂、有机聚合物、香料、pH控制剂、光活化剂、颜料、聚合物分散剂、防腐剂、加工助剂、漂洗助剂、银器护理剂、去污聚合物、污物悬浮剂、增溶剂、溶剂、过氧化氢源、结构增弹剂、泡沫抑制剂、和表面活性剂。示例性辅助材料描述于例如USPN 6,610,642、6,605,458、6,326,348、6,306,812、5,705,464、5,710,115、5,698,504、5,695,679、5,686,014、5,646,101、以及5,576,282中。如果辅助材料与本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体不相容，使用将所述辅助材料和枯草杆菌蛋白酶变体保持分离(即彼此不接触)的合适方法，直到两种组分的组合合适为止。示例性分离方法包括但不限于例如软胶囊、胶囊化、片剂和物理分离。
用于颗粒组合物的示例性填料或载体包括但不限于例如硫酸盐、碳酸盐和硅酸盐的各种盐；滑石；和黏土。用于液体组合物的示例性填料或载体包括但不限于，例如水或低分子量伯醇和仲醇，包括多元醇和二元醇(例如甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇)。在一些实施例中，组合物包含从约5％至约90％的此类填料或载体。在此类组合物中可包含酸性填料以降低清洁方法或应用中所得溶液的pH。
在另一个实施例中，本文所述的一种或多种组合物是处于选自凝胶、片剂、粉末、颗粒、固体、液体、单位剂量及其组合的形式。在一些实施例中，本文所述的清洁组合物是处于单位剂量形式。在其他实施例中，该单位剂量形式选自片剂、胶囊、小药囊、小袋和多室小袋。在一些实施例中，单位剂量形式被设计成在多隔室小袋(或其他单位剂量形式)内提供对成分的控制释放。合适的单位剂量和控制释放形式描述于例如EP 2100949；WO 02/102955；US 4,765,916；US 4,972,017；和WO 04/111178中。在一些实施例中，该单位剂量形式是包含在水溶性膜或小袋中的片剂或粉末。
在一些实施例中，本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体在低温下清洁。在其他实施例中，本文所述的一种或多种组合物在低温下清洁。在其他实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含有效量的本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体，该变体对于清洁需要蛋白质污渍去除的表面有用或有效。
在一个实施例中，本文所述的一种或多种清洁组合物包含有效量的本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体，该变体是单独的或与一种或多种另外的酶组合的。通常，清洁组合物包含至少约0.0001wt％至约20wt％、从约0.0001wt％至约10wt％、从约0.0001wt％至约1wt％、从约0.001wt％至约1wt％、或从约0.01wt％至约0.1wt％的一种或多种蛋白酶。在另一个实施例中，本文所述的一种或多种清洁组合物包含从约0.01至约10mg、约0.01至约5mg、约0.01至约2mg、约0.01至约1mg、约0.5至约10mg、约0.5至约5mg、约0.5至约4mg、约0.5至约4mg、约0.5至约3mg、约0.5至约2mg、约0.5至约1mg、约0.1至约10mg、约0.1至约5mg、约0.1至约4mg、约0.1至约3mg、约0.1至约2mg、约0.1至约2mg、约0.1至约1mg、或约0.1至约0.5mg的一种或多种蛋白酶/克组合物。
本文所述的清洁组合物可以被配制使得在水性条件中使用期间，洗涤水具有从约5.0至约11.5、或甚至从约7.5至约10.5的pH。液体组合物典型地被配制成具有从约3.0至约9.0或从约3.0至约5.0的pH。颗粒洗衣组合物典型地被配制成具有从约9至约11的pH。手洗餐具洗涤剂组合物典型地被配制成具有从约8至约11.5的pH，包括但不限于例如约8至约10、从约9至约11.5、和从约9.5至约11.5的pH范围。用于在推荐的使用水平下控制pH的技术包括，例如，使用缓冲剂、碱和酸。具有从约3至约5的净pH的清洁组合物典型地不含在这样的pH环境中水解的表面活性剂。低pH组合物通常包含足量的pH调节剂(例如，氢氧化钠、单乙醇胺或盐酸)和一种或多种酸稳定的酶。
示例性表面活性剂和/或表面活性剂系统包括但不限于非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂、两性离子表面活性剂、半极性非离子表面活性剂、以及它们的混合物。低pH清洁组合物(例如从约3至约5的净pH)典型地不含有烷基乙氧基化硫酸盐，因为据信这样的表面活性剂可以被此类组合物水解。在一些实施例中，该表面活性剂以从约0.1％至约60％的水平存在，而在可替代的实施例中，该水平为从约1％至约50％，而在仍进一步的实施例中，该水平为从约5％至约40％，以清洁组合物的重量计。
在一些实施例中，本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体被包封以在储存期间保护它不受清洁组合物中的其他组分的影响。在一些实施例中，包封材料包封至少一部分的本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体催化剂。典型地，包封材料是水溶性和/或水分散性的。在一些实施例中，包封材料具有0℃或更高的玻璃化转变温度(Tg)。示例性包封材料包括但不限于碳水化合物、天然或合成胶、甲壳素、壳聚糖、纤维素和纤维素衍生物、硅酸盐、磷酸盐、硼酸盐、聚乙烯醇、聚乙二醇、石蜡及其组合。当包封材料是碳水化合物时，其典型地选自单糖、寡糖、多糖及其组合。在一些典型的实施例中，包封材料是淀粉(参见例如EP 0922499；USPN4,977,252、5,354,559、和5,935,826)。在一些实施例中，包封材料是由塑料(例如热塑性塑料、丙烯腈、甲基丙烯腈、聚丙烯腈、聚甲基丙烯腈及其混合物)制成的微球。示例性商业微球包括但不限于
Figure BDA0001852231980002741
(阿克苏诺贝尔公司(Akzo Nobel ChemicalsInternational,B.V.))；PM6545、PM6550、PM7220、PM7228、和/>
Figure BDA0001852231980002742
(SphereOne公司)；以及/>
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Q-/>
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和/>
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(波特工业有限公司(PottersIndustries LLC))。
另外的实施例涉及一种清洁需要清洁的物品或表面的方法，其中所述方法包括使所述物品或表面与本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体或一种或多种组合物接触。在又另外的实施例中，清洁方法在低温或低pH下进行。在甚至仍另外的实施例中，清洁需要清洁的物品或表面。一些这样的方法进一步包括用水冲洗物品或表面。在一些实施例中，待清洁的物品或物体是餐具物品(例如，餐具、盘、杯、或碗)或食具物品(例如，餐具、刀具、刀、叉、勺子、筷子、玻璃器皿、罐、调味汁碟、和饮用容器)。
甚至另外的实施例涉及一种冷水洗涤方法，该方法包括使需要清洁的物品或表面与本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体或一种或多种组合物接触，其中所述物品或表面在从约10℃至约40℃的温度下洗涤，并且其中所述物品或表面被清洁。在一些实施例中，本文所述的“冷水洗涤”使用从约10℃至约40℃、或从约20℃至约30℃、或从约15℃至约25℃、以及在约15℃至约35℃范围内的所有其他组合、和在10℃至40℃之间所有范围的温度。仍又另外的实施例涉及一种清洁需要清洁的物品或表面的方法，其中所述方法包括使所述物品或表面与本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体或一种或多种组合物以及水接触，其中所述水具有选自1-19gpg、1-7gpg和7-19gpg的硬度。在一些情况下，如果需要，可以将该方法重复一次或多次，特别是如果需要另外的清洁或洗涤。例如，在一些情况下，该方法任选地进一步包括允许物品或表面与本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体或组合物在一段时间内保持接触，该时间足够或有效地将物品或表面清洁或洗涤至所希望的程度。出于本发明的目的，“洗涤”包括但不限于例如擦洗和机械搅拌。
另外的实施例涉及在洗涤机中清洁衣物或织物物品的方法，该方法包含提供洗涤机、放置一定量(足以在机器中清洁衣物或织物物品(例如，通过将组合物置于适当的或提供的洗涤剂隔室或分配器中))的包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体的衣物洗涤剂组合物，将衣物或织物物品放入机器中，以及操作机器以清洁衣物或织物物品(例如，按照制造商的说明)。
不同的地理位置具有不同的水硬度。通常按照颗粒/加仑(“gpg”)混合的Ca2+/Mg2+来描述水硬度。硬度是水中钙(Ca2+)和镁(Mg2+)的量的量度。美国大部分水都是硬水，但是硬度却不同。中等硬(60-120ppm)至硬(121-181ppm)水具有60至181ppm(可以将ppm除以17.1将ppm转化为颗粒/美国加仑)的硬度矿物。
水 颗粒/加仑 份/百万份
软 小于1.0 小于17
略硬 1.0至3.5 17至60
中等硬 3.5至7.0 60至120
硬 7.0至10.5 120至180
非常硬 大于10.5 大于180
典型地，欧洲水硬度大于约10.5(例如约10.5至约20.0)gpg混合的Ca2+/Mg2+(例如约15gpg混合的Ca2+/Mg2+)。典型地，北美水硬度大于日本水硬度、但低于欧洲水硬度。例如，北美水硬度通常在约3至约10gpg之间、约3至约8gpg之间、或约6gpg。日本水硬度典型地小于约4gpg(例如，约3gpg混合的Ca2+/Mg2+)。
仍又另外的实施例涉及一种组合物，该组合物包含按组合物重量计从约0.00001％至约10％的本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体，和按组合物重量计从约99.999％至约90.0％的一种或多种辅助材料。在另一个实施例中，清洁组合物包含按组合物重量计从约0.0001％至约10％、约0.001％至约5％、约0.001％至约2％、或约0.005％至约0.5％的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体，和按组合物重量计从约99.9999％至约90.0％、约99.999％至约98％、约99.995％至约99.5％的一种或多种辅助材料。
在其他实施例中，本文所述的组合物包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体和一种或多种另外的酶。所述一种或多种另外的酶选自半纤维素酶、纤维素酶、过氧化物酶、另外的蛋白酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、果胶酸裂合酶、甘露聚糖酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂加氧酶、木质素酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、漆酶、淀粉酶、金属蛋白酶、和其混合物。在一些实施例中，本文所述的组合物包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体和选自另外的蛋白酶、脂肪酶、角质酶、甘露聚糖酶、纤维素酶和淀粉酶中的一种或多种另外的酶。
在另一个实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体和一种或多种另外的蛋白酶。在一个实施例中，另外的蛋白酶是丝氨酸蛋白酶。在另一个实施例中，另外的蛋白酶是碱性微生物蛋白酶或胰蛋白样蛋白酶。示例性碱性蛋白酶包括衍生自例如芽孢杆菌属的枯草杆菌蛋白酶(例如，迟缓芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶(即GG36)、解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶(即BPN’)、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147、PB92、和枯草杆菌蛋白酶1680)。示例性的另外的蛋白酶包括但不限于例如商业蛋白酶MAXATASE、MAXACAL、MAXAPEM、
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Figure BDA0001852231980002772
OXP、
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PREFERENZTM蛋白酶(例如P100、P110、P280)、EFFECTENZTM蛋白酶(例如P1000、P1050、P2000)、EXCELLENZTM蛋白酶(例如P1000)、/>
Figure BDA0001852231980002774
和PURAFAST(美国丹尼斯科公司(Danisco US))；/>
Figure BDA0001852231980002775
ULTRA、
Figure BDA0001852231980002776
Figure BDA0001852231980002777
16L、/>
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Figure BDA0001852231980002779
ULTRA、/>
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PRIMASE、DURAZYM、
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和/>
Figure BDA00018522319800027713
(诺维信公司)；BLAPTM和BLAPTM变体(汉高公司(Henkel))；LAVERGYTMPRO 104L(BASF)、和
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(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶(花王公司))。示例性的另外的蛋白酶还包括但不限于以下中的那些：例如WO 95/23221、WO 92/21760、WO 2008010925、WO 20100566356、WO2011072099、WO 201113022、WO 2011140364、WO 2012151534、WO 2015038792、WO2015089441、WO 2015089447、WO 2015143360、WO 2016001449、WO 2016001450、WO2016061438、WO 2016069544、WO 2016069548、WO 2016069552、WO 2016069557、WO2016069563、WO 2016069569、WO 2016087617、WO 2016087619、WO 2016145428、WO2016174234、WO 2016183509、WO 2016202835、WO 2016205755、US 2008/0090747、US 5,801,039、US 5,340,735、US 5,500,364、US 5,855,625、RE 34,606、US 5,955,340、US 5,700,676、US 6,312,936、US 6,482,628、US8530219；美国临时申请号62/331282、62/343618、62/351649、62/437171、62/437174、和62/437509；和PCT申请号PCT/CN 2017/076749，以及描述于以下中的金属蛋白酶：WO 2007/044993、WO 2009/058303、WO 2009/058661、WO 2014/071410、WO 2014/194032、WO 2014/194034、WO 2014/194054、和WO 2014/194117。示例性的另外的蛋白酶包括但不限于胰蛋白酶(例如猪或牛起源的)和在WO 89/06270中描述的镰孢菌属(Fusarium)蛋白酶。
另一个实施例涉及包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体和一种或多种脂肪酶的组合物。在一些实施例中，该组合物包含按组合物重量计从约0.00001％至约10％、约0.0001％至约10％、约0.001％至约5％、约0.001％至约2％、或约0.005％至约0.5％的脂肪酶。示例性脂肪酶可以是化学或遗传修饰的突变体。示例性脂肪酶包括但不限于例如细菌或真菌来源的那些，例如像绵毛状腐质菌(H.lanuginosa)脂肪酶(参见例如EP258068、和EP 305216)、疏棉状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)脂肪酶(参见例如WO 2014/059360和WO2015/010009)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶(参见例如EP238023)、假丝酵母属脂肪酶例如南极洲假丝酵母(C.antarctica)脂肪酶(例如南极洲假丝酵母脂肪酶A或B)(参见例如EP 214761)、假单胞菌属脂肪酶例如产碱假单胞菌(P.alcaligenes)脂肪酶和假产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)脂肪酶(参见例如，EP218272)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)脂肪酶(参见例如，EP 331376)、施氏假单胞菌(P.stutzeri)脂肪酶(参见例如，GB 1,372,034)、萤光假单胞菌(P.fluorescens)脂肪酶、芽孢杆菌属脂肪酶(例如枯草芽孢杆菌脂肪酶(Dartois等人，Biochem.Biophys.Acta[生物化学与生物物理学报]1131:253-260(1993))、嗜热脂肪芽孢杆菌脂肪酶(参见例如，JP 64/744992)、和短小芽孢杆菌脂肪酶(参见例如，WO 91/16422))。其他脂解酶如角质酶也可用于本文所述的一种或多种组合物中，包括但不限于例如衍生自门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)的角质酶(参见WO 88/09367)和衍生自豌豆根腐镰孢菌(Fusarium solani pisi)的角质酶(参见WO 90/09446)。示例性商业脂肪酶包括但不限于M1LIPASE、LUMA FAST、和LIPOMAX(杰能科公司(Genencor))；
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和/>
Figure BDA0001852231980002792
ULTRA(诺维信公司)；和LIPASE P(天野药业有限公司(AmanoPharmaceutical Co.Ltd))。
仍进一步的实施例涉及包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体和一种或多种淀粉酶的组合物。在一个实施例中，该组合物包含按组合物重量计从约0.00001％至约10％、约0.0001％至约10％、约0.001％至约5％、约0.001％至约2％、或约0.005％至约0.5％的淀粉酶。适合用于碱性溶液中的任何淀粉酶(例如，α淀粉酶和/或β淀粉酶)可以用于包含在此类组合物中。示例性淀粉酶可以是化学或遗传修饰的突变体。示例性淀粉酶包括但不限于细菌或真菌来源的那些，例如，像描述于以下专利文献中的淀粉酶：GB 1,296,839、WO 91/00353、WO 94/02597、WO 94/183314、WO 95/10603、WO 95/26397、WO 95/35382、WO 96/05295、WO 96/23873、WO 96/23874、WO 96/30481、WO 97/10342、WO 97/41213、WO97/43424、WO 98/13481、WO 98/26078、WO 99/02702、WO 99/09183、WO 99/19467、WO 99/23211、WO 99/29876、WO 99/42567、WO 99/43793、WO 99/43794、WO 99/46399、WO 00/29560、WO 00/60058、WO 00/60059、WO 00/60060、WO 01/14532、WO 01/34784、WO 01/64852、WO 01/66712、WO 01/88107、WO 01/96537、WO 02/092797、WO 02/10355、WO 02/31124、WO 2004055178、WO 2004113551、WO 2005001064、WO 2005003311、WO 2005018336、WO 2005019443、WO 2005066338、WO 2006002643、WO 2006012899、WO 2006012902、WO2006031554、WO 2006063594、WO 2006066594、WO 2006066596、WO 2006136161、WO2008000825、WO 2008088493、WO 2008092919、WO 2008101894、WO 2008112459、WO2009061380、WO 2009061381、WO 2009100102、WO 2009140504、WO 2009149419、WO2010059413、WO 2010088447、WO 2010091221、WO 2010104675、WO 2010115021、WO2010115028、WO 2010117511、WO 2011076123、WO 2011076897、WO 2011080352、WO2011080353、WO 2011080354、WO 2011082425、WO 2011082429、WO 2011087836、WO2011098531、WO 2013063460、WO 2013184577、WO 2014099523、WO 2014164777、和WO2015077126。示例性商业淀粉酶包括但不限于
Figure BDA0001852231980002801
AMPLIFY/>
Figure BDA0001852231980002802
BAN
Figure BDA0001852231980002803
ULTRA、/>
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/>
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PLUS、/>
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ULTRA和/>
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(诺维信公司)；EFFECTENZTM S 1000、/>
Figure BDA0001852231980002808
PREFERENZTM S 100、PREFERENZTM S 110、EXCELLENZTM S 2000、/>
Figure BDA0001852231980002809
和/>
Figure BDA00018522319800028010
P(美国丹尼斯科公司)。
仍又进一步的实施例涉及包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体和一种或多种纤维素酶的组合物。在一个实施例中，该组合物包含按组合物重量计从约0.00001％至约10％、0.0001％至约10％、约0.001％至约5％、约0.001％至约2％、或约0.005％至约0.5％的纤维素酶。任何合适的纤维素酶可以用于本文所述的组合物中。示例性纤维素酶可以是化学或遗传修饰的突变体。示例性纤维素酶包括但不限于细菌或真菌起源的那些纤维素酶，例如像描述于WO 2005054475、WO 2005056787、US 7,449,318、US 7,833,773、US 4,435,307；EP 0495257；美国临时申请号62/435340；和PCT申请号PCT/US 16/67223中的那些。示例性商业纤维素酶包括但不限于
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Figure BDA00018522319800028012
PREMIUM、/>
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和/>
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(诺维信公司)；/>
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100、/>
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200/220和/>
Figure BDA00018522319800028017
2000(美国丹尼斯科公司)；以及KAC-500(B)(花王公司)。在一些实施例中，纤维素酶作为成熟野生型或变体纤维素酶的部分或片段掺入，其中N末端的一部分被缺失(参见例如US5,874,276)。
甚至仍进一步的实施例涉及包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体和一种或多种甘露聚糖酶的组合物。在一个实施例中，该组合物包含按组合物重量计从约0.00001％至约10％、约0.0001％至约10％、约0.001％至约5％、约0.001％至约2％或约0.005％至约0.5％的甘露聚糖酶。示例性甘露聚糖酶可以是化学或遗传修饰的突变体。示例性甘露聚糖酶包括但不限于：细菌或真菌来源的那些，例如像WO 2016007929；USPN6566114、6602842、和6440991以及国际申请号PCT/US2016/060850和PCT/US 2016/060844中所述的那些。示例性商业甘露聚糖酶包括但不限于
Figure BDA0001852231980002811
(诺维信公司)和EFFECTENZTM M 1000、/>
Figure BDA0001852231980002812
M 100、/>
Figure BDA0001852231980002813
和PURABRITE(美国丹尼斯科公司)。
又甚至仍进一步的实施例涉及包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体以及一种或多种过氧化物酶和/或氧化酶的组合物。在一个实施例中，该组合物包含按组合物重量计从约0.00001％至约10％、约0.0001％至约10％、约0.001％至约5％、约0.001％至约2％、或约0.005％至约0.5％的过氧化物酶或氧化酶。过氧化物酶可以与过氧化氢或其来源(例如过碳酸盐、过硼酸盐或过硫酸盐)组合使用，并且氧化酶可以与氧气组合使用。将单独的或与增效剂组合的过氧化物酶和氧化酶用于“溶液漂白”(即当织物在洗涤液中一起洗涤时防止纺织染料从一种染色的织物转移到另一种织物上)(参见例如WO 94/12621和WO95/01426)。示例性过氧化物酶和/或氧化酶可以是化学或遗传修饰的突变体。示例性过氧化物酶/氧化酶包括但不限于植物、细菌或真菌来源的那些。
另一个实施例涉及包含本文所述的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体和一种或多种过水解酶的组合物，例如像于WO 2005056782、WO 2007106293、WO 2008063400、WO2008106214和WO 2008106215中描述的。
在又另一个实施例中，本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体以及在本文所述的一种或多种组合物中包含的一种或多种另外的酶可以各自独立地变动至约10％，其中该清洁组合物的余量为一种或多种辅助材料。
在一些实施例中，本文所述的一种或多种组合物可用作洗涤剂添加剂，其中所述添加剂为固体或液体形式。此类添加剂产品旨在补充和/或提高常规洗涤剂组合物的性能，并且可以在清洁过程的任何阶段添加。在一些实施例中，衣物洗涤剂组合物的密度范围为从约400g/升至约1200g/升，而在其他实施例中，其范围500g/升至约950g/升的组合物(在20℃下测量)。
其他实施例涉及本文所述的一种或多种组合物，其中所述组合物是致密的颗粒状织物清洁组合物，其可用于洗涤有色织物或通过洗涤能力(wash capacity)提供软化，或者所述组合物是重垢液体(HDL)织物清洁组合物。示例性织物清洁组合物描述于USPN 6,610,642和6,376,450中。在欧洲或日本洗涤条件下使用的示例性颗粒状衣物洗涤剂组合物描述于US 6,610,642中。其他示例性清洁组合物描述于例如USPN 6,376,445、6,294,514、5,929,022、5,879,584、5,691,297、5,565,145、5,574,005、5,569,645、5,565,422、5,516,448、5,489,392、以及5,486,303；4,968,451、4,597,898、4,561,998、4,550,862、4,537,706、4,515,707、以及4,515,705中。
在一些实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含一种或多种洗涤剂助洗剂或助洗剂系统。在一个实施例中，该组合物包含按组合物重量计从约1％、从约3％至约60％或甚至从约5％至约40％的助洗剂。示例性助洗剂包括但不限于例如多磷酸盐的碱金属盐、铵盐和烷醇铵盐；碱金属硅酸盐；碱土金属和碱金属碳酸盐；铝硅酸盐；聚羧酸化合物；醚羟基多羧酸盐；马来酸酐与乙烯或乙烯基甲基醚、1,3,5-三羟基苯-2,4,6-三磺酸、和羧基甲基氧基琥珀酸的共聚物；各种碱金属；聚乙酸的铵和取代的铵盐，例如乙二胺四乙酸和次氮基三乙酸，以及聚羧酸酯，例如苯六甲酸、琥珀酸、柠檬酸、氧代二琥珀酸(oxydisuccinicacid)、聚马来酸、苯1,3,5-三羧酸、羧基甲基氧基琥珀酸；及其可溶性盐。在一些此类组合物中，助洗剂形成水溶性硬度离子络合物(例如螯合助洗剂)，例如柠檬酸盐和多磷酸盐(例如三聚磷酸钠、三聚磷酸钠六水合物、三聚磷酸钾、以及混合的三聚磷酸钠和三聚磷酸钾)。示例性助洗剂描述于例如EP 2100949中。
在一些实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含一种或多种螯合剂。在一个实施例中，该组合物包含按组合物重量计从约0.1％至约15％或约3％至约10％的螯合剂。示例性螯合剂包括但不限于例如铜、铁、锰及其混合物。
在一些实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含一种或多种沉积助剂。示例性沉积助剂包括但不限于例如聚乙二醇；聚丙二醇；聚羧酸盐；去污聚合物，例如像聚对苯二甲酸；黏土，例如像高岭石、蒙脱石、硅镁土、伊利石、膨润土和多水高岭土；以及它们的混合物。
在其他实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含一种或多种抗再沉积剂或非离子表面活性剂(其可以防止污物的再沉积)(参见例如EP 2100949)。
在一些实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含一种或多种染料转移抑制剂。示例性聚合物染料转移抑制试剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮、聚乙烯咪唑及其混合物。在一个实施例中，所述组合物包含按组合物的重量计从约0.0001％至约10％、约0.01％至约5％或约0.1％至约3％的染料转移抑制剂。
在一些实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含一种或多种硅酸盐。示例性硅酸盐包括但不限于硅酸钠，例如二硅酸钠、偏硅酸钠和结晶页硅酸盐。在一些实施例中，硅酸盐以按该组合物的重量计从约1％至约20％或约5％至约15％的水平存在。
在一些仍另外的实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含一种或多种分散剂。示例性水溶性有机材料包括但不限于例如均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包括被不超过两个碳原子彼此分开的至少两个羧基自由基。
在一些另外的实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含一种或多种酶稳定剂。在一些实施例中，酶稳定剂是钙和/或镁离子的水溶性来源。在一些实施例中，酶稳定剂包括寡糖、多糖和无机二价金属盐，包括碱土金属，例如钙盐。在一些实施例中，本文使用的酶通过成品组合物中的锌(II)、钙(II)和/或镁(II)离子的水溶性来源(为所述酶提供此类离子)，以及其他金属离子(例如，钡(II)、钪(II)、铁(II)、锰(II)、铝(III)、锡(II)、钴(II)、铜(II)、镍(II)以及氧钒(IV))的存在来稳定。氯化物和硫酸盐也可用于本发明的一些实施例中。示例性寡糖和多糖(例如糊精)描述于例如WO 07/145964中。在一些实施例中，还可使用可逆的蛋白酶抑制剂，例如含硼化合物(例如硼酸盐、4-甲酰基苯基硼酸)和/或三肽醛。
在一些实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含一种或多种漂白剂、漂白活化剂、和/或漂白催化剂。在一些实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含一种或多种无机和/或有机漂白化合物。示例性无机漂白剂包括但不限于过氧化氢合物盐(例如过硼酸盐、过碳酸盐、过磷酸盐、过硫酸盐和过硅酸盐)。在一些实施例中，无机过氧化氢合物盐是碱金属盐。在一些实施例中，包括的无机过氧化氢合物盐为结晶固体，没有另外的保护，但是在一些其他实施例中，该盐被包被。漂白活化剂通常为有机过酸前体，其在60℃及以下的温度下在清洁过程中增强漂白作用。示例性漂白活化剂包括在过水解条件下给出具有从约1至约10个碳原子或约2至约4个碳原子的脂肪族过氧羧酸的化合物、和/或任选地取代的过氧苯甲酸。示例性漂白活化剂描述于例如EP 2100949中。示例性漂白催化剂包括但不限于三氮杂环壬烷锰和相关络合物，以及钴、铜、锰和铁络合物。另外的示例性漂白催化剂描述于例如US 4,246,612；US 5,227,084；US 4,810,410；WO 99/06521；和EP 2100949中。
在一些实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含一种或多种催化性金属络合物。在一些实施例中，可使用含金属的漂白催化剂。在一些实施例中，金属漂白催化剂包含一种催化体系，该催化体系包括：具有限定的漂白催化活性的过渡金属阳离子(例如铜、铁、钛、钌、钨、钼或锰阳离子)，具有很少或不具有漂白催化活性的辅助金属阳离子(例如锌或铝阳离子)，以及对于催化性和辅助性金属阳离子具有限定的稳定性常数的螯合物，特别是乙二胺四乙酸、乙二胺四(亚甲基膦酸)及其水溶性盐(参见例如US 4,430,243)。在一些实施例中，本文所述的一种或多种组合物用锰化合物来催化。此类化合物和使用水平描述于例如US 5,576,282中。在另外的实施例中，钴漂白催化剂可用于和包括于本文所述的一种或多种组合物中。各种钴漂白催化剂描述于例如USPN 5,597,936和5,595,967中。
在一些另外的实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含大多环刚性配体(MRL)的过渡金属络合物。作为实际问题而并非通过限制，在一些实施例中，对本文所述的组合物和清洁方法进行调节以在洗涤液中提供至少一亿分之一量级的、从约0.005ppm至约25ppm、约0.05ppm至约10ppm、或约0.1ppm至约5ppm的活性MRL。
示例性MRL包括但不限于形成交联桥接的特殊超刚性配体(例如像5,12-二乙基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷)。示例性金属MRL描述于例如WO 2000/32601和US 6,225,464中。
在另一个实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含一种或多种金属护理剂。在一些实施例中，组合物包含按该组合物的重量计从约0.1％至约5％的金属护理剂。示例性金属护理剂包括例如铝、不锈钢和非铁金属(例如，银和铜)。另外的示例性金属护理剂描述于例如EP 2100949、WO 94/26860、和WO 94/26859中。在一些组合物中，金属护理剂是锌盐。
在另一个实施例中，本文所述的一种或多种组合物包含磷酸盐和/或硼。在另一个实施例中，本文所述的一种或多种组合物不含磷酸盐或硼。
实例1
方法
性能指数
酶的性能指数(PI)比较了在相同蛋白质浓度下，变体(测量值)与亲本酶(理论值或测量值)的性能。可以使用从亲本酶标准曲线的朗缪尔(Langmuir)拟合提取的参数计算亲本酶的理论浓度。PI大于1(PI>1)表明与亲本或基准蛋白酶(针对每个分析的数据集定义的)相比，变体的性能得到改善，而PI为1(PI＝1)鉴定为变体与其亲本具有相同的性能，PI小于1(PI<1)鉴定为变体的性能不如其亲本。
蛋白质纯化
将样品用25mM的MES(pH为5.4)、1mM的CaCl2缓冲液透析过夜，并装载在用相同缓冲液平衡的30mL的源15S柱(GE医疗集团(GE Healthcare))上。运行0至150mM的NaCl梯度，并收集级分。合并含有靶蛋白的级分，将其浓缩，并用40％丙二醇进行配制，并且无菌过滤。
用于蛋白质确定的HPLC测定
对于高分辨率浓度确定，对蛋白质样品进行高效液相色谱法(HPLC)方法。使用配备有安捷伦300SB-C8柱的安捷伦1100HPLC进行蛋白质定量。使用在水中的0.1％三氟乙酸(TFA)和在乙腈中的0.1％TFA的梯度从柱洗脱样品。在220nm处测量吸光度，并使用ChemStation软件(安捷伦科技公司(Agilent Technologies)，美国)对峰进行积分。基于纯化的GG36蛋白酶变体(指定为JV0001)(SEQ ID NO:14)的标准曲线来计算样品的蛋白质浓度。
蛋白酶活性测定
通过测量二甲基酪蛋白(DMC)或脱脂奶底物的水解或通过测量N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe对硝基苯胺(suc-AAPF-pNA)比色底物的水解来测试GG36野生型(“WT')(SEQID NO:1)(“亲本”)及其变体的蛋白酶活性。
用于DMC测定的试剂溶液是：在100mM碳酸钠缓冲液(pH 9.5)中的2.5％w/v DMC(西格玛C-9801)、在试剂A中的0.075％TNBSA(赛默科技公司(Thermo Scientific))。试剂A：在15mL 4N NaOH中的45.4g Na2B4O7.10H2O，在去离子水中达到1000mL的终体积。将蛋白酶上清液在稀释溶液(10mM NaCl、0.1mM CaCl2、0.005％Tween-80)中稀释至所希望的浓度，以在3min的水解期间获得线性响应。向384孔微量滴定板(MTP)装填27μl DMC底物，随后添加27μl试剂A中的TNBSA。然后伴随缓慢混合添加6μL的5μl稀释的蛋白酶上清液。使用SpectraMax酶标仪以动力学方式在室温下经3min在405nm下测量活性。从每个样品读数中减去含有热灭活蛋白酶的空白的吸光度。将蛋白酶活性表达为mOD/min。
用于脱脂奶测定的试剂溶液为：100mM Tris中的40mg/mL BD Difco脱脂奶粉，0.005％吐温-80(pH 8.6，10gpg硬度)。在使用前将溶液平衡1小时。使用SpectraMax酶标仪以动力学方式在室温下经3min在650nm下测量活性。活性以mOD/min表示。
通过测量N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe对硝基苯胺(suc-AAPF-pNA，西格玛：S-7388)比色底物的水解来测试蛋白酶活性。使用的试剂溶液是：100mM Tris-HCl pH 8.6，0.005％
Figure BDA0001852231980002871
-80(Tris缓冲液)和在DMSO中的160mM suc-AAPF-pNA(suc-AAPF-pNA原液)。酶上清液用稀释溶液(10mM氯化钠，0.1mM的氯化钙，0.005％/>
Figure BDA0001852231980002872
-80和0.02％叠氮化钠)稀释。为了制备工作底物溶液，将1mL suc-AAPF-pNA原液添加到100mL Tris缓冲液中并混合。用50μL/孔的1mg/mL suc-AAPF-pNA工作溶液填充384孔微量滴定板(MTP)，并将等分试样(5μL/孔)的稀释的酶上清液伴随缓慢混合添加到该MTP的孔中。通过使用SpectraMax分光光度计读板器以动力学方式在室温下经3min读取405nm处的吸光度来测量活性。从每个样品读数中减去含有热灭活蛋白酶的空白的吸光度。蛋白酶活性表示为mOD/min，并靶向蛋白酶稀释液，以得到空白校正的无应力蛋白酶活性，范围为5-300mOD/min。
ADW洗涤剂的清洁性能
使用PAS-38微型样本(在丙烯酸纤维织物上的蛋黄，用炭黑染料老化和着色，购自荷兰符拉尔丁根的测试材料BV中心(Center for Testmaterials BV，Vlaardingen，Netherlands))作为基于培养皿的应用的读数来测试GG36变体相对于亲本的清洁性能。预先穿孔(以放入MTP)的、经冲洗的和填充的含样本的MTP(康宁(Corning)3641)由测试材料BV中心(Center for Testmaterials BV)制备。使用组合物A(下表1中所示，使用10mM CAPS将其pH调节至11)在自动餐具洗涤应用(ADW)下评估GG36变体的清洁性能。通过将180μl的10mM CAPS缓冲液(pH 11)添加到含有PAS38微型样本的MTP中来制备PAS38样本。将MTP密封并在iEMS培养箱中在60℃和1100rpm摇动下孵育30min。孵育后，除去缓冲液，并在用于性能测定之前将板风干。在添加酶之前，向MTP填充具有19gpg水硬度(以代表非常硬的水条件)的组合物A，用于在50℃测试。在添加酶之前，在20℃，向MTP填充具有7gpg水硬度(以代表中等水条件)的组合物A和组合物B。通过使用15,000gpg的原液(3:1Ca:Mg、1.924M CaCl2和0.641M MgCl2)调节水硬度。对于洗涤条件，将组合物A稀释至终浓度为3.95g/L用于洗涤试验，并将组合物B稀释至终浓度为1mL/L。
对于测定，向每个孔中添加5-10uL(10-20ppm)稀释的酶溶液。密封MTP，然后在20℃或50℃在IEMS振荡器中孵育30min。在孵育后，将160ul上清液转移到新鲜的MTP(科斯塔9017)中，并使用SpectraMax读板器测量405nm处的吸光度。通过从每个样品值中减去空白对照(无酶)的值(以下为“减去空白的吸光度”)来获得吸光度结果。对于每种条件，通过将每种酶(包括亲本)的减去空白的吸光度除相同浓度的亲本的预测吸光度值来确定比率。该值由符合朗缪尔(Langmuir)拟合的纯化亲本的标准曲线确定。通过将上述每种酶的计算比率除以针对亲本计算的上述比率来计算PI。
Figure BDA0001852231980002881
Figure BDA0001852231980002891
*不含任何蛋白酶
ADW洗涤剂的热稳定性
为了测量酶稳定性，添加组合物A(溶于去离子水中至终浓度为3.95g/L，具有所期望的水硬度(1或19gpg))和GG36变体的等分试样以达到所需的酶浓度。随后使用上文所述的DMC蛋白酶活性测定在加热孵育步骤之前和之后测量蛋白酶的蛋白水解活性。选择热孵育步骤的温度和持续时间，使得参比蛋白酶显示约30％的残留活性。测量在以下中进行：(a)软水(1gpg)，应力温度范围为从48℃至57℃，和(b)硬水(19gpg)，应力温度范围为从56℃至71℃。％残留活性是通过取应力活性与非应力活性的比例并乘以100来计算的。通过将GG36变体的残留活性除以亲本的残留活性获得稳定性PI。随着变体的稳定性增加，由于亲本和越来越稳定的变体之间的稳定性的巨大差异，亲本不能用作测量残留活性％的对照。JV0009(可以被给予应力为与其他变体相似的残留活性％)被选择作为新的对照变体，并随后用于代替亲本来计算这些变体的PI。为了将相对于JV0009计算的PI转换为亲本，在1和19gpg下测定JV0009和亲本的半衰期。通过测量不同时间点的残余DMC活性，并然后将时间点与残余活性拟合为单指数衰减函数来确定半衰期。使用每个水硬度下计算的半衰期的比率将相对于JV0009计算的PI转换为相对于亲本的PI。将表4中所示的PI以这种方式从JV0009转换为亲本。
衣物洗涤剂的清洁性能
使用EMPA-116微型样本(在棉布上的血/奶/墨水，购自荷兰符拉尔丁根的测试材料BV中心(Center for Testmaterials BV，Vlaardingen，Netherlands))作为基于洗衣的应用的读数来测试GG36变体相对于JV0001的清洁性能。使用可商购的重垢液体衣物(HDL)洗涤剂
Figure BDA0001852231980002901
(原味洗衣液(Original scent)，宝洁公司，于2016年在当地超市购买)进行测定。/>
为了消除背景酶活性，通过在水浴中在95℃孵育洗涤剂4小时使在该商业洗涤剂中存在的酶失活。在热孵育后，使用上述AAPF活性测定法测定洗涤剂的任何残余背景蛋白酶活性-在4小时热孵育后未检测到蛋白酶活性，证明背景活性失活。
通过荷兰符拉尔丁根的测试材料BV中心制备MTP板(非结合平底透明聚苯乙烯96孔板，科宁(Corning)3641)中的预先穿孔(以适应MTP)样本。通过添加180μL的去离子水到含有样本的各孔中并将板在25℃以1150rpm震荡15分钟(例如在iEMS孵化器/振摇器中，赛默飞世尔科技公司，沃尔瑟姆(Waltham)，马萨诸塞州)来对这些含有微型样本的板进行预漂洗。除去漂洗水，并然后将样本在板中风干过夜。
对于该测定，根据制造商的说明，使用伯乐公司(Bio-Rad)蛋白质测定染料试剂浓缩物(目录号500-0006，伯乐实验室公司(Bio-Rad Laboratories)，赫拉克勒斯(Hercules)，加利福尼亚州)通过Bradford方法测定酶上清液中的蛋白质浓度。简言之，将试剂浓缩物用去离子水稀释至工作浓度(水与浓缩物的比例为4:1(v/v))，并在微量滴定板的每个孔中(例如，非结合的，平底透明的聚苯乙烯板，科宁3641)，将稀释的酶上清液的等分试样与工作试剂(样品与试剂的比例为1:20(v/v))混合。将板在室温下孵育10分钟，并在读板器分光光度计(例如SpectraMax Plus 384，分子器件公司，森尼韦尔，加利福尼亚州)中测量595nm处的吸光度。基于纯化的JV0001蛋白酶的标准曲线测定样品的蛋白质浓度。
为了测试酶变体的清洁性能，将酶上清液的等分试样添加到含有微型样本的MTP中，所述MTP预填充有热灭活的
Figure BDA0001852231980002902
洗涤剂溶液(最终洗涤剂浓度0.78g/L，使用5mMHEPES缓冲液稀释，pH 8.2和6gpg水硬度)使每孔的最终体积达到180uL，最终酶浓度在0.5-2.5ppm之间。密封MTP，并然后在1150rpm伴随搅动在25℃在iEMS孵化器/振摇器(赛默飞世尔科技公司，沃尔瑟姆(Waltham)，马萨诸塞州)中孵育30min。孵育后，将100μL的洗涤液上清液转移至新鲜MTP(例如中等结合，平底透明聚苯乙烯板，科宁9017)中，并在读板器分光光度计(例如SpectraMax Plus 384，分子设备公司(Molecular Devices)，森尼维耳市(Sunnyvale)，加利福尼亚州)中测量在600nm处的吸光度。从每个样品的吸光度值中减去空白对照(无酶)的吸光度值，得到减去空白的吸光度结果(下文称为“减去空白的吸光度”)。对于每种条件，通过将每种酶(包括JV0001蛋白酶)的减去空白的吸光度除相同浓度的JV0001蛋白酶的预测吸光度值来确定比率。该预测的吸光度值由符合朗缪尔(Langmuir)拟合的纯化JV0001蛋白酶的标准曲线确定。通过将上述每种酶的计算比率除以针对JV0001蛋白酶计算的上述比率来计算性能指数(PI)。
衣物洗涤剂的热稳定性
使用可商购的重垢液体衣物(HDL)洗涤剂
Figure BDA0001852231980002911
(原味洗衣液(Original scent)，宝洁公司，于2016年在当地超市购买)，通过在应力条件下孵育后测量样品的残留活性来评估GG36变体的蛋白酶稳定性。为了消除背景酶活性，使用“衣物洗涤剂的清洁性能”下的上述方案来灭活存在于该商业洗涤剂中的酶(在水浴中在95℃孵育该洗涤剂4小时并使用AAPF活性测定法证实不存在背景蛋白酶活性)。
将热灭活的洗涤剂在去离子水中稀释至10％w/w，并添加等分式样的GG36变体以达到所需的酶浓度。随后使用上文所述的AAPF蛋白酶活性测定在加热孵育步骤之前和之后测量蛋白酶的蛋白水解活性。使用GG36、JV0001和JV0009作为对照，并选择孵育条件，使得所述对照之一显示30％-60％残留活性。热培养步骤在50℃至61℃的应力温度范围中进行5分钟。
在进行AAPF活性测定之前，将蛋白酶-洗涤剂样品在稀释溶液(10mM氯化钠，0.1mM氯化钙，0.005％Tween 80和0.02％叠氮化钠)中稀释10倍。一式三份地测定无应力活性值和应力活性值。通过将减去空白的应力活性除以减去空白的无应力活性来计算每个重复的残留活性。随后计算这些一式三份的残留活性测量值的平均值并乘以100以将它们表示为残留活性％。
实例2
GG36蛋白酶变体的克隆与表达
使用常规分子生物学技术进行产生GG36变体的DNA操作(参见，例如Sambrook等人，Molecular Cloning[分子克隆]：Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社])。产生人工DNA序列，其将多个氨基酸修饰引入GG36WT的序列中以生成不同的变体。GG36WT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。合成包含枯草芽孢杆菌aprE启动子(如SEQ ID NO:4所示)和枯草芽孢杆菌aprE信号肽(如SEQ ID NO:5所示)的DNA盒。使用本领域已知的技术，使用Gibson组件组装PCR片段以制备最终表达盒。由SEQ ID NO:5编码的来自枯草芽孢杆菌的aprE信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。
将掺入GG36变体和上述其他元件的表达盒整合到合适的枯草芽孢杆菌菌株的染色体中或克隆到pSB复制穿梭载体中(BabéLM、Yoast S、Dreyer M和Schmidt BF，“Heterologous expression of human granzyme K in Bacillus subtilis andcharacterization of its hydrolytic activity in vitro[人粒酶K在枯草芽孢杆菌中的异源表达及其体外水解活性的表征]”，Biotechnol Appl Biochem.[应用生物化学与生物技术],27,Pt 2,117-24,1998)，并转化到合适的枯草芽孢杆菌菌株中。pSB载体衍生自pBNppt，通过将aprE基因片段克隆到质粒pBN3中而构建。通过从质粒pBN2中除去氨苄青霉素基因中的PstI位点构建质粒pBN3。质粒pBN2是pBR322和pUB110的杂合质粒，具有来自pUC18的多克隆位点。使用表2中列出的引物，通过PCR扩增包含枯草芽孢杆菌表达盒(如SEQID NO:7所示)和GG36基因(如SEQ ID NO:3所示)的DNA片段。
Figure BDA0001852231980002931
使用本领域已知的技术，使用Gibson组件(SGI DNA Cat#GA1100-10)组装PCR片段以制备最终表达盒。将枯草芽孢杆菌细胞转化至补充有5μg/ml氯霉素的琼脂固化的LB上并在其上生长。
为了产生用于生物化学表征的GG36变体样品，转化的枯草芽孢杆菌细胞的选择性生长在96孔MTP中在32℃在每孔的培养基中进行96小时(以MOPS缓冲液为基础的加富性半组合培养基，以尿素为主要氮源，葡萄糖为主要碳源，并补充1％大豆胨以增强细胞生长)。通过以3600rpm离心45分钟收获培养物，并使用密理博公司(Millipore)真空系统通过
Figure BDA0001852231980002932
过滤板(EMD密理博公司(EMD Millipore)，马萨诸塞州，美国)进行过滤。将过滤的培养物上清液用于下述测定。
产生的GG36蛋白酶变体列于表3和4中，其中使用BPN'编号描述相对于GG36的突变。
Figure BDA0001852231980002933
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实例3
GG36蛋白酶变体的ADW清洁性能和稳定性
在MTP测定(如实例1所述)中筛选如上面实例2中所述产生的GG36变体，以便比较其相对于亲本的清洁性能和稳定性。结果在表5和表6中示出。使用pH 11的组合物A和PAS38蛋黄污物样本，在19gpg、50℃下，测量清洁性能。使用pH 11的组合物A和B以及PAS38蛋黄污物样本，在7gpg、20℃下，测量清洁性能。在应力后(在19gpg且温度范围为56℃-71℃或在1gpg且温度范围为48℃-57℃)通过DMC水解测量酶稳定性。使用脱脂奶作为底物测量比活性。贯穿所有表使用的首字母缩略词“ND”表示该值未确定，或者结果被省略，因为获得的值太低而使得该值不具有可信度。
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实例4
GG36蛋白酶变体的衣物清洁性能和稳定性
在MTP测定(如实例1所述)中筛选如上面实例2中所述产生的GG36变体，以便比较其相对于亲本的清洁性能和稳定性。结果在表7和表8中示出。使用液体洗涤剂
Figure BDA0001852231980003231
(原味洗衣液(Original scent)，宝洁公司)和EMPA-116微型样本(在棉布上的血液/奶/墨水)在25℃测量清洁性能。在表7和8中列出的温度(即，在50℃、59℃和/或61℃)下，在应力孵育5分钟之前和之后，通过AAPF-pNA水解来测量在10％/>
Figure BDA0001852231980003232
液体洗涤剂中的酶热稳定性。贯穿所有表使用的首字母缩略词“ND”表示“未确定”。在表7和8中，与亲本相比，将清洁以PI报告，并且将稳定性以应力后的残余活性百分比报告。/>
Figure BDA0001852231980003233
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Figure BDA0001852231980003281
实例5
蛋白酶的自动餐具洗涤性能评估
自动餐具洗涤组合物中的变体
测试A
在每个循环的分配器抽屉的开口处向每个自动餐具洗涤机中添加一剂量的洗涤剂组合物(组合物D)，其包含14.69g的组合物C和2.13g的组合物B。
测试了表9中描述的ADW组合物。当将蛋白酶添加到表9的组合物中时，将蛋白酶以毫克数的活性酶/洗涤剂剂量添加。测试的蛋白酶包括JV0001、JV0008、JV0009、JV0024、和JV0025。
Figure BDA0001852231980003291
测试污渍
使用由蛋黄(DM22)和蛋黄奶(DM32)弄脏的的6.5cm×10cm三聚氰胺瓷砖的两个测试污渍，所有这些都由测试材料中心(弗拉尔丁恩，荷兰)提供。
测试洗涤程序
Figure BDA0001852231980003292
在北美自动餐具洗涤机中，组合物C的剂量为3866ppm，并且组合物B的剂量为553ppm。将每种污渍类型的两块瓷砖添加到每个自动餐具洗涤机中。进行四次外部重复，并计算表9中列出的每种ADW组合物中每种污渍的平均污渍去除性能(对于表9中每种组合物，共8次重复)。将实例A组合物(不含蛋白酶)的清洁性能作为每个测试的参比，以计算ΔSRI值。使用图像分析来分析污渍，下面给出的结果计算为污渍去除百分比，即参比实例组合物A处理的污渍去除指数(SRI))，以及实例组合物B(ΔB)、C(ΔC)、D(ΔD)、E(ΔE)和F(ΔF)处理中每一种相对于参比实例组合物A处理的SRI变化。使用Tukey的HSD多重比较程序以控制所有成对比较的整体误差率在0.05。污渍去除指数(SRI)定义为：0＝完全没有去除，100＝完全去除。
也通过计算(实例C、实例D、实例E和实例F组合物中每一种的性能减去实例A组合物的性能)除以(比较实例B组合物的性能减去实例A组合物的性能)来测量性能指数。
Figure BDA0001852231980003301
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Figure BDA0001852231980003302
通过比较用实例A的组合物(nil蛋白酶)与用实例B(含有JV0001)、C、D、E和F(分别含有JV0008、JV0009、JV0024和JV0025)洗涤的样品，表11表明JV0008、JV0009、JV0024和JV0025具有改善的污渍去除性能。
通过比较用实例B的组合物(含有JV0001)与用实例C、D、E和F(分别含有JV0008、JV0009、JV0024和JV0025)洗涤的样品，以实例A作为参比(nil蛋白酶)，表12表明JV0008、JV0009、JV0024和JV0025取得了比JV0001更高的污渍去除水平。
测试B
在每个循环的分配器抽屉的开口处向每个自动餐具洗涤机中添加一剂量的洗涤剂组合物(组合物D)，其包含14.69g的组合物C和2.13g的组合物B。
测试了表13中描述的ADW组合物。当将蛋白酶添加到表13的组合物中时，将蛋白酶以毫克数的活性酶/洗涤剂剂量添加。测试的蛋白酶包括JV0001和JV0148。
Figure BDA0001852231980003311
测试污渍
使用由蛋黄(DM22)和蛋黄奶(DM32)弄脏的的6.5cm×10cm三聚氰胺瓷砖的两个测试污渍，所有这些都由测试材料中心(弗拉尔丁恩，荷兰)提供。
测试洗涤程序
Figure BDA0001852231980003312
在北美自动餐具洗涤机中，组合物C的剂量为3866ppm，并且组合物B的剂量为553ppm。将每种污渍类型的两块瓷砖添加到每个ADW机器中。进行四次外部重复，并计算每个实例组合物中每种污渍的平均污渍去除性能(对于每种实例组合物，共8次重复)。将实例A组合物(不含蛋白酶)的清洁性能作为每个测试的参比，以计算ΔSRI值。使用图像分析来分析污渍，下面给出的结果计算为污渍去除百分比，即参比实例A组合物的污渍去除指数(SRI)，以及实例组合物B(ΔB)和C(ΔC)处理中每一种相对于参比实例组合物A处理的SRI变化。使用Tukey的HSD多重比较程序以控制所有成对比较的整体误差率在0.05。污渍去除指数(SRI)定义为：0＝完全没有去除，100＝完全去除。
Figure BDA0001852231980003321
通过比较用实例A的组合物(nil蛋白酶)与用实例B(含有JV0001)以及实例C(含有JV0148)洗涤的样品，表15表明JV0148具有改善的污渍去除性能。
通过比较用实例B的组合物(含有JV0001)与用实例C(含有JV0148)洗涤的样品，根据作为参比的实例A(nil蛋白酶)，显然JV0148取得了比JV0001显著更高的污渍去除水平。
测试C
在每个循环的分配器抽屉的开口处向每个自动餐具洗涤机中添加一剂量的洗涤剂组合物(组合物D)，其包含14.69g的组合物C和2.13g的组合物B。
测试表16中描述的ADW组合物。当将蛋白酶添加到表16的组合物中时，将蛋白酶以毫克数的活性酶/洗涤剂剂量添加。JV124是经测试的蛋白酶。
Figure BDA0001852231980003322
测试污渍
使用由蛋黄(DM22)和蛋黄奶(DM32)弄脏的的6.5cm×10cm三聚氰胺瓷砖的两个测试污渍，所有这些都由测试材料中心(弗拉尔丁恩，荷兰)提供。
测试洗涤程序
Figure BDA0001852231980003331
在北美自动餐具洗涤机中，组合物C的剂量为3866ppm，并且组合物B的剂量为553ppm。将每种污渍类型的两块瓷砖添加到每个ADW机器中。进行四次外部重复，并计算每个实例组合物中每种污渍的平均污渍去除性能(对于每种实例组合物，共8次重复)。将对比实例A组合物的清洁性能作为每个测试的参比，以计算ΔSRI值。使用图像分析来分析污渍，下面给出的结果计算为污渍去除百分比，即对比实例A组合物的污渍去除指数(SRI)，以及实例组合物B(ΔB)处理相对于对比实例组合物A处理的SRI变化。使用Tukey的HSD多重比较程序以控制所有成对比较的整体误差率在0.05。污渍去除指数(SRI)定义为：0＝完全没有去除，100＝完全去除。
Figure BDA0001852231980003332
通过比较用对比实例A的组合物与用实例B(含有JV104)洗涤的样品，表15表明JV0104具有改善的污渍去除性能。

Claims (18)

1.一种分离的枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体与氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的亲本蛋白酶的区别在于氨基酸取代N76D-S78N-S87D-G118R-S128L-P129Q-S130A-Q206Y，所述变体相对于亲本蛋白酶具有改善的洗涤剂清洁性能和改善的洗涤剂热稳定性。
2.如权利要求1所述的分离的枯草杆菌蛋白酶变体，其中所述改善的性质是
(i)改善的清洁性能，并且所述变体具有血液/奶/墨水样本清洁PI>1；
(ii)改善的热稳定性，并且任选地，当在50℃、59℃、和/或61℃测量时，所述变体具有残留活性≥10％。
3.一种组合物，其包含如权利要求1或2所述的枯草杆菌蛋白酶变体，并且所述组合物不是自动餐具洗涤组合物。
4.如权利要求3所述的组合物，其中所述组合物是洗涤剂组合物。
5.如权利要求3或4所述的组合物，其中所述组合物是衣物洗涤剂组合物或手洗餐具洗涤剂组合物。
6.如权利要求3或4所述的组合物，其中所述组合物是单位剂量。
7.如权利要求3或4所述的组合物，其中所述组合物选自凝胶、固体、及其组合。
8.权利要求3或4所述的组合物，其中所述组合物选自片剂、粉末或颗粒。
9.如权利要求3或4所述的组合物，其中所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种另外的酶：半纤维素酶、纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、果胶酸裂合酶、甘露聚糖酶、木质素酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶和漆酶。
10.如权利要求9所述的组合物，其中所述淀粉酶是支链淀粉酶。
11.如权利要求9所述的组合物，其中所述蛋白酶是角蛋白酶。
12.如权利要求3或4所述的组合物，其中所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种另外的酶：还原酶、氧化酶。
13.如权利要求12所述的组合物，其中所述氧化酶是过氧化物酶、酚氧化酶、脂加氧酶。
14.一种用于清洁需要清洁的物品或表面的方法，所述方法包括：将所述物品或表面与如权利要求1或2所述的枯草杆菌蛋白酶变体或如权利要求3或4所述的组合物接触。
15.一种分离的核酸，其包含编码如权利要求1或2所述的枯草杆菌蛋白酶变体的多核苷酸。
16.一种表达载体或表达盒，其包含如权利要求15所述的一种或多种核酸。
17.如权利要求16所述的表达载体或表达盒，其中所述一种或多种核酸与启动子有效地连接。
18.一种重组宿主细胞，其包含如权利要求16或17所述的表达载体或表达盒或如权利要求15所述的核酸。
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