CN111735965A - 心肌肌钙蛋白i检测试剂和制备方法以及心肌肌钙蛋白i检测试剂盒 - Google Patents

心肌肌钙蛋白i检测试剂和制备方法以及心肌肌钙蛋白i检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明涉及心肌肌钙蛋白I检测试剂和制备方法以及心肌肌钙蛋白I检测试剂盒。具体涉及心肌肌钙蛋白I检测试剂，包括包被抗体溶液、检测抗体溶液、指示剂溶液；其中，包被抗体包括由抗体1与固定相偶联得到的抗体固定相偶联物1，以及由抗体2与固定相偶联得到的抗体固定相偶联物2，检测抗体通过抗体3与标记物偶联得到；指示剂溶液中包含用于定量检测标记物浓度的指示剂。本发明还包括该检测试剂的制备方法及运用该检测试剂的试剂盒。本发明中，抗体2和抗体3可以分别与心肌肌钙蛋白I结合，有助于心肌肌钙蛋白I的充分分离，进而提高该试剂对心肌肌钙蛋白I的检测灵敏度。

Description

心肌肌钙蛋白I检测试剂和制备方法以及心肌肌钙蛋白I检测 试剂盒
技术领域
本发明涉及健康检测的技术领域，尤其是涉及心肌肌钙蛋白I检测试剂，本发明还涉及该检测试剂的制备方法。另外，本发明还涉及心肌肌钙蛋白I检测试剂盒。
背景技术
心血管疾病已成为21世纪人类健康的头号杀手。心肌肌钙蛋白是目前诊断心肌坏死敏感和特异的首选心肌损伤标志物，是诊断急性心肌梗死(AMI)和对急性冠状动脉综合征(ACS)危险分层的主要依据。心肌肌钙蛋白是由3个亚单位，即心肌肌钙蛋白C、心肌肌钙蛋白I及心肌肌钙蛋白T组成的复合物。心肌肌钙蛋白I被认为是心肌损伤最特异、最敏感的血清标志物之一，由于其高度的心肌特异性，对于心肌损伤的高度敏感性及较长的窗口期，被大家认为诊断急性心肌梗死的“金标准”。心肌肌钙蛋白I还具有判断愈后的价值，对任何冠状动脉疾患病人，即便其他检查阴性，只要心肌肌钙蛋白I增高，应视为具有高危险性，临床上主要用于心肌梗死、心肌损伤等心脏疾病的辅助诊断，同时对梗死发生、预后及观察疗效具有重要意义。
在现有技术中，对心肌肌钙蛋白I的检测主要包括如下方法：侧向层析法、酶联免疫法、时间分辨荧光法等。其中，酶联免疫法主要通过双抗体夹心的方法对待测试样中的心肌肌钙蛋白I进行固定并检测。在酶联免疫法中通常需要使用两种心肌肌钙蛋白I的抗体，一种抗体上连接有检测试剂，另一种抗体与固定相连接。向体系中加入心肌肌钙蛋白I后，两种抗体会分别连接于心肌肌钙蛋白上的两个位点，之后通过离心、磁分离等分离手段将固定相分离，并通过指示剂对分离后的物料中含有的检测试剂的量进行测定，即可通过分离得到的物料中检测试剂的含量定量计算得到体系中心肌肌钙蛋白I。通过酶联免疫法对心肌肌钙蛋白I的含量进行测定，具有较高的精确度和灵敏度。
但是在现有技术中，在将心肌肌钙蛋白I与抗体的结合体从反应体系中分离的过程中，许多步骤都会产生物料损失，例如在反应过程中肌钙蛋白I可能无法与抗体充分反应、在分离过程中固定相可能无法完全分离等。当样品中心肌肌钙蛋白I浓度较低时，反应和分离过程中产生的损失可能会导致最终检测时心肌肌钙蛋白I无法被测出，从而导致检测的灵敏度降低。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的第一个发明目的是提供一种灵敏度较高、检出限较低的心肌肌钙蛋白I检测试剂。
本发明的第二个发明目的是提供上述心肌肌钙蛋白I检测试剂的制备方法。
本发明的第三个发明目的是提供心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，通过上述心肌肌钙蛋白I检测试剂对心肌肌钙蛋白进行检测。
本发明的第一个发明目的是通过以下技术方案得以实现的：心肌肌钙蛋白I检测试剂，包括分开存储并联合使用的包被抗体溶液、检测抗体溶液、指示剂溶液；
其中，包被抗体包括由抗体1与固定相偶联得到的抗体固定相偶联物1，以及由抗体2与固定相偶联得到的抗体固定相偶联物2，检测抗体通过抗体3与标记物偶联得到；所述指示剂溶液中包含用于定量检测标记物浓度的指示剂，其中，抗体1、抗体2和抗体3中任意两者之间与心肌肌钙蛋白I的结合位点均不重复。
在上述技术方案中，包被抗体中包括抗体固定相偶联物1和抗体固定相偶联物2，在抗体固定相偶联物1和抗体固定相偶联物2上分别偶联有抗体1和抗体2，抗体1和抗体2可以分别与心肌肌钙蛋白I上的两个位点发生特异性反应，进而使心肌肌钙蛋白I与固定相偶联。检测抗体通过抗体3与心肌肌钙蛋白I发生特异性反应，从而将标记物连接在心肌肌钙蛋白I上。在上述过程中，心肌肌钙蛋白I上有两个位点均能与固定相结合，有助于心肌肌钙蛋白I的充分分离，进而提高该试剂对心肌肌钙蛋白I的检测灵敏度。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：抗体1与心肌肌钙蛋白I的结合位点为52-75，抗体2与心肌肌钙蛋白I的结合位点为95-106，抗体3与心肌肌钙蛋白的结合位点为30-40。
上述心肌肌钙蛋白I的位点自氨基一端向羧基一端计数。心肌肌钙蛋白I在上述技术方案中，对抗体1、抗体2和抗体3与心肌肌钙蛋白I的结合位点进行了限定，上述结合位点的选择可以尽可能减小位阻效应对心肌肌钙蛋白I反应性的影响，从而进一步提高该检测试剂对心肌肌钙蛋白I检测灵敏度。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述固定相为磁微粒，所述磁微粒的粒径为1-4μm。
在上述技术方案中，固定相为磁颗粒，在反应完毕后通过磁吸附的方式即可将吸附有心肌肌钙蛋白I的固定相从体系中分离出来，随后通过脱磁将得到的固定相重新分散于新的缓冲液中，即可对分离得到的溶液中含有的标记物的量进行测定。上述过程较为温和，不易使心肌肌钙蛋白I从固定相上脱附，因此有助于进一步提高检测的灵敏度。且该过程操作较为方便，无需额外添加其他试剂对固定相进行分离，不易对体系造成污染。
此外，在上述技术方案中，选用1～4μm的磁微粒与抗体进行结合，该粒径范围内的磁微粒具有较好的实用性。若磁微粒的粒径过小，则在分离过程中较难彻底将磁微粒从体系中完全分理出，造成该试剂的灵敏度降低；若磁微粒的粒径过大，包被抗体在于心肌肌钙蛋白I反应的过程中会有较大的位阻，导致心肌肌钙蛋白I无法充分与包被抗体反应并被包被抗体吸附，同样会导致该试剂的灵敏度降低。
另外，粒径为1～4μm的磁微粒具有超顺磁性，在体系中可以更加均匀地分布，有助于增大抗原和抗体的反应面积，提高反应速度，减少反应所需的时间。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：抗体固定相偶联物1与抗体固定相偶联物2浓度之比为2:(3～3.2)。
在上述技术方案中，在实验过程中发现，抗体固定相偶联物1和抗体固定相偶联物2的比例为2:(3～3.2)时，测试结果线性拟合较好，精确度较高，灵敏度也较高，具有较好的实际运用效果。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述标记物为碱性磷酸酶，所述指示剂为用于定量测定碱性磷酸酶含量的发光底物。
在上述技术方案中，碱性磷酸酶与抗体连接后，其活性和专一性均较强，将碱性磷酸酶与发光底物混合并反应后，可以通过发光强度测定碱性磷酸酶的实际浓度，且发光强度与碱性磷酸酶的浓度之间具有较好的线性拟合。因此，采用碱性磷酸酶进行标记，并在对固定相分离后对分离产物中的碱性磷酸酶的含量进行测定，可以更加精确地对附着于固定相上的心肌肌钙蛋白I含量进行测定，使该检测试剂的检测结果更加精确。
本发明的第二个发明目的是通过以下技术方案得以实现的：心肌肌钙蛋白I检测试剂的生产工艺，包括如下工序：
S1、检测抗体溶液的制备；
S2、包被抗体溶液的制备；
S3、指示剂溶液的准备；
其中，S1具体包括如下步骤：
S1-1：抗体3的活化，配制第一活化剂溶液，与2～4mg/mL的抗体3溶液混合并进行活化，震荡混匀后在室温下充分反应；随后将缓冲液2加入抗体3溶液中终止活化，室温反应10～15min；除去过量的第一活化剂，得到活化抗体3溶液；
S1-2：碱性磷酸酶的活化：配制第二活化剂溶液，与浓度为2～4mg/mL的碱性磷酸酶溶液混合均匀，室温下充分反应；随后将缓冲液2加入碱性磷酸酶溶液中，室温反应10～15min，终止活化，除去过量的第二活化剂，得到活化碱性磷酸酶溶液；
S1-3：抗体3与碱性磷酸酶的偶联：将步骤S1-1中得到的活化抗体3溶液和步骤S1-2中得到的活化碱性磷酸酶溶液混合，保持2～8℃反应12～18小时，得到抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液；其中，抗体3和碱性磷酸酶的质量比为1:(1～2)；
S1-4：偶联反应的终止：向步骤S3中所得的抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液中加入终止试剂，室温反应，得到终止后的抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液；
S1-5：抗体3偶联物的纯化：向步骤S1-4中得到的终止后的抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液中加入缓冲液1，混合均匀，浓缩溶液直至抗体3浓度为0.5～2mg/mL，得到抗体3-碱性磷酸酶偶联物浓缩液；随后以缓冲液2作为洗脱剂对抗体3-碱性磷酸酶偶联物浓缩液进行柱层析分离，并浓缩得到纯化后的酶标抗体3偶联物溶液；
S1-6：检测抗体3溶液的配制：向步骤S1-5中的纯化后的酶标抗体3偶联物溶液中加入缓冲液8，充分混匀，得到检测抗体溶液，所述检测抗体溶液中检测抗体浓度为1～1.4μg/mL；
上述过程中，所述缓冲液1为三乙醇胺缓冲溶液，pH值为7.3～7.6；所述缓冲液2为甘氨酸缓冲溶液；所述缓冲液8为含牛血清白蛋白和氯化钠的磷酸缓冲溶液，所述缓冲液8的pH值为7.0～7.6；
步骤S2具体包括如下步骤：
S2-1：将磁微粒用缓冲液4清洗后，并用缓冲液4重悬至4～6mg/mL，得到磁微粒溶液；
S2-2：按磁微粒与抗体质量比(10～100):1的比例在磁微粒溶液中加入抗体1溶液或抗体2溶液，并加入缓冲溶液4，室温反应10～15min，得到磁微粒-抗体混合液；其中，每毫克磁微粒对应加入的缓冲溶液4的量为10～100μL；
S2-3：向步骤S2中得到的磁微粒-抗体混合液中加入封闭试剂，对磁微粒表面未反应的位点进行封闭，得到封闭后的抗体-磁微粒溶液；
S2-4：对步骤S2-3中得到的抗体磁微粒溶液进行分离，用缓冲液8清洗清洗分离得到的固相，并用缓冲液8重悬至8～12mg/mL；对应抗体1和抗体2分别得到抗体1-磁微粒偶联物溶液和抗体2-磁微粒偶联物溶液；
S2-5：分别将抗体1-磁微粒偶联物溶液和抗体2-磁微粒偶联物溶液以2:(2.9～3.1)的比例加入于缓冲液9中，得到包被抗体溶液；所述包被抗体溶液中包被抗体的总浓度为0.4～0.6μg/mL；
其中，所述缓冲液4为十水合四硼酸钠缓冲溶液，所述缓冲液4的pH值为9.0～11.0；所述缓冲液9为溶解有氯化钠、牛血清白蛋白和蔗糖的磷酸缓冲溶液，所述缓冲液9的pH值为6.2～8.0。
在上述技术方案中，指示剂溶液一般通过购买直接得到。抗体3和碱性磷酸酶先经过活化，随后通过第一活化剂和第二活化剂之间的相互作用，抗体3和碱性磷酸酶以1:1的比例发生偶联，随后通过种植反应并对抗体3-碱性粒氨酸酶偶联产物进行纯化，除去体系中残余的碱性磷酸酶，有助于提高该试剂运用于试剂检测时的检测精度，降低该检测试剂的空白限。
通过磁微粒直接对抗体1和抗体2进行包被，反应过程较为简单，包被完成后通过封闭试剂封闭磁微粒上未反应的位点，以免包被抗体与检测抗体混合时，检测抗体中的抗体1部分与包被抗体上未反应的位点发生结合，有助于进一步提高该检测试剂的灵敏度和精确度。
缓冲液9中含有氯化钠、牛血清白蛋白和蔗糖，有助于包被抗体在其中更加均匀地分布，不易沉降。此外，牛血清白蛋白还可以起到保护抗体的作用。
在上述技术方案中，可以通过0.22μm的滤膜对配置得到的缓冲溶液进行过滤，可以除去缓冲溶液体系中的残留细菌等微生物，进而使缓冲溶液更加纯净，在配制得到检测试剂后可以避免检测试剂因细菌等微生物繁殖而变质，提高检测试剂的保存期限。
在步骤S1-5中，可以采用超滤浓缩法对含有抗体3-碱性磷酸酶偶联物的溶液进行浓缩，一方面保护抗体和碱性磷酸酶不会在浓缩过程中受到损伤，另一方面相较于透析浓缩，效率较高，有助于提高生产效率，适用于大规模生产。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在步骤S1-4中，终止试剂的具体配制方法如下：称取马来酰亚胺，用二甲基甲酰胺溶解，再加入缓冲液1进行稀释，得到8～11g/mL的马来酰亚胺溶液，作为终止试剂；
S1-4具体步骤如下：按1mg抗体3加入10～12μL终止试剂比例，将上述终止试剂与抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液混合，在室温下反应15～18min；得到终止后的偶联反应液。
在上述技术方案中，通过二甲基甲酰胺对马来酰亚胺进行增溶，再用缓冲液1稀释上述浓溶液，从而使马来酰亚胺更加均匀地溶解于缓冲液1中，提高马来酰亚胺对步骤S2-4中偶联反应的终止效果。
本发明在一较佳实施例中可以进一步配制为：述磁微粒为甲苯磺胺基修饰的磁微粒，步骤S2-3具体包括如下两个步骤：
步骤S2-3-1：将缓冲液5加入步骤S2-2中得到的磁微粒-抗体混合液中，在37℃环境中反应16～24小时；其中，每毫克磁微粒对应加入的缓冲液5的量为100～1000μL，得到第一封闭磁微粒溶液；
步骤S2-3-2：分离分步骤S2-3-1中得到的第一封闭磁微粒溶液，用缓冲液6清洗分离得到的固相，再用缓冲液6重悬至3.8～5mg/mL；在37℃环境中反应16～24小时，得到封闭后的抗体-磁微粒溶液；
其中，所述缓冲液5为pH值范围为9.0～11.0的磷酸缓冲溶液，所述缓冲液6为pH值为7.3～7.8的三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液，所述缓冲液6中溶解有牛血清白蛋白和吐温20。
在上述技术方案中，甲苯磺胺基修饰的磁微粒在对抗体进行包被时，无需预先进行活化，节约了反应步骤。反应结束后，先通过缓冲液5淋洗并反应，由于缓冲液5为碱性，因此在反应过程中甲苯磺胺基团在前序反应中形成的铵盐结构会被缓冲液5中和，不会对后续反应造成影响，随后加入缓冲液6，通过牛血清白蛋白对甲苯磺胺基团对封闭，再通过吐温20增溶并除去多余的蛋白质和抗体，即完成对磁微粒表面的位点封闭的过程。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在步骤S1-1中，按如下步骤配制第一活化剂溶液：称取2-亚氨基硫烷盐酸盐,用缓冲液1溶解至12～14mg/mL，得到2-亚氨基硫烷盐酸盐溶液，即为第一活化剂溶液；
步骤S1-1具体操作方法如下：将上述第一活化剂溶液加入2～4mg/mL抗体3溶液中进行活化，震荡混匀后在室温下反应30～60min；随后将缓冲液2加入抗体3溶液中终止活化，室温反应10～15min；除去过量的2-亚氨基硫烷盐酸盐，得到活化抗体3溶液；其中，2-亚氨基硫烷盐酸盐与抗体3的物质的量之比为(15～30):1，每毫克抗体3对应的缓冲液2的加入量为5～20μL。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：
在步骤S1-2中，按如下步骤配制第二活化剂溶液：称取(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯，用二甲基甲酰胺溶解至6～8mg/mL，即为第二活化剂溶液；
步骤S1-2具体操作方法如下：向浓度为2～4mg/mL的碱性磷酸酶溶液加入上述第二活化剂溶液，并震荡混匀后，室温下反应30～60min；随后将缓冲液2加入碱性磷酸酶溶液中，室温反应10～15min，终止活化，除去过量的(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯，得到活化碱性磷酸酶溶液；上述过程中，(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯与碱性磷酸酶的物质的物质的量之比为(15～60):1；每毫克碱性磷酸酶对应的缓冲液2的加入量为10～50μL。
在上述技术方案中，抗体3和碱性磷酸酶之间通过2-亚氨基硫烷盐酸盐和(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯偶联，该偶联效果具有较强的选择性，且在偶联完成后抗体3和碱性磷酸酶对彼此的活性影响较小，有助于进一步提高该检测试剂的检测灵敏度和准确度。
本发明的第三个发明目的是通过以下技术方案得以实现的：一种心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，其包括根据权利要求1至5中任一项所述的心肌肌钙蛋白I检测试剂，所述试剂盒包括一个盒体，所述盒体内放置有校准样盛放瓶、质控样盛放瓶和若干试剂条，在所述试剂条上设置发光底物盛放槽、包被抗体溶液盛放槽、检测抗体溶液盛放槽，所述包被抗体溶液盛放槽中盛放有包被抗体溶液；检测抗体溶液盛放槽中盛放有检测抗体溶液；发光底物盛放槽中盛放有指示剂溶液；所述校准样盛放瓶设置有两个，两个所述校准样盛放瓶中分别盛放有低浓度校准样和高浓度校准样；所述质控样盛放瓶中盛放有质控样。
在上述技术方案中，在使用试剂盒之前，分别将低浓度校准样和高度浓度校准样溶解并进行测定，对标准曲线进行校准。通过质控样可以对批间差进行评估，避免在实际使用过程中因使用质量不合格的试剂盒而导致测量结果发生重大错误，贻误治疗时机。该试剂盒在使用时，定向吸取包被抗体溶液盛放槽中的包被抗体溶液和检测抗体溶液盛放槽中的检测抗体溶液，并将其与待测样本混合并反应，随后通过分离手段从上述反应后的样本中将固定相分离出来，经清洗后通过指示剂溶液盛放槽对分离得到产物中检测标记物的浓度进行测定，并通过与标准曲线进行对比，即可完成对心肌肌钙蛋白I浓度的检测。上述过程整体耗费时间较短，可以通过配套仪器进行测定，操作较为方便。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：高浓度校准样和低浓度校准样的制备方法如下：取对应心肌肌钙蛋白I重组蛋白，溶解于缓冲液7中，分别得到高浓度校准样溶液和低浓度校准样溶液，其中，高浓度校准样溶液的浓度为25ng/mL，低浓度校准样的浓度为0.05ng/mL，将高浓度校准样溶液和低浓度校准样溶液分别等体积分装于两个校准样盛放瓶中，并冻干，即得到高浓度校准样和低浓度校准样；
质控品的制备方法如下：另取心肌肌钙蛋白I重组蛋白，溶解于缓冲液7中，配制得到质控品溶液，质控品溶液的浓度低于高浓度校准样溶液的浓度，且高于低浓度校准样溶液的浓度；将质控品溶液分装于质控品盛放瓶中，且质控品盛放瓶中质控品溶液的体积等于校准样盛放瓶中高浓度校准样和低浓度校准样的体积，随后将质控品盛放瓶冻干，即得到质控品；
其中，缓冲液7通过如下方法配制：称取12.0～15.0g的三羟甲基氨基甲烷、5.0～50.0g的牛血清白蛋白、1.0～30.0g甘氨酸加入到一定量的纯化水中，完全溶解，调节PH值至7.6～8.8，通过纯化水定容至1000mL；用0.22μm的滤膜进行过滤。
在上述技术方案中，高浓度校准样、低浓度校准样和质控品均冻干后储存，有助于延长该试剂盒的储存时间和保质期。在配制和冻干过程中，将心肌肌钙蛋白I重组蛋白溶解于缓冲液7中，缓冲液7中，牛血清白蛋白作为填充剂，有助于心肌肌钙蛋白I重组蛋白在冻干过程中成型；甘氨酸作为pH调节剂，可以保证在冻干过程中溶剂的pH值变化幅度较小，使心肌肌钙蛋白I重组蛋白在冻干过程中形态不易发生变化。上述二者共同作用，可以提高心肌肌钙蛋白I重组蛋白的检测精度。
本发明在一较佳实施例中可以进一步配置为：所述试剂条上还设置有清洗液盛放槽和若干清洗槽,所述清洗液盛放槽中盛放有清洗液；所述清洗液通过如下方法配制：配制浓度为5～10mM、pH值为7.4～7.9的三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液，加入氯化钠，使氯化钠的最终浓度为150～250mM，并加入表面活性剂；所述表面活性剂加入量为1～3g/L。
在上述技术方案中，氯化钠在体系中提供较为稳定的离子强度，使表面活性剂更容易结合游离的检测抗体并将检测抗体除去，从而有助于进一步提高检测精度和灵敏度。
本发明在一较佳实施例中可以进一步配置为：在试剂盒上还设置有用于被读取设备读取的标识码，所述标识码中收录有本试剂盒的标准曲线信息。
在上述技术方案中，试剂盒的标准曲线储存于试剂盒上的标识码中，因此每组试剂盒在使用时均可通过设备上的读取装置读取本试剂盒的标准曲线，高浓度校准样和低浓度校准样在测定完毕后可以更加准确地与标准曲线进行校准。
综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：
1.在本发明中，提供了一种心肌肌钙蛋白I检测试剂，包被抗体中包括抗体固定相偶联物1和抗体固定相偶联物2，抗体固定相偶联物1和抗体固定相偶联物2，可以提高检测试剂对心肌肌钙蛋白I检出过程的灵敏度和精确度。
2.在本发明中，上述心肌肌钙蛋白I检测试剂中，抗体1、抗体2和抗体3的结合位点分别选用52-75、95-106和30-40，有助于降低结合过程中的位阻效应，进一步提高灵敏度，降低检出限。
3.在本发明中，提供了上述检测试剂的制备方法，可以方便快捷方便地对上述检测试剂进行制备。且在制备过程中，通过反应控制限定磁微粒表面的反应位点，并对碱性磷酸酶和抗体3中止活化并纯化，有助于进一步提高检测精度和灵敏度。
附图说明
图1是本发明中单个试剂条未覆膜时结构示意图。
图中，1、试剂条；2、吸头；3、洗脱套；4、清洗液盛放槽；5、发光底物盛放槽；6、包被抗体溶液盛放槽；7、检测抗体溶液盛放槽；8、反应槽；9、清洗槽；10、测读槽。
具体实施方式
以下结合附图对本发明作进一步详细说明。
制备例1：缓冲溶液的配制，具体包括如下配置步骤。
1.缓冲液1的配制：称取14.8g三乙醇胺、5.8g的氯化钠，溶解于100mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至7.3，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液1。
2.缓冲液2的配制：称取75.0g甘氨酸，溶解于100mL纯化水中，用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液2。
3.缓冲液4的配制：称取10.0g十水合四硼酸钠，溶解于100mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至11.0，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液3。
4.缓冲液5的配制：称取470g磷酸氢二钾，溶解于100mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至7.3，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液5。
5.缓冲液6的配制：称取8.0g三羟甲基氨基甲烷、9.0g的氯化钠、3.0g的牛血清白蛋白，溶解于200mL纯化水中，并加入20mL吐温20，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至7.8，用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液6。
6.缓冲液7的配制：称取12g三羟甲基氨基甲烷、50.0g牛血清白蛋白、30.0g甘氨酸，溶解于200mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至8.8，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液7。
7.缓冲液8的配制：称取5.6g十二水合磷酸氢二钠、0.55g磷酸二氢钠、9.0g氯化钠和1.0g牛血清白蛋白，溶解于200mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至7.6，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液8。
8.缓冲液9的配制：称取5.6g十二水合磷酸氢二钠、0.55g磷酸二氢钠、9.0g氯化钠、1.0g牛血清白蛋白和80g蔗糖，溶解于100mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至6.2，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液9。
制备例2：缓冲溶液的配制，具体包括如下配置步骤。
1.缓冲液1的配制：称取15.1g三乙醇胺、6.0g的氯化钠，溶解于100mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至7.6，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液1。
2.缓冲液2的配制：称取75.0g甘氨酸，溶解于100mL纯化水中，用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液2。
3.缓冲液4的配制：称取7.0g十水合四硼酸钠，溶解于100mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至9.0，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液4。
4.缓冲液5的配制：称取530g磷酸氢二钾，溶解于100mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至7.6，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液5。
5.缓冲液6的配制：称取7.5g三羟甲基氨基甲烷、9.0g的氯化钠、10.0g的牛血清白蛋白，溶解于200mL纯化水中，并加入5mL吐温20，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至7.3，用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液6。
6.缓冲液7的配制：称取15g三羟甲基氨基甲烷、5.0g牛血清白蛋白、1.0g甘氨酸，溶解于200mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至7.6，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液7。
7.缓冲液8的配制：称取5.9g十二水合磷酸氢二钠、0.60g磷酸二氢钠、9.0g氯化钠和50.0g牛血清白蛋白，溶解于200mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至7.0，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液8。
8.缓冲液9的配制：称取5.9g十二水合磷酸氢二钠、0.60g磷酸二氢钠、9.0g氯化钠、50.0g牛血清白蛋白和140g蔗糖，溶解于100mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至8.0，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液9。
制备例3：缓冲溶液的配置方法，与制备例1的区别在于，缓冲液5的配置方法如下：称取300g磷酸氢二钾和120g磷酸二氢钾溶解于100mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至6.4，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液5。
制备例4：缓冲溶液的配置方法，与制备例1的区别在于，缓冲液6的配置方法如下：称取7.5g三羟甲基氨基甲烷、9.0g的氯化钠、溶解于200mL纯化水中，并加入5mL吐温20，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至6.5，用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液6。
制备例5：缓冲溶液的配置方法，与制备例1的区别在于，缓冲液7的配置方法如下：称取15g三羟甲基氨基甲烷、1.0g甘氨酸，溶解于200mL纯化水中，通过4mM盐酸和4mM氢氧化钠调节pH值至7.6，并用纯化水定容至1000ml，再用0.22μm的滤膜进行过滤，得到缓冲液7。
制备例6：第一活化剂溶液的配置方法：称取2-亚氨基硫烷盐酸盐,用缓冲液1溶解至13.76mg/mL，得到2-亚氨基硫烷盐酸盐溶液，即为第一活化剂溶液。
制备例7：第一活化剂溶液的配置方法：称取2-亚氨基硫烷盐酸盐,用缓冲液1溶解至12mg/mL，得到2-亚氨基硫烷盐酸盐溶液，即为第一活化剂溶液。
制备例8：第一活化剂溶液的配置方法：称取2-亚氨基硫烷盐酸盐,用缓冲液1溶解至14mg/mL，得到2-亚氨基硫烷盐酸盐溶液，即为第一活化剂溶液。
制备例9：第二活化剂溶液的配置方法：称取mg(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯，用二甲基甲酰胺溶解至6.69mg/mL，即为第二活化剂溶液。
制备例10：第二活化剂溶液的配置方法：称取mg(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯，用二甲基甲酰胺溶解至6mg/mL，即为第二活化剂溶液。
制备例11：第二活化剂溶液的配置方法：称取mg(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯，用二甲基甲酰胺溶解至8mg/mL，即为第二活化剂溶液。
制备例12：终止试剂的配制方法：称取马来酰亚胺，用二甲基甲酰胺溶解并配制成9.7mg/mL的溶液；再加入缓冲液1进行稀释，得到0.97mg/mL马来酰亚胺溶液，作为终止试剂。
制备例13：终止试剂的配制方法：称取马来酰亚胺，用二甲基甲酰胺溶解并配制成8.5mg/mL的溶液；再加入缓冲液1进行稀释，得到0.85mg/mL马来酰亚胺溶液，作为终止试剂。
制备例14：终止试剂的配制方法：称取马来酰亚胺，用二甲基甲酰胺溶解并配制成11.0mg/mL的溶液；再加入缓冲液1进行稀释，得到1.1mg/mL马来酰亚胺溶液，作为终止试剂。
原料购买：
在以下实施例中，部分原料的来源如表1所示：
Figure BDA0002566765880000131
其余物料均选购自市面上常见试剂供应厂家。
实施例1：心肌肌钙蛋白I检测试剂，包括包被抗体溶液、检测抗体溶液和指示剂溶液。
其中，包被抗体溶液中包括包被抗体，包被抗体包括由抗体1与固定相偶联得到的抗体固定相偶联物1和由抗体2与固定相偶联得到的抗体固定相偶联物2两种成分。其中，抗体1与心肌肌钙蛋白I的结合位点为52-75，抗体2与心肌肌钙蛋白结合位点为95-106。固定相为磁微粒，磁微粒的粒径范围为1～4μm。在包被抗体溶液中，抗体固定相偶联物1与抗体固定相偶联物2浓度之比为2:3。检测抗体溶液中含有检测抗体，检测抗体为抗体3与碱性磷酸酶偶联得到的偶联物。抗体3与心肌肌钙蛋白I的结合位点为30-40。
该检测试剂的制备包括如下两个工序：S1、检测抗体溶液的制备和S2、包被抗体溶液的制备和S3、指示剂溶液的准备。其中，指示剂溶液直接购买自阿匹斯公司。
S1、检测抗体溶液的制备具体包括如下步骤：
S1-1：抗体3的活化，将制备例6中得到的第一活化剂溶液加入2mg/mL抗体3溶液中进行活化，震荡混匀后在室温下反应30min；随后将缓冲液2加入抗体3溶液中终止活化，室温反应10min；通过重结晶除去过量的2-亚氨基硫烷盐酸盐，得到活化抗体3溶液；其中，2-亚氨基硫烷盐酸盐与抗体3的物质的量之比为15:1，每毫克抗体3对应的缓冲液2的加入量为5μL。
S1-2：碱性磷酸酶的活化：向浓度为2mg/mL的碱性磷酸酶溶液加入如制备例9中所得的第二活化剂溶液，并震荡混匀后，室温下反应30min；随后将缓冲液2加入碱性磷酸酶溶液中，室温反应10min，终止活化，通过重结晶除去过量的(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯，得到活化碱性磷酸酶溶液；上述过程中，(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯与碱性磷酸酶的物质的物质的量之比为15:1；每毫克碱性磷酸酶对应的缓冲液2的加入量为10μL。
S1-3：抗体3与碱性磷酸酶的偶联：将步骤S1-1中得到的活化抗体3溶液和步骤S1-2中得到的活化碱性磷酸酶溶液混合，保持2～8℃反应12小时，得到抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液；其中，抗体3和碱性磷酸酶的质量比为1:1。
S1-4：偶联反应的终止：按1mg抗体3加入10μL终止试剂比例，将制备例12中得到的终止试剂与抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液混合，在室温下反应15min；得到终止后的偶联反应液。
S1-5：抗体3偶联物的纯化：向步骤S1-4中得到的终止后的抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液中加入缓冲液1，混合均匀，通过超滤法将上述溶液直至抗体3浓度为0.5mg/mL，得到抗体3-碱性磷酸酶偶联物浓缩液；随后以缓冲液2作为洗脱剂对抗体3-碱性磷酸酶偶联物浓缩液进行柱层析分离，通过超滤法对柱层析分离得到的溶液进行浓缩，得到纯化后的酶标抗体3偶联物溶液。
S1-6：检测抗体3溶液的配制：向步骤S1-5中的纯化后的酶标抗体3偶联物溶液中加入缓冲液8，充分混匀，得到检测抗体溶液，所述检测抗体溶液中检测抗体浓度为1.2μg/mL。
S2、包被抗体溶液的制备具体包括如下步骤：
S2-1：将磁微粒用缓冲液4清洗后，并用缓冲液4重悬至5mg/mL，得到磁微粒溶液。
S2-2：按磁微粒与抗体质量比100:1的比例在磁微粒溶液中加入抗体1溶液或抗体2溶液，并加入缓冲溶液4，室温反应10min，得到磁微粒-抗体混合液；其中，每毫克磁微粒对应加入的缓冲溶液4的量为10μL。
S2-3：向步骤S2中得到的磁微粒-抗体混合液中加入封闭试剂，对磁微粒表面未反应的位点进行封闭，得到封闭后的抗体-磁微粒溶液。
S2-4：对步骤S2-3中得到的抗体磁微粒溶液进行分离，用缓冲液8清洗清洗分离得到的固相，并用缓冲液8重悬至10mg/mL；对应抗体1和抗体2分别得到抗体1-磁微粒偶联物溶液和抗体2-磁微粒偶联物溶液。
S2-5：分别将抗体1-磁微粒偶联物溶液和抗体2-磁微粒偶联物溶液以2:3的比例加入于缓冲液9中，得到包被抗体溶液；所述包被抗体溶液中包被抗体的总浓度为0.5μg/mL。
步骤S2-3包括如下两个分步骤：
步骤2-3-1：将缓冲液5加入步骤S2-2中得到的磁微粒-抗体混合液中，在37℃环境中反应16小时；其中，每毫克磁微粒对应加入的缓冲液5的量为100μL，得到第一封闭磁微粒溶液；
步骤2-3-2：分离步骤2-3-1中得到的第一封闭磁微粒溶液，用缓冲液6清洗分离得到的固相，再用缓冲液6重悬至5mg/mL；在37℃环境中反应16小时，得到封闭后的抗体-磁微粒溶液。
在步骤S1和S2中，所述缓当需要对抗体1、抗体2或抗体3的浓度进行检测时，检测方法如下：
配制抗体1、抗体2和抗体3不同浓度的溶液，通过紫外可见分光光度计对不同浓度的抗体1、抗体2和抗体3溶液的吸收光谱进行测定，将最大吸收波长处的吸收强度与浓度绘制成标准曲线；随后通过紫外可见分光光度计对待测样品的吸收光谱进行测定，通过读取吸收光谱上的最大吸收波长处的吸收强度与标准曲线进行对比，从而得到待测样品中抗体1、抗体2或抗体3的浓度。
在步骤S1和S2中，缓冲液1～缓冲液9选用通过制备例1中的方法配置得到的缓冲液。
实施例2：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：在包被抗体溶液中，体固定相偶联物1与抗体固定相偶联物2浓度之比为1:1。
实施例3：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：在包被抗体溶液中，抗体固定相偶联物1与抗体固定相偶联物2浓度之比为1:2。
实施例4：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：在包被抗体溶液中，抗体固定相偶联物1与抗体固定相偶联物2浓度之比为3:2。
实施例5：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：抗体固定相偶联物1与抗体固定相偶联物2浓度之比为2:3.2。
实施例6～8：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于，依次采用制备例2～4中的缓冲液1～9的配置方法。
实施例9：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于，S1-1具体如下：将制备例7中得到的第一活化剂溶液加入4mg/mL抗体3溶液中进行活化，震荡混匀后在室温下反应60min；随后将缓冲液2加入抗体3溶液中终止活化，室温反应15min；除去过量的2-亚氨基硫烷盐酸盐，得到活化抗体3溶液；其中，2-亚氨基硫烷盐酸盐与抗体3的物质的量之比为24:1，每毫克抗体3对应的缓冲液2的加入量为12μL。
S1-2具体如下：向浓度为4mg/mL的碱性磷酸酶溶液加入如制备例10中所得的第二活化剂溶液，并震荡混匀后，室温下反应60min；随后将缓冲液2加入碱性磷酸酶溶液中，室温反应15min，终止活化，除去过量的(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯，得到活化碱性磷酸酶溶液；上述过程中，(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯与碱性磷酸酶的物质的物质的量之比为40:1；每毫克碱性磷酸酶对应的缓冲液2的加入量为30μL。
S1-4中选用制备例13中得到的终止试剂，反应时间为10min。
实施例10：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于，S1-1具体如下：将制备例8中得到的第一活化剂溶液加入3mg/mL抗体3溶液中进行活化，震荡混匀后在室温下反应30min；随后将缓冲液2加入抗体3溶液中终止活化，室温反应10min；除去过量的2-亚氨基硫烷盐酸盐，得到活化抗体3溶液；其中，2-亚氨基硫烷盐酸盐与抗体3的物质的量之比为30:1，每毫克抗体3对应的缓冲液2的加入量为20μL。
S1-2具体如下：向浓度为3mg/mL的碱性磷酸酶溶液加入如制备例11中所得的第二活化剂溶液，并震荡混匀后，室温下反应30min；随后将缓冲液2加入碱性磷酸酶溶液中，室温反应10min，终止活化，除去过量的(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯，得到活化碱性磷酸酶溶液；上述过程中，(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯与碱性磷酸酶的物质的物质的量之比为60:1；每毫克碱性磷酸酶对应的缓冲液2的加入量为50μL。
S1-4中选用制备例14中得到的终止试剂，终止试剂加入的量为12μL。
实施例11：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于，S1-3的具体步骤如下：将步骤S1-1中得到的活化抗体3溶液和步骤S1-2中得到的活化碱性磷酸酶溶液混合，保持2～8℃反应18小时，得到抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液；其中，抗体3和碱性磷酸酶的质量比为1:2。
S1-5的具体步骤如下：抗体3偶联物的纯化：向步骤S1-4中得到的终止后的抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液中加入缓冲液1，混合均匀，通过超滤法将上述溶液直至抗体3浓度为2mg/mL，得到抗体3-碱性磷酸酶偶联物浓缩液；随后以缓冲液2作为洗脱剂对抗体3-碱性磷酸酶偶联物浓缩液进行柱层析分离，通过超滤法对柱层析分离得到的溶液进行浓缩，得到纯化后的酶标抗体3偶联物溶液。
实施例12：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：S2-1具体步骤如下：将磁微粒用缓冲液4清洗后，并用缓冲液4重悬至4mg/mL，得到磁微粒溶液。
S2-2具体步骤如下：按磁微粒与抗体质量比50:1的比例在磁微粒溶液中加入抗体1溶液或抗体2溶液，并加入缓冲溶液4，室温反应15min，得到磁微粒-抗体混合液；其中，每毫克磁微粒对应加入的缓冲溶液4的量为60μL。
S2-4具体步骤如下：对步骤S2-3中得到的抗体磁微粒溶液进行分离，用缓冲液8清洗清洗分离得到的固相，并用缓冲液8重悬至8mg/mL；对应抗体1和抗体2分别得到抗体1-磁微粒偶联物溶液和抗体2-磁微粒偶联物溶液。
实施例13：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：S2-1具体步骤如下：将磁微粒用缓冲液4清洗后，并用缓冲液4重悬至6mg/mL，得到磁微粒溶液。
S2-2具体步骤如下：按磁微粒与抗体质量比10:1的比例在磁微粒溶液中加入抗体1溶液或抗体2溶液，并加入缓冲溶液4，室温反应10min，得到磁微粒-抗体混合液；其中，每毫克磁微粒对应加入的缓冲溶液4的量为100μL。
S2-4具体步骤如下：对步骤S2-3中得到的抗体磁微粒溶液进行分离，用缓冲液8清洗清洗分离得到的固相，并用缓冲液8重悬至12mg/mL；对应抗体1和抗体2分别得到抗体1-磁微粒偶联物溶液和抗体2-磁微粒偶联物溶液。
实施例14：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于，S2-3具体步骤如下：
步骤2-3-1：将缓冲液5加入步骤S2-2中得到的磁微粒-抗体混合液中，在37℃环境中反应24小时；其中，每毫克磁微粒对应加入的缓冲液5的量为1001μL，得到第一封闭磁微粒溶液；
步骤2-3-2：分离步骤2-3-1中得到的第一封闭磁微粒溶液，用缓冲液6清洗分离得到的固相，再用缓冲液6重悬至3.8mg/mL；在37℃环境中反应24小时，得到封闭后的抗体-磁微粒溶液。
实施例15：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：步骤S1-6中，最后得到的检测抗体溶液中检测抗体浓度为1μg/mL；在步骤S2-5中，最后得到的包被抗体溶液中包被抗体的浓度为0.4μg/mL。
实施例16：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：步骤S1-6中，最后得到的检测抗体溶液中检测抗体浓度为1.4μg/mL；在步骤S2-5中，最后得到的包被抗体溶液中包被抗体的浓度为0.6μg/mL。
实施例17：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：步骤S1-5的具体步骤如下：向步骤S1-4中得到的终止后的抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液中加入缓冲液1，混合均匀，通过透析浓缩法将上述溶液直至抗体3浓度为0.0.5mg/mL，得到抗体3-碱性磷酸酶偶联物浓缩液；随后以缓冲液2作为洗脱剂对抗体3-碱性磷酸酶偶联物浓缩液进行柱层析分离，通过透析浓缩法柱层析分离得到的溶液进行浓缩，得到纯化后的酶标抗体3偶联物溶液。
实施例18：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：磁微粒的粒径为4～7μm。
实施例19：一种心肌钙检测试剂盒，包括盒体，在盒体内放置有十个试剂条1、两个校准样盛放瓶和一个质控样盛放瓶，试剂条的结构如图1所示，在试剂条上设置有吸头2、洗脱套3、清洗液盛放槽4、发光底物盛放槽5、包被抗体溶液盛放槽6、检测抗体溶液盛放槽7、反应槽8、三个清洗槽9及测读槽10，其中吸头2、洗脱套3和清洗槽9均可从试剂条上拆卸下。
清洗液盛放槽4中盛放有清洗液，包被抗体溶液盛放槽6中盛放有实施例1中所制的包被抗体溶液，检测抗体溶液盛放槽7盛放槽中盛放有实施例1中所制的的检测抗体溶液，发光底物盛放槽5中盛放有吖啶类碱性磷酸酶显色剂。两个校准样盛放瓶中分别盛放有高浓度校准液和低浓度校准液，质控样盛放瓶中盛放有质控样。
高浓度校准样和低浓度校准样的制备方法如下：称取心肌肌钙蛋白I重组蛋白，溶解于制备例1中得到的缓冲液7中，分别得到高浓度校准样溶液和低浓度校准样溶液，其中，高浓度校准样溶液的浓度为25ng/mL，低浓度校准样的浓度为0.05ng/mL，将高浓度校准样溶液和低浓度校准样溶液分别等体积分装于两个校准样盛放瓶中，并冻干，即得到高浓度校准样和低浓度校准样。
质控品的制备方法如下：称取心肌肌钙蛋白I重组蛋白，溶解于制备例1中得到的缓冲液7中，配制得到质控品溶液，质控品溶液的浓度低于高浓度校准样溶液的浓度，且高于低浓度校准样溶液的浓度；将质控品溶液分装于质控品盛放瓶中，且质控品盛放瓶中质控品溶液的体积等于校准样盛放瓶中高浓度校准样和低浓度校准样的体积，随后将质控品盛放瓶冻干，即得到质控品。
清洗液通过如下方法配制：配制浓度为10mM、pH值为7.4的三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液，加入氯化钠，使氯化钠的最终浓度为150mM，并加入表面活性剂；表面活性剂加入量为1g/L，选用的表面活性剂为吐温20和曲拉通X-100的混合物。
在该试剂盒上还设置有用于被读取设备读取的标识码，标识码中收录有本试剂盒的标准曲线信息。在本实施例中，标识码为二维码。
实施例20～36：心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，与实施例19的区别在于，检测抗体溶液和包被抗体溶液分别选用实施例2～17中得到的检测抗体溶液和包被抗体溶液。其中，实施例24～26中使用的缓冲溶液7分别通过制备例2～4中的方法进行配置。
实施例37：心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，与实施例19的区别在于，缓冲液7通过制备例5中的方法进行配置。
实施例38：心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，与实施例19的区别在于，清洗液通过如下方法配制：配制浓度为5mM、pH值为7.9的三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液，加入氯化钠，使氯化钠的最终浓度为250mM，并加入表面活性剂；所述表面活性剂加入量为3g/L，选用的表面活性剂为月桂基磺化琥珀酸单酯二钠。
实施例39：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：包被抗体包括由抗体4与固定相偶联得到的抗体固定相偶联物4和由抗体5与固定相偶联得到的抗体固定相偶联物5两种成分，抗体4与心肌肌钙蛋白I的结合位点为89-93，抗体5与心肌肌钙蛋白I的结合位点为104-119。
实施例40：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：包被抗体包括由抗体6与固定相偶联得到的抗体固定相偶联物6和由抗体7与固定相偶联得到的抗体固定相偶联物7两种成分，抗体6与心肌肌钙蛋白I的结合位点为65-74，抗体7与心肌肌钙蛋白I的结合位点为143-152。
实施例41：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：检测抗体为抗体8与碱性磷酸酶偶联得到的偶联物。抗体8与心肌肌钙蛋白I的结合位点为41-49。
实施例42-44：心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，与实施例19的区别在于，选用实施例39-41中的检测试剂。
对比例1：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：包被抗体为抗体9与固定相偶联得到的抗体固定相偶联物9，抗体9与心肌肌钙蛋白I的结合位点为65-74。
对比例2：心肌肌钙蛋白I检测试剂，与实施例1的区别在于：检测抗体由抗体10与碱性磷酸酶偶联得到的抗体-碱性磷酸酶偶联物1和抗体11与碱性磷酸酶偶联得到的抗体-碱性磷酸酶偶联物2混合而成，抗体-碱性磷酸酶偶联物1与抗体-碱性磷酸酶偶联物2的物质的量之比为1:1，其中抗体10与心肌肌钙蛋白I的结合位点为30-40，抗体2与心肌肌钙蛋白I的结合位点为143-152。
对比例3～4，与实施例19的区别在于，检测抗体溶液和包被抗体溶液分别选用对比例1～2中得到的检测抗体溶液和包被抗体溶液。
对比例5：心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，与实施例19的区别在于，配制浓度为10mM、pH值为7.4的三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液，加入表面活性剂；表面活性剂加入量为1g/L，选用的表面活性剂为吐温20和曲拉通X-100的混合物。
对于实施例18～38、实施例42～44及对比例3～5，其使用方法如下：
P1：将30μL低浓度校准样、50μL包被抗体溶液和50μL检测抗体溶液加入反应槽中，在37℃下反应10min；
P2：在清洗槽中加入清洗液，用磁力将反应槽中反应完毕的磁微粒吸出，并在清洗槽中脱磁，对磁微粒进行清洗，清洗完成后，用磁力将清洗槽中的磁微粒吸出并移动至下一清洗槽，脱磁后再进行清洗，重复清洗三次；
P3：在测读槽中加入150μL指示剂溶液，将清洗完毕的磁微粒通过磁力从清洗槽中吸出，转移至测读槽中并脱磁，检测测读槽内试剂的发光强度，得到低浓度校准值；
P4：将P1中的低浓度校准样替换为高浓度校准样，重复P1～P3，得到高浓度校准值；
P5：将P3中得到的低浓度校准值与P4中得到的高浓度校准值与标准曲线进行校准；
P6：将P1中的低浓度校准样替换为待测样品，重复P1～P3，得到样品发光强度；
P7：将样品发光强度与校准后的发光曲线进行比对，得到样品的心肌肌钙蛋白I浓度值。
上述过程通过北京美联泰科生物技术有限公司生产的MS-Fast全自动化学发光免疫分析仪自动进行。
对实施例19～38、实施例42～44及对比例3～5，每个实施例或对比例取三个批次的试剂盒，通过如下实验进行测试。
1.回收率测定：将浓度约为25ng/mL的心肌肌钙蛋白I在缓冲液7中的溶液加入到浓度范围0ng/mL-1ng/mL的低值样本B中，所加入cTnI抗原与低值样本B之间的体积比例为1:9，根据公式(1)计算回收率R，结果应符合实验要求。
Figure BDA0002566765880000221
式中：
R—回收率；
V—加入心肌肌钙蛋白I缓冲液7溶液的体积；
V0—低值样本B的体积；
C—低值样本B加入A液后的3次测量平均值；
C0—低值样本B的3次测量平均值；
CS—心肌肌钙蛋白I缓冲液7溶液的浓度。
实验1的实验结果如表2所示。
Figure BDA0002566765880000222
通过上述实验可知，上述实施例和对比例再将固定浓度的心肌肌钙蛋白I加入低浓度样本中后，其回收率均落在[85％，105％]区间内，证明上述样品均可以用于对心肌肌钙蛋白I的浓度进行测定。
2.空白限测定：将零浓度校准品作为样本，重复测试20次，得到20次测试结果的相对发光值，计算其平均值a和标准差SD。根据试剂盒所用校准品的定标曲线方程，将a+2SD所对应的相对发光值代入标准曲线，求出对应的浓度值，即为空白限。
实验2的实验结果如表3所示。
Figure BDA0002566765880000231
出于多种不可抗拒的原因(如底物自发荧光、受激荧光、部分杂质的荧光、溶剂中自由基发光、基线偏移、检测设备光密闭性等)，对于空白样品，在检测中往往也会测定得到一定程度的发光，该发光过程较为微弱，一般情况下不会对检测过程产生影响。将上述发光强度代入标准曲线中并计算得到对应的心肌肌钙蛋白I浓度即为空白限。通过上述空白限实验结果可知，实施例19～38及实施例42～44的空白限均低于0.01ng/mL，其在检测过程中对实际测得的心肌肌钙蛋白I的测定浓度不会产生实质性的影响。
4.检出限测定：将5份浓度近似检出限的样本进行检测，每份样本检测5次，对检测结果按照大小进行排序，若相对发光值低于空白限相对发光值的样本数量不超过三个，则检出限低于该样本的浓度。若相对发光值低于空白限相对发光值的样本数量超过三个，则向上调节样本的浓度，再进行测定，直至测定得到的相对发光值低于空白限相对发光值的样本数量不超过三个。每次调节梯度为0.01mg/mL。实施例19～39及实施例42～44的检出限测定结果如表4所示。
Figure BDA0002566765880000241
通过上述实验结果可知，实施例实施例19～38在检测过程中，检出限均较低，其中除实施例25、实施例26、实施例27和实施例35，其余物料的检出限均低于0.05mg/mL，证明了上述实施例具有较好的检测精度和灵敏度。
实施例26中缓冲液5为酸性，实施例27的缓冲液6中不含牛血清白蛋白，因此磁微粒表面的结合位点无法被缓冲液5和缓冲液6封闭，在检测中会多余的磁微粒会与抗体发生偶联反应，造成检出限偏高。实施例35中磁微粒的粒径偏大，因此磁微粒与抗体1和抗体2偶联后，对于心肌肌钙蛋白I的结合能力变弱，导致了检出限的提高。
实施例42、实施例43和实施例44对抗体的结合位点进行了更换，其检出限稍有提高，原因可能在于，当抗体通过上述位点与心肌肌钙蛋白I进行结合时，受到的位阻较大，导致抗体与心肌肌钙蛋白I的结合性较差，进而导致检出限的升高。
对比例3中选用的为现有技术中常用的手段，即固定相和检测试剂分别与一种抗体进行偶联，其检出限明显高于本发明中涉及的技术方案，证明了相较于现有技术，本发明中的技术方案具有更优的检测精度。对比例5中，清洗液中不含有氯化钠导致清洗过程无法彻底将粘附于磁微粒表面粘附的心肌肌钙蛋白I除去，导致检出限偏高。
4.线性范围：用制备例1中制备得到的缓冲液7配制得到浓度为200ng/mL、150ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、5ng/mL、0.5ng/mL、0.05ng/mL、0.01ng/mL，共9个浓度梯度的心肌肌钙蛋白I溶液。将这9个浓度点和零浓度点每个浓度点进行三次平行测试，得到相对发光值，使用四参数方程计算各点浓度。计算各样品浓度值的平均值，与稀释浓度以最小二乘法做线性回归方程。
将浓度为0的样本进行30次平行测试，将可与零浓度点分开且与其他稀释浓度呈明显线性关系的最小浓度点进行30平行测试。通过以下公式(2)计算最低检出限。
LOD＝AVGa+2SDa+2SDs＝LOB+2SDs………………(2)
LOD————最低检出限相对发光强度；
AVGa————30个零浓度点相对发光强度的平均值；
SDa————30个零浓度点相对发光强度的标准差；
SDs————30个低浓度点相对发光强度的标准差；
LOB————空白限相对发光强度。
通过计算最低检出限得到线性范围下限，通过判断r2得到线性范围上限。
5.线性回归：将接近线性范围上限的高值样本与零浓度样本混合成5个稀释浓度，理论浓度分别为12.5ng/mL、3.13ng/mL、0.78ng/mL、0.2ng/mL、0.05ng/mL。对每一浓度的样本各重复测试3次得到浓度值，记录各样品的测量结果，并计算各样品3次测量值的平均值(xi)。以稀释浓度(yi)为自变量，以测定结果均值(xi)为因变量求出线性回归方程。按公式(3)计算线性回归的相关系数(r)。
Figure BDA0002566765880000261
式中：r————相关系数；
xi————稀释比例；
yi————各个样本测定结果均值；
Figure BDA0002566765880000264
————稀释比例的均值；
Figure BDA0002566765880000263
————样本测定结果总均值。
实验4和实验5的实验结果如表5所示。
Figure BDA0002566765880000262
通过上述实验可知，各个样本的检出限与线性范围基本直接相关。当抗体1与抗体2的比例为1:1、1:2或3:2(即实施例20、21和22)时，其线性拟合度相较于抗体1与抗体2的比例为2:3时的线性比例有较大的差距，因此当选用实施例19中的比例可以进一步提高测定的精准度。
对比例4中，采用了2+2的形式，通过两种包被抗体与两种检测抗体共同对心肌肌钙蛋白I进行结合，但是在实际反应过程中，由于反应平衡的存在，并非所有心肌肌钙蛋白I表面均与两种检测抗体同时联结，因此造成测定结果的线性区间较小，且相关系数较低，无法形成良好的线性拟合。对比例5中，清洗液中不含氯化钠，因此在清洗时难以洗去通过范德华力粘附于固定抗体表面的检测抗体，造成检测结果不精确，线性空间的下限较差，且线性拟合度也较差。
6.重复性检测：分别配制心肌肌钙蛋白I的缓冲液7高浓度溶液(0.5±0.25ng/mL)和低浓度溶液(0.05±0.025ng/mL)各重复检测10次，分别计算10次测试结果的平均值和标准差。按公式(4)计算变异系数(CV)。
Figure BDA0002566765880000271
式中：SD——样本测试值的标准差；
Figure BDA0002566765880000272
——样本测试值的平均值。
对实施例18～38及实施例42～44进行上述测试得到的结果如表6所示。
Figure BDA0002566765880000273
Figure BDA0002566765880000281
通过上述数据可知，本发明实施例的试剂盒测试得到的变异系数均低于10％，且高浓度样本的变异系数均低于5％。变异系数越低，证明该试剂盒对不同样本之间测定的重复性越好。在正常情况下，变异系数低于10％，即证明该样本合格。
7.特异性实验：配制1000ng/mL的心肌肌钙蛋白C缓冲液7溶液、心肌肌钙蛋白T缓冲液7溶液和骨肌心肌肌钙蛋白I缓冲溶液，各测定三次，去平均值，按照公式(5)计算结果。
RCR＝M/C×100％…………………………………………(5)
式中：RCR——交叉反应率；
M——交叉反应物测定结果均值；
C——交叉反应物标示值。
对实施例19～38及实施例42～44中得到的试剂盒进行上述测试，结果如表7所示。
Figure BDA0002566765880000282
Figure BDA0002566765880000291
根据《化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品技术审评规范(2017版)》中“附录：常见测试项目干扰物质列表”，对于心肌肌钙蛋白I检测的试剂盒，需要使用心肌肌钙蛋白C、心肌肌钙蛋白T和骨肌心肌肌钙蛋白I对其进行特异性检测。通过上述实验可知，上述实施例中得到的试剂盒对心肌肌钙蛋白C、心肌肌钙蛋白T和骨肌心肌肌钙蛋白I的交叉反应率极低，在实际运用中，交叉反应率低于5％即可投入使用，因此上述实施例的交叉反应率测试均符合实际使用要求。
8.干扰物质测定：在人血清样本中添加一定量的干扰物，测定干扰物是否对样本的测定值造成影响。干扰物的选择及其浓度如下：血红蛋白：5mg/mL；胆红素：0.125mg/mL；甘油三酯：10mg/mL。
最终偏差值(％)＝(加入干扰物结果–未加干扰物样本结果)/未加干扰物样本结果×100％。
对实施例19～38及实施例42～44中得到的试剂盒进行上述实验，结果如表8所示。
Figure BDA0002566765880000292
Figure BDA0002566765880000301
9.抗凝剂影响测定：分别选用血浆样本和全血样本，在样本中分别添加肝素钠和乙二胺四乙酸二钾作为抗凝剂，计算添加不同抗凝剂测值的样本与未添加抗凝剂的样本测定值的偏差，测定其中偏差大于10％的样本数量。对实施例19～38进行上述实验测定，得到实验结果如表9所示。
Figure BDA0002566765880000302
Figure BDA0002566765880000311
偏差(％)＝(加入抗凝剂结果–未加抗凝剂样本结果)/未加抗凝剂样本结果×100％。
通过上述实验可知，对于血浆或纯血样本，选用不同的抗凝剂，对实际结果并无明显影响。
10.稀释样本测定：超出线性范围上限的已知浓度的血清样本10例，用生理盐水按照5倍稀释后测试，计算回算浓度后与原浓度偏差。对实施例19～38及实施例42～44进行上述测定，得到每个实施例中的试剂盒测得的偏差值的绝对值的平均数如表10所示。
Figure BDA0002566765880000312
通过上述实验可知，对于实施例19～38及实施例42～44，高浓度样本在稀释后重新进行测定时，每组样本的测定值与理论计算值的偏差平均数均小于8％，且在实际检测过程中，每次测定的偏差均在±10％范围，因此上述实施例中得到的试剂盒均符合实际使用要求。
本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。

Claims (15)

1.心肌肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于：包括分开存储并联合使用的包被抗体溶液、检测抗体溶液、指示剂溶液；
其中，包被抗体包括由抗体1与固定相偶联得到的抗体固定相偶联物1，以及由抗体2与固定相偶联得到的抗体固定相偶联物2，检测抗体通过抗体3与标记物偶联得到；所述指示剂溶液中包含用于定量检测标记物浓度的指示剂，其中，抗体1、抗体2和抗体3中任意两者之间与心肌肌钙蛋白I的结合位点均不重复。
2.根据权利要求1所述的心肌肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于：抗体1与心肌肌钙蛋白I的结合位点为52-75，抗体2与心肌肌钙蛋白I的结合位点为95-106，抗体3与心肌肌钙蛋白的结合位点为30-40。
3.根据权利要求1所述的心肌肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于：所述固定相为磁微粒，所述磁微粒的粒径为1～4μm。
4.根据权利要求3所述的心肌肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于：抗体固定相偶联物1与抗体固定相偶联物2浓度之比为2:（3～3.2）。
5.根据权利要求1所述的心肌肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于：所述标记物为碱性磷酸酶，所述指示剂为用于定量测定碱性磷酸酶含量的发光底物。
6.一种制备根据权利要求1至5中任一项所述的心肌肌钙蛋白I检测试剂的方法，其特征在于：包括如下工序：
S1、检测抗体溶液的制备；
S2、包被抗体溶液的制备；
S3、提供指示剂溶液；
其中，S1具体包括如下步骤：
S1-1：抗体3的活化，配制第一活化剂溶液，与2～4mg/mL的抗体3溶液混合并进行活化，震荡混匀后在室温下充分反应；随后将缓冲液2加入抗体3溶液中终止活化，室温反应10～15min；除去过量的第一活化剂，得到活化抗体3溶液；
S1-2：碱性磷酸酶的活化：配制第二活化剂溶液，与浓度为2～4mg/mL的碱性磷酸酶溶液混合均匀，室温下充分反应；随后将缓冲液2加入碱性磷酸酶溶液中，室温反应10～15min，终止活化，除去过量的第二活化剂，得到活化碱性磷酸酶溶液；
S1-3：抗体3与碱性磷酸酶的偶联：将步骤S1-1中得到的活化抗体3溶液和步骤S1-2中得到的活化碱性磷酸酶溶液混合，保持2～8℃反应12～18小时，得到抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液；其中，抗体3和碱性磷酸酶的质量比为1:（1～2）；
S1-4：偶联反应的终止：向步骤S3中所得的抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液中加入终止试剂，室温反应，得到终止后的抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液；
S1-5：抗体3偶联物的纯化：向步骤S1-4中得到的终止后的抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液中加入缓冲液1，混合均匀，浓缩溶液直至抗体3浓度为0.5～2mg/mL，得到抗体3-碱性磷酸酶偶联物浓缩液；随后以缓冲液2作为洗脱剂对抗体3-碱性磷酸酶偶联物浓缩液进行柱层析分离，并浓缩得到纯化后的酶标抗体3偶联物溶液；
S1-6：检测抗体3溶液的配制：向步骤S1-5中的纯化后的酶标抗体3偶联物溶液中加入缓冲液8，充分混匀，得到检测抗体溶液，所述检测抗体溶液中检测抗体浓度为1～1.4μg/mL；
上述过程中，所述缓冲液1为三乙醇胺缓冲溶液，pH值为7.3～7.6；所述缓冲液2为甘氨酸缓冲溶液；所述缓冲液8为含牛血清白蛋白和氯化钠的磷酸缓冲溶液，所述缓冲液8的pH值为7.0～7.6；
步骤S2具体包括如下步骤：
S2-1：将磁微粒用缓冲液4清洗后，并用缓冲液4重悬至4～6mg/mL，得到磁微粒溶液；
S2-2：按磁微粒与抗体质量比（10～100）:1的比例在磁微粒溶液中加入抗体1溶液或抗体2溶液，并加入缓冲溶液4，室温反应10～15min，得到磁微粒-抗体混合液；其中，每毫克磁微粒对应加入的缓冲溶液4的量为10～100μL；
S2-3：向步骤S2中得到的磁微粒-抗体混合液中加入封闭试剂，对磁微粒表面未反应的位点进行封闭，得到封闭后的抗体-磁微粒溶液；
S2-4：对步骤S2-3中得到的抗体磁微粒溶液进行分离，用缓冲液8清洗清洗分离得到的固相，并用缓冲液8重悬至8～12mg/mL；对应抗体1和抗体2分别得到抗体1-磁微粒偶联物溶液和抗体2-磁微粒偶联物溶液；
S2-5：分别将抗体1-磁微粒偶联物溶液和抗体2-磁微粒偶联物溶液以2:（2.9～3.1）的比例加入于缓冲液9中，得到包被抗体溶液；所述包被抗体溶液中包被抗体的总浓度为0.4～0.6μg/mL；
其中，所述缓冲液4为十水合四硼酸钠缓冲溶液，所述缓冲液4的pH值为9.0～11.0；所述缓冲液9为溶解有氯化钠、牛血清白蛋白和蔗糖的磷酸缓冲溶液，所述缓冲液9的pH值为6.2～8.0。
7.据权利要求6所述的方法，其特征在于：在步骤S1-4中，终止试剂的具体配制方法如下：称取马来酰亚胺，用二甲基甲酰胺溶解，再加入缓冲液1进行稀释，得到8～11g/mL的马来酰亚胺溶液，作为终止试剂；
S1-4具体步骤如下：按1mg抗体3加入10～12μL终止试剂比例，将上述终止试剂与抗体3-碱性磷酸酶偶联溶液混合，在室温下反应15～18min；得到终止后的偶联反应液。
8.据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述磁微粒为甲苯磺胺基修饰的磁微粒，步骤S2-3具体包括如下两个步骤：
步骤S2-3-1：将缓冲液5加入步骤S2-2中得到的磁微粒-抗体混合液中，在37℃环境中反应16～24小时；其中，每毫克磁微粒对应加入的缓冲液5的量为100～1000μL，得到第一封闭磁微粒溶液；
步骤S2-3-2：分离分步骤S2-3-1中得到的第一封闭磁微粒溶液，用缓冲液6清洗分离得到的固相，再用缓冲液6重悬至3.8～5mg/mL；在37℃环境中反应16～24小时，得到封闭后的抗体-磁微粒溶液；
其中，所述缓冲液5为pH值范围为9.0～11.0的磷酸缓冲溶液，所述缓冲液6为pH值为7.3～7.8的三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液，所述缓冲液6中溶解有牛血清白蛋白和吐温20。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：在步骤S1-1中，按如下步骤配制第一活化剂溶液：称取2-亚氨基硫烷盐酸盐,用缓冲液1溶解至12～14mg/mL，得到2-亚氨基硫烷盐酸盐溶液，即为第一活化剂溶液；
步骤S1-1具体操作方法如下：将上述第一活化剂溶液加入2～4mg/mL抗体3溶液中进行活化，震荡混匀后在室温下反应30～60min；随后将缓冲液2加入抗体3溶液中终止活化，室温反应10～15min；除去过量的2-亚氨基硫烷盐酸盐，得到活化抗体3溶液；其中，2-亚氨基硫烷盐酸盐与抗体3的物质的量之比为（15～30）:1，每毫克抗体3对应的缓冲液2的加入量为5～20μL。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：在步骤S1-2中，按如下步骤配制第二活化剂溶液：称取(N-马来酰亚胺甲基）环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯，用二甲基甲酰胺溶解至6～8mg/mL，即为第二活化剂溶液；
步骤S1-2具体操作方法如下：向浓度为2～4mg/mL的碱性磷酸酶溶液加入上述第二活化剂溶液，并震荡混匀后，室温下反应30～60min；随后将缓冲液2加入碱性磷酸酶溶液中，室温反应10～15min，终止活化，除去过量的(N-马来酰亚胺甲基）环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯，得到活化碱性磷酸酶溶液；上述过程中，(N-马来酰亚胺甲基）环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯与碱性磷酸酶的物质的物质的量之比为（15～60）:1；每毫克碱性磷酸酶对应的缓冲液2的加入量为10～50μL。
11.一种心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，其包括根据权利要求1至5中任一项所述的心肌肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于：所述试剂盒包括一个盒体，所述盒体内放置有校准样盛放瓶、质控样盛放瓶和若干试剂条（1），在所述试剂条（1）上设置发光底物盛放槽（5）、包被抗体溶液盛放槽（6）、检测抗体溶液盛放槽（7），所述包被抗体溶液盛放槽（6）中盛放有包被抗体溶液；检测抗体溶液盛放槽（7）中盛放有检测抗体溶液；发光底物盛放槽（5）中盛放有指示剂溶液；所述校准样盛放瓶设置有两个，两个所述校准样盛放瓶中分别盛放有低浓度校准样和高浓度校准样；所述质控样盛放瓶中盛放有质控样。
12.根据权利要求11所述的心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，其特征在于：高浓度校准样和低浓度校准样的制备方法如下：取对应心肌肌钙蛋白I重组蛋白，溶解于缓冲液7中，分别得到高浓度校准样溶液和低浓度校准样溶液，其中，高浓度校准样溶液的浓度为25ng/mL，低浓度校准样的浓度为0.05ng/mL，将高浓度校准样溶液和低浓度校准样溶液分别等体积分装于两个校准样盛放瓶中，并冻干，即得到高浓度校准样和低浓度校准样；
质控品的制备方法如下：另取心肌肌钙蛋白I重组蛋白，溶解于缓冲液7中，配制得到质控品溶液，质控品溶液的浓度低于高浓度校准样溶液的浓度，且高于低浓度校准样溶液的浓度；将质控品溶液分装于质控品盛放瓶中，且质控品盛放瓶中质控品溶液的体积等于校准样盛放瓶中高浓度校准样和低浓度校准样的体积，随后将质控品盛放瓶冻干，即得到质控品；
其中，缓冲液7通过如下方法配制：称取12.0～15.0g的三羟甲基氨基甲烷、5.0～50.0g的牛血清白蛋白、1.0～30.0g甘氨酸加入到一定量的纯化水中，完全溶解，调节PH值至7.6～8.8，通过纯化水定容至1000mL；用0.22μm的滤膜进行过滤。
13.根据权利要求11所述的心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，其特征在于：所述试剂条（1）上还设置有清洗液盛放槽（4）和若干清洗槽（9）,所述清洗液盛放槽（4）中盛放有清洗液；所述清洗液通过如下方法配制：配制浓度为5～10mM、pH值为7.4～7.9的三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液，加入氯化钠，使氯化钠的最终浓度为150～250mM，并加入表面活性剂；所述表面活性剂加入量为1～3g/L。
14.根据权利要求13所述的心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，其特征在于：所述试剂条（1）上还设置有吸头（2）、用于将分离得到的固定相从吸头（2）上洗脱的洗脱套（3）、供待测样本与检测抗体和包被抗体发生反应的反应槽（8）以及用于测读清洗完毕后的产物中检测抗体浓度的测读槽（10）；所述吸头（2）和洗脱套（3）与试剂条（1）可拆卸连接。
15.根据权利要求11所述的心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，其特征在于：在所述盒体上还设置有用于被读取设备读取的标识码，所述标识码中收录有本试剂盒的标准曲线信息。
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