CN111965342A - 一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法、试剂及试剂盒 - Google Patents
一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法、试剂及试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法,属于免疫测定技术领域,包括:将胶乳微球与活化缓冲液混匀后加入活化剂进行一次活化;一次活化完毕后加入所述活化剂进行二次活化;抗体经偶联缓冲液稀释后加入到二次活化后的胶乳微球中,进行偶联反应;向偶联反应后的反应液中加入封闭液1,所述封闭液1为TRIS溶液;反应完成后再加入封闭液2,所述封闭液2为BSA溶液;反应完成后进行离心、重悬胶乳微球。该方法可同时提高胶乳免疫比浊法检测试剂的线性范围和长期稳定性。本发明还提供了一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的试剂及试剂盒。
Description
技术领域
本发明属于免疫测定技术领域,涉及一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法、试剂及试剂盒。
背景技术
近年来,随着市场需求,对很多胶乳免疫比浊试剂的线性范围的要求越来越高。比如肌红蛋白项目,当心肌和骨骼肌损伤时,血中肌红蛋白明显增高,心肌梗死发病后4~12h内,血清中肌红蛋白含量可达高峰,浓度甚至可高达1000mg/L以上,市场上绝大部分肌红蛋白测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)的线性只能达到800mg/L左右,遇到临床高值会出现hook效应,影响结果的判断,不能满足临床需要。再比如RBP,血清RBP水平与人体肾功能密切相关,当肾脏疾病发生时,由于肾小球滤过率下降,肾小管重吸收障碍,血清和尿液中RBP均显著增高,浓度可高达200mg/L以上。常规RBP测量范围是3-140mg/L,因此,高线性的RBP测定试剂才能更好的满足临床需要,诸如此类的项目还有很多,比如血清淀粉样蛋白A,SAA是急性相蛋白,机体受感染后,4-6h内即可迅速升高约1000倍,清除病原体后又可迅速的降低至正常水平,是反映机体感染情况和炎症恢复的灵敏指标。
胶乳免疫比浊法对于胶乳检测试剂宽线性范围的需求较常见。另外,胶乳免疫比浊试剂的稳定性也是一个非常重要的性能指标,而胶乳免疫比浊法中对胶乳封闭效果的好坏直接影响了试剂的稳定性。
发明内容
为了解决现有胶乳检测试剂线性范围和稳定性不足的技术问题,本发明提供了一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法,该方法可同时提高胶乳免疫比浊法检测试剂的线性范围和长期稳定性。
本发明还提供了一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的试剂及试剂盒。
本发明通过以下技术方案实现:
一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法,包括:
将胶乳微球与活化缓冲液混匀后加入活化剂进行一次活化;
一次活化完毕后加入所述活化剂进行二次活化;
抗体经偶联缓冲液稀释后加入到二次活化后的胶乳微球中,进行偶联反应;
向偶联反应后的反应液中加入封闭液1,所述封闭液1为TRIS溶液;
反应完成后再加入封闭液2,所述封闭液2为BSA溶液;
反应完成后进行离心、重悬胶乳微球。
其中,所述胶乳微球包括羧基聚苯乙烯胶乳微球,固体含量为5%-10,粒径为100-200nm。
进一步的,所述活化剂为EDC,胶乳微球与EDC的总质量比为25∶4,所述一次活化与二次活化的反应温度均为37℃,反应时间10-20min。
进一步的,所述TRIS溶液浓度为200mM,pH=8.0,所述BSA溶液质量浓度为10%,胶乳微球与TRIS及BSA的体积比为1∶2∶2。
进一步的,加入所述封闭液1后,30-37℃恒温反应0.5-1h,加入所述封闭液2后,30-37℃恒温反应0.5-1h。
进一步的,所述抗体为RBP抗体、Mb抗体和SAA抗体中的任意一种,所述偶联反应温度为37℃,反应时间2h。
进一步的,所述离心工艺的转速为16000rpm,离心时间为40分钟,离心完毕后去除上清,并用50-70mL的R2缓冲液复溶,重悬胶乳微球。
进一步的,所述R2缓冲液中各化学成分及浓度为:25-50mmol/L HEPES,0.5g/L的EDTA-2Na,5%海藻糖,0.1%PC-300,pH值为7.0-7.5;所述活化缓冲液为浓度50-100mmol/L的HEPES缓冲液,pH值为5.5-6.5;所述偶联缓冲液为浓度50-100mmol/L的HEPES缓冲液,pH值为7.4-8.0,抗体经偶联缓冲液稀释后的浓度为1mg/ml。
一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的试剂,所述试剂通过一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法制得。
一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括以下成分:
2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)缓冲液:0.1-0.2mol/L pH7.0;EDTA-2Na:0.5g/L;氯化钠:0.08mol/L;Brij-35:0.1%-0.5%;叠氮化钠:0.1%;
所述试剂R2通过上述一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法制得。
本发明实施例中的一个或多个技术方案,至少具有如下技术效果或优点:
本发明一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法,本发明通过分两次活化胶乳微球,提高活化效率的同时可避免胶乳微球聚集,让胶乳可以偶联到更多抗体,达到提高线性范围的效果,并通过先加入小分子封闭剂后加入大分子封闭剂,使胶乳微球的活性基团充分进行封闭,从而提高试剂的胶乳稳定性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案,下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1是实施例1、2及对比例1-3的线性范围曲线。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例,具体阐述本发明,本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解,这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明,而非限制本发明。
在整个说明书中,除非另有特别说明,本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此,除非另有定义,本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾,本说明书优先。
除非另有特别说明,本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等,均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
本发明实施例提供的技术方案为解决上述技术问题,总体思路如下:
对于胶乳免疫比浊法,如何才能提高试剂的线性范围是很多试剂生产厂家想要迫切解决的问题,想要提高线性范围,首要就是要提高抗体偶联效率,让更多的抗体连到胶乳微球上,才能检测到更高浓度的抗原。
申请人认为:要达到这个目的,除了需要增加抗体投量外,我们主要还是需要提高胶乳微球上羧基的活化效率,只有微球上被活化的羧基数量增加了,我们增加抗体投量才有意义,否则单纯的增加抗体投量,并不能达到预期效果,反而会增加试剂的生产成本。
想要提高微球上的羧基活化效率,常规的方法是增加活化剂EDC的量、摸索合适的缓冲种类及PH值、微球在活化前采用活化缓冲液进行清洗,去除微球保存液中的表面活性剂,以减少空间位阻等等。因为胶乳微球是疏水微球,表面是带有负电荷的羧基,微球间是相互排斥,来保持稳定。如果加入的EDC量过大,会打破胶乳微球表面的电荷平衡,造成胶乳聚集,产生沉淀。
为了解决以上问题,申请人优选合适的缓冲液及PH,同时采用合适浓度的EDC进行多次活化,即先加EDC活化10-20分钟后,再补加一次EDC,继续活化10-20分钟,这样达到了提高活化效率的作用,让胶乳可以偶联到更多抗体,且不会因为EDC量过高而产生胶乳凝集,达到提高线性范围的效果。
另外,胶乳免疫比浊试剂的稳定性也是一个非常重要的性能指标,而胶乳免疫比浊法中对胶乳封闭效果的好坏直接影响了试剂的稳定性,胶乳免疫比浊法中常用的封闭工艺是使用大分子封闭(BSA),我们先用小分子(TRIS)对胶乳未连接的基团进行封闭,然后再用大分子(BSA、脱脂奶粉)对胶乳进行二次封闭,抗体分子量约为150kDa,抗体偶联在胶乳微球上的基团后,会对微球上的一些基团进行遮挡,先加入小分子封闭剂,可以更好地接触到微球上的各个未连接抗体的基团,其中包含被抗体遮挡的基团,可以更好的对其进行封闭,小分子封闭后,再继续加入大分子封闭剂,对胶乳微球还未封闭好的基团进行第二次封闭,使胶乳微球的活性基团充分进行封闭,从而达到提高试剂的胶乳稳定性目的。
具体的,本发明一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法,包括:
(1)将胶乳微球与活化缓冲液混匀后加入活化剂进行一次活化;
(2)一次活化完毕后加入所述活化剂进行二次活化;
(3)抗体经偶联缓冲液稀释后加入到二次活化后的胶乳微球中,进行偶联反应;
(4)向偶联反应后的反应液中加入封闭液1,所述封闭液1为TRIS溶液;
(5)反应完成后再加入封闭液2,所述封闭液2为BSA溶液;
(6)反应完成后进行离心、重悬胶乳微球。
其中,所述胶乳微球包括:羧基聚苯乙烯胶乳微球,固体含量为5%-10%,粒径为100-200nm。
进一步的,所述活化剂为EDC,胶乳微球与EDC的总质量比为25∶4,浓度为10mg/ml,所述一次活化与二次活化的反应温度均为37℃,反应时间10-20min
进一步的,所述TRIS溶液浓度为200mM,pH=8.0,所述BSA溶液质量浓度为10%,胶乳微球与TRIS及BSA的体积比为1∶2∶2。
进一步的,加入所述封闭液1后,30-37℃恒温反应0.5-1h,加入所述封闭液2后,30-37℃恒温反应0.5-1h。
进一步的,所述抗体为RBP抗体、Mb抗体和SAA抗体中的任意一种,所述偶联反应温度为37℃,反应时间2h。
进一步的,所述离心工艺的转速为16000rpm,离心时间为40分钟,离心完毕后去除上清,并用50-70mL的R2缓冲液复溶,重悬胶乳微球。
进一步的,所述R2缓冲液中各化学成分及浓度为:25-50mmol/L HEPES,0.5g/L的EDTA-2Na,5%海藻糖,0.1%PC-300,pH值为7.0-7.5;所述活化缓冲液为浓度50-100mmol/L的HEPES缓冲液,pH值为5.5-6.5;所述偶联缓冲液为浓度50-100mmol/L的HEPES缓冲液,pH值为7.4-8.0,抗体经偶联缓冲液稀释后的浓度为1mg/ml。
本发明所选的活化缓冲液及偶联缓冲液有利于提高胶乳活化及偶联效率,所选的R2缓冲为胶乳微球与抗体提供合适的离子强度和pH,有利于试剂长期储存。
综上,本发明通过分两次活化胶乳微球,提高活化效率的同时可避免胶乳微球聚集,让胶乳可以偶联到更多抗体,达到提高线性范围的效果,并通过先加入小分子封闭剂后加入大分子封闭剂,使胶乳微球的活性基团充分进行封闭,从而提高试剂的胶乳稳定性。
下面将结合实施例、对照例及实验数据对本申请一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法进行详细说明。
本发明中,英文或英文缩写对应的中文翻译如下:
EDTA-2Na:乙二胺四乙酸二钠;
Brij-35:月桂醇聚氧乙烯醚;
HEPES:4-羟乙基哌嗪乙磺酸;
PC-300:防腐剂Proclin 300
EDC:1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐;
BSA:牛血清白蛋白;
RBP抗体:视黄醇结合蛋白抗体;
Mb抗体:肌红蛋白抗体;
SAA抗体:血清淀粉样蛋白A抗体。
实施例1
R1组分的配制,R1试剂中包含:
R2试剂制备:
1.原料溶液制备
a.活化缓冲液:50mmol/L HEPES缓冲液,PH值为6.0。
b.偶联缓冲液:50mmol/L HEPES缓冲液,PH值为7.4。
c.活化剂:按照10mg/ml的浓度称量EDC,现配现用。
d.封闭液1∶200mM TRIS pH=8.0。
e.封闭液2∶10%BSA。
f.R2缓冲液:50mmol/L HEPES,0.5g/L的EDTA-2Na,5%海藻糖,0.1%PC-300,pH值为7.4。
2.胶乳试剂制备
①取粒径为100nm的胶乳微球1mL与活化缓冲液pH6.0(溶液a)按体积比1:6进行混合后混匀;
②向步骤①中加入0.4mL的10mg/ml的活化剂(溶液c),混匀,并置于恒温摇床中反应20min,温度:37℃;
③向步骤②中加入0.4mL的10mg/ml的活化剂(溶液c),混匀,并置于恒温摇床中反应20min,温度:37℃;
④用偶联缓冲液(溶液b)把RBP抗体稀释至1mg/mL,向步骤③中加入5mL的1mg/ml稀释后的RBP抗体,混匀,并置于恒温摇床中反应2h,温度:37℃;
⑤向步骤④中加入2mL的封闭液1(溶液d),混匀,并置于恒温摇床中反应1h,温度:37℃;
⑥向步骤⑤中加入2mL的封闭液2(溶液e),混匀,并置于恒温摇床中反应1h,温度:37℃;
⑦反应完成后离心并去除上清液,转速为16000rpm,离心时间为40分钟。
⑧去除上清液,并用50mL R2缓冲液复溶,重悬胶乳微球,重悬过程中可以使用细胞破碎仪辅助重悬。
实施例2
在实施例1的基础上,胶乳微球粒径为200nm,其它组分和工艺与实施例1相同。
实施例3
在实施例1的基础上,将RBP抗体换成Mb抗体,其它组分和工艺与实施例1相同。
实施例4
在实施例1的基础上,将RBP抗体换成SAA抗体,其它组分和工艺与实施例1相同。
对比例1
在实施例1的基础上,把步骤②③合并为一步活化,保持EDC的用量不变,即:向步骤①中加入0.8mL的10mg/ml的活化剂(溶液c),混匀,并置于恒温摇床中反应20min,温度:37℃。其它组分和工艺与实施例1相同。
对比例2
在实施例1的基础上,去掉步骤⑤。其它组分和工艺与实施例1相同。
对比例3
在实施例1的基础上,把步骤②③合并为一步活化,保持EDC的用量不变:向步骤①中加入0.8mL的10mg/ml的活化剂(溶液c),混匀,并置于恒温摇床中反应20min,温度:37℃。然后去掉步骤⑤。其它组分和工艺与实施例1相同。
一、评价实施方案一(RBP检测试剂评价):
实验仪器选择:HITACHl7180/7100,用对比例1-3、实施例1-2制备好的试剂,选择RBP校准品进行定标后,检测线性范围和稳定性,评价方法如下:
(1)线性范围评价:测定3.0-310.0mg/L不同浓度的样本,每个浓度重复测定三次,计算均值理论值、相对偏差和线性相关系数R;R大于0.9900,各个点的相对偏差在10%以内,能满足使用需求;
(2)试剂空白吸光度:测试剂在对应波长处、10mm光径下的吸光度值;
(3)灵敏度:测试RBP浓度为50.0mg/L被测物时的吸光度与空白试剂测试时的差值(ΔA);
(4)准确度:测定第三方质控品(血清基质),计算与靶值的偏差Bias=(测定均值-靶值)/靶值×100%;
(5)精密度:测定RBP浓度为20.0-40.0mg/L的样本,重复测定十次,计算变异系数CV:
(6)稳定性:将试剂在37℃热破处理14天后,与未热破的试剂同时测试试剂性能,评价指标:试剂空白吸光度、灵敏度、准确度(%)、线性和精密度(%)。
二、评价实施方案二(Mb检测试剂评价):
实验仪器选择:HITACH7180/7100,用实施例3制备好的试剂,选择Mb校准品进行定标后,检测线性范围和稳定性,评价方法如下:
(1)线性范围评价:测定3-3000ng/mL不同浓度的样本,每个浓度重复测定三次,计算均值理论值、相对偏差和线性相关系数R;R大于0.9900,各个点的相对偏差在10%以内,能满足使用需求;
(2)试剂空白吸光度:测试剂在对应波长处、10mm光径下的吸光度值;
(3)灵敏度:测试Mb浓度为200ng/mL被测物时的吸光度与空白试剂测试时的差值(ΔA);
(4)准确度:测第三方质控品(血清基质),计算测定平均值与靶值的偏差,一般应<10%;
(5)精密度:测定Mb浓度为40-90ng/mL的样本,重复测定十次,计算变异系数CV;
(6)稳定性:将试剂在37℃热破处理14天后,与未热破的试剂同时测试试剂性能,评价指标:试剂空白吸光度、灵敏度、准确度(%)、线性和精密度(%)。
三、评价实施方案三(SAA检测试剂评价):
实验仪器选择:HITACHI7180/7100,用实施例4制备好的试剂,选择SAA校准品进行定标后,检测线性范围和稳定性,评价方法如下:
(1)线性范围评价:测定3.0-500.0mg/L不同浓度的样本,每个浓度重复测定三次,计算均值理论值、相对偏差和线性相关系数R;R大于0.9900,各个点的相对偏差在10%以内,能满足使用需求;
(2)试剂空白吸光度:测试剂在对应波长处、10mm光径下的吸光度值;
(3)灵敏度:测试SAA浓度为20.0mg/L被测物时的吸光度与空白试剂测试时的差值(ΔA);
(4)准确度:测定第三方质控品(血清基质),计算与靶值的偏差Bias=(测定均值-靶值)/靶值×100%;
(5)精密度:测定SAA浓度为3.0-8.0mg/L的样本,重复测定十次,计算变异系数CV;
(6)稳定性:将试剂在37℃热破处理14天后,与未热破的试剂同时测试试剂性能,评价指标:试剂空白吸光度、灵敏度、准确度(%)、线性和精密度(%);
方案一评价数据:(RBP及其对照)
(1)、线性范围
表1实施例1-2、对比例1-3线性范围数据
表1中,稀释倍数是指RBP样本稀释倍数,理论浓度是指RBP样本理论浓度(单位mg/L)。依照表1绘制线性范围曲线,结果如图1所示。由表1和图1可知,对比例1和对比例3最高浓度只能测到150mg/L左右,就出现明显的hook效应,实施例1、实施例2和对比例2的线性能测到300mg/L左右,且线性相关系数R和各个浓度的相对偏差都满足要求。
(2)、稳定性
表2实施例1-2的稳定性数据
表3对比例1-3的稳定性数据
由表2、3数据可以看出,与未进行热处理试剂比较,对比例2和对比例3试剂经过热处理后,试剂空白吸光度与灵敏度均升高,且试剂性能均受到影响:线性相关系数降低,准确度偏差增大,精密度CV变大,而实施例1、实施例2与对比例1试剂经过热处理后,试剂空白吸光度、灵敏度、线性相关系数、准确度、精密度均不受影响,基本保持不变。
综合线性和稳定性的数据,对比例1线性只能测到150mg/L左右,线性范围较低,满足不了临床上使用需求;对比例2线性能测到300mg/L左右,但试剂经过热处理后试剂各方面性能均下降,稳定性满足不了临床上使用需求;对比例3线性只能测到150mg/L左右,且试剂经过热处理后试剂各方面性能均下降,线性与稳定性均满足不了临床上使用需求;实施例1和实施例2,线性能测到300mg/L且线性相关性以及线性偏差均较好,试剂经过热处理后,试剂空白吸光度、灵敏度、线性相关系数、准确度、精密度均不受影响,稳定性较好,试剂性能能满足临床使用需求。
方案二评价数据:(Mb)
表4实施例3线性范围数据
表5实施例3稳定性数据
由表4、5可知,实施例3线性范围能测到3000mg/L左右,且线性相关系数R和各个浓度的相对偏差均满足要求,试剂经过热处理后,试剂空白吸光度、灵敏度、线性相关系数、准确度、精密度均不受影响,基本保持不变。
方案三评价数据:(SAA)
表6实施例4线性范围数据
表7实施例4稳定性数据
由表6、7可知,实施例4线性范围能测到500mg/L左右,且线性相关系数R和各个浓度的相对偏差均满足要求,试剂经过热处理后,试剂空白吸光度、灵敏度、线性相关系数、准确度、精密度均不受影响,基本保持不变。
综上所述,运用本发明的技术所制备的胶乳免疫比浊试剂线性范围较高,稳定性较好,且其它各项性能结果也能满足临床使用需求。
最后,还需要说明的是,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已描述了本发明的优选实施例,但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念,则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以,所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然,本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样,倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内,则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (10)
1.一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法,其特征在于,包括:
将胶乳微球与活化缓冲液混匀后加入活化剂进行一次活化;
一次活化完毕后加入所述活化剂进行二次活化;
抗体经偶联缓冲液稀释后加入到二次活化后的胶乳微球中,进行偶联反应;
向偶联反应后的反应液中加入封闭液1,所述封闭液1为TRIS溶液;
反应完成后再加入封闭液2,所述封闭液2为BSA溶液;
反应完成后进行离心、重悬胶乳微球。
2.根据权利要求1所述的一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法,其特征在于,所述胶乳微球包括羧基聚苯乙烯胶乳微球,固体含量为5%-10%,粒径为100-200nm。
3.根据权利要求1所述的一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法,其特征在于,所述活化剂为EDC,浓度为10mg/ml,其中,胶乳微球与EDC的总质量比为25∶4,所述一次活化与二次活化的反应温度均为37℃,反应时间10-20min。
4.根据权利要求1所述的一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法,其特征在于,所述TRIS溶液浓度为200mM,pH=8.0,所述BSA溶液质量浓度为10%,胶乳微球与TRIS及BSA的体积比为1∶2∶2。
5.根据权利要求1所述的一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法,其特征在于,加入所述封闭液1后,30-37℃恒温反应0.5-1h,加入所述封闭液2后,30-37℃恒温反应0.5-1h。
6.根据权利要求1所述的一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法,其特征在于,所述抗体为RBP抗体、Mb抗体和SAA抗体中的任意一种,所述偶联反应温度为37℃,反应时间2h。
7.根据权利要求1所述的一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法,其特征在于,所述离心工艺的转速为16000rpm,离心时间为40分钟,离心完毕后去除上清,并用50-70mL的R2缓冲液复溶,重悬胶乳微球。
8.根据权利要求7所述的一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法,其特征在于,所述R2缓冲液中各化学成分及浓度为:25-50mmol/L HEPES,0.5g/L的EDTA-2Na,5%海藻糖,0.1%PC-300,pH值为7.0-7.5;所述活化缓冲液为浓度50-100mmol/L的HEPES缓冲液,pH值为5.5-6.5;所述偶联缓冲液为浓度50-100mmol/L的HEPES缓冲液,pH值为7.4-8.0,抗体经偶联缓冲液稀释后的浓度为1mg/ml。
9.一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的试剂,其特征在于,所述试剂通过如权利要求1-8中任一项所述的一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法制得。
10.一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的试剂盒,其特征在于,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括以下成分:
2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液:0.1-0.2mol/L pH7.0;EDTA-2Na:0.5g/L;氯化钠:0.08mol/L;Brij-35:0.1%-0.5%;叠氮化钠:0.1%;
所述试剂R2通过如权利要求1-8中任一项所述的一种提高胶乳免疫比浊法线性范围和稳定性的方法制得。
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