CN1073357A

CN1073357A - 生育三烯酚和类生育三烯酚化合物及其使用方法

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Publication number: CN1073357A
Application number: CN92111842A
Authority: CN
Inventors: R·H·雷恩; A·A·克里适; W·A·赛尔瑟
Original assignee: Lipogenics Inc
Current assignee: Lipogenics Inc
Priority date: 1991-11-22
Filing date: 1992-11-21
Publication date: 1993-06-23
Also published as: MX9206735A; JP2000169369A; US5591772A; US6239171B1; NO301223B1; WO1993009777A1; NO941929D0; US5821264A; SG48108A1; AU3150293A; US6204290B1; CA2124086A1; US5919818A; NO941929L; AU670557B2; EP0543417A1; JPH07504887A; US6143770A; MY109856A

Abstract

本发明涉及具有生物活性的新生育三烯酚和类生育三烯酚化合物。本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物可以方便地由生物源或通过化学合成得到，并可用于药物组合物、食品和食品添加剂。本发明还涉及生育三烯酚、类生育三烯酚化合物和它们的混合物的应用，作为血胆固醇降低、抗血栓形成、抗氧化、抗动脉粥样化、抗炎症和免疫调节剂，或作为可用来降低血液中脂蛋白(α)浓度或提高食物转化率的药剂。

Description

本发明涉及呈现生物活性的新颖的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物。本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物可由生物源或通过化学合成很方便地得到，并可用于药物组合物、食品和食品添加剂。本发明还涉及生育三烯酚、类生育三烯酚及其混合物的应用，作为血胆固醇过少剂、抗血栓形成药、抗氧化剂、抗动脉粥样化剂、抗炎症药和免疫调节剂、或者作为用来降低血液中脂蛋白（α）浓度或提高食物转化率的试剂。

已经证明植物成分可用来预防和治疗许多种疾病和条件反射。例如，大麦可特别有效地降低动物体中的脂类含量（A.A.Qureshi等，“Suppression of cholesterogenesis By Plant Constitnents”，Lipids，20，817-24页（1985））。更具体地讲，从大麦提取物中分离出的α-生育三烯酚，一种苯并二氢吡喃醇，已被认定可作血胆固醇过多的治疗药剂（A.A.Qureshi等，“The·structwre of An Inhibitor of cholesterol Biosyntheris Isolatad From Barley”，J.Biol.Chem.，261，10544-50页（1986））。此外，已经证明生育三烯酚、γ-生育三烯酚和δ-生育三烯酚可降低哺乳动物的血胆固醇过多（欧洲专利申请421，419）。

血胆固醇过多包括血清胆固醇含量高，是包括动脉硬化症、动脉粥样硬化、心血管病和黄瘤病的众多疾病的病原体。另外，血清胆固醇含量高也会出现在患下述疾病的病人身上，包括糖尿病、家族性血胆固醇过高、急性间歇prothyria、神经性厌食、肾病综合症、原发性肝硬化和各种肝机能失调证，例如肝炎和梗阻性黄疸。脂蛋白序列的改进和血清总量及低密度脂蛋白胆固醇的降低已被证明可延缓这些疾病的发展，并可在高血胆固醇病人身上引起有临床意义的病变的退化。

虽然血胆固醇过高与其附带疾病（最引入注目的是心血管疾病）之间的关系已被广泛研究，但对这一世界性难题仍未找出清楚的答案。结果，冠状动脉疾病仍然是美国和其它发达国家人死亡的主要原因。冠状动脉疾病是大量的不同过程相互作用的结果，这里包括脂蛋白新陈代谢、血小板凝聚、血凝固和血纤维蛋白溶解。因此，上述病人心血管的危险性取决于这些相互作用。

除了降低胆固醇含量，还可通过降低血清和血液中其它因子的含量来减少病人的心血管危险性。例如，降低凝血噁烷A₂的产生（由凝血噁烷B₂的含量测定，B₂为凝血噁烷A₂一种稳定的代谢物）和血清中血小板因子4的含量可使心血管病危险变小，因为降低了凝血酶原的活性。

凝血噁烷A₂和血小板因子4的含量也与其它的生物活性有关。例如，如果伴随着这些因子的降低而减少了巨噬细胞的数量，就意味着在身体组织中较低的肿瘤死因子（YNF）量和较低的花生四烯酸含量，降低的前列腺素、白细胞三烯和内白细胞素含量。因此，减少这些因子会导致降低伴随多种疾病发生的炎症。另外，由于前列腺素抑制葡糖诱发的胰岛素释放和增进胰高血糖素分泌，也可由前列腺素降低而造成胰岛素对胰高血糖素比增高。这种增高可用于改善糖尿病对葡萄糖的不容忍性和恢复在不依赖胰岛素的糖尿病中的急性葡糖诱发的胰岛素反应。

应当注意，心血管病对消费大量谷类粮食的居民影响很小。过去，可溶和不可溶纤维被认为是导致这些居民胆固醇降低的主要原因（见D.Kritchevsky等，“Fiber，Hypercholesterolemia and Atherosclerosis”，Lipids，13，366-69页，（1978））。最近，谷类作物的血胆固醇少效应发现是由作物的天然成分-生育三烯酚（“T₃”）和结构类似的化合物如生育酚（“T”）引起的。生育三烯酚和生育酚少量地天然存在于多种植物源中，例如米糠、棕榈油和大麦中（A.A.Qureshi等，“Lowering of Serum Cholesterol in Hypercholerterolemic Humans by Tocotrienols（Palmvitee）”，Am.J.Clin.Nutr.，53，1021S-6S页（1991））。

作为一类物质，包括d-α-生育酚（维生素E）在内的生育酚已被广泛研究。这些研究的结果表明，特定的生物活性是由生育酚引起的。这些生物活性包括血小板凝集和抗氧剂作用（例如，参见E.Niki等，“Inhibition of oxidation of Biomembrones By Tocophrol”，Annals of the New York Academy of Sciences，570，23-31页，（1989）和K.Fukuzawa等，“Increased Platelet-Activatin Factor（PAF）Synthesis in Polymorphonuclear Leukocytes of Vitamin E-Deficient Rats”，Annals of the New York Academy of Sciences，570，449-453页，（1989））。虽然精确的结构-功能关系是未知的，但若干试验已经突出了植基侧链对生育酚生物活性的重要性（见W.A.Skinner等，“Antioxidant Properties of α-Tocopherol Derivatives and Relationships of Antioxidant Activity to Biological Activity”，Lipids，5（2），184-186页，（1969）和A.T.Diplock，“Relationship of Tocopherol Structure to Biological Activity，Tissue Uptake，and prostaglandin Biosynthesis”，Annals of the New York Academy of sciences，570，73-84页，（1989））。

与生育酚相反，人们对生育三烯酚的兴趣是有限的，因为这些化合物过去一般被认为它在生物学上是不能用的。然而，最近的研究表明，生育三烯酚可以是生物活性的。例如，美国专利4，603，142认为由大麦提取物分离出的d-α-生育三烯酚可以作胆固醇生物合成的抑制剂。参见A.A.Qureshi等的文章（1986），supra。各种人类及动物研究证实，由大麦、燕麦和棕榈油提取的纯生育三烯酚对胆固醇生物合成，特别是LDL-胆固醇有影响（A.A.Qureshi等，“Dietary Tocotrienols Reduce Concentrotions of Plasma Cholesterol，Apolipoprotein B，Thromboxane B₂and Platelet Factor 4 In Pigs With Inherited Hyperlipidemias”Am.J.Chin.Nutr.，1042S-46S页，（1991）;A.A.Qureshi等，“Lowering of Serum Cholesterol In Hypercholesterolemic Humans By Tocotrienols（Palmvitee）”，Am.J.Clin.Natr.，53，1021S-26S页（1991）;D.T.S.Tan等，“TheEffect of Palm Oil Vitamin E Concentrate on The Serum And Lipoprotein Lipids In Humans”，Am.J.Clin.Nutr.，53，1027、S-30S页（1991））。此外，有人指出生育三烯酚、γ-和δ-生育三烯酚可用于治疗血胆固醇过高、高血脂症和血栓栓塞机能混乱（欧洲专利申请421，419）。

五种天然存在的已知生育三烯酚为生育三烯酚、α-、β-、γ-和δ-生育三烯酚。这些化合物呈现了不同程度的血胆固醇过多活性，已被用作抗血栓形成药和抗氧化剂。例如，α-T₃对鼠肝粒体膜中的脂类过氧化和细胞色素P-450的氧化损伤具有抗氧化活性（E.Serbinova，Free Radical Biology and Medcine，in Press，（1991））。尽管有这些活性，但至今未发现已知的生育三烯酚得到广泛的医疗应用。

因此，仍然存在这种社会需求，使化合物作为单一药剂能安全有效地用作血胆固醇过多、抗血栓形成、抗氧化、抗动脉粥样化、抗炎症和免疫调节的药剂。

本发明解决了上述课题，提供了新颖的生育三烯酚、类生育三烯酚和它们的混合物，这些物质可用作血胆固醇过少、抗血栓形成、抗氧化、抗动脉粥样化、抗炎症和免疫调节剂。这些新颖的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物也可以用来降低血液中的脂蛋白（α）（“Lp（α）”）浓度、提高食物转化率，并可用于治疗或预防发热、水肿、糖尿病、肿瘤、老化体症、疼痛、类风湿、败血性休克、慢性疲劳综合症和功能下降等情况。

本发明的新生育三烯酚和类生育三烯酚化合物可用来抑制HMG-CoA还原酶的合成，降低脂肪生成和提高HDL/LDL胆固醇比，以及降低总血清胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇、Lp（α）、载脂蛋白B、凝血噁烷A₂、血小板因子4、甘油三酸酯和葡萄糖。由于这些单独的活性，这些化合物可用于治疗疾病，例如冠状动脉疾病，它由于脂蛋白新陈代谢、血小板凝集、血液凝固和血纤维蛋白溶解等过程的相互作用而引起。所以，本发明化合物可用于改善病人的整个心血管图形。

本发明还为已知生育三烯酚提供了作为消炎药和免疫调节剂的新用途，以降低血液中的Lp（α）浓度，提高食物转化率，治疗或预防发热、水肿、糖尿病、疼痛、败血性休克、慢性疲劳综合症和功能下降等情况。

有利的是，生育三烯酚和类生育三烯酚化合物可降低血清TNF和IL-1含量。这些活性使得该类化合物可用于减少活性和慢性炎症，例如由类风湿疾病有关的炎症。而且，这些活性也使该类化合物可用治疗、预防或减轻免疫调节疾病的病情，例如自身免疫疾病，以及用于预防或治疗疼痛、败血性休克、慢性疲劳综合症、功能下降和氧化情况。

生育三烯酚和类生育三烯酚化合物对脂类新陈代谢的影响也会影响抗体产生的调节。因而，这些化合物可用来通过调节脂肪酸含量调整免疫功能。

生育三烯酚和类生育三烯酚化合物还可以通过调停胰岛素和胰高血糖素含量来减少葡萄糖。通过提高血液中的胰岛素/胰高血糖素化，这些化合物可用来提高糖尿病对葡萄糖的不容忍限度和恢复与胰岛素无关之糖尿病患者的急性葡萄糖诱发胰岛素反应。

本发明新颖的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物的特征在于其特有的结构特性和特有的生物活性或者，换句话说，在于特有的高性能液相色谱（“HPLC”）洗脱图形和特有的生物活性。更具体地说，本发明化合物可用三个结构特征表示：（1）一个氢给体基团（或一个可水解成氢给体基团的基团），该基团连在一个芳香环系上，（2）一个至少有一个弧电子对的原子，所说电子与芳香系共轭和（3）一个含有一或多个连在所述原子附近位置上的类异戊或与此类似的单元的支链。本发明也包括由这些化合物得到的水解和氧化产物。另外，有上述结构特征的本发明化合物的另一特征是可稳定地抑制β-羟基-β-甲基戊二酰基辅酶A（HMG-CoA）还原酶的活性。再者，这些化合物可有效地治疗或预防下列一或多种疾病或情况：血胆固醇过高病，血栓形成病，氧化状态，炎症或免疫调节病，或者，也可用于提高食物转化率。

按照本发明的选择性实施方式，本发明新生育三烯酚和类生育三烯酚化合物的特征在于在下述HPLC条件下的洗脱时间至少为22分钟：μ-多孔微球硅胶柱（水柱，10μ，4mm×30cm），使用己烷和异丙醇（99.75%∶0.25%，V/V）的isocratic体系，流量为1.3ml/min。在出射波长为295nm和发射波长为330nm（莹光检测器）及UV吸收光为295nm的条件下检测具体化合物。除了上述定义的洗脱图形外，本发明新生育三烯酚特征还在于可稳定地抑制HMG-CoA）还原酶的活性。

按照本发明，生育三烯酚和类生育三烯酚可以很方便地以生物来源得到。或者，它们也可以用常规的化学方法合成。在本发明的优选的实施方案中，由稳定的生物来源分离或提纯生育三烯酚和类生育三烯酚化合物。本发明也包括用来纯化这些化合物的方法。

在本发明一种优选的实施方案中，生育三烯酚、类生育三烯酚及其混合物用于动物或人类作药物组合物、食品或食品添加剂，以治疗或预防血胆固醇过高病，血栓形成病，氧化或动脉粥样化状态、发炎或免疫调节病。有利的是，这些组合物、食品和食品添加剂也可用来提高食物转化率，降低血液中Lp（α）浓度和治疗或预防发热、水肿、糖尿病、肿瘤、老化症、疼痛、类风湿病、败血性休克、慢性疲劳综合症和功能下降。

图1-4表示来自米糠油的各种生育三烯酚对血胆固醇过高的猪不同组织中脂肪酸浓度的影响。

图5表示GT301（γ-T₃）对人类周围血流嗜中性白细胞中过氧化物生成的影响。

为了更充分地理解这里所述的发现，下面对其进行详细描述。在描述中，使用下列术语：

生物源-任何天然或重新组合的植物源、天然或转基因动物源、微生物源（例如细菌）、真菌、酵母、水藻、高级植物源、或其衍生物，它们含有一或多种生育酚、生育三烯酚或类生育三烯酚化合物。

稳定化-一种在生物源中有效地提高生育酚、生育三烯酚和类生育三烯酚化合物可回收数量的一种过程，手段是下列之一或其组合：（1）使能够降解生物源中生育三烯酚和类生育三烯酚化合物的酶失活，（2）断裂一些键或另外用一些相互作用进行干扰…例如氢键、共价键、离子键、范德瓦尔斯力、伦敦力和疏水或亲水作用、它们在生物源中将所需的产物连结到蛋白质、蔗糖、脂类、糖类、糖蛋白、其它生物分子（即氨基酸或核苷酸）或其它膜组分或其结合上…将生育三烯酚或类生育三烯酚化合物保持在生物源中，以释放出那些所需的产物，或（3）提高生物源中生育三烯酚和类生育三烯酚化合物的溶解度，使其超出以前稳定的溶解度或超出生育三烯酚在相应不稳定生物源中的溶解度水平。作为稳定化的结果，可以以高于在相应的不稳定生物源中的产率回收生物源中的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物。

母育酚-选自生育酚（T）、生育三烯酚（T₃）和生育三烯酚（类-T₃）化合物中一种或多种化合物的一种混合物。

类生育三烯酚-包含在由生物源得到的任何生物活性化合物，且（1）它是释放出的，或是在稳定生物源时进行释放的，或（2）稳定生物源使其可回收量增加。这种类生育三烯酚化合物包括任何显示生育三烯酚生物活性的化合物，用一种体外HMG-CoA还原酶测定法测定，该化合物可抑制HMG-CoA还原酶的活性。该测定方法例如是下文所描述的，D.J.Shapiro等，“Microassay for β-hydroxy-β-Mettylglutaryl-CoA Reductase in Rat Liver and in L-Cell Fibroblasts”，Biochim.Biophys.Acta，370，369页（1974）。类生育三烯酚化合物包括但不限于，任何电子传递环化合物，抗氧化类化合物，氧化还原化合物和类似于含有表征本发明生育三烯酚的三个结构特征的化合物的化合物。类-T₃化合物的特殊例子是泛醌、塑体醌、异醌、叶绿醌、苯醌、黄烷醇、类黄烷（flavanoid）、香豆素、不饱和类萜和不饱和类异戊二烯。术语“类-T₃化合物”也包括这种化合物的相似物、同系物、异构体和衍生物，例如异戊二烯基化衍生物或热解衍生物。

优选的类生育三烯酚化合物结构如下：

和它们的盐类、氧化产物及水解产物，其中：

R₁和R₃各自独立地选自H、卤素、OH、OCH₃和C₁-C₆分支或不分支烷基;

R₂选自OH、NAR₈、CO₂Y、C（R₈）₂CO₂H和由OH、NAR₈、CO₂H或C（R₈）₂CO₂H取代的C₁-C₆分支或不分支烷基;

R₄选自O、NH、CH-R₉、C＝O和CH-OH;

R₅选自CH₂、CHOH、O、S和NA;

R₆选自H和C₁-C₆分支或不分支烷基;

各个R₇独立地表示

式中R₁₀选自H、NH₂和C₁-C₆分支或不分支烷基;

R₈和R₉各自独立地选自H和C₁-C₆分支或不分支烷基;

各个R₁₁独立地选自H、C₁-C₆分支或不分支烷基、CH₂OHH、CO₂H或OH;

Y为H或C₁-C₁₈分支或不分支烷基，优选C₁-C₄烷基;

Z为氢、卤素、OH、CH₂OH、CH₃、OCH₃或COCH₃;

n是0-4的一个整数;和

m是1-30的一个整数，更优选1-20，最优选3-10。

TRF-通过稳定和提取生物源得到的一种富含生育三烯酚的馏份。它一般含有不同数量的五种已知的生育三烯酚、已知的生育酚和本发明新的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物。最常见的TRF含约50%至约90%的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物。不管是已知的生育三烯酚还是本发明新的生育三烯酚和类生育三烯酚，TRF均可用于这里所述的任何用途。

标准TRF-由棕榈油得到的一种富含生育三烯酚的馏份（TRF）（A.A.Qureshi等，（1991），supra.）。标准TRF含有不同数量的α-、γ-和δ-生育三烯酚和α-生育酚，但基本上不含本发明新的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物。

强化的-稳定后的生物源的状态，其中本发明新生育三烯酚和类生育三烯酚化合物的可回收量得到提高，超过稳定前从生物源可回收的量。

食物-可用作或准备用作动物或人类食品的物质。食物包括可用来制造食品（例如煎炸油）或食品添加剂的物质。例如，食物包括用于人类消费的动物或其任何产物，例如蛋。这些动物本身可能已经摄食了一或多种生育三烯酚或类生育三烯酚，或含有它们的食物，或用这些东西处理过。正如这里讨论的，在摄食或以其它方式供给生育三烯酚或类生育三烯酚化合物后，这些动物保留了生育三烯酚和类生育三烯酚化合物有利的降低血胆固醇、抗血栓形成、抗氮化、抗动脉粥样化、抗炎症和免疫调节性能。

HPLC洗脱时间或分布-除另有说明外，术语“HPLC洗脱时间或分布”指在下列条件下，从HPLC柱洗脱一给定化合物所需的时间或若干化合物（20μl）的一种混合物的特征分布。所述条件为：μ-多孔微球硅胶柱（水柱，10μ，4mm×30cm），使用己烷和异丙醇的isocratic体系，（99.75%∶0.25%，V/V），流速1.3ml/min。在295nm出射波长和330nm发射波长（莹光检测器）处检测到该化合物，且在295nm处有紫外吸收。

本发明的各个生育三烯酚和类生育三烯酚化合物构形了一类新的生物活性化合物。其中几种化合物以较低含量存在于天然生物源中。所以，本发明的一个优选实施方案是从生物物质中分离回收生育三烯酚和类生育三烯酚化合物，所述生物物质已经过稳定化处理，且按共同待审的国际专利申请PCT/US91/03626（1991.5.23申请）中所述方法提取。本文公开的稳定化和回收方法提高了从生物源回收生育三烯酚和类生育三烯酚化合物的收率。

可从任何生物物质中分离回收生育三烯酚和类生育三烯酚化合物，这些生物物质包括（但不受限于此）：燕麦，小麦，黑麦，大麦，黄豆，小麦胚，小麦麸，玉米，稻米（包括全籽粒，外壳，胚乳和胚），棉籽，马利筋属植物，亚麻，芝麻，米糠，蒸煮糙米，糙米粉，橄榄，植物油馏份，果汁浓缩馏出液，大麦麸，棕榈油，小麦胚油，米糠油，大麦油，椰油，棉籽油，豆油，其它谷类及其它谷类油，植物组织，花，灌木（如桧属植物），树木（如松树和橡胶），果实（如瓜，浆果，西红柿和柑橘属果实），蔬菜，牧草（如苜蓿），真菌（如蘑菇），叶类，籽类（如芝麻，黍和松木籽）如芝麻籽和松籽，茎、树皮、根、坚果（如槚如树坚果和杏仁）及豆科植物（如花生），或它们的混合物。我们已经说明，生物源中的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物随时间延长而分解，所以，优选新收获的生物源。更优选的生物源是新收获的，稳定化的米糠。

或者，可从非稳定化源得到或用公知化学方法合成生育三烯酚和生育三烯酚化合物。典型的合成路线可见J.W.Scott等人的“Synthesis of（2R，4′R，8′R）-α-Tocopherol and （2R，3′E，7′E）-α-Tocotrienol”，Helv.Chem.Acta，pp.290-306（1976）和P.Schuclel等人的“Die Synthese Von rac.all-trans δ-und ε-Tocopherol”，Helv.Chem.Acta.，46，pp.2517-2526（1963）。EP专利申请421419提出另一种合成方案。

采用公知化学手段，可将生育三烯酚和类生育三烯酚化合物改造成各种衍生物或相似物。这些衍生物和相似物可更容易以较纯形式分离，或更耐降解，或具有其它所需特性。本发明亦展望了这些衍生物和相似物。改变本发明化合物的公知化学手段包括，但不限于在有或无空气或在惰性或反应性气体环境（或在惰性和活性气体混合物中）中加热并热解。

本发明包括一生育三烯酚和类生育三烯酚化合物的d-和l-异构体及d-，l-消旋混合物。不过，优选天然存在的d-异构体。本发明亦包括至少一种本发明新型生育三烯酚和类生育三烯酚化合物与一种或多种已知生育三烯酚的混合物。

本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物即可用具体的结构特征来表征，也可用具体的洗脱分布和具体的生物活性表征。在前一种情况下，本发明化合物有三个结构特征：（1）一个氢给体基团（或一个可水解成氢给体基团的基团）与其环系统相连，（2）至少带一个孤对电子的原子，该电子与芳环系统共轭，（3）包括一个或多个与该原子邻位相连的类异戊二烯或类异戊二烯单元的侧链。本发明亦包括从这些化合物得到的水解和氧化产物。这些化合物可有效提高食物转化效率，降低血中Lp（α）浓度或可有效地治疗或预防下列一种或多种疾病或病理状况：免疫调节病，炎症，高烧，浮肿，糖尿病，癌症，老化症，疼痛，类风湿病，败血性休克，慢性疲劳综合症，和功能下降。

根据另一实施方案，本发明的新型生育三烯酚和类生育三烯酚化合物可用洗脱时间和具体生物活性表征。在下列高效液相色谱（HPLC）条件下，至少22min.后这些化合物洗脱出来：多孔微球硅胶柱（水柱，10μ，4mm×30cm），用己烷和异丙醇的isocratic体系，（99.75%∶0.25%，V/V），流速1.3ml/min。在295nm出射波长和330nm发射波长（莹光检测器）处检测到该化合物，且在295nm处有紫外吸收。除上面定义的洗脱分布外，本发明的新型生育三烯酚和类生育三烯酚化合物亦可由抑制β-羟基-β-甲基戊二酰辅酶A还原酶（“HMG-CoA）还原酶”）。

本发明优选的一类化合物是式Ⅰ化合物：

其盐，氧化产物和水解产物，其中R₁和R₁₀，Z，n和m定义同上。

本发明亦包括的式Ⅰ化合物的典型水解产物包括（但不限于）式Ⅱ化合物：

式中R₁-R₁₀，Z，n和m定义同上。优选化合物是式Ⅰ化合物中R₁，R₃和Z各分别是H，卤素，OH，OCH₃，或CH₃;R是OH，OCH₃或NH₂;R₄是C＝O，CH₂或NH;R₅是O，S，CH₂或NH;R⁶是H或CH₃;R₁₀和R₁₁各分别是H或CH₃;n是0或1;m是3-10。

最优选的化合物是式Ⅰ化合物中R₁，R₃，Z，R₈和R₉各是H，R₂是OH，R₄是CH₂，R₅是CH₂或O，R₆是H或CH₃，R₁₀是H或CH₃，n是1，m是3。

式Ⅰ这类化合物中代表性的新化合物是3，4-二氢-2-（4，8，12-三甲基三癸-3′（E），7′（E），11′三烯）-2H-1-苯并吡喃-6-酚（“P₂₅”）。该化合物结构如下所示：

具有上面定义的结构特征的本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚亦可用其生物活性表征。它们可用于提高食物转化效率，降低血中Lp（α）浓度或可用于治疗或预防下列一种或多种疾病或病理状况：免疫调节病，炎症，高烧，浮肿，糖尿病，癌症，老化症，疼痛，类风湿病，败血性休克，慢性疲劳综合症和功能下降。它们亦可限低TNF，IL-1和可能包括IL-2的IL-1刺激产物，IL-6，IL-8，GMCSF，前列腺素和γ-干扰素的含量，同时提高在对外来蛋白质反应中的抗体滴度。由于这些活性，这些化合物可异致减少由嗜中性白细胞，嗜碱性白细胞，单核细胞和巨噬细胞，嗜曙红细胞，血小板，淋巴细胞和多形核白白细胞，内皮组织和其它免疫组织产生的超氧化物和其它细胞毒素的释放量。这些化合物亦可使抗体滴度提高。

HMG-CoA还原酶催化胆固醇生物合成的限速步骤。所以，该活性的降低本身，或与低脂肪低胆固醇饮食相结合，使动物和人体血清中的胆固醇总含量减少。这些作用在饮食无规律的血胆固醇过多的病人身上最明显。一般地，本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物在据Shapiro（supra）所述玻璃试管内分析中，浓度10-20μg/ml时，可将HMG-CoA还原酶活性减少至少约15%。而较好情况下，HMG-CoA还原酶活性减少至少约20%，最好约25%。

虽然不希望受限于理论，我们还是确信，生育三烯酚和类生育三烯酚化合物的某些抗炎证、抗氧化作用及免疫调节特性是抑制游离廿碳四烯酸的生成。磷脂酶A在磷酸脂头端基团的C-2位分解，释放出游离廿碳四烯酸。然后，该酸可转化成各种各样生物上的重要分子，如前列腺素和凝血噁烷（通过环氧合酶途径）白细胞三烯（leukotrienes）（通过脂氧合酶途径）。据信，生育三烯酚和类生育三烯酚化合物的氢供体基团与生物膜的磷酸脂或磷脂基团键合。与芳环系统一起，发挥官能团消除作用。类异戊二烯末端可稳定膜-可能是通过与脂质侧链形成弱键。此外，用其它取代基（如氢）随意取代苯并二氢吡喃酚环2号位上的生育三烯酚甲基，可最大限度稳定膜。据信，其环系统亦有助于紧缩膜表面，由此增加磷脂酶A₂和磷脂酶C的立体位阻，降低其渗透率。其环体系亦有输送电子和抗氧化功能。这种假设可用来解释较宽范围的生物助能，这些功能可通过给服本发明生育三烯酚和为生育三烯酚而得到发挥。

本发明亦包括已知生育三烯酚及本文所述生育三烯酚和类生育三烯酚化合物的几种新用途。实例包括将其用作抗炎症、抗动脉粥样硬化及免疫调节剂，用于治疗高烧，浮肿，糖尿病，癌症，老化症，疼痛，败血性休克，慢性疲劳综合症及功能下降。此外，生育三烯酚和类生育三烯酚化合物可用于提高食物转化效率-将较大部分食品转化成蛋白质而不是脂肪-同时降低血中Lp（α）浓度。公知的生育三烯酚具有与本发明生育三烯酚和类生育三烯酚大体相同的生物活性。例如，公知的生育三烯酚能够降低总血清和LDL-胆固醇，脱辅基脂蛋白B，凝血噁烷A₂，血小板因子4，甘油三酸脂和葡萄糖，同时抑制HMG-CoA还原酶的活性。它们亦可降低TNF和IL-1及可能的IL-2和γ-干扰素的含量，同时提高在对外来蛋白质反应中的抗体滴定度。结合起来，这些因素可产生各种各样有利的新的生物结果，包括减少由免疫调节细胞产生的超氧化物和细胞毒素的释放，提高抗体滴定度。

优选从稳定化的生物源分离回收本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物。或者，可从经过常规食品加工或制备技术的生物源分离回收生育三烯酚和类生育三烯酚化合物。不过稳定化处理可大大提高这些化合物的回收率。虽不希望受限于理论，但据信，大量的生育三烯酚和类生育三烯酚实际上与蛋白质或与生物源的膜中磷酚脂或磷脂基团键合。稳定化处理可明显提高这些化合物回收量的原因在于，将其从蛋白质中，或从断开的磷酸脂或焦磷酸脂部分释放出来，所述磷酸脂或焦磷酸脂部分与生育三烯酚中苯环上的羟基相连，或与类生育三烯酚化合物中氢化体基团相连。利用热及随意地利用压力，有助于释放本发明化合物，使达到较高回收率。最好将加热和加压结合使用。根据采用的回收方法，可将本发明化合物与TRF的其它成份一起提取。

已发现微波特别有效于与膜键合的T₃和类T₃化合物的释放。亦已发现，下述方案可使要求的稳定化结果最优：将一定量（典型地：1g-1Kg）粉碎生物源（最好是稻米或米糠）放入一派瑞克斯玻璃盘（典型的：直径10cm-20cm，高1.5cm-15cm）。可任选将盘盖住或敞开。装有粉碎生物源的第二个盘子可叠放在第一盘上面。优选一次用一个带盖盘。将生物源置于微波炉内，在最大功率（优选600-1500watts）下加热1-5min间隔，任选环境的，真空或氮气气氛。可任选用高于1atm.压力。每次加热后，应将样品搅拌均匀。加热及搅拌过程重复1-10次。优选对0.5Kg样品重复该过程3-5次。然后，如本文所述，提取TRF。

可直接用TRF，或可进一步分离成其组成化合物。可能需要从TRF混合物中分离新的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物。

TRF一般含有不同含量的每一公知生育三烯酚，及额外的母育酚产物。从理论上讲，用标准硅胶柱HPLC法，应可将每一新的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物与TRF中的公知生育酚和生育三烯酚分离。不过，对米糠而言，得到的是一种复杂混合物。该混合物所含3，4-二氢-2-甲基-2-（4，8，12-三甲基三癸-3′（E），7′（E），11′-三烯基）-2H-1-苯并吡喃-6-酚）是一种公知生育三烯酚，在确定条件下，约21min后从HPLC洗脱。由此将该化合物定为“P₂₁”。此外，混合物所含的3，4-二氢-2-（4，8，12-三甲基三癸-3′（E），7′（E），11′三烯基）-2H-1-苯并吡喃-6-酚）或“P₂₅”是一种新的生育三烯酚，约25min后由PHLC洗脱。此外，混合物含有一种透明的甾醇，在315nm有最大紫外吸收，约20min后由HPLC洗脱（“P₂₀”）。用标准硅胶的HPLC技术，不能分离这三种化合物。

因此，本发明包括从不能用硅胶柱分离的混杂物中提纯生育三烯酚和类生育三烯酚化合物的新技术。这些技术特别适用于从甾醇和其它蜡状混杂物中分离生育三烯酚和类生育三烯酚。一种方法是将TRF溶于一适宜溶剂，优选己烷，然后吸附到胺或氰基柱（1ml）上。优选用Bond Elute胺或氰基柱。再用适宜溶剂体系，有选择地将本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚洗脱。最好该溶剂体系是己烷内呈梯度分布的异丙醇。用含少量极性溶剂的非极性溶剂，（最好约0.5%异丙醇的己烷溶剂），可使公知生育三烯酚和生育酚洗脱，同时使本发明新的生育三烯酚和类生育三烯酚滞留在胺柱上。再提高极性溶剂的浓度（最好约3%异丙醇的己烷溶剂），选择洗脱本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚，同时使任何甾醇和蜡状混杂物滞留在胺柱上。最后用高极性溶剂体系，如6-10%异丙醇的己烷溶剂洗脱这些混杂物。用该法可有效分离所需的生育三烯酚和类生育三烯酚。

用另一技术，亦可提高从生物源分离回收生育三烯酚和类生育三烯酚的回收率。该法中，先用甲醇提取稳定化或未稳定化的生物源。该步脱除许多未键合混杂物。再对生物源加热或任选地加压，释放出生育三烯酚和类生育三烯酚化合物。热源的实例包括但不限于辐射热源（即可见光或放射性物质），对流热源，微波，射频，磨擦或剪切。优选热源是微波热。此外，加热和/或加压处理之前、期间或之后，亦可采用冷冻/解冻法或机械研磨。或者，用苛性剂如酸像盐酸或硫酸使生育三烯酚或类生育三烯酚释放出来。根据另一实施方案，可在进行热、压力或苛性剂处理之前、同时或之后，进行声处理或洗涤剂处理。采用这里所述技术，即结合使用加热、加压和各种反应条件进行实验，很容易得到对一确定生物源的优选条件。

一种纯化的本发明优选化合物P₂₅作为降胆固醇剂，显示出较任何公知生育三烯酚更强的生物活性，这些公知生育三烯酚包括P₂₁（亦称作“生育三烯酚”），α-T₃，β-T₃，γ-T₃或δ-T₃。据信，类异戊二烯侧链上的双键构成了这些化合物的活性部分，因为双键的存在，削弱了生物膜中磷脂侧链之间London力的作用。亦可相信，芳环系统和类异戊二烯侧链上烷基取代基的数目和位置造成了生物活性上的差异-烷基取代基数目越少，活性越高。据信，减少甲基造成的空间位阻可使P₂₅更深地进入膜内。这样使膜的结构更有条理而更难渗透。按此假设，用氢取代苯并二氢吡喃酚环2号位上的甲基得到的本发明化合物表现出增强的生物活性。不过，亦研究了在该位和其它位置上的不同取代情况，因为可能包括有导致生物活性提高的九种不同的机理。

由于本发明新的生育三烯酚和类生育三烯酚具有降低总血清胆固醇和低密度脂蛋白-胆固醇，提高HDL-/LDL-胆固醇之比的能力，所以不用其预防及治疗与高胆固醇含量有关的各种疾病。

有利的是，本发明化合物基本上不改变导致胆固醇生物降解的其它血液成份的血清含量。例如，本发明化合物基本上不降低胆固醇7α-羟化酶的活性，该酶负责把胆固醇降解成胆汁酸。

可用本发明化合物治疗的与胆固醇含量高有关的各种疾病包括（但不限于此）：动脉粥样硬化，血栓形成，冠状动脉疾病及其它形式的心血管疾病。此外，本发明化合物能够降低血清葡萄糖含量，这可提高2型糖尿病胰岛素的分泌。

本发明化合物亦可用于改变几种其它血液成份的血清或血浆含量。例如，这些化合物可降低凝血噁烷A₂和血小板因子4的血浆含量。此外，它们可被动地作为简单的抗氧剂，或主动地减少由嗜中性白细胞，嗜碱白细胞，巨噬细胞，内皮组织和其它免疫调节组织产生的超氧化物或其它细胞毒素或细胞分裂素的释放。抗氧化作用至少分两步完成。首先，通过减少廿碳四烯酸代谢物，嗜中性白细胞减少了超氧化物的生成量。其次，这些化合物消除已存在的那些自由基。因此，它们发挥了对内皮，脂蛋白，平滑肌细胞和血小板的保护作用。此外，这些化合物亦可作为抗氧化剂，延长易氧化产品如食品的贮藏寿命。有利的是，本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物亦可防止食品的氧化性降解，这种降解将导致在该食品中形成致癌物化合物。

凝血噁烷（用本发明化合物可降低其血清含量）亦可诱发血小板聚集和血管收缩。所以，在很宽的不同应用场合，可用本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物减少血液凝块。例如，可用这些化合物治疗或防治各种疾病如血栓形成疾病，心血管疾病，高血压，肺病，和肾病。特别地，可用本发明化合物预防或逆转血液凝块及可导致诸如心肌梗塞，中风，肺栓塞，深部静脉血栓形成，外围血管堵塞及其它血液系统血栓形成的各种疾病的损伤。

生育三烯酚和类生育三烯酚化合物亦可作为抗动脉粥样硬化剂，抑制或逆转LDL的氧化作用，或普遍保护血管组织免受氧化性损害。氧化形式的LDL（“OX-LDL”）是形成动脉粥样化的主要成份。这种动脉粥样化的形成通常导致动脉因动脉粥样硬化瘢痕而变窄。虽不希望受限于理论，但据信，通过降低血清LDL浓度，生育三烯酚和类生育三烯酚化合物可提高代谢LDL的代谢速度，因而减少了LDL暴露于氧化剂的机会。

生育三烯酚和类生育三烯酚化合物亦可降低血中脂蛋白（α）的浓度。高浓度Lp（α）与动脉粥样硬化，早熟性心肌局部缺血和类风湿关节炎的早期发作及发展有关，这一点已被充分确认。实际上，Lp（α）浓度比LDL浓度更准确地表示出冠状动脉心脏病。降低其Lp（α）浓度较高（约20mg/dl以上）的个体的Lp（α）浓度，可明显减少患动脉粥样硬化和冠状动脉心脏病的可能性。有意义的是，Lp（α）浓度不像LDL浓度，不受低脂肪饮食或商购的血胆固醇过少剂的影响。

生育三烯酚和类生育三烯酚化合物亦显示出利尿-它们具有对抗血管加压素和血管紧张肽Ⅱ的作用。因此，这些化合物可用于治疗和控制如高血压。

根据本发明另一实施方案，为防止患者出现败血性休克，可在外科手术前给其施用生育三烯酚或类生育三烯酚化合物。有利的是，生育三烯酚和类生育三烯酚化合物可用于处理体外血液。这里所用的术语“体外血液”包括用导管从接受体外治疗的患者身上取出并在诸如透板、或血液过滤或旁路同步计时手术过程中输回患者体内的血液。该术语包括在体外贮存供逐渐输给患者的血液制品。这些制品包括全血，血小板浓缩物，和需要抑制血小板聚集的任何其它血液成份。

根据本发明的另一实施方案，生育三烯酚和类生育三烯酚化合物可用于配制组合物及涂复移植器件表面以减少血小板聚集危险性的方法中，-例如，诸如血管移植，移植片固定膜，导管和人工瓣这样的器件表面。可用包括物理吸附和化学交联这样的常规方法，将生育三烯酚和类生育三烯酚化合物涂复于这类器件上。

此外，已发现本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物，公知生育三烯酚，及它们的混合物也可降低在类脂多糖类刺激中起作用的肿瘤坏死因子的浓度，减少组织中的廿碳四烯酸和动物及人体血液中的氧代谢物。这些结果表明了由廿碳四烯酸合成的前列腺素和白细胞三烯的全面减少及白细胞介素-1的潜在减少。因此，本发明化合物可用于各种场合。例如，可用于防治内皮损伤，如局部缺血和回熔（reperfused）心肌层及溃疡。此外，抑制肿瘤坏死因子的生物合成亦可能伴随着炎症减少-即，通过抑制嗜中性白细胞的呼吸猝发，或通过清除游离基。所以，本发明化合物及公知生育三烯酚亦可用作抗炎症剂，用于防治并治疗包括局部、急性和慢性炎症的各种疾病和病理状况。这些病包括但不限于高烧，类风湿病，疼痛，功能下降、高血压和浮肿。

除其在炎症中起抑制作用外，亦已证实前列腺素可抑制葡萄糖诱发胰岛素的释放，提高葡萄糖浓度且刺激胰高血糖素的分泌。因此，用本发明化合物一般可提高胰岛素与胰高血糖素之比例。所以，可用本发明新的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物，公知生育三烯酚及它们的混合物改善糖尿病的葡萄糖耐受性。在非胰岛素依赖型糖尿病中它们亦可用来恢复急性葡萄糖诱发胰岛素的作用。

除上述用途外，本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物，公知生育三烯酚及它们的混合物亦可用于增强动物和人体的免疫功能。这些化合物通常可减少生物组织中脂肪酸含量。由于脂肪酸含量影响免疫系统，本发明化合物可用作免疫调节剂。例如，它们可用于提高在外来蛋白反应中的抗体滴定度。

此外，用本发明化合物使脂肪酸、胆固醇、甘油三酸脂和葡萄糖浓度降低而无附带的明显失重。原因是提高了食物的蛋白质转化率。所以，本发明新的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物，公知生育三烯酚，及它们的混合物可用于提高食物转化效率。

可用本文所述组合物和混合物治疗的血胆固醇过多性疾病和症状包括但不限于动脉硬化，动脉粥样硬化，黄瘤病，高脂蛋白血和家庭性血胆固醇过多症。

可用这类组合物治疗的血栓形成疾病和病理状态包括但不限于肺部疾病，一般如特异传导性降低，动力学顺性和收缩能力降低（平滑肌收缩），过多肺部液体（如肺淋巴液，泡沫，或支气管肺泡灌洗），成人呼吸道损伤综合症，非定向性和鼻部疾病（如肺和内呼性压力增高，肺水肿，液体积聚（嗜中性白细胞浸润）和肺血管通透性），肺血管收缩（例如，与内毒素血症，革兰氏阴性生物体，过敏反应，出血性休克，或对豚草属过敏等有关的），心肌局部缺血，微小栓塞和/或明显阻塞，穿腔血管成型术后再阻塞，心肌梗塞，与功能障碍有关的心肺旁路循环，血管收缩（肺和外周的），器官功能失调，血小板消耗和/或活化（及继后功能减低，凝集和数目减少），与急性术间肺高压有关的三尖瓣病理改变，由动脉硬化，Maurice Raynaud综合症引起的慢性梗阻性动脉病-血管收缩、肾动脉狭窄，心肌梗塞，中风，肺栓塞，深部静脉血栓形成，外周血管阻塞和其它血液系统血栓形成。

抗氧化用途包括但不限于治疗和预防内皮损伤，如局部缺血和再灌注的心肌。由于其抗氧化活性，本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物亦可用于治疗和防治癌症病理状况，（如，通过阻止动物或人的基因物中致癌突变）。

可用这类组合物治疗的抗动脉粥样硬化病和病理状况包括不限于动脉硬化，动脉粥样硬化，心肌梗塞，局部缺血（即心肌局部缺血，脑局部缺血和肾局部缺血）和中风。

可用这类组合物治疗的炎症病和病理状况包括但不限于原发性高血压，充血性心力衰竭性高血压，由心肌输出减少引起的肾功能障碍，内毒素血症，慢性肝病或高血压，哮喘、支气管炎，肺炎或急性肺损伤方面的肺部炎症，类风湿病（如类风湿关节炎和系统狼疮crythematosus），炎性肠道病（如绒毛样腺瘤），由过量酸、胃蛋白酶或胆汁盐引起的胃肠功能失调，Iotlinger-Ellison综合症，皮肤病或外伤（如烧伤或酸或碱损伤），痛风，Bartter综合症，高烧，类风湿病，疼痛，功能下降，高血压和浮肿。

可用本发明组合物治疗的免疫调节病包括但不限于慢性疲劳综合症，移植排斥反应，自身免疫病如AIDS和其它削弱免疫系统的病毒性疾病。

本文所述组合物和混合物可用于药物组合物，食品和食品添加剂。有利的是，这些制品是血胆固醇过少的、抗血栓形成的，抗氧化的，抗动脉粥样硬化的，抗炎症及免疫调节剂。

药物组合物可制成供口服的片剂，胶囊，乳液，悬浮液和粉剂，供非肠道给药用的无菌溶液或乳液，静脉注射用无菌溶液和局部施药用凝胶，洗剂及乳脂。可按安全且医药上可有效产生本发明化合物和混合物所有的任何所需结果的剂量，给人和动物施用药物组合物。

本发明亦涉及生育三烯酚和类生育三烯酚化合物的原药（prodrug）形式，该形式可在患者用药过程中，经生物转变而成活性形式。

本发明的药物组合物一般包括药物有效量的本发明的生育三烯酚和类生育三烯酚化合物或其混合物，及一种药物用载体。这类载体可是固体或液体，如玉米淀粉，乳糖，蔗糖，橄榄油或芝麻油。如用固体载体，剂型可是片剂，胶囊或糖锭。液体剂型包括软明胶胶囊，糖浆或悬浮液。

本发明的治疗和预防方法包括按可用药物治疗的方式，用本发明组合物和混合物治疗患者的步骤。在说明书所用术语“医药上的有效剂量”或“降低胆固醇的剂量”指可有效降低血中LDL-胆固醇的浓度和总血清胆固醇浓度，同时提高血中HDL-胆固醇与LDL-胆固醇之比的剂量。或者，术语“医药上的有效量指可有效降低与血胆固醇过多症有关的LDL-胆固醇和总血清胆固醇的血中浓度的剂量，可有效促使脂肪生成的剂量，可有效抑制血小板聚集的剂量，可有效减少人体外血液嗜中性白细胞产生的超氧化物的释放的剂量，可有效降低肿瘤坏死因子或白细胞介素-1的浓度的剂量，可有效降低廿碳四烯酸浓度的剂量，可有效提高血中抗体滴度的剂量，可有效用于抗血栓形成的剂量，可有效治疗，预防或延长下列疾病或病理状况中任何一种发作的剂量：炎症疾病，免疫调节疾病，高烧，水肿，糖尿病，癌症，老化症，疼痛，败血性休克，慢性疲劳综合症，和功能下降;或可有效降低血中Lp（α）浓度或提高食料转化效率的剂量。

可按常规方式，用本发明的药物组合物治疗和预防上述疾病和病理状况中的任何一种。这些治疗和预防方法及其剂量和各种需要都为该领域充分了解，且可由该领域普通技术人员从可采用的各种方法和技术中加以选择。剂量范围可为1-约1000mg/天。但可采用较大或较小用量。特殊用量和处理方式将取决于各种因素，如患者健康状况，患病的严重性及病程或对其的处理及治疗医师的判断。

亦可将生育三烯酚和类生育三烯酚化合物及其混合物与用于治疗或预防上述任何疾病的常规治疗结合使用。这种结合治疗有利地采用较低用量的那些常规疗法，由此避免了用这些药剂进行单一治疗时可能诱发的毒性。例如，可将生育三烯酚和类生育三烯酚化合物与下列物质结合使用：胆汁酸多价螯合物如消胆胺和考米替酸;纤维酸衍生物如氯贝丁酯，Gamfibrozil、降脂苯酰，降脂异丙酯和环丙降脂酸;HMGR抑制，如Lovastatin.美伐他汀，Pravastatin、Simvastatin和SRI-62320;丙丁酚;烟酸;其衍生物和配合物，如6-OH-烟酸，Nicotinaria、烟酰胺，烟酰胺-N-氧化物，6-OH-烟酰胺，NAD，N-甲基-2-吡啶-8-羧基酰胺，N-甲基-烟酰胺，N-核糖基-2-吡啶酮-S-羰基化物，N-甲基-4-吡啶酮-5-羧基酰胺、Bradiliani烟酸戊四醇酯，梨醇烟酯和烟酸肌醇酯;新霉素和右旋甲状腺素。

在食品中，可将生育三烯酚和类生育三烯酚化合物及其混合物与任何生物上可用的载体结合使用，以提供降低LDL-胆固醇和总血清胆固醇的血中浓度，同时提高血中HDL-胆固醇与LDL-胆固醇之比的安全有效的手段。此外，这些食品可用于抑制血小板聚集，减少人体末梢血液嗜中性白细胞产生的超氧化物的释放，降低肿瘤坏死因子和白细胞介素-1的浓度，提高血中抗体滴度，或治疗、预防或延长下列疾病或病理状况中一种或多种的发作：免疫疾病，炎症，高烧，水肿，糖尿病，癌症，老化症象，疼痛，类风湿疾病，败血性休克，慢性疲劳综合症和功能下降;或者，它们可用于降低血中Lp（α）浓度或提高食物转化率。

含有本发明生育三烯酚和类生育三烯酚化合物及其混合物的食品可与其它任何食品混合。例如，含本发明化合物的油可用作烹调油，煎炸油或沙拉油，且可用于任何油基食品如人造黄油，蛋黄酱或花生酱。用本发明化合物强化的谷粉可用于食品如焙烤制品，谷物，面条和汤类。含生育三烯酚和类生育三烯酚化合物的油可乳化后用于各种水基食品，如饮料，包括混合饮料。有利的是，这些食品可包括在低脂肪，低胆固醇或有其它限制的饮食谱内。

本发明的药物组合物和食品可施用于人和动物，如畜类和家禽。动物一旦摄取或被施用了生育三烯酚或类生育三烯酚化合物，或其混合物，即方便地保持了所服化合物的血胆血醇过低的，抗血栓形成的，抗氧化，抗炎症，抗动脉粥样硬化，免疫调节和其它有利的生物活性。所以，这种动物，或由该动物得到的任何产品，如牛奶可被人可另一动物消耗而获益于生育三烯酚和类生育三烯酚化合物。例如，食入用本发明化合物强化的谷物或食物的鸡又被人食用后，可获得降低胆固醇的好处。

此外，将生育三烯酚和类生育三烯酚化合物施于动物，可提高食物转化效率。在高脂肪含量的动物如牛、猪、羊、羔羊中，生育三烯酚和类生育三烯酚化合物可有利地导致生长增快，胆固醇含量降低，及瘦肉率高。给家禽施用后，生育三烯酚和类生育三烯酚化合物使下出的蛋具有胆固醇含量降低的蛋黄和蛋白质含量较高的蛋白的特征。

为使本发明得到更好理解，下面列出实施例。这些实施例只供具体说明，不能视作以任何方式限制本发明范围。

实施例中，用由Associate Electrical Industries，Ltd.（Department of Chemistry，University of Wisconsin，Modison）制造并出售的MS-902型取得质谱数据。样品放于玻璃探针上，100℃下直接送入离子源。离子化电子束的电压为70e.v.。室温下用BiuKr，FDR的NMR-500得到CDCl₃中的NMR数据。用Perkin Elmer仪器以薄膜形成得到IR。离子分离在Eppendorf Centrifuge（1240型）中进行。微波在Whirlpool家用炉（型号：MT6901XW-O）中进行，操作功率800瓦。进行HOLC采用Waters泵6000A或Gilson泵307，Shimadzu莹光检测器RF-535和积分仪CR3A，Gilson自动注射器，Perkin Elmer 50AUV检测器，或Shimadzu SPD-10AV UV-VIS光谱分光检测器和Kipp及Zonen BD41记录仪。除另有说明外，采用下述HPLC条件：20μl注入量，多孔微球硅胶柱（Waters柱，10μ，4mm×30cm），己烷和异丙醇的isocratic体系（99.75%∶0.25%，V/V），流速1.3ml/min。检测在295nm出射波长和330nm发射波长（莹光检测器）出现，且在295nm处有紫外吸收。

全部检测分析都是按A.A.Qureshi等人在“Lowering of Serum Cholesterol In Hypercholesterolemic Humans By Tocotrienols”（Palmvitee），Am.J.Clin.Nutr.，53，pp.1021S-26S（1991）所述方案，针对猪和鸡血清进行的。所有的酶分析按下列A.A.Qureshi等人在“Effects of Coeralsand Culture Filtrate of Trichoderma Viride on Lipid Metabolism of Swine”，Lipids，17，pp.924（1982）中所述方案进行。血浆胰岛素，胰高血糖素和TNF浓度的测定;采用分别来自Ventrex Laboratories Ine.（Portland，Maine），ICN Biomedicals，Inc.（Costa Mesa，California）和Genzyme Corp.（Combridge，Massachusetts）的放射免疫分析仪。

实施例1

下述方案可用于稳定的米糠为试样的生物源。

用一工业型连续流动非混合式热风烘干机干燥来自农场的毛稻（稻谷），经过烘干的稻谷其水份由18-22%降低到10-13%。然后，将干燥的稻谷用一工业型稻谷清理设备吸风除去灰尘、石子、草籽和茎梗进行清理，再用去石机进行重力分离，用碟片分级机和滚筒分离机进行颗粒大小的分离。随后用一胶辊砻谷机脱去稻壳，用一谷糙分离机分离除去稻壳（谷壳或称皮壳）。此后，用一擦离式碾米机碾剥分离出粗糠，得到精白米。上述粗糠被气力输送到挤压机中或贮存起来直到进行稳定化处理。

为了进行稳定化处理，将粗糠气力输送至滤尘器/筛分机中，除去残留的碎米。筛分后，粗糠被气力输送到一混合/水分调节料罐中，再由混合罐卸料排出，通过计量螺旋喂料机送至一紧固圆筒单螺旋挤压机的进料阀中。在稳定化处理期间内，挤压机的操作条件保持在下列范围：

流速：900-2000磅/小时

压力：800-2000磅/吋²

温度：135°-210℃

时间：5-90秒

然后，将上述干热稳定化后的粗糠直接送至膨化蒸煮机的进料斗中。另外，送至蒸煮机的粗糠可以是用干冰冷冻过的。在挤压机内，粗糠通过非连续螺旋轴以大约341磅/小时的流速送向卸料板。将水和蒸汽以约38磅/小时的速度由挤压机筒上的注入孔加入进去，以使物料彻底混合，并且提高水份。环境温度约为30℃，物料流速由卸料模板控制在约341磅/小时。进料水份保持约11.4%，温度在约90°-135℃保持约15-90秒。在卸料温度125℃时，筒内物料的水份约为14%。

由于粗糠被挤压通过模板，突然的压力降使液体水份蒸发。在蒸煮过程中，米糠中的酶发生变性，一些成份胶凝化形成流浆，而流浆使颗粒物凝固在一起，形成了硬实的颗粒球。所说的水份蒸发导致细胞破裂，从而特别适合于溶剂迁移渗透。在上述过程中，蒸汽和水的引入使米糠的含水量上升到约22-25%。然后，挤压机以约341磅/小时的流速顺流向一烘干机/冷却装置卸料。上述挤压机中的水份流速保持在大约96磅/小时，温度保持在82°-130℃范围内。烘干机/冷却装置的卸料速度保持为约341磅/小时，水份约8%。稳定化的米糠是所要产物。上述这些条件同时可用于稳定米糠的贮存。

将稳定化的米糠以约2∶1的重量比浸泡于己烷中，采用本方案一般可以提取约10-100g的物料。己烷一般用蒸汽机在防爆通风柜内加热到大约60℃，当然还可以采用其它溶剂和其它温度。己烷/油混合液通过过滤从米糠中分离出来。为了使米糠的含油量低于1%，有必要洗涤5-6次。脱脂米糠和己烷/油混合液二者均在蒸汽缓和加热条件下脱除溶剂。

如果欲提取100-500磅的稳定化米糠，更多的是采用下述方案。即，将稳定化的米糠以约111磅/小时流速送入一逆流提取器中，以约312磅/小时的流速引入新鲜己烷。新鲜溶剂（己烷）的温度保持在约50℃，因此，提取器的温度保持在约52℃左右。提取器内的停留时间一般是大约45分钟。产物为含油量小于1%的脱脂米糠。由提取器排料口排出的己烷/油混合液经一板框式压滤器而过滤。过滤后的混合液泵送至仍在加热的蒸汽中，由此，己烷蒸发，经冷却器收集后再用。

提取、脱溶剂后，一般再将粗米糠油脱胶、脱蜡、脱色，并用蒸汽蒸馏法进行物理精制。脱胶是在搅拌条件下，分两步先加2wt%的水，再加0.15wt%的磷酸（85%试剂级）。保持温度约82°-88℃10分钟，然后通过超速离心法（ultrafugation）除去含胶浊浆（参见US4，049，686）。将脱胶后的米糠冷却到约5°-8℃，保持24小时。脱蜡油层浮于蜡上，可用真空泵滗析。脱色按正式的美国油脂化学协会法6C8a-52进行。物理精制是在一玻璃脱臭装置中进行的，温度约为250℃，压力约为3mmHg，时间2小时左右。

下面的具体方案是针对后面的实施例的。稳定化处理方案基本方法如上所描述，但具体确切的条件如下：

方案Ⅰ-干热稳定法

挤压机：Wenger型X-25

标准螺旋/圆筒装置：

圆筒# 标准孔螺旋# 标准孔

5 28714-9 5 28320-1

4 28318-1 4 28326-9

3 28372-9 3 28326-1

2 28318-1 2 28326-5

1 28350-1 1 28387-9

标准模板：

模板/隔板尺寸标准孔

隔板 0.375 28340-11

尾板 0.625 28361-51

中间板 0.218 28316-723

前板 0.235 28389-507

操作条件：

进料流速：1000磅/小时

温度：卸料板处170℃

压力：925-1025磅/吋²

进料水份：12%

出料水份：9.6%

停留时间：15秒

运行期：8小时

样品量：50磅

方案Ⅱ-先干热后湿热稳定法

干热阶段：同方案Ⅰ

湿热阶段：

挤压机：Anderson 4吋

螺旋/圆筒构造：标准螺纹

模板：

直径：0.1875吋

板厚：0.75吋

操作条件：

进料流速：378磅/小时

轴速：279rpm

蒸汽注入：36磅/小时（＃8孔，32磅/小时）

机器压力：750磅/²（估计值）

进料水份：11.4%

出料水份：15%

卸料流速：450磅/小时

卸料温度：121℃

方案Ⅲ-烘干/冷却法

将方案Ⅱ的湿热稳定物料（15%水份）装入铝盘中，放入101.1℃的盘式烘箱内，直到水份含量为8-10%（大约1.5小时）。然后将上述盘放到盘架上，使之在室温（约20℃）下冷却。

方案Ⅳ-提油（实验室法）

油∶己烷：1∶4

洗涤次数：3

提取温度：40℃

在中度真空条件下，中温加热（40℃）除去提取物中的己烷。

方案Ⅴ-提油（中试法）

油∶己烷：1∶4

洗涤次数：6

提取温度：60℃

提取量：20磅

产物：16磅脱脂米糠

4磅粗油

通过加热至115.5℃除去提取物中的己烷。

方案Ⅵ-提油（冷提）

油∶己烷：1∶4

洗涤次数：6

提取温度：20℃

提取量：20磅

产物：16.4磅脱脂米糠

3.6磅粗油

通过加热至115.5℃除去提取物中的己烷。

方案Ⅶ-脱蜡

将20磅粗油在4°F（-15.6℃）下冷冻24小时，含脱蜡油的上清液从固化的蜡中滗析出来。然后将上述蜡离心分离出夹带的油，得到蜡（0.59磅）和脱蜡油（19.407磅）。

实施例2 P₂₅的提纯

按照方案Ⅰ稳定米糠。取1.0g稳定的米糠磨成细粉，装入振荡器上的带活动螺帽的试管中，用8ml甲醇提取30分钟。然后将悬浮液以2000rpm离心10分钟，回收甲醇层，再于40℃真空条件下蒸发该甲醇层。将留下的干残留物用4ml己烷在一振荡器中振荡提取3分钟，接着以2000离心5分钟。所得上清液移至注射瓶中，盖上盖，再离心2分钟。蒸发得TRF。

将10mg含有新的生育三烯酚P₂₅的TRF溶解在0.5ml的己烷中，并结合到键合洗脱胺柱（Bond Elute Amine column）（1.0ml）上，该柱已先用2ml己烷平衡过。然后，先用1ml己烷，再用1ml含3%异丙醇的己烷洗涤该柱，经过此步，除去了大部分已知为母育酚（Tocol）的产物。之后，再用1.0ml含5%异丙醇的己烷流经所说的柱，将回收的溶液蒸发，得到1.85mg P₂₅和0.44g生育三烯酚（P₂₁）。最后，再用1.0ml含6%异丙醇的己烷、1.0ml含10%异丙醇的己烷先后洗脱该柱两次。所得洗脱液部分做HPLC分析。经HPLC痕量分析，未发现痕量P₂₀杂质。

实施例3

将实施例2中经胺柱提纯的化合物用HPLC进一步提纯，以使生育三烯酚（P₂₁）和P₂₅分开。把几次操作的峰馏份收集起来，做HPLC分析。通过UV和荧光法观察，每一提纯样品均显示出一单对称峰。关于生育三烯酚（P₂₁）和P₂₅获得如下分析数据：

生育三烯酚P₂₁：

MS（EI）：m/e 382⁺（分子离子）

163⁺

123⁺

NMR（CDCl₃）：

δ1.26（s，H），1.50-1.84（m，4H），1.58（s，9H），1.66（s，3H），1.90-2.15（m，10H），2.69（t，J＝6.7Hz，2H），4.23（s，1H），5.07（m，3H），6.51-6.57（m，2H），6.63（d，J＝8.5Hz，1H）。

IR（薄膜）：

（cm^-1）3400，2900，2950，2876，1500，1458，1240，750。

MS数据符合分子式C₂₆H₃₈O₂，图形具有与用α-、β-和γ-生育三烯酚观察相同的特征片断，见Rao等人所报道的“用气相色谱-质谱鉴别评价植物油中的生育酚和生育三烯酚”（J.Agr.Food Chem.，20（2），P240-245，1972）。m/e163⁺处的峰表明侧链（C₁₆H₂₇）⁺消失，产生了离子C₁₀H₁₁O₂（163.0759）。m/e123⁺处的峰是由于氢重排使苯并二氢吡喃结构破坏，造成侧链断裂，以及甲基乙炔片段（CH₃-C＝CH₂）消失而形成的。

NMR谱与T₃的相同，但δ2.2处正常T₃苯环上的甲基在P₂₁谱图上消失。

IR表明在3700cm^-1处有一酚式OH基团，1650cm^-1处有一苯环，1680cm^-1处有一苯并二氢吡喃环。

基于这些数据，P₂₁的结构确定为脱甲基-生育三烯酚[3，4-二氢-2-甲基-2-（4，8，12-三甲基三癸-3′（E），7′（E），11′-三烯基）-2H-1-苯并吡喃-6-酚]：

P₂₅：

MS（EI）：

m/e 386⁺（分子离子）

175⁺

149⁺

123

NMR（CDCl₃）：

δ1.58（s，3H），1.59（s，3H），1.62（s，3H），1.67（s，3H），1.73（m，2H），1.90-2.08（m，10H），2.19（m，2H），2.63-2.85（m，2H），3.89（m，1H），4.30（br.s，1H），5.07（m，2H），5.14（t，J＝7.9Hz，1H），6.51（d，J＝2.9Hz，1H），6.56（d of d，J＝2.9，8.6Hz，1H），6.66E（d，J＝8.6Hz，1H）.

IR（薄膜）：

（cm^-1）3388，2924，1494，1450，1352，1280，1218，1080。

MS数据符合分子式C₂₅H₃₆O₂，图形有γ-生育三烯酚的特性片断，但苯并二氢吡喃环上与O相邻的甲基消失。

NMR谱与脱甲基-T₃的谱图类似。

IR表明在3388cm^-1处有一酚式OH基团，1494cm^-1处有一苯环，1352cm^-1处有一苯并二氢吡喃环。

根据这些数据，P₂₅的结构确定为脱二甲基-生育三烯酚[3，4-二氢-2-（4，8，12-三甲基三癸-3′（E），7′（E），11′-三烯基）-2H-1-苯并吡喃-6-酚]：

实施例 P₁₆和P₁₈的分离与提纯

按照方案Ⅰ稳定米糠。取1.0g稳定的米糠磨成细粉，微波处理3分钟（1分钟间隔），以释放出一些结合的T₃和类T₃化合物。然后在一振荡器上的带活动螺帽的试管中用7ml甲醇提取30分钟。将此悬浮液以2000rpm离心分离约5分钟，分离出上清液，在40℃下真空蒸发掉甲醇。所得残留物含有游离的和前述结合T₃和类T₃化合物的混合物。

将残留物溶于250μl（200mg）己烷中，并加到1ml键合洗脱胺柱上，该柱已先用2ml己烷平衡过。然后用1ml己烷洗涤所说的柱，再用0.5ml下述等分溶剂依次洗脱柱：含0.5%异丙醇的己烷、含1.0%异丙醇的己烷、含1.5%异丙醇的己烷，含2.0%异丙醇的己烷、含2.5%异丙醇的己烷和含3%异丙醇的己烷，最后用0.5ml含10%异丙醇的己烷洗洗柱子，对所得洗脱液部分进行分析，并将含P₁₆和P₁₈的洗脱液合并（仅指用含1.5-3%异丙醇的己烷洗脱收集的含有意义量P₁₆和P₁₈的洗脱液）。

为了分离P₁₆和P₁₈，采用与本申请说明书所述相同的HPLC条件，但己烷中的异丙醇浓度由0.25%提高到0.5%。在这些条件下，13分钟时洗脱P₁₆，15分钟时洗脱P₁₈。收集峰馏份并进行HPLC分析。如UV和荧光法所观察到的，这些纯化的样品每一个均有一单对称峰。下面是P₁₆和P₁₈的分析数据：

MS（EI）：m/e 380⁺（分子离子）

161⁺

分子式：C₂₇H₄₀O

分子量（实际值）：380.3084

（计算值）：380.3079

图形片段类似于P₂₁和P₂₅的。m/e161⁺处的峰证明C₁₆H₂₇侧链消失，形成了C₁₁H₁₃O。基于这些数据，P₁₆的结构确定为：

P₁₈：

MS（EI）：m/e 424⁺（分子离子）

分子式：C₂₈H₄₀O₃

分子量（实际值）：424.3010

（计算值）：424.2977

图形片段同样类似于P₂₁和P₂₅的。根据这些数据，P₁₈的结构确定为：

实施例5

测定不同米糠对鸡血清中总胆固醇、HD2-胆固醇、LDL-胆固醇、apo-脂蛋白（α）、和apo-脂蛋白B含量的影响。

采用下述方案得到表1所列的试样：

第5项：方案Ⅰ

第6项：方案Ⅰ加方案Ⅳ

其它所有的试样均商购得到。

选择鸡作为我们的最初试验对象是因为它们在肝脏中合成胆固醇的机理与人类相似（鼠则不同，它们在肠中合成胆固醇）。

给每组鸡（6周龄白来克亨母鸡）饲喂雏鸡粉料对照日粮或含相当于20%试验米糠的对照日粮，所有组消耗的饲料量与对照组相当，饲喂期为4周。宰杀（0800小时）前禁食14小时。

鸡粉料日粮含下列成份：

成份重量（g）

玉米（8.8%蛋白质） 615.0

大豆粉 335.0

玉米油 10.0

碳酸钙 10.0

磷酸二钙 20.0

碘化盐 5.0

矿物质混合物^a2.5

维生素混合物^b2.5

^a每公斤饲料含矿物质混合物：ZnSO₄·H₂O 110mg，Mn（SO₄）₂·5H₂O，70mg，柠檬酸铁·H₂O 500.0mg，CuSO₄·5H₂O 16.0mg，亚硒酸钠0.2mg，DL-蛋氨酸2.5g，氯化胆碱（50%）1.5g，乙氧喹（1，2-二氢-6-乙氧基-2，2，4-三甲基喹啉）125mg和硫胺素-HCl 1.8mg。^b每公斤饲料含维生素混合物：V_A1，500单位，V_D3400单位，V_E10单位，核黄素3.6mg，泛酸钙10.0mg，烟酸25.0mg，盐酸吡哆醇3.0mg，叶酸0.55mg，生物素（VH）0.15mg，V_B120.01mg和V_K10.55mg。

结果列在下表Ⅰ中，括号内是升高或降低的百分率。

表Ⅰ

¹饲喂期4周，宰杀时间0800，宰杀前禁食14小时，数据表达：平均值±SD，n＝每组6只鸡。

²括号内是升降百分率

^A-D当P＜0.01时，不是同一右上角字母标记的值是不同的。

饲喂含稳定化米糠的日粮与其它日粮相比，胆固醇活性降低。与对照日粮相比，有益的是LDL-胆固醇含量降低了几乎35%，但HDL-胆固醇含量只降低了5.9%。另外，apo-脂蛋白（α）、与apo-脂蛋白B的比值提高了21%，该比值是诊断冠心病的重要指标（参见Naito等人“The Clinical Significance of Apolipoprotein Measurements”J.Ckin.Immunoassay，9（1），P11-20，1986）。

实施例6

本发明人接着测定了饲喂不同米糠对HMG-CoA还原酶、胆固醇7α-羟化酶和脂肪合成酶这些肝脏酶活性及鸡血清中三酸甘油酯和葡萄糖含量的影响。饲喂条件与实施例5所述相同，试样的制备如实施例5所述。

结果列在下表Ⅱ中，括号内是升降百分率。

表Ⅱ

¹饲喂期4周，宰杀时间0800小时，宰杀前禁食14小时，数据表达：平均值±SD，n＝每组6只鸡。

²括号内为升降百分率。

³每分钟每mg微粒体蛋白合成的甲瓦龙酸的p-moles数。

⁴每分钟每mg微粒体蛋白[¹⁴C]胆固醇转化成[¹⁴C]7-α-羟基胆固醇的n-moles数。

⁵每分钟每mg细胞溶质蛋白氧化的HADPH n-moles数。

^A-D当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

如表Ⅱ所示，含稳定化米糠的日粮明显地降低了HMG-CoA还原酶的（与对照日粮相比，降低23%以上），因此，胆固醇生物合成的酶反应速度受到限制。但是，降解胆固醇的酶、胆固醇7α-羟化酶的活性并未有实质影响。另外，这种日粮使血清中三酸甘油酯（脂肪）和葡萄糖的含量分别降低了15.5%和17.7%。

实施例7

此后，本发明人就用添加有从不同来源提取的米糠油的日粮饲喂鸡后，这些油对鸡血清中脂含量的影响进行了比较。每组6只鸡（6周龄白色来克亨母鸡），饲喂实施例5所述的鸡粉料日粮14天。紧接着一段时间内，饲喂添加了5%各种不同油的鸡粉料日粮。对照日粮中含5%玉米油。4周后，先禁食36小时，再饲喂48小时，其后即刻宰杀（0800小时）。所有组消耗的饲料量与对照组相同。表Ⅲ中所列的试样是按下述方案制成的：

第2）：方案Ⅰ加方案Ⅳ

第3）：方案Ⅲ加方案Ⅳ

第4）：方案Ⅲ加方案Ⅳ

第5）：方案Ⅳ

第6）：方案Ⅳ

其它全部试样均为商购所得。

结果列在下表Ⅲ中，括号内是升降百分率。

表Ⅲ

¹饲喂期4周，宰杀时间0800小时，宰杀前禁食14小时，数据表达：平均值±SD，n＝6只鸡/每组。

²括号内是升降百分率。

^A-E当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

上表证明，添加有5%冷提的Louisiana米糠油的日粮降低胆固醇的能力比其它日粮强。总血清胆固醇和LDL-胆固醇明显减少（分别为34.3%和57.8%），但HDL-胆固醇含量只稍有下降（10.8%）。还可以发现三酸甘油酯和葡萄糖含量也有下降。

实施例8

本实例证明蜡（固醇类）对Louisiana米糠及其油降胆固醇特性没有影响。每组6只鸡（6周龄白色来克亨母鸡），饲喂实施例5所述的雏鸡粉料日粮，但其中三个添加有三种不同量的蜡（固醇类），添加50ppm的TRF（按实施例2制备的）或5%当量的甲醇不溶性Louisiana米糠油部分。所有组消耗的饲料量与对照组相等，饲喂期为四周。宰杀（0800小时）前禁食14小时。表Ⅳ中所列试样是按下述方案制备的：

蜡（第2-4项）：方案Ⅶ。

按实施例2所述方法制得TRF（第5项）。通过冷冻Louisiana米糠油（依方案Ⅰ和Ⅳ制成的），然后离心得到甲醇不溶性部分（第6项）。所得上清液用2倍体积的甲醇提取三次。

其它全部样品为商购所得。

下表Ⅳ给出了试验结果，括号内是升降百分率。

表Ⅳ

¹饲喂期4周，宰杀时间0800小时，宰杀前禁食14小时。数据表达：平均值±SD，n＝6只鸡/每组。

²合成甲瓦龙酸的p-moles数/mg微粒体蛋白/min。

³[¹⁴C]7α-羟化胆固醇的n-moles数/mg微粒体蛋白/min。

⁴括号内是升降百分率。

^A-D当P＜0.01时，不是同一右上角字母标记的那些值是不同的。

添加有固醇类的日粮对于总血清胆固醇或LDL-胆固醇含量的降低没有影响。根据记录，饲喂含固醇类日粮的，总胆固醇的最大降低值是10.6%，LDL-胆固醇只有6.5%。HMG-CoA还原酶的肝脏酶活性也只有一点儿下降（11.6%）。相反，饲喂添加了TRF甲醇不溶性部分日粮的鸡，总的血清胆固醇（27.2%）、LDL-胆固醇（58.2%）和HMG-CoA还原酶（19.8%）肝脏酶活性均有显著降低。因此说，是TRF甲醇不溶部分（根据本发明含生育三烯酚），而非固醇类，在对米糠油的明显降胆固醇特性起作用。

实施例9

本试验是为了确定固醇类是否象米糠那样对降低血清中各种酶的含量和血液成份有作用。饲喂条件同实施例8所述，样品亦按实施例8所述制备。

试验结果在下表Ⅴ中，括号内是升降百分率。

表Ⅴ

²氧化的NADPH n-moles数/mg溶质蛋白/min。

³括号内是升降百分率。

上述结果表明，固醇类不能象米糠及其油所看到的那样对降低三酸甘油酯、葡萄糖、血栓烷B₂或血小板因子4的含量有作用。事实上，固醇类会提高或者不会对上述每种因子有明显影响。相反，饲喂了添加Louisiana米糠TRF甲醇不溶部分日粮的鸡明显地降低了上述所有因子。

实施例10

本试验测定了从米糠中分离出来的三种生育三烯酚对肝细胞中与胆固醇有关的酶活度的影响，其中所说的肝细胞是由八周龄母鸡的肝中分离出来的。用雏鸡粉料日粮饲喂鸡八周，宰杀前先禁食40小时，最后再喂48小时。然后按下述标准方法制备肝细胞。

采用下述方案从TRF中分离出每种化合物：用2ml己烷平衡键合洗脱胺柱，把10mg TRF（溶解在0.5ml己烷中）结合到胺柱上。先用1ml己烷，再用1ml含3%异丙醇的己烷洗涤该柱。用含5%异丙醇的己烷将P₂₁和P₂₅从所说的柱上洗脱出来。然后，用含10%异丙醇的己烷洗脱杂质P₂₀。对α-生育三烯酚也作了试验。

结果在下表Ⅵ中列出，括号内是升降百分率。

表Ⅵ

浓度 1 HMG-CoA

(μg/ml) 还原酶脂肪合成酶胆固醇7α-羟化酶

pmoles/min/mg nmoles/min/mg pmoles/min/mg

A)α-生育三烯酚

1. 0.0 26.8 (100.0) 17.2 (100.0) 2.31 (100.0)

2. 10.0 21.4(79.9) 15.2 (88.4) 2.12 (91.8)

3. 20.0 17.3 (64.6) 14.3 (83.2) 2.27 (98.7)

4. 40.0 16.7 (62.3) 12.4 (72.1) 2.34 (101.3)

B)P-21(生育三烯酚)

1. 0.0 26.8 (100.0) 17.2 (100.0) 2.31 (100.0)

2. 10.0 20.4 (76.1) 14.3 (83.1) 2.41 (104.3)

3. 20.0 16.7 (62.3) 12.7 (73.8) 3.40 (103.9)

4. 40.0 14.2 (52.9) 11.8 (68.6) 2.39 (103.5)

5. 80.0 14.3 (53.4) 10.2 (59.3) 1.37 (102.6)

C)P-25

1. 0.0 26.8 (100.0) 17.2 (100.0) 2.31 (100.0)

2. 10.0 19.0 (70.9) 16.2 (94.2) 2.33 (100.9)

3. 20.0 15.3 (57.1) 14.3 (83.1) 2.37 (102.61)

4. 40.0 12.4 (46.3) 12.7 (73.8) 2.44 (105.6)

5. 80.0 11.1 (41.4) 12.1 (70.3) 2.37 (102.6)

D)P-20

1. 0.0 28.78(100.0)

2. 25.0 29.21(101.5)

3. 55.0 28.87(100.3)

4. 100.0 28.21(98.0)

¹饲喂期八周，禁食40小时，再喂48小时。按标准方法，用两副肝10PM制备肝细胞。

试验证明，P₂₅是非常有效的抑制HMG-CoA还原酶的药剂，活性下降的最大值分别是46.6%和58.6%。事实上，P₂₅比已知的血胆固醇过多制剂α-生育三烯酚的效果要明显的好。α-生育三烯酚的最大下降值只有37.7%。P₂₀，固醇杂质对HMG-CoA还原酶没有显出明显的影响。

实施例11

本发明人还测定了从米糠中分离出来的各种生育三烯酚和类生育三烯酚化合物对HMG-CoA还原酶活性的影响。用200.0ml甲醇提取20.0g稳定化的米糠，去除各种UV吸附的杂质和生育三烯酚（总6.7mg）。重复该步骤四次。剩下的残留物在一干燥器内真空干燥，然后在30磅/吋²压力，180℃下加热2小时。干燥后的残留物再次用200.0ml甲醇（3.4mg）提取。通过HPLC提纯各种峰馏份，但注入的是100μl，不是20μl。做20次该操作以获得本试验用的足够材料。将在32，36，45和54分钟时洗脱的峰用于实施例10的鸡肝细胞试验。

HMG-CoA还原酶的分析结果列在下表Ⅶ中。

表Ⅶ

浓度 1 HMG-CoA 还原酶 (pmoles/min/mg 微粒体)

(μg/ml) P-32 P-36 P-45 P-54

1) 0.00 28.78 28.78 28.78 28.78

2) 10.00 24.67 23.78 22.61 25.46

3) 20.00 21.31 20.12 20.33 19.67

4) 30.00 18.36 17.24 19.67 20.11

5) 40.00 16.59 17.34 18.21 18.19

6) 50.00 16.61 15.21 18.40 18.20

¹饲喂期八周，禁食40小时后再喂48小时。按标准方法用两副肝10PM制备肝细胞。

试验证明，上述每种化合物均有抑制HMG-CoA还原酶活性的能力。特别值得注意的是，P₃₆降低活性最多，为47%。

实施例12

本发明测定了TRF以其成份对HMG-CoA还原酶和胆固醇7α-羟化酶肝酶活性的影响。每组12只鸡（六周龄白色来克亨母鸡），饲喂对照日粮，或者是加了TRF，TRF的一种组份商品胆固醇抑制剂（Lovastatin或香叶醇）或商品抑制剂组合物的对照日粮、每只鸡消耗的饲料为11.19-11.60g，饲喂期为四周。宰杀（0800小时）前先禁食36小时，再喂48小时。

按实施例10所述制备TRF（第2项）。香叶醇是从Sigma化学公司购得的，Lovasttatin的商品牌号为LOVOCOR。

本试验所用的鸡日粮包括下列成份：

成份百分量

玉米（9.3%蛋白质） 61.5

大豆粉（44.0%蛋白质） 30.0

肉粉（50.0%蛋白质） 5.0

碳酸钙 0.5

磷酸二钙 1.0

苜蓿草（17%蛋白质） 1.0

矿物质混合物^a0.5

维生素混合物^b0.5

^a每公斤饲料含矿物质混合物：硫酸锌50mg，氯化钠2.0mg和二氧化锰50mg。

^b每公斤饲料含维生素混合物：V_A.2，000单位，V_D3200单位，V_E10单位，核黄素3.6mg，V_B120.01mg，

V_K10.50mg。

结果列在表Ⅷ中，括号内是升降百分率。

表Ⅷ

HMG-CoA

还原酶 2 胆固醇7α-羟化酶³

营养状态 1 pmole/min./mg nmole/min./mg

1)对照日粮(CD) 513.26±15.07^A10.22±0.25^A

(100.00)⁴(100.00)⁴

2)CD+TRF-RBO;50ppm 441.14±7.28^B10.80+0.18^A

(85.95)⁴(105.00)⁴

3)CD+α-T₃;50ppm 459.02±1505^B10.69+0.20^A

(89.43)⁴(104.60)⁴

4)CD+γ-T₃;50ppm 401.99±5.84^C10.97±0.17^A

(78.32)⁴(107.34)⁴

5)CD+δ-T₃;50ppm 389.22±8.54^C10.98±0.16^A

(75.83)⁴(107.44)⁴

6)CD+P-21-T₃;50ppm 373.78±7.99^D11.49±0.20^B

(72.83)⁴(112.43)⁴

7)CD+P-25-T₃;50ppm 366.10±6.66^D11.39±0.26^B

(71.33)⁴(111.45)⁴

8)CD+香叶醇;100ppm 449.89±12.82^B10.28±0.27^A

(87.65)⁴(100.59)⁴

9)CD+Lovastatin;100ppm 527.11±13.93^A11.34±0.31^B

(102.69)⁴(110.96)⁴

10)CD+香叶醇+Lovastatin 442.48±1.64^B11.24±0.17^B

50ppm+50ppm (86.21)⁴(109.98)⁴

¹饲喂期4周，宰杀时间0800小时，在饲喂期（28天）结束时，先禁食36小时，再喂48小时，然后宰杀。数据表达：平均值±SD，n＝12只鸡/组。

²形成的HMG-CoA pmoles数/min/mg微粒体蛋白。

³[¹⁴C]-胆固醇转化成[¹⁴C]7-α-羟基胆固醇的nmoles数/min/mg微粒体蛋白。

⁴括号内是提高的百分率。

^A-D当P＜0.01时，不是同一右上角字母标记的值是不同的。

P₂₅是最好的HMG-CoA还原酶抑制剂，其将该酶的酶活性降低了大约28%，而两倍量的商品降胆固醇药剂最多也不过就降低约13%。这些数据说明生育三烯酚中的稠氧杂环较之单环体系如香叶醇提高了生物活性。

发明人相信三环体系可以提供其它活性。另外，增加的取代基如羰基、羟基和烷基也可以加强类生育三烯酚的生物活性。

实施例13

发明人研究了TRF及其组分对总血清胆固醇含量，HDL-胆固醇/总胆固醇比值和HDL-胆固醇/LDL-胆固醇比值的影响。饲喂条件同实施例12。

试样按实施例12所述制备。

结果在下表Ⅸ中列出，括号内是升降百分率。

表Ⅸ

¹饲喂期4周，宰杀时间0800小时。数据表达：平均值±SD，n＝12只鸡/组。

²括号内是升降百分率。

^A-f当P＜0.01时，不是同一右上角字母标记的值是不同的。

P₂₁和P₂₅降低血清胆固醇含量的程度确实大于任何其它受试化合物，包括Louastatin和香叶醇。P₂₅能降低约33%，而香叶醇是14%，Louastatin只有10%。在提高HDL-/LDL-胆固醇比值方面P₂₁和P₂₅也显然比其它化合物更好。这两种化合物能使HDL-/LDL-胆固醇之比值提高100%，而Louastatin和香叶醇最多只能将比值提高31.5%。

实施例14

发明人测定了TRF及其组分对血清apo-脂蛋白（α）₁、apo-脂蛋白B、三酸甘油酯和葡萄糖及血浆中血栓烷B₂和血小板因子4含量的影响。饲喂条件同实施例12。

试样按实施例12所述制备。

结果在表Ⅹ中给出，括号内是升降百分率。

表Ⅹ

¹饲喂期4周，取血时间0800小时。数据表达：平均值±SD，n＝12只鸡/组。

²括号内是升降百分率。

³当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

P₂₁和P₂₅是最有效的胆固醇抑制剂。它们能使ApoA₁/ApoB之比值达到最高，并使血清中三酸甘油酯和葡萄糖含量最大限度地下降。另外，它们还能比其它受试化合物更大程度地降低血浆中血栓烷B₂和血小板因子4的含量。

实施例15

发明人测定了米糠中各种生育三烯酚对血胆固醇过多的猪中HMG-CoA还原酶和胆固醇7α-羟化酶的影响。因为猪的胆固醇代谢与人类非常相似，故它们能为研究血胆固醇过多症及其有关疾病提供有用的模型。本研究所用的猪载有与apo-脂蛋白B和U有关的Lpd⁵和Lpu¹突变基因。由于这些基因缺陷，证明这些猪会自发升高LDL-胆固醇，并使血胆固醇过多。这些猪的血清胆固醇浓度一般超过300-500mg/dl，而正常成猪是120-160mg/dl。结果是这些猪患上复杂的动脉粥样硬化斑，其极为类似于在人体发现的动脉粥样硬化病变。

按每组3只5月龄猪饲喂对照日粮或添加有50ppm TRF或50ppm单一种生育三烯酚的对照日粮。试样按实施例11所述制备。禁食12小时后，在从饲喂期开始算起的0时，第21天和第42天取血清和血浆试样。在第42天取完血清和血浆试样后，所有的猪再禁食总共40小时，尔后再喂48小时。此时，取每组一只猪宰杀，取出肝、肠、肺、心、腰肌、脂肪组织和腿肌。

猪日粮含有下述成份：

成份百分率

玉米（9.3%蛋白质） 78.37

大豆粉（44.0%蛋白质） 15.42

猪油 3.00

碳酸钙 0.95

磷酸二钙 0.96

矿物质混合物^a0.30

维生素混合物^b1.00

^a每Kg饲料含矿物质混合物：ZnSO₄·H₂O110mg，Mn（SO₄）₂·5H₂O，70mg，柠檬酸铁·H₂O 500.0mg，CuSO₄·5H₂O 16.0mg，亚硒酸钠0.2mg，DL-蛋氨酸2.5g，氯化胆碱（50%）1.5g，乙氧喹（1，2-二氢-6-乙氧基-2，2，4-三甲基喹啉）125mg和硫胺素-HCl 1.8mg。^b每Kg饲料含维生素混合物：V_A1，500单位，V_D3400单位，V_E10单位，核黄素3.6mg，泛酸钙10.0mg，烟酸25.0mg，盐酸吡哆醇3.0mg，叶酸0.55mg，生物素0.15mg，V_B120.01mg和V_K10.55mg。

全部组的体重增长与对照组相同，但由于加了P₂₁和P₂₅，饲料有效转化率分别提高7%和10%。

本研究结果列在下表Ⅺ中，括号内是升降低百分率。

表Ⅺ

HMG-CoA 还原酶 2pg/min/mg 微粒体

试验日粮饲养期对照活性

百分率

营养状态 1 0 21天 42天

血胆固醇过多的猪 355.49 374.14 391.38

±8.44 ±13.35 ±15.75

(100.00) (105.25) (110.09) 100.00^A

2)对照日粮(CD)

3)CD+TRF RB-油;50ppm 348.92 300.72 285.13

±10.82 ±10.53 ±15.58

(100.00) (86.19) (81.72) 74.23^A

4)CD+γ-T₃;50ppm 347.99 300.72 280.88

±16.29 ±10.53 ±12.81

(100.00) (86.19) (80.71) 73.31^B

5)CD+P-21-T₃; 340.36 304.23 275.75

50ppm ±23.55 ±23.13 ±12.76

(100.00) (89.38) (81.02) 73.59^B

6)CD+P-25-T₃; 350.86 307.27 269.43

50ppm ±23.79 ±23.36 ±13.23

(100.00) (87.58) (76.79) 69.75^B

¹用玉米-大豆粉对照日粮或试验日粮饲喂5月龄猪42天，然后所有的组均禁食40小时，再喂48天。宰杀时间是9：00a.m.，全部组织放在冰中保存。TRF＝富含生育三烯酚的部分。

²数据表达：平均值±SD，n＝6个试样，每组3只猪。

^A-B当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

表ⅪA

胆固醇7α-羟化酶 2pg/min/mg微粒体

试验日粮饲养期对照活性

百分率

营养状态 1 0-Time 21天 42天

血胆固醇过多的猪 4.88 5.00 5.07

±0.75 ±0.60 ±0.61

(100.00)^A(102.46)³(103.89)³100.00^A

2)Con对照日粮(CD)

3)CD+TRF RB-油;50ppm 4.58 4.96 5.02

±0.10 ±0.13 ±0.11

(100.00) (108.29) (109.61) 105.50^A

4)CD+γ-T₃;50ppm 4.49 4.53 4.58

±0.13 +0.12 +0.19

(100.00) (100.89) (102.00) 98.18^A

5)脱甲基-T₃; 4.53 4.50 4.63

(P-21);50ppm ±0.10 ±0.18 ±0.56

(100.00) (99.34) (102.21) 98.38^A

6)脱二甲基-T₃; 4.57 4.62 4.68

(P-25);50ppm ±0.19 ±0.19 ±0.18

(100.00) (101.09) (102.41) 98.58^A

¹用玉米-大豆粉对照日粮或试验日粮饲喂5月龄猪42天，然后所有组禁食40小时，再喂48天。宰杀时间是9：00a.m.，全部组织放在冰中保存。TRF＝富含生育三烯酚的部分。

²数据表达：平均值±SD，n＝6个试样，每组3只猪。

³相对于基线值而言的升降百分数。

^A-B当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

使用所有的受试生育三烯酚，HMG-CoA还原酶的肝酶活性均下降大约30%。另外，胆固醇7α-羟化酶的活性没有明显提高。这些结果与时间无关，并且表明胆固醇的生成总体在减少，胆固醇的生物合成没有增加。

实施例16

用实例16所述的猪做了另一试验。试验条件相同，但每组剩下的两头猪在42天的饲喂期后变为喂没有添加物的对照日粮。在此后的70天后，先禁食12小时，然后从这些猪上取血清和血浆试样。

试样的制备如同实施例12。

研究结果列在表Ⅻ-ⅩⅤ中，括号内是升降百分数。

表Ⅻ

血清总胆固醇浓度 (mg/100ml)²

试验日粮饲养期对照活性对照日粮饲养期对照活性

百分数百分数

营养状态 1 0 21天 42天 70天

正常血脂猪

1)对照日粮(CD) 116.53 131.83 142.50 147.20

±5.64 ±6.64 ±2.75 ±4.45

(100.00)³(113.13)³(122.29)³-- (126.32)³--

血胆固醇过多的猪

228.63 251.07 356.87 374.36

2)对照日粮(CD) ±21.89 ±16.82 ±8.69 ±13.50

(100.00) (110.02) (156.79) 100.00^A(164.60) 100.00^A

3)CD+TRF RD-油; 206.43 222.00 243.03 285.77

50ppm ±18.45 ±15.75 ±12.28 ±14.00

(100.00) (107.39) (117.72) 75.00^B(139.16) 84.60^B

4)CD+γT₃;50ppm 209.73 225.20 233.93 271.70

±8.50 ±8.36 ±5.35 ±6.84

(100.00) (107.39) (111.76) 71.00^B(129.66) 78.80^B

5)CD+P-21-T₃; 220.50 236.40 238.17 276.23

50ppm ±16.54 ±18.17 ±14.29 ±15.93

(100.00) (107.20) (108.20) 68.90^B(125.39) 76.20^B

6)CD+P-25-T₃; 216.20 229.90 237.64 268.90

50ppm ±12.50 ±13.97 ±12.15 ±11.41

(100.00) (106.33) (107.60) 68.60^B(124.45) 75.60^B

¹饲喂期六周，取血时间是0.009小时，取血前先禁食12小时。TRF＝富含生育三烯酚的部分。

²数据表达：平均值±SD，n＝6个试样，每组3头猪。

³相对于基线值的升降百分数。

^A-B当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

表ⅩⅢ

血清中HDL-胆固醇浓度 (mg/100ml)²

试验日粮饲养期对照活性对照日粮饲养期对照活性

百分数百分数

营养状态 1 0 21天 42天 70天

正常血脂猪

1)对照日粮(CD) 20.76 23.63 26.41 29.78

±0.67 ±0.62 ±1.67 ±1.43

(100.00)³(113.82)³(136.85)³-- (143.45)³--

血胆固醇过多的猪

24.04 25.82 28.27 31.42

2)对照日粮iet(CD) ±1.53 ±0.86 ±0.69 ±1.67

(100.00) (107.40) (117.59) 100.00^A(130.69) 100.00^A

3)CD+TRF RD-油; 23.36 25.14 26.50 30.19

50ppm ±1.35 ±1.49 ±1.84 ±1.21

(100.00) (107.62) (113.44) 96.47^A(129.24) 98.89^A

4)CD+γT₃;50ppm 21.86 25.27 28.55 30.47

±1.67 ±1.62 ±1.62 ±1.62

(100.00) (115.59) (130.60) 111.06^B(139.39) 106.66^A

5)CD+P-21-T₃; 22.95 26.23 30.74 31.15

50ppm ±1.73 ±0.89 ±1.13 ±1.73

(100.00) (114.29) (133.94) 113.90^B(135.72) 103.80^A

6)CD+P-25-T₃; 21.86 25.68 31.81 32.65

50ppm ±0.99 ±1.67 ±1.75 ±1.09

(100.00) (117.47) (145.52) 123.75^B(149.36) 114.29^A

¹饲喂期六周，禁食12小时后，取血时间为0.009小时。

²数据表达：平均值±SD，n＝6个试样，每组3头猪，TRF＝富含生育三烯酚的部分。

³相对于基线值升降的百分数。

^A-B当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

表ⅩⅣ

血清中LDL-胆固醇浓度 (mg/100ml)²

试验日粮饲养期对照活性对照日粮饲养期对照活性

百分数百分数

营养状态¹0 21天 42天 70天

正常血脂猪

1)对照日粮(CD) 92.84 107.31 110.88 115.70

±1.01 ±1.22 ±9.66 ±11.69

(100.00)³(115.58)³(119.43)³-- (124.62)³

血胆固醇过多的猪

192.84 216.39 319.39 274.11

2)对照日粮(CD) ±11.89 ±13.46 ±6.02 ±13.55

(100.00) (112.21) (164.07) 100.00^A(142.14) 100.00^A

3)CD+TRF RD-油; 177.28 187.15 209.09 267.08

50ppm ±10.97 ±13.49 ±11.86 ±7.7

(100.00) (105.57) (117.94) 71.88^B(150.65) 105.99^A

4)CD+γT₃;50ppm 178.37 185.12 193.80 224.66

±6.32 ±6.63 ±2.70 ±3.71

(100.00) (103.78) (108.65) 66.22^C(125.95) 88.61^B

5)CD+P-21-T₃; 182.09 194.17 198.76 227.82

50ppm ±14.03 ±11.74 ±9.57 ±11.33

(100.00) (106.63) (109.15) 66.53^C(125.11) 88.02^B

6)CD+P-25-T₃; 182.37 191.05 198.01 233.75

50ppm ±11.92 ±8.78 ±6.04 ±7.49

(100.00) (104.76) (107.48) 65.51^C(128.17) 90.17^B

¹饲喂期六周，取血时间为0.009小时。

³相对于基准线值的升降百分数。

^A-C当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

表ⅩⅤ

血清中HDL:LDL胆固醇浓度 (mg/100ml)²

试验日粮饲养期对照活性百分数对照日粮饲养期对照活性

营养状态 1 0-Time 21天 42天 70天百分数

正常血脂猪

1)对照日粮(CD) 1:4.47 1:4.54 1:3.90 1:3.89

(100.00)³(101.57)³(87.25)³-- (87.02)³--

血胆固醇过多的猪

3)CD+TRF RD-油; 1:7.59 1:7.44 1:7.89 1:8.85

50ppm (100.00) (98.02) (103.95) 70.51^B101.41^A

4)CD+γ₃;50ppm 1:8.16 1:7.33 1:6.79 1:7.37

(100.00) (89.83) (82.84) 60.58^C84.52^B

5)CD+P-21-T₃; 1:7.93 1:7.40 1:6.47 1:7.31

50ppm (100.00) (93.32) (81.59) 57.82^C83.83^B

6)CD+P-25-T₃; 1:8.34 1:7.44 1:6.22 1:7.16

50ppm (100.00) (89.20) (74.58) 55.59^D82.06^B

¹饲喂期六周，取血时间为0.009小时，TRF＝富含生育三烯酚的部分。

²数据表达：平均值±SD，n＝6个试样，每组3头猪。

³相对于基线值的升降百分数。

^A-D当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

所有的受试生育三烯酚都能使总血清胆固醇含量和LDL-胆固醇含量分别下降约25%和10%。另外，添加了三种生育三烯酚后，HDL-/LDL-胆固醇比质下降了约20%。这些下降现象与时间无关，而且据观察，在用生育三烯酚饲喂42天后再过10周仍处于降低状况。这一结果说明生育三烯酚在血清中能存留相当一段时间。据信，生育三烯酚可以转移结合到LDL-和HDL-脂蛋白上，但尚无理论根据。另外，生育三烯酚也可以结合到其它蛋白质上。

实施例17

本实施例测定了实例15所述猪的血清apo-脂蛋白（α）₁、apo-脂蛋白B、三酸甘油酯、葡萄糖、胰岛素和胰高血糖素的含量以及血浆中血栓烷B₂和血小板因子4的含量。

试样的制备同实施例12。

研究结果列在下表ⅩⅥ和ⅩⅦ中，括号内是升降百分数。

表ⅩⅥ

血清中浓度 (mg/100ml)

营养状态 1 ApoA₁ApoB 三酸甘油酯

血胆固醇过多的猪 25.69±1.19 147.77±1.50 76.56±1.22

1)对照日粮(CD) (100.00)^A(100.00)^A(100.00)^A

3)CD+γ-T₃;50ppm 26.22±1.11 114.29±1.79 61.78±1.09

(102.06)^A(77.34)^C(80.69)^C

4)CD+P-21-T₃; 26.72±1.14 111.78±1.80 64.44±1.29

50ppm (104.01)^A(75.64)^C(84.17)^B

5)CD+P-25-T₃; 26.73±1.22 106.63±1.72 62.00±1.19

50ppm (104.05)^A(72.16)^D(80.98)^C

¹饲喂期六周，取血时间为0.009小时。

³相对于基线值的升降百分数。

^A-D当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

表ⅩⅦ

(mg/100ml) (μG/ML) (pg/ml) (pg/100ml)

(mg/100ml)

血胆固醇过多的猪

95.99 10.50 330.41 75.93 24.12

1)对照日粮(CD) ±1.37^A±0.12^A±14.08^A±1.45^A±1.75^A

(100.00) (100.00) (100.00) (100.00) (100.00)

2)CD+TRF RB-油; 74.45 23.10 295.36 64.55 20.32

50ppm ±1.03^B±1.08^B±10.45^B±1.28B ±1.70^B

(77.56) (112.68) (89.39) (95.23) (84.30)

3)CD+γ-T₃;50ppm 74.40 21.21 285.41 62.54 20.65

±1.12^B±0.89^B±13.88^B±1.39^B±1.15^B

(77.51) (103.46) (86.38) (92.25) (85.28)

4)CD+P-21-T₃; 72.63 21.45 278.36 60.48 19.85

50ppm ±1.58^B±0.87^B±16.42^B±1.46^B±1.27^B,C

(75.66) (104.63) (84.25) (87.66) (82.59)

5)CD+P-25-T₃; 71.89 20.89 274.41 57.03 19.15

50ppm ±1.89^B±1.79^B±12.32^B±1.95^B,C±1.45^B,C

(74.89) (101.90) (83.05) (83.02) (79.36)

¹用玉米-大豆粉对照日粮或试验日粮饲喂5月龄猪42天，然后所有的组均禁食40小时，再喂48天。宰杀时间是9：00a.m.。所有的组织保存在冰中。TRF＝富含生育三烯酚的部分。

²数据表达：平均值±SD，n＝6个试样，每组3头猪。

³相对于基准线的升降百分数。

^A-C当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

上述结果表明，所有的受试生育三烯酚能将apo-脂蛋白B、三酸甘油酯、葡萄糖、胰高血糖素和血小板因子4分别降低约30%、20%、25%、17%和21%。生育三烯酚对apo-脂蛋白（α）₁和胰岛素含量没有甚么影响。

实施例18

发明人还测定了生育三烯酚对血胆固醇过多的猪的其它组织中的总胆固醇、三酸甘油酯和葡萄糖浓度的影响。

试样按实施例12所述制备。

这些研究结果列在下表ⅩⅧ-ⅩⅩ中，括号内是升降百分数。

表ⅩⅦ

总胆固醇浓度（mg/100gm）²

¹用玉米-大豆粉对照日粮和试验日粮饲喂5月龄猪42天，然后所有的组禁食40小时，再喂48天。宰杀时间是9：00a.m.。所有的组织保存在冰中。TRF＝富含生育三烯酚的部分。

²数据表达：平均值±SD，n＝6个试样，每组3头猪。

^A-E当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

括号内是对照活性百分数。

表ⅩⅨ

总三酸甘油酯浓度（mg/100gm）²

¹用玉米-大豆粉对照日粮和试验日粮饲喂五月龄猪42天，然后所有的组禁食40小时，再喂48天。宰杀时间是9：00a.m.。全部组织存放在冰中。TRF＝富含生育三烯酚的部分。

²数据表达：平均值±SD，n＝4个分析样品/组。

^A-D当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

括号内是对照活性百分数。

表ⅩⅩ

总葡萄糖浓度（mg/100gm）²

¹用玉米-大豆粉对照日粮或试验日粮饲喂五月龄猪42天，然后所有组禁食40小时，再喂48天。宰杀时间是9：00a.m.。全部组织保存在冰中。TRF＝富含生育三烯酚的部分。

²数据表达：平均值±SD，n＝4个分析样品/组。

³括号内是对照活性百分数。

^A-D当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

在每一测试的组织中，发现总血清胆固醇是在下降的。特别值得注意的是，在肝脏和腿肌中，由于P₂₅，总胆固醇浓度分别下降了37%和30%。总的三酸甘油脂和葡萄糖浓度影响不大。

实施例19

发明人测定了米糠油中的不同生育三烯酚对血胆固醇过多猪的各组织的脂肪酸成份的影响。

评价脂肪酸含量，以其酯的测定的方法见K.Hirai等人所述的“日粮脂肪及植物固醇对鼠中血清脂肪酸成份和脂蛋白胆固醇的影响”（J.Nutr.Sci.Vitaminal.，30，P101-112，1984），但其中每一组织取1g与2ml盐水溶液混合，通过polytron均质30秒。均质后，用8ml己烷振荡提取试样20分钟，然后以2000rpm离心10min。在40℃下干燥己烷层，再用0.5ml重氮甲烷处理残留物，得到脂肪酸酯。

通过与标准脂肪酸酯混合物（由Sigma化学公司获得）比较来确定鉴别每种脂肪酸酯。

结果绘在图1-4中，该结果证明试验的生育三烯酚能够降低每一受试组织中总脂肪酸的浓度。可以看出下降最明显是在心脏（76%）、腰肌（81%）和腿肌（66%）中。下降幅度最大的是花生四烯酸。上述下降现象可能是由于皮质酮含量上升所致。皮质酮的上升会抑制磷脂酶A₂的活性，从而导致花生四烯酸代谢的下降。脂肪酸的全面下降是非常重要的，因为它说明这些生育三烯酚起免疫调节作用。

实施例20

发明人还测定了生育三烯酚对免疫功能的影响。用于该研究的模型是六周龄白色来克亨母鸡。每组12只鸡，饲喂不含添加物的鸡日粮或添加有50ppm生育三烯酚或100ppm商购血胆固醇过多药剂（香叶醇或Louastatin）的对照日粮。试样的制备如实施例11所述。如此饲喂鸡4周后取血样。将鸡腹腔洗涤三次后，腹腔注射0.5ml含5%羊红血球细胞（RBCs）的PBS悬浮液（V/V），由此测定抗体响应。用50μg血清和Witlin中所述的微血球凝集技术（“Detection of Antibodies by Microtitration Techniques”Mycopth.Mycol.Appl.，33，P241-257，1967）测定对RBCs的总抗体滴定度。用2-巯基乙醇预培养30分钟测定IgG相对含量。从总的抗体含量中减去IgG抗体含量即计算出IgM相对含量。所有的抗体含量表达为血球凝聚等体积0.5%RBC悬浮液所需的总滴定度的2的对数。本实施例的结果列在下表ⅩⅪ中。

表ⅩⅪ

血清的抗体滴定度（2的对数）

营养状态 1 总的抗体滴定度 IgG IgM

1)对照组(CD) 6.30±2.99^A1.40±0.55^A5.67±3.09^A

2)CD+TRF-RBO50ppm 8.75±1.66^A1.50±0.54^A7.75±1.55^A

3)CD+α-T₃50ppm 7.10±1.51^A1.00±0.00^A6.60±1.24^A

4)CD+γ-T₃50ppm 6.60±1.51^A1.28±0.49^A5.83±1.53^A

5)CD+δ-T₃50ppm 8.67±1.78^A1.00±0.00^A8.25±1.96^A

6)CD+P-21-T₃50ppm 8.67±1.92^A1.50±1.18^A7.17±2.04^A

7)CD+P-25-T₃50ppm 10.30+1.16^B2.43±1.40^A8.92±2.61^A

8)CD+香叶醇 5.60±2.11^A1.00±0.00^A5.42±2.02^A

9)Lovastatin100ppm 6.33+1.44^A1.00±0.00^A5.90±1.68^A

10)香叶醇+Lovastatin 7.17+2.04^A1.00±0.00^A6.83±1.99^A

50ppm+50ppm

¹饲喂期四周，取血时间为0800小时。数据表达：平均值±SD，n＝12只鸡/组。

^A-B当P＜0.01时，不是同一右上角字母标注的值是不同的。

与对照相比，各种生育三烯酚，特别是P₂₅能提高总的抗体滴定度和IgM滴定度，IgG含量也稍有提高。

实施例21

发明人测定了已知生育三烯酚、γ-T₃对人类未稍血嗜中性白血球中过氧化物释放的影响。嗜中性血球是一种自由氧基的胞外源，一旦激活，便可结合到内皮组织上，由此而释放一种烈性毒素-过氧化物。过氧化物能扩大炎症响应，消弱血液的区域循环。

试验用的嗜中性白血球是在Ficoll-Hypaque上通过密度梯度离心，采用常规的方法而分离出来的（见E.Serbinova等人的“Free Radical Recyeling and Interamembrane Mobitity in the Antioxidant Properties of α-Tocopherol and α-Tocotrienol”Free Rad.Bio.and Med.10，P263-75，1987）。将嗜中性白血球放入96-凹形板上，同时加入γ-T₃和佛波醇肉豆蔻酸酯乙酸酯（phorbol myrstate acetate）到凹板中。以能抑制亚铁细胞色素C还原的过氧化物歧化酶测定过氧化物阴离子分泌物。

本研究的结果列在图5中。

当γ-T₃浓度分别为10^-6和10^-5时，所释放的过氧化物的量由对照的19.7nmole（5×10⁵细胞/小时）下降到8.0和0nmole。

发明人描述了大量的本发明的实施方式，显然，可以改变本发明的基本构思来提供其它的利用本发明方法和产品的实施方式。因此，应注意，本发明的范围是由权利要求书限定的，而不是由实例方式给出的具体实施方式而限定的。

Claims

1、生育三烯酚或类生育三烯酚化合物用于提高食物转化率。

2、生育三烯酚或类生育三烯酚化合物用于降低血液中的脂蛋白（α）浓度。

3、生育三烯酚或类生育三烯酚化合物用于治疗或预防选自由免疫调节病、炎症、发热、水肿、糖尿病、疼痛、类风湿病、动脉粥样硬化症、败血性休克、慢性疲劳综合症和功能下降组成的疾病或节能失调。

4、一种结构式如下的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物及其盐类、其氧化产物和水解产物：

式中：

R₂选自OH、NHR₈、CO₂Y、C（R₈）₂CO₂H和由OH、NHR₈、CO₂H或C（R₈）CO₂H取代的C₁-C₆分支或不分支烷基;

R₄选自O、NH、CH-R₉、C＝O和CH-OH;

R₅选自CH₂、CHOH、O、S和NH;

R₆选自H和C₁-C₆分支或不分支烷基;

各个R₇独立地表示

其中R₁₀选自H、NH₂和C₁-C₆分支或不分支烷基;

R₈和R₉各自独立地选自H和C₁-C₆分支或不分支烷基;

各个R₁₁独立地选自H、C₁-C₆分支或不分支烷基、CH₂OH、CO₂H或OH;

Y为H或C₁-C₁₈分支或不分支烷基;

Z为卤素、OH、CH₂OH、CH₃、OCH₃或COCH₃;

n为0-4的一个整数;

m为1-30的一个整数。

5、根据权利要求4的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物，其特征是，R₁、R₃和Z各自独立地为H、卤素、OH、OCH₃或CH₃;R₂为OH、OCH₃或NH₂;R₄为C＝O、CH₂或NH;R₅为O、S、CH₂或NH;R₆为H或CH₃;R₁₀和R₁₁各自独立地为H或CH₃;n为0或1;m为3-10。

6、一种生育三烯酚，其分子式为3，4-二氢-2-（4，8，12-三甲基十三碳-3′（E），7′（E），11′-三烯基）-2H-1-苯并吡喃-6-酚。

7、结构式如下的生育三烯酚：

8、结构式如下的生育三烯酚：

9、权利要求4-8中任一项的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物或它们的混合物用作血胆固醇降低剂、抗血栓形成剂、抗氧化剂、抗动脉粥样硬化剂、抗炎剂或免疫调节剂。

10、权利要求5-8中任一项的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物或它们的混合物用于提高食物转化率。

11、权利要求4-8中任一项的生育三烯酚或类生育三烯酚或它们的混合物用于降低血液中的脂蛋白（α）浓度。

12、权利要求4-8中任一项的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物或它们的混合物用于防止食品的氧化降解。

13、权利要求9所述的应用，用于治疗或预防选自以下所列的疾病或机能失调：动脉粥样硬化、血胆固醇过高、血栓形成、皮内受伤、免疫调节疾病、动脉粥样硬化疾病、炎症、发热、水肿、糖尿病、肿瘤、老化症、疼痛、类风湿症、败血性休克、慢性疲劳综合症和功能下降。

14、TRF用于提高食物转化率。

15、TRF用于降低血液中脂蛋白（α）的浓度。

16、TRF用于治疗或预防选自下列的疾病或状态：免疫调节疾病、炎症、发热、水肿、肿瘤、老化症、糖尿病、疼痛、类风湿性炎症、败血性休克、慢性疲劳综合症和功能下降。

17、具有下列特性的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物：

（a）在下列条件下的HPLC洗脱时间大于约22分钟：20μl试样，μ-多孔微球硅胶柱（水柱，10μ，4mm×30cm），使用一种己烷和异丙醇（99.75%∶0.25%，V/V）的isocratic体系，流量为1.3ml/分;和

（b）能够抑制β-羟基-β-甲基戊二酰基辅酶A还原酶的合成。

18、根据权利要求17的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物，其中所述HPLC洗脱时间约为32、36、45或54分钟。

19、由生物源得到的权利要求4-8、17或18任一项所述的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物。

20、根据权利要求19的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物，其中生物源是稳定化的。

21、根据权利要求19或20的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物，其中生物源是一植物源。

22、根据权利要求21的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物，其中植物源选自燕麦、燕麦糠、燕麦糠油、大麦、大麦糠、大麦糠油、大米、米糠或米糠油。

23、根据权利要求22的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物，其中植物源为米糠或米糠油。

24、通过化学合成得到的权利要求4-8、17或18任一项所述的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物。

25、一种食品，含有权利要求4-8、17或18中任一项所述的生育三烯酚或类生育三烯酚或它们的混合物。

26、权利要求25所述的食品，还含有TRF、P₂₁、α-、β-、γ-或δ-生育三烯酚。

27、一种食品添加剂，含有权利要求4-8、17或18中任一项所述的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物或它们的混合物。

28、权利要求27所述的食品添加剂，还含有TRF、生育三烯酚、α-、β-、γ-或δ-生育三烯酚。

29、一种药物组合物，用于治疗或预防与血胆固醇过高有关的疾病、血栓形成疾病、动脉粥样化疾病、炎症、免疫失调、发热、水肿、糖尿病、肿瘤、老化症、疼痛、败血性休克、慢性疲劳综合症或功能下降，或者用于降低血液中的脂蛋白（α）浓度或提高食物转化率，特征在于含有权利要求4-8、17或18中任一项所述的生育三烯酚或类生育三烯酚化合物或它们的混合物和一种药物载体。

30、根据权利要求29的药物化合物，特征是还含有TRF、P₂₁、α-、β-、γ-或δ-生育三烯酚。

31、一种药物组合物，用于治疗或预防炎症、免疫调节疾病、发热、水肿、糖尿病、肿瘤、老化症、疼痛、类风湿病、败血性休克、慢性疲劳综合症或功能下降，用于降低血液中脂蛋白（α）的浓度或用于提高食物转化率，特征在于含有TRF、P₂₁、α-、β-、δ-或γ-生育三烯酚或它们的组合。

32、一种方法，用于治疗或预防与血胆固醇过高有关的疾病、血栓形成病、动脉粥样化病、炎症、免疫失调、发热、水肿、糖尿病、肿瘤、老化症、疼痛、败血性休克、慢性疲劳综合症或功能下降，降低血液中脂蛋白（α）浓度或提高病人的食物转化率，特征在于包括给病人服用药物有效量的权利要求29或30所述的药物组合物的步骤。

33、一种治疗或预防炎症、免疫调节症、发热、水肿、糖尿病、肿瘤、老化症、疼痛、败血性休克、慢性疲劳综合症和功能下降，降低血液中脂蛋白（α）浓度或提高病人的食物转化率的方法，特征是包括给病人服用药物有效量的权利要求31的药物组合物的步骤。

34、一种降低人或动物总的血清胆固醇和LDL-胆固醇的方法，特征在于包括给所述人或动物食用胆固醇降低有效量的权利要求25或26所述的食品的步骤。

35、一种降低人或动物总的血清胆固醇和LDL-胆固醇的方法，特征在于包括给所述人或动物食用胆固醇降低有效量的权利要求27或28所述的食品添加剂的步骤。

36、一种提高人或动物HDL/LDL胆固醇比的方法，特征在于包括给所述人或动物食用胆固醇降低有效量的权利要求25或26所述的食品的步骤。

37、一种降低人或动物HDL/LDL胆固醇比的方法，特征在于包括给所述人或动物食用胆固醇降低有效量的权利要求27或28所述的食品添加剂的步骤。

38、一种提高从生物源的富生育三烯酚馏份得到生育三烯酚和类生育三烯酚化合物产率的方法，包括下列步骤：

（a）将由生物源得到的富生育三烯酚馏份溶于一种溶剂中，

（b）使溶解的富生育三烯酚馏份与一种胺柱相接触，和

（c）用基本上不洗脱杂质的溶剂洗脱生育三烯酚。

39、一种提高从生物源所得生育三烯酚和类生育三烯酚化合物产率的方法，包括下列步骤：

（a）用一种有机溶剂萃取生物源，

（b）加热萃取的生物源，和

（c）萃取加热的生物源。

40、根据权利要求39的方法，其中通过微波加热完成加热步骤（b）。

41、根据权利要求38或39的方法，其中生物源为一植物源。

42、根据权利要求41的方法，其中植物源选自燕麦、花生、松果、燕麦糠、燕麦糠油、大麦、大麦糠、大麦糠油、大米、米糠或米糠油。

43、根据权利要求42的方法，其中植物源是米糠或米糠油。

44、根据权利要求38的方法，其中步骤（a）的溶剂是己烷。

45、根据权利要求38的方法，其中步骤（b）的胺柱是一种键洗脱（Bond Elute）胺或氧基柱。

46、根据权利要求38的方法，其中步骤（c）的溶剂是一种异丙醇在己烷中为0.5%-3%的梯度体系。

47、稳定化的生物源用于降低血液中脂蛋白（α）浓度、提高食物转化率或用于治疗或预防下列一或多种疾病或状态：免疫调节疾病、炎症、发热、水肿、糖尿病、肿瘤、老化症、疼痛、类风湿病、败血性休克、慢性疲劳综合症和功能下降。

48、根据权利要求47的应用，其中稳定化的生物源是稳定的米糠。