CN108828225A - 血清淀粉样蛋白a含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法 - Google Patents

血清淀粉样蛋白a含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108828225A
CN108828225A CN201810377250.5A CN201810377250A CN108828225A CN 108828225 A CN108828225 A CN 108828225A CN 201810377250 A CN201810377250 A CN 201810377250A CN 108828225 A CN108828225 A CN 108828225A
Authority
CN
China
Prior art keywords
serum amyloid
kit
antibody
protein
latex
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810377250.5A
Other languages
English (en)
Inventor
蔡清华
何浩会
赵亚荣
孙成艳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dirui Medical Technology Co Ltd
Changchun Dirui Industrial Co Ltd
Original Assignee
Dirui Medical Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dirui Medical Technology Co Ltd filed Critical Dirui Medical Technology Co Ltd
Priority to CN201810377250.5A priority Critical patent/CN108828225A/zh
Publication of CN108828225A publication Critical patent/CN108828225A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/82—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a precipitate or turbidity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups

Abstract

本发明提供一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法，属于医学检测领域。该试剂盒包括彼此独立的溶血剂R1和胶乳试剂R2，所述的胶乳试剂R2中包括包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳；所述的包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳为粒径60nm～130nm和190nm～220nm的胶乳分别包被抗血清淀粉样蛋白A1抗体和抗血清淀粉样蛋白A2抗体，然后再混合得到的。本发明还提供一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒的制备方法及检测方法。本发明的试剂盒对全血、血清、脑脊液及胸腹水均可检测，且样本用量少，无需分离或预处理，直接可检测，样本兼容性好。

Description

血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法
技术领域
本发明属于医学检测领域，涉及一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法。
背景技术
血清淀粉样蛋白A(Serum amyloid A protein,SAA)是由肝脏分泌的一种急性时相反应蛋白。它来自于载脂蛋白家族，是组织淀粉样蛋白A的前体物质。其血浆浓度在炎症、创伤、心肌梗死、感染、肿瘤等情况下显著上升，可作为淋巴细胞等免疫细胞的趋化因子；并上调多种炎症因子(如TNF、IL-6及IL-8等)的表达。病毒感染时SAA明显升高，感染后4-6h即升高，康复期消失更快，急性期感染病人增高幅度反映病情严重程度。某些疾病，如病毒感染、移植排斥反应、冠心病等，SAA的敏感性高于CRP，可为临床提供更好的诊疗依据。
正常值：＜10mg/L，由测定方法决定。
临床意义：
1.感染性疾病：SAA在病毒和细菌感染中均升高，而病毒感染中CRP几乎不升高或升高不明显。对于微弱的炎症刺激，SAA较CRP更灵敏，且超过参考范围上限时间早于高于CRP，升高更早，恢复时下降更快，幅度更大。因此在CRP正常的病毒感染患者、非侵袭性或早期侵袭性细菌感染患者中，SAA是一个较为敏感的指标。在小儿感染性疾病早期，由于小儿患者的体征和症状不明确，很难鉴别小儿患者是细菌感染还是病毒感染。所以早期快速地鉴别小儿患者细菌感染和病毒感染，对于及时有效地治疗及预防各种并发症有着重要的意义。由于CRP对病毒感染缺乏敏感性，而SAA在细菌和病毒感染早期均可升高。两者的联合检测可提高病毒感染早期的诊断效率，并为病毒与细菌感染的鉴别及治疗方案的选择提供有价值的参考信息。另外，SAA和CRP的比值与小儿感染性疾病的严重程度存在相关性，监测SAA/CRP比单独检测SAA或CRP具有更大的应用价值。
2.SAA对冠心病风险预测的意义，SAA和hsCRP浓度的升高对预测健康人群未来发生心血管事件危险性的可能性呈正相关，因此SAA均可以作为心血管事件危险因素的趋向性和预后的评估指标，二个指标全部增高将对预测发生心血管事件危险性的意义更大。
3.肿瘤与SAA的相关性：研究表明，许多肿瘤如肝癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、子宫内膜癌等患者体内的SAA均有不同程度升高，SAA水平与肿瘤的活动期、恶性程度及转移有明显的相关性，恶性肿瘤转移阶段SAA升高通常比肿瘤稳定期显示更高的数值。
近年来，随着SAA在临床中的应用范围越来越广泛，用于临床上检测SAA的方法主要有胶乳增强免疫比浊法、放射性免疫测定法、免疫速率散射比浊法、酶联免疫吸附试验等。这些方法均以血清或血浆为检测样本，均需对全血进行预先分离红细胞再进行测试，需专门的分离装置，且样本需求量大。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法，本发明的方法检测时间短、且样本用量少，无需分离或预处理，线性范围宽。
本发明首先提供一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒，该试剂盒包括彼此独立的溶血剂R1和胶乳试剂R2，成分及含量如下：
溶血剂R1：
胶乳试剂R2：
所述的包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳为粒径60nm～130nm和190nm～220nm的胶乳分别包被抗血清淀粉样蛋白A1抗体和抗血清淀粉样蛋白A2抗体，然后再混合得到的。
优选的是，所述的无机盐选自氯化钠、氯化钾或硫酸钠中的一种。
优选的是，所述的表面活性剂选自十二烷基硫酸钠(SDS)、皂素或Triton X-100中的一种；
优选的是，所述的第一缓冲液选用Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液或HEPES缓冲液中的一种；所述的第二缓冲液选自磷酸盐缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液或HEPES缓冲液中的一种。
优选的是，所述的稳定剂选自甘露醇、甘油、明胶、硫酸酯盐、磺酸盐、羧酸盐中的一种或几种。
优选的是，所述的第一防腐剂和第二防腐剂分别选自Proclin-150、Proclin-200、Proclin-300或Proclin500中的一种或两种。
优选的是，所述的封闭剂选自牛血清白蛋白、酪蛋白或明胶中的一种。
本发明还提供一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒的制备方法，包括：
步骤一：按组分配制溶血剂R1；
步骤二：胶乳试剂R2的制备：用第二缓冲液分别将粒径为60nm～130nm和190nm～220nm的聚苯乙烯微球稀释成质量浓度为0.5％-2％的溶液，加入碳化二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，室温条件下反应2h，经离心去上清液，将沉淀液用第二缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为0.5％，重复上述离心操作，去上清，再将沉淀液用第二MES缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为1％-2％，然后加入抗人血清淀粉样蛋白A1抗体和抗人血清淀粉样蛋白A2抗体，直至溶液中聚苯乙烯微球质量浓度为0.25％-0.6％，最后加入封闭剂在室温下封闭18-24小时，将粒径为60nm～130nm包被血清淀粉样蛋白A1抗体的胶乳和粒径为190nm～220nm包被血清淀粉样蛋白A2抗体的胶乳混合后，再加入稳定剂和第二防腐剂，得到胶乳试剂R2。
优选的是，所述的粒径为60nm～130nm包被血清淀粉样蛋白A1抗体的胶乳和粒径为190nm～220nm包被血清淀粉样蛋白A2抗体的胶乳的质量比为2：1。
本发明还提供血清、脑脊液或胸腹水中血清淀粉样蛋白A含量的测定方法，该方法包括：
步骤A、将全血样品与溶血剂R1混匀，溶解红细胞；
步骤B、将胶乳试剂R2加入到步骤A中的溶液中混匀，37℃恒温反应；
步骤C、用全自动血细胞分析仪测定反应后的吸光度，对照标准曲线及相应的红细胞压积计算出全血样品中的血清淀粉样蛋白A含量。
本发明的有益效果
1、本发明的试剂盒检测时间短，两分钟即可完成检测，适用于门诊及急诊测试；
2、本发明的试剂盒对全血、血清、脑脊液及胸腹水均可检测，且样本用量少，无需分离或预处理，直接可检测，样本兼容性好；
3、本发明的试剂盒中的包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳采用两种粒径的胶乳混合使用，达到检出限更低、线性范围更宽的效果：全血为2-1000mg/L；
4、本发明的试剂盒中的包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳采用两种抗体包被的胶乳混合使用，有效消除不同样本的干扰差异。
具体实施方式
本发明首先提供一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒，该试剂盒包括彼此独立的溶血剂R1和胶乳试剂R2，成分及含量如下：
溶血剂R1：第一缓冲液100～500mmoL/L，无机盐100～200mmoL/L，表面活性剂0.3～3g/L，第一防腐剂0.05～0.5g/L，纯化水1L；
胶乳试剂R2：第二缓冲液100～300mmoL/L，稳定剂10～100mmoL/L，第二防腐剂0.05～0.5g/L，包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳0.5～2.5g/L，封闭剂10～50g/L，纯化水1L；
本发明所述的包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳为粒径60nm～130nm和190nm～220nm的胶乳分别包被抗血清淀粉样蛋白A1抗体和抗血清淀粉样蛋白A2抗体，然后再混合得到的。本发明的试剂盒中的包被两种血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳采用两种粒径的胶乳混合使用，达到检出限更低、线性范围更宽的效果，同时可以有效消除不同样本的干扰差异。
按照本发明，所述的无机盐优选自氯化钠、氯化钾或硫酸钠中的一种。
按照本发明，所述的表面活性剂优选选自十二烷基硫酸钠(SDS)、皂素或TritonX-100中的一种。
按照本发明，所述的第一防腐剂优选选自Proclin-150、Proclin-200、Proclin-300或Proclin500中的一种或两种。
按照本发明，所述的第一缓冲液优选选用Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液或HEPES缓冲液中的一种。
按照本发明，所述的第二缓冲液可以和第一缓冲液相同或不同，优选选自磷酸盐缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液或HEPES缓冲液中的一种。
按照本发明，所述的稳定剂优选选自甘露醇、甘油、明胶、硫酸酯盐、磺酸盐、羧酸盐中的一种或几种。
按照本发明，所述的第二防腐剂可以和第一防腐剂相同或不同，优选选自Proclin-150、Proclin-200、Proclin-300或Proclin500中的一种或两种。
按照本发明，所述的封闭剂优选选自牛血清白蛋白、酪蛋白或明胶中的一种。
本发明还提供一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒的制备方法，包括：
步骤一：按组分配制溶血剂R1；
步骤二：胶乳试剂R2的制备：用第二缓冲液分别将粒径为60nm～130nm和190nm～220nm的聚苯乙烯微球稀释成质量浓度为0.5％-2％的溶液，加入2.5mg/mL碳化二亚胺盐酸盐和5mg/mLN-羟基琥珀酰亚胺，室温条件下反应2h，经离心去上清液，将沉淀液用第二缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为0.5％，重复上述离心操作，去上清，再将沉淀液用第二MES缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为1％-2％，然后加入抗人血清淀粉样蛋白A1抗体和抗人血清淀粉样蛋白A2抗体，直至溶液中聚苯乙烯微球质量浓度为0.25％-0.6％，最后加入封闭剂在室温下封闭18-24小时，将粒径为60nm～130nm包被血清淀粉样蛋白A1抗体的胶乳和粒径为190nm～220nm包被血清淀粉样蛋白A2抗体的胶乳混合后，再加入稳定剂和第二防腐剂，得到胶乳试剂R2。
按照本发明，所述的粒径为60nm～130nm包被血清淀粉样蛋白A1抗体的胶乳和粒径为190nm～220nm包被血清淀粉样蛋白A2抗体的胶乳的质量比为2：1。
按照本发明，所述的离心优选是将60nm～130nm聚苯乙烯微球胶乳在12000rpm/min的转速下离心2小时；将190nm～220nm聚苯乙烯微球胶乳在9000rpm/min的转速下离心1小时。
本发明还提供血清、脑脊液或胸腹水中血清淀粉样蛋白A含量的测定方法，该方法包括：
步骤A、将全血样品与溶血剂R1混匀，溶解红细胞；所述的全血样品和溶血剂R1的体积比优选为8：200；所述的混匀时间优选为20s；
步骤B、将胶乳试剂R2加入到步骤A中的溶液中混匀，37℃恒温反应，使样品中的血清淀粉样蛋白A与R2中的血清淀粉样蛋白A抗体发生反应，溶液出现浊度变化；所述的溶血剂R1和胶乳试剂R2的体积比优选为2：1；
步骤C、用全自动血细胞分析仪测定反应后的吸光度，具体为：在加入R2后的20秒和70秒分别测定溶液在870nm的吸光度，对照标准曲线及相应的红细胞压积计算出全血样品中的血清淀粉样蛋白A含量。
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细的描述。
实施例1
按下述组分含量配制溶血剂R1：
取1L纯化水，依次加入上述原料，搅拌溶解后，过滤分装得到溶血剂R1。
胶乳试剂R2的制备：用50mmol/L的MES缓冲液分别将粒径为100nm和220nm的聚苯乙烯微球稀释成质量浓度为1％的溶液，加入2.5mg/mL的碳化二亚胺盐酸盐、5mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺，室温条件下反应2小时，使用高速离心机，220nm的胶乳在9000rpm/min的转速下离心1小时，100nm的胶乳在12000rpm/min的转速下离心2小时，去上清，将沉淀用50mmol/L的MES缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为0.5％，重复上述离心操作，去上清，再将沉淀用50mmol/L的MES缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为1.5％，然后边搅拌边加入抗人血清淀粉样蛋白A1抗体和抗人血清淀粉样蛋白A2抗体，直至溶液中聚苯乙烯微球质量浓度为0.5％为止，最后加入2％的牛血清白蛋白，在室温下封闭18小时，即制备得到包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳，将包被血清淀粉样蛋白A抗体的100nm和220nm的胶乳按质量比2：1混合后，按最终体积加入50mmoL/L的甘油、0.3g/L的Proclin-300即制备得到胶乳试剂R2。
实施例2
按下述组分含量配制溶血剂R1：
取1L纯化水，依次加入上述原料，搅拌溶解后，过滤分装得到溶血剂R1。
胶乳试剂R2的制备：用50mmol/L的MOPS缓冲液分别将粒径为90nm和220nm的聚苯乙烯微球稀释成质量浓度为2％的溶液，加入2.5mg/mL的碳化二亚胺盐酸盐、5mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺，室温条件下反应2小时，使用高速离心机，220nm的胶乳在9000rpm/min的转速下离心1小时，90nm的胶乳在12000rpm/min的转速下离心2小时，去上清，将沉淀用50mmol/LMOPS缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为0.5％，重复上述离心操作，去上清，再将沉淀用50mmol/L的MOPS缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为2％，然后边搅拌边加入抗人血清淀粉样蛋白A1抗体和抗人血清淀粉样蛋白A2抗体，直至溶液中聚苯乙烯微球质量浓度为0.6％为止，最后加入2％的牛血清白蛋白，在室温下封闭24小时，即制备得到包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳，将包被血清淀粉样蛋白A抗体的90nm和220nm的胶乳按质量比2：1混合后，按最终体积加入70mmoL/L的甘露醇、0.3g/L的Proclin-500即制备得到胶乳试剂R2。
实施例3
按下述组分含量配制溶血剂R1：
取1L纯化水，依次加入上述原料，搅拌溶解后，过滤分装得到溶血剂R1。
胶乳试剂R2的制备：用50mmol/L的HEPES缓冲液分别将粒径为60nm和190nm的聚苯乙烯微球稀释成质量浓度为1％的溶液，加入2.5mg/mL的碳化二亚胺盐酸盐、5mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺，室温条件下反应2小时，使用高速离心机，190nm的胶乳在9000rpm/min的转速下离心1小时，60nm的胶乳在12000rpm/min的转速下离心2小时，去上清，将沉淀用50mmol/L HEPES缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为0.5％，重复上述离心操作，去上清，再将沉淀用50mmol/L的HEPES缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为1.5％，然后边搅拌边加入抗人血清淀粉样蛋白A1抗体和抗人血清淀粉样蛋白A2抗体，直至溶液中聚苯乙烯微球质量浓度为0.5％为止，最后加入2％的酪蛋白，在室温下封闭20小时，即制备得到包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳，将包被血清淀粉样蛋白A抗体的60nm和190nm的胶乳按质量比2：1混合后，按最终体积加入10mmoL/L的明胶、0.05g/L的Proclin-200即制备得到胶乳试剂R2。
实施例4
按下述组分含量配制溶血剂R1：
取1L纯化水，依次加入上述原料，搅拌溶解后，过滤分装得到溶血剂R1。
胶乳试剂R2的制备：用50mmol/L的HEPES缓冲液分别将粒径为130nm和220nm的聚苯乙烯微球稀释成质量浓度为1％的溶液，加入2.5mg/mL的碳化二亚胺盐酸盐、5mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺，室温条件下反应2小时，使用高速离心机，220nm的胶乳在9000rpm/min的转速下离心1小时，130nm的胶乳在12000rpm/min的转速下离心2小时，去上清，将沉淀用50mmol/L HEPES缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为0.5％，重复上述离心操作，去上清，再将沉淀用50mmol/L的HEPES缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为1.5％，然后边搅拌边加入抗人血清淀粉样蛋白A1抗体和抗人血清淀粉样蛋白A2抗体，直至溶液中聚苯乙烯微球质量浓度为0.5％为止，最后加入2％的明胶，在室温下封闭20小时，即制备得到包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳，将包被血清淀粉样蛋白A抗体的130nm和220nm的胶乳按质量比2：1混合后，按最终体积加入100mmoL/L的硫酸酯盐、0.5g/L的Proclin-150即制备得到胶乳试剂R2。
实施例5
将实施例1制备得到的试剂盒用于测定全血中血清淀粉样蛋白A含量，具体方法为：
A、将全血样品8uL与200uLR1混匀20秒，溶解红细胞；
B、将100uLR2加入到步骤A中的溶液中混匀，37℃恒温反应，使样品中的血清淀粉样蛋白A与R2中的血清淀粉样蛋白A抗体发生反应，溶液出现浊度变化；
C、在加入R2后的20秒和70秒分别测定溶液在870nm的吸光度，对照标准曲线及相应的红细胞压积计算出样本中的血清淀粉样蛋白A含量。结果如表1所示：
SAA＝SAA全血/(100-HCT)*100
式中：SAA为修正后的血清淀粉样蛋白A浓度；
SAA全血为修正前的血清淀粉样蛋白A浓度，即全血中的血清淀粉样蛋白A浓度；
HCT为红细胞压积。
表1不同样本测值对比
实施例6
将实施例2制备得到的试剂盒用于测定脑脊液中血清淀粉样蛋白A含量，具体方法为：
A、将8uL样品与200uLR1混匀20秒，溶解红细胞；
B、将100uLR2加入到步骤A中的溶液中混匀，37℃恒温反应，使样品中的血清淀粉样蛋白A与R2中的血清淀粉样蛋白A抗体发生反应，溶液出现浊度变化；
C、在加入R2后的20秒和70秒分别测定溶液在870nm的吸光度，对照标准曲线计算出样本中的血清淀粉样蛋白A含量。
实施例7
将实施例2制备得到的试剂盒用于测定胸腹水中血清淀粉样蛋白A含量，具体方法为：
A、将8uL样品与200uLR1混匀20秒，溶解红细胞；
B、将100uLR2加入到步骤A中的溶液中混匀，37℃恒温反应，使样品中的血清淀粉样蛋白A与R2中的血清淀粉样蛋白A抗体发生反应，溶液出现浊度变化；
C、在加入R2后的20秒和70秒分别测定溶液在870nm的吸光度，对照标准曲线计算出样本中的血清淀粉样蛋白A含量。

Claims (10)

1.一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括彼此独立的溶血剂R1和胶乳试剂R2，成分及含量如下：
溶血剂R1：
胶乳试剂R2：
所述的包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳为粒径60nm～130nm和190nm～220nm的胶乳分别包被抗血清淀粉样蛋白A1抗体和抗血清淀粉样蛋白A2抗体，然后再混合得到的。
2.根据权利要求1所述的一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒，其特征在于，所述的无机盐选自氯化钠、氯化钾或硫酸钠中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒，其特征在于，所述的表面活性剂选自十二烷基硫酸钠(SDS)、皂素或Triton X-100中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒，其特征在于，所述的第一缓冲液选用Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液或HEPES缓冲液中的一种；所述的第二缓冲液选自磷酸盐缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液或HEPES缓冲液中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒，其特征在于，所述的稳定剂选自甘露醇、甘油、明胶、硫酸酯盐、磺酸盐、羧酸盐中的一种或几种。
6.根据权利要求1所述的一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒，其特征在于，所述的第一防腐剂和第二防腐剂分别选自Proclin-150、Proclin-200、Proclin-300或Proclin500中的一种或两种。
7.根据权利要求1所述的一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒，其特征在于，所述的封闭剂选自牛血清白蛋白、酪蛋白或明胶中的一种。
8.根据权利要求1所述的一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：
步骤一：按组分配制溶血剂R1；
步骤二：胶乳试剂R2的制备：用第二缓冲液分别将粒径为60nm～130nm和190nm～220nm的聚苯乙烯微球稀释成质量浓度为0.5％-2％的溶液，加入碳化二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，室温条件下反应2h，经离心去上清液，将沉淀液用第二缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为0.5％，重复上述离心操作，去上清，再将沉淀液用第二MES缓冲液稀释至聚苯乙烯微球质量浓度为1％-2％，然后加入抗人血清淀粉样蛋白A1抗体和抗人血清淀粉样蛋白A2抗体，直至溶液中聚苯乙烯微球质量浓度为0.25％-0.6％，最后加入封闭剂在室温下封闭18-24小时，将粒径为60nm～130nm包被血清淀粉样蛋白A1抗体的胶乳和粒径为190nm～220nm包被血清淀粉样蛋白A2抗体的胶乳混合后，再加入稳定剂和第二防腐剂，得到胶乳试剂R2。
9.根据权利要求8所述的一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述的粒径为60nm～130nm包被血清淀粉样蛋白A1抗体的胶乳和粒径为190nm～220nm包被血清淀粉样蛋白A2抗体的胶乳的质量比为2：1。
10.根据权利要求1所述的试剂盒检测血清、脑脊液或胸腹水中血清淀粉样蛋白A含量的测定方法，其特征在于，该方法包括：
步骤A、将全血样品与溶血剂R1混匀，溶解红细胞；
步骤B、将胶乳试剂R2加入到步骤A中的溶液中混匀，37℃恒温反应；
步骤C、用全自动血细胞分析仪测定反应后的吸光度，对照标准曲线及相应的红细胞压积计算出全血样品中的血清淀粉样蛋白A含量。
CN201810377250.5A 2018-04-25 2018-04-25 血清淀粉样蛋白a含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法 Pending CN108828225A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810377250.5A CN108828225A (zh) 2018-04-25 2018-04-25 血清淀粉样蛋白a含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810377250.5A CN108828225A (zh) 2018-04-25 2018-04-25 血清淀粉样蛋白a含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108828225A true CN108828225A (zh) 2018-11-16

Family

ID=64154810

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810377250.5A Pending CN108828225A (zh) 2018-04-25 2018-04-25 血清淀粉样蛋白a含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108828225A (zh)

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110108531A (zh) * 2019-05-14 2019-08-09 深圳天深医疗器械有限公司 一种排除医学检测中血细胞干扰的方法
CN110160991A (zh) * 2019-06-18 2019-08-23 山东艾科达生物科技有限公司 一种散射比浊法测定血清淀粉样蛋白a含量的试剂盒
CN110244063A (zh) * 2019-07-25 2019-09-17 科尼格沃斯(无锡)医学科技有限公司 血清淀粉样蛋白a检测用试剂盒、其制备方法以及血清淀粉样蛋白a的检测方法
CN110927370A (zh) * 2019-12-12 2020-03-27 蓝怡科技集团股份有限公司 一种微球试剂的制备方法
CN112014576A (zh) * 2020-09-03 2020-12-01 北京安图生物工程有限公司 检测人血清淀粉样蛋白a的试剂及其制备方法
CN112432833A (zh) * 2020-12-17 2021-03-02 深圳先进技术研究院 一种脑组织可溶性β-淀粉样蛋白样品的制备方法及其应用
CN112698040A (zh) * 2020-12-09 2021-04-23 宁波职业技术学院 一种尿微量白蛋白检测试剂及其制备方法
CN112782408A (zh) * 2020-12-24 2021-05-11 深圳市科曼医疗设备有限公司 一种血清淀粉样蛋白a胶体金免疫比浊法检测试剂盒
CN112858687A (zh) * 2020-12-30 2021-05-28 宁波职业技术学院 一种血清淀粉样蛋白a检测试剂及其制备方法
CN113189353A (zh) * 2021-05-25 2021-07-30 复旦大学附属华山医院 一种血清中泌乳素单体的检测方法
WO2022134430A1 (zh) * 2020-12-24 2022-06-30 深圳市科曼医疗设备有限公司 一种血清淀粉样蛋白 a 检测试剂盒及其制备与应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105929173A (zh) * 2016-04-27 2016-09-07 深圳市国赛生物技术有限公司 一种血清淀粉样蛋白a的检测试剂盒及检测方法
CN106018299A (zh) * 2016-05-26 2016-10-12 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种测定血清淀粉样蛋白a的试剂盒及其制备方法
CN106198961A (zh) * 2016-07-21 2016-12-07 上海奥普生物医药有限公司 一种定量检测血清淀粉样蛋白a的乳胶增强免疫比浊试剂盒及其制备方法
CN106353507A (zh) * 2016-08-24 2017-01-25 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种检测血清淀粉样蛋白的试剂盒及其用途
CN106568978A (zh) * 2016-11-08 2017-04-19 宁波普瑞柏生物技术股份有限公司 血清淀粉样蛋白a检测方法及试剂
CN107015004A (zh) * 2017-03-21 2017-08-04 深圳市汇松科技发展有限公司 一种血清淀粉样蛋白a测定试剂盒及其制备方法
CN107860929A (zh) * 2017-11-10 2018-03-30 苏州康和顺医疗技术有限公司 一种血清淀粉样蛋白a的免疫比浊检测试剂和方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105929173A (zh) * 2016-04-27 2016-09-07 深圳市国赛生物技术有限公司 一种血清淀粉样蛋白a的检测试剂盒及检测方法
CN106018299A (zh) * 2016-05-26 2016-10-12 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种测定血清淀粉样蛋白a的试剂盒及其制备方法
CN106198961A (zh) * 2016-07-21 2016-12-07 上海奥普生物医药有限公司 一种定量检测血清淀粉样蛋白a的乳胶增强免疫比浊试剂盒及其制备方法
CN106353507A (zh) * 2016-08-24 2017-01-25 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种检测血清淀粉样蛋白的试剂盒及其用途
CN106568978A (zh) * 2016-11-08 2017-04-19 宁波普瑞柏生物技术股份有限公司 血清淀粉样蛋白a检测方法及试剂
CN107015004A (zh) * 2017-03-21 2017-08-04 深圳市汇松科技发展有限公司 一种血清淀粉样蛋白a测定试剂盒及其制备方法
CN107860929A (zh) * 2017-11-10 2018-03-30 苏州康和顺医疗技术有限公司 一种血清淀粉样蛋白a的免疫比浊检测试剂和方法

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110108531B (zh) * 2019-05-14 2022-02-11 深圳天深医疗器械有限公司 一种排除医学检测中血细胞干扰的方法
CN110108531A (zh) * 2019-05-14 2019-08-09 深圳天深医疗器械有限公司 一种排除医学检测中血细胞干扰的方法
CN110160991B (zh) * 2019-06-18 2021-12-14 山东艾科达生物科技有限公司 一种散射比浊法测定血清淀粉样蛋白a含量的试剂盒
CN110160991A (zh) * 2019-06-18 2019-08-23 山东艾科达生物科技有限公司 一种散射比浊法测定血清淀粉样蛋白a含量的试剂盒
CN110244063A (zh) * 2019-07-25 2019-09-17 科尼格沃斯(无锡)医学科技有限公司 血清淀粉样蛋白a检测用试剂盒、其制备方法以及血清淀粉样蛋白a的检测方法
CN110927370A (zh) * 2019-12-12 2020-03-27 蓝怡科技集团股份有限公司 一种微球试剂的制备方法
CN112014576A (zh) * 2020-09-03 2020-12-01 北京安图生物工程有限公司 检测人血清淀粉样蛋白a的试剂及其制备方法
CN112698040A (zh) * 2020-12-09 2021-04-23 宁波职业技术学院 一种尿微量白蛋白检测试剂及其制备方法
CN112432833A (zh) * 2020-12-17 2021-03-02 深圳先进技术研究院 一种脑组织可溶性β-淀粉样蛋白样品的制备方法及其应用
CN112782408A (zh) * 2020-12-24 2021-05-11 深圳市科曼医疗设备有限公司 一种血清淀粉样蛋白a胶体金免疫比浊法检测试剂盒
WO2022134430A1 (zh) * 2020-12-24 2022-06-30 深圳市科曼医疗设备有限公司 一种血清淀粉样蛋白 a 检测试剂盒及其制备与应用
CN112858687A (zh) * 2020-12-30 2021-05-28 宁波职业技术学院 一种血清淀粉样蛋白a检测试剂及其制备方法
CN112858687B (zh) * 2020-12-30 2023-09-15 宁波职业技术学院 一种血清淀粉样蛋白a检测试剂及其制备方法
CN113189353A (zh) * 2021-05-25 2021-07-30 复旦大学附属华山医院 一种血清中泌乳素单体的检测方法
CN113189353B (zh) * 2021-05-25 2024-02-02 复旦大学附属华山医院 一种血清中泌乳素单体的检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108828225A (zh) 血清淀粉样蛋白a含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法
Loewenstein et al. Carcinoembryonic antigen assay of ascites and detection of malignancy
WO2008031288A1 (fr) Colonne centrifuge préremplie servant à dépister un variant d'alpha-fétoprotéine spécifique de l'hépatocarcinome, et trousse d'analyse contenant ladite colonne
CN108680756A (zh) 一种不完全抗体检测试剂盒及检测方法
CN105988000B (zh) 一种测定甘胆酸浓度的试剂盒及方法
JPWO2005080982A1 (ja) Ａ型及びｂ型急性大動脈解離と急性心筋梗塞の鑑別方法及び鑑別用キット
WO2019075769A1 (zh) 一种超敏c反应蛋白的检测方法
CN106706912A (zh) 诊断炎症相关肝癌的标志物及其应用
Manolakis et al. α2-Heremans-schmid glycoprotein (fetuin A) downregulation and its utility in inflammatory bowel disease
CN107255711A (zh) 骨桥蛋白用于制备或筛选慢加急性肝衰竭诊断试剂的用途
CN103954761B (zh) 用于卵巢癌早中期快速诊断试剂盒及其检测方法
CN115656510A (zh) 用于肝细胞癌诊断的血浆外泌体蛋白标志物vcam1、试剂盒及其应用
CN111650381B (zh) 蛋白标志物或其组合在制备急性乳腺炎诊断试剂盒上的应用
JP4580869B2 (ja) 急性大動脈解離の判定方法及び判定用試薬
CN110687285A (zh) 诊断试剂盒及mak16在制备系统性红斑狼疮早期诊断试剂中的应用
CN111426845A (zh) 一种血清载脂蛋白b测定试剂盒及其制备方法和应用
JPS6091264A (ja) フイブロネクチンの免疫学的測定
CN114509573B (zh) 基于同步检测尿液标志物建立的糖尿病肾脏病预警模型
JP6166062B2 (ja) 肝臓疾患の評価方法及び診断キット
US20240118210A1 (en) Ffn fluorescence release assay (ffra) and methods of using same
JP2007093312A (ja) Ｈ−ｆａｂｐ及びｄ−ダイマーによる急性大動脈解離の鑑別方法および鑑別用キット
JP2024039982A (ja) 急性腎障害の発症リスクの評価方法
RU2538685C1 (ru) Способ экспресс-определения холестерина в иммунных комплексах
JP3846973B2 (ja) 慢性炎症の判定方法及びキット
JP2024022933A (ja) 原発性アルドステロン症のサブタイプの検査方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20181116