CN113189353B - 一种血清中泌乳素单体的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种血清中泌乳素单体的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：S1：取适量血清加入等体积的25％聚乙二醇6000溶液中，进行预处理沉淀；S2：室温下涡流混合5～10min；S3：高速离心10～15min，取上清液；S4：采用免疫分析仪对步骤S3中所得上清液进行检测，所得检测结果乘以稀释因子2，即可获得所述血清中泌乳素单体的浓度。根据本发明，首次实现了对血清中泌乳素单体的检测，不仅为高泌乳素血症的诊断提供了依据，而且为患者节省了诊疗时间以及降低了诊疗费用，因此本发明所提供的检测方法在生物分子临床检测中具有推广价值。
Description
技术领域
本发明涉及生物分子检测技术领域，更具体地涉及一种血清中泌乳素单体的检测方法。
背景技术
泌乳素又称催乳素，是脑垂体所分泌的激素中的一种。妇女在怀孕后期及哺乳期，泌乳素分泌旺盛，以促进乳腺发育与泌乳。非孕妇女血清中泌乳素水平最高值一般不会超过20纳克/毫升。
泌乳素由集中于垂体后方两侧的专一细胞所分泌，与生长激素源于同一细胞。泌乳素升高，医学上称作高泌乳素血症，这是一种下丘脑-垂体-性腺轴功能失调性疾病，其主要症状为月经量明显减少，月经稀发甚至闭经，不孕，溢乳，更年期症状等。
泌乳素过高还会使卵巢对促性腺激素失去应有的反应能力，雌激素、孕激素合成因而明显减少，使在受孕过程中起重要作用的雌激素呈现低水平状态，直接影响孕育功能。当性激素的大量减少至一定程度，还会使患者出现酷似女性更年期的诸多症状。
泌乳素瘤是最常见的垂体腺瘤，是病理性高泌乳素血症的主要原因，仅次于原发性甲状腺功能减退症。当外周血循环中有超过60％泌乳素由巨泌乳素构成时定义为巨泌乳素血症，在15-46％的高泌乳素血症患者中存在巨泌乳素。早期筛查巨泌乳素可以减少临床不必要药物治疗和过度影像学检查，但常规泌乳素检测无法鉴定巨泌乳素血症。所以对泌乳素增高患者及时筛查巨泌乳素是诊疗的必要环节，也是高泌乳素血症治疗的难点。
发明内容
本发明的目的是提供一种血清中泌乳素单体的检测方法，从而解决现有技术中缺乏血清中泌乳素单体的检测方法的问题。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
提供一种血清中泌乳素单体的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：S1：取适量血清加入等体积的25％聚乙二醇6000溶液中，进行预处理沉淀；S2：室温下涡流混合5～10min；S3：高速离心10～15min，取上清液；S4：采用免疫分析仪检测步骤S3中所得上清液中的泌乳素，所得检测结果乘以稀释因子2，即可获得所述血清中泌乳素单体的浓度。
优选地，步骤S2包括：室温下涡流混合5min。
优选地，步骤S3包括：13400rpm离心10min，取上清液。
所述25％聚乙二醇6000溶液通过将25g聚乙二醇6000溶解于1000毫升去离子水制得。
泌乳素在外周血清中有三种异构形式，其中具有生物活性和免疫活性的泌乳素单体含量约有60-90％；有15-30％为无生物学活性的二聚体，另有小于10％为较低生物学活性的四聚体以及免疫球蛋白和泌乳素单体的聚合物，称为巨泌乳素。由于人们一直以来对于巨泌乳素血症认识不够，目前检验科没有一种能够完全区分真性高泌乳素血症(泌乳素单体水平增加)和巨泌乳素血症(泌乳素单体浓度正常)的免疫分析方法。根据目前临床上的常规操作，医生通常采用影像学检查，如核磁共振等以及经验性药物治疗对高泌乳素血症进行诊断。然而，本发明的发明人经过研究发现，泌乳素单体是具有生物活性的，通过聚乙二醇能够沉淀大分子蛋白质，沉淀血清中的二聚体、四聚体泌乳素和巨泌乳素，离心后上清液中只有泌乳素单体，从而首次实现了血清中泌乳素单体的检测，摒弃了回收率的计算。
根据本发明提供的方法，不仅限于电化学发光免疫分析仪，其他可以检测泌乳素的免疫分析仪都可采用。
因此，根据本发明提供的这样一种检测方法，基于特异性方法学原理，通过聚乙二醇沉淀法，在免疫检测的基础上，首次实现了血清中泌乳素单体的检测，不仅节省了诊断时间，而且避免了核磁共振扫描带来的费用。
综上所述，根据本发明，首次实现了对血清中泌乳素单体的检测，不仅为高泌乳素血症的诊断提供了依据，而且为患者节省了诊疗时间以及降低了诊疗费用，因此本发明所提供的检测方法在生物分子临床检测中具有推广价值。
附图说明
图1是根据本发明提供的一种血清中泌乳素单体的检测方法的流程图。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限制本发明的范围。
根据本发明所提供的方法，首先采集血液样本，然后采用常规方法，即电化学发光免疫分析法检测血清泌乳素，对于常规泌乳素检测增高，但不符合临床症状，怀疑和排除巨泌乳素血症，即可采用聚乙二醇6000进行预处理沉淀进一步检测上清液泌乳素单体浓度。其流程图如图1所示。
实施例1泌乳素单体检测方法的构建
方案一
提供了一种血清中泌乳素单体的检测方法，包括以下步骤：
1)将200μL血清加入到等体积20％聚乙二醇6000溶液中，进行预处理沉淀，其中，20％聚乙二醇6000溶液通过将20g聚乙二醇6000溶解于1000毫升去离子水制得；
2)室温下涡流混合5分钟；
3)13400rpm离心10分钟；
4)取上清，采用罗氏Cobas 8000电化学发光免疫分析仪检测其中的泌乳素单体的浓度；
5)检测结果乘以稀释因子2，即可获得血清中的泌乳素单体浓度水平。
方案二
提供了一种血清中泌乳素单体的检测方法，包括以下步骤：
1)将200μL血清加入到等体积25％聚乙二醇6000溶液中，进行预处理沉淀，其中，25％聚乙二醇6000溶液通过将25g聚乙二醇6000溶解于1000毫升去离子水制得；
2)室温下涡流混合5分钟；
3)13400rpm离心10min；
4)取上清，采用罗氏Cobas 8000电化学发光免疫分析仪检测其中的泌乳素单体的浓度；
5)检测结果乘以稀释因子2，即可获得血清中的泌乳素单体浓度水平。
方案三
提供了一种血清中泌乳素单体的检测方法，包括以下步骤：
1)将200μL血清加入到等体积30％聚乙二醇6000溶液中，进行预处理沉淀，其中，30％聚乙二醇6000溶液通过将30g聚乙二醇6000溶解于1000毫升去离子水制得；
2)室温下涡流混合5分钟；
3)13400rpm离心10min；
4)取上清，采用罗氏Cobas 8000电化学发光免疫分析仪检测其中的泌乳素单体的浓度；
5)检测结果乘以稀释因子2，即可获得血清中的泌乳素单体浓度水平。
上述方案一、方案二、方案三分别采用了三种浓度的聚乙二醇6000:20％、25％、30％，其中经25％聚乙二醇6000沉淀后单体泌乳素结果与标准方法凝胶过滤层析法最相符。
方案四
提供了一种血清中泌乳素单体的检测方法，包括以下步骤：
1)将200μL血清加入到等体积25％聚乙二醇6000溶液中，进行预处理沉淀，其中，25％聚乙二醇6000溶液通过将25g聚乙二醇6000溶解于1000毫升去离子水制得；
2)室温下涡流混合8分钟；
3)13400rpm离心10min；
4)取上清，采用罗氏Cobas 8000电化学发光免疫分析仪检测其中的泌乳素单体的浓度；
5)检测结果乘以稀释因子2，即可获得血清中的泌乳素单体浓度水平。
方案五
提供了一种血清中泌乳素单体的检测方法，包括以下步骤：
1)将200μL血清加入到等体积25％聚乙二醇6000溶液中，进行预处理沉淀，其中，25％聚乙二醇6000溶液通过将25g聚乙二醇6000溶解于1000毫升去离子水制得；
2)室温下涡流混合10分钟；
3)13400rpm离心10min；
4)取上清，采用罗氏Cobas 8000电化学发光免疫分析仪检测其中的泌乳素单体的浓度；
5)检测结果乘以稀释因子2，即可获得血清中的泌乳素单体浓度水平。
上述方案一、方案四、方案五分别采用了三种涡流混合时长：5分钟、8分钟、10分钟，结果无显著差异。
同理，本发明还分别采用了三种离心时长：10分钟、13分钟、15分钟，结果无显著差异。
综上所述，根据本发明的一个优选实施例，提供了一种血清中泌乳素单体的标准检测方法，包括以下步骤：
1)将200μL血清加入到等体积25％聚乙二醇6000溶液中，进行预处理沉淀，其中，25％聚乙二醇6000溶液通过将25g聚乙二醇6000溶解于1000毫升去离子水制得；
2)室温下涡流混合5分钟；
3)13400rpm离心10min；
4)取上清，采用罗氏Cobas 8000电化学发光免疫分析仪检测其中的泌乳素单体的浓度；
5)检测结果乘以稀释因子2，即可获得血清中的泌乳素单体浓度水平。
实施例2建立本地区两性人群泌乳素单体的参考区间
本实施例还首次建立了本地区聚乙二醇沉淀后健康两性人群的泌乳素单体参考区间，该泌乳素单体参考区间的建立仅限于罗氏电化学发光系统。共收集了240份健康体检者血清样本，年龄从18至60岁，并剔除了其中使用含雌激素避孕药或接受激素治疗的女性血清样本。人群泌乳素单体检测结果男女性别具有显著性差异，并且呈非正太分布，因此参考区间采用双侧2.5-97.5百分位数，女性：3.4-18.5ng/mL；男性：2.7-13.1ng/mL。由于革新了评判标准，采用泌乳素单体参考区间，避免一部分患者因泌乳素单体和巨泌乳素水平同时增高而造成回收率计算值偏高的问题，从而达到鉴别的高准确率。
通过采用本发明提供的这样一种25％聚乙二醇预处理沉淀法，与现有技术中采用凝胶过滤层析法比对，在40例病人的泌乳素单体的验证结果达到95％的准确率。采用临床确诊真性高泌乳素血症样本对该方法的敏感度和特异性进行验证，分别达到79％和90％。
自2020年4月以来，通过将本发明提供的检测方法应用于临床实践中，在高泌乳素血症诊疗中具有明确诊断和缩短疗程等积极作用，临床反映良好。目前已完成1140例高泌乳素血症样本的筛查，巨泌乳素阳性率为22.9％。与现有的诊断方法相比，可提早约6个月明确诊断。核磁共振扫描每次按360元计算，每年至少可以减少20万元诊疗费用的支出。
以上所述的，仅为本发明的较佳实施例，并非用以限定本发明的范围，本发明的上述实施例还可以做出各种变化。凡是依据本发明申请的权利要求书及说明书内容所作的简单、等效变化与修饰，皆落入本发明专利的权利要求保护范围。本发明未详尽描述的均为常规技术内容。
Claims (1)
1.一种血清中泌乳素单体的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
S1：取200~300μL血清加入等体积的25% 聚乙二醇6000溶液中，进行预处理沉淀，所述25% 聚乙二醇6000溶液通过将25g聚乙二醇6000溶解于1000毫升去离子水制得；
S2：室温下涡流混合5min；
S3：13400rpm离心10min，取上清液；
S4：采用免疫分析仪对步骤S3中所得上清液进行检测，所得检测结果乘以稀释因子2，即可获得所述血清中泌乳素单体的浓度。
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