CN105658646A - 作为激酶抑制剂的氨基杂芳基苯甲酰胺 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了式(I)化合物或其盐以及这些化合物的治疗用途。本发明还提供了包含这些化合物药用组合物以及包含这些化合物与联合治疗药物的组合物。

Description

作为激酶抑制剂的氨基杂芳基苯甲酰胺
背景
蛋白激酶参与了非常复杂的信号级联，该级联能够调节大多数细胞功能，包括存活和增殖。这些信号通路已经获得深入研究，特别是由异常细胞功能所导致的疾病，例如癌症。细胞外信号调节的激酶(ERKs)是一类信号激酶，它们参与了将细胞外信号传递至细胞和亚细胞细胞器中的过程。ERK1和2(ERK1/2)是有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)通路中的激酶，也分别被称为p42和p44。ERK1和ERK2以相当大的量存在于细胞中(每个细胞中含有～107个分子)，其参与调节各种活动。的确，ERK1/2级联的失调已知能够导致各种病理，包括神经退行性疾病、发育性疾病、糖尿病和癌症。Wortzel和Seger,Genes&Cancer,2:195－209(2011)，2011年5月9日网上发布。
ERK1/2在癌症中的作用特别令人关注，因为在其信号级联中激活ERK1/2的突变上游被认为能够导致一半以上的癌症。此外，在其中上游成分没有突变的癌症中也发现了过度的ERK1/2活性，这说明ERK1/2信号在癌变中起到了作用，甚至在没有突变激活的癌症中也起到作用。ERK通路也已经显示能够控制肿瘤细胞迁移和侵入，因此可能与转移有关。参见A.vonThun等，ERK2drivestumourcellmigrationin3DmicroenvironmentsbysuppressingexpressionofRab17andLiprin-β2(ERK2通过抑制Rab17和Liprin-β2的表达在3D微环境中驱动肿瘤细胞迁移),J.CellSciences,2012年2月10日网络发布。另外，已有报道，采用shRNA沉默ERK1或ERK2能够在培养基中杀死黑素瘤细胞，也使得黑素瘤细胞对BRAF抑制剂更敏感。J.Qin,等,J.TranslationalMed.10:15(2012)。也有报道，ERK1和2的抑制剂对对MEK抑制剂耐药的肿瘤细胞有效，MEK和ERK的同时抑制提供了协同活性。Molec.CancerTherapeutics,第11卷,1143(2012年5月)。
作为ERK抑制剂的吲唑衍生物被报道可以用于治疗癌症。WO2012/030685；WO2007/070398；WO2008/153858。含有与吡啶酮或类似环连接的联芳基的某些2-氨基吡啶/嘧啶化合物也被报道可以作为ERK的抑制剂，可以用于治疗癌症和高增生性疾病：WO2013/130976。其它ERK抑制剂也被公开为治疗药物，参见例如WO2004/016597。因为它们的治疗价值，需要新的ERK1和/或ERK2抑制剂，用于治疗与异常水平的ERK1/2活性有关的疾病。本发明提供了新的能够抑制ERK1或ERK2或它们两者的化合物，用于治疗疾病，例如与ERK1和/或ERK2过度活性相关的癌症。
发明概述
一方面，本发明提供了式(I)化合物或其可药用的盐：
其中：
R1为选自下列的任选取代的基团：C3-8环烷基、含有1－2个选自N、O和S的作为环成员的杂原子的5－8元杂环基、苯基、-SO2-苯基、-C(O)-苯基、-C(R8)2-苯基和5－6元杂芳基环，其中所述杂环基和杂芳基含有1－2个选自N、O和S的作为环成员的杂原子，
并且其中R1的任选取代基为1－3个独立选自下列的基团：D、卤素、羟基、氨基、-N(R8)2、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-S(C1-4烷基)、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C3-6环烷基、含有1－2个选自N、O和S的杂原子的3－6元杂环基、氧代(除了在芳族环上的)、CN、COOR8、CON(R8)2、-NR8-C(O)R8、-NR8-C(O)OR8-SO2R8、-NR8SO2R8和SO2N(R8)2，其中每个R8独立为H或C1-4烷基；
L为键，或L可以是C1-4亚烷基、C2-4亚链烯基、C1-4亚炔基、C3-6环烷基或含有1－2个选自N、O和S的作为环成员的杂原子的4－7元杂环基，其中L任选被1－3个独立选自下列的基团取代：R11、D、OH、NH2、-NHR11、-NHC(＝O)R11、-NHC(＝O)-OR11、-NHC(＝O)-NH2、-NHC(＝O)-NHR11、-N(R11)2、CN、卤素、N3、CON(R7)2和COOR7；其中每个R11独立为C1-4烷基，其可以被至多三个独立选自下列的基团取代：D、卤素、OH、NH2、-NHMe、-NMe2、-OP(O)(OH)2和O-C1-4烷基；
X和Y独立选自：H、D、卤素、CN、氨基、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷氧基；
R2为H、C1-4烷基或芳基-C1-2-烷基-，其中所述芳基和C1-4烷基任选被卤素、CN、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基或C1-4烷基磺酰基取代；
或者R2可以与X环化形成含有1－2个选自N、O和S的杂原子的5－7元杂环，其与连接X的苯基环稠合，
或者R2可以与L环化形成含有1－2个选自N、O和S的杂原子的5－7元杂环，
其中由R2与X环化或由R2与L环化形成的任选的杂环可以任选被1或2个独立选自下列的基团取代：CN、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、氧代、CN、COOR7、CON(R7)2和-SO2R7；
每个R7独立为H或C1-4烷基；
Z为N或CR4；
R4为H、D、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷氧基；
R5选自–C(O)-R5a和R5a；其中R5a为任选取代的C3-8环烷基、C3-8环烯基、含有1－2个选自N、O和S的杂原子的饱和的或不饱和的3－8元杂环、苯基或含有1－3个选自N、O和S的杂原子的5－6元杂芳基环，其中R5的任选取代基为1－4个独立选自下列的基团：D、卤素、羟基、氨基、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4卤代烷氧基、含有1－2个选自N、O和S的杂原子的C3-6环烷基、3－6元杂环基、氧代(除了在芳族环上的)、CN、-COOR9、-C(O)R9、CON(R9)2、-NR9C(O)R9、-NR9CO2R9、-SO2R9、-NR9SO2R9和-SO2N(R9)2，其中每个R9独立为H或C1-4烷基，其任选被1－3个独立选自下列的基团取代：D、卤素、OH、NH2、NHMe和NMe2；并且R5的相同或相邻碳原子上的两个取代基任选一起形成5－6元环，其可以是饱和的或芳族并且含有1－2个选自N、O和S的杂原子，可以任选被1－2个独立选自下列的基团取代：D、Me、卤素、OH、氧代、O(C1-4烷基)、NH2、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基；并且
R6为H、D、卤代、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；
包括这些化合物的可药用盐(例如HCl盐形式)以及化合物和盐的同位素富集形式，特别是化合物及其盐的氘化形式。这些化合物是ERK1和/或ERK2的抑制剂，因此可以用于治疗与ERK1和/或ERK2的活性水平过度或活性水平失控相关的疾病，特别是对ERK1和/或ERK2抑制剂有响应的癌症。
另一方面，本发明提供了药用组合物，其包含式(I)化合物或本文中所述的其任何亚类以及与之混合的至少一种可药用的载体或赋形剂，任选与两种或多种可药用的载体或赋形剂混合。这些组合物也可以用于治疗与ERK1和/或ERK2的活性水平过度或活性水平失控相关的疾病，特别是对ERK1和/或ERK2抑制剂有响应的癌症。组合物还可以包含一或多种联合治疗药物，例如本文中所述的那些药物，以增强对待治疗疾病或该疾病相关症状的治疗。
另一方面，本发明提供了治疗疾病的方法，该疾病的特征在于ERK1和ERK2的一种或两种的活性水平过度或活性水平失控，其中所述方法包括给予需要该治疗的个体有效量的式(I)化合物或本文中所述的其任何亚类或者包含此类化合物的药用组合物。所述个体可以是哺乳动物，优选人类，通常为被诊断患有与ERK1和/或ERK2活性过度相关疾病的个体。通过本文所述的化合物和方法可治疗的疾病包括对ERK1/2抑制剂有响应的各种形式的癌症，例如实体瘤、腺瘤、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠直肠癌、结肠癌、表皮癌、滤泡癌、泌尿生殖癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、霍奇金病、非何杰金氏淋巴瘤、肝癌、肾癌、肺癌(如小细胞或非小细胞肺癌)、白血病(如AML或CML)、多发性骨髓瘤、淋巴病、皮肤癌(包括黑素瘤)、神经母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、睾丸癌和甲状腺癌。这些化合物尤其适用于治疗黑色素瘤、卵巢癌、甲状腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、子宫颈癌、头颈癌以及白血病，包括慢性骨髓性白血病(CMML)、AML和CML。对于使用本发明化合物的特别感兴趣的适应症包括癌症(其中存在BRAF突变如V600E)，例如黑色素瘤、卵巢癌、甲状腺癌、结肠直肠癌和肺癌；乳腺癌，其中MAPK和/或PI3K通路失调；与KRAS突变相关的癌症，例如肺癌、胰腺癌、结直肠癌；具有ERK2突变的癌症，例如子宫颈癌或头颈癌；白血病，特别是存在NF-1突变的；非小细胞肺癌，其中EGFR存在突变。
另一方面，本发明提供了式(I)化合物以及本文中所述的式(I)的亚类，还提供了这些化合物的可药用的盐以及所有的立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)、互变异构体及其同位素富集形式(包括氘取代)。本发明化合物还包括式I化合物(或其亚式)及其盐的多晶型物。这些化合物可以用于治疗对ERK1/2抑制剂有响应的疾病，例如本文中所述那些疾病，并且可以用于制备用于治疗这些疾病的药物，可以与联合治疗药物组合用于治疗这些疾病。本文中所述的药用组合物和方法可以与联合治疗药物一起使用或者与其一起制成制剂；例如式I化合物及其亚式可以与B-RAF抑制剂以及本文中另外描述的其它治疗药物一起使用或制成制剂。
另一方面，本发明提供了式I化合物的制备方法以及用于制备本发明化合物的关键中间体化合物。
附图说明
图1显示了4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺的游离碱的X-射线粉末衍射图谱。
图2为4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺的游离碱的DSC/TGA热像图。
图3显示了4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺的HCl盐形式的X-射线粉末衍射图谱。
图4为4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺的HCl盐形式的DSC/TGA热像图。
发明详述
除非另有规定或者上下文中显而易见，本文采用下列定义：
本文中使用的术语“卤素”(或卤代)是指氟、溴、氯或碘。卤素-取代的基团和部分(例如被卤素取代的烷基(卤代烷基))可以是单-、多-或全卤代。除非另有说明，氯和氟为烷基或环烷基的优选的卤素取代基；除非另有说明，氟、氯和溴通常优选位于芳基或杂芳基基团上。
除非另有说明，本文中使用的术语“杂原子”是指氮(N)、氧(O)或硫(S)原子，特别是氮或氧。
本文中使用的术语“任选取代的”是指所述基团可以是未取代的或者是被取代的。取代的基团应当不包括这样的取代基，即该取代基基团的数目、位置或选择会使得化合物于室温下在水中不能稳定足够长的时间以便于作为药物成分给药。当存在多个取代基时，除非另有说明，这些取代基可以独立选择，所以当存在2或3个取代基时，例如，这些取代基可以是相同的或者是不同的。
本文中使用的术语“烷基”是指具有至多10个碳原子的完全饱和的支链或非支链烃基。除非另有说明，烷基是指具有1－6个碳原子或1－4个碳原子的烃基部分。烷基的代表性示例包括但不限于甲基、乙基、正-丙基、异-丙基、正-丁基、仲-丁基、异-丁基、叔-丁基、正-戊基、异戊基、新戊基、正-己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正-庚基、正-辛基、正-壬基、正-癸基等。
取代的烷基为含有一或多个代替未取代的烷基的氢原子的取代基的烷基，例如1、2或3个取代基或1－4个取代基，最多为未取代的烷基上存在的氢的数目。如果没有另外说明，烷基的适当的取代基可以选自：卤素、D、CN、氧代、羟基、取代的或未取代的C1-4烷氧基、取代的或未取代的C3-6环烷基、含有1或2个选自N、O和S作为环成员的杂原子的取代的或未取代的3－7元杂环烷基、取代的或未取代的苯基、氨基、(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷硫基、C1-4烷基磺酰基、-C(＝O)-C1-4烷基、COOH、COO(C1-4烷基)、-O(C＝O)-C1-4烷基、–NHC(＝O)C1-4烷基和–NHC(＝O)OC1-4烷基基团；其中取代的C1-4烷氧基、取代的C3-6环烷基、3－7元杂环烷基和取代的苯基的取代基为独立选自下列的至多3个基团：卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、D、C1-4烷氧基、氨基、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基、羟基和CN。除非另有说明，烷基的优选的取代基包括卤素、CN、氧代、羟基、C1-4烷氧基、C3-6环烷基、苯基、氨基、(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷硫基、C1-4烷基磺酰基、-C(＝O)-C1-4烷基、COOH、-COO(C1-4烷基)、-O(C＝O)-C1-4烷基、–NHC(＝O)C1-4烷基和–NHC(＝O)OC1-4烷基。
本文中使用的术语“亚烷基”是指具有1－10个碳原子的二价烷基，二个开放的化合价与其它分子组分连接。与亚烷基连接的两个分子组分可以位于相同的碳原子上或不同的碳原子上；因此，例如亚丙基为3-碳亚烷基，其可以是1,1-二取代的、1,2-二取代的或1,3-二取代的。除非另有说明，亚烷基是指具有1－6个碳原子或1－4个碳原子的部分。亚烷基的代表性示例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚正丙基、亚异丙基、亚正丁基、亚仲丁基、亚异丁基、亚叔丁基、亚正戊基、亚异戊基、亚新戊基、亚正己基、3-甲基亚己基、2,2-二甲基亚戊基、2,3-二甲基亚戊基、亚正庚基、亚正辛基、亚正壬基、亚正癸基等。取代的亚烷基为含有一或多个(例如1、2或3个)取代基的亚烷基；除非另有说明，适当的和优选的取代基选自上述烷基的适当的和优选的取代基。
同样，“亚链烯基”和“亚炔基”分别是指具有双键或三键的亚烷基；它们一般为2－6个并且通常为2－4个碳原子的长度，可以通常如亚烷基中所述被取代。
本文中使用的术语“卤代烷基”是指本文中所定义的烷基，其可以被本文中所定义的一或多个卤代基团取代。除非另有说明，卤代烷基的烷基部分具有1－4个碳原子。卤代烷基可以是单卤代烷基、二卤代烷基、三卤代烷基或多卤代烷基，包括全卤代烷基。单卤代烷基在烷基中可以含有一个碘、溴、氯或氟。二卤代烷基和多卤代烷基在烷基中可以含有2个或多个相同的卤素原子或者不同卤代基团的组合。通常，多卤代烷基含有至多6或4或3或2个卤代基团。卤代烷基的非限定性示例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。全卤代-烷基是指所有氢原子均被卤素原子代替的烷基，例如三氟甲基。除非特别说明，优选的卤代烷基包括单氟-、二氟-和三氟-取代的甲基和乙基，例如CF3、CF2H、CFH2和CH2CF3。
本文中使用的术语“烷氧基”是指烷基-O-，其中烷基如上文所定义。烷氧基的代表性示例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、叔-丁氧基、戊氧基、己氧基等。一般来讲，烷氧基具有1－6个碳，更通常具有1－4个碳原子。
“取代的烷氧基”为在烷氧基的烷基部分上含有一或多个(例如1、2或3个)取代基的烷氧基。除非另有说明，适当的和优选的取代基选自上面烷基所列示的取代基，但是与取代的‘烷基-O’基团的氧直接连接的碳上通常不存在羟基和氨基。
本文中使用的术语“卤代烷氧基”是指卤代烷基-O-，其中卤代烷基如上文所定义。卤代烷氧基的代表性示例包括但不限于氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、2-氯乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙氧基等。一般来讲，卤代烷氧基具有1－4个碳原子和至多3个卤素，例如单氟、二氟和三氟取代的甲氧基和乙氧基。
同样，其它基团如“烷基氨基羰基”、“烷氧基烷基”、“烷氧基羰基”、“烷氧基-羰基烷基”、“烷基磺酰基”、“烷基磺酰氧基(sulfoxyl)”、“烷基氨基”、“卤代烷基”的每个烷基部分应当具有上述“烷基”定义中所述相同意义。当以该方式使用时，除非另有说明，该烷基通常具有1－4个碳并且不被除了指定组分之外的基团进一步取代。当此类烷基被取代时，除非另有说明，适当的取代基选自上述烷基所指定的适当的或优选的取代基。
本文中使用的术语“环烷基”是指3－12个碳原子的饱和的或不饱和的非芳族单环、双环、三环或螺环烃基：所述环烷基可以是不饱和的，可以与另一个饱和的、不饱和的或芳族的环稠合，前提是与相关分子结构式连接的环烷基的环原子不是芳族环原子。除非另有说明，环烷基是指具有3－9个环碳原子或者具有3－7个环碳原子的环烃基基团。除非另有说明，优选环烷基为具有3－7个环原子的饱和的单环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。
取代的环烷基为被1－3个(1、2或3个)或3个以上取代基取代的环烷基，取代基的数目至多为未取代的基团上的氢的数目。一般来讲，取代的环烷基具有1－4个或1－2个取代基。除非另有说明，适当的取代基独立选自下列基团：卤素、羟基、硫醇基、氰基、硝基、氧代、C1-4-烷基亚氨基、C1-4-烷氧基亚氨基(alkoximino)、羟基亚氨基、C1-4-烷基、C2-4-链烯基、C2-4-炔基、C1-4-烷氧基、C1-4-硫烷基、C2-4-链烯基氧基、C2-4-炔基氧基、C1-4-烷基羰基、羧基、C1-4-烷氧基羰基、氨基、C1-4-烷基氨基、二-C1-4-烷基氨基、C1-4-烷基氨基羰基、C1-4-烷基氨基羰基、C1-4-烷基羰基氨基、C1-4-烷基羰基(C1-4-烷基)氨基、C1-4-烷基磺酰基、C1-4-烷基氨磺酰基和C1-4-烷基氨基磺酰基，其中每一个上述烃基(例如烷基、链烯基、炔基、烷氧基)还可以被一或多个在任何情况下独立选自本文中“烷基”的取代基目录中的基团取代。除非另有说明，环烷基的优选的取代基包括C1-4烷基和上面烷基的优选的取代基所列示的取代基基团。
典型的单环烃基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基和环己烯基等。
同样，其它基团如“环烷基氧基”、“环烷氧基烷基”、“环烷氧基羰基”、“环烷氧基-羰基烷基”、“环烷基磺酰基”、“卤代环烷基”的每个环烷基部分应当具有如上面“环烷基”定义中相同的意义。当在这些术语中使用时，环烷基通常为单环3－7碳环，其为未取代的或者被1－4个、通常1－2个基团取代。当(任选)被取代时，除非另有说明，取代基通常选自C1-4烷基和那些上面烷基的适当的或优选的取代基所列示的基团。
本文中使用的术语“芳基”是指在环部分中具有6－14个碳原子的芳族烃基。一般来讲，芳基为具有6－14个碳原子(通常为6－10个碳原子)的单环、双环或三环芳基，例如苯基或萘基。有时优选苯基。另外，本文中使用的术语“芳基”是指芳族取代基，其可以是单芳族环或者是稠合到一起的多芳族环。非限定性示例包括苯基、萘基和1,2,3,4-四氢萘基，前提是四氢萘基通过四氢萘基的芳族环的碳与所述结构式连接。
取代的芳基为被1－5个(1或2或3个)取代基取代的芳基，所述取代基独立选自下列基团：羟基、硫醇基、氰基、硝基、C1-4-烷基、C2-4-链烯基、C2-4-炔基、C1-4-烷氧基、C1-4-硫烷基、C2-4-链烯基氧基、C2-4-炔基氧基、卤素、C1-4-烷基羰基、羧基、C1-4-烷氧基羰基、氨基、C1-4-烷基氨基、二-C1-4-烷基氨基、C1-4-烷基氨基羰基、二-C1-4-烷基氨基羰基、C1-4-烷基羰基氨基、C1-4-烷基羰基(C1-4-烷基)氨基、C1-4-烷基磺酰基、氨磺酰基、C1-4-烷基氨磺酰基和C1-4-烷基氨基磺酰基，其中每个上述烃基(例如烷基、链烯基、炔基、烷氧基)还可以被一或多个在任何情况下独立选自上述烷基的适当的取代基所列示的基团取代。除非另有说明，取代的芳基的优选的取代基为C1-4烷基、卤素、CN、羟基、取代的或未取代的C1-4烷基、取代的或未取代的C1-4烷氧基、取代的或未取代的C3-6环烷基、含有1－2个选自N、O和S的作为环成员的杂原子的取代的或未取代的3－6元杂环烷基、氨基、(C1-4烷基)氨基、二(C1-4烷基)氨基、C1-4烷硫基、C1-4烷基磺酰基、-C(＝O)-C1-4烷基、COOH、COO(C1-4烷基)、-O(C＝O)-C1-4烷基、–NHC(＝O)C1-4烷基和–NHC(＝O)OC1-4烷基；其中取代的C1-4烷氧基、取代的C3-6环烷基、3－6元杂环烷基和取代的烷基的取代基为至多3个独立选自下列的基团：卤素、氧代、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、氨基、羟基和CN。
同样，其它基团如“芳基氧基”、“芳基氧基烷基”、“芳基氧基羰基”、“芳氧基-羰基烷基”的每个芳基部分应当具有上述“芳基”定义中所述相同的意义。
本文中使用的术语“杂环基”或“杂环烷基”是指为饱和的或部分不饱和的但不为芳族的杂环基团，其可以是单环或多环，包括稠合的或桥连的双环、三环或螺环环系。杂环或杂环基含有至少一种非碳原子作为环成员，除非另有说明，通常为N、O或S。除非另有说明，杂环基具有3－10个并且优选4－7个环原子；其中一或多个(优选1－4个，特别是1或2个)环原子为独立选自O、S和N的杂原子(其余的环原子为碳)。不饱和的杂环基可以具有1或2个双键，但是不为芳族。除非被描述为不饱和的，优选本发明化合物中的杂环基为饱和的单环。即使有时被描述为例如C5-6原子基团，杂环含有至少一种杂原子作为环原子并且具有指定的环原子总数，例如在该示例中具有5或6个；所以C5-6杂环基是指5－6元杂环，其中至少一个环成员为杂原子。优选杂环基具有1或2个杂原子作为环原子，优选该杂原子彼此不直接相连。键合环(即该环与相关结构式相连)优选具有4－7个环原子。杂环基团可以与芳族环稠合，前提是与相关结构式连接的杂环基团的原子不是芳族。杂环基团可以通过杂环基团的杂原子(通常为氮)或碳原子与相关结构式连接。杂环基可以含有稠合的或桥连的环以及螺环环系(例如2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷)，多环杂环基团中仅有一个环需要含有杂原子作为环成员。杂环的实例包括四氢呋喃(THF)、二氢呋喃、1,4-二氧六环、吗啉、1,4-二噻烷、哌嗪、哌啶、1,3-二氧戊环、咪唑烷、咪唑啉、吡咯啉、吡咯烷、四氢吡喃、二氢吡喃、氧硫杂环戊烷、二硫戊烷、1,3-二氧六环、1,3-二噻烷、氧硫杂环己烷、硫代吗啉等。
取代的杂环基为被1－5(例如1或2或3)个取代基独立取代的杂环基，除非另有说明，所述取代基选自上述环烷基的适当的或优选的取代基。
同样，其它基团如“杂环基氧基”、“杂环基氧基烷基”、“杂环基氧基羰基”的每个杂环基部分应当具有上述“杂环基”定义中所述相同的意义。
本文中使用的“环醚”是指含有O作为环原子的杂环，通常为4－8元环，例如氧杂环丁烷、四氢呋喃或四氢吡喃。5－8元环醚可以含有两个非相邻氧作为环成员，例如二氧六环和二氧戊环。如杂环环一样，这些环可以被取代；如果没有另外说明，优选的取代基包括C1-4烷基(例如甲基、乙基)、CN、OH、NH2、NHR、NR2、COOH、COOR、CONR2和OR，其中每个R独立为C1-4烷基。一般来讲，为了稳定的原因，OH、NH2、NHR和NR2取代基不与直接与该环中氧连接的环碳原子相连。
本文中使用的术语“杂芳基”是指5－14元单环-或双环-或三环-芳族环系，具有1－8个杂原子作为环成员；所述杂原子选自N、O和S。一般来讲，杂芳基为5－10元环系，例如5－6元单环或8－10元双环基团。杂芳基通常包括2-或3-噻吩基；2-或3-呋喃基；2-或3-吡咯基；2-、4-或5-咪唑基；1-、3-、4-或5-吡唑基；2-、4-或5-噻唑基；3-、4-或5-异噻唑基；2-、4-或5-噁唑基；3-、4-或5-异噁唑基；3-或5-(1,2,4-三唑基)；4-或5-(1,2,3-三唑基)；1-或2-或3-四唑基；2-、3-或4-吡啶基；3-或4-哒嗪基；2-吡嗪基和2-、4-或5-嘧啶基。
术语“杂芳基”还指其中杂芳族环与一或多个芳基、环烷基或杂环环稠合的基团，其中与相关结构式连接的基团或点位于杂芳族环。非限定性示例包括1-、2-、3-、5-、6-、7-或8-中氮茚基；1-、3-、4-、5-、6-或7-异吲哚基；2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基和2-、3-、4-、5-、6-或7-吲唑基。
取代的杂芳基为在杂芳基环上具有一或多个取代基的杂芳基，该取代基代替了未取代的杂芳基上的氢原子，通常具有1、2或3个取代基，除非另有说明，其选自上述芳基的适当的或优选的取代基。
同样，其它基团如“杂芳基氧基”、“杂芳基氧基烷基”、“杂芳基氧基羰基”的每个杂芳基部分应当具有上述“杂芳基”定义中所述相同的意义。
本文中描述了本发明的各种实施方案。应当理解，每个实施方案中说明的特征可以与其它说明的特征组合以提供本发明的其它实施方案。下面列举的实施方案是本发明的代表。
实施方案1.式(I)化合物或其可药用的盐：
其中：
R1为选自下列的任选取代的基团：C3-8环烷基、含有1－2个选自N、O和S的作为环成员的杂原子的5－8元杂环基、苯基、-SO2-苯基、-C(O)-苯基、-C(R8)2-苯基和5－6元杂芳基环，其中所述杂环基和杂芳基含有1－2个选自N、O和S的杂原子作为环成员，
其中R1的任选的取代基为1－3个独立选自下列的基团：D、卤素、羟基、氨基、-N(R8)2、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-S(C1-4烷基)、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C3-6环烷基、含有1－2个选自N、O和S的杂原子的3－6元杂环基、氧代(除了芳族环上的)、CN、COOR8、CON(R8)2、-NR8-C(O)R8、-NR8-C(O)OR8-SO2R8、-NR8SO2R8和SO2N(R8)2，其中每个R8独立为H或C1-4烷基；
L为键，或者L可以是C1-4亚烷基、C2-4亚链烯基、C1-4亚炔基、C3-6环烷基或含有1－2个选自N、O和S的作为环成员的杂原子的4－7元杂环基，其中L任选被1－3个独立选自下列的基团取代：R11、D、OH、NH2、-NHR11、-NHC(＝O)R11、-NHC(＝O)-OR11、-NHC(＝O)-NH2、-NHC(＝O)-NHR11、-N(R11)2、CN、卤素、N3、CON(R7)2和COOR7；其中每个R11独立为C1-4烷基，其可以被至多三个选自下列的基团取代：D、卤素、OH、NH2、-NHMe、-NMe2、-OP(O)(OH)2和O-C1-4烷基；
X和Y独立选自：H、D、卤素、CN、氨基、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷氧基；
R2为H、C1-4烷基或芳基-C1-2-烷基-，其中所述芳基和C1-4烷基任选被下列基团取代：卤素、CN、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基或C1-4烷基磺酰基；
或者R2可以与X环化形成含有1－2个选自N、O和S的杂原子的5－7元杂环，其与连接X的苯基环稠合，
或者R2可以与L环化形成含有1－2个选自N、O和S的杂原子的5－7元杂环，
其中通过R2与X环化或者通过R2与L环化形成的任选的杂环可以任选被1或2个独立选自下列的基团取代：CN、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、氧代、CN、COOR7、CON(R7)2和-SO2R7；
每个R7独立为H或C1-4烷基；
Z为N或CR4；
R4为H、D、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷氧基；
R5选自–C(O)-R5a和R5a；其中R5a为任选取代的C3-8环烷基、C3-8环烯基、含有1－2个选自N、O和S的杂原子的饱和的或不饱和的3－8元杂环、苯基或含有1－3个选自N、O和S的杂原子的5－6元杂芳基环，其中R5的任选的取代基为1－4个独立选自下列的基团：D、卤素、羟基、氨基、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4卤代烷氧基、C3-6环烷基、含有1－2个选自N、O和S的杂原子的3－6元杂环基、氧代(除了在芳族环上的)、CN、-COOR9、-C(O)R9、CON(R9)2、-NR9C(O)R9、-NR9CO2R9、-SO2R9、-NR9SO2R9和-SO2N(R9)2，其中每个R9独立为H或C1-4烷基，其任选被1－3个独立选自D、卤素、OH、NH2、NHMe和NMe2的基团取代；并且R5的相同或相邻碳原子上的两个取代基可以任选一起形成5－6元环，其可以是饱和的或芳族并且含有1－2个选自N、O和S的杂原子，可以任选被1－2个独立选自下列的基团取代：D、Me、卤素、OH、氧代、O(C1-4烷基)、NH2、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基；并且
R6为H、D、卤素、C1-4烷基或C1-4卤代烷基。
实施方案2.实施方案1的化合物或其可药用的盐，其中Z为N。
实施方案3.实施方案1的化合物或其可药用的盐，其中Z为CH。
实施方案4.实施方案1－3中任一项的化合物或其可药用的盐，其中R2为H或Me。
实施方案5.实施方案1－4中任一项的化合物或其可药用的盐，其中R6为H。
实施方案6.实施方案1－5中任一项的化合物或其可药用的盐，其中R5选自–C(O)-R5a和R5a；其中R5a选自C3-8环烷基、含有1－2个选自N、O和S的杂原子的5－8元杂环基、苯基和5－6元杂芳基，其任选被1－3个独立选自下列的基团取代：D、卤素、CN、羟基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4卤代烷氧基、-SO2R’、-N(R’)2、-NR’-C(O)-R’和–SO2NR’2，其中每个R’独立为H或C1-4烷基。
实施方案7.实施方案1－6中任一项的化合物，其中R5选自–C(O)-R5a和R5a；其中R5a选自苯基、吡啶、吡啶酮、吡嗪、哒嗪、吡唑、三唑、四唑、噻唑、噁唑、咪唑、异噻唑、异噁唑、呋喃和噻吩，它们每一个任选被1或2个独立选自下列的基团取代：卤素、D、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4卤代烷氧基、CN、COOR9、CON(R9)2和-SO2R9，其中每个R9独立为H或C1-4烷基。
实施方案8.实施方案3的化合物或其可药用的盐，其中R5选自–C(O)-R5a和R5a；其中R5a为含有至少一个N作为环成员的C5-6杂芳基，其任选被1－2个独立选自下列的基团取代：卤素、CN、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷氧基。
实施方案9.实施方案8的化合物或其可药用的盐，其中R5为选自–C(O)-R5a和R5a；其中R5a为吡唑或三唑，任选被1－2个独立选自下列的基团取代：卤素、CN、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷氧基。
实施方案10.实施方案1－6中任一项的化合物，其中R5为选自–C(O)-R5a和R5a；其中R5a选自环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、四氢吡喃、二氢吡喃、四氢呋喃、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、四氢噻喃(硫杂环己烷)和四氢硫代呋喃(硫杂环戊烷)，它们每一个任选被1－3个独立选自下列的基团取代：卤素、D、CN、N(R9)2、羟基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4卤代烷氧基、氧代、CN、COOR9、CON(R9)2、-NHC(O)R9、-NHCOOR9、-NHSO2R9和-SO2R9，其中每个R9独立为H或C1-4烷基。
实施方案11.实施方案1－10中任一项的化合物，其中R1为苯基并且任选被至多3个独立选自下列的基团取代：卤素、D、CN、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、SR’、-SO2R’、-N(R’)2、-NR’-C(O)-R’和–SO2NR’2，其中每个R’独立为H、C1-4烷基或C1-4卤代烷基。
实施方案12.实施方案1－10中任一项的化合物，其中R1为噻吩、噻唑、吡啶、嘧啶、吡嗪或哒嗪，其任选被至多3个独立选自下列的基团取代：卤素、CN、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、-SO2R’、-N(R’)2、-NR’-C(O)-R’和–SO2NR’2，其中每个R’独立为H或C1-4烷基。
实施方案13.实施方案1－12中任一项的化合物或其可药用的盐，其中L选自下列基团：环丙烷-1,1-二基；环丙烷-1,2-二基；和–CHR”-，其中R”为H、D或C1-2烷基，其任选被至多3个独立选自下列的基团取代：D、羟基、卤素、氨基、C1-2烷基氨基、二(C1-2烷基)氨基和C1-2烷氧基。
实施方案14.实施方案13的化合物，其中L为：
其中R”为甲基或乙基，其任选被下列基团取代：氟、氨基、羟基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、-OP(O)(OH)2、甲氧基或乙氧基。
实施方案15.实施方案1－14中任一项的化合物或其可药用的盐，其中R2和L连接到一起形成杂环基团，其选自吗啉、哌啶、硫代吗啉、哌嗪和吡咯烷，其与R1连接并且还任选被1或2个独立选自下列的基团取代：C1-4烷基、C1-4烷氧基、氧代、CN、COOR7、CON(R7)2和-SO2R7，其中每个R7独立为H或C1-4烷基。
实施方案16.实施方案1－15中任一项的化合物，其中Y为H、甲基或卤素。
实施方案17.实施方案1－16中任一项的化合物，其中X为H，或R2与X环化形成5－7元杂环，其与连接X的苯基环稠合，其中所述5－7元环任选如实施方案1所述被取代。
实施方案18.实施方案1的化合物，其为式IA化合物：
其中R5为吡唑、咪唑、异噁唑、异噻唑、噁唑、三唑或噻唑，其可以被至多2个独立选自下列的基团取代：D、F、Cl、CN、Me、OMe、Et、iPr、OEt和CF3；
Y为H、F、Cl或Me；
R10为H或–CH2-R＊，其中R＊为H、-OH、F、-NH2、-NHMe、-NMe2、-OP(O)(OH)2或–OMe；并且
R1为苯基或噻吩基，任选被1－2个独立选自下列的基团取代：卤素、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、CN、COOR8、CON(R8)2、-SMe和-SO2R8，其中每个R8独立为H或C1-4烷基；
或其可药用的盐。
实施方案19.实施方案1的化合物，其为式IB化合物：
其中R5为4－7元环醚或C5-6环烷基，并且R5可以被至多4个独立选自下列的基团取代：D、F、Cl、CN、氨基、NHMe、NMe2、-CH2OH、-NHC(O)Me、-NHCOOMe、-NHSO2Me、Me、OMe、OH、氧代、Et、iPr、OEt、CN和CF3；
Y为H、F、Cl或Me；
R10为H或–CH2-R＊，其中R＊为H、-OH、F、-NH2、-NHMe、-NMe2、-OP(O)(OH)2或–OMe；并且
R1为苯基，任选被1－2个独立选自下列的基团取代：卤素、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、CN、COOR8、CON(R8)2和-SO2R8，其中每个R8独立为H或C1-4烷基；
或其可药用的盐。
实施方案20.实施方案1－6或19中任一项的化合物，其中R5为环己基，其被1－3个独立选自下列的基团取代：D、F、Cl、CN、氨基、NHMe、NMe2、Me、NHSO2Me、NHCOMe、OMe、OH、Et、CN、-CH2OH和CF3。
在实施方案20的一个替代方案中，为实施方案1－6或19中任一项的化合物，其中R5为四氢吡喃基，特别是4-四氢吡喃基。
在另一个替代方案中，为实施方案1－6或19中任一项的化合物，其中R5选自：
实施方案21.实施方案1－20中任一项的化合物，其中R1为苯基，其被0、1或2个独立选自下列的基团取代：F、Cl、Br、I、SMe、SO2Me和CH3。
实施方案22.实施方案1的化合物，其选自实施例1－452的化合物及其可药用的盐。
实施方案23.药用组合物，其包含实施方案1－22中任一项的化合物以及与之混合的至少一种可药用的赋形剂。
实施方案24.实施方案23的药用组合物，其还包含联合治疗药物。
实施方案25.实施方案24的药用组合物，其中联合治疗药物选自抗癌化合物、镇痛药和抗炎化合物。
实施方案26.治疗癌症的方法，该方法包括给予需要此类治疗的个体治疗有效量的实施方案1－20中任一项的化合物或实施方案23－25中任一项的药用组合物。
实施方案27.实施方案26的方法，其中所述癌症选自腺瘤、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠直肠癌、结肠癌、表皮癌、滤泡癌、生殖泌尿癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、霍奇金病、非何杰金氏淋巴瘤、肝细胞瘤、头颈癌、肾癌、肺癌如小细胞或非小细胞肺癌、白血病如AML或CML、多发性骨髓瘤、淋巴疾病、皮肤癌包括黑素瘤、神经母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、睾丸癌和甲状腺癌。
实施方案28.实施方案1－22中任一项的化合物，用作药物。
实施方案29.实施方案1－22中任一项的化合物或其可药用的盐在生产用于治疗癌症的药物中的用途；或者实施方案1－22中任一项的化合物或其可药用的盐在医学中的用途，特别是用于治疗癌症，例如实施方案27中指定的那些癌症。
实施方案30.合成本发明化合物的方法。例如，4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成方法，该方法包括：
(a).在Pd(dppf)Cl2、DCM、Na2CO3和DME存在下，使得5-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)吡嗪-2-胺与2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸叔-丁基酯反应，形成4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯；
(b).在HCl、ETOH和NaOH存在下，使得4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯反应，形成4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸；
(c).在EDCI和HOAT存在下，使得4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸与(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺盐酸盐反应，获得4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺；和
(d).在LiOH、DMF和4-巯基苯甲酸存在下，使得4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺反应，获得4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺。
实施方案31.本发明提供了高结晶度的4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺的HCl盐，所述形式具有至少一种下列特性：
a)X-射线粉末衍射图谱具有2个或多个峰(优选3个峰，更优选所有的峰)，这些峰位于2-θ角(其中该角的差为+/-0.3、0.2或0.1度)，如实施例184中所示；
b)X-射线粉末衍射图谱具有的峰与图3中所示基本相同；或者
c)热重分析曲线与图4中所示曲线基本一致。
在式I或IA或IB的某些实施方案中，Y为H或卤素，特别是F或Cl。优选卤素，特别是F。Y的位置与这些结构式中所示的羰基“相邻”。
在上述化合物的多个实施方案中，X为H。在其它实施方案中，X为与式I中所示羰基相邻的基团，例如F、Me或Cl，在某些此类实施方案中，X为能够与本文中所述R2一起形成环的基团，该环与式I中所示苯基环稠合。该稠合的环通常为5、6或7个原子的环，可以包含另一个作为环成员的N、O或S，但不包含与R2连接的N。该稠合的环可以是取代的或者是未取代的；当为取代的时，其可以具有1或2个式(I)中所述的取代基，除非另有说明，优选卤素、C1-4烷基、氧代和羟基作为取代基。
在式I化合物的某些实施方案中以及上述其它实施方案中，R2为H或Me，优选H。在替代实施方案中，R2和X一起形成上面式I中所述的5－7元杂环，在此情况下，X在式I中所示的羰基的邻位上与苯基环连接。
在某些上述实施方案中，L为C1-4亚烷基，其可以是直链或支链，可以是未取代的或者被1－3个式I中所述基团取代。在某些实施方案中，L为式-CH(RL)-基团，其中RL为C1-3烷基或C1-2烷基，其任选被1－3个式I中所述基团取代。优选L为C1-2烷基，其可以被1或2个独立选自下列的基团取代：羟基、卤素、氨基、OMe、-NHMe、-OP(O)(OH)2和–NMe2。在某些实施方案中，特别是其中R1为芳基或杂芳基时，L为-CH2-或式–CH(CH2R＊)-的取代的亚烷基，其中R＊为H、Me、OH、F、NH2、NHMe、-OP(O)(OH)2或OMe。在其它实施方案中，L为-CH2CH2-。当L为取代的时，其通常被下列基团取代：甲基、羟基甲基、氨基甲基、甲基氨基、甲基氨基甲基、氟甲基或甲氧基甲基。
在其中L为取代的亚烷基(例如本文中所述的式–CHR”-基团)的实施方案中，L包含手性中心；在某些此类实施方案中，L具有下列立体化学：
其中[N]和[R1]分别表示其中-CH(R”)-与NR2和R1连接的位置。优选R”为-CH3、-CH2OH、-CH2NH2、-CH2NHMe、-CH2NMe2、-CH2F、-CH2OMe、-CH(OH)Me、-CH2OP(O)(OH)2或-CH(OH)CH2OH。在某些实施方案中，式(I)化合物含有具有手性构型的L，该构型超过其对映异构体，所以该化合物具有光学活性。优选此类本发明化合物基本上不含相对的对映异构体，即至少95％的化合物具有上面所示的手性。
在前述化合物的某些实施方案中，R1为芳基或杂芳基，任选如下所述被取代，通常R1选自下列的任选取代的基团：苯基、噻吩基、噻唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基和嘧啶基。对于R1，优选取代的苯基。
R1通常被至少一种选自上述实施方案中所述基团所取代。在某些实施方案中，R1为苯基、3-噻吩基、2-噻唑基、2-吡啶基或3-吡啶基，其为未取代的或者被1－2个独立选自下列的基团取代：卤素(F、Cl、Br或I)、甲基、甲氧基、-SMe、甲基磺酰基、氰基和环丙基。在某些实施方案中，R1为苯基，在至少一个[L]的间位(与L相连的R1的位置)被F、Cl、Br、I、SMe、CH2F、CHF2或甲基磺酰基取代。
在某些实施方案中，式(I)结构的-C(＝O)-NR2-L-R1位置具有下列结构，其中W1和W2独立选自：
在这些实施方案中，W1和W2至少一种通常不为H，优选W1和W2至少一种为卤代，特别是Cl、Br或I。
在本发明化合物的某些实施方案中，R6为H或Me；通常R6为H。
在上述任一种化合物的某些实施方案中，Z为N。在上述任一种化合物的代替实施方案中，Z为CR4，优选CH。
在某些实施方案中，R5为5－6元杂芳基环或苯基，可以如上面式I所述被取代。在此类实施方案中，R5可以是苯基、吡啶基、哒嗪基或嘧啶基，任选如上面所述被取代。在其它此类实施方案中，R5为含氮的5-元杂芳基环，例如吡唑、咪唑、异噁唑、噁唑、噻唑、三唑、四唑、异噻唑、吡咯等，任选如上面所述被取代；在这些实施方案中，Z优选为CH。吡唑、三唑和咪唑有时为R5的优先选择。
在其中R5为杂芳基的实施方案中，R5可以是未取代的，或者其可以被1－3个独立选自下列的基团取代：Me、Et、异丙基、丙基、丁基、叔-丁基、仲-丁基、异丁基、CF3、CN、Cl和F。
这些R5基团的某些优选的实施方案包括：
其中每个R5A独立选自H、Me、Et、丙基和异丙基。优选R5上的R5a基团不多于1或2个不为H，在大多数实施方案中，在这些基团中N上的R5A为甲基、乙基或异丙基。特别适合的基团包括1-甲基-4-吡唑、1-乙基-4-吡唑、1-异丙基-4-吡唑和3-吡唑及其互变异构体；1-甲基咪唑-2-基、1-甲基咪唑-4-基、1-甲基咪唑-5-基；及其甲基-取代的形式。
在其它实施方案中，R5为非芳族环烷基或杂环基团，例如环己基、环戊基、四氢吡喃基(例如4-四氢吡喃基)、3-氧杂环丁基、3-或4-哌啶基、4-或3-哌啶-2-酮基、3-或4-硫杂环戊烷、3-硫杂环己烷、3-四氢呋喃等。在这些实施方案中，环硫可以被氧化为亚砜或砜氧化态，这些环中的每一个可以被选自下列的1－3个基团(通常为1－2个基团)取代：氧代、Me、Et、异丙基、CF3、CN、Cl和F。这些实施方案的某些优选的示例包括：
1,4-二取代的环己基实施方案具有相对于1和4位连接的基团之间的立体化学而言的顺式或反式；在某些实施方案中，优选这些基团之间的反式相对取向。R5的适当的环烷基和杂环基实施方案包括：
R5的优选实施方案包括：
其中R5为杂环或环烷基并且是被取代的，其通常含有至少一个手性中心。在这些手性化合物中，可以分别使用R和S两种异构体以及R和S的混合物，包括外消旋混合物。本发明化合物还包括阻转异构体，杂芳基-芳基(杂芳基)键的旋转受到存在的取代基基团的阻碍；在这种情况下，包括每一种阻转异构体。当一种异构体(对映异构体、非对映异构体、阻转异构体或几何异构体)较其相对的异构体具有较高的作为ERK1或ERK2抑制剂的内在活性时，通常优选该活性较高的异构体。
本文中使用的术语“光学异构体”或“立体异构体”是指本发明指定化合物可能存在的任何各种立体异构构型，包括几何异构体。应当理解，取代基可以与碳原子的手性中心连接。术语“手性”是指与其镜像分子对具有非重叠性特征的分子，而术语“非手性”是指与其镜像分子对能够重叠的分子。本发明包括化合物的对映异构体、非对映异构体或外消旋体。“对映异构体”是彼此镜像不重叠的一对立体异构体。一对对映异构体的1:1混合物为“外消旋”混合物。在适当的时候，该术语用于命名外消旋混合物。“非对映异构体”为具有至少两个不对称原子的立体异构体，但是它们不是彼此的镜像。绝对立体化学根据Cahn-lngold-PrelogR-S系统规定。当化合物为纯对映体时，每个手性碳的立体化学可以指定为R或S。根据它们在钠D线波长处旋转平面偏振光的方向(右旋或左旋)，可以将绝对构型未知的拆分化合物指定为(+)或(-)。本文中所述的某些化合物含有一或多个不对称中心或轴，因此可以产生对映异构体、非对映异构体和其它立体异构形式，它们可以根据绝对立体化学指定为(R)-或(S)-。
根据选择的原料和合成方法，化合物可以是可能存在的异构体形式之一，或者是其混合物的形式，例如根据不对称碳原子的数目，可以是纯光学异构体或异构体混合物例如外消旋体和非对映异构体混合物。本发明应当包括所有此类可能的异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯形式。光学活性的(R)-和(S)-异构体可以采用手性合成子或手性试剂制备，或者采用常规技术拆分。除非指定，如果化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型。除非另有说明，如果化合物含有二取代的环烷基，则该环烷基取代基可以具有顺式-或反式-构型。还应当包括所有的互变异构形式。
在多种情况下，由于氨基和/或羧基基团或其相似基团的存在，本发明化合物能够形成酸和/或碱盐。本文中使用的术语“盐”是指本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“可药用的盐”。术语“可药用的盐”是指能够保持本发明化合物的生物学效能和特性的盐，其通常不具有生物学上或其它方面的不希望的特性。
可药用的酸加成盐可以采用无机酸和有机酸形成，例如乙酸盐、己二酸盐、铝、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、己酸盐、氯化物/盐酸盐、氯普鲁卡因、chlortheophyllonate、柠檬酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二胺四乙酸钙、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、乙二胺、富马酸盐、galactarate(粘酸盐)、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、羟乙酸盐、hexylresorcinate(己基间苯二酚酸盐)、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟基萘酸盐(hydroxynapthoate)(昔萘酸盐)、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂烷基硫酸锂、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、硬脂酸盐(octadecanoate)、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、普鲁卡因、丙酸盐、水杨酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、酒石酸氢盐、甲苯磺酸盐、三苯基乙酸盐和三氟乙酸盐。其它适当的盐的目录可以参考例如雷明顿药物科学(Remington'sPharmaceuticalSciences),第20版,MackPublishingCompany,Easton,Pa.,(1985)；和HandbookofPharmaceuticalsalts:Properties,Selection,andUse(药用盐手册：性能、选择和使用),Stahl和Wermuth(Wiley-VCH,Weinheim,德国,2002)。
在一个实施方案中，本发明提供了4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺的下列盐形式：乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、chlortheophyllonate、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、羟乙酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月硅烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、硬脂酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟甲磺酸盐(trifenatate)、三氟乙酸盐或羟萘甲酸盐。
在另一个实施方案中，本发明提供了4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺的盐酸盐形式。
可以用于盐衍生的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可以用于盐衍生的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
可药用的碱加成盐可以用无机碱或有机碱形成，可以具有无机或有机平衡离子。
用于此类碱盐的无机平衡离子包括例如铵盐和源自周期表I－XII族的金属。在某些实施方案中，平衡离子可以选自钠、钾、铵、具有1－4个C1-C4烷基的烷基铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别适合的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。
可以用于盐衍生的有机碱包括例如伯、仲和叔胺、取代的胺(包括天然存在的取代的胺)、环状胺、碱性离子交换树脂等。适当的有机胺包括异丙胺、苄星青霉素(benzathine)、胆碱酸盐(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。
本发明的可药用的盐可以通过常规化学方法由碱性或酸性部分合成。一般而言，此类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量的适宜的碱(例如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应制备，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计量的适宜的酸反应来制备。此类反应通常在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中进行。一般而言，如果可行，使用非水性介质如乙醚、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯、氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙醇、异丙醇或乙腈是合乎需要的。
本文给出的任意通式还旨在表示该化合物的未标记形式(即化合物中所有原子均以天然同位素丰度存在，没有同位素富集)以及同位素富集或标记形式。同位素富集或标记的化合物具有由本文给出通式所表示的结构，除了化合物的至少一个原子被相同元素的原子所替代，但是后者具有的原子质量或质量数不同于天然存在的原子质量或原子质量分布。可以掺入到富集或标记的本发明化合物中的同位素的示例包括下述元素的同位素：氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯，例如分别为2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F31P、32P、35S、36Cl、125I。本发明括本文所定义的各种同位素标记的化合物，例如那些其中存在放射性同位素(例如3H和14C)的化合物或非放射性同位素(例如2H和13C)的化合物，其存在的水平明显高于这些同位素的天然丰度。这些同位素标记的化合物可用于代谢性研究(采用14C)、反应动力学研究(采用例如2H或3H)、检测或成像技术(如正电子放射断层造影术(PET)或单光子放射计算机断层成像术(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定)，或用于患者的放射性治疗。尤其是，18F或标记的化合物可能对于PET或SPECT研究是特别理想的。同位素标记的式(I)化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术制备，或根据下面实施例和制备方法中所述类似的方法，采用适当的同位素标记试剂代替以前使用的非标记试剂制备。
另外，用较重同位素尤其是氘(例如2H或D)取代，能够提供某些治疗学优点，产生较大的代谢稳定性，例如体内半衰期延长或所需剂量减少或治疗指数的改善。应理解，在上下文中，如果以远高于天然同位素丰度的水平掺入时，氘被认为是式(I)化合物的取代基。本发明包括混合物的同位素富集形式，例如氘化形式以及非氘化形式。氘化形式可以是在单个位点氘化或者在多个位点氘化。
可以通过同位素富集因子来定义这种同位素特别是氘在同位素富集混合物中掺入的程度。本文使用的术语“同位素富集因子”意指在一个样本中指定同位素的同位素丰度与非富集样本中该同位素的天然丰度之间的比例。当本发明化合物的取代基表示为氘时，该化合物对于每个指定氘原子的同位素富集因子为至少3500(每个指定的氘原子具有52.5％的氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)或至少6633.3(99.5％氘掺入)。
本发明的可药用的溶剂化物包括那些其中结晶溶剂可以被同位素取代的那些，例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO以及非富集溶剂的溶剂化物。
含有能够作为氢键供体和/或受体的基团的本发明化合物即式(I)化合物可以与适合的共晶形成剂形成共晶。这些共晶可以通过已知的共晶形成方法由式(I)化合物制得。这些方法包括研磨、加热、共升华、共熔，或者使式(I)化合物在溶液中与共晶形成剂在结晶条件下接触并分离出由此形成的共晶。合适的共晶形成剂包括WO2004/078163中所述的那些。因此本发明还提供了含有式(I)化合物的共晶。
本文使用的术语“可药用的载体”包括任何及所有溶剂、分散介质、包衣材料(coating)、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(如抗菌剂、抗真菌剂)、等张剂、吸收延缓剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等以及上述组合，如本领域普通技术人员所知(参见例如Remington'sPharmaceuticalSciences(雷明顿药物科学)，第18版，MackPrintingCompany，1990，第1289－1329页)。除非任何传统的载体与活性成分不相容，否则预期其可以用于治疗或药学组合物中。
术语本发明化合物的“治疗有效量”是指会引起个体的生物学或医学响应的本发明化合物的量，所述响应例如减少或抑制酶或蛋白活性或改善症状、减轻状况、减缓或延迟疾病进展或预防疾病等。在一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指在施用给个体时对于下述各项有效的本发明化合物的量(1)至少部分减轻、抑制、预防和/或改善(i)由激酶例如ERK1/2介导的或(ii)与激酶例如ERK1/2活性相关的或(iii)特征为ERK1/2的活性(正常或异常)的病症、障碍或疾病，或(2)减少或抑制ERK1/2的活性，或(3)减少或抑制ERK1/2的表达。
在另一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指在施用给细胞或组织或非细胞生物学材料或培养基时对于至少部分减少或抑制ERK1/2的活性、或者至少部分减少或抑制ERK1/2的表达是有效的本发明化合物的量。
本文使用的术语“个体”是指动物。通常，所述动物是哺乳动物。个体也指例如灵长类动物(如人，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，个体是灵长类动物。在其他实施方案中，个体是人类。
本文使用的术语“抑制”指减少或抑制指定的病症、活性、作用、症状或障碍或疾病，或显著减少生物学活性或过程的基线活性。
在一个实施方案中，本文使用的术语任何疾病或病症的“治疗”，是指减轻疾病或病症(即减缓或阻止或减少疾病的发展，或其至少一种临床症状)。在另一个实施方案中，“治疗”指减轻或缓解至少一个身体参数(physicalparameter)，包括那些可能未被患者识别的身体参数。在又一个实施方案中，“治疗”指在身体上(例如稳定可识别症状)、生理上(例如稳定身体参数)或在该两方面上调节疾病或病症。在又一个实施方案中，“治疗”指延迟疾病或病症的发展或恶化。
如本文使用，如果个体将在生物学上、医学上或生活质量上受益于此类治疗，则个体为“需要”治疗的个体。
除非本文另行说明或上下文明确矛盾，本文使用的用于本发明上下文中(尤其在权利要求上下文中)的术语“一个”、“一种”、“该”以及类似的术语等应该理解为包括单数形式和复数形式。
除非本文另行说明或上下文明确矛盾，本文所述的所有方法可以以任何合适的顺序进行。本文提供的任何和所有的实例或示例性语言(如“例如”)的使用，目的仅仅是更好地说明本发明，而不是对另外要求保护的本发明的范围构成限定。
本发明化合物的任何不对称原子(例如碳等)可以以外消旋体或对映体富集形式存在，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型。在某些实施方案中，每个不对称原子的(R)-或(S)-构型具有至少50％的对映体过量、至少60％的对映体过量、至少70％的对映体过量、至少80％的对映体过量、至少90％的对映体过量、至少95％的对映体过量或至少99％的对映体过量；即对于光学活性化合物而言，其通常优选使用一种对映异构体而基本上排除另一种对映异构体。具有碳-碳不饱和双键的原子处的取代基，如果可能，可以呈现为顺(Z)-或反式(E)-形式，除非另有说明，本发明同时包括这两种形式。
因此，本文使用的本发明化合物可以为可能存在的异构体、旋转异构体、阻转异构体或互变异构体或其混合物之一的形式，例如，基本上纯的几何(顺式或反式)异构体、非对映异构体、旋光异构体(对映体)、外消旋体或其混合物。
本文使用的“基本上纯的”或“基本上不含其它异构体”是指相对于优选的异构体而言所述产物含有重量比低于5％(优选低于2％)的其它异构体。
任何得到的异构体的混合物可以基于各组分的物理化学差异而分离为纯的或基本纯的几何异构体或旋光异构体、非对映异构体、外消旋物，例如通过色谱和/或分步结晶方法分离。
任何获得的终产物或中间体的外消旋体可以通过以下已知方法拆分成旋光对映体：例如通过分离用光学活性的酸或碱获得的其非对映体盐并释放该光学活性的酸性或碱性化合物。特别的是，可以利用碱性部分将本发明化合物拆分为其旋光对映体，例如通过对采用光学活性的酸形成的盐进行分级结晶，所述酸例如酒石酸、二苯甲酰酒石酸、双乙酰酒石酸、二-O,O'-对甲苯酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸。外消旋产物还可以通过手性色谱法拆分，例如使用手性吸附剂的高效液相色谱法(HPLC)。
此外，本发明化合物包括其盐还可以以其水合物的形式获得，或包含用于其结晶的其它溶剂。本发明化合物由于自身特性可以或者通过设计可以与可药用的溶剂(包括水)形成溶剂化物；因此，本发明意欲包括溶剂化物和非溶剂化物两种形式。术语“溶剂化物”是指由本发明的化合物(包括其可药用的盐)与一或多个溶剂分子形成的分子复合物。此类溶剂分子是那些制药领域中常用的，已知它们对于接受体是无害的，例如水、乙醇等。术语“水合物”是指其中溶剂分子为水的复合物。
本发明化合物，包括其盐、水合物和溶剂化物，可由于自身特性可以或者通过设计可以形成多晶型物。
式(I)化合物可以根据本文所提供的流程和实施例制备。所述流程在某些情况下阐明了其中L为亚甲基或取代的亚烷基的化合物的制备方法，但是其中L为键或式(I)所包含的其它选择的适当的苯甲酰胺的制备方法对于技术人员而言是显而易见的，可以借鉴多种已知的必需的苯甲酰胺中间体的制备方法，所以这些方法同样适用于制备具有其它L表征的化合物。
流程A.
前体A和B可以采用已知的肽键形成条件进行偶合以制备中间体C。中间体C可以在公知的钯-辅助条件下与杂芳基硼酸(例如中间体G)偶合形成式H产物，其为式(I)化合物。用于与化合物C偶合的必需的氨基吡啶/吡嗪化合物(G)可以采用钯化学(参见上面的中间体E)通过引入需要的R5基团而制备自溴代吡啶/吡嗪，然后溴化与氨基基团邻近的基团并转化为硼酸或酯(G)。流程C阐明了该顺序的应用，包括链烯烃的氢化以获得式G化合物，其中R5为四氢吡喃。
或者，如流程B中所示，可以将化合物C转化为芳基硼酸或酯，其可以与杂芳基溴化物F偶合，再次采用已知的钯催化的偶合条件，获得本发明化合物。
流程B.
中间体F可以根据本领域中已知的方法和本文中公开的方法制备。式F的多种化合物可以根据流程C中所示方法合成自已知的氨基-溴-吡啶和-吡嗪。各种芳基、杂芳基和乙烯基硼酸酯可以采用本领域中已知的钯催化剂与溴代吡啶或溴代吡嗪偶合，获得需要的R5基团。该方法特别用于引入如式(I)中的R5的芳基或杂芳基基团。如果初始偶合产物在R5位置引入了部分不饱和的基团，如流程C所示，则可以通过常规方法将不饱和还原以获得具有R5饱和基团(例如杂环基或环烷基)的化合物。这种选择如流程C所示，其中显示了具有作为R5的4-四氢吡喃基的化合物的制备。
流程C.
流程D阐述了另一种合成路线，其中相应于式(I)中R5的基团在吡啶或嘧啶与苯甲酰胺部分偶合后被连接。该方法使得能够采用范围更宽组合的芳基、杂芳基或乙烯基(不饱和的)R5基团，如本文中所示，乙烯基R5基团可以在偶合反应后还原以提供饱和的R5基团。另外，该路线采用酰胺氮上的苄基基团进行了描述(相当于L＝任选取代的亚烷基并且R1＝任选取代的苯基)，但是由于制备酰胺中间体的原料和方法的可用性更为宽广，所以其同样适合于具有其它L和R1基团的化合物的合成。一旦杂芳基与苯甲酰胺苯基环偶合，R5可以通过钯偶合连接，其中硼酸/酯可以位于R5或位于氨基吡啶/氨基吡嗪环上。在该流程中R1＊表示苯基上的任选的取代基，选择相当于式(I)中R1上的取代基。
流程D.
流程E描述了式(I)化合物的制备方法，该方法从3-溴-2-氨基吡啶或相应的吡嗪和被硼酸或酯取代的苯甲酸酯开始。偶合后形成联芳基基团，氨基吡啶可以在温和的条件下容易地溴化，可以制备需要的酰氨基团。R5可以通过钯催化的Br置换反应自吡啶环引入。另外，硼酸酯可以位于氨基吡啶环上或位于芳基、杂芳基或乙烯基R5基团上。
流程E.
本发明还包括现行方法的任何变通方法，其中在其任何阶段获得的中间体可以用作原料并进行剩余的步骤，或者其中原料在反应条件下在位形成，或者其中反应成分以其盐或光学纯的形式使用。本发明化合物和中间体可以根据本领域技术人员通知的方法互相转化。
另一方面，本发明提供了用于合成式(I)化合物的中间体，包括式(II)化合物：
其中Z2为CH或N；
G为Br或–B(OR21)2；
其中每个R21为H或C1-4烷基，或者两个R21与它们所接连的连接基团–O-B-O-一起形成环硼酸酯；
J为H、F、Cl或Me；并且
R20为H或C1-6烷基。
在某些实施方案中，J最好为氟(F)，在其它实施方案中J为Cl。在某些实施方案中G为环硼酸酯基团，例如4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基或1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基。
另一方面，本发明提供了药用组合物，其包含本发明化合物或其可药用的盐以及至少一种可药用的载体或赋形剂。该药物组合物可被配制用于特定的给药途径，如口服给药、胃肠外给药和直肠给药等。另外，本发明的药物组合物可以制成固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、粉末或栓剂)或液体形式(包括但不限于溶液剂、混悬剂或乳剂)。丸剂或片剂可以可以根据本领域已知的方法薄膜包衣或肠溶包衣。该药物组合物可以经受常规的制药操作，例如杀菌和/或含有常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂以及辅助剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。
通常，包含本发明组合物的药用组合物为片剂或明胶胶囊，其含有作为活性成分的式(I)化合物以及一或多种下列赋形剂：
a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其镁或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还可以含有：
c)粘合剂，例如硅酸铝镁、淀粉糊剂、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，还可以含有：
d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、藻酸或其钠盐或泡腾混合物；和/或
e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂
用于包囊的适当的胶囊的选择以及用于将式I化合物配制成口服剂型的适当的赋形剂的选择均在技术人员的常规知识范围内。片剂可以采用本领域已知的方法薄膜包衣或肠溶包衣。
适于口服给药的组合物包含有效量的本发明化合物，其形式为片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、分散性粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊、或糖浆剂或酏剂。供口服使用的组合物可以根据制备药物组合物领域已知的任何方法制备，且该组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的赋形剂以便提供药学上美观或可口的制剂。片剂可以包含活性成分以及适用于片剂生产的无毒的可药用的赋形剂，包括上面列举的那些。这些赋形剂例如为：惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂未经包衣或通过已知技术包衣以延缓在胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长时期内提供持续作用。例如，可以采用延时材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服使用的制剂可以呈现为硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合；或为软明胶胶囊，其中活性成分与水或油性介质(如花生油，液体石蜡或橄榄油)混合从而在软胶囊中形成溶液剂、乳剂或分散剂。
某些可注射组合物是含水的等渗溶液或混悬剂，栓剂优选由脂肪乳或混悬剂制备。所述组合物可以被灭菌和/或含有辅助剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂(solutionpromoter)、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，它们还可包含其它治疗上有益的物质。所述组合物可以分别根据常规混合、制粒或包衣方法制备，且含有约0.1－75％或含有约1－50％的活性成分。
适用于透皮应用的组合物包含有效量的本发明化合物和适当的载体。适用于透皮递送的载体包括可吸收的可药用的溶剂以便协助穿过宿主的皮肤。例如，透皮装置呈绷带形式，其包括背衬部分、含有化合物和任选载体的贮库、在延长的时间内以可控且预定的速度递送化合物至宿主皮肤的任选的速控屏障以及将装置固定在皮肤上的工具。
用于局部应用(例如皮肤和眼睛)的合适的组合物包括水溶液、混悬剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂或可喷雾制剂，例如通过气溶胶等来递送。这种局部递送系统特别适用于真皮应用，例如用于治疗皮肤癌，例如预防性使用的防晒霜、洗剂、喷雾剂等。因此，它们特别适用于在本领域所熟知的局部制剂、包括化妆品的制剂中使用。此类制剂可以包含增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
如本文使用的局部应用还可涉及吸入或鼻内应用。它们可适宜地如下递送：例如从干粉吸入器以干粉形式(单独，以混合物形式，例如含有乳糖的干掺混物；或例如含有磷脂的混合型组分颗粒)，或者从压力容器、泵、喷雾器、雾化器或雾化吸入器以喷雾剂的形式，可以使用或不使用合适的抛射剂。
本发明还提供了含有作为活性成分的本发明化合物的无水的药用组合物和剂型，因为需要化合物在给药之前尽可能少地暴露于水。本发明的无水的药用组合物和剂型可以采用无水成分或含水分低的成分并且在低水分或低湿度的条件下制备。无水药用组合物可以如此制备并储存从而保持其无水特性。因此，无水组合物可以采用已知的防水材料包装从而使其能够包含在适当的制剂套盒中。适当的包装的示例包括但不限于密封的铝箔、塑料、单位剂量容器(如小瓶)、泡罩包装和条带包装。
本发明还提供了药用组合物和剂型，其包含一或多种能够降低作为活性成分的本发明化合物降解速率的成分。中本文中被称为“稳定剂”的此类成分包括但不限于抗氧剂例如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。
游离形式或盐形式的式I化合物具有有价值的药理学特性，例如它们能够调节或抑制ERK1和/或ERK2的活性，如下面章节中提供的实验数据所示，因此，它们可以如本文中所述的用于治疗，或者用作研究用的化学品，例如作为工具化合物进一步理解EKR1/2抑制的作用或生物化学通路(MAPK)的抑制作用。
因此，在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)化合物或本文中所述式(I)范围内任何实施方案的化合物在治疗中的用途，或者在生产药物中的用途。在另一个实施方案中，所述治疗或药物可以用于通过抑制ERK1和/或ERK2而治疗的疾病。在另一个实施方案中，本发明化合物可以用于治疗癌症，包括但不限于本文中所述的那些癌症。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗通过抑制ERK1和/或ERK2可以治疗的疾病的方法，该方法包括给予治疗有效量的式(I)或(IA)化合物或本文中所述本发明的任何实施方案的化合物。在另一个实施方案中，所述疾病选自上述适当的病症目录。该方法通常包括给予需要此类治疗的个体有效量的本文中所述化合物或包含此类化合物的药用组合物。化合物可以提供适当的方法给药，例如本文中所述那些方法，给药可以由主治医师以一定间隔重复进行。因此，本发明提供了式I和IA化合物或其任何亚类用于治疗病症，所述疾病由ERK1/2活性介导或与ERK1/2活性过度相关或ERK1/2活性异常，包括上面列举的那些。
因此，在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)化合物或本文中所述此类化合物的任何实施方案在生产药物中的用途。在另一个实施方案中，所述药物用于治疗可以通过抑制ERK1和/或ERK2而治疗的疾病。在另一个实施方案中，所述疾病为癌症，例如适当地选自上述目录的癌症。
在某些实施方案中，化合物可以与一或多种联合治疗药物组合使用。适当的联合治疗药物包括抗癌药、镇痛药、抗炎药等。在某些实施方案中，组合物包含作用于RAF通路的联合治疗药物，例如B-RAF抑制剂或C-Raf抑制剂。
在一个实施方案中，本发明提供了套盒，其包含两种或多种不同的药用组合物，其中至少一种含有式(I)化合物。在一个实施方案中，所述套盒包括分别保存所述组合物的工具，例如容器、独立的瓶子或独立的铝箔包装。此类套盒的示例为泡罩包装，通常用于包装片剂、胶囊等。
本发明的套盒可以用于给予不同的剂型，例如口服或胃肠外剂型，用于以不同的剂量间隔给予不同的组合物或者用于彼此独立的不同组合物的间隔给药。为了有助于顺应性，本发明的套盒通常包括给药说明书。
在本发明的组合疗法中，本发明化合物和其它联合治疗药物可以由相同或不同的生产商生产和/或配制。此外，本发明化合物和其它治疗药物在组合疗法中可以汇集到一起使用：(i)在将组合产品发放给医师之前汇集(例如，在套盒包含本发明化合物和其它治疗药物的情况下)；(ii)在即将给药之前由医师自己(或者在医师的监督下)汇集；(iii)由患者自己汇集，例如本发明化合物和其它治疗药物按顺序给药期间。
因此，本发明提供了式(I)化合物在治疗由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症中的用途，其中所述有药物被制备用于与其它治疗药物一起给药。本发明还提供了其它联合治疗药物用于治疗疾病或病症中的用途，其中所述联合药物与式(I)化合物一起给药。
本发明还提供了式(I)化合物，其用于治疗由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症的方法中，其中式(I)化合物被制备用于与其它治疗药物一起给药。本发明还提供了其它联合治疗药物，其用于治疗由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症的方法中，其中其它联合治疗药物被制备用于与式(I)化合物一起给药。本发明还提供了式(I)化合物，其用于治疗由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症的方法中，其中式(I)化合物与其它联合治疗药物一起给药。本发明还提供了其它联合治疗药物，其用于治疗由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症的方法中，其中其它联合治疗药物与式(I)化合物一起给药。
本发明还提供了式(I)化合物在治疗由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症中的用途，其中所述患者为在采用其它治疗药物治疗之前或之后(例如24小时内)的患者。本发明还提供了联合治疗药物在治疗由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症中的用途，其中所述患者之前(例如24小时内)已经采用式(I)化合物治疗。
在一个实施方案中，其它治疗药物(联合治疗药物或碰巧联合治疗药物(justco-agent))为用于治疗癌症的化合物，其通常为FDA批准用于治疗至少一种癌症的药物。适当的联合治疗药物包括埃罗替尼、硼替佐米、氟维司群、苏尼替尼(sunitib)、甲磺酸伊马替尼、来曲唑、finasunate、铂类(例如奥沙利铂、卡铂和顺铂)、finasunate、氟尿嘧啶、雷帕霉素、亚叶酸、拉帕替尼、lonafamib、索拉非尼(sorafenib)、吉非替尼、喜树碱(capmtothecin)、拓扑替康、苔藓抑素(bryostatin)、adezelesin、anthracyclin、卡折来新(carzelesin)、比折来新(bizelesin)、尾海兔素(dolastatin)、auristatins、多卡霉素(duocarmycin)、eleutherobin、紫杉醇类(例如紫杉醇或多西他赛)、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、强的松或强的松龙，其它烷化剂类例如氮芥、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺，抗代谢物例如硫唑嘌呤或巯基嘌呤，其它微管抑制剂(长春花生物碱类，如长春新碱、长春碱、长春瑞滨和长春地辛以及紫杉烷类)，鬼臼毒素(依托泊苷、替尼泊苷、磷酸依托泊苷和表鬼臼毒素)，拓扑异构酶抑制剂，其它细胞毒素例如放线菌素、柔红霉素、戊柔比星、伊达比星、依决洛单抗、表柔比星、博莱霉素、普卡霉素、丝裂霉素以及其它抗癌抗体(西妥昔单抗、贝伐单抗、替伊莫单抗、阿巴伏单抗(abagovomab)、阿德木单抗(adecatumumab)、阿托珠单抗(afutuzumab)、培化阿珠单抗(alacizumab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、麻安莫单抗(anatumomab)、阿泊珠单抗(apolizumab)、巴维昔单抗(bavituximab)、贝利木单抗(belimumab)、比伐单抗-DM1(bivatuzumabmertansine)、兰妥莫单抗(blinatumomab)、brentuximabvedotin、美坎珠单抗(cantuzumabmertansine)、卡妥索单抗(catumazomab)、西妥昔单抗(cetuximab)、西他土珠单抗(citatuzumabbogatox)、西妥木单抗(cixutumumab)、clivatuzumabtetraxetan、可那木单抗(conatumumab)、达西珠单抗(dacetuzumab)、达利珠单抗(daclizumab)、迪莫单抗(detumomab)、依美昔单抗(ecromeximab)、依决洛单抗(edrecolomab)、埃罗妥珠单抗(elotuzumab)、依帕珠单抗(epratuzumab)、厄马索单抗(ertumaxomab)、埃达珠单抗(etaracizumab)、farletuzumab、芬妥木单抗(figitumumab)、夫苏木单抗(fresolimumab)、加利昔单抗(galiximab)、gembatumumabvedotin、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、替伊莫单抗(ibritumomabtiuxetan)、伊珠单抗奥佐米星(inotuzumabozogamicin)、英妥木单抗(intetumumab)、伊匹木单抗(ipilimumab)、伊妥木单抗(iratumumab)、拉贝珠单抗(labetuzumab)、来沙木单抗(lexatumumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、鲁卡木单抗(lucatumumab)、鲁昔单抗(lumilisimab)、马帕木单抗(mapatumumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、米拉珠单抗(milatuzumab)、米妥莫单抗(mitumomab)、他那可单抗(nacolomabtafenatox)、他那莫单抗(naptumomabestafenatox)、奈昔木单抗(necitumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、olaratumab、莫奥珠单抗(oportuzumabmonatox)、奥戈伏单抗(oregovomab)、帕尼单抗(panitumumab)、pemtumomab、帕妥珠单抗(pertuzumab)、平妥莫单抗(pintumomab)、普托木单抗(pritumumab)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、利妥木单抗(rilotumumab)、罗妥木单抗(robatumumab)、利妥昔单抗(rituximab)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、他珠单抗(tacatuzumabtetraxetan)、帕他莫单抗(taplitumomabpaptox)、替妥莫单抗(tenatumomab)、替西木单抗(ticilimumab)、替加珠单抗(tigatuzumab)、托西莫单抗(tositumomab)或131I-托西莫单抗、曲妥珠单抗(trastuzumab)、曲美木单抗(tremelimumab)、西莫白介素单抗(tuocotuzumabcelmoleukin)、维妥珠单抗(veltuzumab)、维西珠单抗(visilizumab)、volocixumab、伏妥莫单抗(votumumab)、扎芦木单抗(zalutumumab)、扎木单抗(zanolimumab)、IGN-101、MDX-010、ABX-EGR、EMD72000、ior-t1、MDX-220、MRA、H-11scFv、huJ591、TriGem、TriAb、R3、MT-201、G-250、ACA-125、Onyvax-105、CD:-960、Cea-Vac、BrevaRexAR54、IMC-1C11、神经胶质瘤b-H、ING-1、抗-LCGMAbs、MT-103、KSB-303、Therex、KW2871、抗-HMI.24、抗-PTHrP、2C4抗体、SGN-30、TRAIL-RIMAb、前列腺癌抗体、H22xKi-r、ABX-Mai、Imuteran、Monopharm-C和抗体-药物轭合物(其包含任何上述药物，特别是阿里他汀(auristatins)MMAE和MMAF、美登木素生物碱类如DM-1、刺孢霉素类或各种细胞毒素)。除非另有说明，优选的联合治疗药物包括威罗菲尼(vemurafinib)、达拉非尼(debrafinib)、LGX818、曲美替尼(trametinib)、MEK162、LEE011、PD-0332991、帕比司他(panobinostat)、伏立诺他(verinostat)、罗咪酯肽(romidepsin)、西妥昔单抗(cetuximab)、吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼(erlotinib)、拉帕替尼(lapatinib)、帕尼单抗(panitumumab)、凡德他尼(vandetanib)、INC280、依维莫司(everolimus)、西罗莫司(simolimus)、BMK120、BYL719和CLR457。
本发明的药用组合物或组合产品可以为单位剂量，对于约50－70kg的主体而言，其为约1－2000mg的活性成分，或约1－500mg或约1－250mg或约1－150mg或约0.5－100mg或约1－50mg的活性成分。化合物、药用组合物或其组合的治疗有效量取决于个体的种属、体重、年龄和个体健康情况、待治疗的疾病或病症及其严重程度。医师、临床医师或兽医师可以容易地确定预防、治疗或抑制疾病或病症所必需的每种活性成分的有效量。
上述剂量特性可以通过体外和体内试验方便地采用哺乳动物例如小鼠、大鼠、犬、猴或其离体器官、组织和制品确定。本发明化合物可在体外以溶液如水溶液形式施用，可以在体内经肠道、胃肠外或有利地经静脉内例如作为混悬液或水溶液施用。体外的剂量可以是约10-3摩尔至10-9摩尔浓度。体内的治疗有效量根据给药途径可以是约0.1－500mg/kg或约1－100mg/kg。
本发明化合物可以与一种或多种联合治疗药物(在本文中也称为联合药物)同时施用或在其之前或之后施用。本发明的化合物可以与联合药物通过相同或不同的施用途径分别施用，或者与联合药物在同一药物组合物中一起施用。
在一个实施方案中，本发明提供了产品，其包含式(I)化合物和至少一种其它联合治疗药物，作为组合制品的形式，用于在治疗中同时、分别或相继使用。在一个实施方案中，所述治疗是对由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症(例如癌症)的治疗。作为组合制品提供的产品包括在同一药物组合物中同时包含式(I)化合物和其它联合治疗药物的组合物，或者式(I)化合物和其它联合治疗药物是分开的形式，例如药盒形式。
在一个实施方案中，本发明提供了药用组合物，其包含式(I)化合物和其它联合治疗药物。任选，所述药用组合物可以含有上述可药用的载体。
在一个实施方案中，本发明提供了套盒，其包含两种或更多种分开的药物组合物，其中至少一种含有式(I)化合物。在一个实施方案中，该套盒包含分别盛装所述组合物的器具，例如容器、分开的瓶或分开的铝箔包装。这类套盒的示例有泡罩包装，通常用于包装片剂、胶囊剂等。
本发明的套盒可用于施用不同的剂型，例如口服和肠胃外剂型，用于以不同的给药间隔施用不同的组合物，或者用于针对彼此逐步增加不同的组合物的剂量。为了有助于依从性，本发明的套盒通常包含给药说明书。
在本发明的组合疗法中，本发明化合物和其它联合治疗药物可以由相同或不同的生产商生产和/或配制。此外，本发明化合物和其它治疗药物在组合疗法中可以汇集到一起使用：(i)在将组合产品发放给医师之前汇集(例如，在套盒包含本发明化合物和其它治疗药物的情况下)；(ii)在即将给药之前由医师自己(或者在医师的监督下)汇集；(iii)由患者自己汇集，例如本发明化合物和其它治疗药物按顺序给药期间。
因此，本发明提供了式(I)化合物用于治疗疾病或病症的用途，所述疾病或病症由ERK1和/或ERK2介导，其中制备药物用于与其它联合治疗药物一起施用。本发明还提供了其它联合治疗药物用于治疗疾病或病症的用途，其中该药物与式(I)化合物一起施用。与本发明化合物一起使用的适当的联合治疗药物通常根据待治疗的病症选择。例如在治疗黑素瘤时，联合治疗药物可以选自：阿地白介素、达拉非尼、达卡巴嗪、DTIC-Dome(达卡巴嗪)、IntronA(重组干扰素Alfa-2b)、易普利姆玛、Mekinist(曲美替尼)、聚乙二醇干扰素Alfa-2b、PEG-Intron(聚乙二醇Alfa-2b)、Proleukin(阿地白介素)、重组干扰素Alfa-2b、Sylatron(聚乙二醇干扰素α-2b)、Tafinlar(达拉非尼)、曲美替尼、维罗非尼、Yervoy(易普利姆玛)和Zelboraf(维罗非尼)。对于卵巢癌的治疗而言，联合治疗药物可以选自：阿霉素RDF(盐酸多柔比星)、卡铂、癌得散(环磷酰胺)、顺铂、环磷酰胺、环磷氮介(环磷酰胺)、盐酸多柔比星、Dox-SL(盐酸多柔比星脂质体)、DOXIL(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸多柔比星脂质体、Evacet(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸吉西他滨、健择(盐酸吉西他滨)、Hycamtin(盐酸拓扑替康)、LipoDox(盐酸多柔比星脂质体)、Neosar(环磷酰胺)、紫杉醇、Paraplat(卡铂)、Paraplatin(卡铂)、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)、泰素(紫杉醇)和盐酸拓扑替康。对于甲状腺癌的治疗而言，联合治疗药物可以选自：阿霉素PFS(盐酸多柔比星)、阿霉素RDF(盐酸多柔比星)、苹果酸卡博替尼、Caprelsa(凡德他尼)、Cometriq(苹果酸卡博替尼)、盐酸多柔比星和凡德他尼。对于结肠癌的治疗而言，联合治疗药物可以选自：Adrucil(氟尿嘧啶)、阿瓦斯汀(贝伐单抗)、贝伐单抗、盐酸伊立替康和山梨醇注射剂(盐酸伊立替康)、卡培他滨、西妥昔单抗、Efudex(氟尿嘧啶)、Eloxatin(奥沙利铂)、爱必妥(西妥昔单抗)、Fluoroplex(氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、盐酸伊立替康、甲酰四氢叶酸钙、奥沙利铂、帕尼单抗、瑞戈非尼、Stivarga(瑞戈非尼)、Vectibix(帕尼单抗)、亚叶酸钙制剂(甲酰四氢叶酸钙)、Xeloda(卡培他滨)、Zaltrap(阿柏西普)和阿柏西普。对于肺癌的治疗而言，联合治疗药物可以选自：Abitrexate(氨甲蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白-稳定的纳米颗粒制剂)、马来酸阿法替尼、力比泰(培美曲塞二钠)、阿瓦斯汀(贝伐单抗)、贝伐单抗、卡铂、顺铂、克唑替尼、盐酸厄洛替尼、Folex(氨甲蝶呤)、FolexPFS(氨甲蝶呤)、吉非替尼、Gilotrif(马来酸阿法替尼)、盐酸吉西他滨、健择(盐酸吉西他滨)、Iressa(吉非替尼)、氨甲蝶呤、氨甲蝶呤LPF(氨甲蝶呤)、Mexate(氨甲蝶呤)、Mexate-AQ(氨甲蝶呤)、紫杉醇、紫杉醇白蛋白-稳定的纳米颗粒制剂、Paraplat(卡铂)、Paraplatin(卡铂)、培美曲塞二钠、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)、Tarceva(盐酸厄洛替尼)、泰素(紫杉醇)和赛可瑞(克唑替尼)。对于胰腺癌的治疗而言，联合治疗药物可以选自：Adrucil(氟尿嘧啶)、氟优(氟尿嘧啶)、盐酸厄洛替尼、Fluoroplex(氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、盐酸吉西他滨、健择(盐酸吉西他滨)、丝裂霉素C、丝裂霉素(丝裂霉素C)、突变霉素(丝裂霉素)和特罗凯(盐酸厄洛替尼)。对于宫颈癌的治疗而言，联合治疗药物可以选自：硫酸博来霉素(博来霉素)、博来霉素、顺铂、Hycamtin(盐酸拓扑替康)、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)和盐酸拓扑替康。对于头颈癌的治疗而言，联合治疗药物可以选自：Abitrexate(氨甲蝶呤)、Adrucil(氟尿嘧啶)、Blenoxane(博来霉素)、博来霉素、西妥昔单抗、顺铂、多西他赛、Efudex(氟尿嘧啶)、爱必妥(西妥昔单抗)、Fluoroplex(氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、Folex(氨甲蝶呤)、FolexPFS(氨甲蝶呤)、氨甲蝶呤、氨甲蝶呤LPF(氨甲蝶呤)、Mexate(氨甲蝶呤)、Mexate-AQ(氨甲蝶呤)、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)和泰索帝(多西他赛l)。对于白血病包括CMML的治疗而言，联合治疗药物可以选自：Bosulif(博舒替尼)、博舒替尼、癌得散(环磷酰胺)、环磷酰胺、阿糖孢苷、Cytosar-U(阿糖孢苷)、环磷氮介(环磷酰胺)、达沙替尼、格列卫(甲磺酸伊马替尼)、Iclusig(盐酸普纳替尼)、甲磺酸伊马替尼、Neosar(环磷酰胺)、尼洛替尼、高三尖杉酯碱、盐酸普纳替尼、Sprycel(达沙替尼)、Synribo(高三尖杉酯碱)、TarabinePFS(阿糖胞苷)和Tasigna(尼洛替尼)。
本发明还提供了式(I)化合物，其用于治疗由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症的方法中，其中式(I)化合物被制备用于与其它治疗药物一起给药。本发明还提供了其它联合治疗药物，其用于治疗由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症的方法中，其中其它联合治疗药物被制备用于与式(I)化合物一起给药。本发明还提供了式(I)化合物，其用于治疗由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症的方法中，其中式(I)化合物与其它联合治疗药物一起给药。本发明还提供了其它联合治疗药物，其用于治疗由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症的方法中，其中其它联合治疗药物与式(I)化合物一起给药。
本发明还提供了式(I)化合物在治疗由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症中的用途，其中所述患者预先(例如24小时内)采用其它治疗药物治疗。本发明还提供了联合治疗药物在治疗由ERK1和/或ERK2介导的疾病或病症中的用途，其中所述患者预先(例如24小时内)采用式(I)化合物治疗。
能够提供特别治疗益处的具体各个组合产品包含本发明化合物和至少一种选自下列抑制剂的化合物：BRAF、MEK、CDK4/6、SHP-2、HDAC、EGFR、MET、mTOR、PI3K和AKT。这些抑制剂的示例包括维罗非尼、达拉非尼、LGX818、曲美替尼、MEK162、LEE011、PD-0332991、帕比司他、伏立诺他(verinostat)、罗米地辛、西妥昔单抗、吉非替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、帕尼单抗、凡德他尼、INC280、依维莫司、西罗莫司、BMK120、BYL719和CLR457。
下列实施例意在阐述本发明，不应被视为对其加以限定。温度均为摄氏度。除非另有说明，所有的蒸发均在减压下进行，通常在约15mmHg至100mmHg(＝20－133mbar)。终产物、中间体和原料的结构通过标准分析方法确证，例如微量元素分析和光谱特性分析，例如MS、IR、NMR。
用于合成本发明化合物的所有的原料、构建模块、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂既可以获自商业，或者可以通过本领域技术人员已知的有机合成方法制备(Houben-Weyl第4版.1952,有机合成方法(MethodsofORGANICSYNTHESIS),Thieme,第21卷)。另外，本发明化合物可以参考下列实施例根据本领域技术人员已知的有机合成方法生产。
化合物和/或中间体可以通过高效液相色谱(HPLC)采用配备2695SeparationModule的WatersMillennium色谱系统(Milford,MA)定性测定。分析柱为反相PhenomenexLunaC18-5μ,4.6×50mm，获自Alltech(Deerfield,IL)。采用梯度洗脱(流速2.5mL/min)，自5％乙腈/95％水开始并逐步增加到100％乙腈，10分钟。所有溶剂均含有0.1％的三氟乙酸(TFA)。化合物通过紫外(UV)吸收于220或254nm检测。HPLC溶剂获自Burdick和Jackson(Muskegan,MI)或FisherScientific(Pittsburgh,PA)。
质谱分析在WatersSystem上进行(WatersAcquityUPLC和WatersSQD质谱检测仪；柱：PhenomenexKinetex2.6umC18,柱体积4.6×50mm；柱温50℃)。梯度洗脱：含有0.1％TFA的2－98％的乙腈水溶液洗脱1.5min；流速1.2mL/min(或者Polar梯度洗脱液1－30％洗脱1.3min，NonPolar梯度洗脱液55－98％洗脱1.3min)；质谱分子量扫描范围150－850；或150－1900。锥电压20V。除非另有说明，所有质量均以质子化的母离子的质量报告。核磁共振(NMR)分析均对选择的化合物采用Varian400MHzNMR(PaloAlto,CA)进行。光谱对照为TMS或已知化学位移的溶剂。
X-射线粉末衍射(XRPD)如下进行：
技术人员应当理解，“图3的表”中的各种峰的相对强度取决于多种因素，例如X-射线束中结晶的定向效应或待分析物质的纯度或样品的结晶度。峰位置也可能由于样品高度的变化而移动，但是峰位置如“图3的表”中所定义基本保持不变。技术人员还应当理解，采用不同波长的测定导致不同的位移，根据Bragg方程–nλ＝2dsinθ计算。然而，也可以通过采用其他波长获得的此类另外的XRPD图谱表示相同的物质。
差示扫描量热法/热重量分析(DSC/TGA)如下进行：
设备：TA DSC Q2000/TGA Q5000
温度范围：室温至300℃
扫描频率：10°/min
氮流速：50ml/min
本领域技术人员应当理解，观察峰的轻微变化可能是由于采用的具体光谱仪和分析者的样品制备技术水平。每个峰值的指定均可能存在一些误差范围(+/-cm-1)。
除非另有说明或者在下面目录中有定义，本文中采用的缩写具有本领域中的常规意义。
ATP腺苷5'-三磷酸盐
BINAP外消旋2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘
BOC叔-丁氧基羰基
br宽峰
BSA牛血清白蛋白
d二重峰
dd双二重峰
DCM二氯甲烷
DIEA二乙基异丙胺
DME1,4-二甲氧基乙烷
DMFN,N-二甲基甲酰胺
DMSO二甲基亚砜
DTT二硫苏糖醇
EDTA乙二胺四乙酸
ESI电喷雾离子化
EtOAc乙酸乙酯
FCC快速柱色谱
h小时
HBTU1-[二(二甲基氨基)亚甲基]-1H-苯并三唑鎓六氟磷酸盐(1-)3-氧化物
HOBt1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HPLC高效液相色谱
IR红外光谱
LCMS液相色谱和质谱
MeOH甲醇
MS质谱
MW微波
m多重峰
min分钟
mL毫升
m/z质荷比
NMR核磁共振
ppm百万分之
PyBOP苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷六氟磷酸盐
rac外消旋
rt室温
s单峰
t三重峰
TFA三氟乙酸
THF四氢呋喃
Tris·HCl氨基三(羟基甲基)甲烷盐酸盐
实施例
下面的实施例举例说明了本发明的某些实施方案以及如何制备和使用它们，它们不应当限定本发明的范围。
方法1
实施例1
(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺的合成
流程1
步骤1.5-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺
向硼酸酯(6.64g,31.6mmol)、5-溴吡嗪-2-胺(5g,28.7mmol)和PdCl2(dppf)(2.1g,2.87mmol)的溶液中加入DME(71.8mL)和2MNa2CO3溶液(24mL)。将反应混合物于90℃加热15h。反应混合物用EtOAc处理。有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(EtOAc庚烷溶液梯度洗脱)，获得5-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺，57％的收率。LCMS(m/z):178.1(MH+),0.34min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.17-8.03(m,1H),8.04-7.88(m,1H),6.57-6.41(m,1H),4.68-4.42(m,2H),4.42-4.29(m,2H),4.06-3.84(m,2H),2.68-2.47(m,2H)。
步骤2.5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺
将5-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺(2.7g,15.24mmol)和Pd-C(10％,Degussa类型)(1.6g,1.5mmol)的MeOH(50mL)溶液通过氮气流脱气15min。配备氢气囊后，将反应混合物于室温下搅拌15h。粗品产物通过硅藻土垫过滤，用EtOAc洗涤。真空浓缩挥发物，获得5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺，可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):180.3(MH+),0.28min。
步骤3.3-溴-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺
于0℃向冰冷的5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺(2.8g,15.6mmol)的CH3CN(52mL)溶液中分二次加入NBS(2.78g,15.62mmol)。将反应混合物于0℃搅拌1h。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和的碳酸钠溶液、水、盐水洗涤干燥并浓缩。粗品3-溴-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺(3.9g,97％)无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):258/260(MH+),0.52min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.83(s,1H),4.90(br.s.,2H),4.14-4.02(m,2H),3.59-3.43(m,2H),2.83(d,J＝5.5Hz,1H),1.91–1.77(m,4H)。
步骤4.(S)-4-溴-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
向4-溴苯甲酸(892mg,4.44mmol)的THF(9.9mL)溶液中加入(S)-2-氨基-2-苯基乙醇(609mg,4.44mmol)、DIEA(1.9mL,11.1mmol)、PyBroP(2.5g,5.32mmol)和HOBT(815mg,5.32mmol)。将反应混合物于室温下搅拌20h。反应混合物用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤。经无水硫酸钠干燥后，过滤并真空浓缩，粗品产物经快速色谱纯化(EtOAc的DCM溶液梯度洗脱)，获得(S)-4-溴-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺(850mg,60％)。LCMS(m/z):338.1(MH+),0.61min。
步骤5.(S)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺
向(S)-4-溴-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼杂环戊烷(B2(PIN)2)(238mg,0.937mmol)、Pd2(dba)3(21.45mg,0.023mmol)、三环己基膦(19.71mg,0.070mmol)的二氧六环(1.562mL)溶液中加入乙酸钾(138mg,1.405mmol)。将反应混合物通过氮气流脱气15min。反应混合物于100℃加热过夜。用EtOAc稀释后，反应混合物通过硅藻土过滤。浓缩后，(S)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):368.3(MH+),0.88min(为硼酸酯)和286.1(MH+),0.49min(为相应的硼酸)。
步骤6.(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
向3-溴-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺(154mg,0.418mmol)、(S)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(90mg,0.349mmol)和PdCl2(dppf)(25.5mg,0.035mmol)的溶液中加入二氧六环(2.3mL)和2MNa2CO3溶液(1.163mL)。将反应混合物在微波合成器中加热(120℃,10min)。将反应混合物用EtOAc处理。有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物通过制备性HPLC纯化。合并纯组分，用碳酸钠溶液游离碱化，用EtOAc萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空干燥。将纯的固体溶于MeCN/水(1:1,6mL)，冷冻干燥获得(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺，为游离碱(46％)。LCMS(m/z):419.2(MH+),0.58min；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.74(d,J＝12Hz,1H),7.99(d,J＝8Hz,2H),7.88(s,1H),7.79(d,J＝12Hz,2H),7.37(d,J＝8Hz,2H),7.29(m,2H),7.22(m,1H),5.99(bs,1H),5.07(m,1H),3.91(m,2H),3.67(m,2H),3.41(m,2H),2.82(m,1H),1.72(m,4H)。
3-氟-4-(3-(甲基磺酰基)苄基氨基甲酰基)苯基硼酸的合成
流程2
将4-二羟硼基-2-氟苯甲酸(218mg,1.2mmol)、(3-(甲基磺酰基)苯基)-甲胺(200mg,1.08mmol)、DIEA(0.754mL,4.32mmol)和TBTU(381mg,1.2mmol)在DMF(2mL)中的混合物于室温下搅拌2天，然后将反应混合物用水稀释(10mL)，产物沉淀为胶状物，离心分离上清液，胶状残留物用水(3mL)超声处理，胶状残留物在高真空下进一步干燥，获得3-氟-4-(3-(甲基磺酰基)苄基氨基甲酰基)-苯基硼酸(335mg,88％)，为白色泡沫状物。LCMS(m/z):352.1(MH+),0.51min。
(+/-)-(3-氟-4-((2,2,2-三氟-1-苯基乙基)氨基甲酰基)苯基)硼酸的合成
流程3
将4-二羟硼基-2-氟苯甲酸(54mg,0.294mmol)的DCM(1468μL)混合物冷却至0℃。然后加入ghosez试剂N,N,3-三甲基丁-2-烯-2-胺(65.8μL,0.587mmol)，将全部混合物于室温下搅拌20min。将混合物加至TEA(246μL,1.762mmol)、2,2,2-三氟-1-苯基乙胺(59.1mg,0.338mmol)和DCM(1468μL)的混合物中。将反应物于室温下搅拌2h。向反应混合物中加入EtOAc，用饱和的碳酸氢钠、水洗涤，经硫酸钠干燥。过滤并浓缩，获得粗品产物，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):342.2(MH+),0.84min。
(R)-1-(2-氟苯基磺酰基)哌啶-3-胺的合成
将(R)-3-Boc-氨基哌啶(1.05g,5.25mmol)溶于DCM(10mL)，然后加入三乙胺(1.10mL,7.89mmol)。于室温下向该溶液中加入2-氟苯磺酰氯(1.127g,5.79mmol)。2h后，通过LCMS监测发现反应完成，用水稀释，用DCM萃取(30mL)，分离有机层，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，其可以直接用于下一步骤。将上述粗品产物溶于DCM(25mL)，一次性加入TFA(10mL)。反应混合物通过LCMS监测。1h后，真空除去TFA，然后将残留物悬浮于3NHCl中，用乙醚洗涤。将水层碱化，用DCM萃取，分离DCM层，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得873mg的(R)-1-((2-氟苯基)磺酰基)哌啶-3-胺，为游离碱目标产物。LCMS(m/z):255.5(MH+),0.49min。
(R)-1-(苯基磺酰基)哌啶-3-胺的合成
将(R)-3-Boc-氨基哌啶(0.843g,4.21mmol)溶于DCM(10mL)，然后加入三乙胺(0.88mL,6.31mmol)。于室温下向该溶液中加入苯磺酰氯(0.818g,4.63mmol)。2h后，通过LCMS监测发现反应完成，用水稀释，用DCM萃取(30mL)，分离有机层，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，将其直接用于下一步骤。将上述粗品产物溶于DCM(25mL)，一次性加入TFA(10mL)。反应混合物通过LCMS监测。3h后，观察到Boc-去保护完成。该阶段后，真空除去TFA，然后将残留物悬浮于3NHCl中，用乙醚洗涤。碱化水层，用DCM萃取，分离DCM层，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得850mg的(R)-1-(苯基磺酰基)哌啶-3-胺，为游离碱目标产物。LCMS(m/z):241.4(MH+),0.43min。
(R)-3-氟-4-(1-(2-氟苯基磺酰基)哌啶-3-基氨基甲酰基)苯基硼酸的合成
流程4
向4-二羟硼基-2-氟苯甲酸(160mg,0.870mmol)、(R)-1-(2-氟苯基磺酰基)哌啶-3-胺(225mg,0.870mmol)和DIEA(456μL,2.61mmol)的THF(1450μL)和DMF(1450μL)溶液中加入HOAt(237mg,1.740mmol)和EDC(417mg,2.175mmol)。于室温下搅拌3h后，反应混合物用EtOAc萃取。有机层用NaHCO3、水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，获得(R)-3-氟-4-(1-(2-氟苯基磺酰基)哌啶-3-基氨基甲酰基)苯基硼酸，其无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):425.2(MH+),0.72min。
4-(2,2-二氟-1-苯基乙基氨基甲酰基)-3-氟苯基硼酸的合成
流程5
步骤1.2,2-二氟-1-苯基乙胺
于室温下向2,2-二氟-1-苯基乙酮(1g,6.4mmol)的甲苯(32mL)溶液中加入LiHMDS(1M的THF溶液)(7.05mL,7.05mmol)。将反应混合物搅拌30min，随后加入BH3-DMS(1.216mL,12.81mmol)。将反应混合物搅拌1h。于0℃冷却后，5分钟内小心地加入2NNaOH水溶液(小心！气体溢出)。将反应物搅拌1h。分层，用水和盐水洗涤。经硫酸钠干燥后，加入HCl的MeOH溶液(7.17mL,8.97mmol)，形成白色沉淀。过滤沉淀，用乙醚洗涤，真空干燥，获得2,2-二氟-1-苯基乙胺(21％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.49(s,5H),6.52-6.07(m,1H),4.78-4.69(m,2H)。
步骤2.4-(2,2-二氟-1-苯基乙基氨基甲酰基)-3-氟苯基硼酸
向4-二羟硼基-2-氟苯甲酸(200mg,1.087mmol)、2,2-二氟-1-苯基乙胺(232mg,1.196mmol)和DIEA(0.570mL,3.26mmol)的THF(3.866mL)和DMF(0.483mL)溶液中加入HOAt(296mg,2.175mmol)和EDC(521mg,2.72mmol)。于室温下搅拌3h后，加入10％柠檬酸溶液(pH～3)，用2-甲基THF和EtOAc(1:1)萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。获得粗品4-(2,2-二氟-1-苯基乙基氨基甲酰基)-3-氟苯基硼酸(90％)，无需纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):375.3(MH+),0.48min.
4-苄基-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂-5(2H)-酮的合成
流程6
步骤1.N-苄基-4-溴-2-氟-N-(2-羟基乙基)苯甲酰胺
于室温下向4-溴-2-氟苯甲酰氯(1g,4.21mmol)的THF(14.04mL)溶液中加入DIEA(1.103mL,6.32mmol)和2-(苄基氨基)乙醇(0.764g,5.05mmol)。将反应混合物搅拌过夜。反应混合物用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤。经无水硫酸钠干燥后，过滤并真空浓缩，粗品N-苄基-4-溴-2-氟-N-(2-羟基乙基)苯甲酰胺可以直接用于下一步骤(83％)。LCMS(m/z):352/354(MH+),0.83min。
步骤2.4-苄基-8-溴-3,4-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂-5(2H)-酮
向N-苄基-4-溴-2-氟-N-(2-羟基乙基)苯甲酰胺(494mg,1.403mmol)的DMF(14.00mL)溶液中缓慢加入NaH(60％的油分散液)(61.7mg,1.543mmol)。氢气溢出后，将反应混合物于90℃加热24h。用水骤冷后，反应混合物用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤。经无水硫酸钠干燥并过滤后，真空蒸发有机层。油性粗品4-苄基-8-溴-3,4-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂-5(2H)-酮经快速色谱纯化(EtOAc的庚烷溶液梯度洗脱)，84％的收率。LCMS(m/z):332.1/334.1(MH+),0.94min。
步骤3.4-苄基-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂-5(2H)-酮
脱气后，立即向4-苄基-8-溴-3,4-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂-5(2H)-酮(111.3mg,0.335mmol)、B2(PIN)2(170mg,0.670mmol)、Pd2(dba)3(15.34mg,0.017mmol)、三环己基膦(14.09mg,0.050mmol)的二氧六环(3.35mL)溶液中加入乙酸钾(99mg,1.005mmol)。将反应混合物于100℃加热过夜。用EtOAc稀释后，反应混合物通过硅藻土过滤。浓缩后，获得粗品4-苄基-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂-5(2H)-酮(>99％)，无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):298.1(硼酸的MH+),0.63min和380.2(MH+),1.05min。
(S)-2-(甲基氨基)-2-苯基乙醇的合成
流程7
于0℃，10分钟内向LiAlH4(0.689g,18.16mmol)的THF(20.18mL)悬浮液中缓慢加入(S)-2-(甲基氨基)-2-苯基乙酸(1g,6.05mmol)的THF(20mL)溶液。反应混合物于室温下搅拌过夜。用水(0.7mL)、NaOH(2.1mL)、水(0.7mL)骤冷。过滤反应混合物。滤液用EtOAc萃取3次。合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(10％的甲醇DCM溶液)，获得(S)-2-(甲基氨基)-2-苯基乙醇，为无色油状物，55％的收率。LCMS(m/z):152.1(MH+),0.31min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.33(m,2H),7.32-7.27(m,3H),3.77-3.69(m,1H),3.69-3.63(m,1H),3.58(d,J＝9.8Hz,1H),2.36(s,3H)。
(S)-4-苯基噁唑烷的合成
流程8
于室温下向(S)-2-氨基-2-苯基乙醇(1.5g,10.93mmol)的甲醇(36.4mL)溶液中加入甲醛(1.065g,13.12mmol。将反应混合物于室温下搅拌2天。将反应混合物浓缩至干。粗品产物经快速色谱纯化(0－50％的EtOAc/庚烷)，获得(S)-4-苯基噁唑烷，40％的收率。LCMS(m/z):150.1(MH+),0.31min。
(S)-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯的合成
流程9
步骤1.(R)-2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙醇
于0℃向(R)-2-(3-氯代苯基)环氧乙烷(13g,84mmol)的THF(84mL)溶液中缓慢加入NaHMDS(1M的THF溶液)(252mL,252mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。向反应混合物中加入水(33mL,2.5mL/g)。于室温下搅拌5h后，真空除去溶剂至约1/4，通过DCM分配。底层略有浑浊，顶层为棕色溶液。浓缩两层，其含有需要的(R)-2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙醇(14g,97％)。合并的产物无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):172.1(MH+),0.37min。
步骤2.(R)-(2-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
向(R)-2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙醇(14g,82mmol)的THF(272mL)溶液中加入二碳酸二叔丁基酯(24.92g,114mmol)。将混合物于室温下搅拌过夜。反应混合物用DCM稀释，然后用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤。然后分离的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(0－50％的乙酸乙酯庚烷溶液)，获得(R)-(2-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(49.2％)。LCMS(m/z):216(MH+-tBu),0.85min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm1.40(s,9H)3.18(s,1H)3.26(d,J＝4.70Hz,1H)4.69(br.s.,1H)7.20-7.34(m,3H)7.35-7.41(m,1H)。
步骤3.(S)-(2-(3-氯代苯基)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
向(R)-(2-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(8.12g,29.9mmol)的THF(100mL)的溶液中加入邻苯二甲酰亚胺(6.16g,41.8mmol)和聚合物键合的三苯膦(3mmol的PPh3/1g树脂,9.8g)。于室温下向反应混合物中缓慢加入DTBAD(7.09g,30.8mmol)的THF(20mL)溶液，然后将其于室温下搅拌过夜。反应混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc洗涤。获得的滤液用Na2CO3溶液、水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(0－30％的EtOAc/庚烷)，获得(S)-(2-(3-氯代苯基)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(58.4％)。LCMS(m/z):301.1(MH+-Boc),1.06min。
步骤4.(S)-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
向(S)-(2-(3-氯代苯基)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(5.0g,12.47mmol)的乙醇(41.6mL)溶液中加入肼水合物(6.06mL,125mmol)。将反应混合物于60℃加热2h。反应混合物通过硅藻土垫过滤。浓缩滤液，残留物用DCM稀释，通过硅藻土过滤。重复相同的过程直到没有白色沉淀出现。完全除去白色副产物，将产物溶于1NHCl(30mL)，用EtOAc洗涤，将水相中和至pH7，然后通过EtOAc再次萃取。有机部分经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，获得(S)-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(89％)。LCMS(m/z):271.1(MH+),0.58min。
表1.通过酰胺键形成和/或硼酸酯形成获得芳基卤化物或相应的硼酸酯/酸
实施例2
(S)-4-(2-氨基-5-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺的合成
流程10
步骤1.6-氨基-5',6'-二氢-[3,4'-联吡啶]-1'(2'H)-甲酸叔-丁基酯
向5-溴吡啶-2-胺(0.84g,4.85mmol)的DME(10mL)溶液中加入N-Boc-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸酯(1g,3.23mmol)和碳酸钠(4.85mL,9.70mmol)。向混合物中充入氮气5min，随后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.26g,0.32mmol)。将获得的混合物在油浴中加热至120℃2h。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水、盐水洗涤，干燥并浓缩。残留物通过快速硅胶柱色谱纯化(ISCO)，采用0－90％的乙酸乙酯庚烷洗脱，获得6-氨基-5',6'-二氢-[3,4'-联吡啶]-1'(2'H)-甲酸叔-丁基酯(560mg,63％)，为棕色固体。LCMS(m/z):276(MH+),0.59min。
步骤2.4-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔-丁基酯
向6-氨基-5',6'-二氢-[3,4'-联吡啶]-1'(2'H)-甲酸叔-丁基酯(560mg,2.03mmol)、5％Pd/C(1082mg,0.5mmol)的甲醇(30mL)悬浮液中充入氮气2min。将反应混合物在氢气环境中、于室温下搅拌16h。反应混合物用二氯甲烷稀释(50mL)，通过硅藻土垫过滤。浓缩滤液，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化(ISCO)，采用0－90％的乙酸乙酯庚烷洗脱，获得4-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔-丁基酯(180mg,31.9％)，为黄色固体。LCMS(m/z):278(MH+),0.57min。
步骤3.4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔-丁基酯
向冰冷的4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔-丁基酯(180mg,0.65mmol)的DCM(18mL)溶液中分二次加入NBS(116mg,0.65mmol)。将反应混合物于0℃在冰浴中搅拌30min。反应溶液用乙酸乙酯稀释，用水、饱和的碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。获得的残留物通过快速硅胶柱色谱纯化(ISCO)，采用0－100％的乙酸乙酯庚烷洗脱，获得4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔-丁基酯(180mg,78％)，为黄色油状物。LCMS(m/z):300/302(MH+),0.67min。
步骤4.4-(6-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔-丁基酯
向4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔-丁基酯(180mg,0.50mmol)的1,4-二氧六环(8mL)悬浮液中加入双(频哪醇合)二硼(385mg,1.51mmol)和乙酸钾(248mg,2.53mmol)。将混合物充氮3min，然后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(49.5mg,0.061mmol)。将反应混合物在油浴中加热至110℃20h，通过中性氧化铝(1g)过滤。将滤液浓缩，获得粗品4-(6-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔-丁基酯，其无需任何纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):322(硼酸MH+),0.60min。
步骤5.(S)-4-(2-氨基-5-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
向(S)-4-溴-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺(67.1mg,0.20mmol)的DME(5mL)悬浮液中加入4-(6-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔-丁基酯(40mg,0.099mmol)和碳酸钠(0.24mL,0.49mmol)。向混合物中充入氮气10min，然后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(12.15mg,0.015mmol)。将反应混合物在油浴中加热至120℃3h。反应混合物用乙酸乙酯稀释。有机溶液采用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。获得的残留物采用30％的TFA的DCM溶液(20mL)处理15min。将反应混合物浓缩，粗品产物通过HPLC纯化，获得(S)-4-(2-氨基-5-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺(9mg,20.8％)，为TFA盐。LCMS(m/z):435(MH+),0.44min；1HNMR(300MHz,CD3OD)δppm8.63(br.s.,1H)7.90(t,J＝7.77Hz,1H)7.84(s,2H)7.47-7.24(m,7H),5.27-5.17(m,1H)3.93-3.79(m,2H)3.52(d,J＝12.60Hz,2H)3.21-3.05(m,2H)2.96(t,J＝12.31Hz,1H)2.15(d,J＝14.07Hz,2H)1.96-1.78(m,2H)。
3-溴-5-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基)吡嗪-2-胺和4-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲酯的合成
流程11
根据流程10中步骤1－3的方法，采用5-溴吡嗪-2-胺和N-Boc-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸酯，获得4-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸叔-丁基酯。LCMS(m/z):301.0/303.0(MH+-tBu),0.875min。
步骤1.3-溴-5-(哌啶-4-基)吡嗪-2-胺
向4-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸叔-丁基酯(70mg,0.196mmol)的DCM(4mL)溶液中加入TFA(1mL,12.98mmol)。将反应混合物于室温下搅拌45min。加入甲苯后，蒸发挥发物，获得3-溴-5-(哌啶-4-基)吡嗪-2-胺。粗品产物直接用于下一步反应(99％)。LCMS(m/z):257.0/259.0(MH+),0.329min。
步骤2.3-溴-5-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基)吡嗪-2-胺
在冰浴中，向3-溴-5-(哌啶-4-基)吡嗪-2-胺(50mg,0.194mmol)的DCM(2mL)溶液中加入DIEA(340μl,1.945mmol)和甲磺酰氯(16.67μl,0.214mmol)。将反应混合物搅拌60min。反应混合物用DCM萃取。有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。(30mg,46％)。LCMS(m/z):335.2/337.2(MH+),0.572min。
步骤3.4-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲酯
在冰浴中向3-溴-5-(哌啶-4-基)吡嗪-2-胺(60mg,0.233mmol)的DCM(2mL)溶液中加入DIEA(408μl,2.333mmol)和氯代甲酸甲酯(18.07μl,0.233mmol)。将反应混合物在冰浴中搅拌30min。将反应混合物在DCM和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。粗品4-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲酯用于下一步骤。LCMS(m/z):315.0/317.0(MH+),0.647min。
实施例3
4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-甲基-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲酰胺的合成
流程12
步骤1.3-溴-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺
根据流程10步骤1－3的方法，采用5-溴吡啶-2-胺，获得3-溴-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺。LCMS(m/z):257/259(MH+),0.38min。
步骤2.5-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺
根据流程10步骤4的方法，采用3-溴-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺，获得5-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺。LCMS(m/z):233(MH+),0.36min。
步骤3.4-溴-2-氟-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲酰胺
向烧瓶中加入4-溴-2-氟苯甲酸(180mg,0.821mmol)、嘧啶-2-基甲胺(89.6mg,0.821mmol)、DIEA(0.358mL,2.05mmol)的DMF(3mL)溶液，向获得的溶液中加入PyBOP(513mg,0.915mmol)，将获得的混合物于室温下搅拌过夜，然后减压浓缩，将残留物用EtOAc(20mL)稀释，用水(3×10mL)、盐水(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩，残留物经硅胶快速色谱纯化，采用EtOAc/庚烷(0－100％)梯度洗脱，获得为浅色固体的4-溴-2-氟-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲酰胺(74.5mg,29.3％)。LCMS(m/z):310.0/312.0(MH+),0.64min。
步骤4.4-溴-2-氟-N-甲基-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲酰胺
向烧瓶中加入4-溴-2-氟-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲酰胺(74.5mg,0.24mmol)、NaH(60％的矿物油分散液,11.5mg,0.288mmol)的DMF(2mL)溶液，向该浆液中加入碘甲烷(20μl,0.312mmol)，将获得的混合物于室温下搅拌10min，然后用水骤冷(20μl)，浓缩，将粗品残留物溶于EtOAc，用水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩，获得为油状物的4-溴-2-氟-N-甲基-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲酰胺(55.3mg,71％)。LCMS(m/z):324.1/326.1(MH+),0.66min。
步骤5.4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-甲基-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲酰胺
向微波反应器的瓶中加入5-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(39.4mg,0.13mmol)、4-溴-2-氟-N-甲基-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲酰胺(28mg,0.086mmol)、Na2CO3水溶液(2M,0.26mL)的DME(1.5mL)溶液，向混合物中充入氩气，随后加入四(三苯基膦)钯(10mg,8.6mmol)并最后排净，然后密封并在微波合成器中于115℃加热15min。收集DME层，浓缩，残留物经制备性HPLC纯化，合并含有终产物的组分，冷冻干燥，获得为白色固体的4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-甲基-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲酰胺的TFA盐。LCMS(m/z):422.2(MH+),0.49min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δ8.81(d,J＝4.9Hz,1H),8.77(d,J＝4.9Hz,1H),7.95(d,J＝2.2Hz,1H),7.88(d,J＝2.2Hz,1H),7.80(dd,J＝2.2,0.6Hz,1H),7.76(dd,J＝2.2,0.6Hz,1H),7.62-7.70(m,1H),7.51-7.58(m,1H),7.45(s,1H),7.38-7.43(m,1H),7.35(dd,J＝10.0,1.5Hz,1H),7.28(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),4.99(s,1H),4.74(s,1H),3.98-4.10(m,2H),3.54(tdd,J＝11.5,8.8,2.7Hz,2H),3.15-3.24(m,3H),2.78-2.93(m,1H),1.65-1.89(m,4H)。
4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物和4-(6-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物的合成
流程13
步骤1.5-(3,6-二氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-2-胺
向5-溴吡啶-2-胺(344mg,1.99mmol)的DME(6mL)溶液中加入2-(3,6-二氢-2H-噻喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(300mg,1.33mmol)和碳酸钠(1.99mL,3.98mmol)。向混合物中充入氮气5min，随后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(108mg,0.13mmol)。将获得的混合物在油浴中加热至115℃5h。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水、盐水洗涤，干燥并浓缩。残留物通过快速硅胶柱色谱纯化(ISCO)，采用0－90％的乙酸乙酯庚烷洗脱，将组分合并并浓缩，获得为棕色固体的5-(3,6-二氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-2-胺(120mg,47％)。LCMS(m/z):193(MH+),0.44min。
步骤2.5-(四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-2-胺
在氢气环境中，将5-(3,6-二氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-2-胺(260mg,1.35mmol)、Pd/C(36mg,0.33mmol)的甲醇(16mL)悬浮液于室温下搅拌16h。将反应混合物用DCM稀释(80mL)，通过硅藻土过滤。将滤液浓缩，获得为黄色固体的5-(四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-2-胺(240mg,91％的收率)。LCMS(m/z):195(MH+),0.46min。
步骤3.4-(6-氨基吡啶-3-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物
向冰冷的5-(四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-2-胺(290mg,1.49mmol)的DCM(15mL)溶液中加入3-氯代过氧苯甲酸(592mg,3.43mmol)。将获得的溶液于室温下搅拌4h。反应混合物用乙酸乙酯稀释。将获得的溶液用水、饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。残留物通过快速硅胶柱色谱纯化(ISCO)，采用0－100％的乙酸乙酯庚烷洗脱，获得为白色固体的4-(6-氨基吡啶-3-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物(140mg,41.4％)。LCMS(m/z):227(MH+),0.25min。
步骤4.4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物
向冰冷的4-(6-氨基吡啶-3-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物(140mg,0.62mmol)的DCM(15mL)溶液中分二次加入NBS(110mg,0.62mmol)。将反应混合物于0℃搅拌20min。反应溶液用乙酸乙酯稀释，用水、饱和的碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，获得4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物(190mg,0.62mmol)。LCMS(m/z):305/307(MH+),0.33min。
步骤5.4-(6-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物
向4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物(190mg,0.62mmol)的1,4-二氧六环(7mL)悬浮液中加入双(频哪醇合)二硼(474mg,1.86mmol)和乙酸钾(305mg,3.11mmol)，随后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(61.0mg,0.075mmol)。将反应混合物在油浴中加热至100℃16h。反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过中性氧化铝(5g)过滤。将滤液通过硅藻土再次过滤。将滤液浓缩，残留物采用庚烷研磨，过滤，获得4-(6-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)四氢-2H-噻喃1,1-二氧化物(140mg,64％的收率)。LCMS(m/z):271(MH+),0.15min。
3-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)吡咯烷-1-甲酸甲酯的合成
流程14
步骤1.3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯
在氮气环境中，向烘干的烧瓶中加入3-氧代吡咯烷-1-甲酸叔-丁基酯(2g,10.8mmol)和THF(16mL)。将溶液在丙酮冰浴中(-78℃)冷却。向其中加入二(三甲基甲硅烷基)氨化锂(12.96mL,12.96mmol)(1M的THF溶液)。将反应混合物于-78℃搅拌15min，然后滴加1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺(4.05g,11.34mmol)的THF(16mL)溶液。将反应混合物搅拌30min，然后温热至0℃并搅拌1.5h。反应混合物通过satd.碳酸氢钠溶液骤冷，然后用乙酸乙酯萃取。合并的萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品产物通过ISCO柱纯化(0－30％的EtOAc/庚烷)，获得3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯(1.9g,55.5％)。
步骤2.3-(6-氨基吡啶-3-基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯
向3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯(400mg,0.882mmol)的THF(10mL)溶液中充入氮气5min，然后加入碳酸钾(610mg,4.41mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(233mg,1.059mmol)、Pd(PPh3)4(10.20mg,8.82μmol)和水(0.1mL)。将反应混合物加热，于70℃加热过夜。将反应混合物倒入饱和的碳酸氢钠溶液，用乙醚萃取。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品产物经快速色谱纯化(0－10％MeOH/DCM)，得到目标产物(180mg,54.6％)。LCMS(m/z):262.2(MH+),0.598min。
步骤3.3-(6-氨基吡啶-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔-丁基酯
在氮气环境中，向3-(6-氨基吡啶-3-基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯(180mg,0.482mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入Pd-C(103mg,0.096mmol)。将反应混合物于室温下氢气环境中搅拌。2h后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇洗涤，蒸发，获得目标产物，其无需纯化可以直接用于下一步骤。(150mg,71％)。LCMS(m/z):264.2(MH+),0.565min。
步骤4.3-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔-丁基酯
在冰浴中向3-(6-氨基吡啶-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔-丁基酯(60mg,0.228mmol)的乙腈(4mL)溶液中加入NBS(36.5mg,0.205mmol)并搅拌。30min后，LCMS显示原料和目标产物的～1:1的混合物。向其中加入12mg(0.3equiv.)NBS并搅拌30min。LCMS显示反应完全。向反应混合物中加入饱和的NaHCO3水溶液并搅拌10min，用乙酸乙酯萃取。合并的萃取液经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步骤(65mg,83％)。LCMS(m/z):342.1/344.1(MH+),0.624min。
步骤5.3-溴-5-(吡咯烷-3-基)吡啶-2-胺
向3-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)吡咯烷-1-甲酸叔-丁基酯(65mg,0.171mmol)的DCM(2.4mL)溶液中加入TFA(0.6mL,7.79mmol)。将反应混合物于室温下搅拌45min。甲苯稀释后，将反应混合物真空蒸发。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步骤。定量计算粗品收率。LCMS(m/z):242.1/244.1(MH+),0.214min。
步骤6.3-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)吡咯烷-1-甲酸甲酯
在冰浴中向3-溴-5-(吡咯烷-3-基)吡啶-2-胺(20mg,0.083mmol)的DCM溶液中加入DIEA(43.3μl,0.248mmol)和氯代甲酸甲酯(6.40μl,0.083mmol)。将反应混合物在冰浴中搅拌30min。将反应混合物在DCM和水之间分配。分离DCM层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):300.0,302.0(MH+),0.421min。
步骤7.3-溴-5-(1-(甲基磺酰基)吡咯烷-3-基)吡啶-2-胺
在冰浴中向3-溴-5-(吡咯烷-3-基)吡啶-2-胺(20mg,0.083mmol)的DCM溶液中加入DIEA(57.7μl,0.330mmol)和甲磺酰氯(7.08μl,0.091mmol)。将反应混合物在冰浴中搅拌30min。将反应混合物在DCM和水之间分配。分离DCM层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):320.0/322.0(MH+),0.363min。
实施例4、5和6
4-(2-氨基-5-(1,1-二氧化四氢噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺、(S)-4-(2-氨基-5-(1,1-二氧化四氢噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺和(R)-4-(2-氨基-5-(1,1-二氧化四氢噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺的合成
流程15
步骤1.4,5-二氢噻吩-3-基三氟甲磺酸酯
于-75至-65℃，3min内向新鲜制备的LDA(10.5mmol的40mLTHF溶液)中滴加二氢噻吩-3-(2H)-酮/THF溶液(1.02g/2mLTHF,10mmol)，然后将获得的反应混合物于-75℃搅拌3h，随后10min内滴加N-(5-氯代吡啶-2-基)-1,1,1-三氟-N-(三氟甲基磺酰基)甲烷磺酰胺/THF(4.12g,10.5mmol的5mLTHF溶液)，然后将反应混合物于-75℃搅拌至少1h，然后将温度逐渐温热至室温。浓缩反应混合物，将残留物在Et2O/H2O(100mL/50mL)之间分配；醚层用水(2×50mL)、3M乙酸钠pH4.8缓冲液(2×50mL)、3MNaOH(2×50mL)顺序洗涤，经硫酸镁干燥，浓缩，获得为棕色油状物的粗品产物(2.05g)，将其再经硅胶快速色谱纯化，采用EtOAc/庚烷(0-15％)梯度洗脱，获得为无色油状物的目标产物(0.9g,38.5％的收率)。
步骤2.5-(4,5-二氢噻吩-3-基)吡啶-2-胺
向瓶中加入所有的试剂：4,5-二氢噻吩-3-基三氟甲磺酸酯(900mg,3.84mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(1.69g,7.69mmol)、K3PO4(2.45g,11.5mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(314mg,0.384mmol)和DME(16mL)，向混合物中充入氩气，然后密封并于90℃通过外部油浴加热过夜。将反应混合物冷却至室温，反应混合物中的沉淀通过过滤除去，将滤液减压浓缩，获得黑色残留物，为粗品产物。将粗品产物溶于EtOAc(30mL)，用水洗涤(20mL)，两层之间的黏状物(slug)通过过滤除去。收集EtOAc层，采用1NHCl(2×20mL)提取，合并水层，用EtOAc(20mL)洗涤，用NaOH水溶液(3g,10mL的水)碱化，用EtOAc萃取(2×30mL)，合并获得EtOAc萃取液，用盐水(30mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩，获得为浅色固体的目标产物。LCMS(m/z):179.0(MH+),0.41,0.43min(区域异构体)。
步骤3.5-(四氢噻吩-3-基)吡啶-2-胺
将5-(4,5-二氢噻吩-3-基)吡啶-2-胺(0.78g,4.38mmol)溶于乙醇(30mL)，向其中加入Pd-C(Deggussa,10％,0.233g)，将混合物在氢气环境中搅拌过夜。LCMS显示反应不完全。通过硅藻土垫过滤除去Pd-C催化剂，向滤液中加入新的Pd-C催化剂(0.24g)，将混合物在氢气环境中在同样的条件下再搅拌6h。反应混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液减压浓缩，获得为无色油状物的5-(四氢噻吩-3-基)吡啶-2-胺(0.661g,84％)。LCMS(m/z):181.2(MH+),0.39min。
步骤4.3-(6-氨基吡啶-3-基)四氢噻吩1,1-二氧化物
将5-(四氢噻吩-3-基)吡啶-2-胺(0.33g,1.831mmol)溶于CH2Cl2(15mL)，向其中加入mCPBA(70％,0.903g,3.66mmol)，将混合物于室温下搅拌10min，将反应混合物减压浓缩，将残留物在EtOAc/sat.NaHCO3(30mL/20mL)之间分配，EtOAc层采用sat.Na2CO3(20mL)、盐水(20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，获得为浅棕色油状物的3-(6-氨基吡啶-3-基)四氢噻吩1,1-二氧化物(96mg,25％)。LCMS(m/z):197.1(MH+),0.21min。
步骤5.3-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)四氢噻吩1,1-二氧化物
将3-(6-氨基吡啶-3-基)四氢噻吩1,1-二氧化物(96mg,0.452mmol)溶于乙腈(5mL)，将溶液冷却至0℃，向其中加入NBS(80mg,0.452mmol)，将混合物于0℃搅拌40min。反应混合物减压浓缩，将残留物在EtOAc/sat.NaHCO3(30mL/20mL)之间分配，EtOAc层用sat.Na2CO3(20mL)、盐水(20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，获得为浅棕色油状物的3-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)四氢噻吩1,1-二氧化物(50mg,38％的收率)。LCMS(m/z):293.0/291.0(MH+),0.29min。
步骤6.4-(2-氨基-5-(1,1-二氧化四氢噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺
向微波反应器的微波瓶中加入3-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)四氢噻吩1,1-二氧化物(50mg,0.172mmol)、4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基硼酸(94mg,0.343mmol)、2MNa2CO3水溶液(0.34mL)、PdCl2(dppf)-DCM加合物(14mg)和DME(3mL)，向混合物中充入氩气，密封并于105℃加热20min。收集反应混合物的DME层，减压浓缩，将残留物再溶于EtOAc(5mL)。EtOAc溶液用1NHCl(4×1mL)提取，合并水层，用EtOAc洗涤(2×1mL)，然后减压浓缩，将残留物在EtOAc/sat.Na2CO3(5mL/1mL)之间分配，EtOAc萃取液用sat.Na2CO3(2×1mL)、盐水(1mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩，将残留物再溶于乙腈/水(6mL/6mL)，冷冻干燥，获得外消旋的4-(2-氨基-5-(1,1-二氧化四氢噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺，为浅黄色粉末。LCMS(m/z):440.2(MH+),0.60min；1HNMR(CD3OD)δppm7.97(d,J＝2.0Hz,1H),7.84(t,J＝7.8Hz,1H),7.50(d,J＝2.3Hz,1H),7.31-7.44(m,6H),7.22-7.30(m,1H),4.61(s,2H),3.55-3.70(m,1H),3.47(dd,J＝13.3,7.0Hz,1H),3.33-3.39(m,1H),3.08-3.25(m,2H),2.53(ddd,J＝13.1,7.4,5.7Hz,1H),2.18-2.40(m,1H)。外消旋产物通过手性SFC再次拆分(ChiralPak5micOJ柱,4.6×100(mm),5mL/min,MeOH+0.1％DEA＝50％)，获得(S)-4-(2-氨基-5-(1,1-二氧化四氢噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺(Rt＝1.7min)和(R)-4-(2-氨基-5-(1,1-二氧化四氢噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺(Rt＝2.22min)。随意指定绝对立体化学。
实施例7
4-(2-氨基-5-((3R,5S)-5-(羟基甲基)吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程16
步骤1.(S)-1-叔-丁基2-甲基4-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯
将(2S,4R)-1-叔-丁基2-甲基4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸酯(10g,40.8mmol)的DCM(100mL)溶液冷却至0℃，然后采用Dess-Martin氧化剂(17.29g,40.8mmol)分次处理20min。将反应物于0℃保持1h，然后移除冷浴。于室温下又3h后，将反应物采用300mL的1:1sat.aq.Na2SO3:sat.aq.NaHCO3处理。将反应物于室温下剧烈搅拌过夜，然后分层。有机部分用水和盐水洗涤，然后经硫酸镁干燥并浓缩。将获得的混合物在DCM(20mL)中浆化，然后通过硅藻土过滤。将有机部分浓缩。粗品油状物通过颗粒状固体直接过滤纯化，获得(S)-1-叔-丁基2-甲基4-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(8.53g,87％的收率)。LCMS(m/z):244.3(MH+),0.42min。
步骤2.4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸1-叔-丁基2-甲基酯
将(S)-1-叔-丁基2-甲基4-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(2.9g,11.92mmol)的THF(30mL)溶液冷却至-78℃，然后采用1.0MLiHMDS的THF溶液(14.31mL,14.31mmol)处理。将反应物于-78℃保持1h，然后采用N-(5-氯代吡啶-2-基)-1,1,1-三氟-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(5.62g,14.31mmol)的THF(15mL)溶液处理。将反应物于-78℃保持1h，然后置于-30℃冰箱中过夜。完成后，将反应物用水骤冷，用乙醚稀释。有机部分用1NNaOH水溶液(40mL)洗涤，然后经硫酸镁干燥并浓缩。将残留物溶于氯仿(40mL)并冷却至0℃30min。将获得的浆液浓缩至总体积～8mL，然后过滤该粘性物，获得(S)-1-叔-丁基2-甲基4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸酯(4.4g,98％的收率)。LCMS(m/z):376.4(MH+),0.64min。
步骤3.(S)-1-叔-丁基2-甲基4-(6-氨基吡啶-3-基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸酯
将(S)-1-叔-丁基2-甲基4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸酯(1.55g,4.13mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(1.00g,4.54mmol)、Pd(PPh3)4(0.239g,0.21mmol)和Cs2CO3(3.36g,10.32mmol)在THF(10mL)和水(2mL)中的混合物微波加热至100℃10min。然后将反应物采用乙酸乙酯(50mL)和水(25mL)稀释。分层，有机部分用水(25mL)和盐水(25mL)洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩，然后经快速色谱纯化[0－8％甲醇/DCM洗脱]，获得(S)-1-叔-丁基2-甲基4-(6-氨基吡啶-3-基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸酯(0.955g,72％的收率)。LCMS(m/z):320.4(MH+),0.50min。
步骤4.(2S,4R)-1-叔-丁基2-甲基4-(6-氨基吡啶-3-基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯
将(S)-1-叔-丁基2-甲基4-(6-氨基吡啶-3-基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸酯(0.955g,2.99mmol)的甲醇(30mL)脱气溶液采用10％Pd/C(0.183g,0.172mmol)处理，然后在氢气环境下保持3h。完成后，反应物通过硅藻土垫过滤并浓缩，获得(2S,4R)-1-叔-丁基2-甲基4-(6-氨基吡啶-3-基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(0.95g.99％的收率)。LCMS(m/z):322.5(MH+),0.52min。
步骤5.(2S,4R)-4-(6-氨基吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔-丁基酯
向(2S,4R)-1-叔-丁基2-甲基4-(6-氨基吡啶-3-基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(250mg,0.778mmol)的2-甲基THF(18mL)溶液中加入LiAlH4(59mg,1.56mmol)。15min后，反应物通过顺序加入水(60μL)、1NNaOH水溶液(60μL)和水(60μL)骤冷。将混合物剧烈搅拌5min，然后通过硅藻土过滤，采用2-甲基THF洗涤。浓缩有机部分，获得(2S,4R)-4-(6-氨基吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔-丁基酯(230mg,100％的收率)。LCMS(m/z):294.1(MH+),0.49min。
步骤6.(2S,4R)-4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲叔-丁基酸酯
将(2S,4R)-4-(6-氨基吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔-丁基酯(230mg,0.784mmol)的MeCN(10mL)溶液采用NBS(147mg,0.823mmol)处理。10min后，反应完成。反应物采用10mL1:1sat.aq.NaHCO3:sat.aq.Na2S2O3处理，将混合物剧烈搅拌10min。将混合物用乙酸乙酯稀释(30mL)并分层。有机部分用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩，获得(2S,4R)-4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔-丁基酯(290mg,100％的收率)。LCMS(m/z):372.1/374.0(MH+),0.55min。
步骤7.4-(2-氨基-5-((3R,5S)-5-(羟基甲基)吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
根据流程10步骤5的方法，采用(2S,4R)-4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔-丁基酯和(S)-(4-((1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)硼酸，获得(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔-丁基酯，为TFA盐(30mg,35％的收率)。LCMS(m/z):585.3,587.3(MH+),0.74min。然后，将(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔-丁基酯-TFA溶于DCM(2mL)，采用TFA(2.0mL)处理。30min后，浓缩反应物，然后通过反相制备性HPLC纯化，获得4-(2-氨基-5-((3R,5S)-5-(羟基甲基)吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺，为二-TFA盐(15.0mg,54％的收率)。LCMS(m/z):485.2,487.2(MH+),0.51min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.59(dd,J＝4.50,7.24Hz,1H),7.87-7.77(m,4H),7.39-7.31(m,3H),7.29-7.24(m,2H),7.24-7.16(m,1H),5.15-5.05(m,1H),3.87-3.71(m,5H),3.70-3.60(m,2H),3.59-3.46(m,1H),2.41(td,J＝6.46,12.91Hz,1H),1.98-1.82(m,1H),1.29-1.16(m,1H)。
实施例8
4-(2-氨基-5-((7R,8aS)-4-氧代六氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-7-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程17
将4-(2-氨基-5-((3R,5S)-5-(羟基甲基)吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(45mg,0.063mmol)(参见实施例7)和氯代乙酸(7.2mg,0.076mmol)的THF(2.5mL)溶液采用HATU(36mg,0.095mmol)和DIEA(55μL,0.316mmol)处理。将反应物于室温下保持1h。然后将反应混合物直接采用NaH(15.2mg,0.631mmol)处理。15min后，将反应物用水骤冷(2mL)，反应混合物用乙酸乙酯萃取(10mL)。有机部分用盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，浓缩，然后通过反相制备性HPLC纯化，获得4-(2-氨基-5-((7R,8aS)-4-氧代六氢-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-7-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(13.0mg,39％的收率)。LCMS(m/z):525.2,527.2(MH+),0.59min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.61(dd,J＝4.30,7.04Hz,1H),7.91(d,J＝1.96Hz,1H),7.84-7.76(m,2H),7.40-7.31(m,3H),7.30-7.24(m,2H),7.24-7.16(m,1H),5.16-5.05(m,1H),4.18-4.08(m,2H),3.99-3.85(m,2H),3.85-3.70(m,3H),3.53-3.42(m,2H),3.39-3.29(m,1H),2.34-2.19(m,1H),1.67(q,J＝11.48Hz,1H)。
实施例9
4-(2-氨基-5-((6R,7aS)-3-氧代六氢吡咯并[1,2-c]噁唑-6-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程18
将4-(2-氨基-5-((3R,5S)-5-(羟基甲基)吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(20mg,0.041mmol)(实施例7)和DIEA(72μL,0.412mmol)的乙腈(0.5mL)溶液采用羰基二咪唑(8.0mg,0.049mmol)处理。1h后，原料消耗完全。反应混合物采用1.0NNaOH水溶液(1.0mL)骤冷，将混合物剧烈搅拌5min，然后用DCM稀释(10mL)。有机部分用盐水洗涤(2mL)，经硫酸钠干燥并浓缩。粗品产物通过反相制备性HPLC纯化，获得4-(2-氨基-5-((6R,7aS)-3-氧代六氢吡咯并[1,2-c]噁唑-6-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(2.0mg,7％的收率)。LCMS(m/z):511.3,513.3(MH+),0.61min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.92-7.84(m,2H),7.46(s,1H),7.44-7.40(m,1H),7.38-7.35(m,1H),7.34-7.28(m,1H),5.19(t,J＝5.87Hz,1H),4.61-4.56(m,1H),4.34(dd,J＝3.52,9.00Hz,1H),4.24-4.15(m,1H),3.92-3.80(m,1H),3.74-3.62(m,1H),2.41(td,J＝5.72,11.64Hz,1H),1.84-1.71(m,1H)。
实施例10
4-(2-氨基-5-((6R,7aS)-3-亚氨基六氢吡咯并[1,2-c]噁唑-6-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程19
于室温下，将4-(2-氨基-5-((3R,5S)-5-(羟基甲基)吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(12.5mg,0.026mmol)(实施例7)和碳酸铯(33.6mg,0.103mmol)的乙醇(0.75mL)混合物采用溴化氰(6.2μL,0.031mmol)处理。1h后，将反应物用水稀释(1.0mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL)。有机部分用盐水洗涤(2mL)，然后经硫酸钠干燥并浓缩，通过反相制备性HPLC纯化，获得4-(2-氨基-5-((6R,7aS)-3-亚氨基六氢吡咯并[1,2-c]噁唑-6-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):510.1,512.1(MH+),0.52min。1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.63-8.54(m,1H),7.92-7.85(m,2H),7.80(t,J＝7.83Hz,1H),7.40-7.31(m,3H),7.29-7.24(m,2H),7.24-7.16(m,1H),5.14-5.06(m,1H),4.97-4.88(m,1H),4.61-4.49(m,2H),3.88-3.70(m,4H),3.32(s,1H),2.41-2.31(m,1H),2.02-1.89(m,1H)。
实施例11
4-(2-氨基-5-((6R,7aS)-3-硫代(thioxo)六氢吡咯并[1,2-c]噁唑-6-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
流程20
向(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔-丁基酯(45mg,0.063mmol)(参见实施例7)的乙腈(0.75mL)和DMF(0.5mL)溶液中加入DIEA(42μL,0.240mmol)和硫代羰基二咪唑(15.6mg,0.088mmol)。2h后，将反应物用1NNaOH水溶液(1mL)骤冷，剧烈搅拌以促进混合的硫代氨基甲酸酯副产物分解。然后将反应物用乙酸乙酯稀释(10mL)，用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，然后经硫酸钠干燥并浓缩。粗品产物通过反相制备性HPLC纯化，获得4-(2-氨基-5-((6R,7aS)-3-硫代六氢吡咯并[1,2-c]噁唑-6-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(3.2mg,11％的收率)。LCMS(m/z):527.3,529.3(MH+),0.67min；1HNMR(400MHz,CD3OD.)δppm8.64(dd,J＝3.91,7.04Hz,1H),7.85(d,J＝1.96Hz,2H),7.83-7.77(m,3H),7.39-7.32(m,5H),7.30-7.26(m,3H),7.25-7.19(m,2H),5.15-5.07(m,2H),4.73-4.69(m,2H),4.45-4.35(m,3H),3.85-3.65(m,8H),2.38(td,J＝5.58,11.54Hz,2H),1.80-1.70(m,1H)。
5-吗啉代-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺的合成
流程21
步骤1.(5-溴吡啶-3-基)氨基甲酸乙酯
将5-溴吡啶-3-胺(20g,116mmol)溶于DCM(500mL)，加入吡啶(28.0mL,347mmol)，随后滴加氯代甲酸甲酯(11.44mL,119mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1.5h。将反应混合物用DCM稀释。分离两相，有机相用10％的CuSO4溶液(2×)、sat.NaHCO3溶液(1×)、盐水(1×)洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发。残留物用乙醚研磨，过滤并干燥，获得(5-溴吡啶-3-基)氨基甲酸乙酯(21.58g,76％)，为白色固体。LCMS(m/z):247.0(MH+),0.58min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.62-8.15(m,3H)7.00(br.s.,1H)4.27(q,J＝7.0Hz,2H)1.34(t,J＝7.0Hz,3H)。
步骤2.(5-溴-2-硝基吡啶-3-基)氨基甲酸乙酯
于0℃向浓H2SO4(60mL,1126mmol)和发烟HNO3(40mL,895mmol)的混合物中分次加入(5-溴吡啶-3-基)氨基甲酸乙酯(21.5g,88mmol)。于0℃搅拌5分钟后，将混合物于室温下搅拌过夜，倒入冰水中。沉淀形成，过滤并用水充分洗涤，干燥。获得为白色固体的(5-溴-2-硝基吡啶-3-基)氨基甲酸乙酯(21.26g,84％)。LCMS(m/z):290.1(MH+),0.76min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm9.63(br.s.,1H)9.33(d,J＝2.0Hz,1H)8.28(d,J＝2.0Hz,1H)4.32(q,J＝7.3Hz,3H)1.68(br.s.,2H)1.38(t,J＝7.0Hz,4H)。
步骤3.5-溴-2-硝基吡啶-3-胺
将(5-溴吡啶-3-基)氨基甲酸乙酯(8g,27.6mmol)溶于EtOH(250mL)，采用冰浴将溶液冷却至5℃。滴加冷的1MKOH(130mL,130mmol)，低于5℃保持。将反应混合物于室温下搅拌过夜，减压浓缩。浓缩时形成沉淀，将其过滤，用水洗涤并干燥，获得5-溴-2-硝基吡啶-3-胺(5.02g,83％)。LCMS(m/z):220.1(MH+),0.46min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.97(d,J＝1.6Hz,1H)7.50(d,J＝2.0Hz,1H)6.03(br.s.,2H)。
步骤4.5-吗啉代-2-硝基吡啶-3-胺
将5-溴-2-硝基吡啶-3-胺(2.32g,10.6mmol)悬浮于吗啉(5mL,57.4mmol)中，将溶液于140℃加热1h。将反应混合物冷却至室温，固体沉淀用水研磨，过滤。获得的固体用水、EtOH洗涤，干燥，获得为浅黄色粉末的5-吗啉代-2-硝基吡啶-3-胺(2.0g,8.92mmol,84％)。根据前面步骤的结果，该固体仍然含有前面步骤中的乙氧基衍生物，通过硅胶柱色谱分离两个化合物(analogix,20％的EtOAc庚烷洗脱2min,100％的EtOAc洗脱15min，然后100％的EtOAc洗脱20min)。LCMS(m/z):225.1(MH+),0.43min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm10.54(s,1H)8.57(d,J＝2.7Hz,1H)7.85(d,J＝2.7Hz,1H)7.70(d,J＝2.3Hz,1H)6.32(d,J＝2.3Hz,1H)6.00(br.s.,1H)3.93-3.83(m,7H)3.83-3.74(m,3H)3.63-3.55(m,3H)3.51-3.43(m,3H)3.41-3.31(m,4H)。
步骤5.4-(5-溴-6-硝基吡啶-3-基)吗啉
向配备磁性搅拌子、加液漏斗和温度计的三颈圆底烧瓶中加入CuBr(629mg,4.4mmol)和HBr(25mL)。将溶液冷却至-5℃(冰盐浴)。缓慢加入固体5-吗啉代-2-硝基吡啶-3-胺(983mg,4.4mmol)，随后通过加液漏斗缓慢加入NaNO2(333mg,4.8mmol)的H2O(25mL)溶液，保证温度不高于0℃。将反应混合物于-5℃搅拌1h，温热至室温，再搅拌1.5h。通过LCMS监测发现反应完成，将混合物再次冷却至0℃，采用6NNaOH骤冷至pH12，用水稀释，用EtOAc萃取。EtOAc层用水(×2)、盐水(×1)洗涤，干燥并浓缩。将残留物与EtOH一起共沸，高真空干燥，获得4-(5-溴-6-硝基吡啶-3-基)吗啉(1.21g,4.20mmol,96％的收率)，为浅黄色固体。LCMS(m/z):288.2(MH+),0.65min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.08-7.99(d,J＝2.3Hz,1H)7.41(d,J＝2.3Hz,1H)3.98-3.81(m,4H)3.45-3.30(m,4H)。
步骤6.3-溴-5-吗啉代吡啶-2-胺
将4-(5-溴-6-硝基吡啶-3-基)吗啉(95mg,0.33mmol)溶于EtOH(12mL)，加入水(3.0mL)，随后加入SnCl2(313mg,1.65mmol)。将反应混合物加热至80℃2h，冷却至室温，用DCM稀释。分离两相，有机相用水洗涤。水相再用DCM萃取。采用6NNaOH将pH调节至12，将混合物用DCM进一步萃取。合并有机萃取液，干燥(Na2SO4)并减压蒸发，获得需要的3-溴-5-吗啉代吡啶-2-胺(71.5mg,84％)。LCMS(m/z):260.0(MH+),0.37min。
替代方法
向圆底烧瓶中的4-(5-溴-6-硝基吡啶-3-基)吗啉(2g,6.9mmol)的MeOH(150mL)溶液中加入锌粉(4.54g,69.4mmol)。将反应混合物冷却至0℃。5min内分次加入固体NH4Cl(3.71g,69.4mmol)。将该不均匀的反应混合物于室温下搅拌2h，通过硅藻土塞过滤，采用甲醇和乙醇洗涤滤饼。将滤液浓缩至褐色固体，将其通过快速硅胶柱色谱纯化(ISCO,80g,柱,0－70％的EtOAc/庚烷洗脱15min，70％的EtOAc洗脱25min)，获得为浅灰白色固体的3-溴-5-吗啉代吡啶-2-胺(936mg,52.2％)。LCMS(m/z):258.2(MH+),0.35min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.75(d,J＝2.3Hz,1H)7.40-7.30(m,1H)4.66(br.s.,2H)3.91-3.74(m,4H)3.07-2.90(m,4H)。
步骤7.5-吗啉代-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺
在压力容器中，将3-溴-5-吗啉代吡啶-2-胺(36mg,0.14mmol)、双(频哪醇合)二硼(70.8mg,0.28mmol)、乙酸钾(41.1mg,0.42mmol)和三环己基膦(5.9mg,0.021mmol)溶于1,4-二氧六环(1.5mL)。向混合物中喷入氮气5min，加入二乙酸钯(3.1mg,0.014mmol)。将反应混合物加热至110℃16h，冷却至室温，用乙酸乙酯稀释。加入SyliaBondDMT，将混合物搅拌1h，通过硅藻土垫过滤并浓缩，获得21.3mg固体，其含有需要的5-吗啉代-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺。该固体需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):224.0(MH+),0.33min(硼酸)。
3-溴-5-((2R,4R)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺和3-溴-5-((2S,4S)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺的合成
流程22
步骤1.2-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-4-基三氟甲磺酸酯
于-78℃向2-甲基二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(2g,17.52mmol)的THF(8.76mL)溶液中滴加LiHMDS(18.40mL,18.40mmol)。将反应混合物于-78℃搅拌1.5h，然后于-78℃加入N-(5-氯代吡啶-2-基)-1,1,1-三氟-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺(7.22g,18.40mmol)。将混合物于-78℃搅拌1h，然后温热至室温，搅拌过夜。通过TLC监测反应。采用satNaHCO3骤冷后，将反应混合物用EtOAc萃取3次。合并的有机层用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥。过滤并真空浓缩。通过柱色谱纯化，采用30％的EtOAc庚烷洗脱，获得为棕色油状物的化合物(4.2g,17.06mmol)。
步骤2.5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡嗪-2-胺
向5-溴吡嗪-2-胺(1g,5.75mmol)、双(频哪醇合)二硼(2.92g,11.49mmol)和PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(0.469g,0.575mmol)的二氧六环(16.42mL)溶液中加入刚刚脱气的乙酸钾(1.692g,17.24mmol)。将反应混合物在微波中于120℃加热20min。采用EtOAc稀释，反应混合物通过硅藻土过滤。浓缩，粗品产物无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):140(MH+，硼酸),0.12min。
步骤3.5-(2-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺
向2-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-4-基三氟甲磺酸酯(0.637g,2.88mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡嗪-2-胺(0.914g,3.74mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.235g,0.288mmol)的DME(9.82mL)溶液中加入2MNa2CO3(3.27mL)。将反应混合物于微波合成器中加热(120℃,10min)。加入乙酸乙酯，用satNaHCO3和水洗涤。然后将需要的化合物萃取到1NHCl水层中，用EtOAc洗涤。采用2NNaOH碱化，将产物萃取到EtOAc层。EtOAc有机层用水洗涤，经硫酸钠干燥。过滤并浓缩，获得250mg的目标化合物。LCMS(m/z):192.2(MH+),0.40min。
步骤4.5-((2R,4R)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺
向5-(2-甲基-3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺(250mg,1.307mmol)的MeOH(13.100mL)溶液中加入Pd/C(278mg,0.261mmol)。向溶液中通过氮气流脱气10min。用氢气排空后，配备氢气囊。将反应混合物搅拌25h。通过硅藻土过滤后，除去挥发物，获得粗品产物，将其采用快速色谱纯化，采用0－10％的MeOH的DCM溶液洗脱，获得180mg非对映异构体。然后通过手性分离(ChiralPak5micAD柱,4.6×100(mm),5mL/min,EtOH+0.1％DEA＝15％)，获得40mg的5-((2R,4R)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺(Rt＝1.32min；LCMS(m/z):194.2(MH+),0.44min)(22％的收率)和30mg的需要的5-((2S,4S)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺(Rt＝1.83min；LCMS(m/z):194.2(MH+),0.44min)(16％的收率)。
步骤5.3-溴-5-((2R,4R)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺和3-溴-5-((2S,4S)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺
于0℃向5-((2R,4R)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺(40mg,0.207mmol)的乙腈(3mL)溶液中加入NBS(35.0mg,0.197mmol)。将反应混合物于0℃搅拌15min。采用NaHCO3骤冷后，将反应混合物用EtOAc萃取三次。合并有机层，用水和盐水洗涤。经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得47mg的3-溴-5-((2R,4R)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺，其可以直接使用。LCMS(m/z):274(MH+),0.64min。对于5-((2S,4S)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺，根据上述方法，获得3-溴-5-((2S,4S)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺。LCMS(m/z):274(MH+),0.65min。产物的绝对立体化学可以任意指定。
3-溴-5-环丙基吡嗪-2-胺的合成
流程23
步骤1.5-环丙基吡嗪-2-胺
向微波瓶中加入5-溴吡嗪-2-胺(400mg.2.3mmol)、2-环丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(1.16g,6.9mmol)、KOt-Bu(1M的t-BuOH溶液9.2mL)、1,4-二氧六环(10mL)和水(0.10mL)，向混合物中充入氩气，随后加入Palladiumtetrakis(266mg,0.23mmol)，最后再充入氩气，然后将混合物密封，通过微波反应器于150℃加热20min。向反应混合物中加入第二份Palladiumtetrakis(266mg)，将反应物通过微波反应器于160℃加热20min。将反应混合物通过硅藻土薄层过滤，将滤液浓缩。残留物采用EtOAc(6mL)研磨，离心除去沉淀物并过滤。EtOAc上层再萃取到TFA水溶液中(3×3mL,TFA/水-1mL/10mL)。合并TFA溶液，用乙腈(10mL)稀释，冷冻干燥，获得为黄色粉末的5-环丙基吡嗪-2-胺。将冷冻干燥后的产物转移至小瓶中，采用sat.Na2CO3(3mL)碱化至pH>12，用EtOAc萃取(4×6mL)，合并EtOAc萃取液，浓缩并再次真空干燥，获得终产物5-环丙基吡嗪-2-胺游离碱(79mg,25.4％的收率)。LCMS(m/z):136.1(MH+),0.30min。1HNMR(CD3OD)δppm8.29(d,J＝1.2Hz,1H),7.70(d,J＝1.6Hz,1H),2.00-2.08(m,1H),0.94-1.00(m,2H),0.87-0.93(m,2H)。
步骤2.3-溴-5-环丙基吡嗪-2-胺
将5-环丙基吡嗪-2-胺(79mg,0.584mmol)的乙腈(10mL)溶液冷却至0℃，1小时内通过逐渐加入NBS(140mg,1.46mmol)处理，同时通过LCMS密切监测反应进程。将反应混合物浓缩，残留物采用EtOAc(2×5mL)研磨，EtOAc上层液通过离心分离，合并，用1NNaOH洗涤(3×1mL)，将EtOAc层干燥(Na2SO4)，浓缩，获得褐色粗品残留物。粗品产物再经硅胶快速色谱纯化，采用EtOAc/CH2Cl2(0－30％)梯度洗脱，获得为无色固体的3-溴-5-环丙基吡嗪-2-胺(38.2mg,38.5％的收率)。LCMS(m/z):214.0/216.0(MH+),0.64min。
3'-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-[3,4'-联吡啶]-6-胺
流程24
步骤1.3'-甲基-3,4'-联吡啶-6-胺
向(2g,9.09mmol)的DME(45.4mL)溶液中加入4-氯代-3-甲基吡啶(1.739g,13.63mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.742g,0.909mmol)和2MNa2CO3(15.15mL)，向混合物中充入氮气5min，将密封的玻璃罐中的反应混合物加热至120℃过夜。反应混合物通过EtOAc萃取，有机层用盐水和水洗涤。有机部分经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗品产物。粗品产物经快速色谱纯化(0－100％EtOAc/庚烷)，得到3'-甲基-3,4'-联吡啶-6-胺(255mg,1.377mmol,15.15％的收率)。LCMS(m/z):406.3(MH+),0.47min
步骤2.5-溴-3'-甲基-3,4'-联吡啶-6-胺
向冰冷的3'-甲基-3,4'-联吡啶-6-胺(250mg,1.350mmol)的DCM(4499μL)溶液中分二次加入NBS(264mg,1.485mmol)。将反应混合物于0℃搅拌2h。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水、盐水洗涤，干燥并浓缩。残留物采用庚烷处理，过滤固体，获得为褐色固体的5-溴-3'-甲基-3,4'-联吡啶-6-胺(350mg,1.325mmol,98％的收率)，其无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):264.4/266.4(MH+),0.32min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.51(s,1H),8.47(d,J＝5.1Hz,1H),8.04(d,J＝2.0Hz,1H),7.69(d,J＝2.0Hz,1H),7.12(d,J＝5.1Hz,1H),5.06(br.s.,2H),2.32(s,3H)。
步骤3.3'-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,4'-联吡啶-6-胺
向(5-溴-3'-甲基-3,4'-联吡啶-6-胺(100mg,0.379mmol)的1,4-二氧六环(947μL)悬浮液中加入bispinB(288mg,1.136mmol)和乙酸钾(186mg,1.893mmol)。向混合物中充入氮气3min，然后加入PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(30.9mg,0.038mmol)。将反应混合物在微波中加热至120℃10min。确认形成需要的产物，但是仍然有部分原料存在，再次经微波120℃10min。将反应混合物通过滤器过滤，用二氧六环(0.7mL)洗涤，滤液无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):230.1(硼酸的MH+),0.22min。
1-(4-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-1-基)乙酮的合成
流程25
在冰浴中向3-溴-5-(哌啶-4-基)吡嗪-2-胺(50mg,0.194mmol)的DCM(4mL)溶液中加入DIEA(0.136mL,0.778mmol)和乙酰氯(0.017mL,0.233mmol)。将反应混合物在冰浴中搅拌30min。将反应混合物在DCM和水之间分配。分离DCM层，用盐水洗涤。经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。进行下一步骤。LCMS(m/z):299.1/301.1(MH+),0.508min。1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.81-7.69(m,2H),7.62-7.45(m,2H),7.37-7.09(m,6H),6.5(dd,J＝8.61,2.35Hz,1H),6.50(dd,J＝13.50,2.15Hz,1H),5.17-5.01(m,1H),4.55(d,J＝13.30Hz,1H),3.94(d,J＝13.69Hz,1H),3.83-3.63(m,2H),2.88(tt,J＝11.84,3.62Hz,1H),2.67(td,J＝12.91,2.35Hz,1H),2.03(s,3H),1.96-1.79(m,2H),1.78-1.50(m,2H)。
3-溴-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺的合成
流程26
步骤1.5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺
向微波瓶中加入5-溴吡啶-2-胺(500mg,2.89mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(1.2g,5.78mmol)、Na2CO3水溶液(2M,5.78mL)、PdCl2(dppf)CH2Cl2(0.236g)和DME(15mL)，向反应混合物充入氩气5min，密封，采用微波反应器于115℃加热20min。收集反应混合物的DME层，浓缩，残留物经快速硅胶柱色谱纯化，采用甲醇/CH2Cl2梯度洗脱，获得为浅褐色固体的5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺(383mg,76％的收率)。LCMS(m/z):175.2(MH+),0.34min。
步骤2.3-溴-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺
于0℃向5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺(380mg,2.18mmol)的乙腈(30mL)溶液中加入NBS(388mg,2.18mmol)，将反应混合物于0℃搅拌30min，然后再于室温下搅拌40min。然后浓缩反应混合物，再溶于甲醇，向其中加入固体LiOH(80mg)，超声并浓缩，残留物用水研磨(2×5mL)，弃去上清液。高真空干燥残留物，然后用EtOAc研磨(2×8mL)，收集上清液，合并并浓缩，获得浅褐色残留物，为粗品3-溴-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺。LCMS(m/z):253.0/255.0(MH+),0.38min。
(S)-4-(2-氨基-4-氟-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺的合成
流程27
步骤1.5-溴-4-氟吡啶-2-胺
于0℃向4-氟吡啶-2-胺(400mg,3.57mmol)的乙腈(35.7mL)溶液中分三次加入NBS(648mg,3.64mmol)。将反应混合物于0℃搅拌20min。LCMS显示反应完成。采用satNa2S2O3和NaHCO3骤冷后，搅拌30min。将反应混合物用EtOAc萃取3次。采用satNaHCO3、水和盐水洗涤。干燥并浓缩。粗品产物用乙醚研磨，无需进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS(m/z):192.9(MH+),0.32min。
步骤2.4-氟-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺
向5-溴-4-氟吡啶-2-胺(369mg,1.932mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(603mg,2.90mmol)、PdCl2(dppf)DCM(141mg,0.193mmol)和DME(9.660μL)的反应混合物中加入2MNa2CO3(3.220mL)。将反应混合物于微波合成器中加热(120℃,12min)。向反应混合物中加入无水硫酸钠，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，采用0－100％EtOAc(含有10％的MeOH/庚烷)洗脱，获得280mg目标产物，75％的收率。LCMS(m/z):193.1(MH+),0.35min。
步骤3.3-溴-4-氟-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺
于0℃向4-氟-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺(150mg,0.780mmol)的乙腈(7.805mL)溶液中分三次加入NBS(142mg,0.796mmol)。将反应混合物于0℃搅拌20min。LCMS显示反应完成。采用satNa2SO3和NaHCO3骤冷后，搅拌30min。将反应混合物用EtOAc萃取3次。过滤固体。该固体不是需要的产物。EtOAc层采用satNaHCO3、水和盐水洗涤。干燥并浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用0－100％EtOAc(含有10％的MeOH/庚烷)洗脱，获得30mg目标产物。LCMS(m/z):273.1(MH+),0.46min。
(+/-)-(1S,3R)-3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)环戊醇、(+/-)-(1R,3R)-3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)环戊醇和(+/-)-3-溴-5-((1R,3R)-3-甲氧基环戊基)吡嗪-2-胺的合成
流程28
步骤1.3-溴环戊-2-烯酮
于0℃向PPh3(44.1g,168mmol)的苯(510mL)溶液中滴加Br2(8.67mL,168mmol)，该溶液转变为黄色悬浮液，然后缓慢加入TEA(23.44mL,168mmol)。向混合物中加入环戊烷-1,3-二酮(15g,153mmol)的苯(100mL)溶液。将反应混合物于室温下搅拌过夜。加入乙醚200mL，然后过滤反应混合物。将滤液浓缩，残留物用Et2O处理，过滤固体，再次重复。粗品产物直接用于下一步反应。LCMS(m/z):160.9(MH+),0.35min。
步骤2.3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)环戊-2-烯酮
向3-溴环戊-2-烯酮(13g,81mmol)的二氧六环(161mL)溶液中加入B2(PIN)2(41.0g,161mmol)和PdCl2(dppf)CH2Cl2(2.95g,4.04mmol)。将反应混合物通过吹入氮气脱气15min。然后加入KOAc(23.77g,242mmol)。将反应混合物于90℃加热过夜。冷却后，将反应混合物通过烧结玻璃滤器过滤，用二氧六环(160mL)洗涤，将滤液真空浓缩，获得粗品3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)环戊-2-烯酮，其无需纯化可以直接用于下一步骤.LCMS(m/z):126.9(MH+),0.17min。
步骤3.3-(5-氨基吡嗪-2-基)环戊-2-烯酮
向3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)环戊-2-烯酮(2.99g,14.37mmol)(上一步骤的滤液)中加入2-氨基-5-溴吡嗪(2.5g,14.37mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(1.173g,1.437mmol)、Na2CO3(7.61g,71.8mmol)和水(17.96mL)。将反应混合物于100℃油浴加热过夜，通过硅藻土过滤。然后将反应混合物通过EtOAc萃取。然后将有机部分采用3NHCl(20mL)洗涤二次，用水50mL洗涤一次，然后AQ通过NaOH中和至pH＝8，然后将反应混合物通过CHCl3/IPA(7:3)萃取三次，将有机部分干燥并浓缩，直接使用。LCMS(m/z):176.1(MH+),0.32min。
步骤4.(5-(3-氧代环戊-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸N,N-二-叔-丁基酯
向3-(5-氨基吡嗪-2-基)环戊-2-烯酮(500mg,2.85mmol)的DCM(9.5mL)溶液中加入Boc2O(1988μl,8.56mmol)和DMAP(523mg,4.28mmol)，反应混合物为深色溶液，将反应混合物于室温下搅拌5h。将反应混合物浓缩，经快速色谱纯化(0－40％的EtOAc/庚烷)，获得N,N-二-叔-丁基(5-(3-氧代环戊-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(47％的收率)。LCMS(m/z):376.2(MH+)0.96min。1HNMR(400MHzCDCl3)δppm8.77(d,J＝1.2Hz,1H),8.72(d,J＝1.2Hz,1H),6.89(s,1H),3.15(td,J＝2.3,4.7Hz,2H),2.64(td,J＝2.4,5.0Hz,2H),1.45-1.37(m,18H)。
步骤5.(+/-)-N,N-二-叔-丁基(5-(3-氧代环戊基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯
向N,N-二-叔-丁基(5-(3-氧代环戊-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(600mg,1.598mmol)的甲醇溶液中充入氮气10min，然后加入Pd/C(170mg,0.160mmol)，向反应混合物再次充入氮气5min，然后向反应混合物中加入氢气，于室温下搅拌2h。通过硅藻土过滤，浓缩滤液，粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):378.1(MH+),0.83min。
步骤6.(+/-)-N,N-二-叔-丁基(5-((1R,3R)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯和(+/-)-N,N-二-叔-丁基(5-((1R,3S)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯
将(+/-)-N,N-二-叔-丁基(5-(3-氧代环戊基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(600mg,1.590mmol)溶于甲醇(5299μl)，然后加入NaBH4(90mg,2.385mmol)，将反应混合物于室温下搅拌30min，加入sat.NH4Cl，然后将反应混合物浓缩以除去甲醇。通过EtOAc萃取，有机部分通过sat.NaHCO3溶液、水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品产物。粗品产物经快速色谱纯化，获得(+/-)-N,N-二-叔-丁基(5-((1R,3R)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(24.9％)，LCMS(m/z):280.1(MH+),0.86min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.50-8.43(m,1H),8.43-8.33(m,1H),4.40(br.s.,1H),3.58-3.45(m,1H),2.36-2.17(m,2H),2.02-1.75(m,5H),1.50-1.39(m,18H)；(+/-)-N,N-二-叔-丁基(5-((1R,3S)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(4％)，LCMS(m/z):380.1(MH+),0.85min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.43(d,J＝1.2Hz,1H),8.36-8.32(m,1H),4.59(d,J＝2.7Hz,1H),3.69-3.57(m,1H),2.37-2.13(m,2H),2.13-2.01(m,2H),1.93-1.68(m,2H),1.49-1.39(m,18H)。
步骤7.(+/-)-(1S,3R)-3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)环戊醇
向N,N-二-叔-丁基(5-((1R,3S)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(35mg,0.092mmol)的DCM(461μl)溶液中加入HCl(922μl,3.69mmol)，将反应混合物于室温下搅拌过夜并浓缩至干，获得HCl盐。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):180.1(MH+),0.22min。将(+/-)-(1S,3R)-3-(5-氨基吡嗪-2-基)环戊醇(15mg,0.084mmol)溶于乙腈(2mL)，然后加入NBS(16.39mg,0.092mmol)，将反应混合物于室温下搅拌30min，加入水，然后将反应混合物通过EtOAc萃取，将有机部分干燥并浓缩，粗品产物直接用于下一步反应。LCMS(m/z):258.1/260.2(MH+),0.45min。根据上述方法，采用(+/-)-N,N-二-叔-丁基(5-((1R,3S)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯，获得(+/-)-(1R,3R)-3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)环戊醇。LCMS(m/z):258.1/260.1(MH+),0.50min。
步骤8.N,N-二-叔-丁基(5-(3-甲氧基环戊基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯
向N,N-二-叔-丁基(5-(3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯的非对映体混合物(50mg,0.132mmol)的MeI(2.635mL)溶液中加入氧化银(305mg,1.318mmol)，将反应混合物在反应瓶中密封，于室温下搅拌过夜。加入10equiv.的氧化银和2mL的MeI，将反应混合物于室温下搅拌一天。反应混合物通过硅藻土垫过滤，用EtOAc和甲醇洗涤。将滤液浓缩后，粗品产物经快速色谱纯化(0－40％的EtOAc/庚烷)，获得N,N-二-叔-丁基(5-((1R,3R)-3-甲氧基环戊基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(25mg)。LCMS(m/z):394.1(MH+),1.06min。
实施例12
(+/-)-4-(3-氨基-6-((1S,3R)-3-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺的合成
流程29
步骤1.3-氧代环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯
于0℃、氮气环境下，将环己烷-1,3-二酮(8g,71.3mmol)加至500mL圆底烧瓶，加入CH2Cl2(160mL)，获得澄清无色的浆液。加入碳酸钠(8.32g,78mmol)，将该悬浮液搅拌15min。1.2h内滴加溶于DCM(16mL)的三氟甲磺酸酐(13.26mL,78mmol)，保持内部温度低于1.9℃以避免二-三氟甲磺酸酯形成。将混合物于0℃搅拌45min，然后20min内温热至最多10℃。通过烧结玻璃漏斗过滤以除去Na2CO3，加入satNaHCO3。分离有机层，用盐水洗涤。经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，减压干燥，获得9.18g目标产物。LCMS(m/z):245.1(MH+),0.81min。
步骤2.3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)环己-2-烯酮
向4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼杂环戊烷)(19.09g,75mmol)和乙酸钾(11.07g,113mmol)中加入3-氧代环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯(9.18g,37.6mmol)的二氧六环(44.6mL)溶液。充入氩气15min，然后加入Pd(dppf)Cl2-DCM(0.824g,1.128mmol)。将全部反应混合物于100℃加热过夜。通过硅藻土过滤溶液，蒸发所有的溶剂。高真空干燥，获得定量的产物，其可以直接使用。LCMS(m/z):141(硼酸的MH+),0.43min。
步骤3.3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己-2-烯酮
向500mL玻璃瓶中的3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)环己-2-烯酮(4.1g,18.46mmol)中加入5-溴吡啶-2-胺(4.15g,24.00mmol)的二氧六环(69.2mL)溶液，随后加入satNa2CO3(23.08mL)和Pd(dppf)Cl2-DCM(1.350g,1.846mmol)。然后将全部混合物通过充入氩气15分钟脱气，回流过夜。加入EtOAc和水并搅拌30min。分离有机部分，水层用EtOAc萃取三次。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc(含有10％的MeOH)/庚烷洗脱，获得2g目标产物。LCMS(m/z):190(MH+),0.42min。
步骤4.3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己-2-烯醇
于室温下向3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己-2-烯酮(150mg,0.793mmol)的乙醇(2643μL)溶液中加入氯化铈(III)(293mg,1.189mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h直到所有的物质溶解。然后将反应混合物冷却至0℃，分次加入硼氢化钠(45.0mg,1.189mmol)。将反应混合物搅拌并温热至室温2h。将反应混合物冷却至0℃，缓慢加入2mL水直到出现明显的气泡，然后消失，继续搅拌30min。然后，加入硫酸钠并搅拌30min。过滤并高真空干燥，获得149mg目标产物。LCMS(m/z):192.1(MH+),0.46min。
步骤5.5-(3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己-1-烯-1-基)吡嗪-2-胺
于0℃向3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己-2-烯醇(149mg,0.779mmol)的DMF(5.5mL)溶液中加入叔-丁基氯代二甲基硅烷(294mg,1.95mmol))和1H-咪唑(212mg,3.12mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。采用satNaHCO3骤冷后，将反应混合物用EtOAc萃取三次。合并的有机层经无水硫酸钠干燥。过滤并真空浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用0－100％EtOAc/庚烷洗脱，获得238mg粗品产物，其可以直接使用。LCMS(m/z):306.9(MH+),1.04min。
步骤6.5-((1R,3S)-3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-胺
将5-(3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己-1-烯-1-基)吡嗪-2-胺(238mg,0.779mmol)和Pd/C(10％)(50mg,0.779mmol)的MeOH(7.79mL)混合物在氢气环境中搅拌3h。LCMS显示约60％的转化。加入更多的Pd/C(20mg)，再搅拌约4h。LCMS显示仍然有少量的原料存在。加入更多的Pd/C(20mg)并搅拌过夜。过滤催化剂，蒸发溶剂。残留物通过快速色谱纯化，采用0－100％EtOAc/庚烷洗脱，获得110mg需要的顺式外消旋化合物。LCMS(m/z):308.4(MH+),1.01min。
步骤7.3-溴-5-(3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-胺
于0℃向5-((1R,3S)-3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-胺(110mg,0.358mmol)的乙腈(5.50mL)溶液中加入NBS(66.9mg,0.376mmol)。将反应混合物于0℃搅拌15min。采用饱和的硫代硫酸钠和satNaHCO3骤冷后，用EtOAc萃取三次。合并有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得138mg需要的顺式外消旋化合物，其可以直接使用。LCMS(m/z):388(MH+),0.72min。
步骤8.4-(3-氨基-6-(3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺
向2mLMW瓶中的3-溴-5-(3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-胺(68mg,0.176mmol)中加入(4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基)硼酸(72.1mg,0.264mmol)、PdCl2(dppf)-DCM(12.88mg,0.018mmol)、DME(1.32mL)和2MNa2CO3溶液(0.44mL)。将反应混合物于微波合成器中加热(12min,120℃)。反应混合物采用EtOAc稀释，用水洗涤三次，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc(含有10％的MeOH)/庚烷洗脱，获得60mg粗品顺式外消旋化合物，其无需进一步纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):535.4(MH+),1.31min。
步骤9.4-(3-氨基-6-((1R,3S)-3-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺
将4-(3-氨基-6-(3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺(61mg,0.114mmol)在6NHCl(0.29mL)、THF(0.57mL)和MeOH(0.285mL)中的混合物搅拌2h。加入固体碳酸氢钠中和反应混合物。蒸发溶剂，将25％的残留物溶于DMSO，采用auto-prep纯化，获得15mg需要的顺式外消旋化合物，为TFA盐。LCMS(m/z):421.3(MH+),0.74min。1HNMR(400MHz,MeOD-d4)δppm7.82-7.69(m,2H)7.62-7.45(m,2H)7.37-7.12(m,5H)4.52(s,2H)3.66-3.52(m,1H)2.75-2.60(m,1H)2.11-2.01(m,1H)1.97-1.70(m,3H)1.52-1.29(m,3H)1.24-1.08(m,1H)。
(+/-)-3-溴-5-((1R,3S)-3-甲氧基环己基)吡嗪-2-胺的合成
流程30
步骤1.(+/-)-N,N-二-Boc-3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己-2-烯酮
向3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己-2-烯酮(1.3g,6.87mmol)的DCM(34.0mL)溶液中加入二碳酸二叔丁基酯(4.50g,20.61mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.084g,0.69mmol)，将混合物于室温下搅拌过夜。将反应混合物用DCM稀释，然后用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤。然后将分离的有机层用硫酸钠干燥并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(0－50％的乙酸乙酯庚烷)，获得1.3g的(+/-)-N,N-二-Boc-3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己-2-烯酮。LCMS(m/z):390.3(MH+),1.02min。
步骤2.(+/-)-N,N-二-Boc-3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己酮
将(+/-)-N,N-二-Boc-3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己-2-烯酮(1.3g,3.34mmol)和Pd/C(10％)(400mg,10.57mmol)中MeOH(33.4mL)中的混合物在氢气环境中搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤，用MeOH和EtOAc充分洗涤。蒸发滤液，获得(+/-)-N,N-二-Boc-3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己酮，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):392.9(MH+),0.97min。
步骤3.(+/-)-N,N-二-Boc-(1S,3R)-3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己醇
将(+/-)-N,N-二-Boc-3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己酮(600mg,1.533mmol)溶于EtOH(17.2mL)，然后加入NaBH4(87mg,2.299mmol)。将反应混合物于室温下搅拌30min。加入水骤冷反应物后，浓缩反应混合物以除去甲醇，通过EtOAc萃取，有机层通过NaHCO3溶液、水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，获得粗品(+/-)-N,N-二-Boc-(1S,3R)-3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己醇(含有5％的反式异构体)，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):394.2(MH+),0.89min。
步骤4.(+/-)-N,N-二-Boc-5-((1R,3S)-3-甲氧基环己基)吡嗪-2-胺
将(+/-)-N,N-二-Boc-(1S,3R)-3-(5-氨基吡嗪-2-基)环己醇(350mg,0.89mmol)、氧化银(2.06g,8.9mmol)、乙腈(2.224mL)和甲基碘(55.6μL,0.890mmol)的混合物搅拌过夜。加入EtOAc后，将反应混合物过滤。蒸发挥发物后，粗品产物经快速色谱纯化(0－100％的EtOAc庚烷)，获得184mg的(+/-)-N,N-二-Boc-5-((1R,3S)-3-甲氧基环己基)吡嗪-2-胺(184mg,0.452mmol)。LCMS(m/z):408.3(MH+),1.10min。
步骤5.(+/-)-3-溴-5-((1R,3S)-3-甲氧基环己基)吡嗪-2-胺
向(+/-)-N,N-二-Boc-5-((1R,3S)-3-甲氧基环己基)吡嗪-2-胺(184mg,0.452mmol)的DCM(4.515mL)溶液中加入HCl(4M的二氧六环溶液)(4.515mL,18.06mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。真空除去挥发物后，将残留物溶于EtOAc。有机层通过碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，以定量收率获得(+/-)-5-((1R,3S)-3-甲氧基环己基)吡嗪-2-胺。LCMS(m/z):208(MH+),0.43min。于0℃向(+/-)-5-((1R,3S)-3-甲氧基环己基)吡嗪-2-胺(54mg,0.261mmol)的乙腈(4.008μL)溶液中加入NBS(48.7mg,0.274mmol)。将反应混合物于0℃搅拌15min。采用NaHCO3骤冷后，用EtOAc萃取三次。有机层通过水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，以定量收率获得75mg的(+/-)-3-溴-5-((1R,3S)-3-甲氧基环己基)吡嗪-2-胺。LCMS(m/z):286(MH+),0.73min。
实施例13
(+/-)-4-(3-氨基-6-(3-(甲基磺酰基)环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺的合成
流程31
步骤1.(+/-)-N-(3-溴-5-(3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-基)新戊酰胺
将新戊酰氯(71.5μL,0.569mmol)滴加至搅拌并冷却(0℃)的(+/-)-3-溴-5-((1R,3S)-3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-胺(110mg,0.285mmol)和TEA(159μL,1.139mmol)的CH2Cl2(949μL)溶液中。将红色混合物于0℃搅拌1h，然后于室温下搅拌2h。加入EtOAc和SatNaHCO3并充分搅拌。分离有机层，水层用EtOAc充分萃取。合并的EtOAc层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物经硅胶快速色谱纯化，采用EtOAc/庚烷洗脱，获得(+/-)-N-(3-溴-5-(3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-基)新戊酰胺97mg，72.4％的收率。LCMS(m/z):472.3(MH+),1.19min。
步骤2.(+/-)-N-(3-溴-5-((1R,3S)-3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-基)新戊酰胺
将(+/-)-N-(3-溴-5-(3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-基)新戊酰胺(97mg,0.206mmol)在6NHCl(687μL)、THF(687μL)、MeOH(687μL)中的混合物搅拌2h。LCMS显示反应完成。加入固体碳酸氢钠以中和HCl。溶于EtOAc和水。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得72mg的粗品(+/-)-N-(3-溴-5-((1R,3S)-3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-基)新戊酰胺，98％的收率。LCMS(m/z):358.6(MH+),0.70min。
步骤3.(+/-)-(1S,3R)-3-(6-溴-5-新戊酰氨基吡嗪-2-基)环己基甲磺酸酯
于0℃向(+/-)-N-(3-溴-5-((1R,3S)-3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-基)新戊酰胺(72mg,0.202mmol)的CH2Cl2(2021μL)的混合物中加入TEA(56.3μL,0.404mmol)和甲磺酰氯(18.90μL,0.243mmol)。将获得的混合物于室温下搅拌3h。加入另一份TEA(56.3μL,0.404mmol)和甲磺酰氯(18.90μL,0.243mmol)并搅拌6h。通过加入水处理反应物，有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc/庚烷洗脱，获得54mg的(+/-)-(1S,3R)-3-(6-溴-5-新戊酰氨基吡嗪-2-基)环己基甲磺酸酯，61.5％的收率。LCMS(m/z):436.1(MH+),0.75min。
步骤4.(+/-)-(1S,3R)-3-(6-(4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基)-5-新戊酰氨基吡嗪-2-基)环己基甲磺酸酯
向2.0mLMW瓶中的顺式外消旋(+/-)-3-(6-溴-5-新戊酰氨基吡嗪-2-基)环己基甲磺酸酯(54mg,0.124mmol)中加入(4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基)硼酸(50.9mg,0.186mmol)、PdCl2(dppf)(9.10mg,0.012mmol)、DME(1166μL)和2MNa2CO3溶液(389μL)。将反应混合物于微波合成器中加热(12min,80℃)。将反应混合物采用EtOAc稀释，用水洗涤三次，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc(含有10％的MeOH)洗脱，获得73mg的(+/-)-(1S,3R)-3-(6-(4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基)-5-新戊酰氨基吡嗪-2-基)环己基甲磺酸酯，其无需进一步纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):583.4(MH+),0.87min。
步骤5.(+/-)-N-苄基-2-氟-4-(6-((1R,3R)-3-(甲硫基)环己基)-3-新戊酰氨基吡嗪-2-基)苯甲酰胺
将(+/-)-(1S,3R)-3-(6-(4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基)-5-新戊酰氨基吡嗪-2-基)环己基甲磺酸酯(25mg,0.043mmol)和甲烷硫醇钠(24.09mg,0.344mmol)的MeOH(430μL)混合物于80℃加热2h。除去溶剂，残留物通过快速色谱纯化，采用EtOAc(含有10％的MeOH)/庚烷洗脱，获得25mg粗品(+/-)-N-苄基-2-氟-4-(6-((1R,3R)-3-(甲硫基)环己基)-3-新戊酰氨基吡嗪-2-基)苯甲酰胺，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):535.3(MH+),1.09min。
步骤6.(+/-)-N-苄基-2-氟-4-(6-((1R,3R)-3-(甲基磺酰基)环己基)-3-新戊酰氨基吡嗪-2-基)苯甲酰胺
于0℃向反式外消旋(+/-)-N-苄基-2-氟-4-(6-((1R,3R)-3-(甲硫基)环己基)-3-新戊酰氨基吡嗪-2-基)苯甲酰胺(35mg,0.065mmol)的MeOH(327μL)溶液中加入过硫酸氢钾(52.3mg,0.085mmol)的水(327μL)溶液。将反应混合物于0℃搅拌，然后于室温下搅拌3h。反应混合物通过2当量的硫代硫酸钠(20.70mg,0.131mmol)的2mL水溶液于0℃骤冷。搅拌30min后，通过加入6NNaOH于0℃碱化。采用EtOAc稀释，经硫酸钠干燥三次。然后过滤并浓缩，获得25mg的(+/-)-N-苄基-2-氟-4-(6-((1R,3R)-3-(甲基磺酰基)环己基)-3-新戊酰氨基吡嗪-2-基)苯甲酰胺，67.4％的收率，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):567.4(MH+),0.90min。
步骤7.(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-(甲基磺酰基)环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺
向(+/-)-N-苄基-2-氟-4-(6-((1R,3R)-3-(甲基磺酰基)环己基)-3-新戊酰氨基吡嗪-2-基)苯甲酰胺(25mg,0.044mmol)的MeOH(221μL)溶液中加入碳酸钾(61.0mg,0.441mmol)。将获得的混合物于80℃加热4h。将反应混合物过滤并浓缩。采用auto-prep纯化，获得5.4mg的(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-(甲基磺酰基)环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺，20.11％的收率。LCMS(m/z):483.1(MH+),0.78min。1HNMR(400MHz,MeOD-d4)δppm8.00–7.81(m,2H)7.76-7.56(m,2H)7.43-7.16(m,5H)4.65-4.55(m,2H)3.61-3.51(m,1H),3.46-3.36(m,2H)2.87-2.97(m,3H)2.61-2.48(m,1H)2.19–1.95(m,3H)1.92-1.78(m,3H)。
实施例14
4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺的合成
流程32
步骤1.5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-胺
向5-溴吡嗪-2-胺(225mg,1.293mmol)中加入4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(482mg,1.810mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(84mg,0.103mmol)、DME(3.5mL)，最后加入碳酸钠2M(1.616mL,3.23mmol)。将反应物于120℃微波加热15min。向反应物中加入80mL的DCM，用水洗涤(1×)，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物。粗品通过12克(固体负载量)硅胶柱色谱纯化，采用10－90％乙酸乙酯和庚烷洗脱。将需要的组分浓缩至恒重，获得为游离碱的173mg目标产物，可以直接使用(56％的收率)。LCMS(m/z):234.2(MH+),0.43min；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.01(d,J＝1.2Hz,1H),7.80(d,J＝1.2Hz,1H),6.33(s,2H),6.27(t,J＝3.9Hz,1H),3.89(s,4H),2.52(d,J＝1.6Hz,2H),2.33(br.s.,2H),1.76(t,J＝6.7Hz,2H)。
步骤2.5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-胺
在用氩气排空的圆底烧瓶中，向5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-胺(645mg,2.77mmol)中加入Pd-C10％degaussa(294mg,0.277mmol)。然后，在氩气环境下，采用注射器加入MeOH(10mL)，最后充入氢气。排空烧瓶，再次充入氢(6×)。在氢气环境下，将反应物于室温下搅拌共16h，通过LCMS监测。向反应物中充入氩气，加入25mL的DCM。粗品混合物通过硅藻土短柱过滤，浓缩至恒重，获得为游离碱的635mg目标产物，直接使用(98％的收率)。LCMS(m/z):236.2(MH+),0.41min；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.78(d,J＝1.2Hz,1H),7.74(d,J＝1.2Hz,1H),6.09(s,2H),3.85(s,4H),2.52-2.60(m,1H),1.65-1.78(m,6H),1.49-1.61(m,2H)。
步骤3.3-溴-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-胺
向5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-胺(620mg,2.64mmol)中加入乙腈(20mL)，然后2min内分次加入NBS(469mg,2.64mmol)。将反应物于室温下搅拌20min，采用饱和的碳酸氢钠溶液骤冷，加入250mL乙酸乙酯。将水层萃取，有机层用饱和的碳酸氢钠、水(2×)、饱和的盐溶液洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物，获得650mg目标产物，可以直接使用(79％的收率)。LCMS(m/z):314.1/316.1(MH+),0.61min。
步骤4.4-(3-氨基-6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺
向3-溴-5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-胺(630mg,2.005mmol)中加入(4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基)硼酸(767mg,2.81mmol)、PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(164mg,0.201mmol)、DME(9mL)，随后加入碳酸钠2M(3.01mL,6.02mmol)。将反应物于115℃微波加热12min。向反应物中加入400mL乙酸乙酯，用水洗涤(2×)，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物。粗品通过40克柱的硅胶柱色谱纯化，采用20－100％的乙酸乙酯庚烷洗脱。将需要的组分浓缩至恒重，获得为游离碱的432mg目标产物，可以直接使用(47％的收率)。LCMS(m/z):463.2(MH+),0.82min；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.94-8.81(m,1H),7.89(s,1H),7.80-7.69(m,1H),7.67-7.52(m,2H),7.33(d,J＝4.3Hz,4H),7.27-7.18(m,1H),6.09(s,2H),4.49(d,J＝5.9Hz,2H),3.85(s,4H),2.70-2.61(m,1H),1.84-1.67(m,6H),1.65-1.48(m,2H)。
步骤5.4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺(170mg,0.368mmol)中加入乙腈(3mL)、水(2mL)，然后加入HCl3M水溶液(0.613mL,1.838mmol)。将反应物于室温下搅拌30min，通过LCMS监测。向反应物中加入200mL乙酸乙酯，采用过量的1MNaOH碱化。萃取水层，有机层用水洗涤(3×)，过滤并浓缩至残留物，获得为游离碱的目标产物。推定定量收率(0.368mmol)。LCMS(m/z):419.3(MH+),0.75min。
步骤6.4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺(77mg,0.184mmol)中加入MeOH(3mL)，冷却至0℃。然后加入硼氢化钠(6.96mg,0.184mmol)。将反应物搅拌20min，同时使其温热至室温，通过LCMS监测。粗品的LCMS显示如预期的约9:1(反式\顺式)异构体。反应物采用过量的饱和的氯化钠骤冷，于室温下搅拌1小时。然后加入150mL乙酸乙酯，采用饱和的碳酸氢钠、水(2×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物，获得73mg粗品产物。将一半的粗品产物(36.5mg)溶于2.0mL的DMSO，过滤，通过制备性HPLC纯化，冷冻干燥，获得16.3mg的目标产物4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺，为TFA盐(32％的收率)。LCMS(m/z):421.3(MH+),0.69min；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.82(br.s.,1H),7.83(s,1H),7.64-7.73(m,1H),7.45-7.61(m,2H),7.25-7.31(m,4H),7.14-7.23(m,1H),4.43(d,J＝5.9Hz,2H),1.66-1.91(m,3H),1.38-1.57(m,2H),1.11-1.31(m,2H)。
实施例15
4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺的合成
流程33
向4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺(77mg,0.184mmol)中加入THF(3mL)，冷却至0℃。然后加入L-Selectride的1MTHF溶液(0.460mL,0.460mmol)。将反应物搅拌20min，同时将其温热至室温，通过LCMS监测。粗品LCMS显示如预期的约大于9:1(顺式/反式)异构体。反应物采用过量的5MNaOH碱化，于室温下搅拌1小时。然后加入150mL乙酸乙酯，用水(3×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物，获得75mg产物，可以直接使用。将一半的粗品产物(36.5mg)溶于2.0mL的DMSO，过滤，通过制备性HPLC纯化，冷冻干燥，获得23mg目标产物4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺，为TFA盐(45％的收率)。LCMS(m/z):421.3(MH+),0.72min；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.87(br.s.,1H),7.89(s,1H),7.79-7.70(m,1H),7.67-7.45(m,2H),7.33(d,J＝4.3Hz,4H),7.28-7.21(m,1H),6.06(s,2H),4.49(d,J＝5.9Hz,2H),4.30(br.s.,1H),3.84(br.s.,1H),2.01-1.84(m,2H),1.75-1.64(m,2H),1.60-1.43(m,4H)。
实施例16
4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-(甲基磺酰基)环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺的合成
流程34
步骤1.N-苄基-2-氟-4-(6-((1r,4r)-4-羟基环己基)-3-新戊酰氨基吡嗪-2-基)苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺(0.105g,0.25mmol)中加入DCM(2.5mL)、TEA(0.105mL,0.750mmol)，然后加入新戊酰氯(0.045g,0.375mmol)。将反应物于室温下搅拌3h，通过LCMS监测。向反应物中加入150mL乙酸乙酯，采用过量的饱和的碳酸氢盐碱化。有机层用水(3×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物，获得为游离碱的产物，可以直接使用。推定定量收率(0.25mmol)。LCMS(m/z):505.4(MH+),0.82min。
步骤2.(1r,4r)-4-(6-(4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基)-5-新戊酰氨基吡嗪-2-基)环己基甲磺酸酯
向N-苄基-2-氟-4-(6-((1r,4r)-4-羟基环己基)-3-新戊酰氨基吡嗪-2-基)苯甲酰胺(125mg,0.248mmol)中加入DCM(2.5mL)、TEA(0.104mL,0.743mmol)，冷却至0℃，然后加入甲磺酰氯(42.6mg,0.372mmol)。将反应物温热至室温并搅拌2h，通过LCMS监测。然后加入另外的TEA(0.104mL,0.743mmol)和甲磺酰氯(42.6mg,0.372mmol)，于室温下再搅拌3h，总共5h。向反应物中加入150mL乙酸乙酯，采用过量的饱和的碳酸氢盐碱化。有机层用水(3×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物，获得为游离碱的产物，可以直接使用。推定定量收率(0.248mmol)。LCMS(m/z):583.3(MH+),0.90min。
步骤3.N-苄基-2-氟-4-(6-((1s,4s)-4-(甲硫基)环己基)-3-新戊酰氨基吡嗪-2-基)苯甲酰胺
向(1r,4r)-4-(6-(4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基)-5-新戊酰氨基吡嗪-2-基)环己基甲磺酸酯(130mg,0.223mmol)中加入叔-丁醇(3.5mL)、硫代甲醇钠(235mg,3.35mmol)。将反应物于80℃加热1h，通过LCMS监测。将反应物冷却。然后加入75mL乙酸乙酯，采用饱和的碳酸氢钠、水(2×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物，获得为游离碱的产物，可以直接使用。推定定量收率(0.223mmol)。LCMS(m/z):535.3(MH+),1.06min。
步骤4.N-苄基-2-氟-4-(6-((1s,4s)-4-(甲基磺酰基)环己基)-3-新戊酰氨基吡嗪-2-基)苯甲酰胺
向N-苄基-2-氟-4-(6-((1s,4s)-4-(甲硫基)环己基)-3-新戊酰氨基吡嗪-2-基)苯甲酰胺(118mg,0.221mmol)中加入DCM(4mL)。然后，于室温、搅拌下，缓慢滴加mCPBA(118mg,0.527mmol)的DCM(1mL)溶液直到反应完成，通过LCMS监测。然后加入75mL乙酸乙酯，用饱和的碳酸氢钠、水(2×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物。将粗品溶于5mL的DMSO，过滤，通过制备性HPLC纯化。合并需要的组分。产物为含有0.1％TFA的100mL的乙腈/水的溶液，可以直接用于下一步骤。推定定量收率(0.221mmol)。LCMS(m/z):567.4(MH+),0.85min。
步骤5.4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-(甲基磺酰基)环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺
向N-苄基-2-氟-4-(6-((1s,4s)-4-(甲基磺酰基)环己基)-3-新戊酰氨基吡嗪-2-基)苯甲酰胺(120mg,0.212mmol)的含有0.1％TFA的水(60mL)和乙腈(40mL)溶液中加入HClconc.(2mL,65.8mmol)。将反应物于60℃搅拌12h，通过LCMS监测。将粗品冷冻干燥至残留物。将残留物溶于DMSO，通过制备性HPLC纯化，冷冻干燥，获得10.2mg目标产物4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-(甲基磺酰基)环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺，为TFA盐，总收率为6％。LCMS(m/z):483.2(MH+),0.72min；1HNMR(CD3OD)δppm7.80(s,1H),7.76(t,J＝7.6Hz,1H),7.63(dd,J＝8.2,1.6Hz,1H),7.55(dd,J＝11.7,1.2Hz,1H),7.22-7.34(m,4H),7.10-7.20(m,1H),4.52(s,2H),3.12(dt,J＝8.9,4.4Hz,1H),2.96(t,J＝4.9Hz,1H),2.81(s,3H),2.16-2.30(m,2H),1.99-2.13(m,2H),1.86-1.96(m,2H),1.70-1.85(m,2H)。
实施例17
4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-(甲基磺酰基)环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺的合成
流程35
根据流程35，采用4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺(实施例15)，获得为TFA盐的4.5mg目标产物4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-(甲基磺酰基)环己基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺，总收率为3％。LCMS(m/z):483.2(MH+),0.71min；1HNMR(CD3OD)δppm7.80-7.89(m,2H),7.68(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.60(dd,J＝11.7,1.6Hz,1H),7.31-7.42(m,4H),7.19-7.30(m,1H),4.61(s,2H),3.05-3.15(m,1H),2.92(s,3H),2.67-2.78(m,1H),2.34(br.s.,2H),2.11(br.s.,2H),1.60-1.82(m,4H)。
实施例18
N-((S)-2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-甲氧基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程36
步骤1.4-(5-氨基吡嗪-2-基)环己酮
向5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-胺(8.68g,45.4mmol)中加入乙腈(368mL)、水(245mL)和3MHCl(76mL)。将反应物于室温下搅拌30min。反应物采用过量的1MNaOH碱化，然后用乙酸乙酯稀释。分离有机层。水层采用EtOAc/2-甲基THF(1:1)充分萃取三次。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得6.91g为游离碱的产物。LCMS(m/z):192.12(MH+),0.30min。
步骤2.亚胺二甲酸2-(5-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯
向4-(5-氨基吡嗪-2-基)环己酮(3.0g,15.69mmol)的DCM(105mL)溶液中加入二碳酸二叔丁基酯(10.27g,47.1mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.192g,1.569mmol)。将混合物于室温下搅拌过夜。反应混合物用DCM稀释，然后用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤。分离的有机层经硫酸钠干燥并浓缩。通过快速色谱纯化，采用0－50％的乙酸乙酯庚烷溶液洗脱，获得2.2g目标产物。LCMS(m/z):392.7(MH+),0.91min。
步骤3.亚胺二甲酸2-(5-(4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯
将亚胺二甲酸2-(5-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯(350mg,0.894mmol)溶于EtOH(10mL)，然后加入NaBH4(50.7mg,1.341mmol)。将反应混合物于室温下搅拌30min。TLC显示反式和顺式的比例为约85:15。加入饱和的NaHCO3溶液骤冷反应物。然后将反应混合物通过EtOAc/2-甲基THF(1:1)萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗品产物，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):394.3(MH+),0.89min。
步骤4.亚胺二甲酸2-(5-(4-甲氧基环己基)吡嗪-2-基)-1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯
将亚胺二甲酸2-(5-(4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯(350mg,0.890mmol)、氧化银(1.649g,7.12mmol)、乙腈(2.22mL)和甲基碘(1.112mL,17.79mmol)的混合物搅拌过夜。加入EtOAc，过滤固体。蒸发溶剂，残留物通过快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc/庚烷洗脱，获得168mg需要的反式化合物，46.3％的收率。LCMS(m/z):408.3(MH+),1.10min。
步骤5.5-((1r,4r)-4-甲氧基环己基)吡嗪-2-胺
向亚胺二甲酸2-(5-(4-甲氧基环己基)吡嗪-2-基)-1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯(168mg,0.412mmol)的DCM(4.123mL)溶液中加入HCl(4M的二氧六环溶液)(4.123mL,16.49mmol)，将反应混合物于室温下搅拌过夜。浓缩，加入EtOAc。用satNaHCO3和水洗涤。水层用EtOAc和2-甲基THF(1:1)萃取三次。经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得需要的反式产物。LCMS(m/z):208(MH+),0.42min。
步骤6.3-溴-5-((1r,4r)-4-甲氧基环己基)吡嗪-2-胺
于0℃向5-((1r,4r)-4-甲氧基环己基)吡嗪-2-胺(92mg,0.444mmol)的乙腈(8.877mL)溶液中加入NBS(83mg,0.466mmol)。将反应混合物于0℃搅拌15min。采用satNa2SO3和NaHCO3骤冷后，用EtOAc和2-甲基THF(1:1)萃取三次。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得定量收率的127mg需要的反式化合物。LCMS(m/z):288(MH+),0.72min。
步骤7.((S)-2-(4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-甲氧基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯酰氨基)-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
在2mLMW瓶中，向3-溴-5-((1r,4r)-4-甲氧基环己基)吡嗪-2-胺(35mg,0.122mmol)中加入(S)-(4-((2-((叔-丁氧基羰基)氨基)-1-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)硼酸(64.1mg,0.147mmol)、PdCl2(dppf)(8.95mg,0.012mmol)、DME(917μL)和2MNa2CO3溶液(306μL)。将反应混合物于微波合成器中加热(12min,120℃)。反应混合物采用EtOAc稀释，用水洗涤三次，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，获得28mg需要的反式产物，38.3％的收率。
步骤8.N-((S)-2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-甲氧基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺
将((S)-2-(4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-甲氧基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(28mg,0.047mmol)、TFA(0.4mL,0.047mmol)和CH2Cl2(1mL)的混合物于室温下搅拌30min。蒸发溶剂，将残留物溶于DMSO，采用auto-prep纯化，获得15mg需要的反式产物，为TFA盐，51.3％的收率。LCMS(m/z):498.2(MH+),0.76min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.94-7.85(m,2H)7.70(dd,J＝8.22,1.56Hz,1H)7.62(dd,J＝11.93,1.37Hz,1H)7.55(s,1H)7.49-7.34(m,3H)5.49(dd,J＝9.00,5.87Hz,1H)3.53-3.41(m,2H)3.38(s,3H)2.70-2.59(m,2H)2.20(d,J＝9.78Hz,2H)1.98(d,J＝12.91Hz,2H)1.65(qd,J＝13.04,3.13Hz,2H)1.41-1.27(m,2H)。
(1s,4s)-4-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-1-甲基环己醇和(1r,4r)-4-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-1-甲基环己醇
流程37
步骤1.(5-((1s,4s)-4-羟基-4-甲基环己基)吡嗪-2-基)氨基甲酸叔-丁基酯和(5-((1r,4r)-4-羟基-4-甲基环己基)吡嗪-2-基)氨基甲酸叔-丁基酯
于-78℃将N,N-二-Boc-4-(5-氨基吡嗪-2-基)环己酮(657mg,1.678mmol)的THF(11.8mL)溶液采用甲基锂(1.469mL,2.350mmol)处理。将反应物于-78℃搅拌2h。再次加入甲基锂(1.469mL,2.350mmol)后，将反应混合物于-78℃再搅拌2h。再次重复该过程。然后，反应混合物采用甲醇和水骤冷。将获得的混合物浓缩，将残留物悬浮于乙酸乙酯。有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品非对映异构体混合物通过色谱纯化(0－100％的乙酸乙酯己烷)。对于(5-((1s,4s)-4-羟基-4-甲基环己基)吡嗪-2-基)氨基甲酸叔-丁基酯(26.7％的收率)。LCMS(m/z):308.7(MH+),0.79min。对于(5-((1r,4r)-4-羟基-4-甲基环己基)吡嗪-2-基)氨基甲酸叔-丁基酯(23.3％的收率),LCMS(m/z):308.7(MH+),0.75min。
步骤2.(1s,4s)-4-(5-氨基吡嗪-2-基)-1-甲基环己醇
向(5-((1s,4s)-4-羟基-4-甲基环己基)吡嗪-2-基)氨基甲酸叔-丁基酯(138mg,0.449mmol)的DCM溶液中加入HCl(4M的二氧六环溶液)(4489μL,17.96mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。采用EtOAc稀释，采用satNaHCO3洗涤。不经分离，经硫酸钠干燥。过滤，用EtOAc洗涤。浓缩，以定量收率获得93mg目标产物。LCMS(m/z):208(MH+),0.41min。
步骤3.(1s,4s)-4-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-1-甲基环己醇
于0℃向(1s,4s)-4-(5-氨基吡嗪-2-基)-1-甲基环己醇(93mg,0.449mmol)的乙腈(8974μL)溶液中加入NBS(80mg,0.449mmol)。将反应混合物于0℃搅拌15min。采用NaHCO3骤冷。用EtOAc萃取三次。合并有机层，用水、盐水洗涤。经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得100mg的(1s,4s)-4-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-1-甲基环己醇，78％的收率。LCMS(m/z):288(MH+),0.60min。
步骤4.(1r,4r)-4-(5-氨基吡嗪-2-基)-1-甲基环己醇和步骤5.(1r,4r)-4-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-1-甲基环己醇
在步骤2和3之后，采用(1r,4r)-4-(5-氨基吡嗪-2-基)-1-甲基环己醇，获得(1r,4r)-4-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-1-甲基环己醇。LCMS(m/z):288(MH+),0.57min。
实施例19和20
3-(5-氨基-6-(4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)丙酸甲酯和4-(3-氨基-6-(3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺
流程38
步骤1.3-(5-氨基吡嗪-2-基)丙炔酸甲基酯
向5mL微波瓶中加入5-碘吡嗪-2-胺(100mg,0.452mmol)、丙炔酸甲酯(161μL,1.810mmol)、碳酸钾(125mg,0.905mmol)、碘化铜(I)(3.45mg,0.018mmol)和THF(1508μL)。将反应混合物于65℃加热2h。反应混合物用水稀释，用EtOAc萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。粗品产物经快速色谱纯化(20％的EtOAc的DCM溶液)，获得3-(5-氨基吡嗪-2-基)丙炔酸甲酯(38％)。LCMS(m/z):178.4(MH+),0.48min。
步骤2.3-(5-氨基吡嗪-2-基)丙酸甲酯
向3-(5-氨基吡嗪-2-基)丙炔酸甲酯(30mg,0.169mmol)的MeOH(847μL)溶液中加入Pd-C(36.0mg,0.034mmol)。向溶液中通过氮气流脱气15min。用氢气排空并配备氢气囊后，将反应混合物搅拌16h。反应混合物通过硅藻土过滤。真空除去挥发物。获得粗品3-(5-氨基吡嗪-2-基)丙酸甲酯(81％)，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):182.1(MH+),0.31min。
步骤3.3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸甲酯
向3-(5-氨基吡嗪-2-基)丙酸甲酯(25mg,0.138mmol)的CH3CN(690μL)溶液中加入NBS(24.56mg,0.138mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h。采用Na2S2O3溶液骤冷后，将反应混合物与NaHCO3溶液一起搅拌20min，用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。获得粗品3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸甲酯(28％)。LCMS(m/z):260.2/262.2(MH+),0.54min。
步骤4.3-(5-氨基-6-(4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)丙酸甲酯
向3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸甲酯(10mg,0.038mmol)、4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基硼酸(13.65mg,0.050mmol)和PdCl2(dppf)(2.81mg,3.84μmol)的DME(256μL)溶液中加入2MNa2CO3(3.87mL)。将反应混合物于微波合成器中加热(120℃,10min)。LCMS(m/z):409.2(酯的MH+),0.75min；395.2(非常少量的酸但是混有硼酸酯的MH+),0.66min。向反应混合物中加入无水硫酸钠，过滤并浓缩。粗品产物通过制备性HPLC纯化，冷冻干燥，获得3-(5-氨基-6-(4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)丙酸甲酯，为TFA盐(12％)。LCMS(m/z):409.1(MH+),0.73min；1HNMR(400MHz,MeOH-d4)δppm7.89-7.76(m,2H),7.69-7.61(m,1H),7.60-7.51(m,1H),7.42-7.28(m,5H),7.28-7.20(m,1H),4.64-4.55(m,2H),3.62(s,3H),3.06-2.93(m,2H),2.79-2.67(m,2H)。
步骤5.3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸
向3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸甲酯(55mg,0.211mmol)的MeOH(961μL)和H2O(96μL)溶液中加入碳酸钾(170mg,1.230mmol)。将反应混合物搅拌过夜。向反应混合物中加入无水Na2SO4。采用EtOAc稀释(3mL)并过滤后，真空除去挥发物。获得粗品3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):246.0/248.0(MH+,major),0.26min。
步骤6.3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-N-甲基丙酰胺
向3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸(32mg,0.130mmol)的DMF(1300μL)溶液中加入TBTU(62.6mg,0.195mmol)、DIEA(68.1μL,0.390mmol)和甲胺盐酸盐(9.66mg,0.143mmol)。将反应混合物搅拌3h。反应混合物用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。获得粗品3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-N-甲基丙酰胺(74％)，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):259/261(MH+),0.35min。
步骤7.4-(3-氨基-6-(3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺
根据流程38步骤4，采用3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-N-甲基丙酰胺，获得4-(3-氨基-6-(3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺(24％)。LCMS(m/z):408.1(MH+),0.51min；1HNMR(400MHz,MeOH-d4)δppm7.89-7.78(m,2H),7.68-7.51(m,2H),7.41-7.29(m,4H),7.26(d,J＝7.1Hz,1H),4.60(s,2H),2.98(t,J＝7.3Hz,2H),2.66(s,3H),2.57(t,J＝7.3Hz,2H)。
2-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)乙醇的合成
流程39
步骤1.5-烯丙基吡嗪-2-胺
向5-溴吡嗪-2-胺(1.3g,7.47mmol)溶液中加入2-烯丙基-,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(1.883g,11.21mmol)、PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(0.610g,0.747mmol)和CsF(3.40g,22.41mmol)，向反应混合物中充入氮气。然后将反应混合物在油浴中于100℃加热3h。反应混合物通过硅藻土过滤，通过EtOAc洗涤，将滤液在EtOAc和水之间分配。有机部分经无水硫酸钠干燥并真空浓缩，粗品产物经快速柱色谱纯化，得到5-烯丙基吡嗪-2-胺，37％的收率。LCMS(m/z):136.0(MH+),0.30min。
步骤2.2-(5-氨基吡嗪-2-基)乙醇
将5-烯丙基吡嗪-2-胺(180mg,1.332mmol)的DCM(26.6mL)溶液冷却至-78℃，然后通入臭氧10min直到溶液转变为蓝色。然后充入氮气5min。缓慢加入NaBH4(151mg,4.00mmol)的乙醇(10mL)溶液，将反应混合物温热至室温。1h后，缓慢加入Sat.NH4Cl，然后反应混合物通过CHCl3/IPA(7:3)(3次)萃取，将有机部分干燥并浓缩，得到粗品产物。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):140.0(MH+),0.21min。
步骤3.2-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)乙醇
于0℃向2-(5-氨基吡嗪-2-基)乙醇(30mg,0.216mmol)的CH3CN(719μL)溶液中加入NBS(38.4mg,0.216mmol)。将反应混合物于0℃搅拌30min。反应混合物通过sat.NaHCO3骤冷，然后通过EtOAc萃取，合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥。过滤并真空浓缩，获得粗品2-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)乙醇，其无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):218.0/220.0(MH+),0.33min。
3-溴-5-(2-甲氧基乙基)吡嗪-2-胺的合成
流程40
步骤1.N,N-二-叔-丁基(5-烯丙基吡嗪-2-基)氨基甲酸酯
于室温下，向5-烯丙基吡嗪-2-胺(1.2g,8.88mmol)的CH2Cl2(29.6mL)溶液中加入Boc2O(4.07g,18.64mmol)和DMAP(1.627g,13.32mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。采用satNaHCO3骤冷后，反应混合物用CH2Cl2萃取三次。合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥。过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱纯化，获得为白色固体的目标产物(1.1g,37％的收率)。Rf(TLC)＝0.3(20％的EtOAc己烷)。LCMS(m/z):336.2(MH+),1.04min。
步骤2.N,N-二-叔-丁基(5-(2-羟基乙基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯
将N,N-二-叔-丁基(5-烯丙基吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(1.1g,3.28mmol)的DCM(32.8mL)溶液冷却至-78℃，充入臭氧直到蓝色出现，然后充入氮气5min。缓慢加入NaBH4(0.74g,19.6mmol)的甲醇(20mL)溶液，将反应混合物温热至室温。2h后，加入饱和的NH4Cl溶液，将反应混合物在EtOAc和水之间分配。有机部分用NaHCO3、水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):340.3(MH+),0.77min。
步骤3.N,N-二-叔-丁基(5-(2-甲氧基乙基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯
向N,N-二-叔-丁基(5-(2-羟基乙基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(240mg,0.707mmol)的MeI(7.7mL)溶液中加入氧化银(983mg,4.24mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。反应混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc和甲醇洗涤，有机部分采用sat.NaHCO3、水和盐水洗涤，干燥并浓缩。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):354.2(MH+),0.92min。
步骤4.5-(2-甲氧基乙基)吡嗪-2-胺
向N,N-二-叔-丁基(5-(2-甲氧基乙基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(200mg,0.566mmol)的DCM(1.9mL)溶液中加入TFA(872μL,11.32mmol)，将反应混合物于室温下搅拌1h，向反应混合物中加入5mL甲苯并浓缩至干。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):154.1(MH+),0.27min。
步骤5.3-溴-5-(2-甲氧基乙基)吡嗪-2-胺
于室温下，向5-(2-甲氧基乙基)吡嗪-2-胺(80mg,0.522mmol)的DCM(1.7mL)溶液中加入NBS(93mg,0.522mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h。采用NaHCO3骤冷后，将反应混合物用DCM萃取三次。合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):232.1/234.1(MH+),0.49min。
实施例21
4-(3-氨基-6-(2-(甲基磺酰基)乙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺的合成
流程41
步骤1.2-(5-(二(叔-丁氧基羰基)氨基)吡嗪-2-基)乙基甲磺酸酯
向N,N-二-叔-丁基(5-(2-羟基乙基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(450mg,1.326mmol)的DCM(10mL)溶液中加入吡啶(0.429mL,5.30mmol)，采用冰浴冷却至0℃。然后加入甲磺酰氯(0.382mL,4.91mmol)，将反应物温热至室温并搅拌16h。向反应物中加入150mL乙酸乙酯和饱和的碳酸氢钠。萃取有机层，再次用饱和的碳酸氢钠、水(3×)洗涤，过滤，经硫酸钠干燥并浓缩至恒重，获得540mg目标产物，可以直接使用(98％的收率)。LCMS(m/z):418.3(MH+),0.89min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.50(s,1H),8.38(s,1H),4.67(t,J＝6.3Hz,2H),3.28(t,J＝6.3Hz,2H),2.94(s,3H),1.45(s,18H)。
步骤2.5-(2-(甲硫基)乙基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯
向2-(5-(二(叔-丁氧基羰基)氨基)吡嗪-2-基)乙基甲磺酸酯(540mg,1.293mmol)的DMF(7mL)溶液中加入硫代甲醇钠(408mg,5.82mmol)，于85℃搅拌3h，通过LCMS监测。将反应物冷却，加入200mL乙酸乙酯和饱和的碳酸氢钠。萃取有机层，用水(3×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，通过2cm硅胶短柱过滤，用乙酸乙酯冲洗。浓缩除去溶剂至恒重，获得为游离碱的294mg目标产物，可以直接使用(84％的收率)。LCMS(m/z):270.4(MH+),0.84min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm9.19(s,1H),8.08(d,J＝1.2Hz,1H),7.20(br.s.,1H),2.99-3.08(m,2H),2.79-2.94(m,2H),2.12(s,3H),1.54(s,9H)。
步骤3.5-(2-(甲基磺酰基)乙基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯
于室温、搅拌下，向5-(2-(甲硫基)乙基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯(292mg,1.084mmol)的DCM(10mL)溶液中加入40％(3.5mL)新鲜制备的mCPBA(972mg,4.34mmol)的DCM(8.7mL)溶液，通过LCMS监测。30min后，加入另一份15％(1.3mL的上述mCPBA溶液)并搅拌30min，通过LCMS监测。然后加入另一份5％(0.044mL的上述mCPBA溶液)并再次搅拌30min。反应通过LCMS监测。向反应物中加入200mL乙酸乙酯和过量的饱和的碳酸氢钠。萃取有机层，再次用饱和的碳酸氢钠、水(3×)，过滤并浓缩至恒重，获得320mg目标产物，可以直接使用(98％的收率)。LCMS(m/z):302.1(MH+),0.62min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm9.20(s,1H),8.14(s,1H),7.23(br.s.,1H),3.47-3.57(m,2H),3.26-3.36(m,2H),2.86-2.93(m,3H),1.55(s,9H)。
步骤4.5-(2-(甲基磺酰基)乙基)吡嗪-2-胺
向5-(2-(甲基磺酰基)乙基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯(320mg,1.062mmol)的DCM(6mL)溶液中加入TFA(2.5mL,32.4mmol)，于室温下搅拌1小时。浓缩除去溶剂至恒重。该产物采用2.5g固体负载的碳酸盐以0.8mmol/g的浓度在6ml乙腈中游离碱化。过滤固体载体，用乙腈冲洗。将产物浓缩至恒重，获得目标产物，可以直接使用，推定定量收率(1.062mmol)。LCMS(m/z):202.1(MH+),0.20min。
步骤5.3-溴-5-(2-(甲基磺酰基)乙基)吡嗪-2-胺
向5-(2-(甲基磺酰基)乙基)吡嗪-2-胺(213mg,1.06mmol)的乙腈(6mL)溶液中加入NBS(179mg,1.007mmol)，于室温下搅拌1h。浓缩除去溶剂至残留物。向粗品中加入乙酸乙酯，用饱和的碳酸钠、水(2×)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至恒重，获得为游离碱的210mg目标产物，可以直接使用(71％的收率)。LCMS(m/z):280.0/282.0(MH+),0.38min。
步骤6.4-(3-氨基-6-(2-(甲基磺酰基)乙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺
向3-溴-5-(2-(甲基磺酰基)乙基)吡嗪-2-胺(126mg,0.405mmol)中加入N-苄基-2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(144mg,0.405mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(33.1mg,0.040mmol)、DME(1.5mL)和碳酸钠2M水溶液(0.607mL,1.214mmol)。将反应物于125℃微波加热12min，通过LCMS监测。向反应物中加入5mL的DME和5mL的MeOH，过滤并浓缩至残留物。将粗品溶于2.5mL的DMSO，过滤，通过制备性HPLC纯化，冷冻干燥获得TFA盐。向TFA盐中加入200mL乙酸乙酯，用饱和的碳酸钠(3×)、水(3×)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至恒重，获得为游离碱的59mg目标产物4-(3-氨基-6-(2-(甲基磺酰基)乙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺，34％的收率。LCMS(m/z):429.2(MH+),0.65min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.95(s,1H),7.83(t,J＝7.6Hz,1H),7.67(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.59(dd,J＝11.7,1.2Hz,1H),7.29-7.42(m,4H),7.20-7.28(m,1H),4.59(s,2H),3.48-3.57(m,2H),3.18(dd,J＝9.0,6.7Hz,2H),2.96(s,3H)。
实施例22、23和24
(+/-)-4-(3-氨基-6-(2-羟基丙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺,(R)-4-(3-氨基-6-(2-羟基丙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺和(S)-4-(3-氨基-6-(2-羟基丙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺的合成
流程42
步骤1.4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基烯丙基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷
于室温、氮气环境下，向镁屑(1.139g,46.9mmol)的THF(65.1mL)悬浮液中加入4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(5.67mL,39.1mmol)。缓慢加入3-溴-2-甲基丙-1-烯(3.97mL,39.1mmol)，30min后，加入更多的3-溴-2-甲基丙-1-烯(3.97mL,39.1mmol)，将反应混合物于室温下搅拌1h。加入庚烷，随后加入1NHCl。然后将反应混合物用庚烷萃取。有机部分用水和盐水洗涤，干燥并浓缩，得到4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基烯丙基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷。该产物无需纯化可以直接用于下一步骤。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm4.67(d,J＝6.7Hz,2H),1.77(s,3H),1.34-1.20(m,12H)。
步骤2.5-(2-甲基烯丙基)吡嗪-2-胺
向5-溴吡嗪-2-胺(1g,5.75mmol)溶液中加入4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基烯丙基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(1.360g,7.47mmol)、PdCl2(dppf)-DCM加合物(0.469g,0.575mmol)、CsF(2.62g,17.24mmol)，充入氮气。将反应混合物于100℃在油浴中搅拌3h。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。有机部分用盐水洗涤，干燥并浓缩。将残留物溶于1NHCl(10mL)，水层再用EtOAc萃取。然后将水层中和至pH＝8，再用EtOAc萃取三次。然后将有机部分干燥并浓缩。粗品产物直接用于下一步反应。LCMS(m/z):150.5(MH+),0.28min。
步骤3.N,N-二-叔-丁基(5-(2-甲基烯丙基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯
向5-(2-甲基烯丙基)吡嗪-2-胺(235mg,1.575mmol)的DCM(5.2mL)溶液中加入Boc2O(731μL,3.15mmol)，随后加入DMAP(385mg,3.15mmol)。将反应物于室温下搅拌过夜。向反应物中加入30mL的DCM，用饱和的碳酸氢钠(2×)、水(1×)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物。粗品通过硅胶色谱纯化，采用0－30％的乙酸乙酯庚烷溶液洗脱，得到250mg产物。LCMS(m/z):350.1(MH+),1.12min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.45(d,J＝1.2Hz,1H),8.41-8.33(m,1H),4.92(s,1H),4.75(s,1H),3.57(s,2H),1.73(s,3H),1.43(s,18H)。
步骤4.(+/-)-N,N-二-叔-丁基(5-(2-羟基丙基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯
将N,N-二-叔-丁基(5-(2-甲基烯丙基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(120mg,0.343mmol)的甲醇(6.8mL)溶液冷却至-78℃，充入臭氧6min。然后充入氮气5min。缓慢加入NaBH4(39.0mg,1.030mmol)的甲醇(5mL)溶液。将反应混合物温热至室温。1h后，缓慢加入Sat.NH4Cl。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。有机部分用饱和的NaHCO3、水和盐水洗涤，干燥并浓缩。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):354.1(MH+),0.84min。
步骤5.(+/-)-1-(5-氨基吡嗪-2-基)丙-2-醇
向(+/-)-N,N-二-叔-丁基(5-(2-羟基丙基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(110mg,0.311mmol)的DCM(3.11mL)溶液中加入TFA(1mL,12.98mmol)，将反应混合物于室温下搅拌30min，将反应混合物与甲苯一起共蒸发。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):154.1(MH+),0.24min。
步骤6.(+/-)-1-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)丙-2-醇
于0℃向(+/-)-1-(5-氨基吡嗪-2-基)丙-2-醇(47mg,0.307mmol)的DCM(3.0mL)溶液中加入NBS(49.1mg,0.276mmol)。将反应混合物于0℃搅拌10min。采用satNaHCO3骤冷后，将反应混合物用EtOAc萃取三次。合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥。过滤并真空浓缩。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):234.0(MH+),0.40min。
步骤7.(+/-)-4-(3-氨基-6-(2-羟基丙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺
向(+/-)-1-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)丙-2-醇(30mg,0.129mmol)的DME(970μL)溶液中加入4-(苄基氨基甲酰基)-3-氟苯基硼酸(31.8mg,0.116mmol)、PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(10.56mg,0.013mmol)、2MNa2CO3(323μL)。将反应混合物在微波中于120℃加热10min。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。干燥有机部分并浓缩。将粗品产物通过制备性HPLC纯化。合并纯组分，脱盐，得到(+/-)-4-(3-氨基-6-(2-羟基丙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):381.2(MH+),0.67min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.95-7.81(m,2H),7.66(dd,J＝1.6,8.2Hz,1H),7.58(dd,J＝1.6,11.7Hz,1H),7.43-7.31(m,4H),7.31-7.19(m,1H),4.62(s,2H),4.16-4.04(m,1H),2.79(d,J＝6.3Hz,2H),1.23(d,J＝6.3Hz,3H)。
步骤7.(R)-4-(3-氨基-6-(2-羟基丙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺和(S)-4-(3-氨基-6-(2-羟基丙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺
将外消旋(+/-)-4-(3-氨基-6-(2-羟基丙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺通过手性SFC拆分(ChiralPak5micAD柱,4.6×100(mm),甲醇+0.1％DEA＝40％,5mL/min)。于Rt＝1.39min获得极性对映体(R)-4-(3-氨基-6-(2-羟基丙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):381.2(MH+),0.67min。于Rt＝1.97min获得极性较小的对映体(S)-4-(3-氨基-6-(2-羟基丙基)吡嗪-2-基)-N-苄基-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):381.2(MH+),0.67min。随意指定立体化学。
3-溴-5-(2-乙氧基乙基)吡嗪-2-胺的合成
流程43
步骤1.(E)-5-(2-乙氧基乙烯基)吡嗪-2-胺
向5-溴吡嗪-2-胺(200mg,1.149mmol)的DME(2874μL)溶液中加入(E)-2-(2-乙氧基乙烯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(341mg,1.724mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(94mg,0.115mmol)和2MNa2CO3(958μL)。将反应混合物在微波反应器中于130℃搅拌20min。将反应混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc洗涤，将滤液在EtOAc和水之间分配。水相通过EtOAc萃取三次，干燥合并的有机部分并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，获得(E)-5-(2-乙氧基乙烯基)吡嗪-2-胺。LCMS(m/z):166.1(MH+),0.41min。
步骤2.5-(2-乙氧基乙基)吡嗪-2-胺
向(E)-5-(2-乙氧基乙烯基)吡嗪-2-胺(75mg,0.454mmol)的乙醇(4.54mL)溶液中加入Pd/C(48.3mg,0.454mmol)。向反应混合物中充入氮气10min，然后在氢气环境下于室温下搅拌2h。然后将反应混合物通过硅藻土过滤，采用甲醇和EtOAc洗涤，然后浓缩。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):168.1(MH+),0.33min。
步骤3.3-溴-5-(2-乙氧基乙基)吡嗪-2-胺
于0℃向5-(2-乙氧基乙基)吡嗪-2-胺(45mg,0.269mmol)的DCM(897μL)溶液中加入NBS(43.1mg,0.242mmol)。将反应混合物于0℃搅拌10min。采用sat.NaHCO3骤冷后，将反应混合物用EtOAc萃取三次。合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥。过滤并真空浓缩。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):246.0(MH+),0.59min。
(+/-)-2-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)丙-1-醇的合成
流程44
步骤1.5-(3-(苄基氧基)丙-1-烯-2-基)吡嗪-2-胺
向5-溴吡嗪-2-胺(200mg,1.149mmol)溶液中加入(3-(苄基氧基)丙-1-烯-2-基)三氟硼酸钾(350mg,1.379mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(94mg,0.115mmol)、Cs2CO3(1124mg,3.45mmol)。充入氮气。将反应混合物在油浴中于100℃搅拌6h。然后将反应混合物在EtOAc和水之间分配，合并有机层，用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，获得5-(3-(苄基氧基)丙-1-烯-2-基)吡嗪-2-胺，61％的收率。LCMS(m/z):245.2(MH+),0.67min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.26(d,J＝1.2Hz,1H),7.96(d,J＝1.2Hz,1H),7.34(d,J＝4.3Hz,5H),5.91(s,1H),5.44(d,J＝1.2Hz,1H),4.59(s,2H),4.49(s,2H)。
步骤2.(+/-)-5-(1-(苄基氧基)丙-2-基)吡嗪-2-胺
于室温下向5-(3-(苄基氧基)丙-1-烯-2-基)吡嗪-2-胺(91mg,0.377mmol)的甲醇(3771μL)溶液中加入Pd/C(40.1mg,0.377mmol)。将反应混合物在氢气环境下于室温下搅拌过夜。反应混合物通过硅藻土过滤，用甲醇和EtOAc洗涤。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):244.2(MH+),0.62min。
步骤3.(+/-)-2-(5-氨基吡嗪-2-基)丙-1-醇
将5-(1-(苄基氧基)丙-2-基)吡嗪-2-胺(80mg,0.329mmol)的1NHCl(1096μL)溶液在油浴中加热7h，冷却，将反应混合物通过EtOAc萃取，将水相浓缩至干，得到为HCl盐的粗品产物，可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):154.1(MH+),0.26min。
步骤4.(+/-)-2-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)丙-1-醇
于0℃向2-(5-氨基吡嗪-2-基)丙-1-醇(30mg,0.196mmol)的DCM(653μL)溶液中加入NBS(31.4mg,0.176mmol)。将反应混合物于0℃搅拌10min。采用satNaHCO3骤冷后，将反应混合物用EtOAc萃取三次。合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥。过滤并真空浓缩。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):234.0(MH+),0.40min。
3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)丙烷腈的合成
流程45
步骤1.N,N-二-叔-丁基(5-甲基吡嗪-2-基)氨基甲酸酯
于室温下，向5-甲基吡嗪-2-胺(1g,9.16mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液中加入Boc2O(4.47mL,19.24mmol)，随后加入DMAP(1.679g,13.75mmol)。反应混合物于室温下搅拌过夜。采用satNaHCO3骤冷后，将反应混合物用CH2Cl2萃取三次。合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥。过滤并真空浓缩。通过快速柱色谱纯化(20％的EtOAc庚烷)，获得为白色固体的目标产物。LCMS(m/z):310.0(MH+),0.93min。
步骤2.N,N-二-叔-丁基(5-(溴甲基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯
向N,N-二-叔-丁基(5-甲基吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(1.37g,4.43mmol)的CCl4(14.76mL)溶液中加入NBS(0.828g,4.65mmol)、苯甲酰基过氧化物(0.107g,0.443mmol)、AIBN(0.073g,0.443mmol)。将反应混合物于回流下搅拌8h。处理，过滤固体，浓缩有机部分。粗品产物经快速色谱纯化，获得目标产物，36％的收率。LCMS(m/z):231.1(MH+-Boc),1.04min。
步骤3.5-(2-氰基乙基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯
于0℃、氩气环境下，将正丁基锂(2.5M的己烷溶液,103μL,0.258mmol)加至二异丙基胺(39.3μL,0.276mmol)的无水THF溶液中，然后将混合物于0℃搅拌1h，然后冷却至-78℃，缓慢加入乙腈(14.12μL,0.270mmol)，将反应混合物温热至室温，于室温下搅拌1h，再次冷却至-78℃，缓慢加入N,N-二-叔-丁基(5-(溴甲基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(100mg,0.258mmol)的THF(0.5mL)溶液，将反应混合物于-78℃搅拌10min，然后温热至室温，2h后，反应物通过sat.NH4Cl溶液骤冷，然后通过EtOAc萃取。有机部分通过盐水洗涤，干燥并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(40％的EtOAc/庚烷)，获得5-(2-氰基乙基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯，40％的收率。LCMS(m/z):193.1(MH+-tBu),0.70min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm9.22(s,1H),8.12(s,1H),3.09(t,J＝7.2Hz,2H),2.83(t,J＝7.2Hz,2H),1.52-1.36(m,8H)。
步骤4.3-(5-氨基吡嗪-2-基)丙烷腈
于室温下向5-(2-氰基乙基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯(25mg,0.101mmol)的DCM(0.336mL)溶液中加入TFA(0.1mL,1.298mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h。采用sat.NaHCO3骤冷后，将反应混合物用DCM萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥。过滤并真空浓缩。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):149.1(MH+),0.24min。
步骤5.3-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)丙烷腈
于0℃向3-(5-氨基吡嗪-2-基)丙烷腈(45mg,0.304mmol)的DCM(1519μL)溶液中加入NBS(48.7mg,0.273mmol)。将反应混合物于0℃搅拌10min。采用NaHCO3骤冷后，反应混合物用EtOAc萃取三次。合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥。过滤并真空浓缩。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):227/229.1(MH+),0.45min。
5-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-2-酮的合成
流程46
步骤1.5-甲基吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯
于℃向5-甲基吡嗪-2-羧酸(2.5g,18.1mmol)、叔-丁醇(6.92mL,72.4mmol)、Et3N(3.78mL,27.1mmol)的1,4-二氧六环(12.5mL)溶液中滴加二苯基磷酰基叠氮化物(DPPA,3.23mL,18.1mmol)，将反应物于95℃加热1.5h，随后加入第二份DPPA(1mL,5.6mmol)，再加热1.5h。将反应混合物冷却，浓缩，残留物采用EtOAc稀释(50mL)，用水(30mL)、3MNaOH(30mL)、sat.NaHCO3(30mL)和盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。残留物通过快速硅胶色谱纯化，采用EtOAc/CH2Cl2(0－20％)梯度洗脱，获得为白色固体的5-甲基吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯。LCMS(m/z):210.1(MH+),0.69min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm9.17(s,1H),8.09(s,1H),7.75(br.s.,1H),2.51(s,3H),1.56(s,9H)。
步骤2.5-(溴甲基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯
向5-甲基吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯(2.79g,13.33mmol)、NBS(2.61g,14.67mmol)和AIBN(0.219g,1.33mmol)的CCl4(45mL)溶液中充入氩气，然后将溶液于85℃油浴中加热4h。将反应混合物冷却至室温，浓缩，将残留物再溶于EtOAc(～50mL)，用稀NaOH水溶液洗涤二次(10mL的1NNaOH在20mLH2O中稀释)、盐水(30mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩。残留物再经硅胶快速色谱纯化，采用EtOAc/CH2Cl2(0－30％)梯度洗脱，获得为灰白色固体的5-(溴甲基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯。LCMS(m/z):288.1/290.1(MH+),0.82min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm9.26(s,1H),8.32(d,J＝1.2Hz,1H),7.62(br.s.,1H),4.56(s,2H),1.56(s,9H)。
步骤3.5-(氰基甲基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯
将5-(溴甲基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯(0.75g,2.60mmol)和NaCN(0.255g,5.21mmol)的DMF(5mL)混合物于室温下搅拌50min。将反应混合物冷却至室温，用0.5NNaOH(10mL)稀释，用EtOAc萃取(2×20mL)，合并EtOAc层，用0.5NNaOH(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩，粗品残留物经硅胶快速色谱纯化，采用EtOAc/CH2Cl2(0－20％)梯度洗脱，获得5-(氰基甲基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯(0.40g,65.6％的收率)。LCMS(MH+-tBu):179.0(MH+),0.68min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm9.28(s,1H),8.32(s,1H),7.59(br.s.,1H),3.91(s,2H),1.57(s,9H)。
步骤4.4-(5-(叔-丁氧基羰基氨基)吡嗪-2-基)-4-氰基丁酸乙酯
向在乙醇/2-甲基四氢呋喃(5mL/5mL)混合溶剂中的5-(氰基甲基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯(0.32g,1.37mmol)中加入新制备的乙醇钠(1M,1.366mL)，将混合物于0℃搅拌10min，随后加入丙烯酸乙酯(145ul,1.366mmol)，将混合物于0℃搅拌2h。此时将反应物通过加入sat.NaHCO3(5mL)骤冷，将反应混合物再搅拌10min，采用EtOAc稀释(20mL)，过滤并将滤液浓缩。将残留物溶于EtOAc(20mL)，采用pH7.0的磷酸钠缓冲液洗涤，浓缩EtOAc层，浅棕色残留油通过快速柱色谱纯化，采用EtOAc/庚烷(0－50％)梯度洗脱，获得4-(5-(叔-丁氧基羰基氨基)吡嗪-2-基)-4-氰基丁酸乙酯(100mg,22％的收率)。LCMS(m/z):279.2(MH+-tBu),0.86min。
步骤5.5-(6-氧代哌啶-3-基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯
在氩气环境下，向4-(5-(叔-丁氧基羰基氨基)吡嗪-2-基)-4-氰基丁酸乙酯的乙醇溶液(94mg,0.281mmol/8mL)中加入雷氏镍催化剂的乙醇悬浮液(镍在～2mL乙醇中，雷氏镍的量没有准确测定)，将反应混合物在氢气环境下搅拌，空气交换三次后，在氢气环境下采用外部油浴于56℃加热过夜。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土垫过滤，将滤液浓缩，获得为黄色固体的5-(6-氧代哌啶-3-基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯。
步骤6.5-(5-氨基吡嗪-2-基)哌啶-2-酮
将5-(6-氧代哌啶-3-基)吡嗪-2-基氨基甲酸叔-丁基酯(60mg,0.205mmol)和concHCl(1mL)的甲醇(2mL)混合物于70℃油浴中加热1小时，冷却反应混合物，浓缩至干，残留物再溶于甲醇(3mL)，向其中加入NaHCO3(200mg)，将混合物于70℃油浴中加热2h。反应混合物的固体悬浮液通过过滤除去，将滤液浓缩，获得浅黄色固体粗品5-(5-氨基吡嗪-2-基)哌啶-2-酮，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):193.1(MH+),0.22min。
步骤7.5-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-2-酮
于0℃向5-(5-氨基吡嗪-2-基)哌啶-2-酮(25mg,0.13mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入NBS(23.2mg,0.13mmol)，将反应混合物于0℃搅拌30min，然后于室温下搅拌4h。浓缩反应混合物，残留物采用1NNaOH(140ul)碱化，用甲醇(2mL)稀释，浓缩。残留物采用EtOAc研磨(3×1mL)，收集EtOAc上清液并浓缩，获得浅色固体粗品5-(5-氨基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-2-酮，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):241/243(MH+),0.41min。
实施例25
4-(2-氨基-5-(6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程47
步骤1.5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)吡啶-2(1H)-酮
于0℃向5-溴吡啶-2(1H)-酮(2.01g,11.55mmol)的DMF(30mL)溶液中加入氢化钠(0.924g,23.10mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h。向其中缓慢加入(2-(氯代甲氧基)乙基)三甲基硅烷(2.89g,17.33mmol)。将反应混合物搅拌过夜。LCMS-0.26min,MH+304.1(非极性方法)。反应物采用sat.aq.NH4Cl骤冷，然后用乙酸乙酯稀释。将反应混合物用EtOAc萃取。合并的有机部分用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物经快速色谱柱纯化，采用0－50％的EtOAc/庚烷洗脱。获得为黄色粘性液体的5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)吡啶-2(1H)-酮。LCMS(m/z):304/306(MH+),0.95min。
步骤2.6'-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-[3,3'-联吡啶]-6(1H)-酮
于室温下，向5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(568mg,1.868mmol)的DME(6227μL,比例：2.000)溶液中加入PdCl2(dppf)(68.3mg,0.093mmol)、2-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(500mg,2.242mmol)、2MNa2CO3(3113μl,比例：1.000)。将反应混合物于微波合成器中于120℃加热10min。向反应混合物中加入硫酸钠和EtOAc。过滤后，真空除去挥发物。粗品产物经快速色谱纯化(EtOAc庚烷溶液梯度洗脱)，获得6'-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-[3,3'-联吡啶]-6(1H)-酮(52％)。LCMS(m/z):321.3(MH+),0.93min。
步骤3.5-(6-氟吡啶-3-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)哌啶-2-酮
向钢瓶中加入6'-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-[3,3'-联吡啶]-6(1H)-酮(311mg,0.971mmol)的MeOH溶液(剩余60％的顶部空间)，随后加入Pd-C(207mg,0.194mmol)。采用氮气流脱气后，钢瓶采用氢气加压至多至250psi。将反应物于室温下搅拌20h。LCMS-0.9minMH+325.1(单一主要成分)。将反应混合物通过硅藻土过滤(用EtOAc洗涤)。真空浓缩挥发物，获得粗品5-(6-氟吡啶-3-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)哌啶-2-酮(290mg,0.894mmol,92％)，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。
步骤4.5-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-2-酮
向钢瓶中的5-(6-氟吡啶-3-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)哌啶-2-酮(290mg,0.894mmol)中加入氢氧化铵(34.8μl,0.894mmol)溶液(40％的顶部体积剩余)。将钢瓶反应器于150℃加热44h(压力指示为250psi)。LCMS-0.23min,MH+192.1(没有SEM)；0.66min,MH+322.1(有SEM)。用MeOH和甲苯稀释后，真空中完全除去挥发物。5-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-2-酮可以直接用于下一步骤。
步骤5.5-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-2-酮
于0℃向5-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-2-酮(132mg,0.690mmol)的乙腈(8.00mL)溶液中加入NBS(98mg,0.552mmol)。将反应混合物搅拌30min，同时温热至室温。LCMS0.28min,MH+270/272；0.7min,MH+400.1/402.1(SEM保护的)。采用Na2S2O3溶液骤冷后，将反应混合物用EtOAc萃取，将其用NaHCO3溶液和盐水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。粗品5-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-2-酮可以直接用于下一步骤。
步骤6.4-(2-氨基-5-(6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
向微波瓶中加入5-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-2-酮(45mg,0.167mmol)、(S)-(4-((1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)硼酸(56.2mg,0.167mmol)、PdCl2(dppf)(12.19mg,0.017mmol)、DME(1111μl,比例：2.000)和Na2CO3(2M溶液)(555μL,比例：1.000)。将反应混合物在微波反应器中于120℃加热10min。LCMS-0.58min,MH+483.2；0.85min,MH+613.3。加入无水硫酸钠除去水后，将反应混合物过滤并真空干燥。少的部分通过制备性HPLC纯化，获得4-(2-氨基-5-(6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺，为非对映异构体混合物(12％)。LCMS(m/z):483.3(MH+),0.56min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.89(m,1H),7.80(m,2H),7.42-7.30(m,3H),7.30-7.24(m,2H),7.25-7.15(m,1H),5.18-5.03(m,1H),3.87-3.64(m,2H),3.47-3.35(m,2H),3.11-2.97(m,1H),2.46-2.30(m,2H),2.08-1.91(m,2H)。
(+/-)-4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮的合成
流程48
步骤1.6-氟-1'-甲基-[3,4'-联吡啶]-2'(1'H)-酮
于室温下，向2-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(500mg,2.242mmol)溶液中加入PdCl2(dppf)(68.3mg,0.093mmol)、4-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(351mg,1.868mmol)、2MNa2CO3(4.1mL)和DME(8.3mL)。将反应混合物在微波合成器中于120℃加热10min。将反应混合物用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品6-氟-1'-甲基-[3,4'-联吡啶]-2'(1'H)-酮经快速色谱纯化(EtOAc的DCM溶液梯度洗脱)。LCMS(m/z):205.2(MH+),0.47min。
步骤2.(+/-)-4-(6-氟吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮
向钢瓶中加入6-氟-1'-甲基-[3,4'-联吡啶]-2'(1'H)-酮(340mg,1.665mmol)的MeOH溶液(剩余60％的顶部空间)，随后加入Pd-C(Degussa)(354mg,0.333mmol)。采用氮气流脱气后，向钢瓶中充入氢气(250psi)。将反应混合物搅拌过夜。反应混合物通过硅藻土过滤(采用EtOAc/MeOH洗涤)。真空浓缩除去挥发物，获得粗品(+/-)-4-(6-氟吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮(341mg,1.638mmol,98％的收率)。其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):209.1(MH+),0.47min。
步骤3.(+/-)-4-(6-氨基吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮
向钢瓶中加入(+/-)-4-(6-氟吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮(341mg,1.638mmol)，随后加入氢氧化铵溶液(0.00mmol)-剩余40％的顶部空间。将反应器于150℃加热20hr(加热时内部压力至多达100psi)。冷却后，反应完成。真空除去全部溶剂(转移至烧瓶中)。加入甲苯并共蒸发以除去水。粗品产物(+/-)-4-(6-氨基吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮无需进一步纯化可以直接用于下一步骤(87％)。LCMS(m/z):206.1(MH+),0.24min。
步骤4.(+/-)-4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮
于0℃向(+/-)-4-(6-氨基吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮(291mg,1.418mmol)的乙腈(14.200mL)溶液中加入NBS(202mg,1.134mmol)。将反应混合物搅拌30min，同时温热至室温。采用Na2S2O3溶液骤冷后，将反应混合物用EtOAc萃取，用NaHCO3溶液和盐水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。粗品产物(+/-)-4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮(98％)可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):284/286(MH+),0.34min。
实施例26、27和28
4-(2-氨基-5-(1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺、4-(2-氨基-5-((R)-1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺和4-(2-氨基-5-((S)-1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
根据流程47步骤6，采用(+/-)-4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮和(S)-(4-((1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)硼酸，获得4-(2-氨基-5-(1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺，为非对映异构体混合物(不可分离)(35％)。LCMS(m/z):497.3(MH+),0.59min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.97(m,1H),7.9(m,1H),7.82(m,1H),7.52-7.39(m,3H),7.39-7.32(m,2H),7.3(m,1H),5.19(m,1H),3.88(m,2H),3.60-3.38(m,3H),3.21-3.08(m,1H),2.72-2.58(m,1H),2.57-2.41(m,1H),2.21-1.95(m,2H)。该非对映异构体混合物通过手性SFC分离(ChiralPak5micAD柱,4.6×100(mm),5mL/min,EtOH+0.1％,DEA＝45％，5min)。于Rt＝1.82min获得极性非对映异构体4-(2-氨基-5-((R)-1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺。于Rt＝2.35min获得极性较低的非对映异构体4-(2-氨基-5-((S)-1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺。两种非对映异构体的绝对立体化学可以随意指定。
实施例29、30和31
4-(2-氨基-5-(1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((R)-1-苯基乙基)苯甲酰胺、4-(2-氨基-5-((R)-1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((R)-1-苯基乙基)苯甲酰胺和4-(2-氨基-5-((S)-1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((R)-1-苯基乙基)苯甲酰胺
根据流程47步骤6，采用(+/-)-4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮和(R)-(3-氟-4-((1-苯基乙基)氨基甲酰基)苯基)硼酸，获得4-(2-氨基-5-(1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((R)-1-苯基乙基)苯甲酰胺，为非对映异构体混合物(不可分离)(34％)。LCMS(m/z):447.3(MH+),0.58min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.85(m,1H),7.72(m,2H),7.41-7.20(m,6H),7.18(m,1H),5.17(m,1H),3.51-3.29(m,3H),3.13-2.98(m,1H),2.88(s,3H),2.60-2.48(m,1H),2.48-2.30(m,1H),2.10-1.85(m,2H),1.58-1.38(m,3H)。该非对映异构体混合物通过手性SFC分离(ChiralPak5micAD柱,4.6×100(mm),100mL/min,IPA+0.1％,DEA＝40％,5ml/min)。于Rt＝1.67min获得极性非对映异构体4-(2-氨基-5-((R)-1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((R)-1-苯基乙基)苯甲酰胺。LCMS(m/z):447.3(MH+),0.64min。于Rt＝2.37min获得极性较低的非对映异构体4-(2-氨基-5-((S)-1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((R)-1-苯基乙基)苯甲酰胺。LCMS(m/z):447.2(MH+),0.64min。两种非对映异构体的绝对立体化学可以随意指定。
实施例32、33和34
4-(2-氨基-5-(1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯代苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺、4-(2-氨基-5-((R)-1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯代苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺和4-(2-氨基-5-((S)-1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯代苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺
根据流程47步骤6，采用(R)-(4-((1-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)硼酸，获得4-(2-氨基-5-(1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯代苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺，为非对映异构体混合物(不可分离)(33％)。LCMS(m/z):481.3(MH+),0.70min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.86(m,1H),7.73(m,2H),7.39-7.20(m,5H),7.19(m,1H),5.14(m,1H),3.52-3.28(m,3H),3.14-2.98(m,1H),2.88(s,3H),2.62-2.48(m,1H),2.46-2.30(m,1H),2.12-1.84(m,2H),1.48(m,3H)。该非对映异构体混合物通过手性SFC分离(ChiralPak5micAD柱,4.6×100(mm),5ml/min,EtOH+0.1％DEA＝35％)。于Rt＝2.83min获得极性非对映异构体4-(2-氨基-5-((R)-1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯代苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):481.2(MH+),0.71min。于Rt＝3.53min获得极性较低的非对映异构体4-(2-氨基-5-((S)-1-甲基-2-氧代哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯代苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):481.2(MH+),0.72。两种非对映异构体的绝对立体化学可以随意指定。
5-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮的合成
流程49
根据流程48，采用5-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮，获得5-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮。LCMS(m/z):284/286(MH+),0.34min。
实施例35、36和37
4-(2-氨基-5-(1-甲基-6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺、4-(2-氨基-5-((R)-1-甲基-6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺和4-(2-氨基-5-((S)-1-甲基-6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
根据流程47步骤6，采用5-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮和(S)-(4-((1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)硼酸，获得4-(2-氨基-5-(1-甲基-6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(33％)。LCMS(m/z):497.2(MH+),0.61min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.70(m,1H),7.98(m,1H),7.88(m,2H),7.44(m,3H),7.36(m,2H),7.30(m,1H),5.19(m,1H),3.88(m,2H),3.51(m,2H),3.21(m,1H),2.97(s,3H),2.50(m,2H),2.07(m,2H)。该非对映异构体混合物通过手性SFC分离(ChiralPak5micAD柱,4.6×100(mm),EtOH+0.1％DEA＝40％,5ml/min)。于Rt＝2.22min获得极性非对映异构体4-(2-氨基-5-((R)-1-甲基-6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):497.2(MH+),0.61min。于Rt＝3.09min获得极性较低的非对映异构体4-(2-氨基-5-((S)-1-甲基-6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):497.3(MH+),0.59min。
实施例38、39和40
4-(2-氨基-5-(1-甲基-6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯代苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺、4-(2-氨基-5-((R)-1-甲基-6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯代苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺和4-(2-氨基-5-((S)-1-甲基-6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯代苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺
根据流程47步骤6，采用(R)-(4-((1-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)硼酸和5-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮，获得4-(2-氨基-5-(1-甲基-6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺，为非对映异构体混合物(4％)。LCMS(m/z):481.3(MH+),0.69min。1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.79-8.65(m,1H),7.93-7.83(m,1H),7.83-7.76(m,1H),7.75-7.65(m,1H),7.40-7.29(m,3H),7.29-7.21(m,2H),7.21-7.13(m,1H),5.22-5.07(m,1H),3.52-3.32(m,3H),3.16-3.01(m,1H),2.88(s,3H),2.48-2.34(m,2H),2.07-1.92(m,2H),1.55-1.40(m,3H)。该非对映异构体混合物通过手性SFC分离(ChiralPak5micAD柱,4.6×100(mm),5ml/min,MeOH+0.1％DEA＝35％)。于Rt＝2.98min获得极性非对映异构体4-(2-氨基-5-((R)-1-甲基-6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯代苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):481.2(MH+),0.71min。于Rt＝3.93min获得极性较低的非对映异构体4-(2-氨基-5-((S)-1-甲基-6-氧代哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯代苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):481.1(MH+),0.71min。
实施例41
4-(2-氨基-5-(5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
流程50
步骤1.4-(6-氟吡啶-3-基)-2-氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯
向2-氧代-4-(甲苯磺酰基氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯(0.8g,2.037mmol)(参见合成实施例24)的DME(27mL)和碳酸钠(7mL,14.00mmol)(2M)溶液中加入(6-氟吡啶-3-基)硼酸(0.431g,3.06mmol)和PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(0.333g,0.407mmol)。充入氮气5min。将反应混合物在油浴中于90℃加热2h。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。经快速柱色谱纯化，采用0－50％EtOAc/庚烷洗脱。合并含有产物的组分并蒸发，获得为灰白色固体的4-(6-氟吡啶-3-基)-2-氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯(54.7％)。LCMS(m/z):223.2(MH+-tBu),0.743min。
步骤2.4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡咯-2(5H)-酮
向4-(6-氟吡啶-3-基)-2-氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯(315mg,1.132mmol)的DCM(4mL)溶液中加入TFA(1mL,12.98mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h。蒸发反应混合物。与甲苯一起共沸(x＝3)，获得4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡咯-2(5H)-酮。进行下一步骤。LCMS(m/z):179.2(MH+),0.373min。定量测定粗品收率。
步骤3.4-(6-氟吡啶-3-基)吡咯烷-2-酮
在氮气环境下，向4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡咯-2(5H)-酮(190mg,1.066mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入Pd-C(227mg,0.213mmol)。将反应混合物在氢气环境下、于室温下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤，用MeOH洗涤。蒸发滤液。与甲苯一起共沸(x＝3)。收率为80％。进行下一步骤。LCMS(m/z):181.0(MH+),0.341min。
步骤4.4-(6-氟吡啶-3-基)-1-甲基吡咯烷-2-酮
在冰浴中向4-(6-氟吡啶-3-基)吡咯烷-2-酮(200mg,0.888mmol)的DMF(4mL)溶液中加入NaH(42.6mg,1.066mmol)和碘甲烷(0.067mL,1.066mmol)。将反应混合物在冰浴中搅拌30min，于室温下搅拌1小时。LC-MS显示SM和产物的混合物(1:1)。再次加入NaH(42.6mg,1.066mmol)和碘甲烷(0.067mL,1.066mmol)，于室温下搅拌1h。LC-MS显示反应完全。将反应混合物采用EtOAc稀释，用水和－50－80％的EtOAc(含有10％的MeOH)/庚烷]。LCMS(m/z):195.2(MH+),0.492min。收率58％
步骤5.4-(6-氨基吡啶-3-基)-1-甲基吡咯烷-2-酮
向4-(6-氟吡啶-3-基)-1-甲基吡咯烷-2-酮(100mg,0.515mmol)中加入氢氧化铵(2mL,15.41mmol)。将反应混合物在加热器中于140℃加热48h。LC-MS显示80％的产物形成。蒸发反应混合物。与甲苯一起共沸(x＝3)，进行下一步骤。LCMS(m/z):192.2(MH+),0.256min。
步骤6.4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基吡咯烷-2-酮
在冰浴中向4-(6-氨基吡啶-3-基)-1-甲基吡咯烷-2-酮(90mg,0.377mmol)的乙腈(3mL)溶液中加入NBS(60.3mg,0.339mmol)。将反应混合物在冰浴中搅拌15min，于室温下搅拌30min。LC-MS显示SM和产物存在。再次加入0.1equiv.的NBS，于室温下再搅拌1h。反应混合物采用EtOAc稀释，加入2mL饱和的碳酸氢钠。搅拌10min。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。继续进行下一步骤。(73％)。LCMS(m/z):270.2/272.2(MH+),0.302min。
步骤7.4-(2-氨基-5-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
向4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基吡咯烷-2-酮(18mg,0.067mmol)的DME(1.6mL)和碳酸钠(0.167mL,0.333mmol)溶液中加入(S)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(30.8mg,0.080mmol)和PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(5.44mg,6.66μmol)。将反应混合物在微波中于120℃加热15min。反应混合物用乙酸乙酯稀释。分离有机层并蒸发。粗品通过制备性HPLC纯化，获得为TFA盐的目标产物(29.3％)。LCMS(m/z):449.3(MH+),0.52min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.65(dd,J＝7.24,4.11Hz,1H)7.97(d,J＝2.35Hz,1H)7.94-7.83(m,2H)7.49-7.39(m,4H)7.36(t,J＝7.63Hz,2H)7.32-7.24(m,1H)5.30-5.13(m,1H)3.94-3.76(m,3H)3.69(quin,J＝8.31Hz,1H)3.50(dd,J＝9.59,7.24Hz,1H)2.89(s,3H)2.79(dd,J＝16.82,9.00Hz,1H)2.56(dd,J＝16.82,8.22Hz,1H)。
实施例42、43和44
4-(2-氨基-5-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺、4-(2-氨基-5-((R)-1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺和4-(2-氨基-5-((S)-1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
根据流程50步骤6，采用4-(6-氨基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基吡咯烷-2-酮和(S)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺，获得4-(2-氨基-5-(1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺，为非对映异构体混合物(33.3％)。LCMS(m/z):483.3(MH+),0.59min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.79-8.61(m,1H)7.97(d,J＝1.96Hz,1H)7.93-7.82(m,2H)7.48-7.39(m,3H)7.39-7.25(m,3H)5.25-5.14(m,1H)3.95-3.76(m,3H)3.69(quin,J＝8.22Hz,1H)3.50(dd,J＝9.78,7.43Hz,1H)2.89(s,3H)2.80(dd,J＝16.82,9.00Hz,1H)2.56(dd,J＝16.82,8.22Hz,1H)。该非对映异构体混合物通过手性SFC分离(ChiralPak5micAD柱,4.6×100(mm),IPA+0.1％DEA＝40％,5mL/min)。于Rt＝1.41min获得极性非对映异构体4-(2-氨基-5-((R)-1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):483.3(MH+),0.586min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.82(d,J＝1.56Hz,1H)7.74(t,J＝7.83Hz,1H)7.35(d,J＝2.35Hz,2H)7.33-7.15(m,5H)5.09(t,J＝5.87Hz,1H)4.48(s,1H))3.83-3.63(m,3H)3.50(quint,J＝8.22Hz,1H)3.36(dd,J＝9.39,7.43Hz,1H)2.78(s,3H)2.67(dd,J＝16.82,9.00Hz,1H)2.42(dd,J＝16.63,8.41Hz,1H)。于Rt＝2.16min获得极性较低的非对映异构体4-(2-氨基-5-((S)-1-甲基-5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):483.3(MH+),0.585min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.92(d,J＝2.35Hz,1H)7.84(t,J＝8.02Hz,1H)7.51-7.21(m,7H)5.18(t,J＝5.87Hz,1H)3.94-3.72(m,3H)3.59(quin,J＝8.22Hz,1H)3.50-3.42(m,1H)2.88(s,3H)2.82-2.70(m,1H)2.51(dd,J＝16.82,8.61Hz,1H)。
实施例45
(S)-4-(2-氨基-5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺的合成
流程51
步骤1.4-(6-氟吡啶-3-基)四氢-2H-吡喃-4-甲醛
向5-溴-2-氟吡啶(2.0g,11.36mmol)的二氧六环(35mL)溶液中加入四氢-2H-吡喃-4-甲醛(2.59g,22.73mmol)、Pd(OAc)2(0.25g,1.14mmol)、碳酸铯(7.41g,22.73mmol)、水(10.24μL,0.57mmol)、9,9-二甲基-4,5-双二苯基膦氧杂蒽(xantphos)(0.98g,1.70mmol)。向混合物中充入氮气5min，将获得的混合物在油浴中加热至110℃15h。将混合物用乙酸乙酯稀释，采用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱纯化(ISCO)，采用0－80％的乙酸乙酯庚烷溶液洗脱，获得为红色油状物的4-(6-氟吡啶-3-基)四氢-2H-吡喃-4-甲醛(560mg,2.68mmol,23.5％的收率)。LCMS(m/z):210(MH+),0.45min。
步骤2.(4-(6-氟吡啶-3-基)四氢-2H-吡喃-4-基)甲醇
向冰冷的4-(6-氟吡啶-3-基)四氢-2H-吡喃-4-甲醛(560mg,2.68mmol)的甲醇(18mL)溶液中加入硼氢化钠(91mg,2.41mmol)。将反应溶液于室温下搅拌30min。真空除去溶剂。残留物用乙酸乙酯稀释，采用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得为棕色油状物的(4-(6-氟吡啶-3-基)四氢-2H-吡喃-4-基)甲醇(550mg,2.60mmol,97％)。LCMS(m/z):212(MH+),0.42min。
步骤3.2-氟-5-(4-(碘甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶
向冰冷的三苯膦(983mg,3.75mmol)、碘(952mg,3.75mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入咪唑(278mg,4.09mmol)。将溶液于室温下搅拌1h，随后加入(4-(6-氟吡啶-3-基)四氢-2H-吡喃-4-基)甲醇(360mg,1.70mmol)的10mL二氯甲烷溶液。将反应混合物在油浴中加热至60℃48h。过滤固体，滤液通过硅胶快速柱色谱纯化(ISCO)，采用0－80％的乙酸乙酯庚烷洗脱，获得为浅黄色油状物的2-氟-5-(4-(碘甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶(330mg,1.03mmol,60.3％的收率)。LCMS(m/z):322(MH+),0.77min。
步骤4.2-氟-5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶
于-15℃向(2-氟-5-(4-(碘甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶(330mg,1.03mmol)的THF(5mL)溶液中滴加N-selectride(2.26mL,2.26mmol)。将溶液于室温下搅拌16h。将溶液在冰浴中再次冷却，加入0.3mL水。将获得的溶液搅拌10min。真空除去溶剂，将残留物溶于DCM。过滤不溶性固体，滤液通过快速硅胶柱色谱纯化(ISCO)，采用0－80％的乙酸乙酯庚烷洗脱，获得为无色油状物的2-氟-5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶(110mg,0.56mmol,54.8％的收率)，纯度>90％。LCMS(m/z):196(MH+),0.64min。
步骤5.N-(2,4-二甲氧基苄基)-5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺
向2-氟-5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶(110mg,0.56mmol)的(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(1016μL,6.76mmol)和DIEA(246μL,1.41mmol)溶液中加入碳酸钾(156mg,1.12mmol)。将获得的混合物在油浴中加热至160℃16h，反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱纯化(ISCO)，采用0－100％的乙酸乙酯庚烷洗脱，获得为浅黄色固体的N-(2,4-二甲氧基苄基)-5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺(100mg,0.29mmol,51.8％的收率)。LCMS(m/z):343(MH+),0.63min。
步骤6.5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺
向冰冷的N-(2,4-二甲氧基苄基)-5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺(100mg,0.29mmol)的DCM(6mL)溶液中加入10mL的30％的TFADCM溶液。将获得的溶液于0℃搅拌15min。真空除去溶剂。将获得的残留物再溶于乙酸乙酯，有机溶液用1MNaOH、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。残留物通过硅胶快速柱色谱纯化(ISCO)，采用0－100％的乙酸乙酯庚烷洗脱，获得为白色固体的5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺(50mg,0.26mmol,89％的收率)。LCMS(m/z):193(MH+),0.35min。
步骤7.3-溴-5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺
向冰冷的5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺(50mg,0.26mmol)的DCM(5mL)溶液中分二次加入NBS(50.9mg,0.28mmol)。将反应混合物于室温下搅拌40min。反应溶液用乙酸乙酯稀释，用水、碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得为黄色残留物的3-溴-5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺(70mg,0.26mmol,99％的收率)。LCMS(m/z):271/273(MH+),0.41min。
步骤8.(S)-4-(2-氨基-5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
向3-溴-5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺(70mg,0.26mmol)的DME(4mL)溶液中加入(S)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(298mg,0.77mmol)和碳酸钠(0.64mL,1.29mmol)。向混合物中充入氮气10min，然后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(31.6mg,0.039mmol)。将反应混合物在油浴中加热至120℃2h。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。获得的残留物通过硅胶快速柱色谱纯化(ISCO)，采用0－100％的乙酸乙酯庚烷洗脱，获得70mg粗品产物，将其通过HPLC纯化，获得为TFA盐的(S)-4-(2-氨基-5-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺(40.8mg,0.089mmol,34.5％的收率)。LCMS(m/z):450(MH+),0.61min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.22(t,J＝7.83Hz,1H)7.77-7.65(m,2H)7.50(dd,J＝11.74,7.43Hz,1H)7.42-7.36(m,4H)7.33(d,J＝7.43Hz,2H)7.21(d,J＝11.74Hz,1H)5.33(d,J＝4.70Hz,1H)4.08-3.94(m,2H)3.83-3.65(m,4H)1.97(ddd,J＝13.40,8.12,5.09Hz,2H)1.72(d,J＝13.69Hz,2H)1.35(s,3H)
实施例46
4-(3-氨基吡嗪-2-基)-N-苄基苯甲酰胺的合成
流程52
向N-苄基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(150mg,0.445mmol)、3-氯代吡嗪-2-胺(74.9mg,0.578mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(36.3mg,0.044mmol)的DME(3.3mL)溶液中加入2MNa2CO3(1.11mL)。将反应混合物于微波合成器中加热(120℃,10min)。采用EtOAc稀释，用水洗涤二次。然后用1NHCl萃取(3×15mL)。酸性溶液用乙醚洗涤二次(2×15mL)，然后用Na2CO3碱化。随后通过EtOAc萃取(20mL,3次)，然后通过饱和的NaHCO3、水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥和过滤，浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc(含有10％MeOH)庚烷溶液洗脱，然后在旋转蒸发仪上浓缩。残留物用乙醚研磨，获得80.2mg目标产物。LCMS(m/z):305.2(MH+),0.59min。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.74(d,J＝8.22Hz,1H)8.41(s,1H)8.06(dd,J＝9.39,2.74Hz,1H)8.01(d,J＝8.61Hz,2H)7.94(br.s.,1H)7.83(d,J＝8.22Hz,2H)7.40-7.34(m,2H)7.30(t,J＝7.63Hz,2H)7.22(d,J＝7.43Hz,1H)6.40(d,J＝9.39Hz,1H)5.12-5.03(m,1H)3.75-3.60(m,2H)。
表2.根据上述方法1制备的化合物
方法2
实施例127
(S)-4-(3-氨基-6-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程53
步骤1.(S)-4-(3-氨基吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
向3-氯代吡嗪-2-胺(288mg,2.22mmol)、(S)-4-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基氨基甲酰基)-3-氟苯基硼酸(500mg,1.48mmol)、PdCl2(dppf)-DCM(108mg,0.148mmol)、DME(1.1mL)的反应混合物中加入2MNa2CO3(3.703mL)。将反应混合物于微波合成器中加热(120℃,12min)。向反应混合物中加入无水硫酸钠，过滤并浓缩。粗品产物先经快速色谱纯化，采用EtOAc(含有10％MeOH)庚烷溶液洗脱。合并纯组分并浓缩，获得389mg目标产物，68％的收率。LCMS(m/z):387(MH+),0.69min。
步骤2.(S)-4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
于0℃向(S)-4-(3-氨基吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(389mg,1.006mmol)的乙腈(21mL)溶液中加入NBS(171mg,0.961mmol)。将反应混合物于0℃搅拌20min。采用satNaHCO3骤冷后搅拌30min。反应混合物用EtOAc萃取三次，有机部分通过satNaHCO3、水和盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。粗品产物无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):367(MH+),0.88min。
步骤3.(S)-4-(3-氨基-6-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
向(S)-4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(40mg,0.086mmol)、1,3-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(38.2mg,0.172mmol)、PdCl2(dppf)-DCM(6.28mg,8.59μmol)和DME(644μL)的反应混合物中加入2MNa2CO3(215μL)。将反应混合物于微波合成器中加热(120℃,12min)。向反应混合物中加入无水硫酸钠，过滤并浓缩。粗品产物通过auto-prep纯化，获得25mg为TFA盐的目标产物。LCMS(m/z):481.3(MH+),0.73min；1HNMR(500MHz,CD3OD)δppm8.66(d,J＝6.26Hz,1H)8.17(s,1H)8.02(s,1H)7.76-7.51(m,3H)7.45-7.16(m,3H)5.07–4.09(m,1H)3.72(s,3H)3.62(m,2H)2.33(s,3H)。
实施例128
(S)-4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程54
步骤1.4-(2-氨基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向500mL圆底烧瓶中的3-溴吡啶-2-胺(5g,28.9mmol)中加入(3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)硼酸(7.44g,37.6mmol)、PdCl2(dppf)-DCM(2.115g,2.89mmol)、DME(108mL)和2MNa2CO3溶液(36.1mL)。将反应混合物在油浴中于110℃加热4h。反应混合物采用EtOAc稀释，用水洗涤三次，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc(含有10％的MeOH)/庚烷洗脱，获得5.6g的4-(2-氨基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯，79％的收率。LCMS(m/z):247.1(MH+),0.50min。
步骤2.4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯
于0℃向4-(2-氨基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯(5.64g,22.90mmol)的乙腈(229mL)溶液中分二份加入NBS(4.16g,23.36mmol)。将反应混合物于0℃搅拌20min。采用satNa2S2O3和NaHCO3骤冷后搅拌30min。将反应混合物用EtOAc萃取三次，有机部分通过satNaHCO3、水和盐水洗涤。干燥并浓缩。粗品产物用乙醚研磨，获得7.05g的4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯，95％的收率。LCMS(m/z):327.1(MH+),0.66min。
步骤3.4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸
向4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯(1.9g,5.84mmol)的THF(19.48mL)和MeOH(9.74mL,比例：1.000)溶液中加入LiOH(1M的水溶液)(10.52mL,10.52mmol)。将反应混合物搅拌5h。然后加入1NHCl(1.9mL)调节pH至多5，反应混合物用EtOAc处理，有机层经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):311.1/313.1(MH+),0.5min。
步骤4.(S)-4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
向4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(300mg,0.964mmol)的THF(8.036mL)溶液中加入(S)-2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙醇(331mg,1.157mmol)。将反应混合物搅拌15h。加入水后，将反应混合物用EtOAc处理，有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品(S)-4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):464.1/466.1(MH+),0.69min。
步骤5.(S)-4-(2-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
向(S)-4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(85mg,0.183mmol)、双(频哪醇合)二硼(93mg,0.366mmol)和PdCl2(dppf)(26.8mg,0.037mmol)的二氧六环(610μL)溶液中加入乙酸钾(54mg,0.549mmol)。将反应混合物于微波合成器中加热(120℃，20min)。反应混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液几乎完全浓缩，粗品(S)-4-(2-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):430.2(MH+，硼酸),0.57min。
步骤6.(S)-4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
于室温下，向粗品(S)-4-(2-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(30mg,0.059mmol)的残留二氧六环溶液中加入4-溴-1-甲基-1H-1,2,3-三唑(14.24mg,0.088mmol)、PdCl2(dppf)(42.9mg,0.059mmol)、DME(195μl)和2MNa2CO3(130μl)。将反应混合物搅拌5h。加入水和EtOAc后，有机层用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物通过制备性HPLC纯化。将纯组分冷冻干燥，获得(S)-4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺，为TFA盐(二步收率25％)。LCMS(m/z):467.3(MH+),0.61min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.64(m,1H),8.31(m,1H),8.25(m,2H),8.2(m,1H),7.82(m,1H),7.4(m,3H),7.28(m,2H),7.22(m,1H),5.11(m,1H),4.07(s,3H),3.78(m,2H)。
实施例129
(S)-4-(3-氨基-6-(6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺的合成
流程55
步骤1.(S)-4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
向3,5-二溴吡嗪-2-胺(826mg,3.27mmol),(S)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(600mg,1.634mmol)和PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(133mg,0.163mmol)的DME(12.3mL)溶液中加入2MNa2CO3(4.08mL)。将反应混合物于微波合成器中加热(120℃,10min)。将反应混合物采用EtOAc处理。有机层用satNaHCO3、水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。粗品产物采用硅胶快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc(含有10％的MeOH)庚烷溶液洗脱，用乙醚研磨，获得800mg的(S)-4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺。LCMS(m/z):415(MH+),0.73min。
步骤2.(S)-4-(3-氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
脱气后立即向(S)-4-(3-氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺(50mg,0.121mmol)、双(频哪醇合)二硼(61.4mg,0.242mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(9.88mg,0.012mmol)的二氧六环(302μL)溶液中加入乙酸钾(35.6mg,0.363mmol)。将反应混合物于微波合成器中加热(120℃，20min)。用EtOAc稀释后，反应混合物通过硅藻土垫过滤。浓缩后，粗品(S)-4-(3-氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):379(硼酸MH+),0.47min。
步骤3.(S)-4-(3-氨基-6-(6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
向(S)-5-氨基-6-(4-(2-羟基-1-苯基乙基氨基甲酰基)苯基)吡嗪-2-基硼酸(55mg,0.145mmol)、5-溴吡啶-2(1H)-酮(38.0mg,0.218mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2(11.88mg,0.015mmol)的DME(1091μL)溶液中加入2MNa2CO3(364μL)。将反应混合物于微波合成器中加热(120℃,10min)。将反应混合物用EtOAc处理。有机层用satNaHCO3、水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。粗品产物通过制备性HPLC纯化，获得4.3mg的(S)-4-(3-氨基-6-(6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺，为TFA盐。LCMS(m/z):428.2(MH+),0.55min；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)3.60-3.75(m,2H)5.03-5.12(m,1H)6.40(d,J＝9.39Hz,1H)7.22(d,J＝7.43Hz,1H)7.30(t,J＝7.63Hz,2H)7.34-7.40(m,2H)7.83(d,J＝8.22Hz,2H)7.94(br.s.,1H)8.01(d,J＝8.61Hz,2H)8.06(dd,J＝9.39,2.74Hz,1H)8.41(s,1H)8.74(d,J＝8.22Hz,1H)。
(S)-4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2,6-二氟苯甲酰胺的合成
流程56
步骤1.4-溴-2,6-二氟苯甲酸甲酯
于室温下，向4-溴-2,6-二氟苯甲酸(800mg,3.38mmol)的MeOH(11mL)溶液中缓慢加入三甲基甲硅烷基重氮甲烷(5.63mL,3.38mmol)直到出现黄色溶液。加入少量的AcOH直到黄色消失。真空除去所有的挥发物，获得4-溴-2,6-二氟苯甲酸甲酯(47％)。LCMS(m/z):251.1(MH+),0.86min。
步骤2.4-(2-氨基吡啶-3-基)-2,6-二氟苯甲酸甲酯
根据流程54步骤1，获得4-(2-氨基吡啶-3-基)-2,6-二氟苯甲酸甲酯(9％)。LCMS(m/z):485.2(MH+),0.64min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.11(m,1H),7.76(m,2H),7.37(m,1H),7.27(m,2H),7.20(m,3H),5.09(m,1H),4.03(s,3H),3.73(m,2H)。
步骤3、4和5.(S)-4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2,6-二氟苯甲酰胺
根据流程54步骤2、3和4，获得(S)-4-(3-氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2,6-二氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):482/484(MH+),0.68min。
表3.用于Suzuki偶合反应的溴化物或相应的硼酸酯中间体
(+/-)-4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺的手性拆分
流程57
(+/-)-4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺(121mg)通过手性色谱拆分(AD-H柱EtOH＝60/40,1mL/min)。于7.41min获得极性化合物(峰1)4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺(50mg,41％)，于10.26min获得极性较低的化合物(峰2)4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺(54mg,44％)。绝对立体化学根据生物化学数据和相应的类似物的对接模型指定。
实施例130
(+/-)-4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺的合成
根据流程59，采用(+/-)-4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺，获得(+/-)-4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺(11％)。LCMS(m/z):428.2(MH+),0.72min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.19(m,1H),7.91(s,1H),7.82(m,1H),7.77(m,1H),7.64(m,1H),7.48-7.33(m,2H),7.31-7.12(m,5H),3.91(s,3H),3.10(m,1H),2.20(m,1H),1.33(m,2H)。
实施例131
4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺的合成
根据流程59，采用4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺，获得4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺(53％)。LCMS(m/z):428.3(MH+),0.69min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.11-8.02(m,1H),7.94(m,1H),7.97-7.88(m,2H),7.85-7.71(m,2H),7.43-7.30(m,2H),7.26-7.14(m,2H),7.14-7.02(m,2H),3.83(s,3H),3.06-2.92(m,1H),2.19-2.02(m,1H),1.35-1.17(m,2H)。绝对立体化学根据生物化学数据和对接模型指定。
实施例132
4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺
根据流程59，采用4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺，获得4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺(42％)。LCMS(m/z):428.3(MH+),1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.09-8.02(m,1H),8.01-7.95(m,1H),7.96-7.88(m,2H),7.84-7.70(m,2H),7.42-7.29(m,2H),7.25-7.02(m,4H),3.83(s,3H),3.10-2.87(m,1H),2.24-2.00(m,1H),1.33-1.15(m,2H)。绝对立体化学根据生物化学数据和对接模型指定。
实施例133
(S)-4-(2-氨基-5-(1-氘-甲基,5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程58
步骤1.1-氘-甲基-1H-吡唑
于0℃向NaH(1.851g,46.3mmol)的2-甲基THF(80mL)溶液中加入1H-吡唑(3g,44.1mmol)的2-甲基THF(30mL)溶液。将反应混合物温热至室温并搅拌1h。向其中缓慢加入CD3I(3.02mL,48.5mmol)。将反应混合物搅拌过夜。采用NH4Cl溶液骤冷后，反应混合物用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤，过滤并真空浓缩。将粗品产物蒸馏，获得1-氘-甲基-1H-吡唑(47％)(b.p.～130℃,浴温为～200℃)。LCMS(m/z):86(MH+),0.24min；1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm7.55-7.42(m,1H),7.39-7.28(m,1H),6.28-6.15(m,1H)。
步骤2.1-氘-甲基,5-甲基-1H-吡唑
于-30℃向n-BuLi(2.5M的己烷溶液)(4.14mL,10.34mmol)的乙醚(20mL)溶液中缓慢加入1-氘-甲基-1H-吡唑(880mg,10.34mmol)的乙醚(2mL)溶液。将反应混合物温热至室温并搅拌2h。冷却至0℃后，向反应混合物中缓慢加入硫酸二甲基酯(0.931mL,9.82mmol)的乙醚(3mL)溶液。将反应混合物于室温下搅拌3h。采用sat.NH4Cl溶液骤冷后，将反应混合物用乙醚萃取(×2)，但是水相仍然含有产物。然后将水相用DCM萃取(×2)。合并的有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物通过蒸馏纯化，获得1-氘-甲基,5-甲基-1H-吡唑(59％)。LCMS(m/z):100.0(MH+),0.24min；1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm7.36(m,1H),6.00(m,1H),2.27(s,3H)。
步骤3.4-溴-1-氘-甲基,5-甲基-1H-吡唑
于0℃向1-氘-甲基,5-甲基-1H-吡唑(100mg,1.009mmol)的MeCN(3.362mL)溶液中缓慢加入NBS(171mg,0.958mmol)。撤去冰浴后，将反应混合物搅拌30min。采用亚硫酸钠溶液骤冷后，将反应混合物用EtOAc萃取。有机层用碳酸钠溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。获得粗品4-溴-1-氘-甲基,5-甲基-1H-吡唑，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤(92％)。LCMS(m/z):178,180(MH+),0.61min。
步骤4.(S)-4-(2-氨基-5-(1-氘-甲基,5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
根据流程54步骤6，采用4-溴-1-氘-甲基,5-甲基-1H-吡唑，获得为游离碱的(S)-4-(2-氨基-5-(1-氘-甲基,5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(9％)。LCMS(m/z):483.2(MH+),0.67min；1HNMR(500MHz,CD3OD)δppm8.00(d,J＝1.9Hz,1H),7.86(t,J＝7.9Hz,1H),7.58-7.23(m,8H),5.19(t,J＝5.8Hz,1H),3.93-3.77(m,2H),2.37(s,1H)。
实施例134
(S)-4-(2-氨基-5-(氰基甲基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺的合成
流程59
向(S)-4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺(40mg,0.093mmol)和异噁唑-4-基硼酸(20.99mg,0.186mmol)的DME(697μl)溶液中加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(7.59mg,9.30μmol)和2MNa2CO3溶液(232μl)。将反应混合物在微波中于120℃加热30min。将反应混合物在EtOAc和水之间分配，有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物通过制备性HPLC纯化。收集纯组分并冷冻干燥，获得为TFA盐的(S)-4-(2-氨基-5-(氰基甲基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺，7％的收率。LCMS(m/z):391.2(MH+),0.51min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.66(br.s.,1H),7.99-7.95(m,1H),7.92-7.82(m,2H),7.44-7.39(m,4H),7.38-7.32(m,2H),7.31-7.25(m,1H),5.25-5.18(m,1H),3.92-3.90(m,2H),3.90-3.80(m,2H)。
实施例135
(S)-4-(3-氨基-6-(2,2,6,6-四氘-四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺的合成
流程60
步骤1.2,2'-(1,3-二氧戊环-2,2-二基)二乙酸二乙基酯
将1,3-丙酮二甲酸二乙基酯(12g,59.3mmol)、乙二醇(9.93mL,178mmol)和对-甲苯磺酸单水合物(564mg,2.97mmol)的苯(80mL)溶液通过Dean-Stark阱加热回流10h以除去水。苯层用饱和的碳酸氢钠水溶液溶液和盐水洗涤。蒸馏除去溶剂，获得的残留物经快速色谱纯化(10－40％的EtOAc庚烷)，获得2,2'-(1,3-二氧戊环-2,2-二基)二乙酸二乙基酯(42％)。LCMS(m/z):247.2(MH+),0.65min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm4.17(q,J＝7.04Hz,4H)4.03(s,4H)2.95(s,4H)1.27(t,J＝7.24Hz,6H)。
步骤2.2,2'-(1,3-二氧戊环-2,2-二基)二乙醇-d4
于-10至0℃，10分钟内向LiAlD4的THF悬浮液(2.46g,58.7mmol,40mL)中加入2,2'-(1,3-二氧戊环-2,2-二基)二乙酸二乙基酯(6.06g)的THF(20mL)溶液。将反应混合物于0℃搅拌1h，通过按顺序加入水(2.5mL)、15wt％的NaOH(2.5mL)和水(7.5mL)骤冷。过滤除去骤冷混合物的沉淀，滤饼用THF小心地洗涤。将滤液浓缩，获得粗品2,2'-(1,3-二氧戊环-2,2-二基)二乙醇-d4(92％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm4.06(s,4H)2.49(s,2H)1.98(s,4H)。
步骤3.1,4,8-三氧杂螺[4.5]癸烷-d4
将2,2'-(1,3-二氧戊环-2,2-二基)二乙醇-d4(3.57g,21.5mmol)和4-甲基苯磺酸水合物(0.204g,1.07mmol)和苯(150mL)的混合物采用Dean-Stark装置于回流温度下加热3h以除去水。将反应混合物冷却，采用sat.NaHCO3(20mL×2)洗涤，合并水层，用Et2O萃取(2×20mL)，合并有机层，用盐水(30mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，通过旋转蒸发仪于20mbar以下浓缩，获得浅黄色油状物粗品1,4,8-三氧杂螺[4.5]癸烷-d4(2.34g,73.5％的收率)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm3.98(s,4H)1.73(s,4H)。
步骤4.二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮-d4
将1,4,8-三氧杂螺[4.5]癸烷-d4(2.34g,15.8mmol)、甲醛(37％,4.6mL,63.2mmol)和吡啶4-甲基苯磺酸盐(0.198g,0.79mmol)平均分配至两个微波瓶中。将每个瓶于80℃加热30min，再加热15min。合并反应混合物，用NaCl饱和，用Et2O萃取直到1H-NMR证实水层中没有需要的产物存在。合并醚萃取液，浓缩，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化(Et2O/正-戊烷梯度洗脱)二次，获得二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮-d4.1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm2.50(s,4H)。
步骤5.3,6-二氢-2H-吡喃-4-基三氟甲磺酸酯-d4
于-75至-65℃，10分钟内向新制备的LDA(10.6mmol)的THF(10mL)溶液中滴加二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮-d4(1.05g)的THF(3.5mL)溶液。将获得的反应混合物于-75℃搅拌3h，随后在10分钟内加入N-(5-氯代吡啶-2-基)-1,1,1-三氟-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺的THF溶液(4.16g/5mL)。将反应混合物于-75℃搅拌1h，然后将温度逐渐温热至室温过夜。将反应混合物冷却至0℃，采用D2O(10mL)骤冷，分离两层，有机层采用D2O(10mL)、柠檬酸(3×10mL,3g柠檬酸的30mL水溶液)、1MNaOH(2×10mL)、盐水(30mL)顺序洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩，粗品油性产物经硅胶快速色谱纯化，采用Et2O/正-戊烷(0－60％)梯度洗脱。纯产物再次通过Kugelrohr于105℃/3mbar蒸馏纯化，获得3,6-二氢-2H-吡喃-4-基三氟甲磺酸酯-d4(500mg,21％的收率)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm5.82(s,1H)2.45(s,2H)。
步骤6.2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-d4
将3,6-二氢-2H-吡喃-4-基三氟甲磺酸酯-d4(500mg,2.12mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼杂环戊烷)(806mg,3.18mmol)、乙酸钾(644mg,6.56mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(86mg,0.106mmol)和p-二氧六环(5mL)的混合物加入微波反应器的瓶，充入氩气5分钟，密封并通过油浴于80℃加热过夜。将反应混合物冷却至室温，采用EtOAc稀释(10mL)，通过中性氧化铝短柱过滤(1.25'H×0.75'D)，滤饼采用EtOAc充分洗涤。将滤液浓缩，获得为浅棕色固体的粗品2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-d4(>99％)。LCMS(m/z):215.2(MH+),0.78min。
步骤7.(S)-4-(3-氨基-6-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺-d4
将2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-d4(300mg,1.4mmol)、(S)-4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺(694mg,1.68mmol)、Na2CO3水溶液(2M,2.8mL)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2(57.2mg,0,07mmol)和p-二氧六环(6mL)的混合物加入微波反应器的瓶中，充入氩气5分钟，密封并于115℃加热30min。将反应混合物采用EtOAc稀释(15mL)，过滤，滤液用1MHCl洗涤(4×30mL)，合并水层，通过固体NaOH碱化至pH12，用EtOAc萃取(60mL)，干燥(Na2SO4)，浓缩，获得含有杂质的第一批产物。采用HCl洗涤后，将EtOAc层浓缩，残留物用DMSO稀释，通过C18反相制备性HPLC纯化，合并产物组分，用Na2CO3饱和，用EtOAc萃取(60mL)，获得为浅黄色固体的第二批纯产物。第一批产物经硅胶快速色谱纯化，采用丙酮/CH2Cl2(0－60％)梯度洗脱。合并二批产物，获得(S)-4-(3-氨基-6-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺-d4(179mg,27.9％的收率)。LCMS(m/z):421.2(MH+),0.65min。
步骤8.(S)-4-(3-氨基-6-(2,2,6,6-四氘-四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
将(S)-4-(3-氨基-6-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺-d4(175mg)和Pd/C(10％,22mg)的甲醇混合物于室温下、氢气环境中搅拌2h。将反应混合物通过硅藻土垫薄层过滤，将滤液浓缩，获得白色固体粗品。粗品产物经快速色谱纯化(0－60％丙酮/CH2Cl2)，将纯产物溶于乙腈/水(1:1,10mL)，冷冻干燥，获得为白色粉末的(S)-4-(3-氨基-6-(2,2,6,6-四氘-四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺(64％)。LCMS(m/z):423.2(MH+),0.60min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.93-8.01(m,2H),7.92(s,1H),7.82-7.89(m,2H),7.38-7.47(m,4H),7.31-7.37(m,1H),6.90(d,J＝7.04Hz,1H),5.32(dt,J＝6.95,4.55Hz,1H),4.68(br.s.,2H),4.06(d,J＝4.30Hz,2H),2.93(tt,J＝11.44,4.40Hz,1H),1.79-1.99(m,4H)。
实施例136和137
4-(3-氨基-6-((S)-四氢呋喃-3-基)吡嗪-2-基)-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺和4-(3-氨基-6-((R)-四氢呋喃-3-基)吡嗪-2-基)-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺的合成
流程61
向(S)-4-(3-氨基-6-(呋喃-3-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺(75mg,0.187mmol)的MeOH(1.873mL)溶液中加入氧化钯(IV)(12.76mg,0.056mmol)。向溶液中通过氮气流脱气15min。采用氢气冲洗并配备氢气囊后，将反应混合物搅拌24h。反应混合物通过硅藻土过滤。除去挥发物后，粗品产物重新开始反应。将反应混合物再搅拌24h。LCMS(m/z)：形成更多的副产物。将反应混合物通过硅藻土过滤。除去挥发物后，向粗品产物的MeOH(1.873mL)溶液中加入Pd-C(100mg,0.094mmol)。向溶液中通过氮气流脱气15min。采用氢气冲洗并配备氢气囊后，将反应混合物搅拌24h。LCMS(m/z)：所有的副产物消失。将反应混合物通过硅藻土过滤。除去挥发物后，粗品产物经快速色谱纯化(EtOAc的DCM溶液)，获得4-(3-氨基-6-(四氢呋喃-3-基)吡嗪-2-基)-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺(9mg,12％)。LCMS(m/z):405.2(MH+),0.58min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.96-7.86(m,2H),7.80(s,1H),7.77-7.70(m,2H),7.38-7.32(m,2H),7.30-7.21(m,2H),7.21-7.12(m,1H),5.14(m,1H),4.08-3.97(m,1H),3.99-3.89(m,1H),3.89-3.67(m,4H),3.56-3.38(m,1H),2.33-2.04(m,2H),1.24-1.13(m,2H)。外消旋产物采用手性HPLC拆分(AD柱,5mL/min,MeOH＝30％,SFC)，获得4-(3-氨基-6-((S)-四氢呋喃-3-基)吡嗪-2-基)-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺和4-(3-氨基-6-((R)-四氢呋喃-3-基)吡嗪-2-基)-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺–3.4mg极性对映体(Rt＝2.12min)和3.5mg极性较小的对映体(Rt＝2.66min)。绝对立体化学任意指定。
表4.采用上述方法2制备的化合物
方法3
实施例173
4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(3-氯代苄基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程62
步骤1.4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯(259mg,1.308mmol)、3-溴-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-胺(225mg,0.872mmol)和PdCl2(dppf)(64mg,0.087mmol)的溶液中加入DME(6.5mL)和2MNa2CO3溶液(3.2mL)。将反应混合物在微波合成器中加热(120℃,10min)。将反应混合物用EtOAc处理。有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(EtOAc庚烷溶液梯度洗脱)得到目标产物(192mg,67％)。LCMS(m/z):332.2(MH+),0.63min。
步骤2.4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(104mg,0.314mmol)的THF(698μL)和MeOH(349μL)溶液中加入LiOH(1M溶液)(565μL,0.565mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h。将反应混合物采用1NHCl溶液骤冷至至多pH5，用EtOAc处理。有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物直接用于下一步骤。LCMS(m/z):318.3(MH+),0.5min。
步骤3.4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(3-氯代苄基)-2-氟苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(17mg,0.054mmol)和(3-氯代苯基)甲胺(8.34mg,0.059mmol)的THF(268μL)溶液中加入PyBroP(27.5mg,0.059mmol)、DIEA(28.1μL,0.161mmol)和HOBT(9.02mg,0.059mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。真空除去所有的挥发物，溶于DCM。将溶于DCM的粗品产物置于快速色谱柱上(EtOAc庚烷溶液梯度洗脱)，获得4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(3-氯代苄基)-2-氟苯甲酰胺，87％的收率。LCMS(m/z):441.1(MH+),0.79min。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.92(s,1H),7.74(m,1H),7.63(m,2H),7.35(m,4H),6.14(s,1H),4.48(m,2H),3.92(m,2H),3.43(m,2H),1.73(m,4H)。
实施例174
(S)-N-(2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程63
步骤1.(S)-(2-(4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
向4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(35mg,0.110mmol)的DMF(368μL)溶液中加入(S)-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(33.9mg,0.110mmol)、aza-HOBt(22.52mg,0.165mmol)、EDC(31.7mg,0.165mmol)和DIEA(57.8μL,0.331mmol)。将反应混合物于室温下搅拌3h。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。有机层通过NaHCO3和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，获得粗品(S)-叔-丁基(2-(4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸酯(>99％)。
步骤2.(S)-N-(2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺
将粗品(S)-(2-(4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯溶于DCM(1.0mL)。加入TFA(0.3mL)后，将反应混合物于室温下搅拌10min。反应混合物采用甲苯稀释并浓缩至干。粗品产物通过反相制备性HPLC纯化。合并纯组分并冷冻干燥，获得(S)-N-(2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺，为TFA盐(二步收率为50％)。LCMS(m/z):470.1(MH+),0.67min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.95-7.85(m,2H),7.72(d,J＝8.2Hz,1H),7.64(d,J＝12.1Hz,1H),7.55(s,1H),7.49-7.38(m,3H),5.49(dd,J＝5.7,8.8Hz,1H),4.04(dd,J＝3.1,11.3Hz,2H),3.57(dt,J＝2.0,11.5Hz,2H),3.51-3.41(m,2H),2.98-2.88(m,1H),1.97-1.76(m,4H)。
实施例175
4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程64
步骤1.4-溴-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
于0℃向搅拌的4-溴-2-氟苯甲酸(60g,274mmol)的无水THF(700mL)溶液中加入DMF(2mL)，随后在1小时内分次加入草酰氯(48mL,548mmol)。将混合物于0℃搅拌30min，然后于室温下搅拌1小时。减压除去溶剂，将残留物溶于DCM(700mL)。加入叔-丁基醇(97g,1315mmol)和吡啶(150mL)，将反应混合物于室温下搅拌64h。将混合物转移至分液漏斗中，用水(400mL)、2NNaOH水溶液(400mL)和盐水(2×200mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。残留物经硅胶快速色谱纯化(0－5％的乙酸乙酯庚烷洗脱30min)，获得4-溴-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(60g,80％)，为油状物。LCMS(m/z):218/220(MH+(-tBu)),1.11min；1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm7.81-7.71(m,1H)7.39-7.30(m,2H)7.29(s,1H)1.68-1.55(m,9H)。
步骤2.2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸叔-丁基酯
向2L圆底烧瓶中加入4-溴-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(30g,114mmol)、双(频哪醇合)二硼(41.5g,164mmol)、乙酸钾(32.1g,327mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(2.67g,3.27mmol)和1,4-二氧六环(500mL)。将反应混合物用氩气脱气15min，然后加热至95℃，于此温度下保持16h。冷却后，将反应混合物蒸发至干，溶于DCM(300mL)，通过硅藻土过滤，用DCM洗涤(3×100mL)。滤液用水(200mL)和盐水(2×200mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。残留物采用硅胶快速色谱纯化(0－10％的EtOAc庚烷洗脱30min)，获得固体2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸叔-丁基酯(27g,90％)。LCMS(m/z):267(MH+(-tBu)),1.23min；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm7.83t,1H)7.57(d,1H)7.43(d,1H)1.62-1.46(m,9H)1.34-1.25(m,12H)。
步骤3.4-(3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
向2L圆底烧瓶中加入2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸叔-丁基酯(54g,151mmol)、2-氨基-3-氯代吡嗪(19.54g,151mmol)、2N碳酸钠(158mL,317mmol)和DME(600mL)。将反应混合物采用氩气脱气10min，然后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(6.16g,7.54mmol)。将反应混合物加热至100℃，于此温度下保持4h。冷却后，将反应混合物倒入水(400mL)中，用EtOAc萃取(3×200mL)。合并的有机部分用盐水洗涤(3×200mL)，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。粗品产物采用硅胶快速色谱纯化(0－70％的EtOAc庚烷洗脱50min)，获得固体4-(3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(37.7g,86％)。LCMS(m/z):290(MH+),0.80min；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.98(d,1H)7.91-7.81(m,2H)7.65-7.46(m,2H)6.35(br.s.,2H)1.54(s,9H)。
步骤4.4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
于0℃向搅拌的4-(3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(37.7g,130mmol)的乙腈(800mL)溶液中一次性加入N-溴琥珀酰亚胺(23.19g,130mmol)。将反应物于0℃搅拌2h，然后用饱和的NaHCO3溶液(200mL)骤冷，于0℃搅拌30min。将混合物用水稀释(300mL)，用EtOAc萃取(3×250mL)。合并的有机部分用水(200mL)和盐水(2×200mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。粗品产物采用硅胶快速色谱纯化(0－40％的EtOAc庚烷洗脱40min)，获得固体4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(30.9g,64％)。LCMS(m/z):368/370(MH+),1.03min；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.14(s,1H)7.97-7.74(m,1H)7.62-7.39(m,2H)6.64(s,2H)1.54(s,9H)。
步骤5.4-(3-氨基-6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
向4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(5.17g,46.2mmol)的DME(115mL)溶液中加入4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(15.36g,57.7mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(1.885g,2.309mmol)，然后加入2M碳酸钠水溶液(19.57g,185mmol)。将反应混合物于100℃加热过夜。LCMS显示反应完成。将反应物冷却。向反应物中加入1000mL的EtOAc和300mL水。将获得的混合物搅拌30min，分离有机层。水层用EtOAc萃取(3×200mL)。合并有机层，用水和盐水洗涤三次，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物用乙醚研磨，获得4-(3-氨基-6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(19.5g,45.6mmol,99％)，为浅黄色固体。LCMS(m/z):428.1(MH+),1.02min。
步骤6.4-(3-氨基-6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
于室温下向4-(3-氨基-6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(11g,25.7mmol)的DCM(100mL)和MeOH(100mL)溶液中加入Pd/C(5g,25.7mmol)(10％在碳上，湿的)。将获得的混合物抽真空，然后充入氢气。将该过程重复三次。然后将反应物于室温、氢气环境下搅拌6h。催化剂通过硅藻土过滤，用DCM洗涤。将滤液浓缩，残留物溶于DCM(60mL)，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc/庚烷洗脱，获得4-(3-氨基-6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(8.18g,19.04mmol,74％)，为浅黄色固体。LCMS(m/z):430.2(MH+),0.99min；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.98-7.82(m,2H),7.71-7.49(m,2H),6.13(s,2H),3.85(s,4H),3.30(s,1H),2.77-2.55(m,1H),2.48(dt,J＝3.62,1.91Hz,2H),1.88-1.65(m,6H),1.63-1.46(m,10H)。
步骤7.4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
向4-(3-氨基-6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(14.34g,33.4mmol)中加入乙腈(250mL)、水(160mL)，然后加入3MHCl水溶液(55.6mL,167mmol)。将反应混合物于25℃搅拌30min，通过LCMS监测。将混合物在搅拌下采用2MNaOH水溶液碱化至pH9。浅黄色固体沉淀出来。于室温下减压除去乙腈。过滤固体，用水洗涤(2×30mL)，高真空干燥过夜，获得4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(12g,31.1mmol,93％)，为浅黄色固体。LCMS(m/z):386.1(MH+),0.89min；1HNMR(400MHz,乙腈-d3)δppm8.05-7.89(m,2H)7.73-7.51(m,2H),5.14(br.s.,2H),3.30-3.08(m,1H),2.64-2.48(m,2H),2.40(br.s.,2H),2.30-2.17(m,2H),2.12-1.99(m,2H),1.96(dt,J＝4.99,2.40Hz,4H),1.61(s,9H)。
步骤8.4-(3-氨基-6-(4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
将4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(9g,23.35mmol)的甲醇(125mL)和THF(125mL)溶液冷却至-78℃，然后分次加入NaBH4(2.297g,60.7mmol)。然后将反应混合物于-78℃搅拌40min，LCMS显示反应完成，观察到某些过度还原产物存在。反式与顺式的比例为约8:1。于-78℃缓慢加入100mL的sat.NH4Cl，然后将混合物逐渐温热至室温。反应混合物通过sat.NaHCO3骤冷，采用EtOAc萃取(2×200mL)。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，高真空干燥，获得4-(3-氨基-6-(4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(8.9g,22.97mmol,98％)，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):388.2(MH+),0.86min。
步骤9&10.4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
将4-(3-氨基-6-(4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(8.8g,22.71mmol)溶于THF(100mL)，然后加入TBDMSCl(8.22g,54.5mmol)和咪唑(5.57g,82mmol)。将反应混合物于室温下搅拌3h。反应混合物通过EtOAc(150mL)稀释，通过水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，采用0－100％的丙酮/DCM洗脱(10％的丙酮/DCM在DCM中的溶液,10－50％,40min洗脱时间,320g,硅胶柱)，获得4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(7.7g,15.35mmol,67.6％)。LCMS(m/z):502.3(MH+),0.96min。于室温下，将4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(7.789g,15.52mmol)在4NHCl二氧六环溶液中搅拌48h。浓缩反应混合物。向浅黄色残留物中加入50mL的Et2O，超声15min，过滤，用15mL的Et2O洗涤二次，真空抽吸干燥2h，获得4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(11,6.0g,15.99mmol,100％的收率)，为浅黄色固体。LCMS(m/z):332.0(MH+,酸),0.48min；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.06-7.79(m,2H)。7.69-7.50(m,2H),3.63-3.30(m,3H)2.62-2.50(m,1H),1.97-1.71(m,4H),1.34-1.11(m,2H),1.63-1.42(m,2H),,
步骤11.4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(670mg,2.022mmol)的DMF(16.80mL)溶液中加入aza-HOBt(413mg,3.03mmol)、EDC(581mg,3.03mmol)、DIEA(1.059mL,6.07mmol)和(S)-2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇盐酸盐(547mg,2.022mmol)。将反应混合物于室温下搅拌3h。LCMS显示产物形成。将反应混合物采用EtOAc稀释，用satNaHCO3、水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物通过快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc(含有10％MeOH)/庚烷洗脱，获得4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(920mg,1.66mmol,82％)。LCMS(m/z):547/549(MH+),0.72min；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm8.74(dd,J＝1.9,7.9Hz,1H),7.92(s,1H),7.81-7.70(m,1H),7.68-7.55(m,2H),7.52-7.39(m,2H),7.30(d,J＝9.5Hz,1H),6.11(s,2H),5.09(t,J＝5.7Hz,2H),4.58(d,J＝4.4Hz,1H),3.69(dt,J＝2.4,5.8Hz,2H),3.49-3.40(m,1H),2.55(t,J＝3.5Hz,1H),1.98-1.76(m,4H),1.55(dd,J＝2.8,12.6Hz,2H),1.29(d,J＝13.6Hz,2H)。
(S)-N-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺的合成
流程65
步骤1.(S)-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
向(s)-2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙醇(4g,19.22mmol)的THF(64.1mL混合物中加入NaHCO3(1.776g,21.15mmol)，随后加入Boc2O(4.91mL,21.15mmol)和DMAP(0.235g,1.922mmol)。然后将反应混合物于室温下搅拌过夜。LCMS显示反应没有完成。加入TEA(5.36mL,38.4mmol)，将反应混合物于室温下搅拌5h。加入水，反应混合物通过EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc/庚烷洗脱，获得(S)-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(4.0g,14.72mmol,77％)。LCMS(m/z):216.1(MH+-56),0.75min。
步骤2.N-甲基-2-硝基苯磺酰胺
将2-硝基苯-1-磺酰氯(4g,18.05mmol)的DCM(60.2mL)溶液用冰水浴冷却至0℃。加入TEA(7.55mL,54.1mmol)和2M甲基胺的四氢呋喃溶液(13.54mL,27.1mmol)。将获得的溶液于室温下搅拌6h。反应混合物用DCM稀释，用sat.NaHCO3(2×100mL)、盐水(100mL)洗涤，然后经硫酸镁干燥。将溶液过滤，然后减压浓缩，用乙醚研磨，获得N-甲基-2-硝基苯磺酰胺(3.12g,14.44mmol,80％的收率)。LCMS(m/z):217.1(MH+),0.53min。
步骤3.(S)-(1-(3-氯代苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)-氨基甲酸叔-丁基酯
向N-甲基-2-硝基苯磺酰胺(3.50g,16.19mmol)的THF(56.6mL)溶液中加入(S)-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(4g,14.72mmol)和三丁基膦(3.87g,19.14mmol)。然后于0℃缓慢加入(E)-二氮烯(diazene)-1,2-二甲酸二-叔-丁基酯(3.29g,19.14mmol)的THF(56.6mL)溶液。将反应混合物于室温下搅拌过夜。LCMS显示仍然有少量原料残留。将反应物采用EtOAc稀释，用sat.NaHCO3、水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc/庚烷洗脱，获得(S)-(1-(3-氯代苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(7g,14.9mmol,100％)。LCMS(m/z):370.1(MH+-100),1.05min。
步骤4.(S)-N-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺
向(S)-(1-(3-氯代苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(7g,14.9mmol)的DCM(149mL)溶液中加入HCl(4M的二氧六环溶液)(14.90mL,59.6mmol)。将反应混合物于室温下搅拌4h。LCMS显示反应完成。过滤白色沉淀，用DCM充分洗涤，获得2.8g(S)-N-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺，为HCl盐。将残留物蒸发至干，在DCM(20mL)中搅拌30min。过滤固体并用DCM充分洗涤，获得另一份400mg的(S)-N-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺，总收率52.9％，纯度95％。LCMS(m/z):370.1(MH+-100),0.67min；1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δppm8.09-7.99(m,1H),7.92-7.77(m,3H),7.60(s,1H),7.53-7.35(m,3H),4.74-4.62(m,1H),3.93(dd,J＝9.0,14.7Hz,1H),3.53(dd,J＝5.4,14.8Hz,1H),2.98(s,3H)。
实施例176
(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程66
步骤1.4-(3-氨基-6-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
向4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(21g,57.0mmol)的DME(127mL)溶液中加入PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(2.329g,2.85mmol)、2-(环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(13.18g,62.7mmol)和2MNa2CO3水溶液(63.4mL)。将反应物于110℃加热16h。向反应混合物中加入200mL乙酸乙酯，用水(2×100mL)、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物经快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc/DCM洗脱，获得4-(3-氨基-6-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(18g,48.5mmol,85％)。LCMS(m/z):372.3(MH+),0.95min。
步骤2.4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
向4-(3-氨基-6-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(15g,40.4mmol)的MeOH(800mL)悬浮液中加入DCM(100mL)直到悬浮液转变为均匀的溶液。用氮气流脱气15min后，向反应混合物中加入Pd/C(10g,9.40mmol)。配备氢气囊后，向该混合物中充入氢气三次。将反应混合物搅拌6h。反应混合物通过硅藻土过滤后，真空除去挥发物。通过加热将残留物溶于MeOH(200mL)，冷却至室温，静置过夜。过滤棕色沉淀，获得4.5g的4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯。浓缩滤液，通过加热溶于EtOH(200mL)。过滤第二批沉淀物，获得3.9g的4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(合并收率为55.7％)。LCMS(m/z):374.7(MH+),0.90min。
步骤3.4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(4.5g,12.05mmol)的DCM(60.3mL)溶液中加入TFA(60.3mL)。将反应混合物搅拌2h。用甲苯(30mL)稀释后，真空除去挥发物二次，获得4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(5.2g,12.06mmol,100％)，为TFA盐。粗品产物无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):318.5(MH+),0.55min。
步骤4.(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(1.55g,4.88mmol)的DMF(16.28mL)溶液中加入HOAt(0.997g,7.33mmol)、EDC(1.498g,7.82mmol)、DIEA(2.61Ml,14.65mmol)和(S)-N-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺(2.084g,5.13mmol)。将反应混合物于室温下搅拌3h，LCMS显示反应完成。反应混合物采用EtOAc稀释，有机部分通过sat.Na2CO3、水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，采用50％的DCM/EtOAc(10％甲醇)洗脱，获得(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺(2.68g,4.01mmol,82％)。LCMS:669.1(MH+),0.95min。
步骤5.(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺
向(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺(2.68g,4.01mmol)的DMF(20mL)溶液中加入4-巯基苯甲酸(1.235g,8.01mmol)和K2CO3(2.214g,16.02mmol)。将反应混合物在氮气环境下、于40℃加热过夜。加入水(50mL)，混合物转变为均匀的。将反应物于室温下搅拌30min，然后缓慢加入水(150mL)。浅黄色固体沉淀出来。将混合物再搅拌30min，过滤悬浮液。固体用水充分洗涤，随后用庚烷洗涤，空气干燥1h。将固体悬浮于水中，于室温下搅拌1h，然后过滤。向固体中加入EtOAc，在旋转蒸发仪上缓慢旋转以除去过量的乙酸乙酯直到剩余约20mL的EtOAc，过滤固体，再溶于乙腈和水中，冷冻干燥。将溶液在冷冻干燥器上干燥，获得(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺(1.31g,2.69mmol,67.2％)。LCMS(m/z):484.3(MH+),0.66min；1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δppm7.90(s,1H),7.83(t,J＝7.7Hz,1H),7.70(dd,J＝1.1,8.0Hz,1H),7.63(d,J＝10.7Hz,1H),7.48(s,1H),7.38(d,J＝5.4Hz,2H),7.32(dt,J＝1.9,4.6Hz,1H),5.33(dd,J＝5.2,9.0Hz,1H),4.05(dd,J＝3.5,11.0Hz,2H),3.57(dt,J＝1.9,11.8Hz,2H),3.12-3.04(m,1H),3.04-2.88(m,2H),2.48(s,3H),1.89-1.88(m,1H),1.96-1.76(m,4H)。
(S)-2-氨基-2-苯基乙基氨基甲酸叔-丁基酯的合成
根据流程9，采用(R)-2-氨基-1-苯基乙醇，获得(S)-2-氨基-2-苯基乙基氨基甲酸叔-丁基酯，47％的收率。LCMS(m/z):237.5(MH+),0.54min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.42-7.32(m,5H),4.81(br.s.,1H),4.11-4.00(m,1H),3.44-3.28(m,1H),3.28-3.13(m,1H),1.49-1.35(m,9H)。
(S)-2-氟-1-苯基乙胺的合成
流程67
步骤1.(S)-2-(2-羟基-1-苯基乙基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温下向(S)-2-氨基-2-苯基乙醇(3g,21.87mmol)的水(26.5mL)和乙腈(46.4mL)溶液中加入2,5-二氧代吡咯烷-1-基甲基邻苯二甲酸酯(5.76g,20.78mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。真空除去乙腈后，然后将反应混合物用EtOAc萃取。有机部分通过水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，获得(S)-2-(2-羟基-1-苯基乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.2g,40％)。LCMS(m/z):268(MH+),0.79min。
步骤2.(S)-2-(2-氟-1-苯基乙基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温下，向(S)-2-(2-羟基-1-苯基乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.5g,5.61mmol)的PhCF3(18.71mL)溶液中加入三乙胺三氢氟酸盐(5.48mL,33.7mmol)、全氟丁烷磺酰氟(1.019mL,5.67mmol)、DIEA(14.70mL,84mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h，然后加入更多的全氟丁烷磺酰氟(1.019mL,5.67mmol)。5h后，反应混合物采用NaHCO3骤冷，用EtOAc萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(0－10％的EtOAC庚烷)，获得(S)-2-(2-氟-1-苯基乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(30％的收率)。LCMS(m/z):270.1(MH+),0.96min。
步骤3.(S)-2-氟-1-苯基乙胺
向(S)-2-(2-氟-1-苯基乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(290mg,1.077mmol)的MeOH(3.59mL)溶液中加入肼(0.507mL,16.15mmol)。将反应混合物于80℃搅拌3h。过滤白色沉淀物。将滤液浓缩，得到粗品(S)-2-氟-1-苯基乙胺，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):140.1(MH+),0.28min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.43-7.34(m,4H),7.34-7.27(m,1H),4.57(dd,J＝3.7,8.8Hz,1H),4.49-4.38(m,1H),4.38-4.32(m,1H),4.32-4.25(m,1H)。
(S)-2-叠氮基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙胺的合成
流程68
步骤1.(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
于室温下，向(S)-2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇(4.4g,16.26mmol)的DCM(80mL)溶液中加入TEA(6.80mL,48.8mmol)，随后加入Boc酸酐(5.32g,24.4mmol)。将反应混合物于室温下搅拌16h。反应混合物用EtOAc萃取。有机层用satNaHCO3、水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(EtOAc庚烷溶液梯度洗脱)，获得(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(4.8g,88％)。LCMS(m/z):280(MH+-tBu),0.79min。
步骤2.(S)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基甲磺酸酯
于0℃向搅拌的(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(4.8g,14.36mmol)的无水DCM(100mL)溶液中加入三乙胺(4.00mL,28.7mmol)，随后加入甲磺酰氯(1.343mL,17.24mmol)。将反应物于0℃搅拌1hr，此时LCMS显示反应完成。将反应混合物倒入饱和的NaHCO3溶液(100mL)中。将混合物振摇，分层，水层用DCM萃取(2×50mL)。合并的有机部分用NaHCO3溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，获得(S)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基甲磺酸酯(5.92g,14.36mmol,100％的收率)，为非常浅的橙色固体。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm7.75(d,J＝8.83Hz,1H),7.43-7.55(m,2H),7.31(d,J＝9.46Hz,1H),4.86-5.00(m,1H),4.30(dd,J＝10.09,5.04Hz,1H),4.24(t,J＝9.30Hz,1H),3.16-3.23(m,3H),1.36-1.44(m,9H)。
步骤3.(S)-(2-叠氮基-1-(3--5-氟苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
将(S)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基甲磺酸酯(5.92g,14.36mmol)溶于无水DMF(60mL)。加入叠氮化钠(2.80g,43.1mmol)，将反应物加热至70℃，于此温度下保持2h。冷却后，将反应混合物倒入水(100mL)中，用EtOAc萃取(3×80mL)。合并的有机部分用水(50mL)和盐水(3×50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。经快速色谱纯化(AnaLogix,80g,柱,在DCM中上样,0－40％的EtOAc庚烷洗脱30min)，获得(S)-(2-叠氮基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(4.29g,11.94mmol,83％的收率)，为白色固体。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm7.73(d,J＝8.83Hz,1H),7.48(t,J＝4.26Hz,2H),7.29(d,J＝9.77Hz,1H),4.80(d,J＝8.20Hz,1H),3.47(d,J＝7.88Hz,2H),1.44-1.38(m,9H),1.36(br.s.,1H)。
步骤4.(S)-2-叠氮基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙胺
向搅拌的(S)-(2-叠氮基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(3.15g,8.77mmol)的二氧六环(40mL)溶液中加入盐酸(10.96mL,43.8mmol)(4N的二氧六环溶液)。将反应物加热至40℃，于此温度下保持2h。冷却后，将反应混合物蒸发至干，获得(S)-2-叠氮基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙胺盐酸盐(2.59g,8.76mmol,100％的收率)，为白色固体。
(S)-2-叠氮基-1-(3-氯代-5-氟苯基)乙胺的合成
根据流程68，采用(S)-2-氨基-2-(3-氯代-5-氟苯基)乙醇，获得(S)-2-叠氮基-1-(3-氯代-5-氟苯基)乙胺。LCMS(m/z):215.1(MH+),0.48min。
(S)-2-叠氮基-1-(3-氯代苯基)乙胺的合成
根据流程68，采用(S)-2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙醇，获得(S)-2-叠氮基-1-(3-氯代-5-氟苯基)乙胺。LCMS(m/z):197(MH+),0.5min。
(S)-3-苯基吗啉的合成
流程69
步骤1.(S)-2-氯代-N-(2-羟基-1-苯基乙基)乙酰胺
于0℃向(S)-2-氨基-2-苯基乙醇(0.852g,6.21mmol)、Et3N(0.952mL,6.83mmol)、DMAP(76mg,0.621mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中加入2-氯代乙酰氯(0519mL,6.52mmol)，将获得的混合物于0℃搅拌15min。反应混合物用HCl水溶液(1M,20mL)洗涤，然后用sat.NaHCO3(20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩，再于高真空下干燥，获得为白色固体的(S)-2-氯代-N-(2-羟基-1-苯基乙基)乙酰胺(0.60g,45.2％的收率)。LCMS(m/z):214(MH+),0.44min。
步骤2.(S)-5-苯基吗啉-3-酮
于0℃向(S)-2-氯代-N-(2-羟基-1-苯基乙基)乙酰胺(600mg,2.8mmol)的无水THF溶液中加入NaH的矿物油悬浮液(247mg,6.18mmol)。将获得的混合物于室温下搅拌过夜。将反应混合物浓缩至干，将残留物在CH2Cl2/盐水/H2O(20mL/18mL/2mL)之间分配。CH2Cl2层经无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。获得为白色固体的粗品产物(S)-5-苯基吗啉-3-酮(498mg,97％)。粗品产物其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):178.2(MH+),0.47min。
步骤3.(S)-3-苯基吗啉
于室温下，5分钟内向LiAlH4/THF浆液(0.47g/2mL)中滴加(S)-5-苯基吗啉-3-酮的THF溶液(481mg在6mL中)。将获得的混合物于室温下搅拌1小时，然后采用72℃油浴加热过夜，再冷却至0℃，通过顺序加入H2O(0.47mL)、3MNaOH水溶液(0.47mL)和H2O(1.4mL)骤冷，骤冷的残留物用Et2O(30mL)稀释，搅拌10min，通过过滤分离醚溶液。将滤液浓缩，进一步真空浓缩，获得为无色固体的(S)-3-苯基吗啉(424mg,96％的收率)。LCMS(m/z):164.2(MH+),0.33min。
(S)-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔-丁基酯的合成
流程70
步骤1.(R)-1-(3-氯代苯基)-2-(甲基氨基)乙醇
将流程9中制备的(R)-(2-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(2.48g,9.13mmol)溶于THF(30.4mL)，加入LiAlH4(1.039g,27.4mmol)。将反应混合物于回流下加热6h，然后冷却。加入水(1.06mL)，随后加入NaOH水溶液(15％,3mL)和水(1.06mL)。将反应混合物于室温下搅拌1h。固体沉淀物通过硅藻土过滤，用EtOAc充分洗涤。将滤液浓缩。粗品产物(R)-1-(3-氯代苯基)-2-(甲基氨基)乙醇(1.75g,9.43mmol,100％)无需进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z):186.1(MH+),0.43min。
步骤2.(R)-(2-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)(甲基)氨基甲酸叔-丁基酯
将(R)-1-(3-氯代苯基)-2-(甲基氨基)乙醇(1.75g,9.43mmol)溶于THF(31.4mL)，然后加入Boc酸酐(2.298mL,9.90mmol)。将反应混合物于室温下搅拌2h。LCMS显示反应完成。将反应混合物浓缩，经快速色谱纯化，获得(R)-(2-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)(甲基)氨基甲酸叔-丁基酯(2.0g,7.00mmol,74.3％)。LCMS(m/z):212.1(MH+-56),0.94min。
步骤3.(S)-(2-(3-氯代苯基)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔-丁基酯
向(R)-(2-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)(甲基)氨基甲酸叔-丁基酯(2.0g,7.00mmol)的THF(23.33mL)混合物中加入邻苯二甲酰亚胺(1.339g,9.10mmol)和PPh3(3mmol的PPh3/1g树脂,2.34g,7.02mmol)。然后于室温下缓慢加入DTBAD(1.660g,7.21mmol)的THF溶液，将反应混合物于室温下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc洗涤。将滤液浓缩，再溶于EtOAc，用sat.Na2CO3、水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，获得(S)-(2-(3-氯代苯基)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔-丁基酯(1.96g,4.72mmol,67.5％)。LCMS(m/z):315.1(MH+-100),1.19min。
步骤4.(S)-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔-丁基酯
向(S)-(2-(3-氯代苯基)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔-丁基酯(1.96g,4.72mmol)的乙醇(15.75mL)溶液中加入肼水合物(2.296mL,47.2mmol)。将反应混合物于60℃加热2h。然后将反应混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液浓缩。残留物再溶于乙醇中，通过硅藻土垫过滤以除去额外的白色固体。NMR显示粗品产物中有杂质存在。将粗品产物通过硅胶短柱过滤，用DCM/EtOAc(2:1的比例)洗涤，用DCM/EtOAc(20％的甲醇,0.5％的NH3甲醇溶液)(1:1比例)闪蒸，获得(s)-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔-丁基酯(1.2g,89％的收率)。LCMS(m/z):285.1(MH+),0.65min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.37(s,1H)7.26(3H),4.20(br.s.,1H),2.85-2.77(m,3H),1.51-1.38(m,9H)。
(S)-2-氨基-4-环丙基丁-3-炔-1-醇的合成
流程71
步骤1.(S)-N-((S)-1-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-4-环丙基丁-3-炔-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将3.0M乙基溴化镁的Et2O溶液(0.360mL,1.081mmol)加至乙炔基环丙烷(71.5mg,1.081mmol)的THF(4mL)溶液中。将溶液加热至50℃1h，然后将获得的Grignard加至-78℃的(S,E)-N-(2-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(100mg,0.360mmol)的DCM(4.00mL)溶液中，将反应物温热至室温。3h后，反应物采用sat.aq.NH4Cl骤冷。分层，有机部分经硫酸镁干燥并浓缩，获得(S)-N-((S)-1-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-4-环丙基丁-3-炔-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，其可以直接使用。LCMS(m/z):344.1(MH+),1.23min。
步骤2.(S)-2-氨基-4-环丙基丁-3-炔-1-醇
将4.0NHCl的二氧六环溶液(0.873mL,3.49mmol)加至室温下的(S)-N-((S)-1-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-4-环丙基丁-3-炔-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(120mg,0.349mmol)的MeOH(4mL)溶液。30min后，将反应物浓缩，然后与苯一起共沸，获得(S)-2-氨基-4-环丙基丁-3-炔-1-醇，为HCl盐。LCMS(m/z):126.2(MH+),0.50min。
(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-(甲硫基)苯基)乙醇的合成
流程72
步骤1:(S)-4-(3-氟-5-(甲硫基)苯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔-丁基酯
将9,9-二甲基-4,5-双二苯基膦氧杂蒽(13.91mg,0.024mmol)、Pd2(dba)3(22.02mg,0.024mmol)、(S)-4-(3-溴-5-氟苯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔-丁基酯(300mg,0.802mmol)、DIEA(700μl,4.01mmol)和甲烷硫醇钠(112mg,1.603mmol)的甲苯(2.6mL)混合物于110℃微波加热18min。加入EtOAc，用satNaHCO3、水和盐水洗涤。过滤混合物，浓缩，通过快速色谱纯化，采用0－60％的EtOAc/庚烷洗脱，获得为油状物的(S)-4-(3-氟-5-(甲硫基)苯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔-丁基酯(278mg,102％)。LCMS(m/z):286.1(MH+-56),1.14min。
步骤2:(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-(甲硫基)苯基)乙醇
将(S)-4-(3-氟-5-(甲硫基)苯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔-丁基酯(278mg,0.814mmol)的4MHCl二氧六环(2.4mL)溶液加热至80℃过夜。仍然有某些原料残留。加入更多的4MHCl二氧六环溶液(2.035mL,8.14mmol)，于80℃再加热10h。真空除去溶剂，获得(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-(甲硫基)苯基)乙醇(194mg,0.814mmol,100％)。LCMS(m/z):170.1(MH+-56),0.26min。
(S)-2-氨基-2-(3-(甲硫基)苯基)乙醇的合成
根据流程72，采用(S)-4-(3-溴苯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔-丁基酯，获得(S)-2-氨基-2-(3-(甲硫基)苯基)乙醇。LCMS(m/z):184(MH+),0.41min。
(S)-2-氨基-2-(3-(氯代甲基)-5-氟苯基)乙醇的合成
流程73
步骤1.(S)-4-(3-(氯代甲基)-5-氟苯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔-丁基酯
向(S)-4-(3-氟-5-(羟基甲基)苯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔-丁基酯(330mg,1.014mmol)的无水DMSO(2.028mL)溶液中分次加入2,4,6-三氯代-1,3,5-三嗪(112mg,0.609mmol)。将混合物于室温下搅拌30min。混合物采用EtOAc稀释，分离。有机相用H2O(5×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤和减压浓缩。残留物通过快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc/庚烷洗脱，获得(S)-4-(3-(氯代甲基)-5-氟苯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔-丁基酯(329mg,94％)。LCMS(m/z):288.1(MH+-56),1.12min。
步骤2:(S)-2-氨基-2-(3-(氯代甲基)-5-氟苯基)乙醇
向(S)-4-(3-(氯代甲基)-5-氟苯基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔-丁基酯(140mg,0.407mmol)的无水DCM(1.357mL)溶液中分次加入4NHCl的二氧六环溶液(1.018mL,4.07mmol)。混合物于80℃回流过夜。反应不完全。加入更多的4NHCl二氧六环溶液(1.018mL,4.07mmol)，再回流24h。真空除去溶剂，获得(S)-2-氨基-2-(3-(氯代甲基)-5-氟苯基)乙醇(70mg,84％)。LCMS(m/z):204(MH+),0.41min。
(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)乙醇的合成
流程74
步骤1.(3-溴-5-氟苯基)甲醇
于0℃，30分钟内向3-溴-5-氟苯甲酸(4.51g,20.59mmol)的THF(41.2mL)溶液中滴加BH3.THF(41.2mL,41.2mmol)，然后将反应混合物温热至室温，于室温下搅拌过夜。缓慢加入甲醇(40mL)，于室温下搅拌1h。真空除去THF和甲醇。然后将残留物通过EtOAc萃取，用sat.NaHCO3洗涤。将有机部分干燥并浓缩。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):187.2(MH+-18),0.66min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.32(s,1H),7.19-7.14(m,1H),7.05(tdd,J＝0.7,1.5,9.1Hz,1H),4.70(br.s.,2H),1.78(br.s.,1H)。
步骤2.1-溴-3-氟-5-(氟甲基)苯
于0℃向(3-溴-5-氟苯基)甲醇(4g,19.51mmol)的DCM(39.0mL)溶液中加入DAST(3.35mL,25.4mmol)。将反应混合物温热至室温，于室温下搅拌过夜。加入Sat.NaHCO3，然后将反应混合物通过DCM萃取。将有机层干燥并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(0－10％的EtOAc/庚烷)，得到为无色油状物的终产物。LCMS(m/z):没有质量(MH+),0.86min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.30(s,1H),7.23(d,J＝8.2Hz,1H),7.03(d,J＝8.6Hz,1H),5.41(s,1H),5.29(s,1H)。
步骤3.3-氟-5-(氟甲基)苯甲醛
将1-溴-3-氟-5-(氟甲基)苯(1.30g,6.28mmol)溶于THF(31.4mL)，然后冷却至-78℃，于-78℃加入丁基锂(2.5M的己烷溶液)(2.76mL,6.91mmol)，然后将反应混合物于-78℃搅拌30min。加入DMF(0.972mL,12.56mmol)，于-78℃搅拌1h后，反应混合物通过HCl骤冷，然后将反应混合物通过EtOAc萃取，将有机部分干燥并浓缩，得到粗品产物。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):没有质量(MH+),0.60min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm10.08-9.93(m,1H),7.68(s,1H),7.56(d,J＝8.2Hz,1H),7.37(d,J＝7.8Hz,1H),5.53(s,1H),5.42(s,1H)
步骤4.(R,E)-N-(3-氟-5-(氟甲基)亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向3-氟-5-(氟甲基)苯甲醛(890mg,5.70mmol)和(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(760mg,6.27mmol)的DCE(19.0mL)溶液中加入硫酸铜(II)(无水)(1.820g,11.40mmol)，将悬浮液在氮气环境中、于60℃在油浴中搅拌过夜。悬浮液转变为浅蓝色。冷却，反应混合物通过硅藻土短柱过滤，用DCM洗涤，将滤液浓缩得到粗品产物。粗品产物通过快速色谱纯化(0－30％的EtOAc庚烷)，得到(R,E)-N-(3-氟-5-(氟甲基)亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(900mg,60.9％的收率)，为浅黄色油状物。LCMS(m/z):260.1(MH+),0.88min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.57(s,1H),7.60(s,1H),7.56(d,J＝8.8Hz,1H),7.26-7.22(m,1H),5.50(s,1H),5.38(s,1H),1.29-1.23(m,9H)
步骤5.(R)-N-((R)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)烯丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在氩气环境下，将二甲基锌(2M的甲苯溶液)(0.434mL,0.868mmol)和乙烯基溴化镁(1M的THF溶液)(4.51mL,4.51mmol)于室温下混合20min，然后冷却至-78℃，随后滴加(R,E)-N-(3-氟-5-(氟甲基)亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.900g,3.47mmol)的无水THF(11.57mL)溶液，将内部温度保持在-74℃至-72℃之间，加入完成后，将反应混合物于-78℃搅拌1h，反应物通过sat.NH4Cl骤冷，真空除去THF，然后通过EtOAc萃取。有机部分通过水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(0－30％的EtOAc/庚烷)，得到产物660mg，LCMS(m/z):288.0(MH+),0.83min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.14(s,1H),7.03(d,J＝9.0Hz,1H),7.07(d,J＝9.4Hz,1H),5.90(ddd,J＝7.4,10.1,17.3Hz,1H),5.45-5.35(m,2H),5.35-5.25(m,2H),5.01-4.94(m,1H),3.45(br.s.,1H),1.30-1.22(m,9H)
步骤6.(R)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)丙-2-烯-1-胺
于0℃向(R)-N-((R)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)烯丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(660mg,2.297mmol)的MeOH(7.66mL)溶液中加入HCl(4M的二氧六环溶液)(5.742mL,22.97mmol)，将反应混合物于室温下搅拌2h，将反应混合物浓缩至干。加入Sat.Na2CO3，然后反应混合物通过EtOAc萃取。将有机部分干燥并浓缩，得到粗品产物。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):184.1(MH+),0.40min。
步骤7.(R)-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)烯丙基)氨基甲酸叔-丁基酯
向(R)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)丙-2-烯-1-胺(421mg,2.30mmol)的DCM(7.6mL)溶液中加入Boc2O(640μl,2.76mmol)，将反应混合物于室温下搅拌过夜并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(0－20％的EtOAc/庚烷)，得到(R)-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)烯丙基)氨基甲酸叔-丁基酯。LCMS(m/z):228.1(MH+-56)),0.91min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.08(s,1H),6.99(d,J＝9.0Hz,2H),5.95(ddd,J＝5.5,10.6,16.8Hz,1H),5.42(s,1H),5.30(s,1H),5.30-5.13(m,3H),4.86(br.s.,1H),1.44(s,9H)。
步骤8.(S)-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
将(R)-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)烯丙基)氨基甲酸叔-丁基酯(410mg,1.447mmol)的DCM(14.5mL)溶液冷却至-78℃，向反应混合物中充入O3(源自臭氧发生器)5min。反应混合物为浅蓝色，充入氮气以除去O3，然后加入NaBH4(547mg,14.47mmol)的乙醇(10mL)溶液，将反应混合物于-78℃搅拌10min，然后温热至室温。30min后，加入sat.NH4Cl，随后加入甲醇，将反应混合物浓缩，然后通过EtOAc萃取。有机部分通过sat.NaHCO3、水和盐水洗涤，干燥并浓缩，得到粗品产物。粗品产物通过快速色谱纯化，获得(S)-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(223mg,54％的收率)。LCMS(m/z):232.2(MH+-56),0.73min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.10(s,1H),7.02(d,J＝9.4Hz,2H),5.43(s,1H),5.35-5.28(m,1H),4.78(br.s.,1H),3.95-3.78(m,2H),1.44(br.s.,9H)。
步骤9.(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)乙醇
于室温下，向(S)-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(220mg,0.766mmol)的DCM(2.5mL)溶液中加入HCl(4M的二氧六环溶液)(1.9mL7.66mmol)，将反应混合物于室温下搅拌1h。然后将反应混合物浓缩至干。将残留物在DCM和庚烷中重结晶。过滤固体并空气干燥，获得(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)乙醇(145mg,0.908mmol,100％的收率)，为白色固体的HCl盐。LCMS(m/z):188.2(MH+),0.32min。
实施例177和178
4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺和4-(3-氨基-6-((1s,4R)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺的合成
流程75
步骤1.4-(3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向3-氯代吡嗪-2-胺(27g,208mmol)的DME(391mL)溶液和碳酸钠(66.3g,625mmol)中加入2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯(64.2g,229mmol)和PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(8.51g,10.42mmol)。向反应混合物中充入氮气，在油浴中于100℃加热3h。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品产物通过EtOAc和庚烷(2:3)重结晶，获得4-(3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯，84％的收率。LCMS(m/z):248.1(MH+),0.58min。
步骤2.4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
于0℃向4-(3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(31.5g,127mmol)的乙腈(430mL)溶液中加入NBS(23.9g,134mmol)。将反应混合物在冰浴中搅拌1h，加入饱和的碳酸氢钠，搅拌30min，产物用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取液，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品产物在EtOAc和庚烷中重结晶，获得4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯，为棕色固体，96％的收率。LCMS(m/z):326.0/328.0(MH+),0.87min。
步骤3.4-(3-氨基-6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(10g,30.7mmol)的DME(77mL)溶液中加入4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(9.79g,36.8mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(1.252g,1.533mmol)、H2O(25.6mL)，随后加入碳酸钠(9.75g,92mmol)。将反应物在油浴中于100℃加热2h。冷却。反应混合物通过EtOAc萃取三次，有机部分用水和盐水洗涤，干燥并浓缩。粗品产物在DCM和庚烷(1:1)中重结晶，获得产物4-(3-氨基-6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯，75％的收率。LCMS(m/z):382.2(MH+),0.82min。
步骤4.4-(3-氨基-6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
将4-(3-氨基-6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(6.1g,15.83mmol)溶于MeOH(150mL)和EtOAc(80mL)，向反应混合物中充入氮气15min，然后加入Pd-C(DEGASSA)(6g,5.64mmol),然后向反应混合物中充入氢气，于室温下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤，将其用EtOAc和甲醇洗涤。将滤液浓缩，得到粗品产物，其无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):388.0(MH+),0.79min。
步骤5.4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向4-(3-氨基-6-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(6.2g,16.00mmol)的乙腈(100mL)和水(40mL)溶液中加入3MHCl水溶液(13.34mL,80mmol)。将反应物于室温下搅拌30min。反应混合物采用6MNaOH(10mL)碱化，然后采用sat.NaHCO3调节至pH8。真空除去乙腈后，将固体悬浮液残留物过滤，用水和庚烷洗涤，空气干燥，获得4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯，为浅黄色固体，67％的收率。LCMS(m/z):344.0(MH+),0.70min。
步骤6.4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
于0℃向4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(3.25g,9.47mmol)的甲醇(100mL)和THF(20mL)溶液中加入NaBH4(0.358g,9.47mmol)。30min后，缓慢加入饱和的NH4Cl，然后于室温下搅拌1h。真空除去甲醇和THF。残留物通过EtOAc萃取三次，合并的有机部分用NaHCO3和水洗涤，干燥并浓缩。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):346.4(MH+),0.63min(trans)和0.66min(cis)；反式/顺式(～4:1)。
步骤7.4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸和4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(3.25g,9.41mmol)的MeOH(15.68mL)和THF(15.68mL)溶液中加入LiOH1M水溶液(23.53mL,23.53mmol)。将反应物于室温下搅拌2h，缓慢加入6MHCl(3.9mL)。真空除去甲醇和THF，过滤残留物(黄色固体悬浮液)。固体用水和庚烷洗涤，空气干燥，得到粗品产物。粗品产物无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):332.1(MH+),0.49min(反式)和0.53min(顺式)。
步骤8.4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺和4-(3-氨基-6-((1s,4R)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸和4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(19.45mg,0.053mmol)的混合物中加入NMP(0.5mL)、Hünig碱(0.042mL,0.240mmol)和(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)乙醇-HCl(9mg,0.048mmol)。然后加入HATU(36.6mg,0.096mmol)。将反应物于室温下搅拌1h，通过LCMS监测。向粗品反应物中加入0.5mL的NMP，过滤，通过制备性HPLC纯化，分离获得两种异构体，反式为4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺，顺式为少量的4-(3-氨基-6-((1s,4R)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺。两种异构体均冷冻干燥为TFA盐。对于反式非对映异构体而言，1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.84-7.70(m,2H),7.64-7.47(m,2H),7.19(s,1H),7.09(d,J＝9.78Hz,1H),6.98(d,J＝9.00Hz,1H),5.36(s,1H),5.24(s,1H),5.13(t,J＝5.87Hz,1H),3.87-3.70(m,2H),3.59-3.45(m,1H),2.62-2.49(m,1H),2.05-1.92(m,2H),1.91-1.79(m,2H),1.57(qd,J＝12.98Hz,2.93Hz,2H),1.39-1.24。对于顺式非对映异构体而言，1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.93-7.81(m,2H)7.75-7.58(m,2H)7.29(d,J＝9.78Hz,1H),7.19(d,J＝9.78Hz,1H),7.07(d,J＝9.00Hz,1H),5.45(s,1H),5.33(s,1H),5.22(t,J＝5.67Hz,1H),4.01(br.s.,1H),3.94-3.77(m,2H),2.80–2.68(m,1H),2.12–1.96(m,2H)1.91-1.80(m,2H),1.77-1.60(m,4H)。
(S)-N-(2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺的合成
流程76
步骤1.3-氨基-5-氟苯甲酸甲酯
将3-溴-5-氟苯甲酸(6.12g,33.1mmol)溶于MeOH(10mL)，在冰水浴中冷却，滴加甲苯(50mL)，然后滴加TMS-二偶氮甲烷(19.84mL,39.7mmol)。将反应混合物温热至室温1h并真空浓缩，将残留物溶于DCM/乙醚，通过硅胶短柱过滤，真空蒸发滤液，获得目标产物，然后将其溶于MeOH(60mL)，加入Pd/C(10wt％3.3g)，将混合物排空，在1atm氢气压环境下搅拌过夜，LCMS显示第二天早晨形成需要的产物。将反应混合物通过硅藻土过滤，真空浓缩滤液，残留物与甲苯一起共沸二次，直接用于下一步骤(99％)。LCMS(m/z):211.1(MH+),0.55min。
步骤2.3-氟-5-碘苯甲酸甲酯
将3-氨基-5-氟苯甲酸甲酯溶于5.0NHCl(68.5mL,343mmol)，冷却至0℃。滴加溶于3.0mL水的NaNO2(2.51g,36.4mmol)。然后30分钟内加入溶于45mL水的KI(6.59g,39.7mmol)，将混合物于室温下搅拌1h，反应混合物采用Et2O萃取二次(200mL)，然后干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，获得粗品产物，将其经快速色谱纯化(0－20％的EtOAc/庚烷)，获得为黄色浆液的5.49g目标产物(59％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.18(s,1H),7.69(d,J＝9.0Hz,1H),7.63(dd,J＝7.6,1.4Hz,1H),3.93(s,3H)。
步骤3.(3-氟-5-碘苯基)甲醇
将3-氟-5-碘苯甲酸甲酯(5.49g,19.60mmol)溶于DCM(100mL)，冷却至-78℃。30分钟内滴加DIBAL-H(49.0mL,49.0mmol)，然后在1h后，加入另一份DIBAL-H(49.0mL,49.0mmol)。将反应混合物于-78℃搅拌4h，小心地倒入冰冷的1NHCl中。将混合物搅拌10min，分层，水层用DCM萃取，将合并的有机萃取液干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，获得定量收率的目标产物。LCMS没有确定。
步骤4.3-氟-5-碘苯甲醛
将(3-氟-5-碘苯基)甲醇(9.79g,35.0mmolmmol)溶于DCM(94mL)，然后加入硅胶(18.0g)。于室温下向混合物中分次加入PCC(18.3g,45.0mmol)，将混合物于室温下搅拌1h，通过TLC监测。1h后，TLC显示SM完全转化为非极性(推定为醛)。将反应混合物通过1-英寸硅胶垫短柱过滤，用30％的醚DCM(200mL)洗脱。将滤液真空浓缩，获得粗品产物，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。
步骤5.(R,E)-N-(3-氟-5-碘亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向3-氟-5-碘苯甲醛(8.75g,35mmol)和(R)-(+)-叔-丁基亚酰胺(4.67g,38.5mmol)的DCE(117mL)溶液中加入硫酸铜(II)(无水)(16.76g,105mmol)，将获得的悬浮液于60℃加热过夜。LCMS显示形成需要的产物。将反应混合物通过硅藻土过滤，真空浓缩滤液，然后将其直接用于下一步骤。LCMS(m/z):354.1(MH+),1.08min。
步骤6.(R)-N-((R)-1-(3-氟-5-碘苯基)烯丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将二甲基锌(1.2M的甲苯溶液)(7.29mL,8.75mmol)和乙烯基溴化镁(45.5mL,45.5mmol)在氩气环境中、于室温下搅拌20min，然后冷却至-78℃，随后约30分钟内滴加(R,E)-N-(3-氟-5-碘亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的无水THF溶液(117mL)。内部温度在-74℃至-72℃之间，加入反应混合物后，于-78℃搅拌1h，样品用水骤冷，LCMS显示目标产物包含未反应的原料。加入更多的乙烯基溴化镁(12mL,12.0mmol)，通过LCMS监测反应，30min后，反应完成。将反应混合物倒入冰冷的sat.NH4Cl和水中，真空除去THF，产物用EtOAc萃取。有机层通过水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，粗品产物经快速色谱纯化(0－70％的EtOAc/庚烷)，获得8.99g的(R)-N-((R)-1-(3-氟-5-碘苯基)烯丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，为无色黄浆液的目标产物。收率(67.4％)。该收率为4个步骤的总收率。注意：主要副产物与去离子化的目标产物一致。LCMS(m/z):382.5(MH+),0.96min；1HNMR(400MHz,CDCl3))δppm7.48(s,1H),7.37(dt,J＝7.6,1.9Hz,1H),7.06(d,J＝9.0Hz,1H),5.85(ddd,J＝17.0,10.0,7.4Hz,1H),5.25-5.47(m,3H),4.90(d,J＝7.0Hz,1H),3.23-3.66(m,1H),1.26(s,9H)。
步骤7.(R)-(1-(3-氟-5-碘苯基)烯丙基)氨基甲酸叔-丁基酯
将(R)-N-((R)-1-(3-氟-5-碘苯基)烯丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(8.99g,23.58mmol)溶于MeOH(40mL)，采用4NHCl(11.79mL,47.2mmol)处理，将混合物于室温下搅拌1h，真空浓缩。将残留物溶于水，加入饱和的碳酸钠。产物用3:1CHCl3:IPA萃取，将有机层干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩。将残留物溶于DCM(60mL)，加入Boc-酸酐(6.79mL,29.2mmol)。将混合物于室温下搅拌过夜，第二天早上，将反应混合物真空浓缩，粗品产物(R)-(1-(3-氟-5-碘苯基)烯丙基)氨基甲酸叔-丁基酯无需任何其它纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):322.1(MH+-56),1.11min。
步骤8.(S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
将(R)-(1-(3-氟-5-碘苯基)烯丙基)氨基甲酸叔-丁基酯(8.89g,23.58mmol)溶于DCM(236mL)，冷却至-78℃。向混合物中充入臭氧直到出现持续的蓝色。然后向反应混合物中充入氮气，一次性加入NaBH4(8.92g,236mmol)，随后加入MeOH(120mL)，将混合物于相同的温度下搅拌2h，然后加入丙酮20mL。将反应混合物再搅拌1h，然后倒入饱和的NH4Cl中，随后用DCM(500mL)萃取，再用3:1CHCl3/IPA(200mL)萃取，合并有机萃取液，干燥(硫酸镁)，真空浓缩溶剂，残留物经快速色谱纯化，获得6.74g,(17.7mmol)(S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(75％)。LCMS(m/z):326.1(MH+-56),0.90min。
步骤9.(S)-(2-叠氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
将(S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(4.8112g,12.62mmol)溶于DCM(100mL)，冷却至0℃。加入Et3N(2.62mL,18.93mmol)，然后滴加MsCl(1.180mL,15.15mmol)。将反应混合物于相同的温度下搅拌30min，然后RM采用Sat'dNaHCO3和水骤冷。产物用DCM萃取，将合并的有机层干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，获得粗品产物，将其溶于DMF(25mL,ca0.5M)。随后加入NaN3(2.462g,37.9mmol)，将混合物于70℃加热。6h后，将反应混合物冷却至室温，采用EtOAc、水稀释，产物用EtOAc萃取。合并的有机萃取液用水洗涤三次，干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，残留物经快速色谱纯化，(0－50％)EtOAc/庚烷洗脱，获得4.03g的(S)-(2-叠氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯，为需要的产物。LCMS(m/z):351.0(MH+-56),1.05min。
步骤10.(S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-(2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
将(S)-(2-叠氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(288mg,0.709mmol)溶于MeOH(7.09mL)，然后加入聚合物键合的PPh3(7.09mmol)。将RM于70℃搅拌过夜。第二天早上，LCMS显示形成需要的产物。RM通过硅藻土过滤，滤饼用DCM和MeOH洗涤，真空浓缩滤液，获得粗品胺，其无需任何其它纯化可以直接用于下一步骤。将粗品胺溶于DCM(7mL)，冷却至0℃，然后加入三乙胺(0.198mL,1.418mmol)。然后一次性加入2-硝基苯-1-磺酰氯(189mg,0.851mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h，用水骤冷，产物用DCM萃取。有机层用盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，残留物经快速色谱纯化(0－40％的EtOAc/庚烷)，获得290mg的(S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-(2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯，为需要的产物。LCMS(m/z):524.0(MH+-56),1.10min。
步骤11.(S)-N-(2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺将(S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-(2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(290mg,0.513mmol)溶于DMF(5.1mL)和K2CO3(142mg,1.026mmol)，随后加入碘甲烷(48.1μl,0.769mmol)。将混合物于室温下搅拌1h，此时观察到反应完成。RM用水和EtOAc稀释。有机层用水洗涤二次，干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，获得相对纯的产物，将其溶于DCM(5mL)，用4NHCl的二氧六环溶液(2mL)处理，将混合物于室温下搅拌过夜，将混合物真空浓缩，获得目标产物(S)-N-(2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺，为盐酸盐。LCMS(m/z):480.4(MH+),0.72min。
实施例179
(S)-N-(2-氨基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程77
步骤1.(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-叠氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺
将4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸TFA加合物(126mg,0.292mmol)和HOAt(0.060g,0.438mmol)溶于DMF(1mL)和DIEA(0.156mL,0.876mmol)。加入(S)-2-叠氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙胺盐酸盐(100mg,292mmol)，其获自(S)-(2-叠氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯与4MHCl二氧六环溶液(流程76步骤9)的反应，随后加入EDC(0.090g,0.467mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。反应混合物采用EtOAc和水稀释，有机层用水洗涤二次，然后用饱和的Na2CO3洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得粗品(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-叠氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺，无需进一步纯化。
步骤2.(S)-N-(2-氨基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺
将粗品(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-叠氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺溶于THF(5mL)，滴加三苯膦(聚合物键合的,3mmol/g)(0.97g,3.70mmol)。将混合物于70℃加热3h。LCMS显示没有原料存在(在此阶段，磷酰亚胺中间体有可能以固相存在)。加入水(4.5mL)和THF(5mL)，将混合物于80℃加热3h，然后过滤。滤饼用DCM洗涤，然后真空浓缩滤液。将残留物溶于DCM，用水洗涤，有机层经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，获得残留物，将其经快速色谱纯化(0－60％的DCM/10％的MeOH在含有0.5％NH4OH的EtOAc中)，收集产物组分，浓缩。将残留物溶于乙腈和水，冷冻干燥，获得101.2mg的(S)-N-(2-氨基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺，为需要的产物。LCMS(m/z):580.1(MH+),0.70min。1HNMR(CD3OD)δ(ppm):7.92(s,1H),7.85-7.79(m,1H),7.73(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.68-7.61(m,2H),7.50-7.43(m,1H),7.23(d,J＝9.5Hz,1H),5.12(t,J＝6.9Hz,1H),4.07(dd,J＝11.2,3.3Hz,2H),3.60(td,J＝11.7,2.0Hz,2H),3.09-2.83(m,3H),2.02-1.76(m,4H)。
(S)-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯的合成
流程78
步骤1.(S,E)-N-(3-溴-5-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向3-溴-5-氟苯甲醛(5g,24.63mmol)和(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.28g,27.1mmol)的DCE(82mL)溶液中加入硫酸铜(II)(无水)(7.86g,49.3mmol)。将悬浮液在氮气环境中、于60℃搅拌过夜。将反应混合物冷却，通过硅藻土短柱过滤，用DCM洗涤。将滤液浓缩得到粗品产物。粗品产物通过快速色谱纯化，采用0－30％的EtOAc庚烷洗脱，得到产物(S,E)-N-(3-溴-5-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(7.5g,24.49mmol,99％的收率)，为浅黄色油状物。LCMS(m/z):306.1/308.1(MH+),1.04min。
步骤2.(S)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-硝基乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将硝基甲烷(1.0mL,17.20mmol)溶于THF(34.4mL)，然后于-78℃加入BuLi(2.5M的己烷溶液)(7.22mL,18.06mmol)。将反应混合物于-78℃搅拌10min，然后温热至室温20min。冷却至-78℃后，滴加(S,E)-N-(3-溴-5-氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4.74g,15.48mmol)的THF(6mL)溶液。将反应混合物于-78℃搅拌20min，温热至室温，于室温下搅拌5h。反应混合物通过satNH4Cl骤冷，用EtOAc萃取。有机部分经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(0－40％－100％的EtOAC/庚烷)。合并纯组分，得到(S)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-硝基乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.2g,5.99mmol,38.7％的收率)。LCMS(m/z):367.1/369.1(MH+),0.89min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.31(s,1H),7.03(d,J＝9.0Hz,1H),5.03(q,J＝5.7Hz,1H),4.87-4.78(m,2H),4.48(d,J＝5.1Hz,1H),1.33-1.25(m,9H)。
步骤3.(S)-N-((S)-2-氨基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将(S)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-硝基乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.2g,5.99mmol)溶于MeOH(19.97mL)，充入氮气10min，然后加入PtO2(0.408g,1.797mmol)。用氢气囊向反应混合物中充入氢气，于室温下搅拌过夜。反应混合物通过硅藻土过滤，采用甲醇和EtOAc洗涤。滤液经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物无需进一步纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z):337.1/339.1(MH+),0.64min.
步骤4.((S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((S)-1,1-二甲基乙基亚酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
将(S)-N-((S)-2-氨基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.75g,5.19mmol)溶于DCM(17.30mL)，然后加入Boc2O(1.325mL,5.71mmol)。将反应混合物于室温下搅拌3h，然后浓缩。将粗品产物纯化，获得产物((S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((S)-1,1-二甲基乙基亚酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(1.78g,78％)。LCMS(m/z):437.1/439.1(MH+),0.99min。
步骤5.(S)-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
于室温下，向((S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((R)-1,1-二甲基乙基亚磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(1.78g,4.07mmol)的DCM(13.57mL)溶液中加入HCl(4M的二氧六环溶液)(4.07mL,16.28mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h。将反应混合物中和至pH＝7，然后用EtOAc萃取，获得需要的(S)-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(300mg)，为游离碱。LCMS(m/z):317.1/319.1(MH+),0.66min。
(S)-(2-氨基-2-(3-溴苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯的合成
根据流程78，采用3-溴苯甲醛，获得(S)-(2-氨基-2-(3-溴苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯，为HCl盐。LCMS(m/z):315.1/317.1(MH+),0.66min。
(S)-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)氨基甲酸甲基酯的合成
流程79
向(S)-N-((S)-2-氨基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(100mg,0.297mmol)的DCM(988μl)溶液中加入TEA(124μl,0.890mmol)和氯代甲酸甲酯(24.12μl,0.311mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h。反应混合物通过EtOAc萃取，有机部分用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残留物溶于Et2O(1mL)，然后加入HCl(4M的二氧六环溶液)(148μl,0.593mmol)。将反应混合物于室温下搅拌30min。倾倒溶剂后，残留的固体无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):291.2/293(MH+),0.49min。
(S)-(2-氨基-2-(3-溴苯基)乙基)氨基甲酸甲基酯
根据流程79，采用(S)-N-((S)-2-氨基-1-(3-溴苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，获得(S)-(2-氨基-2-(3-溴苯基)乙基)氨基甲酸甲基酯。LCMS(m/z):273.0/275.0(MH+),0.46min。
(S)-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸甲基酯
根据流程79，采用(S)-N-((S)-2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，获得(S)-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸甲基酯。LCMS(m/z):229.2(MH+),0.42min。
(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)乙酰胺的合成
流程80
将(S)-N-((S)-2-氨基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(100mg,0.297mmol)溶于DCM(988μl)，随后加入吡啶(71.9μl,0.890mmol)和乙酸酐(28.0μl,0.297mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h，通过EtOAc萃取，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将残留物溶于Et2O(1mL)，然后加入HCl(4M的二氧六环溶液)(148μl,0.593mmol)。将反应混合物于室温下搅拌30min。倾倒出溶剂后，残留的固体无需纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):275.1/277.1(MH+),0.41min。
(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴苯基)乙基)乙酰胺的合成
根据流程80，采用(S)-N-((S)-2-氨基-1-(3-溴苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，获得(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴苯基)乙基)乙酰胺。LCMS(m/z):257.1/259.1(MH+),0.40min。
实施例180
(S)-N-(2-氨基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程81
步骤1.(S)-(2-(4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
向4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(35mg,0.110mmol)的DMF(368μl)溶液中加入(S)-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(40.8mg,0.110mmol)、aza-HOBt(22.52mg,0.165mmol)、EDC(31.7mg,0.165mmol)和DIEA(57.8μl,0.331mmol)。将反应混合物于室温下搅拌3h，然后在EtOAc和水之间分配。有机部分通过NaHCO3、水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。粗品(S)-(2-(4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯可以直接用于下一步反应，无需进一步纯化。LCMS(m/z):632.1/634.1(MH+),0.97min。
步骤2.(S)-N-(2-氨基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺
向(S)-(2-(4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(69mg,0.110mmol)的DCM(1.0mL)溶液中加入TFA(0.5mL)，于室温下搅拌1h。将反应混合物浓缩至干，然后溶于DMSO，经制备性HPLC纯化。合并纯组分，冷冻干燥，获得为TFA盐的终产物。LCMS(m/z):532.1/534.1(MH+),0.69min；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm7.94-7.84(m,2H),7.73(dd,J＝1.4,8.0Hz,1H),7.66(dd,J＝1.4,11.9Hz,1H),7.55(s,1H),7.49-7.39(m,1H),7.29(d,J＝9.4Hz,1H),5.48(t,J＝7.2Hz,1H),4.04(dd,J＝2.9,11.5Hz,2H),3.57(dt,J＝2.2,11.6Hz,2H),3.51-3.41(m,2H),3.01-2.85(m,1H),1.97-1.76(m,4H)。
实施例181
(S)-N-(2-氨基-1-(3-氯代-5-氟苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程82
步骤1.(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-叠氮基-1-(3-氯代-5-氟苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(126mg,0.398mmol)的DMF(1328μl)溶液中加入(S)-2-叠氮基-1-(3-氯代-5-氟苯基)乙胺(100.0mg,0.398mmol)、DIEA(348μl,1.991mmol)、EDC(153mg,0.797mmol)和aza-HOBt(81mg,0.597mmol)。将反应混合物搅拌15h。加入水后，反应混合物用EtOAc处理。有机层经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(EtOAc庚烷溶液梯度洗脱)，获得(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-叠氮基-1-(3-氯代-5-氟苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺(118mg,58％)。LCMS(m/z):514.2(MH+),0.91min。
步骤2.(S)-N-(2-氨基-1-(3-氯代-5-氟苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺
于室温下，向(S)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-叠氮基-1-(3-氯代-5-氟苯基)乙基)-2-氟苯甲酰胺(118mg,0.230mmol)的吡啶(2mL)溶液中顺序加入NH4OH(200μl)和三甲基膦(344μl,0.344mmol)。将反应混合物搅拌2h。加入EtOH(1mL)后，将反应混合物真空浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(20％的MeOH的DCM溶液，含有0.5％的NH3/DCM)，获得89.6mg的(S)-N-(2-氨基-1-(3-氯代-5-氟苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺(79％)。LCMS(m/z):488.2(MH+),0.66min。1HNMR(500MHz,甲醇-d4)δppm7.98-7.89(m,1H),7.89-7.79(m,1H),7.74(td,J＝1.4,8.0Hz,1H),7.69-7.61(m,1H),7.41-7.28(m,1H),7.27-7.08(m,2H),5.27-5.12(m,1H),4.07(dd,J＝3.8,11.0Hz,2H),3.69-3.52(m,2H),3.14-3.03(m,2H),2.96(tt,J＝3.9,11.7Hz,1H),2.02-1.77(m,4H)。
(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺的合成
流程83
步骤1.N-((S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((S)-1,1-二甲基乙基亚磺酰氨基)乙基)-2-硝基苯磺酰胺
于0℃将(S)-N-((S)-2-氨基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.3g,9.78mmol)溶于DCM(32.6mL)，然后加入TEA(1.405mL,10.08mmol)和2-硝基苯-1-磺酰氯(2.169g,9.78mmol)。将反应混合物于室温下搅拌3h。真空浓缩反应混合物，将粗品产物纯化，得到N-((S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((S)-1,1-二甲基乙基亚磺酰氨基)乙基)-2-硝基苯磺酰胺。LCMS(m/z):522.1/524.1(MH+),0.94min。
步骤2.(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-硝基苯磺酰胺
向N-((S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((R)-1,1-二甲基乙基亚磺酰氨基)乙基)-2-硝基苯磺酰胺(3.55g,6.80mmol)的Et2O(22.65mL)溶液中加入HCl(4M的二氧六环溶液)(3.40mL,13.59mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h。反应混合物通过Na2CO3溶液中和，通过EtOAc萃取。有机层用水洗涤，干燥，过滤并真空浓缩，获得粗品(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-硝基苯磺酰胺，其无需进一步纯化可以直接用于下一步反应。LCMS(m/z):418.2/420.2(MH+),0.62min。
步骤3.(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
将(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-硝基苯磺酰胺(1.55g,3.71mmol)溶于CH2Cl2(12.35mL)，然后加入TEA(0.517mL,3.71mmol)和Boc-酸酐(1.119mL,4.82mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，得到(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯。LCMS(m/z):462.0/464.0(MH+-56),0.99min。
步骤4.(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
将(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(2.3g,4.44mmol)溶于DMF(14.79mL)。加入K2CO3(1.226g,8.87mmol)和MeI(0.416mL,6.66mmol)。将反应混合物于室温下搅拌2h，然后加入水。反应混合物通过EtOAc萃取。有机部分用水和盐水洗涤，干燥并浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，得到(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(2.3g,4.32mmol,97％的收率)。
步骤5.(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺
将(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(2.3g,4.32mmol,97％的收率)溶于CH2Cl2，加入HCl(4M的二氧六环溶液,4.44mL,17.75mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。加入庚烷。过滤固体并空气干燥，得到(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺(1.8g,3.84mmol,87％的收率)。LCMS(m/z):432.2/434.1(MH+),0.69min。
(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺盐酸盐制备如下：
步骤1:(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯.
向冰水冷却的(S)-2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇(30g,111mmol)(HCl盐)的DCM(390mL)溶液中加入TEA(46.5mL,333mmol)，随后加入Boc-酸酐(26.4mL,114mmol，在50mLDCM中)。加入在15分钟内完成。移除冰水浴，将反应混合物于室温下搅拌16小时。浓缩反应混合物(水温保持在30℃以下)，残留物采用500mL的EtOAc稀释，用100mL的1NNaOH、100mL水和100mL盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得为粘性液体的粗品产物(批量较小，为半固体)。向该粘性(或半固体)产物中加入120mL的Et2O，然后将获得的混合物超声处理5分钟。将混合物浓缩至总体积约60mL。于室温下1小时后，白色结晶固体沉淀出来。(如果没有结晶形成，加入～2mg晶种)。4小时后，过滤白色固体，用少量的乙醚洗涤，干燥(中央真空(housevacumm)至少1小时)，获得总共30.5g白色固体，为需要的产物。如果将滤液浓缩可以提高回收率，重复上述过程。(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯：30.5g，82％的收率。LC-MS:(MW-56):279.8m/zat0.84min。1HNMR(400MHz,DMSO)ppm1.29-1.43(m,8H)3.38-3.55(m,2H)4.39-4.61(m,1H)4.84(t,J＝5.67Hz,1H)7.15(d,J＝9.39Hz,1H)7.24-7.44(m,3H)。
步骤2:(4S)-4-(3-溴-5-氟苯基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔-丁基酯2-氧化物
在氮气环境中，于-40至-45℃(内部温度，干冰-丙酮浴温度约-55℃)，向SOCl2(19.98mL,274mmol)的乙腈(280mL)溶液中加入(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(30.5g,91mmol)的CH3CN(175mL)溶液。加入在约30分钟内完成。于-40至-45℃搅拌约20分钟后，加入吡啶(40.6mL,502mmol)(在约10分钟内)。于-40℃搅拌10分钟后，撤除冷浴，将混合物温热至室温并搅拌2小时。LC-MS显示两种非对映异构体产物和一定量的二聚体副产物。将混合物用400mL的EtOAc稀释，用盐水(200mL)洗涤三次，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩(水浴约40℃，约2小时)，获得35.7克粗品产物，为浅黄色粘性液体，其立即用于下一步骤，或者于40℃储存。(4S)-4-(3-溴-5-氟苯基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔-丁基酯2-氧化物:LC-MS:(MW-100):281.8，1.02min。
步骤3:(S)-4-(3-溴-5-氟苯基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔-丁基酯2,2-二氧化物
在搅拌下，向冰水冷却的(4S)-4-(3-溴-5-氟苯基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔-丁基酯2-氧化物(34.6g,91mmol)的乙腈(420mL)溶液中加入NaIO4(29.2g,137mmol)和三氯化钌水合物(0.359g,1.729mmol)，随后加入水(320mL)。将反应混合物于0℃搅拌2小时。混合物采用EtOAc稀释(500mL)，用盐水(200mL)洗涤二次，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得粗品产物，其可以直接用于下一步骤。获得40.3g粗品产物。LC-MS:(MW+Na):419.9m/z，1.01min。
步骤4:(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
于室温下，向N-甲基-2-硝基苯磺酰胺(18.69g,86mmol)的乙腈(400mL)溶液中加入KOH(10.21g,182mmol,获自商业的粉末形式)。将获得的混合物于室温下搅拌约15分钟，然后加入(S)-4-(3-溴-5-氟苯基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔-丁基酯2,2-二氧化物(36.1g,91mmol)的180mL的CH3CN溶液(加入在15－20分钟内结束)。将获得的混合物于室温下搅拌1－2小时。将反应混合物浓缩至总体积约200mL。向残留物中加入600mLEtOAc，随后用180mL的3NHCl、200mL的1NNaOH和盐水(200mL)洗涤二次。溶液通过硫酸钠干燥，通过过滤漏斗采用硅藻土(～30g)和硅胶(20g)过滤。浓缩滤液，获得40.3g产物，为粘性液体，其可以直接用于下一步骤。(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯：LC-MS:(MW+Na):555.8m/z，1.07min。(40.3g,76mmol,83％的收率)。
步骤5:(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺盐酸盐
于室温下，向(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(40g,75mmol)的DCM(420mL)溶液中加入HCl(4M的二氧六环溶液,150mL,601mmol)。将获得的溶液于室温下搅拌4小时，在此期间白色固体沉淀出来。过滤反应混合物，白色固体用DCM(50ml×2)洗涤，真空干燥，获得23.8g目标产物，为白色固体(HCl盐)。(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺(23.8g,四步收率共68％)。LC-MS:(M+1):433.9m/z，0.66min。1HNMR(400MHz,<dmso>)ppm2.86(s,3H)3.56-3.82(m,2H)4.61(t,J＝7.24Hz,1H)7.42-7.61(m,2H)7.68(d,J＝1.57Hz,1H)7.75-8.05(m,4H)。
(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-(2-氟乙基)-2-硝基苯磺酰胺的合成
根据路程83步骤4和5，采用1-溴-2-氟乙烷，获得(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-(2-氟乙基)-2-硝基苯磺酰胺。LCMS(m/z):464.1/466.1(MH+),0.71min。
实施例182
4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程84
步骤1.亚胺二甲酸,4-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯,1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯
向4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(3g,7.78mmol)的乙腈(130mL)溶液中加入Boc2O(6.33mL,27.2mmol)和DMAP(0.048g,0.389mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。在旋转蒸发仪上减压除去挥发物后，粗品产物经快速色谱纯化，采用0－50％的EtOAc/庚烷洗脱，获得亚胺二甲酸,4-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯,1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯(4.34g,7.41mmol,95％)。LCMS(m/z):586.5(MH+),1.24min；1HNMR(500MHz,氯仿-d)δppm8.52-8.41(m,1H),7.97(t,J＝7.7Hz,1H),7.61-7.44(m,2H),3.46-3.30(m,1H),2.68-2.52(m,4H),2.38(dd,J＝3.0,13.7Hz,2H),2.28-2.10(m,2H),1.69-1.61(m,9H),1.42-1.29(m,18H)。
步骤2.亚胺二甲酸,4-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)-6-(4-((三乙基甲硅烷基)氧基)环己-3-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯,1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯
于-78℃向亚胺二甲酸,4-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯,1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯(12.1g,20.66mmol)的THF(68.9mL)溶液中加入LiHMDS(1M的THF溶液)(22.73mL,22.73mmol)。搅拌30min后，加入三乙基氯代硅烷(3.67mL,21.69mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌1h。加入饱和的碳酸氢钠溶液，将混合物用EtOAc萃取。有机层用水和盐水充分洗涤，经无水碳酸氢钠干燥，过滤，真空浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，采用5％的EtOAc/庚烷洗脱，获得亚胺二甲酸,4-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)-6-(4-((三乙基甲硅烷基)氧基)环己-3-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯,1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯(12.1g,17.29mmol)。LCMS(m/z,中性-非极性方法):701.8(MH+),1.14min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.41(s,1H),8.00-7.88(m,1H),7.57-7.46(m,2H),4.97(br.s.,1H),3.16-3.00(m,1H),2.49-2.38(m,2H),2.38-2.23(m,1H),2.19-1.94(m,3H),1.61(s,9H),1.33(s,18H),1.06-0.94(m,8H),0.77-0.64(m,6H)。
步骤3.亚胺二甲酸,4-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)-6-(3-氟-4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯,1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯
于0℃向亚胺二甲酸,4-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)-6-(4-((三乙基甲硅烷基)氧基)环己-3-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯,1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯(12.1g,17.29mmol)的乙腈(57.6mL)溶液中加入(7.96g,22.47mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。采用饱和的碳酸氢钠溶液骤冷后，反应混合物用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，获得亚胺二甲酸,4-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)-6-(3-氟-4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯,1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯(10.44g,17.29,100％)，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z,中性-非极性方法):604.3(MH+),1.12min。
步骤4.(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-氟-4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
于室温下，向亚胺二甲酸,4-(3-((叔-丁氧基羰基)氨基)-6-(3-氟-4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯,1,3-二(1,1-二甲基乙基)酯(10.44g,17.29mmol)的THF(57.6mL)溶液中加入4MHCl二氧六环溶液(130mL,519mmol)。将反应混合物搅拌3-4h，通过LCMS监测以防止更多的叔-丁基酯水解为羧酸。将反应物在水浴中冷却，用饱和的碳酸钠中和。将获得的混合物用EtOAc萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物经快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc/庚烷洗脱，获得(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-氟-4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(1.9g,4.71mmol,27.2％)和(+/-)-4-(3-氨基-6-((1S,3S)-3-氟-4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(926mg,2.295mmol,13.3％)。LCMS(m/z)分别为：404.3(MH+),0.84min和404.3(MH+),0.84min。
步骤5.(+/-)-4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
于0℃向(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-氟-4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(1.9g,4.71mmol)的MeOH(47.1mL)溶液中加入NaBH4(0.267g,7.06mmol)。将反应混合物搅拌2h。用饱和的碳酸氢钠溶液骤冷，反应混合物用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，采用35％的EtOAc庚烷溶液洗脱，获得(+/-)-4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(839mg,2.07mmol,43.9％)和(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(900mg,2.22mmol,47％)。LCMS(m/z)分别为：406.3(MH+),0.85min和406.3(MH+),0.85min。
步骤6.4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
将4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(839mg,2.07mmol)通过手性分离(ChiralPak5micAD柱,4.6×100(mm),CO2/EtOH+0.1％DEA＝70/30,SFC＝5ml/min)，获得单一对映体4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(Rt＝1.61min,336mg,0.829mmol,40％)和极性较低的对映体(Rt＝2.45min,43％)。
步骤7.4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(90mg,0.22mmol)的DCM(0.444mL)溶液中加入4MHCl二氧六环溶液(3.7mL,14.80mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。真空蒸发除去挥发物后，将反应混合物用乙醚研磨并过滤，获得4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(86mg,0.22mmol,100％)，为HCl盐，其无需任何纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):350.2(MH+),0.51min。
步骤8.4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(20mg,0.057mmol)的DMF(573μL)溶液中加入(S)-2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇HCl盐(18.59mg,0.069mmol)、aza-HOBt(11.69mg,0.086mmol)、EDC(21.95mg,0.115mmol)和DIEA(30.0μl,0.172mmol)。将反应混合物搅拌15h。加入水，反应混合物用EtOAc萃取三次。有机层经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物通过HPLC纯化。将纯组分冷冻干燥，获得4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(12.9mg,0.019mmol,32.8％)，为TFA盐。LCMS(m/z):565.1/567.1(MH+),0.72min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.78(s,2H),7.63-7.47(m,2H),7.37(s,1H),7.22-7.02(m,2H),5.15-5.03(m,1H),4.43-4.15(m,1H),3.77(t,J＝5.7Hz,2H),3.62-3.47(m,1H),2.76(br.s.,1H),2.19(dd,J＝3.1,6.3Hz,1H),2.02-1.92(m,1H),1.89-1.66(m,2H),1.56(dd,J＝3.3,12.3Hz,1H),1.42(br.s.,1H)。绝对立体化学根据4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的X-射线共结构(co-structure)信息确定。
实施例183
4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程85
步骤1.4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(流程84:365mg,0.9mmol)的DCM(2mL)溶液中加入4MHCl的二氧六环溶液(8mL,32.0mmol)。将反应混合物于室温下搅拌3天。真空蒸发除去挥发物，得到4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):350.3(MH+),0.48min。
步骤2.4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(20mg,0.057mmol)的DMF(573μL)溶液中加入(S)-2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇HCl盐(18.59mg,0.069mmol)、aza-HOBt(11.69mg,0.086mmol)、EDC(21.95mg,0.115mmol)和DIEA(30.0μl,0.172mmol)。将反应混合物搅拌15h。加入水，反应混合物用EtOAc萃取三次。有机层经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物通过HPLC纯化。将纯组分冷冻干燥，获得4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(16.1mg,0.023mmol,41％)，为TFA盐。LCMS(m/z):565.1/567.1(MH+),0.72min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.86-7.69(m,2H),7.65-7.47(m,2H),7.40-7.30(m,1H),7.22-7.06(m,2H),5.08(t,J＝5.7Hz,1H),4.41-4.14(m,1H),3.85-3.67(m,2H),3.63-3.48(m,1H),2.74(t,J＝11.5Hz,1H),2.17(td,J＝3.1,6.3Hz,1H),2.04-1.89(m,1H),1.84-1.66(m,2H),1.65-1.30(m,2H)。绝对立体化学根据4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的ERK2中X-射线共结构信息确定。
实施例184
4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程86
步骤1.4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(156mg,0.403mmol)的DMF(1.28mL)溶液中加入(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺(180mg,0.384mmol)、HOAt(105mg,0.768mmol)、DIEA(402μl,2.8mmol)和EDC.HCl(147mg,0.768mmol)。将反应混合物于室温下搅拌15h，LCMS显示产物形成。将混合物采用EtOAc稀释，用水洗涤，再次用饱和的Na2CO3溶液洗涤，有机层干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩，获得4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺。粗品产物通过ISCO柱色谱纯化(0－100％的EtOAc庚烷)，获得4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺(99％)。
步骤2.4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺(293mg,0.38mmol)的DMF(3.8mL)溶液中加入K2CO3(371mg,2.69mmol)和4-巯基苯甲酸(207mg,1.34mmol)。将反应混合物在微波合成器中于45℃加热55min。反应后，加入水，将混合物用EtOAc萃取三次。合并有机层，用水洗涤三次。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。残留物通过快速色谱纯化，采用EtOAc(含有20％MeOH和0.5％氨水)/DCM洗脱，获得150mg的4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):578,580(MH+),0.64min。1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.80(s,1H),7.76-7.68(m,1H),7.59(dd,J＝1.6,7.8Hz,1H),7.53(dd,J＝1.2,11.7Hz,1H),7.37(s,1H),7.18(d,J＝8.2Hz,1H),7.11(d,J＝9.4Hz,1H),5.27-5.10(m,1H),4.42-4.13(m,1H),3.65-3.49(m,1H),2.97-2.88(m,1H),2.87-2.79(m,1H),2.74(t,J＝11.7Hz,1H),2.35(s,3H),2.22-2.11(m,1H),2.04-1.92(m,1H),1.85-1.68(m,2H),1.55(dq,J＝3.1,12.9Hz,1H),1.46-1.33(m,1H)。
或者，4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺可以如下合成：
(1R,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己烷甲酸乙基酯
向500mL烧瓶中加入(1R,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己烷-甲酸乙基酯(17g,89.3mmol,97.9％ee)、TBSCl(17.5g,116.1mmol)和DCM(200mL)。向获得的澄清的溶液中加入咪唑(12.1g,178mmol)，将反应混合物搅拌16小时。加入水(100mL)，将混合物再搅拌10分钟。分离各相，有机层用水洗涤(100mL)，减压浓缩(40±5℃,50～250mbar)。通过硅胶快速色谱纯化，采用庚烷和乙酸乙酯(100:1)的混合物洗脱，获得(1R,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己烷甲酸乙基酯，为无色油状物(20.6g,收率75.7％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):4.38～4.52(m,1H),4.03～4.08(dd,J＝12Hz,J＝8Hz,2H),3.77～3.81(m,1H),2.54～2.60(m,1H),1.93～2.06(m,1H),1.58～1.86(m,4H),1.46～1.50(m,1H),1.17～1.20(t,J＝12Hz,J＝6Hz,3H),0.85(s,9H),0.03～0.04(d,J＝4Hz,8H),[M+H]+＝305.1，通过GC-MS获得(设备：AgilentTechnologies,GC6890N,MS5975C.GC条件：柱：HP–5MS，毛细管：30.0M×250μm×0.25μm，检测器参数：温度350℃，H2流速：40mL/min，空气流速：400mL/min，Makeup(He)：40mL/min。注射参数：温度200℃。Split比例：100:1。载体气体：He,流速：2.0mL/min，模式：恒流。柱温参数：0min,50℃；2.0min,50℃；5.33min,100℃；15.83min,270℃。注射体积：1μL，注射器冲洗溶剂：乙腈。MS条件：电压：70EV，扫描范围：M/z＝50～550)
2-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪
向1L烧瓶中加入2-溴-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪(23g,67mmol)、(1R,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己烷甲酸乙基酯(28g,83mmol)、{[P(t-Bu)3]PdBr}2(800mg,1mmol)，随后加入甲苯(250mL)。将反应混合物通过氮气排空脱气三次，然后冷却至-35±5℃。向反应混合物中滴加NaHMDS(47mL,2M的THF溶液,94mmol)。在1小时内将温度提高至室温，再搅拌30分钟。反应混合物采用8％的氯化铵溶液(200mL)骤冷，分离各相，水层用庚烷(300mL)萃取。合并的有机层用10％盐水(400mL)洗涤，减压浓缩(45±5℃,50～100mbar)，获得48g的(1RS,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪-2-基)-3-氟环己烷甲酸乙基酯，为1R和1S非对映异构体混合物。该产物无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。HPLC保留时间＝8.274minHPLC方法d：设备：AgilentTechnologies1200系列。柱：WatersXbridgeC18,150＊3.0mm,3um。柱温：35℃。流速：0.70mL/min。检测：210nm/DAD。流动相组成：A:0.1％的H3PO4水溶液；B:乙腈。梯度洗脱：0min：90％A,10％B；5min：100％B；11min：100％B。LC-MS方法：[M+H]+＝476.2706,1HNMR(400MHz,DMSO-d6):8.47(s.1H),8.43(s,1H),5.85(s,2H),4.39～4.52(m,1H),4.14(dd,J＝12Hz,J＝8Hz,2H),3.59～3.66(m,1H),2.28～2.94(m,1H),2.06(s,6H),1.84～1.97(m,3H),1.46～1.52(m,3H),1.14～1.17(t,J＝12Hz,J＝8Hz,2H),0.81(s,9H),0.01(d,J＝4Hz,6H)。
向1L烧瓶中加入(1R,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪-2-基)-3-氟环己烷甲酸乙基酯(48g,67mmol)、乙醇(250mL)，随后加入11％的NaOH水溶液(112g,300mmol)。将反应混合物于30±5℃搅拌16小时，然后采用10％HCl水溶液(70mL)骤冷至pH＝6～7。减压蒸馏乙醇(50±5℃,50～100mbar)后，采用10％HCl将获得的混合物的pH调节至4－5。水溶采用IPAc萃取二次(200mL×2)。合并的有机层用10％盐水(200mL)洗涤，减压浓缩(50±5℃,50～100mbar)，获得46g的(1RS,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪-2-基)-3-氟环己烷甲酸，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。HPLC保留时间＝7.390min(设备：AgilentTechnologies1200下列。柱：WatersXbridgeC18,150＊3.0mm,3um。柱温：35℃。流速：0.70mL/min。检测：210nm/DAD。流动相组成：A:0.1％的H3PO4水溶液；B:乙腈。梯度洗脱：0min:90％A,10％B；5min:100％B；11min100％B),LC-MS:[M+H]+＝448.2415。
在氮气环境中，向500mL烧瓶中加入(1RS,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-(5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪-2-基)-3-氟环己烷甲酸(46g)、甲苯(250mL)和HOAc(0.8g,13.3mmol)。将反应混合物回流1小时，冷却至室温，然后加入6％NaHCO3水溶液(200mL)。分离相，水层用庚烷萃取(250mL)。合并的有机层用10％盐水(200mL)洗涤，减压浓缩(50±5℃,50～100mbar)，获得油状物。向残留物中加入80mL甲醇，将混合物加热至55±5℃并搅拌1小时。2小时内将温度冷却至25±5℃并再搅拌2－3小时。将获得的悬浮液过滤，将湿的滤饼减压干燥(50±5℃,50～100mbar)3小时，获得8.6g的2-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪，为结晶固体(dr>99:1)。将母液减压浓缩(50±5℃,50～100mbar)，获得34.5g(71mmol)黑色油状物。向该残留物中加入tBuOH(200mL)，随后加入tBuOK(8.0g,71mmol)。将反应混合物加热至90±5℃并搅拌3小时。将温度冷却至室温后，加入10％NaHCO3水溶液(150mL)，随后加入庚烷(200mL)，将混合物再搅拌10分钟。分离相，水层用庚烷(200mL)洗涤。合并的有机层用10％盐水(150mL)洗涤，减压浓缩(50±5℃,50～100mbar)，获得油性残留物。向该残留物中加入甲醇(60mL)，将混合物加热至55±5℃。搅拌1小时后，2小时内将温度冷却至25±5℃，随后再搅拌2小时。过滤悬浮液，将获得的湿滤饼减压干燥(50±5℃,50～100mbar)3小时，获得第二批的2-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪，为结晶固体(5.6g,dr＝98:2)。采用2-溴-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪为起始原料的4步总收率为51.8％.mp＝100.6℃～102.9℃.LC/MS:[M+H]+＝404.2459,1HNMR(400MHz,DMSO-d6):8.53(s,1H),8.50(s,1H),5.75(s,2H),4.25～4.43(m,1H),3.60～3.69(m,1H),3.25(s,6H),2.93～3.00(m,1H),2.19～2.27(m,1H),1.98(s,6H),1.72～1.90(m,3H),1.39～1.61(m,2H),0.80(s,9H),0.01(d,J＝4Hz,6H)。,HPLC(设备：AgilentTechnologies1200系列。柱：WatersXbridgeC18,150＊3.0mm,3um。柱温：35℃。流速：0.70mL/min。检测：210nm/DAD。流动相组成：A:0.1％的H3PO4水溶液；B:乙腈。梯度洗脱：0min:90％A,10％B；5min:100％B；11min100％B)。2-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪的保留时间8.084min，2-((1R,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪的保留时间8.324min。
2-溴-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪
向250mL烧瓶中加入5-溴吡嗪-2-胺(18g,10.35mmol)、己烷-2,5-二酮(14.5g,12.41mmol)和PPTS(0.9g,0.36mmol)的甲苯(60mL)溶液。将反应混合物在Dean-Stark阱中加热至回流16小时。将反应混合物冷却至室温，然后减压浓缩(55±5℃,50～100mbar)，获得为油状物的2-溴-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪(28g,含有～10％甲苯，试验收率：95％)。该产物无需进一步纯化可以直接使用。LC/MS:[M+H]+＝252.0139,1HNMR(400MHz,DMSO-d6):8.87(s,1H),8.63(s,1H),5.86(s,2H),2.10(s,6H)。HPLC保留时间＝6.21min,设备：AgilentTechnologies1200系列。柱：WatersXbridgeC18,150＊3.0mm,3um。柱温：35℃。流速：0.70mL/min。检测：210nm/DAD。流动相组成：A:0.1％的H3PO4水溶液；B:乙腈。梯度洗脱：0min:90％A,10％B；5min:100％B；11min100％B。
5-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)吡嗪-2-胺
向搅拌的2-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪(1250g,3097mmol)的乙醇(7.5kg)溶液中加入羟基胺盐酸盐(860.9g,12388.2mmol)，随后加入三乙胺(642.5g,6349.0mmol)。将反应混合物加热至回流(77－78℃)42小时，然后冷却至约40℃。于40℃真空蒸馏6kg乙醇(<100mbar)后，将混合物冷却至室温，采用MTBE(7.0kg)和水(8.0kg)稀释。搅拌10分钟后，分离有机层，水用MTBE(6.0Kg)萃取。合并的有机层用2×12kg的水和8kg的10％盐水顺序洗涤。真空浓缩MTBE层(<100mbar)，获得1.2kg黄色固体粗品产物。将粗品产物溶于2kgDCM，通过硅胶柱色谱纯化，采用EtOAc和庚烷(1/6,v/v)洗脱，回收2-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪(310g)，然后采用EtOAc和庚烷(1/3,v/v)洗脱，获得5-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)吡嗪-2-胺(650g,64.5％的收率)，为黄色固体，mp113-116℃。ESI-MS(m/z):326.1940([M+H]+,100)。HPLC(方法A)，保留时间12.26min。1HNMR(400MHz,CDCl3):7.93(s,1H),7.86(s,1H),4.50(br.s,2H),4.41-4.46,4.27-4.31(m,1H),3.65-3.74(m,1H),2.68-2.74(m,1H),2.24-2.30(m,1H),1.97-2.02(m,1H),1.74-1.87(m,2H),1.44-1.63(m,2H),0.91(s,9H),0.10(d,J＝8Hz,6H)。
4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
将5-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)吡嗪-2-胺(620.0g,1904.8mmol)的DMSO(5L)和水(400mL)溶液冷却至～4℃。1小时内分10份加入NBS(389.8g,2190.5mmol)，将反应温度控制在5℃并持续搅拌30分钟。加入0.3MNa2CO3水溶液(8.5kg)后，将反应温度升高至35℃。加入MTBE(4.5kg)，将混合物再搅拌10分钟。分离相后，水层用MTBE(4kg)萃取。合并的有机层用0.3MNa2CO3水溶液(8.5kg)和水(8kg)顺序洗涤，于30－40℃真空浓缩，获得为泡沫状物的粗品产物3-溴-5-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)吡嗪-2-胺(770g)。该粗品产物无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。ESI-MS(m/z):404.1105,406.1093([M+H]+,100)。HPLC(方法A),保留时间＝14.38min。1HNMR(400MHz,CDCl3):7.81(s,1H),4.99(br.s,2H),4.37-4.42,4.25-4.30(m,1H),3.66-3.72(m,1H),2.67-2.73(m,1H),2.26-2.29(m,1H),1.97-2.02(m,1H),1.74-1.87(m,2H),1.44-1.63(m,2H),0.91(s,9H),0.10(d,J＝8Hz,6H)。
向3-溴-5-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)吡嗪-2-胺(760.0g,1879.4mmol)和2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸叔-丁基酯(605.5g,1879.4mmol)的DME(3.0kg)溶液中加入2.0MNa2CO3水溶液(1880mL,3760mmol)和Pd(dppf)Cl2·DCM(38.4g,47.0mmol)。采用氮气脱气三次后，将反应混合物加热至回流(79－80℃)，于此温度下搅拌3小时。将反应温度冷却至室温，加入MTBE(2.5kg)，随后加入水(4.0kg)。将混合物搅拌10分钟，然后分离相，水层用MTBE(1.8kg)萃取。合并的有机层用水洗涤(2×4kg)并于30－40℃真空浓缩，获得粗品产物4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(ca.1kg)。将该粗品产物的混合物和EtOH(95％,3.2kg)加热至回流(78-80℃)30分钟，获得溶液。100分钟内将温度冷却至40℃，随后30分钟内加入水(800g)。100分钟内将温度冷却至～5℃，于此温度下再持续搅拌60分钟。过滤固体沉淀，湿滤饼用EtOH/水(1.2L,5/1,vol/vol)洗涤。于50℃真空干燥5小时，获得为棕色粉末的4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(755g,2步的收率为76.4％，分析纯度为98.8％)。mp169-172℃。ESI-MS(m/z):520.2739([M+H]+,100)。HPLC(方法A)保留时间15.76min。1HNMR(400MHz,CDCl3):7.98(t,J＝8Hz,1H),7.91(s,1H),7.61(d,J＝8Hz,1H),7.55(d,J＝8Hz,1H),4.68(br.s,2H),4.42-4.48,4.30-4.36(m,1H),3.67-3.76(m,1H),2.75-2.83(m,1H),2.28-2.36(m,1H),1.98-2.05(m,1H),1.83-1.92(m,2H),1.46-1.68(m,2H),1.62(s,9H),0.92(s,9H),0.11(d,J＝8Hz,6H)。
4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-4-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(685.0g,1318.0mmol)的EtOH(3.6kg)悬浮液中加入HCl水溶液(36％,400.5g,3954.2mmol)。将反应混合物加热至30℃并搅拌4小时。将反应温度降低至5℃，加入NaOH(342.7g,8567.5mmol)的水(1.6kg)溶液。将反应混合物加热至30℃，于此温度下搅拌18小时。采用4NHCl水溶液将反应混合物的pH调节至5，形成固体沉淀。于40-50℃真空蒸馏EtOH后，向残留物中加入水(2.5kg)，1小时内将温度冷却至5℃。过滤悬浮液，收集固体，于50-60℃真空干燥(<100mbar)24小时，获得为棕色粉末的4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(460g,HPLC于230nm的纯度为98.2％，定量收率)。Mp226-228℃。ESI-MS(m/z):350.1282([M+H]+,100)。HPLC(方法A),保留时间5.93min。1HNMR(400MHz,DMSO-D6):13.32(br.s,1H),8.00(t,J＝8Hz,1H),7.99(s,1H),7.70(d,J＝8Hz,1H),7.65(d,J＝8Hz,1H),6.24(br.s,2H),5.16(br.s,1H),4.44-4.49,4.30-4.35(m,1H),3.50-3.60(m,1H),2.79-2.84(m,1H),2.20-2.25(m,1H),1.92-1.99(m,1H),1.72-1.83(m,2H),1.50-1.60(m,1H),1.36-1.46(m,1H)。
4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(300g,95％的含量,815.8mmol)和(S)-N-(2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺酰胺盐酸盐(397.7g,848.5mmol)的DMF(2.5kg)溶液中加入DIPEA(421.8g,3263.4mmol)，随后加入EDCI(312.8g,1631.7mmol)和HOAt(222.1g,1631.7mmol)。将反应混合物于25℃搅拌18小时后，将反应温度降低至10℃，然后加入IPAC(3.5kg)和水(4.0kg)。将混合物搅拌10分钟，然后分层。水层用IPAC(2.5kg)萃取。合并的有机层用10％Na2CO3水溶液(4.5kg)和水(2×4kg)顺序洗涤，然后于40－45℃真空浓缩(<100mbar)，获得为泡沫状物的4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺酰氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺(670g，分析纯度为93％)，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。ESI-MS(m/z):763.1216,765.1161([M+H]+,100)。Mp＝115-117℃.HPLC(方法A),保留时间＝10.57min。1HNMR(400MHz,CDCl3):8.11(t,J＝8Hz,1H),7.99(m,1H),7.91(s,1H),7.59-7.72(m,5H),7.35(s,1H),7.19(d,J＝8Hz,1H),7.09(d,J＝8Hz,1H),5.46(br.s,1H),4.77(br.s,2H),4.48-4.55,4.35-4.42(m,1H),3.93(q,J1＝12Hz,J1＝16Hz,1H),3.73-3.82(m,1H),3.33(q,J1＝4Hz,J1＝12Hz,1H),3.00(s,3H),2.78-2.85(m,1H),2.31-2.37(m,1H),2.12-2.20(m,1H),1.84-1.96(m,2H),1.60-1.71(m,1H),1.47-1.56(m,1H)。
向4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)-吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基-磺酰氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺(500g,获自前述步骤的粗品产物)的DMF(2.0kg)悬浮液中加入4-巯基苯甲酸(161.5g,1047.7mmol)。5分钟后反应混合物转变为溶液，然后将其冷却至10℃。一次性加入LiOH·H2O(137.3g,3274.0mmol)后，将混合物于25℃搅拌3小时，然后将温度冷却至10℃。将反应混合物用水稀释(3.0kg)，用IPAC萃取(3＊2.5kg)。IPAC层先用15％Na2CO3水溶液洗涤(2＊3.0kg)，然后用水洗涤(2＊3.0kg)，随后于40－45℃真空浓缩(<100mbar)。向获得的残留物中加入MeCN(1.8kg)，获得澄清的溶液，将其加热至50℃并搅拌30分钟。2小时内将混合物再冷却至10℃，于此温度下再搅拌1小时。将获得的悬浮液过滤后，固体滤饼用预冷却的MeCN(400g,5℃)洗涤。将湿滤饼于80℃真空干燥(<100mbar)18小时，获得为结晶固体的4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺(245g,2步总收率为66％，HPLC纯度＝98.3％，手性纯度＝99.0％)。Mp115-117℃。ESI-MS(m/z):578.1381,580.1381([M+H]+,100)。HPLC(方法A),保留时间＝7.24min。1HNMR(400MHz,DMSO-D6):8.82(d,J＝8Hz,1H),8.0(s,1H),8.82(t,J＝8Hz,1H),7.70(d,J＝8Hz,1H),7.67(d,J＝8Hz,1H),7.53(s,1H),7.48(d,J＝8Hz,1H),7.34(d,J＝8Hz,1H),6.21(br.s,2H),5.18(m,2H),4.46-4.52,4.32-4.37(m,1H),3.52-3.60(m,1H),2.80-2.94(m,3H),2.36(s,3H),2.23-2.25(m,1H),1.95-1.98(m,1H),1.76-1.86(m,3H),1.51-1.62(m,1H),1.39-1.48(m,1H)。
于室温下，通过将4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺(200mg)悬浮于4ml硝基甲烷中制备游离碱形式的4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺。将悬浮液加热至55℃直到溶液澄清。在温度范围55℃-5℃之间进行8次加热-冷却循环。过滤固体，于40℃真空干燥过夜。游离碱形式的X-射线粉末衍射图谱如图1中确定。4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺的游离碱的DSC/TGA热像图如图2所示。
HCl盐形式的4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺如下制备：于室温下，将无定形4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺(120mg)在搅拌下溶于0.5NHCl乙醇溶液(414μL)。搅拌5分钟后观察到沉淀形成。图4提供了高度结晶的HCl盐形式的4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基氨基)乙基)-2-氟苯甲酰胺的DSC/TGA热像图。游离碱形式的X-射线粉末衍射图谱如图3中确定。图3的XRPD中的最重要的峰如表中所示：
实施例185和186
4-(3-氨基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺和4-(3-氨基-6-((1S,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程87
步骤1.4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
将4-(3-氨基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(154mg,0.38mmol)通过手性分离(ChiralPak5micAD柱,4.6×100(mm),CO2/IPA+0.1％DEA＝75/25,SFC＝5ml/min)，获得极性对映体4-(3-氨基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(Rt＝1.86min,63mg,0.155mmol,41％)和极性较低的对映体4-(3-氨基-6-((1S,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(Rt＝2.91,70mg,0.173mmol,46％)。绝对立体化学随意指定。
步骤2和3.4-(3-氨基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸和4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向每个酯(1mmol)的DCM(2mL)溶液中加入4MHCl的二氧六环溶液(30mL)。将反应混合物于室温下搅拌2天。真空蒸发挥发物后，将反应混合物用乙醚研磨并过滤，分别获得4-(3-氨基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(60mg获自63mg的酯)和4-(3-氨基-6-((1S,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(59mg获自70mg的酯)，为HCl盐，其无需任何纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):350.2(MH+),0.5min(每种酸)。
步骤4和5.4-(3-氨基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺和4-(3-氨基-6-((1S,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
向每种酸(20mg,0.057mmol)的DMF(573μL)溶液中加入(S)-2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇HCl盐(18.59mg,0.069mmol)、aza-HOBt(11.69mg,0.086mmol)、EDC(21.95mg,0.115mmol)和DIEA(30.0μl,0.172mmol)。将反应混合物搅拌15h。加入水，将反应混合物用EtOAc萃取三次。有机层经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物通过HPLC纯化。将纯组分冷冻干燥，分别获得目标产物(11mg,0.016mmol,28％)，为TFA盐。对于4-(3-氨基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺而言，LCMS(m/z):565.1/567(MH+),0.74min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.95-7.79(m,1H),7.76-7.59(m,1H),7.46(s,1H),7.33-7.14(m,2H),5.24-5.10(m,1H),4.75-4.49(m,1H),4.16(br.s.,2H),3.96-3.77(m,4H),2.80(t,J＝12.5Hz,2H),2.25(dq,J＝7.6,11.9Hz,2H),2.08-1.78(m,7H),1.76-1.55(m,4H)。对于4-(3-氨基-6-((1S,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺而言，LCMS(m/z):565.1/567.1(MH+),0.74min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.84-7.70(m,2H),7.66-7.49(m,2H),7.37(s,1H),7.24-7.05(m,2H),5.09(d,J＝5.5Hz,1H),4.66-4.41(m,1H),4.07(br.s.,1H),3.88-3.65(m,2H),2.71(t,J＝12.9Hz,1H),2.16(dq,J＝7.4,12.0Hz,1H),1.99-1.70(m,3H),1.66-1.47(m,2H)。绝对立体化学尚未确定。
实施例187和188
4-(3-氨基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺和4-(3-氨基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程88
步骤1.(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
于0℃向(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3S)-3-氟-4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(208mg,0.516mmol)的MeOH(3.017mL溶液中加入NaBH4(29.3mg,0.773mmol)。将反应混合物搅拌2h。LCMS显示～4:1比例的两种非对映异构体。采用碳酸氢钠溶液骤冷后，将反应混合物用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。主要的非对映异构体通过中性制备性HPLC分离。冷冻干燥后，获得(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯，35.8％的收率。(74.9mg)。LCMS(m/z):406.3(MH+),0.80min。(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯的相对立体化学通过NMR确证。
步骤2.4-(3-氨基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯和4-(3-氨基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(74.9mg,0.185mmol)通过手性SFC分离(ChiralPak5micAD柱,4.6×100(mm),CO2/EtOH+0.1％,DEA＝80/20,SFC＝5mL/min)，获得极性对映体4-(3-氨基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(Rt＝1.95min,33mg,44％)和极性较低的对映体4-(3-氨基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(Rt＝3.17,35mg,46％)。绝对立体化学随意指定。
步骤3和4.4-(3-氨基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸和4-(3-氨基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向每种酯(1mmol)的溶液中加入4MHCl的二氧六环溶液(111mL)。将反应混合物于室温下搅拌2天。真空蒸发挥发物后，反应混合物用乙醚研磨并过滤，分别获得4-(3-氨基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(31mg获自33mg的酯)，LCMS(m/z):350.2(MH+)，0.47min；4-(3-氨基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(33mg获自35mg的酯)，LCMS(m/z):350.2(MH+)，0.48min，为HCl盐，其无需任何纯化可以直接用于下一步骤。
步骤5和6.4-(3-氨基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺和4-(3-氨基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
根据流程85步骤8，采用4-(3-氨基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸，获得4-(3-氨基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):565.0/567.1(MH+),0.71min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.93-7.78(m,2H),7.73-7.55(m,2H),7.46(s,1H),7.33-7.13(m,2H),5.17(t,J＝5.9Hz,1H),3.95-3.78(m,2H),3.75-3.42(m,1H),3.09-2.93(m,1H),2.32-2.14(m,1H),2.05-1.79(m,5H),1.80-1.59(m,1H)。采用4-(3-氨基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸，获得4-(3-氨基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):565.0/567.1(MH+),0.71min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.95-7.80(m,2H),7.75-7.56(m,2H),7.46(s,1H),7.33-7.12(m,2H),5.17(t,J＝5.9Hz,1H),3.96-3.78(m,2H),3.76-3.55(m,1H),3.10-2.95(m,1H),2.31-2.12(m,1H),2.08-1.82(m,5H),1.79-1.62(m,1H)。
实施例189
4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺的合成
流程89
步骤1.(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇盐酸盐
将(S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(2.507g,6.58mmol)溶于DCM(60mL)，采用4NHCl的二氧六环溶液(4.93mL,19.73mmol)处理。混合物于室温下搅拌过夜。真空中小心地蒸发大多数溶剂后，浆液采用Et2O研磨，获得1.525g的(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇(72％)的细白色HCl盐，将其通过抽吸过滤分离。LCMS(m/z):282.4(MH+),0.46min。
步骤2.4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(16mg,0.046mmol)的DMF(0.46mL)溶液中加入(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇盐酸盐(17.5mg,0.055mmol)、HOAt(9.35mg,0.069mmol)、EDC(17.6mg,0.092mmol)和DIEA(24μl,0.137mmol)。将反应混合物搅拌15h。加入水后，反应混合物用EtOAc萃取，有机层用水洗涤二次。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用0－100％EtOAc/庚烷洗脱，获得粗品产物，将其采用70％的DCM/乙醚研磨，获得9.3mg的4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺，为TFA盐(28％)。LCMS(m/z):613.1(MH+),0.74min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.93-7.78(m,2H),7.76-7.57(m,3H),7.73-7.56(m,3H),7.43(d,J＝7.8Hz,1H),7.21(d,J＝9.4Hz,1H),5.15(t,J＝5.9Hz,1H),4.37(m,1H),3.83(m,2H),3.63(m,1H),2.84(t,J＝11.7Hz,1H),2.27(dd,J＝2.9,9.2Hz,1H),2.14-1.98(m,1H),1.96-1.75(m,2H),1.65(dq,J＝3.3,13.0Hz,1H),1.56-1.34(m,1H)。
(S)-2-(4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基二氢磷酸酯的合成
步骤1.(S)-(9H-芴-9-基)甲基(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸酯：
向(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇(4500mg,14.17mmol)中加入THF(体积：40mL，比例：2.67)和水(体积：15mL,比例：1.000)，随后加入NaHCO3(4762mg,56.7mmol)。将混合物搅拌2分钟，然后在冰浴中冷却至0℃。向反应物中加入(9H-芴-9-基)甲基氯甲酸酯(carbonochloridate)(5499mg,21.26mmol)，将反应物于0℃搅拌30分钟，随后温热至室温并再搅拌60分钟，通过LCMS监测。将乙酸乙酯加入粗品反应混合物中。将混合物用水(2×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物。粗品产物通过300g柱(固体荷载)硅胶色谱纯化，采用0－60％的乙酸乙酯庚烷洗脱。将需要的组分浓缩至恒重，获得5375mg为游离碱的目标产物，可以直接使用(73％的收率)。LCMS(m/z):504.1(MH+),1.05min。1HNMR(<cd3od>)d:7.78(d,J＝7.4Hz,2H),7.64(d,J＝7.2Hz,2H),7.53(s,1H),7.33-7.43(m,3H),7.25-7.33(m,2H),7.07(d,J＝9.2Hz,1H),4.64(t,J＝5.9Hz,1H),4.31-4.46(m,2H),4.21(t,J＝6.3Hz,1H),3.66(d,J＝3.1Hz,2H)。
步骤2.(S)-(9H-芴-9-基)甲基(2-((二-叔-丁氧基磷酰基)氧基)-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)氨基甲酸酯:
向(S)-(9H-芴-9-基)甲基(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酸酯(5260mg,10.45mmol)中加入咪唑(818mg,12.02mmol)、咪唑HCl(1857mg,17.77mmol)和DMF(体积：50mL)。将反应物在氩气环境下搅拌以溶解2-3分钟。然后2-3分钟内滴加二-叔-丁基二异丙基亚磷酰胺(4928mg,17.77mmol)，于室温下搅拌2小时。反应通过中性LCMS和TLC监测，采用1:1乙酸乙酯/庚烷洗脱。将粗品反应物置于水浴中，缓慢加入过氧化氢30％(5.34mL,52.3mmol)，将混合物于室温下搅拌30分钟，LCMS监测。将粗品反应物置于冰浴中，5-10分钟内滴加(小心地)过量的饱和的硫代硫酸钠。向粗品反应混合物中加入800mL乙酸乙酯，用水(3×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物。粗品通过300g柱硅胶色谱纯化，采用0－55％的乙酸乙酯庚烷洗脱。将需要的峰浓缩至恒重，获得6560mg为游离碱的目标产物，可以直接使用(86％的收率)。LCMS(m/z):696.3(MH+)弱峰,1.25min。注意：于584.2的-112碎片在LCMS中为主要离子，有可能是两个叔-丁基保护基团的损失。1HNMR(<cd3od>)d:7.79(d,J＝7.3Hz,2H),7.64(d,J＝7.3Hz,2H),7.58(s,1H),7.45(d,J＝7.6Hz,1H),7.34-7.42(m,2H),7.22-7.32(m,2H),7.12(d,J＝9.1Hz,1H),4.90(t,J＝6.0Hz,1H),4.41-4.48(m,1H),4.31-4.40(m,1H),4.21(t,J＝6.6Hz,1H),4.08(t,J＝6.3Hz,2H),1.42(s,9H),1.40(s,9H)。
步骤3.(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基二-叔-丁基磷酸酯：
向(S)-(9H-芴-9-基)甲基(2-((二-叔-丁氧基磷酰基)氧基)-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)氨基甲酸酯(6450mg,9.27mmol)中加入DMF(体积：90mL)，随后加入哌啶(25mL,253mmol)，于室温下搅拌30分钟，通过LCMS监测。向粗品反应混合物中加入750mL乙酸乙酯，用饱和的碳酸氢钠(2×)、水(5×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥并过滤。高真空浓缩除去溶剂至恒重，获得需要的粗品产物，其含有FMOC哌啶杂质，其可以直接使用。LCMS(m/z):474.2(MH+),0.80min。
步骤4.(S)-2-(4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基二-叔-丁基磷酸酯：
向4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(3927mg,9.3mmol)的NMP(体积：60mL)溶液中加入(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基二-叔-丁基磷酸酯(4740mg,9.30mmol)、DIEA(9.75mL,55.8mmol)，随后加入HATU(5304mg,13.95mmol)。将反应混合物于室温下搅拌2小时，通过LCMS监测。向粗品反应物中加入850mL乙酸乙酯，用饱和的碳酸氢盐(2×)、水(3×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并干燥至残留物。粗品产物经330g柱硅胶色谱纯化，采用0－70％的(含有10％MeOH的EtOAc)/庚烷洗脱。将需要的峰浓缩至恒重，获得5.75g粗品产物。产物通过330g柱硅胶色谱再次纯化，采用0－60％(含有10％MeOH的EtOAc)/庚烷洗脱，获得5.03g粗品产物。产物通过加入1200mL乙酸乙酯再次纯化，加入200mL庚烷溶解，用200mL的0.5NHCl(5×)、水、饱和的碳酸氢钠、水(3×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至恒重，获得4.70g需要的产物，产物可以直接使用。(两步收率为61％)。LCMS(m/z):805.4(MH+),0.99min。1HNMR(<cd3od>)d:7.90(s,1H),7.77-7.86(m,1H),7.68-7.73(m,2H),7.63(dd,J＝11.8,1.2Hz,1H),7.42-7.52(m,1H),7.26(d,J＝9.5Hz,1H),5.43(t,J＝5.7Hz,1H),4.30-4.49(m,1H),4.28(t,J＝6.3Hz,2H),3.58-3.72(m,1H),2.83(t,J＝11.6Hz,1H),2.27(dt,J＝6.2,3.1Hz,1H),2.02-2.13(m,1H),1.77-1.94(m,2H),1.58-1.74(m,1H),1.48-1.55(m,1H),1.45(d,J＝5.8Hz,18H)。
步骤5.(S)-2-(4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基二氢磷酸酯：
将(S)-2-(4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基二-叔-丁基磷酸酯(4600mg,5.72mmol)完全溶于MeOH(体积：70mL)。然后加入HCl4M的二氧六环溶液(14.29mL,57.2mmol)，于室温下搅拌3小时，通过LCMS监测。浓缩除去大多数溶剂。然后加入MeOH(体积：70mL)，将溶剂浓缩至残留物，加入另一份MeOH(体积：70mL)，将残留物浓缩至恒重。将产物溶于90mL的1:1ACN/水中并冷冻干燥，获得3.99g目标产物，为HCl盐。(94％的收率)。LCMS(m/z):692.9(MH+),0.63min。1HNMR(<cd3od>)d:7.84-7.93(m,1H),7.75(s,1H),7.60-7.71(m,3H),7.45-7.51(m,1H),7.26(dt,J＝9.7,1.6Hz,1H),5.40(t,J＝5.9Hz,1H),4.31-4.50(m,1H),4.22-4.30(m,2H),3.64(tdd,J＝11.7,8.6,5.1Hz,1H),2.82-2.98(m,1H),2.32(ddt,J＝11.7,5.8,2.8Hz,1H),2.01-2.15(m,1H),1.89-1.97(m,1H),1.75-1.89(m,1H),1.58-1.72(m,1H),1.42-1.55(m,1H)。31PNMR(<cd3od>)d:0.00(s,1P)。
HCl盐向二-钠盐的转化：向上述作为HCl盐的产物(24mg,0.035mmol)中加入水(体积：17mL)，然后用2M碳酸钠滴定至pH10-11，然后用15mL的DCM萃取(4x)。将碱性水溶液直接上样于12g的GraceRevelerisC18反相柱上，采用0-20％ACN/水洗脱18分钟，流速15ml/分钟，没有采用缓冲液。将需要的组分冷冻干燥，获得18mg目标产物(S)-2-(4-(3-氨基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基二氢磷酸酯，为二-钠盐，通过反离子分析确定。(70％的收率)。LCMS(m/z):692.9(MH+),0.64min。1HNMR(<cd3od>)d:7.82-7.92(m,2H),7.64-7.72(m,2H),7.58(dd,J＝11.4,1.2Hz,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,1H),7.28(d,J＝9.5Hz,1H),5.17(dd,J＝6.9,4.1Hz,1H),4.25-4.49(m,1H),4.02-4.20(m,2H),3.57-3.73(m,1H),2.83(t,J＝11.6Hz,1H),2.27(dd,J＝6.1,3.6Hz,1H),1.98-2.14(m,1H),1.78-1.94(m,2H),1.59-1.73(m,1H),1.40-1.55(m,1H)。
实施例190
4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺的合成
向4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(18mg,0.052mmol)的DMF(0.52mL)溶液中加入(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇盐酸盐(19.6mg,0.062mmol)、HOAt(10.52mg,0.077mmol)、EDC(19.76mg,0.103mmol)和DIEA(27μl,0.155mmol)。将反应混合物搅拌15h。加入水后，反应混合物用EtOAc萃取，有机层用水洗涤二次。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc/庚烷洗脱，获得15.8mg的4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺，为游离碱(50％)。LCMS(m/z):613.1(MH+),0.74min；1HNMR(400MHz,CD3OD.)δ7.69(m,2H),7.66-7.47(m,3H),7.39-7.26(m,1H),7.12(d,J＝9.4Hz,1H),5.05(t,J＝5.9Hz,1H),4.43-4.14(m,1H),3.84-3.66(m,2H),3.64-3.45(m,1H),2.74(t,J＝11.7Hz,1H),2.17(td,J＝3.1,6.0Hz,1H),2.05-1.87(m,1H),1.84-1.66(m,2H),1.65-1.47(m,1H),1.47-1.27(m,1H)。
(S)-2-(4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基二氢磷酸酯的合成
步骤1.(S)-2-(4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基二-叔-丁基磷酸酯:
向4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(215mg,0.509mmol)的NMP(体积：4mL)溶液中加入(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基二-叔-丁基磷酸酯(260mg,0.509mmol)、DIEA(0.534mL,3.06mmol)，然后加入HATU(290mg,0.764mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1小时，通过LCMS监测。向粗品反应物中加入150mL乙酸乙酯，用饱和的碳酸氢盐(2×)、水(3×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并干燥至残留物。粗品产物经24g柱(DCM负载)硅胶色谱纯化，采用0-80％(含有10％MeOH的EtOAc)/庚烷洗脱。将需要的组分浓缩至恒重，获得315mg为游离碱的目标产物(77％的收率)。LCMS(m/z):805.3(MH+),1.01min。
步骤2.(S)-2-(4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基二氢磷酸酯：
向(S)-2-(4-(3-氨基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基二-叔-丁基磷酸酯(315mg,0.392mmol)溶液中加入HCl4M的二氧六环溶液(5mL,20.00mmol)和甲醇(体积：0.5mL)。将反应混合物于室温下搅拌1小时，通过LCMS监测。浓缩除去溶剂。将粗品产物碱化，采用加入最小量的MeOH的3MNaOH溶液溶解。产物通过12g的GraceRevelerisC18反相柱纯化，采用0-15％的ACN/水洗脱18分钟，流速15ml/分钟，没有缓冲剂。收集需要的组分，采用1MHCl酸化至pH1，采用乙酸乙酯萃取(5×)。合并的有机层(800mL)用最小量的水(3x25mL)洗涤以除去盐。浓缩除去溶剂，溶于1:1ACN/水，冷冻干燥，获得207mg目标产物，为HCL盐。(72％的收率)。LCMS(m/z):693.2(MH+),0.64min。1HNMR(<cd3od>)d:7.87(s,1H),7.81-7.86(m,1H),7.65-7.72(m,2H),7.61(dd,J＝11.7,1.6Hz,1H),7.46(ddd,J＝8.0,2.3,1.4Hz,1H),7.26(dt,J＝9.5,1.9Hz,1H),5.38(t,J＝5.7Hz,1H),4.29-4.49(m,1H),4.18-4.29(m,2H),3.64(tdd,J＝11.6,8.6,4.9Hz,1H),2.76-2.92(m,1H),2.27(ddd,J＝8.8,5.9,2.5Hz,1H),2.01-2.13(m,1H),1.76-1.94(m,2H),1.58-1.71(m,1H),1.39-1.55(m,1H)。31PNMR(<cd3od>)d:0.16(br.s.,1P)。
实施例191和192
4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-氨基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺和4-(3-氨基-6-((1s,4R)-4-氨基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程90
步骤1.4-(3-氨基-6-(4-(苄基氨基)环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(300mg,0.874mmol)中加入MeOH(4mL)、苯甲胺(112mg,1.048mmol)，最后加入无水分子筛。将反应物于室温下搅拌16h。然后加入NaBH4(165mg,4.37mmol)，于室温下搅拌2h，通过LCMS监测。向反应物中加入150mL乙酸乙酯，用饱和的碳酸氢钠、水(2×)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物，获得352mg目标产物，反式与顺式的比例为2:1，可以直接使用(93％)。LCMS(m/z):435.3(MH+),0.68min和0.72min。
步骤2.4-(3-氨基-6-(4-氨基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向充入氩气的圆底烧瓶中的4-(3-氨基-6-(4-(苄基氨基)环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(350mg,0.806mmol)中加入湿的Pd-C10％degaussa(171mg,0.161mmol)。然后在氩气环境下采用注射器加入MeOH(5mL)，最后充入氢气。将烧瓶排空，再次充入氢气6次。将反应物于室温下搅拌14h。向反应物中充入氩气，然后小心地加入湿的Pd-C10％degaussa(171mg,0.161mmol)。然后充入氢气，将烧瓶排空，再次充入氢气6次。将反应物再搅拌10h，总共24h，通过LCMS监测。向反应物中充入氩气，加入35mL的DCM。粗品混合物通过硅藻土短柱过滤，浓缩至恒重，获得230mg目标产物(反式与顺式的比例为2:1)，可以直接使用(83％)。LCMS(m/z):345.2(MH+),0.48min和0.51min。
步骤3.4-(3-氨基-6-(4-((叔-丁氧基羰基)氨基)环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向4-(3-氨基-6-(4-氨基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(230mg,0.668mmol)中加入DCM(5mL)、TEA(0.233mL,1.670mmol)和Boc-酸酐(0.186mL,0.801mmol)。将反应物于室温下搅拌1h，通过LCMS监测。向反应物中加入150mL乙酸乙酯，用饱和的碳酸氢钠、水(二次)、饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至恒重，获得233mg目标产物(反式与顺式的比例为2:1)，可以直接使用(78％)。LCMS(m/z):445.2(MH+),两者均为0.92min。
步骤4.4-(3-氨基-6-(4-((叔-丁氧基羰基)氨基)环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-氨基-6-(4-((叔-丁氧基羰基)氨基)环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(230mg,0.517mmol)溶液中加入MeOH(2mL)、THF(2mL)和氢氧化锂1M水溶液(1.552mL,1.552mmol)。将反应物于室温下搅拌1h。将溶剂浓缩至残留物，然后加入THF(20mL)并浓缩至残留物。然后再次加入THF(20mL)，再次浓缩至残留物恒重，获得目标产物(反式与顺式的比例为2:1)，可以直接使用。推定定量收率(0.517mmol)。LCMS(m/z):431.2(MH+),两者均为0.78。
步骤5.(S)-(4-(5-氨基-6-(4-((1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)环己基)氨基甲酸叔-丁基酯
向4-(3-氨基-6-(4-((叔-丁氧基羰基)氨基)环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(222mg,0.516mmol)中加入DMSO(4mL)、Hünig碱(0.450mL,2.58mmol)、(S)-2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙醇(133mg,0.774mmol)和HATU(392mg,1.031mmol)。将反应物于室温下搅拌1h。向反应物中加入50mL乙酸乙酯，用水洗涤二次，用饱和的盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残留物。粗品通过采用12g柱(固体负载)的快速色谱纯化，采用10-95％的乙酸乙酯庚烷洗脱。将需要的组分浓缩至恒重，获得252mg产物(反式与顺式的比例为2:1)，可以直接使用(两步收率83％)。两者的LCMS(m/z):584.3(MH+),0.91min。
步骤6.4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-氨基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺和4-(3-氨基-6-((1s,4R)-4-氨基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
向(S)-(4-(5-氨基-6-(4-((1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)环己基)氨基甲酸叔-丁基酯(252mg,0.431mmol)中加入DCM(8mL)和TFA(2mL,26.0mmol)。将反应物于室温下搅拌1h。浓缩溶剂，再溶于DMSO，过滤并通过制备性HPLC纯化，收集两种异构体。主要异构体为反式，第一个被洗脱出来，次要异构体为顺式异构体，第二个被洗脱出来。冷冻干燥后，获得87mg反式产物4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-氨基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺，为TFA盐，34％的收率。LCMS(m/z):484.2(MH+),0.58min；1HNMR(CD3OD)δppm7.79(s,1H),7.76(t,J＝7.8Hz,1H),7.58(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),7.52(dd,J＝11.9,1.4Hz,1H),7.36(s,1H),7.30-7.23(m,2H),7.22-7.16(m,1H),5.10(t,J＝5.9Hz,1H),3.83-3.70(m,2H),3.08(tt,J＝11.7,3.9Hz,1H),2.69-2.49(m,1H),2.06(d,J＝10.6Hz,2H),1.97(d,J＝12.9Hz,2H),1.75-1.57(m,2H),1.55-1.31(m,2H)。
另外，冷冻干燥后，获得43mg顺式产物4-(3-氨基-6-((1s,4R)-4-氨基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺，为TFA盐，17％的收率。LCMS(m/z):484.2(MH+),0.61min；1HNMR(CD3OD)δppm7.87(s,1H),7.81-7.72(m,1H),7.60(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.55(d,J＝11.7Hz,1H),7.36(s,1H),7.26(d,J＝5.9Hz,2H),7.22-7.16(m,1H),5.10(t,J＝5.7Hz,1H),3.87-3.67(m,2H),2.91-2.80(m,1H),1.98(q,J＝8.9Hz,2H),1.90-1.71(m,6H)。
实施例193
4-(6-((1r,4S)-4-乙酰氨基环己基)-3-氨基吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
于0℃向4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-氨基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(15mg,0.025mmol)中加入DCM(0.25mL)、THF(0.75mL)和TEA(10.49μl,0.075mmol)。然后加入乙酸酐(2.367μl,0.025mmol)。将反应物于0℃搅拌30min。浓缩反应物，溶于1mL的DMSO，过滤，通过制备性HPLC纯化，冷冻干燥，获得5.4mg目标产物4-(6-((1r,4S)-4-乙酰氨基环己基)-3-氨基吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺，为TFA盐(33％的收率)。LCMS(m/z):526.3(MH+),0.67min；1HNMR(CD3OD)δppm7.71-7.82(m,2H),7.58(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.53(d,J＝11.7Hz,1H),7.37(s,1H),7.22-7.29(m,2H),7.15-7.22(m,1H),5.10(t,J＝5.9Hz,1H),3.71-3.84(m,2H),3.52-3.66(m,1H),2.51-2.65(m,1H),1.86-2.02(m,4H),1.83(s,3H),1.53-1.69(m,2H),1.22-1.39(m,2H)。
实施例194
4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-(甲基磺酰氨基)环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
向4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-氨基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(15mg,0.025mmol)中加入DCM(0.25mL,比例：1.000)、THF(0.250mL)、TEA(10.49μl,0.075mmol)，将其搅拌溶解并冷却至0℃，然后加入甲磺酰氯(1.955μl,0.025mmol)。将反应物于0℃搅拌30min，通过LCMS监测。将反应物浓缩，溶于1mL的DMSO，过滤，通过制备性HPLC纯化并冷冻干燥，获得1.6mg目标产物4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-(甲基磺酰氨基)环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺，为TFA盐(9％的收率)。LCMS(m/z):562.2(MH+),0.69min。1HNMR(CD3OD)δppm7.70-7.82(m,2H),7.59(d,J＝7.8Hz,1H),7.53(d,J＝11.7Hz,1H),7.37(s,1H),7.22-7.30(m,2H),7.13-7.21(m,1H),5.09(t,J＝5.9Hz,1H),3.68-3.89(m,2H),2.87(s,3H),2.48-2.60(m,1H),2.05(d,J＝14.9Hz,2H),1.84-1.95(m,2H),1.54-1.74(m,2H),1.38(q,J＝12.9Hz,2H)。
实施例195
((1S,4r)-4-(5-氨基-6-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)环己基)氨基甲酸甲酯的合成
向4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-氨基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(15mg,0.025mmol)中加入DCM(0.25mL),THF(0.250mL)、TEA(10.49μl,0.075mmol)，将其搅拌溶解并冷却至0℃，然后加入氯代甲酸甲酯(1.943μl,0.025mmol)。将反应物于0℃搅拌30min，通过LCMS监测。将反应物浓缩，溶于1mL的DMSO，过滤，通过制备性HPLC纯化并冷冻干燥，获得4.5mg目标产物((1S,4r)-4-(5-氨基-6-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)环己基)氨基甲酸甲基酯，为TFA盐(27％的收率)。LCMS(m/z):542.3(MH+),0.75min。1HNMR(CD3OD)δ:7.73-7.81(m,2H),7.58(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.48-7.55(m,1H),7.37(s,1H),7.23-7.30(m,2H),7.15-7.22(m,1H),5.10(t,J＝5.9Hz,1H),3.69-3.84(m,2H),3.53(s,3H),3.31-3.36(m,1H),2.48-2.62(m,1H),1.84-2.00(m,4H),1.51-1.68(m,2H),1.21-1.44(m,2H)
实施例196
4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-(2-羟基乙酰氨基)环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
向4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-氨基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺(11mg,0.018mmol)中加入NMP(0.4mL)、2-羟基乙酸(2.80mg,0.037mmol)、Hünig碱(0.013mL,0.074mmol)和HATU(17.49mg,0.046mmol)。将反应物于室温下搅拌30min。将反应物浓缩，溶于0.75mL的DMSO，过滤，通过制备性HPLC纯化并冷冻干燥，获得3.6mg目标产物4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-(2-羟基乙酰氨基)环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺，为TFA盐(29％)。LCMS(m/z):542.2(MH+),0.63min。1HNMR(CD3OD)δppm7.83-7.72(m,2H),7.59(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.53(d,J＝11.7Hz,1H),7.37(s,1H),7.32-7.23(m,2H),7.22-7.16(m,1H),5.10(t,J＝5.9Hz,1H),3.86(s,2H),3.82-3.63(m,3H),2.65-2.50(m,1H),2.02-1.86(m,4H),1.72-1.56(m,2H),1.48-1.33(m,2H)。
实施例197
(S)-N-(2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(4,4-二氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程91
步骤1.4-(3-氨基-6-(4,4-二氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(250mg,0.728mmol)中加入DCM(10mL)，然后将溶液在冰浴中冷却至0℃。随后于0℃加入Deoxo-氟溶液的甲苯50％溶液(805mg,1.820mmol)。将反应物温热至室温并搅拌2h。骤冷反应物，加入TEA(1.522mL,10.92mmol)，于室温下搅拌1h。浓缩除去溶剂至残留物，粗品通过采用12g柱的快速色谱(无水负载)纯化，采用5-75％的乙酸乙酯庚烷洗脱。将需要的组分浓缩至恒重，获得83mg目标产物，为游离碱，可以直接使用(31％的收率)。LCMS(m/z):366.2(MH+),0.87min。
步骤2.4-(3-氨基-6-(4,4-二氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-氨基-6-(4,4-二氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(83mg,0.227mmol)中加入MeOH(1.5mL)、THF(1.5mL)和1MNaOH水溶液(0.909mL,0.909mmol)。将反应物于室温下搅拌6h。将反应物浓缩至残留物。加入THF并再次浓缩至残留物。然后将混合物溶于1:1ACN/水，采用6MHCl酸化并冷冻干燥，获得为HCl盐的需要的产物，可以直接使用。推定定量收率(0.227mmol)。LCMS(m/z):352.1(MH+),0.71min。
步骤3.(S)-(2-(4-(3-氨基-6-(4,4-二氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
向4-(3-氨基-6-(4,4-二氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(48mg,0.124mmol)中加入DMSO(1mL)、Hünig碱(0.108mL,0.619mmol)、(S)-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(50.3mg,0.186mmol)和HATU(94mg,0.248mmol)。将反应物于室温下搅拌1h。向反应物中加入0.5mL的DMSO，过滤，通过制备性HPLC纯化并冷冻干燥，获得11mg目标产物，可以直接使用(12％的收率)。LCMS(m/z):604.2(MH+),1.05min。
步骤4.(S)-N-(2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(4,4-二氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺
向(S)-(2-(4-(3-氨基-6-(4,4-二氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰氨基)-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(11mg,0.018mmol)中加入HCl4M的二氧六环溶液(1mL,4.00mmol)。将反应物于室温下搅拌1h。除去溶剂并浓缩至残留物，将其溶于1:1乙腈/水，过滤并冷冻干燥至HCl盐。将粗品盐残留物溶于1mL的DMSO，通过制备性HPLC纯化并冷冻干燥，获得3.8mg目标产物(S)-N-(2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙基)-4-(3-氨基-6-(4,4-二氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酰胺，为TFA盐(33％)。LCMS(m/z):504.2(MH+),0.74min；1HNMR(CD3OD)δppm7.85-7.73(m,2H),7.62(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.54(dd,J＝12.1,1.2Hz,1H),7.46(s,1H),7.38-7.28(m,3H),5.39(dd,J＝9.0,5.9Hz,1H),3.40-3.33(m,2H),2.72(br.s.,1H),2.12-1.98(m,2H),1.96-1.73(m,6H)。
实施例198和199
顺式-4-(3-氨基-6-(3-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的对映体富集的非对映异构体的合成
流程92
步骤1.极性和较小极性对映体富集的顺式-5-(3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-胺
将制备自流程29的5-(3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-胺(500mg,1.626mmol)通过手性SFC拆分(ChiralPak5micOD柱,4.6×100(mm),CO2/IPA+0.1％DEA＝90/10,SFC＝5mL/min)。对于极性对映体(峰1)(230mg,0.748mmol,46.0％的收率)，Rt＝1.58min。对于较小极性对映体(峰2)(230mg,0.748mmol,46.0％的收率)，Rt＝2.36min。
步骤2、3、4、5和6.顺式-4-(3-氨基-6-(3-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的非对映异构体
根据流程75步骤2、3和7，将每种对映体富集的顺式-5-(3-((叔-丁基二甲基甲硅烷基)氧基)环己基)吡嗪-2-胺先经过溴化，然后通过与3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)硼酸的Suzuki偶合。水解后，根据流程75步骤8，采用(S)-2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙醇和每种对映体，分别获得各个顺式-4-(3-氨基-6-(3-羟基环己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的非对映异构体。对于极性前体的顺式非对映异构体，LCMS(m/z):485.0(MH+),0.70min；1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm7.90-7.69(m,2H)7.64-7.48(m,2H)7.37(s,1H)7.30-7.09(m,3H)5.10(t,J＝6.06Hz,1H)3.89-3.69(m,2H)3.66-3.47(m,1H)2.79-2.60(m,1H)2.06(d,J＝11.74Hz,1H)1.97-1.68(m,3H)1.52-1.26(m,3H)1.24-0.99(m,1H)。对于较小极性前体的顺式非对映异构体，LCMS(m/z):485.0(MH+),0.70min。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm7.88-7.70(m,2H)7.65-7.49(m,2H)7.37(s,1H)7.32-6.98(m,3H)5.10(s,1H)3.76(t,J＝6.06Hz,2H)3.58(s,1H)2.79-2.59(m,1H)2.06(d,J＝12.13Hz,1H)1.97-1.61(m,3H)1.54-1.30(m,3H)1.25-0.96(m,1H)。
两种非对映异构体的环己烷环上的绝对立体化学尚未确定。
实施例200和201
4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺和4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺的合成
流程93
根据流程89步骤2，采用(+/-)-反式-2-苯基环丙胺、EDC(30.2mg,0.158mmol)、HOAt(17.2mg,0.126mmol)和DIEA(0.033mL,0.189mmol)，获得(+/-)-反式-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-苯基环丙基)苯甲酰胺(19mg,70％)。LCMS(m/z):433.2(MH+),0.82min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.29-8.22(m,1H),7.94(s,1H),7.76-7.71(m,1H),7.63-7.56(m,1H),7.35-7.18(m,4H),7.04-6.94(m,1H),4.67(s,2H),4.09(m,2H),3.35(m,2H),3.15(m,1H),2.93(m,1H),2.22(m,1H),2.90-1.8(m,4H),1.43-1.23(m,3H)。
外消旋产物通过手性SFC拆分(ChiralPak5micAD-H柱,4.6×100(mm),庚烷:EtOH＝50/50,1mL/min)。对于极性4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺(27％)，Rt＝11.0min,LCMS(m/z):433.2(MH+),0.81min。对于较小极性4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺，(+/-)-反式-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-苯基环丙基)苯甲酰胺(27％)，Rt＝15.8min,LCMS(m/z):433.2(MH+),0.81min。绝对立体化学根据生物化学数据和对接模型指定。
实施例202和203
4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺和4-(3-氨基-6-((1r,4R)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺的合成
流程94
根据流程89步骤2，采用(+/-)-反式-2-苯基环丙胺(48.6mg,0.37mmol)、EDC(127mg,0.66mmol)、HOAt(67.8mg,0.498mmol)和DIEA(0.174mL,0.996mmol)，获得(+/-)-反式-4-(3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-苯基环丙基)苯甲酰胺(40mg,97％)，其可以通过手性SFC拆分(ChiralPak5micOJ柱,4.6×100(mm),CO2/IPA+0.1％DEA＝60/40,SFC＝5ml/min)。极性非对映异构体为4-(3-氨基-6-((1r,4S)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺(Rt＝1.38min)。LCMS(m/z):447.3(MH+),0.76min；1HNMR(500MHz,CD3OD)δppm7.89-7.78(m,2H),7.72-7.53(m,2H),7.33-7.23(m,2H),7.24-7.10(m,3H),3.68-3.53(m,1H),3.14-3.03(m,1H),2.74-2.56(m,1H),2.27-2.13(m,1H),2.12-1.88(m,4H),1.77-1.57(m,2H),1.52-1.29(m,4H)。极性较低的非对映异构体为4-(3-氨基-6-((1r,4R)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基环丙基)苯甲酰胺(Rt＝1.82min)。LCMS(m/z):447.3(MH+),0.75min；1HNMR(500MHz,CD3OD)δppm7.89-7.78(m,2H),7.72-7.53(m,2H),7.33-7.23(m,2H),7.24-7.10(m,3H),3.68-3.53(m,1H),3.14-3.03(m,1H),2.74-2.56(m,1H),2.27-2.13(m,1H),2.12-1.88(m,4H),1.77-1.57(m,2H),1.52-1.29(m,4H)。绝对立体化学根据生物化学数据和对接模型指定。
实施例204
4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-N-苄基-2-氰基-6-氟苯甲酰胺的合成
流程95
步骤1.4-氯代-2-氟-6-碘苯甲酸
向250mL烧瓶中加入4-氯代-2-氟苯甲酸(4g,22.92mmol)、Pd(OAc)2(0.257g,1.146mmol)、二乙酸碘苯(8.12g,25.2mmol)、碘(6.40g,25.2mmol)和DMF(60mL)。将溶液在氮气环境下于100℃加热20h。LCMS显示约一半的4-氯代-2-氟苯甲酸转化为产物(LCMS保留时间0.98min，没有MH+峰)。冷却至室温后，溶液采用EtOAc稀释，用1NHCl洗涤三次。合并水层，用EtOAc洗涤一次。合并有机层，经硫酸钠干燥并浓缩，获得深棕色油状物(16.4g,42％的纯度)，其无需纯化可以直接用于下一步骤。
步骤2.4-氯代-2-氟-6-碘苯甲酸甲酯
将4-氯代-2-氟-6-碘苯甲酸(16.4g,22.93mmol,与4-氯代-2-氟苯甲酸一起)溶于DMF(30mL)。加入Cs2CO3(8.96g,27.5mmol)，随后加入MeI(1.577mL,25.2mmol)。于室温下90min后，LCMS显示反应完成(保留时间1.06min,无MH+峰)。将其采用EtOAc稀释，通过一片滤纸过滤。滤液用水洗涤三次。合并水层，用EtOAc洗涤一次。合并有机层,经硫酸钠干燥并浓缩。残留物通过硅胶柱纯化(庚烷:EtOAc1:0-9:1)，获得4-氯代-2-氟-6-碘苯甲酸甲酯和4-氯代-2-氟苯甲酸甲酯的混合物，比例约为1:1(1.99g)。
步骤3.4-氯代-2-氰基-6-氟苯甲酸甲酯
将4-氯代-2-氟-6-碘苯甲酸甲酯(1.99g,10.6mmol)溶于DMF(12mL)。加入CuCN(2.84g,31.7mmol)，将悬浮液在微波中于110℃加热18min。加入EtOAc，将悬浮液通过滤纸过滤。滤液用水洗涤三次。合并水层，用EtOAc洗涤一次。合并有机层，经硫酸钠干燥并浓缩。残留物通过硅胶柱纯化(庚烷:EtOAc1:0-9:1)，获得无色固体产物(505mg)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.56(s,1H),7.40(d,1H,J＝8Hz),4.00(s,3H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δppm161.78(d,J＝58Hz),159.44,139.16(d,J＝11Hz),129.96,121.99,121.74,115.48,114.72,53.04.
步骤4.4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氰基-6-氟苯甲酸甲酯
向2mL微波瓶中加入5-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(638mg,1.049mmol)、4-氯代-2-氰基-6-氟苯甲酸甲酯(140mg,0.655mmol)、Pd2(dba)3(30.0mg,0.033mmol)、XPhos(31.2mg,0.066mmol)、NaHCO3(275mg,3.28mmol)、DME(3mL)和H2O(1.5mL)。将溶液在微波中于100℃加热15min。加入水和EtOAc，水层用EtOAc萃取三次。合并有机层，经硫酸钠干燥并浓缩。残留物通过硅胶柱纯化(庚烷:EtOAc1:0-1:4)，获得黄色泡沫状产物(85mg)。LCMS(m/z)356.1(MH+),0.58min。
步骤5.4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氰基-6-氟苯甲酸
向4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氰基-6-氟苯甲酸甲酯(85mg,0.239mmol)和氢氧化锂单水合物(11.04mg,0.263mmol)中加入THF(1mL)和H2O(1.000mL)。将溶液于室温下搅拌3h。蒸发所有溶剂，获得粗品产物的锂盐，为黄色固体(92mg)，其无需纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z)342.0(MH+),0.42min,
步骤6.4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-N-苄基-2-氰基-6-氟苯甲酰胺
向4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氰基-6-氟苯甲酸中加入DCM(1mL)，随后加入苄基胺(0.017mL,0.153mmol)、三乙胺(0.053mL,0.383mmol)和T3P(50％的EtOAc溶液,0.084mL,0.141mmol)。1h后，加入更多的苄基胺(0.017mL,0.153mmol)和T3P(50％的EtOAc溶液0.084mL,0.141mmol)，于2h时反应完全。加入饱和的碳酸氢钠溶液，用EtOAc萃取二次。合并有机层，经硫酸钠干燥并浓缩。残留物通过硅胶柱纯化(庚烷:EtOAc1:0-0:1)，获得无色固体产物(17mg)。LCMS(m/z)431.1(MH+),0.65min。1HNMR(400MHz,CDCl3))δppm8.03(s,1H),7.74(s,1H),7.54(d,1H,J12Hz),7.43-7.30(m,4H)7.26(s,1H),7.23(s,1H)6.57(brs,1H),4.74(d,J5.53Hz,2H),4.10-4.06(m,2H),3.55-3.46(m,2H),2.77-2.67(m,1H),1.80-1.70(m,4H)。
实施例205
4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)苯甲酰胺的合成
流程96
步骤1.(E)-3-(6-氨基吡啶-3-基)丙烯酸乙基酯
向玻璃瓶中加入5-溴吡啶-2-胺(10.0g,57.8mmol)、丙烯酸乙酯(8.14mL,75mmol)和DIEA(25.2mL,144mmol)的DMF(40mL)溶液。向混合物中充入氩气，随后加入Pd(OAc)2(0.649g,2,89mmol)和(o-Tol)3P(3.87g,12.72mmol)，最后充分充入氩气。将混合物密封，于100℃油浴中加热过夜。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土薄层过滤除去沉淀物。将滤液通过旋转蒸发仪尽可能浓缩，将残留物在EtOAc/水(150mL/100mL)中分配。EtOAc层用水(2×100mL)洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。获得棕色固体粗品产物。将粗品产物用EtOAc(40mL)研磨，过滤收集黄色固体。滤饼用少量EtOAc洗涤，真空干燥获得第一批产物(5.0g)。获自研磨的母液用1NHCl稀水溶液(30mL)和水(70mL)提取。水层转移至干净的分液漏斗中，采用20mLsat.Na2CO3碱化，用EtOAc萃取(60mL)。EtOAc层经硫酸钠干燥，浓缩，获得第二批产物(4.0g)。合并两批产物，获得81％的收率。LCMS(m/z)193.2(MH+),0.39min。
步骤2.(E)-3-(6-(二(叔-丁氧基羰基)氨基)吡啶-3-基)丙烯酸乙基酯
向(E)-3-(6-氨基吡啶-3-基)丙烯酸乙基酯(6.6g,34.3mmol)和DMAP(0.21g,1.7mmol)的THF(150mL)溶液中加入二碳酸二叔丁基酯(15.7g,71.9mmol)。将混合物于室温下搅拌过夜。将反应物浓缩，获得为棕色固体的粗品(E)-3-(6-(二(叔-丁氧基羰基)氨基)吡啶-3-基)丙烯酸乙基酯(12.5g,93％)。LCMS(m/z)237.4(MH+)0.98min。
步骤3.2-(6-(叔-丁氧基羰基氨基)吡啶-3-基)丙烷-1,1,3-三甲酸三甲基和2-(6-氨基吡啶-3-基)丙烷-1,1,1,3-四甲酸四甲基酯
向烧瓶中加入无水MeOH(50mL)，将内容物冷却至0℃。向该烧瓶中加入氢化钠(3.18g,60％的矿物油分散液,80mmol)，同时控制气体溢出。将反应混合物于室温下搅拌直到气体溢出停止。向该新制备的NaOMe/MeOH溶液中加入丙二酸二甲基酯(10.52g,80mmol)，将混合物于室温下搅拌20min。混合物转变为乳白色浆液。将该乳白色浆液用25mL无水MeOH稀释，倒入含有氢化钠(12.5g,31.9mmol)的烧瓶中。将反应混合物浆液于室温下搅拌15min，然后加热至回流过夜。将反应混合物冷却至室温并浓缩。将残留物在EtOAc/H2O(100mL/100mL)之间分配。EtOAc层用1NNaOH(3×30mL)、盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。获得为浅棕色油状物的粗品产物。该粗品产物经快速色谱纯化，采用EtOAc/CH2Cl2梯度洗脱。分离并收集两个主峰，为2-(6-(叔-丁氧基羰基氨基)吡啶-3-基)丙烷-1,1,3-三甲酸三甲基酯(2.65g,20.3％的收率)和2-(6-氨基吡啶-3-基)丙烷-1,1,1,3-四甲酸四甲基酯(1.89g,16％的收率)。两个产物通过LCMS和1HNMR定性并确证。对于2-(6-(叔-丁氧基羰基氨基)吡啶-3-基)丙烷-1,1,3-三甲酸三甲基酯：LCMS(m/z)411.5(MH+),0.64min；1HNMR(CDCl3)δppm8.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.88(d,J＝8.6Hz,1H),7.60-7.52(m,2H),3.90(td,J＝9.8,4.7Hz,1H),3.76(s,3H),3.56(s,3H),3.55(s,3H),2.92-2.81(m,1H),2.80-2.69(m,1H),1.53(s,9H)。对于2-(6-氨基吡啶-3-基)丙烷-1,1,1,3-四甲酸四甲基酯：LCMS(m/z)369.5(MH+)0.47min；1HNMR(CDCl3)δppm8.31(s,1H),8.19(d,J＝2.3Hz,1H),7.93(d,J＝8.6Hz,1H),7.60(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),3.92(td,J＝9.7,4.9Hz,1H),3.82(s,3H),3.76(s,3H),3.57(s,3H),3.55(s,3H),2.93-2.82(m,1H),2.81-2.70(m,1H)。
步骤4.3-(6-氨基吡啶-3-基)戊二酸二甲基酯
向2-(6-(叔-丁氧基羰基氨基)吡啶-3-基)丙烷-1,1,3-三甲酸三甲基酯(2.5g,6.1mmol)和2-(6-氨基吡啶-3-基)丙烷-1,1,1,3-四甲酸四甲基酯(1.8g,4.9mmol)的MeOH(30mL)溶液中加入NaOH水溶液(2.44g,NaOH在5mL水中,60.9mmol)。将获得的混合物通过油浴加热至回流1小时。将反应混合物冷却至室温，通过旋转蒸发仪减压浓缩。向浓缩的残留物中加入水(15mL)和conc.HCl(3mL)。将获得的混合物加热至回流过夜。将反应混合物冷却，通过旋转蒸发仪减压浓缩，获得固体。将获得固体残留物用甲醇(100mL)研磨，沉淀物通过过滤除去，获得浅色滤液。向滤液中加入conc.HCl(200μL)，将获得的混合物通过油浴加热至回流1h。将反应混合物冷却并浓缩。将残留物在EtOAc/sat.NaHCO3(50mL/50mL)之间分配。水层用EtOAc萃取(50mL)。合并EtOAc萃取液，用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。获得为白色固体的需要的3-(6-氨基吡啶-3-基)戊二酸二甲基酯(2.6g,10.31mmol,93.9％的收率)。LCMS(m/z)253.2(MH+)0.38min；1HNMR(CDCl3)δppm7.95(d,J＝2.3Hz,1H),7.32(dd,J＝8.2,2.3Hz,1H),6.46(d,J＝8.6Hz,1H),4.37(br.s.,2H),3.61(s,6H),3.55(quin,J＝7.5Hz,1H),2.80-2.66(m,2H),2.65-2.51(m,2H)。
步骤5.3-(6-氨基吡啶-3-基)戊烷-1,5-二醇
于0℃，在约10分钟内向氢化锂铝(III)/THF浆液(0.94g的60mLTHF溶液,25mmol)中加入3-(6-氨基吡啶-3-基)戊二酸二甲基酯/THF溶液(2.5g,9.9mmol的30mLTHF溶液)。将浆液于0℃搅拌40min，然后于室温下搅拌45min。将混合物冷却至0℃，通过顺序加入水(0.96mL)骤冷，同时控制气体溢出，然后加入15％NaOH水溶液(0.96mL)和水(2.9mL)。将骤冷的混合物于室温下搅拌30min。过滤除去沉淀物。将滤液浓缩，获得为浅黄色固体(1.97g,定量收率)，为3-(6-氨基吡啶-3-基)戊烷-1,5-二醇。LCMS(m/z)197.2(MH+)0.22min。
步骤6.5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺
向3-(6-氨基吡啶-3-基)戊烷-1,5-二醇/甲苯混合物(1.96g,10mmol的40mL溶液)加入1mL水以促进溶解，然后加入conc.H2SO4(98％,1.6mL,30mmol)。将获得的混合物采用Dean-Stark加热至回流1h20min以从反应混合物中除去水。将反应混合物冷却至室温并浓缩。残留物用冰冷的水(15mL)稀释，通过固体Na2CO3(4g)中和，用EtOAc萃取(3×30mL)。合并EtOAc萃取液，用盐水洗涤(30mL)，经硫酸钠干燥并浓缩。获得浅黄色固体，为粗品5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺。LCMS(m/z)179.2(MH+)0.33min；1HNMR(CDCl3)δppm7.95(d,J＝2.0Hz,1H),7.32(dd,J＝8.2,2.3Hz,1H),6.49(d,J＝8.2Hz,1H),4.34(br.s.,2H),4.11-3.99(m,2H),3.51(td,J＝11.2,3.3Hz,2H),2.73-2.56(m,1H),1.75-1.69(m,4H)。
步骤7.3-溴-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺
于0－5℃向5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺/乙腈溶液(1.4g,7.85mmol/30mL)中逐份加入NBS(1.4g,7.85mmol)，同时将内部温度控制在5℃以下。将获得的混合物于0℃搅拌1小时40min。将反应混合物减压浓缩，残留物用稀NaOH水溶液/H2O(1g/30mL)研磨。过滤收集固体悬浮液。滤饼用冰冷的水洗涤(～10mL)，合并滤液，用EtOAc萃取(20mL)。EtOAc萃取物用盐水洗涤(20mL)，经硫酸钠干燥并浓缩。将浅黄色固体与滤饼合并，高真空干燥，获得粗品3-溴-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺。LCMS(m/z)257.1/259.1(MH+)0.39min。1HNMR(CDCl3)δppm7.90(d,J＝1.6Hz,1H),7.54(d,J＝2.0Hz,1H),4.80(br.s.,1H),4.12-4.02(m,2H),3.54-3.44(m,2H),2.71-2.61(m,1H),1.78-1.68(m,4H)。
步骤8.4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸
向微波瓶中加入3-溴-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺(500mg,1.95mmol)、4-硼-2-氟苯甲酸(1.07g,5.83mmol)、Na2CO3水溶液(2M,4.86mL)和DME(10mL)。向混合物中充入氩气，随后加入Pd(PPh3)4(225mg,0.194mmol)。向混合物中充入氩气，密封，通过微波反应器于125℃加热20min，然后于130℃再加热40min。收集反应混合物的DME层，固体沉淀物用甲醇研磨(2×10mL)。将甲醇上清液与DME层合并，浓缩。将获得残留物与Et2O(2×60mL)一起研磨，弃去Et2O上清液。将固体残留物在EtOAc(20mL)和aq.HCl(1N,20mL)之间分配。EtOAc层采用1NHCl(2×5mL)提取，合并水层。将水层减压浓缩，获得的浅黄色固体采用甲醇(8mL)研磨。过滤分离上清液，浓缩。获得为浅黄色泡沫状物的4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(0.844g,2.67mmol,137％的收率)。LCMS(m/z)317.2(MH+)0.46min。
步骤9.(E)-6-甲基吡啶甲醛肟
向6-甲基吡啶甲醛(picolinaldehyde)的乙醇溶液(642mg,5.3mmol/2.1mL)中加入羟胺盐酸盐(368mg,5.3mmol)和K2CO3水溶液(0.88g/4.2mL)。然后将获得的溶液通过外部油浴加热至回流30min。将反应混合物冷却至0℃并搅拌30min。过滤收集白色固体悬浮液，滤饼用冰冷的水洗涤。将滤饼空气干燥，然后高真空干燥，获得第一批产物(0.565g)。合并滤液并浓缩至干。将残留物再溶于水(2mL)，冷却至0℃并搅拌20min。过滤收集固体产物，获得第二批产物(70mg)，为浅黄色固体。合并二批产物，获得(E)-6-甲基吡啶甲醛肟(88％)。LCMS(m/z)136.9(MH+)0.21min。
步骤10.(6-甲基吡啶-2-基)甲胺
30分钟内，向(E)-6-甲基吡啶甲醛肟(0.635g,4.66mmol)/乙酸(267μL,4.66mmol)/乙醇(10mL)溶液中分次加入锌粉(5.19g,79mmol)。将获得的混合物再搅拌30min。小份反应物的LCMS显示反应完成。通过过滤除去反应混合物中的锌沉淀，将滤液浓缩。将残留物采用过量的sat.KOH(～7mL)碱化至pH>12，与Et2O(30mL)一起搅拌。收集Et2O层，经硫酸钠干燥并浓缩。将残留物再溶于EtOAc(15mL)，经硫酸钠干燥并浓缩。获得为无色油状物的(6-甲基吡啶-2-基)甲胺(385mg,3.15mmol,67.6％)。LCMS(m/z)123.2(MH+)0.15min。
步骤11.4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)苯甲酰胺
向小瓶中加入4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(20mg,0.063mmol)、(6-甲基吡啶-2-基)甲胺(11.6mg,0.095mmol)、DIEA(28μL,0.158mmol)、PyBOP(65.8,0.126mmol)和DMF(0.5mL)。将混合物于室温下搅拌10min。然后将反应混合物通过制备性HPLC纯化，合并产物组分，冷冻干燥，获得为白色粉末的4-(2-氨基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)苯甲酰胺。LCMS(m/z)421.3(MH+)0.41min。1HNMR(DMSO-d6)δppm8.99(d,J＝3.1Hz,1H),7.95-7.83(m,3H),7.79(t,J＝7.6Hz,1H),7.53(d,J＝11.7Hz,2H),7.44(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.24(d,J＝7.4Hz,2H),4.60(d,J＝5.5Hz,2H),4.02-3.88(m,2H),3.40(td,J＝11.2,2.7Hz,3H),2.88-2.71(m,1H),2.51(br.s.,3H),1.82-1.58(m,4H)。
实施例206
(S)-4-(2-氨基-5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺的合成
流程97
步骤1.4-(2-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯：
将4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯(2g,6.15mmol)、B2(PIN)2(3.12g,12.30mmol)、PdCl2(dppf)(0.225g,0.308mmol)、KOAc(1.811g,18.45mmol)和二氧六环(30.8mL)的混合物在油浴中于100℃加热过夜。反应混合物用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。向粗品产物中加入乙醚。过滤除去不溶物，获得为棕色固体的4-(2-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯(79％)。LCMS(m/z):291.2(MH+),0.44min(for硼酸)。
步骤2.4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯
将粗品4-(2-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯(712mg,1.912mmol)、1-(二氟甲基)-4-碘-3-甲基-1H-吡唑(740mg,2.87mmol)、PdCl2(dppf)(70.0mg,0.096mmol)、DME(7.899mL)和2MNa2CO3(3.95mL)的混合物于100℃加热过夜。加入Na2SO4后，采用EtOAc稀释，过滤反应混合物，真空浓缩获得的挥发物。粗品产物经快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAcDCM溶液洗脱。LCMS(m/z):491.1(MH+),0.64min
步骤3.4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸
向4-(2-氨基-5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯(352mg,0.935mmol)的THF(6236μL)和MeOH(3118μL)溶液中加入LiOH(1M溶液)(1684μL,1.684mmol)。将反应混合物于室温下搅拌。向反应混合物中加入1NHCl至pH至多5。反应混合物用EtOAc萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，获得粗品4-(2-氨基-5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(88％)。LCMS(m/z):363.3(MH+),0.51min。
步骤4.(S)-4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
向4-(2-氨基-5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(25mg,0.069mmol)的DMF溶液中加入(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)乙醇(15.50mg,0.083mmol)、EDC、HOAt和DIEA。将反应混合物搅拌15h。加入水后，反应混合物用EtOAc处理。有机层经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物通过反相制备性HPLC纯化。将纯组分冷冻干燥，获得(S)-4-(2-氨基-5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺，为TFA盐(50％)。LCMS(m/z):532.2(MH+),0.65min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.23(m,1H),7.97(m,1H),7.93(m,1H),7.82(m,1H),7.51-7.30(m,3H),7.2(m,1H),7.09(d,J＝8Hz,1H),6.98(d,J＝12Hz,1H),5.30(d,J＝44Hz,2H),5.14(m,1H),3.8(m,2H),2.32(s,3H)。
4-(2-氨基-5-(1-(二氟甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸的合成
根据流程97步骤2和3，采用1,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑，获得4-(2-氨基-5-(1-(二氟甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z):363.1(MH+),0.53min。
4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸的合成
根据流程97步骤2和3，采用5-碘-1-甲基-1H-1,2,3-三唑，获得4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z):314.3(MH+),0.38min。
4-(2-氨基-5-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸的合成
根据流程97步骤1和2，采用4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲基酯和1,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑，获得4-(2-氨基-5-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z):327.1(MH+),0.45min。
4-(2-氨基-5-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸的合成
根据流程97步骤2和3，采用4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲基酯和1,3-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑，获得4-(2-氨基-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z):327.2(MH+),0.47min。
4-(2-氨基-5-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸的合成
根据流程97步骤2和3，采用4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯和4-溴-1-(二氟甲基)-5-甲基-1H-吡唑，获得4-(2-氨基-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z):341.2(MH+),0.47min。
(3S,4R)-4-(4-氯代-3-氟苯基)-1-甲基吡咯烷-3-胺的合成
流程97b
步骤1.(E)-1-氯代-2-氟-4-(2-硝基乙烯基)苯
向4-氯代-3-氟苯甲醛(8g,50.5mmol)和乙酸铵(9.72g,126mmol)的乙酸(168mL)溶液中加入硝基甲烷(8.16mL,151mmol)。将反应混合物回流加热5h并冷却。加入水(100mL)，将混合物于室温下搅拌1h。过滤固体，用水洗涤，真空干燥。固体经快速色谱纯化(0-20％的EtOAc/庚烷)，得到纯净的产物4.2g，41％的收率。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.92(d,J＝13.7Hz,1H),7.54(d,J＝13.8Hz,1H),7.49(d,J＝7.5Hz,1H),7.33(dd,J＝2.0,9.3Hz,1H),7.31-7.28(m,1H)。
步骤2.(+/-)-(3R,4S)-3-(4-氯代-3-氟苯基)-1-甲基-4-硝基吡咯烷
将(E)-1-氯代-2-氟-4-(2-硝基乙烯基)苯(4.2g,20.84mmol)、2-(甲基氨基)乙酸(4.64g,52.1mmol)、仲甲醛(3.75g,125mmol)在无水甲苯(104mL)中混合。将反应混合物采用Dean-stark回流加热过夜。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。有机部分通过sat.NaCl洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，得到(+/-)-(3R,4S)-3-(4-氯代-3-氟苯基)-1-甲基-4-硝基吡咯烷，45％的收率。LCMS(m/z):259.2(MH+),0.52min；1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.37(t,J＝8.0Hz,1H),7.15(dd,J＝2.0,10.2Hz,1H),7.09-7.01(m,1H),4.91-4.82(m,1H),3.98(d,J＝5.1Hz,1H),3.34(dd,J＝4.1,10.8Hz,1H),3.23(t,J＝8.6Hz,1H),3.10(dd,J＝7.8,10.6Hz,1H),2.63(dd,J＝7.0,9.4Hz,1H),2.44(s,3H)。
步骤3.(+/-)-(3S,4R)-4-(4-氯代-3-氟苯基)-1-甲基吡咯烷-3-胺
将锌粉(5.76g,88mmol)加入(+/-)-(3R,4S)-3-(4-氯代-3-氟苯基)-1-甲基-4-硝基吡咯烷(2.28g,8.81mmol)的MeOH(29.4mL)和乙酸(30mL,524mmol)混合物中。将反应混合物于室温下搅拌5h，过滤。真空除去溶剂。将残留物中和至pH9，然后用IPA:CHCl3(3:7)萃取。有机部分经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化(DCM/甲醇/NH390:9:1)，获得(+/-)-(3S,4R)-4-(4-氯代-3-氟苯基)-1-甲基吡咯烷-3-胺，40％的收率.LCMS(m/z):229.2(MH+),0.25min。
(+/-)-(3S,4R)-4-(3-氯代-4-氟苯基)-1-甲基吡咯烷-3-胺的合成
根据流程97b，采用3-氯代-4-氟苯甲醛(3.92g,24.72mmol)，获得(+/-)-(3S,4R)-4-(3-氯代-4-氟苯基)-1-甲基吡咯烷-3-胺。LCMS(m/z):229.0(MH+),0.32min。
实施例207和208
反式-4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-((3S,4R)-4-(3-氯代-4-氟苯基)-1-甲基吡咯烷-3-基)-2-氟苯甲酰胺和反式-4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-((3R,4S)-4-(3-氯代-4-氟苯基)-1-甲基吡咯烷-3-基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程98
根据流程89步骤2，采用(+/-)-(3S,4R)-4-(3-氯代-4-氟苯基)-1-甲基吡咯烷-3-胺，获得4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-((3S,4R)-4-(3-氯代-4-氟苯基)-1-甲基吡咯烷-3-基)-2-氟苯甲酰胺，70％的收率。LCMS(m/z):523.3(MH+),0.56min。粗品外消旋混合物通过手性SFC拆分(ChiralPak5micOD柱,4.6×100(mm),IPA+0.1％DEA＝30％,5mL/min)。对于极性非对映异构体(Rt＝2.37min)：LCMS(m/z):523.2(MH+),0.57min；1HNMR(400MHz,CD3OD.)δppm8.19(d,J＝2.0Hz,1H),7.91(s,1H),7.79-7.73(m,2H),7.63(d,J＝2.3Hz,1H),7.52(dd,J＝2.3,7.0Hz,1H),7.46-7.29(m,3H),7.26-7.13(m,1H),4.66(d,J＝6.3Hz,1H),3.45-3.37(m,1H),3.21(t,J＝9.0Hz,1H),3.16-3.08(m,1H),2.82(dd,J＝5.7,10.0Hz,1H),2.70(t,J＝9.2Hz,1H),2.54-2.41(m,3H),1.27(d,J＝17.6Hz,1H)。对于较小极性非对映异构体(Rt＝3.96min)：LCMS(m/z):523.2(MH+),0.58min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.19(d,J＝2.0Hz,1H),7.91(s,1H),7.79-7.73(m,2H),7.63(d,J＝2.3Hz,1H),7.52(dd,J＝2.3,7.0Hz,1H),7.46-7.29(m,3H),7.26-7.13(m,1H),4.66(d,J＝6.3Hz,1H),3.45-3.37(m,1H),3.21(t,J＝9.0Hz,1H),3.16-3.08(m,1H),2.82(dd,J＝5.7,10.0Hz,1H),2.70(t,J＝9.2Hz,1H),2.54-2.41(m,3H),1.27(d,J＝17.6Hz,1H)。
实施例209和210
反式-4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-((3S,4R)-4-(4-氯代-3-氟苯基)-1-甲基吡咯烷-3-基)-2-氟苯甲酰胺和反式-4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-((3R,4S)-4-(4-氯代-3-氟苯基)-1-甲基吡咯烷-3-基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程99
根据流程86步骤2，采用(3S,4R)-4-(4-氯代-3-氟苯基)-1-甲基吡咯烷-3-胺，获得(+/-)-4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-((3S,4R)-4-(4-氯代-3-氟苯基)-1-甲基吡咯烷-3-基)-2-氟苯甲酰胺，79％的收率。LCMS(m/z):523.2(MH+),0.57min。粗品外消旋混合物通过手性SFC拆分(ChiralPak5micOD柱,4.6×100(mm),IPA+0.1％DEA＝30％,5mL/min)。对于极性非对映异构体(Rt＝2.45min)：LCMS(m/z):523.2(MH+),0.58min；1HNMR(400MHz,CD3OD.)δppm8.18(d,J＝2.2Hz,1H),7.90(s,1H),7.80-7.72(m,2H),7.66-7.61(m,1H),7.44-7.36(m,3H),7.33-7.29(m,1H),7.19(dd,J＝1.8,8.3Hz,1H),4.71-4.62(m,1H),3.90(s,3H),3.44-3.37(m,1H),3.22(d,J＝9.6Hz,1H),3.12(dd,J＝7.9,10.0Hz,1H),2.86-2.80(m,1H),2.74-2.67(m,1H),2.51-2.44(m,3H)。对于较小极性非对映异构体(Rt＝3.92min)：LCMS(m/z):523.2(MH+),0.58min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.19(d,J＝2.2Hz,1H),7.90(s,1H),7.80-7.70(m,2H),7.63(d,J＝2.2Hz,1H),7.46-7.36(m,3H),7.30(dd,J＝2.0,10.6Hz,1H),7.19(dd,J＝1.8,8.4Hz,1H),4.66(d,J＝5.9Hz,1H),3.91(s,3H),3.44-3.36(m,1H),3.19(t,J＝9.0Hz,1H),3.11(dd,J＝7.8,10.0Hz,1H),2.83-2.78(m,1H),2.69(dd,J＝8.4,9.5Hz,1H),2.45(s,3H)。
4-(3-氨基-6-环丙基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸的合成
流程100
步骤1.4-(3-氨基-6-环丙基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(合成参见实施例34,步骤2)(300mg,0.920mmol)的甲苯(10mL)和水(1mL)溶液中加入环丙基三氟硼酸钾(408mg,2.76mmol)、二(1-金刚烷基)-正-丁基膦(66.0mg,0.184mmol)、碳酸铯(1499mg,4.60mmol)和乙酸钯(II)(20.65mg,0.092mmol)。将反应混合物在加热器中于100℃加热过夜。反应混合物采用sat.NH4Cl骤冷，用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取液，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品经快速色谱纯化(0-80％的EtOAc庚烷)，获得4-(3-氨基-6-环丙基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(250mg,90％)。LCMS(m/z):288.2(MH+),0.756min。
步骤2.4-(3-氨基-6-环丙基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-氨基-6-环丙基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(250mg,0.870mmol)的THF(6mL)和MeOH(3mL)溶液中加入1MLiOH(1.740mL,1.740mmol)。将反应混合物于室温下搅拌2h。通过2NHCl水溶液将反应混合物的pH调节至～4。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到4-(3-氨基-6-环丙基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(230mg,97％)，为浅黄色固体。LCMS(m/z):274.2(MH+),0.621min。
4-(2-氨基-5-环丙基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸的合成
根据流程100，采用4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯，获得4-(2-氨基-5-环丙基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(80％)。LCMS(m/z):273.0(MH+),0.515min。
4-(3-氨基-6-环己基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸的合成
根据流程66步骤1、2和3，采用2-(环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷,获得4-(3-氨基-6-环己基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z):316.3(MH+),0.79min。
实施例211
4-(2-氨基-5-((1S,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程101
步骤1.4-(2-氨基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
将3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(2.4g,10.91mmol)、4-溴-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(3.30g,12.00mmol)、Pd(PPh3)4(0.63mg,0.0.545mmol)、2.0MNa2CO3水溶液(10.91mL)在正-丁醇(26mL)中的脱气混合物微波加热至130℃10min。将反应物用乙酸乙酯稀释(30mL)，然后用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机部分经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，然后经快速色谱纯化(10－60％的乙酸乙酯/庚烷洗脱)，获得4-(2-氨基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(1.35g,43％的收率)。LCMS(m/z):289.4(MH+),0.67min。
步骤2.4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
将4-(2-氨基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(700mg,2.43mmol)的乙腈(10mL)溶液采用NBS(453mg,2.55mmol)处理。10min后，反应完成。将反应物采用1:1sat.aq.NaHCO3:sat.aq.Na2S2O3(10mL)处理。将混合物剧烈搅拌10min。混合物用乙酸乙酯稀释(30mL)并分层。有机部分用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，获得4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(803mg,90％的收率)。LCMS(m/z):367.2,369.2(MH+),0.75min。
步骤3.4-(2-氨基-5-(3,6-二氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
将4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(400mg,1.09mmol)、2-(3,6-二氢-2H-噻喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(296mg,1.31mmol)、Pd(PPh3)4(126mg,0.109mmol)在2.0MNa2CO3水溶液(1.63mL)和正-丁醇(5mL)中的脱气混合物微波加热至130℃15min。反应物用乙酸乙酯稀释(20mL)，然后用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机部分经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，然后经快速色谱纯化(10－60％的乙酸乙酯/庚烷洗脱)，获得4-(2-氨基-5-(3,6-二氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(400mg,95％的收率)。LCMS(m/z):387.1(MH+),0.87min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.83-7.76(m,2H),7.68(d,J＝1.96Hz,1H),7.37-7.34(m,1H),7.33-7.29(m,2H),7.28-7.24(m,2H),7.24-7.18(m,1H),5.10(t,J＝5.87Hz,1H),3.83-3.69(m,2H),2.81-2.70(m,2H),2.63-2.49(m,3H),2.08(dd,J＝2.74,13.30Hz,2H),1.72(dq,J＝2.93,12.59Hz,2H)。
步骤4.4-(2-氨基-5-(1-氧化-3,6-二氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
将0℃的4-(2-氨基-5-(3,6-二氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸酯的丙酮(20mL)溶液采用硫酸氢钾(227mg,0.369mmol)的水(5mL)溶液处理。20min后，将反应物用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀释。分层，水层用乙酸乙酯(50mL)洗涤。合并的有机部分用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩，获得4-(2-氨基-5-(1-氧化-3,6-二氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(220mg,74％的收率)。LCMS(m/z):403.5(MH+),0.66min。
步骤5.4-(2-氨基-5-((1r,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
将4-(2-氨基-5-(1-氧化-3,6-二氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(220mg,0.547mmol)在甲醇(15mL)中的脱气浆液采用1.0NHCl水溶液(0.82mL)和10％Pd(OH)2处理。向容器中充入氢气至250PSI。2h后，反应完成。将浆液脱气，通过硅藻土过滤，浓缩，获得4-(2-氨基-5-((1r,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(150mg,68％的收率)。LCMS(m/z):405.6(MH+),0.63min。
步骤6.4-(2-氨基-5-((1r,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸-TFA
于室温下将4-(2-氨基-5-((1r,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(50mg,0.124mmol)的DCM(2mL)溶液采用TFA(1mL)处理。1h后，反应完成。将获得的产物在苯中超声浆化，然后再次浓缩，获得4-(2-氨基-5-((1r,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸-TFA(57mg,100％的收率)。LCMS(m/z):349.2(MH+),0.37min。
步骤7.4-(2-氨基-5-((1S,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
将4-(2-氨基-5-((1r,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸-TFA(57mg,0.123mmol)和(S)-2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙醇(25mg,0.148mmol)的DMF(1mL)溶液采用HATU(61mg,0.160mmol)和DIEA(129μL,0.738mmol)处理。1h后，将反应物用水稀释(5mL)，用乙酸乙酯萃取(2×10mL)。产物存在于两层中。因此，将水层和有机层均浓缩，通过反相制备性HPLC纯化，获得4-(2-氨基-5-((1S,4r)-1-氧化四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺，为TFA盐(20mg,26％的收率)。LCMS(m/z):502.1,504.1(MH+),0.57min。1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.63(dd,J＝4.11,7.24Hz,1H),7.90(d,J＝1.96Hz,1H),7.80(t,J＝7.83Hz,1H),7.76(d,J＝1.57Hz,1H),7.38-7.31(m,3H),7.29-7.25(m,2H),7.24-7.17(m,1H),5.14-5.06(m,1H),3.83-3.70(m,2H),3.06(d,J＝12.91Hz,2H),2.85-2.70(m,3H),2.38-2.24(m,2H),1.83(d,J＝12.13Hz,2H)。
实施例212
(S)-4-(2-氨基-5-(四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
反应顺序如流程101所示，步骤5、6和7应用于4-(2-氨基-5-(3,6-二氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯，获得(S)-4-(2-氨基-5-(四氢-2H-噻喃-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):486.0,488.0(MH+),0.73min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.83-7.76(m,2H),7.68(d,J＝1.96Hz,1H),7.37-7.34(m,1H),7.33-7.29(m,2H),7.28-7.24(m,2H),7.24-7.18(m,1H),5.10(t,J＝5.87Hz,1H),3.83-3.69(m,2H),2.81-2.70(m,2H),2.63-2.49(m,3H),2.08(dd,J＝2.74,13.30Hz,2H),1.72(dq,J＝2.93,12.59Hz,2H)。
4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸的合成
流程102
步骤1.4-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
将搅拌的4-溴-2-甲基苯甲酸(6g,27.9mmol)、碘甲烷(5.21mL,84mmol)和碳酸钾(11.57g,84mmol)在DMF(60mL)中的混合物于室温下搅拌过夜。将反应混合物在水(250mL)和4:1己烷:乙酸乙酯(650mL)之间分配。有机层用水洗涤，经硫酸钠干燥。真空除去溶剂，获得为油状物的6.39g目标产物，100％的收率。1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.86-7.65(m,7H)7.50(br.s.,2H)3.88(s,3H)2.56(s,3H)。
步骤2.3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺
向3-溴吡啶-2-胺(6g,34.7mmol)的1,4-二氧六环(87mL)悬浮液中加入Bispin(13.21g,52.0mmol)和乙酸钾(10.21g,104mmol)。向混合物中充入氮气10min，然后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(2.83g,3.47mmol)。将反应混合物在油浴中加热至108℃2-3h。反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土过滤并浓缩。残留物直接用于下一步Suzuki偶合，无需进一步纯化。LCMS(m/z):139(MH+)0.22min(for硼酸)。
步骤3.4-(2-氨基吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸甲酯
向500mL圆底烧瓶中的3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(7.37g,33.5mmol)中加入4-溴-2-甲基苯甲酸甲酯(6.390g,27.9mmol)、PdCl2(dppf)-DCM(2.041g,2.79mmol)、DME(209mL)和2MNa2CO3溶液(69.7mL)。向反应混合物中充入氮气20min，在油浴中于108℃加热1.5h。将反应混合物采用EtOAc稀释，用水洗涤三次，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc(含有10％的MeOH)/庚烷洗脱，获得粗品产物约8g，其含有大量的源自前面实验的B2(PIN)2。加入乙醚以溶解粗品混合物，然后加入庚烷以萃取目标产物。过滤固体，获得高纯度的4.2g目标产物，62.1％的收率。LCMS(m/z):243.5(MH+),0.56min。
步骤4.4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸甲基酯
于0℃向4-(2-氨基吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸甲基酯(4.2g,17.34mmol)的乙腈(173mL)溶液中分二次加入NBS(3.15g,17.68mmol)。将反应混合物于0℃搅拌20min。LCMS显示反应完成。采用sat.Na2SO3和NaHCO3骤冷后，将反应混合物搅拌30min。反应混合物用EtOAc萃取三次，用satNaHCO3、水和盐水洗涤。有机部分经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物用乙醚研磨，无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):323.1(MH+),0.68min。
步骤5.4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸甲基酯
向20mLMW瓶中的4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸甲基酯(500mg,1.557mmol)中加入1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(421mg,2.024mmol)、PdCl2(dppf)DCM(114mg,0.156mmol)、DME(11.7mL)和2MNa2CO3溶液(3.892mL)。将反应混合物于微波合成器中加热(12min,120℃)。反应混合物采用EtOAc稀释，用水洗涤三次，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，采用0－100％的EtOAc(含有10％的MeOH)/庚烷洗脱，获得粗品产物，将其用乙醚研磨，获得400mg纯产物，80％的收率。LCMS(m/z):323.4(MH+),0.60min。
步骤6.4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸
向4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸甲基酯(1.20g,3.72mmol)的THF/MeOH/H2O(1:1:1,36mL)溶液中加入LiOH-H2O(0.234g,5.58mmol)。将溶液于室温下搅拌过夜。将pH调节至3-5，最好是4。减压除去所有有机溶剂。加入EtOAc以研磨除去所有的杂质。加入水，将混合物搅拌30min。过滤固体，用50％的乙醚和水充分洗涤。然后将固体在旋转蒸发仪上与甲苯共沸，获得约800mg需要的酸，69.7％的收率。LCMS(m/z):309.2(MH+),0.50min。
4-(2-氨基-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸的合成
流程103
步骤1.4-溴-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
将4-溴-2-氟苯甲酸(20.16g,92mmol)的二氧六环(90mL)浆液和conc.H2SO4(5mL)冷却至0℃，然后充入异丁烯2h。将反应物逐渐温热至室温过夜。向反应物中小心地加入固体NaHCO3(40g)，将混合物搅拌1h。将混合物浓缩，然后再溶于水和乙酸乙酯。分层。水相用乙酸乙酯洗涤。合并的有机部分用sataqNaHCO3和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。获得的油性4-溴-2-氟苯甲酸叔-丁基酯，无需进一步纯化可以直接使用。1HNMR(400MHz,MeOH-d4)δppm7.79-7.70(m,1H),7.42-7.23(m,3H),1.59(s,11H)。
步骤2.2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸叔-丁基酯
将4-溴-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(5.55g,20.17mmol)、BISPIN(7.68g,30.3mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(1.153g,1.412mmol)和乙酸钾(5.94g,60.5mmol)在DMF(75mL)中的浆液脱气，然后加热至100℃过夜。将反应物浓缩，然后溶于DCM，通过硅藻土过滤，然后用水和盐水洗涤。有机部分通过硅藻土过滤，浓缩，然后经快速色谱纯化，采用0-20％的乙酸乙酯/庚烷洗脱，获得5.2g的2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸叔-丁基酯，80％的收率.
步骤3.4-(2-氨基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
将2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸叔-丁基酯(5.1g,15.83mmol)、3-溴氨基吡啶(3.01g,17.41mmol)和Pd(PPh3)4(0.732g,0.633mmol)在正-丁醇(50mL)和2.0MNa2CO3水溶液(19.79mL,39.6mmol)中的浆液脱气，然后加热至100℃过夜。将反应物冷却，用乙酸乙酯稀释。分层，有机部分用盐水洗涤，通过硅藻土过滤并浓缩。粗品经快速色谱纯化，采用10-50％的乙酸乙酯/庚烷洗脱，获得3.41g的4-(2-氨基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯，75％的收率。
步骤4.4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
于室温下，将NBS(2.145g,12.05mmol)加至4-(2-氨基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(3.31g,11.48mmol)的MeCN(60mL)溶液中。将获得的混合物搅拌10min。反应物采用1:1的sat.aq.Na2S2O3:sat.aq.NaHCO3溶液骤冷，然后用乙酸乙酯萃取。合并的有机部分用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩，获得4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯。该产物无需进一步纯化可以直接使用。LCMS(m/z):369.0(MH+),0.85min。
步骤5.4-(2-氨基-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
向4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(200mg,0.544mmol)(参见流程101步骤2)的DME(3mL)和2M碳酸钠(1.5mL,3.0mmol)溶液中加入1-乙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(182mg,0.816mmol)，随后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(44.5mg,0.054mmol)。将反应混合物于120℃微波加热20min。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品经快速色谱纯化，采用0-50％的EtOAc(含有10％的MeOH)/庚烷洗脱，获得4-(2-氨基-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(160mg,77％)。LCMS(m/z):383.2(MH+),0.782min。
步骤6.4-(2-氨基-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸
向4-(2-氨基-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(160mg,0.418mmol)的DCM(0.5mL)溶液中加入TFA(2mL,26mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h。将反应混合物与甲苯一起真空中共蒸发。粗品4-(2-氨基-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):327.2(MH+),0.509min。
实施例213
4-(2-氨基-5-(1-(甲基磺酰基)吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
流程104
步骤1.4-(3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
向3-氯代吡嗪-2-胺(5g,38.6mmol)的DME(160mL)和aq.2M碳酸钠(40mL,80mmol)的混合物中加入2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲基酯(12.97g,46.3mmol)，随后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(3.15g,3.86mmol)。向反应混合物中充入氮气，在油浴中于100℃加热3-4h。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品用DCM研磨。过滤形成的固体，用乙醚洗涤并减压干燥，获得为灰白色固体的产物。将滤液经快速色谱纯化，采用0-50-80％的EtOAc/庚烷洗脱，获得10.6g产物，93％的收率。LCMS(m/z):248.1(MH+),0.563min。
步骤2.4-(3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
在冰浴中，向4-(3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(8.9g,36.0mmol)的乙腈(300mL)溶液中加入NBS(5.77g,32.4mmol)。将反应混合物于0℃搅拌1h。加入NBS(0.05equiv.)，获得的混合物再搅拌30min。向反应混合物中加入饱和的碳酸氢钠溶液。将混合物搅拌30min，产物用EtOAc萃取。合并有机萃取液，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将残留物高真空干燥，获得棕色固体(12.2g,94％)。LCMS(m/z):326.0/328.0(MH+),0.846min。
步骤3.5-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3,4-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔-丁基酯
将3-氧代哌啶-1-甲酸叔-丁基酯(1.1g,5.52mmol)溶于THF(10mL)，冷却至-78℃。向其中加入二(三甲基甲硅烷基)氨化锂(6.07mL,6.07mmol)(1M的THF溶液)。将反应混合物于-78℃搅拌20min，然后滴加1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺(2.071g,5.80mmol)的THF(10mL)溶液。将反应混合物于-78℃搅拌15min，然后温热，于0℃搅拌3h。反应混合物采用饱和的碳酸氢钠溶液骤冷，然后用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品通过中性氧化铝短柱纯化，采用10％的EtOAc庚烷溶液洗脱。蒸发溶剂，干燥残留物，获得为黄色液体的目标产物(2g,98％)。
步骤4.5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔-丁基酯
向烧瓶中的4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼杂环戊烷)(1.223g,4.81mmol)、乙酸钾(1.289g,13.13mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.107g,0.131mmol)的混合物中充入氮气，然后加入二氧六环(12mL)，随后加入5-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3,4-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔-丁基酯(1.45g,4.38mmol)的二氧六环(12mL)溶液。向反应混合物中充入氮气5min，然后在油浴中于80℃加热过夜。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物经快速色谱纯化，采用0-30％的EtOAc/庚烷洗脱，得到为高粘度液体的目标产物(1.2g,89％)。LCMS(m/z):254.1(MH+-tBu),1.21min。
步骤5.5-(5-氨基-6-(3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)吡嗪-2-基)-3,4-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔-丁基酯
向4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(240mg,0.70mmol)的DME(6mL)和2M碳酸钠(1.0mL,2.0mmol)的混合物中加入5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔-丁基酯(180mg,0.582mmol)，随后加入PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(14.4mg,17.5μmol)。将反应混合物在微波中于110℃加热20min。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用水和盐水洗涤。有机部分经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物经快速色谱纯化，采用0-50-80％的EtOAc庚烷洗脱，得到为黄色固体的目标产物(150mg,60％)。LCMS(m/z):429.2(MH+),1.03min。
步骤6.4-(3-氨基-6-(1,4,5,6-四氢吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
向5-(5-氨基-6-(3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)吡嗪-2-基)-3,4-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔-丁基酯(150mg,0.350mmol)(不可分离的混合物)的DCM(4mL)溶液中加入TFA(1mL,12.98mmol)。将反应混合物于室温下搅拌30-45min。将反应混合物在旋转蒸发仪上蒸发，与甲苯共沸。粗品产物无需纯化可以直接进行下一步骤。LCMS(m/z):329.2(MH+),0.502min。
步骤7.4-(3-氨基-6-(哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
向4-(3-氨基-6-(1,4,5,6-四氢吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(115mg,0.350mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入Pd/C(93mg,0.088mmol)。将反应混合物于室温下、氢气环境中搅拌24h。将反应混合物通过硅藻土过滤，用DCM洗涤。蒸发滤液并干燥，获得目标产物。粗品产物可以直接用于下一步骤(115mg,95％)。LCMS(m/z):331.2(MH+),0.492min。
步骤8.4-(3-氨基-6-(1-(甲基磺酰基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
在冰浴中，向粗品4-(3-氨基-6-(哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(38mg,0.114mmol)的DCM(2mL)混合物中加入DIEA(79μL,0.454mmol)，随后加入甲磺酰氯(9.73μL,0.125mmol)。将反应混合物于0℃搅拌30min。将反应混合物在DCM和水之间分配。分离DCM层，用盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品产物(50％纯度)可以直接用于下一步骤LCMS(m/z):409.1(MH+),0.721min。
步骤9.4-(3-氨基-6-(1-(甲基磺酰基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-氨基-6-(1-(甲基磺酰基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(60mg,0.147mmol)的THF(4mL)和MeOH(2mL)溶液中加入1MLiOH(400μL,0.400mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。采用2NHCl将反应混合物的pH调节至～3-4，产物用乙酸乙酯萃取。自水中分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得粗品产物，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):395.1(MH+),0.573min。
步骤10.4-(3-氨基-6-(1-(甲基磺酰基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-(1-(甲基磺酰基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(40mg,0.101mmol)的DMF(1mL)混合物中加入(S)-2-氨基-2-苯基乙醇(13.91mg,0.101mmol)，随后加入HATU(57.8mg,0.152mmol)和DIEA(0.089mL,0.507mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。反应混合物用DMF稀释，通过注射器滤器过滤，然后将其通过制备性HPLC纯化，得到目标产物，为TFA盐(33.4％)。LCMS(m/z):514.2(MH+),0.687min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.95(s,1H)7.85(t,J＝7.83Hz,1H)7.73-7.57(m,2H)7.49-7.21(m,5H)5.22(d,J＝6.65Hz,1H)3.94-3.78(m,3H)3.71(d,J＝11.74Hz,1H)3.03-2.93(m,2H)2.87-2.74(m,4H)2.07-1.97(m,1H)1.92(d,J＝12.13Hz,1H)1.85-1.68(m,1H)1.37-1.25(m,1H)。
实施例214
3-(5-氨基-6-(3-氟-4-(((S)-2-羟基-1-苯基乙基)氨基甲酰基)苯基)吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲基酯
流程105
步骤1.3-(5-氨基-6-(3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲基酯
在冰浴中，向4-(3-氨基-6-(哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(55mg,0.166mmol)(关于合成，参见实施例34步骤7)的DCM(3mL)溶液中加入DIEA(0.116mL,0.666mmol)和氯代甲酸甲酯(0.013mL,0.166mmol)。将反应混合物在冰浴中搅拌30min。将反应混合物在DCM和水之间分配。分离DCM层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物(50mg,77％)无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):389.2(MH+),0.785min。
步骤2.4-(3-氨基-6-(1-(甲氧基羰基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向3-(5-氨基-6-(3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲基酯(50mg,0.129mmol)的THF(4mL)和MeOH(2mL)溶液中加入1MLiOH(0.500mL,0.500mmol)。将反应混合物于室温下搅拌4h。采用2NHCl将反应混合物pH调节至～3，产物用乙酸乙酯萃取。分离EtOAc层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物无需纯化可以直接用于下一步骤(40mg,83％)。LCMS(m/z):375.2(MH+),0.637min。
步骤3.3-(5-氨基-6-(3-氟-4-(((S)-2-羟基-1-苯基乙基)氨基甲酰基)苯基)吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲基酯
向4-(3-氨基-6-(1-(甲氧基羰基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(28mg,0.06mmol)的DMF(1mL)混合物中加入(S)-2-氨基-2-苯基乙醇(12.31mg,0.090mmol)，随后加入HATU(34.1mg,0.090mmol)和DIEA(0.052mL,0.299mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。反应混合物用DMF稀释，通过注射器滤器过滤，通过制备性HPLC纯化，得到目标产物，为TFA盐(10.9mg,29.4％)LCMS(m/z):494.2(MH+),0.733min。1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.82-7.72(m,2H)7.63-7.48(m,2H)7.38-7.11(m,5H)5.12(t,J＝6.06Hz,1H)4.09(d,J＝12.91Hz,1H)3.97(d,J＝12.13Hz,1H)3.87-3.68(m,2H)3.59(s,3H)3.11-2.66(m,3H)2.00-1.88(m,1H))1.85-1.65(m,2H)1.58-1.40(m,1H)
实施例215
4-(6-(1-乙酰基哌啶-3-基)-3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
流程106
步骤1.4-(6-(1-乙酰基哌啶-3-基)-3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
在冰浴中，向4-(3-氨基-6-(哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(55mg,0.166mmol)(关于合成，参见实施例34步骤7)的DCM(3mL)溶液中加入DIEA(0.116mL,0.666mmol)，随后加入乙酰氯(0.012mL,0.166mmol)。将反应混合物于0℃搅拌30min。将反应混合物在DCM和水之间分配。分离DCM层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物无需纯化可以直接用于下一步骤(50mg,81％)。LCMS(m/z):373.3(MH+),0.666min。
步骤2.4-(6-(1-乙酰基哌啶-3-基)-3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(6-(1-乙酰基哌啶-3-基)-3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(50mg,0.134mmol)的THF(4mL)和MeOH(2mL)混合物中加入1MLiOH(0.500mL,0.500mmol)。将反应混合物于室温下搅拌4h。采用2NHCl将反应混合物的pH调节至～3，产物用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物无需纯化可以直接用于下一步骤(34mg,70.7％)。LCMS(m/z):359.1(MH+),0.534min.
步骤3.4-(6-(1-乙酰基哌啶-3-基)-3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
向4-(6-(1-乙酰基哌啶-3-基)-3-氨基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(34mg,0.076mmol)的DMF(1.5mL)混合物中加入(S)-2-氨基-2-苯基乙醇(15.62mg,0.114mmol)，随后加入HATU(43.3mg,0.114mmol)和DIEA(0.066mL,0.379mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。反应混合物用DMF稀释，通过注射器滤器过滤，通过制备性HPLC纯化，得到目标产物，为TFA盐(13.9mg,30％)。LCMS(m/z):478.2(MH+),0.641min。1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.98-7.97(m,2H)7.73-7.58(m,2H)7.47-7.23(m,5H)5.22(t,J＝6.06Hz,1H)4.62-4.37(m,1H)4.08-3.75(m,3H)3.27-3.08(m,1H)3.03-2.71(m,2H)2.11(d,J＝11.35Hz,3H)2.04(d,J＝8.22Hz,1H)2.00-1.75(m,2H)1.73-1.46(m,1H)
实施例216
3-(5-氨基-6-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲基酯
流程107
向4-(3-氨基-6-(1-(甲氧基羰基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(12mg,0.026mmol)(关于合成，参见实施例35,步骤2)的DMF(1mL)溶液中加入(S)-2-氨基-2-(3-氯代苯基)的乙醇(6.60mg,0.038mmol)溶液，随后加入HATU(14.63mg,0.038mmol)和DIEA(0.022mL,0.128mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。反应混合物用DMF稀释，通过注射器滤器过滤，通过制备性HPLC纯化，得到目标产物，为TFA盐(6.5mg,38％)。LCMS(m/z):528.1/530.1(MH+),0.798min。1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.96-7.80(m,2H)7.75-7.58(m,2H)7.50-7.23(m,4H)5.19(t,J＝5.87Hz,1H)4.25-4.01(m,2H)3.92-3.79(m,2H)3.68(s,3H)3.20-2.74(m,3H)2.08-1.97(m,1H)1.91-1.73(m,2H)1.67-1.51(m,1H)
实施例217
(S)-4-(3-氨基-6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
流程108
步骤1.4-(3-氨基-6-(1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
向4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(关于合成，参见实施例34步骤2)(100mg,0.307mmol)的DME(3mL)和2M碳酸钠(0.75mL,1.5mmol)溶液中加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑-1-甲酸叔-丁基酯(90mg,0.307mmol)，随后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(25.04mg,0.031mmol)。将反应混合物在微波中于120℃加热15min。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物无需纯化可以直接用于下一步骤(90mg,74％,80％的纯度)。LCMS(m/z):314.1(MH+),0.595min。
步骤2.4-(3-氨基-6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
向4-(3-氨基-6-(1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(45mg,0.115mmol)的DMF(2mL)溶液中加入碳酸钾(47.6mg,0.345mmol)，随后加入溴乙烷(0.017mL,0.230mmol)。将反应混合物于室温下搅拌48h。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，蒸发，经快速色谱纯化，采用0-60％的EtOAc(含有10％的MeOH)/庚烷洗脱，得到目标产物(25mg,64％,80％的纯度)。LCMS(m/z):342.0(MH+),0.73min。
步骤3.4-(3-氨基-6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-氨基-6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(25mg,0.073mmol)的MeOH(1mL)和THF(2mL)溶液中加入1MLiOH(0.220mL,0.220mmol)。将反应混合物于室温下搅拌4h。通过2NHCl将反应混合物的pH调节至～4。产物用乙酸乙酯萃取二次。合并的有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残留物无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):328.1(MH+),0.607min。
步骤4.(S)-4-(3-氨基-6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(25mg,0.076mmol)的DMF(1mL)溶液中加入EDC.HCl(21.96mg,0.115mmol)，随后加入HOAt(15.60mg,0.115mmol)、(S)-2-氨基-2-苯基乙醇(15.92mg,0.092mmol)和DIEA(0.040mL,0.229mmol)。将反应混合物于室温下搅拌6h。反应混合物用DMF稀释，通过注射器滤器过滤。粗品通过制备性HPLC纯化，得到目标产物，为TFA盐(9.1mg,17％)。LCMS(m/z):447.2(MH+),0.699min。1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.67-8.41(m,1H),8.17(s,1H),8.03(s,1H),7.86(s,1H),7.78(t,J＝7.63Hz,1H),7.67-7.53(m,2H),7.40-7.09(m,5H),5.21-5.03(m,1H),4.13(q,J＝7.30Hz,2H),3.86-3.65(m,2H),1.39(t,J＝7.24Hz,3H)。
实施例218
4-(2-氨基-5-(5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺的合成
流程109
步骤1.4-羟基-2-氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯
于0℃、氮气环境中，向Boc-Gly-OH(1g,5.71mmol)的DCM(12mL)溶液中加入DMAP(1.743g,14.27mmol)和Meldrum酸(0.987g,6.85mmol)。滴加氯代甲酸异丙基酯(8.56mL,8.56mmol)的甲苯溶液，将反应混合物于0℃搅拌3h。反应混合物用15％KHSO4洗涤二次，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗品产物溶于50mL的EtOAc，再回流1h。蒸发挥发物后，粗品产物用EtOAC研磨，将获得的固体过滤并干燥，获得黄色固体(75％)。LCMS(m/z):200.1(MH+),0.504min。
步骤2.2-氧代-4-(甲苯磺酰基氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯
向4-羟基-2-氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯(680mg,3.41mmol)的DCM(12mL)溶液中加入DIEA(1.192mL,6.83mmol)和对甲苯磺酰氯(651mg,3.41mmol)。将反应混合物于室温下搅拌6h。反应混合物用DCM稀释，用饱和的碳酸氢钠洗涤。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品产物经快速色谱纯化(0－50％的EtOAc/庚烷)。合并纯组分，蒸发并干燥，获得为白色固体的目标产物(0.98g,81％)。LCMS(m/z):354.1(MH+),0.97min；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.99(d,J＝8.22Hz,2H)7.54(d,J＝7.83Hz,2H)5.77(s,1H)4.33(s,2H)2.43(s,3H)1.41(s,9H)。
步骤3.4-(2-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
向4-(2-氨基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(400mg,1.089mmol)的DME(12mL)溶液中加入4,4,4',4',5,5,5'-七甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼杂环戊烷)(523mg,2.179mmol)、乙酸钾(321mg,3.27mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2(89mg,0.109mmol)。向反应混合物中充入氮气，在微波瓶中用加热器于110℃加热过夜。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗品溶于乙醚并超声10min，过滤黑色固体。蒸发滤液，获得为浅黄色固体的产物(300mg,66.5％)。LCMS(m/z):333.2(MH+),0.672min(for硼酸)。
步骤4.4-(6-氨基-5-(4-(叔-丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯
向4-(2-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(158mg,0.382mmol)的DME(3mL)和碳酸钠(0.509mL,1.019mmol)溶液中加入2-氧代-4-(甲苯磺酰基氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯(90mg,0.255mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2(41.6mg,0.051mmol)。将反应混合物在微波中于90℃加热30min。LCMS显示仍然有原料存在。加入更多的催化剂，于90℃再次加热20min。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品产物通过快速色谱纯化，采用0－50％的EtOAc(含有10％的MeOH)/庚烷洗脱，获得为黄色固体的产物(66％)。LCMS(m/z):470.2(MH+),0.846min。
步骤5.4-(2-氨基-5-(5-氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸
向4-(6-氨基-5-(4-(叔-丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔-丁基酯(158mg,0.337mmol)溶液中加入TFA(2mL,26.0mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h。加入甲苯后，蒸发挥发性溶剂。粗品产物直接用于下一步骤。LCMS(m/z):314.2(MH+),0.382min。
步骤6.4-(2-氨基-5-(5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸
在氮气环境下，向4-(2-氨基-5-(5-氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(100mg,0.319mmol)的MeOH(15mL)溶液中加入Pd-C(67.9mg,0.064mmol)。将反应混合物在氢气环境中于室温下搅拌24h。反应混合物通过硅藻土过滤，用甲醇洗涤。蒸发滤液。粗品用于进行下一步骤。LCMS(m/z):316.2(MH+),0.338min。
步骤7.(+/-)-4-(2-氨基-5-(5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
向4-(2-氨基-5-(5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(30mg,0.076mmol)的DMF(1mL)溶液中加入(S)-2-氨基-2-苯基乙醇(12.53mg,0.091mmol)、EDC-HCl(21.89mg,0.114mmol)、HOAt(15.54mg,0.114mmol)和DIEA(0.040mL,0.228mmol)。将反应混合物于室温下搅拌5h。反应混合物用DMF稀释，通过制备性HPLC直接纯化，获得(+/-)-4-(2-氨基-5-(5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺，为TFA盐(20.2％)。LCMS(m/z):435.2(MH+),0.476min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.88(s,1H),7.84-7.74(m,2H),7.38-7.30(m,4H),7.27(t,J＝7.43Hz,2H),7.22-7.13(m,1H),5.18-5.05(m,1H),3.85-3.56(m,4H),3.39-3.26(m,1H),2.62(dd,J＝16.82,8.61Hz,1H),2.48-2.33(m,1H)。
实施例219和220
4-(2-氨基-5-((R)-5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺和4-(2-氨基-5-((S)-5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺的合成
流程110
将(+/-)-4-(2-氨基-5-(5-氧代吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺通过手性SFC拆分(ChiralPak5micC10＝AD-H柱,4.6×100(mm),5mL/min,MeOH＝50％)。于Rt＝1.36min获得极性化合物(峰1)(24.5％)。LCMS(m/z):435.2(MH+),0.485min。于Rt＝2.20min获得极性较低的化合物(峰2)(22％)。LCMS(m/z):435.2(MH+),0.482min。环内酰胺的绝对立体化学随意指定。
实施例221
(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-2-甲酸甲基酯的合成
流程111
步骤1.(S)-1-叔-丁基2-甲基4-(6-氨基-5-(4-(叔-丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸酯
将4-(2-氨基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(400mg,0.966mmol)、(S)-1-叔-丁基2-甲基4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸酯(1.087g,2.90mmol)、Pd(PPh3)4(112mg,0.097mmol)和碳酸铯(1.258g,3.86mmol)在THF(10mL)和水(2mL)中的混合物脱气，然后微波加热至90℃10min。完成后，将反应物用乙酸乙酯稀释。有机部分用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩。粗品混合物经硅胶快速色谱纯化(20-90％的乙酸乙酯/庚烷)，获得(S)-1-叔-丁基2-甲基4-(6-氨基-5-(4-(叔-丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸酯(470mg,95％)。LCMS(m/z):514.3(MH+),0.92min。
步骤2.(2S,4R)-1-叔-丁基2-甲基4-(6-氨基-5-(4-(叔-丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯
将(S)-1-叔-丁基2-甲基4-(6-氨基-5-(4-(叔-丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸酯(470mg,0.915mmol)的甲醇(40mL)脱气溶液采用10wt.％Pd/C(3.214g,3.02mmol)处理。将系统再次脱气，然后充入1atm氢过夜。完成后，将反应物脱气，然后氨气处理，再通过硅藻土过滤。将滤饼在甲醇中浆化，采用氨气处理，过滤以回收产物。重复该过程直到没有更多的产物自滤饼中洗脱出来。浓缩合并的有机部分，获得(2S,4R)-1-叔-丁基2-甲基4-(6-氨基-5-(4-(叔-丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(300mg,64％)。LCMS(m/z):516.1(MH+),0.89min。
步骤3.4-(2-氨基-5-((3R,5S)-5-(甲氧基羰基)吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸-2TFA
将(2S,4R)-1-叔-丁基2-甲基4-(6-氨基-5-(4-(叔-丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(300mg,0.58mmol)的DCM(6mL)溶液采用TFA(3mL)处理。1h后，将反应物浓缩，然后将残留物在苯中浆化，超声处理，然后浓缩，获得4-(2-氨基-5-((3R,5S)-5-(甲氧基羰基)吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸-2TFA(345mg,100％的收率)。LCMS(m/z):360.2(MH+),0.34min。
步骤4.(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-2-甲酸甲基酯
将4-(2-氨基-5-((3R,5S)-5-(甲氧基羰基)吡咯烷-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸-2TFA(35mg,0.060mmol)、HATU(34mg,0.089mmol)和DIEA(0.104mL,0.596mmol)的DMF(2mL)混合物采用(S)-2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙醇(51mg,0.348mmol)处理。完成后，反应物用水和盐水洗涤，然后经硫酸镁干燥并浓缩。粗品产物通过反相制备性HPLC纯化，获得(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-2-甲酸甲基酯(4.2mg,9％)。LCMS(m/z):513.2,515.2(MH+),0.58min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.97-7.86(m,3H),7.49-7.40(m,3H),7.39-7.34(m,2H),7.33-7.26(m,1H),5.19(t,J＝5.87Hz,1H),4.62(dd,J＝7.63,10.76Hz,1H),3.93-3.77(m,6H),3.74-3.61(m,1H),2.87(td,J＝6.90,13.21Hz,1H),2.33-2.21(m,1H)。
实施例222和223
(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-2-甲酸和(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-2-甲酸甲基酯的合成
流程112
步骤1.(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-2-甲酸
将(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-2-甲酸甲基酯(120mg,0.234mmol)的MeOH(4mL)溶液采用1.0MLiOH水溶液(0.468mL)处理，然后加热至70℃。1h后，将反应物浓缩，然后溶于水(2mL)，采用1.0NHCl水溶液(0.468mL)处理。将反应混合物用乙酸乙酯萃取(20mL)。有机层用水和盐水洗涤，然后经硫酸镁干燥并浓缩，获得粗品产物(97mg,57％)。将部分该产物通过反相制备性HPLC纯化，获得(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-2-甲酸。LCMS(m/z):499.1/501.1(MH+),0.49min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.56-8.64(m,1H),7.75-7.87(m,4H),7.31-7.38(m,4H),7.24-7.29(m,3H),7.17-7.24(m,1H),5.07-5.14(m,1H),4.36(dd,J＝7.63,9.98Hz,1H),3.64-3.83(m,4H),3.52-3.62(m,1H),3.27-3.34(m,1H),2.72-2.81(m,1H),2.56(s,1H),2.15(td,J＝10.42,13.21Hz,1H)。
步骤2.(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-2-甲酸甲基酯
将(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-2-甲酸(25mg,0.050mmol)的THF(2mL)和DMF(2mL)溶液采用2.0M的甲基胺的THF溶液(1.25mL,2.5mmol)和HATU(95mg,0.25mmol)顺序处理。2h后，将反应物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤。有机部分经硫酸镁干燥并浓缩，通过反相制备性HPLC纯化后，获得(2S,4R)-4-(6-氨基-5-(4-(((S)-1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-2-甲酸甲基酯(1.8mg,5％)。LCMS(m/z):512.2,514.2(MH+),0.54min；1HNMR(400MHz,CD3OD.)δppm8.64-8.73(m,1H),7.84-7.96(m,2H),7.45(s,1H),7.40-7.44(m,1H),7.35-7.38(m,1H),7.27-7.34(m,1H),5.16-5.24(m,1H),4.38(dd,J＝7.83,10.17Hz,1H),3.75-3.92(m,2H),3.60-3.72(m,1H),2.78-2.89(m,3H)。
4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸的合成
根据流程109步骤4和5，采用5-溴-1-甲基-1H-咪唑，获得4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z):313.1(MH+),0.3min。
4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸的合成
根据流程109步骤4和5，采用1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑，获得4-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z):313.4(MH+),0.44min。
4-(2-氨基-5-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸的合成
根据流程109步骤4和5，采用1-异丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑，获得4-(2-氨基-5-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z):341(MH+),0.56min。
实施例224
(S)-4-(3-氨基-6-(氧杂环丁烷-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺的合成
流程113
步骤1.4-(3-氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
向4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(400mg,1.227mmol)的DME(12mL)溶液中加入4,4,4',4',5,5,5'-七甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼杂环戊烷(589mg,2.453mmol)、乙酸钾(361mg,3.68mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2(100mg,0.123mmol)。向反应混合物中充入氮气，在微波中于120℃加热15min。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗品产物溶于乙醚中，超声20min。过滤黑色固体。向滤液中加入庚烷。过滤沉淀物并干燥，获得淡黄色固体(250mg,54.6％)。LCMS(m/z):292.2(MH+),0.47min(硼酸)。
步骤2.4-(3-氨基-6-(氧杂环丁烷-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
向4-(3-氨基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(150mg,0.402mmol)的DME(6mL)和碳酸钠(1.5mL,3.0mmol)溶液中加入3-碘氧杂环丁烷(370mg,2.01mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2(32.8mg,0.042mmol)。将反应混合物在微波中于100℃加热15min。将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗品产通过制备性HPLC纯化分离产物(13.5mg,11.0％)。LCMS(m/z):304.2(MH+),0.61min。
步骤3.4-(3-氨基-6-(氧杂环丁烷-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-氨基-6-(氧杂环丁烷-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(13mg,0.043mmol)的MeOH(1mL)和THF(2mL)溶液中加入LiOH(0.128mL,0.128mmol)。将反应混合物于室温下搅拌2h。将反应混合物调节至酸性(pH～3)，在旋转蒸发仪上蒸发溶剂。将粗品与甲苯共沸，直接进行下一步骤。LCMS(m/z):290.1(MH+),0.46min。
步骤4.(S)-4-(3-氨基-6-(氧杂环丁烷-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-羟基-1-苯基乙基)苯甲酰胺
向4-(3-氨基-6-(氧杂环丁烷-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸-粗品(10mg,0.035mmol)的DMF(1mL)溶液中加入(S)-2-氨基-2-苯基乙醇(14.22mg,0.104mmol)、DIEA(0.030mL,0.173mmol)、EDC(13.25mg,0.069mmol)和aza-HOBt(7.06mg,0.052mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。粗品通过制备性HPLC纯化，获得目标产物，为TFA盐(11.5％)。LCMS(m/z):409.2(MH+),0.597min；1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm7.92-7.82(m,2H)7.78-7.64(m,2H)7.48-7.32(m,5H)7.23-7.31-7.23(m,1H)5.28-5.17(m,1H)5.03-4.90(m,5H)4.47-4.34(m,1H)3.96-3.76(m,3H)。
实施例225、226和227
(+/-)-N-(2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙基)-4-(2-氨基-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酰胺的合成
流程114
根据流程82步骤1和2以及流程102步骤5和6，采用(+/-)-(2-氨基-2-(3-氯代苯基)乙基)氨基甲酸叔-丁基酯，获得(+/-)-N-(2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙基)-4-(2-氨基-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):479.3(MH+),0.54min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm8.16(m,2H),7.87(m,1H),7.47-7.18(m,7H),5.23(m,1H),4.58(bs,2H),3.88(s,3H),3.19(m,2H),2.36(s,3H)。外消旋混合物通过手性SFC拆分(ChiralPak5micAD柱,4.6×100(mm),5mL/min,EtOH+0.1％,DEA＝30％)。于Rt＝2.6min获得极性对映体(S)-N-(2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙基)-4-(2-氨基-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):479.1(MH+),0.57min。于Rt＝3.22min获得极性较低的对映体(R)-N-(2-氨基-1-(3-氯代苯基)乙基)-4-(2-氨基-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酰胺。LCMS(m/z):479.1(MH+),0.57min。绝对立体化学根据生物化学数据和对接模型指定。
4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-氘-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸的合成
流程115
步骤1.4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-氘-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
将4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸乙基酯(98mg,0.285mmol)的甲醇(1.903mL)和THF(0.952mL)溶液冷却至-78℃。向其中分次缓慢加入NaBD4(32.4mg,0.856mmol)。将反应混合物温热至室温1h。反应混合物采用NH4Cl溶液骤冷，然后采用Na2CO3溶液骤冷并搅拌1h。将反应混合物通过tOAc萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，获得粗品4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-氘-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(81.4mg,反式:顺式＝～4:1,82％)，其可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):347.1(MH+),0.61min(主要的，反式)和0.64min(cis)。
步骤2.4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-氘-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-氘-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(81mg,0.234mmol)的THF(1559μl,)和MeOH(780μl)溶液中加入LiOH(1M溶液)(421μl,0.421mmol)。将反应混合物于室温下搅拌1h。pH调节至5后，反应混合物用EtOAc萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，过滤并真空浓缩。粗品4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-氘-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(99％)无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):333.1(MH+),0.47min(主要产物,反式)和0.51min(顺式)。
(S)-2-氨基-2-氘-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇的合成
流程116
步骤1.(3-溴-5-氟苯基)-1,1-二-氘-甲醇
将3-溴-5-氟苯甲酸(5.3g,24.20mmol)溶于THF(81mL)。于0℃向其中加入LiAlD4(1.102g,29.0mmol)。将反应混合物于室温下搅拌过夜。将反应混合物冷却至0℃后，加入1.1mL水，随后加入1.1mL的15％NaOH和3.2mL水。将悬浮液于室温下搅拌2h，然后通过硅藻土过滤，于Et2O洗涤，将滤液浓缩，得到粗品产物，将其经快速色谱纯化(0－30％的EtOAc/庚烷)，得到(3-溴-5-氟苯基)-1,1-二-氘-甲醇，64％的收率。LCMS(m/z):232.0(MNa+),0.69min。
步骤2.3-溴-5-氟苯甲醛-d1
将(3-溴-5-氟苯基)-1,1-二-氘-甲醇(3.2g,15.4mmol)溶于DCM(51.5mL)，冷却至0℃。向反应混合物中加入Dess-Martin氧化剂(9.83g,23.18mmol)，将其于0℃搅拌3h。向混合物中加入饱和的Na2S2O3/NaHCO3(8:1)溶液，将其于室温下搅拌1h。然后将反应混合物用DCM萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，过滤并真空浓缩。粗品产物经快速色谱纯化，得到为白色固体的3-溴-5-氟苯甲醛-d1(2.6g,82％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm7.83(s,1H),7.57-7.50(m,2H)。
步骤3.(S)-2-氨基-2-氘-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇
根据流程74步骤4-9，采用3-溴-5-氟苯甲醛-d1，获得(S)-2-氨基-2-氘-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇，为HCl盐。LCMS(m/z):235.0/237.0(MH+),0.40min。
(R)-2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)-2,2-二-氘-乙醇盐酸盐的合成
流程117
步骤1.(R)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙酸
将(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)烯丙基)氨基甲酸叔-丁基酯(1.235g,3.74mmol)的CCl4(4mL)、乙腈(4mL)和水(6mL)溶液采用高碘酸钠(1.680g,7.85mmol)和RuCl3(16mg,0.075mmol)处理。1h后，反应完成。将反应物在乙酸乙酯和水之间分配。有机部分用盐水洗涤，然后通过硅藻土过滤并浓缩。将粗品再溶于苯，然后过滤并再次浓缩，获得粗品(R)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙酸(1.30g,99％的收率)，其可以直接使用。LCMS(m/z):348.2(MH+),0.52min。
步骤2.(R)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基-2,2-氘-乙基)氨基甲酸叔-丁基酯
于-10℃，将(R)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙酸(1.30g,3.73mmol)的DME(6mL)溶液采用N-甲基吗啉(0.431mL,3.92mmol)处理。5min后，将反应物采用氯代甲酸异丁基酯(0.515mL,3.92mmol)处理。再过5min后，将反应物过滤，滤饼用DME(4mL)洗涤。合并的有机部分采用NaBD4(0.251g,5.97mmol)的水(1mL)溶液处理。完成后，将反应物在乙酸乙酯和水之间分配。有机部分用盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥并浓缩。粗品产物通过制备性HPLC纯化，获得目标化合物,(R)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基-2,2-氘-乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(55mg,4.4％的收率)。LCMS(m/z):337.3(MH+),1.03min。
步骤3.(R)-2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)-2,2-二-氘-乙醇盐酸盐
将(R)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基-2,2-氘-乙基)氨基甲酸叔-丁基酯(46mg,0.137mmol)的4MHCl的二氧六环溶液(1368μl)搅拌过夜。真空除去挥发物。粗品产物无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):236/238(MH+),0.4min。
4-(3-氨基-6-(4-(羟基甲基)环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸的合成
流程118
步骤1.1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸乙基酯
将4-氧代环己烷甲酸乙基酯(15.01g,88.16mmol)与乙二醇(21mL,4.27equiv.)和对p-甲苯磺酸单水合物(0.2g,0.012equiv.)在无水甲苯(50mL)中混合，将混合物于室温下搅拌14h。将反应物用乙醚(200mL)稀释，用H2O(2×200mL)、饱和的碳酸氢钠(100mL)和盐水(80mL)洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩，得到18.15g的4-氧代环己烷甲酸乙基酯乙二醇缩酮(ethyleneketal)(96％的收率)。LCMS(m/z):214.8(MH+),0.74min。
步骤2.1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基甲醇
将LiAlH4(2.51g,66.3mmol)悬浮于THF(60mL)，然后在冰浴中冷却。向悬浮液中滴加溶于THF(40mL)的1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸乙基酯(11.357g,53.0mmol)，1h内将反应混合物逐渐温热至室温，此时LCMS显示SM完全还原。将反应混合物用乙醚(200mL)稀释，用2.5mL水、然后用5mL(10％NaOH)以及7.5mL水骤冷。向其中加入无水MgSO4，然后将其振摇30min，通过硅藻土过滤。将滤液真空浓缩，获得定量收率的目标产物。LCMS(m/z):173.1(MH+),0.41min。
步骤3.4-((苄基氧基)甲基)环己酮
将1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基甲醇(1.33g,7.72mmol)溶于DMF(14mL)，然后冷却至0℃。向溶液中分次加入NaH(0.402g,10.04mmol)，将混合物于10℃振摇1h，然后加入苄基溴(1.194mL,10.04mmol)，将混合物振摇72h。反应混合物用水骤冷，用乙醚萃取，将合并的有机萃取液干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，将粗品产物8-((苄基氧基)甲基)-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷溶于乙腈(35mL)和水(25mL)，采用3NHCl(13mL)处理，于室温下搅拌20min，此时LCMS显示需要的产物。反应混合物采用40mmolNaOH水溶液骤冷，然后用EtOAc萃取(200mL)，有机层用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，残留物经快速色谱纯化(0－50％的EtOAc/庚烷)，获得1.23g目标产物，为无色浆液(73％)。LCMS(m/z):329.2(MH+),1.33min。
步骤4.2-(4-((苄基氧基)甲基)环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷
将1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基甲醇(1.23g,5.63mmol)溶于THF(22.5mL)，冷却至-78℃。然后滴加LiHMDS(6.20mL,6.20mmol)，将混合物于此温度下搅拌1h，此时一次性加入1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲烷磺酰胺(2.214g,6.20mmol)，将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。第二天早上，将反应混合物用1.0MNaHSO4骤冷，真空蒸发溶剂。将残留物在NaOH/乙醚之间分配，分离有机层，用1.0MNaOH洗涤二次并干燥，然后用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，以定量收率获得目标产物4-((苄基氧基)甲基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯，其无需任何其它纯化可以直接用于下一步骤。将中间体4-((苄基氧基)甲基)环己-1-烯-1-基(1000mg,2.85mmol)、B2(PIN)2(1087mg,4.28mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(233mg,0.285mmol)和KOAc(560mg,5.71mmol)加至微波瓶中，然后加入二氧六环(9.5mL)。将混合物排空，充入氮气，然后微波加热至100℃22min。粗品混合物用乙醚和水稀释，分离有机层，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，残留物经快速色谱纯化(0－10％的EtOAc/庚烷)，获得目标产物(51％)。LCMS(m/z):219.2(MH+),0.88min。
步骤5.4-(3-氨基-6-(4-((苄基氧基)甲基)环己-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
将4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(343mg,1.051mmol)、2-(4-((苄基氧基)甲基)环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(414mg,1.261mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(86mg,0.105mmol)置于微波瓶中，然后加入DME(3.5mL)。然后加入2.0MNa2CO3(1261μL,2.52mmol)，将混合物脱气，充入氮气，于115℃加热30min，此时反应完全。将反应混合物采用EtOAc稀释，用水洗涤，分离有机层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，残留物经快速色谱纯化(0－100％的EtOAc/庚烷)，获得381mg目标产物，为黄色固体(81％)。LCMS(m/z):448.2(MH+),1.16min。
步骤6.4-(3-氨基-6-(4-(羟基甲基)环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
将4-(3-氨基-6-(4-((苄基氧基)甲基)环己-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(381mg,0.851mmol)溶于THF(5mL)，然后加入MeOH(15mL)，再加入Pd-C(10％湿)(550mg,0.517mmol)。将混合物置于真空下，充入氢气，将该循环重复三次，最后氢气环境过夜。14h后，LCMS显示烯烃饱和但是仅有部分苄基去保护，因此加入另一份Pd-C(10％湿)(700mg)，将混合物于室温下再搅拌5h，然后观察到苄基完全去保护。将反应混合物过滤并真空浓缩，获得215.6mg目标产物，为非对映体的混合物(顺式/反式不明)(70％)。LCMS(m/z):360.2(MH+),0.71,0.72min。
步骤7.(S)-4-(3-氨基-6-(4-(羟基甲基)环己基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯代苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
将4-(3-氨基-6-(4-(羟基甲基)环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(215.6mg,0.600mmol)溶于THF(3mL)，然后加入MeOH(3mL)，然后加入1.0MLiOH(2400μL,2.400mmol)。将反应混合物振摇过夜，第二天早上，LCMS显示需要的产物形成。真空浓缩反应混合物，然后与THF共沸二次(每次10mL)，然后采用1.5mL的4.0NHCl的二氧六环溶液酸化，真空浓缩。将残留物溶于DMSO(5mL)，将其直接用于下一步骤。LCMS(m/z):346.2(MH+),0.57,0.58min。
4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸的合成
流程119
步骤1.4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
将4-(3-氨基-6-(4-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(401.4mg,1.169mmol)悬浮于MeOH，冷却至0℃。向混合物中加入溶于MeOH(5mL)的NaBH4(133mg,3.51mmol)，将混合物逐渐温热至室温，搅拌30min，此时反应完成。反应混合物采用EtOAc、饱和的NaHCO3稀释，有机层用水洗涤二次，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，获得339.4mg目标产物(84％)。LCMS(m/z):346.2(MH+),0.63min。
步骤2.4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯
将含有4-(3-氨基-6-((1r,4r)-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(339.4mg,0.983mmol)的乙腈(3.2mL)溶液的烧瓶在冰/盐水浴中冷却至0℃，随后加入全氟丁烷磺酰氟(530μl,2.95mmol)，再加入三乙胺三氢氟酸盐(480μl,2.95mmol)和三乙胺(1233μl,8.84mmol)，将获得的反应混合物于0℃搅拌90min。此时，LCMS显示消除产物与需要产物的比例为2.5:1。将反应混合物用水骤冷，用EtOAc萃取，有机萃取液用水洗涤二次，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，获得粗品产物混合物，将其小心地经色谱纯化(0－60％EtOAc/庚烷)，获得67.5mg目标产物。(19.8％)。LCMS(m/z):348.2(MH+),0.86min。
步骤3.4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
将4-(3-氨基-6-((1s,4s)-4-氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(67.5mg,0.194mmol)溶于THF(1mL)和MeOH(1mL)，然后加入1.0MLiOH(0.777mL,0.777mmol)。将反应混合物于室温下振摇。1h后，LCMS显示需要的酸形成。LCMS(m/z):334.2(MH+),0.70min。
3-溴-5-((1r,4r)-4-氟环己基)吡嗪-2-胺的合成
流程120
步骤1.(1s,4s)-4-(5-氨基吡嗪-2-基)环己醇
将4-(5-氨基吡嗪-2-基)环己酮(1.049g,5.48mmol)溶于THF(10mL)，冷却至0℃。滴加L-Selectride(12.06mL,12.06mmol)，将混合物搅拌20min，此时反应完成。反应混合物采用5NNaOH(40mmol)骤冷，然后用MeOH(5mL)骤冷。反应混合物用2-甲基THF稀释，分离水层，有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，获得目标产物，顺式/反式比例为95:5，然后将其用乙醚研磨，获得586.3mg目标产物，为浅黄色沉淀物(55％)。LCMS(m/z):194.1(MH+),0.32min。
步骤2和3.3-溴-5-((1r,4r)-4-氟环己基)吡嗪-2-胺
根据流程119步骤2和3，获得3-溴-5-((1r,4r)-4-氟环己基)吡嗪-2-胺。LCMS(m/z):276.0(MH+),0.81min。
4-(3-氨基-6-(4-氰基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸的合成
根据流程118,步骤4-7，获得4-(3-氨基-6-(4-氰基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z):341.2(MH+),0.64,0.66min(trans,cis)。
表5.采用上述方法3制备的化合物
实施例453
4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺的合成
步骤1.4-(3-氨基-6-(3-氧代环戊-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
将4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(1g,2.72mmol)、环戊-2-烯酮(0.892g,10.86mmol)、N-环己基-N-甲基环己胺(1.061g,5.43mmol)、二(三-叔-丁基膦)钯(0)(0.069g,0.136mmol)、TBAC(0.075g,0.272mmol)在二氧六环(7mL)中的混合物于135℃微波加热25min。冷却后，将混合物浓缩，残留物用10mL的DCM稀释，超声5min，过滤，固体用3ml的DCM洗涤。合并的DCM溶液直接应用于ISCO硅胶柱分离(40g柱,10－90％的EtOAc庚烷)。获得400mg目标产物，为浅黄色固体。LCMS(m/z):(MH+)370.0,0.903min。1HNMR(400MHz,DMSO)δppm1.12-1.26(m,5H)1.55(s,10H)1.59-1.72(m,5H)2.41(dt,J＝5.09,2.15Hz,3H)2.48(dt,J＝3.62,1.91Hz,3H)3.00(dd,J＝5.09,2.35Hz,2H)3.30(s,3H)6.66(t,J＝1.76Hz,1H)7.09(s,H)7.55-7.69(m,H)7.83-7.95(m,1H)8.57(s,1H)。
步骤2:4-(3-氨基-6-(3-氧代环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯:
在搅拌下，向4-(3-氨基-6-(3-氧代环戊-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(650mg,1.760mmol)的MeOH(15mL)溶液中加入15mL的DCM直到获得澄清的溶液。向溶液中充入氮气5min，然后加入Pd/C(300mg,10％,Degussa类)，将获得的混合物通过氮气流脱气15min。配备氢气囊后，将反应混合物于室温下搅拌16h。将反应混合物过滤，浓缩滤液，粗品产物通过ISCO纯化(24g,硅胶,20-80％的EtOAc庚烷)，获得380mg目标产物，为浅黄色固体。58.1％的收率。LC-MS(m/z):(MH+)372.1,0.829min。
步骤3:(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯和(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3S)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯:
于-78℃，向4-(3-氨基-6-(3-氧代环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(200mg,0.538mmol)的MeOH(4mL)溶液中加入NaBH4(61.1mg,1.615mmol)。将反应混合物于-78℃搅拌1hr。于-78℃将反应混合物采用satNH4Cl(4mL)骤冷，移除冷浴，将混合物逐渐温热至室温，然后加入satNaHCO3溶液(4mL)。反应混合物用EtOAc萃取(30mL×2)。有机层用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。获得约210mg粗品产物。将粗品产物溶于4mL的DMSO中，过滤并通过制备性HPLC纯化。极性较大的化合物为反式(需要的，先洗脱出来)，极性较低的化合物为顺式，后洗脱出来。采用1NNaOH中和，获得反式和顺式化合物，为游离碱化合物。
(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯：40mg,19.9％的收率，反式。LC-MS(m/z):(MH+)374.1,0.81min,NMR(400MHz,CD3CN)δppm1.61(s,9H)1.69-1.82(m,1H)1.88-2.25(m,6H)2.59-2.77(m,1H)3.32-3.56(m,1H)4.31-4.48(m,1H)5.07(br.s.,2H)7.59(dd,J＝12.13,1.56Hz,1H)7.66(dd,J＝8.02,1.76Hz,1H)7.88-8.03(m,2H)。
(+/-)-4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯：150mg，74.6％的收率，顺式。LC-MS(m/z):(MH+)374.1,0.81min。1HNMR(400MHz,CD3CN)δppm:1.55-1.67(m,9H)1.69-1.89(m,2H)1.91-2.03(m,4H)2.05-2.13(m,1H)2.21-2.33(m,1H)3.21-3.41(m,1H)3.99(s,1H)4.20-4.34(m,1H)5.04-5.23(m,2H)7.50-7.58(m,1H)7.58-7.67(m,1H)7.90-8.05(m,2H)。
步骤4:4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯和4-(3-氨基-6-((1S,3S)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯:
两个反式异构体(共160mg)通过手性柱分离：OJ柱(21×250mm),SFC＝100ml/min,CO2/EtOH＝85/15，上样：70mg/7mlEtOH,274bar。获得80mg的各种对映体。
4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯:NMR(400MHz,DMSO)δppm:1.04(t,J＝6.85Hz,1H)1.47-1.73(m,11H)1.75-1.86(m,2H)1.89-2.18(m,2H)3.15(s,1H)3.30(s,4H)3.97-4.16(m,1H)4.19-4.39(m,1H)4.44-4.59(m,1H)6.10(s,2H)7.57(d,J＝12.13Hz,1H)7.63(dd,J＝8.02,1.76Hz,1H)7.77-8.01(m,2H)。
4-(3-氨基-6-((1S,3S)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯:NMR(400MHz,DMSO)δppm:1.04(t,J＝6.85Hz,1H)1.14-1.28(m,1H)1.50-1.57(m,10H)1.59-1.71(m,1H)1.75-1.87(m,2H)1.89-2.14(m,2H)3.15(s,1H)3.30(s,4H)4.18-4.37(m,1H)4.42-4.55(m,1H)6.10(s,2H)7.51-7.60(m,1H)7.63(dd,J＝8.02,1.76Hz,1H)7.81-7.95(m,2H)。
步骤5.4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
工艺：于室温下，向4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-羟基环戊基)-吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(7mg,0.019mmol)的DCM(2mL)溶液中加入TFA(0.361mL,4.69mmol)。将获得的溶液于室温下搅拌2h。浓缩溶液，通过高真空进一步浓缩，获得目标产物，为TFA盐，其可以直接用于下一步骤。(6mg,100％的收率)LC-MS(m/z):318.1(MH+),0.46min。
步骤6:4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺:
向(4-(3-氨基-6-((1R,3R)-3-羟基环戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸)(6mg,0.019mmol)、(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇(8.96mg,0.028mmol)、HOAt(5.15mg,0.038mmol)和EDC(7.25mg,0.038mmol)的DMF(1ml)混合物中加入DIEA(0.036mL,0.208mmol)。将获得的混合物于室温下搅拌过夜。混合物采用EtOAc稀释，用水(3次)和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得粗品产物，为浅黄色粘性液体。该粗品通过制备性HPLC纯化，获得为浅黄色固体的目标产物(6mg,45.2％的收率)，为TFA盐。LC-MS:(MH+)581.0at0.726min。1HNMR(400MHz,CD3CN)δppm1.56-1.82(m,2H)2.01-2.30(m,3H)3.47(t,J＝8.61Hz,1H)3.73-3.92(m,3H)4.32-4.45(m,2H)5.05-5.19(m,1H)7.16-7.27(m,1H)7.48(dt,J＝8.12,1.81Hz,1H)7.56-7.71(m,4H)7.74-7.81(m,1H)7.97(t,J＝7.83Hz,1H)。
实施例456
4-(3-氨基-6-((1S,4S)-3,3-二氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺的合成
步骤1:3-氧代环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯
在氮气环境中，于0℃(冰水浴)，向环己烷-1,3-二酮(8g,71.3mmol)的CH2Cl2(120mL)溶液中加入碳酸钠(8.32g,78mmol)。将获得的混合物于0℃搅拌10min。1小时内滴加三氟甲烷磺酸酐(12.05mL,71.3mmol)的35mLDCM溶液。将混合物于0℃搅拌1.5h。混合物通过烧结玻璃漏斗过滤，缓慢加入60mL饱和的NaHCO3溶液。分离有机层，用40ml盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得9g(52％的收率)目标产物，为浅黄色液体。LC-MS(m/z):(MH+)244.9,0.72min。
步骤2:3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)环己-2-烯酮,(3-氧代环己-1-烯-1-基)硼酸
向3-氧代环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯(9g,36.9mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼杂环戊烷)(14.04g,55.3mmol)、乙酸钾(10.85g,111mmol)和Pd(dppf)Cl2.DCM(0.808g,1.106mmol)在二氧六环(80mL)中的混合物中充入氮气5min，然后于90℃加热过夜。冷却后，过滤混合物，固体用3×20mL温二氧六环洗涤。浓缩合并的溶液直到剩下约70mL二氧六环。该产物(在二氧六环中)可以直接用于下一步骤。LCMS(m/z):MH+＝140.8(硼酸),0.284min。
步骤3:4-(3-氨基-6-(3-氧代环己-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
向250mLRB中加入3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)环己-2-烯酮(7.00g,31.5mmol)(在约70mL二氧六环中)、4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(5.8g,15.75mmol))、Pd(dppf)Cl2.DCM(0.576g,0.788mmol)，然后加入饱和的Na2CO3(25mL)。向获得的混合物中充入氮气15min。然后加入DME(10mL)。将混合物于100℃搅拌过夜。加入乙酸乙酯(150mL)和水(50mL)，将获得的混合物搅拌30min。分离有机部分，水层用乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得粗品产物，为粘性黑色半固体。将该固体溶于约30mL乙醚中，超声10min，过滤沉淀的黄色固体，用冷乙醚(5ml×3)洗涤，高真空干燥，获得为黄色固体的目标产物(3.1g,,51.3％)。LC-MS(m/z):(MH+)384.2,0.92min。
步骤4:4-(3-(二(叔-丁氧基羰基)氨基)-6-(3-氧代环己-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
于室温下，向4-(3-氨基-6-(3-氧代环己-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(3g,7.82mmol)的乙腈(25mL)悬浮液中加入DMAP(0.048g,0.391mmol)，随后加入Boc-酸酐(6.36mL,27.4mmol)。将获得的混合物于室温下搅拌25min。溶液采用EtOAc稀释，用satNaHCO3和水洗涤，干燥并浓缩。粗品产物通过ISCO分离纯化(80g,硅胶,30min,5-60％的EtOAc庚烷)。获得为浅黄色粘性液体的目标产物，将其静置过夜固化。(3.5g,6.00mmol,77％的收率)。LC-MS(m/z):(MH+)584.2,1.286min。1HNMR(400MHz,乙腈-d3)δppm0.91(s，1H)1.31(s,16H)1.61(s,7H)1.88-2.03(m,1H)2.16(s,2H)2.50(d,J＝7.04Hz,2H)2.85-3.09(m,2H)6.90(s,1H)7.51-7.71(m,2H)7.91-8.11(m,1H)8.92(s,1H)。
步骤5:4-(3-(二-(叔-丁氧基羰基)氨基)-6-(3-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
于室温下，向4-(3-(二(叔-丁氧基羰基)氨基)-6-(3-氧代环己-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(3g,5.14mmol)的MeOH(15mL)和DCM(10mL)溶液中加入Pd-C(10％,degauss,1.094g,1.028mmol)。向获得的混合物中充入氮气10min，然后于室温下、氮气环境中搅拌5小时。过滤悬浮液，浓缩溶液。经ISCO硅胶柱分离(80g,硅胶,30min,5－60％EtOAc的庚烷溶液)，获得为浅黄色粘性液体的目标产物，将其静置过夜固化。(1.485g,2.54mmol,49.3％的收率)。LC-MS(m/z):(MH+)586.3,1.17min。
步骤6:4-(6-((1S,4S)-4-(苯甲酰基氧基)-3-氧代环己基)-3-(二(叔-丁氧基羰基)氨基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯和4-(6-((1R,4R)-4-(苯甲酰基氧基)-3-氧代环己基)-3-(二(叔-丁氧基羰基)氨基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
A:游离碱催化剂的制备：将300mg的(S)-(6-甲氧基喹啉-4-基)((1S,2R,4S,5R)-5-乙烯基喹核碱-2-基)甲胺(三HCl盐)溶于20mL的DCM，然后采用1NNaOH(5mL)中和，分离有机层，用盐水(5ml×2)和水(5ml×2)洗涤，干燥，过滤并浓缩，获得为游离碱的产物。(200mg游离碱胺在4mL二氧六环中)。
B:向配备磁力搅拌棒的10mL微波瓶中加入4-(3-(二-(叔-丁氧基羰基)氨基)-6-(3-氧代环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(1.485g,2.54mmol)、BHT(丁基化的羟基甲苯,0.067g,0.304mmol)、(S)-(6-甲氧基喹啉-4-基)((1S,2R,4S,5R)-5-乙烯基奎核碱-2-基)甲胺(0.098g,0.304mmol)(在2mL二氧六环中)和三氯代乙酸(0.050g,0.304mmol)。然后加入二氧六环(1ml)，将获得的混合物搅拌5min，然后加入过氧苯甲酸酐(0.983g,4.06mmol)。将反应混合物于30℃搅拌16h。反应混合物用二氯甲烷稀释，采用饱和的NaHCO3水溶液处理，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩至约3mL的DCM。粗品(在3mLDCM中)通过ISCO快速柱色谱纯化，采用EtOAc庚烷溶液洗脱(10-45％的EtOAc庚烷溶液,120g,硅胶柱,35min)。对映体选择性在此阶段没有通过手性-相HPLC分析确定。所有可用的柱/方法均没有观察到分离。该产物可以直接用于下一步反应。(730mg,40.8％的收率)LC-MS(m/z):(MH+)706.3at1.38min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm1.26-1.41(m,19H)1.46-1.67(m,11H)2.08-2.22(m,1H)2.26-2.42(m,2H)2.50-2.67(m,1H)2.70-2.91(m,1H)3.08(s,1H)3.26-3.49(m,1H)4.03-4.19(m,1H)5.49-5.67(m,1H)7.26(d,J＝0.78Hz,2H)7.40-7.66(m,5H)7.97(t,J＝7.83Hz,1H)8.07-8.19(m,2H)8.41(s,1H)。
步骤7:4-(6-(4-(苯甲酰基氧基)-3,3-二氟环己基)-3-(二(叔-丁氧基羰基)氨基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯
于室温下，向4-(6-((1S,4S)-4-(苯甲酰基氧基)-3-氧代环己基)-3-(二(叔-丁氧基羰基)氨基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(730mg,1.034mmol)的DCM(7mL)溶液中加入XtalFlour-E(939mg,4.14mmol)，随后加入三乙胺三氢氟酸盐(0.674mL,4.14mmol)。将获得的混合物于室温下搅拌5小时。过滤混合物，滤液直接用于ISCO分离：24g,硅胶,0-70％的EtOAc庚烷溶液,30min。获得浅黄色固体(670mg,0.902mmol,87％的收率)。LC-MS(m/z):(MH+)728.0，于0.95min(非极性MS方法)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm0.88(s,2H)1.19-1.39(m,21H)1.48-1.68(m,11H)1.86-2.08(m,2H)2.08-2.21(m,1H)2.26-2.47(m,2H)2.47-2.63(m,1H)3.21-3.44(m,1H)5.22-5.51(m,1H)7.41-7.55(m,4H)7.60(s,1H)7.96(d,J＝7.82Hz,1H)8.06-8.19(m,2H)8.42(s,1H)。
步骤8:4-(3-氨基-6-(4-(苯甲酰基氧基)-3,3-二氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
于室温下，向4-(6-(4-(苯甲酰基氧基)-3,3-二氟环己基)-3-(二(叔-丁氧基羰基)氨基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸叔-丁基酯(670mg,0.921mmol)的DCM(12mL)溶液中加入TFA(4.96mL,64.4mmol)。将获得的混合物于室温下搅拌2小时。浓缩混合物，采用EtOAc稀释，采用NaHCO3中和二次，然后用盐水洗涤，分离有机层，干燥并浓缩，获得粗品产物，其可以直接用于下一步骤。(434mg,0.921mmol,100％的收率)。LC-MS(m/z):(MH+)472.1,0.942min。1HNMR(400MHz,DMSO)δppm:1.07(t,J＝7.04Hz,2H)1.83(t,J＝10.17Hz,2H)2.16(d,J＝5.09Hz,1H)2.29-2.45(m,2H)3.02(br.s.,1H)3.16-3.44(m,9H)5.22-5.52(m,1H)5.73(s,1H)6.24(s,2H)7.44-7.75(m,5H)7.89(t,J＝7.83Hz,1H)7.94-8.07(m,3H)。
步骤9:4-(5-氨基-6-(3-氟-4-(((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)苯基)吡嗪-2-基)-2,2-二氟环己基苯甲酸酯、4-(5-氨基-6-(3-氟-4-(((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)苯基)吡嗪-2-基)-2,2-二氟环己基苯甲酸酯
向4-(3-氨基-6-(4-(苯甲酰基氧基)-3,3-二氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(434mg,0.92mmol)、(4-(3-氨基-6-((4R)-4-(苯甲酰基氧基)-3,3-二氟环己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸)、(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇(320mg,1.012mmol)、HOAt(250mg,1.840mmol)和EDC(353mg,1.840mmol)的DMF(5mL)混合物中加入DIEA(1.607mL,9.20mmol)。将获得的混合物于室温下搅拌过夜。混合物采用EtOAc稀释，用水(3次)和盐水洗涤，干燥，浓缩，获得为浅黄色粘性液体的粗品产物。
通过ISCO纯化(24g,根据,10-80％的EtOAc庚烷,35min)后，获得为浅黄色液体的目标产物，其含有两种可能的异构体。(601mg,0.818mmol,89％的收率)。LC-MS(m/z):(MH+)735.0，1.09min。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm1.71(br.s.,1H)1.80-2.00(m,2H)2.18-2.39(m,2H)2.39-2.52(m,1H)2.53-2.70(m,1H)3.13(br.s.,1H)3.82-4.07(m,2H)4.78(s,2H)5.23(d,J＝5.09Hz,2H)7.02-7.16(m,1H)7.31-7.39(m,1H)7.41-7.50(m,2H)7.50-7.76(m,5H)7.87-8.03(m,2H)8.07-8.23(m,3H)。
步骤10:4-(3-氨基-6-(3,3-二氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺
于室温下，向4-(5-氨基-6-(3-氟-4-(((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)苯基)吡嗪-2-基)-2,2-二氟环己基苯甲酸酯(600mg,0.817mmol)的MeOH(8mL)、THF(8mL)和水(8mL)溶液中加入LiOH.H2O(206mg,4.90mmol)。将获得的混合物于25搅拌2小时。将反应混合物浓缩，向残留物中加入30mLEtOAc，用水洗涤(10mL×3)，干燥，过滤并浓缩，获得为浅黄色粘性液体的粗品产物，放置过夜后其变为类白色固体。(515mg,100％的收率)。LC-MS(m/z):(MH+)631.1，0.771min。
步骤11:4-(3-氨基-6-((1S,4S)-3,3-二氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺
将获自步骤10的化合物通过手性分离柱纯化(OJ柱(21×250mm),SFC＝100ml/min,CO2/EtOH＝85/15,上样：70mg/7mlEtOH,274bar)，获得两种手性纯化合物：4-(3-氨基-6-((1S,4S)-3,3-二氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺(255mg,27.8％的收率)。1HNMR(400MHz,DMSO)δppm1.46-1.69(m,2H)1.71-2.26(m,4H)2.79-3.02(m,1H)3.58-3.83(m,2H)4.94-5.15(m,2H)5.25-5.45(m,1H)6.11-6.26(m,1H)7.19-7.34(m,1H)7.46-7.56(m,1H)7.56-7.66(m,2H)7.66-7.77(m,1H)7.95(s,1H)8.66-8.79(m,1H)。
4-(3-氨基-6-((1R,4R)-3,3-二氟-4-羟基环己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺(53mg,5.77％的收率)。1HNMR(400MHz,DMSO)δppm1.15-1.30(m,1H)1.48-1.69(m,2H)1.72-2.25(m,5H)2.77-2.97(m,2H)3.57-3.84(m,3H)4.92-5.14(m,2H)5.27-5.42(m,1H)6.10-6.24(m,2H)7.16-7.34(m,1H)7.46-7.57(m,1H)7.57-7.67(m,2H)7.67-7.77(m,1H)7.95(s,1H)8.63-8.80(m,1H)。
实施例473
(S)-4-(3-氨基-6-(吗啉-4-羰基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺的合成
步骤1:5-氨基-6-溴吡嗪-2-甲酸乙基酯
于室温下，向5-氨基吡嗪-2-甲酸乙基酯(880mg,5.26mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入NBS(984mg,5.53mmol)，将获得的溶液于室温下搅拌1小时。反应混合物采用EtOAc稀释，用satNaHCO3、盐水和水洗涤，干燥，过滤并浓缩，获得粗品产物，将其通过ISCO纯化(24g,硅胶柱,0-50％的EtOAc庚烷洗脱,30min)。1.01g,78％的收率。LC-MS(m/z):247.9(MH+),0.51min。
步骤2:5-氨基-6-(4-(叔-丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-甲酸乙基酯
将5-氨基-6-溴吡嗪-2-甲酸乙基酯(210mg,0.853mmol)、2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸叔-丁基酯(357mg,1.109mmol)、PdCl2(dppf)。CH2Cl2加合物(69.7mg,0.085mmol)和Na2CO3(362mg,3.41mmol)(2M的溶液)的DME(5mL)混合物置于20mL瓶中，密封。将混合物于110℃微波加热15min。混合物采用EtOAc稀释，用水(2次)和盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩，获得粗品，为浅黄色固体。粗品产物通过ISCO纯化(12g,10-55％的EtOAc庚烷,30min)，获得228mg(74％的收率)浅黄色固体。LC-MS(m/z):362.1(MH+),0.89min。
步骤3:4-(3-氨基-6-(乙氧基羰基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
于室温下，向5-氨基-6-(4-(叔-丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-甲酸乙基酯(0.253g,0.7mmol)的DCM(4mL)溶液中加入TFA(2.157mL,28.0mmol)。将获得的溶液于室温下搅拌2小时。浓缩反应溶液，干燥，获得粗品目标产物，为TFA盐。该产物可以直接用于下一步反应。获得0.214g(100％的收率)轻微粘性液体。LC-MS(m/z):306.1(MH+),0.563min。
步骤4:(S)-5-氨基-6-(4-((1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-甲酸乙基酯
向4-(3-氨基-6-(乙氧基羰基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(0.214g,0.7mmol)、(S)-2-氨基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇(272mg,1.009mmol)、HOAt(187mg,1.376mmol)和EDC(264mg,1.376mmol)的DMF(2.5mL)混合物中加入DIEA(0.961mL,5.50mmol)。将获得的混合物于室温下搅拌过夜。混合物采用EtOAc稀释，用水(3次)和盐水洗涤，干燥，浓缩，获得粗品产物，为浅黄色粘性液体。通过ISCO纯化(12g,硅胶,10－90％的EtOAc庚烷,30min)获得目标产物(200mg,84％的收率)，为浅黄色液体。LC-MS(m/z):522.9(MH+),0.787min。
步骤5:(S)-5-氨基-6-(4-((1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-甲酸
将(S)-5-氨基-6-(4-((1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-甲酸乙基酯(220mg,0.422mmol)和LiOH.H2O(142mg,3.38mmol)的MeOH(2ml)、THF(2mL)和水(2mL)混合物于室温下搅拌3小时。浓缩混合物，向残留物中加入2ml水，然后搅拌下加入3NHCl直到最终pH约为4。然后将获得的混合物浓缩，干燥，获得为浅黄色固体的粗品产物。(208mg,0.422mmol,100％的收率)。LC-MS(m/z):494.9(MH+),0.653min。
步骤6:(S)-4-(3-氨基-6-(吗啉-4-羰基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)-2-氟苯甲酰胺
向(S)-5-氨基-6-(4-((1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羟基乙基)氨基甲酰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-甲酸(40mg,0.081mmol)、吗啉(28.3mg,0.324mmol)、HOAt(33.1mg,0.243mmol)和EDC(46.6mg,0.243mmol)的DMF(0.5mL)混合物中加入DIEA(0.170mL,0.973mmol)。将获得的混合物于室温下搅拌过夜。混合物采用EtOAc稀释，用水(3次)和盐水洗涤，干燥，浓缩，获得为浅黄色粘性液体的粗品产物。将粗品产物溶于1.5mLDMSO中，过滤并通过制备性HPLC纯化。(14mg,25.3％的收率)。LC-MS(m/z):563.9(MH+),0.707min。1HNMR(500MHz,乙腈-d3)δppm3.56-3.99(m,13H)5.06-5.23(m,1H)5.78-6.13(m,2H)7.22(d,J＝8.20Hz,1H)7.27-7.36(m,1H)7.41-7.79(m,5H)7.89-8.05(m,1H)8.25-8.43(m,1H)。
实施例478a和478b
4-(3-氨基-6-((R)-6-氧代哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺(实施例478a)和4-(3-氨基-6-((S)-6-氧代哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺(实施例478b)。
1-(4-甲氧基苄基)哌啶-2,6-二酮:
将戊二酰亚胺(5g,44.2mmol)悬浮于丙酮(体积：100mL)，然后加入K2CO3(12.22g,88mmol)、Bu4NI(3.27g,8.84mmol)和4-甲氧基苄基氯(6.02mL,44.2mmol)。将混合物于室温下搅拌过夜，通过硅藻土过滤，然后真空浓缩，残留物经快速色谱纯化(0-50％的EtOAc/庚烷)，获得8.99g目标产物，为无色固体。LCMS(m/z):(MH+),234.2,0.66min。
1-(4-甲氧基苄基)-3,4-二氢吡啶-2(1H)-酮:
将1-(4-甲氧基苄基)哌啶-2,6-二酮(8.99g,38.5mmol)溶于甲苯(体积：128mL)，冷却至-78℃。滴加L-Selectride(42.4mL,42.4mmol)，将混合物振摇1h。1h后，观察到形成稠厚浆液以及沉淀。将反应混合物短暂地移出冷浴以均化混合物。然后一次性加入DMAP(0.047g,0.385mmol)，再加入DIEA(38.4mL,220mmol)，随后加入TFAA(6.53mL,46.2mmol)。移除冷却的烧瓶。将混合物于室温下搅拌2h，然后用水骤冷，用EtOAc萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4),过滤并真空浓缩，获得粗品残留物，将其经快速色谱纯化，获得7.66g目标产物，为黄色浆液。LCMS(m/z):(MH+),234.2,0.73min。
5-碘-1-(4-甲氧基苄基)-3,4-二氢吡啶-2(1H)-酮:
将1-(4-甲氧基苄基)-3,4-二氢吡啶-2(1H)-酮(2g,9.21mmol)溶于MeOH(90mL)，冷却至-78℃。缓慢加入ICl(13.81mL,13.81mmol)，将混合物振摇1h，然后加入Sat'dNa2S2O3，将混合物振摇直到达到室温。真空蒸发溶剂。将残留物溶于DCM，用Sat'dNa2S2O3洗涤，然后用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩。将残留物溶于甲苯(40mL)，采用三氟乙酸(100uL)处理，立即加热至145℃15min，然后冷却至0℃，加入ET3N(5mL)。将混合物振摇1h并真空浓缩，然后将残留物经快速色谱纯化(0-20％的EtOAc/庚烷)，获得目标产物，为胶状浆液。LCMS(m/z):(MH+),344.1,0.88min。
4-(3-氨基-6-(1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-1,4,5,6-四氢吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯:
将5-碘-1-(4-甲氧基苄基)-3,4-二氢吡啶-2(1H)-酮(630mg,1.836mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(150mg,0.184mmol)、4-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(1028mg,2.75mmol)和Na2CO3(2754μl,5.51mmol)在烧瓶中混合，然后加入DME(体积：6120μl)。将混合物脱气，充入氮气，最后于90℃加热2h，此时观察到原料完全消耗。将反应混合物采用EtOAc、水稀释，分离有机层，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，残留物经快速色谱纯化(0-60％的EtOAc/DCM)，获得361mg目标产物，为黄色固体。LCMS(m/z):(MH+),463.1,0.88min。
4-(3-氨基-6-(6-氧代哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯:
4-(3-氨基-6-(1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-1,4,5,6-四氢吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(361mg,0.781mmol)溶于MeOH(体积：7mL)，然后加入Pd-C(400mg,3.76mmol)。将混合物排空，充入氮气三次，最后将混合物在1atm氢气环境中振摇过夜。第二天早上，获得需要的产物以及过度还原的氨基-吡嗪。将混合物通过硅藻土过滤，真空浓缩滤液，将残留物溶于DCM，在空气中振摇1天，然后浓缩，经快速色谱纯化(0-50％的DCM/EtOAc)，获得144mg目标产物，为黄色固体。LCMS(m/z):(MH+),465.1,0.81min。
4-(3-氨基-6-(6-氧代哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸:
将4-(3-氨基-6-(6-氧代哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲基酯(144mg,0.310mmol)溶于TFA(体积：3mL)，在微波中于150℃加热30min。真空蒸发溶剂，将残留物与甲苯一起共沸三次，获得粗品去苄基化的内酰胺。将该粗品产物溶于THF(体积：3mL，比例：3)和MeOH(体积：1.500mL,比例：1.5)，向混合物中加入溶于水(体积：1.500mL,比例：1.5)的LiOH(0.037g,1.550mmol)。将混合物于室温下搅拌30min并真空浓缩，残留物采用2mL(4.0NHCl)中和，蒸发溶剂。残留物与THF一起共沸一次，与甲苯共沸一次，获得粗品酸，其可以直接用于下一步骤(推定定量收率)，无需进一步纯化。LCMS(m/z):(MH+),331.2,0.44min。
4-(3-氨基-6-(6-氧代哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺:
将4-(3-氨基-6-(6-氧代哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(41.0mg,0.124mmol)、DIEA(0.108mL,0.620mmol)和HATU(94mg,0.248mmol)在DMF(1.0mL)中混合，然后加入(S)-2-氨基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇(39.4mg,0.124mmol)。将混合物于室温下搅拌1h，然后通过反相HPLC直接纯化，获得目标化合物，为TFA加合物。将冷冻干燥后获得的固体溶于MeOH，通过含有碱性碳酸盐的硅胶短柱过滤，将滤液真空浓缩，获得28.5mg非对映异构体的混合物。残留物通过手性SFC纯化，获得两种非对映异构体：
非对映体1(实施例478a)：4-(3-氨基-6-((R)-6-氧代哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺(8.8mg)。1HNMR(CD3OD):7.88(s,1H),7.75(t,J＝7.8Hz,1H),7.48-7.64(m,3H),7.34(d,J＝7.4Hz,1H),7.11(d,J＝9.8Hz,1H),5.05(t,J＝5.7Hz,1H),3.67-3.83(m,2H),3.43(d,J＝7.8Hz,2H),3.00-3.15(m,1H),2.28-2.46(m,2H),1.88-2.16(m,2H)；LCMS(m/z):(MH+),594.1,0.71min。
非对映体2(实施例478b)：4-(3-氨基-6-((R)-6-氧代哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羟基乙基)苯甲酰胺(8.2mg)1HNMR(CD3OD):7.89(s,1H),7.75(t,J＝7.6Hz,1H),7.50-7.65(m,3H),7.35(d,J＝7.8Hz,1H),7.12(d,J＝9.8Hz,1H),5.06(t,J＝5.7Hz,1H),3.65-3.89(m,2H),3.37-3.53(m,2H),2.96-3.16(m,1H),2.31-2.59(m,2H),1.88-2.20(m,2H)；LCMS(m/z):(MH+),594.1,0.71min。
生物学活性
采用下列方法测定ERK1和ERK2的抑制。
激活的ERK2(20pM)激酶分析：
采用激酶分析测定化合物对抗激活的ERK2的效能，所述激酶分析能够测定ERK2-催化的生物素化的ERKtide肽底物([Biotin]-AHA-K-R-E-L-V-E-P-L-T-P-S-G-E-A-P-N-Q-A-L-L-R-[NH2]，该肽序列源自EGF受体：SEQIDNO:1)的磷酰基化。该分析在20mMHEPES[pH7.5]、5mMMgCl2、1mMDTT、0.01％Tween-20、0.05％BSA中采用0.02nMERK2、400nMERKtide肽和35μMATP(所有浓度均为反应中的最终浓度)进行，总体积为10.25μL。采用41×终浓度的16-点位、半对数稀释系列的化合物生成IC50曲线。化合物稀释系列在100％DMSO中制备。将ERK2与化合物在室温下一起预温育30分钟。通过加入ERKtide肽和ATP的底物混合物启动反应，于室温下进行4小时。通过加入10μL的2×终止缓冲液终止反应，所述缓冲液包含100mMTris-Cl[pH7.5]、25mMEDTA、0.01％Tween20、20μg/mLAlphaScreen蛋白A受体珠(ProteinAAcceptorBeads)、20μg/mL链霉亲和素供体珠(PerkinElmer,Waltham,MA)和1:1000稀释度的磷-EGF受体(Thr669)抗体(Cat#8808,CellSignalingTechnology,Danvers,MA)。在黑暗中温育过夜后，采用EnVision多功能读板仪(PerkinElmer,Waltham,MA)读取终止的反应物，激发和放射波长分别设定为680nm和570nm。IC50值采用四-参数拟合确定。
对于下表中的某些化合物，采用下列分析条件(ERK2New)，获得了与上述分析基本类似的IC50s，IC50为约0.1μM或更高。当达到该分析的限度时，可以采用上述分析。
采用激酶分析测定化合物对抗激活的ERK2的效能，所述激酶分析能够测定ERK2-催化的生物素化的ERKtide肽底物([Biotin]-AHA-K-R-E-L-V-E-P-L-T-P-S-G-E-A-P-N-Q-A-L-L-R-[NH2]，该肽序列源自EGF受体：SEQIDNO:1)的磷酰基化。该分析在50mMHEPES[pH7.5]、5mMMgCl2、1mMDTT、0.01％Tween-20、0.05％BSA中采用0.25nMERK2、200nMERKtide肽和35μMATP(所有浓度均为反应中的最终浓度)进行，总体积为10.25μL。采用41×终浓度的16-点位、半对数稀释系列的化合物生成IC50曲线。化合物稀释系列在100％DMSO中制备。将ERK2与化合物在室温下一起预温育30分钟。通过加入ERKtide肽和ATP的底物混合物启动反应，于室温下进行2－3小时。通过加入10μL的2×终止缓冲液终止反应，所述缓冲液包含100mMTris-Cl[pH7.5]、25mMEDTA、0.01％Tween20、10μg/mLAlphaScreen蛋白A受体珠、10μg/mL链霉亲和素供体珠(PerkinElmer,Waltham,MA)和1.4μg/mL磷-EGF受体(Thr669)抗体(Cat#3056,CellSignalingTechnology,Danvers,MA)。在黑暗中温育过夜后，采用EnVision多功能读板仪(PerkinElmer,Waltham,MA)读取终止的反应物，激发和放射波长分别设定为680nm和570nm。IC50值采用四-参数拟合确定。
激活的ERK1激酶分析：
采用激酶分析测定化合物对抗激活的ERK1的效能，所述激酶分析能够测定ERK1-催化的生物素化的ERKtide肽底物(([Biotin]-AHA-K-R-E-L-V-E-P-L-T-P-S-G-E-A-P-N-Q-A-L-L-R-[NH2],，该肽序列源自EGF受体：SEQIDNO:1)的磷酰基化。该分析在20mMHEPES[pH7.5]、5mMMgCl2、1mMDTT、0.01％Tween-20、0.05％BSA中采用0.2nMERK1、200nMERKtide肽和45μMATP(所有浓度均为反应中的最终浓度)进行，总体积为10.25μL。采用41×终浓度的16-点位、半对数稀释系列的化合物生成IC50曲线。化合物稀释系列在100％DMSO中制备。将ERK1与化合物在室温下一起预温育30分钟。通过加入ERKtide肽和ATP的底物混合物启动反应，于室温下进行4小时。通过加入10μL的2×终止缓冲液终止反应，所述缓冲液包含100mMTris-Cl[pH7.5]、25mMEDTA、0.01％Tween20、10μg/mLAlphaScreen蛋白A受体珠、10μg/mL链霉亲和素供体珠(PerkinElmer,Waltham,MA)和1.4μg/mL磷-EGF受体(Thr669)抗体(Cat#3056,CellSignalingTechnology,Danvers,MA)。在黑暗中温育过夜后，采用EnVision多功能读板仪(PerkinElmer,Waltham,MA)读取终止的反应物，激发和放射波长分别设定为680nm和570nm。IC50值采用四-参数拟合确定。
所有IC50s均以科学计数法表示，其中‘E’表示10的幂值(thepowerof10)；例如，1.63E-03代表1.63×10-3或0.00163。

Claims (30)

1.式(I)化合物或者可药用的盐：
其中：
R1为选自下列的任选取代的基团：C3-8环烷基、含有1－2个选自N、O和S的作为环成员的杂原子的5－8元杂环基、苯基、-SO2-苯基、-C(O)-苯基、-C(R8)2-苯基和5－6元杂芳基环，其中所述杂环基和杂芳基含有1－2个选自N、O和S的作为环成员的杂原子，
并且其中R1的任选的取代基为1－3个独立选自下列的基团：D、卤素、羟基、氨基、-N(R8)2、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-S(C1-4烷基)、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、C3-6环烷基、含有1－2个选自N、O和S的杂原子的3－6元杂环基、氧代(除了芳族环上的)、CN、COOR8、CON(R8)2、-NR8-C(O)R8、-NR8-C(O)OR8-SO2R8、-NR8SO2R8和SO2N(R8)2，其中每个R8独立为H或C1-4烷基；
L为键，或者L可以为C1-4亚烷基、C2-4亚链烯基、C1-4亚炔基、C3-6环烷基或含有1－2个选自N、O和S的作为环成员的杂原子的4－7元杂环基，其中L任选被1－3个独立选自下列的基团取代：R11、D、OH、NH2、-NHR11、-NHC(＝O)R11、-NHC(＝O)-OR11、-NHC(＝O)-NH2、-NHC(＝O)-NHR11、-N(R11)2、CN、卤素、N3、CON(R7)2和COOR7；其中每个R11独立为C1-4烷基，其可以被至多三个选自下列的基团取代：D、卤素、OH、NH2、-NHMe、-NMe2、-OP(O)(OH)2和O-C1-4烷基；
X和Y独立选自：H、D、卤素、CN、氨基、羟基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷氧基；
R2为H、C1-4烷基或芳基-C1-2-烷基-，其中所述芳基和C1-4烷基任选被卤素、CN、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基或C1-4烷基磺酰基取代；
或者R2可以与X环化形成含有1－2个选自N、O和S的杂原子的5－7元杂环，其与X连接的苯基环稠合，
或者R2可以与L环化形成含有1－2个选自N、O和S的杂原子的5－7元杂环，
其中通过R2与X环化或通过R2与L环化形成的任选的杂环可以任选被1或2个独立选自下列的基团取代：CN、卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、氧代、CN、COOR7、CON(R7)2和-SO2R7；
每个R7独立为H或C1-4烷基；
Z为N或CR4；
R4为H、D、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基或C1-4烷氧基；
R5选自–C(O)-R5a和R5a；其中R5a为任选取代的C3-8环烷基、C3-8环烯基、饱和的或不饱和的含有1－2个选自N、O和S的杂原子的3－8元杂环、苯基或含有1－3个选自N、O和S的杂原子的5－6元杂芳基环，其中R5的任选的取代基为1－4个独立选自下列的基团；D、卤素、羟基、氨基、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4卤代烷氧基、C3-6环烷基、含有1－2个选自N、O和S的杂原子的3－6元杂环基、氧代(除了芳族环上的)、CN、-COOR9、-C(O)R9、CON(R9)2、-NR9C(O)R9、-NR9CO2R9、-SO2R9、-NR9SO2R9和-SO2N(R9)2，其中每个R9独立为H或C1-4烷基，其任选被1－3个独立选自下列的基团取代：D、卤素、OH、NH2、NHMe和NMe2；R5的相同或相邻碳原子上的两个取代基可以任选一起形成5－6元环，其可以是饱和的或芳族并且含有1－2个选自N、O和S的杂原子，可以任选被1－2个独立选自下列的基团取代：D、Me、卤素、OH、氧代、O(C1-4烷基)、NH2、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基；并且
R6为H、D、卤素、C1-4烷基或C1-4卤代烷基。
2.权利要求1的化合物或其可药用的盐，其中Z为N。
3.权利要求1的化合物或其可药用的盐，其中Z为CH。
4.权利要求1－3中任一项的化合物或其可药用的盐，其中R2为H或Me。
5.权利要求1－4中任一项的化合物或其可药用的盐，其中R6为H。
6.权利要求1－5中任一项的化合物或其可药用的盐，其中R5选自–C(O)-R5a和R5a；其中R5a选自C3-8环烷基、含有1－2个选自N、O和S的杂原子的5－8元杂环基、苯基和5－6元杂芳基，任选被1－3个独立选自下列的基团取代：D、卤素、CN、羟基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4卤代烷氧基、-SO2R’、-N(R’)2、-NR’-C(O)-R’和–SO2NR’2。其中每个R’独立为H或C1-4烷基。
7.权利要求1－6中任一项的化合物或其可药用的盐，其中R5选自–C(O)-R5a和R5a；其中R5a选自苯基、吡啶、吡啶酮、吡嗪、哒嗪、吡唑、三唑、四唑、噻唑、噁唑、咪唑、异噻唑、异噁唑、呋喃和噻吩，它们每一个任选被1或2个独立选自下列的基团取代：卤素、D、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4卤代烷氧基、CN、COOR9、CON(R9)2和-SO2R9，其中每个R9独立为H或C1-4烷基。
8.权利要求3的化合物或其可药用的盐，其中R5选自–C(O)-R5a和R5a；其中R5a为含有至少一个作为环成员的N的C5-6杂芳基，任选被1－2个独立选自下列的基团取代：卤素、CN、C1-4烷基、C1-4羟基烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷氧基。
9.权利要求8的化合物或其可药用的盐，其中R5选自–C(O)-R5a和R5a；其中R5a为吡唑或三唑，任选被1－2个独立选自下列的基团取代：卤素、CN、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4烷氧基和C1-4卤代烷氧基。
10.权利要求1－6中任一项的化合物，其中R5选自–C(O)-R5a和R5a；其中R5a选自环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、四氢吡喃、二氢吡喃、四氢呋喃、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、四氢噻喃(硫杂环己烷)和四氢硫代呋喃(硫杂环戊烷)，它们每一个任选被1－3个独立选自下列的基团取代：卤素、D、CN、N(R9)2、羟基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4卤代烷氧基、氧代、CN、COOR9、CON(R9)2、-NHC(O)R9、-NHCOOR9、-NHSO2R9和-SO2R9，其中每个R9独立为H或C1-4烷基。
11.权利要求1－10中任一项的化合物，其中R1为苯基并任选被1－3个独立选自下列的基团取代：卤素、D、CN、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、SR’、-SO2R’、-N(R’)2、-NR’-C(O)-R’和–SO2NR’2，其中每个R’独立为H、C1-4烷基或C1-4卤代烷基。
12.权利要求1－10中任一项的化合物，其中R1为噻吩、噻唑、吡啶、嘧啶、吡嗪或哒嗪，任选被至多三个独立选自下列的基团取代：卤素、CN、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、-SO2R’、-N(R’)2、-NR’-C(O)-R’和–SO2NR’2，其中每个R’独立为H或C1-4烷基。
13.权利要求1－12中任一项的化合物或其可药用的盐，其中L选自下列基团：环丙烷-1,1-二基、环丙烷-1,2-二基和–CHR”-，其中R”为H、D或C1-2烷基，任选被至多三个独立选自下列的基团取代：D、羟基、卤素、氨基、C1-2烷基氨基、二(C1-2烷基)氨基和C1-2烷氧基。
14.权利要求13的化合物，其中L为
其中R”为甲基或乙基，任选被下列基团取代：氟、氨基、羟基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、-OP(O)(OH)2、甲氧基或乙氧基。
15.权利要求1－14中任一项的化合物或其可药用的盐，其中R2和L连接到一起形成选自吗啉、哌啶、硫代吗啉、哌嗪和吡咯烷的杂环基团，其与R1连接，任选被1或2个独立选自下列的基团取代：C1-4烷基、C1-4烷氧基、氧代、CN、COOR7、CON(R7)2和-SO2R7，其中每个R7独立为H或C1-4烷基。
16.权利要求1－15中任一项的化合物，其中Y为H、甲基或卤素。
17.权利要求1－16中任一项的化合物，其中X为H，或者R2与X环化形成与苯基环稠合的5－7元杂环，所述苯基环与X连接。
18.权利要求1的化合物，其为式IA化合物：
其中R5为吡唑、咪唑、异噁唑、异噻唑、噁唑、三唑或噻唑，其可以被至多2个独立选自下列的基团取代：D、F、Cl、CN、Me、OMe、Et、iPr、OEt和CF3；
Y为H、F、Cl或Me；
R10为H或–CH2-R*，其中R*为H、-OH、F、-NH2、-NHMe、-NMe2、-OP(O)(OH)2或–OMe；并且
R1为苯基或噻吩基，任选被1－2个独立选自下列的基团取代：卤素、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、CN、COOR8、CON(R8)2、-SMe和-SO2R8，其中每个R8独立为H或C1-4烷基；
或者其可药用的盐。
19.权利要求1的化合物，其为式IB化合物：
其中R5为4－7元环醚或C5-6环烷基，R5可以被至多4个独立选自下列的基团取代：D、F、Cl、CN、氨基、NHMe、NMe2、-CH2OH、-NHC(O)Me、-NHCOOMe、-NHSO2Me、MeEt、OMe、OH、氧代、Et、iPr、OEt、CN和CF3；
Y为H、F、Cl或Me；
R10为H或–CH2-R*，其中每个R*为H、-OH、F、-NH2、-NHMe、-OP(O)(OH)2、-NMe2或–OMe；并且
R1为苯基，任选被1－2个独立选自下列的基团取代：卤素、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代烷氧基、CN、COOR8、CON(R8)2和-SO2R8，其中每个R8独立为H或C1-4烷基；
或者其可药用的盐。
20.权利要求1－16或19中任一项的化合物，其中R5为环己基，其任选被1－3个独立选自下列的基团取代：D、F、Cl、CN、氨基、NHMe、NMe2、Me、NHSO2Me、NHCOMe、OMe、OH、Et、CN、-CH2OH和CF3。
21.权利要求1－16或19中任一项的化合物，其中R5为四氢吡喃基。
22.权利要求1－20中任一项的化合物，其中R1为苯基，任选被0、1或2个独立选自下列的基团取代：F、Cl、Br、I、SMe、SO2Me和CH3。
23.权利要求1的化合物，其选自实施例1－478的化合物及其可药用的盐。
24.药用组合物，该药用组合物包含权利要求1－23中任一项的化合物以及与之混合的至少一种可药用的赋形剂。
25.权利要求24的药用组合物，该药用组合物还包含联合治疗药物。
26.权利要求25的药用组合物，其中所述联合治疗药物选自抗癌化合物、镇痛药和抗炎化合物。
27.治疗癌症的方法，该方法包括给予需要此类治疗的个体治疗有效量的权利要求1－23中任一项的化合物或权利要求24－26中任一项的药用组合物。
28.权利要求27的方法，其中所述癌症选自腺瘤、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、子宫颈癌、结肠直肠癌、结肠癌、表皮癌、滤泡癌、生殖泌尿癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、霍奇金病、非何杰金氏淋巴瘤、肝细胞瘤、肾癌、肺癌如小细胞或非小细胞肺癌、白血病如AML或CML、多发性骨髓瘤、淋巴疾病、皮肤癌包括黑素瘤、神经母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、睾丸癌和甲状腺癌。
29.权利要求1－23中任一项的化合物，用作药物。
30.权利要求1－23中任一项的化合物或其可药用的盐在生产用于治疗癌症的药物中的用途。
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