CN110927370A - 一种微球试剂的制备方法 - Google Patents
一种微球试剂的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110927370A CN110927370A CN201911273589.1A CN201911273589A CN110927370A CN 110927370 A CN110927370 A CN 110927370A CN 201911273589 A CN201911273589 A CN 201911273589A CN 110927370 A CN110927370 A CN 110927370A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- auxiliary agent
- microsphere
- ultrasonic
- mixing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 title claims abstract description 97
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 22
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 claims abstract description 90
- 108700028909 Serum Amyloid A Proteins 0.000 claims abstract description 82
- 102000054727 Serum Amyloid A Human genes 0.000 claims abstract description 82
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 claims abstract description 56
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 32
- 238000001132 ultrasonic dispersion Methods 0.000 claims abstract description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 165
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 20
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 18
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 18
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 17
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 17
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 15
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 11
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 11
- NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 3-(n-morpholino)-2-hydroxypropanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCOCC1 NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 9
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 8
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 8
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 8
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 8
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 8
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 7
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 7
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 7
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 7
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZPIRTVJRHUMMOI-UHFFFAOYSA-N octoxybenzene Chemical compound CCCCCCCCOC1=CC=CC=C1 ZPIRTVJRHUMMOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 claims description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 18
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 abstract description 12
- 230000006872 improvement Effects 0.000 abstract description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 2
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 13
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 13
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 6
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 4
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- HSXUNHYXJWDLDK-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1-sulfonic acid Chemical compound CC(O)CS(O)(=O)=O HSXUNHYXJWDLDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010048998 Acute phase reaction Diseases 0.000 description 1
- 102000011767 Acute-Phase Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010062271 Acute-Phase Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- -1 N-morpholinyl Chemical group 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003219 hemolytic agent Substances 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4709—Amyloid plaque core protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明提供一种微球试剂的制备方法,所述方法包括如下步骤:1)将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液混合、超声分散;2)向步骤1)分散后的溶液加入第三助剂,混合、超声分散;3)向步骤2)分散后的溶液加入第四助剂,混合,得到所述微球试剂。本发明采用一步法制备所述微球试剂,只需将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液按照特定比例混合,再利用超声分散,同时再配合各步骤条件,各个因素协同增效,得到了分散均匀稳定的微球试剂体系。该方法操作简单,受设备的限制小,单次生产量大,有效提高了生产效率,降低了生产成本。
Description
技术领域
本发明涉及医学检测领域,具体涉及一种微球试剂的制备方法。
背景技术
血清淀粉样蛋白A(Serum amyloid A protein,SAA)是一种由肝脏分泌的急性相蛋白,并能与血浆高密度脂蛋白(HDL)结合。现在,临床研究把目光集中在炎性疾病急性反应期间的SAA类型。
SAA是个灵敏的参数,它在炎性反应大约8h后开始升高,且超过参考范围上限时间早于c反应蛋白(CRP),然而CRP在正常人中的中位数值与参考范围上限的差距,大约有10倍,而在SAA中仅有5倍。这样在一些轻微感染,例如,许多病毒感染中SAA升高要比CRP更为常见。在感染性疾病中,SAA的绝对上升要高于CRP,因此SAA测定,尤其对“正常”与微小急性相反应可提供更好的鉴别。通常约2/3感冒患者SAA升高,但少于1/2的患者相同表现CRP升高。在病毒感染病例中,SAA和CRP浓度升高见于腺病毒感染者。SAA和CRP的反应形式在急性感染的恢复阶段是平行的,这同时适用于细菌和病毒感染。
随着SAA在临床中的应用范围越来越广泛,用于临床上检测SAA的方法主要有胶乳增强免疫比浊法、放射性免疫测定法、免疫速率散射比浊法、酶联免疫吸附试验等。
其中,目前市场上免疫比浊法制备的SAA的检测试剂盒大多采用两步法,第一步偶联剂将微球表面的官能团活化,第二步活化后的微球与抗体结合产生共价键。这种方法为了把未结合的抗体和偶联剂除去,需要进行多次的过滤和清洗,在过滤和清洗过程中,一般使用离心和超滤的方法。这些过滤和清洗过程耗时长、工艺繁锁,且受设备、人员、场地等多种因素限制,单批次制备量少、损耗大、生产成本高。
CN108828225A公开了一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法。该试剂盒包括彼此独立的溶血剂R1和胶乳试剂R2,所述的胶乳试剂R2中包括包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳;所述的包被血清淀粉样蛋白A抗体的胶乳为粒径60nm~130nm和190nm~220nm的胶乳分别包被抗血清淀粉样蛋白A1抗体和抗血清淀粉样蛋白A2抗体,然后再混合得到的。该发明中还提供一种血清淀粉样蛋白A含量测定的试剂盒的制备方法。但该制备方法必须经过重复多次的离心操作,不仅操作繁琐,而且极大地浪费了人力物力,生产成本高。
因此,针对上述现象,开发一种制备方法简单的SAA蛋白的检测试剂盒,有效提高生产效率,降低生产成本是本领域技术人员亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种微球试剂的制备方法。本发明采用一步法制备得到了所述微球试剂,该方法操作简单,受设备的限制小,单次生产量大,有效提高了生产效率,降低了生产成本。
为达此目的,本发明采用以下技术方案:
第一方面,本发明提供了一种微球试剂的制备方法,所述方法包括如下步骤:
1)将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液混合,超声分散;
2)向步骤1)分散后的溶液加入第三助剂,混合、超声分散;
3)向步骤2)分散后的溶液加入第四助剂,混合,得到所述微球试剂。
本发明采用一步法制备所述微球试剂,只需将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液按照特定比例混合,再利用超声分散,同时再配合工艺条件,各个因素相互配合,协同增效,得到了分散均匀稳定的微球试剂体系。该方法操作简单,受设备的限制小,单次生产量大,可以有效提高生产效率,降低生产成本。
优选地,所述微球溶液中的微球为苯乙烯微球。
优选地,所述偶联剂溶液中的偶联剂包括1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)。
优选地,所述偶联剂溶液中的偶联剂还包括N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)。
优选地,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比为1:1:(0.5-1),例如可以是1:1:0.5、1:1:0.6、1:1:0.7、1:1:0.8、1:1:0.9或1:1:1等。
优选地,步骤1)所述微球溶液中,微球的质量浓度为0.1-0.5%,例如可以是0.1%、0.2%、0.3%、0.4%或0.5%等。
优选地,步骤1)所述血清淀粉样蛋白A抗体溶液中,血清淀粉样蛋白A抗体的质量浓度为0.1-0.5%,例如可以是0.1%、0.2%、0.3%、0.4%或0.5%等。
优选地,步骤1)所述偶联剂溶液中,偶联剂的质量浓度为3-10mg/L,例如可以是3mg/L、4mg/L、5mg/L、6mg/L、7mg/L、8mg/L、9mg/L或10mg/L等。
优选地,所述微球溶液和血清淀粉样蛋白A抗体溶液的溶剂均为第一助剂;其中,所述第一助剂包括以下质量浓度的组分:1-5%的无机盐、0.5-2.0%的悬浊剂、0.1-0.5%的防腐剂、0.01-1%的表面活性剂,余量为缓冲液。
需要说明的是,本发明所述第一助剂、第二助剂和第三助剂中使用的缓冲液的浓度为20-100mM,第四助剂中使用的缓冲液的浓度为50-200mM。
所述20-100mM,例如可以是20mM、30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM或100mM等。
所述50-200mM,例如可以是50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM、180mM、190mM或200mM等。
1-5%的无机盐,例如可以是1%、2%、3%、4%或5%等。
0.5-2%的悬浊剂,例如可以是0.5%、0.8%、1%、1.2%、1.5%或2%等。
0.1-0.5%的防腐剂,例如可以是0.1%、0.2%、0.3%、0.4%或0.5%等。
0.01-1%的表面活性剂,例如可以是0.01%、0.05%、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%或1%等。
优选地,所述偶联剂溶液的溶剂为第二助剂;其中,所述第二助剂包括以下质量浓度的组分:1-5%的无机盐、0.1-0.5%的防腐剂、0.5-2.0%的稳定剂、0.01-1%的表面活性剂,余量为缓冲液。
1-5%的无机盐,例如可以是1%、2%、3%、4%或5%等。
0.1-0.5%的防腐剂,例如可以是0.1%、0.2%、0.3%、0.4%或0.5%等。
0.5-2.0%的稳定剂,例如可以是0.5%、0.8%、1%、1.2%、1.5%或2%等。
0.01-1%的表面活性剂,例如可以是0.01%、0.05%、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%或1%等。
优选地,所述第一助剂和第二助剂的pH均为5-7.5,例如可以是5、5.5、6、6.5、7或7.5等。
优选地,所述第一助剂和第二助剂中的缓冲液各自独立地包括2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲液(MES)、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液(MOPSO)或磷酸缓冲盐溶液(PBS)中的任意一种或至少两种的组合。
优选地,所述第一助剂和第二助剂中的无机盐各自独立地包括氯化钾(KCl)和/或氯化钠(NaCl)。
优选地,所述第一助剂和第二助剂中的防腐剂各自独立地包括Proclin300和/或叠氮化钠(NaN3)。
优选地,所述第一助剂和第二助剂中的表面活性剂各自独立地包括吐温-20(Tween-20)、吐温-80(Tween-80)或聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)中的任意一种或至少两种的组合。
优选地,所述第一助剂中的悬浊剂包括海藻糖、蔗糖或聚乙二醇(PEG)中的任意一种或至少两种的组合。
优选地,所述第二助剂中的稳定剂包括牛血清白蛋白(BSA)、明胶或甘油中的任意一种或至少两种的组合。
优选地,步骤1)所述混合的时间为1-24h,例如可以是1h、3h、5h、8h、10h、11h、13h、15h、18h、20h、22h或24h等。
优选地,步骤1)所述混合的转速为20-50rpm,例如可以是20rpm、30rpm、40rpm或50rpm等。
优选地,所述第三助剂包括以下质量浓度的组分:1-5%的无机盐、0.1-0.5%的防腐剂、0.5-2%的稳定剂、0.01-1%的表面活性剂,余量为缓冲液。
1-5%的无机盐,例如可以是1%、2%、3%、4%或5%等。
0.1-0.5%的防腐剂,例如可以是0.1%、0.2%、0.3%、0.4%或0.5%等。
0.5-2%的稳定剂,例如可以是0.5%、0.8%、1%、1.2%、1.5%或2%等。
0.01-1%的表面活性剂,例如可以是0.01%、0.05%、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%或1%等。
优选地,所述第三助剂的pH均为5-7.5,例如可以是5、5.5、6、6.5、7或7.5等。
优选地,所述第三助剂中的缓冲液包括MES、MOPSO或PBS中的任意一种或至少两种的组合。
优选地,所述第三助剂中的无机盐包括KCl和/或NaCl。
优选地,所述第三助剂中的防腐剂包括Proclin300和/或NaN3。
优选地,所述第三助剂中的稳定剂包括BSA、明胶或甘油中的任意一种或至少两种的组合。
优选地,所述第三助剂中的表面活性剂包括Tween-20、Tween-80或TritonX-100中的任意一种或至少两种的组合。
优选地,步骤2)中所述混合的时间为1-4h,例如可以是1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h或4h等。
优选地,步骤2)所述混合的转速为20-50rpm,例如可以是20rpm、25rpm、30rpm、35rpm、40rpm、45rpm或50rpm等。
优选地,步骤2)中所述第三助剂与步骤1)分散后溶液的体积比为(1-3):1,例如可以是1:1、1.5:1、2:1、2.5:1或3:1等。
优选地,步骤1)中所述超声分散和步骤2)中所述超声分散的条件各自独立地为:超声功率10-50%,超声开启时间为1-3s,超声关闭时间为3-6s,超声总时间为5-30min。
所述超声功率10-50%,例如可以是10%、20%、30%、40%或50%等。
超声开启时间为1-3s,例如可以是1s、1.5s、2s、2.5s或3s等。
超声关闭时间为3-6s,例如可以是3s、3.5s、4s、4.5s、5s、5.5s或6s等。
超声总时间为5-30min,例如可以是5min、10min、15min、20min、25min或30min等。
优选地,所述第四助剂包括以下质量浓度的组分:1-5%的无机盐、0.1-0.5%的防腐剂、0.5-2%的稳定剂、0.01-1%的表面活性剂,余量为缓冲液。
1-5%的无机盐,例如可以是1%、2%、3%、4%或5%等。
0.1-0.5%的防腐剂,例如可以是0.1%、0.2%、0.3%、0.4%或0.5%等。
0.5-2%的稳定剂,例如可以是0.5%、0.8%、1%、1.2%、1.5%或2%等。
0.01-1%的表面活性剂,例如可以是0.01%、0.05%、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%或1%等。
优选地,所述第四助剂的pH均为5-7.5,例如可以是5、5.5、6、6.5、7或7.5等。
优选地,所述第四助剂中的缓冲液包括MES、MOPSO或PBS中的任意一种或至少两种的组合。
优选地,所述第四助剂中的无机盐包括KCl和/或NaCl。
优选地,所述第四助剂中的防腐剂包括Proclin300和/或NaN3。
优选地,所述第四助剂中的稳定剂包括BSA、明胶或甘油中的任意一种或至少两种的组合。
优选地,所述第四助剂中的表面活性剂包括Tween-20、Tween-80或TritonX-100中的任意一种或至少两种的组合。
优选地,步骤3)中所述混合的时间为1-5h,例如可以是1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h、4h、4.5h或5h等。
优选地,步骤3)所述混合的转速为20-50rpm,例如可以是20rpm、30rpm、40rpm或50rpm等。
优选地,步骤3)中所述第四助剂与步骤2)分散后溶液的体积比为(1-3):1,例如可以是1:1、1.5:1、2:1、2.5:1或3:1等。
优选地,所述方法包括如下步骤:
1)将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液混合均匀1-24h,转速为20-50rpm,其中,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比为1:1:(0.5-1),微球溶液中微球浓度为0.1-0.5%,血清淀粉样蛋白A抗体溶液中血清淀粉样蛋白A抗体浓度为0.1-0.5%,偶联剂溶液中偶联剂浓度为3-10mg/L,超声分散,超声功率10-50%,超声开启时间为1-3s,超声关闭时间为3-6s,超声总时间为5-30min;
2)向步骤1)分散后的溶液加入第三助剂,所述第三助剂与步骤1)分散后溶液的体积比为(1-3):1,以20-50rpm的搅拌速度混合1-4h后再进行超声分散,超声功率10-50%,超声开启时间为1-3s,超声关闭时间为3-6s,超声总时间为5-30min;
3)向步骤2)分散后的溶液加入第四助剂,所述第四助剂与步骤2)分散后溶液的体积比为(1-3):1,以20-50rpm的搅拌速度混合1-5h,得到所述微球试剂。
相对于现有技术,本发明具有以下有益效果:
本发明采用一步法制备所述微球试剂,只需将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液按照特定比例混合,再利用超声分散,同时再配合各步骤条件,各个因素协同增效,得到了分散均匀稳定的微球试剂体系。该方法操作简单,受设备的限制小,单次生产量大,有效提高了生产效率,降低了生产成本。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了,所述实施例仅仅是帮助理解本发明,不应视为对本发明的具体限制。
本发明实施例和对比例使用的第一助剂、第二助剂、第三助剂和第四助剂的配方如下:
第一助剂包括以下质量浓度的组分:2%的KCl、1%的海藻糖、0.3%的Proclin300、0.5%的Tween-20,余量为MES(2-(N-吗啉基)乙磺酸的浓度为50mM)。
第二助剂包括以下质量浓度的组分:3%的NaCl、0.4%的NaN3、1.5%的BSA、0.8%的Tween-80,余量为MOPSO(3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸的浓度为30mM)。
第三助剂包括以下质量浓度的组分:5%的NaCl、0.2%的Proclin300、0.5%的明胶、0.8%的TritonX-100,余量为PBS(磷酸缓冲盐的浓度为100mM)。
第四助剂包括以下质量浓度的组分:150mM的MES、5%的KCl、0.25%的NaN3、2.0%的甘油、0.3%的Tween-20,余量为MES(2-(N-吗啉基)乙磺酸的浓度为150mM)。
本发明实施例和对比例使用的微球的厂家和牌号如下:
苯乙烯微球(购于JSR公司,牌号为P0114)。
实施例1
本实施例提供了一种微球试剂及其制备方法。
制备方法:
1)将苯乙烯微球溶于第一助剂中,得到微球溶液,其中,在所述微球溶液中,微球的质量浓度为0.3%;
2)将血清淀粉样蛋白A抗体溶于第一助剂,得到血清淀粉样蛋白A抗体溶液,在所述血清淀粉样蛋白A抗体溶液中,血清淀粉样蛋白A抗体的质量浓度为0.3%;
3)将EDC和NHS溶于第二助剂,得到偶联剂溶液,其中,在所述偶联剂溶液中,EDC和NHS的总质量浓度为5mg/L;
4)将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液混合12h,转速为35rpm,超声分散,超声功率35%,超声开启时间为2s,超声关闭时间为5s,超声总时间为20min,其中,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比为1:1:1;
5)向步骤4)得到的混合溶液中加入第三助剂,继续混合3h,转速为35rpm,超声分散,超声功率35%,超声开启时间为2s,超声关闭时间为5s,超声总时间为20min,其中,所述第三助剂与步骤4)分散后溶液的体积比为1:1;
6)向步骤5)分散后的溶液中加入第四助剂,以30rpm的搅拌速度混合3h,其中,所述第四助剂与步骤5)分散后溶液的体积比为1:1,得到所述微球试剂。
实施例2
本实施例提供了一种微球试剂及其制备方法。
制备方法:
1)将苯乙烯微球溶于第一助剂中,得到微球溶液,其中,在所述微球溶液中,微球的质量浓度为0.5%;
2)将血清淀粉样蛋白A抗体溶于第一助剂,得到血清淀粉样蛋白A抗体溶液,在所述血清淀粉样蛋白A抗体溶液中,血清淀粉样蛋白A抗体的质量浓度为0.4%;
3)将EDC溶于第二助剂,得到偶联剂溶液,其中,在所述偶联剂溶液中,EDC的质量浓度为10mg/L;
4)将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液混合24h,转速为20rpm,超声分散,超声功率50%,超声开启时间为2s,超声关闭时间为6s,超声总时间为30min,其中,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比为1:1:0.8;
5)向步骤4)得到的混合溶液中加入第三助剂,继续混合4h,转速为20rpm,超声分散,超声功率50%,超声开启时间为2s,超声关闭时间为6s,超声总时间为30min,其中,所述第三助剂与步骤4)分散后溶液的体积比为2:1;
6)向步骤5)分散后的溶液中加入第四助剂,以30rpm的搅拌速度混合1h,其中,所述第四助剂与步骤5)分散后溶液的体积比为1:1,得到所述微球试剂。
实施例3
本实施例提供了一种微球试剂及其制备方法。
制备方法:
1)将苯乙烯微球溶于第一助剂中,得到微球溶液,其中,在所述微球溶液中,微球的质量浓度为0.1%;
2)将血清淀粉样蛋白A抗体溶于第一助剂,得到血清淀粉样蛋白A抗体溶液,在所述血清淀粉样蛋白A抗体溶液中,血清淀粉样蛋白A抗体的质量浓度为0.5%;
3)将EDC溶于第二助剂,得到偶联剂溶液,其中,在所述偶联剂溶液中,EDC的质量浓度为3mg/L;
4)将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液混合20h,转速为40rpm,超声分散,超声功率30%,超声开启时间为3s,超声关闭时间为3s,超声总时间为10min,其中,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比为1:1:0.5;
5)向步骤4)得到的混合溶液中加入第三助剂,继续混合1h,转速为40rpm,超声分散,超声功率40%,超声开启时间为3s,超声关闭时间为3s,超声总时间为10min,其中,所述第三助剂与步骤4)分散后溶液的体积比为3:1;
6)向步骤5)分散后的溶液中加入第四助剂,以30rpm的搅拌速度混合5h,其中,所述第四助剂与步骤5)分散后溶液的体积比为2:1,得到所述微球试剂。
实施例4
本实施例提供了一种微球试剂及其制备方法。
制备方法:
1)将苯乙烯微球溶于第一助剂中,得到微球溶液,其中,在所述微球溶液中,微球的质量浓度为0.2%;
2)将血清淀粉样蛋白A抗体溶于第一助剂,得到血清淀粉样蛋白A抗体溶液,在所述血清淀粉样蛋白A抗体溶液中,血清淀粉样蛋白A抗体的质量浓度为0.1%;
3)将EDC和NHS溶于第二助剂,得到偶联剂溶液,其中,在所述偶联剂溶液中,EDC和NHS的总质量浓度为6mg/L;
4)将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液混合10h,转速为40rpm,超声分散,超声功率30%,超声开启时间为1s,超声关闭时间为3s,超声总时间为15min,其中,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比为1:1:0.6;
5)向步骤4)得到的混合溶液中加入第三助剂,继续混合1h,转速为40rpm,超声分散,超声功率40%,超声开启时间为1s,超声关闭时间为3s,超声总时间为15min,其中,所述第三助剂与步骤4)分散后溶液的体积比为1:1;
6)向步骤5)分散后的溶液中加入第四助剂,以30rpm的搅拌速度混合4h,其中,所述第四助剂与步骤5)分散后溶液的体积比为3:1,得到所述微球试剂。
实施例5
与实施例1的区别仅在于,步骤1)所述微球溶液中,微球的质量浓度为1%。
实施例6
与实施例1的区别仅在于,步骤1)所述微球溶液中,微球的质量浓度为0.01%。
实施例7
与实施例1的区别仅在于,步骤1)所述血清淀粉样蛋白A抗体溶液中,血清淀粉样蛋白A抗体的质量浓度为1%。
实施例8
与实施例1的区别仅在于,步骤1)所述血清淀粉样蛋白A抗体溶液中,血清淀粉样蛋白A抗体的质量浓度为0.01%。
实施例9
与实施例1的区别仅在于,步骤1)所述偶联剂溶液中,偶联剂的质量浓度为15mg/L。
实施例10
与实施例1的区别仅在于,步骤1)所述偶联剂溶液中,偶联剂的质量浓度为1mg/L。
实施例11
与实施例1的区别仅在于,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比为1:1:1.5。
实施例12
与实施例1的区别仅在于,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比为1:1:0.2。
实施例13
与实施例1的区别仅在于,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比为2:1:1。
实施例14
与实施例1的区别仅在于,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比为1:2:1。
实施例15
与实施例1的区别仅在于,步骤2)中所述第三助剂与步骤1)分散后溶液的体积比为5:1。
实施例16
与实施例1的区别仅在于,步骤2)中所述第三助剂与步骤1)分散后溶液的体积比为0.5:1。
实施例17
与实施例1的区别仅在于,步骤3)中所述第四助剂与步骤2)分散后溶液的体积比为5:1。
实施例18
与实施例1的区别仅在于,步骤3)中所述第四助剂与步骤2)分散后溶液的体积比为0.5:1。
对比例1
与实施例1相比,除了先用偶联剂活化微球,再加入血清淀粉样蛋白A抗体共价结合外,其他条件与实施例1相同。
对比例2
与实施例1的区别仅在于,不采用超声分散。
对比例3
与实施例1的区别仅在于,利用CRP抗体替换血清淀粉样蛋白A。
实施例19
本实施例提供了试剂R1。
制备方法如下:
将质量浓度分别为50mM的MES、2%的NaCl、0.05%的Proclin300和0.1%的Tween-20混合,保持其pH在7.5,溶于纯化水,搅拌,得到所述试剂R1。
试验检测:
将实施例1-18和对比例1-2制得的微球试剂分别与实施例19制得的试剂R1组装成试剂盒;
对比例4为市售血清淀粉样蛋白A商品化试剂盒(购于美康公司,牌号为SAA测定试剂盒)。
对比例5为市售CRP抗体商品化试剂盒(购于菲鹏公司,牌号为CRP AB)。
将上述制得的试剂盒进行血清淀粉样蛋白A含量检测。
检测方法:利用分光光度计对上述试剂盒进行血清淀粉样蛋白A含量的检测。
具体检测结果见表1.
表1
由表1可知,实施例1-4按照本发明提供的技术方案制备微球试剂,组装得到的试剂盒检测结果准确,与市售试剂盒结果基本一致,但制备方法操作更简单。
与实施例1相比,实施例5-10中微球、血清淀粉样蛋白A或偶联剂的用量产出本发明的范围,实施例11-14中,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比均超出本发明限定的范围,实施例15-18中,第三助剂与步骤1)分散后溶液的体积比或第四助剂与步骤2)分散后溶液的体积比均超出本发明限定的范围,其其组装得到的试剂盒的检测结果明显降低或升高,与市售试剂盒的标准结果相违背。
与实施例1相比,对比例2不采用超声分散,其组装得到的试剂盒的检测结果也出现或高或低的结果。这表明本发明所述的制备方法中各组分以及配方中各工艺条件之间是相互配合,协同增效,缺一不可的,再通过搭配特定的实验步骤顺序,共同实现体系的稳定和检测结果的准确,最终可以达到提高生产效率,降低生产成本的目的。
与实施例1相比,对比例3利用CRP抗体替换血清淀粉样蛋白A,其与对比例5市售的CRP抗体商品化试剂盒的检测结果相差很大,这说明不是所有的抗体蛋白检测试剂都适合通过一步法来制备。
申请人声明,以上所述仅为本发明的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,所属技术领域的技术人员应该明了,任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到的变化或替换,均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (10)
1.一种微球试剂的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
1)将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液混合,超声分散;
2)向步骤1)分散后的溶液加入第三助剂,混合、超声分散;
3)向步骤2)分散后的溶液加入第四助剂,混合,得到所述微球试剂。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述微球溶液中的微球为苯乙烯微球;
优选地,所述偶联剂溶液中的偶联剂包括1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐;
优选地,所述偶联剂溶液中的偶联剂还包括N-羟基琥珀酰亚胺;
优选地,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比为1:1:(0.5-1)。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤1)所述微球溶液中,微球的质量浓度为0.1-0.5%;
优选地,步骤1)所述血清淀粉样蛋白A抗体溶液中,血清淀粉样蛋白A抗体的质量浓度为0.1-0.5%;
优选地,步骤1)所述偶联剂溶液中,偶联剂的质量浓度为3-10mg/L。
4.根据权利要去1-3任一项所述的方法,其特征在于,所述微球溶液和血清淀粉样蛋白A抗体溶液的溶剂均为第一助剂;其中,所述第一助剂包括以下质量浓度的组分:1-5%的无机盐、0.5-2%的悬浊剂、0.1-0.5%的防腐剂、0.01-1%的表面活性剂,余量为缓冲液;
优选地,所述偶联剂溶液的溶剂为第二助剂;其中,所述第二助剂包括以下质量浓度的组分:1-5%的无机盐、0.1-0.5%的防腐剂、0.5-2.0%的稳定剂、0.01-1%的表面活性剂,余量为缓冲液;
优选地,所述第一助剂和第二助剂的pH均为5-7.5。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法,其特征在于,所述第一助剂和第二助剂中的缓冲液各自独立地包括2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液或磷酸缓冲盐溶液中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,所述第一助剂和第二助剂中的无机盐各自独立地包括氯化钾和/或氯化钠;
优选地,所述第一助剂和第二助剂中的防腐剂各自独立地包括Proclin300和/或叠氮化钠;
优选地,所述第一助剂和第二助剂中的表面活性剂各自独立地包括吐温-20、吐温-80或聚乙二醇辛基苯基醚中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,所述第一助剂中的悬浊剂包括海藻糖、蔗糖或聚乙二醇中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,所述第二助剂中的稳定剂包括牛血清白蛋白、明胶或甘油中的任意一种或至少两种的组合。
6.根据权利要去1-5任一项所述的方法,其特征在于,步骤1)所述混合的时间为1-24h;
优选地,步骤1)所述混合的转速为20-50rpm。
7.根据权利要去1-6任一项所述的方法,其特征在于,所述第三助剂包括以下质量浓度的组分:1-5%的无机盐、0.1-0.5%的防腐剂、0.5-2%的稳定剂、0.01-1%的表面活性剂,余量为缓冲液;
优选地,所述第三助剂的pH均为5-7.5;
优选地,所述第三助剂中的缓冲液包括包括2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液或磷酸缓冲盐溶液中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,所述第三助剂中的无机盐包括氯化钾和/或氯化钠;
优选地,所述第三助剂中的防腐剂包括Proclin300和/或叠氮化钠;
优选地,所述第三助剂中的稳定剂包括牛血清白蛋白、明胶或甘油中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,所述第三助剂中的表面活性剂包括吐温-20、吐温-80或聚乙二醇辛基苯基醚中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,步骤2)中所述混合的时间为1-4h;
优选地,步骤2)所述混合的转速为20-50rpm;
优选地,步骤2)中所述第三助剂与步骤1)分散后溶液的体积比为(1-3):1;
优选地,步骤1)中所述超声分散和步骤2)中所述超声分散的条件各自独立地为:超声功率10-50%,超声开启时间为1-3s,超声关闭时间为3-6s,超声总时间为5-30min。
8.根据权利要求1-7任一项所述的方法,其特征在于,所述第四助剂包括以下质量浓度的组分:1-5%的无机盐、0.1-0.5%的防腐剂、0.5-2%的稳定剂、0.01-1%的表面活性剂,余量为缓冲液;
优选地,所述第四助剂的pH均为5-7.5;
优选地,所述第四助剂中的缓冲液包括2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液或磷酸缓冲盐溶液中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,所述第四助剂中的无机盐包括氯化钾和/或氯化钠;
优选地,所述第四助剂中的防腐剂包括Proclin300和/或叠氮化钠;
优选地,所述第四助剂中的稳定剂包括牛血清白蛋白、明胶或甘油中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,所述第四助剂中的表面活性剂包括吐温-20、吐温-80或聚乙二醇辛基苯基醚中的任意一种或至少两种的组合。
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法,其特征在于,步骤3)中所述混合的时间为1-5h;
优选地,步骤3)所述混合的转速为20-50rpm;
优选地,步骤3)中所述第四助剂与步骤2)分散后溶液的体积比为(1-3):1。
10.根据权利要求1-9任一项所述的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
1)将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液混合均匀1-24h,转速为20-50rpm,其中,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比为1:1:(0.5-1),微球溶液中微球浓度为0.1-0.5%,血清淀粉样蛋白A抗体溶液中血清淀粉样蛋白A抗体浓度为0.1-0.5%,偶联剂溶液中偶联剂浓度为3-10mg/L,超声分散,超声功率10-50%,超声开启时间为1-3s,超声关闭时间为3-6s,超声总时间为5-30min;
2)向步骤1)分散后的溶液加入第三助剂,所述第三助剂与步骤1)分散后溶液的体积比为(1-3):1,以20-50rpm的搅拌速度混合1-4h后再进行超声分散,超声功率10-50%,超声开启时间为1-3s,超声关闭时间为3-6s,超声总时间为5-30min;
3)向步骤2)分散后的溶液加入第四助剂,所述第四助剂与步骤2)分散后溶液的体积比为(1-3):1,以20-50rpm的搅拌速度混合1-5h,得到所述微球试剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911273589.1A CN110927370A (zh) | 2019-12-12 | 2019-12-12 | 一种微球试剂的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911273589.1A CN110927370A (zh) | 2019-12-12 | 2019-12-12 | 一种微球试剂的制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110927370A true CN110927370A (zh) | 2020-03-27 |
Family
ID=69859216
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201911273589.1A Pending CN110927370A (zh) | 2019-12-12 | 2019-12-12 | 一种微球试剂的制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110927370A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111707817A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-09-25 | 吉林基蛋生物科技有限公司 | 一种肝胆酸测定试剂盒的制备及检测方法 |
CN111879921A (zh) * | 2020-06-22 | 2020-11-03 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种偶联抗体的荧光微球及其制备方法与用途 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6375949B1 (en) * | 1995-08-30 | 2002-04-23 | Eiken Kagaku Kabushiki Kaisha | Monoclonal antibody recognizing serum amyloid A |
CN105929173A (zh) * | 2016-04-27 | 2016-09-07 | 深圳市国赛生物技术有限公司 | 一种血清淀粉样蛋白a的检测试剂盒及检测方法 |
CN108828225A (zh) * | 2018-04-25 | 2018-11-16 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 血清淀粉样蛋白a含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法 |
CN108872592A (zh) * | 2018-07-04 | 2018-11-23 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白a检测试剂盒 |
CN109580936A (zh) * | 2018-12-04 | 2019-04-05 | 蓝怡科技集团股份有限公司 | 一种微球试剂及其制备方法和应用 |
CN109621850A (zh) * | 2018-12-13 | 2019-04-16 | 蓝怡科技集团股份有限公司 | 一种偶联抗体的聚苯乙烯微球的制备方法 |
CN110133281A (zh) * | 2019-05-06 | 2019-08-16 | 中生北控生物科技股份有限公司 | Crp和saa联合检测试剂盒及其制备方法 |
-
2019
- 2019-12-12 CN CN201911273589.1A patent/CN110927370A/zh active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6375949B1 (en) * | 1995-08-30 | 2002-04-23 | Eiken Kagaku Kabushiki Kaisha | Monoclonal antibody recognizing serum amyloid A |
CN105929173A (zh) * | 2016-04-27 | 2016-09-07 | 深圳市国赛生物技术有限公司 | 一种血清淀粉样蛋白a的检测试剂盒及检测方法 |
CN108828225A (zh) * | 2018-04-25 | 2018-11-16 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 血清淀粉样蛋白a含量测定的试剂盒、制备方法及检测方法 |
CN108872592A (zh) * | 2018-07-04 | 2018-11-23 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种胶乳增强免疫比浊法测定血清淀粉样蛋白a检测试剂盒 |
CN109580936A (zh) * | 2018-12-04 | 2019-04-05 | 蓝怡科技集团股份有限公司 | 一种微球试剂及其制备方法和应用 |
CN109621850A (zh) * | 2018-12-13 | 2019-04-16 | 蓝怡科技集团股份有限公司 | 一种偶联抗体的聚苯乙烯微球的制备方法 |
CN110133281A (zh) * | 2019-05-06 | 2019-08-16 | 中生北控生物科技股份有限公司 | Crp和saa联合检测试剂盒及其制备方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111707817A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-09-25 | 吉林基蛋生物科技有限公司 | 一种肝胆酸测定试剂盒的制备及检测方法 |
CN111879921A (zh) * | 2020-06-22 | 2020-11-03 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种偶联抗体的荧光微球及其制备方法与用途 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110927370A (zh) | 一种微球试剂的制备方法 | |
BR112012014937B1 (pt) | método de produção de um anticorpo, fragmento de anticorpo ou proteína de fusão fc purificada usando uma matriz de cromatografia de afinidade | |
JP5735615B2 (ja) | 免疫学的測定における感度増強方法及びそのための試薬 | |
JP2005300552A (ja) | イムノアッセイ用試薬の緩衝剤組成物 | |
CN108593641B (zh) | 一种定量检测全血样品中待测物质的试剂盒及方法 | |
CN107167586B (zh) | 一种抗链球菌溶血素o检测试剂盒及其制备方法 | |
CN102426231A (zh) | 一种免疫层析试条用封闭剂组合物以及一种免疫层析试条 | |
US20220056421A1 (en) | A method for depletion or removal of endotoxin from an endotoxin-containing source or potentially endotoxin-containing source | |
CN109621850B (zh) | 一种偶联抗体的聚苯乙烯微球的制备方法 | |
WO2013147233A1 (ja) | 抗体検出用試薬の製造方法、及びその用途 | |
BRPI0712569B1 (pt) | Processo para separação e determinação da carga viral em uma amostra de pancreatina | |
CN109580936B (zh) | 一种微球试剂及其制备方法和应用 | |
JP6016789B2 (ja) | Pivka−ii測定試薬における非特異反応の抑制方法 | |
CN105713156A (zh) | 一种喹诺酮纳米分子印迹聚合物制备方法与应用 | |
JPH059229A (ja) | スクシンイミド含有ポリマー並びにそれらより製造されるラテツクス | |
CN113125741A (zh) | 降钙素原的检测试剂、试剂盒、系统及检测方法 | |
CN115754288A (zh) | 一种样品垫处理液及其应用 | |
WO2020118526A1 (zh) | 一种检测油脂中辣椒碱成分的方法 | |
Broadbent et al. | Detergent-free membrane protein purification using SMA polymer | |
JPH0758294B2 (ja) | 診断用具 | |
JPH07229900A (ja) | 免疫学的診断試薬 | |
CN1314952C (zh) | 用于固相膜免疫分析方法流动相的样本处理制剂 | |
JP2004061301A (ja) | 生理活性物質担体ポリマー粒子 | |
JP2004109062A (ja) | 免疫学的構造を回復したウイルス抗原を使用した抗ウイルス抗体測定方法並びに測定キット | |
JPH0750110B2 (ja) | 免疫測定法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200327 |