CN1809284A - 用于降低胆固醇和甘油三酯的富含二酰甘油和植物甾醇酯的油 - Google Patents

Abstract

本发明涉及组合物在制造营养补充剂和口服药物制剂中的用途，该组合物包括溶解于或分散于食用油和/或食用脂肪中的二酰甘油(DAG)，主要是1，3－二酰甘油，和植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯(PSE)的组合，该营养补充剂和口服药物制剂能够降低胆固醇和甘油三酯两者的血液水平和/或用于降低血清、血清LDL和巨噬细胞的氧化水平，抑制泡沫细胞的形成和/或防止由脂质诱导的氧化应力而产生的有害影响。此外，本发明的组合物及其药物制剂适用于治疗和防止与动脉粥样硬化相关的病症，如心血管病(CVD)、冠心病(CHD)和糖尿病。

Description

用于降低胆固醇和甘油三酯的富含二酰甘油 和植物甾醇酯的油

发明领域

本发明涉及组合物在制造营养补充剂和口服药物制剂中的用途，该组合物含有溶解于或分散于食用油和/或食用脂肪中的二酰甘油(DAG)，主要是1，3-二酰甘油，和植物甾醇酯和/或植物甾烷醇(phytostanol)酯(PSE)的组合，该营养补充剂和口服药物制剂能够降低胆固醇和甘油三酯两者的血清水平，还呈现出LDL-抗氧化特性，并且其适于治疗和预防心血管病(CVD)和冠心病(CHD)。

发明背景

本申请从头至尾提及的所有出版物在此全部引入作为参考，包括其中引用的所有参考文献。

冠状动脉病(如动脉粥样硬化)是西方发病率和死亡率的主要原因，其发病机理涉及动脉壁细胞、血细胞和血浆脂蛋白之间的复杂相互作用[Rose R.(1993)Nature 362：801-809；Glass C.K.和Witztum J.L.(2001)Cell 104：503-516]。目前，众所周知的是降低胆固醇的水平就降低了心脏病发作、中风和其它形式的动脉粥样硬化血管病的风险。此外，许多最近的研究表明氧化应力在动脉粥样硬化、癌症和其它慢性疾病的发病机理中是具有主要作用的机理。在这种情况下，内皮下空间中的巨噬细胞起了关键作用，其通过氧化的低密度脂蛋白(ox-LDL)激活。最近，将由于氧化应力引起的内皮功能障碍确定为动脉粥样硬化斑发展过程中的引发因素。

早期动脉粥样硬化的损害是通过源自负载胆固醇的巨噬细胞的泡沫细胞来表征的[Gerrity R.G.(1981)Am.J.Pathol.103：181-190；Schaffner T等(1980)Am.J.Pathol.100：57-80]。巨噬细胞胆固醇累积和泡沫细胞形成是早期动脉粥样硬化的标志，且这些细胞中的大部分胆固醇源自血浆低密度脂蛋白(LDL)。然而，天然LDL必需经受一些改变以便引起大量的巨噬细胞胆固醇累积[Brown M.S.和Goldstein J.L.(1983)Annu.Rev.Biochem.52：223-261；Kaplan M.和Aviram M.(1999)Clin.Chem.Lab.Med.37：777-787；Aviram M.(1983)Atherosclerosis 98：1-9；Steinberg D.等(1989)N.Engl.J.Med.320：915-924]。多数研究的具有可能的病理重要性的改变是LDL氧化[Aviram M.(1996)Europ.J.Clin.Chem.Clin.Biochem.34：599-608；Aviram M.(1995)Isr.J.Med.Sci.31：41-249；Chisolm G.M.和Steinberg D.(2000)Free Radic.Biol.Med.28：1815-1826]。该改变导致巨噬细胞摄取修饰脂蛋白的提高，接着细胞胆固醇累积而导致负载脂质的泡沫细胞形成[Aviram(1996)id ibid.；Aviram(1995)idibid；Chisolm(2000)id ibid；Aviram M.(1999)Antiox.Redox.Signal 1：585-594]。

数个报道已经指出氧化应力为引发动脉粥样硬化的主要因素[Heinecke，J.W.(2003)Am.J.Cardiol.91：12A-16A；Ceconi，C.等(2003)Arch.Biochem.Biophys.420：217-221；Dhalla，N.S.等(2000)J.Hypertens.18：655-673]。氧化应力定义为自由基(FR)超量的结果，其在和细胞膜接触时出现并导致生物分子如脂质、碳水化合物、蛋白质和核酸中的氧化损害[Thomas C.E.和Aust，S.D.(1986)Ann.Emerg.Med.15(9)：1075-83]。可以受到FR攻击的分子之一是LDL，形成ox-LDL，其高水平导致动脉粥样硬化。

实验和临床研究两者中增加的证据表明氧化应力在两种类型的糖尿病的致病机理中起主要作用。超量产生活性氧物质的可能来源是广泛的且包括酶解途径、葡萄糖的自体氧化和线粒体。这些自由基的异常高水平和同时的抗氧化防御机制的衰弱导致提高的脂质过氧化反应、细胞器和酶的损害以及CVD的发展。因此，许多研究者认为糖尿病中氧化应力的预防是对抗糖尿病血管病发展的主要防御。此外，一些最近的研究指向氧化应力、山梨糖途径的激活、高级糖化终产物(AGE)和AGE前体为导致这些患者CVD而不是高血糖症的基础性异常[Duckworth W.C.(2001)Curr.Atheroscler.Rep.3：383-91；Yorek M.A.(2003)Free Radic.Res.37：471-80；Maritim A.C.(2003)J.Biochem.Mol.Toxicol.17：24-38]。

对氧磷酶(PON1)是作为HDL的组分运送进血浆中的糖蛋白。已经在体外显示了PON1抑制LDL的氧化修饰。因此，HDL中PON1的存在可以占据这些脂蛋白抗氧化特性的比例[Mackness，M.I.等(1991)FEBS Lett.286：152-154]。

动脉粥样硬化的LDL氧化假设引起了对以下的广泛研究：抗氧化剂对抗LDL氧化的作用作为动脉粥样硬化可能的预防性治疗。尽管观察到用各种合成药剂治疗后对氧化的LDL提高的抗性，还是作出努力来鉴别给予了对抗LDL氧化的抗氧化防御的天然食品。

橄榄油已经显示出能抑制LDL氧化，且该效果与其高油酸含量以及一些酚类(羟基甲苯，oleoropein)和植物甾醇如谷甾醇相关[Aviram M.和Kasem E.(1998)Ann.Nutr.Metabol.37：75-84；VisioliF.等(1995)Atherosclerosis 117：25-32]。

除了LDL氧化，对于冠心病(CHD)-冠状动脉中动脉粥样硬化的结果-已知的风险因素包括高血清LDL胆固醇浓度。血清总胆固醇和LDL胆固醇浓度、与CHD的风险或CHD死亡率之间存在正向线性相关[Jousilahtu等(1998)Circulation 97：1084-1094]。

高浓度血清甘油三酯也是引起CHD的原因[Austin，M.A.(1989)Am.J.Epidemiol.129：249-259]，但是证据不是很清楚。和健康人中的甘油三酯相比较，二酰甘油(DAG)已经显示出能降低餐后血清甘油三酯的升高[Taguchi等(2000)J.Am.Coll.Nutr.19：789-796]。在餐后六小时时和那些摄食44gTG油的相比较，摄食44gDAG油后的血清甘油三酯(TG)浓度显著低。即使是使用低脂肪剂量(10和20g)，该差异也是可再现的[Robert A.Moreau等(2002)Progress in LipidResearch 41：457-500]。

植物甾醇和CHD

术语“植物甾醇”涵盖植物固醇和植物甾烷醇。植物固醇是天然形成物质，作为植物油的微量组分存在于膳食中。植物固醇在植物中具有和胆固醇在哺乳动物中相似的作用，例如，形成细胞膜结构。在人类营养中，植物固醇和植物甾烷醇在降低总血浆胆固醇水平和LDL-胆固醇中都是有效的。

食用植物固醇和植物甾烷醇通过抑制膳食的吸收和小肠内生性产生的胆固醇而降低了血液胆固醇水平。植物固醇/甾烷醇是吸收非常差的组分。该抑制与植物固醇和甾烷醇与胆固醇相似的物理化学特性相关。

已经在涉及超过2,400名患者的大量临床试验中研究了植物固醇降低血液胆固醇的效果，使用每天25g高的剂量，持续时间为3天。在全部数十个植物固醇的辅助临床效果测试中或普通临床使用中没有观察到副作用。此外，药物谷甾醇(主要是β-谷甾醇)作为处方药已经超过20年了并具有卓越的安全记录。

此外，植物固醇和植物甾烷醇已经接受了严格的毒性评价。对于吸收、分布、代谢和分泌的研究显示了植物固醇的小肠吸收是差的(1-10％)。

已经进行了一系列人的研究，使用涂抹酱中的植物油植物固醇酯，摄入高达8.6g植物固醇/天，进行4周。评价了临床化学、血液学、消化道菌丛的细菌特征图和普通物理状态。在所有研究中，没有检测到副作用。

在美国，一组独立的专家推断符合合适的食品级规格和通过常规食品制造惯例生产(21C.F.R.§182.1(b))的植物油固醇酯，对于用作植物油涂覆酱中的配料是安全的，使用量不超过植物固醇酯中的20％。这是专家小组和本领域有资格的专家共同的意见，认为植物油固醇酯是使用安全的，即植物油固醇酯得到了GRAS标准(公认安全无害)的准予。基于GRAS认识，美国食品与药物管理局(FDA)已经明确可以使用含有高达20％植物固醇酯的涂覆酱和另一含有植物甾烷醇酯的涂覆酱。在不同的欧洲国家以及亚洲和澳洲也给出了相似的批准。

膳食在促进或预防心脏病中的用途是重要研究的主题。然而，使用可以降低LDL-胆固醇和甘油三酯水平并抑制LDL-氧化的天然形成物质对于使用合成药物是具有优势的。

最近的研究教导了近几年伴随着对功能食品日益增长的兴趣，植物甾醇用于降低血清胆固醇水平的用途已经成为重要的要素[Stark，A.H.等(2002)Nutrition Reviews 60(6)：170-176]。这尤其归因于植物甾醇和脂肪酸的酯化作用(甾烷醇酯)，提供了商业规模生产含有植物甾醇的食品，如人造黄油。如甾烷醇酯，植物甾醇酯(甾醇酯)已经在临床研究中显示出一贯地降低血清LDL-胆固醇(LDL-C)水平(减少高达约10％或更多)，没有观察到HDL-胆固醇(HDL-C)值的改变。评论建议适当配制的游离植物甾醇和甾烷醇在降低人LDL-C水平中可以与甾烷醇酯以及甾醇酯一样有效。

WO01/32035教导了基于橄榄油的产品，基于特别高级的橄榄油(如初榨橄榄油)，含有植物甾烷醇酯和/或植物固醇酯。

US专利5,843,99公开了从玉米纤维可榨取的油，含有阿魏酸酯(和阿魏酸酯化的植物甾醇酯)，尤其是谷甾烷醇酯，其已经显示出具有降低胆固醇的活性。该专利提及玉米纤维油(含有约73％脂肪(甘油三酯)、8％固醇(脂肪酰基)酯、4％游离固醇、6％二酰甘油和6％阿魏酸酯(固醇酯))用作降低胆固醇水平的补充食品的添加剂。

美国专利6,326,050公开了包括油或脂肪，溶解于或分散于油或脂肪中的二酰甘油、游离植物甾醇和维生素E的组合物。该组合物在降低高胆固醇血症个体的血液胆固醇中起了作用。上述提及的出版物没有一个描述同时降低了胆固醇和甘油三酯的血清水平。

橄榄油，和其它提及的植物油(如玉米纤维油、餐桌用烹调油、大豆油、菜籽油、米糠油和棕榈油)相反，尤其是包括55至85％的单不饱和脂肪酸(MUFA)，特别是油酸，其是使该油具有高营养价值的原因。使用橄榄油比使用其它植物油存在一些截然不同的优势。富含橄榄油的膳食已经显示出在降低总胆固醇和LDL-胆固醇中比不含有高含量MUFA的常规膳食治疗更有效[Brown M.S和Goldstein J.L.(1983)Ann.Rev.Biochem.52：223-261]。

此外，橄榄油是地中海型膳食的整体配料，且累积数据表明其具有健康的益处，包括降低冠心病的风险因素，预防数种癌症以及缓和免疫和炎症反应[Brown和Goldstein(1983)id ibid]。

本申请人的未决的以色列专利申请No.147942描述了物质的组合物，包括分散于油和/或脂肪中的二酰甘油，主要是1，3-二酰甘油(DAG)，和植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯(PSE)。

在研究营养补充剂和/或药物的组合效果中，发明者目前发现了IL147942所述的混合物，即油和/或脂肪中的二酰甘油，主要是1，3-DAG，和PSE的组合，具有协同效果并降低了血液中LDL-胆固醇和甘油三酯两者的水平。该组合物进一步呈现了提高血清和巨噬细胞的抗氧化特性，尤其是LDL抗氧化特性，导致CHD和动脉血管疾病风险的降低。这些新的治疗用途是本发明的主要目的。

本发明进一步的目的是通过给药所述的组合物来降低哺乳动物血液中胆固醇和甘油三酯的水平，并随后降低CHD风险，将分开在油中的所述两个配料(DAG和PSE)各自所获得的降低胆固醇和甘油三酯的水平合并并和该组合物相比较，发现该组合物能较大程度地降低血液胆固醇水平。在现有技术中没有描述过或证明过这样的协同效果。如上所述，美国专利6,326,050涉及二酰甘油和游离植物固醇的组合。尽管在该专利中评述了当二酰甘油的量超过80％wt时，可以预期对脂质代谢的协同效果，但该专利中没有证明或讨论这样的效果。

根据本发明在这方面可以强调，甚至当使用仅含有20wt％DAG和11wt％植物甾醇酯的组合物时，可以同时观察到降低了胆固醇和甘油三酯两者的血清水平的效果和提高的抗氧化特性。

本发明的进一步目的是将所述组合物用作膳食/营养补充剂(食品添加剂)或在药物制剂形式中的用途。

随着以下的描述本发明的这些和其它目的将变得清楚。

发明概述

本发明涉及包括食用组合物的膳食营养物或食品补充剂，其用于降低胆固醇和甘油三酯两者的血液水平和/或用于降低血清、血清LDL和巨噬细胞的氧化水平，抑制泡沫细胞的形成和/或预防由脂质诱导的氧化应力所产生的有害影响，该食用组合物包括溶解于或分散于食用油和/或食用脂肪中的DAG，主要是1，3-DAG，和PSE的组合。当该组合溶解于或分散于所述食用油和/或食用脂肪中时，在此也称为MultOil。

所述组合物中包括的油可以是任何天然油，如橄榄油、大豆油、向日葵油、红花油、低芥酸菜子油、芝麻油、棕榈油、鳄梨油或鱼油。优选油是橄榄油、低芥酸菜子油或鱼油。

所述组合物中包括的脂肪可以是任何合适的脂肪，如乳脂、可可脂、无水乳脂或猪脂。

所述组合物中DAG的脂肪酸残基可以对应于所用油的脂肪酸残基。实例基团是油酸残基、棕榈酸残基、棕榈油酸残基、硬脂酸残基、亚油酸残基、亚麻酸残基、二十二碳六烯酸残基、二十碳五烯酸残基和花生酸残基。

所述组合物中的植物甾醇酯可以是任何脂肪酸酯，例如但不限制于豆甾醇、谷甾醇、β-谷甾醇、菜籽甾醇、菜油甾醇、5-燕麦甾醇的油酸酯和棕榈酸酯及其异构体和衍生物。

根据本发明的膳食营养物或食品补充剂中，所述组合物可以还包括营养组合物的常规配料。

优选实施方案中，本发明的膳食营养物或食品补充剂所包括的组合物中，二酰甘油与植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯之间的摩尔比是约1∶5至约5∶1。

所述组合物中二酰甘油的含量优选至少为1wt％，且植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯的含量优选至少为1wt％。

特定实施方案中，本发明涉及所述膳食营养物或食品补充剂，其中所述组合物中二酰甘油的含量为1至99wt％，优选7至48wt％，且所述组合物中植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯的含量为1至99wt％，优选5至50wt％。

另一优选实施方案中，本发民涉及所述膳食营养物或食品补充剂，其中所述组合物包括溶解于或分散于橄榄油中的15wt％DAG，主要是1，3-二酰甘油，和25wt％总PSE。实例组合物中，植物甾醇酯包括约0.4wt％菜籽甾醇酯，3.1wt％菜油甾醇酯，2.0wt％豆甾醇酯，5.3wt％β-谷甾醇酯，0.2wt％燕麦甾醇酯，且DAG含有以下的脂肪酸残基：油酸残基(65wt％)，棕榈酸残基(15wt％)，亚油酸残基(10wt％)和10wt％包括棕榈油酸残基、硬脂酸残基、亚麻酸残基和花生酸残基的脂肪酸残基。特定实施方案中，所述组合物包括溶解于或分散于橄榄油中的15wt％DAG，主要是1，3-二酰甘油，和25wt％总植物甾醇酯(PSE)。

如在此所涉及的，术语膳食营养物也涉及食用品或食品。

第二方面，本发明涉及口服药物组合物，其用于降低胆固醇和甘油三酯两者的血液水平和/或用于降低血清、血清LDL和巨噬细胞的氧化水平，抑制泡沫细胞的形成和/或预防由脂质诱导的氧化应力而产生的有害影响，该口服药物组合物包括溶解于或分散于食用油和/或食用脂肪中的DAG，主要是1，3-二酰甘油，和PSE的组合，且任选还包括药物学上可接受的添加剂、稀释剂、赋形剂和/或载体。

本发明的药物组合物中，所述组合中二酰甘油与植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯之间的摩尔比优选约1∶5至约5∶1。

本发明的药物组合物中，所述组合中二酰甘油的量至少为1wt％。

此外，本发明的药物组合物中，所述组合中的植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯的量优选至少为1wt％。

特定实施方案中，本发明药物组合物所包括的组合，包括1至99wt％量的二酰甘油，优选7至48wt％，且所述组合中植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯的量为1至99wt％，优选5至50wt％。

另一特定实施方案中，本发明的药物组合物基本上由溶解于或分散于橄榄油中的15wt％DAG，主要是1，3-二酰甘油，和25wt％总PSE组成。该组合物呈现了降低血液胆固醇和甘油三酯水平的效果。实例组合物中，植物甾醇酯包括0.4wt％菜籽甾醇酯，3.1wt％菜油甾醇酯，2.0wt％豆甾醇酯，5.3wt％β-谷甾醇酯和0.2wt％燕麦甾醇酯。DAG含有油酸残基(65wt％)，棕榈酸残基(15wt％)，亚油酸残基(10wt％)和10wt％其它的脂肪酸残基，其主要是棕榈油酸残基、硬脂酸残基、亚麻酸残基和花生酸残基。

本发明的组合物尤其适于治疗和/或预防心血管病症及其相关的疾病如冠心病、动脉粥样硬化和由其他疾病如糖尿病尤其是II型糖尿病诱发的或显现的心血管病症，以及与脂质相关的氧化应力或脂蛋白和巨噬细胞动脉粥样硬化形成相关的任何病症。

再一方面，本发明涉及溶解于或分散于食用油和/或食用脂肪中的DAG，主要是1，3-二酰甘油，和PSE，且任选还包括药物学上可接受的添加剂、稀释剂、赋形剂和/或载体的组合在制备口服药物组合物中的用途，该口服药物组合物用于降低胆固醇和甘油三酯两者的血液水平和/或用于降低血清、血清LDL和巨噬细胞的氧化水平，抑制泡沫细胞的形成和/或预防由脂质诱导的氧化应力而产生的有害影响。

附图简述

图1A-B：橄榄油、橄榄油+植物甾醇和橄榄油MultOil(oliveMultOil)对巨噬细胞的细胞过氧化物含量的影响。

图1A：通过细胞平均荧光(由DCF发射)强度测定的巨噬细胞过氧化物含量。

图1B：通过荧光阳性细胞的百分比测定的巨噬细胞过氧化物含量。

缩写：PT，植物甾醇；cont.，对照；OL.O.，橄榄油，M.F.I，平均荧光强度；Perc.Pos.Ce.，阳性细胞的百分比。

图2：橄榄油、橄榄油+植物甾醇和橄榄油MultOil对巨噬细胞过氧化物阴离子释放的影响。

通过细胞色素C的过氧化物歧化酶可抑制还原而测定的巨噬细胞过氧化物阴离子释放。

缩写：PT，植物甾醇；cont.，对照；OL.O.，橄榄油；S.O.rel.，过氧化物释放；prot.，蛋白质。

图3：食用MultOil-c(低芥酸菜子油MultOil)和MultOil-f(鱼油MultOil)对血清甘油三酯特征的影响。

缩写：Triglyc.，甘油三酯；Plac.，安慰剂；Can.，低芥酸菜子油。

图4：食用MultOil-c(低芥酸菜子油MultOil)和MultOil-f(鱼油MultOil)对血清总胆固醇特征图的影响。

缩写：Chol.，胆固醇；Plac.，安慰剂；Can.，低芥酸菜子油。

图5：食用MultOil-c(低芥酸菜子油MultOil)和MultOil-f(鱼油MultOil)对血清氧化应力的影响。

缩写：Ser.lip.Per.，血清脂质过氧化物；Plac.，安慰剂；Can.，低芥酸菜子油。

图6：食用MultOil-c(低芥酸菜子油MultOil)和MultOil-f(鱼油MultOil)对血清PON1活性的影响。

缩写：Ser.PON1 act.，血清PON1活性；Plac.，安慰剂；Can.，低芥酸菜子油。

图7：食用MultOil-c(低芥酸菜子油MultOil)和MultOil-f(鱼油MultOil)对腹膜巨噬细胞摄取ox-LDL的影响。

缩写：prot.，蛋白质；Plac.，安慰剂；Can.，低芥酸菜子油；deg.，降解；ass.，结合。

图8：食用MultOil-c(低芥酸菜子油MultOil)和MultOil-f(鱼油MultOil)对氧化状态的影响。

缩写：Rel.Fluor.U，相对荧光单位；Plac.，安慰剂；Can.，低芥酸菜子油。

图9：食用MultOil-c(低芥酸菜子油MultOil)和MultOil-f(鱼油MultOil)对巨噬细胞中PMA诱导的过氧化物阴离子释放的影响。

缩写：S.O.rel，过氢化物释放；prot.，蛋白质；Plac.，安慰剂；Can.，低芥酸菜子油。

发明详述

说明书中沿用以下缩写：

低芥酸菜子油MultOi(Canola MultOil)(MultOil-c)：其中基料是低芥酸菜子油的MultOil。

CHD：冠心病

CVD：心血管病

DAG：二酰甘油，主要是1，3-二酰甘油

DHA：二十二碳六烯酸

鱼油MultOil(Fish MultOil)(MultOil-f)：其中基料是鱼油的MultOil。

HBSS：Hanks′平衡盐溶液

HDL：高密度脂蛋白

LDL：低密度脂蛋白

MPM：小鼠腹膜巨噬细胞

MultOil：油和/或脂肪基料中二酰甘油，主要是1，3-二酰甘油，和植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯的组合。

橄榄油MultOil(Olive MultOil)(MultOil-o)：其中基料是橄榄油的MultOil。

Ox-LDL：氧化的LDL

PBS：磷酸盐缓冲盐水

PSE：植物甾醇酯或植物甾烷醇酯

本发明的发明者已经使用动物模型系统apoE⁰小鼠，其中在幼年产生了严重的高胆固醇血症和动脉粥样硬化斑来评价新食用组合物的抗动脉粥样硬化特性，在此新食用组合物指的是MultOil-o、MultOil-c和MultOil-f，与安慰剂和/或低芥酸菜子油相比较。

如上所述，本发明者发现油和/或脂肪中的DAG，主要是1，3-DAG，和PSE的组合(也称为MultOil)通过降低血液中LDL-胆固醇和甘油三酯的水平而提供了增强的效果。该组合以及含有该组合的组合物，进一步呈现了增强的血清、血清LDL和巨噬细胞的抗氧化特性，以及抑制了泡沫细胞的形成和/或防止了由脂质诱导的氧化应力而产生的有害影响，其导致CHD和动脉相关疾病如糖尿病风险的降低。

根据所述组合所用的油基料，如果是橄榄油、低芥酸菜子油或是海产来源的，本发明的组合在整个说明书中各自称为MultOil-o(橄榄油MultOil)、MultOil-c(低芥酸菜子油MultOil)或MultOil-f(鱼油MultOil)。

因此本发明主要涉及含有二酰甘油和植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯的组合作为药剂的新用途，该药剂能够降低胆固醇和甘油三酯两者的血液水平和/或降低血清、血清LDL和巨噬细胞的氧化水平，抑制泡沫细胞的形成和/或防止由脂质诱导的氧化应力而产生的有害影响。

如实施例和附图中所证明的，和安慰剂治疗相比较，在动物模型系统中各种MultOil能够充分地降低血液中甘油三酯和胆固醇两者的水平。

本发明所用的组合基本上由分散于食用油和/或食用脂肪中植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯和二酰甘油，主要是1，3-二酰甘油组成。更特别地，该组合包括溶解于或分散于所述油和/或脂肪中的至少1wt％二酰甘油和至少1wt％植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯。

油和/或脂肪中含有的二酰甘油含量为1wt％至约99wt％，优选约7wt％至约48wt％，最优选约10wt％至约22wt％。

油中含有的植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯含量为1wt％至约99wt％，优选约5wt％至约50wt％，最优选约20wt％至约35wt％。

二酰甘油基本上由主要含有不饱和脂肪酸残基的1，3-二酰甘油组成。二酰甘油的结构取决于用于溶解或分散植物甾醇酯的特定油和/或脂肪。例如，当使用橄榄油时，二酰甘油主要由1，3-二酰甘油组成。一般而言，DAG的脂肪酸部分包括油酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸和花生酸脂肪酸(DAG为1，2-二油酰基甘油、1，3-二油酰基甘油、1，2-油酰基棕榈酰甘油和1，3-油酰基棕榈酰甘油)。

植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯可以是任何植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯。这样的酯的实例是豆甾醇油酸酯、豆甾醇棕榈酸酯、谷甾醇油酸酯、谷甾醇棕榈酸酯、β-谷甾醇油酸酯和β-谷甾醇棕榈酸酯。

油中植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯与二酰甘油的摩尔比为约5∶1至约1∶5，优选约2∶1。

本发明组合物中包括的油可以是任何食用油，包括但不限制于橄榄油、大豆油、向日葵油、红花油、低芥酸菜子油、芝麻油、棕榈油、鳄梨油或鱼油。优选，油至少是橄榄油、低芥酸菜子油或鱼油中的一种。本发明组合物中含有的脂肪可以是任何合适的脂肪，如乳脂、无水乳脂、可可脂以及动物脂肪如猪脂或鱼油浓缩物。

可以通过任何常规的酶解或非酶解方法来获得二酰甘油。优选，通过存在于油和/或脂肪中的植物甾醇和甘油三酯之间的酯交换来获得。可以通过任何常规的酶解或非酶解方法来获得植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯。优选，通过存在于食用油和/或食用脂肪中的植物甾醇和/或植物甾烷醇与甘油三酯之间的酯交换来获得。本发明所用的来获得组合的方法详细描述于所述的IL147942中，在此全部引入作为参考。如IL147942中所述的，还可以通过用油和/或脂肪来混合(或掺合)所需量的二酰甘油和植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯来制得本发明的组合物。

如以下实施例所示的，获得了测试组合物防止和/或降低血清ox-LDL以及巨噬细胞氧化的显著效果。因此，除了具有降低血液LDL-胆固醇和甘油三酯水平的效果，所述组合以及含有该组合的组合物呈现了血清LDL和巨噬细胞抗氧化特性。实施例进一步显示了橄榄油、低芥酸菜子油和/或鱼油MultOil制剂呈现出显著的抗氧化特性，抑制泡沫细胞的形成，和/或防止由脂质诱导的氧化应力而产生的有害影响。

特别地，图5、7、8和9呈现了结果来证明不同的MultOil制剂是怎样降低以下的氧化应力参数的：血清氧化应力、腹膜巨噬细胞的ox-LDL摄取、巨噬细胞氧化状态以及巨噬细胞中PMA诱导的过氧化物阴离子释放。

本发明者已经测量了血清中的PON1活性。PON1是HDL-相关的酯酶，可以消除ox-LDL。令人感兴趣的，图6的结果显示了低芥酸菜子油降低了PON1的活性，而本发明的MultOil组合能够维持PON1较高的活性，提出本发明可以保护动脉粥样硬化前(proatherosclerotic)环境中的PON1活性。

MultOil组合本身可以用作食用品。或者，可以作为食用品和补充剂的配料，其可以进一步地任意含有食品工业中所用的常规添加剂，如防腐剂、色素、调味剂、香料、抗氧化剂和硬化剂、维生素、钙、其他矿物质微量元素、益生元、异黄酮、热量剂等等。

此外，本发明的食品补充剂可以用于任一种功能食品、功能饮料或膳食补充剂的制造中。可以在其制造过程中通过混合、添加和掺入将所述食品补充剂引入所述食品、饮料和膳食补充剂中。

或者，组合可以作为活性成分包括于药物组合物中，该药物组合物用于降低胆固醇和甘油三酯两者的血液水平和/或用于降低血清、血清LDL和巨噬细胞的氧化水平，抑制泡沫细胞的形成和/或防止由脂质诱导的氧化应力而产生的有害影响。药物组合物可以含有药物学上可接受的添加剂、稀释剂、赋形剂和载体。

药物组合物的制备是本领域公知的，参见，例如，US专利5,736,519，5,733,877，5,554,378，5,439,688，5,418,219，5,354,900，5,298,246，5,164,372，4,900,549，4,755,383，4,639,435，4,457,917和4,064,236。本发明所用的组合可以优选和赋形剂、载体和/或稀释剂，以及任意的防腐剂等等混合，药物学上可接受的赋形剂如本领域公知的，参见例如上述美国专利。赋形剂的实例包括葡萄糖、甘露醇、肌醇、蔗糖、乳糖、果糖、淀粉、玉米淀粉、微晶纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等等。任选，可以加入增稠剂，如天然胶体、纤维素衍生物、丙烯酸聚合物或乙烯聚合物等等。

优选以液体、固体或半固体来提供药物组合物。优选以水悬浮液、油悬浮液或微胶囊组合物来提供液体制剂。优选以含水凝胶或油性凝胶或膏剂来提供半固体组合物。

含有本发明组合的片剂、硬片剂、胶囊，和特别地，软明胶胶囊是优选的，作为膳食补充剂和作为药物剂型。实质上，适用于口服的任何药物剂型可以用来传送本发明的组合。

本发明的MultOil组合的剂量取决于待治疗的病症、患者的年龄、性别和体重，且由参与的内科医师或营养学家来决定。对于成人的优选剂量为约4至约6g MultOil每天，优选5g，其包括约1300mgPSE和800mg DAG。

本发明还涉及治疗和/或预防与高胆固醇和甘油三醇血液水平、血清氧化应力、巨噬细胞的ox-LDL摄取、巨噬细胞氧化状态、泡沫细胞形成和脂质诱导的氧化应力任一相关病症的方法，所述方法包括将治疗有效量的食品补充剂或其组合物口服给药于需要的患者。因此，该方法对于心血管病症、冠心病、动脉粥样硬化以及由其他疾病如糖尿病尤其是II型糖尿病诱发的和显现的心血管病症的治疗也是有效的。

或者，通过食用根据本发明的食品来治疗这样的病症。

最后，本发明提供了用于提高健康的方法，包括将治疗有效量的本发明的膳食营养物或其药物组合物给药于需要的患者。

本发明通过权利要求来限定，其可阅读到的内容包括于本说明书公开的范围内。

所公开的和所述的，可以理解本发明不受限制于在此所公开的特定实施例、工序和材料，因为这样的工序和材料可以稍微改变。还可以理解在此所用的术语仅仅是为了描述特定实施方案的目的，并不是用来限制，因为本发明的范围只通过所附权利要求及其等效的来限定。

必须注意的是，本说明书和所附权利要求中所用的单数形式“一个”、“一种”和“这个”包括复数对象，除非文中另外明确指出。

贯穿本说明书以及随后的权利要求，除非文中另外需要，词语“包括”以及变化“包含”和“含有”将理解为包含所述整体或整体的步骤或组合和步骤，但是不排除任何其他整体或整体的步骤或组合或步骤。

以下的实施例是本发明者在实施本发明各个方面中所用技术的代表。可以认识到这些技术是实施本发明的优选实施方案的实例，本领域的那些技术人员，根据本发明的公开，将认识到可以作出各种改变而不脱离本发明所确定的范围。

实施例

材料：

-橄榄油：商业初榨橄榄油，由Meshek Eger(YokeneamHaMoshava，Israel)制造。

-低芥酸菜子油：商业低芥酸菜子油，由Shemen Taasiot(Haifa，Israel)。

-鱼油：商业鱼油，由Pronova(Lysaker，Norway)制造。

表1：本发明所用油的组成

油成分％(w/w)	低芥酸菜子油MultOil	橄榄油MultOil(Enzymotec FG S7/1.75)	鱼油MultOil	富含植物甾醇酯的橄榄油
植物甾醇酯	26	28.5	22.12	18
					甘油一酯	2.1	1.48	4.72	0.31
甘油二酯	14.9	14.62	20.02	0.81
					甘油三酯	46.9	48.9	40.3
游离甾醇	3.1	1.5	5.2	0.2
					FFA	7	5	5	3
甘油	N.D.	N.D.	2.6	N.D.
					菜籽甾醇	0.54	0.46	0.82	N.D.
菜油甾醇	5.43	4.58	4.93	0.009
					豆甾醇	2.84	3.86	3.25	0.00142
B-谷甾醇	8.9	8.41	8.1	0.166

所有材料避光，有气味的产品放置于不高于25℃的温度。

方法

自由基清除能力

通过DPPH试验分析橄榄油、橄榄油+植物甾醇和橄榄油MultOil的自由基清除能力。DPPH(1，1-二苯基-2-苦基-偕腙肼)是产生自由基的底物，广泛用于监控各种抗氧化剂的自由基清除能力(化合物提供电子的能力)[Belinky，P.A.等(1998)Free Radic.Biol.Med.24：1419-29]。由于其不成对的电子DPPH基团具有深紫色，且接着通过517nm处吸收值的损耗可以分光光度测定自由基清除，因为产生了浅黄色非自由基形式。将15μl每个样品的储液和1mL乙醇中0.1mmol的DPPH/L混合，并连续监控517nm处光密度的改变。

小鼠腹膜巨噬细胞的分离

在腹膜内注射盐水中(3Ml)的巯基乙酸盐(24g/L)4天后，从E⁰小鼠(15-25g)的腹膜流体中收集小鼠腹膜巨噬细胞(MPM)。将细胞(10-20×10⁶/小鼠)用PBS洗涤3次并以10⁶/mL重悬浮于含有5％胎牛血清(在56℃热灭活30分钟)、100U盘尼西林/mL、100μg链霉素/mL和2mM谷氨酰胺的DMEM中。将细胞悬浮液接种于培养皿中，并在湿润的培养器(5％CO₂，95％空气)中孵育2小时。用DMEM将培养皿洗涤一次来除去非粘着细胞，并将单细胞层在相同条件下孵育18小时。从每个组的6只小鼠中分离小鼠腹膜巨噬细胞，每个试验重复两次或三次组合并分析。

巨噬细胞过氧化物释放

以过氧化物歧化酶可抑制的细胞色素C还原来测量小鼠腹膜巨噬细胞产生的过氧化物阴离子(O2^-)[Yanagitani Y.等(1999)Hypertension33：335-9]。在1mL含有乙酰细胞色素C(80μmol/L)的HBSS中培养细胞(1×10⁶/孔)。通过加入佛波醇肉豆蔻酸盐醋酸盐来刺激细胞1小时以产生过氧化物。向一些对照样品中加入过氧化物歧化酶(SOD，30mg/L)。测定培养基中过氧化物的释放量并表示为过氧化物/mg细胞蛋白，使用消光系数E550＝21mmol/L^-1cm^-1。

巨噬细胞过氧化物含量

通过流式细胞术使用二氯氢化荧光素-双醋酸酯(DCFH-DA)来测定细胞过氧化物含量[Goupy，P.等(2003)Fr.Journal of Agriculturaland Food Chemistry 51(3)：615-622]。DCFH-DA是扩散入细胞中的非极性染料。其在细胞中水解成非荧光衍生物2’，7’-DCFH，其是极性的并圈闭在细胞中。在氧化应力下，DCFH氧化成DCF(2’，7’-二氯荧光素)，其是荧光化合物。用2.5×10⁵mol/L DCFH-DA在37℃培养腹膜巨噬细胞(2×10⁶)30分钟。在4℃用PBS洗涤来终止反应。用流式细胞设备(FACS-SCAN，Becton Dickinson，San Jose，CA，USA)测定细胞荧光。用氩离子激光器于488nm激发细胞后在510至540nm进行测量。

血清脂质特征

使用可购得的试剂盒(Roche Diagnostics，Penzberg，Germany)分析血清样品的脂质特征，包括总胆固醇和甘油三酯[Rosenblat，M.等(2002)Clin.Chem.Lab.Med.40：9-14]。

血清脂质过氧化作用

以1∶4将血清稀释于PBS中。用100mM自由基产生化合物2’，2’-偶氮二2’-脒基丙烷盐(AAPH)培养血清样品来测定血清对氧化的敏感度，AAPH是水溶性偶氮化合物，其受热恒速分解成过氧化氢自由基。测量硫代巴比妥反应物(TBARS)和脂质过氧化物的形成，并与在相似条件下但是没有AAPH培养的血清相比较。

PON1活性测量

通过测量芳基酯酶活性来测定血清中的PON1活性，使用乙酸苯酯作为底物。在270nm处分光光度测定水解的初速度。试验混合物包括1.0mM乙酸苯酯和20mM Tris HCl中的0.9mM CaCl₂，pH8.0。从总的水解率中减去乙酸苯酯的非酶水解率。反应的E₂₇₀为1,130M^-1cm^-1。一单位芳基酯酶活性等于1μmol水解的乙酸苯酯/min/ml。纯化的酶具有接近2000单位的芳基酯酶活性每mg蛋白质。

巨噬细胞氧化状态

在负载DCF的巨噬细胞中通过流式细胞术来测定细胞氧化应力，使用非荧光DCFH-DA向其荧光对应物DCF的转化作为指标。

巨噬细胞介导的LDL的氧化

用LDL(100μg蛋白质/mL)培养MPM 18小时，在氧化应力下(在2μmolCuSO₄的存在下)，随后通过TBARS试验测定LDL的氧化程度。

巨噬细胞摄取氧化的LDL

用¹²⁵I标记的氧化LDL(10μg蛋白质/mL)培养MPM，并测定这些细胞的脂蛋白结合和降解。以不是由于游离碘引起的甘油三酯酸(TCA)可溶的、非脂质放射性来测量所收集培养基中的脂蛋白细胞降解。在相同条件下测量细胞游离系统中的脂蛋白降解，并从总的降解中减去该降解。将剩余的细胞用冷PBS洗涤三次并溶解于0.1NNaOH中，用于蛋白质和细胞结合脂蛋白测定。

统计学分析

使用Student t-检验来统计分析结果。

实施例1

橄榄油、橄榄油+植物甾醇和橄榄油MultOil在E⁰小鼠中对抗巨噬细胞脂质过氧化作用的抗氧化效果

如上所述，氧化应力涉及动脉粥样硬化的发病机理。动脉粥样硬化与血浆LDL和动脉细胞包括巨噬细胞中的脂质过氧化作用相关[Aviram M.(2000)Free.Radic.Res.33：S85-97；Aviram M.和FuhrmanB.(1998)Mol.Cell.Biochem.188：149-159]。在氧化应力下，巨噬细胞过氧化物含量提高，且巨噬细胞产生了反应性氧属，导致动脉粥样硬化形成的提高[Plump A.S.等(1992)Cell 71：343-353]。

载脂蛋白E缺乏(E⁰)小鼠广泛用作动脉粥样硬化的动物模型，因为它们在食用固体食物(chow diet)时发展出严重的高血脂症和动脉粥样硬化损害。此外，E⁰小鼠中，加速的动脉粥样硬化与血浆脂蛋白和动脉细胞提高的脂质过氧化作用相关[Hayek T.等(1994)Biochem.Biophys.Res.Commun.201：1567-1574；Keidar S.(1998)LifeSci.63：1-11]。

由血管紧张肽原酶-血管紧张素系统产生的血管收缩剂血管紧张素II(Ang-II)涉及动脉粥样硬化。Ang-II激活巨噬细胞NAD(P)H-氧化酶，导致巨噬细胞脂质过氧化作用提高[Rajagopalan S等(1996)J.Clin.Invest.97：1916-1923；Johnston R.B.Jr.(1984)MethodsEnzymol.105：365-9]。

本发明实施例中，分析了橄榄油的三个制剂：指定的橄榄油+植物甾醇、橄榄油MultOil和橄榄油对抗巨噬细胞氧化应力的抗氧化效果。

检验以下的油样品(所有稀释于水中1/2vol./vol.，储液)：

1.橄榄油+植物甾醇

2.橄榄油MultOil

3.橄榄油

通过两个参数：(i)降低巨噬细胞过氧化物含量的能力；和(ii)巨噬细胞释放过氧化物离子的能力，来分析橄榄油MultOil对抗巨噬细胞氧化应力的抗氧化效果，与橄榄油+植物甾醇以及橄榄油相比较。

用50μl储液/ml橄榄油+植物甾醇、橄榄油MultOil和橄榄油培养小鼠腹膜巨噬细胞15分钟，接着进一步用血管紧张素II(10^-7M)培养1小时来诱导氧化应力。对照细胞仅用血管紧张素II培养。然后使用DCFH试验分析巨噬细胞的过氧化物含量和释放过氧化物离子的能力(图2A，B)。

1)橄榄油+植物甾醇、橄榄油MultOil和橄榄油对巨噬细胞过氧化 物含量的影响

用橄榄油+植物甾醇和橄榄油MultOil两者而仅没有橄榄油预培养巨噬细胞来降低巨噬细胞过氧化物含量，与仅用血管紧张素II培养的对照巨噬细胞相比较。使用DCFH试验，通过两个参数来确定巨噬细胞脂质过氧化物含量：第一，DCF发射的平均荧光强度，第二，荧光发射阳性细胞的百分比。

用50μl/ml橄榄油+植物甾醇或橄榄油MultOil预培养巨噬细胞，和对照细胞相比较导致巨噬细胞平均荧光强度83％和64％的降低，而相同浓度的橄榄油和对照细胞相比较对巨噬细胞平均荧光强度没有效果(图2A)。同样，用50μl/ml橄榄油+植物甾醇或橄榄油MultOil预培养巨噬细胞，和对照细胞相比较导致荧光阳性细胞百分比74％和55％的降低，而相同浓度的橄榄油和对照细胞相比较对巨噬细胞平均荧光强度没有效果(图2B)。

2)橄榄油+植物甾醇、橄榄油MultOil和橄榄油对巨噬细胞过氧化 物离子释放的效果

用50μl/ml橄榄油MultOil、橄榄油+植物甾醇或仅用橄榄油预培养从E⁰小鼠分离的小鼠腹膜巨噬细胞15分钟，接着用血管紧张素II(10^-7M)进一步培养1小时来诱导氧化应力。对照细胞仅用血管紧张素II培养。

本发明研究中分析的全部三个橄榄油制剂在一定程度上都抑制了由血管紧张素II诱导的巨噬细胞过氧化物释放。然而，橄榄油MultOil和橄榄油+植物甾醇仅用橄榄油显著有效。用50μl/ml橄榄油MultOil、橄榄油+植物甾醇或仅用橄榄油预培养巨噬细胞各自导致巨噬细胞过氧化物阴离子释放29％、23％和仅仅9％的降低，和仅用血管紧张素II培养的对照细胞相比较(图3)。

富含植物甾醇的橄榄油制剂尤其是橄榄油MultOil呈现出显著的对抗巨噬细胞脂质过氧化作用的抗氧化特性。相反，而仅用橄榄油没有呈现出任何效果。最重要的是，在降低巨噬细胞过氧化物含量和巨噬细胞过氧化物释放的能力上，橄榄油MultOil比橄榄油+植物甾醇制剂更有效。

这些结果表明了橄榄油和另外的成分(植物甾醇和二酰甘油)可以结合并内在化于巨噬细胞中。此外，富含植物甾醇的橄榄油使得本发明的制剂能够抑制细胞氧化系统(如NADPH氧化酶和/或脂肪加氧酶)或能够激活细胞抗氧化系统(如谷胱甘肽或过氧化物歧化酶系统)。此外，将DAG加入橄榄油+植物甾醇制剂中(形成橄榄油MultOil)导致另外的对抗巨噬细胞脂质过氧化物作用的抗氧化物效果。因此本发明者推断DAG，其参与了多个胞内信号转导系统，可以进一步影响上述涉及血管紧张素II-介导的细胞氧化应力的细胞氧化/抗氧化系统，该细胞氧化应力表现为巨噬细胞脂质过氧化作用和过氧化物释放。

实施例2

研究了动脉粥样硬化载脂蛋白E缺失(E⁰)小鼠模型中MultOil-c和MultOil-f对脂蛋白和巨噬细胞的动脉粥样硬化以及对动脉粥样硬化发展的影响。载脂蛋白E缺失(apoE⁰)小鼠8周大。随机分配给以下所述的组(每组5只小鼠)。小鼠接受常规固体食物，此外，如下喂食(通过管饲法)，三天一次：

I组：

1.安慰剂组：没有接受任何另外的油。

2.低芥酸菜子油组(对照)：用60μl低芥酸菜子油喂养。

3.MultOil-c组：用60μl MultOil-c喂养。

II组：

1.安慰剂组：没有接受任何另外的油。

2.MultOil-f组：用60μl MultOil-f喂养。

每只小鼠食用约5mL水/天，和5g固体食物/天

用于喂养的油制剂

给小鼠喂食的MultOil-c和MultOil-f量基于以下：

人的推荐植物甾醇剂量是1.5gr植物甾醇/天。基于每个样品中18.1％植物甾醇，因此人的MultOil-c和MultOil-f剂量为1.5/0.18＝8.33gr/天/人。对于小鼠，应该考虑体重(60,000gr人体重/20gr小鼠体重＝3000)，因此小鼠的日剂量为8.33gr/3000＝2.78mg/天/小鼠，其等于2.78/0.93＝2.99mL/天/小鼠。由于在限定的时间段内进行试验，所用的剂量是5倍高。因此，每个小鼠服用15mL油/天(60mL/4天/小鼠)。

在试验阶段最后，从所有小鼠中收集血样用于血清分离和分析。在每个试验组中，单个分析每只小鼠的血样。分析血清中以下的参数：

1.测定脂质，包括总胆固醇和甘油三酯的水平。

2.测定血清氧化状态。

3.测定对氧磷酶，以芳基酯酶活性来测量。

在除去心脏和主动脉之前收集MPM。用局部鼻容器中的乙醚使小鼠麻醉。从所有小鼠中快速取出心脏和整个主动脉来用于主动脉动脉粥样硬化损害的组织病理学分析。

实验方案(No.IL-066-10-2001)得到Animal Care and UseCommittee of the Technion Israel Institute of Technology(Haifa，Israel)的批准。

图3显示了食用MultOil-c证明了血清中甘油三酯水平显著的和有意义的降低(36％)，和安慰剂相比较(p＜0.001)。

同样地，图4显示了尤其是MultOil-c，还有MultOil-f证明了降低血清中总胆固醇水平的趋势(p＜0.1)。

图5显示了MultOil-c治疗导致对AAPH诱导氧化的血清敏感度急剧的和高度显著的降低63％(p＜0.001)(和安慰剂比较)。MultOil-f证明了相似的趋势，和安慰剂相比较，降低了脂质过氧化物16％。

图6显示了令人感兴趣的结果。食用低芥酸菜子油诱导了血清PON1活性水平的显著降低(p＜0.1)，其对动脉粥样硬化是不利的[Mackness，B.等[2003]Circulation 107：2775-9]，食用MultOil-c或MultOil-f保持了PON1活性，和未处理(安慰剂组)小鼠的水平相比较。因此，食用MultOil-c和MultOil-f对于维持有效水平的PON1活性是有益的。

图7证明了食用MultOil-c导致ox-LDL结合(16％)和降解(14％)的降低(p＜0.05)，导致MPM维持ox-LDL能力的提高，其和降低的氧化状态相关，更大程度的，MultOil-f展示了相似的效果，也导致ox-LDL结合(34％)和降解(30％)(p＜0.001)。相反，食用低芥酸菜子油导致ox-LDL结合和降解的略微提高(p值＜0.05)(各自4％和11％，和安慰剂相比较)。

图8显示了食用MultOil-c或MultOil-f显著降低了E⁰小鼠巨噬细胞的氧化状态(p＜0.0001)。MultOil-f和安慰剂相比较降低了巨噬细胞氧化状态34％，而MultOil-c和安慰剂相比较降低29％。因此，MultOil-f和MultOil-c在降低巨噬细胞的氧化状态中都是有效的。和这些结果相一致的，图9中，本发明者显示，相同地，食用MultOil-f或MultOil-c还显著降低了巨噬细胞中PMA-诱导的过氧化物阴离子释放(p＜0.05)。

Claims (35)

1.含有食用组合物的膳食营养物或食品补充剂，该膳食营养物或食品补充剂用于降低胆固醇和甘油三酯两者的血液水平和/或用于降低血清、血清LDL和巨噬细胞的氧化水平，抑制泡沫细胞的形成和/或防止由脂质诱导的氧化应力而产生的有害影响，该食用组合物包括溶解于或分散于食用油和/或食用脂肪中的二酰甘油(DAG)，主要是1，3-二酰甘油，和植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯(PSE)的组合。

2.根据权利要求1的膳食营养物或食品补充剂，其中所述油是天然油和/或食用油，优选橄榄油、大豆油、向日葵油、红花油、低芥酸菜子油、棕榈油、鳄梨油、芝麻油和鱼油，更优选橄榄油、低芥酸菜子油或鱼油。

3.根据权利要求1的膳食营养物或食品补充剂，其中脂肪是任何天然脂肪，优选乳脂、无水乳脂、可可脂和猪脂。

4.根据之前任一项权利要求的膳食营养物或食品补充剂，其中DAG的脂肪酸残基对应于其来源油的脂肪酸残基，如油酸残基、棕榈酸残基、棕榈油酸残基、硬脂酸残基、亚油酸残基、亚麻酸残基和花生酸残基。

5.根据之前任一项权利要求的膳食营养物或食品补充剂，其中植物甾醇酯是豆甾醇、谷甾醇、β-谷甾醇、菜籽甾醇、菜油甾醇、5-燕麦甾醇的脂肪酸酯及其异构体和衍生物。

6.根据之前任一项权利要求的膳食营养物或食品补充剂，其中所述组合物还包括营养组合物的常规配料。

7.根据之前任一项权利要求的膳食营养物或食品补充剂，其中所述组合物中二酰甘油与植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯之间的摩尔比为1∶5至5∶1。

8.根据之前任一项权利要求的膳食营养物或食品补充剂，其中所述组合物中二酰甘油的含量为至少1wt％。

9.根据之前任一项权利要求的膳食营养物或食品补充剂，其中所述组合物中植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯的含量为至少1wt％。

10.根据之前任一项权利要求的膳食营养物或食品补充剂，其中所述组合物中二酰甘油的含量为1至99wt％，优选7至48wt％，且所述组合物中植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯的含量为1至99wt％，优选5至50wt％。

11.根据之前任一项权利要求的膳食营养物或食品补充剂，其中所述组合物包括溶解于或分散于橄榄油、低芥酸菜子油和鱼油中任一种的15wt％DAG，主要是1，3-DAG，和25wt％总PSE。

12.用于治疗和/或预防心血管病症及其相关疾病的根据之前任一项权利要求的膳食营养物或食品补充剂，如冠心病、动脉粥样硬化和由其它疾病如糖尿病尤其是II型糖尿病诱发的或呈现的心血管病症。

13.用于降低胆固醇和甘油三酯两者的血液水平和/或用于降低血清、血清LDL和巨噬细胞的氧化水平，抑制泡沫细胞的形成和/或防止由脂质诱导的氧化应力而产生的有害影响的口服药物组合物，包括溶解于或分散于食用油和/或食用脂肪中的二酰甘油，主要是1，3-二酰甘油，和植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯的组合，且任选还包括药物学上可接受的添加剂、稀释剂、赋形剂和/或载体。

14.根据权利要求13的药物组合物，其用于治疗和/或预防心血管病症及其相关的疾病，如冠心病、动脉粥样硬化和由其它疾病如糖尿病尤其是II型糖尿病诱发的或呈现的心血管病症。

15.根据权利要求13和14任一项的药物组合物，其中所述油是天然油和/或食用油，优选橄榄油、大豆油、向日葵油、红花油、低芥酸菜子油、棕榈油、芝麻油、鳄梨油和鱼油，优选橄榄油、低芥酸菜子油或鱼油。

16.根据权利要求13的药物组合物，其中脂肪是任何天然脂肪，优选乳脂、可可脂、无水乳脂和猪脂。

17.根据权利要求13至16任一项的药物组合物，其中DAG的脂肪酸残基对应于其来源油的脂肪酸残基，如油酸残基、棕榈酸残基、棕榈油酸残基、硬脂酸残基、亚油酸残基、亚麻酸残基和花生酸残基。

18.根据权利要求13至17任一项的药物组合物，其中植物甾醇酯是豆甾醇、谷甾醇、β-谷甾醇、菜籽甾醇、菜油甾醇、5-燕麦甾醇的脂肪酸酯及其异构体和衍生物。

19.根据权利要求13至18任一项的药物组合物，其中所述组合中二酰甘油与植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯之间的摩尔比为1∶5至5∶1。

20.根据权利要求13至19任一项的药物组合物，其中所述组合中二酰甘油的量为至少1wt％。

21.根据权利要求13至20任一的药物组合物，其中所述组合中植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯的量为至少1wt％。

22.根据权利要求13至21任一的药物组合物，其中所述组合中二酰甘油的量为1至99wt％，优选7至48wt％，且所述组合中植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯的量为1至99wt％，优选5至50wt％。

23.用于降低胆固醇和甘油三酯的血液水平和/或降低LDL氧化的药物组合物，所述组合物基本上由溶解于或分散于橄榄油中的15wt％DAG，主要是1，3-DAG，和25wt％总PSE组成，其中所述组合物的特征在于具有降低胆固醇和甘油三酯两者的血液水平和/或降低血清、血清LDL和巨噬细胞的氧化水平，抑制泡沫细胞的形成和/或防止由脂质诱导的氧化应力而产生的有害影响的作用。

24.根据权利要求13至23任一项的药物组合物，用于治疗和/或预防心血管病症及其相关的疾病，如冠心病、动脉粥样硬化和由其它疾病如糖尿病尤其是II型糖尿病诱发的或呈现的心血管病症。

25.根据权利要求13至24任一项的药物组合物，用于降低和/或防止以下的任一种情况：胆固醇和甘油三酯的血液水平，血清氧化应力，巨噬细胞摄取氧化LDL，巨噬细胞氧化状态，泡沫细胞形成和由脂质诱导的氧化应力而产生的有害影响。

26.溶解于或分散于食用油和/或食用脂肪中的DAG，主要是1，3-DAG，和PSE，且任选还包括药物学上可接受的添加剂、稀释剂、赋形剂和/或载体的组合在制备口服药物组合物中的用途，该口服药物组合物用于降低胆固醇和甘油三酯两者的血液水平和/或用于降低血清、血清LDL和巨噬细胞的氧化水平，抑制泡沫细胞的形成和/或防止由脂质诱导的氧化应力而产生的有害影响。

27.根据权利要求26的用途，其中所述组合中二酰甘油与植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯之间的摩尔比为1∶5至5∶1。

28.根据权利要求26和27任一项的用途，其中所述组合中二酰甘油的量为至少1wt％。

29.根据权利要求26至28任一项的用途，其中所述组合中植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯的量为至少1wt％。

30.根据权利要求26至29任一项的用途，其中所述组合中二酰甘油的量为1至99wt％，优选7至48wt％，且所述组合中植物甾醇酯和/或植物甾烷醇酯的量为1至99wt％，优选5至50wt％。

31.溶解于或分散于橄榄油中的15wt％DAG，主要是1，3-DAG，和25wt％PSE，且任选还包括药物学上可接受的添加剂、稀释剂、赋形剂和/或载体的组合在制备口服药物组合物中的用途，该口服药物组合物用于降低胆固醇和甘油三酯两者的血液水平和/或用于降低血清、血清LDL和巨噬细胞的氧化水平，抑制泡沫细胞的形成和/或防止由脂质诱导的氧化应力而产生的有害影响。

32.权利要求1至12任一项的食品补充剂在制造任一功能食品、功能饮料和膳食补充剂中的用途。

33.治疗和/或预防与高胆固醇和甘油三酯血液水平、高血清氧化应力、高巨噬细胞摄取ox-LDL、高巨噬细胞氧化状态、高泡沫细胞形成和高脂质诱导的氧化应力中任一相关病症的方法，所述方法包括将治疗有效量的权利要求1至12的膳食补充剂或权利要求13至25的组合物给药于需要的患者。

34.权利要求33的方法，用于治疗和/或预防心血管病症及其相关的疾病，如冠心病、动脉粥样硬化和由其它疾病如糖尿病尤其是II型糖尿病诱发的或呈现的心血管病症。

35.提高健康的方法，包括将治疗有效量的权利要求1至12的膳食营养物或权利要求13-25的药物组合物给药于需要的个体。

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