JPH07504887A - トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物ならびにこれらを使用する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物ならびにこれらを使用する方 法 ｌ吸旦挟■公■ 本発明は、生物学的な活性を示す新規なトコトリエノールおよびトコトリエノー ル様化合物に関する。本発明のトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合 物は、通常、生物供給源から、または化学合成により得られ得、薬学的組成物、 食物物質および食餌補足物中で使用され得る。本発明はまた、トコトリエノール 、トコトリエノール様化合物およびそれらの混合物の使用に関し、これらは低コ レスレロール血症薬・抗トロンビン剤・抗酸化剤・抗アテローム形成剤・抗炎症 剤および免疫調節剤、または血液中のりボタンバク質（ａ）濃度を減少し、ある いは飼料転換効率を増加するのに有用な薬剤として使用される。 及豆立背五 植物成分が、多種の疾患および症状の予防と治療に有用であることが証明された 。例えば、オオムギが、動物モデルで脂質のレベルを低下させるのに特に効果的 であることが示された（Ａ、Ａ、　Ｑｕｒｅｓｈｉら、「植物成分によるコレス テロール発生の抑制」、■紅鼓、２０．８１７頁から２４頁（１９８５）　）。 より詳細には、オオムギ抽出物から単離されたクロマノールであるα−トコトリ エノールが、高コレステロール血症の治療剤として同定された（Ａ、Ａ、　Ｑｕ ｒｅｓｈｌら、［オオムギから単離°されたコレステロール生合成阻害剤の構造 」、＝Ｘ鋤１２」ｉＩ工、２６１．１０５４４頁から５０頁（１９８Ｇ）　”） 。さらに、トコトリエノール、γ−トコトリエノールおよびδ−トコトリエノー ルはまた、は乳動物において、高コレステロール血症を減することが示された（ 欧州特許出願４２１．４１９）。 高コレステロール血症は、高い血清コレステロールレベルを含み、動脈硬化症、 アテローム硬化症、心臓血管疾患および黄色腫症を含む疾患の原因となる。さら に、高い血清コレステロールレベルは、真性糖尿病、家族性高コレステロール血 症、急性間欠性プロシリア（ａｃｕｔｅ　１ｎｔｅｒ＋５ｉｔｔｅｎｔ　ｐｒｏ ｔｈｙｒｉａ）、神経性食欲不振、ネフローゼ症候群、原発性肝硬変、および肝 炎ならびに閉塞性黄痘のような様々の肝臓疾患を包含する疾患かかった被検体に 見られる。リポタンパク質プロフィールの改善および全血清および低密度のりボ タンバク質コレステロールの減少は、上記疾患の進行を遅らせること、および高 コレステロール血症の被検体の臨床的に重大な障害の退行を誘起することが示さ れた。 高コレステロール血症およびその多くの関連した疾患との関係は、最も顕著には 、心臓血管疾患が詳しく研究されてきたが、この世界的な課題に対する明確な解 答は、未だに得られていない。その結果、冠状動脈疾患は、米国あるいは他の先 進国での、死亡の第一原因になっている。冠状動脈疾患は、リポタンパク質の代 謝、血小板の凝集、凝血および繊維素溶解を包含する非常に多くの異なる゛プロ セスの複雑な相互作用の結果である。従って、特定の被検体の心臓血管の危険プ ロフィールは、これらの相互作用に依存する。 コレステロールレベルを低下させることに加えて、被検体の心臓血管危険プロフ ィールもまた、血清および血液中の他の要素のレベルを低下させることで減少さ れ得る。例えば、血清中でのトロンボキサンＡ２生成（トロンボキサンＢ２、ト ロンボキサン＾２の安定な代謝物質のレベルで測定された）および血小板因子４ のレベルの減少は、トロンボゲン形成活性が減少するため、心臓血管疾患の危険 性を減少する。 トロンボキサンＡ２および血小板因子４のレベルはまた、他の生物学的活性にも 関係している。例えば、これらの因子の減少が、体組織中のマクロファージ細胞 数の減少、より低い腫瘍性壊死因子（ＴＮＦ）のレベル、およびより低いアラキ ドン酸レベルを伴う場合、プロスタグランジン、す二−コトリエンおよびインタ ーロイキン類の減少したレベルが連座する。従って、これらの因子の減少は、多 種の疾患を伴う炎症の減少に至る。さらに、プロスタグランジンは、グルコース で誘導されるインスリン放出を阻害し、そしてグルカゴンの分泌を増加するので 、増加したグルカゴンに対するインスリンの比が、プロスタグランジンを減少さ せることで起こり得る。このような増加は、真性糖尿病においてグルコース不耐 性を改善し、そしてインスリン非依存性真性糖尿病において急性のグルコース誘 導されるインスリン応答を回復するのに有用である。 大量の穀類を消費している集団では、心臓血管疾患の低い発生率が注目されてき た。可溶性および不溶性の繊維は、過去に、このような集団におけるコレステロ ールの減少の原因であると考えられてきた（Ｄ、　ｌ［ｒＨｃｈｅｖｓｋｙら、 「繊維、高コレステロール血症およびアテローム硬化症」、口紅ｂ、１３．３６ ６頁から６９頁（１９７１）参照）。最近、穀類の低コレステロール血性効果が 、トコトリエノール（ｒＴ３Ｊ）およびそれに構造的に類似の化合物であるトコ トフェロール類（ｒＴＪ　）のような穀粒の天然成分よることがわかった。トコ トリエノール類およびトコトフェロール類は、天然に、米糠（ｒｉｃｅ　ｂｒａ ｎ）、パーム油およびオオムギのような種々の植物供給源に小量存在する（　Ａ 、　Ａ、　Ｑｕｒｅｓｈｉら、　「トコトリエノール（Ｐａｌｍｖｉｔｅｅ）に よる、高コレステロール血症のヒトにおける血清コレステロールの低下」、　組 Ｊ、、ｔ、、ｓ３．１０２１Ｓ頁から６８頁（１９９１））。 クラスとして、トコフェロール類は、ｄ−α−トコフェロール（ビタミンＥ）を 含み詳細に研究された。これらの研究の結果、特定の生物学的活性が、トコフェ ロールにあるとされた。 このような活性は、血小板凝集および抗酸化機能を包含しく例えば、Ｅ、　Ｎｊ ｋｉら、「トコフェロールによる生体膜の酸化の阻害Ｊ、　ｔ　ｗ　ｃａ　、Ｓ フ ０．２３頁から３１頁（１９８９）、およびに、　Ｆｕｋｕｚａｖａら、　「ビ タミンＥ欠損う・ノドの多形核白血球における増加した血小板活性化因子（ＰＡ Ｆ）合成」、Ａｎ　ａｌｓ　ｏｆ　ｔ　ｅ　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　Ａｃａｄｅｍ　 。 −社工凹犯」、５７０．４４９頁から４５３頁（１９１１９）を参照ノコと）。 正確な構造−機能関係は、知られていないが、いくっがの実験が、トコフェロー ル類の生物学的活性におけるフィチル（Ｐｈｙｔｙｌ）側鎖の重要性を際だたせ た（Ｌ＾、　５ｋｉｎｎｅｒら、「α−トコフェロール誘導体の抗酸化特性およ び抗酸化活性の生物学的活性に対する関係」、■ｐＭｓ、５（２）、１８４頁か ら１８６頁（１９６９）、およびＡ、　Ｔ、　Ｄｉｐｌｏｃｋ、ｒ　）コフェロ ール構造の、生物学的活性、組織取り込みおよびプロスタグランジン生合成に対 する関係」、Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　ｔ　ｅ　Ｎｅｗ　Ｙｏ　Ａｃａｄｅｍ　ｏ　 Ｓｃ’ｅ駁且、５７０．７３頁から８４頁（１９８９）を参照のこと）。 トコフェロール類と対照的に、トコトリエノールへの興味は限定されていた。な ぜなら、これらの化合物が生物学的に有用であると、典型的には考えられていな かったからである。 しかしながら、最近、研究によりトコトリエノール類が生物学的に活性であり得 ることが示された。例えば、米国特許第４、６０３．１４２号は、オオムギ抽出 物から単離されたｄ−α−トコトリエノールを、コレステロールの生合成の阻害 剤として同定した。Ａ、　Ａ、　Ｑｕｒｅｓｈｉら（１９８６）、！起も参照の こと。種々のヒトおよび動物の研究が、オオムギ、エンバクおよびパーム油から 単離された純粋なトコトリエノールの、コレステロール生合成、特にＬＤＬ−コ レステロール（Ａ、　Ａ、　Ｑｕｒｅｓｈｌら、「食餌用トコトリエノールが、 遺伝性高脂肪血症のブタの血漿コレステロール、アポリポタンパク質Ｂ、）ロン ホキサンＢ２および血小板因子４の濃度を減少する」、　、　Ｊ、　Ｃ，１０４ ２Ｓ頁から４６Ｓ頁（１９９１）　；　Ａ、＾、　Ｑｕｒｅｓｈｉら、「高コレ ステロール血症のヒトにおけるトコトリエノール（Ｐａｌｍｎｉｔｅｅ）による 血清コレステロールの低下Ｊ、Ｊ、Ｃ、ｔ、５３．１０２１Ｓ頁から２６Ｓ頁（ １９９１）　；　Ｄ、　Ｔ、　Ｓ、　Ｔａｎら、［ヒトにおける血清およびリポ タンパク質脂質に関するパーム油ビタミンＥ濃縮物の効果。」、＾ｒｓ、Ｊ、ｃ 　、ｕｔ　、５３．１０２７Ｓ頁から３０Ｓ頁（１９９１）　）。さらに、トコ トリエノール、γ−およびδ−トコトリエノールは、高コレステロール血症、高 １１ｔｔＦＪａ症オよび血栓閉塞症疾患での使用が示唆された（欧州特許出願系 ４２１、４１９号）。 ５種の既知の天然に存在するトコトリエノール類が、トコトリエノール、α−１ β−１γ−およびδ−トコトリエノールと命名された。これらの化合物は、種々 の程度の高コレステロール活性を示し、そして抗トロンビン剤および抗酸化剤と しても使用された。α−Ｔ３は、例えば、ラット肝臓のミクロソーム膜において 脂質の過酸化、およびトクロームＰ　−４５０の酸化性損傷に対する抗酸化活性 を示す（Ｅ、　５ｅｒｂｉｎｏｖａ％江■」■’ｅａ　Ｂｉｏｌｏ　ａ　ｄ　Ｍ ｅｄ’ｃ’　、ｉｎ　ｐｒｅｓｓ　（１９９１）　）。これらの活性にかかわら ず、既知のトコトリエノール類は、広範囲の臨床的使用が見出されていなかった 。 従って、単一の薬剤として高コレステロール血症、抗トロンビン剤、抗酸化剤、 抗アテローム形成剤、抗炎症剤および免疫調節剤として、安全にそして効果的に 作用し得る化合物の必要性は、未だ存在する。 １吸亘！狛 本発明は、上記で言及したｍ１Ｍを、低コレステロール血症薬、抗トロンビン剤 、抗酸化剤、抗アテローム形成剤、抗炎症剤および免疫調節剤として有用な、新 規なトコトリエノール、トコトリエノール様化合物、およびその混合物を提供す ることにより解決する。これらの新規なトコトリエノール、トコトリエノール様 化合物はまた、血液中のりボタンバク質（ａ）　（ｒＬｐ（ａ）Ｊ　）濃度の減 少、飼料転換効率の増加において、および発熱、浮腫、真性糖尿病、癌、老化の 徴候、疼痛、リウマチ様疾患、敗血症シＮ　ツク、慢性疲労症候群および機能喪 失のような症状の治療と予防において有用である。 本発明の新規なトコトリエノール、トコトリエノール様化合物は、ＨＭＧ−Ｃｏ Ａレダクターゼの合成阻害、脂肪合成の減少およびＦＩＤＬ／ＬＤＬコレステロ ール比の増加、ならびに全血清コレスｆ　ｏ　−Ｊｋ、低密Ｗｅリポタンパク質 −コレスチロール、Ｌｐ（ａ）、アポリポタンパク質Ｂ１トロンボキサンＡ２、 血小板因子４、トリグリセリドおよびグルコースの低下において有用である。 そのような個々の活性のために、これらの化合物は、例えば、リポタンパク質代 謝、血液血小板の凝集、血液凝固および線維素溶解などのプロセスの相互作用の 結果である冠状動脈疾患などの疾患の治療に有用である。従って、本発明の化合 物は、被検体の心臓血管の全体のプロファイルを改善するのに有用である。 本発明はまた、既知のトコトリエノールの、抗炎症剤および免疫調節剤としての 新規な使用を提供し、血液中のＬｐ（ａ）濃度を減少し、飼料転換効率を増加し 、そして発熱、浮腫、真性糖尿病、疼痛、敗血症シしツク、慢性疲労症候群およ び機能喪失のような症状の治療また予防のための新規な使用を提供する。 トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、有利に血清ＴＮＦおよび ＩＬ−ルベルを減少する。これらの活性は、リウマチ様疾患に伴うような、活性 な慢性の炎症を減少することにおいて化合物に有用性を与える。また、そのよう な活性は、自己免疫疾患のような免疫調節疾患の重篤度を治療、予防または軽減 することにおいて、そして疼痛、敗血症シ璽・ツク、慢性疲労症候群、機能喪失 および酸化的症状の予防または治療において、化合物に有用性を与える。 トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物の脂肪代謝に関する作用はま た、抗体産生の制御に影響する。それ故、これらの化合物は、脂肪酸レベルの調 整を通じて免疫機能を調節するのに有用である。 トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物はまた、インスリンおよびグ ルカゴンのレベルを仲介することにより、グルコースレベルを減少する。血液中 のグルカゴンに対するインスリンの比を増加することにより、これらの化合物は 、真性糖尿病におけるグルコース非耐性を増加するのに、そしてインスリン非依 存真性糖尿病被検体における急性のグルコースで誘導されたインスリン反応を回 復するのに有用である。 本発明の新規なトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、特定の構 造的特徴と特定の生物学的活性とで特徴付けられ、あるいは、特定の高速液体ク ロマトグラフィー（°肝ＬＣ−）溶出プロファイルと特定の生物学的活性で特徴 付けられる。より特定すれば、本発明の化合物は、３つの構造的特徴で特徴付け られる＝（１）方向族環系に結合した水素供与基（または水素供与基に加水分解 し得る基）、（２）少なくともひとつの孤立電子対を有する原子であって、この 電子は、芳香族系と結合しており、そして（３）前記の原子に隣接する位置に結 合したひとつまたはそれ以上のイソプレメイドまたはインプレノイド様単位を含 む側鎖。本発明はまた、そのような化合物から得られた加水分解および酸化生成 物を包含する。さらに、上記の構造的特徴を有する本発明の化合物はまた、β− ヒドロキシ−β−メチルグリタリルコエンザイムＡ　（Ｉ（ＭＧ−ＣｏＡ）レダ クターゼの活性を阻害する能力により特徴付けられる。 さらに、これらの化合物は、以下の疾患または症状のひとつまたはそれ以上の治 療または予防において有用である：高コレステロール血症、血栓症、酸化症状、 炎症または免疫調節疾患、あるいは、飼料転換効率の増加。 別の実施態様によれば、本発明の新規なトコトリエノールおよびトコトリエノー ル様化合物は、以下のＨＰＬＣ条件下、少なくとも約２２分の溶出時間によって 特徴付けられる：ヘキサンおよびイソブａ　ハフ　−１ル（９９，７５％：０． ２５Ｘ、Ｖ／Ｖ）　１７）均一系（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ　ｓｙｓｔｅｍ）を、流 速１．３ｍｌ／分で用いるｐ−Ｐｏｒａｓｉｌカラム（ウォーターズカラム、１ ０μ、４　ｕ＋　Ｘ　３０　ｃ＋＊）。特定の化合物は、２９５ｎｍの励起波長 および３３０ｒｖの連光波長（蛍光検出器）、そして２９５ｎｍのＵＶ吸収で検 出される。上記で規定された溶出プロファイルに加えて、本発明の新規なトコト リエノールは、またＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの活性を阻害する能力により特 徴付けられる。 本発明によれば、トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、通常、 生物供給源から得られ得る。あるいは、それらは、従来の化学的方法論を用いて 合成され得る。本発明の好適な実施態様において、トコトリエノールおよびトコ トリエノール様化合物は、安定化された生物供給源から単離されそして精製され る。本発明はまた、そのような化合物を精製するのに用いられる手法を包含する 。 本発明の好適な実施態様において、トコトリエノール、トコトリエノール様化合 物およびそれらの混合物は、薬学的組成物、食物物質または食餌補足物として、 動物またはヒトに投与され得、高コレステロール血症、血栓症、酸化的またはア テローム発生性症状、炎症または免疫調節疾患を治療または予防する。これらの 組成物、食物物質そして食餌補足物はまた、有利に、飼料転換効率を増加するの に、血液中のＬｐ（ａ）濃度を減少するのに使用され得、発熱、浮腫、真性糖尿 病、癌、老化の徴候、疼痛、リウマチ様疾患、敗血症シボツク、慢性疲労症候群 および機能喪失の治療または予防に使用され得る。 図ｍり１咀 図１から４は、高コレステロール血症のブタの種々の組織における、脂肪酸濃度 に対する米糠油由来の異なるトコトリエノールの効果を示す。 図５は、ヒトの末梢血好中球のスーパーオキサイドの生成へのＧＴ３０１（γ− Ｔ３）の効果を示す。 １監東１鳳凰五里 本明細書に記載の発明をさらに十分に理解し得るために、以下に詳細な説明を記 載する。この説明には、以下の用語を使用する。 ！ｈ主煎主亜盈−あらゆる天然または組換え植物供給源、天然または遺伝子導入 動物供給源、微生物供給源（例えば、細！り、菌類、酵母、藻類、高等植物供給 源、あるいはそれらの誘導体であり、これらは、１種以上のトコフェロール、ト コトリエノール、またはトコトリエノール様化合物を包含する。 Ｕ北−生物学的供給源中のトコフェロール、トコトリエノール、またはトコトリ エノール様化合物の回収し得る量を増加するのに有効なプロセスであり、以下の 工程の一種または組み合せによる： （１）トコトリエノールまたはトコトリエノール様化合物を分解し得る酵素を、 その生物学的供給源中で不活性化する工程、（２）結合を切断または相互作用を 妨害する工程−一この結合または相互作用は、例えば、水素結合、共有結合、イ オン結合、ファンデルワールス力、ロンドン力、およヒ、疎水性または親水性相 互作用であり、これらは、生物学的供給源中で、所望の生成物をタンパク質、糖 、脂質、炭化水素、糖タンパク質、他の生物学的分子（すなわち、アミノ酸また は核酸）、または、他の膜成分、あるいは、それらの組み合せでありｍ−これら は、トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物をその生物学的供給源中 に保持するものであり、これにより所望の化合物の放出を容易にする工程、また は、（３）安定化する前よりも、または、対応する非安定化生物学的供給源のト コトリエノールの溶解性のレベルよりも、生物学的供給源のトコトリエノールお よびトコトリエノール様化合物の溶解性を高める工程。安定化の結果として、生 物学的供給源中のトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物を、対応す る非安定化生物学的供給源で認められるよりも高収率で回収し得る。 トコール　Ｏｃｏ　−トコフェロール（Ｔ）、トコトリエノール（Ｔ３）、およ びトコトリエノール様（Ｔ３様）化合物から選択される一種以上の混合物。 トコトリエノール　−生物学的供給源に含まれるかまたは誘導される、生物学的 に活性なあらゆる化合物であって、（１）これは、放出されるか、または、その 放出が供給源を安定化することにより容易になされ、あるいは（２）その供給源 での回収し得る量が供給源を安定化することにより増加する。このようなトコト リエノール様化合物は、ＨＭＯ−Ｃｏ＾レダクターゼ活性を阻害するトコトリエ ノールの生物学的活性を示す、生物学的に活性なあらゆる化合物を含む。ＨＭＧ −Ｃｏ＾活性は、例えば、ひ、Ｊ、　５ｈａｐｉｒｏら、「ラット肝およびＬ− 細胞線維芽細胞におけるβ−ヒドロキシ−β−メチルグルタリル−ＣｏＡレダク ターゼに対するマイクロアッセイ」、Ｃｈ■　Ｂｉｏ　ｈ　ｓ、ｅｔａ、　３７ ０．ｐ、　３６９　（１９７４＞に記載されるような、インビトロ■ＭＧ−Ｃｏ Ａレダクターゼアッセイにより測定する。トコトリエノール様化合物は、限定さ れないが、あらゆる電子転移環状化合物、抗酸化型化合物、酸化還元化合物、お よび、本発明のトコトリエノールを特徴づける３つの構造上の特徴を含むまたは 類似する化合物を含む。Ｔ２様化合物の好ましい例は、ユビキノン、プラストキ ノン、インキノン、フィロキノン、ベンゾキノン、フラバノール、フラバノイド 、クマリン、不飽和テルペノイド、および、不飽和インプレノイドである。用ａ Ｍ　ｒ　Ｔ３様化合物」はまた、プレニル化誘導体または熱分解誘導体などの、 このような化合物のアナログ、ホモログ、異性体、および、誘導体を含む。 好ましいトコトリエノール様化合物は、以下の構造式を有する。および、その塩 、その酸化生成物ならびにその加水分解生成物である： Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立して、Ｈ，ハロゲン、０８％ＯＣＨ３、および 、Ｃ＋−Ｃｓの分枝したまたは分枝していないアルキルからなる群から選択され ； Ｒ２は、ＯＨ，ＮＨＲｅ、　Ｃ０２Ｙ、Ｃ（Ｒ１）２ＣＯ２Ｈ，および、ＯＲ， ＮＨＲｓ。 Ｃ０２Ｈ５またはＣ（Ｒｅ）２ｃＯ２Ｈｒ置換されたＣ＋−Ｃｓの分枝したまた は分枝していないアルキルからなる群から選択され；Ｒ４は、０、ＮＨ，（Ｊ− Ｒ９、Ｃ＝Ｏ，および、ＣトＯＨからなる群から選択され； Ｒ５は、ＣＨ２、ＣｌｌＯＲ，０１Ｓ１　および、Ｎｉｌからなる群から選択さ れ； Ｒ６は、Ｈｌおよび、Ｃｌ−Ｃ６の分枝したまたは分枝していないアルキルから なる群から選択され； Ｒ７は、それぞれ独立して、以下の式で示され；ここで、Ｒ＋ｓは、Ｈ，ＮＨ２ 、および、Ｃｌ−Ｃａの分枝したまたは分枝していないアルキルからなる群から 選択され；ＲｅおよびＲ９は、それぞれ独立して、Ｈｌ　および、Ｃｌ−Ｃａの 分枝したまたは分枝していないアルキルからなる群から選択され； Ｒ目は、それぞれ独立して、ＮＳＣｌ−Ｃｓの分枝したまたは分枝していないア ルキル、ＣＨ２０）１．　Ｃ０２Ｈ，または、ＯＨからなる群から選択され； Ｙは、Ｈｌまたは、Ｃｌ−Ｃｌｓの分枝したまたは分枝していないアルキル、好 ましくはＣｌ−Ｃａアルキルであり；２は、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ，Ｃｌ２０Ｈ１ ＣＨ３、ＯＣＨ３、マタハ、ＣＯＣＨ３であり； １は、０〜４の整数であり；そして ■は、１〜３０の整数、より好ましくは１〜２０．または、最も好ましくは３〜 １０である。 ■−生物学的供給源の安定化および抽出により得られるトコトリエノールリッチ の画分である。典型的には、種々の量の５種の既知のトコトリエノール、既知の トコフェロール、および、本発明の新規なトコトリエノールおよびトコトリエノ ール様化合物を含む。最も通常では、ＴＲＦは、約５０％〜約９０％のトコトリ エノールおよびトコトリエノール様化合物からなｌる。ＴＲＦは、既知のトコト リエノール、または、本発明の新規なトコトリエノールおよびトコトリエノール 様化合物のいずれについても、本明細書中に記載のあらゆる用途に使用され得る 。 ■ＬＬＬ乙Ｌユ上しパーム油から得られるトコトリエノールリッチの画分（ＴＲ Ｆ）である（Ａ、Ａ、　Ｑｕｒｅｓｈｉら、（１９９１）、前述）。ＴＲＦスタ ンダードは、種々の量のα−１γ−１およびδ−トコトリエノール、および、α −トコフェロールを含むが、本質的には本発明の新規なトコトリエノールおよび トコトリエノール様化合物を含まない。 ｎｈａｎｃｅｄ　−安定化した生物学的供給源の状態であって、ここで、本発明 の新規なトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物の回収し得る量は、 安定化する前の生物学的供給源から回収し得る量よりも増加している。 ＦｏｏｃｌｓＬｕｆｆ　−動物またはヒトに対する食物として用いられ得るかま たは用いるためにｒＡ製され得る物質である。食物物質は、食物のｗ４製に用い られ得る物質（フライ用油）または食品添加物を含む。例えば、食物物質は、ヒ トの摂取に用いられる動物、または、それらからのあらゆる生産物（例えば卵な ど）を含む。このような動物自体は、一種以上のトコトリエノールまたはトコト リエノール様化合物、またはそれらを含む食物物質を、摂取し得るかあるいはそ れらで処理され得る。本明細書に記載のように、トコトリエノールまたはトコト リエノール様化合物を摂取し、あるいは投与された後、このような動物は、トコ トリエノールおよびトコトリエノール様化合物の、低コレステロール性、抗血栓 性、抗酸化性、抗アテローム発生性、抗炎症性、および、免疫調節に対する有利 な特性を保持している。 ）ＩＰＬＣたはプロフィール−他に何も記載されてなければ、用語ｒｌｌＰＬｃ 溶出時間またはプロフィール」とは、Ｉ（ＰＬＣカラムから所定の化合物が溶出 されるのに必要な時間または以下の条件下での化合物の混合物（２０μｌ）の特 性プロフィールを指す：流速１１］ｊ１．３ｓｌ／分でヘキサンおよびインプロ パツール（９９，７５％：０．２Ｓ％、ｖ／ｖ）のインクラティックシステムを 用いるｐ　−Ｐｏｒａｓｉｌカラム（Ｗａｔｅｒｓカラム、１０μ、　４ｍｍＸ 　３０ｃ＋ｎ）。化合物は、２９５ｎｍの励起波長および３３０ｎｍの連光波長 （型光検出器）で、そして２９５ｎｍでのＵＶ吸光度で検出される。 本発明の個々のトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、生物活性 化合物の新規なりラスを構成する。これらの化合物のいくつかは、生物供給源に おいて天然には少量で見いだされる。そこで、本発明の好ましい実施態様では、 トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、共に係属中の国際性出願 ＰＣＴ／ＵＳ９１１０３６２６　（１９９１年５月２３日に出願）に記載の方法 に従って安定化され抽出された生物材料から回収される。この同時係属出願の明 細書中に開示された安定化方法および回収方法は、生物供給源から回収されるト コトリエノールおよびトコトリエノール様化合物の収量を増大または増加させる 。 トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、以下を包含するいかなる 生物材料からも回収され得るが、それらに限定されない：カラスムギ、コムギ、 ライムギ、オオムギ、ダイズ、コムギ胚芽、コムギ糠、トウモロコシ、コメ（穀 粒、籾殻（ｈｕｓｋ　ｏｒ　ｈｕｌｌ）、胚乳、および胚芽を包含する）綿実、 トウワタ（ｍｉｌｋ賃ｅｅｄ）、アマ、ゴマ、コメ糠、パーボイルド胚芽米、胚 芽米粉、オリーブ、植物油留出液、果実濃縮液、オオムギ糠、パーム油、コムギ 胚芽油、コメ糠油、オオムギ油、ココナ・７ツ油、綿実油、ダイズ油、他の穀物 粒および他の穀物粒油、植物組織、花、低木（例えばネズミサシ）、木（例えば マツおよびゴム）、果実（例えばメロン、漿果、トマト、およびカンキツ果）、 薩菜、草（例えばアルファルファ）、菌類（例えば食用キノコ）、葉、種子（例 えばゴマ、キビ、およびマツ）、例えばゴマ種子およびマツ種子、茎、樹皮、根 、堅果（例えばカシユーおよびアーモンド）および豆果（例えばビーテ・ノッ） 、またはそれらの一部分。我々は、トコトリエノールおよびトコトリエノール様 化合物が生物供給源中で常に分解していることに注目してきた。従って、収穫さ れたばかりの生物供給源を用いることが好ましい。最も好ましくは、この生物供 給源は、収穫されたばかりの、安定化コメ糠である。 あるいは、トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、非安定化供給 源から得られ得るか、または既知の化学方法に従って合成され得る。典型的な合 成経路は、Ｊ、Ｗ、　５ｃｏｔｔら、ｒ（２Ｒ，４’Ｒ，８’Ｒ）−α−）　： ｉフ、ｏ−ルおよび（２Ｒ，３°Ｅ。 ７’Ｅ）−α−）コトリエノールの合成」、Ｈｖ、　Ｃｈ　、ｃｔａ、　５９、 　ｐｐ、２９０−３０６（１９７６）およびＰ、　５ｅｈｕｄｅｌら、［すべて のトランスδ−および５！　−ト：７７　ｚ　ｏ−ルの合成（Ｄｉｅ　５ｙｎｔ ｈｅｓｅ　ｖａｎ　ｒａｃ、　ａｌｌ−ｔｒａｎｓ　δ−ｕｎｄ　ｔ　−Ｔｏｅ ｏｐｈｅｒｏｌ）Ｊ、ｖ、ｃｈｅｓ　ｃ口、　４６．　ｐｐ、２５１？−２５２ ６（１９６３）に記載されている。別の合成スキームは、欧州特許出願第４２１ ．４１９号中に提案されている。 本発明のトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、既知の化学的手 段によって改変され得、種々の誘導体および類似体を生成する。このような誘導 体および類似体は、より容易に純枠形で単離され得るか、または分解に対してよ り抵抗性であり得るか、または他の所望の特性を有し得る。 このような誘導体および類似体もまた本発明により想定される。本発明の化合物 を改変する既知の化学的手段は、以下を包含するがそれらに限定されない：空気 の存在下または非存在下での、または不活性ガスまたは反応性ガス環境における （または不活性ガスおよび活性ガスの混合における）加熱、および熱分解。 本発明は、各トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物のｄ−または１ −異性体およびｄ、１−ラセミ混合物を包含する。しかし、天然に生じるｄ−異 性体が好ましい。本発明はまた、少なくとも１つの本発明の新規なトコトリエノ ールまたはトコトリエノール様化合物と、１つまたはそれ以上の既知のトコトリ エノールとの混合物を包含する。 本発明のトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、特異的な構造特 性によるか、または、特異的な溶出プロフィールおよび特異的な生物活性により 特性付けられる。 前者の場合では、本発明の化合物は、以下の３つの特徴を有する＝（１）芳香族 環系に結合している水素供与基（または水素供与基に加水分解され得る基）、（ ２）少なくとも１つの孤立電子対を有する原子、該電子は芳香族環系と共役であ る、および（３）その原子に隣接した位置に結合した１つまたはそれ以上のイン プレノイドまたはインプレノイド様単位を含む側鎖。 本発明はまた、このような化合物から得られる加水分解生成物および酸化生成物 を包含する。これらの化合物は、飼料転換効率の増加、血液中のＬｐ（ａ）濃度 の低下に有効であり、一方、以下の疾患または症状の１つまたはそれ以上の治療 または予防に有効である：免疫調節疾患、炎症、発熱、浮腫、糖尿病、癌、老化 の徴候、疼痛、リウマチ様疾患、敗血症性シ璽・ツク、慢性疲労症候群、および 機能喪失。 別の実施態様によると、本発明の新規なトコトリエノールおよびトコトリエノー ル様化合物は、溶出時間および特異的な生物活性によって特性付けられ得る。こ れらの化合物は、以下の高速液体クロマトグラフィー（ｌ（ＰＬＣ）条件下で少 なくとも２２分後に溶出する二流速度１．３ｍｌ／分でヘキサンおよびインプロ パツール（９９，７５％：０．２Ｓ％、ｖ／ｖ）のイソクラテイツクンステムを 用いるＰｏｒａｓｉｌカラム（Ｗａｔｅｒｓカラム、１０μ、４ｍｍｘ　３０ｃ ｍ）。化合物は、２９５ｎ＋ａの励起波長および３３Ｇｎ＋ｓの連光波長（蛍光 検出器）で、そして２９５ｎ＋ｓでのＵＶ吸光度で検出される。 上記の溶出プロフィールに加えて、本発明の新規なトコトリエノールおよびトコ トリエノール様化合物はまた、β−ヒドロキシ−β−メチルグルタリルコエンザ イムＡレダクターゼ（「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ」）の活性を阻害する能力 によっても特性付けられる。 本発明の好ましいクラスの化合物は、以下の式ｌの化合物上記。上述のように、 式ｉの化合物は、デスメチル−トコトリエノール（３，４−ジヒドロ−２−メチ ル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデカ−３°（Ｅ）、７°（Ｅ）、　１ １−）リエニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール）を包含しない。゛（ 式■の化合物はまた、α−１β−１γ−１およびδ−トコトリエノールを除外す る。）本発明の発明により想定される、式ｌの化合物の典型的な加水分解生成物 は、限定はされないが、以下の式１１の化合物を包含する： ここで、Ｒ１〜ＲＩ９％Ｚ、ｎおよびｍは、上記の定義と同様である。好ましい 化合物は、式！の化合物であって、ここで、Ｒ＋％Ｒ３、および２はそれぞれ独 立してＨｌ　ハロゲン、０■、０ＣＲ３、またはＣＴｏであり；ＲはＯｌｌ、　 ０ＣＲｓ、またはＮＨ２であり；Ｒ１はＣ−０１ＣＨ２、またはＮ）ｌであり； Ｒ５はｏ、　ｓ、　ＣＨ２、またはＮｉ１であり；Ｒ６はＨまたはＣＨｚであり ；Ｒ＋ｅおよびＲ＋ｔはそれぞれ独立してＨまたはＣＨ３であり；ｎは０または ｌであり；そしてｍは３〜ｌＯである。 最も好ましい化合物は、式！の化合物であって、ここでＲ１、Ｒ３、Ｚｓ　Ｒｅ 、およびＲ９はそれぞれハロゲンであり、Ｒ２はＯｆｆであり、Ｒ１はＣＨ２で あり、Ｒ５はＣＨ２または０であり、Ｒ６はＨまたはＣＨ３であり、ＲＩ９は■ またはＣ）１３であり、ｎは１であリ、モしてｍは３である。 新規な化合物である３、４−ジヒドロ−２−（４，８，１２−）リメチルトリデ カ−３“（Ｅ）、７’　（Ｅ）、　１１−トリエニル）−２１１−１−ベンゾピ ラン−６−オール）（ｒＰ２５Ｊ）は、式Ｉの代表的なりラスの化合物を表す。 この化合物の！ｌＩ造を以下に示す：上記の定義された構造的特徴を有する、本 発明のトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、生物学的活性によ っても特徴づけられる。それらは、試料転換効率を高めたり、血中または以下の 疾病または症状の治療あるいは予防において、Ｌｐ（ａ）濃度の減少に使用され 得る。即ち、免疫調節疾患、炎症、熱、浮腫、糖尿病、ガン、老衰の兆候、痛み 、リュウマチ様疾患、敗血病ショック、慢性疲労症候群および機能喪失、の１つ 以上を防止することにおいて有用である。それらは、ＴＮＦ、ＩＬ−１およびＩ Ｌ−１の刺激による生産物例えば、Ｉ　Ｌ−２、Ｉ　Ｌ−６、Ｉ　Ｌ−８、ＧＭ Ｃ３Ｆ、フロスタグランジンおよびガンマインターフェロンのレベルを減じ得、 一方、異質のタンパク質に反応して、抗体の力価を増加させ得る。これらの活性 によって、これらの化合物は、好中球、肥満細胞、好塩基球、単球およびマクロ ファージ、好酸球、血小板、リンパ球および多形核白血球、内皮組織および他の 免疫調節組織によって生成されるスーパーオキサイドおよび他の細胞毒の放出を 減じ得る。これらの化合物は、抗体力価の増加に影響を与え得る。 ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼは、コレステロール生合成ノ律速段階を触媒する。 それゆえ、その活性の減少によって、単独で動物やヒトの血清中の、または低脂 肪、低コレステロール食事と組合せて、動物やヒトの血清中のコレステロールの 合計量が減じられる。その効果は、栄養不足な食事壕法をしている高コレステロ ールの生物体において、顕著に認められる。典型的には、本発明のトコトリエノ ールおよびトコトリエノール状の化合物は、５ｈａｐｌｒｏ　（同上）に記載さ れた、ｈユ■皿アッセイにおいて、１１０−２０ｔｔ／■１の濃度で、ＨＭＧ　 −Ｃｏ　Ａリダクターゼの活性を少なくとも１５％減少させる。しかし、ＨＭＧ −ＣｏＡレダクターゼの活性が、少なくとも２０％減じられることが好ましく、 ２５％減じられることが最も好ましい。 理論に拘束されることを意図していないが、本発明のトコトリエノールおよびト コトリエノール様化合物の抗炎症、抗酸化および免疫調節特性は、遊離アラキド ン酸の生成を抑制することによって得られると考えられる。 アラキドン酸の生成の抑制は、ホスホリパーゼＡ２を抑制するか、または血液中 のコルチフステロンレベルを増すことのいずれかによって引き起こされると考え られる。ホスホリパーゼＡ２は、リン酸塩ヘッド基のＣ−２で開裂し、遊離アラ キドン酸を放出する。アラキドン酸は、次いで、　（ンクロオキシゲナーゼ経路 を介して）プロスタグランジンおよびトロンボキサンようなおよび（リポキシゲ ナーゼを介して）ロイコトリエンのような、様々な生物学的に重要な分子に変換 され得る。トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物の水素授与基は、 生物膜のリン酸またはリン脂質と結合すると考えられる。芳香系とともに、それ は、ラジカルスキャベンジャ−としての役割も果たす。インプレノイド尾部は、 おそらくは脂質側鎖と弱い結合を形成するこ七によって、膜を安定させるように 作用し得る。更に、クロマノール環の２の位置において、トコトリエノールメチ ルを他の置換基（例えば、水素）と任意に置換することによって、膜の安定化を 最大にすることができる。芳香系は、膜の表面をきつく締めるのを助は得、従っ て、ホスホリパーゼＡ２およびホスホリパーゼＣに対する立体障害を増し、その 透過性を減じる。芳香系は、電子伝達および抗酸化機能としても作用し得る。こ のような仮説は、本発明によるトコトリエノールおよびトコトリエノール様の化 合物の投与により幅広く生物学的機能が生じることの説明に寄与する。 本発明は、本明細書中に記載されるトコトリエノールおよびトコトリエノール様 化合物とともに、既知のトコトリエノールに対する様々な新規の使用方法も包含 する。実施例では、熱、浮腫、糖尿病、ガン、老衰の兆候、痛み、敗血病ショッ ク、慢性疲労症候群、および機能喪失の治療に対する、抗炎症、抗アテローム発 生および免疫調節剤としてのそれらの使用を含む。更に、トコトリエノールおよ びトコトリエノール様化合物は、試料転換効率を高め−その結果、試料のより大 キナパーセンテージが、脂肪よりもタンパク質に転換される〜、および血液中の Ｌｐ　（ａ）濃度を減じることに有用である。既知のトコトリエノールは、本発 明のトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物と多くの場合同じ生物学 的活性を示す。例えば、既知のトコトリエノールは、血清および、ＬＤＬ−コレ ステロールの合計、アポリポプロティンＢ１トロンボキサンＡ２、血小板第４因 子、トリグリセリドおよびグルコースを減じることができ、ＨＭＧ−ＣｏＡリダ クターゼの活動を阻害することができる。それらは、また、ＴＮＦおよびＩＬ− １，およびおそらくはＩ　Ｌ−２およびガンマインターフェロンのレベルを小さ クシ、他方、異質のタンパク質に反応して、抗体の力価を増加させる。これらの ファクターは、組み合わせると、様々な利点や、新規の生物学的結果を生み出し 、それらは、免疫調節細胞によるスーパーオキサイドおよび他の細胞毒の放出の 減少、および抗体力価の増加を含む。 本発明のトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、安定した生物学 的供給源から回収されることが好ましい。あるいは、トコトリエノールおよびト コトリエノール様化合物は、従来の食品加工および製造技術に適用される生物学 的供給源から回収され得る。しかし、安定化工程によって、これらの化合物の回 収率は、大幅に増加する。理論に拘束される意図はないが、トコトリエノールお よびトコトリエノール様化合物のかなりの量は、本質的に、タンパク質と結合し 、または、生物学的供給源の膜つリン酸またはリン脂質に連結すると考えられる 。安定化によってこれらの化合物の収量がかなりの増加することが可能となるが 、これはタンパク質からの放出、あるいはトコトリエノールのベンゼン環にある ヒドロキシル基に結合した、あるいはトコトリエノール様化合物の水素授与基に 結合したリン酸基またはピリン酸基の開裂に起因し得る。熱、および場合によっ ては、圧力を加えることによって、本発明の化合物を放出するという利点があり 、その結果、これらの化合物は、良好な収率で回収され得る。 、熱および圧力は、組み合わせで用いることが好ましい。本発明の化合物は、使 用される収集の方法に依存して、ＴＲＦの他の化合物と共に抽出され得る。 マイクロウェーブは、膜結合Ｔ３およびＴ３様化合物を放出するために、特に有 効であることが見いだされた。また、以下のプロトコールは、所望の安定化の試 験結果を最大にすることも見いだされた。粉末にした生物学的供給源（好ましく は米あるいは米糠）の所定量（典型的には１ｇから１　ｋｇ）を耐熱ガラスの皿 （典型的には直径１０　ｃ＋ａから２０　ｃｍ、高さ１．５Ｃ−からＩＳｃ會） に配置する。皿は、蓋で覆っても覆わなくてもよく、必要に応じて粉末にした生 物学的供給源が入った第２の皿をｍｌの皿の上に重ねてもよい。−回には蓋で覆 った皿を一つ使用することが好ましい。次に、生物学的供給源はマイクトウエー ジオーブン中で最高レベル（好ましくは、６００−１５００ワツト）で１分から ５分間加熱されるが、必要に応じて室温、真空、あるいは窒素ブランケット環境 などの環境で行ってもよい。１気圧よりも大きい圧力もまた、必要に応じて使用 し得る。各加熱期間後に、サンプルを均質にかくはんしなければならない。加熱 およびかくはん工程は１回から１０回繰り返される。０．５ｋｇのサンプルに対 して３回から５回工程を繰り返すことが好ましい。その後、本明細書に記載され るように、ＴＲＦは抽出され得る。 ＴＲＦは直接使用し得るが、さらにＴＲＦの構成化合物にも分離し得る。ＴＲＦ 混合物から新規なトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物を単離する こともできる。 ＴＲＦは典型的に、様々な割合の各既知のトコトリエノールおよび付加トコール 生成物を含有する。理論上、新規のトコトリエノールおよびトコトリエノール様 化合物は、各々標準シリカゲルＩＩＰＬＣ方法論を用いて、ＴＲＦにおける既知 のトコフェロールおよびトコトリエノールから分離可能でなければならない。し かし、米糠の場合、複雑な混合物が生成される。この生成された混合物は、特定 の状況下に約２１分おいた後、ＨＰＬＣによって溶出された既知のトコトリエノ ールである、３．４−ジヒドロ−２−メチル−２−（４，８，１２−）リンチル トリデカ−３°（Ｅ）、７’（Ｅ）、１１°−トリエニル）−２）１−１−ベン ゾビラン−６−オール）を含有していた。この理由により、この化合物を「Ｐ２ １」と称する。 さらに、混合物は、３，４−ジヒドロ−２−（４，８，１２−１−リンチルトリ デカー３°（Ｅ）、７°（Ｅ）、　１１’−）リエニル）　−２）１−１−ベン ゾピラン−６−オール）、すなわち［Ｐ２ｓ］である約２５分後にＨＰＬＣによ って溶出された新規のトコトリエノールを含有していた。そして、混合物は、２ ０分後にＩＩＰＬによって溶出され、３１５　ｎ＋＊において紫外線吸収率の最 大値を有する見かけステロール（ｒＰ２＠Ｊ）を含有していた。これらの３つの 化合物は、標準シリカゲルＨＰＬＣ法を使用しても分離され得ない。 従って、本発明は、シリカカラムを使用しても除去され得ないＭ染物’ｌからト コトリエノールおよびトコトリエノール様化合物を精製する新規の技法を含む。 これらの技法は、トコフェロールおよびトコトリエノール様化合物をステロール および他のろう質の汚染物質から分離するのに特に適している。ある処理工程で は、ＴＲＦは適当な溶媒、好ましくはへ牛サン中で溶解され、次いで、アミンカ ラムあるいはシアノカラムに結合する（１１）。結合溶出アミンカラムあるいは 結合溶出シアノカラムの使用が好ましい。本発明のトコトリエノールおよびトコ トリエノール様化合物は、次いで、適切な溶媒システムによってカラムから選択 的に溶出され得る。好ましくは、この溶媒システムはインプロパツールのへ牛サ ンでのグラジェントである。非極性溶媒中の低濃度の極性溶媒（好ましくは、ヘ キサン巾約０．５％のインプロパツール）を用いて、既知のトコトリエノールお よびトコフェロールは溶出され得るが、本発明の新規のトコトリエノールおよび トコトリエノール様化合物はアミンカラムに保持される。その後、さらに極性溶 媒の濃度を増加させると（好ましくは、ヘキサン巾約３％のインプロパツール） 、本発明のトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は選択的に溶出さ れ得るが、ステロールおよびロウ質の汚染物質はすべてアミンカラムに結合した ままである。最後に、ヘキサン中６−１０％インプロパツールのような高極性溶 媒システムを用いて、これらの汚染物質は溶出され得る。この手法を用いると、 所望のトコトリ別の技法もまた、生物学的供給源からトコトリエノールおよびト コトリエノール様化合物の回収収率を増加させる。この別の手法においては、安 定化されている、あるいは安定化されていない生物学的供給源は、最初にメタノ ールで抽出される。この工程で、多くの未結合の汚染物質が除去される。 その後、熱、必要であればさらに圧力が生物学的供給源に与えられ、トコトリエ ノールおよびトコトリエノール様化合物を放出する。熱源の例としては、放射熱 源（すなわち、可視光、あるいは放射性物質）、対流熱源、マイクロウェーブ、 高周波、摩擦およびせん断があげられるが、これらに限定されない。好ましい熱 源は、マイクロウェーブ熱である。あるいは、熱および／あるいは加圧処理の前 、最中あるいは後で、凍結／融解法あるいは機械研磨もまた、用いられ得る。あ るいは、トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、腐蝕剤、例えば 塩酸、硫酸などの酸を使用することによって放出され得る。他の実施態様によれ ば、熱処理、加圧処理、あるいは腐蝕側処理の前、同時、あるいは後に、超音波 処理あるいは界面活性剤処理を用い得る。加熱、加圧および反応条件の様々な組 合せを用いた本明細書に記載の技法を用いた実験は、所定の生物学的供給源に対 する好ましい条件を容易に指示する。 精製された形態においては、本発明の好ましい化合物、Ｐ２５は、コレステロー ル低下剤として、いかなる他の既知のトコトリエノールよりも大きな生物学的活 性を示す：これは、Ｐ２１（「トコトリエノール」としても既知」）、α−Ｔ３ 、β−Ｔ３、γ−Ｔ３あるいはδ−■３を含む。インブレノイド側鎖の二重結合 は、これらの化合物の活性部分を有していると考えられる。 なぜなら、二重結合の存在によって、生物学的膜における脂質側鎖の間のロンド ン力の効果が減少するからである。芳香環システムおよびインプレノイド側鎖の アルキル置換基の数および位置は、生物学的活性に差異を与えることも考えられ る。つまり、アルキル置換基の数が少なくなるほど、活性は大きくなる。メチル 基によって立体障害が減少すると、Ｐ２Ｓが膜により深く浸透すると考えられる 。従って、膜はより高度に組織化され得、ゆえにより透過し得な（なり得る。こ の仮説のもとでは、クロマノール環の２位で水素をメチルに置換する本発明の化 合物は、増強され生物学的活性を示す。しかし、生物学的活性を増強するい（つ かの異なったメカニズムが含まれるので、２位でのあるいは他の位置での変更も また考えられ得る。 （以下余白） 血清コレステロールの合計量が少なく、リポタンパク質−コレスチロールの濃度 （ｄｅｎｓｉｔＦ）が低く、そしてＨＤＬ−／ＬＤｔ、−コレステクールの比を 増加させる能力のために、本発明の新規なトコトリエノールおよびトコトリエノ ール様化合物は、高レベルのコレステロールに関連した疾患の予防および治療に 用いられ得る。 好適には、本発明の化合物は、コレステロールの生分解に寄与する他の血液成分 の血清のレベルを実質的に改変しない。 例えば、本発明の化合物は、コレステロール　７α−ヒドロキシラーゼ（コレス テロールを胆汁酸に分解するための酵素）の活性をあまり減少させない。 本発明の化合物によって治療され得る、高レベルのコレステロールに関連した疾 患の例としては、アテローム性動脈硬化症、血栓症、冠状動脈疾患、および心臓 血管疾患の他の形態が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、本発明の 化合物の、血清グルコースレベルを低下させる能力は、タイプ２の糖尿病患者に おけるインスリンの生成を増加し得る〇本発明の化合物はまた、種々の他の血液 組成の血清または血漿のレベルを改変するのに用いられ得る。例えば、これらの 化合物は、トロンボキサンＡ２および血小板第４因子の血漿レベルを低下させる 。さらに、それらは、単純な抗酸化剤として受動的に働き得る。あるいは、それ らは、好中球、および、他の細胞毒素またはサイトカイン、肥満細胞、マクロフ ァージ、内皮組織、および他の免疫調節組織によるスーパーオキサイドの放出を 減少することにより、能動的に働き得る。 抗酸化作用は、少なくとも２つの方法で達成される。まず第一に、アラキドン酸 代謝産物を減少させることにより、好中球はスーパーオキサイドの生成レベルを 減少する。第二に、これらの化合物が、すでに存在しているラジカルを除去する 。 従って、それらは内皮細胞、リポタンパク質、平滑筋細胞、および血小板に対す る保護的な効果を発揮する。さらに、これらの化合物はまた、抗酸化剤として働 いて、酸化し易い製品（例えば、食料品）の貯蔵寿命を延ばす。好適には、本発 明のトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物はまた、このような食料 品における発癌性化合物を形成する、食料品の酸化分解を防ぎ得る。 トロンボキサン（この血漿レベルは、本発明の化合物を用いて減少される）はま た、血小板凝集および血管収縮を誘導する。従って、本発明のトコトリエノール およびトコトリエノール様化合物は、広範囲の種々の用途における血液凝固を減 少するために用いられ得る。例えば、これらの化合物は、疾患（例えば、血栓性 疾患、心臓血管疾患、高血圧症、肺疾患、および腎臓疾患）の治療または予防に 用いられ得る。詳細には、本発明の化合物は、心筋梗塞、脳卒中、肺塞栓症、深 部静脈血栓症、末梢動脈閉塞症、および他の血液系血栓症などの疾患を引き起こ し得る血餅および病巣の形成を予防またはそれらを転換するために用いられ得る 。 トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物はまた、ＬＤＬの酸化を阻害 することまたは転換することによる、および一般的に血管組織を酸化による損傷 から保護することによる、抗アテローム発生剤として作用し得る。ＬＤＬ（ｒＯ Ｘ−ＬＤＬＪ　）の酸化された形態は、アテロームの形成における主成分である 。 このような形成により、通常、動脈硬化症斑による動脈の狭窄が生じる。理論的 には、結合は望まれないが、本発明者らは、血清ＬＤＬレベルを減少させること により、トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、ＬＤＬの代謝回 転速度を増加し、従って、ＬＤＬが酸化剤に晒されるのを減少すると、考えてい る。 トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物はまた、血液中のりボタンバ ク質（ａ）の濃度を減少させる。上昇したＬｐ（ａ）濃度が、アテローム性動脈 硬化症、早発性心筋性虚血、およびリウマチ性関節炎の早期の兆候および進行と 相関関係があることが、十分に確立された。実際、Ｌｐ（ａ）濃度は、ＬＤＬ濃 度よりもより正確な冠動脈性心臓疾患の指標である。高レベルのＬｐ（ａ）（約 ２０＋＋ｇ／ｄｌを越える量）を有する個々におけるＬｐ（ａ）濃度を低下させ ることにより、アテローム性動脈硬化症および冠動脈性心臓疾患の発生の確率は 激的に減少する。重要なことには、Ｌｐ（ａ）レベル（１，ＤＬ濃度とは異なる ）は、低脂肪食餌または市販の入手可能な低コレステロール剤によって影響され ない。 トコトリエ／−ルおよびトコトリエノール様化合物はまた、利尿活性を表す（こ れらはバンプレシンおよびアンジオテンシ石１に対する拮抗作用がある）。従っ て、これらの化合物は、例えば、高血圧症の、治療および処置（ｍａｎａｇｅｍ ｅｎｔ）に有用である。 本発明の他の実施態様では、トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物 は、敗血症性のシ曹ツクを予防するため、に、被検体に、予め効果をもたらすよ うに、投与され得る。 好適には、トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物は、体外血液の治 療に用いられ得る。本明細書に用いられるように、用語「体外血液」は、体外治 療に供される被検体からラインで取り出され、そして透析、あるいは血液濾過ま たはバイパス調節外科手術のようなプロセスで該被検体に戻される血液を包含す る。そして、この用語は、被検体に最終的に投与されるために体外で保存される 血液生成物を包含する。このような生成物としては、全血液、血小板濃縮物、お よび血小板凝集の阻害が望ましい他の任意の血液画分が挙げられる。 本発明の他の実施態様では、トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物 は、侵襲性デバイスの表面（例えば、血管組織移植、ステント、カテーテル、お よび人工バルブのようなデバイスの表面）をコーティングするための組成物およ び方法に処方されて、血小板凝集の影響を低下し得る◎　このようなデバイスは 、物理的吸着および化学的架橋結合を含む通常の方法論を用いて、トコトリエノ ールおよびトコトリエノール様化合物でコートされ得る。 さらに、本発明者らは、本発明のトコトリエノールおよびトコトリエ／−ル様化 合物、既知のトコトリエノール、およびそれらの混合物はまた、リポポリサッカ ライド刺激に対する応答における腫瘍壊死因子のレベルを低下させ、その組織に おけるアラキドン酸を減少させ、そして動物およびヒトの血液中における酸素代 謝産物を減少させる。これらは、プロスタグランジンおよびロイコトリエン（こ れら両者は共に、アラキドン酸から合成される）の全体的な減少、およびインタ ーロイキン−１の可能な限りの減少の点に起因する。従って、本発明の化合物は 、種々の用途に用いられ得る。例えば、それらは、内皮損傷、例えば、虚血性お よび再潅流された心筋層および潰瘍、の予防に用いられ得る。さらに、腫瘍の壊 死因子の生合成の阻害はまた、炎症の減少によってなし遂げられる。すなわち、 好中球の呼吸による破裂（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｂｕｒｓｔ）の阻害または 遊離ラジカルの除去によって成し遂げられる。従って、本発明の化合物および既 知のトコトリエノールはまた、広範囲の種々の疾患および症状（軽症、急性、お よび慢性の炎症を含む）の予防および治療のための抗炎症剤として有用である。 これらの炎症としては、発熱、リウマチ性疾患、疼痛、機能障害、高血圧症およ び浮騰が挙げられるが、これらに限定されない。 炎症応答におけるそれらの役割に加えて、プロスタグランジンもまた、グルコー スにより誘導されるインスワン放出を抑制し、グルコース濃度を増加させ、グル カゴンの分泌を促進することが示された。その結果、本発明の化合物の使用は、 典型的には、グルカゴン／インスリン比が増加する。従って、本発明の新規なト コトリエノールおよびトコトリエノール様化合物、既知のトコトリエノール、お よびそれらの混合物は、糖尿病におけるグルコース不耐性を改善するために用い られ得る。それらはまた、インスリン非依存性の糖尿病における急性のグルコー ス誘導インスリン応答を回復させるためにも用いられ得る。 上記の使用に加えて、本発明のトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合 物、既知のトコトリエノール、およびそれらの混合物はまた、動物およびヒトの 免疫応答を増強するためにも用いられ得る。これらの化合物は、典型的には、生 物学的組織中の脂肪酸の量を減少させる。脂肪酸レベルが免疫系に影響するので 、本発明の化合物は免疫調節剤としても用いられ得る。それらはまた、例えば、 異物タンパク質に対する抗体力価を増強させるために用いられ得る。 さらに、本発明の化合物により影響される脂肪酸、コレステロール、トリグリセ リド、およびグルコースのレベルの低下は、実質的な重量損失を伴うことなく得 られる。この結果は、ａ料のタンパク質への転換率を増大させる。従って、本発 明の新規なトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物、既知のトコトリ エノール、およびそれらの混合物は、飼料転換効率を増大させるために有用であ る。 本明細書中に記載される組成物および混合物を使用して治療され得る高コレステ ロール血性疾患および症状は、動脈硬化、アテローム硬化症、閉塞性黄痕、高す ポタンパク質血症、および家族性高コレステロール血症を包含するがそれに限定 されない。 上記組成物を使用して治療され得る血栓疾患および症状は、以下を包含するがそ れに限定されない：肺動脈疾患、一般的に（特異的コンダクタンスの減少、動的 フンプライアンスの減少および狭窄症（平滑筋の収縮）、　（肺リンパ液、泡沫 、または気管枝肺胞洗浄のような）肺液の過剰、成体呼吸困難症候群、　（肺お よび全身性高血圧症、肺浮腫、　（好中球透過のような）液体蓄積および肺血管 透過性のような）起立不能症（ａｓｔａｔｉｓ）および鼻炎、　（例えば、内毒 血症、グラム陰性生物、アナフィラキンー、出血シ１ツクまたはブタフサに対す るアレルギーに関連する）肺血管収縮、血管虚血、微閉塞性閉鎖および／または 明白な閉鎖、管腔の血管形成術後の再閉鎖、心筋梗塞、機能不全に関係する心肺 バイパス、（肺および末梢の）血管収縮、器官機能不全、血小板消費および／ま たは活性化（および引き続（機能低下、凝集および数の減少）、急性の手術中の 肺高血圧症に関連する僧帽弁の病理状態、動脈硬化により起こる慢性閉鎖性動脈 疾患、モーリスレイナーズ症候群−血管収縮、腎動脈狭窄、心筋梗塞、発作、肺 血管閉塞症、深部静脈血栓（ｄｅｅｐ　ｖｅｉｎ　ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）、末 梢動脈閉鎖および他の血管系血栓。 抗酸化的な使用には、虚血性および潅流された心筋層のような内皮障害の治療お よび予防が含まれるが、それに限定されない。なぜなら、それらの抗酸化活性の ため、本発明のトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物はまた、　（ 例えば、癌を引き起こす、動物またはヒトの遺伝物質中の突然変異の防止による ）癌類似症状の治療および予防に使用され得る。 上記組成物を使用して治療され得る抗アテローム形成疾患および症状は、以下を 包含するがそれに限定されない：動脈硬化、アテローム硬化症、心筋梗塞（ｓｙ ｄｏｃａｒｄｉａｌ　１ｎｆａｒｃｔｉｏｎ）、虚血（即ち、心筋虚血、脳虚血 および腎虚血）および発作。 このような組成物を用いて治療し得る炎症性疾患および症状は、以下のものを包 含するが、これらに限定されない：本態性高血圧症、うっ血性心疾患による高血 圧症、心筋層の拍出量の減少による腎機能不全、内毒素血症、慢性肝疾患または 高血圧症、喘息における肺の炎症、気管支炎、肺炎または急性の肺損傷、リウマ チ性疾患（慢性関節リウマチおよび全身性紅斑性狼癒など）、炎症、注腸疾患（ ａ癌性大腸炎など）、過敏性腸疾患（絨毛腺腫など）、酸、ペプシンまたは胆汁 酸塩の過多による胃腸障害、Ｚｏｌ　ｌｉｎｇｅｒ−Ｅｌ　１１ｓｏｎ症候群、 皮膚疾患または外傷（熱傷あるいは酸性または苛性の損傷）、痛風、Ｂａｒｔｔ ｅｒ’　ｓ症候群、発熱、リウマチ様疾患、疼痛、機能喪失、高血圧症および浮 腫。 免疫調節疾患および本発明の組成物を用いて治療し得る疾患は、以下のものを包 含するが、これらに限定されない：慢性疲労性症候群、移植片の拒絶反応、ＡＩ ＤＳなどの自己免疫疾患、および免疫系を弱める他のウィルス性疾患。 本明細書中に記載される化合物および混合物は薬剤組成物、食物物質、食餌補足 物に有用である。有利には、これらの製品は、低コレステロール血症薬、抗トロ ンビン剤、抗酸化剤、抗アテローム形成剤、抗炎症剤および免疫調節剤である。 薬剤組成物は、経口投与のためには錠剤、カプセル、乳濁液、懸濁液および粉体 の形態であり得、非経口投与のためには滅菌溶液または乳濁液であり、静脈投与 のためには滅菌溶液の形態であり得、そして局所塗布のためにはゲル、ローンヨ ンおよびクリームの形態であり得る。この薬剤組成物は、ヒトおよび動物に対し 、安全で、かつ本明細書中に記載されているこの化合物および混合物による任意 の所望の結果を引き出すために薬学的に効果的な量で投与され得る。 本発明はまた、トコトリエノールおよびトコトリエ／−ル様化合物のプロドラッ グ形態に関し、これは被検体に投与されると、生体内変化を経て、活性な形態と なる。 本発明の薬剤組成物は、典型的には、薬学的に効果的な量の本発明のトコトリエ ／−ルまたはトコトリエノール様化合物、またはその混合物、および薬学的に受 容可能なキャリアを含有する。このようなキャリアは固体または液体であり、例 えば、コーンスターチ、乳糖、ンヨ糖、オリーブ油またはゴマ油などである。固 体キャリアを用いる場合には、投薬形態は錠剤、カプセルまたはロゼンジであり 得る。液体の投薬形態はソフトゼラチンカプセル、シロップまたは懸濁液を包含 する。 本発明の治療方法および予防方法は、本明細書中に記載されている組成物および 混合物で、薬学的に受容可能な方法で被検体を治療する工程を包含する。本願で 用いられるように、「薬学的に効果的な量」または「コレステロールを低下させ る量」という用語は、ＬＤＬ−コレステロールおよび血清コレステロール総量の 血中レベル（ｂｌｏｏｄ　１ｅｖｅｌ）を低下させ、一方、血液中のＨＤＬ−コ レステロール対しＤＬ−コレステロールの比を増大させるのに効果的な量のこと をいう。あるいは、「薬学的に効果的な量」という用語は、高コレステロール血 症に関連するＬＤＬ−コレステロールおよび血清コレステロール総量の血中レベ ルを低下させるのに効果的な量、脂質生成に効果的な量、血小板凝集の阻害に効 果的な量、ヒトの末梢血好中球によるスーパーオキサイドの放出を減少させるの に効果的な量、腫瘍壊死因子またはインターロイキン−１を減少させるのに効果 的な量、アラキドン酸のレベルを減少させるのに効果的な量、血中の抗体力価を 増加させるのに効果的な量、抗トロンビン剤の用途に効果的な量、以下の疾患ま たは症状のうちのいずれかを治療、予防または発生を遅延させるのに効果的な量 （ここで前記疾患または症状は炎症性疾患、免疫調節疾患、発熱、浮腫、真性糖 尿病、癌、老化の徴候、疼痛、敗血症によるンコノク、慢性疲労性症候群および 機能喪失を包含する）あるいは血中のＬｐ（ａ）濃度を減少させるがまた１よ飼 料転換効率を増加させるのに効果的な量のことをいう。 本発明の薬剤組成物は、常法により、上記のいずれの疾患または症状の治療およ び予防に用いられ得る。このような治療および予防の方法およびその投薬レベル および必要な条件は、当該分野で公知であり、そして、当業者によって、入手可 能な方法および技法から選ばれ得−る。投薬量の範囲は、約１〜約１０００霞ｇ ７日であり得る。しかし、より低い投薬量またはより高い投薬量を用い得る。特 定の投薬量および食餌療法は、被検体の健康状態、被検体の疾患の重篤さおよび 原因または被検体の性質、および治療を行う医師（ｐｈｙｓｉｃｉａｎ）の判断 に依存する。 トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物およびその混合物はまた、上 記のいずれの疾患の治療または予防に使用されている従来の治療と組み合わせて も用いられ得る。 このような組み合わせた治療は、従来の治療の投薬量の少なさを利用することが 有利な点であり、従って、上記薬剤を単独の治療で使用した場合にこうむる毒性 の可能性を回避する。 例えば、トコトリエノールまたはトコトリエノール様化合物は、胆汁酸を抑える 薬剤（ｓｅｑｕｅｓｔｒａｎｔｓ）、例えば、コレスチラミンおよびコレスチポ ール；フィブリン酸（ｆｉｂｒｉｃ　ａｃｉｄ）誘導体、例えば、クロフィブレ ート、ガンフィブロジル（Ｇａｍｆ　１ｂｒｏｚｉｌ）、ベザフィブラート、フ ェノフィブラート、およびシプロフイブラート；　ＨＭＧＲ阻害剤、例えばロバ スタチン、メノイスタチン（Ｍｅｖａｓｔａｔｉｎ）、７’ラバスタチン、シン パスタチンおよび５ＲＩ−６２３２０；プロブコール；ニコチン酸；その誘導体 および複合体、例えば、６−０Ｈ−ニコチン酸、ニコｆ　ｔ　！ｊ　７　酸（Ｎ ｉｃ。 ｔｉｎａｒｉａ　Ａｃ１ｄ）、ニコチンアミド、ニコチンアミド−Ｎ−オキシド 、６−０１１−ニコチンアミド、ＮＡＤ、　Ｎ−メチル−２−ピリジン−８−カ ルボキシアミド、Ｎ−メチル−ニコチンアミド、Ｎ−リボシル−２＝ピリドン− ８−カルボキシド、Ｎ−メチル−４−ピリドン−５−カルボキシアミド、ブラジ リアン（Ｂｒａｄｉｌｌａｎ）、二セリトロール、ツルビニカートおよびヘクサ ニンブト；ネオマイシンおよびｄ−チロキシン。 食物物質中では、トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物、およびそ の混合物は、ＬＤＬ−コレステロールおよび血清コレステロール総量の血中レベ ルを低下させ、一方、ＲＤＬ−コレステロール対しＤＬ−コレステロールの比を 増大させる安全でかつ効果的な手段を提供するような、生物学的に受容可能ない かなるキャリアと共にも用い得る。さらに、この食物物質は、血小板凝集の阻害 、ヒトの末梢血好中球によるスーパーオキサイドの放出の減少、腫瘍壊死因子ま たはインターロイキン−１の減少、血中の抗体力価の増加、以下の疾患または症 状のうちの１種またはそれ以上の治療、予防または発生の遅延；免疫調節疾患、 炎症、発熱、浮腫、真性糖尿病、癌、老化の徴候、疼痛、リウマチ様疾患、敗血 症によるシ璽ツク、慢性疲労性症候群および機能喪失：に用いられ得る。 あるいはこれらは、血中のＬｐ（ａ）濃度を減少させるかまたは飼料転換効率を 増加させるのに用いられ得る。 本発明による、トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物を含有する食 物物質、およびその混合物は他の任意の食物物質と組合せられ得る。例えば、本 発明の化合物を含有する油は、料理用油、揚げ物用油、またはサラダ油および任 意の油をベースとする食品、例えば、マーガリン、マヨネーズまたはピーナツツ バター中に用いられ得る。本発明の化合物で強化された穀物粉は、例えば、焼物 、シリアル、パスタおよびスープなどの食物物質に用いられ得る。トコトリエノ ールおよびトコトリエノール様化合物は乳化され得、種々の水をベースとする食 物物質、例えば、飲料混合物を包含する飲料に用いられ得る。有利には、このよ うな食物物質は低脂肪、低コレステロールまたは、他の制限された食餌療法に、 包含され得る。 本発明の薬学的組成物および食物物質は、ヒト、ならびに、例えば家畜および家 禽などの動物に投与され得る。トコトリエノールまたはトコトリエノール様化合 物、またはそれらの混合物を、摂取あるいは投与されると、動物は、トコトリエ ノールおよびトコトリエノール様化合物の、高コレステロール性、抗血栓性、抗 酸化性、抗アテローム性、抗炎症性、免疫調節、および、投与した化合物の他の 有利な生物学的活性を、有利に保持している。したがって、このような動物、ま たは、例えばミルクなどのそれらの動物から得られたあらゆる生産物は、ヒトま たは他の動物に消費されて、トコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物 の有利点が得られ得る。例えば、本発明の化合物で強化した穀物またはその粗粉 を摂取した鶏は、後で、ヒトに食べられ得、コレステロール減少の恩惠を得るこ とができる。 さらに、動物へのトコトリエノールまたはトコトリエノール様化合物の投与によ り、飼料転換効率が増加する。より高脂肪を含有する動物、例えば、ウシ、ブタ 、ヒツジ、子羊では、トコトリエノールまたはトコトリエノール様化合物は、よ り早い成長、より低いコレステロール含量、およびより高い割合の脂肪の少ない 肉へと、有利に導かれる。家禽に投与したとき、トコトリエノールおよびトコト リエノール様化合物により、減少した卵黄のコレステロール含量および卵白のよ り高いタンパク質含量で特徴づけられる卵を生産する。 本発明がさらに十分に理解されるために、以下に実施例を記載する。これらの実 施例は、例示の目的に過ぎず、いかなる方法によっても本発明の範囲を限定する ことを意図するものではない。 これらの実施例では、マススペクトルのデータは、Ａｓ５ｏｃｉａｔｅ　Ｅｌｅ ｃｔｒｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｌｔｄ、Ｉｉ！（Ｄｅｐａｒｔ＋＊ｅ ｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｗｊｓｃｏ ｎｓｉｎ、　Ｍａｄｌｓｏｎ）でありそこから入手可能なモデルＭＳ−９０２を 用いて得られた。サンプルは、ガラスプローブのイオン源中に１００℃で直接導 入した◎イオン化電気ビームのポテンシャルは、７０　ｅ、ｖ、であった。ＣＤ ＣｈでのＮＭＲは、Ｂｔｕにｒ、　ＦＤＲのＮＭＲ−５ｏｎを用いて、室温で得 られた。［Ｒは、Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｓｅｒ装置を用いて、薄膜で行った。遠心 分離は、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心機（モデル１２４０）で行った。マイクロウェ ーブ化は、Ｗｈｉｒｌｐｏｏｒ屋内オーブン（モデルＮｏ、　ＭＴ６９０１ＸＷ −０）で、８００ワツトで操作して、行った。ＨＰＬＣは、Ｗａｔｅｒｓ　ｐｕ ｍｐ　６０００ＡまたはＧ１１ｓｏｎ　ｐｕｓｐ　３０？、５ｈｉｓａｄｚｕ蛍 光検出器ＲＦ−５３５およびインテグレータＣＲ３Ａ％　Ｇ１１ｓｏｎの自動イ ンジェクター、Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ　ＳＯＡ　ＵＶ検出器またはＳｈｉｍ ａｄｚｕ　５ＰＤ−１０＾Ｖ　ＵＶ−ＶＩＳスペクトル光度検出器・および５Ｋ ｉｐｐおよびＺｏｎｅｎ　ＢＤ４１記録計を用（為て行った。特に言及すること がなければ、以下の！ＩＰＬＣ条件が用いられた＝２０μｌのインジェクシッン 、ヘキサンおよびイソプロパツール（９９，７５％：０．２Ｓ％、ｖ／ｖ）のイ ンクラティックシステムを用いて１．３　ｍ１７分の流速でのＰｏｒａｓｉ１カ ラム（ｌＦａｔｅｒｓカラム、１０μ、４　ｗａｘ　３０　ｃｍ）。検出は、励 起波長２９５ｎ■および発光波長３３０ｎ■（蛍光検出器）および２９５ｎ■で のＵＶ吸収で行った。 鶏およびブタの血清で行った全てのアッセイは、＾、Ａ、　Ｑｕｒｅｓｈｉら、 「トコトリエノールによる高コレステロール血症のヒトにおける血清コレステロ ールの低下Ｊ　（Ｐａｌｍｖｉｔｅａ）　、Δｔａ、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｎｕ ｔｒ、、　５３．　ｐｐ、　１０２１Ｓ−２６３（１９９１）に記載のプロトコ ルに従って行った。すべての酵素的アッセイは、Ａ、Ａ、　Ｑｕｒｅｓｈｉら、 ［ブタの脂質代謝における穀物およびトリコデルマ属（Ｔｒｉｅｈｏｄｅｒｍａ 　ｖｉｒｉｄｅ）の培養濾液の効果」、■且韮、１７、ｐｐ、　９２４　（１９ ｇ２）に記載のプロトコルに従って行った。血漿のインスリン、グルカゴン、お よびＴＮＦのレベルは、それぞれ、Ｖｅｎｔｒｅｘ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 、Ｉｎｃ、（Ｐｏｒｔｌａｎｄ、　Ｍａｉｎｅ）ＳＩｃＮＢｉｏｓｅｄｉｃａｌ ｓ、Ｉｎｃ、（Ｃｏｓｔａ　Ｍｅｓａ、　Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ）、およびＧｅ ｎＺｙｍｅ　Ｃｏｒｐ、（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、　Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ ）から入手したラジオイムノアッセイキットを用いて測定した。 支立史上 米糠を試料として使用して、生物資源の安定化処理を行うためには、以下のプロ トコルを使用し得る。 農場からの粗末（籾）を、市販の連続流量非混合加熱空気乾燥機にて乾燥させる 。乾燥を行って、米の水分含有量を約１８〜２２パーセントのレベルから約１０ 〜１３パーセントのレベルまで下げる。次に、市販の米洗浄機で吸引することに より、乾燥米からほこり、石、種、および枝木を取り除き、その後、ストーナー （５ｔｏｎｅｒ）による重力分離、およびディスク選別機およびドラム分離機に よる粒子サイズ別分離が行われる。 次にゴム製ローラ穀むき機を用いて穀を取り除く。籾（穀または外皮）は籾分離 機を用いて取り除く。次に、摩擦製粉機にて未加工の糠を取り除くことにより白 米が精製される。この後、未加工の糠を圧縮空気によって押し出し機に、または 安定化処理を行うまで貯蔵庫に搬送する。 安定化処理を行うためには、未加工の糠を圧縮空気によって濾過機／ふるい機に 搬送し、残っている砕米を取り除く。 ふるいにかけた後、未加工の糠を圧縮空気で混合／Ｉ１合用水ツバータンクに搬 送する。未加工の糠を混合用タンクの排出口から、計測スクリューコンベヤーフ ィーダーを用いて、胴部が締め付けられた単一スクリユー押し出し機の入口バル ブに搬送する。安定化処理の間、押し出し機の操作条件は以下の範囲に維持され る。 流速　９００〜２０００ポンド／時 圧力　８００〜２０００　ＰＳＩ 温度　１３５〜２１０℃ 時間　５〜９０秒 乾燥加熱によって安定化処理された未加工の糠を、次に、エキスパンダー調理機 の供給ホッパーに直接供給する。もしくは、ドライアイスで冷却した未加工の糠 を調理機に供給してもよい。押し出し機内では、糠は、不連続ウオームシャフト によって約３４１ボンド／時の速度で排出プレートの方向に搬出される。水およ び蒸気を、約３８ポンド／時の速度で押し出し機の胴部の注入ボートから添加す ることにより、材料を完全に混合し、また水分レベルを上昇させる。環境温度は 約３０°Ｃである。材料の流速は排出ダイプレートによって約３４１ボンド／時 の速度で制御される。供給材料の水分レベルは約１１．４１に維持され、温度は 約１５〜９０秒の間、約９０℃〜１３５℃の間に保持される。生産されたコレッ トの水分レベルは、１２５℃の排出温度で約１４％である。 糠がグイプレートを通って押し出されるとき、突然の圧力低下により水が蒸発す る。調理中、酵素が変性して糠の成分のあるものがゼラチン化し、粒子同士が結 合する流体ペースト状になり、凝縮パレットが形成される。水の蒸発により、溶 媒の移動濾過にとって最も適切な細胞内の破壊が生じる。 プロセス中に蒸気および水を導入することにより、糠の水分含有量が約２２〜２ ５パーセントに上昇する。次に、押し出し機からの排出物を約３４１ボンド／時 の速度で下流の乾燥機／冷却機に送る。押し出し機への水分の流れを約９６ポン ド／時に維持し、温度を８２°Ｃから１３０　’Ｃの範囲に保持する。乾燥機／ 冷却機からの排出物を約３４１ボンド／時の速度および約８％の水分レベルに維 持する。この結果、安定化処理された米糠が得られる。これらの条件により安定 化処理された糠の貯蔵も可能になる。 安定化処理された糠を、重量約２対ｌの割合でヘキサンに浸漬する。典型的には 、材料の約１０〜１００ｇをこのプロトコルを用いて抽出し得る。一般には、防 爆性の通気フードに内蔵された蒸気テーブルを用いて、ヘキサンを約６０℃に加 熱する。 但し、他の溶媒および他の温度もまた使用し得る。ヘキサン／オイルミセルを濾 過によって糠から取り除く。糠のオイル含有量を１パーセントより低くするため には、約５〜６回の洗浄が必要である。蒸気による穏やかな加熱により、脱脂さ れた糠およびヘキサン／オイルミセルの両方から溶媒が取り除かれる。 安定化処理された糠を１００〜５００ポンド抽出する場合は、以下のプロトコル を用いるとさらに実用的である。安定化処理された糠を約１１１ポンド／時の流 速で向流抽出機に供給する。 新しいヘキサンを約３１２ポンド／時の速度で導入する。新しい溶媒（ヘキサン ）の温度を約５０℃に維持し、抽出機の温度は約５２℃に維持する。抽出機内の 保持期間は典型的には約４５分である。得られた製品はオイル含有量が１パーセ ントより低い脱脂糠である。抽出機の出口から出てくるヘキサン／オイルのミセ ルを、プレートおよびフレームフィルタープレスを介して濾過する。次に濾過し た混合物を蒸気加熱の蒸留器に吸引して、蒸留器にてヘキサンを蒸発させ、凝縮 機により回収して再利用する。 抽出および溶媒除去の後、典型的には、未加工の米糠オイルからゴムおよびワッ クスを除去し、漂白し、また蒸気蒸留％の水および０，１５重量％のリン酸（８ ５％試薬グレード）を２段階で添加することにより行う。温度を約８２°Ｃ〜８ ８℃で１０分間保持し、次にゴムを含有するスラッジをウルトラフィゲーシｌン （ｕｌｔｒａｆｕｇａｔｉｏｎ）により除去する（例えば、米国特許策４．０４ ９．６８６号を参照）。ゴムを除去した糠を約５℃〜８℃に冷却して２４時間保 持する。ワックスを除去したオイルはワックス上に層を形成し、この層は真空ポ ンプを用いて静かに移動させ得る。漂白は公立の米国オイル化学者協会（Ａ＋５ ｅｒｉｃａｎ　ＯｌＩ　Ｃｈｅｍｔｓｔ’ｓ　５ｏｃｉｅｔｙ）による方法６ｃ 　８ａ−５２に従って行う。 物理的な精製は、約２５０°Ｃでおよび約３　ｉｓ　Ｈｇで約２時間、ガラス製 の脱臭機にて行う。 以下の実施例では次の特定のプロトコルが参照される。安定化処理のプロトコル は、以下に規定した正確な条件の下で、上述の一般的な方法に従って行われる。 プロトコル！　− 押し出し機：　ｆｉｎｇｅｔモデルｘ−２５標準スクリ１−／胴部設定： 二と土ｌ旦　１１並二上　エム１土二ｌ旦　１１ヱニ上Ｓ　２ｇ７１４−９　５ 　２８３２０−１２、　２８３１８−１　２　２８３２４−５１皇グエ設亙 り工Ｚ五二ニヱ　糺定　１１ヱニ上 スペーサ　０．３７５　２１１３４０−１１裏部プレート　０．６２５　２８３ ６１−５１中間プレート　０．２１８　２８３１６−７２３前部プレート　０． ２３５　２８３８９−５０７１１条豆 供給速度　１０００ポンド／時 温度　グイ出口で１７０℃ 圧力　９７５〜１０２Ｓ　ｐｓｉ 水分供給　１２％ 水分排出　９．６駕 保持期間　１５秒 操作期間　８時間 試料サイズ　５０ポンド プロトコルＩ　−の′　゛ （１１然汲ｌ：　プロトコル１ １１１墓段量＝ １に番１見：　Ａｎｄｅｒｓｏｎ　４インチスク■ニー　。ン：標準カットフラ イトＬ工改定： 直径：　０．１８７５インチ ランド：０．７％インチ 櫟上り［住 供給速１ｉ　３７８ポンド／時 シャフト速度　２）９　ｒｐｍ 蒸気射出　３６ポンド／時（８番ホールで３２　ｐｓｉ）機械的圧力　７５０　 ｐｓｉ　（推定）水分供給　１１．４％ 排出水分　１５％ 排出速度　４５０ポンド／時 排出１度　１２１″Ｃ プロトコル　−　。 プロトコルＩ＋（水分１５％）の湿った熱安定化生成物をアルミニウムのトレー 上に排出し、水分量が８〜１０％になるまで１０１．１℃のトレーオーブン中に 置いた（約１．　５時間）。その後トレーをトレーラツクに置き、周囲温度（約 ２０℃）まで冷却した。 プロトコルＶ−オイル　ラボート１−゛オイル対ヘキサン比＝１＝４ 洗浄回数＝　３ 抽出温度：　４０℃ 弱真空中、穏やかな加熱（４０℃）によりヘキサンを抽出物から除去した。 プロトコルＶ−オイル　パイロ・・トフーント。 オイル対ヘキサン比＝１：４ 洗浄回数＝　６ 抽出温度：　６０°Ｃ 抽出量：　２０ポンド 収量：　１６ポンド脱脂された糠 ４ポンド粗油 １１５．５°Ｃ１，：加熱してヘキサンを抽出物から除去した。 プロトコルＶ！−オイル　。 オイル対へ牛サン比＝１：４ 洗浄回数＝　６ 抽出温度：　２０’Ｃ（周囲） 抽出量＝　２０ポンド 収量：１６．４ボンド脱脂された糠 ３．６ポンド粗油 １１５．５℃に加熱してヘキサンを抽出物から除去した。 プロトコルＶｌ＋−ワ・・クス。 粗油２０ポンドを４°Ｆ（−１５，６℃）にて２４時間遠心分離した。ワックス を除去したオイルを含む上澄みを、固化したワックスからデカントした。その後 ワックスを遠心分離し、混入した粗油を含むワックス（０，５９ボンド）および ワックスを除去したオイル（１９，４０７ボンド）を除去した。 ２−−Ｐ　５の 米糠をプロトコル■に従って安定化した。安定化された米糠１．０ｇを砕いて細 かい粉とし、使い捨てのスクリューキャップ付きチ二−ブ中で、シェーカーを用 いてメタノール８ｍｌで３０分間抽出した。その後懸濁液を２００Ｏｒｐｍで１ ０分間遠心分離してメタノール層を回収し、メタノール層を真空中４０°Ｃにて 蒸発させた。その後残った乾燥残渣をンエーカー上で３分間振とうすることによ って４ｍｌのへキサンで抽出し、２０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。得られ た上澄みを注入バイアルに移し、キャップして再び２分間遠心分離した。蒸発し てＴＲＦを産出した。 新規なトコトリエノールＰ２５を含有するＴＲＦ　Ｉ　Ｏｍｇをヘキサン０．５ ｍｌ中に溶解し、最初にヘキサン２ｍｌで平衡化したＢｏｎｄ　ＥｌｕＬｅ　Ａ ｍ１ｎｅカラム（１，０ｍ１）に結合させた。ついでカラムをヘキサン１ｍｌで 洗浄し、ヘキサン中３％のイソプロパツール溶液１ｍｌで洗浄した。　このステ ップで、はとんどの既知のトコル生成物を除去した。次に、ヘキサン中５％のイ ソプロパツール溶液１．０ｍｌをカラムに流した。回収した溶液を蒸発させ、Ｐ ２Ｓを１．８５ｍｇおよびトコトリエ／−ル（Ｐ２１）を０．４４ｇ回収した。 最後に、ヘキサン中６％のインプロパツール溶液１．０ｍｌに引き続きへ牛サン 中１０％のインプロパツール溶液１．０ｍｌをカラムに流した。得られたフラク シ冒ンをＨＰＬＣで分析した。 Ｐ２１！不純物の痕跡はＨＰＬＣ）レース中には見られなかった。 爽１１」工 実施例２のアミンカラムで精製した化合物を更にＨＰＬＣにて精製し、トコトリ エノール（Ｐ２１）とＰ２Ｓとを分離した。 数回分離して得られたピーフッラフシコンを集めて、ＨＰＬＣにより分析した。 ＵＶおよび蛍光で観察したところ、各精製されたサンプルは、単一の対称的なピ ークを示した。トコトリエノール（Ｐ２＋）およびＰ２Ｓについて以下の分析デ ータを得た： トコトリエノール　Ｐ２１： ＮＭＲ（ＣＤＣＬ３）： ＭＳデータは分子式Ｃ２６Ｈ３１１０２に対応する。このパターンは、Ｒａｏら の”野菜油中のトコフェロールおよびトコトリエノールのガスクロマトグラフィ ー−質量分光測定を用いた同定および評価″Ｌ」１Ｌ」旦良［工拍」工、２０（ ２）、ｌ）Ｌ　２４０−２４５（１９７２）に報告されているように、α−１β −１およびγ−トコトリエノールで観察されたフラグメンテ−シランに特徴的で ある。ｍ／ｅ１６３”のピークは、側鎖（ＣＩＨ２７）’を失ってイオンＣｌ９ Ｈ１１０２（１６３，０７５９＞が発生したことを示す。ｗ＋／ｅ１２３’のピ ークは、水素再配列を伴うクロマン構造の解裂による側鎖の開裂、およびメチル アセチレンフラグメント（ＣＨ３−Ｃ＝ＣＨ２）の喪失に起因する。 ＮＭＲスペクトルは、通常Ｔ３中に存在するベンゼン環上６２．２のメチル基が Ｐ２＋のスペクトルから消失している以外はＴ３のものと同じである。 ＩＲは、３７００　ｃ　ｍ−’ｌこおけるフェノリックＯＨ基、１６５０ｃｍ− ’におけるベンゼン環、および１６８０ｃｍ−’におけるクロマン環の存在を示 している。 これらのデータに基づき、Ｐ２＋の構造を、デスメチル−トコトリエノール（３ １４−ジヒドロ−２−メチル−２−（４゜８．１２−）リンチルトリデカー３’ 　（Ｅ）、７’　（Ｅ）、１１’−）リエニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６ −オール）と同定した： 爺（ＣＤＣＬ、）　： ＭＳデータは分子式Ｃ２５Ｈ３ｓＯ２に対応する。このパターンは、クロマン環 上の酸素に隣接するメチルが消失している以外は、γ−トコトリエノールで観察 されたフラグメンテーシｌンに特徴的である。 ＮＭＲスペクトルは、デスメチル−１３のものと同様である。 ＩＲは、３３８８　ｃ　ｍ−１におけるフェノリックＯＨ基、１４９４ｃｍ−１ におけるベンゼン環、および１３５２ｃｍ−’におけるクロマン環の存在を示し ている。 これらのデータに基づき、Ｐ２Ｓの構造を、ジデスメチルートコトリエノール（ ３，４−ジヒドロ−２−（４，８，１２−トリメチルトリデカ−３’　（Ｅ）、 ７’　（Ｅ）、１１′−トリエニル）−２Ｈ−１−ベンゾビラン−６−オール） ト同定した： （以下余白） ４−−Ｐ＋　およびＰａｔの　およ 米糠をプロトコルＩに従って安定化した。安定化した米糠１．０ｇを微粉状に粉 砕し、　（１分間の休止期間を置いて）３分間マイクロ波を照射し、Ｔ３化合物 および１３類似化合物の全ての結合を切断した。次いで、マイクロ波を照射した 米糠を、ネジで蓋をした使い捨てのチューブ中でシェーカーを用いて、メタノー ル７１で３０分間抽出した。懸濁液を２００Ｏｒｐｍで約５分間遠心分離した。 上澄み液を除去し、そしてメタノールを４０℃の真空下で蒸発させた。得られた 残留物は、遊離の、および前もって結合したＴ３化合物およびＴ３３類似化物の 混合物を含有した。 上記残留物を、２５０μｌ　（２００ｍｇ）のへ牛サンに溶解し、そミンカラム に入れた。次いで、カラムを１１１のへ牛サンで洗浄した。次いで、以下の溶媒 のアリコート０．５■ｌを連続的にカラムを通して溶出した：ヘキサン中の０， ５％イソプロパツール、ヘキサン中の１．０％イソプロパツール、ヘキサン中の １．５％インプロパ／−ル、ヘキサン中の２．０％インプロパツール、ヘキサン 中の２．５％インプロパツール、およびヘキサン中の３％インプロパツール。最 後に、カラムをヘキサン中の１０％インプロパツール０．５■ｌで洗浄した。得 られた画分を分析し、そしてＰｕｓおよびＰａｔを含有する画分を統合した（へ 牛サン中の１゜５％−３％のインプロパツールを用いて集めた画分のみがＰｌら およびＰｌ９を有意量含有した）。 Ｐ＋６およびＰｕｓを分離するために、ヘキサン中でインプロパツール濃度を０ ．２５％から０，５％まで増加したことを除いて、本出願に記載のものと全く同 じＨＰＬＣ条件を用いた。これらの条件下で、Ｐ＋８は１３分の時点で溶出し、 そしてＰｕｓは１５分の時点で溶出した。ピーク画分を集め、モしてＦＩＰＬＣ で分析した。 これらの精製試料はそれぞれ、Ｕｖ分析および蛍光分析で観測されるような１つ の対称ピークを示した。以下の分析データはＰａｔおよびＰｕｓに対して得られ る：Ｐ１８： ＭＳ（Ｅｌ）：　ａｌｅ　３＋１０＋　（分子イオン）１６１＋ 分子式：　Ｃ２−、ＨａｏＯ 分子量（実際）　：　３８０．３０８４（計算上’）　：　３１１Ｇ、３０７９ 質量分析パターンは、ＰａｔおよびＰ２％の質量分析７＜ターンに類似していた 。＠ｌｅ　１６１＋でのピークは、Ｃ＋＋Ｈ＋ｉ０発生の原因となるＣ　ＩＩＩ Ｈ２７側鎖の消失を示した。これらのデータζこ基づいて、Ｐｅａに対して以下 の構造を同定した：（以下余白） Ｐ１ｇ＝ ＭＳ（Ｅｌ）：　ｖａ／ｅ　４２４＋　（分子イオン）２０５十 分子式：　Ｃ２ｅＨａｒａＯ３ 分子量（実際）　：　４２４．３０１０（計算上）　：　４２４．２９７？ 質量分析パターンは、Ｐ＋６の場合と同様にＰａｔおよびＰ２５の質量分析パタ ーンに類似していた。これらのデータに基づいて、Ｐ１１＋に対して以下の構造 を同定した：Ｌ立匠工 全コレステロール、ＨＤＬ−コレステロール、Ｌ、ＤＬ−コレステロール、アポ リポタンパク質（ａ）　Ｉ　およびアポリポタンパク質Ｂの血清レベルにおける 異なる米糠の効果を、鶏で測定した。 次のプロトコルを、表Ｉに示す試料を産出するために行った： 登録５；プロトコルＩ ｕ録６：プロトコルＩ続いてプロトコルＩ’／。 全ての他の試料は市販品より人手した。 鶏は、我々の最初のモデルとして選択した。なぜなら、鶏は（腸でコレステロー ルを合成するラットおよびマウスと異なり）ヒトのメカニズムと似たメカニズム を用いて、肝臓でコレステロールを合成するからである。鶏（６週間令のメスの ホワイトレグホン）の各グループに、ヒヨコ用マ・ノシココントロール食鶴また は試験米糠を２０％等量含有したコントロール食餌のどちらかを与えた。全グル ープによって消費した食餌量は、コントロールグループと比較し得、そして給餌 期間は４週間であった。トリは（０８００時において）層殺前の１４時間絶食さ せた。 鶏粉餌飼料は以下の成分を含有する： 暖公　１１エエＬ コーン（８，８％タンパク質）　６１５．０あらびきダイズ　３３５．０ コーンオイル　１Ｏ１０ 炭酸カルシウム　１０．０ リン酸シカルシウム　２０，０ ヨード塩　５．０ ミネラル混合物ａ２．５ ビタミン混合物ｂ２．５ １飼料１ｋｇ当りに含有されるミネラル混合物：硫酸亜鉛・Ｈ２Ｏ，１１０謁ｇ ；硫酸マンガン５Ｈ２０，７０１ｇ　；クエン酸第二鉄・Ｈ２Ｏ，５００，０＋ Ｉｇ；硫酸銅・５Ｈ２０，１６，０ｍｇ；亜セレン酸ナトーノウム、０．２ｍｇ ；　ＤＬ−メチオニン、２．５ｇ：塩化コリン（５０％）、１５ｇ；−Ｃトキシ キン（ｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎ）　（１，２−ジヒドロ−６−エトキシー２．２． ４−１−リンチルキノリン）、１２５會ｇ；およびチアミン−ＨＣｌ、１．８ｌ ｇ０ ５飼料１ｋｇ当りに含有されるビタミン混合物：　ビタミンＡ、１．５００単位 ；　ビタミンＤ３．４００単位：　ビタミンＥ、１０単位；　リボフラビン、３ ．６ｌｇ：パントテン酸カルシウム、１０．０ｍｇ；ナイアシン、２５．０ｎｇ ；ピリドキシン−ＭＣＩ、　３．０ｍｇ；フォラシン、０．５５＋ｉｇ；　ピオ チン、０．１５−ｇ；ビタミンＢ１２．０．０１ｍｇＢおよびビタミンに１、Ｏ ，Ｓｔｍｇ。 結果を以下の表Ｉに示す。増加および減少のパーセントは括弧内に示す。 （以下余白） 、４

【 ２１１＋、Ｏ−２（２ｅＥｃｐａ、ｌ　＋５５．ｃｚ１５Ｂ９６．Ｏｔ４．９９ ’　ｃｚ、ｂｔ４．１２”　＋ｚ６．ａｔ３．ａ＋＾　３０D４：＋、３１Ａ （９３，７１＋９２．１１　ｆ＆８．９１　＋９５．４１　＋９６Ｊ）（２ｏｚ ε中、） １　給餌期間は４週間であった；屠殺時間は０８００時であった。層殺前の１４ 時間、トリを絶食させた。データは平均±ＳＤで表した；ｎ数は、グループ当り ６羽の鶏であった。 ２　増加または減少のパーセントは括弧内に入れである。 ０−１ｌｌ共通の上付き文字を用いない値は、Ｐ　＜　０．０１で異なる。 他の食餌と比較すると、安定化した米糠を含有する食餌力ｆコレステロール還元 活性に優れていることが示された。コントロール食餌と比較すると、有利なこと には、上記食餌１；！ＬＤＬ−コレステロールレベルをほとんト３５％低くシタ 力、一方、ＨＤＬ−コレステロールレベルはほんの５．９％だけ低下するだけで あった。さらに、アポリポタンパク質Ｂに対するアポリポタンパク質（ａ）＋の 比率が２１％増加した。この比率は、心臓の冠状動脈疾患（Ｎａｉ　ｔｏら、「 アポリポタンパク質測定の臨床的重要性Ｊ　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｍｍｕ　ｏａ ｓｓａ　、　９（１）、　ｐｐ、１ｌ−２０（１９８６）参照）に対する危険を 評価するための指針として用いる。 尖１１凹」− 我々は次いでＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ、コレステロール７α−ヒドロキシラ ーゼおよび脂肪酸シンセターゼの肝臓の酵素的活性、ならびにこれらを摂取した 鍋中のトリグリセライドおよびグルコースの血清レベルに対する、異なる米糠の 影響を決定した。給餌条件は、実施例５に記載した条件と全（同じであった。試 料を実施例５に記載のように調製した。 結果を以下の表１１に示す。増加および減少のパーセントを括弧内に示す。 （以下余白） ＋２０：　Ｅｃｐａ、ｌ　（Ｕ、９１　（１０５，３１＋７９．９１　＋’Ｍ、 ４１　（８７，５１１給餌期間は４週間であった；屠殺時間は０８００時間であ った。屠殺前の１４時間、トリを絶食させた。データは平均±ＳＤとして表した ；　ｎ数は、グループ当り６羽の鶏であった。 ２　増加または減少のパーセントは括弧内に示す。 ３　ミクロソームタンパク質のＩＢ当り、１分当りの合成されたメバロン酸のｐ −モル数。 １　ミクロソームタンパク質の１ｍｇ当り、１分当りのｃ　Ｉ　Ｊ　Ｃ］−］７ −αヒドロキシコレステローへの一′Ｃ］−コレステロールのｎ−モル数。 ５　サイドシルタンパク質の１ｍｇ当り、１分当りの酸化されたＮＡＤＰＩの１ 〜モル数。 ｏ−（共通の上付き文字を用いない値は、ｐ＜０．０１で異なる。 表１１に示すように、安定化した米糠を含有する食餌は、コレステロールの生合 成の律速酵素である）ＩＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの活性を、著しく減少させた （コントロール食餌に比較して２３％を超えた）。しかし、コレステロールの分 解の原因となる酵素の活性、つまりコレステロール７αヒドロキシラーゼの活性 は、実質上は影響されなかった。さらに、この食餌はトリグリセライド（脂肪） およびグルコースの血清レベルをそれぞれ１５．５％および１７．７％還元した 。 ＩＪＬ興工 次に、これらの米糠油によって補足された食餌された鶏の血清脂質パラメーター に対する種々の供給源から抽出した米糠油の効果を比較した。６羽の鶏からなる 各グループ（生後６週間の雌の白色レグホン）に１４日間、実施例５に記載した 、鶏のマ・ノシュ食餌を与えた。この期間が過ぎると、これらの鶏に、補足物と して種々の油を５％含有した鶏のマノシュ食餌からなる食餌を与えた。コントロ ール食餌には、補足物としてコーン油が５％含まれていた。４週間後、この鳥を ３６時間絶食させ、次いで屠殺前４８時間に（ｏｓｏｏ時間で）再び食餌を与え た。全グループによって消費された飼料の量は、コントロールグループに匹敵し た。表■に示した試料を得るために、以下のプロトコルを実施した：エントリー ２：プロトコルＩ１次いでプロトコル■エントリー３：プロトコルＤＩ、次いで プロトコル■エントリー４：プロトコルｒｎ、次いでプロトコル■エントリー５ ：プロトコル■ エントリー６：プロトコル■ 他の全ての試料は、市販で入手可能な供給源から得た。 この結果を以下の表■に示す。増加または減少のパーセントを括弧中に示す。 Ｊ虹し匡ジとと一一且５圧り一一−− 籠ヤシｎコ＞　＋　彦　Ｃｈａｌ　東Ｃｈ枳、　し口し・Ｃｈｏｌ　）ソブソセ 、圧中　２；０．ス１給餌期間は４週間であった；屠殺時間はｏａｏｏ時間であ った。鳥を屠殺する前、１４時間絶食させた。データは平均値±ＳＤ；　ｎ＝６ 羽の鶏／グループ。 ２増加または減少のパーセントを括弧中に示す。 ″１共通の上付文字を用いていない値はＰ＜０．０１で異なる。 冷抽出したルイジアナ米糠油を５％補足した食餌は、他の食餌以上に、コレステ ロールを低減させる優れた能力のあることを示した。全血清およびＬＤＬ−コレ ステロール（それぞれ３４．３％および５７．８％）の著しい減少が記録された 一方、ＨＤＬ−コレステロールのレベルがほんの僅が減少した（１０．８％）。 トリグリセリドおよびグルコースのレベルの減少も見られた。 」１１１ 本実施例は、ワックス（ステロール）が、ルイジアナ米糠およびその油のコレス テロールを低下させる性質の原因ではないことを示す。６匹の鶏からなる各グル ープ（生後６週間の雌の白色レグホン）に、実施例５に記載のヒヨコ用マッン二 食Ｂ（３種の異なる量のワックス（ステロール）のうち１つ・　ＴＲＦ　５０ｐ ｐｍ（実施例２で調製）、またはルイジアナ米糠油のメタノール不溶画分の５％ 等量を補足した）を与えた。全グループによって消費された飼料の量はコントロ ールグループに匹敵し、モして給餌期間は４週間であった。この鳥は、　（０８ ００時間で）層殺する前、１４時間絶食させた。以下のプロトコルを、表■に示 した試料に対して行ったワックス（エントリー２〜４）：プロトコル■。 ＴＲＦ　（エントリー５）を実施例２に記載の方法を用いて得た。メタノール不 溶画分くエントリー６）を、ルイジアナ米糠油（プロトコルＩおよび■を用いて 調製した）を凍結し、次いで遠心分離することによって得た。生じた上澄み液を ２倍容量のメタ／−ルで３回抽出した。 他の全ての試料は、市販で入手可能な供給源から得た。 結果を表■に示す。増加または減少のパーセントを括弧中１給餌期間は４週間で あった；屠殺時間は０８００時間であった。鳥を層殺する前、１４時間絶食させ た。データは平均値±ＳＤ；　ｎ＝６羽の鶏／グループ。 ２　ミクロソームタンパク質１ｍｇあたり１分あたりのｐ−モルノ合成したメバ ロン酸。 ３　ミクロソームタンパク質１ｍｇあたり１分あたりのれ一モルの［１４Ｃ］７ α−ヒドロキシコレステロール。 ４増加または減少のパーセントを括弧中に示す。 Ｑ−Ｑ共通の上付文字を用いていない値はＰ＜０．０１で異なる。 ステロールを補足した食餌は、全血清またはＬＤＬ−コレステロールのレベルを 減少させるのに有効ではなかった。ステロールを補足した食餌で、記録した全コ レステロールの最大減少量は１０．６％であり、ＬＤＬ−コレステロールの最大 減少量はわずか６．５％であった。最低限の減少だけがＨＭＧ−ＣｏＡレダクタ ーゼの肝臓の酵素活性において見られた（１１、　６％）。それとは逆に、ＴＲ Ｆのメタノール可溶性画分を補足した食餌を与えた鶏は、全血清コレステロール （２７゜２％）、ＬＤＬ−コレステロール（５８，２％）およびＨＭＧ−ＣｏＡ レダクターゼの肝臓の酵素活性（１９，８％）のレベルで大幅な減少を記録した 。従って、ステロールよりはむしろＴＲＦのメタノール可溶性画分（本発明によ りトコトリエノールを含有する）が、米糠油の著しいコレステロール低下性の原 因であった。 支癒亘１ ステロールが、米糠に見られる種々の酵素および血液成分の血清レベルを減少さ せる原因である力）どう力）を味定するために本実験を行った。実施例８番ご記 載の食餌条（牛を用ｔ）た。 試料を実施例８に記載のようもこ調製した。 結果を以下の表Ｖに示す。増加また１ｉ減少のノく一セントを括弧中に示す。 １給餌期間は４週間であった；屠殺時間Ｃよ０８００時間であ値±ＳＤ；　ｎ＝ ５羽の鶏／グループ。 ２サイドシルタンパク質の１ｍｇあたり１分あたりのｎ−モルの酸化されたＮ　 Ａ　Ｄ　Ｐ　Ｈ。 ３増加または減少のパーセントを括弧中に示す。 ｏ−（共通の上付文字を用いていない値は、Ｐ＜０．０１で異なる。 これらの結果は、ステロールが、トリグリセリド、グルコース、トロンボキサン Ｂ２のレベル、または米糠およびその油に見られる血小板第４因子のレベルを減 少させる原因でないことを示す。事実、ステロールは増加するか、またはそれら の各因子のレベルに対して有意な効果を有しなかった。それとは逆に、ルイジア ナ米糠のＴＲＦのメタノール可溶性画分を補足した食餌を与えた鶏は、これら因 子の全てにおいて有意な減少を引き起こした。 実］１乳工」− この研究では、８週齢の雌鶏の肝臓から単離した肝細胞中のコレステロールに関 係する酵素の活性に対する、米糠から単離した３種のトコトリエノールの効果を 測定した。鶏を８週間ヒヨコ用マノン１で給餌した。続いて、それらを４０時間 絶食し、最後に、層殺する前に４８時間再給鶴した。続いて、次の標準的方法に したがって、肝細胞を調製した。 各化合物を、次のプロトコルを用いて、ＴＲＦから単離した二ボンド溶出アミン カラムを、２　ｍ　ｌのへ牛サンで平衡化した。１０ｍｇのＴＲＦ　（０，５ｍ ｌのへ牛サンに溶解）をアミンカラムに結合させた。カラムを１ｍｌのへキサン 、次イテ、３％インプロパツールのへ牛サン溶液１ｍｌで洗浄した。Ｐ−２１お よびＰ−２５を、５％インプロパツールのへ牛サン溶液を用いて、カラムから溶 出した。続いて、１０％イソプロパツールのへ牛サン溶液を用いて、不純物Ｐ− ２０を溶出した。α−トコトリエノールもまたテストした。 結果を下記の表Ｖｌに示す。増加または減少のパーセントを括弧内に示す。 （以下余白） Ａ　Ｖ＋ １、　０．０　２６４（１００，０１１７，２＋１００．０＋　２ｊｌ　ＴＩＧ Ｏ，ＯＩＺ、　＋０．０　ｚｌ、＆　＋７９．９）　ｌｓ、２　＋ａａ、ｔ１　 ２．１２　（９１Ｊ１３、２０．０　＋７．３　Ｃ６４，６１１４４（１！Ｌ１ ．２１　２．２Ｆ　（９１１，７）４、４０．０　１６．７（６２４１１２，４ （７’２．ｌｌ　２．ヌ　（１０１，３）１、０．０　２６．８（１００，０１ ＋７．２　＋＋ＯＯ，Ｏ１２４１（＋ＯＯ，ＯＩＺ、ＩＱ、Ｑ２ＱＪ、（７４， １１１４，１（Ｕ、ｌ１２．４１（ＩＯム、Ｘ）。 ３、２０．０　＋６．７　（６２，３１１２，７Ｉｎ、ａ）３．４０　（１０３ ，９１４、４００＋４．２　（５２，９１１１８（閏、６１　２．３９　（＋０ ３．Ｓ）５、８０．０　１４ｊ　（５１４１１０，２＋５９．１１　１４７　（ １０２，６）１、　０．０　２６．ａ（１００，０＋　１７．２　＋１００．０ １　２４１　（１００，０１２、１０，０１９，０（７０，９１１６，２（９４ ，２１２４１（ＴＯｆｌ、９１４、４０．０　＋２．４　＋４６．３１　１２． ７　ｉｎ、ａｌ　ＺＪＡ　（＋０５．６＋ｌ　給餌期間は、８週間であった；鳥 を４０時時間音し、そして４８時時間給餌した。午後１０時に２つの肝臓から標 準的な方法によって肝細胞を調製した Ｐ２Ｓは、最大活性減少率がそれぞれ４６．６％および５８゜６％であり、非常 に効果的な用量依存性のＨＭＧ−ＣｏＡ’Ｊダクターゼ阻害を示した。事実、Ｐ ２ｓは、既知の高コレステロール薬、α−トコトリエノールよりもより高い効果 を、実質的に及ぼした。α−トコトリエノールは、わずか３７．７％の最大減少 率しか示さなかった。ステロール混入物Ｐ２＋１は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクター ゼ活性に同等重大な影響を及ぼさなかった。 大Ｊｌユ」− 次に、米糠から単離したさまざまなトコトリエノールおよびトコトリエ／−ル様 化合物のＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼに対する効果を測定した。２０．０ｇの安 定化された米糠を、２００．０ｍｌのメタノールで抽出して、さまざまな紫外線 吸収性不純物およびトコトリエノール（総量６．７ｍｇ）を除いた。この操作を ４回繰り返した。残さを、デシケータ−中で減圧乾燥し、次いで、３０ｐｓ　Ｉ の圧力のもとで、２時間、１８０℃で加熱した。続いて、乾燥残さを、再び２０ ０゜０ｍｌのメタノールで抽出した（３．４ｍｇ）。２０μ＋の代わりに１００ μｌをインジェクトした他は、さまざまなピークをＨＰＬＣて精製した。本研究 に必要な十分な量の材料を得るために２０回の分取を行った。３２．３６．４５ および５４分時の溶出ピークを、実施例１０と同様にして鶏胚細胞でテストした 。 ＨＭＧ　−Ｃｏ　Ａリダクタ−ゼア、セイの結果を、下記の表Ｖｌ＋に示す。 １１　０．００　２８．７ｇ　２Ｌ７ａ　２＆７ｇ　２１１１２）　ＩＯ，ＯＯ ２＆、６７　２３．７８２２．６１　２５．４６３１　２０．００　２１．３１ 　２Ｑ、１２　２０．３３　１９．６７４１　３０．００　ｔａｊ６　＋７．２ ４　１９．６７　２０．＋１５１　４０．００　＋６．５９　１７．３４　＋８ ．２１　＋１１．＋９６１　５０．００　１６．６１　＋５．２１　＋ｌ１１． ４０　１８．２０１　給餌期間は、８週間であった；鳥を４０時時間音し、そし て４８時時間給餌した。午後１０時に２つの肝臓から標準的な方法によって肝細 胞を調製した これらの化合物それぞれは、ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ活性を阻害する能力を 示した。最も注意することは、Ｐ３８が４７％の最大活性減少率を示したことで ある。 実１１乳上」工 本実施例では、ＴＲＦおよびその構成成分の、ＨＭＧ−ＣＯＡリダクターゼおよ びコレステロール７α−ヒドロキシラーゼの肝臓の酵素活性に対する効果を測定 した。１２羽の鶏（６週齢の雌のホワイトレグホン）の各グループに、コントロ ール食餌、あるいはＴＲＦ、ＴＲＦの構成成分、市販のコレステロールインヒビ クー（ロバスタチンあるいはゲラニオールのどちらか）または市販のインヒビタ ーの組み合わせを補足したコントロール食餌のどちらかを与えた。消費する飼料 は、鶏１羽あたり１１．１９−１１．６０ｇの範囲で、４週間給餌した。鳥を３ ６時間絶食し、最後に、層殺（０８００時）前に４８時時間給餌した。 ＴＲＦ　（エントリー２）を、実施例１０に記載の方法で調製した。ゲラニオー ルは、Ｓｉｇｍａ　ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ、から入手し、ロバスタチンは、ＬＯ ＶＯＣＯＲと％Ｘう商品名のものとして入手した。 本研究の鶏の食餌は、次の成分を含有していた：（以下余白） ■　パーセント コーン（９，３％タンパク質”）　６１．５大豆ミール　３０．０ （４４，０％タンパク質） 肉片（５０，０％タンパク質）５．０ 炭酸カルシウム　０．　５ リン酸二カルシウム　１．０ アルフアルフア　１．　０ （１７％タンパク質） ミネラル混合物ａ０．５ ビタミン混合物６０．５ ８ミネラル混合物は、１ｋｇの飼料あたり：　５０ｍｇの硫酸亜鉛；２．Ｏｍｇ の塩化ナトリウム；および５０．０ｍｇの二酸化マンガンを含有。 ５ビタミン混合物は、１ｋｇの飼料あたり：　２０００単位のビタミンＡ；２０ ０単位のビタミンＤ３；１０単位のビタミンＥ、３．６ｍｇのりボフラビン；０ ．０１ｍｇのビタミンＢ１２；および０．５０ｍｇのビタミンに＋を含有。 結果を下記の表Ｗｉｌ＋に示す。増加または減少のパーセントを括弧内に示す。 表Ｖｌｌ＋ ＋１フｚトｏ−Ｉｂ１４１１＋ＣＤｌ５＋３．２４ｒＸ、Ｏｆ・Ｉｌｌ、２Ｍ、 ２Ｓ’＋＋ｏｏ、ｏｏ＋　＋＋ｏｏ、ｏｏ＋ ２１　ＣＤ　−ｆｌＦｌｌｏ；　５ｏ−４４日４＋に、２１１”　ｔｏ、ｇｏ＋ ｆｆ１．＋ａ’ｉ８５．９ｓｌ　＋ＩＯ５，ＤＯ１ ３）　０１−　＠Ｔ３；　５Ｇ　ＰＬＳ９．０ｈｌＳＯ５”　１０．６９−１． ２０Ａ＋６９．４３１　（ＨＤＬ、６０１ ｃｌｃｏ−１−Ｉコ１ｓｏＩＰ４０１．９９ｔｉ、ＭＣｌ１＋、９７ｔｔ、Ｉｒ Ａ＋７ａ４２１　１１０７．３４１ ＄１０１−Ｊ・Ｉ、：５ｏｔｙｈ３８９．２ｂ８．５４’ｌｏ、？ｂＯ，＋６’ Ｒ’５１ｍ１’　＋１０７．１．４１’６）■−ｐ−２１・ｆ、；５０ｐａｓ３ ７１．７８＋ｉ、？９’ｌ＋、４Ｍ、２Ｇ”１７２、ＡＩｌ　Ｉｌｌ２．４３１ ７１０）　リ４Ｓ４，７　ＳＯ−’Ｍ４．ＩＯｒ％、ｂ４０１１．３９＋ｉ、２ ６”ｆ７Ｌ３３１　＋１１１．４５１ ｍ１　ｏ　＋　ｆｆ’５：Ｊ−に；　ｔｏｏ　ｐ　ｃｃ？、ａ９ｔ１２．ａ２” 　１６．２Ｍ、２Ｆ’ｃａ７ｊ５１　（ＩＯＱ、５９１ ｔｌ　ｃｏ　＋　ｏ＋５−Ｌ７Ｃ−；　１００−　５２７．ＩＪ１９３’　Ｉｌ ｊ＆＋ｉｊｌ”１１０２．６９１　＋１１０．９６１ ＋０１　Ｌｌ！Ｉ　＋〒＋：Ｊ−＋ｔ＋すバλ？十−μ２．４８ｍ１．ｇ’　＋ １　論Ｂ、　＋ｒ”５Ｇ　ＩＰ＋Ｓｏ　ＰＩ＆４．２＋＋　１１０９．９８１１ 　飼育期間は４週間であった。屠殺時間は、０８００時であった。給鶴期間（２ ８日）の最期に鳥を３６時間絶食し、４８時間再給臼し、続いて層殺した。デー タは、平均値上ＳＤ；ｎ＝１２羽の鳥／グループとして表した。 ２　ミクロソームタンパク質１ｍｇあたり、１分間に生成するＨＭＧ−ＣｏＡの ピコモル。 ３　ミクロソームタンパク質１ｍｇあたり、１分間に［”−Ｃ１７α−ヒドロキ シコレステロールに転換する［＋ＡＣ］　コレステロールのナノモル。 ４　増加のパーセントを、括弧内に示す。 Ａ−Ｄ　共通の上付文字を用いない値は、ｐ＜ｏ、ｏｔで異なる。 Ｐ２Ｓは、最も効果的なＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼのインヒビターであった。 ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの酵素活性は、Ｐ２５によって約２８％減少し、一 方、２倍量の販売しているコレステロール降下薬は、約１３％の減少しかもたら さなかった。これらのデータは、トコトリエノールの縮合した（ｆｕｓｅｄ）酸 素含有へテロ環は、ゲラニオールのような単環系と比較すると、生物学的活性を 増加させることを示している。 ３環系はさらに活性を増すものと考えられる。または、カルボニル基、ヒドロキ シル基およびアルキル基のような置換基を加えることも、トコトリエノール様化 合物の生物学的活性を増し得る。 爽１目」上」− 次に全血清コレステロールレベル、ＨＤＬ−コレステロール／全コレステロール 比、およびＨＤＬ−／　ＬＤＬ−コレステロール比に対してのＴＲＦおよびその 構成成分の効果について調べた。給餌条件を実施例１２と同一にした。 試料を、実施例１２に記載したようにして調製した。 結果を下記の表ＩＸに示す。増加または減少のパーセントを、括弧中に示す。 （以下余白） コＤ１．７１ｔ１．０ＪＣａｏ、４７ｔｏ、６７’４７．９７ｔＯ，５６Ｃ０， ６１５０傳−＋９２．２５１　（９６，１９１＋８７．＋２１　（１０４，３０ １（ｌＩｏ、Ｊ）”　’−１ｃｏ＋ｙ−ｒ、　＋１６．６６：１．４γ０　７♂ 、３９ｔ０．９６”　３７．５２：Ｏ，δ１０　０．６７５０　ｐ（ａ＋、ｇｓ ＋　（９１，７０１（６ａ、＋４＋　＋＋＋４．５０１　（１３７，５０１６＋ 　ｃｏ　リ−２１・ｒ　９２．９＋ａ１．ｚ７’　６ａ、ｕ：１．５２ｃ２２． ＋ｂ＝ｏ、５７Ｅ０．７４　１１Ｔコ ５０−＋６５．Ｏａｌ　７８２ｊ３）　＋Ｊ、２５１　（＋２６．５０１　（２ ０４，６０１ｙｌ　Ｏ）　＋　ｐ４５　・Ｔ　？５．５１ｔｌＪ＋’　７０．ｌ ２ｚ１．２５’　２３．００＝１．２４　０．７１　！、ｏ５５０　ｐｙａ　Ｔ Ｍ、９０１　＋ａＪ、ａ２１　＋４１．７１　＋１２５．３０＋　＋２００．６ ０＋１給鶴期間は４週間であった。採血時間は、ｏｇｏｏ時間であった。 データは平均値±ＳＤ：ｎ！１１２羽の鳥／グループとして表した。 ２増加および減少のパーセントを、括弧内に示す。 ０１共通の上付き文字を用いない値は、Ｐｒｏ、　０１で異なる。 Ｐ２＋およびＰ２５は、ロバスフチンおよびゲラニオールを含め、テストした他 のどの化合物よりも十分に大きな割合で血清コレステロールのレベルを減少させ た。Ｐ２Ｓは、約３３％の減少を引き起こした。これに対して、ゲラニオ−、ル は１４％の減少をもたらし、そしてロバスフチンはほんの１０％の減少しかもた らさなかった。Ｐ２＋およびＰ２Ｓは、またＨＤＬ−／ＬＤＬ−コレステロール 比を増加させる他の化合物よりも明らかに優れていた。これらの化合物の両方は 、ＨＤＬ−／ＬＤＬ−コレステロール比において１００％以上の増加を誘起する のに対し、ロバスフチンおよびゲラニオールは、最大で３１．５％で比を増加さ せた。 実１１性１」ヨ 次にアポリポタンパク質（ａ）＋、アポリポタンパク質Ｂ、トリグリセリド、お よびグルコースの血清レベル、ならびにトロンボキサンＢ２および血小板第４因 子の血漿レベルに対する、ＴＲＦおよびその構成成分の効果を測定した。給餌条 件を実施例１２と同一にした。 試料を実施例１２に記載したようにして調製した。 結果を以下の表Ｘに示す。増加または減少のパーセントを、括弧中に示す。 （以下余白） １給餌期間は４週間であった。採血時間は、０８００時間であった。 データは平均値±ＳＤ；　ｎ＝１２羽の鳥／グループとして表した。 ２増加および減少のパーセントを、括弧内に示す。 ０−″共通の上付き文字を用いない値は、Ｐ（０，０１で異なる。 Ｐ２１およびＰ２５は、最も強力なコレステロールインヒビターであった。それ らは最も高いＡｐｏ　Ａ＋とＡｐｏ　Ｂの比をもたらし、そして、その結果、ト リグリセリドおよびグルコースの血清レベルに最大の減少をもたらした。さらに 、それらは、また、テストした他のどの化合物よりも大きな割合でトロンボキサ ンＢ２および血小板第４因子の血漿レベルを減少させた。 支ｎ皿土ｉ 次に、高コレステロール血症のブタ中のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ、およびコ レステロール７α−ヒドロキシラーゼに対する、様々な米糠由来アトコトリエノ ールの効果を測定した。ブタはそのコレステロール代謝においてヒトとたいへん 似ているので、それらは高コレステロール血症、および関連した疾患の研究に有 用なモデルを提供する。本研究で用いたブタは、アポリポタンパク質Ｂ１　およ びＵについてのＬｐｄ’およびＬｐｕ’変異対立遺伝子を保持した。この遺伝学 的な欠陥のために、これらノフタは、自発的に上昇したＬＤＬ−コレステロール レベル、および高コレステロール血症を示す。これらのブタ中の血清コレステロ ・−ルア１４度は、正常な成熟したブタが、１２０〜１６０ｍｇ／ｄｉであるの に比較して、典型的には３００〜５００ｍｇ／ｄｉ以上である。結果として、ブ タは、ヒトに見られるアテローム性動脈硬化部位によく似た廣雑なアテローム性 動脈硬化プラークを発達させる。 ３頭の５力月齢のブタのそれぞれのグループに、コントロール食餌、あるいはＴ ＲＰを５Ｏｐｐｍ、または個々のトフトリエノールを５Ｏｐｐ−補足したコント ロール食餌のどちらかを投与した。 試料を実施例１１で記載したようにして調製した。１２時間の絶食の後、血清お よび血漿の試料を、給餌期間の最初から０時間、２１日めおよび４２日めに採出 した。４２日めの終わりにブタから血清および血漿を取り出した後、全てのブタ を全４０時間の間、絶食させ、次いで４８時間の間、再び給餌した。それぞれの グループの１頭のブタをそのとき層殺し、そして肝臓、腸、肺、心臓、腰筋肉、 脂肪組織、および腿の筋肉を除去した。 ブタの食餌は、以下の成分を含有した。 （以下余白） 話　Ｘ コーン（９，３％タンパク質）７８．３７大豆ミール（４４，０％タンパク質） 　１５．４２ラード　３．００ 炭酸カルシウム　０．９５ リン酸二カルシウム　０．９６ ミネラル混合物”　０．３０ ビタミン混合物ｂ１．００ １ミネラル混合物は、飼料１ｋｇあたり：　１１０園ｇの硫酸亜鉛・８２０　； ７０＋ｓｇ（Ｄ硫酸７７ガン・５Ｈ２０；５００ｍｇツクｘ７酸鉄・Ｈ２Ｏ；　 １６、Ｏｍｇの硫酸銅・５Ｈ２０；　０．２ｍｇの亜セレン酸ナトリウム；２． ５ｇのＤＬ−メチオニン；１．５ｇの塩化コリン（５０％）　；　１２５ｍｇの エトキシキン（１，２−ジヒドロ−６−エトキシー２．２．４−１−リンチルー キノリン）；および１．８ｍｇのチアミン−１１ｃＩを含有した。 ５　ビタミン混合物は、飼料１ｋｇあたり：　１，５００単位のビタミンＡ；４ ００単位のビタミンＤ３；ｔＧ単位のビタミンＥ、　３．６Ｂのりボフラビン； 　１０．０■ｇのパントテン酸カルシウム；　２５．Ｏｍｇのナイアシン；３． Ｏ■ｇのピリドキシン−ＨＣｌ　：　０．５５Ｂのホルアシン；０、１５ｍｇの ビオチン；０．０１■ｇのビタミンＢ１２；および０．５５ｇ＋ｇのビタミンに ＋を含有した。 飼料転換効率は、Ｐ２１で７％、およびＰ２％で１０％増加したが、全てのグル ープ中の体重の増加は、コントロールと比較し得た。 この研究の結果を表ｘ１に示す。増加および減少のパーセントを、括弧内に示し た。 １フ一ンー大豆ミールコントロール食餌または実験の食餌を、５力月齢のブタに ４２日間給餌した。続いてすべてのグループを４０時間の間、絶食し、そして４ ８日間の間、再び給餌した。屠殺時間は午前９．００であった。全ての組織を氷 上で保存した。 ＴＲＦ＝　トコトリエノールーリノチーフラクシ９ン。 ２データは平均値士ＳＤ；ｎ数は各グループ毎に３匹のブタからの６試料である 。 ０−８共通の上付き文字を用いない値は、ｐ＜ｏ、　ｏｔで異なる。 １フ一ンー大豆ミールコントロール食餌または実験の食餌を、５力月齢のブタに ４２日間給餌した。続いてすべてのグループを４０時間の間、絶食し、そして４ ８日間の間、再び給餌した。屠殺時間は午前９＝００であった。全ての組織を氷 上で保存した。 ＴＲＦＩＩトコトリエノールーリッチーフラクシ冒ン０２ダン０２平均値子５Ｄ Ｈｎ数は各グループ毎に３匹のブタからの６試料である。 １　へ゛−スライン値に対する増加また（言減少のへ°−七ント。 ＨＭＧ−レダクターゼの肝臓の酵素活性は、全てのテストしたトコトリエノール で、約３０％減少した。さらに、コレステロール７α−ヒドロキシラーゼの活性 において顕著な減少が見られなかった。これらの結果は、すべて時間に依存した 。そしてこれらの結果は、コレステロール生成における全体的減少を示し、コレ ステロール生合成の増加はながった。 支五匠■ さらに別の実験を、実施例１６に記載のブタに対して行った。 実験条件は、各グループ中の２匹の残りのブタを、４２日間の給餌期間の後に、 補給されないコントロール食餌に移したこと以外は同じであった。追加の７０日 経過後、血清および血漿試料を、試験のため１２時時間量した上記ブタから集め た。 試料は、実施例１２に記載のように調製した。 上記研究の結果を、以下の表Ｘ１ｌ−ＸＶに示す。増加および減少パーセントを 括弧内に示す。 （以下余白） １　給餌期間は６週間であった。採血時間は、１２時間の絶食後０．００９時で あった；丁１？Ｆはトゴ）９工ｌ−に’ｊｔｆ画分である。 ２　テ′−夕は平均±ＳＤで表される；ｎ数は各り′ドア毎に３匹の７゛りから の６試料である。 ３　へ゛−スライン値に対する増加または減少のへ°−セン）。 ０−８共通の上付文字を用いない値は、ｐ＜　０．０１で異なる。 ＬＸｌ１１ １　給餌期間は６週間であった。採血時間は、１２時間の絶食後０．００９時で あった；　ＴＲＦはトコトリエｌ〜ルリッｆ画分である。 ２　テ゛−夕は平均±ＳＤで表される：ｎ数は各り゛ルーフ°毎に３匹のフ゛り からの６試料である。 ３　へ゛−スラ佇値に対する増加または減少のへ°−セント。 ０１共通の上付文字を用いない値は、ｐ＜　ｏ、　ｏｔで異なる。 　ＸＩＶ １　給餌期間は６週間でありだ。採血時間（家、１２時間の絶食後０．００９時 であった；丁ＲＦはトコトリエノールリッチ画分である。 ２　テ′−夕は平均±ＳＤで表される；ｎ数は各り゛ルーフ°毎（こ３匹の７゛ りからの６試料である。 ３　へ′−スライン値に対する増加または減少のへ°−セント。 ｐ−Ｃ共通の上付文字を用いない値は、Ｐ＜　０．０１で異なる。 息ＸＶ １：ａ、ａ５ ３）　ロー町０１：　フ７，５ｃ。、　二′９二：：’ｚ＋　＋：ｏ互：：＋　 ｙ。、５１”　１ｏｌＪ４”０Ｐ １；乙３７ ４）　ロ叩゛５ｏ−バ詔：晶、　ぷニル　闇：、６゜、５．ｃ　μ、５２８コ― ・　Ｉ−７，９３１ニア、４０　＋：６．４７　１ニア、１＋５ＯｔＰ”　＋＋ ＯＯ，ＯＯ）　Ｌ９１３２）１１１１．５９）５７．１１２Ｃ１ａ１．ａ３”ゝ 　給餌期間は６週間であった。採血時間は、０．００９時であった。　ＴＲＦは ト】トリエノールリッチ画分である。 ２ｆ″−夕は平均±ＳＤで表される；ｎ数は各’）’　ｋ−７’毎に３匹のフ゛ 夕からの６試料である。 ３　へ゛−スライン値に対する増加または減少の八”−セント。 ０−９共通の上付文字を用いない値は、Ｐ＜０．０１で異なる。 試験したすべてのトコトリエノールは、全血清コレステロールおよびＬＤＬ−コ レステロールのレベルを、それぞれ約２５％および約１０％減少させた。さらに 、１（ＯＬ−／ＬＤＬ−コレステロール比が、試験した３つのトコトリエノール すべてに対して約２０％減少した。これらの減少はすべて時間に依存した。さら に、４２日後に観察された減少は、トコトリエノール給餌終了後１０週間にわた って継続した。この結果は、トコトリエノールが長時間にわたって血流中に残存 することを示唆する。理論によって拘束することは望まないが、トコトリエノー ルは、ＬＤＬ−およびＨＤＬ−リポタンパクと結合して輸送され得ると考えられ る。あるいは、トコトリエノールは他のタンパク質ともまた結合し得る。 支血匠■ 本実施例は、実施例１５に記載のブタに対する、アポリポタンパク（ａ）＋、ア ポリポタンパクＢ、トリグリセライド、グルコース、インシュリン、およびグル カゴンの血清レベル、ならびに、トロンボキサンＢ２および血小板第４因子の血 漿レベルを測定するために行った。 試料は、実施例１ｚに記載のように調製した。 上記研究の結果を、以下の表ＸＶＩおよびＸＶＩｒに示す。 増加および減少パーセントを括弧内に示す。 （以下余白） 蟲　ｒＶＩ ２）　Ｏ）◆ＴＩＦ１ｍ−５＊Ｈ５０オ詐緊６：２６ｔＬ、０７　：二８：３ｂ １．５０　．６６：６７：ｉ、、３９゛″′−“３″°−詔：訃ｊ＋　Ｉ＋“° ′°′と“７　°゛７“とＣ７７、μ）　＋ＩＳＯ，６９） １　給餌期間は６週間であった。採血時間は、０．００９時であった。 ２　テ゛−夕は平均±ＳＤで表される；ｎ数は各り゛ルーフ°毎に３匹のフ゛り からの６試料である。　ＴＲＦはトコトリエノールリッチ画分である０３　へ゛ −スライン値に対する増加または減少のパーセント。 ０−０共通の上付文字を用いない値は、ｐ＜　ｏ、　ｏｉで異なる。 ム　買Ｖｌ＋ １　とうもろこし−タ′イス″ミールコント０−ル食餌また（ま実験食餌を５ケ 月令の７゛夕に４２日間給餌させた。そしてすべてのり’　＆−７’が４０時時 間量し、４８日間再び給餌した。屠殺時間（よ午前９二〇〇であった。すべての 組織は氷上で維持された。ＴＲＦ　Ｇ±シコトリエノールリッｆ画分である。 ２　テ゛−夕は平均±ＳＤで表される；ｎ数：１各り゛ルーフ°毎に３匹の〕゛ りからの６試料である。 ３　へ゛−スライン値に対する増加または減少のへ゛−セント。 ｏ−ｃ共通の上付文字を用いなｔ１値は、Ｐ＜　０．０１で異なる。 上記の結果は、試験したすべてのトコトリエノールが、アポリポタンパクＢ、ト リグリセライド、グルコース、グルカゴンおよび血小板第４因子のレベルを、そ れぞれ約３０％、２０％、２５％、１７％および２１％減少させたことを示す。 上記トコトリエノールは、アポリポタンパク（ｉ）　ｔおよびインシュリンのレ ベルには実質的に影響しなかった。 支胤匠Ｊ 次いで、高コレステロール血症のブタの種々の組織中における全コレステロール 、トリグリセライドおよびグルコースの濃度に対する、トコトリエノールの影響 を測定した。 試料は、実施例１２に記載のように調製した。 上記研究の結果を、以下の表ＸＶＩ　Ｉ　Ｉ−ＸＸに示す。増加オよび減少パー セントを括弧内に示す。 （以下余白） Ｊ、ｒｖｍ １　とうもろこし−タ゛イス゛ミーｐｔコントロール食餌または実験食餌を５ケ 月令の７゛夕に４２日間給餌させた。そしてすべてのり゛ルーツブ力５４０時間 絶食し、４８日間再び給餌した。屠殺時間は午前９二００であった。すべての組 織は水上で維持された。ＴＲＦｌ！）コトリエノールリ？ｆ画分である。 ２　テ゛−夕は平均±ＳＤで表される；ｎ数は各り゛ループ毎ζこ３匹のフ゛り からの６試料である。 ０−５共通の上付文字を用いない値は、ｐ＜　ｏ、　ａｔで異なる。 へ゛−スライン値に対する増加または減少のハ゛−セント。 名ｘ＋・ 仝Ｊ旨・・・　〜７．。。−１２ コ謔鮎知７゛２ ＋＋）；１−０−＋４＋４４４ＴＯ＋　３ａａ、ｕ　３００．２４　１６３．５ １　１３０．５１　２０７．５５　２９４．４１　１ｓ７．刀B ＝５．！Ｏ：５．６Ｊ　：１５７　＝３．５９　＝５．５０　＝４．９９　２３ 、閏１　とうもろこし−タ゛イス゛ミールゴントロール食餌または実験食餌を５ ケ月令の７′夕に４２日間給餌させた。そしてすべてのり゛ルーフ゛が４０時間 絶食し、４８日間再び給餌した。屠殺時間は午前９：００であった。すべての組 織は水上で維持された。ＴＲＦはトゴトリエＩ−ルリッチ画分である。 ２　テ′−夕は平均±ＳＤで表される；ｎ数は各り゛ルーフ°毎の試料に対して ４回分板を行った。 ０−０共通の上付文字を用いない値は、ｐ＜　ｏ、　ｏｔで異なる。 ］ントロール活性のへ゛−セントは括弧内に示す。 ムＸＸ ＋１’７ｓ１．４．＄　（０）＋　３６１．０５　６６、＆６　６Ｌ］５　４２ ．ａ６　６５．？ｅ　ｚ＋、ｓｓ　５ｆｆ、ａ２ｔ７．７９ｚ５．δｌ　ｔ６． ４５　＝１．９１　＝２．５７　＝ｓ、ｏｌ　ｚ２．６０１　とうもろこし−タ ゛イス゛ミール］ントロール食餌または実験食餌を５ケ月令の７′夕に４２日間 給餌させた。そしてすべての９”　ｋ−７’が４０時間絶食し、４８日間再び給 餌した。屠殺時間は午前９・００であった。すべての組織は氷上で維持された。 ＴＲＦはトゴトリエｌ−ルリッチ画分である。 ２　テ゛−夕は平均±ＳＤで表される；ｎ数は各り′ループ毎の試料に対して４ 回分板を行った。 ３　コントロール活性のへ°−七ントは括弧内に示す。 ０−［１共通の上付文字を用いない値は、Ｐ＜　０．０１で異なる。 全血清コレステロールの減少は、試験した組織の各々で認められた。最も顕著に は、肝臓および大腿筋中のＰ２ｓで、全コレステロール濃度が、それぞれ３７％ および３０％減少した。トリグリセライドおよびグルコースの濃度に対する影響 は少なかった。 裏Ｊ！ＪＬＬＬ 次に、高コレステロール血症豚の種々の組織中の脂肪酸組成に対する、米糠油の 異なったトコトリエノールの効果を測定した。 脂肪酸のレベルを、それらのエステルとして測定し、各組織を２■ｌの生理食塩 水で混合し、ポリトロン（Ｐｏｌｙｔｒｏｎ）で３０秒間ホモゲナイズしたこと を除いて、Ｋ、　１ｌｉｒａｉら、　「う・ットにおける血清脂肪酸組成および リボタンノくり質コレステロールに対する食餌性脂肪および植物ステロールの効 果」、Ｌ」ｕｔｒ、　Ｓｃｉ、　ＶＨａｍｉｎｏｌ、、　３０．　ｐｐ、　１ｏ ｔ−１１２（１９８４）に記載の方法を用いて算出した。ホモゲナイゼイシ３ン 後、試料を８＋＊１のヘキサンで２０分間振盪して抽出し、次いで１０分間、２ ０００　ｒｐｍで遠心分離した。ヘキサン層を４０℃で乾燥し、そして残渣を０ ．５諷ｌのジアゾメタンで処理して脂肪酸エステルを生じた。 各脂肪酸エステルの同定を脂肪酸エステルの標準混合物（Ｓｉｇ＋ａａ　Ｃｈｅ ｍｉｃａｌ　Ｃｏ、から入手）に対して比較すること（こより行った。 図１−４に示されるように、その結果は、試験しｔこトコトリエノールが、試験 したあらゆる組織中の全脂肪酸濃度を低下させ得ることを実証する。大抵の印象 的な低下は、心筋（７６％）、腰部筋（８１％）および大腿筋（６６％）におい て見られる。 最も大きい減少は、アラキドン酸のレベルで見られる。この減少は、フルチコス テロンのレベルの増加による。そのような増加は、ホスホリパーゼＡ２の活性を 阻害し、アラキドン酸代謝産物を順に減少させる。全体の脂肪酸の減少はまた、 それがこれらトコトリエノール免疫調節の役割の傾向を示すので、重要である。 支１匠主亙 次に、免疫機能に対するトコトリエノールの効果を測定した。この研究のモデル は、６週齢の雌の白色レグホン橿の鶏であった。各群１２羽の鶏に、何も補足し ない鶏の食餌、あるいはトコトリエノールｓｏ　ｐｐｍまたは市販の高コレステ ロール血症薬（ゲラニオールまたはロバスタチン）　１００　ｐｐｍを補足した コントロール食餌を与えた。試料を実施例１１に記載のように調製した。鶏に４ 週間に渡って給餌し、次いで採血した。 前もって３回洗浄しておいたヒツジ赤血球（ＲＢＣｓ）の５％ＰＢＳ（Ｖ／Ｖ） 懸濁液を鶏腹腔内に注入することにより抗体反応を測定した。血清５０μｇと微 小血球凝集法を用いて、ＲＢＣｓに対する抗体力価を決定した。この方法は、Ｗ ｉｔｌｉｎ、「マイクロタイトレーンフン法による抗体の検出」、Ｍ　ｃｏ　ｔ ｈ、　Ｍ　ｃｏｌ、　Ａ　１．。 ３３、　ｐｐ、　２４１−２５７　（１９６７）に記載されている。相対的１ｇ Ｇレベルを、２−メルカプトエタノールを用いて３０分間ブレインキュベーショ ンすることにより決定した。相対的１ｇＭレベルを、総抗体レベルからＩｇＧ抗 体レベルを差引くこと先こより計算した。 すべての抗体のレベルを、等容量の０．５％ＲＢＣ懸濁液を血球凝集するのに必 要な最大力価の２を底とするｌｏｇ（ｌｏｇ　ｂａｓｅ　２）として表した。こ の実施例の結果を以下の表ＸＸＩに示す。 １　給餌期間は４週間であった。採血時間は０８００時間であった。データは平 均値上ＳＤ；１群あたりｎｇｌ　２羽として表した。 ０−８　共通の上付文字を用いない値は、Ｐ（０，０１で異なる。 各トコトリエノールは特に、Ｐ２ｓで著しく、対照と比較して総抗体力価および ＩｇＭ力価を増加させた。ＩｇＧ濃度の微増もまた見られた。 実］１牲ユ」。 ヒト末梢血好中球におけるスーパーオキサイドの放出に対する既知のトコトリエ ノール、すなわちγ−Ｔ３の効果を決定した。好中球は、酸素遊離ラジカルの細 胞外源である。いったん活性化すれば、これらの好中球は内皮組織に付着し得、 そこで好中球は活性毒素、スーパーオキサイドを放出する。 スーパーオキサイドは炎症反応を増幅し、そして血液の局所循環を損なう。 従来法（Ｅ、　５ｅｒｂｉｎｏｖａら、「α−トコフェロールおよびα−トコト リエノールの抗酸化性における遊離ラジカルリサイクリングおよび膜内移動度」 、Ｆｒｅｅ　Ｒａｄ、　Ｂ’ｏ、　ａｎｄ　Ｍｅｄ、、　１０゜ｐｐ、　２６３ −７５　（１９９１））を用いて、試験された好中球をＦ　１ｃｏｌ　１−１ｌ ｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離により単離した。次いで、好中球を９６−ｈルプ レート内に置いた。同時に、γ−Ｔ３およびホルボール　ミルステート　アセテ ート（ｐｈｏｒｂｏｌ　ｍｙｒｓｔａｔｅ　ａｃｅｔａｔｅ）をウェルに加えた 。スーパーオキサイドアニオンの分泌をフェリチトクロームＣのスーパーオキサ イドジスムターゼ阻害的還元として測定した。 この研究の結果を図５に示す。 放出されたスーパーオキサイド量は、コントロールにおける１９．７　ｎ＋１ｏ ｌ（５ｘ　１０５細胞／時間に対して）から、それぞれ１０−６および１０−５ の７−Ｔ３濃度での８．０ｎｓｏｌおよびＯｎｍｏｌまで減少した。 本発明の多くの実施態様を記載したが、本発明の基本的な構築は、本発明の方法 および生産物を利用する他の実施態様を提供するために変更され得ることが明ら かである。従って、本発明の範囲は、実施例により表される特定の実施態様より はむしろ添付の工内求の範囲により限定されることが認められる。 １４：０　１６：０　１６：１ エコレス＋ローｖｊｌＬ譲Ｌｎ７フ Ｖ）　ＣＤ　＆　Ｐ−２１− Ｌフトリエ）−＋ｖ　、；　５０　ＰＰｎ　１７．０５　１５５．０７　６−３ ６Ｖｌ）　ＣＤ　＆　Ｐ−２５− １コトリ二ノー■し　、； ５０　ｐｐｎ　（Ｐ−２５）　２０．３０　１３２．０４　１２・１２番：ｌ、 λ−１０−１い１症の７７ ＩＩ）ゴ〉ドローｉし４セ平　（ＣＤ）　１６．２５　１３９．０１　０・７９ １ｖ）　ＣＤ　＆　＆−Ｅシト１）：Ｌノー１し　；５０ｐｐｎ　１７．８８　 ８５．２８　−島コレスーＴローＩｖｌｎ不夏の７ノ Ｖ）　ＣＤ　＆　Ｐ−２１− Ｆコトｌノ二ノー１し　；　５０　ｐｐｍ　１９．５９　１８３．６３　１９１ ３−４０　−−−Ｖｌ）　ＣＤ　＆　Ｐ−２５− ト、コｌ−ＩノエノーＩＶ　： ５０　ｐｐｍ　ＣＰ−２５）　１８．５９　１１６．８９　１６１．０５　−− −アタ １１）コ〉ドロー１し州（ＣＤ）　１２．０３　１５０．６８　１９４．１２　 ２．７４知しλテロー１し立ｉ鈑丙７”２ ！！）二斗ロー１し４４可（ＣＤ）　−−−１，２８５１６，９０＋コしス−ｒ ｂ−＋　Ｉ／ｌｈ４＠７りＩＩ）、斗ｏ−＋し４１１ｊ、（ＣＤ）　−−−１２ ２，１５−−−Ｖ）　ＣＤ　＆　Ｐ−２１− トコトリエ／−１し；　５０　ｐｐｍ　−−−６８ｊ９　−−−１１）　フ＞１ −ｏ−＋し４４ｙ１＜ｃｏ）　４．ａ６　２７．５２　−−−Ｖ）　ＣＤ　＆　 Ｐ−２＋− １−４ｑｘ７一−％／−；５０ＰＰＴ＋−−−４，１９細１−’／工／−〜・（ ５０兜　−３，４４１りコントロ→し小４１１（ＣＤ）　・−−１５８，８１１ ２８，２９１−＄＋１：ｒ７−＋、−；　ｓｏ　ｐｐｍ　−−−＋３３．０４　 ５０．７６諷フしス＋Ｄ−＋し残１１リア２ ＩＩ）　ＣｏｎｔｒｏＬ　Ｄｉｅｔ　（ＣＤ）　１１．８７　４９．１８　４７ ．４３トコトソエノ−１，ｚ；５０ｐｐｎ　６ｊ３　２１．５６　１８．５３ト コドリゴ）−１し　５０９９ｍ　ｔ、ｎ　１２．３８　１２．９２ＦＩＧ、　３ Ｂ　ＭＥ−ＭＥ−井 （ｙｔｆ％４Ｊｌ　ｌ’ｒＷ；昧　’ｎ”’Ｉｔ１１）コ＞届−１今脅イ（ＣＤ ）　−−−８３，６１５ａ、７２Ｖｌ）　ＣＤ　＆　Ｐ−２５− １１）　Ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｄｉｅｔ　（ＣＤ）　２１．８７　１６０．４２　２ ０９．７６ＦＩＧ“　３Ｃリフ−４贅　リルン舶腎　７シ瞥）島々　公“馴１降 釦しλ子ｔ）−１シ五す覗し９７タ ＩＩ）　ンＪ−ｏｑｖ４４１４ｃｃｏ）　−−−−−−−−−１６７，５０龍ｗ ｋＭ榛 ｏ）　コ〉Ｌローリ４Ｎ鵞Ｔ（■）　７．８　７２Ｂ、５４・−２−０２４８， Ｂ５ １８；２　１８：３　ｍｏ＝４ 拓コしスラローＩＬ／立に薩４ブタ ｉｘ）　コートＯ−１し４９１．ｃｏ）　＋＋＋　＋＋＋　＋＋＋　１９９．０ ６端間（冴２ 閏許謹審報牛 、　、、　ＰＣＴＡＩＳ　９２／１０２７７国際調査報告 フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３１／２１ ５　ＡＢＡ　９４５４−４Ｃ３１／３５　ＡＤＰ　９４５４−４Ｃ ３１／３５５　ＡＢＥ　９４５４−４Ｃ３１／４７　ＡＤＮ　９４５４−４Ｃ ＣＯ７Ｃ３３／３８ ４３／２３　Ｅ　７４１９−４Ｈ ６３／６６　９３５６−４Ｈ Ｃ０７Ｄ　２１５／２０　７０１９−４Ｃ３１１１５８９３６０−４Ｃ ３１１／７２　１０１　９３６０−４Ｃ１０２９３６０−４Ｃ ３１３１００９３６０−４Ｃ ３１３１０８９３６０−４Ｃ ３１３／２０　９３６０−４Ｃ ３３３１５６９４５５−４Ｃ ３３３１５８９４５５−４Ｃ ３３３／６０　９４５５−４Ｃ ｌ フロントページの続き （５１）Ｉｎｔ、Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号３３３／６２　９４５５− ４Ｃ ３３５１０６９４５５−４Ｃ ３３７１０８９４５５−４Ｃ ３３７／１６　９４５５−４Ｃ Ｃ１２Ｎ　９／９９ （８１）指定国、　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。 ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、０Ａ （ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ−、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、ＭＲ，ＳＮ、Ｔ Ｄ、ＴＧ）、ＡＴ、ＡＵ、ＢＢ、ＢＧ、ＢＲ，ＣＡ、ＣＨ，Ｃ３゜ＤＥ、ＤＫ、 ＥＳ、ＦＩ、ＧＢ、ＨＵ、ＪＰ、ＫＰ、ＫＰＩ （７２）発明者　サルサー、ウィンストン　エイ。 アメリカ合衆国　カリフォルニア　９０２７２パシフイツク　バリセイズ、ハー ツェルストリート　１１３８

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．飼料転換効率を増加させるためのトコトリエノールまたはトコトリエノール 様化合物の使用。 ２．血液中のリボタンパク質（ａ）濃度を減少させるためのトコトリエノールま たはトコトリエノール様化合物の使用。 ３．免疫調節疾患、炎症、発熱、浮腫、真性糖尿病、疼痛、リウマチ様疾患、ア テローム性疾患、敗血症性ショック、慢性疲労症候群および機能喪失からなる群 から選択される疾患または症状の治療または予防におけるトコトリエノールまた はトコトリエノール様化合物の使用。 ４．以下の構造式を有するトコトリエノールまたはトコトリエノール様化合物お よびその塩、その酸化生成物ならびにその加水分解生成物： ▲数式、化学式、表等があります▼ ここで、Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立してＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＯＣＨ３、 およびＣ１−Ｃ６の分岐したまたは分岐していないアルキルからなる群から選択 され；Ｒ２は、ＯＨ、ＮＨＲ８、ＣＯ２Ｙ、Ｃ（Ｒ８）２ＣＯ２Ｈ、および、Ｏ Ｈ、ＮＨＲ８、ＣＯ２Ｈ、またはＣ（Ｒ８）２ＣＯ２Ｈで置換されたＣ１−Ｃ６ の分岐したまたは分岐していないアルキルからなる群から選択され； Ｒ４は、Ｏ、ＮＨ、ＣＨ−Ｒ９、Ｃ＝ＯおよびＣＨ−ＯＨからなる群から選択さ れ； Ｒ５は、ＣＨ２、ＣＨＯＨ、Ｏ、ＳおよびＮＨからなる群から選択され； Ｒ６は、ＨおよびＣ１−Ｃ６の分岐したまたは分岐していないアルキルからなる 群から選択され； Ｒ７は、それぞれ独立して、以下の式で示され；▲数式、化学式、表等がありま す▼，▲数式、化学式、表等があります▼または▲数式、化学式、表等がありま す▼ここでＲ１０は、Ｈ、ＮＨ２およびＣ１−Ｃ６の分岐したまたは分岐してい ないアルキルからなる群から選択され；Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立して、 ＨおよびＣ１−Ｃ６の分岐したまたは分岐していないアルキルからなる群から選 択され； Ｒ１１は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６の分岐したまたは分岐していない アルキル、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯ２ＨまたはＯＨからなる群から選択され； Ｙは、ＨまたはＣ１−Ｃ１８の分岐したまたは分岐していないアルキルであり； Ｚは、ハロゲン、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ３、ＯＣＨ３またはＣＯＣＨ２であり ； ｎは、０〜４の整数であり；そして ｍは、１〜３０の整数である。 ５．請求項４に記載のトコトリエノールまたはトコトリエノール様化合物であっ て、Ｒ１、Ｒ３およびＺはそれぞれ独立してＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＯＣＨ３また はＣＨ３であり；Ｒは、ＯＨ、ＯＣＨ３またはＮＨ２であり；Ｒ４は、Ｃ＝Ｏ、 ＣＨ２またはＮＨであり；Ｒ５は、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２またはＮＨであり；Ｒ６は、 ＨまたはＣＨ３であり：Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立してＨまたはＣＨ ３であり；ｎは０または１であり；そしてｍは３〜１０である。 ６．構造式３，４−ジヒドロ−２−（４，８，１２−トリメチルトリデカ−３′ （Ｅ），７′（Ｅ），１１′トリエニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オー ル）を有するトコトリエノール。 ７．以下の構造式を有するトコトリエノール：▲数式、化学式、表等があります ▼ ８．以下の構造式を有するトコトリエノール：▲数式、化学式、表等があります ▼ ９．請求項４から８の任意の請求項に記載のトコトリエノールまたはトコトリエ ノール様化合物、またはその混合物の使用であって、低コレステロール血症薬、 抗トロンピン剤、抗酸化剤、抗アテローム形成剤、抗炎症剤、または免疫調節剤 としての使用。 １０．請求項５から８の任意の請求項に記載のトコトリエノールまたはトコトリ エノール様化合物、またはその混合物の使用であって、飼料転換効率を増加させ るための使用。 １１．請求項４から８の任意の請求項に記載のトコトリエノールまたはトコトリ エノール様化合物、またはその混合物の使用であって、血液中のリボタンパク質 （８）濃度を減少させるための使用。 １２．請求項４から８の任意の請求項に記載のトコトリエノールまたはトコトリ エノール様化合物、またはその混合物の使用であって、食物製品の酸化的分解を 予防するための使用。 １３．請求項９に記載の使用であって、以下の群から選択される疾患または症状 の治療または予防のための使用：アテローム性動脈硬化、高コレステロール血症 、血栓症、内皮損傷、免疫調節疾患、アテローム性疾患、炎症、発熱、浮腫、真 性糖尿病、癌、老化の徴候、疼痛、リウマチ様疾患、敗血症性ショック、慢性疲 労症候群および機能喪失。 １４．飼料転換効率を増加させるためのＴＲＦの使用。 １５．血液中のリボタンパク質（ａ）濃度を減少させるためのＴＲＦの使用。 １６．以下の群から選択される疾患または症状を治療または予防するためのＴＲ Ｆの使用： 免疫調節疾患、炎症、発熱、浮腫、癌、老化の徴候、真性糖尿病、疼痛、リウマ チ様疾患、敗血症性ショック、慢性疲労症候群および機能喪失。 １７．以下の特徴を有するトコトリエノールまたはトコトリエノール樣化合物： （ａ）以下の条件下で約２２分より大きいＨＰＬＣ溶出時間：２０μ１試料、へ キサンおよびイソプロパノール（９９．７５％：０．２５％、Ｖ／Ｖ）のイソク ラティクシステムを、流速１．３ｍｌ／分で用いるμ−Ｐｏｒａｓｉｌカラム（ Ｗａｔｅｒｓカラム、１０μ、４ｍｍ×３０ｃｍ）；および （ｂ）β−ヒドロキシ−β−メチルグルタリルコエンザイムＡレダクターゼの合 成を阻害する活性。 １８．前記ＨＰＬＣ溶出時間が約３２、３６、４５または５４分である、請求項 １７に記載のトコトリエノールまたはトコトリエノール様化合物。 １９．生物供給源から得られた、請求項４から８、１７または１８の任意の請求 項に記載のトコトリエノールまたはトコトリエノール様化合物。 ２０．前記生物供給源が安定化されている、請求項１９に記載のトコトリエノー ルまたはトコトリエノール様化合物。 ２１．前記生物供給源が植物供給源である、請求項１９または２０に記載のトコ トリエノールまたはトコトリエノール様化合物。 ２２．前記植物供給源が、カラスムギ、カラスムギ糠、カラスムギ糠油、オオム ギ、オオムギ糠、オオムギ糠油、米、米糠および米糠油からなる群から選択され る、請求項２１に記載のトコトリエノールまたはトコトリエノール様化合物。 ２３．前記植物供給源が、米糠または米糠油である、請求項２２に記載のトコト リエノールまたはトコトリエノール様化合物。 ２４．化学合成により得られる、請求項４から８、１７または１８の任意の請求 項に記載のトコトリエノールまたはトコトリエノール様化合物。 ２５．請求項４から８、１７または１８の任意の請求項に記載のトコトリエノー ルまたはトコトリエノール様化合物、または、その混合物を含有する食物物質。 ２６．ＴＲＦ、Ｐ２１、α−、β−、γ−またはδ−トコトリエノールをさらに 含有する、請求項２５に記載の食物物質。 ２７．請求項４から８、１７または１８の任意の請求項に記載のトコトリエノー ルまたはトコトリエノール様化合物、または、その混合物を含有する食餌補足物 。 ２８．ＴＲＦ、トコトリエノール、α−、β−、γ−またはδ−トコトリエノー ルをさらに含有する、請求項２７に記載の食餌補足物。 ２９．高コレステロール血症関連疾患、血栓症、アテローム性疾患、炎症、免疫 欠損、発熱、浮腫、真性糖尿病、癌、老化の徴候、疼痛、敗血症性ショック、慢 性疲労症候群または機能喪失を治療または予防するための、あるいは、血液中の リボタンパク質（ａ）濃度を減少させるためにまたは飼料転換効率を増加させる ための薬学的組成物であって、請求項４から８、１７または１８の任意の請求項 に記載のトコトリエノールまたはトコトリエノール様化合物またはその混合物、 および薬学的キャリアを含有する薬学的組成物。 ３０．ＴＲＦ、Ｐ２１、α−、β−、γ−またはδ−トコトリエノールをさらに 含有する、請求項２９に記載の薬学的組成物。 ３１．炎症、免疫調節疾患、発熱、浮腫、真性糖尿病、癌、老化の徴候、疼痛、 リウマチ様疾患、敗血症性ショック、慢性疲労症候群および機能喪失を治療また は予防するための、あるいは、血液中のリボタンパク質（ａ）濃度を減少するた めにまたは■料転換効率を増加するための薬学的組成物であって、ＴＲＦ、Ｐ２ １、α−、β−、γ−トコトリエノール、またはその組み合せを含有する薬学的 組成物。 ３２．高コレステロール血症関連疾患、血栓症、アテローム性疾患、炎症、免疫 欠損、発熱、浮腫、真性糖尿病、癌、老化の徴候、疼痛、敗血症性ショック、慢 性疲労症候群または機能喪失を治療または予防するための方法であって、血液中 のリボタンパク質（ａ）濃度を減少させるかまたは被検体の飼料転換効率を増加 させる、薬学的に有効な量の、請求項２９または３０に記載の薬学的組成物を該 被検体に投与する工程を包含する方法。 ３３．炎症、免疫調節疾患、発熱、浮腫、真性糖尿病、癌、老化の徴候、疼痛、 敗血症性ショック、慢性疲労症候群または機能喪失を治療または予防するための 方法であって、血液中のリボタンパク質（３）濃度を減少させるかまたは被検体 の飼料転換効率を増加させる、薬学的に有効な量の、請求項３１に記載の薬学的 組成物を該被検体に投与する工程を包含する方法。 ３４．ヒトまたは動物において全血清コレステロールおよびＬＤＬ−コレステロ ールを減少させるための方法であって、該ヒトまたは動物に、コレステロールを 低下する有効量の、請求項２５または２６に記載の食物物質を与える工程を包含 する方法。 ３５．ヒトまたは動物において全血清コレステロールおよびＬＤＬ−コレステロ ールを減少させるための方法であって、該ヒトまたは動物に、コレステロールを 低下する有効量の、請求項２７または２８に記載の食餌補足物を与える工程を包 含する方法。 ３６．ヒトまたは動物においてＨＤＬ／ＬＤＬコレステロール比を増大させるた めの方法であって、該ヒトまたは動物に、コレステロールを低下する有効量の、 請求項２５または２６に記載の食物物質を与える工程を包含する方法。 ３７．ヒトまたは動物においてＨＤＬ／ＬＤＬコレステロール比を増加するため の方法であって、該ヒトまたは動物に、コレステロールを低下する有効量の、請 求項２７または２８に記載の食餌補足物を与える工程を包含する方法。 ３８．生物供給源のトコトリエノールリッチの画分からトコトリエノールおよび トコトリエノール様化合物の収量を増加させる方法であって、以下の工程を包含 する方法：（ａ）生物供給源からのトコトリエノールリッチな画分を溶媒中に溶 解する工程、 （ｂ）溶解したトコトリエノールリッチの画分をアミンカラムと接触させる工程 、および （ｃ）実質的に不純物を溶出しない溶媒でトコトリエノールを溶出する工程。 ３９．生物供給源からトコトリエノールおよびトコトリエノール様化合物の収量 を増加きせる方法であって、以下の工程を包含する方法： （ａ）生物供給源を有機溶媒で抽出する工程、（ｂ）抽出した供給源を加熱する 工程、および（ｃ）加熱した生物供給源を抽出する工程。 ４０．前記加熱工程（ｂ）が、マイクロ波加熱で達成される、請求項３９に記載 の方法。 ４１．前記生物供給源が植物供給源である、請求項３８または３９に記載の方法 。 ４２．前記植物供給源が、カラスムギ、ピーナッツ、マツの実、カラスムギ糠、 カラスムギ糠油、オオムギ、オオムギ糠、オオムギ糠油、米、米糠および米糠油 からなる群から選択される、請求項４１に記載の方法。 ４３．前記植物供給源が、米糠または米糠油である、請求項４２に記載の方法。 ４４．前記工程（ａ）の溶媒がへキサンである、請求項３８に記載の方法。 ４５．前記工程（ｂ）のアミンカラムが、Ｂｏｎｄ　Ｅｌｕｔｅアミンまたはシ アノカラムである、請求項３８に記載の方法。 ４６．前記工程（ｃ）の溶媒が、へキサン中の０．５％−３％イソプロパノール のグラジエントシステムである、請求項３８に記載の方法。 ４７．血液中のリボタンパク質（ａ）濃度を減少させ飼料転換効率を増加させる ための、または、以下の疾患または症状の１つあるいはそれ以上の治療または予 防における、安定化された生物供給源の使用： 免疫調節疾患、炎症、発熱、浮腫、真性糖尿病、癌、老化の徴候、疼痛、リウマ チ様疾患、敗血症性ショック、慢性疲労症候群および機能喪失。 ４８．前記安定化された生物供給源が安定化された米糠である、請求項４７に記 載の方法。