CN117434274A - 一种单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒及其测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒及其测定方法，单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒，包含以下组分：白介素6单克隆抗体包被的磁微粒、白介素6单克隆抗体标记的发光物质、样本稀释液、清洗液、底物液、IL‑6校准品。解决多人份试剂开瓶效期，需要额外配备洗液、底物液、稀释液、耗材等问题。此外，还提供了一种改善IL‑6液态校准品稳定性配方，确保了检测结果稳定、可靠。
Description
技术领域
本发明属于体外诊断试剂技术领域，本发明涉及一种单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒及其测定方法。
背景技术
白介素-6(Interleukin 6，IL-6)是一种功能广泛的多效性细胞因子，包含212个氨基酸序列，且氨基末端易裂解形成184个氨基酸系列的多肽，分子量约为22-27kDa。1989年有研究报道发现急性细菌性感染的患者体液内存在分子量约为60-70kDa的免疫反应复合物。随后在内外伤、外科手术、应激反应、感染、脑死亡、肿瘤产生以及其它情况的急性炎症反应过程中均发现有IL-6生成。连续检测ICU(重症监护室)病人血清或血浆中IL-6的水平能有效的评估SIRS(系统性炎症反应综合症)的严重程度、脓毒血症以及脓毒血症性休克的预后情况。IL-6可作为新生儿脓毒血症检测的早期预警标志物，同时也在慢性炎症(如类风湿性关节炎)中发挥作用。
目前，白介素6的测定主要有酶联免疫吸附法(ELISA)、荧光免疫层析法、磁微粒化学发光免疫分析法等。ELISA法多为手工操作，相对繁琐、费时。免疫层析法操作简便、结果快速，但因采用NC膜作为固相基质，其CV和灵敏度较差。磁微粒化学发光免疫分析法可全自动检测，在保证传统ELISA法高敏感性及特异性的前提下，极大地缩短了检测时间，并可对单个样本进行检测，广泛应用于临床检测。
IL-6抗原在液态形式下，容易发生变性，尤其是在低浓度条件下，抗原极其不稳定。目前，国内已获证的商业化IL-6试剂盒中，其校准品多采用冻干形式。专利CN112485451A公布了一种白介素6冻干校准品及其制备方法与冻干保护液。其组分主要有缓冲液(pH 7.2～7.6)、海藻糖、γ-环糊精、甘露醇、胶原蛋白保护剂、表面活性剂和防腐剂等。冻干后的IL-6校准品形态较好，稳定性得了到显著改善。但冻干品制备需要使用特殊设备，且制备、调试过程较为繁琐，使用前也需采用纯化水进行复溶。复溶后的样本准确性、稳定性受所用复溶基质、基质添加量影响，无法做到开封即用。
目前，白介素6磁微粒化学发光试剂主要采用多人份的大包装规格进行检测。当样本量较少时，无法在试剂开瓶效期内使用完，造成不必要的浪费。单人份发光试剂将所有试剂组分集中在一个试剂条中，无需额外的试剂、耗材，真正做到随到随测。此外，其配套仪器还具有无液路，操作简单，免维护，占地面积小等优点。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒及其测定方法，解决多人份试剂开瓶效期短，需要额外配备洗液、底物液、稀释液、耗材等问题。此外，还提供了一种改善IL-6液态校准品稳定性配方，确保了检测结果稳定、可靠。
为解决上述技术问题，提供以下的技术方案：
根据本发明的第一个方面，本发明的单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒，包含以下组分：
白介素6单克隆抗体包被的磁微粒、白介素6单克隆抗体标记的发光物质、样本稀释液、清洗液、底物液、IL-6校准品。
优选地，所述单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒中白介素6单克隆抗体包被的磁微粒浓度为0.1-1.0mg/mL，磁珠粒径为1.0-5.0μm，抗体-磁珠包被浓度5μg/mg-30μg/mg，即白介素6单克隆抗体包被的磁微粒中1mg磁珠包被的白介素6单克隆抗体量在5μg～30μg。进一步优选地，磁微粒为1.5μm的羧基磁微粒，抗体-磁珠包被浓度15μg/mg。
优选地，白介素6单克隆抗体包被的磁微粒由下述方法制备而成：采用EDC.HCl、Sulfo-NHS与MES缓冲液洗涤后的羧基磁微粒反应得活化后的磁微粒，然后与IL-6单克隆抗体反应得连接上IL-6单克隆抗体的磁微粒，采用牛血清白蛋白的TBST缓冲液对IL-6单克隆抗体的磁微粒处理得BSA封闭后的免疫磁微粒；使用时用含50mM pH 8.0Tris、0.9％氯化钠、5％海藻糖、0.1％牛血清白蛋白、1％明胶、0.05％ Tween 20、0.005％ Mak 33IgGpoly、0.005％鼠IgG、0.09％叠氮化钠的缓冲液稀释至浓度为0.3mg/mL。
优选地，所述的白介素6单克隆抗体标记的发光物质可以是碱性磷酸酶、吖啶酯及其衍生物、辣根过氧化物酶或三联吡啶钌中的一种或多种。进一步优选地，化学发光标记物为碱性磷酸酶，例如来源于酵母重组表达的碱性磷酸酶，即白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶。
优选地，所述的白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶浓度为0.2-2.0μg/mL，优选的，标记物浓度为0.5μg/mL。所述白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶有下述方法制备而成：采用2-亚氨基硫烷对IL-6抗体进行活化得2-IT活化后的IL-6抗体，采用Sulfo-SMCC对碱性磷酸酶进行活化得Sulfo-SMCC活化后的碱性磷酸酶，将2-IT活化后的IL-6抗体和Sulfo-SMCC活化后的碱性磷酸酶混匀即得白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶；使用时，50mM pH 7.0PBS、0.9wt％氯化钠、0.05wt％Tween20、0.1wt％酪蛋白钠、0.005wt％Mak 33-IgG poly、0.005wt％鼠IgG、0.09wt％叠氮化钠的缓冲液稀释至浓度为0.5μg/mL。
优选地，所述的样本稀释液含有PBS、氯化钠、蛋白、明胶、表面活性剂、防腐剂、消泡剂。进一步优选的，所述样本稀释液含如下成分：20mM pH 7.4PBS、0.9wt％氯化钠、0.5wt％牛血清白蛋白、0.05wt％Tween 20、0.09wt％叠氮化钠、0.06wt％明胶、0.01wt％有机硅消泡剂。
优选地，所述清洗液含有Tris(三羟甲基氨基甲烷)、氯化钠、表面活性剂、防腐剂、消泡剂。进一步优选地，所述述清洗液中含如下成分：50mM pH8.5 Tris、0.9wt％氯化钠、0.2wt％Tween 20、0.1wt％Triton X-100、0.09wt％叠氮化钠、0.01wt％有机硅消泡剂。
优选地，所述底物液中的底物为APS-5(9-(4'-氯苯硫代磷酰氧亚甲基)-10-甲基-9，10-二氢化吖啶二钠盐)、NaOH和H2O2、鲁米诺、(金钢烷)-1,2-二氧乙烷或其衍生物或三丙胺中的任意一种或多种。进一步优选地，底物液中的底物为化学发光底物APS-5。
优选地，所述的IL-6校准品中的IL-6抗原可以是原核表达、真核表达的重组抗原，亦可是天然提取的抗原；校准品缓冲液含有HEPES、氯化钠、海藻糖、蛋白、氨基酸、表面活性剂、防腐剂。优选的，IL-6抗原为原核大肠杆菌E.coli表达的重组抗原。进一步优选地，所述校准品缓冲液为50mM pH 7.4HEPES、0.9wt％氯化钠、5wt％海藻糖、1wt％牛血清白蛋白、1wt％酪蛋白钠、7wt％甘氨酸、0.05wt％Triton X-405、0.09wt％叠氮化钠的组成的缓冲液。本发明中校准品缓冲液作为重要改进点，改进后的缓冲液可使校准品具有优异的稳定性。
优选地，样本稀释液、清洗液、校准品缓冲液中所述的表面活性剂可采用吐温类、Brij类、曲拉通中的一种或多种组合。
优选地，样本稀释液、清洗液、校准品缓冲液中所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸钠、proclin系列、叠氮化钠中的一种或多种组合。
优选地，样本稀释液、清洗液、校准品缓冲液中所述的蛋白可采用酪蛋白钠、牛血清白蛋白中的一种或多种组合。
根据本发明的第二个方面，本发明提供一种检测体液样本中IL-6浓度的方法，使用上述IL-6检测试剂盒，具体操作步骤如下：
将样本加入到单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒样本孔中。采用化学发光免疫分析仪自动对样本进行稀释，稀释后的样本与白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶、IL-6单克隆抗体包被的磁微粒一起孵育形成抗体-抗原-抗体夹心免疫复合物，经过清洗液洗涤去除多余物质后，加入底物液中化学发光底物对反应体系进行发光，检测化学发光信号值，根据已有的标准曲线信息得到体液样本中IL-6浓度。
优选地，所述样本为血清、血浆、全血、尿液、脑脊液、校准品或质控品中的任意一种。
优选地，所述化学发光免疫分析仪为苏州翊讯生物科技有限公司EASY-M160全自动化学发光免疫分析仪。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1)本发明提供了一种单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒，解决了多人份试剂开瓶效期短，需要额外配备洗液、底物液、稀释液、耗材等问题；
2)本发明单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒灵敏度和重复性性能优异；
3)本发明提供了一种IL-6校准品，该校准品在热加速稳定性方面和实时存储稳定性方面性能优异，可稳定保存13个月。
附图说明
图1为含本发明单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒(条)示例图，其中(1)为1号孔为样本孔，(2)为2号位白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶，(3)-(5)为3-5号位清洗液，(7)为7号位白介素6单克隆抗体包被的磁微粒；(11)为11号位样本稀释液，(13)为13号位底物，(10)为10号孔为检测孔，其余孔位为预留孔。
图2为IL-6试剂盒稀释线性图。
具体实施方式
本发明实施例中，各种缓冲液体系均为水体系，且缓冲液体系中各成分含量未特殊说明均为重量百分比(wt％)。
含本发明单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒(条)示例如图1所示，其中试剂条孔位、孔位对应的试剂名称及其试剂的分装量见表1所示：
表1含本发明单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒(条)信息表
| 试剂条孔位 | 试剂名称 | 分装量(μL) |
| 2号位 | 白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶 | 70 |
| 3号位 | 清洗液 | 400 |
| 4号位 | 清洗液 | 400 |
| 5号位 | 清洗液 | 400 |
| 7号位 | 白介素6单克隆抗体包被的磁微粒 | 50 |
| 11号位 | 样本稀释液 | 50 |
| 13号位 | 底物 | 130 |
注：1号孔为样本孔，10号孔为检测孔，其余孔位为预留孔。
实施例中2号位白介素6酶标记物采用白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶。
实施例1：单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒的制备方法
本发明试剂盒组分包括白介素6单克隆抗体包被的磁微粒、白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶、样本稀释液、清洗液、APS-5底物液、IL-6校准品。
本发明的IL-6化学发光检测试剂盒的制备方法，主要包括以下步骤：
(1)步骤一：制备白介素6单克隆抗体包被的磁微粒
1.1用50mM pH 5.0的MES(4-吗啉乙磺酸)缓冲液对白介素6单克隆抗体(Anti IL-6 2703SPTN-5，Medix Biochemica)进行透析除盐处理。
1.2按1mg羧基磁微粒：约0.5mg EDC.HCl：约1.0mg Sulfo-NHS的比例，依次加入100mg/mL EDC.HCl、100mg/mL Sulfo-NHS于MES洗涤后的羧基磁微粒(MS160/Carboxyl，JSRLife Sciences)中，涡旋混匀后室温反应60min得活化后的磁微粒。
1.3用50mM pH 5.0的MES洗涤活化后的磁微粒，然后按1.0mg活化磁微粒加入0.2mL 50mM pH 5.0的MES缓冲液的比例加入50mM pH 5.0的MES缓冲液，涡旋混匀后备用。按15μg/mg(磁珠-抗体包被比例，即1mg磁珠包被的白介素6单克隆抗体量在15μg)的比例加入所需IL-6单克隆抗体，再次涡旋混匀后室温反应2h得连接上IL-6单克隆抗体的磁微粒。
1.4对连接上IL-6单克隆抗体的磁微粒用含1％ BSA牛血清白蛋白的TBST缓冲液(50mM pH7.4 Tris、0.1％Tween-20+1％BSA+0.09％叠氮化钠)洗涤、磁分离后，按1.0mg磁微粒加入约0.2mL比例加入0.5％ BSA的TBST缓冲液，涡旋混匀后，涡旋混匀后室温反应60min得BSA封闭后的免疫磁微粒。
1.5对BSA封闭后的免疫磁微粒用含0.5％ BSA的TBST缓冲液(50mM pH7.4 Tris、0.1％Tween-20、0.5％BSA、0.09％叠氮化钠)洗涤、磁分离后稀释至10mg/mL，作为浓磁备用。使用时，用含50mM pH 8.0Tris、0.9％氯化钠、5％海藻糖、0.1％牛血清白蛋白、1％明胶、0.05％ Tween 20、0.005％ Mak 33IgG poly、0.005％鼠IgG、0.09％叠氮化钠的缓冲液稀释至浓度为0.3mg/mL，作为本发明单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒中白介素6单克隆抗体包被的磁微粒组份。
(2)步骤二：白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶
将透析除盐后的IL-6抗体(Anti IL-6 2704SPTN-5，Medix Biochemica)按抗体：2-IT 2-亚氨基硫烷摩尔比为1:5的比例加入10mg/mL的2-IT 2-亚氨基硫烷，涡旋混匀后37℃反应活化1h。活化后的IL-6抗体随后通过G-25重力柱除盐，得2-IT活化后的IL-6抗体。
将透析除盐后的碱性磷酸酶按碱性磷酸酶：Sulfo-SMCC摩尔比1:20的比例加入40mg/mL的Sulfo-SMCC，涡旋混匀后37℃反应1h进行活化。活化后的IL-6抗体随后通过G-25重力柱除盐，得Sulfo-SMCC活化后的碱性磷酸酶。
将2-IT活化后的IL-6抗体和Sulfo-SMCC活化后的碱性磷酸酶充分混匀，在4℃冰箱中静置反应24h。反应后的溶液用0.22μm滤膜过滤，随后用AKTA PRIME纯化系统进行纯化。收集目标峰对应的收集管，混合后测定紫外吸收值，随后超滤浓缩白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶浓度为2mg/mL，加入等体积甘油，涡旋混匀后-20℃保存，作为浓酶备用。使用时，用含50mM pH 7.0PBS、0.9wt％氯化钠、0.05wt％Tween20、0.1wt％酪蛋白钠、0.005wt％Mak 33-IgG poly、0.005wt％鼠IgG、0.09wt％叠氮化钠的缓冲液稀释至浓度为0.5μg/mL，作为本发明单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒中白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶组份。
(3)步骤三：配制样本稀释液：所述样本稀释液含如下成分：20mM pH 7.4PBS、0.9wt％氯化钠、0.5wt％牛血清白蛋白、0.05wt％Tween 20、0.09wt％叠氮化钠、0.06wt％明胶、0.01wt％有机硅消泡剂。
(4)步骤四：配制清洗液：所述清洗液中含如下成分：50mM pH8.5 Tris、0.9wt％氯化钠、0.2wt％Tween 20、0.1wt％Triton X-100、0.09wt％叠氮化钠、0.01wt％消泡剂。
(5)步骤五：配制底物液：APS-5底物液为外购物料，来源于武汉瀚海新酶，加入0.01wt％消泡剂，混匀后作为底物组分。
(6)步骤六：将上述试剂组分按照表1中的分装量分别加入试剂条对应孔位中，组成IL-6单人份磁微粒发光试剂条。
(7)校准品：用含50mM pH 7.4HEPES、0.9wt％氯化钠、5wt％海藻糖、1wt％牛血清白蛋白、1wt％酪蛋白钠、7wt％甘氨酸、0.05wt％Triton X-405、0.09wt％叠氮化钠的组成的缓冲液将重组IL-6抗原(Recombinant IL-6，Medix Biochemica)分别稀释至8.0pg/mL(校准品Cal 1)、1000.0pg/mL(校准品Cal 2)。
实施例2：IL-6化学发光检测试剂盒检测方法
本发明IL-6化学发光检测试剂盒包括白介素6单克隆抗体包被的磁微粒、白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶(即白介素6单克隆抗体标记的发光物质)、样本稀释液、清洗液、APS-5底物液、IL-6校准品。
化学发光底物为实施例1中的APS-5底物液。
试剂条样本孔中加入100μL测试样本或校准品、70μL白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶、50μL白介素6单克隆抗体包被的磁微粒、400μL的清洗液、50μL的样本稀释液、130μL的APS-5底物液。将分装好试剂的试剂条放置在试剂架中，随后将试剂架置于仪器温育台卡槽中。使用苏州翊讯生物科技有限公司EASY-M160全自动化学发光免疫分析仪通过Tip头自动进行后续移液、混匀、清洗、集磁等步骤。最后通过试剂条中第10号检测孔进行光子读数。
实施例3：IL-6化学发光检测试剂盒基础性能
(1)IL-6试剂盒灵敏度
将不含IL-6抗原的校准品缓冲液用实施例1制备的IL-6化学发光试剂盒检测20次，计算平均值(M)和标准差(SD)，将M+2SD的数值带入校准曲线，计算对应的浓度值即为灵敏度，统计结果见表2。
表2IL-6试剂盒灵敏度
目前表观健康人群中，IL-6的阳性判断值约7pg/mL。通过仪器内部校准曲线计算，试剂盒灵敏度为1.53pg/mL，满足行业标准YY/T1916-2023要求的灵敏度≤3pg/mL以及临床应用需求。
(2)IL-6试剂盒线性
用接近线性范围上限的线性高值样本L1和接近线性范围下限的线性低值样本L6，按比例混合成6个稀释浓度，每个稀释样本检测3次，分别求出每个稀释样本检测结果的均值(yi)。以稀释比例(xi)为自变量，以检测结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程。根据下列公式计算线性回归的相关系数(r)，IL-6试剂盒稀释线性见表3和图2。
式中：
xi——稀释浓度1～6对应的稀释比例(i＝1,…,6)；
yi——稀释浓度1～6测定的均值(i＝1,…,6)。
表3IL-6试剂盒稀释线性
行业标准YY/T 1916-2023要求IL-6检测试剂盒在5～1200pg/mL线性区间内，相关系数(r)应不小于0.9900。上述测试结果表明试剂盒在1.5～5000pg/mL线性区间内，相关系数(r)为0.9946，大于0.9900，满足要求。
(3)IL-6试剂盒重复性
分别检测低值样本L(7.0±1.0pg/mL)和高值样本H(1000.0±100.0pg/mL)，各重复测定10次，计算10次测定结果的平均值(M)和标准差(SD)，根据平均值(M)和标准差(SD)计算CV值，结果如表4所示。
表4IL-6试剂盒重复性CV值
| 测试次数 | 低值样本L(pg/ml) | 高值样本H(pg/ml) |
| Rep1 | 6.231 | 913.619 |
| Rep2 | 7.083 | 977.015 |
| Rep3 | 6.433 | 900.222 |
| Rep4 | 7.009 | 945.248 |
| Rep5 | 6.600 | 940.687 |
| Rep6 | 6.242 | 936.229 |
| Rep7 | 7.050 | 891.971 |
| Rep8 | 6.839 | 976.910 |
| Rep9 | 6.931 | 953.568 |
| Rep10 | 6.633 | 959.740 |
| Mean | 6.705 | 939.521 |
| SD | 0.33 | 29.69 |
| 批内-CV | 4.85 | 3.16 |
低值样本L为阳性判断值附近样本，所测试结果的变异系数为4.85％；高值样本H测试结果变异系数为3.16％，满足行业标准YY/T1916-2023要求的变异系数应不大于12％。
实施例4IL-6校准品的稳定性
以实施例1中制备出的校准品Cal 1和Cal 2进行稳定性测试。
(1)热加速稳定性
将适量的IL-6校准品，分别置于37℃干燥/培养箱和2～8℃冰箱中，并于7天、14天取出，平衡至室温后上机测试。测试结果如下表5所示：
表5IL-6校准品的稳定性测试结果
前期研究中发现校准品中同时不添加甘氨酸和酪蛋白钠，其余原料成分和配比同实施例1，制备出的校准品定义为D-Cal 1和D-Cal 2，其稳定性结果如表6所示。
表6不含甘氨酸、酪蛋白钠校准品缓冲液测定结果
测试结果表明，现有配方中的甘氨酸、酪蛋白钠可以显著改善IL-6校准品的热加速稳定性(表5和表6中结果比对)，IL-6校准品于37℃干燥/培养箱分别放置7天、14天后，测试结果偏差均小于2％。
本发明校准品缓冲液，甘氨酸用量提高至7wt％，新增0.05wt％Triton X-405，进一步改善了校准品的热加速稳定性，37℃条件下可稳定保存14天；酪蛋白含量降低至1wt％，有效改善了缓冲液的过滤效果，有利于后续放大生产。
(2)实时存储稳定性
将IL-6校准品Cal 1、Cal 2于2～8℃环境中保存，在第0、3、6、9、12、13个月时取出，用效期内试剂盒进行检测，每个浓度点检测2次，计算平均值，测试结果如下表7所示：
表7IL-6校准品的实时存储稳定性结果
测试结果显示，IL-6校准品Cal 1、Cal 2在实时存储条件下，可稳定保存13个月，其浓度偏差均在5％以内。
上述实施例为本发明优选地实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒，包含以下组分：
白介素6单克隆抗体包被的磁微粒、白介素6单克隆抗体标记的发光物质、样本稀释液、清洗液、底物液、IL-6校准品。
2.根据权利要求1所述的单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒，所述单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒中白介素6单克隆抗体包被的磁微粒，浓度为0.1-1.0mg/mL，磁珠粒径为1.0-5.0μm，抗体-磁珠包被浓度5μg/mg-30μg/mg，即白介素6单克隆抗体包被的磁微粒中1mg磁珠包被的白介素6单克隆抗体量在5μg～30μg；
和/或，所述白介素6单克隆抗体包被的磁微粒为1.5μm的羧基磁微粒，抗体-磁珠包被浓度15μg/mg；
和/或，所述白介素6单克隆抗体包被的磁微粒由下述方法制备而成：采用EDC.HCl、Sulfo-NHS与MES缓冲液洗涤后的羧基磁微粒反应得活化后的磁微粒，然后与IL-6单克隆抗体反应得连接上IL-6单克隆抗体的磁微粒，采用牛血清白蛋白的TBST缓冲液对IL-6单克隆抗体的磁微粒处理得BSA封闭后的免疫磁微粒；使用时用含50mM pH 8.0Tris、0.9％氯化钠、5％海藻糖、0.1％牛血清白蛋白、1％明胶、0.05％Tween 20、0.005％Mak 33IgG poly、0.005％鼠IgG、0.09％叠氮化钠的缓冲液稀释至浓度为0.3mg/mL。
3.根据权利要求1所述的单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒，所述的白介素6单克隆抗体标记的发光物质为碱性磷酸酶、吖啶酯及其衍生物、辣根过氧化物酶或三联吡啶钌中的一种或多种；
和/或，白介素6单克隆抗体标记的发光物质为白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶；
和/或,所述的白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶浓度为0.2-2.0μg/mL，优选为0.5μg/mL；
和/或，所述白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶有下述方法制备而成：采用2-亚氨基硫烷对IL-6抗体进行活化得2-IT活化后的IL-6抗体，采用Sulfo-SMCC对碱性磷酸酶进行活化得Sulfo-SMCC活化后的碱性磷酸酶，将2-IT活化后的IL-6抗体和Sulfo-SMCC活化后的碱性磷酸酶混匀即得白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶；使用时，50mM pH 7.0PBS、0.9wt％氯化钠、0.05wt％Tween20、0.1wt％酪蛋白钠、0.005wt％Mak 33-IgG poly、0.005wt％鼠IgG、0.09wt％叠氮化钠的缓冲液稀释至浓度为0.5μg/mL。
4.根据权利要求1所述的单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒，所述的样本稀释液含有PBS、氯化钠、蛋白、明胶、表面活性剂、防腐剂、消泡剂；
和/或，所述样本稀释液含如下成分：20mM pH 7.4PBS、0.9wt％氯化钠、0.5wt％牛血清白蛋白、0.05wt％Tween 20、0.09wt％叠氮化钠、0.06wt％明胶、0.01wt％有机硅消泡剂。
5.根据权利要求1所述的单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒，所述清洗液含有Tris(三羟甲基氨基甲烷)、氯化钠、表面活性剂、防腐剂、消泡剂；
和/或，所述述清洗液中含如下成分：50mM pH8.5 Tris、0.9wt％氯化钠、0.2wt％Tween20、0.1wt％Triton X-100、0.09wt％叠氮化钠、0.01wt％有机硅消泡剂。
6.根据权利要求1所述的单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒，所述底物液中的底物为APS-5(9-(4'-氯苯硫代磷酰氧亚甲基)-10-甲基-9，10-二氢化吖啶二钠盐)、NaOH和H2O2、鲁米诺、(金钢烷)-1,2-二氧乙烷或其衍生物或三丙胺中的任意一种或多种；优选地，底物液中的底物为化学发光底物APS-5。
7.根据权利要求1所述的单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒，所述的IL-6校准品中的IL-6抗原为原核表达、真核表达的重组抗原，或天然提取的抗原；优选的，IL-6抗原为原核大肠杆菌E.coli表达的重组抗原；
和/或，所述校准品缓冲液含有HEPES、氯化钠、海藻糖、蛋白、氨基酸、表面活性剂、防腐剂；优选地，所述校准品缓冲液为50mM pH 7.4HEPES、0.9wt％氯化钠、5wt％海藻糖、1wt％牛血清白蛋白、1wt％酪蛋白钠、7wt％甘氨酸、0.05wt％Triton X-405、0.09wt％叠氮化钠的组成的缓冲液。
8.根据权利要求1-7任一项所述的单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒，所述样本稀释液、清洗液、校准品缓冲液中所述的表面活性剂可采用吐温类、Brij类、曲拉通中的一种或多种组合；
和/或，样本稀释液、清洗液、校准品缓冲液中所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸钠、proclin系列、叠氮化钠中的一种或多种组合；
和/或，样本稀释液、清洗液、校准品缓冲液中所述的蛋白可采用酪蛋白钠、牛血清白蛋白中的一种或多种组合。
9.一种检测体液样本中IL-6浓度的方法，使用权利要求1所述的IL-6检测试剂盒，具体操作步骤如下：
将样本加入到单人份白介素6磁微粒化学发光试剂盒样本孔中，采用化学发光免疫分析仪自动对样本进行稀释，稀释后的样本与白介素6单克隆抗体标记的碱性磷酸酶、IL-6单克隆抗体包被的磁微粒一起孵育形成抗体-抗原-抗体夹心免疫复合物，经过清洗液洗涤去除多余物质后，加入底物液中化学发光底物或激发液对反应体系进行发光，检测化学发光信号值，根据已有的标准曲线信息得到体液样本中IL-6浓度；
和/或，所述样本为血清、血浆、全血、尿液、脑脊液、校准品或质控品中的任意一种；
和/或，所述化学发光免疫分析仪为苏州翊讯生物科技有限公司EASY-M160全自动化学发光免疫分析仪。
10.一种IL-6校准品，包括重组IL-6抗原和缓冲液，所述缓冲液为含50mM pH7.4HEPES、0.9wt％氯化钠、5wt％海藻糖、1wt％牛血清白蛋白、1wt％酪蛋白钠、7wt％甘氨酸、0.05wt％Triton X-405、0.09wt％叠氮化钠的组成的缓冲液。
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