BR112016008133B1 - amino-heteroaril benzamidas como inibidores de quinase, seus usos, e composição farmacêutica - Google Patents

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Yu Ding
Wooseok HAN
Zilin Huang
Qun JIANG
Jeff Xianming Jin
Xiang KOU
Patrick Lee
Mika Lindvall
Zhongcheng MIN
Yue Pan
Sabina Pecchi
Keith Bruce Pfister
Daniel Poon
Vivek Rauniyar
Xiaojing Michael Wang
Qiong Zhang
Jianguang ZHOU
Shejin ZHU
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Abstract

AMINO-HETEROARIL BENZAMIDAS COMO INIBIDORES DE QUINAS, SEUS USOS, E COMPOSIÇÃO FARMACEUTICA. A presente invenção fornece um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo; (I) e usos terapêuticos destes compostos. A presente invenção também fornece composições farmacêuticas compreendendo estes compostos, e composições compreendendo estes compostos com um coagente terapêutico.

Description

ANTECEDENTES
[001] Proteína quinases estão envolvidas em cascatas de sinalização muito complexas que regulam a maioria das funções celulares, incluindo sobrevivência e proliferação. Estas séries de reação de sinalização foram fortemente estudadas, particularmente no contexto de distúrbios causados por função celular desregulada, tal como câncer. As quinases reguladas por sinal extracelular (ERKs) são uma classe de quinases de sinalização que está envolvida na condução de sinais extracelulares em células e organelas subcelulares. ERK1 e 2 (ERK1/2) são quinases na série de reação de proteína quinase ativada por mitógeno (MAPK), e são também referidas como p42 e p44, respectivamente. ERK1 e ERK2 estão presentes em quantidades relativamente grandes em células (~107 moléculas por célula), e estão envolvidas na regulação de uma ampla faixa de atividades. De fato, a desregulação da cascata de ERK1/2 é conhecida causar uma variedade de patologias incluindo doenças neurodegerativas, doenças de desenvolvimento, diabetes e câncer. Wortzel e Seger, Genes &Cancer, 2:195-209 (2011), publicado online em 9 de Maio de 2011.
[002] O papel de ERK1/2 em câncer é de interesse especial porque acredita-se que as mutações de ativação a montante de ERK1/2 em sua cascata de sinalização sejam responsáveis por mais da metade de todos os cânceres. Além disso, atividade de ERK1/2 excessiva foi encontrada em cânceres onde os componentes a montante não foram mutados, sugerindo que a sinalização de ERK1/2 desempenha um papel em carcinogênese mesmo em cânceres sem ativações mutacionais. A série de reação de ERK mostrou tmabém controlar a invasãoe migração de célula de tumor, e desse modo pode estar associada com metástase. Veja, A. von Thun, et al., ERK2 drives tumour cell migration in 3D microenvironments by suppressing expression of Rab17 and Liprin-β2,J. Cell Sciences, data da publicação online 10 de Fevereiro de 2012. Além disso, reportou-se que o silenciamento de ERK1 ou ERK2 usando shRNA matou células de melanoma em cultura, e também tornou as células de melanoma mais sensíveis aos inibidores de BRAF. J. Qin, et al., J. Translational Med. 10:15 (2012). Reportou-setambém que os inibidores de ERK1 e 2 são eficazes em células de tumor resisentes aos inibidores de MEK, e que a inibição de MEK e ERK simultaneamente fornece atividade sinérgica. Molec. Cancer Therapeutics, vol. 11, 1143 (Maio de 2012).
[003] Derivados de indazol agindo como inibidores ERK foram reportados como produtos terapêuticos para tratamento de cânceres. WO2012/030685; WO2007/070398; WO2008/153858. Certos compostos de 2-amino piridina/pirimidina com uma ligação biarila a uma ou anel similar foram reportados como inibidores de ERK úteis para o tratamento de câncer e distúrbios hiperproliferativos: WO2013/130976. Outros inibidores de ERKforam também descritos como agentes terapêuticos, veja, por exemplo, WO2004/016597. Por causa de seu valor terapêutico, novos inibidores de ERK1 e/ou ERK2 são necessários para tratar distúrbios associados com níveis indesejados de atividade de ERK1/2. A presente invenção fornece novos compostos que inibem ERK1 ou ERK2 ou ambos, para uso para doenças tais como câncer que são associados com atividade excessiva de ERK1 e/ou ERK2. SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[004] Em um aspecto, a invenção fornece um composto da fórmula (I):
Figure img0001
[005] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
[006] R1é um grupo opcionalmente substituído selecionado de C3-8 cicloalquila, heterociclila de 5 a 8 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S como membros de anel, fenila, -SO2fenila, -C(O)-fenila, -C(R8)2-fenila, e anel heteroarila de 5 a 6 membros, em que as referidas heterociclila e heteroarila contêm 1-2 heteroátomos selecionados de N, O e S como membros de anel,
[007] e em que os substituintes opcionais para R1são 1 a 3 rupos independentemente selecionados de D, halo, hidróxi, amino, -N(R8)2, CN, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, -S(C1-4 alquil), C1-4 haloalquila, C1-4 haloalcóxi, C3-6 cicloalquila, heterociclila de 3 a 6 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S, oxo (exceto em anéis aromáticos), CN, COOR8, CON(R8)2, -NR8-C(O)R8, -NR8-C(O)OR8 -SO2R8, NR8SO2R8, e SO2N(R8)2, onde cada R8é independentemente H ou C1-4 alquila;
[008] L é uma ligação, ou L pode ser um C1-4 alquileno, C2-4 alquenileno, C1-4 alquinileno, C3-6 cicloalquila ou uma heterocicloíla de 4 a 7 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S como membros de anel, em que L é opcionalmente substituído com 1 a 3 grupos independentemente selecionados de R11, D, OH, NH2, -NHR11, -NHC(=O)R11, -NHC(=O)-OR11, -NHC(=O)-NH2, NHC(=O)-NHR11, -N(R11)2, CN, halo, N3, CON(R7)2, e COOR7; onde cada R11é independentemente C1-4 alquila, que pode ser substituída com até três grupos independentemente selecionado de D, halo, OH, NH2,-NHMe, -NMe2, -OP(O)(OH)2 e O-C1-4 alquila;
[009] X e Y são independentemente selecionados de H, D, halo, CN, amino, hidróxi, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C1-4 alcóxi, e C1-4 haloalcóxi;
[0010] R2é H, C1-4 alquila, ou aril-C1-2-alquil-, em que a arila e C1-4 alquila são opcionalmente substituídas com halo, CN, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C3-6 cicloalquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalcóxi, ou C1-4 alquilsulfonila;
[0011] ou R2 pode ciclizar-se com X para formar um anel heterocíclico de 5 a 7 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S fundidos ao anel fenila ao qual X é ligado,
[0012] ou R2 pode ciclizar-se com L para formar um anel heterocíclico de 5 a 7 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S,
[0013] em que o anel heterocíclico opcional formado por ciclização de R2 com X, ou por ciclização de R2 com L, pode ser opcionalmente substituído com um ou dois grupos independentemente selecionados de CN, halo, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalquila, C1-4 haloalcóxi, oxo, CN, COOR7, CON(R7)2, e -SO2R7;
[0014] cada R7é independentemente H ou C1-4 alquila;
[0015] Z é N ou CR4;
[0016] R4é H, D, halo, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, ou C1-4 alcóxi;
[0017] R5 é selecionado de -C(O)-R5a e R5a; em que R5a é uma C38cicloalquila opcionalmente substituída, C3-8 cicloalquenila, anel heterocíclico de 3 a 8 membros saturado ou insaturado contendo de 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S, fenila, ou anel heteroarila de 5 a 6 membros contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O e S, em que os substituintes opcionais para R5 são 1 a 4 grupos independentemente selecionados de D, halo, hidróxi, amino, CN, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalquila, C1-4 hidroxialquila, C1-4 haloalcóxi, C3-6 cicloalquila, heterociclila de 3 a 6 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S, oxo (exceto em anéis aromáticos), CN, -COOR9, -C(O)R9, CON(R9)2, -NR9C(O)R9, -NR9CO2R9, -SO2R9, NR9SO2R9, e -SO2N(R9)2, onde cada R9é independentemente H ou C14 alquila opcionalmente substituída com 1 a 3 grupos independentemente selecionados de D, halo, OH, NH2, NHMe e NMe2; e dois substituintes nos mesmos átomos de carbono ou adjacentes de R5 podem opcionalmente considerados juntos para formar um anel de 5 a 6 membros que pode ser saturado ou aromático e conter de 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S e pode ser opcionalmente ser substituído com 1 a 2 grupos independentemente selecionados de D, Me, halo, OH, oxo, O(C1-4 alquil), NH2, C1-4 alquilamino, di(C1-4 alquil)amino; e
[0018] R6é H, D, halo, C1-4 alquila, ou C1-4 haloalquila;
[0019] incluindo os sais farmaceuticamente aceitáveis destes compostos, por exemplo, uma forma de sal de HCl, e versões isotopicamente enriquecidas dos compostos e sais, especialmente versões deuteradas dos compostos, e sais dos mesmos. Estes compostos são inibidores de ERK1 e/ou ERK2, e são consequentemente úteis para tartar condições associadas com níveis excessivos ou indesejados de atividade de ERK1 e/ou ERK2, particularmente cânceres que respondem aos inibidores de ERK1 e/ou ERK2.
[0020] Em outro aspecto, a invenção fornece composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula (I), ou qualquer uma das subclasses do mesmo que são descritas aqui, misturadas com pelo menos um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, opcionalmente misturadas com dois ou mais veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Estas composições são também úteis para tartar condições associadas com níveis excessivos ou ondesejados de atividade de ERK1 e/ou ERK2, particularmente cânceres que respondem aos inibidores de ERK1 e/ou ERK2. As composições podem também compreender um ou mais agentes coterapêuticos, tais como aqueles descritos aqui, para realçar o tratamento da condição tratada ou de sintomas associados da condição.
[0021] Em outro aspecto, a invenção fornece um método para tartar uma condição caracterizada por níveis excessivos ou indesejados de atividade de um ou tanto ERK1 quanto ERK2, em que o método compreende administrar a um indivíduo em necessidade de tal tratamento uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) ou qualquersubgênero do mesmo como descrito aqui, ou uma composição farmacêutica compreendendo tal composto. O indivíduo pode ser um mamífero, e é preferivelmente um humano, e é tipicamente um indivíduo diagnosticado com uma condição associada com atividade excessiva de ERK1 e/ou ERK2. Condições tratáveis pelos compostos e métodos descritos aqui incluem várias formas de câncer que são responsivos a inibidores de ERK1/2, tais como tumores sólidos, adenoma, câncer de bexiga, câncer cerebral, câncer de mama, câncer cervical, câncer colorretal, câncer de cólon, carcinoma epidérmico, carcinoma folicular, cânceres genitourinário, glioblastoma, cânceres de cabeça e pescoço, doença de Hodgkin, linfoma de não Hodgkin, hepatoma, câncer de rim, cânceres de pulmão tais como câncer de pulmão de célula pequena ou não pequena, leucemias tais como AML ou CML, mieloma múltiplo, distúrbios linfoides, cânceres de pele incluindo melanoma, neuroblastoma, câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer retal, sarcoma, câncer testicular, e câncer de tiroide. Os compostos são especialmente indicados para uso para tratar melanoma, câncer ovariano, câncer de tiroide, câncer de cólon, câncer de pulmão, câncer pancreático, câncer cervical, câncer de cabeça ou pescoço, e leucemias incluindo leucemia mielomonocítica crônica (CMML), AML e CML. Indicações de interesse especial para uso dos compostos da invenção incluem cânceres onde mutações de BRAF como V600E estão presentes, por exemplo, melanoma, câncer ovariano, câncer de tiroide, câncer colorretal e câncer de pulmão; câncer de mama onde a série de reação MAPK e/ou PI3K é desregulada; cânceres associada com KRAS mutações tais como câncer de pulmão, câncerpancreático, e câncer colorretal; cânceres tendo mutações de ERK2 tais como ou cânceres de cabeça e pescoço cervicais; leucemia, especialmente quando exibindo mutações de NF-1; e câncer de pulmão de célula não pequena em que EGFR é mutado.
[0022] Em um aspecto, a invenção fornece compostos de fórmula (I) e os subgêneros de fórmula (I) descritos aqui, bem como sais farmaceuticamente aceitáveis destes compostos, e todos os estereoisômeros (incluindo diastereoisômeros e enantiômeros), tautômeros e versões isotopicamente enriquecidas dos mesmos (incluindo substituições de deutério). Os compostos da presente invenção também compreendem polimorfos de compostos de fórmula I (ou subfórmulas dos mesmos) e sais dos mesmos. Estes compostos podem ser para uso para tratar condições responsivas a um inibidor de ERK1/2, tais como descritos aqui, e para uso na preparação de um medicamento para tratamento destes distúrbios, e podem ser usados em combinação com agentes coterapêuticos para tratamento destes distúrbios. As composições farmacêuticas e métodos descritos aqui podem também ser usados com ou formulados com um agente coterapêutico; por exemplo, compostos de fórmula I e subfórmulas dos mesmos podem ser usados com ou formulados com inibidores de B-RAF e outros agentes terapêuticos como também descrito aqui.
[0023] Em outro aspecto, a invenção fornece métodos de preparação dos compostos de fórmula I bem como compostos intermediários chave úteis para preparar os compostos da invenção. BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0024] A figura 1 mostra o padrão de difração de pó de raio X da base livre de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2fluorobenzamida.
[0025] A figura 2 é um termógrafo de DSC/TGA da base livre de 4(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida.
[0026] A figura 3 mostra mostra o padrão de difração de pó de raio X da forma de sal de HCl de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida.
[0027] A figura 4 é termógrafo de DSC/TGA da forma de sal de HCl 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida. DESCRIÇÃO DETALHADA
[0028] A seguinte definição aplica-se a menos que de outro modo fornecido ou evidente do contexto:
[0029] Como usado aqui, o termo "halogênio" (ou halo) refere-se a flúor, bromo, cloro, ou iodo. Grupos e porções substituídos por halogênio, tal como alquila substituída por halogênio (haloalquila) podem ser mono-, poliou per-halogenados. Cloro e fluoro são substituintes de halo preferidos em grupos alquila ou cicloalquila, a menos que de outro modo especificado; flúor, cloro, e bromo são frequentemente preferidos em grupos arila ou heteroarila, a menos que de outro modo especificado.
[0030] Como usado aqui, o termo "heteroátomos" refere-se aos átomos de nitrogênio (N), oxigênio (O) ou enxofre (S), em particular nitrogênio ou oxigênio, a menos que de outro modo fornecido.
[0031] Como usado aqui o termo "opcionalmente substituído"indica que um grupo sendo descrito pode ser não substituído ou pode se substituído. Os grupos substituídos não se destinam a abranger números, substituições ou seleções de grupos substituintes que resultariam em um composto que não é esperado ser estável em água, em temperatura ambiente durante pelo menos tempo suficiente para ser administrado como um agente farmacêutico. Quando múltiplos substituintes estão presentes, os substituintes são selecionados independentemente a menos que de outro modo indicado, assim, onde 2 ou 3 substituintes estão presentes, por exemplo, aqueles substituintes podem ser iguais ou diferentes.
[0032] Como usado aqui, o termo "alquila" refere-se a uma porção hidrocarboneto ramificada ou não ramificada totalmente saturada tendoaté 10 átomos de carbono. A menos que de outro modo fornecido, alquila refere-se às porções hidrocarboneto tendo 1 a 6 átomos de carbono, ou 1 a 4 átomos de carbono. Exemplos representativos de alquila incluem, porém não estão limitados à metila, etila, n-propila, iso-propila, n-butila, sec-butila, iso-butila, terc-butila, n-pentila, isopentila, neopentila, n-hexila, 3-metil-hexila, 2,2dimetilpentila, 2,3dimetilpentila, n-heptila, n-octila, n-nonila, n-decila e similares.
[0033] Uma alquila substituída é um grupo alquila contendo um ou mais substituintes no lugar de átomos de hidrogênio da alquila não substituída, tal como um dois ou três substituintes, ou 1 a 4 substituintes, até o número de hidrogênios presentes no grupo alquila não substituído. Substituintes adequados para grupos alquila, se não de outro modo especificado, podem ser selecionados de grupos halogênio, D, CN, oxo, hidróxi, C1-4 alcóxi substituído ou não substituído, C3-6 cicloalquila substituído ou não substituído, heterocicloalquila substituído ou não substituído de 3 a 7 membros contendo 1 ou 2 heteroátomos selecionados de N, O e S como membros de anel, fenila substituída ou não substituída, amino, (C1-4 alquil)amino, di(C1-4 alquil)amino, C1-4 alquiltio, C1-4 alquilsulfonila, -C(=O)C1-4 alquila, COOH, COO(C1-4 alquil), -0(C=0)C1-4 alquila, -NHC(=O)CI-4alquila e -NHC(=O)OCI-4alquila; em que os substituintes para C1-4 alcóxi substituído, C3-6 cicloalquila substituído, heterocicloalquila de 3 a 7 membros, e fenila substituída são até três grupos independentemente selecionados de halo, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, D, C1-4 alcóxi, amino, C1-4 alquilamino, di(C1-4 alquil)amino, hidróxi, e CN. Substituintes preferidos para grupos alquila, a menos que de outro modo especificado, incluem grupos halogênio, CN, oxo, hidróxi, C1-4 alcóxi, C3-6 cicloalquila, fenila, amino, (C1-4 alquil)amino, di(C1-4 alquil)amino, C1-4 alquiltio, C1-4 alquilsulfonil, -C(=O)Ci-4 alquila, COOH, -COO(Ci-4 alquil), -O(C=O)-Ci-4 alquila, NHC(=O)Ci-4alquil e -NHC(=O)O Ci^alquila.
[0034] Como usado aqui, o termo "alquileno" refere-se a um grupo alquila divalente tendo i a i0 átomos de carbono, e duas valências abertas para ligar-se a outros componentes moleculares. Os dois componentes moleculares ligados a um alquileno podem estar no mesmo átomo de carbono ou nos diferentes átomos de carbono; desse modo, por exemplo, propileno é um alquileno de 3 carbonos que pode ser i,i-dissubstituído, i,2-dissubstituído ou i,3-dissubstituído. A menos que de outro modo fornecido, alquileno refere-se às porções tendo de i a 6 átomos de carbono, ou i a 4 átomos de carbono. Exemplos representativos de alquileno incluem, porém não estão limitados a metileno, etileno, n-propileno, iso-propileno, n-butileno, secbutileno, iso-butileno, terc-butileno, n-pentileno, isopentileno, neopentileno, n-hexileno, 3-metil-hexileno, 2,2-dimetilpentileno, 2,3dimetilpentileno, n-heptileno, n-octileno, n-nonileno, n-decileno e similares. Um alquileno substituído é um grupo alquileno contendo um ou mais, tal como um dois ou três substituintes; a menos que de outro modo especificado, substituintes preferidos e adequados são selecionados dos substituintes descritos como adequados e preferidos para grupos alquila.
[0035] Similarmente, "alquenileno" e "alquinileno" referem-se a grupos alquileno tendo uma ligação dupla ou uma ligação tripla, respectivamente; eles são tipicamente 2 a 6 e frequentemente 2 a 4 átomos de carbono em comprimento, e podem ser substituído como explicado quanto aos grupos alquileno geralmente.
[0036] Como usado aqui, o termo "haloalquila" refere-se a uma alquila como definido aqui, que é substituído por um ou mais grupos halo como definido aqui. A menos que de outro modo especificado, a porção alquila da haloalquila tem 1 a 4 átomos de carbono. A haloalquila pode ser mono-haloalquila, di-haloalquila, tri-haloalquila, ou polihaloalquila incluindo per-haloalquila. Uma mono-haloalquila pode ter um iodo, bromo, cloro ou flúor dentro do grupo alquila. Grupos dihaloalquila e poli-halquila podem ter dois ou mais átomos dehalo iguais ou uma combinação de diferentes grupos halo dentro da alquila. Tipicamente a poli-haloalquila contém até 6, ou 4, ou 3, ou 2 grupos halo. Exemplos não limitantes de haloalquila incluem fluorometila, difluorometila, trifluorometila, clorometila, diclorometila, triclorometila, pentafluoroetila, heptafluoropropila, difluoroclorometila, diclorofluorometila, difluoroetila, difluoropropila, dicloroetila e dicloropropila. Um per-halo-alquila refere-se a uma alquila tendo todos os átomos de hidrogênio substituídos com átomos de halo, por exemplo, trifluorometila. Grupos haloalquila preferidos, a menos que especificado de outro modo, incluem grupos etila e metila substituídos por monofluoro-, difluoroe trifluoro, por exemplo, CF3, CF2H, CFH2, e CH2CF3,
[0037] Como usado aqui, o termo "alcóxi"refere-se a alquil-O-, em que alquila é como definido acima. Exemplos representativos de alcóxi incluem, porém não estão limitados a metóxi, etóxi, propóxi, 2-propóxi, butóxi, terc-butóxi, pentilóxi, hexilóxi, e similares. Tipicamente, grupos alcóxi têm de 1 a 6 carbonos, mais comumente de 1 a 4 átomos de carbono.
[0038] A "substituído alcóxi" é um grupo alcóxi contendo um ou mais, tal como um dois ou três substituintes na porção alquila do alcóxi. A menos que de outro modo especificado, substituintes preferidos e adequados são selecionados dos substituintes listados acima para grupos alquila, exceto que hidroxila e amino não estão normalmente presentes no carbono que é diretamente ligado ao oxigênio do grupo 'alquil-O'substituído.
[0039] Como usado aqui, o termo "haloalcóxi"refere-se a haloalquil-O-, em que haloalquila é definida acima. Exemplos representativos de haloalcóxi incluem, porém não estão limitados a fluorometóxi, difluorometóxi, trifluorometóxi, triclorometóxi, 2-cloroetóxi, 2,2,2trifluoroetóxi, 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propóxi, e similares. Tipicamente, grupos haloalquilóxi têm de 1 a 4 átomos de carbono, e até três halogênios, por exemplo, grupos etóxi e grupos metóxi substituídos por monofluoro, difluoro e trifluoro.
[0040] Similarmente, cada parte alquila de outros grupos como "alquilaminocarbonila", "alcoxialquila", "alcoxicarbonila", "alcóxicarbonilalquila", "alquilsulfonila", "alquilsulfoxila", "alquilamino", "haloalquila" devem ter o mesmo significado como descrito na definição acima mencionada acima de "alquila". Quando usado desta maneira, a menos que de outro modo indicado, o grupo alquila é frequentemente uma alquila de 1 a 4 carbonos e não é também substituído por grupos diferentes do componente nomeado. Quando tais grupos alquila são substituídos, substituintes adequados são selecionados dos substituintes preferidos ou adequados nomeados quanto aos grupos alquila, a menos que de outro modo especificado.
[0041] Como usado aqui, o termo "cicloalquila" refere-se a grupos hidrocarboneto monocíclicos, bicíclicos, tricíclicos ou espirocíclicos saturados ou insaturados não aromáticos de 3 a 12 átomos de carbono: o grupo cicloalquila pode ser insaturado, e pode ser fundido a outro anel que pode ser saturado, insaturado ou aromático, contanto que o átomo de anel do grupo cicloalquila que é conectada à fórmula molecular de interesse não seja um átomo de anel aromático. A menos que de outro modo fornecido, cicloalquila refere-se a grupos hidrocarboneto cíclicos tendo entre 3 e 9 átomos de carbono de anel ou entre 3 e 7 átomos de carbono de anel. Preferivelmente, grupos cicloalquila, a menos que de outro modo especificado, são anéis monocíclicos saturados tendo de 3 a 7 átomos de anel, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila ou ciclo-heptila.
[0042] Um cicloalquila substituída é um grupo cicloalquila substituído por 1 a 3 (um, dois, três), ou mais do que três substituintes, até o número de hidrogênios do grupo no grupo não substituído. Tipicamente, uma cicloalquila substituída terá de 1 a 4 ou 1 a 2 substituintes. Substituintes adequados, a menos que de outro modo especificado, são independentemente selecionados do grupo que consiste em halogênio, hidroxila, tiol, ciano, nitro, oxo, C1-4 -alquilimino, C1-4 -alcoximino, hidroxiimino, C1-4 -alquila, C2-4-alquenila, C2-4-alquinila, C1-4 -alcóxi, C1-4 -tioalquila, C2-4-alquenilóxi, C2-4-alquinilóxi, C1-4 -alquilcarbonila, carbóxi, C1-4 -alcoxicarbonila, amino, C1-4 -alquilamino, di-C1-4-alquilamino, C1-4-alquilaminocarbonila, C1-4-alquilaminocarbonila, C1-4 alquilcarbonilamino, C1-4 -alquilcarbonil(C1-4 -alquil)amino, C1-4alquilsulfonila, C1-4 -alquilsulfamoíla, e C1-4 -alquilaminossulfonila, onde cada um dos grupos hidrocarboneto anteriormente mencionado (por exemplo, resíduos de alquila, alquenila, alquinila, alcóxi) pode ser também substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados em cada ocorrência da lista de substituintes quanto aos grupos'alquila' aqui. Substituintes preferidos para uma cicloalquila, a menos que de outro modo especificado, incluem C1-4 alquila e os grupos substituintes listados acima como substituintes preferidos para grupos alquila.
[0043] Grupos hidrocarboneto monocíclicos exemplares incluem, porém não estão limitados à ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclopentenila, ciclo-hexila e ciclo-hexenila e similares.
[0044] Similarmente, cada parte cicloalquila dos outros grupos como "cicloalquilóxi", "cicloalcoxialquila", "cicloalcoxicarbonila", "cicloalcoxi-carbonilalquila", "cicloalquilsulfonila", "halocicloalquila" deve ter o mesmo significado como descrito na definição acima de "cicloalquila". Quando usado nestes termos, a cicloalquila é tipicamente um anel de 3 a 7 carbonos monocíclicos que é não substituído ou é substituído com 1 a 4 grupos, comumente 1 a 2 grupos. Quando (opcionalmente) substituídos, os substituintes são tipicamente selecionados de C1-4 alquila e aqueles grupos mencionados acima como substituintes preferidos ou adequados para grupos alquila, a menos que de outro modo especificado.
[0045] Como usado aqui, o termo "arila" refere-se a um hidrocarboneto aromático tendo de 6 a 14 átomos de carbono na orção anel. Tipicamente, arila é arila monocíclica, bicíclica ou tricíclica tendo de 6 a 14 átomos de carbono, frequentemente de 6 a 10 átomos de carbono, por exemplo, fenila ou naftila. Fenila é algumas vezes preferida. Além disso, o termo "arila" como usado aqui, refere-se a um substituinte aromático que pode ser um anel aromático simples, ou anéis aromáticosmúltiplos que são fundidos entre si. Exemplos não limitantes incluem fenila, naftila e 1,2,3,4-tetra-hidronaftila, contanto que a tetrahidronaftila é conectada à fórmula sendo descrita através de um carbono do anel aromático do grupo tetra-hidronaftila.
[0046] Uma arila substituída é um grupo arila substituído por 1 a 5 (tal como um, ou dois, ou três) substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em hidroxila, tiol, ciano, nitro, C1-4 alquila, C2-4-alquenila, C2-4-alquinila, C1-4 -alcóxi, C1-4 -tioalquila, C2-4alquenilóxi, C2-4-alquinilóxi, halogênio, C1-4 -alquilcarbonila, carbóxi, C14 -alcoxicarbonila, amino, C1-4 -alquilamino, diC1-4 -alquilamino, C1-4 alquilaminocarbonila, di-C1-4-alquilaminocarbonila, C1-4alquilcarbonilamino, C1-4 -alquilcarbonil(C1-4 -alquil)amino, C1-4 alquilsulfonil, sulfamoíla, C1-4 -alquilsulfamoíla, e C1-4 alquilaminosulfonila onde cada um dos grupos hidrocarboneto acima mencionados (por exemplo, resíduos de alquila, alquenila, alquinila, alcóxi) podem ser também substituído por um ou mais rupos independentemente selecionados em cada ocorrência dos rupos listados acima como substituintes adequados para grupos alquila. Substituintes preferidos para um grupo arila substituído, a menos que de outro modo especificado, são C1-4 alquila, halogênio, CN, hidróxi, C1-4 alquila substituído ou não substituído, C1-4 alcóxi substituído ou não substituído, C36 cicloalquila substituído ou não substituído, heterocicloalquila de 3 a 6 membros substituído ou não substituído contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S como membros de anel, grupos amino, (C1-4 alquil)amino, di(C1-4 alquil)amino, C1-4 alquiltio, C1-4 alquilsulfonila, C(=O)C1-4 alquila, COOH, COO(CI-4 alquil), -O(C=O)C1-4 alquila, NHC(=O) C1-4 alquila e -NHC(=O)O C1-4 alquila; em que os substituintes para C1-4 alcóxi substituído, C3-6 cicloalquila substituído, heterocicloalquila de 3 a 6 membros, e alquila substituído são até três grupos independentemente selecionados de halo, oxo, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, e CN.
[0047] Similarmente, cada parte arila dos outros grupos como "arilóxi", "ariloxialquila", "ariloxicarbonila", "ariloxi-carbonilalquila" deve ter o mesmo sinificado como descrito na definição acima mencionada de "arila".
[0048] Como usado aqui, o termo "heterociclila" ou "heterocicloalquila" refere-se a um radical heterocíclico que é saturado ou parcialmente insaturado, porém não aromático, e pode ser um anel monocíclico ou policíclico, incluindo um sistema de anel bicíclico, tricíclico ou espirocíclico fundindo ou em ponte. Um heterociclo ou heterociclila contém pelo menos um átomo de não carbono como um membro de anel, tipicamente N, O ou S a menos que de outro modo especificado. A menos que de outro modo especificado, um grupo heterociclila tem 3 a 10, e preferivelmente 4 a 7 átomos de anel; em que um ou mais, preferivelmente um a quatro, especialmente um ou dois átomos de anel são heteroátomos independentemente selecionado de O, S e N (os átomos de anel restantes, portanto, sendo carbono). Uma heterociclila insaturada pode ter uma ou duas ligações duplas, porém não é aromática. Preferivelmente, a menos que descritos como insaturados, os grupos heterociclila nos compostos da invenção são anéis simples saturados. Mesmo completamente descrito no momento como, por exemplo, um grupo átomo C5-6, um heterociclo contém pelo menos um heteroátomo como uma átomo de anel e tem o número total de átomos de anel estabelecido, por exemplo, 5 ou 6 neste exemplo; assim um grupo C5-6 heterociclila refere-se a um anel heterocíclico de 5 a 6 membros em que pelo menos um membros de anel é um heteroátomo. Preferivelmente, um grupo heterociclila tem um ou dois heteroátomos como átomos de anel, e preferivelmente os heteroátomos não estão diretamente conectados entre si. O anel de ligação (isto é, o anel conectando-seà fórmula de interesse) preferivelmente tem de 4 a 7 átomos de anel. O grupo heterocíclico pode ser fundido a um anel aromático, forneceu os átomos do grupo heterocíclico ligados à fórmula de interesse não é aromático. O grupo heterocíclico pode ser ligado à fórmula de interesse por meio de um heteroátomo (tipicamente nitrogênio) ou um átomo de carbono do grupo heterocíclico. A heterociclila pode compreender anéis fundidos ou em ponte bem como sistemas de anel espirocíclicos (por exemplo, 2-oxa-6-azaspiro[3,3]heptano), e apenas um anel de grupo de um grupo heterocíclico policíclico necessita conter um heteroátomo como um átomo de anel. Exemplos de heterociclos incluem tetra-hidrofurano (THF), di-hidrofurano, 1,4-dioxano, morfolina, 1,4-ditiana, piperazina, piperidina, 1,3-dioxolano, imidazolidina, imidazolina, pirrolina, pirrolidina, tetra-hidropirano, di-hidropirano, oxatiolano, ditiolano, 1,3-dioxano, 1,3-ditiano, oxatiano, tiomorfolina, e similares.
[0049] Uma heterociclila substituída é um grupo heterociclila independentementesubstituída por 1 a 5 (tal como um, ou dois, ou três) substituintes selecionados dos substituintes descritos acima como adequado ou preferido para um grupo cicloalquila, a menos que de outro modo especificado.
[0050] Similarmente, cada parte heterociclila de outros grupos como "heterociclilóxi", "heterocicliloxialquila", "heterocicliloxicarbonila" deve ter o mesmo significado como descrito na definição acima mencionada de "heterociclila".
[0051] Um "éter cíclico"como usado aqui refere-se a um anel heterocíclico contendo O como um átomo de anel, tipicamente um anel de 4 a 8 membros, por exemplo, oxetano, tetra-hidrofurano ou tetrahidropirano. Um éter cíclico de 5 a 8 membros pode conter dois átomos de oxiênio não adjacentes como membros de anel, por exemplo, dioxano e dioxolano. Estes anéis podem ser substituídos por anéis heterocíclicos; substituintes preferidos se não de outro modo especificados incluem C1-4 alquila (por exemplo, metila, etila), CN, OH, NH2, NHR, NR2, COOH, COOR, CONR2, e OR, onde cada R é independentemente C1-4 alquila. Tipicamente, para razões de estabilidade, substituintes de OH, NH2, NHR, e NR2 não são ligados a um carbono de anel diretamente ligado a um átomo de oxigênio no anel.
[0052] Como usado aqui, o termo "heteroarila" refere-se a um sistema de anel aromático monocíclico ou bicíclico ou tricíclico de 5 a 14 membros, tendo 1 a 8 heteroátomos como membros de anel; os heteroátomos são selecionados de N, O e S. Tipicamente, a heteroarila é um sistema de anel de 5 a 10 membros, por exemplo, um grupo monocíclico de 5 a 6 membros ou bicíclico de 8 a 10 membros. Grupos heteroarila típicos incluem 2ou 3-tienila, 2ou 3-furila, 2ou 3pirrolila, 2-, 4-, ou 5-imidazolila, 1-, 3-, 4-, ou 5pirazolila, 2-, 4-, ou 5tiazolila, 3-, 4-, ou 5-isotiazolila, 2-, 4-, ou 5-oxazolila, 3-, 4-, ou 5isoxazolila, 3ou 5-(1,2,4-triazolila), 4ou 5-(1,2, 3-triazolila), 1ou 2ou 3-tetrazolila, 2-, 3-, ou 4-piridila, 3ou 4-piridazinila, 2-pirazinila, e 2, 4-, ou 5-pirimidinila.
[0053] O termo "heteroarila"também refere-se a um grupo em que um anel heteroaromático é fundido a um ou mais anéis arila, cicloalquila, ou heterociclila, onde o radical ou ponto de ligação à fórmula de interesseestá em um anel heteroaromático. Exemplos não limitantes incluem 1-, 2-, 3-, 5-, 6-, 7-, ou 8indolizinila, 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, ou 7isoindolila, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, ou 7-indolila, e 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, ou 7indazolila.
[0054] Uma heteroarila substituída é um grupo heteroarila tendo um ou mais substituintes no anel heteroarila substituindo um átomo de hidrogênio que pode estar na heteroarila não substituída, tipicamente 1, 2 ou 3 substituintes, selecionados dos substituintes descritos acima como adequado ou preferido para um grupo arila, a menos que de outro modo especificado.
[0055] Similarmente, cada parte de heteroarila de outros grupos como "heteroarilóxi", "heteroariloxialquila", "heteroariloxicarbonila"deve ter o mesmo significado como descrito na definição acima mencionada de "heteroarila".
[0056] Várias modalidades da invenção são descritas aqui. Será reconhecido que características especificadas em cada modalidade podem ser combinadas com outras especificadas para fornecer outras modalidades da presente invenção. As seguintes modalidades enumeradasão representativas da invenção.
[0057] Modalidade 1. um composto de fórmula (I):
Figure img0002
[0058] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
[0059] R1é um grupo opcionalmente substituído selecionado de C3-8 cicloalquila, heterociclila de 5 a 8 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S como membros de anel, fenila, -SO2fenila, -C(O)-fenila, -C(R8)2-fenila, e anel heteroarila de 5 a 6 membros, em que as referidas heterociclila e heteroarila contêm 1-2 heteroátomos selecionados de N, O e S como membros de anel,
[0060] e em que os substituintes opcionais para R1são 1 a 3 rupos independentemente selecionados de D, halo, hidróxi, amino, -N(R8)2, CN, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, -S(C1-4 alquil), C1-4 haloalquila, C1-4 haloalcóxi, C3-6 cicloalquila, heterociclila de 3 a 6 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S, oxo (exceto em anéis aromáticos), CN, COOR8, CON(R8)2, -NR8-C(O)R8, -NR8-C(O)OR8 -SO2R8, NR8SO2R8, e SO2N(R8)2, onde cada R8é independentemente H ou C1-4 alquila;
[0061] L é uma ligação, ou L pode ser um C1-4 alquileno, C2-4 alquenileno, C1-4 alquinileno, C3-6 cicloalquila ou uma heterocicloíla de 4 a 7 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S como membros de anel, em que L é opcionalmente substituído com 1 a 3 grupos independentemente selecionados de R11, D, OH, NH2, -NHR11, -NHC(=O)R11, -NHC(=O)-OR11, -NHC(=O)-NH2, NHC(=O)-NHR11, -N(R11)2, CN, halo, N3, CON(R7)2, e COOR7; onde cada R11é independentemente C1-4 alquila, que pode ser substituída com até três grupos independentemente selecionado de D, halo, OH, NH2,-NHMe, -NMe2, -OP(O)(OH)2 e O-C1-4 alquila;
[0062] X e Y são independentemente selecionados de H, D, halo, CN, amino, hidróxi, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C1-4 alcóxi, e C1-4 haloalcóxi;
[0063] R2é H, C1-4 alquila, ou aril-C1-2-alquil-, em que a arila e C1-4 alquila são opcionalmente substituídas com halo, CN, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C3-6 cicloalquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalcóxi, ou C1-4 alquilsulfonila;
[0064] ou R2 pode ciclizar-se com X para formar um anel heterocíclico de 5 a 7 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S fundidos ao anel fenila ao qual X é ligado,
[0065] ou R2 pode ciclizar-se com L para formar um anel heterocíclico de 5 a 7 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S,
[0066] em que o anel heterocíclico opcional formado por ciclização de R2 com X, ou por ciclização de R2 com L, pode ser opcionalmente substituído com um ou dois grupos independentemente selecionados de CN, halo, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalquila, C1-4 haloalcóxi, oxo, CN, COOR7, CON(R7)2, e -SO2R7;
[0067] cada R7é independentemente H ou C1-4 alquila;
[0068] Z é N ou CR4;
[0069] R4é H, D, halo, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, ou C1-4 alcóxi;
[0070] R5 é selecionado de -C(O)-R5a e R5a; em que R5a é uma opcionalmente substituída C3-8 cicloalquila, C3-8 cicloalquenila, anel heterocíclico de 3 a 8 membros saturado ou insaturado contendo de 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S, fenila, ou anel heteroarila de 5 a 6 membros contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O e S, em que os substituintes opcionais para R5 são 1 a 4 grupos independentemente selecionados de D, halo, hidróxi, amino, CN, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalquila, C1-4 hidroxialquila, C1-4 haloalcóxi, C3-6 cicloalquila, heterociclila de 3 a 6 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S, oxo (exceto em anéis aromáticos), CN, -COOR9, -C(O)R9, CON(R9)2, -NR9C(O)R9, -NR9CO2R9, -SO2R9, NR9SO2R9, e -SO2N(R9)2, onde cada R9é independentemente H ou C14 alquila opcionalmente substituída com 1 a 3 grupos independentemente selecionados de D, halo, OH, NH2, NHMe e NMe2; e dois substituintes nos mesmos átomos de carbono ou adjacentes de R5 podem opcionalmente considerados juntos para formar um anel de 5 a 6 membros que pode ser saturado ou aromático e conter de 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S e pode ser opcionalmente ser substituído com 1 a 2 grupos independentemente selecionados de D, Me, halo, OH, oxo, O(C1-4 alquil), NH2, C1-4 alquilamino, di(C1-4 alquil)amino; e
[0071] R6é H, D, halo, C1-4 alquila, ou C1-4 haloalquila.
[0072] Modalidade 2. O composto de acordo com modalidade 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Z é N.
[0073] Modalidade 3. O composto de modalidade 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Z é CH.
[0074] Modalidade 4. O composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 3 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2é H ou Me.
[0075] Modalidade 5. O composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 4 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R6é H.
[0076] Modalidade 6. O composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 5 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R5 é selecionado de -C(O)-R5a e R5a; em que R5a é selecionado de C3-8 cicloalquila, heterociclila de 5 a 8 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S, fenila, e heteroarila de 5 a 6 membros, e é opcionalmente substituído com 1 a 3 grupos independentemente selecionados de D, halo, CN, hidróxi, C1-4 alcóxi, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C1-4 hidroxialquila, C1-4 haloalcóxi, SO2R', -N(R')2, -NR'-C(O)-R', e -SO2NR‘2, onde cada R'é independentemente H ou C1-4 alquila.
[0077] Modalidade 7. O composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 6, em que R5 é selecionado de -C(O)-R5a e R5a; em que R5aé selecionado de fenila, piridina, piridone, pirazina, piridazina, pirazol, triazol, tetrazol, tiazol, oxazol, imidazol, isotiazol, isoxazol, furano, e tiofeno, cada dos quais é opcionalmente substituído com um ou dois grupos independentemente selecionados de halo, D, CN, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalquila, C1-4 hidroxialquila, C1-4 haloalcóxi, CN, COOR9, CON(R9)2, e -SO2R9, onde cada R9é independentemente H ou C1-4 alquila.
[0078] Modalidade 8. O composto de modalidade 3 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R5é selecionado de C(O)-R5a e R5a; em que R5aé C5-6 heteroaril contendo pelo menos one N como um membro de anel, que é opcionalmente substituído com 1-2 grupos independentemente selecionados de halo, CN, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C1-4 hidroxialquila, C1-4 alcóxi, e C1-4 haloalcoxi.
[0079] Modalidade 9. O composto de modalidade 8 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R5é selecionado de C(O)-R5a e R5a; em que R5aé pirazol ou triazol e é opcionalmente substituído com 1-2 grupos independentemente selecionados de halo, CN, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C1-4 hidroxialquila, C1-4 alcóxi, e C1-4 haloalcóxi.
[0080] Modalidade 10. O composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 6, em que R5é selecionado de -C(O)-R5a e R5a; em que R5aé selecionado de ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclohexenila, tetra-hidropiran, di-hidropiran, tetra-hidrofuran, oxetano, azetidina, pirrolidina, piperidina, piperazina, morfolina, tetra-hidrotiopirano (tiaciclo-hexano), e tetra-hidrotiofurano (tiaciclopentano), cada dos quais é opcionalmente substituído com 1 a 3 grupos independentemente selecionados de halo, D, CN, N(R9)2, hidróxi, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalquila, C1-4 hidroxialquila, C1-4 haloalcóxi, oxo, CN, COOR9, CON(R9)2, -NHC(O)R9, -NHCOOR9, -NHSO2R9, e -SO2R9, onde cada R9é independentemente H ou C1-4 alquila.
[0081] Modalidade 11. O composto de qualquer uma das modalidades 1-10, em que R1é fenila e é opcionalmente substituído com até três grupos independentemente selecionados de halo, D, CN, C1-4 alcóxi, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C1-4 haloalcóxi, SR', -SO2R', -N(R')2, -NR'-C(O)-R‘, e -SO2NR2, onde cada R'é independentemente H, C1-4 alquil ou C1-4 haloalquil.
[0082] Modalidade 12. O composto de qualquer uma das modalidades 1 a 10, em que R1 é tiofeno, tiazol, piridina, pirimidina, pirazina ou piridazina, e é opcionalmente substituído com até três grupos independentemente selecionados de halo, CN, C1-4 alcóxi, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C1-4 haloalcóxi, -SO2R', -N(R’)2, -NR'-C(O)-R', e -SO2NR2, onde cada R' é independentemente H ou C1-4 alquila.
[0083] Modalidade 13. O composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 12 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que L é selecionado do grupo que consiste em: ciclopropano-1,1-diila; ciclopropano-1,2-diila; e -CHR"-, em que R" é H, D, ou C1-2 alquila opcionalmente substituída com até três grupos independentemente selecionados de D, hidróxi, halo, amino, C1-2 alquilamino, di(C1-2 alquil)amino, e C1-2 alcóxi.
[0084] Modalidade 14. O composto de modalidade 13, em que L é: R" > I > -t—c—i2 H
Figure img0003
[0085] em que R" é metila ou etila, e é opcionalmente substituído com flúor, amino, hidróxi, metilamino, etilamino, dimetilamino, OP(O)(OH)2, metóxi ou etóxi.
[0086] Modalidade 15. O composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 14 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 e L são ligados juntamente para formar um grupo heterocíclico selecionado de morfolina, piperidina, tiomorfolina, piperazina, e pirrolidina que é ligado a R1 e é também opcionalmente substituído com um ou dois grupos independentemente selecionados de C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, oxo, CN, COOR7, CON(R7)2, e -SO2R7, onde cada R7é independentemente H ou C1-4 alquila.
[0087] Modalidade 16. O composto de qualquer uma das modalidades 1-15, em que Y é H, metila, ou halo.
[0088] Modalidade 17. O composto de qualquer uma das modalidades 1 a 16, em que X é H, ou R2 cicliza com X para formar um anel heterocíclico fundido de 5 a 7 membros ao anel fenila ao qual X é ligado, em que o anel de 5 a 7 membros é opcionalmente substituído como descrito na modalidade 1.
[0089] Modalidade 18. O composto de modalidade 1, que é da fórmula IA:
Figure img0004
(IA)
[0090] em que R5é pirazol, imidazol, isoxazol, isotiazol, oxazol, triazol, ou tiazol, que pode ser substituído com até dois grupos independentemente selecionados de D, F, Cl, CN, Me, OMe, Et, iPr, OEt, e CF3;
[0091] Y é H, F, Cl, ou Me;
[0092] R10 é H ou –CH2-R*, onde R* é H, -OH, F, -NH2, -NHMe, -NMe2, -OP(O)(OH)2 ou -OMe; e
[0093] R1é fenila ou tienila, opcionalmente substituído com 1 a 2 grupos independentemente selecionados de halo, CN, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalquila, C1-4 haloalcóxi, CN, COOR8, CON(R8)2, -SMe, e -SO2R8, onde cada R8é independentemente H ou C1-4 alquila;
[0094] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0095] Modalidade 19. O composto de modalidade 1, que é da fórmula IB:
Figure img0005
(IB)
[0096] em que R5é um éter cíclico de 4 a 7 membros ou C5-6 cicloalquila, e R5 pode ser substituído com até quatro grupos independentemente selecionados de D, F, Cl, CN, amino, NHMe, NMe2, CH2OH, -NHC(O)Me, -NHCOOMe, -NHSO2Me, Me, OMe, OH, oxo, Et, iPr, OEt, CN, e CF3;
[0097] Y é H, F, Cl, ou Me;
[0098] R10é H ou -CH2-R*, onde R* é H, -OH, F, -NH2, -NHMe, NMe2, -OP(O)(OH)2 ou -OMe; e
[0099] R1é fenila, opcionalmente substituído com 1 a 2 grupos independentemente selecionados de halo, CN, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalquila, C1-4 haloalcóxi, CN, COOR8, CON(R8)2, e -SO2R8, onde cada R8é independentemente H ou C1-4 alquila;
[00100] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00101] Modalidade 20. O composto de qualquer uma das modalidades 1 a 6 ou 19, em que R5é ciclo-hexila substituído com 1 a 3 grupos independentemente selecionados de D, F, Cl, CN, amino, NHMe, NMe2, Me, NHSO2Me, NHCOMe, OMe, OH, Et, CN, -CH2OH, e CF3,
[00102] Em uma alternativa à modalidade 20, o composto de qualquer uma das modalidades 1 a 6 ou 19 em que R5é tetra-hidropiranila, especialmente 4-tetra-hidropiranila.
[00103] Em outra alternativa, o composto de qualquer uma das modalidades 1 a 6 ou 19, em que R5 é selecionado de:
Figure img0006
[00104] Modalidade 21. O composto de qualquer uma das modalidades 1 a 20, em que R1 é fenila substituído com 0, 1 ou 2 grupos independentemente selecionados de F, Cl, Br, I, SMe, SO2Me, e CH3.
[00105] Modalidade 22. O composto de modalidade 1, que é selecionado do grupo que consiste nos compostos de Exemplos 1 a 452 e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[00106] Modalidade 23. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 22 misturado com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00107] Modalidade 24. A composição farmacêutica de modalidade 23, também compreendendo um coagente terapêutico.
[00108] Modalidade 25. A composição farmacêutica de modalidade 24, em que o coagente terapêutico é selecionado de compostos anticâncer, analgésicos, e compostos anti-inflamatórios.
[00109] Modalidade 26. A método para tratar câncer, compreendendo administrar a um indivíduo em necessidade de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 20 ou uma composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades 23 a 25.
[00110] Modalidade 27. O método de modalidade 26, em que o câncer é selecionado de adenoma, câncer de bexiga, câncer cerebral, câncer de mama, câncer cervical, câncer colorretal, câncer de cólon, carcinoma epidérmico, carcinoma folicular, cânceres genitourinário, glioblastoma, cânceres de cabeça e pescoço, doença de Hodgkin, linfoma de não Hodgkin, hepatoma, cânceres de cabeça e pescoço, câncer de rim, cânceres de pulmão tais como câncer de pulmão de célula pequena ou não pequena, leucemias tais como AML ou CML, mieloma múltiplo, distúrbios linfoides, cânceres de pele incluindo melanoma, neuroblastoma, câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de próstata,câncer retal, sarcoma, câncer testicular, e câncer de tiroide.
[00111] Modalidade 28. Um composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 22 para uso como um medicamento.
[00112] Modalidade 29. Uso de um composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 22 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer; ou uso de um composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 22 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em medicina, especialmente para tratamento de um câncer tal como aqueles nomeados na modalidade 27.
[00113] Modalidade 30. Um método de sintetizar um composto da invenção. Por exemplo, um método para sintetizar 4-(3-amino-6((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida compreendendo:
[00114] (a). reagir 5-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-3fluorociclo-hexil)pirazin-2-amina com 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de terc-butila na presença de Pd(dppf)Cl2, DCM, Na2CO3 e DME para formar 4-(3-amino-6((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexil)pirazin-2-il)2-fluorobenzoato de terc-butila;
[00115] (b). reagir 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-4-((tercbutildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila na presença de HCl, ETOH e NaOH para formar ácido 4-(3amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico;
[00116] (c). reagir ácido 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico com cloridrato de (S)-N(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2nitrobenzenossulfonamida na presença de EDCI e HOAT para fornecer 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)2-fluorobenzamida; e
[00117] (d). reagir 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamida na presença de LiOH, DMF e ácido 4-mercaptobenzoico para fornecer 4-(3-amino-6((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida.
[00118] Modalidade 31. A invenção fornece um sal de HCl de alta cristalinidade de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2fluorobenzamida em que a referida forma tem pelo menos uma das seguintes características:
[00119] a) Um padrão de difração de pó de raio X com dois ou mais picos (preferivelmente três picos, preferível todos os picos) em graus 2-theta (em que a variação de ângulo é +/0,3, 0,2 ou 0,1 graus) como mostrado no exemplo 184;
[00120] b) Um padrão de difração de pó de raio X com picos substancialmente o mesmo como descrito na figura 3; ou
[00121] c) Uma curva de análise gravimétrica térmica substancialmente de acordo com aquela mostrada na figura 4.
[00122] Em algumas modalidades de fórmula I ou IA ou IB, Y é H ou halo, particularmente F ou Cl. Halo, especialmente F, é preferido. Y pode ser posicionado 'orto'à carbonila descrita nestas fórmulas.
[00123] Em muitas modalidades dos compostos descritos acima, X é H. Em outras palavras, X é um grupo orto à carbonila mostrado na fórmula I, tal como F, Me ou Cl, e em algumas tais modalidades, X é um grupo que, considerado juntamente com R2 como descrito aqui, forma um anel fundido ao anel fenila mostrado na fórmula I. Este anel fundido é tipicamente um anel de 5, 6 ou 7 átomos, e pode conter, além do N ao qual R2é ligado, um N, O ou S adicional como um membro de anel. O anel fundido pode ser substituído ou não substituído; quando substituído, ele pode ter um ou dois substituintes como descrito para fórmula (I), com halo, C1-4 alquila, oxo, e hidróxi como substituintes preferidos, a menos que de outro modo especificado.
[00124] Em algumas modalidades dos compostos de fórmula I e outras modalidades descritas acima, R2é H ou Me, e é preferivelmente H. Em modalidade alternativas, R2 e X considerados juntamente formam um anel heterocíclico de 5 a 7 membros como descrito para a fórmula I acima, em cujo caso X é ligado ao anel fenila em uma posição orto ao grupo carbonila descrito na fórmula I.
[00125] Em certas modalidades anteriores, L é um C1-4 alquileno, que pode ser de cadeia linear ou ramificada, e pode ser não substituído ou substituído com 1 a 3 grupos como descrito para a fórmula I. Em algumas modalidades, L é um grupo da fómula -CH(RL)onde RLé um C1-3 alquila ou um C1-2 alquila e é opcionalmente substituído com 1 a 3 grupos como descrito para a fórmula I. Preferivelmente, L é C1-2 alquila e é substituído por 1 ou 2 grupos independentemente selecionados de hidróxi, halo, amino, OMe, -NHMe, -OP(O)(OH)2 e -NMe2. Em algumas modalidades, particularmente onde R1é um grupo arila ou heteroarila, L é -CH2ou um alquileno substituído da fórmula -CH(CH2R*)onde R* é H, Me, OH, F, NH2, NHMe, -OP(O)(OH)2 ou OMe. Em outras palavras, L é -CH2CH2-. Quando L é substituído, ele é frequentemente substituído com metila, hidroximetila, aminometila, metilamino, metilaminometila, fluorometila, ou metoximetila.
[00126] Em modalidades onde L é alquileno substituído (por exemplo, um grupo de fórmula -CHR"como descrito aqui), L contém um centro quiral; em certas modalidades, L tem esta estereoquímica:
Figure img0007
[00127] onde [N] e [R1] indicam as posições onde -CH(R")é conectado a NR2 e R1, respectivamente. Preferivelmente, R" é -CH3, CH2OH, -CH2NH2, -CH2NHMe, -CH2NMe2, -CH2F, -CH2OMe, CH(OH)Me, -CH2OP(O)(OH)2 ou -CH(OH)CH2OH. Em algumas modalidades, o composto de fórmula (I) compreende L tendo a configuração quiral mostrada em excesso sobre seu enantiômero, assim o composto é oticamente ativo. Preferivelmente, tais compostos da invenção são substancialmente livre do enantiômero oposta, isto é, pelo menos 95% do composto têm a quiralidade mostrada acima.
[00128] Em algumas modalidades dos compostos anteriores, R1 é arila ou heteroarila, opcionalmente substituída como descrito abaixo, e comumente R1 é um grupo opcionalmente substituído selecionado de fenila, tienila, tiazolila, piridinila, piridazinila, pirazinila, e pirimidinila. Fenila substituída é preferida para R1.
[00129] R1 é frequentemente substituído com pelo menos um grupo selecionado daqueles descritos para as modalidades descritas acima. Em algumas modalidades, R1 é fenila, 3-tienila, 2-tiazolila, 2-piridinila, ou 3-piridinila que é não substituído ou é substituído com 1 a 2 grupos independentemente selecionados de halo (F, Cl, Br ou I), metila, metóxi, -SMe, metilsulfonila, ciano, e ciclopropila. Em algumas modalidades, R1é fenila e é substituído em pelo menos uma posição 'meta' a [L] (a posição de R1 que é ligado a L) com F, Cl, Br, I, SMe, CH2F, CHF2, ou metilsulfonila.
[00130] Em algumas modalidades, a porção C(=O)-NR2-L-R1 da estrutura na fórmula (I) tem a seguinte fórmula, onde W1 e W2são selecionados independentemente: R* = H, OH, NH2, NHMe, NMe2, OMe, F, -OP(O)(OH)2 Z2 = CH W1,W2 = H, F, Cl, CN, -SO2Me, Me, OMe, Br, I, CH2F, CF2H, SMe
Figure img0008
[00131] Nestas modalidades, pelo menos um de W1 e W2é tipicamente diferente de H, e preferivelmente pelo menos um de W1 e W2é halo, particularmente Cl, Br ou I.
[00132] Em algumas modalidades dos compostos da invenção, R6é H ou Me; frequentemente R6é H.
[00133] Em algumas modalidades de qualquer um dos compostos descritos acima, Z é N. Em modalidade alternativas de qualquer um dos compostos descritos acima, Z é CR4, preferivelmente CH.
[00134] Em algumas modalidades, R5é um anel heteroarila de 5 a 6 membros ou fenila, e pode ser substituído como descrito para a fórmula I acima.
[00135] Em tais modalidades, R5 pode ser fenila, piridila, piridazinila, ou pirimidinila, opcionalmente substituído como descrito acima. Em outras tais modalidades, R5é um anel heteroarila de 5 membros contendonitrogênio, tal como pirazol, imidazol, isoxazol, oxazol, tiazol, triazol, tetrazol, isotiazol, pirrol, e similares, opcionalmente substituído como descrito acima; nestas modalidades, Z é preferivelmente CH. Pirazóis, triazóis, e imidazóis são algumas vezes opções preferidas para R5.
[00136] Nas modalidades em que R5é heteroarila, R5 pode ser nãosubstituído ou ele pode ser substituído com 1 a 3 grupos independentemente selecionados de Me, Et, isopropila, propila, butila, t-butila, sec-butila, isobutila, CF3, CN, Cl e F.
[00137] Algumas modalidades preferidas destes grupos R5 incluem:
Figure img0009
onde cada R5Aé independentemente selecionado de H, Me, Et, propila, e isopropila. Preferivelmente, não mais do que um ou dois dos grupos R5a em R5são diferentes de H, e na maioria das modalidades, R5A em N nestes grupos é metila, etila, ou isopropila. Grupos adequados específicos incluem 1-metil-4-pirazol, 1-etil-4-pirazol, 1isopropil-4-pirazol, e 3-pirazol e seu tautômero; 1-metilimidazol-2-ila, 1metilimidazol-4-ila, 1-metilimidazol-5-ila; e versões substituídas destes.
[00138] Em outras palavras, R5é um grupo heterocíclico ou cicloalquila não aromática tal como ciclo-hexila, ciclopentila, tetrahidropiranila (por exemplo, 4-tetra-hidropiranila), 3-oxetanila, 3ou 4piperidinila, 4ou 3piperidin-2-onila, 3ou 4-tiaciclopentano, 3tiaciclo-hexano, 3-tetra-hidrofurano, e similares. Nestas modalidades, um enxofre de anel pode ser oxidado em sulfóxido ou estado de oxidação de sulfona, e cada um destes anéis pode ser substituído com 1 a 3 grupos, tipicamente 1 a 2 grupos, selecionados de oxo, Me, Et, isopropila, CF3, CN, Cl e F. Alguns exemplos preferidos destas modalidades incluem:
Figure img0010
[00139] As modalidades de ciclo-hexil 1,4-dissubstituído podem ter estereoquímica relativas cis ou trans entre os grupos ligados nas posições 1 e 4; em algumas modalidades, uma orientação relativa trans entre estes grupos é preferida. Modalidades de cicloalquila e heterociclila adequadas de R5 incluem:
Figure img0011
[00140] Modalidades preferidas de R5 incluem estas:
Figure img0012
[00141] Onde R5é heterocíclico ou cicloalquila e é substituído, ele frequentemente conterá pelo menos um centro quiral. Nestes compostos quirais, tantos os isômeros R quanto S podem ser usados individualmente, em como misturas de R e S, incluindo uma mistura racêmica. Os compostos da invenção podem também incluir atropisômeros onde a rotação em torno de uma ligação de heteroaril-aril(heteroaril) é prejudicada ela presença de grupos substituintes; nestas situações, cada atropisômero é incluído. Onde um isômero (enantiômero, diastereômero, atropisômero, ou isômero geométrico) tem atividade intrínseca maior como um inibidor de ERK1 ou ERK2 do que seu isômero oposto, o isômeto mais ativo é tipicamente preferido.
[00142] Como usado aqui, o termo "isômero ótico"ou "estereoisômero" refere-se a qualquer uma das várias configurações estéreo isoméricas que podem existir para um determinado composto da presente invenção e inclui isômeros geométricos. Entende-se que um substituinte pode ser ligado em um centro quiral de um átomo de carbono. O termo "quiral" refere-se às moléculas que têm a propriedade de não sobreponibilidade em seu parceiro de imagem refletida, ao mesmo tempo em que o termo "aquiral" refere-se às moléculas que são sobreponíveis em seu parceiro de imagem refletida. A invenção inclui enantiômeros, diastereômeros ou racematos dos compostos. "Enantiômeros"são um par de estereoisômeros que são imagens refletidas não sobreponíveis uma da outra. Uma mistura de 1:1 de um par de enantiômeros é uma mistura "racêmica". O termo é usado para designar uma mistura racêmica onde apropriado. "Diastereoisômeros" são estereoisômeros que têm pelo menos dois átomos assimétricos, porém que são imagens não refletidas um do outro. A estereoquímica absoluta é especificada de acordo com o sistema Cahn-lngold-Prelog 'R-S'. Quando um composto é um enantiômero puro, a estereoquímica em cada carbon quiral pode ser especificada por R ou S. Compostos resolvidos cuja configuração absoluta é desconhecida podem ser designados (+) ou (-) dependendo da direção (dextroou levogiratório) que giram em torno do plano da luz polarizada no comprimento da linha D de sódio. Certos compostos descritos aqui contêm um ou mais centros assimétricos ou eixos e podem desse modo dão origem aos enantiômeros, diastereômeros, e outras formas estereoisoméricas que podem ser definidas, em termos de estereoquímica absoluta, como (R)ou (S)-.
[00143] Dependendo da escolha dos materiais de partidas e procedimentos de síntese, os compostos podem estar presentes na forma de um dos possíveis isômeros ou como misturas dos mesmos, por exemplo, como isômeros óticos puros, ou como misturas isoméricas, tais como racematdos e misturas diastereoisoméricas, dependendo do número de átomos de carbono assimétricos. A presente invenção destina-se a incluir todos os tais possíveis isômeros, incluindo misturas racêmicas, misturas diasterioméricas e formas oticamente puras. Isômeros (R)e (S)oticamente ativos podem ser preparados usando sintos quirais ou reagentes quirais, ou resolvido usando técnicas convencional. Se o composto contiver uma ligação dupla, o substituinte pode ser configuração E ou Z a menos que especificado. Se o composto contiver uma alquila dissubstituída, o substituinte de cicloalquila pode ter uma configuração cis ou trans, a menos que de outro modo especificado. Todas as formas tautoméricas são também destinadas a ser incluídas.
[00144] Em muitos casos, os compostos da presente invenção são capazes de formar sais de ácido e/ou base em virtude da presença de grupos amino e/ou carboxila ou grupos similares aos mesmos. Como usado aqui, os termos "sal" ou "sais" referem-se a um sal de adição de ácido ou sal de adição de base de um composto da invenção. "Sais" incluem, em particular, "sais farmacêuticos aceitáveis". O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis"refere-se a sais que retêm a eficácia biológica e propriedades dos compostos desta invenção e, que tipicamentenão são biologicamente ou de outro modo indesejáveis.
[00145] Sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com ácidos inorgânicos e ácidos orgânicos, por exemplo, sais de acetato, adipato, alumínio, ascorbato, aspartato, benzoato, besilato, brometo/hidrobrometo, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, canforsulfonato, caproato, cloreto/cloridrato, cloroprocaína, clorteofilonato, citrato, edetato, edetato de cálcio, etandisulfonato, etilsulfonato, diamina de etileno, fumarato, galactarato (mucato), gluceptato, gluconato, glucuronato, glutamato, glicolato, ressorcinato de hexila, hipurato, hidroiodeto/iodeto, hidroxinafoato (xinafoate), isetionato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, litium, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pantotenato, fosfato/fosfato de hidrogênio/fosfato de di-hidrogênio, poligalacturonato, procaína, propionato, salicilato, sebacato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, sulfossalicilato, tanato, tartarato, bitartarato, tosilato, trifenilacetato, e trifluoroacetato. Listas de sais adequados adicionais podem ser encontradas, por exemplo, em REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES,20a edição, Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); e em HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELEcTION, AND USE, por Stahl e Wermuth (Wiley-VcH, Weinheim, Alemanha, 2002).
[00146] Em uma modalidade, a presente invenção fornece 4-(3amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida em forma de sal de acetato, ascorbato, adipato, aspartato, benzoato, besilato, brometo/hidrobrometo, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, canforsulfonato, caprato, cloreto/hidrocloreto, clorteofillonato, citrato, etandisulfonato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, glutamato, glutarato, glicolato, hippurato, hidroiodeto/iodeto, isetionato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, mucato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/fosfato de hidrogênio/fosfato de di-hidrogênio, poligalacturonato, propionato, sebacato, stearato, succinato, sulfosalicilato, sulfato, tartrato, tosilato trifenatato,trifluoroacetato ou xinafoato.
[00147] Em outra modalidade, a presente invenção fornece 4-(3amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida em forma de sal de cloridrato.
[00148] Ácidos inorgânicos dos quas sais podem ser derivados incluem, por exemplo, ácido hidroclórico, ácido hidrobrômico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, e similares.
[00149] Ácidos orgânicos dos quais sais podem ser derivados incluem, por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maléico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido toluenossulfônico, ácido trifluoroacético, ácido sulfossalicílico, e similares.
[00150] Sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com bases inorgânicas ou orgânicas e podem ter contraíons inorgânicos ou orgânicos.
[00151] Contraíons inorgânicos para tais sais de base incluem, por exemplo, sais de amônio e metais das I a XII da tabela periódica. Em certas modalidades, o contraíon é selecionado de sódio, potássio, amônio, alquilamônio tendo de um a quatro grupos C1-C4 alquila, cálcio,magnésio, ferro, prata, zinco, e cobre; sais particularmente adequados incluem amônio, potássio, sódio, cálcio e magnésio.
[00152] Bases orgânicas das quais sais podem derivados incluem, por exemplo, aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas, resinas de permuta de íon básico, e similares. Aminas orgânicas adequadas incluem isopropilamina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietilamina, lisina, meglumina, piperazina e trometamina.
[00153] Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados de uma porção básica ou acídica, por métodos químicos convencionais. Geralmente, tais sais podem ser preparados reagindo as formas de ácido livre destes compostos com uma quantidadeestequiométrica da base apropriada (tal como hidróxido de Na, Ca, Mg, ou K, carbonato, bicarbonato ou similares), ou reagindo formas de base livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica do ácido aproriado. Tais reações são tipicamente realizadas em água ou em um solvente orgânico, ou em uma mistura dos dois. Geralmente, o uso de meios não aquosos tipo éter, acetato de etila, tetrahidrofurano, tolueno, clorofórmio, diclorometano, metanol, etanol, isopropanol, ou acetonitrila é desejável, onde praticável.
[00154] Qualquer fórmula fornecida aqui destina-se a representar formas não rotuladas (isto é, compostos em que todos os átomos são apresentados em abundâncias isotópicas naturais, e não isotopicamente enriquecidos) bem como isotropicamente enriquecidos ou formas rotuladas dos compostos. Compostos isotopicamente enriquecidos ou rotulados têm estrutura ddescrita pelas fórmulas fornecidas aqui, exceto que pelo menos um átomo do composto é substituído por um átomo do mesmo elemento, porém tendo uma massa atômica ou número atômico diferente da massa atômica ou da distribuição de massa atômica que ocorre naturalmente. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados em compostos enriquecidos ou rotulados da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio,fósforo, flúor, e cloro, tais como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F 31P, 32P, 35S, 36Cl, 125I respectivamente. A invenção inclui vários compostos isotopicamente rotulados como definido aqui, por exemplo, aqueles em que isótopos radioativos, tais como 3H e 14C, ou aqueles em que isótoposnão radioativos, tais como 2H e 13C, estão presentes em níveis significantemente acima da abundância natural para aqueles isótopos. Estes compostos isotopicamente rotulados são úteis em estudos metabólicos(com 14C), estudos de reação cinética (com, por exemplo, 2H ou 3H), técnicas de detecção ou imageamento, tais como tomografia de emissão de pósitron (PET) ou tomografia computadorizada de emissão de fóton simples (SPECT) incluindo ensaios de distribuição de tecido de substrato ou fármaco, ou no tratamento radioativo de pacientes. Em particular, um 18F ou compostos rotulado podem ser particularmentedesejáveis para estudos de PET ou SPECT. Compostos isotopicamente rotulados de fórmula (I) podem ser geralmente preparados por técnicas convencionais conhecidas por aqueles versados na técnica ou por processos análogos àqueles descritos nos Exemplos Companhantes e Preparações usando um reagente isotopicamente rotulado apropriado no lugar do reagente não rotulado anteriormente empregado.
[00155] Além disso, a substituição com isótopos mais pesados, particularmentedeutério (isto é, 2H ou D) pode fornecer certas vantagens terapêuticas resultantes de maios estabilidade metabólica, por exemplo, requisitos de meia vida in vivo aumentada ou de dosagem reduzida ou uma melhora no índice terapêutico. Entende-se que o deutério neste contexto é considerado como um substituinte de um composto da fórmula (I) se ele é incorporado substancialmente acima do nível de abundância isotópica natural. A invenção inclui versões isotopicamente enriquecidas dos compostos, por exemplo, versões deuteradas bem como versões não deuteradas. Versões deuteradas podem ser deuteradas em um único simples, ou em múltiplos sítios.
[00156] O grau de incorporação de tal isótopo em um composto isotopicamente enriquecido, particularmente deutério, pode ser definido pelo fator de enriquecimento isotópico. O termo "fator de enriquecimentoisotópico"como usado aqui significa a relação entre a abundânciaisotópica do isótopo especificado em uma amostra, e a abundância natural do isótopo em uma amostra não enriquecida. Se um substituinte um composto desta invenção for denotado deutério, tal composto terá um fator de enriquecimento isotópico para cada átomo de deutério designado de pelo menos 3500 (52,5% de incorporação de deutério em cada átomo de deutério designado), pelo menos 4000 (60% de incorporação de deutério), pelo menos 4500 (67,5% de incorporação de deutério), pelo menos 5000 (75% de incorporação de deutério), pelo menos 5500 (82,5% de incorporação de deutério), pelo menos 6000 (90% de incorporação de deutério), pelo menos 6333,3 (95% de incorporação de deutério), pelo menos 6466,7 (97% de incorporação de deutério), pelo menos 6600 (99% de incorporação de deutério), ou pelo menos 6633,3 (99,5% de incorporação de deutério).
[00157] Solvatos farmaceuticamente aceitáveis de acordo com a invenção incluem aqueles em que o solvente de cristalização pode ser isotopicamente substituído, por exemplo, D2O, d6-acetona, d6-DMSO, bem como solvatos com solventes não enriquecidos.
[00158] Compostos da invenção, por exemplo, compostos de fórmula (I) que contêm grupos capazes de agir como doadores e/ou receptores para ligações de hidrogênio, podem ser capazes de formar cocristais com formadores de cocristais adequados. Estes cocristais podem ser preparados de compostos de fórmula (I) por procedimentos de formação de cocristal conhecidos. Tais procedimentos incluem moagem, aquecimento, cosublimação, coderretimento, ou contato em compostos de solução de fórmula (I) com o formador de cocristal sob condições de cristalização e isolamento de cocristais, desse modo formados. Formadores de cocristal adequados incluem aqueles descitos no WO 2004/078163. Consequentemente, a invenção fornece também cocristais compreendendo um composto de fórmula (I).
[00159] Como usado aqui, o termo "veículo farmaceuticamente aceitável"inclui quaisquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, tensoativos, antioxantes, conservantes (por exemplo, agentes antibacterianos, aentes antifúngicos), agentes isotônicos, aentes retardantes de absorção, sais, conservantes, estabilizantes de fármaco, aglutinantes, excipientes, agentes de desintegração, lubrificantes, aentes adoçantes, agentes aromatizantes, tinturas, e similares e combinações dos mesmos, como seria conhecido por aqueles conhecidos por aqueles versados na técnica (veja, por exemplo, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES,18a Edição Mack Printing Company, 1990, páginas 1289-1329). Exceto na medida em que qualquer veículo convencional é incompatível com o ingrediente ativo, seu uso nas composições terapêuticas ou farmacêuticas é contemplado.
[00160] O termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto da presente invenção refere-se a uma quantidade do composto da presente invenção que eliciará uma resposta biológica ou médica de um indivíduo, por exemplo, redução ou inibição de uma atividade de enzima ou proteína, ou melhora de sintomas, alívio de condições, diminuição ou retardo da progressão da doença, ou prevenção de uma doença, etc. em uma modalidade não limitante, o termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade do composto da presente invenção que, quando administrada a um indivíduo, é eficaz para (1) pelo menos parcialmente aliviar, inibir, impedir e/ou melhorar uma condição uma condição, ou um distúrbio ou uma doença (i) mediada por uma quinase tal como ERK1/2 ou (ii) associada com atividade de uma quinase tal como ERK1/2, ou (iii) caracterizada por atividade (normal ou anormal) de ERK1/2; ou (2) reduzir ou inibir a atividade de ERK1/2 ou (3) reduzir ou inibir a expressão de ERK1/2.
[00161] Em outra modalidade não limitante, o termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade do composto da presente invenção que, quando administrada a uma célula, ou um tecido, ou um material biológico não celular, ou um meio, é eficaz para pelo menos parcialmente reduzir ou inibir a atividade de ERK1/2, ou pelo menos parcialmente reduzir ou inibir a expressão de ERK1/2.
[00162] Como usado aqui, o termo "indivíduo"refere-se a um animal. Tipicamente o animal é um mamífero. Um indivíduo também refere-se a, por exemplo, primatas (por exemplo, humanos, homes ou mulheres), vacas, ovelha, cabras, cavalos, gatos, coelhos, ratos, camundongos, peixes, pássaros, e similares. Em certas modalidades, o indivíduo é um primata. Em modalidades específicas, o indivíduo é um humano.
[00163] Como usado aqui, o termo "inibir", "inibição"ou "inibindo" refere-se à redução ou supressão de uma determinada condição, atividade, efeito, sintoma, ou distúrbio, ou doença, ou um decréscimo significante na atividade de referência de um processo ou atividade biológica.
[00164] Como usado aqui, o termo "tratar", "tratando" ou "tratamento" de doença ou distúrbio refere-se em uma modalidade, 'melhora da doença ou distúrbio (isto é, diminuição ou interrupção ou redução do desenvolvimento da doença ou pelo menos um dos sintomas clínicos da mesma). Em outra modalidade "tratar", "tratando" ou "tratamento" refere-se ao alívio ou melhora de pelo menos um parâmetro físico incluindo aqueles que não podem ser discerníveis pelo paciente. Ainda em outra modalidade, "tratar", "tratando" ou "tratamento" refere-se à modulação da doença ou distúrbio, psicologicamente, (por exemplo, estabilização de um sintoma discernível), fisiologicamente, (por exemplo,estabilização de um parâmetro físico), ou ambos. Ainda em outra modalidade, "tratar", "tratando" ou "tratamento" refere-se ao retardo do desenvolvimento ou progressão da doença ou distúrbio.
[00165] Como usado aqui, um indivíduo está "em necessidade de" um tratamento se tal indivíduo espera se beneficiar biologicamente, medicamente ou em qualidade de vida de tal tratamento.
[00166] Como usado aqui, o termo "um, uma (a),""um, uma (an)," "o, a" e termos similares usados no contexto da presente invenção (especialmente no contexto das reivindicações) devem ser construídos para abranger tanto o singular quanto o plural, a menos que de outro modo indicado aqui, ou claramente contradito pelo contexto.
[00167] Todos os métodos descritos aqui podem ser realizados em qualquer ordem adequada, a menos que de outro modo indicado aqui, ou de outro modo claramente contradito pelo contexto. O uso de quaisquer e todos os exemplos, ou linguagem exemplar (por exemplo, "tal como") fornecidos aqui destina-se meramente a melhor iluminar a invenção e não colocar uma limitação sobre o escopo da invenção de outro modo reivindicado.
[00168] Qualquer átomo assimétrico (por exemplo, carbono ou similares) do composto(s) da presente invenção pode estar presente em configuração racêmica ou enantiomericamente enriquecida, por exemplo, a configuração (R)-, (S)ou (R,S)-. Em certas modalidades, cada átomo assimétrico tem pelo menos 50 % de excesso enantiomérico, pelo menos 60 % de excesso enantiomérico, pelo menos 70 % de excessoenantiomérico, pelo menos 80 % de excesso enantiomérico, pelo menos 90 % de excesso enantiomérico, pelo menos 95 % de excesso enantiomérico, ou pelo menos 99 % de excesso enantiomérico da confiuração (R)ou (S)-; isto é, para compostos oticamente ativos, é frequentemente preferido usar um enantiômero para a exclusão substancial do outro enantiômero. Substituintes em átomos com ligações duplas de carbono-carbono podem, onde possível, estar presentes na forma cis(Z)ou trans(E), e ambos são incçuídos na invenção, a menos que de outro modo indicado.
[00169] Consequentemente, como usado aqui um composto da presente invenção pode estar na forma de um dos possíveis isômeros, rotâmeros, atropisômeros, ou tautômeros ou como uma mistura dos mesmos, por exemplo, como isômeros (cis ou trans) substancialmente puros, diastereômeros, isômeros óticos (antípodas), racematos ou misturas dos mesmos. 'Substancialmente puro' ou 'substancialmente livre de outros isômeros'como usado aqui significa que o produto contém menos do que 5%, e preferivelmente menos do que 2%, de outros isômeros com relação à quantidade do isômero preferido, por peso.
[00170] Quaisquer misturas resultantes de isômeros podem ser separadas com base nas diferenças fisioquímicas dos constituintes, nos isômeros óticos ou geométricos puros ou substancialmente puros, diastereômeros, racematos, por exemplo, por cromatografia e/ou cristalização fracional.
[00171] Quaisquer racematos resultantes de produtos finais ou intermediários podem ser resolvidos no antípodas óticos por métodos conhecidos, por exemplo, por separação dos sais diastereoméricos dos mesmos, obtidos com uma base ou ácido oticamente ativo, e liberando o composto básico ou acídico oticamente ativo. Em particular, uma porção básica pode, desse modo, ser empregada para resolver os compostos da presente invenção em seus antípodas óticos, por exemplo, por cristalização fracional de um sal formado com um ácido oticamente ativo, por exemplo, ácido tartárico, ácido tartárico de dibenzoíla, ácido tartárico de diacetila, ácido tartárico de di-O,O'-ptoluoíla, ácido mandélico, ácido málico ou ácido canfor-10-sulfônico. Produtos racêmicos podem também ser resolvidos por cromatografia quiral, por exemplo, cromatografia líquida de pressão elevada (HPLC) usando um adsorvente quiral.
[00172] Além disso, os compostos da presente invenção, incluindo seus sais, podem também ser obtidos na forma de seus hidratos, ou incluem outros solventes usados para sua cristalização. Os compostos da presente invenção podem inerentemente ou por projeto formar solvatos com solventes farmaceuticamente aceitáveis (incluindo água); portanto, entende-se que a invenção abrange tanto as formas solvatada e não solvatada. O termo "solvato" refere-se a um complexo molecular de um composto da presente invenção (incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos) com uma ou mais moléculas de solvente. Tais moléculas de solvente são comumente usadas na técnicafarmacêutica, que são conhecidas ser inócuas ao recipiente, por exemplo, água, etanol, e similares. O termo "hidrato" refere-se ao complexo onde a molécula de solvente é água.
[00173] Os compostos da presente invenção, incluindo sais, hidratos e solvatos dos mesmos, podem inerentemente ou por projeto formar polimorfos.
[00174] Os compostos de fórmula (I) podem ser preparados de acordo com os Esquemas e Exemplos fornecidos aqui. Os esquemas, em alguns casos, ilustram a preparação de compostos em que L é metileno ou um grupo alquileno substituído, porém métodos para preparação de benzamidas adequadas onde L é uma ligação ou outras opções abrangidas pela fórmula (I) são facilmente evidentes para a pessoa versada em vista da maioria dos métodos conhecidos para produção dos intermediários de benzamida requeridos, assim estes métodos são igualmente aplicáveis à preparação de compostos com outras modalidades de L. Esquema A.
Figure img0013
[00175] Os precursores A e B podem ser acoplados usando condiçõesde formação de ligação de peptídeo conhecidas para fornecer o intermediário C. O intermediário C pode ser acoplado com um ácido borônico de heteroarila tal como o intermediário G sob condições assistidas por paládio em conhecidas para formar produtos de fórmula H, que são compostos de Fórmula (I). Os compostos de aminopiridina/pirazina requeridos (G) para acoplamento com o composto C podem ser preparados de bromopiridina/pirazinas introduzindo-se um grupo R5 desejado usando química de paládio (veja, intermediário E acima), em seguida brominação adjacente ao grupo amino e convertendo-se no ácido borônico ou éster (G). Esquema C ilustra a aplicaçãodesta sequência, incluindo hidrogenação de uma olefina para chegar em um composto de fórmula G, onde R5é um tetra-hidropirano.
[00176] Alternativamente, como mostrado no esquema B, o composto C pode ser convertido em um ácido arilborônico ou éster, e pode ser acoplado ao brometo de heteroarila F, novamente usando condições de acoplamento catalisado por paládio conhecidas, para fornecer os compostos da invenção. Esquema B.
Figure img0014
[00177] O intermediário F pode ser preparado por métodos conhecidos na técnica e métodos descritos aqui. Numerosos compostos de Fórmula F podem ser sintetizados de amino-bromo-piridinas e pirazinas conhecidos, como ilustrado no esquema C. Vários ésteres de ácido aril, heteroaril, e vinil borônico podem ser acoplado à bromopiridina ou bromopirazina usando catalisadores de paládio no estado em que se encontram conhecidos na técnica, para introduzir um desejado grupo R5. Este método é especialmente útil para introduzir grupos arila ou heteroarila como R5 na Fórmula (I). Onde o produto de acoplamento inicial introduz um grupo parcialmente insaturado na posição R5, como ilustrado no esquema C, a insaturação pode ser reduzida por métodos convencionais para fornecer compostos tendo um grupo saturado (por exemplo, heterociclila ou cicloalquila) como R5. Esta opção é ilustrada no esquema C, onde a preparação de um composto tendo 4tetra-hidropiranila como R5é mostrada. Esquema C.
Figure img0015
[00178] O esquema D ilustra outra rotina de síntese, onde o grupo que corresponde a R5 na Fórmula (I) é ligado após a piridina ou pirimidina é acoplada à porção de benzamida. O método permite a incorporação de uma ampla disposição de grupo arila, heteroarila ou vinílicos (insaturados) R5, e como ilustrado aqui, um grupo vinílico R5 pode ser reduzido após reação de acoplamento para fornecer um grupo saturado R5. Novamente, a rotina é representada como um grupo benzílico no nitrogênio de amida, correspondendo a L = alquileno opcionalmente substituído, e R1 = fenila opcionalmente substituído, porém devido à ampla disponibilidade de materiais de partida e métodos para preparar os intermediários de amida, é igualmente aplicável para a síntese de compostos com outros grupos L e R1. Visto que o grupo heroarila é acoplado ao anel fenila de benzamida, R5 pode ser ligado por acoplamento de paládio, onde o éster / ácido borônico pode estar sobre R5 ou sobre o anel aminopiridina / aminopirazina. R1* neste esquema representa substituintes opcionais no grupo fenila, selecionado para corresponder a substituintes em R1 na Fórmula (I). Esquema D.
Figure img0016
[00179] O esquema E ilustra um método para preparar compostos de fórmula (I) iniciando de um 3-bromo-2-aminopiridina ou um correspondente pirazina, e um éster de benzoato substituído por um éster ou ácido borônico. Após acoplamento para formar um grupo biarila, a aminopiridina pode ser bromada facilmente sob condições amenas, e o grupo amida desejado pode ser preparado. R5 pode ser introduzido por substituição de Br catalizada por paládio do anel pirimidina. Aqui, novamente, o éster de ácido borônico pode estar sobre o anel aminopiridina, ou sobre o grupo arila, heteroarila ou vinílico R5. Esquema E.
Figure img0017
[00180] A invenção também inclui qualquer variante dos presentes processos em que um intermediário obtenível em qualquer estágio dos mesmos é usado como material de partida e as etapas restantes são realizadas, nas quais os materiais de partida são formados in situ sob as condições de reação, ou nas quais os componentes de reação são usados na forma de seus sais ou material oticamente puro. Os compostos e intermediários da invenção podem ser interconvertidos de acordo com métodos geralmente conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00181] Em outro aspecto, a invenção fornece intermediários úteis para a síntese dos compostos de fórmula (I), incluindo compostos de fórmula (II):
Figure img0018
[00182] em que Z2 é CH ou N;
[00183] G é Br ou -B(OR21)2;
[00184] onde cada R21é H ou C1-4 alquila, ou dois R21 empregados junto com a ligação -O-B-Oà qual eles são ligados formam um éster de borato cíclico;
[00185] J é H, F, Cl ou Me; e
[00186] R20é H ou C1-6alquil.
[00187] Em algumas modalidades, J é vantajosamente fluoro (F), e em outras modalidades J é Cl. Em algumas modalidades G é um grupo de éster de borato cíclico tal como 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-ila ou 1,3,2-dioxaborolan-2-ila.
[00188] Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável. A composição farmacêutica pode ser formulada para rotinas de administração particulares tal como administração oral, administração parenteral, e administração retal, e similares. Além disso, as composições farmacêuticas da presente invenção podem ser preparadas em uma forma sólida (incluindo sem limitação cápsulas, comprimidos, pílulas, grânulos,pós ou supositórios), ou em uma forma líquida (incluindo sem limitação soluções, suspensões ou emulsões). Pílulas ou comprimidos podem ser revestidas por película ou revestidas por entérico de acordo com métodos conhecidos na técnica. As composições farmacêuticas podem ser submetidas a operações farmacêuticas convencionais, tal como esterilização e/ou podem conter diluentes inertes convencionais, agentes lubrificantes, ou agentes de tamponamento, bem como adjuvantes, tais como preservativos, estabilizantes, agentes umectantes, emulsificantes e tampões, etc.
[00189] Tipicamente, as composições farmacêuticas compreendendo compostos da invenção são comprimidos ou cápsulas de gelatina compreendendo um composto de fórmula (I) como um ingrediente ativo junto com um ou mais dos seguintes excipientes:
[00190] a) diluentes, por exemplo, lactose, dextrose, sacarose, manitol, sorbitol, celulose e/ou glicina;
[00191] b) lubrificantes, por exemplo, sílica, talco, ácido esteárico, seu sal de magnésio ou cálcio e/ou polietilenoglicol; para comprimidos também
[00192] c) aglutinantes, por exemplo, silicato de alumínio de magnésio, pasta de amido, gelatina, tragacanto, metilcelulose, carboximetilcelulose sódica e/ou polivinilpirrolidona; se desejado
[00193] d) desintegrantes, por exemplo, amidos, ágar, ácido algínico ou seu sal de sódio, ou misturas efervescentes; e/ou
[00194] e) absorventes, colorantes, aromatizantes e adoçantes.
[00195] Seleção de cápsulas adequadas para encapsulação e de excipientes adequados para formulação do composto de fórmula I para preparar formas de dosagem oral é dentro do nível ordinário de experiência. Comprimidos podem ser revestidos por película ou revestidos por entérico usando métodos conhecidos na técnica.
[00196] Composições adequadas para administração oral incluem uma quantidade eficaz de um composto da invenção na forma de comprimidos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós ou grânulosdispersíveis, emulsão, cápsulas duras ou macias, ou xaropes ou elixires. Composições destinadas ao uso oral são preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica para a fabricação de composições farmacêuticas e tais composições podem conter um ou mais agentes selecionados do grupo que consiste em agentes adoçantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes e agentes conservantes a fim de fornecer preparações farmaceuticamente elegantes e palatáveis. Os comprimidos podem conter o ingrediente ativo em mistura com excipientes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos que são adequados para a fabricação de comprimidos, incluindo aqueles listados acima. Estes excipientes são, por exemplo, diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e agentes de desintegração, por exemplo, amido de milho, ou ácido algínico; agentes de ligação, por exemplo, amido, gelatina ou acácia; e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos são não revestidos ou revestidos por técnicas conhecidas para retardar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e desse modo fornecer uma ação prolongada durante um período mais longo. Por exemplo, um material de retardo do tempo, tal como monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila pode ser empregado.Formulações para uso oral podem ser apresentadas como cápsulas de gelatina duras, nas quais o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulim, ou como cápsulas de gelatina macias nas quais o ingrediente ativo é misturado com água ou um meio oleoso, por exemplo,óleo de amendoim, parafina líquida ou óleo de oliva, para formar uma solução, emulsão ou dispersão dentro da cápsula macia.
[00197] Certas composições injetáveis são soluções ou suspensões isotônicas aquosas, e os supositórios são vantajosamente preparados de emulsões ou suspensões graxas. As referidas composições podem ser esterilizadas e/ou conter adjuvantes, tais como agentes preservantes, estabilizantes, umectantes ou emulsificantes, promotores de solução, sais para regulação da pressão osmótica e/ou tampões. Além disso, elas podem também conter outras substâncias terapeuticamente valiosas. As referidas composições são preparadas de acordo com mistura convencional, métodos de granulação ou revestimento, respectivamente, e contêm cerca de 0,1 a 75%, ou contêm cerca de 1 a 50%, do ingrediente ativo.
[00198] Composições adequadas para aplicação transdérmica incluem uma quantidade eficaz de um composto da invenção com um veículo adequado. Veículos adequados para liberação transdérmica incluem solventes farmacologicamente aceitáveis absorvíveis para auxiliar a passagem através da pele do hospedeiro. Por exemplo, dispositivostransdérmicos são na forma de uma bandagem compreendendo um membro de reforço, um reservatório contendo o composto opcionalmente com veículos, opcionalmente uma barreira de controle da taxa para liberar o composto da pele do hospedeiro em uma taxa controlada e predeterminada durante um período de tempo prolongado, e recursos para prender o dispositivo na pele.
[00199] Composições adequadas para aplicação tópica, por exemplo,à pele e olhos, incluem soluções aquosas, suspensões, unguentos, cremes, géis ou formulações vaporizáveis, por exemplo, para liberação por aerossol ou similares. Tais sistemas de liberação tópica, em particular, serão apropriados para aplicação dérmica, por exemplo, para o tratamento de câncer da pele, por exemplo, para uso profilático em cremes solares, loções, sprays e similares. Eles são desse modo particularmente adequados para uso em formulações tópicas, incluindocosméticas, bem conhecidas na técnica. Tais podem conter solubilizantes, estabilizantes, agentes de realce da tonicidade, tampões e preservativos.
[00200] Como usado aqui uma aplicação tópica pode também referir-se a uma inalação ou a uma aplicação intranasal. Eles podem ser convenientemente liberados na forma de um pó seco (sozinhos, como uma mistura, por exemplo, uma mistura seca com lactose, ou uma partícula de componente misto, por exemplo, com fosfolipídios) de um inalador de pó seco ou uma apresentação de spray de aerossol de um recipiente pressurizado, bomba, spray, atomizador ou nebulizador, com ou sem o uso de um propelente adequado.
[00201] A presente invenção também fornece composições farmacêuticas anidrosas e formas de dosagem compreendendo os compostos da presente invenção como ingredientes ativos, onde é desejável minimizar a exposição do composto à água antes da administração. As composições farmacêuticas anidrosas e formas de dosagem da invenção podem ser preparadas usando ingredientes contendo baixa umidade ou anidrosos ou condições de baixa umidade. Uma composição farmacêutica anidrosa pode ser preparada e armazenada de modo que sua natureza anidrosa seja mantida. Consequentemente, composições anidrosas são embaladas usando materiais conhecidos por prevenirem exposição à água, de modo que elas possam ser incluídas em kits de fórmula adequados. Exemplos de embalagem adequada incluem, porém não estão limitados às folhas hermeticamente seladas, plásticos, recipientes de dose unitária (por exemplo, frasconetes), embalagens de bolha, e embalagens de tira.
[00202] A invenção também fornece composições farmacêuticas e formas de dosagem que compreendem um ou mais agentes que reduzem a taxa pela qual o composto da presente invenção como um ingrediente ativo irá se decompor. Tais agentes, que são referidos aqui como "estabilizantes," incluem, porém não estão limitados a, antioxidantes tais como ácido ascórbico, tampões de pH, ou tampões de sal, etc.
[00203] Os compostos de fórmula I em forma livre ou em forma de sal, exibem propriedades farmacológicas valiosas, por exemplo, eles modulam ou inibem de ERK1 e/ou ERK2, como indicado por dados teste fornecidos nas seguintes seções, e são, portanto, indicados para terapia como descrito aqui, ou para uso como produtos químicos de pesquisa, por exemplo, como compostos ferramenta para outro entendimento dos efeitos de inibição de EKR1/2 ou inibição de uma série de reação bioquímica (MAPK).
[00204] Desse modo, como uma outra modalidade, a presente invenção fornece o uso de um composto de fórmula (I) ou qualquer uma das modalidades no escopo de fórmula (I) como descrito aqui, em terapia, ou para a fabricação de um medicamento. Em uma outra modalidade, a terapia ou medicamento é para um doença que pode ser tratada por inibição de ERK1 e/ou ERK2. Em outra modalidade, os compostos da invenção são úteis para tratar cânceres, incluindo, porém não limitados àqueles mencionados aqui.
[00205] Em outra modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de uma doença que é tratável por inibição de ERK1 e/ou ERK2, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I) ou (IA) ou qualquer uma das modalidades da invenção como descrito aqui. Em uma outra modalidade, a doença é selecionada das listas acima mencionadas de condições adequadas. O método tipicamente compreende administrar uma quantidade eficaz de um composto como descrito aqui ou uma composição farmacêutica compreendendo tal composto a um indivíduo em necessidade de tal tratamento. O composto pode ser administrado por qualquer método adequado tal como aqueles descritos aqui, e a administração pode ser repetida em intervalos selecionados por um médico do tratamento. A invenção desse modo fornece um composto de fórmula I e IA ou qualquer subgênero do mesmo como descrito aqui para uso para tratar uma condição mediada por ou associada com níveis excessivos ou indesejados de atividade de ERK1/2, incluindo aqueles mencionados acima.
[00206] Desse modo, como uma outra modalidade, a presente invenção fornece o uso de um composto de fórmula (I), ou qualquer uma das modalidades de tais compostos descritos aqui, para a fabricação de um medicamento. Em uma outra modalidade, o medicamento é para tratamento de uma doença que pode ser tratada por inibição de ERK1 e/ou ERK2. Em outra modalidade, a doença é um câncer, por exemplo, um câncer selecionado da lista anteriormente mencionada, adequadamente.
[00207] Em algumas modalidades, os compostos são usados em combinação com um ou mais agentes coterapêuticos. Agentes coterapêuticos adequados incluem agentes anticâncer, analgésicos, agentes anti-inflamatórios, e similares. Em algumas modalidades, as composições incluem um agente coterapêutico que age sobre a série de reação de RAF, tal como um inibidor de B-RAF ou um inibidor de C-Raf.
[00208] Em uma modalidade, a invenção fornece um kitcompreendendo duas ou mais composições farmacêuticas separadas, pelo menos uma das quais contém um composto de fórmula (I). Em uma modalidade, o kit compreende meios para separadamente reter as referidascomposições, tais como um recipiente, garrafa dividida, ou pacote de folha dividida. Um exemplo de tal kité uma embalagem de bolha, como tipicamente usada para a embalagem de comprimidos, cápsulas e similares.
[00209] O kit da invenção pode ser usado para administrar diferentes formas de dosagem, por exemplo, oral e parenteral, para administrar as composições separadas em diferentes intervalos de dosagem, ou para titular as composições separadas umas contra as outras. Para auxiliar a complacência, o kit da invenção tipicamente compreende direções para a administração.
[00210] Nas terapias de combinação da invenção, o composto da invenção e o outro agente coterapêutico podem ser fabricados e/ou formulado pelos mesmos fabricantes ou fabricantes diferentes. Além disso, o composto da invenção e o outro produto terapêutico podem ser introduzidos juntos em uma terapia de combinação: (i) antes da liberação do produto de combinação pelos médicos (por exemplo, no caso de um kit compreendendo o composto da invenção e o outro agente terapêutico); (ii) pelo próprio médico (ou sob a orientação do médico) pouco antes da administração; (iii) no próprio paciente, por exemplo, durante administração sequencial do composto da invenção e do outro agente terapêutico.
[00211] Consequentemente, a invenção fornece o uso de um composto de fórmula (I) para tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o medicamento é preparado para administração com outro agente terapêutico. A invenção também fornece o uso de outro agente coterapêutico para tratamento de uma doença ou condição, em que o coagente é administrado com um composto de fórmula (I).
[00212] A invenção também fornece um composto de fórmula (I) para uso em um método de tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o composto de fórmula (I) é preparado para administração com outro agente terapêutico. A invenção também fornece outro agente coterapêutico para uso em um método de tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o outro agente coterapêutico é preparado para administração com um composto de fórmula (I). A invenção também fornece um composto de fórmula (I) para uso em um método de tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o composto de fórmula (I) é administrado com outro agente coterapêutico. A invenção também fornece outro agente coterapêutico para uso em um método de tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o outro agente coterapêutico é administrado com um composto de fórmula (I).
[00213] A invenção também fornece o uso de um composto de fórmula (I) para tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o paciente é aquele tratado anteriormente ou subsequentemente (por exemplo, em um período de 24 horas) com outro agente terapêutico. A invenção também fornece o uso de um agente coterapêutico para tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o paciente foi anteriormente (por exemplo, em um período de 24 horas) tratado com um composto de fórmula (I).
[00214] Em uma modalidade, o outro agente terapêutico (agente coterapêuticos ou apenas coagente) é um composto útil para o tratamento de um câncer, e é tipicamente um fármaco aprovado por FDA aprovado para o tratamento de pelo menos um tipo de câncer. Agentescoterapêuticos adequados incluem erlotinibe, bortezomibe, fulvestrante, sunitibe imatinibe mesilato, letrozol, finasunate, platinas tais como oxaliplatina, carboplatina, e cisplatina, finasunato, fluorouracila, rapamicina, leucovorina, lapatinibe, lonafamibe, sorafenibe, gefitinibe, capntotecina, topotecan, briostatina, adezelesina, antraciclina, carzelesina, bizelesina, dolastatina, auristatinas, duocarmicina, eleuterobina, taxóis tais como paclitaxel ou docetaxel, ciclofasfamida, doxorubicina, vincristina, prednisona ou prednisolona, outros agentes de alquilação tais como mecloretamina, clorambucila, e ifosfamida, antimetabólitos tais como azatioprina ou mercaptopurina, outros inibidores de microtúbulo (alcaloides de vinca como vincristina, vinblastina, vinorelbina e vindesina, bem como taxanos), podofilotoxinas (etoposídeo, teniposídeo, fosfato de etoposído, e epipodofilotoxinas), inibidores de topoisomerase, outras citotoxinas tais como actinomicina, daunorubicina, valrubicina, idarubicina, edrecolomabe, epirubicina, bleomicina, plicamicina, mitomicina, bem como outros anticorpos anticâncer (cetuximabe, bevacizumabe, ibritumomabe, abagovomabe, adecatumumabe, afutuzumabe, alacizumabe, alentuzumabe, anatumomabe, apolizumabe, bavituximabe, belimumabe, bivatuzumabe mertansina, blinatumomabe, brentuximabe vedotina, cantuzumabe mertansina, catumazomabe, cetuximabe, citatuzumabe bogatox, cixutumumabe, clivatuzumabe tetraxetano, conatumumabe, dacetuzumabe, daclizumabe, detumomabe, ecromeximabe, edrecolomabe, elotuzumabe, epratuzumabe, ertumaxomabe, etaracizumabe, farletuzumabe, figitumumabe, fresolimumabe, galiximabe, gembatumumabe vedotina, gentuzumabe, ibritumomabe tiuxetano, inotuzumabe ozogamicina, intetumumabe, ipilimumabe, iratumumabe, labetuzumabe, lexatumumabe, lintuzumabe, lucatumumabe, lumilisimabe, mapatumumabe, matuzumabe, milatuzumabe, mitumomabe, nacolomabe tafenatox, naptumomabe estafenatox, necitumumabe, nimotuzumabe, ofatumumabe, olaratumabe, oportuzumabe monatox, oregovomabe, panitumumabe, pentumomabe, pertuzumabe, pintumomabe, pritumumabe, ramucirumabe, rilotumumabe, robatumumabe, rituximabe, sibrotuzumabe, tacatuzumabe tetraxetano, taplitumomabe paptox, tenatumomabe, ticilimumabe, tigatuzumabe, tositumomabe ou 131I-tositumomabe, trastuzumabe, tremelimumabe, tuocotuzumabe celmoleucina, veltuzumabe, visilizumabe, volocixumabe, votumumabe, zalutumumabe, zanolimumabe, IGN-101, MDX010,ABX-EGR, EMD72000, ior-t1, MDX-220, MRA, H-11 scFv, huJ591, TriGem, TriAbe, R3, MT-201, G-250, ACA-125, Onyvax-105, CD:960,Cea-Vac, BrevaRex AR54, IMC-1C11, GlioMab-H, ING-1, antiLCG MAbs, MT-103, KSB-303, Therex, KW2871, anti-HMI.24, Anticorpo anti-PTHrP, 2C4, SGN-30, TRAIL-RI MAbe, anticorpo de câncer de próstata, H22xKi-r, ABX-Mai, Imuteran, Monopharm-C), e conjugados de anticorpo-fármaco compreendendo qualquer um dos agentes acima (especialmente auristatinas MMAE e MMAF, maitansinoides como DM1, caliqueamicinas, ou várias citoxinas). Produtos coterapêuticos preferidos, a menos que de outro modo especificado, incluem vemurafinibe, debrafinibe, LGX818, trametinibe, MEK162, LEE011, PD-0332991, panobinostate, verinostate, romidepsina, cetuximabe, gefitinibe, erlotinibe, lapatinibe, panitumumabe, vandetanibe, INC280, everolimo, simolimo, BMK120, BYL719, e CLR457.
[00215] A composição farmacêutica ou combinação da presente invenção pode ser em dosagem unitária de cerca de 1 a 2000 mg de ingrediente(s) ativo para um indivíduo de cerca de 50 a 70 kg, ou cerca de 1 a 500 mg ou cerca de 1 a 250 mg ou cerca de 1 a 150 mg ou cerca de 0,5 a 100 mg, ou cerca de 1 a 50 mg de ingredientes ativos. A dosagem terapeuticamente eficaz de um composto, a composição farmacêutica, ou as combinações das mesmas, é dependente da espécie do paciente, do peso corporal, e condição individual, do distúrbio ou doença sendo tratada e da gravidade dos mesmos. Um médico, clínico ou veterinário versado na técnica pode facilmente determinar a quantidade eficaz de cada um dos ingredientes ativos necessários para impedir, tratar ou inibir o progresso do distúrbio ou doença.
[00216] As propriedades de dosagem acima citadas são testes in vitro e in vivodemonstráveis usando vantajosamente mamíferos, por exemplo, camundongos, ratos, cachorros, macacos, ou órgãos, tecido, e preparações isolados dos mesmos. Os compostos da presente invenção podem ser aplicados in vitro na forma de soluções, por exemplo,soluções aquosas, e in vivo entericamente, parenteralmente, vantajosamente intravenosamente, por exemplo, como uma suspensão ou em solução aquosa. A dosagem in vitro pode variar entre cerca de concentrações de 10 a 3 molares e 10 a 9 molares. Uma quantidade terapeuticamente eficaz in vivo pode variar dependendo da rotina de administração, entre cerca de 0,1-500 mg/kg, ou entre cerca de 1-100 mg/kg.
[00217] O composto da presente invenção pode ser administrado simultaneamente com, ou antes ou após, um ou mais agentes coterapêuticos, também referido aqui como coagente(s). O composto da presente invenção pode ser administrado separadamente, por rotina igual ou diferente de administração, ou juntamente na mesma composição farmacêutica como o coagente(s).
[00218] Em uma modalidade, a invenção fornece um produto compreendendo um composto de fórmula (I) e pelo menos um outro coagente terapêutico como uma preparação combinada para uso simultâneo, separado ou sequencial em terapia. Em uma modalidade, a terapia é o tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, tal como câncer. Produtos fornecidos como uma preparação combinada incluem uma composição compreendendo o composto de fórmula (I) e o outro agente coterapêutico(s) juntos na mesma composição farmacêutica, ou o composto de fórmula (I) e o outro agente coterapêutico(s) em forma separada, por exemplo, na forma de um kit.
[00219] Em uma modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I) e outro agente coterapêutico(s). Opcionalmente, a composição farmacêutica pode compreender um veículo farmaceuticamente aceitável, como descrito acima.
[00220] Em uma modalidade, a invenção fornece um kitcompreendendo duas ou mais composições farmacêuticas separadas, pelo menos uma das quais contém um composto de fórmula (I). Em uma modalidade, o kit compreende meios para separadamente manter as referidascomposições, tais como um recipiente, garrafas divididas, embalagem de folha dividida. Um exemplo de tal kité uma embalagem de bolha, como tipicamente usado para a embalagem de comprimidos, cápsulas e similares.
[00221] O kit da invenção pode ser usado para administração de diferentes formas de dosagem, por exemplo, oral e parenteral, para administração das composições separadas em diferentes intervalos de dosagem, ou para a titulação de composições separadas umas contra as outras. Para auxiliar a complacência, o kit da invenção tipicamente compreende direções para administração.
[00222] Nas terapias de combinação da invenção, o composto da invenção e o outro agente coterapêutico podem ser fabricados e/ou formulados pelos mesmos fabricantes ou fabricantes diferentes. Além disso, o composto da invenção e o outro produto terapêutico podem ser introduzidos juntos em uma terapia de combinação: (i) antes da liberação do produto de combinação pelos médicos (por exemplo, no caso de um kit compreendendo o composto da invenção e o outro agente terapêutico); (ii) pelo próprio médico (ou sob a orientação do médico) pouco antes da administração; (iii) no próprio paciente, por exemplo, durante a administração sequencial do composto da invenção e do outro agente terapêutico.
[00223] Consequentemente, a invenção fornece o uso de um composto de fórmula (I) para tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o medicamento é preparado para administração com outro agente terapêutico. A invenção também fornece o uso de outro agente coterapêutico para tratamento de uma doença ou condição, em que o medicamento é administrado com um composto de fórmula (I). Agentes coterapêuticos adequados para uso com os compostos da invenção são tipicamente selecionados com base na condição para tratamento. Por exemplo, no tratamento de melanoma, o agente coterapêutico pode ser selecionado de Aldesleucina, Dabrafenibe, Dacarbazine, DTIC-Dome (Dacarbazina), Intron A (Interferon Alfa-2b recombinante), Ipilimumabe, Mekinist (Trametinibe), Peginterferon Alfa-2b, PEG-Intron (Peginterferon Alfa-2b), Proleucina (Aldesleucina), Interferon Alfa-2b recombinante, Sylatron (Peginterferon Alfa-2b), Tafinlar (Dabrafenibe), Trametinibe, Vemurafenibe, Yervoy (Ipilimumabe), e Zelboraf (Vemurafenibe). Para o tratamento de câncer ovariano, o agente coterapêutico pode ser selecionado de Adriamicina PFS (cloridrato de Doxorubicina), Adriamicina RDF (cloridrato de Doxorubicina), Carboplatina, Clafen (Ciclofosfamida), Cisplatina, Ciclofosfamida, Citoxan (Ciclofosfamida), cloridrato de Doxorubicina, Dox-SL (lipossoma de cloridrato de Doxorubicina), DOXIL (lipossoma de cloridrato de Doxorubicina), lipossoma de cloridrato de Doxorubicina, Evacet (lipossoma de cloridrato de Doxorubicina), Cloridrato de gencitabina, Gemzar (cloridrato de Gencitabina), Hicantina (cloridrato de Topotecano), LipoDox (lipossoma de cloridrato de Doxorubicina), Neosar (Ciclofosfamida), Paclitaxel, Paraplat (Carboplatin), Paraplatina (Carboplatina), Platinol (Cisplatina), Platinol-AQ (Cisplatina), Taxol (Paclitaxel), e Cloridrato de Topotecano. Para o tratamento de câncer de tiroide, o agente coterapêutico pode ser selecionado de Adriamicina PFS (cloridrato de Doxorubicina), Adriamicina RDF (cloridrato de Doxorubicina), Cabozantinibe-S-Malato, Caprelsa (Vandetanibe), Cometriq (Cabozantinibe-S-Malato), cloridrato de Doxorubicina , e Vandetanibe. Para o tratamento de câncer de cólon, os coterapêuticos podem ser selecionados de Adrucil (Fluorouracila), Avastina (Bevacizumabe), Bevacizumabe, Camptosar (cloridrato de Irinotecano), Capecitabina, Cetuximabe, Efudex (Fluorouracil), Eloxatina (Oxaliplatina), Erbitux (Cetuximabe) ,Fluoroplex (Fluorouracil), Fluorouracila, cloridrato de Irinotecano, Cálcio de Leucovorina, Oxaliplatina, Panitumumabe, Regorafenibe, Stivarga (Regorafenibe), Vectibix (Panitumumabe), Wellcovorin (cálcio de Leucovorina), Xeloda (Capecitabina), Zaltrap (Ziv-Aflibercept), e Ziv-Aflibercept. Para o tratamento de câncer de pulmão, os coterapêuticos podem ser selecionados de Abitrexate (Metotrexato), Abraxano (formulação de nanopartícula estabilizada por Paclitaxel Albumina), Afatinibe Dimaleato, Alimta (Pemetrexede Dissódico), Avastina (Bevacizumabe), Bevacizumabe, Carboplatina, Cisplatina, Crizotinibe, cloridrato de Erlotinibe, Folex (Metotrexato), Folex PFS (Metotrexato), Gefitinibe, Gilotrif (Afatinibe Dimaleato), cloridrato de gencitabina, Gemzar (cloridrato de Gencitabina), Iressa (Gefitinib), Metotrexato, Metotrexato LPF (Metotrexato), Mexate (Metotrexato), Mexate-AQ (Metotrexato), Paclitaxel, Formulação de Nanopartícula Estabilizada por Paclitaxel Albumina, Paraplate (Carboplatina), Paraplatina (Carboplatina), Pemetrexede dissódico, Platinol (Cisplatina), Platinol-AQ (Cisplatina), Tarceva (cloridrato de Erlotinibe), Taxol (Paclitaxel), e Xalkori (Crizotinibe). Para o tratamento de câncer pancreático, o agente coterapêutico pode ser selecionado de Adrucil (Fluorouracil), Efudex (Fluorouracil), cloridrato de Erlotinibe, Fluoroplex (Fluorouracil), Fluorouracil, cloridrato de Gencitabina, Gemzar (cloridrato de Gencitabina), Mitomicina C, Mitozitrex (Mitomicina C), Mutamicina (Mitomicina) e Tarceva (cloridrato de Erlotinibe. Para o tratamento de câncer cervical, o agente coterapêutico pode ser selecionado de Blenoxano (Bleomicina), Bleomicina, Cisplatina,Hicantina (cloridrato de Topotecano), Platinol (Cisplatina), Platinol-AQ (Cisplatina), e cloridrato de Topotecano. Para o tratamento de câncer de cabeça ou pescoço, o agente coterapêutico pode ser selecionado de Abitrexate (Metotrexato), Adrucil (Fluorouracil), Blenoxano (Bleomicina), Bleomicina, Cetuximabe, Cisplatina, Docetaxel, Efudex (Fluorouracil), Erbitux (Cetuximabe), Fluoroplex (Fluorouracil), Fluorouracil, Folex (Metotrexato), Folex PFS (Metotrexato), Metotrexato, Metotrexato LPF (Metotrexato), Mexato (Metotrexato), Mexate-AQ (Metotrexato), Platinol (Cisplatin), Platinol-AQ (Cisplatin), e Taxotere (Docetaxel). Para o tratamento de leucemia, incluindo CMML, o agente coterapêutico pode ser selecionado de Bosulif (Bosutinibe), Bosutinibe, Clafen (Ciclofosfamida), Ciclofosfamida, Citarabina, Citosar-U (Citarabine), Citoxano (Ciclofosfamida), Dasatinibe, Gleevec (Imatinibe mesilato ), Iclusig (cloridrato de Ponatinibe), Imatinibe Mesilato, Neosar (Ciclofosfamida), Nilotinibe, mepessuccinato de Omacetaxina, cloridrato de Ponatinibe, Sprycel (Dasatinibe), Synribo (mepessuccinato de Omacetaxina), Tarabina PFS (Citarabina), e Tasigna (Nilotinibe).
[00224] A invenção também fornece um composto de fórmula (I) para uso em um método de tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o composto de fórmula (I) é preparado para administração com outro agente terapêutico. A invenção também fornece outro agente coterapêutico para uso em um método de tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o outro agente coterapêutico é preparado para administração com um composto de fórmula (I). A invenção também fornece um composto de fórmula (I) para uso em um método de tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o composto de fórmula (I) é administrado com outro agente coterapêutico. A invenção também fornece outro agente coterapêutico para uso em um método de tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o outro agente coterapêutico é administrado com um composto de fórmula (I).
[00225] A invenção também fornece o uso de um composto de fórmula (I) para tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o paciente foi anteriormente (por exemplo, dentro de 24 horas) tratada com outro agente terapêutico. A invenção também fornece o uso de outro agente terapêutico para tratamento de uma doença ou condição mediada por ERK1 e/ou ERK2, em que o paciente foi anteriormente (por exemplo, em um período de 24 horas) tratado com um composto de fórmula (I).
[00226] Combinações individuais específicas que podem fornecer benefícios de tratamento particulares incluem um composto da invenção com pelo menos um composto selecionado de inibidores de BRAF, MEK, CDK4/6, SHP-2, HDAC, EGFR, MET, mTOR, PI3K, e AKT. Exemplos dos inibidores incluem vemurafinibe, debrafinibe, LGX818, trametinibe, MEK162, LEE011, PD-0332991, panobinostate, verinostate, romidepsina, cetuximabe, gefitinibe, erlotinibe, lapatinibe, panitumumabe, vandetanibe, INC280, everolimo, simolimo, BMK120, BYL719, e CLR457.
[00227] Os seguintes exemplos destinam-se a não ser construídos como sendo limitações neste. As temperaturas são fornecidas em graus Celsius. Se não mencionado de outro modo, todas as evaporações sob pressão reduzida, tipicamente entre cerca de 15 mm Hg e 100 mm Hg (= 20 a 133 mbar). A estrutura de produtos finais, intermediários e materiais de partidas é confirmada por métodos analíticos padrões, por exemplo, microanálise e características espectroscópicas, por exemplo, MS, IR, RMN.
[00228] Todos os materiais de partidas, blocos de construção, reagentes,ácidos, bases, agentes de desidratação, solventes, e catalisadores utilizados para sintetizar os compostos da presente invenção são comercialmente disponíveis ou podem ser produzidos por métodos de síntese orgânica conhecidos por alguém versado na técnica (Houben-Weyl 4a Edição 1952, METHODS OF ORGANIC SYNTHESIS, THIEME, Volume 21). Além disso, os compostos da presente invenção podem ser produzidos por métodos de síntese orgânica conhecidos por alguém versado na técnica em vista dos seguintes exemplos.
[00229] Os compostos e/ou intermediários foram caracterizados por cromatografia líquida de desempenho elevado (HPLC) usando um sistema de cromatografia Waters Millennium com um módulo de separação 2695 (Milford, MA). As colunas analíticas foram Phenomenex Luna C18 -5 μ de fase reversa, 4,6 x 50 mm, de Alltech (Deerfield, IL). Um gradiente de eluição foi usado (fluxo de 2,5 mL/min), iniciando com 5% de acetonitrila/95% de água e progredindo para 100% de acetonitrila durante um período de 10 minutos. Todos os solventes continham 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA). Os compostos foram detectados po absorção de luz ultravioleta (UV) em 220 ou 254 nm. Os solventes de HPLC foram de Burdick e Jackson (Muskegan, Mi), ou Fisher scientific (Pittsburgh, PA).
[00230] Análise espectrométrica de massa foi realizada em um Waters system (Waters Acquity UPLC e um detector de espectrômetro de massa Waters sQD; Coluna: Phenomenex Kinetex 2,6 um C18, tamanho da coluna 4,6 x 50 mm; temperatura da coluna 50°C. gradiente: 2 a 98% de acetonitrila em água com 0,1% de TFA durante um período de 1,5 minutos; taxa de fluxo 1,2 mL/min (ou gradiente polar 1 a 30% durante 1,3 minutos, gradiente não polar 55 a 98% durante 1,3 minutos); faixa de varredura de peso molecular de espectrômetro de massa 150 a 850; ou 150 a 1900. Voltagem de cone 20 V. Todas as massas foram reportadas como aquelas dos íons origem protonados, a menos que de outro modo indicado. Análise de ressonância magnética nuclear (RMN) foi realizada nos compostos selecionados, usando um RMN Varian 400 MHz (Palo Alto, CA). A referência espectral foi TMS ou a mudança química conhecida do solvente.
[00231] Difração de pó de raio X (XRPD) foi realizada como segue:
Figure img0019
[00232] Como será apreciado pela pessoa versada, as intensidades relativas dos vários picos na "Tabela quanto à figura 3" podem variar devido a diversos fatores, tais como os efeitos de orientação de cristais no feixe de raio X ou a pureza do material sendo analisado, ou o grau de cristalinidade da amostra. As posições de piso podem também ser mudadas quanto às variações na altura da amostra, porém as posições de pico permanecerão substancialmente como definido na "tabela quanto à figura 3". A pessoa versada também apreciará que avaliações usando um comprimento de onda diferente resultarão em diferentes mudanças de acordo com a equação Bragg nÀ = 2d sin θ. Tais padrões XRPD alternativos gerados pelo uso de comprimentos de onda alternativos são, no entanto, representações do mesmo material.
[00233] Calorimetria de Varredura Diferencial/Análise termogravimétrica (DSC/TGA) foi realizada como segue:
Figure img0020
[00234] Como será entendido por pessoas versadas na técnica, leves variações em picos observados são esperadas, com base no espectrômetro específico emregado e na técnica de preparação de amostra de análise. Alguma margem de erro está presente em cada uma das designações de pico (+/cm-1).
[00235] As abreviações usadas aqui têm seu significado ordinário na técnica, a menos que de outro modo indicado ou definido na seguinte lista: ATP 5'-trifosfato de adenosina BINAP 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftila racêmica BOC butoxicarbonila terciária br amplo BSA albumina de soro bovino d dupleto dd dupleto de dupletos DCM diclorometano DIEA dietilisopropilamina DME 1,4-dimetoxietano DMF N,N-dimetilformamida DMSO dimetilsulfóxido DTT ditiotreitol EDTA ácido tetra-acetético de etilenodiamina ESI ionização por eletrovaporização EtOAc acetate de etila FCC cromatografia de coluna rápida h hora(s) HBTU hexafluorofosfato(1-) 3-óxido de 1[bis(dimetilamino)metileno]-1H-benzotriazólio HOBt 1-hidróxi-7-azabenzotriazol HPLC Cromatografia líquida de pressão elevada IR espectrometria de infravermelho LCMS cromatografia líquida e espectrometria de massa MeOH metanol MS espectrometria de massa MW micro-ondas m multipleto min minutos mL mililitro(s) m/z relação massa para carga RMN ressonância magnética nuclear ppm partes por milhão PyBOP hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitripirrolidinofosfônio rac racêmico rt temperatura ambiente s singleto t tripleto TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano Tris^HCl cloridrato de aminotris(hidroximetil)metano EXEMPLOS
[00236] Os seguintes exemplos ilustram certas modalidades da invenção e como fazer e usá-los, eles não se destinam a limitar o escopo da invenção. Método 1 Exemplo 1 Síntese de (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2hidróxi-1-feniletil)benzamida Esquema 1
Figure img0021
Etapa 1.5-(3,6-di-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina
[00237] A uma solução de éster borônico (6,64 g, 31,6 mmol), 5bromopirazin-2-amina (5 g, 28,7 mmol), e PdCl2(dppf) (2,1 g, 2,87 mmol) foi adicionado DME (71,8 mL) e solução de Na2CO3 a 2 M (24 mL). A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 15 horas. A mistura reacional foi preparada com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (gradiente de EtOAc em heptanos) produzindo 5-(3,6-dihidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina em 57% de rendimento. LCMS (m/z): 178,1 (MH+), 0,34 minuto; 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 8,17 8,03 (m, 1 H), 8,04 7,88 (m, 1 H), 6,57 6,41 (m, 1 H), 4,68 4,42 (m, 2 H), 4,42 4,29 (m, 2 H), 4,06 3,84 (m, 2 H), 2,68 2,47 (m, 2 H). Etapa 2. 5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina
[00238] Uma solução de 5-(3,6-di-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2amina (2,7 g, 15,24 mmol) e Pd-C (10%, tipo Degussa) (1,6 g, 1,5 mmol) em MeOH (50 mL) foi desgaseificada por corrente de N2 durante 15 minutos. Depois de equipada com balão de gás de hidrogênio, a mistura reacional foi agitada durante 15 horas em temperatura ambiente. O produto bruto foi filtrado através de almofada de celita e lavado com EtOAc. O material volátil foi concentrado em vácuo produzindo 5(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina e foi usado para a etapa seguinte. LCMS (m/z): 180,3 (MH+), 0,28 minutos. Etapa 3, 3-bromo-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina
[00239] A uma solução gelada de 5-(tetra-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-amina (2,8 g, 15,6 mmol) em CH3CN (52 mL) foi adicionado NBS (2,78 g, 15,62 mmol) em duas porções a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 1 hora. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila e foi lavada com solução de carbonato de sódio saturado, água, salmoura, secada e concentrada. O 3-bromo-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina bruto (3,9 g, 97%) foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 258/260 (MH+), 0,52 minuto; 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 7,83 (s, 1H), 4,90 (br. s., 2H), 4,14 4,02 (m, 2H), 3,59 3,43 (m, 2H), 2,83 (d, J=5,5 Hz, 1H), 1,91 1,77 (m, 4H). Etapa 4. (S)-4-bromo-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida
[00240] A uma solução de ácido 4-bromobenzoico (892 mg, 4,44 mmol) em THF (9,9 mL) foi adicionado (S)-2-amino-2-feniletanol (609 mg, 4,44 mmol), DIEA (1,9 mL, 11,1 mmol), PyBroP (2,5 g, 5,32 mmol), e HOBT (815 mg, 5,32 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 20 horas. A mistura reacional foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura. Após secado sobre sulfato de sódio anidroso, filtrado e concentrado em vácuo, o produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (gradiente de EtOAc em DCM) produzindo (S)-4-bromo-N-(2-hidróxi-1feniletil)benzamida (850 mg, 60%). LCMS (m/z): 338,1 (MH+), 0,61 minuto. Etapa 5. (S)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan2-il)benzamida
[00241] A uma solução de (S)-4-bromo-N-(2-hidróxi-1feniletil)benzamida, 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2dioxaborolano (B2(PIN)2) (238 mg, 0,937 mmol), Pd2(dba)3 (21,45 mg, 0,023 mmol), triciclo-hexilfosfina (19,71 mg, 0,070 mmol) em dioxano (1,562 mL) foi adicionado acetato de potássio (138 mg, 1,405 mmol). A mistura reacional foi desgaseificada por corrente de N2 durante 15 minutos. A mistura reacional foi aquecida a 100 oC durante a noite. Depois de diluída com EtOAc, a mistura reacional foi filtrada através de celita. Depois de concentrado, (S)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)-4-(4,4,5,5tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzamida foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 368,3 (MH+), 0,88 minuto (para éster borônico) e 286,1 (MH+), 0,49 minutos (para o ácido borônico correspondente). Etapa 6. (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2hidróxi-1-feniletil)benzamida
[00242] A uma solução de 3-bromo-5-(tetra-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-amina (154 mg, 0,418 mmol), (S)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)-4(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzamida (90 mg, 0,349 mmol), e PdCl2(dppf) (25,5 mg, 0,035 mmol) foi adicionado dioxano (2,3 mL) e solução de Na2CO3 a 2 M (1,163 mL). A mistura reacional foi aquecida para o sintetizador de micro-ondas (120 °C, 10 minutos). A mistura reacional foi preparada com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa. As frações puras foram combinadas, com base livre com solução de carbonato de sódio, e extraídas com EtOAc. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e secada em vácuo. O sólido puro foi dissolvido MeCN/água (1:1, 6 mL) e liofilizado produzindo (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-il)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida como base livre (46%). LCMS (m/z): 419,2 (MH+), 0,58 minuto; 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,74 (d, J = 12 Hz, 1 H), 7,99 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,88 (s, 1 H), 7,79 (d, J = 12 Hz, 2 H), 7,37 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,29 (m, 2 H), 7,22 (m, 1 H), 5,99 (bs, 1 H), 5,07 (m, 1 H), 3,91 (m, 2 H), 3,67 (m, 2 H), 3,41 (m, 2 H), 2,82 (m, 1 H), 1,72 (m, 4 H). Síntese de ácido 3-fluoro-4-(3-(metilsulfonil)benzilcarbamoil)fenilborônico Esquema 2
Figure img0022
[00243] Uma mistura de ácido 4-borono-2-fluorobenzoico (218 mg, 1,2 mmol), (3-(metilsulfonil)fenil)-metanamina (200 mg, 1,08 mmol), DIEA (0,754 mL, 4,32 mmol) e TBTU (381 mg, 1,2 mmol) em DMF (2 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 2 dias, em seguida a mistura reacional foi diluída com água (10 mL), e produto precipitado como goma, e o sobrenadante foi separado por meio de centrifugação, e o resíduo gomoso foi sonicado com água (3 mL), e o resíduo gomoso foi também secado sob vácuo elevado produzindo ácido 3-fluoro-4(3-(metilsulfonil)benzilcarbamoil)-fenilborônico (335 mg, 88%) como espuma branca. LCMS (m/z): 352,1 (MH+), 0,51 minutos. Síntese de ácido(+/-)-(3-fluoro-4-((2,2,2-trifluoro-1feniletil)carbamoil)fenil)borônico Esquema 3
Figure img0023
[00244] Uma mistura de ácido 4-borono-2-fluorobenzoico (54 mg, 0,294 mmol) em DCM (1468 μL) foi resfriada para 0 °C. Em seguida reagente de Ghosez N,N,3-trimetilbut-2-en-2-amina (65,8 μL, 0,587 mmol) foi adicionado e a mistura completa foi agitada para temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura foi adicionada em uma mistura de TEA (246 μL, 1,762 mmol), 2,2,2-trifluoro-1-feniletanamina (59,1 mg, 0,338 mmol) e DCM (1468 μL). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. À mistura reacional foi adicionado EtOAc, e lavada com bicarbonato de sódio saturado, água, e secada sobre Na2SO4. Filtrada e concentrada para fornecer o produto bruto que foi levado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 342,2 (MH+), 0,84 minutos. Síntese de (R)-1-(2-fluorofenilsulfonil)piperidin-3-amina H2N„.
Figure img0024
[00245] (R)-3-Boc-aminopiperidina (1,05 g, 5,25 mmol) foi dissolvido em DCM (10 mL) e em seguida trietilamina (1,10 mL, 7,89 mmol) foi adicionado. A esta solução em temperatura ambiente foi adicionado 2fluorobenzenossulfonilcloreto (1,127 g, 5,79 mmol). Após 2 horas, a reação foi considerada concluída por LCMS e diluída com água e extraída com DCM (30 mL), e a camada orgânica foi separada e secada sobre sulfato de manésio, filtrada e concentrada e levada para a etapa seguinte como tal. O produto do acima foi dissolvido em DCM (25 mL) e TFA (10 mL) adicionado em uma porção. A mistura reacional seguida por LCMS. Após 1 hora, TFA foi removido em vácuo e em seguida o resíduo suspenso em HCl a 3N e lavado com éter. A camada aquosa foi basificada e extraída com DCM e a camada de DCM separada e secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em vácuo para fornecer 873 mg de (R)-1-((2-fluorofenil)sulfonil)piperidin-3-amina como o produto desejado como base livre. LCMS (m/z): 255,5 (MH+), 0,49 minutos. Síntese de (R)-1-(fenilsulfonil)piperidin-3-amina
Figure img0025
[00246] (R)-3-Boc-aminopiperidina (0,843g, 4,21 mmol) foi dissolvido em DCM (10 mL) e em seguida trietilamina (0,88 mL, 6,31 mmol) foi adicionado. A esta solução em temperatura ambiente foi adicionado benzenossulfonilcloreto (0,818g, 4,63 mmol). Após 2 horas, a reação foi considerada concluída por LCMS e diluída com água e extraída com DCM (30 mL), e a camada orgânica foi separada e secada sobre sulfato de manésio, filtrada e concentrada e levada para a etapa seguinte como tal. O produto do acima foi dissolvido em DCM (25 mL) e TFA (10 mL) adicionado em uma porção. A mistura reacional seguida por LCMS. Após 3 horas, desporteção de Boc completa foi observada. Neste estágio, TFA foi removido em vácuo e em seguida o resíduo suspenso em HCl a 3N e lavado com éter. A camada aquosa foi basificada e extraída com DCM e a camada de DCM separada e secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em vácuo para fornecer 850 mg de (R)-1-(fenilsulfonil)piperidin-3-amina como o produto desejado como base livre. LCMS (m/z): 241,4 (MH+), 0,43 minutos. Síntese de ácido (R)-3-fluoro-4-(1-(2-fluorofenilsulfonil)piperidin-3ilcarbamoil)fenilborônico Esquema 4
Figure img0026
[00247] A uma solução de ácido 4-borono-2-fluorobenzoico (160 mg, 0,870 mmol), (R)-1-(2-fluorofenilsulfonil)piperidin-3-amina (225 mg, 0,870 mmol), e DIEA (456 μL, 2,61 mmol) em THF (1450 μL) e DMF (1450 μL) foi adicionado HOAt (237 mg, 1,740 mmol) e EDC (417 mg, 2,175 mmol). Após 3 horas de agitação em temperatura ambiente, a mistura reacional foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com NaHCO3, água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo produzindo ácido (R)-3-fluoro4-(1-(2-fluorofenilsulfonil)piperidin-3-ilcarbamoil)fenilborônico, que foi usado na etapa seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 425,2 (MH+), 0,72 minutos. Síntese de Ácido 4-(2,2-difluoro-1-feniletilcarbamoil)-3fluorofenilborônico Esquema 5 Etapa 1.2,2-difluoro-1-feniletanamina
Figure img0027
[00248] A uma solução de 2,2-difluoro-1-feniletanona (1 g, 6,4 mmol) em tolueno (32 mL) em temperatura ambiente foi adicionado LiHMDS (1M em THF) (7,05 mL, 7,05 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 30 minutos, seguida por adição de BH3-DMS (1,216 mL, 12,81 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 1 hora. Após resfriar a 0 °C, solução de NaOH a 2 N aquosa foi cuidadosamente adicionada durante 5 minutos (Cuidado! evolução de gás). A reação foi agitada durante 1 hora. A camada foi separada e lavada com água e salmoura. Depois de secado sobre sulfato de sódio, HCl em MeOH (7,17 mL, 8,97 mmol) foi adicionado para formar um precipitado branco. O precipitado foi filtrado, lavado com éter, e secado em vácuo produzindo 2,2-difluoro-1-feniletanamina (21%). 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 7,49 (s, 5 H), 6,52 6,07 (m, 1 H), 4,78 4,69 (m, 2 H). Etapa 2. Ácido 4-(2,2-difluoro-1-feniletilcarbamoil)-3-fluorofenilborônico
[00249] A uma solução de ácido 4-borono-2-fluorobenzoico (200 mg, 1,087 mmol), 2,2-difluoro-1-feniletanamina (232 mg, 1,196 mmol), e DIEA (0,570 mL, 3,26 mmol) em THF (3,866 mL) e DMF (0,483 mL) foi adicionado HOAt (296 mg, 2,175 mmol) e EDC (521 mg, 2,72 mmol). Após 3 horas de agitação em temperatura ambiente, solução de ácido cítrico a 10% foi adicionado (pH ~3) e extraída com THF de 2metila e EtOAc (1:1). As camadas orgânicas foram secadas sobre Na2SO4 anidroso, filtradas, e concentradas. O ácido 4-(2,2-difluoro-1feniletilcarbamoil)-3-fluorofenilborônico bruto foi obtido (90%) e usado para a etapa seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 375,3 (MH+), 0,48 minutos. Síntese de 4-benzil-8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,4-dihidrobenzo[f][1,4]oxazepin-5(2H)-ona Esquema 6
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Etapa 1. N-benzil-4-bromo-2-fluoro-N-(2-hidroxietil)benzamida
[00250] A uma solução de cloreto de 4-bromo-2-fluorobenzoíla (1 g, 4,21 mmol) em THF (14,04 mL) foram adicionados DIEA (1,103 mL, 6,32 mmol) e 2-(benzilamino)etanol (0,764 g, 5,05 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada durante a noite. A mistura reacional foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura. Depois de secado sobre sulfato de sódio anidroso, filtrado e concentrado em vácuo, o N-benzil-4-bromo-2-fluoro-N(2-hidroxietil)benzamida bruto foi usado para a etapa seguinte (83%). LCMS (m/z): 352/354 (MH+), 0,83 minutos. Etapa 2. 4-benzil-8-bromo-3,4-di-hidrobenzo[f][1,4]oxazepin-5(2H)-ona
[00251] A uma solução de N-benzil-4-bromo-2-fluoro-N-(2hidroxietil)benzamida (494 mg, 1,403 mmol) em DMF (14,00 mL) foi adicionado NaH (60% em óleo) (61,7 mg, 1,543 mmol) lentamente. Após o gás de H2 evoluir, a mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 24 horas. Depois de extinguida com água, a mistura reacional foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura. Após secagem sobre sulfato de sódio anidroso e filtragem, a camada orgânica foi evaporada em vácuo. O 4-benzil-8-bromo-3,4-dihidrobenzo[f][1,4]oxazepin-5(2H)-ona oleoso bruto foi purificado por cromatografia rápida (gradiente de EtOAc em heptano) em 84% de rendimento. LCMS (m/z): 332,1/334,1 (MH+), 0,94 minuto. Etapa 3, 4-benzil-8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,4-dihidrobenzo[f][1,4]oxazepin-5(2H)-ona
[00252] A uma solução de 4-benzil-8-bromo-3,4-dihidrobenzo[f][1,4]oxazepin-5(2H)-ona (111,3 mg, 0,335 mmol), B2(PIN)2 (170 mg, 0,670 mmol), Pd2(dba)3 (15,34 mg, 0,017 mmol), triciclo-hexilfosfina (14,09 mg, 0,050 mmol) em dioxano (3,35 mL) foi adicionado acetato de potássio (99 mg, 1,005 mmol) apenas à direita após desgaseificação. A mistura reacional foi aquecida a 100 °C durante a noite. Depois de diluída com EtOAc, a mistura reacional foi filtrada através de celita. Depois de concentrado, o 4-benzil-8-(4,4,5,5tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,4-di-hidrobenzo[f][1,4]oxazepin5(2H)-ona bruto foi obtido (>99%) e usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 298,1 (MH+ para ácido borônico), 0,63 minuto e 380,2 (MH+), 1,05 minuto. Síntese de (S)-2-(metilamino)-2-feniletanol Esquema 7
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[00253] A uma suspensão de LiAlH4 (0,689 g, 18,16 mmol) em THF (20,18 mL) foi adicionado ácido (S)-2-(metilamino)-2-fenilacético (1 g, 6,05 mmol) em THF (20 mL) lentamente durante 10 minutos a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Depois extinguida com água (0,7 mL), NaOH (2,1 mL), água (0,7 mL). A mistura reacional foi filtrada. O filtrado foi extraído com EtOAc 3 vezes. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (10% de metanol em DCM) produzindo (S)-2-(metilamino)-2-feniletanol como um óleo incolor em 55% de rendimento. LCMS (m/z): 152,1 (MH+), 0,31 minuto; 1H RMN (400MHz ,CDCl3) δ 7,40 7,33 (m, 2 H), 7,32 7,27 (m, 3 H), 3,77 3,69 (m, 1 H), 3,69 3,63 (m, 1 H), 3,58 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 2,36 (s, 3 H). Síntese de (S)-4-feniloxazolidina Esquema 8
Figure img0030
[00254] A uma solução de (S)-2-amino-2-feniletanol (1,5 g, 10,93 mmol) em metanol (36,4 mL) foi adicionado formaldeído (1,065 g, 13,12 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 dias. A mistura reacional foi concentrada até a secura. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida(0 a 50% de EtOAc/heptanos) para fornecer (S)-4feniloxazolidina em 40% de rendimento. LCMS (m/z): 150,1 (MH+), 0,31 minutos. Síntese de (2-amino-2-(3-clorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila Esquema 9
Figure img0031
ESteo 1 t™<. 1 Etapa 1. (R)-2-amino-1-(3-clorofenil)etanol
[00255] A uma solução de (R)-2-(3-clorofenil)oxirano (13 g, 84 mmol) em THF (84 mL) foi adicionado NaHMDS (1 M em THF) (252 mL, 252 mmol) lentamente a 0 °C. A mistura reacional foi aquecida para temperatura ambiente e agitada durante a noite. À mistura reacional, água (33 mL, 2,5 mL/g) foi adicionada. Após agitar durante 5 horas em temperatura ambiente, o solvente foi removido em vácuo para cerca de 1/4 e dividida por DCM. A camada de base é um pouco turva e a camada de topo era uma solução marrom. Ambas as camadas foram concentradas, que continham o (R)-2-amino-1-(3-clorofenil)etanol desejado (14 g, 97%). Os produtos combinados foram usados na etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 172,1 (MH+), 0,37 minutos. Etapa 2. (2-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (R)-terc-butila
[00256] A uma solução de (R)-2-amino-1-(3-clorofenil)etanol (14 g, 82 mmol) em THF (272 mL) foi adicionado dicarbonato de di-terc-butila (24,92 g, 114 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi diluída com DCM e em seguida lavada com solução de bicarbonato de sódio saturado. A camada orgânica separada foi em seguida secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida(0 a 50% de acetato de etila em heptano) produzindo (2-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (R)-terc-butila (49,2%). LCMS (m/z): 216 (MH+-tBu), 0,85 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,40 (s, 9 H) 3,18 (s, 1 H) 3,26 (d, J=4,70 Hz, 1 H) 4,69 (br. s., 1 H) 7,20 7,34 (m, 3 H) 7,35 7,41 (m, 1 H). Etapa 3. (2-(3-clorofenil)-2-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)etil)carbamato de (S)-terc-butila
[00257] A uma solução de (2-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (R)-terc-butila (8,12 g, 29,9 mmol) em THF (100 mL) foi adicionada ftalimida (6,16 g, 41,8 mmol) e trifenilfosfina ligada por polímero (3 mmol de PPh3/1 g de resina, 9,8 g). DTBAD (7,09 g, 30,8 mmol) em THF (20 mL) foi adicionada lentamente em temperatura ambiente à mistura reacional, que foi em seguida agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de celita e lavada com EtOAc. O filtrado resultante foi lavado com solução de Na2CO3, água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 30% de EtOAc/heptano) produzindo (2-(3clorofenil)-2-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)etil)carbamato de (S)-terc-butila (58,4%). LCMS (m/z): 301,1 (MH+-Boc), 1,06 minuto. Etapa 4. (2-amino-2-(3-clorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila
[00258] A uma solução de (2-(3-clorofenil)-2-(1,3-dioxoisoindolin-2il)etil)carbamato de (S)-terc-butila (5,0 g, 12,47 mmol) em etanol (41,6 mL) foi adicionado hidrato de hidrazina (6,06 mL, 125 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 60 °C durante 2 horas. A mistura reacional foi filtrada através de almofada de celita. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi diluído com DCM e filtrado através de celita. O mesmo processo foi repetido até nenhum precipitado branco ser mostrado. Para remover o produto secundário branco completamente, o produto foi dissolvido em HCl a 1N (30 mL), lavado com EtOAc, e a fase aquosa foi neutralizada para pH 7 em seguida extraída novamente por EtOAc. A orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo produzindo (2-amino-2-(3-clorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila (89%). LCMS (m/z): 271,1 (MH+), 0,58 minuto.
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Exemplo 2 Síntese de (S)-4-(2-amino-5-(piperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2hidróxi-1-feniletil)benzamida Esquema 10
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Etapa 1. 6-amino-5',6'-di-hidro-[3,4'-bipiridina]-1'(2'H)-carboxilato de terc-butila
[00259] A uma solução de 5-bromopiridin-2-amina (0,84 g, 4,85 mmol) em DME (10 mL) foi adicionado N-Boc-5,6-di-hidropiridina1(2H)-carboxilato (1 g, 3,23 mmol), e carbonato de sódio (4,85 mL, 9,70 mmol). A mistura foi purgada com nitrogênio durante 5 minutos, e seguida pela adição de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (0,26 g, 0,32 mmol). A mistura resultante foi aquecida para 120 °C em um óleo de banho durante 2 horas. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila, lavada com água, salmoura, secada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna rápida em sílica gel (ISCO) eluindo com 0 a 90% de acetato de etila em heptano para fornecer 6-amino-5',6'-dihidro-[3,4'-bipiridina]-1'(2'H)-carboxilato de terc-butila (560 mg, 63 %) como um sólido de cor marrom. LCMS (m/z): 276 (MH+), 0,59 minutos. Etapa 2. 4-(6-aminopiridin-3-il)piperidina-1-carboxilato de terc-butila
[00260] Uma suspensão de 6-amino-5',6'-di-hidro-[3,4'-bipiridina]1'(2'H)-carboxilato de terc-butila (560 mg, 2,03 mmol), 5% de Pd/C (1082 mg, 0,5 mmol) em metanol (30 mL) foi purgada com nitrogênio durante 2 minutos. A mistura reacional foi agitada sob nitrogênio em temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura reacional foi diluída com diclorometano (50 mL) e foi filtrada através de almofada de celita. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna rápidaem sílica gel (ISCO) eluindo com 0 a 90% de acetato de etila em heptano para fornecer 4-(6-aminopiridin-3-il)piperidina-1carboxilato de terc-butila (180 mg, 31,9 %) como sólido cor amarela. LCMS (m/z): 278 (MH+), 0,57 minutos. Etapa 3. 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)piperidina-1-carboxilato de terc-butila
[00261] A uma solução gelada de 4-(6-amino-5-bromopiridin-3il)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (180 mg, 0,65 mmol) em DCM (18 mL) foi adicionado NBS (116 mg, 0,65 mmol) em duas porções. A mistura reacional foi agitada a 0 °C em um banho de gelo durante 30 minutos. A solução de reação foi diluída com acetato de etila, lavada com água, bicarbonato de sódio aquoso saturado, salmoura, secada sobre sulfato de sódio e concentrada. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de coluna rápida em sílica gel (ISCO) eluindo com 0 a 100% de acetato de etila em heptano para fornecer 4-(6amino-5-bromopiridin-3-il)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (180 mg, 78%) como um óleo de cor amarela. LCMS (m/z): 300/302 (MH+), 0,67 minutos. Etapa 4. 4-(6-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin3-il)piperidina-1-carboxilato de terc-butila
[00262] A uma suspensão de 4-(6-amino-5-bromopiridin-3il)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (180 mg, 0,50 mmol) em 1,4dioxano (8 mL) foi adicionado bis(pinacolato)diboro (385 mg, 1,51 mmol) e acetato de potássio (248 mg, 2,53 mmol). A mistura foi purgada com nitrogênio durante 3 minutos, em seguida PdCl2(dppf)CH2Cl2Adduct (49,5 mg, 0,061 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi aquecida para 110 °C em um óleo de banho durante 20 horas e filtrada através de alumina neutra (1 g). O filtrado foi concentrado para fornecer 4-(6-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin3-il)piperidina-1-carboxilato de terc-butila bruto, que foi usado diretamente na próxima etapa sem qualquer purificação. LCMS (m/z): 322 (MH+ para ácido borônico), 0,60 minuto. Etapa 5. (S)-4-(2-Amino-5-(piperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2hidróxi-1-feniletil)benzamida
[00263] A uma suspensão de (S)-4-bromo-2-fluoro-N-(2-hidróxi-1feniletil)benzamida (67,1 mg, 0,20 mmol) em DME (5 mL) foram adicionados 4-(6-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin3-il)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (40 mg, 0,099 mmol) e carbonato de sódio (0,24 mL, 0,49 mmol). A mistura foi purgada com nitrogênio durante 10 minutos, em seguida PdCl2(dppf)-CH2Cl2Adduct (12,15 mg, 0,015 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi aquecida para 120 °C em um óleo de banho durante 3 horas. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila. A solução orgânica foi lavada com água, salmoura, secada sobre sulfato de sódio e concentrada. O resíduo resultante foi tratada com 30% de TFA em DCM (20 mL) durante 15 minutos. A mistura reacional foi concentrada e o produto bruto foi purificado por HPLC para fornecer (S)-4-(2-amino-5-(piperidin-4il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida (9 mg, 20,8 %) como sal de TFA. LCMS (m/z): 435 (MH+), 0,44 minuto; 1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ ppm 8,63 (br. s., 1 H) 7,90 (t, J=7,77 Hz, 1 H) 7,84 (s, 2 H) 7,47 -7,24 (m, 7 H), 5,27 -5,17 (m, 1 H) 3,933,79 (m, 2 H) 3,52 (d, J=12,60 Hz, 2 H) 3,213,05 (m, 2 H) 2,96 (t, J=12,31 Hz, 1 H) 2,15 (d, J=14,07 Hz, 2 H) 1,96 -1,78 (m, 2 H). Síntese de 3-bromo-5-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)pirazin-2-amina e 4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidina-1-carboxilato de metila Esquema 11
Figure img0036
[00264] Seguindo a etapa 1 a 3 no esquema 10, usando 5bromopirazin-2-amina e N-Boc-5,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato, 4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidina-1-carboxilato de terc-butila foi obtido. LCMS (m/z): 301,0/303,0 (MH+-tBu), 0,875 minuto. Etapa 1.3-bromo-5-(piperidin-4-il)pirazin-2-amina
[00265] A uma solução de 4-(5-amino-6-bromopirazin-2il)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (70 mg, 0,196 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL, 12,98 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 45 minutos. Após tolueno ser adicionado, os materiais voláteis foram evaporados produzindo 3bromo-5-(piperidin-4-il)pirazin-2-amina. O produto bruto foi usado diretamente para a reação seguinte (99%). LCMS (m/z): 257,0/259,0 (MH+), 0,329 minutos. Etapa 2. 3-bromo-5-(1 -(metilsulfonil)piperidin-4-il)pirazin-2-amina
[00266] À 3-bromo-5-(piperidin-4-il)pirazin-2-amina (50 mg, 0,194 mmol) em DCM (2 mL) em banho de gelo foram adicionados DIEA (340 μl, 1,945 mmol) e cloreto de metanossulfonila (16,67 μl, 0,214 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 60 minutos. A mistura reacional foi extraída com DCM. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada em vácuo. (30mg, 46%). LCMS (m/z): 335,2/337,2 (MH+), 0,572 minuto. Etapa 3, 4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidina-1-carboxilato de metila
[00267] A uma solução de 3-bromo-5-(piperidin-4-il)pirazin-2-amina (60 mg, 0,233 mmol) em DCM (2 mL) em banho de gelo foram adicionados DIEA (408 μl, 2,333 mmol) e cloroformiato de metila (18,07 μl, 0,233 mmol). A mistura reacional foi agitada sob banho de gelo durante 30 minutos. A mistura reacional foi dividida entre DCM e água. A camada orgânica foi separada e lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada, e evaporada em vácuo. O 4-(5-amino-6bromopirazin-2-il)piperidina-1-carboxilato de metila bruto foi usado para a etapa seguinte. LCMS (m/z): 315,0/317,0 (MH+), 0,647 minutos. Exemplo 3 Síntese de 4-(2-amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoroN-metil-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamida Esquema 12
Figure img0037
Etapa 1.3-bromo-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina
[00268] Seguindo a etapa 1 a 3 no esquema 10, usando 5bromopiridin-2-amina, 3-bromo-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2amina foi obtido. LCMS (m/z): 257/259 (MH+), 0,38 minuto. Etapa 2. 5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina
[00269] Seguindo a etapa 4 no esquema 10, usando 3-bromo-5(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina foi obtido, 5-(tetra-hidro-2Hpiran-4-il)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina foi obtido. LCMS (m/z): 233 (MH+), 0,36 minutos. Etapa 3, 4-bromo-2-fluoro-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamida
[00270] Um frasco foi carregado com ácido 4-bromo-2fluorobenzoico (180 mg, 0,821 mmol), pirimidin-2-ilmetanamina (89,6 mg, 0,821 mmol), DIEA (0,358 mL, 2,05 mmol) em DMF (3 mL), e à solução resultante foi adicionado PyBOP (513 mg, 0,915 mmol) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, em seguida foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi diluído com EtOAc (20 mL), lavado com água (3 x 10 mL), salmoura (10 mL) e secado (Na2SO4), concentrado e o resíduo foi purificado por cromatografia rápidaem sílica gel eluído com gradiente de EtOAc/heptano (0 a 100%) e 4-bromo-2-fluoro-N-(pirimidin-2ilmetil)benzamida (74,5 mg, 29,3%) foi obtido como sólido cor clara. LCMS (m/z): 310,0/312,0 (MH+), 0,64 minutos. Etapa 4. 4-bromo-2-fluoro-N-metil-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamida
[00271] Um frasco foi carregado com 4-bromo-2-fluoro-N-(pirimidin2-ilmetil)benzamida (74,5 mg, 0,24 mmol), NaH (60% de dispersão em óleo mineral, 11,5 mg, 0,288 mmol) em DMF(2 mL), à suspensão foi adicionado iodometano (20 μl, 0,312mmol) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 10 minutos, em seguida foi extinguida por água (20 μl), concentrada e o o resíduo bruto foi dissolvido em EtOAc, lavado com água, e salmoura, secado (Na2SO4), concentrado e 4-bromo-2-fluoro-N-metil-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamida foi obtido como óleo (55,3mg, 71% ). LCMS (m/z): 324,1/326,1 (MH+), 0,66 minutos. Etapa 5. 4-(2-amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-Nmetil-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamida
[00272] A um frasconete de reator de micro-ondas foram carregados com 5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina (39,4 mg, 0,13 mmol), 4-bromo-2fluoro-N-metil-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamida (28 mg, 0,086 mmol), Na2CO3 aquoso (2 M, 0,26 mL) em DME (1,5 mL), e a mistura foi purgada com argônio seguido por adição de paládio de tetracis(trifenilfosfina) (10 mg, 8,6 mmol), e purga final, em seguida selada e aquecida a 115 °C durante 15 minutos em sintetizador de microondas. A camada de DME foi coletada, concentrada e o resíduo foi submetido à purificação preparativa de HPLC e frações contendo o produto final foram combinadas, congeladas, liofilizadas e o sal de TFA de 4-(2-amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-Nmetil-N-(pirimidin-2-ilmetil)benzamida foi obtido como pó branco. LCMS (m/z): 422,2 (MH+), 0,49 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,81 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 8,77 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,80 (dd, J = 2,2, 0,6 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 2,2, 0,6 Hz, 1H), 7,62 7,70 (m, 1H), 7,51 7,58 (m, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,38 7,43 (m, 1H), 7,35 (dd, J = 10,0, 1,5 Hz, 1H), 7,28 (dd, J = 7,8, 1,6 Hz, 1H), 4,99 (s, 1H), 4,74 (s, 1H), 3,98 4,10 (m, 2H), 3,54 (tdd, J = 11,5, 8,8, 2,7 Hz, 2H), 3,15 3,24 (m, 3H), 2,78 2,93 (m, 1H), 1,65 1,89 (m, 4H). Síntese de 1,1-dióxido de 4-(6-Amino-5-bromopiridin-3-il)tetra-hidro2H-tiopiran e 1,1-dióxido de 4-(6-Amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)tetra-hidro-2H-tiopirano Esquema 13
Figure img0038
Etapa 1.5-(3,6-Di-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-2-amina
[00273] A uma solução de 5-bromopiridin-2-amina (344 mg, 1,99 mmol) em DME (6mL) foram adicionados 2-(3,6-di-hidro-2H-tiopiran-4il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (300 mg, 1,33 mmol), e carbonato de sódio (1,99 mL, 3,98 mmol). A mistura foi purgada com nitrogênio durante 5 minutos, e seguida pela adição de PdCl2(dppf)CH2Cl2 (108 mg, 0,13 mmol). A mistura resultante foi aquecida para 115°C em um óleo de banho durante 5 horas. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila, lavada com água, salmoura, secada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna rápida em sílica gel (ISCO) eluindo com 0 a 90% de acetato de etila em heptano para fornecer. As frações foram combinadas e concentradas para fornecer 5-(3,6-di-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-2-amina (120 mg, 47%) como um sólido de cor marrom. LCMS (m/z): 193 (MH+), 0,44 minutos. Etapa 2. 5-(Tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-2-amina
[00274] Uma suspensão de 5-(3,6-di-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-2amina (260 mg, 1,35 mmol), Pd/C (36 mg, 0,33 mmol) em metanol (16 mL) foi agitada sob nitrogênio em temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura reacional foi diluída com DCM (80 mL), e foi filtrada através de celita. O filtrado foi concentrado para fornecer 5-(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-2-amina (240 mg, 91% de rendimento) como sólido cor amarela. LCMS (m/z): 195 (MH+), 0,46 minutos. Etapa 3. 1,1-dióxido de 4-(6-Aminopiridin-3-il)tetra-hidro-2H-tiopirano
[00275] A uma solução resfriada por gelo de 5-(tetra-hidro-2Htiopiran-4-il)piridin-2-amina (290 mg, 1,49 mmol) em DCM (15 mL) foi adicionado ácido 3-clorobenzoperóxoico (592 mg, 3,43 mmol). A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila. A solução resultante foi lavada com água, bicarbonato de sódio aquoso saturado, secada sobre sulfato de sódio e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna rápida em sílica gel (ISCO) eluindo com 0 a 100% de acetato de etila em heptano para fornecer 1,1-dióxido de 4(6-aminopiridin-3-il)tetra-hidro-2H-tiopirano (140 mg, 41,4 %) como sólido de cor branca. LCMS (m/z): 227 (MH+), 0,25 minutos. Etapa 4. 1,1-dióxido de 4-(6-Amino-5-bromopiridin-3-il)tetra-hidro-2Htiopirano
[00276] A uma solução gelada de 1,1-dióxido de 4-(6-aminopiridin3-il)tetra-hidro-2H-tiopirano (140 mg, 0,62 mmol) em DCM (15 mL) foi adicionado NBS (110 mg, 0,62 mmol) em duas porções. A mistura reacional foi agitada a 0°C durante 20 minutos. A solução de reação foi diluída com acetato de etila, lavada com água, solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado, salmoura, secada sobre sulfato de sódio e concentrada para fornecer 1,1-dióxido de 4-(6-Amino-5-bromopiridin-3il)tetra-hidro-2H-tiopirano (190 mg, 0,62 mmol). LCMS (m/z): 305/307 (MH+), 0,33 minuto. Etapa 5. 1,1-dióxido de 4-(6-Amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)tetra-hidro-2H-tiopirano
[00277] A uma suspensão de 1,1-dióxido de 4-(6-Amino-5bromopiridin-3-il)tetra-hidro-2H-tiopirano (190 mg, 0,62 mmol) em 1,4dioxano (7 mL) foi adicionado bis(pinacolato)diboro (474 mg, 1,86 mmol) e acetato de potássio (305 mg, 3,11 mmol), e seguida pela adição de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (61,0 mg, 0,075 mmol) foi adicionada. A mistura reacional foi aquecida para 100 °C em um óleo de banho durante 16 horas. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila e foi filtrada através de alumina neutra (5 g). O filtrado foi refiltrado novamenteatravés de celita. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi triturado com heptano, e filtrado para fornecer 1,1-dióxido de 4-(6-Amino5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)tetra-hidro-2Htiopirano (140 mg, 64% de rendimento). LCMS (m/z): 271 (MH+), 0,15 minuto. Síntese de metil 3-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)pirrolidina-1-carboxilato Esquema 14
Figure img0039
E SIBP7 t™~ 7 MeSO2CI / DCM Etapa 1. 3-(((trifluorometil)sulfonil)óxi)-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butila
[00278] A um frasco secado por forno sob N2 foi adicionado 3oxopirrolidina-1-carboxilato de terc-butila (2 g, 10,8 mmol) e THF (16 mL). A solução foi resfriada em acetona banho de gelo (-78 °C). A este foi adicionado bis(trimetilsilil)amida de lítio (12,96 mL, 12,96 mmol) ( solução a 1 M em THF). A mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 15 minutos em seguida adicionada gota a gota uma solução de 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-((trifluorometil)sulfonil) metanossulfonamida (4,05 g, 11,34 mmol) em THF (16 mL). A mistura reacional foi agitada durante 30 minutos em seguida aquecida para 0 °C e agitada durante 1,5 horas. A mistura reacional foi extinguida com solução de bicarbonato de sódio saturado e em seguida extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram lavados com salmoura, secados sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. O produto bruto foi purificado por coluna ISCO (0 a 30% de EtOAc/heptano) fornecendo 3(((trifluorometil)sulfonil)óxi)-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-carboxilato de tercbutila (1,9 g, 55,5%). Etapa 2. 3-(6-aminopiridin-3-il)-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butila
[00279] Uma solução de 3-(((trifluorometil)sulfonil)óxi)-2,5-di-hidro1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butila (400 mg, 0,882 mmol) em THF (10 mL) foi purgada com N2 durante 5 minutos e em seguida foi adicionado carbonato de potássio (610 mg, 4,41 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina (233 mg, 1,059 mmol), Pd(PPh3)4 (10,20 mg, 8,82 μmol) e água ( 0,1 mL). A mistura reacional foi aquecida e agitada a 70 °C durante a noite. A mistura reacional foi vertida à solução de bicarbonato de sódio saturado e extraídas com etil éter. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 10% de MeOH / DCM) para produzir o produto desejado (180 mg, 54,6%). LCMS (m/z): 262,2 (MH+), 0,598 minutos. Etapa 3. 3-(6-aminopiridin-3-il)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butila
[00280] Ao 3-(6-aminopiridin-3-il)-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butila (180 mg, 0,482 mmol) em MeOH (10 mL) sob atmosfera de N2 foi adicionado Pd-C (103 mg, 0,096 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente sob balão de H2. Após 2 horas, a mistura reacional foi filtrada através de almofada de celita, lavada com metanol e evaporada para fornecer o produto desejado, que prosseuiu para a etapa seguinte sem purificação (150 mg, 71%). LCMS (m/z): 264,2 (MH+), 0,565 minutos. Etapa 4. 3-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butila
[00281] Ao 3-(6-aminopiridin-3-il)pirrolidina-1-carboxilato de tercbutila (60 mg, 0,228 mmol) em acetonitrila (4 mL) em banho de gelo foi adicionado NBS (36,5 mg, 0,205 mmol) e agitado. LCMS após 30 minutos mostrou mistura de ~1:1 de material de partida e produto desejado. A esta foram adicionados 12 mg (0,3 equivalente) de NBS e agitados 30 minutos. LCMS mostrou reação completa. À mistura reacional foi adicionado NaHCO3 aquoso saturado agitada durante 10 minutos e extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram secados sobre sulfato de sódio, filtrados, e evaporados. O produto bruto foi usado para a etapa seguinte sem purificação (65 mg, 83%). LCMS (m/z): 342,1/344,1 (MH+), 0,624 minutos. Etapa 5. 3-bromo-5-(pirrolidin-3-il)piridin-2-amina
[00282] Ao 3-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butila (65 mg, 0,171 mmol) em DCM (2,4 mL) foi adicionado TFA (0,6 mL, 7,79 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 45 minutos. A mistura reacional foi evaporada em vácuo após diluição com tolueno. O produto bruto foi usado para a etapa seguinte sem purificação. A produção crua foi quantitativa. LCMS (m/z): 242,1/244,1 (MH+), 0,214 minutos. Etapa 6. 3-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)pirrolidina-1-carboxilato de metila
[00283] À 3-bromo-5-(pirrolidin-3-il)piridin-2-amina, (20 mg, 0,083 mmol) em DCM em banho de gelo foram adicionados DIEA (43,3 μl, 0,248 mmol) e cloroformiato de metila (6,40 μl, 0,083 mmol). A mistura reacional foi agitada em banho de gelo durante 30 minutos. A mistura reacional foi dividida entre DCM e água. A camada de DCM foi separada e lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada, e evaporada. O produto bruto foi usado para a etapa seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 300,0, 302,0 (MH+), 0,421 minutos. Etapa 7. 3-bromo-5-(1-(metilsulfonil)pirrolidin-3-il)piridin-2-amina
[00284] À 3-bromo-5-(pirrolidin-3-il)piridin-2-amina (20 mg, 0,083 mmol) em DCM em banho de gelo foi adicionado DIEA (57,7 μl, 0,330 mmol) e cloreto de metanossulfonila (7,08 μl, 0,091 mmol). A mistura reacional foi agitada em banho de gelo 30 minutos. A mistura reacional foi dividida entre DCM e água. A camada de DCM foi separada e lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O produto bruto foi usado para a etapa seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 320,0/322,0 (MH+), 0,363 minutos. Exemplos 4, 5, e 6 Síntese de 4-(2-amino-5-(1,1-dioxidotetra-hidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida,(S)-4-(2-amino-5-(1,1 -dioxidotetrahidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida, e (R)-4-(2amino-5-(1,1 -dioxidotetra-hidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-N-benzil-2fluorobenzamida Esquema 15
Figure img0040
Etapa 1.4,5-di-hidrotiofen-3-il trifluorometanossulfonato
[00285] LDA recentemente preparado (10,5 mmol em 40 mL de THF) entre -75 a -65 °C foi gota a gota adicionada solução de dihidrotiofeno-3-(2H)-ona/THF (1,02 g/2 mL de THF, 10 mmol) durante 3 minutos, em seguida a mistura reacional resultante foi agitada a -75 °C durante 3 horas, seguida por adição gota a gota de N-(5-cloropiridin-2il)-1,1,1-trifluoro-N-(trifluorometilsulfonil)metanossulfonamida/THF (4,12 g, 10,5 mmol em 5 mL de THF) durante 10 minutos, em seguida a mistura reacional foi agitada a -75 °C durante pelo menos 1 horas, em seguida com temperatura gradualmente aquecida para temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi concentrada, e o resíduo foi dividido entre Et2O/H2O (100 mL/50 mL); a camada de éter foi sequencialmente lavada com água (2 x 50 mL), acetato de sódio a 3 M, tampão a pH 4,8 (2 x 50 mL), NaOH a 3M(2 x 50 mL), e secada sobre sulfato de magnésio, concentrada e um óleo marrom foi obtido como produto bruto (2,05 g) que foi também purificada por cromatografia rápida em sílica gel eluído com gradiente de EtOAc/heptano (0 a 15%) e produto desejado (0,9 g, 38,5% de rendimento) foi obtido como óleo incolor. Etapa 2. 5-(4,5-di-hidrotiofen-3-il)piridin-2-amina
[00286] Um frasconete foi carregado com todos os reagentes: trifluorometanossulfonato de 4,5-di-hidrotiofen-3-ila (900 mg, 3,84 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina (1,69 g, 7,69 mmol), K3PO4 (2,45 g, 11,5 mmol), e aduzido de PdCl2(dppf)CH2Cl2 (314 mg, 0,384 mmol) e DME (16 mL), e a mistura foi purgada com argônio, em seguida selada e aquecida a 90 °C por meio de banho de óleo externo durante a noite. A mistura reacional foi resfriada para abaixo da temperatura ambiente, e o precipitado na mistura reacional foi removido por filtragem, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e um resíduo preto foi obtido como produto bruto. O produto bruto foi dissolvido em EtOAc (30 mL), lavado com água (20 mL), e o pedaço de metal entre as duas camadas foi removido por filtragem. A camada de EtOAc foi coletada, extraída com HCl a 1N (2 x 20 mL) e as camadas aquosas foram combinadas, purificadas com EtOAc (20 mL), basificadas com NaOH aquoso (3 g em 10 mL de água), extraídas com EtOAc (2 x 30 mL), e os extratos de EtOAc obtidos foram combinados, lavados com salmoura (30 mL), secados (Na2SO4), concentrados e o produto desejado foi obtido como sólido cor clara. LCMS (m/z): 179,0 (MH+), 0,41, 0,43 minuto (para regioisômeros). Etapa 3. 5-(tetra-hidrotiofen-3-il)piridin-2-amina
[00287] 5-(4,5-di-hidrotiofen-3-il)piridin-2-amina (0,78g, 4,38 mmol) foi dissolvido em etanol (30 mL), a ele foi adicionado Pd-C (Deggussa, 10%, 0,233 g) e a mistura foi agitada sob balão de H2 durante a noite. A reação não foi concluída por LCMS. O catalisador de Pd-C foi removido por filtragem através de uma almofada de celita, e ao filtrado foi adicionado novo catalisador de Pd-C (0,24 g), e a mistura foi agitada sob balão de H2 sob a mesma condição durante outras 6 horas. A mistura reacional foi filtrada através de almofada de celita, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida produzindo 5-(tetra-hidrotiofen-3il)piridin-2-amina (0,661 g, 84%) como óleo incolor. LCMS (m/z): 181,2 (MH+), 0,39 minuto. Etapa 4. 1,1-dióxido de 3-(6-aminopiridin-3-il)tetra-hidrotiofeno
[00288] 5-(tetra-hidrotiofen-3-il)piridin-2-amina (0,33 g, 1,831 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (15 mL), a ele foi adicionado mCPBA (70%, 0,903 g, 3,66 mmol) e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 10 minutos e a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi dividido entre EtOAc/NaHCO3 saturado (30 mL/20 mL), a camada de EtOAc foi lavada com Na2CO3 saturado (20 mL), salmoura (20 mL), secada (Na2SO4), filtrada, e concentrada em vácuo produzindo 1,1-dióxido de 3-(6-aminopiridin-3-il)tetrahidrotiofeno como óleo marrom claro (96 mg, 25%). LCMS (m/z): 197,1 (MH+), 0,21 minuto. Etapa 5. 1,1-dióxido de 3-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)tetrahidrotiofeno
[00289] 1,1-dióxido de 3-(6-aminopiridin-3-il)tetra-hidrotiofeno (96 mg, 0,452 mmol) foi dissolvido em acetonitrila (5 mL) e a solução foi resfriada para 0 °C, a ela foi adicionado NBS (80 mg, 0,452 mmol) e a mistura foi agitada a 0 °C durante 40 minutos. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi dividido entre EtOAc/NaHCO3 saturado (30 mL/20 mL), a camada de EtOAc foi lavada com Na2CO3 saturada (20 mL), salmoura (20 mL), secada (Na2SO4), filtrada e concentrada em vácuo produzindo 1,1-dióxido de 3-(6-amino5-bromopiridin-3-il)tetra-hidrotiofeno como óleo marrom claro (50 mg, 38% de rendimento). LCMS (m/z): 293,0/291,0 (MH+), 0,29 minutos. Etapa 6. 4-(2-amino-5-(1,1-dioxidotetra-hidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida
[00290] A um reator de micro-ondas foi carregado com 1,1-dióxido de 3-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)tetra-hidrotiofeno (50 mg, 0,172 mmol), ácido 4-(benzilcarbamoil)-3-fluorofenilborônico (94 mg, 0,343 mmol), Na2CO3 aquoso a 2 M (0,34 mL) e aduzido de PdCl2(dppf)DCM (14 mg) e DME (3 mL) foram carregados em um frasconete de micro-ondas e a mistura foi purgada com argônio, selada e aquecida a 105 oC durante 20 minutos. A camada de DME da mistura reacional foi coletada, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi redissolvido em EtOAc (5 mL). A solução de EtOAc foi extraída com HCl a 1N (4 x 1 mL) e as camadas aquosas foram combinadas, purificadas com EtOAc (2 x 1 mL), em seguida concentradas sob pressão reduzida e o resíduo foi dividido entre EtOAc/Na2CO3 saturado (5 mL/1 mL), e o extrato de EtOAc foi lavado com Na2CO3 saturado (2 x 1 mL), salmoura (1 mL), secado (Na2SO4), concentrado e o resíduo foi redissolvido em acetonitrila/água (6 mL/6 mL), congelado e liofilizado produzindo 4-(2amino-5-(1,1-dioxidotetra-hidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-N-benzil-2fluorobenzamidaína racêmica como pó amarelo claro. LCMS (m/z): 440,2 (MH+), 0,60 minuto; 1H RMN (CD3OD) δ ppm 7,97 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,84 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,31 7,44 (m, 6H), 7,22 7,30 (m, 1H), 4,61 (s, 2H), 3,55 3,70 (m, 1H), 3,47 (dd, J = 13,3, 7,0 Hz, 1H), 3,33 3,39 (m, 1H), 3,08 3,25 (m, 2H), 2,53 (ddd, J = 13,1, 7,4, 5,7 Hz, 1H), 2,18 2,40 (m, 1H). O produto racêmico foi também resolvido por SFC quiral (coluna ChiralPak 5mic OJ, 4,6x100 (mm), 5mL/min, MeOH+0,1% DEA= 50%) para fornecer (S)-4-(2amino-5-(1,1-dioxidotetra-hidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-N-benzil-2fluorobenzamida (Rt = 1,7 minutos) e (R)-4-(2-amino-5-(1,1dioxidotetra-hidrotiofen-3-il)piridin-3-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida (Rt = 2,22 minutos). A estereoquímica absoluta foi arbitrariamente designada. Exemplo 7 Síntese de 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5-(hidroximetil)pirrolidin-3-il)piridin-3il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida Esquema 16
Figure img0041
Etapa 1.4-oxopirrolidina-1,2-dicarboxilato de (s)-l-terc-butil 2metila
[00291] Uma solução de 4-hidroxipirrolidina-1,2-dicarboxilajo de (2S,4R)-1-terc-butil 2-metila (10 g, 40,8 mmol) em DCM (100 mL) foi resfriada para 0 °C, em seguida tratada em porções com periodinano de Dess-Martin (17,29 g, 40,8 mmol) durante 20 minutos. A reação foi mantida a 0 °C durante 1 hora, e em seguida o banho frio foi removido. Depois de mais 3 horas em temperatura ambiente, a reação foi tratada com 300 mL de 1:1 de Na2SO3 saturado aquoso:NaHCO3 saturado aquoso. A reação foi agitada vigorosamente durante a noite em temperatura ambiente, em seguida as camadas foram separadas. As orgânicas foram lavadas com água e salmoura, em seguida secadas sobre sulfato de magnésio e concentradas. A mistura resultante foi suspensa em DCM (20 mL) em seguida filtrada sobre celita. As orgânicas foram concentradas. O óleo bruto foi também purificada por filtragem direta de sólidos granulados para fornecer 4-oxopirrolidina-1,2-dicarboxilato de (s)-1-terc-butil 2metila (8,53 g, 87% de rendimento). LCMS (m/z): 244,3 (MH+), 0,42 minutos. Etapa 2. 4-(((trifluorometil)sulfonil)óxi)-1H-pirrol-1,2(2H,5H)-dicarboxilato de 1-terc-butil 2-metila
[00292] Uma solução de 4-oxopirrolidina-1,2-dicarboxilato de (s)-1terc-butil 2metila (2,9 g, 11,92 mmol) em THF (30 mL) foi resfriada para -78 °C, em seguida tratada com LiHMDS a 1,0 M em THF (14,31 mL, 14,31 mmol). A reação foi mantida a -78 °C durante 1 hora, em seguida tratada com uma solução de N-(5-cloropiridin-2-il)-1,1,1trifluoro-N-((trifluorometil)sulfonil)metanossulfonamida (5,62 g, 14,31 mmol) em THF (15 mL). A reação foi mantida a -78 °C durante 1 hora, e em seguida colocada em um refrigerador a -30 °C durante a noite. Na conclusão, a reação foi extinguida com água, e diluída com éter. As orgânicas foram lavadas com solução aquosa a 1 N. NaOH (40 mL), em seguida secadas sobre sulfato de magnésio e concentradas. O resíduo foi dissolvido em clorofórmio (40 mL) e resfriado para 0 °C durante 30 minutos. A suspensão resultante foi concentrada para volume total de ~8 mL, em seguida o material viscoso foi filtrado e concentrado para fornecer (S)-4-(((trifluorometil)sulfonil)óxi)-1H-pirrol-1,2(2H,5H)dicarboxilato de 1-terc-butil 2-metila (4,4 g, 98% de rendimento). LCMS (m/z): 376,4 (MH+), 0,64 minutos. Etapa 3. 4-(6-aminopiridin-3-il)-1H-pirrol-1,2(2H,5H)-dicarboxilato de (S)-l-terc-butil 2-metila
[00293] Uma mistura de (S)-4-(((trifluorometil)sulfonil)óxi)-1H-pirrol1,2(2H,5H)-dicarboxilato de 1-terc-butil 2-metila (1,55 g, 4,13 mmol), 5(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina (1,00 g, 4,54 mmol), Pd(PPh3)4 (0,239 g, 0,21 mmol) e Cs2CO3 (3,36 g, 10,32 mmol) em THF (10 mL) e água (2 mL) foi aquecida por micro-ondas para 100 °C durante 10 minutos. A reação foi em seguida diluída com acetato de etila (50 mL) e água (25 mL). As camadas foram separadas e as orgânicas foram lavadas com água (25 mL) e salmoura (25 mL), secadas sobre sulfato de magnésio e concentradas, em seguida purificadas por cromatografia rápida [0 a 8% de eluente de DCM/metanol] para fornecer 4-(6-aminopiridin-3-il)-1H-pirrol-1,2(2H,5H)-dicarboxilato de (S)-1-terc-butil 2-metila (0,955g, 72% de rendimento). LCMS (m/z): 320,4 (MH+), 0,50 minutos. Etapa 4. 4-(6-aminopiridin-3-il)pirrolidina-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)1-terc-butil 2-metila
[00294] Uma solução desgaseificada de 4-(6-aminopiridin-3-il)-1Hpirrol-1,2(2H,5H)-dicarboxilato de (S)-1-terc-butil 2-metila (0,955 g, 2,99 mmol) em metanol (30 mL) foi tratada com 10% de Pd/C (0,183 g, 0,172 mmol), em seguida mantida sob uma atmosfera de hidrogênio durante 3 horas. Na conclusão, a reação em seguida filtrada sobre uma almofada de celita e concentrada para fornecer 4-(6-aminopiridin3-il)pirrolidina-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-1-terc-butil 2-metila (0,95 g. 99% de rendimento). LCMS (m/z): 322,5 (MH+), 0,52 minutos. Etapa 5. 4-(6-aminopiridin-3-il)-2-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,4R)-terc-butila
[00295] A uma solução de 4-(6-aminopiridin-3-il)pirrolidina-1,2dicarboxilato de (2S,4R)-1-terc-butil 2-metila (250 mg, 0,778 mmol) em THF de 2-metila (18 mL) foi adicionado LiAlH4 (59 mg, 1,56 mmol). Após 15 minutos, a reação foi extinguida pela adição sequencial de áua (60 μL), solução aquosa de NaOH a 1 N (60 μL) e água (60 μL). A mistura foi agitada vigorosamente durante 5 minutos, e em seguida filtrada sobre celita, enxaguada com THF de 2-metila. As orgânicas foram concentradas para fornecer 4-(6-aminopiridin-3-il)-2(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,4R)-terc-butila (230 mg, 100% de rendimento). LCMS (m/z): 294,1 (MH+), 0,49 minuto. Etapa 6. 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-(hidroximetil)pirrolidina-1carboxilato de (2S,4R)-terc-butila
[00296] Uma solução de 4-(6-aminopiridin-3-il)-2(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,4R)-terc-butila (230 mg, 0,784 mmol) em MeCN (10 mL) foi tratada com NBS (147 mg, 0,823 mmol). Depois de 10 minutos, a reação foi concluída. A reação foi tratada com 10 mL de 1:1 de NaHCO3 saturado aquoso:Na2S2O3 saturado aquoso e a mistura foi agitada vigorosamente durante 10 minutos. A mistura e foi diluída com acetato de etila (30 mL) e as camadas foram separadas. As orgânicas foram lavadas com salmoura, secadas sobre sulfato de magnésio e concentradas para fornecer 4-(6-amino-5bromopiridin-3-il)-2-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,4R)terc-butila (290 mg, 100% de rendimento). LCMS (m/z): 372,1/374,0 (MH+), 0,55 minutos. Etapa 7. 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5-(hidroximetil)pirrolidin-3-il)piridin-3-il)N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00297] Seguindo a etapa 5 no esquema 10, usando 4-(6-amino-5bromopiridin-3-il)-2-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S, 4R)terc-butila e ácido (S)-(4-((1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)-3fluorofenil)borônico, 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)-2-(hidroximetil)pirrolidina1-carboxilato de (2S,4R)-terc-butila foi obtido como sal de TFA (30 mg, 35% de rendimento. LCMS (m/z): 585,3 , 587,3 (MH+), 0,74 minuto. Em seguida, uma solução de 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)-2-(hidroximetil)pirrolidina1-carboxilato-TFA de (2S,4R)-terc-butila foi dissolvido em DCM (2 mL) e tratado com TFA (2,0 mL). Após 30 minutos, a reação foi concentrada, e em seguida purificada por HPLC preparativa de fase reversa produzindo 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5-(hidroximetil)pirrolidin-3-il)piridin3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida como o sal de bis-TFA (15,0 mg, 54% de rendimento). LCMS (m/z): 485,2, 487,2 (MH+), 0,51 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,59 (dd, J = 4,50, 7,24 Hz, 1H), 7,87 7,77 (m, 4H), 7,39 7,31 (m, 3H), 7,29 7,24 (m, 2H), 7,24 -7,16 (m, 1H), 5,15 5,05 (m, 1H), 3,87 3,71 (m, 5H), 3,70 3,60 (m, 2H), 3,59 3,46 (m, 1H), 2,41 (td, J = 6,46, 12,91 Hz, 1H), 1,98 1,82 (m, 1H), 1,29 1,16 (m, 1H). Exemplo 8 Síntese de 4-(2-amino-5-((7R,8aS)-4-oxo-hexa-hidro-1H-pirrolo[2,1 c][1,4]oxazin-7-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida Esquema 17
Figure img0042
[00298] Uma solução de 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5(hidroximetil)pirrolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida (45 mg, 0,063 mmol) (veja, Exemplo 7) e ácido cloroacético (7,2 mg, 0,076 mmol) em THF (2,5 mL) foi tratada com HATU (36 mg, 0,095 mmol) e DIEA (55 μL, 0,316 mmol). A reação foi mantida em temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reacional foi em seguida tratada diretamente com NaH (15,2 mg, 0,631 mmol). Após 15 minutos, a reação foi extinguida com água (2 mL) e a mistura reacional foi extraída com acetato de etila (10 mL). As orgânicas foram lavadas com salmoura, em seguida secadas sobre Na2SO4, concentradas, em seguida purificadas por HPLC preparativa de fase reversa produzindo 4-(2-amino-5-((7R,8aS)-4-oxo-hexa-hidro-1Hpirrolo[2,1-c][1,4]oxazin-7-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida (13,0 mg, 39% de rendimento). LCMS (m/z): 525,2, 527,2 (MH+), 0,59 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,61 (dd, J = 4,30, 7,04 Hz, 1H), 7,91 (d, J = 1,96 Hz, 1H), 7,84 7,76 (m, 2H), 7,40 7,31 (m, 3H), 7,30 7,24 (m, 2H), 7,24 7,16 (m, 1H), 5,16 5,05 (m, 1H), 4,18 4,08 (m, 2H), 3,99 3,85 (m, 2H), 3,85 3,70 (m, 3H), 3,53 3,42 (m, 2H), 3,39 3,29 (m, 1H), 2,34 2,19 (m, 1H), 1,67 (q, J = 11,48 Hz, 1H). Exemplo 9 Síntese de 4-(2-amino-5-((6R,7aS)-3-oxo-hexa-hidropirrolo[1,2c]oxazol-6-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida Esquema 18
Figure img0043
[00299] Uma solução de 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5(hidroximetil)pirrolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida (20 mg, 0,041 mmol) (Exemplo 7) e DIEA (72 μL, 0,412 mmol) em acetonitrila (0,5 mL) foi tratada com carbonildiimidazol (8,0 mg, 0,049 mmol). Após 1 hora, o material de partida foi completamente consumido. A mistura reacional foi extinguida com solução de NaOH aquoso a 1,0 N (1,0 mL) e a mistura foi agitada vigorosamente durante 5 minutos, em seguida, diluída com DCM (10 mL). As orgânicas foram lavadas com salmoura (2 mL) e secadas sobre Na2SO4 e concentradas. O material bruto foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa produzindo 4-(2-amino-5-((6R,7aS)-3-oxohexa-hidropirrolo[1,2-c]oxazol-6-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida (2,0 mg, 7% de rendimento). LCMS (m/z): 511,3, 513,3 (MH+), 0,61 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,92 7,84 (m, 2H), 7,46 (s, 1H), 7,44 7,40 (m, 1H), 7,38 7,35 (m, 1H), 7,34 7,28 (m, 1H), 5,19 (t, J = 5,87 Hz, 1H), 4,61 4,56 (m, 1H), 4,34 (dd, J = 3,52, 9,00 Hz, 1H), 4,24 4,15 (m, 1H), 3,92 3,80 (m, 1H), 3,74 3,62 (m, 1H), 2,41 (td, J = 5,72, 11,64 Hz, 1H), 1,84 1,71 (m, 1H). Exemplo 10 Síntese de 4-(2-amino-5-((6R,7aS)-3-imino-hexa-hidropirrolo[1,2c]oxazol-6-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida Esquema 19
Figure img0044
[00300] Uma mistura em temperatura ambiente de 4-(2-amino-5((3R,5S)-5-(hidroximetil)pirrolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida (12,5 mg, 0,026 mmol) (Exemplo 7) e carbonato de césio (33,6 mg, 0,103 mmol) em etanol (0,75 mL) foi tratada com brometo de cianogênio (6,2 μL, 0,031 mmol). Após 1 hora, a reação foi diluída com água (1,0 mL) e extraída em acetato de etila (10 mL). As orgânicas foram lavadas com salmoura (2 mL), em seguida secadas sobre Na2SO4 e concentradas e purificadas por HPLC preparativa de fase reversa produzindo 4-(2-amino-5-((6R,7aS)-3-iminohexa-hidropirrolo[1,2-c]oxazol-6-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida. LCMS (m/z): 510,1, 512,1 (MH+), 0,52 minutos. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,63 8,54 (m, 1H), 7,92 7,85 (m, 2H), 7,80 (t, J = 7,83 Hz, 1H), 7,40 7,31 (m, 3H), 7,29 7,24 (m, 2H), 7,24 7,16 (m, 1H), 5,14 5,06 (m, 1H), 4,97 4,88 (m, 1H), 4,61 4,49 (m, 2H), 3,88 3,70 (m, 4H), 3,32 (s, 1H), 2,412,31 (m, 1H), 2,02 -1,89 (m, 1H). Exemplo 11 4-(2-amino-5-((6R,7aS)-3-tioxo-hexa-hidropirrolo[1,2-c]oxazol-6il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida Esquema 20
Figure img0045
[00301] A uma solução de 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)-2-(hidroximetil)pirrolidina1-carboxilato de (2S,4R)-terc-butila (45 mg, 0,063 mmol) (veja, Exemplo 7) em acetonitrila (0,75 mL) e DMF (0,5 mL) foram adicionados DIEA (42 μL, 0,240 mmol) e tiocarbonil diimidazol (15,6 mg, 0,088 mmol). Após 2 horas, a reação foi extinguida com solução aquosa a 1 N. NaOH (1 mL) e agitado vigorosamente para a realizar a deposição de um produto secundário de tiocarbamato misto. A reação foi em seguida diluída com acetato de etila (10 mL), lavada com água (5 mL) e salmoura (5 mL), em seguida secada sobre sulfato de sódio e concentrada. O material bruto foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa produzindo 4-(2-amino-5-((6R,7aS)-3-tioxo-hexa-hidropirrolo[1,2c]oxazol-6-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida (3,2 mg, 11% de rendimento). LCMS (m/z): 527,3, 529,3 (MH+), 0,67 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,64 (dd, J = 3,91, 7,04 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 1,96 Hz, 2H), 7,83 7,77 (m, 3H), 7,39 7,32 (m, 5H), 7,30 7,26 (m, 3H), 7,25 7,19 (m, 2H), 5,15 5,07 (m, 2H), 4,73 4,69 (m, 2H), 4,45 4,35 (m, 3H), 3,85 3,65 (m, 8H), 2,38 (td, J = 5,58, 11,54 Hz, 2H), 1,80 1,70 (m, 1H). Síntese de 5-morfolino-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2il)piridin-2-amina Esquema 21
Figure img0046
Etapa 1. (5-bromopiridin-3-il)carbamato de etila
[00302] 5-bromopiridin-3-amina (20 g, 116 mmol) foi dissolvido em DCM (500 mL) e piridina (28,0 mL, 347 mmol) foi adicionado, segudi por cloroformiato de etila (11,44 mL, 119 mmol) gota a gota. A mistura reacional foi agitada durante 1,5 hora em temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com DCM. As duas fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com solução de CuSO4 a 10%, (2x) solução de NaHCO3 saturado, (1x) salmoura (1x) secadas (Na2SO4) e evaporadas. O resíduo foi triturado com dietil éter, filtrado e secado obtendo (5-bromopiridin-3-il)carbamato de etila (21,58 g, 76 %) como um solido branco. LCMS (m/z): 247,0 (MH+), 0,58 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3 ) δ ppm8,62 8,15 (m, 3 H) 7,00 (br. s., 1 H) 4,27 (q, J=7,0 Hz, 2 H) 1,34 (t, J=7,0 Hz, 3 H). Etapa 2. (5-bromo-2-nitropiridin-3-il)carbamato de etila
[00303] A uma mistura de H2SO4concentrado (60 mL, 1126 mmol) e HNO3 fumegante (40 mL, 895 mmol), (5-bromopiridin-3-il)carbamato de etila (21,5 g, 88 mmol) foi adicionado em porções a 0 °C. Após agitar a 0 °C durante 5 minutos, a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e vertida em água gelada. Um precipitado formado foi filtrado e lavado completamente com água e secado. (5bromo-2-nitropiridin-3-il)carbamato de etila (21,26 g, 84%) foi desse modo obtido como um solido branco. LCMS (m/z): 290,1 (MH+), 0,76 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9,63 (br. s., 1 H) 9,33 (d, J=2,0 Hz, 1 H) 8,28 (d, J=2,0 Hz, 1 H) 4,32 (q, J=7,3 Hz, 3 H) 1,68 (br. s., 2 H) 1,38 (t, J=7,0 Hz, 4 H). Etapa 3, 5-Bromo-2-nitropiridin-3-amina
[00304] (5-bromopiridin-3-il)carbamato de etila (8 g, 27,6 mmol) foi dissolvido em EtOH (250 mL) e a solução foi resfriada abaixo de 5 °C com um banho de gelo. KOH a 1M frio (130 mL, 130 mmol) foi adicionado gota a gota, mantendo-se abaixo de 5 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, concentrada sob pressão reduzida. Sob concentração, um precipitado forma-se, que foi filtrado, lavado com água e secado fornecendo 5-bromo-2-nitropiridin3-amina (5,02 g, 83%). LCMS (m/z): 220,1 (MH+), 0,46 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm7,97 (d, J=1,6 Hz, 1 H) 7,50 (d, J=2,0 Hz, 1 H) 6,03 (br. s., 2 H). Etapa 4. 5-morfolino-2-nitropiridin-3-amina
[00305] 5-Bromo-2-nitropiridin-3-amina (2,32 g, 10,6 mmol) foi suspenso em morfolina (5 mL, 57,4 mmol) e a solução foi aquecida a 140 °C durante 1 horas. A mistura reacional foi resfriada para temperatura ambiente e o precipitado sólido foi triturado com água e filtrado. O sólido, este obtido, foi lavado com água, EtOH, e secado, obtendo 5morfolino-2-nitropiridin-3-amina (2,0 g, 8,92 mmol, 84%) como um pó amarelo claro. Dependendo do resultado da etapa anterior, este sólido pode ainda conter o derivado de etóxi da etapa anterior, e os dois compostos podem ser separados por cromatografia de coluna em sílica gel (analogix, 20% de EtOAc em heptano durante 2 minutos, a 100% de EtOAc a 15 minutos, em seguida 100% de EtOAc a 20 minutos). LCMS (m/z): 225,1(MH+), 0,43 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 10,54 (s, 1 H) 8,57 (d, J=2,7 Hz, 1 H) 7,85 (d, J=2,7 Hz, 1 H) 7,70 (d, J=2,3 Hz, 1 H) 6,32 (d, J=2,3 Hz, 1 H) 6,00 (br. s., 1 H) 3,93 3,83 (m, 7 H) 3,83 3,74 (m, 3 H) 3,63 3,55 (m, 3 H) 3,51 3,43 (m, 3 H) 3,413,31 (m, 4 H). Etapa 5. 4-(5-bromo-6-nitropiridin-3-il)morfolina
[00306] Um frasco de base redonda de três gargalos equipado com uma barra de aitação magnética, um funil de gotejamento e um termômetro, foi carregado com CuBr (629 mg, 4,4 mmol) e HBr (25 mL). A solução foi resfriada para -5 °C (banho de sal gelado). 5-morfolino-2nitropiridin-3-amina (983 mg, 4,4 mmol) foi lentamente adicionado, seguido pela adição lenta de uma solução de NaNO2 (333 mg, 4,8 mmol) em H2O (25 mL) por meio do funil de gotejamento, garantindo que a temperatura não aumente acima de 0 °C. A mistura reacional foi agitada a -5 °C durante 1 hora, aquecida para temperatura ambiente e agitada durante mais 1,5 horas. A reação foi considerada concluída por LCMS e a mistura foi resfriada novamente para 0 °C, extinguida com NaOH a 6 N para pH 12, diluída com água e extraída com EtOAc. EtOAc foi lavado com água (x2), salmoura (x1) secado e concentrado. O resíduo foi azeotropado com EtOH secado sob vácuo elevado, obtendo 4-(5-bromo-6-nitropiridin-3-il)morfolina (1,21 g, 4,20 mmol, 96 % de rendimento) como um sólido amarelo claro. LCMS (m/z): 288,2 (MH+), 0,65 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8,08 7,99 (d, J=2,3 Hz, 1 H) 7,41 (d, J=2,3 Hz, 1 H) 3,98 3,81 (m, 4 H) 3,45 3,30 (m, 4 H). Etapa 6. 3-bromo-5-morfolinopiridin-2-amina
[00307] 4-(5-Bromo-6-nitropiridin-3-il)morfolina (95 mg, 0,33 mmol) foi dissolvido em EtOH (12 mL) e água (3,0 mL) foi adicionada, seguido por SnCl2 (313 mg, 1,65 mmol). A mistura reacional foi aquecida para 80 °C durante 2 horas, resfriado para temperatura ambiente e diluída com DCM. As duas fases foram separadas, a fase orgânica foi lavada com água. A fase de água foi novamente extraída com DCM. O pH foi ajustado para 12 com NaOH a 6N e a mistura foi também exraída com DCM. Os extratos orgânicos foram combinados, secados (Na2SO4) e evaporados sob pressão reduzida obtendo a 3-bromo-5morfolinopiridin-2-amina desejada (71,5 mg, 84%). LCMS (m/z): 260,0 (MH+), 0,37 minuto. Método alternativo
[00308] A uma solução de 4-(5-Bromo-6-nitropiridin-3-il)morfolina (2 g, 6,9 mmol) em MeOH (150 mL) em um frasco de base redonda foi adicionado pó de Zn (4,54 g, 69,4 mmol). A mistura reacional foi resfriada para 0 °C. NH4Cl sólido (3,71 g, 69,4 mmol) foi adicionado em porções, durante 5 minutos. A mistura reacional heterogênea foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas, filtrada através de um tampão de celita, lavando a massa filtrada com metanol e etanol. O filtrado foi concentrado para um sólido amarronado que foi purificado por cromatografia de coluna rápida em sílica gel (ISCO, coluna de 80 g, 0 a 70% de EtOAc/heptano em 15 minutos e 70% de EtOAc a 25 minutos), obtendo 3-bromo-5-morfolinopiridin-2-amina (936 mg, 52,2 %) como um sólido levemente não totalmente branco. LCMS (m/z): 258,2 (MH+), 0,35 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,75 (d, J=2,3 Hz, 1 H) 7,40 7,30 (m, 1 H) 4,66 (br. s., 2 H) 3,913,74 (m, 4 H) 3,07 2,90 (m, 4 H). Etapa 7. 5-Morfolino-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2il)piridin-2-amina
[00309] 3-bromo-5-morfolinopiridin-2-amina (36 mg, 0,14 mmol), bis(pinacolato)diboro (70,8 mg, 0,28 mmol), acetato de potássio (41,1 mg, 0,42 mmol) e triciclo-hexilfosfina (5,9 mg, 0,021 mmol) foram dissolvidos em 1,4-dioxano (1,5 mL) em um recipiente de pressão. A mistura foi pulverizada com N2 durante 5 minutos e diacetato de paládio (3,1 mg, 0,014 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi aquecida para 110 °C durante 16 horas, resfriada para temperatura ambiente e diluída com acetato de etila. SyliaBondDMT foi adicionado, a mistura foi agitada durante 1 hora, filtrada sobre uma almofada de celita e concentrada, obtendo 21,3 mg de um sólido que contém o 5-morfolino-3(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina desejado. Estesólido foi usado bna etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 224,0 (MH+), 0,33 min (para ácido borônico). Síntese de 3-bromo-5-((2R,4R)-2-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin2-amina e 3-bromo-5-((2S,4S)-2-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2amina Esquema 22
Figure img0047
Etapa 1.2-metil-3,6-di-hidro-2H-piran-4-il trifluorometanossulfonato
[00310] A uma solução de 2-metildi-hidro-2H-piran-4(3H)-ona (2g, 17,52 mmol) em THF (8,76 mL) foi adicionado LiHMDS (18,40 mL, 18,40 mmol) gota a gota a -78 °C. A mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 1,5 horas, em seguida N-(5-cloropiridin-2-il)-1,1,1-trifluoroN-((trifluorometil)sulfonil)metanossulfonamida (7,22 g, 18,40 mmol) em THF (17 mL) foi adicionado a -78 °C. A mistura foi agitada a -78 °C durante 1 hora, e em seguida deixada aquecer para temperatura ambiente, e agitada durante a noite. A reação foi monitorada por TLC. Depois de extinguida com NaHCO3 saturado, a mistura reacional foi extraída com EtOAc 3 vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, e secadas sobre sulfato de sódio anidroso, filtradas e concentradas em vácuo. O composto desejado (4,2 g, 17,06 mmol) foi obtido como um óleo marrom por cromatografia de coluna rápidaeluindo com 30% de EtOAc em heptano. Etapa 2. 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirazin-2-amina
[00311] A uma solução de 5-bromopirazin-2-amina (1 g, 5,75 mmol), bis(pinacolato)diboro (2,92 g, 11,49 mmol), e aduzido de PdCl2(dppf)CH2Cl2 (0,469 g, 0,575 mmol) em dioxano (16,42 mL) foi adicionado acetato de potássio (1,692 g, 17,24 mmol) apenas à direita após desgaseificação. A mistura reacional foi aquecida em microondas a 120 °C durante 20 minutos, diluída com EtOAc, e a mistura reacional foi filtrada através de celita, concentrada, e o produto bruto foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 140 (MH+ para ácido borônico), 0,12 minutos. Etapa 3, 5-(2-metil-3,6-di-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina
[00312] A uma solução de 2-metil-3,6-di-hidro-2H-piran-4-il trifluorometanossulfonato (0,637 g, 2,88 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)pirazin-2-amina (0,914 g, 3,74 mmol), e aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0,235 g, 0,288 mmol) em DME (9,82 mL) foi adicionado Na2CO3 a 2 M (3,27 mL). A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas (120 oC, 10 minutos). Acetato de etila foi adicionado, e lavado com NaHCO3 saturado, e água. Em seguida o composto desejado foi extraído para camada aquosa de HCl a 1N, e lavada com EtOAc. Basificado com NaOH a 2N, o produto foi extraído para camada de EtOAc. Camada orgânica de EtOAc foi lavada com água e secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer 250 mg de composto desejado. LCMS (m/z): 192,2 (MH+), 0,40 minutos. Etapa 4. 5-((2R,4R)-2-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2amina
[00313] A uma solução de 5-(2-metil-3,6-di-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-amina (250 mg, 1,307 mmol) em MeOH (13,100 mL) foi adicionado Pd/C (278 mg, 0,261 mmol). A solução foi desgaseificada por corrente de N2 duante 10 minutos. Após inundado por gás de H2, balão de hidrogênio foi equipado. A mistura reacional foi agitada durante 25 horas. Após filtrado através de celita, o material volátil foi removido para fornecer o produto bruto, que foi purificado com cromatografia rápidaeluindo com 0 a 10% de MeOH em DCM para fornecer 180 mg de diastereômeros. Em seguida separação quiral (Coluna ChiralPak 5mic AD, 4,6x100 (mm), 5mL/min, EtOH+0,1% DEA = 15%) forneceu 40 mg de 5-((2R,4R)-2-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2amina (Rt = 1,32 minuto; LCMS (m/z): 194,2 (MH+), 0,44 minutos) em 22% de rendimento e 30 mg de 5-((2S,4S)-2-metiltetra-hidro-2H-piran4-il)pirazin-2-amina desejado (Rt = 1,83 minuto; LCMS (m/z): 194,2 (MH+), 0,44 minutos) em 16% de rendimento. Etapa 5. 3-bromo-5-((2R,4R)-2-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2amina e 3-bromo-5-((2S,4S)-2-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2amina
[00314] A uma solução de 5-((2R,4R)-2-metiltetra-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-amina (40 mg, 0,207 mmol) em acetonitrila (3 mL) foi adicionado NBS (35,0 mg, 0,197 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 15 minutos. Depois de extinguida com NaHCO3, a mistura reacional foi extraída com EtOAc três vezes. As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas com água, e salmoura. Secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas para fornecer 47 mg de 3bromo-5-((2R,4R)-2-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina, que foi usado no estado em que se encontrava. LCMS (m/z): 274 (MH+), 0,64 minutos. Para 5-((2S,4S)-2-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2amina, seguindo o método acima, 3-bromo-5-((2S,4S)-2-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina foi obtido. LCMS (m/z): 274 (MH+), 0,65 minutos. A estereoquímica absoluta dos produtos foi designada arbitrariamente. Síntese de 3-bromo-5-ciclopropilpirazin-2-amina Esquema 23
Figure img0048
Etapa 1.5-ciclopropilpirazin-2-amina
[00315] A um frasconete de micro-ondas foi carregado com 5bromopirazin-2-amina (400 mg. 2,3 mmol), 2-ciclopropil-4,4,5,5tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,16 g, 6,9 mmol), KOt-Bu (1M em tBuOH, 9,2 mL), 1,4-dioxano (10 mL), e água (0,10 mL), e a mistura foi purgada com argônio, seguida por adição de tetracis paládio (266 mg, 0,23 mmol) e purga final de argônio, em seguida a mistura foi selada e aquecida a 150 °C por meio de reator de micro-ondas durante 20 minutos. À mistura reacional foi adicionada a 2 porção de Tetracis de paládio (266 mg) e a reação foi aquecida a 160 °C por meio de reator de micro-ondas durante 20 minutos. A mistura reacional foi filtrada através de uma camada fina de celita, e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi triturado com EtOAc (6 mL), e os precipitados foram removidos por meio de centrifugação e filtragem. O sobrenadante de EtOAc foi novamente extraído com solução de TFA aquosa (3 x 3 mL, TFA/água1 mL/10 mL). As soluções de TFA foram combinadas, diluídas com acetonitrila (10 mL), congeladas e liofilizadas para fornecer 5ciclopropilpirazin-2-amina em um pó amarelo. O produto após liofilização foi transferido para um frasconete, basificado para pH > 12 com Na2CO3 saturado (3 mL), extraída com EtOAc (4 x 6 mL), e os extratos de EtOAc foram combinados, e concentrados e também secados sob vácuo elevado, e base livre de 5-ciclopropilpirazin-2-amina final foi obtida (79 mg, 25,4% de rendimento). LCMS (m/z): 136,1 (MH+), 0,30 minutos. 1H RMN (CD3OD) δ ppm 8,29 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 2,00 2,08 (m, 1H), 0,94 1,00 (m, 2H), 0,87 0,93 (m, 2H). Etapa 2. 3-bromo-5-ciclopropilpirazin-2-amina
[00316] Uma solução de 5-ciclopropilpirazin-2-amina (79 mg, 0,584 mmol) em acetonitrila (10 mL) foi resfriada abaixo de 0 °C, e tratada com adição gradual de NBS (140 mg, 1,46 mmol) durante o curso de 1 hora ao mesmo tempo em que monitorando intimamente o progresso de reação por LCMS. A mistura reacional foi concentrada e o resíduo foi triturado com EtOAc (2 x 5 mL) e os sobrenadantes de EtOAc foram separados por meio de centrifugação, combinados e lavados com NaOH a 1 N (3 x 1 mL) e a camada de EtOAc foi secada (sobre Na2SO4), concentrada e um resíduo marrom bruto foi obtido. O produto bruto foi também purificado por cromatografia rápida em sílica gel eluído com gradiente de EtOAc/CH2Cl2 (0 a 30%) para fornecer 3-bromo-5ciclopropilpirazin-2-amina em sólido incolor (38,2 mg, 38,5% de rendimento). LCMS (m/z): 214,0/216,0 (MH+), 0,64 minutos. Síntese de 3'-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-[3,4‘bipiridin]-6-amina Esquema 24
Figure img0049
Etapa 1.3'-metil-3,4'-bipiridin-6-amina
[00317] A uma solução de (2 g, 9,09 mmol) em DME (45,4 mL) foi adicionado 4-cloro-3-metilpiridina (1,739 g, 13,63 mmol), e aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (0,742 g, 0,909 mmol) e Na2CO3 a 2 M (15,15 mL), a mistura foi purgada com nitrogênio durante 5 minutos. A mistura reacional em bomba de vidro selada foi aquecida para 120 oC durante a noite. A mistura reacional foi extraída por EtOAc, as camadas orgânicas e lavadas com salmoura, água. A orgânica foi secada por Na2SO4 anidroso, filtrada e concentrada para produzir o produto bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida(0 a 100% de EtOAc/heptano) para produzir 3'-metil-3,4'-bipiridin-6-amina (255 mg, 1,377 mmol, 15,15 % de rendimento). LCMS (m/z): 406,3 (MH+), 0,47 min Etapa 2. 5-bromo-3'-metil-3,4'-bipiridin-6-amina
[00318] A uma solução gelada de 3'-metil-3,4'-bipiridin-6-amina (250 mg, 1,350 mmol) em DCM (4499 μL) foi adicionado NBS (264 mg, 1,485 mmol) em duas porções. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 2 horas. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila, e foi lavada com água, salmoura, secada e concentrada. O resíduo foi tratado com heptano, o sólido filtrado para fornecer 5-bromo-3'-metil3,4'-bipiridin-6-amina (350 mg, 1,325 mmol, 98 % de rendimento) como um sólido de cor marrom, usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 264,4/266,4 (MH+), 0,32 minuto; 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 8,51 (s, 1 H), 8,47 (d, J = 5,1 Hz, 1 H), 8,04 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 7,12 (d, J = 5,1 Hz, 1 H), 5,06 (br. s., 2 H), 2,32 (s, 3 H). Etapa 3, 3'-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,4'bipiridin-6-amina
[00319] A uma suspensão de (5-bromo-3'-metil-3,4'-bipiridin-6amina (100 mg, 0,379 mmol) em 1,4-dioxano (947 μL) foi adicionado bispinB (288 mg, 1,136 mmol) e acetato de potássio, (186 mg, 1,893 mmol). A mistura foi purgada com nitrogênio durante 3 minutos, em seguida aduzido de PdCl2(dppf)CH2Cl2 (30,9 mg, 0,038 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi aquecida para 120 °C em micro-ondas durante 10 minutos. A formação de produto desejado foi confirmada. Ainda algum material de partida permaneceu, reenviado para microondas 120 °C durante 10 minutos. A mistura reacional foi filtrada através de filtrar e enxaguada com dioxano (0,7 mL), a solução filtrada foi usada na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 230,1 (MH+ para ácido borônico), 0,22 minutos. Síntese de 1 -(4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidin-1-il)etanona Esquema 25
Figure img0050
[00320] À 3-bromo-5-(piperidin-4-il)pirazin-2-amina (50 mg, 0,194 mmol) em DCM (4 mL) em banho de gelo foram adicionados DIEA (0,136 mL, 0,778 mmol) e cloreto de acetila (0,017 mL, 0,233 mmol). A mistura reacional foi agitada em um banho de gelo 30 minutos. A mistura reacional foi dividida entre DCM e água. A camada de DCM foi separada e lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. Prosseguiu para a etapa seguinte. LCMS (m/z): 299,1/301,1 (MH+), 0,508 minutos. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,81-7,69 (m, 2 H), 7,62-7,45 (m, 2 H), 7,37-7,09 (m, 6 H), 6,5 (dd, J=8,61, 2,35 Hz, 1 H), 6,50 (dd, J=13,50, 2,15 Hz, 1 H), 5,17-5,01 (m, 1 H), 4,55 (d, J=13,30 Hz, 1 H), 3,94 (d, J=13,69 Hz, 1 H), 3,83-3,63 (m, 2 H), 2,88 (tt, J=11,84, 3,62Hz, 1 H), 2,67 (td, J=12,91, 2,35 Hz, 1 H), 2,03 (s, 3 H), 1,96-1,79 (m, 2 H), 1,78-1,50 (m, 2 H). Síntese de 3-bromo-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amina Esquema 26
Figure img0051
Etapa 1.5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amina
[00321] A um frasconete de micro-ondas foi carregado 5bromopiridin-2-amina (500 mg, 2,89 mmol), 1-metil-4-(4,4,5,5tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (1,2 g, 5,78 mmol), Na2CO3 aquoso (2 M, 5,78 mL), PdCl2(dppf) CH2Cl2 (0,236 g) e DME (15 mL), e a mistura reacional foi purgada com argônio durante 5 minutos, selada e aquecida com reator de micro-ondas a 115 °C durante 20 minutos. A camada de DME da mistura reacional foi coletada, concentrada e o resíduo foi submetido à cromatografia de coluna rápida em sílica gel eluído com gradiente Metanol/CH2Cl2 e 5-(1-metil-1Hpirazol-4-il)piridin-2-amina foi obtido como sólido marrom claro (383 mg, 76% de rendimento). LCMS (m/z): 175,2 (MH+), 0,34 minutos. Etapa 2. 3-bromo-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amina
[00322] À solução de 5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amina (380 mg, 2,18 mmol) acetonitrila (30 mL) a 0 °C foi adicionado NBS (388 mg, 2,18 mmol) e a mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 30 minutos, em seguida em temperatura ambiente durante mais 40 minutos. A mistura reacional foi em seguida concentrada, redissolvida em metanol, à ela foi adicionado LiOH sólido (80 mg), sonicado e concentrado, o resíduo foi triturado com água (2 x 5 mL), e os sobrenadantes foram descartados. o resíduo foi secado sob vácuo elevado, em seguida triturado com EtOAc (2 x 8 mL), e os sobrenadantes foram coletados, combinados, e concentrados e o resíduo marrom claro foi obtido o 3-bromo-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amina bruto. LCMS (m/z): 253,0/255,0 (MH+), 0,38 minutos. Síntese de (S)-4-(2-amino-4-fluoro-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3il)-2-fluoro-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida Esquema 27
Figure img0052
Etapa 1.5-bromo-4-fluoropiridin-2-amina
[00323] A uma solução de 4-fluoropiridin-2-amina (400 mg, 3,57 mmol) em acetonitrila (35,7 mL) foi adicionado NBS (648 mg, 3,64 mmol) em três porções a 0 °C . A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 20 minutos. LCMS mostrou a reação concluída. Depois de extinguida com Na2S2O3 saturado e NaHCO3, agitada durante 30 minutos. A mistura reacional foi extraída com EtOAc 3 vezes. Lavada por NaHCO3 saturado, água e salmoura, secada e concentrada. O material bruto foi triturado com éter e levada para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 192,9 (MH+), 0,32 minutos. Etapa 2. 4-fluoro-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amina
[00324] À mistura reacional de 5-bromo-4-fluoropiridin-2-amina (369 mg, 1,932 mmol), 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)1H-pirazol (603 mg, 2,90 mmol), PdCl2(dppf)DCM (141 mg, 0,193 mmol) e DME (9,660 μL), Na2COβ a 2M (3,220 mL) foram adicionados. A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas (120 °C , 12 minutos). À mistura reacional, sulfato de sódio anidroso foi adicionado, filtrado, e concentrado. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 100% de EtOAc (contendo 10% de MeOH/heptano para fornecer 280 mg de produto desejado in 75 % de rendimento. LCMS (m/z): 193,1 (MH+), 0,35 minutos. Etapa 3, 3-bromo-4-fluoro-5-(1 -metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2-amina
[00325] A uma solução de 4-fluoro-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin2-amina (150 mg, 0,780 mmol) em acetonitrila (7. 805 mL) foi adicionado NBS (142 mg, 0,796 mmol) em três porções a 0 °C . A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 20 minutos. LCMS mostrou a reação concluída. Depois de extinguida com Na2SO3 saturado e NaHCO3, agitada durante 30 minutos, a mistura reacional foi extraída com EtOAc 3 vezes. Filtrado o sólido. O sólido não foi o produto desejado. As camadas de EtOAc foram lavadas por NaHCO3 saturadas, água e salmoura, secadas e concentradas. O material bruto foi purificado com cromatografia rápidaeluindo com 0 a 100% de EtOAc (contendo 10% MeOH/heptano para fornecer 30 mg de produto desejado. LCMS (m/z): 273,1 (MH+), 0,46 minutos. Síntese de (+/-)-(1S,3R)-3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)ciclopentanol, (+/-)-(1R,3R)-3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)ciclopentanol, e (+/-)-3bromo-5-((1R,3R)-3-metoxiciclopentil)pirazin-2-amina Esquema 28
Figure img0053
Etapa 1.3-bromociclopent-2-enona
[00326] A uma solução de PPh3 (44,1 g, 168 mmol) em benzeno (510 mL), Br2 (8,67 mL, 168 mmol) foi adicionado gota a gota a 0 °C, a solução tornou-se uma suspensão amarela, em seguida TEA (23,44 mL, 168 mmol) foi adicionado lentamente. À mistura foi adicionado ciclopentano-1,3-diona (15 g, 153 mmol) em benzeno (100 mL). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Éter, 200 mL, foi adicionado, a mistura reacional foi em seguida filtrada. O filtrado foi concentrado, o resíduo foi tratado com Et2O, o sólido foi filtrado, repetido uma vez mais. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte. LCMS (m/z): 160,9 (MH+), 0,35 minuto. Etapa 2. 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclopent-2-enona
[00327] A uma solução de 3-bromociclopent-2-enona (13 g, 81 mmol) em dioxano (161 mL) foi adicionado B2(PIN)2 (41,0 g, 161 mmol) e PdCl2(dppf)CH2Cl2 (2,95 g, 4,04 mmol). A mistura reacional foi desgaseificada durante 15 minutos por borbulhamento de N2. Em seguida KOAc (23,77 g, 242 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante a noite. Aós refriamento, a mistura reacional foi filtrada através de um filtro de vidro frita e enxaguada com dioxano (160 mL), o filtrado foi concentrado em vácuo produzindo 3-(4,4,5,5tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclopent-2-enona bruto, que foi usado para a etapa seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 126,9 (MH+), 0,17 minutos. Etapa 3, 3-(5-aminopirazin-2-il)ciclopent-2-enona
[00328] Ao 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclopent-2enona (2,99 g, 14,37 mmol) (o filtrado da última etapa) foi adicionado 2-amino-5 bromopirazina (2,5 g, 14,37 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (1,173 g, 1,437 mmol), Na2CO3 (7,61 g, 71,8 mmol) e água (17,96 mL) a mistura reacional foi agitada em banho de óleo a 100 °C durante a noite, filtrado através de celita. A mistura reacional foi em seguida extraída por EtOAc. A orgânica foi em seguida usada HCl a 3N (20 mL) lavada 2 vezes, e água 50 mL uma vez, a AQ foi em seguida neutralizada por NaOH to pH= 8, a mistura reacional foi em seguida extraído por CHCl3/IPA (7:3) 3 vezes, a orgânica foi secada e concentrada e usada no estado em que se encontra. LCMS (m/z): 176,1 (MH+), 0,32 minutos. Etapa 4. N,N(5-(3-oxociclopent-1-en-1-il)pirazin-2-il)carbamato de diterc-butila
[00329] A uma solução de 3-(5-aminopirazin-2-il)ciclopent-2-enona (500 mg, 2,85 mmol) em DCM (9,5mL) foram adicionados Boc2O (1988 μl, 8,56 mmol) e DMAP (523 mg, 4,28 mmol), a mistura reacional é uma solução escura, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura reacional foi concentrada e purificada por cromatografia rápida (0 a 40% de EtOAc/heptano) para fornecer (5-(3-oxociclopent-1-en-1-il)pirazin-2-il)carbamato de N,N-di-tercbutila em 47% de rendimento. LCMS (m/z): 376,2 (MH+) 0,96 minutos. 1H RMN (400MHz CDCl3) δ ppm 8,77 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 8,72 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 6,89 (s, 1 H), 3,15 (td, J = 2,3, 4,7 Hz, 2 H), 2,64 (td, J = 2,4,5,0 Hz, 2 H), 1,45 1,37 (m, 18H). Etapa 5. (5-(3-oxociclopentil)pirazin-2-il)carbamato de (+/-)-N,N-Diterc-butila
[00330] (5-(3-oxociclopent-1-en-1-il)pirazin-2-il)carbamato de N,Ndi-terc-butila (600 mg, 1,598 mmol) em metanol foi purgado por N2 durante 10 minutos, o Pd/C (170 mg, 0,160 mmol) foi adicionado, a mistura reacional foi purgada por N2 durante mais 5 minutos, a mistura reacional foi em seguida carregada com balão de hidrogênio e agitada em temperatura ambiente durante 2 horas, filtrada através de celita, o filtrado foi concentrada, o material bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 378,1 (MH+), 0,83 minutos. Etapa 6. (5-((1R,3R)-3-hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)carbamato de (+/-)N,N-Di-terc-butila e (5-((1R,3S)-3-hidroxiciclopentil)pirazin-2il)carbamato de (+/-)-N,N-Di-terc-butila
[00331] (5-(3-oxociclopentil)pirazin-2-il)carbamato de (+/-)-N,N-Diterc-butila (600 mg, 1,590 mmol) foi dissolvido em metanol (5299 μl), em seguida NaBH4 (90 mg, 2,385 mmol) foi adicionado, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos, NH4Cl saturado asicionado, a mistura reacional foi em seguida concentrada para remover metanol. Extraída por EtOAc, a orgânica foi lavada por solução de NaHCO3 saturado, água e salmoura, secada sobre Na2SO4 anidroso, concentrada para produzir o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápidapara fornecer (5-((1R,3R)-3hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)carbamato de (+/-)-N,N-Di-terc-butila (24,9%). LCMS (m/z): 280,1 (MH+), 0,86 minutos. 1H RMN (400MHz ,CDCl3) δ ppm 8,50 8,43 (m, 1 H), 8,43 8,33 (m, 1 H), 4,40 (br. s., 1 H), 3,58 3,45 (m, 1 H), 2,36 2,17 (m, 2 H), 2,02 1,75 (m, 5 H), 1,50 1,39 (m, 18 H). (5-((1R,3S)-3-hidroxiciclopentil)pirazin-2il)carbamato de (+/-)-N,N-Di-terc-butila (4%), LCMS (m/z): 380,1 (MH+), 0,85 minutos. 1H RMN (400MHz ,CDCl3) δ ppm 8,43 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 8,36 8,32 (m, 1 H), 4,59 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 3,69 3,57 (m, 1 H), 2,37 2,13 (m, 2 H), 2,13 2,01 (m, 2 H), 1,93 1,68 (m, 2 H), 1,49 1,39 (m, 18 H). Etapa 7. (+/-)-(1S,3R)-3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)ciclopentanol
[00332] (5-((1R,3S)-3-hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)carbamato de N,N-Di-terc-butila (35 mg, 0,092 mmol) em DCM (461 μl) foi adicionado HCl (922 μl, 3,69 mmol), a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e concentrada até secura produzindo sal de HCl. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 180,1 (MH+), 0,22 minuto. (+/-)-(1S,3R)-3-(5aminopirazin-2-il)ciclopentanol (15 mg, 0,084 mmol) foi dissolvido em acetonitrila (2 mL), em seguida NBS (16,39 mg, 0,092 mmol) foi adicionado, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos, água foi adicionada, a mistura reacional foi em seguida extraída por EtOAc, a orgânica foi secada e concentrada, o material bruto foi usado na etapa de reação seguinte. LCMS (m/z): 258,1/260,2 (MH+), 0,45 minutos. Seguindo o método acima, usando (5-((1R,3S)-3hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)carbamato de (+/-)-N,N-Di-terc-butila, (+/-)-(1R,3R)-3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)ciclopentanol foi obtido. LCMS (m/z): 258,1/260,1 (MH+), 0,50 minutos. Etapa 8. (5-(3-metoxiciclopentil)pirazin-2-il)carbamato de N,N-Di-tercbutila
[00333] A uma solução de mistura diastereomérica de (5-(3hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)carbamato de N,N-Di-terc-butila (50 mg, 0,132 mmol) em MeI (2,635 mL) foi adicionado óxido de prata (305 mg, 1,318 mmol), a mistura reacional foi tampada em um frasconete de reação e agitada em temperatura ambiente durante a noite. 10 equivalentes de óxido de prata e 2 mL de MeI foram adicionados, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante mais um dia. A mistura reacional foi filtrada através de almofada de celita e lavada com EtOAc e metanol. Depois do filtrado ser concentrado, o produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 40% de EtOAc/heptano) produzindo (5-((1R,3R)-3-metoxiciclopentil)pirazin-2il)carbamato de N,N-Di-terc-butila (25 mg). LCMS (m/z): 394,1 (MH+), 1,06 minutos. Exemplo 12 Síntese de (+/-)-4-(3-amino-6-((1S,3R)-3-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)N-benzil-2-fluorobenzamida Esquema 29
Figure img0054
Etapa 1.3-oxociclo-hex-1-en-1-il trifluorometanossulfonato
[00334] Ciclo-hexano-1,3-diona (8 g, 71,3 mmol) foi pesado em um frasco de base redonda de 500 ml e CH2Cl2 (160 mL) foi adicionado resultando em suspensão incolor clara a 0 °C sob N2. Carbonato de sódio (8,32 g, 78 mmol) foi adicionado e a suspensão foi agitada durante 15 minutos. Anidrido trifluorometanossulfônico (13,26 mL, 78 mmol) dissolvido em DCM (16 mL) foi adicionado gota a gota durante 1,2 horas mantendo a temperatura interna menor do que 1,9 °C para evitar a formação de bis-triflato. A mistura foi deixada agitar a 0 °C durante 45 minutos, em seguida deixada aquecer para 10 °C durante 20 minutos. Filtrada através de funil de vidro frito para ficar livre de Na2CO3 e NaHCO3 saturado foi adicionado. A camada orgânica foi separada e lavada com salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada, concentrada e secada sob pressão reduzida para fornecer 9,18 g de produto desejado. LCMS (m/z): 245,1 (MH+), 0,81 minutos. Etapa 2. 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-2-enona
[00335] A uma mistura de 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2dioxaborolano) (19,09 g, 75 mmol) e acetato de potássio (11,07 g, 113 mmol) foi adicionado 3-oxociclo-hex-1-en-1-il trifluorometanossulfonato (9,18 g, 37,6 mmol) como uma solução em dioxano (44,6 mL). Argônio foi borbulhado durante 15 minutos, em seguida Pd(dppf)Cl2-DCM (0,824 g, 1,128 mmol) foi adicionado. A mistura total reacional foi aquecida a 100 °C durante a noite. A solução filtrada através de celita e todo o solvente foi evaporado, secado sob vácuo elevado para fornecer produto quantitativo que foi usado no estado em que se encontrava. LCMS (m/z): 141 (MH+ para ácido borônico), 0,43 minutos. Etapa 3, 3-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hex-2-enona
[00336] Em um vidro de 500 mL pesado, 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-2-enona (4,1 g, 18,46 mmol), 5bromopiridin-2-amina (4,15 g, 24,00 mmol) foi adicionado como uma solução em dioxano (69,2 mL), seguido por Na2CO3 saturado (23,08 mL) e Pd(dppf)Cl2-DCM (1,350 g, 1,846 mmol). A mistura completa foi em seguida desgaseificada borbulhando ar durante 15 minutos e refluxada durante a noite. EtOAc e água foram adicionados, e agitados durante 30 minutos. A orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc três vezes. As camadas orgânicas foram combinadas e secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas. Purificadas com cromatografia rápidaeluindo com 0 a 100% de EtOAc (contendo 10% de MeOH)/heptano para fornecer 2 g de produto desejado. LCMS (m/z): 190 (MH+), 0,42 minutos. Etapa 4. 3-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hex-2-enol
[00337] A uma solução de 3-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hex-2-enona (150 mg, 0,793 mmol) em etanol (2643 μL) foi adicionado cloreto de cério (lll) (293 mg, 1,189 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora até todos os materiais serem dissolvidos. A mistura reacional foi em seguida resfriada para 0 °C e boroidreto de sódio (45,0 mg, 1,189 mmol) foi adicionado em porções. A mistura reacional foi agitada sob aquecimento para temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reacional foi resfriada para 0 °C e 2 mL de água foram lentamente adicionados as bolhas se mostrarem claramente e em seguida desaparecessem. A agitação continuou durante 30 minutos, em seguida, sulfato de sódio foi adicionado e agitada durante 30 minutos. Filtrada e secada sob vácuo elevado para fornecer 149 mg de produto desejado. LCMS (m/z): 192,1 (MH+), 0,46 minutos. Etapa 5. 5-(3-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo-hex-1-en-1-il)pirazin-2amina
[00338] A uma solução de 3-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hex-2-enol (149 mg, 0,779 mmol) em DMF (5,5 mL) a 0 °C foram adicionados terc-butilclorodimetilsilano (294 mg, 1,95 mmol) ) e 1H-imidazol (212 mg, 3,12 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Depois de extinguida com NaHCO3 saturado, a mistura reacional foi extraída com EtOAc 3 vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre sulfato de sódio anidroso, filtradas e concentradas em vácuo. O produto bruto foi purificado com cromatografia rápida eluindo com 0 a 100% de EtOAc/heptano para fornecer 238 mg de produto bruto que foi usado no estado em que se encontrava. LCMS (m/z): 306,9 (MH+), 1,04 minutos. Etapa 6. 5-((1R,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)pirazin-2amina
[00339] Uma mistura de 5-(3-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo-hex-1en-1-il)pirazin-2-amina (238 mg, 0,779 mmol) e Pd/C (10%) (50 mg, 0,779 mmol) em MeOH (7,79 mL) foi agitada sob atmosfera de H2 durante 3 horas. LCMS indicou cerca de conversão de 60%. Mais Pd/C (20 mg) foi adicionado, e agitado cerca de mais 4 horas. LCMS indicou ainda pouca quantidade de material de partida deixada. Mais Pd/C (20 mg) foi adicionado e agitado durante a noite. O catalisador foi filtrado e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado com cromatografia rápida eluindo com 0 a 100% de EtOAc/heptano para fornecer 110 mg de composto de cis racemato desejado. LCMS (m/z): 308,4 (MH+), 1,01 minutos. Etapa 7. 3-bromo-5-(3-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)pirazin-2amina
[00340] A uma solução de 5-((1R,3S)-3-((tercbutildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)pirazin-2-amina (110 mg, 0,358 mmol) em acetonitrila (5,50 mL) foi adicionado NBS (66,9 mg, 0,376 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 15 minutos. Depois de extinguida com tiossulfato de sódio saturado e NaHCO3 saturado, extraída com EtOAc três vezes. As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas com salmoura, secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas para fornecer 138 mg de composto de cis racemato, que foi usado no estado em que se encontrava. LCMS (m/z): 388 (MH+), 0,72 minuto. Etapa 8. 4-(3-amino-6-(3-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)pirazin-2il)-N-benzil-2-fluorobenzamida
[00341] À 3-bromo-5-(3-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)pirazin2-amina (68 mg, 0,176 mmol) em frasconete de MW de 2 mL foram adicionados ácido (4-(benzilcarbamoil)-3-fluorofenil)borônico (72,1 mg, 0,264 mmol), PdCl2(dppf)-DCM (12,88 mg, 0,018 mmol), DME (1,32 mL) e solução de Na2CO3 a 2 M (0,44 mL). A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas (12 minutos, 120 °C). A mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com água três vezes, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápidaeluindo com 0 a 100% de EtOAc (contendo 10% de MeOH)/heptano para fornecer 60 mg de composto de cis racemato bruto que foi levado para a reação seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 535,4 (MH+), 1,31 minuto. Etapa 9. 4-(3-amino-6-((1R,3S)-3-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida
[00342] Uma mistura de 4-(3-amino-6-(3-((tercbutildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida (61 mg, 0,114 mmol) em HCl a 6N (0,29 mL),THF (0,57 mL) e MeOH (0,285 mL) foi agitada durante 2 horas. Bicarbonato de sódio sólido foi adicionado para neutralizar a mistura reacional. O solvente foi evaporado e 25 % do resíduo foram dissolvidos em DMSO, e purificados com auto-prep para fornecer 15 mg do composto de cis racemato desejado como um sal de TFA. LCMS (m/z): 421,3 (MH+), 0,74 minutos. 1H RMN (400 MHz, MeOD-d4) δ ppm 7,82 7,69 (m, 2 H) 7. 62 7. 45 (m, 2 H) 7,37 7,12 (m, 5 H) 4,52 (s, 2 H) 3,66 -3,52 (m, 1 H) 2,75 2,60 (m, 1 H) 2,11 2,01 (m, 1 H) 1,97 1,70 (m, 3 H) 1,52 1,29 (m, 3 H) 1,24 1,08 (m, 1 H). Síntese de (+/-)-3-bromo-5-((1R,3S)-3-metoxiciclo-hexil)pirazin-2amina Esquema 30
Figure img0055
Etapa 1. (+/-)-N,N-di-Boc-3-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hex-2-enona
[00343] À 3-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hex-2-enona (1,3 g, 6,87 mmol) em DCM (34,0 mL) foi adicionado dicarbonato de di-terc-butila (4,50 g, 20,61 mmol) e N,N-dimetilpiridin-4-amina (0,084 g, 0,69 mmol) e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi diluída com DCM e em seguida lavada com solução de bicarbonato de sódio saturado. A camada orgânica separada foi em seguida secadaa com sulfato de sódio e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida(0 a 50% de acetato de etila em heptano) produzindo 1,3 g de (+/-)-N,N-di-Boc-3-(5aminopirazin-2-il)ciclo-hex-2-enona. LCMS (m/z): 390,3 (MH+), 1,02 minutos. Etapa 2. (+/-)-N,N-di-Boc-3-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hexanona
[00344] Uma mistura de (+/-)-N,N-di-Boc-3-(5-aminopirazin-2il)ciclo-hex-2-enona (1,3 g, 3,34 mmol) e Pd/C (10%) (400 mg, 10,57 mmol) em MeOH (33,4 mL) foi agitada sob atmosfera de H2 durante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de celita, e bem lavada com MeOH e EtOAc. O filtrado foi evaporado produzindo (+/-)-N,N-diBoc-3-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hexanona que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 392,9 (MH+), 0,97 minutos. Etapa 3, (+/-)-N,N-di-Boc-(1S,3R)-3-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hexanol
[00345] (+/-)-N,N-di-Boc-3-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hexanona (600 mg, 1,533 mmol) foi dissolvido em EtOH (17,2 mL), em seguida NaBH4 (87 mg, 2,299 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. Depois de adicionar água para extinguir a reação, a mistura reacional foi concentrada para remover metanol e extraída por EtOAc, e a camada orgânica foi lavada por solução de NaHCO3, água e salmoura, secada sobre Na2SO4 anidroso, e concentrada produzindo o (+/-)-N,N-di-Boc-(1S,3R)-3-(5aminopirazin-2-il)ciclo-hexanol bruto (contendo 5% de trans isômero) que foi levado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 394,2 (MH+), 0,89 minuto. Etapa 4. (+/-)-N,N-di-Boc-5-((1R,3S)-3-metoxiciclo-hexil)pirazin-2amina
[00346] Uma mistura de (+/-)-N,N-di-Boc-(1S,3R)-3-(5-aminopirazin2-il)ciclo-hexanol (350 mg, 0,89 mmol), óxido de prata (2,06 g, 8,9 mmol), acetonitrila (2,224 mL) e iodeto de metila (55,6 μL, 0,890 mmol) foi agitada durante a noite. Depois de EtOAc ser adicionado, a mistura reacional foi filtrada. Depois o material volátil foi evaporado, o produto bruto foi purificado por cromatografia rápida(0 a 100% de EtOAc em heptano) produzindo 184 mg de (+/-)-N,N-di-Boc-5-((1R,3S)-3metoxiciclo-hexil)pirazin-2-amina (184 mg, 0,452 mmol). LCMS (m/z): 408,3 (MH+), 1,10 minutos. Etapa 5. (+/-)-3-bromo-5-((1R,3S)-3-metoxiciclo-hexil)pirazin-2-amina
[00347] (+/-)-N,N-di-Boc-5-((1R,3S)-3-metoxiciclo-hexil)pirazin-2amina (184 mg, 0,452 mmol) em DCM (4,515 mL) foi adicionado HCl (4M em dioxano) (4,515 mL, 18,06 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Depois do material volátil foi removido em vácuo, o resíduo foi dissolvido em EtOAc. A camada orgânica foi lavada por solução de NaHCO3, água e salmoura, secada sobre Na2SO4 anidroso, e concentrada fornecendo (+/-)-5((1R,3S)-3-metoxiciclo-hexil)pirazin-2-amina em produção quantitativa. LCMS (m/z): 208 (MH+), 0,43 minutos. A uma solução de (+/-)-5((1R,3S)-3-metoxiciclo-hexil)pirazin-2-amina (54 mg, 0,261 mmol) em acetonitrila (4,008 μL) foi adicionado NBS (48,7 mg, 0,274 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 15 minutos. Depois de extinguida com NaHCO3, extraída com EtOAc três vezes, a camada orgânica foi lavada por água e salmoura, secada sobre Na2SO4 anidroso, e concentrada para fornecer 75 mg de (+/-)-3-bromo-5-((1R,3S)3-metoxiciclo-hexil)pirazin-2-amina em produção quantitativa. LCMS (m/z): 286 (MH+), 0,73 minutos. Exemplo 13 Síntese de (+/-)-4-(3-amino-6-(3-(metilsulfonil)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida Esquema 31
Figure img0056
Etapa 1(+/-)-N-(3-bromo-5-(3-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclohexil)pirazin-2-il)pivalamida
[00348] Cloreto de pivaloíla (71,5 μL, 0,569 mmol) foi adicionado gota a gota à mistura agitada, resfriada (0 °C) de (+/-)-3-bromo-5((1R,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)pirazin-2-amina (110 mg, 0,285 mmol) e TEA (159 μL, 1,139 mmol) em CH2CI2 (949 μL). A mistura vermelha foi agitada a 0 °C durante 1 hora, em seguida em temperatura ambiente durante 2 horas, EtOAc e NaHCO3 saturado foram adicionados e bem agitados. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi bem extraída com EtOAc. As camadas combinadas de EtOAc foram lavadas com salmoura, secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida em sílica gel eluindo com EtOAc/heptano para fornecer (+/-)-N-(3bromo-5-(3-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)pirazin-2-il)pivalamida 97 mg em 72,4% de rendimento. LCMS (m/z): 472,3 (MH+), 1,19 minutos. Etapa 2. (+/-)-N-(3-bromo-5-((1R,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclohexil)pirazin-2-il)pivalamida
[00349] Uma mistura de (+/-)-N-(3-bromo-5-(3-((tercbutildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)pirazin-2-il)pivalamida (97 mg, 0,206 mmol) em 6N HCl (687 μL), THF (687 μL) MeOH (687 μL) foi agitada durante 2 horas. LCMS indicou que a reação foi concluída. Bicarbonato de sódio sólido foi adicionado para neutralizar o HCl. Dissolvido em EtOAc e água. A camada orgânica foi separada e lavada com salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer 72 mg de (+/-)-N-(3-bromo-5-((1R,3S)-3-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclohexil)pirazin-2-il)pivalamida bruto em 98% de rendimento. LCMS (m/z): 358,6 (MH+), 0,70 minutos. Etapa 3. (+/-)-(1S,3R)-3-(6-bromo-5-pivalamidopirazin-2-il)ciclo-hexil metanossulfonato
[00350] A uma mistura de (+/-)-N-(3-bromo-5-((1R,3S)-3-((tercbutildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)pirazin-2-il)pivalamida (72 mg, 0,202 mmol) em CH2Cl2 (2021 μL) a 0 °C foram adicionados TEA (56,3 μL, 0,404 mmol) e cloreto de metanossulfonila (18,90 μL, 0,243 mmol). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas. Mais TEA (56,3 μL, 0,404 mmol) e cloreto de metanossulfonila (18,90 μL, 0,243 mmol) foi adicionado, e agitada durante 6 horas. A reação preparada por adição de água. A fase orgânica foi lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado com cromatografia rápidaeluindo com 0 a 100% de EtOAc/heptano para fornecer 54 mg de (+/-)-(1S,3R)-3-(6bromo-5-pivalamidopirazin-2-il)ciclo-hexil metanossulfonato em 61,5% de rendimento. LCMS (m/z): 436,1 (MH+), 0,75 minutos. Etapa 4. (+/-)-(1S,3R)-3-(6-(4-(benzilcarbamoil)-3-fluorofenil)-5pivalamidopirazin-2-il)ciclo-hexil metanossulfonato
[00351] Ao metanossulfonato de (+/-)-3-(6-bromo-5pivalamidopirazin-2-il)ciclo-hexila de cis racemato (54 mg, 0,124 mmol) em frasconete de MW de 2,0 mL foi adicionado ácido (4(benzilcarbamoil)-3-fluorofenil)borônico (50,9 mg, 0,186 mmol), PdCl2(dppf) (9,10 mg, 0,012 mmol), DME (1166 μL) e solução de Na2CO3 a 2 M (389 μL). A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas (12 minutos, 80 °C). A mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com água três vezes, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápidaeluindo com 0 a 100% de EtOAc (contendo 10% de MeOH) para fornecer 73 mg de metanossulfonato de (+/-)-(1S,3R)-3-(6-(4(benzilcarbamoil)-3-fluorofenil)-5-pivalamidopirazin-2-il)ciclo-hexila que foi levado para a reação seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 583,4 (MH+), 0,87 minutos. Etapa 5. (+/-)-N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1 R,3R)-3-(metiltio)ciclo-hexil)-3pivalamidopirazin-2-il)benzamida
[00352] Uma mistura de metanossulfonato de (+/-)-(1S,3R)-3-(6-(4(benzilcarbamoil)-3-fluorofenil)-5-pivalamidopirazin-2-il)ciclo-hexila (25 mg, 0,043 mmol) e metanotiolato de sódio (24,09 mg, 0,344 mmol) em MeOH (430 μL) foi aquecida a 80 °C durante 2 horas. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado com cromatografia rápida eluindo com EtOAc (contendo 10% de MeOH)/heptano para fornecer 25 mg de (+/-)-N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1R,3R)-3-(metiltio)ciclo-hexil)-3pivalamidopirazin-2-il)benzamida bruto que foi levado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 535,3 (MH+), 1,09 minutos. Etapa 6. (+/-)-N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1R,3R)-3-(metilsulfonil)ciclohexil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamida
[00353] Ao (+/-)-N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1R,3R)-3-(metiltio)ciclohexil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamida de trans racemato (35 mg, 0,065 mmol) em MeOH (327 μL) a 0 °C foi adicionado oxona (52,3 mg, 0,085 mmol) em água (327 μL). A mistura reacional foi agitada a 0 °C e temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura reacional foi extinguida por 2 equivalentes de tiossulfato de sódio (20,70 mg, 0,131 mmol) em 2 mL água a 0 °C, agitada durante 30 minutos, e em seguida basificada adicionando NaOH a 6N a 0 °C, diluída com EtOAc, e secada sobre sulfato de sódio três vezes. Em seguida filtrada e concentrada para fornecer 25 mg de (+/-)-N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1R,3R)3-(metilsulfonil)ciclo-hexil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamida in 67,4% de rendimento que foi levado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 567,4 (MH+), 0,90 minutos. Etapa 7. (+/-)-4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-(metilsulfonil)ciclo-hexil)pirazin2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida
[00354] À (+/-)-N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1R,3R)-3-(metilsulfonil)ciclohexil)-3-pivalamidopirazin-2-il)benzamida (25 mg, 0,044 mmol) em MeOH (221 μL) foi adicionado carbonato de potássio (61,0 mg, 0,441 mmol). A mistura resultante foi aquecida a 80 °C durante 4 horas. A mistura reacional foi filtrada e concentrada, purificada com auto-prep para fornecer 5,4 mg de (+/-)-4-(3-amino-6-((1R,3R)-3(metilsulfonil)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida em 20,11% de rendimento. LCMS (m/z): 483,1 (MH+), 0,78 minutos. 1H RMN (400MHz, MeOD-d4) δ ppm 8,00 7,81 (m, 2 H) 7,76 7,56 (m, 2 H) 7,43 7,16 (m, 5 H) 4,65 4,55 (m, 2 H) 3,61 3,51 (m, 1 H), 3,46 3,36 (m, 2 H) 2,87 2,97 (m, 3 H) 2,61 2,48 (m, 1 H) 2,19 1,95 (m, 3 H) 1,92 1,78 (m, 3 H). Exemplo 14 Síntese de 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida Esquema 32
Figure img0057
Etapa 1.5-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-amina
[00355] À 5-bromopirazin-2-amina (225 mg, 1,293 mmol) foram adicionados 4,4,5,5-tetrametil-2-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-il)-1,3,2dioxaborolano (482 mg, 1,810 mmol), aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (84 mg, 0,103 mmol), DME (3,5 mL) e em seguida último carbonato de sódio 2M (1,616 mL, 3,23 mmol). A reação foi submetida ao microondas 120 °C durante 15 minutos. À reação foram adicionados 80 mL de DCM, lavados com água (1x), secados com sulfato de sódio, filtrados e concentrados ao resíduo. O bruto foi purificado por cromatografia de sílica gel usando coluna de 12 gramas (carga sólida) eluindo com 10 a 90% de acetato de etila e heptano. As frações desejadas foram concentradas para massa constante para fornecer 173 mg do produto desejado como base livre usado no estado em que se encontra (56% de rendimento). LCMS (m/z): 234,2 (MH+), 0,43 minuto; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,01 (d, J=1,2 Hz, 1H), 7,80 (d, J=1,2 Hz, 1H), 6,33 (s, 2H), 6,27 (t, J=3,9 Hz, 1H), 3,89 (s, 4H), 2,52 (d, J=1,6 Hz, 2H), 2,33 (br. s., 2H), 1,76 (t, J=6,7 Hz, 2H). Etapa 2. 5-(1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-il)pirazin-2-amina
[00356] À 5-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-amina (645 mg, 2,77 mmol) em um frasco de base redonda que foi inundado com argônio foi adicionado Pd-C a 10% degaussa (294 mg, 0,277 mmol). Em seguida, sob argônio com seringa foi adicionado MeOH ( 10 mL) e em seguida por último um balão de hidrogênio foi adicionado. O frasco foi evacuado e recarregado com hidrogênio (6 X). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante total de 16 horas, sob o balão de hidrogênio, seguido por LCMS. A reação foi estimulada com argônio e 25 mL de DCM foram adicionados. A mistura crua foi filtrada através de um tampão de celita, e concentrada para massa constante para fornecer 635 mg do produto desejado como base livre, usado no estado em que se encontra (98% de rendimento). LCMS (m/z): 236,2 (MH+), 0,41 minuto; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,78 (d, J=1,2 Hz, 1H), 7,74 (d, J=1,2 Hz, 1H), 6,09 (s, 2H), 3,85 (s, 4H), 2,522,60 (m, 1H), 1,65-1,78 (m, 6H), 1,49-1,61 (m, 2H). Etapa 3, 3-bromo-5-(1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-il)pirazin-2-amina
[00357] À 5-(1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-il)pirazin-2-amina (620 mg, 2,64 mmol) foi adicionada acetonitrila (20 mL) e em seguida foi adicionado NBS (469 mg, 2,64 mmol) em porções durante 2 minutos. A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 20 minutos e extinguida com solução de bicarbonato de sódio saturado, e 250 mL de acetato de etila foram adicionados. A aquosa foi extraída e a camada orgânica foi lavada com bicarbonato de sódio saturado, água (2x), solução de sal saturado, em seguida secada com sulfato de sódio, filtrada e concentrada para resíduo para fornecer 650 mg do produto desejado, usado no estado em que se encontra, (79% de rendimento). LCMS (m/z): 314,1/316,1 (MH+), 0,61 minutos. Etapa 4. 4-(3-amino-6-(1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-il)pirazin-2-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida
[00358] À 3-bromo-5-(1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-il)pirazin-2-amina (630 mg, 2,005 mmol) foram adicionados ácido (4-(benzilcarbamoil)-3fluorofenil)borônico (767 mg, 2,81 mmol), aduzido de PdCl2(dppf)CH2Cl2 (164 mg, 0,201 mmol), DME (9 mL) e em seguida carbonato de sódio a 2M final (3,01 mL, 6,02 mmol). A reação foi submetida ao micro-ondas 115 °C durante 12 minutos. À reação foram adicionados 400 mL de acetato de etila, lavada com água (2x), secada com sulfato de sódio, filtrada e concentrada no resíduo. O bruto foi purificado por cromatografia de sílica gel usando coluna de 40 gramas eluindo com 20 a 100% de acetato de etila e heptano. As frações desejadas foram concentradas para massa constante para fornecer 432 mg do produto desejado como base livre usado no estado em que se encontra, (47% de rendimento). LCMS (m/z): 463,2 (MH+), 0,82 minuto;1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,94 8,81 (m, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,80 7,69 (m, 1H), 7,67 7,52 (m, 2H), 7,33 (d, J=4,3 Hz, 4H), 7,27 -7,18 (m, 1H), 6,09 (s, 2H), 4,49 (d, J=5,9 Hz, 2H), 3,85 (s, 4H), 2,70 2,61 (m, 1H), 1,84 -1,67 (m, 6H), 1,65 -1,48 (m, 2H). Etapa 5. 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-N-benzil-2fluorobenzamida
[00359] À 4-(3-amino-6-(1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-il)pirazin-2-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida (170 mg, 0,368 mmol) foram adicionadas acetonitrila (3 mL), água (2 mL) e em seguida Solução aquosa a 3M de HCl (0,613 mL, 1,838 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos seguido por LCMS. À reação foram adicionados 200 mL de acetato de etila, basificada com excesso de NaOH a 1 M. A camada aquosa foi extraída e a camada orgânica foi lavada com água (3x), filtrada e concentrada para resíduo para fornecer o produto desejado como base livre. Assumir a produção quantitativa (0,368 mmol). LCMS (m/z): 419,3 (MH+), 0,75 minutos. Etapa 6. 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-benzil2-fluorobenzamida
[00360] À 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-N-benzil-2fluorobenzamida (77 mg, 0,184 mmol) foi adicionado MeOH (3 mL), resfriado para 0 °C. Em seguida boroidreto de sódio (6,96 mg, 0,184 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada durante 20 minutos ao mesmo tempo em que deixando-a aquecer para temperatura ambiente, seguido por LCMS. LCMS bruto mostrou cerca de isômeros de 9:1 (trans\cis) como esperado. A reação foi extinguida com excesso de cloreto de sódio saturado e agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. Em seguida 150 mL de acetato de etila foram adicionados e lavados com bicarbonato de sódio saturado, água (2x), solução de sal saturado, secados com sulfato de sódio, filtrados e concentrados para resíduo para fornecer 73 mg de produto bruto. A metade (36,5 mg) do produto bruto foi dissolvida em 2,0 mL de DMSO, filtrada, purificada por HPLC preparativa, e liofilizada para fornecer 16,3 mg do produto desejado 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-benzil2-fluorobenzamida como sal de TFA, in (32 % de rendimento). LCMS (m/z): 421,3 (MH+), 0,69 minuto; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,82 (br. s., 1H), 7,83 (s, 1H), 7,64-7,73 (m, 1H), 7,45-7,61 (m, 2H), 7,25-7,31 (m, 4H), 7,14-7,23 (m, 1H), 4,43 (d, J=5,9 Hz, 2H), 1,66-1,91 (m, 3H), 1,38-1,57 (m, 2H), 1,11-1,31 (m, 2H). Exemplo 15 Síntese de 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida Esquema 33
Figure img0058
[00361] À 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-N-benzil-2fluorobenzamida (77 mg, 0,184 mmol) foi adicionado THF (3 mL), resfriada para 0 °C. Em seguida, THF a 1M de L-selectrida (0,460 mL, 0,460 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada durante 20 minutos ao mesmo tempo em que deixando aquecer para temperatura ambiente, seguido por LCMS. O LCMS bruto mostrou cerca de mais do que 9:1 de isômeros (cis/trans) como esperado. A reação foi basificada com excesso de NaOH a 5M e agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. Em seguida 150 mL de acetato de etila foram adicionados e lavados com água (3x), solução de sal saturado, secados com sulfato de sódio, filtrados e concentrados para resíduo para fornecer 75 mg de produto, usado no estado em que se encontra. A metade (36,5 mg) do produto bruto foi dissolvido em 2,0 mL de DMSO, filtrada, purificada por HPLC preparativa, e liofilizada para fornecer 23 mg do produto desejado 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)N-benzil-2-fluorobenzamida como sal de TFA, em (45% de rendimento). LCMS (m/z): 421,3 (MH+), 0,72 minuto; 1H RMN (400 MHz, DMSOd6) δ ppm 8,87 (br. s., 1H), 7,89 (s, 1H), 7,79 7,70 (m, 1H), 7,67 7,45 (m, 2H), 7,33 (d, J=4,3 Hz, 4H), 7,28 7,21 (m, 1H), 6,06 (s, 2H), 4,49 (d, J=5,9 Hz, 2H), 4,30 (br. s., 1H), 3,84 (br. s., 1H), 2,01 1,84(m, Eaefi MCI conc., AX Water 6% pro— ]|| yjθid Etapa 1. N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1r,4r)-4-hidroxiciclo-hexil)-3pivalamidopirazin-2-il)benzamida
Figure img0059
[00362] À 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida (0,105 g, 0,25 mmol) foram adicionados DCM (2,5 mL), TEA (0,105 mL, 0,750 mmol) e em seguida cloreto de pivaloíla (0,045 g, 0,375 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas seguido por LCMS. À reação foram adicionados 150 mL de acetato de etila, basificada com excesso de bicarbonato saturado. A camada orgânica foi lavada com água (3x), solução de sal saturado, secada sulfato de sódio, filtrada e concentrada para resíduo para fornecer o produto como base livre, usado no estado em que se encontra. Assumir a produção quantitativa (0,25 mmol). LCMS (m/z): 505,4 (MH+), 0,82 minutos. Etapa 2. (1r,4r)-4-(6-(4-(benzilcarbamoil)-3-fluorofenil)-5-pivalamidopirazin-2il)ciclo-hexil metanossulfonato
[00363] À N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1r,4r)-4-hidroxiciclo-hexil)-3pivalamidopirazin-2-il)benzamida (125 mg, 0,248 mmol) foram adicionados DCM (2,5 mL), TEA (0,104 mL, 0,743 mmol) e resfriado para 0 °C em seguida cloreto de metanossulfonila (42,6 mg, 0,372 mmol) foi adicionado. A reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante 2 horas, seguido por LCMS. Em seguida, mais TEA (0,104 mL, 0,743 mmol) e cloreto de metanossulfonila (42,6 mg, 0,372 mmol) foram adicionados e agitados em temperatura ambiente durante mais 3 horas, durante um total de 5 horas. À reação foram adicionados 150 mL de acetato de etila, basificada com excesso de bicarbonato saturado. A camada orgânica foi lavada com água (3x), solução de sal saturado, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada para resíduo para fornecer o produto como base livre, usado no estado em que se encontra. Assumir a produção quantitativa (0,248 mmol). LCMS (m/z): 583,3 (MH+), 0,90 minuto. Etapa 3, N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1s,4s)-4-(metiltio)ciclo-hexil)-3pivalamidopirazin-2-il)benzamida
[00364] Ao metanossulfonato de (1r,4r)-4-(6-(4-(benzilcarbamoil)-3fluorofenil)-5-pivalamidopirazin-2-il)ciclo-hexila (130 mg, 0,223 mmol) foram adicionados t-butanol ( 3,5 mL), tiometóxido de sódio (235 mg, 3,35 mmol). A reação foi aquecida a 80 °C durante 1 hora, seguido por LCMS. A reação foi desixada resfriar. Em seguida 75 mL de acetato de etila foram adicionados, lavados com bicarbonato de sódio saturado, água (2x), solução de sal saturado, secados sulfato de sódio, filtrados e concentrados para resíduo para fornecer o produto como base livre, usado no estado em que se encontra. Assumir a produção quantitativa (0,223 mmol). LCMS (m/z): 535,3 (MH+), 1,06 minutos. Etapa 4. N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1s,4s)-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)-3pivalamidopirazin-2-il)benzamida
[00365] À N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1s,4s)-4-(metiltio)ciclo-hexil)-3pivalamidopirazin-2-il)benzamida (118 mg, 0,221 mmol) foi adicionado DCM (4 mL). Em seguida com agitação em temperatura ambiente, uma solução de mCPBA (118 mg, 0,527 mmol) em DCM (1 mL) foi lentamente titulada até a reação ser feita, seguido por LCMS. Em seguida 75 mL de acetato de etila foram adicionados, lavados com bicarbonato de sódio saturado, água (2x), solução de sal saturado, secados sulfato de sódio, filtrados e concentrados para resíduo. O bruto foi dissolvido em 5 mL de DMSO, filtrado e purificado por HPLC preparativa. As frações desejadas foram combinadas. O produto como um solução e 100 mL em acetonitrila/água com 0,1% de TFA, foi usado no estado em que se encontra na etapa seguinte. Assumir a produção quantitativa (0,221 mmol). LCMS (m/z): 567,4 (MH+), 0,85 minutos. Etapa 5. 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida
[00366] À N-benzil-2-fluoro-4-(6-((1s,4s)-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)3-pivalamidopirazin-2-il)benzamida (120 mg, 0,212 mmol) em uma solução de água (60 mL) e acetonitrila (40 mL) com 0,1% de TFA foi adicionado HCl concentrado (2 mL, 65,8 mmol). A reação foi agitada a 60 °C durante 12 horas, seguido por LCMS. O bruto foi liofilizado para resíduo. O resíduo foi dissolvido em DMSO, purificado por HPLC preparativa, e liofilizado para fornecer 10,2 mg do produto desejado 4-(3amino-6-((1s,4s)-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-benzil-2fluorobenzamida como sal de TFA, em 6% de rendimento total. LCMS (m/z): 483,2 (MH+), 0,72 minuto; 1H RMN (CD3OD) δ ppm 7,80 (s, 1H), 7,76 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,63 (dd, J=8,2, 1,6 Hz, 1H), 7,55 (dd, J=11,7, 1,2 Hz, 1H), 7,22-7,34 (m, 4H), 7,10 a 7,20 (m, 1H), 4,52 (s, 2H), 3,12 (dt, J=8,9, 4,4 Hz, 1H), 2,96 (t, J=4,9 Hz, 1H), 2,81 (s, 3H), 2,16-2,30 (m, 2H), 1,99-2,13 (m, 2H), 1,86-1,96 (m, 2H), 1,70 a 1,85 (m, 2H). Exemplo 17 Síntese de 4-(3-amino-6-(( 1r,4r)-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)pirazin-2-il)N-benzil-2-fluorobenzamida Esquema 35
Figure img0060
[00367] Seguindo o esquema 35, usando 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida (Exemplo 15), 4,5 mg do produto desejado 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4(metilsulfonil)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida foram obtidos como sal de TFA em 3% de rendimento total. LCMS (m/z): 483,2 (MH+), 0,71 minuto; 1H RMN (CD3OD) δ ppm 7,80 a 7,89 (m, 2H), 7,68 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,60 (dd, J=11,7, 1,6 Hz, 1H), 7,317,42 (m, 4H), 7,19-7,30 (m, 1H), 4,61 (s, 2H), 3,05-3,15 (m, 1H), 2,92 (s, 3H), 2,67-2,78 (m, 1H), 2,34 (br. s., 2H), 2,11 (br. s., 2H), 1,60 a 1,82 (m, 4H). Exemplo 18 Síntese de N-((S)-2-amino-1-(3-clorofenil)etil)-4-(3-amino-6-((1r,4S)-4metoxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida Esquema 36
Figure img0061
Etapa 1.4-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hexanona
[00368] À 5-(1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-il)pirazin-2-amina (8,68 g, 45,4 mmol) foram adicionados acetonitrila (368 mL), água (245 mL) e HCl a 3M (76 mL). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. A reação foi basificada com excesso de NaOH a 1 M, e em seguida diluída com de acetato de etila. A camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi bem extraída com EtOAc/THF de 2-metila (1:1) três vezes. As camadas orgânicas foram combinadas e secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas para fornecer 6,91 g de produto como base livre. LCMS (m/z): 192,12 (MH+), 0,30 minuto. Etapa 2. Ácido imidodicarbônico, 2-(5-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-, 1,3-bis(1,1-dimetiletil) éster
[00369] À 4-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hexanona (3,0 g, 15,69 mmol) em DCM ( 105 mL) foram adicionados dicarbonato de di-terc-butila (10,27 g, 47,1 mmol) e N,N-dimetilpiridin-4-amina (0,192 g, 1,569 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi diluída com DCM e em seguida lavada com solução de bicarbonato de sódio saturado. A camada orgânica separada foi secada sobre sulfato de sódio e concentrada. Purificada sobre a cromatografia rápidae eluindo com 0 a 50% de acetato de etila em heptano para fornecer 2,2 g de produto desejado. LCMS (m/z): 392,7 (MH+), 0,91 minutos. Etapa 3. Ácido imidodicarbônico, 2-(5-(4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-, 1,3-bis(1,1-dimetiletil) éster
[00370] Ácido imidodicarbônico, 2-(5-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-, 1,3-bis(1,1-dimetiletil) éster (350 mg, 0,894 mmol) foram dissolvidos em EtOH (10 mL), em seguida NaBH4 (50,7 mg, 1,341 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. A relação de trans e cis ratio é de cerca de 85:15 de TLC. Solução de NaHCO3 saturado foi adicionada para extinguir a reação. A mistura reacional foi em seguida extraída por EtOAc/THF de 2metila (1:1). As camadas orgânicas foram combinadas e secadas sobre Na2SO4 anidroso, e concentradas para produzir o produto bruto, que foi levado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 394,3 (MH+), 0,89 minuto. Etapa 4. Ácido imidodicarbônico, 2-( 5-(4-metoxiciclo-hexil)pirazin-2-il), 1,3-bis(1,1-dimetiletil) éster
[00371] Uma mistura de ácido imidodicarbônico, 2-(5-(4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-, 1,3-bis(1,1-dimetiletil) éster (350 mg, 0,890 mmol), óxido de prata (1,649 g, 7,12 mmol), acetonitrila (2,22 mL) e iodeto de metila (1,112 mL, 17,79 mmol) foi agitada durante a noite. EtOAc foi adicionado, e o sólido foi filtrado. O solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia rápida eluindo com 0 a 100% de EtOAc/heptano para fornecer 168 mg de composto trans desejado em 46,3% de rendimento. LCMS (m/z): 408,3 (MH+), 1,10 minutos. Etapa 5. 5-((1r,4r)-4-metoxiciclo-hexil)pirazin-2-amina
[00372] Ácido imidodicarbônico, 2-( 5-(4-metoxiciclo-hexil)pirazin-2il)-, 1,3-bis(1,1-dimetiletil) éster (168 mg, 0,412 mmol) em DCM (4,123 mL) foi adicionado HCl (4M em dioxano) (4,123 mL, 16,49 mmol), a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, concentradas, e EtOAc foi adicionado. Lavada com NaHCO3 saturado, e água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc e THF de 2-metila (1:1) três vezes. Secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer o produto trans desejado. LCMS (m/z): 208 (MH+), 0,42 minutos. Etapa 6. 3-bromo-5-((1r,4r)-4-metoxiciclo-hexil)pirazin-2-amina
[00373] A uma solução de 5-((1r,4r)-4-metoxiciclo-hexil)pirazin-2amina (92 mg, 0,444 mmol) em acetonitrila (8,877 mL) foi adicionado NBS (83 mg, 0,466 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 15 minutos. Depois de extinguida com Na2SO3 saturado e NaHCO3, extraída com EtOAc e THF de 2-metila (1:1) três vezes. As camadas orgânicas foram combinadas, secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas para fornecer 127 mg de composto trans desejada em produção quantitativa. LCMS (m/z): 288 (MH+), 0,72 minutos. Etapa 7. ((S)-2-(4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-metoxiciclo-hexil)pirazin-2-il)2-fluorobenzamido)-2-(3-clorofenil)etil)carbamato de terc-butila
[00374] À 3-bromo-5-((1r,4r)-4-metoxiciclo-hexil)pirazin-2-amina (35 mg, 0,122 mmol) em frasconete de MW de 2 mL foi adicionado ácido (S)-(4-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-1-(3-clorofenil)etil)carbamoil)-3fluorofenil)borônico (64,1 mg, 0,147 mmol), PdCl2(dppf) (8,95 mg, 0,012 mmol), DME (917 μL) e solução de Na2CO3 a 2 M (306 μL) . A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas (12 minutos, 120 °C). A mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com água três vezes, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápidapara fornecer 28 mg de produto trans desejado em 38,3% de rendimento. Etapa 8. N-((S)-2-amino-1-(3-clorofenil)etil)-4-(3-amino-6-((1r,4S)-4metoxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida
[00375] Uma mistura de ((S)-2-(4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-metoxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-clorofenil)etil)carbamato de terc-butila (28 mg, 0,047 mmol), TFA (0,4 mL, 0,047 mmol) e CH2Cl2 (1 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em DMSO, purificado com auto-prep para fornecer 15 mg de produto trans desejado como um sal de TFA em 51,3% de rendimento. LCMS (m/z): 498,2 (MH+), 0,76 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,94 7,85 (m, 2 H) 7,70 (dd, J=8,22, 1,56 Hz, 1 H) 7,62 (dd, J=11,93, 1,37 Hz, 1 H) 7,55 (s, 1 H) 7,49 7,34 (m, 3 H) 5,49 (dd, J=9,00, 5,87 Hz, 1 H) 3,53 3,41 (m, 2 H) 3,38 (s, 3 H) 2,70 a 2,59 (m, 2 H) 2,20 (d, J=9,78 Hz, 2 H) 1,98 (d, J=12,91 Hz, 2 H) 1,65 (qd, J=13,04, 3,13 Hz, 2 H) 1,41 1,27 (m, 2 H). Síntese de (1s,4s)-4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-1-metilciclo-hexanol e (1r,4r)-4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-1-metilciclo-hexanol Esquema 37
Figure img0062
Etapa 1. (5-((1s,4s)-4-hidróxi-4-metilciclo-hexil)pirazin-2-il)carbamato de terc-butila e (5-((1r,4r)-4-hidróxi-4-metilciclo-hexil)pirazin-2il)carbamato de terc-butila
[00376] N,N-di-Boc-4-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hexanona (657 mg, 1,678 mmol) em THF (11,8 mL) foi tratada com metillítio (1,469 mL, 2,350 mmol) a -78 °C. A reação foi agitada a -78 °C durante 2 horas. Depois de metillítio (1,469 mL, 2,350 mmol) ser adicionado, a mistura reacional foi agitada a -78 °C durante mais 2 horas. Este processo foi repetido mais uma vez. em seguida, a mistura reacional foi extinguida com metanol e água. A mistura resultante foi concentrada e o resíduo foi suspenso em acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada, e concentrada. A mistura crua diastereômérica foi purificada por cromatografia (0 a 100% de acetato de etila em hexano). Para (5-((1s,4s)-4-hidróxi-4metilciclo-hexil)pirazin-2-il)carbamato de terc-butila (26,7% de rendimento). LCMS (m/z): 308,7 (MH+), 0,79 minutos. Para (5-((1r,4r)-4hidróxi-4-metilciclo-hexil)pirazin-2-il)carbamato de terc-butila (23,3% de rendimento), LCMS (m/z): 308,7 (MH+), 0,75 minutos. Etapa 2. (1s,4s)-4-(5-aminopirazin-2-il)-1-metilciclo-hexanol
[00377] (5-((1s,4s)-4-hidróxi-4-metilciclo-hexil)pirazin-2-il)carbamato de terc-butila (138 mg, 0,449 mmol) em DCM foi adicionado HCl (4 M em dioxano) (4489 μL, 17,96 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Diluída com EtOAc e lavada com NaHCO3 saturado, sem separação, e secada com Na2SO4, filtrada e lavada com EtOAc. Concentrada para fornecer 93 mg de produto desejado em produção quantitativa. LCMS (m/z): 208 (MH+), 0,41 minutos. Etapa 3. (1s,4s)-4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-1-metilciclo-hexanol
[00378] A uma solução de (1s,4s)-4-(5-aminopirazin-2-il)-1metilciclo-hexanol (93 mg, 0,449 mmol) em acetonitrila (8974 μL) foi adicionado NBS (80 mg, 0,449 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 15 minutos. Depois extinguida com NaHCO3, extraída com EtOAc três vezes. As camadas orgânicas foram combinadas e lavada com água, e salmoura. Secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas para fornecer 100 mg de (1s,4s)-4-(5-amino-6bromopirazin-2-il)-1-metilciclo-hexanol em 78 % de rendimento. LCMS (m/z): 288 (MH+), 0,60 minuto. Etapa 4. (1r,4r)-4-(5-aminopirazin-2-il)-1-metilciclo-hexanol e Etapa 5. (1r,4r)-4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-1-metilciclo-hexanol
[00379] Seguindo as etapas 2 e 3, usando (1r,4r)-4-(5-aminopirazin2-il)-1-metilciclo-hexanol, (1r,4r)-4-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-1metilciclo-hexanol foi obtido. LCMS (m/z): 288 (MH+), 0,57 minutos. Exemplos 19 e 20 Síntese de 3-(5-amino-6-(4-(benzilcarbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2il)propanoato de metila e 4-(3-amino-6-(3-(metilamino)-3oxopropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida Esquema 38
Figure img0063
Etapa 1.3-(5-aminopirazin-2-il)propiolato de metila
[00380] A um frasconete de micro-ondas de 5 mL foi adicionado 5iodopirazin-2-amina (100 mg, 0,452 mmol), propiolato de metila (161 μL, 1,810 mmol), carbonato de potássio (125 mg, 0,905 mmol), iodeto de cobre (l) (3,45 mg, 0,018 mmol), e THF (1508 μL). A mistura reacional foi aquecida a 65 oC durante 2 horas. A mistura reacional foi diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e evaporada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida(20% de EtOAc em DCM) produzindo 3-(5-aminopirazin-2-il)propiolato de metila (38%). LCMS (m/z): 178,4 (MH+), 0,48 minutos. Etapa 2. 3-(5-aminopirazin-2-il)propanoato de metila
[00381] A uma solução de 3-(5-aminopirazin-2-il)propiolato de metila (30 mg, 0,169 mmol) em MeOH (847 μL) foi adicionado Pd-C (36,0 mg, 0,034 mmol). A solução foi desgaseificada por corrente de N2 durante 15 minutos. Depois de estimulada com gás de hidrogênio e equipada com um balão de hidrogênio, a mistura reacional foi agitada durante 16 horas. A mistura reacional foi filtrada através de celita. Os materiaisvoláteis foram removidos em vácuo. O 3-(5-aminopirazin-2il)propanoato de metila bruto foi obtido (81%) e usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 182,1 (MH+), 0,31 minuto. Etapa 3. 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propanoato de metila
[00382] A uma solução de 3-(5-aminopirazin-2-il)propanoato de metila (25 mg, 0,138 mmol) em CH3CN (690 μL) foi adicionado NBS (24,56 mg, 0,138 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. Depois de extinguida com solução de Na2S2O3, a mistura reacional foi agitada com solução de NaHCO3 durante 20 minutos e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propanoato de metila bruto foi obtido (28%). LCMS (m/z): 260,2/262,2 (MH+), 0,54 minutos. Etapa 4. 3-(5-amino-6-(4-(benzilcarbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2il)propanoato de metila
[00383] A uma solução de 3-(5-amino-6-bromopirazin-2il)propanoato de metila (10 mg, 0,038 mmol), ácido 4(benzilcarbamoil)-3-fluorofenilborônico (13,65 mg, 0,050 mmol) e PdCh(dppf) (2,81 mg, 3,84 μmol) em DME (256 μL) foi adicionado Na2CO3 a 2 M (3,87 mL). A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas (120 °C, 10 minutos). LCMS (m/z): 409,2 (MH+ para éster), 0,75 minuto; 395,2 (MH+ para uma quantidade muito pequena de ácido, porém misturada com éster borônico), 0,66 minuto. À mistura reacional, sulfato de sódio anidroso foi adicionado, filtrado, e concentrado. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa, liofilizado produzindo 3-(5-amino-6-(4-(benzilcarbamoil)-3fluorofenil)pirazin-2-il)propanoato de metila como um sal de TFA (12%). LCMS (m/z): 409,1 (MH+), 0,73 minuto; 1H RMN (400MHz, MeOH-d4) δ ppm 7,89 7,76 (m, 2 H), 7,69 7,61 (m, 1 H), 7,60 7,51 (m, 1 H), 7,42 7,28 (m, 5 H), 7,28 7,20 (m, 1 H), 4,64 4,55 (m, 2 H), 3,62 (s, 3 H), 3,06 2,93 (m, 2 H), 2,79 2,67 (m, 2 H). Etapa 5. Ácido 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propanoico
[00384] A uma solução de metil 3-(5-amino-6-bromopirazin-2il)propanoate (55 mg, 0,211 mmol) em MeOH (961 μL) e H2O (96 μL) foi adicionado carbonato de potássio (170 mg, 1,230 mmol). A mistura reacional foi agitada durante a noite. À mistura reacional, Na2SO4 anidroso foi adicionado. Depois de diluídos com EtOAc (3 mL) e filtrados, os materiais voláteis foram removidos em vácuo. O ácido 3-(5-amino6-bromopirazin-2-il)propanoico bruto foi obtido e usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 246,0/248,0 (MH+, major), 0,26 minuto. Etapa 6. 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-metilpropanamida
[00385] A uma solução de ácido 3-(5-amino-6-bromopirazin-2il)propanoico (32 mg, 0,130 mmol) em DMF (1300 μL) foram adicionados TBTU (62,6 mg, 0,195 mmol), DIEA (68,1 μL, 0,390 mmol), e cloridrato de metanamina (9,66 mg, 0,143 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 3 horas. A mistura reacional foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O 3-(5-amino-6bromopirazin-2-il)-N-metilpropanamida bruto (74%) foi obtido e foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 259/261 (MH+), 0,35 minutos. Etapa 7. 4-(3-amino-6-(3-(metilamino)-3-oxopropil)pirazin-2-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida
[00386] Seguindo a etapa 4 no esquema 38, usando 3-(5-amino-6bromopirazin-2-il)-N-metilpropanamida, 4-(3-amino-6-(3-(metilamino)3-oxopropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida foi obtido (24%). LCMS (m/z): 408,1 (MH+), 0,51 minuto; 1H RMN (400MHz, MeOH-d4) δ ppm 7,89 7,78 (m, 2 H), 7,68 7,51 (m, 2 H), 7,41 7,29 (m, 4 H), 7,26 (d, J = 7,1 Hz, 1 H), 4,60 (s, 2 H), 2,98 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 2,66 (s, 3 H), 2,57 (t, J = 7,3 Hz, 2 H). Síntese de 2-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)etanol Esquema 39
Figure img0064
Etapa 1.5-alilpirazin-2-amina
[00387] A uma solução de 5-bromopirazin-2-amina (1,3 g, 7,47 mmol) em foram adicionados 2-alil-,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolano (1,883 g, 11,21 mmol), aduzido de PdCl2(dppf)CH2Cl2 (0,610 g, 0,747 mmol) e CsF (3,40 g, 22,41 mmol), a mistura reacional foi purgada através de nitrogênio. A mistura reacional foi em seguida aquecida a 100 oC em banho de óleo durante 3 horas. A mistura reacional foi filtrada através de celita, lavada por EtOAc, o filtrada foi dividida entre EtOAc e água. A orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada em vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna rápidapara produzir 5-alilpirazin-2-amina em 37% de rendimento. LCMS (m/z): 136,0 (MH+), 0,30 minutos. Etapa 2. 2-(5-aminopirazin-2-il)etanol
[00388] 5-alilpirazin-2-amina (180 mg, 1,332 mmol) em DCM (26,6 mL) foi resfriada abaixo de -78 oC, em seguida ozônio foi borbulhado durante 10 minutos até a solução tornar-se uma cor azul. Em seguida, nitrogênio foi purgada durante 5 minutos. NaBH4 (151 mg, 4,00 mmol) em etanol (10 mL) foram adicionados lentamente. A mistura reacional foi deixada retornar para temperatura ambiente. Após 1 hora, NH4Cl saturado foi adicionado lentamente, a mistura reacional foi em seguida extraída por CHCl3/IPA(7:3) (3 vezes), a orgânica foi secada e concentrada para produzir o produto bruto. O produto bruto é usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 140,0 (MH+), 0,21 minutos. Etapa 3, 2-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)etanol
[00389] A uma solução de 2-(5-aminopirazin-2-il)etanol (30 mg, 0,216 mmol) em CH3CN (719 μL) foi adicionado NBS (38,4 mg, 0,216 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 30 minutos. A mistura reacional foi extinguida por NaHCO3 saturado, em seguida extraída por EtOAc. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada em vácuo produzindo 2-(5-amino-6-bromopirazin-2il)etanol bruto que foi usado na etapa seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 218,0/220,0 (MH+), 0,33 minutos. Síntese de 3-bromo-5-(2-metoxietil)pirazin-2-amina Esquema 40
Figure img0065
Etapa 1. (5-alilpirazin-2-il)carbamato de N,N-di-terc-butila
[00390] A uma solução de 5-alilpirazin-2-amina (1,2 g, 8,88 mmol) em CH2Cl2 (29,6 mL) foram adicionados Boc2O (4,07 g, 18,64 mmol) e DMAP (1,627 g, 13,32 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Depois de extinguida com NaHCO3 saturado, a mistura reacional foi extraída com CH2Cl2 3 vezes. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada em vácuo. O desejado foi obtido como um sólido branco (1,1 g, 37% de rendimento) por cromatografia de coluna rápida. Rf (TLC) = 0,3 (20% de EtOAc em hexanos). LCMS (m/z): 336,2 (MH+), 1,04 minutos. Etapa 2. (5-(2-hidroxietil)pirazin-2-il)carbamato de N,N-di-terc-butila
[00391] Uma solução de (5-alilpirazin-2-il)carbamato de N,N-di-tercbutila (1,1 g, 3,28 mmol) em DCM (32,8 mL) foi resfriada abaixo de -78 oC, ozônio foi borbulhado completamente até uma cor azul aparecer, em seguida nitrogênio foi purgado completamente durante 5 minutos. NaBH4 (0,74 g, 19,6 mmol) em metanol (20 mL) foi adicionado lentamente. A mistura reacional foi deixada retornar para temperatura ambiente.Após 2 horas, solução de NH4Cl saturado foi adicionado, a mistura reacional foi dividida entre EtOAc e água. A orgânica foi lavada com NaHCO3, água e salmoura, secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrado e concentrada. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 340,3 (MH+), 0,77 minutos. Etapa 3. (5-(2-metoxietil)pirazin-2-il)carbamato de N,N-di-terc-butila
[00392] A uma solução de (5-(2-hidroxietil)pirazin-2-il)carbamato de N,N-di-terc-butila (240 mg, 0,707 mmol) em MeI (7,7 mL) foi adicionado óxido de prata (983 mg, 4,24 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de celita e lavada com EtOAc e metanol, a orgânica foi lavada por NaHCO3 saturado, água e salmoura, secada e concentrada. O material bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 354,2 (MH+), 0,92 minutos. Etapa 4. 5-(2-metoxietil)pirazin-2-amina
[00393] (5-(2-metoxietil)pirazin-2-il)carbamato de N,N-Di-terc-butila (200 mg, 0,566 mmol) em DCM (1,9 mL) foi adicionado TFA (872 μL, 11,32 mmol), a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora, à mistura reacional foram adicionados 5 mL de tolueno e concentrada até secura. O material bruto foi usado na etapa de reaçãoseguinte sem purificação. LCMS (m/z): 154,1 (MH+), 0,27 minutos. Etapa 5. 3-bromo-5-(2-metoxietil)pirazin-2-amina
[00394] A uma solução de 5-(2-metoxietil)pirazin-2-amina (80 mg, 0,522 mmol) em DCM (1,7 mL) foi adicionado NBS (93 mg, 0,522 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. Depois de extinguida com NaHCO3, a mistura reacional foi extraída com DCM 3 vezes. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso. O material bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 232,1/234,1 (MH+), 0,49 minutos. Exemplo 21 Síntese de 4-(3-amino-6-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-il)-N-benzil-2fluorobenzamida Esquema 41
Figure img0066
Etapa 1. 2-(5-(bis(terc-butoxicarbonil)amino)pirazin-2-il)etil metanossulfonato
[00395] Ao (5-(2-hidroxietil)pirazin-2-il)carbamato de N,N-di-tercbutila (450 mg, 1,326 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado piridina (0,429 mL, 5,30 mmol) e resfriado para 0 °C usando banho de gelo. Em seguida, Mesil-Cl (0,382 mL, 4,91 mmol) foi adicionado e a reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante 16 horas. À reação foram adicionados 150 mL de acetato de etila e bicarbonato de sódio saturado. A camada orgânica foi extraída e lavada novamente com bicarbonato de sódio saturado, água (3x), filtrada, secada com sulfato de sódio e concentrada para massa constante para fornecer 540 mg de produto desejado, usado no estado em que se encontra, (98% de rendimento). LCMS (m/z): 418,3 (MH+), 0,89 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8,50 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 4,67 (t, J=6,3 Hz, 2H), 3,28 (t, J=6,3 Hz, 2H), 2,94 (s, 3H), 1,45 (s, 18H). Etapa 2. 5-(2-(metiltio)etil)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila
[00396] Ao 2-(5-(bis(terc-butoxicarbonil)amino)pirazin-2-il)etil metanossulfonato (540 mg, 1,293 mmol) em DMF (7 mL) foi adicionado tiometóxido de sódio (408 mg, 5,82 mmol) e foi agitado a 85 °C durante 3 horas, seguido por LCMS. A reação foi deixada resfriar, 200 mL de acetato de etila e bicarbonato de sódio saturado foi adicionado. A camadaorgânica foi extraída e lavada com água (3x), solução de sal saturado, secada sobre sulfato de sódio, filtrada através de tampão de sílica gel de 2 cm e estimulada com acetato de etila. O solvente foi concentrado para massa constante para fornecer 294 mg do produto desejado como base livre usado no estado em que se encontra, (84% de rendimento). LCMS (m/z): 270,4 (MH+), 0,84 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9,19 (s, 1H), 8,08 (d, J=1,2 Hz, 1H), 7,20 (br. s., 1H), 2,99-3,08 (m, 2H), 2,79-2,94 (m, 2H), 2,12 (s, 3H), 1,54 (s, 9H). Etapa 3. 5-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila
[00397] A 5-(2-(metiltio)etil)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila (292 mg, 1,084 mmol) em DCM (10 mL) foiram adicionados 40% (3,5 mL) de uma solução recentemente preparada de mCPBA (972 mg, 4,34 mmol) em DCM (8,7 mL) com agitação em temperatura ambiente, seguido por LCMS. Após 30 minutos, mais 15% (1,3 mL da solução de mCPBA acima) foram adicionados e agitados durante 30 minutos, seguido por LCMS. Em seguida, mais 5% (0,044 mL da solução de mCPBA acima) foram adicionados e agitados durante mais 30 minutos. A reação foi seguida por LCMS. À reação foram adicionados 200 mL de acetato de etila e excesso de bicarbonato de sódio saturado. A camada orgânica foi extraída e lavada novamente com bicarbonato de sódio saturado, água (3x), filtrada e concentrada para massa constante para fornecer 320 mg do produto desejado usado no estado em que se encontra, (98% de rendimento). LCMS (m/z): 302,1 (MH+), 0,62 minuto;1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9,20 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,23 (br. s., 1H), 3,47-3,57 (m, 2H), 3,26-3,36 (m, 2H), 2,86-2,93 (m, 3H), 1,55 (s, 9H). Etapa 4. 5-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-amina
[00398] A 5-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila (320 mg, 1,062 mmol) em DCM (6 mL) foi adicionado TFA (2,5 mL, 32,4 mmol) e agitado em temperatura ambiente durante 1 hora. O solvente foi concentrado para massa constante. O produto era com base livre usando 2,5 gramas de carbonato suportado sólido a 0,8 mmol/grama com 6 mL de acetonitrila e agitado durante 5 minutos. O suporte sólido foi filtrado e estimulado com acetonitrila. O produto foi concentrado para massa constante para fornecer o produto desejado usado no estado em que se encontra, assumindo a produção quantitativa (1,062 mmol). LCMS (m/z): 202,1 (MH+), 0,20 minutos. Etapa 5. 3-bromo-5-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-amina
[00399] À 5-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-amina (213 mg, 1,06 mmol) em acetonitrila (6 mL) foi adicionado NBS (179 mg, 1,007 mmol) e foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. O solvente foi concentrado para resíduo. Ao bruto foi adicionado acetato de etila, lavado com carbonato de sódio saturado, água (2x), secado sulfato de sódio, filtrado e concentrado para massa constante para fornecer 210 mg do produto desejado como base livre usada no estado em que se encontrava, (71% de rendimento). LCMS (m/z): 280,0/282,0 (MH+), 0,38 minuto. Etapa 6. 4-(3-amino-6-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-il)-N-benzil-2fluorobenzamida
[00400] À 3-bromo-5-(2-(metilsulfonil)etil)pirazin-2-amina (126 mg, 0,405 mmol) foram adicionados N-benzil-2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzamida (144 mg, 0,405 mmol), aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (33,1 mg, 0,040 mmol), DME (1,5 mL) e em seguida carbonato de sódio solução aquosa a 2 M (0,607 mL, 1,214 mmol). A reação foi submetida a micro-ondas a 125 °C durante 12 minutos, seguido por LCMS. À reação foram adicionados 5 mL de DME e 5 mL de MeOH, filtrada e concentrada para resíduo. O bruto foi dissolvido em 2,5 mL de DMSO, filtrado, purificado por HPLC preparativa e liofilizado em sal de TFA. Ao sal de TFA foram adicionados 200 mL de acetato de etila, lavada com carbonato de sódio saturado (3x), água (3x), secado sulfato de sódio, filtrado e concentrado para massa constante para fornecer 59 mg do produto desejado 4-(3-amino-6-(2(metilsulfonil)etil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida como base livre em 34% de rendimento. LCMS (m/z): 429,2 (MH+), 0,65 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,95 (s, 1H), 7,83 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,67 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,59 (dd, J=11,7, 1,2 Hz, 1H), 7,29-7,42 (m, 4H), 7,20 a 7,28 (m, 1H), 4,59 (s, 2H), 3,48-3,57 (m, 2H), 3,18 (dd, J=9,0, 6,7 Hz, 2H), 2,96 (s, 3H). Exemplos 22, 23, e 24 Síntese de (+/-)-4-(3-amino-6-(2-hidroxipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2fluorobenzamida,(R)-4-(3-amino-6-(2-hidroxipropil)pirazin-2-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida, e (S)-4-(3-amino-6-(2-hidroxipropil)pirazin-2il)-N-benzil-2-fluorobenzamida Esquema 42
Figure img0067
Etapa 1.4,4,5,5-tetrametil-2-(2-metilalil)-1,3,2-dioxaborolano
[00401] A uma suspensão de torneamento de magnésio (1,139 g, 46,9 mmol) em THF (65,1 mL) foi adicionado 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolano (5,67 mL, 39,1 mmol) em temperatura ambiente sob nitrogênio. 3-bromo-2-metilprop-1-eno (3,97 mL, 39,1 mmol) foi adicionado lentamente, após 30 minutos, mais 3-bromo-2-metilprop-1-eno (3,97 mL, 39,1 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. heptanos foram adicionados, seguidos por HCl a 1N. A mistura reacional foi em seguida extraída por heptanos. A orgânica foi lavada por água e salmoura, secada e concentrada para produzir 4,4,5,5-tetrametil-2-(2-metilalil)-1,3,2dioxaborolano. O produto foi usado na etapa seguinte sem purificação, 1H RMN (400MHz ,CDCl3) δ ppm 4,67 (d, J = 6,7 Hz, 2 H), 1,77 (s, 3 H), 1,34 1,20 (m, 12 H). Etapa 2. 5-(2-metilalil)pirazin-2-amina
[00402] A uma solução de 5-bromopirazin-2-amina (1 g, 5,75 mmol) foram adicionados 4,4,5,5-tetrametil-2-(2-metilalil)-1,3,2-dioxaborolano (1,360 g, 7,47 mmol), aduzido de PdCl2(dppf)-DCM (0,469 g, 0,575 mmol), CsF (2,62 g, 17,24 mmol), purgada através de nitrogênio. A mistura reacional foi agitada a 100 oC em banho de óleo durante 3 horas. A mistura reacional foi dividida entre EtOAc e água. A orgânica foi lavada com salmoura, secada e concentrada. O resíduo foi dissolvido em HCl a 1N (10 mL). A camada aquosa foi novamente extraída com EtOAc, a aquosa foi em seguida neutralizada para o pH = 8, em seguida extraída por EtOAc 3 vezes. A orgânica foi em seguida secada e concentrada. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte. LCMS (m/z): 150,5 (MH+), 0,28 minutos. Etapa 3. (5-(2-metilalil)pirazin-2-il)carbamato de N,N-di-terc-butila
[00403] A uma solução de 5-(2-metilalil)pirazin-2-amina (235 mg, 1,575 mmol) em DCM (5,2 mL), BOC2O (731 μL, 3,15 mmol) foi adicionado, seguido por DMAP (385 mg, 3,15 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. À reação foram adicionados 30 mL de DCM e lavada com bicarbonato de sódio saturado (2x) água (1x), secada sulfato de sódio, filtrada e concentrada para resíduo. O bruto foi purificado por cromatografia de sílica gel eluindo com 0 a 30% de acetato de etila e heptano para produzir 250 mg de produto. LCMS (m/z): 350,1 (MH+), 1,12 minuto; 1H RMN (400MHz ,CDCl3) δ ppm 8,45 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 8,41 8,33 (m, 1 H), 4,92 (s, 1 H), 4,75 (s, 1 H), 3,57 (s, 2 H), 1,73 (s, 3 H), 1,43 (s, 18 H). Etapa 4. (5-(2-hidroxipropil)pirazin-2-il)carbamato de (+/-)-N,N-di-tercbutila
[00404] (5-(2-metilalil)pirazin-2-il)carbamato de N,N-Di-terc-butila (120 mg, 0,343 mmol) em metanol (6,8 mL) foi resfriado abaixo de 78 o, o ozônio foi borbulhado completamente durante 6 minuto. Em seguida, nitroênio foi purgado completamente durante 5 minutos. NaBH4 (39,0 mg, 1,030 mmol) em metanol (5 mL) foi adicionado lentamente. A mistura reacional foi deixada retornar para temperatura ambiente. Após 1 hora, NH4Cl saturado foi adicionado lentamente. A mistura reacional foi dividida entre EtOAc e água. A orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado, água e salmoura, secada e concentrada. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 354,1 (MH+), 0,84 minutos. Etapa 5. (+/-)-1-(5-aminopirazin-2-il)propan-2-ol
[00405] (5-(2-hidroxipropil)pirazin-2-il)carbamato de (+/-)-N,N-Diterc-butila (110 mg, 0,311 mmol) em DCM (3,11 mL) foi adicionado TFA (1 mL, 12,98 mmol), a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos, a mistura reacional foi coevaporada com tolueno. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 154,1 (MH+), 0,24 minutos. Etapa 6. (+/-)-1-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propan-2-ol
[00406] A uma solução de (+/-)-1-(5-aminopirazin-2-il)propan-2-ol (47 mg, 0,307 mmol) em DCM (3,0 mL) foi adicionado NBS (49,1 mg, 0,276 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 10 minutos. Depois de extinguida com NaHCO3 saturado, a mistura reacional foi extraída com EtOAc 3 vezes. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada em vácuo. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 234. 0 (MH+), 0,40 minutos. Etapa 7. (+/-)-4-(3-amino-6-(2-hidroxipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2fluorobenzamida
[00407] A uma solução de (+/-)-1-(5-amino-6-bromopirazin-2il)propan-2-ol (30 mg, 0,129 mmol) em DME (970 μL) foram adicionados ácido 4-(benzilcarbamoil)-3-fluorofenilborônico (31,8 mg, 0,116 mmol), aduzido de PdCl2(dppf)CH2Cl2 (10,56 mg, 0,013 mmol), Na2CO3 a 2 M (323 μL). A mistura reacional foi agitada a 120 °C durante 10 minutos em micro-ondas. A mistura reacional foi dividida entre EtOAc e água. A orgânica foi secada e concentrada. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa. A fração pura foi combinada e dessalinizada para produzir (+/-)-4-(3-amino-6-(2-hidroxipropil)pirazin2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida. LCMS (m/z): 381,2 (MH+), 0,67 minuto;1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 7,95 7,81 (m, 2 H), 7,66 (dd, J = 1,6, 8,2 Hz, 1 H), 7,58 (dd, J = 1,6, 11,7 Hz, 1 H), 7,43 7,31 (m, 4 H), 7,31 7,19 (m, 1 H), 4,62 (s, 2 H), 4,16 4,04 (m, 1 H), 2,79 (d, J = 6,3 Hz, 2 H), 1,23 (d, J = 6,3 Hz, 3 H). Etapa 7. (R)-4-(3-amino-6-(2-hidroxipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2fluorobenzamida e (S)-4-(3-amino-6-(2-hidroxipropil)pirazin-2-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida
[00408] A (+/-)-4-(3-amino-6-(2-hidroxipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2fluorobenzamida racêmica foi resolvida por SFC quiral (coluna ChiralPak 5mic AD, 4,6x100 (mm), metanol+0,1% de DEA=40%, 5 mL/min). O enantiômero polar, (R)-4-(3-amino-6-(2-hidroxipropil)pirazin-2-il)-Nbenzil-2-fluorobenzamida, foi obtido em Rt = 1,39 minutos. LCMS (m/z): 381,2 (MH+), 0,67 minuto. O enantiômero menos polar, (S)-4-(3amino-6-(2-hidroxipropil)pirazin-2-il)-N-benzil-2-fluorobenzamida, foi obtido em Rt = 1,97 minutos. LCMS (m/z): 381,2 (MH+), 0,67 minuto. A estereoquímica foi designada arbitrariamente. Síntese de 3-bromo-5-(2-etoxietil)pirazin-2-amina Esquema 43
Figure img0068
Etapa 1. (E)-5-(2-etoxivinil)pirazin-2-amina
[00409] A uma solução de 5-bromopirazin-2-amina (200 mg, 1,149 mmol) em DME (2874 μL) foram adicionados (E)-2-(2-etoxivinil)4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (341 mg, 1,724 mmol), aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (94 mg, 0,115 mmol), e Na2CO3 a 2 M (958 μL). A mistura reacional foi agitada a 130 oC em reator de micro-ondas reactor durante 20 minutos. A mistura reacional foi filtrada através de celita e lavada com EtOAc, o filtrado foi dividido entre EtOAc e água. A aquosa foi extraída por EtOAc três vezes, a orgânica combinada foi secada e concentradas. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida para fornecer (E)-5-(2-etoxivinil)pirazin-2-amina. LCMS (m/z): 166,1(MH+), 0,41 minutos. Etapa 2. 5-(2-etoxietil)pirazin-2-amina
[00410] A uma solução de (E)-5-(2-etoxivinil)pirazin-2-amina (75 mg, 0,454 mmol) em etanol (4,54 mL) foi adicionado Pd/C (48,3 mg, 0,454 mmol). A mistura reacional foi purgada por nitrogênio durante 10 minutos, e em seguida agitada em temperatura ambiente durante 2 horas sob balão de hidrogênio. A mistura reacional foi em seguida filtrada através de celita e lavada com metanol e EtOAc, em seguida concentrada. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 168,1 (MH+), 0,33 minutos. Etapa 3. 3-bromo-5-(2-etoxietil)pirazin-2-amina
[00411] A uma solução de 5-(2-etoxietil)pirazin-2-amina (45 mg, 0,269 mmol) em DCM (897 μL) foi adicionado NBS (43,1 mg, 0,242 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 10 minutos. Depois de extinguida com NaHCO3 saturado, a mistura reacional foi extraída com EtOAc 3 vezes. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada em vácuo. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 246,0 (MH+), 0,59 minuto. Síntese de (+/-)-2-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propan-1-ol Esquema 44
Figure img0069
Etapa 1.5-(3-(benzilóxi)prop-1-en-2-il)pirazin-2-amina
[00412] A uma solução de 5-bromopirazin-2-amina (200mg, 1,149 mmol) em foram adicionados (3-(benzilóxi)prop-1-en-2-il)trifluoroborato de potássio (350 mg, 1,379 mmol), aduzido de PdCl2(dppf).CH2Cl2 (94 mg, 0,115 mmol), Cs2CO3 (1124 mg, 3,45 mmol). Purgada através de nitrogênio. A mistura reacional foi agitada a 100 oC em banho de óleo durante 6 horas. A mistura reacional foi em seguida dividida entre EtOAc e água, as camadas orgânicas combinadas e lavadas com água e salmoura, secadas sobre sulfato de sódio anidroso e concentradas. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida para fornecer 5-(3-(benzilóxi)prop-1-en-2-il)pirazin-2-amina em 61 % de rendimento. LCMS (m/z): 245,2 (MH+), 0,67 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 8,26 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 7,96 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 7,34 (d, J = 4,3 Hz, 5 H), 5,91 (s, 1 H), 5,44 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 4,59 (s, 2 H), 4,49 (s, 2 H). Etapa 2. (+/-)-5-(1-(benzilóxi)propan-2-il)pirazin-2-amina
[00413] A uma solução de 5-(3-(benzilóxi)prop-1-en-2-il)pirazin-2amina (91 mg, 0,377 mmol) em metanol (3771 μL) foi adicionado Pd/C (40,1 mg, 0,377 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente sob balão de hidrogênio durante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de celita, lavada com metanol e EtOAc. O material bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 244,2 (MH+), 0,62 minutos. Etapa 3, (+/-)-2-(5-aminopirazin-2-il)propan-1-ol
[00414] Uma solução de 5-(1-(benzilóxi)propan-2-il)pirazin-2-amina (80 mg, 0,329 mmol) em HCl a 1N (1096 μL) foi aquecida em banho de óleo durante 7 horas, resfriada. A mistura reacional foi extraída por EtOAc, a aquosa foi concentrada até a secura para produzir o produto bruto como sal de HCl e usado na etapa de reação seguinte. LCMS (m/z): 154,1 (MH+), 0,26 minutos. Etapa 4. (+/-)-2-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propan-1-ol
[00415] A uma solução de 2-(5-aminopirazin-2-il)propan-1-ol (30 mg, 0,196 mmol) em DCM (653 μL) foi adicionado NBS (31,4 mg, 0,176 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 10 minutos. Depois de extinguida com NaHCO3 saturado, a mistura reacional foi extraída com EtOAc 3 vezes. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada em vácuo. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 234,0 (MH+), 0,40 minuto. Síntese de 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propanonitrila Esquema 45
Figure img0070
Etep3 LDA MeCN -78 °C 35% Etapa 1. (5-metilpirazin-2-il)carbamato de N,N-di-terc-butila
[00416] A uma solução de 5-metilpirazin-2-amina (1 g, 9,16 mmol) em CH2Cl2 ( 30 mL), Boc2O (4,47 mL, 19,24 mmol) foi adicionado, seguido por DMAP (1,679 g, 13,75 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Depois de extinguida com NaHCO3 saturado, a mistura reacional foi extraída com CH2Cl2 3 vezes. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada em vácuo. O produto desejado foi obtido como um solido branco por cromatografia de coluna rápida(20 % de EtOAc em heptano). LCMS (m/z): 310,0 (MH+), 0,93 minutos. Etapa 2. (5-(bromometil)pirazin-2-il)carbamato de N,N-di-terc-butila
[00417] A uma solução de (5-metilpirazin-2-il)carbamato de N,N-diterc-butila (1,37 g, 4,43 mmol) em CCl4 (14,76 mL) foram adicionados NBS (0,828 g, 4,65 mmol), peróxido de benzoíla (0,107 g, 0,443 mmol), AIBN (0,073 g, 0,443 mmol). A mistura reacional foi agitada para refluxo durante 8 horas. Preparação, o sólido foi filtrado, a orgânica foi concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápidapara fornecer o produto título em 36% de rendimento. LCMS (m/z): 231,1 (MH+-Boc), 1,04 minutos. Etapa 3. 5-(2-cianoetil)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila
[00418] n-Butil lítio (2,5 M em hexanos 103 μL, 0,258 mmol) foi adicionado em diisopropilamina (39,3 μL, 0,276 mmol) em THF seco a 0 °C sob argônio, a mistura foi em seguida agitada a 0 °C durante 1 horas, em seguida resfriada abaixo de -78 °C, acetonitrila (14,12 μL, 0,270 mmol) foi adicionado lentamente, a mistura reacional foi deixada retornar para temperatura ambiente e agitada em temperatura ambiente durante 1 hora, resfriada abaixo de -78 °C novamente, e (5(bromometil)pirazin-2-il)carbamato de N,N-di-terc-butila (100 mg, 0,258 mmol) em THF (0,5 mL) foi adicionado lentamente, a mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 10 minutos, em seguida deixada retornar para temperatura ambiente, após 2 horas, a reação foi extinguida por solução de NH4Cl saturado, em seguida extraída por EtOAc. A orgânica foi lavada por salmoura, secada e concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida(40% de EtOAc/heptano) para fornecer 5-(2-cianoetil)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila em 40% de rendimento. LCMS (m/z): 193,1 (MH+-tBu), 0,70 minuto; 1H RMN (400MHz ,CDCl3) δ ppm 9,22 (s, 1 H), 8,12 (s, 1 H), 3,09 (t, J = 7,2 Hz, 2 H), 2,83 (t, J = 7,2 Hz, 2 H), 1,52 1,36 (m, 8 H). Etapa 4. 3-(5-aminopirazin-2-il)propanonitrila
[00419] A uma solução de 5-(2-cianoetil)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila (25 mg, 0,101 mmol) em DCM (0,336 mL) foi adicionado TFA (0,1 mL, 1,298 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. Depois de extinguida com NaHCO3 saturado, a mistura reacional foi extraída com DCM. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada em vácuo. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 149,1 (MH+), 0,24 minutos. Etapa 5. 3-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)propanonitrila
[00420] A uma solução de 3-(5-aminopirazin-2-il)propanonitrila (45 mg, 0,304 mmol) em DCM (1519 μL) foi adicionado NBS (48,7 mg, 0,273 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 10 minutos. Depois de extinguida com NaHCO3, a mistura reacional foi extraída com EtOAc 3 vezes. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada e concentrada em vácuo. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 227/229,1 (MH+), 0,45 minutos. Síntese de 5-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidin-2-ona Esquema 46
Figure img0071
Etapa 1.5-metilpirazin-2-ilcarbamato de terc-butila
[00421] À solução ácido 5-metilpirazina-2-carboxílico (2,5 g, 18,1 mmol), terc-butanol (6,92 mL, 72,4 mmol), Et3N (3,78 mL, 27,1 mmol) em 1,4-dioxano (12,5 mL) a 95°C foi gota a gota adicionado difenilfosforil azida (DPPA, 3,23 mL, 18,1 mmol), e a reação foi aquecida a 95 °C durante 1,5 horas, seguida por uma 2a porção de DPPA (1 mL, 5,6mmol) e aquecida durante mais 1,5 horas. A mistura reacional foi resfriada, concentrada e o resíduo foi diluído com EtOAc (50 mL), lavado com água (30 mL), NaOH a 3 M (30 mL), NaHCO3 saturado (30 mL) e salmoura (30 mL), secado sobre Na2SO4, e concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida em sílica gel eluindo com gradiente de EtOAc/CH2Cl2 (0 a 20%) para fornecer 5-metilpirazin-2ilcarbamato de terc-butila como sólido branco. LCMS (m/z): 210,1 (MH+), 0,69 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9,17 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,75 (br. s., 1H), 2,51 (s, 3H), 1,56 (s, 9H). Etapa 2. 5-(bromometil)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila
[00422] Uma solução de 5-metilpirazin-2-ilcarbamato de terc-butila (2,79 g, 13,33 mmol), NBS (2,61 g, 14,67 mmol) e AIBN (0,219 g, 1,33 mmol) em CCl4 (45 mL) foi purgada com argônio, em seguida a solução foi aquecida com banho de óleo a 85°C durante 4 horas. A mistura reacional foi resfriada para temperatura ambiente, concentrada e o resíduo foi redissolvido em EtOAc (~50 mL), lavado com NaOh aquoso diluído duas vezes (10 mL de NaOH a1 N diluído em 20 mL de H2O), salmoura (30 mL), secado (Na2SO4) e concentrado. O resíduo foi também purificado por cromatografia rápida em sílica gel eluído com gradiente de EtOAc/CH2Cl2 (0 a 30%) e 5-(bromometil)pirazin-2ilcarbamato de terc-butila foi obtido em sólido não totalmente branco. LCMS (m/z): 288,1/290,1 (MH+), 0,82 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9,26 (s, 1H), 8,32 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,62 (br. s., 1H), 4,56 (s, 2H), 1,56 (s, 9H). Etapa 3, 5-(cianometil)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila
[00423] Uma mistura de 5-(bromometil)pirazin-2-ilcarbamato de (0,75 g, 2,60 mmol) e NaCN (0,255 g, 5,21 mmol) em DMF (5 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 50 minutos. A mistura reacional foi resfriada para abaixo da temperatura ambiente, diluída com NaOH a 0,5 N (10 mL) e extraída com EtOAc (2 x 20 mL), e as camadas de EtOAc foram combinadas, lavadas com NaOH a 0,5 N (10 mL), secadas (Na2SO4), concentradas e o resíduo bruto foi purificado por cromatografia rápidaem sílica gel eluído com gradiente de EtOAc/CH2Cl2 (0 a 20%) para fornecer 5-(cianometil)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila (0,40 g, 65,6% de rendimento). LCMS (MH+tBu): 179,0 (MH+), 0,68 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 9,28 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,59 (br. s., 1H), 3,91 (s, 2H), 1,57 (s, 9H). Etapa 4. 4-(5-(terc-butoxicarbonilamino)pirazin-2-il)-4-cianobutanoato de etila
[00424] Ao 5-(cianometil)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila (0,32 g, 1,37 mmol) em uma mistura do solvente de etanol/2-metiltetrahidrofuran (5mL/5mL) foi adicionado etóxido de sódio recentemente preparado (1 M, 1,366 mL), e a mistura foi agitada a 0 °C durante 10 minutos, seguida por adição de etil acrilato (145 ul, 1,366 mmol) e a mistura foi agitada a 0 °C durante 2 horas. A reação foi extinguida neste ponto adicionando NaHCO3 saturado (5 mL), e a mistura reacional foi agitada durante mais 10 minutos, diluída com EtOAc (20 mL), filtrado e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (20 mL), lavado com tampão de fosfato de sódio a pH 7,0, e camada de EtOAc foi concentrada, e óleo residual marrom claro foi purificado por coluna rápida eluído com gradiente de EtOAc/heptano (0 a 50%) para fornecer 4-(5-(terc-butoxicarbonilamino)pirazin-2-il)-4-cianobutanoato de etila (100 mg, 22% de rendimento). LCMS (m/z): 279,2 (MH+-tBu), 0,86 minuto. Etapa 5. 5-(6-oxopiperidin-3-il)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila
[00425] Sob argônio, ao 4-(5-(terc-butoxicarbonilamino)pirazin-2-il)4-cianobutanoato de etila em solução de etanol (94 mg, 0,281 mmol/8 mL) foi adicionada suspensão de etanol de catalisador de níquel de Raney (Níquel em ~2 mL etanol, a quantidade de níquel de Raney não foi seguramente medida), e a mistura reacional foi agitada sob balão de H2 após permuta de atmosfera de ar 3 vezes, aquecida com banho de óleo externo a 56 °C durante a noite com balão de H2. A mistura reacional foi resfriada para abaixo da temperatura ambiente, e filtrada através de uma almofada de celita, o filtrado foi concentrado para fornecer 5-(6-oxopiperidin-3-il)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila em um sólido amarelo. Etapa 6. 5-(5-aminopirazin-2-il)piperidin-2-ona
[00426] Uma mistura de 5-(6-oxopiperidin-3-il)pirazin-2-ilcarbamato de terc-butila (60 mg, 0,205 mmol) e HCl concentrado (1 mL) em metanol (2 mL) foi aquecida com banho de óleo a 70 °C durante 1 hora e a mistura reacional foi resfriada, concentrada até secura e o resíduo foi redissolvido em metanol (3 mL), e a ele foi adicionado NaHCO3 (200 mg), e a mistura foi aquecida com 70 °C banho de óleo durante 2 horas. A suspensão sólida da mistura reacional foi removida por filtragem, e o filtrado foi concentrado e um sólido amarelo claro foi obtido como 5-(5-aminopirazin-2-il)piperidin-2-ona bruto que foi usado diretamente na etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 193,1 (MH+), 0,22 minuto. Etapa 7. 5-(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidin-2-ona
[00427] À solução de 5-(5-aminopirazin-2-il)piperidin-2-ona (25 mg, 0,13 mmol) e acetonitrila (10 mL) a 0 °C foi adicionado NBS (23,2 mg, 0,13 mmol) e a mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 30 minutos, em seguida em temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura reacional foi concentrada, e o resíduo foi basificado por NaOH a 1 N (140 ul), diluído com metanol (2 mL), concentrado. O resíduo foi triturado com EtOAc (3 x 1 mL), e os sobrenadantes de EtOAc foram coletados, combinados e concentrados e um sólido claro foi obtido como 5(5-amino-6-bromopirazin-2-il)piperidin-2-ona bruto que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 241/243 (MH+), 0,41 minutos. Exemplo 25 Síntese de 4-(2-amino-5-(6-oxopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida Esquema 47
Figure img0072
Etapa 1.5-bromo-1-((2-(trimetilsilil)etóxi)metil)piridin-2(1H)-ona
[00428] A uma solução de 5-bromopiridin-2(1H)-ona (2,01 g, 11,55 mmol) em DMF (30 mL) a 0 °C foi adicionado hidreto de sódio (0,924 g, 23,10 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. A esta, (2-(clorometóxi)etil)trimetilsilano (2,89 g, 17,33 mmol) foi adicionado lentamente. A mistura reacional foi agitada durante a noite. LCMS 0,26 minutos, MH+ 304,1 (método não polar). A reação foi extinguida com NH4Cl saturado aquoso, e em seguida diluída com acetato de etila. A mistura reacional foi extraída com EtOAc. As orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, em seguida secadas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia coluna rápida usando 0 a 50% de EtOAc / heptano. 5-bromo-1-((2(trimetilsilil)etóxi)metil)piridin-2(1H)-ona foi obtido como um líquido amarelo viscoso. LCMS (m/z): 304/306 (MH+), 0,95 minutos. Etapa 2. 6'-fluoro-1-((2-(trimetilsilil)etóxi)metil)-[3,3'-bipiridin]-6(1H)-ona
[00429] A uma solução de 5-bromo-1-((2(trimetilsilil)etóxi)metil)piridin-2(1H)-ona (568 mg, 1,868 mmol) em DME (6227 μL, Relação: 2,000) foram adicionados PdCh(dppf) (68,3 mg, 0,093 mmol), 2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2il)piridina (500 mg, 2,242 mmol), Na2CO3 a 2 M (3113 μl, Relação: 1,000) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas durante 10 minutos a 120 °C. À mistura reacional, sulfato de sódio e EtOAc foram adicionados. Depois de filtrados, os materiais voláteis foram removidos em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (gradiente de EtOAc em heptano) produzindo 6'-fluoro-1-((2-(trimetilsilil)etóxi)metil)-[3,3'bipiridin]-6(1H)-ona (52%). LCMS (m/z): 321,3 (MH+), 0,93 minutos. Etapa 3, 5-(6-fluoropiridin-3-il)-1 -((2-(trimetilsilil)etóxi)metil)piperidin-2ona
[00430] A uma bomba de aço, uma solução de 6'-fluoro-1-((2(trimetilsilil)etóxi)metil)-[3,3'-bipiridin]-6(1H)-ona (311 mg, 0,971 mmol) em MeOH (permanecendo 60% de topo livre) foi adicionada seguida por adição de Pd-C (207 mg, 0,194 mmol). Depois de desgaseificar com corrente de nitrogênio, a bomba de aço foi pressurizada com gás de hidrogênio até 17,57 kg/cm2 (250 psi). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 20 horas. LCMS 0,9 minuto MH+ 325,1 (maior simples). A mistura reacional foi filtrada através de celita (lavada com EtOAc). Os materiais voláteis foram concentrados em vácuo para fornecer 5-(6-fluoropiridin-3-il)-1-((2(trimetilsilil)etóxi)metil)piperidin-2-ona bruto (290 mg, 0,894 mmol, 92%), que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. Etapa 4. 5-(6-aminopiridin-3-il)piperidin-2-ona
[00431] Ao -(6-fluoropiridin-3-il)-1-((2-(trimetilsilil)etóxi)metil)piperidin-2-ona (290 mg, 0,894 mmol) em uma bomba de aço, solução de hidróxido de amônio (34,8 μl, 0,894 mmol) foi adicionada (40% de volume de topo remanescentes). O reator de bomba de aço foi aquecido a 150 °C durante 44 horas (17,57 kg/cm2 (250 psi) em medidor de pressão). LCMS 0,23 minutos, MH+ 192,1 (sem SEM); 0,66 minutos, MH+ 322,1 (com SEM). Depois de diluídos com MeOH e tolueno, os materiais voláteis foram completamente removidos em vácuo. 5-(6aminopiridin-3-il)piperidin-2-ona foi usado para a etapa seguinte. Etapa 5. 5-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)piperidin-2-ona
[00432] A uma solução de 5-(6-aminopiridin-3-il)piperidin-2-ona (132 mg, 0,690 mmol) em acetonitrila ( 8,00 mL) foi adicionado NBS (98 mg, 0,552 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada durante 30 minutos sob aquecimento para temperatura ambiente. LCMS 0,28 minutos, MH+ 270/272; 0,7 minutos, MH+ 400,1/402,1 (um proteido por SEM). Depois de extinguida com solução de Na2S2O3, a mistura reacional foi extraída com EtOAc, que foi lavada com solução de NaHCO3 e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada, concentrada em vácuo. O bruto 5-(6-amino-5-bromopiridin-3il)piperidin-2-ona foi usado para a etapa seguinte. Etapa 6. 4-(2-amino-5-(6-oxopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00433] A um frasconete de micro-ondas, 5-(6-amino-5bromopiridin-3-il)piperidin-2-ona (45 mg, 0,167 mmol), ácido (S)-(4-((1(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)borônico (56,2 mg, 0,167 mmol), PdCl2(dppf) (12,19 mg, 0,017 mmol), DME (1111 μl, Relação: 2,000), e Na2CO3 (solução a 2M) (555 μL, Relação: 1,000) foram adicionados. A mistura reacional foi aquecida no reator de microondas durante 10 minutos a 120 °C. LCMS 0,58 minutos, MH+ 483,2; 0,85 minutos, MH+ 613,3. Depois, sulfato de sódio anidroso foi adicionado para remover água, a mistura reacional foi filtrada e secada em vácuo. A pequena porção foi purificada por HPLC preparativa produzindo 4-(2-amino-5-(6-oxopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida como uma mistura diastereomérica (12%). LCMS (m/z): 483,3 (MH+), 0,56 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 7,89 (m, 1H), 7,80 (m, 2H), 7,42 7,30 (m, 3H), 7,30 7,24 (m, 2H), 7,25 7,15 (m, 1H), 5,18 5,03 (m, 1H), 3,87 3,64 (m, 2H), 3,47 3,35 (m, 2H), 3,11 2,97 (m, 1H), 2,46 2,30 (m, 2H), 2,08 1,91 (m, 2H). Síntese de (+/-)-4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona Esquema 48 E Step 3 J NH4OH JL 150 °C p ] (100 psi) 20 h I (+/-)
Figure img0073
Etapa 1.6-fluoro-1'-metil-[3,4'-bipiridin]-2'(1'H)-ona
[00434] A uma solução de 2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)piridina (500 mg, 2,242 mmol) foram adicionados PdCl2(dppf) (68,3 mg, 0,093 mmol), 4-bromo-1-metilpiridin-2(1H)-ona (351 mg, 1,868 mmol), Na2CO3 a 2 M (4,1 mL) e DME (8,3 mL) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas durante 10 minutos a 120 °C. A mistura reacional foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas foram lavadas com água e salmoura, secadas sobre Na2SO4 anidroso, filtradas, e concentradas em vácuo. O 6-fluoro-1'-metil-[3,4'-bipiridin]-2'(1'H)-ona bruto foi purificado por cromatografia rápida(gradiente de EtOAc em DCM). LCMS (m/z): 205,2 (MH+), 0,47 minutos. Etapa 2. (+/-)-4-(6-fluoropiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona
[00435] A uma bomba de aço, uma solução de 6-fluoro-1'-metil[3,4'-bipiridin]-2'(1'H)-ona (340 mg, 1,665 mmol) em MeOH (permanecendo 60% de topo livre) foi adicionado seguida por adição de Pd-C (Degussa) (354 mg, 0,333 mmol). Depois de desgaseificar com corrente de nitrogênio, a bomba de aço foi carregada com hidrogênio (15,57 kg/cm2 (250 psi)). A mistura reacional foi agitada durante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de celita (lavada com EtOAc/MeOH). Os materiais voláteis foram concentrados em vácuo para fornecer (+/-)-4-(6-fluoropiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona bruto (341 mg, 1,638 mmol, 98 % de rendimento) que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 209,1 (MH+), 0,47 minuto. Etapa 3, (+/-)-4-(6-aminopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona
[00436] A uma bomba de aço, (+/-)-4-(6-fluoropiridin-3-il)-1metilpiperidin-2-ona (341 mg, 1,638 mmol) foi adicionada seguida por adição de solução de hidróxido de amônio (0,00 mmol) permanecendo 40% de topo livre. O reator foi aquecido a 150 °C durante 20 horas (pressão interna elevada até 7,06 kg/cm2 (100 psi) sob aquecimento). Após resfriamento, a reação foi concluída. O solvente completo (transferido para um frasco) foi removido em vácuo. Tolueno foi adicionado e co-evaporado para remover água. O produto bruto, (+/-)-4-(6aminopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona, foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação (87%). LCMS (m/z): 206,1 (MH+), 0,24 minuto. Etapa 4. (+/-)-4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona
[00437] A uma solução de (+/-)-4-(6-aminopiridin-3-il)-1metilpiperidin-2-ona (291 mg, 1,418 mmol) em acetonitrila (14,200 mL) foi adicionado NBS (202 mg, 1,134 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada durante 30 minutos sob aquecimento para temperatura ambiente. Depois de extinguida com solução de Na2S2O3, a mistura reacional foi extraída com EtOAc, que foi lavada com solução de NaHCO3 e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada, concentrada em vácuo. O produto bruto, (+/-)-4-(6-amino-5bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona, (98%) foi usado para a etapa seguinte. LCMS (m/z): 284/286 (MH+), 0,34 minuto. Exemplos 26, 27, e 28 4-(2-amino-5-(1-metil-2-oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-2oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida, e 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-2-oxopiperidin-4-il)piridin3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
Figure img0074
[00438] Seguindo a etapa 6 no esquema 47, usando (+/-)-4-(6amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona e ácido (S)-(4-((1-(3clorofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)boronic, 4-(2-amino-5(1-metil-2-oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida foi obtido como uma mistura diastereomérica (inseparável) (35%). LCMS (m/z): 497,3 (MH+), 0,59 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 7,97 (m, 1H), 7,9 (m, 1H), 7,82 (m, 1H), 7,52 7,39 (m, 3H), 7,39 7,32 (m, 2H), 7,3 (m, 1H), 5,19 (m, 1H), 3,88 (m, 2H), 3,60 3,38 (m, 3H), 3,21 3,08 (m, 1H), 2,72 2,58 (m, 1H), 2,57 2,41 (m, 1H), 2,21 1,95 (m, 2H). A mistura diastereomérica foi separada por SFC quiral (Coluna ChiralPak 5mic AD, 4,6x100 (mm), 5mL/min, EtOH+0,1%, DEA= 45% em 5 minutos). O diastereômero polar, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-2-oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida foi obtido a Rt = 1,82 minutos. O diastereômero menos polar, 4-(2-amino-5-((S)-1-metil2-oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida foi obtido a Rt = 2,35 minutos. A estereoquímica absoluta para ambos os diastereômeros foi designada arbitrariamente. Exemplos 29, 30, e 31 4-(2-amino-5-(1-metil-2-oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((R)-1feniletil)benzamida, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-2-oxopiperidin-4-il)piridin3-il)-2-fluoro-N-((R)-1-feniletil)benzamida, e 4-(2-amino-5-((S)-1-metil2-oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((R)-1-feniletil)benzamida
Figure img0075
[00439] Seguindo a etapa 6 no esquema 47, usando (+/-)-4-(6amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona e ácido (R)-(3-fluoro4-((1-feniletil)carbamoil)fenil)borônico, 4-(2-amino-5-(1-metil-2oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((R)-1-feniletil)benzamida foi obtido como uma mistura diastereomérica (inseparável) (34%). LCMS (m/z): 447,3 (MH+), 0,58 minuto;1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 7,85 (m, 1H), 7,72 (m, 2H), 7,41 7,20 (m, 6H), 7,18 (m, 1H), 5,17 (m, 1H), 3,51 3,29 (m, 3H), 3,13 2,98 (m, 1H), 2,88 (s, 3H), 2,60 2,48 (m, 1H), 2,48 2,30 (m, 1H), 2,10 1,85 (m, 2H), 1,58 1,38 (m, 3H). A mistura diastereomérica foi separada por SFC quiral (Coluna ChiralPak 5mic AD, 4,6x100 (mm), 100mL/minuto, IPA+0,1%, DEA = 40%, 5ml/minuto). O diastereômero polar, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-2oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((R)-1-feniletil)benzamida foi obtido a Rt = 1,67 minutos. LCMS (m/z): 447,3 (MH+), 0,64 minuto. O diastereômero menos polar, 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-2-oxopiperidin-4il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((R)-1-feniletil)benzamida foi obtido a Rt = 2,37 minutos. LCMS (m/z): 447,2 (MH+), 0,64 minuto. A estereoquímica absoluta para ambos os diastereômeros foi designada arbitrariamente. Exemplos 32, 33, e 34 4-(2-amino-5-(1-metil-2-oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3clorofenil)etil)-2-fluorobenzamida,4-(2-amino-5-((R)-1-metil-2oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-clorofenil)etil)-2fluorobenzamida, e 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-2-oxopiperidin-4-il)piridin3-il)-N-((R)-1-(3-clorofenil)etil)-2-fluorobenzamida
Figure img0076
[00440] Seguindo a etapa 6 no esquema 47, usando ácido (R)-(4((1-(3-clorofenil)etil)carbamoil)-3-fluorofenil)borônico, 4-(2-amino-5-(1metil-2-oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-clorofenil)etil)-2fluorobenzamida foi obtido como uma mistura diastereomérica (inseparável) (33%). LCMS (m/z): 481,3 (MH+), 0,70 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 7,86 (m, 1H), 7,73 (m, 2H), 7,39 7,20 (m, 5H), 7,19 (m, 1H), 5,14 (m, 1H), 3,52 3,28 (m, 3H), 3,14 2,98 (m, 1H), 2,88 (s, 3H), 2,62 2,48 (m, 1H), 2,46 2,30 (m, 1H), 2,12 1,84 (m, 2H), 1,48 (m, 3H). A mistura diastereomérica foi separadas por SFC quiral (Coluna ChiralPak 5mic AD, 4,6x100 (mm), 5ml/min, EtOH+0,1% DEA=35%). O diastereômero polar, 4-(2-amino-5-((R)-1metil-2-oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-clorofenil)etil)-2fluorobenzamida foi obtido a Rt = 2,83 minutos. LCMS (m/z): 481,2 (MH+), 0,71 minuto. O diastereômero menos polar, 4-(2-amino-5-((S)1-metil-2-oxopiperidin-4-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-clorofenil)etil)-2fluorobenzamida foi obtido a Rt = 3,53 minutos. LCMS (m/z): 481,2 (MH+), 0,72. A estereoquímica absoluta para ambos os diastereômeros foi designada arbitrariamente. Síntese de 5-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona Esquema 49
Figure img0077
[00441] Seguindo o esquema 48, usando 5-bromo-1-metilpiridin2(1H)-ona, 5-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona foi obtido. LCMS (m/z): 284/286 (MH+), 0,34 minutos. Exemplos 35, 36, e 37 4-(2-amino-5-(1 -metil-6-oxopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-6oxopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida, e 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-6-oxopiperidin-3-il)piridin3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
Figure img0078
[00442] Seguindo a etapa 6 no esquema 47, usando 5-(6-amino-5bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona e ácido (S)-(4-((1-(3-clorofenil)2-hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)borônico, 4-(2-amino-5-(1-metil-6oxopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida foi obtido (33%). LCMS (m/z): 497,2 (MH+), 0,61 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 8,70 (m, 1H), 7,98 (m, 1H), 7,88 (m, 2H), 7,44 (m, 3H), 7,36 (m, 2H), 7,30 (m, 1H), 5,19 (m, 1H), 3,88 (m, 2H), 3,51 (m, 2H), 3,21 (m, 1H), 2,97 (s, 3H), 2,50 (m, 2H), 2,07 (m, 2H). A mistura diastereomérica foi separada por SFC quiral (Coluna ChiralPak 5mic AD, 4,6x100 (mm), EtOH+0,1%DEA=40%, 5ml/minuto). O diastereômero polar, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-6oxopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida foi obtido a Rt = 2,22 minutos. LCMS (m/z): 497,2 (MH+), 0,61 minuto. O diastereômero menos polar, 4-(2-amino-5-((S)1-metil-6-oxopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida foi obtido em Rt = 3,09 minuto. LCMS (m/z): 497,3 (MH+), 0,59 minuto. Exemplos 38, 39, e 40 4-(2-amino-5-(1 -metil-6-oxopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3clorofenil)etil)-2-fluorobenzamida,4-(2-amino-5-((R)-1-metil-6oxopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-clorofenil)etil)-2fluorobenzamida, e 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-6-oxopiperidin-3-il)piridin3-il)-N-((R)-1-(3-clorofenil)etil)-2-fluorobenzamida
Figure img0079
[00443] Seguindo a etapa 6 no esquema 47, usando ácido (R)-(4((1-(3-clorofenil)etil)carbamoil)-3-fluorofenil)borônico e 5-(6-amino-5bromopiridin-3-il)-1-metilpiperidin-2-ona, 4-(2-amino-5-(1-metil-6oxopiperidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida foi obtido como uma mistura diastereomérica (4%). LCMS (m/z): 481,3 (MH+), 0,69 minuto. 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 8,79 8,65 (m, 1H), 7,93 7,83 (m, 1H), 7,83 7,76 (m, 1H), 7,75 7,65 (m, 1H), 7,40 7,29 (m, 3H), 7,29 7,21 (m, 2H), 7,21 7,13 (m, 1H), 5,22 5,07 (m, 1H), 3,52 3,32 (m, 3H), 3,16 3,01 (m, 1H), 2,88 (s, 3H), 2,48 2,34 (m, 2H), 2,07 1,92 (m, 2H), 1,55 1,40 (m, 3H). A mistura diastereomérica foi separadas por SFC quiral (Coluna ChiralPak 5mic AD, 4,6x100 (mm), 5ml/min, MeOH+0,1% DEA = 35%). O diastereômero polar, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-6-oxopiperidin-3il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-clorofenil)etil)-2-fluorobenzamida foi obtido em Rt = 2,98 minutos. LCMS (m/z): 481,2 (MH+), 0,71 minuto. O diastereômero menos polar, 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-6-oxopiperidin-3il)piridin-3-il)-N-((R)-1-(3-clorofenil)etil)-2-fluorobenzamida foi obtido em Rt = 3,93 minutos. LCMS (m/z): 481,1 (MH+), 0,71 minuto. Exemplo 41 4-(2-amino-5-(5-oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidróxi-1feniletil)benzamida Esquema 50
Figure img0080
Etapa 1. 4-(6-fluoropiridin-3-il)-2-oxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butila
[00444] Ao 2-oxo-4-(tosilóxi)-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butila (0,8g, 2,037 mmol) (Veja,Exemplo 24 quanto à síntese) em DME ( 27 mL) e carbonato de sódio (7 mL, 14,00 mmol) (2M) foram adicionados ácido (6-fluoropiridin-3-il)borônico (0,431 g, 3,06 mmol) e aduzido de PdCl2(dppf).CH2Cl2 (0,333 g, 0,407 mmol). Purga com N2 durante 5 minutos. A mistura reacional foi aquecida em banho de óleo a 90°C durante 2 horas. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. Purificada por cromatografia coluna rápidausando 0 a 50% de EtOAc / heptano. As frações contendo o produto foram combinadas e evaporadas para fornecer 4-(6-fluoropiridin-3-il)-2-oxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butila como um sólido não totalmente branco (54,7%). LCMS (m/z): 223,2 (MH+-tBu), 0,743 minutos. Etapa 2. 4-(6-fluoropiridin-3-il)-1H-pyrrol-2(5H)-ona
[00445] Ao 4-(6-fluoropiridin-3-il)-2-oxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1carboxilato de terc-butila (315 mg, 1,132 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL, 12,98 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reacional foi evaporada, azeotropada com tolueno (x=3) produzindo 4-(6-fluoropiridin-3il)-1H-pirrol-2(5H)-ona. Prosseguiu para a etapa seguinte. LCMS (m/z): 179,2 (MH+), 0,373 minutos. A produção bruto foi quantitativo. Etapa 3, 4-(6-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-2-ona
[00446] Ao 4-(6-fluoropiridin-3-il)-1H-pirrol-2(5H)-ona (190 mg, 1,066 mmol) em MeOH ( 10 mL) sob atmosfera de N2 foi adicionado Pd-C (227 mg, 0,213 mmol). A mistura reacional foi agitada sob balão de H2 em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de celita, lavada com MeOH. O filtrado foi evaporado. Azeotropado com tolueno (x=3). A produção foi de 80%. Prosseguiu para a etapa seguinte. LCMS (m/z): 181,0 (MH+), 0,341 minutos. Etapa 4. 4-(6-fluoropiridin-3-il)-1-metilpirrolidin-2-ona
[00447] À 4-(6-fluoropiridin-3-il)pirrolidin-2-ona (200 mg, 0,888 mmol) em DMF (4 mL) em banho de gelo foram adicionados NaH (42,6 mg, 1,066 mmol) e iodometano (0,067 mL, 1,066 mmol). A mistura reacional foi agitada em banho de gelo durante 30 minutos e temperatura ambiente durante 1 hora. LC-MS mostrou a mistura de SM e produto (1:1). Adicionados novamente NaH (42,6 mg, 1,066 mmol) e iodometano (0,067 mL, 1,066 mmol), agitados durante 1 hora em temperatura ambiente. Reação completa por LC-MS. A mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O bruto foi purificado por cromatografia rápida [0 a 50 a 80% de EtOAc (contém 10% de MeOH) / heptano]. LCMS (m/z): 195,2 (MH+), 0,492 minutos. Produção 58% Etapa 5. 4-(6-aminopiridin-3-il)-1-metilpirrolidin-2-ona
[00448] À 4-(6-fluoropiridin-3-il)-1-metilpirrolidin-2-ona (100 mg, 0,515 mmol) foi adicionado hidróxido de amônio (2 mL, 15,41 mmol). A mistura reacional foi aquecida em bloco de aquecimento a 140°C durante 48 horas. LC-MS mostra 80% de produto. A mistura reacional foi evaporada. Azeotropada com Tolueno (x=3) e prosseguiu para a etapa seguinte. LCMS (m/z): 192,2 (MH+), 0,256 minutos. Etapa 6. 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpirrolidin-2-ona
[00449] À 4-(6-aminopiridin-3-il)-1-metilpirrolidin-2-ona (90 mg, 0,377 mmol) em acetonitrila ( 3 mL) em banho de gelo foi adicionado NBS (60,3 mg, 0,339 mmol). A mistura reacional foi agitada em banho de gelo durante 15 minutos e temperatura ambiente durante 30 minutos. LC-MS mostrou a mistura de SM e produto. Adicionado mais 0,1 equivalente de NBS e agitado durante mais 1 hora em temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com EtOAc e adicionados 2 mL de bicarbonato de sódio saturado. Agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. Prosseguiu para a etapa seguinte (73%). LCMS (m/z): 270,2/272,2(MH+), 0,302 minutos. Etapa 7. 4-(2-amino-5-(1-metil-5-oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoroN-((S)-2-hidróxi-1-feniletil)benzamida
[00450] À 4-(6-amino-5-bromopiridin-3-il)-1-metilpirrolidin-2-ona (18 mg, 0,067 mmol) em DME ( 1,6 mL) e carbonato de sódio (0,167 mL, 0,333 mmol) foram adicionados (S)-2-fluoro-N-(2-hidróxi-1-feniletil)-4(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzamida (30,8 mg, 0,080 mmol) e aduzido de PdCh(dppf).CH2Cl2 (5,44 mg, 6,66 μmol). A mistura reacional foi aquecida em micro-ondas a 120°C durante 15 minutos. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila. A camada orgânica foi separada e evaporada. O bruto foi purificado por HPLC preparativa para fornecer o produto desejado como um sal de TFA (29,3%). LCMS (m/z): 449,3 (MH+), 0,52 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,65 (dd, J=7,24, 4,11 Hz, 1 H) 7,97 (d, J=2,35 Hz, 1 H) 7,94-7,83 (m, 2 H) 7,49-7,39 (m, 4 H) 7,36 (t, J=7,63 Hz, 2 H) 7,32-7,24 (m, 1 H) 5,30 a 5,13 (m, 1 H) 3,94-3,76 (m, 3 H) 3,69 (quinteto, J=8,31 Hz, 1 H) 3,50 (dd, J=9,59, 7,24 Hz, 1 H) 2,89 (s, 3 H) 2,79 (dd, J=16,82, 9,00 Hz, 1 H) 2,56 (dd, J=16,82, 8,22 Hz, 1 H). Exemplo 42, 43, e 44 4-(2-amino-5-(1 -metil-5-oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida, 4-(2-amino-5-((R)-1-metil-5oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida, e 4-(2-amino-5-((S)-1-metil-5-oxopirrolidin-3-il)piridin3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
Figure img0081
[00451] Seguindo a etapa 6 no esquema 50, usando 4-(6-amino-5bromopiridin-3-il)-1-metilpirrolidin-2-ona e (S)-N-(1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2il)benzamida, 4-(2-amino-5-(1-metil-5-oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-N((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida foi obtido como uma mistura diastereomérica (33,3%). LCMS (m/z): 483,3 (MH+), 0,59 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,79-8,61 (m, 1 H) 7,97 (d, J=1,96 Hz, 1 H) 7,93-7,82 (m, 2 H) 7,48-7,39 (m, 3 H) 7,39-7,25 (m, 3 H) 5,25-5,14 (m, 1 H) 3,95-3,76 (m, 3 H) 3,69 (quinteto, J=8,22 Hz, 1 H) 3,50 (dd, J=9,78, 7,43 Hz, 1 H) 2,89 (s, 3 H) 2,80 (dd, J=16,82, 9,00 Hz, 1 H) 2,56 (dd, J=16,82, 8,22 Hz, 1 H). A mistura diastereomérica foi separada por SFC quiral (Coluna ChiralPak 5mic AD, 4,6x100 (mm), IPA+0,1% DEA=40%, 5mL/min). O diastereômero polar, 4-(2amino-5-((R)-1-metil-5-oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida, foi obtido em Rt = 1,41 minutos. LCMS (m/z): 483,3 (MH+), 0,586 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD)δ ppm 7,82 (d, J=1,56 Hz, 1 H) 7,74 (t, J=7,83 Hz, 1 H) 7,35 (d, J=2,35 Hz, 2 H) 7,33-7,15 (m, 5 H) 5,09 (t, J=5,87 Hz, 1 H) 4,48 (s, 1 H) ) 3,83-3,63 (m, 3 H) 3,50 (quint, J=8,22 Hz, 1 H) 3,36 (dd, J=9,39, 7,43 Hz, 1H) 2,78 (s, 3 H) 2,67 (dd, J=16,82, 9,00 Hz, 1 H) 2,42 (dd, J=16,63, 8,41 Hz, 1 H). O diastereômero menos polar, 4-(2-amino-5((S)-1-metil-5-oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida, foi obtido em Rt = 2,16 minutos. LCMS (m/z): 483,3 (MH+), 0,585 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD)δ ppm 7,92 (d, J=2,35 Hz, 1 H) 7,84 (t, J=8,02 Hz, 1 H) 7,51-7,21 (m, 7 H) 5,18 (t, J=5,87 Hz, 1 H) 3,94-3,72 (m, 3 H) 3,59 (quinteto, J=8,22 Hz, 1 H) 3,50 a 3,42 (m, 1 H) 2,88 (s, 3 H) 2,82-2,70 (m, 1 H) 2,51 (dd, J=16,82, 8,61 Hz, 1 H). Exemplo 45 Síntese de (S)-4-(2-Amino-5-(4-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3il)-2-fluoro-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida Esquema 51
Figure img0082
Etapa 1.4-(6-Fluoropiridin-3-il)tetra-hidro-2H-piran-4-carbaldeído
[00452] A uma solução de 5-bromo-2-fluoropiridina (2,0 g, 11,36 mmol) em dioxano (35 mL) foram adicionados tetra-hidro-2H-piran-4carbaldeído (2,59 g, 22,73 mmol), Pd(OAc)2 (0,25 g, 1,14 mmol), carbonato de césio (7,41 g, 22,73 mmol), e água (10,24 μL, 0,57 mmol), xantphos (0,98 g, 1,70 mmol). A mistura foi purgada com nitrogênio durante 5 minutos, a mistura resultante foi aquecida para 110 °C em um óleo de banho durante 15 horas. A mistura foi diluída com acetato de etila, e foi lavada com água, salmoura, secada sobre sulfato de sódio e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna rápidaem sílica gel (ISCO) eluindo com 0 a 80% de acetato de etila em heptano para fornecer 4-(6-fluoropiridin-3-il)tetra-hidro-2H-piran-4carbaldeído (560 mg, 2,68 mmol, 23,5 % de rendimento) como óleo de cor vermelha. LCMS (m/z): 210 (MH+), 0,45 minuto. Etapa 2. (4-(6-Fluoropiridin-3-il)tetra-hidro-2H-piran-4-il)metanol
[00453] A uma solução resfriada por gelo de 4-(6-fluoropiridin-3il)tetra-hidro-2H-piran-4-carbaldeído (560 mg, 2,68 mmol) em metanol (18 mL) foi adicionado boroidreto de sódio (91 mg, 2,41 mmol). A solução de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. O solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi diluído com acetato de etila, e foi lavado com água, salmoura, secado sobre sulfato de sódio, filtrado e concentrado para fornecer (4-(6-fluoropiridin-3-il)tetrahidro-2H-piran-4-il)metanol (550 mg, 2,60 mmol, 97 %) um óleo de cor marrom. LCMS (m/z): 212 (MH+), 0,42 minutos. Etapa 3. 2-Fluoro-5-(4-(iodometil)tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridina
[00454] A uma solução resfriada por gelo de trifenilfosfina (983 mg, 3,75 mmol), iodo (952 mg, 3,75 mmol) em diclorometano (20 mL) foi adicionado imidazol (278 mg, 4,09 mmol). A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora, seguida pela adição de (4-(6fluoropiridin-3-il)tetra-hidro-2H-piran-4-il)metanol (360 mg, 1,70 mmol) em 10 mL de diclorometano. A mistura reacional foi aquecida para 60°C em um óleo de banho durante 48 horas. Sólido foi filtrado, o filtrado foi purificado por cromatografia de coluna rápida em sílica gel (ISCO) eluindo com 0 a 80% de acetato de etila em heptano para fornecer para fornecer 2-fluoro-5-(4-(iodometil)tetra-hidro-2H-piran-4il)piridina (330 mg, 1,03 mmol, 60,3 % de rendimento) como óleo de cor amarelo claro. LCMS (m/z): 322 (MH+), 0,77 minutos. Etapa 4. 2-Fluoro-5-(4-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)piridina
[00455] A uma solução de (2-fluoro-5-(4-(iodometil)tetra-hidro-2Hpiran-4-il)piridina (330 mg, 1,03 mmol) em THF (5 mL) a -15 °C, foi adicionada N-selectrida (2,26 mL, 2,26 mmol) gota a gota. A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 16 horas. A solução foi resferiada em um banho de gelo, e 0,3 mL de água foi adicionado. A solução resultante foi agitada durante 10 minutos. O solvente foi removido sob vácuo, e o resíduo foi dissolvido em DCM. O sólido insolúvel foi filtrado, e o filtrado foi purificado por cromatografia de coluna rápida em sílica gel (ISCO) eluindo com 0 a 80% de acetato de etila em heptano para fornecer 2-fluoro-5-(4-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)piridina (110 mg, 0,56 mmol, 54,8 % de rendimento) como óleo incolor com >90% de pureza. LCMS (m/z): 196 (MH+), 0,64 minutos. Etapa 5. N-(2,4-Dimetoxibenzil)-5-(4-metiltetra-hidro-2H-piran-4il)piridin-2-amina
[00456] A uma solução de 2-fluoro-5-(4-metiltetra-hidro-2H-piran-4il)piridina (110 mg, 0,56 mmol) em (2,4-dimetoxifenil)metanamina (1016 μL, 6,76 mmol) e DIEA (246 μL, 1,41 mmol) foi adicionado carbonato de potássio (156 mg, 1,12 mmol). A mistura resultante foi aquecida para 160 °C em um óleo de banho durante 16 h, A mistura reacional foi diluída com acetato de etila, lavada com água, salmoura, secada sobre sulfato de sódio e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna rápida em sílica gel (ISCO) eluindo com 0 a 100% de acetato de etila em heptano para fornecer N-(2,4dimetoxibenzil)-5-(4-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina (100 mg, 0,29 mmol, 51,8 % de rendimento) como um sólido de cor amarelo claro. LCMS (m/z): 343 (MH+), 0,63 minutos. Etapa 6. 5-(4-Metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina
[00457] A uma solução gelada de N-(2,4-dimetoxibenzil)-5-(4metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina (100 mg, 0,29 mmol) em DCM (6 mL) foram adicionados 10 mL de TFA a 30% em solução de DCM. A solução resultante foi agitada a 0°C durante 15 minutos. O solvente foi removido por meio de vácuo. O resíduo resultante foi redissolvido em acetato de etila, e a solução orgânica foi lavada com NaOH a 1M, salmoura, secada sobre sulfato de sódio e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna rápidaem sílica gel (ISCO) eluindo com 0 a 100% de acetato de etila em heptano para fornecer 5-(4-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina (50 mg, 0,26 mmol, 89 % de rendimento) como sólido de cor branca. LCMS (m/z): 193 (MH+), 0,35 minutos. Etapa 7. 3-Bromo-5-(4-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina
[00458] A uma solução gelada de 5-(4-metiltetra-hidro-2H-piran-4il)piridin-2-amina (50 mg, 0,26 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado NBS (50,9 mg, 0,28 mmol) em duas porções. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 40 minutos. A solução de reação e foi diluída com acetato de etila, lavada com água, bicarbonato de sódio aquoso, salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada, e concentrada para fornecer 3-bromo-5-(4-metiltetra-hidro-2H-piran-4il)piridin-2-amina (70 mg, 0,26 mmol, 99 % de rendimento) como resíduo de cor amarela. LCMS (m/z): 271/273 (MH+), 0,41 minutos. Etapa 8. (S)-4-(2-Amino-5-(4-metiltetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)2-fluoro-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida
[00459] A uma solução de 3-bromo-5-(4-metiltetra-hidro-2H-piran-4il)piridin-2-amina (70 mg, 0,26 mmol) em DME (4 mL) foram adicionados (S)-2-fluoro-N-(2-hidróxi-1-feniletil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)benzamida (298 mg, 0,77 mmol) e carbonato de sódio (0,64 mL, 1,29 mmol). A mistura foi purgada com nitrogênio durante 10 minutos, em seguida PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (31,6 mg, 0,039 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi aquecida para 120 °C em um óleo de banho durante 2 horas. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila, lavada com água, salmoura, secada sobre sulfato de sódio e concentrada. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de coluna rápida em sílica gel (ISCO) eluindo com 0 a 100% de acetato de etila em heptano para fornecer 70 mg de produto bruto, que foi purificado por HPLC para fornecer (S)-4-(2-amino-5-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2-hidróxi-1feniletil)benzamida (40,8 mg, 0,089 mmol, 34,5 % de rendimento) como sal de TFA. LCMS (m/z): 450 (MH+), 0,61 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8,22 (t, J=7,83 Hz, 1 H) 7,77 7,65 (m, 2 H) 7,50 (dd, J=11,74, 7,43 Hz, 1 H) 7,42 7,36 (m, 4 H) 7,33 (d, J=7,43 Hz, 2 H) 7,21 (d, J=11,74 Hz, 1 H) 5,33 (d, J=4,70 Hz, 1 H) 4,08 3,94 (m, 2 H) 3,83 3,65 (m, 4 H) 1,97 (ddd, J=13,40, 8,12, 5,09 Hz, 2 H) 1,72 (d, J=13,69 Hz, 2 H) 1,35 (s, 3 H) Exemplo 46 Síntese de 4-(3-aminopirazin-2-il)-N-benzilbenzamida Esquema 52
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[00460] A uma solução de N-benzil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)benzamida (150 mg, 0,445 mmol), 3-cloropirazin-2amina (74,9 mg, 0,578 mmol), e aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (36,3 mg, 0,044 mmol) em DME (3,3 mL) foi adicionado Na2CO3 a 2 M (1,11 mL). A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas (120 °C, 10 minutos). Diluída com EtOAc e lavada com água duas vezes. Em seguida extraída com HCl a 1N (3 X15 mL). A solução acídica foi lavada com éter duas vezes (2 X15 mL), e em seguida basificada com Na2CO3, seguido por extração com EtOAc (20 mL, 3 vezes) e em seguida lavada por NaHCO3 saturado, água e salmoura, secada sobre Na2SO4 e filtrada, concentrada. O produto bruto foi purificado com cromatografia rápida eluindo com 0 a 100% de EtOAc (contendo 10% de MeOH) em heptano, em seguida concentrada em Rotavap. O resíduo foi triturado com éter para fornecer 80,2 mg de produto desejado. LCMS (m/z): 305,2 (MH+), 0,59 minutos. 1H RMN (400 MHz, DMSOd6) δ ppm 8,74 (d, J=8,22 Hz, 1 H) 8,41 (s, 1 H) 8,06 (dd, J=9,39, 2,74 Hz, 1 H) 8,01 (d, J=8,61 Hz, 2 H) 7,94 (br. s., 1 H) 7,83 (d, J=8,22 Hz, 2 H) 7,40 7,34 (m, 2 H) 7,30 (t, J=7,63 Hz, 2 H) 7,22 (d, J=7,43 Hz, 1 H) 6,40 (d, J=9,39 Hz, 1 H) 5,12 5,03 (m, 1 H) 3,75 3,60 (m, 2 H
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). Método 2 Exemplo 127 Síntese de (S)-4-(3-amino-6-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-N(1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida Esquema 53
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Etapa 1. (S)-4-(3-aminopirazin-2-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida
[00461] À mistura reacional de 3-cloropirazin-2-amina (288 mg, 2,22 mmol), ácido (S)-4-(1-(3-clorofenil)-2-hidroxietilcarbamoil)-3fluorofenilborônico (500 mg, 1,48 mmol), PdCl2(dppf)-DCM (108 mg, 0,148 mmol), DME (1,1 mL), Na2CO3 a 2 M (3,703 mL) foram adicionados. A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de microondas (120 oC, 12 minutos). À mistura reacional, sulfato de sódio anidroso foi adicionado, filtrada, e concentrada. O produto bruto foi prepurificado por cromatografia rápida eluindo com EtOAc (contendo 10% MeOH) em heptano. As frações puras foram combinadas e concentradas para fornecer 389 mg do produto desejado in 68% de rendimento. LCMS (m/z): 387 (MH+), 0,69 minutos. Etapa 2. (S)-4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-(1 -(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00462] A uma solução de (S)-4-(3-aminopirazin-2-il)-N-(1-(3clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida (389 mg, 1,006 mmol) em acetonitrila (21 mL) foi adicionado NBS (171 mg, 0,961 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 20 minutos. Depois de extinguida com NaHCO3 saturado, e agitar durante 30 minutos. A mistura reacional foi extraída com EtOAc 3 vezes, a orgânica foi lavada por NaHCO3 saturado, água e salmoura, secada, filtrada, e concentrada. O material bruto foi levada para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 367 (MH+), 0,88 minuto. Etapa 3, (S)-4-(3-amino-6-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-N-(1(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00463] À mistura reacional de (S)-4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)N-(1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida (40 mg, 0,086 mmol), 1,3-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1Hpirazol (38,2 mg, 0,172 mmol), PdCl2(dppf)-DCM (6,28 mg, 8,59 μmol), e DME (644 μL), Na2COβ a 2 M (215 μL) foram adicionados. A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas (120 °C, 12 minutos). À mistura reacional, sulfato de sódio anidroso foi adicionado, filtrada, e concentrada. O produto bruto foi purificado por auto-prep para fornecer 25 mg de produto desejado como um sal de TFA. LCMS (m/z): 481,3 (MH+), 0,73 minuto; 1H RMN (500 MHz, CD3OD) δ ppm 8,66 (d, J=6,26 Hz, 1 H) 8,17 (s, 1 H) 8,02 (s, 1 H) 7,76 7,51 (m, 3 H) 7,45 7,16 (m, 3 H) 5,07 4,09 (m, 1 H) 3,72 (s, 3 H) 3,62 (m, 2 H) 2,33 (s, 3 H). Exemplo 128 Síntese de (S)-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)piridin-3-il)-N(1 -(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida Esquema 54
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Etapa 1.4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00464] À 3-bromopiridin-2-amina (5 g, 28,9 mmol) em frasco de base redonda de 500 mL foram adicionados ácido (3-fluoro-4(metoxicarbonil)fenil)borônico (7,44 g, 37,6 mmol), PdCl2(dppf)-DCM (2,115 g, 2,89 mmol), DME (108 mL) e solução de Na2CO3 a 2 M (36,1 mL). A mistura reacional foi aquecida em um banho de óleo a 110 °C durante 4 horas. A mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com água três vezes, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápidaeluindo com 0 a 100% de EtOAc (contendo 10% de MeOH)/heptano produzindo 5,6 g de 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de metila em 79 % de rendimento. LCMS (m/z): 247,1 (MH+), 0,50 minutos. Etapa 2. 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00465] A uma solução de 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de metila (5,64 g, 22,90 mmol) em acetonitrila (229 mL) foi adicionado NBS (4,16 g, 23,36 mmol) em duas porções a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 20 minutos. Depois de extinguida com Na2S2O3 saturado e NaHCO3, e agitada durante 30 minutos. A mistura reacional foi extraída com EtOAc 3 vezes, a orgânica lavada por NaHCO3 saturado, água e salmoura, secada e concentrada. O material bruto foi triturado com éter para fornecer 7,05 g de 4-(2-amino-5bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de metila em 95 % de rendimento. LCMS (m/z): 327,1 (MH+), 0,66 minutos. Etapa 3. ácido 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoico
[00466] A uma solução de 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2fluorobenzoato de metila (1,9 g, 5,84 mmol) em THF (19,48 mL) e MeOH (9,74 mL, Relação: 1,000) foi adicionado LiOH (solução aquosa a 1 M) (10,52 mL, 10,52 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 5 horas. Depois HCl a 1N (1,9 mL) foi adicionado até o pH 5, a mistura reacional foi preparada com EtOAc, a camada orgânica foi secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O ácido 4-(2-amino-5bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoico bruto foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 311,1/313,1 (MH+), 0,5 minutos. Etapa 4. (S)-4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-N-(1 -(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00467] A uma solução de ácido 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2fluorobenzoico (300 mg, 0,964 mmol) em THF (8,036 mL) foi adicionado (S)-2-amino-2-(3-clorofenil)etanol (331 mg, 1,157 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 15 horas. Após água ser adicionada, a mistura reacional foi preparada com EtOAc, a camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada e concentrada em vácuo. O (S)4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida bruto foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 464,1/466,1 (MH+), 0,69 minutos. Etapa 5. (S)-4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2il)piridin-3-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00468] A uma solução de (S)-4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-N-(1(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida (85 mg, 0,183 mmol), bis(pinacolato)diboro (93 mg, 0,366 mmol), e PdCl2(dppf) (26,8 mg, 0,037 mmol) em dioxano (610 μL) foi adicionado acetato de potássio (54 mg, 0,549 mmol). A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas (120 °C durante 20 minutos). A mistura reacional foi filtrada através de almofada de celita. Depois do filtrado ser quase concentrado, o (S)-4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan2-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida bruto foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 430,2 (MH+ para ácido borônico), 0,57 minuto. Etapa 6. (S)-4-(2-amino-5-(1 -metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)piridin-3-il)-N-(1 (3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00469] A uma solução do (S)-4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida bruto (30 mg, 0,059 mmol) em dioxano residual foram adicionados 4-bromo-1-metil-1H-1,2,3-triazol (14,24 mg, 0,088 mmol), PdCl2(dppf) (42,9 mg, 0,059 mmol), DME (195 μl) e Na2CO3 a 2 M (130 μl) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada durante 5 horas. Após água e EtOAc serem adicionados, a camada orgânica foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa. As frações puras foram liofilizadas produzindo (S)-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-1,2,3triazol-4-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida como um sal de TFA (25% durante 2 etapas). LCMS (m/z): 467,3 (MH+), 0,61 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 8,64 (m, 1 H), 8,31 (m, 1 H), 8,25 (m, 2 H), 8,2 (m, 1 H), 7,82 (m, 1 H), 7,4 (m, 3 H), 7,28 (m, 2 H), 7,22 (m, 1 H), 5,11 (m, 1 H), 4,07 (s, 3 H), 3,78 (m, 2 H). Exemplo 129 Síntese de (S)-4-(3-amino-6-(6-oxo-1,6-di-hidropiridin-3-il)pirazin-2-il)N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida Esquema 55
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Etapa 1. (S)-4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida
[00470] A uma solução de 3,5-dibromopirazin-2-amina (826 mg, 3,27 mmol), (S)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)benzamida (600 mg, 1,634 mmol), e aduzido de PdCl2(dppf).CH2Cl2 (133 mg, 0,163 mmol) em DME (12,3 mL) foram adicionados Na2CO3 a 2 M (4,08 mL). A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas (120 °C, 10 minutos). A mistura reacional foi preparada com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado, água e salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada, concentradas em vácuo. O produto bruto foi purificado com silica cromatografia rápidaeluindo com 0 a 100% de EtOAc (contendo 10% de MeOH) em heptano, e triturado com éter para fornecer 800 mg de (S)4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida. LCMS (m/z): 415 (MH+), 0,73 minuto. Etapa 2. (S)-4-(3-amino-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2il)pirazin-2-il)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida
[00471] A uma solução de (S)-4-(3-amino-6-(4,4,5,5-tetrametil1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida (50 mg, 0,121 mmol), bis(pinacolato)diboro (61,4 mg, 0,242 mmol), e aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (9,88 mg, 0,012 mmol) em dioxano (302 μL) foi adicionado acetato de potássio (35,6 mg, 0,363 mmol) apenas à direita após desgaseificação. A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas (120 °C durante 20 minutos). Depois de diluída com EtOAc, a mistura reacional foi filtrada através de almofada de celita. Depois de concentrado, o (S)-4-(3-amino-6(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidróxi-1feniletil)benzamida bruto foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 379 (MH+ para ácido borônico), 0,47 minutos. Etapa 3, (S)-4-(3-amino-6-(6-oxo-1,6-di-hidropiridin-3-il)pirazin-2-il)-N(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida
[00472] A uma solução de ácido (S)-5-amino-6-(4-(2-hidróxi-1feniletilcarbamoil)fenil)pirazin-2-ilborônico (55 mg, 0,145 mmol), 5bromopiridin-2(1H)-ona (38,0 mg, 0,218 mmol), e PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (11,88 mg, 0,015 mmol) em DME (1091 μL) foi adicionado Na2CO3 a 2 M (364 μL). A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de microondas (120 °C, 10 minutos). A mistura reacional foi preparada com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado, água e salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada, concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa produzindo 4,3 mg de (S)-4-(3-amino-6-(6-oxo-1,6-di-hidropiridin-3-il)pirazin-2-il)-N-(2hidróxi-1-feniletil)benzamida como um sal de TFA. LCMS (m/z): 428,2 (MH+), 0,55 minuto; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 3,60 3,75 (m, 2 H) 5,03 5,12 (m, 1 H) 6,40 (d, J=9,39 Hz, 1 H) 7,22 (d, J=7,43 Hz, 1 H) 7,30 (t, J=7,63 Hz, 2 H) 7,34 7,40 (m, 2 H) 7,83 (d, J=8,22 Hz, 2 H) 7,94 (br. s., 1 H) 8,01 (d, J=8,61 Hz, 2 H) 8,06 (dd, J=9,39, 2,74 Hz, 1 H) 8,41 (s, 1 H) 8,74 (d, J=8,22 Hz, 1 H). Síntese de (S)-4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2,6-difluorobenzamida Esquema 56
Figure img0116
E Step 2 Pd(dppf)CI2-DCM Na2CO3, DME μW, 120 °C Etapa 1.4-bromo-2,6-difluorobenzoato de metila
[00473] A uma solução de ácido 4-bromo-2,6-difluorobenzoico (800 mg, 3,38 mmol) em MeOH (11 mL) em temperatura ambiente, trimetilsilildiazometano (5,63 mL, 3,38 mmol) foi lentamente adicionado até a solução tornar-se amarela. A pequena quantidade de AcoH foi adicionada até a cor amarela desaparecer. Todos os materiais voláteis foram removidos em vácuo produzindo 4-bromo-2,6-difluorobenzoato de metila (47%). LCMS (m/z): 251,1 (MH+), 0,86 minutos. Etapa 2. 4-(2-aminopiridin-3-il)-2,6-difluorobenzoato de metila
[00474] Seguido por etapa 1 no esquema 54, 4-(2-aminopiridin-3-il)2,6-difluorobenzoato de metila foi obtido (9%). LCMS (m/z): 485,2 (MH+), 0,64 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,11 (m, 1 H), 7,76 (m, 2 H), 7,37 (m, 1 H), 7,27 (m, 2 H), 7,20 (m, 3 H), 5,09 (m, 1 H), 4,03 (s, 3 H), 3,73 (m, 2 H). Etapa 3, 4, e 5. (S)-4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-N-(1-(3-clorofenil)2-hidroxietil)-2,6-difluorobenzamida
[00475] Seguindo a etapa 2, 3, e 4 no esquema 54, (S)-4-(3-amino6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirazin-2-il)-N-(1-(3clorofenil)-2-hidroxietil)-2,6-difluorobenzamida foi obtido. LCMS (m/z): 482/484 (MH+), 0,68 minutos.
Figure img0117
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Figure img0119
Resolução quiral de (+/-)-4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N((1S,2R)-2-fenilciclopropil)benzamida Esquema 57
Figure img0120
[00476] (+/-)-4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2fenilciclopropil)benzamida (121 mg) foi resolvido por cromatografia quiral (coluna AD-H EtOH=60/40, 1mL/min). O composto polar (Pico 1), 4(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2fenilciclopropil)benzamida, foi obtido a 7,41 minutos (50 mg, 41%) e o composto menos polar (Pico 2), 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciclopropil)benzamida, foi obtido em 10,26 minutos (54 mg, 44%). A estereoquímica absoluta foi designada com base nos dados bioquímicos e modelo de acoplamento dos análogos correspondentes. Exemplo 130 Síntese de (+/-)-4-(2-amino-5-(1 -metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciclopropil)benzamida
Figure img0121
[00477] Seguindo o esquema 59, usando (+/-)-4-(2-amino-5bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciclopropil)benzamida, (+/)-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)2-fenilciclopropil)benzamida foi obtido (11%). LCMS (m/z): 428,2 (MH+), 0,72 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 8,19 (m, 1 H), 7,91 (s, 1 H), 7,82 (m, 1 H), 7,77 (m, 1 H), 7,64 (m, 1 H), 7,48 7,33 (m, 2 H), 7,31 7,12 (m, 5 H), 3,91 (s, 3 H), 3,10 (m, 1 H), 2,20 (m, 1 H), 1,33 (m, 2 H). Exemplo 131 Síntese de 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N((1R,2S)-2-fenilciclopropil)benzamida
Figure img0122
[00478] Seguindo o esquema 59, usando 4-(2-amino-5bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciclopropil)benzamida, 4(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2fenilciclopropil)benzamida foi obtido (53%). LCMS (m/z): 428,3 (MH+), 0,69 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 8,11 8,02 (m, 1 H), 7,94 (m, 1 H), 7,97 7,88 (m, 2 H), 7,85 7,71 (m, 2 H), 7,43 7,30 (m, 2 H), 7,26 7,14 (m, 2H), 7,14 7,02 (m, 2 H), 3,83 (s, 3 H), 3,06 2,92 (m, 1 H), 2,19 2,02 (m, 1 H), 1,35 1,17 (m, 2 H). A estereoquímica absoluta foi designada com base nos dados bioquímicos e modelo de acoplamento. Exemplo 132 4-(2-amino-5-(1 -metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2fenilciclopropil)benzamida
Figure img0123
[00479] Seguindo o esquema 59, usando 4-(2-amino-5bromopiridin-3-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciclopropil)benzamida, 4(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((1S,2R)-2fenilciclopropil)benzamida foi obtido (42%). LCMS (m/z): 428,3 (MH+), 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 8,09 8,02 (m, 1 H), 8,01 7,95 (m, 1 H), 7,96 7,88 (m, 2 H), 7,84 7,70 (m, 2 H), 7,42 7,29 (m, 2 H), 7,25 7,02 (m, 4 H), 3,83 (s, 3 H), 3,10 2,87 (m, 1 H), 2,24 2,00 (m, 1 H), 1,33 1,15 (m, 2 H). A estereoquímica absoluta foi designado com base nos dados bioquímicos e modelo de acoplamento. Exemplo 133 Síntese de (S)-4-(2-amino-5-(1-deuterido-metila,5-metil-1H-pirazol-4il)piridin-3-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida Esquema 58
Figure img0124
Etapa 1. 1-deuterido-metil-1H-pirazol
[00480] A uma solução de NaH (1,851 g, 46,3 mmol) em THF de 2metila (80 mL) foi adicionado 1H-pirazol (3 g, 44,1 mmol) em THF de 2-metila (30 mL) a 0 °C. A mistura reacional foi aquecida para temperatura ambiente e agitada durante 1 hora. À esta, CD3I (3,02 mL, 48,5 mmol) foi lentamente adicionado. A mistura reacional foi agitada durante a noite. Depois de extinguida com solução de NH4Cl, a mistura reacional extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, filtrada, e concentrada em vácuo. O produto bruto foi destilado produzindo 1-deuterido-metil-1H-pirazol (47%) (b.p. ~130 °C, a temperatura do banho foi de ~200 °C). LCMS (m/z): 86 (MH+), 0,24 minuto; 1H RMN (500MHz, CDCl3) δ ppm 7,55 7,42 (m, 1H), 7,39 7,28 (m, 1H), 6,28 6,15 (m, 1H). Etapa 2. 1-deuterido-metila,5-metil-1H-pirazol
[00481] A uma solução de n-BuLi (2,5 M em hexanos) (4,14 mL, 10,34 mmol) em éter (20 mL) a -30 °C foi lentamente adicionada uma solução de 1-deuterido-metil-1H-pirazol (880 mg, 10,34 mmol) em éter (2 mL). A mistura reacional foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. Após ser resfriado para 0 °C, uma solução de sulfato de dimetila (0,931 mL, 9,82 mmol) em éter (3 mL) foi lentamente adicionada à mistura reacional. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas. Depois de extinguida com solução de NH4Cl, a mistura reacional foi extraída com éter (x2), a fase aquosa ainda continha produto. Em seguida, a fase aquosa foi extraída com DCM (x2). A fase orgânica combinada foi secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por destilação produzindo 1-deuterido-metila,5metil-1H-pirazol (59%). LCMS (m/z): 100,0 (MH+), 0,24 minuto; 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,36 (m, 1H), 6,00 (m, 1H), 2,27 (s, 3H). Etapa 3, 4-bromo-1-deuterido-metila,5-metil-1H-pirazol
[00482] A uma solução de 1-deuterido-metila,5-metil-1H-pirazol (100 mg, 1,009 mmol) em MeCN ( 3,362 mL) foi adicionado NBS (171 mg, 0,958 mmol) lentamente a 0 °C. Após o banho de gelo ser removido, a mistura reacional foi agitada durante 30 minutos. Depois de extinguida com solução de sulfeto de sódio, a mistura reacional foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com solução de carbonato de sódio e salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada em vácuo. O bruto 4-bromo-1-deuterido-metila,5-metil1H-pirazol foi obtido e foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação (92%). LCMS (m/z): 178, 180 (MH+), 0,61 minutos. Etapa 4. (S)-4-(2-amino-5-(1-deuterido-metila,5-metil-1H-pirazol-4il)piridin-3-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00483] Seguindo a etapa 6 no esquema 54, usando 4-bromo-1deuterido-metila,5-metil-1H-pirazol, (S)-4-(2-amino-5-(1-deuteridometila,5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida foi obtido como uma base livre (9%). LCMS (m/z): 483,2 (MH+), 0,67 minuto; 1H RMN (500MHz, CD3OD) δ ppm 8,00 (d, J=1,9 Hz, 1H), 7,86 (t, J=7,9 Hz, 1H), 7,58 7,23 (m, 8H), 5,19 (t, J=5,8 Hz, 1H), 3,93 3,77 (m, 2H), 2,37 (s, 1H). Exemplo 134 Síntese de (S)-4-(2-amino-5-(cianometil)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(2hidróxi-1-feniletil)benzamida Esquema 59
Figure img0125
[00484] A uma solução de (S)-4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2fluoro-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida (40 mg, 0,093 mmol) e ácido isoxazol-4-ilborônico (20,99 mg, 0,186 mmol) em DME (697 μl) foi adicionado PdCh(dppf)-CH2Ch (7,59 mg, 9,30 μmol) e solução de Na2CO3 a 2 M (232 μl). A mistura reacional foi aquecida em microondas at 120 °C durante 30 minutos. A mistura reacional foi dividida entre EtOAc e água. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa. As frações puras foram coletadas e liofilizadas produzindo (S)-4-(2-amino-5-(cianometil)piridin-3-il)-2fluoro-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida como um sal de TFA em 7% de rendimento. LCMS (m/z): 391,2 (MH+), 0,51 minuto; 1H RMN (400MHz ,CD3OD) δ ppm 8,66 (br. s., 1 H), 7,99 7,95 (m, 1 H), 7,92 7,82 (m, 2 H), 7,44 7,39 (m, 4 H), 7,38 7,32 (m, 2 H), 7,31 7,25 (m, 1 H), 5,25 5,18 (m, 1 H), 3,92 3,90 (m, 2 H), 3,90 3,80 (m, 2 H). Exemplo 135 Síntese de (S)-4-(3-amino-6-(2,2,6,6-tetradeuterido-tetra-hidro-2Hpiran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida Esquema 60
Figure img0126
Etapa 1. 2,2'-(1,3-dioxolano-2,2-diil)diacetato de dietila
[00485] Uma solução de 1,3-acetonedicarboxilato de dietila (12 g, 59,3 mmol), etilenoglicol (9,93 mL, 178 mmol), e mono-hidrato de ácidop-toluenossulfônico (564 mg, 2,97 mmol) em benzeno (80 mL) foi refluxada sob aquecimento removendo água durante 10 horas por armadilha de Dean-Stark. A camada de benzeno foi lavada com a solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado e salmoura. O solvente foi destilado e o resíduo obtido foi purificado por cromatografia rápida (10 a 40% de EtOAc em heptanos) produzindo 2,2'-(1,3-dioxolano-2,2diil)diacetato de dietila (42%). LCMS (m/z): 247,2 (MH+), 0,65 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4,17 (q, J=7,04 Hz, 4 H) 4,03 (s, 4 H) 2,95 (s, 4 H) 1,27 (t, J=7,24 Hz, 6 H). Etapa 2. 2,2'-(1,3-dioxolano-2,2-diil)dietanol-d4
[00486] A uma suspensão de LiAlD4 em THF (2,46 g, 58,7 mmol em 40 mL) entre -10 a 0 °C foi adicionado uma solução de 2,2'-(1,3dioxolane-2,2-diil)diacetato de dietila (6,06 g) em THF (20 mL) durante 10 minutos. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 1 hora e extinguida por adição sequencial de água (2,5 mL), 15 % em peso de NaOH (2,5 mL), e água (7,5 mL). Os precipitados da mistura extinguida foram removidos por filtragem e a massa filtrada foi cuidadosamente enxaguada com THF. O filtrado foi concentrado e o 2,2'-(1,3dioxolano-2,2-diil)dietanol-d4 bruto foi obtido (92%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4,06 (s, 4 H) 2,49 (s, 2 H) 1,98 (s, 4 H). Etapa 3, 1,4,8-trioxaspiro[4,5]decano-d4
[00487] Uma mistura de 2,2'-(1,3-dioxolano-2,2-diil)dietanol-d4 (3,57 g, 21,5 mmol) e hidrato de ácido 4-metilbenzenossulfônico (0,204 g, 1,07 mmol) e benzeno (150 mL) foi aquecida durante 3 horas em temperatura de refluxo com aparato de Dean-Stark para remover água. A mistura reacional foi resfriada, lavada com NaHCO3 saturado (20 mL x 2), e as camadas aquosas foram combinadas, extraídas com Et2O(2 x 20 mL), as camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura (30 mL), secadas (Na2SO4), filtradas, e concentradas sob 20 mbar por meio de Rotavap, e óleo amarelo claro foi obtido como 1,4,8trioxaspiro[4,5]decano-d4 bruto (2,34 g, 73,5% de rendimento). 1H RMN (400 MHz, CDCl3)δ ppm 3,98 (s, 4 H) 1,73 (s, 4 H). Etapa 4. di-hidro-2H-piran-4(3H)-ona-d4
[00488] O 1,4,8-trioxaspiro[4,5]decano-d4 (2,34 g, 15,8 mmol), formaldeído (37%, 4,6 mL, 63,2 mmol) e piridina 4metilbenzenossulfonato (0,198 g, 0,79 mmol) foram igualmente divididos em dois frasconete de micro-ondas. Cada frasconete foi aquecido a 80 °C durante 30 minutos e mais 15 minutos. As misturas reacionais foram combinadas com NaCl, extraídas com Et2O até nenhum produto desejado ser encontrado na camada aquosa por 1H-RMN. Os extratos de éter foram combinados, concentrados e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna rápida em sílica gel (gradiente de Et2O/npentano) duas vezes produzindo di-hidro-2H-piran-4(3H)-ona-d4. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2,50 (s, 4 H). Etapa 5. 3,6-di-hidro-2H-piran-4-il trifluorometanossulfonato-d4
[00489] A um LDA recentemente preparado (10,6 mmol) em THF (10 mL) entre -75 a -65 °C foi gota a gota adicionada uma solução de di-hidro-2H-piran-4(3H)-ona-d4 (1,05 g) em THF (3,5 mL) durante 10 minutos. A mistura reacional resultante foi agitada a -75 °C durante 3 horas, seguida por adição de N-(5-cloropiridin-2-il)-1,1,1-trifluoro-N((trifluorometil)sulfonil)metanossulfonamida em THF (4,16 g/5 mL) durante 10 minutos. A mistura reacional foi agitada a -75 °C durante 1 hora, em seguida com a temperatura gradualmente aquecendo para temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi resfriada para 0 °C, extinguida com D2O (10 mL), e as duas camadas foram separadas, a camada orgânica foi lavada sequencialmente com D2O (10 mL), ácido cítrico (3 x 10 mL, 3 g de ácido cítrico em 30 mL de água), NaOH a 1M (2 x 10 mL), salmoura (30 mL), secada (Na2SO4), concentrada e o produto oleoso foi purificado por cromatografia rápida em sílica gel eluído com gradiente de Et2O/n-pentano (0 a 60%). O produto purificado foi também purificado por purificação por destilação por Kugelrohr a 105°C/3 mbar produzindo 3,6-di-hidro-2H-piran-4-il trifluorometanossulfonato-d4 (500 mg, 21% de rendimento). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5,82 (s, 1 H) 2,45 (s, 2 H). Etapa 6. 2-(3,6-di-hidro-2H-piran-4-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolano-d4
[00490] Uma mistura de 3,6-di-hidro-2H-piran-4-il trifluorometanossulfonato-d4 (500 mg, 2,12 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'bi(1,3,2-dioxaborolano) (806 mg, 3,18 mmol), acetato de potássio (644 mg, 6,56 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (86 mg, 0,106 mmol) e p-dioxano (5 mL) foi carregada em um frasconete de reator de micro-ondas, purgada com argônio durante 5 minutos, selada e aquecida a 80 °C durante a noite por meio de banho de óleo. A mistura reacional foi resfriada para abaixo da temperatura ambiente, diluída com EtOAc (10 mL), filtrado através de um tampão de alumina neutr (1,25' H x 0,75' D), e a massa filtrada foi lavada completamente com EtOAc. O filtrado foi concentrado produzindo 2-(3,6-di-hidro-2H-piran-4-il)-4,4,5,5-tetrametil1,3,2-dioxaborolano-d4 bruto em sólido marrom claro (>99%). LCMS (m/z): 215,2 (MH+), 0,78 minutos. Etapa 7. (S)-4-(3-amino-6-(3,6-di-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2hidróxi-1-feniletil)benzamida-d4
[00491] Uma mistura de 2-(3,6-di-hidro-2H-piran-4-il)-4,4,5,5tetrametil-1,3,2-dioxaborolano-d4 (300 mg, 1,4 mmol), (S)-4-(3-amino6-bromopirazin-2-il)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida (694mg, 1,68 mmol), Na2CO3 aquoso (2 M, 2,8 mL), e PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (57,2 mg, 0,07mmol) e p-dioxano (6 mL) foram carregados em um frasconete de reator de micro-ondas, purgados com argônio durante 5 minutos, selados e aquecidos a 115 °C durante 30 minutos. A mistura reacional foi diluída com EtOAc (15 mL), filtrada e o filtrado foi lavado com HCl a 1 M (4 x 30 mL), e as camadas aquosas foram combinadas, basificadas por NaOH sólido para o pH 12, extraídas com EtOAc (60 mL), secadas (Na2SO4), concentradas e a primeira colheita do produto foi obtida com algumas impurezas. A camada de EtOAc após lavagem com HCl aquoso foi concentrada e o resíduo foi diluído com DMSO, purificado por HPLC preparativa C18 de fase reversa, e as frações do produto foram combinadas, saturadas com Na2CO3, extraídas com EtOAc (60 mL), e uma segunda colheita do produto puro foi obtida em sólido amarelo claro. A primeira colheita do produto foi purificada por cromatografia rápidaem sílica gel eluído com gradiente acetona/CH2Cl2 (0 a 60%). As duas colheitas do produto foram combinadas e (S)-4-(3amino-6-(3,6-di-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidróxi-1feniletil)benzamida-d4 (179 mg, 27,9% de rendimento) foi obtido. LCMS (m/z): 421,2 (MH+), 0,65 minutos. Etapa 8. (S)-4-(3-amino-6-(2,2,6,6-tetradeuterido-tetra-hidro-2H-piran4-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida
[00492] Uma mistura de (S)-4-(3-amino-6-(3,6-di-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-il)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida-d4 (175 mg) e Pd/C (10%, 22 mg) em metanol foi agitada sob balão de hidrogênio em temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reacional foi filtrada através de uma camada fina de almofada de celita, e o filtrado foi concentrado para fornecer sólido branco bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 60% de acetona/CH2Cl2) e o produto puro foi dissolvido em acetonitrila/água (1:1, 10 mL), congelada e liofilizado para (S)-4-(3-amino-6-(2,2,6,6-tetradeuterido-tetra-hidro-2Hpiran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida em um pó branco (64%). LCMS (m/z): 423,2 (MH+), 0,60 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,93 8,01 (m, 2 H), 7,92 (s, 1 H), 7,82 7,89 (m, 2 H), 7,38 7,47 (m, 4 H), 7,31 7,37 (m, 1 H), 6,90 (d, J=7,04 Hz, 1 H), 5,32 (dt, J=6,95, 4,55 Hz, 1 H), 4,68 (br. s., 2 H), 4,06 (d, J=4,30 Hz, 2 H), 2,93 (tt, J=11,44, 4,40 Hz, 1 H), 1,79 1,99 (m, 4 H). Exemplos 136 e 137 Síntese de 4-(3-amino-6-((S)-tetra-hidrofuran-3-il)pirazin-2-il)-N-((S)-2hidróxi-1-feniletil)benzamida e 4-(3-amino-6-((R)-tetra-hidrofuran-3il)pirazin-2-il)-N-((S)-2-hidróxi-1-feniletil)benzamida Esquema 61
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[00493] A uma solução de (S)-4-(3-amino-6-(furan-3-il)pirazin-2-il)N-(2-hidróxi-1-feniletil)benzamida (75 mg, 0,187 mmol) em MeOH (1,873 mL) foi adicionado óxido de platina (IV) (12,76 mg, 0,056 mmol). A solução foi desgaseificada por corrente de N2 durante 15 minutos. Depois de estimulada com gás de hidrogênio e equipada com um balão de hidrogênio, a mistura reacional foi agitada durante 24 horas. A mistura reacional foi filtrada através de celita. Após os materiais voláteis serem removidos, o produto bruto foi reestabelecido para reação. A mistura reacional foi agitada durante mais 24 horas. LCMS (m/z): mais produtos colaterais foram formados. A mistura reacional foi filtrada através de celita. Depois dos materiais voláteis serem removidos, a uma solução do produto bruto em MeOH (1,873 mL) foi adicionado Pd-C (100 mg, 0,094 mmol). A solução foi desgaseificada por corrente de N2 durante 15 minutos. Depois de estimulada com gás de hidrogênio e equipada com um balão de hidrogênio, a mistura reacional foi agitada durante 24 horas. LCMS (m/z): todo s.m. desapareceu. A mistura reacional foi filtrada através de celita. Depois dos materiais voláteis serem removidos, o produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (EtOAc em DCM) produzindo 4-(3-amino-6-(tetrahidrofuran-3-il)pirazin-2-il)-N-((S)-2-hidróxi-1-feniletil)benzamida (9 mg, 12%). LCMS (m/z): 405,2 (MH+), 0,58 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD)δ ppm 7,96 7,86 (m, 2 H), 7,80 (s, 1 H), 7,77 7,70 (m, 2 H), 7,38 7,32 (m, 2 H), 7,30 7,21 (m, 2 H), 7,21 7,12 (m, 1 H), 5,14 (m, 1 H), 4,08 3,97 (m, 1 H), 3,99 3,89 (m, 1 H), 3,89 3,67 (m, 4 H), 3,56 3,38 (m, 1 H), 2,33 2,04 (m, 2 H), 1,24 1,13 (m, 2 H). O produtoracêmico foi resolvido em HPLC quiral (coluna AD, 5mL/minuto, MeOH= 30%, SFC) produzindo 4-(3-amino-6-((S)-tetra-hidrofuran-3il)pirazin-2-il)-N-((S)-2-hidróxi-1-feniletil)benzamida e 4-(3-amino-6((R)-tetra-hidrofuran-3-il)pirazin-2-il)-N-((S)-2-hidróxi-1feniletil)benzamida 3,4 mg de enantiômero polar (Rt = 2,12 minutos) e 3,5 mg de enantiômero menos polar (Rt = 2,66 minutos). A estereoquímica absoluta foi arbitrariamente designada.
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Método 3 Exemplo 173 Síntese de 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(3clorobenzil)-2-fluorobenzamida Esquema 62
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Etapa 1. 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila
[00494] A uma solução de 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)benzoato de metila (259 mg, 1,308 mmol), 3-bromo5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-amina (225 mg, 0,872 mmol), e PdCl2(dppf) (64 mg, 0,087 mmol) foi adicionado DME (6,5 mL) e solução de Na2CO3 a 2 M (3,2 mL). A mistura reacional foi aquecida para o sintetizador de micro-ondas (120 °C, 10 minutos). A mistura reacional foi preparada com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (gradiente de EtOAc em heptano) para produzir o produto desejado (192 mg, 67%). LCMS (m/z): 332,2 (MH+), 0,63 minutos. Etapa 2. Ácido 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico
[00495] A uma solução de 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (104 mg, 0,314 mmol) em THF (698 μL) e MeOH (349 μL) foi adicionado LiOH (solução a 1 M) (565 μL, 0,565 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. A mistura reacional foi extinguida com solução de HCl a 1N até o pH 5, e preparada com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo. O produto bruto foi usado para a etapa seguinte. LCMS (m/z): 318,3 (MH+), 0,5 minutos. Etapa 3, 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(3clorobenzil)-2-fluorobenzamida
[00496] A uma solução de ácido 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (17 mg, 0,054 mmol) e (3clorofenil)metanamina (8,34 mg, 0,059 mmol) em THF (268 μL) foram adicionados PyBroP (27,5 mg, 0,059 mmol), DIEA (28,1 μL, 0,161 mmol) e HOBT (9,02 mg, 0,059 mmol). A mistura reacional foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. Todo o material volátil foi removido em vácuo e dissolvido em DCM. O produto bruto dissolvido em DCM foi carregado para cromatografia coluna rápida (gradiente de EtOAc em heptano) fornecendo 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-il)-N-(3-clorobenzil)-2-fluorobenzamida em 87% de rendimento. LCMS (m/z): 441,1 (MH+), 0,79 minutos. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,92 (s, 1 H), 7,74 (m, 1 H), 7,63 (m, 2 H), 7,35 (m, 4 H), 6,14 (s, 1 H), 4,48 (m, 2 H), 3,92 (m, 2 H), 3,43 (m, 2 H), 1,73 (m, 4 H). Exemplo 174 Síntese de (S)-N-(2-amino-1-(3-clorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida Esquema 63
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Etapa 1. (2-(4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzamido)-2-(3-clorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila
[00497] A uma solução de ácido 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (35 mg, 0,110 mmol) em DMF ( 368 μL) foram adicionados (2-amino-2-(3-clorofenil)etil)carbamato de (S)terc-butila (33,9 mg, 0,110 mmol), aza-HOBt (22,52 mg, 0,165 mmol), EDC (31,7 mg, 0,165 mmol), e DIEA (57,8 μL, 0,331 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura reacional foi dividida entre EtOAc e água. A camada orgânica foi lavada com NaHCO3, água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo produzindo (2-(4-(3-amino6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3clorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila bruto (>99%). Etapa 2. (S)-N-(2-amino-1-(3-clorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida
[00498] O (2-(4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzamido)-2-(3-clorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila bruto foi dissolvido em DCM (1,0 mL). Após TFA (0,3 mL) ser adicionado, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 10 minutos. A mistura reacional foi diluída com tolueno e concentrada até a secura. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa. As frações puras foram combinadas e liofilizadas produzindo (S)-N-(2-amino-1-(3-clorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida como sal de TFA (50% de rendimento durante 2 etapas). LCMS (m/z): 470,1 (MH+), 0,67 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 7,95 7,85 (m, 2H), 7,72 (d, J=8,2 Hz, 1H), 7,64 (d, J=12,1 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,49 7,38 (m, 3H), 5,49 (dd, J=5,7, 8,8 Hz, 1H), 4,04 (dd, J=3,1, 11,3 Hz, 2H), 3,57 (dt, J=2,0, 11,5 Hz, 2H), 3,51 3,41 (m, 2H), 2,98 2,88 (m, 1H), 1,97 1,76 (m, 4H). Exemplo 175 Síntese de 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida Esquema 64
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Etapa 1.4-bromo-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00499] A uma solução agitada de ácido 4-bromo-2-fluorobenzoico (60 g, 274 mmol) em THF anidroso (700 mL) a 0 oC foi adicionado DMF (2 mL) seguido por cloreto de oxalila (48 mL, 548 mmol) em porções durante 1 hora. A mistura foi agitada a 0 oC durante 30 minutos, e em seguida em temperatura ambiente durante 1 hora. O solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo dissolvido em DCM (700 mL). Álcool terc-butílico (97 g, 1315 mmol) e piridina (150 mL) foram adicionados, e a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 64 horas. A mistura foi transferida para um funil de separação e lavada com água (400 mL), solução de NaOH aquosa a 2 N (400 mL) e salmoura (2 x 200 mL), secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápidaem sílica gel (0 a 5% de acetato de etila em heptano durante 30 minutos) para fornecer 4-bromo-2-fluorobenzoato de tercbutila (60 g, 80%) como um óleo. LCMS (m/z): 218 / 220 (MH+ (-tBu)), 1,11 minuto; 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ ppm 7,81 7,71 (m, 1 H) 7,39 7,30 (m, 2 H) 7,29 (s, 1 H) 1,68 1,55 (m, 9 H). Etapa 2. 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de terc-butila
[00500] Um frasco de base redonda de 2 L foi carregado com 4bromo-2-fluorobenzoato de terc-butila (30 g, 114 mmol), bis(pinocolato)diboro (41,5 g, 164 mmol), acetato de potássio (32,1 g, 327 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (2,67 g, 3,27 mmol) e 1,4-dioxano (500 mL). A mistura reacional foi desgaseificada com argônio durante 15 minutos, em seguida aquecida para 95 oC e mantida nesta temperatura durante 16 horas. Após resfriar, a mistura reacional foi evaporada até a secura, dissolvida em DCM (300 mL), e filtrada sobre celita lavando com DCM (3 x 100 mL). O filtrado foi lavado com água (200 mL) e salmoura (2 x 200 mL), secado sobre sulfato de magnésio, filtrado e concentrado. O resíduo foi purificado usando cromatografia rápida em sílica gel (0 a 10% de EtOAc em heptano durante 30 minutos), fornecendo 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de terc-butila (27 g, 90%) como um sólido. LCMS (m/z): 267 (MH+ (-tBu)), 1,23 minuto; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,83 (t, 1 H) 7,57 (d, 1 H) 7,43 (d, 1 H) 1,62 -1,46 (m, 9 H) 1,34 1,25 (m, 12 H). Etapa 3. 4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00501] Um frasco de base redonda de 2 L foi carregado com tercbutil 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoate (54 g, 151 mmol), 2-amino-3-cloropirazina (19,54 g, 151 mmol), carbonato de sódio a 2 N (158 mL, 317 mmol) e DME (600 mL). A mistura reacional foi desgaseificada durante 10 minutos usando argônio, e em seguida PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (6,16 g, 7,54 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi aquecida para 100 oC e mantida nesta temperatura durante 4 horas. Após resfriar, a mistura reacional foi vertida em água (400 mL) e extraída com EtOAc (3 x 200 mL). As orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (3 x 200 mL), secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas. O material bruto foi purificado usando cromatografia rápidaem sílica gel (0 a 70% de EtOAc em heptano durante 50 minutos), fornecendo 4-(3-aminopirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila (37,7 g, 86%) como um sólido. LCMS (m/z): 290 (MH+), 0,80 minuto; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,98 (d, 1 H) 7,91 -7,81 (m, 2 H) 7,65 -7,46 (m, 2 H) 6,35 (br. s., 2 H) 1,54 (s, 9 H). Etapa 4. 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de tercbutila
[00502] A uma solução agitada de 4-(3-aminopirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila (37,7 g, 130 mmol) em acetonitrila (800 mL) a 0 oC foi adicionado N-bromossuccinimida (23,19 g, 130 mmol) em uma porção. A reação foi agitada a 0 °C durante 2 horas, em seguida extinguida com solução de NaHCO3 saturado (200 mL) e agitada a 0 °C durante 30 minutos. A mistura foi diluída com água (300 mL) e extraída com EtOAc (3 x 250 mL). As orgânicas combinadas foram lavadas com água (200 mL) e salmoura (2 x 200 mL), secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas. O material bruto foi purificado usando cromatografia rápida em sílica gel (0 a 40% de EtOAc em heptano durante 40 minutos), fornecendo 4-(3-amino-6bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (30,9 g, 64%) como um sólido. LCMS (m/z): 368 / 370 (MH+), 1,03 minuto; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,14 (s, 1 H) 7,97 -7,74 (m, 1 H) 7,62 7,39 (m, 2 H) 6,64 (s, 2 H) 1,54 (s, 9 H). Etapa 5. 4-(3-amino-6-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila
[00503] Ao 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (5,17 g, 46,2 mmol) em DME (115 mL) foram adicionados 4,4,5,5-tetrametil-2-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-il)-1,3,2dioxaborolano (15,36 g, 57,7 mmol), aduzido de PdCl2(dppf).CH2Cl2 (1,885 g, 2,309 mmol), e em seguida solução de carbonato de sódio aquoso a 2 M (19,57 g, 185 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 100 °C durante a noite. LCMS indicou que a reação foi concluída. A reação foi resfriada. À mistura foram adicionados 1000 mL de EtOAc e 300 mL de água. A mistura resultante foi agitada durante 30 minutos, e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 X 200 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com água três vezes e salmoura, secadas sobre sulfato de sódio, filtradas, e concentradas em vácuo. O produto bruto foi triturado por éter para fornecer 4-(3-amino-6-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (19,5 g, 45,6 mmol, 99%) como um sólido amarelo claro. LCMS (m/z): 428,1 (MH+), 1,02 minutos. Etapa 6. 4-(3-amino-6-(1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila
[00504] A uma solução de 4-(3-amino-6-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7en-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (11 g, 25,7 mmol) em DCM (100 mL) e MeOH (100 mL) em temperatura ambiente foi adicionado Pd/C (5 g, 25,7 mmol) (10% em carbono, úmido). A mistura resultante foi aspirada, e em seguida recarregada com hidrogênio. O processo foi repetido três vezes. Em seguida, a reação foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de H2 durante 6 horas. O catalisador foi filtrado através de Celite®, e lavado com DCM. O filtrado foi concentrado, e o resíduo foi dissolvido em DCM (60 mL), filtrado e concentrado. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 100% de EtOAc/heptano para fornecer 4-(3-amino-6(1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de tercbutila (8,18 g, 19,04 mmol, 74%) como um sólido amarelo claro. LCMS (m/z): 430,2 (MH+), 0,99 minuto; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,98 7,82 (m, 2 H), 7,71 7,49 (m, 2 H), 6,13 (s, 2 H), 3,85 (s, 4 H), 3,30 (s, 1 H), 2,77 2,55 (m, 1 H), 2,48 (dt, J = 3,62, 1,91 Hz, 2 H), 1,88 1,65 (m, 6 H), 1,63 1,46 (m, 10 H). Etapa 7. 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00505] Ao 4-(3-amino-6-(1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-il)pirazin-2-il)2-fluorobenzoato de terc-butila (14,34 g, 33,4 mmol) foram adicionados acetonitrila (250 mL), água (160 mL) e em seguida HCl de solução aquosa a 3 M (55,6 mL, 167 mmol). A mistura reacional foi agitada a 25 °C durante 30 minutos que foi monitorada por LCMS. A mistura foi basificada com solução aquosa de NaOH a 2M sob agitação para o pH 9. Sólido amarelo claro foi precipitado. Acetonitrila foi removida sob pressão reduzida em temperatura ambiente. O sólido foi filtrado e lavado com água (2 X 30 mL), e secado sob vácuo elevado durante a noite para fornecer 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila (12 g, 31,1 mmol, 93%) como um sólido amarelo claro. LCMS (m/z): 386,1 (MH+), 0,89 minuto; 1H RMN (400 MHz, acetonitrila-d3) δ ppm 8,05 7,89 (m, 2 H) 7,73 7,51 (m, 2 H), 5,14 (br. s., 2 H), 3,30 3,08 (m, 1 H), 2,64 2,48 (m, 2 H), 2,40 (br. s., 2 H), 2,30 2,17 (m, 2 H), 2,12 1,99 (m, 2 H), 1,96 (dt, J = 4,99, 2,40 Hz, 4 H), 1,61 (s, 9 H). Etapa 8. 4-(3-amino-6-(4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00506] Uma solução de 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)2-fluorobenzoato de terc-butila (9 g, 23,35 mmol) em metanol (125 mL) e THF (125 mL) foi resfriada abaixo de -78 oC, e em seguida NaBH4 (2,297 g, 60,7 mmol) foi adicionado em porção. A mistura reacional foi em seguida agitada a -78 °C durante 40 minutos, e LCMS indicou que a reação foi concluída. Algum produto durante redução foi observado. A relação de trans a cis foi cerca de 8:1. 100 mL de NH4Cl saturado foi adicionado lentamente a -78 °C, e em seguida a mistura foi aquecida gradualmente para temperatura ambiente. A mistura reacional foi extinguida por NaHCO3 saturado, e extraído por EtOAc (2 X 200 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, secadas sobre Na2SO4, filtradas, concentradas e secadas sob vácuo elevado para fornecer 4-(3amino-6-(4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de tercbutila (8,9 g, 22,97 mmol, 98%), que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 388,2 (MH+), 0,86 minutos. Etapa 9 & 10. Ácido 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2il)-2-fluorobenzoico
[00507] 4-(3-amino-6-(4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila (8,8 g, 22,71 mmol) foi dissolvido em THF (100 mL), e em seguida TBDMSCl (8,22 g, 54,5 mmol) e imidazol (5,57 g, 82 mmol) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura reacional foi diluída por EtOAc (150 mL), lavada por água e salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada, e concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 100% de acetona/DCM (10% de acetona/DCM em DCM, 10 a 50 %, duração de 40 minutos, coluna de sílica gel de 320 g) para fornecer 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-((tercbutildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (7,7 g, 15,35 mmol, 67,6%). LCMS (m/z): 502,3 (MH+), 0,96 minutos. A uma solução de 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (7,789 g, 15,52 mmol) em HCl a 4 N em dioxano foi agitada em temperatura ambiente durante 48 horas. A mistura reacional foi concentrada. Ao resíduo amarelo claro foram adicionados 50 mL de Et2O, sonicados durante 15 minutos, filtrado, lavada com 15 mL de Et2O duas vezes, e secado sob sucção a vácuo durante 2 horas para fornecer ácido 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (11, 6,0 g, 15,99 mmol, 100 % de rendimento) como um sólido amarelo claro. LCMS (m/z): 332,0 (MH+, ácido), 0,48 minuto; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,06 7,79 (m, 2 H). 7,69 7,50 (m, 2 H), 3,63 -3,30 (m, 3 H) 2,62 2,50 (m, 1 H), 1,97 -1,71 (m, 4 H), 1,34 1,11 (m, 2 H), 1,63 1,42 (m, 2 H), , Etapa 11. 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00508] Ácido 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)2-fluorobenzoico (670 mg, 2,022 mmol) em DMF (16,80 mL) foi adicionado aza-HOBt (413 mg, 3,03 mmol), EDC (581 mg, 3,03 mmol), DIEA (1,059 mL, 6,07 mmol) e cloridrato de (S)-2-amino-2-(3-bromo-5fluorofenil)etanol (547 mg, 2,022 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas. LCMS indicou o produto. A mistura reacional foi diluída com EtOAc, lavada com NaHCO3 saturado, água e salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada, e concentrada. O resíduo foi purificado com cromatografia rápida eluindo com 0 a 100% de EtOAc (contendo 10% de MeOH)/heptano para fornecer 4-(3amino-6-((1r,4S)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5fluorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida (920 mg, 1,66 mmol, 82%). LCMS (m/z): 547/549 (MH+), 0,72 minuto; 1H RMN (500 MHz, DMSOd6) δ ppm 8,74 (dd, J = 1,9, 7,9 Hz, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,81 7,70 (m, 1H), 7,68 7,55 (m, 2H), 7,52 7,39 (m, 2H), 7,30 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 6,11 (s, 2H), 5,09 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 4,58 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 3,69 (dt, J = 2,4, 5,8 Hz, 2H), 3,49 3,40 (m, 1H), 2,55 (t, J = 3,5 Hz, 1H), 1,98 1,76 (m, 4H), 1,55 (dd, J = 2,8, 12,6 Hz, 2H), 1,29 (d, J = 13,6 Hz, 2H). Síntese de(S)-N-(2-amino-2-(3-clorofenil)etil)-N-metil-2nitrobenzenossulfonamida Esquema 65
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Etapa 1. (1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (S)-terc-butila
[00509] A uma mistura de (s)-2-amino-2-(3-clorofenil)etanol (4 g, 19,22 mmol) em THF (64,1 mL) foram adicionados NaHCO3 (1,776 g, 21,15 mmol), seguido por Boc2O (4,91 mL, 21,15 mmol) e DMAP (0,235 g, 1,922 mmol). A mistura reacional foi em seguida agitada em temperatura ambiente durante a noite. LCMS indicou que a reação não foi concluída. TEA (5,36 mL, 38,4 mmol) foi adicionado, e a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 5 horas. Água foi adicionada, e a mistura reacional foi extraída por EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia rápidaeluindo com 0 a 100% de EtOAc/heptano para fornecer (1-(3clorofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (S)-terc-butila (4,0 g, 14,72 mmol, 77%). LCMS (m/z): 216,1 (MH+-56), 0,75 minutos. Etapa 2. N-metil-2-nitrobenzenossulfonamida
[00510] Uma solução de cloreto de 2-nitrobenzeno-1-sulfonila (4 g, 18,05 mmol) em DCM (60,2 mL) foi resfriada abaixo de 0 °C com um anho de água gelada. TEA (7,55 mL, 54,1 mmol) e metilamina a 2 M em tetra-hidofurano (13,54 mL, 27,1 mmol) foram adicionados. A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 6 horas. A mistura reacional foi diluída com DCM, lavada com NaHCO3 saturado (2 x 100 mL), salmoura (100 mL) e em seguida secada sobre sulfato de magnésio. A solução foi filtrada antes de concentrar sob pressão reduzida, e triturada em éter para fornecer N-metil-2nitrobenzenossulfonamida (3,12 g, 14,44 mmol, 80 % de rendimento). LCMS (m/z): 217,1 (MH+), 0,53 minutos. Etapa 3. (1 -(3-clorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)-terc-butila
[00511] N-metil-2-nitrobenzenossulfonamida (3,50 g, 16,19 mmol) em THF (56,6 mL) foram adicionados (1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)carbamato de (S)-terc-butila (4 g, 14,72 mmol) e tributilfosfina (3,87 g, 19,14 mmol). Em seguida diazene-1,2-dicarboxilato de (E)di-terc-butila (3,29 g, 19,14 mmol) em THF (56,6 mL) foi adicionado lentamente a 0 °C. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. LCMS indicou que permaneceu material de partida levemente. A reação foi diluída com EtOAc, lavada com NaHCO3 saturado, água e salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada, e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 100% de EtOAc/heptano para fornecer (1-(3-clorofenil)-2-(Nmetil-2-itrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)-terc-butila (7 g, 14,9 mmol, 100%). LCMS (m/z): 370,1 (MH+-100), 1,05 minutos. Etapa 4.(S)-N-(2-amino-2-(3-clorofenil)etil)-N-metil-2nitrobenzenossulfonamida
[00512] (1-(3-clorofenil)-2-(N-metil-2itrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)-terc-butila (7 g, 14,9 mmol) em DCM (149 mL) foi adicionado HCl (4 M em dioxano) (14,90 mL, 59,6 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 4 horas. LCMS indicou que a reação foi concluída. Precipitado branco foi filtrado e bem lavado com DCM para fornecer 2,8 g de (S)N-(2-amino-2-(3-clorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzenossulfonamida como um sal de HCl. O resíduo foi evaporado até a secura, e agitado em DCM (20 mL) durante 30 minutos. O sólido foi filtrado e bem lavado com DCM para fornecer mais 400 mg de (S)-N-(2-amino-2-(3clorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzenossulfonamida que trouxe a produção total para 52,9% com 95% de pureza. LCMS (m/z): 370,1 (MH+100), 0,67 minuto; 1H RMN (500 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8,09 7,99 (m, 1H), 7,92 7,77 (m, 3H), 7,60 (s, 1H), 7,53 7,35 (m, 3H), 4,74 4,62 (m, 1H), 3,93 (dd, J=9,0, 14,7 Hz, 1H), 3,53 (dd, J = 5,4, 14,8 Hz, 1H), 2,98 (s, 3H). Exemplo 176 Síntese de (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(1 (3-clorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida Esquema 66
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Etapa 1. 4-(3-amino-6-(3,6-di-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila
[00513] A uma solução de 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila (21 g, 57,0 mmol) em DME (127 mL) foram adicionados aduzido de PdCl2(dppf).CH2Cl2 (2,329 g, 2,85 mmol), 2-(ciclo-hex-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (13,18 g, 62,7 mmol), e solução de Na2CO3 aquoso a 2 M (63,4 mL). A reação foi aquecida a 110 °C durante 16 horas. À mistura reacional foram adicionados 200 mL de acetato de etila, lavados com água (2 x 100 mL), salmoura, secados sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia rápidaeluindo com 0 a 100% de EtOAc/DCM para fornecer 4-(3-amino-6-(3,6-di-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (18 g, 48,5 mmol, 85%). LCMS (m/z): 372,3 (MH+), 0,95 minutos. Etapa 2. 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila
[00514] A uma suspensão de 4-(3-amino-6-(3,6-di-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (15 g, 40,4 mmol) em MeOH (800 mL) foi adicionado DCM (100 mL) até a suspensão tornarse uma solução homogênea. Depois de desgaseificada por corrente de N2 durante 15 minutos, Pd/C (10 g, 9,40 mmol) foi adicionado à mistura reacional. A esta mistura, balão de hidrogênio foi equipado depois de estimulada com gás de hidrogênio três vezes. A mistura reacional foi agitada durante 6 horas. Depois a mistura reacional foi filtrada através de almofada de Celite®, os materiais voláteis foram removidos em vácuo. O resíduo foi dissolvido em MeOH (200 mL) aquecendo e resfriando para temperatura ambiente e repousando durante a noite. O precipitado marrom foi filtrado, que forneceu 4,5 g de 4-(3-amino-6(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila. O filtrado foi concentrado e dissolvido em EtOH (200 mL) por aquecimento. O segundo precipitado marrom foi filtrada para fornecer 3,9 g de 4(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (55,7% combinados produção). LCMS (m/z): 374,7 (MH+), 0,90 minutos. Etapa 3. Ácido 4-(3-Amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico
[00515] A uma solução de 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (4,5 g, 12,05 mmol) em DCM (60,3 mL) foi adicionado TFA (60,3 mL). A mistura reacional foi agitada durante 2 horas. Depois de diluídos com tolueno (30 mL), os materiais voláteis foram removidos em vácuo duas vezes para fornecer ácido 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico (5,2 g, 12,06 mmol, 100%) como um sal de TFA. O produto bruto foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 318,5 (MH+), 0,55 minutos. Etapa 4. (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(1 -(3clorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamida
[00516] A uma solução de ácido 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (1,55 g, 4,88 mmol) em DMF (16,28 mL) foram adicionados HOAt (0,997g, 7,33 mmol), EDC (1,498 g, 7,82 mmol), DIEA (2,61 ml, 14,65 mmol) e (S)-N-(2-amino-2-(3clorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzenossulfonamida (2,084 g, 5,13 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas, e LCMS indicou que a reação foi concluída. A mistura reacional foi diluída com EtOAc, e a orgânica foi lavada por Na2CO3 saturado, água e salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada, e concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia rápidaeluindo com 50% de DCM/EtOAc (10% de metanol) para fornecer (S)-4-(3amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2-(Nmetil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamida (2,68 g, 4,01 mmol, 82%). LCMS: 669,1 (MH+), 0,95 minutos. Etapa 5. (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(1-(3clorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida
[00517] A uma solução de (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)2-fluorobenzamida (2,68 g, 4,01 mmol) em DMF (20 mL) foi adicionado ácido 4-mercaptobenzoico (1,235 g, 8,01 mmol) e K2CO3 (2,214 g, 16,02 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 40 oC durante a noite sob nitrogênio. Água (50 mL) foi adicionada, e a mistura tornou-se homogênea. A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos, e em seguida água (150 mL) foi adicionada lentamente. Sólido amarelo claro foi precipitado. A mistura foi agitada durante mais 30 minutos, e a suspensão foi filtrada. O sólido foi bem lavado com água, seguido por heptano, e secado por ar durante 1 hora. O sólido foi suspenso em água e agitado em temperatura ambiente durante 1 hora, e em seguida filtrado. Ao sólido foi adicionado EtOAc, e lentamente girado em Rotavap para remover o excesso de acetato de etila até permanecerem cerca de 20 mL de EtOAc, o sólido branco foi filtrado, e redissolvido em acetoniltrila e água, liofilizado. A solução foi secada em liofilizador para fornecer (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida (1,31 g, 2,69 mmol, 67,2%). LCMS (m/z): 484,3 (MH+), 0,66 minuto; 1H RMN (500 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,90 (s, 1H), 7,83 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,70 (dd, J = 1,1, 8,0 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,38 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 7,32 (dt, J = 1,9, 4,6 Hz, 1H), 5,33 (dd, J = 5,2, 9,0 Hz, 1H), 4,05 (dd, J = 3,5, 11,0 Hz, 2H), 3,57 (dt, J = 1,9, 11,8 Hz, 2H), 3,12 3,04 (m, 1H), 3,04 2,88 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 1,89 1,88 (m, 1H), 1,96 1,76 (m, 4H). Síntese de 2-amino-2-feniletilcarbamato de (S)-terc-butila
Figure img0147
[00518] Seguindo o esquema 9, usando (R)-2-amino-1-feniletanol, 2-amino-2-feniletilcarbamato de (S)-terc-butila foi obtido em 47% de rendimento. LCMS (m/z): 237,5 (MH+), 0,54 minutos. 1H RMN (400MHz ,CDCl3) δ ppm 7,42 7,32 (m, 5 H), 4,81 (br. s., 1 H), 4,11 4,00 (m, 1 H), 3,44 3,28 (m, 1 H), 3,28 3,13 (m, 1 H), 1,49 1,35 (m, 9 H). Síntese de (S)-2-fluoro-1-feniletanamina Esquema 67
Figure img0148
Etapa 1. (S)-2-(2-hidróxi-1-feniletil)isoindolina-1,3-diona
[00519] A uma solução de (S)-2-amino-2-feniletanol (3 g, 21,87 mmol) em água (26,5 mL), e acetonitrila (46,4 mL) foi adicionado ftalato de metila de 2,5-dioxopirrolidin-1-ila (5,76 g, 20,78 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Após acetonitrila ser removida em vácuo, a mistura reacional foi em seguida extraída com EtOAc. A orgânica foi lavada por água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo produzindo (S)-2-(2-hidróxi-1feniletil)isoindolina-1,3-diona (2,2 g, 40%). LCMS (m/z): 268 (MH+), 0,79 minutos. Etapa 2. (S)-2-(2-fluoro-1-feniletil)isoindolina-1,3-diona
[00520] A uma solução de (S)-2-(2-hidróxi-1-feniletil)isoindolina-1,3diona (1,5 g, 5,61 mmol) em PhCF3 (18,71 mL) foi adicionado trihidrofluoreto de trietilamina (5,48 mL, 33,7 mmol), fluoreto de perfluorobutanossulfonila (1,019 mL, 5,67 mmol), DIEA (14,70 mL, 84 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora, em seguida mais fluoreto de perfluorobutanossulfonila (1,019 mL, 5,67 mmol) foi adicionado. Após 5 horas, a mistura reacional foi extinguida com NaHCO3 e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secadas sobre sulfato de sódio anidroso, filtradas, e concentradas em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 10% de EtOAC em heptano) produzindo (S)-2-(2-fluoro-1feniletil)isoindolina-1,3-diona (30% de rendimento). LCMS (m/z): 270,1 (MH+), 0,96 minutos. Etapa 3, (S)-2-fluoro-1-feniletanamina
[00521] A uma solução de (S)-2-(2-fluoro-1-feniletil)isoindolina-1,3diona (290 mg, 1,077 mmol) em MeOH (3,59 mL) foi adicionado hidrazina (0,507 mL, 16,15 mmol). A mistura reacional foi agitada a 80 °C durante 3 horas. O precipitado branco foi filtrado. O filtrado foi concentrado para produzir o (S)-2-fluoro-1-feniletanamina bruto, que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 140,1 (MH+), 0,28 minuto; 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 7,43 7,34 (m, 4 H), 7,34 7,27 (m, 1 H), 4,57 (dd, J = 3,7, 8,8 Hz, 1 H), 4,49 4,38 (m, 1 H), 4,38 4,32 (m, 1H), 4,32 4,25 (m, 1 H). Síntese de (S)-2-azido-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etanamina Esquema 68
Figure img0149
Etapa 1. (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (S)-tercbutila
[00522] A uma solução de (S)-2-amino-2-(3-bromo-5fluorofenil)etanol (4,4 g, 16,26 mmol) em DCM (80 mL) foi adicionado TEA (6,80 mL, 48,8 mmol) seguido por anidrido de Boc (5,32 g, 24,4 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura reacional foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado, água e salmoura, secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada, e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida(gradiente de EtOAc em heptano) para fornecer (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2hidroxietil)carbamato de (S)-terc-butila (4,8 g, 88%). LCMS (m/z): 280 (MH+-tBu), 0,79 minutos. Etapa 2. (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-(3bromo-5-fluorofenil)etil metanossulfonato
[00523] A uma solução agitada de (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2hidroxietil)carbamato de (S)-terc-butila (4,8 g, 14,36 mmol) em DCM anidroso (100 mL) a 0 °C foram adicionados trietilamina (4,00 mL, 28,7 mmol) seguido por cloreto de metanossulfonila (1,343 mL, 17,24 mmol). A reação foi agitada a 0 °C durante 1 hora, em cujo tempo a LCMS indicou que a reação chegou à conclusão. A mistura reacional foi vertida em solução de NaHCO3 saturado (100 mL). A mistura foi agitada, as camadas separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM (2 x 50 mL). As orgânicas combinadas foram lavadas com solução de NaHCO3 (50 mL) e salmoura (50 mL), secadas (MgSO4), filtradas e concentradas, fornecendo metanossulfonato de (S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etila (5,92 g, 14,36 mmol, 100 % de rendimento) um sólido laranja muito claro. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,75 (d, J=8,83 Hz, 1 H), 7,43 7,55 (m, 2 H), 7,31 (d, J=9,46 Hz, 1 H), 4,86 5,00 (m, 1 H), 4,30 (dd, J=10,09, 5,04 Hz, 1 H), 4,24 (t, J=9,30 Hz, 1 H), 3,16 3,23 (m, 3 H), 1,36 1,44 (m, 9 H). Etapa 3. (2-azido-1-(3bromo-5-fluorofenil)etil)carbamato de (S)-tercbutila
[00524] Metanossulfonato de (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-2(3-bromo-5-fluorofenil)etila (5,92 g, 14,36 mmol) foi dissolvido em DMF anidroso (60 mL). Sodium azide (2,80 g, 43,1 mmol) foi adicionado, e a reação aquecida to 70 °C e mantida nesta temperatura durante 2 horas. After cooling, a mistura reacional foi vertida em água (100 mL) e extraída com EtOAc (3 x 80 mL). As orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL) e salmoura (3 x 50 mL), secadas (MgSO4), filtradas e concentradas. Cromatografia rápida (AnaLogix, coluna de 80 g, carregada em DCM, 0 a 40% de EtOAc em heptano durante 30 minutos) forneceu (2-azido-1-(3bromo-5-fluorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila (4,29 g, 11,94 mmol, 83 % de rendimento) como um solido branco. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,73 (d, J=8,83 Hz, 1 H), 7,48 (t, J=4,26 Hz, 2 H), 7,29 (d, J=9,77 Hz, 1 H), 4,80 (d, J=8,20 Hz, 1 H), 3,47 (d, J=7,88 Hz, 2 H), 1,44 1,38 (m, 9 H), 1,36 (br. s., 1 H). Etapa 4. (S)-2-azido-1-(3bromo-5-fluorofenil)etanamina
[00525] A uma solução agitada de (2-azido-1-(3bromo-5fluorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila (3,15 g, 8,77 mmol) em dioxano (40 mL) foi adicionado ácido hidroclórico (10,96 mL, 43,8 mmol) (solução a 4N em dioxano). A reação foi aquecida para 40 °C e mantida nesta temperatura durante 2 horas. Após resfriar, a mistura reacional foi evaporada até a secura, fornecendo cloridrato de (S)-2azido-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etanamina (2,59 g, 8,76 mmol, 100 % de rendimento) como um solido branco. Síntese de (S)-2-azido-1-(3-cloro-5-fluorofenil)etanamina
Figure img0150
[00526] Seguindo o esquema 68, usando (S)-2-amino-2-(3-cloro-5fluorofenil)etanol, (S)-2-azido-1-(3-cloro-5-fluorofenil)etanamina foi obtido. LCMS (m/z): 215,1 (MH+), 0,48 minutos. Síntese de (S)-2-azido-1-(3-clorofenil)etanamina
Figure img0151
[00527] Seguindo o esquema 68, usando (S)-2-amino-2-(3clorofenil)etanol, (S)-2-azido-1-(3-cloro-5-fluorofenil)etanamina foi obtido. LCMS (m/z): 197 (MH+), 0,5 minutos. Síntese de (S)-3-fenilmorfolina Esquema 69
Figure img0152
Etapa 1. (S)-2-cloro-N-(2-hidróxi-1-feniletil)acetamida
[00528] A uma solução de (S)-2-amino-2-feniletanol (0,852 g, 6,21 mmol), Et3N (0,952 mL, 6,83 mmol), DMAP (76 mg, 0,621 mmol) em CH2Cl2 (10 mL) a 0 °C foi adicionado cloreto de 2-cloroacetila (0519 mL, 6,52 mmol), e a mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 15 minutos. A mistura reacional foi lavada com HCl aquoso (1 M, 20 mL), em seguida NaHCO3 saturado (20 mL), secada (Na2SO4), concentrada, também secada sob vácuo elevado e (S)-2-cloro-N-(2-hidróxi-1feniletil)acetamida (0,60 g, 45,2% de rendimento) foi obtido como sólido branco. LCMS (m/z): 214 (MH+), 0,44 minutos. Etapa 2. (S)-5-fenilmorfolin-3-ona
[00529] A uma solução de (S)-2-cloro-N-(2-hidróxi-1feniletil)acetamida (600 mg, 2,8 mmol) em solução de THF anidroso a 0 °C foi adicionada suspensão de óleo mineral de NaH (247 mg, 6,18 mmol). A mistura resultante foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. A mistura reacional foi concentrada até a secura, e o resíduo foi dividido entre CH2Cl2/salmoura/H2O (20 mL/18 mL/2 mL). Camada de CH2Cl2 foi secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada, concentrada em vácuo. O produto bruto, (S)-5-fenilmorfolin-3-ona, foi obtido como um solido branco (498 mg, 97%). O produto bruto foi usado diretamente na etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 178,2 (MH+), 0,47 minutos. Etapa 3. (S)-3-fenilmorfolina
[00530] A uma suspensão de LiAlH4/THF (0,47g/2 mL) foi adicionada gota a gota (S)-5-fenilmorfolin-3-ona em solução de THF (481 mg em 6mL) em temperatura ambiente durante 5 minutos. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente depois disso durante 1 hora, em seguida foi aquecida com banho de óleo a 72 °C durante a noite, em seguida foi resfriada abaixo de 0 °C, extinguida por adição sequencial de H2O (0,47 mL), NaOH de suspensão aquosa a 3M (0,47 mL) e H2O (1,4 mL), e o resíduo extinguido foi diluído com Et2O (30 mL), agitado durante 10 minutos e a solução etérea foi separada por filtragem. O filtrado foi concentrado, também secado sob vácuo e (S)3-fenilmorfolina (424 mg, 96% de rendimento) foi obtido como sólido incolor. LCMS (m/z): 164,2 (MH+), 0,33 minutos. Síntese de (2-amino-2-(3-clorofenil)etil)(metil)carbamato de (S)-tercbutila Esquema 70
Figure img0153
Etapa 1. (R)-1-(3-clorofenil)-2-(metilamino)etanol
[00531] (2-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (R)-terc-butila (2,48 g, 9,13 mmol), preparado no esquema 9, foi dissolvido THF (30,4 mL), e LiAlH4 (1,039 g, 27,4 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi aquecida para refluxo durante 6 horas e em seguida resfriada. Água (1,06 mL) foi adicionada, seguido por NaOH aquoso (15%, 3 mL), e água (1,06 mL). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. O precipitado sólido foi filtrado através de celite® e bem enxaguado com EtOAc. O filtrado foi concentrado. O produto bruto (R)-1-(3-clorofenil)-2-(metilamino)etanol (1,75 g, 9,43 mmol, 100%) foi usado na etapa de reação seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 186,1 (MH+), 0,43 minutos. Etapa 2. (2-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)(metil)carbamato de (R)-tercbutila
[00532] (R)-1-(3-clorofenil)-2-(metilamino)etanol (1,75 g, 9,43 mmol) foi dissolvido em THF (31,4 mL), e em seguida anidrido de Boc (2,298 mL, 9,90 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. LCMS indicou que a reação foi concluída. A mistura reacional foi concentrada, e purificada por cromatografia rápida para fornecer (2-(3-clorofenil)-2hidroxietil)(metil)carbamato de (R)-terc-butila (2,0 g, 7,00 mmol, 74,3%). LCMS (m/z): 212,1 (MH+-56), 0,94 minutos. Etapa 3. (2-(3-clorofenil)-2-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)etil)(metil)carbamato de (S)-terc-butila
[00533] A uma mistura de (2-(3-clorofenil)-2hidroxietil)(metil)carbamato de (R)-terc-butila (2,0 g, 7,00 mmol) em THF (23,33 mL) foi adicionado ftalimida (1,339 g, 9,10 mmol) e PPh3 (3 mmol de PPh3/1 g de resina, 2,34 g, 7,02 mmol). Em seguida, DTBAD (1,660 g, 7,21 mmol) em THF foi lentamente adicionado em temperatura ambiente, e a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de celita® e lavada com EtOAc. O filtrado foi concentrado, redissolvido em EtOAc, lavado com Na2CO3 saturado, água e salmoura, secado sobre sulfato de sódio, filtrado, e concentrado. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida para fornecer (2-(3-clorofenil)-2-(1,3dioxoisoindolin-2-il)etil)(metil)carbamato de (S)-terc-butila (1,96 g, 4,72 mmol, 67,5%). LCMS (m/z): 315,1 (MH+-100), 1,19 minutos. Etapa 4. (2-amino-2-(3-clorofenil)etil)(metil)carbamato de (S)-terc-butila
[00534] A uma solução de (2-(3-clorofenil)-2-(1,3-dioxoisoindolin-2il)etil)(metil)carbamato de (S)-terc-butila (1,96 g, 4,72 mmol) em etanol (15,75 mL) foi adicionado hidrato de hidrazina (2,296 mL, 47,2 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 60 °C durante 2 horas. A mistura reacional foi em seguida filtrada através de almofada de celita e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi re-dissolvido em etanol e filtrado através de almofada de celita® para remover sólido branco extra. RMN mostrou que houve impureza no material bruto. O produto bruto foi filtradoatravés de um tampão de sílica, lavado por DCM/EtOAc (relação de 2:1) e flashed com DCM/EtOAc (20% metanol, 0,5 % NH3 em Metanol)(relação de 1:1) para fornecer (2-amino-2-(3clorofenil)etil)(metil)carbamato de butila (1,2 g, 89% de rendimento). LCMS (m/z): 285,1 (MH+), 0,65 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,37 (s, 1H) 7,26 ( 3H), 4,20 (br. s., 1H), 2,852,77 (m, 3H), 1,51 1,38 (m, 9H). Síntese de (S)-2-amino-4-ciclopropilbut-3-in-1-ol Esquema 71
Figure img0154
Etapa 1. (S)-N-((S)-1-((terc-butildimetilsilil)óxi)-4-ciclopropilbut-3-in-2il)-2-metilpropano-2-sulfinamida
[00535] Brometo de manésio de etila a 3,0 M em Et2O (0,360 mL, 1,081 mmol) foi adicionado a uma solução de etinilciclopropano (71,5 mg, 1,081 mmol) em THF ( 4 mL). A solução foi aquecida para 50 °C durante 1 horas, em seguida o Grignard resultante foi adicionado a uma solução a -78 °C de (S,E)-N-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)etilideno)2-metilpropano-2-sulfinamida (100 mg, 0,360 mmol) em DCM (4,00 mL), e a reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente. Depois de 3 horas, a reação foi extinguida com NH4Cl saturado aquoso. As camadas foram separadas e as orgânicas foram secadas sobre sulfato de magnésio e concentradas para fornecer (S)-N-((S)-1-((tercbutildimetilsilil)óxi)-4-ciclopropilbut-3-in-2-il)-2-metilpropano-2sulfinamida, que foi usado diretamente. LCMS (m/z): 344,1 (MH+), 1,23 minutos. Etapa 2. (S)-2-amino-4-ciclopropilbut-3-in-1-ol
[00536] HCl a 4,0 em dioxano (0,873 mL, 3,49 mmol) foi adicionado a uma solução de temperatura ambiente de (S)-N-((S)-1-((tercbutildimetilsilil)óxi)-4-ciclopropilbut-3-in-2-il)-2-metilpropano-2sulfinamida (120 mg, 0,349 mmol) em MeOH (4 mL). Após 30 minutos, a reação foi concentrada, em seguida azeotropada com benzeno para fornecer (S)-2-amino-4-ciclopropilbut-3-in-1-ol como o sal de HCl. LCMS (m/z): 126,2 (MH+), 0,50 minutos. Síntese de (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(metiltio)fenil)etanol Esquema 72
Figure img0155
Etapa 1: 4-(3-fluoro-5-(metiltio)fenil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila
[00537] Uma mistura de Xantphos (13,91 mg, 0,024 mmol), Pd2(dba)3 (22,02 mg, 0,024 mmol), 4-(3-bromo-5-fluorofenil)-2,2dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (300 mg, 0,802 mmol), DIEA (700 μl, 4,01 mmol) e metanotiolato de sódio (112 mg, 1,603 mmol) em tolueno (2,6 mL) foi aquecida por micro-ondas a 110 °C durante 18 minutos. EtOAc foi adicionado, e lavado com NaHCO3 saturado, água, e salmoura. A mistura foi filtrada, concentrada e purificada com cromatografia rápidaeluindo com 0 a 60% de EtOAc/heptano para fornecer 4-(3-fluoro-5-(metiltio)fenil)-2,2dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (278 mg, 102%) como um óleo. LCMS (m/z): 286,1 (MH+-56), 1,14 minutos. Etapa 2: (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(metiltio)fenil)etanol
[00538] Uma solução de 4-(3-fluoro-5-(metiltio)fenil)-2,2dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (278 mg, 0,814 mmol) em 4 M HCl em dioxano (2,4 mL) foi aquecida para 80 °C durante a noite. Houve ainda algum material de partida restante. Mais HCl a 4 M em dioxano (2,035 mL, 8,14 mmol) foi adicionado, e aquecido a 80 °C durante mais 10 horas. O solvente foi removido sov vácuo reduzido para fornecer (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(metiltio)fenil)etanol (194 mg, 0,814 mmol, 100%). LCMS (m/z): 170,1 (MH+-56), 0,26 minutos. Síntese de (S)-2-amino-2-(3-(metiltio)fenil)etanol /OH
Figure img0156
[00539] Seguindo o esquema 72, usando 4-(3-bromofenil)-2,2dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila, (S)-2-amino-2-(3(metiltio)fenil)etanol foi obtido. LCMS (m/z): 184 (MH+), 0,41 minutos. Síntese de (S)-2-amino-2-(3-(clorometil)-5-fluorofenil)etanol Esquema 73
Figure img0157
Etapa 1. 4-(3-(clorometil)-5-fluorofenil)-2,2-dimetiloxazolidina-3carboxilato de (S)-terc-butila
[00540] A uma solução de 4-(3-fluoro-5-(hidroximetil)fenil)-2,2dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (330 mg, 1,014 mmol) em DMSO anidrodo (2,028 mL) foi adicionado 2,4,6-tricloro1,3,5-triazina (112 mg, 0,609 mmol) em porções. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi diluída com EtOAc, e separada. A fase orgânica foi lavada com H2O (5 x 30 mL), secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado com cromatografia rápida eluindo com 0 a 100% de EtOAc/heptano para fornecer 4-(3-(clorometil)-5fluorofenil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (329 mg, 94%). LCMS (m/z): 288,1 (MH+-56), 1,12 minutos. Etapa 2: (S)-2-amino-2-(3-(clorometil)-5-fluorofenil)etanol
[00541] A uma solução de 4-(3-(clorometil)-5-fluorofenil)-2,2dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (140 mg, 0,407 mmol) em DCM anidroso (1,357 mL) foi adicionado HCl a 4 N em dioxano (1,018 mL, 4,07 mmol) em porções. A mistura foi refluxada a 80 °C durante a noite. A reação não foi concluída. Mais HCl a 4 N em dioxano (1,018 mL, 4,07 mmol) foi adicionado, e refluxada durante mais 24 horas. O solvente foi removido sob vácuo reduzido para fornecer (S)-2-amino-2-(3-(clorometil)-5-fluorofenil)etanol (70 mg, 84%). LCMS (m/z): 204 (MH+), 0,41 minutos. Síntese de (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)etanol Esquema 74
Figure img0158
Etapa 1. (3-bromo-5-fluorofenil)metanol
[00542] A uma suspensão de ácido 3-bromo-5-fluorobenzoico (4,51 g, 20,59 mmol) em THF (41,2 mL) a 0 oC, BH3,THF (41,2 mL, 41,2 mmol) foi adicionado gota a gota durante 30 minutos, a mistura reacional foi em seguida deixada retornar para temperatura ambiente e agitada em temperatura ambiente durante a noite. Metanol (40mL) foi adicionado lentamente e agitado em temperatura ambiente durante 1 hora. THF e metanol foram removidos em vácuo. O resíduo foi em seguidaextraído por EtOAc, e lavado com NaHCO3 saturado. A orgânica foi secada e concentrada. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 187,2 (MH+-18), 0,66 minutos.1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 7,32 (s, 1H), 7,19 7,14 (m, 1H), 7,05 (tdd, J=0,7, 1,5, 9,1 Hz, 1H), 4,70 (br. s., 2H), 1,78 (br. s., 1H). Etapa 2. 1-bromo-3-fluoro-5-(fluorometil)benzeno
[00543] A uma solução de (3-bromo-5-fluorofenil)metanol (4 g, 19,51 mmol) em DCM (39,0 mL) a 0 oC, DAST (3,35 mL, 25,4 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi deixada retornar para temperatura ambiente e agitada em temperatura ambiente durante a noite. NaHCO3 saturado foi adicionado, a mistura reacional foi em seguida extraída por DCM. A orgânica foi secada e concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida(0 a 10% de EtOAc/heptanos) para produzir o produto final como óleo incolor. LCMS (m/z): no mass (MH+), 0,86 minutos. 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 7,30 (s, 1H), 7,23 (d, J=8,2 Hz, 1H), 7,03 (d, J=8,6 Hz, 1H), 5,41 (s, 1H), 5,29 (s, 1H). Etapa 3, 3-fluoro-5-(fluorometil)benzaldeído
[00544] 1-bromo-3-fluoro-5-(fluorometil)benzeno (1,30 g, 6,28 mmol) foi dissolvido em THF (31,4 mL), em seguida resfriada para -78 oC, butillítio (2,5M em hexanos) (2,76mL, 6,91 mmol) foi adicionado a 78 oC, a mistura reacional foi em seguida agitada a -78 °C durante 30 minutos. DMF (0,972 mL, 12,56 mmol) foi adicionado, depois de agitada a -78 °C durante 1 hora. A mistura reacional foi extinguida por HCl e a mistura reacional foi em seguida extraída por EtOAc, a orgânica foi secada e concentradas para produzir o produto bruto. O material bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): nenhuma massa (MH+), 0,60 minutos.1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 10,08 9,93 (m, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,56 (d, J=8,2 Hz, 1H), 7,37 (d, J=7,8 Hz, 1H), 5,53 (s, 1H), 5,42 (s, 1H) Etapa 4. (R,E)-N-(3-fluoro-5-(fluorometil)benzilideno)-2-metilpropano-2sulfinamida
[00545] A uma solução de 3-fluoro-5-(fluorometil)benzaldeído (890 mg, 5,70 mmol) e (R)-2-metilpropano-2-sulfinamida (760 mg, 6,27 mmol) em DCE (19,0 mL) foi adicionado sulfato de cobre (ll) (anidroso) (1,820 g, 11,40 mmol), a suspensão foi agitada sob nitrogênio at 60 oC em um óleo de banho durante a noite. A suspensão tornou-se de cor azul claro. Resfriando, a mistura reacional foi filtrada através de um tampão de celita e enxaguada com DCM, o filtrado foi concentrado para produzir o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida(0 a 30% de EtOAc em heptano) para produzir the (R,E)N-(3-fluoro-5-(fluorometil)benzilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida (900 mg, 60,9 % de rendimento) como óleo de cor amarelo claro. LCMS (m/z): 260,1 (MH+), 0,88 minutos. 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 8,57 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,56 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,26 7,22 (m, 1H), 5,50 (s, 1H), 5,38 (s, 1H), 1,29 1,23 (m, 9H) Etapa 5. (R)-N-((R)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)alil)-2-metilpropano2-sulfinamida
[00546] Zinco de dimetila (2M em Toluno) (0,434 mL, 0,868 mmol) e brometo de vinilmagnésio (1M em THF) (4,51 mL, 4,51 mmol) foram misturados em temperatura ambiente durante 20 minutos sob argônio antes de resfriados para -78 oC, em seguida (R,E)-N-(3-fluoro-5(fluorometil)benzilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida (0,900 g, 3,47 mmol) em THF seco (11,57 mL) foi adicionado gota a gota para manter a temperatura interna entre -74 oC a -72 oC, após adição, a mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 1 hora, a reação foi extinguida por NH4Cl saturado, THF foi removido em vácuo, em seguida extraído por EtOAc. A orgânica foi lavada por água e salmoura, secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 30% de EtOAc/heptanoatano) para produzir produto 660 mg, LCMS (m/z): 288,0 (MH+), 0,83 minutos. 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 7,14 (s, 1H), 7,03 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,07 (d, J=9,4 Hz, 1H), 5,90 (ddd, J=7,4, 10,1, 17,3 Hz, 1H), 5,45 5,35 (m, 2H), 5,35 5,25 (m, 2H), 5,01 4,94 (m, 1H), 3,45 (br. s., 1H), 1,30 1,22 (m, 9H) Etapa 6. (R)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)prop-2-en-1-amina
[00547] (R)-N-((R)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)alil)-2metilpropano-2-sulfinamida (660 mg, 2,297 mmol) em MeOH (7,66 mL), foi adicionado HCl (4 M em dioxano) (5,742 mL, 22,97 mmol) a 0 oC, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reacional foi concentrada até a secura. Na2CO3 saturado foi adicionado, a mistura reacional foi em seguida extraída por EtOAc. A orgânica foi foi secado e concentradas para produzir o produto bruto. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 184,1 (MH+), 0,40 minutos. Etapa 7. (1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)alil)carbamato de (R)-tercbutila
[00548] A uma solução de (R)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)prop-2en-1-amina (421 mg, 2,30 mmol) em DCM (7,6 mL) foi adicionado BOC2O (640 μl, 2,76 mmol), a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 20% de EtOAc/heptano) para produzir (1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)alil)carbamato de (R)-terc-butila. LCMS (m/z): 228,1 (MH+-56)), 0,91 minutos. 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 7,08 (s, 1H), 6,99 (d, J=9,0 Hz, 2H), 5,95 (ddd, J=5,5, 10,6, 16,8 Hz, 1H), 5,42 (s, 1H), 5,30 (s, 1H), 5,30 5,13 (m, 3H), 4,86 (br. s., 1H), 1,44 (s, 9H). Etapa 8. (1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroxietil)carbamato de (S)terc-butila
[00549] (1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)alil)carbamato de (R)-tercbutila (410 mg, 1,447 mmol) em DCM (14,5 mL) foi resfriada abaixo de -78 oC. A mistura reacional foi borbulhada por O3 (do gerador de ozônio) durante 5 minutos. A mistura reacional é de cor azul claro, N2 foi borbulhado completamente para livrar-se de O3, em seguida NaBH4 (547 mg, 14,47 mmol) em etanol (10 mL) foi adicionado, a mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 10 minutos, em seguida deixada retornar para temperatura ambiente. Após 30 minutos, NH4Cl saturado foi adicionado seguido por metanol, a mistura reacional foi concentrada, em seguida extraída por EtOAc. A orgânica foi lavada por NaHCO3 saturado, água e salmoura, secada e concentrada para produzir produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápidapara fornecer o (1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroxietil)carbamato de (S)-terc-butila (223 mg, 54% de rendimento). LCMS (m/z): 232,2 (MH+56), 0,73 minutos.1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 7,10 (s, 1H), 7,02 (d, J=9,4 Hz, 2H), 5,43 (s, 1H), 5,35 5,28 (m, 1H), 4,78 (br. s., 1H), 3,95 3,78 (m, 2H), 1,44 (br. s., 9H). Etapa 9. (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)etanol
[00550] A uma solução de (1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2hidroxietil)carbamato de (S)-terc-butila (220 mg, 0,766 mmol) em DCM (2,5 mL), HCl (4M em dioxano) (1,9 mL 7,66 mmol) foi adicionado em temperatura ambiente, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reacional foi em seguida concentrada até a secura. O resíduo foi recristalizado de DCM e heptano. O sólido foi filtrado e secado por ar para produzir (S)-2-amino-2-(3-fluoro5-(fluorometil)fenil)etanol (145 mg, 0,908 mmol, 100 % de rendimento) sal de HCl como sólido branco. LCMS (m/z): 188,2 (MH+), 0,32 minutos. Exemplos 177 e 178 Síntese de 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroxietil)benzamida e 4-(3-amino-6-((1s,4R)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroxietil)benzamida Esquema 75 Eteo 1 PdCI2dppf.CH2CI2 DME/Na2CO3 100 °C,3h 90%
Figure img0159
Etapa 1.4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00551] À 3-cloropirazin-2-amina (27 g, 208 mmol) em DME (391 mL) e carbonato de sódio (66,3 g, 625 mmol) foram adicionados 2fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de metila (64,2 g, 229 mmol) e aduzido de PdCl2(dppf).CH2Cl2 (8,51 g, 10,42 mmol). A mistura reacional foi purgada com N2 e aquecida em banho de óleo a 100 °C durante 3 horas. A mistura reacional foi dividida entre EtOAc e água. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O produto bruto foi recristalizado por EtOAc e heptano (2:3) para fornecer 4-(3aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila em 84% de rendimento. LCMS (m/z): 248,1 (MH+), 0,58 minutos. Etapa 2. 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00552] A uma suspensão de 4-(3-aminopirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (31,5 g, 127 mmol) em acetonitrila (430 mL) a 0 oC foi adicionado NBS (23,9 g, 134 mmol). A mistura reacional foi agitada em banho de gelo durante 1 hora, bicarbonato de sódio saturado foi adicionado, agitada 30 minutos e produto foi extraída com etilacetate. Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com salmoura, secados sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. O produto bruto foi recristalizado em EtOAc e heptano para fornecer 4-(3amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila como um sólido de cor marrom em 96% de rendimento. LCMS (m/z): 326,0/328,0 (MH+), 0,87 minutos. Etapa 3. 4-(3-amino-6-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila
[00553] A uma solução de 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (10 g, 30,7 mmol) em DME (77 mL) foi adicionado 4,4,5,5-tetrametil-2-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-il)-1,3,2dioxaborolano (9,79 g, 36,8 mmol), aduzido de PdCl2(dppf).CH2Cl2 (1,252 g, 1,533 mmol), H2O (25,6 mL) e em seguida o restante de carbonato de sódio (9,75 g, 92 mmol). A reação foi aquecida a 100 °C em banho de óleo durante 2 horas. Resfriada. A mistura reacional foi extraída por EtOAc 3 vezes, a orgânica foi lavada com água e salmoura, secada e concentrada. O material bruto foi recristalizado em DCM e heptano (1:1) para fornecer o produto, 4-(3-amino-6-(1,4dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila, em 75% de rendimento. LCMS (m/z): 382,2 (MH+), 0,82 minutos. Etapa 4. 4-(3-amino-6-(1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila
[00554] 4-(3-amino-6-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-il)pirazin-2-il)2-fluorobenzoato de metila (6,1 g, 15,83 mmol) foi dissolvido em MeOH (150 mL) e EtOAc (80 mL) a mistura reacional foi estimulada com N2 durante 15 minutos, Em seguida Pd-C (DEGASSA) (6 g, 5,64 mmol) foi adicionado, a mistura reacional foi em seguida carregada com balão de hidrogênio e agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de celita, que foi lavada com EtOAc e metanol. O filtrado foi concentrado para produzir o produto bruto, que foi usado na reação de etapa seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 388,0 (MH+), 0,79 minutos. Etapa 5. 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00555] A uma solução de 4-(3-amino-6-(1,4-dioxaspiro[4,5]decan8-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (6,2 g, 16,00 mmol) em acetonitrila (100 mL), água (40 mL), foi adicionado HCl de solução aquosa a 3M (13,34 mL, 80 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura reacional foi basificada com NaOH a 6 M (10 mL), em seguida usou NaHCO3 saturado para ajustar-se para pH 8. Após acetonitrila ser removida em vácuo, a suspensão sólida do resíduo foi filtrada e lavada com água e heptano, secada por ar para fornecer 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila como sólido amarelo claro em 67 % de rendimento. LCMS (m/z): 344,0 (MH+), 0,70 minutos. Etapa 6. 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila
[00556] A uma solução de 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2il)-2-fluorobenzoato de metila (3,25 g, 9,47 mmol) em Metanol (100 mL) e THF (20 mL) a 0 °C, NaBH4 foi adicionado (0,358 g, 9,47 mmol). Após 30 minutos, NH4Cl saturado foi adicionado lentamente, em seguida agitado em temperatura ambiente durante 1 hora. Metanol e THF foram removidos em vácuo. O resíduo foi extraído por EtOAc 3 vezes, a orgânica combinada foi lavada com NaHCO3 e água, secada e concentrada. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 346,4 (MH+), 0,63 min (trans) e 0,66 min (cis); trans/cis (~4 :1). Etapa 7. ácido 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico e ácido 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico
[00557] A uma solução de 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (3,25 g, 9,41 mmol) em MeOH (15,68 mL) e THF (15,68 mL) e em seguida solução aquosa a 1M de LiOH (23,53 mL, 23,53 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas, HCl a 6 M (3,9 mL ) foi adicionado lentamente. Metanol e THF foram removidos em vácuo, o resíduo (suspensão sólida amarela) foi filtrado. O sólido foi lavado com água e heptano, secado por ar para produzir o produto bruto. O produto bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 332,1 (MH+), 0,49 min (trans) e 0,53 min (cis). Etapa 8. 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluoroN-((S)-1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroxietil)benzamida e 4-(3amino-6-((1s,4R)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroxietil)benzamida
[00558] A uma mistura de ácido 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico e ácido 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (19,45 mg, 0,053 mmol) foram adicionados NMP (0,5 mL), base de Hünig (0,042 mL, 0,240 mmol) e (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)etanol-HCl (9 mg, 0,048 mmol). Em seguida HATU (36,6 mg, 0,096 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente, seguida por LCMS. À reação crua foi adicionado 0,5 mL de NMP, filtrada, purificada por HPLC preparativa com ambos os isômeros isolados 4-(3amino-6-((1r,4S)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroxietil)benzamida como trans e 4-(3amino-6-((1s,4R)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2-hidroxietil)benzamida menor como cis. Ambos os produtos foram liofilizados para sais de TFA. Para diastereômero trans, 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,84 7,70 (m, 2 H), 7,64 7,47 (m, 2 H), 7,19 (s, 1 H), 7,09 (d, J=9,78 Hz, 1 H), 6,98(d, J=9,00 Hz, 1 H), 5,36 (s, 1 H), 5,24 (s, 1 H), 5,13 (t, J=5,87 Hz, 1 H), 3,87 3,70 (m, 2 H), 3,59 -3,45 (m, 1 H), 2,62 2,49 (m, 1 H), 2,05 1,92 (m, 2 H), 1,911,79 ( m, 2 H), 1,57 (qd, J=12,98 Hz, 2,93 Hz, 2 H), 1,39-1,24 Para diastereômero cis, 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,93-7,81 (m, 2H) 7,75-7,58 (m, 2H) 7,29 (d, J=9,78 Hz, 1 H), 7,19 (d, J=9,78 Hz, 1H), 7,07 (d, J=9,00 Hz, 1H), 5,45 ( s, 1 H), 5,33 (s, 1 H), 5,22( t, J=5,67 Hz, 1H), 4,01 ( br. s., 1 H), 3,94 -3,77 (m, 2 H), 2,80 2,68 ( m, 1 H), 2,12 1,96 (m, 2 H) 1,911,80 (m, 2 H), 1,77-1,60 (m, 4 H). Síntese de (S)-N-(2-amino-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etil)-N-metil-2nitrobenzenossulfonamida Esquema 76
Figure img0160
Etapa 1. Metil 3-amino-5-fluorobenzoato
[00559] Ácido 3-bromo-5-fluorobenzoico (6,12 g, 33,1 mmol) foi dissolvido em MeOH (10 mL) e resfriado em banho de água gelada e tolueno (50 mL) e em seguida TMS-diazometano (19,84 mL, 39,7 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura reacional foi deixada retornar para temperatura ambiente durante 1 hora e concentrada em vácuo e o resíduo dissolvido em DCM/Éter e filtrado através de um curto tampão de sílica e o filtrado evaporado em vácuo para fornecer o produto desejado que foi em seguida dissolvido em MeOH (60 mL) e Pd/C a 10 % em peso de 3,3 g foi adicionado e a mistura evacuado e agitada sob 1 atm de hidrogênio durante a noite e LCMS indicou produto desejado na manhã seguinte. A mistura reacional foi filtrada através de celita e o filtrado foi concentrado em vácuo e o resíduo azeotropado com tolueno duas vezes e levado para a etapa seguinte tal como (99%). LCMS (m/z): 211,1 (MH+), 0,55 minutos. Etapa 2. 3-fluoro-5-iodobenzoato de metila
[00560] 3-amino-5-fluorobenzoato de metila foi dissolvido em 5,0 N HCl (68,5 mL, 343 mmol) e resfriado para 0 °C. NaNO2 (2,51 g, 36,4 mmol) dissolvido em 3,0 mL água foi adicionada gota a gota. Em seguida KI (6,59 g, 39,7 mmol) dissolvido em 45 mL água foi adicionada durante 30 minutos e a mistura agitada em temperatura ambiente durante 1 hora e a mistura reacional foi extraída com Et2O duas vezes (200 mL) e em seguida secada (sulfato de magnésio), filtrada e concentrada em vácuo para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia rápida(0 a 20 % de EtOAc/heptano) para fornecer 5,49 g do produto desejado como um xarope amarelo (59 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8,18 (s, 1H), 7,69 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,63 (dd, J=7,6, 1,4 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H). Etapa 3. (3-fluoro-5-iodofenil)metanol
[00561] 3-fluoro-5-iodobenzoato de metila (5,49 g, 19,60 mmol) foi dissolvido em DCM (100 mL) e resfriado para -78 °C. DIBAL-H (49,0 mL, 49,0 mmol) foi adicionado gota a gota durante 30 minutos e em seguida após 1 hora outra porção de DIBAL-H (49,0 mL, 49,0 mmol) foi adicionada. A mistura reacional agitada a -78°C durante 4 horas e vertida cuidadosamente no HCl a 1N gelado. A mistura foi agitada durante 10 minutos e as camadas separadas e a camada aquosa extraída com DCM e o extrato orgânico combinado foi secado (sulfato de magnésio), filtrado e concentrado em vácuo para fornecer o produto desejado em produção quantitativa. LCMS não conclusivo. Etapa 4. 3-fluoro-5-iodobenzaldeído
[00562] (3-fluoro-5-iodofenil)metanol (9,79 g, 35,0 mmol mmol) foi dissolvido em DCM (94 mL) e em seguida sílica gel (18,0 g) foi adicionado. À mistura em temperatura ambiente foi adicionado PCC (18,3 g, 45,0 mmol) em porções e a mistura agitada em temperatura ambiente durante 1 hora e seguida por TLC. Após 1 hora, TLC indicou conversão completa do SM a um não-polar (presumivelmente aldeído). A mistura reacional foi filtrada sobre tampão de 1 polegada de almofada de sílica e eluído com 30 % de éter em DCM (200 mL). O filtrado foi concentrado em vácuo para fornecer o produto bruto, que foi levado para a etapa seguinte sem outra purificação. Etapa 5. (R,E)-N-(3-fluoro-5-iodobenzilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida
[00563] A uma solução de 3-fluoro-5-iodobenzaldeído (8,75 g, 35 mmol) e (R)-(+)-t-Butilsulfinamida (4,67 g, 38,5 mmol) em DCE ( 117 mL) foi adicionado sulfato de cobre (ll) (anidroso) (16,76 g, 105 mmol) e a suspensão resultante foi aquecida a 60 °C durante a noite. LCMS indicou formação de produto desejado. A mistura reacional foi filtrada através de celita e o filtrado concentrado em vácuo e em seguida levado para a etapa seguinte como tal. LCMS (m/z): 354,1 (MH+), 1,08 minutos. Etapa 6. (R)-N-((R)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)alil)-2-metilpropano-2sulfinamida
[00564] Zinco de dimetila (1,2M em tolueno) (7,29 mL, 8,75 mmol) e brometo de vinilmagnésio (45,5 mL, 45,5 mmol) foram misturados em temperatura ambiente durante 20 min sob argônio antes de serem resfriados para -78 °C, em seguida (R,E)-N-(3-fluoro-5-iodobenzilideno)-2metilpropano-2-sulfinamida em THF seco ( 117 mL) visto que foram adicionados gota a gota cerca de 30 minutos. A temperatura interna entre -74 °C e -72 °C, após a adição da mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 1 hora, a amostra foi considerada extinguida por água, LCMS mostrou o produto desejado junto com material de partida não reagido. Mais brometo de vinil magnésio (12 mL, 12,0 mmol)) foi adicionado e a reação monitorada por LCMS e, após 30 minutos, a reação foi considerada concluída. A mistura reacional foi vertida sobre NH4Cl saturado gelado e água, THF foi removido em vácuo e o produto extraído por EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada e concentrada e o produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 70 % de EtOAc/heptano) para fornecer 8,99 g de (R)-N-((R)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)alil)-2metilpropano-2-sulfinamida como o produto desejado como um xarope amarelo incolor. Produção (67,4 %). A produção é para a sequência de 4 etapas. Note: O produto secundário principal corresponde ao produto desejado desionizado. LCMS (m/z): 382,5 (MH+), 0,96 minutos; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) ) δ ppm 7,48 (s, 1H), 7,37 (dt, J=7,6, 1,9 Hz, 1H), 7,06 (d, J=9,0 Hz, 1H), 5,85 (ddd, J=17,0, 10,0, 7,4 Hz, 1H), 5,255,47 (m, 3H), 4,90 (d, J=7,0 Hz, 1H), 3,23-3,66 (m, 1H), 1,26 (s, 9H). Etapa 7. (1-(3-fluoro-5-iodofenil)alil)carbamato de (R)-terc-butila
[00565] (R)-N-((R)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)alil)-2-metilpropano-2sulfinamida (8,99 g, 23,58 mmol) foi dissolvido em MeOH (40 mL) e tratado com HCl a 4 N (11,79 mL, 47,2 mmol) e a mistura agitada em temperatura ambiente durante 1 hora e concentrada em vácuo. O resíduo foi dissolvido em água e Na2CO3 saturado foi adicionado. O produto foi extraída com 3:1 de CHCl3:IPA e a camada orgânica foi secada (sulfato de magnésio), filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi dissolvido em DCM (60 mL) e boc-anidrido (6,79 mL, 29,2 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada durante a noite em temperatura ambiente e, na manhã seguinte, a mistura reacional foi concentrada em vácuo e o produto bruto (1-(3-fluoro-5-iodofenil)alil)carbamato de (R)terc-butila levado para a etapa seguinte sem qualquer outra purificação. LCMS (m/z): 322,1 (MH+-56), 1,11 minutos. Etapa 8. (1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (S)-tercbutila
[00566] (1-(3-fluoro-5-iodofenil)alil)carbamato de (R)-terc-butila (8,89 g, 23,58 mmol) foi dissolvido em DCM (236 mL) e resfriado para -78 °C. Ozônio foi purgado através da mistura até a cor azul persistir. A mistura reacional foi em seguida purgada com nitrogênio e NaBH4 (8,92 g, 236 mmol) foi adicionado em uma porção seguida por adição de MeOH (120 mL) e a mistura foi agitada na mesma temperatura durante 2 horas e em seguida 20 mL de acetona foram adicionados. A mistura reacional foi agitada durante mais 1 hora e em seguida vertida sobre NH4Cl saturado e em seguida extraída com DCM (500 mL) e em seguida com 3:1 de CHCl3/IPA (200 mL) e os extratos orgânicos foram combinados e secados (sulfato de magnésio), e o solvente concentrado em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia rápida para fornecer 6,74 g (17,7 mmol) de (1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2hidroxietil)carbamato de (S)-terc-butila (75%). LCMS (m/z): 326,1 (MH+-56), 0,90 minuto. Etapa 9. (2-azido-1-(3-fluoro-5-iodofenil)etil)carbamato de (S)-tercbutila
[00567] (1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (S)-tercbutila (4,8112 g, 12,62 mmol) foi dissolvido em DCM (100 mL) e resfriado para 0 °C. Et3N (2,62 mL, 18,93 mmol) foi adicionado e em seguida MsCl (1,180 mL, 15,15 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura reacional foi agitada na mesma temperatura durante 30 minutos, após os quais RM extinguida com NaHCO3 e água. O produto foi extraído com DCM e a camada orgânica combinada foi secada (sulfato de magnésio), filtrada e concentrada em vácuo para fornecer o produto bruto que foi dissolvido em DMF (25 mL, aproximadamente 0,5 M). NaN3 (2,462 g, 37,9 mmol) foi adicionado em seguida e a mistura aquecida a 70 °C. Após 6 horas, a mistura reacional foi resfriada para temperatura ambiente e diluída com EtOAc e água e o produto extraído com EtOAc. O extrato orgânico combinado foi lavado com água três vezes e secado (sulfato de magnésio), filtrado e concentrado em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia rápida (0 a 50%) EtOAc/heptano para fornecer 4,03 g de (2-azido-1-(3-fluoro-5iodofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila como produto desejado. LCMS (m/z): 351,0 (MH+-56), 1,05 minuto. Etapa 10. (1 -(3-fluoro-5-iodofenil)-2-(2-nitrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)-terc-butila
[00568] (2-azido-1-(3-fluoro-5-iodofenil)etil)carbamato de (S)-tercbutila (288 mg, 0,709 mmol) foi dissolvido em MeOH (7,09 mL) e em seguida PPh3 ligado ao polímero (7,09 mmol) foi adicionado. RM agitado a 70 °C durante a noite. Na manhã seguinte, LCMS indicou a formação de produto desejado. Filtrou-se o RM através de celita e lavou-se a massa filtrada com DCM e MeOH e concentrou-se o filtrado em vácuo para fornecer a amina crua que foi levada para a etapa seguinte sem qualquer outra purificação. A amina crua foi dissolvida em DCM (7 mL) e resfriada para 0 °C e em seguida trietilamina (0,198 mL, 1,418 mmol) foi adicionado. Em seguida cloreto de 2-nitrobenzeno-1sulfonila (189 mg, 0,851 mmol) foi adicionado em uma porção. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora e extinguida com água e o produto extraído com DCM. A camada orgânica foi lavada com salmoura e secada (sulfato de magnésio), filtrada e concentrada em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia rápida (0 a 40 % de EtOAc/heptano) para fornecer 290 mg de (1-(3-fluoro-5iodofenil)-2-(2-nitrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)-terc-butila como o produto desejado. LCMS (m/z): 524,0 (MH+-56), 1,10 minuto. Etapa 11. (S)-N-(2-amino-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etil)-N-metil-2nitrobenzenossulfonamida
[00569] (1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2-(2nitrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)-terc-butila (290 mg, 0,513 mmol) foi dissolvido em DMF (5,1 mL) e K2CO3 (142 mg, 1,026 mmol) seguido por iodometano (48,1 μl, 0,769 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora sob a qual reação completa se observou. RM diluída com água e EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água duas vezes e secada (sulfato de magnésio), filtrada e concentrada em vácuo para fornecer produto relativamente puro que foi dissolvido em DCM (5 mL) e tratado com HCl a 4N em dioxano (2 mL) e a mistura agitada em temperatura ambiente durante a noite e a mistura concentrada em vácuo para fornecer o produto desejado (S)-N-(2-amino-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etil)-N-metil-2nitrobenzenossulfonamida como o sol de cloridrato. LCMS (m/z): 480,4 (MH+), 0,72 minuto. Exemplo 179 Síntese de (S)-N-(2-amino-1-(3-fluoro-5-iodofenil)etil)-4-(3-amino-6(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida Esquema 77
Figure img0161
Etapa 1. (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2azido-1-(3-fluoro-5-iodofenil)etil)-2-fluorobenzamida
[00570] Aduzido de TFA de ácido 4-(3-Amino-6-(tetra-hidro-2Hpiran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (126 mg, 0,292 mmol) e HOAt (0,060 g, 0,438 mmol) foi dissolvido em DMF (1 mL) e DIEA (0,156 mL, 0,876 mmol). Sal de cloridrato de (S)-2-azido-1-(3-fluoro-5iodofenil)etanamina (100 mg, 292 mmol), obtido da reação de (2-azido1-(3-fluoro-5-iodofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila com HCl a 4M em dioxano (Etapa 9 no esquema 76), foi adicionado, seguido por EDC (0,090 g, 0,467 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi diluída com EtOAc e água, e a camada orgânica foi lavada com água duas vezes e em seguida com Na2CO3 saturado, a camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em vácuo fornecendo (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2-azido-1-(3fluoro-5-iodofenil)etil)-2-fluorobenzamida bruta sem outra purificação. Etapa 2. (S)-N-(2-amino-1-(3-fluoro-5-iodofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida
[00571] A (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N(2-azido-1-(3-fluoro-5-iodofenil)etil)-2-fluorobenzamida bruta foi dissolvida em THF (5 mL), e trifenilfosfina (ligada a polímero, 3 mmol/g) (0,97 g, 3,70 mmol) foi adicionada gota a gota. A mistura foi aquecida a 70 °C durante 3 horas. LCMS indicou ausência de material de partida (neste estágio, o intermediário fosforilimina está provavelmente presente em fase sólida). Água (4,5 mL) e THF (5 mL) foram adicionados, e a mistura foi aquecida a 80 °C durante 3 horas e em seguida filtrada. A massa filtrada foi lavada com DCM e em seguida o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo foi dissolvido em DCM e lavado com água e a camada orgânica secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em vácuo para fornecer o resíduo que foi purificado por cromatografia rápida (0 a 60 % DCM/10 % de MeOH em EtOAc contendo 0,5 % de NH4OH), e as frações de produto foram coletadas e concentradas. O resíduo foi dissolvido em acetonitrila e água, e liofilizado para obter 101,2 mg de (S)-N-(2-amino-1-(3-fluoro-5iodofenil)etil)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzamida como o produto desejado. LCMS (m/z): 580,1 (MH+), 0,70 minuto. 1H RMN (CD3OD) δ (ppm): 7,92 (s, 1H), 7,85 7,79 (m, 1H), 7,73 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,68 7,61 (m, 2H), 7,50 7,43 (m, 1H), 7,23 (d, J=9,5 Hz, 1H), 5,12 (t, J=6,9 Hz, 1H), 4,07 (dd, J=11,2, 3,3 Hz, 2H), 3,60 (td, J=11,7, 2,0 Hz, 2H), 3,09 2,83 (m, 3H), 2,02 1,76 (m, 4H). Síntese de (2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)carbamato de (S)terc-butila Esquema 78
Figure img0162
Etapa 1. (S,E)-N-(3-bromo-5-fluorobenzilideno)-2-metilpropano-2sulfinamida
[00572] A uma solução de 3-bromo-5-fluorobenzaldeído (5 g, 24,63 mmol) e (S)-2-metilpropano-2-sulfinamida (3,28 g, 27,1 mmol) em DCE (82 mL) foi adicionado sulfato de cobre (ll) (anidroso) (7,86 g, 49,3 mmol). A suspensão foi agitada sob nitrogênio a 60 °C durante a noite. A mistura reacional foi resfriada, filtrada através de um tampão de celita, e enxaguada com DCM. O filtrado foi concentrado para produzir o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash eluindo com 0 a 30 % de EtOAc em heptano para produzir o produto (S,E)-N-(3-bromo-5-fluorobenzilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida (7,5 g, 24,49 mmol, 99 % de rendimento) como um óleo incolor amarelo claro. LCMS (m/z): 306,1/308,1 (MH+), 1,04 minuto. Etapa 2. (S)-N-((S)-1 -(3-bromo-5-fluorofenil)-2-nitroetil)-2-metilpropano-2sulfinamida
[00573] Nitrometano (1,0 mL, 17,20 mmol) foi dissolvido em THF (34,4 mL), em seguida BuLi (2,5 M em hexanos) (7,22 mL, 18,06 mmol) foi adicionado a -78 °C. A mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 10 minutos, em seguida aquecida para temperatura ambiente durante 20 minutos. Após resfriada para -78 °C, (S,E)-N-(3-bromo-5fluorobenzilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida (4,74 g, 15,48 mmol) em THF (6 mL) foi adicionado gota a gota. A mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 20 minutos, aquecida para temperatura ambiente, e agitada em temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura reacional foi extinguida por NH4Cl saturado, e extraída por EtOAc. A orgânica foi secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 40 % de A 100 % de EtOAC/ heptano). As frações puras foram combinadas para produzir (S)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-nitroetil)-2-metilpropano-2sulfinamida (2,2 g, 5,99 mmol, 38,7 % de rendimento). LCMS (m/z): 367,1/369,1 (MH+), 0,89 minuto; 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 7,31 (s, 1H), 7,03 (d, J=9,0 Hz, 1H), 5,03 (q, J=5,7 Hz, 1H), 4,87 4,78 (m, 2H), 4,48 (d, J=5,1 Hz, 1H), 1,33 1,25 (m, 9H). Etapa 3. (S)-N-((S)-2-amino-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2-metilpropano2-sulfinamida
[00574] (S)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-nitroetil)-2metilpropano-2-sulfinamida (2,2 g, 5,99 mmol) foi dissolvido em MeOH (19,97 mL), estimulado com N2 duurante 10 minutos, e em seguida PtO2 (0,408 g, 1,797 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi carregado com balão de hidrogênio e agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi filtrada através de celita e lavada por metanol e EtOAc. O filtrado foi secado sobre Na2SO4, filtrado e concentrado. O material bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 337,1/339,1 (MH+), 0,64 minuto. Etapa 4. ((S)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((S)-1,1-dimetiletilsulfinamido) etil)carbamato de terc-butila
[00575] (S)-N-((S)-2-amino-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2metilpropano-2-sulfinamida (1,75 g, 5,19 mmol) foi dissolvido em DCM (17,30 mL), e em seguida Boc2O (1,325 mL, 5,71 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas, e em seguida concentradas. O produto bruto foi purificado para produzir o produto ((S)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((S)-1,1dimetiletilsulfinamido)etil)carbamato de terc-butila (1,78 g, 78%). LCMS (m/z): 437,1/439,1 (MH+), 0,99 minuto. Etapa 5. (2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)carbamato de (S)-tercbutila
[00576] A uma solução de ((S)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((R)-1,1dimetiletilsulfinamido)etil)carbamato de terc-butila (1,78 g, 4,07 mmol) em DCM (13,57 mL) foi adicionado HCl (4M em dioxano ) (4,07 mL, 16,28 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reacional foi neutralizada para pH = 7, em seguida extraída por EtOAc para fornecer o (2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila desejado (300 mg) como uma base livre. LCMS (m/z): 317,1/319,1 (MH+), 0,66 minuto. Síntese de (2-amino-2-(3-bromofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila
Figure img0163
[00577] Seguindo o esquema 78, usando 3-bromobenzaldeído, (2amino-2-(3-bromofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila foi obtido como um sal de HCl. LCMS (m/z): 315,1/317,1 (MH+), 0,66 minuto. Síntese de (2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)carbamato de (S)metila Esquema 79
Figure img0164
[00578] A uma solução de (S)-N-((S)-2-amino-1-(3-bromo-5fluorofenil)etil)-2-metilpropano-2-sulfinamida (100 mg, 0,297 mmol) em DCM (988 μl) foi adicionado TEA (124 μl, 0,890 mmol) e cloroformiato de metila (24,12 μl, 0,311 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reacional foi extraída por EtOAc e as orgânicas foram lavadas com água e salmoura, secadas sobre sulfato de sódio, filtradas, e concentradas em vácuo. O resíduo foi dissolvido em Et2O (1 mL), em seguida HCl (4M em dioxano) (148 μl, 0,593 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. Após o solvente ser decantado para fora, o resíduo sólido foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 291,2/293 (MH+), 0,49 minuto. (2-amino-2-(3-bromofenil)etil)carbamato de (S)-metila
Figure img0165
[00579] Seguindo o esquema 79, usando (S)-N-((S)-2-amino-1-(3bromofenil)etil)-2-metilpropano-2-sulfinamida, (2-amino-2-(3bromofenil)etil)carbamato de (S)-metila foi obtido. LCMS (m/z): 273,0/275,0 (MH+), 0,46 minuto. (2-amino-2-(3-clorofenil)etil)carbamato de (S)-metila
Figure img0166
[00580] Seguindo o esquema 79, usando (S)-N-((S)-2-amino-1-(3clorofenil)etil)-2-metilpropano-2-sulfinamida, (2-amino-2-(3clorofenil)etil)carbamato de (S)-metila foi obtido. LCMS (m/z): 229,2 (MH+), 0,42 minuto. Síntese de (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)acetamida Esquema 80
Figure img0167
[00581] (S)-N-((S)-2-amino-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2metilpropano-2-sulfinamida (100 mg, 0,297 mmol) foi dissolvido em DCM (988 μl), seguido por piridina (71,9 μl, 0,890 mmol) e anidrido acético (28,0 μl, 0,297 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora, extraída por EtOAc, lavada com água e salmoura, secada sobre Na2SO4 e concentrada. O resíduo foi dissolvido em Et2O (1 mL), em seguida HCl (4 M em dioxano) (148 μl, 0,593 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. Após o solvente foi decantado para fora, o resíduo sólido foi usado na etapa de reação seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 275,1/277,1 (MH+), 0,41 minuto. Síntese de (S)-N-(2-amino-2-(3-bromofenil)etil)acetamida
Figure img0168
[00582] Seguindo o esquema 80, usando (S)-N-((S)-2-amino-1-(3bromofenil)etil)-2-metilpropano-2-sulfinamida, (S)-N-(2-amino-2-(3bromofenil)etil)acetamida foi obtida. LCMS (m/z): 257,1/259,1 (MH+), 0,40 minuto. Exemplo 180 Síntese de (S)-N-(2-amino-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-4-(3-amino-6(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida Esquema 81
Figure img0169
Etapa 1. (2-(4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzamido)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)carbamato de (S)-tercbutila
[00583] A uma solução de ácido 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (35 mg, 0,110 mmol) em DMF (368 μl) foram adicionados (2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila (40,8 mg, 0,110 mmol), aza-HOBt (22,52 mg, 0,165 mmol), EDC (31,7 mg, 0,165 mmol), e DIEA (57,8 μl, 0,331 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas, e em seguida dividida entre EtOAc e água. A orgânica foi lavada por NaHCO3, água e salmoura, secada sobre Na2SO4 e concentrada. O (2-(4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzamido)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)carbamato de (S)-tercbutila bruto foi usado na etapa de reação seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 632,1/634,1 (MH+), 0,97 minuto. Etapa 2. (S)-N-(2-amino-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-4-(3-amino-6(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida
[00584] A uma solução de (2-(4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-bromo-5fluorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila (69 mg, 0,110 mmol) em DCM ( 1,0 mL) foi adicionado TFA (0,5 mL) e agitado em temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reacional foi concentrada até a secura, em seguida dissolvida em DMSO e submetida à HPLC preparativa. Fração pura foi combinada e liofilizada para produzir produto final como um sal de TFA. LCMS (m/z): 532,1/534,1 (MH+), 0,69 minuto; 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ ppm 7,94 7,84 (m, 2H), 7,73 (dd, J=1,4, 8,0 Hz, 1H), 7,66 (dd, J=1,4, 11,9 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,49 7,39 (m, 1H), 7,29 (d, J=9,4 Hz, 1H), 5,48 (t, J=7,2 Hz, 1H), 4,04 (dd, J=2,9, 11,5 Hz, 2H), 3,57 (dt, J=2,2, 11,6 Hz, 2H), 3,51 3,41 (m, 2H), 3,01 2,85 (m, 1H), 1,97 1,76 (m, 4H). Exemplo 181 Síntese de (S)-N-(2-amino-1-(3-cloro-5-fluorofenil)etil)-4-(3-amino-6(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida Esquema 82
Figure img0170
Etapa 1. (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2azido-1-(3-cloro-5-fluorofenil)etil)-2-fluorobenzamida
[00585] A uma solução de ácido 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (126 mg, 0,398 mmol) em DMF (1328 μl) foram adicionados (S)-2-azido-1-(3-cloro-5-fluorofenil)etanamina (100,0 mg, 0,398 mmol), DIEA (348 μl, 1,991 mmol), EDC (153 mg, 0,797 mmol), e aza-HOBt (81 mg, 0,597 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 15 horas. Após água ser adicionada, a mistura reacional foi preparada com EtOAc. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4, filtrada, e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (gradiente de EtOAc em heptano) para fornecer (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-N-(2azido-1-(3-cloro-5-fluorofenil)etil)-2-fluorobenzamida (118 mg, 58%). LCMS (m/z): 514,2 (MH+), 0,91 minuto. Etapa 2. (S)-N-(2-amino-1-(3-cloro-5-fluorofenil)etil)-4-(3-amino-6(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida
[00586] A uma solução de (S)-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4il)pirazin-2-il)-N-(2-azido-1-(3-cloro-5-fluorofenil)etil)-2-fluorobenzamida (118 mg, 0,230 mmol) em piridina (2 mL) foram adicionados NH4OH (200 μl) e trimetilfosfina (344 μl, 0,344 mmol) sequencialmente em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada durante 2 horas. Após EtOH (1 mL) ser adicionado, a mistura reacional foi concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (20 % de MeOH em DCM contendo 0,5% de NH3 / DCM) para fornecer 89,6 mg de (S)-N-(2-amino-1-(3-cloro-5-fluorofenil)etil)-4-(3-amino-6(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida (79%). LCMS (m/z): 488,2 (MH+), 0,66 minuto. 1H RMN (500MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,98 7,89 (m, 1H), 7,89 7,79 (m, 1H), 7,74 (td, J=1,4, 8,0 Hz, 1H), 7,69 7,61 (m, 1H), 7,41 7,28 (m, 1H), 7,27 7,08 (m, 2H), 5,27 5,12 (m, 1H), 4,07 (dd, J=3,8, 11,0 Hz, 2H), 3,69 3,52 (m, 2H), 3,14 3,03 (m, 2H), 2,96 (tt, J=3,9, 11,7 Hz, 1H), 2,02 1,77 (m, 4H). Síntese de (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2nitrobenzenossulfonamida Esquema 83
Figure img0171
Etapa 1. N-((S)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((S)-1,1-dimetiletilsulfinamido)etil)2-nitrobenzenossulfonamida
[00587] (S)-N-((S)-2-amino-1-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2metilpropano-2-sulfinamida (3,3 g, 9,78 mmol) foi dissolvido em DCM (32,6 mL) a 0 °C, em seguida TEA (1,405 mL, 10,08 mmol), e cloreto de 2-nitrobenzeno-1-sulfonila (2,169 g, 9,78 mmol) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura reacional foi concentrada em vácuo e o produto bruto foi purificado para produzir N-((S)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((S)-1,1dimetiletilsulfinamido)etil)-2-nitrobenzenossulfonamida. LCMS (m/z): 522,1/524,1 (MH+), 0,94 minuto. Etapa 2(S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2nitrobenzenossulfonamida
[00588] N-((S)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((R)-1,1dimetiletilsulfinamido)etil)-2-nitrobenzenossulfonamida (3,55 g, 6,80 mmol) em Et2O (22,65 mL), e HCl (4 M em dioxano) (3,40 mL, 13,59 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reacional foi neutralizada por solução de Na2CO3 e extraída por EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, secada, filtrada, e concentrada em vácuo fornecendo a (S)N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2-nitrobenzenossulfonamida bruta, que foi usada na etapa de reação seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 418,2/420,2 (MH+), 0,62 minuto. Etapa 3. (1 -(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(2-nitrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)-terc-butila
[00589] (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-2nitrobenzenossulfonamida (1,55 g, 3,71 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (12,35 mL), e em seguida TEA (0,517 mL, 3,71 mmol) e bocanidrido (1,119 mL, 4,82 mmol) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora, e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida para produzir (1(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(2-nitrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)terc-butila. LCMS (m/z): 462,0/464,0 (MH+-56), 0,99 minuto. Etapa 4. (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido) etil)carbamato de (S)-terc-butila
[00590] (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(2nitrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)-terc-butila (2,3 g, 4,44 mmol) foi dissolvido em DMF (14,79 mL). K2CO3 (1,226 g, 8,87 mmol) e MeI (0,416 mL, 6,66 mmol) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas, e em seguida água foi adicionada. A mistura reacional foi extraída por EtOAc. A orgânica foi lavada com água e salmoura, secada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash para produzir (1-(3bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)-terc-butila (2,3 g, 4,32 mmol, 97 % de rendimento). Etapa 5. (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2nitrobenzenossulfonamida
[00591] (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2nitrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)-terc-butila (2,3 g, 4,32 mmol, 97 % de rendimento) foi dissolvido em CH2Cl2 e HCl (4 M em dioxano, 4,44 mL, 17,75 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Heptano foi adicionado. O sólido foi filtrado, e secado por ar para produzir (S)-N-(2amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2nitrobenzenossulfonamida (1,8 g, 3,84 mmol, 87 % de rendimento). LCMS (m/z): 432,2/434,1 (MH+), 0,69 minuto.
[00592] Sal de cloridrato de (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5fluorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzenossulfonamida foi reparado como segue: /OH ^.OH ■■ F (Boc)20fTEA/DCM : F SOCI2/Py/CH3CN θ^N^X/^F NalO4 / RuCI3.H2O θd^'N-∑/j^/F θ∑ * B°FHN^T “ " Boc' Y jT CH3CN * Boc' YY < E w* E . _ PaE E step 2 E step 3 E StePl Zr'' ' μ Br BocHNDCM; TA 60% de rendimento, 3 etapas Etapa 5
Figure img0172
[00593] Etapa 1: (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (S)-terc-butila.
[00594] A uma solução resfriada com água gelada de (S)-2-amino2-(3-bromo-5-fluorofenil)etanol (30 g, 111 mmol) (HCl salt) em DCM (390 mL) foi adicionado TEA (46,5 mL, 333 mmol) seguido por bocanidrido (26,4 mL, 114 mmol in 50 mL de DCM). A adição foi completada em 15 minutos. O banho de água gelada foi removido e a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura reacional foi concentrada, (a temperatura de banho de água foi mantida abaixo de 300C), o resíduo foi diluído com 500 mL de EtOAc, lavado com 100 mL de NaOH a 1N, 100 mL de água e 100 mL de salmoura, secado sobre Na2SO4, filtrado e concentrado para fornecer o produto bruto como um líquido viscoso, (em escalas menores, foi semissólido). A este produto viscoso (ou semissólido) foram adicionados 120 mL de Et2O e a mistura resultante foi em seguida sonicada durante 5 minutos. A mistura foi concentrada a cerca de 60 mL de volume total. Após 1 hora em temperatura ambiente, um sólido cristalino branco precipitou-se. (se nenhum cristal se formar, ~ 2 mg da semente foi adicionado). Após 4 horas, o sólido branco foi filtrado, lavado com uma quantidade mínima de éter e secado (sobre câmara de vácuo durante pelo menos 1 hora) para fornecer um total de 30,5 g do sólido branco como o produto desejado. A recuperação seria melhorada se o produto fosse concentrado e o procedimento acima foi repetido. (1-(3bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (S)-terc-butila: 30,5 g, 82 % de rendimento. LC-MS: ( MW-56): 279,8 m/z em 0,84 minuto. 1H RMN (400 MHz, DMSO) ppm 1,29 1,43 (m, 8 H) 3,38 3,55 (m, 2 H) 4,39 4,61 (m, 1 H) 4,84 (t, J=5,67 Hz, 1 H) 7,15 (d, J=9,39 Hz, 1 H) 7,24 7,44 (m, 3 H).
[00595] Etapa 2: 2-óxido de 4-(3-bromo-5-fluorofenil)-1,2,3oxatiazolidina-3-carboxilato de (4S)-terc-butila. A uma solução de SOCl2 (19,98 mL, 274 mmol) em acetonitrila (280 ml) a -40 a 45°C (temperatura interna, temperatura de banho gelo seco-acetona em torno de -55C) sob atmosfera de nitrogênio foi adicionado (1-(3-bromo-5fluorofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (S)-terc-butila (30,5 g, 91 mmol) em CH3CN (175 ml). A adição foi completada em cerca de 30 minutos. Após cerca de 20 minutos agitando a -40 a 45°C, piridina (40,6 mL, 502 mmol) foi adicionada (em cerca de 10 minutos). Após agitar durante 10 minutos a -40°C, o banho de resfriamento foi removido, a mistura foi aquecida para para temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. LC-MS mostrou dois produtos diastereométricos, e alguma quantidade de subproduto de dímero. A mistura foi diluída com 400 mL de EtOAc, lavada com salmoura (200 ml) três vezes, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada (banho de água em torno de 400C, cerca de 2 horas) para fornecer 35,7 gramas do produto bruto como um líquido viscoso amarelo claro, que foi usado imediatamente na etapa seguinte ou armazenado a 4oC. 2-óxido de 4-(3-bromo-5-fluorofenil)1,2,3-oxatiazolidina-3-carboxilato de (4S)-terc-butila: LC-MS: (MW100): 281,8 em 1,02 minuto.
[00596] Etapa 3: 2,2-dióxido de 4-(3-bromo-5-fluorofenil)-1,2,3oxatiazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila. A uma solução resfriada com água gelada de 2-óxido de 4-(3-bromo-5-fluorofenil)-1,2,3oxatiazolidina-3-carboxilato de (4S)-terc-butila (34,6 g, 91 mmol) em acetonitrila (420 mL) sob agitação foram adicionados NaIO4 (29,2 g, 137 mmol), e hidrato de tricloreto de rutênio (0,359 g, 1,729 mmol), seguido por água (320 ml). A mistura reacional foi agitada a 0°C durante 2 horas. A mistura foi diluída com EtOAc (500 ml), lavada com salmoura (200 ml) duas vezes, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer o produto bruto, que foi usado diretamente na etapa seguinte. 40,3 gramas do produto bruto foi obtido. LC-MS: (MW + Na): 419,9 m/z em 1,01 minuto.
[00597] Etapa 4: (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2nitrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)-terc-butila. A uma solução de N-metil-2-nitrobenzenossulfonamida (18,69 g, 86 mmol) em acetonitrila (400 ml) em temperatura ambiente foi adicionado KOH (10,21 g, 182 mmol, forma em pó, comercial). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante cerca de 15 minutos antes de 2,2dióxido de 4-(3-bromo-5-fluorofenil)-1,2,3-oxatiazolidina-3-carboxilato de (S)-terc-butila (36,1 g, 91 mmol) em 180 mL de CH3CN ser adicionado (a adição foi acabada em 15 a 20 minutos). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 1 a 2 horas. A mistura reacional foi concentrada a cerca de 200 mL de volume total. Ao resíduo foram adicionados 600 mL de EtOAc, seguido por lavagem com 180 mL de 3N HCl, 200 mL de NaOH a 1N, e salmoura (200 ml), duas vezes. A solução foi secada por Na2SO4, filtrada através de um funil de filtro com celita (~30 g) e sílica-gel ( 20 g). A solução filtrada foi concentrada para fornecer 40,3 gramas do produto como um líquido viscoso, que foi usado na etapa seguinte diretamente. (1-(3-bromo-5fluorofenil)-2-(N-metil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)terc-butila: LC-MS: (MW + Na): 555,8 m/z em 1,07 minuto. (40,3 g, 76 mmol, 83 % de rendimento).
[00598] Etapa 5:sal de cloridrato de (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5fluorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzenossulfonamida. A uma solução de (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2nitrofenilsulfonamido)etil)carbamato de (S)-terc-butila (40 g, 75 mmol) em DCM ( 420 ml) em temperatura ambiente foi adicionado HCl (4M em dioxano, 150 ml, 601 mmol). A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 4 horas, tempo durante o qual um precipitadosólido branco. A mistura reacional foi filtrada, o sólido branco foi lavado com DCM ( 50ml x2), e secado a vácuo para fornecer 23,8 gramas do produto desejado como um solido branco. (sal de HCl). (S)N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-metil-2nitrobenzenossulfonamida (23,8 g, 68 % de rendimento durante quatro etapas). LC-MS: ( M+1): 433,9 m/z em 0,66 minuto. 1H RMN (400 MHz, <dmso>) ppm 2,86 (s, 3 H) 3,56 3,82 (m, 2 H) 4,61 (t, J=7,24 Hz, 1 H) 7,42 7,61 (m, 2 H) 7,68 (d, J=1,57 Hz, 1 H) 7,75 -8,05 (m, 4 H). Síntese de (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-(2-fluoroetil)2-nitrobenzenossulfonamida
Figure img0173
[00599] Seguindo as etapas 4 e 5 no esquema 83, usando 1-bromo2-fluoroetano, (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etil)-N-(2fluoroetil)-2-nitrobenzenossulfonamida foi obtido. LCMS (m/z): 464,1/466,1 (MH+), 0,71 minuto. Exemplo 182 Síntese de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida Esquema 84
Figure img0174
Etapa 1. Ácido imidodicarbônico, 4-(3-((terc-butoxicarbonil)amino)-6(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato, 1,3-bis(1,1 -dimetiletil) éster
[00600] A uma solução de 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (3 g, 7,78 mmol) em acetonitrila (130 mL) foram adicionados Boc2O (6,33 mL, 27,2 mmol) e DMAP (0,048 g, 0,389 mmol). A mistura reacional foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. Após os materiais voláteis serem removidos no vaporizador sob pressão reduzida, o produto bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 50 % de EtOAc/heptano para fornecer ácido imidodicarbônico, 4-(3-((terc-butoxicarbonil)amino)-6-(4-oxociclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato, 1,3-bis(1,1-dimetiletil) éster (4,34 g, 7,41 mmol, 95%). LCMS (m/z): 586,5 (MH+), 1,24 minuto; 1H RMN (500 MHz, CLOROFORM-d) δ ppm 8,52 8,41 (m, 1H), 7,97 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,61 7,44 (m, 2H), 3,46 3,30 (m, 1H), 2,68 2,52 (m, 4H), 2,38 (dd, J=3,0, 13,7 Hz, 2H), 2,28 2,10 (m, 2H), 1,69 1,61 (m, 9H), 1,42 1,29 (m, 18H). Etapa 2. Ácido imidodicarbônico, 4-(3-((terc-butoxicarbonil)amino)-6(4-((trietilsilil)óxi)ciclo-hex-3-en-1-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato, 1,3bis(1,1-dimetiletil) éster
[00601] A uma solução de ácido imidodicarbônico, 4-(3-((tercbutoxicarbonil)amino)-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato, 1,3-bis(1,1-dimetiletil) éster (12,1 g, 20,66 mmol) em THF (68,9 mL) foi lentamente adicionado LiHMDS (1 M em THF) (22,73 mL, 22,73 mmol) a -78 °C. Após agitar durante 30 minutos, trietilclorosilano (3,67 mL, 21,69 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi aquecida para temperatura ambiente e agitada durante 1 hora. Solução de bicarbonato de sódio saturado foi adicionado, e a mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi bem lavada com água e salmoura, secada sobre NaHCO3 anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 5% de EtOAc/heptano para fornecer ácido imidodicarbônico, 4-(3-((tercbutoxicarbonil)amino)-6-(4-((trietilsilil)óxi)ciclo-hex-3-en-1-il)pirazin-2il)-2-fluorobenzoato, 1,3-bis(1,1-dimetiletil) éster (12,1 g, 17,29 mmol). LCMS (m/z, método não-polar neutro): 701,8 (MH+), 1,14 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8,41 (s, 1H), 8,00 7,88 (m, 1H), 7,57 7,46 (m, 2H), 4,97 (br, s., 1H), 3,16 3,00 (m, 1H), 2,49 2,38 (m, 2H), 2,38 2,23 (m, 1H), 2,19 1,94 (m, 3H), 1,61 (s, 9H), 1,33 (s, 18H), 1,06 0,94 (m, 8H), 0,77 0,64 (m, 6H). Etapa 3. Ácido imidodicarbônico, 4-(3-((terc-butoxicarbonil)amino)-6(3-fluoro-4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato, 1,3-bis(1,1dimetiletil) éster
[00602] A uma solução de ácido imidodicarbônico, 4-(3-((tercbutoxicarbonil)amino)-6-(4-((trietilsilil)óxi)ciclo-hex-3-en-1-il)pirazin-2il)-2-fluorobenzoato, 1,3-bis(1,1-dimetiletil) éster (12,1 g, 17,29 mmol) em acetonitrila (57,6 mL) foi adicionado Selectfluor® (7,96 g, 22,47 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi aquecida para temperatura ambiente e agitada durante a noite. Depois de extinguida com solução de NaHCO3 saturada, a mistura reacional foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentradas em vácuo para fornecer ácido imidodicarbônico, 4-(3-((terc-butoxicarbonil)amino)-6-(3-fluoro-4-oxociclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato, 1,3-bis(1,1-dimetiletil) éster (10,44 g, 17,29, 100%), que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z, método não polar neutro): 604,3 (MH+), 1,12 minuto. Etapa 4. 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-fluoro-4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de (+/-)-terc-butila
[00603] A uma solução de ácido imidodicarbônico, 4-(3-((tercbutoxicarbonil)amino)-6-(3-fluoro-4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato, 1,3-bis(1,1-dimetiletil) éster (10,44 g, 17,29 mmol) em THF (57,6 mL) foi adicionado HCl a 4 M em dioxano (130 mL, 519 mmol) em temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada durante 3 a 4 horas, a qual foi monitorada por LCMS para prevenir mais do éster de t-butila a partir da hidrolização do ácido carboxílico. A reação foi reafriada em banho de água, e neutralizada com carbonato de sódio saturado. A mistura resultante foi extraída com EtOAc três vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 100 % de EtOAc/heptano para fornecer 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-fluoro-4-oxociclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de (+/-)-terc-butila (1,9 g, 4,71 mmol, 27,2%) e 4-(3-amino-6-((1S,3S)-3-fluoro-4-oxociclo-hexil)pirazin2-il)-2-fluorobenzoato de (+/-)-terc-butila (926 mg, 2,295 mmol, 13,3%). LCMS (m/z): 404,3 (MH+), 0,84 minuto e 404,3 (MH+), 0,84 minuto respectivamente. Etapa 5. 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin2-il)-2-fluorobenzoato de (+/-)-terc-butila
[00604] A uma solução de 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-fluoro-4oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de (+/-)-terc-butila (1,9 g, 4,71 mmol) em MeOH (47,1 mL) foi adicionado NaBH4 (0,267 g, 7,06 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada durante 2 horas. Depois de extinguida com solução de NaHCO3 saturada, a mistura reacional foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 35% de EtOAc em heptano plano para fornecer 4-(3-amino-6((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de (+/-)-terc-butila (839 mg, 2,07mmol, 43,9%) e 4-(3-amino-6((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de (+/-)-terc-butila (900 mg, 2,22 mmol, 47%). LCMS (m/z): 406,3 (MH+), 0,85 min e 406,3 (MH+), 0,85 min respectivamente. Etapa 6. 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00605] 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (839 mg, 2,07mmol) foi submetido à separação quiral (coluna ChiralPak 5mic AD, 4,6x100 (mm), CO2/EtOH+0,1% DEA=70/30, SFC=5ml/min) para fornecer 4-(3amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila de enantiômero simples (TaTr= 1,61 minuto, 336 mg, 0,829 mmol, 40%) e o enantiômero menos polar (TaTr= 2,45 minutos, 43%). Etapa 7. Ácido 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico
[00606] A uma solução de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (90 mg, 0,22 mmol) em DCM (0,444 mL) foi adicionado HCl a 4 M em dioxano (3,7 mL, 14,80 mmol). A mistura reacional foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. Após os materiais voláteis serem evaporados em vácuo, a mistura reacional foi triturada com Et2O, e filtrada para fornecer ácido 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (86 mg, 0,22 mmol, 100%) como um sal de HCl, que foi usado para a etapa seguinte sem qualquer outra purificação. LCMS (m/z): 350,2 (MH+), 0,51 minuto. Etapa 8. 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00607] A uma solução de ácido 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (20 mg, 0,057 mmol) em DMF (573 μL) foi adicionado sal de HCl de (S)-2-amino-2-(3bromo-5-fluorofenil)etanol (18,59 mg, 0,069 mmol), aza-HOBt (11,69 mg, 0,086 mmol), EDC (21,95 mg, 0,115 mmol), e DIEA (30,0 μl, 0,172 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 15 horas. Água foi adicionada, e a mistura reacional foi extraída com EtOAc três vezes. As camadas orgânicas foram secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O produto bruto foi purificado por HPLC. As frações puras foram liofilizadas para fornecer 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida (12,9 mg, 0,019 mmol, 32,8%) como um sal de TFA. LCMS (m/z): 565,1/567,1 (MH+), 0,72 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,78 (s, 2H), 7,63 7,47 (m, 2H), 7,37 (s, 1H), 7,22 7,02 (m, 2H), 5,15 5,03 (m, 1H), 4,43 4,15 (m, 1H), 3,77 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,62 3,47 (m, 1H), 2,76 (br, s., 1H), 2,19 (dd, J = 3,1, 6,3 Hz, 1H), 2,02 1,92 (m, 1H), 1,89 1,66 (m, 2H), 1,56 (dd, J = 3,3, 12,3 Hz, 1H), 1,42 (br, s., 1H). A estereoquímica absoluta foi determinada com base na formação da coestrutura de raios X de 4-(3amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida. Exemplo 183 Síntese de 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida Esquema 85
Figure img0175
Etapa 1. Ácido 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico
[00608] A uma solução de 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (Esquema 84: 365 mg, 0,9 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionado HCl a 4 M em dioxano (8 mL, 32,0 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 3 dias em temperatura ambiente. Após os materiais voláteis serem evaporados em vácuo para produzir ácido 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico, que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 350,3 (MH+), 0,48 minuto. Etapa 2. 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00609] A uma solução de ácido 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (20 mg, 0,057 mmol) em DMF (573 μL) foi adicionado sal de HCl de (S)-2-amino-2-(3bromo-5-fluorofenil)etanol (18,59 mg, 0,069 mmol), aza-HOBt (11,69 mg, 0,086 mmol), EDC (21,95 mg, 0,115 mmol), e DIEA (30,0 μl, 0,172 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 15 horas. Água foi adicionada, e a mistura reacional foi extraída com EtOAc três vezes. As camadas orgânicas foram secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O produto bruto foi purificado por HPLC. As frações puras foram liofilizadas para fornecer 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida (16,1 mg, 0,023 mmol, 41 %) como um sal de TFA. LCMS (m/z): 565,1/567,1 (MH+), 0,72 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,86 7,69 (m, 2H), 7,65 7,47 (m, 2H), 7,40 7,30 (m, 1H), 7,22 7,06 (m, 2H), 5,08 (t, J=5,7 Hz, 1H), 4,41 4,14 (m, 1H), 3,85 3,67 (m, 2H), 3,63 3,48 (m, 1H), 2,74 (t, J=11,5 Hz, 1H), 2,17 (td, J=3,1, 6,3 Hz, 1H), 2,04 1,89 (m, 1H), 1,84 1,66 (m, 2H), 1,65 1,30 (m, 2H). A estereoquímica absoluta foi determinada com base na formação da coestrutura de raios X em ERK2 de 4-(3amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida. Exemplo 184 Síntese de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2fluorobenzamida Esquema 86
Figure img0176
Etapa 1. 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamida
[00610] A uma solução de ácido 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (156 mg, 0,403 mmol) em DMF (1,28 mL) foram adicionados (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5fluorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzenossulfonamida (180 mg, 0,384 mmol), HOAt (105 mg, 0,768 mmol), DIEA (402 μl, 2,8 mmol), e EDC.HCl (147 mg, 0,768 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 15 horas, LCMS indicou o produto. A mistura foi diluída com EtOAc e lavada com água e uma vez com Na2CO3 saturado e a camada orgânica foi secada (sulfato de magnésio), filtrada e concentrada em vácuo fornecendo 4-(3-amino-6((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna ISCO (0 a 100 % de EtOAc em heptano) levando a 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(N-metil-2nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamida (99%). Etapa 2. 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2fluorobenzamida
[00611] A uma solução de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(Nmetil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamida (293 mg, 0,38 mmol) em DMF (3,8 mL) foi adicionado K2CO3 (371 mg, 2,69 mmol) e ácido 4-mercaptobenzoico (207 mg, 1,34 mmol). A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas a 45 °C durante 55 minutos.Após a reação, água foi adicionada, e a mistura foi extraída com EtOAc três vezes. As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas com água três vezes. A camada orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio, filtrada, e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado com cromatografia rápida eluindo com EtOAc (contendo 20 % de MeOH e 0,5 % de amônia em água)/DCM para fornecer 150 mg de 4(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida. LCMS (m/z): 578, 580 (MH+), 0,64 minuto. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,80 (s, 1H), 7,76 7,68 (m, 1H), 7,59 (dd, J=1,6, 7,8 Hz, 1H), 7,53 (dd, J=1,2, 11,7 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,18 (d, J=8,2 Hz, 1H), 7,11 (d, J=9,4 Hz, 1H), 5,27 5,10 (m, 1H), 4,42 4,13 (m, 1H), 3,65 3,49 (m, 1H), 2,97 2,88 (m, 1H), 2,87 2,79 (m, 1H), 2,74 (t, J=11,7 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,22 2,11 (m, 1H), 2,04 1,92 (m, 1H), 1,85 1,68 (m, 2H), 1,55 (dq, J=3,1, 12,9 Hz, 1H), 1,46 1,33 (m, 1H).
[00612] Alternativamente, 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida pode ser sintetizado como segue: 4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexanocarboxilatode (1R, 3 S, 4 S )-etila COOEt COOEt TBSCI jf F OH OTBS
Figure img0177
[00613] A um frasco de 500 mL foi adicionado 3-fluoro-4hidroxiciclo-hexano-carboxilato de (1R,3S,4S)-etila (17 g, 89,3 mmol, 97,9% de excesso enantiomérico), TBSCl (17,5 g, 116,1 mmol) e DCM (200 mL). Imidazol (12,1 g, 178 mmol) foi adicionado à solução clara resultante e a mistura reacional foi agitada durante 16 horas. Água (100 mL) foi adicionada e a mistura foi agitada durante mais 10 minutos. As fases foram separadas e a camada orgânica foi lavada com água (100 mL) e concentradas sob pressão reduzida (40±5 °C, 50 ~ 250 mbar). Purificação por cromatografia rápida em sílica eluindo com uma mistura de heptano e acetato de etila (100:1) forneceu 4-((tercbutildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexanocarboxilato de (1R,3S,4S)-etila como um óleo incolor (20,6 g, produção 75,7%). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): 4,38 ~ 4,52 (m, 1 H), 4,03 ~ 4,08 (dd, J = 1 2 Hz, J = 8 Hz, 2 H), 3,77 ~ 3,81( m, 1 H), 2,54 ~ 2,60 (m, 1 H), 1,93 ~ 2,06 (m, 1 H), 1,58 ~ 1,86 (m, 4 H), 1,46~1,50 (m, 1 H), 1,17 ~ 1,20 (t, J = 12 Hz, J = 6 Hz, 3 H), 0,85 (s, 9 H), 0,03 ~ 0,04 (d, J = 4 Hz, 8 H), [M+H]+ = 305,1 por meio de GC-MS (Instrumento: Agilent Technologies, GC 6890N, MS 5975C. GC condições: Coluna : HP 5 MS, Capilar : 30,0 m x 250 μm x 0,25 μm, Parâmetros de detector: Temperatura: 350 °C, Fluxo H2:40 mL / minutos, fluxo de ar: 400 mL / minutos, Preparação (He): 40 mL / minutos. Parâmetros de injetor: Temperatura : 200 °C. Relação de separação: 100:1. Gás carreador: He, Fluxo: 2,0 mL / minutos, Modo: Fluxo constante. Parâmetros de forno: 0 minuto, 50 °C; 2,0 minutos, 50 °C; 5,33 minutos, 100 °C; 15,83 minutos, 270 °C. Volume de injeção: 1 μL, Solvente de lavagem de seringa: acetonitrila. Condições de MS: Voltagem: 70 EV, faixa de varredura: m / z = 50 ~ 550) 2-((1 S ,3 S ,4 S )-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexil)-5-(2,5dimetil-1H-pirrol-1-il)pirazina
Figure img0178
[00614] A um frasco de 1 L foram adicionados 2-bromo-5-(2,5dimetil-1H-pirrol-1-il)pirazina (23 g, 67 mmol), 4-((tercbutildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexanocarboxilato de (1R,3S,4S)-etila (28 g, 83 mmol), {[P(t-Bu)3]PdBr}2 (800 mg, 1 mmol) seguido por tolueno (250 mL). A mistura reacional foi desgaseificada três vezes purgando com nitrogênio e em seguida resfriada para -35±5°C. À mistura reacional foi adicionado NaHMDS (47 mL, 2 M em THF, 94 mmol), gota a gota. A temperatura foi aumentada para temperatura ambiente durante um período de uma hora e agitada durante mais 30 minutos. A mistura reacional foi extinguida com cloreto de amônio aquoso a 8% (200 mL), as fases separadas, e a camada aquosa extraídas com heptano (300 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura a 10 % (400 mL), concentrada sob pressão reduzida (45±5 °C, 50 ~ 100 mbar) para fornecer 48 g de 4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-1-(5-(2,5dimetil-1H-pirrol-1-il)pirazin-2-il)-3-fluorociclo-hexanocarboxilato de (1RS,3S,4S)-etila como uma mistura de diastereômeros 1R e 1S. Este material foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. Tempo de retenção de HPLC = 8,274 min HPLC método d: Instrumento: Agilent Technologies 1200 series. Coluna Waters Xbridge C18, 150*3,0 mm, 3 μm. Temperatura de coluna: 35 oC. Taxa de fluxo: 0,70 mL / minutos.Detecção: 210 nm/ DAD. Composição de fase móvel: A: 0,1% H3PO4 em água; B: acetonitrila. Gradiente: 0 min: 90 % de A, 10 % de B; 5 min: 100 % de B; 11 min 100 % de B. Método de LC-MS: [M+H]+ = 476,2706, 1H RMN(400MHz, DMSO-d6): 8,47 (s. 1 H), 8,43 (s, 1 H), 5,85(s, 2 H), 4,39 ~ 4,52 (m, 1 H), 4,14 (dd, J = 1 2 Hz, J = 8 Hz, 2 H), 3,59 ~ 3,66 (m, 1 H), 2,28 ~ 2,94 (m, 1H), 2,06 (s, 6 H), 1,84 ~ 1,97 (m, 3 H), 1,46 ~ 1,52 (m, 3 H), 1,14 ~ 1,17 (t, J = 1 2 Hz, J = 8 Hz, 2H), 0,81 (s, 9 H), 0,01( d, J = 4 Hz, 6 H).
[00615] A um frasco de 1 L foi adicionado 4-((tercbutildimetilsilil)óxi)-1-(5-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)pirazin-2-il)-3fluorociclo-hexanocarboxilato de (1R,3S,4S)-etila (48 g, 67 mmol), etanol (250 mL) seguido por solução de NaOH aquoso a 11% (112 g, 300 mmol). A mistura reacional foi agitada a 30±5 °C durante 16 horas, e em seguida foi extinguida com HCl aquoso a 10 % (70 mL) a pH = 6~7. Após destilação de etanol sob pressão reduzida (50±5 °C, 50 ~ 100 mbar), o pH da mistura resultante foi ajustado para entre 4 e 5 com 10 % HCl. A solução aquosa foi extraída duas vezes com IPAc (200 mL *2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura a 10 % (200 mL) e concentradas sob pressão reduzida (50±5 °C, 50 ~ 100 mbar) para fornecer 46 g de ácido (1 RS,3S,4S)-4-((tercbutildimetilsilil)óxi)-1-(5-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)pirazin-2-il)-3fluorociclo-hexanocarboxílico que foi usado para a etapa seguinte sem outras purificações. Tempo de retenção de HPLC = 7,390 min (Instrumento: Agilent Technologies 1200 series. Coluna Waters Xbridge C18, 150*3,0 mm, 3 um. Temperatura de coluna: 35 oC. Taxa de fluxo: 0,70 mL / minutos. Detecção: 210 nm/ DAD. Composição de fase móvel: A: 0,1% de H3PO4 em água; B: acetonitrila. Gradiente: 0 min: 90 % de A, 10 % de B; 5 min: 100 % de B; 11 min 100 % de B), LC-MS: [M+H]+ = 448,2415.
[00616] A um frasco de 500 mL foi adicionado ácido (1RS,3S,4S)-4((terc-butildimetilsilil)óxi)-1-(5-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)pirazin-2-il)-3fluorociclo-hexanocarboxílico (46 g), tolueno (250 mL) e HOAc (0,8 g, 13,3 mmol) sob nitrogênio. A mistura reacional foi refluxada durante 1 hora e em seguida resfriada para temperatura ambiente antes da adição de NaHCO3 aquoso a 6% (200 mL). As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com heptano (250 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com 10 % de salmoura (200 mL) e concentrada sob pressão reduzida (50±5 °C, 50 ~ 100 mbar) para fornecer um óleo. Após a adição de 80 mL de metanol ao resíduo, a mistura foi aquecida para 55±5 °C e agitada durante 1 hora. A temperatura foi resfriada para 25±5 °C durante um período de 2 horas e agitada durante mais 2 a 3 horas. A suspensão resultante foi filtrada e a massa filtrada foi secada sob pressão reduzida (50±5 °C, 50 ~ 100 mbar) durante 3 horas para fornecer 8,6 g de 2-((1S,3S,4S)-4-((tercbutildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1il)pirazina como um solido cristalino (dr > 99:1). O licor mãe foi concentrado sob pressão reduzida (50±5 °C, 50 ~ 100 mbar) para fornecer 34,5 g de (71 mmol) óleo escuro. A este resíduo foram adicionados tBuOH (200 mL), seguido por tBuOK (8,0 g, 71 mmol). A mistura reacional foi aquecida para 90±5 °C e agitada durante 3 horas. Após a temperatura foi resfriada para temperatura ambiente, NaHCO3 aquoso a 10 % (150 mL) foi adicionado seguido por heptano (200 mL) e a mistura foi agitada durante mais 10 minutos. As fases foram separadas e a camada aquosa foi lavada com heptano (200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura a 10% (150 mL) e concentradas sob pressão reduzida (50±5 °C, 50 ~ 100 mbar) para fornecer um resíduo de óleo. A este resíduo foi adicionado metanol (60 mL), e a mistura foi aquecida para 55±5 °C. Após agitar durante 1 hora, a temperatura foi resfriada para 25±5 °C durante um período de 2 horas seguido por agitação durante mais 2 horas. A suspensão foi filtrada e a massa úmida resultante foi secada sob pressão reduzida (50±5 °C, 50 ~ 100 mbar) durante 3 horas para fornecer a segunda batelada de 2-((1 S ,3 S ,4 S )-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclohexil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)pirazina como um solido cristalino (5,6 g, dr = 98:2). A produção total das 4 etapas partindo de 2-bromo5-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)pirazina é de 51,8%. pf = 100,6°C ~ 102,9 °C. LC/MS: [M+H]+ = 404,2459, 1H RMN(400MHz, DMSO-d6): 8,53 (s, 1 H), 8,50 (s, 1 H), 5,75 (s, 2 H), 4,25 ~ 4,43 (m, 1 H), 3,60 ~ 3,69 (m, 1 H), 3,25 (s, 6 H), 2,93 ~ 3,00 (m, 1 H), 2,19 ~ 2,27 (m, 1 H), 1,98 (s, 6 H), 1,72 ~ 1,90 (m, 3 H), 1,39 ~ 1,61 (m, 2 H), 0,80 (s, 9H), 0,01 (d, J = 4 Hz, 6 H)., HPLC (Instrumento: Agilent Technologies 1200 series. Coluna Waters Xbridge C18, 150*3,0 mm, 3 um. Temperatura de coluna: 35 oC. Taxa de fluxo: 0,70 mL / minutos. Detecção: 210 nm/ DAD. Composição de fase móvel: A: 0,1% H3PO4 em água; B: acetonitrila. Gradiente: 0 min: 90 % de A, 10 % de B; 5 min: 100 % de B; 11 min 100 % de B) tempo de retenção: 8,084 minutos para 2-((1S,3S,4S)-4((terc-butildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1il)pirazina, 8,324 minutos para 2-((1R,3S,4S)-4-((tercbutildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1il)pirazina. 2-bromo-5-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)pirazina
Figure img0179
[00617] A um frasco de 250 mL foram adicionados 5-bromopirazin2-amina (18 g, 10,35 mmol), hexano-2,5-diona (14,5g, 12,41 mmol) e PPTS (0,9 g, 0,36 mmol) em tolueno (60 mL). A mistura reacional foi aquecida para refluxo em uma armadilha Dean-Stark durante 16 horas. A mistura reacional foi resfriada para temperatura ambiente e em seguida concentradas sob pressão reduzida (55±5 °C, 50 ~ 100 mbar) para fornecer 2-bromo-5-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)pirazinacomo um óleo (28 g, contendo ~10 % de tolueno, produção de ensaio: 95%). Este material foi usado sem outra purificação. LC/MS: [M+H]+ = 252,0139, 1H RMN(400MHz, DMSO-d6): 8,87 (s, 1H), 8,63 (s, 1 H), 5,86 (s, 2 H), 2,10 (s, 6 H). Tempo de retenção de HPLC = 6,21 minutos, Instrumento: Agilent Technologies 1200 series. Coluna Waters Xbridge C18, 150*3,0 mm, 3 um. Temperatura de coluna: 35 oC. Taxa de fluxo: 0,70 mL / minutos. Detecção: 210 nm/ DAD. Composição de fase móvel: A: 0,1% H3PO4 em água; B: acetonitrila. Gradiente: 0 min: 90 % de A, 10 % de B; 5 minutos: 100 % de B; 11 minutos 100 % de B. 5-((1 S ,3 S ,4 S)-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexil)pirazin-2amina
Figure img0180
[00618] À suspensão agitada de 2-((1S,3S,4S)-4-((tercbutildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1il)pirazina (1250 g, 3097 mmol) em etanol (7,5 kg) foi adicionado hidroxilamina cloridrato (860,9 g, 12388,2 mmol) seguido por trietilamina (642,5 g, 6349,0 mmol). A mistura reacional foi aquecida para refluxo (77-78 °C) durante 42 horas, e em seguida resfriada para cerca de 40°C. Após destilação de 6 kg de etanol sob vácuo (<100 mbar ) a 40°C, a mistura foi resfriada para temperatura ambiente, diluída com MTBE (7,0 kg) e água (8,0 kg). Após agitar durante 10 minutos, a camadaorgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com MTBE (6,0 Kg). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas sucessivamente com 2x12 kg de água e 8 kg de 10 % de salmoura. A camada de MTBE foi concentrada sob vácuo (<100 mbar) para fornecer 1,2 kg de sólido amarelo como produto bruto. O produto bruto foi dissolvido em 2 kg de DCM e também purificado por meio de cromatografia de coluna de sílica eluindo com EtOAc e heptano (1/6, volume/volume) para recuperar 2-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-3fluorociclo-hexil)-5-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)pirazina (310 g), em seguida eluindo com EtOAc e heptano (1/3, volume/volume) para fornecer 5-((1 S ,3 S ,4 S)-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexil)pirazin2-amina (650 g, 64,5 % de rendimento) como sólido amarelo claro, pf 113-116 °C. ESI-MS (m/z): 326,1940 ([M+H]+, 100). HPLC (método A), tempo de retenção 12,26 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 7,93 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 4,50 (br. s, 2H), 4,41-4,46, 4,27-4,31 (m, 1H), 3,653,74 (m, 1H), 2,68-2,74 (m, 1H), 2,24-2,30 (m, 1H), 1,97-2,02 (m, 1H), 1,74-1,87 (m, 2H), 1,44-1,63 (m, 2H), 0,91 (s, 9H), 0,10 (d, J = 8Hz, 6H). 4-(3-amino-6-((1 S, 3 S, 4 S)-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
Figure img0181
[00619] Uma solução de 5-((1S,3S,4S)-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)3-fluorociclo-hexil)pirazin-2-amina (620,0 g, 1904,8 mmol) em DMSO (5 L) e água (400 mL) foi resfriada para ~4 °C. NBS (389,8 g, 2190,5 mmol) foi adicionado em 10 porções dentro de um período de 1 hora e a reação temperatura foi controlada sob 5°C com agitação contínua durante 30 minutos. Após adição de Na2CO3 aquoso a 0,3 M (8,5 kg), a temperatura de reação foi aumentada para 35°C. MTBE (4,5 kg) foi adicionado e a mistura foi agitada durante mais 10 minutos. Após separação de fase, a camada aquosa foi extraída com MTBE (4 kg). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas sucessivamente com Na2CO3 aquoso a 0,3 M (8,5 kg) e água (8 kg), e concentradas sob vácuo a 30 a 40°C para fornecer produto bruto 3-bromo-5-((1S,3S,4S)4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexil)pirazin-2-amina como uma espuma (770 g). Este produto bruto foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. ESI-MS (m/z): 404,1105, 406,1093 ([M+H]+, 100). HPLC (método A), tempo de retenção = 14,38 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 7,81 (s, 1H), 4,99 (br. s, 2H), 4,37-4,42, 4,25-4,30 (m, 1H), 3,66-3,72 (m, 1H), 2,67-2,73 (m, 1H), 2,26-2,29 (m, 1H), 1,972,02 (m, 1H), 1,74-1,87 (m, 2H), 1,44-1,63 (m, 2H), 0,91 (s, 9H), 0,10 (d, J = 8 Hz, 6H).
[00620] A uma solução de 3-bromo-5-((1S, 3S, 4S)-4-((tercbutildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexil)pirazin-2-amina (760,0 g, 1879,4 mmol) e 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de terc-butila (605,5 g, 1879,4 mmol) em DME (3,0 kg) foram adicionados Na2CO3 aquoso a 2,0 M (1880 mL, 3760 mmol) e Pd(dppf)ChDCM (38,4 g, 47,0 mmol). Depois de desgaseificar com N2 três vezes, a mistura reacional foi aquecida para refluxo (79-80 °C) e agitada nesta temperatura durante 3 horas. A reação temperatura foi resfriada para temperatura ambiente e MTBE (2,5 kg) foi adicionado seguido por água (4,0 kg). A mistura foi agitada durante 10 minutos antes da separação de fase, e a camada aquosa foi extraída com MTBE (1,8 kg). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (2x4 kg), e concentradas sob vácuo a 30 a 40 °C para fornecer produto bruto 4-(3-amino-6-((1S, 3S, 4S)-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-3fluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (aproximadamente 1 kg). A mistura deste produto bruto e EtOH (95%, 3,2 kg) foi aquecida para refluxo (78-80°C) durante 30 minutos para fornecer uma solução. A temperatura foi resfriada para 40°C dentro de um período de 100 minutos seguido por adição de água (800 g) dentro de um período de 30 minutos. A temperatura foi resfriada para ~5°C dentro de um período de 100 minutos e agitação nesta temperatura foi continuada durante 60 minutos. A precipitação de sólido foi filtrada e a massa filtrada foi lavada com EtOH/água (1,2 L, 5/1, volume/volume). Após secagem sob vácuo a 50°C durante 5 horas, 4-(3-amino-6-((1 S, 3 S, 4 S)-4-((terc-butildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butilafoi obtido como um pó marrom (755g, 76,4% de rendimento durante 2 etapas, pureza de ensaio é 98,8%). pf 169-172 °C. ESI-MS (m/z): 520,2739 ([M+H]+, 100). HPLC (método A) tempo de retenção 15,76 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 7,98 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,61 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 8 Hz, 1H), 4,68 (br. s, 2H), 4,42-4,48, 4,30 a 4,36 (m, 1H), 3,67-3,76 (m, 1H), 2,75-2,83 (m, 1H), 2,28-2,36 (m, 1H), 1,98-2,05 (m, 1H), 1,83-1,92 (m, 2H), 1,46-1,68 (m, 2H), 1,62 (s, 9H), 0,92 (s, 9H), 0,11 (d, J = 8 Hz, 6H). Ácido 4-(3-amino-6-((1 S ,3 S ,4 S )-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2il)-2-fluorobenzoico
Figure img0182
[00621] A uma suspensão de 4-(3-amino-6-((1S, 3S, 4S)-4-((tercbutildimetilsilil)óxi)-3-fluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (685,0 g, 1318,0 mmol) em EtOH (3,6 kg) foi adicionado HCl aquoso (36%, 400,5 g, 3954,2 mmol). A mistura reacional foi aquecida para 30°C e agitada durante 4 horas. A reação temperatura foi diminuída para 5°C e uma solução de NaOH (342,7g, 8567,5 mmol) em água (1,6 kg) foi adicionada. A mistura reacional foi aquecida para 30°C e agitada nesta temperatura durante 18 horas. O pH da mistura reacional foi ajustado para 5 usando HCl a 4 N aquoso para formar uma precipitação sólida. Após destilação de EtOH sob vácuo a 40 a 50 °C, água (2,5 kg) foi adicionada para resíduo e a temperatura foi resfriada para 5°C em um período de 1 hora. A suspensão foi filtrada, o sólido foi coletado e secado sob vácuo (<100 mbar) a 50 a 60°C durante 24 horas para fornecer ácido 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico como um pó marrom (460 g, pureza de HPLC a 230 nm foi 98,2%, produção quantitativa). Pf 226-228 °C. ESI-MS (m/z): 350,1282 ([M+H]+, 100). HPLC (método A), tempo de retenção 5,93 minutos. 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6): 13,32 (br. s, 1H), 8,00 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,70 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,24 (br. s, 2H), 5,16 (br. s, 1H), 4,44-4,49, 4,30 a 4,35 (m, 1H), 3,50 a 3,60 (m, 1H), 2,79-2,84 (m, 1H), 2,20 a 2,25 (m, 1H), 1,92-1,99 (m, 1H), 1,72-1,83 (m, 2H), 1,50 a 1,60 (m, 1H), 1,36-1,46 (m, 1H). 4-(3-amino-6-((1 S ,3 S ,4 S )-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N((S )-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida
Figure img0183
[00622] A uma solução de ácido 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (300 g, 95% de ensaio, 815,8 mmol) e cloridrato de (S)-N-(2-amino-2-(3-bromo-5fluorofenil)etil)-N-metil-2-nitrobenzenossulfonamida (397,7 g, 848,5 mmol) em DMF (2,5 kg) foram adicionados DIPEA (421,8 g, 3263,4 mmol), seguido por EDCI (312,8 g, 1631,7 mmol) e HOAt (222,1g, 1631,7 mmol). Após a mistura reacional ser agitada a 25 °C durante 18 horas, a temperatura de reação foi diminuída para 10°C antes de IPAC (3,5 kg) e água (4,0 kg) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 10 minutos e em seguida as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com IPAC (2,5 kg). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas sucessivamente com Na2CO3 aquoso a 10 % (4,5 kg) e água (2x4 kg), e em seguida concentradas sob vácuo (<100 mbar) a 40 a 45 °C para fornecer 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(Nmetil-2-nitrofenilsulfonamido)etil)-2-fluorobenzamida como uma espuma (670 g, pureza de ensaio é 93%), que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. ESI-MS (m/z): 763,1216, 765,1161 ([M+H]+, 100). Pf=115-117 oC. HPLC (método A), tempo de retenção = 10,57 minutos. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 8,11 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,99 (m, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,59-7,72 (m, 5H), 7,35 (s, 1H), 7,19 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 8 Hz, 1H), 5,46 (br. s,1H), 4,77 (br. s, 2H), 4,48-4,55, 4,35-4,42 (m, 1H), 3,93 (q, J1 = 12 Hz, J1 = 16 Hz, 1H), 3,73-3,82 (m, 1H), 3,33 (q, J1 = 4 Hz, J1 = 12 Hz, 1H), 3,00 (s, 3H), 2,78-2,85 (m, 1H), 2,31-2,37 (m, 1H), 2,12-2,20 (m, 1H), 1,84-1,96 (m, 2H), 1,60 a 1,71 (m, 1H), 1,47-1,56 (m, 1H).
[00623] A uma suspensão de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)-pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(Nmetil-2-nitrofenil-sulfonamido)etil)-2-fluorobenzamida (500 g produto bruto da etapa anterior) em DMF (2,0 kg) foi adicionado ácido 4mercaptobenzoico (161,5 g, 1047,7 mmol). A mistura reacional tornouse uma solução após 5 minutos e em seguida foi resfriada para 10°C. Após adição de LiOH^O (137,3 g, 3274,0 mmol) em uma porção, a mistura foi agitada a 25°C durante 3 horas antes da temperatura ser resfriada para 10°C. A mistura reacional foi diluída com água (3,0 kg) e extraída com IPAC (3*2,5 kg). As camadas de IPAC foram primeiro lavadas com Na2CO3 aquoso a 15% (2*3,0 kg) seguido por água (2*3,0 kg), e em seguida concentradas sob vácuo (<100 mbar) a 40 a 45 °C. Para resíduo resultante foi adicionado MeCN (1,8 kg) para fornecer uma solução clara, que foi aquecida para 50°C e agitada durante 30 minutos. A mistura foi também resfriada para 10°C em 2 horas e agitada nesta temperatura durante mais 1 hora. Após filtragem da suspensão resultante, a massa sólida foi lavada com MeCN pré-resfriado (400 g, 5 °C). A massa filtrada foi secada sob vácuo (<100 mbar) a 80°C durante 18 horas para fornecer 4-(3-amino-6-((1 S,3S,4S)-3fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-(( S )-1-(3-bromo-5-fluorofenil)2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida como um solido cristalino (245 g, produção total para 2 etapas é de 66%, HPLC pureza = 98,3%, pureza quiral = 99,0 % ). Pf 115-117°C. ESI-MS (m/z): 578,1381, 580,1381 ([M+H]+, 100). HPLC (método A), tempo de retenção = 7,24 minutos. 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6): 8,82 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,0 (s, 1H), 8,82 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,67 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,48 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,21 (br. s, 2H), 5,18 (m, 2H), 4,46-4,52, 4,32-4,37 (m, 1H), 3,52-3,60 (m, 1H), 2,80 a 2,94 (m, 3H), 2,36 (s, 3H), 2,23-2,25 (m, 1H), 1,95-1,98 (m, 1H), 1,76-1,86 (m, 3H), 1,51-1,62 (m, 1H), 1,39-1,48 (m, 1H).
[00624] A forma de base livre de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida foi preparada suspendendo-se 4(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida (200 mg) em 4 mL de nitrometano em temperatura ambiente. A suspensão foi aquecida para 55oC até a solução ficar clara. Oito ciclos de aquecimento-resfriamento foram conduzidos em uma faixa de temperatura 55oC a 5oC. O sólido foi gerado por filtragem e secado sob vácuo a 40oC durante a noite. Um padrão de difração de pó de raios X da forma de base livre foi determinado na figura 1. Um termograma de DSC/TGA da base livre de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida é fornecido na figura 2.
[00625] A forma de sal de HCl de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida foi preparada dissolvendo-se 4(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida amorfo (120 mg) em solução de etanol de HCl a 0,5 N (414 μL) com agitação em temperatura ambiente. Um precipitado é observado após 5 minutos de agitação. Um termograma de DSC/TGA da forma de sal de HCl altamente cristalina de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-(metilamino)etil)-2fluorobenzamida é fornecido na figura 4. Um padrão de difração de pó de raios X da forma de base livre foi determinado na figura 3. Os picos mais significantes no XRPD de figura 3 são mostrados na tabela: Ângulo 2-teta % de Intensidade 12,346 9,9 15,57 10,8 16,195 15,3 16,652 59,3 18,245 4,5 19,118 47,7 19,26 100 19,642 39,3 20,029 5,4 21,509 22,2 21,777 22,2 22,568 68,9 23,611 36,3 24,334 88 24,733 18,9 25,748 10,9 26,826 16 27,421 13,6 28,46 15,5 28,837 13,6 29,177 17,3 29,382 10,1 29,88 19,1 30,14 20,5 31,361 7,8 31,424 7,8 32,751 21,2 33,787 12,3 34,649 17 35,391 26,9 37,057 11,4 38,005 6,1 40,657 6,2 40,954 5,1 41,658 5,1 Ângulo 2-teta % de Intensidade 42,926 5,8 44,201 17,7
Figure img0184
Figure img0185
Exemplos 185 e 186 Síntese de 4-(3-amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida e 4-(3-amino-6-((1S,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida Esquema 87
Figure img0186
Etapa 1. 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00626] 4-(3-amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (154 mg, 0,38 mmol) foi submetido à separação quiral (Coluna ChiralPak 5mic AD, 4,6x100 (mm), CO2/IPA+0,1% de DEA=75/25, SFC=5ml/min) para fornecer enantiômero polar, 4-(3-amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (TaTr= 1,86 minuto, 63 mg, 0,155 mmol, 41%) e o enantiômero menos polar, 4-(3-amino-6((1S,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (TaTr= 2,91, 70 mg, 0,173 mmol, 46%). A estereoquímica absoluta foi designada arbitrariamente. Etapas 2 e 3. Ácido 4-(3-amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico e ácido 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico
[00627] A uma solução de cada éster (1 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionado HCl a 4 M em dioxano (30 mL). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 dias. Após os materiais voláteis serem evaporados em vácuo, a mistura reacional foi triturada com Et2O e filtrada para fornecer ácido 4-(3-amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (60 mg de 63 mg do éster) e ácido 4-(3-amino-6-((1S,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (59 mg de 70 mg do éster) como um sal de HCl respectivamente, que foi usado para a etapa seguinte sem qualquer outra purificação. LCMS (m/z): 350,2 (MH+), 0,5 min (para cada ácido). Etapa 4 e 5. 4-(3-amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida e 4-(3-amino-6-((1S,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida
[00628] A uma solução de cada ácido (20 mg, 0,057 mmol) em DMF (573 μL) foram adicionados sal de HCl de (S)-2-amino-2-(3bromo-5-fluorofenil)etanol (18,59 mg, 0,069 mmol), aza-HOBt (11,69 mg, 0,086 mmol), EDC (21,95 mg, 0,115 mmol), e DIEA (30,0 μl, 0,172 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 15 horas. Água foi adicionada, e a mistura reacional foi extraída com EtOAc três vezes. As camadas orgânicas foram secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O produto bruto foi purificado por HPLC. As frações puras foram liofilizadas para fornecer o produto desejado (11 mg, 0,016 mmol, 28%) como um sal de TFA respectivamente. Para 4-(3amino-6-((1R,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida, LCMS (m/z): 565,1/567 (MH+), 0,74 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,95 7,79 (m, 1H), 7,76 7,59 (m, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,33 7,14 (m, 2H), 5,24 5,10 (m, 1H), 4,75 4,49 (m, 1H), 4,16 (br. s., 2H), 3,96 3,77 (m, 4H), 2,80 (t, J=12,5 Hz, 2H), 2,25 (dq, J=7,6, 11,9 Hz, 2H), 2,08 1,78 (m, 7H), 1,76 1,55 (m, 4H). For 4-(3-amino-6-((1S,3S,4R)-3fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida, LCMS (m/z): 565,1/567,1 (MH+), 0,74 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,84 7,70 (m, 2H), 7,66 7,49 (m, 2H), 7,37 (s, 1H), 7,24 7,05 (m, 2H), 5,09 (d, J=5,5 Hz, 1H), 4,66 4,41 (m, 1H), 4,07 (br. s., 1H), 3,88 3,65 (m, 2H), 2,71 (t, J=12,9 Hz, 1H), 2,16 (dq, J=7,4, 12,0 Hz, 1H), 1,99 1,70 (m, 3H), 1,66 1,47 (m, 2H). A estereoquímica absoluta foi não foi determinada ainda. Exemplos 187 e 188 Síntese de 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida e 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida Esquema 88
Figure img0187
Etapa 1. 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin2-il)-2-fluorobenzoato de (+/-)-terc-butila
[00629] A uma solução de 4-(3-amino-6-((1R,3S)-3-fluoro-4oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de (+/-)-terc-butila (208 mg, 0,516 mmol) em MeOH (3,017 mL) foi adicionado NaBH4 (29,3 mg, 0,773 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada durante 2 horas. LCMS mostrou relação de ~4:1 de dois diastereômeros. Depois de extinguida com solução de NaHCO3, a mistura reacional foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada em vácuo. O maior diastereômero foi separado por HPLC preparativa neutra. Após liofilização, 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de (+/-)-terc-butila foi obtido em 35,8% de rendimento. (74,9 mg). LCMS (m/z): 406,3 (MH+), 0,80 minuto. A estereoquímica relativa de 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de (+/-)-terc-butila foi confirmada por RMN. Etapa 2. 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila e 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00630] 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de (+/-)-terc-butila (74,9 mg, 0,185 mmol) foi submetido à SFC quiral (Coluna ChiralPak 5mic AD, 4,6x100 (mm), CO2/EtOH+0,1%, DEA=80/20, SFC=5mL/min) para fornecer enantiômero polar, 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (TaTr= 1,95 minuto, 33 mg, 44 %) e o enantiômero menos polar, 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (TaTr= 3,17, 35 mg, 46%). A estereoquímica absoluta foi designada arbitrariamente. Etapas 3 e 4. Ácido 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico e ácido 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico
[00631] A uma solução de cada éster (1 mmol) foi adicionado HCl a 4 M em dioxano (111 mL). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 dias. Após os materiais voláteis serem evaporados em vácuo, a mistura reacional foi triturada com Et2O e filtrada para fornecer ácido 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (31 mg de 33 mg do éster), LCMS (m/z): 350,2 (MH+), 0,47 minuto, e ácido 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (33 mg de 35 mg do éster), LCMS (m/z): 350,2 (MH+), 0,48 minuto, como um sal de HCl respectivamente, que foi usado para a etapa seguinte sem qualquer outra purificação. Etapas 5 e 6. 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida e 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida
[00632] Seguindo a etapa 8 no esquema 85, usando ácido 4-(3amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico, 4-(3-amino-6-((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida foi obtido. LCMS (m/z): 565,0/567,1 (MH+), 0,71 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 7,93 7,78 (m, 2H), 7,73 7,55 (m, 2H), 7,46 (s, 1H), 7,33 7,13 (m, 2H), 5,17 (t, J=5,9 Hz, 1H), 3,95 3,78 (m, 2H), 3,75 3,42 (m, 1H), 3,09 2,93 (m, 1H), 2,32 2,14 (m, 1H), 2,05 1,79 (m, 5H), 1,80 1,59 (m, 1H). Usando ácido 4-(3amino-6-((1S,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico, 4-(3-amino-6-((1S,3R,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida foi obtido. LCMS (m/z): 565,0/567,1 (MH+), 0,71 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 7,95 7,80 (m, 2H), 7,75 7,56 (m, 2H), 7,46 (s, 1H), 7,33 7,12 (m, 2H), 5,17 (t, J=5,9 Hz, 1H), 3,96 3,78 (m, 2H), 3,76 3,55 (m, 1H), 3,10 2,95 (m, 1H), 2,31 2,12 (m, 1H), 2,08 1,82 (m, 5H), 1,79 1,62 (m, 1H). Exemplo 189 Síntese de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2hidroxietil)benzamida Esquema 89
Figure img0188
Etapa 1. (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etanol cloridrato
[00633] (1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (S)-tercbutila (2,507 g, 6,58 mmol) foi dissolvido em DCM (60 mL) e tratado com HCl a 4 N em dioxano (4,93 mL, 19,73 mmol). A mistura foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. Após a maior parte do solvente ser cuidadosamente evaporada em vácuo, a suspensão foi triturada com Et2O para fornecer 1,525 g de um sal de HCl branco fino de (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etanol (72%), que foi isolado por filtragem por sucção. LCMS (m/z): 282,4 (MH+), 0,46 minuto. Etapa 2. 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2-hidroxietil)benzamida
[00634] A uma solução de ácido 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (16 mg, 0,046 mmol) em DMF (0,46 mL) foram adicionados (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5iodofenil)etanol cloridrato (17,5 mg, 0,055 mmol), HOAt (9,35 mg, 0,069 mmol), EDC (17,6 mg, 0,092 mmol), e DIEA (24 μl, 0,137 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 15 horas. Após água ser adicionada, a mistura reacional foi extraída com EtOAc e a camada orgânica foi lavada com água duas vezes. A camada orgânica foi separada e secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 100 % de EtOAc/heptano para fornecer produto bruto, que foi triturado com 70 % de DCM/éter para fornecer 9,3 mg de 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5iodofenil)-2-hidroxietil)benzamida como um sal de TFA (28%). LCMS (m/z): 613,1 (MH+), 0,74 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 7,93 7,78 (m, 2H), 7,76 7,57 (m, 3H), 7,73 7,56 (m, 3H), 7,43 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,21 (d, J=9,4 Hz, 1H), 5,15 (t, J=5,9 Hz, 1H), 4,37 (m, 1H), 3,83 (m, 2H), 3,63 (m, 1H), 2,84 (t, J=11,7 Hz, 1H), 2,27 (dd, J=2,9, 9,2 Hz, 1H), 2,14 1,98 (m, 1H), 1,96 1,75 (m, 2H), 1,65 (dq, J=3,3, 13,0 Hz, 1H), 1,56 1,34 (m, 1H). Síntese de fosfato de di-hidrogênio de (S)-2-(4-(3-amino-6((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etila OH SÍÊBl f H2N F Fmoc-Chloride L H THF, Water, Sodium bicarbonate I 73% 1 94% ield
Figure img0189
Etapa 1. (1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (S)-(9Hfluoren-9-il)metila:
[00635] Ao (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etanol (4500 mg, 14,17 mmol) foram adicionados THF (Volume: 40 mL, Relação: 2,67) e água (Volume: 15 mL, Relação: 1,000), seguido por NaHCO3 (4762 mg, 56,7 mmol). A mistura foi agitada durante 2 minutos em seguida resfriado para 0°C em um banho de gelo. À reação foi adicionado carbocloridato de (9H-fluoren-9-il)metila (5499 mg, 21,26 mmol) e a reação foi agitada a 0 °C durante 30 minutos, deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante mais 60 minutos, antes de conduzir LCMS. Acetato de etila foi adicionado à mistura reacional crua. A mistura foi lavada com água (2x), solução de sal saturado, secado sulfato de sódio, filtrado e concentradas para resíduo. O produto bruto foi purificado por cromatografia de sílica-gel usando uma coluna de 300 g (carga sólida) eluindo de 0 a 60 % de acetato de etila em heptano. As frações desejadas foram concentradas para massa constante para fornecer como sólido branco 5375 mg do produto desejado como base livre usado no estado em que se encontra, (73% de rendimento). LCMS (m/z): 504,1 (MH+), 1,05 minuto. 1H RMN (<cd3od>) d: 7,78 (d, J=7,4 Hz, 2H), 7,64 (d, J=7,2 Hz, 2H), 7,53 (s, 1H), 7,33-7,43 (m, 3H), 7,25-7,33 (m, 2H), 7,07 (d, J=9,2 Hz, 1H), 4,64 (t, J=5,9 Hz, 1H), 4,314,46 (m, 2H), 4,21 (t, J=6,3 Hz, 1H), 3,66 (d, J=3,1 Hz, 2H). Etapa 2. (2-((di-terc-butoxifosforil)óxi)-1 -(3-fluoro-5-iodofenil)etil)carbamato de (S)-(9H-fluoren-9-il)metila:
[00636] Ao (1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2-hidroxietil)carbamato de (S)(9H-fluoren-9-il)metila (5260 mg, 10,45 mmol) foiram adicionados imidazol (818 mg, 12,02 mmol), imidazol HCl (1857 mg, 17,77 mmol), e DMF (Volume: 50 mL). A reação foi agitada para dissolver sob argônio durante 2 a 3 minutos. Em seguida diisopropilfosforamidita de di-tercbutita (4928 mg, 17,77 mmol) foi adicionado gota a gota durante 2 a 3 minutos e agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. A reação foi seguida por LCMS neutra e por TLC eluindo com 1:1 acetato de etila/heptano. A reação crua foi colocada em um banho de água, peróxido de hidrogênio 30 % (5,34 mL, 52,3 mmol) foi adicionado lentamente, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos, seguido por LCMS. A reação crua foi colocada em um banho de gelo e excesso de tiossulfato de sódio saturado foi adicionado (cuidadosamente) gota a gota durante 5 a 10 minutos. À mistura reacional crua foram adicionados 800 mL de acetato de etila lavada com água (3x), solução de sal saturado, secada sulfato de sódio, filtrada e concentrada para resíduo. O bruto foi purificado por cromatografia de sílica-gel usando coluna de 300 g eluindo de 0 a 55% de acetato de etila em heptano. O pico desejado foi concentrada para massa constante para fornecer 6560 mg do produto desejado como base livre usada no estado em que se encontra, (86% de rendimento). LCMS (m/z): 696,3 (MH+) fraca, 1,25 minuto. Observação: fragmento -112 em 584,2 é o íon principal em LCMS como esperado da perda de dois grupos de proteção de t-butila. 1H RMN (<cd3od>) d: 7,79 (d, J=7,3 Hz, 2H), 7,64 (d, J=7,3 Hz, 2H), 7,58 (s, 1H), 7,45 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,34-7,42 (m, 2H), 7,22-7,32 (m, 2H), 7,12 (d, J=9,1 Hz, 1H), 4,90 (t, J=6,0 Hz, 1H), 4,41-4,48 (m, 1H), 4,31-4,40 (m, 1H), 4,21 (t, J=6,6 Hz, 1H), 4,08 (t, J=6,3 Hz, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,40 (s, 9H). Etapa 3. di-terc-butil fosfato de (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etila:
[00637] Ao (2-((di-terc-butoxifosforil)óxi)-1-(3-fluoro-5iodofenil)etil)carbamato de (S)-(9H-fluoren-9-il)metila (6450 mg, 9,27 mmol) foi adicionado DMF (Volume: 90 mL) seguido por piperidina (25 mL, 253 mmol) e agitado em temperatura ambiente durante 30 minutos, seguido por LCMS. À mistura reacional crua foram adicionados 750 ml de acetato de etila, lavada com bicarbonato de sódio saturado (2x), água (5x), solução de sal saturado, secada sulfato de sódio, e filtrada. O solvente foi concentrado para massa constante sob vácuo elevado para fornecer o produto desejado bruto que inclui impureza de piperidina de FMOC piperidina, usada no estado em que se encontra. LCMS (m/z): 474,2 (MH+), 0,80 minuto. Etapa 4. di-terc-butil fosfato de (S)-2-(4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5iodofenil)etila:
[00638] A uma solução de ácido 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (3927 mg, 9,3 mmol) em NMP (Volume: 60 mL) foram adicionados di-terc-butil fosfato de (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etila (4740 mg, 9,30 mmol), DIEA (9,75 mL, 55,8 mmol), e em seguida HATU (5304 mg, 13,95 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas seguido por LCMS. À reação crua foram adicionados 850 mL de acetato de etila, lavada com bicarbonato saturado (2x), água (3x), solução de sal saturado, secada sulfato de sódio, filtrada e secada para resíduo. O produto bruto foi purificado por coluna de 330g de cromatografia em sílica-gel eluindo com 0 a 70 % (EtOAc com 10 % de MeOH) / heptano . O pico desejado foi concentrado para massa constante para fornecer 5,75 gramas de produto bruto. O material foi repurificado por coluna de 330g de cromatografia em sílica-gel eluindo com 0 a 60 % (EtOAc com 10 % de MeOH) / heptano para fornecer 5,03 gramas de produto bruto. O material foi também purificado por adição de 1200 mL de acetato de etila para dissolver 200 mL de heptano, lavado com 200 mL de HCl a 0,5 N (5x), água, bicarbonato de sódio saturado, água (3x), solução de sal saturado, secado sulfato de sódio, filtrado e concentrado para massa constante para fornecer 4,70 gramas de produto desejado, produção usado no estado em que se encontra. (61% de rendimento durante duas etapas). LCMS (m/z): 805,4 (MH+), 0,99 minuto. 1H RMN (<cd3od>) d: 7,90 (s, 1H), 7,77-7,86 (m, 1H), 7,68-7,73 (m, 2H), 7,63 (dd, J=11,8, 1,2 Hz, 1H), 7,42-7,52 (m, 1H), 7,26 (d, J=9,5 Hz, 1H), 5,43 (t, J=5,7 Hz, 1H), 4,30 a 4,49 (m, 1H), 4,28 (t, J=6,3 Hz, 2H), 3,58-3,72 (m, 1H), 2,83 (t, J=11,6 Hz, 1H), 2,27 (dt, J=6,2, 3,1 Hz, 1H), 2,02-2,13 (m, 1H), 1,77-1,94 (m, 2H), 1,58-1,74 (m, 1H), 1,48-1,55 (m, 1H), 1,45 (d, J=5,8 Hz, 18H). Etapa 5. Fosfato de (S)-2-(4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5iodofenil)etil di-hidrogênio:
[00639] Di-terc-butil fosfato de (S)-2-(4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5iodofenil)etila (4600 mg, 5,72 mmol) foi totalmente dissolvido em MeOH (Volume: 70 mL). Em seguida HCl a 4M em dioxano (14,29 mL, 57,2 mmol) foi adicionado e agitado em temperatura ambiente durante 3 horas, seguido por LCMS. O solvente foi concentrado completamente. Em seguida MeOH (Volume: 70 mL) foi adicionado e o solvente foi concentrado para resíduo, MeOH adicional (Volume: 70 mL) foi adicionado e o resíduo concentrado para massa constante. O produto foi dissolvido em 90 mL de 1:1 ACN/água e liofilizado para fornecer 3,99 gramas do produto desejado como sal de HCl. (94% de rendimento). LCMS (m/z): 692,9 (MH+), 0,63 minuto. 1H RMN (<cd3od>) d: 7,847,93 (m, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,60 a 7,71 (m, 3H), 7,45-7,51 (m, 1H), 7,26 (dt, J=9,7, 1,6 Hz, 1H), 5,40 (t, J=5,9 Hz, 1H), 4,31-4,50 (m, 1H), 4,224,30 (m, 2H), 3,64 (tdd, J=11,7, 8,6, 5,1 Hz, 1H), 2,82-2,98 (m, 1H), 2,32 (ddt, J=11,7, 5,8, 2,8 Hz, 1H), 2,01-2,15 (m, 1H), 1,89-1,97 (m, 1H), 1,75-1,89 (m, 1H), 1,58-1,72 (m, 1H), 1,42-1,55 (m, 1H). 31P RMN (<cd3od>) d: 0,00 (s, 1P).
[00640] Conversão de sal de HCl em sal de dissódio: Ao produto desejado acima como sal de HCl (24 mg, 0,035 mmol) foi adicionada água (Volume: 17 mL) em seguida titulado com carbonato de sódio a 2M para pH 10 a 11 e em seguida extraído com 15 mL de DCM (4x). A água básica foi diretamente carregada em uma coluna de fase reversa de 12 gramas Grace Reveleris C18, eluída com 0 a 20 % de ACN/água durante 18 minutos em taxa de fluxo de 15 ml/minuto, sem nenhum tampão. As frações desejadas foram liofilizadas para fornecer 18 mg do produto desejado fosfato de di-hidrogênio de (S)-2-(4-(3amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etila como o sal de dissódio, determinado por análise de contraíon. (70 % de rendimento). LCMS (m/z): 692,9 (MH+), 0,64 minuto. 1H RMN (<cd3od>) d: 7,82-7,92 (m, 2H), 7,64-7,72 (m, 2H), 7,58 (dd, J=11,4, 1,2 Hz, 1H), 7,39 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,28 (d, J=9,5 Hz, 1H), 5,17 (dd, J=6,9, 4,1 Hz, 1H), 4,25-4,49 (m, 1H), 4,02-4,20 (m, 2H), 3,57-3,73 (m, 1H), 2,83 (t, J=11,6 Hz, 1H), 2,27 (dd, J=6,1, 3,6 Hz, 1H), 1,98-2,14 (m, 1H), 1,78-1,94 (m, 2H), 1,59-1,73 (m, 1H), 1,40 a 1,55 (m, 1H). Exemplo 190 Síntese de 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2hidroxietil)benzamida OH
Figure img0190
[00641] A uma solução de ácido 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (18 mg, 0,052 mmol) em DMF (0,52 mL) foram adicionados (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5iodofenil)etanol cloridrato (19,6 mg, 0,062 mmol), HOAt (10,52 mg, 0,077 mmol), EDC (19,76 mg, 0,103 mmol), e DIEA (27 μl, 0,155 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 15 horas. Após água ser adicionada, a mistura reacional foi extraída com EtOAc e a camada orgânica foi lavada com água duas vezes. A camada orgânica foi separada e secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 100 % de EtOAc/heptano para fornecer 15,8 mg de 4-(3-amino-6((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1(3-fluoro-5-iodofenil)-2-hidroxietil)benzamida como uma base livre (50%). LCMS (m/z): 613,1 (MH+), 0,74 minuto; 1H RMN (400MHz, CD3OD)δ ppm 7,89 7,69 (m, 2H), 7,66 7,47 (m, 3H), 7,39 7,26 (m, 1H), 7,12 (d, J=9,4 Hz, 1H), 5,05 (t, J=5,9 Hz, 1H), 4,43 4,14 (m, 1H), 3,84 3,66 (m, 2H), 3,64 3,45 (m, 1H), 2,74 (t, J=11,7 Hz, 1H), 2,17 (td, J=3,1, 6,0 Hz, 1H), 2,05 1,87 (m, 1H), 1,84 1,66 (m, 2H), 1,65 1,47 (m, 1H), 1,47 1,27 (m, 1H). Síntese de fosfato de (S)-2-(4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5iodofenil)etil di-hidrogênio
Figure img0191
Etapa 1. Fosfato de (S)-2-(4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5iodofenil)etil di-terc-butila:
[00642] A uma solução de ácido 4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (215 mg, 0,509 mmol) em NMP (Volume: 4 mL) foram adicionados fosfato de di-terc-butila de (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etila (260 mg, 0,509 mmol), DIEA (0,534 mL, 3,06 mmol) e em seguida HATU (290 mg, 0,764 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora, seguido por LCMS. À reação crua foi adicionado 150 mL de acetato de etila lavada com bicarbonato saturado (2x), água (3x), solução de sal saturado, secado sulfato de sódio, filtrado e secado para resíduo. O produto bruto foi purificado por coluna de cromatografia de 24 g de sílica-gel (carga de DCM) eluindo com 0 a 80 % (EtOAc com 10 % de MeOH) / heptano. As frações desejadas foram concentradas para massa constante para fornecer 315 mg de produto desejado como base livre. (77 % de rendimento). LCMS (m/z): 805,3 (MH+), 1,01 minuto. Etapa 2. fosfato de (S)-2-(4-(3-amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5iodofenil)etil di-hidrogênio:
[00643] A uma solução de fosfato de di-terc-butila de (S)-2-(4-(3amino-6-((1R,3R,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzamido)-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etila (315 mg, 0,392 mmol) foi adicionado HCl a 4 M em dioxano (5 mL, 20,00 mmol) e metanol (Volume: 0,5 mL). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora seguida por LCMS. O solvente foi concentrado. O material bruto foi basificado e dissolvido com solução de NaOH a 3M com MeOH mínimo adicionado. O material foi purificado por coluna de fase reversa Grace Reveleris C18 de 12 gramas eluída com 0 a 15 % de ACN/água durante 18 minutos em uma taxa de fluxo de 15 ml/minuto, sem tampões. As frações desejadas foram coletadas, acidificadas com HCl a 1 M para pH de 1 e extraídas com acetato de etila (5x). A camada orgânica combinada (800 ml) foi lavada com água mínima (3 x 25 ml) para remover os sais. O solvente foi concentrado, dissolvido em 1:1 de ACN/água e liofilizado para fornecer 207 mg do produto desejado como sal de HCl. (72 % de rendimento). LCMS (m/z): 693,2 (MH+), 0,64 minuto. 1H RMN (<cd3od>) d: 7,87 (s, 1H), 7,817,86 (m, 1H), 7,65-7,72 (m, 2H), 7,61 (dd, J=11,7, 1,6 Hz, 1H), 7,46 (ddd, J=8,0, 2,3, 1,4 Hz, 1H), 7,26 (dt, J=9,5, 1,9 Hz, 1H), 5,38 (t, J=5,7 Hz, 1H), 4,29-4,49 (m, 1H), 4,18-4,29 (m, 2H), 3,64 (tdd, J=11,6, 8,6, 4,9 Hz, 1H), 2,76-2,92 (m, 1H), 2,27 (ddd, J=8,8, 5,9, 2,5 Hz, 1H), 2,01-2,13 (m, 1H), 1,76-1,94 (m, 2H), 1,58-1,71 (m, 1H), 1,39-1,55 (m, 1H). 31P RMN (<cd3od>) d: 0,16 (br. s., 1P). Exemplos 191 e 192 Síntese de 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-aminociclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)1 -(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida e 4-(3-amino-6((1s,4R)-4-aminociclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida Esquema 90
Figure img0192
Etapa 1. 4-(3-amino-6-(4-(benzilamino)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila
[00644] A 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (300 mg, 0,874 mmol) foram adicionados MeOH ( 4 mL), fenilmetanamina (112 mg, 1,048 mmol) e por último peneiras moleculares 4 Â secas. A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 16 h. Em seguida, NaBH4 (165 mg, 4,37 mmol) foi adicionado e agitado em temperatura ambiente durante 2 h seguido por LCMS. À reação foram adicionados 150 mL de acetato de etila, lavados com bicarbonato de sódio saturado, água (2x), solução de sal saturado, secados sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados para resíduo para fornecer 352 mg do produto desejado em relação de 2:1 de trans para cis, usado no estado em que se encontra (93 %). LCMS (m/z): 435,3 (MH+), 0,68 min e 0,72 minuto. Etapa 2. 4-(3-amino-6-(4-aminociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00645] Ao 4-(3-amino-6-(4-(benzilamino)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (350 mg, 0,806 mmol) em um frasco de base redonda que foi inundado com argônio foi adicionado Pd-C a 10 % degaussa, úmido (171 mg, 0,161 mmol). Em seguida sob argônio com seringa, foi adicionado MeOH (5 mL) e um último balão de hidrogênio. O frasco foi evacuado e recarregado com hidrogênio seis vezes. A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 14 h. A reação foi purgada com argônio, em seguida Pd-C a 10 % degaussa, úmido (171 mg, 0,161 mmol) foi cuidadosamente adicionado. Em seguida, um balão de hidrogênio foi adicionado, e o frasco foi evacuado e recarregado com hidrogênio seis vezes. A reação foi agitada durante mais 10 h para fornecer um total de 24 h, seguido por LCMS. A reação foi inundada com argônio e 35 mL de DCM foram adicionados. A mistura crua foi filtrada através de um tampão de celita, e concentrada para massa constante para fornecer 230 mg de produto desejado (cuja relação é de 2:1 de trans para cis), usado no estado em que se encontra (83 %). LCMS (m/z): 345,2 (MH+), 0,48 min e 0,51 minuto. Etapa 3. 4-(3-amino-6-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)pirazin2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00646] Ao 4-(3-amino-6-(4-aminociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (230 mg, 0,668 mmol) foram adicionados DCM (5 mL), TEA (0,233 mL, 1,670 mmol), e boc-anidrido (0,186 mL, 0,801 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora, seguida por LCMS. À reação foram adicionados 150 mL de acetato de etila, lavados com bicarbonato de sódio saturado, água duas vezes, solução de sal saturado, secados sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados para massa constante para fornecer 233 mg do produto desejado (cuja relação é de 2:1 de trans para cis), usado no estado em que se encontra (78 %). LCMS (m/z): 445,2 (MH+), 0,92 min para ambos. Etapa 4. Ácido 4-(3-amino-6-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico
[00647] Ao 4-(3-amino-6-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (230 mg, 0,517 mmol) foi adicionado MeOH (2 mL), THF (2 mL) e em seguida solução aquosa a 1 M de hidróxido de lítio (1,552 mL, 1,552 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. O solvente foi concentrado para resíduo, em seguida THF (20 mL) foi adicionado e concentrado para resíduo. Em seguida, THF (20 mL) foi adicionado novamente e re-concentrado para resíduo para massa constante para fornecer o produto desejado (cuja relação é de 2:1 de trans para cis), usado no estado em que se encontra. Assume a produção quantitativa (0,517 mmol). LCMS (m/z): 431,2 (MH+), 0,78 min para ambos. Etapa 5. (4-(5-amino-6-(4-((1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)-3fluorofenil)pirazin-2-il)ciclo-hexil)carbamato de (S)-terc-butila
[00648] Ao ácido 4-(3-amino-6-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (222 mg, 0,516 mmol) foram adicionados DMSO (4 mL), base de Hünig (0,450 mL, 2,58 mmol), (S)-2amino-2-(3-clorofenil)etanol (133 mg, 0,774 mmol) e em seguida HATU (392 mg, 1,031 mmol). A reação foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. À reação foram adicionados 50 mL de acetato de etila, lavados com água duas vezes, solução de sal saturado, secados sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados para resíduo. O bruto foi purificado por cromatografia rápida usando coluna de 12 gramas (carga sólida) eluindo com 10 a 95 % de acetato de etila em heptano. As frações desejadas foram concentradas para massa constante para fornecer 252 mg de produto (cuja relação é de 2:1 de trans para cis), usado no estado em que se encontra (83 % em duas etapas). LCMS (m/z): 584,3 (MH+), 0,91 min para ambos. Etapa 6. 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-aminociclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida e 4-(3-amino-6-((1s,4R)4-aminociclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida
[00649] Ao (4-(5-amino-6-(4-((1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-il)ciclo-hexil)carbamato de (S)-terc-butila (252 mg, 0,431 mmol) foi adicionado DCM (8 mL) e em seguida TFA (2 mL, 26,0 mmol). A reação foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. O solvente foi concentrado, novamente dissolvido em DMSO, filtrado, e purificado por HPLC preparativa com ambos os isômeros coletados. Com maior isômero trans eluído primeiro e menores isômeros cis eluídos segundo. Após liofilização, 87 mg de produto trans 4-(3amino-6-((1r,4S)-4-aminociclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida foram obtidos como sal de TFA em 34 % de rendimento. LCMS (m/z): 484,2 (MH+), 0,58 minuto; 1H RMN (CD3OD) δ ppm 7,79 (s, 1H), 7,76 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,58 (dd, J=7,8, 1,6 Hz, 1H), 7,52 (dd, J=11,9, 1,4 Hz, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,30 7,23 (m, 2H), 7,22 7,16 (m, 1H), 5,10 (t, J=5,9 Hz, 1H), 3,83 3,70 (m, 2H), 3,08 (tt, J=11,7, 3,9 Hz, 1H), 2,69 2,49 (m, 1H), 2,06 (d, J=10,6 Hz, 2H), 1,97 (d, J=12,9 Hz, 2H), 1,75 1,57 (m, 2H), 1,55 1,31 (m, 2H).
[00650] Além disso, após liofilização 43 mg do produto cis 4-(3amino-6-((1s,4R)-4-aminociclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida foram obtidos como sal de TFA, em 17 % de rendimento. LCMS (m/z): 484,2 (MH+), 0,61 minuto; 1H RMN (CD3OD) δ ppm 7,87 (s, 1H), 7,81 7,72 (m, 1H), 7,60 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,55 (d, J=11,7 Hz, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,26 (d, J=5,9 Hz, 2H), 7,22 7,16 (m, 1H), 5,10 (t, J=5,7 Hz, 1H), 3,87 3,67 (m, 2H), 2,91 2,80 (m, 1H), 1,98 (q, J=8,9 Hz, 2H), 1,90 1,71 (m, 6H). Exemplo 193 Síntese de 4-(6-((1r,4S)-4-acetamidociclo-hexil)-3-aminopirazin-2-il)-N((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
Figure img0193
[00651] Ao 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-aminociclo-hexil)pirazin-2-il)-N((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida (15 mg, 0,025 mmol) foram adicionados DCM (0,25 mL), THF (0,75 mL) e TEA (10,49 μl, 0,075 mmol) a 0 °C. Em seguida, anidrido acético (2,367 μl, 0,025 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada durante 30 minutos a 0 °C. A reação foi concentrada, dissolvida em 1 mL de DMSO, filtrada, purificada por HPLC preparativa, e liofilizada para fornecer 5,4 mg do produto desejado 4-(6-((1r,4S)-4-acetamidociclo-hexil)-3-aminopirazin-2il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida como um sal de TFA (33 % de rendimento). LCMS (m/z): 526,3 (MH+), 0,67 minuto; 1H RMN (CD3OD) δ ppm 7,71-7,82 (m, 2H), 7,58 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,53 (d, J=11,7 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,22-7,29 (m, 2H), 7,15-7,22 (m, 1H), 5,10 (t, J=5,9 Hz, 1H), 3,71-3,84 (m, 2H), 3,52-3,66 (m, 1H), 2,51-2,65 (m, 1H), 1,86-2,02 (m, 4H), 1,83 (s, 3H), 1,53-1,69 (m, 2H), 1,22-1,39 (m, 2H). Exemplo 194 Síntese de 4-(3-amino-6-(( 1 r,4S)-4-(metilsulfonamido)ciclo-hexil)pirazin-2-il)N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
Figure img0194
[00652] Ao 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-aminociclo-hexil)pirazin-2-il)-N((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida (15 mg, 0,025 mmol) foram adicionados DCM (0,25 mL, Relação: 1,000), THF (0,250 mL), TEA (10,49 μl, 0,075 mmol), agitados para dissolver e resfriados para 0 °C, e em seguida cloreto de metanossulfonila (1,955 μl, 0,025 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada durante 30 minutos a 0 °C, seguida por LCMS. A reação foi concentrada, dissolvida em 1 mL de DMSO, filtrada, purificada por HPLC preparativa, e liofilizada para fornecer 1,6 mg do produto desejado 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4(metilsulfonamido)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida como sal de TFA (9 % de rendimento). LCMS (m/z): 562,2 (MH+), 0,69 minuto. 1H RMN (CD3OD) δ ppm 7,70 a 7,82 (m, 2H), 7,59 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,53 (d, J=11,7 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,22-7,30 (m, 2H), 7,13-7,21 (m, 1H), 5,09 (t, J=5,9 Hz, 1H), 3,683,89 (m, 2H), 2,87 (s, 3H), 2,48-2,60 (m, 1H), 2,05 (d, J=14,9 Hz, 2H), 1,84-1,95 (m, 2H), 1,54-1,74 (m, 2H), 1,38 (q, J=12,9 Hz, 2H). Exemplo 195 Síntese de((1 S,4r)-4-(5-amino-6-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-il)ciclo-hexil)carbamato de metila
Figure img0195
[00653] Ao 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-aminociclo-hexil)pirazin-2-il)-N((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida (15 mg, 0,025 mmol) foram adicionados DCM (0,25 mL), THF (0,250 mL), TEA (10,49 μl, 0,075 mmol) agitados para dissolver e resfriados para 0 °C, e em seguida cloroformiato de metila (1,943 μl, 0,025 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada durante 30 minutos a 0 °C, seguida por LCMS. A reação foi concentrada, dissolvida em 1 mL de DMSO, filtrada, purificada por HPLC preparativa, e liofilizada para fornecer 4,5 mg do produto desejado ((1S,4r)-4-(5-amino-6-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)pirazin-2-il)ciclo-hexil)carbamato de metila como sal de TFA (27 % de rendimento). LCMS (m/z): 542,3 (MH+), 0,75 minuto. 1H RMN (CD3OD) δ: 7,73-7,81 (m, 2H), 7,58 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,48-7,55 (m, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,23-7,30 (m, 2H), 7,15-7,22 (m, 1H), 5,10 (t, J=5,9 Hz, 1H), 3,69-3,84 (m, 2H), 3,53 (s, 3H), 3,31-3,36 (m, 1H), 2,48-2,62 (m, 1H), 1,84-2,00 (m, 4H), 1,51-1,68 (m, 2H), 1,21-1,44 (m, 2H) Exemplo 196 Síntese de 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-(2-hidroxiacetamido)ciclohexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida o
Figure img0196
[00654] Ao 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-aminociclo-hexil)pirazin-2-il)-N((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida (11 mg, 0,018 mmol) foram adicionados NMP (0,4 mL), ácido 2-hidroxiacético (2,80 mg, 0,037 mmol), base de Hünig (0,013 mL, 0,074 mmol) e em seguida HATU (17,49 mg, 0,046 mmol). A reação foi agitada durante 30 minutos em temperatura ambiente. A reação foi concentrada, dissolvida em 0,75 mL de DMSO, filtrada, purificada por HPLC preparativa, e liofilizada para fornecer 3,6 mg do produto desejado 4-(3-amino-6((1r,4S)-4-(2-hidroxiacetamido)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida como sal de TFA (29 %). LCMS (m/z): 542,2 (MH+), 0,63 minuto. 1H RMN (CD3OD) δ ppm 7,83 7,72 (m, 2H), 7,59 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,53 (d, J=11,7 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,32 7,23 (m, 2H), 7,22 7,16 (m, 1H), 5,10 (t, J=5,9 Hz, 1H), 3,86 (s, 2H), 3,82 3,63 (m, 3H), 2,65 2,50 (m, 1H), 2,02 1,86 (m, 4H), 1,72 1,56 (m, 2H), 1,48 1,33 (m, 2H). Exemplo 197 Síntese de (S)-N-(2-amino-1-(3-clorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(4,4difluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida Esquema 91
Figure img0197
Etapa 1. 4-(3-amino-6-(4,4-difluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00655] Ao 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (250 mg, 0,728 mmol) foi adicionado DCM (10 mL) e a solução foi resfriada para 0 °C em banho de gelo. Em seguida, solução de Deoxo-fluoro em tolueno a 50 % (805 mg, 1,820 mmol) foi adicionada a 0 °C. A reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. Para extinguir a reação, TEA (1,522 mL, 10,92 mmol) foi adicionado e agitado durante 1 hora em temperatura ambiente. O solvente foi concentrado para resíduo e o bruto foi purificado por cromatografia rápida (carga seca) usando coluna de 12 gramas eluindo com 5 75 % de acetato de etila em heptano. As frações desejadas foram concentradas para massa constante para fornecer 83 mg do produto desejado como uma base livre, usada no estado em que se encontra (31 % de rendimento). LCMS (m/z): 366,2 (MH+), 0,87 minuto. Etapa 2. Ácido 4-(3-amino-6-(4,4-difluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico
[00656] Ao 4-(3-amino-6-(4,4-difluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (83 mg, 0,227 mmol) foram adicionados MeOH (1,5 mL), THF (1,5 mL) e em seguida solução de NaOH aquosa a 1 M (0,909 mL, 0,909 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 6 h. A reação foi concentrada para resíduo. THF foi adicionado e concentrado para resíduo novamente. Em seguida, a mistura foi dissolvida em 1:1 de ACN/água, acidificada com HCl a 6 M e liofilizada para fornecer produto desejado como sal de HCl usado no estado em que se encontra. Assume a produção quantitativa, (0,227 mmol). LCMS (m/z): 352,1 (MH+), 0,71 minuto. Etapa 3. (2-(4-(3-amino-6-(4,4-difluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzamido)-2-(3-clorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila
[00657] Ao ácido 4-(3-amino-6-(4,4-difluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico (48 mg, 0,124 mmol) foram adicionados DMSO (1 mL), base de Hünig (0,108 mL, 0,619 mmol), (2-amino-2-(3clorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila (50,3 mg, 0,186 mmol) e em seguida HATU (94 mg, 0,248 mmol). A reação foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. À reação foi adicionado 0,5 mL de DMSO, filtrado, purificado por HPLC preparativa, e liofilizado para fornecer 11 mg do produto desejado usado no estado em que se encontra (12 % de rendimento). LCMS (m/z): 604,2 (MH+), 1,05 minuto. Etapa 4. (S)-N-(2-amino-1-(3-clorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(4,4difluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida
[00658] Ao (2-(4-(3-amino-6-(4,4-difluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzamido)-2-(3-clorofenil)etil)carbamato de (S)-terc-butila (11 mg, 0,018 mmol) foi adicionado HCl a 4 M em dioxano (1 mL, 4,00 mmol). A reação foi agitada durante 1 hora em temperatura ambiente. O solvente foi removido e concentrado para resíduo, que foi dissolvido em 1:1 de acetonitrila/ água, filtrado e liofilizado para sal de HCl. O resíduo de sal bruto foi dissolvido em 1 mL de DMSO, purificado por HPLC preparativa e liofilizado para fornecer 3,8 mg do produto desejado (S)-N-(2-amino-1-(3-clorofenil)etil)-4-(3-amino-6-(4,4-difluorociclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzamida como um sal de TFA (33 %). LCMS (m/z): 504,2 (MH+), 0,74 minuto; 1H RMN (CD3OD) δ ppm 7,85 7,73 (m, 2H), 7,62 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,54 (dd, J=12,1, 1,2 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,38 7,28 (m, 3H), 5,39 (dd, J=9,0, 5,9 Hz, 1H), 3,40 3,33 (m, 2H), 2,72 (br. s., 1H), 2,12 1,98 (m, 2H), 1,96 1,73 (m, 6H). Exemplos 198 e 199 Síntese de diastereômeros enantiomericamente enriquecidos de cis-4(3-amino-6-(3-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida Esquema 92
Figure img0198
Etapa 1. Polar e menos polar enantiomericamente enriquecido cis-5(3-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)pirazin-2-aminas
[00659] 5-(3-((terc-Butildimetilsilil)óxi)ciclo-hexil)pirazin-2-amina (500 mg, 1,626 mmol), preparado de Esquema 29, foi resolvido por SFC quiral (coluna ChiralPak 5 mic OD, 4,6 x 100 (mm), CO2/IPA + 0,1 % de DEA = 90/10, SFC = 5 mL/min). Para enantiômero polar (pico 1) (230 mg, 0,748 mmol, 46,0 % de rendimento), TaTr= 1,58 minuto. Para enantiômero menos polar (pico 2) (230 mg, 0,748 mmol, 46,0 % de rendimento), TaTr= 2,36 minutos. Etapas 2, 3, 4, 5 e 6. diastereômeros de cis-4-(3-amino-6-(3hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida
[00660] Seguindo as etapas 2, 3, e 7 no esquema 75, cada enantiomericamente enriquecido cis-5-(3-((terc-butildimetilsilil)óxi)ciclohexil)pirazin-2-amina sofreu bromação, seguida por acoplamento Suzuki com ácido 3-fluoro-4-(metoxicarbonil)fenil)borônico. Após hidrólise, seguindo a etapa 8 no esquema 75, usando (S)-2-amino-2-(3clorofenil)etanol e cada enantiômero, cada diastereômero de cis-4-(3amino-6-(3-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)-2-fluorobenzamida foi obtido respectivamente. Para diastereômero cis de precursor polar, LCMS (m/z): 485,0 (MH+), 0,70 minuto; 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,90 7,69 (m, 2 H) 7,64 7,48 (m, 2 H) 7,37 (s, 1 H) 7,30 7,09 (m, 3 H) 5,10 (t, J=6,06 Hz, 1 H) 3,89 3,69 (m, 2 H) 3,66 3,47 (m, 1 H) 2,79 2,60 (m, 1 H) 2,06 (d, J=11,74 Hz, 1 H) 1,97 1,68 (m, 3 H) 1,52 1,26 (m, 3 H) 1,24 -0,99 (m, 1 H). Para diastereômero cis de precursor menos polar, LCMS (m/z): 485,0 (MH+), 0,70 minuto. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,88 7,70 (m, 2 H) 7,65 7,49 (m, 2 H) 7,37 (s, 1 H) 7,32 6,98 (m, 3 H) 5,10 (s, 1 H) 3,76 (t, J=6,06 Hz, 2 H) 3,58 (s, 1 H) 2,792,59 (m, 1 H) 2,06 (d, J=12,13 Hz, 1 H) 1,97 1,61 (m, 3 H) 1,54 1,30 (m, 3 H) 1,25 -0,96 (m, 1 H).
[00661] Estereoquímica absoluta sobre anel de ciclo-hexano para ambos diastereômeros não foi determinada. Exemplos 200 e 201 Síntese de 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoroN-((1S,2R)-2-fenilciclopropil)benzamida e 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2Hpiran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciclopropil)benzamida Esquema 93
Figure img0199
[00662] Seguindo a etapa 2 no esquema 89, usando (+/-)-trans-2fenilciclopropanamina, EDC (30,2 mg, 0,158 mmol), HOAt (17,2 mg, 0,126 mmol), e DIEA (0,033 mL, 0,189 mmol), (+/-)-trans-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-(2-fenilciclopropil)benzamida foi obtido (19 mg, 70 %). LCMS (m/z): 433,2 (MH+), 0,82 minuto; 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 8,29-8,22 (m, 1 H), 7,94 (s, 1 H), 7,76-7,71 (m, 1 H), 7,63-7,56 (m, 1 H), 7,35-7,18 (m, 4 H), 7,04-6,94 (m, 1 H), 4,67 (s, 2 H), 4,09 (m, 2 H), 3,35 (m, 2 H), 3,15 (m, 1 H), 2,93 (m, 1 H), 2,22 (m, 1 H), 2,90 a 1,8 (m, 4 H), 1,43-1,23 (m, 3 H).
[00663] O produto racêmico foi resolvido por SFC quiral (coluna ChiralPak 5 mic AD-H, 4,6 x 100 (mm), heptano : EtOH = 50/50, 1 mL/min). Para 4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2fluoro-N-((1S,2R)-2-fenilciclopropil)benzamida polar (27 %) em TaTr= 11,0 minutos, LCMS (m/z): 433,2 (MH+), 0,81 minuto. Para 4-(3-amino6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2fenilciclopropil)benzamida menos polar, (+/-)-trans-4-(3-amino-6-(tetrahidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-(2-fenilciclopropil)benzamida (27 %) em TaTr= 15,8 minutos, LCMS (m/z): 433,2 (MH+), 0,81 minuto. A estereoquímica absoluta foi designada com base nos dados bioquímicos e modelo de acoplamento. Exemplos 202 e 203 Síntese de 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluoroN-((1S,2R)-2-fenilciclopropil)benzamida e 4-(3-amino-6-((1r,4R)-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciclopropil)benzamida Esquema 94
Figure img0200
[00664] Seguindo a etapa 2 no esquema 89, usando (+/-)-trans-2fenilciclopropanamina (48,6 mg, 0,37 mmol), EDC (127 mg, 0,66 mmol), HOAt (67,8 mg, 0,498 mmol), e DIEA (0,174 mL, 0,996 mmol), (+/-)-trans-4-(3-amino-6-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoroN-(2-fenilciclopropil)benzamida foi obtido (40 mg, 97 %), que foi separado por SFC quiral (coluna ChiralPak 5 mic OJ, 4,6 x 100 (mm), CO2/IPA + 0,1 % de DEA = 60/40, SFC = 5 ml/min). O diastereômero polar foi 4-(3-amino-6-((1r,4S)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluoroN-((1S,2R)-2-fenilciclopropil)benzamida (TaTr= 1,38 minuto)._LCMS (m/z): 447,3 (MH+), 0,76 minuto; 1H RMN (500 MHz, CD3OD) δ ppm 7,89 7,78 (m, 2H), 7,72 7,53 (m, 2H), 7,33 7,23 (m, 2H), 7,24 7,10 (m, 3H), 3,68 -3,53 (m, 1H), 3,14 3,03 (m, 1H), 2,74 2,56 (m, 1H), 2,27 2,13 (m, 1H), 2,12 1,88 (m, 4H), 1,77 1,57 (m, 2H), 1,52 1,29 (m, 4H). O diastereômero menos polar foi 4-(3-amino-6-((1r,4R)4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((1R,2S)-2-fenilciclopropil)benzamida (TaTr= 1,82 minuto). LCMS (m/z): 447,3 (MH+), 0,75 minuto; 1H RMN (500 MHz, CD3OD) δ ppm 7,89 7,78 (m, 2H), 7,72 7,53 (m, 2H), 7,33 7,23 (m, 2H), 7,24 7,10 (m, 3H), 3,68 3,53 (m, 1H), 3,14 3,03 (m, 1H), 2,74 2,56 (m, 1H), 2,27 2,13 (m, 1H), 2,12 1,88 (m, 4H), 1,77 1,57 (m, 2H), 1,52 1,29 (m, 4H). A estereoquímica absoluta foi designada com base nos dados bioquímicos e modelo de acoplamento. Exemplo 204 Síntese de 4-(2-amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-N-benzil2-ciano-6-fluorobenzamida
Figure img0201
Etapa 1. Ácido 4-cloro-2-fluoro-6-iodobenzoico
[00665] A um frasco de 250 mL foram adicionados ácido 4-cloro-2fluorobenzoico (4 g, 22,92 mmol), Pd(OAc)2 (0,257 g, 1,146 mmol), diacetato de iodobenzeno (8,12 g, 25,2 mmol), iodo (6,40 g, 25,2 mmol) e DMF (60 mL). A solução foi aquecida sob uma atmosfera de nitrogênio a 100 °C durante 20 horas. LCMS mostrou que cerca de metade de ácido 4-cloro-2-fluorobenzoico foi convertido para o produto (LCMS, tempo de retenção 0,98 minuto, no pico MH+). Após resfriar para temperatura ambiente, a solução foi diluída com EtOAc e lavada três vezes com HCl a 1 N. As camadas aquosas foram combinadas e extraídas uma vez com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, secadas sobre Na2SO4 e concentradas para fornecer um óleo marrom escuro (16,4 g, 42 % puro), que foi levado para a etapa seguinte sem purificação. Etapa 2. 4-Cloro-2-fluoro-6-iodobenzoato de metila
[00666] Ácido 4-cloro-2-fluoro-6-iodobenzoico (16,4 g, 22,93 mmol, junto com ácido 4-cloro-2-fluorobenzoico) foi dissolvido em DMF (30 mL). Cs2CO3 (8,96 g, 27,5 mmol) foi adicionado, seguido por MeI (1,577 mL, 25,2 mmol). Após 90 min em temperatura ambiente, LCMS mostrou que a reação foi concluída (tempo de retenção 1,06 minuto, no pico MH+). Isto foi diluído com EtOAc e filtrado através de uma peça de papel filtro. O filtrado foi lavado três vezes com água. As camadas aquosas foram combinadas e extraídas uma vez com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, secadas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo foi purificado sobre uma coluna de sílica-gel (heptano:EtOAc 1:0 a 9:1) para fornecer uma mistura de 4-cloro-2-fluoro-6iodobenzoato de metila e 4-cloro-2-fluorobenzoato de metila em aproximadamente relação de 1:1 (1,99 g). Etapa 3. 4-Cloro-2-ciano-6-fluorobenzoato de metila
[00667] 4-Cloro-2-fluoro-6-iodobenzoato de metila (1,99 g, 10,6 mmol) foi dissolvido em DMF ( 12 mL). CuCN (2,84 g, 31,7 mmol) foi adicionado e a suspensão foi aquecida sob micro-ondas a 110 °C durante 18 minutos. EtOAc foi adicionado e a suspensão foi filtrada através de uma peça de papel filtro. O filtrado foi lavado três vezes com água. As camadas aquosas foram combinadas e extraídas uma vez com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, secadas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo foi purificado sobre uma coluna de sílica-gel (heptano : EtOAc 1:0 a 9:1) para fornecer o produto como um sólido incolor (505 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,56 (s, 1H), 7,40 (d, 1H, J=8 Hz), 4,00 (s, 3H); 13C RMN (100 MHz, CDCl3) δ ppm 161,78 (d, J=58 Hz), 159,44, 139,16 (d, J=11 Hz), 129,96, 121,99, 121,74, 115,48, 114,72, 53,04. Etapa 4. 4-(2-Amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-ciano-6fluorobenzoato de metila
[00668] A um frasconete de micro-ondas de 2 mL foram adicionados 5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina (638 mg, 1,049 mmol), 4-cloro-2ciano-6-fluorobenzoato de metila (140 mg, 0,655 mmol), Pd2(dba)3 (30,0 mg, 0,033 mmol), XPhos (31,2 mg, 0,066 mmol), NaHCO3 (275 mg, 3,28 mmol), DME (3 mL) e H2O (1,5 mL). A solução foi aquecida sob micro-ondas a 100 °C durante 15 minutos. Água e EtOAc foram adicionados e a camada aquosa foi extraída três vezes com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, secadas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo foi purificado sobre uma coluna de sílica-gel (heptano : EtOAc 1:0 a 1:4) para fornecer o produto como uma espuma amarela (85 mg). LCMS (m/z) 356,1 (MH+), 0,58 minuto. Etapa 5. Ácido 4-(2-amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2ciano-6-fluorobenzoico
[00669] Ao 4-(2-amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2ciano-6-fluorobenzoato de metila (85 mg, 0,239 mmol) e mono-hidrato de hidróxido de lítio (11,04 mg, 0,263 mmol) foram adicionados THF (1 mL) e H2O (1,000 mL). A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas. Todos os solventes foram evaporados para fornecer o sal de lítio de produto bruto como um sólido amarelo (92 mg) que foi usado na etapa seguinte sem purificação. LCMS (m/z) 342,0 (MH+), 0,42 minuto. Etapa 6. 4-(2-Amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-N-benzil-2ciano-6-fluorobenzamida
[00670] Ao ácido 4-(2-amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)2-ciano-6-fluorobenzoico foi adicionado DCM (1 mL), seguido por benzilamina (0,017 mL, 0,153 mmol), trietilamina (0,053 mL, 0,383 mmol) e T3P (50 % em EtOAc, 0,084 mL, 0,141 mmol). Após mais 1 hora, benzilamina (0,017 mL, 0,153 mmol) e T3P (50 % em EtOAc, 0,084 mL, 0,141 mmol) foram adicionados e em 2 h a reação foi concluída. Solução de NaHCO3 saturado foi adicionada e extraída duas vezes com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, secadas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo foi purificado sobre uma coluna de sílica-gel (heptano : EtOAc 1:0 a 0:1) para fornecer o produto como um sólido incolor (17 mg). LCMS (m/z) 431,1 (MH+), 0,65 minuto. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) ) δ ppm 8,03 (s, 1 H), 7,74 (s, 1 H), 7,54 (d, 1 hora, J 12 Hz), 7,43-7,30 (m, 4 H) 7,26 (s, 1 H), 7,23 (s, 1 H) 6,57 (br s, 1 H), 4,74 (d, J 5,53 Hz, 2 H), 4,10 -4,06 (m, 2 H), 3,55 -3,46 (m, 2 H), 2,77 2,67 (m, 1H), 1,80 -1,70 (m, 4 H). Exemplo 205 Síntese de 4-(2-amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoroN-((6-metilpiridin-2-il)metil)benzamida Esquema 96 tana 1 -^1 x ESteBZ O ta'9 2 o DIEA, PdOAc2 J J (o-Tol)3P/DMF BoczO, cat. DMAP * 81% H2N N 93% Boc2N N E Step 4 tana 4
Figure img0202
Etapa.I.S-iβ-Aminopiridin-S-iliacrilatodeJEi-etila
[00671] A uma bomba de vidro foram carregados com 5bromopiridin-2-amina (10,0 g, 57,8 mmol), acrilato de etila (8,14 mL, 75 mmol) e DIEA (25,2 mL, 144 mmol) em DMF (40 mL). A mistura foi purgada com argônio, seguida por adição de Pd(OAc)2 (0,649 g, 2,89 mmol) e (o-Tol)3P (3,87 g, 12,72 mmol), e finalmente purgada completamente com argônio. A mistura foi selada, e aquecida com banho de óleo a 100 oC durante a noite. A mistura reacional foi resfriada para abaixo da temperatura ambiente, e os precipitados foram removidos por filtração através de uma camada fina de celita. O filtrado foi concentrado tanto quanto possível por meio de rotavap, e o resíduo foi dividido entre EtOAc/água (150 mL/100 mL). A camada de EtOAc foi lavada com água (2 x 100 mL), secada sobre Na2SO4, e concentrada. Um sólido marrom foi obtido como produto bruto. O produto bruto foi triturado com EtOAc (40 mL) e o sólido amarelo foi coletado por meio de filtragem. A massa filtrada foi enxaguada com pequena quantidade de EtOAc e secada sob vácuo como a primeira colheita de produto (5,0 g). O licor mãe de trituração foi despojado por HCl a 1 N aquoso diluído (30 mL) e água (70 mL). Camada aquosa foi transferida para um funil separatório limpo, basificada com 20 mL de Na2CO3 sat., e extraída com EtOAc (60 mL). A camada de EtOAc foi secada sobre Na2SO4, concentrada e forneceu a segunda porção de produto (4,0 g). As duas colheitas de produto foram combinadas para fornecer 81 % de rendimento. LCMS (m/z) 193,2 (MH+), 0,39 minuto. Etapa 2. 3-(6-(bis(terc-butoxicarbonil)amino)piridin-3-il)acrilato de (E)etila
[00672] À solução de 3-(6-aminopiridin-3-il)acrilato de (E)-etila (6,6 g, 34,3 mmol) e DMAP (0,21 g, 1,7 mmol) em THF (150 mL) foi adicionado dicarbonato de di-terc-butila (15,7 g, 71,9 mmol). A mistura foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. A reação foi concentrada e um sólido marrom foi obtido como 3-(6-(bis(tercbutoxicarbonil)amino)piridin-3-il)acrilato de (E)-etila bruto (12,5 g, 93 %). LCMS (m/z) 237,4 (MH+) 0,98 minuto. Etapa 3. 2-(6-(terc-butoxicarbonilamino)piridin-3-il)propano-1,1,3tricarboxilato de trimetila e 2-(6-aminopiridin-3-il)propano-1,1,1,3tetracarboxilato de tetrametila
[00673] Um frasco em chamas foi carregado com MeOH anidroso (50 mL), e o conteúdo foi resfriado abaixo de 0 oC. Ao frasco foi adicionado hidreto de sódio (3,18 g, óleo mineral em 60 % de dispersão, 80 mmol) com evolução de gás sob controle. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente até a evolução de gás cesar. A esta solução de NaOMe/MeOH recentemente preparada foi adicionado malonato de dimetila (10,52 g, 80 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura tornou-se uma suspensão leitosa. A suspensão leitosa foi diluída com 25 mL de MeOH anidroso, e decantada para um frasco com hidreto de sódio (12,5 g, 31,9 mmol). A suspensão de mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 15 minutos, e em seguida aquecida ao refluxo durante a noite. A mistura reacional foi resfriada para abaixo da temperatura ambiente, e concentrada. O resíduo foi dividido entre EtOAc/H2O (100 mL/100 mL). A camada de EtOAc foi lavada com NaOH a 1 N (3 x 30 mL), salmoura (30 mL), secada sobre Na2SO4, e concentrada. Um óleo marrom claro foi obtido como produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com gradiente de EtOAc/CH2Cl2. Os dois maiores picos foram isolados e coletados como 2-(6-(terc-butoxicarbonilamino)piridin-3-il)propano-1,1,3-tricarboxilato de trimetila (2,65 g, 20,3 % de rendimento) e 2-(6-aminopiridin-3il)propano-1,1,1,3-tetracarboxilato de tetrametila (1,89 g, 16 % de rendimento). Os dois produtos foram caracterizados e confirmados por LCMS e 1H RMN. Para 2-(6-(terc-butoxicarbonilamino)piridin-3il)propano-1,1,3-tricarboxilato de trimetila. LCMS (m/z) 411,5 (MH+), 0,64 minuto; 1H RMN (CDCl3) δ ppm 8,15 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,60 7,52 (m, 2H), 3,90 (td, J = 9,8, 4,7 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 3,55 (s, 3H), 2,92 2,81 (m, 1H), 2,80 2,69 (m, 1H), 1,53 (s, 9H). Para 2-(6-aminopiridin-3-il)propano-1,1,1,3tetracarboxilato de tetrametila: LCMS (m/z) 369,5 (MH+) 0,47 minuto; 1H RMN (CDCl3) δ ppm 8,31 (s, 1H), 8,19 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,60 (dd, J = 8,6, 2,3 Hz, 1H), 3,92 (td, J = 9,7, 4,9 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,55 (s, 3H), 2,93 2,82 (m, 1H), 2,812,70 (m, 1H). Etapa 4. 3-(6-Aminopiridin-3-il)pentanodioato de dimetila
[00674] A uma mistura de 2-(6-(terc-butoxicarbonilamino)piridin-3il)propano-1,1,3-tricarboxilato de trimetila (2,5 g, 6,1 mmol) e 2-(6aminopiridin-3-il)propano-1,1,1,3-tetracarboxilato de tetrametila (1,8 g, 4,9 mmol) em MeOH (30 mL) foi adicionada solução de NaOH aquoso (2,44 g de NaOH em 5 mL de água, 60,9 mmol). A mistura resultante foi aquecida ao refluxo por banho de óleo durante 1 hora. A mistura reacional foi resfriada para abaixo da temperatura ambiente, e concentrada sob pressão reduzida por meio de rotavap. Ao resíduo concentrado foram adicionados água (15 mL) e HCl conc. (3 mL). A mistura resultante foi aquecida ao refluxo durante a noite. A mistura reacional foi resfriada, e concentrada sob pressão reduzida por meio de rotavap, e um sólido foi obtido. O resíduo sólido obtido foi triturado com metanol (100 mL) e os precipitados foram removidos por filtragem, e um filtrado de cor clara foi obtido. Ao filtrado foi adicionado HCl conc. (200 μL) e a mistura resultante foi aquecida ao refluxo por meio de banho de óleo externo durante 1 hora. A mistura reacional foi resfriada, e concentrada. O resíduo foi dividido entre EtOAc/NaHCO3 saturado (50 mL/50 mL). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (50 mL). Os extratos de EtOAc foram combinados, lavados com salmoura (50 mL), secados sobre Na2SO4, e concentrados. Um sólido branco foi obtido como 3-(6aminopiridin-3-il)pentanodioato de dimetila desejado (2,6 g, 10,31 mmol, 93,9 % de rendimento). LCMS (m/z) 253,2 (MH+) 0,38 minuto; 1H RMN (CDCl3) δ ppm 7,95 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 8,2, 2,3 Hz, 1H), 6,46 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 4,37 (br. s., 2H), 3,61 (s, 6H), 3,55 (quinteto, J = 7,5 Hz, 1H), 2,80 -2,66 (m, 2H), 2,652,51 (m, 2H). Etapa 5. 3-(6-aminopiridin-3-il)pentano-1,5-diol
[00675] À suspensão de hidreto de lítio de alumínio (III)/THF (0,94 g em 60 mL de THF, 25 mmol) a 0 oC foi adicionada solução de 3-(6aminopiridin-3-il)pentanodioato de dimetila/THF (2,5 g, 9,9 mmol em 30 mL de THF) durante ~10 minutos. A suspensão foi agitada a 0 °C durante 40 minutos, e em seguida em temperatura ambiente durante 45 minutos. A mistura foi resfriada abaixo de 0 oC, e extinguida por adição sequencial de água (0,96 mL) com evolução de gás sob controle, em seguida 15 % de NaOH aquoso (0,96 mL), e água (2,9 mL). A mistura extinguida foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. Os precipitados foram removidos por meio de filtragem. O filtrado foi concentrado, e um sólido amarelo claro (1,97 g, produção quantitativa) foi obtido como 3-(6-aminopiridin-3-il)pentano-1,5-diol. LCMS (m/z) 197,2 (MH+) 0,22 minuto. Etapa 6. 5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina
[00676] À mistura de 3-(6-aminopiridin-3-il)pentano-1,5-diol/tolueno (1,96 g, 10 mmol in 40 mL) foi adicionado 1 mL de água para auxiliar na dissolução, e em seguida H2SO4 conc. (98 %, 1,6 mL, 30 mmol). A mistura resultante foi aquecida ao refluxo com Dean-Stark para remover água da mistura reacional durante 1 hora e 20 minutos. A mistura reacional foi resfriada para abaixo da temperatura ambiente, e concentrada. O resíduo foi diluído com água resfriada (15 mL), neutralizado por Na2CO3 sólido (4 g), e extraído com EtOAc (3 x 30 mL). Os extratos de EtOAc foram combinados, lavados com salmoura (30 mL), secados sobre Na2SO4, e concentrados. Um sólido amarelo claro foi obtido como 5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina bruto. LCMS (m/z) 179,2 (MH+) 0,33 minuto; 1H RMN (CDCl3) δ ppm 7,95 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 8,2, 2,3 Hz, 1H), 6,49 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,34 (br. s., 2H), 4,11 3,99 (m, 2H), 3,51 (td, J = 11,2, 3,3 Hz, 2H), 2,73 -2,56 (m, 1H), 1,75 -1,69 (m, 4H). Etapa 7. 3-Bromo-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina
[00677] À solução de 5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina /acetonitrila (1,4 g, 7,85 mmol/30 mL) a 0 a 5 oC foi adicionado em porções NBS (1,4 g, 7,85 mmol) com temperatura interna controlada abaixo de 5 oC. A mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 1 hora e 40 minutos. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi triturado com H2O/NaOH aquoso diluído (1 g / 30 mL). A suspensão sólida foi coletada por meio de filtragem. A massa filtrante foi lavada com água resfriada (~10 mL), e o filtrado foi combinado, e extraído com EtOAc (20 mL). O extrato de EtOAc foi lavado com salmoura (20 mL), secado sobre Na2SO4, e concentrado. Um sólido amarelo claro foi combinado com a massa filtrada, e secado sob vácuo elevado como 3-bromo-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina bruto. LCMS (m/z) 257,1/259,1 (MH+) 0,39 minuto. 1H RMN (CDCl3) δ ppm 7,90 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 4,80 (br. s., 1H), 4,12 -4,02 (m, 2H), 3,54 -3,44 (m, 2H), 2,71 2,61 (m, 1H), 1,78 -1,68 (m, 4H). Etapa 8. Ácido 4-(2-amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoico
[00678] Um frasconete de micro-ondas foi carregado com 3-bromo5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-2-amina (500 mg, 1,95 mmol), ácido 4-borono-2-fluorobenzoico (1,07 g, 5,83 mmol), Na2CO3 aquoso (2 M, 4,86 mL) e DME (10 mL). A mistura foi purgada com argônio, seguida por adição de Pd(PPh3)4 (225 mg, 0,194 mmol). A mistura foi purgada com argônio, selada e aquecida por meio de reator de micro-ondas a 125 °C durante 20 minutos, e em seguida a 130 °C durante mais 40 minutos. A camada de DME da mistura reacional foi coletada, e os precipitados sólidos foram triturados com metanol (2 x 10 mL). Sobrenadantes de metanol foram combinados com camada de DME, e concentrados. O resíduo obtido foi agitado com Et2O (2 x 60 mL), e os sobrenadantes de Et2O foram descartados. O resíduo sólido foi dividido entre EtOAc (20 mL) e HCl aq. (1 N, 20 mL). A camada de EtOAc foi extraída com HCl a 1 N (2 x 5 mL), e as camadas aquosas foram combinadas. A camada aquosa foi concentrada sob pressão reduzida, e o sólido amarelo claro obtido foi triturado com metanol (8 mL). O sobrenadante foi isolado por meio de filtragem e concentrado. Ácido 4-(2amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico (0,844 g, 2,67 mmol, 137 % de rendimento) foi obtido como espuma amarela clara. LCMS (m/z) 317,2 (MH+) 0,46 minuto. Etapa 9. Oxima de (E)-6-metilpicolinaldeído
[00679] À solução de 6-metilpicolinaldeído etanol (642 mg, 5,3 mmol/2,1 mL) foram adicionados cloridrato de hidroxiamina (368 mg, 5,3 mmol) e solução aquosa de K2CO3 (0,88 g/4,2 mL). A solução resultante foi em seguida aquecida ao refluxo por meio de banho de óleo externo durante 30 minutos. A mistura reacional foi resfriada abaixo de 0 oC, e agitada durante 30 minutos. A suspensão sólida branca foi coletado por meio de filtragem, e a massa filtrada foi lavada com alguma água resfriada. A massa filtrada foi secada por ar, e também secada sob vácuo elevado como a primeira colheita de produto (0,565 g). Os filtrados foram combinados, e concentrados até a secura. O resíduo foi novamente dissolvido em água (2 mL), resfriado para 0 oC e agitado durante 20 minutos. O produto sólido foi coletado por meio de filtragem como a segunda colheita de produto (70 mg) como sólido amarelo claro. As duas colheitas de produto foram combinadas para fornecer oxima de (E)-6-metilpicolinaldeído (88 %). LCMS (m/z) 136,9 (MH+) 0,21 minuto. Etapa 10. (6-Metilpiridin-2-il)metanamina
[00680] À solução de oxima de (E)-6-metilpicolinaldeído (0,635 g, 4,66 mmol) / ácido acético (267 μL, 4,66 mmol)/etanol (10 mL) foi adicionado em porções pó de zinco (5,19 g, 79 mmol) durante 30 minutos. A mistura resultante foi agitada durante mais 30 minutos. LCMS de alíquota de reação indicou que a reação foi concluída. Os precipitados de zinco na mistura reacional foram removidos por filtragem, e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi basificado para pH > 12 com excesso de KOH sataturado (~ 7 mL), e agitado com Et2O (30 mL). A camada de Et2O foi coletada, secada sobre Na2SO4, e concentrada. O resíduo foi novamente dissolvido em EtOAc (15 mL), secado sobre Na2SO4, e concentrado. (6-Metilpiridin-2-il)metanamina foi obtido como um óleo incolor (385 mg, 3,15 mmol, 67,6 %). LCMS (m/z) 123,2 (MH+) 0,15 minuto. Etapa 11. 4-(2-amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N((6-metilpiridin-2-il)metil)benzamida
[00681] A um frasconete foram carregado com 4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico ácido (20 mg, 0,063 mmol), (6-metilpiridin-2-il)metanamina (11,6 mg, 0,095 mmol), DIEA (28 μL, 0,158 mmol), PyBOP (65,8, 0,126 mmol) e DMF (0,5 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 10 minutos. A mistura reacional foi em seguida purificadas por HPLC preparativa, e as frações de produto foram combinadas, congeladas e liofilizadas para fornecer 4-(2-amino-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)piridin-3-il)-2-fluoroN-((6-metilpiridin-2-il)metil)benzamida como um pó branco. LCMS (m/z) 421,3 (MH+) 0,41 minuto. 1H RMN (DMSO-d6) δ ppm 8,99 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 7,95 -7,83 (m, 3H), 7,79 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 11,7 Hz, 2H), 7,44 (dd, J = 8,0, 1,4 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 4,60 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 4,02 3,88 (m, 2H), 3,40 (td, J = 11,2, 2,7 Hz, 3H), 2,88 2,71 (m, 1H), 2,51 (br. s., 3H), 1,82 1,58 (m, 4H). Exemplo 206 Síntese de (S)-4-(2-amino-5-(1-(difluorometil)-3-metil-1H-pirazol-4il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(1-(3-fluoro-5-(fluorometil)fenil)-2hidroxietil)benzamida Esquema 97
Figure img0203
Etapa 1. 4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin3-il)-2-fluorobenzoato de metila:
[00682] Uma mistura de 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2fluorobenzoato de metila (2 g, 6,15 mmol), B2(PIN)2 (3,12 g, 12,30 mmol), PdCl2(dppf) (0,225 g, 0,308 mmol), KOAc (1,811 g, 18,45 mmol) e dioxano (30,8 mL) foi aquecida a banho de óleo durante a noite a 100 °C. A mistura reacional foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. To o produto bruto, éter foi adicionado. O material insolúvel foi filtrado para fornecer 4-(2-amino-5-(4,4,5,5tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato de metila como um sólido marrom (79%). LCMS (m/z): 291,2 (MH+), 0,44 min (para ácido borônico). Etapa 2. 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00683] Uma mistura de 4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato de metila bruto (712 mg, 1,912 mmol), 1-(difluorometil)-4-iodo-3-metil-1H-pirazol (740 mg, 2,87 mmol), PdCl2(dppf) (70,0 mg, 0,096 mmol), DME (7,899 mL), e Na2CO3 a 2 M (3,95 mL) foi aquecida a 100 °C durante a noite. Após adição de Na2SO4 seguida por diluição com EtOAc, a mistura reacional foi filtrada e os materiais voláteis resultantes foram concentrados em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 100 % de EtOAc em DCM. LCMS (m/z): 491,1 (MH+), 0,64 min Etapa 3. Ácido 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoico
[00684] A uma solução de 4-(2-amino-5-(1-(difluorometil)-3-metil1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato de metila (352 mg, 0,935 mmol) em THF (6236 μL) e MeOH (3118 μL) foi adicionado LiOH (solução a 1 M) (1684 μL, 1,684 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente. À mistura reacional, HCl a 1 N foi adicionado até pH 5. A mistura reacional foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo para fornecer ácido 4-(2-amino-5-(1-(difluorometil)-3-metil1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico bruto (88%). LCMS (m/z): 363,3 (MH+), 0,51 minuto. Etapa 4. (S)-4-(2-amino-5-(1 -metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-(1 -(3clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00685] A uma solução de ácido 4-(2-amino-5-(1-(difluorometil)-3metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico (25 mg, 0,069 mmol) em DMF foram adicionado (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5(fluorometil)fenil)etanol (15,50 mg, 0,083 mmol), EDC, HOAt, e DIEA. A mistura reacional foi agitada durante 15 horas. Após água ser adicionada, a mistura reacional foi preparada com EtOAc. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa. As frações puras foram liofilizadas para fornecer (S)-4-(2-amino-5-(1(difluorometil)-3-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-(1-(3-fluoro5-(fluorometil)fenil)-2-hidroxietil)benzamida como um sal de TFA (50%). LCMS (m/z): 532,2 (MH+), 0,65 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,23 (m, 1H), 7,97 (m, 1H), 7,93 (m, 1H), 7,82 (m, 1H), 7,51 7,30 (m, 3H), 7,2 (m, 1H), 7,09 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 44 Hz, 2H), 5,14 (m, 1H), 3,8 (m, 2H), 2,32 (s, 3H). Síntese de ácido 4-(2-amino-5-(1-(difluorometil)-5-metil-1H-pirazol-4il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico
Figure img0204
[00686] Seguindo as etapas 2 e 3 no esquema 97, usando 1,5dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol, ácido 4(2-amino-5-(1-(difluorometil)-5-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoico foi obtido. LCMS (m/z): 363,1 (MH+), 0,53 minuto. Síntese de ácido 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-5-il)piridin-3-il)2-fluorobenzoico
Figure img0205
[00687] Seguindo as etapas 2 e 3 no esquema 97, usando 5-iodo-1metil-1H-1,2,3-triazol, ácido 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-5il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico foi obtido. LCMS (m/z): 314,3 (MH+), 0,38 minuto. Síntese de ácido 4-(2-amino-5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoico
Figure img0206
[00688] Seguindo as etapas 1 e 2 no esquema 97, usando 4-(2amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de metila e 1,5-dimetil-4(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol, 4-(2-amino-5(1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico ácido foi obtido. LCMS (m/z): 327,1 (MH+), 0,45 minuto. Síntese de ácido 4-(2-amino-5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoico
Figure img0207
[00689] Seguindo as etapas 2 e 3 no esquema 97, usando 4-(2amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de metila e 1,3-dimetil-4(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol, ácido 4-(2amino-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico foi obtido. LCMS (m/z): 327,2 (MH+), 0,47 minuto. Síntese de ácido 4-(2-amino-5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoico
Figure img0208
[00690] Seguindo as etapas 2 e 3 no esquema 97, usando 4-(2amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de metila e 4-bromo-1(difluorometil)-5-metil-1H-pirazol, ácido 4-(2-amino-5-(1,3-dimetil-1Hpirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico foi obtido. LCMS (m/z): 341,2 (MH+), 0,47 minuto. Síntese de (3S,4R)-4-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-metilpirrolidin-3-amina Esquema 97b
Figure img0209
Etapa 1. (E)-1-cloro-2-fluoro-4-(2-nitrovinil)benzeno
[00691] A uma solução de 4-cloro-3-fluorobenzaldeído (8 g, 50,5 mmol) e acetato de amônia (9,72 g, 126 mmol) em acético ácido (168 mL) foi adicionado nitrometano (8,16 mL, 151 mmol). A mistura reacional foi aquecida a refluxo durante 5 horas e resfriada. Água (100 mL) foi adicionada, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. O sólido foi filtrado, lavado com água, e secado sob vácuo. O sólido foi purificado por cromatografia rápida (0 a 20 % de EtOAc/heptano) para produzir produto claro 4,2 g em 41 % de rendimento. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,92 (d, J=13,7 Hz, 1H), 7,54 (d, J=13,8 Hz, 1H), 7,49 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,33 (dd, J=2,0, 9,3 Hz, 1H), 7,31 7,28 (m, 1H). Etapa 2. (+/-)-(3R,4S)-3-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-metil-4-nitropirrolidina
[00692] (E)-1-cloro-2-fluoro-4-(2-nitrovinil)benzeno (4,2 g, 20,84 mmol), ácido 2-(metilamino)acético (4,64 g, 52,1 mmol), paraformaldeído (3,75 g, 125 mmol) foram misturados em tolueno seco (104 mL). A mistura reacional foi aquecida a refluxo usando Dean-stark durante a noite. A mistura reacional foi dividida entre EtOAc e água. A orgânica foi lavada por NaCl saturado, secada sobre Na2SO4 e concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida para produzir (+/)-(3R,4S)-3-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-metil-4-nitropirrolidina em 45% de rendimento. LCMS (m/z): 259,2 (MH+), 0,52 minuto; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,37 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,15 (dd, J=2,0, 10,2 Hz, 1H), 7,09 7,01 (m, 1H), 4,91 4,82 (m, 1H), 3,98 (d, J=5,1 Hz, 1H), 3,34 (dd, J=4,1, 10,8 Hz, 1H), 3,23 (t, J=8,6 Hz, 1H), 3,10 (dd, J=7,8, 10,6 Hz, 1H), 2,63 (dd, J=7,0, 9,4 Hz, 1H), 2,44 (s, 3H). Etapa 3. (+/-)-(3S,4R)-4-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-metilpirrolidin-3-amina
[00693] Pó de zinco (5,76 g, 88 mmol) foi adicionado em uma mistura de (+/-)-(3R,4S)-3-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-metil-4-nitropirrolidina (2,28 g, 8,81 mmol) em MeOH (29,4 mL) e ácido acético (30 mL, 524 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 5 horas e filtrada. O solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi neutralizado para pH 9, em seguida extraído por IPA:CHCl3 (3:7). A orgânica foi secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (DCM/Metanol/ NH3 90:9:1) para obter (+/-)-(3S,4R)-4-(4-cloro-3-fluorofenil)-1metilpirrolidin-3-amina em 40 % de rendimento. LCMS (m/z): 229,2 (MH+), 0,25 minuto. Síntese de (+/-)-(3S,4R)-4-(3-cloro-4-fluorofenil)-1-metilpirrolidin-3amina
Figure img0210
[00694] Seguindo o esquema 97b, usando 3-cloro-4fluorobenzaldeído (3,92 g, 24,72 mmol), (+/-)-(3S,4R)-4-(3-cloro-4fluorofenil)-1-metilpirrolidin-3-amina foi obtido. LCMS (m/z): 229,0 (MH+), 0,32 minuto. Exemplos 207 e 208 Síntese de trans-4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N((3S,4R)-4-(3-cloro-4-fluorofenil)-1-metilpirrolidin-3-il)-2fluorobenzamida e trans-4-(2-amino-5-(1 -metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3il)-N-((3R,4S)-4-(3-cloro-4-fluorofenil)-1-metilpirrolidin-3-il)-2fluorobenzamida Esquema 98
Figure img0211
[00695] Seguida a Etapa 2 no esquema 89, usando (+/-)-(3S,4R)-4(3-cloro-4-fluorofenil)-1-metilpirrolidin-3-amina, 4-(2-amino-5-(1-metil1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-((3S,4R)-4-(3-cloro-4-fluorofenil)-1metilpirrolidin-3-il)-2-fluorobenzamida foi obtido em 70 % de rendimento. LCMS (m/z): 523,3 (MH+), 0,56 minuto. A mistura racêmica crua foi resolvida por SFC quiral (coluna ChiralPak 5mic OD, 4,6x100 (mm), IPA+0,1% DEA=30%, 5mL/min). For polar diastereômero (TaTr= 2,37 minutos), LCMS (m/z): 523,2 (MH+), 0,57 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,19 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,79 7,73 (m, 2H), 7,63 (d, J=2,3 Hz, 1H), 7,52 (dd, J=2,3, 7,0 Hz, 1H), 7,46 7,29 (m, 3H), 7,26 7,13 (m, 1H), 4,66 (d, J=6,3 Hz, 1H), 3,45 3,37 (m, 1H), 3,21 (t, J=9,0 Hz, 1H), 3,16 3,08 (m, 1H), 2,82 (dd, J=5,7, 10,0 Hz, 1H), 2,70 (t, J=9,2 Hz, 1H), 2,54 2,41 (m, 3H), 1,27 (d, J=17,6 Hz, 1H). Para diastereômero menos polar (TaTr= 3,96 minutos), LCMS (m/z): 523,2 (MH+), 0,58 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,19 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,79 7,73 (m, 2H), 7,63 (d, J=2,3 Hz, 1H), 7,52 (dd, J=2,3, 7,0 Hz, 1H), 7,46 7,29 (m, 3H), 7,26 7,13 (m, 1H), 4,66 (d, J=6,3 Hz, 1H), 3,45 3,37 (m, 1H), 3,21 (t, J=9,0 Hz, 1H), 3,16 3,08 (m, 1H), 2,82 (dd, J=5,7, 10,0 Hz, 1H), 2,70 (t, J=9,2 Hz, 1H), 2,54 2,41 (m, 3H), 1,27 (d, J=17,6 Hz, 1H). Exemplos 209 e 210 Síntese de trans-4-(2-amino-5-(1 -metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N((3S,4R)-4-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-metilpirrolidin-3-il)-2fluorobenzamida e trans-4-(2-amino-5-(1 -metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3il)-N-((3R,4S)-4-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-metilpirrolidin-3-il)-2fluorobenzamida Esquema 99
Figure img0212
[00696] Seguindo a etapa 2 no esquema 86, usando (3S,4R)-4-(4cloro-3-fluorofenil)-1-metilpirrolidin-3-amina, (+/-)-4-(2-amino-5-(1-metil1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-N-((3S,4R)-4-(4-cloro-3-fluorofenil)-1metilpirrolidin-3-il)-2-fluorobenzamida foi obtido em 79% de rendimento. LCMS (m/z): 523,2 (MH+), 0,57 minuto. A mistura racêmica crua foi resolvido por SFC quiral (coluna ChiralPak 5mic OD, 4,6x100 (mm), IPA+0,1% DEA=30%, 5mL/min). Para diastereômero polar (TaTr= 2,45 minutos), LCMS (m/z): 523,2 (MH+), 0,58 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,18 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,80 7,72 (m, 2H), 7,66 7,61 (m, 1H), 7,44 7,36 (m, 3H), 7,33 7,29 (m, 1H), 7,19 (dd, J=1,8, 8,3 Hz, 1H), 4,71 4,62 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,44 3,37 (m, 1H), 3,22 (d, J=9,6 Hz, 1H), 3,12 (dd, J=7,9, 10,0 Hz, 1H), 2,86 2,80 (m, 1H), 2,74 2,67 (m, 1H), 2,51 2,44 (m, 3H). Para diastereômero menos polar (TaTr= 3,92 minutos), LCMS (m/z): 523,2 (MH+), 0,58 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,19 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,80 7,70 (m, 2H), 7,63 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,46 7,36 (m, 3H), 7,30 (dd, J=2,0, 10,6 Hz, 1H), 7,19 (dd, J=1,8, 8,4 Hz, 1H), 4,66 (d, J=5,9 Hz, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,44 3,36 (m, 1H), 3,19 (t, J=9,0 Hz, 1H), 3,11 (dd, J=7,8, 10,0 Hz, 1H), 2,83 2,78 (m, 1H), 2,69 (dd, J=8,4, 9,5 Hz, 1H), 2,45 (s, 3H). Síntese de ácido 4-(3-amino-6-ciclopropilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoico Esquema 100
Figure img0213
Etapa 1. 4-(3-amino-6-ciclopropilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00697] Ao 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (para síntese veja Exemplo 34, Etapa 2) (300 mg, 0,920 mmol) em tolueno (10 mL) e água (1 mL) foi adicionado trifluoroborato de ciclopropila de potássio (408 mg, 2,76 mmol), di(1-adamantil)-n-butilfosfina (66,0 mg, 0,184 mmol), carbonato de césio (1499 mg, 4,60 mmol), e acetato de paládio(II) (20,65 mg, 0,092 mmol). A mistura reacional foi aquecida em bloco de aquecimento a 100 °C durante a noite. A mistura reacional foi extinguida com NH4Cl saturado e extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com salmoura, secados sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. O bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 80 % de EtOAc em heptano) produzindo 4-(3-amino-6-ciclopropilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (250 mg, 90%). LCMS (m/z): 288,2 (MH+), 0,756 minuto. Etapa 2. Ácido 4-(3-amino-6-ciclopropilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoico
[00698] Ao 4-(3-amino-6-ciclopropilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (250 mg, 0,870 mmol) em THF (6 mL) e MeOH (3 mL) foi adicionado LiOH a 1M (1,740 mL, 1,740 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. O pH das misturas reacionais foi ajustado para ~4 por HCl aquoso a 2N. A mistura reacional foi dividida entre EtOAc e água. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada para produzir ácido 4-(3-amino-6-ciclopropilpirazin-2-il)-2fluorobenzoico (230 mg, 97%) como um sólido amarelo claro. LCMS (m/z): 274,2 (MH+), 0,621 minuto. Síntese de ácido 4-(2-amino-5-ciclopropilpiridin-3-il)-2-fluorobenzoico
Figure img0214
[00699] Seguindo o esquema 100, usando 4-(2-amino-5bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de metila, ácido 4-(2-amino-5ciclopropilpiridin-3-il)-2-fluorobenzoico foi obtido (80%). LCMS (m/z): 273,0 (MH+), 0,515 minuto. Síntese de ácido 4-(3-amino-6-ciclo-hexilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoico
Figure img0215
[00700] Seguindo as etapas 1, 2 e 3 no esquema 66, usando 2(ciclo-hex-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano, ácido 4-(3amino-6-ciclo-hexilpirazin-2-il)-2-fluorobenzoico foi obtido. LCMS (m/z): 316,3 (MH+), 0,79 minuto. Exemplo 211 Síntese de 4-(2-amino-5-((1S,4r)-1-oxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida Esquema 101 Etapa 1.4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
Figure img0216
[00701] Uma mistura desgaseificada de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina (2,4 g, 10,91 mmol), 4-bromo-2fluorobenzoato de terc-butila (3,30 g, 12,00 mmol), Pd(PPh3)4 (0,63 mg, 0,0,545 mmol), solução de Na2CO3 aquoso a 2,0 M (10,91 mL) em n-butanol (26 mL) foi aquecida por micro-ondas para 130 °C durante 10 minutos. A reação foi diluída com acetato de etila (30 mL), e em seguida lavada com água (10 mL) e salmoura (10 mL). As orgânicas foram secadas sobre sulfato de sódio, filtradas, concentradas, e em seguida purificadas por cromatografia rápida (10 a 60 % de eluente de acetato de etila/heptano) para fornecer 4-(2-aminopiridin-3-il)-2fluorobenzoato de terc-butila (1,35 g, 43% de rendimento). LCMS (m/z): 289,4 (MH+), 0,67 minuto. Etapa 2. 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00702] Uma solução de 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (700 mg, 2,43 mmol) em acetonitrila (10 mL) foi tratada com NBS (453 mg, 2,55 mmol). Depois de 10 minutos, a reação foi concluída. A reação foi tratada com 1:1 de NaHCO3 aquoso saturado: Na2S2O3 aquoso saturado (10 mL). A mistura foi agitada vigorosamente durante 10 minutos. A mistura foi diluída com acetato de etila (30 mL) e as camadas foram separadas. As orgânicas foram lavadas com salmoura, secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas para fornecer 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de tercbutila (803 mg, 90 % de rendimento). LCMS (m/z): 367,2, 369,2 (MH+), 0,75 minuto. Etapa 3. 4-(2-amino-5-(3,6-di-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoato de terc-butila
[00703] Uma mistura desgaseificada de 4-(2-amino-5-bromopiridin3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (400 mg, 1,09 mmol), 2-(3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (296 mg, 1,31 mmol), Pd(PPh3)4 (126 mg, 0,109 mmol) em solução de Na2CO3 aquoso a 2,0 M (1,63 mL) e n-butanol (5 mL) foi aquecida por microondas para 130 oC durante 15 minutos. A reação foi diluída com acetato de etila (20 mL), e em seguida lavada com água (10 mL) e salmoura (10 mL). As orgânicas foram secadas sobre sulfato de sódio, filtradas, concentradas, e em seguida purificadas por cromatografia rápida (10 a 60 % de eluente de acetato de etila/heptano) para fornecer 4-(2-amino5-(3,6-di-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato de tercbutila (400 mg, 95% de rendimento). LCMS (m/z): 387,1 (MH+), 0,87 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,83 7,76 (m, 2H), 7,68 (d, J = 1,96 Hz, 1H), 7,37 7,34 (m, 1H), 7,33 7,29 (m, 2H), 7,28 7,24 (m, 2H), 7,24 7,18 (m, 1H), 5,10 (t, J = 5,87 Hz, 1H), 3,83 3,69 (m, 2H), 2,81 2,70 (m, 2H), 2,63 2,49 (m, 3H), 2,08 (dd, J = 2,74, 13,30 Hz, 2H), 1,72 (dq, J = 2,93, 12,59 Hz, 2H). Etapa 4. 4-(2-amino-5-(1 -oxido-3,6-di-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)2-fluorobenzoato de terc-butila
[00704] Uma solução a 0 oC de 4-(2-amino-5-(3,6-di-hidro-2Htiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato em acetona (20 mL) foi tratada com uma solução de oxona (227 mg, 0,369 mmol) em água (5 mL). Após 20 minutos, a reação foi diluída com acetato de etila (50 mL) e água (50 mL). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi lavada com acetato de etila (50 mL). As orgânicas combinadas foram lavadas com água (30 mL) e salmoura (30 mL), secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas para fornecer 4-(2-amino-5-(1oxido-3,6-di-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato de tercbutila (220 mg, 74% de rendimento). LCMS (m/z): 403,5 (MH+), 0,66 minuto. Etapa 5. 4-(2-amino-5-((1r,4r)-1-oxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00705] Uma suspensão desgaseificada de 4-(2-amino-5-(1-oxido3,6-di-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (220 mg, 0,547 mmol) em metanol (15 mL) foi tratada com solução aquosa de HCl a 1,0 N (0,82 mL) e 10 % de Pd(OH)2. O vaso foi carregado com hidrogênio para 17,57 kg/cm2 (250 psi). Após 2 horas, a reação foi concluída. A suspensão foi desgaseificada, filtrada sobre celita e concentrada para fornecer 4-(2-amino-5-((1r,4r)-1-oxidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (150 mg, 68% de rendimento). LCMS (m/z): 405,6 (MH+), 0,63 minuto. Etapa 6. TFA-ácido 4-(2-amino-5-((1r,4r)-1-oxidotetra-hidro-2Htiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico
[00706] Uma solução em temperatura ambiente de 4-(2-amino-5((1r,4r)-1-oxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (50 mg, 0,124 mmol) em DCM (2 mL) foi tratada com TFA (1 mL). Após 1 hora, a reação foi concentrada. O material resultante foi suspenso em benzeno com sonicação, e em seguida concentrado novamente para fornecer TFA-ácido 4-(2-amino-5-((1r,4r)-1oxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico (57 mg, 100 % de rendimento). LCMS (m/z): 349,2 (MH+), 0,37 minuto. Etapa 7. 4-(2-amino-5-((1S,4r)-1-oxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00707] Uma solução de TFA-ácido 4-(2-amino-5-((1r,4r)-1oxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico (57 mg, 0,123 mmol) e (S)-2-amino-2-(3-clorofenil)etanol (25 mg, 0,148 mmol) em DMF (1 mL) foi tratada com HATU (61 mg, 0,160 mmol) e DIEA (129 μL, 0,738 mmol). Após 1 hora, a reação foi diluída com água (5 mL) e extraída em acetato de etila (2 x 10 mL). O produto foi apresentado em ambas as camadas. Portanto, tanto as camadas orgânicas quanto as aquosas foram concentradas e purificadas por HPLC preparativa de fase reversa para fornecer 4-(2-amino-5-((1S,4r)-1-oxidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-N-((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida como um sal de TFA (20 mg, 26% de rendimento). LCMS (m/z): 502,1, 504,1 (MH+), 0,57 minuto. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,63 (dd, J = 4,11, 7,24 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 1,96 Hz, 1H), 7,80 (t, J = 7,83 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 1,57 Hz, 1H), 7,38 7,31 (m, 3H), 7,29 -7,25 (m, 2H), 7,24 7,17 (m, 1H), 5,14 5,06 (m, 1H), 3,83 3,70 (m, 2H), 3,06 (d, J = 12,91 Hz, 2H), 2,85 2,70 (m, 3H), 2,38 2,24 (m, 2H), 1,83 (d, J = 12,13 Hz, 2H). Exemplo 212 Síntese de (S)-4-(2-amino-5-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-N(1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
Figure img0217
[00708] A sequência de reação descrita no esquema 101, etapas 5, 6, e 7 foi aplicada ao 4-(2-amino-5-(3,6-di-hidro-2H-tiopiran-4-il)piridin3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila para obter (S)-4-(2-amino-5-(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)piridin-3-il)-N-(1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2fluorobenzamida. LCMS (m/z): 486,0, 488,0 (MH+), 0,73 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,83 -7,76 (m, 2H), 7,68 (d, J = 1,96 Hz, 1H), 7,37 -7,34 (m, 1H), 7,33 -7,29 (m, 2H), 7,28 7,24 (m, 2H), 7,24 7,18 (m, 1H), 5,10 (t, J = 5,87 Hz, 1H), 3,83 3,69 (m, 2H), 2,81 -2,70 (m, 2H), 2,63 2,49 (m, 3H), 2,08 (dd, J = 2,74, 13,30 Hz, 2H), 1,72 (dq, J = 2,93, 12,59 Hz, 2H). Síntese de ácido 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2metilbenzoico Esquema 102
Figure img0218
Etapa 1.4-bromo-2-metilbenzoato de metila
[00709] A mistura agitada de ácido 4-bromo-2-metilbenzoico (6 g, 27,9 mmol), iodometano (5,21 mL, 84 mmol) e carbonato de potássio (11,57 g, 84 mmol) em DMF (60 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi dividida entre água (250 mL) e 4:1 hexanos:acetato de etila (650 mL). A camada orgânica foi lavada com água e secada sobre Na2SO4. O solvente foi removido sob vácuo para fornecer 6,39 g de produto desejado como um óleo em 100 % de rendimento. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,86 7,65 (m, 7 H) 7,50 (br. s., 2 H) 3,88 (s, 3 H) 2,56 (s, 3 H). Etapa 2. 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina
[00710] A uma suspensão de 3-bromopiridin-2-amina (6 g, 34,7 mmol) em 1,4-dioxano (87 mL) foram adicionados Bispina (13,21 g, 52,0 mmol) e acetato de potássio (10,21 g, 104 mmol). A mistura foi purgada com nitrogênio durante 10 minutos, e em seguida aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (2,83 g, 3,47 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi aquecida para 108 °C em um óleo de banho durante 2 3 horas. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila, filtrada através de celita e concentrada. O resíduo foi usado na etapa seguinte para acoplamento Suzuki sem outra purificação. LCMS (m/z): 139 (MH+) 0,22 min (para ácido borônico). Etapa 3. 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-metilbenzoato de metila
[00711] À 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2amina (7,37 g, 33,5 mmol) em frasco de base redonda de 500 mL foram adicionados 4-bromo-2-metilbenzoato de metila (6,390 g, 27,9 mmol), PdCl2(dppf)-DCM (2,041 g, 2,79 mmol), DME (209 mL) e solução de Na2CO3 a 2 M (69,7 mL). A mistura reacional foi borbulhada através de N2 durante 20 minutos e aquecida em um banho de óleo a 108 °C durante 1,5 horas. A mistura reacional foi diluída com EtOAc, lavada com água três vezes, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 100 % de EtOAc (contendo 10 % de MeOH)/heptano para fornecer produto bruto em torno de 8 g que continha quantidade razoável de B2(PIN)2 de experimento anterior. Éter foi adicionado para dissolver a mistura crua, e em seguida heptano foi adicionado para subjugar o produto desejado. O sólido foi filtrado para fornecer 4,2 g de produto desejado com pureza elevada em 62,1 % de rendimento. LCMS (m/z): 243,5 (MH+), 0,56 minuto. Etapa 4. 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-metilbenzoato de metila
[00712] A uma solução de 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-metilbenzoato de metil (4,2 g, 17,34 mmol) em acetonitrila (173 mL) foi adicionado NBS (3,15 g, 17,68 mmol) em duas porções a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 20 minutos. LCMS mostrou a reação concluída. Depois de extinguida com Na2SO3 saturado e NaHCO3, a mistura reacional foi agitada durante 30 minutos. A mistura reacional foi extraída com EtOAc 3 vezes, lavada por NaHCO3 saturado, água e salmoura. As orgânicas foram secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas. O material bruto foi triturado com éter e levado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 323,1 (MH+), 0,68 minuto. Etapa 5. 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-metilbenzoato de metila
[00713] Ao 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-metilbenzoato de metila (500 mg, 1,557 mmol) em frasconete de MW de 20 mL foram adicionados 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (421 mg, 2,024 mmol), PdCl2(dppf)DCM (114 mg, 0,156 mmol), DME (11,7 mL) e solução de Na2CO3 a 2 M (3,892 mL). A mistura reacional foi aquecida em sintetizador de micro-ondas (12 minutos, 120 °C). A mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com água três vezes, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 100 % de EtOAc (contendo 10 % de MeOH)/heptano para fornecer produto bruto que foi triturado com éter para fornecer 400 mg de produto puro em 80 % de rendimento. LCMS (m/z): 323,4 (MH+), 0,60 minuto. Etapa 6. Ácido 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2metilbenzoico
[00714] A uma solução de 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-4il)piridin-3-il)-2-metilbenzoato de metila (1,20 g, 3,72 mmol) em THF/MeOH/H2O (1:1:1, 36 mL) foi adicionado LiOH-H2O (0,234 g, 5,58 mmol). A solução foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O pH foi ajustado para 3 a 5, idealmente 4. Todos os solventes orgânicos foram removidos por pressão reduzida. EtOAc foi adicionado para triturar todas as impurezas. Água foi adicionada e a mistura foi agitada durante 30 minutos. O sólido foi filtrado e bem lavado com 50 % de éter e água. O sólido foi em seguida azotropado em Rodovap com tolueno para fornecer cerca de 800 mg de ácido desejado em 69,7 % de rendimento. LCMS (m/z): 309,2 (MH+), 0,50 minuto. Síntese de ácido 4-(2-amino-5-(1-etil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoico Esquema 103
Figure img0219
Etapa 1.4-bromo-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00715] Uma suspensão de ácido 4-bromo-2-fluorobenzoico (20,16 g, 92 mmol) em dioxano (90 mL) e H2SO4 concentrado (5 mL) foi resfriada para 0 °C, e em seguida borbulhada completamente com isobuteno durante 2 horas. A reação foi deixada aquecer gradualmente para temperatura ambiente durante a noite. NaHCO3 sólido (40 g) foi cuidadosamente adicionado à reação e a mistura foi agitada durante 1 hora. A mistura foi concentrada, e em seguida redissolvida em água e acetato de etila. As camadas foram separadas. A fase aquosa foi lavada com acetato de etila. As orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCO3 saturado aquoso e salmoura, em seguida secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas. O 4-bromo-2-fluorobenzoato de tercbutila oleoso resultante foi usado sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz, MeOH-d4) δ ppm 7,79 7,70 (m, 1H), 7,42 7,23 (m, 3H), 1,59 (s, 11H). Etapa 2. 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de terc-butila
[00716] Uma suspensão de 4-bromo-2-fluorobenzoato de terc-butila (5,55 g, 20,17 mmol), BISPIN (7,68 g, 30,3 mmol), aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2(1,153 g, 1,412 mmol) e acetato de potássio (5,94 g, 60,5 mmol) em DMF (75 mL) foi desgaseificada, e em seguida aquecida para 100 °C durante a noite. A reação foi concentrada, em seguida dissolvida em DCM, filtrada sobre celita, e em seguida lavada com água e salmoura. As orgânicas foram filtradas sobre celita, concentradas, e em seguida purificadas por cromatografia rápida eluindo com 0 20 % de acetato de etila/heptano para fornecer 5,2 g de 2fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de tercbutila em 80 % de rendimento. Etapa 3. 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00717] Uma suspensão de 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)benzoato de terc-butila (5,1 g, 15,83 mmol), 3bromoaminopiridina (3,01 g, 17,41 mmol) e Pd(PPh3)4 (0,732 g, 0,633 mmol) em n-butanol (50 mL) e solução de Na2CO3 aquoso a 2,0 M (19,79 mL, 39,6 mmol) foi desgaseificada, e em seguida aquecida para 100 °C durante a noite. A reação foi resfriada, e diluída com acetato de etila. As camadas foram separadas, e as orgânicas foram lavadas com salmoura, filtradas sobre celita e concentradas. O bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 10 50 % de acetato de etila/heptano para fornecer 3,41 g de terc-butil 4-(2-aminopiridin-3-il)-2fluorobenzoato in 75% de rendimento. Etapa 4. 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00718] NBS (2,145 g, 12,05 mmol) foi adicionado a uma solução de temperatura ambiente de 4-(2-aminopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (3,31 g, 11,48 mmol) em MeCN (60 mL). A mistura resultante foi agitada durante 10 minutos. A reação foi extinguida com 1:1 de Na2S2O3 aquoso saturado:NaHCO3 aquoso saturado, e em seguida extraída em acetato de etila. As orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre sulfato de sódio e concentradas em vácuo produzindo 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila. O material foi usado sem outra purificação. LCMS (m/z): 369,0 (MH+), 0,85 minuto. Etapa 5. 4-(2-amino-5-(1-etil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00719] Ao 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de tercbutila (200 mg, 0,544 mmol) (veja, Esquema 101, Etapa 2 para síntese) em DME (3 mL) e carbonato de sódio a 2 M (1,5 mL, 3,0 mmol) foi adicionado 1-etil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1Hpirazol (182 mg, 0,816 mmol) seguido por aduzido de PdCl2(dppf)CH2Cl2 (44,5 mg, 0,054 mmol). A mistura reacional foi submetida a micro-onda aquecido a 120 °C durante 20 minutos. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O bruto foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 50 % de EtOAc (contém 10 % de MeOH) / heptano produzindo 4(2-amino-5-(1-etil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato de tercbutila (160 mg, 77%). LCMS (m/z): 383,2 (MH+), 0,782 minuto. Etapa 6. Ácido 4-(2-amino-5-(1-etil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoico
[00720] Ao 4-(2-amino-5-(1-etil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoato de terc-butila (160 mg, 0,418 mmol) em DCM (0,5 mL) foi adicionado TFA (2 mL, 26 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reacional foi coevaporada com tolueno em vácuo. O ácido 4-(2-amino-5-(1-etil-1Hpirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico bruto foi usado para a etapa seguinte. LCMS (m/z): 327,2 (MH+), 0,509 minuto. Exemplo 213 4-(2-amino-5-(1-(metilsulfonil)pirrolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)-2hidróxi-1-feniletil)benzamida Esquema 104
Figure img0220
Etapa 1.4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00721] A uma mistura de 3-cloropirazin-2-amina (5 g, 38,6 mmol) em DME (160 mL) e carbonato de sódio aquoso a 2 M (40 mL, 80 mmol) foram adicionados 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)benzoato de metila (12,97 g, 46,3 mmol) seguido por aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2(3,15 g, 3,86 mmol). A mistura reacional foi purgada com N2 e aquecida em um banho de óleo a 100 °C durante 3 -4 h. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O bruto foi triturado com DCM. O sólido observado foi filtrado, lavado com éter e secado sob pressão reduzida para fornecer produto como um sólido esbranquiçado. O filtrado foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 50 a 80 % de EtOAc / heptano para fornecer 10,6 g de produto in 93% de rendimento. LCMS (m/z): 248,1 (MH+), 0,563 minuto. Etapa 2. 4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00722] A uma mistura de 4-(3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (8,9 g, 36,0 mmol) em acetonitrila (300 mL) em um banho de gelo foi adicionado NBS (5,77 g, 32,4 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 1 hora. NBS (0,05 equivalente) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada durante mais 30 minutos. À mistura reacional foi adicionada solução de bicarbonato de sódio saturado. A mistura foi agitada durante 30 minutos e produto foi extraído com EtOAc. Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com salmoura, secados sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. O resíduo foi secado sob vácuo elevado para fornecer um sólido marrom (12,2g, 94%). LCMS (m/z): 326,0/328,0 (MH+), 0,846 minuto. Etapa 3. 5-(((trifluorometil)sulfonil)óxi)-3,4-di-hidropiridina-1(2H)carboxilato de terc-butila
[00723] 3-oxopiperidina-1-carboxilato de terc-butila (1,1 g, 5,52 mmol) foi apreendido em THF (10 mL) e resfriado para -78 °C. A este foi adicionado bis(trimetilsilil)amida de lítio (6,07 mL, 6,07 mmol) (solução a 1 M em THF). A mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 20 minutos, e em seguida uma solução de 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N((trifluorometil)sulfonil)metanossulfonamida (2,071 g, 5,80 mmol) em THF (10 mL) foi adicionado gota a gota. A mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 15 minutos, em seguida aquecida para e agitada a 0 °C durante 3 horas. A mistura reacional foi extinguida com solução de bicarbonato de sódio saturado e em seguida extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram lavados com salmoura, secados sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. O bruto foi purificado através de um tampão de alumina neutra com 10 % de EtOAc em heptano. O solvente foi evaporado e o resíduo foi secado para fornecer o produto desejado como um líquido amarelo (2 g, 98%). Etapa 4. 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,4-di-hidropiridina1(2H)-carboxilato de terc-butila
[00724] Uma mistura de 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2dioxaborolano) (1,223 g, 4,81 mmol), acetato de potássio (1,289 g, 13,13 mmol) e aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (0,107 g, 0,131 mmol) em frasco foi estimulada com N2, e em seguida dioxano (12 mL) foram adicionados, seguido por uma solução de 5(((trifluorometil)sulfonil)óxi)-3,4-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc-butila (1,45 g, 4,38 mmol) em dioxano (12 mL). A mistura reacional foi purgada com N2 durante 5 minutos, e em seguida aquecida em banho de óleo a 80 °C durante a noite. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 30 % de EtOAc / heptano para produzir o produto desejado como um líquido altamente viscoso (1,2 g, 89%). LCMS (m/z): 254,1 (MH+-tBu), 1,21 minuto. Etapa 5. 5-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(metoxicarbonil)fenil)pirazin-2-il)-3,4di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc-butila
[00725] A uma mistura de 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (240 mg, 0,70 mmol) em DME (6 mL) e carbonato de sódio a 2 M (1,0 mL, 2,0 mmol) foram adicionados 5(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,4-di-hidropiridina-1(2H)carboxilato terc-butila (180 mg, 0,582 mmol) seguido por aduzido de PdCh(dppf).CH2Ch (14,4 mg, 17,5 μmol). A mistura reacional foi aquecida em micro-ondas a 110 °C durante 20 minutos. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A camada orgânica foi separada, e lavada com água e salmoura. A orgânica foi secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida eluindo com 0 a 50 a 80 % de EtOAc em heptano para produzir o produto desejado como um sólido amarelo (150 mg, 60%). LCMS (m/z): 429,2 (MH+), 1,03 minuto. Etapa 6. 4-(3-amino-6-(1,4,5,6-tetra-hidropiridin-3-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila
[00726] Ao 5-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(metoxicarbonil)fenil)pirazin-2il)-3,4-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc-butila (150 mg, 0,350 mmol) (mistura inseparável) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL, 12,98 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 30 45 minutos. A mistura reacional foi evaporada em Rotovap, e azeotropada com tolueno. O produto bruto prosseguiu para a etapa seguinte sem purificação. LCMS (m/z): 329,2 (MH+), 0,502 minuto. Etapa 7. 4-(3-amino-6-(piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00727] Ao 4-(3-amino-6-(1,4,5,6-tetra-hidropiridin-3-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (115 mg, 0,350 mmol) em MeOH (10 mL) foi adicionado Pd/C (93 mg, 0,088 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 24 horas sob balão de H2. A mistura reacional foi filtrada através de celita e lavada com DCM. O filtrado foi evaporado e secado para produzir o produto desejado. O produto bruto prosseguiu para a etapa seguinte (115 mg, 95%). LCMS (m/z): 331,2 (MH+), 0,492 minuto. Etapa 8. 4-(3-amino-6-(1 -(metilsulfonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila
[00728] A uma mistura de 4-(3-amino-6-(piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila bruto (38 mg, 0,114 mmol) em DCM (2 mL) em um banho de gelo foi adicionado DIEA (79 μL, 0,454 mmol) seguido por cloreto de metanossulfonila (9,73 μL, 0,125 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 30 minutos. A mistura reacional foi dividida entre DCM e água. A camada de DCM foi separada e lavada com salmoura. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O produto bruto (50 % de pureza) prosseguiu para a etapa seguinte. LCMS (m/z): 409,1 (MH+), 0,721 minuto. Etapa 9. Ácido 4-(3-amino-6-(1-(metilsulfonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)2-fluorobenzoico
[00729] Ao 4-(3-amino-6-(1-(metilsulfonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (60 mg, 0,147 mmol) em THF (4 mL) e MeOH (2 mL) foi adicionado LiOH a 1 M (400 μL, 0,400 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O pH da mistura reacional foi ajustado para ~3 a 4 com HCl a 2 N, e o produto foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi separada de água e lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada, e evaporada para fornecer o produto bruto, que foi levado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 395,1 (MH+), 0,573 minuto. Etapa 10. 4-(3-amino-6-(1 -(metilsulfonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2fluoro-N-((S)-2-hidróxi-1-feniletil)benzamida
[00730] A uma mistura de ácido 4-(3-amino-6-(1(metilsulfonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (40 mg, 0,101 mmol) em DMF (1 mL) foram adicionados (S)-2-amino-2-feniletanol (13,91 mg, 0,101 mmol) seguido por HATU (57,8 mg, 0,152 mmol) e DIEA (0,089 mL, 0,507 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi diluída com DMF e filtrada através de filtro de seringa, que foi em seguida purificada por HPLC preparativa para produzir o produto desejado como um sal de TFA (33,4%). LCMS (m/z): 514,2 (MH+), 0,687 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm7,95 (s, 1 H) 7,85 (t, J=7,83 Hz, 1 H) 7,737,57 (m, 2 H) 7,49-7,21 (m, 5 H) 5,22 (d, J=6,65 Hz, 1 H) 3,94-3,78 (m, 3 H) 3,71 (d, J=11,74 Hz, 1 H) 3,03-2,93 (m, 2 H) 2,87-2,74 (m, 4 H) 2,07-1,97 (m, 1 H) 1,92 (d, J=12,13 Hz, 1 H) 1,85-1,68 (m, 1 H)1,371,25 (m, 1 H). Exemplo 214 3-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(((S)-2-hidróxi-1feniletil)carbamoil)fenil)pirazin-2-il)piperidina-1-carboxilato de metila Esquema 105
Figure img0221
Etapa 1. 3-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(metoxicarbonil)fenil)pirazin-2il)piperidina-1-carboxilato de metila
[00731] Ao 4-(3-amino-6-(piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (55 mg, 0,166 mmol) (para síntese, veja Exemplo 34, Etapa 7) em DCM (3 mL) em banho de gelo foram adicionados DIEA (0,116 mL, 0,666 mmol) e cloroformiato de metila (0,013 mL, 0,166 mmol). A mistura reacional foi agitada em um banho de gelo durante 30 minutos. A mistura reacional foi dividida entre DCM e água. A camada de DCM foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O resíduo (50 mg, 77%) foi levado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 389,2 (MH+), 0,785 minuto. Etapa 2. Ácido 4-(3-amino-6-(1-(metoxicarbonil)piperidin-3-il)pirazin-2il)-2-fluorobenzoico
[00732] Ao 3-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(metoxicarbonil)fenil)pirazin-2il)piperidina-1-carboxilato de metila (50 mg, 0,129 mmol) em THF (4 mL) e MeOH (2 mL) foi adicionado LiOH a 1 M (0,500 mL, 0,500 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura reacional pH foi ajustada para ~ 3 com HCl a 2 N, e produto foi extraído com acetato de etila. A camada de EtOAc foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O resíduo prosseguiu para a etapa seguinte sem purificação (40 mg, 83%). LCMS (m/z): 375,2 (MH+), 0,637 minuto. Etapa 3. 3-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(((S)-2-hidróxi-1-feniletil)carbamoil)fenil)pirazin-2-il)piperidina-1-carboxilato de metila
[00733] A uma mistura de ácido 4-(3-amino-6-(1(metoxicarbonil)piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (28 mg, 0,06 mmol) em DMF (1 mL) foram adicionados (S)-2-amino-2-feniletanol (12,31 mg, 0,090 mmol) seguido por HATU (34,1 mg, 0,090 mmol) e DIEA (0,052 mL, 0,299 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi diluída com DMF, filtrada através de filtro de seringa e purificada por HPLC preparativa para produzir o produto desejado como um sal de TFA (10,9 mg, 29,4%) LCMS (m/z): 494,2 (MH+), 0,733 minuto. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm7,82-7,72 (m, 2 H) 7,63-7,48 (m, 2 H) 7,38-7,11 (m, 5 H) 5,12 (t, J=6,06 Hz, 1 H) 4,09 (d, J=12,91 Hz, 1 H) 3,97 (d, J=12,13 Hz, 1 H) 3,87-3,68(m, 2 H) 3,59 (s, 3 H) 3,11-2,66 (m, 3 H) 2,00 a 1,88 (m, 1 H) ) 1,85-1,65 (m, 2 H) 1,58-1,40 (m, 1 H) Exemplo 215 4-(6-(1-acetilpiperidin-3-il)-3-aminopirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidróxi1-feniletil)benzamida Esquema 106
Figure img0222
Etapa 1. 4-(6-(1-acetilpiperidin-3-il)-3-aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00734] A uma mistura de 4-(3-amino-6-(piperidin-3-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (55 mg, 0,166 mmol) (para síntese, veja exemplo 34, Etapa 7) em DCM (3 mL) em banho de gelo foi adicionado DIEA (0,116 mL, 0,666 mmol) seguido por cloreto de acetila (0,012 mL, 0,166 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 30 minutos. A mistura reacional foi dividida entre DCM e água. A camada de DCM foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O resíduo prosseguiu para a etapa seguinte sem purificação (50 mg, 81%). LCMS (m/z): 373,3 (MH+), 0,666 minuto. Etapa 2. Ácido 4-(6-(1-acetilpiperidin-3-il)-3-aminopirazin-2-il)-2fluorobenzoico
[00735] A uma mistura de 4-(6-(1-acetilpiperidin-3-il)-3aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (50 mg, 0,134 mmol) em THF (4 mL) e MeOH (2 mL) foi adicionado LiOH a 1 M (0,500 mL, 0,500 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 4 horas. O pH da mistura reacional foi ajustado para ~3 com HCl a 2 N, e o produto foi extraído com acetato de etila. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O resíduo prosseguiu para a etapa seguinte sem purificação (34 mg, 70,7%). LCMS (m/z): 359,1 (MH+), 0,534min. Etapa 3. 4-(6-(1 -acetilpiperidin-3-il)-3-aminopirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)2-hidróxi-1-feniletil)benzamida
[00736] A uma mistura de ácido 4-(6-(1-acetylpiperidin-3-il)-3aminopirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (34 mg, 0,076 mmol) em DMF (1,5 mL) foram adicionados (S)-2-amino-2-feniletanol (15,62 mg, 0,114 mmol), seguido por HATU (43,3 mg, 0,114 mmol) e DIEA (0,066 mL, 0,379 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi diluída com DMF, filtrado através de filtro de seringa e purificada por HPLC preparativa para produzir o produto desejado como um sal de TFA (13,9 mg, 30%). LCMS (m/z): 478,2 (MH+), 0,641 minuto. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,98-7,97 (m, 2 H) 7,73-7,58 (m, 2 H) 7,47-7,23 (m, 5 H) 5,22 (t, J=6,06 Hz, 1 H) 4,62-4,37 (m, 1 H) 4,08-3,75 (m, 3 H) 3,27-3,08 (m, 1 H) 3,032,71 (m, 2 H) 2,11 (d, J=11,35 Hz, 3 H) 2,04 (d, J=8,22 Hz, 1 H) 2,00 a 1,75 (m, 2 H) 1,73-1,46 (m, 1 H) Exemplo 216 3-(5-amino-6-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)-3fluorofenil)pirazin-2-il)piperidina-1-carboxilato de metila Esquema 107
Figure img0223
[00737] Ao ácido 4-(3-amino-6-(1-(metoxicarbonil)piperidin-3il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (12 mg, 0,026 mmol) (para síntese, veja Exemplo 35, Etapa 2) em DMF (1 mL) foram adicionado s(S)-2-amino2-(3-clorofenil)etanol (6,60 mg, 0,038 mmol), seguido por HATU (14,63 mg, 0,038 mmol) e DIEA (0,022 mL, 0,128 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi diluída com DMF, filtrada através de filtro de seringa e purificada por HPLC preparativa para produzir produto desejado como um sal de TFA (6,5 mg, 38%). LCMS (m/z): 528,1/530,1 (MH+), 0,798 minuto. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm7,96-7,80 (m, 2 H) 7,75-7,58 (m, 2 H) 7,50 a 7,23 (m, 4 H) 5,19 (t, J=5,87 Hz, 1 H) 4,25-4,01 (m, 2 H) 3,92-3,79 (m, 2 H) 3,68 (s, 3 H) 3,20 a 2,74 (m, 3 H) 2,08-1,97 (m, 1 H) 1,91-1,73 (m, 2 H) 1,67-1,51 (m, 1 H) Exemplo 217 (S)-4-(3-amino-6-(1-etil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-(2hidróxi-1-feniletil) benzamida Esquema 108
Figure img0224
Etapa 1. 4-(3-amino-6-(1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato) de metila
[00738] Ao 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (Para síntese, veja Exemplo 34, Etapa 2) (100 mg, 0,307 mmol) em DME (3 mL) e carbonato de sódio a 2 M (0,75 mL, 1,5 mmol) foram adicionados 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol-1carboxilato de terc-butila (90 mg, 0,307 mmol) seguido por aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (25,04 mg, 0,031 mmol). A mistura reacional foi aquecida em micro-ondas a 120 °C durante 15 minutos. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A camada orgânica foi separada, lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O resíduo prosseguiu para a etapa seguinte sem purificação (90 mg, 74%, 80 % de pureza). LCMS (m/z): 314,1 (MH+), 0,595 minuto. Etapa 2. 4-(3-amino-6-(1-etil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00739] Ao 4-(3-amino-6-(1H-pirazol-4-il) pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (45 mg, 0,115 mmol) em DMF (2 mL) foram adicionados carbonato de potássio (47,6 mg, 0,345 mmol), seguido por bromoetano (0,017 mL, 0,230 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 48 horas. As misturas reacionais foram divididas entre acetato de etila e água. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada, evaporada e purificada por cromatografia rápida eluindo com 0 60 % de EtOAc (contém 10 % de MeOH) / heptano para produzir o produto desejado (25 mg, 64%, 80 % de pureza). LCMS (m/z): 342,0 (MH+), 0,73 minuto. Etapa 3. Ácido 4-(3-amino-6-(1-etil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico
[00740] Ao 4-(3-amino-6-(1-etil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (25 mg, 0,073 mmol) em MeOH (1 mL) e THF (2 mL) foi adicionado LiOH a 1 M (0,220 mL, 0,2 20 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 4 horas. O pH da mistura reacional foi ajustado para ~ 4 por HCl a 2 N. O produto foi extraído com acetato de etila duas vezes. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secados sobre sulfato de sódio, filtrados, e evaporados. O resíduo prosseguiu para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 328,1 (MH+), 0,607 minuto. Etapa 4. (S)-4-(3-amino-6-(1 -etil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N(2-hidróxi-1-feniletil) benzamida
[00741] Ao ácido 4-(3-amino-6-(1-etil-1H-pirazol-4-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico (25 mg, 0,076 mmol) em DMF (1 mL) foi adicionado EDC.HCl (21,96 mg, 0,115 mmol), seguido por HOAt (15,60 mg, 0,115 mmol), (S)-2-amino-2-feniletanol (15,92 mg, 0,092 mmol) e DIEA (0,040 mL, 0,229 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 6 horas. A mistura reacional foi diluída com DMF e filtrada através de filtro de seringa. O bruto foi purificado por HPLC preparativa para produzir o produto desejado como um sal de TFA (9,1mg, 17%). LCMS (m/z): 447,2 (MH+), 0,699 minuto. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,67-8,41 (m, 1 H), 8,17 (s, 1 H), 8,03 (s, 1 H), 7,86 (s, 1 H), 7,78 (t, J=7,63 Hz, 1 H), 7,67-7,53 (m, 2 H), 7,40 a 7,09 (m, 5 H), 5,21-5,03 (m, 1 H), 4,13 (q, J=7,30 Hz, 2 H), 3,86-3,65 (m, 2 H), 1,39 (t, J=7,24 Hz, 3 H). Exemplo 218 Síntese de 4-(2-amino-5-(5-oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)2-hidróxi-1-feniletil)benzamida Esquema 109
Figure img0225
Etapa 1. 4-hidróxi-2-oxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-carboxilato de tercbutila
[00742] Ao Boc-Gly-OH (1 g, 5,71 mmol) em DCM (12 mL) sob atmosfera de N2 a 0 °C foram adicionados DMAP (1,743 g, 14,27 mmol) e ácido de Meldrum (0,987 g, 6,85 mmol). Uma solução de cloroformiato de isopropila (8,56 mL, 8,56 mmol) em tolueno foi adicionada gota a gota. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 3 horas. A mistura reacional foi lavada com 15% KHSO4 duas vezes, secados sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. O produto bruto foi apreendido em 50 mL de EtOAc e refluxado durante 1 hora. Após os materiais voláteis serem evaporados, o produto bruto foi triturado com EtOAC e o sólido resultante foi filtrado e secado para fornecer um sólido amarelo (75%). LCMS (m/z): 200,1 (MH+), 0,504 minuto. Etapa 2. 2-oxo-4-(tosilóxi)-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-carboxilato de tercbutila
[00743] Ao 4-hidróxi-2-oxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butila (680 mg, 3,41 mmol) em DCM (12 mL) foram adicionados DIEA (1,192 mL, 6,83 mmol) e cloreto de tosila (651 mg, 3,41 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 6 horas. A mistura reacional foi diluída com DCM e lavada com bicarbonato de sódio saturado. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida (0 a 50 % de EtOAc / heptano). As frações puras foram combinadas, evaporadas e secadas para fornecer o produto desejado como um solido branco (0,98 g, 81%). LCMS (m/z): 354,1 (MH+), 0,97 minuto; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,99 (d, J=8,22 Hz, 2 H) 7,54 (d, J=7,83 Hz, 2 H) 5,77 (s, 1 H) 4,33 (s, 2 H) 2,43 (s, 3 H) 1,41 (s, 9 H). Etapa 3. 4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila
[00744] Ao 4-(2-amino-5-bromopiridin-3-il)-2-fluorobenzoato de tercbutila (400 mg, 1,089 mmol) em DME (12 mL) foram adicionados 4,4,4',4',5,5,5'-heptametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (523 mg, 2,179 mmol), acetato de potássio (321 mg, 3,27 mmol) e PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (89 mg, 0,109 mmol). A mistura reacional foi purgada com N2 e aquecida em frasconete de micro-ondas em bloco de aquecimento a 110 °C durante a noite. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O bruto foi apreendido em éter e sonicado durante 10 minutos e o sólido preto foi filtrado. O filtrado foi evaporado para fornecer produto como um sólido amarelo claro (300 mg, 66,5%). LCMS (m/z): 333,2 (MH+), 0,672 minuto (para ácido borônico). Etapa 4. 4-(6-amino-5-(4-(terc-butoxicarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)2-oxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butila
[00745] Ao 4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (158 mg, 0,382 mmol) em DME (3 mL) e carbonato de sódio (0,509 mL, 1,019 mmol) foram adicionados 2-oxo-4-(tosilóxi)-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-carboxilato (90 mg, 0,255 mmol) e PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (41,6 mg, 0,051 mmol). A mistura reacional foi aquecida em micro-ondas a 90 °C durante 30 minutos. LCMS mostrou material de partida remanescente. Mais catalisadores foram adicionados e aquecidos novamente a 90 °C durante 20 minutos. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida usando 0 a 50 % de EtOAc (contém 10 % de MeOH) / heptano para fornecer produto como um sólido amarelo (66%). LCMS (m/z): 470,2 (MH+), 0,846 minuto. Etapa 5. Ácido 4-(2-amino-5-(5-oxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-3-il)piridin-3il)-2-fluorobenzoico
[00746] Ao 4-(6-amino-5-(4-(terc-butoxicarbonil)-3-fluorofenil)piridin3-il)-2-oxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butila (158 mg, 0,337 mmol) foi adicionado TFA (2 mL, 26,0 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. Após tolueno ser adicionado, os solventes voláteis foram evaporados. O produto bruto foi usado para a etapa seguinte. LCMS(m/z): 314,2 (MH+), 0,382 minuto. Etapa 6. ácido 4-(2-amino-5-(5-oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoico
[00747] Ao ácido 4-(2-amino-5-(5-oxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-3il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico (100 mg, 0,319 mmol) em MeOH (15 mL) sob atmosfera de N2 foi adicionado Pd-C (67,9 mg, 0,064 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 24 horas sob balão de H2. A mistura reacional foi filtrada através de celita e lavada com metanol. O filtrado foi evaporado. O bruto foi prosseguiu para a etapa seguinte. LCMS(m/z): 316,2 (MH+), 0,338 minuto. Etapa 7. (+/-)-4-(2-amino-5-(5-oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N((S)-2-hidróxi-1-feniletil)benzamida
[00748] Ao ácido 4-(2-amino-5-(5-oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoico (30 mg, 0,076 mmol) em DMF (1 mL) foram adicionados (S)-2-amino-2-feniletanol (12,53 mg, 0,091 mmol), EDC-HCl (21,89 mg, 0,114 mmol), HOAt (15,54 mg, 0,114 mmol) e DIEA (0,040 mL, 0,228 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura reacional foi diluída com DMF e diretamente purificada por HPLC preparativa para fornecer (+/-)-4-(2amino-5-(5-oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidróxi-1feniletil)benzamida como um sal de TFA (20,2%). LCMS (m/z): 435,2 (MH+), 0,476 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,88 (s, 1 H), 7,84-7,74 (m, 2 H), 7,38-7,30 (m, 4 H), 7,27 (t, J=7,43 Hz, 2 H), 7,227,13 (m, 1 H), 5,18-5,05 (m,1 H), 3,85-3,56 (m, 4 H), 3,39 -3,26(m, 1 H), 2,62 (dd, J=16,82, 8,61 Hz, 1 H), 2,48-2,33 (m, 1 H). Exemplos 219 e 220 Síntese de 4-(2-amino-5-((R)-5-oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N((S)-2-hidróxi-1-feniletil)benzamida e 4-(2-amino-5-((S)-5-oxopirrolidin3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N-((S)-2-hidróxi-1-feniletil)benzamida Esquema 110
Figure img0226
[00749] (+/-)-4-(2-amino-5-(5-oxopirrolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluoro-N((S)-2-hidróxi-1-feniletil)benzamida foi resolvido por SFC quiral (coluna Chiral Pak 5mic C10=AD-H, 4,6x100 (mm), 5mL/min, MeOH = 50%). O composto polar (pico 1) foi obtido em TaTr= 1,36 min (24,5%). LCMS (m/z): 435,2 (MH+), 0,485 minuto. O composto menos polar (pico 2) foi obtido em TaTr= 2,20 min (22%). LCMS (m/z): 435,2 (MH+), 0,482 minuto. A estereoquímica absoluta em lactam cíclico foi arbitrariamente designado. Exemplo 221 Síntese de 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1 -(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)-3fluorofenil)piridin-3-il)pirrolidina-2-carboxilato de (2S,4R)-metila Esquema 111
Figure img0227
Etapa 1. 4-(6-amino-5-(4-(terc-butoxicarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)1H-pirrol-1,2(2H,5H)-dicarboxilato de (S)-1-terc-butil 2-metila
[00750] Uma mistura de 4-(2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (400 mg, 0,966 mmol), (S)-4-(((trifluorometil)sulfonil)óxi)-1H-pirrol-1,2(2H,5H)dicarboxilato de 1-terc-butil 2-metila (1,087 g, 2,90 mmol, Pd(PPh3)4 (112 mg, 0,097 mmol) e carbonato de césio (1,258 g, 3,86 mmol) em THF (10 mL) e água (2 mL) foi desgaseificada, em seguida aquecida por micro-ondas para 90 °C durante 10 minutos. Na conclusão, a reação foi diluída com acetato de etila. As orgânicas foram lavadas com salmoura, secadas sobre sulfato de magnésio e concentradas. A mistura crua foi purificada por cromatografia rápida sobre sílica-gel (20 a 90 % de acetato de etila/heptano) para fornecer 4-(6-amino-5-(4-(tercbutoxicarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)-1H-pirrol-1,2(2H,5H)dicarboxilato de (S)-1-terc-butil 2-metila (470 mg, 95%). LCMS (m/z): 514,3 (MH+), 0,92 minuto. Etapa 2. 4-(6-amino-5-(4-(terc-butoxicarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3il)pirrolidina-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-1-terc-butil 2-metila
[00751] Uma solução desgaseificada de 4-(6-amino-5-(4-(tercbutoxicarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)-1H-pirrol-1,2(2H,5H)dicarboxilato de (S)-1-terc-butil 2-metila (470 mg, 0,915 mmol) em metanol (40 mL) foi tratada com 10 % em peso de Pd/C (3,214 g, 3,02 mmol). O sistema foi desgaseificado novamente, em seguida carregado com 1 atmosfera de hidrogênio durante a noite. Na conclusão, a reação desgaseificada, em seguida tratada com ás de amônia, em seguida filtrada sobre celita. A massa foi ressuspensa em metanol, tratada com gás de amônia, e filtrada para recuperar o produto adicional. O processo foi repetido até nenhum outro produto eluir da massa filtrada. As orgânicas combinadas foram concentradas para fornecer 4-(6amino-5-(4-(terc-butoxicarbonil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirrolidina-1,2dicarboxilato de (2S,4R)-1-terc-butil 2-metila (300 mg, 64%). LCMS (m/z): 516,1 (MH+), 0,89 minuto. Etapa 3. 2TFA-ácido 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5-(metoxicarbonil)pirrolidin-3il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico
[00752] Uma solução de 4-(6-amino-5-(4-(terc-butoxicarbonil)-3fluorofenil)piridin-3-il)pirrolidina-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-1-terc-butil 2-metila (300 mg, 0,58 mmol) em DCM (6 mL) foi tratada com TFA (3 mL). Após 1 hora, a reação foi concentrada, em seguida o resíduo foi suspenso em benzeno, sonicado, em seguida concentrado para fornecer ácido-2TFA 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5-(metoxicarbonil)pirrolidin-3il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico (345 mg, 100 % de rendimento). LCMS (m/z): 360,2 (MH+), 0,34 minuto. Etapa 4. 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)3-fluorofenil)piridin-3-il)pirrolidina-2-carboxilato de (2S,4R)-metila
[00753] Uma mistura de ácido-2TFA 4-(2-amino-5-((3R,5S)-5(metoxicarbonil)pirrolidin-3-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico (35 mg, 0,060 mmol), HATU (34 mg, 0,089 mmol), e DIEA (0,104 mL, 0,596 mmol) em DMF (2 mL) foi tratada com (S)-2-amino-2-(3clorofenil)etanol (51 mg, 0,348 mmol). Na conclusão, a reação foi lavada com água e salmoura, em seguida secada sobre MgSO4 e concentrada. O material bruto foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa para fornecer 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirrolidina-2-carboxilato de (2S,4R)-metila (4,2 mg, 9%). LCMS (m/z): 513,2, 515,2 (MH+), 0,58 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,97 7,86 (m, 3H), 7,49 7,40 (m, 3H), 7,39 7,34 (m, 2H), 7,33 7,26 (m, 1H), 5,19 (t, J = 5,87 Hz, 1H), 4,62 (dd, J = 7,63, 10,76 Hz, 1H), 3,93 3,77 (m, 6H), 3,74 3,61 (m, 1H), 2,87 (td, J = 6,90, 13,21 Hz, 1H), 2,33 2,21 (m, 1H). Exemplos 222 e 223 Síntese de ácido (2S,4R)-4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirrolidina-2-carboxílico e 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)-3fluorofenil)piridin-3-il)pirrolidina-2-carboxilato de (2S,4R)-metila Esquema 112
Figure img0228
Etapa 1. Ácido (2S,4R)-4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirrolidina-2-carboxílico
[00754] Uma solução de 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirrolidina-2-carboxilato de (2S,4R)-metila (120 mg, 0,234 mmol) em MeOH (4 mL) foi tratada com solução aquosa de LiOH a 1,0 M (0,468 mL), em seguida aquecida para 70 °C. Após 1 hora, a reação foi concentrada, em seguida dissolvida em água (2 mL) e tratada com HCl aquoso a 1,0 N (0,468 mL). A mistura reacional foi extraída com acetato de etila (20 mL). A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, em seguida secada sobre MgSO4 e concentrada para fornecer o produto bruto (97 mg, 57%). A porção deste material foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa produzindo ácido (2S,4R)-4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)2-hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirrolidina-2-carboxílico. LCMS (m/z): 499,1/501,1 (MH+), 0,49 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,56 8,64 (m, 1H), 7,75 7,87 (m, 4H), 7,31 7,38 (m, 4H), 7,24 7,29 (m, 3H), 7,17 7,24 (m, 1H), 5,07 5,14 (m, 1H), 4,36 (dd, J = 7,63, 9,98 Hz, 1H), 3,64 3,83 (m, 4H), 3,52 3,62 (m, 1H), 3,27 3,34 (m, 1H), 2,72 2,81 (m, 1H), 2,56 (s, 1H), 2,15 (td, J = 10,42, 13,21 Hz, 1H). Etapa 2. 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)3-fluorofenil)piridin-3-il)pirrolidina-2-carboxilato de (2S,4R)-metila
[00755] Uma solução de ácido (2S,4R)-4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3clorofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirrolidina-2carboxílico (25 mg, 0,050 mmol) em THF (2 mL) e DMF (2 mL) foi sequencialmente tratada com uma solução a 2,0 M de metilamina em THF (1,25 mL, 2,5 mmol), e HATU (95 mg, 0,25 mmol). Após 2 horas, a reação foi diluída com acetato de etila e lavada com água e salmoura. As orgânicas foram secadas sobre sulfato de magnésio e concentradas para fornecer 4-(6-amino-5-(4-(((S)-1-(3-clorofenil)-2hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)piridin-3-il)pirrolidina-2-carboxilato de (2S,4R)-metila após purificação por HPLC preparativa de fase reversa (1,8 mg, 5%). LCMS (m/z): 512,2, 514,2 (MH+), 0,54 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,64 8,73 (m, 1H), 7,84 7,96 (m, 2H), 7,45 (s, 1H), 7,40 7,44 (m, 1H), 7,35 7,38 (m, 1H), 7,27 7,34 (m, 1H), 5,16 5,24 (m, 1H), 4,38 (dd, J = 7,83, 10,17 Hz, 1H), 3,75 3,92 (m, 2H), 3,60 3,72 (m, 1H), 2,78 2,89 (m, 3H). Síntese de ácido 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-imidazol-5-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoico
Figure img0229
[00756] Seguindo as etapas 4 e 5 no esquema 109, usando 5bromo-1-metil-1H-imidazol, ácido 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-imidazol-5il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico foi obtido. LCMS (m/z): 313,1 (MH+), 0,3 minuto. Síntese de ácido 4-(2-amino-5-(1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoico
Figure img0230
[00757] Seguindo as etapas 4 e 5 no esquema 109, usando 1-metil5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol, ácido 4-(2amino-5-(1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico foi obtido. LCMS (m/z): 313,4 (MH+), 0,44 minuto. Síntese de ácido 4-(2-amino-5-(1-isopropil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2fluorobenzoico
Figure img0231
[00758] Seguindo as etapas 4 e 5 no esquema 109, usando 1isopropil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol, ácido 4-(2-amino-5-(1-isopropil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzoico foi obtido. LCMS (m/z): 341 (MH+), 0,56 minuto. Exemplo 224 Síntese de (S)-4-(3-amino-6-(oxetan-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-(2hidróxi-1-feniletil)benzamida Esquema 113
Figure img0232
Etapa 1. 4-(3-amino-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00759] Ao 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (400 mg, 1,227 mmol) em DME (12 mL) foram adicionados 4,4,4',4',5,5,5'-heptametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano (589 mg, 2,453 mmol), acetato de potássio (361 mg, 3,68 mmol) e PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (100 mg, 0,123 mmol). A mistura reacional foi purgada com N2 e aquecida em micro-ondas a 120°C durante 15 minutos. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O produto bruto foi apreendido em éter e sonicado durante 20 minutos. O sólido preto foi filtrado. Ao filtrado foi adicionado heptano. O precipitado foi filtrado e secado para fornecer um sólido amarelo claro. (250 mg, 54,6%). LCMS (m/z): 292,2 (MH+), 0,47 min (para ácido borônico). Etapa 2. 4-(3-amino-6-(oxetan-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00760] Ao 4-(3-amino-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (150 mg, 0,402 mmol) em DME (6 mL) e carbonato de sódio (1,5 mL, 3,0 mmol) foram adicionados 3-iodooxetano (370 mg, 2,01 mmol) e PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (32,8 mg, 0,042 mmol). A mistura reacional foi aquecida em micro-ondas a 100 °C durante 15 minutos. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa para isolar o produto (13,5 mg, 11,0%). LCMS (m/z): 304,2 (MH+), 0,61 minuto. Etapa 3. Ácido 4-(3-amino-6-(oxetan-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico
[00761] Ao 4-(3-amino-6-(oxetan-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (13 mg, 0,043 mmol) em MeOH (1 mL) e THF (2 mL) foi adicionado LiOH (0,128 mL, 0,128 mmol). A mistura reacional foi agitada 2 horas em temperatura ambiente. A mistura reacional foi ajustada para acídica (pH ~3) e o solvente foi evaporado em Rotovap. O bruto foi azeotropado com tolueno e prosseguiu para a etapa seguinte. LCMS (m/z): 290,1 (MH+), 0,46 minuto. Etapa 4. (S)-4-(3-amino-6-(oxetan-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-(2-hidróxi1-feniletil)benzamida
[00762] Ao ácido 4-(3-amino-6-(oxetan-3-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico bruto (10 mg, 0,035 mmol) em DMF (1 mL) foram adicionados (S)-2-amino-2-feniletanol (14,22 mg, 0,104 mmol), DIEA (0,030 mL, 0,173 mmol), EDC (13,25 mg, 0,069 mmol) e aza-HOBt (7,06 mg, 0,052 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O bruto foi purificado por HPLC preparativa para fornecer o produto desejado como um sal de TFA (11,5%). LCMS (m/z): 409,2 (MH+), 0,597 minuto; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,927,82 (m, 2H) 7,78-7,64 (m, 2 H) 7,48-7,32 (m, 5 H) 7,23 7,31-7,23 (m, 1 H) 5,28-5,17 (m, 1 H) 5,03-4,90 (m, 5 H) 4,47-4,34 (m, 1 H)3,96-3,76 (m, 3 H). Exemplos 225, 226, e 227 Síntese de (+/-)-N-(2-amino-1-(3-clorofenil)etil)-4-(2-amino-5-(1,3dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzamida Esquema 114
Figure img0233
[00763] Seguindo as etapas 1 e 2 no esquema 82, Etapa s 5 e 6 no esquema 102, usando (2-amino-2-(3-clorofenil)etil)carbamato de (+/-)terc-butila, (+/-)-N-(2-amino-1-(3-clorofenil)etil)-4-(2-amino-5-(1,3dimetil-1H-pirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzamida foi obtido. LCMS (m/z): 479,3 (MH+), 0,54 minuto. 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 8,16 (m, 2H), 7,87 (m, 1H), 7,47 7,18 (m, 7H), 5,23 (m, 1H), 4,58 (bs, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,19 (m, 2H), 2,36 (s, 3H). A mistura racêmica foi resolvida por SFC quiral (Coluna ChiralPak 5mic AD, 4,6x100 (mm), 5 mL/min, EtOH+0,1%, DEA = 30%). O enantiômero polar, (S)-N-(2amino-1-(3-clorofenil)etil)-4-(2-amino-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4il)piridin-3-il)-2-fluorobenzamida, foi obtido em TaTr= 2,6 minutos. LCMS (m/z): 479,1 (MH+), 0,57 minuto. O enantiômero menos polar, (R)-N-(2-amino-1-(3-clorofenil)etil)-4-(2-amino-5-(1,3-dimetil-1Hpirazol-4-il)piridin-3-il)-2-fluorobenzamida, foi obtido em TaTr= 3,22 minutos. LCMS (m/z): 479,1 (MH+), 0,57 minuto. A estereoquímica absoluta foi designada com base nos dados bioquímicos e modelo de acoplamento. Síntese de Ácido 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-deuterido-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico Esquema 115
Figure img0234
Etapa 1. 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-deuterido-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2il)-2-fluorobenzoato de metila
[00764] Uma solução de 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)2-fluorobenzoato de etila (98 mg, 0,285 mmol) em metanol (1,903 mL), THF (0,952 mL) foi resfriada abaixo de -78 °C. A esta, NaBD4 (32,4 mg, 0,856 mmol) foi lentamente adicionado em porção. A mistura reacional foi deixada aquecer para temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reacional foi extinguida com solução de NH4Cl, em seguida seguido por solução de Na2CO3 e agitada durante 1 hora. A mistura reacional foi extraída por EtOAc. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada, e concentrada em vácuo para fornecer 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4deuterido-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila bruto (81,4 mg, trans:cis = ~4:1, 82%), que foi usado para a etapa seguinte. LCMS (m/z): 347,1 (MH+), 0,61 min (maior, trans) e 0,64 min (cis). Etapa 2. Ácido 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-deuterido-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico
[00765] A uma solução de 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-deuterido-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (81 mg, 0,234 mmol) em THF (1559 μl,) e MeOH (780 μl) foi adicionado LiOH (solução a 1M) (421 μl, 0,421 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. Após pH ser ajustado para 5, a mistura reacional foi extraída com EtOAc. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, filtrada, e concentrada em vácuo. O ácido 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-deuterido-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico bruto (99%) foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 333,1 (MH+), 0,47 min (major, trans) e 0,51 min (cis). Síntese de (S)-2-amino-2-deuterido-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etanol Esquema 116
Figure img0235
Etapa 1. (3-bromo-5-fluorofenil)-1,1-di-deuterido-metanol
[00766] Ácido 3-bromo-5-fluorobenzoico (5,3 g, 24,20 mmol) foi dissolvido em THF (81 mL). A este, LiAlD4 (1,102 g, 29,0 mmol) foi adicionado a 0 oC. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Após a mistura reacional ser resfriada abaixo de 0 °C, 1,1 mL de água foi adicionada, seguido por 1,1 mL de NaOH a 15% e 3,2 mL de água. A suspensão foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas, em seguida filtrada através de celita e enxaguada com Et2O, o filtrado foi concentrado para produzir o produto bruto, que foi purificado por cromatografia rápida (0 a 30 % de EtOAc/heptano) para produzir (3-bromo-5-fluorofenil)-1,1-di-deuterido-metanol in 64% de rendimento. LCMS (m/z): 232,0 (MNa+), 0,69 minuto. Etapa 2. 3-bromo-5-fluorobenzaldeído-d1
[00767] (3-Bromo-5-fluorofenil)-1,1-di-deuterido-metanol (3,2 g, 15,4 mmol) foi dissolvido em DCM (51,5 mL) e resfriado abaixo de 0 °C. periodinano de Dess-Martin (9,83 g, 23,18 mmol) foi adicionado à mistura reacional, que foi agitada a 0°C durante 3 horas. Solução de Na2S2O3 / NaHCO3 (8:1) saturada foi adicionada à mistura, que foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reacional foi em seguidaextraída com DCM. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, filtrada, e concentrada em vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida para produzir 3-bromo-5fluorobenzaldeído-d1 como sólido branco (2,6 g, 82%). 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ ppm 7,83 (s, 1H), 7,57 7,50 (m, 2H). Etapa 3. (S)-2-amino-2-deuterido-2-(3-bromo-5-fluorofenil)etanol
[00768] Seguindo as etapas 4 a 9 no esquema 74, usando 3-bromo5-fluorobenzaldeído-d1, (S)-2-amino-2-deuterido-2-(3-bromo-5fluorofenil)etanol foi obtido como um sal de HCl. LCMS (m/z): 235,0/237,0 (MH+), 0,40 minuto. Síntese de cloridrato de (R)-2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2,2-dideuterido-etanol Esquema 117
Figure img0236
Etapa 1. Ácido (R)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)acético
[00769] Uma solução de (1-(3-bromo-5-fluorofenil)alil)carbamato de (S)-terc-butila (1,235 g, 3,74 mmol) em CCl4 (4 mL), acetonitrila (4 mL) e água (6 mL) foi tratada com periodato de sódio (1,680 g, 7,85 mmol) e RuCl3 (16 mg, 0,075 mmol). Após 1 hora, a reação foi concluída. A reação foi dividida entre acetato de etila e água. As orgânicas foram lavadas com salmoura, em seguida filtradas sobre celita e concentradas. O bruto foi redissolvido em benzeno, em seguida filtrado e concentrado novamente para fornecer ácido (R)-2-(3-bromo-5-fluorofenil)2-((terc-butoxicarbonil)amino)acético bruto (1,30 g, 99% de rendimento) que foi usado diretamente. LCMS (m/z): 348,2 (MH+), 0,52 minuto. Etapa 2. (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidróxi-2,2-deuterido-etil)carbamato de (R)-terc-butila
[00770] Uma solução a -10 °C de ácido (R)-2-(3-bromo-5fluorofenil)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)acético (1,30 g, 3,73 mmol) em DME (6 mL) foi tratada com N-metil morfolina (0,431 mL, 3,92 mmol). Após 5 minutos, a reação foi tratada com cloroformiato de isobutila (0,515 mL, 3,92 mmol). Após mais 5 minutos, a reação foi filtrada e a massa foi lavada com DME (4 mL). As orgânicas combinadas foram tratadas com uma solução de NaBD4 (0,251 g, 5,97 mmol) em água (1 mL). Na conclusão, a reação foi dividida entre acetato de etila e água. As orgânicas foram lavadas com salmoura, em seguida secadas sobre sulfato de sódio e concentradas. O material bruto foi purificado por HPLC preparativa para fornecer o composto título, (1-(3bromo-5-fluorofenil)-2-hidróxi-2,2-deuterido-etil)carbamato de (R)-tercbutila (55 mg, 4,4% de rendimento). LCMS (m/z): 337,3 (MH+), 1,03 minuto. Etapa 3. cloridrato de (R)-2-amino-2-(3-bromo-5-fluorofenil)-2,2-dideuterido-etanol
[00771] Uma solução de (1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidróxi-2,2deuterido-etil)carbamato de (R)-terc-butila (46 mg, 0,137 mmol) em HCl a 4 M em dioxano (1368 μl) foi agitada durante a noite. Os materiais voláteis foram removidos em vácuo. O produto bruto foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS (m/z): 236/238 (MH+), 0,4 minuto. Síntese de ácido 4-(3-amino-6-(4-(hidroximetil)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico
Figure img0237
Etapa 1. 1,4-dioxaspiro[4,5]decano-8-carboxilato de etila
[00772] 4-oxociclo-hexanocarboxilato de etila (15,01 g, 88,16 mmol) foi combinado com etileno glicol (21 mL, 4,27 equivalentes) e monohidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,2 g, 0,012 equivalente) em anidroso tolueno (50 mL), e a mistura foi agitada 14 horas em temperatura ambiente. A reação foi diluída com éter (200 mL) e foi lavada com H2O (2x200 mL), bicarbonato de sódio saturado (100 mL) e salmoura (80 mL). A camada orgânica foi secada (Na2SO4), filtrada e concentrada sob pressão reduzida para produzir 18,15 g de etileno cetal de 4oxociclo-hexanocarboxilato de etila (96% de rendimento). LCMS (m/z): 214,8 (MH+), 0,74 minuto. Etapa 2. 1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-ilmetanol
[00773] LiAlH4 (2,51 g, 66,3 mmol) foi suspenso em THF (60 mL) e em seguida resfriado em um banho gelado. À suspensão foi adicionado Etil 1,4-dioxaspiro[4,5]decano-8-carboxilato (11,357 g, 53,0 mmol) dissolvido em THF (40 mL) gota a gota e a mistura reacional foi gradualmente aquecida para temperatura ambiente durante 1 hora sob a qual LCMS indicou redução completa de SM. A mistura reacional foi diluída com éter (200 mL) e extinguida com 2,5 mL água e em seguida 5 mL (10 % NaOH) e em seguida 7,5 mL água. A esta, MgSO4 anidroso foi adicionado, que foi em seguida agitado durante 30 minutos e filtrado sobre celita. O filtrado foi concentrado em vácuo para fornecer o produto desejado em produção quantitativa. LCMS (m/z): 173,1 (MH+), 0,41 minuto. Etapa 3. 4-((benzilóxi)metil)ciclo-hexanona
[00774] 1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-ilmetanol (1,33 g, 7,72 mmol) foi dissolvido em DMF (14 mL) e em seguida resfriado para 0 °C. À solução foi adicionado NaH (0,402 g, 10,04 mmol) em porções e a mistura agitada a 10 °C durante 1 hora e em seguida brometo de benzila (1,194 mL, 10,04 mmol) foi adicionado e a mistura agitada durante 72 horas. A mistura reacional foi extinguida com água e extraída com éter e os extratos orgânicos combinados secados (MgSO4), filtrados e concentrados em vácuo e o produto bruto, 8-((benzilóxi)metil)-1,4dioxaspiro[4,5]decano, dissolvido em acetonitrila (35 mL) e água (25 mL) e tratada com HCl a 3N (13 mL) e agitada em temperatura ambiente durante 20 minutos sob os quais LCMS indicou o produto desejado. A mistura reacional foi extinguida com 40 mmol de NaOH aquoso e em seguida extraída com EtOAc (200 mL) e a camada orgânica foi lavada com água e secada (MgSO4), filtrada e concentrada em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia rápida (0 a 50 % de EtOAc/heptano) para fornecer 1,23 g do produto desejado como um xarope incolor (73%). LCMS (m/z): 329,2 (MH+), 1,33 minuto. Etapa 4. 2-(4-((benzilóxi)metil)ciclo-hex-1-en-1-il)-4,4,5,5-tetrametil1,3,2-dioxaborolano
[00775] 1,4-dioxaspiro[4,5]decan-8-ilmetanol (1,23 g, 5,63 mmol) foi dissolvido em THF (22,5 mL) e resfriado para -78 °C. Em seguida LiHMDS (6,20 mL, 6,20 mmol) foi adicionado gota a gota e a mistura agitada nesta temperatura durante 1 hora sob a qual 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N((trifluorometil)sulfonil)metanossulfonamida (2,214 g, 6,20 mmol) foi adicionado em uma porção e a mistura reacional foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitar durante a noite. Na manhã seguinte, a mistura reacional foi extinguida com NaHSO4 a 1,0 M e o solvente evaporado em vácuo. O resíduo foi dividido entre NaOH/éter e a camada orgânica foi separada e lavada com NaOH a 1,0 M duas vezes, e secado com salmoura e em seguida MgSO4, filtrado e concentradas em vácuo para fornecer o produto desejado 4-((benzilóxi)metil)ciclo-hex-1-en-1-il trifluorometanossulfonato em produção quantitativa que foi levada para a etapa seguinte sem qualquer outra purificação. O intermediário 4((benzilóxi)metil)ciclo-hex-1-en-1-ila (1000 mg, 2,85 mmol), B2(PIN)2 (1087 mg, 4,28 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (233 mg, 0,285 mmol) e KOAc (560 mg, 5,71 mmol) foram carregados em um frasconete de microondas e em seguida dioxano (9,5 mL) foi adicionado. A mistura foi evacuada e purgada com N2 e em seguida aquecida par 100 °C durante 22 minutos em micro-ondas. A mistura crua foi diluída com éter e água e a camada orgânica foi separada e secada (MgSO4), filtrada e concentrada em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia rápida (0 a 10 % de EtOAc/heptanos) para fornecer o produto desejado (51%). LCMS (m/z): 219,2 (MH+), 0,88 minuto. Etapa 5. 4-(3-amino-6-(4-((benzilóxi)metil)ciclo-hex-1-en-1-il)pirazin-2il)-2-fluorobenzoato de metila
[00776] 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (343 mg, 1,051 mmol), 2-(4-((benzilóxi)metil)ciclo-hex-1-en-1-il)4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (414 mg, 1,261 mmol) aduzido de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (86 mg, 0,105 mmol) foram colocados em um frasconete de micro-ondas e em seguida DME (3,5 mL) foi adicionado. Em seguida Na2CO3 a 2,0 M (1261 μL, 2,52 mmol) foi adicionado e a mistura foi desgaseificada e purgada com nitrogênio e em seguida aquecida a 115 °C durante 30 minutos sob os quais a reação foi concluída. A mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com água e a camada orgânica foi separada e secada (MgSO4), filtrada e concentrada e o resíduo purificado por cromatografia rápida (0 a 100 % de EtOAc/heptano) para fornecer 381 mg do produto desejado como um sólido amarelo (81%). LCMS (m/z): 448,2 (MH+), 1,16 minuto. Etapa 6. 4-(3-amino-6-(4-(hidroximetil)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila
[00777] 4-(3-amino-6-(4-((benzilóxi)metil)ciclo-hex-1-en-1-il)pirazin2-il)-2-fluorobenzoato de metila (381 mg, 0,851 mmol) foi dissolvido em THF (5 mL) e em seguida MeOH (15 mL) foi adicionado e em seguida Pd-C (10 % de umidade) (550 mg, 0,517 mmol) foi adicionado. A mistura foi colocada sob vácuo e purgada com hidrogênio e este ciclo foi repetido três vezes e em seguida finalmente sob hidrogênio durante a noite. Após 14 horas, LCMS indicou saturação de alqueno, porém apenas desproteção de benzila parcial, e, portanto, mais Pd-C (10 % de umidade) (700 mg) foi adicionado e a mistura agitada em temperatura ambiente durante mais 5 horas após as quais observou-se a desproteçãode benzila completa. A mistura reacional foi filtrada e concentrada em vácuo para fornecer 215,6 mg do produto desejado como uma mistura de diasterômeros (cis/trans não especificados) (70%). LCMS (m/z): 360,2 (MH+), 0,71, 0,72 minuto. Etapa 7. (S)-4-(3-amino-6-(4-(hidroximetil)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-(1(3-clorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
[00778] 4-(3-amino-6-(4-(hidroximetil)ciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (215,6 mg, 0,600 mmol) foi dissolvido em THF (3 mL) e em seguida MeOH (3 mL) foi adicionado e em seguida LiOH a 1,0 M (2400 μL, 2,400 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada durante a noite e na manhã seguinte, LCMS indicou a formação de produto desejado. A mistura reacional foi concentrada em vácuo e em seguida azeotropada com THF duas vezes (10 mL cada) e em seguida acidificada com 1,5 mL de HCl a 4,0 em dioxano e concentrada em vácuo. O resíduo foi dissolvido em DMSO (5 mL) e levado para a etapa seguinte como tal. LCMS (m/z): 346,2 (MH+), 0,57, 0,58 minuto. Síntese de ácido 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-fluorociclo-hexil)pirazin-2-il)2-fluorobenzoico Esquema 119
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Etapa 1. 4-(3-amino-6-((1r,4r)-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila
[00779] 4-(3-amino-6-(4-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato (401,4 mg, 1,169 mmol) foi suspenso em MeOH e resfriado para 0 °C. À mistura foi adicionado NaBH4 (133 mg, 3,51 mmol) dissolvido em MeOH (5 mL) e a mistura foi gradualmente aquecida para temperatura ambiente e agitada durante 30 minutos sob os quais a reação foi concluída. A mistura reacional foi diluída com EtOAc e NaHCO3 saturado e a camada orgânica lavada com água duas vezes e secada (MgSO4), filtrada e concentrada em vácuo para fornecer 339,4 mg do produto desejado (84%). LCMS (m/z): 346,2 (MH+), 0,63 minuto. Etapa 2. 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-fluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila
[00780] Um frasco contendo uma solução de 4-(3-amino-6-((1r,4r)4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (339,4 mg, 0,983 mmol) em acetonitrila (3,2 mL) foi resfriado para 0 °C em um banho de gelo/salmoura e fluoreto de perfluorobutanossulfonila (530 μl, 2,95 mmol) seguido por tri-hidrofluoreto de trietilamina (480 μl, 2,95 mmol) e trietilamina (1233 μl, 8,84 mmol) foi adicionada e a mistura reacional resultante foi deixada agitar a 0 °C durante 90 minutos. Após o tempo decorrido, LCMS indicou uma relação de 2,5:1 de eliminação vs. produto desejado. A mistura reacional foi extinguida com água e extraída com EtOAc e o extrato orgânico lavado com água duas vezes e secado (MgSO4), filtrado e concentrado em vácuo para fornecer a mistura de produto bruto que foi cuidadosamente submetida à cromatografia (0 a 60 % de EtOAc/heptano) para fornecer 67,5 mg do produto desejado. (19,8%). LCMS (m/z): 348,2 (MH+), 0,86 minuto. Etapa 3. 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-fluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico
[00781] 4-(3-amino-6-((1s,4s)-4-fluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (67,5 mg, 0,194 mmol) foi dissolvido em THF (1 mL) e MeOH (1 mL) e em seguida LiOH a 1,0 M (0,777 mL, 0,777 mmol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente. Após 1 hora, LCMS indicou a formação de ácido desejado. LCMS (m/z): 334,2 (MH+), 0,70 minuto. Síntese de 3-bromo-5-((1r,4r)-4-fluorociclo-hexil)pirazin-2-amina Esquema 120
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Etapa 1. (1s,4s)-4-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hexanol
[00782] 4-(5-aminopirazin-2-il)ciclo-hexanona (1,049 g, 5,48 mmol) foi dissolvido em THF (10 mL) e resfriado para 0 °C. L-Selectrida (12,06 mL, 12,06 mmol) foi adicionada gota a gota e a mistura agitada durante 20 minutos, sob os quais a reação foi concluída. A mistura reacional foi extinguida com 5 N NaOH (40 mmol) e em seguida MeOH (5mL). A mistura reacional foi diluída com THF de 2-metila e a camada aquosa separada e a camada orgânica lavada com salmoura e secada (MgSO4), filtrada e concentrada em vácuo para fornecer o produto desejado em uma relação de 95:5 de cis/trans que foi em seguida triturada com éter para obter 586,3 mg de precipitado amarelo claro como o produto desejado (55%). LCMS (m/z): 194,1 (MH+), 0,32 minuto. Etapa 2 e 3, 3-bromo-5-((1r,4r)-4-fluorociclo-hexil)pirazin-2-amina
[00783] Seguindo a etapa 2 e 3 no esquema 119, 3-bromo-5((1r,4r)-4-fluorociclo-hexil)pirazin-2-amina foi obtido. LCMS (m/z): 276,0 (MH+), 0,81 minuto. Síntese de ácido 4-(3-amino-6-(4-cianociclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico
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[00784] Seguindo as etapas 4 a 7 no esquema 118, ácido 4-(3amino-6-(4-cianociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico foi obtido. LCMS (m/z): 341,2 (MH+), 0,64, 0,66 min (trans, cis). Exemplo 453 Síntese de 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)-2fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2-hidroxietil)benzamida E Step1 Pd(tri-tty|.ph)2 butil-Ph)2 * N-ciclo-hexil-N-N-methyl metilciclo-hexanamina nine 40%
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Etapa 1. 4-(3-Amino-6-(3-oxociclopent-1-en-1-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila:
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[00785] Uma mistura de 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila (1 g, 2,72 mmol), ciclopent-2-enona (0,892 g, 10,86 mmol), N-ciclo-hexil-N-metilciclo-hexanamina (1,061 g, 5,43 mmol), bis(tri-t-butilfosfina)paládio(0) (0,069 g, 0,136 mmol), TBAC (0,075 g, 0,272 mmol) em dioxano (7 mL) foi submetida à microondas a 135 0C durante 25 minutos. Após resfriamento, a mistura foi concentrada e o resíduo foi diluído com 10 mL de DCM, sonicado durante 5 minutos, filtrado e o sólido foi lavado com 3 mL de DCM. A solução de DCM combinada foi diretamente aplicada para separação de coluna de sílica ISCO. (coluna de 40 gramas, 10 a 90 % de EtOAc em heptano). 400 mg do produto desejado foram obtidos como um sólido amarelo claro. LCMS (m/z): (MH+) 370,0, 0,903 minuto. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ ppm 1,12 1,26 (m, 5 H) 1,55 (s, 10 H) 1,59 1,72 (m, 5 H) 2,41 (dt, J=5,09, 2,15 Hz, 3 H) 2,48 (dt, J=3,62, 1,91Hz, 3 H) 3,00 (dd, J=5,09, 2,35 Hz, 2 H) 3,30 (s, 3 H) 6,66 (t, J=1,76 Hz, 1 H) 7,09 (s, H) 7,55 7,69 (m, H) 7,83 7,95 (m, 1 H) 8,57 (s, 1 H). Etapa 2: 4-(3-Amino-6-(3-oxociclopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila:
[00786] Ao 4-(3-amino-6-(3-oxociclopent-1-en-1-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila (650 mg, 1,760 mmol) em MeOH (15 ml) foram adicionados 15 mL de DCM sob agitação até uma solução clara ser obtida. A solução foi purgada por nitrogênio durante 5 minutos, em seguida Pd/C (300 mg, 10 %, tipo Degussa) foi adicionado, e a mistura resultante foi desgaseificada por corrente de N2 durante 15 minutos. Depois de equipada com balão de gás de hidrogênio, a mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 16 h. A mistura reacional foi filtrada, e a solução filtrada foi concentrada, e o material bruto foi purificado por ISCO (24 g de sílica-gel, 20 a 80 % de EtOAc em heptano) para fornecer 380 mg do produto desejado como um sólido amarelo claro. 58,1 % de rendimento. LC-MS (m/z): (MH+) 372,1, 0,829 minuto. Etapa 3: 4-(3-Amino-6-((1R,3R)-3-hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de (+/-)terc-butila e 4-(3-amino-6-((1R,3S)-3hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de (+/-)terc-butila:
[00787] A uma solução de 4-(3-amino-6-(3-oxociclopentil)pirazin-2il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (200 mg, 0,538 mmol) em MeOH ( 4 mL) a -78 0C foi adicionado NaBH4 (61,1 mg, 1,615 mmol). A mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 1 h. A -78 0C, a mistura reacional foi extinguida com NH4Cl saturado ( 4 ml), e o banho resfriamento foi removido, e a mistura foi gradualmente aquecida para TA, em seguida solução de NaHCO3 saturado ( 4 ml) foi adicionada. A mistura reacional foi extraída com EtOAc ( 30 ml x 2). A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada em vácuo. Cerca de 210 mg do produto bruto foram obtidos. O produto bruto foi dissolvido em 4 mL de DMSO, filtrado e purificado por HPLC preparativa. O composto mais polar é trans (desejado, surgiu mais cedo), o composto menos polar é cis, surgiu por último. Após neutralizados com NaOH a 1 N, compostos trans e cis foram obtidos como compostos de base livre.
[00788] 4-(3-Amino-6-((1R,3R)-3-hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de (+/-) terc-butila: 40 mg, 19,9 % de rendimento), trans. LC-MS (m/z): (MH+) 374,1, 0,81 minuto, RMN (400 MHz, CD3CN) δ ppm 1,61 (s, 9 H) 1,69 1,82 (m, 1 H) 1,88 2,25 (m, 6 H) 2,59 2,77 (m, 1 H) 3,32 3,56 (m, 1 H) 4,31 4,48(m, 1 H) 5,07 (br. s., 2 H) 7,59 (dd, J=12,13, 1,56 Hz, 1 H) 7,66 (dd, J=8,02, 1,76 Hz, 1 H) 7,88 8,03 (m, 2 H).
[00789] 4-(3-Amino-6-((1R,3R)-3-hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de (+/-) terc-butila: 150 mg, 74,6 % de rendimento, cis . LC-MS (m/z): (MH+) 374,1, 0,81 minuto. 1H RMN (400 MHz, CD3CN) δ ppm: 1,55 1,67 (m, 9 H) 1,69 1,89 (m, 2 H) 1,91 2,03 (m, 4 H) 2,05 2,13 (m, 1 H) 2,21 2,33 (m, 1 H) 3,21 -3,41 (m, 1 H) 3,99 (s, 1 H) 4,20 4,34 (m, 1 H) 5,04 5,23 (m, 2 H) 7,50 7,58 (m, 1 H) 7,58 7,67 (m, 1 H) 7,90 8,05 (m, 2 H). Etapa 4: 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila e 4-(3-amino-6-((1S,3S)-3hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila:
[00790] Os dois isômeros trans (160 mg total) foram separados por coluna quiral: coluna OJ ( 21 X 250 mm), SFC = 100 ml/min, CO2/EtOH = 85/15, carregamento: 70 mg/7ml de EtOH, 274 bar. 80 mg de cada enantiômero foram obtidos.
[00791] 4-(3-Amino-6-((1R,3R)-3-hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila: RMN (400 MHz, DMSO) δ ppm: 1,04 (t, J=6,85 Hz, 1 H) 1,47 1,73 (m, 11 H) 1,75 1,86 (m, 2 H) 1,89 2,18 (m, 2 H) 3,15 (s, 1 H) 3,30 (s, 4H) 3,97 4,16 (m, 1 H) 4,19 4,39 (m, 1 H) 4,44 4,59 (m, 1 H) 6,10 (s, 2 H) 7,57 (d, J=12,13 Hz, 1 H) 7,63 (dd, J=8,02, 1,76 Hz, 1 H) 7,77 8,01 (m, 2 H).
[00792] 4-(3-Amino-6-((1S,3S)-3-hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila: RMN (400 MHz, DMSO) δ ppm: 1,04 (t, J=6,85 Hz, 1 H) 1,14 1,28 (m, 1 H) 1,50 1,57 (m, 10 H) 1,59 1,71 (m, 1 H) 1,75 1,87 (m, 2 H)1,89 2,14 (m, 2 H) 3,15 (s, 1 H) 3,30 (s, 4 H) 4,18 4,37 (m, 1 H) 4,42 4,55 (m, 1 H) 6,10 (s, 2 H) 7,51 7,60 (m, 1 H) 7,63 (dd, J=8,02, 1,76 Hz,1 H) 7,81 7,95 (m, 2 H). Etapa 5. Ácido 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)2-fluorobenzoico
[00793] Procedimento: A uma solução de 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3hidroxiciclopentil)-pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (7 mg, 0,019 mmol) em DCM ( 2 mL) em Ta foi adicionado TFA (0,361 mL, 4,69 mmol). A solução resultante foi agitada para temperatura ambiente durante 2 horas. A solução foi concentrada, e também secada por vácuo elevado para fornecer o produto desejado como um sal de TFA, que foi usado na etapa seguinte diretamente. (6 mg, 100 % de rendimento) LC-MS (m/z): 318,1 (MH+), 0,46 minuto. Etapa 6: 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3-hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)-2fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2-hidroxietil)benzamida:
[00794] A uma mistura de (ácido 4-(3-amino-6-((1R,3R)-3hidroxiciclopentil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico) (6 mg, 0,019 mmol), (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etanol (8,96 mg, 0,028 mmol), HOAt (5,15 mg, 0,038 mmol) e EDC (7,25 mg, 0,038 mmol) em DMF (1ml) foi adicionado DIEA (0,036 ml, 0,208 mmol). A mistura resultante foi agitada durante a noite em Ta. A mistura foi diluída com EtOAc, lavada com água três vezes e salmoura, secada com Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer o produto bruto como um líquido viscoso amarelo claro. Este bruto foi purificado por HPLC preparativa para fornecer produto desejado (6 mg, 45,2 % de rendimento) como um sólido amarelo claro, um sal de TFA. LC-MS: (MH+) 581,0 em 0,726 minuto. 1H RMN (400 MHz, CD3CN) δ ppm 1,56 1,82 (m, 2 H) 2,01 2,30 (m, 3 H) 3,47 (t, J=8,61 Hz, 1 H) 3,73 3,92 (m, 3 H) 4,32 4,45 (m, 2 H) 5,05 5,19 (m, 1 H) 7,16 7,27 (m, 1 H) 7,48 (dt, J=8,12, 1,81 Hz, 1 H) 7,56 7,71 (m, 4 H) 7,74 7,81 (m, 1 H) 7,97 (t, J=7,83 Hz, 1 H). Exemplo 456 Síntese de 4-(3-amino-6-((1S,4S)-3,3-difluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2hidroxietil)benzamida
Figure img0329
Etapa 1: trifluorometanossulfonato de 3-oxociclo-hex-1-en-1-ila
[00795] A uma solução de ciclo-hexano-1,3-diona (8 g, 71,3 mmol) em CH2Cl2 ( 120 ml) a 0 0C (banho de água gelada) sob nitrogênio foi adicionado carbonato de sódio (8,32 g, 78 mmol). A mistura resultante foi agitada a 0 0C durante 10 minutos. Uma solução de anidrido trifluorometanossulfônico (12,05 ml, 71,3 mmol) em 35 mL de DCM foi adicionada gota a gota durante 1 h. A mistura foi agitada a 0 0C durante 1,5 horas. A mistura foi filtrada através de funil de vidro fritado, e 60 mL de NaHCO3 saturado foram adicionados lentamente. A camada orgânica foi em seguida separada e lavada com 40 mL de salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para fornecer 9 g (52 % de rendimento) de produto desejado como um líquido amarelo claro. LC-MS (m/z): (MH+) 244,9, 0,72 minuto. Etapa 2: 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-2-enona, ácido (3-oxociclo-hex-1-en-1-il)borônico:
[00796] Uma mistura de trifluorometanossulfonato de 3-oxociclohex-1-en-1-ila (9 g, 36,9 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'bi(1,3,2-dioxaborolano) (14,04 g, 55,3 mmol), acetato de potássio (10,85 g, 111 mmol) e Pd(dppf)Cl2.DCM (0,808 g, 1,106 mmol) em dioxano (80 mL) foi inundada com nitrogênio durante 5 min e em seguida aquecida a 90 °C durante a noite. Após resfriamento, a mistura foi filtrada, e o sólido foi lavado com 3 x 20 mL de dioxano quente. A solução combinada foi concentrada até cerca de 70 mL de dioxano serem deixados. Este produto (em dioxano) foi usado diretamente na etapa seguinte. LCMS ( m/z): MH+ = 140,8 (ácido borônico), 0,284 minuto. Etapa 3: 4-(3-amino-6-(3-oxociclo-hex-1-en-1-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila:
[00797] Um RB de 250 ml foi carregado com 3-(4,4,5,5-tetrametil1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-2-enona (7,00 g, 31,5 mmol) (em cerca de 70 ml de dioxano), 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2fluorobenzoato de terc-butila (5,8 g, 15,75 mmol)), Pd(dppf)Cl2.DCM (0,576 g, 0,788 mmol), e em seguida Na2CO3 saturado (25 mL). A mistura resultante foi inundada com nitrogênio durante 15 min. DME (10 mL) foi em seguida adicionado. A mistura foi agitada a 100 0C durante a noite. Acetato de etila ( 150 ml) e água ( 50 ml) foram adicionados, e a mistura resultante foi agitada durante 30 minutos. Os orgânicos foram separados e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (30 ml x3). As camadas orgânicas foram combinadas e secadas sobre Na2SO4, filtradas e evaporadas para fornecer material desejado bruto como um semissólido de cor escura pegajoso. Este sólido foi tomado para cerca de 30 mL de éter, sonicado durante 10 minutos, e o sólido amarelo precipitado foi filtrado, e lavado com éter frio (5 ml x 3), secado sob vácuo elevado para fornecer o produto desejado (3,1 g , 51,3 %) como um sólido amarelo. LC-MS (m/z): (MH+) 384,2, 0,92 minuto. Etapa 4: 4-(3-(bis(terc-butoxicarbonil)amino)-6-(3-oxociclo-hex-1-en-1il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila:
[00798] A uma suspensão de 4-(3-amino-6-(3-oxociclo-hex-1-en-1il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (3 g, 7,82 mmol) em acetonitrila ( 25 mL) em Ta foi adicionado DMAP (0,048 g, 0,391 mmol) seguido por anidrido Boc (6,36 mL, 27,4 mmol). A mistura resultante foi agitada para temperatura ambiente durante 25 minutos. A solução foi diluída com EtOAc, lavada com NaHCO3 saturado e água, secada e concentrada. O produto bruto foi purificado por separação ISCO (80 g de sílica, 30 minutos, 5 a 60 % de EtOAc em heptano). O produto desejado foi obtido como um líquido pegajoso amarelo claro, que solidificou-se em repouso durante a noite. (3,5 g, 6,00 mmol, 77 % de rendimento). LC-MS (m/z): (MH+) 584,2, 1,286 minuto. 1H RMN (400 MHz, ACETONITRILA-d3) δ ppm 0,91 (s, 1 H) 1,31 (s, 16 H) 1,61 (s, 7 H) 1,88 2,03 (m, 1 H) 2,16 (s, 2 H) 2,50 (d, J=7,04 Hz, 2H) 2,85 3,09 (m, 2 H) 6,90 (s, 1 H) 7,51 7,71 (m, 2 H) 7,91 8,11 (m, 1 H) 8,92 (s, 1 H). Etapa 5 4-(3-(bis-(terc-butoxicarbonil)amino)-6-(3-oxociclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila:
[00799] A uma solução de 4-(3-(bis(terc-butoxicarbonil)amino)-6-(3oxociclo-hex-1-en-1-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (3 g, 5,14 mmol) em MeOH (15 mL) e DCM (10 mL) em Ta foi adicionado Pd-C (10 %, degauss, 1,094 g, 1,028 mmol). A mistura resultante foi inundada com hidrogênio durante 10 minutos, em seguida agitada em Ta durante 5 horas sob atmosfera de hidrogênio. A suspensão foi filtrada e a solução foi concentrada. Separação de coluna de sílica ISCO (80 g de sílica, 30 minutos, 5 a 60 % de EtOAc em heptano) forneceu o produto desejado como um líquido pegajoso amarelo claro, que solidificou-se em repouso durante a noite. (1,485 g, 2,54 mmol, 49,3 % de rendimento). LC-MS (m/z): (MH+) 586,3, 1,17 minutos. Etapa 6: 4-(6-((1S,4S)-4-(benzoilóxi)-3-oxociclo-hexil)-3-(bis(tercbutoxicarbonil)amino)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila e 4(6-((1R,4R)-4-(benzoilóxi)-3-oxociclo-hexil)-3-(bis(tercbutoxicarbonil)amino)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila:
[00800] A: Prep do catalisador de base livre: 300 mg de (S)-(6metoxiquinolin-4-il)((1S,2R,4S,5R)-5-vinilquinuclidin-2-il)metanamina ( sal de tri.HCl) foram dissolvidos em 20 mL de DCM, em seguida neutralizados com NaOH a 1 N (5 ml), a camada orgânica foi separada, lavada com salmoura (5 ml x2) e água (5 ml x2), secada, filtrada e concentrada para fornecer o produto como uma base livre. (200 mg de amina de base livre em 4 mL de dioxano).
[00801] B: Um frasconete de micro-ondas de 10 mL, equipado com uma barra agitadora magnética, foi carregado com 4-(3-(bis-(tercbutoxicarbonil)amino)-6-(3-oxociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (1,485 g, 2,54 mmol), BHT (hidroxiltolueno butilado, 0,067 g, 0,304 mmol), (S)-(6-metoxiquinolin-4-il)((1S,2R,4S,5R)-5vinilquinuclidin-2-il)metanamina (0,098 g, 0,304 mmol) (em 2 mL de dioxano) e ácido tricloroacético (0,050 g, 0,304 mmol). Dioxano (1 ml) foi em seguida adicionado, e a mistura resultante foi agitada durante 5 min antes de peroxianidrido benzoico (0,983 g, 4,06 mmol) ser adicionado. A mistura reacional foi agitada a 30 °C durante 16 h. A mistura reacional foi diluída com diclorometano, tratada com uma solução aquosa saturada de NaHCO3, lavada com salmoura, secada sobre Na2SO4, filtrada, concentrada para aprox. 3 mL de DCM. O bruto (em 3 mL de DCM) foi purificado por cromatografia de coluna rápida ISCO eluindo com um EtOAc em heptano (10 a 45 % de EtOAc em heptano, 120 g de coluna de sílica-gel, 35 minutos). A enantiosseletividade nãp pode ser determinada neste estágio por análise de HPLC de fase quiral. Nenhuma separação foi observada por todas as colunas/métodos disponíveis. Este produto foi diretamente usado na reação de etapa seguinte. (730 mg, 40,8 % de rendimento) LC-MS (m/z): (MH+) 706,3 em 1,38 minuto. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1,26 1,41 (m, 19 H) 1,46 1,67 (m, 11 H) 2,08 2,22 (m, 1 H) 2,26 2,42 (m, 2 H) 2,50 2,67 (m, 1 H) 2,70 a 2,91 (m, 1 H) 3,08 (s, 1 H) 3,26 3,49 (m, 1 H) 4,03 4,19 (m, 1 H) 5,49 5,67 (m, 1 H) 7,26 (d, J=0,78 Hz, 2 H) 7,40 7,66 (m, 5 H) 7,97 (t,J=7,83 Hz, 1 H) 8,07 8,19 (m, 2 H) 8,41 (s, 1 H). Etapa 7: 4-(6-(4-(benzoilóxi)-3,3-difluorociclo-hexil)-3-(bis(tercbutoxicarbonil)amino)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila:
[00802] A uma solução de 4-(6-((1S,4S)-4-(benzoilóxi)-3-oxociclohexil)-3-(bis(terc-butoxicarbonil)amino)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (730 mg, 1,034 mmol) em DCM (7 mL) em Ta foi adicionado XtalFlour-E (939 mg, 4,14 mmol) seguido por triidrofluoreto de trietilamina (0,674 mL, 4,14 mmol). A mistura resultante foi agitada para temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura foi filtrada e a solução filtrada foi diretamente aplicada para separação ISCO: 24 g de sílica-gel, 0 a 70 % de EtOAc em heptano, 30 minutos. Um sólido amarelo claro (670 mg, 0,902 mmol, 87 % de rendimento) foi obtido. LCMS (m/z): (MH+) 728,0 em 0,95 min (método MS não polar). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0,88 (s, 2 H) 1,19 1,39 (m, 21 H) 1,48 1,68 (m, 11 H) 1,86 2,08 (m, 2 H) 2,08 2,21 (m, 1 H) 2,26 2,47(m, 2 H) 2,47 2,63 (m, 1 H) 3,21 3,44 (m, 1 H) 5,22 5,51 (m, 1 H) 7,41 7,55 (m, 4 H) 7,60 (s, 1 H) 7,96 (d, J=7,82 Hz, 1 H) 8,06 8,19 (m, 2H) 8,42 (s, 1 H). Etapa 8: ácido 4-(3-amino-6-(4-(benzoilóxi)-3,3-difluorociclohexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico:
[00803] A uma solução de 4-(6-(4-(benzoilóxi)-3,3-difluorociclohexil)-3-(bis(terc-butoxicarbonil)amino)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de terc-butila (670 mg, 0,921 mmol) em DCM (12 mL) em Ta foi adicionado TFA (4,96 mL, 64,4 mmol). A mistura resultante foi agitada para temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi concentrada, diluída com EtOAc, neutralizada com NaHCO3 duas vezes, em seguida salmoura, a camada orgânica foi separada, secada e concentrada para fornecer o produto bruto, que foi usado na etapa seguinte diretamente. (434 mg, 0,921 mmol, 100 % de rendimento). LC-MS (m/z): (MH+) 472,1, em 0,942 minuto. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ ppm: 1,07 (t, J=7,04 Hz, 2 H) 1,83 (t, J=10,17 Hz, 2 H) 2,16 (d, J=5,09 Hz, 1 H) 2,29 2,45 (m, 2 H) 3,02 (br. s., 1H) 3,16 3,44 (m, 9 H) 5,22 5,52 (m, 1 H) 5,73 (s, 1 H) 6,24 (s, 2 H) 7,44 7,75 (m, 5 H) 7,89 (t, J=7,83 Hz, 1 H) 7,94 8,07 (m, 3 H). Etapa 9: benzoato de 4-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(((S)-1-(3-fluoro-5iodofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)fenil)pirazin-2-il)-2,2-difluorociclohexila, benzoato de 4-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(((S)-1-(3-fluoro-5iodofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)fenil)pirazin-2-il)-2,2-difluorociclohexila:
[00804] A uma mistura de ácido 4-(3-amino-6-(4-(benzoilóxi)-3,3difluorociclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico (434 mg, 0,92 mmol) (ácido 4-(3-amino-6-((4R)-4-(benzoilóxi)-3,3-difluorociclo-hexil)pirazin2-il)-2-fluorobenzoico), (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etanol (320 mg, 1,012 mmol), HOAt (250 mg, 1,840 mmol) e EDC (353 mg, 1,840 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionado DIEA (1,607 mL, 9,20 mmol) . A mistura resultante foi agitada durante a noite em Ta. A mistura foi diluída com EtOAc, lavada com água três vezes e salmoura, secada, concentrada para fornecer o produto bruto como um líquido viscoso amarelo claro.
[00805] Após purificação ISCO (24 g de sílica, 10 a 80 % de EtOAc em heptano, 35 minutos), o produto desejado foi obtido como um líquido amarelo claro, que contém dois possíveis isômeros. (601 mg, 0,818 mmol, 89 % de rendimento) LC-MS ( m/z): (MH+) 735,0 em 1,09 minuto. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1,71 (br. s., 1 H) 1,80 2,00 (m, 2 H) 2,18 2,39 (m, 2 H) 2,39 2,52 (m, 1 H) 2,53 2,70 (m, 1 H) 3,13 (br. s.,1 H) 3,82 4,07 (m, 2 H) 4,78 (s, 2 H) 5,23 (d, J=5,09 Hz, 2 H) 7,02 7,16 (m, 1 H) 7,31 7,39 (m, 1 H) 7,41 7,50 (m, 2 H) 7,50 7,76 (m, 5 H) 7,87 8,03 (m, 2 H) 8,07 8,23 (m, 3 H). Etapa 10: 4-(3-amino-6-(3,3-difluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2-hidroxietil)benzamida:
[00806] Ao benzoato de 4-(5-amino-6-(3-fluoro-4-(((S)-1-(3-fluoro-5iodofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)fenil)pirazin-2-il)-2,2-difluorociclohexila (600 mg, 0,817 mmol) em MeOH (8 ml), THF (8 ml) e água ( 8 ml) em Ta foi adicionado LiOH.H2O (206 mg, 4,90 mmol). A mistura resultante foi agitada a 25 0C durante 2 horas. A mistura reacional foi concentrada e ao resíduo foram adicionados 30 mL de EtOAc, lavados com água (10 ml x3), secados, filtrados, e concentrados para fornecer o produto bruto como um líquido pegajoso amarelo claro, que tornouse um sólido esbranquiçado após descansar durante a noite. (515 mg, 100 % de rendimento) . LC-MS (m/z): (MH+) 631,1 em 0,771 minuto. Etapa 11:4-(3-amino-6-((1S,4S)-3,3-difluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2hidroxietil)benzamida:
[00807] O composto obtido de etapa 10 foi purificado por coluna de separação quiral (coluna OJ (21 X 250 mm), SFC = 100 ml/min, CO2/EtOH = 85/15, carregamento: 70 mg/7ml de EtOH, 274 bar) para fornecer dois compostos puros quirais: 4-(3-amino-6-((1S,4S)-3,3difluoro-4-hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5iodofenil)-2-hidroxietil)benzamida (255 mg, 27,8 % de rendimento). 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ ppm 1,46 1,69 (m, 2 H) 1,71 2,26 (m, 4 H) 2,79 3,02 (m, 1 H) 3,58 3,83 (m, 2 H) 4,94 5,15 (m, 2 H) 5,25 5,45 (m, 1 H) 6,11 6,26 (m, 1 H) 7,19 7,34 (m, 1 H) 7,46 7,56 (m, 1 H) 7,56 7,66 (m, 2 H) 7,66 7,77 (m, 1 H) 7,95 (s, 1 H) 8,66 8,79 (m, 1H).
[00808] 4-(3-Amino-6-((1R,4R)-3,3-difluoro-4-hidroxiciclohexil)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2hidroxietil)benzamida (53 mg, 5,77 % de rendimento). 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ ppm 1,15 1,30 (m, 1 H) 1,48 1,69 (m, 2 H) 1,72 2,25 (m, 5 H) 2,77 2,97 (m, 2 H) 3,57 3,84 (m, 3 H) 4,92 -5,14 (m, 2 H) 5,27 5,42 (m, 1 H) 6,10 6,24 (m, 2 H) 7,16 7,34 (m, 1 H) 7,46 7,57 (m, 1 H) 7,57 7,67 (m, 2 H) 7,67 7,77 (m, 1 H) 7,95 (s, 1H) 8,63 8,80 (m, 1 H). Exemplo 473 Síntese de (S)-4-(3-amino-6-(morfolina-4-carbonil)pirazin-2-il)-N-(1-(3bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida
Figure img0330
Etapa 1: 5-amino-6-bromopirazina-2-carboxilato de etila:
[00809] A uma solução de 5-aminopirazina-2-carboxilato de etila (880 mg, 5,26 mmol) em acetonitrila ( 20 mL) em Ta foi adicionado NBS (984 mg, 5,53 mmol), a solução resultante foi agitada para temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reacional foi diluída com EtOAc, lavada com NaHCO3 saturado, salmoura e água, secada, filtrada, e concentrada para fornecer o produto bruto, que foi purificado por ISCO (24 g de coluna de sílica-gel, 0 a 50 % de EtOAc em heptano, 30 minutos). 1,01 g, 78 % de rendimento. LC-MS (m/z): 247,9 ( MH+), 0,51 minuto. Etapa 2: 5-Amino-6-(4-(terc-butoxicarbonil)-3-fluorofenil)pirazina-2carboxilato de etila:
[00810] Uma mistura de 5-amino-6-bromopirazina-2-carboxilato de etila (210 mg, 0,853 mmol), 2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioxaborolan-2-il)benzoato de terc-butila (357 mg, 1,109 mmol), aduto de PdCl2(dppf).CH2Cl2 (69,7 mg, 0,085 mmol) e Na2CO3 (362 mg, 3,41 mmol) (solução a 2 M foi usada) em DME ( 5 mL) foi colocada em um frasconete de 20 ml e selada. A mistura foi tratada por micro-ondas durante 15 minutos a 110 0C. A mistura foi diluída com EtOAc, lavada com água duas vezes e salmoura, secada, filtrada, e concentrada para fornecer o bruto como um sólido amarelo claro. O produto bruto foi purificado por ISCO (12 g, 10 55 % de EtOAc em heptano, 30 minutos) para fornecer 228 mg (74 % de rendimento) de sólido amarelo claro. LC-MS (m/z): 362,1 (MH+), 0,89 minuto. Etapa 3: ácido 4-(3-amino-6-(etoxicarbonil)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico:
[00811] A uma solução de 5-amino-6-(4-(terc-butoxicarbonil)-3fluorofenil)pirazina-2-carboxilato de etila (0,253 g, 0,7 mmol) em DCM ( 4 mL) em Ta foi adicionado TFA (2,157 mL, 28,0 mmol). A solução resultante foi agitada para temperatura ambiente durante 2 horas. A solução de reação foi concentrada e também secada para fornecer o bruto produto desejado como um sal de TFA. Este produto foi diretamente usado na etapa seguinte. 0,214 g (100 % de rendimento) de líquido pegajoso claro foi obtido. LC-MS (m/z): 306,1 ( MH+), 0,563 minuto. Etapa 4: 5-amino-6-(4-((1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)-3fluorofenil)pirazina-2-carboxilato de (S)-etila:
[00812] A uma mistura de ácido 4-(3-amino-6-(etoxicarbonil)pirazin2-il)-2-fluorobenzoico (0,214 g, 0,7 mmol), (S)-2-amino-2-(3-bromo-5fluorofenil)etanol (272 mg, 1,009 mmol), HOAt (187 mg, 1,376 mmol) e EDC (264 mg, 1,376 mmol) em DMF ( 2,5 mL) foi adicionado DIEA (0,961 mL, 5,50 mmol). A mistura resultante foi agitada durante a noite em Ta. A mistura foi diluída com EtOAc, lavada com água três vezes e salmoura, secada, concentrada para fornecer o produto bruto como um líquido viscoso amarelo claro. Purificação ISCO (12 g de sílica, 10 a 90 % de EtOAc em heptano, 30 minutos) forneceu o produto desejado (200 mg, 84 % de rendimento) como um líquido amarelo claro. LCMS (m/z): 522,9 (MH+), 0,787 minuto. Etapa 5: ácido (S)-5-amino-6-(4-((1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)pirazina-2-carboxílico:
[00813] Uma mistura de 5-amino-6-(4-((1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)pirazina-2-carboxilato de (S)-etila (220 mg, 0,422 mmol) e LiOH.H2O (142 mg, 3,38 mmol) em MeOH ( 2ml), THF (2mL) e água ( 2mL) foi agitada durante 3 horas em Ta. A mistura foi concentrada, ao resíduo foram adicionados 2 mL de água, HCl a 3N foi em seguida adicionado sob agitação até o pH final ficar cerca de 4. A mistura resultante foi em seguida concentrada e também secada para fornecer o produto bruto como um sólido amarelo claro. (208 mg, 0,422 mmol, 100 % de rendimento). LC-MS (m/z): 494,9 ( MH+), 0,653 minuto. Etapa 6: (S)-4-(3-amino-6-(morfolina-4-carbonil)pirazin-2-il)-N-(1-(3bromo-5-fluorofenil)-2-hidroxietil)-2-fluorobenzamida:
[00814] A uma mistura de ácido (S)-5-amino-6-(4-((1-(3-bromo-5fluorofenil)-2-hidroxietil)carbamoil)-3-fluorofenil)pirazina-2-carboxílico (40 mg, 0,081 mmol), morfolina (28,3 mg, 0,324 mmol), HOAt (33,1 mg, 0,243 mmol) e EDC (46,6 mg, 0,243 mmol) em DMF ( 0,5 mL) foi adicionado DIEA (0,170 mL, 0,973 mmol). A mistura resultante foi agitada durante a noite em Ta. A mistura foi diluída com EtOAc, lavada com água três vezes e salmoura, secada, concentrada para fornecer o produto bruto como um líquido viscoso amarelo claro. O produto bruto foi dissolvido em 1,5 mL de DMSO, filtrado, e foi purificado por HPLC preparativa. (14 mg, 25,3 % de rendimento). LC-MS (m/z): 563,9 ( MH+), 0,707 minuto. 1H RMN (500 MHz, ACETONITRILA-d3) δ ppm 3,56 3,99 (m, 13 H) 5,06 5,23 (m, 1 H) 5,78 6,13 (m, 2 H) 7,22 (d, J=8,20 Hz, 1 H) 7,27 -7,36 (m, 1 H) 7,41 7,79 (m, 5 H) 7,89 8,05 (m, 1 H) 8,25 8,43 (m, 1 H). Exemplos 478a e 478b 4-(3-Amino-6-((R)-6-oxopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3fluoro-5-iodofenil)-2-hidroxietil)benzamida (Exemplo 478a) e 4-(3amino-6-((S)-6-oxopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro5-iodofenil)-2-hidroxietil)benzamida (Exemplo 478b)
Figure img0331
. 1-(4-Metoxibenzil)piperidina-2,6-diona:
[00815] Glutarimida (5 g, 44,2 mmol) foi suspenso em acetona (Volume: 100 mL) e em seguida K2CO3 (12,22 g, 88 mmol), Bu4NI (3,27 g, 8,84 mmol) e cloreto de 4-metoxibenzila (6,02 mL, 44,2 mmol) foram adicionados. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e filtrada através de celita e em seguida concentrada em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia rápida (0 a 50% de EtOAc/heptano) para fornecer 8,99 g do produto desejado como um sólido incolor. LCMS (m/z): (MH+), 234,2, 0,66 minuto. 1 -(4-Metoxibenzil)-3,4-di-hidropiridin-2(1H)-ona:
[00816] 1-(4-metoxibenzil)piperidina-2,6-diona (8,99 g, 38,5 mmol) foi dissolvido em tolueno (Volume: 128 ml) e resfriado para -78 °C. LSelectrida (42,4 ml, 42,4 mmol) foi adicionado gota a gota e a mistura agitada durante 1 hora. Após 1 hora, suspensão espessa juntamente com precipitado foi observada. A mistura reacional foi rapidamente retirada do banho de resfriamento para homogeneizar a mistura. Em seguida, DMAP (0,047 g, 0,385 mmol) foi adicionado em uma porção e em seguida DIEA (38,4 ml, 220 mmol) foi adicionado e em seguida TFAA (6,53 ml, 46,2 mmol) foi adicionado. Em seguida, o frasco de resfriamento foi removido e a mistura agitada em temperatura ambiente durante 2 h e em seguida extinguida com água e o produto extraído com EtOAc. A camada orgânica combinada foi secada (MgSO4), filtrada e concentrada em vácuo para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia rápida para fornecer 7,66 g do produto desejado como um xarope amarelo. LCMS (m/z): (MH+), 234,2, 0,73 minuto. 5-Iodo-1-(4-metoxibenzil)-3,4-di-hidropiridin-2(1 H)-ona:
[00817] 1-(4-metoxibenzil)-3,4-di-hidropiridin-2(1H)-ona (2 g, 9,21 mmol) foi dissolvido em MeOH (90 mL) e resfriado para -78 °C. ICl (13,81 ml, 13,81 mmol) foi adicionado lentamente e a mistura agitada durante 1 hora e em seguida Na2S2O3 saturado foi adicionado e a mistura foi agitada até a temperatura ambiente ser observada. O solvente foi evaporado em vácuo. O resíduo foi dissolvido em DCM e lavado com Na2S2O3 saturado e em seguida com água e secado (MgSO4), filtrado e concentrado em vácuo. O resíduo foi dissolvido em tolueno (40 mL) e tratado com ácido trifluoroacético (100 uL) e aquecido imediatamente para 145 °C durante 15 minutos e em seguida resfriado para 0 °C e ET3N (5 mL) foi adicionado. A mistura foi agitada durante 1 hora e concentrada em vácuo e em seguida o resíduo purificado por cromatografia rápida (0 a 20 % de EtOAc/heptano) para fornecer o produto desejado como um xarope gomoso. LCMS (m/z): (MH+), 344,1, 0,88 minuto. 4-(3-Amino-6-(1 -(4-metoxibenzil)-6-oxo-1,4,5,6-tetra-hidropiridin-3il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila:
[00818] 5-iodo-1-(4-metoxibenzil)-3,4-di-hidropiridin-2(1H)-ona (630 mg, 1,836 mmol), aduzido de PdCl2(dppf).CH2Cl2 (150 mg, 0,184 mmol), 4-(3-amino-6-bromopirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (1028 mg, 2,75 mmol) e Na2CO3 (2754 μl, 5,51 mmol) foram combinados em um frasco e em seguida DME (Volume: 6120 μl) foi adicionado. A mistura foi desgaseificada e purgada com nitrogênio e em seguida finalmente aquecida a 90 °C durante 2 h após o que completa consumação de material de partida foi observada. A mistura reacional foi diluída com EtOAc e água e a camada orgânica foi separada e secada (MgSO4), filtrada e concentrada em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia rápida (0 a 60% de EtOAc/DCM) para fornecer 361 mg do produto desejado como um sólido amarelo. LCMS (m/z): (MH+), 463,1, 0,88 minuto. 4-(3-Amino-6-(6-oxopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila:
[00819] 4-(3-Amino-6-(1-(4-metoxibenzil)-6-oxo-1,4,5,6-tetrahidropiridin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoato de metila (361 mg, 0,781 mmol) foi dissolvido em MeOH (Volume: 7 mL) e em seguida Pd-C (400 mg, 3,76 mmol) foi adicionado. A mistura foi evacuada e purgada com hidrogênio três vezes e finalmente, a mistura foi agitada sob 1 atm de hidrogênio durante a noite. Na manhã seguinte, o produto desejado juntamente com amino-pirazina super reduzido foi obtido. A mistura foi filtrada sobre celita e o filtrado concentrado em vácuo e o resíduo dissolvido em DCM e agitado sob ar durante 1 dia e em seguida concentrado e purificado por cromatografia rápida (0 a 50 % de DCM/EtOAc) para fornecer 144 mg do produto desejado como um sólido amarelo. LCMS (m/z): (MH+), 465,1, 0,81 minuto. Ácido 4-(3-amino-6-(6-oxopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluorobenzoico:
[00820] 4-(3-amino-6-(6-oxopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoato de metila (144 mg, 0,310 mmol) foi dissolvido em TFA (Volume: 3 mL) e aquecido a 150 °C durante 30 minutos em microondas. O solvente foi evaporado em vácuo e o resíduo foi azeotropado com tolueno três vezes para fornecer o lactam desbenzilado bruto. Este produto bruto foi dissolvido em THF (Volume: 3 mL, Relação: 3) e MeOH (Volume: 1,500 mL, Relação: 1,5) e à mistura foi adicionado LiOH (0,037 g, 1,550 mmol) dissolvido em água (Volume: 1,500 mL, Relação: 1,5). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos e concentrada em vácuo e o resíduo neutralizado com 2 mL (HCl a 4,0 N) e o solvente evaporado. O resíduo foi azeotropado uma vez com THF e uma vez com tolueno para fornecer o ácido bruto que foi levado para a etapa seguinte (assumindo produção quantitativa) sem qualquer outra purificação. LCMS (m/z): (MH+), 331,2, 0,44 minuto. 4-(3-Amino-6-(6-oxopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3fluoro-5-iodofenil)-2-hidroxietil)benzamida:
[00821] Ácido 4-(3-amino-6-(6-oxopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2fluorobenzoico (41,0 mg, 0,124 mmol), DIEA (0,108 mL, 0,620 mmol) e HATU (94 mg, 0,248 mmol) foram combinados em DMF (1,0 mL) e em seguida (S)-2-amino-2-(3-fluoro-5-iodofenil)etanol (39,4 mg, 0,124 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora e em seguida submetida diretamente à purificação por HPLC de fase reversa para fornecer o composto título como aduzido de TFA. O sólido obtido após liofilização foi dissolvido em MeOH e passado através de carbonato básico contendo cartucho de sílica e o filtrado foi concentrado em vácuo para fornecer 28,5 mg de uma mistura de diastereômero. O resíduo foi purificado por SFC quiral para fornecer os dois diastereômeros:
[00822] Diastereômero 1 (Exemplo 478a): 4-(3-amino-6-((R)-6oxopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2hidroxietil)benzamida (8,8 mg). 1H RMN (CD3OD): 7,88 (s, 1H), 7,75 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,48-7,64 (m, 3H), 7,34 (d, J=7,4 Hz, 1H), 7,11 (d, J=9,8 Hz, 1H), 5,05 (t, J=5,7 Hz,1H), 3,67-3,83 (m, 2H), 3,43 (d, J=7,8 Hz, 2H), 3,00 a 3,15 (m, 1H), 2,28-2,46 (m, 2H), 1,88-2,16 (m, 2H); LCMS (m/z): (MH+), 594,1, 0,71 minuto.
[00823] Diastereômero 2 (Exemplo 478b): 4-(3-amino-6-((R)-6oxopiperidin-3-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-1-(3-fluoro-5-iodofenil)-2hidroxietil)benzamida (8,2 mg) 1H RMN (CD3OD): 7,89 (s, 1H), 7,75 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,50 a 7,65 (m, 3H), 7,35 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,12 (d, J=9,8 Hz, 1H), 5,06 (t, J=5,7 Hz,1H), 3,65-3,89 (m, 2H), 3,37-3,53 (m, 2H), 2,96-3,16 (m, 1H), 2,31-2,59 (m, 2H), 1,88-2,20 (m, 2H); LCMS (m/z): (MH+), 594,1, 0,71 minuto. Atividade Biológica
[00824] Inibição de ERK1 e ERK2 foi medida usando os seguintes métodos. Ensaio de ERK2 (20 pM) quinase ativado:
[00825] Potência de composto contra ERK2 ativado foi determinada usando um ensaio quinase que mede fosforilação catalisada por ERK2 de substrato de peptídeo de ERKtídeo biotinilado ([Biotina] -AHA-K-RE-L-V-E-P-L-T-P-S-G-E-A-P-N-Q-A-L-L-R[NH2], a sequência de peptídeo derivada de receptor de EGF: SEQ ID NO:1). O ensaio foi realizado em HEPES a 20 mM [pH 7,5], MgCl2 a 5 mM, DTT a 1 mM, 0,01 % de Tween-20, 0,05 % de BSA usando ERK2 a 0,02 nM , peptídeo de ERKtídeo a 400 nM e ATP a 35 μM (todas as concentrações são finais na reação) em um volume total de 10,25 μL. Uma série de diluição de meio log, de 16 pontos de compostos em 41x de concentração final foi usada para gerar curvas de IC50. Séries de diluição de composto foram preparadas em 100 % de DMSO. ERK2 foi pré-incubado com compostos durante 30 minutos em temperatura ambiente. Reação foi iniciada por adição de um coquetel de substrato de peptídeo de ERKtídeo e ATP e foi deixada proceder durante 4 horas em temperatura ambiente. Reação foi terminada por adição de 10 μL de um tampão de interrupção de 2 vezes consistindo em Tris-Cl a 100 mM [pH 7,5], EDTA a 25 mM, 0,01 % de Tween 20, 20 μg/mL de contas Aceptoras de Proteína A AlphaScreen, 20 μg/mL de contas doadoras de Estreptavidina (PerkinElmer, Waltham, MA), e diluição de 1:1000 de anticorpo de Receptor de fosfo-EGF (Tnr669) (Cat # 8808, Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Reações terminadas foram lidas, após incubação durante a noite no escuro, em uma leitora de placa EnVision Multilabel (PerkinElmer, Waltham, MA), com excitação e emissão de comprimentos de onda definidos como 680 nm e 570 nm, respectivamente. Valores de IC50 foram determinados usando um ajuste de quatro parâmetros.
[00826] As seguintes condições de ensaio (ERK2 New) foram usadas para alguns compostos na seguinte tabela, e fornecem IC50s substancialmente similares para o ensaio descrito acima, para IC50 cerca de 0,1 μM ou acima. Quando a limitação deste ensaio foi atingida, o ensaio descrito acima foi usado.
[00827] Potência de composto contra ERK2 ativado é determinada usando um ensaio quinase que mede fosforilação catalisada por ERK2 de substrato de peptídeo de ERKtídeo biotinilado ([Biotina] -AHA-K-RE-L-V-E-P-L-T-P-S-G-E-A-P-N-Q-A-L-L-R[NH2], a sequência de peptídeo derivada de receptor de EGF : SEQ ID NO:1). O ensaio é realizado em HEPES a 50 mM [pH 7,5], MgCl2 a 5 mM, DTT a 1 mM, 0,01 % de Tween-20, 0,05 % de BSA usando ERK2 a 0,25 nM, peptídeo de ERKtídeo a 200 nM e ATP a 35 μM (todas as concentrações são finais na reação) em um volume total de 10,25 μL. Uma série de diluição de meio log, de 16 pontos de compostos em 41x de concentração final é usada para gerar curvas de IC50. Séries de diluição de composto são preparadas em 100 % de DMSO. ERK2 é pré-incubado com compostos durante 30 minutos em temperatura ambiente. Reação é iniciada por adição de um coquetel de substrato de peptídeo de ERKtídeo e ATP e é deixada proceder durante 2-3 horas em temperatura ambiente. Reação é terminada por adição de 10 μL de um tampão de interrupção de 2 vezes consistindo em Tris-Cl a 100 mM [pH 7,5], EDTA a 25 mM, 0,01 % de Tween 20, 10 μg/mL de contas Aceptoras de Proteína A AlphaScreen, 10 μg/mL de contas doadoras de Estreptavidina (PerkinElmer, Waltham, MA), e 1,4 μg/mL de anticorpo de receptor de fosfo-EGF (Thr669) (Cat # 3056, Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Reações terminadas são lidas, após incubação durante a noite no escuro, em uma leitora de placa EnVision Multilabel (PerkinElmer, Waltham, MA), com excitação e emissão de comprimentos de onda definidos como 680 nm e 570 nm, respectivamente. Valores de IC50 são determinados usando um ajuste de quatro parâmetros. Ensaio de ERK1 quinase ativado:
[00828] Potência de composto contra ERK1 ativado foi determinada usando um ensaio quinase que mede fosforilação catalisada por ERK1 de substrato de peptídeo de ERKtídeo biotinilado ([Biotina] -AHA-K-RE-L-V-E-P-L-T-P-S-G-E-A-P-N-Q-A-L-L-R[NH2], a sequência de peptídeo derivada de receptor de EGF : SEQ ID NO:1). O ensaio foi realizado em HEPES a 20 mM [pH 7,5], MgCl2 a 5 mM, DTT a 1 mM, 0,01 % de Tween-20, 0,05 % de BSA usando ERK1 a 0,2 nM, peptídeo de ERKtídeo a 200 nM e ATP a 45 μM (todas as concentrações são finais na reação) em um volume total de 10,25 μL. Uma série de diluição de meio log, de 16 pontos de compostos em 41x de concentração final foi usada para gerar curvas de IC50. Séries de diluição de composto foram preparadas em 100 % de DMSO. ERK1 foi pré-incubado com compostos durante 30 minutos em temperatura ambiente. Reação foi iniciada por adição de um coquetel de substrato de peptídeo de ERKtídeo e ATP e foi deixada proceder durante 4 horas em temperatura ambiente. Reação foi terminada por adição de 10 μL de um tampão de interrupção de 2 vezes consistindo em Tris-Cl a 100 mM [pH 7,5], EDTA a 25 mM, 0,01 % de Tween 20, 10 μg/mL de contas aceptoras de Proteína A AlphaScreen, 10 μg/mL de contas doadoras de Estreptavidina (PerkinElmer, Waltham, MA), e 1,4 μg/mL de anticorpo de receptor de fosfo-EGF (Thr669) (Cat # 3056, Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Reações terminadas foram lidas, após incubação durante a noite no escuro, em uma leitora de placa EnVision Multilabel (PerkinElmer, Waltham, MA), com excitação e emissão de comprimentos de onda definidos como 680 nm e 570 nm, respectivamente. Valores de IC50 foram determinados usando um ajuste de quatro parâmetros.
[00829] Todos os IC50s são apresentados em notação científica onde 'E' indica a potência de 10; por exemplo, 1,63E-03 representa 1,63 x 10 a 3, ou 0,00163.
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Claims (23)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (I):
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ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na qual R1 é um grupo opcionalmente substituído selecionado de C3-8 cicloalquila, heterociclila de 5 a 8 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S como membros de anel, fenila, SO2-fenila, -C(O)-fenila, -C(R8)2-fenila, e anel heteroarila de 5 a 6 membros, sendo que as ditas heterociclila e heteroarila contêm 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S como membros de anel, e sendo que os substituintes opcionais para R1 são 1 a 3 grupos independentemente selecionados
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de D, halo, hidróxi, amino, -N(R8)2, CN, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, -S(C1-4 alquila), C1-4 haloalquila, C1-4 haloalcóxi, C3-6 cicloalquila, heterociclila de 3 a 6 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S, oxo (exceto em anéis aromáticos), COOR8, CON(R8)2, -NR8-C(O)R8, -NR8-C(O)OR8 -SO2R8, -NR8SO2R8, e SO2N(R8)2, em que cada R8 é independentemente H ou C1-4 alquila; R" , I > L é H * , em que R’’ é metila ou etila, e é opcionalmente substituído com flúor, amino, hidróxi, metilamino, etila-mino, dimetilamino, -OP(O)(OH)2, metóxi ou etóxi; X e Y são independentemente selecionados de H, D, halo, CN, amino, hidróxi, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C1-4 alcóxi, e C1-4 haloalcóxi; R2 é H, C1-4 alquila, ou aril-C1-2-alquil-, no qual a arila e C1-4 alquila são opcionalmente substituídas com halo, CN, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C3-6 cicloalquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalcóxi, ou C1-4 alquilsulfonila; ou R2 e L são ligados juntamente para formar um grupo heterocíclico selecionado de morfolina, piperidina, tiomorfolina, piperazina, e pirrolidina que é ligado a R1 e é também opcionalmente substituído com um ou dois grupos independentemente selecionados de C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, oxo, CN, COOR7, CON(R7)2, e SO2R7, onde cada R7 é independentemente H ou C1-4 alquila; Z é N ou CR4; R4 é H, D, halo, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, ou C1-4 alcóxi; R5 é selecionado de -C(O)-R5a e R5a; em que R5a é uma C3-8 cicloalquila opcionalmente substituída, C3-8 cicloalquenila, anel heterocíclico de 3 a 8 membros saturado ou insaturado contendo de 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S, fenila, ou anel heteroarila de 5 a 6 membros contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O e S, sendo que os substituintes opcionais para R5 são 1 a 4 grupos independentemente selecionados de D, halo, hidróxi, amino, CN, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalquila, C1-4 hidroxialquila, C1-4 haloalcóxi, C3-6 cicloalquila, heterociclila de 3 a 6 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S, oxo (exceto em anéis aromáticos), -COOR9, -C(O)R9, CON(R9)2, -NR9C(O)R9, NR9CO2R9, -SO2R9, -NR9SO2R9, e -SO2N(R9)2, sendo que cada R9 é independentemente H ou C1-4 alquila opcionalmente substituída com 1 a 3 grupos independentemente selecionados de D, halo, OH, NH2, NHMe e NMe2; e dois substituintes nos mesmos átomos de carbono ou adjacentes de R5 podem ser opcionalmente considerados juntos para formar um anel de 5 a 6 membros que pode ser saturado ou aromático e conter de 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S e pode ser opcionalmente substituído com 1 a 2 grupos independentemente selecionados de D, Me, halo, OH, oxo, O(C1-4 alquila), NH2, C1-4 alquilamino, di(C1-4 alquil)amino; e R6 é H, D, halo, C1-4 alquila, ou C1-4 haloalquila.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que Z é N.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é H ou Me.
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R6 é H.
5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R5 é selecionado de -C(O)-R5a e R5a; sendo que R5a é selecionado de C3-8 cicloalquila, heterociclila de 5 a 8 membros contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O e S, fenila, e heteroarila de 5 a 6 membros, e é opcionalmente substituído com 1 a 3 grupos independentemente selecionados de D, halo, CN, hidróxi, C1-4 alcóxi, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C1-4 hidroxialquila, C1-4 haloalcóxi, -SO2R’, -NR’-C(O)-R’, e -SO2NR’2, onde cada R’ é independentemente H ou C1-4 alquila.
6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R5 é selecionado de -C(O)-R5a e R5a; sendo que R5a é selecionado de ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclohexenila, tetra-hidropirano, di-hidropirano, tetra-hidrofurano, oxetano, azetidina, pirrolidina, piperidina, piperazina, morfolina, tetrahidrotiopirano (tiaciclo-hexano), e tetra-hidrotiofurano (tiaciclopentano), cada um dos quais é opcionalmente substituído com 1 a 3 grupos independentemente selecionados de halo, D, CN, hidróxi, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalquila, C1-4 hidroxialquila, C1-4 haloalcóxi, oxo, COOR9, CON(R9)2, -NHC(O)R9, -NHCOOR9, -NHSO2R9, e -SO2R9, onde cada R9 é independentemente H ou C1-4 alquila.
7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R1 é fenila e é opcionalmente substituída com um a três grupos independentemente selecionados de halo, D, CN, C1-4 alcóxi, C1-4 alquila, C1-4 haloalquila, C1-4 haloalcóxi, SO2R’, -N(R’)2, -NR’-C(O)-R’, e -SO2NR’2, onde cada R’ é independentemente H ou C1-4 alquila.
8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que Y é H, metila, ou halo.
9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que que apresenta a fórmula IB:
Figure img0346
(IB) na qual R5 é um éter cíclico de 4 a 7 membros ou C5-6 cicloalquila, e R5 pode ser substituído com até quatro grupos independentemente selecionados de D, F, Cl, CN, amino, -CH2OH, -NHC(O)Me, NHCOOMe, -NHSO2Me, Me, OMe, OH, oxo, Et, iPr, OEt, e CF3; Y é H, F, Cl, ou Me; R10 é -CH2-R*, onde R* é H, -OH, F, -NH2, -NHMe, OP(O)(OH)2, -NMe2, ou -OMe; e R1 é fenila opcionalmente substituída com 1 a 2 grupos independentemente selecionados de halo, CN, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, C1-4 haloalquila, C1-4 haloalcóxi, COOR8, CON(R8)2, e -SO2R8, onde cada R8 é independentemente H ou C1-4 alquila; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
10. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 e 9, caracterizado pelo fato de que R5 é ciclo-hexila substituída com 1 a 3, grupos independentemente selecionados de D, F, Cl, CN, amino, Me, NHSO2Me, NHCOMe, OMe, OH, Et, CN, -CH2OH, e CF3.
11. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é fenila substituída com 0, 1 ou 2 grupos independentemente selecionados de F, Cl, Br, I, SMe, SO2Me e CH3.
12. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
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Figure img0385
Figure img0386
13. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula:
Figure img0387
, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
14. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula:
Figure img0388
, ou um sal farmaceuticamente aceitá-
15. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula:
Figure img0389
, ou um sal farmaceuticamente aceitável
16. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula:
Figure img0390
, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
17. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é 4-(3-amino-6-((1S,3S,4S)-3-fluoro-4hidroxiciclo-hexil)pirazin-2-il)-N-((S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)-2(metilamino)etil)-2-fluorobenzamida em forma de sal de cloridrato.
18. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 17, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo misturado com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
19. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um coagente terapêutico.
20. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica, como definida na reivindicação 18 ou 19, caracterizado(a) pelo fato de é para uso no tratamento de câncer.
21. Composto, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado de adenoma, câncer de bexiga, câncer cerebral, câncer de mama, câncer cervical, câncer colorretal, câncer de cólon, carcinoma epidérmico, carcinoma folicular, cânceres genitourinário, glioblastoma, cânceres de cabeça e pescoço, doença de Hodgkin, linfoma de não Hodgkin, hepatoma, câncer de rim, cânceres de pulmão tais como câncer de pulmão de célula pequena ou não pequena, leucemias tais como AML ou CML, mieloma múltiplo, distúrbios linfoides, cânceres de pele incluindo melanoma, neuroblastoma, câncer ovariano, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer retal, sarcoma, câncer testicular, e câncer de tiroide.
22. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que está em combinação com um composto selecionado dentre vemurafinibe, debrafinibe, LGX818, trametinibe, MEK162, LEE011, PD-0332991, panobinostate, verinostate, romidepsina, cetuximabe, gefitinibe, erlotinibe, lapatinibe, panitumumabe, vandetanibe, INC280, everolimo, simolimo, BMK120, BYL719, e CLR457.
23. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 17, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.
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