CN217404307U - 一种精子sp10蛋白快速检测装置 - Google Patents
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Abstract
本实用新型实施例公开了一种精子SP10蛋白快速检测装置。本实用新型的精子SP10蛋白快速检测装置，包括：样品垫、免疫胶体金玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸收垫和塑料板；所述样品垫、免疫胶体金玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸收垫依次搭接后粘贴在所述塑料板上；所述硝酸纤维素膜上设置第一检测线和质控线；所述第一检测线上固相有纯化的纳米颗粒‑精子SP10蛋白抗体；所述质控线上喷点羊抗鼠IgG抗体。本实用新型的精子SP10蛋白快速检测装置可以有效地对人类精子质量进行快速精准的检测。
Description
技术领域
本实用新型实施例涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种精子SP10蛋白快速检测装置。
背景技术
SP10顶体蛋白酶是受精过程中不可缺少的一种中性蛋白水解酶，其存在于精子顶体内膜及赤道部膜上，通常以无活性形式存在。顶体酶对于精子的运动和受精过程都是不可缺少的，顶体酶活力不足可导致男性不育。根据【WHO人类精液实验室检验手册】(第五版)中提到，评价男性不育的指标有：精液量、精子总数、精子浓度、液化时间、精液pH值、精子正常形态率等，其中精子浓度检测则是衡量男性不育的一项重要指标。根据该手册，当精子浓度的少于15×106个/ml时，通常即认为有生育困难。
然而，目前针对男性精子质量的检测试剂，在利用精子浓度进行检测时，由于所选用的目标蛋白不同和所采用的检测原理不同，因此分析得出的精子质量的准确度难以满足要求。
发明内容
本实用新型实施例提供一种精子SP10蛋白快速检测装置，针对上述问题，可以有效地对人类精子质量进行快速精准的检测。
本实施例提供一种精子SP10蛋白快速检测装置，包括：样品垫、免疫胶体金玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸收垫和塑料板；
所述样品垫、免疫胶体金玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸收垫依次搭接后粘贴在所述塑料板上；
所述硝酸纤维素膜上设置第一检测线和质控线；
所述第一检测线上固相有纯化的纳米颗粒-精子SP10蛋白抗体；
所述质控线上喷点羊抗鼠IgG抗体。
采用该技术方案，可以有效地对精子中的SP10蛋白进行精准快速的检测，具有检测结果可靠、检测稳定性好、便于操作的优点。
可选地，所述纳米颗粒为高特异性氧化铈纳米颗粒。
采用该技术方案，是利用了高特异性氧化铈纳米颗粒可以更好地提高蛋白的结合力，使检测结果更加精准。
可选地，所述硝酸纤维素膜的两端分别搭接在所述免疫胶体金玻璃纤维膜和所述吸收垫的下方。
采用该技术方案，是为了使硝酸纤维素膜的固定更加有利于检测的进行。
可选地，还包括：保护壳；
所述保护壳罩在所述样品垫、所述免疫胶体金玻璃纤维膜、所述硝酸纤维素膜和所述吸收垫上。
采用该技术方案，可以方便对检测试剂进行运输。
可选地，所述保护壳为塑料透明材质。
采用该技术方案，是为了方便用户对检测试剂进行观测和使用。
可选地，所述免疫胶体金玻璃纤维膜所采用的胶体金颗粒粒径为20～60 纳米。
采用该技术方案，是为了使蛋白结合更加牢固、蛋白数量足够观测。
附图说明
为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本实用新型的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本实用新型实施例中精子SP10蛋白快速检测装置的结构示意图；
图2为本实用新型实施例中精子SP10蛋白快速检测装置的剖视图。
图中标号：
1、样品垫；2、免疫胶体金玻璃纤维膜；3、硝酸纤维素膜；4、吸收垫； 5、塑料板；T1、第一检测线；C、质控线。
具体实施方式
为使本实用新型实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。
在本实用新型的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”、“轴向”、“径向”、“周向”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本实用新型和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本实用新型的限制。
在本实用新型中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，也可以是成一体；可以是机械连接，也可以是电连接，也可以是通讯连接；可以是直接连接，也可以通过中间媒介的间接连接，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系，除非另有明确的限定。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本实用新型中的具体含义。下面以具体地实施例对本实用新型的技术方案进行详细说明。下面这几个具体的实施例可以相互结合，对于相同或相似的概念或过程可能在某些实施例不再赘述。
申请人发现，SP10蛋白浓度与精子浓度呈一定的线性关系。例如，当精子浓度≥15×106个/ml时，SP10蛋白检测显示阳性。因此，作为精子生成历程最后一步的分化标志物，SP10蛋白可以被选作精子浓度的分析物。
当作为标志物的检测蛋白确定后，如何利用该检测蛋白，对精子质量进行高灵敏度的检测，则成为制作精子质量检测装置的关键。
申请人发现，胶体金免疫层析技术(gold immunochromatography assay， GICA)是一种将胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的固相膜免疫分析技术。胶体金免疫层析技术是一种常用的免疫层析检测方法，由于其操作简单、省时、制造成本较低、结果易判读等特点，非常适合于现场检测，广泛用于生物、医药、食品等领域。由于胶体金免疫层析技术是一步完成检测，因此检测过程的干扰因素较多，其灵敏度低是限制胶体金免疫层析应用范围的主要因素，传统的胶体金免疫层析技术的检测限高于 ELISA等方法。
申请人同时发现，在胶体金免疫层析检测中，蛋白质固着于硝酸纤维素膜(NC膜)作为待测样本的捕获试剂。由于检测结果完全取决于捕获试剂在膜上达到良好的吸附效果，因此蛋白质在膜上均一、良好的吸附对胶体金检测结果非常重要。如果NC膜上结合的蛋白量不足或者蛋白结合力不够强，就会出现相当多的问题，在检测结果的检测线上非常明显。如果膜上结合的蛋白量太低，那么在结果中检测线显色较弱而且检测灵敏度降低。如果蛋白不能牢固的吸附于NC膜，那么在蛋白吸附于NC膜以前发生扩散，从而导致检测线较宽、显色较弱而不是鲜艳而清晰，使检测结果难以解释。在极端条件下，如果蛋白与NC膜的物理吸附作用太弱，流过的蛋白检测物和表面活性剂溶液可能将固着的蛋白从NC膜上洗掉，从而显示较宽或者根本不清晰的检测线，难以解释检测结果。
此外，申请人也发现，二氧化铈是一种廉价、用途极广的轻稀土氧化物，已被用于发光材料、抛光剂、紫外吸收剂、汽车尾气净化催化剂、玻璃的化学脱色剂、耐辐射玻璃、电子陶瓷等。二氧化铈的物理化学性质可能直接影响材料的性能，通过将二氧化铈的纳米颗粒与精子SP10蛋白进行结合，对制作出的精子检测装置的检测效果具有重要意义。
基于此，申请人在本实施例中提供一种精子SP10蛋白快速检测装置，图 1为本实用新型实施例中精子SP10蛋白快速检测装置的结构示意图，图2为本实用新型实施例中精子SP10蛋白快速检测装置的剖视图。
如图1和图2所示，本实施例中提供的精子SP10蛋白快速检测装置，包括：样品垫1、免疫胶体金玻璃纤维膜2、硝酸纤维素膜3、吸收垫4和塑料板5。
其中，样品垫1、免疫胶体金玻璃纤维膜2、硝酸纤维素膜3、吸收垫4 依次搭接后粘贴在塑料板5上。一种可能的粘贴在塑料板5上的方式为：采用对蛋白不会产生影响的粘接剂，属于现有技术。
硝酸纤维素膜3上设置的第一检测线T1和质控线C，第一检测线T1上固相有纯化的纳米颗粒-精子SP10蛋白抗体，质控线C上喷点羊抗鼠IgG抗体，属于现有技术。
该精子SP10蛋白快速检测装置详细制作步骤可以参考以下：
(a)采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金
在加热的100ml纯化水中快速加入氯化金，待溶液再次沸腾后，迅速加入柠檬酸三钠，氯化金：柠檬酸三钠1：0.5，继续煮沸，观察溶液颜色由黄色变黑再变紫，最后变成稳定的酒红色后，计时继续加热10分钟即可，胶体金颗粒为20nm。
(b)免疫胶体金制备
1)分别取100毫升20nm胶体金溶液，加入pH调节剂140μl，混匀；静置5min。
2)在20nm胶体金溶液中，按照每毫升胶体金溶液15μg的比例加入精子 SP10蛋白抗体，共1.5mg，混匀；静置5min。
3)分别按照0.4％的比例加入胶体金稳定剂0.4毫升，混匀，静置5分钟。
4)10000、12000、14000rpm离心10min，分别收集沉淀，合并三次收集的沉淀。
(c)采用优化的喷金缓冲液稀释免疫胶体金获得免疫胶体金溶液，用免疫胶体金溶液喷涂于玻璃纤维垫，制得免疫胶体玻璃纤维膜；所述的喷金缓冲液包括：浓度为20mMTris-HCL液、蔗糖浓度为2.5％、海藻糖浓度为1％、 BSA浓度为1％，pH为8.5。
(d)固相硝酸纤维素膜3
氧化铈纳米颗粒修饰精子SP10蛋白抗体，称量一定量的Ce(-NO3)3-6H2O 配成0.4mol/L的溶液，加入乙醇作分散剂(分散剂与Ce3+的摩尔比为2)。
滴加氨水至pH＝10。继续搅拌1h，静置4h后，过滤，用蒸馏水洗涤，再用乙醇洗涤3次，然后置于110℃的烘箱中干燥过夜。干燥后的沉淀物稍稍研磨，或直接装入研钵中，放入马弗炉，在300℃焙烧4h即可得黄色的固体粉末——CeO2。焙烧后将样品封入小瓶，置于干燥器中保存。
取1mL SP10蛋白抗体溶液，加入CeO210mL，搅拌1小时后，分别以 12000rpm，8500rpm和7000rpm离心10分钟收集，无水乙醇、去离子水各洗2遍。
(e)样品垫1预处理
将玻璃纤维用样品垫1处理液浸泡10min，其种样品垫1处理液包括： Tris-HCL液浓度为0.1M、牛血清白蛋白BSA浓度为0.5％、酪蛋白浓度为 0.1％、表面活性剂浓度为0.5％，37℃烘干备用，经处理后样品垫1可提高反应灵敏度；
(f)组装
将预处理的样品垫1、免疫胶体金玻璃纤维膜2、免疫硝酸纤维素膜3、吸水纸依次粘贴在胶板上，具体可以参考图1和图2。然后将切裁制得检测试剂条。可选地，可以制作与样品垫1、免疫胶体金玻璃纤维膜2、免疫硝酸纤维素膜3、吸水纸相配合的保护壳，例如塑料透明外壳，将检测试剂条装入塑料透明外壳内，以起到保护作用。
需要说明的是，附图2中，T1即第一检测线，又称T线，C为质控线，又称C线。
该精子SP10蛋白快速检测装置的使用方法是：T线与C线均出现红色条带，T线弱阳，表示精子受精能力差；T线中阳，表示精子受精能力一般；T 线强阳，表示精子受精能力很好。
采用该技术方案，可以有效地对精子中的SP10蛋白进行精准快速的检测，具有检测结果可靠、检测稳定性好、便于操作的优点。
可选地，所述纳米颗粒为高特异性氧化铈纳米颗粒。
采用该技术方案，是利用了高特异性氧化铈纳米颗粒可以更好地提高蛋白的结合力，使检测结果更加精准。
可选地，如图1和图2所示，所述硝酸纤维素膜3的两端分别搭接在所述免疫胶体金玻璃纤维膜2和所述吸收垫4的下方。
采用该技术方案，是为了使硝酸纤维素膜3的固定更加有利于检测的进行。
可选地，还包括：保护壳。
如前所述，保护壳罩在样品垫1、免疫胶体金玻璃纤维膜2、硝酸纤维素膜3和吸收垫4上，目的是对检测装置进行保护。
采用该技术方案，可以方便对检测试剂进行运输。
可选地，所述保护壳为塑料透明材质。
为了提高保护的可靠性，可选地，可以将保护壳与样品垫1、免疫胶体金玻璃纤维膜2、硝酸纤维素膜3、吸收垫4所产生的密闭空间设置为负压状态或者正压状态；可选地，负压或正压由氮气等纯净气体等填充。
采用该技术方案，是为了方便用户对检测试剂进行观测和使用。
可选地，所述免疫胶体金玻璃纤维膜2所采用的胶体金颗粒粒径为20～60 纳米。
采用该技术方案，是为了使蛋白结合更加牢固、蛋白数量足够观测。
在本实用新型中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征“上”或“下”可以是第一特征和第二特征直接接触，或第一特征和第二特征通过中间媒介间接接触。
而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”可以是第一特征在第二特征正上方或斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”可以是第一特征在第二特征正下方或斜下方，或仅仅表示第一特征水平高度低于第二特征。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等的描述，意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本实用新型的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任意一个或者多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本实用新型的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本实用新型进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本实用新型各实施例技术方案的范围。
Claims (6)
1.一种精子SP10蛋白快速检测装置，其特征在于，包括：样品垫、免疫胶体金玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸收垫和塑料板；
所述样品垫、免疫胶体金玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸收垫依次搭接后粘贴在所述塑料板上；
所述硝酸纤维素膜上设置第一检测线和质控线；
所述第一检测线上固相有纯化的纳米颗粒-精子SP10蛋白抗体；
所述质控线上喷点羊抗鼠IgG抗体。
2.根据权利要求1所述的精子SP10蛋白快速检测装置，其特征在于，所述纳米颗粒为高特异性氧化铈纳米颗粒。
3.根据权利要求1所述的精子SP10蛋白快速检测装置，其特征在于，所述硝酸纤维素膜的两端分别搭接在所述免疫胶体金玻璃纤维膜和所述吸收垫的下方。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的精子SP10蛋白快速检测装置，其特征在于，还包括：保护壳；
所述保护壳罩在所述样品垫、所述免疫胶体金玻璃纤维膜、所述硝酸纤维素膜和所述吸收垫上。
5.根据权利要求4所述的精子SP10蛋白快速检测装置，其特征在于，所述保护壳为塑料透明材质。
6.根据权利要求4所述的精子SP10蛋白快速检测装置，其特征在于，所述免疫胶体金玻璃纤维膜所采用的胶体金颗粒粒径为20～60纳米。
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