CN110702926A - 一种胃泌素g17检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种胃泌素G17检测试剂盒，包括试剂1和试剂2，试剂1和试剂2的体积比为4:1；试剂1由第一缓冲剂、电解质、第一稳定剂、增浊剂、第一防腐剂，水组成；试剂2由G17纳米抗体、保存剂、活化剂、标记剂、清洗剂、封闭剂、羧基胶乳微球、水组成。本发明胃泌素G17检测试剂盒具有操作简便、稳定性好、易于保存、特异性强、灵敏度高、检测速度快、结果准确的优点,制备方法简单，适合广泛应用。

Description

一种胃泌素G17检测试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明属于体外检测试剂技术领域，涉及一种胃泌素G17检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
中国有13.9亿人口，胃肠病患者接近1.2亿，其中老年人占70％以上，消化性溃疡发病率约10％，慢性胃炎发病率约30％，是全世界的“胃病大国”。
胃泌素是一种重要的胃肠道肽类激素，其合成经历由胃泌素原、甘胆酸、延伸型胃泌素到成熟胃泌素的阶段，人体中95％活性胃泌素为α-酰胺胃泌素，包括G17、G34、G14、G6、G52、G71，其中G17占所有活性胃泌素80-90％以上，是最主要的存在形式。
血清G17的生物活性主要有以下几点：1)刺激胃酸分泌；2)促进细胞增殖和抑制细胞凋亡；3)促进胃肠内胃蛋白酶、胰液、胆汁的分泌，促进降钙素和胰岛素释放，加强胃肠道运动和胆囊收缩。G17不仅促进正常胃粘膜生长，还对癌细胞生长和恶性转化产生影响。众多研究表明胃癌、结肠癌等肿瘤复合表达胃泌素和胃泌素受体，同时提出了“自分泌环假说”与消化系统肿瘤密切相关。在健康个体中，G17血清浓度极低，仅为1-7pmol/L；在结肠癌、胃癌、胃萎缩等患者体内，会促进G17分泌，使得体内G17浓度增高。当患有严重的胃部疾病时，G17浓度急剧增加，比正常水平增加几倍甚至几十倍。对于其他非胃部疾病，G17浓度增高不明显或轻微变化，因此G17对于胃萎缩类疾病具有高度的特异性。
目前17的检测方法主要有酶联免疫分析和化学发光免疫分析等方法。但是酶联免疫分析和化学发光免疫分析均需要购置特殊的设备，而且检测花费时间长、操作繁琐。由于目前检测G17所用的抗体均为鼠抗或兔抗，均为IgG，检测易受类风湿因子影响，可能或激活补体系统，造成假阳性，特异性有缺陷。
纳米抗体分子量为15KD，只有IgG的十分之一，而且由于不含有Fc片段，所以具有以下明显的优点：1)单位表面积可以偶联更多的抗体数目；2)偶联后，抗体之间的空间位阻效应小；3)不与类风湿因子反应，不激活补体系统，特异性更高。因此使用纳米抗体检测的灵敏度更高，特异性更好。
由于临床灵敏度的要求、以及内源性干扰因子的困扰，基于传统单抗或多抗IgG抗体的胶乳增强免疫比浊法虽然比普通免疫比浊的检测灵敏度较好，但是仍然达不到G17的检测灵敏度要求。
因此，研发一种操作简便、稳定性好、易于保存、特异性强、灵敏度高、检测速度快、结果准确的胃泌素G17检测试剂盒及其制备方法是本领域技术人员亟需解决的技术问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种胃泌素G17检测试剂盒及其制备方法。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种胃泌素G17检测试剂盒，包括试剂1和试剂2，上述试剂1和试剂2的体积比为4:1；
上述试剂1中各组分的浓度如下：
第一缓冲剂1-500mmol/L，优选为50mmol/L，
电解质1-500mmol/L，
第一稳定剂0.01-10％，
增浊剂0.01-5％，优选为4％，
第一防腐剂0.01-2％，优选为0.1％，
水余量；
上述试剂2中各组分的浓度如下：
G17纳米抗体1-10mg/L，
保存剂10-200mmol/L，
活化剂10-200mmol/L，优选为50-100mmol/L，
标记剂10-200mmol/L，优选为50-100mmol/L，
清洗剂10-200mmol/L，优选为50-100mmol/L，
封闭剂0.05-10％，优选为1-3％，
羧基胶乳微球0.01-1％，优选为0.2-0.5％，
水余量。
本发明百分比浓度指每100ml试剂1或试剂2中含有各组分的质量，质量单位为g。
进一步，试剂1中：上述第一缓冲剂为TRIS、PBS、HEPES、MOPS、MOPSO、MES、甘氨酸中的任一种；优选地，上述第一缓冲剂为TRIS。
上述电解质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、硫酸镁、硝酸钠、硝酸钾、氯化钙中的一种或几种的混合；
上述第一稳定剂为BSA或OVA。
上述增浊剂为吐温20、曲拉通100、布里杰35、聚乙二醇400-20000的一种或几种的混合；优选地，上述增浊剂为聚乙二醇6000。
上述第一防腐剂为叠氮钠、PC300、硫柳汞、苯酚中的任一种；优选地，上述第一防腐剂为PC300。
进一步，上述试剂2中保存剂的各组分浓度如下：
第二缓冲剂1-500mmol/L，优选为100mmol/L，
第二稳定剂0.01-10％，优选为0.05-0.5％，
悬浮剂0.1-10％，优选为3-5％，
第二防腐剂0.01-2％，优选为0.05-0.1％。
采用上述进一步的有益效果在于：上述试剂2中保存剂的各组分浓度的设置，初步提高了试剂的稳定性。
进一步，上述第二缓冲剂为TRIS、PBS、HEPES、MOPS、MOPSO、MES、甘氨酸中的一种或几种的混合；优选地，上述第二缓冲剂为甘氨酸。
上述第二稳定剂为BSA或OVA；优选地，上述第二稳定剂为BSA；
上述悬浮剂为甘油、葡聚糖、蔗糖、海藻糖、聚蔗糖、壳聚糖中的一种或几种的混合；优选地，上述悬浮剂为蔗糖；
上述第二防腐剂为叠氮钠、PC300、硫柳汞中的任一种，优选地，上述第二防腐剂为PC300。
进一步，上述试剂2中，上述活化剂为PBS、HEPES、MOPS、MOPSO、MES、BS、PEIPES中的任一种，优选地，上述活化剂为BS；
上述标记剂为PBS、HEPES、MOPS、MOPSO、MES、BS、PEIPES中的任一种，优选地，上述标记剂为BS；
上述封闭剂为BSA、OVA、KLH、甘氨酸中的任一种，优选地，上述封闭剂为BSA；
上述清洗剂为PBS、HEPES、MOPS、MOPSO、MES、BS、PEIPES、甘氨酸中的任一种，优选地，上述清洗剂为甘氨酸。
进一步，上述试剂2中的羧基胶乳微球的直径为100-400nm，优选200-300nm。
采用上述进一步的有益效果在于：羧基胶乳微球的直径可以优化试剂空白吸光度和灵敏度的关系，在尽可能低的试剂空白下提高了试剂灵敏度。
本发明还提供了一种胃泌素G17检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
(1)按照上述组分浓度称取各原料；
(2)试剂1的制备：将第一缓冲剂、电解质、第一稳定剂、增浊剂、第一防腐剂加水溶解混合均匀，调节pH值，定容；
(3)试剂2的制备：
1)将保存剂、活化剂、标记剂、清洗剂、封闭剂依次制备成保存液、活化液、标记液、清洗液和封闭液，分别调节pH值；
2)将上述羧基胶乳微球使用活化液进行稀释，得羧基胶乳微球溶液，备用；
3)称取碳二酰亚胺加水溶解至浓度为0.1-1％后，加入到步骤2)所得羧基胶乳微球溶液中，室温活化；
4)将G17纳米抗体溶解在标记液中，然后加入到步骤3)活化后的羧基胶乳微球溶液中室温交联；
5)向步骤4)交联后的羧基胶乳微球溶液加入封闭液，室温反应；
6)将步骤5)反应后的羧基胶乳微球溶液离心，使用清洗液溶解沉淀，弃上清；
7)将步骤6)清洗液溶解后的沉淀使用保存液溶解，超声分散，定容。
进一步，步骤(2)试剂1调节pH值为7.4-7.6，步骤(3)活化液调节pH值为4.0-8.0，优选为6.0-7.0；标记液调节pH值为4.0-8.0，优选为6.0-7.0，封闭液调节pH值为6.0-8.0，清洗液调节pH值为4.0-9.0，优选为6.0-8.0。
进一步，步骤1)保存液的制备方法为：将第二缓冲剂、第二稳定剂、悬浮剂、第二防腐剂加水溶解混合均匀，调节pH值为7.0-8.0。
进一步，步骤(3)室温指20-25℃。
进一步，步骤3)活化时间为10-240min，优选10-60min；
步骤4)交联时间为10-240min，优选30-120min；
步骤5)反应时间为10-2400min，优选30-600min。
进一步，步骤6)离心的离心力为5000-80000g，离心时间为10-80min，离心力优选8000g，离心时间优选30-60min。
本发明的有益效果是：本发明胃泌素G17检测试剂盒结合胶乳免疫比浊法和纳米抗体的优点于一身，既可达到临床灵敏度的要求，又具有抗内源性干扰的特点，本发明胃泌素G17检测试剂盒可应用于临床诊断，该试剂盒具有操作简便、稳定性好、易于保存、特异性强、灵敏度高、检测速度快、结果准确的优点。本发明优化了胃泌素G17检测试剂盒生产工艺，提高生产效率，节约生产成本，制备方法简单，适合大规模生产和应用。
附图说明
图1为本发明制备的G17测定试剂和对照发光试剂相关图。
具体实施方式
结合以下实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
一种胃泌素G17检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
(1)试剂1制备：称取6.0gTRIS、8.5g KCl、40g PEG6000、1.0g BSA、0.5g PC300溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.20±0.05，使用纯净水定容至1L即可。
(2)试剂2制备：
1)活化液制备：称取5.0g BS溶解在0.9L纯净水中，调节pH至6.30±0.05，使用纯净水定容至1L。
标记液制备：称取5.0g BS溶解在0.9L纯净水中，调节pH至8.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
封闭液制备：称取40gBSA溶解在0.9L纯净水中。
清洗液制备：称取3.75g甘氨酸，溶解在0.9L纯净水中，调节pH至8.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
保存液制备：称取7.51g甘氨酸、2g BSA、80g蔗糖、1g PC300，溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.50±0.05，使用纯净水定容至1L。
2)称取20mL浓度为10％、直径在280nm的胶乳微球溶解在180mL活化液中，得羧基胶乳微球溶液，备用；
3)缓慢加入新配制的浓度为20mg/mL的碳二酰亚胺水溶液20mL，胶乳室温活化60min；
4)称取浓度为10mg/mL，效价为1:256的G17纳米抗体5mL，溶解在95mL抗体标记液中，然后加入到步骤3)活化后的羧基胶乳微球溶液中室温交联30min；
5)向步骤4)交联后的羧基胶乳微球溶液加入封闭液25mL，室温封闭120min；
6)将8000g步骤5)反应后的羧基胶乳微球溶液离心30min，使用200mL清洗液清洗两次，弃上清；
7)将步骤6)清洗液溶解后的沉淀使用保存液溶解，超声分散，定容至1L。
实施例2
一种胃泌素G17检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
(1)试剂1制备：称取5.95g HEPES、8.5g NaCl、20g PEG8000、0.5g BSA、0.5g叠氮钠溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.40±0.05，使用纯净水定容至1L即可。
(2)试剂2制备：
1)活化液制备：称取3.0g PBS溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
标记液制备：称取5.0g HEPES溶解在0.9L纯净水中，调节pH至8.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
封闭液制备：称取40g BSA溶解在0.9L纯净水中。
清洗液制备：称取3.75g甘氨酸，溶解在0.9L纯净水中，调节pH至8.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
保存液制备：称取7.51g HEPES、5g OVA、100g海藻糖、1g PC300，溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.50±0.05，使用纯净水定容至1L。
2)称取20mL浓度为10％、直径在280nm的胶乳微球溶解在180mL活化液中，得羧基胶乳微球溶液，备用；
3)缓慢加入新配制的浓度为10mg/mL的碳二酰亚胺水溶液40mL，胶乳室温活化50min；
4)称取浓度为10mg/mL，效价为1:256的G17纳米抗体5mL，溶解在95mL抗体标记液中，然后加入到步骤3)活化后的羧基胶乳微球溶液中室温交联240min；
5)向步骤4)交联后的羧基胶乳微球溶液加入封闭液25mL，室温封闭120min；
6)将8000g步骤5)反应后的羧基胶乳微球溶液离心30min，使用300mL清洗液清洗两次，弃上清；
7)将步骤6)清洗液溶解后的沉淀使用保存液溶解，超声分散，定容至1L。
实施例3
一种胃泌素G17检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
(1)试剂1制备：称取6.0g PBS、8.5g NaCl、80g PEG4000、1.0g BSA、0.5g硫柳汞溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.00±0.05，使用纯净水定容至1L即可。
(2)试剂2制备：
1)活化液制备：称取5.0g MES溶解在0.9L纯净水中，调节pH至5.50±0.05，使用纯净水定容至1L。
标记液制备：称取5.0g BS溶解在0.9L纯净水中，调节pH至8.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
封闭液制备：称取60g OVA溶解在0.9L纯净水中。
清洗液制备：称取6.0g MOPS，溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.60±0.05，使用纯净水定容至1L。
保存液制备：称取6.0g MOPS、1g OVA、80g甘油、1g PC300，溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
2)称取20mL浓度为10％、直径在280nm的胶乳微球溶解在180mL活化液中，得羧基胶乳微球溶液，备用；
3)缓慢加入新配制的浓度为20mg/mL的碳二酰亚胺水溶液20mL，胶乳室温活化120min；
4)称取浓度为10mg/mL，效价为1:256的G17纳米抗体5mL，溶解在95mL抗体标记液中，然后加入到步骤3)活化后的羧基胶乳微球溶液中室温交联80min；
5)向步骤4)交联后的羧基胶乳微球溶液加入封闭液25mL，室温封闭20min；
6)将8000g步骤5)反应后的羧基胶乳微球溶液离心30min，使用200mL清洗液清洗两次，弃上清；
7)将步骤6)清洗液溶解后的沉淀使用保存液溶解，超声分散，定容至1L。
实施例4
一种胃泌素G17检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
(1)试剂1制备：称取5.0g,MOPSO、12.0g KCl、30g PEG6000、1.0g BSA、0.5g PC300溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.20±0.05，使用纯净水定容至1L即可。
(2)试剂2制备：
1)活化液制备：称取1.0g PIPES溶解在0.9L纯净水中，调节pH至6.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
标记液制备：称取15.0g BS溶解在0.9L纯净水中，调节pH至9.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
封闭液制备：称取40g OVA溶解在0.9L纯净水中。
清洗液制备：称取3.28g MOPSO，溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
保存液制备：称取5.8g MOPSO、1g OVA、100g壳聚糖、1g PC300，溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
2)称取20mL浓度为10％、直径在280nm的胶乳微球溶解在180mL活化液中，得羧基胶乳微球溶液，备用；
3)缓慢加入新配制的浓度为20mg/mL的碳二酰亚胺水溶液20mL，胶乳室温活化90min；
4)称取浓度为10mg/mL，效价为1:256的G17纳米抗体5mL，溶解在95mL抗体标记液中，然后加入到步骤3)活化后的羧基胶乳微球溶液中室温交联60min；
5)向步骤4)交联后的羧基胶乳微球溶液加入封闭液25mL，室温封闭120min；
6)将8000g步骤5)反应后的羧基胶乳微球溶液离心30min，使用200mL清洗液清洗两次，弃上清；
7)将步骤6)清洗液溶解后的沉淀使用保存液溶解，超声分散，定容至1L。
实施例5
一种胃泌素G17检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
(1)试剂1制备：称取6.0g TRIS、8.5g NaCl、20g PEG6000、1.0g OVA、0.5g PC300溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.60±0.05，使用纯净水定容至1L即可。
(2)试剂2制备：
1)活化液制备：称取5.0g PEPES溶解在0.9L纯净水中，调节pH至6.50±0.05，使用纯净水定容至1L。
标记液制备：称取5.0g MOPS溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.80±0.05，使用纯净水定容至1L。
封闭液制备：称取30g BSA溶解在0.9L纯净水中。
清洗液制备：称取3.0g PIPES，溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
保存液制备：称取5.95gHEPES、2g OVA、80g乳糖、1g PC300，溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.50±0.05，使用纯净水定容至1L。
2)称取20mL浓度为10％、直径在280nm的胶乳微球溶解在180mL活化液中，得羧基胶乳微球溶液，备用；
3)缓慢加入新配制的浓度为20mg/mL的碳二酰亚胺水溶液20mL，胶乳室温活化30min；
4)称取浓度为10mg/mL，效价为1:256的G17纳米抗体5mL，溶解在95mL抗体标记液中，然后加入到步骤3)活化后的羧基胶乳微球溶液中室温交联300min；
5)向步骤4)交联后的羧基胶乳微球溶液加入封闭液25mL，室温封闭120min；
6)将8000g步骤5)反应后的羧基胶乳微球溶液离心30min，使用200mL清洗液清洗两次，弃上清；
7)将步骤6)清洗液溶解后的沉淀使用保存液溶解，超声分散，定容至1L。
实施例6
一种胃泌素G17检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
(1)试剂1制备：称取6.0g BS、15g KCl、20g PEG4000、1.0g BSA、0.5g叠氮钠溶解在0.9L纯净水中，调节pH至8.00±0.05，使用纯净水定容至1L即可。
(2)试剂2制备：
1)活化液制备：称取5.0g BS溶解在0.9L纯净水中，调节pH至6.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
标记液制备：称取5.0g MOPS溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.50±0.05，使用纯净水定容至1L。
封闭液制备：称取60g OVA溶解在0.9L纯净水中。
清洗液制备：称取5.0g BS，溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.00±0.05，使用纯净水定容至1L。
保存液制备：称取6.0g TRIS、3g BSA、120g甘露醇、1g PC300，溶解在0.9L纯净水中，调节pH至7.20±0.05，使用纯净水定容至1L。
2)称取20mL浓度为10％、直径在320nm的胶乳微球溶解在180mL活化液中，得羧基胶乳微球溶液，备用；
3)缓慢加入新配制的浓度为20mg/mL的碳二酰亚胺水溶液20mL，胶乳室温活化15min；
4)称取浓度为10mg/mL，效价为1:256的G17纳米抗体5mL，溶解在95mL抗体标记液中，然后加入到步骤3)活化后的羧基胶乳微球溶液中室温交联20min；
5)向步骤4)交联后的羧基胶乳微球溶液加入封闭液25mL，室温封闭30min；
6)将8000g步骤5)反应后的羧基胶乳微球溶液离心20min，使用200mL清洗液清洗两次，弃上清；
7)将步骤6)清洗液溶解后的沉淀使用保存液溶解，超声分散，定容至1L。
对实施例1制备的G17测定试剂，在AU400全自动生化仪上进行测试，测试参数如下：样本体积10ul、试剂1体积180ul、试剂2体积45ul、主波长700nm、副波长无，测试读点12-27，六点校准定标，样条函数制作校准曲线。针对精密度、准确度、稳定性、抗干扰能力进行了测试。
校准曲线数据如表1：
表1校准曲线数据
校准点 浓度(pmol/L) ABS
1 0 0
2 1 0.0284
3 4 0.0926
4 16 0.1735
5 64 0.3247
6 256 0.5732
由表1得出，本发明制备的G17测定试剂具有较高的灵敏度(1pmol/L以下)和较高的线性(256pmol/L)。
精密度：对同一份临床样本连续测试10次，得到精密度数据如表2：
表2精密度数据
Figure BDA0002206266890000131
Figure BDA0002206266890000141
由表2得出，本发明制备的G17测定试剂精密度较好(CV小于2％)，满足临床要求。
准确度：与已经取得注册证的化学发光厂家做40例临床样本比对，结果表3；本发明制备的G17测定试剂和对照发光试剂相关图见图1。
表3准确度数据
Figure BDA0002206266890000142
Figure BDA0002206266890000151
由表3得出，本发明制备的G17测定试剂和对照发光试剂比较相关性较好，见图1，相对偏差小于5％；
抗干扰：按照EP-07文件在样本中添加不同浓度的类风湿因子，进行抗类风湿因子干扰实验，结果如表4：
表4抗干扰数据
Figure BDA0002206266890000152
由表4得出，本发明制备的G17测定试剂抗RF干扰较强，200IU/ml的RF浓度对测试无影响。
稳定性结果如表5：
表5抗干扰数据
浓度(pmol/L) 0个月 3个月 6个月 9个月 12个月 15个月
0 0 0 0 0 0 0
1 0.0284 0.0279 0.0281 0.0291 0.0276 0.0283
4 0.0926 0.0935 0.0904 0.0921 0.0938 0.0916
16 0.1735 0.1752 0.1729 0.1756 0.1748 0.1731
64 0.3247 0.3261 0.3239 0.3256 0.3246 0.3244
256 0.5732 0.5756 0.5761 0.5729 0.5718 0.5726
由表5得出，本发明制备的G17测定试剂在规定保存条件下至少可以稳定15个月，稳定性较好。
以上内容是结合具体的优先实施方式对本发明所作的进一步说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明，对于发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演和替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种胃泌素G17检测试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2，所述试剂1和试剂2的体积比为4:1；
所述试剂1中各组分的浓度如下：
第一缓冲剂1-500mmol/L，
电解质1-500mmol/L，
第一稳定剂0.01-10％，
增浊剂0.01-5％，
第一防腐剂0.01-2％，
水余量；
所述试剂2中各组分的浓度如下：
G17纳米抗体1-10mg/L，
保存剂10-200mmol/L，
活化剂10-200mmol/L，
标记剂10-200mmol/L，
清洗剂10-200mmol/L，
封闭剂0.05-10％，
羧基胶乳微球0.01-1％，
水余量。
2.根据权利要求1所述的一种胃泌素G17检测试剂盒，其特征在于，试剂1中：所述第一缓冲剂为TRIS、PBS、HEPES、MOPS、MOPSO、MES、甘氨酸中的任一种；
所述电解质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、硫酸镁、硝酸钠、硝酸钾、氯化钙中的一种或几种的混合；
所述第一稳定剂为BSA或OVA；
所述增浊剂为吐温20、曲拉通100、布里杰35、聚乙二醇400-20000的一种或几种的混合；
所述第一防腐剂为叠氮钠、PC300、硫柳汞、苯酚中的任一种。
3.根据权利要求1所述的一种胃泌素G17检测试剂盒，其特征在于，所述试剂2中保存剂的各组分浓度如下：
第二缓冲剂1-500mmol/L，
第二稳定剂0.01-10％，
悬浮剂0.1-10％，
第二防腐剂0.01-2％。
4.根据权利要求3所述的一种胃泌素G17检测试剂盒，其特征在于，所述第二缓冲剂为TRIS、PBS、HEPES、MOPS、MOPSO、MES、甘氨酸中的一种或几种的混合；
所述第二稳定剂为BSA或OVA；
所述悬浮剂为甘油、葡聚糖、蔗糖、海藻糖、聚蔗糖、壳聚糖中的一种或几种的混合；
所述第二防腐剂为叠氮钠、PC300、硫柳汞中的任一种。
5.根据权利要求1所述的一种胃泌素G17检测试剂盒，其特征在于，试剂2中，所述活化剂为PBS、HEPES、MOPS、MOPSO、MES、BS、PEIPES中的任一种；
所述标记剂为PBS、HEPES、MOPS、MOPSO、MES、BS、PEIPES中的任一种；
所述封闭剂为BSA、OVA、KLH、甘氨酸中的任一种；
所述清洗剂为PBS、HEPES、MOPS、MOPSO、MES、BS、PEIPES中的任一种。
6.根据权利要求1所述的一种胃泌素G17检测试剂盒，其特征在于，所述试剂2中的羧基胶乳微球的直径为100-400nm。
7.一种胃泌素G17检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)按照权利要求1-6任一项所述的组分浓度称取各原料；
(2)试剂1的制备：将第一缓冲剂、电解质、第一稳定剂、增浊剂、第一防腐剂加水溶解混合均匀，调节pH值，定容；
(3)试剂2的制备：
1)将保存剂、活化剂、标记剂、清洗剂、封闭剂依次制备成保存液、活化液、标记液、清洗液和封闭液，分别调节pH值；
2)将所述羧基胶乳微球使用活化液进行稀释，得羧基胶乳微球溶液，备用；
3)称取碳二酰亚胺加水溶解至浓度为0.1-1％后，加入到步骤2)所得羧基胶乳微球溶液中，室温活化；
4)将G17纳米抗体溶解在标记液中，然后加入到步骤3)活化后的羧基胶乳微球溶液中室温交联；
5)向步骤4)交联后的羧基胶乳微球溶液加入封闭液，室温反应；
6)将步骤5)反应后的羧基胶乳微球溶液离心，使用清洗液溶解沉淀，弃上清；
7)将步骤6)清洗液溶解后的沉淀使用保存液溶解，超声分散，定容。
8.根据权利要求7所述的一种胃泌素G17检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述试剂1调节pH值为7.4-7.6，步骤(3)所述活化液调节pH值为4.0-8.0，所述标记液调节pH值为4.0-8.0，所述封闭液调节pH值为6.0-8.0，所述清洗液调节pH值为4.0-9.0。
9.根据权利要求7所述的一种胃泌素G17检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤3)所述活化时间为10-240min；
步骤4)所述交联时间为10-240min；
步骤5)所述反应时间为10-2400min。
10.根据权利要求7所述的一种胃泌素G17检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤6)所述离心的离心力为5000-80000g，离心时间为10-80min。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112268868A (zh) * 2020-10-16 2021-01-26 深圳市鸿美诊断技术有限公司 乳胶免疫比浊法测定钙卫蛋白的试剂盒
CN113419072A (zh) * 2021-06-21 2021-09-21 安徽大千生物工程有限公司 胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒及其制备使用方法
CN116008567A (zh) * 2023-01-04 2023-04-25 北京九强生物技术股份有限公司 一种胃泌素17检测试剂盒
CN116008569A (zh) * 2023-03-29 2023-04-25 北京万泰德瑞诊断技术有限公司 一种检测胃泌素17的试剂盒及其制备方法

Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090311257A1 (en) * 2006-03-20 2009-12-17 Xoma Technology Ltd. Human antibodies specific for gastrin materials and methods
CN104198732A (zh) * 2014-08-28 2014-12-10 宁波瑞源生物科技有限公司 一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒
CN104407157A (zh) * 2014-12-05 2015-03-11 重庆中元生物技术有限公司 一种离子稳定剂和悬浮稳定剂配合使用的检测瘦素的胶乳增强免疫比浊试剂盒
US20170051260A1 (en) * 2015-05-11 2017-02-23 David Gordon Bermudes Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria
CN106501502A (zh) * 2016-11-02 2017-03-15 北京华科泰生物技术有限公司 胃泌素17荧光免疫层析用活化荧光乳胶微球
CN106596934A (zh) * 2016-12-19 2017-04-26 江苏省农业科学院 一种检测o型口蹄疫病毒的试剂盒
CN107543932A (zh) * 2017-10-31 2018-01-05 太原瑞盛生物科技有限公司 一种降钙素的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法
CN108445230A (zh) * 2018-03-21 2018-08-24 北京科卫临床诊断试剂有限公司 基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂及检测方法
CN108593925A (zh) * 2017-12-28 2018-09-28 华南农业大学 一种基于纳米抗体检测二乙氧基有机磷农药的酶联免疫试剂盒及其使用方法
CN108896773A (zh) * 2018-08-23 2018-11-27 潍坊市康华生物技术有限公司 一种胃泌素17检测试剂盒及其制备和使用方法
CN109061200A (zh) * 2018-08-23 2018-12-21 上海复星长征医学科学有限公司 胃泌素17时间分辨微球免疫层析检测试剂卡及其制备方法
CN109884008A (zh) * 2019-02-25 2019-06-14 武汉中科兴达技术有限公司 一种黄曲霉毒素b1纳米抗体的时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法和应用
CN110146706A (zh) * 2019-05-28 2019-08-20 中生北控生物科技股份有限公司 抗链球菌溶血素“o”胶乳免疫比浊检测试剂盒及制备方法

Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090311257A1 (en) * 2006-03-20 2009-12-17 Xoma Technology Ltd. Human antibodies specific for gastrin materials and methods
CN104198732A (zh) * 2014-08-28 2014-12-10 宁波瑞源生物科技有限公司 一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒
CN104407157A (zh) * 2014-12-05 2015-03-11 重庆中元生物技术有限公司 一种离子稳定剂和悬浮稳定剂配合使用的检测瘦素的胶乳增强免疫比浊试剂盒
US20170051260A1 (en) * 2015-05-11 2017-02-23 David Gordon Bermudes Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria
CN106501502A (zh) * 2016-11-02 2017-03-15 北京华科泰生物技术有限公司 胃泌素17荧光免疫层析用活化荧光乳胶微球
CN106596934A (zh) * 2016-12-19 2017-04-26 江苏省农业科学院 一种检测o型口蹄疫病毒的试剂盒
CN107543932A (zh) * 2017-10-31 2018-01-05 太原瑞盛生物科技有限公司 一种降钙素的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法
CN108593925A (zh) * 2017-12-28 2018-09-28 华南农业大学 一种基于纳米抗体检测二乙氧基有机磷农药的酶联免疫试剂盒及其使用方法
CN108445230A (zh) * 2018-03-21 2018-08-24 北京科卫临床诊断试剂有限公司 基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂及检测方法
CN108896773A (zh) * 2018-08-23 2018-11-27 潍坊市康华生物技术有限公司 一种胃泌素17检测试剂盒及其制备和使用方法
CN109061200A (zh) * 2018-08-23 2018-12-21 上海复星长征医学科学有限公司 胃泌素17时间分辨微球免疫层析检测试剂卡及其制备方法
CN109884008A (zh) * 2019-02-25 2019-06-14 武汉中科兴达技术有限公司 一种黄曲霉毒素b1纳米抗体的时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法和应用
CN110146706A (zh) * 2019-05-28 2019-08-20 中生北控生物科技股份有限公司 抗链球菌溶血素“o”胶乳免疫比浊检测试剂盒及制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
赵肃清 等: "《新兴产业和高新技术现状与前景研究丛书 生命科学及生物技术现状与应用前景》", 30 May 2015 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112268868A (zh) * 2020-10-16 2021-01-26 深圳市鸿美诊断技术有限公司 乳胶免疫比浊法测定钙卫蛋白的试剂盒
CN113419072A (zh) * 2021-06-21 2021-09-21 安徽大千生物工程有限公司 胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒及其制备使用方法
CN116008567A (zh) * 2023-01-04 2023-04-25 北京九强生物技术股份有限公司 一种胃泌素17检测试剂盒
CN116008569A (zh) * 2023-03-29 2023-04-25 北京万泰德瑞诊断技术有限公司 一种检测胃泌素17的试剂盒及其制备方法

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