CN108896773A - 一种胃泌素17检测试剂盒及其制备和使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及免疫检测领域，具体涉及一种胃泌素17检测试剂盒及其制备和使用方法，包括包被有G17抗体的磁性微球混悬液、G17参考品、G17质控品、G17示踪物工作液、浓缩洗涤液和底物液。本发明还涉及该试剂盒的制备和使用方法。本发明的检测试剂盒具有检测结果准确、稳定性好、特异性强、灵敏度高、线性范围宽、检测时间短、使用方便，适于推广应用等优点。

Description

一种胃泌素17检测试剂盒及其制备和使用方法

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，具体涉及一种胃泌素17检测试剂盒及其制备和使用方法。

背景技术

中国13亿人口，肠胃病患者就有1.2亿，其中中老年人占70％以上，消化性溃疡发病率10％，慢性胃炎发病率30％，是全世界当之无愧的“胃病大国”。

胃泌素是一种主要由胃窦和十二指肠的G细胞分泌的胃肠激素，对调节消化道功能和维持其结构完整有重要作用。目前发现的胃泌素分子，包括胃泌素原、甘氨酸延伸型胃泌素和酰胺化胃泌素等多种类型。其中，人体95％以上有生物活性的胃泌素是α-酰胺化胃泌素，主要含两种异构体G-17和G-34,其中80％～90％是G-17。

胃泌素17，是一个应用于临床医学的全新胃部指标，受到了国内外许多专家的关注。我国不仅将胃泌素17联合胃蛋白酶原辅助诊断胃黏膜疾病写入了“中国早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见”，国家科技部、中国健康促进基金会更是将该项目列为了科研课题。

胃泌素17是由胃窦部及十二指肠近端黏膜的G细胞分泌的一种胃肠激素。人体中G-17的生理作用主要是刺激胃酸和胃蛋白酶的分泌，促进黏膜的生长及调节胃肠道功能，因此对于胃肠道正常功能的维持具有非常重要的作用。在不同的病理条件下，G-17水平会发生不同的变化。当发生胃黏膜萎缩后，由于胃窦腺体丧失导致胃窦G细胞数量减少，进入血液循环的G-17水平降低；胃体萎缩导致胃酸分泌降低，对胃窦G细胞的抑制作用减弱，血清G-17分泌增加。因此认为血清G-17是胃窦萎缩的血清学标志物。

磁微粒化学发光法是免疫分析技术的新发展，该技术将磁性微球应用于免疫检测的固相，大大提高了反应的表面积，增加了抗原或抗体的吸附量，加快了反应速度，提高了检测的灵敏度。相比于时间免疫分辨荧光、免疫层析及ELISA方法，具有准确度高、特异性好、精密度高、线性范围广、试剂稳定性良好等特点；目前磁微粒化学发光免疫分析技术已成为在免疫诊断领域全球使用最广泛的分析方法，也是免疫试剂重要的发展方向之一。现有技术胃泌素17的检测方法主要有酶联免疫法、时间分辨荧光免疫分析法、化学发光法等，然而这些方法具有线性范围窄，检测时间长等缺点，无法满足临床需求，因此寻找一种更有效的检测方式就成了临床应用的关键。

发明内容

本发明的第一个目的在于是：针对现有技术存在的不足，提供一种用于检测胃泌素17的检测试剂盒；该试剂盒检测结果准确、稳定性好、特异性强、灵敏度高、线性范围宽、检测时间短、使用方便，适于推广应用。

为了实现上述发明的目的，本发明的技术方案是：

一种胃泌素17检测试剂盒，检测试剂盒包括包被有G17抗体的磁性微球混悬液、G17参考品、G17质控品、G17示踪物工作液、浓缩洗涤液和底物液,所述包被G17抗体的磁性微球混悬液的浓度按照1:1000-1:5000的比例配置；所述G17示踪物工作液为吖啶酯标记的G17单克隆抗体,所述G17示踪物工作液的浓度按照其与示踪物稀释液1:2000-1:7000的比例稀释；所述G17参考品和所述G17质控品分别由G17标准品与参考品稀释液配置而成，所述G17参考品的浓度分别为0pmol/mL、1pmol/mL、4pmol/mL、16pmol/mL、64pmol/mL、256pmol/mL；所述G17质控品的浓度分别为4pmol/mL、64pmol/mL。

作为一种进一步优选的技术方案，所述包被G17抗体的磁性微球混悬液的浓度按照1:3000的比例配置，所述G17示踪物工作液的浓度按照其与示踪物稀释液1:5000的比例稀释。

作为一种优选的技术方案，所述参考品稀释液为pH7.5的PBS缓冲液，每1L PBS缓冲液中含有8-12gBSA、40-60g蔗糖和0.3-0.5mL的Proclin-300。

作为一种优选的技术方案，所述浓缩洗涤液为0.04-0.06mol、pH7.4-pH7.6的Tris-HCl缓冲液，每1L缓冲液中还含有0.04-0.06％v/v的吐温-80或0.02-0.08％v/v的吐温-20和0.7-0.8％v/v的Proclin-300或0.01-0.05m/v的NaN₃。

作为一种优选的技术方案，所述底物液包括底物液A和底物液B,所述底物液A为浓度为0.01-0.2mol/L的双氧水和浓度为0.2-0.7mol/L的硝酸；所述底物液B为浓度为0.1-0.6％(m/v)氢氧化钠溶液。

作为一种优选的技术方案，一种检测胃泌素17的检测试剂盒的制备方法。

S1，配置G17磁性微球混悬液

将活化后的磁微粒加磁场，用吗啉乙磺酸缓冲液清洗后并用吗啉乙磺酸缓冲液按照浓度为20-60mg/mL将磁微粒进行悬浮；加入G17抗体，再加磁场，再用含有吐温-20、牛血清白蛋白和Proclin-300的磷酸盐缓冲液清洗，并用该溶液配制成1-4mg/mL的磁性微球混悬母液，再将所述磁性微球混悬母液按1:1000-1:5000稀释，制得G17磁性微球混悬液；

S2，制备G17参考品及质控品

用参考品稀释液将G17标准品按一定的比例稀释成系列参考品，其参考品浓度范围为0pmol/mL-256pmol/mL；按照上述操作制备浓度为4pmol/mL、64pmol/mL的质控品，对参考品和质控品进行分装；

S3，抗体的标记

a.预处理：取适量G17抗体用0.05-0.2M pH值7.5-9.0的碳酸盐缓冲溶液于2-10℃透析10-20小时；

b.抗体标记：取吖啶酯溶液和G17抗体溶液，在标记缓冲液环境中进行标记反应，然后加入20-50％v/v的1g/mL赖氨酸盐溶液进行反应，反应20-60分钟。

c.纯化与收集：反应液用0.05-0.2M pH值7.5-9.0的碳酸盐缓冲溶液于2-8℃透析20-26小时。处理后溶液收集于避光容器内。

S4，配制G17示踪物工作液

将吖啶酯标记的G17单克隆抗体溶液与示踪物稀释液按照1:2000-1:7000的比例稀释配制；

S5，配制浓缩洗涤液

按照每1LpH7.5的Tris-HCl缓冲液中含有7-10gNaCl、0.4-0.6ml吐温-80或0.2-0.8ml的吐温-20和6-8mlProclin-300或1-5g NaN3进行配置；

S6，配制底物液A和底物液B

底物液A：使用0.01-0.1mol/L pH 6.8-7.8的磷酸盐缓冲溶液作为基础缓冲液，其中含有浓度为0.01-0.2mol/L的双氧水和浓度为0.2-0.7mol/L的硝酸；

底物液B：使用0.01-0.1mol/L pH 6.8-7.8的磷酸盐缓冲溶液作为基础缓冲液，其中含有浓度为0.1-0.6％m/v氢氧化钠溶液；

S7，将上述步骤S1-S6制备的磁性微球混悬液、示踪物工作液、参考品、质控品、浓缩洗涤液、底物液A和底物液B的分装。

作为一种改进的技术方案，所述步骤S1中磁微粒为粒径1-3μm，且表面包裹有羧基、氨基、磺酰基任意一种活性基团的磁性微球。

作为一种优选的技术方案，所述步骤S4中示踪物稀释液为pH7.5的PBS缓冲液，且每1LPBS缓冲液中还含有8-11g牛血清白蛋白、5-6g氯化钾、0.1-1g的酪蛋白、0.02-0.04％v/v的Proclin-300和0.3～1.0％v/v的AES。

作为一种优选的技术方案，一种胃泌素17检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

A1，将在冷藏环境中贮存的试剂室温平衡15分钟以上；

A2,用纯化水将浓缩洗涤液进行40倍稀释，摇匀备用，作为应用洗涤液；

A3,用蒸馏水溶解参考品、质控品，静置15分钟后混匀使用；

A4,将G17参考品、质控品及待测样本置于相应板架上，设定相关测定参数为：磁性微球的加量为50μL，样本、参考品、质控品的加液量为50μL，设定温育时间为30分钟，循环清洗次数为三次，每次应用洗涤液用量为400μL，示踪物工作液的加液量为50μL，设定温育时间为30分钟，循环清洗次数为三次，每次应用洗涤液用量为400μL，底物液A设定的加液量为50μL，振荡混匀时间为20秒，底物液B设定的加液量为50μL，立即检测，信号收集时间为0.1-4秒；

A5,根据各标准溶液发光值，借助全自动化学发光免疫分析仪的分析软件进行四参数Logistic拟合，坐标选择X-Y，得标准曲线；或采用双对数Log(X)-Log(Y)线性分析方法，得标准曲线；最后根据标准曲线计算出样本中G17的浓度。

本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有以下优点：

本发明是将双抗体夹心法免疫测定原理与超顺磁性纳米微球标记技术和直接化学发光免疫分析相结合的定量检测产品，由于本发明试剂盒体系中所采用的各溶液配方和各组分的制备方法均是该反应体系下的最优方案，使得本发明试剂盒线性范围较其它试剂盒最宽，在0.6-256pmol/mL之间成良好的线性关系，而且灵敏度高，准确度高(相关系数r为0.9997)，批内和批间差均符合检测标准，准确程度优于目前市场上其它类型的G17试剂盒。

本发明方法中采用吖啶酯类化合物标记抗体。吖啶酯类化合物通过化学反应使吖啶酯通过共价键与被标记的蛋白、多肽或核酸的氨基结合。通常标记物无本底发光，可用于检测低浓度或微量浓度的样品，且其发光效率高，使结合物具有化学发光活性强、免疫反应特异性高的特点。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

一种胃泌素17检测试剂盒，包括包被有G17抗体的磁性微球混悬液、G17参考品、G17质控品、G17示踪物工作液、浓缩洗涤液和底物液。其中包被G17抗体的磁性微球混悬液的浓度为1:1000-1:5000(优选工作浓度为1:3000)，G17示踪物工作液为吖啶酯标记的G17单克隆抗体，G17示踪物工作液的浓度为1:2000-1:7000(优选工作浓度为1:5000)；G17参考品和质控品均为G17标准品与参考品溶液配置而成，G17参考品的浓度分别为0pmol/mL、1pmol/mL、4pmol/mL、16pmol/mL、64pmol/mL、256pmol/mL；所述G17质控品的浓度为4pmol/mL、64pmol/mL。

参考品溶液为pH7.5的PBS缓冲液，且每1L缓冲液中还含有8-12gBSA、40-60g蔗糖和0.3-0.5mL的Proclin-300。

浓缩洗涤液为0.05mol、pH7.5的Tris-HCl缓冲液，且每1L缓冲液中还含有0.04％v/v的吐温-80或0.04％v/v的吐温-20和0.75％v/v的Proclin-300或0.02m/v的NaN3。

底物液包括底物液A和底物液B,底物液A为浓度为0.1mol/L的双氧水和浓度为0.3mol/L的硝酸；

底物液B为浓度为3g/L氢氧化钠溶液。

实施例2

一种检测胃泌素17的检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)配置G17磁性微球混悬液

将粒径为2.8μm的磁微粒用N-羟基琥珀酰亚胺和碳二亚胺进行活化，室温下搅拌30min，加磁场，静置1-3min,吸出上清液，用pH值为5-6的0.01mol/L的吗啉乙磺酸缓冲液清洗三次，并用该溶液按照浓度为20-60mg/mL将磁微粒进行悬浮；

每毫升吗啉乙磺酸溶液中加入G17抗体50-150μg,在25℃下搅拌2-5h，加磁场，静置2-6min，吸出上清液；

用pH值为7.4、含0.1％v/v的吐温-20、1.0％m/v的牛血清白蛋白和0.01％v/vProclin-300的磷酸盐缓冲液清洗3-5次，并用该溶液配制成1-4mg/mL的磁性微球初溶液，并用该溶液将所述磁性微球初溶液按1:1000-1:5000稀释，制得G17磁性微球混悬液；

(2)制备G17参考品及质控品

用参考品稀释液将G17标准品按一定的比例稀释成系列参考品，其参考品浓度范围为0pmol/mL-256pmol/mL；按照上述操作制备浓度为4pmol/mL、64pmol/mL的质控品，并以0.5mL/支对参考品和质控品进行分装；

(3)配制G17示踪物工作液

将吖啶酯标记的G17单克隆抗体溶液与示踪物稀释液按照1:2000-1:7000比例配制；

(4)配制浓缩洗涤液

配置1L pH为7.5的Tris-HCl缓冲液，然后再称量9g NaCl、量取0.5mL吐温-80或0.4mL吐温-20、7.5mL Proclin-300或2g NaN3加入Tris-HCl缓冲液中，即得浓缩洗涤液；

(5)配制底物液A和底物液B

底物液A：使用0.1mol/L pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液作为基础缓冲液，其中含有浓度为0.1mol/L的双氧水和浓度为0.3mol/L的硝酸；

底物液B：使用0.1mol/L pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液作为基础缓冲液，其中含有浓度为0.3％(m/v)氢氧化钠溶液；

(6)将上述步骤(1)-(5)制备的磁性微球混悬液、示踪物工作液、参考品、质控品、浓缩洗涤液、底物液A和底物液B的分装。

实施例3

一种检测胃泌素17的试剂盒检测胃泌素17的方法，包括以下步骤：

(1)将在冷藏环境中贮存的试剂室温平衡15分钟以上；

(2)用纯化水将浓缩洗涤液进行40倍稀释，摇匀备用，作为应用洗涤液；

(3)用蒸馏水溶解参考品、质控品，静置15分钟后混匀使用；

(4)将G17参考品、质控品及待测样本置于相应板架上，设定相关测定参数为：磁性微球的加量为50μL，样本、参考品、质控品的加液量为50μL，设定温育时间为30分钟，循环清洗次数为三次，每次应用洗涤液用量为400μL，示踪物工作液的加液量为50μL，设定温育时间为30分钟，循环清洗次数为三次，每次应用洗涤液用量为400μL，底物液A设定的加液量为50μL，振荡混匀时间为20秒，底物液B设定的加液量为50μL，立即检测，信号收集时间为0.1-4秒；

(5)根据各标准溶液发光值，借助全自动化学发光免疫分析仪的分析软件进行四参数Logistic拟合，坐标选择X-Y，得标准曲线；或采用双对数Log(X)-Log(Y)线性分析方法，得标准曲线；最后根据标准曲线计算出样本中G17的浓度。

实施例4

一种胃泌素17检测试剂盒的主要产品性能指标为：

(1)试剂盒的最低检测限(灵敏度)

10孔平行测定样本稀释液，计算测定结果的平均数(M)与标准差(SD)，得出M+2SD对应的发光值，代入剂量-反应曲线，计算出相应的浓度值，该浓度值即为本试剂盒的最低检测限。经验证，本试剂盒的最低检测限指标检测结果见表1。

表1试剂盒最低检测限的测定

结论：测定的G17样本稀释液的平均发光值M＝3413.6，SD＝276.02，将(M+2SD)的值带入此次反应曲线，得其灵敏度为：0.048pmol/mL(<0.6pmol/mL)，符合要求。

(2)试剂盒的剂量-反应曲线的线性

复孔测定试剂盒的参考品(浓度依次为0pmol/mL、1pmol/mL、4pmol/mL、16pmol/mL、64pmol/mL和256pmol/mL的参考品进行两孔测定)，用四参数进行拟合，本试剂盒的剂量-反应曲线的线性检测结果见表2。

表2试剂盒剂量-反应曲线的线性

结论：测定的G17剂量-反应曲线线性相关系数(r)为：0.9999(>0.9900)，符合要求。

(3)试剂盒的准确度

将企业标准品配制的标准溶液A(130pmol/mL)按体积1:9加入已知低浓度(4pmol/mL)中，计算回收率。

结论：测定值为16.06pmol/mL，回收率95.84％，回收率应在90％-110％之间，符合要求。

(4)试剂盒的精密度

a、分析内精密度：浓度分别为4pmol/mL和64pmol/mL的参考品重复检测，本试剂盒的分析内精密度检测结果见表3。

表3试剂盒分析内精密度的测定

结论：测定的4pmol/mL和64pmol/mL精密度参考品的分析内变异系数(CV)分别为：4.29％和4.16％(均<8.0％)，符合要求。

b、批间精密度：用3个批号的试剂盒分别检测浓度为4pmol/mL和64pmol/mL的参考品，各重复10次，本试剂盒的分析间精密度检测结果见表4。

表4试剂盒批间精密度的测定

结论：测定的4pmol/mL和64pmol/mL精密度参考品的批间变异系数(CV)分别为：3.93％和4.55％(均<15.0％)，符合要求。

从上述测定的数据可以看出，本发明设计的一种胃泌素17检测试剂盒在灵敏度、准确度、精密度等各项质量参数均处于领先地位。

实施例5

一种胃泌素17检测试剂盒的临床检测实例如下：

采用本发明试剂盒对240例检测样本进行检测，其中阳性样本约80例，阴性样本约160例，其中包含干扰因素及交叉反应样本40例(高脂血样本、溶血样本、高胆红素样本、类风湿因子阳性样本各10例)，检测结果见表5。

表5 G17考核试剂与对比试剂检测结果比较

结论：t值＜t0.05,500＝1.965＜t0.05,239，P＞0.05，两种试剂差别无显著性，说明两试剂测定结果高度相关，具有等效性。

G17考核试剂与对比试剂阳性符合率为97.44％，阴性符合率为98.15％，总符合率为97.92％。通过相关性分析、卡方检验及配对t检验，说明考核试剂和临床诊断不存在显著性差异，具有很好的相关性。

本专利不局限于上述具体的实施方式，本领域的普通技术人员从上述构思出发，不经过创造性的劳动，所作出的种种变换，均落在本专利的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种胃泌素17检测试剂盒，其特征在于：检测试剂盒包括包被有G17抗体的磁性微球混悬液、G17参考品、G17质控品、G17示踪物工作液、浓缩洗涤液和底物液,所述包被G17抗体的磁性微球混悬液的浓度按照1:1000-1:5000的比例配置；所述G17示踪物工作液为吖啶酯标记的G17单克隆抗体,所述G17示踪物工作液的浓度按照其与示踪物稀释液1:2000-1:7000的比例稀释；所述G17参考品和所述G17质控品分别由G17标准品与参考品稀释液配置而成，所述G17参考品的浓度分别为0pmol/mL、1pmol/mL、4pmol/mL、16pmol/mL、64pmol/mL、256pmol/mL；所述G17质控品的浓度分别为4pmol/mL、64pmol/mL。

2.根据权利要求1所述的一种胃泌素17检测试剂盒，其特征在于：所述包被G17抗体的磁性微球混悬液的浓度按照1:3000的比例配置，所述G17示踪物工作液的浓度按照其与示踪物稀释液1:5000的比例稀释。

3.根据权利要求2所述的一种胃泌素17检测试剂盒及其制备和使用方法，其特征在于：所述参考品稀释液为pH7.5的PBS缓冲液，每1L PBS缓冲液中含有8-12gBSA、40-60g蔗糖和0.3-0.5mL的Proclin-300。

4.根据权利要求1所述的一种胃泌素17检测试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为0.04-0.06mol、pH7.4-pH7.6的Tris-HCl缓冲液，每1L缓冲液中还含有0.04-0.06％v/v的吐温-80或0.02-0.08％v/v的吐温-20和0.7-0.8％v/v的Proclin-300或0.01-0.05m/v的NaN₃。

5.根据权利要求1所述的一种胃泌素17检测试剂盒，其特征在于：所述底物液包括底物液A和底物液B,所述底物液A为浓度为0.01-0.2mol/L的双氧水和浓度为0.2-0.7mol/L的硝酸；所述底物液B为浓度为0.1-0.6％(m/v)氢氧化钠溶液。

6.一种胃泌素17检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：

S1，配置G17磁性微球混悬液

将活化后的磁微粒加磁场，用吗啉乙磺酸缓冲液清洗后并用吗啉乙磺酸缓冲液按照浓度为20-60mg/mL将磁微粒进行悬浮；加入G17抗体，再加磁场，再用含有吐温-20、牛血清白蛋白和Proclin-300的磷酸盐缓冲液清洗，并用该溶液配制成1-4mg/mL的磁性微球混悬母液，再将所述磁性微球混悬母液按1:1000-1:5000稀释，制得G17磁性微球混悬液；

S2，制备G17参考品及质控品

用参考品稀释液将G17标准品按一定的比例稀释成系列参考品，其参考品浓度范围为0pmol/mL-256pmol/mL；按照上述操作制备浓度为4pmol/mL、64pmol/mL的质控品，对参考品和质控品进行分装；

S3，抗体的标记

a.预处理：取适量G17抗体用0.05-0.2M pH值7.5-9.0的碳酸盐缓冲溶液于2-10℃透析10-20小时；

b.抗体标记：取吖啶酯溶液和G17抗体溶液，在标记缓冲液环境中进行标记反应，然后加入20-50％v/v的1g/mL赖氨酸盐溶液进行反应，反应20-60分钟。

c.纯化与收集：反应液用0.05-0.2M pH值7.5-9.0的碳酸盐缓冲溶液于2-8℃透析20-26小时。处理后溶液收集于避光容器内。

S4，配制G17示踪物工作液

将吖啶酯标记的G17单克隆抗体溶液与示踪物稀释液按照1:2000-1:7000的比例稀释配制；

S5，配制浓缩洗涤液

按照每1LpH7.5的Tris-HCl缓冲液中含有7-10gNaCl、0.4-0.6ml吐温-80或0.2-0.8ml的吐温-20和6-8mlProclin-300或1-5g NaN3进行配置；

S6，配制底物液A和底物液B

底物液A：使用0.01-0.1mol/L pH 6.8-7.8的磷酸盐缓冲溶液作为基础缓冲液，其中含有浓度为0.01-0.2mol/L的双氧水和浓度为0.2-0.7mol/L的硝酸；

底物液B：使用0.01-0.1mol/L pH 6.8-7.8的磷酸盐缓冲溶液作为基础缓冲液，其中含有浓度为0.1-0.6％m/v氢氧化钠溶液；

S7，将上述步骤S1-S6制备的磁性微球混悬液、示踪物工作液、参考品、质控品、浓缩洗涤液、底物液A和底物液B的分装。

7.根据权利要求6所述的一种胃泌素17检测试剂盒的制备方法，其特征在于:所述步骤S1中的磁微粒为粒径1-3μm，表面包裹有羧基、氨基、磺酰基任意一种活性基团的磁性微球。

8.根据权利要求6所述的一种胃泌素17检测试剂盒的制备方法，其特征在于:所述步骤S4中示踪物稀释液为pH7.5的PBS缓冲液，每1L PBS缓冲液中含有8-11g牛血清白蛋白、5-6g氯化钾、0.1-1g的酪蛋白、0.02-0.04％v/v的Proclin-300和0.3～1.0％v/v的AES。

9.一种胃泌素17检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

A1，将在冷藏环境中贮存的试剂室温平衡15分钟以上；

A2,用纯化水将浓缩洗涤液进行40倍稀释，摇匀备用，作为应用洗涤液；

A3,用蒸馏水溶解参考品、质控品，静置15分钟后混匀使用；

A4,将G17参考品、质控品及待测样本置于相应板架上，设定相关测定参数为：磁性微球的加量为50μL，样本、参考品、质控品的加液量为50μL，设定温育时间为30分钟，循环清洗次数为三次，每次应用洗涤液用量为400μL，示踪物工作液的加液量为50μL，设定温育时间为30分钟，循环清洗次数为三次，每次应用洗涤液用量为400μL，底物液A设定的加液量为50μL，振荡混匀时间为20秒，底物液B设定的加液量为50μL，立即检测，信号收集时间为0.1-4秒；

A5,根据各标准溶液发光值，借助全自动化学发光免疫分析仪的分析软件进行四参数Logistic拟合，坐标选择X-Y，得标准曲线；或采用双对数Log(X)-Log(Y)线性分析方法，得标准曲线；最后根据标准曲线计算出样本中G17的浓度。