CN113358879A - 一种全量程c反应蛋白检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种全量程C反应蛋白检测试剂盒，通过两种胶乳微球分别偶联C反应蛋白多抗和单抗来达到增强试剂灵敏度和检测上限的目的。本发明解决了普通胶乳免疫比浊法灵敏度低、检测上限低且稳定性差的问题。本发明所述的试剂盒包括试剂R1和R2。其中试剂R1为适当的缓冲液，试剂R2为偶联了抗人CRP抗体的胶乳微球的溶液。本发明的试剂盒具有灵敏度高，检测上限高，特异性强，稳定性好等特点。可用于检测人血清或血浆中C反应蛋白含量，适用于全自动生化分析仪。本发明试剂盒灵敏度可达到0.01mg/L，检测上限达到400mg/L。

Description

一种全量程C反应蛋白检测试剂盒
技术领域
本发明涉及体外诊断生化检测技术领域，更具体的涉及一种全量程C反应蛋白检测试剂盒。
背景技术
C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）是指生命机体在受到感染和创伤时在血浆中急剧上升的一种蛋白质。其在各种急性炎症、组织损伤、心肌梗死、手术创伤、放射性损伤等疾病发作后数小时迅速升高，并有成倍增长之势。病变好转时，又迅速降至正常，其升高幅度与感染的程度呈正相关。因此C反应蛋白在体外诊断中是一种非常重要的非特异性炎症标志物。
CRP的常见检测方法有胶体金法、酶联免疫法（ELISA）、胶乳增强免疫比浊法。这些方法中以胶乳增强免疫比浊法的灵敏度最高，线性范围最广，且有较强的易操作性。临床应用广泛，市场潜力巨大。
胶乳增强免疫比浊法（PETIA）利用利用微球与抗体的交联来改变反应溶液的吸光度，通过检测不同浓度样本与试剂反应产生的浊度，并根据定标曲线计算出样本中特定物质的含量。其不但适用于大型的生化仪，也同样适用于小型的POCT的设备，适用性很强，可以很好的满足我国各个层级医疗机构的使用需求。本试剂盒优势在于其灵敏度极高，在测试低浓度样本时不出0值，且线性范围广，最高可达400mg/L。对临床的准确判断提供稳定可靠的辅助。
发明内容
本发明实施例的目的在于提出一种新的全量程C反应蛋白检测试剂盒，用以解决当前市面上的全量程CRP试剂盒灵敏度低，检测低浓度样本出0值及线性范围窄的问题。本发明的全量程C反应蛋白检测试剂盒既可以检测超低浓度样本且不出0值，又可以检测超高浓度样本，本试剂盒的灵敏度高，线性范围广且准确度高；同时该发明试剂盒的稳定性好，大大增强了试剂在高温、敞口和运输过程中的可靠性。
为实现上述目的，本发明实施例提供一种C反应蛋白检测试剂盒，所述C反应蛋白检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2。其中，所述试剂R1包括缓冲液和无机盐，所述试剂R2包括CRP抗体偶联的两种微球、缓冲液和防腐剂。
所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒试剂R1的缓冲液为磷酸盐缓冲液，浓度为20mM/L，pH7.33。
所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒试剂R1中的无机盐为氯化钠，浓度为15g/L。
所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒试剂R2，微球为两种聚苯乙烯微球体，两种微球的平均粒径分别为88nm和180nm。
所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒试剂R2中CRP抗体分为CRP单抗和CRP多抗。
所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒试剂R2中优选CRP单抗偶联尺寸较小的微球，CRP多抗偶联尺寸较大的微球。
所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒，优选单抗偶联尺寸较小的微球和多抗偶联尺寸较大的微球的比例为8:1。
所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒试剂R2中缓冲液为Tris缓冲液，浓度为50mM/L，pH7.0。
所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒试剂R2中的防腐剂为叠氮钠，浓度为1g/L。
所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒，试剂R1和试剂R2的体积比为1:1。
本发明实施例具有如下优点。
1、本发明技术方案是一种新型C反应蛋白普通免疫比浊法检测试剂盒，该试剂盒灵敏度高，准确度高，既可以测出低值样本中的CRP含量，又可以测定高值样本中的CRP含量。
2、通过用多抗偶联大尺寸微球增加试剂的灵敏度，降低0值率；通过单抗偶联小尺寸微球来增加试剂的线性范围。
3、本发明通过对两种抗体-微球试剂的比例摸索，增加试剂的准确度。
4、本发明具有极强的稳定性，可在37摄氏度下放置30天，4摄氏度敞口120天，-20摄氏度冻融后测值与冷藏对照试剂无差异。
5、本发明因使用一部分多克隆抗体，成本较低。
6、本发明所用的各种溶液的成分简单，制备容易。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例中提供了一种C反应蛋白检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2。
优选地，所述试剂R1中包括下列成分：20mM/L磷酸盐缓冲液，15g/L氯化钠；所述试剂R1的pH7.33。
优选地，所述试剂R2包括下列成分：50mM/LTris缓冲液、0.2mg/mL CRP多抗、0.4mg/mL CRP单抗、0.4%w/v 88nm胶乳微球、0.2%w/v 180nm胶乳微球、1 g/L叠氮钠，所述试剂R2的pH为7.00。
优选地，所述试剂R1与试剂R2的体积比为1:1。
将实施例1获得的C反应蛋白检测试剂盒，在全自动生化分析仪上进行性能验证。
其中试剂盒的检测参数如表1所示：
表1 试剂盒的检测参数。
Figure 797756DEST_PATH_IMAGE002
实验操作步骤如表2所示：
表2检测样本中CRP含量的实验操作步骤。
Figure 714897DEST_PATH_IMAGE004
使用本发明的全量程C反应蛋白检测试剂盒与两家已上市厂家的全量程C反应蛋白检测试剂盒(胶乳免疫比浊法)按照各自的说明书设置参数，，以进口的全量程C反应蛋白检测试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)为参照，随机测试临床样本300例，统计普通免疫比浊法检测试剂盒的0值情况（200例）及测试浓度超过150mg/mL的样本（100例）出现HOOK效应的情况，统计结果见下表3：
表3 四组试剂盒检测200例低值样本及100例高于150mg/L的样本。
Figure 494634DEST_PATH_IMAGE006
由此，采用本发明中的试剂组分及原料配比配制试剂，在全自动生化分析仪上进行性能验证，试剂的精密度(CV)为0.6％，线性相关系数为0 .999，试剂的灵敏度高，随机测试200例正常样本，仅有1例0值，0值比率为0.5％。线性范围广，测试100例高浓度样本没有出现HooK效应。
稳定性实验：
使用本发明的全量程C反应蛋白检测试剂盒分别做高温30天，敞口120天及冻融后检测100例样本，以冷藏试剂作为对照，测试200例样本，以偏差小于10%为标准，检测结果如下表4所示：
表4稳定性测试200例随机血清对照实验。
Figure 889843DEST_PATH_IMAGE008
由此，采用本发明中的试剂组分及原料配比配制试剂，在全自动生化分析仪上进行稳定性性能验证，高温30天及敞口120天试剂与冷藏试剂测值偏差均小于10%，冻融后的试剂与冷藏试剂测值大于10%的比率仅有0.5%。
由此，本发明实施例提供的全量程C反应蛋白试剂盒具有高灵敏度，线性范围广且稳定性好的特点。另外其成本低，操作简单，易于制备，具有很大的市场潜力。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种全量程C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述全量程C反应蛋白试剂盒包括试剂R1和试剂R2；其中试剂R1包括缓冲液和无机盐；试剂R2中成分包括CRP抗体偶联的两种微球、缓冲液和防腐剂。
2.根据权利要求1所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，试剂R1中的缓冲液为磷酸盐缓冲液，浓度为20mM/L，pH7.33。
3.根据权利要求1所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，试剂R1中无机盐为氯化钠，浓度为15g/L。
4.根据权利要求1所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，试剂R2中两种微球的尺寸分别为88nm和180nm。
5.根据权利要求1所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，试剂R2中CRP抗体分为CRP单抗和CRP多抗。
6.根据权利要求5所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，试剂R2中CRP单抗偶联尺寸较小的微球，CRP多抗偶联尺寸较大的微球。
7.根据权利要求6所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，单抗偶联尺寸较小的微球和多抗偶联尺寸较大的微球的比例为8:1。
8.根据权利要求1所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，试剂R2中的缓冲液为Tris缓冲液，浓度为50mM/L，pH7.00。
9.根据权利要求1所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，试剂R2中防腐剂为叠氮钠，浓度为1g/L。
10.根据权利要求1所述的全量程C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2的体积比为1:1。
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