CN113125741A - 降钙素原的检测试剂、试剂盒、系统及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了一种降钙素原的检测试剂、试剂盒及检测方法,该降钙素原的检测试剂包括:第一载体微球、第二载体微球、分别与所述第一载体微球、所述第二载体微球连接的降钙素原抗体以及保存液;其中,所述降钙素原抗体包括第一降钙素原抗体、第二降钙素原抗体,所述第一载体微球至少与所述第一降钙素原抗体连接,所述第二载体微球至少与所述第二降钙素原抗体连接,所述第一降钙素原抗体与所述第二降钙素原抗体分别对应所述降钙素原的不同的抗原决定簇;其中,所述第一载体微球的平均粒径不小于第一预设粒径,所述第二载体微球的平均粒径不大于第二预设粒径,所述第一预设粒径大于所述第二预设粒径。通过上述方式,本申请能够提高降钙素原的检测灵敏度的同时,还能够具有较宽的线性范围以及缩短检测时间。
Description
技术领域
本申请涉及免疫检测技术领域,特别是涉及一种降钙素原的检测试剂、试剂盒、系统及检测方法。
背景技术
降钙素原(procalcitonin,PCT)是一种蛋白质,其与细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症等具有较高的相关性,从而可用于细菌感染性脓毒症的诊断、分层、治疗监测和预后评估。
当前针对降钙素原的试剂、试剂盒等在对降钙素原记性检测时灵敏度较低且检测时间较长,从而不能够满足使用需求。
发明内容
本申请主要解决的技术问题是提供一种降钙素原的检测试剂、试剂盒、系统及检测方法,能够提高降钙素原的检测灵敏度、具有较宽的线性范围以及缩短检测时间。
为解决上述技术问题,本申请采用的一个技术方案是:提供一种降钙素原的检测试剂,所述检测试剂包括:第一载体微球、第二载体微球、分别与所述第一载体微球、所述第二载体微球连接的降钙素原抗体以及保存液;其中,所述降钙素原抗体包括第一降钙素原抗体、第二降钙素原抗体,所述第一载体微球至少与所述第一降钙素原抗体连接,所述第二载体微球至少与所述第二降钙素原抗体连接,所述第一降钙素原抗体与所述第二降钙素原抗体分别对应所述降钙素原的不同的抗原决定簇;其中,所述第一载体微球的平均粒径不小于第一预设粒径,所述第二载体微球的平均粒径不大于第二预设粒径,所述第一预设粒径大于所述第二预设粒径。
为解决上述技术问题,本申请采用的另一个技术方案是:提供一种降钙素原的检测试剂盒,所述检测试剂盒包括如上所述的检测试剂。
为解决上述技术问题,本申请采用的另一个技术方案是:提供一种降钙素原检测系统,所述降钙素原检测系统包括降钙素原检测仪以及如上所述的降钙素原的检测试剂盒。
为解决上述技术问题,本申请采用的另一个技术方案是:提供一种基于如上述所述的检测试剂的降钙素原的检测方法,所述检测方法包括:提供所述检测试剂以及待测样本;将所述检测试剂与所述待测样本混合,以使得所述待测样本中的降钙素原分别与所述检测试剂中的连接第一载体微球的第一降钙素原抗体和连接第二载体微球的第二降钙素原抗体结合,而形成第一载体微球-第一降钙素原抗体-降钙素原-第二降钙素原抗体-第二载体微球复合物,从而得到待测组合物;对所述待测组合物进行吸光度测定,从而得出所述待测样本中的降钙素原的含量。
为解决上述技术问题,本申请采用的另一个技术方案是:提供一种降钙素原的检测试剂的制备方法,所述制备方法包括:提供第一载体微球、第二载体微球、降钙素原抗体以及保存液,其中,所述降钙素原抗体包括第一降钙素原抗体、第二降钙素原抗体;分别对所述第一载体微球及所述降钙素原抗体进行处理,以使得所述第一载体微球至少与所述第一降钙素原抗体连接;分别对所述第二载体微球及所述降钙素原抗体进行处理,以使得所述第二载体微球至少与所述第二降钙素原抗体连接;将至少连接有第一降钙素原抗体的第一载体微球、至少连接有第二降钙素原抗体的第二载体微球以及保存液混合,得到所述降钙素原的所述检测试剂;其中,所述第一载体微球的平均粒径不小于第一预设粒径,所述第二载体微球的平均粒径不大于第二预设粒径,所述第一预设粒径大于所述第二预设粒径。
本申请的有益效果是:区别于现有技术的情况,本申请第一载体微球的粒径较大,能够包被较多的降钙素原抗体,从而在对样本中的降钙素原进行检测时,能够增加样本中的降钙素原与降钙素原抗体反应时的浊度,从而能够提高检测的灵敏度;而由于第二载体微球的粒径较小,从而在质量一定时,可增大第二载体微球的数量,在检测时,一方面能够提高检测的线性范围,另一方面能够提高检测速度,缩短检测时间。本申请充分利用粒径较大的第一载体微球以及粒径较小的第二载体微球各自的优势,形成优势互补,以在提高检测的灵敏度的同时,还能够提高检测的线性范围以及缩短检测时间。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案,下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。其中:
图1是本申请降钙素原的检测试剂盒一实施方式的结构示意图;
图2是本申请降钙素原检测系统一实施方式的结构示意图;
图3是本申请降钙素原的制备方法一实施方式的流程示意图;
图4是图3中步骤S12的流程示意图;
图5是图3中步骤S13的流程示意图;
图6是本申请降钙素原的检测方法一实施方式的流程示意图;
图7是实施例一中检测试剂对待测样本进行检测得出的线性曲线;
图8是实施例二中检测试剂对待测样本进行检测得出的线性曲线;
图9是实施例三中检测试剂对待测样本进行检测得出的线性曲线。
具体实施方式
下面将结合本申请实施例中的附图,对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例,而不是全部实施例。基于本申请中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性的劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本申请保护的范围。
本申请提供一种降钙素原的检测试剂,在一实施方式中,该降钙素原的检测试剂包括第一载体微球、第二载体微球、降钙素原抗体以及保存液。
其中,第一载体微球与第二载体微球均可以为胶乳微球、三聚氰胺微球或磁性微球等,需要说明的是,第一载体微球与第二载体微球的种类可以相同,也可以不同,此处不做具体限定。
在一实施方式中,第一载体微球和第二载体微球均为胶乳微球,具体均可以为聚苯乙烯胶乳微球。
其中,该胶乳微球的表面可带有羧基、羟基、氨基、甲苯磺酰基、氯甲基、巯基、醛基、酰肼、硅羟基、琥珀酰亚胺酯、环氧基中的至少一种官能团。在一个应用场景中,上述胶乳微球的表面官能团为羧基,由于羧基容易被活化,从而在制备该检测试剂时能够快速与降钙素原抗体结合,以提高偶联效果。
进一步地,降钙素原抗体可包括第一降钙素原抗体、第二降钙素原抗体,其中,第一降钙素原抗体与第二降钙素原抗体分别对应于降钙素原的不同的抗原决定簇。
本实施方式中的降钙素原抗体并不限定于仅包括上述第一降钙素原抗体和第二降钙素原抗体,还可以包括其它。需要指出的是,第一载体微球至少与第一降钙素原抗体连接,第二载体微球至少与第二降钙素原抗体连接。
具体地,本实施方式中的降钙素原抗体可包括鼠抗人降钙素原抗体、山羊抗人降钙素原抗体、兔抗人降钙素原抗体的至少一种。
进一步地,保存液可包括缓冲液、蛋白保护剂以及防腐剂中的至少一种。具体地,缓冲液可以为氨基丁三醇体系、磷酸盐体系、4-羟乙基哌嗪乙磺酸体系中的至少一种;蛋白保护剂可包括牛血清蛋白、甘氨酸、糖类、甘油中的至少一种;防腐剂可包括叠氮钠、ProClin 300中的至少一种。当然,在其它实施方式中还可以采用其它的保存液,此处不做具体限定。
进一步地,本实施方式中的第一载体微球的平均粒径不小于第一预设粒径,第二载体微球的平均粒径不大于第二预设粒径,且第一预设粒径大于第二预设粒径。
具体地,第一载体微球的平均粒径可以为200nm-400nm,具体如200nm、300nm、400nm等,第二载体微球的平均粒径可以为50nm-100nm,具体如50nm、70nm、90nm、100nm等,此处不做具体限定。
需要指出的是,由于第一载体微球的粒径较大,因此第一载体微球上能够包被较多的降钙素原抗体,从而在对样本中的降钙素原进行检测时,能够增加样本中的降钙素原与降钙素原抗体反应时的浊度,从而能够提高检测的灵敏度;而由于第二载体微球的粒径较小,从而在质量一定时,可增大第二载体微球的数量,在检测时,一方面能够提高检测的线性范围,另一方面能够提高检测速度,缩短检测时间。本实施方式充分利用粒径较大的第一载体微球以及粒径较小的第二载体微球各自的优势,形成优势互补,以在提高检测的灵敏度的同时,还能够提高检测的线性范围以及缩短检测时间。
进一步地,在一实施方式中,第一载体微球上连接的降钙素原抗体的量可以为20μg-50μg/mg,具体如20μg/mg、30μg/mg、40μg/mg、50μg/mg,第二载体微球上连接的降钙素原抗体的量可以为40μg-80μg/mg,具体如40μg/mg、50μg/mg、60μg/mg、70μg/mg、80μg/mg等,此处不做具体限定。
进一步地,在一实施方式中,第一载体微球及其连接的降钙素原抗体的质量百分含量可为30%-50%,具体如30%、40%、50%等,所述第二载体微球及其连接的降钙素原抗体的质量百分含量为20%-30%,具体如20%、30%、40%、50%等,所述保存液的质量比为20%-50%,具体如20%、30%、40%、50%等。
需要指出的是,检测试剂中各物质的上述质量百分含量的设置能够进一步提高检测试剂对降钙素原的检测灵敏度、线性范围以及进一步缩短检测反应时间。
请参阅图1,图1是本申请降钙素原的检测试剂盒一实施方式的结构示意图。本实施方式中,该检测试剂盒100包括盒体10、设置于盒体10内的试剂容置位20以及容置于对应的试剂容置位20内的降钙素原的检测试剂30。
其中,本实施方式中的降钙素原的检测试剂30可与上述本申请降钙素原的检测试剂相同,相关详细内容请参阅上述实施方式,此处不再赘述。
需要指出的是,本实施方式中的检测试剂盒100充分利用粒径较大的第一载体微球以及粒径较小的第二载体微球各自的优势,形成优势互补,以在提高检测的灵敏度的同时,还能够提高检测的线性范围以及缩短反应时间。
请参阅图2,图2是本申请降钙素原检测系统1000一实施方式的结构示意图。本实施方式中,降钙素原检测系统包括降钙素原的检测试剂盒100以及降钙素原检测仪200。
本实施方式中的降钙素原的检测试剂盒100可与上述本申请降钙素原的检测试剂盒实施方式中的相同,相关详细内容请参阅上述实施方式,此处不再赘述。
请参阅图3,图3是本申请降钙素原的检测试剂的制备方法一实施方式的流程示意图。本实施方式中,降钙素原的检测试剂的制备方法包括:
步骤S11:提供第一载体微球、第二载体微球、降钙素原抗体以及保存液,其中,降钙素原抗体包括第一降钙素原抗体、第二降钙素原抗体;
具体地,所提供的降钙素原抗体可以为包括第一降钙素原抗体和第二降钙素原抗体的降钙素原多克隆抗体,也可以分别为第一降钙素原单克隆抗体和第二降钙素原单克隆抗体。
步骤S12:分别对第一载体微球及降钙素原抗体进行处理,以使得第一载体微球至少与第一降钙素原抗体连接;
步骤S13:分别对第二载体微球及降钙素原抗体进行处理,以使得第二载体微球至少与第二降钙素原抗体连接;
步骤S14:将至少连接有第一降钙素原抗体的第一载体微球、至少连接有第二降钙素原抗体的第二载体微球以及保存液混合,得到降钙素原的检测试剂。
本实施方式中不限定上述步骤S20与步骤S30的顺序,第一载体微球、第二载体微球、降钙素原抗体以及保存液等相关物质与上述本申请降钙素原的检测试剂实施方式中的相同,相关详细内容请参阅上述实施方式,此处不再赘述。
需要指出的是,请参阅图4,步骤S12包括:
步骤S121:提供活化液以及缓冲液;
其中,缓冲液可以为2-吗啉乙磺酸(2-morpholino-ethanesμlfonic acid,MES)缓冲液、磷酸缓冲盐溶液(phosphate bμffer saline,PBS)等。
活化液可以为N-羟基琥珀酰亚胺(N-Hydroxysμccinimide,NHS)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(N-Ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidehydrochloride,EDC)、NHS与MES的混合液、EDC与MES的混合液中的至少一种。
步骤S122:利用缓冲液对第一载体微球进行清洗,并离心换液,加入缓冲液对第一载体微球进行第一分散处理;
步骤S123:向第一分散处理后的第一载体微球中加入活化液活化处理第一预设时间,然后离心换液;
步骤S124:向第一载体微球中加入缓冲液,进行第二分散处理;
步骤S125:向第二分散处理后的第一载体微球中加入降钙素原抗体,混匀后震荡反应第二预设时间;
其中,此处所添加的降钙素原抗体中至少包括第一降钙素原抗体,反应后,第一载体微球至少与第一降钙素原抗体连接。
步骤S126:在反应第二预设时间后进一步加入封闭液,封闭第三预设时间;
步骤S127:对封闭后的第一载体微球进行离心换液,加入保存液,然后进行第三分散处理。
进一步地,请参阅图5,步骤S13可包括:
步骤S131:提供活化液以及缓冲液;
其中,步骤S30中所涉及到的活化液、缓冲液等可与上述步骤S20中的相同,当然也可以不同,具体根据实际情况选择即可。
步骤S132:利用缓冲液对第二载体微球进行清洗,并离心换液,加入缓冲液对第二载体微球进行第四分散处理;
步骤S133:向第四分散处理后的第二载体微球中加入活化液活化处理第四预设时间,然后离心换液;
步骤S134:向第二载体微球中加入缓冲液,进行第五分散处理;
步骤S135:向第五分散处理后的第二载体微球中加入降钙素原抗体,混匀后震荡反应第五预设时间;
其中,此处所添加的降钙素原抗体中至少包括第二降钙素原抗体,反应后,第二载体微球至少与第二降钙素原抗体连接。
步骤S136:在反应第五预设时间后进一步加入封闭液,封闭第六预设时间;
步骤S137:对封闭后的第二载体微球进行离心换液,加入保存液,然后进行第六分散处理。
请参阅图6,图6是本申请降钙素原的检测方法一实施方式的流程示意图。本实施方式中,降钙素原的检测方法包括:
步骤S21:提供检测试剂以及待测样本;
其中,本实施方式中的检测试剂即为上述本申请降钙素原的检测试剂实施方式中的检测试剂,相关详细内容请参阅上述实施方式,此处不做具体限定。
步骤S22:将检测试剂与待测样本混合,以使得待测样本中的降钙素原分别与检测试剂中的连接第一载体微球的第一降钙素原抗体和连接第二载体微球的第二降钙素原抗体结合,而形成第一载体微球-第一降钙素原抗体-降钙素原-第二降钙素原抗体-第二载体微球复合物,得到具有一定浊度的待测组合物;
需要指出的是,在将检测试剂与待测样本混合后,连接第一载体微球的第一降钙素原抗体和连接第二载体微球的第二降钙素原抗体分别对应降钙素原的不同的抗原决定簇,从而出现载体微球相互交联、聚集的情况,导致试剂的浊度增强。
步骤S23:在预设波长下,检测待测组合物所引起的散射光信号的变化,从而得出待测样本中的降钙素原的含量。
具体地,上述降钙素原的检测方法可以采用速率散射比浊分析对待测组合物进行检测,以形成上述第一载体微球-第一降钙素原抗体-降钙素原-第二降钙素原抗体-第二载体微球复合物,利用待测组合物所引起的散射光信号的变化进行检测,以测定形成上述复合物达到最高峰的时间,以及该复合物的形成量,从而得出待测样本中的降钙素原的含量。需要指出的是,采用上述方式进行检测,检测速度快、准确性高,。
下面以具体的实施例对本申请中的降钙素原的检测试剂进行说明。
实施例一
第一载体微球选用平均粒径为300nm的羧基胶乳微球,第二载体微球选用平均粒径为80nm的羧基胶乳微球,降钙素原抗体选用降钙素原多克隆抗体。
降钙素原多克隆抗体包被第一载体微球:
1)使用浓度为50mM、pH值为6.0的MES缓冲液对EDC以及NHS进行配制,所得到的EDC活化液的浓度为10mg/mL,所得到的NHS活化液的浓度为10mg/mL;
2)取1mg平均粒径为300nm的羧基胶乳微球,加入400μl的、pH值为6.0的MES清洗稀释后进行离心换液,加入500μl的MES重悬微球,超声分散;
3)进一步加入EDC和NHS活化液进行活化处理30min,然后离心换液;
4)向活化后的羧基胶乳微球中加入MES缓冲液重悬微球,超声分散;
5)在分散后的羧基胶乳微球中加入25μg的降钙素原多克隆抗体,迅速混匀后震荡反应1h;
6)反应1h后进一步加入封闭液10μl,并封闭1h。
7)对封闭后的羧基胶乳微球进行离心换液,并换成标记抗体保存液,然后超声分散。
降钙素原多克隆抗体包被第二载体微球:
1)使用浓度为50mM、pH值为6.0的MES缓冲液对EDC以及NHS进行配制,所得到的EDC活化液的浓度为10mg/mL,所得到的NHS活化液的浓度为10mg/mL。
2)取1mg平均粒径为80nm的羧基胶乳微球,加入400μl、pH值为6.0的MES稀释后进行离心换液,加入500μl的MES重悬微球,超声分散;
3)进一步加入一定EDC和NHS活化液进行活化处理30min,然后离心换液;
4)向活化后的羧基胶乳微球中加入MES缓冲液重悬微球,超声分散;
5)在分散后的羧基胶乳微球中加入60μg的降钙素原多克隆抗体,迅速混匀后震荡反应1h;
6)反应1h后进一步加入封闭液10μl,并封闭1h。
7)对封闭后的羧基胶乳微球进行离心换液,并换成标记抗体保存液,然后超声分散。
在上述两个包被步骤均完成后,将降钙素原多克隆抗体包被的第一载体微球、降钙素原多克隆抗体包被第二载体微球于保存液按质量比2:1:2的比例进行混合,得到降钙素原的待测试剂。
实施例二
第一载体微球选用平均粒径为340nm的羧基胶乳微球,第二载体微球选用平均粒径为99nm的羧基胶乳微球,第一降钙素原抗体选用第一降钙素原鼠单克隆抗体,第二降钙素原抗体选用第二降钙素原鼠单克隆抗体,其中,第一降钙素原鼠单克隆抗体与第二降钙素原鼠单克隆抗体分别对应降钙素原的不同的抗原决定簇。
第一降钙素原鼠单克隆抗体包被第一载体微球:
1)使用浓度为50mM、pH值为6.0的MES缓冲液对EDC以及NHS进行配制,所得到的EDC活化液的浓度为10mg/mL,所得到的NHS活化液的浓度为10mg/mL;
2)取1mg平均粒径为300nm的羧基胶乳微球,加入400μl、pH值为6.0的MES清洗稀释后进行离心换液,加入500μl的MES重悬微球,超声分散;
3)进一步加入EDC和NHS活化液进行活化处理30min,然后离心换液;
4)向活化后的羧基胶乳微球中加入MES缓冲液重悬微球,超声分散;
5)在分散后的羧基胶乳微球中加入20μg的第一降钙素原鼠单克隆抗体,迅速混匀后震荡反应1h;
6)反应1h后进一步加入封闭液10μl,并封闭1h。
7)对封闭后的羧基胶乳微球进行离心换液,并换成标记抗体保存液,然后超声分散。
第二降钙素原鼠单克隆抗体包被第二载体微球:
1)使用浓度为50mM、pH值为6.0的MES缓冲液对EDC以及NHS进行配制,所得到的EDC活化液的浓度为10mg/mL,所得到的NHS活化液的浓度为10mg/mL。
2)取1mg平均粒径为99nm的羧基胶乳微球,加入400μl、pH值为6.0的MES稀释后进行离心换液,加入500μl的MES重悬微球,超声分散;
3)进一步加入一定EDC和NHS活化液进行活化处理30min,然后离心换液;
4)向活化后的羧基胶乳微球中加入MES缓冲液重悬微球,超声分散;
5)在分散后的羧基胶乳微球中加入40μg的第二降钙素原鼠单克隆抗体,迅速混匀后震荡反应1h;
6)反应1h后进一步加入封闭液10μl,并封闭1h。
7)对封闭后的羧基胶乳微球进行离心换液,并换成标记抗体保存液,然后超声分散。
在上述两个包被步骤均完成后,将降钙素原多克隆抗体包被的第一载体微球、降钙素原多克隆抗体包被第二载体微球于保存液案质量比2:1:1的比例进行混合,得到降钙素原的检测试剂。
实施例三
第一载体微球选用平均粒径为340nm的羧基胶乳微球,第二载体微球选用平均粒径为99nm的羧基胶乳微球,第一降钙素原抗体选用第一降钙素原鼠单克隆抗体,第二降钙素原抗体选用第二降钙素原鼠单克隆抗体,其中,第一降钙素原鼠单克隆抗体与第二降钙素原鼠单克隆抗体分别对应降钙素原的不同的抗原决定簇。
第一降钙素原鼠单克隆抗体包被第一载体微球:
1)使用浓度为50mM、pH值为6.0的MES缓冲液对EDC以及NHS进行配制,所得到的EDC活化液的浓度为10mg/mL,所得到的NHS活化液的浓度为10mg/mL;
2)取1mg平均粒径为340nm的羧基胶乳微球,加入400μl、pH值为6.0的MES清洗稀释后进行离心换液,加入500μl的MES重悬微球,超声分散;
3)进一步加入EDC和NHS活化液进行活化处理30min,然后离心换液;
4)向活化后的羧基胶乳微球中加入MES缓冲液重悬微球,超声分散;
5)在分散后的羧基胶乳微球中加入30μg的第一降钙素原鼠单克隆抗体,迅速混匀后震荡反应1h;
6)反应1h后进一步加入封闭液10μl,并封闭1h。
7)对封闭后的羧基胶乳微球进行离心换液,并换成标记抗体保存液,然后超声分散。
第二降钙素原鼠单克隆抗体包被第二载体微球:
1)使用浓度为50mM、pH值为6.0的MES缓冲液对EDC以及NHS进行配制,所得到的EDC活化液的浓度为10mg/mL,所得到的NHS活化液的浓度为10mg/mL。
2)取1mg平均粒径为99nm的羧基胶乳微球,加入400μl、pH值为6.0的MES稀释后进行离心换液,加入500μl的MES重悬微球,超声分散;
3)进一步加入一定EDC和NHS活化液进行活化处理30min,然后离心换液;
4)向活化后的羧基胶乳微球中加入MES缓冲液重悬微球,超声分散;
5)在分散后的羧基胶乳微球中加入40μg的第二降钙素原鼠单克隆抗体,迅速混匀后震荡反应1h;
6)反应1h后进一步加入封闭液10μl,并封闭1h。
7)对封闭后的羧基胶乳微球进行离心换液,并换成标记抗体保存液,然后超声分散。
在上述两个包被步骤均完成后,将降钙素原多克隆抗体包被的第一载体微球、降钙素原多克隆抗体包被第二载体微球于保存液案质量比2:1:1的比例进行混合,得到降钙素原的检测试剂。
按照上述各方式制备完成后,分别对上述各实施例所制备得到的降钙素原的检测试剂进行测试,具体在帝迈生物技术有限公司自主开发的DX450全自动血液免疫一体机上进行的检测,仪器自动吸取40μL待测样本,加入200μL缓冲液,混匀后,加入100μL上述实施例中制备的试剂,混匀,反应一定时间,最终根据待测样本与检测试剂反应而接收到散射光强度的变化信息,得到该待测样本中降钙素原的反应度。在测试一系列不同浓度梯度的样本后,根据待测样本浓度、测试结果的反应度等信息绘制出该试剂的线性曲线。
利用实施例一中的检测试剂进行检测所利用的检测时间为5min,待测样本浓度与反应度的对应关系表格如下表1所示,所绘制的反应曲线如图7所示。
表1
利用实施例二中的检测试剂进行检测所利用的检测时间为5min,待测样本浓度与反应度的对应关系表格如下表2所示,所绘制的反应曲线如图8所示。
表2
利用实施例三中的检测试剂进行检测所利用的检测时间为7min,待测样本浓度与反应度的对应关系表格如下表3所示,所绘制的反应曲线如图9所示。
表3
由上述各实施例的检测结果能够看出,本申请降钙素原的检测试剂能够在5-7min内实现0.1-20.0ng/mL的降钙素原浓度的检测范围,检测灵敏度高、线性范围宽,检测时间短。
以上所述仅为本申请的实施方式,并非因此限制本申请的专利范围,凡是利用本申请说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换,或直接或间接运用在其他相关的技术领域,均同理包括在本申请的专利保护范围内。
Claims (10)
1.一种降钙素原的检测试剂,其特征在于,所述检测试剂包括:
第一载体微球、第二载体微球、分别与所述第一载体微球、所述第二载体微球连接的降钙素原抗体以及保存液;
其中,所述降钙素原抗体包括第一降钙素原抗体、第二降钙素原抗体,所述第一载体微球至少与所述第一降钙素原抗体连接,所述第二载体微球至少与所述第二降钙素原抗体连接,所述第一降钙素原抗体与所述第二降钙素原抗体分别对应所述降钙素原的不同的抗原决定簇;
其中,所述第一载体微球的平均粒径不小于第一预设粒径,所述第二载体微球的平均粒径不大于第二预设粒径,所述第一预设粒径大于所述第二预设粒径。
2.根据权利要求1所述的检测试剂,其特征在于,
所述第一载体微球的平均粒径为200nm-400nm,所述第二载体微球的平均粒径为50nm-100nm。
3.根据权利要求2所述的检测试剂,其特征在于,
所述第一载体微球上连接的所述降钙素原抗体的量为20μg-50μg/mg,所述第二载体微球上连接的所述降钙素原抗体的量为40μg-80μg/mg。
4.根据权利要求1所述的检测试剂,其特征在于,
所述第一载体微球及其连接的降钙素原抗体的质量百分含量为30%-50%、所述第二载体微球及其连接的降钙素原抗体的质量百分含量为20%-30%、所述保存液的质量比为20%-50%。
5.根据权利要求1所述的检测试剂,其特征在于,
所述第一载体微球及所述第二载体微球均为表面带有羧基、羟基、氨基、甲苯磺酰基、氯甲基、巯基、醛基、酰肼、硅羟基、琥珀酰亚胺酯、环氧基中的至少一种官能团的胶乳微球、三聚氰胺微球或磁性微球。
6.根据权利要求1所述的检测试剂,其特征在于,
所述保存液包括缓冲液、蛋白保护剂以及防腐剂中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的检测试剂,其特征在于,
所述缓冲液为氨基丁三醇体系、磷酸盐体系、4-羟乙基哌嗪乙磺酸体系中的至少一种;
所述蛋白保护剂包括牛血清蛋白、甘氨酸、糖类、甘油中的至少一种;
所述防腐剂包括叠氮钠、ProClin 300中的至少一种。
8.一种降钙素原的检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒包括如权利要求1-7任一项所述的检测试剂。
9.一种降钙素原检测系统,其特征在于,所述降钙素原检测系统包括降钙素原检测仪以及如权利要求8所述的降钙素原的检测试剂盒。
10.一种基于如权利要求1-7任一项所述的检测试剂的降钙素原的检测方法,其特征在于,所述检测方法包括:
提供所述检测试剂以及待测样本;
将所述检测试剂与所述待测样本混合,以使得所述待测样本中的降钙素原分别与所述检测试剂中的连接第一载体微球的第一降钙素原抗体和连接第二载体微球的第二降钙素原抗体结合,而形成第一载体微球-第一降钙素原抗体-降钙素原-第二降钙素原抗体-第二载体微球复合物,从而得到具有一定浊度的待测组合物;
在预设波长下,检测所述待测组合物所引起的散射光信号的变化,从而得出所述待测样本中的降钙素原的含量。
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