CN116430032A - 一种降钙素原的化学发光检测试剂盒及其检测方法 - Google Patents
一种降钙素原的化学发光检测试剂盒及其检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116430032A CN116430032A CN202211657901.9A CN202211657901A CN116430032A CN 116430032 A CN116430032 A CN 116430032A CN 202211657901 A CN202211657901 A CN 202211657901A CN 116430032 A CN116430032 A CN 116430032A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- buffer solution
- reagent
- procalcitonin
- magnetic
- magnetic bead
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108010048233 Procalcitonin Proteins 0.000 title claims abstract description 76
- CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N procalcitonin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CSSC1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N 0.000 title claims abstract description 76
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title abstract description 29
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims abstract description 83
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims abstract description 18
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical class C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000002038 chemiluminescence detection Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 64
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 57
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 37
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 31
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 31
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 21
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 18
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 17
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 17
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 16
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 16
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 14
- -1 acridine ester Chemical class 0.000 claims description 13
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 10
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 10
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 10
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims description 10
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 10
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 10
- 229940124272 protein stabilizer Drugs 0.000 claims description 10
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 9
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 9
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 8
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 8
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 8
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 8
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 7
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 7
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 claims description 7
- 229940093429 polyethylene glycol 6000 Drugs 0.000 claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 6
- YEIKGFFXYDKWAJ-UHFFFAOYSA-N ethyl hydrogen sulfate;2-piperazin-1-ylethanol Chemical compound CCOS(O)(=O)=O.OCCN1CCNCC1 YEIKGFFXYDKWAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 6
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 4
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims description 4
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 4
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 4
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 4
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O acridine;hydron Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3[NH+]=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 4
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 4
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 4
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide/propylene oxide copolymer Chemical compound CCCOC(C)COCCO CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XVBRCOKDZVQYAY-UHFFFAOYSA-N bronidox Chemical compound [O-][N+](=O)C1(Br)COCOC1 XVBRCOKDZVQYAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 3
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 claims description 3
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 claims description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 3
- RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M sodium;1-hydroxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].ON1C(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C1=O RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000007664 blowing Methods 0.000 claims description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 claims 5
- CBELXINFGUVRTL-UHFFFAOYSA-N ethane 2-piperazin-1-ylethanol sulfuric acid Chemical compound CC.OS(O)(=O)=O.OCCN1CCNCC1 CBELXINFGUVRTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 3
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 6
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 5
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 2
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 2
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003771 C cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 101100495315 Dictyostelium discoideum cdk5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100399297 Dictyostelium discoideum limE gene Proteins 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 101150006779 crp gene Proteins 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002796 luminescence method Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 1
- 230000008383 multiple organ dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明属于体外检测技术领域，公开了一种降钙素原的化学发光检测试剂盒及其检测方法,本检测试剂盒采用了一步夹心法反应原理。该检测方法包括：1)R1试剂:用降钙素原单克隆第一抗体包被磁珠；2)R2试剂：用PCT单克隆第二抗体标记吖啶酯；3)以PCT重组抗原制备的校准品及质控品；4)样本或校准品中的降钙素原与R1试剂和R2试剂混合均匀并发生反应；5)经过一定的温育时间后清洗读数，即可计算样本中降钙素原的含量。本发明提供了一种降钙素原测定试剂盒，并且可以配合全自动化学发光分析仪对血清中降钙素原进行高通量快速化测定。其优点在于灵敏度高，特异性好，准确性高，精密度好，且样本无需预稀释，操作简单省时等。
Description
技术领域
本发明涉及免疫分析领域，是一种体外诊断试剂，用于定量检测人血液或血清中降钙素原(PCT)的含量，具体涉及一种降钙素原的化学发光检测试剂盒及其检测方法。
背景技术
细菌病毒等经由创面、泌尿道、呼吸道、消化道入侵，在创伤严重造成机体抵抗力差的条件下，会引起严重的感染症状，带来如脓毒症、败血症休克，多器官功能障碍症等多种临床并发症，严重情况下会造成死亡。在临床上细菌感染尤其是脓毒症感染的一个重要特异性指标就是降钙素原(procalcitonin，PCT)，与同类感染指标如白细胞分类和计数，血常规检查，IL-2，IL-6，IL-8，CRP和TNF-α相比，PCT作为特异性检测指标，误诊及漏诊的概率大大降低。PCT对脓毒症患者的全身炎症反应综合征(SIRS)患者的敏感性最高(85％)和特异性(91％)最高，因此可以作为诊断脓毒症和鉴别严重细菌感染的生物标志物。
PCT是无激素活性的降钙素前肽物质，来自定位于第11号染色体上(11p15,4)的单拷贝基因，该基因由280个碱基对组成，含6个外显子和5个内含子。仅在甲状腺的C细胞受到激素性刺激时才产生，经酶切作用下剪掉nPro-CT端单一序列，生成116氨基酸的PCT，分子量约为13kD，PCT和降钙素具有一个相同的32个氨基酸的序列(60～91位)。PCT对于机体细菌感染的反馈十分灵敏，在2-4h内迅速升高，12-48h内即可达到峰值，在健康人的血清PCT质量浓度低于0.05ng/ml。即使在不足10％的特殊体质人群，老年人和慢性疾病患者体内，PCT含量也不会超过0.3ng/ml。临床表明当PCT为0.10-0.25ng/ml时，提示细菌感染的可能性不大，PCT为0.25-0.50ng/ml时，可能存在需要治疗的细菌感染，多数专家建议将0.50ng/ml作为脓毒症的诊断临界值，严重脓毒症和脓毒性休克患者PCT质量浓度波动在2～500ng/ml之间，超过10ng/ml时患者存在死亡风险。这也就决定了PCT的高特异性及高灵敏性，对于脓毒症和全身性细菌感染的辅助鉴别诊断预后判断、疗效观察等方面有很高的临床价值。
目前降钙素原的测定方法众多，如化学发光免疫分析法(CLIA)、放射性免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体金免疫层析法(GICA)。但在实际应用中逐渐反应出一些缺陷，如RIA有放射性元素的污染，检测耗时长，检测结果重复性差，而且标记物的货架期短。ELISA酶易失活且大分子标记容易产生位阻效应，导致其灵敏度不高线性范围窄、不易实现全自动化等。GICA的检测灵敏度低，并且只能做定性无法准确实验定量检测。CLIA是在酶联免疫分析法基础上发展起来的一种免疫检测技术，具有灵敏度高、检测线性范围宽、操作简便，自动化程度高等优势，近年来得到了广泛应用。磁微粒免疫检测技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲和力的抗体或抗原等各种免疫活性物质，具有分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单、不影响被分离细胞或其他生物材料的生物学性状和功能等特点。市售的PCT化学发光检测试剂盒大多包含链霉亲和素磁珠、生物素标记的PCT抗体和吖啶酯标记的PCT抗体等试剂，制备过程繁琐不易控制。且在将该试剂盒装载在化学发光免疫分析仪中进行测试时，化学发光免疫分析仪需要分别从四个试剂杯中吸取试剂加入反应杯中，以便进行检测，存在着试剂吸取程序较为复杂的问题。
现有技术，如公开号为CN113030497A公开了一种检测降钙素原的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒，该专利中的试剂盒的灵敏度只能达到0.2ng/ml，试剂盒特异性也较差、检测范围较窄。另外，中国专利CN105842458A以及CN106093416B公开的检测降钙素原的试剂盒，也存在着线性范围窄的问题，并且前者检测整体曲线斜率较低。另一中国专利CN109061186A公开了一种PCT酶促发光法检测试剂盒，该试剂盒的检测步骤十分复杂。与之有相同检测步骤繁琐问题的还有专利CN111175492A和CN107367626A报道的两种链霉亲和素试剂盒，并且上述两种试剂盒制备过程也较为复杂。中国专利CN104749367A和CN201510152340.0公开的降钙素原检测试剂盒中，校准品为冻干状态，存在冻干与复溶工艺的复杂及不可控风险。
发明内容
本发明为解决现有技术中的上述问题，提出一种检测血液中降钙素原的试剂盒，阐明了该降钙素原检测试剂盒的制备方法及降钙素原的检测方法，解决了校准品稳定性差，检测灵敏度低，特异性差，试剂成分复杂且制备可控性差等问题。
本发明通过以下技术方案予以实现上述目的：
本发明提出的降钙素原化学发光检测试剂盒包括如下试剂：
1)R1试剂:用降钙素原单克隆第一抗体包被磁微粒。
2)R2试剂：用PCT单克隆第二抗体标记吖啶酯。
3)以PCT重组抗原制备的校准品及质控品。
所述PCT校准品、所述PCT质控品均为含有PCT抗原和质量百分含量0.5-5.0％(w/v)蛋白稳定剂、质量百分含量0.5-5.0‰(v/v)防腐剂。其中，所述PCT质控品抗原的浓度分别为0.1ng/mL、10.0ng/mL；所述PCT校准品抗原的浓度分别为0.1ng/mL、10.0ng/mL和40.0ng/mL。
所述R1试剂均为含有用降钙素原单克隆第一抗体包被磁微粒和质量百分含量0.5-5.0％(w/v)蛋白稳定剂、质量百分含量0.5-5.0‰(v/v)防腐剂、质量百分含量0.1-2.0％增敏剂的缓冲液。
所述R2试剂均为含有用降钙素原单克隆第二抗体标记吖啶酯和质量百分含量0.5-5.0％(w/v)蛋白稳定剂、质量百分含量0.5-5.0‰(v/v)防腐剂、质量百分含量0.1-2.0％增敏剂的缓冲液。
进一步地，所述的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液和羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液其中的一种或多种；其pH为5.0-9.0。
进一步地，所述防腐剂为：叠氮化钠、苯酚和procline300中一种或多种。
进一步地，所述蛋白稳定剂为：山梨醇、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、羧甲基纤维素、环糊精、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和牛血清白蛋白的一种或多种。
进一步地，所述增敏剂为：Bronidox、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇10000、吐温20、吐温80、CTAB、IPTG或Poloxamer 188中一种或多种。
进一步地，所述磁微粒的粒径在0.5-5μm。
优选地，所述磁微粒与PCT第一单克隆抗体的包被过程由磁珠清洗，磁珠活化，抗体包被反应，磁珠封闭以及清洗收集组成。
具体包括如下使用步骤：
1)清洗磁珠：
将磁珠原液置于血液混匀仪上50-110r/min混匀至磁珠分散均匀无凝集，取50-500μL混匀后的磁珠原液加入到润洗后的玻璃瓶中，加入2-15mL磁珠偶联缓冲溶液重悬磁珠，在血液混匀仪上50-110r/min混匀2-10min。静置磁吸1-5min，将磁力架与玻璃瓶同时上下颠倒2次以上，以将瓶盖与泡沫中的磁珠涮洗至液体中，静置磁吸1-5min，移弃上清，加入0.5-2.0mL磁珠偶联缓冲溶液重悬磁珠，摇动混匀至肉眼观测不到磁珠沉淀和聚集后，在血液混匀仪上50-110r/min混匀1-5min。重复清洗2次以上。
2)磁珠活化：
加入50-500μL Sulfo-NHS溶液(5-30mg/mL)，上下颠倒混匀10次，再加入50-500μLEDC(5-30mg/mL)，立即上下颠倒混匀10次，放入生化培养箱中25℃血液混匀仪上50-110r/min混匀活化10-70min。
3)抗体偶联及封闭：
静置磁吸1-5min，将磁力架与玻璃瓶同时上下颠倒2次以上，以将瓶盖与泡沫中的磁珠涮洗至液体中，静置磁吸2min，移弃上清，加入0.5-2.0mL磁珠偶联缓冲溶液重悬磁珠，摇动混匀至肉眼观测不到磁珠沉淀和聚集后，在血液混匀仪上50-110r/min混匀1-5min。重复清洗3-5次，最后1次移弃上清后加入0.5-2.0mL磁珠偶联缓冲溶液重悬磁珠。取0.02-2mg包被抗体，加入到重悬的磁珠中，摇动混匀至肉眼观测不到磁珠沉淀和聚集后，放入生化培养箱中25℃血液混匀仪上50-110r/min混匀过夜孵育。反应结束，加入20-150μL浓度为0.5-15％的牛血清白蛋白溶液进行封闭，封闭时间0.2-2h。
4)清洗并保存：
静置磁吸1-5min，将磁力架与玻璃瓶同时上下颠倒2次以上，以将瓶盖与泡沫中的磁珠涮洗至液体中，静置磁吸1-5min，移弃上清，加入0.5-2.0mL磁珠稀释液重悬磁珠，在血液混匀仪上50-110r/min混匀3min，重复清洗10次，最后1次移弃上清后加入0.5-2.0mL磁珠稀释液重悬磁珠。
进一步地，所述的磁珠偶联缓冲溶液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、吗啉乙磺酸缓冲液和羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液其中的一种或多种；其pH为5.0-9.0。
优选地，所述吖啶酯与PCT第二单克隆抗体的标记过程由抗体清洗，吖啶酯标记，吖啶酯封闭以及吖啶酯-抗体复合物清洗收集组成。
具体包括如下使用步骤：
1)抗体清洗
取一支50K规格的超滤管，加入200-600μL吖啶酯标记缓冲液，清洗3次以上，每离心一次弃去超滤管中液体。取PCT第二单克隆抗体0.02-0.3mg加入超滤管，用吖啶酯标记缓冲液清洗3次以上，每次定容到200-600μL，最后吸取底部剩余抗体溶液，转移至1.5mL的离心管中，用吖啶酯标记缓冲液定容至100-300μL。
2)吖啶酯标记
在离心管中加入1-10uL吖啶酯溶液。放入生化培养箱中25℃血液混匀仪上50-150r/min避光混匀反应0.5-5h。
3)吖啶酯封闭
标记反应结束后，在离心管中加入0.5-5％(w/v)的赖氨酸溶液20-150μL，立即用移液器吹打混匀10次，在血液混匀仪上50-150r/min，避光混匀封闭10-60min。
4)吖啶酯-抗体复合物清洗收集
将封闭后的抗体溶液转移至超滤管内管中，离心1次弃去超滤管外管中液体。加入200-600uL吖啶酯纯化缓冲液，重复离心清洗3-10次，每离心一次弃去超滤管外管中液体。清洗过程结束后，将超滤管中收集的抗体标记液转移至洁净离心管中，加入吖啶酯纯化缓冲液定容至0.2-3.0mL。
进一步地，所述的吖啶酯标记缓冲溶液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、吗啉乙磺酸缓冲液和羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液其中的一种或多种；其pH为5.0-9.0。
所述降钙素原化学发光检测试剂盒的使用方法，其特征在于包括如下步骤：将PCT校准品、血清、血浆或全血作为样本加入反应杯中，并加入R1试剂和R2试剂，于25-40℃条件下温育5-30min，清洗后读取样本中降钙素原的含量。
优选的，所述的待测样本、所述的R1试剂和所述的R2试剂的体积比为1:0.5-2。0：0.5-2.0。
本发明是采用直接化学发光检测技术，测定人全血、血浆及血清样品中的降钙素原的定量体外诊断试剂盒，可以与其他临床信息联合用于诊断和鉴别诊断个体感染性疾病。本发明的试剂盒采用直接化学发光法测定标本中的PCT含量，具有特异性强、重复性好、灵敏度高、稳定性好、操作简便等优点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明试剂盒检测线性性能评价。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
实施例1
试剂盒的制备：
1.以PCT单克隆第一抗体包被磁珠：
将磁珠原液置于血液混匀仪上混匀至磁珠分散均匀无凝集，取200μL加入40mL玻璃瓶中，加入5mL磁珠偶联缓冲溶液重悬磁珠，在血液混匀仪上混匀5min。静置磁吸后移弃上清，加入5mL磁珠偶联缓冲溶液重悬磁珠，重复清洗4次后重悬备用。
加入200μL浓度为15mg/mL的Sulfo-NHS溶液和150μL浓度为7mg/mL的EDC，放在血液混匀仪上混匀活化50min。
静置磁吸后移弃上清，加入5mL磁珠偶联缓冲溶液重悬磁珠，摇动混匀至肉眼观测不到磁珠沉淀和聚集后，取PCT单克隆第一抗体0.5mg，加入到重悬的磁珠中，在血液混匀仪上混匀过夜孵育。反应结束，加入200μL浓度为15％的牛血清白蛋白溶液进行封闭，封闭时间1.5h。
静置磁吸后移弃上清，加入5mL磁珠偶联缓冲溶液重悬磁珠，摇动混匀至肉眼观测不到磁珠沉淀和聚集，重复清洗10次，最后1次移弃上清后加入5mL磁珠稀释液重悬磁珠；
2.以PCT单克隆第二抗体标记吖啶酯：
取一支50K规格的超滤管，加入750μL吖啶酯标记缓冲液，离心清洗3次，每离心一次弃去超滤管中液体。取PCT单克隆第二抗体0.2mg加入超滤管，用吖啶酯标记缓冲液清洗3次，每次定容到750μL，最后吸取底部剩余抗体溶液，转移至1.5mL的离心管中，用吖啶酯标记缓冲液定容至200μL。
在离心管中加入10uL吖啶酯溶液。在血液混匀仪上50-150r/min避光混匀反应2h。
标记反应结束后，在离心管中加入1％(w/v)的赖氨酸溶液120μL，在血液混匀仪上避光混匀封闭40min。
将封闭后的抗体溶液转移至超滤管内管中，加入400uL吖啶酯纯化缓冲液，重复离心清洗6次，每离心一次弃去超滤管外管中液体。清洗过程结束后，将超滤管中收集的抗体标记液转移至洁净离心管中，加入吖啶酯纯化缓冲液定容至2mL。；
3.PCT校准品制备：
所述PCT校准品以抗原稀释液(30mmol/L Tris-HCl，1％BSA、0.9％NaCl、0.01％Proclin-300、0.2％Tween-20，pH8.0)将PCT抗原稀释至指定校准品浓度(0.1ng/mL、10.0ng/mL和40.0ng/mL)。
实施例2
本实施例提供了一种用于所述检测方法的试剂盒，其检测方法依照如下步骤进行：
下述检测步骤由全自动化学发光分析仪自动完成，也可手工操作完成。
将R1试剂和R2试剂加入到反应杯中，充分混匀后，将包括PCT校准品、血清、血浆或全血在内的样本加入反应杯中，并通过涡旋充分混匀，而后置于37℃的温育条件下反应15min，磁吸清洗5次后读取样本中降钙素原的含量。
实施例3
本发明检测试剂盒的试剂性能测试：
1.重复性评价：
使用0.5ng/mL、10ng/mL两个浓度的样本作为待测样本。按说明书的操作方法，用全自动化学发光仪分别对待测样本进行10次重复测定。按公式(1)计算重复性变异系数。
注：式中：
10次测定浓度的平均值；Xi：每次测定浓度值
实验结果如表1所示，重复性变异系数在2.5％以内。
表1
| 序号 | 0.5ng/mL | 10ng/mL |
| 1 | 0.561 | 10.279 |
| 2 | 0.555 | 9.871 |
| 3 | 0.554 | 9.756 |
| 4 | 0.567 | 9.79 |
| 5 | 0.559 | 10.133 |
| 6 | 0.558 | 10.341 |
| 7 | 0.549 | 10.214 |
| 8 | 0.572 | 10.084 |
| 9 | 0.561 | 10.366 |
| 10 | 0.568 | 9.866 |
| 平均值 | 0.56 | 10.07 |
| 变异系数 | 1.3％ | 2.3％ |
2.线性评价：
用接近线性范围上限的高浓度100ng/mL和接近线性范围下限的低浓度样品0ng/mL，混合成5个稀释浓度(混合方式及稀释浓度见表2)，每个浓度平行检测3次，将每个浓度测定结果的平均值与标识浓度进行直线拟合。
表2
| 样品组 | 原始浓度(ng/mL) | 稀释倍数 | 配制浓度(ng/mL) |
| 1 | 1000 | 10 | 100 |
| 2 | 100 | 2.5 | 40 |
| 3 | 40 | 4 | 10 |
| 4 | 10 | 20 | 0.5 |
| 5 | 0.5 | 5 | 0.1 |
| 6 | 0.1 | 5 | 0.02 |
实验结果如表3所示，线性整体相关系数R为0.9921，考虑正常人血清的浓度及相关疾病患者的浓度范围，再结合试剂本身线性范围的限制，综合考虑，本试剂盒测定范围定为0.02～70ng/mL。
表3
3.准确度评价：
配制浓度为0.5ng/mL的PCT标准溶液，在900μL的人血清中加入100μL浓度为0.5ng/mL的标准溶液，重复测定3次取均值，根据公式(2)计算回收率R，结果应符合2.4的要求。
注：式中R：回收率，％；V：加入标准溶液的体积；V0：人血清的体积；C：人血清加入标准溶液后的检测浓度；C0：人血清的检测浓度；CS：标准溶液的浓度。
实验结果如表4所示，正常人血清测值<0.02ng/ml，按0.02ng/ml进行的计算；回收率为91.8％-106.8％。
表4
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
Claims (22)
1.一种降钙素原化学发光检测试剂盒，其特征在于：包括如下试剂：
1)R1试剂:用降钙素原单克隆第一抗体包被磁微粒；
2)R2试剂：用PCT单克隆第二抗体标记吖啶酯；
3)以PCT重组抗原制备的校准品及质控品。
2.根据权利要求1所述的降钙素原化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述PCT校准品、所述PCT质控品均为含有PCT抗原、质量百分含量0.5-5.0％(w/v)蛋白稳定剂、质量百分含量0.5-5.0‰(v/v)防腐剂；其中，所述PCT质控品抗原的浓度分别为0.1ng/mL、10.0ng/mL；所述PCT校准品抗原的浓度分别为0.1ng/mL、10.0ng/mL和40.0ng/mL。
3.根据权利要求2所述的校准品及质控品稀释液，其特征在于：所述的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液和羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液其中的一种或多种；其pH为5.0-9.0。
4.根据权利要求2所述的校准品及质控品稀释液，其特征在于：所述防腐剂为：叠氮化钠、苯酚和procline300中一种或多种。
5.根据权利要求2所述的校准品及质控品稀释液，其特征在于：所述蛋白稳定剂为：山梨醇、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、羧甲基纤维素、环糊精、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和牛血清白蛋白的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的降钙素原化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述R1试剂均为含有用降钙素原单克隆第一抗体包被磁微粒、质量百分含量0.5-5.0％(w/v)蛋白稳定剂、质量百分含量0.5-5.0‰(v/v)防腐剂、质量百分含量0.1-2.0％增敏剂的缓冲液。
7.根据权利要求6所述的R1试剂，其磁珠稀释液特征在于：所述的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液和羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液其中的一种或多种；其pH为5.0-9.0。
8.根据权利要求6所述的R1试剂，其磁珠稀释液特征在于：所述防腐剂为：叠氮化钠、苯酚和procline300中一种或多种。
9.根据权利要求6所述的R1试剂，其磁珠稀释液特征在于：所述蛋白稳定剂为：山梨醇、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、羧甲基纤维素、环糊精、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和牛血清白蛋白的一种或多种。
10.根据权利要求6所述的R1试剂，其磁珠稀释液特征在于：所述增敏剂为：Bronidox、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇10000、吐温20、吐温80、CTAB、IPTG或Poloxamer 188中一种或多种。
11.根据权利要求6所述的R1试剂，其特征在于：所述磁微粒的粒径在0.5-5μm。
12.根据权利要求6所述的R1试剂，其特征在于：所述磁微粒与PCT第一单克隆抗体的包被过程由磁珠清洗，磁珠活化，抗体包被反应，磁珠封闭以及清洗收集组成。
具体包括如下使用步骤：
1)清洗磁珠：
将磁珠原液置于血液混匀仪上50-110r/min混匀至磁珠分散均匀无凝集，取50-500μL混匀后的磁珠原液加入到润洗后的玻璃瓶中，加入2-15mL磁珠偶联缓冲溶液重悬磁珠，在血液混匀仪上50-110r/min混匀2-10min。静置磁吸1-5min，将磁力架与玻璃瓶同时上下颠倒2次以上，以将瓶盖与泡沫中的磁珠涮洗至液体中，静置磁吸1-5min，移弃上清，加入0.5-2.0mL磁珠偶联缓冲溶液重悬磁珠，摇动混匀至肉眼观测不到磁珠沉淀和聚集后，在血液混匀仪上50-110r/min混匀1-5min。重复清洗2次以上。
2)磁珠活化：
加入50-500μL Sulfo-NHS溶液(5-30mg/mL)，上下颠倒混匀10次，再加入50-500μL EDC(5-30mg/mL)，立即上下颠倒混匀10次，放入生化培养箱中25℃血液混匀仪上50-110r/min混匀活化10-70min。
3)抗体偶联及封闭：
静置磁吸1-5min，将磁力架与玻璃瓶同时上下颠倒2次以上，以将瓶盖与泡沫中的磁珠涮洗至液体中，静置磁吸2min，移弃上清，加入0.5-2.0mL磁珠偶联缓冲溶液重悬磁珠，摇动混匀至肉眼观测不到磁珠沉淀和聚集后，在血液混匀仪上50-110r/min混匀1-5min。重复清洗3-5次，最后1次移弃上清后加入0.5-2.0mL磁珠偶联缓冲溶液重悬磁珠。取0.02-2mg包被抗体，加入到重悬的磁珠中，摇动混匀至肉眼观测不到磁珠沉淀和聚集后，放入生化培养箱中25℃血液混匀仪上50-110r/min混匀过夜孵育。反应结束，加入20-150μL浓度为0.5-15％的牛血清白蛋白溶液进行封闭，封闭时间0.2-2h。
4)清洗并保存：
静置磁吸1-5min，将磁力架与玻璃瓶同时上下颠倒2次以上，以将瓶盖与泡沫中的磁珠涮洗至液体中，静置磁吸1-5min，移弃上清，加入0.5-2.0mL磁珠稀释液重悬磁珠，在血液混匀仪上50-110r/min混匀3min，重复清洗10次，最后1次移弃上清后加入0.5-2.0mL磁珠稀释液重悬磁珠。
13.根据权利要求12所述的包被工艺，其特征在于：所述的磁珠偶联缓冲溶液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、吗啉乙磺酸缓冲液和羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液其中的一种或多种；其pH为5.0-9.0。
14.根据权利要求1所述的降钙素原化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述R2试剂均为含有用降钙素原单克隆第二抗体标记吖啶酯、质量百分含量0.5-5.0％(w/v)蛋白稳定剂、质量百分含量0.5-5.0‰(v/v)防腐剂、质量百分含量0.1-2.0％增敏剂的缓冲液。
15.根据权利要求14所述的R2试剂，其吖啶酯稀释液特征在于：所述的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液和羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液其中的一种或多种；其pH为5.0-9.0。
16.根据权利要求14所述的R2试剂，其吖啶酯稀释液特征在于：所述防腐剂为：叠氮化钠、苯酚和procline300中一种或多种。
17.根据权利要求14所述的R2试剂，其吖啶酯稀释液特征在于：所述蛋白稳定剂为：山梨醇、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、羧甲基纤维素、环糊精、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和牛血清白蛋白的一种或多种。
18.根据权利要求14所述的R2试剂，其吖啶酯稀释液特征在于：所述增敏剂为：Bronidox、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇10000、吐温20、吐温80、CTAB、IPTG或Poloxamer 188中一种或多种。
19.根据权利要求14所述的R2试剂，其吖啶酯稀释液特征在于：所述吖啶酯与PCT第二单克隆抗体的标记过程由抗体清洗，吖啶酯标记，吖啶酯封闭以及吖啶酯-抗体复合物清洗收集组成。
具体包括如下使用步骤：
1)抗体清洗
取一支50K规格的超滤管，加入200-600μL吖啶酯标记缓冲液，清洗3次以上，每离心一次弃去超滤管中液体。取0.02-0.3mg抗体加入超滤管，用吖啶酯标记缓冲液清洗3次以上，每次定容到200-600μL，最后吸取底部剩余抗体溶液，转移至1.5mL的离心管中，用吖啶酯标记缓冲液定容至100-300μL。
2)吖啶酯标记
在离心管中加入1-10uL吖啶酯溶液。放入生化培养箱中25℃血液混匀仪上50-150r/min避光混匀反应0.5-5h。
3)吖啶酯封闭
标记反应结束后，在离心管中加入0.5-5％(w/v)的赖氨酸溶液20-150μL，立即用移液器吹打混匀10次，在血液混匀仪上50-150r/min，避光混匀封闭10-60min。
4)吖啶酯-抗体复合物清洗收集
将封闭后的抗体溶液转移至超滤管内管中，离心1次弃去超滤管外管中液体。加入200-600uL吖啶酯纯化缓冲液，重复离心清洗3-10次，每离心一次弃去超滤管外管中液体。清洗过程结束后，将超滤管中收集的抗体标记液转移至洁净离心管中，加入吖啶酯纯化缓冲液定容至0.2-3.0mL。
20.根据权利要求19所述的标记工艺，其特征在于：所述的吖啶酯标记缓冲溶液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、吗啉乙磺酸缓冲液和羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液其中的一种或多种；其pH为5.0-9.0。
21.权利要求1所述降钙素原化学发光检测试剂盒的使用方法，其特征在于包括如下步骤：将PCT校准品、血清、血浆或全血作为样本加入反应杯中，并加入R1试剂和R2试剂，于25-40℃条件下温育5-30min，清洗后读取样本中降钙素原的含量。
22.权利要求21所述降钙素原化学发光检测试剂盒的使用方法，其特征在于：所述的待测样本、所述的R1试剂和所述的R2试剂的体积比为1:0.5-2.0：0.5-2.0。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211657901.9A CN116430032A (zh) | 2022-12-22 | 2022-12-22 | 一种降钙素原的化学发光检测试剂盒及其检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211657901.9A CN116430032A (zh) | 2022-12-22 | 2022-12-22 | 一种降钙素原的化学发光检测试剂盒及其检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116430032A true CN116430032A (zh) | 2023-07-14 |
Family
ID=87086063
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211657901.9A Pending CN116430032A (zh) | 2022-12-22 | 2022-12-22 | 一种降钙素原的化学发光检测试剂盒及其检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116430032A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118033151A (zh) * | 2024-04-11 | 2024-05-14 | 江西省转化医学研究院 | 环肽发光耦合分子构建的均相化学发光降钙素原检测试剂 |
-
2022
- 2022-12-22 CN CN202211657901.9A patent/CN116430032A/zh active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118033151A (zh) * | 2024-04-11 | 2024-05-14 | 江西省转化医学研究院 | 环肽发光耦合分子构建的均相化学发光降钙素原检测试剂 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11959912B2 (en) | Fluorescence immunochromatographic detection card and a preparation method therefor and use thereof | |
| WO2018000898A1 (zh) | 一种锌转运蛋白 8 抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN110806487A (zh) | 一种用于人肝素结合蛋白检测的试剂盒及其制备方法 | |
| CN110780067A (zh) | 一种检测降钙素原的荧光免疫层析试纸及其制备方法 | |
| CN113433318A (zh) | 一种检测甲胎蛋白异质体afp-l3含量的试剂盒及其检测方法和应用 | |
| CN115639367A (zh) | 一种检测抗角蛋白抗体IgG的化学发光免疫试剂盒及应用 | |
| CN116430032A (zh) | 一种降钙素原的化学发光检测试剂盒及其检测方法 | |
| CN113614539A (zh) | 一种粘液病毒抗性蛋白1的定量试剂盒 | |
| JP7503505B2 (ja) | 自己抗体の直接イムノアッセイ測定法 | |
| CN110531085A (zh) | 一种测定人体神经丝轻链蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN117434274A (zh) | 一种单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒及其测定方法 | |
| CN109633163B (zh) | 降钙素原/c反应蛋白二合一检测试剂盒 | |
| WO2024001044A1 (zh) | 一种与肺癌相关的生物标志物组合、含其的试剂盒及其用途 | |
| WO2018000446A1 (zh) | 抑制素b化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN108362892B (zh) | 一种降钙素原胶体金免疫比浊法检测试剂 | |
| CN113376378A (zh) | 一种d-二聚体检测试剂盒、制备方法及用途 | |
| CN114200129B (zh) | 组织金属蛋白酶抑制剂-2胶乳免疫比浊法血尿同检试剂盒 | |
| CN111505303A (zh) | 化学发光法检测心型脂肪酸结合蛋白试剂盒及使用方法 | |
| CN115290897A (zh) | 一种癌胚抗原（cea）化学发光免疫测定试剂盒 | |
| CN112213490A (zh) | 透明质酸化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN112147333A (zh) | 一种基于胃蛋白酶原pgⅱ的免疫分析试剂盒及其制备方法和检测方法 | |
| CN113777326A (zh) | 一种高特异检测肝素结合蛋白的试剂盒及其应用 | |
| CN112763724A (zh) | 同时测定血清和尿液中视黄醇结合蛋白含量的试剂组合及试剂盒 | |
| CN112485419A (zh) | 一种锌转运体8抗体检测试剂盒 | |
| CN111208292A (zh) | 肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒、其制备方法及使用方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |