CN114200129B

CN114200129B - 组织金属蛋白酶抑制剂-2胶乳免疫比浊法血尿同检试剂盒

Info

Publication number: CN114200129B
Application number: CN202111499111.8A
Authority: CN
Inventors: 孙娜; 张丽
Original assignee: Beijing Leadman Biochemistry Co ltd
Current assignee: Beijing Leadman Biochemistry Co ltd
Priority date: 2021-12-09
Filing date: 2021-12-09
Publication date: 2023-04-14
Anticipated expiration: 2041-12-09
Also published as: CN114200129A

Abstract

本发明公开了组织金属蛋白酶抑制剂‑2胶乳免疫比浊法血尿同检试剂盒，属于免疫分析技术领域。该试剂盒包括试剂R1、试剂R2、高值校准品、质控品和0值校准品(可同时作为校准品稀释液)；其中，所述试剂R1包括增敏剂、表面活性剂、金属盐、牛血清白蛋白；所述试剂R2包括组织金属蛋白酶抑制剂‑2抗体包被的胶乳颗粒；所述高值校准和质控品包括组织金属蛋白酶抑制剂‑2(TIMP‑2)抗原；所述0值校准品包括功能性分子。该试剂盒与市售ELISA试剂盒相比，灵敏度更高，线性范围更宽，结合全自动生化分析仪可简便、快速实现血样和尿液样本中人组织金属蛋白酶抑制剂‑2(TIMP2)浓度的定量检测。

Description

组织金属蛋白酶抑制剂-2胶乳免疫比浊法血尿同检试剂盒

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP2)胶乳免疫比浊法血、尿同检试剂盒。

背景技术

TIMP-2是TIMP家族成员之一，是分子量为21kDa的金属蛋白酶抑制剂，参与肾脏病理发生过程，为近两年发现的早期肾损伤标志物。在缺血或脓毒症等原因导致的肾损伤时，能诱导肾小管上皮细胞G1周期阻滞期，产生TIMP-2。同时，TIMP-2还参与肾小管上皮细胞的损伤过程，且持续处于高表达水平直到损伤修复。TIMP-2能够抑制DNA损伤情况下的细胞分裂，避免细胞凋亡，该应答机制可以用于判断急性肾损伤病情的发展和预后。

有研究发现，TIMP-2与IGFBP7(胰岛素样生长因子结合蛋白7)两者联用，可使急性肾损伤病情12小时内分期准确率提高，且尿中TIMP-2与IGFBP7的乘积在急性肾损伤时，在短短几小时内快速上升。用于判断急性肾损伤病情的发展和预后，敏感性及特异性均较高。

国内已申请专利的检测技术包括胶体金免疫层析法(公开号CN 203909042 U、公开号CN 204028082U)、荧光检测法(公开号CN 107271692A)和酶联免疫吸附(ELISA)法(公开号CN 112798789 A)。胶体金免疫层析法和荧光检测法，作为POCT快速检测项目，操作简单，但灵敏度、线性、重复性和定量准确性较差，目前更多运用于疾病初步筛查；ELISA法技术成熟，但该检测方法干扰因素多，重复性不好且操作繁琐、检测耗时长，操作复杂；即便采用全自动酶免分析仪，检测速度仍然较慢，不利于样本的及时检测、无法满足临床快速定量检测需求。

血、尿同检的胶乳免疫比浊试剂，由于尿液中检测指标的浓度一般比血液中指标浓度低，且尿液样本中蛋白质的含量比血清样本中低很多，基质效应会对测试结果产生较大影响。因此，找到一种既能够降低操作难度、减少检测时间、控制检测成本，又能够提高试剂低值检测灵敏度、线性范围、准确度和重复性的试剂盒是本领域亟需解决的技术问题。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提出组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)胶乳免疫比浊法血、尿同检试剂盒及其制备方法，该试剂盒通过与全自动生化分析仪联用，大大降低了操作难度和检测时间，在保证线性好的基础上，提高低值检测灵敏度。

基于上述目的，本发明提供的一种组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)胶乳免疫比浊法血、尿同检试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2、0值校准品、高值校准品和质控品，所述试剂R1包括：缓冲液、增敏剂、表面活性剂、金属盐、牛血清白蛋白和防腐剂；所述试剂R2包括：缓冲液、组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体包被的胶乳颗粒、防腐剂和助悬剂；其特征在于，所述0值校准品中包括有缓冲液、防腐剂、保护剂和能使0值处的反应度降低，提高血清和尿液样本检测空白限的准确性的功能性分子；

高值校准品中加入有组织金属蛋白酶抑制剂-2抗原，以0值校准品作为高值校准品稀释液。

获得高值校准品，以0值校准品作为中间浓度血清样本校准品和尿液样本校准品制备时的校准品稀释液。

进一步地，所述R1试剂中金属盐的质量百分浓度大于增敏剂的质量百分浓度，金属盐与增敏剂的质量百分浓度的比例为2:1～10:1，更优选地，金属盐与增敏剂的质量百分浓度的比例为3.3:1。所述金属盐选自氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙等碱金属盐或碱土金属盐，质量百分浓度为0.5％～3％；更优选地，使用氯化镁，质量百分浓度为1.0％。所述增敏剂选自聚乙二醇系列、葡聚糖系列、聚乙烯吡咯烷酮系列，质量百分浓度为0.05％～0.50％，更优选地，增敏剂为聚乙二醇8000，质量百分浓度为0.3％；增敏剂为葡聚糖系列时，质量百分浓度为0.1％。适量的增敏剂的加入和合适浓度的金属盐的相互作用，且金属盐的加入量远多于增敏剂，有利于减少回勾现象，同时提高试剂的灵敏度。

进一步地，所述功能性分子为氯化胆碱、甘露醇等能降低0值点处的反应度的活性分子，质量百分浓度为0.5％～5.0％。更优选地，使用功能性分子为氯化胆碱，质量百分浓度为2.0％。

进一步地，所述R1试剂中的牛血清白蛋白的质量百分浓度为0.5％～4.0％，加入较多的牛血清白蛋白能够降低检测尿液样本的基质效应，尽可能消除基质效应对血清和尿液检测的差异。更优选地，牛血清白蛋白的质量百分浓度为2.0％。

进一步地，所述组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体包被的胶乳颗粒中，组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体与羧基微球的质量比例为1:50～1:200；更优选地，组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体与羧基微球的质量比例为1:100-150。所述组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体为单克隆抗体或多克隆抗体，浓度为0.01g/L～0.2g/L，更优选地，使用组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体为兔抗人多克隆抗体，浓度为0.05g/L；包被组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体的胶乳微球为羧基微球，粒径100nm～300nm，浓度为1g/L～15g/L，包被方法为化学键交联法。更优选地，使用羧基微球，粒径为110nm～120nm，浓度为4g/L-6g/L，加入较高浓度中等粒径的微球有利于TIMP-2的线性检测。

上述试剂R1、试剂R2、0值校准品、高值校准品、质控品中的缓冲液均可以选自磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液和TAPS缓冲液中的一种，缓冲液pH值为6.0～9.0。更优选地，试剂R1中的缓冲液为PBS缓冲液，pH值为7.4；试剂R2中缓冲液为TAPS缓冲液，PH为8.0；校准品和质控品中缓冲液为磷酸盐缓冲液，pH值为7.4。所述组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)抗原和抗体在本申请的pH环境中，性能较好，不受影响。防腐剂选自叠氮化钠和Procline300中的一种，所述防腐剂的质量百分比浓度为0.1％～0.3％，更优选地，防腐剂为叠氮化钠，质量百分浓度为0.1％。

所述试剂R1中表面活性剂选自吐温系列、司盘系列、曲拉通系列，质量百分浓度为0.1％～0.8％，更优选地，表面活性剂为吐温20，质量百分浓度为0.3％；所述试剂R2中的助悬剂包括蔗糖、牛血清白蛋白、丙三醇、海藻糖中的一种或任意几种混合，更优选地，所述助悬剂为蔗糖和牛血清白蛋白的混合物。

0值校准品、高值校准品和质控品中的保护剂为蔗糖、牛血清白蛋白、海藻糖中的一种或任意几种混合，更优选地，所述保护剂为牛血清白蛋白与海藻糖的混合物。

高值校准品中组织金属蛋白酶抑制剂-2抗原浓度分别为血液模式：37.5ng/mL、75ng/mL、150ng/mL、300ng/mL和600ng/mL；尿液模式的校准液浓度以150ng/mL进行梯度稀释获得；所述质控品液系列中人组织金属蛋白酶抑制剂-2抗原浓度分别为25ng/mL、50ng/mL和150ng/mL。

所述试剂R2中组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体包被的胶乳颗粒的制备方法如下：

(1)胶乳微球的活化：

(a)分别将粒径为110nm～150nm的胶乳微球颗粒用MES缓冲液PH6.0稀释到终浓度1g/L～15g/L，充分搅拌。

(b)在(a)的体系中加入EDC，使EDC/胶乳微球的质量比值为(0.2～1):1，充分搅拌。

(c)在(b)的体系中加入NHS，使NHS/EDC的质量比值为(0.5～5):1，充分搅拌，室温反应0.5h～5h。

(2)抗体的包被：

(d)组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)抗体用PH7.2 MOPS缓冲液稀释，充分搅拌。

(e)将(d)中活化的羧基微球，边搅拌边缓慢的加入组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体中，充分搅拌，TIMP-2抗体的终浓度为0.01g/L～0.2g/L。

(f)室温条件下，过夜反应。

(3)封闭：

室温过夜反应后，在步骤(2)获得的抗体包被溶液中加入BSA，终质量百分浓度为0.2％～2％，室温搅拌封闭0.5h～5h。

(4)离心

封闭后的试剂，进行离心，10000g～20000g，4℃条件下，离心20min～90min。去除上清。用试剂R2的缓冲液溶解离心去除上清后的沉淀，使其终浓度为2g/L～10g/L。

(5)超声

离心重悬后的胶乳微球，超声分散后置于2℃～8℃备用。

从上面所述可以看出，本发明的优点和有益效果是：

本发明提供的人组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP2)试剂盒，能够实现单一微球粒径下血、尿两种样本类型的测试。使用中等粒径微球提高线性，通过试剂R1中加入的牛血清白蛋白降低基质效应对低值尿液样本检测的影响，通过试剂R1中金属盐与增敏剂比例的优化保证线性和低值灵敏度的平衡，使两种检测结果均能达到要求；0值校准品中活性分子的加入，可降低低值样本的反应度，提高空白限的检测准确性，增加了临床检测受众人群，提高了测试效率。具体是：

(1)本发明提供的人组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP2)试剂盒，0值校准品(亦做为高值校准品稀释液)中活性分子的加入，能够降低试剂0值反应度，使血清和尿液样本的空白限检测更加准确，未有负值出现，空白限≤2ng/mL。

(2)本发明通过在R1中加入牛血清白蛋白，降低了基质效应对尿液测试的影响，提高了低值尿液样本的检测灵敏度，使尿液在低值处的重复性变异系数能够保持在10％以内。

(3)本发明通过在R1中，通过优化金属盐与增敏剂的比例，提高低值灵敏度，重复性均可控制在10％以内。

(4)本发明试剂R2胶乳微球使用中等粒径的微球和高亲和抗体、提高线性范围，尿液样本的检测线性范围为5ng/mL～150ng/mL，血清样本的检测线性范围为5ng/mL～600ng/mL。

综上，本发明提供的胶乳免疫比浊法检测组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP2)，操作简单、检测耗时短，提高了试剂盒的检测灵敏度、线性检测范围和重复性，能兼容市场上多数的生化检测的设备，利用生化分析仪的通量检测能力，及时、批量的对样本进行检测，满足临床快速定量检测需求。

附图说明

图1为本发明实施例中血清样本测试值相关性比对图；

图2为本发明实施例中尿液样本测试值相关性比对图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明进一步详细说明。

本发明的难点是，组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)的在血、尿中的浓度比较低，检测单位为ng/mL，为保证检测的准确性需要提高试剂的灵敏度，单纯提高增敏剂浓度和使用大粒径微球会使试剂的检测线性变差，检测高值处易出现回勾，且低值区域的反应度高，容易使低值样本检测出现负值，导致空白限检测不准确。如何保证线性检测范围且低值的灵敏度好，测试空白限准确度不出现负值为本申请的难点。

试剂R1中；调整金属盐离子和增敏剂的比例，显著增加金属盐离子的含量，通过两者之间的协同效果，能够有效保证线性范围和低值灵敏度，由于免疫反应中，抗体为球蛋白，抗原多数亦为蛋白质，两者均含有大量的氨基和羧基残基，在溶液中这些残基带有电荷，由于静电的作用，在抗体和抗原周围会出现带相反电荷的电子云，并形成水化层，增敏剂的加入能破坏抗原抗体的水化层，促进其靠近反应，当抗原抗体结合后，水化层表面电荷减少或消失，水化层变薄，电子云也消失，合适浓度的金属盐离子的加入可以使抗原和抗体更进一步的相互靠拢，形成抗原抗体复合物，从而金属盐离子和增敏剂的协同作用，有效的提高抗原抗体的结合，保证线性检范围和低值灵敏度。

试剂R2中胶乳微球使用中等粒径的微球、提高线性范围，高亲和抗体有效提高了TIMP-2检测的灵敏度。

0值校准品(亦做为高值校准品的稀释液)中活性分子的加入使0值处的反应度降低，保证血清和尿液空白限检测的准确性，从而有效提高了本发明中TIMP-2检测的灵敏度、线性范围、准确度和重复性。

0值校准品亦做为高值校准品稀释液，高值校准品稀释液的作用有两点：①作为0值校准品，②作为稀释液稀释高值校准品，加入有功能性分子的0值校准品能够降低0值点的反应度，从而保证血清和尿液样本检测空白限的准确性。功能性分子和保护剂协同作用，提高了稳定性，保证货架期。通过R1中加入牛血清白蛋白降低尿液样本的基质效应，通过调节金属盐离子和增敏剂的比例，保证较高线性检测范围的基础上，进行低值灵敏度的优化，使得在线性检测范围和低值灵敏度两者质检要求达到较好的平衡，实现血、尿同检。

本申请中TIMP-2的浓度单位为ng/mL，浓度非常低，在保证线性好的基础上，提高低值检测灵敏度，校准品中功能性分子、增敏剂的含量、球粒径等产生较大影响，这种影响在高值检测时并不明显。

实施例1

1.1试剂R1的配制

在试剂R1配制的过程中，按照下表进行配制，配制完成后用0.22μm滤膜进行过滤，置于2℃～8℃冰箱中备用。

1.2试剂R2缓冲液的配制

在试剂R2配制的过程中，按照下表进行配制，配制完成后用0.22μm滤膜进行过滤，置于2℃～8℃冰箱中备用。

1.3校准品的配制

0值校准品(亦做高值校准品稀释液)的配制

在高值校准品配制的过程中，高值校准品的缓冲液按照下表进行配制，配制完成后用0.22μm滤膜进行过滤，置于2℃～8℃冰箱中备用。然后按照血清中组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP2)抗原的浓度配制高值校准品浓度为600ng/mL，用0值校准品再梯度稀释出37.5ng/mL、75ng/mL、150ng/mL、300ng/mL的血清样本校准品。浓度为150ng/mL的校准品用0值校准品进行梯度稀释出9.38ng/mL、18.75ng/mL、37.5ng/mL、75ng/mL的尿液样本校准品。

1.4质控品的配制

在质控品配制的过程中，按照下表进行配制，配制完成后用0.22μm滤膜进行过滤，置于2℃～8℃冰箱中备用。然后按照质控品中组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP2)的浓度梯度25ng/mL、50ng/mL和150ng/mL进行配制。

试剂R2的配制：

2.1羧基微球的活化

1)将粒径为113nm的胶乳微球颗粒用MES缓冲液PH6.0稀释到终浓度6g/L，充分搅拌。

2)在1)的体系中加入EDC，使EDC/胶乳微球的质量比为0.5:1，充分搅拌。

3)在2)的体系中加入NHS，使NHS/EDC的质量比为2:1，充分搅拌，室温反应1h，获得活化后的羧基微球。

2.2抗体的包被

1)组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)抗体用PH7.2 MOPS缓冲液稀释，充分搅拌。

2)将2.1中活化的羧基微球，边搅拌边缓慢的加入组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体中，充分搅拌，TIMP-2抗体的终浓度为0.05g/L。

3)室温条件下，过夜反应。

2.3封闭

室温过夜反应后，在上述溶液中加入BSA，终质量百分浓度为0.8％，室温搅拌封闭1h。

2.4离心

封闭后的试剂，进行离心，20000g，4℃条件下，离心30min。去除上清。用试剂R2的缓冲液溶解离心去除上清后的沉淀，使其终浓度为4g/L～5g/L。

2.5超声

离心重悬后的胶乳微球，超声分散后置于2℃～8℃备用。

试剂盒检测参数：

在AU680全自动生化分析仪上，读点为12-27。

实验评价：

4.1.试剂盒精密度测定

4.1.1批内精密度分析

将上述试剂盒一批，分别测定质控液系列，重复10次，得到变异系数结果如表1所示。

表1：批内精密度

4.1.2批间精密度分析

将试剂盒取三批，每批试剂盒均测定质控液系列，重复3次，统计批间变异系数结果如表2和表3所示。

表2：血液模式-批间精密度

表3：尿液模式批件精密度

4.1.3试剂盒空白限

空白限是用零浓度校准品作为样本进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果，计算其平均值(M)和标准差(SD)，得出M+2SD。试剂盒空白限检测结果如表4所示。

表4：空白限检测结果

4.1.4试剂盒抗干扰试验

向180μL浓度为100ng/mL～130ng/mL的血清和尿液样本添加20μL高浓度的干扰物，分别配制干扰物。向180μL浓度为100ng/mL～130ng/mL的血清和尿液样本中添加20μL纯化水，作为对照样本。采用本实施例试剂盒测定对照样本和干扰样本，每个样本测定2次。结果如表5和表6所示。

表5：血液模式干扰

表6：尿液模式干扰

由表5和表6结果可知，干扰样本测值与对照样本测值的偏差均小于±10％。本发明的试剂盒抗干扰效果良好。

4.1.5.线性范围检测(血液高值样本浓度为500ng/mL～650ng/mL，尿液高值样本浓度为150ng/mL～160ng/mL，分别进行梯度稀释，实现线性范围检测)

表7：血液模式线性检测

表8：尿液模式线性检测范围

由表7和表8结果可知血液模式和尿液模式线性回归系数均能够达到0.99；血样模模式和尿液模式线性偏差较好，在浓度高于100ng/mL时，线性相对偏差小于10％，浓度低于100ng/mL时，线性绝对偏差小于10ng/mL。

4.1.6.试剂盒稳定性试验

对上述试剂盒分别进行2℃～8℃和37℃放置的稳定性实验，试剂盒2℃～8℃放置12个月和37℃放置7天，校准品定标正常，质控品测值在规定范围内，空白限低于5ng/mL，试剂盒批间内和批间精密度分别小于±10％和±15％、准确度测值偏差小于±10％。因此，试剂盒有效期可达12个月。

经过大量的实验证明，本发明的试剂盒方法学指标如下：

线性检测范围：血液模式5ng/mL～600ng/mL；

尿液模式：5ng/mL～150ng/mL；

空白限：空白限不高于2ng/mL；

精密度：批内变异系数小于±10％，批间变异系数小于±15％；

抗干扰：胆红素浓度≤500μmol/L、乳糜浓度≤0.3％、血红蛋白浓度≤2g/L对本发明试剂盒检测无干扰。

稳定性：试剂各组分置2℃～8℃12个月和37℃7天后测定结果均符合要求，试剂盒效期可达12个月。

将本发明试剂盒同市售ELISA法试剂盒临床样本测值比对。

用本发明试剂盒和市售ELISA法试剂盒分别对40份人血清样品和尿液样本同时进行检测，其检测结果如表9和表10所示；以本发明试剂盒测定值为纵坐标，以市售ELISA法试剂盒测定的结果为横坐标作图，测试结果如图1和图2所示(超出ELISA试剂盒线性检测范围的样本，需稀释至线性检测范围后进行检测，再乘以稀释倍数得到样本值)。

表9：血清相关性测试

表10：尿液样本相关性测试

采用本发明试剂盒测定的血清和尿液中人TIMP-2浓度为纵坐标，以市售ELISA法试剂盒测定的结果为横坐标作回归分析，经统计学处理结果表明，本方法同市售ELISA法试剂盒临床样本测定值相关性良好。

本发明试剂盒同市售ELISA法试剂盒灵敏度比对。灵敏度的高低用低浓度样本测值的变异系数大小表示，变异系数小的灵敏高，测试结果如表11所示。

表11：灵敏度比对

采用及本发明的试剂盒，血清样本和尿液样本的灵敏度比对照试剂盒均好。

从上面所述可以看出，本发明的优点和有益效果是：

(1)本发明提供的胶乳免疫比浊法检测组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP2)，能够实现单一微球粒径下血、尿两种样本类型的测试，增加了临床检测受众人群，提高了测试效率，操作简单、检测耗时短。

(2)本发明提供的人组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP2)试剂盒，0值校准品(亦做为高值校准品稀释液)中活性分子的加入，能够降低试剂0值反应度，使血清和尿液样本的空白限检测更加准确，未有负值出现，空白限≤2ng/mL。

(3)本发明通过在试剂R1中加入牛血清白蛋白，同时优化金属盐与增敏剂的比例，降低了基质效应对尿液测试的影响，提高了低值尿液样本的检测灵敏度，使尿液在低值处的重复性变异系数能够保持在10％以内。

(4)本发明试剂2胶乳微球使用中等粒径110-130的微球和高亲和抗体，胶乳微球包被抗体，提高比表面积，提高线性范围，尿液样本的检测线性范围为5ng/mL～150ng/mL，血清样本的检测线性范围为5ng/mL～600ng/mL。

(5)本发明提供的试剂盒兼容市场上多数的生化检测的设备，利用生化分析仪的通量检测能力，及时、批量的对样本进行检测，提高了试剂盒的检测灵敏度、线性检测范围和重复性，实现了血尿同检，满足临床快速定量检测需求。

以上实施例仅用于说明本发明，但不用来限制本发明范围(包括权力要求)。在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种组织金属蛋白酶抑制剂-2胶乳免疫比浊法血尿同检试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2、0值校准品、高值校准品和质控品，所述试剂R1包括：缓冲液、增敏剂、表面活性剂、金属盐、牛血清白蛋白和防腐剂；所述试剂R2包括：缓冲液、组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体包被的胶乳颗粒、防腐剂和助悬剂；其特征在于，所述0值校准品中包括有缓冲液、防腐剂、保护剂和能使0值处的反应度降低，提高血清和尿液样本检测空白限的准确性的功能性分子；

高值校准品中加入有组织金属蛋白酶抑制剂-2抗原，以0值校准品作为高值校准品稀释液；

所述试剂R1中金属盐的质量百分浓度大于增敏剂的质量百分浓度，金属盐与增敏剂的质量百分浓度的比例为2:1～10:1；

所述金属盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙中的至少一种，质量百分浓度为0.5％～3％；

所述增敏剂选自聚乙二醇系列、葡聚糖系列或聚乙烯吡咯烷酮系列，质量百分浓度为0.05％～0.50％；

所述功能性分子为氯化胆碱或甘露醇，质量百分浓度为0.5％～5.0％。

2.根据权利要求1所述血尿同检试剂盒，其特征在于，金属盐与增敏剂的质量百分浓度的比例为3.3:1。

3.根据权利要求2所述血尿同检试剂盒，其特征在于，使用氯化镁作为金属盐，质量百分浓度为1.0％；增敏剂为聚乙二醇8000，质量百分浓度为0.3％；增敏剂为葡聚糖系列时，质量百分浓度为0.1％。

4.根据权利要求1所述血尿同检试剂盒，其特征在于，获得高值校准品，以0值校准品作为中间浓度血清样本校准品和尿液样本校准品制备时的校准品稀释液。

5.根据权利要求1所述血尿同检试剂盒，其特征在于，使用功能性分子为氯化胆碱，质量百分浓度为2.0％。

6.根据权利要求1所述血尿同检试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的牛血清白蛋白的质量百分浓度为0.5％～4.0％。

7.根据权利要求1所述血尿同检试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的牛血清白蛋白的质量百分浓度为2.0％。

8.根据权利要求1所述血尿同检试剂盒，其特征在于，所述组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体包被的胶乳颗粒中，组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体与羧基微球的质量比例为1:50～1:200；所述组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体为单克隆抗体或多克隆抗体，浓度为0.01g/L～0.2g/L；包被组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体的胶乳微球为羧基微球，粒径100nm～300nm，浓度为1g/L～15g/L，包被方法为化学键交联法。

9.根据权利要求8所述血尿同检试剂盒，其特征在于，组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体与羧基微球的质量比例为1:100～1：150；使用组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体为兔抗人多克隆抗体，浓度为0.05g/L；使用羧基微球，粒径为110nm～120nm，浓度为4g/L～6g/L。

10.根据权利要求1所述血尿同检试剂盒，其特征在于，试剂R1、试剂R2、0值校准品、高值校准品、质控品中的缓冲液均选自磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液和TAPS缓冲液中的一种，缓冲液pH值为6.0～9.0；防腐剂选自叠氮化钠和Procline300中的一种，所述防腐剂的质量百分比浓度为0.1％～0.3％；所述试剂R1中表面活性剂选自吐温系列、司盘系列、曲拉通系列，质量百分浓度为0.1％～0.8％；所述试剂R2中的助悬剂包括蔗糖、牛血清白蛋白、丙三醇、海藻糖中的一种或任意几种混合；保护剂为蔗糖、牛血清白蛋白、海藻糖中的一种或任意几种混合。

11.根据权利要求1所述血尿同检试剂盒，其特征在于，所述试剂R2组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体包被的胶乳颗粒的制备过程是：

(1)胶乳微球的活化：

(a)分别将粒径为110nm～150nm的胶乳微球颗粒用MES缓冲液PH6.0稀释到终浓度1g/L～15g/L，充分搅拌；

(b)在(a)的体系中加入EDC，使EDC/胶乳微球的质量比为(0.2～1):1，充分搅拌；

(c)在(b)的体系中中加入NHS，使NHS/EDC的质量比为(0.5～5):1，充分搅拌，室温反应0.5h～5h；

(2)抗体的包被：

(d)组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体用PH7.2 MOPS缓冲液稀释，充分搅拌；

(e)将(d)中活化的羧基微球，边搅拌边缓慢的加入组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体中，充分搅拌，组织金属蛋白酶抑制剂-2抗体的终浓度为0.01g/L～0.2g/L；

(f)室温条件下，过夜反应；

(3)封闭：

室温过夜反应后，在上述溶液中加入BSA，终质量百分浓度为0.2％～2％，室温搅拌封闭0.5h～5h；

(4)离心

封闭后的试剂，进行离心，10000g～20000g，4℃条件下，离心20min～90min；去除上清，用试剂R2的缓冲液溶解离心去除上清后的沉淀，使其终浓度为2g/L～10g/L；

(5)超声

离心重悬后的胶乳微球，超声分散后置于2℃～8℃备用。

12.根据权利要求1所述血尿同检试剂盒，其特征在于，所述试剂盒能达到下述指标：

线性检测范围：血液模式5ng/mL～600ng/mL；

尿液模式：5ng/mL～150ng/mL

空白限：空白限不高于2ng/mL

精密度：批内变异系数小于±10％，批间变异系数小于±15％

抗干扰：胆红素浓度≤500μmol/L、乳糜浓度≤0.3％、血红蛋白浓度≤2g/L对试剂盒检测无干扰；

稳定性：试剂各组分置2℃～8℃12个月和37℃7天后测定结果均符合要求，试剂盒效期能达12个月。