CN111007263B - 一种检测试剂盒及检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种检测试剂盒，所述试剂盒包括彼此独立的试剂1、试剂2和试剂3，所述试剂1中包含单克隆抗体1，所述试剂2中包含单克隆抗体2，所述试剂3中包含抗体3，所述单克隆抗体1、所述单克隆抗体2和所述抗体3针对同一待测抗原，所述抗体3和所述单克隆抗体2针对待测抗原的不同表位，所述抗体3和所述单克隆抗体1针对待测抗原的相同表位或不同表位。本发明还公开了所述检测试剂盒用于检测待测抗原的方法，该方法不需要引入样本稀释程序，操作简便快速，检测结果准确，而且能够实现全量程检测。

Description

一种检测试剂盒及检测方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测试剂盒及检测方法。
背景技术
C反应蛋白(C-reactiveprotein，CRP)是急性时相反应蛋白之一，1930年美国洛克菲勒研究院AVERY实验室的Tillett和Fransic发现急性感染患者的血清能和肺炎双球菌细胞壁上的C多糖发生沉淀反应，后证实参与反应的是一种蛋白质，故称之为C反应蛋白。
在组织损伤的急性期，肝脏合成的一些血浆蛋白显著增加，这些蛋白质通常称为急性时相蛋白，其中CRP是急性时相蛋白中变化最显著的一种。CRP在正常人血清中含量极微，在组织受到损伤、炎症、感染或肿瘤破坏时CRP可以在数小时内急剧上升，可增高数倍或数百倍，2～3天达峰值，待病情改善时逐渐下降，恢复正常。CRP被广泛用于临床疾病的早期诊断及鉴别诊断，其升高可见于：组织损伤、感染、肿瘤、心肌梗塞及一系列急慢性炎症性疾病，如风湿性关节炎、全身性血管炎、多肌痛风湿病；术后感染及并发症的指标，提示可能并发感染或血栓栓塞，可作为细菌性感染和病毒性感染的鉴别诊断：大多数细菌性感染会引起患者血清CRP升高，而病毒性感染则多数不升高。通常情况下，新生儿血清CRP<2mg/L，儿童和正常成年人血清中CRP≤10mg/L。临床常规方法测定CRP的方法有免疫沉淀法、免疫浊度法、标记免疫法等，其中以免疫浊度法最常用，检测的线性范围一般为3～200mg/L，可用于评价感染、组织损伤和炎症性疾病。
超敏C反应蛋白(hypersensitive-CRP，hs-CRP)与普通CRP属同一种蛋白，只是由于其测定方法更敏感而得名。大量研究发现，超敏C反应蛋白是区分低水平炎症状态的灵敏指标，可作为心血管疾病风险识别的辅助手段。近年来，检测hs-CRP的方法有胶乳增强的免疫散色比浊法、免疫透射比浊法、免疫发光法和速率散射免疫比浊法等，检测低限可至0.005～0.10mg/L，使得低浓度CRP(如0.15～10mg/L)的测定更加准确。
由于普通CRP有较高的线性但灵敏度不好，hs-CRP有较高的灵敏度但线性较低，这样就出现了同一种待检物质，两种检测名称。近几年，随着检测技术的发展，开始出现一种全量程C反应蛋白检测试剂盒，能同时满足高灵敏度和高线性范围。目前国内主流全量程C反应蛋白检测试剂盒与全自动生化分析仪配套使用的主要有胶乳增强免疫比浊、免疫散色比浊和化学发光法。
化学发光法因灵敏度高、特异性好，线性范围宽被广泛应用于蛋白质、激素、肿瘤标志物的体外诊断。在发明名称为“一种C反应蛋白磁微粒检测试剂盒及其使用方法”的中国专利申请CN201710861832.6中介绍了一种检测全量程CRP的磁微粒化学发光试剂盒，在0.22～237mg/L范围内理论值与检测值有较好的相关性，但需要对待检样本进行连续2次稀释操作，把样本稀释100倍后进行检测。另外，西门子公司的高灵敏度C反应蛋白测定试剂盒(化学发光法)，在0.2～100mg/L范围内具有较好的相关性，同样需要把样本稀释100倍后进行检测。由于炎症患者血清中CRP的含量较高，若用化学发光法对CRP进行全量程检测，通常需要对样本进行一定比例的稀释，然后再检测。在检测中引入稀释程序，会导致检测通量变小，出结果时间延长，检测程序繁琐和基质效应等。如果在化学发光平台能直接检测样本原液，又能实现全量程的要求，则能大大的提高检测效率和准确度。
专利文献1：申请号CN 201710861832.6，公开号CN 107656043A。
发明内容
本发明要解决的技术问题是采用化学发光法检测全量程待测抗原时需要对待检样本进行稀释、操作繁琐、通量低的问题。
为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：
第一方面，本发明提供一种检测试剂盒。
作为本发明的一种具体实施方式，本发明的检测试剂盒包括彼此独立的试剂1、试剂2和试剂3，所述试剂1中包含单克隆抗体1，所述试剂2中包含单克隆抗体2，所述试剂3中包含抗体3，所述单克隆抗体1、所述单克隆抗体2和所述抗体3针对同一待测抗原，所述抗体3和所述单克隆抗体2针对待测抗原的不同表位，所述抗体3和所述单克隆抗体1针对待测抗原的相同表位或不同表位。
作为本发明的一种具体实施方式，所述试剂1中的单克隆抗体1与所述试剂3中的抗体3的浓度比为(0.4～8):(50～200)。
作为本发明的一种具体实施方式，所述试剂1中的单克隆抗体1、所述试剂2中的单克隆抗体2以及所述试剂3中的抗体3的浓度比为(0.4～8):(0.05～0.8):(50～200)。
作为本发明的一种具体实施方式，所述待测抗原为C反应蛋白。
作为本发明的一种具体实施方式，所述试剂1中包含抗C反应蛋白单克隆抗体，所述试剂2中包含标记物标记的抗C反应蛋白单克隆抗体，所述试剂3中包含抗C反应蛋白抗体；优选地，所述试剂3中包含抗C反应蛋白单克隆抗体。
作为本发明的一种具体实施方式，所述试剂1中包含抗C反应蛋白单克隆抗体0.4～8μg/ml，所述抗C反应蛋白单克隆抗体包被在磁微粒上；所述试剂2中包含标记物标记的抗C反应蛋白单克隆抗体0.05～0.8μg/ml；所述试剂3中包含抗C反应蛋白单克隆抗体50～200μg/ml。
作为本发明的一种具体实施方式，所述试剂1中的抗C反应蛋白单克隆抗体包被在磁微粒上，所述磁微粒包括链霉亲和素磁微粒、甲苯磺酰基磁微粒、羧基磁微粒和氨基磁微粒等。
作为本发明的一种具体实施方式，所述标记物选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和吖啶类标记物中的一种，优选为吖啶酯或吖啶磺酰胺。
作为本发明的一种具体实施方式，所述试剂1、所述试剂2和所述试剂3中还分别包含缓冲液、无机盐、表面活性剂和/或防腐剂；
作为本发明的另一个具体实施方式，所述试剂1、所述试剂2和所述试剂3中还分别包含缓冲液、无机盐、助悬剂、稳定剂、表面活性剂和/或防腐剂。
优选地，所述缓冲液选自PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、MOPS缓冲液、MES缓冲液、Hepes缓冲液、硼酸缓冲液、醋酸盐缓冲液和氯化铵缓冲液中的一种或多种；和/或
优选地，所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁、氯化锌和氯化钙中的一种或多种；和/或
优选地，所述助悬剂选自葡萄糖、壳聚糖、山梨醇、海藻糖、果糖、蔗糖中的一种或多种；和/或
优选地，所述稳定剂选自牛血清白蛋白、酪蛋白、脱脂奶粉、甘露醇和丙三醇中的一种或多种；和/或
优选地，所述表面活性剂选自Triton、Tween20、Tween80、NP40、thesit和BrijL23中的一种或多种；和/或
所述防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸和PC系列防腐剂中的一种或多种。
作为本发明的一种优选的具体实施方式，本发明提供一种C反应蛋白的检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1、试剂R2和试剂R3三种液体组分，每种试剂包含的成分及相应含量为：
注：所述试剂1中，抗C反应蛋白单克隆抗体包被在磁微粒上。
作为本发明的一种更优选的具体实施方式，本发明提供一种C反应蛋白的检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1、试剂R2和试剂R3三种液体组分，每种试剂包含的成分及相应含量为：
第二方面，本发明还提供一种本发明的所述试剂盒用于检测待测抗原的方法。
作为本发明的一种具体实施方式，本发明的所述试剂盒用于检测待测抗原的方法包括以下步骤：
(1)将待测样本与试剂1和试剂3混合，使其充分反应；
(2)洗涤后，加入试剂2，充分反应形成抗体抗原抗体免疫复合物；
(3)第二次洗涤后加入发光底物，测定反应后的相对发光值；
(4)根据相对发光值计算出样本中的待测抗原的浓度。
作为本发明的一种具体实施方式，步骤(1)中，所述待测样本与试剂1和试剂3的总体积的体积比在(1:10)～(1:20)之间；优选地，试剂1与试剂3的体积比为1:(1～2)。
作为本发明的一种具体实施方式，步骤(2)中，试剂2的加入量为试剂1加入量的1～2倍体积；优选地，以与试剂1等体积加入
样本中C反应蛋白的浓度(mg/L)通过四参数拟合的方式计算检测相对发光值在校准曲线上的浓度值。
本发明具有以下有益效果：本发明公开了一种检测试剂盒，尤其涉及全量程C反应蛋白(CRP+hsCRP)的检测试剂盒(直接化学发光法)。然而，本发明的检测试剂盒不仅限于C反应蛋白的检测试剂盒，同样适用制备成用于检测其他待测样本的检测试剂盒，比如总类风湿因子的检测试剂盒、抗类风湿因子的IgA抗体的检测试剂盒、抗类风湿因子的IgG抗体的检测试剂盒、抗类风湿因子的IgM抗体的检测试剂盒等。以检测C反应蛋白为例，发明人意外发现，在试剂3中添加抗C反应蛋白抗体，可以有效增大检测的线性范围；进一步的，可直接检测待测样本中的C反应蛋白，省去了样本的稀释步骤；避免了用样本稀释液稀释样本带来的基质效应；简化步骤的同时提高了检测的准确度。中华人民共和国医药行业标准(YY/T1513-2017)规定全量程C反应蛋白测定试剂盒线性区间不窄于[0.5,80](mg/L)；超敏C反应蛋白测定试剂盒线性区间不窄于[0.5,10](mg/L)。通过调整本发明各成分使用量，可以保证试剂盒的线性区间达到0.01～200mg/L，远远超过了行业标准，实现了全量程检测的同时又保证了超敏检测。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步说明，应该理解的是，本发明实施例仅仅是用于说明本发明，而不是本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
在以下实施例中使用的主要仪器、主要原材料和缓冲液。
主要仪器：
i3000全自动化学发光免疫分析仪(迈克电子)
主要原料及耗材：
生物素酯(Thermo Scifntific)
吖啶酯(深圳市美凯特科技有限公司)
磁微粒(Dynabeads MyOne Streptavidin T1,Invitrogen,Cat No.656.01)
磁微粒(JSR Streptavidin)
脱盐柱(Zeba Spin Desalting Columns andPlates,Thermo Scifntific,CatNo.89883)
C反应蛋白单克隆抗体-1(杭州博茵生物技术有限公司，货号M010101)
C反应蛋白单克隆抗体-2(四川迈克生物科技股份有限公司，货号XCL1145)
C反应蛋白单克隆抗体-3(杭州博茵生物技术有限公司，货号M010102)；该C反应蛋白单克隆抗体-3识别的抗原表位与C反应蛋白单克隆抗体-1和C反应蛋白单克隆抗体-2均不相同。
C反应蛋白单克隆抗体-4(四川迈克生物科技股份有限公司，货号XCL1749)；该C反应蛋白单克隆抗体-4识别的抗原表位与C反应蛋白单克隆抗体-1、C反应蛋白单克隆抗体-2和C反应蛋白单克隆抗体-3均不相同。
C反应蛋白(BBI,CatNo.PP100-7N)
C反应蛋白多克隆抗体-1(四川迈克生物科技股份有限公司，货号47872900)
C反应蛋白多克隆抗体-2(四川迈克生物科技股份有限公司，货号Q0329)
缓冲液：
磁微粒保护液(10mM PBS，0.5mol/L NaCl，10g/L BSA，20g/L甘露醇，10g/L丙三醇，0.1g/L TX-100，1g/L PC-300)
标记物保护液(10mM PBS，0.5mol/LNaCl，10g/L酪蛋白，10g/L海藻糖，10g/L丙三醇，0.1g/L TX-100，1g/LPC-300)
校准品保护液(10mM PBS，0.5mol/LNaCl，10g/L酪蛋白，20g/L海藻糖，10g/L丙三醇，0.1g/L TX-100，1g/LPC-300)
实施例1：
1.按照如下方法制备C反应蛋白的检测试剂盒
(1)配制试剂1(R1)
取生物素标记的C反应蛋白单克隆抗体-1与链霉亲和素磁微粒进行混合，反应30min后，清洗；加入磁微粒保护液使C反应蛋白单克隆抗体-1的终浓度为0.8μg/ml，得到试剂1(R1)。
(2)配制试剂2(R2)
取标记物保护液，加入吖啶标记的C反应蛋白单克隆抗体-2，稀释，使C反应蛋白单克隆抗体-2的终浓度为0.4μg/ml，混匀得到试剂2(R2)。
(3)配制试剂3(R3)
取磁微粒保护液，加入C反应蛋白单克隆抗体-1，使C反应蛋白单克隆抗体-1的终浓度为120μg/ml，混匀得到试剂3(R3)。
(4)主校准品配制
使用校准品保护液将C反应蛋白稀释成如下浓度：200mg/L、100mg/L、50mg/L、25mg/L、12.5mg/L、6.25mg/L、3.125mg/L、1.56mg/L、0.78mg/L、0.39mg/L、0.20mg/L、0.10mg/L、0.05mg/L、0.03mg/L。
2.检测步骤
(1)加入10μl样本，然后加入50μl试剂1(R1)和50μl试剂3(R3)，37℃孵育10min，清洗3次；
(2)加入100μl试剂2(R2)，孵育10min，洗涤3次；
(3)加入发光底物，用全自动化学发光免疫分析仪检测信号值，测定反应后的相对发光值；
(4)根据相对发光值计算出样本中的C反应蛋白的浓度。
本实施例的试剂盒的检测范围为0.03～200mg/L。
实施例2：
在实施例1的基础上，保持试剂2(R2)和试剂3(R3)不变，试剂1(R1)中生物素化C反应蛋白单克隆抗体-1的工作浓度调整为0.4μg/ml。
使用与实施例1相同的反应模式检测主校准品，结果试剂盒的检测范围为0.01～200mg/L。
实施例3：
在实施例1的基础上，保持试剂2(R2)和试剂3(R3)不变，试剂1(R1)中生物素化C反应蛋白单克隆抗体-1的工作浓度调整为3.2μg/ml。
使用与实施例1相同的反应模式检测主校准品，结果试剂盒的检测范围为0.01～100mg/L。
实施例4：
在实施例1的基础上，保持试剂1(R1)和试剂2(R2)不变，试剂3(R3)中C反应蛋白单克隆抗体-1的工作浓度调整为50μg/ml。
试剂3(R3)的配制：取25ml磁微粒保护液，加入C反应蛋白单克隆抗体-1 1.25mg，使终浓度为50μg/ml，混匀得到试剂3(R3)。
使用与实施例1相同的反应模式检测主校准品，结果试剂盒的检测范围为0.01～100mg/L。
实施例5：
在实施例1的基础上，保持试剂1(R1)和试剂2(R2)不变，试剂3(R3)中C反应蛋白单克隆抗体-1的工作浓度调整为200μg/ml。
试剂3(R3)的配制：取25ml磁微粒保护液，加入5mg C反应蛋白单克隆抗体-1，使终浓度为200μg/ml，混匀得到试剂3(R3)。
使用与实施例1相同的反应模式检测主校准品，结果试剂盒的检测范围为0.03～200mg/L。
实施例6：
在实施例1的基础上，保持试剂3(R3)不变，试剂1(R1)的生物素化C反应蛋白单克隆抗体-1工作浓度调整为3.2μg/ml，试剂2(R2)中吖啶标记C反应蛋白单克隆抗体-2的工作浓度调整为0.05μg/ml。
以上试剂，使用相同的反应模式检测主校准品，结果试剂盒的检测范围为0.05～100mg/L。
实施例7：
在实施例1的基础上，保持试剂1(R1)和试剂3(R3)不变，试剂2(R2)中吖啶标记C反应蛋白单克隆抗体-2的工作浓度调整为0.8μg/ml。
以上试剂，使用相同的反应模式检测主校准品，结果试剂盒的检测范围为0.03～200mg/L。
实施例8：
在实施例1的基础上，保持试剂2(R2)和试剂3(R3)不变，试剂1(R1)中生物素化C反应蛋白单克隆抗体-1的工作浓度不变0.8μg/ml，把磁微粒(Dynabeads，1.0μm)更换成磁微粒(JSR,1.5μm)，其余条件保持不变。
以上试剂，使用相同的反应模式检测主校准品，结果试剂盒的检测范围为0.03～200mg/L。
实施例9：
在实施例1的基础上，保持试剂1(R1)、试剂2(R2)和试剂3(R3)不变，检测过程中把样本的加样量更改为5μl，其余条件不变，检测主校准品，结果该试剂盒的检测范围为0.05～200mg/L。
实施例10：
在实施例1的基础上，保持试剂1(R1)、试剂2(R2)和试剂3(R3)不变，检测过程中把样本的加样量更改为20μl，其余条件不变，检测主校准品，结果该试剂盒的检测范围为0.01～100mg/L。
实施例11：
在实施例1的基础上，保持试剂1(R1)和试剂2(R2)不变，试剂3(R3)中C反应蛋白单克隆抗体-1换成与固相包被抗体和吖啶标记抗体不同的另一个抗体“C反应蛋白单克隆抗体-3”，工作浓度为200μg/ml。
以上试剂，使用相同的反应模式检测主校准品，结果试剂盒的检测范围为0.03～100mg/L。
实施例12：
在实施例1的基础上，保持试剂1(R1)和试剂2(R2)不变，试剂3(R3)中C反应蛋白单克隆抗体-1换成与固相包被抗体和吖啶标记抗体不同的另一个抗体“C反应蛋白单克隆抗体-4”，工作浓度为50μg/ml。
以上试剂，使用相同的反应模式检测主校准品，结果试剂盒的检测范围为0.03～200mg/L。
比较例1：
在实施例1的基础上，保持试剂2(R2)和试剂3(R3)不变，试剂1(R1)中生物素化C反应蛋白单克隆抗体-1的工作浓度下调为0.2μg/ml。
以上试剂，使用相同的反应模式检测主校准品，结果当试剂1(R1)的工作浓度下调为0.2μg/ml时，试剂盒的检测范围为0.03～50mg/L。
比较例2：
在实施例3的基础上，保持试剂2(R2)和试剂3(R3)不变，试剂1(R1)中生物素化C反应蛋白单克隆抗体-1的工作浓度上调为6.4μg/ml。
以上试剂，使用相同的反应模式检测主校准品，结果当试剂1(R1)的工作浓度上调为6.4μg/ml时，试剂盒的检测范围为0.03～50mg/L。
比较例3：
在实施例1的基础上，保持试剂1(R1)和试剂2(R2)不变，试剂3(R3)中去掉C反应蛋白单克隆抗体-1，使用相同的反应模式检测主校准品。结果，当试剂中不使用游离C反应蛋白单克隆抗体-1时，试剂盒的检测范围为0.01～0.8mg/L。
比较例4：
在实施例1的基础上，保持试剂1(R1)和试剂2(R2)不变，试剂3(R3)中C反应蛋白单克隆抗体-1的工作浓度下调为20μg/ml。
以上试剂，使用相同的反应模式检测主校准品，结果试剂盒的检测范围为0.01～6mg/L。
比较例5：
在实施例1的基础上，保持试剂1(R1)和试剂2(R2)不变，试剂3(R3)中C反应蛋白单克隆抗体-1换成与吖啶标记物相同的抗体“C反应蛋白单克隆抗体-2”，工作浓度为120μg/ml。
以上试剂，使用相同的反应模式检测主校准品，结果试剂盒的检测范围为0.05～50mg/L。
比较例6：
在实施例6的基础上，保持试剂1(R1)和试剂3(R3)不变，试剂2(R2)中吖啶标记C反应蛋白单克隆抗体-2的工作浓度下调为0.025μg/ml。
以上试剂，使用相同的反应模式检测主校准品，结果试剂盒的检测范围为0.2～100mg/L。
比较例7：
在实施例1的基础上，保持试剂1(R1)和试剂3(R3)不变，试剂2(R2)中吖啶标记C反应蛋白单克隆抗体-2的工作浓度上调为1.6μg/ml。
以上试剂，使用相同的反应模式检测主校准品，结果试剂盒的检测范围为0.03～50mg/L。
比较例8：
在实施例1的基础上，保持试剂1(R1)和试剂2(R2)不变，试剂3(R3)中C反应蛋白单克隆抗体-1换成C反应蛋白多克隆抗体-1，工作浓度为120μg/ml。
比较例9：
在实施例1的基础上，保持试剂1(R1)和试剂2(R2)不变，试剂3(R3)中C反应蛋白单克隆抗体-1换成C反应蛋白多克隆抗体-1，工作浓度为120μg/ml。
使用实施例2～12、比较例1～9，采用实施例1中的检测步骤对不同浓度的主校准品进行检测，结果如下表1所示。
表1
因此，从实施例1、实施例11、实施例12、比较例3和比较例5可以看出，当试剂3(R3)中加入游离抗体，并且游离抗体与试剂2(R2)中的单抗为针对同一待测抗原不同表位的抗体，试剂3(R3)中的游离抗体与试剂1(R1)中的单抗相同或不同时，均可直接检测待测样本中的C反应蛋白，省去了样本的稀释步骤；避免了用样本稀释液稀释样本带来的基质效应；并且检测的线性范围较宽，远远超出了行业标准；当试剂3(R3)中的游离抗体与试剂2(R2)中的单抗为针对同一待测抗原相同表位的抗体时，通过直接检测待测样本的C反应蛋白，其检测的线性范围窄，不能达到行业标准。
从比较例8和比较例9可以看出，当试剂3(R3)中的游离抗体为多克隆抗体时，检测结果的信号值变化倍数与浓度倍比存在不符，影响检测准确性。
从实施例1～7，比较例1～2、4和6～7看出，在使用的试剂3(R3)中的游离抗体与试剂2(R2)中的单抗为针对同一待测抗原不同表位的单抗，试剂3(R3)中的游离抗体与试剂1(R1)中的单抗相同或不同时，并且试剂1(R1)、试剂2(R2)、试剂3(R3)加入合适量的单抗时，可直接检测待测样本中的C反应蛋白，不进行稀释处理，避免了稀释带来的基质效应；简化步骤的同时提高了检测的准确度；并且只有在适合的使用量的条件下，才能保证检测限定范围远远超过行业标准，实现C反应蛋白的全量程检测的同时也保证超敏检测的准确性。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (10)

1.一种检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括彼此独立的试剂1、试剂2和试剂3，
所述试剂1中包含单克隆抗体1，其中所述单克隆抗体1为抗C反应蛋白单克隆抗体，且所述抗C反应蛋白单克隆抗体包被在磁微粒上，
所述试剂2中包含单克隆抗体2，其中所述单克隆抗体2为标记物标记的抗C反应蛋白单克隆抗体，
所述试剂3中包含抗体3，其中所述抗体3为抗C反应蛋白单克隆抗体，
所述单克隆抗体1、所述单克隆抗体2和所述抗体3针对同一待测抗原，
所述抗体3和所述单克隆抗体2针对待测抗原的不同表位，
所述抗体3和所述单克隆抗体1针对待测抗原的相同表位或不同表位，
所述试剂1中的单克隆抗体1与所述试剂3中的抗体3的浓度比为(0 .4～8):(50～200)，
所述试剂1中的单克隆抗体1、所述试剂2中的单克隆抗体2以及所述试剂3中的抗体3的浓度比为(0 .4～8):(0 .05～0 .8):(50～200)，
所述待测抗原为C反应蛋白。
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述磁微粒选自链霉亲和素磁微粒、甲苯磺酰基磁微粒、羧基磁微粒和氨基磁微粒中的一种。
3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述标记物选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和吖啶类标记物中的一种。
4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述标记物为吖啶酯或吖啶磺酰胺。
5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，
所述试剂1包含缓冲液、无机盐、表面活性剂和防腐剂，
所述试剂2包含缓冲液、无机盐、表面活性剂和防腐剂，和
所述试剂3包含缓冲液、无机盐、表面活性剂和防腐剂。
6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液选自PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、MOPS缓冲液、MES缓冲液、Hepes缓冲液、硼酸缓冲液、醋酸盐缓冲液和氯化铵缓冲液中的一种或多种。
7.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁、氯化锌和氯化钙中的一种或多种；所述表面活性剂选自Triton、Tween20、Tween80、NP40、Thesit和BrijL23中的一种或多种；和/或，所述防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸和PC系列防腐剂中的一种或多种。
8.权利要求1-7中任一项所述的检测试剂盒中的试剂1、试剂2和试剂3在制备用于检测待测抗原试剂盒中的用途，其特征在于，所述检测包括如下步骤：
(1)将待测样本与试剂1和试剂3混合，使其充分反应；
(2)洗涤后，加入试剂2，充分反应形成抗体抗原抗体免疫复合物；
(3)第二次洗涤后加入发光底物，测定反应后的相对发光值；
(4)根据相对发光值计算出样本中的待测抗原的浓度。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，步骤(1)中，所述待测样本与试剂1和试剂3的总体积的体积比在(1:10)～(1:20)之间。
10.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，试剂1与试剂3的体积比为1:(1～2)。
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