RS57641B1 - Aminoheteroaril benzamidi kao inhibitori kinaze - Google Patents

Aminoheteroaril benzamidi kao inhibitori kinaze

Info

Publication number
RS57641B1
RS57641B1 RS20180955A RSP20180955A RS57641B1 RS 57641 B1 RS57641 B1 RS 57641B1 RS 20180955 A RS20180955 A RS 20180955A RS P20180955 A RSP20180955 A RS P20180955A RS 57641 B1 RS57641 B1 RS 57641B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mmol
amino
4alkyl
cancer
lcms
Prior art date
Application number
RS20180955A
Other languages
English (en)
Inventor
Jeffrey T Bagdanoff
Yu Ding
Wooseok Han
Zilin Huang
Qun Jiang
Jeff Xianming Jin
Xiang Kou
Patrick Lee
Mika Lindvall
Zhongcheng Min
Yue Pan
Sabina Pecchi
Keith Bruce Pfister
Daniel Poon
Vivek Rauniyar
Xiaojing Michael Wang
Qiong Zhang
Jianguang Zhou
Shejin Zhu
Original Assignee
Novartis Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis Ag filed Critical Novartis Ag
Publication of RS57641B1 publication Critical patent/RS57641B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A61K31/497—Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/73—Unsubstituted amino or imino radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4418—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having a carbocyclic group directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cyproheptadine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4433—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with oxygen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4436—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a heterocyclic ring having sulfur as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5355—Non-condensed oxazines and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5383—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/553—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having at least one nitrogen and one oxygen as ring hetero atoms, e.g. loxapine, staurosporine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/20—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)

Description

Opis
OSNOVA PRONALASKA
[0001] Protein kinaze su uključene u veoma složene signalne kaskade koje regulišu većinu ćelijskih funkcija, uključujući preživljavanje i proliferaciju. Ovi signalni putevi su intenzivno proučavani, posebno u kontekstu poremećaja izazvanih pogrešno regulisanim ćelijskim funkcijama, kao što je kancer. Kinaze regulisane vanćelijskim signalima (ERK) su jedna klasa signalnih kinaza koje su uključene u prenošenje vanćelijskih signala u ćelije i subćelijske organele. ERK1 i 2 (ERK1/2) su kinaze u protein kinaznom (MAPK) putu aktiviranom mitogenom, i takodje su označene kao p42 odnosno p44. ERK1 i ERK2 su prisutne u relativno velikim količinama u ćelijama (~10<7>molekula po ćeliji), i uključene su u regulaciju širokog opsega aktivnosti. Zaista, poznato je da deregulacija ERK1/2 kaskade izaziva različite patologije uključujući neurodegenerativne bolesti, razvojne poremećaje, dijabetes i kancer. Wortzel and Seger, Genes & Cancer, 2:195-209 (2011), objavljeno na internetu 9. maja 2011.
[0002] Uloga ERK1/2 u kanceru je od posebnog interesa jer se veruje da su aktivirajuće mutacije ushodno od ERK1/2 u njenoj signalnoj kaskadi odgovorne za više od polovine svih kancera. Osim toga, povišena aktivnost ERK1/2 je nadjena i u kancerima u kojima ushodne komponente nisu mutirane, sugerišući da ERK1/2 signalni put igra ulogu u karcinogenezi čak i u kancerima bez aktivacije putem mutacija. Takodje je pokazano da put ERK kontroliše migraciju i invaziju tumorskih ćelija i tako može da bude povezan sa metastazama. Videti A. von Thun, et al., ERK2 drives tumour cell migration in 3D microenvironments by suppressing expression of Rab17 and Liprin-β2, J. Cell Sciences, datum objavljivanja na internetu 10. feb.2012. Dodatno, prijavljeno je da utišavanje ERK1 ili ERK2 korišćenjem shRNK ubija ćelije melanoma u kulturi, i isto tako čini ćelije melanoma osetljivijim na inhibitore BRAF. J. Qin, et al., J. Translational Med.10:15 (2012). Takodje je prijavljeno da su inhibitori ERK1 i 2 efikasni protiv tumorskih ćelija otpornih na MEK inhibitore, i da istovremena inhibicija MEK i ERK proizvodi sinergističku aktivnost. Molec. Cancer Therapeutics, vol.11, 1143 (maj 2012.).
[0003 ] Derivati indazola koji deluju kao inhibitori ERK su prijavljeni kao terapeutici za lečenje kancera. WO2012/030685; WO2007/070398; WO2008/153858. Prijavljeno je da su i odredjena 2-amino piridinska/pirimidinska jedinjenja sa biarilnom vezom sa piridonom ili sličnim prstenom inhibitori ERK, korisni za lečenje kancera i hiperproliferativnih poremećaja: WO2013/130976. Drugi inhibitori ERK su takodje opisani kao terapijska sredstva, videti npr., WO2004/016597. Zbog njihove terapijske vrednosti, potrebni su novi inhibitori ERK1 i/ili ERK2 za lečenje poremećaja povezanih sa neželjenim nivoima aktivnosti ERK1/2. Predmetni pronalazak obezbedjuje nova jedinjenja koja inhibiraju ERK1 ili ERK2 ili oba, za upotrebu u lečenju bolesti, kao što je kancer, koje su povezane sa prekomernom aktivnošću ERK1 i/ili ERK2.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0004] U jednom aspektu, pronalazak obezbedjuje jedinjenje formule (I):
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde:
R<1>je izborno supstituisana grupa odabrana od C3-8cikloalkila, 5-8-članog heterociklila koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članove prstena, fenila, -SO2-fenila, -C(O)-fenila, -C(R<8>)2-fenila, i 5-6-članog heteroaril prstena, gde pomenuti heterociklil i heteroaril sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članove prstena,
i gde izborne supstituente za R<1>predstavljaju 1-3 grupe nezavisno odabrane od D, halo, hidroksi, amino, -N(R<8>)2, CN, C1-4alkil, C1-4alkoksi, -S(C1-4alkil), C1-4haloalkil, C1-4haloalkoksi, C3-6cikloalkil, 3-6-članog heterociklila koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S, okso (osim na aromatičnim prstenovima), COOR<8>, CON(R<8>)2, -NR<8>-C(O)R<8>, -NR<8>-C(O)OR<8>-SO2R<8>, -NR<8>SO2R<8>i SO2N(R<8>)2, gde je svaki R<8>nezavisno H ili C1-4alkil;
L je
gde je R" metil ili etil, i izborno je supstituisan sa fluoro, amino, hidroksi, metilamino, etilamino, dimetilamino, -OP(O)(OH)2, metoksi ili etoksi;
X i Y su nezavisno odabrani od H, D, halo, CN, amino, hidroksi, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4alkoksi, i C1-4haloalkoksi;
R<2>je H, C1-4alkil, ili aril-C1-2-alkil-, gde su aril i C1-4alkil izborno supstituisani sa halo, CN, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C3-6cikloalkil, C1-4alkoksi, C1-4haloalkoksi, ili C1-4alkilsulfonil; ili R<2>i L su povezani zajedno tako da obrazuju heterocikličnu grupu odabranu od morfolina, piperidina, tiomorfolina, piperazina i pirolidina koji je povezan sa R1 i takodje je izborno supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od C1-4alkil, C1-4alkoksi, okso, CN, COOR<7>, CON(R<7>)2, i -SO2R<7>; gde je svaki R<7>nezavisno H ili C1-4alkil;
Z je N ili CR<4>;
R<4>je H, D, halo, C1-4alkil, C1-4haloalkil, ili C1-4alkoksi;
R<5>je odabran od –C(O)-R<5a>i R<5a>; gde je R<5a>izborno supstituisan C3-8cikloalkil, C3-8cikloalkenil, zasićen ili nezasićen 3-8-člani heterociklični prsten koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S, fenil, ili 5-6-člani heteroaril prsten koji sadrži 1-3 heteroatoma odabrana od N, O i S, gde su izborni supstituenti za R<5>1-4 grupe nezavisno odabrane od D, halo, hidroksi, amino, CN, C1-4alkil, C1-4alkoksi, C1-4haloalkil, C1-4hidroksialkil, C1-4haloalkoksi, C3-6cikloalkil, 3-6-članog heterociklila koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S, okso (osim na aromatičnim prstenovima), -COOR<9>, -C(O)R<9>, CON(R<9>)2, -NR<9>C(O)R<9>, -NR<9>CO2R<9>, -SO2R<9>, -NR<9>SO2R<9>i -SO2N(R<9>)2, gde je svaki R<9>nezavisno H ili C1-4alkil izborno supstituisan sa 1-3 grupe nezavisno odabrane od D, halo, OH, NH2, NHMe i NMe2; i dva supstituenta na istom ili susednim atomima ugljenika u R<5>mogu izborno uzeta zajedno da obrazajuju 5-6-člani prsten koji može da bude zasićen ili aromatičan i sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S i može izborno da bude supstituisan sa 1-2 grupe nezavisno odabrane od D, Me, halo, OH, okso, O(C1-4alkil), NH2, C1-4alkilamino, di(C1-4alkil)amino; i
R<6>je H, D, halo, C1-4alkil, ili C1-4haloalkil;
uključujući farmaceutski prihvatljive soli ovih jedinjenja, na primer oblik HCl soli, i izotopski obogaćene verzije jedinjenja i soli, posebno deuterisane verzije jedinjenja, i njihove soli. Ova jedinjenja su inhibitori ERK1 i/ili ERK2, i prema tome korisna za lečenje stanja povezanih sa prekomernim ili nepoželjnim nivoima aktivnosti ERK1 i/ili ERK2, posebno kancera koji odgovaraju na inhibitore ERK1 i/ili ERK2.
[0005] U drugom aspektu, pronalazak obezbedjuje farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (I), ili bilo koju od njihovih podklasa koje su ovde opisane, pomešano sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijensom, izborno pomešan sa dva ili više farmaceutski prihvatljiva nosača ili ekscipijensa. Ove kompozicije su takodje korisne za lečenje stanja povezanih sa prekomernim ili nepoželjnim nivoima aktivnosti ERK1 i/ili ERK2, naročito kancera koji odgovaraju na inhibitore ERK1 i/ili ERK2. Kompozicije mogu takodje da sadrže jedno ili više ko-terapijskih sredstava, kao ona koja su ovde opisana, za poboljšanje lečenja stanja koje se leči ili udruženih simptoma stanja.
[0006] U drugom aspektu, pronalazak obezbedjuje postupak za lečenje stanja koje se odlikuje prekomernim ili nepoželjnim nivoima aktivnosti jedne ili obe ERK1 i ERK2, pri čemu postupak obuhvata primenu kod subjekta kome je takvo lečenje potrebno efikasne količine jedinjenja formule (I) ili bilo koje njene ovde opisane podvrste, ili farmaceutske kompozicije koja sadrži takvo jedinjenje. Subjekt može da bude sisar, i poželjno je čovek, i predstavlja subjekta kome je dijagnostikovano stanje povezano sa prekomernom aktivnošću ERK1 i/ili ERK2. Stanja koja mogu da se leče jedinjenjima i ovde opisanim postupcima uključuju različite oblike kancera koji su responsivni na inhibitore ERK1/2, kao što su solidni tumori, adenom, kancer bešike, kancer mozga, kancer dojke, cervikalni kancer, kolorektalni kancer, kancer kolona, epidermalni karcinom, folikularni karcinom, genitourinarni kanceri, glioblastom, kanceri glave i vrata, Hodgkinova bolest, ne-Hodgkinov limfom, hepatom, kancer bubrega, kanceri pluća kao što su sitnoćelijski ili nesitnoćelijski kancer pluća, leukemije kao što su AML ili CML, multipli mijelom, limfoidni poremećaji, kanceri kože uključujući melanom, neuroblastom, kancer jajnika, kancer pankreasa, kancer prostate, rektalni kancer, sarkom, kancer testisa i kancer tiroidee. Jedinjenja su posebno indikovana za upotrebu u lečenju melanoma, kancera jajnika, kancera tiroidee, kancera kolona, kancera pluća, kancera pankreasa, cervikalnog kancera, kancera glave i vrata, i leukemije uključujući hroničnu mijelomonocitnu leukemiju (CMML), AML i CML. Indikacije od posebnog interesa za upotrebu jedinjenja pronalaska uključuju kancere u kojima su prisutne BRAF mutacije kao V600E, npr., melanom, kancer jajnika, kancer tiroidee, kolorektalni kancer i kancer pluća; kancer dojke u kojima je MAPK i/ili PI3K put deregulisan; kanceri povezani sa KRAS mutacijama kao što su kancer pluća, kancer pankreasa i kolorektalni kancer; kanceri koji imaju ERK2 mutacije kao što su cervikalni ili kanceri glave i vrata; leukemija, posebno kada ispoljava NF-1 mutacije; i nesitnoćelijski kancer pluća u kome je EGFR mutiran.
[0007] U jednom aspektu, pronalazak obezbedjuje jedinjenja formule (I) i podvrste formule (I) koja je ovde opisana, kao i farmaceutski prihvatljive soli ovih jedinjenja, i sve njihove stereoizomere (uključujući dijastereoizomere i enantiomere), tautomere i izotopski obogaćene verzije (uključujući deuterijumske supstitucije). Jedinjenja predmetnog pronalaska takodje obuhvataju polimorfe jedinjenja formule I (ili njenih podformula) i njihove soli. Ova jedinjenja mogu da se koriste u lečenju stanja koja odgovaraju na inhibitor ERK1/2, kao ona koja su ovde opisana, i za upotrebu u pripremi leka za lečenje ovih poremećaja, i mogu da se koriste u kombinaciji sa ko-terapijskim sredstvima za lečenje ovih poremećaja. Farmaceutske kompozicije i postupci koji su ovde opisani mogu takodje da se koriste sa, ili da budu formulisani sa koterapijskim sredstvom; na primer, jedinjenja formule I i njenih podformula mogu da se koriste sa, ili da budu formulisani sa inhibitorima B-RAF i drugim terapijskim sredstvima kao što je ovde dalje opisano.
[0008] U drugom aspektu, pronalazak obezbedjuje postupke za pripremu jedinjenja formule I kao i ključnih intermedijera jedinjenja korisnih za pripremu jedinjenja prema pronalasku.
KRATAK OPIS SLIKA
[0009]
Slika 1 prikazuje obrazac difrakcije X-zraka na prahu slobodne baze 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida.
Slika 2 predstavlja DSC/TGA termograf slobodne baze 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida.
Slika 3 prikazuje obrazac difrakcije X-zraka na prahu 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida u obliku HCl soli.
Slika 4 predstavlja DSC/TGA termograf 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida u obliku HCl soli.
DETALJNI OPIS
[0010] Sledeće definicije se primenjuju, osim ako nije drugačije naglašeno ili očigledno iz konteksta:
Kako se ovde koristi, pojam “halogen” (ili halo) se odnosi na fluor, brom, hlor ili jod. Halogensupstituisane grupe i fragmenti, kao što su alkil supstituisani halogenom (haloalkil) mogu da budu mono-, poli- ili per-halogenovane. Hloro i fluoro su poželjni halo supstituenti na alkil ili cikloalkil grupama, osim ako nije drugačije naznačeno; fluoro, hloro i bromo su često poželjni na aril ili heteroaril grupama, osim ako nije drugačije naznačeno.
[0011] Kako se ovde koristi, pojam “hetero atomi” se odnosi na atome azota (N), kiseonika (O) ili sumpora (S), naročito azota ili kiseonika, osim ako nije drugačije dato.
[0012] Kako se ovde koristi pojam “izborno supstituisan” označava da opisana grupa može da bude nesupstituisana ili može da bude supstituisana. Supstituisane grupe nisu namenjene da obuhvataju brojeve, položaje ili izbor supstituentskih grupa koje bi rezultovale u jedinjenju za koje se ne očekuje da bude stabilno u vodi na sobnoj temperaturi najmanje dovoljno dugo da bi se primenilo kao farmaceutsko sredstvo. Kada su višestruki supstituenti prisutni, supstituenti su odabrani nezavisno osim ako nije drugačije naznačeno, tako da tamo gde je 2 ili 3 supstituenta prisutno, na primer, ovi supstituenti mogu da budu isti ili različiti.
[0013] Kako se ovde koristi, pojam “alkil” se odnosi na potpuno zasićen razgranati ili nerazgranati ugljovodonični fragment koji ima do 10 atoma ugljenika. Osim ako nije drugačije dato, alkil se odnosi na ugljovodonični fragmenti koji ima 1 do 6 atoma ugljenika, ili 1 do 4 atoma ugljenika. Reprezentativni primeri alkila uključuju, ali nisu ograničeni na, metil, etil, n-propil, izo-propil, nbutil, sek-butil, izo-butil, terc-butil, n-pentil, izopentil, neopentil, n-heksil, 3-metilheksil, 2,2-dimetilpentil, 2,3-dimetilpentil, n-heptil, n-oktil, n-nonil, n-decil i slično.
[0014] Supstituisani alkil je alkil grupa koja sadrži jedan ili više supstituenata na mestu atoma vodonika nesupstituisanog alkila, kao što su jedan, dva ili tri supstituenta, ili 1-4 supstituenta, do broja vodonika prisutnih na nesupstituisanoj alkil grupi. Pogodni supstituenti za alkil grupe, ako nije drugačije naznačeno, mogu da budu odabrani od halogena, D, CN, okso, hidroksi, supstituisanog ili nesupstituisanog C1-4alkoksi, supstituisanog ili nesupstituisanog C3-6cikloalkil, supstituisanog ili nesupstituisanog 3-7-članog heterocikloalkil koji sadrži 1 ili 2 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članove prstena, supstituisanog ili nesupstituisanog fenil, amino, (C1-4alkil)amino, di(C1-4alkil)amino, C1-4alkiltio, C1-4alkilsulfonil, -C(=O)- C1-4alkil, COOH, COO(C1-
4alkil), -O(C=O)- C1-4alkil, –NHC(=O)C1-4alkil i –NHC(=O)OC1-4alkil grupe; gde su supstituenti za supstituisani C1-4alkoksi, supstituisani C3-6cikloalkil, 3-7-člani heterocikloalkil i supstituisani fenil do tri grupe nezavisno odabrane od halo, C1-4alkil, C1-4haloalkil, D, C1-4alkoksi, amino, C1-4alkilamino, di(C1-4alkil)amino, hidroksi, i CN. Poželjno supstituenti za alkil grupe, osim ako nije drugačije naznačeno, uključuju halogen, CN, okso, hidroksi, C1-4alkoksi, C3-6cikloalkil, fenil, amino, (C1-4alkil)amino, di(C1-4alkil)amino, C1-4alkiltio, C1-4alkilsulfonil, -C(=O)- C1-4alkil, COOH, -COO(C1-4alkil), -O(C=O)-C1-4alkil, –NHC(=O)C1-4alkil i –NHC(=O)O C1-4alkil grupe.
[0015] Kako se ovde koristi, pojam “alkilen” se odnosi na divalentnu alkil grupu koja ima 1 do 10 atoma ugljenika, i dve otvorene valence za vezivanje za druge molekulske komponente. Dve molekulske komponente vezane za alkilen mogu da budu na istom atomu ugljenika ili na različitim atomima ugljenika; tako na primer, propilen je 3-ugljenični alkilen koji može da bude 1,1-disupstituisan, 1,2-disupstituisan ili 1,3-disupstituisan. Osim ako nije drugačije dato, alkilen se odnosi na fragmente koji imaju 1 do 6 atoma ugljenika, ili 1 do 4 atoma ugljenika. Reprezentativni primeri alkilena uključuju, ali nisu ograničeni na, metilen, etilen, n-propilen, izo-propilen, nbutilen, sek-butilen, izo-butilen, terc-butilen, n-pentilen, izopentilen, neopentilen, n-heksilen, 3-metilheksilen, 2,2-dimetilpentilen, 2,3-dimetilpentilen, n-heptilen, n-oktilen, n-nonilen, n-decilen i slično. Supstituisani alkilen je alkilen grupa koja sadrži jedan ili više, kao što su jedan, dva ili tri supstituenta; osim ako nije drugačije naznačeno, pogodni i poželjni supstituenti su odabrani od supstituenata koji su opisani kao pogodni i poželjni za alkil grupe.
[0016] Slično, “alkenilen” i “alkinilen” se odnosi na alkilen grupe koje imaju dvogubu vezu odnosno trogubu vezu; one su obično dužine 2-6 i često dužine 2-4 atoma ugljenika, i mogu da budu supstituisane kao što je objašnjeno za alkilen grupe uopšteno.
[0017] Kako se ovde koristi, pojam “haloalkil” se odnosi na alkil kao što je ovde definisano, koji je supstituisan jednim ili više halo grupa kao što je ovde definisano. Osim ako nije drugačije naznačeno, alkilni deo haloalkila ima 1-4 atoma ugljenika. Haloalkil može da bude monohaloalkil, dihaloalkil, trihaloalkil, ili polihaloalkil uključujući perhaloalkil. Monohaloalkil može da ima jedan jodo, bromo, hloro ili fluoro u okviru alkil grupe. Dihaloalkil i polihaloalkil grupe mogu da imaju dva ili više istih halo atoma ili kombinaciju različitih halo grupa unutar alkila. Tipično polihaloalkil sadrži do 6, ili 4, ili 3, ili 2 halo grupe. Neograničavajući primeri haloalkila uključuju fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hlorometil, dihlorometil, trihlorometil, pentafluoroetil, heptafluoropropil, difluorohlorometil, dihlorofluorometil, difluoroetil, difluoropropil, dihloroetil i dihloropropil. Perhalo-alkil se odnosi na alkil koji ima sve atome vodonika zamenjene halo atomima, npr., trifluorometil. Poželjno haloalkil grupe, osim ako nije drugačije naznačeno, uključuju monofluoro-, difluoro- i trifluoro- supstituisane metil i etil grupe, npr. CF3, CF2H, CFH2, i CH2CF3.
[0018] Kako se ovde koristi, pojam “alkoksi” se odnosi na alkil-O-, gde je alkil kao što je definisano gore. Reprezentativni primeri alkoksi uključuju, ali nisu ograničeni na, metoksi, etoksi, propoksi, 2-propoksi, butoksi, terc-butoksi, pentiloksi, heksiloksi, i slično. Tipično, alkoksi grupe imaju 1-6 ugljenika, uobičajenije 1-4 atoma ugljenika.
[0019] “Supstituisan alkoksi” je alkoksi grupa koja sadrži jedan ili više, kao što su jedan, dva ili tri supstituenta na alkilnom delu alkoksi grupe. Osim ako nije drugačije naznačeno, pogodni i poželjni supstituenti su odabrani od supstituenata koji su gore navedeni za alkil grupe, osim što hidroksil i amino grupe nisu normalno prisutne na ugljeniku koji je direktlno vezan za kiseonik supstituisane ‘alkil-O’ grupe.
[0020] Kako se ovde koristi, pojam “haloalkoksi” se odnosi na haloalkil-O-, gde je haloalkil definisan gore. Reprezentativni primeri haloalkoksi uključuju, ali nisu ograničeni na, fluorometoksi, difluorometoksi, trifluorometoksi, trihlorometoksi, 2-hloroetoksi, 2,2,2-trifluoroetoksi, 1,1,1,3,3,3-heksafluoro-2-propoksi, i slično. Tipično, haloalkiloksi grupe imaju 1-4 atoma ugljenika, i do tri halogena, npr., monofluoro, difluoro i trifluoro supstituisane metoksi grupe i etoksi grupe.
[0021] Slično, svaki alkil deo drugih grupa kao “alkilaminokarbonil”, “alkoksialkil”, “alkoksikarbonil”, “alkoksi-karbonilalkil”, “alkilsulfonil”, “alkilsulfoksil”, “alkilamino”, “haloalkil” će imati isto značenje kao što je opisano u gore pomenutoj definiciji “alkil”. Kada se koristi na ovaj način, osim ako nije drugačije naznačeno, alkil grupa je obično alkil od 1-4 ugljenika i nije dodatno supstituisana grupama osim navedene komponente. Kada su takve alkil grupe supstituisane, pogodni supstituenti su odabrani od pogodnih ili poželjnih supstituenata navedenih gore za alkil grupe, osim ako nije drugačije naznačeno.
[0022] Kako se ovde koristi, pojam "cikloalkil" se odnosi na zasićene ili nezasićene nearomatične monociklične, biciklične, triciklične ili spirociklične ugljovodonične grupe od 3-12 atoma ugljenika: cikloalkil grupa može da bude nezasićena, i može da bude spojena sa drugim prstenom koji može da bude zasićen, nezasićen ili aromatičan, pod uslovom da atom prstena cikloalkil grupe koji je povezan sa molekulskom formulom od interesa nije atom aromatičnog prstena. Osim ako nije drugačije dato, cikloalkil se odnosi na ciklične ugljovodonične grupe koje imaju izmedju 3 i 9 atoma ugljenika u prstenu ili izmedju 3 i 7 atoma ugljenika u prstenu. Poželjno, cikloalkil grupe, osim ako nije drugačije naznačeno, su zasićeni monociklični prstenovi koji imaju 3-7 atoma u prstenu, npr., ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil ili cikloheptil.
[0023] Supstituisan cikloalkil je cikloalkil grupa supstituisana sa 1-3 (jedan, dva, tri), ili više od tri supstituenta, do broja vodonika na nesupstituisanoj grupi. Tipično, supstituisani cikloalkil će imati 1-4 ili 1-2 supstituenta. Pogodni supstituenti, osim ako nije drugačije naznačeno, su nezavisno odabrani od grupe koja se sastoji od halogen, hidroksil, tiol, cijano, nitro, okso, C1-4-alkilimino, C1-4-alkoksimino, hidroksiimino, C1-4-alkil, C2-4-alkenil, C2-4-alkinil, C1-4-alkoksi, C1-4-tioalkil, C2-
4-alkeniloksi, C2-4-alkiniloksi, C1-4-alkilkarbonil, karboksi, C1-4-alkoksikarbonil, amino, C1-4-alkilamino, di- C1-4-alkilamino, C1-4-alkilaminokarbonil, C1-4-alkilaminokarbonil, C1-4-alkilkarbonilamino, C1-4-alkilkarbonil(C1-4-alkil)amino, C1-4-alkilsulfonil, C1-4-alkilsulfamoil i C1-
4-alkilaminosulfonil, gde svaka od prethodno pomenutih ugljovodoničnih grupa (npr., alkil, alkenil, alkinil, alkoksi ostataka) može da bude dodatno supstituisana jednom ili više nezavisno odabranih grupa na svakom pojavljivanju sa liste supstituenata za ‘alkil’ grupe ovde navedenih. Poželjni supstituenti za cikloalkil, osim ako nije drugačije naznačeno, uključuju C1-4alkil i substituentske grupe koje su ovde navedene kao poželjni supstituenti za alkil grupe.
[0024] Primeri monocikličnih ugljovodoničnih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, cilopropil, ciklobutil, ciklopentil, ciklopentenil, cikloheksil i cikloheksenil i slično.
[0025] Slično, svaki cikloalkilni deo drugih grupa kao “cikloalkiloksi”, “cikloalkoksialkil”, “cikloalkoksikarbonil”, “cikloalkoksi-karbonilalkil”, “cikloalkilsulfonil”, “halocikloalkil” će imati isto značenje kao što je opisano u gornjoj definiciji “cikloalkil”. Kada se koristi u tom smislu, cikloalkil je tipično monociklični prsten od 3-7 ugljenika koji je nesupstituisan ili je supstituisan sa 1-4 grupe, obično 1-2 grupe. Kada je (izborno) supstituisan, supstituenti su tipično odabrani od C1-4alkil i gore navedenih grupa kao pogodnih ili poželjnih supstituenata za alkil grupe, osim ako nije drugačije naznačeno.
[0026] Kako se ovde koristi, pojam "aril" se odnosi na aromatičnu ugljovodoničnu grupu koji ima 6-14 atoma ugljenika u delu koji predstavlja prsten. Tipično, aril je monociklični, biciklični ili triciklični aril koji ima 6-14 atoma ugljenika, često 6-10 atoma ugljenika, npr., fenil ili naftil. Fenil je ponekad poželjan. Osim toga, pojam "aril” kako se ovde koristi, odnosi se na aromatični supstituent koji može da bude pojedinačni aromatični prsten, ili višestruki aromatični prstenovi koji su spojeni zajedno. Neograničavajući primeri uključuju fenil, naftil i 1,2,3,4-tetrahidronaftil, pod uslovom da je tetrahidronaftil povezan sa opisanom formulom preko ugljenika aromatičnog prstena tetrahidronaftil grupe.
[0027] Supstituisani aril je aril grupa supstituisana sa 1-5 (kao što su jedan, ili dva, ili tri) supstituenta nezavisno odabrana iz grupe koja se sastoji od hidroksil, tiol, cijano, nitro, C1-4-alkil, C2-4-alkenil, C2-4-alkinil, C1-4-alkoksi, C1-4-tioalkil, C2-4-alkeniloksi, C2-4-alkiniloksi, halogen, C1-4-alkilkarbonil, karboksi, C1-4-alkoksikarbonil, amino, C1-4-alkilamino, di- C1-4-alkilamino, C1-4-alkilaminokarbonil, di- C1-4-alkilaminokarbonil, C1-4-alkilkarbonilamino, C1-4-alkilkarbonil(C1-4-alkil)amino, C1-4-alkilsulfonil, sulfamoil, C1-4-alkilsulfamoil, i C1-4-alkilaminosulfonil gde svaka od gore pomenutih ugljovodoničnih grupa (npr., alkil, alkenil, alkinil, alkoksi ostataka) može da bude dodatno supstituisana jednom ili više nezavisno odabranih grupa na svakom pojavljivanju od grupa koje su gore navedene kao pogodni supstituenti za alkil grupe. Poželjni supstituenti za supstituisanu aril grupu, osim ako nije drugačije naznačeno, su C1-4alkil, halogen, CN, hidroksi, supstituisani ili nesupstituisani C1-4alkil, supstituisani ili nesupstituisani C1-4alkoksi, supstituisani ili nesupstituisani C3-6cikloalkil, supstituisani ili nesupstituisani 3-6-člani heterocikloalkil koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članove prstena, amino, (C1-4alkil)amino, di(C1-4alkil)amino, C1-4alkiltio, C1-4alkilsulfonil, -C(=O)- C1-4alkil, COOH, COO(C1-4alkil), -O(C=O)-C1-4alkil, –NHC(=O) C1-4alkil i –NHC(=O)O C1-4alkil grupe; gde supstituente za supstituisani C1-4alkoksi, supstituisani C3-6cikloalkil, 3-6-člani heterocikloalkil i supstituisani alkil, predstavljaju do tri grupe nezavisno odabrane od halo, okso, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4alkoksi, amino, hidroksi i CN.
[0028] Slično, svaki arilni deo drugih grupa kao “ariloksi”, “ariloksialkil”, “ariloksikarbonil”, “ariloksi-karbonilalkil” će imati isto značenje kao što je opisano u gore pomenutoj definiciji za “aril”.
[0029] Kako se ovde koristi, pojam “heterociklil” ili “heterocikloalkil” se odnosi na heterociklični radikal koji je zasićen ili delimično nezasićen ali nije aromatičan, i može da bude monociklični ili policiklični prsten, uključujući fuzionisani ili premošćeni biciklični, triciklični ili spirociklični prstenasti sistem. Heterocikl ili heterociklil sadrži najmanje jedan neugljenični atom kao člana prstena, tipično N, O ili S osim ako nije drugačije naznačeno. Osim ako nije drugačije naznačeno, heterociklil grupa ima 3 do 10, i poželjno 4 do 7 atoma prstena; gde su jedan ili više, poželjno jedan do četiri, naročito jedan ili dva atoma prstena heteroatomi nezavisno odabrani od O, S i N (preostali atomi prstena stoga su ugljenik). Nezasićeni heterociklil može da ima jednu ili dve dvogube veze, ali nije aromatičan. Poželjno, osim ako nisu opisane kao nezasićene, heterociklil grupe u jedinjenjima pronalaska su zasićeni pojedinačni prstenovi. Iako povremeno opisan kao npr., grupa od C5-6atoma, heterocikl sadrži najmanje jedan heteroatom kao atom prstena i ima ukupni broj atoma prstena naznačen kao, npr.5 ili 6 u ovom primeru; prema tome, C5-6heterociklil grupa se odnosi na 5-6-člani heterociklični prsten gde je najmanje jedan član prstena heteroatom. Poželjno, heterociklil grupa ima jedan ili dva heteroatoma kao atome prstena, i poželjno heteroatomi nisu neposredno povezani jedan sa drugim. Vezujući prsten (tj. prsten povezan sa formulom od interesa) poželjno ima 4 do 7 atoma prstena. Heterociklična grupa može da bude spojena sa aromatičnim prstenom, pod uslovom da atom heterociklične grupe povezan sa formulom od interesa nije aromatičan. Heterociklična grupa može da bude povezana sa formulom od interesa preko heteroatoma (tipično azota) ili atoma ugljenika heterociklične grupe. Heterociklil može da sadrži fuzionisane ili premošćene prstenove kao i spirociklične prstenaste sisteme (npr., 2-oksa-6-azaspiro[3.3]heptan), i samo jedan prsten polikiklične heterociklične grupe treba da sadrži heteroatom kao atom prstena. Primeri heterocikla uključuju tetrahidrofuran (THF), dihidrofuran, 1,4-dioksan, morfolin, 1,4-ditian, piperazin, piperidin, 1,3-dioksolan, imidazolidin, imidazolin, pirolin, pirolidin, tetrahidropiran, dihidropiran, oksatiolan, ditiolan, 1,3-dioksan, 1,3-ditian, oksatian, tiomorfolin, i slično.
[0030] Supstituisani heterociklil je heterociklil grupa nezavisno supstituisana sa 1-5 (kao što su jedan, ili dva, ili tri) supstituenta odabrana od supstituenata koji su gore opisani kao pogodni ili poželjni za cikloalkil grupu, osim ako nije drugačije naznačeno.
[0031] Slično, svaki heterociklilni deo drugih grupa kao “heterocikliloksi”, “heterocikliloksialkil”, “heterocikliloksikarbonil” će imati isto značenje kao što je opisano u gore pomenutoj definiciji za “heterociklil”.
[0032] “Ciklični etar”, kako se ovde koristi, odnosi se na heterociklični prsten koji sadrži O kao atom prstena, tipično 4-8-člani prsten, npr., oksetan, tetrahidrofuran ili tetrahidropiran. Ciklični etar od 5-8 članova može da sadrži dva nesusedna atoma kiseonika kao članove prstena, npr., dioksan i dioksolan. Ovi prstenovi mogu da budu supstituenti na primer za heterociklične prstenove; poželjno supstituenti ako nije drugačije naznačeno uključuju C1-4alkil (npr., metil, etil), CN, OH, NH2, NHR, NR2, COOH, COOR, CONR2, i OR, gde je svaki R nezavisno C1-4alkil. Tipično, iz razloga stabilnosti, OH, NH2, NHR, i NR2supstituenti nisu povezani sa ugljenikom prstena koji je neposredno vezan za atom kiseonika u prstenu.
[0033] Kako se ovde koristi, pojam "heteroaril" se odnosi na 5-14-člani monociklični- ili biciklični- ili triciklični-aromatični prstenasti sistem, koji ima 1 do 8 heteroatoma kao članove prstena; heteroatomi su odabrani od N, O i S. Tipično, heteroaril je 5-10-člani prstenasti sistem, npr., 5-6-člana monociklična ili 8-10-člana biciklična grupa. Tipične heteroaril grupe uključuju 2-ili 3-tienil, 2- ili 3-furil, 2- ili 3-pirolil, 2-, 4-, ili 5-imidazolil, 1-, 3-, 4-, ili 5- pirazolil, 2-, 4-, ili 5-tiazolil, 3-, 4-, ili 5-izotiazolil, 2-, 4-, ili 5-oksazolil, 3-, 4-, ili 5-izoksazolil, 3- ili 5-(1,2,4-triazolil), 4- ili 5-(1,2, 3-triazolil), 1- ili 2- ili 3-tetrazolil, 2-, 3-, ili 4-piridil, 3- ili 4-piridazinil, 2-pirazinil, i 2-, 4-, ili 5-pirimidinil.
[0034] Pojam “heteroaril” takodje se odnosi na grupu u kojoj je heteroaromatični prsten fuzionisan sa jednim ili više aril, cikloalkil, ili heterociklil prstenova, gde je radikal ili tačka vezivanja sa formulom od interesa na heteroaromatičnom prstenu. Neograničavajući primeri uključuju 1-, 2-, 3-, 5-, 6-, 7-, ili 8- indolizinil, 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, ili 7-izoindolil, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, ili 7-indolil, i 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, ili 7-indazolil.
[0035] Supstituisani heteroaril je heteroaril grupa koja ima jedan ili više supstituenata na heteroaril prstenu koji zamenjuju atom vodonika koj bi postojao na nesupstituisanom heteroarilu, tipično 1, 2 ili 3 supstituenta, odabrana od supstituenata koji su gore opisani kao pogodni ili poželjni za aril grupu, osim ako nije drugačije naznačeno.
[0036] Slično, svaki heteroarilni deo drugih grupa kao “heteroariloksi”, “heteroariloksialkil”, “heteroariloksikarbonil” će imati isto značenje kao što je opisano u gore pomenutoj definiciji za “heteroaril”.
[0037] Ovde su opisani različiti primeri izvodjenja pronalaska. Biće jasno da naznačena svojstva u svakom primeru izvodjenja mogu da se kombinuju sa drugim naznačenim svojstvima da bi se dobili sledeći primeri izvodjenja predmetnog pronalaska. Sledeći numerisani primeri izvodjenja su reprezentativni primeri pronalaska.
Primer izvodjenja 1. Jedinjenje formule (I):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde:
R<1>je izborno supstituisana grupa odabrana od C3-8cikloalkila, 5-8-članog heterociklila koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članove prstena, fenila, -SO2-fenila, -C(O)-fenila, -C(R<8>)2-fenila, i 5-6-članog heteroaril prstena, gde pomenuti heterociklil i heteroaril sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članove prstena,
i gde izborne supstituente za R<1>predstavljaju 1-3 grupe nezavisno odabrane od D, halo, hidroksi, amino, -N(R<8>)2, CN, C1-4alkil, C1-4alkoksi, -S(C1-4alkil), C1-4haloalkil, C1-4haloalkoksi, C3-6cikloalkil, 3-6-člani heterociklil koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S, okso (osim na aromatičnim prstenovima), COOR<8>, CON(R<8>)2, -NR<8>-C(O)R<8>, -NR<8>-C(O)OR<8>-SO2R<8>, -NR<8>SO2R<8>i SO2N(R<8>)2, gde je svaki R<8>nezavisno H ili C1-4alkil;
L je
gde je R" metil ili etil, i izborno je supstituisan sa fluoro, amino, hidroksi, metilamino, etilamino, dimetilamino, -OP(O)(OH)2, metoksi ili etoksi;
X i Y su nezavisno odabrani od H, D, halo, CN, amino, hidroksi, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4alkoksi, i C1-4haloalkoksi;
R<2>je H, C1-4alkil, ili aril-C1-2-alkil-, gde su aril i C1-4alkil izborno supstituisani sa halo, CN, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C3-6cikloalkil, C1-4alkoksi, C1-4haloalkoksi, ili C1-4alkilsulfonil; ili R<2>i L su povezani zajedno tako da obrazuju heterocikličnu grupu odabranu od morfolina, piperidina, tiomorfolina, piperazina i pirolidina koji je povezan sa R1 i takodje je izborno supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od C1-4alkil, C1-4alkoksi, okso, CN, COOR<7>, CON(R<7>)2, i -SO2R<7>; gde je svaki R<7>nezavisno H ili C1-4alkil;
Z je N ili CR<4>;
R<4>je H, D, halo, C1-4alkil, C1-4haloalkil, ili C1-4alkoksi;
R<5>je odabran od –C(O)-R<5a>i R<5a>; gde je R<5a>izborno supstituisan C3-8cikloalkil, C3-8cikloalkenil, zasićen ili nezasićen 3-8-člani heterociklični prsten koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S, fenil, ili 5-6-člani heteroaril prsten koji sadrži 1-3 heteroatoma odabrana od N, O i S, gde su izborni supstituenti za R<5>1-4 grupe nezavisno odabrane od D, halo, hidroksi, amino, CN, C1-4alkil, C1-4alkoksi, C1-4haloalkil, C1-4hidroksialkil, C1-4haloalkoksi, C3-6cikloalkil, 3-6-člani heterociklil koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S, okso (osim na aromatični prstenovima), -COOR<9>, -C(O)R<9>, CON(R<9>)2, -NR<9>C(O)R<9>, -NR<9>CO2R<9>, -SO2R<9>, -NR<9>SO2R<9>i -SO2N(R<9>)2, gde je svaki R<9>nezavisno H ili C1-4alkil izborno supstituisan sa 1-3 grupe nezavisno odabrane od D, halo, OH, NH2, NHMe i NMe2; i dva supstituenta na istom ili susednim atomima ugljenika u R<5>mogu izborno uzeta zajedno da obrazajuju 5-6-člani prsten koji može da bude zasićen ili aromatičan i sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S i može izborno da bude supstituisan sa 1-2 grupe nezavisno odabrane od D, Me, halo, OH, okso, O(C1-4alkil), NH2, C1-4alkilamino, di(C1-4alkil)amino; i
R<6>je H, D, halo, C1-4alkil, ili C1-4haloalkil.
Primer izvodjenja 2. Jedinjenje prema primeru izvodjenja 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde Z predstavlja N.
Primer izvodjenja 3. Jedinjenje iz primera izvodjenja 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde Z predstavlja CH.
Primer izvodjenja 4. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1-3 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde R<2>predstavlja H ili Me.
Primer izvodjenja 5. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1 do 4 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde R<6>predstavlja H.
Primer izvodjenja 6. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1 do 5 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<5>odabrano od –C(O)-R<5a>i R<5a>; gde je R<5a>odabrano od C3-8cikloalkila, 5-8-članog heterociklila koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S, fenila, i 5-6-članog heteroarila, i izborno je supstituisan sa 1-3 grupe nezavisno odabrane od D, halo, CN, hidroksi, C1-4alkoksi, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4hidroksialkil, C1-4haloalkoksi, -SO2R’, -NR’-C(O)-R’, i –SO2NR’2, gde je svaki R’ nezavisno H ili C1-4alkil.
Primer izvodjenja 7. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1-6, gde je R<5>odabrano od –C(O)-R<5a>i R<5a>; gde je R<5a>odabrano od fenila, piridina, piridona, pirazina, piridazina, pirazola, triazola, tetrazola, tiazola, oksazola, imidazola, izotiazola, izoksazola, furana i tiofena, od kojih je svaki izborno supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od halo, D, CN, C1-4alkil, C1-4alkoksi, C1-4haloalkil, C1-4hidroksialkil, C1-4haloalkoksi, COOR<9>, CON(R<9>)2, i -SO2R<9>, gde je svaki R<9>nezavisno H ili C1-4alkil.
Primer izvodjenja 8. Jedinjenje iz primera izvodjenja 3 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<5>odabrano od –C(O)-R<5a>i R<5a>; gde je R<5a>pirazol ili triazol i koji je izborno supstituisan sa 1-2 grupe nezavisno odabrane od halo, CN, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4hidroksialkil, C1-4alkoksi i C1-4haloalkoksi.
Primer izvodjenja 9. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1-6, gde je R<5>odabrano od –C(O)-R<5a>i R<5a>; gde je R<5a>odabrano od ciklobutila, ciklopentila, cikloheksila, cikloheksenila, tetrahidropirana, dihidropirana, tetrahidrofurana, oksetana, azetidina, pirolidina, piperidina, piperazina, morfolina, tetrahidrotiopirana (tiacikloheksana), i tetrahidrotiofurana (tiaciklopentana), od kojih je svaki izborno supstituisan sa 1-3 grupe nezavisno odabrane od halo, D, CN, hidroksi, C1-4alkil, C1-4alkoksi, C1-4haloalkil, C1-4hidroksialkil, C1-4haloalkoksi, okso, COOR<9>, CON(R<9>)2, -NHC(O)R<9>, -NHCOOR<9>, -NHSO2R<9>, i -SO2R<9>, gde je svaki R<9>nezavisno H ili C1-4alkil.
Primer izvodjenja 10. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1-9, gde je R<1>fenil i izborno je supstituisan sa do tri grupe nezavisno odabrane od halo, D, CN, C1-4alkoksi, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4haloalkoksi, -SO2R’, -N(R’)2, -NR’-C(O)-R’, i –SO2NR’2, gde je svaki R’ nezavisno H ili C1-4alkil.
Primer izvodjenja 11. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1-9, gde je R<1>tiofen, tiazol, piridin, pirimidin, pirazin ili piridazin, i izborno je supstituisan sa do tri grupe nezavisno odabrane od halo, CN, C1-4alkoksi, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4haloalkoksi, -SO2R’, -N(R’)2, -NR’-C(O)-R’, i –SO2NR’2, gde je svaki R’ nezavisno H ili C1-4alkil.
Primer izvodjenja 12. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1-11, gde Y predstavlja H, metil, ili halo.
Primer izvodjenja 13. Jedinjenje iz primera izvodjenja 1, formule IA:
gde je R<5>pirazol, imidazol, izoksazol, izotiazol, oksazol, triazol, ili tiazol, koji može da bude supstituisan sa do dve grupe nezavisno odabrane od D, F, Cl, CN, Me, OMe, Et, iPr, OEt i CF3;
Y je H, F, Cl, ili Me;
R<10>je –CH2-R*, gde R* je H, -OH, F, -NH2, -NHMe, -NMe2, -OP(O)(OH)2ili –OMe; i R<1>je fenil ili tienil, izborno supstituisan sa 1-2 grupe nezavisno odabrane od halo, CN, C1-
4alkil, C1-4alkoksi, C1-4haloalkil, C1-4haloalkoksi, COOR<8>, CON(R<8>)2, -SMe, i -SO2R<8>, gde je svaki R<8>nezavisno H ili C1-4alkil;
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
Primer izvodjenja 14. Jedinjenje iz primera izvodjenja 1, formule IB:
gde R<5>predstavlja 4-7-člani ciklični etar ili C5-6cikloalkil, i R<5>može da bude supstituisan sa do četiri grupe nezavisno odabrane od D, F, Cl, CN, amino, -CH2OH, -NHC(O)Me, -NHCOOMe, -NHSO2Me, Me, OMe, OH, okso, Et, iPr, OEt i CF3;
Y je H, F, Cl, ili Me;
R<10>je –CH2-R*, gde R* je H, -OH, F, -NH2, -NHMe, -NMe2, -OP(O)(OH)2ili –OMe; i R<1>je fenil, izborno supstituisan sa 1-2 grupe nezavisno odabrane od halo, CN, C1-4alkil, C1-4alkoksi, C1-4haloalkil, C1-4haloalkoksi, COOR<8>, CON(R<8>)2, i -SO2R<8>, gde je svaki R<8>nezavisno H ili C1-4alkil;
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
Primer izvodjenja 15. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1-6 ili 14, gde je R<5>cikloheksil supstituisan sa 1-3 grupe nezavisno odabrane od D, F, Cl, CN, amino, Me, NHSO2Me, NHCOMe, OMe, OH, Et, -CH2OH i CF3.
U alternativi sa primerom izvodjenja 15, jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1-6 ili 14 gde je R<5>tetrahidropiranil, naročito 4-tetriahdropiranil.
U drugoj alternativi, jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1-6 ili 14, gde je R5 odabrano od:
Primer izvodjenja 16. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1-15, gde je R<1>fenil supstituisan sa 0, 1 ili 2 grupe nezavisno odabrane od F, Cl, Br, I, SMe, SO2Me i CH3.
Primer izvodjenja 17. Jedinjenje iz primera izvodjenja 1, koje je odabranao iz grupe koja se sastoji od jedinjenja prema patentnom zahtevu 12 i njihovih farmaceutski prihvatljivih soli.
Primer izvodjenja 18. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1-17 pomešano sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom. Primer izvodjenja 19. Farmaceutska kompozicija iz primera izvodjenja 18, koja dodatno sadrži terapijski ko-agens.
Primer izvodjenja 20. Farmaceutska kompozicija iz primera izvodjenja 19, gde je terapijski koagens odabran od antikancerskih jedinjenja, analgetika i anti-inflamatornih jedinjenja.
Primer izvodjenja 21. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1-20 ili farmaceutska kompozicija prema bilo kom od primera izvodjenja 18-20 za upotrebu u lečenju kancera.
Primer izvodjenja 22. Jedinjenje ili kompozicija za upotrebu prema primeru izvodjenja 21, gde je kancer odabran od adenoma, kancera bešike, kancera mozga, kancera dojke, cervikalnog kancera, kolorektalnog kancera, kancera kolona, epidermalnog karcinoma, folikularnog karcinoma, genitourinarnih kancera, glioblastoma, kancera glave i vrata, Hodgkinove bolesti, ne-Hodgkinovog limfoma, hepatoma, kancera glave i vrata, kancera bubrega, kancera pluća kao što su sitnoćelijski ili nesitnoćelijski kancer pluća, leukemije kao što su AML ili CML, multiplog mijeloma, limfoidnih poremećaja, kancera kože uključujući melanom, neuroblastoma, kancera jajnika, kancera pankreasa, kancera prostate, rektalnog kancera, sarkoma, kancera testisa i kancera tiroidee. Primer izvodjenja 23. Jedinjenje prema bilo kom od primera izvodjenja 1-17 za upotrebu kao lek.
Postupak za sintezu jedinjenja pronalaska je takodje opisan. Na primer, postupak za sintezu 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida koji obuhvata:
(a) reakciju 5-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)pirazin-2-amina sa terc-butil 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoatom u prisustvu Pd(dppf)Cl2, DCM, Na2CO3i DME da bi se obrazovao terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat;
(b) reakciju terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata u prisustvu HCl, ETOH i NaOH da bi se obrazovala 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina;
(c) reakciju 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline sa (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzenesulfonamid hidrohloridom u prisustvu EDCI i HOAT da bi se dobio 4-(3-amino-6- ((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamid; i
(d) reakciju 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-2- fluorobenzamida u prisustvu LiOH, DMF i 4-merkaptobenzoeve kiseline da bi se dobio 4-(3- amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamid.
Primer izvodjenja 24. Pronalazak obezbedjuje visoko kristalnu HCl so 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida koja u pomenutom obliku ima najmanje jedno od sledećih svojstava:
a) Obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa dva ili više pikova (poželjno tri pika, poželjno sve pikove) na stepenima 2-teta (gde je ugaona varijacija /- 0.3, 0.2 ili 0.1 stepeni) kao što je prikazano u primeru 184;
b) Obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa pikovima koji su suštinski isti kao oni koji su prikazani na slici 3; ili
c) Krivu termalne gravimetrijske analize koja je suštinski u skladu sa onom koja je prikazana na slici 4.
[0038] U nekim primerima izvodjenja formule I ili IA ili IB, Y je H ili halo, naročito F ili Cl. Poželjno je halo, naročito F. Y može da bude u položaju “orto” u odnosu na karbonil prikazan u ovim formulama.
[0039] U mnogim primerima izvodjenja gore opisanih jedinjenja, X je H. U drugim primerima izvodjenja, X je grupa u položaju orto u odnosu na karbonil prikazan u formuli I, kao što su F, Me ili Cl.
[0040] U nekim primerima izvodjenja jedinjenja formule I i drugim gore opisanim primerima izvodjenja, R<2>je H ili Me, i poželjno je H.
[0041] U nekim od gore navedenih primera izvodjenja, L j C1-4alkilen, koji može da bude ravnog lanca ili razgranat, i može da bude nesupstituisan ili supstituisan sa 1-3 grupe kao što je opisano za formulu I. U nekim primerima izvodjenja, L je grupa formule -CH(R<L>)- gde R<L>predstavlja C1-2alkil i izborno je supstituisan sa 1-3 grupe kao što je opisano za formulu I. Poželjno, L je C1-2alkil i supstituisan je sa 1 ili 2 grupe nezavisno odabrane od hidroksi, halo, amino, OMe, -NHMe, OP(O)(OH)2i –NMe2. U nekim primerima izvodjenja, naročito tamo gde je R<1>aril ili heteroaril grupa, L je supstituisani alkilen formule –CH(CH2R*)- gde R* predstavlja H, Me, OH, F, NH2, NHMe, -OP(O)(OH)2ili OMe.
[0042] U primerima izvodjenja gde je L supstituisani alkilen (npr., grupa formule –CHR”- kao što je ovde opisano), L sadrži hiralni centar; u odredjenim od ovih primera izvodjenja, L ima ovu stereohemiju:
gde [N] i [R<1>] označava položaje u kojima je -CH(R”)- povezan sa NR<2>i R<1>, redom. Poželjno, R” je -CH3, -CH2OH, -CH2NH2, -CH2NHMe, -CH2NMe2, -CH2F, -CH2OMe, -CH(OH)Me, -CH2OP(O)(OH)2ili -CH(OH)CH2OH. U nekim primerima izvodjenja, jedinjenje formule (I) sadrži L koji ima hiralnu konfiguraciju prikazanu u višku u odnosu na enantiomer, tako da je jedinjenje optički acktivno. Poželjno, takva jedinjenja pronalaska su suštinski bez suprotnog enantiomera, tj., najmanje 95% jedinjenja ima hiralnost koja je gore prikazana.
[0043] U nekim primerima izvodjenja gore opisanog jedinjenja, R<1>je aril ili heteroaril, izborno supstituisan kao što je dole opisano, i obično je R<1>izborno supstituisana grupa odabrana od fenil, tienil, tiazolil, piridinil, piridazinil, pirazinil i pirimidinil. Supstituisani fenil je poželjan za R<1>.
[0044] R<1>je obično supstituisan sa najmanje jednom grupom odabranom od onih opisanih za primere izvodjenja koji su gore opisani. U nekim primerima izvodjenja, R<1>je fenil, 3-tienil, 2-tiazolil, 2-piridinil, ili 3-piridinil koji je nesupstituisan ili supstituisan sa 1-2 grupe nezavisno odabrane od halo (F, Cl, Br ili I), metil, metoksi, -SMe, metilsulfonil, cijano i ciklopropil. U nekim primerima izvodjenja, R<1>je fenil i supstituisan je na najmanje jednom položaju “meta” u odnosu na [L] (položaj R<1>koji je vezan za L) sa F, Cl, Br, I, SMe, CH2F, CHF2, ili metilsulfonilom.
[0045] U nekim primerima izvodjenja, deo -C(=O)-NR<2>-L-R<1>strukture u formulai (I) ima sledeću formulu, u kojoj su W<1>i W<2>odabrani nezavisno:
[0046] U ovim primerima izvodjenja, najmanje jedan od W<1>i W<2>je tipično drugačiji od H, i poželjno najmanje jedan od W<1>i W<2>je halo, naročito Cl, Br ili I.
[0047] U nekim primerima izvodjenja jedinjenja pronalaska, R<6>je H ili Me; često R<6>predstavlja H.
[0048] U nekim primerima izvodjenja bilo kog od gore opisanih jedinjenja, Z je N. U alternativnim primerima izvodjenja bilo kog od gore opisanih jedinjenja, Z je CR<4>, poželjno CH.
[0049] U nekim primerima izvodjenja, R<5>je 5-6-člani heteroarilni prsten ili fenil, i može da bude supstituisan kao što je opisano za formulu I, gore. U takvim primerima izvodjenja, R<5>može da bude fenil, piridil, piridazinil, ili pirimidinil, izborno supstituisan kao što je gore opisano. U drugim takvim primerima izvodjenja, R<5>je 5-člani heteroaril prsten koji sadrži azot, kao što su pirazol, imidazol, izoksazol, oksazol, tiazol, triazol, tetrazol, izotiazol, pirol, i slično, izborno supstituisan kao što je gore opisano; u ovim primerima izvodjenja, Z je poželjno CH. Pirazoli, triazoli i imidazoli su ponekad poželjne opcije za R<5>.
[0050] U primerima izvodjenja gde je R<5>heteroaril, R<5>može da bude nesupstituisan ili može da bude supstituisan sa 1-3 grupe nezavisno odabrane od Me, Et, izopropil, propil, butil, t-butil, sekbutil, izobutil, CF3, CN, Cl i F.
[0051] Neki poželjnoi primeri izvodjenja ovih R<5>grupa uključuju:
gde je svaki R<5A>nezavisno odabran od H, Me, Et, propil i izopropil. Poželjno, ne više od jedne ili dve od R<5a>grupa na R<5>su drugačije od H, i u većini primera izvodjenja, R<5A>na N u ovim grupama je metil, etil, ili izopropil. Specifične pogodne grupe uključuju 1-metil-4-pirazol, 1-etil-4-pirazol, 1-izopropil-4-pirazol i 3-pirazol i njegov tautomer; 1-metilimidazol-2-il, 1-metilimidazol-4-il, 1-metilimidazol-5-il; i metil-supstituisane verzije ovih jedinjenja.
[0052] U drugim primerima izvodjenja, R<5>je nearomatični cikloalkil ili heterociklična grupa kao što su cikloheksil, ciklopentil, tetrahidropiranil (npr., 4-tetrahidropiranil), 3-oksetanil, 3- ili 4-piperidinil, 4- ili 3- piperidin-2-onil, 3- ili 4-tiaciklopentan, 3-tiacikloheksan, 3-tetrahidrofuran, i slično. U ovim primerima izvodjenja, sumpor prstena može da bude oksidovan do oksidacionog stanja sulfoksida ili sulfona, i svaki od ovih prstenova može da bude supstituisan sa 1-3 grupe, tipično 1-2 grupe, odabranom od okso, Me, Et, izopropil, CF3, CN, Cl i F. Neki poželjni primeri ovih primera izvodjenja uključuju:
[0053] Primeri izvodjenja 1,4-disupstituisanog cikloheksila mogu da imaju cis ili trans relativnu stereohemiju izmedju grupa povezanih na položajima 1 i 4; u nekim primerima izvodjenja, trans relativna orjentacija izmedju ovih grupa je poželjna. Pogodni cikloalkil i heterociklil primeri izvodjenja R<5>uključuju:
[0054] Poželjni primeri izvodjenja R<5>uključuju sledeće:
[0055] Kada je R<5>heterocikličan ili cikloalkil i kada je supstituisan, on će često sadržati najmanje jedan hiralni centar. U ovim hiralnim jedinjenjima, i R i S izomeri mogu da se koriste pojedinačnom, kao i smeše R i S, uključujući racemsku smešu. Jedinjenja pronalaska mgu takodje da uključuju atropizomere u kojima je rotacija oko heteroaril-aril(heteroaril) veze ometana prisustvom supstituentske grupe; u ovim situacijama, svaki atropizomer je uključen. Kada jedan izomer (enantiomer, dijastereomer, atropizomer, ili geometrijski izomer) ima višu intrinzičku aktivnost kao inhibitor ERK1 ili ERK2 nego njegov suprotni izomer, tipično je poželjan aktivniji izomer.
[0056] Kako se ovde koristi, pojam “optički izomer” ili “stereoizomer” se odnosi na bilo koju od različitih stereoizomernih konfiguracija koje mogu da postoje za dato jedinjenje predmetnog pronalaska i uključuje geometrijske izomere. Podrazumeva se da supstituent može da bude vezan na hiralnom centru atoma ugljenika. Pojam "hiralni" se odnosi na molekule koji imaju svojstvo da ne mogu da se preklope sa svojom slikom u ogledalu, dok se pojam "ahiralni" odnosi na molekule koji mogu da se preklope sa svojom slikom u ogledalu. Pronalazak uključuje enantiomere, dijastereomere ili racemate jedinjenja. “Enantiomeri” su par stereoizomera koji slikom u ogledalu jedan drugog koje ne mogu da se preklope. Smeša u odnosu 1:1 para enantiomera je "racemska” smeša. Pojam se koristi da označi racemsku smešu tamo gde je prikladno. "Dijastereoizomeri” su stereoizomeri koji imaju najmanje dva asimetrična atoma, ali koji nisu slike u ogledalu jedan drugog. Apsolutna stereohemija je naznačena prema ‘R-S’ sistemu Cahn-lngold-Prelog. Kada je jedinjenje čist enantiomer, stereohemija na svakom hiralnom ugljeniku može da bude odredjena sa R ili S. Razdvojena jedinjenja čija apsolutna konfiguracija je nepoznata mogu da se označe kao (+) ili (-) u zavisnosti od smera (desno- ili levorotirajuće) u kome rotiraju ravan polarizovane svetlosti na talasnoj dužini D linije natrijuma. Izvesna ovde opisana jedinjenja sadrže jedan ili više asimetričnih centara ili osa i mogu stoga da daju enantiomere, dijastereomere i druge stereoizomerne oblike koji mogu da budu definisani, u smislu apsolutne stereohemije, kao (R)- ili (S)-.
[0057] U zavisnosti od izbora polaznih materijala i sintetskih postupaka, jedinjenja mogu da budu prisutna u obliku jednog od mogućih izomera ili kao njihova smeša, na primer kao čisti optički izomeri, ili kao smeše izomera, kao što su racemske i dijastereoizomerne smeše, u zavisnosti od broja asimmetričnih atoma ugljenika. Predmetni pronalazak je namenjen da uključuje sve takve moguće izomere, uključujući racemske smeše, dijasteriomerne smeše i optički čiste oblike. Optički aktivni (R)- i (S)- izomeri mogu da se prireme upotrebom hiralnih sintona ili hiralnih reagenasa, ili razdvojeni korišćenjem uobičajenih tehnika. Ako jedinjenje sadrži dvostruku vezu, supstituent može da bude u E ili Z konfiguraciji osim ako nije specifično odredjen. Ako jedinjenje sadrži disupstituisani cikloalkil, cikloalkil supstituent može da ima cis- ili trans-konfiguraciju, osim ako nije drugačije naznačeno. Namenjeno je da svi tautomerni oblici takodje budu uključeni.
[0058] U mnogim slučajevima, jedinjenja predmetnog pronalaska su sposobna da obrazuju kisele i/ili bazne soli putem prisustva amino i/ili karboksilnih grupa ili njima sličnih grupa. Kako se ovde koriste, pojmovi “so” ili “soli” se odnose na kisele adicione ili bazne adicione soli jedinjenja pronalaska. “Soli” uključuju naročito “farmaceutski prihvatljive soli”. Pojam “farmaceutski prihvatljive soli” se odnosi na soli koje zadržavaju biološku efikasnost i svojstva jedinjenja ovog pronalaska i, koje tipično nisu biološki ili drugačije nepoželjne.
[0059] Farmaceutski prihvatljive kisele adi cione soli modu da budu obrazovane sa neorganskim kiselinama i organskim kiselinama, npr., soli acetata, adipata, aluminijuma, askorbata, aspartata, benzoata, besilata, bromida/hidrobromida, bikarbonata/karbonata, bisulfata/sulfata, kamforsulfonata, kaproata, hlorida/hidrohlorida, hloroprokaina, hlorteofilonata, citrata, edetata, kalcijum edetata, etandisulfonata, etilsulfonata, etilen diamina, fumarata, galaktarata (mucata), gluceptata, glukonata, glukuronata, glutamata, glikolata, heksil rezorcinata, hipurata, hidrojodida/jodida, hidroksinaftoata (ksinafoata), izetionata, laktata, laktobionata, laurilsulfata, litijuma, malata, maleata, malonata, mandelata, mezilata, metilsulfata, naftoata, napsilata, nikotinata, nitrata, oktadekanoata, oleata, oksalata, palmitata, pamoata, pantotenata, fosfata/hidrogen fosfata/dihidrogen fosfata, poligalakturonata, prokaina, propionata, salicilata, sebakata, stearata, subacetata, sukcinata, sulfata, sulfosalicilata, tanata, tartrata, bitartrata, tozilata, trifenilacetata i trifluoroacetata. Spisak dodatnih pogodnih soli može da se nadje, npr., u REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); i u HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION, AND USE, by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).
[0060] U jednom primeru izvodjenja, predmetni pronalazak obezbedjuje 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamid u obliku soli acetata, askorbata, adipata, aspartata, benzoata, besilata, bromida/hidrobromida, bikarbonata/karbonata, bisulfata/sulfata, kamforsulfonata, kaprata, hlorida/hidrohlorida, hlorteofilonata, citrata, etandisulfonata, fumarata, gluceptata, glukonata, glukuronata, glutamata, glutarata, glikolata, hipurata, hidrojodida/jodida, izetionata, laktata, laktobionata, laurilsulfata, malata, maleata, malonata, mandelata, mezilata, metilsulfata, mucata, naftoata, napsilata, nikotinata, nitrata, oktadekanoata, oleata, oksalata, palmitata, pamoata, fosfata/hidrogen fosfata/dihidrogen fosfata, poligalakturonata, propionata, sebakata, stearata, sukcinata, sulfosalicilata, sulfata, tartrata, tozilata, trifenatata, trifluoroacetata ili ksinafoata.
[0061] U drugom primeru izvodjenja, predmetni pronalazak obezbedjuje 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamid u obliku soli hidrohlorida.
[0062] Neorganske kiseline iz kojih soli mogu da budu izvedene uključuju, na primer, hlorovodoničnu kiselinu, bromovodoničnu kiselinu, sumpornu kiselinu, azotnu kiselinu, fosfornu kiselinu, i slično.
[0063] Organske kiseline iz kojih soli mogu da budu izvedene uključuju, na primer, sirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, glikolnu kiselinu, oksalnu kiselinu, maleinsku kiselinu, malonsku kiselinu, sukcinsku kiselinu, fumarnu kiselinu, vinsku kiselinu, limunsku kiselinu, benzoevu kiselinu, mandeličnu kiselinu, metansulfonsku kiselinu, etansulfonsku kiselinu, toluensulfonsku kiselinu, trifluoroacetatnu kiselinu, sulfosalicilnu kiselinu, i slično.
[0064] Farmaceutski prihvatljive bazne adicione soli mogu da budu obrazovane sa neorganskim ili organskim bazama i mogu da imaju neorganske ili organske protivjone.
[0065] Neorganski protivjoni za takve bazne soli uključuju, na primer, amonijum soli i metale iz kolona I do XII periodnog sistema elemenata. U odredjenim primerima izvodjenja, protivjon je odabran od natrijuma, kalijuma, amonijuma, alkilamonijuma koji ima jednu do četiri C1-C4 alkil grupe, kalcijuma, magnezijuma, gvoždja, srebra, cinka i bakra; naročito pogodne soli uključuju soli amonijuma, kalijuma, natrijuma, kalcijuma i magnezijuma.
[0066] Organske baze iz kojih soli mogu da budu izvedene uključuju, na primer, primarne, sekundarne i tercijarne amine, supstituisane amine uključujući prirodno supstituisane amine, ciklične amine, bazne jonoizmenjivačke smole, i slično. Pogodni organski amini uključuju izopropilamin, benzatin, holinat, dietanolamin, dietilamin, lizin, meglumin, piperazin i trometamin.
[0067] Farmaceutski prihvatljive soli predmetnog pronalaska mogu da budu sintetisane iz baznog ili kiselog fragmenta, uobičajenim hemijskim postupcima. Uopšteno, takve soli mogu da budu pripremljene reakcijom ovih jedinjenja u obliku slobodnih kiselina sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze (kao što su Na, Ca, Mg, ili K hidroksid, karbonat, bikarbonat ili slično), ili reakcijom ovih jedinjenja u obliku slobodnih baza sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće kiseline. Takve reakcije se tipično izvode u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ova dva. Uopšteno, upotreba nevodenog medijuma kao što je etar, etil acetat, tetrahidrofuran, toluen, hloroform, dihlorometan, metanol, etanol, izopropanol, ili acetonitril je poželjna, kada je to izvodljivo.
[0068] Bilo koja ovde data formula je namenjena da predstavlja neobeležene oblike (tj., jedinjenja gde su svi atomi prisutni kao prirodno zastupljeni izotopi, i nisu izotopski obogaćeni), kao i izotopski obogaćene ili obeležene oblike jedinjenja. lzotopski obogaćena ili obeležena jedinjenja imaju strukture prikazane formulama koje su ovde date osim što je najmanje jedan atom jedinjenja zamenjen atomom istog elementa ali koji ima atomsku masu ili maseni broj različit od atomske mase ili raspodele atomske mase koja se javlja u prirodi. Primeri izotopa koji mogu da budu ugradjeni u obogaćena ili obeležena jedinjenja pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora i hlora, kao što su<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<18>F<31>P,<32>P,<35>S,<36>Cl,<125>I, redom. Pronalazak uključuje različita izotopski obeležena jedinjenja kao što je ovde definisano, na primer ona u kojima su radioaktivni izotopi, kao što su<3>H i<14>C, ili ona u kojima su neradioaktivni izotopi, kao što su<2>H i<13>C, prisutni na nivoima značajno iznad prirodne zastupljenosti ovih izotopa. Ova izotopski obeležena jedinjenja su korisna u metaboličkim studijama (sa<14>C), ispititvanjima kinetike reakcija (sa, na primer<2>H ili<3>H), tehnikama detekcije ili vizuelizacije, kao što su pozitronska emisiona tomografija (PET) ili emisiona kompjuterizovana tomografija pojedinačnog fotona (SPECT) uključujući oglede raspodele leka ili supstrata u tkivu, ili u radioaktivnom tretmanu pacijenata. Naročito,<18>F ili obeleženo jedinjenje može da bude naročito poželjno za PET ili SPECT ispitivanja. Izotopski-obeležena jedinjenja formule (I) mogu uopšteno da se pripreme uobičajenim tehnikama poznatim stručnjacima u oblasti ili postupcima analogim onim koji su opisani u pratećim primerima i pripremama upotrebom odgovarajuće izotopski-obeleženih reagenasa umesto prethodno korišćenih nebeleženih reagenasa.
[0069] Dalje, supstitucija sa težim izotopima, naročito deuterijumom (tj.,<2>H ili D) mogu da pruže izvesne terapijske prednosti koje rezultuju iz veće metaboličke stabilnosti, na primer povećanog in vivo polu-života ili smanjenje potrebnog doziranja ili poboljšanje terapijskog indeksa. Razume se da se deuterijum u ovom kontekstu posmatra kao supstituent jedinjenja formule (I) ako je ugradjen suštinski iznad nivoa prirodne zastupljenosti izotopa. Pronalazak uključuje izotopski obogaćene verzije ovih jedinjenja, npr., deuterisane verzije kao i nedeuterisane verzije. Deuterisane verzije mogu da budu deuterisane na jednom mestu, ili na više mesta.
[0070] Stepen ugradjivanja takvih izotopa u izotopski obogaćeno jedinjenje, naročito deuterijum, može da se definiše faktorom izotopskog obogaćenja. Pojam "faktor izotopskog obogaćenja", kako se ovde koristi, označava odnos izmedju izotopske zastupljenosti specifičnog zsotopa u uzorku, i prirodne zastupljenosti izotopa u neobogaćenom uzorku. Ako je supstituent u jedinjenju ovog pronalaska naznačen kao deuterijum, takvo jedinjenje ima faktor izotopskog obogaćenja za svaki naznačeni atom deuterijuma od najmanje 3500 (52.5% ugradnje deuterijuma na svaki naznačeni atom deuterijuma), najmanje 4000 (60% ugradnje deuterijuma), najmanje 4500 (67.5% ugradnje deuterijuma), najmanje 5000 (75% ugradnje deuterijuma), najmanje 5500 (82.5% ugradnje deuterijuma), najmanje 6000 (90% ugradnje deuterijuma), najmanje 6333.3 (95% ugradnje deuterijuma), najmanje 6466.7 (97% ugradnje deuterijuma), najmanje 6600 (99% ugradnje deuterijuma), ili najmanje 6633.3 (99.5% ugradnje deuterijuma).
[0071] Farmaceutski prihvatljivi solvati u skladu sa pronalaskom uključuju one gde rastvarač za kristalizaciju može da bude izotopski supstituisan, npr. D2O, d<6>-aceton, d<6>-DMSO, kao i solvati sa neobogaćenim rastvaračima.
[0072] Jedinjenja pronalaska, npr., jedinjenja formule (I) koja sadrže grupe sposobne da deluju kao donorsi i/ili akceptori u vodoničnim vezama, mogu da imaju sposobnost obrazovanja kokristala sa pogodnim sredstvima za obrazovanje ko-kristala. Ovi ko-kristali mogu da se pripreme iz jedinjenja formule (I) poznatim postupcima za obrazovanje ko-kristala. Takvi postupci uključuju mlevenje, zagrevanje, ko-sublimaciju, ko-topljenje, ili dovodjenje u kontakt u rastvoru jedinjenja formule (I) sa sredstvom za obrazovanje ko-kristala pod uslovima kristalizacije i izdvajanje kokristala koji se tako obrazuju. Pogodna sredstva za obrazovanje ko-kristala uključuju ona opisana u WO 2004/078163. Stoga pronalazak dodatno obezbedjuje ko-kristale koji sadrže jedinjenje formule (I).
[0073] Kako se ovde koristi, pojam "farmaceutski prihvatljivi nosač" uključuje bilo koje i sve rastvarače, medijume za dispergovanje, prevlake, surfaktante, antioksidanse, konzervanse (npr., antibakterijska sredstva, antifungalna sredstva), izotonična sredstva, sredstva za odlaganje apsorpcije, soli, konzervanse, stabilizatore lekova, vezivna sredstva, ekscipijense, sredstva za raspadanje, lubrikanse, zasladjivače, sredstva za davanje arome, boje, i slično i njihove kombinacije, kao što će biti poznato stručnjacima u datoj oblasti (videti, na primer, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329). Osim ako je bilo koji uobičajeni nosač nekompatibilan sa aktivnim sastojkom, njegova upotreba u terapijskim ili farmaceutskim kompozicijama se ovde razmatra.
[0074] Pojam "terapijski efikasna količina" jedinjenja predmetnog pronalaska se odnosi na količinu jedinjenja predmetnog pronalaska koja će izazvati biološki ili medicinski odgovor subjekta, na primer, redukciju ili inhibiciju aktivnosti enzima ili proteina, ili ublažavanje simptoma, olakšanje stanja, usporavanje ili odlaganje progresije bolesti, ili sprečavanje bolesti, itd. U jednom neograničavajućem primeru izvodjenja, pojam “terapijski efikasna količina” se odnosi na količinu jedinjenja predmetnog pronalaska koja je, kada se primeni kod subjekta, efikasna u (1) najmanje delimičnom olakšavanju, inhibiciji, sprečavanju i/ili poboljšanju stanja, ili poremećaja ili bolesti (i) posredovane kinazom kao što je ERK1/2 ili (ii) povezane sa aktivnošću kinaze kao što je ERK1/2, ili (iii) koja se odlikuje aktivnošću (normalnom ili abnormalnom) ERK1/2; ili (2) smanjenju ili inhibiciji aktivnosti ERK1/2 ili (3) smanjenju ili inhibiciji ekspresije ERK1/2.
[0075] U drugom neograničavajućem primeru izvodjenja, pojam “terapijski efikasna količina” se odnosi na količinu jedinjenje predmetnog pronalaska koja je, kada se primeni na ćeliju, ili tkivo, ili bezćelijski biološki materijal, ili medijum, efikasna u najmanje delimičnom smanjenju ili inhibiciji aktivnosti ERK1/2, ili najmanje delimičnom smanjenju ili inhibiciji ekspresije ERK1/2.
[0076] Kako se ovde koristi, pojam “subjekt” se odnosi na životinju. Tipično, životinja je sisar. Subjekt se takodje odnosi na, na primer, primate (npr., ljude, muškog ili ženskog pola), krave, ovce, koze, konje, pse, mačke, zečeve, pacove, miševe, ribe, ptice i slično. U izvesnin primerima izvodjenja, subjekt je primat. U specifičnim primerima izvodjenja, subjekt je čovek.
[0077] Kako se ovde koristi, pojam “inhibirati”, "inhibicija" ili “inhibiranje” se odnosi na smanjenje ili supresiju datog stanja, aktivnosti, dejstva, simptoma, ili poremećaja, ili bolesti, ili značajno smanjenje bazalne aktivnosti biološke aktivnosti ili postupka.
[0078] Kako se ovde koristi, pojam “lečiti”, “lečenje" ili "tretman" bilo koje bolesti ili poremećaja označava u jednom primeru izvodjenja, ublažavanje bolesti ili poremećaja (tj., usporavanje ili zaustavljanje ili redukovanje razvoja bolesti ili najmanje jednog njenog ckliničkog simptoma). U drugom primeru izvodjenja “lečiti”, “lečenje" ili "tretman" se odnosi na olakšavanje ili ublažavanje najmanje jednog fizičkog parametera uključujući uključujući one koje pacijent možda ne opaža. U još jednom primeru izvodjenja, “lečiti”, “lečenje" ili "tretman" se odnosi na modulaciju bolesti ili poremećaja, bilo fizički, (npr., stabilizacijom uočljivih simptoma), fiziološki, (npr., stabilizacijom fizičkog parametra), ili oba. U još jednom primeru izvodjenja, “lečiti”, “lečenje" ili "tretman" se odnosi na odlaganje razvoja ili progresije bolesti ili poremećaja.
[0079] Kako se ovde koristi, subjektu je “potreban” tretman ako bi se očekivalo da takav subjekt ima biološku korist, medicinsku korist ili korist u kvalitetu života od takvog tretmana.
[0080] Kako se ovde koristi, pojmove u jednini koji se koriste u kontekstu predmetnog pronalaska (naročito u kontekstu patentnih zahteva) treba shvatiti tako da obuhvataju i jedninu i množinu, osim ako ovde nije drugačije naznačeno ili očigledno suprotno kontekstu.
[0081] Svi ovde opisani postupci mogu da budu izvedeni u bilo kom pogodnom redosledu osim ako nije drugačije naznačeno u tekstu ili drugačije očigledno suprotno kontekstu. Upotreba bilo kog i svih primera, ili izraza koji označavaju primere (npr. "kao što su”) koji su ovde dati namenjena je samo da bolje osvetli pronalazak i ne predstavlja ograničenje obima pronalaska za koji se traži zaštita.
[0082] Bilo koji asimetrični atom (npr., ugljenik ili slično) jedinjenja predmetnog pronalaska može da bude prisutan u racemski ili enantiomerno obogaćenoj, na primer (R)-, (S)- ili (R,S)-konfiguraciji. U odredjenim primeriam izvodjenja, svaki asimetrični atom ima najmanje 50% enantiomernog viška, najmanje 60% enantiomernog viška, najmanje 70% enantiomernog viška, najmanje 80% enantiomernog viška, najmanje 90% enantiomernog viška, najmanje 95% enantiomernog viška, ili najmanje 99% enantiomernog viška ili (R)- ili (S)- konfiguracije; tj., za optički aktivna jedinjenja, često je poželjno koristiti jedan enantiomer za suštinsko isključivanje drugog enantiomera. Supstituenti na atomima sa ugljenik-ugljenik dvogubim vezama mogu, gde je to moguće, da budu prisutni u cis- (Z)- ili trans- (E)- obliku, i oba su uključena u pronalazak osim ako nije drugačije naznačeno.
[0083] Prema tome, kako se ovde koristi jedinjenje predmetnog pronalaska može da bude u obliku jednog od mogućih izomera, rotamera, atropizomera, ili tautomera ili kao njihova smeša, na primer, kao suštinski čisti geometrijski (cis ili trans) izomeri, dijastereomeri, optički izomeri (antipodi), racemati ili njihove smeše. “Suštinski čist” ili “suštinski bez drugih izomera” kako se ovde koristi označava da proizvod sadrži manje od 5%, i poželjno manje od 2%, drugih izomera u odnosu na količinu poželjnog izomera, po težini.
[0084] Bilo koje rezultujuće smeše izomera mogu da budu razdvojene na osnovu fizikohemijskih razlika sastojaka, na čiste ili suštinski čiste geometrijske ili optičke izomere, dijastereomere, racemate, na primer, hromatografijom i/ili frakcionom kristalizacijom.
[0085] Bilo koji rezultujući racemati finalnih proizvoda ili intermedijera mogu da budu razdvojeni na optičke antipode poznatim postupcima, npr., razdvajanjem njihovih dijastereomernih soli, dobijenih sa optički aktivnom kiselinom ili bazom, i oslobadjanjem optički aktivnod kiselog ili baznog jedinjenja. Naročito, bazni fragment može prema tome da se koristi za razdvajanje jedinjenja predmetnog pronalaska na njihove optičke antipode, npr., frakcionom kristalizacijom soli obrazovanih sa optički aktivnom kiselinom, npr., tartarskom kiselinom, dibenzoil tartarskom kiselinom, diacetil tartarskom kiselinom, di-O,O'-p-toluoil vinskom kiselinom, mandeličnom kiselinom, maličnom kiselinom ili kamfor-10-sulfonskom kiselinom. Racemski proizvodi mogu takodje da se razdvoje hiralnom hromatografijom, npr., tečnom hromatografijom na visokom pritisku (HPLC) upotrebom hiralnog adsorbenta.
[0086] Osim toga, jedinjenja predmetnog pronalaska, uključujući njihove soli, mogu takodje da se dobiju u obliku njihovih hidrata, ili da uključuju druge rastvarače korišćene za njihovu kristalizaciju. Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu inherentno ili po dizajnu da obrazuju solvate sa farmaceutski prihvatljivim rastvaračima (uključujući vodu); stoga, pronalazak je namenjen da obuhvata i solvatirane i nesolvatirane oblike. Pojam "solvat" se odnosi na molekulski kompleks jedinjenja predmetnog pronalaska (uključujući njegove farmaceutski prihvatljive soli) sa jedanim ili više molekula rastvarača. Takvi molekuli rastvarača su oni koji se uobičajeno koriste u farmaceutskoj struci, za koje se zna da nisu štetni za primaoca, npr., voda, etanol, i slično. Pojam "hidrat" se odnosi na kompleks gde je molekul rastvarača voda.
[0087] Jedinjenja predmetnog pronalaska, uključujući njihove soli, hidrate i solvate, mogu inherentno ili po dizajnu da obrazuju polimorfe.
[0088] Jedinjenja formule (I) mogu da budu pripemljena prema šemama i primerima koji su ovde dati. Šeme u nekim slučajevima ilustruju pripremu jedinjenja gde je L metilen ili supstituisana alkilen grupa, ali postupci za pripremu pogodnih benzamida u kojima L predstavlja vezu ili druge mogućnosti obuhvaćene formulom (I) su sasvim očigledne stručnjaku u oblasti u svetlu mnogih poznatih postupaka za pravljenje potrebnih benzamidnih intermedijera, tako da su ovi postupci jednako primenljivi za pripremu jedinjenja kao i drugi primeri izvodjenja L.
Šema A.
[0089] Prekursori A i B mogu da budu kuplovani upotrebom poznatih uslova za obrazovanje peptidne veze da bi se obezbedio intermedijer C. Intermedijer C može da bude kuplovan sa heteroaril boronskom kiselinom kao što je intermedijer G pod dobro poznatim uslovima pomognutim paladijumom da bi se obrazovali proizvodi formule H, koji predstavljaju jedinjenja formule (I). Potrebna aminopiridinska/pirazinska jedinjenja (G) za kuplovanje sa jedinjenjem C mogu da se pripreme iz bromopiridina/pirazina uvodjenjem željene R<5>grupe korišćenjem hemije paladijuma (videti intermedijer E gore), zatim brominacijom na susednoj poziciji do amino grupe i prevodjenjem u boronsku kiselinu ili estar (G). Šema C ilustruje primenu ovog redosleda postupaka, uključujući hidrogenaciju olefina da bi se došlo do jedinjenja formule G, gde je R<5>tetrahidropiran.
[0090] Alternativno, kao što je prikazano na šemi B, jedinjenje C može da bude prevedeno u arilboronsku kiselinu ili estar, i može da bude kuplovano sa heteroaril bromidom F, ponovo korišćenjem poznatih uslova kuplovanja katalizovanih paladijumom, da bi se obeznedila jedinjenja pronalaska.
Šema B.
[0091] Intermedijer F može da bude pripremljen postupcima koji su poznati u stanju tehnike i postupcima koji su ovde opisani. Brojna jedinjenja formule F mogu da budu sintetisana iz poznatih amino-bromo-piridina i -pirazina kao što je prikazano na šemi C. Različiti aril, heteroaril i vinil estri boronske kiseline mogu da budu kuplovani sa bromopiridinom ili bromopirazinom korišćenjem paladijumskih katalizatora kao što je poznato u stanju tehnike, za uvodjenje željene R<5>grupe. Ovaj postupak je naročito koristan za uvodjenje aril ili heteroaril grupe kao R<5>u formuli (I). Kada početni proizvod kuplovanja uvodi delimično nezasićenu grupu na položaju R<5>, kao što je prikazano na šemi C, nezasićenost može da bude redukovana uobičajenim postupcima za dobijanje jedinjenja koji imaju zasićenu grupu (npr., heterociklil ili cikloalkil) kao R<5>. Ova mogućnost je prikazana na šemi C, gde je prikazana priprema jedinjenja koje ima 4-tetrahidropiranil kao R<5>.
Šema C.
[0092] Šema D ilustruje drugi sintetski put, gde je grupa koja odgovara R<5>u formuli (I) spojena nakon što je piridin ili pirimidin kuplovan sa benzamidnim delom. Postupak omogućava ugradnju širokog opsega aril, heteroaril ili vinilnih (nezasićenih) R<5>grupa, i kao što je ovde prikazano, vinilna R<5>grupa može da bude redukovana posle reakcije kuplovanja da bi se dobila zasićena R<5>grupa. Ponovo, prikazan je put sa benzilnom grupom na amidnom azotu, odgovarajući L = izborno supstituisan alkilen, i R<1>= izborno supstituisan fenil, ali zbog velike raspoloživosti polaznih materijala i postupaka za pravljenje amidnih intermedijera, jednako je primenjiv na sintezu jedinjenja sa drugim L i R<1>grupama. Jednom kada je heteroaril grupa kuplovana sa fenil prstenom benzamida, R<5>može da bude povezana paladijumskim kuplovanjem, gde boronska kiselina/estar može da bude na R<5>ili na aminopiridinskom/aminopirazinskom prstenu. R<1*>na ovoj šemi predstavlja izborne supstituente na fenil grupi, odabrane tako da odgovaraju supstituentima na R<1>u formuli (I).
Šema D.
[0093] Šema E ilustruje postupak za pravljenje jedinjenja formule (I) polazeći od 3-bromo-2-aminopiridina ili odgovarajućeg pirazina, i benzoat estra supstituisanog sa boronskom kiselinom ili estrom. Nakon kuplovanja za obrazovanje biaril grupe, aminopiridin može da bude lako brominovan pod blagim uslovima, i željena amidna grupa može da bude pripremljena. R<5>može da bude uvedena zamenom Br iz piridinskog prstena katalizovanom paladijumom. Ovde ponovo, estar boronske kiseline može da bude na aminopiridinskom prstenu, ili na arilu, heteroarilu ili vinilnoj R<5>grupi.
Šema E.
[0094] Pronalazak dalje uključuje bilo koju varijantu predmetnih postupaka u kojoj se intermedijer koji može da se dobije u bilo kom stadijumu postupka koristi kao polazni materijal i sprovode se preostali koraci, ili u kojoj se polazni materijali obrazuju in situ pod reakcionim uslovima, ili u kojoj se komponente reakcije koriste u obliku svojih soli ili optički čistog materijala. Jedinjenja pronalaska i intermedijeri mogu da se pretvaraju jedni u druge prema postupcima koji su uopšteno poznati stručnjacima u datoj oblasti.
[0095] U drugom aspektu, pronalazak obezbedjuje intermedijere korisne za sintezu jedinjenja formule (I), uključujući jedinjenja formule (II):
gde Z<2>predstavlja CH ili N;
G je Br ili –B(OR<21>)2;
gde svaki R<21>predstavlja H ili C1-4alkil, ili dva R<21>uzeta zajedno sa spojnicom – O-B-O- sa kojom su povezana obrazuju ciklični boratni estar;
J je H, F, Cl ili Me; i
R<20>je H ili C1-6alkil.
[0096] U nekim primerima izvodjenja, J je pogodno fluoro (F), i u drugim primerima izvodjenja J je Cl. U nekim primerima izvodjenja G je grupa cikličnog boratnog estra kao što su 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il ili 1,3,2-dioksaborolan-2-il.
[0097] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbedjuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje predmetnog pronalaska, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens. Farmaceutska kompozicija može da bude formulisana za konkretne puteve primene kao što su oralna primena, parenteralna primena i rektalna primena, i slično. Pored toga, farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska mogu da budu napravljene u čvrstom obliku (uključujući bez ograničenja kapsule, tablete, pilule, granule, prahove ili supozitorije), ili u tečnom obliku (uključujući bez ograničenja rastvore, suspenzije ili emulzije). Pilule ili tablete mogu da budu obložene filmom ili enteričkim omotačem u skladu sa postupcima poznatim u stanju tehnike. Farmaceutske kompozicije mogu da budu podvrgnute uobičajenim farmaceutskim postupcima kao što je sterilizacija i/ili mogu da sadrže uobičajene inertne razblaživače, sredstva za podmazivanje, ili puferska sredstva, kao i adjuvanse, kao što su konzervansi, stabilizatori, sredstva za kvašenje, sredstva za emulgovanje i puferi, itd.
[0098] Tipično, farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenja pronalaska su tablete ili želatinske kapsule koje sadrže jedinjenje formule (I) kao aktivno sredstvo zajedno sa jednim ili više od sledećih ekscipijenasa:
a) razblaživača, npr., laktoza, dekstroza, saharoza, manitol, sorbitol, celuloza i/ili glicin;
b) sredstava za podmazivanje, npr., silicijum dioksid, talk, stearinska kiselina, njena magnezijumova ili kalcijumova so i/ili polietileneglikol; za tabletse takodje
c) vezivnih sredstava, npr., magnezijum aluminijum silikat, skrobna pasta, želatin, tragakant, metilceluloza, natrijum karboksimetilceluloza i/ili polivinilpirolidon; po želji
d) sredstava za raspadanje, npr., skrobi, agar, alginska kiselina ili njena natrijumova so, ili penušave smeše; i/ili
e) apsorbenata, sredstava za bojenje, aroma i zasladjivača.
[0099] Izbor pogodnih kapsula za inkapsulaciju i pogodnih ekscipijenasa za formulaciju jedinjenja formule I za pravljenje oralnih doznih oblika su u okviru uobičajenog poznavanja struke. Tablete mogu da budu obložene filmom ili enteričkim omotačem korišćenjem postupaka poznatih u stanju tehnike.
[0100] Pogodne kompozicije forza oralnu primenu uključuju efikasnu količinu jedinjenja pronalaska u obliku tableta, lozengi, vodenih ili uljanih suspenzija, disperzibilnih prahova ili granula, emulzija, tvrdih ili mekih kapsula, ili sirupa ili eliksira. Kompozicije namenjene za oralnu upotrebu se pripremaju prema bilo kom postupku poznatom u stanju tehnike za proizvodnju farmaceutskih kompozicija i takve kompozicije mogu da sadrže jedno ili više sredstava odabranih iz grupe koja se sastoji od zasladjivača, sredstva za davanje arome, sredstva za bojenje i konzervanasa u cilju obezbedjivanja farmaceutsi elegantnih i ukusnih preparata. Tablete mogu da sasdrže aktivni sastojak u smeši sa netoksičnim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima koji su pogodni za proizvodnju tableta, uključujući ona koja su gore navedena. Ovi ekscipijensi su, na primer, inertni razblaživači, kao što su kalcijum karbonat, natrijum karbonat, laktoza, kalcijum ili natrijum fosfat; sredstva za granulaciju i raspadanje, na primer, kukuruzni skrob, ili alginska kiselina; vezivna sredstva, na primer, skrob, želatin ili akacija; i sredstva za podmazivanje, na primer magnezijum stearat, stearinska kiselina ili talk. Tablete su neobložene ili obložene poznatim tehnikama za odlaganje raspadanja i apsorpcije u gastrointestinalnom traktu i stoga obezbedjuju produženo delovanje tokom dužeg perioda. Na primer, može da se upotrebi materijal za vremensko odlaganje kao što je gliceril monostearat ili gliceril distearat. Formulacije za oralnu upotrebu mogu da budu mogu da budu date kao tvrde želatinske kapsule u kojim je aktivni sastojak pomešan sa inertnim čvrstim razblaživačem, na primer, kalcijum karbonatom, kalcijum fosfatom ili kaolinom, ili kao meke želatinske kapsule u kojim je aktivni sastojak pomešan sa vodom ili uljanim medijumom, na primer, uljem kikirikija, tečnim parafinom ili uljem masline, tako da obrazuje rastvor, emulziju ili disperziju unutar meke kapsule.
[0101] Izvesne injektabilne kompozicije su vodeni izotonični rastvori ili suspenzije, i supozitorije se pogodno pripremaju od masnih emulzija ili suspenzija. Pomenute kompozicije mogu da se sterilišu i/ili da sadrže adjuvanse, kao što su konzervansi, stabilizatori, sredstva za kvašenje ili sredstva za emulgovanje, pospešivači rastvaranja, soli za regulaciju osmotskog pritiska i/ili puferi. Osim toga, oni mogu takodje da sadrže druge terapijski vredne supstance. Pomenute kompozicije se pripremaju prema uobičajenim postupcima za mešanje, granulaciju ili oblaganje, redom, i sadrže oko 0.1-75%, ili sadrže oko 1-50%, aktivnog sastojka.
[0102] Pogodne kompozicije za transdermalnu primenu uključuju efikasnu količinu jedinjenja pronalaska sa pogodnim nosačem. Nosači pogodni za transdermalnu dostavu uključuju farmakološki prihvatljive rastvarače koji mogu da se apsorbuju za pomoć u prolaženju kroz kožu domaćina. Na primer, transdermalni uredjaji su u obliku poveza koji sadrže potporu, rezervoar koji sadrži jedinjenje izborno sa nosačima, izborno barijeru za kontrolu brzine za dostavljanje jedinjenja u kožu domaćina kontrolisanom i unapred odredjenom brzinom tokom produženog perioda vremena, i sredstvo za učvršćivanje uredjaja na koži.
[0103] Pogodne kompozicije za topikalnu primenu, npr., na kožu i oči, uključuju vodene rastvore, suspenzije, masti, kreme, gelove ili formulatcije u spreju npr., za dostavu putem aerosola ili slično. Takvi sistemi za topikalnu dostavu će naročito biti pogodni za dermalnu primenu, npr., za lečenje kancera kože, npr., za profilaktičku upotrebu u kremama, losionima, sprejevima za sunčanje i slično. Oni su stoga naročito pogodni za upotrebu u topikalnim, uključujući kozmetičke, formulacijama koje su dobro poznate u stanju tehnike. One mogu da sadrže sredstva za poboljšanje rastvorljivosti, stabilizatore, sredstva za poboljšanje toničnosti, pufere i konzervanse.
[0104] Kako se ovde koristi, topikalna primena može takodje da se odnosi na inhalaciju ili na intranazalnu primenu. Formulacije mogu pogodno da budu dostavljene u obliku suvog praha (bilo same, kao smeša, na primer suva smeša sa laktozom, ili smeša komponenti u vidu čestica, na primer sa fosfolipidima) iz inhaler sa suvim prahom ili u vidu spreja aerosola iz kontejnera pod pritiskom, pumpe, spreja, atomizera ili nebulizera, sa ili bez upotrebe pogodnog propelanta.
[0105] Predmetni pronalazak dalje obezbedjuje anhidrovane farmaceutske kompozicije i dozne oblike koji sadrže jedinjenja predmetnog pronalaska kao aktivne sastojke, tamo gde je potrebno smanjiti izlaganje jedinjenja vodi pre primene. Anhidrovane farmaceutske kompozicije i dozni oblici pronalaska mogu da budu pripremljeni korišćenjem anhidrovanih sastojaka ili sastojaka koji sadrže malo vlage i uslova niske vlage ili niske vlažnosti. Anhidrovana farmaceutska kompozicija može da se pripremi i skladišti tako da se njena anhidrovana prirodao čuva. Prema tome, anhidrovane kompozicije se pakuju korišćenjem materijala za koje je poznato da sprečavaju izlaganje vodi tako da mogu da budu uključeni u pogodne kitove formulacije. Primeri pogodnih pakovanja uključuju, ali nisu ograničeni na, hermetički zatvorene folije, plastična pakovanja, jedinične dozne kontejnere (npr., fiole), blister pakovanja i strip pakovanja.
[0106] Pronalazak dodatno obezbedjuje farmaceutske kompozicije i dozne oblike koji sadrže jedno ili više sredstava koji smanjuju brzinu kojom će se jedinjenje predmetnog pronalaska kao aktivni sastojak razložiti. Takva sredstva, koja su ovde označena kao "stabilizatori” uključuju, ali nisu ograničena na, antioksidanse kao što je askorbinska kiselina, pH pufere, ili puferske soli, itd.
[0107] Jedinjenja formule I u slobodnom obliku ili u obliku soli, ispoljavaju vredna farmakološka svojstva, npr. modulišu ili inhibiraju aktivnost ERK1 i/ili ERK2, na šta ukazuju podaci iz ogleda obezbedjenih u narednim odeljcima, i stoga su indikovana za terapiju kao što je ovde opisano, ili za upotrebu kao hemikalije za istraživanje, npr. kao jedinjenja-istraživački alati za dodatno razumevanje dejstava inhibicije EKR1/2 ili inhibicije biohemijskog puta (MAPK).
[0108] Tako, kao sledeći primer izvodjenja, predmetni pronalazak obezbedjuje jedinjenje formule (I) ili bilo kog od primera izvodjenja u okviru obima formule (I) kao što je ovde opisano, za upotrebu u terapiji. U sledećem primeru izvodjenja, terapija je za bolest koja može da se leči inhibicijom ERK1 i/ili ERK2. U drugom primeru izvodjenja, jedinjenja pronalaska su korisna za lečenje kancera, uključujući, ali bez ograničenja, one koji su ovde pomenuti.
[0109] U drugom primeru izvodjenja, postupak za lečenje bolesti koja može da se leči inhibicijom ERK1 i/ili ERK2 obuhvata primenu terapijski efikasne količine jedinjenja formule (I) ili (IA) ili bilo kog od primera izvodjenja pronalaska kao što je ovde opisano. Bolest može da bude odabrana sa gore pomenute liste pogodnih stanja. Postupak tipično obuhvata primenu efikasne količine jedinjenja kao što je ovde opisano ili farmaceutske kompozicije koja sadrži takvo jedinjenje kod subjekta kome je takav tretman potreban. Jedinjenje može da se primeni bilo kojim pogodnim postupkom kao što su oni koji su ovde opisani, i primena može da se ponavlja u intervalima koje odabere nadležni lekar. Pronalazak tako obezbedjuje jedinjenje formule I i IA ili bilo koje njegove podvrste kao što je ovde opisano za upotrebu u lečenju stanja posredovanog ili povezanog sa prekomernim ili nepoželjnim nivoima aktivnosti ERK1/2, uključujući prethodno pomenute.
[0110] Jedinjenje formule (I), ili bilo kog od ovde opisanih primera izvodjenja takvih jedinjenja, može da se koristi za proizvodnju leka. Lek može da bude za lečenje bolesti koja može da se leči inhibicijom ERK1 i/ili ERK2. Bolest može da bude kancer, npr., kancer odabran sa gore pomenutog spiska, pogodno.
[0111] U nekim primerima izvodjenja, jedinjenja se koriste u kombinaciji sa jednim ili više koterapijskih sredstava. Pogodna ko-terapijska sredstva uključuju antikancerska sredstva, analgetike, antiinflamatorna sredstva, i slično. U nekim primerima izvodjenja, kompozicije uključuju koterapijsko sredstvo koje deluje na put RAF, kao što su B-RAF inhibitor ili C-Raf inhibitor.
[0112] U jednom primeru izvodjenja, pronalazak obezbedjuje kit koji sadrži dve ili više odvojenih farmaceutskih kompozicija, od kojih najmanje jedna sadrži jedinjenje formule (I). U jednom primeru izvodjenja, kit sadrži sredstvo za održavanje odvojenim pomenutih kompozicija, kao što je kontejner, podeljena boca, ili podeljeni paket od folije. Primer takvog kita je blister pakovanje, kakvo se tipično koristi za pakovanje tableta, kapsula i slično.
[0113] Kit pronalaska može da se koristi za primenu različitih doznih oblika, na primer, oralnih i parenteralnih, za primenu odvojenih kompozicija u različitim doznim intervalima, ili za titraciju odvojenih kompozicija jedne prema drugoj. Da bi se olakšalo pridržavanje propisane upotrebe od strane pacijenta, kit pronalaska tipično sadrži uputstvo za upotrebu.
[0114] U kombinovanim terapijama pronalaska, jedinjenje pronalaska i drugi terapijski ko-agens mogu da budu proizvedeni i/ili formulisani od strane istog ili različitih proizvodjača. Osim toga, jedinjenje pronalaska i drugi terapeutik mogu da se povežu u kombinovanu terapiju: (i) pre nego što kombinovani proizvod bude odobren za lekare (npr. u slučaju kita koji sadrži jedinjenje pronalaska i drugo terapijsko sredstvo); (ii) od strane samih lekara (ili pod nadzorom lekara) kratko pre primene; (iii) kod samih pacijenata, npr. tokom uzastopne primene jedinjenja pronalaska i drugog terapijskog sredstva.
[0115] Pronalazak takodje obezbedjuje jedinjenje formule (I) za upotrebu u postupku za lečenje bolesti ili stanja posredovanog sa ERK1 i/ili ERK2, gde je jedinjenje formule (I) pripremljeno za primenu sa drugim terapijskim sredstvom. Pronalazak takodje obezbedjuje drugi terapijski koagens za upotrebu u postupku za lečenje bolesti ili stanja posredovanog sa ERK1 i/ili ERK2, gde je drugi terapijski ko-agens pripremljen za primenu sa jedinjenjem formule (I). Pronalazak takodje obezbedjuje jedinjenje formule (I) za upotrebu u postupku za lečenje bolesti ili stanja posredovanog sa ERK1 i/ili ERK2, gde se jedinjenje formule (I) primenjuje sa drugim terapijskim ko-agensom. Pronalazak takodje obezbedjuje drugi terapijski ko-agens za upotrebu u postupku za lečenje bolesti ili stanja posredovanog sa ERK1 i/ili ERK2, gde se drugi terapijski ko-agens primenjuje sa jedinjenjem formule (I).
[0116] Pronalazak takodje obezbedjuje jedinjenje formule (I) za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja posredovanog sa ERK1 i/ili ERK2, gde je pacijent lečen prethodno ili naknadno (npr. u okviru 24 časa) drugim terapijskim sredstvom. Pronalazak takodje obezbedjuje ko-terapijsko sredstvo za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja posredovanog sa ERK1 i/ili ERK2, gde je pacijent prethodno (npr. u okviru 24 časa) lečen jedinjenjem formule (I).
[0117] U jednom primeru izvodjenja, drugo terapijsko sredstvo (ko-terapijsko sredstvo ili samo ko-agens) je jedinjenje korisno za lečenje kancera, i tipično je lek odobren od FDA koji je odobren za lečenje najmanje jednog tipa kancera. Pogodna ko-terapijska sredstva uključuju erlotinib, bortezomib, fulvestrant, sunitib imatinib mezilat, letrozol, finasunat, platine kao što su oksaliplatin, karboplatin i cisplatin, finasunat, fluorouracil, rapamicin, leukovorin, lapatinib, lonafamib, sorafenib, gefitinib, kapmtotecin, topotekan, briostatin, adezelesin, antraciklin, karzelesin, bizelesin, dolastatin, auristatine, duokarmicin, eleuterobin, taksole kao što su paklitaksel ili docetaksel, ciklofasfamid, doksorubicin, vinkristin, prednizon ili prednizolon, druga alkilirajuća sredstva kao što su mehloretamin, hlorambucil i ifosfamid, antimetabolite kao što su azatioprin ili merkaptopurin, druge mikrotubularne inhibitore (alkaloide vinke kao vinkristin, vinblastin, vinorelbin i vindesin, kao i taksane), podofilotoksine (etopozid, tenipozid, etopozid fosfat i epipodofilotoksine), inhibitore topoizomeraza, druge citotoksine kao što su aktinomicin, daunorubicin, valrubicin, idarubicin, edrekolomab, epirubicin, bleomicin, plikamicin, mitomicin, kao i druga antikancerska antitela (cetuksimab, bevacizumab, ibritumomab, abagovomab, adekatumumab, afutuzumab, alacizumab, alemtuzumab, anatumomab, apolizumab, bavituksimab, belimumab, bivatuzumab mertanzin, blinatumomab, brentuksimab vedotin, kantuzumab mertanzin, katumazomab, cetuksimab, citatuzumab bogatoks, ciksutumumab, klivatuzumab tetraksetan, konatumumab, dacetuzumab, daklizumab, detumomab, ekromeksimab, edrekolomab, elotuzumab, epratuzumab, ertumaksomab, etaracizumab, farletuzumab, figitumumab, frezolimumab, galiksimab, gembatumumab vedotin, gemtuzumab, ibritumomab tiuksetan, inotuzumab ozogamicin, intetumumab, ipilimumab, iratumumab, labetuzumab, leksatumumab, lintuzumab, lukatumumab, lumilisimab, mapatumumab, matuzumab, milatuzumab, mitumomab, nakolomab tafenatoks, naptumomab estafenatoks, necitumumab, nimotuzumab, ofatumumab, olaratumab, oportuzumab monatoks, oregovomab, panitumumab, pemtumomab, pertuzumab, pintumomab, pritumumab, ramucirumab, rilotumumab, robatumumab, rituksimab, sibrotuzumab, takatuzumab tetraksetan, taplitumomab paptoks, tenatumomab, ticilimumab, tigatuzumab, tozitumomab ili<131>I-tozitumomab, trastuzumab, tremelimumab, tuokotuzumab celmoleukin, veltuzumab, vizilizumab, volociksumab, votumumab, zalutumumab, zanolimumab, IGN-101, MDX-010,ABX-EGR, EMD72000, ior-t1, MDX-220, MRA, H-11 scFv, huJ591, TriGem, TriAb, R3, MT-201, G-250, ACA-125, Onyvax-105, CD:-960, Cea-Vac, BrevaRex AR54, IMC-1C11, GlioMab-H, ING-1, anti-LCG MAbs, MT-103, KSB-303, Therex, KW2871, anti-HMI.24, Anti-PTHrP, 2C4 antitelo, SGN-30, TRAIL-RI MAb, antitelo protiv kancera prostate, H22xKi-r, ABX-Mai, imuteran, monofarm-C), i konjugati antitelo-lek koji sadrže bilo koje od gore navedenih sredstava (naročito auristatine MMAE i MMAF, majtanzinoide kao DM-1, kaliheamicine, ili različite citotoksine). Poželjno ko-terapeutici, osim ako nije drugačije naznačeno, uključuju vemurafinib, debrafinib, LGX818, trametinib, MEK162, LEE011, PD-0332991, panobinostat, verinostat, romidepsin, cetuksimab, gefitinib, erlotinib, lapatinib, panitumumab, vandetanib, INC280, everolimus, simolimus, BMK120, BIL719 i CLR457.
[0118] Farmaceutska kompozicija ili kombinacija predmetnog pronalaska može da bude u doznim jedinicama od oko 1-2000 mg aktivnog sastojka/sastojaka za subjekta od oko 50-70 kg, ili oko 1-500 mg ili oko 1-250 mg ili oko 1-150 mg ili oko 0.5-100 mg, ili oko 1-50 mg aktivnih sastojaka. Terapijski efikasna doza jedinjenja, farmaceutske kompozicije, ili njihovih kombinacija, zavisi od vrste subjekta, telesne težine, godina i pojedinačnog stanja, poremećaja ili bolesti koja se leči i njene ozbiljnosti. Lekar, kliničar ili veterinar uobičajenog znanja u ovoj oblasti može lako da odredi efikasnu količinu svakog od aktivnih sastojaka neophodnih za sprečavanje, lečenje ili inhibiciju napredovanja poremećaja ili bolesti.
[0119] Svojstva gore navedenih doza se mogu pokazati u in vitro i in vivo ogledima korišćenjem pogodno sisara, npr., miševa, pacova, pasa, majmuna ili izolovanih organa, tkiva i njihovih preparata. Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da se primene in vitro u obliku rastvora, npr., vodenih rastvora, i in vivo enteralno, parenteralno, pogodno intravenski, npr., kao suspenzija ili u vodenom rastvoru. Doziranje in vitro može da bude u opsegu koncentracija izmedju 10<-3>molova i 10<-9>molova. Terapijski efikasna količina in vivo može da bude u opsegu u zavisnosti od puta primene, izmedju oko 0.1-500 mg/kg, ili izmedju oko 1-100 mg/kg.
[0120] Jedinjenje predmetnog pronalaska može da se primeni istovremeno sa, ili pre ili posle, jednog ili više ko-terapijskih sredstava, takodje ovde označenih kao ko-agens(i). Jedinjenje predmetnog pronalaska može da se primeni odvojeno, istim ili drugim putem primene, ili zajedno u istoj farmaceutskoj kompoziciji kao ko-agens(i).
[0121] U jednom primeru izvodjenja, pronalazak obezbedjuje proizvod koji sadrži jedinjenje formule (I) i najmanje jedan dodatni terapijski ko-agens kao kombinovani preparat za istovremenu, odvojenu ili uzastopnu upotrebu u terapiji. U jednom primeru izvodjenja, terapija je lečenje bolesti ili stanja posredovanog sa ERK1 i/ili ERK2, kao što je kancer. Proizvodi obeznedjeni kao kombinovani preparat uključuju kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I) i drugi terapijski ko-agens(e) zajedno u istoj farmaceutskoj kompoziciji, ili jedinjenje formule (I) i drugi terapijski ko-agens(e) u odvojenom obliku, npr. u obliku kita.
[0122] U jednom primeru izvodjenja, pronalazak obezbedjuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I) i drugi terapijski ko-agens(e). Izborno, farmaceutska kompozicija može da sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač, kao što je gore opisano.
[0123] U jednoj varijaciji, pronalazak obezbedjuje kit koji sadrži dve ili više odvojenih farmaceutskih kompozicija, od kojih najmanje jedna sadrži jedinjenje formule (I). U jednoj varijaciji, kit sadrži sredstvo za održavanje odvojenim navedenih kompozicija, kao što su kontejner, podeljena boca, ili podeljeni paket od folije. Primer takvog kita je blister pakovanje, kakvo se obično koristi za pakovanje tableta, kapsula i slično.
[0124] Kit prema pronalasku može da se koristi za primenu različitih doznih oblika, na primer, oralnog i parenteralnog, za primenu odvojenih kompozicija u različitim doznim intervalima, ili za titraciju odvojenih kompozicija jedne nasuprot drugoj. Da bi se olakšalo pridržavanje propisane upotrebe od strane pacijenta, kit pronalaska tipično sadrži uputstvo za upotrebu.
[0125] U kombinovanim terapijama pronalaska, jedinjenje pronalaska i drugi terapijski ko-agens, mogu da budu proizvedeni i/ili formulisani od strane istog ili različitih proizvodjača. Osim toga, jedinjenje pronalaska i drugi terapeutik mogu da se povežu u kombinovanu terapiju: (i) pre nego što kombinovani proizvod bude odobren za lekare (npr. u slučaju kita koji sadrži jedinjenje pronalaska i drugo terapijsko sredstvo); (ii) od strane samih lekara (ili pod nadzorom lekara) kratko pre primene; (iii) kod samih pacijenata, npr. tokom uzastopne primene jedinjenja pronalaska i drugog terapijskog sredstva.
[0126] Prema tome, pronalazak obezbedjuje jedinjenje formule (I) za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja posredovanog sa ERK1 i/ili ERK2, gde se lek priprema za primenu sa drugim terapijskim ko-agensom. Pronalazak takodje obezbedjuje drugo terapijsko dodatno sredstvo za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja, gde gde se lek primenjuje sa jedinjenjem formule (I). Pogodna koterapijska sredstva za upotrebu sa jedinjenjima pronalaska se tipično biraju na osnovu stanja koje treba da se leči. Na primer, u lečenju melanoma, ko-terapijsko sredstvo može da bude odabrano iz grupe koju čine: aldesleukin, dabrafenib, dakarbazin, DTIC-Dome (dakarbazin), intron A (rekombinantni interferon alfa-2b), ipilimumab, mekinist (trametinib), peginterferon Alfa-2b, PEG-intron (peginterferon alfa-2b), proleukin (aldesleukin), rekombinantni interferon alfa-2b, silatron (peginterferon alfa-2b), tafinlar (dabrafenib), trametinib, vemurafenib, Yervoy (ipilimumab) i zelboraf (vemurafenib). Za lečenje kancera jajnika, ko-terapijsko sredstvo može da bude odabrano iz grupe koju čine: adriamicin PFS (doksorubicin hidrohlorid), adriamicin RDF (doksorubicin hidrohlorid), karboplatina, klafen (ciklofosfamid), cisplatin, ciklofosfamid, citoksan (ciklofosfamid), doksorubicin hidrohlorid, Dox-SL (doksorubicin hidrohlorid lipozom), DOXIL (doksorubicin hidrohlorid lipozom), doksorubicin hidrohlorid lipozom, evacet (doksorubicin hidrohlorid lipozom), gemcitabin hidrohlorid, gemzar (gemcitabin hidrohlorid), hikamtin (topotekan hidrohlorid), lipoDox (doksorubicin hidrohlorid lipozom), neosar (ciklofosfamid), paklitaksel, paraplat (karboplatin), paraplatin (karboplatin), platinol (cisplatin), platinol-AQ (cisplatin), taksol (paklitaksel) i topotekan hidrohlorid. Za lečenje kancera tiroidee, ko-terapijsko sredstvo može da bude odabrano iz grupe koju čine: adriamicin PFS (doksorubicin hidrohlorid), adriamicin RDF (doksorubicin hidrohlorid), kabozantinib-S-malat, kaprelsa (vandetanib), kometrik (kabozantinib-S-malat), doksorubicin hidrohlorid i vandetanib. Za lečenje kancera kolona, koterapijsko sredstvo može da bude odabrano iz grupe koju čine: adrucil (fluorouracil), avastin (bevacizumab), bevacizumab, kamptosar (irinotekan hidrohlorid), kapecitabin, cetuksimab, efudeks (fluorouracil), eloksatin (oksaliplatin), erbituks (cetuksimab), fluoropleks (fluorouracil), fluorouracil, irinotekan hidrohlorid, leukovorin kalcijum, oksaliplatin, panitumumab, regorafenib, stivarga (regorafenib), vektibiks (panitumumab), velkovorin (leukovorin kalcijum), kseloda (kapecitabin), zaltrap (ziv-aflibercept) i ziv-aflibercept. Za lečenje kancera pluća, ko-terapijsko sredstvo može da bude odabrano iz grupe koju čine: abitreksat (metotreksat), abraksan (formulacija nanočestica paklitaksela stabilizovana albuminom), afatinib dimaleat, alimta (pemetreksed dinatrijum), avastin (bevacizumab), bevacizumab, karboplatin, cisplatin, krizotinib, erlotinib hidrohlorid, foleks (metotreksat), foleks PFS (metotreksat), gefitinib, gilotrif (afatinib dimaleat), gemcitabin hidrohlorid, gemzar (gemcitabin hidrohlord), iresa (gefitinib), metotreksat, metotreksat LPF (metotreksat), meksat (metotreksat), meksat-AQ (metotreksat), paklitaksel, formulacija nanočestica paklitaksela stabilizovana albuminom, paraplat (karboplatin), paraplatin (karboplatin), pemetreksed dinatrijum, platinol (cisplatin), platinol-AQ (cisplatin), tarceva (erlotinib hidrohlorid), taksol (paklitaksel) i ksalkori (krizotinib). Za lečenje kancera pankreasa, ko-terapijsko sredstvo može da bude odabrano iz grupe koju čine: adrucil (fluorouracil), efudeks (fluorouracil), erlotinib hidrohlorid, fluoropleks (fluorouracil), fluorouracil, gemcitabin hidrohlorid, gemzar (gemcitabin hidrohlorida), mitomicin C, mitozitreks (mitomicin C), mutamicin (mitomicin) i tarceva (erlotinib hidrohlorid). Za lečenje cervikalnog kancera, ko-terapijsko sredstvo može da bude odabrano iz grupe koju čine: blenoksan (bleomicin), bleomicin, cisplatin, hikamtin (topotekan hidrohlorid), platinol (cisplatin), platinol-AQ (cisplatin) i topotekan hidrohlorid. Za lečenje kancera glave i vrata, ko-terapijsko sredstvo može da bude odabrano iz grupe koju čine: abitreksat (metotreksat), adrucil (fluorouracil), blenoksan (bleomicin), bleomicin, cetuksimab, cisplatin, docetaksel, efudeks (fluorouracil), erbituks (cetuksimab), fluoropleks (fluorouracil), fluorouracil, foleks (metotreksat), foleks PFS (metotreksat), metotreksat, metotreksat LPF (metotreksat), meksat (metotreksat), meksat-AQ (metotreksat), platinol (cisplatin), platinol-AQ (cisplatin) i taksoter (docetaksel). Za lečenje leukemije, uključujući CMML, ko-terapijsko sredstvo može da bude odabrano iz grupe koju čine: bosulif (bosutinib), bosutinib, klafen (ciklofosfamid), ciklofosfamid, citarabin, citosar-U (citarabin), citoksan (ciklofosfamid), dasatinib, glivek (imatinib mezilat), ikluzig (ponatinib hidrohlorid), imatinib mezilat, neosar (ciklofosfamid), nilotinib, omacetaksin mepesukcinat, ponatinib hidrohlorid, spricel (dasatinib), sinribo (omacetaksin mepesukcinat), tarabin PFS (citarabin) i tasigna (nilotinib).
[0127] Specifične individualne kombinacije koje mogu da obezbede konkretne koristi od lečenja uključuju jedinjenje pronalaska sa najmanje jednim jedinjenjem odabranim od inhibitora BRAF, MEK, CDK4/6, SHP-2, HDAC, EGFR, MET, mTOR, PI3K, i AKT. Primeri ovih inhibitora uključuju vemurafinib, debrafinib, LGX818, trametinib, MEK162, LEE011, PD-0332991, panobinostat, verinostat, romidepsin, cetuksimab, gefitinib, erlotinib, lapatinib, panitumumab, vandetanib, INC280, everolimus, simolimus, BMK120, BIL719 i CLR457.
[0128] Sledeći primeri su namenjeni da ilustruju pronalazak i ne treba ih shvatiti kao ograničavajuće. Temperature su date u stepenima Celzijusa. Osim ako nije drugačije navedeno, sva uparavanja se izvode pod sniženim pritiskom, tipično izmedju oko 15 mm Hg i 100 mm Hg (= 20-133 mbar). Struktura finalnih proizvoda, intermedijera i polaznih materijala je potvrdjena standardnim analitičkim postupcima, npr., mikroanalizom i spektroskopskim karakterizacijama, npr., MS, IR, NMR.
[0129] Svi polazni materijali, gradivni blokovi, reagensi, kiseline, baze, dehidrataciona sredstva, rastvarači i katalizatori korišćeni za sintezu jedinjenja predmetnog pronalaska ili komercijalno dostupni ili mogu da budu proizvedeni postupcima organske sinteze poznatim stručnjaku u ovoj oblasti (Houben-Weil 4th Ed. 1952, METHODS OF ORGANIC SYNTHESIS, THIEME, Volume 21). Dalje, jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da budu proizvedena postupcima organske sinteze poznatim stručnjaku u ovoj oblasti u svetlu sledećih primera.
[0130] Jedinjenja i/ili intermedijeri su okarakterisani pomoću tečne hromatografije visokih performansi (HPLC) korišćenjem hromatografskog sistema Waters Millennium sa modulom za razdvajanje 2695 (Milford, MA). Analitičke kolone su bile reverzno-fazne Phenomenex Luna C18 -5 µ, 4.6 x 50 mm, proizvodjača Alltech (Deerfield, IL). Korišćen je gradijent elucije (protok 2.5 mL/min), počevši sa 5% acetonitrila/95% vode i napredujući do 100% acetonitrila tokom perioda od 10 minuta. Svi rastvarači su sadržali 0.1% trifluorosirćetnu kiselinu (TFA). Jedinjenja su detektovana apsorpcijom ultraljubičaste svetlosti (UV) na 220 ili 254 nm. HPLC rastvarači su poticali od Burdick and Jackson (Muskegan, MI), ili Fisher Scientific (Pittsburgh, PA).
[0131] Maseno-spektrometrijska analiza je izvedena na sistemu Waters System (Waters Acquity UPLC i maseno-spektrometrijski detektor Waters SQD; kolona: Phenomenex Kinetex 2.6 um C18, veličina kolone 4.6 x 50 mm; temperatura kolone 50°C, gradijent: 2-98% acetonitril u vodi sa 0.1% TFA tokom perioda od 1.5 minuta; protok 1.2 mL/min (ili polarni gradijent 1-30% tokom 1.3 minuta, nepolarni gradijent 55-98% tokom 1.3 minuta); opseg skeniranja molekulske težine masenog spektrometra 150-850; ili 150-1900, napon konusa 20 V. Sve mase su prikazane kao one kod protonovanih parentalnih jona, osim ako nije drugačije naznačeno. Analiza nuklearne magnetne rezonance (NMR) izvedena je na odabranim jedinjenjima, korišćenjem Varian 400 MHz NMR (Palo Alto, CA). Spektralna referenca je bila ili TMS ili poznato hemijsko pomeranje rastvarača.
[0132] Difrakcija X-zraka na prahu (XRPD) je izvedena kao što sledi:
[0133] Kao što će stručnjaku biti jasno, relativni intenziteti različitih pikova u “tabeli za sliku 3” mogu da variraju zbog brojnih faktora kao što su dejstva orjentacije kristala u snopu X-zraka ili čistoća materijala koji se analizira ili stepen kristalnosti uzorka. Položaji pikova mogu takodje da budu pomereni za varijacije u visini uzorka ali položaji pikova će ostati suštinski kao što je definisano u “tabeli za sliku 3”. Stručnjaku će takodje biti jasno da će merenja korišćenjem drugačije talasne dužine rezultovati u drugačijim pomeranjima prema jednačini Bragg-a – nλ = 2d sin �. Takvi alternativni obrasci XRPD stvoreni upotrebom alternativnih talasnih dužina ipak reprezentuju isti materijal.
[0134] Diferencijalna skenirajuća kalorimetrija/termogravimetrijska analiza (DSC/TGA) je izvedena kao što sledi:
[0135] Kao što će stručnjaku u ovoj oblasti biti jasno, neznatne varijacije u zapaženim pikovima se očekuju na osnovu specificčnog spektrometra koji se koristi i tehnike pripreme uzoraka analitičara. Odredjena margina greške je prisutna pri svakoj dodeli vrednosti piku (+/- cm<-1>).
[0136] Skraćenice koje su ovde korišćene imaju svoje uobičajeno značenje u odgovarajućoj oblasti, osim ako nije drugačije naznačeno ili definisano na sledećoj listi:
ATP adenozin 5'-trifosfat
BINAP racemski 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftil
BOC tercijarni butoksikarbonil
br široko
BSA govedji serum albumin
d dublet
dd dublet dubleta
DCM dihlorometan
DIEA dietilizopropilamin
DME 1,4-dimetoksietan
DMF N,N-dimetilformamid
DMSO dimetilsulfoksid
DTT ditiotreitol
EDTA etilendiamin tetrasirćetna kiselina
ESI elektrosprej jonizacija
EtOAc etil acetat
FCC fleš hromatografija na koloni
h čas(ovi)
HBTU 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-benzotriazoliumheksafluorofosfat(1-) 3-oksid HOBt 1-hidroksi-7-azabenzotriazol
HPLC tečna hromatografija na visokom pritisku
IR infracrvena spektroskopija
LCMS tečna hromatografija i masena spektrometrija
MeOH metanol
MS masena spektrometrija
MW mikrotalasno zračenje
m multiplet
min minuti
mL millilitar/mililitri
m/z odnos mase prema naelektrisanju
NMR nuklearna magnetna rezonanca
ppm delova na milion
PyBOP benzotriazol-1-iloksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat
rac racemski
rt sobna temperatura
s singlet
t triplet
TFA trifluorosirćetna kiselina
THF tetrahidrofuran
Tris∙HCl aminotris(hidroksimetil)metan hidrohlorid
PRIMERI
[0137] Sledeći primeri ilustruju odredjene primere izvodjenja pronalaska i kako ih napraviti i koristiti, oni nisu namenjeni da ograniče obim pronalaska. Sledeći primeri su uključeni u svrhu reference: 3, 4, 5, 6, 10-17, 19-24, 46, 48, 49, 50-52, 54, 66, 67, 72, 75, 78, 86-93, 99-104, 109, 110-118, 124-126, 130-134, 139, 145, 147, 155, 171-173, 200-205, 207-210, 236-239, 245, 246, 285, 286, 310, 311, 316-321, 323, 324, 328, 333, 334, 349-352, 399, 400, 402-413, 421, 424, 427, 430, 431 i 439.
Postupak 1
Primer 1
Sinteza (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida
[0138]
Šema 1
Faza 1.5-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amin
[0139] Rastvoru boronskog estra (6.64 g, 31.6 mmol), 5-bromopirazin-2-amina (5 g, 28.7 mmol), i PdCl2(dppf) (2.1 g, 2.87 mmol) dodat je DME (71.8 mL) i 2 M rastvor Na2CO3(24 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 90°C tokom 15 h. Reakciona smeša je obradjena sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtran, i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (gradijent EtOAc u heptanima) dajući 5-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amin u prinosu od 57%. LCMS (m/z): 178.1 (MH<+>), 0.34 min; 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8.17 - 8.03 (m, 1 H), 8.04 - 7.88 (m, 1 H), 6.57 - 6.41 (m, 1 H), 4.68 - 4.42 (m, 2 H), 4.42 - 4.29 (m, 2 H), 4.06 -3.84 (m, 2 H), 2.68 - 2.47 (m, 2 H).
Faza 2.5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amin
[0140] Rastvor 5-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina (2.7 g, 15.24 mmol) i Pd-C (10%, tip Degussa) (1.6 g, 1.5 mmol) u MeOH (50 mL) je degaziran strujom N2tokom 15 min. Nakon što je opremljena balonom sa vodoničnim gasom, reakciona smeša je mešana tokom 15 h na sobnoj temperaturi. Sirovi proizvod je filtran kroz čep od celita i opran sa EtOAc. Isparljivi materijal je koncentrovan u vakuumu dajući 5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amin i korišćen u sledećoj fazi. LCMS (m/z): 180.3 (MH<+>), 0.28 min.
Faza 3.3-bromo-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amin
[0141] Ledeno hladnom rastvoru 5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina (2.8 g, 15.6 mmol) u CH3CN (52 mL) dodat je NBS (2.78 g, 15.62 mmol) u dve porcije na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom i oprana zasićenim rastvorom natrijum karbonata, vodom, zasićenim slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Sirovi 3-bromo-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amin (3.9 g, 97%) je korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 258/260 (MH<+>), 0.52 min; 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.83 (s, 1H), 4.90 (br. s., 2H), 4.14 - 4.02 (m, 2H), 3.59 - 3.43 (m, 2H), 2.83 (d, J=5.5 Hz, 1H), 1.91 – 1.77 (m, 4H).
Faza 4. (S)-4-bromo-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0142] Rastvoru 4-bromobenzoeve kiseline (892 mg, 4.44 mmol) u THF (9.9 mL) dodat je (S)-2-amino-2-feniletanol (609 mg, 4.44 mmol), DIEA (1.9 mL, 11.1 mmol), PyBroP (2.5 g, 5.32 mmol), i HOBT (815 mg, 5.32 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 20 h. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom. Nakon što je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan u vakuumu, sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (gradijent EtOAc u DCM) dajući (S)-4-bromo-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid (850 mg, 60%). LCMS (m/z): 338.1 (MH<+>), 0.61 min.
Faza 5. (S)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamid
[0143] Rastvoru (S)-4-bromo-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida, 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana (B2(PIN)2) (238 mg, 0.937 mmol), Pd2(dba)3(21.45 mg, 0.023 mmol), tricikloheksilfosfina (19.71 mg, 0.070 mmol) u dioksanu (1.562 mL) dodat je kalijum acetat (138 mg, 1.405 mmol). Reakciona smeša je degazirana u struji N2tokom 15 min. Reakciona smeša je zagrevana na 100<o>C preko noći. Nakon razblaživanja sa EtOAc, reakciona smeša j filtrirana kroz celit. Posle koncentrovanja, (S)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamid je korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 368.3 (MH<+>), 0.88 min (za boronski estar) i 286.1 (MH<+>), 0.49 min (za odgovarajuću boronsku kiselinu).
Faza 6. (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0144] Rastvoru 3-bromo-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina (154 mg, 0.418 mmol), (S)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamida (90 mg, 0.349 mmol), i PdCl2(dppf) (25.5 mg, 0.035 mmol) dodat je dioksan (2.3 mL) i 2 M rastvor Na2CO3(1.163 mL). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (120°C, 10 min). Reakciona smeša je obradjena sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen prep HPLC. Čiste frakcije su kombinovane, pretvorene u slobodnu bazu pomoću rastvora natrijum karbonata i ekstrahovane sa EtOAc. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtran, i osušen u vakuumu. Čista čvrsta supstanca je rastvorena u MeCN/voda (1:1, 6 mL) i osušena zamrzavanjem dajući (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid kao slobodnu bazu (46%). LCMS (m/z): 419.2 (MH<+>), 0.58 min; 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.74 (d, J = 12 Hz, 1 H), 7.99 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7.88 (s, 1 H), 7.79 (d, J = 12 Hz, 2 H), 7.37 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7.29 (m, 2 H), 7.22 (m, 1 H), 5.99 (bs, 1 H), 5.07 (m, 1 H), 3.91 (m, 2 H), 3.67 (m, 2 H), 3.41 (m, 2 H), 2.82 (m, 1 H), 1.72 (m, 4 H).
Sinteza 3-fluoro-4-(3-(metilsulfonil)benzilkarbamoil)fenilboronske kiseline
[0145]
Šema 2
[0146] Smeša 4-borono-2-fluorobenzoeve kiseline (218 mg, 1.2 mmol), (3-(metilsulfonil)fenil)-metanamina (200 mg, 1.08 mmol), DIEA (0.754 mL, 4.32 mmol) i TBTU (381 mg, 1.2 mmol) u DMF (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 2 dana, zatim je reakciona smeša razblažena vodom (10 mL), i proizvod staložen u vidu gume, a supernatant je odvojen centrifugiranjem, i gumasti ostatak je sonifikovan vodom (3 mL), i gumasti ostatak je dodatno osušen pod visokim vakuumom čime je dobijena 3-fluoro-4-(3-(metilsulfonil)benzilkarbamoil)-fenilboronska kiselina (335 mg, 88%) kao bela pena. LCMS (m/z): 352.1 (MH<+>), 0.51 min.
Sinteza (+/-)-(3-fluoro-4-((2,2,2-trifluoro-1-feniletil)karbamoil)fenil)boronske kiseline
[0147]
Šema 3
[ 0148] Smeša 4-borono-2-fluorobenzoeve kiseline (54 mg, 0.294 mmol) u DCM (1468 µL) je ohladjena do 0°C. Zatim je dodat Ghosez-ov reagens N,N,3-trimetilbut-2-en-2-amin (65.8 µL, 0.587 mmol) i cela smeša je mešana na rt 20 min. Ova smeša je dodata u smešu TEA (246 µL, 1.762 mmol), 2,2,2-trifluoro-1-feniletanamina (59.1 mg, 0.338 mmol) i DCM (1468 µL). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. U reakcionu smešu je dodat EtOAc, i opran zasićenim natrijum bikarbonatom, vodom, i osušen iznad Na2SO4. Filtriran je i koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod koji je prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 342.2 (MH<+>), 0.84 min.
Sinteza (R)-1-(2-fluorofenilsulfonil)piperidin-3-amina
[0149]
[0150] (R)-3-Boc-aminopiperidin (1.05 g, 5.25 mmol) je rastvoren u DCM (10 mL) a zatim je dodat trietilamin (1.10 mL, 7.89 mmol). Ovom rastvoru na sobnoj temperaturi dodat je 2-fluorobenzensulfonilhlorid (1.127 g, 5.79 mmol). Posle 2 h, reakcija je ocenjena kao završena pomoću LCMS i razblažena vodom i ekstrahovana sa DCM (30 mL), a organski sloj je izdvojen i osušen iznad magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan i prenet u sledeću fazu kao takav. Ovaj sirovi proizvod je rastvoren u DCM (25 mL) i TFA (10 mL) dodatim u jednoj porciji. Reakciona smeša je praćena pomoću LCMS. Posle 1 h, TFA je uklonjen u vakuumu i ostatak je suspendovan u 3N HCl i opran etrom. Vodeni sloj je učinjen baznim i ekstrahovan sa DCM i sloj u DCM je izdvojen i osušen iznad magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo 873 mg (R)-1-((2-fluorofenil)sulfonil)piperidin-3-amina kao željenog proizvoda u vidu slobodne baze. LCMS (m/z): 255.5 (MH<+>), 0.49 min.
Sinteza (R)-1-(fenilsulfonil)piperidin-3-amina
[0151]
[0152] (R)-3-Boc-aminopiperidin (0.843g, 4.21 mmol) je rastvoren u DCM (10 mL) i zatim je dodat trietilamin (0.88 mL, 6.31 mmol). Ovom rastvoru na sobnoj temperaturi dodat je benzenesulfonilhlorid (0.818g, 4.63 mmol). Posle 2 h, reakcija je ocenjena završenom pomoću LCMS i razblažena vodom i ekstrahovana sa DCM (30 mL), i organski sloj je izdvojen i osušen iznad magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan i prenet u sledeću fazu kao takav. Sirovi proizvod iz gornje rakcije je rastvoren u DCM (25 mL) i TFA (10 mL) dodatim u jednoj porciji. Reakciona smeša je praćena pomoću LCMS. Posle 3 h, zapažena je potpuno uklanjanje zaštitne grupe Boc. Na ovom stadijumu, TFA je uklonjen u vakuumu i ostatak je zatim suspendovan u 3N HCl i opran etrom. Vodeni sloj je učinjen baznim i ekstrahovan sa DCM i sloj DCM je izdvojen i osušen iznad magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo 850 mg (R)-1-(fenilsulfonil)piperidin-3-amina kao željenog proizvoda u vidu slobodne baze. LCMS (m/z): 241.4 (MH<+>), 0.43 min.
Sinteza (R)-3-fluoro-4-(1-(2-fluorofenilsulfonil)piperidin-3-ilkarbamoil)fenilboronske kiseline [0153]
Šema 4
[0154] Rastvoru 4-borono-2-fluorobenzoeve kiseline (160 mg, 0.870 mmol), (R)-1-(2-fluorofenilsulfonil)piperidin-3-amina (225 mg, 0.870 mmol), i DIEA (456 µL, 2.61 mmol) u THF (1450 µL) i DMF (1450 µL) dodat je HOAt (237 mg, 1.740 mmol) i EDC (417 mg, 2.175 mmol). Posle 3 h mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran sa NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtran i koncentrovan u vakuumu dajući (R)-3-fluoro-4-(1-(2-fluorofenilsulfonil)piperidin-3-ilkarbamoil)fenilboronsku kiselinu, koja je korišćena u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 425.2 (MH<+>), 0.72 min.
Sinteza 4-(2,2-difluoro-1-feniletilkarbamoil)-3-fluorofenilboronske kiseline
[0155]
Šema 5
Faza 1.2,2-difluoro-1-feniletanamin
[0156] Rastvoru 2,2-difluoro-1-feniletanona (1 g, 6.4 mmol) u toluenu (32 mL) na sobnoj temperaturi dodat je LiHMDS (1M u THF) (7.05 mL, 7.05 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 30 min, nakon čega je dodat BH3-DMS (1.216 mL, 12.81 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 1 h. Posle hladjenja na 0°C, 2 N vodeni rastvor NaOH je pažljivo dodavan tokom 5 min (Pažnja! Razvija se gas). Reakcija je mešana tokom 1 h. Sloj je izdvojen i opran vodom i zasićenim slanim rastvorom. Posle sušenja iznad natrijum sulfata, dodata je HCl u MeOH (7.17 mL, 8.97 mmol) čime se obrazuje beli talog. Talog je filtran, opran etrom, i osušen u vakuumu dajući 2,2-difluoro-1-feniletanamin (21%).1H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.49 (s, 5 H), 6.52 -6.07 (m, 1 H), 4.78 - 4.69 (m, 2 H).
Faza 2.4-(2,2-difluoro-1-feniletilkarbamoil)-3-fluorofenilboronska kiselina
[0157] Rastvoru 4-borono-2-fluorobenzoeve kiseline (200 mg, 1.087 mmol), 2,2-difluoro-1-feniletanamina (232 mg, 1.196 mmol), i DIEA (0.570 mL, 3.26 mmol) u THF (3.866 mL) i DMF (0.483 mL) dodat je HOAt (296 mg, 2.175 mmol) i EDC (521 mg, 2.72 mmol). Posle 3 h mešanja na sobnoj temperaturi, smeši je dodat 10% rastvor limunske kiseline (pH ~3) i ekstrahovana je sa 2-metil THF i EtOAc (1:1). Organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4, filtrirani, i koncentrovani. Dobijena je sirova 4-(2,2-difluoro-1-feniletilkarbamoil)-3-fluorofenilboronska kiselina (90%) i korišćena za sledeću fazu bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 375.3 (MH<+>), 0.48 min.
Sinteza 4-benzil-8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,4-dihidrobenzo[f][1,4]oksazepin-5(2H)-ona
[0158]
Šema 6
Faza 1. N-benzil-4-bromo-2-fluoro-N-(2-hidroksietil)benzamid
[0159] Rastvoru 4-bromo-2-fluorobenzoil hlorida (1 g, 4.21 mmol) u THF (14.04 mL) dodat je DIEA (1.103 mL, 6.32 mmol) i 2-(benzilamino)etanol (0.764 g, 5.05 mmol) na sobnoj temperaturi.
Reakciona smeša je mešana tokom noći. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom. Posle sušenja iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran je i koncentrovan u vakuumu, i sirovi N-benzil-4-bromo-2-fluoro-N-(2-hidroksietil)benzamid je korišćen u sledećoj fazi (83%). LCMS (m/z): 352/354 (MH<+>), 0.83 min.
Faza 2.4-benzil-8-bromo-3,4-dihidrobenzo[f][1,4]oksazepin-5(2H)-on
[0160] Rastvoru N-benzil-4-bromo-2-fluoro-N-(2-hidroksietil)benzamida (494 mg, 1.403 mmol) u DMF (14.00 mL) polako je dodavan NaH (60% u ulju) (61.7 mg, 1.543 mmol). Posle razvoja H2gasa, reakciona smeša je zagrevana na 90°C tokom 24 h. Posle kvenčovanja vodom, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran sa vodom i zasićenim slanim rastvorom. Posle sušenja nad anhidrovanim natrijum sulfatom i filtracije, organski sloj je uparen u vakuumu. Uljani sirovi 4-benzil-8-bromo-3,4-dihidrobenzo[f][1,4]oksazepin-5(2H)-on je prečišćen fleš hromatografijom (gradijent EtOAc u heptanu) sa prinosom od 84%. LCMS (m/z): 332.1/334.1 (MH<+>), 0.94 min.
Faza 3. 4-benzil-8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,4-dihidrobenzo[f][1,4]oksazepin-5(2H)-on
[0161] Rastvoru 4-benzil-8-bromo-3,4-dihidrobenzo[f][1,4]oksazepin-5(2H)-ona (111.3 mg, 0.335 mmol), B2(PIN)2(170 mg, 0.670 mmol), Pd2(dba)3(15.34 mg, 0.017 mmol), tricikloheksilfosfina (14.09 mg, 0.050 mmol) u dioksanu (3.35 mL) dodat je kalijum acetat (99 mg, 1.005 mmol) neposredno nakon degaziranja. Reakciona smeša je zagrevana na 100°C preko noći. Posle razblaživanja sa EtOAc, reakciona smeša je filtrirana kroz celit. Posle koncentrovanja, dobijen je sirovi 4-benzil-8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,4-dihidrobenzo[f] [1,4]oksazepin-5(2H)-on (>99%) i korišćen za sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 298.1 (MH<+>za boronsku kiselinu), 0.63 min i 380.2 (MH<+>), 1.05 min.
Sinteza (S)-2-(metilamino)-2-feniletanola
[0162]
Šema 7
[0163] Suspenziji LiAlH4(0.689 g, 18.16 mmol) u THF (20.18 mL) polako je dodavana (S)-2-(metilamino)-2-fenilsirćetna kiselina (1 g, 6.05 mmol) u THF (20 mL) tokom 10 min na 0°C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Nakon toga je kvenčovana vodom (0.7 mL), NaOH (2.1 mL), vodom (0.7 mL). Reakciona smeša je filtrana. Filtrat je ekstrahovan sa EtOAc 3 puta. Kombinovani organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtran, i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (10% metanol u DCM) dajući (S)-2-(metilamino)-2-feniletanol kao bezbojno ulje sa prinosom od 55%. LCMS (m/z): 152.1 (MH<+>), 0.31 min;<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.40 - 7.33 (m, 2 H), 7.32 - 7.27 (m, 3 H), 3.77 - 3.69 (m, 1 H), 3.69 - 3.63 (m, 1 H), 3.58 (d, J = 9.8 Hz, 1 H), 2.36 (s, 3 H).
Sinteza (S)-4-feniloksazolidina
[0164]
Šema 8
[0165] Rastvoru (S)-2-amino-2-feniletanola (1.5 g, 10.93 mmol) u metanolu (36.4 mL) dodat je formaldehid (1.065 g, 13.12 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 dana. Reakciona smeša je koncentrovana do suva. Sirovi material je prečišćen fleš hromatografijom (0-50% EtOAc/heptani) da bi se dobio (S)-4-feniloksazolidin sa prinosom od 40%. LCMS (m/z): 150.1 (MH<+>), 0.31 min.
Sinteza (S)-terc-butil (2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)karbamata
[0166]
Šema 9
Faza 1. (R)-2-amino-1-(3-hlorofenil)etanol
[0167] Rastvoru (R)-2-(3-hlorofenil)oksirana (13 g, 84 mmol) u THF (84 mL) dodat je polako NaHMDS (1 M u THF) (252 mL, 252 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana preko noći. U reakcionu smešu je dodata voda (33 mL, 2.5 mL/g). Posle mešanja u toku 5 h na sobnoj temperaturi, rastvarač je uklonjen u vakuumu do oko 1/4 i raspodeljen pomoću DCM. Donji sloj je blago zamućen, a gornji sloj je rastvor smedje boje. Oba sloja su koncentrovana, i sadržala su željeni (R)-2-amino-1-(3-hlorofenil)etanol (14 g, 97%). Kombinovani proizvodi su upotrebljeni u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 172.1 (MH<+>), 0.37 min.
Faza 2. (R)-terc-butil (2-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamat
[0168] Rastvoru (R)-2-amino-1-(3-hlorofenil)etanola (14 g, 82 mmol) u THF (272 mL) dodat je di-terc-butil dikarbonat (24.92 g, 114 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa DCM, a zatim oprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata. Izdvojeni organski sloj je zatim osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtran, i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0 do 50% etil acetata u heptanu) dajući (R)-terc-butil (2-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamat (49.2%). LCMS (m/z): 216 (MH<+>-<t>Bu), 0.85 min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1.40 (s, 9 H) 3.18 (s, 1 H) 3.26 (d, J=4.70 Hz, 1 H) 4.69 (br. s., 1 H) 7.20 - 7.34 (m, 3 H) 7.35 - 7.41 (m, 1 H).
Faza 3. (S)-terc-butil (2-(3-hlorofenil)-2-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)etil)karbamat
[0169] Rastvoru (R)-terc-butil (2-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamata (8.12 g, 29.9 mmol) u THF (100 mL) dodat je ftalimid (6.16 g, 41.8 mmol) i trifenilfosfin vezan za polimer (3 mmol PPh3/1 g smole, 9.8 g). DTBAD (7.09 g, 30.8 mmol) u THF (20 mL) je dodat polako na sobnoj temperaturi u reakcionu smešu, koja je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i oprana sa EtOAc. Rezultujući filtrat je opran rastvorom Na2CO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtran, i koncentrovan u vakuumu. Sirovi material je prečišćen fleš hromatografijom (0-30% EtOAc/heptan) dajući (S)-terc-butil (2-(3-hlorofenil)-2-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)etil)karbamat (58.4%). LCMS (m/z): 301.1 (MH<+>-Boc), 1.06 min.
Faza 4. (S)-terc-butil (2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)karbamat
[0170] Rastvoru (S)-terc-butil (2-(3-hlorofenil)-2-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)etil)karbamata (5.0 g, 12.47 mmol) u etanolu (41.6 mL) dodat je hidrazin hidrat (6.06 mL, 125 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 60°C tokom 2 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz čep od celita. Filtrat je koncentrovan i ostatak je razblažen sa DCM i filtran kroz celit. Isti postupak je ponavljan dok beli talog nije prestao da se javlja. Da bi se beli sporedni proizvod u potpunosti uklonio, proizvod je rastvoren u 1N HCl (30 mL), opran sa EtOAc, i vodena faza je neutralizovana do pH 7, a zatim povratno ekstrahovana pomoću EtOAc. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrana, i koncentrovana u vakuumu dajući (S)-terc-butil (2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)karbamat (89%). LCMS (m/z): 271.1 (MH<+>), 0.58 min.
Tabela 1. Aril halidi ili odgovarajući boronski estri/kiseline dobijene obrazovanjem amidne veze i/ili obrazovanja boronskog estra
Primer 2
Sinteza (S)-4-(2-amino-5-(piperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida [0171]
Šema 10
Faza 1. terc-Butil 6-amino-5',6'-dihidro-[3,4'-bipiridin]-1'(2'H)-karboksilat
[0172] Rastvoru 5-bromopiridin-2-amina (0.84 g, 4.85 mmol) u DME (10 mL) dodat je N-Boc-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (1 g, 3.23 mmol) i natrijum karbonat (4.85 mL, 9.70 mmol). Smeša je pročišćena azotom tokom 5 min, i nakon toga je dodat PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.26 g, 0.32 mmol). Rezultujuća smeša je zagrevana do 120°C u u uljanom kupatilu 2 h. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom, oprana vodom, zasićenim slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silika gela (ISCO) eluiranjem sa 0-90% etil acetata u heptanu da bi se dobio terc-butil 6-amino-5',6'-dihidro-[3,4'-bipiridin]-1'(2'H)-karboksilat (560 mg, 63 %) kao čvrsta supstanca smedje boje. LCMS (m/z): 276 (MH<+>), 0.59 min.
Faza 2. terc-Butil 4-(6-aminopiridin-3-il)piperidin-1-karboksilat
[0173] Suspenzija terc-butil 6-amino-5',6'-dihidro-[3,4'-bipiridin]-1'(2'H)-karboksilata (560 mg, 2.03 mmol), 5% Pd/C (1082 mg, 0.5 mmol) u metanolu (30 mL) je pročišćena azotom u toku 2 min. Reakciona smeša je mešana pod vodonikom na sobnoj temperaturi 16 h. Reakciona smeša je razblažena dihlorometanom (50 mL) i filtrirana kroz čep od celita. Filtrat je koncentrovan i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silika gela (ISCO) eluiranjem sa 0-90% etil acetata u heptanu da bi se dobio terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il)piperidin-1-karboksilat (180 mg, 31.9 %) kao čvrsta supstanca žute boje. LCMS (m/z): 278 (MH<+>), 0.57 min.
Faza 3. terc-butil 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)piperidin-1-karboksilat
[0174] Ledeno hladnom rastvoru terc-butil 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)piperidin-1-karboksilata (180 mg, 0.65 mmol) u DCM (18 mL) dodat je NBS (116 mg, 0.65 mmol) u dve porcije. Reakciona smeša je mešana na 0°C u ledenom kupatilu 30 min. Reakcioni rastvor je razblažen etil acetatom, opran vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan. Rezultujući ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silika gela (ISCO) eluiranjem sa 0-100% etil acetata u heptanu da bi se dobio terc-butil 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)piperidin-1-karboksilat (180 mg, 78%) kao ulje žute boje. LCMS (m/z): 300/302 (MH<+>), 0.67 min.
Faza 4. terc-butil 4-(6-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)piperidin-1-karboksilat
[0175] U suspenziju terc-butil 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)piperidin-1-karboksilata (180 mg, 0.50 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) dodat je bis(pinakolato)diboron (385 mg, 1.51 mmol) i kalijum acetat (248 mg, 2.53 mmol). Smeša je pročišćena azotom tokom 3 min, zatim je dodat PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (49.5 mg, 0.061 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 110°C u uljanom kupatilu 20 h i filtrirana kroz neutralnu aluminu (1 g). Filtrat je koncentrovan da bi se dobio sirovi terc-butil 4-(6-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)piperidin-1-karboksilat, koji je korišćen neposredno u sledećoj fazi bez ikakvog prečišćavanja. LCMS (m/z): 322 (MH<+>za boronsku kiselinu), 0.60 min.
Faza 5. (S)-4-(2-Amino-5-(piperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0176] U suspenziju (S)-4-bromo-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida (67.1 mg, 0.20 mmol) u DME (5 mL) dodat je terc-butil 4-(6-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)piperidin-1-karboksilat (40 mg, 0.099 mmol) i natrijum karbonat (0.24 mL, 0.49 mmol). Smeša je pročišćena azotom 10 min, zatim je dodat PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (12.15 mg, 0.015 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 120°C u uljanom kupatilu 3 h. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom. Organski rastvor je opran vodom, zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan. Rezultujući ostatak je obradjen dodatkom 30% TFA u DCM (20 mL) u toku 15 min. Reakciona smeša je koncentrovana i sirovi proizvod je prečišćen pomoću HPLC da bi se dobio (S)-4-(2-amino-5-(piperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid (9 mg, 20.8 %) kao so TFA. LCMS (m/z): 435 (MH<+>), 0.44 min;<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ ppm 8.63 (br. s., 1 H) 7.90 (t, J=7.77 Hz, 1 H) 7.84 (s, 2 H) 7.47 -7.24 (m, 7 H), 5.27 -5.17 (m, 1 H) 3.93- 3.79 (m, 2 H) 3.52 (d, J=12.60 Hz, 2 H) 3.21- 3.05 (m, 2 H) 2.96 (t, J=12.31 Hz, 1 H) 2.15 (d, J=14.07 Hz, 2 H) 1.96 -1.78 (m, 2 H).
Sinteza 3-bromo-5-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)pirazin-2-amina i metil 4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidin-1-karboksilata
[0177]
Šema 11
[0178] Prateći faze 1 do 3 na šemi 10, korišćenjem 5-bromopirazin-2-amina i N-Boc-5,6-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata, dobijen je terc-butil 4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidin-1-karboksilat. LCMS (m/z): 301.0/303.0 (MH<+>-<t>Bu), 0.875 min.
Faza 1.3-bromo-5-(piperidin-4-il)pirazin-2-amin
[0179] Rastvoru terc-butil 4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidin-1-karboksilata (70 mg, 0.196 mmol) u DCM (4 mL) dodat je TFA (1 mL, 12.98 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 45 min. Zatim je dodat toluen, isparljivi materijali su upareni dajući 3-bromo-5-(piperidin-4-il)pirazin-2-amin. Sirovi proizvod je korišćen neposredno za sledeću reakciju (99%). LCMS (m/z): 257.0/259.0 (MH<+>), 0.329 min.
Faza 2.3-bromo-5-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)pirazin-2-amin
[0180] U 3-bromo-5-(piperidin-4-il)pirazin-2-amin (50 mg, 0.194 mmol) u DCM (2 mL) u ledenom kupatilu dodat je DIEA (340 µl, 1.945 mmol) i metansulfonil hlorid (16.67 µl, 0.214 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 60 min. Reakciona smeša je ekstrahovana sa DCM. Organski sloj je opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen u vakuumu. (30mg, 46%). LCMS (m/z): 335.2/337.2 (MH<+>), 0.572 min.
Faza 3. metil 4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidin-1-karboksilat
[0181] Rastvoru 3-bromo-5-(piperidin-4-il)pirazin-2-amina (60 mg, 0.233 mmol) u DCM (2 mL) u ledenom kupatilu dodat je DIEA (408 µl, 2.333 mmol) i metil hloroformat (18.07 µl, 0.233 mmol). Reakciona smeša je mešana u ledenom kupatilu 30 min. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju DCM i vode. Organski sloj je izdvojen i opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtran, i uparen u vakuumu. Sirovi metil 4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidin-1-karboksilat je korišćen za sledeću fazu. LCMS (m/z): 315.0/317.0 (MH<+>), 0.647 min.
Primer 3
Sinteza 4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-metil-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamida
[0182]
Šema 12
Faza 1.3-bromo-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amin
[0183] Prateći faze 1 do 3 na šemi 10, korišćenjem 5-bromopiridin-2-amina, dobijen je 3-bromo-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amin. LCMS (m/z): 257/259 (MH<+>), 0.38 min.
Faza 2.5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin
[0184] Prateći fazu 4 na šemi 10, korišćenjem 3-bromo-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina, dobijen je 5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin. LCMS (m/z): 233 (MH<+>), 0.36 min.
Faza 3.4-bromo-2-fluoro-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamid
[0185] U balon je sipana 4-bromo-2-fluorobenzoeva kiselina (180 mg, 0.821 mmol), pirimidin-2-ilmetanamin (89.6 mg, 0.821 mmol), DIEA (0.358 mL, 2.05 mmol) u DMF (3 mL), i u rezultujući rastvor dodat je PyBOP (513 mg, 0.915 mmol) i rezultujuća smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je razblažen sa EtOAc (20 mL), opran vodom (3 x 10 mL), zasićenim slanim rastvorom (10 mL), osušen (Na2SO4), koncentrovan, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom EtOAc/heptan (0-100%) i dobijen je 4-bromo-2-fluoro-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamid (74.5 mg, 29.3%) čvrsta supstanca svetle boje. LCMS (m/z): 310.0/312.0 (MH<+>), 0.64 min.
Faza 4.4-bromo-2-fluoro-N-metil-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamid
[0186] U balon je sipan 4-bromo-2-fluoro-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamid (74.5 mg, 0.24 mmol), NaH (60% disperzija u mineralnom ulju, 11.5 mg, 0.288 mmol) u DMF(2 mL), gustoj suspenziji je dodat jodometan (20 µl, 0.312mmol) i rezultujuća smeša je mešana na sobnoj temperaturi 10 min, zatim je kvenčovana vodom (20 µl), koncentrovana i sirovi ostatak je rastvoren u EtOAc, opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen (Na2SO4), koncentrovan i dobijen je 4-bromo-2-fluoro-N-metil-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamid u vidu ulja (55.3mg, 71% ). LCMS (m/z): 324.1/326.1 (MH<+>), 0.66 min.
Faza 5. 4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-metil-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamid
[0187] U fiolu za mikrotalasni reaktor dodat je 5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin (39.4 mg, 0.13 mmol), 4-bromo-2-fluoro-N-metil-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamid (28 mg, 0.086 mmol), vodeni Na2CO3(2 M, 0.26 mL) u DME (1.5 mL), i smeša je pročišćena argonom nakon čega je dodat tetrakis(trifenilfosfin) paladijum (10 mg, 8.6 mmol), i finalno prečišćena, zatim čvrsto zatvorena i zagrevana na 115°C u toku 15 min u mikrotalasnom uredjaju za sintezu. DME sloj je sakupljen, koncentrovan i ostatak je podvrgnut prečišćavanju preparativnom HPLC i frakcije koje sadrže finalni proizvod su kombinovane, zamrznute, osušene zamrzavanjem i dobijena je TFA so 4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-metil-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamida kao beli prah. LCMS (m/z): 422.2 (MH<+>), 0.49 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.81 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.77 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 2.2, 0.6 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 2.2, 0.6 Hz, 1H), 7.62 - 7.70 (m, 1H), 7.51 - 7.58 (m, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.38 - 7.43 (m, 1H), 7.35 (dd, J = 10.0, 1.5 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H), 4.99 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 3.98 -4.10 (m, 2H), 3.54 (tdd, J = 11.5, 8.8, 2.7 Hz, 2H), 3.15 - 3.24 (m, 3H), 2.78 - 2.93 (m, 1H), 1.65 -1.89 (m, 4H).
Sinteza 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksida i 4-(6-Amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksida
[0188]
Šema 13
Faza 1.5-(3,6-Dihidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-2-amin
[0189] Rastvoru 5-bromopiridin-2-amina (344 mg, 1.99 mmol) u DME (6mL) dodat je 2-(3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (300 mg, 1.33 mmol), i natrijum karbonat (1.99 mL, 3.98 mmol). Smeša je pročišćena azotom tokom 5 min, i nakon toga je dodat PdCl2(dppf)-CH2Cl2(108 mg, 0.13 mmol). Rezultujuća smeša je zagrevana do 115°C u uljanom kupatilu 5 h. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom, oprana vodom, zasićenim slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silika gela (ISCO) eluiranjem sa 0-90% etil acetata u heptanu da bi se dobile frakcije koje su kombinovane i koncentrovane da bi se dobio 5-(3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-2-amin (120 mg, 47%) kao čvrsta supstanca smedje boje. LCMS (m/z): 193 (MH<+>), 0.44 min.
Faza 2.5-(Tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-2-amin
[0190] Suspenzija 5-(3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-2-amina (260 mg, 1.35 mmol), Pd/C (36 mg, 0.33 mmol) u metanolu (16 mL) je mešana pod vodonikom na sobnoj temperaturi 16 h. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (80 mL), i filtrirana kroz celit. Filtrat je koncentrovan da bi se dobio 5-(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-2-amin (240 mg, 91% prinos) kao čvrsta supstanca žute boje. LCMS (m/z): 195 (MH<+>), 0.46 min.
Faza 3.4-(6-Aminopiridin-3-il)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksid
[0191] Ledeno hladnom rastvoru 5-(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-2-amina (290 mg, 1.49 mmol) u DCM (15 mL) dodata je 3-hlorobenzoperoksoična kiselina (592 mg, 3.43 mmol). Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 4 h. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom. Rezultujući rastvor je opran vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silika gela (ISCO) eluiranjem sa 0-100% etil acetata u heptanu da bi se dobio 4-(6-aminopiridin-3-il)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksid (140 mg, 41.4 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (m/z): 227 (MH<+>), 0.25 min.
Faza 4.4-(6-Amino-5-bromopiridin-3-il)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksid
[0192] Ledeno hladnom rastvoru 4-(6-aminopiridin-3-il)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksida (140 mg, 0.62 mmol) u DCM (15 mL) dodat je NBS (110 mg, 0.62 mmol) u dve porcije. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 20 min. Reakcioni rastvor je razblažen etil acetatom, opran vodom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan da bi se dobio 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksid (190 mg, 0.62 mmol). LCMS (m/z): 305/307 (MH<+>), 0.33 min.
Faza 5. 4-(6-Amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksid
[0193] U suspenziju 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksida (190 mg, 0.62 mmol) u 1,4-dioksanu (7 mL) dodat je bis(pinakolato)diboron (474 mg, 1.86 mmol) i kalijum acetat (305 mg, 3.11 mmol), i nakon toga je dodat PdCl2(dppf)-CH2Cl2(61.0 mg, 0.075 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 100°C u uljanom kupatilu 16 h. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom i filtrirana kroz neutralnu aluminu (5 g). Filtrat je ponovo refiltriran kroz celit. Filtrat je koncentrovan i ostatak je triturisan heptanom, i filtriran da bi se dobio 4-(6-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksid (140 mg, 64% prinosa). LCMS (m/z): 271 (MH<+>), 0.15 min.
Sinteza metil 3-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)pirolidin-1-karboksilata
[0194]
Šema 14
Faza 1. terc-butil 3-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat
[0195] U balon osušen u sušnici pod N2dodat je terc-butil 3-oksopirolidin-1-karboksilat (2 g, 10.8 mmol) i THF (16 mL). Rastvor je ohladjen u ledenom kupatilu sa acetonom (-78°C). Tome je dodat litijum bis(trimetilsilil)amid (12.96 mL, 12.96 mmol) (1 M rastvor u THF). Reakciona smeša je mešana na -78°C 15 min, a zatim je u kapima dodat rastvor 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N((trifluorometil)sulfonil) metansulfonamida (4.05 g, 11.34 mmol) u THF (16 mL). Reakciona smeša je mešana tokom 30 min zatim zagrejana do 0°C i mešana 1.5 h. Reakciona smeša je kvenčovana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata i zatim ekstrahovana etil acetatom. Kombinovani ekstrakti su oprani zasićenim slanim rastvorom, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i upareni. Sirovi proizvod je prečišćen na koloni ISCO (0-30%EtOAc/heptan) dajući tercbutil 3-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat (1.9 g, 55.5%).
Faza 2. terc-butil 3-(6-aminopiridin-3-il)-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat
[0196] Rastvor terc-butil 3-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilata (400 mg, 0.882 mmol) u THF (10 mL) je pročišćen sa N2tokom 5 min i zatim je dodat kalijum karbonat (610 mg, 4.41 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin (233 mg, 1.059 mmol), Pd(PPh3)4(10.20 mg, 8.82 µmol) i voda ( 0.1 mL). Reakciona smeša je zagrevana i mešana na 70°C preko noći. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor natrijum bikarbonata i ekstrahovana etil etrom. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0-10%MeOH / DCM) da bi se dobio željeni proizvod (180 mg, 54.6%). LCMS (m/z): 262.2 (MH<+>), 0.598 min.
Faza 3. terc-butil 3-(6-aminopiridin-3-il)pirolidin-1-karboksilat
[0197] U terc-butil 3-(6-aminopiridin-3-il)-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat (180 mg, 0.482 mmol) u MeOH (10 mL) pod atmosferom N2dodat je Pd-C (103 mg, 0.096 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod balonom sa H2. Posle 2 h, reakciona smeša je filtrirana kroz čep od celita, oprana metanolom i uparena da bi se dobio željeni proizvod, koji je prosledjen u sledeću fazu bez prečišćavanja (150 mg, 71%). LCMS (m/z): 264.2 (MH<+>), 0.565 min.
Faza 4. terc-butil 3-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)pirolidin-1-karboksilat
[0198] U terc-butil 3-(6-aminopiridin-3-il)pirolidin-1-karboksilat (60 mg, 0.228 mmol) u acetonitrilu (4 mL) u ledenom kupatilu dodat je NBS (36.5 mg, 0.205 mmol) i smeša je mešana. LCMS je posle 30 min pokazala smešu u odnosu ~1:1 polaznog materijala i željenog proizvoda. Ovome je dodato 12 mg (0.3 ekviv.) NBS i smeša je mešana 30 min. LCMS je pokazala da je reakcija završena. U reakcionu smešu je dodat zasićeni vodeni rastvor NaHCO3, mešana je 10 min i ekstrahovana etil acetatom. Kombinovani ekstrakti su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrani, i upareni. Sirovi proizvod je korišćen za sledeću fazu bez prečišćavanja (65 mg, 83%). LCMS (m/z): 342.1/344.1 (MH<+>), 0.624 min.
Faza 5.3-bromo-5-(pirolidin-3-il)piridin-2-amin
[0199] U terc-butil 3-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)pirolidin-1-karboksilat (65 mg, 0.171 mmol) u DCM ( 2.4 mL) dodat je TFA (0.6 mL, 7.79 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 45 min. Reakciona smeša je uparena u vakuumu posle razblaživanja toluenom. Sirovi proizvod je korišćen za sledeću fazu bez prečišćavanja. Sirovi prinos je bio kvantitativan. LCMS (m/z): 242.1/244.1 (MH<+>), 0.214 min.
Faza 6. metil 3-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)pirolidin-1-karboksilat
[0200] U 3-bromo-5-(pirolidin-3-il)piridin-2-amin, (20 mg, 0.083 mmol) u DCM u ledenom kupatilu dodat je DIEA (43.3 µl, 0.248 mmol) i metil hloroformat (6.40 µl, 0.083 mmol). Reakciona smeša je mešana u ledenom kupatilu 30 min. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju DCM i vode. DCM sloj je izdvojen i opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtran i uparen. Sirovi proizvod je korišćen za sledeću fazu bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 300.0, 302.0 (MH<+>), 0.421 min.
Faza 7.3-bromo-5-(1-(metilsulfonil)pirolidin-3-il)piridin-2-amin
[0201] U 3-bromo-5-(pirolidin-3-il)piridin-2-amin (20 mg, 0.083 mmol) u DCM u ledenom kupatilu dodat je DIEA (57.7 µl, 0.330 mmol) i metansulfonil hlorid (7.08 µl, 0.091 mmol). Reakciona smeša je mešana u ledenom kupatilu 30 min. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju DCM i vode. DCM sloj je izdvojen i opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Sirovi proizvod je korišćen za sledeću fazu bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 320.0/322.0 (MH<+>), 0.363 min.
Primeri 4, 5 i 6
Sinteza 4-(2-amino-5-(1,1-dioksidotetrahidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida, (S)-4-(2-amino-5-(1,1-dioksidotetrahidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida, i (R)-4-(2-amino-5-(1,1-dioksidotetrahidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida
[0202]
Šema 15
Faza 1.4,5-dihidrotiofen-3-il trifluorometansulfonat
[0203] U sveže pripremljen LDA (10.5 mmol u 40 mL THF) na temperaturi izmedju -75 i -65°C u kapima je dodavan dihidrotiofen-3-(2H)-on/THF rastvor (1.02 g/2 mL THF, 10 mmol) tokom 3 min, zatim je rezultujuća reakciona smeša mešana na -75°C tokom 3 h, nakon čega je u kapima dodavan N-(5-hloropiridin-2-il)-1,1,1-trifluoro-N-(trifluorometilsulfonil)metansulfonamid/THF (4.12 g, 10.5 mmol u 5 mL THF) tokom 10 min, zatim je reakciona smeša mešana na -75°C najmanje 1 h, a nakon toga na temperaturi koja je postepeno povećavana do sobne temperature preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana, i ostatak je raspodeljen izmedju Et2O/H2O (100 mL/50 mL); etarski sloj je uzastopno opran vodom (2 x 50 mL), 3 M natrijum acetatnim puferom pH 4.8 (2 x 50 mL), 3M NaOH (2 x 50 mL), i osušen iznad magnezijum sulfata, koncentrovan i dobijeno je smedje ulje kao sirovi proizvod (2.05 g) koji je dalje prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom EtOAc/heptan (0-15%) i željeni proizvod (0.9 g, 38.5% prinosa) je dobijen kao bezbojno ulje.
Faza 2.5-(4,5-dihidrotiofen-3-il)piridin-2-amin
[0204] U fiolu su sipani svi reagensi: 4,5-dihidrotiofen-3-il trifluorometansulfonat (900 mg, 3.84 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin (1.69 g, 7.69 mmol), K3PO4(2.45 g, 11.5 mmol), i PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (314 mg, 0.384 mmol) i DME(16 mL), i smeša je pročišćena argonom, zatim čvrsto zatvorena i zagrejana na 90°C putem eksternalnog uljanog kupatila preko noći. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature, i talozi u reakcionoj smeši su uklonjeni filtracijom, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i crni ostatak je dobijen kao sirovi proizvod. Sirovi proizvod je rastvoren u EtOAc (30 mL), opran vodom (20 mL), i prsten izmedju dva sloja je uklonjen filtracijom. EtOAc sloj je sakupljen, obradjen sa 1N HCl (2 x 20 mL) i vodeni slojevi su kombinovani, pročišćeni sa EtOAc (20 mL), učinjeni baznim dodatkom vodenog rastvora NaOH (3 g u 10 mL vode), ekstrahovani sa EtOAc (2 x 30 mL), i dobijeni EtOAc ekstrakti su kombinovani, oprani zasićenim slanim rastvorom (30 mL), osušeni (Na2SO4), koncentrovani i željeni proizvod je dobijen kao čvrsta supstanca svelte boje. LCMS (m/z): 179.0 (MH<+>), 0.41, 0.43 min (za regioizomeri).
Faza 3.5-(tetrahidrotiofen-3-il)piridin-2-amin
[0205] 5-(4,5-dihidrotiofen-3-il)piridin-2-amin (0.78g, 4.38 mmol) je rastvoren u etanolu (30 mL), dodat je Pd-C (Deggussa, 10%, 0.233 g) i smeša je mešana pod balonom sa H2preko noći. Reakcija nije bila potpuna kako je odredjeno pomoću LCMS. Katalizator Pd-C je uklonjen filtracijom kroz čep od celita, i filtrate je dodat novi Pd-C katalizator (0.24 g), i smeša je mešana pod balonom sa H2pod istim uslovima dodatnih 6 h. Reakciona smeša je filtrana kroz čep od celita, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom dajući 5-(tetrahidrotiofen-3-il)piridin-2-amin (0.661 g, 84%) kao bezbojno ulje. LCMS (m/z): 181.2 (MH<+>), 0.39 min.
Faza 4.3-(6-aminopiridin-3-il)tetrahidrotiofen 1,1-dioksid
[0206] 5-(tetrahidrotiofen-3-il)piridin-2-amin (0.33 g, 1.831 mmol) je rastvoren u CH2Cl2(15 mL), dodat mu je mCPBA (70%, 0.903 g, 3.66 mmol), smeša je mešana na sobnoj temperaturi 10 min i reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je raspodeljen izmedju EtOAc/zas. NaHCO3(30 mL/20 mL), EtOAc sloj je opran zas. Na2CO3(20 mL), zasićenim slanim rastvorom (20 mL), osušen (Na2SO4), filtran, i koncentrovan u vakuumu dajući 3-(6-aminopiridin-3-il)tetrahidrotiofen 1,1-dioksid kao svetlo smedje ulje (96 mg, 25%). LCMS (m/z): 197.1 (MH<+>), 0.21 min.
Faza 5.3-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)tetrahidrotiofen 1,1-dioksid
[0207] 3-(6-Aminopiridin-3-il)tetrahidrotiofen 1,1-dioksid (96 mg, 0.452 mmol) je rastvoren u acetonitrilu (5 mL) i rastvor je ohladjen do 0°C, dodat mu je NBS (80 mg, 0.452 mmol) i smeša je mešana na 0°C tokom 40 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je raspodeljen izmedju EtOAc/zas. NaHCO3(30 mL/20 mL), sloj EtOAc je opran zas. Na2CO3(20 mL), zasićenim slanim rastvorom (20 mL), osušen (Na2SO4), filtran i koncentrovan u vakuumu dajući 3-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)tetrahidrotiofen 1,1-dioksid kao svetlo smedje ulje (50 mg, 38% prinosa). LCMS (m/z): 293.0/291.0 (MH<+>), 0.29 min.
Faza 6.4-(2-amino-5-(1,1-dioksidotetrahidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid
[0208] Fiola za mikrotalasni reaktor je napunjena 3-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)tetrahidrotiofen 1,1-dioksidom (50 mg, 0.172 mmol), 4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenilboronskom kiselinom (94 mg, 0.343 mmol), 2 M vodenim rastvorom Na2CO3(0.34 mL) i PdCl2(dppf)-DCM aduktom (14 mg) i DME (3 mL) i smeša je pročišćena argonom, čvrsto zatvorena i zagrejana na 105<o>C tokom 20 min. DME sloj reakcione smeše je sakupljen, koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je ponovo rastvoren u EtOAc (5 mL). Rastvor EtOAc je uklonjen sa 1N HCl (4 x 1 mL) i vodeni slojevi su kombinovani, očišćeni sa EtOAc (2 x 1 mL), zatim koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je raspodeljen izmedju EtOAc/zas. Na2CO3(5 mL/1 mL), i ekstrakt EtOAc je opran zas. Na2CO3(2 x 1 mL), zasićenim slanim rastvorom (1 mL), osušen (Na2SO4), koncentrovan i ostatak je ponovo rastvoren u smeši acetonitril/voda (6 mL/6 mL), zamrznut i osušen zamrzavanjem dajući racemski 4-(2-amino-5-(1,1-dioksidotetrahidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-N-benzil-2-fluorobenzamidein kao svetlo žuti prah. LCMS (m/z): 440.2 (MH<+>), 0.60 min;<1>H NMR (CD3OD) δ ppm 7.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.84 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.31 - 7.44 (m, 6H), 7.22 - 7.30 (m, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.55 - 3.70 (m, 1H), 3.47 (dd, J = 13.3, 7.0 Hz, 1H), 3.33 - 3.39 (m, 1H), 3.08 - 3.25 (m, 2H), 2.53 (ddd, J = 13.1, 7.4, 5.7 Hz, 1H), 2.18 - 2.40 (m, 1H). Racemski proizvod je dalje razdvojen pomoću hiralne SFC (ChiralPak 5mic OJ kolona, 4.6x100 (mm), 5mL/min, MeOH+0.1% DEA= 50%) da bi se dobio (S)-4-(2-amino-5-(1,1-dioksidotetrahidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid (Rt = 1.7 min) i (R)-4-(2-amino-5-(1,1-dioksidotetrahidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid (Rt = 2.22 min). Apsolutna stereohemija je proizvoljno dodeljena.
Primer 7
Sinteza 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5-(hidroksimetil)pirolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0209]
Šema 16
Faza 1. (S)-1-terc-butil 2-metil 4-oksopirolidin-1,2-dikarboksilat
[0210] Rastvor (2S,4R)-1-terc-butil 2-metil 4-hidroksipirolidin-1,2-dikarboksilata (10 g, 40.8 mmol) u DCM (100 mL) je ohladjen do 0°C, zatim obradjen u porcijama sa Dess-Martin-ovim perjodinanom (17.29 g, 40.8 mmol) tokom 20 min. Reakcija je održavana na 0°C u toku 1 h, i zatim je uklonjeno hladno kupatilo. Posle dodatna 3 h na sobnoj temperaturi, reakcija je obradjena sa 300 mL smeše zas. vodeni Na2SO3:zas. vodeni NaHCO3u odnosu 1:1. Reakcija je snažno mešana preko noći na sobnoj temperaturi, zatim su slojevi razdvojeni. Organske faze su oprane vodom i zasićenim slanim rastvorom, zatim osušene iznad magnezijum sulfata i koncentrovane. Rezultujući smeša je suspendovana u DCM (20 mL) zatim filtrirana preko celita. Organske faze su koncentrovane. Sirovo ulje je dalje prečišćeno direktnom filtracijom od zrnastih čvrstih supstanci da bi se dobio (S)-1-terc-butil 2-metil 4-oksopirolidin-1,2-dikarboksilat (8.53 g, 87% prinosa). LCMS (m/z): 244.3 (MH<+>), 0.42 min.
Faza 2.1-terc-butil 2-metil 4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-1H-pirol-1,2(2H,5H)-dikarboksilat
[0211] Rastvor (S)-1-terc-butil 2-metil 4-oksopirolidin-1,2-dikarboksilata (2.9 g, 11.92 mmol) u THF (30 mL) je ohladjen do -78°C, zatim obradjen sa 1.0 M LiHMDS u THF (14.31 mL, 14.31 mmol). Reakcija je održavana na -78°C tokom 1h, zatim obradjena dodatkom rastvora N-(5-hloropiridin-2-il)-1,1,1-trifluoro-N-((trifluorometil)sulfonil)metansulfonamida (5.62 g, 14.31 mmol) u THF (15 mL). Reakcija je održavana na -78°C u toku 1 h, i zatim smeštena u frižider na -30°C preko noći. Po završetku, reakcija je kvenčovana vodom, i razblažena etrom. Organske supstance su oprane 1N vodenim rastvorom NaOH (40 mL), zatim osušene iznad magnezijum sulfata i koncentrovane. Ostatak je rastvoren u hloroformu (40 mL) i ohladjen do 0°C tokom 30 min. Rezultujuća gusta suspenzija je koncentrovana do ~8 mL ukupne zapremine, zatim je viskozni materijal filtriran i koncentrovan da bi se dobio (S)-1-terc-butil 2-metil 4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-1H-pirol-1,2(2H,5H)-dikarboksilat (4.4 g, 98% prinosa). LCMS (m/z): 376.4 (MH<+>), 0.64 min.
Faza 3. (S)-1-terc-butil 2-metil 4-(6-aminopiridin-3-il)-1H-pirol-1,2(2H,5H)-dikarboksilat
[0212] Smeša (S)-1-terc-butil 2-metil 4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-1H-pirol-1,2(2H,5H)-dikarboksilata (1.55 g, 4.13 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amina (1.00 g, 4.54 mmol), Pd(PPh3)4(0.239 g, 0.21 mmol) i Cs2CO3(3.36 g, 10.32 mmol) u THF (10 mL) i vode (2 mL) je zagrejana u mikrotalasnim zračenjem do 100°C tokom 10 min. Reakcija je zatim razblažena etil acetatom (50 mL) i vodom (25 mL). Slojevi su razdvojeni i organske faze su oprane vodom (25 mL) i zasićenim slanim rastvorom (25 mL), osušene iznad magnezijum sulfata i koncentrovane, zatim prečišćene pomoću fleš hromatografije [0-8% metanol/DCM eluent] da bi se dobio (S)-1-terc-butil 2-metil 4-(6-aminopiridin-3-il)-1H-pirol-1,2(2H,5H)-dikarboksilat (0.955g, 72% prinosa). LCMS (m/z): 320.4 (MH<+>), 0.50 min.
Faza 4. (2S,4R)-1-terc-butil 2-metil 4-(6-aminopiridin-3-il)pirolidin-1,2-dikarboksilat
[0213] Degazirani rastvor (S)-1-terc-butil 2-metil 4-(6-aminopiridin-3-il)-1H-pirol-1,2(2H,5H)-dikarboksilata (0.955 g, 2.99 mmol) u metanolu (30 mL) je obradjen sa 10% Pd/C (0.183 g, 0.172 mmol), zatim održavan pod atmosferom vodonika tokom 3 h. Po završetku, reakcija je filtrirana preko čepa od celita i koncentrovana da bi se dobio (2S,4R)-1-terc-butil 2-metil 4-(6-aminopiridin-3-il)pirolidin-1,2-dikarboksilat (0.95 g.99% prinosa). LCMS (m/z): 322.5 (MH<+>), 0.52 min.
Faza 5. (2S,4R)-terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat
[0214] Rastvoru (2S,4R)-1-terc-butil 2-metil 4-(6-aminopiridin-3-il)pirolidin-1,2-dikarboksilata (250 mg, 0.778 mmol) u 2-metil THF (18 mL) dodat je LiAlH4(59 mg, 1.56 mmol). Posle 15 min, reakcija je kvenčovana uzastopnim dodavanjem vode (60 µL), 1 N NaOH vodeni rastvor (60 µL) i vodom (60 µL). Smeša je snažno mešana 5 min, i zatim filtrirana preko celita uz ispranje sa 2-metil THF. Organske faze su koncentrovane da bi se dobio (2S,4R)-terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (230 mg, 100% prinosa). LCMS (m/z): 294.1 (MH<+>), 0.49 min.
Faza 6. (2S,4R)-terc-butil 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat
[0215] Rastvor (2S,4R)-terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (230 mg, 0.784 mmol) u MeCN (10 mL) je obradjen sa NBS (147 mg, 0.823 mmol). Posle 10 min, reakcija je bila završena. Reakcija je obradjena sa 10 mL zas. vod. rastv. NaHCO3:zas.vod. rastv. Na2S2O3u dnosu 1:1 i smeša je snažno mešana 10 min. Smeša je razblažena etil acetatom (30 mL) i slojevi su razdvojeni. Organske faze su oprane zasićenim slanim rastvorom, osušene iznad magnezijum sulfata i koncentrovane da bi se dobio (2S,4R)-terc-butil 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (290 mg, 100% prinosa). LCMS (m/z): 372.1/374.0 (MH<+>), 0.55 min.
Faza 7. 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5-(hidroksimetil)pirolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0216] Prateći faze 5 na šemi 10, korišćenjem (2S, 4R)-terc-butil 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata i (S)-(4-((1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)boronske kiseline, dobijen je (2S,4R)-terc-butil 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat kao TFA so (30 mg, 35% prinosa. LCMS (m/z): 585.3 , 587.3 (MH<+>), 0.74 min. Zatim, rastvor (2S,4R)-terc-butil 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat-TFA je rastvoren u DCM (2 mL) i obradjen sa TFA (2.0 mL). Posle 30 min, reakcija je koncentrovana, i zatim prečišćena pomoću reverzno-fazne preparativne HPLC dajući 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5-(hidroksimetil)pirolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid u vidu bis-TFA soli (15.0 mg, 54% prinosa). LCMS (m/z): 485.2, 487.2 (MH<+>), 0.51 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.59 (dd, J = 4.50, 7.24 Hz, 1H), 7.87 - 7.77 (m, 4H), 7.39 - 7.31 (m, 3H), 7.29 - 7.24 (m, 2H), 7.24 -7.16 (m, 1H), 5.15 - 5.05 (m, 1H), 3.87 - 3.71 (m, 5H), 3.70 - 3.60 (m, 2H), 3.59 - 3.46 (m, 1H), 2.41 (td, J = 6.46, 12.91 Hz, 1H), 1.98 - 1.82 (m, 1H), 1.29 - 1.16 (m, 1H).
Primer 8
Sinteza 4-(2-amino-5-((7R,8aS)-4-oksoheksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]oksazin-7-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0217]
Šema 17
[0218] Rastvor 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5-(hidroksimetil)pirolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida (45 mg, 0.063 mmol) (videti primer 7) i hlorosirćetne kiseline (7.2 mg, 0.076 mmol) u THF (2.5 mL) je obradjen sa HATU (36 mg, 0.095 mmol) i DIEA (55 µL, 0.316 mmol). Reakcija je održavana na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona smeša je zatim direktno obradjena sa NaH (15.2 mg, 0.631 mmol). Posle 15 min, reakcija je kvenčovana vodom (2 mL) i reakciona smeša je ekstrahovana etil acetatom (10 mL). Organske faze su oprane zasićenim slanim rastvorom, zatim osušene iznad Na2SO4, koncentrovane, zatim prečišćene pomoću reverzno-fazne preparativne HPLC dajući 4-(2-amino-5-((7R,8aS)-4-oksoheksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]oksazin-7-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid (13.0 mg, 39% prinosa). LCMS (m/z): 525.2, 527.2 (MH<+>), 0.59 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.61 (dd, J = 4.30, 7.04 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 1.96 Hz, 1H), 7.84 - 7.76 (m, 2H), 7.40 - 7.31 (m, 3H), 7.30 - 7.24 (m, 2H), 7.24 - 7.16 (m, 1H), 5.16 - 5.05 (m, 1H), 4.18 - 4.08 (m, 2H), 3.99 - 3.85 (m, 2H), 3.85 - 3.70 (m, 3H), 3.53 - 3.42 (m, 2H), 3.39 -3.29 (m, 1H), 2.34 - 2.19 (m, 1H), 1.67 (q, J = 11.48 Hz, 1H).
Primer 9
Sinteza 4-(2-amino-5-((6R,7aS)-3-oksoheksahidropirolo[1,2-c]oksazol-6-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
Šema 18
[0220] Rastvor 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5-(hidroksimetil)pirolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida (20 mg, 0.041 mmol) (primer 7) i DIEA (72 µL, 0.412 mmol) u acetonitrilu (0.5 mL) je obradjen karbonildiimidazolom (8.0 mg, 0.049 mmol). Posle 1 h, polazni materijal je potpuno potrošen. Reakciona smeša je kvenčovana sa 1.0 N vodenim rastvorom NaOH (1.0 mL) i smeša je snažno mešana 5 min, zatim, razblažena sa DCM (10 mL). Organske faze su oprane zasićenim slanim rastvorom (2 mL) i osušene iznad Na2SO4i koncentrovane. Sirovi materijal je prečišćen pomoću reverzno-fazne preparativne HPLC dajući 4-(2-amino-5-((6R,7aS)-3-oksoheksahidropirolo[1,2-c]oksazol-6-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid (2.0 mg, 7% prinosa). LCMS (m/z): 511.3, 513.3 (MH<+>), 0.61 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.92 - 7.84 (m, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.44 -7.40 (m, 1H), 7.38 - 7.35 (m, 1H), 7.34 - 7.28 (m, 1H), 5.19 (t, J = 5.87 Hz, 1H), 4.61 - 4.56 (m, 1H), 4.34 (dd, J = 3.52, 9.00 Hz, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 1H), 3.92 - 3.80 (m, 1H), 3.74 - 3.62 (m, 1H), 2.41 (td, J = 5.72, 11.64 Hz, 1H), 1.84 - 1.71 (m, 1H).
Primer 10
Sinteza 4-(2-amino-5-((6R,7aS)-3-iminoheksahidropirolo[1,2-c]oksazol-6-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0221]
Šema 19
[0222] Smeša na sobnoj temperaturi 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5-(hidroksimetil)pirolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida (12.5 mg, 0.026 mmol) (primer 7) i cezijum karbonata (33.6 mg, 0.103 mmol) u etanolu (0.75 mL) je obradjena cijanogen bromidom (6.2 µL, 0.031 mmol). Posle 1 h, reakcija je razblažena vodom (1.0 mL) i ekstrahovana u etil acetatu (10 mL). Organske faze su oprane zasićenim slanim rastvorom (2 mL), zatim osušene iznad Na2SO4i koncentrovane i prečišćene pomoću reverzno-fazne preparativne HPLC dajući 4-(2-amino-5-((6R,7aS)-3-iminoheksahidropirolo[1,2-c]oksazol-6-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid. LCMS (m/z): 510.1, 512.1 (MH<+>), 0.52 min.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.63 - 8.54 (m, 1H), 7.92 - 7.85 (m, 2H), 7.80 (t, J = 7.83 Hz, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 3H), 7.29 - 7.24 (m, 2H), 7.24 - 7.16 (m, 1H), 5.14 - 5.06 (m, 1H), 4.97 - 4.88 (m, 1H), 4.61 - 4.49 (m, 2H), 3.88 - 3.70 (m, 4H), 3.32 (s, 1H), 2.41- 2.31 (m, 1H), 2.02 -1.89 (m, 1H).
Primer 11
4-(2-amino-5-((6R,7aS)-3-tioksoheksahidropirolo[1,2-c]oksazol-6-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0223]
Šema 20
[0224] Rastvoru (2S,4R)-terc-butil 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil) karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (45 mg, 0.063 mmol) (videti primer 7) u acetonitrilu (0.75 mL) i DMF (0.5 mL) dodat je DIEA (42 µL, 0.240 mmol) i tiokarbonil diimidazol (15.6 mg, 0.088 mmol). Posle 2 h, reakcija je kvenčovana dodatkom 1 N vodenog rastvora NaOH (1 mL) i snažno mešana da bi se postigla razgradnja mešanog tiokarbamatnog sporednog proizvoda. Reakcija je zatim razblažena etil acetatom (10 mL), oprana vodom (5 mL) i zasićenim slanim rastvorom (5 mL), zatim osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen pomoću reverzno-fazne preparativne HPLC dajući 4-(2-amino-5-((6R,7aS)-3-tioksoheksahidropirolo[1,2-c]oksazol-6-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid (3.2 mg, 11% prinosa). LCMS (m/z): 527.3, 529.3 (MH<+>), 0.67 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.64 (dd, J = 3.91, 7.04 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 1.96 Hz, 2H), 7.83 - 7.77 (m, 3H), 7.39 - 7.32 (m, 5H), 7.30 - 7.26 (m, 3H), 7.25 - 7.19 (m, 2H), 5.15 - 5.07 (m, 2H), 4.73 - 4.69 (m, 2H), 4.45 - 4.35 (m, 3H), 3.85 - 3.65 (m, 8H), 2.38 (td, J = 5.58, 11.54 Hz, 2H), 1.80 - 1.70 (m, 1H).
Sinteza 5-morfolino-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amina
[0225]
Šema 21
Faza 1. Etil (5-bromopiridin-3-il)karbamat
[0226] 5-Bromopiridin-3-amin (20 g, 116 mmol) je rastvoren u DCM (500 mL) i dodat je piridin (28.0 mL, 347 mmol), nakon čega je u kapima dodat etil hloroformat (11.44 mL, 119 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 1.5 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je razblažena sa DCM. Dve faze su razdvojene i organska faza je oprana sa 10% rastvorom CuSO4(2x), zas. rastvorom NaHCO3(1x), zasićenim slanim rastvorom (1x), osušena (Na2SO4) i uparena. Ostatak je triturisan dietil etrom, filtriran i osušen, čime je dobijen etil (5-bromopiridin-3-il)karbamat (21.58 g, 76%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 247.0 (MH<+>), 0.58 min; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm8.62 - 8.15 (m, 3 H) 7.00 (br. s., 1 H) 4.27 (q, J=7.0 Hz, 2 H) 1.34 (t, J=7.0 Hz, 3 H).
Faza 2. Etil (5-bromo-2-nitropiridin-3-il)karbamat
[0227] U smešu koncentrovane H2SO4(60 mL, 1126 mmol) i dimljive HNO3(40 mL, 895 mmol), dodat je u porcijama etil (5-bromopiridin-3-il)karbamat (21.5 g, 88 mmol) na 0°C. Posle mešanja na 0°C tokom 5 min, smeša je mešana na rt preko noći i izlivena na ledenu vodu. Obrazovan je talog koji je filtran, dobro opran vodom i osušen. Na taj način je dobijen etil (5-bromo-2-nitropiridin-3-il)karbamat (21.26 g, 84%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 290.1 (MH<+>), 0.76 min. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9.63 (br. s., 1 H) 9.33 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 8.28 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 4.32 (q, J=7.3 Hz, 3 H) 1.68 (br. s., 2 H) 1.38 (t, J=7.0 Hz, 4 H).
Faza 3.5-Bromo-2-nitropiridin-3-amin
[0228] Etil (5-bromopiridin-3-il)karbamat (8 g, 27.6 mmol) je rastvoren u EtOH (250 mL) i rastvor je ohladjen do 5°C na ledenom kupatilu. Hladni 1M KOH (130 mL, 130 mmol) je dodat u kapima, uz održavanje ispod 5°C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, koncentrovana pod sniženim pritiskom. Nakon koncentrovanja obrazovan je talog koji je filtran, opran sa vodom i osušeni dajući 5-bromo-2-nitropiridin-3-amin (5.02 g, 83%). LCMS (m/z): 220.1 (MH<+>), 0.46 min; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm7.97 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 7.50 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 6.03 (br. s., 2 H).
Faza 4.5-morfolino-2-nitropiridin-3-amin
[0229] 5-Bromo-2-nitropiridin-3-amin (2.32 g, 10.6 mmol) je suspendovan u morfolinu (5 mL, 57.4 mmol) i rastvor je zagrevan na 140°C tokom 1h. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature i čvrsti talog je triturisan vodom i filtriran. Ovako dobijena čvrsta supstanca je oprana vodom, EtOH, i osušena, čime je dobijen 5-morfolino-2-nitropiridin-3-amin (2.0 g, 8.92 mmol, 84%) kao svetlo žuti prah. U zavisnosti od ishoda prethodne faze, ova čvrsta supstanca može i dalje da sadrži etoksi derivat iz prethodne faze, i dva jedinjenja mogu da budu razdvojena hromatografijom na koloni silika gela (analogix, 20% EtOAc u heptanu 2 min, do 100% EtOAc do 15 min, zatim 100% EtOAc do 20 min). LCMS (m/z): 225.1(MH<+>), 0.43 min; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 10.54 (s, 1 H) 8.57 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 7.85 (d, J=2.7 Hz, 1 H) 7.70 (d, J=2.3 Hz, 1 H) 6.32 (d, J=2.3 Hz, 1 H) 6.00 (br. s., 1 H) 3.93 - 3.83 (m, 7 H) 3.83 - 3.74 (m, 3 H) 3.63 -3.55 (m, 3 H) 3.51 - 3.43 (m, 3 H) 3.41- 3.31 (m, 4 H).
Faza 5.4-(5-bromo-6-nitropiridin-3-il)morfolin
[0230] Balon okriglog dna sa tri grla opremljen magnetnom mešalicom, levkom za dodavanje i termometrom, napunjen je sa CuBr (629 mg, 4.4 mmol) i HBr (25 mL). Rastvor je ohladjen do -5°C (kupatilo sa ledom i soli). Čvrsti 5-morfolino-2-nitropiridin-3-amin (983 mg, 4.4 mmol) je polako dodat, nakon čega je polako dodat rastvor NaNO2(333 mg, 4.8 mmol) u H2O (25 mL) kroz levak za dodavanje, čime je osigurano da temperatura ne predje 0°C. Reakciona smeša je mešana na -5°C tokom 1 h, zagrejana do sobne temperature i mešana dodatnih 1.5 h. Reakcija je ocenjena završenom pomoću LCMS i smeša je ponovo ohladjena do 0°C, kvenčovana sa 6 N NaOH do pH 12, razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. EtOAc je opran vodom (x2), zasićenim slanim rastvorom (x1) osušen i koncentrovan. Ostatak je azeotropno obradjen sa EtOH, osušen pod visokim vakuumom, čime je dobijen 4-(5-bromo-6-nitropiridin-3-il)morfolin (1.21 g, 4.20 mmol, 96% prinosa) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 288.2 (MH<+>), 0.65 min. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.08 - 7.99 (d, J=2.3 Hz, 1 H) 7.41 (d, J=2.3 Hz, 1 H) 3.98 - 3.81 (m, 4 H) 3.45 - 3.30 (m, 4 H).
Faza 6.3-bromo-5-morfolinopiridin-2-amin
[0231] 4-(5-Bromo-6-nitropiridin-3-il)morfolin (95 mg, 0.33 mmol) je rastvoren u EtOH (12 mL) i dodata je voda (3.0 mL), nakon čega je dodat SnCl2(313 mg, 1.65 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 80°C tokom 2 h, ohladjena do sobne temperature i razblažena sa DCM. Dve faze su razdvojene, organska faza je oprane vodom. Vodena faza je povratno ekstrahovana sa DCM. pH je podešen do 12 sa 6N NaOH i smeša je dalje ekstrahovana sa DCM. Organski ekstrakti su kombinovani, osušeni (Na2SO4) i upareni pod sniženim pritiskom čime je dobijen željeni 3-bromo-5-morfolinopiridin-2-amin (71.5 mg, 84%). LCMS (m/z): 260.0 (MH<+>), 0.37 min.
Alternativni postupak
[0232] Rastvoru 4-(5-bromo-6-nitropiridin-3-il)morfolina (2 g, 6.9 mmol) u MeOH (150 mL) u balonu sa okruglim dnom dodat je prah Zn (4.54 g, 69.4 mmol). Reakciona smeša je ohladjena do 0°C. Čvrsti NH4Cl (3.71 g, 69.4 mmol) je dodavan u porcijama, tokom 5 min. Heterogena reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h, filtrirana kroz čep od celita uz ispiranje filter kolača metanolom i etanolom. Filtrat je koncentrovan do braonkaste čvrste supstance koja je prečišćena fleš hromatografijom na koloni silika gela (ISCO, kolona od 80 g, 0-70% EtOAc/heptan 15 min i 70% EtOAc do 25 min), čime je dobijen 3-bromo-5-morfolinopiridin-2-amin (936 mg, 52.2 %) kao blago beličasta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 258.2 (MH<+>), 0.35 min; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.75 (d, J=2.3 Hz, 1 H) 7.40 - 7.30 (m, 1 H) 4.66 (br. s., 2 H) 3.91- 3.74 (m, 4 H) 3.07 - 2.90 (m, 4 H).
Faza 7.5-Morfolino-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin
[0233] 3-bromo-5-morfolinopiridin-2-amin (36 mg, 0.14 mmol), bis(pinakolato)diboron (70.8 mg, 0.28 mmol), kalijum acetat (41.1 mg, 0.42 mmol) i tricikloheksilfosfin (5.9 mg, 0.021 mmol) su rastvoreni u 1,4-dioksanu (1.5 mL) u sudu pod pritiskom. Smeša je poprskana sa N2tokom 5 min i paladijum diacetat (3.1 mg, 0.014 mmol) je dodat. Reakciona smeša je zagrevana do 110°C tokom 16 h, ohladjena do sobne temperature i razblažena etil acetatom. Dodat je SiliaBondDMT, smeša je mešana tokom 1h, filtrirana preko čepa od celita i koncentrovana, čime je dobijeno 21.3 mg čvrste supstance koja sadrži željeni 5-morfolino-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin. Ova čvrsta supstanca je korišćena u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 224.0 (MH<+>), 0.33 min (za boronsku kiselinu).
Sinteza 3-bromo-5-((2R,4R)-2-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina i 3-bromo-5-((2S,4S)-2-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina
[0234]
Šema
22
Faza 1. 2-metil-3,6-dihidro-2H-piran-4-il trifluorometansulfonat
[0235] Rastvoru 2-metildihidro-2H-piran-4(3H)-ona (2g, 17.52 mmol) u THF (8.76 mL) dodat je LiHMDS (18.40 mL, 18.40 mmol) u kapima na -78°C. Reakciona smeša je mešana na -78°C tokom 1.5 h, zatim je dodat N-(5-hloropiridin-2-il)-1,1,1-trifluoro-N-((trifluorometil)sulfonil) metansulfonamid (7.22 g, 18.40 mmol) u THF (17 mL) na -78°C. Smeša je mešana na -78°C tokom 1h, i zatim ostavljena da se ugreje do sobne temperature, i mešana preko noći. Reakcija je praćena pomoću TLC. Posle kvenčovanja zasićenim NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc 3 puta. Kombinovani organski slojevi su oprani vodom, zasićenim slanim rastvorom i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Filtrirani su i koncentrovani u vakuumu. Željeno jedinjenje (4.2 g, 17.06 mmol) je dobijeno kao smedje ulje pomoću fleš hromatografije na koloni eluiranjem sa 30% EtOAc u heptanu.
Faza 2.5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazin-2-amin
[0236] Rastvoru 5-bromopirazin-2-amina (1 g, 5.75 mmol), bis(pinakolato)diborona (2.92 g, 11.49 mmol), i PdCl2(dppf)CH2Cl2adukta (0.469 g, 0.575 mmol) u dioksanu (16.42 mL) dodat je kalijum acetat (1.692 g, 17.24 mmol) neposredno nakon degaziranja. Reakciona smeša je zagrevana u mikrotalasnoj pećnici na 120°C u toku 20 min. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i filtrirana kroz celit. Smeša je koncentrovana, i sirovi proizvod je korišćen za sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 140 (MH<+>za boronsku kiselinu), 0.12 min.
Faza 3.5-(2-metil-3,6-dihidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amin
[0237] Rastvoru 2-metil-3,6-dihidro-2H-piran-4-il trifluorometansulfonata (0.637 g, 2.88 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazin-2-amina (0.914 g, 3.74 mmol), i PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukta (0.235 g, 0.288 mmol) u DME (9.82 mL) dodat je 2M Na2CO3(3.27 mL). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (120<o>C, 10 min). Etil acetated je dodat, i opran zasićenim NaHCO3i vodom. Zatim je željeno jedinjenje ekstrahovano u 1N HCl vodenom sloju, i oprano sa EtOAc. Jedinjenje je učinjenio baznim dodatkom 2N NaOH, i proizvod je ekstrahovan u EtOAc sloj. EtOAc organski sloj je opran vodom i osušen iznad Na2SO4. Filtriran je i koncentrovan da bi se dobilo 250 mg željenog jedinjenja. LCMS (m/z): 192.2 (MH<+>), 0.40 min.
Faza 4.5-((2R,4R)-2-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amin
[0238] Rastvoru 5-(2-metil-3,6-dihidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina (250 mg, 1.307 mmol) u MeOH (13.100 mL) dodat je Pd/C (278 mg, 0.261 mmol). Rastvor je degaziran pod strujom N2tokom 10 min. Posle ispiranja gasovitim H2, dodat je balon sa vodonikom. Reakciona smeša je mešana tokom 25 h. Posle filtriranja kroz celit, isparljivi materijal je uklonjen da bi se dobio sirovi proizvod, koji je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-10% MeOH u DCM da bi se dobilo 180 mg dijastereomera. Zatim je hiralno razdvajanje (ChiralPak 5mic AD kolona, 4.6x100 (mm), 5mL/min, EtOH+0.1% DEA = 15%) dalo 40 mg 5-((2R,4R)-2-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina (Rt = 1.32 min; LCMS (m/z): 194.2 (MH<+>), 0.44 min) sa 22% prinosa i 30 mg željenog 5-((2S,4S)-2-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina (Rt = 1.83 min; LCMS (m/z): 194.2 (MH<+>), 0.44 min) sa 16% prinosa.
Faza 5. 3-bromo-5-((2R,4R)-2-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amin i 3-bromo-5-((2S,4S)-2-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amin
[0239] Rastvoru 5-((2R,4R)-2-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina (40 mg, 0.207 mmol) u acetonitrilu (3 mL) dodat je NBS (35.0 mg, 0.197 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 15 min. Posle kvenčovanja sa NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc tri puta. Organski slojevi su kombinovani i oprani sa vodom, i zasićenim slanim rastvorom. Osušeni su iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobilo 47 mg 3-bromo-5-((2R,4R)-2-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina, koji je korišćen kao takav. LCMS (m/z): 274 (MH<+>), 0.64 min. Za 5-((2S,4S)-2-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amin, prateći gore navedeni postupak, dobijen je 3-bromo-5-((2S,4S)-2-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amin. LCMS (m/z): 274 (MH<+>), 0.65 min. Apsolutna stereohemija proizvoda je dodeljena proizvoljno.
Sinteza 3-bromo-5-ciklopropilpirazin-2-amina
[0240]
Šema 23
Faza 1.5-ciklopropilpirazin-2-amin
[0241] Fiola za mikrotalasno zračenje je napunjena 5-bromopirazin-2-aminom (400 mg. 2.3 mmol), 2-ciklopropil-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolanom (1.16 g, 6.9 mmol), KOt-Bu (1M u t-BuOH, 9.2 mL), 1,4-dioksanom (10 mL), i vodom (0.10 mL), i smeša je pročišćena argonom, nakon čega je dodat paladijum tetrakis (266 mg, 0.23 mmol) i uradjeno finalno pročišćavanje argonom, zatim je smeša čvrsto zatvorena i zagrejvana na 150°C pomoću mikrotalasnog reaktora 20 min. U reakcionu smešu je dodata druga porcija paladijum tetrakisa (266 mg) i reakcija je zagrevana na 160°C pomoću mikrotalasnog reaktora 20 min. Reakciona smeša je filtrirana kroz tanak sloj celita, i filtrat je koncentrovan. Ostatak je triturisan sa EtOAc (6 mL), i talozi su uklonjeni centrifugiranjem i filtracijom. EtOAc supernatant je ponovo ekstrahovan vodenim rastvorom TFA (3 x 3 mL, TFA/voda 1 mL/10 mL). Rastvori TFA su kombinovani, razblaženi acetonitrilom (10 mL), zamrznuti i osušeni zamrzavanjem da bi se dobio 5-ciklopropilpirazin-2-amin u vidu žutog praha. Proizvod je posle sušenja zamrzavanjem prenet u fiolu, učinjen baznim do pH > 12 sa zas. Na2CO3(3mL), ekstrahovan sa EtOAc (4 x 6 mL), i EtOAc ekstrakti su kombinovani, koncentrovani i dodatno osušeni pod visokim vakuumom, i finalni 5-ciklopropilpirazin-2-amin u vidu slobodne baze je dobijen (79 mg, 25.4% prinosa). LCMS (m/z): 136.1 (MH<+>), 0.30 min. 1H NMR (CD3OD) δ ppm 8.29 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 2.00 - 2.08 (m, 1H), 0.94 - 1.00 (m, 2H), 0.87 - 0.93 (m, 2H).
Faza 2.3-bromo-5-ciklopropilpirazin-2-amin
[0242] Rastvor 5-ciklopropilpirazin-2-amina (79 mg, 0.584 mmol) u acetonitrilu (10 mL) je ohladjen do 0°C, i obradjen postepenim dodavanjem NBS (140 mg, 1.46 mmol) tokom 1 časa uz pažljivo praćenje toka reakcije pomoću LCMS. Reakciona smeša je koncentrovana i ostatak je triturisan sa EtOAc (2 x 5 mL) i EtOAc supernatanti su izdvojeni centrifugiranjem, kombinovani i oprani sa 1N NaOH (3 x 1 mL) i EtOAc sloj je osušen (nad Na2SO4), koncentrovan i sirovi smedji ostatak je dobijen. Sirovi proizvod je dalje prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu uz eluiranje gradijentom EtOAc/CH2Cl2(0-30%) da bi se dobio 3-bromo-5-ciklopropilpirazin-2-amin u vidu bezbojne čvrste supstance (38.2 mg, 38.5% prinosa). LCMS (m/z): 214.0/216.0 (MH<+>), 0.64 min.
Sinteza 3'-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-[3,4'-bipiridin]-6-amina
[0243]
Šema 24
Faza 1. 3'-metil-3,4'-bipiridin-6-amin
[0244] Rastvoru (2 g, 9.09 mmol) u DME (45.4 mL) dodat je 4-hloro-3-metilpiridin (1.739 g, 13.63 mmol), i PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (0.742 g, 0.909 mmol) i 2 M Na2CO3(15.15 mL), smeša je pročišćena azotom 5min, reakciona smeša u čvrsto zatvorenom staklenom autoklavu je zagrevana do 120<o>C preko noći. Reakciona smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc, organski slojevi su oprani zasićenim slanim rastvorom i vodom Organska supstanca je osušena pomoću anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi material je prečišćen fleš hromatografijom (0-100% EtOAc/heptan) da bi se dobio 3'-metil-3,4'-bipiridin-6-amin (255 mg, 1.377 mmol, 15.15 % prinosa). LCMS (m/z): 406.3 (MH<+>), 0.47 min
Faza 2.5-bromo-3'-metil-3,4'-bipiridin-6-amin
[0245] Ledeno hladnom rastvoru 3'-metil-3,4'-bipiridin-6-amina (250 mg, 1.350 mmol) u DCM (4499 µL) dodat je NBS (264 mg, 1.485 mmol) u dve porcije. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 2 h. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom, i oprana sa vodom, zasićenim slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Ostatak je obradjen heptanom, čvrsta supstanca je filtrirana da bi se dobio 5-bromo-3'-metil-3,4'-bipiridin-6-amin (350 mg, 1.325 mmol, 98 % prinosa) kao smedja čvrsta supstanca, koja se koristi u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 264.4/266.4 (MH<+>), 0.32 min;<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8.51 (s, 1 H), 8.47 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 8.04 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.69 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.12 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 5.06 (br. s., 2 H), 2.32 (s, 3 H).
Faza 3.3'-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,4'-bipiridin-6-amin
[0246] Suspenziji (5-bromo-3'-metil-3,4'-bipiridin-6-amina (100 mg, 0.379 mmol) u 1,4-dioksanu (947 µL) je dodat bispinB (288 mg, 1.136 mmol) i kalijum acetat, (186 mg, 1.893 mmol). Smeša je pročišćavana azotom 3 min, zatim je dodat PdCl2(dppf)CH2Cl2adukt (30.9 mg, 0.038 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 120°C u mikrotalasnom reaktoru 10 min, potvrdjeno je obrazovanje željenog proizvoda. Još uvek je preostalo nešto polaznog materijala, koji je ponovo podvrgnut mikrotalasnom zračenju na 120°C tokom 10 min. Reakciona smeša je filtrirana kroz filter i isprana dioksanom (0.7 mL), filtrirani rastvor je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 230.1 (MH<+>za boronsku kiselinu), 0.22 min.
Sinteza 1-(4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidin-1-il)etanona
[0247]
Šema 25
[0248] U 3-bromo-5-(piperidin-4-il)pirazin-2-amin (50 mg, 0.194 mmol) u DCM (4 mL) u ledenom kupatilu dodat je DIEA (0.136 mL, 0.778 mmol) i acetil hlorid (0.017 mL, 0.233 mmol) . Reakciona smeša je mešana u ledenom kupatilu 30 min. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju DCM i vode. DCM sloj je izdvojen i opran zasićenim slanim rastvorom. Osušen je iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Prosledjen je u sledeću fazu. LCMS (m/z): 299.1/301.1 (MH<+>), 0.508 min. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.81-7.69 (m, 2 H), 7.62-7.45 (m, 2 H), 7.37-7.09 (m, 6 H), 6.5 (dd, J=8.61, 2.35 Hz, 1 H), 6.50 (dd, J=13.50, 2.15 Hz, 1 H), 5.17-5.01 (m, 1 H), 4.55 (d, J=13.30 Hz, 1 H), 3.94 (d, J=13.69 Hz, 1 H), 3.83-3.63 (m, 2 H), 2.88 (tt, J=11.84, 3.62Hz, 1 H), 2.67 (td, J=12.91, 2.35 Hz, 1 H), 2.03 (s, 3 H), 1.96-1.79 (m, 2 H), 1.78-1.50 (m, 2 H).
Sinteza 3-bromo-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amina
[0249]
Šema 26
Faza 1.5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amin
[0250] U fiolu za mikrotalasno zračenje je sipan 5-bromopiridin-2-amin (500 mg, 2.89 mmol), 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (1.2 g, 5.78 mmol), vodeni Na2CO3(2 M, 5.78 mL), PdCl2(dppf) CH2Cl2(0.236 g) i DME (15 mL), i reakciona smeša je pročišćavana argonom 5 min, fiola je čvrsto zatvorena i zagrevana u mikrotalasnom reaktoru na 115°C tokom 20 min. DME sloj reakcione smeše je sakupljen, koncentrovan i ostatak je podvrgnut fleš hromatografiji na koloni silika gela eluiranjem gradijentom metanol/CH2Cl2, i 5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amin je dobijen kao svetlo smedja čvrsta supstanca (383 mg, 76% prinosa). LCMS (m/z): 175.2 (MH<+>), 0.34 min.
Faza 2.3-bromo-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amin
[0251] U 5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amin (380 mg, 2.18 mmol), rastvor u acetonitrilu (30 mL) na 0°C dodat je NBS (388 mg, 2.18 mmol) i reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 30 min, zatim na sobnoj temperaturi dodatnih 40 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana, ponovo rastvorena u metanolu, dodat joj je čvrsti LiOH (80 mg), sonifikovana je i koncentrovana, ostatak je triturisan vodom (2 x 5 mL), i supernatanti su odbačeni. Ostatak je osušen pod visokim vakuumom, zatim triturisan sa EtOAc (2 x 8 mL), i supernatanti su sakupljeni, kombinovani, i koncentrovani i svetlo smedji ostatak je dobijen kao sirovi 3-bromo-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amin. LCMS (m/z): 253.0/255.0 (MH<+>), 0.38 min.
Sinteza (S)-4-(2-amino-4-fluoro-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida
[0252]
Šema 27
Faza 1.5-bromo-4-fluoropiridin-2-amin
[0253] Rastvoru 4-fluoropiridin-2-amina (400 mg, 3.57 mmol) u acetonitrilu (35. 7 mL) dodat je NBS (648 mg, 3.64 mmol) u tri porcije na 0°C . Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 20 min. LCMS je pokazao da je reakcija završena. Posle kvenčovanja sa zasićenim Na2S2O3i NaHCO3, mešana je 30 min. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc 3 puta. Oprana je sa zasićenim NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom. Osušena je i koncentrovana Sirovi material je triturisan etrom i prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 192.9 (MH<+>), 0.32 min.
Faza 2.4-fluoro-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amin
[0254] U reakcionu smešu 5-bromo-4-fluoropiridin-2-amina (369 mg, 1.932 mmol), 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (603 mg, 2.90 mmol), PdCl2(dppf)DCM (141 mg, 0.193 mmol) i DME (9.660 µL), dodat je 2M Na2CO3(3.220 mL). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (120°C, 12 min). U reakcionu smešu dodat je anhidrovani natrijum sulfat, smeša je filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc (koji sadrži 10% MeOH/heptan da bi se dobilo 280 mg željenog proizvoda sa 75 % prinosa. LCMS (m/z): 193.1 (MH<+>), 0.35 min.
Faza 3.3-bromo-4-fluoro-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amin
[0255] Rastvoru 4-fluoro-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amina (150 mg, 0.780 mmol) u acetonitrilu (7. 805 mL) dodat je NBS (142 mg, 0.796 mmol) u tri porcije na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 20 min. LCMS je pokazala da je reakcija potpuna. Posle kvenčovanja sa zasićenim Na2SO3i NaHCO3, smeša je mešana 30 min. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc 3 puta. Čvrsta supstanca je otfiltrirana. Čvrsta supstanca nije predstavljala željeni proizvod. EtOAc slojevi su oprani zasićenim NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom. Osušeni su i koncentrovani. Sirovi material je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc (koji sadrži 10% MeOH/heptan da bi se dobilo 30 mg željenog proizvoda. LCMS (m/z): 273.1 (MH<+>), 0.46 min.
Sinteza (+/-)-(1S,3R)-3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)ciklopentanola, (+/-)-(1R,3R)-3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)ciklopentanola, i (+/-)-3-bromo-5-((1R,3R)-3-metoksiciklopentil)pirazin-2-amina
[0256]
Šema 28
Faza 1.3-bromociklopent-2-enon
[0257] Rastvoru PPh3(44.1 g, 168 mmol) u benzenu (510 mL), dodat je Br2(8.67 mL, 168 mmol) u kapima na 0°C, rastvor se pretvorio u žutu suspenziju, zatim je polako dodat TEA (23.44 mL, 168 mmol). U smešu je dodat ciklopentan-1,3-dion (15 g, 153 mmol) u benzenu (100 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodato je 200 mL etra, reakciona smeša je zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan, ostatak je obradjen sa Et2O, čvrsta supstanca je filtriranea, postupak je ponovljen još jednom. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije. LCMS (m/z): 160.9 (MH<+>), 0.35 min.
Faza 2.3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)ciklopent-2-enon
[0258] Rastvoru 3-bromociklopent-2-enona (13 g, 81 mmol) u dioksanu ( 161 mL) dodat je B2(PIN)2(41.0 g, 161 mmol) i PdCl2(dppf)CH2Cl2(2.95 g, 4.04 mmol). Reakciona smeša je degazirana 15 min propuštanjem N2u mehurićima. Zatim je dodat KOAc (23.77 g, 242 mmol).
Reakciona smeša je zagrevana na 90ºC preko noći. Posle hladjenja, reakciona smeša je filtrana kroz stakleni filter i isprana dioksanom (160 mL), filtrat je koncentrovan u vakuumu dajući sirovi 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)ciklopent-2-enon, koji je korišćen u sledećoj fazi bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 126.9 (MH<+>), 0.17 min.
Faza 3.3-(5-aminopirazin-2-il)ciklopent-2-enon
[0259] U 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)ciklopent-2-enon (2.99 g, 14.37 mmol) (filtrat iz poslednje faze) dodat je 2-amino-5 bromopirazin (2.5 g, 14.37 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2(1.173 g, 1.437 mmol), Na2CO3(7.61 g, 71.8 mmol) i voda (17.96 mL) i reakciona smeša je mešana u uljanom kupatilu na 100<o>C preko noći, filtrirana kroz celit. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa EtOAc. Organska supstanca je zatim oprana 2 puta korišćenjem 3N HCl (20 mL), i jednom sa 50 mL vode, vodeni sloj je zatim neutralizovan sa NaOH do pH= 8, reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa CHCl3/IPA (7:3) 3 puta, organska supstanca je osušena i koncentrovana i korišćena kao takva. LCMS (m/z): 176.1 (MH<+>), 0.32 min.
Faza 4. N,N- di-terc-butil (5-(3-oksociklopent-1-en-1-il)pirazin-2-il)karbamat
[0260] Rastvoru 3-(5-aminopirazin-2-il)ciklopent-2-enona (500 mg, 2.85 mmol) u DCM (9.5mL) dodat je Boc2O (1988 µl, 8.56 mmol) i DMAP (523 mg, 4.28 mmol), reakciona smeša je mrki rastvor, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 5 h. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena pomoću fleš hromatografije (0-40% EtOAc/heptan) da bi se dobio N,N- di-terc-butil (5-(3-oksociklopent-1-en-1-il)pirazin-2-il)karbamat sa 47% prinosa. LCMS (m/z): 376.2 (MH<+>) 0.96 min.<1>H NMR (400MHz CDCl3) δ ppm 8.77 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 8.72 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 6.89 (s, 1 H), 3.15 (td, J = 2.3, 4.7 Hz, 2 H), 2.64 (td, J = 2.4,5.0 Hz, 2 H), 1.45 - 1.37 (m, 18H).
Faza 5. (+/-)-N,N-Di-terc-butil (5-(3-oksociklopentil)pirazin-2-il)karbamat
[0261] N,N-di-terc-butil (5-(3-oksociklopent-1-en-1-il)pirazin-2-il)karbamat (600 mg, 1.598 mmol) u metanolu je pročišćen sa N2tokom 10 min, dodat je Pd/C (170 mg, 0.160 mmol), reakciona smeša je pročišćena sa N2dodatnih 5 min, reakciona smeša je zatim opremljena balonom sa vodonikom i mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Filtrirana je kroz celit, filtrat je koncentrovan, sirovi material je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 378.1 (MH<+>), 0.83 min.
Faza 6. (+/-)-N,N-Di-terc-butil (5-((1R,3R)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)karbamat i (+/-)-N,N-Di-terc-butil (5-((1R,3S)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)karbamat
[0262] (+/-)-N,N-Di-terc-butil (5-(3-oksociklopentil)pirazin-2-il)karbamat (600 mg, 1.590 mmol) je rastvoren u metanolu (5299 µl), zatim je dodat NaBH4(90 mg, 2.385 mmol), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 min, zas. NH4Cl je dodat, reakciona smeša je zatim koncentrovana da bi se uklonio metanol. Ekstrahovana je sa EtOAc, organska supstanca je oprana zas. NaHCO3rastvorom, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad anhidrous Na2SO4, koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobio (+/-)-N,N-Di-terc-butil (5-((1R,3R)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)karbamat (24.9%). LCMS (m/z): 280.1 (MH<+>), 0.86 min.<1>H NMR (400MHz,CDCl3)δ ppm 8.50 - 8.43 (m, 1 H), 8.43 - 8.33 (m, 1 H), 4.40 (br. s., 1 H), 3.58 - 3.45 (m, 1 H), 2.36 - 2.17 (m, 2 H), 2.02 - 1.75 (m, 5 H), 1.50 - 1.39 (m, 18 H). (+/-)-N,N-Di-terc-butil (5-((1R,3S)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)karbamat (4%), LCMS (m/z): 380.1 (MH<+>), 0.85 min.<1>H NMR (400MHz,CDCl3) δ ppm 8.43 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 8.36 - 8.32 (m, 1 H), 4.59 (d, J = 2.7 Hz, 1 H), 3.69 - 3.57 (m, 1 H), 2.37 -2.13 (m, 2 H), 2.13 - 2.01 (m, 2 H), 1.93 - 1.68 (m, 2 H), 1.49 - 1.39 (m, 18 H).
Faza 7. (+/-)-(1S,3R)-3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)ciklopentanol
[0263] N,N-Di-terc-butil (5-((1R,3S)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)karbamatu (35 mg, 0.092 mmol) u DCM (461 µl) je dodata HCl (922 µl, 3.69 mmol), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i koncentrovana do suva dajući HCl so. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 180.1 (MH<+>), 0.22 min. (+/-)-(1S,3R)-3-(5-aminopirazin-2-il)ciklopentanol (15 mg, 0.084 mmol) je rastvoren u acetonitrilu (2 mL), zatim je dodat NBS (16.39 mg, 0.092 mmol), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 min, dodata je voda, reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa EtOAc, organska supstanca je osušena i koncentrovana, sirovi material je korišćen u sledećoj fazi reakcije. LCMS (m/z): 258.1/260.2 (MH<+>), 0.45 min. Prateći prethodni postupak, korišćenjem (+/-)-N,N-Di-terc-butil (5-((1R,3S)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)karbamata, dobijen je (+/-)-(1R,3R)-3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)ciklopentanol. LCMS (m/z): 258.1/260.1 (MH<+>), 0.50 min.
Faza 8. N,N-Di-terc-butil (5-(3-metoksiciklopentil)pirazin-2-il)karbamat
[0264] Rastvoru dijastereomerne smeše N,N-Di-terc-butil (5-(3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)karbamata (50 mg, 0.132 mmol) u MeI (2.635 mL) dodat je srebro oksid (305 mg, 1.318 mmol), reakciona smeša je zatvorena u reakcionu fiolu i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodato je 10 ekviv. srebro oksida i 2 mL MeI, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi još jedan dan. Reakciona smeša je filtrirana kroz čep od celita i oprana sa EtOAc i metanolom. Nakon toga je filtrat koncentrovan, sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0-40% EtOAc/heptan) dajući N,N-Di-terc-butil (5-((1R,3R)-3-metoksiciklopentil)pirazin-2-il)karbamat (25 mg). LCMS (m/z): 394.1 (MH<+>), 1.06 min.
Primer 12
Sinteza (+/-)-4-(3-amino-6-((1S,3R)-3-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida
[0265]
Šema 29
Faza 1.3-oksocikloheks-1-en-1-il trifluorometansulfonat
[0266] Cikloheksan-1,3-dion (8 g, 71.3 mmol) je odmeren u balon okruglog dna od 500 mL i dodat je CH2Cl2(160 mL) rezultujući u bistro bezbojnoj gustoj suspenziji na 0 ºC pod N2. Dodat je natrijum karbonat (8.32 g, 78 mmol) i suspenzija je mešana tokom 15 min. Trifluorometansulfonski anhidrid (13.26 mL, 78 mmol) rastvoren u DCM (16 mL) je dodat u kapima tokom 1.2 h uz održavanje unutrašnje temperature nižom od 1.9ºC da bi se izbeglo obrazovanje bis-triflata. Smeša je ostavljena da se meša na 0ºC tokom 45 min, zatim ostavljena da se ugreje do 10ºC tokom 20 min. Filtrirana je kroz levak od sinterovanog stakla da bi se odstranio Na2CO3i dodat je zasićeni NaHCO3. Organski sloj je izdvojen i opran zasićenim slanim rastvorom. Osušen je iznad Na2SO4, filtriran, koncentrovan i osušen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 9.18 g željenog proizvoda. LCMS (m/z): 245.1 (MH<+>), 0.81 min.
Faza 2. 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-2-enon
[0267] U smešu 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana) (19.09 g, 75 mmol) i kalijum acetata (11.07 g, 113 mmol) dodat je 3-oksocikloheks-1-en-1-il trifluorometansulfonat (9.18 g, 37.6 mmol) kao rastvor u dioksanu (44.6 mL). Kroz smešu je produvavan argon u mehurićima tokom 15 min, zatim je dodat Pd(dppf)Cl2-DCM (0.824 g, 1.128 mmol). Cela reakciona smeša je zagrevana na 100°C preko noći. Rastvor je filtriran kroz celit i sav rastvarač je uparen. Ostatak je osušen pod visokim vakuumom da bi se dobio vantitativni proizvod koji je korišćen kao takav. LCMS (m/z): 141 (MH<+>za boronsku kiselinu), 0.43 min.
Faza 3.3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheks-2-enon
[0268] U čašu od 500 mL odmeren je 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-2-enon (4.1 g, 18.46 mmol), 5-bromopiridin-2-amin (4.15 g, 24.00 mmol) je dodat kao rastvor u dioksanu (69.2 mL), a nakon toga zasićeni Na2CO3(23.08 mL) i Pd(dppf)Cl2-DCM (1.350 g, 1.846 mmol). Cela smeša je zatim degazirana produvavanjem mehurića Ar 15 min i refluksovana preko noći. Dodat je EtOAc i voda, i smeša je mešana 30 min. Organska supstanca je izdvojena i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc tri puta. Organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Prečišćeni su fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc (koji sadrži 10% MeOH)/heptan da bi se dobilo 2 g željenog proizvoda. LCMS (m/z): 190 (MH<+>), 0.42 min.
Faza 4.3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheks-2-enol
[0269] Rastvoru 3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheks-2-enona (150 mg, 0.793 mmol) u etanolu (2643 µL) dodat je cerijum (III) hlorid (293 mg, 1.189 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h dok se sav materijal nije rastvorio. Reakciona smeša je zatim ohladjena do 0 ºC i natrijum borohidrid (45.0 mg, 1.189 mmol) je dodat u porcijama. Reakciona smeša je mešana nakon zagrevanja do sobne temperature tokom 2 h. Reakciona smeša je ohladjena do 0ºC i 2 mL vode je polako dodato dok se mehurići nisu jasno pojavili i zatim nestali, mešanje je nastavljeno 30 min. Zatim je dodat natrijum sulfat i smeša je mešana 30 min. Filtrirana je i osušena pod visokim vakuumom da bi se dobilo 149 mg željenog proizvoda. LCMS (m/z): 192.1 (MH<+>), 0.46 min.
Faza 5. 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheks-1-en-1-il)pirazin-2-amin
[0270] Rastvoru 3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheks-2-enola (149 mg, 0.779 mmol) u DMF (5.5 mL) na 0 ºC dodat je terc-butilhlorodimetilsilan (294 mg, 1.95 mmol) ) i 1H-imidazol (212 mg, 3.12 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Posle kvenčovanja zasićenim NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc 3 puta. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Filtrirani su i koncentrovani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc/heptan da bi se dobilo 238 mg sirovog proizvoda koji je korišćen kao takav. LCMS (m/z): 306.9 (MH<+>), 1.04 min.
Faza 6.5-((1R,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-amin
[0271] Smeša 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheks-1-en-1-il)pirazin-2-amina (238 mg, 0.779 mmol) i Pd/C (10%) (50 mg, 0.779 mmol) u MeOH (7.79 mL) je mešana pod atmosferom H2tokom 3 h. LCMS je pokazala oko 60% konverzije. Dodato je još Pd/C (20 mg), i smeša je mešana oko još 4 h. LCMS je pokazala da je preostala mala količina polaznog materijala. Dodato je još Pd/C (20 mg) i mešano preko noći. Katalizator je otfiltriran i rastvarač je uparen. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc/heptan da bi se dobilo 110 mg cis racemata željenog jedinjenja. LCMS (m/z): 308.4 (MH<+>), 1.01 min.
Faza 7.3-bromo-5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-amin
[0272] Rastvoru 5-((1R,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-amina (110 mg, 0.358 mmol) u acetonitrilu (5.50 mL) dodat je NBS (66.9 mg, 0.376 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 15 min. Posle kvenčovanja zasićenim natrijum tiosulfatom i zasićenim NaHCO3, uradjena je ekstrakcija sa EtOAc tri puta. Organski slojevi su kombinovani i oprani zasićenim slanim rastvorom, osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobilo 138 mg cis racemata željenog jedinjenja, koji je korišćen kao takav. LCMS (m/z): 388 (MH<+>), 0.72 min.
Faza 8. 4-(3-amino-6-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid
[0273] U 3-bromo-5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-amin (68 mg, 0.176 mmol) u fiolu za mikrotalasno zračenje od 2 mL dodata je (4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenil)boronska kiselina (72.1 mg, 0.264 mmol), PdCl2(dppf)-DCM (12.88 mg, 0.018 mmol), DME (1.32 mL) i 2M rastvor Na2CO3(0.44 mL). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (12 min, 120°C). Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i oprana vodom tri puta, osušena iznad Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc (koji sadrži 10% MeOH)/heptan da bi se dobilo 60 mg sirovog cis racemata jedinjenja koje je preneto u sledeću reakciju bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 535.4 (MH<+>), 1.31 min.
Faza 9.4-(3-amino-6-((1R,3S)-3-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid
[0274] Smeša 4-(3-amino-6-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida (61 mg, 0.114 mmol) u 6N HCl (0.29 mL),THF (0. 57 mL) i MeOH (0.285 mL) je mešana tokom 2 h. Čvrsti natrijum bikarbonat je dodat da bi se reakciona smeša neutralizovala.
Rastvarač je uparen i 25 % od ostatka je rastvoreno u DMSO, i prečišćeno pomoću autopreparativne hromatografije da bi se dobilo 15 mg željenog cis racemata jedinjenja kao TFA so. LCMS (m/z): 421.3 (MH<+>), 0.74 min.1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ ppm 7.82 - 7.69 (m, 2 H) 7.62 - 7. 45 (m, 2 H) 7.37 - 7.12 (m, 5 H) 4.52 (s, 2 H) 3.66 -3.52 (m, 1 H) 2.75 - 2.60 (m, 1 H) 2.11 - 2.01 (m, 1 H) 1.97 - 1.70 (m, 3 H) 1.52 - 1.29 (m, 3 H) 1.24 - 1.08 (m, 1 H).
Sinteza (+/-)-3-bromo-5-((1R,3S)-3-metoksicikloheksil)pirazin-2-amina
[0275]
Šema 30
Faza 1. (+/-)-N,N-di-Boc-3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheks-2-enon
[0276] U 3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheks-2-enon (1.3 g, 6.87 mmol) u DCM (34.0 mL) dodat je di-terc-butil dikarbonat (4.50 g, 20.61 mmol) i N,N-dimetilpiridin-4-amin (0.084 g, 0.69 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa DCM i zatim oprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata. Izdvojeni organski sloj je zatim osušen natrijum sulfatom i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0 u 50% etil acetata u heptanu) dajući 1.3 g (+/-)-N,N-di-Boc-3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheks-2-enona. LCMS (m/z): 390.3 (MH<+>), 1.02 min.
Faza 2. (+/-)-N,N-di-Boc-3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheksanon
[0277] Smeša (+/-)-N,N-di-Boc-3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheks-2-enona (1.3 g, 3.34 mmol) i Pd/C (10%) (400 mg, 10.57 mmol) u MeOH (33.4 mL) je mešana pod H2atmosferom preko noći. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit, i dobro oprana sa MeOH i EtOAc. Filtrat je uparen dajući (+/-)-N,N-di-Boc-3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheksanon koji je korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 392.9 (MH<+>), 0.97 min.
Faza 3. (+/-)-N,N-di-Boc-(1S,3R)-3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheksanol
[0278] (+/-)-N,N-di-Boc-3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheksanon (600 mg, 1.533 mmol) je rastvoren u EtOH (17.2 mL), zatim je dodat NaBH4(87 mg, 2.299 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Posle dodavanja vode za kvenčovanje reakcije, reakciona smeša je koncentrovana da bi se uklonio metanol i ekstrahovana sa EtOAc, i organski sloj je opran rastvorom NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, i koncentrovan dajući sirovi (+/-)-N,N-di-Boc-(1S,3R)-3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheksanol (koji sadrži 5% trans izomera) koji je prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 394.2 (MH<+>), 0.89 min.
Faza 4. (+/-)-N,N-di-Boc-5-((1R,3S)-3-metoksicikloheksil)pirazin-2-amin
[0279] Smeša (+/-)-N,N-di-Boc-(1S,3R)-3-(5-aminopirazin-2-il)cikloheksanola (350 mg, 0.89 mmol), srebro oksida (2.06 g, 8.9 mmol), acetonitrila (2. 224 mL) i metil jodida (55.6 µL, 0.890 mmol) je mešana preko noći. Posle dodavanja EtOAc, reakciona smeša je filtrana. Posle uparavanja isparljivog materijala, sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0-100% EtOAc u heptanu) dajući 184 mg (+/-)-N,N-di-Boc-5-((1R,3S)-3-metoksicikloheksil)pirazin-2-amina (184 mg, 0.452 mmol). LCMS (m/z): 408.3 (MH<+>), 1.10 min.
Faza 5. (+/-)-3-bromo-5-((1R,3S)-3-metoksicikloheksil)pirazin-2-amin
[0280] (+/-)-N,N-di-Boc-5-((1R,3S)-3-metoksicikloheksil)pirazin-2-aminu (184 mg, 0.452 mmol) u DCM (4. 515 mL) dodata je HCl (4M u dioksanu) (4.515 mL, 18.06 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Posle uklonjanja isparljivog materijala u vakuumu, ostatak je rastvoren u EtOAc. Organski sloj je opran rastvorom NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, i koncentrovan dajući (+/-)-5-((1R,3S)-3-metoksicikloheksil)pirazin-2-amin u kvantitativnom prinosu. LCMS (m/z): 208 (MH<+>), 0.43 min. Rastvoru (+/-)-5-((1R,3S)-3-metoksicikloheksil)pirazin-2-amina (54 mg, 0.261 mmol) u acetonitrilu (4. 008 µL) dodat je NBS (48.7 mg, 0.274 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 15 min. Posle kvenčovanja sa NaHCO3, ekstrahovana je sa EtOAc tri puta. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, i koncentrovan da bi se dobilo 75 mg (+/-)-3-bromo-5-((1R,3S)-3-metoksicikloheksil)pirazin-2-amina u kvantitativnom prinosu. LCMS (m/z): 286 (MH<+>), 0.73 min.
Primer 13
Sinteza (+/-)-4-(3-amino-6-(3-(metilsulfonil)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida
[0281]
Šema 31
Faza 1. (+/-)-N-(3-bromo-5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-il)pivalamid
[0282] Pivaloil hlorid (71.5 µL, 0.569 mmol) je dodat u kapima u mešanu, ohladjenu (0°C) smešu (+/-)-3-bromo-5-((1R,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-amina (110 mg, 0.285 mmol) i TEA (159 µL, 1.139 mmol) u CH2Cl2(949 µL). Crvena smeša je mešana na 0°C tokom 1 h, zatim na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Dodat je EtOAc i zasićeni NaHCO3i smeša je dobro promešana. Organski sloj je izdvojen i vodeni sloj je intenzivno ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani EtOAc slojevi su oprani zasićenim slanim rastvorom, osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu eluiranjem smešom EtOAc/heptan da bi se dobilo 97 mg (+/-)-N-(3-bromo-5-(3-((terc-butildimetilsilil) oksi)cikloheksil)pirazin-2-il)pivalamida sa 72.4% prinosa. LCMS (m/z): 472.3 (MH<+>), 1.19 min.
Faza 2. (+/-)-N-(3-bromo-5-((1R,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-il)pivalamid
[0283] Smeša (+/-)-N-(3-bromo-5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-il)pivalamida (97 mg, 0.206 mmol) u 6N HCl (687 µL), THF (687 µL) MeOH (687 µL) je mešana tokom 2h. LCMS je pokazala da je reakcija završena. Čvrsti natrijum bikarbonat je dodat da bi se neutralizovala HCl. Smeša je rastvorena u EtOAc i vodi. Organski sloj je izdvojen i opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobilo 72 mg sirovog (+/-)-N-(3-bromo-5-((1R,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-il) pivalamida sa 98% prinosa. LCMS (m/z): 358.6 (MH<+>), 0.70 min.
Faza 3. (+/-)-(1S,3R)-3-(6-bromo-5-pivalamidopirazin-2-il)cikloheksil metansulfonat
[0284] U smešu (+/-)-N-(3-bromo-5-((1R,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-il)pivalamida (72 mg, 0.202 mmol) u CH2Cl2(2021 µL) na 0°C dodat je TEA (56.3 µL, 0.404 mmol) i metansulfonil hlorid (18.90 µL, 0.243 mmol). Rezultujuća smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3h. Dodatni TEA (56.3 µL, 0.404 mmol) i metansulfonil hlorid (18.90 µL, 0.243 mmol) je dodat, i smeša je mešana tokom 6h. Reakciona smeša je obradjena dodatkom vode. Organska faza je oprana zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc/heptana da bi se dobilo 54 mg (+/-)-(1S,3R)-3-(6-bromo-5-pivalamidopirazin-2-il)cikloheksil metansulfonata sa 61.5% prinosa. LCMS (m/z): 436.1 (MH<+>), 0.75 min.
Faza 4. (+/-)- (1S,3R)-3-(6-(4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenil)-5-pivalamidopirazin-2-il)cikloheksil metansulfonat
[0285] U cis racemat (+/-)-3-(6-bromo-5-pivalamidopirazin-2-il)cikloheksil metansulfonata (54 mg, 0.124 mmol) u fiolu za mikrotalasno zračenje od 2.0 mL dodata je (4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenil)boronska kiselina (50.9 mg, 0.186 mmol), PdCl2(dppf) (9.10 mg, 0.012 mmol), DME (1166 µL) i 2M rastvor Na2CO3(389 µL). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (12 min, 80°C). Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i oprana vodom tri puta, osušena iznad Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc (koji sadrži 10% MeOH) da bi se dobilo 73 mg (+/-)-(1S,3R)-3-(6-(4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenil)-5-pivalamidopirazin-2-il)cikloheksil metansulfonata koje je prenet u sledeću reakciju bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 583.4 (MH<+>), 0.87 min.
Faza 5. (+/-)-N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1R,3R)-3-(metiltio)cikloheksil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamid
[0286] Smeša (+/-)-(1S,3R)-3-(6-(4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenil)-5-pivalamidopirazin-2-il)cikloheksil metansulfonata (25 mg, 0.043 mmol) i natrijum metantiolata (24.09 mg, 0.344 mmol) u MeOH (430 µL) je zagrevana na 80°C tokom 2 h. Rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa EtOAc (koji sadrži 10% MeOH)/heptan da bi se dobilo 25 mg sirovog (+/-)-N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1R,3R)-3-(metiltio)cikloheksil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamida koji je prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 535.3 (MH<+>), 1.09 min.
Faza 6. (+/-)-N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1R,3R)-3-(metilsulfonil)cikloheksil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamid
[0287] U trans racemat (+/-)-N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1R,3R)-3-(metiltio)cikloheksil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamida (35 mg, 0.065 mmol) u MeOH (327 µL) na 0°C dodat je okson (52.3 mg, 0.085 mmol) u vodi (327 µL). Reakciona smeša je mešana na 0°C i nakon toga na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je kvenčovana sa 2 ekviv. natrijum tiosulfata (20.70 mg, 0.131 mmol) u 2 mL vode na 0°C. Mešana je tokom 30 min, i zatim učinjena baznom dodatkom 6N NaOH na 0°C. Razblažena je sa EtOAc, i osušena iznad natrijum sulfata tri puta. Zatim je filtrirana i koncentrovana da bi se dobilo 25 mg (+/-)-N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1R,3R)-3-(metilsulfonil)cikloheksil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamida sa 67.4% prinosa koji je prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 567.4 (MH<+>), 0.90 min.
Faza 7. (+/-)-4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-(metilsulfonil)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid
[0288] U (+/-)-N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1R,3R)-3-(metilsulfonil)cikloheksil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamida (25 mg, 0.044 mmol) u MeOH (221 µL) dodat je kalijum karbonat (61.0 mg, 0.441 mmol). Rezultujuća smeša je zagrevana na 80°C tokom 4 h. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana. Prečišćena je pomoću autopreparativne hromatografije da bi se dobilo 5.4 mg (+/)-4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-(metilsulfonil)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida u prinosu od 20.11% . LCMS (m/z): 483.1 (MH<+>), 0.78 min.1H NMR (400MHz, MeOD-d4) δ ppm 8.00 – 7.81 (m, 2 H) 7.76 - 7.56 (m, 2 H) 7.43 - 7.16 (m, 5 H) 4.65 - 4.55 (m, 2 H) 3.61 - 3.51 (m, 1 H), 3.46 - 3.36 (m, 2 H) 2.87 - 2.97 (m, 3 H) 2.61 - 2.48 (m, 1 H) 2.19 – 1.95 (m, 3 H) 1.92 -1.78 (m, 3 H).
Primer 14
Sinteza 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida
[0289]
Šema 32
Faza 1. 5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-amin
[0290] U 5-bromopirazin-2-amin (225 mg, 1.293 mmol) dodat je 4,4,5,5-tetrametil-2-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)-1,3,2-dioksaborolan (482 mg, 1.810 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (84 mg, 0.103 mmol), DME (3.5 mL) i zatim na kraju natrijum karbonat 2M (1.616 mL, 3.23 mmol). Reakcija je podvrgnuta mikrotalasima na 120°C tokom 15 min. U reakciju je dodato 80 mL DCM, oprana je vodom (1x), osušena natrijum sulfatom, filtrirana i koncentrovana do ostatka. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu korišćenjem kolone od 12 grama (čvrsto punjenje) eluiranjem sa 10-90% etil acetata i heptana. Željene frakcije su koncentrovane do konstantne mase da bi se dobilo 173 mg željenog proizvoda u vidu slobodne baze koji je korišćen kao takav (56% prinosa). LCMS (m/z): 234.2 (MH<+>), 0.43 min;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.01 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.80 (d, J=1.2 Hz, 1H), 6.33 (s, 2H), 6.27 (t, J=3.9 Hz, 1H), 3.89 (s, 4H), 2.52 (d, J=1.6 Hz, 2H), 2.33 (br. s., 2H), 1.76 (t, J=6.7 Hz, 2H).
Faza 2. 5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)pirazin-2-amin
[0291] U 5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-amin (645 mg, 2.77 mmol) u balonu sa okruglim dnom koja je ispran argonom dodat je Pd-C 10% Degaussa (294 mg, 0.277 mmol). Zatim je pod argonom špricem dodat MeOH ( 10 mL) i na kraju je dodat balon sa vodonikom. Balon je pražnjen i ponovo punjen vodonikom (6 X). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom ukupno 16 h, pod balonom sa vodonikom, nakon čega je uradjena LCMS. Reakcija je isprana argonom i dodato je 25 mL DCM. Sirova smeša je filtrirana kroz čep od celita, i koncentrovana do nepromenljive mase da bi se dobilo 635 mg željenog proizvoda u vidu slobodne baze, koji je korišćen kao takav (98% prinosa). LCMS (m/z): 236.2 (MH<+>), 0.41 min;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.78 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.74 (d, J=1.2 Hz, 1H), 6.09 (s, 2H), 3.85 (s, 4H), 2.52-2.60 (m, 1H), 1.65-1.78 (m, 6H), 1.49-1.61 (m, 2H).
Faza 3. 3-bromo-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)pirazin-2-amin
[0292] U 5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)pirazin-2-amin (620 mg, 2.64 mmol) dodat je acetonitril (20 mL), a zatim je dodat NBS (469 mg, 2.64 mmol) u porcijama tokom 2 min. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min i kvenčovana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata, i dodato je 250 mL etil acetata. Vodeni sloj je ekstrahovan i organski sloj je opran zasićen natrijum bikarbonatom, vodom (2x), zasićenim slanim rastvorom, zatim osušen natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan do ostatka da bi se dobilo 650 mg željenog proizvoda, koji je korišćen kao takav, (79% prinosa). LCMS (m/z): 314.1/316.1 (MH<+>), 0.61 min.
Faza 4. 4-(3-amino-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid
[0293] U 3-bromo-5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)pirazin-2-amin (630 mg, 2.005 mmol) dodata je (4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenil)boronska kiselina (767 mg, 2.81 mmol), PdCl2(dppf)CH2Cl2adukt (164 mg, 0.201 mmol), DME ( 9 mL) i zatim na kraju 2M natrijum karbonat (3.01 mL, 6.02 mmol). Reakcija je podvrgnuta mikrotalasima na 115°C tokom 12 min.U reakcija je dodato 400 mL etil acetate, oprana je vodom (2x), osušena natrijum sulfatom, filtrirana i koncentrovana do ostatka. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu korišćenjem kolone od 40 grama eluiranjem sa 20-100% etil acetata i heptana. Željene frakcije su koncentrovane do nepromenljive mase da bi se dobilo 432 mg željenog proizvoda u vidu slobodne baze koji je korišćen kao takav, (47% prinosa). LCMS (m/z): 463.2 (MH<+>), 0.82 min;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.94 - 8.81 (m, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.80 - 7.69 (m, 1H), 7.67 - 7.52 (m, 2H), 7.33 (d, J=4.3 Hz, 4H), 7.27 -7.18 (m, 1H), 6.09 (s, 2H), 4.49 (d, J=5.9 Hz, 2H), 3.85 (s, 4H), 2.70 -2.61 (m, 1H), 1.84 -1.67 (m, 6H), 1.65 -1.48 (m, 2H).
Faza 5. 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid
[0294] U 4-(3-amino-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid (170 mg, 0.368 mmol) dodat je acetonitril (3 mL), voda (2 mL) i zatim 3M vodeni rastvor HCl (0.613 mL, 1.838 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min nakon čega je uradjena LCMS. U reakciju je dodato 200 mL etil acetata, učinjena je baznom dodatkom 1M NaOH u višku. Vodeni sloj je ekstrahovan i organski sloj je opran vodom (3x), filtriran i koncentrovan do ostatka da bi se dobio željeni proizvod u vidu slobodne baze. Pretpostavljen je kvantitativni prinos (0.368 mmol). LCMS (m/z): 419.3 (MH<+>), 0.75 min.
Faza 6. 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid
[0295] U 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid (77 mg, 0.184 mmol) dodat je MeOH (3 mL), ohladjen do 0°C. Zatim je dodat natrijum borohidrid (6.96 mg, 0.184 mmol). Reakcija je mešana tokom 20 min pri čemu je dozvoljeno da se zagreje do sobne temperature, nakon čega je uradjena LCMS. LCMS sirovog proizvoda je pokazala približno 9:1 (trans\cis) izomera kao što je očekivano. Reakcija je kvenčovana viškom zasićenog natrijum hlorida i mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. Potom je dodato 150 mL etil acetata i smeša je oprana zasićen natrijum bikarbonatom, vodom (2x), zasićenim slanim rastvorom, osušena natrijum sulfatom, filtrirana i koncentrovana do ostatka da bi se dobilo 73 mg sirovog proizvoda. Polovina (36.5 mg) sirovog proizvoda je rastvorena u 2.0 mL DMSO, filtrirana, prečišćena pomoću preparativne HPLC, i osušena zamrzavanjem da bi se dobilo 16.3 mg željenog proizvoda 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida kao TFA so, u 32% prinosa. LCMS (m/z): 421.3 (MH<+>), 0.69 min;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.82 (br. s., 1H), 7.83 (s, 1H), 7.64-7.73 (m, 1H), 7.45-7.61 (m, 2H), 7.25-7.31 (m, 4H), 7.14-7.23 (m, 1H), 4.43 (d, J=5.9 Hz, 2H), 1.66-1.91 (m, 3H), 1.38-1.57 (m, 2H), 1.11-1.31 (m, 2H).
Primer 15
Sinteza 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida Šema 33
[0297] U 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid (77 mg, 0.184 mmol) dodat je THF (3 mL), smeša je ohladjena do 0°C. Zatim je dodat 1M L-Selectride u THF (0.460 mL, 0.460 mmol). Reakcija je mešana tokom 20 min uz dopuštanje da se zagreje do sobne temperature, nakon čega je uradjena LCMS. LCMS sirovog proizvoda je pokazala približno više od 9:1 (cis/trans) izomera kao što je očekivano. Reakcija je učinjena baznom viškom 5M NaOH i mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. Potom je dodato 150 mL etil acetata i smeša je oprana vodom (3x), zasićenim slanim rastvorom, osušena natrijum sulfatom, filtrirana i koncentrovana do ostatka da bi se dobilo 75 mg proizvoda, koji je korišćen kao takav. Pola (36.5 mg) sirovog proizvoda je rastvoreno u 2.0 mL DMSO, filtrirano, prečišćeno pomoću prep HPLC, i osušeno zamrzavanjem da bi se dobilo 23 mg željenog proizvoda 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida kao TFA so, u (45% prinos). LCMS (m/z): 421.3 (MH<+>), 0.72 min;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.87 (br. s., 1H), 7.89 (s, 1H), 7.79 - 7.70 (m, 1H), 7.67 - 7.45 (m, 2H), 7.33 (d, J=4.3 Hz, 4H), 7.28 - 7.21 (m, 1H), 6.06 (s, 2H), 4.49 (d, J=5.9 Hz, 2H), 4.30 (br. s., 1H), 3.84 (br. s., 1H), 2.01 - 1.84(m, 2H), 1.75 - 1.64 (m, 2H), 1.60 - 1.43 (m, 4H).
Primer 16
Sinteza 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-(metilsulfonil)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida
[0298]
Šema 34
Faza 1. N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamid
[0299] U 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid (0.105 g, 0.25 mmol) dodat je DCM (2.5 mL), TEA (0.105 mL, 0.750 mmol) i zatim pivaloil hlorid (0.045 g, 0.375 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h nakon čega je uradjena LCMS. U reakcionu smešu je dodato 150 mL etil acetata, učinjena je baznom dodavanjem zasićenog bikarbonata u višku. Organski sloj je opran vodom (3x), zasićenim slanim rastvorom, osušen natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan do ostatka da bi se dobio proizvod u vidu slobodne baze, koji je korišćen kao takav. Pretpostavljen je kvantitativni prinos (0.25 mmol). LCMS (m/z): 505.4 (MH<+>), 0.82 min.
Faza 2. (1r,4r)-4-(6-(4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenil)-5-pivalamidopirazin-2-il)cikloheksil metansulfonat
[0300] U N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)-3-pivalamidopirazin-2-il) benzamid (125 mg, 0.248 mmol) je dodat DCM (2.5 mL), TEA (0.104 mL, 0.743 mmol) i ohladjen je do 0°C, a zatim je dodat metansulfonil hlorid (42.6 mg, 0.372 mmol). Reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana tokom 2 h, nakon čega je uradjena LCMS.
Zatim je dodato još TEA (0.104 mL, 0.743 mmol) i metansulfonil hlorida (42.6 mg, 0.372 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dodatna 3 h, tokom ukupno 5 h. U reakciju je dodato 150 mL etil acetata, i učinjena je baznom viškom zasićenog bikarbonata. Organski sloj je opran vodom (3x), zasićenim slanim rastvorom, osušen natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan do ostatka da bi se dobio proizvod u vidu slobodne baze, koji je korišćen kao takav. Pretpostavljen je kvantitativni prinos (0.248 mmol). LCMS (m/z): 583.3 (MH<+>), 0.90 min.
Faza 3. N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1s,4s)-4-(metiltio)cikloheksil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamid
[0301] U (1r,4r)-4-(6-(4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenil)-5-pivalamidopirazin-2-il)cikloheksil metansulfonata (130 mg, 0.223 mmol) dodat je t-butanol ( 3.5 mL), natrijum tiometoksid (235 mg, 3.35 mmol). Reakcija je zagrevana na 80°C tokom 1 h nakon čega je uradjena LCMS. Reakcija je ostavljena da se ohladi. Zatim je dodato 75 mL etil acetata, smeša je oprana zasićen natrijum bikarbonatom, vodom (2x), zasićenim slanim rastvorom, osušena natrijum sulfatom, filtrirana i koncentrovana do ostatka da bi se dobio proizvod u vidu slobodne baze, koji je korišćen kao takav. Pretpostavljen je kvantitativni prinos (0.223 mmol). LCMS (m/z): 535.3 (MH<+>), 1.06 min.
Faza 4. N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1s,4s)-4-(metilsulfonil)cikloheksil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamid
[0302] U N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1s,4s)-4-(metiltio)cikloheksil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamid (118 mg, 0.221 mmol) je dodat DCM (4 mL). Zatim je uz mešanje na sobnoj temperaturi rastvor mCPBA (118 mg, 0.527 mmol) u DCM (1 mL) polako titriran u smešu dok reakcija nije završena, nakon čega je uradjena LCMS. Zatim je dodato 75 mL etil acetata, smeša je oprana zasićen natrijum bikarbonatom, vodom (2x), zasićenim slanim rastvorom, osušena natrijum sulfate, filtrirana i koncentrovana do ostatka. Sirovi ostatak je rastvoren u 5 mL DMSO, filtriran i prečišćen pomoću prep HPLC. Željene frakcije su kombinovanie. Proizvod u vidu 100 mL rastvora u acetonitrilu/vodi sa 0.1% TFA, korišćen je kao takav u sledećoj fazi. Pretpostavljen je kvantitativni prinos (0.221 mmol). LCMS (m/z): 567.4 (MH<+>), 0.85 min.
Faza 5. 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-(metilsulfonil)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid
[0303] U N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1s,4s)-4-(metilsulfonil)cikloheksil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamid (120 mg, 0.212 mmol) u rastvoru vode (60 mL) i acetonitrila (40 mL) sa 0.1% TFA dodata je konc. HCl (2 mL, 65.8 mmol). Reakcija je mešana na 60°C tokom 12 h, nakon čega je uradjena LCMS. Sirovi proizvod je osušen zamrzavanjem do ostatka. Ostatak je rastvoren u DMSO, prečišćen pomoću prep HPLC, i osušen zamrzavanjem da bi se dobilo 10.2 mg željenog proizvoda 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-(metilsulfonil)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida kao TFA so, sa 6% ukupnog prinosa. LCMS (m/z): 483.2 (MH<+>), 0.72 min;<1>H NMR (CD3OD) δ ppm 7.80 (s, 1H), 7.76 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.63 (dd, J=8.2, 1.6 Hz, 1H), 7.55 (dd, J=11.7, 1.2 Hz, 1H), 7.22-7.34 (m, 4H), 7.10-7.20 (m, 1H), 4.52 (s, 2H), 3.12 (dt, J=8.9, 4.4 Hz, 1H), 2.96 (t, J=4.9 Hz, 1H), 2.81 (s, 3H), 2.16-2.30 (m, 2H), 1.99-2.13 (m, 2H), 1.86-1.96 (m, 2H), 1.70-1.85 (m, 2H).
Primer 17
Sinteza 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-(metilsulfonil)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida
[0304]
Šema 35
[0305] Prateći šemu 35, korišćenjem 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida (primer 15), dobijeno je 4.5 mg željenog proizvoda 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-(metilsulfonil)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida kao TFA so sa 3% ukupnog prinosa. LCMS (m/z): 483.2 (MH<+>), 0.71 min;<1>H NMR (CD3OD) δ ppm 7.80-7.89 (m, 2H), 7.68 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.60 (dd, J=11.7, 1.6 Hz, 1H), 7.31-7.42 (m, 4H), 7.19-7.30 (m, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.05-3.15 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.67-2.78 (m, 1H), 2.34 (br. s., 2H), 2.11 (br. s., 2H), 1.60-1.82 (m, 4H).
Primer 18
Sinteza N-((S)-2-amino-1-(3-hlorofenil)etil)-4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-metoksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida
Šema 36
Faza 1.4-(5-aminopirazin-2-il)cikloheksanon
[0307] U 5-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)pirazin-2-amin (8.68 g, 45.4 mmol) dodat je acetonitril (368 mL), voda (245 mL) i 3M HCl (76 mL). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakcija je učinjena baznom dodatkom 1M NaOH u višku, i zatim razblažena etil acetatom. Organski sloj je izdvojen. Vodeni sloj je intenzivno ekstrahovan sa EtOAc/2-metil THF (1:1) tri puta. Organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobilo 6.91 g proizvoda u vidu slobodne baze. LCMS (m/z): 192.12 (MH<+>), 0.30 min.
Faza 2. 1,3-bis(1,1-Dimetiletil) estar 2-(5-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il) imidodikarbonske kiseline
[0308] U 4-(5-aminopirazin-2-il)cikloheksanon (3.0 g, 15.69 mmol) u DCM ( 105 mL) dodat je diterc-butil dikarbonat (10.27 g, 47.1 mmol) i N,N-dimetilpiridin-4-amin (0.192 g, 1.569 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa DCM i zatim oprana zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata. Izdvojeni organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije eluiranjem sa 0 do 50% etil acetata u heptanu da bi se dobilo 2.2 g željenog proizvoda. LCMS (m/z): 392.7 (MH<+>), 0.91 min.
Faza 3. 1,3-bis(1,1-Dimetiletil) estar 2-(5-(4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)- imidodikarbonske kiseline
[0309] 1,3-bis(1,1-Dimetiletil) estar 2-(5-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-imidodikarbonske kiseline (350 mg, 0.894 mmol) je rastvoren u EtOH (10 mL), zatim je dodat NaBH4(50.7 mg, 1.341 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Odnos trans i cis je oko 85:15 prema TLC. Zasićeni rastvor NaHCO3je dodat za kvenčovanje reakcije. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa EtOAc/2-metil THF (1:1). Organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4, i koncentrovani da bi se dobio sirovi proizvod, koji je prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 394.3 (MH<+>), 0.89 min.
Faza 4. 1,3-bis(1,1-dimetiletil) estar 2-( 5-(4-metoksicikloheksil)pirazin-2-il)-imidodikarbonskiea kiseline
[0310] Smeša 1,3-bis(1,1-dimetiletil) estra 2-(5-(4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-imidodikarbonske kiseline (350 mg, 0.890 mmol), srebro oksida (1.649 g, 7.12 mmol), acetonitrila (2.22 mL) i metil jodida (1.112 mL, 17.79 mmol) je mešana preko noći. Dodat je EtOAc, i čvrsta supstanca je odfiltrirana. Rastvarač je uparen i ostatak je prečišćen putem fleš hromatografije eluiranjem smešom 0-100% EtOAc/heptan da bi se dobilo 168 mg željenog trans jedinjenja sa 46.3% prinosa. LCMS (m/z): 408.3 (MH<+>), 1.10 min.
Faza 5.5-((1r,4r)-4-metoksicikloheksil)pirazin-2-amin
[0311] 1,3-bis(1,1-dimetiletil) estru 2-( 5-(4-metoksicikloheksil)pirazin-2-il)-imidodikarbonske kiseline (168 mg, 0.412 mmol) u DCM (4.123 mL) dodata je HCl (4M u dioksanu) (4.123 mL, 16.49 mmol), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Koncentrovana je, i dodat je EtOAc. Smeša je oprana zasićenim NaHCO3, i vodom. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc i 2-metil THF (1:1) tri puta. Osušen je iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio željeni trans proizvod. LCMS (m/z): 208 (MH<+>), 0.42 min.
Faza 6.3-bromo-5-((1r,4r)-4-metoksicikloheksil)pirazin-2-amin
[0312] Rastvoru 5-((1r,4r)-4-metoksicikloheksil)pirazin-2-amina (92 mg, 0.444 mmol) u acetonitrilu (8.877 mL) dodat je NBS (83 mg, 0.466 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 15 min. Posle kvenčovanja zasićenim Na2SO3i NaHCO3, ekstrahovana je sa EtOAc i 2-metil THF (1:1) tri puta. Organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobilo 127 mg željenog trans jedinjenja u kvantitativnom prinosu. LCMS (m/z): 288 (MH<+>), 0.72 min.
Faza 7. terc-butil ((S)-2-(4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-metoksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-hlorofenil)etil)karbamat
[0313] U 3-bromo-5-((1r,4r)-4-metoksicikloheksil)pirazin-2-amin (35 mg, 0.122 mmol) u fiolu za mikrotalasno zračenje od 2 mL dodata je (S)-(4-((2-((terc-butoksikarbonil)amino)-1-(3-hlorofenil)etil)karbamoil)-3-fluorofenil)boronska kiselina (64.1 mg, 0.147 mmol), PdCl2(dppf) (8.95 mg, 0.012 mmol), DME (917 µL) i 2M rastvor Na2CO3(306 µL) . Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (12 min, 120°C). Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i oprana vodom tri puta, osušena iznad Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobilo 28 mg željenog trans proizvoda sa 38.3% prinosa.
Faza 8. N-((S)-2-amino-1-(3-hlorofenil)etil)-4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-metoksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamid
[0314] Smeša terc-butil ((S)-2-(4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-metoksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-hlorofenil)etil)karbamata (28 mg, 0.047 mmol), TFA (0.4 mL, 0.047 mmol) i CH2Cl2(1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Rastvarač je uparen i ostatak je rastvoren u DMSO, prečišćen pomoću autopreparativne hromatografije da bi se dobilo 15 mg željenog trans proizvoda u vidu TFA soli sa 51.3% prinosa. LCMS (m/z): 498.2 (MH<+>), 0.76 min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.94 - 7.85 (m, 2 H) 7.70 (dd, J=8.22, 1.56 Hz, 1 H) 7.62 (dd, J=11.93, 1.37 Hz, 1 H) 7.55 (s, 1 H) 7.49 - 7.34 (m, 3 H) 5.49 (dd, J=9.00, 5.87 Hz, 1 H) 3.53 - 3.41 (m, 2 H) 3.38 (s, 3 H) 2.70- 2.59 (m, 2 H) 2.20 (d, J=9.78 Hz, 2 H) 1.98 (d, J=12.91 Hz, 2 H) 1.65 (qd, J=13.04, 3.13 Hz, 2 H) 1.41 - 1.27 (m, 2 H).
Sinteza (1s,4s)-4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-1-metilcikloheksanola i (1r,4r)-4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-1-metilcikloheksanola
[0315]
Šema 37
Faza 1. terc-butil (5-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)pirazin-2-il)karbamat i terc-butil (5-((1r,4r)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)pirazin-2-il)karbamat
[0316] N,N-di-Boc-4-(5-aminopirazin-2-il)cikloheksanon (657 mg, 1.678 mmol) u THF (11.8 mL) je obradjen sa metillitijumom (1.469 mL, 2.350 mmol) na -78°C. Reakcija je mešana na -78°C tokom 2 h. Posle dodavanja još metillitijuma (1.469 mL, 2.350 mmol), reakciona smeša je mešana na -78°C tokom dodatna 2 h. Ovaj postupak je ponovljen još jednom. Zatim, reakciona smeša je kvenčovana metanolom i vodom. Rezultujuća smeša je koncentrovana i ostatak je suspendovan u etil acetatu. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtran, i koncentrovan. Sirova dijastereomerna smeša je prečišćena hromatografijom (0-100% etil acetat u heksanu). Za terc-butil (5-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)pirazin-2-il)karbamat (26.7% prinosa). LCMS (m/z): 308.7 (MH<+>), 0.79 min. Za terc-butil (5-((1r,4r)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)pirazin-2-il)karbamat (23.3% prinosa), LCMS (m/z): 308.7 (MH<+>), 0.75 min.
Faza 2. (1s,4s)-4-(5-aminopirazin-2-il)-1-metilcikloheksanol
[0317] Terc-butil (5-((1s,4s)-4-hidroksi-4-metilcikloheksil)pirazin-2-il)karbamatu (138 mg, 0.449 mmol) u DCM dodata je HCl (4 M u dioksanu) (4489 µL, 17.96 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Razblažena je sa EtOAc i oprana zasićenim NaHCO3. Bez razdvajanja, osušena je sa Na2SO4. Filtrirana je i oprana sa EtOAc. Koncentrovanjem je dobijeno 93 mg željenog proizvoda u kvantitativnom prinosu. LCMS (m/z): 208 (MH<+>), 0.41 min.
Faza 3. (1s,4s)-4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-1-metilcikloheksanol
[0318] Rastvoru (1s,4s)-4-(5-aminopirazin-2-il)-1-metilcikloheksanol (93 mg, 0.449 mmol) u acetonitrilu (8974 µL) dodat je NBS (80 mg, 0.449 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 15 min. Posle kvenčovanja sa NaHCO3. ekstrahovana je sa EtOAc tri puta. Organski slojevi su kombinovani i oprani vodom i zasićenim slanim rastvorom. Osušeni su iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da bi se dobilo 100 mg (1s,4s)-4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-1-metilcikloheksanola sa 78 % prinosa. LCMS (m/z): 288 (MH<+>), 0.60 min.
Faza 4. (1r,4r)-4-(5-aminopirazin-2-il)-1-metilcikloheksanol i Faza 5. (1r,4r)-4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-1-metilcikloheksanol
[0319] Prateći faze 2 i 3, korišćenjem (1r,4r)-4-(5-aminopirazin-2-il)-1-metilcikloheksanola, dobijen je (1r,4r)-4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-1-metilcikloheksanol. LCMS (m/z): 288 (MH<+>), 0.57 min.
Primeri 19 i 20
Sinteza metil 3-(5-amino-6-(4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-il)propanoata i 4-(3-amino-6-(3-(metilamino)-3-oksopropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida
[0320]
Šema 38
Faza 1. metil 3-(5-aminopirazin-2-il)propiolat
[0321] U fiolu od 5 mL za mikrotalasno zračenje dodat je 5-jodopirazin-2-amin (100 mg, 0.452 mmol), metil propiolat (161 µL, 1.810 mmol), kalijum karbonat (125 mg, 0.905 mmol), bakar (I) jodid (3.45 mg, 0.018 mmol), i THF (1508 µL). Reakciona smeša je zagrevana na 65<o>C tokom 2 h. Reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran, i uparen u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (20%EtOAc u DCM) dajući metil 3-(5-aminopirazin-2-il)propiolat (38%). LCMS (m/z): 178.4 (MH<+>), 0.48 min.
Faza 2. metil 3-(5-aminopirazin-2-il)propanoat
[0322] Rastvoru metil 3-(5-aminopirazin-2-il)propiolata (30 mg, 0.169 mmol) u MeOH (847 µL) dodat je Pd-C (36.0 mg, 0.034 mmol). Rastvor je degaziran strujom N2tokom 15 min. Posle ispiranja vodoničnim gasom i opremanja balonom sa vodonikom, reakciona smeša je mešana tokom 16 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit. Isparljivi materijali su uklonjeni u vakuumu.
Sirovi metil 3-(5-aminopirazin-2-il)propanoat je dobijen (81%) i korišćen za sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 182.1 (MH<+>), 0.31 min.
Faza 3. metil 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propanoat
[0323] Rastvoru metil 3-(5-aminopirazin-2-il)propanoata (25 mg, 0.138 mmol) u CH3CN (690 µL) dodat je NBS (24.56 mg, 0.138 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Posle kvenčovanja rastvorom Na2S2O3, reakciona smeša je mešana sa rastvorom NaHCO3tokom 20 min i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi metil 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propanoate je dobijen (28%). LCMS (m/z): 260.2/262.2 (MH<+>), 0.54 min.
Faza 4. metil 3-(5-amino-6-(4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-il)propanoat
[0324] Rastvoru metil 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propanoata (10 mg, 0.038 mmol), 4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenilboronske kiseline (13.65 mg, 0.050 mmol) i PdCl2(dppf) (2.81 mg, 3.84 µmol) u DME (256 µL), dodat je 2M Na2CO3(3.87 mL). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (120°C, 10 min). LCMS (m/z): 409.2 (MH<+>za estar), 0.75 min; 395.2 (MH<+>za veoma male količine kiseline, ali pmešane sa boronskim estrom), 0.66 min. U reakcionu smešu dodat je anhidrovani natrijum sulfat, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću prep HPLC, osušen zamrzavanjem dajući metil 3-(5-amino-6-(4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-il)propanoat u vidu soli TFA (12%). LCMS (m/z): 409.1 (MH<+>), 0.73 min; 1H NMR (400MHz, MeOH-d4) δ ppm 7.89 - 7.76 (m, 2 H), 7.69 - 7.61 (m, 1 H), 7.60 - 7.51 (m, 1 H), 7.42 - 7.28 (m, 5 H), 7.28 - 7.20 (m, 1 H), 4.64 - 4.55 (m, 2 H), 3.62 (s, 3 H), 3.06 - 2.93 (m, 2 H), 2.79 - 2.67 (m, 2 H).
Faza 5.3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propionska kiselina
[0325] Rastvoru metil 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propanoata (55 mg, 0.211 mmol) u MeOH (961 µL) i H2O (96 µL) dodat je kalijum karbonat (170 mg, 1.230 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom noći. U reakcionu smešu, dodat je anhidrovani Na2SO4. Posle razblaženja sa EtOAc (3 mL) i filtriranja, isparljivi materijali su uklonjeni u vakuumu. Sirova 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propionska kiselina je dobijena i korišćena za sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 246.0/248.0 (MH<+>, major), 0.26 min.
Faza 6.3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-metilpropanamida
[0326] Rastvoru 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propionske kiseline (32 mg, 0.130 mmol) u DMF (1300 µL) dodat je TBTU (62.6 mg, 0.195 mmol), DIEA (68.1 µL, 0.390 mmol), i metanamin hidrohlorid (9.66 mg, 0.143 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 3 h. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-metilpropanamid (74%) je dobijen i korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 259/261 (MH<+>), 0.35 min.
Faza 7.4-(3-amino-6-(3-(metilamino)-3-oksopropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid
[0327] Prateći fazu 4 na šemi 38, korišćenjem 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-metilpropanamida, dobijen je 4-(3-amino-6-(3-(metilamino)-3-oksopropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid (24%). LCMS (m/z): 408.1 (MH<+>), 0.51 min; 1H NMR (400MHz, MeOH-d4) δ ppm 7.89 - 7.78 (m, 2 H), 7.68 - 7.51 (m, 2 H), 7.41 - 7.29 (m, 4 H), 7.26 (d, J = 7.1 Hz, 1 H), 4.60 (s, 2 H), 2.98 (t, J = 7.3 Hz, 2 H), 2.66 (s, 3 H), 2.57 (t, J = 7.3 Hz, 2 H).
Sinteza 2-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)etanola
[0328]
Šema 39
Faza 1.5-alilpirazin-2-amin
[0329] Rastvoru 5-bromopirazin-2-amina (1.3 g, 7.47 mmol) dodat je 2-alil-,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (1.883 g, 11.21 mmol), PdCl2(dppf)CH2Cl2adukt (0.610 g, 0.747 mmol) i CsF (3.40 g, 22.41 mmol), reakciona smeša je pročišćena azotom. Reakciona smeša je zatim zagrevana na 100<o>C u uljanom kupatilu tokom 3h. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit, oprana sa EtOAc, filtrat je raspodeljen izmedju EtOAc i vode. Organska supstanca je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana u vakuumu, sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni da bi se dobio 5-alilpirazin-2-amin sa 37% prinosa. LCMS (m/z): 136.0 (MH<+>), 0.30 min.
Faza 2.2-(5-aminopirazin-2-il)etanol
[0330] 5-Alilpirazin-2-amin (180 mg, 1.332 mmol) u DCM (26.6 mL) je ohladjen do -78<o>C, zatim je krpz njega propušten ozon u mehurićima tokom 10 min dok rastvor nije dobio plavu boju. Zatim je azot propuštan kroz njega tokom 5 min. NaBH4(151 mg, 4.00 mmol) u etanolu (10 mL) je dodat polako, reakciona smeša je ostavljena da se vrati na sobnu temperaturu. Posle 1h, polako je dodat zas. NH4Cl, reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa CHCl3/IPA(7:3) (3 puta), organska supstanca je osušena i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 140.0 (MH<+>), 0.21 min.
Faza 3.2-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)etanol
[0331] Rastvoru 2-(5-aminopirazin-2-il)etanol (30 mg, 0.216 mmol) u CH3CN (719 µL) dodat je NBS (38.4 mg, 0.216 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 30 min. Reakciona smeša je kvenčovana zas. NaHCO3, zatim ekstrahovana sa EtOAc, Kombinovani organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Filtriran je i koncentrovan u vakuumu dajući sirovi 2-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)etanol koji je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 218.0/220.0 (MH<+>), 0.33 min.
Sinteza 3-bromo-5-(2-metoksietil)pirazin-2-amina
[0332]
Šema 40
Faza 1. N,N-di-terc-butil (5-alilpirazin-2-il)karbamat
[0333] Rastvoru 5-alilpirazin-2-amina (1.2 g, 8.88 mmol) u CH2Cl2(29.6 mL) dodat je Boc2O (4.07 g, 18.64 mmol) i DMAP (1.627 g, 13.32 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Posle kvenčovanja zasićenim NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa CH2Cl23 puta. Kombinovani organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Filtriran je i koncentrovan u vakuumu. Željeni proizvod je dobijen kao bela čvrsta supstanca (1.1 g, 37% prinosa) putem fleš hromatografije na koloni. Rf(TLC) = 0.3 (20% EtOAc u heksanima). LCMS (m/z): 336.2 (MH<+>), 1.04 min.
Faza 2. N,N-di-terc-butil (5-(2-hidroksietil)pirazin-2-il)karbamat
[0334] Rastvor N,N-di-terc-butil (5-alilpirazin-2-il)karbamata (1.1 g, 3.28 mmol) u DCM (32.8 mL) je ohladjen do -78<o>C, kroz njega je produvan ozon u mehurićima do pojave plave boje, zatim je pročišćavan azotom tokom 5 min. NaBH4(0.74 g, 19.6 mmol) u metanolu (20 mL) je dodat polako, reakciona smeša je ostavljena da se vrati na sobnu temperaturu. Posle 2 h, zasićeni rastvor NH4Cl je dodat, reakciona smeša je raspodeljena izmedju EtOAc i vode. Organska supstanca je oprana sa NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 340.3 (MH<+>), 0.77 min.
Faza 3. N,N-di-terc-butil (5-(2-metoksietil)pirazin-2-il)karbamat
[0335] Rastvoru N,N-di-terc-butil (5-(2-hidroksietil)pirazin-2-il)karbamata (240 mg, 0.707 mmol) u MeI (7.7 mL) dodat je srebro oksid (983 mg, 4.24 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i oprana sa EtOAc i metanolom, organska supstanca je oprana sa zas. NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Sirovi materijal je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 354.2 (MH<+>), 0.92 min.
Faza 4.5-(2-metoksietil)pirazin-2-amin
[0336] N,N-Di-terc-butil (5-(2-metoksietil)pirazin-2-il)karbamatu (200 mg, 0.566 mmol) u DCM (1.9 mL) dodat je TFA (872 µL, 11.32 mmol), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h, reakcionoj smeši je dodato 5 mL toluena i koncentrovana je do suva. Sirovi materijal je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 154.1 (MH<+>), 0.27 min.
Faza 5.3-bromo-5-(2-metoksietil)pirazin-2-amin
[0337] Rastvoru 5-(2-metoksietil)pirazin-2-amina (80 mg, 0.522 mmol) u DCM (1.7 mL) dodat je NBS (93 mg, 0.522 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Posle kvenčovanja sa NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa DCM 3 puta. Kombinovani organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Sirovi materijal je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 232.1/234.1 (MH<+>), 0.49 min.
Primer 21
Sinteza 4-(3-amino-6-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida
[0338]
Šema 41
Faza 1. 2-(5-(bis(terc-butoksikarbonil)amino)pirazin-2-il)etil metansulfonat
[0339] U N,N-di-terc-butil (5-(2-hidroksietil)pirazin-2-il)karbamat (450 mg, 1.326 mmol) u DCM (10 mL) dodat je piridin (0.429 mL, 5.30 mmol) i ohladjen do 0°C korišćenjem ledenog kupatila. Zatim je dodat mezil-Cl (0.382 mL, 4.91 mmol) i reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana tokom 16 h. U reakcionu smešu je dodato 150 mL etil acetata i zasićeni natrijum bikarbonat. Organski sloj je ekstrahovan i ponovo opran zasićenim natrijum bikarbonatom, vodom (3x), filtriran, osušen sa natrijum sulfatom i koncentrovan do nepromenljive mase da bi se dobilo 540 mg željenog proizvoda, koji je korišćen kao takav, (98% prinosa). LCMS (m/z): 418.3 (MH<+>), 0.89 min;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.50 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 4.67 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.28 (t, J=6.3 Hz, 2H), 2.94 (s, 3H), 1.45 (s, 18H).
Faza 2. terc-butil 5-(2-(metiltio)etil)pirazin-2-ilkarbamat
[0340] U 2-(5-(bis(terc-butoksikarbonil)amino)pirazin-2-il)etil metansulfonat (540 mg, 1.293 mmol) u DMF (7 mL) dodat je natrijum tiometoksid (408 mg, 5.82 mmol) i smeša je mešana na 85°C tokom 3 h, nakon čega je uradjena LCMS. Reakcija je ostavljena da se ohladi, dodato je 200 mL etil acetata i zasićeni natrijum bikarbonat. Organski sloj je ekstrahovan i opran vodom (3x), zasićenim slanim rastvorom, osušen natrijum sulfatom, filtriran kroz čep od 2 cm silika gela i ispran etil acetatom. Rastvarač je odstranjen koncentrovanjem do nepromenljive mase da bi se dobilo 294 mg željenog proizvoda u vidu slobodne baze koji je korišćen kao takav, (84% prinosa). LCMS (m/z): 270.4 (MH<+>), 0.84 min.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9.19 (s, 1H), 8.08 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.20 (br. s., 1H), 2.99-3.08 (m, 2H), 2.79-2.94 (m, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.54 (s, 9H).
Faza 3. terc-butil 5-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-ilkarbamat
[0341] U terc-butil 5-(2-(metiltio)etil)pirazin-2-ilkarbamat (292 mg, 1.084 mmol) u DCM (10 mL) dodato je 40% (3.5 mL) sveže napravljenog rastvora mCPBA (972 mg, 4.34 mmol) u DCM (8.7 mL) uz mešanje na sobnoj temperaturi, nakon čega je uradjena LCMS. Posle 30 min još 15% (1.3 mL gore navedenog rastvora mCPBA) je dodato i smeša je mešana tokom 30 min, nakon čega je uradjena LCMS. Zatim je dodato još 5% (0.044 mL gore navedenog rastvora mCPBA) i smeša je mešana tokom još 30 min. Reakcija je praćena pomoću LCMS. U reakciju je dodato 200 mL etil acetata i višak zasićenog natrijum bikarbonata. Organski sloj je ekstrahovan i ponovo opran zasićenim natrijum bikarbonatom, vodom (3x), filtriran i koncentrovan do nepromenljive mase da bi se dobilo 320 mg željenog proizvoda koji je korišćen kao takav, (98% prinosa). LCMS (m/z): 302.1 (MH<+>), 0.62 min;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9.20 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.23 (br. s., 1H), 3.47-3.57 (m, 2H), 3.26-3.36 (m, 2H), 2.86-2.93 (m, 3H), 1.55 (s, 9H).
Faza 4. 5-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-amin
[0342] U terc-butil 5-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-ilkarbamat (320 mg, 1.062 mmol) u DCM (6 mL) dodat je TFA (2.5 mL, 32.4 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. Rastvarač je uklonjen koncentrovanjem do nepromenljive mase. Proizvod je preveden u slobodnu bazu korišćenjem 2.5 grama pri 0.8 mmol/gramu karbonata podržanog čvrstom supstancom sa 6 mL acetonitrila i mešana tokom 5 min. Podloga od čvrste supstance je filtrana i isprana acetonitrilom. Proizvod je koncentrovan do nepromenljive mase da bi se dobio željeni proizvod koji je korišćen kao takav, pretpostavljen je kvantitativni prinos (1.062 mmol). LCMS (m/z): 202.1 (MH<+>), 0.20 min.
Faza 5. 3-bromo-5-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-amin
[0343] U 5-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-aminu (213 mg, 1.06 mmol) u acetonitrilu (6 mL) dodat je NBS (179 mg, 1.007 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Rastvarač je odkoncentrovan do ostatka. U sirovi ostatak dodat je etil acetat, opran je zasićenim natrijum karbonatom, vodom (2x), osušen natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan do nepromenljive mase da bi se dobilo 210 mg željenog proizvoda u vidu slobodne baze koji je korišćen kao takav, (71% prinosa). LCMS (m/z): 280.0/282.0 (MH<+>), 0.38 min.
Faza 6. 4-(3-amino-6-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid
[0344] U 3-bromo-5-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-amin (126 mg, 0.405 mmol) dodat je N-benzil-2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamid (144 mg, 0.405 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (33.1 mg, 0.040 mmol), DME (1.5 mL) i zatim 2 M vodeni rastvor natrijum karbonata (0.607 mL, 1.214 mmol). Reakcija je podvrgnuta mikrotalasima na 125°C tokom 12 minuta nakon čega je uradjena LCMS. U reakciju je dodato 5 mL DME i 5mL MeOH, smeša je filtrirana i koncentrovana do ostatka. Sirovi ostatak je rastvoren u 2.5 mL DMSO, filtriran, prečišćen pomoću prep HPLC i osušen zamrzavanjem do TFA soli. U TFA so je dodato 200 mL etil acetata, opran je zasićenim natrijum karbonatom (3x), vodom (3x), osušen natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan do nepromenljive mase da bi se dobilo 59 mg željenog proizvoda 4-(3-amino-6-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida u vidu slobodne baze sa 34% prinosa. LCMS (m/z): 429.2 (MH<+>), 0.65 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.95 (s, 1H), 7.83 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.67 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.59 (dd, J=11.7, 1.2 Hz, 1H), 7.29-7.42 (m, 4H), 7.20-7.28 (m, 1H), 4.59 (s, 2H), 3.48-3.57 (m, 2H), 3.18 (dd, J=9.0, 6.7 Hz, 2H), 2.96 (s, 3H).
Primeri 22, 23, i 24
Sinteza (+/-)-4-(3-amino-6-(2-hidroksipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida, (R)-4-(3-amino-6-(2-hidroksipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida i (S)-4-(3-amino-6-(2-hidroksipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida
[0345]
Šema 42
Faza 1.4,4,5,5-tetrametil-2-(2-metilalil)-1,3,2-dioksaborolan
[0346] U suspenziju strugotine magnezijuma (1.139 g, 46.9 mmol) u THF (65.1 mL) dodat je 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (5.67 mL, 39.1 mmol) na sobnoj temperaturi pod azotom. Polako je dodat 3-bromo-2-metilprop-1-en (3.97 mL, 39.1 mmol), posle 30 min, dodato je još 3-bromo-2-metilprop-1-ena (3.97 mL, 39.1 mmol), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Zatim su dodati heptani, a nakon toga 1N HCl. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa heptanima. Organska supstanca je oprana vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena i koncentrovana da bi se dobio 4,4,5,5-tetrametil-2-(2-metilalil)-1,3,2-dioksaborolan. Proizvod je korišćen u sledećoj fazi bez prečišćavanja,<1>H NMR (400MHz,CDCl3) δ ppm 4.67 (d, J = 6.7 Hz, 2 H), 1.77 (s, 3 H), 1.34 - 1.20 (m, 12 H).
Faza 2.5-(2-metilalil)pirazin-2-amin
[0347] Rastvoru 5-bromopirazin-2-amina (1 g, 5.75 mmol) dodat je 4,4,5,5-tetrametil-2-(2-metilalil)-1,3,2-dioksaborolan (1.360 g, 7.47 mmol), PdCl2(dppf)-DCM adukt (0.469 g, 0.575 mmol), CsF (2.62 g, 17.24 mmol), smeša je pročišćena azotom. Reakciona smeša je mešana na 100<o>C u uljanom kupatilu tokom 3h. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju EtOAc i vode. Organska supstanca je oprana zasićenim slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Ostatak je rastvoren u 1N HCl (10 mL) Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan sa EtOAc, vodeni sloj je zatim neutralizovan do pH = 8, zatim ekstrahovan sa EtOAc 3 puta. Organska supstanca je zatim osušena i koncentrovana Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije. LCMS (m/z): 150.5 (MH<+>), 0.28 min.
Faza 3. N,N-di-terc-butil (5-(2-metilalil)pirazin-2-il)karbamat
[0348] Rastvoru 5-(2-metilalil)pirazin-2-amina (235 mg, 1.575 mmol) u DCM (5.2 mL), dodat je Boc2O (731 µL, 3.15 mmol), a nakon toga DMAP (385 mg, 3.15 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. U reakciju je dodato 30 mL DCM i smeša je oprana zasićen natrijum bikarbonatom (2x) vodom (1x), osušena natrijum sulfatom, filtrirana i koncentrovana do ostatka. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa 0-30% etil acetata i heptana da bi se dobilo 250 mg proizvoda. LCMS (m/z): 350.1 (MH<+>), 1.12 min;<1>H NMR (400MHz,CDCl3) δ ppm 8.45 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 8.41 - 8.33 (m, 1 H), 4.92 (s, 1 H), 4.75 (s, 1 H), 3.57 (s, 2 H), 1.73 (s, 3 H), 1.43 (s, 18 H).
Faza 4. (+/-)-N,N-di-terc-butil (5-(2-hidroksipropil)pirazin-2-il)karbamat
[0349] N,N-Di-terc-butil (5-(2-metilalil)pirazin-2-il)karbamat (120 mg, 0.343 mmol) u metanolu (6.8 mL) je ohladjen do - 78<o>C, ozon je propuštan u mehurićima koroz smešu tokom 6 min. Zatim je smeša pročišćena azotom tokom 5 min. Polako je dodat NaBH4(39.0 mg, 1.030 mmol) u metanolu (5 mL). Reakciona smeša je je ostavljena da se prilagodi sobnoj temperaturi. Posle 1h, zas. NH4Cl je polako dodat. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju EtOAc i vode. Organska supstanca je oprana zasićen NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 354.1 (MH<+>), 0.84 min.
Faza 5. (+/-)-1-(5-aminopirazin-2-il)propan-2-ol
[0350] (+/-)-N,N-Di-terc-butil (5-(2-hidroksipropil)pirazin-2-il)karbamatu (110 mg, 0.311 mmol) u DCM (3.11 mL) dodat je TFA (1 mL, 12.98 mmol), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, reakciona smeša je uparena zajedno sa toluenom. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 154.1 (MH<+>), 0.24 min.
Faza 6. (+/-)-1-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propan-2-ol
[0351] Rastvoru (+/-)-1-(5-aminopirazin-2-il)propan-2-ola (47 mg, 0.307 mmol) u DCM (3.0 mL) dodat je NBS (49.1 mg, 0.276 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 10 min. Posle kvenčovanja zasićenim NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc 3 puta. Kombinovani organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Filtriran je i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 234.0 (MH<+>), 0.40 min.
Faza 7. (+/-)-4-(3-amino-6-(2-hidroksipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid
[0352] Rastvoru (+/-)-1-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propan-2-ola (30 mg, 0.129 mmol) u DME (970 µL) dodata je 4-(benzilkarbamoil)-3-fluorofenilboronska kiselina (31.8 mg, 0.116 mmol), PdCl2(dppf)CH2Cl2adukt (10.56 mg, 0.013 mmol), 2M Na2CO3(323 µL). Reakciona smeša je mešana na 120°C tokom 10 min u mikrotalasnom reaktoru. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju EtOAc i vode. Organska supstanca je osušena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću prep HPLC. Čista frakcija je kombinovana i uklonjena je so da bi se dobio (+/-)-4-(3-amino-6-(2-hidroksipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid. LCMS (m/z): 381.2 (MH<+>), 0.67 min;<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 7.95 - 7.81 (m, 2 H), 7.66 (dd, J = 1.6, 8.2 Hz, 1 H), 7.58 (dd, J = 1.6, 11.7 Hz, 1 H), 7.43 - 7.31 (m, 4 H), 7.31 - 7.19 (m, 1 H), 4.62 (s, 2 H), 4.16 - 4.04 (m, 1 H), 2.79 (d, J = 6.3 Hz, 2 H), 1.23 (d, J = 6.3 Hz, 3 H).
Faza 7. (R)-4-(3-amino-6-(2-hidroksipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid i (S)-4-(3-amino-6-(2-hidroksipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid
[0353] Racemski (+/-)-4-(3-amino-6-(2-hidroksipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid je razdvojen hiralnom SFC (ChiralPak 5mic AD kolona, 4.6x100 (mm), metanol+0.1%DEA=40%, 5 mL/min). Polarni enantiomer, (R)-4-(3-amino-6-(2-hidroksipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid je dobijen na Rt = 1.39 min. LCMS (m/z): 381.2 (MH<+>), 0.67 min. Manje polarni enantiomer, (S)-4-(3-amino-6-(2-hidroksipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamid je dobijen na Rt = 1.97 min. LCMS (m/z): 381.2 (MH<+>), 0.67 min. Stereohemija je dodeljena proizvoljno.
Sinteza 3-bromo-5-(2-etoksietil)pirazin-2-amina
[0354]
Šema 43
Faza 1. (E)-5-(2-etoksivinil)pirazin-2-amin
[0355] Rastvoru 5-bromopirazin-2-amina (200 mg, 1.149 mmol) u DME (2874 µL) dodat je (E)-2-(2-etoksivinil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolane (341 mg, 1.724 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (94 mg, 0.115 mmol) i 2M Na2CO3(958 µL). Reakciona smeša je mešana na 130<o>C u mikrotalasnom reaktoru tokom 20 min. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i oprana sa EtOAc, filtrat je raspodeljen izmedju EtOAc i vode. Vodeni sloj je ekstrahovan pomoću EtOAc tri puta, kombinovana organska supstanca je osušena i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobio (E)-5-(2-etoksivinil)pirazin-2-amin. LCMS (m/z): 166.1(MH<+>), 0.41 min.
Faza 2.5-(2-etoksietil)pirazin-2-amin
[0356] Rastvoru (E)-5-(2-etoksivinil)pirazin-2-amina (75 mg, 0.454 mmol) u etanolu (4.54 mL) dodat je Pd/C (48.3 mg, 0.454 mmol). Reakciona smeša je pročišćena azotom tokom 10 min, i zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h pod balonom vodonika. Reakciona smeša je zatim filtrirana kroz celit i oprana metanolom i EtOAc, zatim koncentrovana. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 168.1 (MH<+>), 0.33 min.
Faza 3.3-bromo-5-(2-etoksietil)pirazin-2-amin
[0357] Rastvoru 5-(2-etoksietil)pirazin-2-amina (45 mg, 0.269 mmol) u DCM (897 µL) dodat je NBS (43.1 mg, 0.242 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 10 min. Posle kvenčovanja zas. NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc 3 puta. Kombinovani organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Filtriran je i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 246.0 (MH<+>), 0.59 min.
Sinteza (+/-)-2-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propan-1-ola
[0358]
Šema 44
Faza 1.5-(3-(benziloksi)prop-1-en-2-il)pirazin-2-amin
[0359] Rastvoru 5-bromopirazin-2-amina (200mg, 1.149 mmol) dodat je kalijum (3-(benziloksi)prop-1-en-2-il)trifluoroborat (350 mg, 1.379 mmol), PdCl2(dppf).CH2Cl2adukt (94 mg, 0.115 mmol), Cs2CO3(1124 mg, 3.45 mmol). Smeša je pročišćena azotom. Reakciona smeša je mešana na 100<o>C u uljanom kupatilu tokom 6 h. Reakciona smeša je zatim raspodeljena izmedju EtOAc i vode, organski slojevi su kombinovani i oprani vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobio 5-(3-(benziloksi)prop-1-en-2-il)pirazin-2-amin sa 61 % prinosa. LCMS (m/z): 245.2 (MH<+>), 0.67 min;<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 8.26 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 7.96 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 7.34 (d, J = 4.3 Hz, 5 H), 5.91 (s, 1 H), 5.44 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 4.59 (s, 2 H), 4.49 (s, 2 H).
Faza 2. (+/-)-5-(1-(benziloksi)propan-2-il)pirazin-2-amin
[0360] Rastvoru 5-(3-(benziloksi)prop-1-en-2-il)pirazin-2-amina (91 mg, 0.377 mmol) u metanolu (3771 µL) dodat je Pd/C (40.1 mg, 0.377 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod balonom vodonika tokom noći. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit, oprana metanolom i EtOAc. Sirovi materijal je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 244.2 (MH<+>), 0.62 min.
Faza 3. (+/-)-2-(5-aminopirazin-2-il)propan-1-ol
[0361] Rastvor 5-(1-(benziloksi)propan-2-il)pirazin-2-amina (80 mg, 0.329 mmol) u 1N HCl (1096 µL) je zagrevan u uljanom kupatilu tokom 7 h, ohladjen, reakciona smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc, vodeni sloj je koncentrovan do suva da bi se dobio sirovi proizvod kao HCl so i korišćen u sledećoj fazi reakcije. LCMS (m/z): 154.1 (MH<+>), 0.26 min.
Faza 4. (+/-)-2-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propan-1-ol
[0362] Rastvoru 2-(5-aminopirazin-2-il)propan-1-ola (30 mg, 0.196 mmol) u DCM (653 µL) dodat je NBS (31.4 mg, 0.176 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 10 min. Posle kvenčovanja zasićenim NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc 3 puta. Kombinovani organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Filtriran je i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 234.0 (MH<+>), 0.40 min.
Sinteza 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propannitrila
[0363]
Šema 45
Faza 1. N,N-di-terc-butil (5-metilpirazin-2-il)karbamat
[0364] Rastvoru 5-metilpirazin-2-amina (1 g, 9.16 mmol) u CH2Cl2( 30 mL), dodat je Boc2O (4.47 mL, 19.24 mmol), a nakon toga DMAP (1.679 g, 13.75 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Posle kvenčovanja zasićenim NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa CH2Cl23 puta. Kombinovani organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Filtriran je i koncentrovan u vakuumu. Željeni proizvod je dobijen kao bela čvrsta supstanca pomoću fleš hromatografije na koloni (20% EtOAc u heptanu). LCMS (m/z): 310.0 (MH<+>), 0.93 min.
Faza 2. N,N-di-terc-butil (5-(bromometil)pirazin-2-il)karbamat
[0365] Rastvoru N,N-di-terc-butil (5-metilpirazin-2-il)karbamata (1.37 g, 4.43 mmol) u CCl4(14.76 mL) dodat je NBS (0.828 g, 4.65 mmol), benzoil peroksid (0.107 g, 0.443 mmol), AIBN (0.073 g, 0.443 mmol). Reakciona smeša je mešana na refluksu tokom 8 h. Obradjena je, čvrsta supstanca je filtrirana, organska supstanca je koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobio proizvod iz naslova sa 36% prinosa. LCMS (m/z): 231.1 (MH<+>-Boc), 1.04 min.
Faza 3. terc-butil 5-(2-cijanoetil)pirazin-2-ilkarbamat
[0366] n-Butil litijum (2.5 M u heksanima, 103 µL, 0.258 mmol) je dodat u diizopropilamin (39.3 µL, 0.276 mmol) u suvom THF na 0°C pod argonom, smeša je zatim mešana na 0°C tokom 1 h, zatim ohladjena do -78°C, acetonitril (14.12 µL, 0.270 mmol) je dodat polako, reakciona smeša je ostavljena da se prilagodi sobnoj temperaturi i mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, ohladjena ponovo do -78°C, i N,N-di-terc-butil (5-(bromometil)pirazin-2-il)karbamat (100 mg, 0.258 mmol) u THF (0.5 mL) je dodat polako, reakciona smeša je mešana na -78°C tokom 10 min, zatim ostavljena da se prilagodi sobnoj temperaturi, posle 2 h, reakcija je kvenčovana zas. rastvorom NH4Cl, zatim ekstrahovana sa EtOAc. Organska supstanca je oprana zasićenim slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom (40% EtOAc/heptan) da bi se dobio terc-butil 5-(2-cijanoetil)pirazin-2-ilkarbamat sa 40% prinosa. LCMS (m/z): 193.1 (MH<+>-tBu), 0.70 min;<1>H NMR (400MHz,CDCl3) δ ppm 9.22 (s, 1 H), 8.12 (s, 1 H), 3.09 (t, J = 7.2 Hz, 2 H), 2.83 (t, J = 7.2 Hz, 2 H), 1.52 - 1.36 (m, 8 H).
Faza 4.3-(5-aminopirazin-2-il)propannitril
[0367] Rastvoru terc-butil 5-(2-cijanoetil)pirazin-2-ilkarbamata (25 mg, 0.101 mmol) u DCM (0.336 mL) dodat je TFA (0.1 mL, 1.298 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Posle kvenčovanja zas. NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Filtriran je i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 149.1 (MH<+>), 0.24 min.
Faza 5.3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propannitril
[0368] Rastvoru 3-(5-aminopirazin-2-il)propannitrila (45 mg, 0.304 mmol) u DCM (1519 µL) dodat je NBS (48.7 mg, 0.273 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 10 min. Posle kvenčovanja sa NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc 3 puta. Kombinovani organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Filtriran je i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 227/229.1 (MH<+>), 0.45 min.
Sinteza 5-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidin-2-ona
[0369]
Šema 46
Faza 1. terc-butil 5-metilpirazin-2-ilkarbamat
[0370] U rastvor 5-metilpirazin-2-karboksilne kiseline (2.5 g, 18.1 mmol), terc-butanol (6.92 mL, 72.4 mmol), Et3N (3.78 mL, 27.1 mmol) u 1,4-dioksanu (12.5 mL) na 95°C je u kapima dodat difenilfosforil azid (DPPA, 3.23 mL, 18.1 mmol), i reakcija je zagrevana na 95°C tokom 1.5 h, a nakon toga druga porcija DPPA (1 mL, 5.6 mmol) i zagrejana tokom dodatnih 1.5 h. Reakciona smeša je ohladjena, koncentrovana i ostatak je razblažen sa EtOAc (50 mL), oprana sa vodom (30 mL), 3 M NaOH( 30 mL), zas. NaHCO3(30 mL) i zasićenim slanim rastvorom (30 mL), osušena iznad Na2SO4, i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika u eluiranjem sa gradijentom EtOAc/CH2Cl2(0-20%) da bi se dobilo terc-butil 5-metilpirazin-2-ilkarbamat kao bela čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 210.1 (MH<+>), 0.69 min; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9.17 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.75 (br. s., 1H), 2.51 (s, 3H), 1.56 (s, 9H).
Faza 2. terc-butil 5-(bromometil)pirazin-2-ilkarbamat
[0371] Rastvor terc-butil 5-metilpirazin-2-ilkarbamata (2.79 g, 13.33 mmol), NBS (2.61 g, 14.67 mmol) i AIBN (0.219 g, 1.33 mmol) u CCl4(45 mL) je pročišćavan argonom, zatim je rastvor je zagrevan u uljanom kupatilu na 85°C tokom 4 h. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature, koncentrovana i ostatak je ponovo rastvoren u EtOAc (~50 mL), oprana razblaženim vodenim rastvorom NaOH dvaput (10 mL 1 N NaOH razblažen u 20 mL H2O), zasićenim slanim rastvorom (30 mL), osušena (Na2SO4) i koncentrovana. Ostatak je dodatno prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu eluiranjem gradijentom EtOAc/CH2Cl2(0-30%) i terc-butil 5-(bromometil)pirazin-2-ilkarbamat je dobijen u vidu beličaste supstance. LCMS (m/z): 288.1/290.1 (MH<+>), 0.82 min; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9.26 (s, 1H), 8.32 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.62 (br. s., 1H), 4.56 (s, 2H), 1.56 (s, 9H).
Faza 3. terc-butil 5-(cijanometil)pirazin-2-ilkarbamat
[0372] Smeša terc-butil 5-(bromometil)pirazin-2-ilkarbamata (0.75 g, 2.60 mmol) i NaCN (0.255 g, 5.21 mmol) u DMF (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 50 min. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature, razblažena sa 0.5 N NaOH (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (2 x 20 mL), i EtOAc slojevi su kombinovani, oprani sa 0.5 N NaOH (10 mL), osušeni (Na2SO4), koncentrovani i sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu eluiranjem gradijentom EtOAc/CH2Cl2(0-20%) da bi se dobio terc-butil 5-(cijanometil)pirazin-2-ilkarbamat (0.40 g, 65.6% prinosa). LCMS (MH<+>-<t>Bu): 179.0 (MH<+>), 0.68 min; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9.28 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.59 (br. s., 1H), 3.91 (s, 2H), 1.57 (s, 9H).
Faza 4. etil 4-(5-(terc-butoksikarbonilamino)pirazin-2-il)-4-cijanobutanoat
[0373] U terc-butil 5-(cijanometil)pirazin-2-ilkarbamat (0.32 g, 1.37 mmol) u smeši rastvarača etanol/2-metiltetrahidrofuran (5mL/5mL) dodat je sveže pripremljeni natrijum etoksid (1 M, 1.366 mL), i smeša je mešana na 0°C tokom 10 min, nakon čega je dodat etil akrilat (145 ul, 1.366 mmol) i smeša je mešana na 0°C tokom 2 h. Reakcija je kvenčovana na ovoj tački dodavanjem zas. NaHCO3(5 mL), i reakciona smeša je mešana tokom dodatnih 10 min, razblažena sa EtOAc (20 mL), filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je rastvoren u EtOAc (20 mL), opran natrijum fosfatnim puferom pH 7.0, i EtOAc sloj je koncentrovan, i rezidualno ulje svetlo smedje boje je prečišćeno na fleš koloni eluiranjem gradijentom EtOAc/heptan (0-50%) da bi se dobio etil 4-(5-(terc-butoksikarbonilamino)pirazin-2-il)-4-cijanobutanoat (100 mg, 22% prinosa). LCMS (m/z): 279.2 (MH<+>-<t>Bu), 0.86 min.
Faza 5. terc-butil 5-(6-oksopiperidin-3-il)pirazin-2-ilkarbamat
[0374] Pod argonom, u etil 4-(5-(terc-butoksikarbonilamino)pirazin-2-il)-4-cijanobutanoat u etanolskom rastvoru (94 mg, 0.281 mmol/8 mL) dodata je etanolska suspenzija katalizatora Raney nikl (nikl u ~2 mL etanola, količina Raney nikla nije precizno izmerena), i reakciona smeša je mešana pod balonom sa H2,posle 3 izmene atmosfere zagrevana je spoljnim uljanim kupatilom na 56°C tokom noći sa balonom sa H2. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature, i filtrirana kroz čep od celita, filtrat je koncentrovan da bi se dobilo terc-butil 5-(6-oksopiperidin-3-il)pirazin-2-ilkarbamat kao čvrsta supstanca žute boje.
Faza 6.5-(5-aminopirazin-2-il)piperidin-2-on
[0375] Smeša terc-butil 5-(6-oksopiperidin-3-il)pirazin-2-ilkarbamata (60 mg, 0.205 mmol) i konc. HCl (1 mL) u metanolu (2 mL) je zagrevana uljanim kupatilom na 70°C tokom 1 časa i reakciona smeša je ohladjena, koncentrovana do suva i ostatak je ponovo rastvoren u metanolu (3 mL), i dodat mu je NaHCO3(200 mg), i smeša je zagrevana uljanim kupatilom na 70°C tokom 2 h. Suspenzija čvrste supstance reakcione smeše je uklonjena filtracijom, i filtrat je koncentrovan i svetložuta čvrsta supstanca je dobijena kao sirovi 5-(5-aminopirazin-2-il)piperidin-2-on koji je korišćen neposredno u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 193.1 (MH<+>), 0.22 min.
Faza 7.5-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidin-2-on
[0376] U acetonitrilni (10 mL) rastvor 5-(5-aminopirazin-2-il)piperidin-2-ona (25 mg, 0.13 mmol) na 0°C dodat je NBS (23.2 mg, 0.13 mmol) i reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 30 min, zatim na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Reakciona smeša je koncentrovana, i ostatak je učinjen baznim dodatkom 1 N NaOH (140 ul), razblažen metanolom (2 mL), koncentrovan. Ostatak je triturisan sa EtOAc (3 x 1 mL), i EtOAc supernatanti su sakupljeni, kombinovani i koncentrovani i svetla čvrsta supstanca je dobijena kao sirovi 5-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidin-2-on i korišćena je u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 241/243 (MH<+>), 0.41 min.
Primer 25
Sinteza 4-(2-amino-5-(6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0377]
Šema 47
Faza 1.5-bromo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridin-2(1H)-on
[0378] Rastvoru 5-bromopiridin-2(1H)-ona (2.01 g, 11.55 mmol) u DMF (30 mL) na 0°C dodat je natrijum hidrid (0.924 g, 23.10 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. U ovo je polako dodat (2-(hlorometoksi)etil)trimetilsilan (2.89 g, 17.33 mmol). Reakciona smeša je mešana preko noći. LCMS - 0.26 min, MH<+>304.1 (nepolarni postupak). Reakcija je kvenčovana zas. vod. rastv. NH4Cl, i zatim razblažena etil acetatom. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovane organske supstance su oprane vodom i zasićenim slanim rastvorom, zatim osušene iznad natrijum sulfata, filtrane i koncentrovane u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni korišćenjem 0-50% EtOAc/heptan.5-bromo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridin-2(1H)-on je dobijen kao žuta viskozna tečnost. LCMS (m/z): 304/306 (MH<+>), 0.95 min.
Faza 2.6'-fluoro-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-[3,3'-bipiridin]-6(1H)-on
[0379] Rastvoru 5-bromo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridin-2(1H)-ona (568 mg, 1.868 mmol) u DME ( 6227 µL, odnos: 2.000) dodat je PdCl2(dppf) (68.3 mg, 0.093 mmol), 2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin (500 mg, 2.242 mmol), 2M Na2CO3( 3113 µl, odnos: 1.000) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu tokom 10 min na 120°C. U reakcionu smešu je dodat natrijum sulfat i EtOAc. Posle filtriranja, isparljivi materijali su uklonjeni u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (gradijent EtOAc u heptanu) dajući 6'-fluoro-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-[3,3'-bipiridin]-6(1H)-on (52%). LCMS (m/z): 321.3 (MH<+>), 0.93 min.
Faza 3.5-(6-fluoropiridin-3-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piperidin-2-on
[0380] U čelični autoklav dodat je rastvor 6'-fluoro-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-[3,3'-bipiridin]-6(1H)-ona (311 mg, 0.971 mmol) u MeOH (preostalo 60% prostora pri vrhu) nakon čega je dodat Pd-C (207 mg, 0.194 mmol). Posle degaziranja strujom azota, u čeličnom autoklavu je povećan pritisak vodoničnim gasom na 250 psi. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 h. LCMS - 0.9 min MH<+>325.1 (jedna glavna). Reakciona smeša je filtrana kroz celit (oprano sa EtOAc). Isparljivi materijali su koncentrovani u vakuumu da bi se dobio sirovi 5-(6-fluoropiridin-3-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piperidin-2-on (290 mg, 0.894 mmol, 92%), koji je korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja.
Faza 4.5-(6-aminopiridin-3-il)piperidin-2-on
[0381] U -(6-fluoropiridin-3-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piperidin-2-on (290 mg, 0.894 mmol) u čeličnom autoklavu, dodat je rastvor amonijum hidroksida (34.8 µl, 0.894 mmol) (40% glavne preostale zapremine). Reaktor u vidu čeličnog autoklava je zagrevan na 150°C tokom 44 h (250 psi na ventilu za pritisak). LCMS - 0.23 min, MH<+>192.1 (bez SEM); 0.66 min, MH<+>322.1 (sa SEM). Posle razblaživanja sa MeOH i toluenom, isparljivi materijali su u potpunosti uklonjeni u vakuumu.5-(6-Aminopiridin-3-il)piperidin-2-on je korišćen u sledećoj fazi.
Faza 5.5-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)piperidin-2-on
[0382] Rastvoru 5-(6-aminopiridin-3-il)piperidin-2-ona (132 mg, 0.690 mmol) u acetonitrilu ( 8.00 mL) dodat je NBS (98 mg, 0.552 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana tokom 30 min nakon zagrevanja do sobne temperature. LCMS 0.28 min, MH<+>270/272; 0.7 min, MH<+>400.1/402.1 (zaštićen sa SEM). Posle kvenčovanja rastvorom Na2S2O3, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc, koji je opran rastvorom NaHCO3i zasićenim slanim rastvorom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtran, koncentrovan u vakuumu. Sirovi 5-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)piperidin-2-on korišćen je u sledećoj fazi.
Faza 6. 4-(2-amino-5-(6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0383] U fiolu za mikrotalasno zračenje dodat je 5-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)piperidin-2-on (45 mg, 0.167 mmol), (S)-(4-((1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)boronska kiselina (56.2 mg, 0.167 mmol), PdCl2(dppf) (12.19 mg, 0.017 mmol), DME (1111 µl, odnos: 2.000), i Na2CO3(2M rastvor) ( 555 µL, odnos: 1.000). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom reaktoru tokom 10 min na 120°C. LCMS - 0.58 min, MH<+>483.2; 0.85 min, MH<+>613.3. Posle dodavanja anhidrovanog natrijum sulfata za uklanjanje vode, reakciona smeša je filtrana i osušena u vakuumu. Mala porcija je prečišćena sa prep HPLC dajući 4-(2-amino-5-(6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid kao dijastereomernu smešu (12%). LCMS (m/z): 483.3 (MH<+>), 0.56 min; 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 7.89 (m, 1H), 7.80 (m, 2H), 7.42 - 7.30 (m, 3H), 7.30 - 7.24 (m, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 1H), 5.18 - 5.03 (m, 1H), 3.87 - 3.64 (m, 2H), 3.47 - 3.35 (m, 2H), 3.11 - 2.97 (m, 1H), 2.46 - 2.30 (m, 2H), 2.08 - 1.91 (m, 2H).
Sinteza (+/-)-4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona
[0384]
Šema 48
Faza 1.6-fluoro-1'-metil-[3,4'-bipiridin]-2'(1'H)-on
[0385] Rastvoru 2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina (500 mg, 2.242 mmol) dodat je PdCl2(dppf) (68.3 mg, 0.093 mmol), 4-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-on (351 mg, 1.868 mmol), 2M Na2CO3(4.1 mL) i DME (8.3 mL) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu tokom 10 min na 120°C. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su oprani vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4, filtrani, i koncentrovani u vakuumu. Sirovi 6-fluoro-1'-metil-[3,4'-bipiridin]-2'(1'H)-on je prečišćen fleš hromatografijom (gradijent EtOAc u DCM). LCMS (m/z): 205.2 (MH<+>), 0.47 min.
Faza 2. (+/-)-4-(6-fluoropiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-on
[0386] U čelični autoklav je dodat rastvor 6-fluoro-1'-metil-[3,4'-bipiridin]-2'(1'H)-ona (340 mg, 1.665 mmol) u MeOH (preostalo 60% prostora pri vrhu) nakon čega je dodat Pd-C (Degussa) (354 mg, 0.333 mmol). Posle degaziranja strujom azota, čelični autoklav je napunjen vodonikom (250 psi). Reakciona smeša je mešana preko noći. Reakciona smeša je filtrana kroz celit (opran sa EtOAc/MeOH). Isparljivi materijali su koncentrovani u vakuumu da bi se dobio sirovi (+/-)-4-(6-fluoropiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-on (341 mg, 1.638 mmol, 98 % prinosa) koji je korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 209.1 (MH<+>), 0.47 min.
Faza 3. (+/-)-4-(6-aminopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-on
[0387] U čelični autoklav je dodat (+/-)-4-(6-fluoropiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-on (341 mg, 1.638 mmol) nakon čega je dodat rastvor amonijum hidroksxida (0.00 mmol) - preostalo 40% prostora pri vrhu. Reaktro je zagrevan na 150°C tokom 20 časova (unutrašnji pritisak je podignut do100 psi po zagrevanju). Posle hladjenja, reakcija je završena. Sav rastvarač (preneto u balon) je uklonjen u vakuumu. Toluen je dodat i uparen zajedno sa smešim da bi se uklonila voda. Sirovi proizvod, (+/-)-4-(6-aminopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-on, korišćen je u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja (87%). LCMS (m/z): 206.1 (MH<+>), 0.24 min.
Faza 4. (+/-)-4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-on
[0388] Rastvoru (+/-)-4-(6-aminopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona (291 mg, 1.418 mmol) u acetonitrilu (14.200 mL) dodat je NBS (202 mg, 1.134 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana tokom 30 min po zagrevanju do sobne temperature. Posle kvenčovanja rastvorom Na2S2O3, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc, koji je opran rastvorom NaHCO3i zasićenim slanim rastvorom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtran, koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod (+/-)-4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-on (98%) je korišćen u sledećoj fazi. LCMS (m/z): 284/286 (MH<+>), 0.34 min.
Primeri 26, 27 i 28
4-(2-amino-5-(1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid i 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0389]
[0390] Prateći fazu 6 na šemi 47, korišćenjem (+/-)-4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-on i (S)-(4-((1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)boronska kiselina, dobijen je 4-(2-amino-5-(1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid kao dijastereomerna smeša (nerazdvojiva) (35%). LCMS (m/z): 497.3 (MH<+>), 0.59 min; 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 7.97 (m, 1H), 7.9 (m, 1H), 7.82 (m, 1H), 7.52 - 7.39 (m, 3H), 7.39 - 7.32 (m, 2H), 7.3 (m, 1H), 5.19 (m, 1H), 3.88 (m, 2H), 3.60 - 3.38 (m, 3H), 3.21 - 3.08 (m, 1H), 2.72 - 2.58 (m, 1H), 2.57 - 2.41 (m, 1H), 2.21 - 1.95 (m, 2H). Dijastereomerna smeša je razdvojena pomoću hiralne SFC (ChiralPak 5mic AD kolona, 4.6x100 (mm), 5mL/min, EtOH+0.1%, DEA= 45% u 5 min). Polarni dijastereomer, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid je dobijen na Rt = 1.82 min. Manje polarni dijastereomer, 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid je dobijen na Rt = 2.35 min. Apsolutna stereohemija za oba dijastereomera je dodeljena proizvoljno.
Primeri 29, 30 i 31
4-(2-amino-5-(1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((R)-1-feniletil)benzamid, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((R)-1-feniletil)benzamid i 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((R)-1-feniletil)benzamid
[0392] Prateći fazu 6 na šemi 47, korišćenjem (+/-)-4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona i (R)-(3-fluoro-4-((1-feniletil)karbamoil)fenil)boronske kiseline, dobijen je 4-(2-amino-5-(1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((R)-1-feniletil)benzamid kao dijastereomerna smeša (nerazdvojiva) (34%). LCMS (m/z): 447.3 (MH<+>), 0.58 min;1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 7.85 (m, 1H), 7.72 (m, 2H), 7.41 - 7.20 (m, 6H), 7.18 (m, 1H), 5.17 (m, 1H), 3.51 - 3.29 (m, 3H), 3.13 - 2.98 (m, 1H), 2.88 (s, 3H), 2.60 - 2.48 (m, 1H), 2.48 - 2.30 (m, 1H), 2.10 - 1.85 (m, 2H), 1.58 - 1.38 (m, 3H). Dijastereomerna smeša je razdvojena pomoću hiralne SFC (ChiralPak 5mic AD kolona, 4.6x100 (mm), 100mL/min, IPA+0.1%, DEA = 40%, 5ml/min). Polarni dijastereomer, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((R)-1-feniletil)benzamid je dobijen na Rt = 1.67 min. LCMS (m/z): 447.3 (MH<+>), 0.64 min. Manje polarni dijastereomer, 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((R)-1-feniletil)benzamid je dobijen na Rt = 2.37 min. LCMS (m/z): 447.2 (MH<+>), 0.64 min. Apsolutna stereohemija za oba dijastereomera je dodeljena proizvoljno.
Primeri 32, 33 i 34
4-(2-amino-5-(1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-hlorofenil)etil)-2-fluorobenzamid, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-hlorofenil)etil)-2-fluorobenzamid i 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-hlorofenil)etil)-2-fluorobenzamid
[0393]
[0394] Prateći fazu 6 na šemi 47, korišćenjem (R)-(4-((1-(3-hlorofenil)etil)karbamoil)-3-fluorofenil)boronske kiseline, dobijen je 4-(2-amino-5-(1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-hlorofenil)etil)-2-fluorobenzamid kao dijastereomerna smeša (nerazdvojiva) (33%). LCMS (m/z): 481.3 (MH<+>), 0.70 min; 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 7.86 (m, 1H), 7.73 (m, 2H), 7.39 - 7.20 (m, 5H), 7.19 (m, 1H), 5.14 (m, 1H), 3.52 - 3.28 (m, 3H), 3.14 - 2.98 (m, 1H), 2.88 (s, 3H), 2.62 - 2.48 (m, 1H), 2.46 - 2.30 (m, 1H), 2.12 - 1.84 (m, 2H), 1.48 (m, 3H). Dijastereomerna smeša je razdvojena pomoću hiralne SFC (ChiralPak 5mic AD kolona, 4.6x100 (mm), 5ml/min, EtOH+0.1% DEA=35%). Polarni dijastereomer, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-hlorofenil)etil)-2-fluorobenzamid je dobijen na Rt = 2.83 min. LCMS (m/z): 481.2 (MH<+>), 0.71 min. Manje polarni dijastereomer, 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-2-oksopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-hlorofenil)etil)-2-fluorobenzamid je dobijen na Rt = 3.53 min. LCMS (m/z): 481.2 (MH<+>), 0.72. Apsolutna stereohemija za oba dijastereomera je dodeljena proizvoljno.
Sinteza 5-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona
[0395]
Šema 49
[0396] Prateći šemu 48, korišćenjem 5-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona, dobijen je 5-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-on. LCMS (m/z): 284/286 (MH<+>), 0.34 min.
Primeri 35, 36 i 37
4-(2-amino-5-(1-metil-6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid i 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0397]
[0398] Prateći fazu 6 na šemi 47, korišćenjem 5-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona i (S)-(4-((1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)boronske kiseline, dobijen je 4-(2-amino-5-(1-metil-6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid (33%). LCMS (m/z): 497.2 (MH<+>), 0.61 min;<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 8.70 (m, 1H), 7.98 (m, 1H), 7.88 (m, 2H), 7.44 (m, 3H), 7.36 (m, 2H), 7.30 (m, 1H), 5.19 (m, 1H), 3.88 (m, 2H), 3.51 (m, 2H), 3.21 (m, 1H), 2.97 (s, 3H), 2.50 (m, 2H), 2.07 (m, 2H). Dijastereomerna smeša je razdvojena pomoću hiralne SFC (ChiralPak 5mic AD kolona, 4.6x100 (mm), EtOH+0.1%DEA=40%, 5ml/min). Polarni dijastereomer, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid je dobijen na Rt = 2.22 min. LCMS (m/z): 497.2 (MH<+>), 0.61 min. Manje polarni dijastereomer, 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid je dobijen na Rt = 3.09 min. LCMS (m/z): 497.3 (MH<+>), 0.59 min.
Primeri 38, 39 i 40
4-(2-amino-5-(1-metil-6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-hlorofenil)etil)-2-fluorobenzamid, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-hlorofenil)etil)-2-fluorobenzamid i 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-hlorofenil)etil)-2-fluorobenzamid
[0400] Prateći fazu 6 na šemi 47, korišćenjem (R)-(4-((1-(3-hlorofenil)etil)karbamoil)-3-fluorofenil)boronske kiseline i 5-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona, dobijen je 4-(2-amino-5-(1-metil-6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid kao dijastereomerna smeša (4%). LCMS (m/z): 481.3 (MH<+>), 0.69 min.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 8.79 - 8.65 (m, 1H), 7.93 - 7.83 (m, 1H), 7.83 - 7.76 (m, 1H), 7.75 -7.65 (m, 1H), 7.40 - 7.29 (m, 3H), 7.29 - 7.21 (m, 2H), 7.21 - 7.13 (m, 1H), 5.22 - 5.07 (m, 1H), 3.52 - 3.32 (m, 3H), 3.16 - 3.01 (m, 1H), 2.88 (s, 3H), 2.48 - 2.34 (m, 2H), 2.07 - 1.92 (m, 2H), 1.55 - 1.40 (m, 3H). Dijastereomerna smeša je razdvojena pomoću hiralne SFC (ChiralPak 5mic AD kolona, 4.6x100 (mm), 5ml/min, MeOH+0.1% DEA = 35%). Polarni dijastereomer, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-hlorofenil)etil)-2-fluorobenzamid je dobijen na Rt = 2.98 min. LCMS (m/z): 481.2 (MH<+>), 0.71 min. Manje polarni dijastereomer, 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-6-oksopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-hlorofenil)etil)-2-fluorobenzamid je dobijen na Rt = 3.93min. LCMS (m/z): 481.1 (MH<+>), 0.71 min.
Primer 41
4-(2-amino-5-(5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0401]
Šema 50
Faza 1. terc-butil 4-(6-fluoropiridin-3-il)-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat
[0402] U terc-butil 2-okso-4-(tosiloksi)-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat (0.8g, 2.037 mmol) (videti primer 24 za sintezu) u DME (27 mL) i natrijum karbonat (7 mL, 14.00 mmol) (2M) dodata je (6-fluoropiridin-3-il)boronska kiselina (0.431 g, 3.06 mmol) i PdCl2(dppf).CH2Cl2adukt (0.333 g, 0.407 mmol). Smeša je pročišćena strujom N2tokom 5 min. Reakciona smeša je zagrevana u uljanom kupatilu na 90°C tokom 2 h. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju etilacetata i vode. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Prečišćen je pomoću fleš hromatografije na koloni korišćenjem 0-50%EtOAc / heptan. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i uparene da bi se dobio terc-butil 4-(6-fluoropiridin-3-il)-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat kao beličasta čvrsta supstanca (54.7%). LCMS (m/z): 223.2 (MH<+>-<t>Bu), 0.743 min.
Faza 2.4-(6-fluoropiridin-3-il)-1H-pirol-2(5H)-on
[0403] U terc-butil 4-(6-fluoropiridin-3-il)-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat (315 mg, 1.132 mmol) u DCM (4 mL) dodat je TFA (1 mL, 12.98 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h. Reakciona smeša je uparena. Azeotrop sa toluenom (x=3) je dao 4(6-fluoropiridin-3-il)-1H-pirol-2(5H)-on. Prosledjen je u sledeću fazu. LCMS (m/z): 179.2 (MH<+>), 0.373 min. Sirovi prinos je kvantitativan.
Faza 3.4-(6-fluoropiridin-3-il)pirolidin-2-on
[0404] U 4-(6-fluoropiridin-3-il)-1H-pirol-2(5H)-on (190 mg, 1.066 mmol) u MeOH ( 10 mL) pod N2atmosferom dodat je Pd-C (227 mg, 0.213 mmol). Reakciona smeša je mešana pod balonom sa H2na sobnoj temperaturi tokom noći. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit, oprana sa MeOH. Filtrat je uparen. Azeotrop sa toluenom (x=3). Prinos je 80%. Prosledjen je u sledeću fazu. LCMS (m/z): 181.0 (MH<+>), 0.341 min.
Faza 4.4-(6-fluoropiridin-3-il)-1-metilpirolidin-2-on
[0405] U 4-(6-fluoropiridin-3-il)pirolidin-2-on (200 mg, 0.888 mmol) u DMF (4 mL) u ledenom kupatilu dodat je NaH (42.6 mg, 1.066 mmol) i jodometan (0.067 mL, 1.066 mmol). Reakciona smeša je mešana u ledenom kupatilu tokom 30 min i na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. LC-MS je pokazala smešu SM i proizvoda (1:1). Ponovo je dodat NaH (42.6 mg, 1.066 mmol) i jodometan (0.067 mL, 1.066 mmol), smeša je mešana tokom 1h na sobnoj temperaturi. Završena reakcija je potvrdjena pomoću LC-MS. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i oprana vodom i zasićenim slanim rastvorom. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom [0-50-80%EtOAc (sadrži 10% MeOH)/heptan]. LCMS (m/z): 195.2 (MH<+>), 0.492 min. Prinos 58%
Faza 5.4-(6-aminopiridin-3-il)-1-metilpirolidin-2-on
[0406] U 4-(6-fluoropiridin-3-il)-1-metilpirolidin-2-on (100 mg, 0.515 mmol) dodat je amonijum hidroksid (2 mL, 15.41 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na bloku za zagrevanje na 140°C tokom 48h. LC-MS je pokazala 80% proizvoda. Reakciona smeša je uparena. Formiran je azeotrop sa toluenom (x=3) i prosledjen u sledeću fazu. LCMS (m/z): 192.2 (MH<+>), 0.256 min.
Faza 6.4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpirolidin-2-on
[0407] U 4-(6-aminopiridin-3-il)-1-metilpirolidin-2-on (90 mg, 0.377 mmol) u acetonitrilu ( 3 mL) u ledenom kupatilu dodat je NBS (60.3 mg, 0.339 mmol). Reakciona smeša je mešana u ledenom kupatilu tokom 15 min i na sobnoj temperaturi tokom 30 min. LC-MS je pokazala smešu SM i proizvoda. Dodat je 0.1 ekviv. dodatnog NBS i smeša je mešana još 1h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i dodato je 2 mL zasićenog natrijum bikarbonata. Smeša je mešana 10 min. Organski sloj je izdvojen, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Prosledjeno je u sledeću fazu (73%). LCMS (m/z): 270.2/272.2(MH<+>), 0.302 min.
Faza 7. 4-(2-amino-5-(1-metil-5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0408] U 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpirolidin-2-on (18 mg, 0.067 mmol) u DME ( 1.6 mL) i natrijum karbonat (0.167 mL, 0.333 mmol) dodat je (S)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamid (30.8 mg, 0.080 mmol) i PdCl2(dppf). CH2Cl2adukt (5.44 mg, 6.66 µmol). Reakciona smeša je zagrevana u mikrotalasnoj pećnici na 120°C tokom 15 min. Reakciona smeša je razblažena etilacetatom. Organski sloj je izdvojen i uparen. Sirovi ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC da bi se dobio željeni proizvod u vidu soli TFA (29.3%). LCMS (m/z): 449.3 (MH<+>), 0.52 min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.65 (dd, J=7.24, 4.11 Hz, 1 H) 7.97 (d, J=2.35 Hz, 1 H) 7.94-7.83 (m, 2 H) 7.49-7.39 (m, 4 H) 7.36 (t, J=7.63 Hz, 2 H) 7.32-7.24 (m, 1 H) 5.30-5.13 (m, 1 H) 3.94-3.76 (m, 3 H) 3.69 (kvin, J=8.31 Hz, 1 H) 3.50 (dd, J=9.59, 7.24 Hz, 1 H) 2.89 (s, 3 H) 2.79 (dd, J=16.82, 9.00 Hz, 1 H) 2.56 (dd, J=16.82, 8.22 Hz, 1 H).
Primer 42, 43 i 44
4-(2-amino-5-(1-metil-5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid i 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0409]
[0410] Prateći fazu 6 na šemi 50, korišćenjem 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpirolidin-2-ona i (S)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2il)benzamida, dobijen je 4-(2-amino-5-(1-metil-5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid kao dijastereomerna smeša (33.3%). LCMS (m/z): 483.3 (MH<+>), 0.59 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.79-8.61 (m, 1 H) 7.97 (d, J=1.96 Hz, 1 H) 7.93-7.82 (m, 2 H) 7.48-7.39 (m, 3 H) 7.39-7.25 (m, 3 H) 5.25-5.14 (m, 1 H) 3.95-3.76 (m, 3 H) 3.69 (kvint, J=8.22 Hz, 1 H) 3.50 (dd, J=9.78, 7.43 Hz, 1 H) 2.89 (s, 3 H) 2.80 (dd, J=16.82, 9.00 Hz, 1 H) 2.56 (dd, J=16.82, 8.22 Hz, 1 H). Dijastereomerna smeša je razdvojena pomoću hiralne SFC (ChiralPak 5mic AD kolona, 4.6x100 (mm), IPA+0.1% DEA=40%, 5mL/min). Polarni dijastereomer, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid je dobijen na Rt = 1.41 min. LCMS (m/z): 483.3 (MH<+>), 0.586 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.82 (d, J=1.56 Hz, 1 H) 7.74 (t, J=7.83 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=2.35 Hz, 2 H) 7.33-7.15 (m, 5 H) 5.09 (t, J=5.87 Hz, 1 H) 4.48 (s, 1 H) ) 3.83-3.63 (m, 3 H) 3.50 (kvint, J=8.22 Hz, 1 H) 3.36 (dd, J=9.39, 7.43 Hz, 1H) 2.78 (s, 3 H) 2.67 (dd, J=16.82, 9.00 Hz, 1 H) 2.42 (dd, J=16.63, 8.41 Hz, 1 H). Manje polarni dijastereomer, 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid je dobijen na Rt = 2.16 min. LCMS (m/z): 483.3 (MH<+>), 0.585 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.92 (d, J=2.35 Hz, 1 H) 7.84 (t, J=8.02 Hz, 1 H) 7.51-7.21 (m, 7 H) 5.18 (t, J=5.87 Hz, 1 H) 3.94-3.72 (m, 3 H) 3.59 (kvint, J=8.22 Hz, 1 H) 3.50-3.42 (m, 1 H) 2.88 (s, 3 H) 2.82-2.70 (m, 1 H) 2.51 (dd, J=16.82, 8.61 Hz, 1 H).
Primer 45
Sinteza (S)-4-(2-amino-5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida
[0411]
Šema 51
Faza 1.4-(6-Fluoropiridin-3-il)tetrahidro-2H-piran-4-karbaldehid
[0412] Rastvoru 5-bromo-2-fluoropiridina (2.0 g, 11.36 mmol) u dioksaanu (35 mL) dodat je tetrahidro-2H-piran-4-karbaldehid (2.59 g, 22.73 mmol), Pd(OAc)2(0.25 g, 1.14 mmol), cezijum karbonat (7.41 g, 22.73 mmol), i voda (10.24 µL, 0.57 mmol), ksantfos (0.98 g, 1.70 mmol). Smeša je pročišćena azotom tokom 5 min, rezultujuća smeša je zagrevana do 110°C u uljanom kupatilu 15 h. Smeša je razblažena etil acetatom, i oprana vodom, zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni na silica gelu (ISCO) eluiranjem sa 0-80% etil acetata u heptanu da bi se dobio 4-(6-fluoropiridin-3-il)tetrahidro-2H-piran-4-karbaldehid (560 mg, 2.68 mmol, 23.5% prinosa) kao crveno ulje. LCMS (m/z): 210 (MH<+>), 0.45 min.
Faza 2. (4-(6-Fluoropiridin-3-il)tetrahidro-2H-piran-4-il)metanol
[0413] Ledeno hladnom rastvoru 4-(6-fluoropiridin-3-il)tetrahidro-2H-piran-4-karbaldehida (560 mg, 2.68 mmol) u metanolu (18 mL) dodat je natrijum borohidrid (91 mg, 2.41 mmol). Reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom.
Ostatak je razblažen etil acetatom, i opran vodom, zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan da bi se dobio (4-(6-fluoropiridin-3-il)tetrahidro-2H-piran-4-il)metanol (550 mg, 2.60 mmol, 97 %) kao ulje smedje boje. LCMS (m/z): 212 (MH<+>), 0.42 min.
Faza 3.2-Fluoro-5-(4-(jodometil)tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin
[0414] Ledeno hladnom rastvoru trifenilfosfina (983 mg, 3.75 mmol), joda (952 mg, 3.75 mmol) u dihlorometanu (20 mL) dodat je imidazol (278 mg, 4.09 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 h, nakon toga je dodat (4-(6-fluoropiridin-3-il)tetrahidro-2H-piran-4-il)metanol (360 mg, 1.70 mmol) u 10 mL dihlorometana. Reakciona smeša je zagrevana u 60°C u uljanom kupatilu 48 h. Čvrsta supstanca je filtrana, filtrat je prečišćen fleš hromatografijom na koloni na silika gelu (ISCO) eluiranjem sa 0-80% etil acetata u heptanu da bi se dobio 2-fluoro-5-(4-(jodometil)tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin (330 mg, 1.03 mmol, 60.3% prinosa) kao ulje svetlo žute boje. LCMS (m/z): 322 (MH<+>), 0.77 min.
Faza 4.2-Fluoro-5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin
[0415] Rastvoru (2-fluoro-5-(4-(jodometil)tetrahidro-2H-piran-4-il)piridina (330 mg, 1.03 mmol) u THF (5mL) na -15°C, dodat je N-selektrid (2.26 mL, 2.26 mmol) u kapima. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Rastvor je ponovo ohladjen u ledenom kupatilu, i 0.3 mL vode je dodato. Rezultujući rastvor je mešan tokom 10 min. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, i ostatak je rastvoren u DCM. Nerastvorljiva čvrsta supstanca je filtrirana, i filtrat je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silika gela (ISCO) eluiranjem sa 0-80% etil acetata u heptanu da bi se dobio 2-fluoro-5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin (110 mg, 0.56 mmol, 54.8% prinosa) kao bezbojno ulje sa >90% čistoće. LCMS (m/z): 196 (MH<+>), 0.64 min.
Faza 5. N-(2,4-Dimetoksibenzil)-5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amin
[0416] Rastvoru 2-fluoro-5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridina (110 mg, 0.56 mmol) u (2,4-dimetoksifenil)metanaminu (1016 µL, 6.76 mmol) i DIEA (246 µL, 1.41 mmol) dodat je kalijum karbonat (156 mg, 1.12 mmol). Rezultujuća smeša je zagrevana u 160°C u uljanom kupatilu 16 h, Reakciona smeša je razblažena etil acetatom, oprana vodom, zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni na silika gelu (ISCO) eluiranjem sa 0-100% etil acetata u heptanu da bi se dobio N-(2,4dimetoksibenzil)-5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amin (100 mg, 0.29 mmol, 51.8% prinos) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 343 (MH<+>), 0.63 min.
Faza 6.5-(4-Metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amin
[0417] Ledeno hladnom rastvoru N-(2,4-dimetoksibenzil)-5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina (100 mg, 0.29 mmol) u DCM (6 mL) dodato je 10 mL 30% rastvora TFA u DCM. Rezultujući rastvor je mešan na 0°C tokom 15 min. Rastvarač je uklonjen putem vakuuma. Rezultujući ostatak je ponovo rastvoren u etil acetatu, i rastvor organske supstance je opran sa 1M NaOH, zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni na silika gelu (ISCO) eluiranjem sa 0-100% etil acetata u heptanu da bi se dobio 5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amin (50 mg, 0.26 mmol, 89% prinosa) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 193 (MH<+>), 0.35 min.
Faza 7.3-Bromo-5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amin
[0418] Ledeno hladnom rastvoru 5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina (50 mg, 0.26 mmol) u DCM (5 mL) dodat je NBS (50.9 mg, 0.28 mmol) u dve porcije. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 40 min. Reakcioni rastvor je razblažen etil acetatom, opran vodom, vodenim natrijum bikarbonatom, zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtran, i koncentrovan da bi se dobio 3-bromo-5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amin (70 mg, 0.26 mmol, 99% prinosa) kao ostatak žute boje. LCMS (m/z): 271/273 (MH<+>), 0.41 min.
Faza 8. (S)-4-(2-Amino-5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0419] Rastvoru 3-bromo-5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina (70 mg, 0.26 mmol) u DME (4 mL) dodat je (S)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamid (298 mg, 0.77 mmol) i natrijum karbonat (0.64 mL, 1.29 mmol). Smeša je pročišćena azotom tokom 10 min, zatim je dodat PdCl2(dppf)-CH2Cl2(31.6 mg, 0.039 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 120°C u uljanom kupatilu 2 h. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom, oprana vodom, zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana. Rezultujući ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni na silika gelu (ISCO) eluiranjem sa 0-100% etil acetata u heptanu da bi se dobilo 70 mg sirovog proizvoda, koji je prečišćen pomoću HPLC da bi se dobio (S)-4-(2-amino-5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid (40.8 mg, 0.089 mmol, 34.5% prinosa) kao TFA so. LCMS (m/z): 450 (MH<+>), 0.61 min; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.22 (t, J=7.83 Hz, 1 H) 7.77 - 7.65 (m, 2 H) 7.50 (dd, J=11.74, 7.43 Hz, 1 H) 7.42 - 7.36 (m, 4 H) 7.33 (d, J=7.43 Hz, 2 H) 7.21 (d, J=11.74 Hz, 1 H) 5.33 (d, J=4.70 Hz, 1 H) 4.08 - 3.94 (m, 2 H) 3.83 -3.65 (m, 4 H) 1.97 (ddd, J=13.40, 8.12, 5.09 Hz, 2 H) 1.72 (d, J=13.69 Hz, 2 H) 1.35 (s, 3 H)
Primer 46
Sinteza 4-(3-aminopirazin-2-il)-N-benzilbenzamida
[0420]
Šema 52
[0421] Rastvoru N-benzil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamida (150 mg, 0.445 mmol), 3-hloropirazin-2-amina (74.9 mg, 0.578 mmol), i PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukta (36.3 mg, 0.044 mmol) u DME (3.3 mL) dodat je 2 M Na2CO3(1.11 mL). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (120°C, 10 min). Razblažena je sa EtOAc i oprana vodom dvaput. Zatim je ekstrahovana sa 1N HCl (3 X 15 mL). Kiseli rastvor je opran etrom dvaput (2 X 15 mL), i zatim učinjen baznim dodatkom Na2CO3. Nakon toga, ekstrahovan je sa EtOAc (20 mL, 3 puta), zatim opran zasićenim NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4, filtran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc(koji sadrži 10% MeOH) u heptanu, zatim koncentrovan na rotavap uredjaju. Ostatak je triturisan etrom da bi se dobilo 80.2 mg željenog proizvoda. LCMS (m/z): 305.2 (MH<+>), 0.59 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.74 (d, J=8.22 Hz, 1 H) 8.41 (s, 1 H) 8.06 (dd, J=9.39, 2.74 Hz, 1 H) 8.01 (d, J=8.61 Hz, 2 H) 7.94 (br. s., 1 H) 7.83 (d, J=8.22 Hz, 2 H) 7.40 -7.34 (m, 2 H) 7.30 (t, J=7.63 Hz, 2 H) 7.22 (d, J=7.43 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=9.39 Hz, 1 H) 5.12 -5.03 (m, 1 H) 3.75 - 3.60 (m, 2 H).
Tabela 2. Jedinjenja pripremljena u postupku 1 koji je gore opisan
Postupak 2
Primer 127
Sinteza (S)-4-(3-amino-6-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0422]
Šema 53
Faza 1. (S)-4-(3-aminopirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0423] U reakcionu smešu 3-hloropirazin-2-amina (288 mg, 2.22 mmol), (S)-4-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietilkarbamoil)-3-fluorofenilboronske kiseline (500 mg, 1.48 mmol), PdCl2(dppf)-DCM (108 mg, 0.148 mmol), DME (1.1 mL), dodat je 2M Na2CO3(3.703 mL). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (120<o>C, 12 min). U reakcionu smešu je dodat anhidrovani natrijum sulfat, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je predprečišćen pomoću fleš hromatografije eluiranjem sa EtOAc (koji sadrži 10% MeOH) u heptanu. Čiste frakcije su kombinovane i koncentrovane da bi se dobilo 389 mg željenog proizvoda sa 68% prinosa. LCMS (m/z): 387 (MH<+>), 0.69 min.
Faza 2. (S)-4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0424] Rastvoru (S)-4-(3-aminopirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida (389 mg, 1.006 mmol) u acetonitrilu (21 mL) dodat je NBS (171 mg, 0.961 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 20 min. Zatim je kvenčovana zasićenim NaHCO3, i mešana tokom 30 min. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc 3 puta, organska supstanca je oprana zasićenim NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena, filtrana i koncentrovana. Sirovi materijal je prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 367 (MH<+>), 0.88 min.
Faza 3. (S)-4-(3-amino-6-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0425] U reakcionu smešu (S)-4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida (40 mg, 0.086 mmol), 1,3-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola (38.2 mg, 0.172 mmol), PdCl2(dppf)-DCM (6.28 mg, 8.59 µmol), i DME (644 µL), dodato je 2 M Na2CO3(215 µL). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (120°C, 12 min). U reakcionu smešu je dodat anhidrovani natrijum sulfat, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen autopreparativne hromatografije postupkom da bi se dobilo 25 mg željenog proizvoda u vidu soli TFA. LCMS (m/z): 481.3 (MH<+>), 0.73 min; 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm 8.66 (d, J=6.26 Hz, 1 H) 8.17 (s, 1 H) 8.02 (s, 1 H) 7.76 - 7.51 (m, 3 H) 7.45 - 7.16 (m, 3 H) 5.07 – 4.09 (m, 1 H) 3.72 (s, 3 H) 3.62 (m, 2 H) 2.33 (s, 3 H).
Primer 128
Sinteza (S)-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0426]
Šema 54
Faza 1. metil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoat
[0427] U 3-bromopiridin-2-amin (5 g, 28.9 mmol) u balonu sa okruglim dnom od 500 mL dodata je (3-fluoro-4-(metoksikarbonil)fenil)boronska kiselina (7.44 g, 37.6 mmol), PdCl2(dppf)-DCM (2.115 g, 2.89 mmol), DME (108 mL) i 2M rastvor Na2CO3(36.1 mL). Reakciona smeša je zagrevana u uljanom kupatilu na 110°C tokom 4 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i oprana vodom tri puta, osušena iznad Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc (koji sadrži 10% MeOH)/heptan dajući 5.6 g metil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoata sa 79% prinosa. LCMS (m/z): 247.1 (MH<+>), 0.50 min.
Faza 2. metil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoat
[0428] Rastvoru metil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoata (5.64 g, 22.90 mmol) u acetonitrilu (229 mL) dodat je NBS (4.16 g, 23.36 mmol) u dve porcije na 0°C . Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 20 min. Nakon toga je kvenčovana zasićenim Na2S2O3i NaHCO3, i mešana tokom 30 min. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc 3 puta, organska supstanca oprana zasićenim NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom. Osušena je i koncentrovana. Sirovi materijal je triturisan etrom da bi se dobilo 7.05 g metil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoata sa 95% prinosa. LCMS (m/z): 327.1 (MH<+>), 0.66 min.
Faza 3.4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0429] Rastvoru metil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoata (1.9 g, 5.84 mmol) u THF (19.48 mL) i MeOH ( 9.74 mL, odnos: 1.000) dodat je LiOH (1 M vodeni rastvor) (10.52 mL, 10.52 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 5 h. Nakon što je 1N HCl (1.9 mL) dodata do pH 5, reakciona smeša je obradjena sa EtOAc, organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtran i koncentrovan u vakuumu. Sirova 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina korišćena je u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 311.1/313.1 (MH<+>), 0.5 min.
Faza 4. (S)-4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0430] Rastvoru 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (300 mg, 0.964 mmol) u THF (8.036 mL) dodat je (S)-2-amino-2-(3-hlorofenil)etanol (331 mg, 1.157 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 15 h. Posle dodavanja vode, reakciona smeša je obradjena sa EtOAc, organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi (S)-4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid korišćen je u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 464.1/466.1 (MH<+>), 0.69 min.
Faza 5. (S)-4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0431] Rastvoru (S)-4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida (85 mg, 0.183 mmol), bis(pinakolato)diborona (93 mg, 0.366 mmol) i PdCl2(dppf) (26.8 mg, 0.037 mmol) u dioksanu (610 µL) dodat je kalijum acetat (54 mg, 0.549 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (120°C tokom 20 min). Reakciona smeša je filtrirana kroz čep od celita. Nakon što je filtrat gotovo koncentrovan, sirovi (S)-4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid je korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 430.2 (MH<+>za boronsku kiselinu), 0.57 min.
Faza 6. (S)-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0432] Rastvoru sirovog (S)-4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida (30 mg, 0.059 mmol) u rezidualnom dioksanu dodat je 4-bromo-1-metil-1H-1,2,3-triazol (14.24 mg, 0.088 mmol), PdCl2(dppf) (42.9 mg, 0.059 mmol), DME (195 µl) i 2 M Na2CO3(130 μl) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana tokom 5 h. Posle dodavanja vode i EtOAc, organski sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtran, i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC. Čiste frakcije su osušene zamrzavanjem dajući (S)-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid u vidu soli TFA (25% tokom 2 faze). LCMS (m/z): 467.3 (MH<+>), 0.61 min; 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 8.64 (m, 1 H), 8.31 (m, 1 H), 8.25 (m, 2 H), 8.2 (m, 1 H), 7.82 (m, 1 H), 7.4 (m, 3 H), 7.28 (m, 2 H), 7.22 (m, 1 H), 5.11 (m, 1 H), 4.07 (s, 3 H), 3.78 (m, 2 H).
Primer 129
Sinteza (S)-4-(3-amino-6-(6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida
[0433]
Šema 55
Faza 1. (S)-4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0434] Rastvoru 3,5-dibromopirazin-2-amina (826 mg, 3.27 mmol), (S)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamida (600 mg, 1.634 mmol), i PdCl2(dppf).CH2Cl2adukta (133 mg, 0.163 mmol) u DME (12.3 mL) dodat je 2 M Na2CO3(4.08 mL). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (120°C, 10 min). Reakciona smeša je obradjena sa EtOAc. Organski sloj je opran zasićenim NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4, filtran, koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen silika fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc (koji sadrži 10% MeOH) u heptanu, i triturisan etrom da bi se dobilo 800 mg (S)-4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid. LCMS (m/z): 415 (MH<+>), 0.73 min.
Faza 2. (S)-4-(3-amino-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0435] Rastvoru (S)-4-(3-amino-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida (50 mg, 0.121 mmol), bis(pinakolato)diborona (61.4 mg, 0.242 mmol), i PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukta (9.88 mg, 0.012 mmol) u dioksanu (302 µL) dodat je kalijum acetat (35.6 mg, 0.363 mmol) odmah posle degaziranja. Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (120°C tokom 20 min). Nakon što je razblažena sa EtOAc, reakciona smeša je filtrirana kroz čep od celita. Posle koncentrovanja, sirovi (S)-4-(3-amino-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid korišćen je u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 379 (MH<+>za boronsku kiselinu), 0.47 min.
Faza 3. (S)-4-(3-amino-6-(6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0436] Rastvoru (S)-5-amino-6-(4-(2-hidroksi-1-feniletilkarbamoil)fenil)pirazin-2-ilboronske kiseline (55 mg, 0.145 mmol), 5-bromopiridin-2(1H)-ona (38.0 mg, 0.218 mmol), i PdCl2(dppf)-CH2Cl2(11.88 mg, 0.015 mmol) u DME (1091 µL) dodat je 2M Na2CO3(364 µL). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (120°C, 10 min). Reakciona smeša je obradjena sa EtOAc. Organski sloj je opran zasićenim NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4, filtran, koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC dajući 4.3 mg (S)-4-(3-amino-6-(6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida u vidu soli TFA. LCMS (m/z): 428.2 (MH<+>), 0.55 min;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 3.60 - 3.75 (m, 2 H) 5.03 - 5.12 (m, 1 H) 6.40 (d, J=9.39 Hz, 1 H) 7.22 (d, J=7.43 Hz, 1 H) 7.30 (t, J=7.63 Hz, 2 H) 7.34 - 7.40 (m, 2 H) 7.83 (d, J=8.22 Hz, 2 H) 7.94 (br. s., 1 H) 8.01 (d, J=8.61 Hz, 2 H) 8.06 (dd, J=9.39, 2.74 Hz, 1 H) 8.41 (s, 1 H) 8.74 (d, J=8.22 Hz, 1 H).
Sinteza (S)-4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2,6-difluorobenzamida
[0437]
Šema 56
Faza 1. metil 4-bromo-2,6-difluorobenzoat
[0438] Rastvoru 4-bromo-2,6-difluorobenzoeve kiseline (800 mg, 3.38 mmol) u MeOH (11 mL) na sobnoj temperaturi, polako je dodavan trimetilsilildiazometan (5.63 mL, 3.38 mmol) dok rastvor nije postao žut. Mala količina AcOH dodavana je dok žuta boja nije nestala. Svi isparljivi materijali su uklonjeni u vakuumu dajući metil 4-bromo-2,6-difluorobenzoat (47%). LCMS (m/z): 251.1 (MH<+>), 0.86 min.
Faza 2. metil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2,6-difluorobenzoat
[0439] Praćenjem faze 1 na šemi 54, dobijen je metil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2,6-difluorobenzoat (9%). LCMS (m/z): 485.2 (MH<+>), 0.64 min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.11 (m, 1 H), 7.76 (m, 2 H), 7.37 (m, 1 H), 7.27 (m, 2 H), 7.20 (m, 3 H), 5.09 (m, 1 H), 4.03 (s, 3 H), 3.73 (m, 2 H).
Faza 3, 4, i 5. (S)-4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2,6-difluorobenzamid
[0440] Prateći faze 2, 3, i 4 na šemi 54, dobijen je (S)-4-(3-amino-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2,6-difluorobenzamid. LCMS (m/z): 482/484 (MH<+>), 0.68 min.
Tabela 3. Intermedijeri bromida ili odgovarajućeg boronskog estra za Suzuki kuplovanje
Hiralno razdvajanje (+/-)-4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciklopropil)benzamida
[0441]
Šema 57
[0442] (+/-)-4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciklopropil)benzamid (121 mg) je razdvojen hrialnom hromatografijom (AD-H kolona EtOH=60/40, 1mL/min). Polarno jedinjenje (pik 1), 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciklopropil)benzamid, je dobijeno na 7.41 min (50 mg, 41%) i manje polarno jedinjenje (pik 2), 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciklopropil)benzamid, je dobijeno na 10.26 min (54 mg, 44%). Apsolutna stereohemija je dodeljena na osnovu biohemijskih podataka i modela molekulskog dokinga odgovarajućih analoga.
Primer 130
Sinteza (+/-)-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciklopropil)benzamida
[0443]
[0444] Prateći šemu 59, korišćenjem (+/-)-4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciklopropil)benzamida, dobijen je (+/-)-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciklopropil)benzamid (11%). LCMS (m/z): 428.2 (MH<+>), 0.72 min; 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 8.19 (m, 1 H), 7.91 (s, 1 H), 7.82 (m, 1 H), 7.77 (m, 1 H), 7.64 (m, 1 H), 7.48 - 7.33 (m, 2 H), 7.31 - 7.12 (m, 5 H), 3.91 (s, 3 H), 3.10 (m, 1 H), 2.20 (m, 1 H), 1.33 (m, 2 H).
Primer 131
Sinteza 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciklopropil)benzamida
[0445]
[0446] Praćenjem šeme 59, korišćenjem 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciklopropil)benzamida, dobijen je 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciklopropil)benzamid (53%). LCMS (m/z): 428.3 (MH<+>), 0.69 min; 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 8.11 - 8.02 (m, 1 H), 7.94 (m, 1 H), 7.97 - 7.88 (m, 2 H), 7.85 -7.71 (m, 2 H), 7.43 - 7.30 (m, 2 H), 7.26 - 7.14 (m, 2H), 7.14 - 7.02 (m, 2 H), 3.83 (s, 3 H), 3.06 -2.92 (m, 1 H), 2.19 - 2.02 (m, 1 H), 1.35 - 1.17 (m, 2 H). Apsolutna stereohemija je dodeljena na osnovu biohemijskih podataka i modela molekulskog dokinga odgovarajućih analoga.
Primer 132
4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciklopropil)benzamid
[0447]
[0448] Praćenjem šeme 59, korišćenjem 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciklopropil)benzamida, dobijen je 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciklopropil)benzamid (42%). LCMS (m/z): 428.3 (MH<+>), 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 8.09 - 8.02 (m, 1 H), 8.01 - 7.95 (m, 1 H), 7.96 - 7.88 (m, 2 H), 7.84 -7.70 (m, 2 H), 7.42 - 7.29 (m, 2 H), 7.25 - 7.02 (m, 4 H), 3.83 (s, 3 H), 3.10 - 2.87 (m, 1 H), 2.24 2.00 (m, 1 H), 1.33 - 1.15 (m, 2 H). Apsolutna stereohemija je dodeljena na osnovu biohemijskih podataka i modela molekulskog dokinga odgovarajućih analoga.
Primer 133
Sinteza (S)-4-(2-amino-5-(1-deuterido-metil,5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0449]
Šema 58
Faza 1.1-deuterido-metil-1H-pirazol
[0450] Rastvoru NaH (1.851 g, 46.3 mmol) u 2-metil THF (80 mL) dodat je 1H-pirazol (3 g, 44.1 mmol) u 2-metil THF (30 mL) na 0°C. Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 1 h. U ovo je polako dodat CD3I (3.02 mL, 48.5 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom noći. Posle kvenčovanja rastvorom NH4Cl, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, filtran, i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je destilovan dajući 1-deuterido-metil-1H-pirazol (47%) (b.p. ~130°C, temp. kupatila je ~200°C). LCMS (m/z): 86 (MH<+>), 0.24 min; 1H NMR (500MHz, CDCl3) δ ppm 7.55 -7.42 (m, 1H), 7.39 - 7.28 (m, 1H), 6.28 - 6.15 (m, 1H).
Faza 2.1-deuterido-metil,5-metil-1H-pirazol
[0451] Rastvoru n-BuLi (2.5 M u heksanima) (4.14 mL, 10.34 mmol) u etru (20 mL) na -30°C polako je dodat rastvor 1-deuterido-metil-1H-pirazola (880 mg, 10.34 mmol) u etru (2 mL). Reakciona smeša je je ostavljena da se ugreje do sobne temperature i mešana tokom 2 h. Nakon hladjenja do 0°C, rastvor dimetil sulfata (0.931 mL, 9.82 mmol) u etru (3 mL) je polako dodat u reakcionu smešu. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Posle kvenčovanja zas. rastvorom NH4Cl, reakciona smeša je ekstrahovana etrom (x2), ali vodena faza je još uvek sadržala proizvod. Zatim, vodena faza je ekstrahovana sa DCM (x2). Kombinovana organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, filtrana, i koncentrovana u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen destilacijom dajući 1-deuterido-metil,5-metil-1H-pirazol (59%). LCMS (m/z): 100.0 (MH<+>), 0.24 min; 1H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 7.36 (m, 1H), 6.00 (m, 1H), 2.27 (s, 3H).
Faza 3.4-bromo-1-deuterido-metil,5-metil-1H-pirazol
[0452] Rastvoru 1-deuterido-metil,5-metil-1H-pirazola (100 mg, 1.009 mmol) u MeCN ( 3.362 mL) dodat je NBS (171 mg, 0.958 mmol) polako na 0°C. Nakon što je ledeno kupatilo uklonjeno, reakciona smeša je mešana tokom 30 min. Posle kvenčovanja rastvorom natrijum sulfita, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran rastvorom natrijum karbonata i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi 4-bromo-1-deuterido-metil,5-metil-1H-pirazol je dobijen i korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja (92%). LCMS (m/z): 178, 180 (MH<+>), 0.61 min.
Faza 4. (S)-4-(2-amino-5-(1-deuterido-metil,5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0453] Prateći fazu 6 na šemi 54, korišćenjem 4-bromo-1-deuterido-metil,5-metil-1H-pirazola, dobijen je (S)-4-(2-amino-5-(1-deuterido-metil,5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid kao slobodna baza (9%). LCMS (m/z): 483.2 (MH<+>), 0.67 min; 1H NMR (500MHz, CD3OD) δ ppm 8.00 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.86 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.58 - 7.23 (m, 8H), 5.19 (t, J=5.8 Hz, 1H), 3.93 - 3.77 (m, 2H), 2.37 (s, 1H).
Primer 134
Sinteza (S)-4-(2-amino-5-(cijanometil)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida
[0454]
Šema 59
[0455] Rastvoru (S)-4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida (40 mg, 0.093 mmol) i izoksazol-4-ilboronske kiseline (20.99 mg, 0.186 mmol) u DME (697 µl) dodat je PdCl2(dppf)-CH2Cl2(7.59 mg, 9.30 µmol) i 2 M rastvor Na2CO3(232 µl). Reakciona smeša je zagrevana u mikrotalasnoj peći na 120°C tokom 30 min. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju EtOAc i vode, organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtran, i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC. Čiste frakcije su sakupljene i osušene zamrzavanjem dajući (S)-4-(2-amino-5-(cijanometil)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid u vidu soli TFA sa 7% prinosa. LCMS (m/z): 391.2 (MH<+>), 0.51 min;<1>H NMR (400MHz,CD3OD) δ ppm 8.66 (br. s., 1 H), 7.99 - 7.95 (m, 1 H), 7.92 - 7.82 (m, 2 H), 7.44 - 7.39 (m, 4 H), 7.38 - 7.32 (m, 2 H), 7.31 - 7.25 (m, 1 H), 5.25 - 5.18 (m, 1 H), 3.92 - 3.90 (m, 2 H), 3.90 - 3.80 (m, 2 H).
Primer 135
Sinteza (S)-4-(3-amino-6-(2,2,6,6-tetradeuterido-tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida
[0456]
Šema 60
Faza 1. dietil 2,2'-(1,3-dioksolan-2,2-diil)diacetat
[0457] Rastvor dietil 1,3-acetondikarboksilata (12 g, 59.3 mmol), etileneglikola (9.93 mL, 178 mmol), i monohidrata p-toluensulfonske kiseline (564 mg, 2.97 mmol) u benzenu (80 mL) je refluksovan pod zagrevanjem uz uklanjanje vode tokom 10 h pomoću Dean-Stark zamke. Sloj benzena je opran zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim slanim rastvorom. Rastvarač je uklonjen destilovanjem i dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (10 do 40% EtOAc u heptanima) dajući dietil 2,2'-(1,3-dioksolan-2,2-diil)diacetat (42%). LCMS (m/z): 247.2 (MH<+>), 0.65 min;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4.17 (q, J=7.04 Hz, 4 H) 4.03 (s, 4 H) 2.95 (s, 4 H) 1.27 (t, J=7.24 Hz, 6 H).
Faza 2.2,2'-(1,3-dioksolan-2,2-diil)dietanol-d4
[0458] U suspenziju LiAlD4u THF (2.46 g, 58.7 mmol u 40 mL) izmedju -10 do 0°C dodat je rastvor dietil 2,2'-(1,3-dioksolan-2,2-diil)diacetata (6.06 g) u THF (20 mL) tokom 10 min. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 1 h i kvenčovana uzastopnim dodavanjem vode (2.5 mL), 15 tež.% NaOH (2.5 mL), i vode (7.5 mL). Talozi ugašene smeše su uklonjeni filtracijom i filter kolač je pažljivo ispran sa THF. Filtrat je koncentrovan i dobijen je sirovi 2,2'-(1,3-dioksolan-2,2-diil)dietanol-d4 (92%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4.06 (s, 4 H) 2.49 (s, 2 H) 1.98 (s, 4 H).
Faza 3.1,4,8-trioksaspiro[4.5]dekan-d4
[0459] Smeša 2,2'-(1,3-dioksolan-2,2-diil)dietanol-d4 (3.57 g, 21.5 mmol) i hidrata 4-metilbenzensulfonske kiseline (0.204 g, 1.07 mmol) i benzena (150 mL) je zagrevana tokom 3 h na temperature refluksa sa Dean-Stark aparaturom za uklanjanje vode. Reakciona smeša je ohladjena, opran zas. NaHCO3(20 mL x 2), i vodeni slojevi su kombinovani, ekstrahovani sa Et2O(2 x 20 mL), organski slojevi su kombinovani, oprani zasićenim slanim rastvorom (30 mL), osušeni (Na2SO4), filtrani i koncentrovani pod 20 mbar putem uredjaja rotavap, i svetlo žuto ulje je dobijeno kao sirovi 1,4,8-trioksaspiro[4.5]dekan-d4 (2.34 g, 73.5% prinos).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.98 (s, 4 H) 1.73 (s, 4 H).
Faza 4. dihidro-2H-piran-4(3H)-on-d4
[0460] 1,4,8-trioksaspiro[4.5]dekan-d4 (2.34 g, 15.8mmol), formaldehid (37%, 4.6 mL, 63.2 mmol) i piridin 4-metilbenzensulfonat (0.198 g, 0.79mmol) su ravnomerno podeljeni u dve fiole za mikrotalasno zračenje. Svaka fiola je zagrevana na 80°C tokom 30 min i dodatnih 15 min. Reakcione smeše su kombinovane, zasićene sa NaCl, ekstrahovane sa Et2O sve dok željenog proizvoda nije više bilo u vodenom sloju pri proveri pomoću<1>H-NMR. Etarski ekstrakti su kombinovani, koncentrovani i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silika gela (gradijent Et2O/n-pentan) dva puta dajući dihidro-2H-piran-4(3H)-on-d4.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.50 (s, 4 H).
Faza 5.3,6-dihidro-2H-piran-4-il trifluorometansulfonat-d4
[0461] U sveže pripremljeni LDA (10.6 mmol) u THF (10 mL) izmedju -75 do -65°C je u kapima dodavan rastvor dihidro-2H-piran-4(3H)-on-d4 (1.05 g) u THF (3.5 mL) tokom 10 min. Rezultujuća reakciona smeša je mešana na -75°C tokom 3 h, nakon čega je dodavan N-(5-hloropiridin-2-il)-1,1,1-trifluoro-N-((trifluorometil)sulfonil)metansulfonamid u THF (4.16 g/5 mL) tokom 10 min. Reakciona smeša je mešana na -75°C tokom 1 h, a zatim na temperaturi koja se postepeno zagreva do sobne temperature preko noći. Reakciona smeša je ohladjena do 0°C, kvenčovana sa D2O (10mL), i dva sloja su razdvojena, organski sloj je opran uzastopno sa D2O(10 mL), limunskom kiselinom (3 x 10 mL, 3 g limunske kiseline u 30 mL vode), 1M NaOH (2 x 10 mL), zasićenim slanim rastvorom (30 mL), osušen (Na2SO4), koncentrovan i sirovi uljani proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom Et2O/n-pentan (0-60%). Prečišćeni proizvod je dodatno prečišćen pomoću destilacije prečišćavanjem uredjajem Kugelrohr na 105°C/3 mbar dajući 3,6-dihidro-2H-piran-4-il trifluorometansulfonat-d4 (500 mg, 21% prinosa).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5.82 (s, 1 H) 2.45 (s, 2 H).
Faza 6.2-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-d4
[0462] Smeša 3,6-dihidro-2H-piran-4-il trifluorometansulfonat-d4 (500 mg, 2.12 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana) (806 mg, 3.18 mmol), kalijum acetate (644 mg, 6.56 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2(86 mg, 0.106 mmol) i p-dioksana (5 mL) je sipana u fiolu za mikrotalasni reaktor, pročišćena argonom tokom 5 min, čvrsto zatvorena i zagrejana na 80°C preko noći u uljanom kupatilu. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature, razblažena sa EtOAc (10mL), filtrirana kroz neutralni čep od alumine (1.25' H x 0.75' D), i filter kolač je dobro ispran sa EtOAc. Filtrat je koncentrovan dajući sirovi 2-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-d4 u vidu svetlo smedje čvrste supstance (>99%). LCMS (m/z): 215.2 (MH<+>), 0.78 min.
Faza 7. (S)-4-(3-amino-6-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid-d4
[0463] Smeša 2-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-d4 (300 mg, 1.4 mmol), (S)-4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid (694mg, 1.68 mmol), vodenog rastvora Na2CO3(2 M, 2.8 mL), i PdCl2(dppf)-CH2Cl2(57.2 mg, 0,07mmol) i pdioksana (6 mL) je sipana u fiolu za mikrotalasni reaktor, pročišćena argonom tokom 5 min, čvrsto zatvorena i zagrejana na 115°C tokom 30 min. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (15 mL), filtrirana i filtrat je opran sa 1M HCl (4 x 30 mL), i vodeni slojevi su kombinovani, zaalkaljeni dodatkom čvrstog NaOH do pH 12, ekstrahovani sa EtOAc (60 mL), osušeni (Na2SO4), koncentrovani i prvi prinos proizvoda je dobijen sa izvesnim nečistoćama. Sloj EtOAc je posle pranja vodenim rastvorom HCl koncentrovan i ostatak je razblažen sa DMSO, prečišćen pomoću C18 reverzno-fazne preparativne HPLC, i frakcije proizvoda su kombinovane, zasićene sa Na2CO3, ekstrahovane sa EtOAc (60 mL), i drugi prinos čistog proizvoda je dobijen u vidu svetlo žute čvrste supstance. Prvi prinos proizvoda je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa gradijentom aceton/CH2Cl2(0-60%). Dva prinosa proizvoda su kombinovana i dobijen je (S)-4-(3-amino-6-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil) benzamid-d4 (179 mg, 27.9% prinosa). LCMS (m/z): 421.2 (MH<+>), 0.65 min.
Faza 8. (S)-4-(3-amino-6-(2,2,6,6-tetradeuterido-tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0464] Smeša (S)-4-(3-amino-6-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid-d4 (175 mg) i Pd/C (10%, 22 mg) u metanolu je mešana pod balonom vodonika na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz tanak sloj celita, i filtrat je koncentrovan da bi se dobilla sirova bela čvrsta supstanca. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0-60% aceton/CH2Cl2) i čisti proizvod je rastvoren u smeši rastvarača acetonitril/voda (1:1, 10 mL), zamrznut i osušen zamrzavanjem do (S)-4-(3-amino-6-(2,2,6,6-tetradeuterido-tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida u vidu belog praha (64%). LCMS (m/z): 423.2 (MH<+>), 0.60 min;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.93 - 8.01 (m, 2 H), 7.92 (s, 1 H), 7.82 - 7.89 (m, 2 H), 7.38 - 7.47 (m, 4 H), 7.31 - 7.37 (m, 1 H), 6.90 (d, J=7.04 Hz, 1 H), 5.32 (dt, J=6.95, 4.55 Hz, 1 H), 4.68 (br. s., 2 H), 4.06 (d, J=4.30 Hz, 2 H), 2.93 (tt, J=11.44, 4.40 Hz, 1 H), 1.79 - 1.99 (m, 4 H).
Primeri 136 i 137
Sinteza 4-(3-amino-6-((S)-tetrahidrofuran-3-il)pirazin-2-il)-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamida i 4-(3-amino-6-((R)-tetrahidrofuran-3-il)pirazin-2-il)-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamida
[0465]
Šema 61
[0466] Rastvoru (S)-4-(3-amino-6-(furan-3-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida (75 mg, 0.187 mmol) u MeOH (1.873 mL) dodat je platina (IV) oksid (12.76 mg, 0.056 mmol). Rastvor je degaziran u struji N2tokom 15 min. Posle pročišćavanja vodoničnim gasom i opremanja balonom sa vodonikom, reakciona smeša je mešana tokom 24 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit. Posle uklanjanja isparljivih materijala, sirovi proizvod je ponovo postavljen u reakciju. Reakciona smeša je mešana tokom dodatna 24 h. LCMS (m/z): više sporednih proizvoda je obrazovano. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit. Posle uklanjanja isparljivih materijala, rastvoru sirovog proizvoda u MeOH (1.873 mL) dodat je Pd-C (100 mg, 0.094 mmol). Rastvor je degaziran u struji N2tokom 15 min. Posle pročišćavanja vodoničnim gasom i opremanja balonom sa vodonikom, reakciona smeša je mešana tokom 24 h. LCMS (m/z): svi sporedni proizvodi su nestali. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit. Posle uklanjanja isparljivih materijala, sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (EtOAc u DCM) dajući 4-(3-amino-6-(tetrahidrofuran-3-il)pirazin-2-il)-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamid (9 mg, 12%). LCMS (m/z): 405.2 (MH<+>), 0.58 min;<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 7.96 - 7.86 (m, 2 H), 7.80 (s, 1 H), 7.77 - 7.70 (m, 2 H), 7.38 - 7.32 (m, 2 H), 7.30 - 7.21 (m, 2 H), 7.21 - 7.12 (m, 1 H), 5.14 (m, 1 H), 4.08 - 3.97 (m, 1 H), 3.99 - 3.89 (m, 1 H), 3.89 - 3.67 (m, 4 H), 3.56 - 3.38 (m, 1 H), 2.33 - 2.04 (m, 2 H), 1.24 -1.13 (m, 2 H). Racemski proizvod je razdvojen hrialnom HPLC (AD kolona, 5mL/min, MeOH= 30%, SFC) dajući 4-(3-amino-6-((S)-tetrahidrofuran-3-il)pirazin-2-il)-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamid i 4-(3-amino-6-((R)-tetrahidrofuran-3-il)pirazin-2-il)-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamid – 3.4 mg polarnog enantiomera (Rt = 2.12 min) i 3.5 mg manje polarnog enantiomera (Rt = 2.66 min). Apsolutna stereohemija je pripisana proizvoljno.
Tabela 4. Jedinjenja pripremljena korišćenjem postupka 2 koji je gore opisan.
Postupak 3
Primer 173
Sinteza 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(3-hlorobenzil)-2-fluorobenzamida
[0467]
Šema 62
Faza 1. metil 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0468] Rastvoru metil 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata (259 mg, 1.308 mmol), 3-bromo-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina (225 mg, 0.872 mmol), i PdCl2(dppf) (64 mg, 0.087 mmol) dodat je DME (6.5 mL) i 2 M rastvor Na2CO3(3.2 mL). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (120°C, 10 min). Reakciona smeša je obradjena sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtran, i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (gradijent EtOAc u heptanu) da bi se dobio željeni proizvod (192 mg, 67%). LCMS (m/z): 332.2 (MH<+>), 0.63 min.
Faza 2.4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0469] Rastvoru metil 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (104 mg, 0.314 mmol) u THF (698 µL) i MeOH (349 µL) dodat je LiOH (1 M rastvor) (565 µL, 0.565 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je kvenčovana sa 1N rastvorom HCl do pH 5, i obradjena sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtran, i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi. LCMS (m/z): 318.3 (MH<+>), 0.5 min.
Faza 3.4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(3-hlorobenzil)-2-fluorobenzamid
[0470] Rastvoru 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (17 mg, 0.054 mmol) i (3-hlorofenil)metanamina (8.34 mg, 0.059 mmol) u THF (268 µL) dodat je PyBroP (27.5 mg, 0.059 mmol), DIEA (28.1 µL, 0.161 mmol) i HOBT (9.02 mg, 0.059 mmol). Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Sav isparljivi materijal je uklonjen u vakuumu i ostatak je rastvoren u DCM. Sirovi proizvod rastvoren u DCM je nanet na kolonu za fleš hromatografiju (gradijent EtOAc u heptanu) dajući 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(3-hlorobenzil)-2-fluorobenzamid sa 87% prinosa. LCMS (m/z): 441.1 (MH<+>), 0.79 min.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.92 (s, 1 H), 7.74 (m, 1 H), 7.63 (m, 2 H), 7.35 (m, 4 H), 6.14 (s, 1 H), 4.48 (m, 2 H), 3.92 (m, 2 H), 3.43 (m, 2 H), 1.73 (m, 4 H).
Primer 174
Sinteza (S)-N-(2-amino-1-(3-hlorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida
[0471]
Šema 63
Faza 1. (S)-terc-butil (2-(4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-hlorofenil)etil)karbamat
[0472] Rastvoru 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (35 mg, 0.110 mmol) u DMF ( 368 µL) dodat je (S)-terc-butil (2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)karbamat (33.9 mg, 0.110 mmol), aza-HOBt (22.52 mg, 0.165 mmol), EDC (31.7 mg, 0.165 mmol), i DIEA (57.8 µL, 0.331 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju EtOAc i vode. Organski sloj je opran sa NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtran, i koncentrovan u vakuumu dajući sirovi (S)-terc-butil (2-(4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-hlorofenil)etil)karbamat (>99%).
Faza 2. (S)-N-(2-amino-1-(3-hlorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamid
[0473] Sirovi (S)-terc-butil (2-(4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-hlorofenil)etil)karbamat je rastvoren u DCM (1.0 mL). Nakon toga, dodat je TFA (0.3 mL), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Reakciona smeša je razblažena toluenom i koncentrovana do suva. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću reverzno-fazne preparativne HPLC. Čiste frakcije su kombinovane i osušene zamrzavanjem dajući (S)-N-(2-amino-1-(3-hlorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamid kao TFA so (50% prinosa tokom 2 faze). LCMS (m/z): 470.1 (MH<+>), 0.67 min; 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 7.95 - 7.85 (m, 2H), 7.72 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.64 (d, J=12.1 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.49 - 7.38 (m, 3H), 5.49 (dd, J=5.7, 8.8 Hz, 1H), 4.04 (dd, J=3.1, 11.3 Hz, 2H), 3.57 (dt, J=2.0, 11.5 Hz, 2H), 3.51 - 3.41 (m, 2H), 2.98 - 2.88 (m, 1H), 1.97 - 1.76 (m, 4H).
Primer 175
Sinteza 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0474]
Šema 64
Faza 1. terc-Butil 4-bromo-2-fluorobenzoat
[0475] U mešani rastvor 4-bromo-2-fluorobenzoeve kiseline (60 g, 274 mmol) u anhidrovanom THF (700 mL) na 0<o>C dodat je DMF (2 mL), a nakon toga oksalil hlorid (48 mL, 548 mmol) u porcijama tokom 1 časa. Smeša je mešana na 0<o>C tokom 30 min, i zatim na sobnoj temperaturi tokom 1 časa. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak rastvoren u DCM (700 mL). Dodati su terc-butil alkohol (97 g, 1315 mmol) i piridin (150 mL), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 64 h. Smeša je preneta u levak za odvajanje i oprana vodom (400 mL), 2 N vodenim rastvorom NaOH (400 mL) i zasićenim slanim rastvorom (2 x 200 mL), osušena iznad magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (0 do 5% etil acetata u heptanu tomkom 30 min) da bi se dobio terc-butil 4-bromo-2-fluorobenzoat (60 g, 80%) u vidu ulja. LCMS (m/z): 218 / 220 (MH<+>(-tBu)), 1.11 min; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 7.81 - 7.71 (m, 1 H) 7.39 - 7.30 (m, 2 H) 7.29 (s, 1 H) 1.68 - 1.55 (m, 9 H).
Faza 2. terc-Butil 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat
[0476] Balon sa okruglim dnom od 2 L napunjenje sa terc-butil 4-bromo-2-fluorobenzoatom (30 g, 114 mmol), bis(pinocolato)diboronom (41.5 g, 164 mmol), kalijum acetatom (32.1 g, 327 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2(2.67 g, 3.27 mmol) i 1,4-dioksanom (500 mL). Reakciona smeša je degazirana argonom tokom 15 min, zatim zagrejana do 95<o>C i održavana na ovoj temperaturi tokom 16 h. Posle hladjenja, reakciona smeša je uparena do suva, rastvorena u DCM (300 mL), i filtrirana preko celita pranjem sa DCM (3 x 100 mL). Filtrat je opran vodom (200 mL) i zasićenim slanim rastvorom (2 x 200 mL), osušen iznad magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen korišćenjem fleš hromatografije na silika gelu (0 do 10% EtOAc u heptanu tokom 30 min), dajući terc-butil 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat (27 g, 90%) kao čvrstu supstancu. LCMS (m/z): 267 (MH<+>(-tBu)), 1.23 min; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.83 (t, 1 H) 7.57 (d, 1 H) 7.43 (d, 1 H) 1.62 -1.46 (m, 9 H) 1.34 - 1.25 (m, 12 H).
Faza 3. terc-Butil 4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0477] Balon sa okruglim dnom od 2 L napunjen je sa terc-butil 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoatom (54 g, 151 mmol), 2-amino-3-hloropirazinom (19.54 g, 151 mmol), 2 N natrijum karbonatom (158 mL, 317 mmol) i DME (600 mL). Reakciona smeša je degazirana tokom 10 min korišćenjem argona, a zatim je dodat PdCl2(dppf)-CH2Cl2(6.16 g, 7.54 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 100<o>C i održavana na ovoj temperaturi tokom 4 h. Posle hladjenja, reakciona smeša je sipana u vodu (400 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 200 mL). Kombinovane organske supstance su oprane zasićenim slanim rastvorom (3 x 200 mL), osušene iznad magnezijum sulfata, filtrirane i koncentrovane. Sirovi materijal je prečišćen korišćenjem fleš hromatografije na silika gelu (0 do 70% EtOAc u heptanu tokom 50 min), dajući terc-butil 4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (37.7 g, 86%) kao čvrstu supstancu. LCMS (m/z): 290 (MH<+>), 0.80 min; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.98 (d, 1 H) 7.91 -7.81 (m, 2 H) 7.65 -7.46 (m, 2 H) 6.35 (br. s., 2 H) 1.54 (s, 9 H).
Faza 4. terc-butil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0478] U mešani rastvor terc-butil 4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (37.7 g, 130 mmol) u acetonitrilu (800 mL) na 0<o>C dodat je N-bromosukcinimid (23.19 g, 130 mmol) u jednoj porciji. Reakcija je mešana na 0<o>C tokom 2 h, zatim kvenčovana zasićenim rastvorom NaHCO3(200 mL) i mešana na 0<o>C tokom 30 min. Smeša je razblažena vodom (300 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 250 mL). Kombinovane organske supstance su oprane vodom (200 mL) i zasićenim slanim rastvorom (2 x 200 mL), osušene iznad magnezijum sulfata, filtrirane i koncentrovane. Sirovi materijal je prečišćen korišćenjem fleš hromatografije na silika gelu (0 do 40% EtOAc u heptanu tokom 40 min), dajući terc-butil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (30.9 g, 64%) kao čvrstu supstancu. LCMS (m/z): 368 / 370 (MH<+>), 1.03 min; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.14 (s, 1 H) 7.97 -7.74 (m, 1 H) 7.62 - 7.39 (m, 2 H) 6.64 (s, 2 H) 1.54 (s, 9 H).
Faza 5. Terc-butil 4-(3-amino-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0479] U terc-butil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (5.17 g, 46.2 mmol) u DME (115 mL) dodat je 4,4,5,5-tetrametil-2-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)-1,3,2-dioksaborolan (15.36 g, 57.7 mmol), PdCl2(dppf).CH2Cl2adukt (1.885 g, 2.309 mmol), i zatim 2 M vodeni rastvor natrijum karbonata (19.57 g, 185 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 100°C preko noći. LCMS je pokazala da je reakcija završena. Reakcija je ohladjena. U smešu je dodato 1000 mL EtOAc i 300 mL vode. Rezultujuća smeša je mešana tokom 30 min, i organski sloj je izdvojen. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 X 200 mL). Organski slojevi su kombinovani, oprani vodom tri puta i zasićenim slanim rastvorom, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrani, i koncentrovani u vakuumu. Sirovi proizvod je triturisan etrom da bi se dobio terc-butil 4-(3-amino-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (19.5 g, 45.6 mmol, 99%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 428.1 (MH<+>), 1.02 min.
Faza 6. Terc-butil 4-(3-amino-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat [0480] Rastvoru terc-butil 4-(3-amino-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (11 g, 25.7 mmol) u DCM (100 mL) i MeOH (100 mL) na sobnoj temperaturi dodat je Pd/C (5 g, 25.7 mmol) (10% u ugljeniku, vlažno). Rezultujuća smeša je vakuumirana, i zatim ponovo napunjena vodonikom. Postupak je ponovljen tri puta. Zatim je reakcija mešana na sobnoj temperaturi pod H2atmosferom tokom 6 h. Katalizator je otfiltriran kroz celit®, i opran sa DCM. Filtrat je koncentrovan, i ostatak je rastvoren u DCM (60 mL), filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc/heptan da bi se dobio terc-butil 4-(3-amino-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (8.18 g, 19.04 mmol, 74%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 430.2 (MH<+>), 0.99 min; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.98 - 7.82 (m, 2 H), 7.71 - 7.49 (m, 2 H), 6.13 (s, 2 H), 3.85 (s, 4 H), 3.30 (s, 1 H), 2.77 - 2.55 (m, 1 H), 2.48 (dt, J = 3.62, 1.91 Hz, 2 H), 1.88 - 1.65 (m, 6 H), 1.63 - 1.46 (m, 10 H).
Faza 7. Terc-butil 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0481] U terc-butil 4-(3-amino-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (14.34 g, 33.4 mmol) dodat je acetonitril (250 mL), voda (160 mL) i zatim 3 M vodeni rastvor HCl (55.6 mL, 167 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25°C tokom 30 min i praćena je pomoću LCMS. Smeša je učinjena baznom sa 2 M vodenim rastvorom NaOH uz mešanje do pH 9. Svetlo žuta čvrsta supstanca se staložila. Acetonitril je uklonjen pod sniženim pritiskom na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca je filtrirana i oprana vodom (2 X 30 mL), i osušena pod visokim vakuumom preko noći da bi se dobio terc-butil 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (12 g, 31.1 mmol, 93%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 386.1 (MH<+>), 0.89 min; 1H NMR (400 MHz, ACETONITRIL-d3) δ ppm 8.05 - 7.89 (m, 2 H) 7.73 - 7.51 (m, 2 H), 5.14 (br. s., 2 H), 3.30 - 3.08 (m, 1 H), 2.64 - 2.48 (m, 2 H), 2.40 (br. s., 2 H), 2.30 - 2.17 (m, 2 H), 2.12 - 1.99 (m, 2 H), 1.96 (dt, J = 4.99, 2.40 Hz, 4 H), 1.61 (s, 9 H).
Faza 8. Terc-butil 4-(3-amino-6-(4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0482] Rastvor terc-butil 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (9 g, 23.35 mmol) u metanolu (125 mL) i THF (125 mL) je ohladjen do -78<o>C, i zatim je NaBH4(2.297 g, 60.7 mmol) dodat u porcijama. Reakciona smeša je zatim mešana na -78<o>C tokom 40 min, i LCMS je pokazala da je reakcija završena. Nešto prekomerno redukovanog proizvoda je primećeno. Odnos trans u cis je oko 8:1. Polako je dodato 100 mL zas. NH4Cl na -78°C, i zatim je smeša postepeno zagrejana do sobne temperature. Reakciona smeša je kvenčovana zasićenim NaHCO3, i ekstrahovana sa EtOAc (2 X 200 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad Na2SO4, filtrani, koncentrovani i osušeni pod visokim vakuumom da bi se dobio terc-butil 4-(3-amino-6-(4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (8.9 g, 22.97 mmol, 98%), koji je korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 388.2 (MH<+>), 0.86 min.
Faze 9 i 10.4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0483] Terc-butil 4-(3-amino-6-(4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (8.8 g, 22.71 mmol) je rastvoren u THF (100 mL), a zatim su dodati TBDMSCl (8.22 g, 54.5 mmol) i imidazol (5.57 g, 82 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (150 mL), oprana vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad Na2SO4, filtrana, i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% smeše rastvarača aceton/DCM (10% aceton/DCM u DCM, 10 do 50 %, 40 min trajanja, kolona od 320 g silika gela) da bi se dobilo terc-butil 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (7.7 g, 15.35 mmol, 67.6%). LCMS (m/z): 502.3 (MH<+>), 0.96 min. Rastvor terc-butil 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (7.789 g, 15.52 mmol) u 4 N HCl u dioksanu je mešan na sobnoj temperaturi tokom 48 h. Reakciona smeša je koncentrovana. U svetlo žuti ostatak dodato je 50 mL Et2O, sonifikovan je tokom 15 min, filtriran, opran sa 15 mL Et2O dvaput, i osušen pod vakuumom tokom 2 h da bi se dobila 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (11, 6.0 g, 15.99 mmol, 100% prinosa) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 332.0 (MH<+>, kiselina), 0.48 min; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.06 - 7.79 (m, 2 H).7.69 - 7.50 (m, 2 H), 3.63 -3.30 (m, 3 H) 2.62 - 2.50 (m, 1 H), 1.97 -1.71 (m, 4 H), 1.34 - 1.11 (m, 2 H), 1.63 - 1.42 (m, 2 H), ,
Faza 11. 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0484] 4-(3-Amino-6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoevoj kiselini (670 mg, 2.022 mmol) u DMF (16.80 mL) dodat je aza-HOBt (413 mg, 3.03 mmol), EDC (581 mg, 3.03 mmol), DIEA (1.059 mL, 6.07 mmol) i (S)-2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etanol hidrohlorid (547 mg, 2.022 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. LCMS je ukazala na proizvod. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc, oprana zasićenim NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad Na2SO4, filtrana, i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc (koji sadrži 10% MeOH)/heptan da bi se dobio 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid (920 mg, 1.66 mmol, 82%). LCMS (m/z): 547/549 (MH<+>), 0.72 min; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.74 (dd, J = 1.9, 7.9 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.81 - 7.70 (m, 1H), 7.68 - 7.55 (m, 2H), 7.52 - 7.39 (m, 2H), 7.30 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 6.11 (s, 2H), 5.09 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 4.58 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.69 (dt, J = 2.4, 5.8 Hz, 2H), 3.49 - 3.40 (m, 1H), 2.55 (t, J = 3.5 Hz, 1H), 1.98 - 1.76 (m, 4H), 1.55 (dd, J = 2.8, 12.6 Hz, 2H), 1.29 (d, J = 13.6 Hz, 2H).
Sinteza (S)-N-(2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamida
[0485]
Šema 65
Faza 1. (S)-terc-butil (1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamat
[0486] U smešu (s)-2-amino-2-(3-hlorofenil)etanola (4 g, 19.22 mmol) u THF (64.1 mL) dodat je NaHCO3(1.776 g, 21.15 mmol), a nakon toga Boc2O (4.91 mL, 21.15 mmol) i DMAP (0.235 g, 1.922 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći. LCMS je pokazala da reakcija nije završena. Dodat je TEA (5.36 mL, 38.4 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Dodata je voda, i reakciona smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc. Organski sloj je opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc/heptan da bi se dobio (S)-terc-butil (1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamat (4.0 g, 14.72 mmol, 77%). LCMS (m/z): 216.1 (MH<+>-56), 0.75 min.
Faza 2. N-metil-2-nitrobenzensulfonamid
[0487] Rastvor 2-nitrobenzen-1-sulfonil hlorida (4 g, 18.05 mmol) u DCM (60.2 mL) je ohladjen do 0°C pomoću kupatila sa ledenom vodom. Dodat je TEA (7.55 mL, 54.1 mmol) i 2 M metilamin u tetrahidofuranu (13.54 mL, 27.1 mmol). Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 6 h. Reakciona smeša je razblažena sa DCM, oprana zas. NaHCO3(2 x 100 mL), zasićenim slanim rastvorom (100 mL) i zatim osušena iznad magnezijum sulfata. Rastvor je filtriran pre koncentrovanja pod sniženim pritiskom, i triturisan etrom da bi se dobio N-metil-2-nitrobenzensulfonamid (3.12 g, 14.44 mmol, 80% prinosa). LCMS (m/z): 217.1 (MH<+>), 0.53 min.
Faza 3. (S)-terc-butil (1-(3-hlorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-karbamat
[0488] N-metil-2-nitrobenzensulfonamid (3.50 g, 16.19 mmol) u THF (56.6 mL) dodat je (S)-tercbutil (1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamat (4 g, 14.72 mmol) i tributilfosfin (3.87 g, 19.14 mmol). Zatim je polako dodat (E)-di-terc-butil diazen-1,2-dikarboksilat (3.29 g, 19.14 mmol) u THF (56.6 mL) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. LCMS je pokazala da je nešto polaznog materijala preostalo. Reakcija je razblažena sa EtOAc, opran zas. NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad Na2SO4, filtrana, i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc/heptan da bi se dobio (S)-terc-butil (1-(3-hlorofenil)-2-(N-metil-2-itrofenilsulfonamido)etil)karbamat (7 g, 14.9 mmol, 100%). LCMS (m/z): 370.1 (MH<+>-100), 1.05 min.
Faza 4. (S)-N-(2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamid
[0489] (S)-terc-Butil (1-(3-hlorofenil)-2-(N-metil-2-itrofenilsulfonamido)etil)karbamatu (7 g, 14.9 mmol) u DCM (149 mL) dodata je HCl (4 M u dioksanu) (14.90 mL, 59.6 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. LCMS je pokazala da je reakcija završena. Beli talog je otfiltriran i dobro opran sa DCM da bi se dobilo 2.8 g (S)-N-(2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamida kao HCl so. Ostatak je uparen do suva, i mešan u DCM (20 mL) tokom 30 min. Čvrsta supstanca je filtrirana i dobro oprana sa DCM da bi se dobilo dodatnih 400 mg (S)-N-(2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamida koji je dao ukupni prinos od 52.9% sa 95% čistoće. LCMS (m/z): 370.1 (MH<+>-100), 0.67 min;<1>H NMR (500 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8.09 - 7.99 (m, 1H), 7.92 - 7.77 (m, 3H), 7.60 (s, 1H), 7.53 - 7.35 (m, 3H), 4.74 - 4.62 (m, 1H), 3.93 (dd, J=9.0, 14.7 Hz, 1H), 3.53 (dd, J = 5.4, 14.8 Hz, 1H), 2.98 (s, 3H).
Primer 176
Sinteza (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida
[0490]
Šema 66
Faza 1. Terc-butil 4-(3-amino-6-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0491] Rastvoru terc-butil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (21 g, 57.0 mmol) u DME (127 mL) dodat je PdCl2(dppf).CH2Cl2adukt (2.329 g, 2.85 mmol), 2-(cikloheks-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (13.18 g, 62.7 mmol), i 2 M vodeni rastvor Na2CO3(63.4 mL). Reakcija je zagrevana na 110°C tokom 16 h. U reakcionu smešu dodato je 200 mL etil acetata, oprana je vodom (2 x 100 mL), zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc/DCM da bi se dobio terc-butil 4-(3-amino-6-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (18 g, 48.5 mmol, 85%). LCMS (m/z): 372.3 (MH<+>), 0.95 min.
Faza 2. Terc-butil 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0492] U suspenziju terc-butil 4-(3-amino-6-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (15 g, 40.4 mmol) u MeOH (800 mL) dodavan je DCM (100 mL) dok suspenzija nije postala homogeni rastvor. Posle degaziranja strujom N2tokom 15 min, dodata je Pd/C (10 g, 9.40 mmol) u reakcionu smešu. Ova smeša je opremljena balonom sa vodonikom nakon što je isprana vodoničnim gasom tri puta. Reakciona smeša je mešana tokom 6 h. Nakon što je reakciona smeša filtrirana kroz čep od celit<®>, isparljivi materijali su uklonjeni u vakuumu. Ostatak je rastvoren u MeOH (200 mL) zagrevanjem i hladjenjem do sobne temperature i stajanjem preko noći. Smedji talog je filtran, što je dalo 4.5 g terc-butil 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata. Flitrat je koncentrovan i rastvoren u EtOH (200 mL) zagrevanjem. Drugi smedji talog je filtran da bi se dobilo 3.9 g terc-butil 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (kombinovani prinos 55.7%). LCMS (m/z): 374.7 (MH<+>), 0.90 min.
Faza 3.4-(3-Amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0493] Rastvoru terc-butil 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (4.5 g, 12.05 mmol) u DCM (60.3 mL) dodat je TFA (60.3 mL). Reakciona smeša je mešana tokom 2 h. Posle razblaživanja toluenom (30 mL), isparljivi materijali su uklonjeni u vakuumu dvaput da bi se dobila 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (5.2 g, 12.06 mmol, 100%) u vidu soli TFA. Sirovi proizvod korišćen je u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 318.5 (MH<+>), 0.55 min.
Faza 4. (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamid
[0494] Rastvoru 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (1.55 g, 4.88 mmol) u DMF (16.28 mL) dodat je HOAt (0.997g, 7.33 mmol), EDC (1.498 g, 7.82 mmol), DIEA (2.61 m l, 14.65 mmol) i (S)-N-(2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamid (2.084 g, 5.13 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h, i LCMS je pokazala da je reakcija završena. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc, i organska supstanca je oprana zas.Na2CO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad Na2SO4, filtrana, i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 50% DCM/EtOAc (10% metanol) da bi se dobio (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamid (2.68 g, 4.01 mmol, 82%). LCMS: 669.1 (MH<+>), 0.95 min.
Faza 5. (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamid
[0495] Rastvoru (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamida (2.68 g, 4.01 mmol) u DMF (20 mL) dodata je 4-merkaptobenzoeva kiselina (1.235 g, 8.01 mmol) i K2CO3(2.214 g, 16.02 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 40<o>C preko noći pod azotom. Dodata je voda (50 mL), i smeša je postala homogena. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, a zatim je voda polako dodata (150 mL). Svetlo žuta čvrsta supstanca je staložena. Smeša je mešana tokom još 30 min, i suspenzija je otfiltrirana. Čvrsta supstanca je dobro oprana vodom, a nakon toga heptanom, i osušena na vazduhu tokom 1 h. Čvrsta supstanca je suspendovana u vodi i mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i zatim filtrirana. U čvrstu supstancu je dodat EtOAc, i polako je rotirana na uredjaju rotavap da bi se uklonio višak etil acetata do oko 20 mL preostalog EtOAc, bela čvrsta supstanca je filtrirana, i ponovo rastvorena u acetoniltrilu i vodi, osušena zamrzavanjem. Rastvor je osušen na liofilizatoru da bi se dobilo (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamid (1.31 g, 2.69 mmol, 67.2%). LCMS (m/z): 484.3 (MH<+>), 0.66 min;<1>H NMR (500 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7.90 (s, 1H), 7.83 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 1.1, 8.0 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.38 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 7.32 (dt, J = 1.9, 4.6 Hz, 1H), 5.33 (dd, J = 5.2, 9.0 Hz, 1H), 4.05 (dd, J = 3.5, 11.0 Hz, 2H), 3.57 (dt, J = 1.9, 11.8 Hz, 2H), 3.12 - 3.04 (m, 1H), 3.04 - 2.88 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 1.89 - 1.88 (m, 1H), 1.96 - 1.76 (m, 4H).
Sinteza (S)-terc-butil 2-amino-2-feniletilkarbamata
[0496]
[0497] Prateći šemu 9, korišćenjem (R)-2-amino-1-feniletanola, dobijen je (S)-terc-butil 2-amino-2-feniletilkarbamat sa 47% prinosa. LCMS (m/z): 237.5 (MH<+>), 0.54 min.<1>H NMR (400MHz,CDCl3) δ ppm 7.42 - 7.32 (m, 5 H), 4.81 (br. s., 1 H), 4.11 - 4.00 (m, 1 H), 3.44 - 3.28 (m, 1 H), 3.28 - 3.13 (m, 1 H), 1.49 - 1.35 (m, 9 H).
Sinteza (S)-2-fluoro-1-feniletanamina
[0498]
Šema 67
Faza 1. (S)-2-(2-hidroksi-1-feniletil)izoindolin-1,3-dion
[0499] Rastvoru (S)-2-amino-2-feniletanola (3 g, 21.87 mmol) u vodi (26.5 mL), i acetonitrilu (46.4 mL) dodat je 2,5-dioksopirolidin-1-il metil ftalat (5.76 g, 20.78 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Nakon toga, acetonitril je uklonjen u vakuumu, reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa EtOAc. Organska supstanca je oprana vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrana, i koncentrovana u vakuumu dajući (S)-2-(2-hidroksi-1-feniletil)izoindolin-1,3-dion (2.2 g, 40%). LCMS (m/z): 268 (MH<+>), 0.79 min.
Faza 2. (S)-2-(2-fluoro-1-feniletil)izoindolin-1,3-dion
[0500] Rastvoru (S)-2-(2-hidroksi-1-feniletil)izoindolin-1,3-diona (1.5 g, 5.61 mmol) u PhCF3(18.71 mL) dodat je trietilamin trihidrofluorid (5.48 mL, 33.7 mmol), perfluorobutansulfonil fluorid (1.019 mL, 5.67 mmol), DIEA (14.70 mL, 84 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, zatim je dodato još perfluorobutansulfonil fluorida (1.019 mL, 5.67 mmol). Posle 5 h, reakciona smeša je kvenčovana sa NaHCO3i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su oprani vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrani, i koncentrovani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0-10% EtOAC u heptanu) dajući (S)-2-(2-fluoro-1-feniletil)izoindolin-1,3-dion (30% prinosa). LCMS (m/z): 270.1 (MH<+>), 0.96 min.
Faza 3. (S)-2-fluoro-1-feniletanamin
[0501] Rastvoru (S)-2-(2-fluoro-1-feniletil)izoindolin-1,3-diona (290 mg, 1.077 mmol) u MeOH (3.59 mL) dodat je hidrazin (0.507 mL, 16.15 mmol). Reakciona smeša je mešana na 80°C tokom 3 h. Beli talog je filtran. Filtrat je koncentrovan da bi se dobio sirovi (S)-2-fluoro-1-feniletanamin, koji je korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 140.1 (MH<+>), 0.28 min; 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.43 - 7.34 (m, 4 H), 7.34 - 7.27 (m, 1 H), 4.57 (dd, J = 3.7, 8.8 Hz, 1 H), 4.49 - 4.38 (m, 1 H), 4.38 - 4.32 (m, 1H), 4.32 - 4.25 (m, 1 H).
Sinteza (S)-2-azido-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etanamina
[0502]
Šema 68
Faza 1. (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)karbamat
[0503] Rastvoru (S)-2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etanola (4.4 g, 16.26 mmol) u DCM (80 mL) dodat je TEA (6.80 mL, 48.8 mmol) a nakon toga Boc anhidrid (5.32 g, 24.4 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran zasićenim NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtran, i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (gradijent EtOAc u heptanu) da bi se dobio (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)karbamat (4.8 g, 88%). LCMS (m/z): 280 (MH<+>-<t>Bu), 0.79 min.
Faza 2. (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-(3- bromo-5-fluorofenil)etil metansulfonat
[0504] U mešani rastvor (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)karbamata (4.8 g, 14.36 mmol) u anhidrovanom DCM (100 mL) na 0°C dodat je trietilamin (4.00 mL, 28.7 mmol) a nakon toga metansulfonil hlorid (1.343 mL, 17.24 mmol). Reakcija je mešana na 0°C tokom 1 časa, do kog vremena je LCMS pokazala da je reakcija završena. Reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor NaHCO3(100 mL). Smeša je mućkana, slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2 x 50 mL). Kombinovane organske supstance su oprane rastvorom NaHCO3(50 mL) i zasićenim slanim rastvorom (50 mL), osušene (MgSO4), filtrirane i koncentrovan, dajući (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-(3- bromo-5-fluorofenil)etil metansulfonat (5.92 g, 14.36 mmol, 100% prinosa) kao veoma bledo narandžastu čvrstu supstancu.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.75 (d, J=8.83 Hz, 1 H), 7.43 - 7.55 (m, 2 H), 7.31 (d, J=9.46 Hz, 1 H), 4.86 - 5.00 (m, 1 H), 4.30 (dd, J=10.09, 5.04 Hz, 1 H), 4.24 (t, J=9.30 Hz, 1 H), 3.16 - 3.23 (m, 3 H), 1.36 - 1.44 (m, 9 H).
Faza 3. (S)-terc-butil (2-azido-1-(3- bromo-5-fluorofenil)etil)karbamat
[0505] (S)-2-((terc-Butoksikarbonil)amino)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil metansulfonat (5.92 g, 14.36 mmol) je rastvoren u anhidrovanom DMF (60 mL). Natrijum azid (2.80 g, 43.1 mmol) je dodat, i reakcija zagrejana do 70°C i održavana na ovoj temperaturi tokom 2 h. Posle hladjenja, reakciona smeša je sipana u vodu (100 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 80 mL). Kombinovane organske supstance su oprane vodom (50 mL) i zasićenim slanim rastvorom (3 x 50 mL), osušene (MgSO4), filtrirane i koncentrovane. Fleš hromatografija (AnaLogix, kolona 80 g, naneto u DCM, 0 do 40% EtOAc u heptanu tokom 30 min) je dala (S)-terc-butil (2-azido-1-(3- bromo-5-fluorofenil)etil)karbamat (4.29 g, 11.94 mmol, 83 % prinosa) kao belu čvrstu supstancu. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.73 (d, J=8.83 Hz, 1 H), 7.48 (t, J=4.26 Hz, 2 H), 7.29 (d, J=9.77 Hz, 1 H), 4.80 (d, J=8.20 Hz, 1 H), 3.47 (d, J=7.88 Hz, 2 H), 1.44 - 1.38 (m, 9 H), 1.36 (br. s., 1 H).
Faza 4. (S)-2-azido-1-(3- bromo-5-fluorofenil)etanamin
[0506] U mešani rastvor (S)-terc-butil (2-azido-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)karbamata (3.15 g, 8.77 mmol) u dioksanu (40 mL) dodata je hlorovodonična kiselina (10.96 mL, 43.8 mmol) (4N rastvor u dioksanu). Reakcija je zagrevana do 40°C i održavana na ovoj temperaturi tokom 2 h. Posle hladjenja reakciona smeša je uparena do suva, dajući (S)-2-azido-1-(3- bromo-5-fluorofenil)etanamin hidrohlorid (2.59 g, 8.76 mmol, 100% prinosa) kao belu čvrstu supstancu.
Sinteza (S)-2-azido-1-(3-hloro-5-fluorofenil)etanamina
[0507]
[0508] Prateći šemu 68, korišćenjem (S)-2-amino-2-(3-hloro-5-fluorofenil)etanola, dobijen je (S)-2-azido-1-(3-hloro-5-fluorofenil)etanamin. LCMS (m/z): 215.1 (MH<+>), 0.48 min.
Sinteza (S)-2-azido-1-(3-hlorofenil)etanamina
[0509]
[0510] Prateći šemu 68, korišćenjem (S)-2-amino-2-(3-hlorofenil)etanola, dobijen je (S)-2-azido-1-(3-hloro-5-fluorofenil)etanamin. LCMS (m/z): 197 (MH<+>), 0.5 min.
Sinteza (S)-3-fenilmorfolina
[0511]
Šema 69
Faza 1. (S)-2-hloro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)acetamid
[0512] Rastvoru (S)-2-amino-2-feniletanola (0.852 g, 6.21 mmol), Et3N (0.952 mL, 6.83 mmol), DMAP (76 mg, 0.621 mmol) u CH2Cl2(10 mL) na 0°C dodat je 2-hloroacetil hlorid (0519 mL, 6.52 mmol), i rezultujuća smeša je mešana na 0°C tokom 15 min.
[0513] Reakciona smeša je oprana vodenim rastvorom HCl (1 M, 20 mL), zatim zas. NaHCO3(20 mL), osušena (Na2SO4), koncentrovana, dodatno osušena pod visokim vakuumom i dobijen je (S)-2-hloro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)acetamid (0.60 g, 45.2% prinosa) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 214 (MH<+>), 0.44 min.
Faza 2. (S)-5-fenilmorfolin-3-on
[0514] Rastvoru (S)-2-hloro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)acetamida (600 mg, 2.8 mmol) u rastvoru anhidrovanog THF na 0°C dodata je NaH suspenzija mineralnog ulja (247 mg, 6.18 mmol). Rezultujuća smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je koncentrovana do suva, i ostatak je raspodeljen izmedju smeše CH2Cl2/zasićeni slani rastvor/H2O (20 mL/18 mL/2 mL). Sloj CH2Cl2je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtran, koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod, (S)-5-fenilmorfolin-3-on, je dobijen kao bela čvrsta supstanca (498 mg, 97%). Sirovi proizvod je korišćen neposredno u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 178.2 (MH<+>), 0.47 min.
Faza 3. (S)-3-fenilmorfolin
[0515] U gustu suspenziju LiAlH4/THF (0.47g/2 mL) dodavan je u kapima (S)-5-fenilmorfolin-3-on u rastvoru THF (481 mg u 6mL) na sobnoj temperaturi tokom 5 min. Rezultujuća smeša je mešana na sobnoj temperaturi nakon toga tokom 1 časa, zatim je zagrevana pomoću uljanog kupatila na 72°C preko noći, zatim je ohladjena do 0°C, kvenčovana uzastopnim dodavanjem H2O (0.47 mL), 3M vodenog rastvora NaOH (0.47 mL) i H2O (1.4 mL), i kvenčovani ostatak je razblažen sa Et2O (30 mL), mešan tokom 10 min i etarski rastvor je izdvojen filtracijom. Filtrat je koncentrovan, dodatno osušena pod vakuumom i (S)-3-fenilmorfolin (424 mg, 96% prinosa) je dobijen kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 164.2 (MH<+>), 0.33 min.
Sinteza (S)-terc-butil (2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)(metil)karbamata
[0516]
Šema 70
Faza 1. (R)-1-(3-hlorofenil)-2-(metilamino)etanol
[0517] (R)-terc-butil (2-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamat (2.48g, 9.13 mmol), pripremljen na šemi 9, rastvoren je u THF (30.4 mL), i dodat je LiAlH4(1.039 g, 27.4 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na refluksu tokom 6 h i zatim ohladjena. Dodata je voda (1.06 mL), a nakon toga vodeni rastvor NaOH (15%, 3 mL), i voda (1.06 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Čvrsti talog je filtriran kroz celit<®>i dobro ispran sa EtOAc. Filtrat je koncentrovan.
Sirovi proizvod (R)-1-(3-hlorofenil)-2-(metilamino)etanol (1.75 g, 9.43 mmol, 100%) je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 186.1 (MH<+>), 0.43 min.
Faza 2. (R)-terc-butil (2-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)(metil)karbamat
[0518] (R)-1-(3-hlorofenil)-2-(metilamino)etanol (1.75 g, 9.43 mmol) je rastvoren u THF (31.4 mL), i zatim je dodat Boc anhidrid (2.298 mL, 9.90 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. LCMS je pokazala da je reakcija završena. Reakciona smeša je koncentrovana, i prečišćena pomoću fleš hromatografije da bi se dobio (R)-terc-butil (2-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)(metil)karbamat (2.0 g, 7.00 mmol, 74.3%). LCMS (m/z): 212.1 (MH<+>-56), 0.94 min.
Faza 3. (S)-terc-butil (2-(3-hlorofenil)-2-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)etil)(metil)karbamat
[0519] U smešu (R)-terc-butil (2-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)(metil)karbamata (2.0 g, 7.00 mmol) u THF (23.33 mL) dodat je ftalimid (1.339 g, 9.10 mmol) i PPh3(3 mmol PPh3/1 g smole, 2.34 g, 7.02 mmol). Zatim je polako dodat DTBAD (1.660 g, 7.21 mmol) u THF na sobnoj temperaturi, i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit<®>i oprana sa EtOAc. Filtrat je koncentrovan, ponovo rastvoren u EtOAc, opran sa zas. Na2CO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtran, i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobio (S)-terc-butil (2-(3-hlorofenil)-2-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)etil)(metil)karbamat (1.96 g, 4.72 mmol, 67.5%). LCMS (m/z): 315.1 (MH<+>-100), 1.19 min.
Faza 4. (S)-terc-butil (2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)(metil)karbamat
[0520] Rastvoru (S)-terc-butil (2-(3-hlorofenil)-2-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)etil)(metil)karbamata (1.96 g, 4.72 mmol) u etanolu (15.75 mL) dodat je hidrazin hidrat (2.296 mL, 47.2 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 60°C tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana kroz čep od celita i filtrat je koncentrovan. Ostatak je ponovo rastvoren u etanolu i filtriran kroz čep od celit<®>da bi se uklonio višak bele čvrste supstance. NMR je pokazala nečistoće u sirovom materijalu. Sirovi proizvod je filtriran kroz šep od silike, opran sa DCM/EtOAc (odnos 2:1) i ispran sa DCM/EtOAc (20% metanola, 0.5 % NH3u metanolu) (odnos 1:1) da bi se dobio (s)-terc-butil (2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)(metil)karbamat (1.2 g, 89% prinosa). LCMS (m/z): 285.1 (MH<+>), 0.65 min;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.37 (s, 1H) 7.26 ( 3H), 4.20 (br. s., 1H), 2.85- 2.77 (m, 3H), 1.51 - 1.38 (m, 9H).
Sinteza (S)-2-amino-4-ciklopropilbut-3-in-1-ol
[0521]
Šema 71
Faza 1. (S)-N-((S)-1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-4-ciklopropilbut-3-in-2-il)-2-metilpropan-2-sulfinamid
[0522] 3.0 M Etil magnezijum bromida u Et2O (0.360 mL, 1.081 mmol) dodato je rastvoru etinilciklopropana (71.5 mg, 1.081 mmol) u THF ( 4 mL). Rastvor je zagrevan do 50°C tokom 1 h, zatim je rezultujući Grinjar dodat u rastvor (S,E)-N-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etiliden)-2-metilpropan-2-sulfinamida (100 mg, 0.360 mmol) u DCM (4.00 mL) na -78°C, i reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature. Posle 3h, reakcija je kvenčovana zas. vod. rastv. NH4Cl. Slojevi su razdvojeni i organske faze su osušene iznad magnezijum sulfata i koncentrovane da bi se dobio (S)-N-((S)-1-((terc-butildimetilsilil)oksi)-4-ciklopropilbut-3-in-2-il)-2-metilpropan-2-sulfinamid, koji je korišćen neposredno. LCMS (m/z): 344.1 (MH<+>), 1.23 min.
Faza 2. (S)-2-amino-4-ciklopropilbut-3-in-1-ol
[0523] 4.0 N HCl u dioksanu (0.873 mL, 3.49 mmol) dodata je u rastvor (S)-N-((S)-1-((tercbutildimetilsilil)oksi)-4-ciklopropilbut-3-in-2-il)-2-metilpropan-2-sulfinamida (120 mg, 0.349 mmol) u MeOH (4 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 30 min, reakcija je koncentrovana, zatim je obrazovan azeotrop sa benzenom da bi se dobio (S)-2-amino-4-ciklopropilbut-3-in-1-ol kao HCl so. LCMS (m/z): 126.2 (MH<+>), 0.50 min.
Sinteza (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(metiltio)fenil)etanola
[0524]
Šema 72
Faza 1: (S)-terc-butil 4-(3-fluoro-5-(metiltio)fenil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksilat
[0525] Smeša ksantfosa (13.91 mg, 0.024 mmol), Pd2(dba)3(22.02 mg, 0.024 mmol), (S)-terc-butil 4-(3-bromo-5-fluorofenil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksilata (300 mg, 0.802 mmol), DIEA (700 µl, 4.01 mmol) i natrijum metantiolata (112 mg, 1.603 mmol) u toluenu (2.6 mL) je zagrevana mikrotalasima na 110°C tokom 18 min. Dodat je EtOAc, smeša je oprana zasićenim NaHCO3, vodom, i zasićenim slanim rastvorom. Smeša je filtrana, koncentrovana i prečišćena fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-60% EtOAc/heptan da bi se dobio (S)-terc-butil 4-(3-fluoro-5-(metiltio)fenil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksilat (278 mg, 102%) u vidu ulja. LCMS (m/z): 286.1 (MH<+>-56), 1.14 min.
Faza 2: (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(metiltio)fenil)etanol
[0526] Rastvor (S)-terc-butil 4-(3-fluoro-5-(metiltio)fenil)-2,2-dimetiloksazolidine-3-karboksilata (278 mg, 0.814 mmol) u 4 M HCl u dioksanu (2.4 mL) je zagrevan do 80°C preko noći. Posle toga je preostalo nešto polaznog materijala. Dodato je još 4 M HCl u dioksanu (2.035 mL, 8.14 mmol), i smeša je zagrevana na 80°C tokom dodatnih 10 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim vakuumom da bi se dobio (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(metiltio)fenil)etanol (194 mg, 0.814 mmol, 100%). LCMS (m/z): 170.1 (MH<+>-56), 0.26 min.
Sinteza (S)-2-amino-2-(3-(metiltio)fenil)etanola
[0527]
[0528] Prateći šemu 72, korišćenjem (S)-terc-butil 4-(3-bromofenil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksilata, dobijen je (S)-2-amino-2-(3-(metiltio)fenil)etanol. LCMS (m/z): 184 (MH<+>), 0.41 min.
Sinteza (S)-2-amino-2-(3-(hlorometil)-5-fluorofenil)etanola
[0529]
Šema 73
Faza 1. (S)-terc-butil 4-(3-(hlorometil)-5-fluorofenil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksilat
[0530] Rastvoru (S)-terc-butil 4-(3-fluoro-5-(hidroksimetil)fenil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksilata (330 mg, 1.014 mmol) u anhidrovanom DMSO (2. 028 mL) dodat je 2,4,6-trihloro-1,3,5-triazin (112 mg, 0.609 mmol) u porcijama. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Smeša je razblažena sa EtOAc, i razdvojena. Organska faza je oprana sa H2O (5 × 30 mL), osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, filtrana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc/heptan da bi se dobio (S)-terc-butil 4-(3-(hlorometil)-5-fluorofenil)-2,2-dimetiloksazolidin-3-karboksilat (329 mg, 94%). LCMS (m/z): 288.1 (MH<+>-56), 1.12 min.
Faza 2: (S)-2-amino-2-(3-(hlorometil)-5-fluorofenil)etanol
[0531] Rastvoru (S)-terc-butil 4-(3-(hlorometil)-5-fluorofenil)-2,2-dimetiloksazolidine-3-karboksilata (140 mg, 0.407 mmol) u anhidrovanom DCM (1.357 mL) dodata je 4 N HCl u dioksanu (1.018 mL, 4.07 mmol) u porcijama. Smeša je refluksovana na 80°C preko noći. Reakcija nije završena. Dodato je još 4N HCl u dioksanu (1. 018 mL, 4.07 mmol), i smeša je refluksovana tokom još 24 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim vakuumom da bi se dobio (S)-2-amino-2-(3-(hlorometil)-5-fluorofenil)etanol (70 mg, 84%). LCMS (m/z): 204 (MH<+>), 0.41 min.
Sinteza (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)etanola
[0532]
Šema 74
Faza 1. (3-bromo-5-fluorofenil)metanol
[0533] U suspenziju 3-bromo-5-fluorobenzoeve kiseline (4.51 g, 20.59 mmol) u THF (41.2 mL) na 0<o>C, BH3.THF (41.2 mL, 41.2 mmol) dodavan je u kapima tokom 30 min, reakciona smeša je zatim ostavljena da se prilagodi sobnoj temperaturi i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Metanol (40mL) je dodat polako i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. THF i metanol su uklonjeni u vakuumu. Ostatak je zatim ekstrahovan sa EtOAc, i opran sa zas.NaHCO3, organska supstanca je osušena i koncentrovana. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 187.2 (MH<+->18), 0.66 min.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.32 (s, 1H), 7.19 - 7.14 (m, 1H), 7.05 (tdd, J=0.7, 1.5, 9.1 Hz, 1H), 4.70 (br. s., 2H), 1.78 (br. s., 1H).
Faza 2.1-bromo-3-fluoro-5-(fluorometil)benzen
[0534] Rastvoru (3-bromo-5-fluorofenil)metanola (4 g, 19.51 mmol) u DCM (39.0 mL) na 0<o>C, dodat je DAST (3.35 mL, 25.4 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se prilagodi sobnoj temperaturi i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodat je zas. NaHCO3, reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa DCM. Organska supstanca je osušena i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom (0-10% EtOAc/heptani) da bi se dobio finalni proizvod kao bezbojno ulje. LCMS (m/z): nema mase (MH<+>), 0.86 min.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.30 (s, 1H), 7.23 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.03 (d, J=8.6 Hz, 1H), 5.41 (s, 1H), 5.29 (s, 1H).
Faza 3.3-fluoro-5-(fluorometil)benzaldehid
[0535] 1-bromo-3-fluoro-5-(fluorometil)benzen (1.30 g, 6.28 mmol) je rastvoren u THF (31.4 mL), zatim je ohladjen do -78<o>C, butillitijum (2.5M u heksanima) (2.76 mL, 6.91 mmol) je dodat na -78<o>C, reakciona smeša je zatim mešana na -78<o>C tokom 30 min. Dodat je DMF (0.972 mL, 12.56 mmol), posle mešanja na -78<o>C tokom 1h, reakciona smeša je kvenčovana sa HCl i reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa EtOAc, organska supstanca je osušena i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi materijal je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): nema mase (MH<+>), 0.60 min.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 10.08 - 9.93 (m, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.56 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.37 (d, J=7.8 Hz, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.42 (s, 1H)
Faza 4. (R,E)-N-(3-fluoro-5-(fluorometil)benziliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid
[0536] Rastvoru 3-fluoro-5-(fluorometil)benzaldehida (890 mg, 5.70 mmol) i (R)-2-metilpropan-2-sulfinamida (760 mg, 6.27 mmol) u DCE (19.0 mL) dodat je bakar (II) sulfat (anhidrovani) (1.820 g, 11.40 mmol), suspenzija je mešana pod azotom na 60<o>C u uljanom kupatilu preko noći. Suspenzija je dobila svetlo plavu boju. Ohladjena, reakciona smeša je filtrirana kroz čep od celita i isprana sa DCM, filtrat je koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0-30% EtOAc u heptanu) da bi se dobio (R,E)-N-(3-fluoro-5-(fluorometil)benziliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid (900 mg, 60.9% prinosa) kao svetlo žuto ulje.
LCMS (m/z): 260.1 (MH<+>), 0.88 min.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8.57 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.56 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.22 (m, 1H), 5.50 (s, 1H), 5.38 (s, 1H), 1.29 - 1.23 (m, 9H)
Faza 5. (R)-N-((R)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)alil)-2-metilpropan-2-sulfinamid
[0537] Dimetil cink (2M u tolunu) (0.434 mL, 0.868 mmol) i vinilmagnezijum bromid (1M u THF) (4.51 mL, 4.51 mmol) su mešani na sobnoj temperaturi tokom 20 min pod argonom pre hladjenja do -78<o>C, zatim je dodat (R,E)-N-(3-fluoro-5-(fluorometil)benziliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid (0.900 g, 3.47 mmol) u suvom THF (11.57 mL) u kapima, uz održavanje unutrašnje temperature izmedju -74<o>C u -72<o>C, posle dodavanja, reakciona smeša je mešana na -78<o>C tokom 1h, reakcija je kvenčovana dodavanjem zas. NH4Cl, THF je uklonjen u vakuumu, zatim je smeša ekstrahovana sa EtOAc. Organska supstanca je oprana vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0-30% EtOAc/heptanatan) da bi se dobilo 660 mg proizvoda, LCMS (m/z): 288.0 (MH<+>), 0.83 min.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.14 (s, 1H), 7.03 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.07 (d, J=9.4 Hz, 1H), 5.90 (ddd, J=7.4, 10.1, 17.3 Hz, 1H), 5.45 - 5.35 (m, 2H), 5.35 - 5.25 (m, 2H), 5.01 - 4.94 (m, 1H), 3.45 (br. s., 1H), 1.30 - 1.22 (m, 9H)
Faza 6. (R)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)prop-2-en-1-amin
[0538] (R)-N-((R)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)alil)-2-metilpropan-2-sulfinamid (660 mg, 2.297 mmol) u MeOH (7.66 mL), dodat je HCl (4 M u dioksanu) (5.742 mL, 22.97 mmol) na 0<o>C, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana do suva. Dodat je zas. Na2CO3, reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa EtOAc. Organska supstanca je osušena i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 184.1 (MH<+>), 0.40 min.
Faza 7. (R)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)alil)karbamat
[0539] Rastvoru (R)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)prop-2-en-1-amina (421 mg, 2.30 mmol) u DCM (7.6 mL) dodat je Boc2O (640 µl, 2.76 mmol), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0-20% EtOAc/heptan) da bi se dobio (R)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)alil)karbamat. LCMS (m/z): 228.1 (MH<+>-56)), 0.91 min. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.08 (s, 1H), 6.99 (d, J=9.0 Hz, 2H), 5.95 (ddd, J=5.5, 10.6, 16.8 Hz, 1H), 5.42 (s, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.30 - 5.13 (m, 3H), 4.86 (br. s., 1H), 1.44 (s, 9H).
Faza 8. (S)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroksietil)karbamat
[0540] (R)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)alil)karbamat (410 mg, 1.447 mmol) u DCM (14.5 mL) je ohladjen do -78<o>C, Kroz reakcionu smešu je propuštan u mehurićima O3( iz generatora ozona) tokom 5 min. Reakciona smeša je svetlo plave boje, N2je propušten kroz nju u mehurićima da bi se uklonio O3, zatim je dodat NaBH4(547 mg, 14.47 mmol) u etanolu (10 mL), reakciona smeša je mešana na -78<o>C tokom 10 min, zatim ostavljena da se prilagodi sobnoj temperaturi. Posle 30 min, dodat je zas. NH4Cl praćen metanolom, reakciona smeša je koncentrovana, zatim ekstrahovana sa EtOAc. Organska supstanca je oprana sa zas. NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena i koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobio (S)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroksietil)karbamat (223 mg, 54% prinosa). LCMS (m/z): 232.2 (MH<+>-56), 0.73 min.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.10 (s, 1H), 7.02 (d, J=9.4 Hz, 2H), 5.43 (s, 1H), 5.35 - 5.28 (m, 1H), 4.78 (br. s., 1H), 3.95 - 3.78 (m, 2H), 1.44 (br. s., 9H).
Faza 9. (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)etanol
[0541] Rastvoru (S)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroksietil)karbamata (220 mg, 0.766 mmol) u DCM (2.5 mL), dodata je HCl (4M u dioksanu) (1.9 mL 7.66 mmol) na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1h.Reakciona smeša je zatim koncentrovana do suva. Ostatak je rekristalizovan iz DCM i heptana. Čvrsta supstanca je filtrirana i osušen na vazduhu da bi se dobila HCl so (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)etanola (145 mg, 0.908 mmol, 100% prinosa) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 188.2 (MH<+>), 0.32 min.
Primeri 177 i 178
Sinteza 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroksietil)benzamida i 4-(3-amino-6-((1s,4R)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroksietil)benzamida
[0542]
Šema 75
Ċ
Faza 1. Metil 4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0543] U 3-hloropirazin-2-amin (27 g, 208 mmol) u DME (391 mL) i natrijum karbonat (66.3 g, 625 mmol) dodat je metil 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat (64.2 g, 229 mmol) i PdCl2(dppf).CH2Cl2adukt (8.51 g, 10.42 mmol). Reakciona smeša je pročišćena sa N2i zagrejana u uljanom kupatilu na 100°C tokom 3h. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju EtOAc i vode. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Sirovi proizvod je rekristalisan sa EtOAc i heptanom (2:3) da bi se dobio metil 4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat sa 84% prinosa. LCMS (m/z): 248.1 (MH<+>), 0.58 min.
Faza 2. Metil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0544] U suspenziju metil 4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (31.5 g, 127 mmol) u acetonitrilu (430 mL) na 0<o>C dodat je NBS (23.9 g, 134 mmol). Reakciona smeša je mešana u ledenom kupatilu tokom 1 h, dodat je zas. natrijum bikarbonat, smeša je mešana 30 min i proizvod je ekstrahovan etilacetatom. Organski ekstrakti su kombinovani, oprani zasićenim slanim rastvorom, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i upareni. Sirovi proizvod je rekristalisan u EtOAc i heptanu da bi se dobio metil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat kao smeđa čvrsta supstanca sa 96% prinosa. LCMS (m/z): 326.0/328.0 (MH<+>), 0.87 min.
Faza 3. Metil 4-(3-amino-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0545] U rastvor metil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoata ( 10 g, 30.7 mmol) u DME (77 mL) dodat je 4,4,5,5-tetrametil-2-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)-1,3,2-dioksaborolan (9.79 g, 36.8 mmol), PdCl2(dppf).CH2Cl2adukt (1.252 g, 1.533 mmol), H2O (25.6 mL) i zatim najzad natrijum karbonat (9.75 g, 92 mmol). Reakcija je zagrevana na 100°C u uljanom kupatilu tokom 2 h. Reakcija je ohladjena. Reakciona smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc 3 puta, organska supstanca je oprana vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Sirovi materijal je rekristalisan u DCM i heptanu (1:1) da bi se dobio proizvod metil 4-(3-amino-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat sa 75% prinosa. LCMS (m/z): 382.2 (MH<+>), 0.82 min.
Faza 4. Metil 4-(3-amino-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0546] Metil 4-(3-amino-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (6.1 g, 15.83 mmol) je rastvoren u MeOH (150 mL) i EtOAc (80 mL), reakciona smeša je isprana sa N2tokom 15 min, zatim je dodat Pd-C (DEGASSA) (6 g, 5.64 mmol), reakciona smeša je zatim opremljena balonom sa vodonikom i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit, koji je opran sa EtOAc i metanolom. Filtrat je koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod, koji je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 388.0 (MH<+>), 0.79 min.
Faza 5. Metil 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0547] U rastvor metil 4-(3-amino-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (6.2 g, 16.00 mmol) u acetonitrilu (100 mL), vodi (40 mL), dodat je 3M vodeni rastvor HCl (13.34 mL, 80 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša je učinjena baznom sa 6M NaOH (10 mL), zatim je korišćen zas. NaHCO3da bi se pH vrednost podesila na 8. Nakon što je acetonitril uklonjen u vakuumu, suspenzija čvrstog ostatka je filtrirana i oprana vodom i heptanom, osušena na vazduhu da bi se dobio metil 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat kao svetlo žuta čvrsta supstanca sa 67% prinosa. LCMS (m/z): 344.0 (MH<+>), 0.70 min.
Faza 6. Metil 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0548] Rastvoru metil 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (3.25 g, 9.47 mmol) u metanolu (100 mL) i THF (20 mL) na 0°C, dodat je NaBH4(0.358 g, 9.47 mmol). Posle 30 min, polako je dodat zasićen NH4Cl, zatim je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Metanol i THF je uklonjen u vakuumu. Ostatak je ekstrahovan pomoću EtOAc 3 puta, kombinovana organska supstanca je oprana sa NaHCO3i vodom, osušena i koncentrovana. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 346.4 (MH<+>), 0.63 min (trans) i 0.66 min (cis); trans/cis (~4 :1).
Faza 7. 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina i 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0549] U rastvor metil 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (3.25 g, 9.41 mmol) u MeOH (15.68 mL) i THF (15.68 mL) i zatim je dodat 1M vodeni rastvor LiOH (23.53 mL, 23.53 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, i polako je dodata 6 M HCl (3.9 mL ). Metanol i THF je uklonjen u vakuumu, ostatak (žuta suspenzija čvrste supstance ) je filtriran. Čvrsta supstanca je oprana vodom i heptanom, osušena na vazduhu da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 332.1 (MH<+>), 0.49 min (trans) i 0.53 min (cis).
Faza 8. 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroksietil)benzamid i 4-(3-amino-6-((1s,4R)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroksietil)benzamid
[0550] U smešu 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline i 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (19.45 mg, 0.053 mmol) dodat je NMP (0.5 mL), Hunigova baza (0.042 mL, 0.240 mmol) i (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)etanol-HCl (9 mg, 0.048 mmol). Zatim je dodat HATU (36.6 mg, 0.096 mmol). Reakcija je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi, nakon čega je uradjena LCMS. U sirovu reakciju dodat je 0.5 mL NMP, filtrirano, prečišćeno pomoću preparativne HPLC uz izolovanje oba izomera 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroksietil)benzamida kao trans i manje zastupljenog 4-(3-amino-6-((1s,4R)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil) fenil)-2-hidroksietil)benzamida kao cis. Oba proizvoda su osušena zamrzavanjem do TFA soli. Za trans dijastereomer, 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.84 - 7.70 (m, 2 H), 7.64 - 7.47 (m, 2 H), 7.19 (s, 1 H), 7.09 (d, J=9.78 Hz, 1 H), 6.98(d, J=9.00 Hz, 1 H), 5.36 (s, 1 H), 5.24 (s, 1 H), 5.13 (t, J=5.87 Hz, 1 H), 3.87 - 3.70 (m, 2 H), 3.59 -3.45 (m, 1 H), 2.62 - 2.49 (m, 1 H), 2.05 - 1.92 (m, 2 H), 1.91- 1.79 ( m, 2 H), 1.57 (qd, J=12.98 Hz, 2.93 Hz, 2 H), 1.39-1.24 Za cis dijastereomer, 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.93-7.81 (m, 2H) 7.75-7.58 (m, 2H) 7.29 (d, J=9.78 Hz, 1 H), 7.19 (d, J=9.78 Hz, 1H), 7.07 (d, J=9.00 Hz, 1H), 5.45 ( s, 1 H), 5.33 (s, 1 H), 5.22( t, J=5.67 Hz, 1H), 4.01 ( br. s., 1 H), 3.94 -3.77 (m, 2 H), 2.80 – 2.68 ( m, 1 H), 2.12 – 1.96 (m, 2 H) 1.91- 1.80 (m, 2 H), 1.77-1.60 (m, 4 H).
Sinteza (S)-N-(2-amino-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamida
[0551]
Šema 76
Faza 1. Metil 3-amino-5-fluorobenzoat
[0552] 3-bromo-5-fluorobenzoeva kiselina (6.12 g, 33.1 mmol) je rastvorena u MeOH (10 mL) i ohladjena u kupatilu led-voda a zatim je dodat toluen (50 mL) i TMS-diazometan (19.84 mL, 39.7 mmol) u kapima. Reakciona smeša je ostavjena da ponovo dostigne sobnu temperaturu tokom 1 h i koncentrovana u vakuumu i ostatak je rastvoren u smeši DCM/etar i filtriran kroz kratak čep od silike i filtrat uparen u vakuumu da bi se dobio željeni proizvod koji je zatim rastvoren u MeOH (60 mL) i dodato je 3.3 g Pd/C 10 tež.% i smeša je ispražnjena i mešana pod 1 atmosferom vodonika preko noći, i LCMS je pokazala željeni proizvod sledećeg jutra. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i filtrat je koncentrovan u vakuumu i od ostatka je dva puta obrazovan azeotrop sa toluenom i prenet u sledeću fazu kao takav (99%). LCMS (m/z): 211.1 (MH<+>), 0.55 min.
Faza 2. Metil 3-fluoro-5-jodobenzoat
[0553] Metil 3-amino-5-fluorobenzoat je rastvoren u 5.0 N HCl (68.5 mL, 343 mmol) i ohladjen do 0°C. NaNO2(2.51 g, 36.4 mmol) rastvoren u 3.0 mL vode je dodat u kapima. Zatim je KI (6.59 g, 39.7 mmol) rastvoren u 45 mL vode dodavan tokom 30 min, smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i reakciona smeša je ekstrahovana sa Et2O dva puta (200 mL) i zatim osušena (magnezijum sulfat), filtrirana i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen fleš hromatografijom (0-20%EtOAc/heptan) da bi se dobilo 5.49 g željenog proizvoda kao žuti sirup (59 %). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.18 (s, 1H), 7.69 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.63 (dd, J=7.6, 1.4 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H).
Faza 3. (3-fluoro-5-jodofenil)metanol
[0554] Metil 3-fluoro-5-jodobenzoat (5.49 g, 19.60 mmol) je rastvoren u DCM (100 mL) i ohladjen do -78°C. DIBAL-H (49.0 mL, 49.0 mmol) je dodavan u kapima tokom 30 min, a zatim je posle 1 h dodata još jedna porcija DIBAL-H (49.0 mL, 49.0 mmol). Reakciona smeša je mućkana na -78°C tokom 4 h i sipana pažljivo na ledom ohladjenu 1N HCl. Smeša je mućkana tokom 10 min i slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM i kombinovani organski ekstrakt je osušen (magnezijum sulfat), filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio željeni proizvod u kvantitativnom prinosu. LCMS nija neosporna.
Faza 4.3-fluoro-5-jodobenzaldehid
[0555] (3-Fluoro-5-jodofenil)metanol (9.79 g, 35.0 mmol mmol) je rastvoren u DCM (94 mL) a zatim je dodat silika gel (18.0 g). U smešu na sobnoj temperaturi dodat je PCC (18.3 g, 45.0 mmol) u porcijama i smeša je mućkana na sobnoj temperaturi tokom 1 h i nakon toga je uradjena TLC. Posle 1 h, TLC je pokazala potpunu konverziju SM u nepolarnu supstancu (verovatno aldehid). Reakciona smeša je filtrirana preko čepa od silike od 1 inča i eluirana sa 30% etra u DCM (200 mL). Filtrat je koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo sirovi proizvod, koji je prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja.
Faza 5. (R,E)-N-(3-fluoro-5-jodobenziliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid
[0556] Rastvoru 3-fluoro-5-jodobenzaldehida (8.75 g, 35 mmol) i (R)-(+)-t-butilsulfinamida (4.67 g, 38.5 mmol) u DCE ( 117 mL) dodat je bakar(II) sulfat (anhidrovani) (16.76 g, 105 mmol) i rezultujuća suspenzija je zagrevana na 60°C preko noći. LCMS je pokazala obrazovanje željenog proizvoda. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i filtrat je koncentrovan u vakuumu i zatim prenet u sledeću fazu kao takav. LCMS (m/z): 354.1 (MH<+>), 1.08 min.
Faza 6. (R)-N-((R)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)alil)-2-metilpropan-2-sulfinamid
[0557] Dimetil cink (1.2M u toluenu) (7.29 mL, 8.75 mmol) i vinilmagnezijum bromid (45.5 mL, 45.5 mmol) je pomešan na sobnoj temperaturi tokom 20 min pod argonom pre hladjenja do -78°C, zatim je (R,E)-N-(3-fluoro-5-jodobenziliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid u suvom THF ( 117 mL) dodavan u kapima oko 30 min. Unutrašnja temperatura je održavana izmedju -74 C u -72°C, posle dodavanja reakciona smeša je mešana na -78°C tokom 1 h, uzet je uzorak kvenčovan sa vodom, LCMS je pokazala željeni proizvod zajedno sa neizreagovalim polaznim materijalom. Dodato je još vinilmagnezijum bromida (12 mL, 12.0 mmol)) i reakcija praćena sa LCMS i posle 30 min, reakcija je smatrana kompletnom. Reakciona smeša je je sipana preko ledeno hladnog zas.NH4Cl i vode, THF je uklonjen u vakuumu i proizvod ekstrahovan sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan i sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0-70% EtOAc/heptan) da bi se dobilo 8.99 g (R)-N-((R)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)alil)-2-metilpropan-2-sulfinamida kao željenog proizvoda u vidu bezbojnog žutog sirupa. Prinos (67.4%). Prinos se odnosi na sekvencu od 4 faze. Zapaziti: Glavni sporedni proizvod odgovara de-jodinovanom željenom proizvodu. LCMS (m/z): 382.5 (MH<+>), 0.96 min; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) ) δ ppm 7.48 (s, 1H), 7.37 (dt, J=7.6, 1.9 Hz, 1H), 7.06 (d, J=9.0 Hz, 1H), 5.85 (ddd, J=17.0, 10.0, 7.4 Hz, 1H), 5.25-5.47 (m, 3H), 4.90 (d, J=7.0 Hz, 1H), 3.23-3.66 (m, 1H), 1.26 (s, 9H).
Faza 7. (R)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-jodofenil)alil)karbamat
[0558] (R)-N-((R)-1-(3-Fluoro-5-jodofenil)alil)-2-metilpropan-2-sulfinamid (8.99 g, 23.58 mmol) je rastvoren u MeOH (40 mL) i obradjen sa 4 N HCl (11.79 mL, 47.2 mmol) i smeša je mućkana na sobnoj temperaturi tokom 1 h i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je rastvoren vodom i dodat je zasićeni Na2CO3. Proizvod je ekstrahovan sa 3:1 CHCl3:IPA i organski sloj je osušen (magnezijum sulfat), filtriran i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je rastvoren u DCM (60 mL) i dodat je Boc-anhidrid (6.79 mL, 29.2 mmol). Smeša je mućkana preko noći na sobnoj temperaturi i sledećeg jutra, reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i sirovi proizvod (R)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-jodofenil)alil)karbamat prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 322.1 (MH<+>-56), 1.11 min.
Faza 8. (S)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)karbamat
[0559] (R)-terc-Butil (1-(3-fluoro-5-jodofenil)alil)karbamat (8.89 g, 23.58 mmol) je rastvoren u DCM (236 mL) i ohladjen do -78°C. Ozon je produvan kroz smešu sve dok se plava boja zadržavala. Reakciona smeša je zatim pročišćena azotom i NaBH4(8.92 g, 236 mmol) je dodat u jednoj porciji nakon čega je dodat MeOH (120 mL) i smeša je mućkana na istoj temperaturi tokom 2 h a zatim je dodato 20 mL acetona. Reakciona smeša je mućkana tokom dodatnog 1 h i zatim sippana preko zasićenog NH4Cl i zatim ekstrahovana sa DCM (500 mL), a zatim sa 3:1 CHCl3/IPA (200 mL) i organski ekstrakti su kombinovani i osušeni (magnezijum sulfat), i rastvarač jr koncentrovan u vakuumu i ostatak prečišćen pomoću fleš hromatografije da bi se dobilo 6.74 g (17.7 mmol) (S)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)karbamata (75%). LCMS (m/z): 326.1 (MH<+>-56), 0.90 min.
Faza 9. (S)-terc-butil (2-azido-1-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)karbamat
[0560] (S)-terc-Butil (1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)karbamat (4.8112 g, 12.62 mmol) je rastvoren u DCM (100 mL) i ohladjen do 0°C. Et3N (2.62 mL, 18.93 mmol) je potom dodat, a zatim je MsCl (1.180 mL, 15.15 mmol) dodat u kapima. Reakciona smeša je mućkana na istoj temperaturi tokom 30 min posle čega je reakciona smeša kvenčovana zasićeni NaHCO3i vodom. Proizvod je ekstrahovan sa DCM i kombinovani organski sloj je osušen (magnezijum sulfat), filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo sirovi proizvod koji je rastvoren u DMF (25 mL, oko 0.5 M). Nakon toga je dodat NaN3(2.462 g, 37.9 mmol) i smeša je zagrejana na 70°C. Posle 6 h, reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature i razblažena sa EtOAc i vodom i proizvod ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakt je opran vodom triput i osušen (magnezijum sulfat), filtriran i koncentrovan u vakuumu i ostatak prečišćen pomoću fleš hromatografije (0-50%) EtOAc/heptan da bi se dobilo 4.03 g (S)-terc-butil (2-azido-1-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)karbamata kao željenog proizvoda. LCMS (m/z): 351.0 (MH<+>-56), 1.05 min.
Faza 10. (S)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-(2-nitrofenilsulfonamido)etil)karbamat
[0561] (S)-terc-Butil (2-azido-1-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)karbamat (288 mg, 0.709 mmol) je rastvoren u MeOH (7.09 mL) a zatim je dodat polimer-vezani PPh3(7.09 mmol). Reakciona smeša je mućkana na 70°C preko noći. Sledećeg jutra, LCMS je pokazala obrazovanje željenog proizvoda. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i filter-kolač je opran sa DCM i MeOH i filtrat je koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo sirovi amin koji je prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. Sirovi amin je rastvoren u DCM (7 mL) i ohladjen do 0°C, a zatim je dodat trietilamin (0.198 mL, 1.418 mmol). Zatim je dodat 2-nitrobenzen-1-sulfonil hlorid (189 mg, 0.851 mmol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mućkana na sobnoj temperaturi tokom 1 h i kvenčovana vodom i proizvod je ekstrahovan sa DCM. Organski sloj je opran zasićenim slanim rastvorom i osušen (magnezijum sulfat), filtriran i koncentrovan u vakuumu i ostatak prečišćen pomoću fleš hromatografije (0-40% EtOAc/heptan) da bi se dobilo 290 mg (S)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-(2-nitrofenilsulfonamido)etil)karbamata kao željenog proizvoda. LCMS (m/z): 524.0 (MH<+>-56), 1.10 min.
[0562] Faza 11. (S)-N-(2-amino-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamid (S)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-(2-nitrofenilsulfonamido)etil)karbamat (290 mg, 0.513 mmol) je rastvoren u DMF (5.1 mL) i K2CO3(142 mg, 1.026 mmol), a nakon toga je dodat jodometan (48.1 µl, 0.769 mmol). Smeša je mućkana na sobnoj temperaturi tokom 1 h nakon čega je utvrdjeno da je reakcija završena. Reakciona smeša razblažena je sa vodom i EtOAc. Organski sloj je opran vodom dvaput i osušen (magnezijum sulfat), filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio relativno čist proizvod koji je rastvoren u DCM (5 mL) i obradjen sa 4N HCl u dioksanu (2 mL) i smeša je mućkana na sobnoj temperaturi preko noći, i smeša je koncentrovana u vakuumu da bi se dobilo željeni proizvod (S)-N-(2-amino-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamid kao hidrohloridna so. LCMS (m/z): 480.4 (MH<+>), 0.72 min.
Primer 179
Sinteza (S)-N-(2-amino-1-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida
[0563]
Šema 77
Faza 1. (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-azido-1-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)-2-fluorobenzamid
[0564] TFA adukt 4-(3-Amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (126 mg, 0.292 mmol) i HOAt (0.060 g, 0.438 mmol) je rastvoren u DMF(1 mL) i DIEA (0.156 mL, 0.876 mmol). Dodata je hidrohloridna so (S)-2-azido-1-(3-fluoro-5-jodofenil)etanamina (100 mg, 292 mmol), dobijena iz reakcije (S)-terc-butil (2-azido-1-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)karbamata sa 4M HCl u dioksanu (faza 9 na šemi 76), a nakon toga EDC (0.090 g, 0.467 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i vodom, i organski sloj je opran vodom dvaput i zatim sa zasićenim Na2CO3. Organski sloj je osušen iznad magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan u vakuumu dajući sirovi (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-azido-1-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)-2-fluorobenzamid bez dodatnog prečišćavanja.
Faza 2. (S)-N-(2-amino-1-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamid
[0565] Sirovi (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-azido-1-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)-2-fluorobenzamid je rastvoren u THF (5 mL), i dodat je trifenilfosfin (3 mmol/g, vezan za polimer) (0.97 g, 3.70 mmol) u kapima. Smeša je zagrevana na 70°C tokom 3 h. LCMS je pokazala odsustvo polaznog materijala (na ovom stadijumu, fosforiliminski intermedijer je verovatno prisutan u čvrstoj fazi). Dodata je voda (4.5 mL) i THF (5 mL), i smeša je zagrevana na 80°C tokom 3 h i zatim filtrirana. Filter kolač je opran sa DCM, a zatim je filtrat koncentrovan u vakuumu. Ostatak je rastvoren u DCM i opran vodom i organski sloj je osušen iznad magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo ostatak koji je prečišćen fleš hromatografijom (0-60% DCM/10% MeOH u EtOAc koji sadrži 0.5% NH4OH), i dobijene frakcije su sakupljene i koncentrovane. Ostatak je rastvoren u acetonitrilu i vodi, i osušen zamrzavanjem da bi se dobilo 101.2 mg (S)-N-(2-amino-1-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida kao željenog proizvoda. LCMS (m/z): 580.1 (MH<+>), 0.70 min.<1>H NMR (CD3OD) δ (ppm): 7.92 (s, 1H), 7.85 - 7.79 (m, 1H), 7.73 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.68 - 7.61 (m, 2H), 7.50 - 7.43 (m, 1H), 7.23 (d, J=9.5 Hz, 1H), 5.12 (t, J=6.9 Hz, 1H), 4.07 (dd, J=11.2, 3.3 Hz, 2H), 3.60 (td, J=11.7, 2.0 Hz, 2H), 3.09 - 2.83 (m, 3H), 2.02 -1.76 (m, 4H).
Sinteza (S)-terc-butil (2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)karbamata
[0566]
Šema 78
Faza 1. (S,E)-N-(3-bromo-5-fluorobenziliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid
[0567] Rastvoru 3-bromo-5-fluorobenzaldehida (5 g, 24.63 mmol) i (S)-2-metilpropan-2-sulfinamida (3.28 g, 27.1 mmol) u DCE (82 mL) dodat je bakar(II) sulfat (anhidrovani) (7.86 g, 49.3 mmol). Suspenzija je mešana pod azotom na 60°C preko noći. Reakciona smeša je ohladjena, filtrirana kroz čep od celita, i isprana sa DCM. Filtrat je koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-30% EtOAc u heptanu da bi se dobio proizvod (S,E)-N-(3-bromo-5-fluorobenziliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid (7.5 g, 24.49 mmol, 99% prinosa) kao svetlo žuto ulje. LCMS (m/z): 306.1/308.1 (MH<+>), 1.04 min.
Faza 2. (S)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-nitroetil)-2-metilpropan-2-sulfinamid
[0568] Nitrometan (1.0 mL, 17.20 mmol) je rastvoren u THF (34.4 mL), zatim je dodat BuLi (2.5 M u heksanima) (7.22 mL, 18.06 mmol) na -78°C. Reakciona smeša je mešana na -78°C tokom 10 min, zatim zagrejana do sobne temperature tokom 20 min. Posle hladjenja do -78°C, dodat je (S,E)-N-(3-bromo-5-fluorobenziliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid (4.74 g, 15.48 mmol) u THF (6 mL) u kapima. Reakciona smeša je mešana na -78°C tokom 20 min, zagrejana do sobne temperature, i mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Reakciona smeša je kvenčovana zasićenim NH4Cl, i ekstrahovana sa EtOAc. Organska supstanca je osušena iznad Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0-40%-100% EtOAC/heptan). Čiste frakcije su kombinovane da bi se dobio (S)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-nitroetil)-2-metilpropan-2-sulfinamid (2.2 g, 5.99 mmol, 38.7% prinosa). LCMS (m/z): 367.1/369.1 (MH<+>), 0.89 min;<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.31 (s, 1H), 7.03 (d, J=9.0 Hz, 1H), 5.03 (q, J=5.7 Hz, 1H), 4.87 - 4.78 (m, 2H), 4.48 (d, J=5.1 Hz, 1H), 1.33 - 1.25 (m, 9H).
Faza 3. (S)-N-((S)-2-amino-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid
[0569] (S)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-nitroetil)-2-metilpropan-2-sulfinamid (2.2 g, 5.99 mmol) je rastvoren u MeOH (19.97 mL), ispran sa N2tokom 10 min, i zatim je dodat PtO2(0.408 g, 1.797 mmol). Reakciona smeša je napunjena balonom sa vodonikom i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i oprana metanolom i EtOAc. Filtrat je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi materijal je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 337.1/339.1 (MH<+>), 0.64min.
Faza 4. terc-butil ((S)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((S)-1,1-dimetiletilsulfinamido) etil)karbamat
[0570] (S)-N-((S)-2-Amino-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid (1.75 g, 5.19 mmol) je rastvoren u DCM (17.30 mL), a zatim je dodat Boc2O (1.325 mL, 5.71 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h, i zatim koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćeno da bi se dobio proizvod terc-butil ((S)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((S)-1,1-dimetiletilsulfinamido)etil)karbamat (1.78 g, 78%). LCMS (m/z): 437.1/439.1 (MH<+>), 0.99 min.
Faza 5. (S)-terc-butil (2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)karbamat
[0571] Rastvoru terc-butil ((S)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)etil) karbamata (1.78 g, 4.07 mmol) u DCM (13.57 mL) dodata je HCl (4M u dioksanu) (4.07 mL, 16.28 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je neutralizovana do pH = 7, zatim ekstrahovana sa EtOAc da bi se dobio željeni (S)-terc-butil (2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)karbamat (300 mg) kao slobodna baza. LCMS (m/z): 317.1/319.1 (MH<+>), 0.66 min.
Sinteza (S)-terc-butil (2-amino-2-(3-bromofenil)etil)karbamata
[0572]
[0573] Prateći šemu 78, korišćenjem 3-bromobenzaldehida, dobijen je (S)-terc-butil (2-amino-2-(3-bromofenil)etil)karbamat kao HCl so. LCMS (m/z): 315.1/317.1 (MH<+>), 0.66 min.
Sinteza (S)-metil (2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)karbamata
[0574]
Šema 79
[0575] Rastvoru (S)-N-((S)-2-amino-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamida (100 mg, 0.297 mmol) u DCM (988 µl) dodat je TEA (124 µl, 0.890 mmol) i metil hloroformat (24.12 µl, 0.311 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc i organske faze su oprane vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušene iznad natrijum sulfata, filtrane, i koncentrovane u vakuumu. Ostatak je rastvoren u Et2O (1 mL), zatim je dodata HCl (4M u dioksanu) (148 µl, 0.593 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Posle dekantovanja rastvarača, ostatak čvrste supstance je korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 291.2/293 (MH<+>), 0.49 min.
(S)-metil (2-amino-2-(3-bromofenil)etil)karbamat
[0576]
[0577] Prateći šemu 79, korišćenjem (S)-N-((S)-2-amino-1-(3-bromofenil)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamida, dobijen je (S)-metil (2-amino-2-(3-bromofenil)etil)karbamat. LCMS (m/z): 273.0/275.0 (MH<+>), 0.46 min.
(S)-metil (2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)karbamat
[0578]
[0579] Prateći šemu 79, korišćenjem (S)-N-((S)-2-amino-1-(3-hlorofenil)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamida, dobijen je (S)-metil (2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)karbamat. LCMS (m/z): 229.2 (MH<+>), 0.42 min.
Sinteza (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)acetamida
[0580]
Šema 80
[0581] (S)-N-((S)-2-Amino-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid (100 mg, 0.297 mmol) je rastvoren u DCM (988 µl), a nakon toga je dodat piridin (71.9 µl, 0.890 mmol) i anhidrid sirćetne kiseline (28.0 µl, 0.297 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, ekstrahovana sa EtOAc, oprana vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad Na2SO4i koncentrovana. Ostatak je rastvoren u Et2O (1 mL), zatim je dodata HCl (4 M u dioksanu) (148 µl, 0.593 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Posle dekantovanja rastvarača, ostatak čvrste supstance je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 275.1/277.1 (MH<+>), 0.41 min.
Sinteza (S)-N-(2-amino-2-(3-bromofenil)etil)acetamida
[0582]
[0583] Prateći šemu 80, korišćenjem (S)-N-((S)-2-amino-1-(3-bromofenil)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamida, dobijen je (S)-N-(2-amino-2-(3-bromofenil)etil)acetamide. LCMS (m/z): 257.1/259.1 (MH<+>), 0.40 min.
Primer 180
Sinteza (S)-N-(2-amino-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida
[0584]
Šema 81
Faza 1. (S)-terc-butil (2-(4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)karbamat
[0585] Rastvoru 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (35 mg, 0.110 mmol) u DMF (368 µl) dodat je (S)-terc-butil (2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)karbamat (40.8 mg, 0.110 mmol), aza-HOBt (22.52 mg, 0.165 mmol), EDC (31.7 mg, 0.165 mmol), i DIEA (57.8 µl, 0.331 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h, i zatim raspodeljena izmedju EtOAc i vode. Organska supstanca je oprana sa NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad Na2SO4i koncentrovana. Sirovi (S)-terc-butil (2-(4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)karbamat je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 632.1/634.1 (MH<+>), 0.97 min.
Faza 2. (S)-N-(2-amino-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamid
[0586] Rastvoru (S)-terc-butil (2-(4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)karbamata (69 mg, 0.110 mmol) u DCM ( 1.0 mL) dodat je TFA (0.5 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana do suva, zatim rastvorena u DMSO i podvrgnuta preparativnoj HPLC. Čista frakcija je kombinovana i osušena zamrzavanjem da bi se dobio finalni proizvod u vidu soli TFA. LCMS (m/z): 532.1/534.1 (MH<+>), 0.69 min;<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ ppm 7.94 - 7.84 (m, 2H), 7.73 (dd, J=1.4, 8.0 Hz, 1H), 7.66 (dd, J=1.4, 11.9 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.29 (d, J=9.4 Hz, 1H), 5.48 (t, J=7.2 Hz, 1H), 4.04 (dd, J=2.9, 11.5 Hz, 2H), 3.57 (dt, J=2.2, 11.6 Hz, 2H), 3.51 - 3.41 (m, 2H), 3.01 - 2.85 (m, 1H), 1.97 - 1.76 (m, 4H).
Primer 181
Sinteza (S)-N-(2-amino-1-(3-hloro-5-fluorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida
[0587]
Šema 82
Faza 1. (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-azido-1-(3-hloro-5-fluorofenil)etil)-2-fluorobenzamid
[0588] Rastvoru 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (126 mg, 0.398 mmol) u DMF (1328 µl) dodat je (S)-2-azido-1-(3-hloro-5-fluorofenil)etanamin (100.0 mg, 0.398 mmol), DIEA (348 µl, 1.991 mmol), EDC (153 mg, 0.797 mmol), i aza-HOBt (81 mg, 0.597 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 15 h. Posle dodavanja vode, reakciona smeša je obradjena sa EtOAc. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtran, i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (gradijent EtOAc u heptanu) da bi se dobio (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-azido-1-(3-hloro-5-fluorofenil)etil)-2-fluorobenzamid (118 mg, 58%). LCMS (m/z): 514.2 (MH<+>), 0.91 min.
Faza 2. (S)-N-(2-amino-1-(3-hloro-5-fluorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamid
[0589] Rastvoru (S)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-azido-1-(3-hloro-5-fluorofenil)etil)-2-fluorobenzamida (118 mg, 0.230 mmol) u piridinu (2 mL) dodat je NH4OH (200 µl) i trimetilfosfin (344 µl, 0.344 mmol) uzastopno na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana tokom 2 h. Posle dodavanja EtOH (1 mL), reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (20% MeOH u DCM koji sadrži 0.5% NH3/DCM) da bi se dobilo 89.6 mg (S)-N-(2-amino-1-(3-hloro-5-fluorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida (79%). LCMS (m/z): 488.2 (MH<+>), 0.66 min. 1H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ ppm 7.98 - 7.89 (m, 1H), 7.89 - 7.79 (m, 1H), 7.74 (td, J=1.4, 8.0 Hz, 1H), 7.69 - 7.61 (m, 1H), 7.41 - 7.28 (m, 1H), 7.27 - 7.08 (m, 2H), 5.27 - 5.12 (m, 1H), 4.07 (dd, J=3.8, 11.0 Hz, 2H), 3.69 - 3.52 (m, 2H), 3.14 - 3.03 (m, 2H), 2.96 (tt, J=3.9, 11.7 Hz, 1H), 2.02 - 1.77 (m, 4H).
Sinteza (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamida
[0590]
Šema 83
Faza 1. N-((S)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((S)-1,1-dimetiletilsulfinamido)etil)-2-nitrobenzensulfonamid
[0591] (S)-N-((S)-2-amino-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid (3.3 g, 9.78 mmol) je rastvoren u DCM (32.6 mL) na 0°C, zatim su dodati TEA (1.405 mL, 10.08 mmol) i 2-nitrobenzen-1-sulfonil hlorid (2.169 g, 9.78 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i sirovi proizvod je prečišćen da bi se dobio N-((S)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((S)-1,1-dimetiletilsulfinamido)etil)-2-nitrobenzensulfonamid. LCMS (m/z): 522.1/524.1 (MH<+>), 0.94 min.
Faza 2. (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2-nitrobenzensulfonamid
[0592] N-((S)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)etil)-2-nitrobenzensulfonamidu (3.55 g, 6.80 mmol) u Et2O (22.65 mL) dodata je HCl (4 M u dioksanu) (3.40 mL, 13.59 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je neutrailizovana rastvorom Na2CO3i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom, osušen, filtran, i koncentrovan u vakuumu dajući sirovi (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2-nitrobenzensulfonamid, koji je korišćen u sledećoj fazi reakcije bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 418.2/420.2 (MH<+>), 0.62 min.
Faza 3. (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(2-nitrofenilsulfonamido)etil)karbamat
[0593] (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2-nitrobenzensulfonamid (1.55 g, 3.71 mmol) je rastvoren u CH2Cl2(12.35 mL), a zatim su dodati TEA (0.517 mL, 3.71 mmol) i Bocanhidrid (1.119 mL, 4.82 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobio (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(2-nitrofenilsulfonamido)etil)karbamat. LCMS (m/z): 462.0/464.0 (MH<+>-56), 0.99 min.
Faza 4. (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido) etil)karbamat
[0594] (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(2-nitrofenilsulfonamido)etil)karbamat (2.3 g, 4.44 mmol) je rastvoren u DMF (14.79 mL). Dodati su K2CO3(1.226 g, 8.87 mmol) i MeI (0.416 mL, 6.66 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, a zatim je dodata voda. Reakciona smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc. Organska supstanca je oprana vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatagrafijom da bi se dobio (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil) karbamat (2.3 g, 4.32 mmol, 97% prinosa).
Faza 5. (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamid
[0595] (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil) karbamat (2.3 g, 4.32 mmol, 97% prinosa) je rastvoren u CH2Cl2i dodata je HCl (4 M u dioksanu, 4.44 mL, 17.75 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Heptan je dodat. Čvrsta supstanca je filtrirana, i osušena na vazduhu da bi se dobio (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamid (1.8 g, 3.84 mmol, 87% prinosa). LCMS (m/z): 432.2/434.1 (MH<+>), 0.69 min.
[0596] (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamid hidrohloridna so je pripremljena kao što sledi:
Faza 1: (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)karbamat.
[0597] U ledenom vodom ohladjen rastvor (S)-2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etanola (30 g, 111 mmol) (HCl salt) u DCM (390 mL) dodat je TEA (46.5 mL, 333 mmol) a nakon toga Bocanhidrid (26.4 mL, 114 mmol u 50 ml DCM). Dodavanje je završeno za 15 minuta. Kupatilo sa ledenom vodom je uklonjeno i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 časova. Reakciona smeša je koncentrovana, (temperatura vodenog kupatila je održavana ispod 30<0>C), ostatak je razblažen sa 500 ml EtOAc, opran sa 100 ml 1N NaOH, 100 ml vode i 100 ml zasićenog slanog rastvora, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod kao viskozna tečnost, (na manjoj skali, to je polučvrsta supstanca). U ovaj viskozni (ili polučvrsti) proizvod dodato je 120 ml Et2O i rezultujuća smeša je zatim sonicated tokom 5 minuta. Smeša je koncentrovana do oko 60 ml ukupne zapremine. Posle 1 časa na sobnoj temperaturi, bela kristalna čvrsta supstanca se staložila. (ako se kristali nisu obrazovali, dodato je ~ 2 mg kristalnog zametka). Posle 4 časa, bela čvrsta supstanca je filtrirana, oprana mininalnom količinom etra i osušena (preko vakuumskog creva tokom najmanje 1 časa) da bi se dobilo ukupno 30.5 g bele čvrste supstance kao željenog proizvoda. Prinos se poboljšava ako se filtrat koncentruje i gore opisani postupak ponovi. (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)karbamat: 30.5 g, 82% prinosa. LC-MS: ( MW-56): 279.8 m/z na 0.84 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO) ppm 1.29 - 1.43 (m, 8 H) 3.38 - 3.55 (m, 2 H) 4.39 - 4.61 (m, 1 H) 4.84 (t, J=5.67 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=9.39 Hz, 1 H) 7.24 - 7.44 (m, 3 H).
[0598] Faza 2: (4S)-terc-butil 4-(3-bromo-5-fluorofenil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2-oksid. Rastvoru SOCl2(19.98 mL, 274 mmol) u acetonitrilu (280 ml) na -40-45<0>C (unutrašnja temperatura, temperatura kupatila sa suvim ledom-acetonom oko -55<0>C) pod atmosferom azota dodat je (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)karbamat (30.5 g, 91 mmol) u CH3CN (175 ml). Dodavanje je završeno za oko 30 minuta. Posle oko 20 minuta mešanja na -40-45<0>C, dodat je piridin (40.6 mL, 502 mmol) (za oko 10 minuta). Posle mešanja tokom 10 minuta na -40<0>C, kupatilo za hladjenje je uklonjeno, smeša je zagrejana do sobne temeperature i mešana tokom 2 časa. LC-MS je pokazala dva dijastereomerna proizvoda, i odredjenu količinu dimernod sporednog proizvoda. Smeša je razblažena sa 400 ml EtOAc, oprana zasićenim slanim rastvorom (200 ml) tri puta, osušena iznad Na2SO4, filtrirana i koncentrovana (vodeno kupatilo na oko 40<0>C, oko 2 časa) da bi se dobilo 35.7 grama sirovog proizvoda kao svetlo žuta viskozna tečnost, koji je korišćen neposredno u sledećoj fazi ili skladišten na 4<o>C. (4S)-terc-butil 4-(3-bromo-5-fluorofenil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2-oksid: LC-MS: (MW-100): 281.8 na 1.02 min.
[0599] Faza 3: (S)-terc-butil 4-(3-bromo-5-fluorofenil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksid. U ledenom vodom ohladjen rastvor (4S)-terc-butil 4-(3-bromo-5-fluorofenil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2-oksida (34.6 g, 91 mmol) u acetonitrilu (420 mL) uz mešanje dodat je NaIO4(29.2 g, 137 mmol), i rutenijum trihlorid hidrat (0.359 g, 1.729 mmol), a nakon toga voda (320 ml). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 2 časa. Smeša je razblažena sa EtOAc (500 ml), oprana zasićenim slanim rastvorom (200 ml) dvaput, osušena iznad Na2SO4, filtrirana i koncentrovana da bi se dobilo sirovi proizvod, koji je korišćen neposredno u sledećoj fazi. Dobijeno je 40.3 grama sirovog proizvoda. LC-MS: (MW Na): 419.9 m/z na 1.01 min.
[0600] Faza 4: (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)karbamat. Rastvoru N-metil-2-nitrobenzensulfonamida (18.69 g, 86 mmol) u acetonitrilu (400 ml) na sobnoj temperaturi dodat je KOH (10.21 g, 182 mmol, komercijalni, u obliku praha). Rezultujuća smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom oko 15 minuta dodavanja (S)-terc-butil 4-(3-bromo-5-fluorofenil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksida (36.1 g, 91 mmol) u 180 ml CH3CN (dodavanje je završeno za 15- 20 minuta). Rezultujuća smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1-2 časa. Reakciona smeša je koncentrovana do oko 200 ml ukupne zapremine. Ostatku je dodato 600 ml EtOAc, a nakon toga je opran sa 180 ml 3N HCl, 200 ml 1N NaOH, i zasićenim slanim rastvorom (200 ml), dvaput. Rastvor je osušen pomoću Na2SO4, filtriran kroz filter levak sa celitom (~30 g) i silika gel (20 g). Filtrirani rastvor je koncentrovan da bi se dobilo 40.3 grama proizvoda u vidu viskozne tečnosti, koji je korišćen u sledećoj fazi neposredno. (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)karbamat: LC-MS: (MW Na): 555.8 m/z na 1.07 min. (40.3 g, 76 mmol, 83 % prinos).
[0601] Faza 5: Hidrohloridna so (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamida. Rastvoru (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2nitrofenilsulfonamido)etil)karbamata (40 g, 75 mmol) u DCM (420 ml) na sobnoj temperaturi dodata je HCl (4M u dioksanu, 150 ml, 601 mmol). Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 4 časa u toku kog vremena se staložila bela čvrsta supstanca. Reakciona smeša je filtrirana, bela čvrsta supstanca je oprana sa DCM ( 50ml x2), i osušena vakuumom da bi se dobilo 23.8 grama željenog proizvod kao bela čvrsta supstanca. (HCl so). (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamid (23.8 g, 68% prinosa tokom četiri faze). LC-MS: ( M+1): 433.9 m/z na 0.66 min. 1H NMR (400 MHz, <dmso>) ppm 2.86 (s, 3 H) 3.56 - 3.82 (m, 2 H) 4.61 (t, J=7.24 Hz, 1 H) 7.42 - 7.61 (m, 2 H) 7.68 (d, J=1.57 Hz, 1 H) 7.75 -8.05 (m, 4 H).
Sinteza (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-(2-fluoroetil)-2-nitrobenzensulfonamida
[0602]
[0603] Prateći faze 4 i 5 na šemi 83, korišćenjem 1-bromo-2-fluoroetana, dobijen je (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-(2-fluoroetil)-2-nitrobenzensulfonamid. LCMS (m/z): 464.1/466.1 (MH<+>), 0.71 min.
Primer 182
Sinteza 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0604]
Šema 84
Faza 1. 1,3-bis(1,1-Dimetiletil) estar 4-(3-((terc-butoksikarbonil)amino)-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata imidodikarbonske kiseline
[0605] Rastvoru terc-butil 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (3 g, 7.78 mmol) u acetonitrilu (130 mL) dodat je Boc2O (6.33 mL, 27.2 mmol) i DMAP (0.048 g, 0.389 mmol). Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Posle uklanjanja isparljivih materijala na uredjaju rotavap pod sniženim pritiskom, sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-50% EtOAc/heptan da bi se dobio 1,3-bis(1,1-dimetiletil) estar 4-(3-((terc-butoksikarbonil)amino)-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata imidodikarbonske kiseline (4.34 g, 7.41 mmol, 95%). LCMS (m/z): 586.5 (MH<+>), 1.24 min;<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 8.52 - 8.41 (m, 1H), 7.97 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.61 - 7.44 (m, 2H), 3.46 - 3.30 (m, 1H), 2.68 - 2.52 (m, 4H), 2.38 (dd, J=3.0, 13.7 Hz, 2H), 2.28 - 2.10 (m, 2H), 1.69 - 1.61 (m, 9H), 1.42 - 1.29 (m, 18H).
Faza 2. 1,3-bis(1,1-Dimetiletil) estar 4-(3-((terc-butoksikarbonil)amino)-6-(4-((trietilsilil)oksi)cikloheks-3-en-1-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata imidodikarbonske kiseline
[0606] Rastvoru 1,3-bis(1,1-dimetiletil) estra 4-(3-((terc-butoksikarbonil)amino)-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata imidodikarbonske kiseline (12.1 g, 20.66 mmol) u THF (68.9 mL) polako je dodat LiHMDS (1 M u THF) (22.73 mL, 22.73 mmol) na -78°C. Posle mešanja tokom 30 min, dodat je trietilhlorosilan (3.67 mL, 21.69 mmol). Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 1 h. Dodat je zasićeni rastvor natrijum bikarbonata, i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je dobro opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog NaHCO3, filtran, i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 5% EtOAc/heptan da bi se dobio 1,3-bis(1,1-dimetiletil) estar 4-(3-((terc-butoksikarbonil)amino)-6-(4-((trietilsilil)oksi)cikloheks-3-en-1-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata imidodikarbonske kiseline, (12.1 g, 17.29 mmol). LCMS (m/z, neutralni-nepolarni postupak): 701.8 (MH<+>), 1.14 min;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.41 (s, 1H), 8.00 - 7.88 (m, 1H), 7.57 - 7.46 (m, 2H), 4.97 (br. s., 1H), 3.16 - 3.00 (m, 1H), 2.49 - 2.38 (m, 2H), 2.38 - 2.23 (m, 1H), 2.19 - 1.94 (m, 3H), 1.61 (s, 9H), 1.33 (s, 18H), 1.06 - 0.94 (m, 8H), 0.77 - 0.64 (m, 6H).
Faza 3. 1,3-bis(1,1-Dimetiletil) estar 4-(3-((terc-butoksikarbonil)amino)-6-(3-fluoro-4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata imidodikarbonske kiseline
[0607] Rastvoru 1,3-bis(1,1-dimetiletil) estra 4-(3-((terc-butoksikarbonil)amino)-6-(4-((trietilsilil)oksi)cikloheks-3-en-1-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata imidodikarbonske kiseline (12.1 g, 17.29 mmol) u acetonitrilu (57.6 mL) dodat je Selectfluor<®>(7.96 g, 22.47 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana preko noći. Posle kvenčovanja zas. rastvorom NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio 1,3-bis(1,1-dimetiletil) estar 4-(3-((terc-butoksikarbonil)amino)-6-(3-fluoro-4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata imidodikarbonske kiseline, (10.44 g, 17.29, 100%), koji je korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z, neutralno–nepolarni postupak): 604.3 (MH<+>), 1.12 min.
Faza 4. (+/-)-terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-fluoro-4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0608] Rastvoru 1,3-bis(1,1-dimetiletil) estra 4-(3-((terc-butoksikarbonil)amino)-6-(3-fluoro-4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata imidodikarbonske kiseline, (10.44 g, 17.29 mmol) u THF (57.6 mL) dodata je 4 M HCl u dioksanu (130 mL, 519 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana tokom 3-4 h, i praćena pomoću LCMS da bi se sprečilo da više t-butil estra hidrolizuje u karboksilnu kiselinu. Reakcija je ohladjena u vodenom kupatilu, i neutralisana zasićenim rastvorom natrijum karbonata. Rezultujuća smeša je ekstrahovana sa EtOAc tri puta. Kombinovani organski slojevi su oprani zasićenim slanim rastvorom, osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% smeše EtOAc/heptan da bi se dobio (+/-)-terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-fluoro-4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (1.9 g, 4.71 mmol, 27.2%) i (+/-)-terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3S)-3-fluoro-4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (926 mg, 2.295 mmol, 13.3%). LCMS (m/z): 404.3 (MH<+>), 0.84 min i 404.3 (MH<+>), 0.84 min redom.
Faza 5. (+/-)-Terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0609] Rastvoru (+/-)-terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-fluoro-4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (1.9 g, 4.71 mmol) u MeOH (47.1 mL) dodat je NaBH4(0.267 g, 7.06 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana tokom 2 h. Posle kvenčovanja zas. rastvorom NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran sa vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa konstantno 35% EtOAc u heptanu da bi se dobio (+/-)-terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (839 mg, 2.07 mmol, 43.9%) i (+/-)-terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (900 mg, 2.22 mmol, 47%). LCMS (m/z): 406.3 (MH<+>), 0.85 min i 406.3 (MH<+>), 0.85 min redom.
Faza 6. Terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0610] Terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (839 mg, 2.07 mmol) je podvrgnut hiralnom razdvajanju (ChiralPak 5mic AD kolona, 4.6x100 (mm), CO2/EtOH+0.1% DEA=70/30, SFC=5ml/min) da bi se dobio jedan enantiomer terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (Rt = 1.61 min, 336 mg, 0.829 mmol, 40%) i manje polarni enantiomer (Rt = 2.45 min, 43%).
Faza 7. 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0611] Rastvoru terc-butil terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (90 mg, 0.22 mmol) u DCM (0.444 mL) dodata je 4 M HCl u dioksanu (3.7 mL, 14.80 mmol). Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Posle uparavanja isparljivih materijala u vakuumu, reakciona smeša je triturisana sa Et2O, i filtrirana da bi se dobila 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (86 mg, 0.22 mmol, 100%) kao HCl so, koja je korišćena u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 350.2 (MH<+>), 0.51 min.
Faza 8. 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0612] Rastvoru 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (20 mg, 0.057 mmol) u DMF (573 µL) dodata je HCl so (S)-2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etanola (18.59 mg, 0.069 mmol), aza-HOBt (11.69 mg, 0.086 mmol), EDC (21.95 mg, 0.115 mmol), i DIEA (30.0 µl, 0.172 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 15 h. Dodata je voda, i reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc tri puta. Organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije su osušene zamrzavanjem da bi se dobio 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid (12.9 mg, 0.019 mmol, 32.8%) u vidu soli TFA. LCMS (m/z): 565.1/567.1 (MH<+>), 0.72 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.78 (s, 2H), 7.63 - 7.47 (m, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.22 - 7.02 (m, 2H), 5.15 - 5.03 (m, 1H), 4.43 - 4.15 (m, 1H), 3.77 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.62 - 3.47 (m, 1H), 2.76 (br. s., 1H), 2.19 (dd, J = 3.1, 6.3 Hz, 1H), 2.02 - 1.92 (m, 1H), 1.89 - 1.66 (m, 2H), 1.56 (dd, J = 3.3, 12.3 Hz, 1H), 1.42 (br. s., 1H). Apsolutna stereohemija je odredjena na osnovu informacije o ko-strukturi 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida dobijene pomoću X-zraka.
Primer 183
Sinteza 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0613]
Šema 85
Faza 1. 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0614] Rastvoru terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (šema 84: 365 mg, 0.9 mmol) u DCM (2 mL) dodata je 4 M HCl u dioksanu (8 mL, 32.0 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 3 dana na sobnoj temperaturi. Posle uparavanja isparljivih materijala u vakuumu dobijena je 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina, koja je korišćena u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 350.3 (MH<+>), 0.48 min.
Faza 2. 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0615] Rastvoru 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (20 mg, 0.057 mmol) u DMF (573 µL) dodata je HCl so (S)-2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etanola (18.59 mg, 0.069 mmol), aza-HOBt (11.69 mg, 0.086 mmol), EDC (21.95 mg, 0.115 mmol), i DIEA (30.0 µl, 0.172 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 15 h. Dodata je voda, i reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc tri puta. Organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije su osušene zamrzavanjem da bi se dobio 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid (16.1 mg, 0.023 mmol, 41%) u vidu soli TFA. LCMS (m/z): 565.1/567.1 (MH<+>), 0.72 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.86 - 7.69 (m, 2H), 7.65 - 7.47 (m, 2H), 7.40 -7.30 (m, 1H), 7.22 - 7.06 (m, 2H), 5.08 (t, J=5.7 Hz, 1H), 4.41 - 4.14 (m, 1H), 3.85 - 3.67 (m, 2H), 3.63 - 3.48 (m, 1H), 2.74 (t, J=11.5 Hz, 1H), 2.17 (td, J=3.1, 6.3 Hz, 1H), 2.04 - 1.89 (m, 1H), 1.84 - 1.66 (m, 2H), 1.65 - 1.30 (m, 2H). Apsolutna stereohemija je odredjena na osnovu informacije o ko-strukturi u ERK2 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida dobijene pomoću X-zraka.
Primer 184
Sinteza 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida
[0616]
Šema 86
Faza1. 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamid
[0617] Rastvoru 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (156 mg, 0.403 mmol) u DMF (1.28 mL) dodat je (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamid (180 mg, 0.384 mmol), HOAt (105 mg, 0.768 mmol), DIEA (402 µl, 2.8 mmol), i EDC.HCl (147 mg, 0.768 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 h, LCMS je pokazala obrazovanje proizvoda. Smeša je razblažena sa EtOAc i oprana vodom i jednom zasićenim Na2CO3i organski sloj je osušen (magnezijum sulfat), filtriran i koncentrovan u vakuumu dajući 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamid. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na ISCO koloni (0-100% EtOAc u heptanu) dajući 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamid (99%).
Faza 2. 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamid
[0618] Rastvoru 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamida (293 mg, 0.38 mmol) u DMF (3.8 mL) dodat je K2CO3(371 mg, 2.69 mmol) i 4-merkaptobenzoeve kiseline (207 mg, 1.34 mmol). Reakciona smeša je zagrevana u mikrotalasnom uredjaju za sintezu na 45°C tokom 55 min. Posle reakcije, dodata je voda, i smeša je ekstrahovana sa EtOAc tri puta. Organski slojevi su kombinovani i oprani vodom tri puta. Kombinovani organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtran, i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa EtOAc (koji sadrži 20% MeOH i 0.5 % amonijaka u vodi )/DCM da bi se dobilo 150 mg 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida. LCMS (m/z): 578, 580 (MH<+>), 0.64 min.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.80 (s, 1H), 7.76 - 7.68 (m, 1H), 7.59 (dd, J=1.6, 7.8 Hz, 1H), 7.53 (dd, J=1.2, 11.7 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.18 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.11 (d, J=9.4 Hz, 1H), 5.27 -5.10 (m, 1H), 4.42 - 4.13 (m, 1H), 3.65 - 3.49 (m, 1H), 2.97 - 2.88 (m, 1H), 2.87 - 2.79 (m, 1H), 2.74 (t, J=11.7 Hz, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 2.04 - 1.92 (m, 1H), 1.85 - 1.68 (m, 2H), 1.55 (dq, J=3.1, 12.9 Hz, 1H), 1.46 - 1.33 (m, 1H).
[0619] Alternativno, 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamid može da bude sintetisan kao što sledi:
(1R,3S,4S)-etil 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3- fluorocikloheksankarboksilat
[0620]
[0621] U balon od 500 mL dodat je (1R,3S,4S)-etil 3-fluoro-4-hidroksicikloheksan-karboksilat (17 g, 89.3 mmol, 97.9% ee), TBSCl (17.5 g, 116.1 mmol) i DCM (200 mL). U rezultujući bistri rastvor dodat je imidazol ( 12.1 g, 178 mmol) i reakciona smeša je mešana tokom 16 časova. Dodata je voda (100 mL) i smeša je mešana tokom dodatnih 10 minuta. Faze su razdvojene i organski sloj je opran vodom (100 mL) i koncentrovan pod sniženim pritiskom (40±5°C, 50 ~ 250 mbar). Prečišćavanje fleš hromatografijom na siliki eluiranjem smešom heptan i etil acetat (100:1) dalo je (1R,3S,4S)-etil 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksankarboksilat kao bezbojno ulje (20.6 g, prinos 75.7%).<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6): 4.38 ~ 4.52 (m, 1 H), 4.03 ~ 4.08 (dd, J = 12 Hz, J = 8 Hz, 2 H), 3.77 ~ 3.81( m, 1 H), 2.54 ~ 2.60 (m, 1 H), 1.93 ~ 2.06 (m, 1 H), 1.58 ~ 1.86 (m, 4 H), 1.46~1.50 (m, 1 H), 1.17 ~ 1.20 (t, J = 12 Hz, J = 6 Hz, 3 H), 0.85( s, 9 H), 0.03 ~ 0.04 ( d, J = 4 Hz, 8 H), [M+H]<+>= 305.1 via GC-MS (Instrument: Agilent Technologies, GC 6890N, MS 5975C. GC uslovi: Kolona : HP – 5 MS, Kapilarno : 30.0 m × 250 μm × 0.25 μm, Parametri detektora: Temperatura: 350°C, Protok H2: 40 mL/min, Protok vazduha: 400 mL/min, Obrada (He): 40 mL/min. Parametri injektora: temperatura: 200°C. Odnos podele: 100:1. Noseći gas: He, Protok: 2.0 mL/min, Mod: Konstantni protok. Parametri pećnice: 0 min, 50°C; 2.0 min, 50°C; 5.33 min, 100 °C; 15.83 min, 270 °C. Injekciona zapremina: 1 μL, Rastvarač za ispiranje šprica: acetonitril. MS uslovi: Volt: 70 EV, Opseg skeniranja: m / z = 50 ~ 550)
2-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazin
[0622]
[ 0623] U balon od 1 L dodat je 2-bromo-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazin (23 g, 67 mmol), (1R,3S,4S)-etil 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksankarboksilat (28 g, 83 mmol), {[P(t-Bu)3]PdBr}2(800 mg, 1 mmol) a nakon toga toluen (250 mL). Reakciona smeša je degazirana tri puta produvavanjem azotom i zatim ohladjena do -35±5°C. U reakcionu smešu dodat je NaHMDS (47 mL, 2 M u THF, 94 mmol), u kapima. Temperatura je podignuta do sobne temeperature tokom perioda od jednog časa, i smeša je mešana tokom dodatnih 30 minuta. Reakciona smeša je kvenčovana sa 8% vodenim rastvorom amonijum hlorida (200 mL), faze su razdvojene, i vodeni sloj je ekstrahovan heptanom (300 mL). Kombinovani organski sloj je opran sa 10% zasićenim slanim rastvorom (400 mL), koncentrovan pod sniženim pritiskom (45±5°C, 50 ~ 100 mbar) da bi se dobilo 48 g (1RS,3S,4S)-etil 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-(5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazin-2-il)-3-fluorocikloheksankarboksilata kao smeša 1R i 1S dijastereomera.
Ovaj materijal je korišćen za sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. HPLC retenciono vreme = 8.274 min. HPLC postupak d: Instrument : Agilent Technologies serije 1200. Kolona: Waters Xbridge C18, 150*3.0 mm, 3 um. Temperatura kolone: 35<o>C. Protok: 0.70 mL / min. Detekcija: 210 nm/ DAD. Sastav mobilne faze: A: 0.1% H3PO4u vodi; B: acetonitril. Gradijent: 0 min: 90% A, 10% B; 5 min: 100% B; 11 min 100% B. LC-MS postupak: [M+H]<+>= 476.2706,<1>H NMR(400MHz, DMSO-d6): 8.47 (s. 1 H), 8.43 (s, 1 H), 5.85(s, 2 H), 4.39 ~ 4.52 (m, 1 H), 4.14 (dd, J = 12 Hz, J = 8 Hz, 2 H), 3.59 ~ 3.66 (m, 1 H), 2.28 ~ 2.94 (m, 1H), 2.06 (s, 6 H), 1.84 ~ 1.97 (m, 3 H), 1.46 ~ 1.52 (m, 3 H), 1.14 ~ 1.17 (t, J = 12 Hz, J = 8 Hz, 2H), 0.81 (s, 9 H), 0.01( d, J = 4 Hz, 6 H).
[0624] U balon od 1 L dodat je (1R,3S,4S)-etil 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-(5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazin-2-il)-3-fluorocikloheksankarboksilat (48g, 67 mmol), etanol (250 mL) a nakon toga 11% vodeni rastvor NaOH (112 g, 300 mmol). Reakciona smeša je mešana na 30±5°C tokom 16 časova, a zatim je kvenčovana sa 10% vodenim rastvorom HCl (70 mL) do pH = 6-7. Posle destilacije etanola pod sniženim pritiskom (50±5°C, 50 ~ 100 mbar), pH rezultujuće smeše je podešen do izmedju 4 i 5 sa 10% HCl. Vodeni rastvor je ekstrahovan dvaput sa IPAc (200 mL ×2). Kombinovani organski slojevi su oprani sa 10% zasićenim slanim rastvorom (200 mL) i koncentrovan pod sniženim pritiskom (50±5°C, 50 ~ 100 mbar) da bi se dobilo 46 g (1RS,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-(5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazin-2-il)-3-fluorocikloheksankarboksilne kiseline koja je korišćena tokom sledeće faze bez dodatnih prečišćavanja. HPLC retenciono vreme = 7.390 min (Instrument: Agilent Technologies serije 1200. Kolona: Waters Xbridge C18, 150*3.0 mm, 3 um. Temperatura kolone: 35<o>C. Protok: 0.70 mL/min. Detekcija: 210 nm/ DAD. Sastav mobilne faze: A: 0.1% H3PO4u vodi; B: acetonitril. Gradijent: 0 min: 90% A, 10% B; 5 min: 100% B; 11 min 100% B), LC-MS: [M+H]<+>= 448.2415.
[0625] U balon od 500 mL dodata je (1RS,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-1-(5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazin-2-il)-3-fluorocikloheksankarboksilna kiselina (46 g), toluen (250 mL) i HOAc (0.8 g, 13.3mmol) pod azotom. Reakciona smeša je refluksovana tokom 1 časa i zatim ohladjena do sobne temperature pre dodavanja 6% vodenog rastvora NaHCO3(200 mL). Faze su izdvojene i vodeni sloj je ekstrahovan sa heptanom (250 mL). Kombinovani organski sloj je opran sa 10% zasićenim slanim rastvorom (200 mL) i koncentrovan pod sniženim pritiskom (50±5°C, 50 ~ 100 mbar) da bi se dobilo ulje. Posle dodatka 80 mL metanola ostatku, smeša je zagrevana do 55±5°C i mešana tokom 1 časa. Temperatura je snižena do 25±5°C tokom perioda od 2 časa i mešana tokom dodatna 2-3 časa. Rezultujuća suspenzija je filtrirana i vlažni kolač je osušen pod sniženim pritiskom (50±5°C, 50 ~ 100 mbar) tokom 3 časa da bi se dobilo 8.6 g 2-((1S,3S,4S)-4((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazina kao kristalna čvrsta supstanca (dr > 99:1). Matična tečnost je koncenterovana pod sniženim pritiskom (50±5°C, 50 ~ 100 mbar) da bi se dobilo 34.5 g (71 mmol) tamnog ulja. U ovaj ostatak dodat je<t>BuOH (200 mL), a nakon toga<t>BuOK (8.0 g, 71 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 90±5°C i mešana tokom 3 časa. Posle snižavanja temperature do sobne temperature, 10% vodeni rastvor NaHCO3(150 mL) je dodat, a nakon toga heptan (200 mL) i smeša je mešana tokom još 10 minuta. Faze su razdvojene i vodeni sloj je opran heptanom (200 mL). Kombinovani organski slojevi su oprani sa 10% zasićenim slanim rastvorom (150 mL) i koncentrovani pod sniženim pritiskom (50±5°C, 50 ~ 100 mbar) da bi se dobio uljani ostatak. U ovaj ostatak dodat je metanol (60 mL), i smeša je zagrevana do 55±5°C. Posle mešanja tokom 1 časa, smeša je ohladjena do 25±5°C tokom perioda od 2 časa, a nakon toga mešana tokom još 2 časa. Suspenzija je filtrirana i rezultujući vlažni kolač je osušen pod sniženim pritiskom (50±5°C, 50 ~ 100 mbar) tokom 3 časa da bi se dobila druga serija 2-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazina kao kristalna čvrsta supstanca (5.6 g, dr = 98:2). Ukupni prinos 4 faze polazeći od 2-bromo-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazina je 51.8%. mp = 100.6°C ~ 102.9°C. LC/MS: [M+H]<+>= 404.2459,<1>H NMR(400MHz, DMSO-d6): 8.53 (s, 1 H), 8.50 (s, 1 H), 5.75 (s, 2 H), 4.25 ~ 4.43 (m, 1 H), 3.60 ~ 3.69 (m, 1 H), 3.25 (s, 6 H), 2.93 ~ 3.00 (m, 1 H), 2.19 ~ 2.27 (m, 1 H), 1.98 (s, 6 H), 1.72 ~ 1.90 (m, 3 H), 1.39 ~ 1.61 (m, 2 H), 0.80 (s, 9H), 0.01 (d, J = 4 Hz, 6 H)., HPLC (Instrument : Agilent Technologies serije 1200. Kolona: Waters Xbridge C18, 150*3.0 mm, 3 um. Temperatura kolone: 35<o>C. Protok: 0.70 mL / min. Detekcija: 210 nm/ DAD. Sastav mobilne faze: A: 0.1% H3PO4u vodi; B: acetonitril. Gradijent: 0 min: 90% A, 10% B; 5 min: 100% B; 11 min 100% B) Retenciono vreme: 8.084 min za 2-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazin, 8.324 min za 2-((1R,3S,4S)-4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazin.
2-bromo-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazin
[0626]
[0627] U bocu od 250 mL dodat je 5-bromopirazin-2-amin (18 g, 10.35 mmol), heksan-2,5-dion (14.5g, 12.41 mmol) i PPTS (0.9 g, 0.36 mmol) u toluenu (60 mL). Reakciona smeša je zagrevana na refluksu u Dean-Stark petlji tokom 16 časova. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temeparature i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom (55±5°C, 50 ~ 100 mbar) da bi se dobio 2-bromo-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazin kao ulje (28 g, koje sadrži ~10% toluena, prinos ogleda: 95%). Ovaj materijal je korišćen bez dodatnog prečišćavanja. LC/MS: [M+H]<+>= 252.0139,<1>H NMR(400MHz, DMSO-d6): 8.87 (s, 1H), 8.63 (s, 1 H), 5.86 (s, 2 H), 2.10 (s, 6 H). HPLC retenciono vreme = 6.21 min, Instrument: Agilent Technologies serije 1200. Kolona: Waters Xbridge C18, 150*3.0 mm, 3 um. Temperatura kolone: 35<o>C. Protok: 0.70 mL / min. Detekcija: 210 nm/ DAD. Sastav mobilne faze: A: 0.1% H3PO4u vodi; B: acetonitril. Gradijent: 0 min: 90% A, 10% B; 5 min: 100% B; 11 min 100% B.
5-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)pirazin-2-amin
[0628]
[0629] U mešanu suspenziju 2-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazina (1250 g, 3097 mmol) u etanolu (7.5 kg) dodat je hidroksilamin hidrohlorid (860.9 g, 12388.2 mmol) a nakon toga trietilamin (642.5 g, 6349.0 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na refluksu (77-78°C) tokom 42 časa, i zatim ohladjena do oko 40°C. Posle destilacije 6 kg etanola pod vakuumom (<100 mbar ) na 40°C, smeša je ohladjena do sobne temperature, razblažena sa MTBE (7.0 kg) i vodom (8.0 kg). Posle mešanja tokom 10 minuta, organski sloj je izdvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa MTBE (6.0 Kg). Kombinovani organski slojevi su oprani uzastopno sa 2×12 kg vode i 8 kg 10% zasićenog slanog rastvora. MTBE sloj je koncentrovan pod vakuumom (<100 mbar ) da bi se dobilo 1.2 kg žute čvrste supstance kao sirovi proizvod. Sirovi proizvod je rastvoren u 2 kg DCM i dalje prečišćen preko silika kolone hromatografijom eluiranjem sa EtOAc i heptanom (1/6, zapr./zapr.) da bi se izdvojio 2-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)pirazin (310 g), zatim eluiranjem sa EtOAc i heptanom (1/3, zapr./zapr.) da bi se dobio 5-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)pirazin-2-amin (650 g, 64.5% prinosa) kao svetlo žuta čvrsta supstanca, mp 113-116°C. ESI-MS (m/z): 326.1940 ([M+H]<+>, 100). HPLC (postupak A), retenciono vreme 12.26 min.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): 7.93 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 4.50 (br.
s, 2H), 4.41-4.46, 4.27-4.31 (m, 1H), 3.65-3.74 (m, 1H), 2.68-2.74 (m, 1H), 2.24-2.30 (m, 1H), 1.97-2.02 (m, 1H), 1.74-1.87 (m, 2H), 1.44-1.63 (m, 2H), 0.91 (s, 9H), 0.10 (d, J = 8Hz, 6H).
terc-butil 4-(3-amino-6-((1S, 3S, 4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0630]
[0631] Rastvor 5-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)pirazin-2-amina (620.0 g, 1904.8 mmol) u DMSO (5 L) i vodi (400 mL) je ohladjen do ~4°C. NBS (389.8 g, 2190.5 mmol) je dodat u 10 porcija tokom 1 časa i temperatura reakcije je kontrolisana ispod 5°C sa neprekidnim mešanjem tokom 30 minuta. Posle dodavanja 0.3 M vodenog rastvora Na2CO3(8.5 kg), temperatura reakcije je povećana do 35°C. MTBE (4.5 kg) je dodat i smeša je mešana tokom još 10 minuta. Posle razdvajanja faza, vodeni sloj je ekstrahovan sa MTBE (4 kg). Kombinovani organski slojevi su oprani uzastopno sa 0.3 M vodenim rastvorom Na2CO3(8.5 kg) i vodom (8 kg), i koncentrovani pod vakuumom na 30-40°C da bi se dobio sirovi proizvod 3-bromo-5-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)pirazin-2-amin kao pena (770 g). Ovaj sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. ESI-MS (m/z): 404.1105, 406.1093 ([M+H]<+>, 100). HPLC (postupak A), retenciono vreme = 14.38 min.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): 7.81 (s, 1H), 4.99 (br. s, 2H), 4.37-4.42, 4.25-4.30 (m, 1H), 3.66-3.72 (m, 1H), 2.67-2.73 (m, 1H), 2.26-2.29 (m, 1H), 1.97-2.02 (m, 1H), 1.74-1.87 (m, 2H), 1.44-1.63 (m, 2H), 0.91 (s, 9H), 0.10 (d, J = 8 Hz, 6H).
[0632] Rastvoru 3-bromo-5-((1S, 3S, 4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)pirazin-2-amina (760.0 g, 1879.4 mmol) i terc-butil 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata (605.5 g, 1879.4 mmol) u DME (3.0 kg) dodat je 2.0 M vodeni rastvor Na2CO3(1880 mL, 3760 mmol) i Pd(dppf)Cl2·DCM (38.4 g, 47.0 mmol). Posle degaziranja sa N2tri puta, reakciona smeša je zagrevana na refluksu (79-80°C) i mešana na ovoj temperaturi tokom 3 časa. Temperatura reakcije je ohladjena do sobne temperature i MTBE (2.5 kg) je dodat, a nakon toga voda (4.0 kg). Smeša je mešana tokom 10 minuta pre razdvajanja faza, i vodeni sloj je ekstrahovan sa MTBE (1.8 kg). Kombinovani organski slojevi su oprani vodom (2×4 kg), i koncentrovani pod vakuumom na 30-40°C da bi se dobio sirovi proizvod terc-butil 4-(3-amino-6-((1S, 3S, 4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (ca. 1 kg). Smeša ovog sirovog proizvoda i EtOH (95%, 3.2 kg) je zagrevana na refluksu (78-80°C) tokom 30 minuta da bi se dobio rastvor. Temperatura smeše je snižena do 40°C u okviru 100 minuta, a nakon toga je dodavana voda (800 g) tokom 30 minuta. Temperatura smeše je snižena do ~5°C u okviru 100 minuta i mešanje na ovoj temperaturi je nastavljeno tokom još 60 minuta. Čvrsti talog je filtriran i vlažni kolač je opran smešom EtOH/voda (1.2 L, 5/1, zapr./zapr.). Posle sušenja pod vakuumom na 50°C tokom 5 časova, terc-butil 4-(3-amino-6-((1S, 3S, 4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat je dobijen kao smedji prah (755g, 76.4% prinosa tokom 2 faze, čistoća je 98.8%). mp 169-172°C. ESI-MS (m/z): 520.2739 ([M+H]<+>, 100). HPLC (postupak A) retenciono vreme 15.76 min.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): 7.98 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.61 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8 Hz, 1H), 4.68 (br. s, 2H), 4.42-4.48, 4.30-4.36 (m, 1H), 3.67-3.76 (m, 1H), 2.75-2.83 (m, 1H), 2.28-2.36 (m, 1H), 1.98-2.05 (m, 1H), 1.83-1.92 (m, 2H), 1.46-1.68 (m, 2H), 1.62 (s, 9H), 0.92 (s, 9H), 0.11 (d, J = 8 Hz, 6H).
4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0633]
[0634] U suspenziju terc-butil 4-(3-amino-6-((1S, 3S, 4S)-4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-fluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (685.0 g, 1318.0 mmol) u EtOH (3.6 kg) dodat je vodeni rastvor HCl (36%, 400.5 g, 3954.2 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 30°C i mešana tokom 4 časa. Temperatura reakcije je snižena do 5°C i rastvor NaOH (342.7g, 8567.5 mmol) u vodi (1.6 kg) je dodat. Reakciona smeša je zagrevana do 30°C i mešana na ovoj temperaturi tokom 18 časova. pH reakcione smeše je podešen do 5 korišćenjem 4 N vodenog rastvora HCl da bi došlo do talženja čvrste supstance. Posle destilacija EtOH pod vakuumom na 40-50°C, ostatku je dodata voda (2.5 kg) i temperatura je snižena do 5°C u okviru 1 časa. Suspenzija je filtrirana, čvrsta supstanca je sakupljena i osušena pod vakuumom (<100 mbar) na 50-60°C tokom 24 časa da bi se dobila 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina kao smedji prah (460 g, HPLC čistoća na 230 nm je 98.2%, kvantitativni prinos). Mp 226-228°C. ESI-MS (m/z): 350.1282 ([M+H]<+>, 100). HPLC (postupak A), retenciono vreme 5.93 min.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-D6): 13.32 (br. s, 1H), 8.00 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8 Hz, 1H), 6.24 (br. s, 2H), 5.16 (br. s, 1H), 4.44-4.49, 4.30-4.35 (m, 1H), 3.50-3.60 (m, 1H), 2.79-2.84 (m, 1H), 2.20-2.25 (m, 1H), 1.92-1.99 (m, 1H), 1.72-1.83 (m, 2H), 1.50-1.60 (m, 1H), 1.36-1.46 (m, 1H).
4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamid
[0635]
[0636] Rastvoru 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (300 g, 95% ogled, 815.8 mmol) i (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzensulfonamid hidrohlorida (397.7 g, 848.5 mmol) u DMF (2.5 kg) dodata je DIPEA (421.8 g, 3263.4 mmol), a nakon toga EDCI (312.8 g, 1631.7 mmol) i HOAt (222.1g, 1631.7 mmol). Nakon mešanja reakcione smeše na 25°C tokom 18 časova, temperatura reakcije je snižena do 10°C pre dodvanja IPAC (3.5 kg) i vode (4.0 kg). Smeša je mešana tokom 10 minuta i zatim su slojevi razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa IPAC (2.5 kg). Kombinovani organski slojevi su oprani uzastopno sa 10% vodenim rastvorom Na2CO3(4.5 kg) i vodom (2×4 kg), i zatim koncentrovani pod vakuumom (<100 mbar) na 40-45°C da bi se dobio 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamid kao pena (670 g, čistoća probe je 93%), koji je korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. ESI-MS (m/z): 763.1216, 765.1161 ([M+H]<+>, 100). Mp=115-117<o>C. HPLC (postupak A), retenciono vreme = 10.57 min.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): 8.11 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.99 (m, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.59-7.72 (m, 5H), 7.35 (s, 1H), 7.19 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.46 (br. s,1H), 4.77 (br. s, 2H), 4.48-4.55, 4.35-4.42 (m, 1H), 3.93 (q, J1= 12 Hz, J1= 16 Hz, 1H), 3.73-3.82 (m, 1H), 3.33 (q, J1= 4 Hz, J1= 12 Hz, 1H), 3.00 (s, 3H), 2.78-2.85 (m, 1H), 2.31-2.37 (m, 1H), 2.12-2.20 (m, 1H), 1.84-1.96 (m, 2H), 1.60-1.71 (m, 1H), 1.47-1.56 (m, 1H).
[0637] U suspenziju 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)-pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenil-sulfonamido)etil)-2-fluorobenzamida (500 g sirovog proizvoda iz prethodne faze) u DMF (2.0 kg) dodata je 4-merkaptobenzoeva kiselina (161.5 g, 1047.7 mmol). Reakciona smeša je postala rastvor posle 5 minuta i zatim je ohladjena do 10°C. Posle dodatka LiOH·H2O (137.3 g, 3274.0 mmol) u jednoj porciji, smeša je mešana na 25°C tokom 3 časa pre nego što je temperatura snižena do 10°C. Reakciona smeša je razblažena vodom (3.0 kg) i ekstrahovana sa IPAC (3*2.5 kg). IPAC slojevi su prvo oprani sa 15% vodenim rastvorom Na2CO3(2x3.0 kg) a nakon toga vodom (2x3.0 kg), i zatim koncentrovani pod vakuumom (<100 mbar) na 40-45°C. U rezultujući ostatak dodat je MeCN (1.8 kg) da bi se dobio bistar rastvor, koji je zagrevan u 50°C i mešan tokom 30 minuta. Smeša je dalje ohladjena do 10°C za 2 časa i mešana na ovoj temperaturi tokom još 1 časa. Posle filtracije rezultujuće suspenzije, čvrsti kolač je opran prethodno ohladjenim MeCN (400 g, 5°C). Vlažni kolač je osušen pod vakuumom (<100 mbar) na 80°C tokom 18 časova da bi se dobio 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamid kao kristalna čvrsta supstanca (245 g, ukupni prinos tokom 2 faze je 66%, HPLC čistoća = 98.3%, hiralna čistoća = 99.0% ). Mp 115-117°C. ESI-MS (m/z): 578.1381, 580.1381 ([M+H]<+>, 100). HPLC (postupak A), retenciono vreme = 7.24 min.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-D6): 8.82 (d, J = 8 Hz, 1H), 8.0 (s, 1H), 8.82 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.48 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8 Hz, 1H), 6.21 (br. s, 2H), 5.18 (m, 2H), 4.46-4.52, 4.32-4.37 (m, 1H), 3.52-3.60 (m, 1H), 2.80-2.94 (m, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.23-2.25 (m, 1H), 1.95-1.98 (m, 1H), 1.76-1.86 (m, 3H), 1.51-1.62 (m, 1H), 1.39-1.48 (m, 1H).
[0638] Slobodna baza obrazovana od 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida je pripremljena suspendovanjem 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida (200mg) u 4 ml nitrometana na sobnoj temperaturi. Suspenzija je zagrevana do 55<o>C dok rastvor nije postao bistar. Sprovedeno je osam ciklusa zagrevanja-hladjenja u temperaturnom opsegu 55<o>C do 5<o>C. Čvrsta supstanca je dobijena filtracijom i osušena pod vakuumom na 40<o>C preko noći. Obrazac difrakcije X-zraka na prahu slobodne baze odredjen je na slici 1. DSC/TGA termograf slobodne baze 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida obezbedjen je na slici 2.
[0639] Oblik HCl soli 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida je pripremljen rastvaranjem amorfnog 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida (120 mg) u 0.5N HCl etanolnom rastvoru (414 μL) uz mešanje na sobnoj temperaturi. Talog je zapažen posle 5 minuta mešanja. DSC/TGA termograf visoko kristalnog oblika HCl soli 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida dat je na slici 4. Obrazac difrakcije X-zraka na prahu slobodne baze odredjen je na slici 3. Najznačajniji vrhovi XRPD na slici 3 prikazani su u tabeli:
Primeri 185 i 186
Sinteza 4-(3-amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida i 4-(3-amino-6-((1S,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0640]
Šema 87
Faza 1. Terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0641] terc-Butil 4-(3-amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (154 mg, 0.38 mmol) je podvrgnut hiralnom razdvajanju (ChiralPak 5mic AD kolona, 4.6x100 (mm), CO2/IPA+0.1% DEA=75/25, SFC=5ml/min) da bi se dobio polarni enantiomer, terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (Rt = 1.86 min, 63 mg, 0.155 mmol, 41%) i manje polarni enantiomer, terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (Rt = 2.91, 70 mg, 0.173 mmol, 46%). Apsolutna stereohemija je dodeljena proizvoljno.
Faze 2 i 3. 4-(3-amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina i 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0642] Rastvoru svakog estra (1 mmol) u DCM (2 mL) dodata je 4 M HCl u dioksanu (30 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 dana. Posle uparavanja isparljivih materijala u vakuumu, reakciona smeša je triturisana sa Et2O i filtrirana da bi se dobila 4-(3-amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (60 mg iz 63 mg estra) odnosno 4-(3-amino-6-((1S,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (59 mg iz 70 mg estra) kao HCl so, koje su korišćene u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 350.2 (MH<+>), 0.5 min (za svaku kiselinu).
Faza 4 i 5. 4-(3-amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid i 4-(3-amino-6-((1S,3S,4R)-3-fluoro-4hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0643] Rastvoru svake kiseline (20 mg, 0.057 mmol) u DMF (573 µL) dodata je HCl so (S)-2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etanola (18.59 mg, 0.069 mmol), aza-HOBt (11.69 mg, 0.086 mmol), EDC (21.95 mg, 0.115 mmol), i DIEA (30.0 µl, 0.172 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 15 h. Dodata je voda, i reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc tri puta. Organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću HPLC. Čiste frakcije su osušene zamrzavanjem da bi se dobio željeni proizvod (11 mg, 0.016 mmol, 28%) u vidu soli TFA redom. Za 4-(3-amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid, LCMS (m/z): 565.1/567 (MH<+>), 0.74 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.95 - 7.79 (m, 1H), 7.76 - 7.59 (m, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.33 - 7.14 (m, 2H), 5.24 - 5.10 (m, 1H), 4.75 - 4.49 (m, 1H), 4.16 (br. s., 2H), 3.96 - 3.77 (m, 4H), 2.80 (t, J=12.5 Hz, 2H), 2.25 (dq, J=7.6, 11.9 Hz, 2H), 2.08 - 1.78 (m, 7H), 1.76 - 1.55 (m, 4H). Za 4-(3-amino-6-((1S,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid, LCMS (m/z): 565.1/567.1 (MH<+>), 0.74 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.84 - 7.70 (m, 2H), 7.66 - 7.49 (m, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.24 - 7.05 (m, 2H), 5.09 (d, J=5.5 Hz, 1H), 4.66 - 4.41 (m, 1H), 4.07 (br. s., 1H), 3.88 - 3.65 (m, 2H), 2.71 (t, J=12.9 Hz, 1H), 2.16 (dq, J=7.4, 12.0 Hz, 1H), 1.99 - 1.70 (m, 3H), 1.66 - 1.47 (m, 2H). Apsolutna stereohemija još nije odredjena.
Primeri 187 i 188
Sinteza 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida i 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0644]
Šema 88
Faza 1. (+/-)-terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0645] Rastvoru (+/-)-terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3S)-3-fluoro-4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (208 mg, 0.516 mmol) u MeOH (3.017 mL) dodat je NaBH4(29.3 mg, 0.773 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana tokom 2 h. LCMS je pokazala odnos ~4:1 dva dijastereomera. Posle kvenčovanja rastvorom NaHCO3, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtran i koncentrovan u vakuumu. Glavni dijastereomer je izdvojen pomoću neutralne preparativne HPLC. Posle sušenja zamrzavanjem, (+/-)-terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat je dobijen sa 35.8% prinosa. (74.9 mg). LCMS (m/z): 406.3 (MH<+>), 0.80 min. Relativna stereohemija (+/-)-terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata je potvrdjena pomoću NMR.
Faza 2. terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat i terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0646] (+/-)-Terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (74.9 mg, 0.185 mmol) je podvrgnut hiralnoj SFC (ChiralPak 5mic AD kolona, 4.6x100 (mm), CO2/EtOH+0.1%, DEA=80/20, SFC=5mL/min) da bi se dobio polarni enantiomer, terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (Rt = 1.95 min, 33 mg, 44%) i manje polarni enantiomer, terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (Rt = 3.17, 35 mg, 46%). Apsolutna stereohemija je dodeljena proizvoljno.
Faza 3 i 4. 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina i 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0647] Rastvoru svakog estra (1 mmol) dodata je 4 M HCl u dioksanu (111 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 dana. Posle uparavanja isparljivik materijala u vakuumu, reakciona smeša je triturisana sa Et2O i filtriran da bi se dobila 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (31 mg iz 33 mg estra), LCMS (m/z): 350.2 (MH<+>), 0.47 min, odnosno 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (33 mg iz 35 mg estra), LCMS (m/z): 350.2 (MH<+>), 0.48 min, kao HCl so, koje su korišćene u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja.
Faza 5 i 6. 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid i 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0648] Prateći fazu 8 na šemi 85, korišćenjem 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline, dobijen je 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid. LCMS (m/z): 565.0/567.1 (MH<+>), 0.71 min; 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 7.93 - 7.78 (m, 2H), 7.73 - 7.55 (m, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.33 - 7.13 (m, 2H), 5.17 (t, J=5.9 Hz, 1H), 3.95 - 3.78 (m, 2H), 3.75 - 3.42 (m, 1H), 3.09 - 2.93 (m, 1H), 2.32 - 2.14 (m, 1H), 2.05 - 1.79 (m, 5H), 1.80 - 1.59 (m, 1H). Korišćenjem 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina, dobijen je 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid. LCMS (m/z): 565.0/567.1 (MH<+>), 0.71 min; 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 7.95 - 7.80 (m, 2H), 7.75 - 7.56 (m, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.33 - 7.12 (m, 2H), 5.17 (t, J=5.9 Hz, 1H), 3.96 - 3.78 (m, 2H), 3.76 - 3.55 (m, 1H), 3.10 - 2.95 (m, 1H), 2.31 - 2.12 (m, 1H), 2.08 - 1.82 (m, 5H), 1.79 - 1.62 (m, 1H).
Primer 189
Sinteza 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamida
[0649]
Šema 89
Faza 1. (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etanol hidrohlorid
[0650] (S)-terc-butil (1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)karbamat (2.507 g, 6.58 mmol) je rastvoren u DCM (60 mL) i obradjen sa 4 N HCl u dioksanu (4.93 mL, 19.73 mmol). Smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Nakon što je veći deo rastvarača pažljivo uparen u vakuumu, gusta suspenzija je titurisana sa Et2O da bi se dobilo 1.525 g fine bele HCl soli (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etanola (72%), koja je izdvojena sukcionom filtracijom. LCMS (m/z): 282.4 (MH<+>), 0.46 min.
Faza 2. 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamid
[0651] Rastvoru 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (16 mg, 0.046 mmol) u DMF (0.46 mL) dodat je (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etanol hidrohlorid (17.5 mg, 0.055 mmol), HOAt (9.35 mg, 0.069 mmol), EDC (17.6 mg, 0.092 mmol), i DIEA (24 µl, 0.137 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 15 h. Posle dodavanja vode, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc i organski sloj je opran vodom dvaput. Organski sloj je izdvojen i osušen iznad Na2SO4, filtran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromtografijom eluiranjem smešom rastvarača 0-100% EtOAc/heptan da bi se dobio sirovi proizvod, koji je triturisan sa 70% DCM/etar da bi se dobilo 9.3 mg 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamida u vidu soli TFA (28%). LCMS (m/z): 613.1 (MH<+>), 0.74 min; 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 7.93 - 7.78 (m, 2H), 7.76 - 7.57 (m, 3H), 7.73 - 7.56 (m, 3H), 7.43 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.21 (d, J=9.4 Hz, 1H), 5.15 (t, J=5.9 Hz, 1H), 4.37 (m, 1H), 3.83 (m, 2H), 3.63 (m, 1H), 2.84 (t, J=11.7 Hz, 1H), 2.27 (dd, J=2.9, 9.2 Hz, 1H), 2.14 - 1.98 (m, 1H), 1.96 -1.75 (m, 2H), 1.65 (dq, J=3.3, 13.0 Hz, 1H), 1.56 - 1.34 (m, 1H).
Sinteza (S)-2-(4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil dihidrogen fosfata
[0652]
Faza 1. (S)-(9H-fluoren-9-il)metil (1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)karbamat:
[0653] U (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etanol (4500 mg, 14.17 mmol) dodat je THF (zapremina: 40 mL, odnos: 2.67) i voda (zapremina: 15 mL, odnos: 1.000), a nakon toga NaHCO3(4762 mg, 56.7 mmol). Smeša je mešana tokom 2 minuta zatim ohladjena do 0°C u ledenom kupatilu. U reakciju je dodat (9H-fluoren-9-il)metil karbonohloridat (5499 mg, 21.26 mmol) i reakcija je mešana na 0°C tokom 30 minuta, ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana tokom još 60 minuta, pre izvodjenja LCMS. Etil acetat je dodat u sirovu reakcionu smešu. Smeša je oprana vodom (2x), zasićenim slanim rastvorom, osušena natrijum sulfatom, filtrirana i koncentrovana do ostatka. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu korišćenjem kolone od 300 g (čvrsto punjenje) eluiranjem od 0-60% etil acetata u heptanu. Željene frakcije su koncentrovane do nepromenljive mase da bi se dobilo 5375 mg bele čvrste supstance željenog proizvoda u vidu slobodne baze, koji je korišćen kao takav, (73% prinosa). LCMS (m/z): 504.1 (MH<+>), 1.05 min. 1H NMR (<cd3od>) d: 7.78 (d, J=7.4 Hz, 2H), 7.64 (d, J=7.2 Hz, 2H), 7.53 (s, 1H), 7.33-7.43 (m, 3H), 7.25-7.33 (m, 2H), 7.07 (d, J=9.2 Hz, 1H), 4.64 (t, J=5.9 Hz, 1H), 4.31-4.46 (m, 2H), 4.21 (t, J=6.3 Hz, 1H), 3.66 (d, J=3.1 Hz, 2H).
[0654] Faza 2. (S)-(9H-fluoren-9-il)metil (2-((di-terc-butoksiphosphoril)oksi)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)karbamat: U (S)-(9H-fluoren-9-il)metil (1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)karbamat (5260 mg, 10.45 mmol) dodat je imidazol (818 mg, 12.02 mmol), imidazol HCl (1857 mg, 17.77 mmol), i DMF (Volume: 50 mL). Reakcija je je mešana da bi se rastvorila pod argonom tokom 2-3 minuta. Zatim je u kapima dodavan di-terc-butil diizopropilfosforamidit (4928 mg, 17.77 mmol) tokom 2-3 minuta i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 časa. Reakcija je praćena pomoću neutralne LCMS i pomoću TLC eluiranjem smešom etil acetat/heptan u odnosu 1:1. Sirova reakciona smeša je smeštena u vodeno kupatilo, polako je dodat hidrogen peroksid 30% (5.34 mL, 52.3 mmol), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, nakon čega je uradjena LCMS. Sirova reakciona smeša je smeštena u ledeno kupatilo i dodavan je (pažljivo) u kapima zasićeni rastvor natrijum tiosulfata tokom 5-10 minuta. U sirovu reakcionu smešu dodato je 800 ml etil acetata, smeša je oprana vodom (3x), zasićenim slanim rastvorom, osušena natrijum sulfatom, filtrirana i koncentrovana do ostatka. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu korišćenjem kolone od 300 g eluiranjem od 0-55% etil acetata u heptanu. Željeni pik je koncentrovan do nepromenljive mase da bi se dobilo 6560 mg željenog proizvoda u vidu slobodne baze, koji je korišćen kao takav, (86% prinosa). LCMS (m/z): 696.3 (MH<+>) slabo, 1.25 min. Zapaziti: -112 fragment na 584.2 je glavni jon u LCMS kao što je očekivano od gubitka dve t-butil zaštitne grupe. 1H NMR (<cd3od>) d: 7.79 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.64 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.58 (s, 1H), 7.45 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.34-7.42 (m, 2H), 7.22-7.32 (m, 2H), 7.12 (d, J=9.1 Hz, 1H), 4.90 (t, J=6.0 Hz, 1H), 4.41-4.48 (m, 1H), 4.31-4.40 (m, 1H), 4.21 (t, J=6.6 Hz, 1H), 4.08 (t, J=6.3 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.40 (s, 9H).
[0655] Faza 3. (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil di-terc-butil fosfat: U (S)-(9H-fluoren-9-il)metil (2-((di-terc-butoksifosforil)oksi)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)etil)karbamat (6450 mg, 9.27 mmol) dodat je DMF (Volume: 90 mL), a nakon toga piperidin (25 mL, 253 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, nakon čega je uradjena LCMS. U sirovu reakcionu smešu dodato je 750 ml etil acetata, smeša je oprana zasićen natrijum bikarbonatom (2x), vodom (5x), zasićenim slanim rastvorom, osušena natrijum sulfatom, i filtrirana. Rastvarač je uklonjen koncentrovanjem do nepromenljive mase pod visokim vakuumom da bi se dobio željeni sirovi proizvod, koji uključuje nečistoću koja potiče od FMOC piperidina, koji je korišćen kao takav. LCMS (m/z): 474.2 (MH<+>), 0.80 min.
[0656] Faza 4. (S)-2-(4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil di-terc-butil fosfat: Rastvoru 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (3927 mg, 9.3 mmol) u NMP (Volume: 60 mL) dodat je (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil di-terc-butil fosfat (4740 mg, 9.30 mmol), DIEA (9.75 mL, 55.8 mmol), i zatim HATU (5304 mg, 13.95 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 časa nakon čega je uradjena LCMS. U sirovu reakcionu smešu dodato je 850 ml etil acetata, smeša je oprana zasićenim bikarbonatom (2x), vodom (3x), zasićenim slanim rastvorom, osušena natrijum sulfatom, filtrirana i osušena do ostatka. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom na koloni od 330g eluiranjem sa 0-70% (EtOAc sa 10% MeOH)/heptan. Željeni pik je koncentrovan do nepromenljive mase da bi se dobilo 5.75 grama sirovog proizvoda. Materijal je ponovo prečišćen pomoću silika gel hromatografije na koloni od 330g eluiranjem sa 0-60% (EtOAc sa 10% MeOH)/heptan da bi se dobilo 5.03 grama sirovog proizvoda. Materijal je dodtno prečišćen dodavanjem 1200 ml etil acetata za rastvaranje i 200 ml heptana, opran sa 200 ml 0.5 N HCl (5x), vodom, zasićenim natrijum bikarbonatom, vodom (3x), zasićenim slanim rastvorom, osušen natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan do nepromenljive mase da bi se dobilo 4.70 grama željenog proizvoda, koji je korišćen kao takav. (61% prinosa u dve faze). LCMS (m/z): 805.4 (MH<+>), 0.99 min. 1H NMR (<cd3od>) d: 7.90 (s, 1H), 7.77-7.86 (m, 1H), 7.68-7.73 (m, 2H), 7.63 (dd, J=11.8, 1.2 Hz, 1H), 7.42-7.52 (m, 1H), 7.26 (d, J=9.5 Hz, 1H), 5.43 (t, J=5.7 Hz, 1H), 4.30-4.49 (m, 1H), 4.28 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.58-3.72 (m, 1H), 2.83 (t, J=11.6 Hz, 1H), 2.27 (dt, J=6.2, 3.1 Hz, 1H), 2.02-2.13 (m, 1H), 1.77-1.94 (m, 2H), 1.58-1.74 (m, 1H), 1.48-1.55 (m, 1H), 1.45 (d, J=5.8 Hz, 18H).
[0657] Faza 5. (S)-2-(4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil dihidrogen fosfat: (S)-2-(4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil diterc-butil fosfat (4600 mg, 5.72 mmol) je potpuno rastvoren u MeOH (zapremina: 70 mL). Zatim je dodata 4M HCl u dioksanu (14.29 mL, 57.2 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 časa, nakon čega je uradjena LCMS. Rastvarač je uglavnom uklonjen koncentrovanjem. Zatim je dodat MeOH (zapremina: 70 mL) i rastvarač je uklonjen koncentrovanjem do ostatka, dodato je još MeOH (zapremina: 70 mL) i ostatak je koncentrovan do nepromenljive mase. Proizvod je rastvoren u 90 ml smeše ACN/voda u odnosu 1:1 i osušen zamrzavanjem da bi se dobilo 3.99 grama željenog proizvoda kao HCl so. (94% prinosa). LCMS (m/z): 692.9 (MH<+>), 0.63 min. 1H NMR (<cd3od>) d: 7.84-7.93 (m, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.60-7.71 (m, 3H), 7.45-7.51 (m, 1H), 7.26 (dt, J=9.7, 1.6 Hz, 1H), 5.40 (t, J=5.9 Hz, 1H), 4.31-4.50 (m, 1H), 4.22-4.30 (m, 2H), 3.64 (tdd, J=11.7, 8.6, 5.1 Hz, 1H), 2.82-2.98 (m, 1H), 2.32 (ddt, J=11.7, 5.8, 2.8 Hz, 1H), 2.01-2.15 (m, 1H), 1.89-1.97 (m, 1H), 1.75-1.89 (m, 1H), 1.58-1.72 (m, 1H), 1.42-1.55 (m, 1H). 31P NMR (<cd3od>) d: 0.00 (s, 1P).
[0658] Konverzija HCl soli u di-natrijumovu so: U gore navedeni željeni proizvod u vidu HCl soli (24 mg, 0.035 mmol) dodata je voda (zapremina: 17 mL) zatim je titrisan sa 2M natrijum karbonatom do pH 10-11 i zatim ekstrahovan sa 15 ml DCM (4x). Bazna voda je neposredno naneta na reverzno-faznu kolonu Grace Reveleris C18 od 12 grama, eluirana sa 0-20% ACN/voda tokom 18 minuta pri protoku od 15 ml/minutu, bez pufera. Željene frakcije su osušene zamrzavanjem da bi se dobilo 18 mg željenog proizvoda (S)-2-(4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil dihidrogen fosfata kao di-natrijumova so, odredjeno analizom protiv-jona. (70% prinosa). LCMS (m/z): 692.9 (MH+), 0.64 min. 1H NMR (<cd3od>) d: 7.82-7.92 (m, 2H), 7.64-7.72 (m, 2H), 7.58 (dd, J=11.4, 1.2 Hz, 1H), 7.39 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.28 (d, J=9.5 Hz, 1H), 5.17 (dd, J=6.9, 4.1 Hz, 1H), 4.25-4.49 (m, 1H), 4.02-4.20 (m, 2H), 3.57-3.73 (m, 1H), 2.83 (t, J=11.6 Hz, 1H), 2.27 (dd, J=6.1, 3.6 Hz, 1H), 1.98-2.14 (m, 1H), 1.78-1.94 (m, 2H), 1.59-1.73 (m, 1H), 1.40-1.55 (m, 1H).
Primer 190
Sinteza 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamida
[0659]
[0660] Rastvoru 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (18 mg, 0.052 mmol) u DMF (0.52 mL) dodat je (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etanol hidrohlorid (19.6 mg, 0.062 mmol), HOAt (10.52 mg, 0.077 mmol), EDC (19.76 mg, 0.103 mmol), i DIEA (27 µl, 0.155 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 15 h. Posle dodavanja vode, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc i organski sloj je opran vodom dvaput. Organski sloj je izdvojen i osušen iznad Na2SO4, filtran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc/heptan da bi se dobilo 15.8 mg 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamida kao slobodna baza (50%). LCMS (m/z): 613.1 (MH<+>), 0.74 min; 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 7.89 - 7.69 (m, 2H), 7.66 - 7.47 (m, 3H), 7.39 - 7.26 (m, 1H), 7.12 (d, J=9.4 Hz, 1H), 5.05 (t, J=5.9 Hz, 1H), 4.43 - 4.14 (m, 1H), 3.84 - 3.66 (m, 2H), 3.64 - 3.45 (m, 1H), 2.74 (t, J=11.7 Hz, 1H), 2.17 (td, J=3.1, 6.0 Hz, 1H), 2.05 - 1.87 (m, 1H), 1.84 - 1.66 (m, 2H), 1.65 - 1.47 (m, 1H), 1.47 - 1.27 (m, 1H).
Sinteza (S)-2-(4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil dihidrogen fosfata
[0661]
[0662] Faza 1. (S)-2-(4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil di-terc-butil fosfat: Rastvoru 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (215 mg, 0.509 mmol) u NMP (zapremina: 4 mL) dodat je (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil di-terc-butil fosfat (260 mg, 0.509 mmol), DIEA (0.534 mL, 3.06 mmol) i zatim HATU (290 mg, 0.764 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa, nakon čega je uradjena LCMS. U sirovu reakciju dodato je 150 ml etil acetata, smeša je oprana zasićenim bikarbonatom (2x), vodom (3x), zasićenim slanim rastvorom, osušena natrijum sulfatom, filtrirana i osušena do ostatka. Sirovi proizvod je prečišćen silika gel hromatografijom na koloni od 24 g (DCM punjenje) eluiranjem sa 0-80% (EtOAc sa 10% MeOH)/heptan. Željene frakcije su koncentrovane do nepromenljive mase da bi se dobilo 315 mg željenog proizvoda u vidu slobodne baze. (77% prinosa). LCMS (m/z): 805.3 (MH<+>), 1.01 min.
[0663] Faza 2. (S)-2-(4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil dihidrogen fosfat: Rastvoru (S)-2-(4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etil di-terc-butil fosfata (315 mg, 0.392 mmol) dodata je 4M HCl u dioksanu (5 mL, 20.00 mmol) i metanol (zapremina: 0.5 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 časa nakon čega je uradjena LCMS. Rastvarač je uklonjen koncentrovanjem. Sirovi materijal je učinjen baznim i rastvoren sa 3M rastvorom NaOH sa minimalnom količinom dodatog MeOH. Materijal je prečišćen na reverzno-faznoj koloni Grace Reveleris C18 od 12 grama eluiranjem sa 0-15% ACN/voda tokom 18 minuta pri protoku od 15 ml/minutu, bez pufera. Željene frakcije su sakupljene, zakišeljene sa 1 M HCl do pH 1 i ekstrahovane etil acetatom (5x). Kombinovani organski sloj (800 ml) je opran minimalnom količinom vode (3x 25 ml) da bi se uklonile soli. Rastvarač je uklonjen koncentrovanjem, smeša je rastvorena u 1:1 ACN/voda i osušena zamrzavanjem da bi se dobilo 207 mg željenog proizvoda kao HCL so. (72% prinosa). LCMS (m/z): 693.2 (MH<+>), 0.64 min. 1H NMR (<cd3od>) d: 7.87 (s, 1H), 7.81-7.86 (m, 1H), 7.65-7.72 (m, 2H), 7.61 (dd, J=11.7, 1.6 Hz, 1H), 7.46 (ddd, J=8.0, 2.3, 1.4 Hz, 1H), 7.26 (dt, J=9.5, 1.9 Hz, 1H), 5.38 (t, J=5.7 Hz, 1H), 4.29-4.49 (m, 1H), 4.18-4.29 (m, 2H), 3.64 (tdd, J=11.6, 8.6, 4.9 Hz, 1H), 2.76-2.92 (m, 1H), 2.27 (ddd, J=8.8, 5.9, 2.5 Hz, 1H), 2.01-2.13 (m, 1H), 1.76-1.94 (m, 2H), 1.58-1.71 (m, 1H), 1.39-1.55 (m, 1H). 31P NMR (<cd3od>) d: 0.16 (br. s., 1P).
Primeri 191 i 192
Sinteza 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-aminocikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida i 4-(3-amino-6-((1s,4R)-4-aminocikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0664]
Šema 90
Faza 1. metil 4-(3-amino-6-(4-(benzilamino)cikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0665] U metil 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (300 mg, 0.874 mmol) dodat je MeOH ( 4 mL), fenilmetanamin (112 mg, 1.048 mmol) i poslednje suva molekulska sita od 4 Å. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Zatim je dodat NaBH4(165 mg, 4.37 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h nakon čega je uradjena LCMS. U reakciju je dodato 150 mL etil acetata, smeša je oprana zasićen natrijum bikarbonatom, vodom (2x), zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana do ostatka da bi se dobilo 352 mg željenog proizvoda, u odnosu trans prema cis od 2:1, koji je korišćen kao takav (93%). LCMS (m/z): 435.3 (MH<+>), 0.68 min i 0.72 min.
Faza 2. metil 4-(3-amino-6-(4-aminocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0666] U metil 4-(3-amino-6-(4-(benzilamino)cikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (350 mg, 0.806 mmol) u balonu okruglog dna koji je ispran argonom dodat je 10% Pd-C Degaussa, vlažan (171 mg, 0.161 mmol). Zatim je pod argonom špricem dodat MeOH (5 mL) i najzad balon sa vodonikom. Balon je ispražnjen i ponovo napunjen vodonikom šest puta. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 14 h. Reakcija je pročišćena argonom, zatim je pažljivo dodat 10% Pd-C Degaussa, vlažan (171 mg, 0.161 mmol). Nakon toga je dodat balon sa vodonikom, i balon je ispražnjen i ponovo napunjen vodonikom šest puta. Reakcija je mešana tokom dodatnih 10 h što čini ukupno 24 h, nakon čega je uradjena LCMS. Reakcija je isprana argonom i dodato je 35 mL DCM. Sirova smeša je filtrirana kroz čep od celita, i koncentrovana do nepromenljive mase da bi se dobilo 230 mg željenog proizvoda (koji ima odnos 2:1 trans prema cis), koji je korišćen kao takav (83%). LCMS (m/z): 345.2 (MH<+>), 0.48 min i 0.51 min.
Faza 3. metil 4-(3-amino-6-(4-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0667] U metil 4-(3-amino-6-(4-aminocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (230 mg, 0.668 mmol) dodat je DCM (5 mL), TEA (0.233 mL, 1.670 mmol), i Boc-anhidrid (0.186 mL, 0.801 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, nakon čega je uradjena LCMS. U reakciju je dodato 150 mL etil acetata, smeša je oprana zasićen natrijum bikarbonatom, vodom dvaput, zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana do nepromenljive mase da bi se dobilo 233 mg željenog proizvoda (koji ima odnos 2:1 trans prema cis), koji je korišćen kao takav (78%). LCMS (m/z): 445.2 (MH<+>), 0.92 min za oba.
Faza 4. 4-(3-amino-6-(4-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0668] U metil 4-(3-amino-6-(4-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (230 mg, 0.517 mmol) dodat je MeOH (2 mL), THF (2 mL) i zatim 1M vodeni rastvor litijum hidroksida (1.552 mL, 1.552 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Rastvarač je koncentrovan do ostatka, zatim je dodat THF (20 mL) i smeša je koncentrovana do ostatka. Zatim je ponovo dodat THF (20 mL) i smeša je ponovo koncentrovana do ostatka do nepromenljive mase da bi se dobio željeni proizvod, (koji ima odnos 2:1 trans prema cis), koji je korišćen kao takav. Pretpostavljen je kvanitativni prinos (0.517 mmol). LCMS (m/z): 431.2 (MH<+>), 0.78 min za oba.
Faza 5. (S)-terc-butil (4-(5-amino-6-(4-((1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-il)cikloheksil)karbamat
[0669] U 4-(3-amino-6-(4-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoevu kiselinu (222 mg, 0.516 mmol) dodat je DMSO (4 mL), Hunigova baza (0.450 mL, 2.58 mmol), (S)-2-amino-2-(3-hlorofenil)etanol (133 mg, 0.774 mmol) i zatim HATU (392 mg, 1.031 mmol). Reakcija je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. U reakciju je dodato 50 mL etil acetata, oprana je vodom dvaput, zasićenim slanim rastvorom, osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana do ostatka. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom korišćenjem kolone od 12 grama (čvrsto punjenje) eluiranjem sa 10-95% etil acetata u heptanu. Željene frakcije su koncentrovane do nepromenljive mase da bi se dobilo 252 mg proizvoda (koji ima odnos 2:1 trans prema cis), koji je korišćen kao takav (83% u dve faze). LCMS (m/z): 584.3 (MH<+>), 0.91 min za oba.
Faza 6. 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-aminocikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid i 4-(3-amino-6-((1s,4R)-4-aminocikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0670] U (S)-terc-butil (4-(5-amino-6-(4-((1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-il)cikloheksil)karbamat (252 mg, 0.431 mmol) dodat je DCM (8 mL) i zatim TFA (2 mL, 26.0 mmol). Reakcija je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Rastvarač je koncentrovan, smeša je ponovo rastvorena u DMSO, filtrirana, i prečišćena pomoću preparativne HPLC uz sakupljanje oba izomera. Glavni izomer, trans, eluiran je prvi, a manje zastupljen, cis izomer eluiran je drugi. Posle sušenja zamrzavanjem, dobijeno je 87 mg trans proizvoda 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-aminocikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida kao TFA so sa 34% prinosa. LCMS (m/z): 484.2 (MH<+>), 0.58 min;<1>H NMR (CD3OD) δ ppm 7.79 (s, 1H), 7.76 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.58 (dd, J=7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.52 (dd, J=11.9, 1.4 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.30 - 7.23 (m, 2H), 7.22 - 7.16 (m, 1H), 5.10 (t, J=5.9 Hz, 1H), 3.83 - 3.70 (m, 2H), 3.08 (tt, J=11.7, 3.9 Hz, 1H), 2.69 - 2.49 (m, 1H), 2.06 (d, J=10.6 Hz, 2H), 1.97 (d, J=12.9 Hz, 2H), 1.75 - 1.57 (m, 2H), 1.55 - 1.31 (m, 2H).
[0671] Dodatno, posle sušenja zamrzavanjem dobijeno je 43 mg cis proizvoda, 4-(3-amino-6-((1s,4R)-4-aminocikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida kao TFA so, sa 17% prinosa. LCMS (m/z): 484.2 (MH<+>), 0.61 min;<1>H NMR (CD3OD) δ ppm 7.87 (s, 1H), 7.81 - 7.72 (m, 1H), 7.60 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.55 (d, J=11.7 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.26 (d, J=5.9 Hz, 2H), 7.22 - 7.16 (m, 1H), 5.10 (t, J=5.7 Hz, 1H), 3.87 -3.67 (m, 2H), 2.91 - 2.80 (m, 1H), 1.98 (q, J=8.9 Hz, 2H), 1.90 - 1.71 (m, 6H).
Primer 193
Sinteza 4-(6-((1r,4S)-4-acetamidocikloheksil)-3-aminopirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0672]
[0673] U 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-aminocikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid (15 mg, 0.025 mmol) dodat je DCM ( 0.25 mL), THF (0.75 mL) i TEA (10.49 µl, 0.075 mmol) na 0°C. Zatim je dodat anhidrid sirćetne kiseline (2.367 µl, 0.025 mmol). Reakcija je mešana tokom 30 min na 0°C. Reakcija je koncentrovana, rastvorena u 1 mL DMSO, filtrirana, prečišćena pomoću preparativne HPLC, i osušena zamrzavanjem da bi se dobilo 5.4 mg željenog proizvoda 4-(6-((1r,4S)-4-acetamidocikloheksil)-3-aminopirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida u vidu soli TFA (33% prinosa). LCMS (m/z): 526.3 (MH<+>), 0.67 min;<1>H NMR (CD3OD) δ ppm 7.71-7.82 (m, 2H), 7.58 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.53 (d, J=11.7 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.22-7.29 (m, 2H), 7.15-7.22 (m, 1H), 5.10 (t, J=5.9 Hz, 1H), 3.71-3.84 (m, 2H), 3.52-3.66 (m, 1H), 2.51-2.65 (m, 1H), 1.86-2.02 (m, 4H), 1.83 (s, 3H), 1.53-1.69 (m, 2H), 1.22-1.39 (m, 2H).
Primer 194
Sinteza 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-(metilsulfonamido)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0674]
[0675] U 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-aminocikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid (15 mg, 0.025 mmol) dodat je DCM ( 0.25 mL, odnos: 1.000), THF (0.250 mL), TEA (10.49 µl, 0.075 mmol), smeša je mešana do rastvaranja i ohladjena do 0°C, a zatim je dodat metansulfonil hlorid (1.955 µl, 0.025 mmol). Reakcija je mešana tokom 30 min na 0°C, nakon čega je uradjena LCMS. Reakcija je koncentrovana, rastvorena u 1 mL DMSO, filtrirana, prečišćena pomoću preparativne HPLC, i osušena zamrzavanjem da bi se dobilo 1.6 mg željenog proizvoda 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-(metilsulfonamido)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida kao TFA so (9% prinosa). LCMS (m/z): 562.2 (MH<+>), 0.69 min.<1>H NMR (CD3OD) δ ppm 7.70-7.82 (m, 2H), 7.59 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J=11.7 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.22-7.30 (m, 2H), 7.13-7.21 (m, 1H), 5.09 (t, J=5.9 Hz, 1H), 3.68-3.89 (m, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.48-2.60 (m, 1H), 2.05 (d, J=14.9 Hz, 2H), 1.84-1.95 (m, 2H), 1.54-1.74 (m, 2H), 1.38 (q, J=12.9 Hz, 2H).
Primer 195
Sinteza metil ((1S,4r)-4-(5-amino-6-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-il)cikloheksil)karbamata
[0676]
[0677] U 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-aminocikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida (15 mg, 0.025 mmol) dodat je DCM (0.25 mL), THF (0.250 mL), TEA (10.49 µl, 0.075 mmol), smeša je mešana da bi se rastvorila i ohladjena do 0°C, a zatim je dodat metil hloroformat (1.943 µl, 0.025 mmol). Reakcija je mešana tokom 30 min na 0°C, nakon čega je uradjena LCMS. Reakcija je koncentrovana, rastvorena u 1 mL DMSO, filtrirana, prečišćena pomoću preparativne HPLC, i osušena zamrzavanjem da bi se dobilo 4.5 mg željenog proizvoda metil ((1S,4r)-4-(5-amino-6-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-il)cikloheksil)karbamata kao TFA so (27% prinosa). LCMS (m/z): 542.3 (MH<+>), 0.75 min.<1>H NMR (CD3OD) δ: 7.73-7.81 (m, 2H), 7.58 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.48-7.55 (m, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.23-7.30 (m, 2H), 7.15-7.22 (m, 1H), 5.10 (t, J=5.9 Hz, 1H), 3.69-3.84 (m, 2H), 3.53 (s, 3H), 3.31-3.36 (m, 1H), 2.48-2.62 (m, 1H), 1.84-2.00 (m, 4H), 1.51-1.68 (m, 2H), 1.21-1.44 (m, 2H)
Primer 196
Sinteza 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-(2-hidroksiacetamido)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0678]
[0679] U 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-aminocikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid (11 mg, 0.018 mmol) dodat je NMP (0.4 mL), 2-hidroksisirćetna kiselina (2.80 mg, 0.037 mmol), Hunigova baza (0.013 mL, 0.074 mmol) i zatim HATU (17.49 mg, 0.046 mmol). Reakcija je mešana tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Reakcija je koncentrovana, rastvorena u 0.75 mL DMSO, filtrirana, prečišćena pomoću preparativne HPLC, i osušena zamrzavanjem da bi se dobilo 3.6 mg željenog proizvoda 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-(2-hidroksiacetamido)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida kao TFA so (29%). LCMS (m/z): 542.2 (MH<+>), 0.63 min.<1>H NMR (CD3OD) δ ppm 7.83 - 7.72 (m, 2H), 7.59 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.53 (d, J=11.7 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.32 -7.23 (m, 2H), 7.22 - 7.16 (m, 1H), 5.10 (t, J=5.9 Hz, 1H), 3.86 (s, 2H), 3.82 - 3.63 (m, 3H), 2.65 -2.50 (m, 1H), 2.02 - 1.86 (m, 4H), 1.72 - 1.56 (m, 2H), 1.48 - 1.33 (m, 2H).
Primer 197
Sinteza (S)-N-(2-amino-1-(3-hlorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(4,4-difluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida
Šema 91
Faza 1. metil 4-(3-amino-6-(4,4-difluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0681] U metil 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (250 mg, 0.728 mmol) dodat je DCM (10 mL) i rastvor je ohladjen do 0°C u ledenom kupatilu. Zatim je dodat 50% rastvor deokso-fluoro u toluenu (805 mg, 1.820 mmol) na 0°C. Reakcija je ostavljena da se zagreje so sobne temperature i mešana tokom 2 h. Za kvenčovanje reakcije, dodat je TEA (1.522 mL, 10.92 mmol) i reakcija je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uklonjen koncentrovanjem do ostatka i sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (suvo punjenje) korišćenjem kolone od 12 grama eluiranjem sa 5-75% etil acetata u heptanu. Željene frakcije su koncentrovane do nepromenljive mase da bi se dobilo 83 mg željenog proizvoda kao slobodna baza, koji je korišćen kao takav (31% prinosa). LCMS (m/z): 366.2 (MH<+>), 0.87 min.
Faza 2. 4-(3-amino-6-(4,4-difluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0682] U metil 4-(3-amino-6-(4,4-difluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (83 mg, 0.227 mmol) dodat je MeOH (1.5 mL), THF (1.5 mL) i zatim 1 M vodeni rastvor NaOH (0.909 mL, 0.909 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 h. Reakcija je koncentrovana do ostatka. Dodat je THF i smeša je ponovo koncentrovana do ostatka. Zatim je smeša rastvorena u smeši rastvarača ACN/voda u odnosu 1:1, zakišeljena sa 6 M HCl i osušena zamrzavanjem da bi se dobio željeni proizvod kao HCl so koji je korišćen kao takav. Predpostavljen je kvantitativni prinos, (0.227 mmol). LCMS (m/z): 352.1 (MH<+>), 0.71 min.
Faza 3. (S)-terc-butil (2-(4-(3-amino-6-(4,4-difluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-hlorofenil)etil)karbamat
[0683] U 4-(3-amino-6-(4,4-difluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoevu kiselinu (48 mg, 0.124 mmol) dodat je DMSO (1 mL), Hunigova baza (0.108 mL, 0.619 mmol), (S)-terc-butil (2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)karbamat (50.3 mg, 0.186 mmol) i zatim HATU (94 mg, 0.248 mmol). Reakcija je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. U reakciju je dodato 0.5 mL DMSO, reakcija je filtrirana, prečišćena pomoću preparativne HPLC, i osušena zamrzavanjem da bi se dobilo 11 mg željenog proizvoda koji je korišćen kao takav (12% prinosa). LCMS (m/z): 604.2 (MH<+>), 1.05 min.
Faza 4. (S)-N-(2-amino-1-(3-hlorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(4,4-difluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamid
[0684] U (S)-terc-butil (2-(4-(3-amino-6-(4,4-difluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-hlorofenil)etil)karbamat (11 mg, 0.018 mmol) dodata je 4M HCl u dioksanu (1 mL, 4.00 mmol). Reakcija je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uklonjen i koncentrovan do ostatka, koji je rastvoren u 1:1 acetonitril/voda, filtriran i osušen zamrzavanjem da bi se dobila HCl so. Sirovi so ostatak je rastvoren u 1 mL DMSO, prečišćen pomoću preparativne HPLC i osušen zamrzavanjem da bi se dobilo 3.8 mg željenog proizvoda (S)-N-(2-amino-1-(3-hlorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(4,4-difluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida u vidu soli TFA (33%). LCMS (m/z): 504.2 (MH<+>), 0.74 min;<1>H NMR (CD3OD) δ ppm 7.85 - 7.73 (m, 2H), 7.62 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.54 (dd, J=12.1, 1.2 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 3H), 5.39 (dd, J=9.0, 5.9 Hz, 1H), 3.40 - 3.33 (m, 2H), 2.72 (br. s., 1H), 2.12 -1.98 (m, 2H), 1.96 - 1.73 (m, 6H).
Primeri 198 i 199
Sinteza enantiomerno obogaćenih dijastereomera cis-4-(3-amino-6-(3-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0685]
Šema 92
Faza 1. Polarni i manje polarni enantiomerno obogaćeni cis-5-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-amini
[0686] 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-amin (500 mg, 1.626 mmol), pripremljen prema šemi 29, razdvojen je hiralnom SFC (ChiralPak 5mic OD kolona, 4.6x100 (mm), CO2/IPA+0.1% DEA=90/10, SFC=5mL/min). Za polarni enantiomer (pik 1) (230 mg, 0.748 mmol, 46.0% prinosa), Rt = 1.58 min. Za manje polarni enantiomer (pik 2) (230 mg, 0.748 mmol, 46.0% prinosa), Rt = 2.36 min.
Faze 2, 3, 4, 5 i 6. cis-4-(3-amino-6-(3-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid dijastereomeri
[0687] Prateći faze 2, 3, i 7 na šemi 75, svaki enantiomerno obogaćeni cis-5-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)cikloheksil)pirazin-2-amin podvrgnut je brominaciji, a nakon toga Suzuki kuplovanju sa 3-fluoro-4-(metoksikarbonil)fenil)boronskom kiselinom. Posle hidrolize, prateći fazu 8 na šemi 75, korišćenjem (S)-2-amino-2-(3-hlorofenil)etanola i svakog enantiomera dobijen je redom svaki dijastereomer cis-4-(3-amino-6-(3-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida. Za cis dijastereomer iz polarnog prekursora, LCMS (m/z): 485.0 (MH<+>), 0.70 min; 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7.90 - 7.69 (m, 2 H) 7.64 - 7.48 (m, 2 H) 7.37 (s, 1 H) 7.30 - 7.09 (m, 3 H) 5.10 (t, J=6.06 Hz, 1 H) 3.89 - 3.69 (m, 2 H) 3.66 - 3.47 (m, 1 H) 2.79 - 2.60 (m, 1 H) 2.06 (d, J=11.74 Hz, 1 H) 1.97 - 1.68 (m, 3 H) 1.52 - 1.26 (m, 3 H) 1.24 -0.99 (m, 1 H). Za cis dijastereomer iz manje polarnog prekursora, LCMS (m/z): 485.0 (MH<+>), 0.70 min. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7.88 - 7.70 (m, 2 H) 7.65 -7.49 (m, 2 H) 7.37 (s, 1 H) 7.32 - 6.98 (m, 3 H) 5.10 (s, 1 H) 3.76 (t, J=6.06 Hz, 2 H) 3.58 (s, 1 H) 2.79- 2.59 (m, 1 H) 2.06 (d, J=12.13 Hz, 1 H) 1.97 - 1.61 (m, 3 H) 1.54 - 1.30 (m, 3 H) 1.25 -0.96 (m, 1 H).
[0688] Apsolutna stereohemija na prstenu cikloheksana za oba dijastereomera nije odredjena.
Primeri 200 i 201
Sinteza 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciklopropil)benzamida i 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciklopropil)benzamida
[0689]
Šema 93
[0690] Prateći fazu 2 na šemi 89, korišćenjem (+/-)-trans-2-fenilciklopropanamina, EDC (30.2 mg, 0.158 mmol), HOAt (17.2 mg, 0.126 mmol), i DIEA (0.033 mL, 0.189 mmol), dobijen je (+/-)-trans-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-(2-fenilciklopropil)benzamid (19 mg, 70%). LCMS (m/z): 433.2 (MH<+>), 0.82 min;<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8.29-8.22 (m, 1 H), 7.94 (s, 1 H), 7.76-7.71 (m, 1 H), 7.63-7.56 (m, 1 H), 7.35-7.18 (m, 4 H), 7.04-6.94 (m, 1 H), 4.67 (s, 2 H), 4.09 (m, 2 H), 3.35 (m, 2 H), 3.15 (m, 1 H), 2.93 (m, 1 H), 2.22 (m, 1 H), 2.90-1.8 (m, 4 H), 1.43-1.23 (m, 3 H).
[0691] Racemski proizvod je razdvojen hiralnom SFC (ChiralPak 5mic AD-H kolona, 4.6x100 (mm), heptan:EtOH= 50/50, 1mL/min). Za polarni 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciklopropil)benzamid (27%) na Rt = 11.0 min, LCMS (m/z): 433.2 (MH<+>), 0.81 min. Za manje polarni 4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciklopropil)benzamid (+/-)-trans-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-(2-fenilciklopropil)benzamid (27%) na Rt = 15.8 min, LCMS (m/z): 433.2 (MH<+>), 0.81 min. Apsolutna stereohemija je dodeljena na osnovu biohemijskih podataka i modela molekulskog dokinga.
Primeri 202 i 203
Sinteza 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciklopropil)benzamida i 4-(3-amino-6-((1r,4R)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciklopropil)benzamida
[0692]
Šema 94
[0693] Prateći fazu 2 na šemi 89, korišćenjem (+/-)-trans-2-fenilciklopropanamina (48.6 mg, 0.37 mmol), EDC (127 mg, 0.66 mmol), HOAt (67.8 mg, 0.498 mmol), i DIEA (0.174 mL, 0.996 mmol), dobijen je (+/-)-trans-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-(2-fenilciklopropil)benzamid (40 mg, 97%), koji je razdvojen pomoću hiralne SFC (ChiralPak 5mic OJ kolona, 4.6x100 (mm), CO2/IPA+0.1% DEA=60/40, SFC=5ml/min). Polarni dijasteremer je bio 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciklopropil)benzamid (Rt = 1.38 min). LCMS (m/z): 447.3 (MH<+>), 0.76 min; 1H NMR (500MHz, CD3OD) δ ppm 7.89 - 7.78 (m, 2H), 7.72 - 7.53 (m, 2H), 7.33 - 7.23 (m, 2H), 7.24 -7.10 (m, 3H), 3.68 -3.53 (m, 1H), 3.14 - 3.03 (m, 1H), 2.74 - 2.56 (m, 1H), 2.27 - 2.13 (m, 1H), 2.12 - 1.88 (m, 4H), 1.77 - 1.57 (m, 2H), 1.52 - 1.29 (m, 4H). Manje polarni dijastereomer je bio 4-(3-amino-6-((1r,4R)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciklopropil)benzamid (Rt = 1.82 min). LCMS (m/z): 447.3 (MH<+>), 0.75 min; 1H NMR (500MHz, CD3OD) δ ppm 7.89 - 7.78 (m, 2H), 7.72 - 7.53 (m, 2H), 7.33 - 7.23 (m, 2H), 7.24 -7.10 (m, 3H), 3.68 - 3.53 (m, 1H), 3.14 - 3.03 (m, 1H), 2.74 - 2.56 (m, 1H), 2.27 - 2.13 (m, 1H), 2.12 - 1.88 (m, 4H), 1.77 - 1.57 (m, 2H), 1.52 - 1.29 (m, 4H). Apsolutna stereohemija je dodeljena na osnovu biohemijskih podataka i modela molekulskog dokinga.
Primer 204
Sinteza 4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-N-benzil-2-cijano-6-fluorobenzamida
[0694]
Šema 95
Faz Faza 1.4-hloro-2-fluoro-6-jodobenzoeva kiselina
[0695] U bocu od 250 mL dodata je 4-hloro-2-fluorobenzoeva kiselina (4 g, 22.92 mmol), Pd(OAc)2(0.257 g, 1.146 mmol), jodobenzen diacetat (8.12 g, 25.2 mmol), jod (6.40 g, 25.2 mmol) i DMF (60 mL). Rastvor je zagrevan pod atmosferom azota na 100°C tokom 20 h. LCMS je pokazala da je oko polovine 4-hloro-2-fluorobenzoeve kiseline pretvoreno u proizvod (LCMS retenciono vreme 0.98 min, bez MH<+>pika). Posle hladjenja do sobne temperature, rastvor je razblažen sa EtOAc i opran tri puta sa 1 N HCl. Vodeni slojevi su kombinovani i ekstrahovani jednom sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani da bi se dobilo tamno smedje ulje (16.4 g, 42% čistoće), koje je preneto u sledeću fazu bez prečišćavanja.
Faza 2. Metil 4-hloro-2-fluoro-6-jodobenzoat
[0696] 4-Hloro-2-fluoro-6-jodobenzoeva kiselina (16.4 g, 22.93 mmol, zajedno sa 4-hloro-2-fluorobenzoevom kiselinom) je rastvorena u DMF (30 mL). Dodat je Cs2CO3(8.96 g, 27.5 mmol), a nakon toga MeI (1.577 mL, 25.2 mmol). Posle 90 min na sobnoj temperaturi, LCMS je pokazala da je reakcija završena (retenciono vreme 1.06 min, bez MH<+>pika). Smeša je razblažena sa EtOAc i filtrirana kroz komad filter papira. Filtrat je opran tri puta vodom. Vodeni slojevi su kombinovani i ekstrahovani jednom sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani. Ostatak je prečišćeno na koloni silika gela (heptan:EtOAc 1:0 do 9:1) da bi se dobila smeša metil 4-hloro-2-fluoro-6-jodobenzoata i metil 4-hloro-2-fluorobenzoata u približnom odnosu 1:1 (1.99 g).
Faza 3. Metil 4-hloro-2-cijano-6-fluorobenzoat
[0697] Metil 4-hloro-2-fluoro-6-jodobenzoat (1.99 g, 10.6 mmol) je rastvoren u DMF ( 12 mL). Dodat je CuCN (2.84 g, 31.7 mmol) i suspenzija je zagrevana pod mikrotalasima na 110°C tokom 18 min. EtOAc je dodat i suspenzija je filtrirana kroz komad filter papira. Filtrat je opran tri puta vodom. Vodeni slojevi su kombinovani i ekstrahovani jednom sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (heptan:EtOAc 1:0 do 9:1) da bi se dobio proizvod kao bezbojna čvrsta supstanca (505 mg).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.56 (s, 1H), 7.40 (d, 1H, J=8 Hz), 4.00 (s, 3H);<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ ppm 161.78 (d, J=58 Hz), 159.44, 139.16 (d, J=11 Hz), 129.96, 121.99, 121.74, 115.48, 114.72, 53.04.
Faza 4. Metil 4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-cijano-6-fluorobenzoat [0698] U fiolu za mikrotalasno zračenje od 2 mL dodat je 5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin (638 mg, 1.049 mmol), metil 4-hloro-2-cijano-6-fluorobenzoat (140 mg, 0.655 mmol), Pd2(dba)3(30.0 mg, 0.033 mmol), XPhos (31.2 mg, 0.066 mmol), NaHCO3(275 mg, 3.28 mmol), DME (3 mL) i H2O (1.5 mL). Rastvor je zagrevan pod mikrotalasima na 100°C tokom 15 min. dodata je voda i EtOAc i vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (heptan:EtOAc 1:0 do 1:4) da bi se dobio proizvod kao žuta pena (85 mg). LCMS (m/z) 356.1 (MH<+>), 0.58 min.
Faza 5.4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-cijano-6-fluorobenzoeva kiselina [0699] U metil 4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-cijano-6-fluorobenzoat (85 mg, 0.239 mmol) i litijum hidroksid monohidrat (11.04 mg, 0.263 mmol) dodat je THF (1 mL) i H2O (1.000 mL). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Svi rastvarači su upareni da bi se dobila litijumova so sirovog proizvoda kao žuta čvrsta supstanca (92 mg) koja je korišćena u sledećoj fazi bez prečišćavanja. LCMS (m/z) 342.0 (MH<+>), 0.42 min,
Faza 6.4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-N-benzil-2-cijano-6-fluorobenzamid
[0700] U 4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-cijano-6-fluorobenzoevu kiselinu dodat je DCM (1 mL), a nakon toga benzilamin (0.017 mL, 0.153 mmol), trietilamin (0.053 mL, 0.383 mmol) i T3P (50% u EtOAc, 0.084 mL, 0.141 mmol). Posle 1 h dodato je još benzilamina (0.017 mL, 0.153 mmol) i T3P (50% u EtOAc, 0.084 mL, 0.141 mmol) i za 2 h reakcija je završena. Dodat je zasićeni rastvor NaHCO3i smeša je ekstrahovana dvaput sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (heptan:EtOAc 1:0 do 0:1) da bi se dobio proizvod kao bezbojna čvrsta supstanca (17 mg). LCMS (m/z) 431.1 (MH<+>), 0.65 min.1H NMR (400 MHz, CDCl3) ) δ ppm 8.03 (s, 1 H), 7.74 (s, 1 H), 7.54 (d, 1 H, J 12 Hz), 7.43-7.30 (m, 4 H) 7.26 (s, 1 H), 7.23 (s, 1 H) 6.57 (br s, 1 H), 4.74 (d, J 5.53 Hz, 2 H), 4.10 -4.06 (m, 2 H), 3.55 -3.46 (m, 2 H), 2.77 -2.67 (m, 1H), 1.80 -1.70 (m, 4 H).
Primer 205
Sinteza 4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((6-metilpiridin-2-il)metil)benzamida
[0701]
Šema 96
Faza 1. (E)-etil 3-(6-aminopiridin-3-il)akrilat
[0702] Stakleni autoklav je napunjen 5-bromopiridin-2-aminom (10.0 g, 57.8 mmol), etil akrilatom (8.14 mL, 75 mmol) i DIEA (25.2 mL, 144mmol) u DMF (40 mL). Smeša je pročišćavana argonom, nakon čega je dodat Pd(OAc)2(0.649 g, 2,89 mmol) i (o-Tol)3P (3.87 g, 12.72 mmol), i najzad je dobro pročišćena argonom. Smeša je čvrsto zatvorena, i zagrevana na 100<o>C u uljanom kupatilu preko noći. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature, i talozi su uklonjeni filtriranjem kroz tanak sloj Celita. Filtrat je koncentrovan koliko je moguće pomoću uredjaja rotavap, i ostatak je raspodeljen izmedju smeše EtOAc/voda (150 mL/100 mL). EtOAc sloj je opran vodom (2 x 100 mL), osušen iznad Na2SO4, i koncentrovan. Smedja čvrsta supstanca je dobijena kao sirovi proizvod. Sirovi proizvod je triturisan sa EtOAc (40 mL) i žuta čvrsta supstanca je sakupljena putem filtracije. Filter kolač je ispran malom količinom EtOAc i osušen pod vakuumom kao prva porcija proizvoda (5.0 g). Matična tečnost od trituracije je uklonjena razblaženim vodenim rastvorom 1 N HCl (30 mL) i vodom (70 mL). Vodeni sloj je prenet u čist levak za odvajanje, zaalkaljen sa 20 mL zas. Na2CO3, i ekstrahovan sa EtOAc (60 mL). EtOAc sloj je osušen iznad Na2SO4, koncentrovan i time je dobijena druga porcija proizvoda (4.0 g). Dve porcije proizvoda su kombinovane da bi se dobio prinos od 81%. LCMS (m/z) 193.2 (MH<+>), 0.39 min.
Faza 2. (E)-etil 3-(6-(bis(terc-butoksikarbonil)amino)piridin-3-il)akrilat
[0703] U rastvor (E)-etil 3-(6-aminopiridin-3-il)akrilata (6.6 g, 34.3 mmol) i DMAP (0.21 g, 1.7 mmol) u THF (150 mL) dodat je di-terc-butil dikarbonat (15.7 g, 71.9 mmol). Smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je koncentrovana i smedja čvrsta supstanca je dobijena kao sirovi (E)-etil 3-(6-(bis(terc-butoksikarbonil)amino)piridin-3-il)akrilat (12.5 g, 93%). LCMS (m/z) 237.4 (MH<+>) 0.98 min.
Faza 3. trimetil 2-(6-(terc-butoksikarbonilamino)piridin-3-il)propan-1,1,3-trikarboksilat i tetrametil 2-(6-aminopiridin-3-il)propan-1,1,1,3-tetrakarboksilat
[0704] Balon za žarenje je napunjen anhidrovanim MeOH (50mL), i sadržaj je ohladjen do 0<o>C. U balon je dodat natrijum hidrid (3.18 g, 60% u disperziji mineralnog ulja, 80 mmol) uz kontrolisani razvoj gasa. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi sve do prestanka razvijanja gasa. U ovaj sveže pripremljeni NaOMe/MeOH rastvor dodat je dimetil malonat (10.52 g, 80 mmol), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Smeša se pretvorila u mlečnu gustu suspenziju. Mlečna gusta suspenzija je razblažena sa 25 mL anhidrovanog MeOH, i dekantovana u balon sa natrijum hidridom (12.5 g, 31.9 mmol). Reakciona gusta suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min, i zatim zagrevana na refluksu preko noći. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature i koncentrovana. Ostatak je raspodeljen izmedju EtOAc/H2O (100 mL/100 mL). EtOAc sloj je opran sa 1 N NaOH (3 x 30 mL), zasićenim slanim rastvorom (30 mL), osušen iznad Na2SO4, i koncentrovan. Svetlo smedje ulje je dobijeno kao sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa gradijentom EtOAc/CH2Cl2Dva glavna pika su izdvojena i sakupljena kao trimetil 2-(6-(terc-butoksikarbonilamino)piridin-3-il)propan-1,1,3-trikarboksilat (2.65 g, 20.3% prinosa) i tetrametil 2-(6-aminopiridin-3-il)propan-1,1,1,3-tetrakarboksilat (1.89 g, 16% prinosa). Dva proizvoda su okarakterisana i potvrdjena pomoću LCMS i 1H NMR. Za trimetil 2-(6-(terc-butoksikarbonilamino)piridin-3-il)propan-1,1,3-trikarboksilat. LCMS (m/z) 411.5 (MH<+>), 0.64 min;<1>H NMR (CDCl3) δ ppm 8.15 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.60 - 7.52 (m, 2H), 3.90 (td, J = 9.8, 4.7 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.55 (s, 3H), 2.92 - 2.81 (m, 1H), 2.80 - 2.69 (m, 1H), 1.53 (s, 9H). Za tetrametil 2-(6-aminopiridin-3-il)propan-1,1,1,3-tetrakarboksilat: LCMS (m/z) 369.5 (MH<+>) 0.47 min;<1>H NMR (CDCl3) δ ppm 8.31 (s, 1H), 8.19 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 3.92 (td, J = 9.7, 4.9 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.55 (s, 3H), 2.93 - 2.82 (m, 1H), 2.81- 2.70 (m, 1H).
Faza 4. dimetil 3-(6-aminopiridin-3-il)pentandioat
[0705] U smešu trimetil 2-(6-(terc-butoksikarbonilamino)piridin-3-il)propan-1,1,3-trikarboksilata (2.5 g, 6.1 mmol) i tetrametil 2-(6-aminopiridin-3-il)propan-1,1,1,3-tetrakarboksilata (1.8 g, 4.9 mmol) u MeOH (30 mL) dodat je vodeni rastvor NaOH (2.44 g NaOH u 5 mL vode, 60.9 mmol). Rezultujuća smeša je zagrevana do reluksa pomoću uljanog kupatila tokom 1 časa. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature, i koncentrovana pod sniženim pritiskom putem uredjaja rotavap. U koncentrovani ostatak je dodata voda (15 mL) i konc. HCl (3 mL). Rezultujuća smeša je zagrevana na refluksu preko noći. Reakciona smeša je ohladjena, i koncentrovana pod sniženim pritiskom na uredjaju rotavap, i dobijena je čvrsta supstanca. Dobijeni čvrsti ostatak je triturisan metanolom (100 mL) i talog je uklonjen filtracijom, i dobijen je filtrat svetle boje. U filtrat je dodata konc. HCl (200 µL) i rezultujuća smeša je zagrevana na refluksu putem spoljašnjeg uljanog kupatila tokom 1 h. Reakciona smeša je ohladjena i koncentrovana. Ostatak je raspodeljen izmedju smeše EtOAc/zas. NaHCO3(50 mL/50 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (50 mL). EtOAc ekstrakti su kombinovani, oprani zasićenim slanim rastvorom (50 mL), osušeni iznad Na2SO4, i koncentrovani. Bela čvrsta supstanca je dobijena kao željeni dimetil 3-(6-aminopiridin-3-il)pentandioat (2.6 g, 10.31 mmol, 93.9% prinosa). LCMS (m/z) 253.2 (MH<+>) 0.38 min;<1>H NMR (CDCl3) δ ppm 7.95 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.37 (br. s., 2H), 3.61 (s, 6H), 3.55 (kvint, J = 7.5 Hz, 1H), 2.80 -2.66 (m, 2H), 2.65- 2.51 (m, 2H).
Faza 5.3-(6-aminopiridin-3-il)pentan-1,5-diol
[0706] U gustu suspenziju aluminijum (III) litijum hidrid/THF (0.94g u 60 mL THF, 25 mmol) na 0<o>C dodat je rastvor dimetil 3-(6-aminopiridin-3-il)pentandioat/THF (2.5 g, 9.9 mmol u 30 mL THF) tokom ~10 min. Gusta suspenzija je mešana na 0<o>C tokom 40 min, i zatim na sobnoj temperaturi tokom 45 min. Smeša je ohladjena do 0<o>C, i kvenčovana uzastopnim dodavanjem vode (0.96 mL) uz kontrolisani razvoj gasa, zatim dodavanjem 15% vodenog rastvora NaOH (0.96 mL), i vode (2.9 mL). Kvenčovana smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Talozi su uklonjeni putem filtracije. Filtrat je koncentrovan, i svetlo žuta čvrsta supstanca (1.97 g, kvantitativni prinos) je dobijena kao 3-(6-aminopiridin-3-il)pentan-1,5-diol. LCMS (m/z) 197.2 (MH<+>) 0.22 min.
Faza 6.5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amin
[0707] U smešu 3-(6-aminopiridin-3-il)pentan-1,5-diol/toluen (1.96 g, 10 mmol u 40 mL) dodat je 1 mL vode da bi se olakšalo rastvaranje, i zatim konc. H2SO4(98%, 1.6 mL, 30 mmol). Rezultujuća smeša je zagrevana na refluksu sa Dean-Stark krivinom da bi se uklonila voda iz reakcione smeše tokom 1 h 20 min. Reakciona smeša je ohladjena do sobne temperature, i koncentrovana. Ostatak je razblažen ledeno hladnom vodom (15 mL), neutralizovan čvrstim Na2CO3(4 g), i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 30 mL). EtOAc ekstrakti su kombinovani, oprani zasićenim slanim rastvorom (30mL), osušeni iznad Na2SO4, i koncentrovani. Svetlo žuta čvrsta supstanca je dobijena kao sirovi 5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amin. LCMS (m/z) 179.2 (MH<+>) 0.33 min;<1>H NMR (CDCl3) δ ppm 7.95 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.34 (br. s., 2H), 4.11 - 3.99 (m, 2H), 3.51 (td, J = 11.2, 3.3 Hz, 2H), 2.73 -2.56 (m, 1H), 1.75 -1.69 (m, 4H).
Faza 7.3-bromo-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amin
[0708] U rastvor 5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amin/acetonitril (1.4 g, 7.85 mmol/30 mL) na 0-5<o>C dodat je u porcijama NBS (1.4 g, 7.85 mmol) uz kontrolisanje unutrašnje temperature ispod 5<o>C. Rezultujuća smeša je mešana na 0<o>C tokom 1 časa 40 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je triturisan razblaženim vodenim rastvorom NaOH/H2O(1 g/30 mL). Suspenzija čvrste supstance je sakupljena filtracijo. Filter kolač je opran ledeno hladnom vodom (~10 mL), i filtrati su kombinovani, i ekstrahovani sa EtOAc (20 mL). EtOAc ekstrakt je opran zasićenim slanim rastvorom (20 mL), osušen iznad Na2SO4, i koncentrovan. Svetlo žuta čvrsta supstanca je kombinovana sa filter kolačem, i osušena pod visokim vakuumom kao sirovi 3-bromo-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amin. LCMS (m/z) 257.1/259.1 (MH<+>) 0.39 min.<1>H NMR (CDCl3) δ ppm 7.90 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.80 (br. s., 1H), 4.12 -4.02 (m, 2H), 3.54 -3.44 (m, 2H), 2.71 - 2.61 (m, 1H), 1.78 -1.68 (m, 4H).
Faza 8.4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0709] Fiola za mikrotalasno zračenje je napunjena 3-bromo-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-2-aminom (500 mg, 1.95 mmol), 4-borono-2-fluorobenzoevom kiselinom (1.07 g, 5.83 mmol), vodenim rastvorom Na2CO3(2 M, 4.86 mL) i DME (10 mL). Smeša je pročišćavana argonom, nakon čega je dodat Pd(PPh3)4(225 mg, 0.194 mmol). Smeša je pročišćavana argonom, čvrsto zatvorena i zagrejana pomoću mikrotalasnog reaktora na 125<o>C tokom 20 min, i zatim na 130<o>C tokom dodatnih 40 min. DME sloj reakcione smeše je sakupljen, i čvrsti talozi su triturisani metanolom (2 x 10 mL). Metanolski supernatanti su kombinovani sa DME slojem, i koncentrovani. Dobijeni ostatak je pomešan sa Et2O (2 x 60 mL), i Et2O supernatanti su odbačeni. Čvrsti ostatak je raspodeljen izmedju smeše EtOAc (20 mL) i vod. rastv. HCl (1N, 20 mL). EtOAc sloj je uklonjen sa 1N HCl (2 x 5 mL), i vodeni slojevi su kombinovani. Vodeni sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i dobijena svetlo žuta čvrsta supstanca je triturisana metanolom (8 mL). Supernant je izdvojen filtracijom i koncentrovan. Dobijena je 4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (0.844 g, 2.67 mmol, 137% prinosa) kao svetlo žuta pena. LCMS (m/z) 317.2 (MH<+>) 0.46 min.
Faza 9. (E)-6-metilpikolinaldehid oksim
[0710] U etanolni rastvor 6-metilpikolinaldehida (642 mg, 5.3 mmol/2.1 mL) dodat je hidroksiamin hidrohlorid (368 mg, 5.3 mmol) i vodeni rastvor K2CO3(0.88 g/4.2 mL). Rezultujući rastvor je zatim zagrevan na refluksu pomoću spoljašnjeg uljanog kupatila tokom 30 min. Reakciona smeša je ohladjena do 0<o>C, i mešana tokom 30 min. Bela suspenzija čvrste supstance je sakupljena filtracijom, i filter kolač je opran sa nešto ledeno hladne vode. Filter kolač je osušen na vazduhu, i dodatno osušen pod visokim vakuumom kao prva porcija proizvoda (0.565 g). Filtrati su kombinovani, i koncentrovani do suva. Ostatak je ponovo rastvoren u vodi (2 mL), ohladjen do 0<o>C i mešan tokom 20 min. Čvrsti proizvod je sakupljen filtracijom kao druga porcija proizvoda (70 mg) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. Dve porcije proizvoda su kombinovane da bi se dobio (E)-6-metilpikolinaldehid oksim (88%). LCMS (m/z) 136.9 (MH<+>) 0.21 min.
Faza 10. (6-metilpiridin-2-il)metanamin
[0711] U rastvor (E)-6-metilpikolinaldehid oksima (0.635 g, 4.66 mmol)/sirćetne kiseline (267 µL, 4.66 mmol)/etanola (10 mL) dodavan je u porcijama prah cinka (5.19 g, 79 mmol) tokom 30 min. Rezultujuća smeša je mešana tokom dodatnih 30 min. LCMS alikvota reakcione smeše je pokazala da je reakcija završena. Talog cinka u reakcionoj smeši je uklonjen filtracijom, i filtrat je koncentrovan. Ostatak je učinjen baznim do pH > 12 dodatkom viška zas. KOH (~ 7 mL), i mešan sa Et2O (30 mL). Et2O sloj je sakupljen, osušen iznad Na2SO4, i koncentrovan. Ostatak je ponovo rastvoren u EtOAc(15 mL), osušen iznad Na2SO4, i koncentrovan. Dobijen je (6-metilpiridin-2-il)metanamin kao bezbojno ulje (385 mg, 3.15 mmol, 67.6%). LCMS (m/z) 123.2 (MH<+>) 0.15 min.
Faza 11. 4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((6-metilpiridin-2-il)metil)benzamid
[0712] U fiolu je sipana 4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (20 mg, 0.063 mmol), (6-metilpiridin-2-il)metanamin (11.6 mg, 0.095 mmol), DIEA (28 µL, 0.158 mmol), PyBOP (65.8, 0.126 mmol) i DMF (0.5 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min. Reakciona smeša je zatim prečišćena pomoću preparativne HPLC, i frakcije proizvoda su kombinovane, zamrznute i osušene zamrzavanjem da bi se dobio 4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((6-metilpiridin-2-il)metil)benzamid kao beli prah. LCMS (m/z) 421.3 (MH<+>) 0.41 min.<1>H NMR (DMSO-d6) δ ppm 8.99 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 7.95 -7.83 (m, 3H), 7.79 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 11.7 Hz, 2H), 7.44 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 4.60 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 4.02 - 3.88 (m, 2H), 3.40 (td, J = 11.2, 2.7 Hz, 3H), 2.88 - 2.71 (m, 1H), 2.51 (br. s., 3H), 1.82 - 1.58 (m, 4H).
Primer 206
Sinteza (S)-4-(2-amino-5-(1-(difluorometil)-3-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroksietil)benzamida
[0713]
Šema 97
Faza 1. metil 4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat:
[0714] Smeša metil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoata (2 g, 6.15 mmol), B2(PIN)2(3.12 g, 12.30 mmol), PdCl2(dppf) (0.225 g, 0.308 mmol), KOAc (1.811 g, 18.45 mmol) i dioksana (30.8 mL) je zagrevana u uljanom kupatilu preko noći na 100°C. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. U sirovi proizvod dodat je etar. Nerastvorljivi materijal je filtriran da bi se dobio metil 4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat kao smedja čvrsta supstanca (79%). LCMS (m/z): 291.2 (MH<+>), 0.44 min (za boronsku kiselinu).
Faza 2. metil 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat
[0715] Smeša sirovog metil 4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoata (712 mg, 1.912 mmol), 1-(difluorometil)-4-jodo-3-metil-1H-pirazola (740 mg, 2.87 mmol), PdCl2(dppf) (70.0 mg, 0.096 mmol), DME (7.899 mL), i 2M Na2CO3(3.95 mL) je zagrevana na 100°C preko noći. Posle dodavanja Na2SO4, praćenog razblaživanjem sa EtOAc, reakciona smeša je filtrirana i rezultujući isparljivi materijali su koncentrovani u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc u DCM. LCMS (m/z): 491.1 (MH<+>), 0.64 min
Faza 3.4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0716] Rastvoru metil 4-(2-amino-5-(1-(difluorometil)-3-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoata (352 mg, 0.935 mmol) u THF (6236 µL) i MeOH (3118 µL) dodat je LiOH (1 M rastvor) (1684 µL, 1.684 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. U reakcionu smešu, dodat je 1 N HCl do pH 5. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtran, i koncentrovan u vakuumu da bi se dobila sirova 4-(2-amino-5-(1-(difluorometil)-3-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (88%). LCMS (m/z): 363.3 (MH<+>), 0.51 min.
Faza 4. (S)-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0717] Rastvoru 4-(2-amino-5-(1-(difluorometil)-3-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (25 mg, 0.069 mmol) u DMF dodat je (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)etanol (15.50 mg, 0.083 mmol), EDC, HOAt i DIEA. Reakciona smeša je mešana tokom 15 h. Posle dodavanja vode, reakciona smeša je obradjena sa EtOAc. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću reverzno-fazne preparativne HPLC. Čiste frakcije su osušene zamrzavanjem da bi se dobio (S)-4-(2-amino-5-(1-(difluorometil)-3-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroksietil)benzamid u vidu soli TFA (50%). LCMS (m/z): 532.2 (MH<+>), 0.65 min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.23 (m, 1H), 7.97 (m, 1H), 7.93 (m, 1H), 7.82 (m, 1H), 7.51 - 7.30 (m, 3H), 7.2 (m, 1H), 7.09 (d, J = 8 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 12 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 44 Hz, 2H), 5.14 (m, 1H), 3.8 (m, 2H), 2.32 (s, 3H).
Sinteza 4-(2-amino-5-(1-(difluorometil)-5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0719] Prateći faze 2 i 3 na šemi 97, korišćenjem 1,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola, dobijena je 4-(2-amino-5-(1-(difluorometil)-5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina. LCMS (m/z): 363.1 (MH<+>), 0.53 min.
Sinteza 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0720]
[0721] Prateći faze 2 i 3 na šemi 97, korišćenjem 5-jodo-1-metil-1H-1,2,3-triazola, dobijena je 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina. LCMS (m/z): 314.3 (MH<+>), 0.38 min.
Sinteza 4-(2-amino-5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0722]
[0723] Prateći faze 1 i 2 na šemi 97, korišćenjem metil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoata i 1,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola, dobijena je 4-(2-amino-5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina. LCMS (m/z): 327.1 (MH<+>), 0.45 min.
Sinteza 4-(2-amino-5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0724]
[0725] Prateći faze 2 i 3 na šemi 97, korišćenjem metil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoata i 1,3-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola, dobijena je 4-(2-amino-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina. LCMS (m/z): 327.2 (MH<+>), 0.47 min.
Sinteza 4-(2-amino-5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0726]
[0727] Prateći faze 2 i 3 na šemi 97, korišćenjem metil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoata i 4-bromo-1-(difluorometil)-5-metil-1H-pirazola, dobijena je 4-(2-amino-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina. LCMS (m/z): 341.2 (MH<+>), 0.47 min.
Sinteza (3S,4R)-4-(4-hloro-3-fluorofenil)-1-metilpirolidin-3-amina
[0728]
Šema 97b
Faza 1. (E)-1-hloro-2-fluoro-4-(2-nitrovinil)benzen
[0729] Rastvoru 4-hloro-3-fluorobenzaldehida (8 g, 50.5 mmol) i amonijum acetata (9.72 g, 126 mmol) u sirćetnoj kiselini (168 mL) dodat je nitrometan (8.16 mL, 151 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na refluksu tokom 5 h i ohladjena. Dodata je voda (100 mL), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Čvrsta supstanca je filtrirana, oprana vodom, i osušena pod vakuumom. Čvrsta supstanca je prečišćena fleš hromatografijom (0-20% EtOAc/heptan) da bi se dobilo 4.2 g čistog proizvoda sa 41% prinosa.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.92 (d, J=13.7 Hz, 1H), 7.54 (d, J=13.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.33 (dd, J=2.0, 9.3 Hz, 1H), 7.31 - 7.28 (m, 1H).
Faza 2. (+/-)-(3R,4S)-3-(4-hloro-3-fluorofenil)-1-metil-4-nitropirolidin
[0730] (E)-1-hloro-2-fluoro-4-(2-nitrovinil)benzen (4.2 g, 20.84 mmol), 2-(metilamino)sirćetna kiselina (4.64 g, 52.1 mmol), paraformaldehid (3.75 g, 125 mmol) su pomešani u suvom toluenu (104 mL). Reakciona smeša je zagrevana na refluksu korišćenjem Dean-stark petlje preko noći. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju smeše EtOAc i voda. Organska supstanca je oprana sa zas. NaCl, osušena iznad Na2SO4i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobio (+/-)-(3R,4S)-3-(4-hloro-3-fluorofenil)-1-metil-4-nitropirolidin sa 45% prinosa. LCMS (m/z): 259.2 (MH<+>), 0.52 min;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.37 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.15 (dd, J=2.0, 10.2 Hz, 1H), 7.09 - 7.01 (m, 1H), 4.91 - 4.82 (m, 1H), 3.98 (d, J=5.1 Hz, 1H), 3.34 (dd, J=4.1, 10.8 Hz, 1H), 3.23 (t, J=8.6 Hz, 1H), 3.10 (dd, J=7.8, 10.6 Hz, 1H), 2.63 (dd, J=7.0, 9.4 Hz, 1H), 2.44 (s, 3H).
Faza 3. (+/-)-(3S,4R)-4-(4-hloro-3-fluorofenil)-1-metilpirolidin-3-amin
[0731] Prah cinka (5.76 g, 88 mmol) dodat je u smešu (+/-)-(3R,4S)-3-(4-hloro-3-fluorofenil)-1-metil-4-nitropirolidina (2.28 g, 8.81 mmol) u MeOH (29.4 mL) i sirćetne kiseline (30 mL, 524 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h i filtrirana. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je neutralizovan do pH 9, zatim je ekstrahovan sa IPA:CHCl3(3:7). Organska supstanca je osušena iznad Na2SO4,filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom ( DCM/metanol/NH390:9:1) da bi se dobio (+/-)-(3S,4R)-4-(4-hloro-3-fluorofenil)-1-metilpirolidin-3-amin sa 40% prinosa. LCMS (m/z): 229.2 (MH<+>), 0.25 min.
Sinteza (+/-)-(3S,4R)-4-(3-hloro-4-fluorofenil)-1-metilpirolidin-3-amina
[0732]
[0733] Prateći šemu 97b, korišćenjem 3-hloro-4-fluorobenzaldehida (3.92 g, 24.72 mmol), dobijen je (+/-)-(3S,4R)-4-(3-hloro-4-fluorofenil)-1-metilpirolidin-3-amin. LCMS (m/z): 229.0 (MH<+>), 0.32 min.
Primeri 207 i 208
Sinteza trans-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-((3S,4R)-4-(3-hloro-4-fluorofenil)-1-metilpirolidin-3-il)-2-fluorobenzamida i trans-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-((3R,4S)-4-(3-hloro-4-fluorofenil)-1-metilpirolidin-3-il)-2-fluorobenzamida
[0734]
Šema 98
[0735] Prateći fazu 2 na šemi 89, korišćenjem (+/-)-(3S,4R)-4-(3-hloro-4-fluorofenil)-1-metilpirolidin-3-amina, dobijen je 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-((3S,4R)-4-(3-hloro-4-fluorofenil)-1-metilpirolidin-3-il)-2-fluorobenzamid sa 70% prinosa. LCMS (m/z): 523.3 (MH<+>), 0.56 min. Sirova racemska smeša je razdvojena hiralnom SFC (ChiralPak 5mic OD kolona, 4.6x100 (mm), IPA+0.1% DEA=30%, 5mL/min). Za polarni dijastereomer (Rt = 2.37 min), LCMS (m/z): 523.2 (MH<+>), 0.57 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.19 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.79 - 7.73 (m, 2H), 7.63 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.52 (dd, J=2.3, 7.0 Hz, 1H), 7.46 - 7.29 (m, 3H), 7.26 - 7.13 (m, 1H), 4.66 (d, J=6.3 Hz, 1H), 3.45 - 3.37 (m, 1H), 3.21 (t, J=9.0 Hz, 1H), 3.16 - 3.08 (m, 1H), 2.82 (dd, J=5.7, 10.0 Hz, 1H), 2.70 (t, J=9.2 Hz, 1H), 2.54 - 2.41 (m, 3H), 1.27 (d, J=17.6 Hz, 1H). Za manje polarni dijastereomer (Rt = 3.96 min), LCMS (m/z): 523.2 (MH<+>), 0.58 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.19 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.79 -7.73 (m, 2H), 7.63 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.52 (dd, J=2.3, 7.0 Hz, 1H), 7.46 - 7.29 (m, 3H), 7.26 - 7.13 (m, 1H), 4.66 (d, J=6.3 Hz, 1H), 3.45 - 3.37 (m, 1H), 3.21 (t, J=9.0 Hz, 1H), 3.16 - 3.08 (m, 1H), 2.82 (dd, J=5.7, 10.0 Hz, 1H), 2.70 (t, J=9.2 Hz, 1H), 2.54 - 2.41 (m, 3H), 1.27 (d, J=17.6 Hz, 1H).
Primeri 209 i 210
Sinteza trans-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-((3S,4R)-4-(4-hloro-3-fluorofenil)-1-metilpirolidin-3-il)-2-fluorobenzamida i trans-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-((3R,4S)-4-(4-hloro-3-fluorofenil)-1-metilpirolidin-3-il)-2-fluorobenzamida
[0736]
Šema 99
[0737] Prateći fazu 2 na šemi 86, korišćenjem (3S,4R)-4-(4-hloro-3-fluorofenil)-1-metilpirolidin-3-amina, dobijen je (+/-)-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-((3S,4R)-4-(4-hloro-3-fluorofenil)-1-metilpirolidin-3-il)-2-fluorobenzamid sa 79% prinosa. LCMS (m/z): 523.2 (MH<+>), 0.57 min. Sirova racemska smeša je razdvojena hiralnom SFC (ChiralPak 5mic OD kolona, 4.6x100 (mm), IPA+0.1% DEA=30%, 5mL/min). Za polarni dijastereomer (Rt = 2.45 min), LCMS (m/z): 523.2 (MH<+>), 0.58 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.18 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.80 - 7.72 (m, 2H), 7.66 - 7.61 (m, 1H), 7.44 - 7.36 (m, 3H), 7.33 - 7.29 (m, 1H), 7.19 (dd, J=1.8, 8.3 Hz, 1H), 4.71 - 4.62 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.44 - 3.37 (m, 1H), 3.22 (d, J=9.6 Hz, 1H), 3.12 (dd, J=7.9, 10.0 Hz, 1H), 2.86 - 2.80 (m, 1H), 2.74 - 2.67 (m, 1H), 2.51 - 2.44 (m, 3H). Za manje polarni dijastereomer (Rt = 3.92 min), LCMS (m/z): 523.2 (MH<+>), 0.58 min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.19 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.80 - 7.70 (m, 2H), 7.63 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.46 - 7.36 (m, 3H), 7.30 (dd, J=2.0, 10.6 Hz, 1H), 7.19 (dd, J=1.8, 8.4 Hz, 1H), 4.66 (d, J=5.9 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.44 - 3.36 (m, 1H), 3.19 (t, J=9.0 Hz, 1H), 3.11 (dd, J=7.8, 10.0 Hz, 1H), 2.83 - 2.78 (m, 1H), 2.69 (dd, J=8.4, 9.5 Hz, 1H), 2.45 (s, 3H).
Sinteza 4-(3-amino-6-ciklopropilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0738]
Šema 100
Faza 1. metil 4-(3-amino-6-ciklopropilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0739] U metil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (za sintezu videti primer 34, faza 2) (300 mg, 0.920 mmol) u toluenu (10 mL) i vodi (1 mL) dodat je kalijum ciklopropil trifluoroborat (408 mg, 2.76 mmol), di(1-adamantil)-n-butilfosfin (66.0 mg, 0.184 mmol), cezijum karbonat (1499 mg, 4.60 mmol), i paladijum(II) acetat (20.65 mg, 0.092 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na bloku za zagrevanje na 100°C preko noći. Reakciona smeša je kvenčovana zas. NH4Cl i ekstrahovana etil acetatom. Organski ekstrakti su kombinovani, oprani zasićenim slanim rastvorom, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i upareni. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0 do 80% EtOAc u heptanu) dajući metil 4-(3-amino-6-ciklopropilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (250 mg, 90%). LCMS (m/z): 288.2 (MH<+>), 0.756 min.
Faza 2.4-(3-amino-6-ciklopropilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0740] U metil 4-(3-amino-6-ciklopropilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (250 mg, 0.870 mmol) u THF (6 mL) i MeOH (3 mL) dodat je 1M LiOH (1.740 mL, 1.740 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. pH reakcione smeše je podešen do ~4 pomoću vodenog rastvora 2N HCl. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju smeše EtOAc i voda. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen da bi se dobila 4-(3-amino-6-ciklopropilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (230 mg, 97%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 274.2 (MH<+>), 0.621 min.
Sinteza 4-(2-amino-5-ciklopropilpiridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0741]
[0742] Prateći šemu 100, korišćenjem metil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoata, dobijena je 4-(2-amino-5-ciklopropilpiridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (80%). LCMS (m/z): 273.0 (MH<+>), 0.515 min.
Sinteza 4-(3-amino-6-cikloheksilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0743]
[0744] Prateći faze 1, 2 i 3 na šemi 66, korišćenjem 2-(cikloheks-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana, dobijena je 4-(3-amino-6-cikloheksilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina. LCMS (m/z): 316.3 (MH<+>), 0.79 min.
Primer 211
Sinteza 4-(2-amino-5-((1S,4r)-1-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0745]
Šema 101
Faza 1. terc-butil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoat
[0746] Degazirana smeša 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amina (2.4 g, 10.91 mmol), terc-butil 4-bromo-2-fluorobenzoata (3.30 g, 12.00 mmol), Pd(PPh3)4(0.63 mg, 0.0.545 mmol), 2.0 M vodenog rastvora Na2CO3(10.91 mL) u n-butanolu (26 mL) zagrevana je mikrotalasima do 130<o>C tokom 10 min. Reakcija je razblažena etil acetatom (30 mL), i zatim oprana vodom (10 mL) i zasićenim slanim rastvorom (10 mL). Organske faze su osušene iznad natrijum sulfata, filtrirane, koncentrovane, i zatim prečišćene pomoću fleš hromatografije (eluent 10-60% etil acetat/heptan) da bi se dobio terc-butil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoat (1.35 g, 43% prinosa). LCMS (m/z): 289.4 (MH<+>), 0.67 min.
Faza 2. terc-butil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoat
[0747] Rastvor terc-butil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoata (700 mg, 2.43 mmol) u acetonitrilu (10 mL) je obradjen sa NBS (453 mg, 2.55 mmol). Posle 10 min, reakcija je završena. Reakcija je obradjena smešom zas. vod. rastv. NaHCO3: zas.vod. rastv. Na2S2O3u odnosu 1:1 (10 mL). Smeša je intenzivno mešana tokom 10 min. Smeša je razblažena etil acetatom (30 mL) i slojevi su razdvojeni. Organske faze su oprane zasićenim slanim rastvorom, osušene iznad magnezijum sulfata, filtrirane i koncentrovane da bi se dobio terc-butil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoat (803 mg, 90% prinosa). LCMS (m/z): 367.2, 369.2 (MH<+>), 0.75 min.
Faza 3. terc-butil 4-(2-amino-5-(3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat
[0748] Degazirana smeša terc-butil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoata (400 mg, 1.09 mmol), 2-(3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (296 mg, 1.31 mmol), Pd(PPh3)4(126 mg, 0.109 mmol) u 2.0 M vodenom rastvoru Na2CO3(1.63 mL) i nbutanolu (5 mL) je zagrevana mikrotalasima do 130<o>C tokom 15 minuta. Reakcija je razblažena etil acetatom (20 mL), i zatim oprana vodom (10 mL) i zasićenim slanim rastvorom (10 mL). Organske faze su osušene iznad natrijum sulfata, filtrirane, koncentrovane, i zatim prečišćene pomoću fleš hromatografije (eluent 10-60% etil acetat/heptan) da bi se dobio terc-butil 4-(2-amino-5-(3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat (400 mg, 95% prinosa). LCMS (m/z): 387.1 (MH<+>), 0.87 min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.83 - 7.76 (m, 2H), 7.68 (d, J = 1.96 Hz, 1H), 7.37 - 7.34 (m, 1H), 7.33 - 7.29 (m, 2H), 7.28 - 7.24 (m, 2H), 7.24 - 7.18 (m, 1H), 5.10 (t, J = 5.87 Hz, 1H), 3.83 - 3.69 (m, 2H), 2.81 - 2.70 (m, 2H), 2.63 - 2.49 (m, 3H), 2.08 (dd, J = 2.74, 13.30 Hz, 2H), 1.72 (dq, J = 2.93, 12.59 Hz, 2H).
Faza 4. terc-butil 4-(2-amino-5-(1-oksido-3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat
[0749] Rastvor 4-(2-amino-5-(3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoata u acetonu (20 mL) na 0<o>C je obradjen rastvorom oksona (227 mg, 0.369 mmol) u vodi (5 mL). Posle 20 minuta, reakcija je razblažena etil acetatom (50 mL) i vodom (50 mL). Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je opran etil acetatom (50 mL). Kombinovane organske supstance su oprane vodom (30 mL) i zasićenim slanim rastvorom (30 mL), osušene iznad magnezijum sulfata, filtrirane i koncentrovane da bi se dobio terc-butil 4-(2-amino-5-(1-oksido-3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat (220 mg, 74% prinosa). LCMS (m/z): 403.5 (MH<+>), 0.66 min.
Faza 5. terc-butil 4-(2-amino-5-((1r,4r)-1-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat
[0750] Degazirana gusta suspenzija terc-butil 4-(2-amino-5-(1-oksido-3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoata (220 mg, 0.547 mmol) u metanolu (15 mL) je obradjena sa 1.0 N vodenim rastvorom HCl (0.82 mL) i 10% Pd(OH)2. Sud je napunjen vodonikom do 250 PSI. Posle 2 h, reakcija je završena. Gusta suspenzija je degazirana, filtrirana preko celita i koncentrovana da bi se dobio terc-butil 4-(2-amino-5-((1r,4r)-1-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat (150 mg, 68% prinosa). LCMS (m/z): 405.6 (MH<+>), 0.63 min.
Faza 6. 4-(2-amino-5-((1r,4r)-1-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina-TFA
[0751] Rastvor sobne temperature terc-butil 4-(2-amino-5-((1r,4r)-1-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoata (50 mg, 0.124 mmol) u DCM (2 mL) je obradjen sa TFA (1 mL). Posle 1 h, reakcija je koncentrovana. Rezultujući materijal je suspendovan u benzenu uz sonifikaciju, i zatim ponovo koncentrovan da bi se dobila 4-(2-amino-5-((1r,4r)-1-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina-TFA (57 mg, 100% prinosa). LCMS (m/z): 349.2 (MH<+>), 0.37 min.
Faza 7. 4-(2-amino-5-((1S,4r)-1-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0752] Rastvor 4-(2-amino-5-((1r,4r)-1-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline-TFA (57 mg, 0.123 mmol) i (S)-2-amino-2-(3-hlorofenil)etanola (25 mg, 0.148 mmol) u DMF (1 mL) je obradjen sa HATU (61 mg, 0.160 mmol) i DIEA (129 μL, 0.738 mmol). Posle 1 h, reakcija je razblažena vodom (5 mL) i ekstrahovana u etil acetat (2 x 10 mL). Proizvod je prisutan u oba sloja. Stoga su i vodeni rastvor i organski slojevi koncentrovani i prečišćeni pomoću reverzno-fazne preparativne HPLC da bi se dobio 4-(2-amino-5-((1S,4r)-1-oksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid u vidu soli TFA (20 mg, 26% prinosa). LCMS (m/z): 502.1, 504.1 (MH<+>), 0.57 min. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.63 (dd, J = 4.11, 7.24 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 1.96 Hz, 1H), 7.80 (t, J = 7.83 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 1.57 Hz, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 3H), 7.29 -7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.17 (m, 1H), 5.14 - 5.06 (m, 1H), 3.83 -3.70 (m, 2H), 3.06 (d, J = 12.91 Hz, 2H), 2.85 -2.70 (m, 3H), 2.38 - 2.24 (m, 2H), 1.83 (d, J = 12.13 Hz, 2H).
Primer 212
Sinteza (S)-4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0753]
[0754] Redosled reakcija prikazan na šemi 101, faze 5, 6, i 7 je primenjen na terc-butil 4-(2-amino-5-(3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat da bi se dobio (S)-4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid. LCMS (m/z): 486.0, 488.0 (MH<+>), 0.73 min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.83 -7.76 (m, 2H), 7.68 (d, J = 1.96 Hz, 1H), 7.37 -7.34 (m, 1H), 7.33 -7.29 (m, 2H), 7.28 - 7.24 (m, 2H), 7.24 - 7.18 (m, 1H), 5.10 (t, J = 5.87 Hz, 1H), 3.83 - 3.69 (m, 2H), 2.81 -2.70 (m, 2H), 2.63 - 2.49 (m, 3H), 2.08 (dd, J = 2.74, 13.30 Hz, 2H), 1.72 (dq, J = 2.93, 12.59 Hz, 2H).
Sinteza 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-metilbenzoeve kiseline
[0755]
Šema 102
Faza 1. metil 4-bromo-2-metilbenzoat
[0756] Mešana smeša 4-bromo-2-metilbenzoeve kiseline (6 g, 27.9 mmol), jodometana (5.21 mL, 84 mmol) i kalijum karbonata (11.57 g, 84 mmol) u DMF (60 mL) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju vode (250 mL) i smeše 4:1 heksan:etil acetat (650 mL). Organski sloj je opran vodom i osušen iznad Na2SO4. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobilo 6.39 g željenog proizvoda kao ulje sa 100% prinosa. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.86 - 7.65 (m, 7 H) 7.50 (br. s., 2 H) 3.88 (s, 3 H) 2.56 (s, 3 H).
Faza 2.3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin
[0757] U suspenziju 3-bromopiridin-2-amina (6 g, 34.7 mmol) u 1,4-dioksanu (87 mL) dodat je Bispin (13.21 g, 52.0 mmol) i kalijum acetat (10.21 g, 104 mmol). Smeša je pročišćena azotom tokom 10 minuta, a zatim je dodat PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (2.83 g, 3.47 mmol). Reakciona smeša je zagrevana do 108°C u uljanom kupatilu 2 - 3 h. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom, filtrirana kroz celit i koncentrovana. Ostatak je korišćen u sledećoj fazi Suzuki kuplovanja bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 139 (MH<+>) 0.22 min (za boronsku kiselinu).
Faza 3. metil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-metilbenzoat
[0758] U 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin (7.37 g, 33.5 mmol) u balonu sa okruglim dnom od 500 mL dodat je metil 4-bromo-2-metilbenzoat (6.390 g, 27.9 mmol), PdCl2(dppf)-DCM (2.041 g, 2.79 mmol), DME (209 mL) i 2 M rastvor Na2CO3(69.7 mL). Kroz reakcionu smešu su propuštani mehurići N2tokom 20 min i zagrevana je u uljanom kupatilu na 108°C tokom 1.5 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc, oprana vodom tri puta, osušena iznad Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-100% EtOAc (koji sadrži 10% MeOH)/heptan da bi se dobio oko 8 g sirovog proizvoda koji je sadržao osrednju količinu B2(PIN)2iz prethodnog eksperimenta. Da bi se rastvorila sirova smeša dodat je etar, a zatim je dodat heptan da se istisne željeni proizvod. Čvrsta supstanca je filtrirana da bi se dobilo 4.2 g željenog proizvoda visoke čistoće sa 62.1% prinosa. LCMS (m/z): 243.5 (MH<+>), 0.56 min.
Faza 4. metil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-metilbenzoat
[0759] Rastvoru metil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-metilbenzoata (4.2 g, 17.34 mmol) u acetonitrilu (173 mL) dodat je NBS (3.15 g, 17.68 mmol) u dve porcije na 0°C . Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 20 minuta. LCMS je pokazala da je reakcija potpuna. Posle kvenčovanja zas. Na2SO3i NaHCO3, reakciona smeša je mešana tokom 30 minuta. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc 3 puta, oprana zasićenim NaHCO3, vodom i zasićenim slanim rastvorom. Organska faza je osušena iznad Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirovi materijal je triturisan etrom i prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 323.1 (MH<+>), 0.68 min.
Faza 5. metil 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-metilbenzoat
[0760] U metil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-metilbenzoat (500 mg, 1.557 mmol) u fioli za mikrotalasno zračenje od 20 mL dodat je 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (421 mg, 2.024 mmol), PdCl2(dppf)DCM (114 mg, 0.156 mmol), DME (11.7 mL) i 2 M rastvor Na2CO3(3.892 mL). Reakciona smeša je zagrevana na mikrotalasnom uredjaju za sintezu (12 min, 120°C). Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i oprana vodom tri puta, osušena iznad Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem smešom 0-100% EtOAc (koji sadrži 10% MeOH)/heptan da bi se dobio sirovi proizvod koji je triturisan etrom da bi se dobilo 400 mg čistog proizvoda sa 80 % prinosa. LCMS (m/z): 323.4 (MH<+>), 0.60 min.
Faza 6.4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-metilbenzoeva kiselina
[0761] Rastvoru metil 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-metilbenzoata (1.20 g, 3.72 mmol) u THF/MeOH/H2O (1:1:1, 36 mL) dodat je LiOH-H2O (0.234 g, 5.58 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. pH je podešen do 3-5, optimalno 4. Svi organski rastvarači su uklonjeni pomoću sniženog pritiska. Dodat je EtOAc da bi se sve nečistoće uklonile trituracijom. Dodata je voda i smeša je mešana tokom 30 minuta. Čvrsta supstanca je filtrirana i dobro oprana sa 50% etra i vode. Čvrsta supstanca je zatim obrazovala azotrop sa toluenom na uredjaju rotovap da bi se dobilo oko 800 mg željene kiseline sa 69.7% prinosa. LCMS (m/z): 309.2 (MH<+>), 0.50 min.
Sinteza 4-(2-amino-5-(1-etil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0762]
Šema 103
Faza 1. terc-butil 4-bromo-2-fluorobenzoat
[0763] Gusta suspenzija 4-bromo-2-fluorobenzoeve kiseline (20.16 g, 92 mmol) u dioksanu (90 mL) i konc. H2SO4(5 mL) je ohladjena do 0°C, i zatim je kroz nju propušten u mehurićima izobuten tokom 2 h. Reakcija je je ostavljena da se postepeno ugreje do sobne temperature preko noći. Čvrsti NaHCO3(40 g) je pažljivo dodat u reakcionu smešu i smeša je mešana tokom 1 h. Smeša je koncentrovana, i zatim ponovo rastvorena u vodi i etil acetatu. Slojevi su razdvojeni. Vodena faza je oprana etil acetatom. Kombinovane organske supstance su oprane zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i zasićenim slanim rastvorom, zatim osušene iznad Na2SO4, filtrirane i koncentrovane. Rezultujući uljani terc-butil 4-bromo-2-fluorobenzoat je korišćen bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 7.79 - 7.70 (m, 1H), 7.42 - 7.23 (m, 3H), 1.59 (s, 11H).
Faza 2. terc-butil 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat
[0764] Gusta suspenzija terc-butil 4-bromo-2-fluorobenzoata (5.55 g, 20.17 mmol), BISPIN (7.68 g, 30.3 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (1.153 g, 1.412 mmol) i kalijum acetata (5.94 g, 60.5 mmol) u DMF (75 mL) je degazirana, i zatim zagrevana do 100°C preko noći. Reakcija je koncentrovana, zatim rastvorena u DCM, filtrirana preko celita, i zatim oprana vodom i zasićenim slanim rastvorom. Organske faze su filtrirane preko celita, koncentrovane, i zatim prečišćene pomoću fleš hromatografije eluiranjem sa 0 - 20% etil acetat/heptan da bi se dobilo 5.2 g terc-butil 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata sa 80% prinosa.
Faza 3. terc-butil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoat
[0765] Gusta suspenzija terc-butil 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata (5.1 g, 15.83 mmol), 3-bromoaminopiridina (3.01 g, 17.41 mmol) i Pd(PPh3)4(0.732 g, 0.633 mmol) u n-butanolu (50 mL) i 2.0 M vodenom rastvoru Na2CO3(19.79 mL, 39.6 mmol) je degazirana, i zatim zagrevana do 100°C preko noći. Reakcija je ohladjena, i razblažena etil acetatom. Slojevi su razdvojeni, i organske faze su oprane zasićenim slanim rastvorom, filtrirane preko celita i koncentrovane. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 10 -50% etil acetat/heptan da bi se dobilo 3.41 g terc-butil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoata sa 75% prinosa.
Faza 4. terc-butil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoat
[0766] NBS (2.145 g, 12.05 mmol) je dodat u rastvor sobne temperature terc-butil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoata (3.31 g, 11.48 mmol) u MeCN (60 mL). Rezultujuća smeša je mešana tokom 10 minuta. Reakcija je kvenčovana smešom zas. vod. rastv. Na2S2O3: zas. vod. rastv. NaHCO3u odnosu 1:1, i zatim ekstrahovana u etil acetatu. Kombinovane organske supstance su oprane zasićenim slanim rastvorom, osušene iznad natrijum sulfata i koncentrovane u vakuumu dajući terc-butil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoat. Materijal je korišćen bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 369.0 (MH<+>), 0.85 min.
Faza 5. terc-butil 4-(2-amino-5-(1-etil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat
[0767] U terc-butil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoat (200 mg, 0.544 mmol) (videti šemu 101, fazu 2 za sintezu) u DME (3 mL) i 2 M natrijum karbonat (1.5 mL, 3.0 mmol) dodat je 1-etil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (182 mg, 0.816 mmol), a nakon toga PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (44.5 mg, 0.054 mmol). Reakciona smeša je zagrejana mikrotalasima na 120°C tokom 20 minuta. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju etilacetata i vode. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-50% EtOAc (koji sadrži 10% MeOH)/heptan dajući terc-butil 4-(2-amino-5-(1-etil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat (160 mg, 77%). LCMS (m/z): 383.2 (MH<+>), 0.782 min.
Faza 6.4-(2-amino-5-(1-etil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0768] U terc-butil 4-(2-amino-5-(1-etil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat (160 mg, 0.418 mmol) u DCM (0.5 mL) dodat je TFA (2 mL, 26 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je uparena zajedno sa toluenom u vakuumu. Sirova 4-(2-amino-5-(1-etil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina je korišćena za sledeću fazu. LCMS (m/z): 327.2 (MH<+>), 0.509 min.
Primer 213
4-(2-amino-5-(1-(metilsulfonil)pirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0769]
Šema 104
Faza 1. metil 4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0770] U smešu 3-hloropirazin-2-amina (5 g, 38.6 mmol) u DME ( 160 mL) i 2 M vod. rastv. natrijum karbonata (40 mL, 80 mmol) dodat je metil 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoat (12.97 g, 46.3 mmol), a nakon toga PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (3.15 g, 3.86 mmol). Reakciona smeša je pročišćena sa N2i zagrevana u uljanom kupatilu na 100°C tokom 3-4 h. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju etilacetata i vode. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Sirovi proizvod je triturisan sa DCM. Zapažena čvrsta supstanca je filtrirana, oprana etrom i osušena pod sniženim pritiskom da bi se dobio proizvod kao beličasta čvrsta supstanca. Filtrat je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-50-80% EtOAc/heptan da bi se dobilo 10.6 g proizvoda sa 93% prinosa. LCMS (m/z): 248.1 (MH<+>), 0.563 min.
Faza 2. metil 4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0771] U smešu metil 4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (8.9 g, 36.0 mmol) u acetonitrilu (300 mL) u ledenom kupatilu dodat je NBS (5.77 g, 32.4 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 1 h. NBS (0.05 ekviv.) je dodat i rezultujuća smeša je mešana tokom dodatnih 30 min. U reakcionu smešu dodat je zasićeni rastvor natrijum bikarbonata. Smeša je mešana tokom 30 min i proizvod je ekstrahovan sa EtOAc. Organski ekstrakti su kombinovani, oprani zasićenim slanim rastvorom, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i upareni. Ostatak je osušen pod visokim vakuumom da bi se dobila smedja čvrsta supstanca (12.2g, 94%). LCMS (m/z): 326.0/328.0 (MH<+>), 0.846 min.
Faza 3. terc-butil 5-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-3,4-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat
[0772] Terc-butil 3-oksopiperidin-1-karboksilat (1.1 g, 5.52 mmol) je sipan u THF (10 mL) i ohladjen do -78°C. U to je dodat litijum bis(trimetilsilil)amid (6.07 mL, 6.07 mmol) (1 M rastvor u THF). Reakciona smeša je mešana na -78°C tokom 20 min, a zatim je dodat rastvor 1,1,1-trifluoroN-fenil-N-((trifluorometil)sulfonil) metansulfonamida (2.071 g, 5.80 mmol) u THF (10 mL) u kapima. Reakciona smeša je mešana na -78°C tokom 15 min, zatim zagrejana do, i mešana na 0°C tokom 3 h. Reakciona smeša je kvenčovana zas. rastvorom natrijum bikarbonata i zatim ekstrahovana etil acetatom. Kombinovani ekstrakti su oprani zasićenim slanim rastvorom, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i upareni. Sirovi proizvod je prečišćen kroz čep od neutralne alumine sa 10% EtOAc u heptanu. Rastvarač je uparen i ostatak je osušen da bi se dobio željeni proizvod kao žuta tečnost (2 g, 98%).
Faza 4. terc-butil 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,4-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat
[0773] Smeša 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolana) (1.223 g, 4.81 mmol), kalijum acetata (1.289 g, 13.13 mmol) i PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukta (0.107 g, 0.131 mmol) u balonu je isprana sa N2, a zatim je dodat dioksan (12 mL), a nakon toga rastvor terc-butil 5-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-3,4-dihidropiridin-1(2H)-karboksilata (1.45 g, 4.38 mmol) u dioksanu (12 mL). Reakciona smeša je pročišćavana sa N2tokom 5 min, i zatim zagrejana u uljanom kupatilu na 80°C preko noći. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju etil acetata i vode. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem smešom 0-30% EtOAc/heptan da bi se dobio željeni proizvod kao visoko viskozna tečnost (1.2 g, 89%). LCMS (m/z): 254.1 (MH<+>-tBu), 1.21 min.
Faza 5. terc-butil 5-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(metoksikarbonil)fenil)pirazin-2-il)-3,4-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat
[0774] U smešu metil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (240 mg, 0.70 mmol) u DME (6 mL) i 2 M natrijum karbonata (1.0 mL, 2.0 mmol) dodat je terc-butil 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-3,4-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (180 mg, 0.582 mmol) a nakon toga PdCl2(dppf).CH2Cl2adukt (14.4 mg, 17.5 µmol). Reakciona smeša je zagrevana mikrotalasima na 110°C tokom 20 minuta. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju etilacetata i vode. Organski sloj je izdvojen, i opran vodom i zasićenim slanim rastvorom. Organska supstanca je osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i uparena. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem sa 0-50-80% EtOAc u heptanu da bi se dobio željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (150 mg, 60%). LCMS (m/z): 429.2 (MH<+>), 1.03 min.
Faza 6. metil 4-(3-amino-6-(1,4,5,6-tetrahidropiridin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0775] U terc-butil 5-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(metoksikarbonil)fenil)pirazin-2-il)-3,4-dihidropiridin-1(2H)-karboksilat (150 mg, 0.350 mmol) (nerazdvojiva smeša) u DCM (4 mL) dodat je TFA (1 mL, 12.98 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30-45 minuta. Reakciona smeša je uparena na uredjaju rotovap, i obrazovan je azeotrop sa toluenom. Sirovi proizvod je prosledjen u sledeću fazu bez prečišćavanja. LCMS (m/z): 329.2 (MH<+>), 0.502 min.
Faza 7. metil 4-(3-amino-6-(piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0776] U metil 4-(3-amino-6-(1,4,5,6-tetrahidropiridin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (115 mg, 0.350 mmol) u MeOH (10 mL) dodat je Pd/C (93 mg, 0.088 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 h pod balonom sa H2. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i oprana sa DCM. Filtrat je uparen i osušen da bi se dobio željeni proizvod. Sirovi proizvod je prosledjen u sledeću fazu (115 mg, 95%). LCMS (m/z): 331.2 (MH<+>), 0.492 min.
Faza 8. metil 4-(3-amino-6-(1-(metilsulfonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0777] U smešu sirovog metil 4-(3-amino-6-(piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (38 mg, 0.114 mmol) u DCM (2 mL) u ledenom kupatilu dodat je DIEA (79 µL, 0.454 mmol) a nakon toga metansulfonil hlorid (9.73 µL, 0.125 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju DCM i vode. DCM sloj je izdvojen i opran zasićenim slanim rastvorom. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Sirovi proizvod (50% čistoće) je prosledjen u sledeću fazu. LCMS (m/z): 409.1 (MH<+>), 0.721 min.
Faza 9.4-(3-amino-6-(1-(metilsulfonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0778] U metil 4-(3-amino-6-(1-(metilsulfonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (60 mg, 0.147 mmol) u THF (4 mL) i MeOH (2 mL) dodat je 1 M LiOH (400 µL, 0.400 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. pH reakcione smeše je podešen do ~3 do 4 sa 2 N HCl, i proizvod je ekstrahovan etil acetatom. Organski sloj je izdvojen iz vode i opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran, i uparen da bi se dobio sirovi proizvod, koji je prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 395.1 (MH<+>), 0.573 min.
Faza 10. 4-(3-amino-6-(1-(metilsulfonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0779] U smešu 4-(3-amino-6-(1-(metilsulfonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (40 mg, 0.101 mmol) u DMF (1 mL) dodat je (S)-2-amino-2-feniletanol (13.91 mg, 0.101 mmol) a nakon toga HATU (57.8 mg, 0.152 mmol) i DIEA (0.089 mL, 0.507 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa DMF i filtrirana kroz špric-filter, a zatim je prečišćena pomoću preparativne HPLC da bi se dobio željeni proizvod u vidu soli TFA (33.4%). LCMS (m/z): 514.2 (MH<+>), 0.687 min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.95 (s, 1 H) 7.85 (t, J=7.83 Hz, 1 H) 7.73-7.57 (m, 2 H) 7.49-7.21 (m, 5 H) 5.22 (d, J=6.65 Hz, 1 H) 3.94-3.78 (m, 3 H) 3.71 (d, J=11.74 Hz, 1 H) 3.03-2.93 (m, 2 H) 2.87-2.74 (m, 4 H) 2.07-1.97 (m, 1 H) 1.92 (d, J=12.13 Hz, 1 H) 1.85-1.68 (m, 1 H)1.37-1.25 (m, 1 H).
Primer 214
Metil 3-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(((S)-2-hidroksi-1-feniletil)karbamoil)fenil)pirazin-2-il)piperidin-1-karboksilat
[0780]
Šema 105
Faza 1. metil 3-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(metoksikarbonil)fenil)pirazin-2-il)piperidin-1-karboksilat
[0781] U metil 4-(3-amino-6-(piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (55 mg, 0.166 mmol) (za sintezu, videti primer 34, faza 7) u DCM (3 mL) u ledenom kupatilu dodat je DIEA (0.116 mL, 0.666 mmol) i metil hloroformat (0.013 mL, 0.166 mmol). Reakciona smeša je mešana u ledenom kupatilu tokom 30 min. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju DCM i vode. DCM sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Ostatak (50 mg, 77%) je prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 389.2 (MH<+>), 0.785 min.
Faza 2.4-(3-amino-6-(1-(metoksikarbonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0782] U metil 3-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(metoksikarbonil)fenil)pirazin-2-il)piperidin-1-karboksilat (50 mg, 0.129 mmol) u THF (4 mL) i MeOH (2 mL) dodat je 1 M LiOH (0.500 mL, 0.500 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. pH reakcione smeše je podešen do ~ 3 sa 2 N HCl, i proizvod je ekstrahovan etil acetatom. EtOAc sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Ostatak je prenet u sledeću fazu bez prečišćavanja (40 mg, 83%). LCMS (m/z): 375.2 (MH<+>), 0.637 min.
Faza 3. metil 3-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(((S)-2-hidroksi-1-feniletil)karbamoil)fenil)pirazin-2-il)piperidin-1-karboksilat
[0783] U smešu 4-(3-amino-6-(1-(metoksikarbonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (28 mg, 0.06 mmol) u DMF (1 mL) dodat je (S)-2-amino-2-feniletanol (12.31 mg, 0.090 mmol) a nakon toga HATU (34.1 mg, 0.090 mmol) i DIEA (0.052 mL, 0.299 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa DMF, filtrirana kroz špric-filter i prečišćena pomoću preparativne HPLC da bi se dobio željeni proizvod u vidu soli TFA (10.9 mg, 29.4%) LCMS (m/z): 494.2 (MH<+>), 0.733 min. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm7.82-7.72 (m, 2 H) 7.63-7.48 (m, 2 H) 7.38-7.11 (m, 5 H) 5.12 (t, J=6.06 Hz, 1 H) 4.09 (d, J=12.91 Hz, 1 H) 3.97 (d, J=12.13 Hz, 1 H) 3.87-3.68(m, 2 H) 3.59 (s, 3 H) 3.11-2.66 (m, 3 H) 2.00-1.88 (m, 1 H) ) 1.85-1.65 (m, 2 H) 1.58-1.40 (m, 1 H)
Primer 215
4-(6-(1-acetilpiperidin-3-il)-3-aminopirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0784]
Šema 106
Faza 1. metil 4-(6-(1-acetilpiperidin-3-il)-3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0785] U smešu metil 4-(3-amino-6-(piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (55 mg, 0.166 mmol) (za sintezu, videti primer 34, faza 7) u DCM (3 mL) u ledenom kupatilu dodat je DIEA (0.116 mL, 0.666 mmol) a nakon toga acetil hlorid (0.012 mL, 0.166 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju DCM i vode. DCM sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Ostatak je prenet u sledeću fazu bez prečišćavanja (50 mg, 81%). LCMS (m/z): 373.3 (MH<+>), 0.666 min.
Faza 2.4-(6-(1-acetilpiperidin-3-il)-3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0786] U smešu metil 4-(6-(1-acetilpiperidin-3-il)-3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (50 mg, 0.134 mmol) u THF (4 mL) i MeOH (2 mL) dodat je 1 M LiOH (0.500 mL, 0.500 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. pH reakcione smeše je podešen do ~3 sa 2 N HCl, i proizvod je ekstrahovan etil acetatom. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Ostatak je prenet u sledeću fazu bez prečišćavanja (34 mg, 70.7%). LCMS (m/z): 359.1 (MH<+>), 0.534min.
Faza 3. 4-(6-(1-acetilpiperidin-3-il)-3-aminopirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0787] U smešu 4-(6-(1-acetilpiperidin-3-il)-3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (34 mg, 0.076 mmol) u DMF (1.5 mL) dodat je (S)-2-amino-2-feniletanol (15.62 mg, 0.114 mmol), a nakon toga HATU (43.3 mg, 0.114 mmol) i DIEA (0.066 mL, 0.379 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa DMF, filtrirana kroz špric-filter i prečišćena pomoću preparativne HPLC da bi se dobio željeni proizvod u vidu soli TFA (13.9 mg, 30%). LCMS (m/z): 478.2 (MH<+>), 0.641 min.1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.98-7.97 (m, 2 H) 7.73-7.58 (m, 2 H) 7.47-7.23 (m, 5 H) 5.22 (t, J=6.06 Hz, 1 H) 4.62-4.37 (m, 1 H) 4.08-3.75 (m, 3 H) 3.27-3.08 (m, 1 H) 3.03-2.71 (m, 2 H) 2.11 (d, J=11.35 Hz, 3 H) 2.04 (d, J=8.22 Hz, 1 H) 2.00-1.75 (m, 2 H) 1.73-1.46 (m, 1 H)
Primer 216
Metil 3-(5-amino-6-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-il)piperidin-1-karboksilat
[0788]
Šema 107
[0789] U 4-(3-amino-6-(1-(metoksikarbonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoevu kiselinu (12 mg, 0.026 mmol) (za sintezu, videti primer 35, faza 2) u DMF (1 mL) dodat je (S)-2-amino-2-(3-hlorofenil)etanol (6.60 mg, 0.038 mmol), a nakon toga HATU (14.63 mg, 0.038 mmol) i DIEA (0.022 mL, 0.128 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa DMF, filtrirana kroz špric-filter i prečišćena pomoću preparativne HPLC da bi se dobio željeni proizvod u vidu soli TFA (6.5 mg, 38%). LCMS (m/z): 528.1/530.1 (MH<+>), 0.798 min. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm7.96-7.80 (m, 2 H) 7.75-7.58 (m, 2 H) 7.50-7.23 (m, 4 H) 5.19 (t, J=5.87 Hz, 1 H) 4.25-4.01 (m, 2 H) 3.92-3.79 (m, 2 H) 3.68 (s, 3 H) 3.20-2.74 (m, 3 H) 2.08-1.97 (m, 1 H) 1.91-1.73 (m, 2 H) 1.67-1.51 (m, 1 H)
Primer 217
(S)-4-(3-amino-6-(1-etil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil) benzamid
[0790]
Šema 108
Faza1. metil 4-(3-amino-6-(1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat)
[0791] U metil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (za sintezu videti primer 34, faza 2) (100 mg, 0.307 mmol) u DME (3 mL) i 2 M natrijum karbonat (0.75 mL, 1.5 mmol) dodat je terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-karboksilat (90 mg, 0.307 mmol), a nakon toga PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (25.04 mg, 0.031 mmol). Reakciona smeša je zagrevana mikrotalasima na 120°C tokom 15 min. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju etil acetata i vode. Organski sloj je izdvojen, opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Ostatak je prenet u sledeću fazu bez prečišćavanja (90 mg, 74%, 80% čistoće). LCMS (m/z): 314.1 (MH<+>), 0.595 min.
Faza 2. metil 4-(3-amino-6-(1-etil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0792] U metil 4-(3-amino-6-(1H-pirazol-4-il) pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (45 mg, 0.115 mmol) u DMF (2 mL) dodat je kalijum karbonat (47.6 mg, 0.345 mmol), a nakon toga bromoetan (0.017 mL, 0.230 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 48 h. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju etilacetata i vode. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran, uparen i prečišćen pomoću fleš hromatografije eluiranjem smešom rastvarača 0 - 60% EtOAc (sadrži 10% MeOH)/heptan da bi se dobio željeni proizvod (25 mg, 64%, 80% čistoće). LCMS (m/z): 342.0 (MH<+>), 0.73 min.
Faza 3.4-(3-amino-6-(1-etil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0793] U metil 4-(3-amino-6-(1-etil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (25 mg, 0.073 mmol) u MeOH (1 mL) i THF (2 mL) dodat je 1 M LiOH (0.220 mL, 0.220 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. pH reakcione smeše je podešen do ~ 4 sa 2 N HCl. Proizvod je ekstrahovan etil acetatom dvaput. Kombinovani organski ekstrakti su oprani zasićenim slanim rastvorom, osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i upareni. Ostatak je prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 328.1 (MH<+>), 0.607 min.
Faza 4. (S)-4-(3-amino-6-(1-etil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil) benzamid
[0794] U 4-(3-amino-6-(1-etil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoevu kiselinu (25 mg, 0.076 mmol) u DMF (1 mL) dodat je EDC.HCl (21.96 mg, 0.115 mmol), a nakon toga HOAt (15.60 mg, 0.115 mmol), (S)-2-amino-2-feniletanol (15.92 mg, 0.092 mmol) i DIEA (0.040 mL, 0.229 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 h. Reakciona smeša je razblažena sa DMF i filtrirana kroz špric-filter. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC da bi se dobio željeni proizvod u vidu soli TFA (9.1 mg, 17%). LCMS (m/z): 447.2 (MH<+>), 0.699 min. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.67-8.41 (m, 1 H), 8.17 (s, 1 H), 8.03 (s, 1 H), 7.86 (s, 1 H), 7.78 (t, J=7.63 Hz, 1 H), 7.67-7.53 (m, 2 H), 7.40-7.09 (m, 5 H), 5.21-5.03 (m, 1 H), 4.13 (q, J=7.30 Hz, 2 H), 3.86-3.65 (m, 2 H), 1.39 (t, J=7.24 Hz, 3 H).
Primer 218
Sinteza 4-(2-amino-5-(5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamida
[0795]
Šema 109
Faza 1. Terc-butil 4-hidroksi-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat
[0796] U Boc-Gly-OH (1 g, 5.71 mmol) u DCM (12 mL) pod atmosferom N2na 0°C dodat je DMAP (1.743 g, 14.27 mmol) i Meldrumova kiselina (0.987 g, 6.85 mmol). Rastvor izopropil hloroformata (8.56 mL, 8.56 mmol) u toluenu je dodat u kapima. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 3 h. Reakciona smeša je oprana sa 15% KHSO4dvaput, osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i uparena. Sirovi proizvod je sipan u 50 mL EtOAc i refluksovan tokom 1 h. Nakon što su isparljivi materijali upareni, sirovi proizvod je triturisan sa EtOAC i rezultujuća čvrsta supstanca je filtrirana i osušena da bi se dobila žuta čvrsta supstanca (75%). LCMS (m/z): 200.1 (MH<+>), 0.504 min.
Faza 2. Terc-butil 2-okso-4-(tosiloksi)-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat
[0797] U terc-butil 4-hidroksi-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat (680 mg, 3.41 mmol) u DCM (12 mL) dodat je DIEA (1.192 mL, 6.83 mmol) i tozil hlorid (651 mg, 3.41 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 h. Reakciona smeša je razblažena sa DCM i oprana zasićenim natrijum bikarbonatom. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (0 do 50% EtOAc/heptan). Čiste frakcije su kombinovane, uparene i osušene da bi se dobio željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (0.98 g, 81%). LCMS (m/z): 354.1 (MH<+>), 0.97 min; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.99 (d, J=8.22 Hz, 2 H) 7.54 (d, J=7.83 Hz, 2 H) 5.77 (s, 1 H) 4.33 (s, 2 H) 2.43 (s, 3 H) 1.41 (s, 9 H).
Faza 3. Terc-butil 4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat
[0798] U terc-butil 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoat (400 mg, 1.089 mmol) u DME (12 mL) dodat je 4,4,4',4',5,5,5'-heptametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (523 mg, 2.179 mmol), kalijum acetat (321 mg, 3.27 mmol) i PdCl2(dppf)-CH2Cl2(89 mg, 0.109 mmol). Reakciona smeša je pročišćena sa N2i zagrevana u fioli za mikrotalasnu pećnicu u bloku za zagrevanje na 110°C tokom noći. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju etil acetata i vode. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Sirovi proizvod je sipan u etar i sonifikovan tokom 10 min i crna čvrsta supstanca je filtrirana. Filtrat je uparen da bi se dobio proizvod kao svetlo žuta čvrsta supstanca (300 mg, 66.5%). LCMS (m/z): 333.2 (MH<+>), 0.672 min (za boronsku kiselinu).
Faza 4. Terc-butil 4-(6-amino-5-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat
[0799] U terc-butil 4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoat (158 mg, 0.382 mmol) u DME (3 mL) i natrijum karbonat (0.509 mL, 1.019 mmol) dodat je terc-butil 2-okso-4-(tosiloksi)-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat (90 mg, 0.255 mmol) i PdCl2(dppf)-CH2Cl2(41.6 mg, 0.051 mmol). Reakciona smeša je zagrevana mikrotalasima na 90°C tokom 30 minuta. LCMS je pokazala da je polazni materijal i dalje prisutan. Dodato je još katalizatora i smeša je ponovo zagrejana na 90°C tokom 20 min. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju etilacetata i vode. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatorgrafijom korišćenjem smeše rastvarača 0-50% EtOAc (sadrži 10%MeOH)/heptan da bi se dobio proizvod kao žuta čvrsta supstanca (66%). LCMS (m/z): 470.2 (MH<+>), 0.846 min.
Faza 5.4-(2-amino-5-(5-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-3-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0800] U terc-butil 4-(6-amino-5-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)-2-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilat (158 mg, 0.337 mmol) dodat je TFA (2 mL, 26.0 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Posle dodavanja toluena, isparljivi rastvarači su upareni. Sirovi proizvod korišćen je u sledećoj fazi. LCMS(m/z): 314.2 (MH<+>), 0.382 min.
Faza 6.4-(2-amino-5-(5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0801] U 4-(2-amino-5-(5-okso-2,5-dihidro-1H-pirol-3-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoevu kiselinu (100 mg, 0.319 mmol) u MeOH (15 mL) pod atmosferom N2dodat je Pd-C (67.9 mg, 0.064 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 h pod balonom H2. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i oprana metanolom. Filtrat je uparen. Sirovi proizvod je prosledjen u sledeću fazu. LCMS(m/z): 316.2 (MH<+>), 0.338 min.
Faza 7. (+/-)-4-(2-amino-5-(5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0802] U 4-(2-amino-5-(5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoevu kiselinu (30 mg, 0.076 mmol) u DMF (1 mL) dodat je (S)-2-amino-2-feniletanol (12.53 mg, 0.091 mmol), EDC-HCl (21.89 mg, 0.114 mmol), HOAt (15.54 mg, 0.114 mmol) i DIEA (0.040 mL, 0.228 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Reakciona smeša je razblažena sa DMF i neposredno prečišćena pomoću preparativne HPLC da bi se dobio (+/-)-4-(2-amino-5-(5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamid u vidu soli TFA (20.2%). LCMS (m/z): 435.2 (MH<+>), 0.476 min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.88 (s, 1 H), 7.84-7.74 (m, 2 H), 7.38-7.30 (m, 4 H), 7.27 (t, J=7.43 Hz, 2 H), 7.22-7.13 (m, 1 H), 5.18-5.05 (m,1 H), 3.85-3.56 (m, 4 H), 3.39 -3.26(m, 1 H), 2.62 (dd, J=16.82, 8.61 Hz, 1 H), 2.48-2.33 (m, 1 H).
Primeri 219 i 220
Sinteza 4-(2-amino-5-((R)-5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamida i 4-(2-amino-5-((S)-5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil)benzamida
[0803]
Šema 110
[0804] (+/-)-4-(2-amino-5-(5-oksopirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidroksi-1-feniletil) benzamid je razdvojen hiralnom SFC (Chiral Pak 5mic C10=AD-H kolona, 4.6x100 (mm), 5 mL/min, MeOH = 50%). Polarno jedinjenje (pik 1) je dobijeno na Rt = 1.36 min (24.5%). LCMS (m/z): 435.2 (MH<+>), 0.485 min. Manje polarno jedinjenje (pik 2) je dobijeno na Rt = 2.20 min (22%). LCMS (m/z): 435.2 (MH<+>), 0.482 min. Apsolutna stereohemija na cikličnom laktamu je proizvoljno dodelejna.
Primer 221
Sinteza (2S,4R)-metil 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-2-karboksilata
[0805]
Šema 111
Faza 1. (S)-1-terc-butil 2-metil 4-(6-amino-5-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)-1H-pirol-1,2(2H,5H)-dikarboksilat
[0806] Smeša terc-butil 4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoata (400 mg, 0.966 mmol), (S)-1-terc-butil 2-metil 4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-1H-pirol-1,2(2H,5H)-dikarboksilata (1.087 g, 2.90 mmol, Pd(PPh3)4(112 mg, 0.097 mmol) i cezijum karbonata (1.258 g, 3.86 mmol) u THF (10 mL) i vodi (2 mL) je degazirana, zatim zagrejana mikrotalasima do 90°C tokom 10 min. Po završetku, reakcija je razblažena etil acetatom. Organske faze su oprane zasićenim slanim rastvorom, osušene iznad magnezijum sulfata i koncentrovane. Sirova smeša je prečišćena fleš hromatografijom preko silika gela (20-90% etil acetat/heptan) da bi se dobio (S)-1-terc-butil 2-metil 4-(6-amino-5-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)-1H-pirol-1,2(2H,5H)-dikarboksilat (470 mg, 95%). LCMS (m/z): 514.3 (MH<+>), 0.92 min.
Faza 2. (2S,4R)-1-terc-butil 2-metil 4-(6-amino-5-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-1,2-dikarboksilat
[0807] Degazirani rastvor (S)-1-terc-butil 2-metil 4-(6-amino-5-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)-1H-pirol-1,2(2H,5H)-dikarboksilat (470 mg, 0.915 mmol) u metanolu (40 mL) je obradjen sa 10 tež.% Pd/C (3.214 g, 3.02 mmol). Sistem je ponovo degaziran, zatim napunjen sa 1 atmosferom vodonika preko noći. Po završetku, reakcija je degazirana, zatim obradjena amonijačnim gasom i zatim filtrirana preko celita. Kolač je ponovo suspendovan u metanolu, obradjen amonijačnim gasom, i filtriran da bi se povratio dodatni proizvod. Postupak je ponavljan sve dok proizvod nije više eluiran iz filter kolača. Kombinovane organske supstance su koncentrovane da bi se dobio (2S,4R)-1-terc-butil 2-metil 4-(6-amino-5-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-1,2-dikarboksilat (300 mg, 64%). LCMS (m/z): 516.1 (MH<+>), 0.89 min.
Faza 3. 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5-(metoksikarbonil)pirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina-2TFA
[0808] Rastvor (2S,4R)-1-terc-butil 2-metil 4-(6-amino-5-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-1,2-dikarboksilata (300 mg, 0.58 mmol) u DCM (6 mL) je obradjen sa TFA (3 mL). Posle 1h, reakcija je koncentrovana, zatim je ostatak suspendovan u benzenu, sonifikovan, zatim koncentrovan da bi se dobila 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5(metoksikarbonil)pirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina-2TFA (345 mg, 100% prinosa). LCMS (m/z): 360.2 (MH<+>), 0.34 min.
Faza 4. (2S,4R)-metil 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-2-karboksilat
[0809] Smeša 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5-(metoksikarbonil)pirolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline-2TFA (35 mg, 0.060 mmol), HATU (34 mg, 0.089 mmol), i DIEA (0.104 mL, 0.596 mmol) u DMF (2 mL) je obradjena sa (S)-2-amino-2-(3-hlorofenil)etanolom (51 mg, 0.348 mmol). Po završetku, reakcija je oprana vodom i zasićenim slanim rastvorom, zatim osušena iznad MgSO4i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen pomoću reverzno-fazne preparativne HPLC da bi se dobio (2S,4R)-metil 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-2-karboksilat (4.2 mg, 9%). LCMS (m/z): 513.2, 515.2 (MH<+>), 0.58 min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.97 - 7.86 (m, 3H), 7.49 - 7.40 (m, 3H), 7.39 - 7.34 (m, 2H), 7.33 - 7.26 (m, 1H), 5.19 (t, J = 5.87 Hz, 1H), 4.62 (dd, J = 7.63, 10.76 Hz, 1H), 3.93 - 3.77 (m, 6H), 3.74 - 3.61 (m, 1H), 2.87 (td, J = 6.90, 13.21 Hz, 1H), 2.33 - 2.21 (m, 1H).
Primeri 222 i 223
Sinteza (2S,4R)-4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-2-karboksilne kiseline i (2S,4R)-metil 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-2-karboksilata
[0810]
Šema 112
Faza 1. (2S,4R)-4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-2-karboksilna kiselina
[0811] Rastvor (2S,4R)-metil 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-2-karboksilata (120 mg, 0.234 mmol) u MeOH (4 mL) je obradjen sa 1.0 M vodenim rastvorom LiOH (0.468 mL), zatim zagrejan do 70°C. Posle 1 h, reakcija je koncentrovana, zatim rastvorena u vodi (2 mL) i obradjena sa 1.0 N vodenog rastvora HCl (0.468 mL). Reakciona smeša je ekstrahovana etil acetatom (20 mL). Organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, zatim osušen iznad MgSO4i koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod (97 mg, 57%). Porcija ovog materijala je prečišćena pomoću reverzno-fazne preparativne HPLC dajući (2S,4R)-4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-2-karboksilnu kiselinu. LCMS (m/z): 499.1/501.1 (MH<+>), 0.49 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.56 - 8.64 (m, 1H), 7.75 - 7.87 (m, 4H), 7.31 - 7.38 (m, 4H), 7.24 - 7.29 (m, 3H), 7.17 - 7.24 (m, 1H), 5.07 - 5.14 (m, 1H), 4.36 (dd, J = 7.63, 9.98 Hz, 1H), 3.64 - 3.83 (m, 4H), 3.52 - 3.62 (m, 1H), 3.27 - 3.34 (m, 1H), 2.72 - 2.81 (m, 1H), 2.56 (s, 1H), 2.15 (td, J = 10.42, 13.21 Hz, 1H).
Faza 2. (2S,4R)-metil 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-2-karboksilat
[0812] Rastvor (2S,4R)-4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-2-karboksilne kiseline (25 mg, 0.050 mmol) u THF (2 mL) i DMF (2 mL) je redom obradjen sa 2.0 M rastvorom metilamina u THF (1.25 mL, 2.5 mmol), i HATU (95 mg, 0.25 mmol). Posle 2 h, reakcija je razblažena etil acetatom i oprana vodom i zasićenim slanim rastvorom. Organske faze su osušene iznad magnezijum sulfata i koncentrovane da bi se dobio (2S,4R)-metil 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirolidin-2-karboksilat posle prečišćavanja pomoću reverzno-fazne preparativne HPLC (1.8 mg, 5%). LCMS (m/z): 512.2, 514.2 (MH<+>), 0.54 min;<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.64 - 8.73 (m, 1H), 7.84 - 7.96 (m, 2H), 7.45 (s, 1H), 7.40 - 7.44 (m, 1H), 7.35 - 7.38 (m, 1H), 7.27 - 7.34 (m, 1H), 5.16 - 5.24 (m, 1H), 4.38 (dd, J = 7.83, 10.17 Hz, 1H), 3.75 - 3.92 (m, 2H), 3.60 - 3.72 (m, 1H), 2.78 - 2.89 (m, 3H).
Sinteza 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0813]
[0814] Prateći faze 4 i 5 na šemi 109, korišćenjem 5-bromo-1-metil-1H-imidazola, dobijena je 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina. LCMS (m/z): 313.1 (MH<+>), 0.3 min.
Sinteza 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0815]
[0816] Prateći faze 4 i 5 na šemi 109, korišćenjem 1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola, dobijena je 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina. LCMS (m/z): 313.4 (MH<+>), 0.44 min.
Sinteza 4-(2-amino-5-(1-izopropil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0817]
[0818] Prateći faze 4 i 5 na šemi 109, korišćenjem 1-izopropil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola, dobijena je 4-(2-amino-5-(1-izopropil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoeva kiselina. LCMS (m/z): 341 (MH<+>), 0.56 min.
Primer 224
Sinteza (S)-4-(3-amino-6-(oksetan-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamida
[0819]
Šema 113
Faza 1. Metil 4-(3-amino-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0820] U metil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (400 mg, 1.227 mmol) u DME (12 mL) dodat je 4,4,4',4',5,5,5'-heptametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan (589 mg, 2.453 mmol), kalijum acetat (361 mg, 3.68 mmol) i PdCl2(dppf)-CH2Cl2(100 mg, 0.123 mmol). Reakciona smeša je pročišćena sa N2i zagrevana mikrotalasima na 120°C tokom 15 min. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju etilacetata i vode. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Sirovi proizvod je sipan u etar i sonifikovan tokom 20 min. Crna čvrsta supstanca je filtrirana. U filtrat je dodat heptan. Talog je filtriran i osušen da bi se dobila svetlo žuta čvrsta supstanca. (250mg, 54.6%). LCMS (m/z): 292.2 (MH<+>), 0.47 min (za boronsku kiselinu).
Faza 2. Metil 4-(3-amino-6-(oksetan-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0821] U metil 4-(3-amino-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (150 mg, 0.402 mmol) u DME (6 mL) i natrijum karbonatu (1.5 mL, 3.0 mmol) dodat je 3-jodooksetan (370 mg, 2.01 mmol) i PdCl2(dppf)-CH2Cl2(32.8 mg, 0.042 mmol). Reakciona smeša je zagrevana mikrotalasima na 100°C tokom 15 min. Reakciona smeša je raspodeljena izmedju etilacetata i vode. Organski sloj je izdvojen, opran zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i uparen. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC da bi se izdvojio proizvod (13.5 mg, 11.0%). LCMS (m/z): 304.2 (MH<+>), 0.61 min.
Faza 3.4-(3-amino-6-(oksetan-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0822] U metil 4-(3-amino-6-(oksetan-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (13 mg, 0.043 mmol) u MeOH (1 mL) i THF (2 mL) dodat je LiOH (0.128 mL, 0.128 mmol). Reakciona smeša je mešana 2 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je podešena do kisele (pH ~3) i rastvarač je uparen na uredjaju rotovap. Sirovi proizvod je obrazovao azeotrop sa toluenom i prosledjen je u sledeću fazu. LCMS (m/z): 290.1 (MH<+>), 0.46 min.
Faza 4. (S)-4-(3-amino-6-(oksetan-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-(2-hidroksi-1-feniletil)benzamid
[0823] U sirovu 4-(3-amino-6-(oksetan-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoevu kiselinu (10 mg, 0.035 mmol) u DMF (1 mL) dodat je (S)-2-amino-2-feniletanol (14.22 mg, 0.104 mmol), DIEA (0.030 mL, 0.173 mmol), EDC (13.25 mg, 0.069 mmol) i aza-HOBt (7.06 mg, 0.052 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC da bi se dobio željeni proizvod u vidu soli TFA (11.5%). LCMS (m/z): 409.2 (MH<+>), 0.597 min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.92-7.82 (m, 2H) 7.78-7.64 (m, 2 H) 7.48-7.32 (m, 5 H) 7.23 - 7.31-7.23 (m, 1 H) 5.28-5.17 (m, 1 H) 5.03-4.90 (m, 5 H) 4.47-4.34 (m, 1 H)3.96-3.76 (m, 3 H).
Primeri 225, 226, i 227
Sinteza (+/-)-N-(2-amino-1-(3-hlorofenil)etil)-4-(2-amino-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzamida
[0824]
Šema 114
[0825] Prateći faze 1 i 2 na šemi 82, faze 5 i 6 na šemi 102, korišćenjem (+/-)-terc-butil (2-amino-2-(3-hlorofenil)etil)karbamata, dobijen je (+/-)-N-(2-amino-1-(3-hlorofenil)etil)-4-(2-amino-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzamid. LCMS (m/z): 479.3 (MH<+>), 0.54 min.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8.16 (m, 2H), 7.87 (m, 1H), 7.47 - 7.18 (m, 7H), 5.23 (m, 1H), 4.58 (bs, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.19 (m, 2H), 2.36 (s, 3H). Racemska smeša je razdvojena hiralnom SFC (ChiralPak 5mic AD kolona, 4.6x100 (mm), 5 mL/min, EtOH+0.1%, DEA = 30%). Polarni enantiomer, (S)-N-(2-amino-1-(3-hlorofenil)etil)-4-(2-amino-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzamid, dobijen je na Rt = 2.6 min. LCMS (m/z): 479.1 (MH<+>), 0.57 min. Manje polarni enantiomer, (R)-N-(2-amino-1-(3-hlorofenil)etil)-4-(2-amino-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzamid, dobijen je na Rt = 3.22 min. LCMS (m/z): 479.1 (MH<+>), 0.57 min. Apsolutna stereohemija je pripisana na osnovu biohemijskih podataka i modela molekulskog dokinga.
Sinteza 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-deuterido-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0826]
Šema 115
Faza 1. metil 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-deuterido-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0827] Rastvor etil 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (98 mg, 0.285 mmol) u metanolu (1.903 mL), THF (0.952 mL) je ohladjen do -78°C. U ovo je polako dodat NaBD4(32.4 mg, 0.856 mmol) u porcijama. Reakciona smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature tokom 1 h. Reakciona smeša je kvenčovana rastvorom NH4Cl, a nakon toga rastvorom Na2CO3i mešana tokom 1 h. Reakciona smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovani organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtran, i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio sirovi metil 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-deuterido-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (81.4 mg, trans:cis = ~4:1, 82%), koji je korišćen u sledećoj fazi. LCMS (m/z): 347.1 (MH<+>), 0.61 min (major, trans) i 0.64 min (cis).
Faza 2. 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-deuterido-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina
[0828] Rastvoru metil 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-deuterido-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (81 mg, 0.234 mmol) u THF (1559 µl,) i MeOH (780 µl) dodat je LiOH (1M rastvor) (421 µl, 0.421 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Posle podešavanja pH do 5, reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, filtriran, i koncentrovan u vakuumu. Sirova 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-deuterido-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (99%) korišćena je u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 333.1 (MH<+>), 0.47 min (major, trans) i 0.51 min (cis).
Sinteza (S)-2-amino-2-deuterido-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etanola
[0829]
Šema 116
Faza 1. (3-bromo-5-fluorofenil)-1,1-di-deuterido-metanol
[0830] 3-Bromo-5-fluorobenzoeva kiselina (5.3 g, 24.20 mmol) je rastvorena u THF (81 mL). U ovo je dodat LiAlD4(1.102 g, 29.0 mmol) na 0<o>C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Posle hladjenja reakcione smeše do 0°C, dodat je 1.1 mL vode, a nakon toga 1.1 mL 15% NaOH i 3.2 mL vode. Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, zatim filtrirana kroz celit i isprana sa Et2O, filtrat je koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod, koji je prečišćen fleš hromatografijom (0-30% EtOAc/heptan) da bi se dobio (3-bromo-5-fluorofenil)-1,1-di-deuterido-metanol sa 64% prinosa. LCMS (m/z): 232.0 (MNa<+>), 0.69 min.
Faza 2.3-bromo-5-fluorobenzaldehid-d1
[0831] (3-Bromo-5-fluorofenil)-1,1-di-deuterido-metanol (3.2 g, 15.4 mmol) je rastvoren u DCM (51.5 mL) i ohladjen do 0°C. Des-Martinov perjodinan (9.83 g, 23.18 mmol) je dodat u reakcionu smešu, koja je mešana na 0°C tokom 3 h. Zasićeni rastvor Na2S2O3/NaHCO3(8:1) je dodat u smešu, koja je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski sloj je opran vodom i zasićenim slanim rastvorom, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobio 3-bromo-5-fluorobenzaldehid-d1 kao bela čvrsta supstanca (2.6 g, 82%). 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.83 (s, 1H), 7.57 - 7.50 (m, 2H).
Faza 3. (S)-2-amino-2-deuterido-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etanol
[0832] Prateći faze 4 do 9 na šemi 74, korišćenjem 3-bromo-5-fluorobenzaldehida-d1, dobijen je (S)-2-amino-2-deuterido-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etanol kao HCl so. LCMS (m/z): 235.0/237.0 (MH<+>), 0.40 min.
Sinteza (R)-2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2,2-di-deuterido-etanol hidrohlorida
[0833]
Šema 117
Faza 1. (R)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)sirćetna kiselina [0834] Rastvor (S)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)alil)karbamata (1.235 g, 3.74 mmol) u CCl4(4 mL), acetonitrila (4 mL) i vode (6 mL) je obradjen natrijum perjodatom (1.680 g, 7.85 mmol) i RuCl3(16 mg, 0.075 mmol). Posle 1 h, reakcija je završena. Reakcija je raspodeljena izmedju etil acetata i vode. Organske faze su oprane zasićenim slanim rastvorom, zatim filtrirane preko celita i koncentrovane. Sirovi proizvod je ponovo rastvoren u benzenu, zatim filtriran i ponovo koncentrovan da bi se dobila sirova (R)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)sirćetna kiselina (1.30 g, 99% prinosa) koja je korišćena neposredno. LCMS (m/z): 348.2 (MH<+>), 0.52 min.
Faza 2. (R)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksi-2,2-deuterido-etil)karbamat [0835] Rastvor (R)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)sirćetne kiseline (1.30 g, 3.73 mmol) u DME (6 mL) na -10°C je obradjen N-metil morfolinom (0.431 mL, 3.92 mmol). Posle 5 min, reakcija je obradjena izobutil hloroformatom (0.515 mL, 3.92 mmol). Posle dodatnih 5 min, reakcija je filtrirana i kolač je opran sa DME (4 mL). Kombinovane organske supstance su obradjene rastvorom NaBD4(0.251 g, 5.97 mmol) u vodi (1 mL). Po završetku, reakcija je raspodeljena izmedju etil acetata i vode. Organske faze su oprane zasićenim slanim rastvorom, zatim osušene iznad natrijum sulfata i koncentrovane. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne HPLC da bi se dobilo naslovno jedinjenje, (R)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksi-2,2-deuterido-etil)karbamat (55 mg, 4.4% prinosa). LCMS (m/z): 337.3 (MH<+>), 1.03 min.
Faza 3. (R)-2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2,2-di-deuterido-etanol hidrohlorid
[08363] Rastvor (R)-terc-butil (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksi-2,2-deuterido-etil)karbamata (46 mg, 0.137 mmol) u 4 M HCl u dioksanu (1368 µl) je mešan tokom noći. Isparljivi materijali su uklonjeni u vakuumu. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS (m/z): 236/238 (MH<+>), 0.4 min.
Sinteza 4-(3-amino-6-(4-(hidroksimetil)cikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0837]
Šema 118
Faza 1. Etil 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilat
[0838] Etil 4-oksocikloheksankarboksilat (15.01 g, 88.16 mmol) je kombinovan sa etilen glikolom (21 mL, 4.27 ekviv.) i monohidratom p-toluensulfonske kiseline (0.2 g, 0.012 ekviv.) u anhidrovanom toluenu (50 mL), i smeša je mešana 14 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je razblažena etrom (200 mL) i je oprana sa H2O (2×200 mL), zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (100 mL) i zasićenim slanim rastvorom (80 mL). Organski sloj je osušen (Na2SO4), filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 18.15 g etil 4-oksocikloheksankarboksilat etilen ketala (96% prinosa). LCMS (m/z): 214.8 (MH<+>), 0.74 min.
Faza 2.1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-ilmetanol
[0839] LiAlH4(2.51 g, 66.3 mmol) je suspendovan u THF (60 mL) i zatim ohladjen u ledenom kupatilu. U suspenziju je dodat etil 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilat (11.357 g, 53.0 mmol) rastvoren u THF (40 mL) u kapima i reakciona smeša je postepeno zagrevana do sobne temperature tokom 1 h nakon čega je LCMS pokazala potpunu redukciju SM. Reakciona smeša je razblažena etrom (200 mL) i kvenčovana sa 2.5 mL vode i zatim 5 mL (10% NaOH) i zatim 7.5 mL vode. U ovo je dodat anhidrovani MgSO4,smeša je zatim mućkana tokom 30 min i filtrirana preko celita. Filtrat je koncentrovan u vakuumu da bi se dobio željeni proizvod u kvantitativnom prinosu. LCMS (m/z): 173.1 (MH<+>), 0.41 min.
Faza 3.4-((benziloksi)metil)cikloheksanon
[0840] 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-ilmetanol (1.33 g, 7.72 mmol) je rastvoren u DMF (14 mL) i zatim ohladjen do 0°C. U rastvor je dodat NaH (0.402 g, 10.04 mmol) u porcijama i smeša je mućkana na 10°C tokom 1 h i zatim je dodat benzil bromid (1.194 mL, 10.04 mmol), i smeša je mućkana tokom 72 h. Reakciona smeša je kvenčovana vodom i ekstrahovana etrom i kombinovani organski ekstrakti su osušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani u vakuumu i sirovi proizvod 8-((benziloksi)metil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan je rastvoren u acetonitrilu (35 mL) i vodi (25 mL) i obradjen sa 3N HCl (13 mL) i mućkan na sobnoj temperaturi tokom 20 min nakon čega je LCMS označila željeni proizvod. Reakciona smeša je kvenčovana sa 40 mmol vodenog rastvora NaOH i zatim ekstrahovana sa EtOAc (200 mL) i organski sloj je opran vodom i osušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan u vakuumu i ostatak prečišćen pomoću fleš hromatografije (0-50% EtOAc/heptan) da bi se dobilo 1.23 g željenog proizvoda kao bezbojni sirup (73%). LCMS (m/z): 329.2 (MH<+>), 1.33 min.
Faza 4.2-(4-((benziloksi)metil)cikloheks-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan [0841] 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-ilmetanol (1.23 g, 5.63 mmol) je rastvoren u THF (22.5 mL) i ohladjen do -78°C. Zatim je dodat LiHMDS (6.20 mL, 6.20 mmol) u kapima i smeša je mešana na ovoj temperaturi tokom 1 h nakon čega je dodat 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-((trifluorometil)sulfonil)metansulfonamid (2.214 g, 6.20 mmol) u jednoj porciji i reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i meša preko noći. Sledećeg jutra, reakciona smeša je kvenčovana sa 1.0 M NaHSO4i rastvarač je uparen u vakuumu. Ostatak je raspodeljen izmedju NaOH/etra i organski sloj je izdvojen i opran sa 1.0 M NaOH dvaput, i zasićenim slanim rastvorom i zatim osušen sa MgSO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio željeni proizvod 4-((benziloksi)metil)cikloheks-1-en-1-il trifluorometansulfonat u kvantitativnom prinosu koji je prenet u sledeću fazu bez dodatnog prečišćavanja. Intermedijer 4-((benziloksi)metil)cikloheks-1-en-1-il (1000 mg, 2.85 mmol), B2(PIN)2(1087 mg, 4.28 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2(233 mg, 0.285 mmol) i KOAc (560 mg, 5.71 mmol) su sipani u fiolu za mikrotalasno zračenje i zatim je dodat dioksan (9.5 mL). Smeša je ispražnjena i pročišćena sa N2i zatim zagrejana do 100°C tokom 22 min mikrotalasima. Sirova smeša je razblažena etrom i vodom i organski sloj je izdvojen i osušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan u vakuumu i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije (0-10% EtOAc/heptani) da bi se dobio željeni proizvod (51%). LCMS (m/z): 219.2 (MH<+>), 0.88 min.
Faza 5. Metil 4-(3-amino-6-(4-((benziloksi)metil)cikloheks-1-en-1-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat [0842] Metil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (343 mg, 1.051 mmol), 2-(4-((benziloksi)metil)cikloheks-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (414 mg, 1.261 mmol) PdCl2(dppf)-CH2Cl2adukt (86 mg, 0.105 mmol) su smešteni u fiolu za mikrotalasno zračenje i zatim je dodat DME (3.5 mL). Zatim je dodat 2.0 M Na2CO3(1261 µL, 2.52 mmol) i smeša je degazirana i pročišćena azotom i zatim zagrejana na 115°C tokom 30 minuta nakon čega je reakcija završena. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i oprana vodom i organski sloj je izdvojen i osušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan i ostatak prečišćen pomoću fleš hromatografije (0-100% EtOAc/heptan) da bi se dobilo 381 mg željenog proizvoda kao žuta čvrsta supstanca (81%). LCMS (m/z): 448.2 (MH<+>), 1.16 min.
Faza 6. Metil 4-(3-amino-6-(4-(hidroksimetil)cikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat [0843] Metil 4-(3-amino-6-(4-((benziloksi)metil)cikloheks-1-en-1-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (381 mg, 0.851 mmol) je rastvoren u THF (5 mL), zatim je dodat MeOH (15 mL), a zatim Pd-C (10%, vlažni) (550 mg, 0.517 mmol). Smeša je stavljena pod vakuum i pročišćena vodonikom i ovaj ciklus je ponavljan triput i zatim je smeša najzad smeštena pod vodonik preko noći. Posle 14 h, LCMS je pokazala zasićenje alkena ali samo delimičnu deprotekciju benzila, i zbog toga je dodato još Pd-C (10%, vlažni) (700 mg) i smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom dodatnih 5 h posle kojih je zapažena potpuna deprotekcija benzila. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana u vakuumu da bi se dobilo 215.6 mg željenog proizvoda kao smeša dijasteromera (cis/trans nespecifikovano) (70%). LCMS (m/z): 360.2 (MH<+>), 0.71, 0.72 min.
Faza 7. (S)-4-(3-amino-6-(4-(hidroksimetil)cikloheksil)pirazin-2-il)-N-(1-(3-hlorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid
[0844] Metil 4-(3-amino-6-(4-(hidroksimetil)cikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (215.6 mg, 0.600 mmol) je rastvoren u THF (3 mL), zatim je dodat MeOH (3 mL), a zatim 1.0 M LiOH (2400 µL, 2.400 mmol). Reakciona smeša je mućkana preko noći i sledećeg jutra, LCMS je pokazala obrazovanje željenog proizvoda. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i zatim je dvaput obrazovan azeotrop sa THF (10 mL svaki ), a zatim je zakišeljena sa 1.5 mL 4.0 N HCl u dioksanu i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je rastvoren u DMSO (5 mL) i prenet u sledeću fazu kao takav. LCMS (m/z): 346.2 (MH<+>), 0.57, 0.58 min.
Sinteza 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-fluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0845]
Šema 119
Faza 1. metil 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat [0846] Metil 4-(3-amino-6-(4-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (401.4 mg, 1.169 mmol) je suspendovan u MeOH i ohladjen do 0°C. U smešu je dodat NaBH4(133 mg, 3.51 mmol) rastvoren u MeOH (5 mL) i smeša je postepeno zagrevana do sobne temperature i mešana tokom 30 minuta nakon čega je reakcija završena. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i zasićenim rastvorom NaHCO3i organski sloj je opran vodom dvaput i osušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo 339.4 mg željenog proizvoda (84%). LCMS (m/z): 346.2 (MH<+>), 0.63 min.
Faza 2. Metil 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-fluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat
[0847] Balon koja sadrži rastvor metil 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (339.4 mg, 0.983 mmol) u acetonitrilu (3.2 mL) je ohladjen do 0°C u kupatilu sa mešavinom leda i zasićenog slanog rastvora i dodat je perfluorobutansulfonil fluorid (530 µl, 2.95 mmol), a nakon toga trietilamin trihidrofluorid (480 µl, 2.95 mmol) i trietilamin (1233 µl, 8.84 mmol) i rezultujuća reakciona smeša je ostavljena da se meša na 0°C tokom 90 min. Nakon isteka vremena, LCMS je pokazala odnos 2.5:1 eliminisanog nasuprot željenom proizvodu. Reakciona smeša je kvenčovana vodom i ekstrahovana sa EtOAc i organski ekstrakt opran vodom dvaput i osušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobila smeša sirovog proizvoda koja je pažljivo podvrgnuta hromatografiji (0-60% EtOAc/heptan) da bi se dobilo 67.5 mg željenog proizvoda. (19.8%). LCMS (m/z): 348.2 (MH<+>), 0.86 min.
Faza 3.4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-fluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina [0848] Metil 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-fluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (67.5 mg, 0.194 mmol) je rastvoren u THF (1 mL) i MeOH (1 mL) i zatim je dodat 1.0 M LiOH (0.777 mL, 0.777 mmol). Reakciona smeša je mućkana na sobnoj temperaturi. Posle 1 h, LCMS je pokazala obrazovanje željene kiseline. LCMS (m/z): 334.2 (MH<+>), 0.70 min.
Sinteza 3-bromo-5-((1r,4r)-4-fluorocikloheksil)pirazin-2-amina
[0849]
Šema 120
Faza 1. (1s,4s)-4-(5-aminopirazin-2-il)cikloheksanol
[0850] 4-(5-aminopirazin-2-il)cikloheksanon (1.049 g, 5.48 mmol) je rastvoren u THF (10 mL) i ohladjen do 0°C. Dodat je L-Selektrid (12.06 mL, 12.06 mmol) u kapima i smeša je mešana tokom 20 min nakon čega je reakcijazavršena. Reakciona smeša je kvenčovana sa 5 N NaOH (40 mmol) i zatim sa MeOH (5mL). Reakciona smeša je razblažena sa 2-metil THF i vodeni sloj izdvojen i organski sloj opran zasićenim slanim rastvorom i osušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo željeni proizvod u odnosu cis/trans od 95:5 koji je zatim titurisan etrom da bi se dobilo 586.3 mg blago žutog taloga kao željenog proizvoda (55%). LCMS (m/z): 194.1 (MH<+>), 0.32 min.
Faza 2 i 3.3-bromo-5-((1r,4r)-4-fluorocikloheksil)pirazin-2-amin
[0851] Prateći faze 2 i 3 na šemi 119, dobijen je 3-bromo-5-((1r,4r)-4-fluorocikloheksil)pirazin-2-amin. LCMS (m/z): 276.0 (MH<+>), 0.81 min.
Sinteza 4-(3-amino-6-(4-cijanocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline
[0852]
[0853] Prateći faze 4 do 7 na šemi 118, dobijena je 4-(3-amino-6-(4-cijanocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina. LCMS (m/z): 341.2 (MH<+>), 0.64, 0.66 min (trans, cis).
Tabela 5. Jedinjenja pripremljena korišćenjem postupka 3 koji je gore opisan.
Primer 453
Sinteza 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamida
[0854]
[0855] Faza 1. terc-butil 4-(3-amino-6-(3-oksociklopent-1-en-1-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat: Smeša terc-butil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (1 g, 2.72 mmol), ciklopent-2-enona (0.892 g, 10.86 mmol), N-cikloheksil-N-metilcikloheksanamina (1.061 g, 5.43 mmol), bis(tri-t-butilfosfin)paladijuma(0) (0.069 g, 0.136 mmol), TBAC (0.075 g, 0.272 mmol) u dioksanu (7 mL) se podvrgava mikrotalasnom zračenju na temperaturi od 135°C tokom 25 min. Nakon hladjenja, smeša se koncentruje i ostatak se razblaži sa 10 ml DCM-a, sonifikuje tokom 5 min, filtrira i čvrsti proizvod se ispire sa 3 ml DCM-a. Kombinovani rastvor DCM-a se direktno stavlja u ISCO silika kolonu za razdvajanje. (40 gram kolona, 10 do 90% EtOAc u Heptanu). 400 mg željenog proizvoda se dobija u obliku čvrstog proizvoda svetložute boje. LCMS (m/z): (MH+) 370.0, 0.903 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 1.12 - 1.26 (m, 5 H) 1.55 (s, 10 H) 1.59 -1.72 (m, 5 H) 2.41 (dt, J=5.09, 2.15 Hz, 3 H) 2.48 (dt, J=3.62, 1.91 Hz, 3 H) 3.00 (dd, J=5.09, 2.35 Hz, 2 H) 3.30 (s, 3 H) 6.66 (t, J=1.76 Hz, 1 H) 7.09 (s, H) 7.55 - 7.69 (m, H) 7.83 - 7.95 (m, 1 H) 8.57 (s, 1 H).
[0856] Faza 2: terc-butil 4-(3-amino-6-(3-oksociklopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat: U tercbutil 4-(3-amino-6-(3-oksociklopent-1-en-1-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (650 mg, 1.760 mmol) u MeOH (15 ml) dodaje se uz mešanje 15 ml DCM-a do dobijanja bistrog rastvora. Rastvor se prečisti azotom u vremenu od 5 min, nakon toga se dodaje Pd/C (300 mg, 10%, tip Degussa), i rezultujuća smeša se degazira strujom N2tokom 15 min. Nakon opremanja sa balonom sa vodonikom, reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Reakciona smeša se filtrira, i filtrirani rastvor se koncentruje, i sirovi materijal se prečišćava ISCO. (24 g silika gela, 20 do 80% EtOAc u heptanu) dajući 380 mg željenog proizvoda u obliku čvrstog proizvoda svetlo žute boje. Prinos 58.1 %. LC-MS (m/z): (MH+) 372.1, 0.829 min.
[0857] Faza 3: (+/-) terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat i (+/-)terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3S)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat: U rastvor terc-butil 4-(3-amino-6-(3-oksociklopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (200 mg, 0.538 mmol) u MeOH (4 mL) na temperaturi od -78°C dodaje se NaBH4(61.1 mg, 1.615 mmol). Reakciona smeša se meša na temperaturi od -78 °C tokom 1 h. Na temperaturi od - 78°C, reakciona smeša se kvenčuje sa zasić. NH4Cl (4 ml), i uklanja se rashladno kupatilo, i smeša se postepeno zagreje do sobne temperature, nakon toga se dodaje zasić. rastvor NaHCO3(4 ml). Reakciona smeša se ekstrahuje sa EtOAc (30 ml x2). Organski sloj se ispire sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli, suši na natrijum sulfatu, filtrira i koncentruje na vakumu. Dobija se oko 210 mg sirovog proizvoda. Sirovi proizvod se rastvara u 4 ml DMSO, filtrira i prečišćava prep HPLC. Polarnije jedinjenje je trans (poželjno, ranije se pojavljuje), dok je manje polarno jedinjenje cis, i pojavljuje se kasnije. Nakon što se neutralizuju sa 1N NaOH, trans i cis jedinjenje se dobijaju u obliku slobodnih baza. (+/-) terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat : 40 mg, prinos 19.9 %), trans.
LC-MS (m/z): (MH+) 374.1, 0.81 min, NMR (400 MHz, CD3CN) δ ppm 1.61 (s, 9 H) 1.69 - 1.82 (m, 1 H) 1.88 - 2.25 (m, 6 H) 2.59 - 2.77 (m, 1 H) 3.32 - 3.56 (m, 1 H) 4.31 - 4.48(m, 1 H) 5.07 (br. s., 2 H) 7.59 (dd, J=12.13, 1.56 Hz, 1 H) 7.66 (dd, J=8.02, 1.76 Hz, 1 H) 7.88 - 8.03 (m, 2 H). (+/-) terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat : 150 mg, prinos 74.6 %, cis. LC-MS (m/z): (MH+) 374.1, 0.81 min. 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ ppm: 1.55 - 1.67 (m, 9 H) 1.69 - 1.89 (m, 2 H) 1.91 - 2.03 (m, 4 H) 2.05 - 2.13 (m, 1 H) 2.21 - 2.33 (m, 1 H) 3.21 -3.41 (m, 1 H) 3.99 (s, 1 H) 4.20 - 4.34 (m, 1 H) 5.04 - 5.23 (m, 2 H) 7.50 - 7.58 (m, 1 H) 7.58 - 7.67 (m, 1 H) 7.90 - 8.05 (m, 2 H).
[0858] Faza 4: terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat i terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3S)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat: Dva trans izomera (ukupno 160 mg) se razdvajaju na hiralnoj koloni: OJ kolona (21 X250 mm), SFC = 100 ml/min, CO2/EtOH = 85/15, punjenje: 70 mg/7ml EtOH, 274 bar. Dobija se 80 mg svakog enantiomera.
terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat: NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm: 1.04 (t, J=6.85 Hz, 1 H) 1.47 - 1.73 (m, 11 H) 1.75 - 1.86 (m, 2 H) 1.89 -2.18 (m, 2 H) 3.15 (s, 1 H) 3.30 (s, 4H) 3.97 -4.16 (m, 1 H) 4.19 - 4.39 (m, 1 H) 4.44 - 4.59 (m, 1 H) 6.10 (s, 2 H) 7.57 (d, J=12.13 Hz, 1 H) 7.63 (dd, J=8.02, 1.76 Hz, 1 H) 7.77 - 8.01 (m, 2 H). terc-butil 4-(3-amino-6-((1S,3S)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat: NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm: 1.04 (t, J=6.85 Hz, 1 H) 1.14 - 1.28 (m, 1 H) 1.50 - 1.57 (m, 10 H) 1.59 -1.71 (m, 1 H) 1.75 - 1.87 (m, 2 H)1.89 - 2.14 (m, 2 H) 3.15 (s, 1 H) 3.30 (s, 4 H) 4.18 - 4.37 (m, 1 H) 4.42 - 4.55 (m, 1 H) 6.10 (s, 2 H) 7.51 - 7.60 (m, 1 H) 7.63 (dd, J=8.02, 1.76 Hz,1 H) 7.81 -7.95 (m, 2 H).
[0859] Faza 5. 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina Postupak: U rastvor terc-butil 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroksiciklopentil)-pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (7 mg, 0.019 mmol) u DCM-u (2 mL) na sobnoj temperaturi dodaje se TFA (0.361 mL, 4.69 mmol). Dobijeni rastvor se meša na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Rastvor se koncentruje, i dalje sušu na povišenom vakumu dajući željeni proizvod u obliku TFA koji se direktno koristi u sledećoj fazi reakcije. (6 mg, prinos 100 %) LC-MS (m/z): 318.1 (MH+), 0.46 min.
[0860] Faza 6: 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamid: U smešu (4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroksiciklopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline) (6 mg, 0.019 mmol), (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etanola (8.96 mg, 0.028 mmol), HOAt (5.15 mg, 0.038 mmol) i EDC (7.25 mg, 0.038 mmol) u DMF-u (1ml) dodaje se DIEA (0.036 ml, 0.208 mmol). Rezultujuća smeša se tokom noći meša na sobnoj temperaturi. Smeša se razblažuje sa EtOAc, ispire tri puta sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli, suši sa Na2SO4, filtrira i koncentruje dajući sirovi proizvod u obliku viskozne tečnosti svetložute boje. Ovaj sirovi proizvod se prečišćava prep HPLC dajući željeni proizvod (6 mg, proinos 45.2 %) u obliku čvrstog proizvoda svetložute boje, TFA so. LC-MS: (MH+) 581.0 za 0.726 min. 1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ ppm 1.56 - 1.82 (m, 2 H) 2.01 -2.30 (m, 3 H) 3.47 (t, J=8.61 Hz, 1 H) 3.73 -3.92 (m, 3 H) 4.32 - 4.45 (m, 2 H) 5.05 - 5.19 (m, 1 H) 7.16 - 7.27 (m, 1 H) 7.48 (dt, J=8.12, 1.81 Hz, 1 H) 7.56 - 7.71 (m, 4 H) 7.74 - 7.81 (m, 1 H) 7.97 (t, J=7.83 Hz, 1 H).
Primer 456
Sinteza 4-(3-amino-6-((1S,4S)-3,3-difluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamida
[0861]
[0862] Faza 1: 3-oksocikloheks-1-en-1-il trifluorometansulfonat: U rastvor cikloheksan-1,3-diona (8 g, 71.3 mmol) u CH2Cl2 (120 ml) na temperaturi od 0°C (ledeno kupatilo) u struji azota dodaje se natrijum karbonat (8.32 g, 78 mmol). Rezultujuća smeša se meša na temperaturi od 0°C tokom 10 min. Rastvor anhidrida trifluorometansulfonske kiseline (12.05 ml, 71.3 mmol) u 35 ml DCM-a dodaje se u kapima tokom 1h. Smeša se meša na temperaturi od 0°C tokom 1.5 h. Smeša se filtrira kroz levak od poroznog stakla, i lagano se dodaje 60 ml zasićenog NaHCO3. Organski sloj se zatim razdvaja i ispire sa 40 ml koncentrovanog rastvora soli, suši na Na2SO4, filtrira i koncentruje da bi se dobilo 9 g (prinos 52 %) željenog proizvoda u obliku tečnosti svetlo žute boje. LC-MS (m/z): (MH+) 244.9, 0.72 min.
[0863] Faza 2: 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-2-enon, (3-oksocikloheks-1-en-1-il)borna kiselina: Smeša 3-oksocikloheks-1-en-1-il trifluorometansulfonata (9 g, 36.9 mmol), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-oktametil-2,2’-bi(1,3,2-dioksaborolan) (14.04 g, 55.3 mmol), kalijum acetata (10.85 g, 111 mmol) i Pd(dppf)Cl2.DCM (0.808 g, 1.106 mmol) u dioksanu (80 mL) se ispire sa azotom u vremenu od 5 min i nakon toga zagreva tokom noći na temperaturi od 90 °C. Nakon hladjenja, smeša se filtrira i čvrsti ostatak se ispire sa 3x20 mL toplog dioksana. Spojeni rastvor se koncentruje dok ne preostane oko 70 ml dioksana. Ovaj proizvod (u dioksanu) se direktno koristi u sledećoj fazi reakcije. LCMS ( m/z): MH+=140.8 (Borna kiselina), 0.284 min.
[0864] Faza 3: Terc-butil 4-(3-amino-6-(3-oksocikloheks-1-en-1-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat: Balon sa okruglim dnom od 250 ml je napunjen sa 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-2-enonom (7.00 g, 31.5 mmol) (u oko 70 ml dioksana), terc-butil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoatom (5.8 g, 15.75 mmol)), Pd(dppf)Cl2.DCM (0.576 g, 0.788 mmol), i nakon toga sa zasićenim Na2CO3(25 mL). Rezultujuća smeša se ispire sa azotom tokom 15min. Zatim se dodaje DME (10 mL). Smeša se meša tokom noći na temperaturi od 100°C. Dodaju se etil acetat (150 ml) i voda (50 ml), i rezultujuća smeša se meša 30 min. Organski sloj se odvaja i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (30 ml x3). Organski slojevi se sakupljaju i suše na Na2SO4, filtriraju i uparavaju dajući sirovi željeni materijal kao tamni polučvrsti lepljivi ostatak. Ovaj ostatak se sipa u oko 30 ml etra, podvrgne sonifikaciji tokom 10 min, i istaloženi čvrsti proizvod žute boje se filtrira, i ispire sa hladnim etrom (5ml x 3), suši na visokom vakumu dajući željeni proizvod (3.1 g, 51.3%) u obliku čvrstog proizvoda žute boje. LC-MS (m/z): (MH+) 384.2, 0.92 min.
[0865] Faza 4: terc-butil 4-(3-(bis(terc-butoksikarbonil)amino)-6-(3-oksocikloheks-1-en-1-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat: U suspenziju terc-butil 4-(3-amino-6-(3-oksocikloheks-1-en-1-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (3 g, 7.82 mmol) u acetonitrilu (25 mL) na sobnoj temperaturi dodaje se DMAP (0.048 g, 0.391 mmol) a nakon toga i Boc-anhidrid (6.36 mL, 27.4 mmol). Rezultujuća smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 25 min. Rastvor se razblažuje sa EtOAc, ispire sa zasićenim NaHCO3 i vodom, suši i koncentruje. Sirovi proizvod se prečišćava na ISCO kolonoi za razdvajanje (80 g silika, 30 min, 5 to 60% EtOAc u Heptanu). Željeni proizvod se dobija kao lepljiva tečnost svetlo žute boje, koja očvršćava tokom noći. (3.5 g, 6.00 mmol, prinos 77 %). LC-MS (m/z): (MH+) 584.2, 1.286 min. 1H NMR (400 MHz, ACETONITRIL-d3) δ ppm 0.91 (s, 1 H) 1.31 (s, 16 H) 1.61 (s, 7 H) 1.88 - 2.03 (m, 1 H) 2.16 (s, 2 H) 2.50 (d, J=7.04 Hz, 2H) 2.85 - 3.09 (m, 2 H) 6.90 (s, 1 H) 7.51 - 7.71 (m, 2 H) 7.91 - 8.11 (m, 1 H) 8.92 (s, 1 H).
[0866] Faza 5: terc-butil 4-(3-(bis-(terc-butoksikarbonil)amino)-6-(3-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat: U rastvor terc-butil 4-(3-(bis(terc-butoksikarbonil)amino)-6-(3-oksocikloheks-1-en-1-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (3g, 5.14 mmol) u MeOH (15 mL) i DCM (10 mL) na sobnoj temperaturi dodaje se Pd-C (10%, degaziranje, 1.094 g, 1.028 mmol). Rezultujuća smeša se ispire sa vodonikom tokom 10 min, zatim se meša na sobnoj temperaturi tokom 5 h u atmosferi vodonika. Suspenzija se filtrira i rastvor se koncentruje. Pomoću ISCO silika kolone za razdvajanje (80 g silika, 30 min, 5 do 60% EtOAc u Heptanu) dobija se željeni proizvod u obliku lepljive tečnosti svetlo žute boje, koja očvršćava tokom noći. (1.485 g, 2.54 mmol, prinos 49.3 %). LC-MS (m/z): (MH+) 586.3, 1.17 min.
[0867] Faza 6: terc-butil 4-(6-((1S,4S)-4-(benzoiloksi)-3-oksocikloheksil)-3-(bis(tercbutoksikarbonil)amino)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat i terc-butil 4-(6-((1R,4R)-4-(benzoiloksi)-3-oksocikloheksil)-3-(bis(terc-butoksikarbonil)amino) pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat:
A: Dobijanje katalizatora slobodne baze: 300 mg (S)-(6-metoksihinolin-4-il)((1S,2R,4S,5R)-5-vinilhinuklidin-2-il)metanamina (tri.HCl so) se rastvara u 20 ml DCM-a, zatim neutralizuje sa 1N NaOH (5 ml), organski sloj se odvaja, ispire sa koncentrovanim rastvorom soli (5ml x 2) i vode (5ml x 2), suši, filtrira i koncentruje dajući proizvod u obliku slobodne baze. (200 mg amina slobodne baze u 4 ml dioksana).
B: Fiola za mikrotalasno zračenje od 10 mL, opremljena sa magnetnom mešalicom , napunjena je sa terc-butil 4-(3-(bis-(terc-butoksikarbonil)amino)-6-(3-oksocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoatom (1.485 g, 2.54 mmol), BHT (Butilovani hidroksitoluen, 0.067 g, 0.304 mmol), (S)-(6-metoksihinolin-4-il)((1S,2R,4S,5R)-5-vinilhinuklidin-2-il)metanaminom (0.098 g, 0.304 mmol) (u 2 ml Dioksana) i trihlorosirćetnom kiselinom (0.050 g, 0.304 mmol). Nakon toga se dodaje dioksan (1ml), i rezultujuća smeša se meša 5 min pre dodatka peroksianhidrida benzoeve kiseline (0.983 g, 4.06 mmol). Reakciona smeša se meša na temperaturi od 30 °C tokom 16 h. Reakciona smeša se razblažuje sa dihlorometanom, obradjuje sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, ispire sa zasićenim rastvorom soli, suši na Na2SO4, filtrira, koncentruje do približno 3 ml DCM-a. Sirovi ostatak (u 3 ml DCM-a) se prečišćava fleš hromatografijom na ISCO koloni eluiranjem sa EtOAc u Heptanu (10 do 45% EtOAc u Heptanu, kolona je napunjena sa 120 g silika gela, 35 min). Enantioselektivnost ne može da bude odredjena u ovoj fazi pomoću HPLC analize hiralne faze. Nisu primećena razdvajanja pomoću svih raspoloživih kolona/ postupaka. Ovaj proizvod se direktno koristi u sledećoj fazi reakcije. (730 mg, prinos 40.8 %) LCMS (m/z): (MH+) 706.3 at 1.38 min. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.26 - 1.41 (m, 19 H) 1.46 - 1.67 (m, 11 H) 2.08 - 2.22 (m, 1 H) 2.26 - 2.42 (m, 2 H) 2.50 - 2.67 (m, 1 H) 2.70- 2.91 (m, 1 H) 3.08 (s, 1 H) 3.26 - 3.49 (m, 1 H) 4.03 -4.19 (m, 1 H) 5.49 - 5.67 (m, 1 H) 7.26 (d, J=0.78 Hz, 2 H) 7.40 - 7.66 (m, 5 H) 7.97 (t,J=7.83 Hz, 1 H) 8.07- 8.19 (m, 2 H) 8.41 (s, 1 H).
[0868] Faza 7: terc-butil 4-(6-(4-(benzoiloksi)-3,3-difluorocikloheksil)-3-(bis(tercbutoksikarbonil)amino)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat: U rastvor terc-butil 4-(6-((1S,4S)-4-(benzoiloksi)-3-oksocikloheksil)-3-(bis(terc-butoksikarbonil) amino)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (730 mg, 1.034 mmol) u DCM-u (7 mL) na sobnoj temperaturi, dodaje se XtalFluor-E (939 mg, 4.14 mmol) a zatim i trietilamin trihidrofluorid (0.674 mL, 4.14 mmol). Rezultujuća smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 5 časova. Smeša se filtrira i filtrirani rastvor se direktno primenjuje za razdvajanje na ISCO koloni: 24 g silika gel, 0 to 70% EtOAc u Heptanu, 30 min. Dobija se čvrsti proizvod svetlo žute boje (670 mg, 0.902 mmol, prinos 87 %). LC-MS (m/z): (MH+) 728.0 na 0.95 min (postupak MS za nepolarne supstance).1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.88 (s, 2 H) 1.19 - 1.39 (m, 21 H) 1.48 - 1.68 (m, 11 H) 1.86 - 2.08 (m, 2 H) 2.08 - 2.21 (m, 1 H) 2.26 -2.47(m, 2 H) 2.47 - 2.63 (m, 1 H) 3.21 - 3.44 (m, 1 H) 5.22 - 5.51 (m, 1 H) 7.41 - 7.55 (m, 4 H) 7.60 (s, 1 H) 7.96 (d, J=7.82 Hz, 1 H) 8.06 - 8.19 (m, 2H) 8.42 (s, 1 H).
[0869] Faza 8: 4-(3-amino-6-(4-(benzoiloksi)-3,3-difluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina: U rastvor terc-butil 4-(6-(4-(benzoiloksi)-3,3-difluorocikloheksil)-3-(bis(terc-butoksikarbonil) amino)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoata (670 mg, 0.921 mmol) u DCM-u (12 mL) na sobnoj temperaturi dodaje se TFA (4.96 mL, 64.4 mmol). Rezultujuća smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Smeša se koncentruje, razblažuje sa EtOAc, neutralizuje dva puta sa NaHCO3, zatim sa koncentrovanim rastvorom soli, organski sloj se razdvaja, suši i koncentruje dajući sirovi proizvod, koji se koristi direktno u sledećoj fazi reakcije. (434 mg, 0.921 mmol, prinos 100 %). LC-MS (m/z): (MH+) 472.1, at 0.942 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm: 1.07 (t, J=7.04 Hz, 2 H) 1.83 (t, J=10.17 Hz, 2 H) 2.16 (d, J=5.09 Hz, 1 H) 2.29 - 2.45 (m, 2 H) 3.02 (br. s., 1H) 3.16 - 3.44 (m, 9 H) 5.22 - 5.52 (m, 1 H) 5.73 (s, 1 H) 6.24 (s, 2 H) 7.44 - 7.75 (m, 5 H) 7.89 (t, J=7.83 Hz, 1 H) 7.94 -8.07 (m, 3 H).
[0870] Faza 9: 4-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)fenil) pirazin-2-il)-2,2-difluorocikloheksil benzoat, 4-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)fenil)pirazin-2-il)-2,2-difluorocikloheksil benzoat: U smešu 4-(3-amino-6-(4-(benzoiloksi)-3,3-difluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline (434 mg, 0.92 mmol) (4-(3-amino-6-((4R)-4-(benzoiloksi)-3,3difluorocikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeve kiseline), (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etanola (320 mg, 1.012 mmol), HOAt (250 mg, 1.840 mmol) i EDC (353 mg, 1.840 mmol) u DMF-u (5 mL) dodaje se DIEA (1.607 mL, 9.20 mmol). Rezultujuća smeša se tokom noći meša na sobnoj temperaturi. Smeša se razblažuje sa EtOAc, ispire tri puta sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli, suši, koncentruje dajući sirovi proizvod u obliku viskozne tečnosti svetlo žute boje.
[0871] Nakon prečišćavanja na ISCO koloni (24 g silika gela, 10 do 80% EtOAc u heptanu, 35 min), željeni proizvod se dobija u obliku tečnosti svetlo žute boje, koja sadrži dva moguća izomera. (601 mg, 0.818 mmol, prinos 89 %) LC-MS (m/z): (MH+) 735.0 at 1.09 min. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.71 (br. s., 1 H) 1.80 - 2.00 (m, 2 H) 2.18 - 2.39 (m, 2 H) 2.39 - 2.52 (m, 1 H) 2.53 - 2.70 (m, 1 H) 3.13 (br. s.,1 H) 3.82 - 4.07 (m, 2 H) 4.78 (s, 2 H) 5.23 (d, J=5.09 Hz, 2 H) 7.02 - 7.16 (m, 1 H) 7.31 - 7.39 (m, 1 H) 7.41 - 7.50 (m, 2 H) 7.50 - 7.76 (m, 5 H) 7.87 - 8.03 (m, 2 H) 8.07 - 8.23 (m, 3 H).
[0872] Faza 10: 4-(3-amino-6-(3,3-difluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamid: U 4-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)fenil)pirazin-2-il)-2,2-difluorocikloheksil benzoat (600 mg, 0.817 mmol) u MeOH (8 ml), THF (8 ml) i vodi (8 ml) na sobnoj temperaturi dodaje se LiOH.H2O (206 mg, 4.90 mmol). Rezultujuća smeš se meša na temperaturi od 25°C tokom 2 časa. Reakciona smeša se koncentruje i u ostatak se dodaje 30 ml EtOAc, ispire sa vodom (10 ml x3), suši, filtrira, i koncentruje dajući sirovi proizvod u obliku lepljive tečnosti svetlo žute boje, koja postaje beličasti čvrsti proizvod nakon stajanja tokom noći. (515 mg, prinos 100 %). LC-MS (m/z): (MH+) 631.1 za 0.771 min.
[0873] Faza 11: 4-(3-amino-6-((1S,4S)-3,3-difluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamid: Jedinjenje dobijeno iz koraka 10 se prečišćava hiralnom separacijom na koloni (OJ kolona (21 X250 mm), SFC = 100 ml/min, CO2/EtOH = 85/15, punjenje: 70 mg/7ml EtOH, 274 bar) dajući dva hiralno čista jedinjenja: 4-(3-amino-6-((1S,4S)-3,3-difluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamid (255 mg, prinos 27.8 %). 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 1.46 - 1.69 (m, 2 H) 1.71 - 2.26 (m, 4 H) 2.79 - 3.02 (m, 1 H) 3.58 - 3.83 (m, 2 H) 4.94 - 5.15 (m, 2 H) 5.25 -5.45 (m, 1 H) 6.11 - 6.26 (m, 1 H) 7.19 - 7.34 (m, 1 H) 7.46 - 7.56 (m, 1 H) 7.56 - 7.66 (m, 2 H) 7.66 - 7.77 (m, 1 H) 7.95 (s, 1 H) 8.66 - 8.79 (m, 1H).
4-(3-amino-6-((1R,4R)-3,3-difluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamid (53 mg, prinos 5.77 %). 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 1.15 - 1.30 (m, 1 H) 1.48 - 1.69 (m, 2 H) 1.72 - 2.25 (m, 5 H) 2.77 - 2.97 (m, 2 H) 3.57 -3.84 (m, 3 H) 4.92 -5.14 (m, 2 H) 5.27 - 5.42 (m, 1 H) 6.10 - 6.24 (m, 2 H) 7.16 - 7.34 (m, 1 H) 7.46 - 7.57 (m, 1 H) 7.57 - 7.67 (m, 2 H) 7.67 - 7.77 (m, 1 H) 7.95 (s, 1H) 8.63 - 8.80 (m, 1 H).
Primer 473
Sinteza (S)-4-(3-amino-6-(morfolin-4-karbonil)pirazin-2-il)-N-(1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamida
[0875] Faza 1: Etil 5-amino-6-bromopirazin-2-karboksilat: U rastvor etil 5-aminopirazin-2-karboksilata (880 mg, 5.26 mmol) u acetonitrilu (20 mL) na sobnoj temperaturi dodaje se NBS (984 mg, 5.53 mmol), rezultujući rastvor se meša na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša se razblažuje sa EtOAc, ispire sa zasić NaHCO3, koncentrovanim rastvorom soli i vode, suši, filtrira, i koncentruje dajući sirovi proizvod, koji se prečišćava na ISCO koloni (kolona napunjena sa 24 g silika gela, 0 do 50% EtOAc u Heptanu, 30 min). 1.01 g, prinos 78 %. LC-MS (m/z): 247.9 (MH+), 0.51 min.
[0876] Faza 2: Etil 5-amino-6-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-fluorofenil)pirazin-2-karboksilat: Smeša etil 5-amino-6-bromopirazin-2-karboksilata (210 mg, 0.853 mmol), terc-butil 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzoata (357 mg, 1.109 mmol), PdCl2(dppf).CH2Cl2 adukt (69.7 mg, 0.085 mmol) i Na2CO3 (362 mg, 3.41 mmol) (korišćen je 2M rastvor) u DME (5 mL) se stavlja u fiolu od 20 ml i zatvara. Smeša se podvrgava mikrotalasnom zračenju tokom 15 min na temperaturi od 110°C. Smeša se razblažuje sa EtOAc, ispire dva puta sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli, suši, filtrira, i koncentruje dajući sirovi proizvod u obliku čvrstog proizvoda svetlo žute boje. Sirovi proizvod se prečišćava na ISCO koloni (12 g, 10 -55 % EtOAc u heptanu, 30 min) dajući 228 mg (prinos 74 %) čvrstog proizvoda svetlo žute boje. LC-MS (m/z): 362.1 (MH+), 0.89 min.
[0877] Faza 3: 4-(3-amino-6-(etoksikarbonil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina: U rastvor etil 5-amino-6-(4-(terc-butoksikarbonil)-3-fluorofenil)pirazin-2-karboksilata (0.253 g, 0.7 mmol) u DCM-u (4 mL) na sobnoj temperaturi dodaje se TFA (2.157 mL, 28.0 mmol). Rezultujući rastvor se meša na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcioni rastvor se koncentruje i dalje suši dajući neprečišćeni željeni proizvod u obliku TFA soli. Ovaj proizvod se direktno koristi u sledećoj fazi reakcije. Dobija se 0.214 g (prinos 100 %) svetle lepljive tečnosti. LC-MS (m/z): 306.1 (MH+), 0.563 min.
[0878] Faza 4: (S)-etil 5-amino-6-(4-((1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-karboksilat: U smešu koju čine 4-(3-amino-6-(etoksikarbonil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (0.214 g, 0.7 mmol), (S)-2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etanol (272 mg, 1.009 mmol), HOAt (187 mg, 1.376 mmol) i EDC (264 mg, 1.376 mmol) u DMF-u (2.5 mL) dodaje se DIEA (0.961 mL, 5.50 mmol). Rezultujuća smeša se meša tokom noći na sobnoj temperaturi. Smeša je razblažena sa EtOAc, ispire tri puta sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli, suši, koncentruje da bi se dobio sirovi proizvod u obliku viskozne tečnosti svetlo žute boje. Prečišćavanjem na ISCO koloni (napunjenoj sa 12 g silika gela, 10 do 90% EtOAc u heptanu, 30 min) dobija se željeni proizvod (200 mg, prinos 84 %) u obliku tečnosti svetlo žute boje. LC-MS (m/z): 522.9 (MH+), 0.787 min.
[0879] Faza 5: (S)-5-amino-6-(4-((1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-karboksilna kiselina: Smeša (S)-etil 5-amino-6-(4-((1-(3-bromo-5fluorofenil)-2-hidroksietil)karbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-karboksilata (220 mg, 0.422 mmol) i LiOH.H2O (142 mg, 3.38 mmol) u MeOH (2ml), THF (2mL) i vode (2mL) se meša 3 h na sobnoj temperaturi. Smeša se koncentruje, u ostatak se dodaje 2ml vode, 3N HCI se nakon toga dodaje uz mešanje sve dok krajnja vrednost pH ne bude oko 4. Rezultujuća smeša se nakon toga koncentruje i dalje suši dajući sirovi proizvod u obliku čvrstog proizvoda svetlo žute boje. (208 mg, 0.422 mmol, prinos 100 %). LC-MS (m/z): 494.9 (MH+), 0.653 min.
[0880] Faza 6: (S)-4-(3-amino-6-(morfolin-4-karbonil)pirazin-2-il)-N-(1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil)-2-fluorobenzamid: U smešu (S)-5-amino-6-(4-((1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroksietil) karbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-karboksilne kiseline (40 mg, 0.081 mmol), morfolina (28.3 mg, 0.324 mmol), HOAt (33.1 mg, 0.243 mmol) i EDC (46.6 mg, 0.243 mmol) u DMF-u (0.5 mL) dodaje se DIEA (0.170 mL, 0.973 mmol). Rezultujuća smeša se meša tokom noći na sobnoj temperaturi. Smeša se razblažuje sa EtOAc, ispire tri puta sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli, suši, koncentruje dajući sirovi proizvod u obliku viskozne tečnosti svetlo žute boje. Neprečišćeni proizvod se rastvara u 1.5 ml DMSO, filtrira, i prečišćava prep HPLC. (14 mg, prinos 25.3 %). LC-MS (m/z): 563.9 (MH+), 0.707 min.1H NMR (500 MHz, ACETONITRIL-d3) δ ppm 3.56 - 3.99 (m, 13 H) 5.06 - 5.23 (m, 1 H) 5.78 - 6.13 (m, 2 H) 7.22 (d, J=8.20 Hz, 1 H) 7.27 -7.36 (m, 1 H) 7.41 - 7.79 (m, 5 H) 7.89 - 8.05 (m, 1 H) 8.25 - 8.43 (m, 1 H).
Primer 478a i 478b
4-(3-amino-6-((R)-6-oksopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamida (Primer 478a) i 4-(3-amino-6-((S)-6-oksopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamida (Primer 478b).
[0881]
[0882] 1-(4-metoksibenzil)piperidin-2,6-dion: Glutarimid (5 g, 44.2 mmol) se suspenduje u acetonu (Zapremina: 100 mL) i zatim se dodaju K2CO3(12.22 g, 88 mmol), Bu4NI (3.27 g, 8.84 mmol) i 4-metoksibenzil hlorid (6.02 mL, 44.2 mmol). Smeša se tokom noći meša na sobnoj temperaturi i filtrira kroz sloj celita i nakon toga koncentruje na vakuumu i ostatak se prečišćava fleš hromatografijom (0-50% EtOAc/heptan) dajući 8.99 g željenog proizvoda u obliku bezbojnog čvrstog proizvoda. LCMS (m/z): (MH+), 234.2, 0.66 min.
[0883] 1-(4-metoksibenzil)-3,4-dihidropiridin-2(1H)-on: 1-(4-metoksibenzil)piperidin-2,6-dion (8.99 g, 38.5 mmol) se rastvara u Toluenu (Zapremina: 128 ml) i hladi do temperature od -78 °C. L-Selektrid (42.4 ml, 42.4 mmol) se dodaje u kapima i smeša se mućka tokom 1 h. Nakon 1 h, posmatra se gusti mulj zajedno sa talogom. Reakciona smeša je na kratko izvučena iz ledenog kupatila da se homogenizuje smeša. Nakon toga se odjednom dodaje DMAP (0.047 g, 0.385 mmol) i zatim se dodaje DIEA (38.4 ml, 220 mmol) i nakon toga i TFAA (6.53 ml, 46.2 mmol). Nakon toga se uklanja ohladjeni balon i smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 2 h i nakon toga kvenčuje sa vodom i proizvod se ekstrahuje sa EtOAc. Spojeni organski sloj se suši (MgSO4), filtrira i koncentruje na vakuumu dajući neprečišćeni ostatak koji se prečišćava fleš hromatografijom dajući 7.66 g željenog proizvoda dajući žuti sirup. LCMS (m/z): (MH+), 234.2, 0.73 min.
[0884] 5-jodo-1-(4-metoksibenzil)-3,4-dihidropiridin-2(1H)-on: 1-(4-metoksibenzil)-3,4dihidropiridin-2(1H)-on (2 g, 9.21 mmol) se rastvara u MeOH (90 mL) i hladi do temperature od -78 °C. ICI (13.81 ml, 13.81 mmol) se lagano dodaje i smeša se mućka 1 h i nakon toga se dodaje zasićeni Na2S2O3i smeša se promućka dok se ne dostigne sobna temperatura. Rastvarač se upari na vakuumu. Ostatak se rastvara u DCM i ispire sa zasićenim Na2S2O3i nakon toga sa vodom i suši (MgSO4), filtrira i koncentruje na vakuumu. Ostatak se rastvara u toluenu (40 mL) i obradjuje sa trifluorosirćetnom kiselinom (100 uL) i odmah zagreje do temperature od 145 °C tokom 15 min i zahtim hladi do temperature od 0 °C i dodaje se ET3N (5 mL). Smeša se meša 1 h i koncentruje na vakuumu i onda se ostatak prečišćava fleš hromatografijom (0-20% EtOAc/heptan) dajući željeni proizvod u obliku lepljivog sirupa. LCMS (m/z): (MH+), 344.1, 0.88 min.
[0885] Metil 4-(3-amino-6-(1-(4-metoksibenzil)-6-okso-1,4,5,6-tetrahidropiridin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat: 5-jodo-1-(4-metoksibenzil)-3,4-dihidropiridin-2(1H)-on (630 mg, 1.836 mmol), PdCl2(dppf).CH2Cl2 adukt (150 mg, 0.184 mmol), metil 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (1028 mg, 2.75 mmol) i Na2CO3(2754 μl, 5.51 mmol) su spojeni u balonu i tada se dodaje DME (Zapremina: 6120 μl). Smeša se degazira i pročišćava sa azotom i onda se konačno zagreje do temperature od 90 °C tokom 2 h za koje vreme se primećuje kompletna potrošnja polaznog materijala. Reakciona smeša se razblažuje sa EtOAc i vodom, i organski sloj se odvaja i suši (MgSO4), filtrira i koncentruje na vakuumu i ostatak se prečišćava fleš hromatografijom (0-60% EtOAc/DCM) dajući 361 mg željenog proizvoda u obliku čvrstog proizvoda žute boje. LCMS (m/z): (MH+), 463.1, 0.88 min.
[0886] Metil 4-(3-amino-6-(6-oksopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat: Metil 4-(3-amino-6-(1-(4-metoksibenzil)-6-okso-1,4,5,6-tetrahidropiridin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (361 mg, 0.781 mmol) se rastvara u Me-OH (Zapremina: 7 mL) i tada se dodaje Pd-C (400 mg, 3.76 mmol). Smeša se uklanja i pročišćava sa vodonikom tri puta i konačno, smeša se tokom noći promućka na pritisku od 1 atm vodonika. Sledećeg jutra, dobija se željeni proizvod zajedno sa redukovanim amino-pirazinom. Smeša se filtrira preko celita i filtrat se koncentruje na vakuumu i ostatak se rastvara u DCM-u i promeša na vazduhu toko 1 dana i nakon toga se koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom (0-50% DCM/EtOAc) dajući 144 mg željenog proizvoda u obliku čvrstog proizvoda žute boje. LCMS (m/z): (MH+), 465.1, 0.81 min.
[0887] 4-(3-Amino-6-(6-oksopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina: Metil 4-(3-amino-6-(6-oksopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoat (144 mg, 0.310 mmol) se rastvara u TFA (Zapremina: 3 mL) i zagreje na temperaturi od 150 °C tokom 30 min u mikrotalasnoj peći. Rastvarač se upari na vakuumu i ostatak se azeotropno destiluje dva puta sa toluenom dajući sirovi debenzilovani laktam. Ovaj neprečišćeni proizvod se rastvara u THF-u (Zapremina: 3 mL, Odnos: 3) i MeOH (Zapremina: 1.500 mL, Odnos: 1.5) i u smešu se dodaje LiOH (0.037 g, 1.550 mmol) rastvoren u vodi (Zapremina: 1.500 mL, Odnos: 1.5). Smeša se mućka na sobnoj temperature tokom 30 min i koncentruje na vakuumu i ostatak se neutralizuje sa 2 mL (4.0 N HCl) i rastvarač se upari. Ostatak se jednom azeotropno destiluje sa THF-om i jednom sa toluenom dajući neprečišćenu kiselinu koja se uzima u sledećoj fazi reakcije (uzimajući u obzir kvantitativni prinos) bez daljeg prečišćavanja. LCMS (m/z): (MH+), 331.2, 0.44 min.
[0888] 4-(3-Amino-6-(6-oksopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamid: 4-(3-Amino-6-(6-oksopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoeva kiselina (41.0 mg, 0.124 mmol), DIEA (0.108 mL, 0.620 mmol) i HATU (94 mg, 0.248 mmol) su spojeni u DMF (1.0 mL) i nakon toga se dodaje (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-jodofenil)etanol (39.4 mg, 0.124 mmol). Smeša se promućka na sobnoj temperature tokom 1 h i nakon toga se direktno podvrgne prečišćavanju HPLC reverzne-faze dajući jedinjenje iz naslova u obliku TFA adukta. Čvrsti ostatak dobijen nakon liofillizacije se rastvara u MeOH i propušta kroz bazni karbonat koji sadrži kertridž sa silika gelom i filtrat se koncentruje na vakuumu dajući 28.5 mg smeše dijastereomera. Ostatak se prečišćava hiralnom SFC što za rezultat ima dobijanje dva dijastereomera:
[0889] Dijasteromer 1 (Primer 478a): 4-(3-amino-6-((R)-6-oksopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamid (8.8 mg).1H NMR (CD3OD): 7.88 (s, 1H), 7.75 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.48-7.64 (m, 3H), 7.34 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7.11 (d, J=9.8 Hz, 1H), 5.05 (t, J=5.7 Hz, 1H), 3.67-3.83 (m, 2H), 3.43 (d, J=7.8 Hz, 2H), 3.00-3.15 (m, 1H), 2.28-2.46 (m, 2H), 1.88-2.16 (m, 2H); LCMS (m/z): (MH+), 594.1, 0.71 min.
[0890] Dijasteromer 2 (Primer 478b): 4-(3-amino-6-((R)-6-oksopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-jodofenil)-2-hidroksietil)benzamide (8.2 mg) 1H NMR (CD3OD): 7.89 (s, 1H), 7.75 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.50-7.65 (m, 3H), 7.35 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.12 (d, J=9.8 Hz, 1H), 5.06 (t, J=5.7 Hz, 1H), 3.65-3.89 (m, 2H), 3.37-3.53 (m, 2H), 2.96-3.16 (m, 1H), 2.31-2.59 (m, 2H), 1.88-2.20 (m, 2H); LCMS (m/z): (MH+), 594.1, 0.71 min.
Biološka aktivnost
[0891] Inhibicija ERK1 i ERK2 je merena korišćenjem sledećih postupaka.
Kinazni ogled za aktiviranu ERK2 (20 pM):
[0892] Aktivnost jedinjenja protiv aktivirane ERK2 je odredjena korišćenjem kinaznog ogleda koji meri ERK2-katalizovanu fosforilaciju biotinilisanog peptidnog supstrata ERKtida ([Biotin] -AHA-K-R-E-L-V-E-P-L-T-P-S-G-E-A-P-N-Q-A-L-L-R- [NH2], peptidne sekvence izvedene iz EGF receptora: SEQ ID NO:1). Ogled je izveden u 20 mM HEPES [pH 7.5], 5 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.01% Tween-20, 0.05% BSA korišćenjem 0.02 nM ERK2, 400 nM ERKtid peptida i 35 μM ATP (sve koncentracije su finalne u reakciji) u ukupnoj zapremini od 10.25 μL. Za generisanje IC50 krivih korišćena serija razblaženja na pola loga u 16 tačaka, jedinjenja pri 41x finalnoj koncentraciji. Serije razblaženja jedinjenja su pripremljene u 100% DMSO. ERK2 je preinkubirana sa jedinjenjima tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Reakcija je započeta dodavanjem koktela peptidnog supstrata ERKtida i ATP i ostavljena da se odvija tokom 4 časa na sobnoj temperaturi. Reakcija je završena dodavanjem 10 μL 2x stop pufera koji se sastoji od 100 mM Tris-Cl [pH 7.5], 25 mM EDTA, 0.01% Tween 20, 20 μg/mL perli AlphaScreen Protein A Acceptor Beads, 20 μg/mL perli Streptavidin Donor Beads (PerkinElmer, Waltham, MA), i razblaženja 1:1000 fosfo-EGF receptor (Thr669) antitela (kat br.8808, Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Završene reakcije su očitane, nakon inkubacije preko noći u mraku, na čitaču ploča EnVision Multilabel Plate Reader (PerkinElmer, Waltham, MA), sa talasnim dužinama ekscitacije i emisije podešenim na 680 nm odnosno 570 nm. Vrednosti IC50 su odredjene korišćenjem četvoroparametarskog podešavanja.
[0893] Sledeći uslovi ogleda (Novi ERK2) su korišćeni za neka jedinjenja u sledećoj tabeli, i dala su suštinski slične vrednosti IC50 sa gore opisanim ogledom, za IC50 oko 0.1 μM ili više. Kada su granice ovog ogleda dostignute, korišćen je gore opisani ogled.
[0894] Aktivnost jedinjenja protiv aktivirane ERK2 je odredjena korišćenjem kinaznog ogleda koji meri ERK2-katalizovanu fosforilaciju biotinilisanog ERKtid peptidnog supstrata ([Biotin] -AHA-K-R-E-L-V-E-P-L-T-P-S-G-E-A-P-N-Q-A-L-L-R- [NH2], peptidne sekvence izvedene iz EGF receptora: SEQ ID NO:1). Ogled je izveden u 50 mM HEPES [pH 7.5], 5 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.01% Tween-20, 0.05% BSA korišćenjem 0.25 nM ERK2, 200 nM ERKtid peptida i 35 μM ATP (sve koncentracije su finalne u reakciji) u ukupnoj zapremini od 10.25 μL. Za generisanje IC50 krivih korišćena serija razblaženja na pola loga u 16 tačaka, jedinjenja pri 41x finalnoj koncentraciji. Serije razblaženja jedinjenja su pripremljene u 100% DMSO. ERK2 je preinkubirana sa jedinjenjima tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Reakcija je započeta dodavanjem koktela supstrata ERKtid peptida i ATP i ostavljena da se odvija tokom 2-3 časa na sobnoj temperaturi. Reakcija je završena dodavanjem 10 μL 2x stop pufera koji se sastoji od 100 mM Tris-Cl [pH 7.5], 25 mM EDTA, 0.01% Tween 20, 10 μg/mL perli AlphaScreen Protein A Acceptor Beads, 10 μg/mL perli Streptavidin Donor Beads (PerkinElmer, Waltham, MA), i 1.4 μg/mL fosfo-EGF receptor (Thr669) antitela (kat br. 3056, Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Završene reakcije su očitane, nakon inkubacije preko noći u mraku, na čitaču ploča EnVision Multilabel Plate Reader (PerkinElmer, Waltham, MA), sa talasnim dužinama ekscitacije i emisije podešenim na 680 nm odnosno 570 nm. Vrednosti IC50 su odredjene korišćenjem četvoroparametarskog podešavanja.
Kinazni ogled za aktiviranu ERK1:
[0895] Aktivnost jedinjenja protiv aktivirane ERK1 je odredjena korišćenjem kinaznog ogleda koji meri ERK1- katalizovanu fosforilaciju biotinilisanog ERKtidnog peptidnog supstrata ([Biotin] -AHA-K-R-E-L-V-E-P-L-T-P-S-G-E-A-P-N-Q-A-L-L-R- [NH2], peptidne sekvence izvedene iz EGF receptora: SEQ ID NO:1). Ogled je izveden u 20 mM HEPES [pH 7.5], 5 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.01% Tween-20, 0.05% BSA korišćenjem 0.2 nM ERK1, 200 nM ERKtid peptida i 45 μM ATP (sve koncentracije su finalne u reakciji) u ukupnoj zapremini od 10.25 μL. Za generisanje IC50 krivih korišćena serija razblaženja na pola loga u 16 tačaka, jedinjenja pri 41x finalnoj koncentraciji. Serije razblaženja jedinjenja su pripremljene u 100% DMSO. ERK1 je preinkubirana sa jedinjenjima tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Reakcija je započeta dodavanjem koktela peptidnog supstrata ERKtida i ATP i ostavljena da se odvija tokom 4 časa na sobnoj temperaturi. Reakcija je završena dodavanjem 10 μL 2x stop pufera koji se sastoji od 100 mM Tris-Cl [pH 7.5], 25 mM EDTA, 0.01% Tween 20, 10 μg/mL perli AlphaScreen Protein A Acceptor Beads, 10 μg/mL perli Streptavidin Donor Beads (PerkinElmer, Waltham, MA), i 1.4 μg/mL fosfo-EGF receptor (Thr669) antitela (kat br. 3056, Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Završene reakcije su očitane, nakon inkubacije preko noći u mraku, na čitaču ploča EnVision Multilabel Plate Reader (PerkinElmer, Waltham, MA), sa talasnim dužinama ekscitacije i emisije podešenim na 680 nm odnosno 570 nm. Vrednosti IC50 su odredjene korišćenjem četvoroparametarskog podešavanja.
[0896] Sve vrednosti IC50 su predstavljene naučnom notacijom gde ‘E’ označava eksponent 10; na primer, 1.63E-03 predstavlja 1.63 x 10<-3>, ili 0.00163.

Claims (22)

  1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje formule (I):
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačen time, što je: R<1>je izborno supstituisana grupa odabrana od C3-8cikloalkila, 5-8-članog heterociklila koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članove prstena, fenila, -SO2-fenila, -C(O)-fenila, -C(R<8>)2-fenila, i 5-6-članog heteroaril prstena, gde pomenuti heterociklil i heteroaril sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S kao članove prstena, i gde izborne supstituente za R<1>predstavljaju 1-3 grupe nezavisno odabrane od D, halo, hidroksi, amino, -N(R<8>)2, CN, C1-4alkil, C1-4alkoksi, -S(C1-4alkil), C1-4haloalkil, C1-4haloalkoksi, C3-6cikloalkil, 3-6-članog heterociklila koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S, okso (osim na aromatičnim prstenovima), COOR<8>, CON(R<8>)2, -NR<8>-C(O)R<8>, -NR<8>-C(O)OR<8>-SO2R<8>, -NR<8>SO2R<8>i SO2N(R<8>)2, gde je svaki R<8>nezavisno H ili C1-4alkil; L je
    gde je R" metil ili etil, i izborno je supstituisan sa fluoro, amino, hidroksi, metilamino, etilamino, dimetilamino, -OP(O)(OH)2, metoksi ili etoksi; X i Y su nezavisno odabrani od H, D, halo, CN, amino, hidroksi, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4alkoksi, i C1-4haloalkoksi; R<2>je H, C1-4alkil, ili aril-C1-2-alkil-, gde su aril i C1-4alkil izborno supstituisani sa halo, CN, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C3-6cikloalkil, C1-4alkoksi, C1-4haloalkoksi, ili C1-4alkilsulfonil; ili R<2>i L su povezani zajedno tako da obrazuju heterocikličnu grupu odabranu od morfolina, piperidina, tiomorfolina, piperazina i pirolidina koji je povezan sa R<1>i takodje je izborno supstituisan sa jednom ili dve grupe nezavisno odabrane od C1-4alkil, C1-4alkoksi, okso, CN, COOR<7>, CON(R<7>)2, i -SO2R<7>; gde je svaki R<7>nezavisno H ili C1-4alkil; Z je N ili CR<4>; R<4>je H, D, halo, C1-4alkil, C1-4haloalkil, ili C1-4alkoksi; R<5>je odabran od –C(O)-R<5a>i R<5a>; gde je R<5a>izborno supstituisan C3-8cikloalkil, C3-8cikloalkenil, zasićen ili nezasićen 3-8-člani heterociklični prsten koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S, fenil, ili 5-6-člani heteroaril prsten koji sadrži 1-3 heteroatoma odabrana od N, O i S, gde su izborni supstituenti za R<5>1-4 grupe nezavisno odabrane od D, halo, hidroksi, amino, CN, C1-4alkil, C1-4alkoksi, C1-4haloalkil, C1-4hidroksialkil, C1-4haloalkoksi, C3-6cikloalkil, 3-6-članog heterociklila koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S, okso (osim na aromatičnim prstenovima), -COOR<9>, -C(O)R<9>, CON(R<9>)2, -NR<9>C(O)R<9>, -NR<9>CO2R<9>, -SO2R<9>, -NR<9>SO2R<9>i -SO2N(R<9>)2, gde je svaki R<9>nezavisno H ili C1-4alkil izborno supstituisan sa 1-3 grupe nezavisno odabrane od D, halo, OH, NH2, NHMe i NMe2; i dva supstituenta na istom ili susednim atomima ugljenika u R<5>mogu izborno uzeta zajedno da obrazuju 5-6-člani prsten koji može da bude zasićen ili aromatičan i sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S i može izborno da bude supstituisan sa 1-2 grupe nezavisno odabrane od D, Me, halo, OH, okso, O(C1-4alkil), NH2, C1-4alkilamino, di(C1-4alkil)amino; i R<6>je H, D, halo, C1-4alkil, ili C1-4haloalkil.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačen time, što Z predstavlja N.
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačen time, što R<2>predstavlja H ili Me.
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 3 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačen time, što R<6>predstavlja H.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 4 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačen time, što je R<5>odabran od –C(O)-R<5a>i R<5a>; gde je R<5a>odabran od C3-8cikloalkila, 5-8-članog heterociklila koji sadrži 1-2 heteroatoma odabrana od N, O i S, fenil, i 5-6-članog heteroarila, i izborno je supstituisan sa 1-3 grupe nezavisno odabrane od D, halo, CN, hidroksi, C1-4alkoksi, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4hidroksialkil, C1-4haloalkoksi, -SO2R’, -NR’-C(O)-R’ i – SO2NR’2, gde je svaki R’ nezavisno H ili C1-4alkil.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 - 4 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačen time, što je R<5>odabran od –C(O)-R<5a>i R<5a>; gde je R<5a>odabran od ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheksenil, tetrahidropiran, dihidropiran, tetrahidrofuran, oksetan, azetidin, pirolidin, piperidin, piperazin, morfolin, tetrahidrotiopiran (tiacikloheksan), i tetrahidrotiofuran (tiaciklopentan), gde je svaki od njih po slobodnom izboru supstituisan sa 1-3 grupe koje su nezavisno odabrane od halo, D, CN, hidroksi, C1-4alkil, C1-4alkoksi, C1-4haloalkil, C1-4hidroksialkil, C1-4haloalkoksi, okso, COOR<9>, CON(R<9>)2, -NHC(O)R<9>, -NHCOOR<9>, -NHSO2R<9>, i -SO2R<9>, gde svaka R<9>nezavisno predstavlja H ili C1-4alkil.
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-6, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so naznačen time, što R<1>predstavlja fenil i što je po slobodnom izboru supstutisan sa jednom do tri grupe koje su nezavisno odabrane od halo, D, CN, C1-4alkoksi, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-4haloalkoksi, -SO2R’, -N(R’)2, -NR’-C(O)-R’ i -SO2NR’2, gde svaki R<’>nezavisno predstavlja H ili C1-4alkil.
  8. 8. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1-7, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačen time, što Y predstavlja H, metil, ili halo.
  9. 9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što ima Formulu IB:
    gde R<5>predstavlja 4-7-člani ciklični etar ili C5-6cikloalkil, i gde R<5>može biti supstituisan sa do četiri grupe koje su nezavisno odabrane od D, F, Cl, CN, amino, -CH2OH, -NHC(O)Me, -NHCOOMe, -NHSO2Me, Me, OMe, OH, okso, Et, iPr, OEt, i CF3; Y predstavlja H, F, Cl, ili Me; R<10>je –CH2-R*, gde R* predstavlja H, -OH, F, -NH2, -NHMe, -OP(O)(OH)2, -NMe2, ili – OMe; i R<1>predstavlja fenil, po slobodnom izboru supstituisan sa 1-2 grupe koje su nezavisno odabrane od halo, CN, C1-4alkil, C1-4alkoksi, C1-4haloalkil, C1-4haloalkoksi, COOR<8>, CON(R<8>)2i -SO2R<8>, gde svaki R<8>nezavisno predstavlja H ili C1-4alkil; ili njena farmaceutska prihvatljiva so.
  10. 10. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1-4 ili 9, naznačen time, što R<5>predstavlja cikloheksil supstituisan sa 1-3 grupe koje su nezavisno odabrane iz grupe koju čine D, F, Cl, CN, amino, Me, NHSO2Me, NHCOMe, OMe, OH, Et, CN, -CH2OH i CF3.
  11. 11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačen time, što R<1>predstavlja fenil supstituisan sa 0, 1 ili 2 grupe koje su nezavisno odabrane od F, Cl, Br, I, SMe, SO2Me i CH3.
  12. 12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje je odabrano iz grupe koju čine:
    –
  13. 13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje predstavlja
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  14. 14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje predstavlja
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  15. 15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje predstavlja
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  16. 16. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje predstavlja
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  17. 17. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačen time, što se 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroksicikloheksil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamid nalazi u obliku hidrohloridne soli.
  18. 18. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1-17, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pomešano sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom.
  19. 19. Farmaceutska kompozicija iz patentnog zahteva 18, naznačen time, što dalje obuhvata terapijski ko-agens.
  20. 20. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-17, ii njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 18, ili patentnom zahtevu 19 za upotrebu u lečenju kancera.
  21. 21. Jedinjenje ili kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 20, naznačen time, što je kancer odabran iz grupe koju čine adenom, kancer bešike, kancer mozga, kancer dojke, cervikalni kancer, kolorektalni kancer, kancer kolona, epidermalni karcinom, folikularni karcinom, genitourinarni kanceri, glioblastom, kanceri glave i vrata, Hodgkinova bolest, ne-Hodgkinov limfom, hepatom, kancer bubrega, kanceri pluća kao što su sitnoćelijski ili nesitnoćelijski kancer pluća, leukemije kao što su AML ili CML, multipli mijelom, limfoidni poremećaji, kanceri kože uključujući melanom, neuroblastom, kancer jajnika, kancer pankreasa, kancer prostate, rektalni kancer, sarkom, kancer testisa i kancer tiroidee.
  22. 22. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1-17, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u kombinaciji sa jedinjenjem koje je odabrano iz grupe koju čine vemurafinib, debrafinib, LGX818, trametinib, MEK162, LEE011, PD-0332991, panobinostat, verinostat, romidepsin, cetuksimab, gefitinib, erlotinib, lapatinib, panitumumab, vandetanib, INC280, everolimus, simolimus, BMK120, BYL719 i CLR457.
RS20180955A 2013-11-01 2014-10-29 Aminoheteroaril benzamidi kao inhibitori kinaze RS57641B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361898761P 2013-11-01 2013-11-01
CN2014088409 2014-10-11
PCT/US2014/062913 WO2015066188A1 (en) 2013-11-01 2014-10-29 Aminoheteroaryl benzamides as kinase inhibitors
EP14800191.0A EP3063143B1 (en) 2013-11-01 2014-10-29 Aminoheteroaryl benzamides as kinase inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS57641B1 true RS57641B1 (sr) 2018-11-30

Family

ID=51932581

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20180955A RS57641B1 (sr) 2013-11-01 2014-10-29 Aminoheteroaril benzamidi kao inhibitori kinaze

Country Status (36)

Country Link
US (4) US9242996B2 (sr)
EP (1) EP3063143B1 (sr)
JP (2) JP6219507B2 (sr)
KR (1) KR101910720B1 (sr)
CN (1) CN105658646B (sr)
AP (1) AP2016009099A0 (sr)
AU (1) AU2014342338B2 (sr)
BR (1) BR112016008133B1 (sr)
CA (1) CA2922532C (sr)
CL (1) CL2016000807A1 (sr)
CU (1) CU24425B1 (sr)
CY (1) CY1120635T1 (sr)
DK (1) DK3063143T3 (sr)
DO (1) DOP2016000085A (sr)
EA (1) EA032754B1 (sr)
ES (1) ES2684360T3 (sr)
HR (1) HRP20181287T1 (sr)
HU (1) HUE039306T2 (sr)
IL (1) IL244240B (sr)
JO (1) JO3452B1 (sr)
LT (1) LT3063143T (sr)
MX (1) MX355480B (sr)
PE (1) PE20161073A1 (sr)
PH (1) PH12016500467B1 (sr)
PL (1) PL3063143T3 (sr)
PT (1) PT3063143T (sr)
RS (1) RS57641B1 (sr)
SG (1) SG11201601467SA (sr)
SI (1) SI3063143T1 (sr)
SV (1) SV2016005180A (sr)
TN (1) TN2016000081A1 (sr)
TR (1) TR201811764T4 (sr)
TW (1) TWI663153B (sr)
UY (1) UY35813A (sr)
WO (1) WO2015066188A1 (sr)
ZA (1) ZA201601102B (sr)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PE20161073A1 (es) 2013-11-01 2016-10-30 Novartis Ag Amino-heteroaril-benzamidas como inhibidores de cinasa
US10642873B2 (en) * 2014-09-19 2020-05-05 Microsoft Technology Licensing, Llc Dynamic natural language conversation
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
UY36351A (es) 2014-10-14 2016-06-01 Novartis Ag Moléculas de anticuerpo que se unen a pd-l1 y usos de las mismas
CA2979215A1 (en) 2015-03-10 2016-09-15 Aduro Biotech, Inc. Compositions and methods for activating "stimulator of interferon gene"-dependent signalling
LT3317301T (lt) 2015-07-29 2021-07-26 Novartis Ag Kombinuotos terapijos, apimančios antikūno molekules prieš lag-3
CN108025051B (zh) 2015-07-29 2021-12-24 诺华股份有限公司 包含抗pd-1抗体分子的联合疗法
ES2986067T3 (es) 2015-12-17 2024-11-08 Novartis Ag Moléculas de anticuerpos frente a PD-1 y usos de las mismas
US10759806B2 (en) 2016-03-17 2020-09-01 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Isotopologues of isoquinolinone and quinazolinone compounds and uses thereof as PI3K kinase inhibitors
CN106198778B (zh) * 2016-06-24 2018-11-20 南京优科制药有限公司 一种同时测定吉非替尼及其有关物质的方法
WO2018009466A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Aduro Biotech, Inc. Locked nucleic acid cyclic dinucleotide compounds and uses thereof
WO2018051306A1 (en) 2016-09-19 2018-03-22 Novartis Ag Therapeutic combinations comprising a raf inhibitor and a erk inhibitor
CN108456213B (zh) * 2017-02-22 2021-01-15 浙江九洲药业股份有限公司 一种3-氟-4-羟基环己烷羧酸酯的制备方法
UY37695A (es) 2017-04-28 2018-11-30 Novartis Ag Compuesto dinucleótido cíclico bis 2’-5’-rr-(3’f-a)(3’f-a) y usos del mismo
KR20240032157A (ko) 2017-05-02 2024-03-08 노파르티스 아게 병용 요법
SG11201911936YA (en) * 2017-06-30 2020-01-30 Bristol Myers Squibb Co Substituted quinolinycyclohexylpropanamide compounds and improved methods for their preparation
CN109467538A (zh) * 2017-09-07 2019-03-15 和记黄埔医药（上海）有限公司 环烯烃取代的杂芳环类化合物及其用途
US11406627B2 (en) * 2017-10-12 2022-08-09 Novartis Ag Combinations of MDM2 inhibitors with inhibitors of ERK for treating cancers
AU2018388406B2 (en) * 2017-12-22 2023-07-06 HiberCell Inc. Aryl-bipyridine amine derivatives as phosphatidylinositol phosphate kinase inhibitors
US12398209B2 (en) 2018-01-22 2025-08-26 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers with antagonistic anti-PD-1 antibodies
JP2021512160A (ja) 2018-01-29 2021-05-13 カピュラス セラピューティクス リミテッド ライアビリティ カンパニー ６員の中央環を含むｓｒｅｂｐ阻害剤
TWI903299B (zh) 2018-03-08 2025-11-01 美商英塞特公司 作為PI3K-γ抑制劑之胺基吡嗪二醇化合物
CN111936141A (zh) * 2018-03-30 2020-11-13 诺华股份有限公司 包含达拉菲尼、曲美替尼和erk抑制剂的三重药物组合
CN108727355A (zh) * 2018-05-16 2018-11-02 张玉叶 一种甲酰胺类衍生物、制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用
CN108440514A (zh) * 2018-05-16 2018-08-24 张玉叶 一种甲酰胺类衍生物、制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用
CN108727354A (zh) * 2018-05-16 2018-11-02 张玉叶 一种甲酰胺类衍生物及其在抗肿瘤药物中的应用
CN108440513A (zh) * 2018-05-16 2018-08-24 张玉叶 一种甲酰胺类衍生物及其在抗肿瘤药物中的应用
CN108558844A (zh) * 2018-05-16 2018-09-21 张玉叶 一种甲酰胺类衍生物及其在抗肿瘤药物中的应用
WO2020010003A1 (en) 2018-07-02 2020-01-09 Incyte Corporation AMINOPYRAZINE DERIVATIVES AS PI3K-γ INHIBITORS
CA3105585A1 (en) * 2018-07-18 2020-01-23 Astrazeneca Ab A xinafoate salt of a jak inhibiting compound
MX2021013817A (es) 2019-05-13 2021-12-14 Novartis Ag Nuevas formas cristalinas de n-(3-(2-(2-hidroxietoxi)-6-morfolinop iridin-4-il)-4-metilfenil)-2-(trifluorometil)isonicotinamida como inhibidores de raf para el tratamiento del cancer.
CN110275010B (zh) * 2019-06-21 2022-07-01 中山大学孙逸仙纪念医院 一种用于治疗前列腺癌药物的P38a MAPK信号通路抑制剂的筛选方法
CN114025758A (zh) * 2019-07-01 2022-02-08 钱立刚 P2x7r拮抗剂
WO2021026672A1 (en) 2019-08-09 2021-02-18 Novartis Ag Heterocyclic wdr5 inhibitors as anti-cancer compounds
TW202140029A (zh) 2020-02-18 2021-11-01 瑞士商諾華公司 用於治療ｂｒａｆ突變型ｎｓｃｌｃ的包含ｒａｆ抑制劑之治療組合
AU2021225491A1 (en) 2020-02-28 2022-10-20 Novartis Ag A triple pharmaceutical combination comprising dabrafenib, an Erk inhibitor and a RAF inhibitor
TW202146021A (zh) 2020-02-28 2021-12-16 瑞士商諾華公司 包含達拉菲尼、erk抑制劑和shp2抑制劑之三重藥物組合
CN115551509A (zh) 2020-05-12 2022-12-30 诺华股份有限公司 包含craf抑制剂的治疗组合
WO2022074599A1 (en) 2020-10-08 2022-04-14 Novartis Ag Use of an erk inhibitor for the treatment of myelofibrosis
EP4225317A1 (en) 2020-10-08 2023-08-16 Novartis AG Use of an erk inhibitor for the treatment of myelofibrosis
KR20230170644A (ko) 2021-02-02 2023-12-19 르 라보레또레 쎄르비에르 선택적 bcl-xl protac 화합물 및 사용 방법
CN117794529B (zh) 2021-05-11 2025-02-11 欧瑞克制药公司 Polo样激酶4抑制剂
WO2022259157A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Novartis Ag A triple pharmaceutical combination comprising dabrafenib, trametinib and a shp2 inhibitor
US20250339547A1 (en) 2022-05-20 2025-11-06 Novartis Ag Met bcl-xl inhibitor antibody-drug conjugates and methods of use thereof
WO2023225320A1 (en) 2022-05-20 2023-11-23 Novartis Ag Epha2 bcl-xl inhibitor antibody-drug conjugates and methods of use thereof
JP2025522438A (ja) * 2022-06-14 2025-07-15 シュレーディンガー， インコーポレイテッド フェニルアミド化合物及び使用方法
CN120239700A (zh) * 2022-11-17 2025-07-01 英矽智能科技知识产权有限公司 盐诱导激酶(sik)抑制剂及其使用方法
EP4676540A1 (en) 2023-03-10 2026-01-14 Novartis AG Panras inhibitor antibody-drug conjugates and methods of use thereof
AR132351A1 (es) 2023-04-13 2025-06-18 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de imidazo[1,2-a]pirazina
CN116444496B (zh) * 2023-06-16 2023-11-24 药康众拓(北京)医药科技有限公司 一种嘧啶联氘代吡唑类化合物及其应用
TW202540185A (zh) 2023-11-22 2025-10-16 法商施維雅藥廠 抗cd74抗體藥物結合物及其使用方法
WO2025215536A1 (en) 2024-04-10 2025-10-16 Novartis Ag Macrocyclic panras inhibitors for the treatment of cancer
WO2025232848A1 (en) * 2024-05-09 2025-11-13 Insilico Medicine Ip Limited Salt-inducible kinases (sik) inhibitors and methods of uses thereof

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1863780A (zh) * 2002-08-14 2006-11-15 沃泰克斯药物股份有限公司 蛋白激酶抑制剂及其应用
EP1546117A2 (en) * 2002-08-14 2005-06-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Protein kinase inhibitors and uses thereof
CA2514733A1 (en) 2003-02-28 2004-09-16 Transform Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical co-crystal compositions of drugs such as carbamazepine, celecoxib, olanzapine, itraconazole, topiramate, modafinil, 5-fluorouracil, hydrochlorothiazide, acetaminophen, aspirin, flurbiprofen, phenytoin and ibuprofen
KR20140018997A (ko) * 2005-01-07 2014-02-13 신타 파마슈티칼스 코프. 염증 및 면역 관련 용도를 위한 화합물
CA2633023C (en) 2005-12-13 2015-11-24 Schering Corporation Polycyclic indazole derivatives that are erk inhibitors
GB0625659D0 (en) * 2006-12-21 2007-01-31 Cancer Rec Tech Ltd Therapeutic compounds and their use
KR20100025553A (ko) 2007-06-05 2010-03-09 쉐링 코포레이션 암 치료용 ｅｒｋ 억제제로서의 폴리사이클릭 인다졸 유도체 및 이의 용도
UY33469A (es) * 2010-06-29 2012-01-31 Irm Llc Y Novartis Ag Composiciones y metodos para modular la via de señalizacion de wnt
WO2012030685A2 (en) 2010-09-01 2012-03-08 Schering Corporation Indazole derivatives useful as erk inhibitors
KR20140014205A (ko) * 2011-03-04 2014-02-05 렉시컨 파마슈티컬스 인코퍼레이티드 Mst1 키나제 억제제 및 그의 사용 방법
DK3321262T3 (da) 2012-03-01 2021-01-25 Array Biopharma Inc Serin-/threoninkinasehæmmere
WO2015051043A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Amgen Inc. Biaryl acyl-sulfonamide compounds as sodium channel inhibitors
PE20161073A1 (es) * 2013-11-01 2016-10-30 Novartis Ag Amino-heteroaril-benzamidas como inhibidores de cinasa

Also Published As

Publication number Publication date
SI3063143T1 (sl) 2018-09-28
DOP2016000085A (es) 2016-06-15
TN2016000081A1 (en) 2017-07-05
PT3063143T (pt) 2018-10-19
PH12016500467A1 (en) 2016-05-16
CA2922532A1 (en) 2015-05-07
KR20160078957A (ko) 2016-07-05
US10188649B2 (en) 2019-01-29
US20150126490A1 (en) 2015-05-07
JP2016540728A (ja) 2016-12-28
UY35813A (es) 2015-05-29
MX355480B (es) 2018-04-19
PH12016500467B1 (en) 2016-05-16
IL244240A0 (en) 2016-04-21
CU24425B1 (es) 2019-06-04
EA201690598A1 (ru) 2016-10-31
BR112016008133B1 (pt) 2020-11-24
EA032754B1 (ru) 2019-07-31
ZA201601102B (en) 2017-09-27
WO2015066188A1 (en) 2015-05-07
AU2014342338A1 (en) 2016-03-10
US20190247392A1 (en) 2019-08-15
HRP20181287T1 (hr) 2018-10-05
CL2016000807A1 (es) 2016-07-08
CN105658646A (zh) 2016-06-08
CU20160052A7 (es) 2017-02-02
CY1120635T1 (el) 2019-12-11
TW201607926A (zh) 2016-03-01
IL244240B (en) 2018-01-31
US9763937B2 (en) 2017-09-19
US20170182038A1 (en) 2017-06-29
JP2018076287A (ja) 2018-05-17
AP2016009099A0 (en) 2016-03-31
TR201811764T4 (tr) 2018-09-21
PE20161073A1 (es) 2016-10-30
EP3063143A1 (en) 2016-09-07
MX2016004938A (es) 2016-07-11
PL3063143T3 (pl) 2018-10-31
TWI663153B (zh) 2019-06-21
SG11201601467SA (en) 2016-05-30
US9242996B2 (en) 2016-01-26
CN105658646B (zh) 2018-11-27
JP6388991B2 (ja) 2018-09-12
DK3063143T3 (en) 2018-08-20
JP6219507B2 (ja) 2017-10-25
SV2016005180A (es) 2016-11-21
KR101910720B1 (ko) 2018-10-22
LT3063143T (lt) 2018-08-10
NZ717223A (en) 2021-05-28
HUE039306T2 (hu) 2018-12-28
EP3063143B1 (en) 2018-05-16
AU2014342338B2 (en) 2016-12-01
CA2922532C (en) 2023-09-19
US10660888B2 (en) 2020-05-26
US20180028532A1 (en) 2018-02-01
JO3452B1 (ar) 2020-07-05
ES2684360T3 (es) 2018-10-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10660888B2 (en) Aminoheteroaryl benzamides as kinase inhibitors
AU2021237841A1 (en) Biaryl derivatives as YAP/TAZ-TEAD protein-protein interaction inhibitors
TWI761315B (zh) 醫藥化合物
EP3778562A1 (en) Tricyclic spiro compound
RS61007B1 (sr) Farmaceutska jedinjenja
JP2021519266A (ja) ３−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）フェニル）ピロリジン−１−カルボキサミド誘導体
US12071425B2 (en) Phenoxy-pyridyl-pyrimidine compounds and methods of use
TW202333663A (zh) Rxfp1促效劑
JP2025513725A (ja) Ｔｅａｄ阻害剤および使用方法
TWI810547B (zh) Pd-l1拮抗劑化合物
RU2830596C1 (ru) Биарильные производные в качестве ингибиторов белок-белкового взаимодействия yap/taz-tead
HK1225021B (en) Aminoheteroaryl benzamides as kinase inhibitors
HK1225021A1 (en) Aminoheteroaryl benzamides as kinase inhibitors
NZ717223B2 (en) Aminoheteroaryl benzamides as kinase inhibitors