CN104507468A - 用于改善软膜侧支循环和治疗血液凝固障碍的方法与组合物 - Google Patents

用于改善软膜侧支循环和治疗血液凝固障碍的方法与组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN104507468A
CN104507468A CN201380040067.1A CN201380040067A CN104507468A CN 104507468 A CN104507468 A CN 104507468A CN 201380040067 A CN201380040067 A CN 201380040067A CN 104507468 A CN104507468 A CN 104507468A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tocotrienol
experimenter
disease
kinds
group
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201380040067.1A
Other languages
English (en)
Inventor
C·森
C·瑞克
S·罗伊
G·克里斯托佛里迪斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ohio University
Ohio State University
Original Assignee
Ohio State University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ohio State University filed Critical Ohio State University
Publication of CN104507468A publication Critical patent/CN104507468A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
    • A61K31/355—Tocopherols, e.g. vitamin E
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/15—Vitamins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/40—Complete food formulations for specific consumer groups or specific purposes, e.g. infant formula
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A61K31/522—Purines, e.g. adenine having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. hypoxanthine, guanine, acyclovir
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/727—Heparin; Heparan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pediatric Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明提供了促进受试者的动脉生成的方法。实施例包括以下方法，这些方法包括：向该受试者给予有效剂量的生育三烯酚；在该受试者中导致脑血管侧支循环的血管中的金属蛋白酶组织抑制剂金属肽酶抑制剂1(TIMP1)增加；减弱基质金属蛋白酶-2(MMP2)的活性；由此促进动脉生成。

Description

用于改善软膜侧支循环和治疗血液凝固障碍的方法与组合物
发明人：Chandan K.Sen(凯丹K森)，Cameron L.Rink(卡梅伦L林克)，Sashwati Roy(萨施瓦特罗伊)，Greg Christoforidis(格雷格克里斯托弗里迪斯)
相关申请的交叉引用
本申请要求于2012年6月8日提交的美国临时专利申请号61/657,433的权益，其全部披露出于所有目的通过引用清楚地结合在此。
关于联邦政府资助的研究的申明
本发明是在授权UL1RR025755和NIH授权NS42617下在美国政府支持下完成的。政府在本发明中享有某些权利。
对序列表的引用
本申请经由USPTO EFS-WEB服务器以电子方式提交，如在MPEP§1730II.B.2(a)(A)中所批准和阐述，并且此电子存档包括一个以电子方式递交的序列(SEQ ID)表。此序列表的全部内容出于所有目的通过引用结合在此。该序列表被识别为如下以电子方式提交的.txt文件：604_53835_SEQ_ID_OSU-2009-085.txt，创建于2013年5月29日并且大小为3,492字节。
发明背景
在美国，每年795,000例中风中，约25％是重复中风事件。另外，所有中风事件中百分之十五在之前是短暂性脑缺血发作(TIA)，将其定义为由至脑的血流减少导致的神经功能障碍的暂时发作但是对脑组织没有永久损害。TIA后，中风的90日风险高达17.3％。因而，预防性干预在有利地改变中风后果中可以发挥关键作用，尤其是针对已经患有TIA并且因此面临高风险的大卒中事件的那些。
测试维生素E在广泛的重大健康障碍中的作用的临床试验已经得到以下总体结论，维生素E在某些情况下是无帮助的或可能是有害的。对20个测试维生素E的随机对照临床试验进行荟萃分析，现已得出以下结论：这些结论一方面作为用于重新调整公共政策和实践的基础，而另一方面，受制于在任何这些报道中都未认清的一个主要盲点。虽然此类荟萃分析的标题要求作为一个整体论述维生素E，但它们未能认识到在所有这些试验中研究的维生素E的唯一形式是α-生育酚，其代表天然维生素E家族的八分之一。天然维生素E以两种形式存在：生育酚和生育三烯酚。生育酚和生育三烯酚都拥有一个色原烷醇环。在生育酚和生育三烯酚家族内，分别根据在位置5、7和8处的甲基的存在，将同工型分别以α、β、γ及δ区分。生育酚由一条饱和侧链表征，而生育三烯酚拥有一条在C-3、-7和-11处具有双键的类异戊二烯侧链。
近来，对生育三烯酚的生物学特性的兴趣已经急剧上升，因为这种形式的天然维生素E的独特生物学功能并不是更为人熟知的生育酚所共有的，这些更为人熟知的生育酚在临床试验中未能达到期望。在纳摩尔浓度下，α-生育三烯酚(αTCT)，而非α-生育酚，是一种有效力的神经保护剂。在浓度基础上，这代表整个维生素E家族的所有生物学功能中最有效力的。神经细胞生物学研究已经鉴定了独特的αTCT-敏感信号转导限制点，这些限制点从由一系列损害导致的可诱导的细胞死亡中营救细胞。重要地，尽管在来自从膳食性来源中接受αTCP的受试者的血清中检测到了αTCP，但是αTCT在未补充的美国人的血清中的存在是可忽略的。这可能归因于西方食物消耗，因为大部分西方食物包含非常低水平的生育三烯酚。由于TCT的生物学重要性日益显现，对于给予TCT以优化健康并有助于疾病管理的基于循证的配制品和方法存在需要。
出生后侧支生长和重建(称作动脉生成)的分子机制与在血管生成(angiogenesis)和血管发生(vasculogenesis)中进行的那些不同。血管生成描述了新毛细血管的形成，而血管发生是血管从成血管细胞的胚胎发育。动脉生成描述了动脉闭塞后从已经存在的微动脉形成成熟的动脉。动脉生成与血管生成共有一些特征，但是引起动脉生成的途径不同，如最终结果不同一样：动脉生成潜在地能够完全替换闭塞的动脉，而血管生成不能。在特殊情况下，动脉生成可以引起血流从显著减少的水平恢复。当闭塞在上游时，增加缺血区内的毛细血管的数目不能增加血流。这两种类型的血管生长之间的另一个根本区别是血管生成对组织低氧/缺血的依赖性。相比之下，动脉生成发生于氧化的环境中。对于影响血管生成的因素的另外的阐释和用于治疗和预防缺血性中风的治疗性干预方法存在需要。
发明概述
本发明提供了改善软膜侧支循环并保护缺血性组织的方法，这些方法包括：a.)向需要软膜侧支循环改善和缺血性组织保护的受试者每天给予一种组合物，该组合物包括处于从约10mg至约1000mg的量的至少一种形式的生育三烯酚；并且b.)在该受试者中改善软膜侧支循环并保护缺血性组织。
本发明还提供了促进受试者的动脉生成的方法，这些方法包括：向需要促进动脉生成的受试者每天给予一种组合物，该组合物包括处于从约10mg至约1000mg的量的至少一种形式的生育三烯酚；并且促进该受试者的动脉生成。
本发明还提供了在对其有需要的受试者中增加脑血管侧支循环的血管中的金属蛋白酶组织抑制剂金属肽酶抑制剂1(TIMP1)以及减弱基质金属蛋白酶-2(MMP2)的活性的方法，这些方法包括：向需要增加脑血管侧支循环的血管中的金属蛋白酶组织抑制剂金属肽酶抑制剂1(TIMP1)以及需要减弱基质金属蛋白酶-2(MMP2)的活性的受试者每天给予一种组合物，该组合物包括处于从约10mg至约1000mg的量的至少一种形式的生育三烯酚；并且在该受试者中增加脑血管侧支循环的血管中的金属蛋白酶组织抑制剂金属肽酶抑制剂1(TIMP1)以及减弱基质金属蛋白酶-2(MMP2)的活性。
本发明还提供了在受试者中缓解脑血液凝固的症状或减少脑血液凝固的风险的方法，这些方法包括：向需要缓解脑血液凝固的症状或减少脑血液凝固的风险的受试者每天给予一种组合物，该组合物包括处于从约10mg至约1000mg的量的至少一种形式的生育三烯酚；并且在该受试者中缓解脑血液凝固的症状或减少脑血液凝固的风险。
还提供了此类方法，其中该脑血液凝固与一种脑血管缺血性疾病相关，其中该疾病选自下组，该组由以下各项组成：(a)脑缺血，特别是短暂性脑缺血发作、中风、血管性痴呆和/或梗塞性痴呆；(b)心肌缺血，特别是冠心病和/或心肌梗塞；和/或(c)周围肢体疾病，特别是周围动脉闭塞性疾病。
还提供了此类方法，这些方法对该受试者进一步具有一种选自下组的作用，该组由以下各项组成：减弱缺血性中风诱发的病损体积；预防中风后白质纤维束连接性的损失；改善脑血管侧支循环；预防血管损伤；减少缺血性中风的风险；减少脑血管缺血性疾病；以及缓解血管阻塞的症状。
还提供了此类方法，其中每天经由口服补充给予100mg和500mg的至少一种生育三烯酚，持续至少四周。
还提供了此类方法，其中该至少一种生育三烯酚选自下组，该组由以下各项组成：α生育三烯酚；β生育三烯酚；γ生育三烯酚；δ生育三烯酚；及其组合。
还提供了此类方法，其中该组合物包括富集至该组合物的总重的选自下组的百分比的混合生育三烯酚，该组由以下各项组成：大约20％；大约30％；大约40％；大约50％；大约60％；大约70％；大约80％；以及大约90％。
还提供了此类方法，其中该至少一种生育三烯酚被作为400mg每日剂量Tocovid而给予，持续至少四周。
还提供了此类方法，其中通过以下各项中的一种或多种递送该口服补充剂：胶囊剂；片剂药丸；胶体；咀嚼胶姆剂；凝胶；饮剂；食品添加剂；薄膜溶解条；乳化的食品涂剂；乳剂，糖浆；肉类食品；乳制品；以及蛋。
还提供了此类方法，其中该受试者处于脑血液凝固的升高风险中。
还提供了此类方法，这些方法进一步包括给予一种血液稀释剂。
还提供了此类方法，其中该受试者选自下组，该组由以下各项组成：人类；家畜；伴侣动物；研究动物。
还提供了此类方法，其中该受试者选自下组，该组由以下各项组成：宇航员；飞行员；专业赛车手；深海潜水员；登山者；手术前患者；镰状细胞贫血患者；睡眠呼吸暂停患者；戒毒患者；老年人；老年动物；灰狗；或赛马。
还提供了此类方法，其中所述受试者具有一种选自下组的属性，该组由以下各项组成：(a)显示出处于患上脑血管缺血性疾病的风险的症状；(b)在离体测试中显示出任何风险标志，特别是在血液样品中；(c)先前患过脑缺血或心肌缺血；和/或(d)具有患上脑血管缺血性疾病的易感性，特别是遗传易感性。
还提供了此类方法，其中这些症状选自下组，该组包括：神经功能障碍、短暂性脑缺血发作、充血性心力衰竭、心绞痛、心脏瓣膜疾病、心肌病、心包疾病、先天性心脏病、缩窄(coarctation)、房间隔缺损和/或室间隔缺损。
还提供了此类方法，其中该受试者展现出至少一种选自下组的病症，该组由以下各项组成：阿尔茨海默病；硬化，特别是动脉粥样硬化和/或移植诱发的硬化；脑闭塞性疾病，肾闭塞性疾病，系膜动脉供血不足或眼或视网膜闭塞，术后或创伤后病症；血栓形成；栓塞；再狭窄，特别是原发性再狭窄，继发性再狭窄和/或支架内再狭窄；21三体综合征；低血糖；脉管炎；子痫前期；胎盘缺氧；睡眠呼吸暂停；性功能障碍，特别是勃起功能障碍或女性性功能障碍；术后缺氧；雷诺氏病(Raynaud's disease)；内皮功能障碍；癌症；肾衰竭；静脉曲张；水肿；低血压；褥疮；一氧化碳中毒；重金属中毒；溃疡；婴儿猝死综合征；成红细胞增多；哮喘；慢性阻塞性肺病；镰状细胞病；诱导的g-力(g-force)，其限制血流并且迫使血液到达身体末端；潜水员病；局部极端寒冷，特别是冻伤；止血带应用；增加水平的谷氨酸受体刺激或针对血管壁中的动脉粥样硬化斑块引起血管直径的阻塞的任何疾病；骨坏死；以及累卡佩斯病(Legg Calvé Perthesdisease)。
还提供了此类方法，其中所述受试者已经或将被暴露于：(a)损害一个或多个动脉的药物或医学治疗；(b)损害一个或多个动脉的的放射治疗；和/或(c)损害一个或多个动脉的手术治疗。
本发明还提供了用于治疗血管阻塞的药物组合物，这些组合物包括：一种或多种溶栓药以及一种或多种含生育三烯酚的组合物。
还提供了此类组合物，其中该含生育三烯酚的组合物是Tocovid
还提供了此类组合物，这些组合物进一步包括一种或多种选自下组的化合物，该组由以下各项组成：肝素；生育酚；一种或多种集落刺激因子(CSF)；一种或多种二十醛；血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂；β-阻断剂；抗血小板剂；己酮可可碱；以及西洛他唑。
还提供了用于辅助循环系统健康的营养补充剂，这些营养补充剂包括至少一种生育三烯酚以及至少两种选自以下各项的另外的化合物：维生素A、维生素B、维生素C、维生素D、葡萄籽提取物、山楂提取物、绿茶提取物、大蒜提取物、柠檬烯、卡尼汀、叶黄素、玉米黄质、ω-3必需脂肪酸、锌、钙、铬以及铁。
还提供了此类补充剂，其中选择的这些另外的化合物是脂溶性的。
还提供了婴儿配方组合物，这些组合物包括脂肪、碳水化合物、蛋白质及维生素，其中这些维生素中的至少一种是α生育三烯酚。
附图简要说明
本专利或申请文件可以包含一张或多张制成的彩色附图或一张或多张照片。在请求并支付必要的费用后，美国专利局将会提供带有一张或多张彩色附图和/或照片的本专利或专利申请公开文件的副本。
图1A-图1E.富含生育三烯酚的天然维生素E保护免受中风诱发的脑损伤。(A和B)10周口服补充对生育三烯酚和生育酚的大脑皮层浓度的影响。(A)在补充安慰剂(PBO)的犬的脑中未检测到生育三烯酚。富含生育三烯酚(TE)的补充显著增加了大脑皮层中的α-、γ-和δ-生育三烯酚异构体。(B)在脑α-生育酚水平方面观察到适中但显著(*p＝0.047)增长，因为每个TE凝胶胶囊都包含61.5mg的α-生育酚。(C)响应于中风的中风诱发的梗塞体积。MD＝在1h时获取的平均扩散率图，FLAIR＝在24h时获取的液体衰减反转恢复。在(D)1h的犬脑的代表性冠状切片MR图像展示了细胞毒性水肿(*p<0.05)并且在(E)24h的犬脑的代表性冠状切片MR图像展示了再灌注后的细胞毒性水肿和血管源性水肿(*p<0.005)。
图2A-图2C.TE减弱急性缺血性中风后的白质损伤。(A)用2个ROI掩模进行PBO和TE白质纤维束的流线示踪成像，以在第24h使将放射冠连接至内囊的束可视化。将纤维束覆盖在T2加权结构扫描(512x 512矩阵)上，以按冠状取向在对侧(右侧)和同侧(左侧)半球的背景下可视化。对侧和同侧半球的矢状视图展示了TE补充的保护作用。(B)概率示踪成像揭示了代表性犬中的从内囊的种区(seed region)投射的白质纤维束至放射冠的连接性。由黑到红至黄到白的色移指示了补充PBO和TE的犬的中风影响半球中的区域之间的更高程度的相对连接性。(C)概率示踪的变化，作为从内囊种区的距离的函数。contra＝对侧的，ipsi＝同侧的。
图3A-图3L.TE在急性缺血性中风期间改善脑血管侧支循环。通过数字减影血管造影术(DSA)在PBO(A-E)和TE(F-J)处理的犬中鉴定了脑血管侧支。为了可视化中风影响的MCA区域的侧支(绿线)，将左侧颈内动脉(L-ICA)的中风前动脉(A，F)和静脉(B，G)DSA与右侧颈内动脉(R-ICA)的中风后动脉(D，I)和静脉(E，J)DSA进行比较。在动脉期(C，H)期间，中风后L-ICADSA通过栓塞线圈(由红色椭圆标出)展示了有效的MCA闭塞。在中风后动脉期期间，与PBO对照物相比，在补充TE的犬的MCA区域中观察到更大的侧支灌注(黑色箭头)(I对D)。同样地，在补充TE的犬的中风影响的半球中观察到更多的静脉血流和对比“发红(blush)”(黑色三角)(J对E)。根据11分制(方法)确定补充PBO和TE的犬的平均侧支得分。(K)与PBO对照物相比，补充TE的犬中的中风期间的侧支得分显著更高。*P<0.05。(L)侧支得分与梗塞体积的相互关系(决定系数，r2＝0.821)，开放的菱形表示PBO，闭合的菱形表示TE犬。
图4A-图4H.TE增加动脉生成标志物在激光捕获分离的皮质微动脉中的表达。(A-C)在中风发作后24h，微动脉(箭头，平均直径6.6±2.9μm)被选择性地从对侧对照和同侧中风影响的大脑皮层中捕获。(D)为了验证捕获要素的特异性，用实时PCR检查血管标志物(VWF)、神经元标志物(NF-H)和神经胶质标志物(GFAP)的基因表达。*p<0.05VWF对NF-H，ND＝未检测。(E-H)使用实时PCR证实动脉生成基因在对侧(白色)和同侧(黑色)微动脉中的表达。*p<0.05，在补充TE的对照中对比在中风中。在PBO中对比在TE对照组织中。(E)氯离子胞内通道1(CLIC1)。(F)氯离子胞内通道4(CLIC4)。(G)金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)。(H)血管内皮生长因子(VEGF)。
图5A-图5D.TE抑制MMP2在中风影响的大脑皮层中的活性。通过对中风后24h，补充PBO和TE的犬的对侧(contra)和同侧(ipsi)躯体感觉皮层进行蛋白质印迹(A)和光密度分析(B)，未观察到MMP2蛋白表达的差异。明胶酶谱(C)和光密度测定法(D)展示了MMP-2在PBO而非TE犬的中风影响的半球中的显著更高的活性。*p<0.05PBO对照对比中风，PBO中风对比TE中风。
图6.生理参数。在基线处(MCA的栓塞线圈闭塞之前)、缺血期间和立即再灌注之后，对犬的生理参数进行评估。
图7.实时PCR的引物序列。(按出现的顺序，分别为SEQ IDNO:1-14)。
图8A-图8F.犬中的大脑中动脉闭塞的荧光透视引导。在引导的C臂荧光透视下，(A)微线从基底动脉(BA)沿着后交通动脉(PCOM)向左侧大脑中动脉(L-MCA)前进。(B)BA造影剂注射后，DSA允许可视化覆盖微线进入L-MCA的途径的韦利斯氏环(Circle of Willis)。微导管沿着微线循踪进入L-MCA。从该微导管，栓塞线圈(C)被布置进入L-MCA，从而闭塞M1区段。(D)L-ICA造影剂注射的DSA确认L-MCA被闭塞。(E)R-ICA造影剂注射的DSA确认对侧MCA仍是不闭的。闭塞1小时后，栓塞线圈被取回以再灌注中风影响的半球。(F)BA造影剂注射揭示韦利斯氏环是完整的。L-MCA灌注明显慢于RMCA；水肿的发作和成功的局灶性急性缺血性中风的标志。
图9.来自中风后24小时的代表性PBO和TE犬的FLAIR图像的3D容积重建。
图10.来自中风后24小时的代表性PBO和TE犬的流线示踪成像的3D容积重建。
发明详细说明
本发明的实施例提供了一种用于在急性缺血性中风期间改善侧支循环的预防性干预。
维生素E由生育酚和生育三烯酚组成，其中α-生育三烯酚是最有效力的神经保护形式，其在保护啮齿动物免受中风方面也是有效的。由于单独的神经保护剂对于保护免受中风而言是不够的，诸位发明人使用一种使得可以进行荧光透视引导的血管造影术的临床前模型测试了生育三烯酚在缺血性中风期间对脑血管循环的影响。
在诱导短暂性大脑中动脉(MCA)闭塞之前，杂种犬(平均体重＝26.3±3.2kg)补充十周富含生育三烯酚(TE)的补充剂(200mg，每日两次，n＝11)或运载体安慰剂(PBO，n＝9)。再灌注后1h和24h进行MRI，以评估中风诱发的病损体积。TE补充显著减弱缺血性中风诱发的病损体积(p<0.005)。此外，TE预防中风后白质纤维束连接性的损失，如通过概率示踪成像所证明。MCA闭塞期间脑血管造影的因果关系分析揭示，补充TE的犬具有至缺血的MCA区域的改善的脑血管侧支循环(p<0.05)。TE诱导动脉生成TIMP1并且随后减弱MMP2的活性。TE的动脉生成作用对于已经患有短暂性脑缺血发作并且因此处于高风险中风的患者而言是有益的。
与中风相关的高发病率和死亡率的标志是潜在的中风治疗剂的失败，这些治疗剂在小动物啮齿动物中风模型中显示出益处但是不能平移至临床成功。其结果是，已经针对小哺乳动物脑与大哺乳动物脑之间的解剖学差异、梗塞体积的大的变异性以及诱导和确认动脉闭塞的不精确方法评价了啮齿动物中风模型。与啮齿动物的无脑回畸形(lissencephalic)脑相比，犬脑的大小和解剖学特性集接近地模拟人类的脑。犬具有一个高度进化的多脑回新皮层，其白质:灰质比接近地近似灵长类，并且与人类一样，大脑中动脉(MCA)区域中的侧支循环已经在犬中得以记录。此外，当前实验模型受益于大脑中动脉闭塞(MCAO)的C臂荧光透视可视化。与广泛使用的MCAO的啮齿动物腔内线栓模型相对，此方法允许重复实时记录中风事件，从而改善该程序的整体再现性并且使得可以客观评估脑缺血期间的侧支循环。后者被证明在鉴定TE对中风影响的脑组织的灌注的影响方面是关键的。直到此处，当前文献在TE的神经保护特性的基础上记录了体内中风的保护作用。αTCT的神经保护的具体机制依赖于谷氨酸兴奋性毒性和神经变性中涉及的三种关键胞质靶标：c-Src激酶(c-Src)、12-脂氧合酶(12-Lox)和磷脂酶A2(PLA2)。然而，单独的神经保护剂被认为在提供免受中风的有意义保护方面是不够的。靶向神经和血管病理生理学两者的多模疗法是令人希望的。
脑血管侧支循环是指小血管通道的附属网络，当主要管道被阻塞时，如在缺血性中风中，这些小血管通道可以稳定脑血流。这些小侧支途径可以通过软脑膜微动脉而出现，这些软脑膜微动脉使得脑前动脉和脑后动脉(ACA，PCA)的远支与MCA重叠并吻合。的确，中风介导的病变的风险和严重性在具有不佳侧支循环的患者中是更糟糕的。预存在的微动脉被募集而绕开闭塞部位的机制过程被称作动脉生成。动脉生成引起一种快速增殖并重建应答，其不同于被动扩张、发育性血管发生或新生血管性血管生成。在脑中诱导动脉生成性侧支生长早至血管闭塞后24h便发生，并且适应性动脉生成的开始由蛋白酶抑制剂TIMP1在脑的生长的侧支中的早期表达而标志。TE补充显著增加了TIMP1在大脑皮层的对侧对照和中风影响的微动脉两者中的表达。
在此提供了一种TE补充方案，该方案调节TIMP1表达并且随后引起脑血管动脉生成。
弥散张量成像(DTI)使得可以重复、无创性评估白质细胞结构和连接性，这归因于水分子沿着轴突纤维束的无限制平行(各向异性)扩散。这种基于磁共振成像MRI的技术作为一种用于预后诊断中风患者的神经缺陷和评估康复潜力的临床相关工具而出现。从皮层出发，放射冠(corona radiata)或辐射冠(“radiating crown”)的白质纤维束以称为内囊的带形式在豆状核与丘脑之间汇聚并通过。放射冠与内囊之间的纤维束包含负责躯体感觉皮层与运动神经元之间的感觉运动神经传递的皮质脊髓神经束。
利用流线和概率示踪成像评估中风介导的损伤和中风后内囊与放射冠之间的白质连接性的损失。TE而非PBO处理的动物的白质维持内囊与放射冠之间的细胞结构连接，表明TE保护解剖学连接性免受中风损伤并且因此保护生物学功能。与补充TE的小鼠中的MCAO后的功能性结果的显著改善一起，数据显示预防性TE补充减弱中风相关的感觉运动损伤的严重性。
除示踪成像之外，DTI还使得可以评估中风诱发的病损。在脑缺血的急性期期间(再灌注后0-24h)，自DTI生成的表观扩散系数(ADC)图的下降与导致不可逆脑损伤的细胞毒性水肿相关。中风再灌注后立即使用DTI成像，诸位发明人发现TE补充在再灌注后的第一小时内减弱中风诱发的细胞毒性水肿。虽然细胞毒性水肿在数分钟至数小时内发展，但是血管源性在数小时至数天中发生并且与血脑屏障破坏相关。在第24h进行的MRI利用了一个T2加权液体衰减反转恢复(FLAIR)序列，其捕获中风诱发的水肿的细胞毒性和血管源性组分两者。补充TE的动物中的病损体积在1h与24h MRI之间未显著增加；TE在很大程度上预防血脑屏障破坏和随后的血管源性水肿。
作为一种营养素，生育三烯酚已经被人类安全地消费多年，尤其是在远东。此外，生育三烯酚已经被美国FDA认证为一般认为安全(GRAS，GRN No.307)的食品成分。在自然界中，丰富的生育酚和生育三烯酚遍及植物界而发现。生育酚是光合植物组织中的维生素E的主要来源，而生育三烯酚富集于谷类、谷物和棕榈种子的胚乳中。越来越多的研究支持天然维生素E家族的不同成员具有与健康和疾病有关的独特生物学特性。例如，不为α-生育酚所共享的γ-生育三烯酚的抗肿瘤发生特性已经描述于乳腺癌和前列腺癌两者中。此外，已经报道生育三烯酚在不存在对α-生育酚具有高亲和力的转运系统的生育酚转运蛋白(TTP)的情况下转运至组织(包括脑)。的确，TTP-/-小鼠的能育性的损失可以由TE补充挽救。在测试生育酚在多种疾病环境中的作用的临床试验的荟萃分析得出与公共卫生政策和实践有关的主要结论的时候，这阐释了研究中的一个盲点：对维生素E的广义要求反而应该局限于研究的维生素E的特定形式。
在此展示了天然维生素E生育三烯酚的预防性补充在临床前环境中减少中风后的脑损伤。鉴于在脑缺血期间观察到TE在改善侧支循环方面的作用和生育三烯酚补充的确定的降胆固醇作用，在此提供了用于诱导预防性TE补充在减少中风发生率上的作用的方案。因此，在高风险中风群体(例如TIA患者)中显示TE补充的有益作用。TIA患者群体(每年多于200,000位美国人中)非常适于治疗。
实例
除神经保护作用之外，αTCT在人类中降低他汀模拟胆固醇的特性将生育三烯酚定位为一种强有力的中风治疗剂候选物。诸位发明人已经展示口服补充的αTCT在自发性高血压大鼠的脑中保护免受中风诱发的病损。由于小动物研究被认为具有用于在临床试验中预测中风治疗剂的成功的有限的可靠性，诸位发明人研发了一种用于在随机、盲、安慰剂对照的环境中测试富含生育三烯酚的补充剂(TE)的疗效的微创临床前犬模型。在诸位发明人的较大动物背景中能用的血管造影术帮助解释预防性TE补充在中风期间改善至中风影响的区域的侧支血流。在临床上，将血管造影侧支分级用作中风后果的一种预报因子。出生后侧支生长和重建(称作动脉生成)的分子机制与在血管生成和血管发生中进行的那些不同。当前研究的结果展示了生育三烯酚补充与促动脉生成因子在中风影响的半球的灌注侧支中的表达之间的直接联系。
实例1.随机、盲、安慰剂对照的补充方案。
所有实验过程均已被俄亥俄州立大学(The Ohio StateUniversity)的研究机构动物护理和使用委员会批准。在研究入选之前，由俄亥俄州立大学的兽医学院使二十条杂种犬(2.4±0.9龄，26.6±2.6kg)经受总体检，犬恶丝虫、全血计数和血液化学测试。兽医人员未观察到总体检异常、犬恶丝虫或全血计数或血液化学方面的显著差异。基线体检后，将犬随机化为两个处理组-一组接受TE(n＝11，200mg混合的生育三烯酚，超维特公司(Carotech Inc)，马来西亚)，并且另一组接受缺乏维生素E的玉米油(n＝9，运载体安慰剂，PBO)。在补充的持续时间，犬维持为标准饲料(TD2025；哈伦泰克实验室(Harlan Teklad))。将TE和PBO补充剂在外观和大小一致的凝胶胶囊中口服地递送。犬每天接受两次补充剂，早餐和晚餐后，持续十周的时间。在接受最后一次补充剂后12小时内诱导中风。研究人员和兽医人员不清楚胶囊内容物和处理组，直到所有MRI中风结果数据由俄亥俄州立大学医学中心(The Ohio State UniversityMedical Center)的生物统计学中心学院(faculty of the Center forBiostatistics)独立综述。
实例2.急性缺血性中风的C臂荧光透视引导的临床前模型。
进行微创的血管内方法，以在犬中实现大脑中动脉闭塞。简言之，用5法曲(French)的鞘管(艾睿GE健康系统(ArrowGEHealthsystems))使麻醉犬(1.5％-2.0％异氟烷)经历两侧股动脉进入，自其中使用4-Fr和5-Fr导引导管(波士顿科学公司(BostonScientific))来提供进入基底动脉(BA)系统并且用于MCA区域的常规造影剂(欧乃派克)可视化。使用微导管技术进入并闭塞来自BA的MCA。将一个栓塞线圈(3mm x 20cm超软基质2铂金线圈(Ultrasoft Matrix2Platinum Coil)，波士顿科学公司)递送进来自微导管(SL-10，波士顿科学公司)的任一MCA的M1区段中，并且贯穿1h闭塞时间每15min使用颈内动脉和椎基底动脉循环的数字减影血管造影(DSA)记录闭塞。1h的MCAO后，取回栓塞线圈并且使用DSA来确认再灌注。血管穿孔和出血的血管造影记录是用于研究排除的根据。贯穿该程序监测生理参数，并且包括在MCAO之前、闭塞期间和再灌注后确定血压和血液参数。再灌注后，取出血管内装置并闭合动脉切开部位。在兽医护理下，立即将犬转运到俄亥俄州立大学的赖特创新中心(Wright Center of Innovation)进行1h再灌注后MRI。记录手术程序的荧光透视引导的血管造影提供于图8A-F中。
实例3.磁共振成像(MRI)
在一个3T MRI(阿奇沃(Achieva)，飞利浦医疗保健公司(Philips Healthcare))MRI成像系统中使用一个编码8通道敏感性(SENSE)的膝关节线圈进行梗塞体积的评价。再灌注后1h和24h获得图像。顺序包括：弥散张量成像(DTI)[视场(FOV)＝140x 140mm，矩阵＝128x 128，刺激次数(NEX)＝1，重复时间(TR)/重复时间(TE)192-2131/71，切片厚度＝3mm，b值＝1000，总扫描时间接近4分钟]和T2液体衰减反转恢复(FLAIR)[FOV＝160mm，矩阵＝512x 512，NEX＝1，TR/TE/反转时间(TI)＝11000/125/2800，切片厚度＝3mm，总扫描时间接近8分钟]以及3D飞行时间磁共振血管造影(MRA)(FOV＝150mm，矩阵＝512x 512，TR/TE＝8.6/3.45，翻转角＝20，切片厚度＝1mm，总扫描时间接近6分钟)。将DTI数据转移至工作站，其中从再灌注后一小时DTI(FSL 4.1.4，牛津大学(Oxford University))得到平均扩散性(MD)图。MRA再次确认至暂时闭塞的区域的再灌注。通过将MD图和FLAIR图像输入进图像J(Image J)(国立卫生研究院(National Institutes of Health))中计算梗塞体积。双盲观察者使用半自动阈值技术独立地概述梗塞体积。
实例4.流线和概率白质纤维追踪
用Trackvis软件(版本0.5.1)，使用FACT算法进行内囊的流线示踪成像。与流线示踪成像相对，概率示踪成像使得可以定量分析基于DTI的连接性。为了研究TE在中风后保护白质连接性的治疗疗效，使用FSL软件包利用概率示踪成像框架。使用的概率方法利用了一个单ROI掩模，该掩模具有从内囊ROI中的每个体素投射的10,000个束(曲率阈值为0.2)。连接性图像位于其原生空间内并且不是直接可比较的。为此原因，将每个样品、每个时间戳的张量图像送入一个基于张量场的弹性登记例程中，以用计算机计算一个群体平均张量图像和将每个数据标绘在这一平均脑空间上的转化。使用DTI-TK工具箱(版本2.0)进行此登记。将转化以同一坐标框架应用至对应的示踪图像，该图像为平均张量图像。
实例5.脑血管侧支募集的血管造影评价
综述恰好在再灌注之前获得的DSA采集图像，以使用11分制评估脑血管侧支募集。此分制考虑了软脑膜侧支从脑后动脉(PCA)和脑前动脉(ACA)循环至影响的MCA区域的解剖学范围和通过时间。综述DSA图像，以鉴定MCA区域的前面、中间和后面的软脑膜侧支重构。将MCA和PCA的水平部分用作地标，从而将MCA区域(territory)分为这三个区域(region)-前部、中部和后部。将图像与闭塞侧的闭塞前动脉波的动脉相和静脉相进行比较。
实例6.维生素E提取与分析
使用HPLC-库仑电极阵列检测器(库仑阵列检测器(CoularrayDetector)，12通道，型号5600，ESA公司)进行犬脑组织的维生素E提取与分析。此系统使得可以在一个单个运行中同时检测所有八种天然发生的维生素E家族成员。
实例7.激光显微切割压力弹射(catapulting)
24h MRI后，对犬实施安乐死并且收集脑组织用于下游应用，包括激光显微切割压力弹射(LMPC)。将包括MCA的M1区段的犬脑的连续冠状切片(3mm)包埋并冷冻于OCT化合物(樱花(Sakura))中。使用恒冷箱(CM3050s，徕卡显微系统公司(Leica MicrosystemsInc))将包埋的脑切片为12μm的切片。将这些切片装在RNA酶抑制剂处理的热塑性(聚萘二甲酸乙二醇酯(polyethylene napthalate))-盖玻片(PALM科技公司(PALM Technologies))上。将玻片在RNA-later稳定剂(应用生物系统公司(Applied Biosystems))中孵育4min并且用抗-VWF抗体迅速染色(1:50稀释，15min)，用于从中风影响的(同侧)和对侧对照组织中选择性捕获内皮细胞。收集多于800,000μm2的捕获要素，用于下游RNA分离，cDNA合成和实时PCR。用于高通量收集，使用一个PALM微激光器、微束和RoboStage/RoboMover(PALM MicroLaser,MicroBeam,andRoboStage/RoboMover)系统捕获所有要素。使用PicoPure RNA分离试剂盒(阿克图斯公司(Arcturus))从捕获和弹射要素中分离RNA。
实例8.实时PCR
使用实时PCR，在第24h独立地确定来自对侧对照和中风影响的LMPC捕获要素的侧支基因候选物的表达水平。简言之，使用寡聚-dT引物和Superscript III将总RNA(>250ng)反转录为cDNA。使用双链DNA结合染料SYBR Green-I，通过实时PCR测定而量化RT产生的DNA。将相对基因表达标准化为18s rRNA。数据显示为平均数±SD。引物序列提供于图7中。
实例9.免疫印迹分析
为了从犬脑中提取蛋白质，将S1皮层和对侧对照组织在冰上均匀化于裂解缓冲液(50mM Tris-HCL pH 7.6；1.5mM NaCl；0.5mMCaCl2；0.01％Brij 35；1％Triton X-100)中并且在4℃下于14,000g下离心15分钟。使用MMP2抗体(恩佐生命科学(Enzo LifeSciences)，宾夕法尼亚)，通过蛋白质印迹分析确定基质金属蛋白酶-2(MMP2)在犬皮层中的蛋白表达。在4％-12％凝胶(英杰公司(Invitrogen))上通过SDS–PAGE分离蛋白质，转移至聚偏氟乙烯(PVDF)膜上，并且将膜在4℃下与MMP2抗体(1:400稀释)用包含5％乳的Tris-缓冲盐水(TBS)孵育12-18h。接下来，将膜用包含0.1％Tween-20的Tris-缓冲盐水(TBST)洗涤三次并且在室温下于辣根过氧化物酶共轭的二级驴抗兔抗体(GE医疗生命科学公司(GEHealthcare Life Sciences)，新泽西州，1:2000稀释于包含5％乳的TBST中)中孵育1h。根据制造商推荐，用ECL PlusTM蛋白质印迹检测试剂(GE医疗生命科学公司)使免疫印迹显影。为了评价装载效率，将膜用抗-β肌动蛋白抗体(西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)，1:5000，在TBS中，1h)进行探测。扫描每个蛋白质印迹并且使用国立卫生研究院的图像J软件(版本1.44)分析条带的密度。
实例10.明胶酶谱
如(Beceriklisoy(拜科里科里斯)等人2007)所描述，通过明胶酶谱确定MMP2活性。简言之，将50μg总蛋白与Tris Glycerine SDS装载缓冲液(英杰公司，加州)以1:1比例合并并且通过在包含0.1％明胶(英杰公司)的10％聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳来分离样品。将凝胶在复性缓冲液(英杰公司)中孵育30min，并且然后在显影缓冲液(英杰公司)中处理30min。将凝胶在37℃下伴随温和搅拌在新鲜显影缓冲液中孵育24h。将凝胶用20ml的SimplyBlueTMSafeStain(英杰公司)染色，褪色，并且使用Pharos FX plus分子成像仪(伯乐公司(Bio-Rad)，加州)成像并且使用国立卫生研究院的图像J软件(版本1.44)分析条带的密度。
实例11.统计分析
将统计处理的数据报告为平均数±标准差。用学生t检验或单向ANOVA与杜克(Tukey)事后检验(适当时)测试平均数之间的差异(α水平＝0.05)。使用SPSS软件(版本17.0)用于所有统计计算。
实例12.口服TE补充减弱中风影响的病损体积和水肿
A.在实验中风之前，将健康杂种犬随机化为处理组并且每日口服给予两次200mg富含生育三烯酚(TE，包含61.52mgα-生育三烯酚，112.8mgγ-生育三烯酚，及25.68mgδ-生育三烯酚；n＝11)或运载体对照(PBO，包含去除维生素E的玉米油的安慰剂，n＝9)的凝胶胶囊，持续十周。由试验统计员监督随机化，而研究和兽医人员不清楚补充剂内容物和实验组，直到研究结束。在中风再灌注之前(基线)、期间或之后立即，TE补充对监测的生理参数不具有显著影响(图6)。与PBO对照相比，口服TE胶囊补充显著增加生育三烯酚在提供有大脑中动脉(MCA)的大脑皮层中的浓度(图1A)。TE补充使皮层脑组织以几乎相等量富集α-和γ-TCT同工型(分别为77.4nmol/g蛋白和77.5nmol/g蛋白)和大约三分之一量的δ-生育三烯酚同工型(22.4nmol/g蛋白)。与西方饮食一样，犬饲料缺乏生育三烯酚类。尽管使用高度敏感的电化学HPLC方法(Roy(罗伊)等人2002)，但是在PBO对照的皮层中未检测到可感知量的α-、γ-或δ-生育三烯酚。α-和γ-生育三烯酚在补充TE的动物中的浓度比发现于大脑皮层中的α-生育酚的浓度低10倍(图1B)。与PBO对照相比，TE补充(表示从棕榈油富集的天然维生素E的共混物)适中地增加了α-生育酚在脑组织中的浓度；然而，在PBO和TE组之间未观察到γ-生育酚浓度差异。
B.细胞毒性水肿由中风发作的急性期(<24h)中的细胞肿胀表征。超代谢脑组织中的脑缺血导致ATP-依赖性离子转运蛋白的失效，从而引起胞内Na2+快速积累和水的涌入，以维持渗透平衡。DTI使得可以早期检测急性缺血性中风后的细胞毒性水肿。产生自DTI的平均扩散性图揭示，与PBO对照相比，补充TE的犬在急性缺血性中风后1h具有显著减弱的(p<0.05)细胞毒性水肿(图1C，1D)。虽然再灌注后的1h与24h时间点之间，中风诱发的病损体积在PBO犬中增加了一倍多(9804.7mm3至20579.8mm3)，但是补充TE的犬中的病损体积仍持续偏低(3675.3mm3至3834.9mm3，图1C，1E)。在1h时间点，补充TE的犬的中风诱发的病损体积小于PBO对照的病损体积的40％；并且在第24h，TE病损体积小于其PBO对应者的20％。在第24h，来自代表性PBO和TE FLAIR图像的脑的三维容积重建提供了TE补充的保护作用的清晰的视觉鉴别(图9)。
实例13.中风后，补充TE的犬的白质纤维束连接性受到保护
白质纤维途径表示脑的沟通网络。大脑白质与大脑皮层(灰质)的细胞结构和解剖学连接性直接影响脑功能。中风背景下的白质损伤对感觉运动损害和中风后功能性恢复具有直接影响。在拥有高度定向组织的脑组织中，水及其质子的扩散与白质纤维束的定向一致。DTI的近来发展已经使得可以可视化中风后的白质纤维束连接性。中风再灌注后24h，在PBO犬脑中，从内囊区域中投射至放射冠的纤维束被显著重组织(图2A，10)。确切地，纤维束的流线示踪成像可视化揭示了内囊和放射冠中的感兴趣区域(ROI)环境之间的受损的连接性。与PBO对照相比，口服TE补充保护中风影响的半球中的纤维束投射。概率示踪成像是一种用于定量分析白质连接性的强大工具。诸位发明人利用一个概率示踪成像构架来定量地评估TE补充对中风影响的皮层中的白质纤维束连接性的影响。为了定量地评估连接性，将40,000个束从内囊ROI中的体素投射至远端放射冠ROI中(图2B)。与PBO对照相比，内囊与放射冠之间的纤维束的相对连接性在代表性补充TE的犬脑中高得多。与TE对应者相比，PBO犬脑具有作为从内囊种ROI的距离的函数的更高的束变化(图2C)。
实例14.TE补充改善缺血性中风期间的脑血管侧支循环
在人类和大型哺乳动物(突显诸位发明人的方法的平移显著性)中，软脑膜空间的侧支动脉跨皮质分水岭的边界区而汇合。此动脉网络有助于一种用于将血液经由逆行充盈循环至组织的替代性方法，例如当主要皮层分支的损伤或闭塞破坏脑血管血流时。改善至中风影响的区域的侧支循环和血液灌注在临床上是一种具有公认价值的治疗靶标。在许多情况下，由动脉闭塞产生的局灶性循环异常可以通过脑血管侧支循环适当地补偿。诸位发明人的临床前犬中风模型受益于MCAO期间侧支循环的血管造影评估。缺血性中风期间的大脑血管造影的因果关系分析揭示，与PBO对照相比，接受口服TE补充的犬具有改善的脑血管侧支循环(图3)。MCAO前和MCAO后颈内动脉血管造影(图3A-J)使得可以根据临床有关的11分制，对中风影响的半球侧支进行客观评分。与PBO对照相比，补充TE的犬中的MCA-区域侧支得分显著更高(PBO＝5.2±1.9，TE＝8.1±2.9；图3K)。侧支得分越高，并且因此中风影响的半球中的灌注越好，与第24h的更小的中风诱发的病损大小紧密相关(r2＝0.821，图3L)。
实例15.TE诱导的动脉生成基因在大脑皮层侧支中的表达
动脉生成是指已存在的侧支动脉积极向外重建成为更大的血管，其绕过闭塞部位。为了确定TE补充是否启用大脑动脉生成的分子机制，来自中风影响的(同侧)和对侧对照大脑皮层的微动脉为选择性分离的LMPC(图4A-D)。大脑动脉生成的已知基因靶标包括氯离子胞内通道(CLIC)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)和血管内皮生长因子(VEGF)的成员。与PBO对照相比，在补充TE的犬的中风影响的皮层中观察到CLIC1和TIMP1的增加的基因表达(图4E，G)。特别值得注意的是，依赖于TE补充的TIMP1表达的增加并未将中风影响的内皮细胞限制在同侧部位。TE补充在捕获自对侧对照组织的微动脉中诱导TIMP1(图4G)。这些效果是特异性的，因为其他动脉生成候选基因(例如CLIC4和VEGF)并不受TE补充影响(图4F，H)。TIMP1以1:1化学计量比结合至活性基质金属蛋白酶-2(MMP2)，从而提供了MMP活性的局部控制。独立于MMP2蛋白表达(图5A，B)，TE补充显著减弱MMP2在中风影响的大脑皮层中的活性(图5C，D)。
虽然已经在上文讨论了多个示例性方面和实施例，但是本领域的普通技术人员将认识到某些修改、排列、添加及其子组合。因此旨在，在下文介绍的以下所附权利要求书被解释为包括在其真实精神和范围内的所有此类修改、排列、添加以及子组合。在此描述的每个装置实施例都具有多个等效物。
所采用的术语和表达被用作说明性的而非限制性的术语，并且无意在使用此类术语以及表达时将本发明示出或描述的特征的任何等效物或其一部分排除在外，但应认识到，在所要求保护的本发明的范围之内，不同的修改是有可能的。因此，应当理解的是尽管已经确切地通过优选实施例和可任选的特征对本发明进行了披露，但是本领域的普通技术人员可以采取在此披露的概念的修改和变体，并且此类修改或变体被认为是在由所附权利要求书限定的本发明的范围之内。无论何时在说明书中给定一个范围，所有中间范围和子范围以及被包括在给定范围内的所有单独值都旨在包括于本披露中。当在此使用马库什(Markush)组或其他分组时，该组的所有单独成员以及该组可能的所有组合与子组合旨在被单独地包括在本披露内。
通常，在此使用的术语和短语具有其本领域公认的含义，可以通过参考标准文本、期刊参考文献和本领域的普通技术人员已知的背景而找到。提供以上定义来澄清其在本发明的背景下的特定用途。

Claims (25)

1.一种改善软膜侧支循环并保护缺血性组织的方法，该方法包括：
a.)向需要软膜侧支循环改善和缺血性组织保护的受试者每天给予一种组合物，该组合物包括处于从约10mg至约1000mg的量的至少一种形式的生育三烯酚；并且
b.)在该受试者中改善软膜侧支循环并保护缺血性组织。
2.一种促进受试者的动脉生成的方法，该方法包括：
a.)向需要动脉生成促进的受试者每天给予一种组合物，该组合物包括处于从约10mg至约1000mg的量的至少一种形式的生育三烯酚；并且
b.)促进该受试者的动脉生成。
3.一种在对其有需要的受试者中增加脑血管侧支循环的血管中的金属蛋白酶组织抑制剂金属肽酶抑制剂1(TIMP1)并减弱基质金属蛋白酶-2(MMP2)的活性的方法，该方法包括：
a.)向需要增加脑血管侧支循环的血管中的金属蛋白酶组织抑制剂金属肽酶抑制剂1(TIMP1)并且需要减弱基质金属蛋白酶-2(MMP2)的活性的受试者每天给予一种组合物，该组合物包括处于从约10mg至约1000mg的量的至少一种形式的生育三烯酚；并且
b.)在该受试者中增加脑血管侧支循环的血管中的金属蛋白酶组织抑制剂金属肽酶抑制剂1(TIMP1)并减弱基质金属蛋白酶-2(MMP2)的活性。
4.一种在受试者中缓解脑血液凝固的症状或减少脑血液凝固的风险的方法，该方法包括：
a.)向需要缓解脑血液凝固的症状或减少脑血液凝固的风险的受试者每天给予一种组合物，该组合物包括处于从约10mg至约1000mg的量的至少一种形式的生育三烯酚；并且
b.)在该受试者中缓解脑血液凝固的症状或减少脑血液凝固的风险。
5.一种在此的方法，其中该脑血液凝固与一种脑血管缺血性疾病相关，其中该疾病选自下组，该组由以下各项组成：
a.)脑缺血，特别是短暂性脑缺血发作、中风、血管性痴呆和/或梗塞性痴呆；
b.)心肌缺血，特别是冠心病和/或心肌梗塞；和/或
c.)周围肢体疾病，特别是周围动脉闭塞性疾病。
6.一种在此的方法，该方法对该受试者进一步具有一种选自下组的作用，该组由以下各项组成：减弱缺血性中风诱发的病损体积；预防中风后白质纤维束连接性的损失；改善脑血管侧支循环；预防血管损伤；减少缺血性中风的风险；减少脑血管缺血性疾病；以及缓解血管阻塞的症状。
7.一种在此的方法，其中每天经由口服补充给予100mg和500mg的至少一种生育三烯酚，持续至少四周。
8.一种在此的方法，其中该至少一种生育三烯酚选自下组，该组由以下各项组成：α生育三烯酚；β生育三烯酚；γ生育三烯酚；δ生育三烯酚；及其组合。
9.一种在此的方法，其中该组合物包括富集至该组合物的总重的选自下组的百分比的混合生育三烯酚，该组由以下各项组成：大约20％；大约30％；大约40％；大约50％；大约60％；大约70％；大约80％；以及大约90％。
10.一种在此的方法，其中该至少一种生育三烯酚被作为400mg每日剂量的Tocovid 而给予，持续至少四周。
11.一种在此的方法，其中通过以下各项中的一种或多种递送该口服补充剂：胶囊剂；片剂药丸；胶体；咀嚼胶姆剂；凝胶；饮剂；食品添加剂；薄膜溶解条；乳化的食品涂剂；乳剂，糖浆；肉类食品；乳制品；以及蛋。
12.一种在此的方法，其中该受试者处于脑血液凝固的升高风险中。
13.一种在此的方法，该方法进一步包括给予一种血液稀释剂。
14.一种在此的方法，其中该受试者选自下组，该组由以下各项组成：人类；家畜；伴侣动物；研究动物。
15.一种在此的方法，其中该受试者选自下组，该组由以下各项组成：宇航员；飞行员；专业赛车手；深海潜水员；登山者；手术前患者；镰状细胞贫血患者；睡眠呼吸暂停患者；戒毒患者；老年人；老年动物；灰狗；或赛马。
16.一种在此的方法，其中所述受试者具有一种选自下组的属性，该组由以下各项组成：
a.)显示出处于患上脑血管缺血性疾病的风险的症状；
b.)在离体测试中显示出任何风险标志，特别是在血液样品中；
c.)先前患过脑缺血或心肌缺血；和/或
d.)具有患上脑血管缺血性疾病的易感性，特别是遗传易感性。
17.一种在此的方法，其中这些症状选自下组，该组包括：神经功能障碍、短暂性脑缺血发作、充血性心力衰竭、心绞痛、心脏瓣膜疾病、心肌病、心包疾病、先天性心脏病、缩窄、房间隔缺损和/或室间隔缺损。
18.一种在此的方法，其中该受试者展现出至少一种选自下组的病症，该组由以下各项组成：阿尔茨海默病；硬化，特别是动脉粥样硬化和/或移植诱发的硬化；脑闭塞性疾病，肾闭塞性疾病，系膜动脉供血不足或眼或视网膜闭塞，术后或创伤后病症；血栓形成；栓塞；再狭窄，特别是原发性再狭窄，继发性再狭窄和/或支架内再狭窄；21三体综合征；低血糖；脉管炎；子痫前期；胎盘缺氧；睡眠呼吸暂停；性功能障碍，特别是勃起功能障碍或女性性功能障碍；术后缺氧；雷诺氏病；内皮功能障碍；癌症；肾衰竭；静脉曲张；水肿；低血压；褥疮；一氧化碳中毒；重金属中毒；溃疡；婴儿猝死综合征；成红细胞增多；哮喘；慢性阻塞性肺病；镰状细胞病；诱导的g-力，其限制血流并且迫使血液到达身体末端；潜水员病；局部极端寒冷，特别是冻伤；止血带应用；增加水平的谷氨酸受体刺激或针对血管壁中的动脉粥样硬化斑块引起血管直径的阻塞的任何疾病；骨坏死；以及累卡佩斯病。
19.一种在此的方法，其中所述受试者已经或将被暴露于：
a.)损害一个或多个动脉的药物或医学治疗；
b.)损害一个或多个动脉的的放射治疗；和/或
c.)损害一个或多个动脉的手术治疗。
20.一种用于治疗血管阻塞的药物组合物，该组合物包括：一种或多种溶栓药以及一种或多种含生育三烯酚的组合物。
21.一种在此的药物组合物，其中该含生育三烯酚的组合物是Tocovid
22.一种在此的药物组合物，该组合物进一步包括一种或多种选自下组的化合物，该组由以下各项组成：肝素；生育酚；一种或多种集落刺激因子(CSF)；一种或多种二十醛；血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂；β-阻断剂；抗血小板剂；己酮可可碱；以及西洛他唑。
23.一种用于辅助循环系统健康的营养补充剂，该营养补充剂包括至少一种生育三烯酚以及至少两种选自以下各项的另外的化合物：维生素A、维生素B、维生素C、维生素D、葡萄籽提取物、山楂提取物、绿茶提取物、大蒜提取物、柠檬烯、卡尼汀、叶黄素、玉米黄质、ω-3必需脂肪酸、锌、钙、铬以及铁。
24.一种在此的营养补充剂，其中选择的这些另外的化合物是脂溶性的。
24.一种婴儿配方组合物，该组合物包括脂肪、碳水化合物、蛋白质及维生素，其中这些维生素中的至少一种是一种生育三烯酚。
CN201380040067.1A 2012-06-08 2013-06-07 用于改善软膜侧支循环和治疗血液凝固障碍的方法与组合物 Pending CN104507468A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261657433P 2012-06-08 2012-06-08
US61/657,433 2012-06-08
PCT/US2013/044690 WO2013185022A1 (en) 2012-06-08 2013-06-07 Methods and compositions for improving pial collateral circulation and treating blood clotting disorders

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104507468A true CN104507468A (zh) 2015-04-08

Family

ID=49712670

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201380040067.1A Pending CN104507468A (zh) 2012-06-08 2013-06-07 用于改善软膜侧支循环和治疗血液凝固障碍的方法与组合物

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20150139938A1 (zh)
EP (1) EP2858643A4 (zh)
KR (2) KR20170061191A (zh)
CN (1) CN104507468A (zh)
AU (1) AU2013271440A1 (zh)
RU (1) RU2014153089A (zh)
WO (1) WO2013185022A1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104837488A (zh) * 2012-07-19 2015-08-12 俄亥俄州立大学 改善凝血病变的方法以及相关材料和方法
CN105901645A (zh) * 2016-04-19 2016-08-31 王胜 一种具有治疗静脉曲张功能的植物盐及其制备方法
CN113222974A (zh) * 2021-05-31 2021-08-06 沈阳先进医疗设备技术孵化中心有限公司 一种侧支循环的自动评价方法和装置

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013185024A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 The Ohio State University Treating burn and scar injury using tocotrienol
MY196888A (en) * 2019-11-19 2023-05-08 Hovid Berhad A composition for managing cadasil
RU2737338C1 (ru) * 2020-06-02 2020-11-27 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России) Способ хирургического лечения болезни Легга - Кальве - Пертеса у детей

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1073357A (zh) * 1991-11-22 1993-06-23 利普格尼斯公司 生育三烯酚和类生育三烯酚化合物及其使用方法
US20030104078A1 (en) * 2001-03-30 2003-06-05 Bridget Barrett-Reis Method of improving the antioxidant status of an infant

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6596306B1 (en) * 2000-07-07 2003-07-22 David Ho Sue San Ho Drug delivery system:formulation for fat-soluble drugs
KR20060113651A (ko) * 2003-08-08 2006-11-02 더 오하이오 스테이트 유니버시티 리서치 파운데이션 토코트리에놀의 보호 용도 및 치료 용도
MY148321A (en) * 2007-10-02 2013-03-29 Malaysian Palm Oil Board Mpob Vitamin e supplementation to tetanus toxoid

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1073357A (zh) * 1991-11-22 1993-06-23 利普格尼斯公司 生育三烯酚和类生育三烯酚化合物及其使用方法
US20030104078A1 (en) * 2001-03-30 2003-06-05 Bridget Barrett-Reis Method of improving the antioxidant status of an infant

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104837488A (zh) * 2012-07-19 2015-08-12 俄亥俄州立大学 改善凝血病变的方法以及相关材料和方法
CN105901645A (zh) * 2016-04-19 2016-08-31 王胜 一种具有治疗静脉曲张功能的植物盐及其制备方法
CN113222974A (zh) * 2021-05-31 2021-08-06 沈阳先进医疗设备技术孵化中心有限公司 一种侧支循环的自动评价方法和装置
CN113222974B (zh) * 2021-05-31 2023-12-29 沈阳先进医疗设备技术孵化中心有限公司 一种侧支循环的自动评价方法和装置

Also Published As

Publication number Publication date
RU2014153089A (ru) 2016-08-10
EP2858643A4 (en) 2015-11-11
KR20170061191A (ko) 2017-06-02
AU2013271440A1 (en) 2015-01-29
US20150139938A1 (en) 2015-05-21
WO2013185022A1 (en) 2013-12-12
EP2858643A1 (en) 2015-04-15
KR20150030703A (ko) 2015-03-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tagge et al. Concussion, microvascular injury, and early tauopathy in young athletes after impact head injury and an impact concussion mouse model
CN104507468A (zh) 用于改善软膜侧支循环和治疗血液凝固障碍的方法与组合物
Castellano et al. Human umbilical cord plasma proteins revitalize hippocampal function in aged mice
Członkowska et al. Wilson disease
Rink et al. Tocotrienol vitamin E protects against preclinical canine ischemic stroke by inducing arteriogenesis
Forsdahl et al. Risk factors for abdominal aortic aneurysms: a 7-year prospective study: the Tromsø Study, 1994–2001
Papa et al. Systematic review of clinical studies examining biomarkers of brain injury in athletes after sports-related concussion
Kuhlencordt et al. Accelerated atherosclerosis, aortic aneurysm formation, and ischemic heart disease in apolipoprotein E/endothelial nitric oxide synthase double-knockout mice
CN105917229B (zh) 用于肾损伤和肾衰竭的诊断和预后的方法和组合物
Brady et al. Selective deficits in spatial working memory in the neonatal ventral hippocampal lesion rat model of schizophrenia
ES2546732T3 (es) STXBP1 como biomarcador psiquiátrico en un sistema de modelo murino y sus usos
Cramer et al. Neuronal and vascular deficits following chronic adaptation to high altitude
Arain et al. Systematic review on" vitamin E and prevention of colorectal cancer".
AU2017240635B2 (en) Beta-caseins and cognitive function
Mendonça et al. Open oral food challenge in the confirmation of cow's milk allergy mediated by immunoglobulin E
Gong et al. Effects of aging on autophagy after experimental intracerebral hemorrhage
Fan et al. RGD1564534 represses NLRP3 inflammasome activity in cerebral injury following ischemia-reperfusion by impairing miR-101a-3p-mediated Dusp1 inhibition
Hu et al. Nonbifurcating carotid artery: a case report with a review of embryogenesis
Yan et al. Analysis of role of rat cerebral pericytes in cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage and molecular mechanism of neurovascular injury
Yang et al. The role of the Toll like receptor 4 signaling in sex-specific persistency of depression-like behavior in response to chronic stress
RU2557916C1 (ru) Способ диагностики окклюзирующих поражений сосудов у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями
Stenkamp et al. The interphotoreceptor retinoid-binding protein (IRBP) of the chicken (Gllus gallus domesticus)
Blei Update October 2022
CN109641029A (zh) 用于apoa1给药的组合物和剂量
Farrag et al. PM472 Echocardiographic screening for rheumatic valvular heart disease among Egyptian school children

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150408