CN116298317A - 基于胶乳免疫比浊法的甲胎蛋白测定试剂盒 - Google Patents
基于胶乳免疫比浊法的甲胎蛋白测定试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种基于胶乳免疫比浊法的甲胎蛋白测定试剂盒,属于生物检测技术领域,所述试剂盒,包括试剂1和试剂2,所述试剂1包括:4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、氯化钠、血清白蛋白、表面活性剂和防腐剂;所述试剂2包括:4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒、血清白蛋白、棉子糖、二氢槲皮素、表面活性剂和防腐剂。本发明提供的试剂盒稳定性好,保持时间长,测定结果的精密度高、线性范围广,且样本中胆红素≤700mg/L,血红蛋白≤15g/L,对测试结果无明显,抗干扰性好。
Description
技术领域
本发明属于生物检测技术领域,涉及一种基于胶乳免疫比浊法的甲胎蛋白测定试剂盒。
背景技术
甲胎蛋白(AFP)是一种糖蛋白,在正常情况下,这种蛋白主要看来自胚胎的肝细胞,胎儿出生后约两周,甲胎蛋白(AFP)从血液中消失,正常人血清中甲胎蛋白(AFP)含量不足20微克/升。但是当人体肝细胞发生癌变时,却又恢复了产生这中蛋白质的功能,而且随着病情的恶化,其含量也急剧增加,因此,甲胎蛋白(AFP)就成了诊断原发性肝癌的一个重要诊断依据。
随着全自动生化仪的普及,免疫比浊法成为甲胎蛋白测定的主流技术。胶乳颗粒增强比浊法(particle-enhanced turbidimetric immunoassay,PETIA)是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法。在高分子胶乳微球的表面交联单克隆抗体,当交联有抗体的微球与抗原结合后,在短时间内会迅速聚集在一起,改变了反应液的散光性能或透光性能。反应液透光性能(即吸光度)的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性,在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。PETIA检测方法的简便快速,灵敏度高,能更有效地避免许多外界因素的干扰,稳定性和重复性都较好,能较真实地反映被测物质的含量。
如CN106596963A公开了及一种测定甲胎蛋白的试剂盒,包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分,所述的彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分,包括的成分及相应含量为:试剂R1:HEPES缓冲液40~260 mmol/L,氯化钠120~380 mmol/L,EDTA 20~80 mmol/L,牛血清白蛋白28~60 g/L,聚乙二醇-6000 5~25 g/L,吐温-80 4~16 mL/L,叠氮钠0 .6~0.9 g/L,抗人类风湿因子抗体0 .2~1 .8 g/L,其溶剂为纯化水;试剂R2:HEPES缓冲液50~150 mmol/L,氯化钠180~500 mmol/L,EDTA 20~80 mmol/L,牛血清白蛋白28~60 g/L,叠氮钠0 .6~0 .9 g/L,乳胶包被抗人甲胎蛋白抗体0 .1~2 .0 %,其溶剂为纯化水。该试剂盒与化学发光检测结果相关性好。
CN102662061A公开了胶乳增强免疫比浊法测定人甲胎蛋白含量的试剂盒。该试剂盒包括甲胎蛋白R1试剂、甲胎蛋白R2试剂和甲胎蛋白校准品,其中甲胎蛋白R1试剂包含电解质、促凝剂、稳定剂、表面活性剂、防腐剂及缓冲液;甲胎蛋白R2试剂包含抗人甲胎蛋白的多克隆抗体包被胶乳颗粒、电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂及缓冲液;甲胎蛋白校准品包含防腐剂、电解质、稳定剂、甲胎蛋白抗原及缓冲液,该发明的试剂盒的灵敏度为2ng/mL,线性范围为100-1000ng/mL。
目前市面上已知的测定甲胎蛋白的试剂盒,存在灵敏度不足、线性较差、抗干扰性差、保持时间短等缺陷,不利于临床推广使用。因此,亟需提供一种基于胶乳免疫比浊法的甲胎蛋白测定试剂盒,以期解决上述技术问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于胶乳免疫比浊法的甲胎蛋白测定试剂盒,该试剂盒稳定性好,保存时间长,测定结果的线性范围广,且样本中胆红素≤700mg/L,血红蛋白≤15g/L,对测试结果无明显,抗干扰性好。
为了实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种基于胶乳免疫比浊法的甲胎蛋白测定试剂盒,包括试剂1和试剂2;
所述试剂1包括:4-羟乙基哌嗪乙磺酸95-110mM、氯化钠8-10g/L、血清白蛋白5-10g/L、表面活性剂8-12g/L和防腐剂0.5-1ml/L;
所述试剂2包括:4-羟乙基哌嗪乙磺酸95-110mM、兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒0.10-0.15w/v%、血清白蛋白5-10g/L、棉子糖5-10g/L、二氢槲皮素40-60mg/L、表面活性剂8-12 g/L和防腐剂0.5-1ml/L。
所述生物防腐剂为NaN3、苯甲酸钠、Proclin-200、Proclin-300或Proclin500中的至少一种;优选地,所述生物防腐剂为Proclin-300。
所述表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35;优选地,所述聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35的质量比为2-3:0.5-1:3-5;最优选为2.5:0.8:4。
所述兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒为兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体包被的聚甲基丙烯酸甲酯胶乳颗粒,其中,所述聚甲基丙烯酸甲酯胶乳颗粒的粒径为90-120nm和140-170nm。优选地,粒径90-120nm的聚甲基丙烯酸甲酯胶乳颗粒和粒径140-170nm的聚甲基丙烯酸甲酯胶乳颗粒的质量比为4:1。
所述兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体与聚甲基丙烯酸甲酯胶乳颗粒的体积比为1:3。
优选地,本发明的兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体胶乳颗粒的制备方法,包括以下步骤:
(1)将兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体溶于MES缓冲液中,pH为6.5,制得浓度为1.0mL/mL的兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体溶液;
(2)取聚甲基丙烯酸甲酯胶乳颗粒溶解于0.1mol/L的MES缓冲液中,浓度为1%(w/v),加入10mg/mL的聚天冬氨酸和10mg/mL 的N,N-亚甲基双丙烯酰胺,孵育,离心,弃上清,用MES缓冲液洗涤胶乳微球3-4次,加入MES缓冲液,震荡重悬,制得浓度为1%(w /v)的胶乳微球悬浮液;
(3)将步骤(1)得到的兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体溶液和步骤(2)得到的胶乳微球悬浮液混均,孵育,加入4μl/mL的2-羟基乙胺混匀,封闭,离心,弃上清,用MES缓冲液洗涤3-4次,加入MES缓冲液,震荡重悬,制得兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体胶乳颗粒。
优选地,所述试剂1包括:4-羟乙基哌嗪乙磺酸100-108mM、氯化钠8.5-9.5g/L、血清白蛋白6-9g/L、表面活性剂9-11g/L和防腐剂0.6-0.9ml/L;最优选地,所述试剂1包括:4-羟乙基哌嗪乙磺酸105mM、氯化钠9g/L、血清白蛋白8.5g/L、表面活性剂10g/L和防腐剂0.8ml/L。
优选地,所述试剂2包括:4-羟乙基哌嗪乙磺酸100-108mM、兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒0.11-0.14w/v%、血清白蛋白6-9g/L、棉子糖6-9g/L、二氢槲皮素45-55mg/L、表面活性剂9-11 g/L和防腐剂0.6-0.9ml/L;最优选地,所述试剂2包括:4-羟乙基哌嗪乙磺酸105mM、兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒0.13w/v%、血清白蛋白8.5g/L、棉子糖8.5g/L、二氢槲皮素50mg/L、表面活性剂10 g/L和防腐剂0.8ml/L。
本发明另一方面提供了一种甲胎蛋白的检测方法,所述检测方法为利用上述的试剂盒检测血清和/或血浆中甲胎蛋白的含量。
具体地,所述的检测方法,包括以下步骤:
(1)绘制标准曲线:以校准品的吸光度变化值△A=A校准-A空白为纵坐标,其相应的浓度C校准为横坐标,绘制校准曲线;
(2)测定样本:将样本和试剂R1混均,37℃温育5min,加入试剂R2混匀,静置30s,在700nm的波长下检测吸光度A1,37℃恒温反应4.5min,结束反应,在700nm的波长下检测吸光度A2,根据步骤(1)绘制的标准曲线,利用吸光度变化值ΔA=A2-A1计算样本中甲胎蛋白的浓度。
本发明的有益效果为:
本发明所提供的基于胶乳免疫比浊法的甲胎蛋白试剂盒,通过添加棉子糖、二氢槲皮素以及对表面活性剂的优化,可以防止胶乳颗粒的凝集沉淀,提高了试剂盒的稳定性,在2-8℃下保持24个月精密度CV低于8%。
同时,本发明提供的试剂盒检测结果的线性范围广,且样本中胆红素≤700mg/L,血红蛋白≤15g/L,对测试结果无明显,抗干扰性好。
具体实施方式
除非另外定义,本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
以下实施例如无特殊说明,则不含有除不可避免的杂质以外的其它未明确指出的组分。各实施例中所用的原料均为市售产品。
实施例1兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体胶乳颗粒的制备
(1)将兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体溶于MES缓冲液中,pH为6.5,制得浓度为1.0mL/mL的兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体溶液;
(2)按质量比4:1,取粒径90-120nm的聚甲基丙烯酸甲酯胶乳颗粒和粒径140-170nm的聚甲基丙烯酸甲酯胶乳颗粒溶解于0.1mol/L的MES缓冲液中,浓度为1%(w/v),加入10mg/mL的聚天冬氨酸和10mg/mL 的N,N-亚甲基双丙烯酰胺,在20℃下孵育30min,10000rpm下离心20min,弃上清,用相同体积的MES缓冲液洗涤胶乳微球3-4次,去除多余的交联剂,洗涤后,再将胶乳颗粒溶于MES缓冲液中,25℃下震荡15min重悬,制得浓度为1%(w/v)的胶乳微球悬浮液;
(3)按质量比1:3,将步骤(1)得到的兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体溶液和步骤(2)得到的胶乳微球悬浮液混均,37℃下孵育2h,加入4μl/mL 的2-羟基乙胺混匀,37℃下封闭30min,10000rpm下离心20min,弃上清,用相同体积的MES缓冲液洗涤3-4次,去除未结合的抗体,再加入MES缓冲液,25℃下震荡15min重悬,制得兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体胶乳颗粒。
实施例2甲胎蛋白测定试剂盒
所述甲胎蛋白测定试剂盒,包括试剂1和试剂2;
所述试剂1:4-羟乙基哌嗪乙磺酸105mM、氯化钠9g/L、血清白蛋白8.5g/L、表面活性剂10g/L和防腐剂0.8ml/L;
所述试剂2:4-羟乙基哌嗪乙磺酸105mM、兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒0.13w/v%、血清白蛋白8.5g/L、棉子糖8.5g/L、二氢槲皮素50mg/L、表面活性剂10 g/L和防腐剂0.8ml/L;
所述防腐剂为Proclin-300;
所述表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35,所述聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35的质量比为2.5:0.8:4。
实施例3甲胎蛋白测定试剂盒
所述甲胎蛋白测定试剂盒,包括试剂1和试剂2;
所述试剂1:4-羟乙基哌嗪乙磺酸95mM、氯化钠8g/L、血清白蛋白5g/L、表面活性剂8g/L和防腐剂1ml/L;
所述试剂2:4-羟乙基哌嗪乙磺酸95mM、兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒0.10w/v%、血清白蛋白5g/L、棉子糖5g/L、二氢槲皮素40mg/L、表面活性剂8 g/L和防腐剂1ml/L。
所述防腐剂为Proclin-200;所述表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35;所述聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35的质量比为2:0.5:3。
实施例4甲胎蛋白测定试剂盒
所述甲胎蛋白测定试剂盒,包括试剂1和试剂2;
所述试剂1:4-羟乙基哌嗪乙磺酸110mM、氯化钠10g/L、血清白蛋白10g/L、表面活性剂12g/L和防腐剂0.5ml/L;
所述试剂2:4-羟乙基哌嗪乙磺酸110mM、兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒0.15w/v%、血清白蛋白10g/L、棉子糖10g/L、二氢槲皮素60mg/L、表面活性剂12 g/L和防腐剂0.5ml/L。
所述防腐剂为Proclin500;所述表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35;所述聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35的质量比为3:1:5。
实施例5甲胎蛋白测定试剂盒
所述甲胎蛋白测定试剂盒,包括试剂1和试剂2;
所述试剂1:4-羟乙基哌嗪乙磺酸100mM、氯化钠8.5g/L、血清白蛋白6g/L、表面活性剂9g/L和防腐剂0.9ml/L;
所述试剂2:4-羟乙基哌嗪乙磺酸100mM、兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒0.11w/v%、血清白蛋白6g/L、棉子糖6g/L、二氢槲皮素45mg/L、表面活性剂9g/L和防腐剂0.9ml/L;
所述防腐剂为Proclin300;所述表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35;所述聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35的质量比为2.5:0.8:4。
实施例6甲胎蛋白测定试剂盒
所述甲胎蛋白测定试剂盒,包括试剂1和试剂2;
所述试剂1:4-羟乙基哌嗪乙磺酸108mM、氯化钠9.5g/L、血清白蛋白9g/L、表面活性剂11g/L和防腐剂0.6ml/L;
优选地,所述试剂2:4-羟乙基哌嗪乙磺酸108mM、兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒0.14w/v%、血清白蛋白9g/L、棉子糖9g/L、二氢槲皮素55mg/L、表面活性剂11 g/L和防腐剂0.6ml/L;
所述防腐剂为Proclin300;所述表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35;所述聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35的质量比为2.5:0.8:4。
对比例1
本对比例与实施例2的区别在于:表面活性剂不同。
具体地,本对比例采用的表面活性剂为质量比0:2:5的聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35。
对比例2
本对比例与实施例2的区别在于:表面活性剂不同。
具体地,本对比例采用的表面活性剂为质量比5:1:1的聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35。
对比例3
本对比例与实施例2的区别在于:试剂2不同;
具体地,所述试剂2:4-羟乙基哌嗪乙磺酸105mM、兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒0.13w/v%、血清白蛋白8.5g/L、棉子糖15g/L、二氢槲皮素30mg/L、表面活性剂5g/L和防腐剂0.8ml/L。
对比例4
本对比例与实施例2的区别在于:试剂2不同;
具体地,所述试剂2:4-羟乙基哌嗪乙磺酸105mM、兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒0.13w/v%、血清白蛋白8.5g/L、棉子糖3g/L、二氢槲皮素70mg/L、表面活性剂15g/L和防腐剂0.8ml/L。
实施例7甲胎蛋白测定
适用仪器:日立7170/7600/7180/3500/008AS、迈瑞BS2000、迪瑞CS2000、雅培C16000 、东芝TBA120FR/2000FR/FX8、贝克曼AU5800/AU680/AU2700/DXC800、西门子ADVIA2400/CH930/DIMENSION RXL、罗氏C701/C702全自动生化分析仪。
检测方法:
(1)绘制标准曲线:以校准品的吸光度变化值△A=A校准-A空白为纵坐标,其相应的浓度C校准为横坐标,绘制校准曲线;
(2)测定样本:将15μL样本和180μL试剂R1混均,37℃温育5min,加入60μL试剂R2混匀,静置30s,在700nm的波长下检测吸光度A1,37℃恒温反应4.5min,结束反应,在700nm的波长下检测吸光度A2,根据步骤(1)绘制的标准曲线,利用吸光度变化值ΔA=A2-A1计算样本中的甲胎蛋白的浓度。
所述的样本为新鲜血清或血浆。
所述标准品:包括甲胎蛋白0.8w/v%,牛血清白蛋白8.5g/L、防腐剂0.8 ml/L;所述防腐剂为与试剂盒对应的防腐剂。
所述质控品:包括甲胎蛋白0.15w/v%,牛血清白蛋白8.5g/L、防腐剂0.8 ml/L;所述防腐剂为与试剂盒对应的防腐剂。
实施例8 试剂盒性能分析
A线性区间
实验要求:在[0.256,800] ng/mL范围内,理论浓度与实测浓度的线性相关系数(r)≥0.9900
实验方法:将接近线性范围上限的高值样本(800ng/mL)与零浓度样本混合成7个稀释浓度,理论浓度分别为800ng/mL、160ng/mL、32ng/mL、6.4ng/mL、1.28ng/mL、0.256ng/mL、0ng/mL。对每一浓度的样本各重复测试3次得到浓度值,记录各样品的测量结果,并计算各样品3次测量值的平均值()。以稀释浓度(/>)为自变量,以测定结果均值(/>)为因变量求出线性回归方程。按公式(2)计算线性回归的相关系数(r),结果如表1所示。
式中:
表1 线性区间的结果
由上表可知,实施例2-6的试剂盒的线性相关系数(r)实验结果不低于0.9900,因此可以定义实施例2-6的试剂盒的线性范围为[0.256,800]ng/mL;而对比例1-4的试剂盒的线性相关系数(r)均低于0.9900。表明表面活性剂的组成以及试剂2的具体用量会对试剂盒的线性关系产生重要影响。
B精密度检测:同一样品中连续抽取20次,按照上述步骤进行测定,计算测定值的平均值、标准差(SD)和变异系数(CV),CV=(标准差/平均值)*100%,结果见表2,CV通常用于衡量一项测定方法的精密度,CV值越小,表示该测定方法的结果精密度越好。对于临床化学检验项目而言,CV小于8%的方法精密度公认是可以接受的。
表2精密度检测结果
由表2可知,表明本发明提供的试剂盒精密度较高,其中实施例2所述的试剂盒的精密度最高。
同时,为了进一步验证本发明所取得的技术效果,将实施例2-6和对比例1-4制备的试剂盒在2-8℃下放置24个月,检测其精密度,结果如表3所示。
表3第24个月的精密度结果
由表3可知,本发明通过添加棉子糖、二氢槲皮素以及对表面活性剂的优化,可以防止胶乳颗粒的凝集沉淀,提高了试剂盒的稳定性。
实施例9
选择三种潜在干扰物,结合胆红素和和血红蛋白,在质控品中分别加入680mg/L、700mg/L、720mg/L的结合胆红素;13g/L、15g/L、17g/L的血红蛋白。对照组为不加任何干扰物的质控品,利用实施例2所述的试剂盒和实施例7所述的检测方法进行测定,每个样本测定5次,取平均值,发现当结合胆红素浓度达到700mg/L,血红蛋白达到15g/L,对测试结果无明显干扰,CV%小于8%,相对偏差CB不超过±10%。
以上是结合具体实施例对本发明进一步的描述,但这些实施例仅仅是范例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种基于胶乳免疫比浊法的甲胎蛋白测定试剂盒,包括试剂1和试剂2,其特征在于,所述试剂1包括:4-羟乙基哌嗪乙磺酸95-110mM、氯化钠8-10g/L、血清白蛋白5-10g/L、表面活性剂8-12g/L和防腐剂0.5-1ml/L;
所述试剂2包括:4-羟乙基哌嗪乙磺酸95-110mM、兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒0.10-0.15w/v%、血清白蛋白5-10g/L、棉子糖5-10g/L、二氢槲皮素40-60mg/L、表面活性剂8-12 g/L和防腐剂0.5-1ml/L。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述生物防腐剂为NaN3、苯甲酸钠、Proclin-200、Proclin-300或Proclin500中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述聚乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸钠和聚氧乙烯月桂醚-35的质量比为2-3:0.5-1:3-5。
5.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒为兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体包被的聚甲基丙烯酸甲酯胶乳颗粒,其中,所述聚甲基丙烯酸甲酯胶乳颗粒的粒径为90-120nm和140-170nm。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,粒径90-120nm的聚甲基丙烯酸甲酯胶乳颗粒和粒径140-170nm的聚甲基丙烯酸甲酯胶乳颗粒的质量比为4:1。
7.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂1包括:4-羟乙基哌嗪乙磺酸100-108mM、氯化钠8.5-9.5g/L、血清白蛋白6-9g/L、表面活性剂9-11g/L和防腐剂0.6-0.9ml/L。
8. 根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂2包括:4-羟乙基哌嗪乙磺酸100-108mM、兔抗人甲胎蛋白多克隆抗体乳胶颗粒0.11-0.14w/v%、血清白蛋白6-9g/L、棉子糖6-9g/L、二氢槲皮素45-55mg/L、表面活性剂9-11 g/L和防腐剂0.6-0.9ml/L。
9.一种利用权利要求1-8任一项所述的试剂盒检测甲胎蛋白的方法,其特征在于,所述检测方法为利用试剂盒检测血清和/或血浆中甲胎蛋白的含量。
10.根据权利要求9所述的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)绘制标准曲线:以校准品的吸光度变化值△A=A校准-A空白为纵坐标,其相应的浓度C校准为横坐标,绘制校准曲线;
(2)测定样本:将样本和试剂R1混均,37℃温育5min,加入试剂R2混匀,静置30s,在700nm的波长下检测吸光度A1,37℃恒温反应4.5min,结束反应,在700nm的波长下检测吸光度A2,根据步骤(1)绘制的标准曲线,利用吸光度变化值ΔA=A2-A1计算样本中甲胎蛋白的浓度。
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