CN105195243A - 一种肌红蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种肌红蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，其结构主要包括盖片(1)和底片(11)，其中盖片(1)上的空气泵(3)，气流微通道(5)，加样口(2)，样本液流通道(6)，第一生物标记物存储池(4)，微混合器(7)以及过渡区(10)依次连接；底片(11)上的过滤器(12)，反应池(13)，清洗池(14)，检测池(15)，溶液释放通道(18)依次连接；底片(11)上的检测池(15)通过溶液释放通道(18)与清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)连接。

Description

一种肌红蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片

技术领域

本发明涉及临床医学检验领域，具体涉及一种肌红蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，能够在数分钟内实现对生物样品中肌红蛋白的定量检测，该检测方法具有操作简单，灵敏度高，低成本等特点。

技术背景

肌红蛋白(myoglobin，MYO，Mb)是由一条肽链和一个血红素辅基组成的结合蛋白，是肌肉内储存氧的蛋白质，它的氧饱和曲线为双曲线型。肌肉中运载氧的蛋白质，由153个氨基酸残基组成，分子量为16.7KD，含有血红素，和血红蛋白同源，与氧的结合能力介于血红蛋白和细胞色素氧化酶之间，可帮助肌细胞将氧转运到线粒体。肌红蛋白是组成骨骼肌和心肌的主要蛋白质，当肌肉损伤时，可以从肌肉组织中漏到循环血液中，使血清肌红蛋白浓度增加。因此，该指标用于判断是否发生肌肉损伤。在健康人体内，正常值，男性20～80μg/L；女性10～70μg/L；急性心肌梗死早期、急性肌损伤、肌营养不良、肌萎缩、多发性肌炎、急性或慢性肾功能衰竭、严重充血性心力衰竭和长期休克等都可能导致肌红蛋白含量升高。测定血清肌红蛋白可作为急性心肌梗死(AMI)诊断的早期最灵敏的指标。但特异性差，骨骼肌损伤、创伤、肾功能衰竭等疾病，都可导致其升高。Myo阳性虽不能确诊AMI，但可用于早期排除AMI诊断的重要指标。

目前用于检测肌红蛋白的主要方法为酶联免疫法(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)和化学发光免疫分析法(chemiluminescenceimmunoassay，CLIA)。ELISA则由于方法间差异较大，导致结果不均一，且线性范围较窄，操作复杂，不适于做单人份或少量标本的检测。化学发光技术兴起于上个世纪80年代是继酶联免疫技术和放免技术之后发展起来的新兴技术，由于其高灵敏度、高特异性，同时方法简便、快速，标记结合物稳定，无放射性同位素损伤和污染等特点，在近些年得到了飞速发展。中国专利(CN103033627A)，公开了一种人肌红蛋白酶促化学发光免疫检测方法，具体做法为：在固定有抗人肌红蛋白单克隆抗体的聚苯乙烯微孔板上，加入待检测样本和辣根过氧化物酶标记的抗人肌红蛋白单克隆抗体，孵育一定时间，经过洗涤，再加入发光试剂，在化学发光仪测定发光值，根据抗原浓度和发光强度间的关系，得出待检样品中肌红蛋白的含量。本方法用于肌红蛋白的定量检测灵敏度高，稳定性好，但检测时操作步骤繁琐，需要专业人员操作，不适合中小医院和基层医疗单位，同时检测时间长，不能用于及时快速诊断。

近年来，生物分析技术领域得到了快速的发展，出现了很多重要的研究方向。微流控芯片分析技术是其中最活跃的一支，在科研和实际应用领域都获得了广泛的重视。微流控芯片作为一种新型的分析检测平台，具有高通量、集成化、便携式、易操作、低成本等优点，已经在众多领域中得到了广泛的应用，尤其是在免疫分析领域已崭露头角。

表面功能化的磁性微球作为固相载体，可以用来有效地捕获核酸、蛋白分子、病毒颗粒甚至细胞，已经被广泛地应用于各种生化指标的临床诊断等领域。而微流控芯片系统具有快速、高效、集成化等特点，两者相结合，将成为一种新型的高性能检测方法，以解决当前检测方法中存在的灵敏度低，检测过程复杂，难以实现微量样本检测的问题，有望进一步推动临床检测仪器向便携化和微型化发展。

免疫磁珠的生物微流控芯片是将磁颗粒技术，免疫分析集成到微流控芯片上的一种分析检测方法，目前这种综合性的检测方法的主要难点表现为：1)液体在芯片内部微流动的智能控制，目前常采用的方法是在芯片内部设置多个微泵和微阀，使得微流控体系变得更加复杂化；2)反应体系的混合不充分，导致反应不充分；3)集成化程度不高，导致非特异性背景高。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提出一种肌红蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，临床检验人员只需经过简单操作，即可在数分钟内快速实现样品中肌红蛋白浓度的定量检测。检测结果灵敏度高，准确可靠，重复性好，成本低。

本发明涉及的技术问题所采用的技术方案如下为：

一种肌红蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片结构主要包括盖片(1)和底片(11)，其中盖片(1)上空气泵(3)，气流微通道(5)，加样口(2)，样本液流通道(6)，第一生物标记物存储池(4)，微混合器(7)以及过渡区(10)依次连接；底片(11)上过滤器(12)，反应池(13)，清洗池(14)，检测池(15)，溶液释放通道(18)依次连接；底片(11)上检测池(15)通过溶液释放通道(18)与清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)连接；

所述第一生物标记物存储池(4)存储预封装酶或发光剂标记抗肌红蛋白抗体溶液；所述反应池(13)存储预封装磁颗粒标记抗肌红蛋白抗体；所述清洗液存储池(14)和和发光液存储池(17)分别存储预封装清洗液和发光液；所述盖片(1)和底片(11)用胶带(20和22)密封；所述微流控芯片测试流程中，用磁铁操控磁颗粒移动或聚集。

具体地，本发明所述第一生物标记物存储池(4)、清洗液存储池(14)和发光液存储池(17)体积为10～500μL，优选10～300μL，为液囊或腔体；所述微流控芯片的微混合器是宽度为20～300μm，深度为10～100μm的蛇形，折线形或方形结构；所述微流控芯片的过滤器由腔体和滤血膜组成。

优选地，所述微流控芯片的微混合器宽度为150μm，深度为50μm的方形结构，在外部压力作用下，可使样本和试剂充分混合，提高反应效率。

优选地，所述微流控芯片的过滤器的腔体体积为样本体积的3～10倍，优选腔体体积为样本体积的4～6倍。

具体地，所述微流控芯片底片中过滤器内的滤血膜材质可以为玻璃纤维膜，聚酯纤维膜或CytoSep膜等，优选地，以玻璃纤维膜作为滤血膜。

具体地，本发明所述微流控芯片的过滤器具有滤除样本杂质的功能外，还可以将液体引导进入下一级微结构和微通道。

具体地，本发明所述微流控芯片的反应池为一毛细管微通道，该毛细管微通道为管状通道或矩形通道，允许微液体流进或通过。

优选地，所述反应池为管状通道，直径为0.5～10mm；更优选微通道的直径为5mm，进一步优选2mm或1mm。

优选地，所述反应池为矩形通道，宽为0.1～5mm，深度为0.01～2mm，长为5～40mm。

具体地，本发明所述毛细管通道的体积小于150μl，作为优选，毛细管通道的体积小于100μl，进一步优选，毛细管通道体积小于50μl，低于30μl甚至更好，低于20μl甚至更好，如小于15μl，小于10μl甚至小于5μl。

具体地，本发明所述磁颗粒标记抗肌红蛋白抗体使用的磁颗粒为超顺磁性颗粒，可为顺磁性的Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃化合物，优选Fe₃O₄化合物，磁颗粒粒径为0.1～10μm。优选磁颗粒粒径为1～3μm，更优选粒径为2.0μm的磁颗粒。

具体地，本发明所述微流控芯片盖片和底片内除上述主要微通道和微结构外还有许多透气孔和用于组装固定的让位孔和立柱。

具体地，所述微流控芯片盖片上的空气泵(3)主要是通过气流通道(5)传递压力，主要作用是用于样本和第一生物标记物的混合，提高一级孵育效果。

具体地，本发明所述微流控芯片的气流通道尺寸为0.1～100μm，进一步优选2～50μm。

具体地，本发明所述微流控芯片盖片的过渡区是盖片和底片连接的枢纽，一级反应混合物经过渡区流入过滤器，实现了液体在微流控芯片的上下片层间的流动。

本发明所述微流控芯片的反应池内部需进行一定的表面改性处理，所述表面改性处理方法可为化学反应，表面涂层，等离子处理等，从而获得良好的亲水性，促使液体样本在毛细管作用力下流动，快速填充微通道。

本发明中所述酶，包含但不限定于过氧化氢酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)。发光基底液为酶对应的发光底物(如鲁米诺或金刚烷)和发光增强液(如苯衍生物等增强剂)，其中发光底物和发光增强液可合并，如图2所示混合均匀后注入一个发光基底液存储池(17)；但当混合液保质期少于1年时应分开，如图4所示分别注入发光基底液存储池(17)和发光基底液存储池(24)，通过预混合通道(23)混合均匀。

本发明所述微流控芯片的组装，盖片和底片通过密封胶带进行黏合，密封胶带可为普通双面胶，热敏胶和压敏胶等，作为优选密封胶带为热敏胶或压敏胶。

具体地，本发明所述清洗液，用于清洗磁颗粒，去除未参与反应的杂质物质。清洗液主要包含缓冲体系、蛋白质、表面活性剂和防腐剂，其中缓冲体系包含但不限于硼酸盐、磷酸盐、Tris-HCl和醋酸盐等。其中蛋白质包含但不限于牛血清白蛋白、酪蛋白等；其中表面活性剂包含但不限于吐温20、吐温80、曲拉通X-100、聚乙二醇和聚乙烯基吡咯烷酮等。

本发明提供一种使用上述微流控芯片对待测样本进行检测的方法，具体操作步骤包括：

步骤1)从加样口加入样本，将微流控芯片放入配套仪器中，从第一生物标记物存储池释放酶或发光剂标记抗肌红蛋白抗体溶液后，按压空气泵，气流通过气流微通道推进样本流经样本液流通道，在微混合器与酶或发光剂标记抗肌红蛋白抗体溶液混合均匀反应，形成一种免疫复合物，然后流入过渡区进入底板过滤器中；

步骤2)样本经过滤器后，到达反应池，复溶包被在该区域的磁颗粒标记抗肌红蛋白抗体，且与之发生反应，接着磁铁收集磁颗粒并移动至清洗池，从清洗液存储池释放清洗液，磁颗粒经充分洗涤后，在磁铁作用下移至检测池，从发光液存储池释放发光基底液，根据相对发光强度(RLU)与肌红蛋白抗原浓度间的比例关系，检测系统可自动换算，可快速报告测试结果，从而实现肌红蛋白的定量检测。

具体地，本发明所用的检测样品包括来自人体的全血，血清和血浆，所用样本体积为5～200μL，优选150μL，进一步优选50μL。

具体地，所述配套仪器为小型便携设备，所述设备主要包括控制装置和检测装置。

具体地，所述配套小型便携设备的控制装置主要作用为对放置其内部的微流控芯片可实施包含控制液体流动，样本混合，释放存储池内试剂，磁铁移动，检测装置的主要作用为采集发光信号并对其进行分析，最终显示检测结果。

具体地，所述磁铁运动为相对于反应池的匀速直线运动或加速运动或减速运动，匀速运动的速度为1mm/s～50mm/s，优选磁铁运动速度为2mm/s～30mm/s。

具体地，本发明所述便携设备的控制装置主要作用为对微流控芯片实施挤压空气泵实现样本和生物标记物的混合，控制磁铁的运动实现磁性微球标记抗体和一级反应物的充分混合和磁珠的收集，控制磁铁的运动实现反应混合物依次在反应池，清洗池，检测池间的移动，有效降低非特异性干扰。

本发明所述微流控芯片的制备方法如下：

步骤1)酶或发光剂标记抗肌红蛋白抗体，磁颗粒标记抗肌红蛋白抗体，这两种标记抗体可为同一种抗体或不同抗体；

步骤2)将酶或发光剂标记抗体溶液放入盖片的标记抗体存储池中，密封，将磁颗粒标记抗体溶液放入底片的反应池中，干燥，将清洗液和发光基底液分别注入清洗液存储池和发光基底液存储池中，密封，用胶带(20和22)密封盖片和底片，并组装形成一个完整的微流控芯片。

本发明与现有技术相比，所获得的有益效果为：

1)测试前无需对样本进行复杂的预处理工作，且对样本类型无局限性，全血，血清，血浆都在本方法中适用；

2)将磁免疫技术集成到微流控芯片上，综合了两种技术的优势，使整个检测过程具有操作简单，结果准确可靠，灵敏度高的特点。

3)配合小型检测设备和芯片内部的简单处理，无需复杂的泵阀和电场就能够有效地在微流控芯片内部实现液流的智能控制。

4)具有多步混合功能，在一定程度上可提高免疫反应效率。

5)在微流控芯片上的各种反应、清洗和检测过程分区域进行，集成化程度高，可有效降低非特异性干扰，提高检测的灵敏度。

6)采用本发明所涉及微流控芯片进行检测，能够快速报告检测结果，可进一步用于床旁检测和各种便携设备。

本发明的核心技术是将磁微粒技术、化学发光免疫检测技术和微流控芯片技术三者相结合，其中磁颗粒的种类、大小、通道形状、大小等参数的细微改变都会极大影响检测结果的准确性。本发明通过微流控芯片的精细设计和加工，并配合小型便携设备，成功实现了微流体在微流控芯片内部的智能控制，通过磁铁的作用使得磁微粒能够在微流控芯片内部实现可控的运动，混合，收集和清洗，提高反应效率，降低了非特异性干扰，从而增强了检测信号，提高了检测灵敏度。本发明的技术并非三者的简单叠加，而是集成了三者的优势，在现有技术基础上进行了完善和改进的一种新的用于肌红蛋白快速定量的方法。

附图说明

图1为微流控芯片的盖片结构示意图，其中2为加样口，3为空气泵，4为第一生物标记物存储池，5为气流通道，6为样本液流通道，7为微混合器，8为储液池让位孔，9为磁铁运动滑槽，10为过渡区。

图2为微流控芯片的底片结构示意图，其中12为过滤器，13为反应池，14为清洗池，15为检测池，16为清洗液存储池，17为发光液存储池，18为清洗液和发光试剂释放通道，19为废液回收池。

图3为微流控芯片的完整结构示意图，其中1为盖片，11为底片，20为顶部胶带，22为底部胶带。

图4为三个液体存储池的底片结构示意图，其中16为清洗液存储池，17和24为发光液存储池，18为清洗液，23为发光液释放通道。

具体实施方式：

本发明公开了一种C反应蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面对照附图并结合优选具体实施方式对本发明进行详细的阐述。

实施例1：辣根过氧化物酶-鲁米诺(HRP-luminol)系统用于肌红蛋白的检测

1.微流控芯片的制作

1)抗体标记：i)酶标抗体：称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中；于上液中加入0.2ml新配的0.1MNaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟；将上述溶液装入透析袋中，对1mMpH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜；加20μl0.2MpH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化HRP的pH升高到9.0～9.5，然后立即加入10mg肌红蛋白抗体，在1ml0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时；加0.1ml新配的4mg/mlNaBH4液，混匀，再置4℃2小时；将上述液装入透析袋中，对0.15MpH7.4PBS透析，4℃过夜；在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时；3000rpm离心半小时，弃上清；沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15MpH7.4的PBS中；将上述溶液装入透析袋中，对0.15MpH7.4的PBS缓冲液透析，去除铵离子后，10，000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，分装后，2-4℃保存。ii)磁标抗体：准确移取30μl浓度为1mg/ml的链霉亲和素标记磁珠，其中该功能化磁颗粒是以Fe₃O₄为核，聚苯乙烯为壳，粒径为2.0μm，于2ml离心管中，涡旋震荡30min。再加入30μl浓度为10μg/ml的生物素标记的人肌红蛋白二抗，室温下孵育2小时。磁性分离器除去磁珠中的液体，用0.01MPBS(含0.01％BSA/0.2％NaN3pH7.4)清洗3次，将磁珠悬浮于0.01MPBS，孵育过夜，重复上述分离，清洗步骤，最终稀释至指定浓度。

2)磁标抗体的包被：采用点样仪或喷点仪将10μl磁性微球点样在微流控芯片的反应池中，室温干燥30分钟以上。

3)微流控芯片的组装：将10μl浓度为3μg/ml的HRP，300μl清洗液，200μl发光试剂分别封装在试剂卡的各存储池内，同时将芯片卡其他部件进行组装，形成一张完整的微流控芯片。

4)存储：4℃，湿度为50％条件下保存。

2.肌红蛋白的定量检测

1)标准曲线的制作：将肌红蛋白标准品用小牛血清稀释，配成浓度为0ng/mL，10ng/mL，25ng/mL，50ng/mL，150ng/mL，400ng/mL的肌红蛋白标准品各150μl，取30uμl加入本发明实施例中制备的微流控芯片的加样口，盖上血液盖，将试剂盒置于配套的设备中，放置15min。每个样本分别重复测定3次。读取器自动显示肌红蛋白含量，根据肌红蛋白的浓度及相应的发光强度，取三次测定平均值，绘制标准曲线。

2)取待检样本200μl，置于本发明实施例中所制作的微流控芯片中进行检测，每次取样30μl，重复测定3次，根据1)中绘制的标准曲线获得待检样品中肌红蛋白的浓度。

3)结果表明：采用本发明所述方法，得出的检出限为1ng/ml，检测范围为0.5ng/ml-1000ng/ml，批间CV小于10％，批内CV小于5％。

实施例2：碱性磷酸酶-金刚烷(ALP-AMPPD)系统用于肌红蛋白的检测

1.微流控芯片的制作

1)抗体标记：i)酶标抗体：2.5mgALP(50IU/mg)，加入200uL含1.25％戊二醛的100mM的PB(pH6.8)，混匀，室温反应过夜；4℃条件下，电磁搅动，透析至50mMPBS(pH7.2)，12小时，换液4次；1.5mg肌红蛋白抗体溶于100uL1M的碳酸盐溶液(pH9.0)；将活化的AP加入配好的蛋白质液体中，混匀，4℃条件下反应24小时，加入10μL200mM的赖氨酸溶液，混匀，22℃条件下反应2小时；4℃条件下透析至50mMPBS(pH7.2)，12小时，换液4次；离心，取上清，用50mMTB7.4+0.6％BSA+0.05％NaN₃稀释所需浓度，-20℃保存。ii)磁标抗体：准确移取30μl浓度为1mg/ml的链霉亲和素标记磁珠，其中该功能化磁颗粒是以Fe₃O₄为核，聚苯乙烯为壳，粒径为2.0μm，于2ml离心管中，涡旋震荡30min。再加入30μl浓度为10μg/ml的生物素标记的人肌红蛋白二抗，室温下孵育2小时。磁性分离器除去磁珠中的液体，用0.01MPBS(含0.01％BSA/0.2％NaN₃pH7.4)清洗3次，将磁珠悬浮于0.01MPBS，孵育过夜，重复上述分离，清洗步骤，最终稀释至指定浓度。

2)磁标抗体的包被：采用点样仪或喷点仪将10μl磁性微球点样在微流控芯片的反应池中，室温干燥30min以上。

3)微流控芯片的组装：将10μl浓度为3μg/ml的HRP，300μl清洗液，200μl发光试剂分别封装在试剂卡的各存储池内，同时将芯片卡其他部件进行组装，形成一张完整的微流控芯片。

4)存储：4℃，湿度为50％条件下保存。

2.肌红蛋白的定量检测

1)标准曲线的制作：将肌红蛋白标准品用小牛血清稀释，配成浓度为0ng/mL，10ng/mL，25ng/mL，50ng/mL，150ng/mL，400ng/mL的肌红蛋白标准品各150μl，取30uμl加入本发明实施例中制备的试剂盒的加样区，盖上血液盖，将试剂盒置于配套的设备中，放置15分钟。每个样本分别重复测定3次。读取器自动显示肌红蛋白含量，根据肌红蛋白的浓度及相应的发光强度，取三次测定平均值，绘制标准曲线。

2)取待检样本200μl，置于本发明实施例中所制作的微流控芯片中进行检测，每次取样30μl，重复测定3次，根据1)中绘制的标准曲线获得待检样品中肌红蛋白的浓度。

3)结果表明：采用本发明所述方法，得出的检出限为0.05ng/ml，检测范围为0.01ng/ml-1500ng/ml，批间CV小于8.5％，批内CV小于2.4％。

实施例3：磁微粒颗粒尺寸筛选

磁性微球的粒径小，比表面积大，表面含有活性基团，故偶联容量大，但磁颗粒尺寸过小不利于磁铁收集，故进行磁微粒尺寸筛选。

其他的实验条件参见实施例2，磁微粒颗粒的尺寸按照以下方案进行。

选择颗粒尺寸分别为0.1μm、0.5μm、1.8μm、2μm、3μm、10μm磁颗粒标记抗C反应蛋白抗体。检测时采用磁性大小经过优选的永磁铁，固定磁铁高度。

实验结果如下：

磁微粒粒径尺寸从0.1μm、0.5μm、1.8μm、2μm、3μm依次增强，3μm干扰加大，10μm开始减小，信号值最低，综合各因素1.8μm信号最强，干扰最小。

结果分析：磁微粒尺寸较小时，比表面积较大，表面所负载的生物分子量大，同时能够很好地分散在溶液中，但要保证磁性微球充分被收集所需的磁场强度大。在本实施例中由于磁珠所受的磁场力不能保证其充分被收集，导致部分有效磁珠在清洗过程中流失，从而导致最终检测信号值不高。当磁颗粒粒径较大时，比表面积小，表面生物分子的标记率相对较低，相同条件下，磁性粒子所受磁场力大，分散的磁珠能够得到充分的收集，但其由于极易发生沉降，导致生物分子间反应不充分，从而减弱发光信号。综合考虑，粒径为1～3μm磁性微球效果较好，因此本发明的实施例中1.8μm的磁性微球效果最好。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种肌红蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片结构主要包括盖片(1)和底片(11)，其中盖片(1)上的空气泵(3)，气流微通道(5)，加样口(2)，样本液流通道(6)，第一生物标记物存储池(4)，微混合器(7)以及过渡区(10)依次连接；底片(11)上的过滤器(12)，反应池(13)，清洗池(14)，检测池(15)，溶液释放通道(18)依次连接；底片(11)上的检测池(15)通过溶液释放通道(18)与清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)连接；

所述第一生物标记物存储池(4)存储预封装酶或发光剂标记抗肌红蛋白抗体溶液；所述反应池(13)存储预封装磁颗粒标记抗肌红蛋白抗体；所述清洗液存储池(14)和发光液存储池(17)分别存储预封装清洗液和发光液；所述盖片(1)和底片(11)用胶带(20和22)密封；所述微流控芯片测试流程中，用磁铁操控磁颗粒移动或聚集。

2.如权利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述第一生物标记物存储池(4)、清洗液存储池(14)和发光液存储池(17)体积为10～500μL，为液囊或腔体；所述微流控芯片的微混合器是宽度为20～300μm，深度为10～100μm的蛇形，折线形或方形结构；所述微流控芯片的过滤器由腔体和滤血膜组成；所述微流控芯片的反应池为毛细管微通道，该毛细管微通道为管状通道或矩形通道，允许微液体流进或通过。

3.如权利要求2所述微流控芯片，其特征在于，所述反应池为管状通道，直径为0.5～10mm。

4.如权利要求2所述微流控芯片，其特征在于，所述反应池为矩形通道，宽为0.1～5mm，深度为0.01～2mm，长为5～40mm。

5.如权利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述磁颗粒标记抗肌红蛋白抗体使用的磁颗粒为超顺磁性颗粒，可为顺磁性的Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃化合物，磁颗粒粒径为0.1～10μm。

6.如权利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片进行样品测定主要包括如下操作：

步骤1)从加样口加入样本，将微流控芯片放入配套仪器中，从第一生物标记物存储池释放酶或发光剂标记抗肌红蛋白抗体溶液后，按压空气泵，气流通过气流微通道推进样本流经样本液流通道，在微混合器与酶或发光剂标记抗肌红蛋白抗体溶液混合均匀反应，形成一种免疫复合物，然后流入过渡区进入底片过滤器中；

步骤2)样本经过滤器后，到达反应池，复溶包被在该区域的磁颗粒标记抗肌红蛋白抗体，且与之发生反应，接着磁铁收集磁颗粒并移动至清洗池，从清洗液存储池释放清洗液，磁颗粒经充分洗涤后，在磁铁作用下移至检测池，从发光液存储池释放发光基底液，根据相对发光强度(RLU)与肌红蛋白抗原浓度间的比例关系，检测系统可自动换算，可快速报告测试结果，从而实现肌红蛋白的定量检测。

7.如权利要求6所述的一种肌红蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，其特征在于，所述样本体积为5～200μl。

8.如权利要求6所述的一种肌红蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，其特征在于，所述配套仪器为小型便携设备，所述设备主要包括控制装置和检测装置。

9.如权利要求6所述的一种肌红蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，其特征在于，所述配套小型便携设备的控制装置主要作用为对放置其内部的微流控芯片可实施包含控制液体流动，样本混合，释放存储池内试剂，磁铁移动，检测装置的主要作用为采集发光信号并对其进行分析，最终显示检测结果。

10.如权利要求6所述的一种肌红蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，其特征在于，所述磁铁运动为相对于反应池的匀速直线运动或加速运动或减速运动，匀速运动的速度为1mm/s～50mm/s。