CN108303544A - 一种全血c反应蛋白检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医学免疫领域，特别涉及一种全血C反应蛋白检测试剂盒。该试剂盒包括试剂R1和试剂R2，试剂R2采用C反应蛋白抗体分别致敏不同粒径的乳胶颗粒。结果表明，本发明试剂盒的线性检测范围宽、灵敏度高、准确性和精密度好。与现有的人全血CRP比浊试剂盒相比，进一步拓宽了线性范围，尤其是增强了对低值样本的检测灵敏度。而且，可以使用患者的末梢血或静脉血全血作为测试样本，减轻了患者尤其是新生儿及烧烫伤患者的采血痛苦，对临床超敏、普通CRP样本做到了真正的全血、全量程检测。

Description

一种全血C反应蛋白检测试剂盒
技术领域
本发明涉及医学免疫领域，特别涉及一种全血C反应蛋白检测试剂盒。
背景技术
C反应蛋白(CRP)是一种由肝细胞合成的急性时相蛋白，分子量约为115KD，在健康人体的血清中其以痕量的形式存在(约0.58mg/L)。当机体受到微生物入侵或组织损伤等炎症性刺激时，在白细胞介素、肿瘤坏死因子等细胞因子的诱导下，CRP表达量会随之急剧升高至最高达1000倍以上。而随着机体的复原，其含量则会迅速的恢复正常。因此，临床上对常规浓度CRP的检测对于鉴别细菌或病毒感染、癌症等重大疾病的进程、预后及治疗效果的评估具有广泛意义。相对于常规CRP而言，超敏C反应蛋白(浓度小于10mg/L)的临床意义除了可用于诊断低水平炎症状态之外，则主要在于对心血管疾病的风险的评判。
目前，临床常用的CRP检测方法包括荧光免疫层析、胶体金法、酶联免疫吸附法以及免疫比浊法。前两者虽然灵敏度高，但是只能做定性或半定量分析；酶联免疫吸附法检测虽然既能确保灵敏度，同时能做到定量检测，但由于方法本身无法进行批量自动化分析，因此不适用于样品量多的环境。
现有技术中，CRP免疫比浊法的产品分为对普通CRP及超敏CRP检测两大类。针对普通CRP的测定范围一般为3-200mg/L，线性范围宽但灵敏度低；而对于超敏CRP的测定范围为0.3-100mg/L，灵敏度虽高但无法测定高浓度CRP含量。
专利CN105158476及专利CN101769932公开的CRP检测试剂盒，虽然能够同时保证高灵敏度和较宽的检测范围，但其检测样本均为血清或血浆，由于获得血清或血浆时需要大量的采集静脉血，无疑增加了受试者的痛苦且不适合某些采血困难的特殊患者，如儿童患者尤其是婴幼儿和大面积烧烫伤人群。此外对全血样本的预处理一方面增加了检验工作人员的工作量，还限制了对待测样本的直接自动化分析，延长了检测时间。
发明内容
有鉴于此，本发明目的在于提供一种全血C反应蛋白检测试剂盒，该试剂盒以全血作为测试样本进行检测，能够同时保证较高的灵敏度和较宽的线性范围。
为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
一种全血中C反应蛋白含量测定的试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括溶血剂和第一缓冲液；所述试剂R2包括抗体-乳胶复合物和第二缓冲液；
所述抗体-乳胶复合物包括偶联物S1和偶联物S2；
所述偶联物S1、S2为C反应蛋白抗体分别致敏粒径为150nm-250nm和50nm-150nm的乳胶颗粒；
所述偶联物S1和所述偶联物S2的质量比为50:1-500:1。
所述C反应蛋白抗体包括C反应蛋白单克隆抗体和C反应蛋白多克隆抗体，其中，所述偶联物S1为C反应蛋白单克隆抗体致敏的乳胶颗粒；所述偶联物S2为C反应蛋白多克隆抗体致敏的粒乳胶颗粒；所述C反应蛋白单克隆抗体和C反应蛋白多克隆抗体致敏的乳胶颗粒的粒径不同。
本发明提供的试剂盒，采用C反应蛋白单克隆抗体和C反应蛋白多克隆抗体分别致敏两种特定的不同粒径的乳胶颗粒，平均粒径较大的乳胶颗粒偶联C反应蛋白单克隆抗体，平均粒径较小的乳胶颗粒偶联CRP多克隆抗体，然后将致敏后的乳胶颗粒按照特定比例混合，最终制得的检测试剂盒与现有的生物全血CRP比浊试剂盒相比，进一步拓宽了线性范围。
优选地，C反应蛋白多克隆抗体为羊抗人CRP多克隆抗体、马抗人CRP多克隆抗体、兔抗人CRP多克隆抗体或驴抗人CRP多克隆抗体中的一种；所述C反应蛋白单克隆抗体为鼠抗人C反应蛋白单克隆抗体或兔抗人C反应蛋白单克隆抗体。
优选地，所述C反应蛋白单克隆抗体致敏的乳胶颗粒的粒径为180～250nm，所述CRP多克隆抗体致敏的乳胶颗粒的粒径为50～90nm。在一些具体的实施例中，所述C反应蛋白单克隆抗体致敏的乳胶颗粒的粒径为250nm，所述CRP多克隆抗体致敏的乳胶颗粒的粒径为70nm。
优选地，所述偶联物S1和所述偶联物S2的质量比为500:1。
优选地，所述试剂R2中抗体-乳胶复合物的含量为0.5-5mg/ml。
本发明试剂盒中，试剂R1中的第一缓冲液和试剂R2中的第二缓冲液均可选自磷酸液缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、Hepes缓冲、硼酸盐缓冲液、醋酸缓冲液、氯化铵缓冲液或MES缓冲液中的一种。优选地，其浓度为50-500mM，pH为6-8。
所述溶血剂为曲拉通100、吐温20、吐温80、皂素、司盘40、季铵盐、溶血磷脂、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠中的一种或两者以上的混合物。
优选地，所述试剂R1中还包括促聚剂、稳定剂、助悬剂和防腐剂。其中，促聚剂选自PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG20000、葡聚糖20000、硫酸纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮等中的一种或两者以上的混合物；
稳定剂包括离子型稳定剂和蛋白类稳定剂，所述离子型稳定剂为氯化钠、硫酸钠、氯化钙、氯化钾、硫酸钾、氯化铵中的一种或两者以上的混合物；所述蛋白类稳定剂为牛血清白蛋白、明胶、酪蛋白、鸡血清白蛋白、多聚氨基酸中的一种或两者以上的混合物；
助悬剂为甘油、葡萄糖、蔗糖、海藻糖、曲拉通-100、吐温20、吐温80等一种或两者以上的混合物；
防腐剂为叠氮化钠和/或Proclin300。
优选地，R2中还包括稳定剂、表面活性剂和防腐剂。其中，稳定剂可以选自牛血清白蛋白、鸡血清白蛋白、酪蛋白、明胶中的一种或两者以上的混合物；表面活性剂选自吐温20、吐温80，曲拉通100，NP40中的一种或两者以上的混合物；防腐剂可选叠氮化钠和/或Proclin300；在一些具体实施例中，稳定剂为1％BSA和150mM氯化钠的混合物；表面活性剂为0.1％吐温20；防腐剂为0.1％的叠氮化钠。
在一些具体实施方案中，试剂R1包含如下组分：0.2％SDS(十二烷基磺酸钠)、4％PEG6000(聚乙二醇6000)、200mM氯化钠、2％BSA(牛血清白蛋白)、1％葡萄糖、0.1％TritonX-100(曲拉通100)以及0.1％叠氮化钠的Tris缓冲液。其中，Tris缓冲液浓度为100mM，pH为7.4。
试剂R2包含偶联物S1、偶联物S2、pH 7.4,100mM的Tris缓冲液、1％BSA和150mM氯化钠、表面活性剂和防腐剂，其中，稳定剂为1％BSA+150mM氯化钠；表面活性剂为0.1％吐温20；防腐剂为0.1％的叠氮化钠；偶联物S1由羊抗人CRP多克隆抗体致敏平均粒径为70nm的小粒径乳胶获得；偶联物S2由兔抗人CRP单克隆抗体致敏250nm的大乳胶颗粒获得。
本发明提供的检测试剂盒的线性检测范围为0.1-350mg/L，灵敏度为0.05mg/L，与现有的生物全血CRP比浊试剂盒相比，进一步拓宽了线性范围，尤其是增强了对低值样本的检测灵敏度。同时，可以使用患者的末梢血或静脉血全血作为测试样本，减轻了患者尤其是新生儿及烧烫伤患者的采血痛苦，对临床超敏、普通CRP样本做到了真正的全血、全量程检测。而且，本发明提供的全血中全量程C反应蛋白乳胶增强免疫比浊检测试剂盒能够搭配全自动生化仪或全自动特定蛋白仪及其他自动分析仪器，能够实现批量自动化分析，极大地提高了检测速度，缩短了患者等待检测结果的时间。
附图说明
图1示不同浓度C反应蛋白校准品的含量(mg/mL)及其散光度建立的标准曲线图；
图2示C反应蛋白浓度检测值与理论值(mg/mL)的线性关系图。
具体实施方式
本发明公开了一种全血中全量程C反应蛋白乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
实施例1全血全量程CRP检测试剂盒的制备
试剂R1组分:含0.2％SDS(十二烷基磺酸钠)、4％PEG6000(聚乙二醇6000)、200mM氯化钠、2％BSA(牛血清白蛋白)、1％葡萄糖、0.1％Triton X-100(曲拉通100)以及0.1％叠氮化钠的Tris缓冲液。Tris缓冲液浓度为100mM，pH为7.4。
试剂R2制备：用羊抗人CRP多克隆抗体致敏平均粒径为70nm的小粒径乳胶，兔抗人CRP单克隆抗体致敏250nm的大乳胶颗粒。两种致敏的乳胶颗粒经离心漂洗后超声重悬，并按照一定的浓度稀释于第二缓冲液、稳定剂、表面活性剂和防腐剂中备用。上述两种致敏胶乳悬浮液按照一定的比例进行混合，即得到试剂R2。
所述的致敏过程如下(以平均粒径为70nm，胶乳固含量为5％的JSR聚苯乙烯乳胶颗粒为例叙述)：向1ml胶乳悬浮液(已用活化缓冲液MES稀释至1％浓度)中按顺序加入20mgEDC(碳二亚胺)及20mg NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)并立即混匀，室温颠倒混匀或搅拌混匀活化15-30min；13000rpm,4℃离心25min，去除上清。重复两次。随后以1ml偶联缓冲液重悬乳胶微球，使其成为均匀分散，浓度为1％w/v的悬液；向上述已活化的乳胶颗粒悬液中加入1ml浓度为2mg/ml的抗体溶液并迅速搅拌均匀，室温下搅拌孵育2h；加入终浓度为10mM的盐酸羟胺终止偶联反应；13000rpm，4℃离心20min。将上清转移至另一干净的Ep管中，用Bradford法定量上清中残余抗体的数量，并计算抗体的偶联效率。再加入1ml偶联缓冲液重悬洗涤并按上述条件再次离心；以生理盐水(含1％BSA)或PBS缓冲液(pH 7.2；另含1％BSA)重悬抗体-乳胶颗粒，使其均匀分散在溶液中备用，如需要可进行超声分散。
平均粒径为250nm的JSR聚苯乙烯乳胶颗粒和上述平均粒径为70nm的聚苯乙烯乳胶颗粒的处理方法相同。
大、小乳胶颗粒按照上述同样的方法进行致敏后，各自以pH7.4,100mM浓度的Tris缓冲液、1％BSA+150mM氯化钠、0.1％吐温20、0.1％的叠氮化钠稀释至浓度为1.5mg/ml储存。取上述两种处理后的胶乳按照小粒径胶乳与大粒径胶乳比例为500:1)，即可得到最终的试剂R2，R2试剂为乳白色均匀的悬浮溶液。
实施例2 C反应蛋白的测定
检测工具：开立半自动特定蛋白仪
分析方法：速率散射比浊法；仪器检测波长为670nm。
校准方法：将10ul不同浓度的校准品(6个浓度梯度：0mg/L、5mg/L、22.5mg/L、44mg/L、175mg/L、350mg/L)与400ul R1混合，放置在机器的检测通道内，再加入40ul R2，第10秒读取该时间段最低散射值A1，第60秒后读取散射值A2，即可计算出A2减A1的散射差值(即最终散光值)。随后，利用样条函数(Spline)对校准品浓度和散射值进行校准曲线的计算和绘制，标准曲线如图1所示。
全血样本测试方法：取全血样本10ul，与400ul R1混合后放置于检测通道中，再加入40ul R2，随后依次在10秒和60秒后读取散射值A1和A2，计算二者的差值即为最终读取的散光值。利用上述定标的校准曲线和标准曲线方程，即可依据测得的样本散光值计算得到样本中C反应蛋白的浓度。
不考虑加样时间，本发明在60秒内即可获得待测样本中的CRP浓度，且检测线性范围宽达0.1-350mg/L,均优于市面上的全血CRP检测试剂盒。
实施例3本发明试剂盒准确度分析
取可溯源至国际标准的血清校准品两支，包含高值和低值各一支。利用本发明的试剂及本公司特定蛋白仪对相关样品进行测试，每支样品重复检测10次，并与校准品靶值进行比较。结果见表1：
表1准确度检测结果
由表1数据可知，本发明提供的试剂盒测定的C反应蛋白的平均值与靶值很接近，低值样品检测的准确度为98.36％，高值样品检测的准确度为99.21％，表明本发明试剂盒准确度高。
实施例4本发明试剂盒精密度分析
取全血样品两支，包含CRP含量高值和低值各一支。利用本发明的试剂及本公司特定蛋白仪对相关样品进行测试，每支样品重复检测10次。计算检测结果的平均值、标准差和变异系数(CV)，结果见表2。
表2精密度检测结果
测试次数 样品1(低值，单位mg/L) 样品2(高值，单位mg/L)
1 20.62 144.5
2 20.47 145
3 19.4 143.75
4 20.24 144.06
5 20.73 144.27
6 20.48 147.12
7 20.4 143.84
8 21.7 145.39
9 19.84 144.11
10 20.24 143.12
平均值 20.412 144.47
标准差 0.59 1.06
变异系数 2.89％ 0.73％
结果显示，低值样品标准差率为0.59％，高值样品标准差率为1.06，均小于标准的3％；低值样品CV＝2.89％，高值样品CV＝0.73％，均小于5％，符合《体外诊断试剂通用要求》表明本发明所述试剂盒具有高精密度。
实施例5本发明试剂盒灵敏度分析
取不含CRP的健康人全血样本一只，利用本发明试剂对其进行测试，重复检测10次并依据平均值和标准差计算灵敏度，结果见表3。
表3灵敏度检测结果
由表3数据可知，本发明试剂盒的灵敏度极高，可达0.05mg/L。
实施例6本发明试剂盒线性的检测
取可溯源至国际标准的高值校准品，用健康人全血(不含CRP)稀释成多个不同浓度的样本。对每个样本利用本发明进行测试并取平均值(测试3次)。将测试数值与理论稀释浓度进行相关性比较并作图，结果见图2和表4。
表4线性分析结果
由图2和表4的结果可知，在0.1-350mg/L范围内，R2＝0.9944，表明表明本发明试剂盒检测C反应蛋白的线性好，检测范围宽。
实施例7
对比例1
按照本发明实施例1制备方法制备所述的CRP检测试剂盒，与实施例1的区别在于，在试剂R2的制备中，用羊抗人CRP多克隆抗体致敏平均粒径为250nm的大粒径的乳胶颗粒，兔抗人CRP单克隆抗体致敏250nm的大粒径的乳胶颗粒，其他步骤条件均相同，制备得到对比例1的检测试剂盒，然后按照本发明实施例2的方法对C反应蛋白进行测定。
对比例2
按照本发明实施例1制备方法制备所述的CRP检测试剂盒，与实施例1的区别在于，在试剂R2的制备中，用兔抗人CRP单克隆抗体致敏平均粒径为70nm的小粒径的乳胶颗粒大粒径的乳胶颗粒，其他步骤条件均相同，制备得到对比例1的检测试剂盒，然后按照本发明实施例2的方法对C反应蛋白进行测定。
对比例3
按照本发明实施例1制备方法制备所述的CRP检测试剂盒，与实施例1的区别在于，在试剂R2的制备中，用羊抗人CRP多克隆抗体分别致敏平均粒径为70nm的小粒径的乳胶颗粒和250nm的大粒径的乳胶颗粒，其他步骤条件均相同，制备得到对比例1的检测试剂盒，然后按照本发明实施例2的方法对C反应蛋白进行测定。
按照本发明实施例5的方法，对对比例1～3的试剂盒进行灵敏度分析和线性范围的检测，结果见表5～6。
表5对比例1～3的灵敏度检测结果
平均值(M) 标准差(SD) 灵敏度(M+2.6SD)
对比例1 0.08 0.002 0.0852
对比例2 0.0498 0.002 0.055
对比例3 0.1001 0.0032 0.1084
表6对比例1～3的线性检测结果
线性范围 R2
对比例1 0.3-280mg/ml 0.992
对比例2 0.12-180mg/ml 0.994
对比例3 0.4-350mg/ml 0.985
结果显示，对比例1、3的试剂盒灵敏度均不如本发明试剂盒高，线性检测范围也不如本发明试剂盒宽。虽然对比例2的试剂盒的灵敏度与本发明试剂盒相当，但其线性检测范围明显不如本发明宽。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种全血中C反应蛋白含量测定的试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括溶血剂和第一缓冲液；所述试剂R2包括抗体-乳胶复合物和第二缓冲液；
所述抗体-乳胶复合物包括偶联物S1和偶联物S2；
所述偶联物S1、S2为C反应蛋白抗体分别致敏的粒径为150nm-250nm和50nm-150nm的乳胶颗粒；
所述偶联物S1和所述偶联物S2的质量比为50:1-500:1。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述C反应蛋白抗体包括C反应蛋白单克隆抗体和C反应蛋白多克隆抗体，其中，所述偶联物S1为C反应蛋白单克隆抗体致敏的乳胶颗粒；所述偶联物S2为C反应蛋白多克隆抗体致敏的粒乳胶颗粒；所述C反应蛋白单克隆抗体和C反应蛋白多克隆抗体致敏的乳胶颗粒的粒径不同。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述C反应蛋白多克隆抗体为羊抗人CRP多克隆抗体、马抗人CRP多克隆抗体、兔抗人CRP多克隆抗体或驴抗人CRP多克隆抗体中的一种；所述C反应蛋白单克隆抗体为鼠抗人C反应蛋白单克隆抗体或兔抗人C反应蛋白单克隆抗体。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述C反应蛋白单克隆抗体致敏的乳胶颗粒的粒径为180～250nm，所述CRP多克隆抗体致敏的乳胶颗粒的粒径为50～90nm。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中抗体-乳胶复合物的含量为0.5-5mg/ml。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液、第二缓冲液选自磷酸液缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、Hepes缓冲、硼酸盐缓冲液、醋酸缓冲液、氯化铵缓冲液或MES缓冲液中的一种。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液和第二缓冲液的浓度为50-500mM，pH为6-8。
8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述溶血剂为曲拉通100、吐温20、吐温80、皂素、司盘40、季铵盐、溶血磷脂、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠中的一种或两者以上的混合物。
9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中还包括促聚剂、稳定剂、助悬剂和防腐剂。
10.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中还包括稳定剂、表面活性剂和防腐剂。
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Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107340395A (zh) * 2017-07-05 2017-11-10 深圳开立生物医疗科技股份有限公司 一种检测降钙素原的免疫比浊试剂盒
CN109613259A (zh) * 2018-12-20 2019-04-12 北京贝尔生物工程股份有限公司 一种高灵敏度、宽检测范围的人肝素结合蛋白测定试剂盒
CN109856067A (zh) * 2019-01-11 2019-06-07 河北省医疗器械与药品包装材料检验研究院(河北省医疗器械技术审评中心) 一种c反应蛋白测定试剂盒
CN110007074A (zh) * 2019-04-18 2019-07-12 桂林优利特医疗电子有限公司 用于检测c反应蛋白的试剂盒、其制备方法及用途
CN110095615A (zh) * 2019-05-27 2019-08-06 山东艾科达生物科技有限公司 一种测定超敏c反应蛋白含量的试剂盒
CN110687306A (zh) * 2019-10-30 2020-01-14 深圳上泰生物工程有限公司 一种直接机上溶血酶法双试剂糖化血红蛋白检测试剂盒
CN110702908A (zh) * 2019-10-10 2020-01-17 南京欧凯生物科技有限公司 一种全量程c反应蛋白检测试剂盒
CN111007263A (zh) * 2019-12-25 2020-04-14 迈克生物股份有限公司 一种检测试剂盒及检测方法
CN111141913A (zh) * 2020-01-02 2020-05-12 四川纳海川生物科技有限公司 一种铜蓝蛋白检测试剂盒的及其制备方法
CN111896757A (zh) * 2020-08-04 2020-11-06 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种改善全血样本测值的d-二聚体测定试剂盒、制备方法及应用
CN112798790A (zh) * 2020-12-24 2021-05-14 深圳市科曼医疗设备有限公司 一种测定c反应蛋白浓度的试剂盒及制备方法
CN113176404A (zh) * 2021-04-14 2021-07-27 北京指真生物科技有限公司 一种全血样本多指标联检的试剂盒及其使用方法
CN113358879A (zh) * 2021-06-10 2021-09-07 吉林基蛋生物科技有限公司 一种全量程c反应蛋白检测试剂盒
CN114200129A (zh) * 2021-12-09 2022-03-18 北京利德曼生化股份有限公司 组织金属蛋白酶抑制剂-2胶乳免疫比浊法血尿同检试剂盒
CN114778858A (zh) * 2022-06-23 2022-07-22 深圳市帝迈生物技术有限公司 一种狼疮抗凝物检测试剂盒

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111751544B (zh) * 2019-03-28 2023-06-09 北京九强生物技术股份有限公司 一种用于检测可溶性生长激素表达基因2蛋白的试剂盒
CN110794131A (zh) * 2019-09-12 2020-02-14 苏州普瑞斯生物科技有限公司 一种白介素-6检测试剂盒及其制备方法
CN110568180A (zh) * 2019-09-12 2019-12-13 苏州普瑞斯生物科技有限公司 一种甘胆酸检测试剂盒及其制备方法
CN110794139A (zh) * 2019-09-12 2020-02-14 苏州普瑞斯生物科技有限公司 一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒及其制备方法
CN110531088A (zh) * 2019-09-26 2019-12-03 阿里生物技术泰州有限公司 一种iv型胶原蛋白检测试剂盒的检测方法
CN111856039A (zh) * 2020-03-16 2020-10-30 苏州德沃生物技术有限公司 一种测定全血降钙素原的免疫比浊方法学试剂盒
CN111830260B (zh) * 2020-07-27 2023-06-27 北京安图生物工程有限公司 一种降低胶乳增强免疫比浊试剂生产批间差异的工艺
CN111830254B (zh) * 2020-07-29 2022-07-26 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种基质金属蛋白酶-3测定试剂盒及其制备方法
CN112505331B (zh) * 2020-11-20 2024-03-01 阿里生物技术泰州有限公司 Iv胶原蛋白检测试剂盒
CN112903994A (zh) * 2021-01-20 2021-06-04 南京立顶医疗科技有限公司 一种高线性人血清淀粉样蛋白试剂盒、制备方法及应用
CN113866412B (zh) * 2021-09-07 2024-07-26 山东博科生物产业有限公司 一种灵敏的总前列腺特异性抗原检测试剂盒
CN113933519B (zh) * 2021-10-20 2024-06-14 上海艾瑞德生物科技有限公司 一种联合检测crp和saa的试纸条、试剂盒及制备方法
CN114295825B (zh) * 2021-12-01 2024-08-02 柏荣诊断产品（上海）有限公司 一种高灵敏度特异性透散射一体法肌钙蛋白i胶乳比浊检测试剂盒
CN114295567B (zh) * 2021-12-30 2024-01-16 青岛汉唐生物科技有限公司 一种磷脂酶a2检测试剂盒及其制备方法
CN114924071A (zh) * 2022-03-29 2022-08-19 北京世纪沃德生物科技有限公司 一种抗酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒
CN114965983A (zh) * 2022-05-12 2022-08-30 上海云泽生物科技有限公司 一种试剂组、试剂盒及利用其进行免疫检测的方法
CN114935655B (zh) * 2022-06-16 2024-02-20 安徽农业大学 一种猪il-17胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法
CN116063482B (zh) * 2022-11-01 2023-06-13 北京中楷健康科技有限公司 C反应蛋白(crp)尿液检测试剂盒
CN115575627B (zh) * 2022-11-15 2023-03-14 北京博奥森生物技术有限公司 超支化聚缩水甘油醚的应用、蛋白质标记物保存液和比浊法检测试剂盒
CN116298317A (zh) * 2023-03-14 2023-06-23 浙江夸克生物科技有限公司 基于胶乳免疫比浊法的甲胎蛋白测定试剂盒

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105510604A (zh) * 2016-02-01 2016-04-20 浙江夸克生物科技有限公司 一种提高胶乳试剂灵敏度和线性的方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3249919B2 (ja) * 1996-07-30 2002-01-28 株式会社堀場製作所 免疫測定方法
KR20100038064A (ko) * 2008-10-02 2010-04-12 바디텍메드 주식회사 시료 처리 키트 및 이를 이용한 시료 처리 방법
CN101769932B (zh) * 2010-01-26 2013-09-18 宁波美康生物科技股份有限公司 全量程c反应蛋白检测试剂盒
JP5588336B2 (ja) * 2010-12-17 2014-09-10 株式会社堀場製作所 血液分析装置及び血液分析方法
CN103073642B (zh) * 2012-08-29 2016-06-15 深圳伯美生物医药有限公司 Crp单克隆抗体纳米乳胶微球组合物及制备工艺
CN104515857B (zh) * 2013-09-30 2016-09-14 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 全血c-反应蛋白测量方法、装置及样本分析仪
CN105334333B (zh) * 2014-07-01 2019-06-18 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 一种易于更换乳胶试剂的全血测量仪和自动进样装置
CN105158476A (zh) * 2015-06-03 2015-12-16 南京闻智生物科技有限公司 一种全量程c反应蛋白胶乳增强免疫比浊检测试剂盒
CN104949980A (zh) * 2015-07-01 2015-09-30 南京普朗医疗设备有限公司 一种c反应蛋白免疫比浊试剂盒及其制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105510604A (zh) * 2016-02-01 2016-04-20 浙江夸克生物科技有限公司 一种提高胶乳试剂灵敏度和线性的方法

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107340395A (zh) * 2017-07-05 2017-11-10 深圳开立生物医疗科技股份有限公司 一种检测降钙素原的免疫比浊试剂盒
CN109613259A (zh) * 2018-12-20 2019-04-12 北京贝尔生物工程股份有限公司 一种高灵敏度、宽检测范围的人肝素结合蛋白测定试剂盒
CN109856067A (zh) * 2019-01-11 2019-06-07 河北省医疗器械与药品包装材料检验研究院(河北省医疗器械技术审评中心) 一种c反应蛋白测定试剂盒
CN110007074A (zh) * 2019-04-18 2019-07-12 桂林优利特医疗电子有限公司 用于检测c反应蛋白的试剂盒、其制备方法及用途
CN110095615A (zh) * 2019-05-27 2019-08-06 山东艾科达生物科技有限公司 一种测定超敏c反应蛋白含量的试剂盒
CN110702908A (zh) * 2019-10-10 2020-01-17 南京欧凯生物科技有限公司 一种全量程c反应蛋白检测试剂盒
CN110687306A (zh) * 2019-10-30 2020-01-14 深圳上泰生物工程有限公司 一种直接机上溶血酶法双试剂糖化血红蛋白检测试剂盒
CN111007263B (zh) * 2019-12-25 2023-10-20 迈克生物股份有限公司 一种检测试剂盒及检测方法
CN111007263A (zh) * 2019-12-25 2020-04-14 迈克生物股份有限公司 一种检测试剂盒及检测方法
CN111141913A (zh) * 2020-01-02 2020-05-12 四川纳海川生物科技有限公司 一种铜蓝蛋白检测试剂盒的及其制备方法
CN111896757B (zh) * 2020-08-04 2023-08-29 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种改善全血样本测值的d-二聚体测定试剂盒、制备方法及应用
CN111896757A (zh) * 2020-08-04 2020-11-06 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种改善全血样本测值的d-二聚体测定试剂盒、制备方法及应用
CN112798790A (zh) * 2020-12-24 2021-05-14 深圳市科曼医疗设备有限公司 一种测定c反应蛋白浓度的试剂盒及制备方法
CN113176404A (zh) * 2021-04-14 2021-07-27 北京指真生物科技有限公司 一种全血样本多指标联检的试剂盒及其使用方法
CN113358879A (zh) * 2021-06-10 2021-09-07 吉林基蛋生物科技有限公司 一种全量程c反应蛋白检测试剂盒
CN114200129A (zh) * 2021-12-09 2022-03-18 北京利德曼生化股份有限公司 组织金属蛋白酶抑制剂-2胶乳免疫比浊法血尿同检试剂盒
CN114200129B (zh) * 2021-12-09 2023-04-14 北京利德曼生化股份有限公司 组织金属蛋白酶抑制剂-2胶乳免疫比浊法血尿同检试剂盒
CN114778858A (zh) * 2022-06-23 2022-07-22 深圳市帝迈生物技术有限公司 一种狼疮抗凝物检测试剂盒

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