CN109470872B

CN109470872B - 磁微粒缓冲液

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Publication number: CN109470872B
Application number: CN201811495096.8A
Authority: CN
Inventors: 黄春; 田君喜; 张凌燕; 席强
Original assignee: Maccura Biotechnology Co ltd
Current assignee: Maccura Biotechnology Co ltd
Priority date: 2018-12-07
Filing date: 2018-12-07
Publication date: 2022-02-08
Anticipated expiration: 2038-12-07
Also published as: CN109470872A

Abstract

本发明提供一种磁微粒缓冲液，所述磁微粒缓冲液含有基础缓冲液、0.005～0.08％(v/v)的消泡剂和0.05～0.6mol/L的柠檬酸盐。本发明磁微粒缓冲液分散性好且不易起泡，同时能够显著提高样本中待测物的检测灵敏度。

Description

磁微粒缓冲液

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，具体涉及一种磁微粒缓冲液及其应用。

背景技术

生长激素(Growth Hormone，GH)是垂体前叶分泌的具有促进生长功能的一种蛋白质激素，人的生长激素(human Growth Hormone，hGH)由191个氨基酸组成，分子量为22KD，其可以促进物质代谢和生长发育，对机体各器官组织均有影响，尤其对骨骼、肌肉及内脏器官的作用更为显著。

目前，hGH的实验室检测方法有放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)、时间分辨荧光分析法(TRFIA)、化学发光免疫测定法(CLIA)等。RIA和ELISA出现较早，但由于污染性、时间长、灵敏度低等缺点，已不再据主体地位。TRFIA对检测设备要求较高，设备要求带有能够检测时间分辨荧光的模块，而且TRFIA是通过稀有镧系元素实现的，存在在检测某些指标时，找不到对应的检测试剂(稀有镧系元素标记的抗体)。

目前医院测定hGH的主流方法是化学发光免疫分析法(CLIA)，化学发光免疫分析技术经过了几代发展，以磁微粒化学发光法为主流产品，磁微粒化学发光免疫分析法是指以磁微粒为固相载体，将抗体(或抗原)通过化学键链接到磁微粒上，与待检测物质以及标记了发光物质的抗体(或抗原)发生反应，通过洗涤除去未反应的物质，再利用仪器检测保留下来的结合物的信号，从而实现对待检物质的检测。国内外厂家在此基础上开发出一系列的全自动产品，如Roche公司Cobas系列，Abbott公司Architect系列，Maccura公司IS1200等。

磁微粒化学发光免疫分析法中使用的磁微粒大部分微溶于水，容易聚集，分散性不好，导致检测时仪器将多个磁微粒误认为一个磁微粒，造成检测结果严重失真，非常不利于后续检测结果的分析。所以磁微粒在保存过程中，如果发生聚集，通常需要重新分散才能使用，如果没有合适的工具或方法，则难于重新均匀分散，虽然高速搅拌、超声分散等常用方法能解决磁微粒的分散问题，但是高速搅拌会产生气泡，影响检测结果，超声分散有时候会改变磁微粒的性质，导致检测结果有偏差。

实际上，磁微粒化学发光免疫分析法中需要在水中加入辅助剂，来解决磁微粒的难以分散的问题和容易起泡的问题，通常还需要提供基础缓冲体系(如基础缓冲液等)来消除辅助剂带来的其他影响检测结果的问题，如灵敏度等。

因此，为了在磁微粒化学发光免疫分析方面的应用，本领域急需分散性好、又不易起泡，同时显著提高样本中待测物检测灵敏度的磁微粒试剂(如磁微粒缓冲液)。

发明内容

本发明的目的是提供一种磁微粒缓冲液，该磁微粒缓冲液具有以下特点：

1.在自然重力条件下分散性好，不易沉降，便于仪器取样，保证每一个测试样本中使用的磁微粒的用量均相同；

2.在磁微粒混匀过程中不易起泡，或起泡后泡沫很快破裂，避免仪器空探导致的检测结果异常；

3.能够显著提高样本中待测物的检测灵敏度。

据此，在第一个方面，本发明提供了一种磁微粒缓冲液，其中，所述磁微粒缓冲液含有基础缓冲液、0.005～0.08％(v/v)的消泡剂和0.05～0.6mol/L的柠檬酸盐。

在优选的实施方式中，所述磁微粒缓冲液含有基础缓冲液、0.01～0.08％(v/v)的消泡剂和0.1～0.6mol/L的柠檬酸盐。

在优选的实施方式中，所述消泡剂选自聚醚类消泡剂、硅类消泡剂中的一种或几种。

在优选的实施方式中，所述柠檬酸盐选自柠檬酸钠盐、柠檬酸钾盐、柠檬酸镁盐和柠檬酸钙盐中的一种或几种。

在优选的实施方式中，所述基础缓冲液含有pH值调节剂、渗透压调节剂、稳定剂、表面活性剂和防腐剂。

在优选的实施方式中，所述基础缓冲液含有2～20g/L的pH值调节剂、1～15g/L的渗透压调节剂、5-60g/L的稳定剂、0.05～0.1mL/L的表面活性剂和0.5～2mL/L的防腐剂。

在第二个方面，本发明提供了一种用于生长激素测定试剂盒的磁微粒缓冲液，其中，所述磁微粒缓冲液含有基础缓冲液、0.005～0.08％(v/v)的消泡剂和0.05～0.6mol/L的柠檬酸盐。

在第三个方面，本发明提供了一种测定试剂盒，所述试剂盒含有基础缓冲液、0.005～0.08％(v/v)的消泡剂和0.05～0.6mol/L的柠檬酸盐；且所述基础缓冲液含有2～20g/L的pH值调节剂、1～15g/L的渗透压调节剂、1～30g/L的甘露醇、2～20g/L的牛血清白蛋白、5-40mL/L的丙三醇、0.05～0.1mL/L的表面活性剂和0.5～2mL/L的防腐剂。

在优选的实施方式中，所述试剂盒含有本发明所述的磁微粒缓冲液。

在第四个方面，本发明提供了一种生长激素测定试剂盒，所述试剂盒含有基础缓冲液、0.005～0.08％(v/v)的消泡剂和0.05～0.6mol/L的柠檬酸盐；且所述基础缓冲液含有2～20g/L的pH值调节剂、1～15g/L的渗透压调节剂、1～30g/L的甘露醇、2～20g/L的牛血清白蛋白、5-40mL/L的丙三醇、0.05～0.1mL/L的表面活性剂和0.5～2mL/L的防腐剂。

在优选的实施方式中，所述生长激素测定试剂盒含有本发明所述的磁微粒缓冲液。

在第五个方面，本发明提供了一种测定方法，所述方法含有使用本发明所述的磁微粒缓冲液的步骤。

在第六个方面，本发明还提供了一种生长激素测定方法，所述方法含有使用本发明所述的磁微粒缓冲液的步骤。

此外，还提供了本发明的磁微粒缓冲液在制备试剂盒中的用途。优选地，在制备用于生长激素测定试剂盒中的用途。

本发明的磁微粒缓冲液的有益效果在于，首先，分散性好，在自然重力条件下不易沉降，便于仪器取样，保证每一个测试样本中使用的磁微粒的用量均相同；其次，不易起泡，或者在磁微粒混匀过程中起泡后泡沫很快破裂，避免仪器空探导致的检测结果异常；再次，能够显著提高待测物的检测灵敏度。

具体实施方式

目前，用于磁微粒化学发光免疫分析的试剂中存在着分散性不好、易于起泡以及检测灵敏度低的问题，这些情况或多或少地会影响最终的测定结果。为了改善磁微粒化学发光免疫分析试剂的分散性、易于起泡及检测灵敏度，以使待测物的测定结果更加理想，本发明人尝试对已有的消泡剂、分散剂的种类及其用量选择和调整，并且对和其配合的缓冲体系进行选择，然而大多数选择和调整方式均未取得更为理想的效果。

在大量实验研究过程中，本发明人意外发现了“在特定的基础缓冲液中加入特定量的消泡剂、特定量的柠檬酸盐”这一组合方式在改善分散性及易于起泡的同时获得了更为理想的检测灵敏度。对此，我们推测这是由于这些物质使抗体蛋白保持了良好的空间结构和生物学活性，加之良好的磁珠分散性共同提高了检测的灵敏度。而且基础缓冲液中稳定剂和表面活性剂的使用能够进一步降低磁微粒沉降的风险。对此，我们推测这是由于稳定剂使磁微粒表面抗体蛋白空间结构稳定，减少磁微粒间蛋白互相粘连以及表面活性剂基团的定向排列共同降低了磁微粒的沉降。

据此，本发明提供了一种磁微粒缓冲液和包含该磁微粒缓冲液的试剂盒，其克服了目前磁微粒化学发光免疫分析试剂中存在的分散性不好、易于起泡的问题，同时该磁微粒缓冲液和包含该磁微粒缓冲液的试剂盒取得了出人意料的检测灵敏度的技术效果。

下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚的呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。

在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。由此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。

磁微粒

在本发明中，“磁微粒”是指可用作待标记物的载体以用于免疫学检测的微小实体的集合，其直径一般小于5微米。

在本发明中，可使用任何合适类型的磁微粒，只要其与样本中存在的待测物(例如抗原)特异性结合的物质(例如抗体)能够偶联即可。常见的磁微粒可例如为：胶乳(例如聚苯乙烯微球、壳聚糖微球、聚乳酸微球、聚丙烯酸微球和/淀粉微球等)、微球、磁珠。但本发明不限于此。

与待测物特异性结合的物质在本领域是众所周知的，例如，在一种孕酮测定试剂盒中，样本中的孕酮可作为待测物，在此情况下孕酮抗体可与本发明的磁微粒偶联。类似地，本领域技术人员知晓哪些物质可以与磁微粒进行偶联。

对于磁微粒的直径，本发明没有特别的限制，例如0.8μm～3μm范围内的直径都可用于本发明的试剂盒中。

消泡剂

在本发明中，消泡剂是指在磁微粒混匀过程中降低表面张力，抑制泡沫产生或消除已产生泡沫的试剂。

对于消泡剂的种类，可以为聚醚类消泡剂、硅类消泡剂中的一种，所述聚醚类消泡剂可以例如为GP型消泡剂、GPE型消泡剂、GPES型消泡剂，所述硅类消泡剂可例如为聚二甲基硅氧烷、硅油、硅酮类。

对于消泡剂的使用剂量，可以为0.005～0.08％(v/v)，优选为0.01～0.08％(v/v)。例如，所述消泡剂的量可以为0.005％、0.01％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％、0.035％、0.04％、0.045％、0.05％、0.055、0.06％、0.065％、0.07％、0.075％、0.08％。将消泡剂的量控制在0.005～0.08％(v/v)的范围内时可以有效地抑制泡沫产品或消除已产生泡沫。将消泡剂的量提高至0.01％(v/v)及以上可以更好的充分消除气泡对检测结果的影响，更好地避免仪器空探导致的检测结果异常。

分散剂

在本发明中，分散剂是指一种在分子内同时具有亲油性和亲水性两种相反性质的界面活性剂。可均一分散难溶解的无机或有机颜料固体及液体颗粒，同时也能防止颗粒的沉降和凝聚，形成安定悬浮液所需的两亲性试剂。

对于分散剂的种类，本发明优选为柠檬酸盐，所述柠檬酸盐选自柠檬酸钠盐、柠檬酸钾盐、柠檬酸镁盐和柠檬酸钙盐中的一种。所述柠檬酸钠盐可以例如为二水柠檬酸钠，所述柠檬酸钾盐可以例如为柠檬酸三钾，所述柠檬酸镁盐可以例如为柠檬酸镁，所述柠檬酸钙盐可以例如为柠檬酸钙。

对于柠檬酸盐的用量，可以为0.05～0.6mol/L，优选为0.1～0.6mol/L。例如，所述分散剂的量可以为0.05mol/L、0.1mol/L、0.15mol/L、0.2mol/L、0.25mol/L、0.3mol/L、0.35mol/L、0.4mol/L、0.45mol/L、0.5mol/L、0.55mol/L、0.6mol/L。将柠檬酸盐的量控制在0.05～0.6mol/L的范围内时可以有效地防止磁微粒的沉降和凝集。将柠檬酸盐的量提高至0.1mol/L及以上可以更好的防止磁微粒的沉降和凝集，便于仪器取样，更好的保证每一个测试样本中使用的磁微粒的用量均相同。

基础缓冲液

在本发明中，基础缓冲液是指具有盐平衡、PH缓冲、保护抗原抗体蛋白的结构和生物特性的作用，并能延长磁微粒溶液保存时间的缓冲液。

所述基础缓冲液含有pH值调节剂、渗透压调节剂、稳定剂、表面活性剂和防腐剂。本发明的基础缓冲液不仅可以使加入的消泡剂和分散剂更好的发挥各自的作用，同时还意外的提高了磁微粒试剂的检测灵敏度。

所述pH值调节剂，是指能在一定程度上抵消、减轻外加强酸或强碱对溶液酸碱度的影响，从而保持溶液的pH值相对稳定的试剂。

对于pH值调节剂的种类，本发明选自磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液、Tris缓冲液和HEPES缓冲液中的一种或多种。

对于pH值调节剂的用量，本领域技术人员可以根据pH值调节剂的种类进行选择，比如，在使用磷酸缓冲液时可以采用例如2～20g/L的浓度。

所述渗透压调节剂，是指在一定程度上对溶液进行稀释，维持溶液的离子浓度使其处于相对稳定平衡状态的试剂。

对于渗透压调节剂的种类，本发明选自氯化钠、氯化钾中的一种或多种。

对于渗透压调节剂的用量，本领域技术人员可以根据渗透压调节剂的种类进行选择，比如，在使用氯化钠时可以采用例如1～15g/L的浓度。

所述稳定剂，是指保持抗原抗体蛋白的空间结构稳定的试剂。

对于稳定剂的种类，本发明选自甘露醇、牛血清白蛋白、丙三醇、海藻糖、酪蛋白、聚乙烯吡咯烷酮和羟乙基淀粉中的一种或多种，优选为甘露醇、牛血清白蛋白和丙三醇的组合方式。

对于稳定剂的用量，本领域技术人员可以根据稳定剂的种类进行选择，比如在使用甘露醇、牛血清白蛋白和丙三醇作为稳定剂时，可以采用例如1～30g/L的甘露醇、2～20g/L的牛血清白蛋白和5-40mL/L的丙三醇。

所述表面活性剂，是指加入少量能够使其溶液体系的界面状态发生明显变化的物质；其具有固定的亲水亲油基团且在溶液的表面能够定向排列。

对于表面活性剂的种类，本发明可选自Tween、SPAN、曲拉通、EMULGEN系列表面活性剂(如吐温20、吐温40和曲拉通100)以及月桂酸聚乙二醇甘油酯、阴离子烷基多苷、十二烷基二甲基甜菜碱、3ARAMT1、SHO62C和AMPHITOL中的一种或几种。

对于表面活性剂的用量，本领域技术人员能够根据表面活性剂的种类进行选择，比如，在使用曲拉通100时可以采用例如0.05-0.1mL/L的浓度。

所述防腐剂，是指用来延长磁微粒溶液保存时间的试剂。

对于防腐剂的种类，本发明可选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙、二甲苯酚、尼泊金酯、高锰酸盐、抗生素类(如庆大霉素、二氯乙酰胺、SUPELCO公司推出的ProClin系列等)、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。

对于防腐剂的使用剂量，本领域技术人员能够根据防腐剂的种类进行选择，比如，在使用ProClin300时可以采用例如0.5-2mL/L的浓度。

试剂盒

本发明的试剂盒根据需要可包括容器、芯片、使用说明书、免疫助剂和/或用于进行结果判断所需的其他结构和/或试剂。

本发明的试剂盒中用于进行结果判断所需的其他结构包括但不限于，用于取样结构、用于进行对照结构和/或用于观察测定过程或结果的结构。

本发明的试剂盒中用于进行结果判断所需的其他试剂包括但不限于，洗涤剂、显色剂和/或终止剂，以及除本发明的分散剂、消泡剂、缓冲液外的其他分散剂、消泡剂、缓冲液。

本领域技术人员能够理解，本发明产生的磁微粒缓冲液可用于制备检测试剂盒，优选的，可用于制备免疫检测试剂盒，更优选的，可用于制备生长激素测定试剂盒，其中，免疫检测试剂盒可例如为胶乳免疫比浊试剂盒、荧光免疫检测试剂盒、化学发光检测试剂盒等。

例如，在一个实施方式中，本发明的磁微粒缓冲液可作为生长激素测定试剂盒中的测定试剂(R1)，在这种情况下，该测定试剂盒还可以包括用于与样本中待测物特异性结合的标记试剂(R2)、还可以包括用于制作工作曲线的校准品/校准物、还可以包括用于质控控制的质控品/质控物。

以下通过实施例更详细地说明本发明，但本发明不限于这些实施例。

实施例1基础缓冲液中的pH值调节剂的研究实验

表1 pH值调节剂的用量研究

实施例2基础缓冲液中渗透压调节剂的研究实验

表2渗透压调节剂的用量研究

实施例3基础缓冲液中稳定剂的研究实验(一)

表3甘露醇的用量研究

实施例4基础缓冲液中稳定剂的研究实验(二)

表4牛血清白蛋白的用量研究

实施例5基础缓冲液中稳定剂的研究实验(三)

表5丙三醇的用量研究

实施例6基础缓冲液中表面活性剂的研究实验

表6表面活性剂的用量研究

实施例7基础缓冲液中防腐剂的研究实验

表7防腐剂的用量研究

实施例8消泡剂和分散剂的配制

表8消泡剂和分散剂的配制

实施例9磁微粒缓冲液的制备

1.将实施例1和实施例8中所示组分按照所示含量混合以制备磁微粒缓冲液。

2.将实施例2和实施例8中所示组分按照所示含量混合以制备磁微粒缓冲液。

3.将实施例3和实施例8中所示组分按照所示含量混合以制备磁微粒缓冲液。

4.将实施例4和实施例8中所示组分按照所示含量混合以制备磁微粒缓冲液。

5.将实施例5和实施例8中所示组分按照所示含量混合以制备磁微粒缓冲液。

6.将实施例6和实施例8中所示组分按照所示含量混合以制备磁微粒缓冲液。

7.将实施例7和实施例8中所示组分按照所示含量混合以制备磁微粒缓冲液。

实施例10基础缓冲液效果验证实验

1.自然重力下的沉降实验

实验方法：取包被有hGH抗体的磁微粒7mL，分别使用按照实施例9中1、2、3、4、5、6、7的配方制备的磁微粒缓冲液洗涤3次，每次待上清液完全澄清后再移除上清液，再以磁微粒缓冲液重悬，混匀，平分为7份，每份1mL。隔一段时间取100μL上清液用多功能读数仪(Thermo)测定其在550nm处的吸光度值。结果如表9所示。

表9

结果显示：磁微粒在本发明磁微粒缓冲液中的自然沉降速率均较慢，且可以清晰的观察到自然沉降30min时，本发明磁微粒缓冲液中上清仍是混悬液，没有明显的分层界限。

2.免疫验证实验

实验方法：将包被有hGH抗体的磁微粒分别分散于按照实施例9中1、2、3、4、5、6、7的配方制备的磁微粒缓冲液中，结合试剂盒其他组分，采用迈克生物股份有限公司全自动化学发光免疫分析仪测定主校准品和50例临床样本，观察磁微粒缓冲液在免疫实验应用中是否有影响。结果如表10、表11所示。

表10

表11

结果显示：按照实施例9中1的配方制备的磁微粒缓冲液均不影响免疫反应性。

同样的，发明人将包被有hGH抗体的磁微粒分别分散于实施例9中2、3、4、5、6、7制备的磁微粒缓冲液中，结合试剂盒其他组分，采用迈克生物股份有限公司全自动化学发光免疫分析仪测定主校准品和50例临床样本，观察磁微粒缓冲液在免疫实验应用中是否有影响。结果同上表10、表11中类似。

3.消泡效果验证实验

对于大包装的化学发光磁微粒试剂，每次测定前均需对磁微粒组份进行混匀，当剩余体积较少时，磁微粒混匀后易产生气泡，导致随后测定过程中出现试剂针空探现象。为解决此类问题，我们以hGH免疫磁微粒为例，分别使用实施例9中1、2、3、4、5、6、7制备的磁微粒缓冲液，在迈克生物股份有限公司全自动化学发光免疫分析仪i3000上执行磁微粒混匀程序，5秒内裸眼观察起泡比例。结果如表12所示。

表12

结果显示：按照实施例9中1的配方制备的磁微粒缓冲液在磁珠混匀过程中几乎不产生气泡或者产生的气泡比例很低。

同样的，发明人以hGH免疫磁微粒为例，分别使用按照实施例9中2、3、4、5、6、7的配方制备的磁微粒缓冲液，在迈克生物股份有限公司全自动化学发光免疫分析仪i3000上执行磁微粒混匀程序，5秒内裸眼观察起泡比例，结果同上表12中类似。

4.灵敏度验证实验

实验方法：将包被有hGH抗体的免疫磁微粒分别分散于按照实施例9中1、2、3、4、5、6、7的配方制备的磁微粒缓冲液中，结合试剂盒其他组分，对零浓度校准品进行20次重复检测，平均值加2倍SD即试剂的空白限。然后对5份浓度接近最低检出限的样本进行检测，每份样本检测5次，计算检出限。观察实施例9中1、2、3、4、5、6、7制备的磁微粒缓冲液对检出限即灵敏度的影响。结果如表13所示。

表13

结果显示：按照实施例9中1的配方制备的磁微粒缓冲液均能提高灵敏度，当使用其中的配方2、配方3、配方4、配方5时，其灵敏度(LOD值)能够达到0.037。

同样的，将包被有hGH抗体的免疫磁微粒分别分散于按照实施例9中2、3、4、5、6、7的配方制备的磁微粒缓冲液中，结合试剂盒其他组分，对零浓度校准品进行20次重复检测，平均值加2倍SD即试剂的空白限。然后对5份浓度接近最低检出限的样本进行检测，每份样本检测5次，计算检出限。观察实施例9中2、3、4、5、6、7制备的磁微粒缓冲液对检出限即灵敏度的影响。结果同上表13中类似。

实施例11消泡剂的研究实验

表14

实施例12分散剂的研究实验

表15

实施例13消泡剂效果验证实验

1.自然重力下的沉降实验

实验方法：取包被有hGH抗体的磁微粒7mL，分别使用按照实施例11中的配方制备的磁微粒缓冲液洗涤3次，每次待上清完全澄清后再移除上清，再以磁微粒缓冲液重悬，混匀，平分为7份，每份1mL。隔一段时间取100μL上清液用多功能读数仪(Thermo)测定其在550nm处的吸光度值。结果如表16所示。

表16

2.免疫验证实验

实验方法：将包被有hGH抗体的磁微粒分别分散于按照实施例11的配方制备的磁微粒缓冲液中，结合试剂盒其他组分，采用迈克生物股份有限公司全自动化学发光免疫分析仪测定主校准品和50例临床样本，观察磁微粒缓冲液在免疫实验应用中是否有影响。结果如表17、表18所示。

表17

表18

结果显示：按照实施例11中的配方制备的磁微粒缓冲液均不影响免疫反应性。

3.消泡效果验证实验

对于大包装的化学发光磁微粒试剂，每次测定前均需对磁微粒组份进行混匀，当剩余体积较少时，磁微粒混匀后易产生气泡，导致随后测定过程中出现试剂针空探现象。为解决此类问题，我们以hGH免疫磁微粒为例，分别使用实施例11制备的磁微粒缓冲液，在迈克生物股份有限公司全自动化学发光免疫分析仪i3000上执行磁微粒混匀程序，5秒内裸眼观察起泡比例。结果如表19所示。

表19

结果显示：在本发明的基础缓冲液中，当消泡剂的含量在0.005～0.08％(v/v)范围时，其气泡比例明显低于0.002％(v/v)和0.1％(v/v)；而且当消泡剂的含量提高至0.01％(v/v)时，无气泡产生。

4.灵敏度验证实验

实验方法：将包被有hGH抗体的免疫磁微粒分别分散于按照实施例11的配方制备的磁微粒缓冲液中，结合试剂盒其他组分，对零浓度校准品进行20次重复检测，平均值加2倍SD即试剂的空白限。然后对5份浓度接近最低检出限的样本进行检测，每份样本检测5次，计算检出限。观察实施例11制备的磁微粒缓冲液对检出限即灵敏度的影响。结果如表20所示。

表20

结果显示：本发明配方制备的磁微粒缓冲液能够显著提高检测灵敏度，其灵敏度(LOD值)能够达到0.034，相对的，而配方1、配方5的灵敏度(LOD值)为0.041、0.040。

实施例14分散剂效果验证试验

1.自然重力下的沉降实验

实验方法：取包被有hGH抗体的磁微粒7mL，分别使用按照实施例12中的配方制备的磁微粒缓冲液洗涤3次，每次待上清完全澄清后再移除上清，再以磁微粒缓冲液重悬，混匀，平分为7份，每份1mL。隔一段时间取100μL上清液用多功能读数仪(Thermo)测定其在550nm处的吸光度值。结果如表21所示。

表21

2.免疫验证实验

实验方法：将包被有hGH抗体的磁微粒分别分散于按照实施例12制备的磁微粒缓冲液中，结合试剂盒其他组分，采用迈克生物股份有限公司全自动化学发光免疫分析仪测定主校准品和50例临床样本，观察磁微粒缓冲液在免疫实验应用中是否有影响。结果如表22、表23所示。

表22

表23

结果显示：按照实施例12中的配方制备的磁微粒缓冲液均不影响免疫反应性。

3.消泡效果验证实验

对于大包装的化学发光磁微粒试剂，每次测定前均需对磁微粒组份进行混匀，当剩余体积较少时，磁微粒混匀后易产生气泡，导致随后测定过程中出现试剂针空探现象。为解决此类问题，我们以hGH免疫磁微粒为例，分别使用实施例12制备的磁微粒缓冲液，在迈克生物股份有限公司全自动化学发光免疫分析仪i3000上执行磁微粒混匀程序，5秒内裸眼观察起泡比例。结果如表24所示。

表24

结果显示：在本发明的基础缓冲液中，当分散剂的含量在0.05～0.6mol/L范围时，其气泡比例明显低于0.02mol/L和0.8mol/L；而且分散剂的含量提高至0.1mol/L时，无气泡产生。

4.灵敏度验证实验

实验方法：将包被有hGH抗体的免疫磁微粒分别分散于按照实施例12的配方制备的磁微粒缓冲液中，结合试剂盒其他组分，对零浓度校准品进行20次重复检测，平均值加2倍SD即试剂的空白限。然后对5份浓度接近最低检出限的样本进行检测，每份样本检测5次，计算检出限。观察实施例12制备的磁微粒缓冲液对检出限即灵敏度的影响。结果如表25所示。

表25

结果显示：本发明配方制备的磁微粒缓冲液能够显著提高检测灵敏度，其灵敏度(LOD值)能够达到0.034，相对的，而配方1、配方5的灵敏度(LOD值)为0.042、0.041。

应该理解到披露的本发明不仅仅限于描述的特定的方法、方案和物质，因为这些均可变化。还应理解这里所用的术语仅仅是为了描述特定的实施方式方案的目的，而不是意欲限制本发明的范围，本发明的范围仅受限于所附的权利要求。

本领域的技术人员还将认识到，或者能够确认使用不超过常规实验，在本文中所述的本发明的具体的实施方案的许多等价物。这些等价物也包含在所附的权利要求中。

Claims

1.一种磁微粒缓冲液，其中，所述磁微粒缓冲液含有基础缓冲液、0.005％～0.08％(v/v)的消泡剂和0.05mol/L～0.6mol/L的柠檬酸盐；

所述消泡剂为Antifoam SE-15；

所述磁微粒为用于生长激素测定的磁微粒；

所述柠檬酸盐为柠檬酸钠盐；

所述基础缓冲液含有2g/L～20g/L的pH值调节剂、1g/L～15g/L的渗透压调节剂、1g/L～30g/L的甘露醇、2g/L～20g/L的牛血清白蛋白、5mL/L-40mL/L的丙三醇、0.05mL/L～0.1mL/L的表面活性剂和0.5mL/L～2mL/L的防腐剂。

2.根据权利要求1所述的磁微粒缓冲液，其中，所述磁微粒缓冲液含有基础缓冲液、0.01％～0.08％(v/v)的消泡剂和0.1mol/L～0.6mol/L的柠檬酸盐。

3.一种生长激素测定试剂盒，其中，所述试剂盒含有权利要求1～2任一项所述的磁微粒缓冲液。

4.权利要求1～2任一项所述的磁微粒缓冲液在制备用于生长激素测定试剂盒中的用途。

5.一种生长激素的测定方法，其中，所述方法含有使用权利要求1-2任一项所述的磁微粒缓冲液的步骤。