CN109709323A - 高敏心肌肌钙蛋白i磁微粒化学发光免疫检测试剂盒、制备方法及用途 - Google Patents

Abstract

本申请提供一种高敏心肌肌钙蛋白I(hs‑cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2、磁微粒工作液和cTnI抗原校准品，其中该试剂R1包含生物素标记的抗cTnI多克隆抗体，该试剂R2包含两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体，该磁微粒工作液包含链霉亲和素磁珠。该试剂盒还可包括H₂O₂溶液和碱溶液。本申请还提供了该试剂盒的制备方法和用途。本申请的试剂盒能对cTnI抗原的多个表位进行识别，大大提高了心肌肌钙蛋白I化学发光免疫检测试剂盒的分析灵敏度和精密度。

Description

高敏心肌肌钙蛋白I磁微粒化学发光免疫检测试剂盒、制备方 法及用途

技术领域

本发明涉及医疗检测技术领域，特别是磁微粒化学发光免疫检测技术领域，具体涉及一种高敏心肌肌钙蛋白I磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和用途。

背景技术

肌钙蛋白(troponin,Tn)复合物由肌钙蛋白I、肌钙蛋白T、肌钙蛋白C组成，能调节肌肉收缩。心肌肌钙蛋白I(cardiactroponin I,cTnI)是存在于心肌细胞中的一种肌钙蛋白I异构体，具有高度的心肌特异性，可用于鉴别心肌损伤和骨骼肌损伤相关的临床情形。急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)是目前威胁人类生命的主要疾病之一。当心肌梗死或缺血而使心肌细胞受损时，cTnI迅速透过心肌细胞膜进入血液。因此，在发病初期，快速、灵敏且准确地测定人血中的cTnI及其变化趋势，对于急性心肌梗死的诊断和治疗有着重要的临床意义。

cTnI作为心肌损伤的首选标志物，目前临床检测常用的方法是化学发光免疫分析法，且目前主要采用磁微粒化学发光法，而发光方式则有酶促化学发光和直接化学发光两种。按照分析灵敏度和精密度的不同，cTnI化学发光免疫分析又可分为传统cTnI化学发光免疫分析和高敏cTnI(hs-cTnI)化学发光免疫分析。传统cTnI化学发光免疫分析的灵敏度为0.04-0.20ng/mL，而高敏化学发光免疫分析的灵敏度高达2.5pg/mL。传统cTnI化学发光免疫分析由于分析灵敏度的限制，在心肌梗死发病后4-6小时之内不能检测出cTnI浓度的变化，作出诊断则通常需要7小时。而高敏cTnI化学发光免疫分析在3-4小时之内即可作出诊断，未来更是可能研发出可在病人心肌梗死发病后1小时内作出诊断的高敏cTnI化学发光免疫分析仪器和试剂，将极大地促进急性心肌梗死的早诊断早治疗，为挽救病人的生命赢得宝贵的时间，降低心肌梗死对病人心脏的永久性损伤。

目前，国产仪器和试剂已经占领了传统cTnI化学发光免疫分析领域相当的份额，而在高敏cTnI化学发光免疫分析领域仍然被国外厂家如罗氏、雅培、西门子、贝克曼所垄断，这是因为目前国产cTnI化学发光免疫分析试剂在分析灵敏度和精密度方面与高敏cTnI化学发光免疫分析的要求还有相当的距离。因此，开发研制出国产的分析灵敏度高和精密度高的高敏cTnI化学发光免疫分析试剂极为必要。

发明内容

本发明旨在提供分析灵敏度高和精密度高的高敏cTnI化学发光免疫分析试剂盒，实现高敏cTnI化学发光免疫分析试剂的进口替代。

因此，在一个方面，本发明提供一种高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2、磁微粒工作液和cTnI抗原校准品，其中该试剂R1包含生物素标记的抗cTnI多克隆抗体，该生物素标记的抗cTnI多克隆抗体溶于捕获抗体稀释液中；该试剂R2包含两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体，该两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体的质量比为1:1，溶于标记抗体稀释液中；该磁微粒工作液包含链霉亲和素磁珠，该链霉亲和素磁珠溶于磁珠稀释液中。

该生物素标记的抗cTnI多克隆抗体作为捕获抗体，该两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体作为标记抗体。

在本发明的具体实施方案中，试剂R1包含生物素标记的抗cTnI多克隆抗体和捕获抗体稀释液，生物素标记的抗cTnI多克隆抗体在试剂R1中的浓度为0.4-2μg/mL，捕获抗体稀释液包含10-150mM Na₂HPO₄、10-150mM KH₂PO₄、50-200mM NaCl、50-200mM KCl、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.01-0.2％(v/v)ProClin300、0.05％-0.2％(v/v)Tween-20，pH6.50-8.50。

在本发明的具体实施方案中，试剂R2包含两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体和标记抗体稀释液，两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体在试剂R2中的浓度为0.1-5μg/mL，标记抗体稀释液包含10-150mM 2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.01-0.2％(v/v)ProClin300、0.05％-0.2％(v/v)Tween-20，pH 6.10-8.20。

在本发明的具体实施方案中，磁微粒工作液包含链霉亲和素磁珠和磁珠稀释液，链霉亲和素磁珠在磁微粒工作液中的浓度为0.5-1mg/mL，磁珠稀释液包含20-100mMNa₂HPO₄、20-100mM KH₂PO₄、50-180mM NaCl、50-180mM KCl、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.05％-0.1％(v/v)ProClin300、0.05％-0.1％(v/v)Tween-20、1％(v/v)PEG、0.05-0.5％(w/v)酪蛋白，pH 7.0-8.50。

在本发明的优选实施方案中，该试剂盒还包括cTnI抗原校准品。具体地，该cTnI抗原校准品为通过将cTnI抗原加入到含有10-100mM Tris-HCl,10-200mM NaCl,10-200mMKCl,5-50％小牛血清(v/v),0.1-1％ProClin300(v/v),pH 6.5-8.5的稀释液中制得的浓度分别为0ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.08ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的一系列cTnI抗原溶液。

该cTnI抗原校准品用于制作校准曲线，以便对待测样本中的cTnI抗原进行定量检测。

在本发明的优选实施方案中，该试剂盒还包含H₂O₂溶液。H₂O₂溶液的浓度优选为0.1％-1％。

H₂O₂溶液用于在使用该试剂盒的试剂R1、试剂R2和磁微粒工作液与待测样本中的cTnI抗原形成“链霉亲和素磁珠-生物素标记的抗cTnI多克隆抗体-待测cTnI抗原-吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体”磁珠复合物后，加入到磁珠复合物中，并在加入碱溶液使磁珠复合物处于碱性环境后，与磁珠复合物中的吖啶酯发生反应而发光，由此实现待测样本中的cTnI抗原的定量检测。

当然，H₂O₂溶液也可以由本发明试剂盒的使用者另外现成配制，因此，H₂O₂溶液不是本发明试剂盒的必需组分，但从方便使用的角度，优选在本发明试剂盒中包含H₂O₂溶液。

在本发明的优选实施方案中，该试剂盒还包含碱溶液。碱溶液优选为NaOH溶液或者KOH溶液。碱溶液的浓度优选为0.1M-1M。

碱溶液用于在使用该试剂盒的试剂R1、试剂R2和磁微粒工作液与待测样本中的cTnI抗原形成“链霉亲和素磁珠-生物素标记的抗cTnI多克隆抗体-待测cTnI抗原-吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体”磁珠复合物并向该磁珠复合物加入H₂O₂后，加入体系中使该磁珠复合物处于碱性环境，以使H₂O₂与磁珠复合物中的吖啶酯发生反应而发光，由此实现待测样本中的cTnI抗原的定量检测。

当然，碱溶液也可以由本发明试剂盒的使用者另外现成配制，因此，碱溶液不是本发明试剂盒的必需组分，但从方便使用的角度，优选在本发明试剂盒中包含碱溶液。

在第二方面，本发明提供制备第一方面的高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒的方法，该方法包括以下步骤：

(1)用生物素标记抗cTnI多克隆抗体，其中抗cTnI多克隆抗体与生物素的质量比为5:1-20:1，经脱盐纯化得到该生物素标记的抗cTnI多克隆抗体；

(2)将制备得到的该生物素标记的抗cTnI多克隆抗体用该捕获抗体稀释液配成0.4-2μg/mL的浓度，得到该试剂R1；

(3)用吖啶酯标记两株针对不同cTnI抗原表位的抗cTnI单克隆抗体，其中每株该抗cTnI单克隆抗体与吖啶酯的质量比为5:1-20:1，经脱盐纯化得到该两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体；

(4)将制备得到的该两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体以质量比1:1混合，然后用该标记抗体稀释液配成0.1-5μg/mL的浓度，得到该试剂R2；

(5)用磁珠稀释液将链霉亲和素磁珠稀释至0.5-1mg/mL的浓度，得到该磁微粒工作液；

(6)将cTnI抗原加入到含有10-100mM Tris-HCl,10-200mM NaCl,10-200mM KCl,5-50％小牛血清(v/v),0.1-1％ProClin300(v/v),pH 6.5-8.5的稀释液中，制得浓度分别为0ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.08ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的cTnI抗原校准品；

(7)将该试剂R1、该试剂R2、该磁微粒工作液和该cTnI抗原校准品连同试剂盒说明书装在试剂盒包装中，制得该试剂盒。

在本发明的优选实施方案中，该方法还包括提供浓度为0.1％-1％的H₂O₂溶液和浓度为0.1M-1M的碱溶液，并且将该H₂O₂溶液和该碱溶液装在试剂盒包装中，制得该试剂盒。

在第三方面，本发明提供第一方面的试剂盒用于检测心肌肌钙蛋白I的用途。尤其是，该试剂盒用于非治疗性检测心肌肌钙蛋白I含量。

该试剂盒基于抗体夹心法和直接化学发光法来检测待测样本中的cTnI抗原。试剂R1中的生物素标记的抗cTnI多克隆抗体和试剂R2中的两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体与待测样本中的cTnI抗原发生免疫反应后，形成“生物素标记的抗cTnI多克隆抗体-待测cTnI抗原-吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体”免疫复合物，该免疫复合物与链霉亲和素磁珠反应后，形成“链霉亲和素磁珠-生物素标记的抗cTnI多克隆抗体-待测cTnI抗原-吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体”磁珠复合物，可以方便地通过磁场将该磁珠复合物分离纯化。向该磁珠复合物加入H₂O₂溶液并加入NaOH溶液使体系处于碱性环境，吖啶酯与H₂O₂反应而发光。发光强度与待测样本中的cTnI抗原的量成正比，通过化学发光分析仪测定发光强度，可以得知待测样本中的cTnI抗原的量。

本发明的有益效果：

本发明使用生物素标记的抗cTnI多克隆抗体作为捕获抗体，两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体以质量比1:1混合作为标记抗体，因而能对cTnI抗原的多个表位进行识别，避免了使用单一抗体时因为cTnI抗原的快速降解而未能被抗体有效识别的缺陷，大大提高了分析灵敏度和精密度，提供了一种检测结果稳定、灵敏度高、精密度高、检测范围宽、成本低、适用于高敏cTnI化学发光免疫分析临床应用的检测试剂盒。

附图说明

图1显示本发明实施例1的高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒的校准曲线。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明作进一步详细说明。这些实施例旨在对本发明做示例性的说明，并不意在以任何方式限制本发明。

实施例1——高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒的制备

1.试剂R1的制备

A.生物素标记的抗cTnI多克隆抗体的制备：将抗cTnI多克隆抗体(HyTest)用缓冲液稀释至2mg/mL的浓度，与生物素混合后室温反应1-3小时以进行生物素标记。抗cTnI多克隆抗体与生物素的质量比为5:1-20:1，其中生物素过量，以对抗cTnI多克隆抗体充分地进行标记。缓冲液的组成为5-50mM Na₂CO₃+10-100mM NaHCO₃,pH 8.0-10.5。标记完成后用Thermo Scientific Zeba^TM Spin Desalting Columns进行离心脱盐纯化，得到生物素标记的抗cTnI多克隆抗体，保存在4℃下备用。

B.将制备得到的生物素标记的抗cTnI多克隆抗体用捕获抗体稀释液配成1μg/mL的浓度，得到试剂R1。捕获抗体稀释液包括：缓冲剂、电解质、封闭剂、防腐剂、表面活性剂，具体组成如下表1，其中Na₂HPO₄和KH₂PO₄作为缓冲剂，NaCl和KCl作为电解质、牛血清白蛋白(BSA)作为封闭剂、ProClin300作为防腐剂，防止试剂中微生物的生长，Tween-20作为表面活性剂。

表1实施例1的捕获抗体稀释液的组成

2.试剂R2的制备

A.吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体的制备：将两株针对不同cTnI抗原表位的抗cTnI单克隆抗体(Medix)分别用5-100mM,pH 6-8.5PBS缓冲液稀释至2mg/mL的浓度，与吖啶酯混合后在室温反应10-60分钟以进行吖啶酯标记。每株抗cTnI单克隆抗体与吖啶酯的质量比为10:1，其中吖啶酯过量，可以对每株抗cTnI单克隆抗体充分地进行标记。标记完成后用Thermo Scientific Zeba^TM Spin Desalting Columns进行离心脱盐纯化，分别得到两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体。

B.将制备得到的两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体以质量比1:1混合，然后用标记抗体稀释液配成1μg/mL的浓度，得到试剂2。标记抗体稀释液包括：缓冲剂、封闭剂、防腐剂、表面活性剂，具体组成如下表2，其中2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)作为缓冲剂，牛血清白蛋白(BSA)作为封闭剂，ProClin300作为防腐剂、Tween-20作为表面活性剂。

表2实施例1的标记抗体稀释液的组成

3.磁微粒工作液的制备

取直径0.2-2uM链霉亲和素磁珠，用磁珠稀释液稀释至0.8mg/mL的浓度。磁珠稀释液包含缓冲剂、电解质、阻断剂、防腐剂、表面活性剂，具体组成如下表3，其中Na₂HPO₄和KH₂PO₄作为缓冲剂，NaCl和KCl作为电解质、牛血清白蛋白(BSA)作为封闭剂、ProClin300作为防腐剂，防止试剂中微生物的生长，Tween-20作为表面活性剂，PEG作为稳定剂，酪蛋白作为封闭剂。

表3.实施例1的磁珠稀释液的组成

4.cTnI抗原校准品的制备

cTnI抗原校准品的制备方法如下：按照所需浓度，将计算量的cTnI抗原加入到含有10-100mM Tris-HCl,10-200mM NaCl,10-200mM KCl,5-50％小牛血清(v/v),0.1-1％ProClin300(v/v),pH 6.5-8.5的稀释液中，制得浓度分别为0ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.08ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的一系列cTnI抗原溶液。

5.另外，配制0.1％-1％H₂O₂和0.1M-1M NaOH溶液。将制备得到的试剂R1、试剂R2、磁微粒工作液、cTnI抗原校准品、H₂O₂溶液和碱溶液分装到合适的试剂瓶中，连同试剂盒说明书装在试剂盒包装中，制得试剂盒产品。

实施例2——高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒的制备

本实施例的制备方法与实施例1类似，但有以下不同：

1.试剂R1的制备

制备得到的生物素标记的抗cTnI多克隆抗体用捕获抗体稀释液配成0.4μg/mL的浓度。捕获抗体稀释液的组成如下表4所示。

表4实施例2的捕获抗体稀释液的组成

2.试剂R2的制备

制备得到的两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体以质量比1:1混合，然后用标记抗体稀释液配成0.5μg/mL的浓度。标记抗体稀释液的组成如下表5所示。

表5实施例2的标记抗体稀释液的组成

3.磁微粒工作液的制备

链霉亲和素磁珠用磁珠稀释液稀释至0.5mg/mL的浓度。磁珠稀释液的组成如下表6所示。

表6.实施例2的磁珠稀释液的组成

实施例3——高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒的制备

本实施例的制备方法与实施例1类似，但有以下不同：

1.试剂R1的制备

制备得到的生物素标记的抗cTnI多克隆抗体用捕获抗体稀释液配成2μg/mL的浓度。捕获抗体稀释液的组成如下表7所示。

表7实施例3的捕获抗体稀释液的组成

2.试剂R2的制备

制备得到的两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体以质量比1:1混合，然后用标记抗体稀释液配成5μg/mL的浓度。标记抗体稀释液的组成如下表8所示。

表8实施例3的标记抗体稀释液的组成

3.磁微粒工作液的制备

链霉亲和素磁珠用磁珠稀释液稀释至1mg/mL的浓度。磁珠稀释液的组成如下表9所示。

表9.实施例3的磁珠稀释液的组成

检测例1——cTnI抗原的定量检测

本检测例使用实施例2制备得到的高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，对cTnI抗原进行定量检测。

先取该试剂盒的浓度分别为0ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的cTnI抗原校准品制作校准曲线。以下操作都由化学发光免疫分析仪自动完成。具体地讲，化学发光免疫分析仪将100μL试剂R1、100μL试剂R2和100μL特定浓度的cTnI抗原标准品混合均匀，在37℃下孵育10分钟，以形成“生物素标记的抗cTnI多克隆抗体-cTnI抗原-吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体”免疫复合物。然后加入20μL链霉亲和素磁珠，混合均匀，孵育10分钟，然后用含有吐温的磷酸盐缓冲液清洗去除游离的抗体，得到“链霉亲和素磁珠-生物素标记的抗cTnI多克隆抗体-cTnI抗原-吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体”磁珠复合物。向该磁珠复合物中加入0.1％-1％H₂O₂，并加入0.1M-1M NaOH溶液后化学发光免疫分析仪即时读取相应的发光值。将校准品浓度和测得的发光值输入到对应的定标参数中，再以浓度为0.08ng/mL、5ng/mL的cTnI校准品作为C1、C2定标，选用四参数法，化学发光免疫分析仪即生成校准曲线(图1)。定标后，化学发光免疫分析仪即能测出样本中所含的cTnI抗原的浓度。

检测例2——试剂盒的分析灵敏度和精密度

本检测例考察实施例2制备得到的高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒的分析灵敏度和精密度。

1.分析灵敏度

依据美国临床实验室标准化委员会/临床和实验室标准协会(NCCLS/CLSI)的EP17-A文件(CLSI EP17 A Ed.1 Protocols for Determination of Limits ofDetection and Limits of Quantitation(确定最低检出限和定量限的方案))，对浓度为0ng/mL的cTnI抗原校准品进行25次重复测试。25次重复测试的平均发光值加上2个标准偏差的发光值所对应的cTnI抗原浓度水平即为最低检出限LoD(分析灵敏度)。经测定，实施例4制备得到的试剂盒的分析灵敏度为0.002ng/mL。将变异系数≤10％时测定的最低cTnI抗原浓度定义为定量限LoQ(功能灵敏度)。该试剂盒的功能灵敏度为0.01ng/mL，可测定浓度高达50ng/mL。

传统cTnI化学发光免疫分析的灵敏度为0.04-0.20ng/mL，而高敏化学发光免疫分析的灵敏度高达2.5pg/mL。可见，实施例4制备得到的试剂盒的灵敏度远高于传统cTnI化学发光免疫分析，与高敏化学发光免疫分析的灵敏度相当，表明本发明的高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒可望实现国外高敏cTnI化学发光免疫分析试剂的进口替代。

2.分析精密度

依据NCCLS/CLSI的EP5-A2文件(EP5-A 2 Evaluation of PrecisionPerformance of Quantitative Measurement Methods(定量测量方法的精密度性能评价))，采用3批试剂，对浓度分别为0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.02ng/mL、0.2ng/mL、1ng/mL、50ng/mL的6份cTnI抗原校准品每天上下午各检测一次，共进行20天，得到批内变异系数及总体变异系数，结果见表10。

表10：3批试剂的批内变异系数及总体变异系数

由上表可见，当cTnI抗原校准品浓度还很低(0.01ng/mL)时，批内变异系数和总体变异系数均小于10％，数据的分析精密度高。

以上应用了具体实例对本发明进行了阐述，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明。本发明所属技术领域的技术人员依据本发明的构思，还可以做出若干简单推演、变形或替换。这些推演、变形或替换方案也落入本发明的权利要求范围内。

Claims (10)

1.一种高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1、试剂R2、磁微粒工作液和cTnI抗原校准品，其中所述试剂R1包含生物素标记的抗cTnI多克隆抗体，所述生物素标记的抗cTnI多克隆抗体溶于捕获抗体稀释液中；所述试剂R2包含两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体，所述两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体的质量比为1:1，溶于标记抗体稀释液中；所述磁微粒工作液包含链霉亲和素磁珠，所述链霉亲和素磁珠溶于磁珠稀释液中。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的抗cTnI多克隆抗体在所述试剂R1中的浓度为0.4-2μg/mL，所述捕获抗体稀释液包含10-150mM Na₂HPO₄、10-150mMKH₂PO₄、50-200mM NaCl、50-200mM KCl、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.01-0.2％(v/v)ProClin300、0.05％-0.2％(v/v)Tween-20，pH 6.50-8.50。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体在所述试剂R2中的浓度为0.1-5μg/mL，所述标记抗体稀释液包含10-150mM 2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.01-0.2％(v/v)ProClin300、0.05％-0.2％(v/v)Tween-20，pH 6.10-8.20。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁珠在所述磁微粒工作液中的浓度为0.5-1mg/mL，所述磁珠稀释液包含20-100mM Na₂HPO₄、20-100mM KH₂PO₄、50-180mM NaCl、50-180mM KCl、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.05％-0.1％(v/v)ProClin300、0.05％-0.1％(v/v)Tween-20、1％(v/v)PEG、0.05-0.5％(w/v)酪蛋白，pH7.0-8.50。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述cTnI抗原校准品为通过将cTnI抗原加入到含有10-100mM Tris-HCl,10-200mM NaCl,10-200mM KCl,5-50％小牛血清(v/v),0.1-1％ProClin300(v/v),pH 6.5-8.5的稀释液中制得的浓度分别为0ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.08ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的一系列cTnI抗原溶液。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的试剂盒，其特征在于，还包括H₂O₂溶液和碱溶液，所述H₂O₂溶液的浓度为0.1％-1％，所述碱溶液的浓度为0.1M-1M。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述碱溶液为NaOH溶液或者KOH溶液。

8.一种制备根据权利要求1-7中任一项所述的试剂盒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用生物素标记抗cTnI多克隆抗体，其中抗cTnI多克隆抗体与生物素的质量比为5:1-20:1，经脱盐纯化得到所述生物素标记的抗cTnI多克隆抗体；

(2)将制备得到的所述生物素标记的抗cTnI多克隆抗体用所述捕获抗体稀释液配成0.4-2μg/mL的浓度，得到所述试剂R1；

(3)用吖啶酯标记两株针对不同cTnI抗原表位的抗cTnI单克隆抗体，其中每株所述抗cTnI单克隆抗体与吖啶酯的质量比为5:1-20:1，经脱盐纯化得到所述两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体；

(4)将制备得到的所述两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体以质量比1:1混合，然后用所述标记抗体稀释液配成0.1-5μg/mL的浓度，得到所述试剂2；

(5)用磁珠稀释液将链霉亲和素磁珠稀释至0.5-1mg/mL的浓度，得到所述磁微粒工作液；

(6)将cTnI抗原加入到含有10-100mM Tris-HCl,10-200mM NaCl,10-200mM KCl,5-50％小牛血清(v/v),0.1-1％ProClin300(v/v),pH 6.5-8.5的稀释液中，制得浓度分别为0ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.08ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的cTnI抗原校准品；

(7)将所述试剂R1、所述试剂R2、所述磁微粒工作液和所述cTnI抗原校准品连同试剂盒说明书装装在试剂盒包装中，制得所述试剂盒。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，还包括提供浓度为0.1％-1％的H₂O₂溶液和浓度为0.1M-1M的碱溶液，并且将所述H₂O₂溶液和所述碱溶液装在试剂盒包装中，制得所述试剂盒。

10.根据权利要求1-7中任一项所述的试剂盒用于非治疗性检测心肌肌钙蛋白I含量的用途。