CN106620640A - 一种解酒护肝组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种解酒护肝组合物，其包括以下组分及其质量份数：玉米低聚肽粉20～50份，姜黄素微囊5～20份，枳椇子提取物3～15份，铁皮石斛提取物3～15份，葛根提取物0～10份，砂仁提取物0～10份，针叶樱桃粉0～10份，富硒酵母0～10份；同时还涉及该组合物的制备方法和应用。本发明所用的姜黄素采用微囊包埋技术，不仅提高了其稳定性，且提高了其生物利用度，将玉米低聚肽、姜黄素微囊与其他多种组分进行合理组配，使其发挥联合解酒、保肝的作用，克服了现有产品功能单一、功效差的问题，能有效促进机体对酒精的代谢能力，降低酒精对肝脏的毒性，有效提升了解酒、保肝效果，此外，制备工艺简单，能最大程度的提取原料的有效成分，提高有效成分的生物利用率和功效。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种解酒护肝组合物及其制备方法和应用。
背景技术
随着人们生活水平的提高，生活节奏的加快，饮酒人群也随之不断的增长，饮酒人群中，不乏高级商务人士、管理人员，不分年龄和性别。饮酒后会出现头昏脑胀、记忆力减退、肠胃不适等症状，并且长期大量饮酒会导致酒精性肝病。此外，现代人工作压力大、经常熬夜加班这些都容易引起肝血不足而出现无法控制的疲惫感，休息也无法缓解的亚健康状态。
肝脏功能复杂多样，在机体物质代谢中占据非常重要的地位，同时肝脏还有分泌、排泄、生物转化等方面的功能，肝细胞中含有丰富的酶和各种凝血因子，储存和释放造血因子，参与血液凝固和造血过程，肝脏更是机体的屏障器官，具有解毒及吞噬功能。我国是肝病大国，酒精逐渐成为继病毒性肝炎后的肝脏的第二大杀手，而且大多数人对酒精引起的轻度、中度脂肪肝和肝损伤并不十分重视。
近年来，欧美及日本畅销的解酒产品多添加兴奋剂、止痛剂、维生素和矿物质，只能暂时缓解宿醉症状，对酒精性肝损伤并无确切疗效。随着饮酒人数与肝损伤人数的不断暴增，迫切需要开发出能够真正减轻饮酒带来的伤害以及日常护肝的产品。
发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题是针对现有技术而提供一种能有效缓解酒精对人体造成的伤害、有效护肝的解酒护肝组合物。
本发明所要解决的第二个技术问题是针对现有技术而提供一种上述解酒护肝组合物的制备方法。
本发明所要解决的第三个技术问题是针对现有技术而提供一种上述解酒护肝组合物在保健食品和药物中的应用。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种解酒护肝组合物，其特征在于包括以下组分及其质量份数：玉米低聚肽粉20～50份，姜黄素微囊5～20份，枳椇子提取物3～15份，铁皮石斛提取物3～15份，葛根提取物0～10份，砂仁提取物0～10份，针叶樱桃粉0～10份以及富硒酵母0～10份。
上述技术方案中，玉米低聚肽可用于降血压、醒酒护肝、增强免疫力及增强运动能力，具有抗疲劳和保护肝脏的作用。姜黄的主要功能成分是姜黄素，姜黄素是植物界很稀少的具有二酮的色素，医学研究证实，姜黄素具有降血脂、抗肿瘤、抗炎、利胆，有助于增强肝组织的抗氧化作用，从而有效避免肝组织的急性损伤和慢性损伤。枳椇子含有大量的葡萄糖、苹果酸钙，有较强的利尿作用，能促进乙醇的分解和排出，显著降低乙醇在血液中的浓度，并能消除乙醇在体内产生的自由基，阻止过氧化酯质的形成，从而减轻乙醇对肝组织的损伤，避免酒精中毒导致的各种代谢异常而诱发的各种疾病。
铁皮石斛的药用价值很高，可以调理脾胃，清除胃火，增强肠胃功能，调节由阴虚造成的虚热，使神志安宁，并解除盗汗症状，解暑散热。铁皮石斛的药效成分包括多糖、石斛碱、游离氨基酸、维生素(维生素A、维生素C、维生素E)、叶绿素以及各种酶，能提高人体免疫力，增强记忆力，补五脏虚劳、抗衰老，抑制肿瘤、改善糖尿病症状及抗缺氧。
葛根味甘辛，性凉，入脾、胃、肺经，有解饥退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通络活络，解酒毒之功能。《千金方》、《药性论》等传统医学典籍记载葛根“解酒毒，治酒醉不醒”，葛根作为中国传统医学中最具代表性的解酒药物之一，具有解酒防醉、改善心脑血管循环、降低心肌耗氧量，降低血糖，防止高血压及动脉硬化，抗肝脏毒，抗炎，祛痰，解热，提高机体免疫力，抗菌，抗病毒等多种药理作用，可有效提高肝脏乙醇脱氢酶(alcoholdehydrogenase，ADH)与乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase，ALDH)的活性。
砂仁是芳香化湿、醒脾开胃的常用药物，味辛性温，入脾、胃、肾经，有行气化湿、温脾，止泻等功效。中医认为，砂仁主要作用于人体的胃、肾和脾，能够行气调中和胃醒脾。针叶樱桃富含维生素C，而维生素C是人体必需的维生素，维生素C具有很强的抗氧化作用。大剂量的维生素C对包括酒精在内的多种有毒物质造成的肝损伤，具有保护作用，可减轻炎症反应，增强抗氧化能力，减轻肝脏损伤。
富硒酵母通过生物富集工艺使无机硒富集在酵母细胞内，其以有机硒的形式存在，具有吸收利用率高、毒性低的特点。硒作为体内抗氧化保护系统的重要组分，能阻断体内有害物质自由基对肝脏细胞的损伤，从而保护增强肝细胞功能，调节机体免疫力。硒可通过直接或间接的抗氧化作用，减轻或阻止脂质过氧化反应，降低体内脂质过氧化物浓度。补硒可明显降低胆固醇和甘油三脂的水平，减少低密度脂蛋白的产生，增加高密度脂蛋白含量，还可增强肝细胞胆固醇清除能力，减少胆固醇及卵磷脂在血管内皮细胞内的沉积。
作为优选，所述玉米低聚肽粉中分子量小于1000D的成分占96％以上，其平均分子量为357。有效提高机体对玉米低聚肽粉的吸收利用率，达到无需消化或稍加消化即能吸收的效果。
作为优选，所述姜黄素微囊中姜黄素的包埋率达85％以上，粒径为1～300μm。所得的姜黄素微囊具有良好的溶解性，对光、热均具有良好的稳定性。
本发明解决的第二个技术问题所采用的技术方案为：上述解酒护肝组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将玉米蛋白粉经粉碎、酶解、过滤以及干燥得所需的玉米低聚肽粉，该玉米低聚肽粉中分子量小于1000D的成分占96％以上，其平均分子量为357；
(2)分别配置壁材溶液和姜黄素乳化液，将两者混合均匀，接着进行乳化均质处理，干燥后即得所需的姜黄素微囊，该姜黄素微囊中姜黄素的包埋率达85％以上，粒径为1～300μm；
(3)按上述质量份数将上述制得的玉米低聚肽粉与枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、砂仁提取物、针叶樱桃粉以及富硒酵母混合均匀得混合物，再将该混合物加入到上述制备的姜黄素微囊中，混合均匀，即得所需的解酒护肝组合物。
进一步，所述步骤(1)中玉米低聚肽粉的制备方法如下：
(a)粉碎：将玉米蛋白粉粉碎，过60目筛，用纯净水配制成玉米蛋白分散液；
(b)酶解：调节玉米蛋白分散液的pH至8～9，加热并使其温度保持在45±5℃之间，接着在该玉米蛋白分散液中分别加入中性蛋白酶和木瓜蛋白酶，搅拌均匀后酶解2h～3h，其中中性蛋白酶加入的量为底物含量的0.2％～0.5％，木瓜蛋白酶的加入量是底物含量0.1％～0.2％，酶解结束后进行高温灭酶；
(c)过滤：将灭酶后的酶解液进行离心去杂，收集清液，启动膜过滤设备，确保滤液的澄清透明，去除滤渣；
(d)浓缩：将过滤后的溶液依次进行浓缩、脱色、脱盐及去游离氨基酸，得玉米蛋白清液；
(e)干燥：将上述玉米蛋白清液干燥，得所需的玉米低聚肽粉。
进一步，所述步骤(2)中姜黄素微囊的制备方法如下：
(a)称取适量的阿拉伯胶和大豆分离蛋白，在65℃热水中搅拌使其溶解，得到壁材溶液，该壁材溶液中阿拉伯胶和大豆分离蛋白的总质量分数为0.5～1％，且阿拉伯胶和大豆分离蛋白的质量比为1:1～9；
(b)将姜黄素加入含蔗糖酯和磷脂的10％乙醇溶液中，其中蔗糖酯与磷脂比例为1:1～5，配置成3.5％～4.0％的姜黄素乳化液；
(c)将步骤(b)制得的姜黄素乳化液倒入步骤(a)制得的壁材溶液中，其中姜黄素乳化液与壁材溶液的体积比为0.8～1:1，于50℃下进行乳化均质处理，调节pH至4.2～6.5，反应时间5～20min，制得初产品；
(d)将上述制得的初产品进行喷雾干燥，制得所需的姜黄素微囊成品，其中喷雾干燥的进口温度为120～190℃，出口温度为85～95℃。
进一步，所述枳椇子提取物、葛根提取物和砂仁提取物均可通过以下步骤制备：
(a)取粉碎过的枳椇子或葛根或砂仁，加入物料体积8～10倍的水，于95±4℃动态逆流提取，得到提取液；
(b)离心分离：将提取液进行离心分离，获得澄清液；
(c)减压浓缩：将澄清液进行减压浓缩，获得浸膏；
(d)喷雾干燥：将浸膏加热过筛过滤后喷雾干燥后得到枳椇子提取物或葛根提取物或砂仁提取物。
进一步，所述铁皮石斛提取物可通过以下步骤制备：
(a)取粉碎过的铁皮石斛，加入物料体积15～10倍的水，于90±4℃动态逆流提取，得到提取液；
(b)离心分离：将提取液进行离心分离，获得澄清液；
(c)减压浓缩：将澄清液进行减压浓缩，获得浸膏；
(d)喷雾干燥：将浸膏加热过筛过滤后喷雾干燥后得到铁皮石斛提取物。
本发明解决第三个技术问题所采用的技术方案为：上述的解酒护肝组合物在保健食品或药物中的应用。本发明中的解酒护肝组合物可通过加入食品或药学上可接受的辅料，通过制剂技术制备成保健食品或药物，并且可以为片剂、硬胶囊、粉剂、软胶囊等多种剂型。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明的解酒护肝组合物中玉米低聚肽能促进体内酒精代谢，具有解酒、保护肝脏的作用，同时其具有较强的抗氧化性；姜黄素能明显增强肝组织的抗氧化能力，明显减轻急、慢性酒精性肝损伤，有助于减轻肝组织纤维化，并且以微胶囊形式将姜黄素加入到组合物中，使姜黄素的稳定性和生物利用度均得到有效提高。
本发明将上述玉米低聚肽、姜黄素微囊与枳椇子提取物、铁皮石斛提取物等进行合理组配，使玉米低聚肽、姜黄素微囊、枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物以及砂仁提取物发挥联合解酒、保肝的作用，从而克服了目前市场上的相关产品功能单一、功效差的问题，能有效促进机体对酒精的代谢能力，降低酒精对肝脏的毒性，有效提升解酒、保肝的效果，同时针叶樱桃粉利用其所含的维生素C、异麦芽酮糖等成分进一步提升组合物的解酒保肝作用，而富硒酵母通过其所含的有机硒有效阻断机体内有害物质自由基对肝脏细胞的损伤，从而保护、增强肝细胞的功能。
本发明中解酒护肝组合物的制备工艺简单，其中采用微胶囊包埋技术对姜黄素进行微胶囊化处理，能有效提升姜黄素的稳定性和溶解性，提高其生物利用率和功效，同时降低制备过程中姜黄素的污染；利用动态逆流提取技术对中药成分进行提取，可有效降低提取过程中的外扩散阻力，减少溶剂的消耗，提高提取效率，最大程度地提取原料中的有效成分。
附图说明
图1为本发明实施例8中空白对照组处理后的斑马鱼典型图；
图2为本发明实施例8中模型对照组处理后的斑马鱼典型图；
图3为本发明实施例8中低剂量组处理后的斑马鱼典型图；
图4为本发明实施例8中中剂量组处理后的斑马鱼典型图；
图5为本发明实施例8中高剂量组处理后的斑马鱼典型图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1：玉米低聚肽的制备
玉米低聚肽的制备方法为：将玉米蛋白粉经粉碎、酶解、过滤以及干燥得所需的玉米低聚肽粉。具体过程如下：
(1)粉碎：将玉米蛋白粉粉碎，过60目筛，用纯净水配制成玉米蛋白分散液。
(2)酶解：调节玉米蛋白分散液的pH至8～9，加热至45℃并保持其温度在45±5℃之间，接着在玉米蛋白分散液体中分别加入中性蛋白酶和木瓜蛋白酶，搅拌均匀后酶解2h～3h，其中中性蛋白酶的加入量为底物含量的0.2％～0.5％，木瓜蛋白酶的加入量是底物含量的0.1％～0.2％，酶解结束后用高温瞬时灭酶法进行灭活。
(3)过滤：灭酶后的酶解液体经过离心机(4000rpm，15min)离心分离，去除杂质，收集清液，启动膜过滤设备，确保滤液的澄清透明，去除滤渣。
(4)浓缩：启动蒸发器对物料进行浓缩，浓缩到一定程度，按照浓缩液的体积比例添加1.5～2.0％的活性炭，对浓缩液进行脱色处理。将脱色后的溶液过滤，将玉米蛋白过滤液经过超滤和纳滤进行脱盐和去游离氨基酸之后得到玉米蛋白清液。
(5)将玉米蛋白清液，启动喷雾干燥系统上料，最终得到符合企标的玉米低聚肽粉。
表1为本实施例制备的玉米低聚肽的主要组分的相对分子质量分布与含量，由表1可以看出，本实施例所制备的玉米低聚肽中分子量在1000D以下的占到96％以上，平均分子量357，达到了不需要消化或稍加消化即可吸收的程度，具有很高的吸收效率。表2为本实施例所制备的玉米低聚肽中氨基酸组成，由表2可见，本实施例所制备的玉米低聚肽中谷氨酸、亮氨酸以及丙氨酸的含量较多。
表1玉米低聚肽的主要组分的相对分子质量分布与含量
表2玉米低聚肽的氨基酸组成
本实施例所制备的玉米低聚肽的生理作为如下：
(1)促进体内酒精代谢，具有解酒效果
玉米低聚肽具有明显的促进体内酒精代谢的作用。人体试验证实，玉米低降肽可降低饮酒者呼气中的乙醇的水平，并呈现剂量效应关系，并且较高剂量的玉米低聚肽还能够明显降低饮酒者全血乙醇含量。有研究指出，玉米低聚肽中含有大量的丙氨酸和亮氨酸，这些氨基酸是合成辅酶I所必需的物质，并且玉米低聚肽中的这些氨基酸主要以低聚肽的形式存在，更易被吸收和利用，因此能快速增加肝组织中辅酶I的含量，进而增加乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的活性，促进体内酒精代谢，减轻醉酒症状和由此带来的其他不适及危害。
(2)保护肝脏
玉米低聚肽可以对抗多种有毒物质对肝脏的损伤，维持肝功能和生化指标。科学研究发现，玉米肽对由四氯化碳和硫代乙酰胺引起的小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用，降低血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性，其作用机制主要是通过提高机体的抗氧化能力和肝糖原的含量。同时对乙硫氨酸引起的小鼠脂肪肝中三酸甘油脂含量也具有明显的降低作用，此外，玉米低聚肽的肝脏保护作用还具有明显的剂量效应关系。
人体试验发现，玉米低聚肽对于改善慢性酒精性肝损伤具有明显效果，玉米低聚肽可明显降低慢性酒精性肝损伤的人群血清总胆红素和碱性磷酸酶的水平，玉米低聚肽组γ-谷氨酰转肽酶也有所下降。玉米低聚肽干预后可降低受试者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平，降低血清中肝纤维化指标III型前胶原氨基端肽的水平，对于预防肝硬化也表现出一定的效果。
(2)抗氧化性
体外试验研究证实，玉米低聚肽具有明显的清除超氧阴离子自由基和羟基自由基的作用，并能显著地抑制细胞和组织脂质过氧化反应的发生，主要表现为对H2O2诱导的红细胞氧化溶血实验的抑制作用以及对cys-Fe2+激发的肝脏、心脏、脑的脂质过氧化反应(MDA生成)的抑制作用。人体试验研究也证实，利用玉米低聚肽进行营养干预后，人体血清超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)显著上升，氧化指标丙二醛(MDA)明显下降。
实施例2：姜黄素微囊的制备
本发明中对姜黄素进行微胶囊化处理，而微胶囊化处理中壁材的选择和芯材的选择是关键，具体如下：
2.1壁材的选择
喷雾干燥O/W乳液体系实现对疏水芯材的包埋具有多种要求，传统壁材如阿拉伯胶和麦芽糖糊精等缺乏乳化性和成膜性而不能单独作为壁材，而乳蛋白,包括乳清蛋白、酪蛋白本身及与其不同糖类的混合体，虽然表现出较好的包埋特性，但其高成本限制了市场消费。综上，本发明选择阿拉伯胶和大豆分离蛋白作为壁材。
2.1芯材的选择
磷脂复合物是一种新颖的微胶囊技术，将生物活性物质包埋后，可起到保护物质活性、显著提高其稳定性和生物利用度等作用。由磷脂形成的脂质膜，能很好地阻止光、热、氧和金属离子等对包埋物的破坏，对包埋物的稳定性具有很好的促进作用。进一步，脂质体膜与细胞膜结构相似，与细胞膜有较强的亲水性，可增加透过细胞膜的能力。此外，其还具有缓释的作用，延长包埋物的作用时间，提高生物利用度。
2.3姜黄素微囊包埋工艺具体如下：
(1)分别称取适量的阿拉伯胶和大豆分离蛋白，在65℃热水中搅拌使其溶解，得到壁材溶液，该壁材溶液中阿拉伯胶和大豆分离蛋白的总质量分数为0.5～1％(具体可为0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％以及1.0％等)，阿拉伯胶和大豆分离蛋白的质量比为1:1～9(具体可为1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8以及1:9等)；
(2)将姜黄素加入蔗糖酯和磷脂的10％乙醇溶液中，其中蔗糖酯与磷脂比例为1:1～5(具体可为1:1、1:2、1:3、1:4以及1:5等)，配置成3.5％～4.0％(具体可为3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％以及4.0％等)的姜黄素乳化液。
(3)将步骤(2)所得的姜黄素乳化液倒入步骤(1)所得的壁材溶液中，其中姜黄素乳化液与壁材溶液的体积比为0.8～1:1(具体可为0.8:1、0.9:1以及1:1等)，于50℃下乳化均质处理，用10％的酸溶液调节pH至4.2～6.5，反应时间5～20min，制得初产品。
(4)将上述制得的初产品进行喷雾干燥，制得所需的姜黄素微囊成品，其中喷雾干燥的进口温度为120～190℃，出口温度为85～95℃。
本实施例制得的姜黄素微囊中姜黄素的包埋率达85％以上，粒径为1～300μm(具体可为1μm、5μm、20μm、50μm、100μm、120μm、150μm、180μm、200μm、250μm、270μm、300μm等)。
2.4姜黄素微囊生物利用率实验
2.4.1实验设计
将本实施例制备的姜黄素微囊与纯度为95％的姜黄素提取物以及其他含姜黄的商业化产品A(该产品A为市售常规的含姜黄的产品)在相对吸收率方面进行比较。
2.4.2实验步骤：
选择雄性Wister大鼠(购于宁波大学医学院动物实验中心，重量160～200g,8周龄)为实验对象分四组，禁食12h后，分别喂食含等量姜黄素的本实施例制备的姜黄素微囊、纯姜黄素及产品A，第四组为空白对照(喂食等量的生理盐水)。在喂食后第15、30、60、90、120和150min后分别抽血一次，测量血浆中的游离姜黄素及其代谢产物(姜黄素葡萄苷酸和姜黄素硫酸酯)的AUC(μg﹒min/ml)总含量，测量结果如表3所述。
由表3可见，本实施例制备的姜黄素微囊的吸收率比95％姜黄素或商业化产品A的姜黄素的吸收率高出约48倍。表明本实施例制备的姜黄素微囊的生物利用率显著提高，更有利于发挥其解酒护肝的功能。
表3大鼠血浆中不同时间的姜黄素及代谢产物总值
实施例3：枳椇子提取物的制备
本发明药材提取采用动态逆流提取技术，动态逆流提取(DynamicCountercurrent Extraction，DCE)是指药材与溶剂在浸出容器中沿相反方向运动，连续而充分地进行接触提取的一种方法。逆流提取能够充分利用固液两相的浓度梯度，逐级将有效成分扩散至起始浓度较低的套提溶液中，使出料的提取液达到较高的平衡浓度，既可保证被提取物的提取率，又可节省能源，缩短提取时间，并大大减少后续浓缩工艺的工作量和能耗，可全面解决目前广泛使用的单罐间歇浸出存在的问题。
(1)取粉碎过的枳椇子，浸润30分钟，药材从投料斗投入，用物料体积8～10倍的水于95±4℃动态逆流提取，正向进料、反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动，控制出料速度，提取时间为30min，得到提取液；
(2)离心分离：将提取液进行离心分离，获得澄清液；
(3)减压浓缩：将澄清液进行减压浓缩，获得浸膏；
(4)喷雾干燥：将浸膏加热过筛过滤后喷雾干燥后得到枳椇子提取物。
本发明中的葛根提取物和砂仁提取物可以采用与制备枳椇子提取物相同的方法制备。
实施例4：铁皮石斛提取物的制备
(1)取粉碎过的铁皮石斛，浸润30分钟，药材从投料斗投入，用物料体积10～15倍的水于90±4℃动态逆流提取，正向进料、反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动，控制出料速度，提取时间为45min，得到提取液；
(2)离心分离：将提取液进行离心分离，获得澄清液；
(3)减压浓缩：将澄清液进行减压浓缩，获得浸膏；
(4)喷雾干燥：将浸膏加热过筛过滤后喷雾干燥后得到铁皮石斛提取物。
实施例5：解酒护肝组合物的制备
实施例5.1
分别取玉米低聚肽粉(由实施例1制备，下同)36份，姜黄素微囊(由实施例2制备，下同)12份，枳椇子提取物(由实施例3制备，下同)10份以及铁皮石斛提取物(由实施例4制备，下同)6份。首先将玉米低聚肽粉、枳椇子提取物以及铁皮石斛提取物混合均匀，然后将该混合物加入到姜黄素微囊中，混合均匀得解酒护肝组合物。
实施例5.2
分别取玉米低聚肽粉30份，姜黄素微囊10份，枳椇子提取物5份，铁皮石斛提取物5份，葛根提取物(采用与实施例3相同的方法制备，下同)5份，砂仁提取物(采用与实施例4相同的方法制备，下同)5份，针叶樱桃粉2份，富硒酵母2份。首先将玉米低聚肽粉、枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、砂仁提取物、针叶樱桃粉及富硒酵母混合均匀，然后将该混合物加入到姜黄素微囊中，混合均匀得解酒护肝组合物。
实施例5.3
分别取玉米低聚肽粉40份，姜黄素微囊8份，枳椇子提取物5份，铁皮石斛提取物5份，葛根提取物4份，砂仁提取物4份，针叶樱桃粉4份以及富硒酵母2份。首先将玉米低聚肽粉、枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、砂仁提取物、针叶樱桃粉及富硒酵母混合均匀，然后将该混合物加入到姜黄素微囊中，混合均匀得解酒护肝组合物。
实施例5.4
分别取玉米低聚肽粉25份，姜黄素微囊5份，枳椇子提取物5份，铁皮石斛提取物5份，葛根提取物2份，砂仁提取物2份以及针叶樱桃粉10份。首先将玉米低聚肽粉、枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、砂仁提取物及针叶樱桃粉混合均匀，然后将该混合物加入到姜黄素微囊中，混合均匀得解酒护肝组合物。
实施例5.5
分别取玉米低聚肽粉25份，姜黄素微囊5份，枳椇子提取物3份，铁皮石斛提取物3份，葛根提取物2份以及砂仁提取物2份。首先将玉米低聚肽粉、枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物以及砂仁提取物混合均匀，然后将该混合物加入到姜黄素微囊中，混合均匀得解酒护肝组合物。
实施例5.6
分别取玉米低聚肽粉20份，姜黄素微囊20份，枳椇子提取物15份，铁皮石斛提取物15份，葛根提取物10份，砂仁提取物10份，针叶樱桃粉10份以及富硒酵母10份。首先将玉米低聚肽粉、枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、砂仁提取物、针叶樱桃粉及富硒酵母混合均匀，然后将该混合物加入到姜黄素微囊中，混合均匀得解酒护肝组合物。
实施例5.7
分别取玉米低聚肽粉50份，姜黄素微囊15份，枳椇子提取物8份，铁皮石斛提取物10份，葛根提取物8份，砂仁提取物8份，针叶樱桃粉6份以及富硒酵母6份。首先将玉米低聚肽粉、枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、砂仁提取物、针叶樱桃粉及富硒酵母混合均匀，然后将该混合物加入到姜黄素微囊中，混合均匀得解酒护肝组合物。
实施例5.8
分别取玉米低聚肽粉30份，姜黄素微囊10份，枳椇子提取物10份，铁皮石斛提取物10份，砂仁提取物5份，针叶樱桃粉5份以及富硒酵母5份。首先将玉米低聚肽粉、枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、砂仁提取物、针叶樱桃粉及富硒酵母混合均匀，然后将该混合物加入到姜黄素微囊中，混合均匀得解酒护肝组合物。
实施例5.9
分别取玉米低聚肽粉40份，姜黄素微囊18份，枳椇子提取物12份，铁皮石斛提取物8份，葛根提取物5份，针叶樱桃粉7份以及富硒酵母10份。首先将玉米低聚肽粉、枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、针叶樱桃粉及富硒酵母混合均匀，然后将该混合物加入到姜黄素微囊中，混合均匀得解酒护肝组合物。
实施例6：应用该解酒护肝组合物的制剂的制备
实施例6.1：解酒护肝组合物片剂的制备
6.1.1组方如下：
玉米低聚肽粉36份，姜黄素微囊12份，枳椇子提取物10份，铁皮石斛提取物6份，微晶纤维素26份，糊精6份，硬脂酸镁1份，薄膜包衣预混剂3份。
6.1.2制备方法如下：
(1)粉碎、过筛：将玉米低聚肽粉、枳椇子提取物以及铁皮石斛提取物分别粉碎，过100目筛备用。
(2)制粒：经步骤(1)处理后玉米低聚肽粉、枳椇子提取物以及铁皮石斛提取物和微晶纤维素依次放入沸腾制粒机内，开启沸腾制粒机使物料预混合5分钟，边混合边加热，保持进风温度65～75℃，喷入糊精纯水溶液作为粘合剂，制成适宜颗粒，粘合剂停喷后，继续干燥，水分控制在3～4％。
(3)整粒、总混：颗粒过14目筛进行整粒，加到混合机中，将制粒好的颗粒依次加入上述配方量的姜黄素微囊和硬脂酸镁，混合10min。
(4)压片：将总混均匀的颗粒通过压片机进行压片，控制片子的重量为0.6g/片，素片硬度为80～100N。
(5)包衣：准确称量薄膜包衣预混剂和纯化水，薄膜包衣预混剂比例为20％，加入搅拌机中，搅拌均匀，过100目筛，设置包衣上限和下限温度，保证排风温度在35-45℃之间，包衣完成，最终片剂完成。
实施例6.2：解酒护肝组合物片剂的制备
6.2.1组方如下：
玉米低聚肽粉30份，姜黄素微囊10份，枳椇子提取物5份，铁皮石斛提取物5份，葛根提取物5份，砂仁提取物5份，针叶樱桃粉2份，富硒酵母2份，微晶纤维素26份，糊精6份，硬脂酸镁1份，薄膜包衣预混剂3份。
6.2.2制备方法如下：
(1)粉碎、过筛：将玉米低聚肽粉、枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、砂仁提取物、针叶樱桃粉、富硒酵母以及微晶纤维素分别粉碎，过100目筛备用。
(2)制粒：将经上述步骤(1)处理后的玉米低聚肽粉、枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、砂仁提取物、针叶樱桃粉及富硒酵母和微晶纤维素依次放入沸腾制粒机内，开始沸腾制粒机使物料预混合5分钟，边混合边加热，保持进风温度65～75℃，喷入糊精纯水溶液做粘合剂，制成适宜颗粒，粘合剂停喷后，继续干燥，水分控制在3～4％。
(3)整粒、总混：颗粒过14目筛整粒，加到混合机中，将制粒好的颗粒加入配方比例的姜黄素微囊、硬脂酸镁中，混合10min。
(4)压片：总混均匀的颗粒通过压片机进行压片，控制片子的重量为0.6g/片、素片硬度为80～100N。
(5)包衣：准确称量薄膜包衣预混剂和纯化水，薄膜包衣预混剂比例20％，加入搅拌机中，搅拌均匀，过100目筛，设置包衣上限和下限温度，保证排风温度在35～45℃之间，包衣完成，最终片剂完成。
实施例6.3：解酒护肝组合物胶囊的制备
6.3.1组方如下：
玉米低聚肽粉40份，姜黄素微囊8份，枳椇子提取物5份，铁皮石斛提取物5份，葛根提取物4份，砂仁提取物4份，针叶樱桃粉4份，富硒酵母2份，微晶纤维素21份，糊精6份，硬脂酸镁1份。
6.3.2制备方法如下：
(1)过筛：将枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、砂仁提取物、针叶樱桃粉、富硒酵母以及微晶纤维素分别过100目筛备用。
(2)制粒：将玉米低聚肽粉、枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、砂仁提取物、针叶樱桃粉、富硒酵母、微晶纤维素依次放入沸腾制粒机内，开始沸腾制粒机使物料预混合5分钟，边混合边加热，保持进风温度65～75℃，喷入糊精纯水溶液做粘合剂，制成适宜颗粒，粘合剂停喷后，继续干燥，水分控制在3～4％。
(3)整粒、总混：颗粒过14目筛整粒，加到混合机中，将制粒好的颗粒加入配方比例的姜黄素微囊、硬脂酸镁中，混合10min。
(4)填充：颗粒使用胶囊充填机进行胶囊填充，控制胶囊装量0.5g/粒，制得硬胶囊。
实施例6.4：解酒护肝组合物粉剂的制备
6.4.1组方如下：
玉米低聚肽粉25份，姜黄素微囊5份，枳椇子提取物5份，铁皮石斛提取物5份，葛根提取物2份，砂仁提取物2份，针叶樱桃粉10份，赤藓糖醇45份，微粉硅胶1份。6.4.2制备方法如下：
(1)过筛：将枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、砂仁提取物、针叶樱桃粉、赤藓糖醇分别过100目筛备用。
(2)总混：将上述过筛好物料加到混合机中，并加入配方比例的玉米低聚肽粉、姜黄素微囊、微粉硅胶，混合15min，制得所需要的解酒护肝组合物粉剂。
实施例6.5：解酒护肝组合物软胶囊剂的制备
6.5.1组方如下：
玉米低聚肽粉25份，姜黄素微囊5份，枳椇子提取物3份，铁皮石斛提取物3份，葛根提取物2份，砂仁提取物2份，富硒酵母2份，蜂蜡3份，大豆油157份。
6.5.2制备方法如下：
(1)化胶：取明胶40份、甘油15份、纯化水35份，加热溶化，过滤，得胶皮溶液，保温备用。
(2)过筛：将玉米低聚肽粉、姜黄素微囊、枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、砂仁提取物、富硒酵母分别过100目筛备用。
(3)匀质：将上述过筛物料、蜂蜡投入大豆油中，胶体磨匀质，得均匀稳定乳化物。
(4)压丸：上述乳化物及胶皮溶液用软胶囊压丸机压制成软胶囊，控制软胶囊装量0.4g/粒。
实施例7
7.1实验材料：
7.1.1动物：ICR小鼠，清洁级，18～22g，购于宁波大学医学院动物实验中心。
7.1.2药物与试剂：四氯化碳，丙二醛(MDA)测定试剂盒(上海江莱生物科技有限公司)、谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒(上海一基实业有限公司)。
7.1.3仪器：电子天平、电子恒温水浴锅、冷冻离心机。
7.2实验方法
空白组：给予蒸馏水，按照0.1ml/10g体重给小白鼠灌胃。
模型租：给予蒸馏水，按照0.1ml/10g体重给小白鼠灌胃。
实验组：任取实施例5中制备的一种解酒护肝组合物，按照每千克小白鼠体重给予0.2g、0.4g、0.6g的标准，分别用蒸馏水配置成溶液，同样按0.1ml/10g体重灌胃，即分别为实验组1、实验组2、实验组3。任取实施例5中制备的另一种制备的解酒护肝组合物，按照每千克小白鼠体重给予0.2g、0.4g、0.6g的标准，分别用蒸馏水配置成溶液，同样0.1ml/10g体重灌胃，即分别为实验组4、实验组5、实验组6。
7.3模型制作与给药
80只小鼠随机分配为8组，每组10只。每日经口灌胃给予各实验组上述剂量的组合物，而空白组、模型组给予相应量的蒸馏水。30天后，各组动物隔夜禁食16个小时，模型组及实验组一次性灌胃0.5％四氯化碳10ml/kg体重(折合CCl4的剂量为80mg/kg体重)，空白组给予纯净水，实验组1、2、3、4、5、6相继给予组合物至实验结束。给予四氯化碳24小时后处死动物，取血分离血清，测定其AST、ALT指标，并取肝脏进行病理组织学检测，试验结果如表4所述。
造模前，各组实验小鼠可正常饮食，体重逐渐增长。四氯化碳造模后，除空白对照小鼠外，模型对照组、实验组的小鼠明显活动减弱，出现步态不稳现象。
表4血清中AST、ALT含量、肝脏病理检测的结果
与空白组比较：+P<0.05++P<0.01，与模型组比较：*P<0.05**P<0.01
由表4可见，动物一次性给予0.5％四氯化碳后，与空白组比较，模型组小鼠血清中ALT和AST水平明显升高(P<0.01)，与模型组比较，本发明的组合物能显著降低ALT、AST。实验证明本发明中的组合物对化学性肝损伤有良好的缓解作用，其他例组与模型组相比，没有显著差异。
动物一次灌胃0.5％四氯化碳后，肝脏病理检测结果发现，模型组小鼠表现为肝细胞脂变、水样变性或气球样变，少数肝细胞坏死。本发明组合物给药的实验组小鼠的肝细胞退行性病变减轻，与模型组比较，本发明中的组合物有改善小鼠化学性肝损伤的作用。
四氯化碳是动物实验复制肝损伤动物模型的化学物质，许多研究均认为四氯化碳复制的肝损伤可模拟化学性肝损伤，其表现出来的症状与化学性肝炎、肝功能检测指标、肝脏病理改变具有相似性。本次实验中，小鼠灌胃0.5％四氯化碳24小时后，模型组小鼠的主要表现为肝细胞退行性病变及少数肝细胞坏死，主要的病变类型是肝细胞水样变性、脂肪变性、肝细胞气球样变、胞浆凝集和细胞坏死等。模型组小鼠血清ALT、AST水平均升高，表明本次肝损伤小鼠模型的诱导成功。本发明组合物给药实验组中，小鼠血清ALT、AST水平显著降低，实验组小鼠肝脏损伤程度远低于模型组，表明本发明的组合物对化学性肝损伤有显著的抑制作用，对肝脏有保护作用。
实施例8
8.1实验材料
8.1.1动物：4～5月龄的成年斑马鱼(购于杭州环特生物科技股份有限公司)，受精后5d的黑色素等位基因突变型半透明Albino品系斑马鱼。
8.1.2药物与试剂：乙醇。
8.1.3仪器：解剖显微镜(SZX7，OLYMPUS，Japan)；精密电子天平(CP214，OHAUS，America)。
8.2实验分组
任取一种实施例5中制备的组合物，用纯水配制成50mg/mL母液，用饲养基础用水按照实验分组进行稀释。
斑马鱼成鱼均分为5组，分别为正常对照组、模型对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，各组对应的饲养用水分别为基础用水、基础用水加入1％乙醇、167μg/mL组合物稀释液加入1％乙醇、800μg/mL组合物稀释液加入1％乙醇、1500μg/mL组合物稀释液加入1％乙醇，各组均采用丰年虾作为日常饲养饲料。
8.3实验结果
对受精5d后的黑色素等位基因突变型半透明Albino品系斑马鱼分别用不同剂量的本发明的组合物和乙醇处理30h，未发现斑马鱼死亡现象，高剂量组出现6.7％的侧翻。每个实验组随机选取10尾斑马鱼在解剖显微镜下拍照并采集数据。由图1～图5可见，乙醇可明显导致斑马鱼的肝损伤，表现为肝脏光密度明显高于空白对照组，而经过本发明的组合物处理后，斑马鱼肝脏光密度呈下降趋势。
用NIS-Elements D 3.10高级图像处理软件进行图像分析，计算斑马鱼肝脏光密度总和，进行定量分析，通过表5可以看出，模型对照组斑马鱼肝脏光密度总和为3919像素，显著高于正常对照组的2960像素。低剂量组、中剂量组、高剂量组的肝脏光密度总和分别为3364、3236和3066像素，随着本发明产品剂量的增加，肝脏光密度总和呈下降趋势，且与模型对照组有显著差异，说明本发明中的组合物对斑马鱼肝脏有显著的保护作用，通过数据分析发现，低剂量组、中剂量组、高剂量组的肝脏保护作用分别为58％、71％、89％。表明随着本发明的组合物剂量的增加，对肝脏保护作用呈增加趋势，且中剂量组与低剂量组无显著差异，高剂量组与低剂量组存在显著差异，说明高剂量能更加有效地保护斑马鱼的肝脏。
表5本发明产品处理后对斑马鱼肝保护作用
| 组别 | 肝脏光密度 | 肝保护作用％ |
| 正常对照组 | 2960±57a | - |
| 模型对照组 | 3919±104b | - |
| 低剂量组 | 3364±104c | 58a |
| 中剂量组 | 3236±58cd | 71ab |
| 高剂量组 | 3066±58ad | 89b |
实施例9
试验方法：将50只ICR小鼠(同实施例7所用小鼠)分为五组别，分别为空白对照组(灌服纯水)、模型组(灌胃白酒，剂量为0.15ml/10g)，实验组(分为低、中、高剂量三个组，各组分别灌胃白酒，剂量为0.15ml/10g，各组的组合物给予剂量如表6所示)。以小鼠翻正反射消失(醉倒)为醉酒模型成功，观察并记录小鼠醉酒时间和醒酒时间，结果如下表6所示。
表6小鼠的醉酒时间和醒酒时间
| 组别 | N(只) | 剂量(g/kg) | 醉酒时间(min) | 醒酒时间(min) |
| 空白组 | 10 | 0 | / | / |
| 模型组 | 10 | 0 | 35.21±10.87 | 262.51±32.1 |
| 低剂量组 | 10 | 0.212 | 42.74±15.56 | 221.69±6.32 |
| 中剂量组 | 10 | 0.424 | 56.85±9.12 | 186.95±18.74 |
| 高剂量组 | 10 | 0.464 | 65.21±9.33 | 156.45±7.65 |
由表6可见，实验组的醉酒时间比模型组要延长，而醒酒时间比模型组缩短，说明本发明的组合物具有明显的解酒效果。本实验期间，空白对照小鼠一直处于正常状态，模型组小鼠灌酒之后，相应时间醉倒，表明醉酒模型成功。
Claims (9)
1.一种解酒护肝组合物，其特征在于包括以下组分及其质量份数：玉米低聚肽粉20～50份，姜黄素微囊5～20份，枳椇子提取物3～15份，铁皮石斛提取物3～15份，葛根提取物0～10份，砂仁提取物0～10份，针叶樱桃粉0～10份，富硒酵母0～10份。
2.如权利要求1所述的解酒护肝组合物，其特征在于，所述玉米低聚肽粉中分子量小于1000D的成分占96％以上，其平均分子量为357。
3.如权利要求1所述的解酒护肝组合物，其特征在于，所述姜黄素微囊中姜黄素的包埋率达85％以上，粒径为1～300μm。
4.一种如权利要求1所述的解酒护肝组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将玉米蛋白粉经粉碎、酶解、过滤以及干燥得所需的玉米低聚肽粉，该玉米低聚肽粉中分子量小于1000D的成分占96％以上，其平均分子量为357；
(2)分别配置壁材溶液和姜黄素乳化液，将两者混合均匀，接着进行乳化均质处理，干燥后得所需的姜黄素微囊，该姜黄素微囊中姜黄素的包埋率达85％以上，粒径为1～300μm；
(3)按上述质量份数将上述制得的玉米低聚肽粉与枳椇子提取物、铁皮石斛提取物、葛根提取物、砂仁提取物、针叶樱桃粉以及富硒酵母混合均匀，接着将混合物加入到姜黄素微囊中，即得所需的解酒护肝组合物。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中玉米低聚肽粉的制备方法如下：
(a)粉碎：将玉米蛋白粉粉碎，过60目筛，用纯净水配制成玉米蛋白分散液；
(b)酶解：调节玉米蛋白分散液的pH至8～9，加热并使其温度保持在45±5℃之间，接着在该玉米蛋白分散液中分别加入中性蛋白酶和木瓜蛋白酶，搅拌均匀后酶解2h～3h，其中中性蛋白酶加入的量为底物含量的0.2％～0.5％，木瓜蛋白酶的加入量是底物含量0.1％～0.2％，酶解结束后进行高温灭酶；
(c)过滤：将灭酶后的酶解液进行离心去杂，收集清液，启动膜过滤设备，确保滤液的澄清透明，去除滤渣；
(d)浓缩：将过滤后的溶液依次进行浓缩、脱色、脱盐及去游离氨基酸，得玉米蛋白清液；
(e)干燥：将上述玉米蛋白清液干燥，得所需的玉米低聚肽粉。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中姜黄素微囊的制备方法如下：
(a)分别称取适量的阿拉伯胶和大豆分离蛋白，在65℃热水中搅拌使其溶解，得到壁材溶液，该壁材溶液中阿拉伯胶和大豆分离蛋白的总质量分数为0.5～1％，阿拉伯胶和大豆分离蛋白的质量比为1:1～9；
(b)将姜黄素加入含蔗糖酯和磷脂的10％乙醇溶液中，其中蔗糖酯与磷脂比例为1:1～5，配置成3.5％～4.0％的姜黄素乳化液；
(c)将步骤(b)制得的姜黄素乳化液倒入步骤(a)制得的壁材溶液中，其中姜黄素乳化液与壁材溶液的体积比为0.8～1:1，于50℃下进行乳化均质处理，调节pH至4.2～6.5，反应时间5～20min，制得初产品；
(d)将上述制得的初产品进行喷雾干燥，制得所需的姜黄素微囊成品，其中喷雾干燥的进口温度为120～190℃，出口温度为85～95℃。
7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述枳椇子提取物、葛根提取物或砂仁提取物均可通过以下步骤制备：
(a)取粉碎过的枳椇子或葛根或砂仁，加入物料体积8～10倍的水，于95±4℃动态逆流提取，得到提取液；
(b)离心分离：将提取液进行离心分离，获得澄清液；
(c)减压浓缩：将澄清液进行减压浓缩，获得浸膏；
(d)喷雾干燥：将浸膏加热过筛过滤后喷雾干燥后得到枳椇子提取物粉或葛根提取物或砂仁提取物。
8.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述铁皮石斛提取物可通过以下步骤制备：
(a)取粉碎过的铁皮石斛，加入物料体积15～10倍的水，于90±4℃动态逆流提取，得到提取液；
(b)离心分离：将提取液进行离心分离，获得澄清液；
(c)减压浓缩：将澄清液进行减压浓缩，获得浸膏；
(d)喷雾干燥：将浸膏加热过筛过滤后喷雾干燥后得到铁皮石斛提取物。
9.一种如权利要求1所述的解酒护肝组合物在保健食品或药物中的应用。
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