TWI663153B - 作為激酶抑制劑的胺基雜芳基苯甲醯胺 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種式(I)化合物或其鹽；
及此等化合物之治療用途。本發明進一步提供包含此等化合物之醫藥組合物，及包含此等化合物及治療輔劑之組合物。

Description

作為激酶抑制劑的胺基雜芳基苯甲醯胺
蛋白激酶涉及極複雜的信號傳導級聯，該等級聯調節大多數細胞功能，包括存活及增殖。此等信號傳導路徑已獲得深度研究，尤其在由失調細胞功能引起的病症(諸如癌症)之情形下。細胞外信號調節激酶(ERK)為一類涉及將細胞外信號傳送至細胞及亞細胞之細胞器中的信號傳導激酶。ERK1及2(ERK1/2)為在有絲分裂促進劑活化之蛋白激酶(MAPK)路徑中的激酶，且亦分別稱為p42及p44。ERK1及ERK2以相對較大的量存在於細胞中(每個細胞約107個分子)，且涉及調節多種活性。實際上，已知ERK1/2級聯之失調引起多種病理，包括神經退化性疾病、發育疾病、糖尿病及癌症。Wortzel及Seger,Genes & Cancer,2：195-209(2011)，2011年5月9日在線公開。
ERK1/2在癌症中之作用受到特殊關注，因為據信在其信號傳導級聯中在ERK1/2上游之活化突變為造成所有癌症中超過一半癌症之原因。此外，過度ERK1/2活性亦發現於其中上游組分未突變之癌症中，表明ERK1/2信號傳導即使在無突變活化之癌症中亦在癌發生中起作用。ERK路徑亦已展示控制腫瘤細胞遷移及侵襲，且因此可與癌轉移相關。參見A.von Thun等人，ERK2 drives tumour cell migration in 3D microenvironments by suppressing expression of Rab17 and Liprin-β2,J.Cell Sciences，在線公開日期2012年2月10日。此外，已報導使用shRNA使ERK1或ERK2沉默會殺死培養之黑色素瘤細胞，且 亦使黑色素瘤細胞對BRAF抑制劑更敏感。J.Qin等人，J.Translational Med.10：15(2012)。亦報導ERK1及2抑制劑在對MEK抑制劑具有抗性之腫瘤細胞上有效，且MEK及ERK之抑制作用同時提供協同活性。Molec.Cancer Therapeutics，第11卷，1143(2012年5月)。
充當ERK抑制劑之吲唑衍生物已經報導為用於治療癌症之治療劑。WO2012/030685；WO2007/070398；WO2008/153858。某些具有與吡啶酮或類似環之聯芳基鍵聯之2-胺基吡啶/嘧啶化合物亦已經報導為適用於治療癌症及過度增殖性病症之ERK抑制劑：WO2013/130976。其他ERK抑制劑亦已揭示為治療劑，參見例如WO2004/016597。由於其治療價值，需要新的ERK1及/或ERK2抑制劑來治療與不需要之ERK1/2活性水準相關的病症。本發明提供抑制ERK1或ERK2或兩者之新穎化合物，用於治療與過度ERK1及/或ERK2活性相關的疾病，諸如癌症。
在一態樣中，本發明提供式(I)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R1為視情況經取代之基團，選自C3-8環烷基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子作為環成員的5-8員雜環基、苯基、-SO2-苯基、-C(O)-苯基、-C(R8)2-苯基及5-6員雜芳基環，其中該雜環基及雜芳基含有1-2個選自N、O及S之雜原子作為環成員， 且其中R1之視情況選用之取代基為1-3個獨立地選自D、鹵基、羥基、胺基、-N(R8)2、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-S(C1-4烷基)、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子的3-6員雜環基、側氧基(除在芳環上)、CN、COOR8、CON(R8)2、-NR8-C(O)R8、-NR8-C(O)OR8-SO2R8、-NR8SO2R8及SO2N(R8)2之基團，其中各R8獨立地為H或C1-4烷基；L為一鍵，或L可為C1-4伸烷基、C2-4伸烯基、C1-4伸炔基、C3-6環烷基或含有1-2個選自N、O及S之雜原子作為環成員的4-7員雜環基，其中L視情況經1-3個獨立地選自R11、D、OH、NH2、-NHR11、-NHC(=O)R11、-NHC(=O)-OR11、-NHC(=O)-NH2、-NHC(=O)-NHR11、-N(R11)2、CN、鹵基、N3、CON(R7)2及COOR7之基團取代；其中各R11獨立地為C1-4烷基，其可經多達3個獨立地選自D、鹵基、OH、NH2、-NHMe、-NMe2、-OP(O)(OH)2及O-C1-4烷基之基團取代；X及Y獨立地選自H、D、鹵基、CN、胺基、羥基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基及C1-4鹵烷氧基；R2為H、C1-4烷基或芳基-C1-2烷基-，其中芳基及C1-4烷基視情況經鹵基、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C3-6環烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基或C1-4烷基磺醯基取代；或R2可與X環化以形成與X所連接之苯基環稠合的含有1-2個選自N、O及S之雜原子之5-7員雜環，或R2可與L環化以形成含有1-2個選自N、O及S之雜原子之5-7員雜環，其中由R2與X環化或由R2與L環化所形成之視情況選用之雜環可視情況經一或兩個獨立地選自CN、鹵基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、側氧基、CN、COOR7、CON(R7)2及-SO2R7之基團取代； 各R7獨立地為H或C1-4烷基；Z為N或CR4；R4為H、D、鹵基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基或C1-4烷氧基；R5係選自-C(O)-R5a及R5a；其中R5a為視情況經取代之C3-8環烷基、C3-8環烯基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子之飽和或不飽和3-8員雜環、苯基或含有1-3個選自N、O及S之雜原子之5-6員雜芳基環，其中R5之視情況選用之取代基為1-4個獨立地選自D、鹵基、羥基、胺基、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子的3-6員雜環基、側氧基(除在芳環上)、CN、-COOR9、-C(O)R9、CON(R9)2、-NR9C(O)R9、-NR9CO2R9、-SO2R9、-NR9SO2R9及-SO2N(R9)2之基團，其中各R9獨立地為H或視情況經1-3個獨立地選自D、鹵基、OH、NH2、NHMe及NMe2之基團取代的C1-4烷基；且在R5之相同或相鄰碳原子上的兩個取代基可視情況合起來形成可為飽和或芳族且含有1-2個選自N、O及S之雜原子且可視情況經1-2個獨立地選自D、Me、鹵基、OH、側氧基、O(C1-4烷基)、NH2、C1-4烷基胺基、二(C1-4烷基)胺基之基團取代的5-6員環；且R6為H、D、鹵基、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；包括此等化合物之醫藥學上可接受之鹽，例如HCl鹽形式，及該等化合物及鹽之同位素富含型式，尤其該等化合物之氘化型式及其鹽。此等化合物為ERK1及/或ERK2之抑制劑，且因此適用於治療與過度或不需要之ERK1及/或ERK2活性水準相關的病狀，尤其回應於ERK1及/或ERK2之抑制劑的癌症。
在另一態樣中，本發明提供醫藥組合物，其包含式(I)化合物，或描述於本文中之其任何子類，與至少一種醫藥學上可接受之載劑或賦形劑摻合，視情況與兩種或兩種以上醫藥學上可接受之載劑或賦形 劑摻合。此等組合物亦適用於治療與過度或不需要之ERK1及/或ERK2活性水準相關的病狀，尤其回應於ERK1及/或ERK2之抑制劑的癌症。該等組合物亦可包含一或多種共治療劑，諸如本文中所描述者，以增強所治療病狀或該病狀之相關症狀的治療。
在另一態樣中，本發明提供一種治療特徵在於ERK1及ERK2中一或兩者之過度或不需要之活性水準之病狀的方法，其中該方法包含向需要該治療之個體投與有效量的式(I)化合物或如本文所述之其任何亞屬，或包含該化合物之醫藥組合物。個體可為哺乳動物，且較佳為人類，且典型地為經診斷患有與過度ERK1及/或ERK2活性相關之病狀的個體。可由本文所述之化合物及方法治療的病狀包括對ERK1/2抑制劑起反應之各種癌症形式，諸如實體腫瘤、腺瘤、膀胱癌、腦癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、結腸癌、表皮癌、濾胞癌、泌尿生殖癌、神經膠母細胞瘤、頭頸部癌、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、非霍奇金氏淋巴瘤、肝癌、腎癌、肺癌(諸如小細胞或非小細胞肺癌)、白血病(諸如AML或CML)、多發性骨髓瘤、淋巴病症、皮膚癌(包括黑色素瘤)、神經母細胞瘤、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、直腸癌、肉瘤、睾丸癌及甲狀腺癌。該等化合物尤其適合用於治療黑色素瘤、卵巢癌、甲狀腺癌、結腸癌、肺癌、胰臟癌、子宮頸癌、頭頸部癌及白血病(包括慢性骨髓單核細胞性白血病(CMML)、AML及CML)。特別關注使用本發明化合物之適應症包括其中存在如V600E之BRAF突變的癌症，例如黑色素瘤、卵巢癌、甲狀腺癌、結腸直腸癌及肺癌；其中MAPK及/或PI3K路徑失調之乳癌；與KRAS突變相關之癌症，諸如肺癌、胰臟癌及結腸直腸癌；具有ERK2突變之癌，諸如子宮頸癌或頭頸部癌；白血病，尤其當展現NF-1突變時；及其中EGFR突變之非小細胞肺癌。
在一態樣中，本發明提供式(I)化合物及本文所述之式(I)之亞 屬，以及此等化合物之醫藥學上可接受之鹽，及所有立體異構體(包括非對映異構體及對映異構體)、互變異構體及其同位素富含型式(包括氘取代)。本發明化合物亦包含式(I)(或其子式)之化合物的多晶型物及其鹽。此等化合物可用於治療對ERK1/2抑制劑起反應之病狀，諸如本文所述者，及用於製備用以治療此等病症之藥劑，且可與用於治療此等病症之共治療劑組合使用。本文所述之醫藥組合物及方法亦可與共治療劑一起使用或一起調配；例如，式I及其子式之化合物可與B-RAF抑制劑及如本文進一步描述之其他治療劑一起使用或一起調配。
在另一態樣中，本發明提供製備式I化合物以及適用於製備本發明化合物之關鍵中間物化合物之方法。
圖1展示4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺之游離鹼的X射線粉末繞射圖案。
圖2為4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺之游離鹼的DSC/TGA熱圖形。
圖3展示4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺之HCl鹽形式的X射線粉末繞射圖案。
圖4為4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺之HCl鹽形式的DSC/TGA熱圖形。
除非另外提供或自本文顯而易見，否則以下定義適用： 如本文所用，術語「鹵素」(或鹵基)係指氟、溴、氯或碘。經鹵素取代之基團及部分(諸如經鹵素取代之烷基(鹵烷基))可為單鹵化、多鹵化或全鹵化的。除非另外規定，否則氯及氟為烷基或環烷基上之較佳鹵基取代基；除非另外規定，否則氟、氯及溴通常較佳在芳基或雜芳基上。
除非另外提供，否則如本文所用，術語「雜原子」係指氮(N)、氧(O)或硫(S)原子，尤其氮或氧。
如本文所用，術語「視情況經取代」指示所描述之基團可為未經取代的，或其可為經取代的。經取代之基團不欲涵蓋將產生如下化合物之取代基之數目、位置或選擇，該化合物預期在室溫下在水中無法穩定持續至少足以呈醫藥劑形式投與之長時間。當存在多個取代基時，除非另外指示，否則該等取代基獨立地經選擇，因此在存在2或3個取代基時，例如彼等取代基可為相同或不同的。
如本文所用，術語「烷基」係指具有至多10個碳原子之完全飽和分支鏈或無支鏈烴部分。除非另外提供，否則烷基係指具有1至6個碳原子或1至4個碳原子之烴部分。烷基之代表性實例包括(但不限於)甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、異丁基、第三丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基及其類似基團。
經取代之烷基為含有一或多個取代基來替代未經取代烷基之氫原子，諸如1、2或3個取代基或1-4個取代基，高達未經取代烷基上存在的氫數目之烷基。若未另外規定，則烷基之合適取代基可選自鹵素、D、CN、側氧基、羥基、經取代或未經取代C1-4烷氧基、經取代或未經取代C3-6環烷基、含有1或2個選自N、O及S之雜原子作為環成員的經取代或未經取代3-7員雜環烷基、經取代或未經取代苯基、胺 基、(C1-4烷基)胺基、二(C1-4烷基)胺基、C1-4烷基硫基、C1-4烷基磺醯基、-C(=O)-C1-4烷基、COOH、COO(C1-4烷基)、-O(C=O)-C1-4烷基、-NHC(=O)C1-4烷基及-NHC(=O)OC1-4烷基；其中經取代C1-4烷氧基、經取代C3-6環烷基、3-7員雜環烷基及經取代苯基之取代基為多達3個獨立地選自鹵基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、D、C1-4烷氧基、胺基、C1-4烷基胺基、二(C1-4烷基)胺基、羥基及CN之基團。除非另外規定，否則烷基之較佳取代基包括鹵素、CN、側氧基、羥基、C1-4烷氧基、C3-6環烷基、苯基、胺基、(C1-4烷基)胺基、二(C1-4烷基)胺基、C1-4烷基硫基、C1-4烷基磺醯基、-C(=O)-C1-4烷基、COOH、-COO(C1-4烷基)、-O(C=O)-C1-4烷基、-NHC(=O)C1-4烷基及-NHC(=O)OC1-4烷基。
如本文所用，術語「伸烷基」係指具有1至10個碳原子及兩個開放價態以連接至其他分子組分之二價烷基。連接至伸烷基之兩種分子組分可在同一碳原子上或在不同碳原子上；因此，例如伸丙基為3碳伸烷基，其可為1,1-二取代、1,2-二取代或1,3-二取代。除非另外提供，否則伸烷基係指具有1至6個碳原子或1至4個碳原子之部分。伸烷基之代表性實例包括(但不限於)亞甲基、伸乙基、伸正丙基、伸異丙基、伸正丁基、伸第二丁基、伸異丁基、伸第三丁基、伸正戊基、伸異戊基、伸新戊基、伸正己基、3-甲基伸己基、2,2-二甲基伸戊基、2,3-二甲基伸戊基、伸正庚基、伸正辛基、伸正壬基、伸正癸基及其類似基團。經取代之伸烷基為含有一或多個，諸如1、2或3個取代基之伸烷基；除非另外規定，否則合適且較佳取代基係選自關於烷基描述為合適且較佳之取代基。
同樣，「伸烯基」及「伸炔基」係指分別具有雙鍵或參鍵之伸烷基；其典型地為2-6且通常2-4個碳原子長度，且可如一般關於伸烷基所解釋經取代。
如本文所用，術語「鹵烷基」係指如本文所定義之烷基，其經 一或多個如本文所定義之鹵基取代。除非另外規定，否則鹵烷基之烷基部分具有1-4個碳原子。鹵烷基可為單鹵烷基、二鹵烷基、三鹵烷基，或多鹵烷基，包括全鹵烷基。單鹵烷基可在烷基內具有一個碘、溴、氯或氟。二鹵烷基及多鹵烷基可在烷基內具有兩個或兩個以上相同鹵原子或不同鹵基之組合。多鹵烷基典型地含有多達6個，或4個，或3個或2個鹵基。鹵烷基之非限制性實例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基及二氯丙基。全鹵-烷基係指所有氫原子均經鹵原子置換之烷基，例如三氟甲基。除非另外規定，否則較佳之鹵烷基包括單氟、二氟及三氟取代之甲基及乙基，例如CF3、CF2H、CFH2及CH2CF3。
如本文所用，術語「烷氧基」係指烷基-O-，其中烷基如上文中定義。烷氧基之代表性實例包括(但不限於)甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、第三丁氧基、戊氧基、己氧基及其類似基團。典型地，烷氧基具有1-6個碳，更通常地1-4個碳原子。
「經取代之烷氧基」為含有一或多個，諸如1、2或3個取代基在烷氧基之烷基部分上的烷氧基。除非另外規定，否則合適且較佳取代基係選自上文關於烷基所列之取代基，除了羥基及胺基通常不存在於直接連接至經取代之『烷基-O』基團的氧之碳上。
如本文所用，術語「鹵烷氧基」係指鹵烷基-O-，其中鹵烷基在上文中經定義。鹵烷氧基之代表性實例包括(但不限於)氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、2-氯乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙氧基及其類似基團。典型地，鹵烷氧基具有1-4個碳原子及多達3個鹵素，例如單氟、二氟及三氟取代之甲氧基及乙氧基。
同樣，如「烷基胺基羰基」、「烷氧基烷基」、「烷氧基羰基」、 「烷氧基-羰基烷基」、「烷基磺醯基」、「烷基硫氧基」、「烷基胺基」之其他基團的各烷基部分應具有如以上提及之「烷基」定義中所述的相同含義。當以此方式使用時，除非另外指示，否則烷基通常為1-4個碳之烷基且不會進一步經除所指定之組分以外的基團取代。除非另外規定，否則當該等烷基經取代時，合適取代基係選自上文關於烷基所指定之合適或較佳取代基。
如本文所用，術語「環烷基」係指3-12個碳原子之飽和或不飽和非芳族單環、雙環、三環或螺環烴基團：環烷基可為不飽和的且可稠合至另一可為飽和、不飽和或芳族之環，其限制條件在於連接至所關注分子式之環烷基的環原子不為芳環碳。除非另外提供，否則環烷基係指具有3個與9個之間的環碳原子或3個與7個之間的環碳原子之環狀烴基。除非另外規定，否則較佳地，環烷基為具有3-7個環原子之飽和單環，例如環丙基、環丁基、環戊基、環己基或環庚基。
經取代之環烷基為經1-3個(1、2、3個)或超過3個取代基(高達未經取代之基團上的氫數目)取代之環烷基。典型地，經取代之環烷基將具有1-4或1-2個取代基。除非另外規定，否則合適取代基獨立地選自由以下組成之群：鹵素、羥基、硫醇、氰基、硝基、側氧基、C1-4烷基亞胺基、C1-4烷氧亞胺基、羥基亞胺基、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、C1-4硫烷基、C2-4烯氧基、C2-4炔氧基、C1-4烷基羰基、羧基、C1-4烷氧基羰基、胺基、C1-4烷基胺基、二C1-4烷基胺基、C1-4烷基胺基羰基、二C1-4烷基胺基羰基、C1-4烷基羰基胺基、C1-4烷基羰基(C1-4烷基)胺基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷基胺磺醯基及C1-4烷基胺基磺醯基，其中各先前提及之烴基團(例如烷基、烯基、炔基、烷氧基殘基)可進一步經一或多個在每次出現時獨立地選自本文中關於『烷基』之取代基清單的基團取代。除非另外規定，否則環烷基之較佳取代基包括C1-4烷基及上文作為烷基之較佳取代基列舉的取代基。
例示性單環烴基包括(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基及環己烯基及其類似基團。
同樣，如「環烷氧基」、「環烷氧基烷基」、「環烷氧基羰基」、「環烷氧基-羰基烷基」、「環烷基磺醯基」、「鹵環烷基」之其他基團的各環烷基部分應具有如以上「環烷基」定義中所述的相同含義。當在此等術語中使用時，環烷基典型地為未經取代或經1-4個基團、通常1-2個基團取代之單環3-7碳環。除非另外規定，否則當(視情況)經取代時，取代基典型地選自C1-4烷基及上文作為烷基之合適或較佳取代基陳述之彼等基團。
如本文所用，術語「芳基」係指環部分中具有6-14個碳原子之芳族烴基。典型地，芳基為具有6-14個碳原子、通常6-10個碳原子之單環、雙環或三環芳基，例如苯基或萘基。苯基有時為較佳的。此外，如本文所用之術語「芳基」係指可為單一芳環或稠合在一起之多個芳環的芳族取代基。非限制性實例包括苯基、萘基及1,2,3,4-四氫萘基，其限制條件為該四氫萘基經由四氫萘基之芳環的碳連接至所描述之式。
經取代之芳基為經1-5個(諸如1或2或3個)獨立地選自由以下組成之群之取代基取代的芳基：羥基、硫醇、氰基、硝基、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、C1-4硫烷基、C2-4烯氧基、C2-4炔氧基、鹵素、C1-4烷基羰基、羧基、C1-4烷氧基羰基、胺基、C1-4烷基胺基、二C1-4烷基胺基、C1-4烷基胺基羰基、二C1-4烷基胺基羰基、C1-4烷基羰基胺基、C1-4烷基羰基(C1-4烷基)胺基、C1-4烷基磺醯基、胺磺醯基、C1-4烷基胺磺醯基及C1-4烷基胺基磺醯基，其中各先前提及之烴基團(例如烷基、烯基、炔基、烷氧基殘基)可進一步經一或多個在每次出現時獨立地選自上文中作為烷基之較佳取代基列舉的基團取代。除非另外規定，否則經取代之芳基之較佳取代基為C1-4烷基、鹵素、 CN、羥基、經取代或未經取代C1-4烷基、經取代或未經取代C1-4烷氧基、經取代或未經取代C3-6環烷基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子作為環成員的經取代或未經取代3-6員雜環烷基、胺基、(C1-4烷基)胺基、二(C1-4烷基)胺基、C1-4烷基硫基、C1-4烷基磺醯基、-C(=O)-C1-4烷基、COOH、COO(C1-4烷基)、-O(C=O)-C1-4烷基、-NHC(=O)C1-4烷基及-NHC(=O)OC1-4烷基；其中經取代C1-4烷氧基、經取代C3-6環烷基、3-6員雜環烷基及經取代烷基之取代基為多達3個獨立地選自鹵基、側氧基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基、胺基、羥基及CN之基團。
同樣，如「芳氧基」、「芳氧基烷基」、「芳氧基羰基」、「芳氧基-羰基烷基」之其他基團的各芳基部分應具有如以上提及之「芳基」定義中所述的相同含義。
如本文所用，術語「雜環基」或「雜環烷基」係指飽和或部分不飽和但非芳族，且可為單環或多環之雜環基團，包括稠合或橋接雙環、三環或螺環系統。除非另外規定，否則雜環或雜環基含有至少一個非碳原子作為環成員，典型地為N、O或S。除非另外規定，否則雜環基具有3至10個且較佳地4至7個環原子；其中一或多個，較佳地一至四個，尤其一或兩個環原子為獨立地選自O、S及N之雜原子(剩餘環原子因此為碳)。不飽和雜環基可具有一或兩個雙鍵，但非芳族。較佳地，除非描述為不飽和，否則本發明化合物中之雜環基為飽和單環。即使有時描述為例如C5-6原子基團，雜環含有至少一個雜原子作為環原子且具有所述環原子總數，例如在此實例中為5或6；因此，C5-6雜環基係指5-6員雜環，其中至少一個環成員為雜原子。較佳地，雜環基具有一或兩個雜原子作為環原子，且較佳地雜原子不直接連接至彼此。鍵結環(亦即，連接至所關注之式之環)較佳地具有4至7個環原子。雜環基團可稠合至芳環，其限制條件為連接至所關注之式之雜 環基團原子不為芳族的。雜環基團可經由雜環基團之雜原子(典型地為氮)或碳原子連接至所關注之式。雜環基可包含稠合或橋接環以及螺環系統(例如，2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷)，且多環雜環基團之僅一個環需要含有雜原子作為環原子。雜環之實例包括四氫呋喃(THF)、二氫呋喃、1,4-二噁烷、嗎啉、1,4-二噻烷、哌嗪、哌啶、1,3-二氧戊環、咪唑啶、咪唑啉、吡咯啉、吡咯啶、四氫哌喃、二氫哌喃、氧硫雜環戊烷、二硫雜環戊烷、1,3-二噁烷、1,3-二噻烷、氧硫雜環己烷、硫嗎啉及其類似物。
除非另外規定，否則經取代之雜環基為獨立地經1-5個(諸如1或2或3個)選自上文關於環烷基描述為合適或較佳之取代基的取代基取代之雜環基團。
同樣，如「雜環基氧基」、「雜環基氧基烷基」、「雜環基氧基羰基」之其他基團的各雜環基部分應具有如以上提及之「雜環基」定義中所述的相同含義。
如本文所用之「環醚」係指含有O作為環原子之雜環，典型地為4-8員環，例如氧雜環丁烷、四氫呋喃或四氫哌喃。5-8員環醚可含有兩個非相鄰氧原子作為環成員，例如二噁烷及二氧戊環。此等環可關於雜環經取代；若未另外規定，則較佳取代基包括C1-4烷基(例如甲基、乙基)、CN、OH、NH2、NHR、NR2、COOH、COOR、CONR2及OR，其中各R獨立地為C1-4烷基。典型地，出於穩定性原因，OH、NH2、NHR及NR2取代基未在直接鍵結於環中氧原子之環碳處連接。
如本文所用，術語「雜芳基」係指5-14員單環或雙環或三環芳環系統，其具有1至8個雜原子作為環成員；該等雜原子選自N、O及S。典型地，雜芳基為5-10員環系統，例如5-6員單環或8-10員雙環基團。典型雜芳基包括2-或3-噻吩基、2-或3-呋喃基、2-或3-吡咯基、2-、4-或5-咪唑基、1-、3-、4-或5-吡唑基、2-、4-或5-噻唑基、3-、4-或5- 異噻唑基、2-、4-或5-噁唑基、3-、4-或5-異噁唑基、3-或5-(1,2,4-三唑基)、4-或5-(1,2,3-三唑基)、1-或2-或3-四唑基、2-、3-或4-吡啶基、3-或4-噠嗪基、2-吡嗪基及2-、4-或5-嘧啶基。
術語「雜芳基」亦係指其中雜芳環稠合至一或多個芳基、環烷基或雜環基環之基團，其中連接至所關注之式之基團或點在雜芳環上。非限制性實例包括1-吲哚嗪基、2-吲哚嗪基、3-吲哚嗪基、5-吲哚嗪基、6-吲哚嗪基、7-吲哚嗪基或8-吲哚嗪基、1-異吲哚基、3-異吲哚基、4-異吲哚基、5-異吲哚基、6-異吲哚基或7-異吲哚基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、5-吲哚基、6-吲哚基或7-吲哚基及2-吲唑基、3-吲唑基、4-吲唑基、5-吲唑基、6-吲唑基或7-吲唑基。
除非另外規定，否則經取代之雜芳基為在雜芳基環上具有一或多個取代基來替換將位於未經取代之雜芳基上的氫原子，典型地為1、2或3個選自上文關於芳基描述於合適或較佳之取代基的取代基之雜芳基。
同樣，如「雜芳氧基」、「雜芳氧基烷基」、「雜芳氧基羰基」之其他基團的各雜芳基部分應具有如以上提及之「雜芳基」定義中所述的相同含義。
本發明之各種實施例描述於本文中。應認識到，各實施例中所指定之特徵可與其他所指定之特徵組合以提供本發明之其他實施例。以下列舉之實施例代表本發明。
實施例1. 一種式(I)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R1為視情況經取代之基團，選自C3-8環烷基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子作為環成員的5-8員雜環基、苯基、-SO2-苯基、-C(O)-苯基、-C(R8)2-苯基及5-6員雜芳基環，其中該雜環基及雜芳基含有1-2個選自N、O及S之雜原子作為環成員，且其中R1之視情況選用之取代基為1-3個獨立地選自D、鹵基、羥基、胺基、-N(R8)2、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-S(C1-4烷基)、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子的3-6員雜環基、側氧基(除在芳環上)、CN、COOR8、CON(R8)2、-NR8-C(O)R8、-NR8-C(O)OR8-SO2R8、-NR8SO2R8及SO2N(R8)2之基團，其中各R8獨立地為H或C1-4烷基；L為一鍵，或L可為C1-4伸烷基、C2-4伸烯基、C1-4伸炔基、C3-6環烷基或含有1-2個選自N、O及S之雜原子作為環成員的4-7員雜環基，其中L視情況經1-3個獨立地選自R11、D、OH、NH2、-NHR11、-NHC(=O)R11、-NHC(=O)-OR11、-NHC(=O)-NH2、-NHC(=O)-NHR11、-N(R11)2、CN、鹵基、N3、CON(R7)2及COOR7之基團取代；其中各R11獨立地為C1-4烷基，其可經多達3個獨立地選自D、鹵基、OH、NH2、-NHMe、-NMe2、-OP(O)(OH)2及O-C1-4烷基之基團取代；X及Y獨立地選自H、D、鹵基、CN、胺基、羥基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基及C1-4鹵烷氧基； R2為H、C1-4烷基或芳基-C1-2烷基-，其中芳基及C1-4烷基視情況經鹵基、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C3-6環烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基或C1-4烷基磺醯基取代；或R2可與X環化以形成與X所連接之苯基環稠合的含有1-2個選自N、O及S之雜原子之5-7員雜環，或R2可與L環化以形成含有1-2個選自N、O及S之雜原子之5-7員雜環，其中由R2與X環化或由R2與L環化所形成之視情況選用之雜環可視情況經一或兩個獨立地選自CN、鹵基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、側氧基、CN、COOR7、CON(R7)2及-SO2R7之基團取代；各R7獨立地為H或C1-4烷基；Z為N或CR4；R4為H、D、鹵基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基或C1-4烷氧基；R5係選自-C(O)-R5a及R5a；其中R5a為視情況經取代之C3-8環烷基、C3-8環烯基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子之飽和或不飽和3-8員雜環、苯基或含有1-3個選自N、O及S之雜原子之5-6員雜芳基環，其中R5之視情況選用之取代基為1-4個獨立地選自D、鹵基、羥基、胺基、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子的3-6員雜環基、側氧基(除在芳環上)、CN、-COOR9、-C(O)R9、CON(R9)2、-NR9C(O)R9、-NR9CO2R9、-SO2R9、-NR9SO2R9及-SO2N(R9)2之基團，其中各R9獨立地為H或視情況經1-3個獨立地選自D、鹵基、OH、NH2、NHMe及NMe2之基團取代的C1-4烷基；且在R5之相同或相鄰碳原子上的兩個取代基可視情況合起來形成可為飽和或芳族且含有1-2個選自N、O及S之雜原子且可視情況經1-2個獨立地選自D、Me、鹵 基、OH、側氧基、O(C1-4烷基)、NH2、C1-4烷基胺基、二(C1-4烷基)胺基之基團取代的5-6員環；且R6為H、D、鹵基、C1-4烷基或C1-4鹵烷基。
實施例2. 根據實施例1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Z為N。
實施例3. 根據實施例1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Z為CH。
實施例4. 根據實施例1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2為H或Me。
實施例5. 根據實施例1至4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R6為H。
實施例6. 根據實施例1至5中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R5係選自-C(O)-R5a及R5a；其中R5a係選自C3-8環烷基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子之5-8員雜環基、苯基及5-6員雜芳基，且視情況經1-3個獨立地選自D、鹵基、CN、羥基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4鹵烷氧基、-SO2R'、-N(R')2、-NR'-C(O)-R'及-SO2NR'2之基團取代，其中各R'獨立地為H或C1-4烷基。
實施例7. 根據實施例1至6中任一項之化合物'其中R5係選自-C(O)-R5a及R5a；其中R5a係選自苯基、吡啶、吡啶酮、吡嗪、噠嗪、吡唑、三唑、四唑、噻唑、噁唑、咪唑、異噻唑、異噁唑、呋喃及噻吩，其各視情況經一或兩個獨立地選自鹵基、D、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4鹵烷氧基、CN、COOR9、CON(R9)2及-SO2R9之基團取代，其中各R9獨立地為H或C1-4烷基。
實施例8. 實施例3之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R5係選自-C(O)-R5a及R5a；其中R5a為含有至少一個N作為環成員之C5-6雜芳 基，其視情況經1-2個獨立地選自鹵基、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4烷氧基及C1-4鹵烷氧基之基團取代。
實施例9. 實施例8之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R5係選自-C(O)-R5a及R5a；其中R5a為吡唑或三唑且視情況經1-2個獨立地選自鹵基、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4烷氧基及C1-4鹵烷氧基之基團取代。
實施例10. 根據實施例1至6中任一項之化合物，其中R5係選自-C(O)-R5a及R5a；其中R5a係選自環丁基、環戊基、環己基、環己烯基、四氫哌喃、二氫哌喃、四氫呋喃、氧雜環丁烷、氮雜環丁烷、吡咯啶、哌啶、哌嗪、嗎啉、四氫硫哌喃(硫雜環己烷)及四氫硫呋喃(硫雜環戊烷)，其各視情況經1-3個獨立地選自鹵基、D、CN、N(R9)2、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4鹵烷氧基、側氧基、CN、COOR9、CON(R9)2、-NHC(O)R9、-NHCOOR9、-NHSO2R9及-SO2R9之基團取代，其中各R9獨立地為H或C1-4烷基。
實施例11. 實施例1至10中任一項之化合物，其中R1為苯基且視情況經多達3個獨立地選自鹵基、D、CN、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、SR'、-SO2R'、-N(R')2、-NR'-C(O)-R'及-SO2NR'2之基團取代，其中各R'獨立地為H、C1-4烷基或C1-4鹵烷基。
實施例12. 實施例1至10中任一項之化合物，其中R1為噻吩、噻唑、吡啶、嘧啶、吡嗪或噠嗪，且視情況經多達3個獨立地選自鹵基、CN、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、-SO2R'、-N(R')2、-NR'-C(O)-R'及-SO2NR'2之基團取代，其中各R'獨立地為H或C1-4烷基。
實施例13. 根據實施例1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係選自由以下組成之群：環丙烷-1,1-二基；環丙烷-1,2二基；及-CHR"-，其中R"為H、D或視情況經多達3個獨立地選自 D、羥基、鹵基、胺基、C1-2烷基胺基、二(C1-2烷基)胺基及C1-2烷氧基之基團取代的C1-2烷基。
實施例14. 實施例13之化合物，其中L為：
其中R"為甲基或乙基，且視情況經氟、胺基、羥基、甲基胺基、乙基胺基、二甲基胺基、-OP(O)(OH)2、甲氧基或乙氧基取代。
實施例15. 根據實施例1至14中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2及L鍵聯在一起以形成選自嗎啉、哌啶、硫嗎啉、哌嗪及吡咯啶之雜環基團，該雜環基團連接至R1且亦視情況經一或兩個獨立地選自C1-4烷基、C1-4烷氧基、側氧基、CN、COOR7、CON(R7)2及-SO2R7之基團取代，其中各R7獨立地為H或C1-4烷基。
實施例16. 實施例1至15中任一項之化合物，其中Y為H、甲基或鹵基。
實施例17. 實施例1至16中任一項之化合物，其中X為H，或R2與X環化以形成與X所連接之苯基環稠合的5-7員雜環，其中該5-7員環如實施例1中所述視情況經取代。
實施例18. 實施例1之化合物，其具有式IA：
其中R5為吡唑、咪唑、異噁唑、異噻唑、噁唑、三唑或噻唑，其可經多達2個獨立地選自D、F、Cl、CN、Me、OMe、Et、iPr、OEt及 CF3之基團取代；Y為H、F、Cl或Me；R10為H或-CH2-R*，其中R*為H、-OH、F、-NH2、-NHMe、-NMe2、-OP(O)(OH)2或-OMe；且R1為苯基或噻吩基，視情況經1-2個獨立地選自鹵基、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、CN、COOR8、CON(R8)2、-SMe及-SO2R8之基團取代，其中各R8獨立地為H或C1-4烷基；或其醫藥學上可接受之鹽。
實施例19. 實施例1之化合物，其具有式IB：
其中R5為4-7員環醚或C5-6環烷基，且R5可經多達4個獨立地選自D、F、Cl、CN、胺基、NHMe、NMe2、-CH2OH、-NHC(O)Me、-NHCOOMe、-NHSO2Me、Me、OMe、OH、側氧基、Et、iPr、OEt、CN及CF3之基團取代；Y為H、F、Cl或Me；R10為H或-CH2-R*，其中R*為H、-OH、F、-NH2、-NHMe、-NMe2、-OP(O)(OH)2或-OMe；且R1為苯基，視情況經1-2個獨立地選自鹵基、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、CN、COOR8、CON(R8)2及-SO2R8之基團取代，其中各R8獨立地為H或C1-4烷基；或其醫藥學上可接受之鹽。
實施例20. 實施例1至6或19中任一項之化合物，其中R5為經1-3個獨立地選自D、F、Cl、CN、胺基、NHMe、NMe2、Me、NHSO2Me、NHCOMe、OMe、OH、Et、CN、-CH2OH及CF3之基團取代的環己基。
在實施例20之替代實施例中，實施例1至6或19中任一項之化合物，其中R5為四氫哌喃基，尤其4-四氫哌喃基。
在另一替代實施例中，實施例1至6或19中任一項之化合物，其中R5係選自：
實施例21. 實施例1至20中任一項之化合物，其中R1為經0、1或2個獨立地選自F、Cl、Br、I、SMe、SO2Me及CH3之基團取代的苯基。
實施例22. 實施例1之化合物，其係選自由實例1至452之化合物及其醫藥學上可接受之鹽組成之群。
實施例23. 一種醫藥組合物，其包含與至少一種醫藥學上可接受之賦形劑摻合的根據實施例1至22中任一項之化合物。
實施例24. 實施例23之醫藥組合物，其進一步包含治療輔劑。
實施例25. 實施例24之醫藥組合物，其中該治療輔劑係選自抗癌化合物、止痛劑及消炎化合物。
實施例26. 一種治療癌症之方法，其包含向需要該治療之個體投與治療有效量之根據實施例1至20中任一項之化合物或實施例23至25中任一項之醫藥組合物。
實施例27. 實施例26之方法，其中該癌症係選自腺瘤、膀胱 癌、腦癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、結腸癌、表皮癌、濾胞癌、泌尿生殖癌、神經膠母細胞瘤、頭頸部癌、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、肝癌、頭頸部癌、腎癌、肺癌(諸如小細胞或非小細胞肺癌)、白血病(諸如AML或CML)、多發性骨髓瘤、淋巴病症、皮膚癌(包括黑色素瘤)、神經母細胞瘤、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、直腸癌、肉瘤、睾丸癌及甲狀腺癌。
實施例28. 根據實施例1至22中任一項之化合物，其用作藥劑。
實施例29. 根據實施例1至22中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造用以治療癌症之藥劑；或根據實施例1至22中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於醫學中，尤其用於治療癌症，諸如實施例27中所指定之彼等癌症。
實施例30. 一種合成本發明化合物之方法。例如，一種用於合成4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺之方法，其包含：(a).使5-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)吡嗪-2-胺與2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲酸第三丁酯在Pd(dppf)Cl2、DCM、Na2CO3及DME存在下反應以形成4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯；(b).使4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯在HCl、ETOH及NaOH存在下反應以形成4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸；(c).使4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸與(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺鹽酸鹽在EDCI及HOAT存在下反應以生成4-(3-胺基-6- ((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺；及(d).使4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺在LiOH、DMF及4-巰基苯甲酸存在下反應以生成4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺。
實施例31. 本發明提供4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺之高結晶度HCl鹽，其中該形式具有至少一種以下特徵：a)在2-θ度數(其中角度變化為+/- 0.3、0.2或0.1°)處具有兩個或兩個以上峰(較佳地三個峰，較佳所有峰)之X射線粉末繞射圖案，如實例184中所示；b)具有實質上與圖3中所描繪相同之峰的X射線粉末繞射圖案；c)實質上與圖4中所示之曲線一致的熱解重量分析曲線。
在式I或IA或IB之一些實施例中，Y為H或鹵基，尤其為F或Cl。鹵基，尤其F為較佳的。Y可定位於此等式中所描繪之羰基的『鄰位』。
在上文所述化合物之一些實施例中，X為H。在其他實施例中，X為式I中所示羰基之鄰位的基團，諸如F、Me或Cl，且在一些此類實施例中，X為與如本文所述之R2合起來形成與式I中所示之苯基環稠合的環之基團。此稠合環典型地為5、6或7原子環，且除與R2連接之N之外亦可含有額外N、O或S作為環成員。該稠合環可經取代或未經取代；當經取代時，其可具有一或兩個如關於式(I)所述之取代基，其中除非另外規定，否則鹵基、C1-4烷基、側氧基及羥基為較佳取代基。
在式I化合物之一些實施例及上文所述之其他實施例中，R2為H或Me，且較佳為H。在替代實施例中，R2及X合起來形成如上文關於式I所述之5-7員雜環，在該情形下X在式I中所描繪之羰基的鄰位連接於苯基環。
在某些前述實施例中，L為C1-4伸烷基，其可為直鏈或分支鏈的，且可未經取代或經1-3個如關於式I所述之基團取代。在一些實施例中，L為式-CH(RL)-之基團，其中RL為C1-3烷基或C1-2烷基且視情況經1-3個如關於式I所述之基團取代。較佳地，L為C1-2烷基且經1或2個獨立地選自羥基、鹵基、胺基、OMe、-NHMe、-OP(O)(OH)2及-NMe2之基團取代。在一些實施例中，尤其在R1為芳基或雜芳基之情形下，L為-CH2-或式-CH(CH2R*)-之經取代伸烷基，其中R*為H、Me、OH、F、NH2、NHMe、-OP(O)(OH)2或OMe。在其他實施例中，L為-CH2CH2-。當L經取代時，其通常經甲基、羥基甲基、胺基甲基、甲基胺基、甲基胺基甲基、氟甲基或甲氧基甲基取代。
在其中L為經取代之伸烷基(例如，如本文所述之式-CHR"-之基團)的實施例中，L含有對掌性中心；在某些此等實施例中，L具有此立體化學：
其中[N]及[R1]分別指示其中-CH(R")-連接於NR2及R1之位置。較佳地，R"為-CH3、-CH2OH、-CH2NH2、-CH2NHMe、-CH2NMe2、-CH2F、-CH2OMe、-CH(OH)Me、-CH2OP(O)(OH)2或-CH(OH)CH2OH。在一些實施例中，式(I)化合物包含超過其對映異構體過量展示之具有對掌性組態之L，因此該化合物為光學活性的。較佳地，該等本發明化合物實質上不含相對對映異構體，亦即該化合物之至少95%具有上 文所示之對掌性。
在前述化合物之一些實施例中，R1為芳基或雜芳基，如下文所述視情況經取代，且通常R1為選自苯基、噻吩基、噻唑基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基及嘧啶基之視情況經取代之基團。關於R1，經取代之苯基為較佳的。
R1通常經至少一個選自關於上述實施例所述之基團的基團取代。在一些實施例中，R1為苯基、3-噻吩基、2-噻唑基、2-吡啶基或3-吡啶基，其未經取代或經1-2個獨立地選自鹵基(F、Cl、Br或I)、甲基、甲氧基、-SMe、甲基磺醯基、氰基及環丙基之基團取代。在一些實施例中，R1為苯基且在[L]之至少一個『鄰』位(連接於L之R1的位置)經F、Cl、Br、I、SMe、CH2F、CHF2或甲基磺醯基取代。
在一些實施例中，式(I)中之結構的-C(=O)-NR2-L-R1部分具有下式，其中W1及W2係獨立地經選擇：
在此等實施例中，W1及W2中之至少一者典型地不為H，且較佳地W1及W2中之至少一者為鹵基，尤其Cl、Br或I。
在本發明化合物之一些實施例中，R6為H或Me；通常R6為H。
在任何上述化合物之一些實施例中，Z為N。在任何上述化合物之替代實施例中，Z為CR4，較佳為CH。
在一些實施例中，R5為5-6員雜芳基環或苯基，且可如上文關於式I所述經取代。在此類實施例中，R5可為苯基、吡啶基、噠嗪基或嘧啶基，視情況如上文所述經取代。在其他此類實施例中，R5為含氮 5員雜芳基環，諸如吡唑、咪唑、異噁唑、噁唑、噻唑、三唑、四唑、異噻唑、吡咯及其類似物，視情況如上文所述經取代；在此等實施例中，Z較佳為CH。吡唑、三唑及咪唑有時對於R5為較佳選項。
在其中R5為雜芳基之實施例中，R5可未經取代或其可經1-3個獨立地選自Me、Et、異丙基、丙基、丁基、第三丁基、第二丁基、異丁基、CF3、CN、Cl及F之基團取代。
此等R5基團之一些較佳實施例包括：
其中各R5A獨立地選自H、Me、Et、丙基及異丙基。較佳地，R5上之R5a基團中僅一或兩者不為H，且在大多數實施例中，在此等基團中之N上的R5A為甲基、乙基或異丙基。特定合適基團包括1-甲基-4-吡唑、1-乙基-4-吡唑、1-異丙基-4-吡唑及3-吡唑及其互變異構體；1-甲基咪唑-2-基、1-甲基咪唑-4-基、1-甲基咪唑-5-基；及此等基團之甲基經取代型式。
在其他實施例中，R5為非芳族環烷基或雜環基團，諸如環己基、環戊基、四氫哌喃基(例如4-四氫哌喃基)、3-氧雜環丁烷基、3-哌啶基或4-哌啶基、4-哌啶-2-酮基或3-哌啶-2-酮基、3-硫雜環戊烷或4-硫雜環戊烷、3-硫雜環己烷、3-四氫呋喃及其類似基團。在此等實施例中，環硫可經氧化成亞碸或碸氧化態，且此等環各可經1-3個基團、 典型地1-2個基團取代，該等基團選自側氧基、Me、Et、異丙基、CF3、CN、Cl及F。此等實施例之一些較佳實例包括：
1,4-二取代之環己基實施例可在位置1與4處連接之基團之間具有順式或反式相對立體化學；在一些實施例中，在此等基團之間的反式相對取向為較佳的。R5之合適環烷基及雜環基實施例包括：
R5之較佳實施例包括此等：
在R5為雜環基或環烷基且經取代時，其通常將含有至少一個對掌性中心。在此等對掌性化合物中，R及S異構體均可單獨使用，以及R 及S之混合物，包括外消旋混合物。本發明化合物亦可包括其中圍繞雜芳基-芳基(雜芳基)鍵之旋轉由於取代基之存在而受到阻礙之滯轉異構體；在此等情形下，各滯轉異構體均包括在內。在一種異構體(對映異構體、非對映異構體、滯轉異構體或幾何異構體)作為ERK1或ERK2抑制劑之固有活性高於其相對異構體時，更具活性之異構體典型地為較佳的。
如本文所用，術語「光學異構體」或「立體異構體」係指可針對本發明之既定化合物存在之各種立體異構體組態中之任一者，且包括幾何異構體。應理解取代基可連接於碳原子之對掌性中心處。術語「對掌性」係指具有不重疊於其鏡像搭配物上之性質之分子，而術語「非對掌性」係指重疊於其鏡像搭配物上之分子。本發明包括化合物之對映異構體、非對映異構體或外消旋體。「對映異構體」為一對彼此呈不重疊鏡像之立體異構體。一對對映異構體之1：1混合物為「外消旋」混合物。該術語用於在適當時指代外消旋混合物。「非對映異構體」為具有至少兩個不對稱原子，但其彼此不為鏡像之立體異構體。根據Cahn-lngold-Prelog『R-S』系統指定絕對立體化學。當化合物為純對映異構體時，各對掌性碳處之立體化學可由R或S指定。絕對組態未知之解析化合物可視其在鈉D線之波長下使平面偏振光旋轉之方向(右旋或左旋)指定為(+)或(-)。本文所述之某些化合物含有一或多個不對稱中心或軸，且可由此產生可在絕對立體化學方面定義為(R)-或(S)-的對映異構體、非對映異構體及其他立體異構體形式。
視起始材料及合成程序之選擇而定，化合物可以一種可能異構體或其混合物形式存在，例如純光學異構體，或異構體混合物，諸如外消旋體及非對映異構體混合物，視不對稱碳原子數目而定。本發明意欲包括所有該等可能異構體，包括外消旋混合物、非對映異構體混合物及光學純形式。可使用對掌性合成組元或對掌性試劑製備或使用 習知技術解析光學活性(R)-及(S)-異構體。若化合物含有雙鍵，則除非有規定，否則取代基可為E或Z組態。若化合物含有二取代之環烷基，則除非另外規定，否則環烷基取代基可具有順式或反式組態。亦意欲包括所有互變異構體形式。
在許多狀況下，本發明化合物由於存在胺基及/或羧基或其類似基團而能夠形成酸式鹽及/或鹼式鹽。如本文所用，術語「鹽(salt)」或「鹽(salts)」係指本發明化合物之酸加成鹽或鹼加成鹽。「鹽」尤其包括「醫藥學上可接受之鹽」。術語「醫藥學上可接受之鹽」係指保留本發明化合物之生物有效性及特性且典型地在生物學上或其他方面合乎需要之鹽。
可用無機酸及有機酸形成醫藥學上可接受之酸加成鹽，例如乙酸鹽、己二酸鹽、鋁、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、己酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、氯普魯卡因、氯茶鹼鹽、檸檬酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、乙二胺四乙酸鈣、乙烷二磺酸鹽、乙基磺酸鹽、乙二胺、反丁烯二酸鹽、半乳糖二酸鹽(黏酸鹽)、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、麩胺酸鹽、羥基乙酸鹽、己基間苯二酚鹽、馬尿酸鹽(hippurate)、氫碘酸鹽/碘化物、羥基萘甲酸鹽(昔萘酸鹽)、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂基硫酸鹽、鋰、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘甲酸鹽、萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、十八烷酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、普魯卡因、丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、硬脂酸鹽、鹼式乙酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、磺基水楊酸鹽、丹寧酸鹽、酒石酸鹽、酒石酸氫鹽、甲苯磺酸鹽、三苯基乙酸鹽及三氟乙酸鹽。額外合適的鹽之清單可見於例如REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES，第20版，Mack Publishing Company,Easton,Pa.,(1985)；及HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS：PROPERTIES,SELECTION,AND USE,Stahl及Wermuth(Wiley-VCH,Weinheim，德國，2002)中。
在一實施例中，本發明提供呈乙酸鹽、抗壞血酸鹽、己二酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、癸酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、氯茶鹼鹽、檸檬酸鹽、乙烷二磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、麩胺酸鹽、戊二酸鹽、羥基乙酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、黏酸鹽、萘甲酸鹽、萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、十八烷酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、癸二酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、磺基水楊酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽、三氟甲磺酸鹽、三氟乙酸鹽或昔萘酸鹽形式之4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺。
在另一實施例中，本發明提供呈鹽酸鹽形式之4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺。
可產生鹽之無機酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其類似物。
可產生鹽之有機酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、順丁烯二酸、丙二酸、丁二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、杏仁酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、甲苯磺酸、三氟乙酸、磺基水楊酸及 其類似物。
醫藥學上可接受之鹼加成鹽可用無機或有機鹼形成且可具有無機或有機相對離子。
用於該等鹼式鹽之無機相對離子包括例如銨鹽及來自週期表之第I欄至第XII欄之金屬。在某些實施例中，相對離子係選自鈉、鉀、銨、具有1至4個C1-C4烷基之烷基銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅及銅；特定言之，合適之鹽包括銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽及鎂鹽。
可產生鹽之有機鹼包括例如一級、二級及三級胺；經取代之胺，包括天然產生之經取代之胺；環胺；鹼離子交換樹脂及其類似物。合適之有機胺包括異丙胺、苄星(benzathine)、膽酸鹽(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、離胺酸、葡甲胺(meglumine)、哌嗪及緩血酸胺(tromethamine)。
可藉由習知化學方法自鹼性或酸性部分合成本發明之醫藥學上可接受之鹽。一般而言，該等鹽可藉由使此等化合物之游離酸形式與化學計量之量的適當鹼(諸如Na、Ca、Mg或K之氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽或其類似物)反應或藉由使此等化合物之游離鹼形式與化學計量之量的適當酸反應來製備。該等反應典型地在水中或在有機溶劑中或在二者之混合物中進行。一般而言，在可實行時，需要使用非水性介質，如乙醚、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯、氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙醇、異丙醇或乙腈。
本文中給出之任何式均意欲表示該等化合物之未標記形式(亦即，其中所有原子均以天然同位素豐度存在且無同位素富含之化合物)以及同位素富含或標記形式。同位素富含或標記之化合物具有本文中給出之式所描繪的結構，除了化合物之至少一個原子由相同元素之原子置換，但該相同元素之原子的原子質量或質量數不同於天然出現之原子質量或原子質量分佈。可併入經富含或經標記之本發明化合 物中之同位素之實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯之同位素，分別諸如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、125I。本發明包括如本文所定義之各種經同位素標記之化合物，例如其中存在放射性同位素，諸如3H及14C之化合物，或其中存在非放射性同位素，諸如2H及13C之化合物，該等同位素之含量顯著高於此等同位素之天然豐度。該等經同位素標記之化合物適用於代謝研究(使用14C)；反應動力學研究(使用例如2H或3H)；偵測或成像技術，諸如正電子發射斷層攝影術(PET)或單光子發射電腦斷層攝影術(SPECT)，包括藥物或基質組織分佈分析；或患者之放射性治療。特定言之，18F或經標記化合物可特別合乎PET或SPECT研究之需要。經同位素標記之式(I)化合物通常可藉由熟習此項技術者已知之習知技術，或藉由與伴隨實例及製備中所述類似之方法，使用適當經同位素標記試劑替代先前採用之未標記試劑來製備。
此外，以重同位素，尤其氘(亦即2H或D)進行之取代可得到由較大代謝穩定性產生之某些治療優勢，例如活體內半衰期增加或劑量需求減小或治療指數改良。應瞭解，在此背景中之氘若實質上高於天然同位素豐度之水準經併入，則被視為式(I)化合物之取代基。本發明包括該等化合物之同位素富含型式，例如氘化型式以及非氘化型式。氘化型式在單一位點處或在多個位點處經氘化。
同位素富含化合物中此類同位素(尤其氘)之併入程度可由同位素富含因子確定。如本文所用，術語「同位素富含因子」意謂樣品中指定同位素之同位素豐度與非富含樣品中該同位素之天然豐度之間的比率。若本發明化合物中之取代基表示為氘，則該化合物中各指定氘原子的同位素富含因子為至少3500(各指定氘原子上52.5%氘併入)、至少4000(60%氘併入)、至少4500(67.5%氘併入)、至少5000(75%氘併入)、至少5500(82.5%氘併入)、至少6000(90%氘併入)、至少 6333.3(95%氘併入)、至少6466.7(97%氘併入)、至少6600(99%氘併入)或至少6633.3(99.5%氘併入)。
本發明之醫藥學上可接受之溶劑合物包括其中結晶溶劑可經同位素取代(例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO)之溶劑合物，以及具有非增濃溶劑之溶劑合物。
本發明化合物，例如含有能夠充當氫鍵之供體及/或受體之基團的式(I)化合物，可能夠用合適的共晶形成劑來形成共晶。此等共晶可藉由已知之共晶形成程序由式(I)化合物來製備。該等程序包括在溶液中將式(I)化合物與共晶形成劑一起在結晶條件下研磨、加熱、共昇華、共熔融或接觸，及分離藉此形成之共晶。合適之共晶形成劑包括WO 2004/078163中所述之共晶形成劑。因此，本發明進一步提供包含式(I)化合物之共晶。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之載劑」包括如為熟習此項技術者所知之任何及所有溶劑、分散介質、塗料、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如抗細菌劑、抗真菌劑)、等張劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物穩定劑、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、染料及其類似物及其組合(參見例如REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES，第18版Mack Printing Company,1990，第1289頁至第1329頁)。除了在任何習知載劑與活性成分不相容之情況下之外，涵蓋其在治療或醫藥組合物中之用途。
術語本發明化合物之「治療有效量」係指將引起個體之生物或醫學反應，例如酶或蛋白質活性降低或抑制，或改善症狀、緩解病狀、減緩或延遲疾病進展或預防疾病等之本發明化合物的量。在一非限制性實施例中，術語「治療有效量」係指當投與個體時有效地(1)至少部分地緩慢、抑制、預防及/或改善(i)由諸如ERK1/2之激酶介導或(ii)與諸如ERK1/2之激酶的活性有關或(iii)特徵在於ERK1/2活性(正 常或異常)之病狀或病症或疾病；或(2)降低或抑制ERK1/2之活性；或(3)降低或抑制ERK1/2之表現之本發明化合物的量。
在另一非限制性實施例中，術語「治療有效量」係指當投與至細胞或組織或非細胞生物材料或培養基時有效地至少部分降低或抑制ERK1/2活性或至少部分降低或抑制ERK1/2之表現之本發明化合物的量。
如本文所用，術語「個體」係指動物。動物典型地為哺乳動物。個體亦係指例如靈長類動物(例如人類，男性或女性)、母牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠、魚類、鳥類及其類似物。在某些實施例中，個體為靈長類動物。在特定實施例中，個體為人類。
如本文所用，術語「抑制(inhibit)」、「抑制(inhibition)」或「抑制(inhibiting)」係指減輕或遏止既定病狀、活性、效應、症狀或病症或疾病，或顯著降低生物活性或過程之基線活性。
如本文所用，在一實施例中，術語「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」任何疾病或病症係指改善該疾病或病症(亦即減緩或阻止或減慢疾病之發展或其至少一種臨床症狀)。在另一實施例中，「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」係指緩解或改善至少一種身體參數，包括患者無法辨識之參數。在又一實施例中，「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」係指在身體上(例如穩定化可辨識之症狀)、生理上(例如穩定化身體參數)或兩方面調節疾病或病症。在又一實施例中，「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」係指延遲疾病或病症之發展或進展。
如本文所用，若個體在生物學、醫學或生活品質上將受益於治療，則該個體「需要」該治療。
除非本文中另外指示或與上下文明顯抵觸，否則如本文所用，本發明之上下文中(尤其在申請專利範圍之上下文中)所用之術語「一(a)」、「一(an)」、「該(the)」及類似術語應解釋為涵蓋單數及複數。
除非本文另外指出或上下文另外明顯矛盾，否則本文所述之所有方法可以任何合適順序進行。使用本文所提供之任何及所有實例或例示性語言(例如「諸如」)僅意欲較佳地說明本發明，且不對另外所主張之本發明之範疇造成限制。
本發明化合物之任何不對稱原子(例如碳或其類似原子)可以外消旋體或對映異構體增濃形式，例如(R)-、(S)-或(R,S)-組態存在。在某些實施例中，各不對稱原子具有(R)-或(S)-組態之至少50%對映異構體過量、至少60%對映異構體過量、至少70%對映異構體過量、至少80%對映異構體過量、至少90%對映異構體過量、至少95%對映異構體過量或至少99%對映異構體過量；亦即，對於光學活性化合物，通常較佳使用一種對映異構體來實質性排除另一對映異構體。除非另外指示，否則具有碳-碳雙鍵之原子處的取代基可能以順式(Z)-或反式(E)-形式存在且兩種形式均包括於本發明中。
因此，如本文所用，本發明化合物可呈可能之異構體、旋轉異構體、滯轉異構體或互變異構體或其混合物中一者之形式，例如呈實質上純之幾何(順式或反式)異構體、非對映異構體、光學異構體(對映體)、外消旋體或其混合物形式。如本文所用之『實質上純』或『實質上不含其他異構體』意謂以重量計，產物含有相對於較佳異構體之量小於5%且較佳小於2%的其他異構體。
基於該等成分之物理化學差異，例如藉由層析法及/或分步結晶，可將任何所得之異構體之混合物分離為純的或實質上純的幾何異構體或光學異構體、非對映異構體、外消旋體。
任何所得之最終產物或中間物之外消旋體均可藉由已知方法解 析為光學對映體，例如藉由分離用光學活性酸或鹼獲得之其非對映異構體鹽及釋放光學活性酸性或鹼性化合物。特定言之，因此，可採用鹼性部分將本發明化合物解析成其光學對映體，例如藉由分步結晶用光學活性酸形成之鹽，該光學活性酸例如為酒石酸、二苯甲醯基酒石酸、二乙醯基酒石酸、二-O,O'-對甲苯甲醯基酒石酸、杏仁酸、蘋果酸或樟腦-10-磺酸。亦可藉由對掌性層析法，例如使用對掌性吸附劑之高壓液相層析法(HPLC)解析外消旋產物。
此外，本發明化合物(包括其鹽)亦可以其水合物形式獲得或包括其結晶所用之其他溶劑。本發明化合物可固有地或有意地與醫藥學上可接受之溶劑(包括水)形成溶劑合物；因此，本發明意欲涵蓋溶合形式及非溶合形式。術語「溶劑合物」係指本發明化合物(包括其醫藥學上可接受之鹽)與一或多個溶劑分子之分子複合物。該等溶劑分子為醫藥技術中常用之溶劑分子，已知其對於接受者無害，例如為水、乙醇及其類似物。術語「水合物」係指溶劑分子為水之複合物。
本發明化合物(包括其鹽、水合物及溶劑合物)可固有地或有意地形成多晶型物。
式(I)化合物可根據本文所提供之流程及實例製備。在一些情形中之流程說明其中L為亞甲基或經取代之伸烷基的化合物之製備，但用於製備其中L為一鍵或由式(I)涵蓋之其他選項的合適苯甲醯胺之方法容易由熟習此項技術者鑒於用於製備必要苯甲醯胺中間體之多種已知方法而瞭解，因此此等方法同樣可適用於製備具有L的其他實施例之化合物。
流程A。
前驅體A及B可使用已知肽鍵形成條件偶合以提供中間體C。中間體C可與雜芳基酸(諸如中間體G)在熟知鈀輔助條件下偶合以形成式H之產物，其為式(I)化合物。用於與化合物C偶合之必要胺基吡啶/吡嗪化合物(G)可由溴吡啶/吡嗪藉由使用鈀化學(參見上文中間體E)引入所需R5基團，接著鄰近於胺基溴化且轉化為酸或酯(G)而製備。流程C說明此順序之應用，包括氫化烯烴以實現其中R5為四氫哌喃之式G化合物。
或者，如流程B所示，化合物C可轉化為芳基酸或酯，且可再次使用已知鈀催化之偶合條件偶合於雜芳基溴化物F，以提供本發明化合物。
中間體F可藉由此項技術中已知之方法及本文中所揭示之方法製備。多種式F化合物可如流程C中所說明由已知之胺基-溴-吡啶及胺基-溴-吡嗪合成。各種芳基、雜芳基及乙烯基酸酯可使用此項技術中已知之鈀催化劑偶合於溴吡啶或溴吡嗪，以引入所需之R5基團。此方法尤其適用於引入芳基或雜芳基作為式(I)中之R5。在初始偶合產物在R5位置處引入部分不飽和基團時，如流程C中所說明，不飽和可藉由習知方法降低以提供具有飽和基團(例如雜環基或環烷基)作為R5之化合物。此選項說明於流程C中，其中展示具有4-四氫哌喃基作為R5之化合物的製備。
流程D說明另一合成途徑，其中在吡啶或嘧啶偶合於苯甲醯胺部分之後連接對應於式(I)中之R5的基團。該方法允許併入多種芳基、雜芳基或乙烯系(不飽和)R5基團，且如本文中所說明，乙烯系R5基團可在偶合反應之後經還原以提供飽和R5基團。又，該途徑由醯胺氮上之苯甲基描繪，對應於L=視情況經取代之伸烷基，且R1=視情況經取代之苯基，但由於起始材料及用於製備醯胺中間體之方法的廣泛可用性，其同樣可適用於合成具有其他L及R1基團之化合物。一旦雜芳基偶合於苯甲醯胺苯基環，則R5可藉由鈀偶合而連接，其中酸/酯可 處於R5上或胺基吡啶/胺基吡嗪環上。此流程中之R1*表示苯基上視情況選用之取代基，經選擇以對應於式(I)中之R1上的取代基。
流程E說明一種以3-溴-2-胺基吡啶或對應吡嗪及經酸或酯取代之苯甲酸酯為起始物來製備式(I)化合物之方法。在偶合形成聯芳基之後，胺基吡啶可在適度條件下容易地溴化，且可製備所需醯胺基團。R5可藉由鈀催化之Br置換由吡啶環引入。此處，再次，酸酯可處於胺基吡啶環上或芳基、雜芳基或乙烯系R5基團上。
本發明另外包括本發明方法之任何變體，其中將可於其任何階段獲得之中間體用作起始材料且進行剩餘步驟，或其中該等起始材料係在反應條件下當場形成，或其中該等反應組分係以其鹽或光學純材料形式使用。本發明化合物及中間體可根據熟習此項技術者一般已知之方法相互轉化。
在另一態樣中，本發明提供適用於合成式(I)化合物，包括式(II)化合物之中間體：
其中Z2為CH或N；G為Br或-B(OR21)2；其中各R21為H或C1-4烷基，或兩個R21與其所連接之鍵聯-O-B-O-合起來形成環狀硼酸酯； J為H、F、Cl或Me；且R20為H或C1-6烷基。
在一些實施例中，J宜為氟(F)，且在其他實施例中，J為Cl。在一些實施例中，G為環狀硼酸酯基團，諸如4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基或1,3,2-二氧硼-2-基。
在另一態樣中，本發明提供包含本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽及至少一種醫藥學上可接受之載劑或賦形劑的醫藥組合物。該醫藥組合物可經調配用於特定投與途徑，諸如經口投與、非經腸投與及直腸投與及其類似途徑。另外，本發明之醫藥組合物可以固體形式(包括(不限於)膠囊、錠劑、丸劑、顆粒、散劑或栓劑)或以液體形式(包括(不限於)溶液、懸浮液或乳液)構成。丸劑或錠劑可根據此項技術中已知之方法包覆膜衣或包覆腸溶包衣。該等醫藥組合物可經習知醫藥操作(諸如滅菌)及/或可含有習知惰性稀釋劑、潤滑劑或緩衝劑以及佐劑(諸如防腐劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑及緩衝劑等)。
典型地，包含本發明化合物之醫藥組合物為包含式(I)化合物作為活性成分連同一或多種以下賦形劑之錠劑或明膠膠囊：a)稀釋劑，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纖維素及/或甘胺酸；b)潤滑劑，例如矽石、滑石、硬脂酸、其鎂或鈣鹽及/或聚乙二醇；對於錠劑，亦包含c)黏合劑，例如矽酸鎂鋁、澱粉糊、明膠、黃蓍、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉及/或聚乙烯吡咯啶酮；必要時，d)崩解劑，例如澱粉、瓊脂、褐藻酸或其鈉鹽或發泡混合物；及/或e)吸收劑、著色劑、調味劑及甜味劑。
用於囊封之合適膠囊及用於調配式I化合物以製備經口劑型之合 適賦形劑之選擇在一般技術水準範圍內。錠劑可使用此項技術中已知之方法包覆膜衣或包覆腸溶包衣。
用於經口投與之合適組合物包括有效量之呈以下形式的本發明化合物：錠劑、口含錠、水性或油性懸浮液、可分散粉劑或顆粒、乳液、硬或軟膠囊或糖漿或酏劑。根據製造醫藥組合物之技術中已知之任何方法來製備意欲經口使用之組合物，且該等組合物可含有一或多種選自由以下組成之群之試劑：甜味劑、調味劑、著色劑及防腐劑，以提供醫藥學上精緻且可口之製劑。錠劑可含有活性成分與適於製造錠劑之醫藥學上可接受之無毒賦形劑的混合物，包括上文所列舉之混合物。此等賦形劑為例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；粒化及崩解劑，例如玉米澱粉或褐藻酸；黏合劑，例如澱粉、明膠或阿拉伯膠；及潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。錠劑為未包覆包衣的或藉由已知技術包覆包衣以延遲在胃腸道中之崩解及吸收，且藉此提供較長時期內之持續作用。舉例而言，可採用時間延遲材料，諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用於經口使用之調配物可以其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合之硬明膠膠囊形式或以其中活性成分與水或油介質(例如花生油、液體石蠟或橄欖油)混合以在軟膠囊內部形成溶液、乳液或分散液之軟明膠膠囊形式呈遞。
某些可注射組合物為等張水溶液或懸浮液，且栓劑宜自脂肪乳液或懸浮液製備。該等組合物可經滅菌及/或含有佐劑，諸如防腐劑、穩定劑、濕潤劑或乳化劑、溶解促進劑、用於調節滲透壓之鹽及/或緩衝液。另外，其亦可含有其它治療上有價值之物質。該等組合物係分別根據習知混合、粒化或包覆方法製備，且含有約0.1-75%或含有約1-50%活性成分。
用於經皮施用之合適組合物包括有效量之本發明化合物及合適 載劑。適於經皮遞送之載劑包括可吸收之藥理學上可接受之溶劑以幫助傳遞通過宿主皮膚。舉例而言，經皮器件係呈繃帶形式，其包含稱底部件、含有化合物及視情況具有之載劑之貯器、視情況在延長時期內以受控及預定速率向宿主皮膚遞送化合物之速率控制障壁、及使該器件固定於皮膚之構件。
用於表面施用(例如至皮膚及眼睛)之合適組合物包括水溶液、懸浮液、軟膏、乳膏、凝膠或例如藉由氣溶膠或其類似物遞送之可噴射調配物。該等表面遞送系統將尤其適於真皮施用，例如用於治療皮膚癌，例如以日霜、洗劑、噴霧劑及其類似形式用於預防性用途。因此，其尤其適合用於此項技術中熟知之表面(包括化妝)調配物。該等物質可含有增溶劑、穩定劑、張力增強劑、緩衝劑及防腐劑。
如本文所用，局部施用亦可關於吸入或鼻內施用。其可以乾粉形式(單獨，以混合物形式(例如與乳糖之無水摻合物)或混合組分顆粒(例如與磷脂))自乾粉吸入器或以氣溶膠噴霧形式在使用或不使用合適推進劑之情況下自加壓容器、泵、噴霧器、霧化器或氣霧器便利地遞送。
本發明進一步提供包含本發明化合物作為活性成分之無水醫藥組合物及劑型，其中在投與之前可需要使該化合物暴露於水之情形減至最少。本發明之無水醫藥組合物及劑型可使用無水或含低水分之成分且在低水分或低濕氣條件下製備。無水醫藥組合物可經製備及儲存以使得維持其無水性質。因此，無水組合物使用已知防止暴露於水之材料經封裝，使得其可包括在合適配方之套組中。合適封裝之實例包括(但不限於)密封之箔、塑膠、單位劑量容器(例如小瓶)、泡殼包裝及條狀包裝。
本發明進一步提供醫藥組合物及劑型，其包含一或多種降低作為活性成分之本發明化合物將分解之速率的試劑。本文中稱為「穩定 劑」之該等試劑包括(但不限於)諸如抗壞血酸之抗氧化劑、pH緩衝劑或鹽緩衝劑等。
呈游離形式或呈鹽形式之式I化合物展現有價值的藥理學特性，例如其調節或抑制ERK1及/或ERK2之活性，如以下章節中所提供之測試資料所指示，且因此適合用於如本文所述之療法，或用作研究化學品，例如用作工具化合物以進一步瞭解EKR1/2抑制或生物化學路徑(MAPK)之抑制的效應。
因此，作為另一實施例，本發明提供式(I)化合物或在如本文所述之式(I)範疇內之任何實施例用於療法或用於製造藥劑之用途。在另一實施例中，療法或藥劑係針對可藉由抑制ERK1及/或ERK2來治療之疾病。在另一實施例中，本發明化合物適用於治療癌症，包括(但不限於)本文提及之彼等癌症。
在另一實施例中，本發明提供一種治療可藉由抑制ERK1及/或ERK2來治療之疾病的方法，其包含投與治療有效量之式(I)或(IA)化合物或如本文所述之任何本發明實施例。在另一實施例中，該疾病係選自合適病狀之上文所提及之清單。該方法典型地包含向需要該治療之個體投與有效量的如本文所述之化合物或包含該化合物之醫藥組合物。該化合物可藉由任何合適方法，諸如本文所述之方法來投與，且投與可以由治療醫師選擇之時間間隔重複。本發明因此提供式I及IA化合物或如本文所述之其任何亞屬，其用於治療藉由ERK1/2活性介導或與過度或不需要之ERK1/2活性水準相關的病狀，包括上文所提及之彼等病狀。
因此，作為另一實施例，本發明提供式(I)化合物或本文所述之該等化合物之任何實施例用於製造藥劑之用途。在另一實施例中，該藥劑係用於治療可藉由抑制ERK1及/或ERK2來治療之疾病。在另一實施例中，該疾病為癌症，例如合適地選自上文所提及之清單的癌 症。
在一些實施例中，該等化合物與一或多種共治療劑組合使用。合適之共治療劑包括抗癌劑、止痛劑、消炎劑及其類似藥劑。在一些實施例中，該等組合物包括對RAF路徑起作用之共治療劑，諸如B-RAF抑制劑或C-Raf抑制劑。
在一實施例中，本發明提供包含兩種或兩種以上各別醫藥組合物之套組，該等醫藥組合物中之至少一者含有式(I)化合物。在一個實施例中，套組包含用於分別保留該等組合物之構件，諸如容器、分隔之小瓶或分隔之鋁箔封包。該套組之實例為如典型地用於封裝錠劑、膠囊及其類似物之泡殼包裝。
本發明之套組可用於例如經口及非經腸投與不同劑型，以不同劑量間隔投與各別組合物，或相對於彼此滴定各別組合物。為了幫助順應性，本發明套組典型地包含投藥指導。
在本發明之組合療法中，本發明化合物及其他治療輔劑可由相同或不同製造商製造及/或調配。此外，本發明化合物及其他治療劑可共同用於組合療法：(i)在對醫師發行組合產品之前(例如，在套組包含本發明化合物及其他治療劑的情況下)；(ii)在投藥之前不久由醫師親自進行(或在醫師指導下進行)；(iii)由患者本人進行，例如，在本發明化合物及其他治療劑之依序投藥期間。
因此，本發明提供式(I)化合物用於治療由ERK1及/或ERK2介導之疾病或病狀的用途，其中該藥劑經製備用於與另一治療劑一起投與。本發明亦提供另一共治療劑用於治療疾病或病狀之用途，其中該輔劑與式(I)化合物一起投與。
本發明亦提供用於治療由ERK1及/或ERK2介導之疾病或病狀之方法中的式(I)化合物，其中該式(I)化合物經製備用於與另一治療劑一起投與。本發明亦提供用於治療由ERK1及/或ERK2介導之疾病或 病狀之方法中的另一治療輔劑，其中該另一治療輔劑經製備用於與式(I)化合物一起投與。本發明亦提供用於治療由ERK1及/或ERK2介導之疾病或病狀之方法中的式(I)化合物，其中該式(I)化合物與另一治療輔劑一起投與。本發明亦提供用於治療由ERK1及/或ERK2介導之疾病或病狀之方法中的另一共治療劑，其中該另一治療輔劑與式(I)化合物一起投與。
本發明亦提供式(I)化合物用於治療由ERK1及/或ERK2介導之疾病或病狀的用途，其中患者為先前或隨後(例如在24小時內)用另一治療劑治療之患者。本發明亦提供共治療劑用於治療由ERK1及/或ERK2介導之疾病或病狀的用途，其中患者先前(例如在24小時內)已用式(I)化合物治療。
在一實施例中，該另一治療劑(共治療劑或僅輔劑)為適用於治療癌症之化合物，且典型地為經批准用於治療至少一種類型之癌症的FDA批准藥物。合適之共治療劑包括埃羅替尼(erlotinib)、硼替佐米(bortezomib)、氟維司群(fulvestrant)、舒尼替尼(sunitib)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)、來曲唑(letrozole)、非那蘇納特(finasunate)、鉑(諸如奧沙利鉑(oxaliplatin)、卡鉑及順鉑(cisplatin))、非那蘇納特、氟尿嘧啶、雷帕黴素(rapamycin)、甲醯四氫葉酸(leucovorin)、拉帕替尼(lapatinib)、洛那法尼(lonafamib)、索拉非尼(sorafenib)、吉非替尼(gefitinib)、喜樹鹼(capmtothecin)、拓朴替康(topotecan)、苔蘚抑素(bryostatin)、阿多來新(adezelesin)、蒽環黴素(anthracyclin)、卡折來新(carzelesin)、比折來新(bizelesin)、海兔毒素(dolastatin)、奧里斯他汀(auristatin)、倍癌黴素(duocarmycin)、艾榴塞洛素(eleutherobin)、紫杉醇(諸如太平洋紫杉醇或多烯紫杉醇)、環磷醯胺、小紅莓(doxorubicin)、長春新鹼(vincristine)、潑尼松(prednisone)或潑尼龍(prednisolone)、其他烷基化劑(諸如氮芥 (mechlorethamine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)及異環磷醯胺)、抗代謝物(諸如咪唑硫嘌呤(azathioprine)或巰基嘌呤)、其他微管抑制劑(長春花生物鹼(vinca alkaloid)，如長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、長春瑞濱(vinorelbine)及長春地辛(vindesine)，以及紫杉烷)、鬼臼毒素(依託泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、磷酸依託泊苷及表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin))、拓撲異構酶抑制劑、其他細胞毒素(諸如放線菌素、道諾黴素(daunorubicin)、戊柔比星(valrubicin)、艾達黴素(idarubicin)、依決洛單抗(edrecolomab)、表阿黴素(epirubicin)、博來黴素、光神黴素(plicamycin)、絲裂黴素)以及其他抗癌抗體(西妥昔單抗、貝伐單抗(bevacizumab)、替伊莫單抗(ibritumomab)、阿巴伏單抗(abagovomab)、阿德木單抗(adecatumumab)、阿托珠單抗(afutuzumab)、阿珠單抗(alacizumab)、阿倫單抗(alemtuzumab)、安那莫單抗(anatumomab)、阿泊珠單抗(apolizumab)、巴維昔單抗(bavituximabo)、貝利木單抗(belimumab)、莫比伐珠單抗(bivatuzumab mertansine)、比那珠單抗(blinatumomab)、維藍妥昔單抗(brentuximab vedotin)、莫坎妥珠單抗(cantuzumab mertansine)、卡圖馬單抗(catumazomab)、西妥昔單抗(cetuximab)、泊西妥珠單抗(citatuzumab bogatox)、西妥木單抗(cixutumumab)、他克維妥珠單抗(clivatuzumab tetraxetan)、考哪妥木單抗(conatumumab)、達西珠單抗(dacetuzumab)、達利珠單抗(daclizumab)、地莫單抗(detumomab)、依美昔單抗(ecromeximab)、依決洛單抗(edrecolomab)、依土珠單抗(elotuzumab)、依帕珠單抗(epratuzumab)、厄妥索單抗(ertumaxomab)、埃達珠單抗(etaracizumab)、伐樂單抗(farletuzumab)、費吉單抗(figitumumab)、夫蘇木單抗(fresolimumab)、加利昔單抗(galiximab)、維格巴圖單抗(gembatumumab vedotin)、吉姆單抗(gemtuzumab)、替伊莫單抗 (ibritumomab tiuxetan)、奧英妥珠單抗(inotuzumab ozogamicin)、英妥木單抗(intetumumab)、易普利單抗(ipilimumab)、伊妥木單抗(iratumumab)、拉貝珠單抗(labetuzumab)、來沙木單抗(lexatumumab)、林妥珠單抗(lintuzumab)、盧卡木單抗(lucatumumab)、路密西單抗(lumilisimab)、馬帕木單抗(mapatumumab)、馬妥珠單抗(matuzumab)、米拉妥珠單抗(milatuzumab)、米妥莫單抗(mitumomab)、他那可單抗(nacolomab tafenatox)、艾那妥莫單抗(naptumomab estafenatox)、奈妥木單抗(necitumumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、奧法木單抗(ofatumumab)、奧拉圖單抗(olaratumab)、莫奧珠單抗(oportuzumab monatox)、奧戈伏單抗(oregovomab)、帕尼單抗(panitumumab)、培妥單抗(pemtumomab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、平妥單抗(pintumomab)、普立木單抗(pritumumab)、雷莫蘆單抗(ramucirumab)、利妥木單抗(rilotumumab)、羅妥木單抗(robatumumab)、利妥昔單抗(rituximab)、西羅珠單抗(sibrotuzumab)、他塔卡妥珠單抗(tacatuzumab tetraxetan)、帕他普莫單抗(taplitumomab paptox)、替那妥單抗(tenatumomab)、替力單抗(ticilimumab)、替格妥單抗(tigatuzumab)、托西莫單抗(tositumomab)或131I-托西莫單抗、曲妥珠單抗(trastuzumab)、替西木單抗(tremelimumab)、賽托考珠單抗(tuocotuzumab celmoleukin)、維妥珠單抗(veltuzumab)、維希珠單抗(visilizumab)、弗洛西單抗(volocixumab)、弗妥單抗(votumumab)、紮魯木單抗(zalutumumab)、紮木單抗(zanolimumab)、IGN-101、MDX-010、ABX-EGR、EMD72000、ior-t1、MDX-220、MRA、H-11 scFv、huJ591、TriGem、TriAb、R3、MT-201、G-250、ACA-125、Onyvax-105、CD：-960、Cea-Vac、BrevaRex AR54、IMC-1C11、GlioMab-H、ING-1、 抗LCG MAbs、MT-103、KSB-303、Therex、KW2871、抗HMI.24、抗PTHrP、2C4抗體、SGN-30、TRAIL-RI MAb、前列腺癌抗體、H22xKi-r、ABX-Mai、Imuteran、Monopharm-C)及包含任何以上試劑(尤其奧里斯他汀MMAE及MMAF、類美登素(如DM-1)、加利車黴素或各種細胞毒素)之抗體-藥物結合物。除非另外規定，否則較佳共治療劑包括威羅菲尼(vemurafinib)、德拉菲尼(debrafinib)、LGX818、曲美替尼(trametinib)、MEK162、LEE011、PD-0332991、帕比司他(panobinostat)、伏立諾他(verinostat)、羅米地辛(romidepsin)、西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼、拉帕替尼、帕尼單抗、凡德他尼(vandetanib)、INC280、依維莫司(everolimus)、西蒙莫司(simolimus)、BMK120、BYL719及CLR457。
對於約50-70kg之個體，本發明醫藥組合物或組合可呈約1-2,000mg活性成分、或約1-500mg或約1-250mg或約1-150mg或約0.5-100mg、或約1-50mg活性成分的單位劑量。化合物、醫藥組合物或其組合之治療有效劑量取決於個體之物種、體重、年齡及個體狀況、經治療之病症或疾病及其嚴重性。一般熟練之醫師、臨床醫師或獸醫可容易地確定預防、治療或抑制病症或疾病進展所必需之各活性成分的有效量。
可有利地使用哺乳動物(例如小鼠、大鼠、狗、猴)或經分離器官、組織及其製劑在活體外及活體內測試中證明上述劑量特性。本發明化合物可以溶液(例如水溶液)形式活體外應用，及例如以懸浮液形式或於水溶液中經腸、非經腸、有利地經靜脈內活體內應用。活體外劑量可介於約10-3莫耳濃度與10-9莫耳濃度之間範圍內。視投藥途徑而定，活體內治療有效量可介於約0.1-500mg/kg之間，或較佳約1-100mg/kg之間之範圍內。
本發明化合物可與一或多種共治療劑(本文中亦稱為輔劑)同時或 在其之前或之後投與。本發明化合物可分別地藉由相同或不同投與途徑，或與輔劑在同一醫藥組合物中一起投與。
在一實施例中，本發明提供包含式(I)化合物及至少一種其他治療輔劑之產品作為在療法中同時、分別或依序使用之組合製劑。在一實施例中，該療法係治療藉由ERK1及/或ERK2介導之疾病或病狀，諸如癌症。作為組合製劑提供之產品包括包含式(I)化合物及其他治療輔劑一起在同一醫藥組合物中，或式(I)化合物及其他治療輔劑呈各別形式，例如呈套組形式之組合物。
在一實施例中，本發明提供包含式(I)化合物及另外的治療輔劑之醫藥組合物。視情況，醫藥組合物可包含如上文所述之醫藥學上可接受之載劑。
在一實施例中，本發明提供包含兩種或兩種以上各別醫藥組合物之套組，該等醫藥組合物中之至少一者含有式(I)化合物。在一個實施例中，套組包含用於分別保留該等組合物之構件，諸如容器、分隔之小瓶或分隔之鋁箔封包。該套組之實例為如典型地用於封裝錠劑、膠囊及其類似物之泡殼包裝。
本發明之套組可用於例如經口及非經腸投與不同劑型，以不同劑量間隔投與各別組合物，或相對於彼此滴定各別組合物。為了幫助順應性，本發明套組典型地包含投藥指導。
在本發明之組合療法中，本發明化合物及其他治療輔劑可由相同或不同製造商製造及/或調配。此外，本發明化合物及其他治療劑可共同用於組合療法：(i)在對醫師發行組合產品之前(例如，在套組包含本發明化合物及其他治療劑的情況下)；(ii)在投藥之前不久由醫師親自進行(或在醫師指導下進行)；(iii)由患者本人進行，例如，在本發明化合物及其他治療劑之依序投藥期間。
因此，本發明提供式(I)化合物用於治療由ERK1及/或ERK2介導 之疾病或病狀的用途，其中該藥劑經製備用於與另一治療劑一起投與。本發明亦提供另一治療輔劑用於治療疾病或病狀之用途，其中該藥劑與式(I)化合物一起投與。與本發明化合物一起使用之合適共治療劑典型地基於用於治療之病狀來選擇。例如，在黑色素瘤之治療中，共治療劑可選自阿地白介素(Aldesleukin)、達拉菲尼(Dabrafenib)、達卡巴嗪(Dacarbazine)、DTIC-Dome(達卡巴嗪)、內含子A(重組干擾素α-2b)、易普利單抗、Mekinist(曲美替尼)、聚乙二醇化干擾素α-2b、PEG-內含子(聚乙二醇化干擾素α-2b)、普留淨(Proleukin)(阿地白介素)、重組干擾素α-2b、Sylatron(聚乙二醇化干擾素α-2b)、Tafinlar(達拉菲尼)、曲美替尼、威羅菲尼(Vemurafenib)、Yervoy(易普利單抗)及Zelboraf(威羅菲尼)。關於卵巢癌之治療，共治療劑可選自阿德力黴素PFS(小紅莓鹽酸鹽)、阿德力黴素RDF(小紅莓鹽酸鹽)、卡鉑、Clafen(環磷醯胺)、順鉑、環磷醯胺、Cytoxan(環磷醯胺)、小紅莓鹽酸鹽、Dox-SL(小紅莓鹽酸鹽脂質體)、DOXIL(小紅莓鹽酸鹽脂質體)、小紅莓鹽酸鹽脂質體、Evacet(小紅莓鹽酸鹽脂質體)、吉西他濱鹽酸鹽、Gemzar(吉西他濱鹽酸鹽)、Hycamtin(拓朴替康鹽酸鹽)、LipoDox(小紅莓鹽酸鹽脂質體)、Neosar(環磷醯胺)、太平洋紫杉醇、Paraplat(卡鉑)、Paraplatin(卡鉑)、Platinol(順鉑)、Platinol-AQ(順鉑)、紫杉醇(太平洋紫杉醇)及拓朴替康鹽酸鹽。關於甲狀腺癌之治療，共治療劑可選自阿德力黴素PFS(小紅莓鹽酸鹽)、阿德力黴素RDF(小紅莓鹽酸鹽)、卡博替尼(Cabozantinib)-S-蘋果酸鹽、Caprelsa(凡德他尼)、Cometriq(卡博替尼-S-蘋果酸鹽)、小紅莓鹽酸鹽及凡德他尼。關於結腸癌之治療，共治療劑可選自Adrucil(氟尿嘧啶)、Avastin(貝伐單抗)、貝伐單抗、Camptosar(依立替康鹽酸鹽)、卡培他濱(Capecitabine)、西妥昔單抗、Efudex(氟尿嘧啶)、Eloxatin(奧沙利鉑)、Erbitux(西妥昔單抗)、Fluoroplex(氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、依 立替康鹽酸鹽、甲醯四氫葉酸鈣、奧沙利鉑、帕尼單抗、瑞格拉非尼(Regorafenib)、Stivarga(瑞格拉非尼)、Vectibix(帕尼單抗)、Wellcovorin(甲醯四氫葉酸鈣)、Xeloda(卡培他濱)、Zaltrap(Ziv-Aflibercept)及Ziv-Aflibercept。關於肺癌之治療，共治療劑可選自Abitrexate(甲胺喋呤)、Abraxane(太平洋紫杉醇白蛋白穩定之奈米粒子調配物)、阿法替尼二順丁烯二酸鹽、Alimta(培美曲塞二鈉(Pemetrexed Disodium))、Avastin(貝伐單抗)、貝伐單抗、卡鉑、順鉑、克唑替尼(Crizotinib)、埃羅替尼鹽酸鹽、Folex(甲胺喋呤)、Folex PFS(甲胺喋呤)、吉非替尼、Gilotrif(阿法替尼二順丁烯二酸鹽)、吉西他濱鹽酸鹽、Gemzar(吉西他濱鹽酸鹽)、Iressa(吉非替尼)、甲胺喋呤、甲胺喋呤LPF(甲胺喋呤)、Mexate(甲胺喋呤)、Mexate-AQ(甲胺喋呤)、太平洋紫杉醇、太平洋紫杉醇白蛋白穩定之奈米粒子調配物、Paraplat(卡鉑)、Paraplatin(卡鉑)、培美曲塞二鈉、Platinol(順鉑)、Platinol-AQ(順鉑)、Tarceva(埃羅替尼鹽酸鹽)、紫杉烷(太平洋紫杉醇)及Xalkori(克唑替尼)。關於胰臟癌之治療，共治療劑可選自Adrucil(氟尿嘧啶)、Efudex(氟尿嘧啶)、埃羅替尼鹽酸鹽、Fluoroplex(氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、吉西他濱鹽酸鹽、Gemzar(吉西他濱鹽酸鹽)、絲裂黴素C、Mitozytrex(絲裂黴素C)、突變黴素(Mutamycin)(絲裂黴素)及Tarceva(埃羅替尼鹽酸鹽。關於子宮頸癌之治療，共治療劑可選自Blenoxane(博來黴素)、博來黴素、順鉑、Hycamtin(拓朴替康鹽酸鹽)、Platinol(順鉑)、Platinol-AQ(順鉑)及拓朴替康鹽酸鹽。關於頭頸部癌之治療，共治療劑可選自Abitrexate(甲胺喋呤)、Adrucil(氟尿嘧啶)、Blenoxane(博來黴素)、博來黴素、西妥昔單抗、順鉑、多烯紫杉醇、Efudex(氟尿嘧啶)、Erbitux(西妥昔單抗)、Fluoroplex(氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、Folex(甲胺喋呤)、Folex PFS(甲胺喋呤)、甲胺喋呤、甲胺喋呤LPF(甲胺喋 呤)、Mexate(甲胺喋呤)、Mexate-AQ(甲胺喋呤)、Platinol(順鉑)、Platinol-AQ(順鉑)及Taxotere(多烯紫杉醇)。關於白血病(包括CMML)之治療，共治療劑可選自Bosulif(博舒替尼(Bosutinib))、博舒替尼、Clafen(環磷醯胺)、環磷醯胺、阿糖胞苷、Cytosar-U(阿糖胞苷)、Cytoxan(環磷醯胺)、達沙替尼(Dasatinib)、Gleevec(甲磺酸伊馬替尼)、Iclusig(帕納替尼鹽酸鹽)、甲磺酸伊馬替尼、Neosar(環磷醯胺)、尼洛替尼(Nilotinib)、高三尖杉酯鹼(Omacetaxine Mepesuccinate)、帕納替尼鹽酸鹽、Sprycel(達沙替尼)、Synribo(高三尖杉酯鹼)、Tarabine PFS(阿糖胞苷)及Tasigna(尼洛替尼)。
本發明亦提供用於治療由ERK1及/或ERK2介導之疾病或病狀之方法中的式(I)化合物，其中該式(I)化合物經製備用於與另一治療劑一起投與。本發明亦提供用於治療由ERK1及/或ERK2介導之疾病或病狀之方法中的另一治療輔劑，其中該另一治療輔劑經製備用於與式(I)化合物一起投與。本發明亦提供用於治療由ERK1及/或ERK2介導之疾病或病狀之方法中的式(I)化合物，其中該式(I)化合物與另一治療輔劑一起投與。本發明亦提供用於治療由ERK1及/或ERK2介導之疾病或病狀之方法中的另一治療輔劑，其中該另一治療輔劑與式(I)化合物一起投與。
本發明亦提供式(I)化合物用於治療由ERK1及/或ERK2介導之疾病或病狀的用途，其中患者先前(例如在24小時內)已用另一治療劑治療。本發明亦提供另一治療劑用於治療由ERK1及/或ERK2介導之疾病或病狀的用途，其中患者先前(例如在24小時內)已用式(I)化合物治療。
可提供特定治療益處之特定個別組合包括本發明化合物及至少一種選自BRAF、MEK、CDK4/6、SHP-2、HDAC、EGFR、MET、mTOR、PI3K及AKT抑制劑之化合物。該等抑制劑之實例包括威羅菲 尼、德拉菲尼、LGX818、曲美替尼、MEK162、LEE011、PD-0332991、帕比司他、伏立諾他、羅米地辛、西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼、拉帕替尼、帕尼單抗、凡德他尼、INC280、依維莫司、西蒙莫司、BMK120、BYL719及CLR457。
下列實例意欲說明本發明且不應解釋為對其進行限制。溫度以攝氏度給出。若未另外提及，則所有蒸發均在減壓下進行，典型地在約15mm Hg與100mm Hg(=20-133毫巴)之間。最終產物、中間物及起始材料之結構藉由標準分析方法證實，例如微量分析及光譜特徵(例如MS、IR、NMR)。
所有用以合成本發明化合物之起始材料、架構基塊、試劑、酸、鹼、脫水劑、溶劑及催化劑均為市售的或可藉由一般技術者已知之有機合成方法(Houben-Weyl第4版1952,METHODS OF ORGANIC SYNTHESIS,THIEME，第21卷)製得。此外，本發明化合物可藉由一般技術者已知之有機合成方法鑒於以下實例來製造。
該等化合物及/或中間體藉由高效液相層析法(HPLC)使用具有2695分離模組之Waters Millennium層析系統(Milford,MA)來表徵。分析管柱為逆相Phenomenex Luna C18-5μ,4.6 x 50mm，來自Alltech(Deerfield,IL)。使用梯度溶離(流動2.5mL/min)，以5%乙腈/95%水起始且經10分鐘時期進展至100%乙腈。所有溶劑均含有0.1%三氟乙酸(TFA)。化合物藉由在220或254nm下之紫外光(UV)吸收來偵測。HPLC溶劑來自Burdick and Jackson(Muskegan,MI)或Fisher Scientific(Pittsburgh,PA)。
在Waters System(Waters Acquity UPLC)及Waters SQD質譜儀偵測器上進行質譜分析；管柱：Phenomenex Kinetex 2.6um C18，管柱尺寸4.6 x 50mm；管柱溫度50℃。梯度：經1.5分鐘時期2-98%乙腈/含0.1% TFA之水；流動速率1.2mL/min(或經1.3分鐘之極性梯度1- 30%，經1.3分鐘之非極性梯度55-98%)；質譜儀分子量掃描範圍150-850；或150-1900。錐孔電壓20V。除非另外指示，否則所有質量均報導為質子化母離子之質量。使用Varian 400MHz NMR(Palo Alto,CA)，對所選化合物進行核磁共振(NMR)分析。光譜參考物為TMS或該溶劑之已知化學位移。
如下進行X射線粉末繞射(XRPD)：
熟練人員應瞭解，在「關於圖3之表格」內的各種峰之相對強度可由於多種因素而改變，諸如X射線光束中晶體之定向效應或所分析材料之純度或樣品之結晶程度。峰位置亦可關於樣品高度之變化而遷移，但峰位置將實質上保持如「關於圖3之表格」中所規定。熟練人員亦應瞭解，使用不同波長獲得之量測值將根據布拉格等式-nλ=2d sin θ產生不同位移。藉由使用替代波長產生之該等替代XRPD圖案仍表示同一種材料。
如下進行差示掃描熱量測定/熱解重量分析(DSC/TGA)：
熟習此項技術者應瞭解，基於所用之特定光譜儀及分析者之樣品製備技術預期所觀察到之峰的細微變化。一些誤差範圍存在於各峰指派值(+/- cm-1)中。
除非另外指示或在以下清單中定義，否則本文所用之縮寫具有此項技術中之其一般含義：
實例
以下實例說明本發明之某些實施例及如何製造及使用該等實施例，其不欲限制本發明之範疇。
方法1 實例1 (S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺之合成
流程1
步驟1. 5-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺
向酸酯(6.64g，31.6mmol)、5-溴吡嗪-2-胺(5g，28.7mmol)及PdCl2(dppf)(2.1g，2.87mmol)之溶液中添加DME(71.8mL)及2M Na2CO3溶液(24mL)。反應混合物在90℃下加熱15小時。用EtOAc處理反應混合物。有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗產物藉由急驟層析(梯度EtOAc/庚烷)純化，生成5-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺，57%產率。LCMS(m/z)：178.1(MH+),0.34min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.17-8.03(m,1 H),8.04-7.88(m,1 H),6.57-6.41(m,1 H),4.68-4.42(m,2 H),4.42-4.29(m,2 H),4.06-3.84(m,2 H),2.68-2.47(m,2 H)。
步驟2. 5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺
5-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺(2.7g，15.24mmol)及Pd-C(10%，Degussa類型)(1.6g，1.5mmol)於MeOH(50mL)中之溶液藉由N2流脫氣持續15分鐘。在配備氫氣球之後，反應混合物在室溫下攪拌15小時。粗產物經矽藻土墊過濾且用EtOAc洗滌。揮發性材料在真空中濃縮，生成5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺，且用於下一步驟。LCMS(m/z)：180.3(MH+),0.28min。
步驟3. 3-溴-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺
在0℃下向5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺(2.8g，15.6mmol)於CH3CN(52mL)中之冰冷溶液中分兩部分添加NBS(2.78g，15.62mmol)。反應混合物在0℃下攪拌1小時。反應混合物用乙酸乙酯稀釋且用飽和碳酸鈉溶液、水、鹽水洗滌，經乾燥且濃縮。粗3-溴-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺(3.9g，97%)無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：258/260(MH+),0.52min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.83(s,1H),4.90(br.s.,2H),4.14-4.02(m,2H),3.59-3.43(m,2H),2.83(d,J=5.5Hz,1H),1.91-1.77(m,4H)。
步驟4. (S)-4-溴-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
向4-溴苯甲酸(892mg，4.44mmol)於THF(9.9mL)中之溶液中添加(S)-2-胺基-2-苯基乙醇(609mg，4.44mmol)、DIEA(1.9mL，11.1mmol)、PyBroP(2.5g，5.32mmol)及HOBT(815mg，5.32mmol)。反應混合物在室溫下攪拌20小時。用EtOAc萃取反應混合物。有機層用水及鹽水洗滌。在經無水硫酸鈉乾燥、過濾且在真空中濃縮之後，粗產物藉由急驟層析(梯度EtOAc/DCM)純化，生成(S)-4-溴-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺(850mg，60%)。LCMS(m/z)：338.1(MH+),0.61min。
步驟5. (S)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)苯甲醯胺
向(S)-4-溴-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼(B2(PIN)2)(238mg，0.937mmol)、Pd2(dba)3(21.45mg，0.023mmol)、三環己基膦(19.71mg，0.070mmol)於二噁烷(1.562mL)中之溶液中添加乙酸鉀(138mg，1.405mmol)。反應混合物藉由N2流脫氣持續15分鐘。反應混合物在100℃下加熱隔夜。在用EtOAc稀釋之後，反應混合物經矽藻土過濾。在濃縮之後，(S)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)苯甲醯胺無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：368.3(MH+),0.88min(關於酸酯)及286.1(MH+),0.49min(關於相應酸)。
步驟6. (S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
向3-溴-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺(154mg，0.418mmol)、(S)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲醯胺(90mg，0.349mmol)及PdCl2(dppf)(25.5mg，0.035mmol)之溶液中添加二噁烷(2.3mL)及2M Na2CO3溶液(1.163mL)。反應混合物在微波合成器(120℃，10min)處加熱。反應混合物用EtOAc處理。有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗產物藉由製備型HPLC純化。組合純溶離份，用碳酸鈉溶液實現游離鹼化，且用EtOAc萃取。有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。純固體溶解於MeCN/水(1：1，6mL)中且凍乾，生成呈游離鹼形式之(S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺(46%)。LCMS(m/z)：419.2(MH+),0.58min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.74(d,J=12Hz,1 H),7.99(d,J=8Hz,2 H),7.88(s,1 H),7.79(d,J=12Hz,2 H),7.37(d,J=8Hz,2 H),7.29(m,2 H),7.22(m,1 H),5.99(bs,1 H),5.07(m,1 H),3.91(m,2 H),3.67(m,2 H),3.41(m,2 H),2.82(m,1 H),1.72(m,4 H)。
3-氟-4-(3-(甲基磺醯基)苯甲基胺甲醯基)苯基 酸之合成
4-二羥硼基-2-氟苯甲酸(218mg，1.2mmol)、(3-(甲基磺醯基)苯 基)-甲胺(200mg，1.08mmol)、DIEA(0.754mL，4.32mmol)及TBTU(381mg，1.2mmol)於DMF(2mL)中之混合物在室溫下攪拌2天，接著反應混合物用水(10mL)稀釋，且產物以膠狀物形式沈澱，且經由離心分離上清液，且膠狀殘餘物用水(3mL)進行音波處理，且膠狀殘餘物進一步在高真空下乾燥，生成呈白色泡沫狀之3-氟-4-(3-(甲基磺醯基)苯甲基胺甲醯基)-苯基觸酸(335mg，88%)。LCMS(m/z)：352.1(MH+),0.51min。
(+/-)-(3-氟-4-((2,2,2-三氟-1-苯基乙基)胺甲醯基)苯基) 酸之合成
4-二羥硼基-2-氟苯甲酸(54mg，0.294mmol)於DCM(1468μL)中之混合物冷卻至0℃。接著添加ghosez試劑N,N,3-三甲基丁-2-烯-2-胺(65.8μL，0.587mmol)且整個混合物在rt下攪拌20分鐘。該混合物添加至TEA(246μL，1.762mmol)、2,2,2-三氟-1-苯基乙胺(59.1mg，0.338mmol)及DCM(1468μL)之混合物中。反應物在室溫下攪拌2小時。向反應混合物中添加EtOAc，且用飽和碳酸氫鈉、水洗滌，且經Na2SO4乾燥。過濾且濃縮，提供粗產物，其無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：342.2(MH+),0.84min。
(R)-1-(2-氟苯基磺醯基)哌啶-3-胺之合成
(R)-3-Boc-胺基哌啶(1.05g，5.25mmol)溶解於DCM(10mL)中且接著添加三乙胺(1.10mL，7.89mmol)。在室溫下向此溶液中添加2-氟苯磺醯氯(1.127g，5.79mmol)。2小時之後，藉由LCMS認為反應完成且用水稀釋且用DCM(30mL)萃取，且分離有機層且經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮，且原樣用於下一步驟。來自上文之粗產物溶解於DCM(25mL)中且一次性添加TFA(10mL)。反應混合物接著進行LCMS。1小時之後，TFA在真空中汽提且接著殘餘物懸浮於3N HCl中且用乙醚洗滌。鹼化水層且用DCM萃取，且分離DCM層且經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮，生成873mg呈游離鹼形式之(R)-1-((2-氟苯基)磺醯基)哌啶-3-胺作為所需產物。LCMS(m/z)：255.5(MH+),0.49min。
(R)-1-(苯基磺醯基)哌啶-3-胺之合成
(R)-3-Boc-胺基哌啶(0.843g，4.21mmol)溶解於DCM(10mL)中且接著添加三乙胺(0.88mL，6.31mmol)。在室溫下向此溶液中添加苯磺醯氯(0.818g，4.63mmol)。2小時之後，藉由LCMS認為反應完成且用水稀釋且用DCM(30mL)萃取，且分離有機層且經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮，且原樣用於下一步驟。來自上文之粗產物溶解於DCM(25mL)中且一次性添加TFA(10mL)。反應混合物接著進行LCMS。3小時之後，觀察到完全Boc保護基脫除。在此階段，TFA在真空中汽提且接著殘餘物懸浮於3N HCl中且用乙醚洗滌。鹼化水層且用DCM萃取，且分離DCM層且經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮，生成850mg呈游離鹼形式之(R)-1-(苯基磺醯基)哌啶-3-胺作為所 需產物。LCMS(m/z)：241.4(MH+),0.43min。
(R)-3-氟-4-(1-(2-氟苯基磺醯基)哌啶-3-基胺甲醯基)苯基 酸之合成
向4-二羥硼基-2-氟苯甲酸(160mg，0.870mmol)、(R)-1-(2-氟苯基磺醯基)哌啶-3-胺(225mg，0.870mmol)及DIEA(456μL，2.61mmol)於THF(1450μL)及DMF(1450μL)中之溶液中添加HOAt(237mg，1.740mmol)及EDC(417mg，2.175mmol)。在室溫下攪拌3小時之後，反應混合物用EtOAc萃取。有機層用NaHCO3、水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮，生成(R)-3-氟-4-(1-(2-氟苯基磺醯基)哌啶-3-基胺甲醯基)苯基酸，其無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：425.2(MH+),0.72min。
4-(2,2-二氟-1-苯基乙基胺甲醯基)-3-氟苯基 酸之合成
步驟1. 2,2-二氟-1-苯基乙胺
在室溫下向2,2-二氟-1-苯基乙酮(1g，6.4mmol)於甲苯(32mL)中之溶液中添加LiHMDS(1M於THF中)(7.05mL，7.05mmol)。反應混合物攪拌30分鐘，繼而添加BH3-DMS(1.216mL，12.81mmol)。反應混合物攪拌1小時。在0℃下冷卻之後，經5分鐘小心地添加2N NaOH水溶液(小心！氣體析出)。反應物攪拌1小時。分離該層且用水 及鹽水洗滌。在經硫酸鈉乾燥之後，添加含HCl之MeOH(7.17mL，8.97mmol)以形成白色沈澱物。過濾沈澱物，用乙醚洗滌，且在真空中乾燥，生成2,2-二氟-1-苯基乙胺(21%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.49(s,5 H),6.52-6.07(m,1 H),4.78-4.69(m,2 H)。
步驟2. 4-(2,2-二氟-1-苯基乙基胺甲醯基)-3-氟苯基 酸
向4-二羥硼基-2-氟苯甲酸(200mg，1.087mmol)、2,2-二氟-1-苯基乙胺(232mg，1.196mmol)及DIEA(0.570mL，3.26mmol)於THF(3.866mL)及DMF(0.483mL)中之溶液中添加HOAt(296mg，2.175mmol)及EDC(521mg，2.72mmol)。在室溫下攪拌3小時之後，添加10%檸檬酸溶液(pH約為3)且用2-甲基THF及EtOAc(1：1)萃取。有機層經無水Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。獲得粗4-(2,2-二氟-1-苯基乙基胺甲醯基)-3-氟苯基酸(90%)且無需純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：375.3(MH+),0.48min。
4-苯甲基-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)-3,4-二氫苯并[f][1,4]噁氮呯-5(2H)-酮之合成
步驟1. N-苯甲基-4-溴-2-氟-N-(2-羥基乙基)苯甲醯胺
在室溫下向4-溴-2-氟苯甲醯氯(1g，4.21mmol)於THF(14.04mL)中之溶液中添加DIEA(1.103mL，6.32mmol)及2-(苯甲基胺基)乙醇(0.764g，5.05mmol)。反應混合物攪拌隔夜。反應混合物用EtOAc 萃取。有機層用水及鹽水洗滌。在經無水硫酸鈉乾燥、過濾且在真空中濃縮之後，粗N-苯甲基-4-溴-2-氟-N-(2-羥基乙基)苯甲醯胺用於下一步驟(83%)。LCMS(m/z)：352/354(MH+),0.83min。
步驟2. 4-苯甲基-8-溴-3,4-二氫苯并[f][1,4]噁氮呯-5(2H)-酮
向N-苯甲基-4-溴-2-氟-N-(2-羥基乙基)苯甲醯胺(494mg，1.403mmol)於DMF(14.00mL)中之溶液中緩慢添加NaH(60%於油中)(61.7mg，1.543mmol)。在H2氣體析出之後，反應混合物在90℃下加熱24小時。在用水淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取。有機層用水及鹽水洗滌。在經無水硫酸鈉乾燥且過濾之後，有機層在真空中蒸發。藉由急驟層析(梯度EtOAc/庚烷)純化油性粗4-苯甲基-8-溴-3,4-二氫苯并[f][1,4]噁氮呯-5(2H)-酮，84%產率。LCMS(m/z)：332.1/334.1(MH+),0.94min。
步驟3. 4-苯甲基-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)-3,4-二氫苯并[f][1,4]噁氮呯-5(2H)-酮
在脫氣之後即刻向4-苯甲基-8-溴-3,4-二氫苯并[f][1,4]噁氮呯-5(2H)-酮(111.3mg，0.335mmol)、B2(PIN)2(170mg，0.670mmol)、Pd2(dba)3(15.34mg，0.017mmol)、三環己基膦(14.09mg，0.050mmol)於二噁烷(3.35mL)中之溶液中添加乙酸鉀(99mg，1.005mmol)。反應混合物在100℃下加熱隔夜。在用EtOAc稀釋之後，反應混合物經矽藻土過濾。在濃縮之後，獲得粗4-苯甲基-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-3,4-二氫苯并[f][1,4]噁氮呯-5(2H)-酮(>99%)且無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：298.1(MH+關於酸)，0.63min及380.2(MH+),1.05min。
(S)-2-(甲基胺基)-2-苯基乙醇之合成
流程7
在0℃下經10分鐘向LiAlH4(0.689g，18.16mmol)於THF(20.18mL)中之懸浮液中緩慢添加含(S)-2-(甲基胺基)-2-苯基乙酸(1g，6.05mmol)之THF(20mL)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。在用水(0.7mL)、NaOH(2.1mL)、水(0.7mL)淬滅之後，過濾反應混合物。濾液用EtOAc萃取3次。經組合之有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗產物藉由急驟層析(10%甲醇/DCM)純化，生成呈無色油狀物之(S)-2-(甲基胺基)-2-苯基乙醇，55%產率。LCMS(m/z)：152.1(MH+),0.31min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.33(m,2 H),7.32-7.27(m,3 H),3.77-3.69(m,1 H),3.69-3.63(m,1 H),3.58(d,J=9.8Hz,1 H),2.36(s,3 H)。
(S)-4-苯基噁唑啶之合成
在室溫下向(S)-2-胺基-2-苯基乙醇(1.5g，10.93mmol)於甲醇(36.4mL)中之溶液中添加甲醛(1.065g，13.12mmol)。反應混合物在室溫下攪拌2天。反應混合物濃縮至乾。粗材料藉由急驟層析(0-50% EtOAc/庚烷)純化，生成(S)-4-苯基噁唑啶，40%產率。LCMS(m/z)：150.1(MH+),0.31min。
(S)-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯之合成
流程9
步驟1. (R)-2-胺基-1-(3-氯苯基)乙醇
在0℃下向(R)-2-(3-氯苯基)環氧乙烷(13g，84mmol)於THF(84mL)中之溶液中緩慢添加NaHMDS(1M於THF中)(252mL，252mmol)。反應混合物溫至室溫且攪拌隔夜。向反應混合物中添加水(33mL，2.5mL/g)。在室溫下攪拌5小時之後，溶劑在真空中移除至約1/4且藉由DCM分配。底層為少量渾濁且頂層為棕色溶液。濃縮兩個層，其含有所需(R)-2-胺基-1-(3-氯苯基)乙醇(14g，97%)。經組合之產物無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：172.1(MH+),0.37min。
步驟2. (R)-(2-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯
向(R)-2-胺基-1-(3-氯苯基)乙醇(14g，82mmol)於THF(272mL)中之溶液中添加二碳酸二第三丁酯(24.92g，114mmol)。該混合物在室溫下攪拌隔夜。反應混合物用DCM稀釋且接著用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌。分離之有機層接著經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗產物藉由急驟層析(0-50%乙酸乙酯/庚烷)純化，生成(R)-(2-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(49.2%)。LCMS(m/z)：216(MH+-tBu),0.85min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 1.40(s,9 H)3.18(s,1 H)3.26(d,J=4.70Hz,1 H)4.69(br.s.,1 H)7.20-7.34(m,3 H)7.35-7.41(m,1 H)。
步驟3. (S)-(2-(3-氯苯基)-2-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
向(R)-(2-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(8.12g，29.9mmol)於THF(100mL)中之溶液中添加鄰苯二甲醯亞胺(6.16g，41.8mmol)及聚合物結合之三苯基膦(3mmol PPh3/1g樹脂，9.8g)。含DTBAD(7.09g，30.8mmol)之THF(20mL)在室溫下緩慢添加至反應混合物中，其接著在室溫下攪拌隔夜。反應混合物經矽藻土過濾且用EtOAc洗滌。所得濾液用Na2CO3溶液、水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗材料藉由急驟層析(0-30% EtOAc/庚烷)純化，生成(S)-(2-(3-氯苯基)-2-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(58.4%)。LCMS(m/z)：301.1(MH+-Boc),1.06min。
步驟4. (S)-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
向(S)-(2-(3-氯苯基)-2-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(5.0g，12.47mmol)於乙醇(41.6mL)中之溶液中添加水合肼(6.06mL，125mmol)。反應混合物在60℃下加熱2小時。反應混合物經矽藻土墊過濾。濃縮濾液且殘餘物用DCM稀釋且經矽藻土過濾。重複相同過程直至不展示白色沈澱物。為了完全移除白色副產物，將產物溶解於1N HCl(30mL)中，用EtOAc洗滌，且將水相中和至pH 7，接著藉由EtOAc反萃取。有機物經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮，生成(S)-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(89%)。LCMS(m/z)：271.1(MH+),0.58min。
實例2 (S)-4-(2-胺基-5-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺之合成
流程10
步驟1. 6-胺基-5',6'-二氫-[3,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-甲酸第三丁酯
向5-溴吡啶-2-胺(0.84g，4.85mmol)於DME(10mL)中之溶液中添加N-Boc-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸酯(1g，3.23mmol)及碳酸鈉(4.85mL，9.70mmol)。該混合物用氮氣吹掃持續5分鐘，且繼而添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.26g，0.32mmol)。所得混合物在油浴中加熱至120℃持續2小時。反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用水、鹽水洗滌，乾燥且濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析(ISCO)用0-90%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化，生成呈棕色固體狀之6-胺基-5',6'-二氫-[3,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-甲酸第三丁酯(560mg，63%)。LCMS(m/z)：276(MH+),0.59min。
步驟2. 4-(6-胺基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
6-胺基-5',6'-二氫-[3,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-甲酸第三丁酯(560mg，2.03mmol)、5% Pd/C(1082mg，0.5mmol)於甲醇(30mL)中之懸浮液用氮氣吹掃持續2分鐘。反應混合物在氫氣下在環境溫度下攪拌16小時。反應混合物用二氯甲烷(50mL)稀釋且經矽藻土墊過濾。濃縮濾液且殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析(ISCO)用0-90%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化，生成呈黃色固體狀之4-(6-胺基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(180mg，31.9%)。LCMS(m/z)：278(MH+),0.57min。
步驟3. 4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
向4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(180mg，0.65mmol)於DCM(18mL)中之冰冷溶液中分兩部分添加NBS(116mg，0.65mmol)。反應混合物在0℃下在冰浴中攪拌30分鐘。反應溶液用乙酸乙酯稀釋，用水、飽和碳酸氫鈉水溶液、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且濃縮。所得殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析(ISCO)用0-100%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化，生成呈黃色油狀物之4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(180mg，78%)。LCMS(m/z)：300/302(MH+),0.67min。
步驟4. 4-(6-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯
向4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(180mg，0.50mmol)於1,4-二噁烷(8mL)中之懸浮液中添加雙(頻哪醇根基)二硼(385mg，1.51mmol)及乙酸鉀(248mg，2.53mmol)。該混合物用氮氣吹掃持續3分鐘，接著添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(49.5mg，0.061mmol)。反應混合物在油浴中加熱至110℃持續20小時且經中性氧化鋁(1g)過濾。濃縮濾液，生成粗4-(6-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯，其無需任何純化直接用於下一步驟。LCMS(m/z)：322(MH+關於酸)，0.60min。
步驟5. (S)-4-(2-胺基-5-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
向(S)-4-溴-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺(67.1mg，0.20mmol)於DME(5mL)中之懸浮液中添加4-(6-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(40mg，0.099mmol)及碳酸鈉(0.24mL，0.49mmol)。該混合物用氮氣吹掃持續10分鐘，接著添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(12.15mg，0.015mmol)。反應混合物在油浴中加熱至120℃持續3小時。反應混合物用乙酸乙酯稀 釋。有機溶液用水、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且濃縮。所得殘餘物用含30% TFA之DCM(20mL)處理15分鐘。濃縮反應混合物且粗產物藉由HPLC來純化，生成呈TFA鹽之(S)-4-(2-胺基-5-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺(9mg，20.8%)。LCMS(m/z)：435(MH+),0.44min；1H NMR(300MHz,CD3OD)δ ppm 8.63(br.s.,1 H)7.90(t,J=7.77Hz,1 H)7.84(s,2 H)7.47-7.24(m,7 H),5.27-5.17(m,1 H)3.93-3.79(m,2 H)3.52(d,J=12.60Hz,2 H)3.21-3.05(m,2 H)2.96(t,J=12.31Hz,1 H)2.15(d,J=14.07Hz,2 H)1.96-1.78(m,2 H)。
3-溴-5-(1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基)吡嗪-2-胺及4-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲酯之合成
根據流程10中之步驟1-3，使用5-溴吡嗪-2-胺及N-Boc-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸酯，獲得4-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯。LCMS(m/z)：301.0/303.0(MH+-tBu),0.875min。
步驟1. 3-溴-5-(哌啶-4-基)吡嗪-2-胺
向4-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(70mg，0.196 mmol)於DCM(4mL)中之溶液中添加TFA(1mL，12.98mmol)。反應混合物在室溫下攪拌45分鐘。在添加甲苯之後，蒸發揮發性材料，生成3-溴-5-(哌啶-4-基)吡嗪-2-胺。粗產物直接用於下一反應(99%)。LCMS(m/z)：257.0/259.0(MH+),0.329min。
步驟2. 3-溴-5-(1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基)吡嗪-2-胺
在冰浴中向含3-溴-5-(哌啶-4-基)吡嗪-2-胺(50mg，0.194mmol)之DCM(2mL)中添加DIEA(340μl，1.945mmol)及甲烷磺醯氯(16.67μl，0.214mmol)。反應混合物攪拌60分鐘。反應混合物用DCM萃取。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中蒸發。(30mg，46%)。LCMS(m/z)：335.2/337.2(MH+),0.572min。
步驟3. 4-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲酯
在冰浴中向3-溴-5-(哌啶-4-基)吡嗪-2-胺(60mg，0.233mmol)於DCM(2mL)中之溶液中添加DIEA(408μl，2.333mmol)及氯甲酸甲酯(18.07μl，0.233mmol)。反應混合物在冰浴下攪拌30分鐘。反應混合物分配於DCM與水之間。分離有機層且用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中蒸發。粗4-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲酯用於下一步驟。LCMS(m/z)：315.0/317.0(MH+),0.647min。
實例3 4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-甲基-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲醯胺之合成
流程12
步驟1. 3-溴-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺
根據流程10中之步驟1-3，使用5-溴吡啶-2-胺，獲得3-溴-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺。LCMS(m/z)：257/259(MH+),0.38min。
步驟2. 5-(四氫-2H-哌喃-4-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)吡啶-2-胺
根據流程10中之步驟4，使用獲得之3-溴-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺，獲得5-(四氫-2H-哌喃-4-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-2-胺。LCMS(m/z)：233(MH+),0.36min。
步驟3. 4-溴-2-氟-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲醯胺
向燒瓶中饋入含4-溴-2-氟苯甲酸(180mg，0.821mmol)、嘧啶-2-基甲胺(89.6mg，0.821mmol)、DIEA(0.358mL，2.05mmol)之DMF(3mL)，且向所得溶液中添加PyBOP(513mg，0.915mmol)且所得混合物在室溫下攪拌隔夜，接著在減壓下濃縮且殘餘物用EtOAc(20mL)稀釋，用水(3 x 10mL)、鹽水(10mL)洗滌且乾燥(Na2SO4)，濃縮且殘餘物藉由矽膠急驟層析用梯度EtOAc/庚烷(0-100%)溶離來純化且獲得呈淺色固體狀之4-溴-2-氟-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲醯胺(74.5mg，29.3%)。LCMS(m/z)：310.0/312.0(MH+),0.64min。
步驟4. 4-溴-2-氟-N-甲基-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲醯胺
向燒瓶中饋入含4-溴-2-氟-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲醯胺(74.5 mg，0.24mmol)、NaH(60%分散液於礦物油中，11.5mg，0.288mmol)之DMF(2mL)，向漿料中添加碘甲烷(20μl，0.312mmol)且所得混合物在室溫下攪拌10分鐘，接著藉由水(20μl)淬滅，濃縮且粗殘餘物溶解於EtOAc中，用水及鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)，濃縮且獲得呈油狀物之4-溴-2-氟-N-甲基-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲醯胺(55.3mg，71%)。LCMS(m/z)：324.1/326.1(MH+),0.66min。
步驟5. 4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-甲基-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲醯胺
向微波反應器小瓶中饋入含5-(四氫-2H-哌喃-4-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-2-胺(39.4mg，0.13mmol)、4-溴-2-氟-N-甲基-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲醯胺(28mg，0.086mmol)、Na2CO3水溶液(2M，0.26mL)之DME(1.5mL)，且該混合物用氬氣吹掃，繼而添加肆(三苯基膦)鈀(10mg，8.6mmol)，且最終吹掃，接著密封且在微波合成器中在115℃下加熱15分鐘。收集DME層，濃縮且殘餘物經受製備型HPLC純化且組合含有最終產物之溶離份，冷凍，凍乾且獲得呈白色粉末狀之4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-甲基-N-(嘧啶-2-基甲基)苯甲醯胺之TFA鹽。LCMS(m/z)：422.2(MH+),0.49min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.81(d,J=4.9Hz,1H),8.77(d,J=4.9Hz,1H),7.95(d,J=2.2Hz,1H),7.88(d,J=2.2Hz,1H),7.80(dd,J=2.2,0.6Hz,1H),7.76(dd,J=2.2,0.6Hz,1H),7.62-7.70(m,1H),7.51-7.58(m,1H),7.45(s,1H),7.38-7.43(m,1H),7.35(dd,J=10.0,1.5Hz,1H),7.28(dd,J=7.8,1.6Hz,1H),4.99(s,1H),4.74(s,1H),3.98-4.10(m,2H),3.54(tdd,J=11.5,8.8,2.7Hz,2H),3.15-3.24(m,3H),2.78-2.93(m,1H),1.65-1.89(m,4H)。
4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)四氫-2H-硫哌喃1,1-二氧化物及4-(6-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)吡啶-3-基)四氫-2H-硫哌喃1,1-二 氧化物之合成
步驟1. 5-(3,6-二氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-2-胺
向5-溴吡啶-2-胺(344mg，1.99mmol)於DME(6mL)中之溶液中添加2-(3,6-二氫-2H-硫哌喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(300mg，1.33mmol)及碳酸鈉(1.99mL，3.98mmol)。該混合物用氮氣吹掃持續5分鐘，且繼而添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2(108mg，0.13mmol)。所得混合物在油浴中加熱至115℃持續5小時。反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用水、鹽水洗滌，乾燥且濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析(ISCO)用0-90%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化，生成溶離份，組合且濃縮，生成呈棕色固體狀之5-(3,6-二氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-2-胺(120mg，47%)。LCMS(m/z)：193(MH+),0.44min。
步驟2. 5-(四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-2-胺
5-(3,6-二氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-2-胺(260mg，1.35mmol)、Pd/C(36mg，0.33mmol)於甲醇(16mL)中之懸浮液在氫氣下在環境溫度下攪拌16小時。反應混合物用DCM稀釋(80mL)，且經矽藻土過濾。濃縮濾液，生成呈黃色固體狀之5-(四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-2- 胺(240mg，91%產率)。LCMS(m/z)：195(MH+),0.46min。
步驟3. 4-(6-胺基吡啶-3-基)四氫-2H-硫哌喃1,1-二氧化物
向5-(四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-2-胺(290mg，1.49mmol)於DCM(15mL)中之冰冷溶液中添加3-氯過氧苯甲酸(592mg，3.43mmol)。所得溶液在環境溫度下攪拌4小時。反應混合物用乙酸乙酯稀釋。所得溶液用水、飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥且濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析(ISCO)用0-100%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化，生成呈白色固體狀之4-(6-胺基吡啶-3-基)四氫-2H-硫哌喃1,1-二氧化物(140mg，41.4%)。LCMS(m/z)：227(MH+),0.25min。
步驟4. 4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)四氫-2H-硫哌喃1,1-二氧化物
向4-(6-胺基吡啶-3-基)四氫-2H-硫哌喃1,1-二氧化物(140mg，0.62mmol)於DCM(15mL)中之冰冷溶液中分兩部分添加NBS(110mg，0.62mmol)。反應混合物在0℃下攪拌20分鐘。反應溶液用乙酸乙酯稀釋，用水、飽和碳酸氫鈉水溶液、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且濃縮，生成4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)四氫-2H-硫哌喃1,1-二氧化物(190mg，0.62mmol)。LCMS(m/z)：305/307(MH+),0.33min。
步驟5. 4-(6-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)吡啶-3-基)四氫-2H-硫哌喃1,1-二氧化物
向4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)四氫-2H-硫哌喃1,1-二氧化物(190mg，0.62mmol)於1,4-二噁烷(7mL)中之懸浮液中添加雙(頻哪醇根基)二硼(474mg，1.86mmol)及乙酸鉀(305mg，3.11mmol)，且繼而添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2(61.0mg，0.075mmol)。反應混合物在油浴中加熱至100℃持續16小時。反應混合物用乙酸乙酯稀釋且經中性氧化鋁(5g)過濾。濾液再次經矽藻土再過濾。濃縮濾液且殘餘物用庚烷濕磨，且過濾，生成4-(6-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-3-基)四氫-2H-硫哌喃1,1-二氧化物(140mg，64%產率)。 LCMS(m/z)：271(MH+),0.15min。
3-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)吡咯啶-1-甲酸甲酯之合成
步驟1. 3-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯
在N2下向烘箱乾燥之燒瓶中添加3-側氧基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2g，10.8mmol)及THF(16mL)。溶液在丙酮冰浴(-78℃)中冷卻。向其中添加雙(三甲基矽烷基)胺化鋰(12.96mL，12.96mmol)(1M溶液於THF中)。反應混合物在-78℃下攪拌15分鐘，接著逐滴添加1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺醯基)甲烷磺醯胺(4.05g，11.34mmol)於THF(16mL)中之溶液。反應混合物攪拌30分鐘，接著溫至0℃且攪拌1.5小時。反應混合物用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅且接著用乙酸乙酯萃取。經組合之萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗產物藉由ISCO管柱(0-30% EtOAc/庚烷)來純化，提供3-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(1.9g，55.5%)。
步驟2. 3-(6-胺基吡啶-3-基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯
3-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(400mg，0.882mmol)於THF(10mL)中之溶液用N2吹掃5分鐘且接著添加碳酸鉀(610mg，4.41mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-2-胺(233mg，1.059mmol)、Pd(PPh3)4(10.20mg，8.82μmol)及水(0.1mL)。加熱反應混合物且在70℃下攪拌隔夜。反應混合物傾至飽和碳酸氫鈉溶液中且用乙醚萃取。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗產物藉由急驟層析(0-10% MeOH/DCM)來純化以生成所需產物(180mg，54.6%)。LCMS(m/z)：262.2(MH+),0.598min。
步驟3. 3-(6-胺基吡啶-3-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
在N2氛圍下向含3-(6-胺基吡啶-3-基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(180mg，0.482mmol)之MeOH(10mL)中添加Pd-C(103mg，0.096mmol)。反應混合物在室溫下在H2氣球下攪拌。2小時之後，反應混合物經矽藻土墊過濾，用甲醇洗滌且蒸發以提供所需產物，其無需純化繼續用於下一步驟(150mg，71%)。LCMS(m/z)：264.2(MH+),0.565min。
步驟4. 3-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
在冰浴中向含3-(6-胺基吡啶-3-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(60mg，0.228mmol)之乙腈(4mL)添加NBS(36.5mg，0.205mmol)且攪拌。30分鐘後，LCMS顯示起始材料與所需產物之約1：1混合物。向其中添加12mg(0.3eq)NBS且攪拌30分鐘。LCMS顯示完全反應。向反應混合物中添加飽和NaHCO3水溶液，攪拌10分鐘且用乙酸乙酯萃取。經組合之萃取物經硫酸鈉乾燥，過濾，且蒸發。粗產物無需純化即用於下一步驟(65mg，83%)。LCMS(m/z)：342.1/344.1(MH+),0.624min。
步驟5. 3-溴-5-(吡咯啶-3-基)吡啶-2-胺
向含3-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(65mg，0.171mmol)之DCM(2.4mL)中添加TFA(0.6mL，7.79mmol)。反應混合物在室溫下攪拌45分鐘。在用甲苯稀釋後，反應混合物在真空中蒸發。粗產物無需純化即用於下一步驟。粗物質產率為定量的。LCMS(m/z)：242.1/244.1(MH+),0.214min。
步驟6. 3-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)吡咯啶-1-甲酸甲酯
在冰浴中向含3-溴-5-(吡咯啶-3-基)吡啶-2-胺(20mg，0.083mmol)之DCM中添加DIEA(43.3μl，0.248mmol)及氯甲酸甲酯(6.40μl，0.083mmol)。反應混合物在冰浴中攪拌30分鐘。反應混合物分配於DCM與水之間。分離DCM層且用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，且蒸發。粗產物無需純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：300.0,302.0(MH+),0.421min。
步驟7. 3-溴-5-(1-(甲基磺醯基)吡咯啶-3-基)吡啶-2-胺
在冰浴中向含3-溴-5-(吡咯啶-3-基)吡啶-2-胺(20mg，0.083mmol)之DCM中添加DIEA(57.7μl，0.330mmol)及甲烷磺醯氯(7.08μl，0.091mmol)。反應混合物在冰浴中攪拌30分鐘。反應混合物分配於DCM與水之間。分離DCM層且用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗產物無需純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：320.0/322.0(MH+),0.363min。
實例4、5及6 4-(2-胺基-5-(1,1-二氧離子基四氫噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺、(S)-4-(2-胺基-5-(1,1-二氧離子基四氫噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺及(R)-4-(2-胺基-5-(1,1-二氧離子基四氫噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺之合成
流程15
步驟1. 三氟甲烷磺酸4,5-二氫噻吩-3-基酯
經3分鐘向新鮮製備之在-75至-65℃之間之LDA(10.5mmol於40mL THF中)中逐滴添加二氫噻吩-3-(2H)-酮/THF溶液(1.02g/2mL THF，10mmol)，接著所得反應混合物在-75℃下攪拌3小時，繼而經10分鐘逐滴添加N-(5-氯吡啶-2-基)-1,1,1-三氟-N-(三氟甲基磺醯基)甲烷磺醯胺/THF(4.12g，10.5mmol於5mL THF中)，接著反應混合物在-75℃下攪拌至少1小時，接著溫度逐漸溫至室溫隔夜。濃縮反應混合物，且殘餘物分配於Et2O/H2O(100mL/50mL)之間；醚層依序用水(2 x 50mL)、3M乙酸鈉pH 4.8緩衝液(2 x 50mL)、3M NaOH(2 x 50mL)洗滌，且經硫酸鎂乾燥，濃縮且獲得作為粗產物之棕色油狀物(2.05g)，其藉由矽膠急驟層析用梯度EtOAc/庚烷(0-15%)溶離來進一步純化且獲得呈無色油狀物之所需產物(0.9g，38.5%產率)。
步驟2. 5-(4,5-二氫噻吩-3-基)吡啶-2-胺
向小瓶中饋入所有試劑：三氟甲烷磺酸4,5-二氫噻吩-3-基酯(900mg，3.84mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-2-胺 (1.69g，7.69mmol)、K3PO4(2.45g，11.5mmol)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(314mg，0.384mmol)及DME(16mL)，且該混合物用氬氣吹掃，接著密封且經由外部油浴在90℃下加熱隔夜。反應混合物冷卻至室溫，且反應混合物中之沈澱物藉由過濾移除，且濾液在減壓下濃縮且獲得作為粗產物之黑色殘餘物。粗產物溶解於EtOAc(30mL)中，用水(20mL)洗滌，且藉由過濾移除兩層之間之插塞。收集EtOAc層，用1N HCl(2 x 20mL)汽提且組合水層，用EtOAc(20mL)洗滌，用NaOH水溶液(3g於10mL水中)鹼化，用EtOAc(2 x 30mL)萃取，且組合所獲得之EtOAc萃取物，用鹽水(30mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，濃縮且獲得呈淺色固體狀之所需產物。LCMS(m/z)：179.0(MH+),0.41,0.43min(關於區位異構體)。
步驟3. 5-(四氫噻吩-3-基)吡啶-2-胺
5-(4,5-二氫噻吩-3-基)吡啶-2-胺(0.78g，4.38mmol)溶解於乙醇(30mL)中，向其中添加Pd-C(Deggussa，10%，0.233g)且該混合物在H2氣球下攪拌隔夜。藉由LCMS發現反應不完全。Pd-C催化劑藉由經矽藻土墊過濾來移除，且向濾液中添加新的Pd-C催化劑(0.24g)，且該混合物在H2氣球下在相同條件下再攪拌6小時。反應混合物經矽藻土墊過濾，且在減壓下濃縮濾液，生成呈無色油狀物之5-(四氫噻吩-3-基)吡啶-2-胺(0.661g，84%)。LCMS(m/z)：181.2(MH+),0.39min。
步驟4. 3-(6-胺基吡啶-3-基)四氫噻吩1,1-二氧化物
5-(四氫噻吩-3-基)吡啶-2-胺(0.33g，1.831mmol)溶解於CH2Cl2(15mL)中，向其中添加mCPBA(70%，0.903g，3.66mmol)且該混合物在室溫下攪拌10分鐘且反應混合物在減壓下濃縮且殘餘物分配於EtOAc/飽和NaHCO3(30mL/20mL)之間，EtOAc層用飽和Na2CO3(20mL)、鹽水(20mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾，且在真空中濃縮，生 成呈淺棕色油狀物之3-(6-胺基吡啶-3-基)四氫噻吩1,1-二氧化物(96mg，25%)。LCMS(m/z)：197.1(MH+),0.21min。
步驟5. 3-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)四氫噻吩1,1-二氧化物
3-(6-胺基吡啶-3-基)四氫噻吩1,1-二氧化物(96mg，0.452mmol)溶解於乙腈(5mL)中且溶液冷卻至0℃，向其中添加NBS(80mg，0.452mmol)且該混合物在0℃下攪拌40分鐘。反應混合物在減壓下濃縮且殘餘物分配於EtOAc/飽和NaHCO3(30mL/20mL)之間，EtOAc層用飽和Na2CO3(20mL)、鹽水(20mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾且在真空中濃縮，生成呈淺棕色油狀物之3-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)四氫噻吩1,1-二氧化物(50mg，38%產率)。LCMS(m/z)：293.0/291.0(MH+),0.29min。
步驟6. 4-(2-胺基-5-(1,1-二氧離子基四氫噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺
3-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)四氫噻吩1,1-二氧化物(50mg，0.172mmol)、4-(苯甲基胺甲醯基)-3-氟苯基酸(94mg，0.343mmol)、2M Na2CO3水溶液(0.34mL)及PdCl2(dppf)-DCM加合物(14mg)及DME(3mL)，饋入微波小瓶中且該混合物用氬氣吹掃，密封且在105℃下加熱20分鐘。收集反應混合物之DME層，在減壓下濃縮且殘餘物再溶解於EtOAc(5mL)中。EtOAc溶液用1N HCl(4 x 1mL)汽提且組合水層，用EtOAc(2 x 1mL)洗滌，接著在減壓下濃縮且殘餘物分配於EtOAc/飽和Na2CO3(5mL/1mL)之間，且EtOAc萃取物用飽和Na2CO3(2 x 1mL)、鹽水(1mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，濃縮且殘餘物再溶解於乙腈/水(6mL/6mL)中，冷凍且凍乾，生成呈淺黃色粉末狀之外消旋4-(2-胺基-5-(1,1-二氧離子基四氫噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：440.2(MH+),0.60min；1H NMR(CD3OD)δ ppm 7.97(d,J=2.0Hz,1H),7.84(t,J=7.8Hz, 1H),7.50(d,J=2.3Hz,1H),7.31-7.44(m,6H),7.22-7.30(m,1H),4.61(s,2H),3.55-3.70(m,1H),3.47(dd,J=13.3,7.0Hz,1H),3.33-3.39(m,1H),3.08-3.25(m,2H),2.53(ddd,J=13.1,7.4,5.7Hz,1H),2.18-2.40(m,1H)。外消旋產物進一步藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic OJ管柱，4.6x100(mm),5mL/min，MeOH+0.1% DEA=50%)解析，提供(S)-4-(2-胺基-5-(1,1-二氧離子基四氫噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺(Rt=1.7min)及(R)-4-(2-胺基-5-(1,1-二氧離子基四氫噻吩-3-基)吡啶-3-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺(Rt=2.22min)。絕對立體化學經任意指派。
實例7 4-(2-胺基-5-((3R,5S)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. (S)-4-側氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯
(2S,4R)-4-羥基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(10g，40.8mmol)於DCM(100mL)中之溶液冷卻至0℃，接著經20分鐘用戴斯-馬丁高碘烷(17.29g，40.8mmol)逐份處理。反應在0℃下維持1小時，且接著移除冷浴。再在室溫下3小時之後，反應物用300mL 1：1飽和 Na2SO3水溶液：飽和NaHCO3水溶液處理。反應物在室溫下劇烈攪拌隔夜，接著分離各層。有機物用水及鹽水洗滌，接著經硫酸鎂乾燥且濃縮。所得混合物在DCM(20mL)中成漿，接著經矽藻土過濾。濃縮有機物。粗油狀物進一步藉由自顆粒狀固體直接過濾來純化以提供(S)-4-側氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(8.53g，87%產率)。LCMS(m/z)：244.3(MH+),0.42min。
步驟2. 4-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸1-第三丁基2-甲酯
(S)-4-側氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(2.9g，11.92mmol)於THF(30mL)中之溶液冷卻至-78℃，接著用含1.0M LiHMDS之THF(14.31mL，14.31mmol)處理。反應在-78℃下維持1小時，接著用N-(5-氯吡啶-2-基)-1,1,1-三氟-N-((三氟甲基)磺醯基)甲烷磺醯胺(5.62g，14.31mmol)於THF(15mL)中之溶液處理。反應在-78℃下維持1小時，且接著置於-30℃冰箱中隔夜。在完成時，反應物用水淬滅，且用乙醚稀釋。有機物用1N NaOH水溶液(40mL)洗滌，接著經硫酸鎂乾燥且濃縮。殘餘物溶解於氯仿(40mL)中且冷卻至0℃持續30分鐘。所得漿液濃縮至約8mL總體積，接著黏性材料經過濾且濃縮以提供(S)-4-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(4.4g，98%產率)。LCMS(m/z)：376.4(MH+),0.64min。
步驟3. (S)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸1-第三丁基2-甲酯
(S)-4-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(1.55g，4.13mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-2-胺(1.00g，4.54mmol)、Pd(PPh3)4(0.239g，0.21mmol)及Cs2CO3(3.36g，10.32mmol)於THF(10mL)及水(2mL)中之混合物 經微波加熱至100℃持續10分鐘。反應物接著用乙酸乙酯(50mL)及水(25mL)稀釋。分離各層且有機物用水(25mL)及鹽水(25mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥且濃縮，接著藉由急驟層析[0-8%甲醇/DCM溶離劑]純化以提供(S)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(0.955g，72%產率)。LCMS(m/z)：320.4(MH+),0.50min。
步驟4. (2S,4R)-4-(6-胺基吡啶-3-基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯
(S)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(0.955g，2.99mmol)於甲醇(30mL)中之脫氣溶液用10% Pd/C(0.183g，0.172mmol)處理，接著在氫氣氛圍下維持3小時。在完成時，反應物接著經矽藻土墊過濾且濃縮以提供(2S,4R)-4-(6-胺基吡啶-3-基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(0.95g，99%產率)。LCMS(m/z)：322.5(MH+),0.52min。
步驟5. (2S,4R)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-2-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
向(2S,4R)-4-(6-胺基吡啶-3-基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(250mg，0.778mmol)於2-甲基THF(18mL)中之溶液中添加LiAlH4(59mg，1.56mmol)。15分鐘之後，反應物藉由依序添加水(60μL)、1N NaOH水溶液(60μL)及水(60μL)淬滅。該混合物劇烈攪拌5分鐘，且接著經矽藻土過濾，用2-甲基THF沖洗。濃縮有機物以提供(2S,4R)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-2-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(230mg，100%產率)。LCMS(m/z)：294.1(MH+),0.49min。
步驟6. (2S,4R)-4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
(2S,4R)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-2-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(230mg，0.784mmol)於MeCN(10mL)中之溶液用NBS(147mg， 0.823mmol)處理。10分鐘之後，反應完成。反應物用10mL 1：1飽和NaHCO3水溶液：飽和Na2S2O3水溶液處理且該混合物劇烈攪拌10分鐘。該混合物用乙酸乙酯(30mL)稀釋且分離各層。有機物用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥且濃縮以提供(2S,4R)-4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(290mg，100%產率)。LCMS(m/z)：372.1/374.0(MH+),0.55min。
步驟7. 4-(2-胺基-5-((3R,5S)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
根據流程10中之步驟5，使用(2S,4R)-4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯及(S)-(4-((1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)酸，獲得呈TFA鹽之(2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(30mg，35%產率。LCMS(m/z)：585.3,587.3(MH+),0.74min。接著，(2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯-TFA之溶液溶解於DCM(2mL)中且用TFA(2.0mL)處理。30分鐘之後，濃縮反應物，且接著藉由逆相製備型HPLC純化，生成呈雙TFA鹽之4-(2-胺基-5-((3R,5S)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(15.0mg，54%產率)。LCMS(m/z)：485.2,487.2(MH+),0.51min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.59(dd,J=4.50,7.24Hz,1H),7.87-7.77(m,4H),7.39-7.31(m,3H),7.29-7.24(m,2H),7.24-7.16(m,1H),5.15-5.05(m,1H),3.87-3.71(m,5H),3.70-3.60(m,2H),3.59-3.46(m,1H),2.41(td,J=6.46,12.91Hz,1H),1.98-1.82(m,1H),1.29-1.16(m,1H)。
實例8 4-(2-胺基-5-((7R,8aS)-4-側氧基六氫-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-7-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
4-(2-胺基-5-((3R,5S)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(45mg，0.063mmol)(參見實例7)及氯乙酸(7.2mg，0.076mmol)於THF(2.5mL)中之溶液用HATU(36mg，0.095mmol)及DIEA(55μL，0.316mmol)處理。反應在室溫下維持1小時。反應混合物接著直接用NaH(15.2mg，0.631mmol)處理。15分鐘之後，反應物用水(2mL)淬滅且反應混合物用乙酸乙酯(10mL)萃取。有機物用鹽水洗滌，接著經Na2SO4乾燥，濃縮，接著藉由逆相製備型HPLC純化，生成4-(2-胺基-5-((7R,8aS)-4-側氧基六氫-1H-吡咯并[2,1-c][1,4]噁嗪-7-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(13.0mg，39%產率)。LCMS(m/z)：525.2,527.2(MH+),0.59min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.61(dd,J=4.30,7.04Hz,1H),7.91(d,J=1.96Hz,1H),7.84-7.76(m,2H),7.40-7.31(m,3H),7.30-7.24(m,2H),7.24-7.16(m,1H),5.16-5.05(m,1H),4.18-4.08(m,2H),3.99-3.85(m,2H),3.85-3.70(m,3H),3.53-3.42(m,2H),3.39-3.29(m,1H),2.34-2.19(m,1H),1.67(q,J=11.48Hz,1H)。
實例9 4-(2-胺基-5-((6R,7aS)-3-側氧基六氫吡咯并[1,2-c]噁唑-6-基)吡啶-3- 基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
4-(2-胺基-5-((3R,5S)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(20mg，0.041mmol)(實例7)及DIEA(72μL，0.412mmol)於乙腈(0.5mL)中之溶液用羰基二咪唑(8.0mg，0.049mmol)處理。1小時之後，起始材料完全消耗。反應混合物用1.0N NaOH水溶液(1.0mL)淬滅且該混合物劇烈攪拌5分鐘，接著，用DCM(10mL)稀釋。有機物用鹽水(2mL)洗滌且經Na2SO4乾燥且濃縮。粗材料藉由逆相製備型HPLC來純化，生成4-(2-胺基-5-((6R,7aS)-3-側氧基六氫吡咯并[1,2-c]噁唑-6-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(2.0mg，7%產率)。LCMS(m/z)：511.3,513.3(MH+),0.61min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.92-7.84(m,2H),7.46(s,1H),7.44-7.40(m,1H),7.38-7.35(m,1H),7.34-7.28(m,1H),5.19(t,J=5.87Hz,1H),4.61-4.56(m,1H),4.34(dd,J=3.52,9.00Hz,1H),4.24-4.15(m,1H),3.92-3.80(m,1H),3.74-3.62(m,1H),2.41(td,J=5.72,11.64Hz,1H),1.84-1.71(m,1H)。
實例10 4-(2-胺基-5-((6R,7aS)-3-亞胺基六氫吡咯并[1,2-c]噁唑-6-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
4-(2-胺基-5-((3R,5S)-5-(羥基甲基)吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(12.5mg，0.026mmol)(實例7)及碳酸銫(33.6mg，0.103mmol)於乙醇(0.75mL)中之室溫混合物用溴化氰(6.2μL，0.031mmol)處理。1小時之後，反應物用水(1.0mL)稀釋且萃取至乙酸乙酯(10mL)中。有機物用鹽水(2mL)洗滌，接著經Na2SO4乾燥且濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化，生成4-(2-胺基-5-((6R,7aS)-3-亞胺基六氫吡咯并[1,2-c]噁唑-6-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：510.1,512.1(MH+),0.52min.1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.63-8.54(m,1H),7.92-7.85(m,2H),7.80(t,J=7.83Hz,1H),7.40-7.31(m,3H),7.29-7.24(m,2H),7.24-7.16(m,1H),5.14-5.06(m,1H),4.97-4.88(m,1H),4.61-4.49(m,2H),3.88-3.70(m,4H),3.32(s,1H),2.41-2.31(m,1H),2.02-1.89(m,1H)。
實例11 4-(2-胺基-5-((6R,7aS)-3-硫酮基六氫吡咯并[1,2-c]噁唑-6-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
流程20
向(2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(45mg，0.063mmol)(參見實例7)於乙腈(0.75mL)及DMF(0.5mL)中之溶液中添加DIEA(42μL，0.240mmol)及硫羰基二咪唑(15.6mg，0.088mmol)。2小時之後，反應物用1N NaOH水溶液(1mL)淬滅且劇烈攪拌以實現混合硫代胺基甲酸酯副產物之分解。反應物接著用乙酸乙酯(10mL)稀釋，用水(5mL)及鹽水(5mL)洗滌，接著經硫酸鈉乾燥且濃縮。粗材料藉由逆相製備型HPLC來純化，生成4-(2-胺基-5-((6R,7aS)-3-硫酮基六氫吡咯并[1,2-c]噁唑-6-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(3.2mg，11%產率)。LCMS(m/z)：527.3,529.3(MH+),0.67min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.64(dd,J=3.91,7.04Hz,1H),7.85(d,J=1.96Hz,2H),7.83-7.77(m,3H),7.39-7.32(m,5H),7.30-7.26(m,3H),7.25-7.19(m,2H),5.15-5.07(m,2H),4.73-4.69(m,2H),4.45-4.35(m,3H),3.85-3.65(m,8H),2.38(td,J=5.58,11.54Hz,2H),1.80-1.70(m,1H)。
5-嗎啉基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)吡啶-2-胺之合成
流程21
步驟1. (5-溴吡啶-3-基)胺基甲酸乙酯
5-溴吡啶-3-胺(20g，116mmol)溶解於DCM(500mL)中且添加吡啶(28.0mL，347mmol)，繼而逐滴添加氯甲酸乙酯(11.44mL，119mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1.5小時。反應混合物用DCM稀釋。分離兩相且有機相用10% CuSO4溶液(2x)、飽和NaHCO3溶液(1x)、鹽水(1x)洗滌，乾燥(Na2SO4)且蒸發。殘餘物用二乙醚濕磨，過濾且乾燥，獲得呈白色固體狀之(5-溴吡啶-3-基)胺基甲酸乙酯(21.58g，76%)。LCMS(m/z)：247.0(MH+),0.58min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm8.62-8.15(m,3 H)7.00(br.s.,1 H)4.27(q,J=7.0Hz,2 H)1.34(t,J=7.0Hz,3 H)。
步驟2. (5-溴-2-硝基吡啶-3-基)胺基甲酸乙酯
在0℃下向濃H2SO4(60mL，1126mmol)及發煙HNO3(40mL，895mmol)之混合物中逐份添加(5-溴吡啶-3-基)胺基甲酸乙酯(21.5g，88mmol)。在0℃下攪拌5分鐘之後，該混合物在rt下攪拌隔夜且傾至冰水上。形成碎塊且過濾且用水充分洗滌且乾燥。由此獲得呈白色固體狀之(5-溴-2-硝基吡啶-3-基)胺基甲酸乙酯(21.26g，84%)。LCMS(m/z)：290.1(MH+),0.76min.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 9.63(br.s.,1 H)9.33(d,J=2.0Hz,1 H)8.28(d,J=2.0Hz,1 H)4.32(q,J=7.3Hz,3 H)1.68(br.s.,2 H)1.38(t,J=7.0Hz,4 H)。
步驟3. 5-溴-2-硝基吡啶-3-胺
(5-溴吡啶-3-基)胺基甲酸乙酯(8g，27.6mmol)溶解於EtOH(250mL)中且溶液用冰浴冷卻至5℃。逐滴添加冷1M KOH(130mL，130mmol)，維持低於5℃。反應混合物在室溫下攪拌隔夜，在減壓下濃縮。在濃縮時，形成碎塊，其經濾出，用水洗滌且乾燥，提供5-溴-2-硝基吡啶-3-胺(5.02g，83%)。LCMS(m/z)：220.1(MH+),0.46min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm7.97(d,J=1.6Hz,1 H)7.50(d,J=2.0Hz,1 H)6.03(br.s.,2 H)。
步驟4. 5-嗎啉基-2-硝基吡啶-3-胺
5-溴-2-硝基吡啶-3-胺(2.32g，10.6mmol)懸浮於嗎啉(5mL，57.4mmol)中且溶液在140℃下加熱1小時。反應混合物冷卻至室溫且固體碎塊用水濕磨且過濾。由此獲得之固體用水、EtOH洗滌，且乾燥，獲得呈亮黃色粉末狀之5-嗎啉基-2-硝基吡啶-3-胺(2.0g，8.92mmol，84%)。視前一步驟之結果而定，此固體仍可含有來自前一步驟之乙氧基衍生物，且兩種化合物可藉由矽膠管柱層析(analogix，20% EtOAc/庚烷持續2分鐘，至100% EtOAc至15分鐘，接著100% EtOAc至20分鐘)分離。LCMS(m/z)：225.1(MH+),0.43min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 10.54(s,1 H)8.57(d,J=2.7Hz,1 H)7.85(d,J=2.7Hz,1 H)7.70(d,J=2.3Hz,1 H)6.32(d,J=2.3Hz,1 H)6.00(br.s.,1 H)3.93-3.83(m,7 H)3.83-3.74(m,3 H)3.63-3.55(m,3 H)3.51-3.43(m,3 H)3.41-3.31(m,4 H)。
步驟5. 4-(5-溴-6-硝基吡啶-3-基)嗎啉
向配備有磁攪拌棒、滴液漏斗及溫度計之三頸圓底燒瓶中饋入CuBr(629mg，4.4mmol)及HBr(25mL)。溶液冷卻至-5℃(冰鹽浴)。緩慢添加固體5-嗎啉基-2-硝基吡啶-3-胺(983mg，4.4mmol)，繼而經由滴液漏斗緩慢添加含NaNO2(333mg，4.8mmol)溶液之H2O(25 mL)，確保溫度不會升至0℃以上。反應混合物在-5℃下攪拌1小時，溫至室溫且再攪拌1.5小時。藉由LCMS確認反應完成且該混合物再冷卻至0℃，用6N NaOH淬滅至pH 12，用水稀釋且用EtOAc萃取。EtOAc用水(x2)、鹽水(x1)洗滌，乾燥且濃縮。殘餘物與EtOH共沸，在高真空下乾燥，獲得呈淺黃色固體狀之4-(5-溴-6-硝基吡啶-3-基)嗎啉(1.21g，4.20mmol，96%產率)。LCMS(m/z)：288.2(MH+),0.65min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.08-7.99(d,J=2.3Hz,1 H)7.41(d,J=2.3Hz,1 H)3.98-3.81(m,4 H)3.45-3.30(m,4 H)。
步驟6. 3-溴-5-嗎啉基吡啶-2-胺
4-(5-溴-6-硝基吡啶-3-基)嗎啉(95mg，0.33mmol)溶解於EtOH(12mL)中且添加水(3.0mL)，繼而添加SnCl2(313mg，1.65mmol)。反應混合物加熱至80℃持續2小時，冷卻至室溫且用DCM稀釋。分離兩相，有機相用水洗滌。水相用DCM反萃取。pH用6N NaOH調節至12且該混合物進一步用DCM萃取。組合有機萃取物，乾燥(Na2SO4)且在減壓下蒸發，獲得所需3-溴-5-嗎啉基吡啶-2-胺(71.5mg，84%)。LCMS(m/z)：260.0(MH+),0.37min。
替代方法
向圓底燒瓶中4-(5-溴-6-硝基吡啶-3-基)嗎啉(2g，6.9mmol)於MeOH(150mL)中之溶液中添加Zn塵(4.54g，69.4mmol)。反應混合物冷卻至0℃。經5分鐘分成數份添加固體NH4Cl(3.71g，69.4mmol)。異質反應混合物在室溫下攪拌2小時，經矽藻土插塞過濾，用甲醇及乙醇洗滌濾餅。濃縮濾液至帶棕色固體，其藉由矽膠急驟管柱層析(ISCO，80g管柱，在15分鐘內0-70% EtOAc/庚烷且70% EtOAc至25分鐘)純化，獲得呈略微灰白色固體狀之3-溴-5-嗎啉基吡啶-2-胺(936mg，52.2%)。LCMS(m/z)：258.2(MH+),0.35min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.75(d,J=2.3Hz,1 H)7.40-7.30(m,1 H)4.66(br.s.,2 H)3.91-3.74(m,4 H)3.07-2.90(m,4 H)。
步驟7. 5-嗎啉基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)吡啶-2-胺
3-溴-5-嗎啉基吡啶-2-胺(36mg，0.14mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(70.8mg，0.28mmol)、乙酸鉀(41.1mg，0.42mmol)及三環己基膦(5.9mg，0.021mmol)溶解於壓力容器中之1,4-二噁烷(1.5mL)中。該混合物用N2充氣持續5分鐘且添加二乙酸鈀(3.1mg，0.014mmol)。反應混合物加熱至110℃持續16小時，冷卻至室溫且用乙酸乙酯稀釋。添加SyliaBondDMT，該混合物攪拌1小時，經矽藻土墊過濾且濃縮，獲得21.3mg固體，其含有所需5-嗎啉基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-2-胺。此固體無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：224.0(MH+),0.33min(關於酸)。
3-溴-5-((2R,4R)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺及3-溴-5-((2S,4S)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺之合成
步驟1. 三氟甲烷磺酸2-甲基-3,6-二氫-2H-哌喃-4-基酯
在-78℃下向2-甲基二氫-2H-哌喃-4(3H)-酮(2g，17.52mmol)於 THF(8.76mL)中之溶液中逐滴添加LiHMDS(18.40mL，18.40mmol)。反應混合物在-78℃下攪拌1.5小時，接著在-78℃下添加含N-(5-氯吡啶-2-基)-1,1,1-三氟-N-((三氟甲基)磺醯基)甲烷磺醯胺(7.22g，18.40mmol)之THF(17mL)。該混合物在-78℃下攪拌1小時，且接著使其溫至室溫且攪拌隔夜。反應藉由TLC監測。在用飽和NaHCO3淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取3次。經組合之有機層用水、鹽水洗滌，且經無水硫酸鈉乾燥。過濾且在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析用30% EtOAc/庚烷溶離，獲得呈棕色油狀物之所需化合物(4.2g，17.06mmol)。
步驟2. 5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)吡嗪-2-胺
在脫氣之後即刻向5-溴吡嗪-2-胺(1g，5.75mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(2.92g，11.49mmol)及PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(0.469g，0.575mmol)於二噁烷(16.42mL)中之溶液中添加乙酸鉀(1.692g，17.24mmol)。反應混合物在微波中在120℃下加熱20分鐘。用EtOAc稀釋，且反應混合物經矽藻土過濾。濃縮，且粗產物無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：140(MH+關於酸)，0.12min。
步驟3. 5-(2-甲基-3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺
向三氟甲烷磺酸2-甲基-3,6-二氫-2H-哌喃-4-基酯(0.637g，2.88mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡嗪-2-胺(0.914g，3.74mmol)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.235g，0.288mmol)於DME(9.82mL)中之溶液中添加2M Na2CO3(3.27mL)。反應混合物在微波合成器(120℃，10min)處加熱。添加乙酸乙酯，且用飽和NaHCO3及水洗滌。接著所需化合物萃取至1N HCl水層中，且用EtOAc洗滌。用2N NaOH鹼化，且產物萃取至EtOAc層中。EtOAc有機層用水洗滌且經Na2SO4乾燥。過濾且濃縮以提供250mg所需化合物。LCMS(m/z)：192.2(MH+),0.40min。
步驟4. 5-((2R,4R)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺
向5-(2-甲基-3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺(250mg，1.307mmol)於MeOH(13.100mL)中之溶液中添加Pd/C(278mg，0.261mmol)。溶液藉由N2流脫氣10分鐘。在藉由H2氣體沖洗之後，配備氫氣球。反應混合物攪拌25小時。在經矽藻土過濾之後，移除揮發性材料，生成粗產物，其藉由急驟層析用0-10% MeOH/DCM溶離來純化以提供180mg非對映異構體。接著對掌性分離(ChiralPak 5mic AD管柱，4.6x100(mm),5mL/min,EtOH+0.1% DEA=15%)以22%產率提供40mg 5-((2R,4R)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺(Rt=1.32min；LCMS(m/z)：194.2(MH+),0.44min)且以16%產率提供30mg所需5-((2S,4S)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺(Rt=1.83min；LCMS(m/z)：194.2(MH+),0.44min)。
步驟5. 3-溴-5-((2R,4R)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺及3-溴-5-((2S,4S)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺
在0℃下向5-((2R,4R)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺(40mg，0.207mmol)於乙腈(3mL)中之溶液中添加NBS(35.0mg，0.197mmol)。反應混合物在0℃下攪拌15分鐘。在用NaHCO3淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取三次。組合有機層且用水及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，提供47mg 3-溴-5-((2R,4R)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺，其按原樣使用。LCMS(m/z)：274(MH+),0.64min。關於5-((2S,4S)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺，根據上述方法，獲得3-溴-5-((2S,4S)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺。LCMS(m/z)：274(MH+),0.65分鐘。產物之絕對立體化學經任意指派。
3-溴-5-環丙基吡嗪-2-胺之合成
流程23
步驟1. 5-環丙基吡嗪-2-胺
向微波小瓶中饋入5-溴吡嗪-2-胺(400mg，2.3mmol)、2-環丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(1.16g，6.9mmol)、KOt-Bu(1M於t-BuOH中，9.2mL)、1,4-二噁烷(10mL)及水(0.10mL)，且該混合物用氬氣吹掃，繼而添加Palladium tetrakis(266mg，0.23mmol)且最終用氬氣吹掃，接著密封該混合物且經微波反應器在150℃下加熱20分鐘。向反應混合物中添加第二部分之Palladium Tetrakis(266mg)且反應物經微波反應器在160℃下加熱20分鐘。反應混合物經矽藻土薄層過濾，且濃縮濾液。殘餘物用EtOAc(6mL)濕磨，且沈澱物經離心及過濾移除。EtOAc上清液用TFA水溶液(3 x 3mL，TFA/水-1mL/10mL)反萃取。組合TFA溶液，用乙腈(10mL)稀釋，冷凍且凍乾以提供呈黃色粉末狀之5-環丙基吡嗪-2-胺。產物在凍乾後轉移至小瓶，用飽和Na2CO3(3mL)鹼化至pH>12，用EtOAc(4 x 6mL)萃取且組合EtOAc萃取物，且濃縮且進一步在高真空下乾燥，且獲得最終5-環丙基吡嗪-2-胺游離鹼(79mg，25.4%產率)。LCMS(m/z)：136.1(MH+),0.30min.1H NMR(CD3OD)δ ppm 8.29(d,J=1.2Hz,1H),7.70(d,J=1.6Hz,1H),2.00-2.08(m,1H),0.94-1.00(m,2H),0.87-0.93(m,2H)。
步驟2. 3-溴-5-環丙基吡嗪-2-胺
5-環丙基吡嗪-2-胺(79mg，0.584mmol)於乙腈(10mL)中之溶液冷卻至0℃，且藉由經1小時之過程逐漸添加NBS(140mg，1.46mmol)來處理，同時藉由LCMS密切監測反應進展。濃縮反應混合物且殘餘物用EtOAc(2 x 5mL)濕磨且經離心分離EtOAc上清液，組合 且用1N NaOH(3 x 1mL)洗滌且乾燥EtOAc層(經Na2SO4)，濃縮且獲得粗棕色殘餘物。粗產物進一步藉由矽膠急驟層析用梯度EtOAc/CH2Cl2(0-30%)溶離來純化，提供呈無色固體狀之3-溴-5-環丙基吡嗪-2-胺(38.2mg，38.5%產率)。LCMS(m/z)：214.0/216.0(MH+),0.64min。
3'-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)-[3,4'-聯吡啶]-6-胺之合成
步驟1. 3'-甲基-3,4'-聯吡啶-6-胺
向(2g，9.09mmol)於DME(45.4mL)中之溶液中添加4-氯-3-甲基吡啶(1.739g，13.63mmol)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.742g，0.909mmol)及2M Na2CO3(15.15mL)，混合物用氮氣吹掃5分鐘。密封玻璃彈形容器中之反應混合物加熱至120℃隔夜。反應混合物藉由EtOAc萃取，有機層且用鹽水、水洗滌。有機物藉由無水Na2SO4乾燥，過濾且濃縮以生成粗產物。粗材料藉由急驟層析(0-100% EtOAc/庚烷)來純化以生成3'-甲基-3,4'-聯吡啶-6-胺(255mg，1.377mmol，15.15%產率)。LCMS(m/z)：406.3(MH+),0.47min
步驟2. 5-溴-3'-甲基-3,4'-聯吡啶-6-胺
向3'-甲基-3,4'-聯吡啶-6-胺(250mg，1.350mmol)於DCM(4499μL)中之冰冷溶液中分兩部分添加NBS(264mg，1.485mmol)。反應混合物在0℃下攪拌2小時。反應混合物用乙酸乙酯稀釋，且用水、鹽水洗滌，乾燥且濃縮。殘餘物用庚烷處理，過濾固體，生成呈棕色固 體狀之5-溴-3'-甲基-3,4，-聯吡啶-6-胺(350mg，1.325mmol，98%產率)，無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：264.4/266.4(MH+),0.32min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.51(s,1 H),8.47(d,J=5.1Hz,1 H),8.04(d,J=2.0Hz,1 H),7.69(d,J=2.0Hz,1 H),7.12(d,J=5.1Hz,1 H),5.06(br.s.,2 H),2.32(s,3 H)。
步驟3. 3'-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)-3,4'-聯吡啶-6-胺
向(5-溴-3'-甲基-3,4'-聯吡啶-6-胺(100mg，0.379mmol)於1,4-二噁烷(947μL)中之懸浮液中添加bispinB(288mg，1.136mmol)及乙酸鉀(186mg，1.893mmol)。混合物用氮氣吹掃3分鐘，接著添加PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(30.9mg，0.038mmol)。反應混合物在微波中加熱至120℃持續10分鐘。確認所需產物之形成。仍有一些起始材料，再提交用於微波120℃持續10分鐘。反應混合物經過濾器過濾且用二噁烷(0.7mL)沖洗，濾液溶液無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：230.1(MH+關於酸)，0.22min。
1-(4-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-1-基)乙酮之合成
在冰浴中向含3-溴-5-(哌啶-4-基)吡嗪-2-胺(50mg，0.194mmol)之DCM(4mL)添加DIEA(0.136mL，0.778mmol)及乙醯氯(0.017mL，0.233mmol)。反應混合物在冰浴中攪拌30分鐘。反應混合物分配於DCM與水之間。分離DCM層且用鹽水洗滌。經硫酸鈉乾燥，過 濾且蒸發。繼續用於下一步驟。LCMS(m/z)：299.1/301.1(MH+),0.508min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.81-7.69(m,2 H),7.62-7.45(m,2 H),7.37-7.09(m,6 H),6.5(dd,J=8.61,2.35Hz,1 H),6.50(dd,J=13.50,2.15Hz,1 H),5.17-5.01(m,1 H),4.55(d,J=13.30Hz,1 H),3.94(d,J=13.69Hz,1 H),3.83-3.63(m,2 H),2.88(tt,J=11.84,3.62Hz,1 H),2.67(td,J=12.91,2.35Hz,1 H),2.03(s,3 H),1.96-1.79(m,2 H),1.78-1.50(m,2 H)。
3-溴-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺之合成
步驟1. 5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺
向微波小瓶中饋入5-溴吡啶-2-胺(500mg，2.89mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1H-吡唑(1.2g，5.78mmol)、Na2CO3水溶液(2M，5.78mL)、PdCl2(dppf)CH2Cl2(0.236g)及DME(15mL)，且反應混合物用氬氣吹掃5分鐘，密封且用微波反應器在115℃下加熱20分鐘。收集反應混合物之DME層，濃縮且殘餘物經受矽膠急驟管柱層析用梯度甲醇/CH2Cl2溶離且獲得呈淺棕色固體狀之5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺(383mg，76%產率)。LCMS(m/z)：175.2(MH+),0.34min。
步驟2. 3-溴-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺
在0℃下向5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺(380mg，2.18mmol)於乙腈(30mL)中之溶液中添加NBS(388mg，2.18mmol)且反應混合物在0℃下攪拌30分鐘，接著在室溫下再攪拌40分鐘。反應 混合物接著濃縮，再溶解於甲醇中，向其中添加固體LiOH(80mg)，音波處理且濃縮，殘餘物用水(2 x 5mL)濕磨，且棄去上清液。殘餘物在高真空下乾燥，接著用EtOAc(2 x 8mL)濕磨，且收集上清液，組合，且濃縮且獲得作為粗3-溴-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺之淺棕色殘餘物。LCMS(m/z)：253.0/255.0(MH+),0.38min。
(S)-4-(2-胺基-4-氟-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺之合成
步驟1. 5-溴-4-氟吡啶-2-胺
在0℃下分三部分向4-氟吡啶-2-胺(400mg，3.57mmol)於乙腈(35.7mL)中之溶液中添加NBS(648mg，3.64mmol)。反應混合物在0℃下攪拌20分鐘。LCMS顯示反應完成。在用飽和Na2S2O3及NaHCO3淬滅之後，攪拌30分鐘。反應混合物用EtOAc萃取3次。藉由飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌。乾燥且濃縮。粗材料用乙醚濕磨且無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：192.9(MH+),0.32min。
步驟2. 4-氟-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺
向5-溴-4-氟吡啶-2-胺(369mg，1.932mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1H-吡唑(603mg，2.90mmol)、PdCl2(dppf)DCM(141mg，0.193mmol)及DME(9.660μL)之反應混合物中添加2M Na2CO3(3.220mL)。反應混合物在微波合成器處(120℃，12min)加熱。向反應混合物中添加無水硫酸鈉，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離來純化 以提供280mg所需產物，75%產率。LCMS(m/z)：193.1(MH+),0.35min。
步驟3. 3-溴-4-氟-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺
在0℃下分三部分向4-氟-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺(150mg，0.780mmol)於乙腈(7.805mL)中之溶液中添加NBS(142mg，0.796mmol)。反應混合物在0℃下攪拌20分鐘。LCMS顯示反應完成。在用飽和Na2SO3及NaHCO3淬滅之後，攪拌30min。反應混合物用EtOAc萃取3次。濾出固體。固體不為所需產物。EtOAc層藉由飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌。乾燥且濃縮。粗材料藉由急驟層析用0-100% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離來純化以提供30mg所需產物。LCMS(m/z)：273.1(MH+),0.46min。
(+/-)-(1S,3R)-3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)環戊醇、(+/-)-(1R,3R)-3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)環戊醇及(+/-)-3-溴-5-((1R,3R)-3-甲氧基環戊基)吡嗪-2-胺之合成
步驟1. 3-溴環戊-2-烯酮
在0℃下向PPh3(44.1g，168mmol)於苯(510mL)中之溶液中逐滴添加Br2(8.67mL，168mmol)，溶液變為黃色懸浮液，接著緩慢添加TEA(23.44mL，168mmol)。向該混合物中添加含環戊烷-1,3-二酮(15g，153mmol)之苯(100mL)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。添加醚200mL，反應混合物接著過濾。濃縮濾液，殘餘物用Et2O處理，過濾固體，再重複一次。粗產物用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：160.9(MH+),0.35min。
步驟2. 3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)環戊-2-烯酮
向3-溴環戊-2-烯酮(13g，81mmol)於二噁烷(161mL)中之溶液中添加B2(PIN)2(41.0g，161mmol)及PdCl2(dppf)CH2Cl2(2.95g，4.04mmol)。反應混合物藉由N2鼓泡脫氣15分鐘。接著添加KOAc(23.77g，242mmol)。反應混合物在90℃下加熱隔夜。在冷卻之後，反應混合物經燒結玻璃過濾器過濾且用二噁烷(160mL)沖洗，在真空中濃縮濾液，生成粗3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)環戊-2-烯酮，其無需純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：126.9(MH+),0.17min。
步驟3. 3-(5-胺基吡嗪-2-基)環戊-2-烯酮
向3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)環戊-2-烯酮(2.99g，14.37mmol)(來自最後一個步驟之濾液)中添加2-胺基-5溴吡嗪(2.5g，14.37mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(1.173g，1.437mmol)、Na2CO3(7.61g，71.8mmol)及水(17.96mL)，反應混合物在100℃油浴中攪拌 隔夜，經矽藻土過濾。反應混合物接著藉由EtOAc萃取。有機物接著使用3N HCl(20mL)洗滌2次，且使用水50mL洗滌一次，AQ接著藉由NaOH中和至pH=8，反應混合物接著藉由CHCl3/IPA(7：3)萃取3次，有機物乾燥且濃縮且按原樣使用。LCMS(m/z)：176.1(MH+),0.32min。
步驟4. (5-(3-側氧基環戊-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯
向3-(5-胺基吡嗪-2-基)環戊-2-烯酮(500mg，2.85mmol)於DCM(9.5mL)中之溶液中添加BOc2O(1988μl，8.56mmol)及DMAP(523mg，4.28mmol)，反應混合物為暗溶液，反應混合物在室溫下攪拌5小時。濃縮反應混合物且藉由急驟層析(0-40% EtOAc/庚烷)純化，生成(5-(3-側氧基環戊-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯，47%產率。LCMS(m/z)：376.2(MH+)0.96min。1H NMR(400MHzCDCl3)δ ppm 8.77(d,J=1.2Hz,1 H),8.72(d,J=1.2Hz,1 H),6.89(s,1 H),3.15(td,J=2.3,4.7Hz,2 H),2.64(td,J=2.4,5.0Hz,2 H),1.45-1.37(m,18H)。
步驟5. (5-(3-側氧基環戊基)吡嗪-2-基)胺基甲酸(+/-)-N,N-二-第三丁酯
含(5-(3-側氧基環戊-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯(600mg，1.598mmol)之甲醇藉由N2吹掃10min，添加Pd/C(170mg，0.160mmol)，反應混合物再藉由N2吹掃5min，反應混合物接著用氫氣球充氣且在室溫下攪拌2小時。經矽藻土過濾，濃縮濾液，粗材料無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：378.1(MH+),0.83min。
步驟6. (5-((1R,3R)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)胺基甲酸(+/-)-N,N-二-第三丁酯及(5-((1R,3S)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)胺基甲酸(+/-)-N,N-二-第三丁酯
(5-(3-側氧基環戊基)吡嗪-2-基)胺基甲酸(+/-)-N,N-二-第三丁酯(600mg，1.590mmol)溶解於甲醇(5299μl)中，接著添加NaBH4(90mg，2.385mmol)，反應混合物在室溫下攪拌30min，添加飽和NH4Cl，反應混合物接著濃縮以移除甲醇。藉由EtOAc萃取，有機物藉由飽和NaHCO3溶液、水及鹽水洗滌，經無水Na2SO4乾燥，濃縮以生成粗產物。粗產物藉由急驟層析來純化以生成(5-((1R,3R)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)胺基甲酸(+/-)-N,N-二-第三丁酯(24.9%)。LCMS(m/z)：280.1(MH+),0.86min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.50-8.43(m,1 H),8.43-8.33(m,1 H),4.40(br.s.,1 H),3.58-3.45(m,1 H),2.36-2.17(m,2 H),2.02-1.75(m,5 H),1.50-1.39(m,18 H)。(5-((1R,3S)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)胺基甲酸(+/-)-N,N-二-第三丁酯(4%),LCMS(m/z)：380.1(MH+),0.85min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.43(d,J=1.2Hz,1 H),8.36-8.32(m,1 H),4.59(d,J=2.7Hz,1 H),3.69-3.57(m,1 H),2.37-2.13(m,2 H),2.13-2.01(m,2 H),1.93-1.68(m,2 H),1.49-1.39(m,18 H)。
步驟7. (+/-)-(1S,3R)-3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)環戊醇
向含(5-((1R,3S)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯(35mg，0.092mmol)之DCM(461μl)中添加HCl(922μl，3.69mmol)，反應混合物在室溫下攪拌隔夜且濃縮至乾，生成HCl鹽。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：180.1(MH+),0.22min。(+/-)-(1S,3R)-3-(5-胺基吡嗪-2-基)環戊醇(15mg，0.084mmol)溶解於乙腈(2mL)中，接著添加NBS(16.39mg，0.092mmol)，反應混合物在室溫下攪拌30min，添加水，反應混合物接著藉由EtOAc萃取，有機物乾燥且濃縮，粗材料用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：258.1/260.2(MH+),0.45min。根據上述方法，使用(5-((1R,3S)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)胺基甲酸(+/-)-N,N-二-第三丁酯，獲得(+/-)- (1R,3R)-3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)環戊醇。LCMS(m/z)：258.1/260.1(MH+),0.50min。
步驟8. (5-(3-甲氧基環戊基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯
向(5-(3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯之非對映異構體混合物(50mg，0.132mmol)於MeI(2.635mL)中之溶液中添加氧化銀(305mg，1.318mmol)，反應混合物在反應小瓶中封蓋且在室溫下攪拌隔夜。添加10eq氧化銀及2mL MeI，反應混合物再在室溫下攪拌一天。反應混合物經矽藻土墊過濾且用EtOAc及甲醇洗滌。在濃縮濾液之後，粗產物藉由急驟層析(0-40% EtOAc/庚烷)來純化，生成(5-((1R,3R)-3-甲氧基環戊基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯(25mg)。LCMS(m/z)：394.1(MH+),1.06min。
實例12 (+/-)-4-(3-胺基-6-((1S,3R)-3-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺之合成
流程29
步驟1. 三氟甲烷磺酸3-側氧基環己-1-烯-1-基酯
在0℃下在N2下將環己烷-1,3-二酮(8g，71.3mmol)稱量至500mL圓底燒瓶中且添加CH2Cl2(160mL)，生成透明無色漿液。添加碳酸鈉(8.32g，78mmol)且懸浮液攪拌15min。經1.2小時逐滴添加溶解於DCM(16mL)中之三氟甲烷磺酸酐(13.26mL，78mmol)，保持內部溫度低於1.9℃以避免雙-三氟甲磺酸酯形成。該混合物保持在0℃下攪 拌45min，接著在20min期間使其溫至10℃。經燒結玻璃漏斗過濾以去除Na2CO3且添加飽和NaHCO3。分離有機層且用鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥，過濾，濃縮且在減壓下乾燥以提供9.18g所需產物。LCMS(m/z)：245.1(MH+),0.81min。
步驟2. 3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)環己-2-烯酮
向4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(19.09g，75mmol)及乙酸鉀(11.07g，113mmol)之混合物中添加三氟甲烷磺酸3-側氧基環己-1-烯-1-基酯(9.18g，37.6mmol)於二噁烷(44.6mL)中之溶液。使氬氣鼓泡通過持續15min，接著添加Pd(dppf)Cl2-DCM(0.824g，1.128mmol)。整個混合物在100℃下加熱隔夜。經矽藻土過濾溶液且所有溶劑均蒸發。在高真空下乾燥以提供定量產物，其按原樣使用。LCMS(m/z)：141(MH+關於酸)，0.43min。
步驟3. 3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己-2-烯酮
在稱量3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)環己-2-烯酮(4.1g，18.46mmol)之500mL玻璃中添加5-溴吡啶-2-胺(4.15g，24.00mmol)於二噁烷(69.2mL)中之溶液，繼而添加飽和Na2CO3(23.08mL)及Pd(dppf)Cl2-DCM(1.350g，1.846mmol)。整個混合物接著藉由使Ar鼓泡通過持續15min來脫氣且回流隔夜。添加EtOAc及水，且攪拌30min。分離有機物且水層用EtOAc萃取三次。組合有機層且經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。藉由急驟層析用0-100% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離來純化以提供2g所需產物。LCMS(m/z)：190(MH+),0.42min。
步驟4. 3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己-2-烯醇
在室溫下向3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己-2-烯酮(150mg，0.793mmol)於乙醇(2643μL)中之溶液中添加氯化鈰(III)(293mg，1.189mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1h，直至所有材料溶解。反應混合 物接著冷卻至0℃且分成數份添加硼氫化鈉(45.0mg，1.189mmol)。溫至室溫持續2小時，同時攪拌反應混合物。反應混合物冷卻至0℃且緩慢添加2mL水，直至氣泡清楚地顯現且接著消失。繼續攪拌30min。接著，添加硫酸鈉且攪拌30min。過濾且在高真空下乾燥以提供149mg所需產物。LCMS(m/z)：192.1(MH+),0.46min。
步驟5. 5-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己-1-烯-1-基)吡嗪-2-胺
在0℃下向3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己-2-烯醇(149mg，0.779mmol)於DMF(5.5mL)中之溶液中添加第三丁基氯二甲基矽烷(294mg，1.95mmol))及1H-咪唑(212mg，3.12mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。在用飽和NaHCO3淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取3次。經組合之有機層經無水硫酸鈉乾燥。過濾且在真空中濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供238mg粗產物，其按原樣使用。LCMS(m/z)：306.9(MH+),1.04min。
步驟6. 5-((1R,3S)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-胺
在H2氛圍下攪拌5-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己-1-烯-1-基)吡嗪-2-胺(238mg，0.779mmol)及Pd/C(10%)(50mg，0.779mmol)於MeOH(7.79mL)中之混合物持續3h。LCMS指示約60%轉化。再添加Pd/C(20mg)且再攪拌約4小時。LCMS指示仍有少量起始材料。再添加Pd/C(20mg)且攪拌隔夜。濾出催化劑且蒸發溶劑。殘餘物藉由急驟層析用0-100% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供110mg所需順式外消旋體化合物。LCMS(m/z)：308.4(MH+),1.01min。
步驟7. 3-溴-5-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-胺
在0℃下向5-((1R,3S)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-胺(110mg，0.358mmol)於乙腈(5.50mL)中之溶液中添加NBS(66.9mg，0.376mmol)。反應混合物在0℃下攪拌15分鐘。在用飽和硫代硫酸鈉及飽和NaHCO3淬滅之後，用EtOAc萃取三次。組合有機 層且用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，提供138mg所需順式外消旋體化合物，其按原樣使用。LCMS(m/z)：388(MH+),0.72min。
步驟8. 4-(3-胺基-6-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺
向2mL MW小瓶中之3-溴-5-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-胺(68mg，0.176mmol)添加(4-(苯甲基胺甲醯基)-3-氟苯基)酸(72.1mg，0.264mmol)、PdCl2(dppf)-DCM(12.88mg，0.018mmol)、DME(1.32mL)及2M Na2CO3溶液(0.44mL)。反應混合物在微波合成器處(12min，120℃)加熱。反應混合物用EtOAc稀釋且用水洗滌三次，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離來純化以提供60mg粗順式外消旋體化合物，其無需進一步純化即用於下一反應。LCMS(m/z)：535.4(MH+),1.31min。
步驟9. 4-(3-胺基-6-((1R,3S)-3-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺
4-(3-胺基-6-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺(61mg，0.114mmol)於6N HCl(0.29mL)、THF(0.57mL)及MeOH(0.285mL)之混合物攪拌2小時。添加固體碳酸氫鈉以中和反應混合物。蒸發溶劑且25%殘餘物溶解於DMSO中，且用auto-prep純化以提供15mg呈TFA鹽之所需順式外消旋體化合物。LCMS(m/z)：421.3(MH+),0.74min.1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ ppm 7.82-7.69(m,2 H)7.62-7.45(m,2 H)7.37-7.12(m,5 H)4.52(s,2 H)3.66-3.52(m,1 H)2.75-2.60(m,1 H)2.11-2.01(m,1 H)1.97-1.70(m,3 H)1.52-1.29(m,3 H)1.24-1.08(m,1 H)。
(+/-)-3-溴-5-((1R,3S)-3-甲氧基環己基)吡嗪-2-胺之合成
步驟1. (+/-)-N,N-二-Boc-3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己-2-烯酮
向含3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己-2-烯酮(1.3g，6.87mmol)之DCM(34.0mL)中添加二碳酸二第三丁酯(4.50g，20.61mmol)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.084g，0.69mmol)且該混合物在室溫下攪拌隔夜。反應混合物用DCM稀釋且接著用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌。分離之有機層接著用硫酸鈉乾燥且濃縮。粗產物藉由急驟層析(0-50%乙酸乙酯/庚烷)來純化，生成1.3g(+/-)-N,N-二-Boc-3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己-2-烯酮。LCMS(m/z)：390.3(MH+),1.02min。
步驟2. (+/-)-N,N-二-Boc-3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己酮
(+/-)-N,N-二-Boc-3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己-2-烯酮(1.3g，3.34mmol)及Pd/C(10%)(400mg，10.57mmol)於MeOH(33.4mL)中之混合物攪拌在H2氛圍下隔夜。反應混合物經矽藻土過濾，且用MeOH及EtOAc充分洗滌。蒸發濾液，生成(+/-)-N,N-二-Boc-3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己酮，其無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：392.9(MH+),0.97min。
步驟3. (+/-)-N,N-二-Boc-(1S,3R)-3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己醇
(+/-)-N,N-二-Boc-3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己酮(600mg，1.533 mmol)溶解於EtOH(17.2mL)中，接著添加NaBH4(87mg，2.299mmol)。反應混合物在室溫下攪拌30min。在添加水以淬滅反應之後，濃縮反應混合物以移除甲醇且藉由EtOAc萃取，且有機層藉由NaHCO3溶液、水及鹽水洗滌，經無水Na2SO4乾燥，且濃縮，生成粗(+/-)-N,N-二-Boc-(1S,3R)-3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己醇(含有5%反式異構體)，無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：394.2(MH+),0.89min。
步驟4. (+/-)-N,N-二-Boc-5-((1R,3S)-3-甲氧基環己基)吡嗪-2-胺
(+/-)-N,N-二-Boc-(1S,3R)-3-(5-胺基吡嗪-2-基)環己醇(350mg，0.89mmol)、氧化銀(2.06g，8.9mmol)、乙腈(2.224mL)及碘甲烷(55.6μL，0.890mmol)之混合物攪拌隔夜。在添加EtOAc之後，過濾反應混合物。在揮發性材料蒸發之後，粗產物藉由急驟層析(0-100% EtOAc/庚烷)來純化，生成184mg(+/-)-N,N-二-Boc-5-((1R,3S)-3-甲氧基環己基)吡嗪-2-胺(184mg，0.452mmol)。LCMS(m/z)：408.3(MH+),1.10min。
步驟5. (+/-)-3-溴-5-((1R,3S)-3-甲氧基環己基)吡嗪-2-胺
向含(+/-)-N,N-二-Boc-5-((1R,3S)-3-甲氧基環己基)吡嗪-2-胺(184mg，0.452mmol)之DCM(4.515mL)中添加HCl(4M於二噁烷中)(4.515mL，18.06mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。在真空中移除揮發性材料之後，殘餘物溶解於EtOAc中。有機層藉由NaHCO3溶液、水及鹽水洗滌，經無水Na2SO4乾燥，且濃縮，以定量產率提供(+/-)-5-((1R,3S)-3-甲氧基環己基)吡嗪-2-胺。LCMS(m/z)：208(MH+),0.43min。在0℃下向(+/-)-5-((1R,3S)-3-甲氧基環己基)吡嗪-2-胺(54mg，0.261mmol)於乙腈(4.008μL)中之溶液中添加NBS(48.7mg，0.274mmol)。反應混合物在0℃下攪拌15分鐘。在用NaHCO3淬滅之後，用EtOAc萃取三次。有機層藉由水及鹽水洗滌，經無水Na2SO4乾 燥，且濃縮，以定量產率提供75mg(+/-)-3-溴-5-((1R,3S)-3-甲氧基環己基)吡嗪-2-胺。LCMS(m/z)：286(MH+),0.73min。
實例13 (+/-)-4-(3-胺基-6-(3-(甲基磺醯基)環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. (+/-)-N-(3-溴-5-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-基)特戊醯胺
特戊醯氯(71.5μL，0.569mmol)逐滴添加至(+/-)-3-溴-5-((1R,3S)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-胺(110mg，0.285mmol)及TEA(159μL，1.139mmol)於CH2Cl2(949μL)中之經攪拌、經冷卻(0℃)混合物中。紅色混合物在0℃下攪拌1h，接著在室溫下攪拌2小時。添加EtOAc及飽和NaHCO3且充分攪拌。分離有機層且水層用EtOAc充分萃取。經組合之EtOAc層用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟層析用EtOAc/庚烷溶離來純 化，生成(+/-)-N-(3-溴-5-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-基)特戊醯胺97mg，72.4%產率。LCMS(m/z)：472.3(MH+),1.19min。
步驟2. (+/-)-N-(3-溴-5-((1R,3S)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-基)特戊醯胺
(+/-)-N-(3-溴-5-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-基)特戊醯胺(97mg，0.206mmol)於6N HCl(687μL)、THF(687μL)、MeOH(687μL)中之混合物攪拌2h。LCMS指示反應完成。添加固體碳酸氫鈉以中和HCl。溶解於EtOAc及水中。分離有機層且用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮以提供72mg粗(+/-)-N-(3-溴-5-((1R,3S)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-基)特戊醯胺，98%產率。LCMS(m/z)：358.6(MH+),0.70min。
步驟3. 甲烷磺酸(+/-)-(1S,3R)-3-(6-溴-5-特戊醯胺基吡嗪-2-基)環己酯
在0℃下向(+/-)-N-(3-溴-5-((1R,3S)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-基)特戊醯胺(72mg，0.202mmol)於CH2Cl2(2021μL)之混合物中添加TEA(56.3μL，0.404mmol)及甲烷磺醯氯(18.90μL，0.243mmol)。所得混合物在室溫下攪拌3h。再添加TEA(56.3μL，0.404mmol)及甲烷磺醯氯(18.90μL，0.243mmol)，且攪拌6h。藉由添加水處理反應。有機相用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供54mg甲烷磺酸(+/-)-(1S,3R)-3-(6-溴-5-特戊醯胺基吡嗪-2-基)環己酯，61.5%產率。LCMS(m/z)：436.1(MH+),0.75min。
步驟4. 甲烷磺酸(+/-)-(1S,3R)-3-(6-(4-(苯甲基胺甲醯基)-3-氟苯基)-5-特戊醯胺基吡嗪-2-基)環己酯
向2.0mL MW小瓶中之順式外消旋體甲烷磺酸(+/-)-3-(6-溴-5-特戊醯胺基吡嗪-2-基)環己酯(54mg，0.124mmol)中添加(4-(苯甲基胺 甲醯基)-3-氟苯基)酸(50.9mg，0.186mmol)、PdCl2(dppf)(9.10mg，0.012mmol)、DME(1166μL)及2M Na2CO3溶液(389μL)。反應混合物在微波合成器處(12min，80℃)加熱。反應混合物用EtOAc稀釋且用水洗滌三次，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc(含有10% MeOH)溶離來純化以提供73mg甲烷磺酸(+/-)-(1S,3R)-3-(6-(4-(苯甲基胺甲醯基)-3-氟苯基)-5-特戊醯胺基吡嗪-2-基)環己酯，其無需進一步純化即用於下一反應。LCMS(m/z)：583.4(MH+),0.87min。
步驟5. (+/-)-N-苯甲基-2-氟-4-(6-((1R,3R)-3-(甲硫基)環己基)-3-特戊醯胺基吡嗪-2-基)苯甲醯胺
甲烷磺酸(+/-)-(1S,3R)-3-(6-(4-(苯甲基胺甲醯基)-3-氟苯基)-5-特戊醯胺基吡嗪-2-基)環己酯(25mg，0.043mmol)及甲烷硫醇鈉(24.09mg，0.344mmol)於MeOH(430μL)中之混合物在80℃下加熱2小時。移除溶劑且殘餘物藉由急驟層析用EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離來純化以提供25mg粗(+/-)-N-苯甲基-2-氟-4-(6-((1R,3R)-3-(甲硫基)環己基)-3-特戊醯胺基吡嗪-2-基)苯甲醯胺，無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：535.3(MH+),1.09min。
步驟6. (+/-)-N-苯甲基-2-氟-4-(6-((1R,3R)-3-(甲基磺醯基)環己基)-3-特戊醯胺基吡嗪-2-基)苯甲醯胺
在0℃下向含反式外消旋體(+/-)-N-苯甲基-2-氟-4-(6-((1R,3R)-3-(甲硫基)環己基)-3-特戊醯胺基吡嗪-2-基)苯甲醯胺(35mg，0.065mmol)之MeOH(327μL)中添加含臭氧(52.3mg，0.085mmol)之水(327μL)。之後反應混合物在0℃及室溫下攪拌3小時。反應混合物藉由在0℃下含2當量硫代硫酸鈉(20.70mg，0.131mmol)之2mL水淬滅。攪拌30min，且接著藉由在0℃下添加6N NaOH來鹼化。用EtOAc稀釋，且經硫酸鈉乾燥三次。接著過濾且濃縮，提供25mg(+/-)-N-苯甲基-2- 氟-4-(6-((1R,3R)-3-(甲基磺醯基)環己基)-3-特戊醯胺基吡嗪-2-基)苯甲醯胺，67.4%產率，無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：567.4(MH+),0.90min。
步驟7. (+/-)-4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-(甲基磺醯基)環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺
向含(+/-)-N-苯甲基-2-氟-4-(6-((1R,3R)-3-(甲基磺醯基)環己基)-3-特戊醯胺基吡嗪-2-基)苯甲醯胺(25mg，0.044mmol)之MeOH(221μL)中添加碳酸鉀(61.0mg，0.441mmol)。所得混合物在80℃下加熱4小時。過濾反應混合物且濃縮。用auto-prep純化以提供5.4mg(+/-)-4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-(甲基磺醯基)環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺，20.11%%產率。LCMS(m/z)：483.1(MH+),0.78min。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ ppm 8.00-7.81(m,2 H)7.76-7.56(m,2 H)7.43-7.16(m,5 H)4.65-4.55(m,2 H)3.61-3.51(m,1 H),3.46-3.36(m,2 H)2.87-2.97(m,3 H)2.61-2.48(m,1 H)2.19-1.95(m,3 H)1.92-1.78(m,3 H)。
實例14 4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺之合成
流程32
步驟1. 5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-胺
向5-溴吡嗪-2-胺(225mg，1.293mmol)中添加4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼(482mg，1.810mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(84mg，0.103mmol)、DME(3.5mL)且接著最後添加碳酸鈉2M(1.616mL，3.23mmol)。反應在120℃下經微波處理持續15min。向反應物中添加80mL DCM，用水洗滌(1x)，硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至殘餘物。粗物質藉由矽膠層析使用12g管柱(固體負載)用10-90%乙酸乙酯及庚烷溶離來純化。所需溶離份濃縮至恆定質量，生成173mg呈游離鹼形式之所需產物，原樣使用(56%產率)。LCMS(m/z)：234.2(MH+),0.43min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.01(d,J=1.2Hz,1H),7.80(d,J=1.2Hz,1H),6.33(s,2H),6.27(t,J=3.9Hz,1H),3.89(s,4H),2.52(d,J=1.6Hz,2H),2.33(br.s.,2H),1.76(t,J=6.7Hz,2H)。
步驟2. 5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-胺
向用氬氣沖洗之圓底燒瓶中的5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基) 吡嗪-2-胺(645mg，2.77mmol)中添加Pd-C 10% degaussa(294mg，0.277mmol)。接著在氬氣下用注射器添加MeOH(10mL)且接著最後添加氫氣球。將燒瓶抽真空且用氫氣再填充(6 X)。反應在室溫下在氫氣球下攪拌總計16h，繼而LCMS。反應用氬氣沖洗且添加25mL DCM。粗物質混合物經矽藻土插塞過濾，且濃縮至恆定質量，生成635mg呈游離鹼之所需產物，原樣使用(98%產率)。LCMS(m/z)：236.2(MH+),0.41min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.78(d,J=1.2Hz,1H),7.74(d,J=1.2Hz,1H),6.09(s,2H),3.85(s,4H),2.52-2.60(m,1H),1.65-1.78(m,6H),1.49-1.61(m,2H)。
步驟3. 3-溴-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-胺
經2分鐘分成數份向5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-胺(620mg，2.64mmol)中添加乙腈(20mL)且接著添加NBS(469mg，2.64mmol)。反應在室溫下攪拌20min且用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，且添加250mL乙酸乙酯。萃取水層且有機層用飽和碳酸氫鈉、水(2x)、飽和鹽溶液洗滌，接著用硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至殘餘物，生成650mg所需產物，原樣使用，(79%產率)。LCMS(m/z)：314.1/316.1(MH+),0.61min。
步驟4. 4-(3-胺基-6-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺
向3-溴-5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-胺(630mg，2.005mmol)中添加(4-(苯甲基胺甲醯基)-3-氟苯基)酸(767mg，2.81mmol)、PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(164mg，0.201mmol)、DME(9mL)且接著最後添加碳酸鈉2M(3.01mL，6.02mmol)。反應在115℃下經微波處理持續12min。向反應物中添加400mL乙酸乙酯，用水洗滌(2x)，用硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至殘餘物。粗物質藉由矽膠層析使用40g管柱用20-100%乙酸乙酯及庚烷溶離來純化。所需溶離份濃 縮至恆定質量，生成432mg呈游離鹼形式之所需產物，原樣使用，(47%產率)。LCMS(m/z)：463.2(MH+),0.82min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.94-8.81(m,1H),7.89(s,1H),7.80-7.69(m,1H),7.67-7.52(m,2H),7.33(d,J=4.3Hz,4H),7.27-7.18(m,1H),6.09(s,2H),4.49(d,J=5.9Hz,2H),3.85(s,4H),2.70-2.61(m,1H),1.84-1.67(m,6H),1.65-1.48(m,2H)。
步驟5. 4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺(170mg，0.368mmol)中添加乙腈(3mL)、水(2mL)及接著HCl 3M水溶液(0.613mL，1.838mmol)。反應物在室溫下攪拌30min，繼而LCMS。向反應物中添加200mL乙酸乙酯，用過量1M NaOH鹼化。萃取水層且有機層用水洗滌(3x)，過濾且濃縮至殘餘物，生成呈游離鹼之所需產物。假定定量產率(0.368mmol)。LCMS(m/z)：419.3(MH+),0.75min。
步驟6. 4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺(77mg，0.184mmol)中添加MeOH(3mL)，冷卻至0℃。接著添加硼氫化鈉(6.96mg，0.184mmol)。反應攪拌20min，同時使其溫至室溫，繼而LCMS。粗LCMS顯示約9：1(反式\順式)預期異構體。反應物用過量飽和氯化鈉淬滅且在室溫下攪拌1小時。接著添加150mL乙酸乙酯且用飽和碳酸氫鈉、水(2x)、飽和鹽溶液洗滌，用硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至殘餘物，生成73mg粗產物。一半(36.5mg)粗產物溶解於2.0mL DMSO中，過濾，藉由製備型HPLC純化，且凍乾，生成16.3mg呈TFA鹽之所需產物4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-羥基環己基)吡嗪 -2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺，(32%產率)。LCMS(m/z)：421.3(MH+),0.69min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.82(br.s.,1H),7.83(s,1H),7.64-7.73(m,1H),7.45-7.61(m,2H),7.25-7.31(m,4H),7.14-7.23(m,1H),4.43(d,J=5.9Hz,2H),1.66-1.91(m,3H),1.38-1.57(m,2H),1.11-1.31(m,2H)。
實例15 4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺之合成
向4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺(77mg，0.184mmol)中添加THF(3mL)，冷卻至0℃。接著添加三第二丁基硼氫化鋰1M THF(0.460mL，0.460mmol)。反應物攪拌20min，同時使其溫至室溫，繼而LCMS。粗物質LCMS顯示約大於9：1(順式/反式)預期異構體。反應物用過量5M NaOH鹼化且在室溫下攪拌1小時。接著添加150mL乙酸乙酯且用水(3x)、飽和鹽溶液洗滌，用硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至殘餘物，生成75mg產物，原樣使用。一半(36.5mg)粗產物溶解於2.0mL DMSO中，過濾，藉由製備型HPLC純化，且凍乾，生成23mg呈TFA鹽之所需產物4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺，(45%產率)。LCMS(m/z)：421.3(MH+),0.72min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.87(br.s.,1H),7.89(s,1H),7.79-7.70(m,1H),7.67-7.45(m,2H),7.33(d,J=4.3Hz,4H)，7.28-7.21(m,1H),6.06(s,2H),4.49 (d,J=5.9Hz,2H),4.30(br.s.,1H),3.84(br.s.,1H),2.01-1.84(m,2H),1.75-1.64(m,2H),1.60-1.43(m,4H)。
實例16 4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-(甲基磺醯基)環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. N-苯甲基-2-氟-4-(6-((1r,4r)-4-羥基環己基)-3-特戊醯胺基吡嗪-2-基)苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺(0.105g，0.25mmol)中添加DCM(2.5mL)、TEA(0.105mL，0.750mmol)且接著添加特戊醯氯(0.045g，0.375mmol)。反應在室溫下攪拌3h，繼而LCMS。向反應物中添加150mL乙酸乙酯，用過量飽和碳酸氫鹽鹼化。有機層用水(3x)、飽和鹽溶液洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至殘餘物，生成呈游離鹼之產物，原樣使用。假定定量產率(0.25mmol)。LCMS(m/z)：505.4(MH+),0.82min。
步驟2. 甲烷磺酸(1r,4r)-4-(6-(4-(苯甲基胺甲醯基)-3-氟苯基)-5-特戊醯胺基吡嗪-2-基)環己酯
向N-苯甲基-2-氟-4-(6-((1r,4r)-4-羥基環己基)-3-特戊醯胺基吡嗪-2-基)苯甲醯胺(125mg，0.248mmol)中添加DCM(2.5mL)、TEA(0.104mL，0.743mmol)且冷卻至0℃，接著添加甲烷磺醯氯(42.6mg，0.372mmol)。使反應溫至室溫且攪拌2h，繼而LCMS。接著添加額外TEA(0.104mL，0.743mmol)及甲烷磺醯氯(42.6mg，0.372mmol)且在室溫下再攪拌3h，總計5小時。向反應物中添加150mL乙酸乙酯，用過量飽和碳酸氫鹽鹼化。有機層用水(3x)、飽和鹽溶液洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至殘餘物，生成呈游離鹼之產物，原樣使用。假定定量產率(0.248mmol)。LCMS(m/z)：583.3(MH+),0.90min。
步驟3. N-苯甲基-2-氟-4-(6-((1s,4s)-4-(甲硫基)環己基)-3-特戊醯胺基吡嗪-2-基)苯甲醯胺
向甲烷磺酸(1r,4r)-4-(6-(4-(苯甲基胺甲醯基)-3-氟苯基)-5-特戊醯胺基吡嗪-2-基)環己酯(130mg，0.223mmol)中添加第三丁醇(3.5mL)、硫代甲醇鈉(235mg，3.35mmol)。反應物在80℃下加熱1h，繼而LCMS。使反應物冷卻。接著添加75mL乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉、水(2x)、飽和鹽溶液洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至殘餘物，生成呈游離鹼之產物，原樣使用。假定定量產率(0.223mmol)。LCMS(m/z)：535.3(MH+),1.06min。
步驟4. N-苯甲基-2-氟-4-(6-((1s,4s)-4-(甲基磺醯基)環己基)-3-特戊醯胺基吡嗪-2-基)苯甲醯胺
向N-苯甲基-2-氟-4-(6-((1s,4s)-4-(甲硫基)環己基)-3-特戊醯胺基吡嗪-2-基)苯甲醯胺(118mg，0.221mmol)中添加DCM(4mL)。接著在攪拌下在室溫下緩慢滴定mCPBA(118mg，0.527mmol)於DCM(1 mL)中之溶液，直至反應完成，繼而LCMS。接著添加75mL乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉、水(2x)、飽和鹽溶液洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至殘餘物。粗物質溶解於5mL DMSO中，過濾且藉由製備型HPLC純化。組合所需溶離份。呈乙腈/具有0.1% TFA之水中之100mL溶液形式之產物原樣用於下一步驟。假定定量產率(0.221mmol)。LCMS(m/z)：567.4(MH+),0.85min。
步驟5. 4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-(甲基磺醯基)環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺
向含N-苯甲基-2-氟-4-(6-((1s,4s)-4-(甲基磺醯基)環己基)-3-特戊醯胺基吡嗪-2-基)苯甲醯胺(120mg，0.212mmol)之具有0.1% TFA之水(60mL)及乙腈(40mL)溶液中添加濃HCl(2mL，65.8mmol)。反應在60℃下攪拌12h，繼而LCMS。粗物質凍乾至殘餘物。殘餘物溶解於DMSO中，藉由製備型HPLC純化，且凍乾，生成10.2mg呈TFA鹽之所需產物4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-(甲基磺醯基)環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺，6%總體產率。LCMS(m/z)：483.2(MH+),0.72min；1H NMR(CD3OD)δ ppm 7.80(s,1H),7.76(t,J=7.6Hz,1H),7.63(dd,J=8.2,1.6Hz,1H),7.55(dd,J=11.7,1.2Hz,1H),7.22-7.34(m,4H),7.10-7.20(m,1H),4.52(s,2H),3.12(dt,J=8.9,4.4Hz,1H),2.96(t,J=4.9Hz,1H),2.81(s,3H),2.16-2.30(m,2H),1.99-2.13(m,2H),1.86-1.96(m,2H),1.70-1.85(m,2H)。
實例17 4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-(甲基磺醯基)環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺之合成
流程35
根據流程35，使用4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺(實例15)，獲得4.5mg呈TFA鹽之所需產物4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-(甲基磺醯基)環己基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺，3%總體產率。LCMS(m/z)：483.2(MH+),0.71min；1H NMR(CD3OD)δ ppm 7.80-7.89(m,2H),7.68(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.60(dd,J=11.7,1.6Hz,1H),7.31-7.42(m,4H),7.19-7.30(m,1H),4.61(s,2H),3.05-3.15(m,1H),2.92(s,3H),2.67-2.78(m,1H),2.34(br.s.,2H),2.11(br.s.,2H),1.60-1.82(m,4H)。
實例18 N-((S)-2-胺基-1-(3-氯苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-甲氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. 4-(5-胺基吡嗪-2-基)環己酮
向5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-胺(8.68g，45.4mmol)中添加乙腈(368mL)、水(245mL)及3M HCl(76mL)。反應在室溫下攪拌30min。反應用過量1M NaOH鹼化，且接著用乙酸乙酯稀釋。分離有機層。水層用EtOAc/2-甲基THF(1：1)充分萃取三次。組合有機層且經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，生成6.91g呈游離鹼之產物。LCMS(m/z)：192.12(MH+),0.30min。
步驟2. 亞胺基二碳酸，2-(5-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯
向含4-(5-胺基吡嗪-2-基)環己酮(3.0g，15.69mmol)之DCM(105mL)中添加二碳酸二第三丁酯(10.27g，47.1mmol)及N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.192g，1.569mmol)。該混合物在室溫下攪拌隔夜。反應混合物用DCM稀釋且接著用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌。分離之有機層經硫酸鈉乾燥且濃縮。藉由急驟層析且用0-50%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化以提供2.2g所需產物。LCMS(m/z)：392.7(MH+),0.91min。
步驟3. 亞胺基二碳酸，2-(5-(4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯
亞胺基二碳酸，2-(5-(4-側氧基環已基)吡嗪-2-基)-，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯(350mg，0.894mmol)溶解於EtOH(10mL)中，接著添加NaBH4(50.7mg，1.341mmol)。反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。自TLC已知，反式與順式比率約為85：15。添加飽和NaHCO3溶液以淬滅 反應。反應混合物接著藉由EtOAc/2-甲基THF(1：1)萃取。組合有機層且經無水Na2SO4乾燥，且濃縮以生成粗產物，無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：394.3(MH+),0.89min。
步驟4. 亞胺基二碳酸，2-(5-(4-甲氧基環己基)吡嗪-2-基)-，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯
亞胺基二碳酸，2-(5-(4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯(350mg，0.890mmol)、氧化銀(1.649g，7.12mmol)、乙腈(2.22mL)及碘甲烷(1.112mL，17.79mmol)之混合物攪拌隔夜。添加EtOAc，且濾出固體。蒸發溶劑且殘餘物經由急驟層析用0-100% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供168mg所需反式化合物，46.3%產率。LCMS(m/z)：408.3(MH+),1.10min。
步驟5. 5-((1r,4r)-4-甲氧基環己基)吡嗪-2-胺
向含亞胺基二碳酸，2-(5-(4-甲氧基環己基)吡嗪-2-基)-，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯(168mg，0.412mmol)之DCM(4.123mL)中添加HCl(4M於二噁烷中)(4.123mL，16.49mmol)，反應混合物在室溫下攪拌隔夜。濃縮，且添加EtOAc。用飽和NaHCO3及水洗滌。水層用EtOAc及2-甲基THF(1：1)萃取三次。經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，提供所需反式產物。LCMS(m/z)：208(MH+),0.42min。
步驟6. 3-溴-5-((1r,4r)-4-甲氧基環己基)吡嗪-2-胺
在0℃下向5-((1r,4r)-4-甲氧基環己基)吡嗪-2-胺(92mg，0.444mmol)於乙腈(8.877mL)中之溶液中添加NBS(83mg，0.466mmol)。反應混合物在0℃下攪拌15分鐘。在用飽和Na2SO3及NaHCO3淬滅之後，用EtOAc及2-甲基THF(1：1)萃取三次。組合有機層，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，提供127mg所需反式化合物，定量產率。LCMS(m/z)：288(MH+),0.72min。
步驟7. ((S)-2-(4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-甲氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯 甲醯胺基)-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
向2mL MW小瓶中之3-溴-5-((1r,4r)-4-甲氧基環己基)吡嗪-2-胺(35mg，0.122mmol)添加(S)-(4-((2-((第三丁氧基羰基)胺基)-1-(3-氯苯基)乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)酸(64.1mg，0.147mmol)、PdCl2(dppf)(8.95mg，0.012mmol)、DME(917μL)及2M Na2CO3溶液(306μL)。反應混合物在微波合成器處(12min，120℃)加熱。反應混合物用EtOAc稀釋且用水洗滌三次，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析來純化以提供28mg所需反式產物，38.3%產率。
步驟8. N-((S)-2-胺基-1-(3-氯苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-甲氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺
((S)-2-(4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-甲氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(28mg，0.047mmol)、TFA(0.4mL，0.047mmol)及CH2Cl2(1mL)之混合物在室溫下攪拌30min。蒸發溶劑且殘餘物溶解於DMSO中，用auto-prep純化以提供15mg呈TFA鹽之所需反式產物，51.3%產率。LCMS(m/z)：498.2(MH+),0.76min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.94-7.85(m,2 H)7.70(dd,J=8.22,1.56Hz,1 H)7.62(dd,J=11.93,1.37Hz,1 H)7.55(s,1 H)7.49-7.34(m,3 H)5.49(dd,J=9.00,5.87Hz,1 H)3.53-3.41(m,2 H)3.38(s,3 H)2.70-2.59(m,2 H)2.20(d,J=9.78Hz,2 H)1.98(d,J=12.91Hz,2 H)1.65(qd,J=13.04,3.13Hz,2 H)1.41-1.27(m,2 H)。
(1s,4s)-4-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-1-甲基環己醇及(1r,4r)-4-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-1-甲基環己醇之合成
流程37
步驟1. (5-((1s,4s)-4-羥基-4-甲基環己基)吡嗪-2-基)胺基甲酸第三丁酯及(5-((1r,4r)-4-羥基-4-甲基環己基)吡嗪-2-基)胺基甲酸第三丁酯
在-78℃下含N,N-二-Boc-4-(5-胺基吡嗪-2-基)環己酮(657mg，1.678mmol)之THF(11.8mL)用用基鋰(1.469mL，2.350mmol)處理。反應在-78℃下攪拌2小時。在添加更多甲基鋰(1.469mL，2.350mmol)之後，反應混合物在-78℃下再攪拌2小時。此過程再重複一次。接著，反應混合物用甲醇及水淬滅。濃縮所得混合物且殘餘物懸浮於乙酸乙酯中。有機層用水及鹽水洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾，且濃縮。粗非對映異構體混合物藉層析(0-100%乙酸乙酯/己烷)來純化。關於(5-((1s,4s)-4-羥基-4-甲基環己基)吡嗪-2-基)胺基甲酸第三丁酯(26.7%產率)，LCMS(m/z)：308.7(MH+),0.79min。關於(5-((1r,4r)-4-羥基-4-甲基環己基)吡嗪-2-基)胺基甲酸第三丁酯(23.3%產率)，LCMS(m/z)：308.7(MH+),0.75min。
步驟2. (1s,4s)-4-(5-胺基吡嗪-2-基)-1-甲基環己醇
向含(5-((1s,4s)-4-羥基-4-甲基環己基)吡嗪-2-基)胺基甲酸第三丁酯(138mg，0.449mmol)之DCM中添加HCl(4M於二噁烷中)(4489μL，17.96mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。用EtOAc稀釋且用飽和NaHCO3洗滌。未分離，且用Na2SO4乾燥。過濾且用EtOAc洗滌。濃縮以提供93mg所需產物，定量產率。LCMS(m/z)：208(MH+), 0.41min。
步驟3. (1s,4s)-4-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-1-甲基環己醇
在0℃下向(1s,4s)-4-(5-胺基吡嗪-2-基)-1-甲基環己醇(93mg，0.449mmol)於乙腈(8974μL)中之溶液中添加NBS(80mg，0.449mmol)。反應混合物在0℃下攪拌15分鐘。在用NaHCO3淬滅之後，用EtOAc萃取三次。組合有機層且用水及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，提供100mg(1s,4s)-4-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-1-甲基環己醇，78%產率。LCMS(m/z)：288(MH+),0.60min。
步驟4. (1r,4r)-4-(5-胺基吡嗪-2-基)-1-甲基環己醇及步驟5.(1r,4r)-4-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-1-甲基環己醇
根據步驟2及3，使用(1r,4r)-4-(5-胺基吡嗪-2-基)-1-甲基環己醇，獲得(1r,4r)-4-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-1-甲基環己醇。LCMS(m/z)：288(MH+),0.57min。
實例19及20 3-(5-胺基-6-(4-(苯甲基胺甲醯基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)丙酸甲酯及4-(3-胺基-6-(3-(甲基胺基)-3-側氧基丙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺之合成
流程38
步驟1. 3-(5-胺基吡嗪-2-基)丙炔酸甲酯
向5mL微波小瓶中添加5-碘吡嗪-2-胺(100mg，0.452mmol)、丙炔酸甲酯(161μL，1.810mmol)、碳酸鉀(125mg，0.905mmol)、碘化酮(I)(3.45mg，0.018mmol)及THF(1508μL)。反應混合物在65℃下加熱2小時。反應混合物用水稀釋且用EtOAc萃取。有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中蒸發。粗產物藉由急驟層析(20% EtOAc/DCM)來純化，生成3-(5-胺基吡嗪-2-基)丙炔酸甲酯(38%)。LCMS(m/z)：178.4(MH+),0.48min。
步驟2. 3-(5-胺基吡嗪-2-基)丙酸甲酯
向3-(5-胺基吡嗪-2-基)丙炔酸甲酯(30mg，0.169mmol)於MeOH(847μL)中之溶液中添加Pd-C(36.0mg，0.034mmol)。溶液藉由N2流脫氣持續15min。在用氫氣沖洗且配備有氫氣球之後，反應混合物攪拌16小時。反應混合物經矽藻土過濾。揮發性材料在真空中移除。獲得粗3-(5-胺基吡嗪-2-基)丙酸甲酯(81%)且無需進一步純化即用於下 一步驟。LCMS(m/z)：182.1(MH+),0.31min。
步驟3. 3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸甲酯
向3-(5-胺基吡嗪-2-基)丙酸甲酯(25mg，0.138mmol)於CH3CN(690μL)中之溶液中添加NBS(24.56mg，0.138mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。在用Na2S2O3溶液淬滅之後，反應混合物與NaHCO3溶液一起攪拌20min且用EtOAc萃取。有機層用水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。獲得粗3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸甲酯(28%)。LCMS(m/z)：260.2/262.2(MH+),0.54min。
步驟4. 3-(5-胺基-6-(4-(苯甲基胺甲醯基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)丙酸甲酯
向3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸甲酯(10mg，0.038mmol)、4-(苯甲基胺甲醯基)-3-氟苯基酸(13.65mg，0.050mmol)及PdCl2(dppf)(2.81mg，3.84μmol)於DME(256μL)中之溶液中添加2M Na2CO3(3.87mL)。反應混合物在微波合成器處(120℃，10min)加熱。LCMS(m/z)：409.2(MH+關於酯)，0.75min；395.2(MH+關於極少量之酸，但與酸酯混合)，0.66min。向反應混合物中添加無水硫酸鈉，過濾且濃縮。粗產物藉由製備型HPLC來純化，凍乾，生成呈TFA鹽之3-(5-胺基-6-(4-(苯甲基胺甲醯基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)丙酸甲酯(12%)。LCMS(m/z)：409.1(MH+),0.73min；1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ ppm 7.89-7.76(m,2 H),7.69-7.61(m,1 H),7.60-7.51(m,1 H),7.42-7.28(m,5 H),7.28-7.20(m,1 H),4.64-4.55(m,2 H),3.62(s,3 H),3.06-2.93(m,2 H),2.79-2.67(m,2 H)。
步驟5. 3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸
向3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸甲酯(55mg，0.211mmol)於MeOH(961μL)及H2O(96μL)中之溶液中添加碳酸鉀(170mg，1.230mmol)。反應混合物攪拌隔夜。向反應混合物中添加無水Na2SO4。在 用EtOAc(3mL)稀釋且過濾之後，揮發性材料在真空中移除。獲得粗3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸且無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：246.0/248.0(MH+,major),0.26min。
步驟6. 3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-N-甲基丙醯胺
向3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)丙酸(32mg，0.130mmol)於DMF(1300μL)中之溶液中添加TBTU(62.6mg，0.195mmol)、DIEA(68.1μL，0.390mmol)及甲胺鹽酸鹽(9.66mg，0.143mmol)。反應混合物攪拌3小時。反應混合物用EtOAc萃取。有機層用水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。獲得粗3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-N-甲基丙醯胺(74%)且無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：259/261(MH+),0.35min。
步驟7. 4-(3-胺基-6-(3-(甲基胺基)-3-側氧基丙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺
根據流程38中之步驟4，使用3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-N-甲基丙醯胺，獲得4-(3-胺基-6-(3-(甲基胺基)-3-側氧基丙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺(244%)。LCMS(m/z)：408.1(MH+),0.51min；1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ ppm 7.89-7.78(m,2 H),7.68-7.51(m,2 H),7.41-7.29(m,4 H),7.26(d,J=7.1Hz,1 H),4.60(s,2 H),2.98(t,J=7.3Hz,2 H),2.66(s,3 H),2.57(t,J=7.3Hz,2 H)。
2-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)乙醇之合成
步驟1. 5-烯丙基吡嗪-2-胺
向5-溴吡嗪-2-胺(1.3g，7.47mmol)之溶液中添加2-烯丙基-,4,5,5- 四甲基-1,3,2-二氧硼(1.883g，11.21mmol)、PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(0.610g，0.747mmol)及CsF(3.40g，22.41mmol)，反應混合物經氮氣吹掃。反應混合物接著在油浴中在100℃下加熱3小時。反應混合物經矽藻土過濾，藉由EtOAc洗滌，濾液分配於EtOAc與水之間。有機物經無水硫酸鈉乾燥且在真空中濃縮，粗材料藉由急驟層析管柱來純化以生成5-烯丙基吡嗪-2-胺，37%產率。LCMS(m/z)：136.0(MH+),0.30min。
步驟2. 2-(5-胺基吡嗪-2-基)乙醇
含5-烯丙基吡嗪-2-胺(180mg，1.332mmol)之DCM(26.6mL)冷卻至-78℃，接著臭氧鼓泡通過持續10min，直至溶液變為藍色。接著經氮氣吹掃持續5min。緩慢添加含NaBH4(151mg，4.00mmol)之乙醇(10mL)，使反應混合物返回室溫。1小時之後，緩慢添加飽和NH4Cl，反應混合物接著藉由CHCl3/IPA(7：3)(3次)萃取，有機物經乾燥且濃縮以生成粗產物。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：140.0(MH+),0.21min。
步驟3. 2-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)乙醇
在0℃下向2-(5-胺基吡嗪-2-基)乙醇(30mg，0.216mmol)於CH3CN(719μL)中之溶液中添加NBS(38.4mg，0.216mmol)。反應混合物在0℃下攪拌30min。反應混合物藉由飽和NaHCO3淬滅，接著藉由EtOAc萃取，經組合之有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥。過濾且在真空中濃縮，生成粗2-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)乙醇，其無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：218.0/220.0(MH+),0.33min。
3-溴-5-(2-甲氧基乙基)吡嗪-2-胺之合成
流程40
步驟1. (5-烯丙基吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯
在室溫下向5-烯丙基吡嗪-2-胺(1.2g，8.88mmol)於CH2Cl2(29.6mL)中之溶液中添加Boc2O(4.07g，18.64mmol)及DMAP(1.627g，13.32mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。在用飽和NaHCO3淬滅之後，反應混合物用CH2Cl2萃取3次。經組合之有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥。過濾且在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析獲得呈白色固體狀之所需物(1.1g，37%產率)。Rf(TLC)=0.3(20% EtOAc/己烷)。LCMS(m/z)：336.2(MH+),1.04min。
步驟2. (5-(2-羥基乙基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯
(5-烯丙基吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯(1.1g，3.28mmol)於DCM(32.8mL)中之溶液冷卻至-78℃，使臭氧鼓泡通過，直至藍色出現，接著經氮氣吹掃持續5min。緩慢添加含NaBH4(0.74g，19.6mmol)之甲醇(20mL)，使反應混合物返回室溫。2小時之後，添加飽和NH4Cl溶液，反應混合物分配於EtOAc與水之間。有機物用NaHCO3、水及鹽水洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：340.3(MH+),0.77min。
步驟3. (5-(2-甲氧基乙基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯
向(5-(2-羥基乙基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯(240 mg，0.707mmol)於MeI(7.7mL)中之溶液中添加氧化銀(983mg，4.24mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。反應混合物經矽藻土過濾且用EtOAc及甲醇洗滌，有機物藉由飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌，乾燥且濃縮。粗材料無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：354.2(MH+),0.92min。
步驟4. 5-(2-甲氧基乙基)吡嗪-2-胺
向含(5-(2-甲氧基乙基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯(200mg，0.566mmol)之DCM(1.9mL)中添加TFA(872μL，11.32mmol)，反應混合物在室溫下攪拌1小時，向反應混合物中添加5mL甲苯且濃縮至乾。粗材料無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：154.1(MH+),0.27min。
步驟5. 3-溴-5-(2-甲氧基乙基)吡嗪-2-胺
在室溫下向5-(2-甲氧基乙基)吡嗪-2-胺(80mg，0.522mmol)於DCM(1.7mL)中之溶液中添加NBS(93mg，0.522mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。在用NaHCO3淬滅之後，反應混合物用DCM萃取3次。經組合之有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥。粗材料無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：232.1/234.1(MH+),0.49min。
實例21 4-(3-胺基-6-(2-(甲基磺醯基)乙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺之合成
流程41
步驟1. 甲烷磺酸2-(5-(雙(第三丁氧基羰基)胺基)吡嗪-2-基)乙酯
向含(5-(2-羥基乙基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯(450mg，1.326mmol)之DCM(10mL)中添加吡啶(0.429mL，5.30mmol)且使用冰浴冷卻至0℃。接著添加Mesyl-Cl(0.382mL，4.91mmol)且使反應物溫至室溫且攪拌16小時。向反應物中添加150mL乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉。萃取有機層且用飽和碳酸氫鈉、水(3x)再次洗滌，過濾，用硫酸鈉乾燥且濃縮至恆定質量，生成540mg所需產物，原樣使用，(98%產率)。LCMS(m/z)：418.3(MH+),0.89min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.50(s,1H),8.38(s,1H),4.67(t,J=6.3Hz,2H),3.28(t,J=6.3Hz,2H),2.94(s,3H),1.45(s,18H)。
步驟2. 5-(2-(甲硫基)乙基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯
向含甲烷磺酸2-(5-(雙(第三丁氧基羰基)胺基)吡嗪-2-基)乙酯(540mg，1.293mmol)之DMF(7mL)中添加硫代甲醇鈉(408mg，5.82mmol)且在85℃下攪拌3h，繼而LCMS。使反應物冷卻，添加200mL乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉。萃取有機層且用水(3x)、飽和鹽溶液洗滌，硫酸鈉乾燥，經2cm矽膠插塞過濾且用乙酸乙酯沖洗。溶劑濃縮至恆定質量，生成294mg呈游離鹼形式之所需產物，原樣使用，(84%產率)。LCMS(m/z)：270.4(MH+),0.84min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 9.19(s,1H),8.08(d,J=1.2Hz,1H),7.20(br.s.,1H), 2.99-3.08(m,2H),2.79-2.94(m,2H),2.12(s,3H),1.54(s,9H)。
步驟3. 5-(2-(甲基磺醯基)乙基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯
在室溫下在攪拌下向含5-(2-(甲硫基)乙基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯(292mg，1.084mmol)之DCM(10mL)中添加40%(3.5mL)之mCPBA(972mg，4.34mmol)於DCM(8.7mL)中之新鮮製備之溶液，繼而LCMS。30分鐘之後，再添加15%(1.3mL上述mCPBA溶液)且攪拌30min，繼而LCMS。接著再添加5%(0.044mL上述mCPBA溶液)且再攪拌30min。反應之後進行LCMS。向反應物中添加200mL乙酸乙酯及過量飽和碳酸氫鈉。萃取有機層且用飽和碳酸氫鈉、水(3x)再次洗滌，過濾且濃縮至恆定質量，生成320mg所需產物，原樣使用，(98%產率)。LCMS(m/z)：302.1(MH+),0.62min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 9.20(s,1H),8.14(s,1H),7.23(br.s.,1H),3.47-3.57(m,2H),3.26-3.36(m,2H),2.86-2.93(m,3H),1.55(s,9H)。
步驟4. 5-(2-(甲基磺醯基)乙基)吡嗪-2-胺
向含5-(2-(甲基磺醯基)乙基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯(320mg，1.062mmol)之DCM(6mL)中添加TFA(2.5mL，32.4mmol)且在室溫下攪拌1小時。溶劑濃縮至恆定質量。產物藉由使用固體支撐之碳酸鹽2.5g用6mL乙腈以0.8mmol/g實現游離鹼化且攪拌5min。過濾固體支撐物且用乙腈沖洗。產物濃縮至恆定質量，生成所需產物，原樣使用，假定定量產率(1.062mmol)。LCMS(m/z)：202.1(MH+),0.20min。
步驟5. 3-溴-5-(2-(甲基磺醯基)乙基)吡嗪-2-胺
向含5-(2-(甲基磺醯基)乙基)吡嗪-2-胺(213mg，1.06mmol)之乙腈(6mL)中添加NBS(179mg，1.007mmol)且在室溫下攪拌1小時。溶劑濃縮至殘餘物。向粗物質中添加乙酸乙酯，用飽和碳酸鈉、水(2x)洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至恆定質量，生成210mg呈游離鹼形 式之所需產物，原樣使用，(71%產率)。LCMS(m/z)：280.0/282.0(MH+),0.38min。
步驟6. 4-(3-胺基-6-(2-(甲基磺醯基)乙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺
向3-溴-5-(2-(甲基磺醯基)乙基)吡嗪-2-胺(126mg，0.405mmol)中添加N-苯甲基-2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲醯胺(144mg，0.405mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(33.1mg，0.040mmol)、DME(1.5mL)且接著添加碳酸鈉2M水溶液(0.607mL，1.214mmol)。反應物在125℃下經微波處理持續12min，繼而LCMS。向反應物中添加5mL DME及5mL MeOH，過濾且濃縮至殘餘物。粗物質溶解於2.5mL DMSO中，過濾，藉由製備型HPLC純化且凍乾成TFA鹽。向TFA鹽中添加200mL乙酸乙酯，用飽和碳酸鈉(3x)、水(3x)洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至恆定質量，生成59mg呈游離鹼形式之所需產物4-(3-胺基-6-(2-(甲基磺醯基)乙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺，34%產率。LCMS(m/z)：429.2(MH+),0.65min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.95(s,1H),7.83(t,J=7.6Hz,1H),7.67(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.59(dd,J=11.7,1.2Hz,1H),7.29-7.42(m,4H),7.20-7.28(m,1H),4.59(s,2H),3.48-3.57(m,2H),3.18(dd,J=9.0,6.7Hz,2H),2.96(s,3H)。
實例22、23及24 (+/-)-4-(3-胺基-6-(2-羥基丙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺、(R)-4-(3-胺基-6-(2-羥基丙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺及(S)-4-(3-胺基-6-(2-羥基丙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺之合成
流程42
步驟1. 4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基烯丙基)-1,3,2-二氧硼
在室溫下在氮氣下向鎂屑(1.139g，46.9mmol)於THF(65.1mL)中之懸浮液中添加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(5.67mL，39.1mmol)。緩慢添加3-溴-2-甲基丙-1-烯(3.97mL，39.1mmol)，30分鐘之後，再添加3-溴-2-甲基丙-1-烯(3.97mL，39.1mmol)，反應混合物在室溫下攪拌1小時。添加庚烷，繼而添加1N HCl。反應混合物接著藉由庚烷萃取。有機物藉由水及鹽水洗滌，乾燥且濃縮以生成4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基烯丙基)-1,3,2-二氧硼。產物無需純化即用於下一步驟，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 4.67(d,J=6.7Hz,2 H),1.77(s,3 H),1.34-1.20(m,12 H)。
步驟2. 5-(2-甲基烯丙基)吡嗪-2-胺
向5-溴吡嗪-2-胺(1g，5.75mmol)之溶液中添加4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基烯丙基)-1,3,2-二氧硼(1.360g，7.47mmol)、PdCl2(dppf)-DCM加合物(0.469g，0.575mmol)、CsF(2.62g，17.24mmol)，經氮氣吹掃。反應混合物在油浴中在100℃下攪拌3小時。反應混合物分配於EtOAc與水之間。有機物用鹽水洗滌，乾燥且濃縮。殘餘物溶解於1N HCl(10mL)中。水層用EtOAc反萃取，水層接著中和至pH=8，接著藉由EtOAc萃取3次。有機物接著乾燥且濃縮。粗產物用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：150.5(MH+),0.28min。
步驟3. (5-(2-甲基烯丙基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯
向5-(2-甲基烯丙基)吡嗪-2-胺(235mg，1.575mmol)於DCM(5.2mL)中之溶液中添加Boc2O(731μL，3.15mmol)，繼而添加DMAP(385mg，3.15mmol)。反應物在室溫下攪拌隔夜。向反應物中添加30mL DCM且用飽和碳酸氫鈉(2x)、水(1x)洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至殘餘物。粗物質藉由矽膠層析用0-30%乙酸乙酯及庚烷溶離來純化以生成250mg產物。LCMS(m/z)：350.1(MH+),1.12min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.45(d,J=1.2Hz,1 H),8.41-8.33(m,1 H),4.92(s,1 H),4.75(s,1 H),3.57(s,2 H),1.73(s,3 H),1.43(s,18 H)。
步驟4. (5-(2-羥基丙基)吡嗪-2-基)胺基甲酸(+/-)-N,N-二-第三丁酯
含(5-(2-甲基烯丙基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯(120mg，0.343mmol)之甲醇(6.8mL)冷卻至-78℃，使臭氧鼓泡通過持續6min。接著經氮氣吹掃持續5min。緩慢添加含NaBH4(39.0mg，1.030mmol)之甲醇(5mL)。使反應混合物返回室溫。1小時之後，緩慢添加飽和NH4Cl。反應混合物分配於EtOAc與水之間。有機物用飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌，乾燥且濃縮。粗產物無需純化即用於下一 步驟反應。LCMS(m/z)：354.1(MH+),0.84min。
步驟5. (+/-)-1-(5-胺基吡嗪-2-基)丙-2-醇
向含(5-(2-羥基丙基)吡嗪-2-基)胺基甲酸(+/-)-N,N-二-第三丁酯(110mg，0.311mmol)之DCM(3.11mL)中添加TFA(1mL，12.98mmol)，反應混合物在室溫下攪拌30min，反應混合物與甲苯共蒸發。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：154.1(MH+),0.24min。
步驟6. (+/-)-1-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)丙-2-醇
在0℃下向(+/-)-1-(5-胺基吡嗪-2-基)丙-2-醇(47mg，0.307mmol)於DCM(3.0mL)中之溶液中添加NBS(49.1mg，0.276mmol)。反應混合物在0℃下攪拌10min。在用飽和NaHCO3淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取3次。經組合之有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥。過濾且在真空中濃縮。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：234.0(MH+),0.40min。
步驟7. (+/-)-4-(3-胺基-6-(2-羥基丙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺
向(+/-)-1-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)丙-2-醇(30mg，0.129mmol)於DME(970μL)中之溶液中添加4-(苯甲基胺甲醯基)-3-氟苯基酸(31.8mg，0.116mmol)、PdCl2(dppf)CH2Cl2加合物(10.56mg，0.013mmol)、2M Na2CO3(323μL)。反應混合物在120℃下在微波中攪拌10min。反應混合物分配於EtOAc與水之間。有機物經乾燥且濃縮。粗產物藉由製備型HPLC來純化。組合純溶離份且脫鹽以生成(+/-)-4-(3-胺基-6-(2-羥基丙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：381.2(MH+),0.67min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.95-7.81(m,2 H),7.66(dd,J=1.6,8.2Hz,1 H),7.58(dd,J=1.6,11.7Hz,1 H),7.43-7.31(m,4 H),7.31-7.19(m,1 H),4.62(s,2 H),4.16- 4.04(m,1 H),2.79(d,J=6.3Hz,2 H),1.23(d,J=6.3Hz,3 H)。
步驟7. (R)-4-(3-胺基-6-(2-羥基丙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺及(S)-4-(3-胺基-6-(2-羥基丙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺
外消旋(+/-)-4-(3-胺基-6-(2-羥基丙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic AD管柱，4.6x100(mm)，甲醇+0.1% DEA=40%,5mL/min)解析。在Rt=1.39min下獲得極性對映異構體(R)-4-(3-胺基-6-(2-羥基丙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：381.2(MH+),0.67min。在Rt=1.97min下獲得較少極性對映異構體(S)-4-(3-胺基-6-(2-羥基丙基)吡嗪-2-基)-N-苯甲基-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：381.2(MH+),0.67min。立體化學經任意指派。
3-溴-5-(2-乙氧基乙基)吡嗪-2-胺之合成
步驟1. (E)-5-(2-乙氧基乙烯基)吡嗪-2-胺
向5-溴吡嗪-2-胺(200mg，1.149mmol)於DME(2874μL)中之溶液中添加(E)-2-(2-乙氧基乙烯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(341mg，1.724mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(94mg，0.115mmol)及2M Na2CO3(958μL)。反應混合物在130℃下在微波反應器中攪拌20min。反應混合物經矽藻土過濾且用EtOAc洗滌，濾液分配於EtOAc與水之間。水層藉由EtOAc萃取三次，組合之有機物經乾燥且濃縮。粗材料藉由急驟層析來純化以生成(E)-5-(2-乙氧基乙烯基)吡嗪-2-胺。LCMS(m/z)：166.1(MH+),0.41min。
步驟2. 5-(2-乙氧基乙基)吡嗪-2-胺
向(E)-5-(2-乙氧基乙烯基)吡嗪-2-胺(75mg，0.454mmol)於乙醇(4.54mL)中之溶液中添加Pd/C(48.3mg，0.454mmol)。反應混合物藉由氮氣吹掃10min，且接著在室溫下在氫氣球下攪拌2h。反應混合物接著經矽藻土過濾且用甲醇及EtOAc洗滌，接著濃縮。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：168.1(MH+),0.33min。
步驟3. 3-溴-5-(2-乙氧基乙基)吡嗪-2-胺
在0℃下向5-(2-乙氧基乙基)吡嗪-2-胺(45mg，0.269mmol)於DCM(897μL)中之溶液中添加NBS(43.1mg，0.242mmol)。反應混合物在0℃下攪拌10min。在用飽和NaHCO3淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取3次。經組合之有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥。過濾且在真空中濃縮。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：246.0(MH+),0.59min。
(+/-)-2-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)丙-1-醇之合成
步驟1. 5-(3-(苯甲基氧基)丙-1-烯-2-基)吡嗪-2-胺
向5-溴吡嗪-2-胺(200mg，1.149mmol)之溶液中添加(3-(苯甲基氧基)丙-1-烯-2-基)三氟硼酸鉀(350mg，1.379mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(94mg，0.115mmol)、Cs2CO3(1124mg，3.45mmol)。用氮氣 吹掃。反應混合物在100℃下在油浴中攪拌6小時。反應混合物接著分配於EtOAc與水之間，組合有機層且用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且濃縮。粗產物藉由急驟層析來純化以生成5-(3-(苯甲基氧基)丙-1-烯-2-基)吡嗪-2-胺，61%產率。LCMS(m/z)：245.2(MH+),0.67min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.26(d,J=1.2Hz,1 H),7.96(d,J=1.2Hz,1 H),7.34(d,J=4.3Hz,5 H),5.91(s,1 H),5.44(d,J=1.2Hz,1 H),4.59(s,2 H),4.49(s,2 H)。
步驟2. (+/-)-5-(1-(苯甲基氧基)丙-2-基)吡嗪-2-胺
在室溫下向5-(3-(苯甲基氧基)丙-1-烯-2-基)吡嗪-2-胺(91mg，0.377mmol)於甲醇(3771μL)中之溶液中添加Pd/C(40.1mg，0.377mmol)。反應混合物在室溫下在氫氣球下攪拌隔夜。反應混合物經矽藻土過濾，用甲醇及EtOAc洗滌。粗材料無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：244.2(MH+),0.62min。
步驟3. (+/-)-2-(5-胺基吡嗪-2-基)丙-1-醇
5-(1-(苯甲基氧基)丙-2-基)吡嗪-2-胺(80mg，0.329mmol)於1N HCl(1096μL)中之溶液在油浴中加熱7h，冷卻，反應混合物藉由EtOAc萃取，水層濃縮至乾以生成呈HCl鹽之粗產物且用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：154.1(MH+),0.26min。
步驟4. (+/-)-2-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)丙-1-醇
在0℃下向2-(5-胺基吡嗪-2-基)丙-1-醇(30mg，0.196mmol)於DCM(653μL)中之溶液中添加NBS(31.4mg，0.176mmol)。反應混合物在0℃下攪拌10min。在用飽和NaHCO3淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取3次。經組合之有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥。過濾且在真空中濃縮。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：234.0(MH+),0.40min。
3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)丙腈之合成
步驟1. (5-甲基吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯
在室溫下向5-甲基吡嗪-2-胺(1g，9.16mmol)於CH2Cl2(30mL)中之溶液中添加Boc2O(4.47mL，19.24mmol)，繼而添加DMAP(1.679g，13.75mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。在用飽和NaHCO3淬滅之後，反應混合物用CH2Cl2萃取3次。經組合之有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥。過濾且在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析(20% EtOAc/庚烷)獲得呈白色固體狀之所需產物。LCMS(m/z)：310.0(MH+),0.93min。
步驟2. (5-(溴甲基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯
向(5-甲基吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯(1.37g，4.43mmol)於CCl4(14.76mL)中之溶液中添加NBS(0.828g，4.65mmol)、過氧化苯甲醯(0.107g，0.443mmol)、AIBN(0.073g，0.443mmol)。反應混合物在回流下攪拌8小時。處理，過濾固體，濃縮有機物。粗產物藉由急驟層析來純化以生成標題產物，36%產率。LCMS(m/z)：231.1(MH+-Boc),1.04min。
步驟3. 5-(2-氰基乙基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯
在0℃下在氬氣下正丁基鋰(2.5M於己烷中，103μL，0.258mmol)添加至無水THF中之二異丙胺(39.3μL，0.276mmol)中，該混合物接著在0℃下攪拌1h，接著冷卻至-78℃，緩慢添加乙腈(14.12μL，0.270mmol)，使反應混合物返回室溫且在室溫下攪拌1h，再次冷卻至-78℃，且緩慢添加含(5-(溴甲基)吡嗪-2-基)胺基甲酸N,N-二-第三丁酯(100mg，0.258mmol)之THF(0.5mL)，反應混合物在-78℃下攪拌10min，接著使其返回室溫，2小時之後，反應物藉由飽和NH4Cl溶液淬滅，接著藉由EtOAc萃取。有機物藉由鹽水洗滌，乾燥且濃縮。粗材料藉由急驟層析(40% EtOAc/庚烷)來純化，生成5-(2-氰基乙基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯，40%產率。LCMS(m/z)：193.1(MH+-tBu),0.70min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 9.22(s,1 H),8.12(s,1 H),3.09(t,J=7.2Hz,2 H),2.83(t,J=7.2Hz,2 H),1.52-1.36(m,8 H)。
步驟4. 3-(5-胺基吡嗪-2-基)丙腈
在室溫下向5-(2-氰基乙基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯(25mg，0.101mmol)於DCM(0.336mL)中之溶液中添加TFA(0.1mL，1.298mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。在用飽和NaHCO3淬滅之後，反應混合物用DCM萃取。經組合之有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥。過濾且在真空中濃縮。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：149.1(MH+),0.24min。
步驟5. 3-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)丙腈
在0℃下向3-(5-胺基吡嗪-2-基)丙腈(45mg，0.304mmol)於DCM(1519μL)中之溶液中添加NBS(48.7mg，0.273mmol)。反應混合物在0℃下攪拌10min。在用NaHCO3淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取3次。經組合之有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥。過濾且在真空中濃縮。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS (m/z)：227/229.1(MH+),0.45min。
5-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-2-酮之合成
步驟1. 5-甲基吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯
在95℃下向5-甲基吡嗪-2-甲酸(2.5g，18.1mmol)、第三丁醇(6.92mL，72.4mmol)、Et3N(3.78mL，27.1mmol)於1,4-二噁烷(12.5mL)中之溶液中逐滴添加二苯基磷酸疊氮化物(DPPA，3.23mL，18.1mmol)，且反應物在95℃下加熱1.5h，繼而添加第二部分之DPPA(1mL，5.6mmol)且再加熱1.5小時。反應混合物經冷卻，濃縮且殘餘物用EtOAc(50mL)稀釋，用水(30mL)、3M NaOH(30mL)、飽和NaHCO3(30mL)及鹽水(30mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，且濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟層析用梯度EtOAc/CH2Cl2(0-20%)溶離來純化，提供呈白色固體狀之5-甲基吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯。LCMS(m/z)：210.1(MH+),0.69min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 9.17(s,1H), 8.09(s,1H),7.75(br.s.,1H),2.51(s,3H),1.56(s,9H)。
步驟2. 5-(溴甲基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯
5-甲基吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯(2.79g，13.33mmol)、NBS(2.61g，14.67mmol)及AIBN(0.219g，1.33mmol)於CCl4(45mL)中之溶液用氬氣吹掃，接著溶液用85℃油浴加熱4小時。反應混合物冷卻至室溫，濃縮且殘餘物再溶解於EtOAc(約50mL)中，用稀NaOH水溶液洗滌兩次(10mL 1N NaOH稀釋於20mL H2O中)，用鹽水(30mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)且濃縮。殘餘物進一步藉由矽膠急驟層析用梯度EtOAc/CH2Cl2(0-30%)溶離來純化且獲得呈灰白色固體狀之5-(溴甲基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯。LCMS(m/z)：288.1/290.1(MH+),0.82min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 9.26(s,1H),8.32(d,J=1.2Hz,1H),7.62(br.s.,1H),4.56(s,2H),1.56(s,9H)。
步驟3. 5-(氰基甲基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯
5-(溴甲基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯(0.75g，2.60mmol)及NaCN(0.255g，5.21mmol)於DMF(5mL)中之混合物在室溫下攪拌50min。反應混合物冷卻至室溫，用0.5N NaOH(10mL)稀釋且用EtOAc(2 x 20mL)萃取，且組合EtOAc層，用0.5N NaOH(10mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，濃縮且粗殘餘物藉由矽膠急驟層析用梯度EtOAc/CH2Cl2(0-20%)溶離來純化，提供5-(氰基甲基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯(0.40g，65.6%產率)。LCMS(MH+-tBu)：179.0(MH+),0.68min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 9.28(s,1H),8.32(s,1H),7.59(br.s.,1H),3.91(s,2H),1.57(s,9H)。
步驟4. 4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)吡嗪-2-基)-4-氰基丁酸乙酯
向含5-(氰基甲基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯(0.32g，1.37mmol)之乙醇/2-甲基四氫呋喃(5mL/5mL)混合溶劑中添加新鮮製備之乙醇鈉(1M，1.366mL)，且該混合物在0℃下攪拌10min，繼而添 加丙烯酸乙酯(145ul，1.366mmol)且該混合物在0℃下攪拌2小時。反應物此時藉由添加飽和NaHCO3(5mL)淬滅，且反應混合物再攪拌10min，用EtOAc(20mL)稀釋，過濾且濃縮濾液。殘餘物溶解於EtOAc(20mL)中，用pH 7.0磷酸鈉緩衝液洗滌，且濃縮EtOAc層，且淺棕色殘餘油狀物藉由急驟管柱用梯度EtOAc/庚烷(0-50%)溶離來純化，提供4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)吡嗪-2-基)-4-氰基丁酸乙酯(100mg，22%產率)。LCMS(m/z)：279.2(MH+-tBu),0.86min。
步驟5. 5-(6-側氧基哌啶-3-基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯
在氬氣下，向含4-(5-(第三丁氧基羰基胺基)吡嗪-2-基)-4-氰基丁酸乙酯之乙醇溶液(94mg，0.281mmol/8mL)中添加阮尼鎳催化劑乙醇懸浮液(鎳於約2mL乙醇中，阮尼鎳之量未精確量測)，且反應混合物在3次空氣氛圍交換之後在H2氣球下攪拌，在H2氣球下用外部油浴在56℃下加熱隔夜。反應混合物冷卻至室溫，且經矽藻土墊過濾，濃縮濾液，提供呈黃色固體狀之5-(6-側氧基哌啶-3-基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯。
步驟6. 5-(5-胺基吡嗪-2-基)哌啶-2-酮
5-(6-側氧基哌啶-3-基)吡嗪-2-基胺基甲酸第三丁酯(60mg，0.205mmol)及濃HCl(1mL)於甲醇(2mL)中之混合物用70℃油浴加熱1小時且冷卻反應混合物，濃縮至乾且殘餘物再溶解於甲醇(3mL)中，且向其中添加NaHCO3(200mg)，且該混合物用70℃油浴加熱2小時。反應混合物之固體懸浮液藉由過濾移除，且濃縮濾液且獲得作為粗5-(5-胺基吡嗪-2-基)哌啶-2-酮之淺黃色固體，其無需進一步純化直接用於下一步驟。LCMS(m/z)：193.1(MH+),0.22min。
步驟7. 5-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-2-酮
在0℃下向5-(5-胺基吡嗪-2-基)哌啶-2-酮(25mg，0.13mmol)於乙腈(10mL)中之溶液中添加NBS(23.2mg，0.13mmol)且反應混合物在 0℃下攪拌30min，接著在室溫下攪拌4小時。反應混合物經濃縮，且殘餘物藉由1N NaOH(140ul)鹼化，用甲醇(2mL)稀釋，濃縮。殘餘物用EtOAc(3 x 1mL)濕磨，且收集EtOAc上清液，組合且濃縮且獲得作為粗5-(5-胺基-6-溴吡嗪-2-基)哌啶-2-酮之淺色固體，其無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：241/243(MH+),0.41min。
實例25 4-(2-胺基-5-(6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. 5-溴-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)吡啶-2(1H)-酮
在0℃下向5-溴吡啶-2(1H)-酮(2.01g，11.55mmol)於DMF(30mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.924g，23.10mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。向其中緩慢添加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基矽烷(2.89g，17.33mmol)。反應混合物攪拌隔夜。LCMS-0.26min,MH+ 304.1(非極性方法)。反應物用飽和NH4Cl水溶液淬滅，且接著用乙酸乙酯 稀釋。反應混合物用EtOAc萃取。組合之有機物用水及鹽水洗滌，接著經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗產物藉由急驟層析管柱使用0-50% EtOAc/庚烷來純化。獲得呈黃色黏性液體狀之5-溴-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)吡啶-2(1H)-酮。LCMS(m/z)：304/306(MH+),0.95min。
步驟2. 6'-氟-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-[3,3'-聯吡啶]-6(1H)-酮
在室溫向5-溴-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)吡啶-2(1H)-酮(568mg，1.868mmol)於DME(6227μL，比率：2.000)中之溶液中添加PdCl2(dppf)(68.3mg，0.093mmol)、2-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶(500mg，2.242mmol)、2M Na2CO3(3113μl，比率：1.000)。反應混合物在微波合成器中在120℃加熱10min。向反應混合物中添加硫酸鈉及EtOAc。在過濾之後，揮發性材料在真空中移除。粗產物藉由急驟層析(梯度EtOAc於庚烷中)純化，生成6'-氟-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-[3,3'-聯吡啶]-6(1H)-酮(52%)。LCMS(m/z)：321.3(MH+),0.93min。
步驟3. 5-(6-氟吡啶-3-基)-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)哌啶-2-酮
向鋼彈形容器中添加6'-氟-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-[3,3'-聯吡啶]-6(1H)-酮(311mg，0.971mmol)於MeOH(剩餘60%頂部空間)中之溶液，繼而添加Pd-C(207mg，0.194mmol)。在用氮氣流脫氣之後，鋼彈形容器用氫氣加壓至250psi。反應物在室溫攪拌20小時。LCMS-0.9min MH+ 325.1(單一主要物質)。反應混合物經矽藻土(用EtOAc洗滌)過濾。揮發性材料在真空中濃縮，生成粗5-(6-氟吡啶-3-基)-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)哌啶-2-酮(290mg，0.894mmol，92%)，其未進一步純化即用於下一步驟。
步驟4. 5-(6-胺基吡啶-3-基)哌啶-2-酮
向鋼彈形容器中之-(6-氟吡啶-3-基)-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)哌啶-2-酮(290mg，0.894mmol)中添加氫氧化銨(34.8μl，0.894mmol)溶液(40%頂部體積剩餘)。鋼彈形反應器在150℃加熱44h(250psi，在壓力計上)。LCMS-0.23min,MH+ 192.1(無SEM)；0.66min,MH+ 322.1(使用SEM)。在用MeOH及甲苯稀釋之後，揮發性材料在真空中完全移除。5-(6-胺基吡啶-3-基)哌啶-2-酮用於下一步驟。
步驟5. 5-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-2-酮
在0℃下向5-(6-胺基吡啶-3-基)哌啶-2-酮(132mg，0.690mmol)於乙腈(8.00mL)中之溶液中添加NBS(98mg，0.552mmol)。溫至室溫之後，將反應混合物攪拌30分鐘。LCMS 0.28min,MH+ 270/272；0.7min,MH+ 400.1/402.1(SEM保護者)。在用Na2S2O3溶液淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取，其用NaHCO3溶液及鹽水洗滌。有機層經無水Na2SO4乾燥，過濾，在真空中濃縮。粗5-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-2-酮用於下一步驟。
步驟6. 4-(2-胺基-5-(6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
向微波小瓶中添加5-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)哌啶-2-酮(45mg，0.167mmol)、(S)-(4-((1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)酸(56.2mg，0.167mmol)、PdCl2(dppf)(12.19mg，0.017mmol)、DME(1111μl，比率：2.000)及Na2CO3(2M溶液)(555μL，比率：1.000)。反應混合物在120℃下在微波反應器處加熱10min。LCMS-0.58min,MH+ 483.2；0.85min,MH+ 613.3。在添加無水硫酸鈉以移除水之後，過濾反應混合物且在真空中乾燥。小部分藉由製備型HPLC來純化，生成呈非對映異構體混合物形式之4-(2-胺基-5-(6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(12%)。LCMS(m/z)：483.3(MH+),0.56min；1H NMR(400MHz, CD3OD)δ ppm 7.89(m,1H),7.80(m,2H),7.42-7.30(m,3H),7.30-7.24(m,2H),7.25-7.15(m,1H),5.18-5.03(m,1H),3.87-3.64(m,2H),3.47-3.35(m,2H),3.11-2.97(m,1H),2.46-2.30(m,2H),2.08-1.91(m,2H)。
(+/-)-4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮之合成
步驟1. 6-氟-1'-甲基-[3,4'-聯吡啶]-2'(1'H)-酮
在室溫下向2-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶(500mg，2.242mmol)之溶液中添加PdCl2(dppf)(68.3mg，0.093mmol)、4-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(351mg，1.868mmol)、2M Na2CO3(4.1mL)及DME(8.3mL)。反應混合物在120℃下在微波合成器處加熱10min。反應混合物用EtOAc萃取。有機層用水及鹽水洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗6-氟-1'-甲基-[3,4'-聯吡啶]-2'(1'H)-酮藉由急驟層析(梯度EtOAc/DCM)來純化。LCMS(m/z)：205.2(MH+),0.47min。
步驟2. (+/-)-4-(6-氟吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮
向鋼彈形容器中添加6-氟-1'-甲基-[3,4'-聯吡啶]-2'(1'H)-酮(340mg，1.665mmol)於MeOH(剩餘60%頂部空間)中之溶液，繼而添加Pd-C(Degussa)(354mg，0.333mmol)。在用氮氣流脫氣之後，鋼彈 形容器充滿氫氣(250psi)。反應混合物攪拌隔夜。反應混合物經矽藻土(用EtOAc/MeOH洗滌)過濾。揮發性材料在真空中濃縮，生成粗(+/-)-4-(6-氟吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮(341mg，1.638mmol，98%產率)，其無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：209.1(MH+),0.47min。
步驟3. (+/-)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮
向鋼彈形容器中添加(+/-)-4-(6-氟吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮(341mg，1.638mmol)，繼而添加氫氧化銨溶液(0.00mmol)-剩餘40%頂部空間。反應器在150℃下加熱20h(在加熱後，內部壓力增長至100psi)。在冷卻之後，反應完成。整個溶劑(轉移至燒瓶)在真空中移除。添加甲苯且共蒸發以移除水。粗產物(+/-)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮，無需進一步純化即用於下一步驟(87%)。LCMS(m/z)：206.1(MH+),0.24min。
步驟4. (+/-)-4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮
在0℃下向(+/-)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮(291mg，1.418mmol)於乙腈(14.200mL)中之溶液中添加NBS(202mg，1.134mmol)。溫至室溫之後，反應混合物攪拌30分鐘。在用Na2S2O3溶液淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取，其用NaHCO3溶液及鹽水洗滌。有機層經無水Na2SO4乾燥，過濾，在真空中濃縮。粗產物(+/-)-4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮(98%)用於下一步驟。LCMS(m/z)：284/286(MH+),0.34min。
實例26、27及28 4-(2-胺基-5-(1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺、4-(2-胺基-5-((R)-1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺及4-(2-胺基-5-((S)-1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯 苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
根據流程47中之步驟6，使用(+/-)-4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮及(S)-(4-((1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)酸，獲得呈非對映異構體混合物形式之4-(2-胺基-5-(1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(不可分離)(35%)。LCMS(m/z)：497.3(MH+),0.59min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.97(m,1H),7.9(m,1H),7.82(m,1H),7.52-7.39(m,3H),7.39-7.32(m,2H),7.3(m,1H),5.19(m,1H),3.88(m,2H),3.60-3.38(m,3H),3.21-3.08(m,1H),2.72-2.58(m,1H),2.57-2.41(m,1H),2.21-1.95(m,2H)。非對映異構體混合物藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic AD管柱，4.6x100(mm),5mL/min,EtOH+0.1%，5分鐘內DEA=45%)分離。在Rt=1.82min下獲得極性非對映異構體4-(2-胺基-5-((R)-1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺。在Rt=2.35min下獲得較少極性非對映異構體4-(2-胺基-5-((S)-1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺。關於兩種非對映異構體之絕對立體化學經任意指派。
實例29、30及31 4-(2-胺基-5-(1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((R)-1-苯基乙基)苯甲醯胺、4-(2-胺基-5-((R)-1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((R)-1-苯基乙基)苯甲醯胺及4-(2-胺基-5-((S)-1-甲基-2- 側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((R)-1-苯基乙基)苯甲醯胺
根據流程47中之步驟6，使用(+/-)-4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮及(R)-(3-氟-4-((1-苯基乙基)胺甲醯基)苯基)酸，獲得呈非對映異構體混合物形式之4-(2-胺基-5-(1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((R)-1-苯基乙基)苯甲醯胺(不可分離)(34%)。LCMS(m/z)：447.3(MH+),0.58min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.85(m,1H),7.72(m,2H),7.41-7.20(m,6H),7.18(m,1H),5.17(m,1H),3.51-3.29(m,3H),3.13-2.98(m,1H),2.88(s,3H),2.60-2.48(m,1H),2.48-2.30(m,1H),2.10-1.85(m,2H),1.58-1.38(m,3H)。非對映異構體混合物藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic AD管柱，4.6x100(mm),100mL/min,IPA+0.1%,DEA=40%,5ml/min)分離。在Rt=1.67min下獲得極性非對映異構體4-(2-胺基-5-((R)-1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((R)-1-苯基乙基)苯甲醯胺。LCMS(m/z)：447.3(MH+),0.64分鐘。在Rt=2.37min下獲得較少極性非對映異構體4-(2-胺基-5-((S)-1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((R)-1-苯基乙基)苯甲醯胺。LCMS(m/z)：447.2(MH+),0.64min。關於兩種非對映異構體之絕對立體化學經任意指派。
實例32、33及34 4-(2-胺基-5-(1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺、4-(2-胺基-5-((R)-1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺及4-(2-胺基-5- ((S)-1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺
根據流程47中之步驟6，使用(R)-(4-((1-(3-氯苯基)乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)酸，獲得呈非對映異構體混合物形式之4-(2-胺基-5-(1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺(不可分離)(33%)。LCMS(m/z)：481.3(MH+),0.70min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.86(m,1H),7.73(m,2H),7.39-7.20(m,5H),7.19(m,1H),5.14(m,1H),3.52-3.28(m,3H),3.14-2.98(m,1H),2.88(s,3H),2.62-2.48(m,1H),2.46-2.30(m,1H),2.12-1.84(m,2H),1.48(m,3H)。非對映異構體混合物藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic AD管柱，4.6x100(mm),5ml/min,EtOH+0.1% DEA=35%)分離。在Rt=2.83min下獲得極性非對映異構體4-(2-胺基-5-((R)-1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：481.2(MH+),0.71min。在Rt=3.53min下獲得較少極性非對映異構體4-(2-胺基-5-((S)-1-甲基-2-側氧基哌啶-4-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：481.2(MH+),0.72。關於兩種非對映異構體之絕對立體化學經任意指派。
5-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮之合成
流程49
根據流程48，使用5-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮，獲得5-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮。LCMS(m/z)：284/286(MH+),0.34min。
實例35、36及37 4-(2-胺基-5-(1-甲基-6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺、4-(2-胺基-5-((R)-1-甲基-6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺及4-(2-胺基-5-((S)-1-甲基-6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
根據流程47中之步驟6，使用5-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮及(S)-(4-((1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)酸，獲得4-(2-胺基-5-(1-甲基-6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(33%)。LCMS(m/z)：497.2(MH+),0.61min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.70(m,1H),7.98(m,1H),7.88(m,2H),7.44(m,3H),7.36(m,2H),7.30(m,1H),5.19(m,1H),3.88(m,2H),3.51(m,2H),3.21(m,1H),2.97(s,3H),2.50(m,2H),2.07(m,2H)。非對映異構體混合物藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic AD管柱，4.6x100(mm),EtOH+0.1%DEA=40%,5 ml/min)分離。在Rt=2.22min下獲得極性非對映異構體4-(2-胺基-5-((R)-1-甲基-6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：497.2(MH+),0.61min。在Rt=3.09min下獲得較少極性非對映異構體4-(2-胺基-5-((S)-1-甲基-6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：497.3(MH+),0.59min。
實例38、39及40 4-(2-胺基-5-(1-甲基-6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺、4-(2-胺基-5-((R)-1-甲基-6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺及4-(2-胺基-5-((S)-1-甲基-6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺
根據流程47中之步驟6，使用(R)-(4-((1-(3-氯苯基)乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)酸及5-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基哌啶-2-酮，獲得呈非對映異構體混合物形式之4-(2-胺基-5-(1-甲基-6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(4%)。LCMS(m/z)：481.3(MH+),0.69min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.79-8.65(m,1H),7.93-7.83(m,1H),7.83-7.76(m,1H),7.75-7.65(m,1H),7.40-7.29(m,3H),7.29-7.21(m,2H),7.21-7.13(m,1H),5.22-5.07(m,1H),3.52-3.32(m,3H),3.16-3.01(m,1H),2.88(s,3H),2.48-2.34(m,2H),2.07-1.92(m,2H),1.55-1.40(m, 3H)。非對映異構體混合物藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic AD管柱，4.6x100(mm),5ml/min,MeOH+0.1% DEA=35%)分離。在Rt=2.98min下獲得極性非對映異構體4-(2-胺基-5-((R)-1-甲基-6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：481.2(MH+),0.71min。在Rt=3.93min下獲得較少極性非對映異構體4-(2-胺基-5-((S)-1-甲基-6-側氧基哌啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((R)-1-(3-氯苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：481.1(MH+),0.71min。
實例41 4-(2-胺基-5-(5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((5)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
步驟1. 4-(6-氟吡啶-3-基)-2-側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯
向含2-側氧基-4-(甲苯磺醯基氧基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(0.8g，2.037mmol)(關於合成，參見實例24)之DME(27mL)及 碳酸鈉(7mL，14.00mmol)(2M)中添加(6-氟吡啶-3-基)酸(0.431g，3.06mmol)及PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(0.333g，0.407mmol)。用N2吹掃持續5min。反應混合物在油浴中在90℃下加熱2小時。反應混合物分配於乙酸乙酯與水之間。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。藉由急驟層析管柱使用0-50% EtOAc/庚烷純化。組合含有產物之溶離份且蒸發以提供呈灰白色固體狀之4-(6-氟吡啶-3-基)-2-側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(54.7%)。LCMS(m/z)：223.2(MH+-tBu),0.743min。
步驟2. 4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡咯-2(5H)-酮
向含4-(6-氟吡啶-3-基)-2-側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(315mg，1.132mmol)之DCM(4mL)中添加TFA(1mL，12.98mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。蒸發反應混合物。與甲苯(x=3)共沸，生成4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡咯-2(5H)-酮。繼續用於下一步驟。LCMS(m/z)：179.2(MH+),0.373min。粗物質產率為定量的。
步驟3. 4-(6-氟吡啶-3-基)吡咯啶-2-酮
在N2氛圍下向含4-(6-氟吡啶-3-基)-1H-吡咯-2(5H)-酮(190mg，1.066mmol)之MeOH(10mL)中添加Pd-C(227mg，0.213mmol)。反應混合物在H2氣球下在室溫下攪拌隔夜。反應混合物經矽藻土過濾，用MeOH洗滌。蒸發濾液。與甲苯(x=3)共沸。產率為80%。繼續用於下一步驟。LCMS(m/z)：181.0(MH+),0.341min。
步驟4. 4-(6-氟吡啶-3-基)-1-甲基吡咯啶-2-酮
在冰浴中向含4-(6-氟吡啶-3-基)吡咯啶-2-酮(200mg，0.888mmol)之DMF(4mL)添加NaH(42.6mg，1.066mmol)及碘甲烷(0.067mL，1.066mmol)。反應混合物在冰浴中攪拌30min且在室溫下攪拌1小時。LC-MS顯示SM及產物(1：1)之混合物。再添加NaH(42.6mg，1.066mmol)及碘甲烷(0.067mL，1.066mmol)，在室溫下攪拌1小 時。藉由LC-MS發現完全反應。反應混合物用EtOAc稀釋且用水及鹽水洗滌。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗物質藉由急驟層析[0-50-80% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷]來純化。LCMS(m/z)：195.2(MH+),0.492min。產率58%
步驟5. 4-(6-胺基吡啶-3-基)-1-甲基吡咯啶-2-酮
向4-(6-氟吡啶-3-基)-1-甲基吡咯啶-2-酮(100mg，0.515mmol)中添加氫氧化銨(2mL，15.41mmol)。反應混合物在加熱塊中在140℃下加熱48h。LC-MS顯示80%產物。蒸發反應混合物。與甲苯(x=3)共沸且繼續用於下一步驟。LCMS(m/z)：192.2(MH+),0.256min。
步驟6. 4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基吡咯啶-2-酮
在冰浴中向含4-(6-胺基吡啶-3-基)-1-甲基吡咯啶-2-酮(90mg，0.377mmol)之乙腈(3mL)中添加NBS(60.3mg，0.339mmol)。反應混合物在冰浴中攪拌15min且在室溫下攪拌30min。LC-MS顯示SM及產物之混合物。再添加0.1eq NBS且在室溫下再攪拌1h。反應混合物用EtOAc稀釋且添加2mL飽和碳酸氫鈉。攪拌10min。分離有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。繼續用於下一步驟(73%)。LCMS(m/z)：270.2/272.2(MH+),0.302min。
步驟7. 4-(2-胺基-5-(1-甲基-5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
向含4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基吡咯啶-2-酮(18mg，0.067mmol)之DME(1.6mL)及碳酸鈉(0.167mL，0.333mmol)中添加(S)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲醯胺(30.8mg，0.080mmol)及PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(5.44mg，6.66μmol)。反應混合物在微波中在120℃下加熱15min。反應混合物用乙酸乙酯稀釋。分離有機層且蒸發。粗物質藉由製備型HPLC來純化以提供呈TFA鹽之所需產物(29.3%)。LCMS(m/z)：449.3(MH+), 0.52min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.65(dd,J=7.24,4.11Hz,1 H)7.97(d,J=2.35Hz,1 H)7.94-7.83(m,2 H)7.49-7.39(m,4 H)7.36(t,J=7.63Hz,2 H)7.32-7.24(m,1 H)5.30-5.13(m,1 H)3.94-3.76(m,3 H)3.69(五重峰，J=8.31Hz,1 H)3.50(dd,J=9.59,7.24Hz,1 H)2.89(s,3 H)2.79(dd,J=16.82,9.00Hz,1 H)2.56(dd,J=16.82,8.22Hz,1 H)。
實例42、43及44 4-(2-胺基-5-(1-甲基-5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺、4-(2-胺基-5-((R)-1-甲基-5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺及4-(2-胺基-5-((S)-1-甲基-5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
根據流程50中之步驟6，使用4-(6-胺基-5-溴吡啶-3-基)-1-甲基吡咯啶-2-酮及(S)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲醯胺，獲得呈非對映異構體混合物形式之4-(2-胺基-5-(1-甲基-5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(33.3%)。LCMS(m/z)：483.3(MH+),0.59min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.79-8.61(m,1 H)7.97(d,J=1.96Hz,1 H)7.93-7.82(m,2 H)7.48-7.39(m,3 H)7.39-7.25(m,3 H)5.25-5.14(m,1 H)3.95-3.76(m,3 H)3.69(五重峰，J=8.22Hz,1 H)3.50(dd,J=9.78,7.43Hz,1 H)2.89(s,3 H)2.80(dd,J=16.82,9.00 Hz,1 H)2.56(dd,J=16.82,8.22Hz,1 H)。非對映異構體混合物藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic AD管柱，4.6x100(mm),IPA+0.1% DEA=40%,5mL/min)分離。在Rt=1.41min下獲得極性非對映異構體4-(2-胺基-5-((R)-1-甲基-5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：483.3(MH+),0.586min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.82(d,J=1.56Hz,1 H)7.74(t,J=7.83Hz,1 H)7.35(d,J=2.35Hz,2 H)7.33-7.15(m,5 H)5.09(t,J=5.87Hz,1 H)4.48(s,1 H))3.83-3.63(m,3 H)3.50(quint,J=8.22Hz,1 H)3.36(dd,J=9.39,7.43Hz,1H)2.78(s,3 H)2.67(dd,J=16.82,9.00Hz,1 H)2.42(dd,J=16.63,8.41Hz,1 H)。在Rt=2.16min下獲得較少極性非對映異構體4-(2-胺基-5-((S)-1-甲基-5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：483.3(MH+),0.585min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.92(d,J=2.35Hz,1 H)7.84(t,J=8.02Hz,1 H)7.51-7.21(m,7 H)5.18(t,J=5.87Hz,1 H)3.94-3.72(m,3 H)3.59(五重峰，J=8.22Hz,1 H)3.50-3.42(m,1 H)2.88(s,3 H)2.82-2.70(m,1 H)2.51(dd,J=16.82,8.61Hz,1 H)。
實例45 (S)-4-(2-胺基-5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺之合成
流程51
步驟1. 4-(6-氟吡啶-3-基)四氫-2H-哌喃-4-甲醛
向5-溴-2-氟吡啶(2.0g，11.36mmol)於二噁烷(35mL)中之溶液中添加四氫-2H-哌喃-4-甲醛(2.59g，22.73mmol)、Pd(OAc)2(0.25g，1.14mmol)、碳酸銫(7.41g，22.73mmol)及水(10.24μL，0.57mmol)、xantphos(0.98g，1.70mmol)。該混合物用氮氣吹掃持續5分鐘，所得混合物在油浴中加熱至110℃持續15小時。該混合物用乙酸乙酯稀釋，且用水、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析(ISCO)用0-80%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化，生成呈紅色油狀物之4-(6-氟吡啶-3-基)四氫-2H-哌喃-4-甲醛(560mg，2.68mmol，23.5%產率)。LCMS(m/z)：210(MH+),0.45min。
步驟2. (4-(6-氟吡啶-3-基)四氫-2H-哌喃-4-基)甲醇
向4-(6-氟吡啶-3-基)四氫-2H-哌喃-4-甲醛(560mg，2.68mmol)於甲醇(18mL)中之冰冷溶液中添加硼氫化鈉(91mg，2.41mmol)。反應溶液在環境溫度下攪拌30分鐘。在真空下移除溶劑。殘餘物用乙酸乙 酯稀釋，且用水、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，生成呈棕色油狀物之(4-(6-氟吡啶-3-基)四氫-2H-哌喃-4-基)甲醇(550mg，2.60mmol，97%)。LCMS(m/z)：212(MH+),0.42min。
步驟3. 2-氟-5-(4-(碘甲基)四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶
向三苯基膦(983mg，3.75mmol)、碘(952mg，3.75mmol)於二氯甲烷(20mL)中之冰冷溶液中添加咪唑(278mg，4.09mmol)。溶液在環境溫度下攪拌1h，繼而添加含(4-(6-氟吡啶-3-基)四氫-2H-哌喃-4-基)甲醇(360mg，1.70mmol)之10mL二氯甲烷。反應混合物在油浴中加熱至60℃持續48小時。過濾固體，濾液藉由矽膠急驟管柱層析(ISCO)用0-80%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化，生成呈淺黃色油狀物之2-氟-5-(4-(碘甲基)四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶(330mg，1.03mmol，60.3%產率)。LCMS(m/z)：322(MH+),0.77min。
步驟4. 2-氟-5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶
在-15℃下向(2-氟-5-(4-(碘甲基)四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶(330mg，1.03mmol)於THF(5mL)中之溶液中逐滴添加三第二丁基硼氫化鈉(N-selectride)(2.26mL，2.26mmol)。溶液在環境溫度下攪拌16小時。溶液在冰浴中再冷卻且添加0.3mL水。所得溶液攪拌10分鐘。在真空下移除溶劑，且殘餘物溶解於DCM中。過濾不溶性固體，且濾液藉由矽膠急驟管柱層析(ISCO)用0-80%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化，生成呈無色油狀物之2-氟-5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶(110mg，0.56mmol，54.8%產率)，>90%純度。LCMS(m/z)：196(MH+),0.64min。
步驟5. N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺
向2-氟-5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶(110mg，0.56mmol)於(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(1016μL，6.76mmol)及DIEA(246μL，1.41 mmol)中之溶液中添加碳酸鉀(156mg，1.12mmol)。所得混合物在油浴中加熱至160℃持續16h，反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用水、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析(ISCO)用0-100%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化，生成呈淺黃色固體狀之N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺(100mg，0.29mmol，51.8%產率)。LCMS(m/z)：343(MH+),0.63min。
步驟6. 5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺
向N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺(100mg，0.29mmol)於DCM(6mL)中之冰冷溶液中添加10mL 30% TFA之DCM溶液。所得溶液在0℃下攪拌15min。經由真空移除溶劑。所得殘餘物再溶解於乙酸乙酯中，且有機溶液用1M NaOH、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析(ISCO)用0-100%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化，生成呈白色固體狀之5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺(50mg，0.26mmol，89%產率)。LCMS(m/z)：193(MH+),0.35min。
步驟7. 3-溴-5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺
分兩部分向5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺(50mg，0.26mmol)於DCM(5mL)中之冰冷溶液中添加NBS(50.9mg，0.28mmol)。反應混合物在環境溫度下攪拌40min。反應溶液用乙酸乙酯稀釋，用水、碳酸氫鈉水溶液、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，且濃縮，生成呈黃色殘餘物之3-溴-5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺(70mg，0.26mmol，99%產率)。LCMS(m/z)：271/273(MH+),0.41min。
步驟8. (S)-4-(2-胺基-5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
向3-溴-5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺(70mg，0.26 mmol)於DME(4mL)中之溶液中添加(S)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲醯胺(298mg，0.77mmol)及碳酸鈉(0.64mL，1.29mmol)。該混合物用氮氣吹掃持續10分鐘，接著添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2(31.6mg，0.039mmol)。反應混合物在油浴中加熱至120℃持續2小時。反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用水、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且濃縮。所得殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析(ISCO)用0-100%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化，生成70mg粗產物，其藉由HPLC來純化，生成呈TFA鹽之(S)-4-(2-胺基-5-(4-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺(40.8mg，0.089mmol，34.5%產率)。LCMS(m/z)：450(MH+),0.61min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.22(t,J=7.83Hz,1 H)7.77-7.65(m,2 H)7.50(dd,J=11.74,7.43Hz,1 H)7.42-7.36(m,4 H)7.33(d,J=7.43Hz,2 H)7.21(d,J=11.74Hz,1 H)5.33(d,J=4.70Hz,1 H)4.08-3.94(m,2 H)3.83-3.65(m,4 H)1.97(ddd,J=13.40,8.12,5.09Hz,2 H)1.72(d,J=13.69Hz,2 H)1.35(s,3 H)
實例46 4-(3-胺基吡嗪-2-基)-N-苯甲基苯甲醯胺之合成
向N-苯甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲醯胺(150mg，0.445mmol)、3-氯吡嗪-2-胺(74.9mg，0.578mmol)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(36.3mg，0.044mmol)於DME(3.3mL)中之溶液中添加2M Na2CO3(1.11mL)。反應混合物在微波合成器處(120℃，10min)加熱。用EtOAc稀釋且用水洗滌兩次。接著用1N HCl (3 X15mL)萃取。酸性溶液用乙醚兩次(2 X15mL)洗滌，且接著用Na2CO3鹼化。繼而用EtOAc(20mL，3次)萃取且接著藉由飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且過濾，濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離來純化，接著在旋轉蒸發器上濃縮。殘餘物用乙醚濕磨以提供80.2mg所需產物。LCMS(m/z)：305.2(MH+),0.59min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.74(d,J=8.22Hz,1 H)8.41(s,1 H)8.06(dd,J=9.39,2.74Hz,1 H)8.01(d,J=8.61Hz,2 H)7.94(br.s.,1 H)7.83(d,J=8.22Hz,2 H)7.40-7.34(m,2 H)7.30(t,J=7.63Hz,2 H)7.22(d,J=7.43Hz,1 H)6.40(d,J=9.39Hz,1 H)5.12-5.03(m,1 H)3.75-3.60(m,2 H)。
方法2 實例127 (S)-4-(3-胺基-6-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. (S)-4-(3-胺基吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
向3-氯吡嗪-2-胺(288mg，2.22mmol),(S)-4-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基胺甲醯基)-3-氟苯基酸(500mg，1.48mmol)、PdCl2(dppf)-DCM(108mg，0.148mmol)、DME(1.1mL)之反應混合物中添加2M Na2CO3(3.703mL)。反應混合物在微波合成器處(120℃，12min)加 熱。向反應混合物中添加無水硫酸鈉，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析用EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離預純化。組合純溶離份且濃縮以提供389mg所需產物，68%產率。LCMS(m/z)：387(MH+),0.69min。
步驟2. (S)-4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
在0℃下向(S)-4-(3-胺基吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(389mg，1.006mmol)於乙腈(21mL)中之溶液中添加NBS(171mg，0.961mmol)。反應混合物在0℃下攪拌20min。在用飽和NaHCO3淬滅之後，且攪拌30min。反應混合物用EtOAc萃取3次，有機物藉由飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌，乾燥，過濾，且濃縮。粗材料無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：367(MH+),0.88min。
步驟3. (S)-4-(3-胺基-6-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
向(S)-4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(40mg，0.086mmol)、1,3-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1H-吡唑(38.2mg，0.172mmol)、PdCl2(dppf)-DCM(6.28mg，8.59μmol)及DME(644μL)之反應混合物中添加2M Na2CO3(215μL)。反應混合物在微波合成器處(120℃，12min)加熱。向反應混合物中添加無水硫酸鈉，過濾且濃縮。粗產物藉由auto-prep來純化以提供25mg呈TFA鹽之所需產物。LCMS(m/z)：481.3(MH+),0.73min；1H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 8.66(d,J=6.26Hz,1 H)8.17(s,1 H)8.02(s,1 H)7.76-7.51(m,3 H)7.45-7.16(m,3 H)5.07-4.09(m,1 H)3.72(s,3 H)3.62(m,2 H)2.33(s,3 H)。
實例128 (S)-4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. 4-(2-胺基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向500mL圓底燒瓶之3-溴吡啶-2-胺(5g，28.9mmol)中添加(3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)酸(7.44g，37.6mmol)、PdCl2(dppf)-DCM(2.115g，2.89mmol)、DME(108mL)及2M Na2CO3溶液(36.1mL)。反應混合物在油浴中在110℃下加熱4小時。反應混合物用EtOAc稀釋且用水洗滌三次，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離來純化，生成5.6g 4-(2-胺基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯，79%產率。LCMS(m/z)：247.1 (MH+),0.50min。
步驟2. 4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯
在0℃下分兩部分向4-(2-胺基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯(5.64g，22.90mmol)於乙腈(229mL)中之溶液中添加NBS(4.16g，23.36mmol)。反應混合物在0℃下攪拌20min。在用飽和Na2S2O3及NaHCO3淬滅之後，且攪拌30min。反應混合物用EtOAc萃取3次，有機物藉由飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌。乾燥且濃縮。粗材料用乙醚濕磨以提供7.05g 4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯，95%產率。LCMS(m/z)：327.1(MH+),0.66min。
步驟3. 4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸
向4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯(1.9g，5.84mmol)於THF(19.48mL)及MeOH(9.74mL，比率：1.000)中之溶液中添加LiOH(1M水溶液)(10.52mL，10.52mmol)。反應混合物攪拌5小時。在添加1N HCl(1.9mL)至pH 5之後，反應混合物用EtOAc處理，有機層經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：311.1/313.1(MH+),0.5min。
步驟4. (S)-4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
向4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(300mg，0.964mmol)於THF(8.036mL)中之溶液中添加(S)-2-胺基-2-(3-氯苯基)乙醇(331mg，1.157mmol)。反應混合物攪拌15小時。在添加水之後，反應混合物用EtOAc處理，有機層經無水Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗(S)-4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：464.1/466.1(MH+),0.69min。
步驟5. (S)-4-(2-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
向(S)-4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(85mg，0.183mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(93mg，0.366mmol)及PdCl2(dppf)(26.8mg，0.037mmol)於二噁烷(610μL)中之溶液中添加乙酸鉀(54mg，0.549mmol)。反應混合物在微波合成器處(120℃持續20min)加熱。反應混合物經矽藻土墊過濾。在濾液幾乎濃縮之後，粗(S)-4-(2-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：430.2(MH+關於酸)，0.57min。
步驟6. (S)-4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
在室溫下向粗(S)-4-(2-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(30mg，0.059mmol)於殘餘二噁烷中之溶液中添加4-溴-1-甲基-1H-1,2,3-三唑(14.24mg，0.088mmol)、PdCl2(dppf)(42.9mg，0.059mmol)、DME(195μl)及2M Na2CO3(130μl)。反應混合物攪拌5小時。在添加水及EtOAc之後，有機層用EtOAc萃取。有機層用水及鹽水洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗產物藉由製備型HPLC來純化。凍乾純溶離份，生成呈TFA鹽之(S)-4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(25%，經2個步驟)。LCMS(m/z)：467.3(MH+),0.61min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.64(m,1 H),8.31(m,1 H),8.25(m,2 H),8.2(m,1 H),7.82(m,1 H),7.4(m,3 H),7.28(m,2 H),7.22(m,1 H),5.11(m,1 H),4.07(s,3 H),3.78(m,2 H)。
實例129 (S)-4-(3-胺基-6-(6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺之合成
步驟1. (S)-4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
向3,5-二溴吡嗪-2-胺(826mg，3.27mmol)、(S)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲醯胺(600mg，1.634mmol)及PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(133mg，0.163mmol)於DME(12.3mL)中之溶液中添加2M Na2CO3(4.08mL)。反應混合物在微波合成器處(120℃，10min)加熱。反應混合物用EtOAc處理。有機層用飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，在真空中濃縮。粗產物用矽石急驟層析用0-100% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離來純化，且用乙醚濕磨以提供800mg(S)-4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺。LCMS(m/z)：415(MH+),0.73min。
步驟2. (S)-4-(3-胺基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)吡嗪-2- 基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
在脫氣之後即刻向(S)-4-(3-胺基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺(50mg，0.121mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(61.4mg，0.242mmol)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(9.88mg，0.012mmol)於二噁烷(302μL)中之溶液中添加乙酸鉀(35.6mg，0.363mmol)。反應混合物在微波合成器處(120℃持續20min)加熱。在用EtOAc稀釋之後，反應混合物經矽藻土墊過濾。在濃縮之後，粗(S)-4-(3-胺基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：379(MH+關於酸)，0.47min。
步驟3. (S)-4-(3-胺基-6-(6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
向(S)-5-胺基-6-(4-(2-羥基-1-苯基乙基胺甲醯基)苯基)吡嗪-2-基酸(55mg，0.145mmol)、5-溴吡啶-2(1H)-酮(38.0mg，0.218mmol)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2(11.88mg，0.015mmol)於DME(1091μL)中之溶液中添加2M Na2CO3(364μL)。反應混合物在微波合成器處(120℃，10min)加熱。反應混合物用EtOAc處理。有機層用飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，在真空中濃縮。粗產物藉由製備型HPLC來純化，生成4.3mg呈TFA鹽之(S)-4-(3-胺基-6-(6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺。LCMS(m/z)：428.2(MH+),0.55min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)3.60-3.75(m,2 H)5.03-5.12(m,1 H)6.40(d,J=9.39Hz,1 H)7.22(d,J=7.43Hz,1 H)7.30(t,J=7.63Hz,2 H)7.34-7.40(m,2 H)7.83(d,J=8.22Hz,2 H)7.94(br.s.,1 H)8.01(d,J=8.61Hz,2 H)8.06(dd,J=9.39,2.74Hz,1 H)8.41(s,1 H)8.74(d,J=8.22Hz,1 H)。
(S)-4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2,6-二氟 苯甲醯胺之合成
步驟1. 4-溴-2,6-二氟苯甲酸甲酯
在室溫下向4-溴-2,6-二氟苯甲酸(800mg，3.38mmol)於MeOH(11mL)中之溶液中緩慢添加三甲基矽烷基重氮甲烷(5.63mL，3.38mmol)，直至變成黃色溶液。添加少量AcOH直至黃色消失。所有揮發性材料均在真空中移除，生成4-溴-2,6-二氟苯甲酸甲酯(47%)。LCMS(m/z)：251.1(MH+),0.86min。
步驟2. 4-(2-胺基吡啶-3-基)-2,6-二氟苯甲酸甲酯
根據流程54中之步驟1，獲得4-(2-胺基吡啶-3-基)-2,6-二氟苯甲酸甲酯(9%)。LCMS(m/z)：485.2(MH+),0.64min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.11(m,1 H),7.76(m,2 H),7.37(m,1 H),7.27(m,2 H),7.20(m,3 H),5.09(m,1 H),4.03(s,3 H),3.73(m,2 H)。
步驟3、4及5. (S)-4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2,6-二氟苯甲醯胺
根據流程54中之步驟2、3及4，獲得(S)-4-(3-胺基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2,6-二氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：482/484(MH+),0.68min。
(+/-)-4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺之對掌性解析
流程57
(+/-)-4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺(121mg)藉由對掌性層析(AD-H管柱EtOH=60/40,1mL/min)解析。在7.41min處獲得極性化合物(峰1)4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺(50mg，41%)且在10.26min處獲得較少極性化合物(峰2)4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺(54mg，44%)。絕對立體化學基於生物化學資料及相應類似物之對接模型來指派。
實例130 (+/-)-4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺之合成
根據流程59，使用(+/-)-4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺，獲得(+/-)-4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺(11%)。LCMS(m/z)：428.2(MH+),0.72min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.19(m,1 H),7.91(s,1 H),7.82(m,1 H),7.77(m,1 H),7.64(m,1 H),7.48-7.33(m,2 H),7.31-7.12(m,5 H),3.91(s,3 H),3.10(m,1 H),2.20(m,1 H),1.33(m,2 H)。
實例131 4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基 環丙基)苯甲醯胺之合成
根據流程59，使用4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺，獲得4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺(53%)。LCMS(m/z)：428.3(MH+),0.69min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.11-8.02(m,1 H),7.94(m,1 H),7.97-7.88(m,2 H),7.85-7.71(m,2 H),7.43-7.30(m,2 H),7.26-7.14(m,2H),7.14-7.02(m,2 H),3.83(s,3 H),3.06-2.92(m,1 H),2.19-2.02(m,1 H),1.35-1.17(m,2 H)。絕對立體化學基於生物化學資料及對接模型來指派。
實例132 4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺
根據流程59，使用4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺，獲得4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺(42%)。LCMS(m/z)：428.3(MH+),1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.09-8.02(m,1 H),8.01-7.95(m,1 H),7.96-7.88(m,2 H),7.84-7.70(m,2 H),7.42- 7.29(m,2 H),7.25-7.02(m,4 H),3.83(s,3 H),3.10-2.87(m,1 H),2.24-2.00(m,1 H),1.33-1.15(m,2 H)。絕對立體化學基於生物化學資料及對接模型來指派。
實例133 (S)-4-(2-胺基-5-(1-氘離子基-甲基，5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. 1-氘離子基-甲基-1H-吡唑
在0℃下向NaH(1.851g，46.3mmol)於2-甲基THF(80mL)中之溶液中添加含1H-吡唑(3g，44.1mmol)之2-甲基THF(30mL)。反應混合物溫至室溫且攪拌1小時。向其中緩慢添加CD3I(3.02mL，48.5mmol)。反應混合物攪拌隔夜。在用NH4Cl溶液淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取。有機層用水及鹽水洗滌，過濾，且在真空中濃縮。粗產物蒸餾出，生成1-氘離子基-甲基-1H-吡唑(47%)(b.p.約為130℃，浴溫度約為200℃)。LCMS(m/z)：86(MH+),0.24min；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ ppm 7.55-7.42(m,1H),7.39-7.28(m,1H),6.28-6.15(m,1H)。
步驟2. 1-氘離子基-甲基，5-甲基-1H-吡唑
在-30℃下向n-BuLi(2.5M in己烷)(4.14mL，10.34mmol)於乙醚(20mL)中之溶液中緩慢添加1-氘離子基-甲基-1H-吡唑(880mg，10.34mmol)於乙醚(2mL)中之溶液。使反應混合物溫至室溫且攪拌2小時。在冷卻至0℃之後，硫酸二甲酯(0.931mL，9.82mmol)於乙醚(3mL)中之溶液緩慢添加至反應混合物中。反應混合物在室溫下攪拌3小時。在用飽和NH4Cl溶液淬滅之後，反應混合物用乙醚(x2)萃取，但水相仍含有產物。接著，水相用DCM(x2)萃取。組合之有機相經無水Na2SO4乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗產物藉由蒸餾來純化，生成1-氘離子基-甲基，5-甲基-1H-吡唑(59%)。LCMS(m/z)：100.0(MH+),0.24min；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ ppm 7.36(m,1H),6.00(m,1H),2.27(s,3H)。
步驟3. 4-溴-1-氘離子基-甲基，5-甲基-1H-吡唑
在0℃下向1-氘離子基-甲基，5-甲基-1H-吡唑(100mg，1.009mmol)於MeCN(3.362mL)中之溶液中緩慢添加NBS(171mg，0.958mmol)。在移除冰浴之後，反應混合物攪拌30分鐘。在用亞硫酸鈉溶液淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取。有機層用碳酸鈉溶液及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。獲得粗4-溴-1-氘離子基-甲基，5-甲基-1H-吡唑且無需進一步純化即用於下一步驟(92%)。LCMS(m/z)：178,180(MH+),0.61min。
步驟4. (S)-4-(2-胺基-5-(1-氘離子基-甲基，5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
根據流程54中之步驟6，使用4-溴-1-氘離子基-甲基，5-甲基-1H-吡唑，獲得呈游離鹼之(S)-4-(2-胺基-5-(1-氘離子基-甲基，5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(9%)。LCMS(m/z)：483.2(MH+),0.67min；1H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 8.00(d,J=1.9Hz,1H),7.86(t,J=7.9Hz,1H),7.58-7.23(m,8H), 5.19(t,J=5.8Hz,1H),3.93-3.77(m,2H),2.37(s,1H)。
實例134 (S)-4-(2-胺基-5-(氰基甲基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺之合成
向(S)-4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺(40mg，0.093mmol)及異噁唑-4-基酸(20.99mg，0.186mmol)於DME(697μl)中之溶液中添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2(7.59mg，9.30μmol)及2M Na2CO3溶液(232μl)。反應混合物在微波中在120℃下加熱30分鐘。反應混合物分配於EtOAc與水之間，有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗產物藉由製備型HPLC來純化。收集純溶離份且凍乾，生成呈TFA鹽之(S)-4-(2-胺基-5-(氰基甲基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺，7%產率。LCMS(m/z)：391.2(MH+),0.51min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.66(br.s.,1 H),7.99-7.95(m,1 H),7.92-7.82(m,2 H),7.44-7.39(m,4 H),7.38-7.32(m,2 H),7.31-7.25(m,1 H),5.25-5.18(m,1 H),3.92-3.90(m,2 H),3.90-3.80(m,2 H)。
實例135 (S)-4-(3-胺基-6-(2,2,6,6-四氘離子基-四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺之合成
流程60
步驟1. 2,2'-(1,3-二氧戊環-2,2-二基)二乙酸二乙酯
1,3-丙酮二甲酸二乙酯(12g，59.3mmol)、乙二醇(9.93mL，178mmol)及對甲苯磺酸單水合物(564mg，2.97mmol)於苯(80mL)中之溶 液在熱移除水下藉由Dean-Stark分水器回流10h。苯層用飽和碳酸氫鈉水溶液及鹽水洗滌。溶劑蒸餾出且所獲得之殘餘物藉由急驟層析(10-40% EtOAc/庚烷)來純化，生成2,2'-(1,3-二氧戊環-2,2-二基)二乙酸二乙酯(42%)。LCMS(m/z)：247.2(MH+),0.65min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 4.17(q,J=7.04Hz,4 H)4.03(s,4 H)2.95(s,4 H)1.27(t,J=7.24Hz,6 H)。
步驟2. 2,2'-(1,3-二氧戊環-2,2-二基)二乙醇-d4
在-10至0℃之間經10分鐘向LiAlD4於THF中之懸浮液(2.46g，58.7mmol於40mL中)中添加2,2'-(1,3-二氧戊環-2,2-二基)二乙酸二乙酯(6.06g)於THF(20mL)中之溶液。反應混合物在0℃下攪拌1h且藉由依序添加水(2.5mL)、15wt% NaOH(2.5mL)及水(7.5mL)淬滅。經淬滅之混合物的沈澱物藉由過濾移除且濾餅用THF小心地沖洗。濃縮濾液且獲得粗2,2'-(1,3-二氧戊環-2,2-二基)二乙醇-d4(92%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 4.06(s,4 H)2.49(s,2 H)1.98(s,4 H)。
步驟3. 1,4,8-三氧雜螺[4.5]癸烷-d4
2,2'-(1,3-二氧戊環-2,2-二基)二乙醇-d4(3.57g，21.5mmol)及4-甲基苯磺酸水合物(0.204g，1.07mmol)及苯(150mL)之混合物在回流溫度下用Dean-Stark裝置加熱3小時以移除水。冷卻反應混合物，用飽和NaHCO3(20mL x 2)洗滌，且組合水層，用Et2O(2 x 20mL)萃取，組合有機層，用鹽水(30mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾，且經由旋轉蒸發器在20毫巴下濃縮，且獲得淺黃色油狀物作為粗1,4,8-三氧雜螺[4.5]癸烷-d4(2.34g，73.5%產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 3.98(s,4 H)1.73(s,4 H)。
步驟4. 二氫-2H-哌喃-4(3H)-酮-d4
1,4,8-三氧雜螺[4.5]癸烷-d4(2.34g，15.8mmol)、甲醛(37%,4.6mL，63.2mmol)及吡啶4-甲基苯磺酸酯(0.198g，0.79mmol)相等地分 至兩個微波小瓶中。各小瓶在80℃下加熱30min及額外15min。組合反應混合物，使NaCl飽和，用Et2O萃取，直至藉由1H-NMR未在水層中發現所需產物。組合乙醚萃取物，濃縮且殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析(梯度Et2O/正戊烷)純化兩次，生成二氫-2H-哌喃-4(3H)-酮-d4。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 2.50(s,4 H)。
步驟5. 三氟甲烷磺酸3,6-二氫-2H-哌喃-4-基酯-d4
在-75至-65℃之間經10分鐘向新鮮製備之含LDA(10.6mmol)之THF(10mL)中逐滴添加二氫-2H-哌喃-4(3H)-酮-d4(1.05g)於THF(3.5mL)中之溶液。所得反應混合物在-75℃下攪拌3h，繼而經10分鐘添加含N-(5-氯吡啶-2-基)-1,1,1-三氟-N-((三氟甲基)磺醯基)甲烷磺醯胺之THF(4.16g/5mL)。反應混合物在-75℃下攪拌1h，接著溫度逐漸溫至室溫隔夜。反應混合物冷卻至0℃，用D2O(10mL)淬滅，且分離兩層，有機層依序用D2O(10mL)、檸檬酸(3 x 10mL，3g檸檬酸於30mL水中)、1M NaOH(2 x 10mL)、鹽水(30mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，濃縮且粗油性產物藉由矽膠急驟層析用梯度Et2O/正戊烷(0-60%)溶離來純化。純化產物進一步藉由蒸餾純化藉由Kugelrohr以105℃/3毫巴純化，生成三氟甲烷磺酸3,6-二氫-2H-哌喃-4-基酯-d4(500mg，21%產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 5.82(s,1 H)2.45(s,2 H)。
步驟6. 2-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -d4
三氟甲烷磺酸3,6-二氫-2H-哌喃-4-基酯-d4(500mg，2.12mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(806mg，3.18mmol)、乙酸鉀(644mg，6.56mmol),PdCl2(dppf)-CH2Cl2(86mg，0.106mmol)及對二噁烷(5mL)之混合物饋入微波反應器小瓶中，用氬氣吹掃持續5min，密封且經油浴在80℃下加熱隔夜。反應混合物冷卻至室溫，用EtOAc(10mL)稀釋，經中性氧化鋁插塞(1.25' H x 0.75' D)過濾，且濾餅用EtOAc充分洗滌。濃縮濾液，生成呈淺棕色固體狀之粗2-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-d4(>99%)。LCMS(m/z)：215.2(MH+),0.78min。
步驟7. (S)-4-(3-胺基-6-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺-d4
2-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-d4(300mg，1.4mmol)、(S)-4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺(694mg,1.68mmol)、Na2CO3水溶液(2M，2.8mL)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2(57.2mg，0,07mmol)及對二噁烷(6mL)之混合物饋入微波反應器小瓶中，用氬氣吹掃持續5min，密封且在115℃下加熱30分鐘。反應混合物用EtOAc(15mL)稀釋，過濾且濾液用1M HCl(4 x 30mL)洗滌，且組合水層，藉由固體NaOH鹼化至pH 12，用EtOAc(60mL)萃取，乾燥(Na2SO4)，濃縮且獲得具有一些雜質之第一批產物。濃縮在HCl水溶液洗滌液之後的EtOAc層且殘餘物用DMSO稀釋，藉由C18逆相製備型HPLC純化，且組合產物溶離份，使Na2CO3飽和，用EtOAc(60mL)萃取，且獲得呈淺黃色固體狀之第二批純產物。第一批產物藉由矽膠急驟層析用梯度丙酮/CH2Cl2(0-60%)溶離來純化。組合第二批產物且獲得(S)-4-(3-胺基-6-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺-d4(179mg，27.9%產率)。LCMS(m/z)：421.2(MH+),0.65min。
步驟8. (S)-4-(3-胺基-6-(2,2,6,6-四氘離子基-四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
(S)-4-(3-胺基-6-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺-d4(175mg)及Pd/C(10%,22mg)於甲醇中之混合物在氫氣球下在室溫下攪拌2小時。反應混合物經矽藻土墊薄層過濾，且濃縮濾液，提供粗白色固體。粗產物藉由急驟層析(0-60%丙酮 /CH2Cl2)來純化且純產物溶解於乙腈/水(1：1,10mL)中，冷凍且凍乾成呈白色粉末狀之(S)-4-(3-胺基-6-(2,2,6,6-四氘離子基-四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺(64%)。LCMS(m/z)：423.2(MH+),0.60min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.93-8.01(m,2 H),7.92(s,1 H),7.82-7.89(m,2 H),7.38-7.47(m,4 H),7.31-7.37(m,1 H),6.90(d,J=7.04Hz,1 H),5.32(dt,J=6.95,4.55Hz,1 H),4.68(br.s.,2 H),4.06(d,J=4.30Hz,2 H),2.93(tt,J=11.44,4.40Hz,1 H),1.79-1.99(m,4 H)。
實例136及137 4-(3-胺基-6-((S)-四氫呋喃-3-基)吡嗪-2-基)-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺及4-(3-胺基-6-((R)-四氫呋喃-3-基)吡嗪-2-基)-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺之合成
向(S)-4-(3-胺基-6-(呋喃-3-基)吡嗪-2-基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺(75mg，0.187mmol)於MeOH(1.873mL)中之溶液中添加氧化鉑(IV)(12.76mg，0.056mmol)。溶液藉由N2流脫氣持續15min。在用氫氣沖洗且配備有氫氣球之後，反應混合物攪拌24小時。反應混合物經矽藻土過濾。在移除揮發性材料之後，粗產物再配置反應。反應混合物再攪拌24小時。LCMS(m/z)：形成更多副產物。反應混合物經矽藻土過濾。在移除揮發性材料之後，向粗產物於MeOH(1.873mL)中之溶液中添加Pd-C(100mg，0.094mmol)。溶液藉由N2流脫氣持續15min。在用氫氣沖洗且配備有氫氣球之後，反應混合物攪拌24 小時。LCMS(m/z)：所有s.m.均消失。反應混合物經矽藻土過濾。在移除揮發性材料之後，粗產物藉由急驟層析(EtOAc/DCM)來純化，生成4-(3-胺基-6-(四氫呋喃-3-基)吡嗪-2-基)-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺(9mg，12%)。LCMS(m/z)：405.2(MH+),0.58min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.96-7.86(m,2 H),7.80(s,1 H),7.77-7.70(m,2 H),7.38-7.32(m,2 H),7.30-7.21(m,2 H),7.21-7.12(m,1 H),5.14(m,1 H),4.08-3.97(m,1 H),3.99-3.89(m,1 H),3.89-3.67(m,4 H),3.56-3.38(m,1 H),2.33-2.04(m,2 H),1.24-1.13(m,2 H)。外消旋產物在對掌性HPLC(AD管柱，5mL/min,MeOH=30%,SFC)中解析，生成4-(3-胺基-6-((S)-四氫呋喃-3-基)吡嗪-2-基)-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺及4-(3-胺基-6-((R)-四氫呋喃-3-基)吡嗪-2-基)-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺-3.4mg極性對映異構體(Rt=2.12min)及3.5mg較少極性對映異構體(Rt=2.66min)。絕對立體化學經任意指派。
方法3 實例173 4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(3-氯苯甲基)-2-氟苯甲 醯胺之合成
步驟1. 4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲酸甲酯(259mg，1.308mmol)、3-溴-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-胺(225mg，0.872mmol)及PdCl2(dppf)(64mg，0.087mmol)之溶液中添加DME(6.5mL)及2M Na2CO3溶液(3.2mL)。反應混合物在微波合成器處(120℃,10min)加熱。反應混合物用EtOAc處理。有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗產物藉由急驟層析(梯度EtOAc/庚烷)來純化以生成所需產物(192mg，67%)。LCMS(m/z)：332.2(MH+),0.63min。
步驟2. 4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(104mg，0.314mmol)於THF(698μL)及MeOH(349μL)中之溶液中添加LiOH(1M溶液)(565μL，0.565mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。反應混合物用1N HCl溶液淬滅至pH 5，且用EtOAc處理。有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。 粗產物用於下一步驟。LCMS(m/z)：318.3(MH+),0.5min。
步驟3. 4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(3-氯苯甲基)-2-氟苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(17mg，0.054mmol)及(3-氯苯基)甲胺(8.34mg，0.059mmol)於THF(268μL)中之溶液中添加PyBroP(27.5mg，0.059mmol)、DIEA(28.1μL，0.161mmol)及HOBT(9.02mg，0.059mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。所有揮發性材料均在真空中移除且溶解於DCM中。溶解於DCM中之粗產物負載至急驟層析管柱(梯度EtOAc/庚烷)，提供4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(3-氯苯甲基)-2-氟苯甲醯胺，87%產率。LCMS(m/z)：441.1(MH+),0.79min。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ ppm 7.92(s,1 H),7.74(m,1 H),7.63(m,2 H),7.35(m,4 H),6.14(s,1 H),4.48(m,2 H),3.92(m,2 H),3.43(m,2 H),1.73(m,4 H)。
實例174 (S)-N-(2-胺基-1-(3-氯苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. (S)-(2-(4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲 醯胺基)-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
向4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(35mg，0.110mmol)於DMF(368μL)中之溶液中添加(S)-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(33.9mg，0.110mmol)、aza-HOBt(22.52mg，0.165mmol)、EDC(31.7mg，0.165mmol)及DIEA(57.8μL，0.331mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3小時。反應混合物分配於EtOAc與水之間。有機層藉由NaHCO3、水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮，生成粗(S)-(2-(4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(>99%)。
步驟2. (S)-N-(2-胺基-1-(3-氯苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺
粗(S)-(2-(4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯溶解於DCM(1.0mL)中。在添加TFA(0.3mL)之後，反應混合物在室溫下攪拌10min。反應混合物用甲苯稀釋且濃縮至乾。粗產物藉由逆相製備型HPLC來純化。組合純溶離份且凍乾，生成呈TFA鹽之(S)-N-(2-胺基-1-(3-氯苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺(50%產率，經2個步驟)。LCMS(m/z)：470.1(MH+),0.67min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.95-7.85(m,2H),7.72(d,J=8.2Hz,1H),7.64(d,J=12.1Hz,1H),7.55(s,1H),7.49-7.38(m,3H),5.49(dd,J=5.7,8.8Hz,1H),4.04(dd,J=3.1,11.3Hz,2H),3.57(dt,J=2.0,11.5Hz,2H),3.51-3.41(m,2H),2.98-2.88(m,1H),1.97-1.76(m,4H)。
實例175 4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯 基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. 4-溴-2-氟苯甲酸第三丁酯
在0℃下經1小時逐份向4-溴-2-氟苯甲酸(60g，274mmol)於無水THF(700mL)中之攪拌溶液中依序添加DMF(2mL)、乙二醯氯(48mL，548mmol)。該混合物在0℃下攪拌30min，且接著在室溫下攪拌1小時。在減壓下移除溶劑，且殘餘物溶解於DCM(700mL)中。添加第三丁醇(97g，1315mmol)及吡啶(150mL)，且反應混合物在室溫下攪拌64小時。該混合物轉移至分液漏斗且用水(400mL)、2N NaOH水溶液(400mL)及鹽水(2 x 200mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空下濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟層析(0-5%乙酸乙酯/庚烷，經30min)來純化，生成呈油狀物之4-溴-2-氟苯甲酸第三丁酯(60g，80%)。LCMS(m/z)：218/220(MH+(-tBu)),1.11min；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ ppm 7.81-7.71(m,1 H)7.39-7.30(m,2 H)7.29(s,1 H)1.68-1.55(m,9 H)。
步驟2. 2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)苯甲酸第三丁酯
向2L圓底燒瓶中饋入4-溴-2-氟苯甲酸第三丁酯(30g，114mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(41.5g，164mmol)、乙酸鉀(32.1g，327 mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(2.67g，3.27mmol)及1,4-二噁烷(500mL)。反應混合物用氬氣脫氣持續15min，接著加熱至95℃且在此溫度下維持16小時。在冷卻之後，反應混合物蒸發至乾，溶解於DCM(300mL)中，且經矽藻土過濾，用DCM(3 x 100mL)洗滌。濾液用水(200mL)及鹽水(2 x 200mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。殘餘物使用矽膠急驟層析(0-10% EtOAc/庚烷，經30min)來純化，生成呈固體狀之2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲酸第三丁酯(27g，90%)。LCMS(m/z)：267(MH+(-tBu)),1.23min；1H NMR(500MHz,DMSO-d 6 )δ ppm 7.83(t,1 H)7.57(d,1 H)7.43(d,1 H)1.62-1.46(m,9 H)1.34-1.25(m,12 H)。
步驟3. 4-(3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
向2L圓底燒瓶中饋入2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲酸第三丁酯(54g，151mmol)、2-胺基-3-氯吡嗪(19.54g，151mmol)、2N碳酸鈉(158mL，317mmol)及DME(600mL)。反應混合物使用氬氣脫氣持續10min，且接著添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2(6.16g，7.54mmol)。反應混合物加熱至100℃且在此溫度下維持4小時。在冷卻之後，反應混合物傾至水(400mL)中且用EtOAc(3 x 200mL)萃取。組合之有機物用鹽水(3 x 200mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗材料使用矽膠急驟層析(0-70% EtOAc/庚烷，經50min)來純化，生成呈固體狀之4-(3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(37.7g，86%)。LCMS(m/z)：290(MH+),0.80min；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ ppm 7.98(d,1 H)7.91-7.81(m,2 H)7.65-7.46(m,2 H)6.35(br.s.,2 H)1.54(s,9 H)。
步驟4. 4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
在0℃下向4-(3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(37.7g，130mmol)於乙腈(800mL)中之攪拌溶液中一次性添加N-溴丁二醯亞胺 (23.19g，130mmol)。反應在0℃下攪拌2h，接著用飽和NaHCO3溶液(200mL)淬滅且在0℃下攪拌30min。該混合物用水(300mL)稀釋且用EtOAc萃取(3 x 250mL)。組合之有機物用水(200mL)及鹽水(2 x 200mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。粗材料使用矽膠急驟層析(0-40% EtOAc/庚烷，經40min)來純化，生成呈固體狀之4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(30.9g，64%)。LCMS(m/z)：368/370(MH+),1.03min；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ ppm 8.14(s,1 H)7.97-7.74(m,1 H)7.62-7.39(m,2 H)6.64(s,2 H)1.54(s,9 H)。
步驟5. 4-(3-胺基-6-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
向含4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(5.17g，46.2mmol)之DME(115mL)中添加4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼(15.36g，57.7mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(1.885g，2.309mmol)，且接著添加2M碳酸鈉水溶液(19.57g，185mmol)。反應混合物在100℃下加熱隔夜。LCMS指示反應完成。反應物經冷卻。向該混合物中添加1000mL EtOAc及300mL水。所得混合物攪拌30分鐘，且分離有機層。水層用EtOAc(3 X 200mL)萃取。組合有機層，用水洗滌三次及用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗產物藉由乙醚濕磨以提供呈淺黃色固體狀之4-(3-胺基-6-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(19.5g，45.6mmol，99%)。LCMS(m/z)：428.1(MH+),1.02min。
步驟6. 4-(3-胺基-6-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯在室溫下向4-(3-胺基-6-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(11g，25.7mmol)於DCM(100mL)及 MeOH(100mL)中之溶液中添加Pd/C(5g，25.7mmol)(10%於碳中，濕)。所得混合物抽真空，且接著再填充氫氣。該過程重複三次。接著反應在室溫下在H2氛圍下攪拌6小時。催化劑經Celite®濾出，且用DCM洗滌。濃縮濾液，且殘餘物溶解於DCM(60mL)中，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供呈淺黃色固體狀之4-(3-胺基-6-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(8.18g，19.04mmol，74%)。LCMS(m/z)：430.2(MH+),0.99min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.98-7.82(m,2 H),7.71-7.49(m,2 H),6.13(s,2 H),3.85(s,4 H),3.30(s,1 H),2.77-2.55(m,1 H),2.48(dt,J=3.62,1.91Hz,2 H),1.88-1.65(m,6 H),1.63-1.46(m,10 H)。
步驟7. 4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
向4-(3-胺基-6-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(14.34g，33.4mmol)中添加乙腈(250mL)、水(160mL)且接著添加3M HCl水溶液(55.6mL，167mmol)。反應混合物在25℃下攪拌30min，其藉由LCMS監測。該混合物在攪拌下用2M NaOH水溶液鹼化至pH 9。淺黃色固體沈澱出。乙腈在減壓下在室溫下移除。過濾固體且用水(2 X 30mL)洗滌，且在高真空下乾燥隔夜，提供呈淺黃色固體狀之4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(12g，31.1mmol，93%)。LCMS(m/z)：386.1(MH+),0.89min；1H NMR(400MHz，乙腈-d3)δ ppm 8.05-7.89(m,2 H)7.73-7.51(m,2 H),5.14(br.s.,2 H),3.30-3.08(m,1 H),2.64-2.48(m,2 H),2.40(br.s.,2 H),2.30-2.17(m,2 H),2.12-1.99(m,2 H),1.96(dt,J=4.99,2.40Hz,4 H),1.61(s,9 H)。
步驟8. 4-(3-胺基-6-(4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(9 g，23.35mmol)於甲醇(125mL)及THF(125mL)中之溶液冷卻至-78℃，且接著逐份添加NaBH4(2.297g，60.7mmol)。反應混合物接著在-78℃下攪拌40min，且LCMS指示反應完成。觀察到一些過度還原產物。反式與順式之比率為約8：1。在-78℃下緩慢添加100mL飽和NH4Cl，且接著該混合物逐漸溫至室溫。反應混合物藉由飽和NaHCO3淬滅，且藉由EtOAc(2 X 200mL)萃取。組合有機層，經Na2SO4乾燥，過濾，濃縮且在高真空下乾燥以提供4-(3-胺基-6-(4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(8.9g，22.97mmol，98%)，其無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：388.2(MH+),0.86min。
步驟9及10. 4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
4-(3-胺基-6-(4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(8.8g，22.71mmol)溶解於THF(100mL)中，且接著添加TBDMSCl(8.22g，54.5mmol)及咪唑(5.57g，82mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3小時。反應混合物藉由EtOAc(150mL)稀釋，藉由水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，且濃縮。粗材料藉由急驟層析用0-100%丙酮/DCM(10%丙酮/DCM於DCM中，10-50%，40min持續時間，320g矽膠管柱)溶離來純化，提供4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(7.7g，15.35mmol，67.6%)。LCMS(m/z)：502.3(MH+),0.96min。4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(7.789g，15.52mmol)於含4N HCl之二噁烷中的溶液在室溫下攪拌48小時。濃縮反應混合物。向淺黃色殘餘物中添加50mL Et2O，音波處理15min，過濾，用15mL Et2O洗滌兩次，且在真空抽吸下乾燥2h以提供呈淺黃色固體狀之4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(11,6.0g，15.99mmol，100%產率)。 LCMS(m/z)：332.0(MH+，酸)，0.48min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.06-7.79(m,2 H)。7.69-7.50(m,2 H),3.63-3.30(m,3 H)2.62-2.50(m,1 H),1.97-1.71(m,4 H),1.34-1.11(m,2 H),1.63-1.42(m,2 H)。
步驟11. 4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
向含4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(670mg，2.022mmol)之DMF(16.80mL)中添加aza-HOBt(413mg，3.03mmol)、EDC(581mg，3.03mmol)、DIEA(1.059mL，6.07mmol)及(S)-2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇鹽酸鹽(547mg，2.022mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3小時。LCMS指示產物。反應混合物用EtOAc稀釋，用飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，且濃縮。殘餘物藉由急驟層析用0-100% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離來純化以提供4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(920mg，1.66mmol，82%)。LCMS(m/z)：547/549(MH+),0.72min；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.74(dd,J=1.9,7.9Hz,1H),7.92(s,1H),7.81-7.70(m,1H),7.68-7.55(m,2H),7.52-7.39(m,2H),7.30(d,J=9.5Hz,1H),6.11(s,2H),5.09(t,J=5.7Hz,2H),4.58(d,J=4.4Hz,1H),3.69(dt,J=2.4,5.8Hz,2H),3.49-3.40(m,1H),2.55(t,J=3.5Hz,1H),1.98-1.76(m,4H),1.55(dd,J=2.8,12.6Hz,2H),1.29(d,J=13.6Hz,2H)。
(S)-N-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺之合成
流程65
步驟1. (S)-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯
向(s)-2-胺基-2-(3-氯苯基)乙醇(4g，19.22mmol)於THF(64.1mL)中之混合物中添加NaHCO3(1.776g，21.15mmol)，繼而添加Boc2O(4.91mL，21.15mmol)及DMAP(0.235g，1.922mmol)。反應混合物接著在室溫下攪拌隔夜。LCMS指示反應不完全。添加TEA(5.36mL，38.4mmol)，且反應混合物在室溫下攪拌5小時。添加水，且反應混合物藉由EtOAc萃取。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。粗材料藉由急驟層析用0-100% EtOAc/庚烷溶離來純化，提供(S)-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(4.0g，14.72mmol，77%)。LCMS(m/z)：216.1(MH+-56),0.75min。
步驟2. N-甲基-2-硝基苯磺醯胺
2-硝基苯-1-磺醯氯(4g，18.05mmol)於DCM(60.2mL)中之溶液用冰水浴冷卻至0℃。添加TEA(7.55mL，54.1mmol)及含2M甲胺之四氫呋喃(13.54mL，27.1mmol)。所得溶液在室溫下攪拌6小時。反應混合物用DCM稀釋，用飽和NaHCO3(2 x 100mL)、鹽水(100mL) 洗滌且接著經硫酸鎂乾燥。溶液經過濾，接著在減壓下濃縮，且於乙醚中濕磨，提供N-甲基-2-硝基苯磺醯胺(3.12g，14.44mmol，80%產率)。LCMS(m/z)：217.1(MH+),0.53min。
步驟3. (S)-(1-(3-氯苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)-胺基甲酸第三丁酯
向含N-甲基-2-硝基苯磺醯胺(3.50g，16.19mmol)之THF(56.6mL)中添加(S)-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(4g，14.72mmol)及三丁基膦(3.87g，19.14mmol)。接著在0℃下緩慢添加含(E)-二氮烯-1,2-二甲酸二第三丁酯(3.29g，19.14mmol)之THF(56.6mL)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。LCMS指示少量起始材料剩餘。反應物用EtOAc稀釋，用飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，且濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc/庚烷溶離來純化，提供(S)-(1-(3-氯苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(7g，14.9mmol，100%)。LCMS(m/z)：370.1(MH+-100),1.05min。
步驟4. (S)-N-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺
向含(S)-(1-(3-氯苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(7g，14.9mmol)之DCM(149mL)中添加HCl(4M於二噁烷中)(14.90mL，59.6mmol)。反應混合物在室溫下攪拌4小時。LCMS指示反應完成。白色沈澱物濾出且用DCM充分洗滌以提供2.8g呈HCl鹽之(S)-N-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺。殘餘物蒸發至乾，且在DCM(20mL)中攪拌30min。過濾固體且用DCM充分洗滌以提供另外400mg(S)-N-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺，其使總產率達到52.9%，95%純度。LCMS(m/z)：370.1(MH+-100),0.67min；1H NMR(500MHz，甲醇-d 4 )δ ppm 8.09-7.99(m,1H),7.92-7.77(m,3H),7.60(s,1H),7.53-7.35(m, 3H),4.74-4.62(m,1H),3.93(dd,J=9.0,14.7Hz,1H),3.53(dd,J=5.4,14.8Hz,1H),2.98(s,3H)。
實例176 (S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. 4-(3-胺基-6-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
向4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(21g，57.0mmol)於DME(127mL)中之溶液中添加PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(2.329g，2.85mmol)、2-(環己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧 硼(13.18g，62.7mmol)及2M Na2CO3水溶液(63.4mL)。反應在110℃下加熱16小時。向反應混合物中添加200mL乙酸乙酯，用水(2 x 100mL)、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析用0-100% EtOAc/DCM溶離來純化以提供4-(3-胺基-6-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(18g，48.5mmol，85%)。LCMS(m/z)：372.3(MH+),0.95min。
步驟2. 4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
向4-(3-胺基-6-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(15g，40.4mmol)於MeOH(800mL)中之懸浮液中添加DCM(100mL)，直至懸浮液變為均質溶液。在藉由N2流脫氣持續15min之後，Pd/C(10g，9.40mmol)添加至反應混合物中。在用氫氣沖洗三次之後，向此混合物中配備氫氣球。將反應混合物攪拌6小時。在反應混合物經Celite®墊過濾之後，揮發性材料在真空中移除。殘餘物藉由加熱且冷卻至室溫且靜置隔夜而溶解於MeOH(200mL)中。濾出棕色沈澱物，其提供4.5g 4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯。濃縮濾液且藉由加熱而溶解於EtOH(200mL)中。濾出第二棕色沈澱物，提供3.9g 4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(55.7%組合產率)。LCMS(m/z)：374.7(MH+),0.90min。
步驟3. 4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(4.5g，12.05mmol)於DCM(60.3mL)中之溶液中添加TFA(60.3mL)。反應混合物攪拌2小時。在用甲苯(30mL)稀釋之後，揮發性材料在真空中移除兩次以提供呈TFA鹽之4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(5.2g，12.06mmol，100%)。粗產物無需進 一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：318.5(MH+),0.55min。
步驟4. (S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(1.55g，4.88mmol)於DMF(16.28mL)中之溶液中添加HOAt(0.997g,7.33mmol)、EDC(1.498g，7.82mmol)、DIEA(2.61mL，14.65mmol)及(S)-N-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺(2.084g，5.13mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3h，且LCMS指示反應完成。反應混合物用EtOAc稀釋，且有機物藉由飽和Na2CO3、水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，且濃縮。粗材料藉由急驟層析用50% DCM/EtOAc(10%甲醇)溶離來純化以提供(S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺(2.68g，4.01mmol，82%)。LCMS：669.1(MH+),0.95min。
步驟5. (S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺
向(S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺(2.68g，4.01mmol)於DMF(20mL)中之溶液中添加4-巰基苯甲酸(1.235g，8.01mmol)及K2CO3(2.214g，16.02mmol)。反應混合物在氮氣下在40℃下加熱隔夜。添加水(50mL)中，且該混合物變為均質的。反應物在室溫下攪拌30min，且接著緩慢添加水(150mL)。淺黃色固體沈澱出。該混合物再攪拌30min，且濾出懸浮液。固體相繼用水、庚烷充分洗滌，且空氣乾燥1小時。固體懸浮於水中且在室溫下攪拌1h，且接著過濾。向固體中添加EtOAc，且在旋轉蒸發器上緩慢旋轉以移除過量乙酸乙酯直至約20mL EtOAc剩餘，過濾白色固體，且再溶解於 乙腈及水中，凍乾。溶液在凍乾器上乾燥，提供(S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺(1.31g，2.69mmol，67.2%)。LCMS(m/z)：484.3(MH+),0.66min；1H NMR(500MHz，甲醇-d 4 )δ ppm 7.90(s,1H),7.83(t,J=7.7Hz,1H),7.70(dd,J=1.1,8.0Hz,1H),7.63(d,J=10.7Hz,1H),7.48(s,1H),7.38(d,J=5.4Hz,2H),7.32(dt,J=1.9,4.6Hz,1H),5.33(dd,J=5.2,9.0Hz,1H),4.05(dd,J=3.5,11.0Hz,2H),3.57(dt,J=1.9,11.8Hz,2H),3.12-3.04(m,1H),3.04-2.88(m,2H),2.48(s,3H),1.89-1.88(m,1H),1.96-1.76(m,4H)。
(S)-2-胺基-2-苯基乙基胺基甲酸第三丁酯之合成
根據流程9，使用(R)-2-胺基-1-苯基乙醇，獲得(S)-2-胺基-2-苯基乙基胺基甲酸第三丁酯，47%產率。LCMS(m/z)：237.5(MH+),0.54min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.42-7.32(m,5 H),4.81(br.s.,1 H),4.11-4.00(m,1 H),3.44-3.28(m,1 H),3.28-3.13(m,1 H),1.49-1.35(m,9 H)。
(S)-2-氟-1-苯基乙胺之合成
步驟1. (S)-2-(2-羥基-1-苯基乙基)異吲哚啉-1,3-二酮
在室溫下向(S)-2-胺基-2-苯基乙醇(3g，21.87mmol)於水(26.5mL)及乙腈(46.4mL)中之溶液中添加鄰苯二甲酸2,5-二側氧基吡咯啶- 1-基甲酯(5.76g，20.78mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。在真空中移除乙腈之後，反應混合物接著用EtOAc萃取。有機物藉由水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮，生成(S)-2-(2-羥基-1-苯基乙基)異吲哚啉-1,3-二酮(2.2g，40%)。LCMS(m/z)：268(MH+),0.79min。
步驟2. (S)-2-(2-氟-1-苯基乙基)異吲哚啉-1,3-二酮
在室溫下向(S)-2-(2-羥基-1-苯基乙基)異吲哚啉-1,3-二酮(1.5g，5.61mmol)於PhCF3(18.71mL)中之溶液中添加三乙胺三氟化氫(5.48mL，33.7mmol)、全氟丁烷磺醯氟(1.019mL，5.67mmol)、DIEA(14.70mL，84mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1h，接著添加更多全氟丁烷磺醯氟(1.019mL，5.67mmol)。在5h之後，反應混合物用NaHCO3淬滅且用EtOAc萃取。經組合之有機層用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗產物藉由急驟層析(0-10% EtOAc/庚烷)來純化，生成(S)-2-(2-氟-1-苯基乙基)異吲哚啉-1,3-二酮(30%產率)。LCMS(m/z)：270.1(MH+),0.96min。
步驟3. (S)-2-氟-1-苯基乙胺
向(S)-2-(2-氟-1-苯基乙基)異吲哚啉-1,3-二酮(290mg，1.077mmol)於MeOH(3.59mL)中之溶液中添加肼(0.507mL，16.15mmol)。反應混合物在80℃下攪拌3小時。濾出白色沈澱物。濃縮濾液以生成粗(S)-2-氟-1-苯基乙胺，其無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：140.1(MH+),0.28min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.43-7.34(m,4 H),7.34-7.27(m,1 H),4.57(dd,J=3.7,8.8Hz,1 H),4.49-4.38(m,1 H),4.38-4.32(m,1H),4.32-4.25(m,1 H)。
(S)-2-疊氮基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙胺之合成
流程68
步驟1. (S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯
在室溫下向(S)-2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇(4.4g，16.26mmol)於DCM(80mL)中之溶液中添加TEA(6.80mL，48.8mmol)，繼而添加Boc酐(5.32g，24.4mmol)。反應混合物在室溫下攪拌16小時。反應混合物用EtOAc萃取。有機層用飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾，且濃縮。粗產物藉由急驟層析(梯度EtOAc/庚烷)來純化以提供(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(4.8g，88%)。LCMS(m/z)：280(MH+-tBu),0.79min。
步驟2. 甲烷磺酸(S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-(3-溴-5-氟苯基)乙酯
在0℃下向(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(4.8g，14.36mmol)於無水DCM(100mL)中之攪拌溶液添加三乙胺(4.00mL，28.7mmol)，繼而添加甲烷磺醯氯(1.343mL，17.24mmol)。反應物在0℃下攪拌1hr，此時LCMS指示反應已完成。反應混合物傾至飽和NaHCO3溶液(100mL)中。震盪該混合物，分離各層且水層用DCM(2 x 50mL)萃取。組合之有機物用NaHCO3溶液(50mL)及鹽水(50mL)洗滌，乾燥(MgSO4)，過濾且濃縮，生成呈極淺橙色固體狀之甲烷磺酸(S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-(3-溴-5-氟苯基)乙酯(5.92g，14.36mmol，100%產率)。1H NMR(500MHz,DMSO- d6)δ ppm 7.75(d,J=8.83Hz,1 H),7.43-7.55(m,2 H),7.31(d,J=9.46Hz,1 H),4.86-5.00(m,1 H),4.30(dd,J=10.09,5.04Hz,1 H),4.24(t,J=9.30Hz,1 H),3.16-3.23(m,3 H),1.36-1.44(m,9 H)。
步驟3. (S)-(2-疊氮基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
甲烷磺酸(S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-(3-溴-5-氟苯基)乙酯(5.92g，14.36mmol)溶解於無水DMF(60mL)中。添加疊氮化鈉(2.80g，43.1mmol)，且反應物加熱至70℃且在此溫度下維持2小時。在冷卻之後，反應混合物傾至水(100mL)中且用EtOAc(3 x 80mL)萃取。組合之有機物用水(50mL)及鹽水(3 x 50mL)洗滌，乾燥(MgSO4)，過濾且濃縮。急驟層析(AnaLogix，80g管柱，負載於DCM中，0-40% EtOAc/庚烷，經30min)生成呈白色固體狀之(S)-(2-疊氮基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(4.29g，11.94mmol，83%產率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.73(d,J=8.83Hz,1 H),7.48(t,J=4.26Hz,2 H),7.29(d,J=9.77Hz,1 H),4.80(d,J=8.20Hz,1 H),3.47(d,J=7.88Hz,2 H),1.44-1.38(m,9 H),1.36(br.s.,1 H)。
步驟4. (S)-2-疊氮基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙胺
向(S)-(2-疊氮基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(3.15g，8.77mmol)於二噁烷(40mL)中之攪拌溶液中添加鹽酸(10.96mL，43.8mmol)(4N溶液於二噁烷中)。反應加熱至40℃且在此溫度下維持2小時。在冷卻之後，反應混合物蒸發至乾，生成呈白色固體狀之(S)-2-疊氮基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙胺鹽酸鹽(2.59g，8.76mmol，100%產率)。
(S)-2-疊氮基-1-(3-氯-5-氟苯基)乙胺之合成
根據流程68，使用(S)-2-胺基-2-(3-氯-5-氟苯基)乙醇，獲得(S)-2-疊氮基-1-(3-氯-5-氟苯基)乙胺。LCMS(m/z)：215.1(MH+),0.48min。
(S)-2-疊氮基-1-(3-氯苯基)乙胺之合成
根據流程68，使用(S)-2-胺基-2-(3-氯苯基)乙醇，獲得(S)-2-疊氮基-1-(3-氯-5-氟苯基)乙胺。LCMS(m/z)：197(MH+),0.5min。
(S)-3-苯基嗎啉之合成
步驟1. (S)-2-氯-N-(2-羥基-1-苯基乙基)乙醯胺
在0℃下向(S)-2-胺基-2-苯基乙醇(0.852g，6.21mmol)、Et3N(0.952mL，6.83mmol)、DMAP(76mg，0.621mmol)於CH2Cl2(10mL)中之溶液中添加2-氯乙醯氯(0519mL，6.52mmol)，且所得混合物在0℃下攪拌15min。反應混合物用HCl水溶液(1M，20mL)、接著飽和NaHCO3(20mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，濃縮，進一步在高真空下乾燥且獲得呈白色固體狀之(S)-2-氯-N-(2-羥基-1-苯基乙基)乙醯胺(0.60g，45.2%產率)。LCMS(m/z)：214(MH+),0.44min。
步驟2. (S)-5-苯基嗎啉-3-酮
在0℃下向(S)-2-氯-N-(2-羥基-1-苯基乙基)乙醯胺(600mg，2.8mmol)於無水THF溶液中之溶液中添加NaH礦物油懸浮液(247mg，6.18mmol)。所得混合物在室溫下攪拌隔夜。反應混合物濃縮至乾，且殘餘物分配於CH2Cl2/鹽水/H2O(20mL/18mL/2mL)之間。CH2Cl2層經無水Na2SO4乾燥，過濾，在真空中濃縮。獲得呈白色固體狀之粗產物(S)-5-苯基嗎啉-3-酮(498mg，97%)。粗產物無需進一步純化直接用於下一步驟。LCMS(m/z)：178.2(MH+),0.47min。
步驟3. (S)-3-苯基嗎啉
在室溫下經5分鐘向LiAlH4/THF漿液(0.47g/2mL)中逐滴添加含(S)-5-苯基嗎啉-3-酮之THF溶液(481mg於6mL中)。所得混合物其後在室溫下攪拌1小時，接著用72℃油浴加熱隔夜，接著冷卻至0℃，藉由依序添加H2O(0.47mL)、3M水溶液NaOH(0.47mL)及H2O(1.4mL)淬滅，且經淬滅之殘餘物用Et2O(30mL)稀釋，攪拌10min且藉由過濾分離乙醚溶液。濃縮濾液，進一步在真空下乾燥且獲得呈無色固體狀之(S)-3-苯基嗎啉(424mg，96%產率)。LCMS(m/z)：164.2(MH+),0.33min。
(S)-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯之合成
步驟1. (R)-1-(3-氯苯基)-2-(甲基胺基)乙醇
在流程9中製備之(R)-(2-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(2.48g,9.13mmol)溶解於THF(30.4mL)中，且添加LiAlH4(1.039g，27.4mmol)。反應混合物在回流下加熱6h且接著冷卻。添加水(1.06mL)，繼而添加NaOH水溶液(15%,3mL)及水(1.06mL)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。固體沈澱物經Celite®過濾且用EtOAc充分沖洗。濃縮濾液。粗產物(R)-1-(3-氯苯基)-2-(甲基胺基)乙醇(1.75g，9.43mmol，100%)無需進一步純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：186.1(MH+),0.43min。
步驟2. (R)-(2-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯
(R)-1-(3-氯苯基)-2-(甲基胺基)乙醇(1.75g，9.43mmol)溶解於THF(31.4mL)中，且接著添加Boc酐(2.298mL，9.90mmol)。反應混合物在室溫下攪拌2小時。LCMS指示反應完成。濃縮反應混合物，且藉由急驟層析純化以提供(R)-(2-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯(2.0g，7.00mmol，74.3%)。LCMS(m/z)：212.1(MH+-56),0.94min。
步驟3. (S)-(2-(3-氯苯基)-2-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)乙基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯
向(R)-(2-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯(2.0g，7.00mmol)於THF(23.33mL)中之混合物中添加鄰苯二甲醯亞胺(1.339g，9.10mmol)及PPh3(3mmol PPh3/1g樹脂，2.34g，7.02mmol)。接著在室溫下緩慢添加含DTBAD(1.660g，7.21mmol)之THF，且反應混合物在室溫下攪拌隔夜。反應混合物經Celite®過濾且用EtOAc洗滌。濃縮濾液，再溶解於EtOAc中，用飽和Na2CO3、水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，且濃縮。粗產物藉由急驟層析來純化以提供(S)-(2-(3-氯苯基)-2-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)乙基)(甲 基)胺基甲酸第三丁酯(1.96g，4.72mmol，67.5%)。LCMS(m/z)：315.1(MH+-100),1.19min。
步驟4. (S)-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯
向(S)-(2-(3-氯苯基)-2-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)乙基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯(1.96g，4.72mmol)於乙醇(15.75mL)中之溶液中添加水合肼(2.296mL，47.2mmol)。反應混合物在60℃下加熱2小時。反應混合物接著經矽藻土墊過濾且濃縮濾液。殘餘物再溶解於乙醇中且經Celite®墊過濾以移除額外白色固體。NMR顯示粗材料中存在雜質。粗產物經矽石插塞過濾，藉由DCM/EtOAc(2：1比率)洗滌且用DCM/EtOAc(20%甲醇，0.5% NH3於甲醇中)(1：1比率)進行急驟層析以提供(S)-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯(1.2g，89%產率)。LCMS(m/z)：285.1(MH+),0.65min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.37(s,1H)7.26(3H),4.20(br.s.,1H),2.85-2.77(m,3H),1.51-1.38(m,9H)。
(S)-2-胺基-4-環丙基丁-3-炔-1-醇之合成
步驟1. (S)-N-((S)-1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-環丙基丁-3-炔-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
含3.0M乙基溴化鎂之Et2O(0.360mL，1.081mmol)添加至乙炔基環丙烷(71.5mg，1.081mmol)於THF(4mL)中之溶液中。溶液加熱至50℃持續1h，接著所得Grignard添加至(S,E)-N-(2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(100mg，0.360mmol)於DCM(4.00mL)中之-78℃溶液中，且使反應溫至室溫。在3h之 後，反應物用飽和NH4Cl水溶液淬滅。分離各層且有機物經硫酸鎂乾燥且濃縮以提供(S)-N-((S)-1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-環丙基丁-3-炔-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺，其直接使用。LCMS(m/z)：344.1(MH+),1.23min。
步驟2. (S)-2-胺基-4-環丙基丁-3-炔-1-醇
含4.0N HCl之二噁烷(0.873mL，3.49mmol)添加至(S)-N-((S)-1-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-4-環丙基丁-3-炔-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(120mg，0.349mmol)於MeOH(4mL)中之室溫溶液中。30分鐘之後，濃縮反應物，接著與苯共沸以提供呈HCl鹽之(S)-2-胺基-4-環丙基丁-3-炔-1-醇。LCMS(m/z)：126.2(MH+),0.50min。
(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-(甲硫基)苯基)乙醇之合成
步驟1：(S)-4-(3-氟-5-(甲硫基)苯基)-2,2-二甲基噁唑啶-3-甲酸第三丁酯
Xantphos(13.91mg，0.024mmol)、Pd2(dba)3(22.02mg，0.024mmol)、(S)-4-(3-溴-5-氟苯基)-2,2-二甲基噁唑啶-3-甲酸第三丁酯(300mg，0.802mmol)、DIEA(700μl，4.01mmol)及甲烷硫醇鈉(112mg，1.603mmol)於甲苯(2.6mL)中之混合物在110℃下經微波加熱持續18min。添加EtOAc，且用飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌。過濾該混合物，濃縮且藉由急驟層析用0-60% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供呈油狀物之(S)-4-(3-氟-5-(甲硫基)苯基)-2,2-二甲基噁唑啶-3-甲酸第三丁酯(278mg，102%)。LCMS(m/z)：286.1(MH+-56),1.14min。
步驟2：(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-(甲硫基)苯基)乙醇
(S)-4-(3-氟-5-(甲硫基)苯基)-2,2-二甲基噁唑啶-3-甲酸第三丁酯(278mg，0.814mmol)於含4M HCl之二噁烷(2.4mL)中的溶液加熱至80℃隔夜。仍有一些起始材料剩餘。添加更多含4M HCl之二噁烷(2.035mL，8.14mmol)，且在80℃下再加熱10小時。在降低之真空下移除溶劑以提供(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-(甲硫基)苯基)乙醇(194mg，0.814mmol，100%)。LCMS(m/z)：170.1(MH+-56),0.26min。
(S)-2-胺基-2-(3-(甲硫基)苯基)乙醇之合成
根據流程72，使用(S)-4-(3-溴苯基)-2,2-二甲基噁唑啶-3-甲酸第三丁酯，獲得(S)-2-胺基-2-(3-(甲硫基)苯基)乙醇。LCMS(m/z)：184(MH+),0.41min。
(S)-2-胺基-2-(3-(氯甲基)-5-氟苯基)乙醇之合成
步驟1. (S)-4-(3-(氯甲基)-5-氟苯基)-2,2-二甲基噁唑啶-3-甲酸第三丁酯
向(S)-4-(3-氟-5-(羥基甲基)苯基)-2,2-二甲基噁唑啶-3-甲酸第三丁酯(330mg，1.014mmol)於無水DMSO(2.028mL)中之溶液中逐份添加2,4,6-三氯-1,3,5-三嗪(112mg，0.609mmol)。該混合物在室溫下攪拌30min。該混合物用EtOAc稀釋，且分離。有機相用H2O(5×30mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。殘餘物藉由 急驟層析用0-100% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供(S)-4-(3-(氯甲基)-5-氟苯基)-2,2-二甲基噁唑啶-3-甲酸第三丁酯(329mg，94%)。LCMS(m/z)：288.1(MH+-56),1.12min。
步驟2：(S)-2-胺基-2-(3-(氯甲基)-5-氟苯基)乙醇
向(S)-4-(3-(氯甲基)-5-氟苯基)-2,2-二甲基噁唑啶-3-甲酸第三丁酯(140mg，0.407mmol)於無水DCM(1.357mL)中之溶液中逐份添加含4N HCl之二噁烷(1.018mL，4.07mmol)。該混合物在80℃下回流隔夜。反應不完全。添加更多含4N HCl之二噁烷(1.018mL，4.07mmol)，且再回流24小時。在降低之真空下移除溶劑以提供(S)-2-胺基-2-(3-(氯甲基)-5-氟苯基)乙醇(70mg，84%).LCMS(m/z)：204(MH+),0.41min。
(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)乙醇之合成
步驟1. (3-溴-5-氟苯基)甲醇
在0℃下經30分鐘向3-溴-5-氟苯甲酸(4.51g，20.59mmol)於THF(41.2mL)中之懸浮液中逐滴添加BH3.THF(41.2mL，41.2mmol)，接著使反應混合物返回室溫且在室溫下攪拌隔夜。緩慢添加甲醇(40mL)且在室溫下攪拌1小時。THF及甲醇在真空中移除。殘餘物接著藉由EtOAc萃取，且用飽和NaHCO3洗滌。有機物經乾燥且濃縮。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：187.2(MH+-18),0.66min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.32(s,1H),7.19-7.14(m,1H),7.05(tdd,J=0.7,1.5,9.1Hz,1H),4.70(br.s.,2H),1.78(br.s.,1H).
步驟2. 1-溴-3-氟-5-(氟甲基)苯
在0℃下向(3-溴-5-氟苯基)甲醇(4g，19.51mmol)於DCM(39.0mL)中之溶液中添加DAST(3.35mL，25.4mmol)。使反應混合物返回室溫且在室溫下攪拌隔夜。添加飽和NaHCO3，反應混合物接著藉由DCM萃取。有機物經乾燥且濃縮。粗材料藉由急驟層析(0-10% EtOAc/庚烷)來純化以生成呈無色油狀物之最終產物。LCMS(m/z)：無質量(MH+),0.86min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.30(s,1H),7.23(d,J=8.2Hz,1H),7.03(d,J=8.6Hz,1H),5.41(s,1H),5.29(s,1H)。
步驟3. 3-氟-5-(氟甲基)苯甲醛
1-溴-3-氟-5-(氟甲基)苯(1.30g，6.28mmol)溶解於THF(31.4mL)中，接著冷卻至-78℃，在-78℃下添加丁基鋰(2.5M於己烷中)(2.76mL,6.91mmol)，反應混合物接著在-78℃下攪拌30min。添加DMF(0.972mL，12.56mmol)，在-78℃下攪拌1h之後，反應混合物藉由HCl淬滅且反應混合物接著藉由EtOAc萃取，有機物經乾燥且濃縮以生成粗產物。粗材料無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：無質量(MH+),0.60min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 10.08-9.93(m,1H),7.68(s,1H),7.56(d,J=8.2Hz,1H),7.37(d,J=7.8Hz,1H),5.53(s,1H),5.42(s,1H)
步驟4. (R,E)-N-(3-氟-5-(氟甲基)苯亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
向3-氟-5-(氟甲基)苯甲醛(890mg，5.70mmol)及(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(760mg，6.27mmol)於DCE(19.0mL)中之溶液中添加硫酸銅(II)(無水)(1.820g，11.40mmol)，懸浮液在氮氣下在60℃下在油浴中攪拌隔夜。懸浮液變為淺藍色。冷卻，反應混合物經矽藻土插塞過濾且用DCM沖洗，濃縮濾液以生成粗產物。粗產物藉由急驟層析(0-30% EtOAc/庚烷)來純化以生成呈淺黃色油狀物之(R,E)-N-(3-氟-5-(氟甲基)苯亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(900mg，60.9%產率)。LCMS(m/z)：260.1(MH+),0.88min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.57(s,1H),7.60(s,1H),7.56(d,J=8.8Hz,1H),7.26-7.22(m,1H),5.50(s,1H),5.38(s,1H),1.29-1.23(m,9H)
步驟5. (R)-N-((R)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)烯丙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
二甲基鋅(2M於甲苯中)(0.434mL，0.868mmol)及乙烯基溴化鎂(1M於THF中)(4.51mL，4.51mmol)在室溫下在氬氣下混合20min，接著冷卻至-78℃，接著逐滴添加含(R,E)-N-(3-氟-5-(氟甲基)苯亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(0.900g，3.47mmol)之無水THF(11.57mL)，維持內部溫度在-74℃至-72℃之間，在添加之反應混合物在-78℃下攪拌1h之後，反應物藉由飽和NH4Cl淬滅，THF在真空中移除，接著藉由EtOAc萃取。有機物藉由水及鹽水洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析(0-30% EtOAc/庚烷)來純化以生成產物660mg，LCMS(m/z)：288.0(MH+),0.83min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.14(s,1H),7.03(d,J=9.0Hz,1H),7.07(d,J=9.4Hz,1H),5.90(ddd,J=7.4,10.1,17.3Hz,1H),5.45-5.35(m,2H),5.35- 5.25(m,2H),5.01-4.94(m,1H),3.45(br.s.,1H),1.30-1.22(m,9H)
步驟6. (R)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)丙-2-烯-1-胺
在0℃下含(R)-N-((R)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)烯丙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(660mg，2.297mmol)之MeOH(7.66mL)添加至HCl(4M於二噁烷中)(5.742mL，22.97mmol)中，反應混合物在室溫下攪拌2h，反應混合物濃縮至乾。添加飽和Na2CO3，反應混合物接著藉由EtOAc萃取。有機物經乾燥且濃縮以生成粗產物。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：184.1(MH+),0.40min。
步驟7. (R)-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)烯丙基)胺基甲酸第三丁酯
向(R)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)丙-2-烯-1-胺(421mg，2.30mmol)於DCM(7.6mL)中之溶液中添加Boc2O(640μl，2.76mmol)，反應混合物在室溫下攪拌隔夜，濃縮。粗產物藉由急驟層析(0-20% EtOAc/庚烷)來純化以生成(R)-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)烯丙基)胺基甲酸第三丁酯。LCMS(m/z)：228.1(MH+-56)),0.91min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.08(s,1H),6.99(d,J=9.0Hz,2H),5.95(ddd,J=5.5,10.6,16.8Hz,1H),5.42(s,1H),5.30(s,1H),5.30-5.13(m,3H),4.86(br.s.,1H),1.44(s,9H)。
步驟8. (S)-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯
含(R)-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)烯丙基)胺基甲酸第三丁酯(410mg，1.447mmol)之DCM(14.5mL)冷卻至-78℃，反應混合物藉由O3(來自臭氧產生器)鼓泡持續5min。反應混合物為淺藍色，使N2鼓泡通過以去除O3，接著添加含NaBH4(547mg，14.47mmol)之乙醇(10mL)，反應混合物在-78℃下攪拌10min，接著使其返回室溫。在30min之後，添加飽和NH4Cl，接著添加甲醇，濃縮反應混合物，接著藉由EtOAc萃取。有機物藉由飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌，乾燥且濃縮以生成粗產物。粗產物藉由急驟層析來純化，生成(S)-(1-(3-氟- 5-(氟甲基)苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(223mg，54%產率)。LCMS(m/z)：232.2(MH+-56),0.73min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.10(s,1H),7.02(d,J=9.4Hz,2H),5.43(s,1H),5.35-5.28(m,1H),4.78(br.s.,1H),3.95-3.78(m,2H),1.44(br.s.,9H)。
步驟9. (S)-2-胺基-2-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)乙醇
在室溫下向(S)-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(220mg，0.766mmol)於DCM(2.5mL)中之溶液中添加HCl(4M於二噁烷中)(1.9mL 7.66mmol)，反應混合物在室溫下攪拌1小時。反應混合物接著濃縮至乾。殘餘物自DCM及庚烷再結晶。過濾固體且空氣乾燥以生成呈白色固體狀之(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)乙醇(145mg，0.908mmol，100%產率)HCl鹽。LCMS(m/z)：188.2(MH+),0.32min。
實例177及178 4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺及4-(3-胺基-6-((1s,4R)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺之合成
流程75
步驟1. 4-(3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向含3-氯吡嗪-2-胺(27g，208mmol)之DME(391mL)及碳酸鈉(66.3g，625mmol)中添加2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲酸甲酯(64.2g，229mmol)及PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(8.51g，10.42mmol)。反應混合物用N2吹掃且在油浴中在100℃下加熱3小 時。反應混合物分配於EtOAc與水之間。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗產物藉由EtOAc及庚烷(2：3)再結晶以生成4-(3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯，84%產率。LCMS(m/z)：248.1(MH+),0.58min。
步驟2. 4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
在0℃下向4-(3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(31.5g，127mmol)於乙腈(430mL)中之懸浮液中添加NBS(23.9g，134mmol)。反應混合物在冰浴中攪拌1h，添加飽和碳酸氫鈉，攪拌30min且產物用乙酸乙酯萃取。組合有機萃取物，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗產物在EtOAc及庚烷中再結晶，生成呈棕色固體狀之4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯，96%產率。LCMS(m/z)：326.0/328.0(MH+),0.87min。
步驟3. 4-(3-胺基-6-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(10g，30.7mmol)於DME(77mL)中之溶液中添加4,4,5,5-四甲基-2-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)-1,3,2-二氧硼(9.79g，36.8mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(1.252g，1.533mmol)、H2O(25.6mL)且接著最後添加碳酸鈉(9.75g，92mmol)。反應在100℃下在油浴中加熱2小時。冷卻。反應混合物藉由EtOAc萃取3次，有機物用水及鹽水洗滌，乾燥且濃縮。粗材料在DCM及庚烷(1：1)中再結晶，生成產物4-(3-胺基-6-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯，75%產率。LCMS(m/z)：382.2(MH+),0.82min。
步驟4. 4-(3-胺基-6-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
4-(3-胺基-6-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲 酸甲酯(6.1g，15.83mmol)溶解於MeOH(150mL)及EtOAc(80mL)中，反應混合物用N2沖洗15min，接著添加Pd-C(DEGASSA)(6g，5.64mmol)，反應混合物接著用氫氣球充氣且在室溫下攪拌隔夜。反應混合物經矽藻土過濾，用EtOAc及甲醇洗滌。濃縮濾液以生成粗產物，其無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：388.0(MH+),0.79min。
步驟5. 4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向4-(3-胺基-6-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(6.2g，16.00mmol)於乙腈(100mL)、水(40mL)中之溶液中添加3M水溶液HCl(13.34mL，80mmol)。反應物在室溫下攪拌30min。反應混合物用6M NaOH(10mL)鹼化，接著使用飽和NaHCO3以調節至pH 8。在真空中移除乙腈之後，過濾固體懸浮液殘餘物且用水及庚烷洗滌，空氣乾燥以生成呈淺黃色固體狀之4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯，67%產率。LCMS(m/z)：344.0(MH+),0.70min。
步驟6. 4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
在0℃下向4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(3.25g，9.47mmol)於甲醇(100mL)及THF(20mL)中之溶液中添加NaBH4(0.358g，9.47mmol)。30分鐘之後，緩慢添加飽和NH4Cl，接著在室溫下攪拌1小時。甲醇及THF在真空中移除。殘餘物藉由EtOAc萃取3次，組合之有機物用NaHCO3及水洗滌，乾燥且濃縮。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：346.4(MH+),0.63min(反式)及0.66min(順式)；反式/順式(約4：1)。
步驟7. 4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸及4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯 (3.25g，9.41mmol)於MeOH(15.68mL)及THF(15.68mL)中之溶液中加入LiOH 1M水溶液(23.53mL，23.53mmol)。反應物在室溫下攪拌2h，緩慢添加6M HCl(3.9mL)。甲醇及THF在真空中移除，過濾殘餘物(黃色固體懸浮液)。固體用水及庚烷洗滌，空氣乾燥以生成粗產物。粗產物無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：332.1(MH+),0.49min(反式)及0.53min(順式)。
步驟8. 4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺及4-(3-胺基-6-((1s,4R)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸及4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(19.45mg，0.053mmol)之混合物中添加NMP(0.5mL)、胡尼希鹼(0.042mL，0.240mmol)及(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)乙醇-HCl(9mg，0.048mmol)。接著添加HATU(36.6mg，0.096mmol)。反應在室溫下攪拌1小時，繼而LCMS。向粗反應物中添加0.5mL NMP，過濾，藉由製備型HPLC純化，其中兩種異構體分離為呈反式之4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺及呈順式之次要4-(3-胺基-6-((1s,4R)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺。兩種產物凍乾成TFA鹽。關於反式非對映異構體，1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.84-7.70(m,2 H),7.64-7.47(m,2 H),7.19(s,1 H),7.09(d,J=9.78Hz,1 H),6.98(d,J=9.00Hz,1 H),5.36(s,1 H),5.24(s,1 H),5.13(t,J=5.87Hz,1 H),3.87-3.70(m,2 H),3.59-3.45(m,1 H),2.62-2.49(m,1 H),2.05-1.92(m,2 H),1.91-1.79(m,2 H),1.57(qd,J=12.98Hz,2.93Hz,2 H),1.39-1.24。關於順 式非對映異構體，1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.93-7.81(m,2H)7.75-7.58(m,2H)7.29(d,J=9.78Hz,1 H),7.19(d,J=9.78Hz,1H),7.07(d,J=9.00Hz,1H),5.45(s,1 H),5.33(s,1 H),5.22(t,J=5.67Hz,1H),4.01(br.s.,1 H),3.94-3.77(m,2 H),2.80-2.68(m,1 H),2.12-1.96(m,2 H)1.91-1.80(m,2 H),1.77-1.60(m,4 H)。
(S)-N-(2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺之合成
步驟1. 3-胺基-5-氟苯甲酸甲酯
3-溴-5-氟苯甲酸(6.12g，33.1mmol)溶解於MeOH(10mL)中且在冰水浴中冷卻且相繼逐滴添加甲苯(50mL)及TMS-重氮甲烷(19.84mL，39.7mmol)。使反應混合物返回室溫持續1h且在真空中濃縮且殘餘物溶解於DCM/乙醚中且經短矽石插塞過濾且在真空中蒸發濾液，提供所需產物，其接著溶解於MeOH(60mL)中且添加Pd/C 10wt% 3.3g且該混合物抽真空且在1atm氫氣下攪拌隔夜且次日早晨LCMS指示所需產物。反應混合物經矽藻土過濾且濾液在真空中濃縮且殘餘物與甲苯共沸兩次且原樣用於下一步驟(99%)。LCMS(m/z)：211.1(MH+),0.55min。
步驟2. 3-氟-5-碘苯甲酸甲酯
3-胺基-5-氟苯甲酸甲酯溶解於5.0N HCl(68.5mL，343mmol)中且冷卻至0℃。逐滴添加溶解於3.0mL水中之NaNO2(2.51g，36.4mmol)。接著經30分鐘添加溶解於45mL水中之KI(6.59g，39.7mmol)且該混合物在室溫下攪拌1h且反應混合物用Et2O(200mL)萃取兩次且接著乾燥(硫酸鎂)，過濾且在真空中濃縮，生成粗產物，其藉由急驟層析(0-20% EtOAc/庚烷)來純化，提供5.49g呈黃色糖漿狀之所需產物(59%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.18(s,1H),7.69(d,J=9.0Hz,1H),7.63(dd,J=7.6,1.4Hz,1H),3.93(s,3H)。
步驟3. (3-氟-5-碘苯基)甲醇
3-氟-5-碘苯甲酸甲酯(5.49g，19.60mmol)溶解於DCM(100mL)中且冷卻至-78℃。經30分鐘逐滴添加DIBAL-H(49.0mL，49.0mmol)且接著1小時後添加另一部分DIBAL-H(49.0mL，49.0mmol)。反應混合物在-78℃下攪拌4h且小心地傾至冰冷1N HCl上。該混合物攪拌10min且分離各層且水層用DCM萃取且組合之有機萃取物經乾燥(硫酸鎂)，過濾且在真空中濃縮，提供所需產物，定量產率。LCMS未有結論。
步驟4. 3-氟-5-碘苯甲醛
(3-氟-5-碘苯基)甲醇(9.79g，35.0mmol mmol)溶解於DCM(94mL)中且接著添加矽膠(18.0g)。在室溫下向該混合物中逐份添加PCC(18.3g，45.0mmol)且該混合物在室溫下攪拌1h且繼而TLC。1小時之後，TLC指示SM完全轉化為非極性(大概為醛)。經1吋矽石墊插塞過濾反應混合物且用含30%乙醚之DCM(200mL)溶離。在真空中濃縮濾液以提供粗產物，其無需進一步純化即用於下一步驟。
步驟5. (R,E)-N-(3-氟-5-碘苯亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
向3-氟-5-碘苯甲醛(8.75g，35mmol)及(R)-(+)-第三丁基亞磺醯 胺(4.67g，38.5mmol)於DCE(117mL)中之溶液中添加硫酸銅(II)(無水)(16.76g，105mmol)且所得懸浮液在60℃下加熱隔夜。LCMS指示所需產物形成。反應混合物經矽藻土過濾且濾液在真空中濃縮且接著原樣用於下一步驟。LCMS(m/z)：354.1(MH+),1.08min。
步驟6. (R)-N-((R)-1-(3-氟-5-碘苯基)烯丙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
二甲基鋅(1.2M in甲苯)(7.29mL，8.75mmol)及乙烯基溴化鎂(45.5mL，45.5mmol)在室溫下在氬氣下混合持續20min，接著冷卻至-78℃，接著經約30min逐滴添加含(R,E)-N-(3-氟-5-碘苯亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺之無水THF(117mL)。內部溫度在-74℃至-72℃之間，在添加之反應混合物在-78℃下攪拌1h之後，樣品藉由水淬滅，LCMS顯示所需產物連同未反應之起始材料。添加更多乙烯基溴化鎂(12mL，12.0mmol))且藉由LCMS監測反應且30分鐘之後，認為反應完全。將反應混合物傾於冰冷飽和NH4Cl及水上，THF在真空中移除且產物藉由EtOAc萃取。有機層藉由水及鹽水洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且濃縮且粗產物藉由急驟層析(0-70% EtOAc/庚烷)來純化以提供8.99g呈無色黃色糖漿狀之(R)-N-((R)-1-(3-氟-5-碘苯基)烯丙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺作為所需產物。產率(67.4%)。產率針對4步驟次序。注意：主要副產物對應於去碘化所需產物。LCMS(m/z)：382.5(MH+),0.96min；1H NMR(400MHz,CDCl3))δ ppm 7.48(s,1H),7.37(dt,J=7.6,1.9Hz,1H),7.06(d,J=9.0Hz,1H),5.85(ddd,J=17.0,10.0,7.4Hz,1H),5.25-5.47(m,3H),4.90(d,J=7.0Hz,1H),3.23-3.66(m,1H),1.26(s,9H)。
步驟7. (R)-(1-(3-氟-5-碘苯基)烯丙基)胺基甲酸第三丁酯
(R)-N-((R)-1-(3-氟-5-碘苯基)烯丙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(8.99g，23.58mmol)溶解於MeOH(40mL)中且用4N HCl(11.79mL，47.2mmol)處理且該混合物在室溫下攪拌1h且在真空中濃縮。 殘餘物溶解於水中且添加飽和Na2CO3。產物用3：1 CHCl3：IPA萃取且有機層經乾燥(硫酸鎂)，過濾且在真空中濃縮。殘餘物溶解於DCM(60mL)中且添加Boc-酐(6.79mL，29.2mmol)。該混合物在室溫下攪拌隔夜且次日早晨，在真空中濃縮反應混合物且粗產物(R)-(1-(3-氟-5-碘苯基)烯丙基)胺基甲酸第三丁酯無需任何進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：322.1(MH+-56),1.11min。
步驟8. (S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯
(R)-(1-(3-氟-5-碘苯基)烯丙基)胺基甲酸第三丁酯(8.89g，23.58mmol)溶解於DCM(236mL)中且冷卻至-78℃。使臭氧吹掃通過該混合物直至藍色持續。反應混合物接著用氮氣吹掃且一次性添加NaBH4(8.92g，236mmol)，繼而添加MeOH(120mL)且該混合物在相同溫度下攪拌2h且接著添加丙酮20mL。反應混合物再攪拌1h且接著傾於飽和NH4Cl上且接著用DCM(500mL)萃取且接著用3：1 CHCl3/IPA(200mL)萃取且組合有機萃取物且乾燥(硫酸鎂)，且溶劑在真空中濃縮且殘餘物藉由急驟層析純化以提供6.74g(17.7mmol)(S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(75%)。LCMS(m/z)：326.1(MH+-56),0.90min。
步驟9. (S)-(2-疊氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
(S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(4.8112g，12.62mmol)溶解於DCM(100mL)中且冷卻至0℃。接著添加Et3N(2.62mL，18.93mmol)且接著逐滴添加MsCl(1.180mL，15.15mmol)。反應混合物在相同溫度下攪拌30min，之後RM用飽和NaHCO3及水淬滅。產物用DCM萃取且經組合之有機層經乾燥(硫酸鎂)，過濾且在真空中濃縮，提供粗產物，其溶解於DMF(25mL，約0.5M)中。接著添加NaN3(2.462g，37.9mmol)且該混合物在70℃下加熱。6小時之後，反應混合物冷卻至室溫且用EtOAc及水稀釋且產 物用EtOAc萃取。組合之有機萃取物用水洗滌三次且乾燥(硫酸鎂)，過濾且在真空中濃縮且殘餘物藉由急驟層析(0-50%)EtOAc/庚烷純化，提供4.03g(S)-(2-疊氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯作為所需產物。LCMS(m/z)：351.0(MH+-56),1.05min。
步驟10. (S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-(2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
(S)-(2-疊氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(288mg，0.709mmol)溶解於MeOH(7.09mL)中且接著添加聚合物結合之PPh3(7.09mmol)。RM在70℃下攪拌隔夜。次日早晨，LCMS指示所需產物形成。RM經矽藻土過濾且濾餅用DCM及MeOH洗滌且濾液在真空中濃縮，提供粗胺，其無需任何進一步純化即用於下一步驟。粗胺溶解於DCM(7mL)中且冷卻至0℃且接著添加三乙胺(0.198mL，1.418mmol)。接著一次性添加2-硝基苯-1-磺醯氯(189mg，0.851mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1h且用水淬滅且產物用DCM萃取。有機層用鹽水洗滌且乾燥(硫酸鎂)，過濾且在真空中濃縮且殘餘物藉由急驟層析(0-40% EtOAc/庚烷)純化，提供290mg(S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-(2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯作為所需產物。LCMS(m/z)：524.0(MH+-56),1.10min。
步驟11. (S)-N-(2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺(S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-(2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(290mg，0.513mmol)溶解於DMF(5.1mL)及K2CO3(142mg，1.026mmol)中，繼而添加碘甲烷(48.1μl，0.769mmol)。該混合物在室溫下攪拌1h，此時觀察到完全反應。RM用水及EtOAc稀釋。有機層用水洗滌兩次且乾燥(硫酸鎂)，過濾且在真空中濃縮，生成相對純產物，其溶解於DCM(5mL)中且用含4N HCl之二噁烷(2mL)處理且該混合物在室溫下攪拌隔夜且該混合物在真空中濃縮，提供呈鹽 酸鹽形式之所需產物(S)-N-(2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺。LCMS(m/z)：480.4(MH+),0.72min。
實例179 (S)-N-(2-胺基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. (S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-疊氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺
4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸TFA加合物(126mg，0.292mmol)及HOAt(0.060g，0.438mmol)溶解於DMF(1mL)及DIEA(0.156mL，0.876mmol)中。添加獲自(S)-(2-疊氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯與含4M HCl之二噁烷之反應(流程76中之步驟9)的(S)-2-疊氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙胺鹽酸鹽(100mg，292mmol)，繼而添加EDC(0.090g，0.467mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。反應混合物用EtOAc及水稀釋，且有機層用水洗滌兩次且接著用飽和Na2CO3洗滌。有機層經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮，提供粗(S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-疊氮基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺，而無需進一步純化。
步驟2. (S)-N-(2-胺基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺
粗(S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-疊氮基- 1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺溶解於THF(5mL)中，且逐滴添加三苯基膦(聚合物結合，3mmol/g)(0.97g，3.70mmol)。該混合物在70℃下加熱3小時。LCMS指示不存在起始材料(在此階段，磷醯亞胺中間體可能存在於固相中)。添加水(4.5mL)及THF(5mL)，且該混合物在80℃下加熱3h且接著過濾。濾餅用DCM洗滌且接著濾液在真空中濃縮。殘餘物溶解於DCM中且用水洗滌且有機層經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮，提供殘餘物，其藉由急驟層析(0-60% DCM/10% MeOH於含有0.5% NH4OH之EtOAc中)來純化，且收集產物溶離份且濃縮。殘餘物溶解於乙腈及水中，且凍乾以獲得101.2mg(S)-N-(2-胺基-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺作為所需產物。LCMS(m/z)：580.1(MH+),0.70min。1H NMR(CD3OD)δ(ppm)：7.92(s,1H),7.85-7.79(m,1H),7.73(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.68-7.61(m,2H),7.50-7.43(m,1H),7.23(d,J=9.5Hz,1H),5.12(t,J=6.9Hz,1H),4.07(dd,J=11.2,3.3Hz,2H),3.60(td,J=11.7,2.0Hz,2H),3.09-2.83(m,3H),2.02-1.76(m,4H)。
(S)-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯之合成
步驟1. (S,E)-N-(3-溴-5-氟苯亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
向3-溴-5-氟苯甲醛(5g，24.63mmol)及(S)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(3.28g，27.1mmol)於DCE(82mL)中之溶液中添加硫酸銅(II)(無水)(7.86g，49.3mmol)。懸浮液在氮氣下在60℃下攪拌隔夜。冷卻反應混合物，經矽藻土插塞過濾，且用DCM沖洗。濃縮濾液以生成粗產物。粗產物藉由急驟層析用0-30% EtOAc/庚烷溶離來純化以生成呈淺黃色油狀物之產物(S,E)-N-(3-溴-5-氟苯亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(7.5g，24.49mmol，99%產率)。LCMS(m/z)：306.1/308.1(MH+),1.04min。
步驟2. (S)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-硝基乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
硝基甲烷(1.0mL，17.20mmol)溶解於THF(34.4mL)中，接著在-78℃下添加BuLi(2.5M於己烷中)(7.22mL，18.06mmol)中。反應混合物在-78℃下攪拌10min，接著溫至室溫持續20min。在冷卻至-78℃之後，逐滴添加含(S,E)-N-(3-溴-5-氟苯亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(4.74g，15.48mmol)之THF(6mL)。反應混合物在-78℃下攪拌20min，溫至室溫，且在室溫下攪拌5小時。反應混合物藉由飽和NH4Cl淬滅，且藉由EtOAc萃取。有機物經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析(0-40%-100% EtOAC/庚烷)來純化。組合純溶離份以生成(S)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-硝基乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(2.2g，5.99mmol，38.7%產率)。LCMS(m/z)：367.1/369.1(MH+),0.89min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.31(s,1H),7.03(d,J=9.0Hz,1H),5.03(q,J=5.7Hz,1H),4.87-4.78(m,2H),4.48(d,J=5.1Hz,1H),1.33-1.25(m,9H)。
步驟3. (S)-N-((S)-2-胺基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺
(S)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-硝基乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(2.2g，5.99mmol)溶解於MeOH(19.97mL)中，用N2沖洗持續10min，且接著添加PtO2(0.408g，1.797mmol)。反應混合物饋入氫氣球且在室溫下攪拌隔夜。反應混合物經矽藻土過濾且藉由甲醇及EtOAc洗滌。濾液經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗材料無需進一步純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：337.1/339.1(MH+),0.64min.
步驟4. ((S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((S)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
(S)-N-((S)-2-胺基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(1.75g，5.19mmol)溶解於DCM(17.30mL)中，且接著添加Boc2O(1.325mL，5.71mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3h，且接著濃縮。粗產物經純化以生成((S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((S)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(1.78g，78%)。LCMS(m/z)：437.1/439.1(MH+),0.99min。
步驟5. (S)-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
在室溫下向((S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((R)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(1.78g，4.07mmol)於DCM(13.57mL)中之溶液中添加HCl(4M於二噁烷中)(4.07mL，16.28mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。反應混合物經中和至pH=7，接著藉由EtOAc萃取，生成呈游離鹼之所需(S)-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(300mg)。LCMS(m/z)：317.1/319.1(MH+),0.66min。
(S)-(2-胺基-2-(3-溴苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯之合成
根據流程78，使用3-溴苯甲醛，獲得呈HCl鹽之(S)-(2-胺基-2-(3-溴苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯。LCMS(m/z)：315.1/317.1(MH+),0.66min。
(S)-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)胺基甲酸甲酯之合成
向(S)-N-((S)-2-胺基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(100mg，0.297mmol)於DCM(988μl)中之溶液中添加TEA(124μl，0.890mmol)及氯甲酸甲酯(24.12μl，0.311mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。反應混合物藉由EtOAc萃取且有機物用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。殘餘物溶解於Et2O(1mL)中，接著添加HCl(4M於二噁烷中)(148μl，0.593mmol)。反應混合物在室溫下攪拌30min。在溶劑傾析出之後，殘餘物固體無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：291.2/293(MH+),0.49min。
(S)-(2-胺基-2-(3-溴苯基)乙基)胺基甲酸甲酯
根據流程79，使用(S)-N-((S)-2-胺基-1-(3-溴苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺，獲得(S)-(2-胺基-2-(3-溴苯基)乙基)胺基甲酸甲酯。LCMS(m/z)：273.0/275.0(MH+),0.46min。
(S)-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸甲酯
根據流程79，使用(S)-N-((S)-2-胺基-1-(3-氯苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺，獲得(S)-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸甲酯。LCMS(m/z)：229.2(MH+),0.42min。
(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)乙醯胺之合成
(S)-N-((S)-2-胺基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(100mg，0.297mmol)溶解於DCM(988μl)中，繼而吡啶(71.9μl，0.890mmol)及乙酸酐(28.0μl，0.297mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1h，藉由EtOAc萃取，藉由水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且濃縮。殘餘物溶解於Et2O(1mL)中，接著添加HCl(4M於二噁烷中)(148μl，0.593mmol)。反應混合物在室溫下攪拌30min。在溶劑傾析出之後，殘餘物固體無需純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：275.1/277.1(MH+),0.41min。
(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴苯基)乙基)乙醯胺之合成
根據流程80，使用(S)-N-((S)-2-胺基-1-(3-溴苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺，獲得(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴苯基)乙基)乙醯胺。LCMS(m/z)：257.1/259.1(MH+),0.40min。
實例180 (S)-N-(2-胺基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. (S)-(2-(4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
向4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(35mg，0.110mmol)於DMF(368μl)中之溶液中添加(S)-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(40.8mg，0.110mmol)、aza-HOBt(22.52mg，0.165mmol)、EDC(31.7mg，0.165mmol)及DIEA(57.8μl，0.331mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3h，且接著分配於EtOAc與水之間。有機物藉由NaHCO3、水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且濃縮。粗(S)-(2-(4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯無需進一步純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：632.1/634.1(MH+),0.97min。
步驟2. (S)-N-(2-胺基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺
向(S)-(2-(4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(69mg，0.110mmol)於DCM(1.0mL)中之溶液中添加TFA(0.5mL)且在室溫下攪拌1小時。反應混合物濃縮至乾，接著溶解於DMSO中且經受製備型HPLC。組合純溶離份且凍乾以生成呈TFA鹽之最終產物。LCMS(m/z)：532.1/534.1(MH+),0.69min；1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ ppm 7.94-7.84(m,2H),7.73(dd,J=1.4,8.0Hz,1H),7.66(dd,J=1.4,11.9Hz,1H),7.55(s,1H),7.49-7.39(m,1H),7.29(d,J=9.4Hz,1H),5.48(t,J=7.2Hz,1H),4.04(dd,J=2.9,11.5Hz,2H),3.57(dt,J=2.2,11.6Hz,2H),3.51-3.41(m,2H),3.01-2.85(m,1H),1.97-1.76(m,4H)。
實例181 (S)-N-(2-胺基-1-(3-氯-5-氟苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. (S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-疊氮基-1-(3-氯-5-氟苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(126mg，0.398mmol)於DMF(1328μl)中之溶液中添加(S)-2-疊氮基-1-(3-氯-5-氟苯基)乙胺(100.0mg，0.398mmol)、DIEA(348μl，1.991mmol)、EDC(153mg，0.797mmol)及aza-HOBt(81mg，0.597mmol)。反應混合物攪拌15小時。在添加水之後，反應混合物用 EtOAc處理。有機層經Na2SO4乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗產物藉由急驟層析(梯度EtOAc/庚烷)來純化以提供(S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-疊氮基-1-(3-氯-5-氟苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺(118mg，58%)。LCMS(m/z)：514.2(MH+),0.91min。
步驟2. (S)-N-(2-胺基-1-(3-氯-5-氟苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺
在室溫下依序向(S)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-N-(2-疊氮基-1-(3-氯-5-氟苯基)乙基)-2-氟苯甲醯胺(118mg，0.230mmol)於吡啶(2mL)中之溶液中添加NH4OH(200μl)及三甲基膦(344μl，0.344mmol)。反應混合物攪拌2小時。在添加EtOH(1mL)之後，在真空中濃縮反應混合物。粗產物藉由急驟層析(20% MeOH於含有0.5% NH3之DCM中/DCM)來純化以提供89.6mg(S)-N-(2-胺基-1-(3-氯-5-氟苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺(79%)。LCMS(m/z)：488.2(MH+),0.66min。1H NMR(500MHz，甲醇-d 4 )δ ppm 7.98-7.89(m,1H),7.89-7.79(m,1H),7.74(td,J=1.4,8.0Hz,1H),7.69-7.61(m,1H),7.41-7.28(m,1H),7.27-7.08(m,2H),5.27-5.12(m,1H),4.07(dd,J=3.8,11.0Hz,2H),3.69-3.52(m,2H),3.14-3.03(m,2H),2.96(tt,J=3.9,11.7Hz,1H),2.02-1.77(m,4H)。
(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺之合成
流程83
步驟1. N-((S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((S)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)乙基)-2-硝基苯磺醯胺
在0℃下(S)-N-((S)-2-胺基-1-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(3.3g，9.78mmol)溶解於DCM(32.6mL)中，接著添加TEA(1.405mL，10.08mmol)及2-硝基苯-1-磺醯氯(2.169g，9.78mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3小時。在真空中濃縮反應混合物且粗產物經純化以生成N-((S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((S)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)乙基)-2-硝基苯磺醯胺。LCMS(m/z)：522.1/524.1(MH+),0.94min。
步驟2. (S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-硝基苯磺醯胺
向含N-((S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((R)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)乙基)-2-硝基苯磺醯胺(3.55g，6.80mmol)之Et2O(22.65mL)中添加HCl(4M於二噁烷中)(3.40mL，13.59mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。反應混合物藉由Na2CO3溶液中和且藉由EtOAc萃取。有機層用水洗滌，乾燥，過濾，且在真空中濃縮，提供粗(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-硝基苯磺醯胺，其無需進一步純化即用於下一步驟反應。LCMS(m/z)：418.2/420.2(MH+),0.62min。
步驟3. (S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-2-硝基苯磺醯胺(1.55g， 3.71mmol)溶解於CH2Cl2(12.35mL)中，且接著添加TEA(0.517mL，3.71mmol)及Boc-酐(1.119mL，4.82mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1h，且濃縮。粗產物藉由急驟層析來純化以生成(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯。LCMS(m/z)：462.0/464.0(MH+-56),0.99min。
步驟4. (S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(2.3g，4.44mmol)溶解於DMF(14.79mL)中。添加K2CO3(1.226g，8.87mmol)及MeI(0.416mL，6.66mmol)。反應混合物在室溫下攪拌2h，且接著添加水。反應混合物藉由EtOAc萃取。有機物藉由水及鹽水洗滌，乾燥且濃縮。粗產物藉由急驟層析來純化以生成(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(2.3g，4.32mmol，97%產率)。
步驟5. (S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺
(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(2.3g，4.32mmol，97%產率)溶解於CH2Cl2中且添加HCl(4M於二噁烷中，4.44mL，17.75mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。添加庚烷。過濾固體，且藉由空氣乾燥以生成(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺(1.8g，3.84mmol，87%產率)。LCMS(m/z)：432.2/434.1(MH+),0.69min。
(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺鹽酸鹽製備如下：
步驟1：(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯。
向(S)-2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇(30g，111mmol)(HCl鹽)於DCM(390mL)中之冰水冷卻溶液中添加TEA(46.5mL，333mmol)，繼而添加Boc-酐(26.4mL，114mmol於50mL DCM中)。添加在15分鐘內完成。移除冰水浴且反應混合物在室溫下攪拌16小時。濃縮反應混合物，(水浴溫度保持低於30℃)，殘餘物用500mL EtOAc稀釋，用100mL 1N NaOH、100mL水及100mL鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，提供呈黏性液體狀之粗產物，(以較小規模，其為半固體)。向此黏性(或半固體)產物中添加120ml Et2O且所得混合物接著經音波處理持續5分鐘。該混合物濃縮至約60ml總體積。在室溫下1小時之後，白色結晶固體沈澱出。(若未形成晶體，則添加約2mg晶種)。在4小時之後，過濾白色固體，用最少量之乙醚洗滌且乾燥(經室內真空持續至少1小時)，提供總計30.5g白色固體作為所需產物。若濃縮濾液且重複以上程序，則回收得到改良。(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯：30.5g，82%產率。LC-MS：(MW-56)：279.8m/z，在0.84min處。1H NMR(400MHz,DMSO)ppm 1.29-1.43(m,8 H)3.38-3.55(m,2 H)4.39-4.61(m,1 H)4.84(t,J=5.67Hz,1 H)7.15(d,J=9.39Hz,1 H)7.24-7.44(m,3 H)。
步驟2：(4S)-4-(3-溴-5-氟苯基)-1,2,3-噁噻唑啶-3-甲酸第三丁酯2- 氧化物。在氮氣氛圍下在-40-45℃下(內部溫度，乾冰-丙酮浴溫度約為-55℃)向SOCl2(19.98mL，274mmol)於乙腈(280ml)中之溶液中添加含(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(30.5g，91mmol)之CH3CN(175ml)。添加在約30分鐘內完成。在-40-45℃下攪拌約20分鐘之後，添加吡啶(40.6mL，502mmol)(在約10分鐘內)。在-40℃下攪拌10分鐘之後，移除冷卻浴，該混合物溫至室溫且攪拌2小時。LC-MS顯示兩種非對映異構體產物，及一些量之二聚體副產物。該混合物用400ml EtOAc稀釋，用鹽水(200ml)洗滌三次，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮(水浴約40℃，約2小時)，提供35.7g呈淺黃色黏性液體狀之粗產物，其直接用於下一步驟或儲存於4℃下。(4S)-4-(3-溴-5-氟苯基)-1,2,3-噁噻唑啶-3-甲酸第三丁酯2-氧化物：LC-MS：(MW-100)：281.8，在1.02min處。
步驟3：(S)-4-(3-溴-5-氟苯基)-1,2,3-噁噻唑啶-3-甲酸第三丁酯2,2-二氧化物。在攪拌下向(4S)-4-(3-溴-5-氟苯基)-1,2,3-噁噻唑啶-3-甲酸第三丁酯2-氧化物(34.6g，91mmol)於乙腈(420mL)中之冰水冷卻溶液中添加NaIO4(29.2g，137mmol)及三氯化釕水合物(0.359g，1.729mmol)，繼而添加水(320ml)。反應混合物在0℃下攪拌2小時。該混合物用EtOAc稀釋(500ml)，用鹽水(200ml)洗滌兩次，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮以提供粗產物，其直接用於下一步驟。獲得40.3g粗產物。LC-MS：(MW+Na)：419.9m/z，在1.01min處。
步驟4：(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯。在室溫下向N-甲基-2-硝基苯磺醯胺(18.69g，86mmol)於乙腈(400ml)中之溶液中添加KOH(10.21g，182mmol，商業，粉末形式)。所得混合物在室溫下攪拌約15分鐘，接著添加含(S)-4-(3-溴-5-氟苯基)-1,2,3-噁噻唑啶-3-甲酸第三丁酯2,2-二氧化物(36.1g，91mmol)之180mL CH3CN(添加在15-20分鐘內完成)。所得 混合物在室溫下攪拌1-2小時。濃縮反應混合物至約200mL總體積。向殘餘物中添加600mL EtOAc，繼而用180ml 3N HCl、200mL 1N NaOH及鹽水(200ml)洗滌兩次。溶液藉由Na2SO4乾燥，經由具有矽藻土(約30g)及矽膠(20g)之過濾漏斗過濾。濃縮經過濾之溶液，提供40.3g呈黏性液體狀之產物，其直接用於下一步驟。(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯：LC-MS：(MW+Na)：555.8m/z，在1.07min處。(40.3g，76mmol，83%產率)。
步驟5：(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺鹽酸鹽。在室溫下向(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(40g，75mmol)於DCM(420ml)中之溶液中添加HCl(4M於二噁烷中，150mL，601mmol)。所得溶液在室溫下攪拌4小時，在此期間白色固體沈澱出。過濾反應混合物，白色固體用DCM(50ml x2)洗滌，且經真空乾燥以提供23.8g呈白色固體狀之所需產物。(HCl鹽)。(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺(23.8g，68%產率，經4個步驟)。LC-MS：(M+1)：433.9m/z，在0.66min處。1H NMR(400MHz,<dmso>)ppm 2.86(s,3 H)3.56-3.82(m,2 H)4.61(t,J=7.24Hz,1 H)7.42-7.61(m,2 H)7.68(d,J=1.57Hz,1 H)7.75-8.05(m,4 H)。
(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-(2-氟乙基)-2-硝基苯磺醯胺之合成
根據流程83中之步驟4及5，使用1-溴-2-氟乙烷，獲得(S)-N-(2-胺 基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-(2-氟乙基)-2-硝基苯磺醯胺。LCMS(m/z)：464.1/466.1(MH+),0.71min。
實例182 4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. 亞胺基二碳酸，4-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯
向4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(3g，7.78mmol)於乙腈(130mL)中之溶液中添加Boc2O(6.33mL，27.2mmol)及DMAP(0.048g，0.389mmol)。反應混合物在室溫下攪 拌隔夜。在旋轉蒸發器上在減壓下移除揮發性材料之後，粗產物藉由急驟層析用0-50% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供亞胺基二碳酸，4-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯(4.34g，7.41mmol，95%)。LCMS(m/z)：586.5(MH+),1.24min；1H NMR(500MHz，氯仿-d)δ ppm 8.52-8.41(m,1H),7.97(t,J=7.7Hz,1H),7.61-7.44(m,2H),3.46-3.30(m,1H),2.68-2.52(m,4H),2.38(dd,J=3.0,13.7Hz,2H),2.28-2.10(m,2H),1.69-1.61(m,9H),1.42-1.29(m,18H)。
步驟2. 亞胺基二碳酸，4-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-6-(4-((三乙基矽烷基)氧基)環己-3-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯
在-78℃下向亞胺基二碳酸，4-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯(12.1g，20.66mmol)於THF(68.9mL)中之溶液中緩慢添加LiHMDS(1M於THF中)(22.73mL，22.73mmol)。在攪拌30min之後，添加三乙基氯矽烷(3.67mL，21.69mmol)。反應混合物溫至室溫且攪拌1小時。添加飽和碳酸氫鈉溶液，且該混合物用EtOAc萃取。有機層用水及鹽水充分洗滌，經無水NaHCO3乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗產物藉由急驟層析用5% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供亞胺基二碳酸，4-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-6-(4-((三乙基矽烷基)氧基)環己-3-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯(12.1g，17.29mmol)。LCMS(m/z，中性-非極性方法)：701.8(MH+),1.14min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.41(s,1H),8.00-7.88(m,1H),7.57-7.46(m,2H),4.97(br.s.,1H),3.16-3.00(m,1H),2.49-2.38(m,2H),2.38-2.23(m,1H),2.19-1.94(m,3H),1.61(s,9H),1.33(s,18H),1.06-0.94(m,8H),0.77-0.64(m,6H)。
步驟3. 亞胺基二碳酸，4-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-6-(3-氟-4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯
在0℃下向亞胺基二碳酸，4-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-6-(4-((三乙基矽烷基)氧基)環己-3-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯(12.1g，17.29mmol)於乙腈(57.6mL)中之溶液中添加Selectfluor®(7.96g，22.47mmol)。反應混合物溫至室溫且攪拌隔夜。在用飽和NaHCO3溶液淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取。有機層用水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮以提供亞胺基二碳酸，4-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-6-(3-氟-4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯(10.44g，17.29,100%)，其無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z，中性-非極性方法)：604.3(MH+),1.12min。
步驟4. 4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-氟-4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)-第三丁酯
在室溫下向亞胺基二碳酸，4-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-6-(3-氟-4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸酯，1,3-雙(1,1-二甲基乙基)酯(10.44g，17.29mmol)於THF(57.6mL)中之溶液中添加含4M HCl之二噁烷(130mL，519mmol)。反應混合物攪拌3-4h，其藉由LCMS監測以預防更多第三丁基酯水解成羧酸。反應物在水浴中冷卻，且用飽和碳酸鈉中和。所得混合物用EtOAc萃取三次。經組合之有機層用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由急驟層析用0-100% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-氟-4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)-第三丁酯(1.9g，4.71mmol，27.2%)及4-(3-胺基-6-((1S,3S)-3-氟-4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)-第三丁酯(926mg，2.295mmol，13.3%)。LCMS(m/z)：分別為404.3(MH+),0.84min及404.3(MH+),0.84min。
步驟5. 4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)-第三丁酯
在0℃下向4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-氟-4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)-第三丁酯(1.9g，4.71mmol)於MeOH(47.1mL)中之溶液中添加NaBH4(0.267g，7.06mmol)。反應混合物攪拌2小時。在用飽和NaHCO3溶液淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取。有機層用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗產物藉由急驟層析用單調35% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)-第三丁酯(839mg，2.07mmol,43.9%)及4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)-第三丁酯(900mg，2.22mmol，47%)。LCMS(m/z)：分別為406.3(MH+),0.85min及406.3(MH+),0.85min。
步驟6. 4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(839mg，2.07mmol)經受對掌性分離(ChiralPak 5mic AD管柱，4.6x100(mm),CO2/EtOH+0.1% DEA=70/30,SFC=5ml/min)以提供單一對映異構體4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(Rt=1.61min,336mg，0.829mmol，40%)及較少極性對映異構體(Rt=2.45min,43%)。
步驟7. 4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(90mg，0.22mmol)於DCM(0.444mL)中之溶液中添加含4M HCl之二噁烷(3.7mL，14.80mmol)。反應混合物在室溫下攪拌 隔夜。在真空中蒸發揮發性材料之後，反應混合物用Et2O濕磨，且過濾以提供呈HCl鹽之4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(86mg，0.22mmol，100%)，其無需任何進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：350.2(MH+),0.51min。
步驟8. 4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(20mg，0.057mmol)於DMF(573μL)中之溶液中添加(S)-2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇HCl鹽(18.59mg，0.069mmol)、aza-HOBt(11.69mg，0.086mmol),EDC(21.95mg，0.115mmol)及DIEA(30.0μl，0.172mmol)。反應混合物攪拌15小時。添加水，且反應混合物用EtOAc萃取三次。有機層經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗產物藉由HPLC來純化。凍乾純溶離份以提供呈TFA鹽之4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(12.9mg，0.019mmol，32.8%)。LCMS(m/z)：565.1/567.1(MH+),0.72min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.78(s,2H),7.63-7.47(m,2H),7.37(s,1H),7.22-7.02(m,2H),5.15-5.03(m,1H),4.43-4.15(m,1H),3.77(t,J=5.7Hz,2H),3.62-3.47(m,1H),2.76(br.s.,1H),2.19(dd,J=3.1,6.3Hz,1H),2.02-1.92(m,1H),1.89-1.66(m,2H),1.56(dd,J=3.3,12.3Hz,1H),1.42(br.s.,1H)。絕對立體化學基於4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之X射線共結構的資訊來測定。
實例183 4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. 4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(流程84：365mg，0.9mmol)於DCM(2mL)中之溶液中添加含4M HCl之二噁烷(8mL，32.0mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3天。在真空中蒸發揮發性材料之後生成4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸，其無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：350.3(MH+),0.48min。
步驟2. 4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(20mg，0.057mmol)於DMF(573μL)中之溶液中添加(S)-2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇HCl鹽(18.59mg，0.069mmol)、aza-HOBt(11.69mg，0.086mmol)、EDC(21.95mg，0.115mmol)及DIEA(30.0μl，0.172mmol)。反應混合物攪拌15小時。添加水，且反應混合物用EtOAc萃取三次。有機層經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗產物藉由HPLC來純化。凍乾純溶離份以提供呈TFA鹽之4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(16.1mg，0.023mmol，41%)。LCMS(m/z)：565.1/567.1(MH+),0.72min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.86-7.69(m,2H),7.65-7.47(m,2H),7.40-7.30(m,1H),7.22-7.06 (m,2H),5.08(t,J=5.7Hz,1H),4.41-4.14(m,1H),3.85-3.67(m,2H),3.63-3.48(m,1H),2.74(t,J=11.5Hz,1H),2.17(td,J=3.1,6.3Hz,1H),2.04-1.89(m,1H),1.84-1.66(m,2H),1.65-1.30(m,2H)。絕對立體化學基於4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之ERK2中的X射線共結構之資訊來測定。
實例184 4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. 4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(156mg，0.403mmol)於DMF(1.28mL)中之溶液中添加(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺(180mg，0.384mmol)、HOAt(105mg，0.768mmol)、DIEA(402μl，2.8mmol)及EDC.HCl(147mg，0.768mmol)。反應混合物在室溫下攪拌15h，LCMS指示產物。該混合物用EtOAc稀釋且用水洗滌及用飽和Na2CO3洗滌一次且有機層經乾燥(硫酸鎂)，過濾且在真空中濃縮，提供4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺。粗產物藉由ISCO管柱層析 (0-100% EtOAc/庚烷)來純化，生成4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺(99%)。
步驟2. 4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺(293mg，0.38mmol)於DMF(3.8mL)中之溶液中添加K2CO3(371mg，2.69mmol)及4-巰基苯甲酸(207mg，1.34mmol)。反應混合物在微波合成器中在45℃下加熱55min。在反應之後，添加水，且該混合物用EtOAc萃取三次。組合有機層且用水洗滌三次。經組合之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。殘餘物藉由急驟層析用EtOAc(在水中含有20% MeOH及0.5%氨)/DCM溶離來純化以提供150mg 4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：578,580(MH+),0.64min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm7.80(s,1H),7.76-7.68(m,1H),7.59(dd,J=1.6,7.8Hz,1H),7.53(dd,J=1.2,11.7Hz,1H),7.37(s,1H),7.18(d,J=8.2Hz,1H),7.11(d,J=9.4Hz,1H),5.27-5.10(m,1H),4.42-4.13(m,1H),3.65-3.49(m,1H),2.97-2.88(m,1H),2.87-2.79(m,1H),2.74(t,J=11.7Hz,1H),2.35(s,3H),2.22-2.11(m,1H),2.04-1.92(m,1H),1.85-1.68(m,2H),1.55(dq,J=3.1,12.9Hz,1H),1.46-1.33(m,1H)。
或者，4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺可如下合成：
(1R,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己烷甲酸乙酯
向500mL燒瓶中添加(1R,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己烷-甲酸乙酯(17g，89.3mmol，97.9% ee)、TBSCl(17.5g，116.1mmol)及DCM(200mL)。咪唑(12.1g，178mmol)添加至所得澄清溶液且反應混合物攪拌16小時。添加水(100mL)且該混合物進一步攪拌10分鐘。分離各相且有機層用水(100mL)洗滌且在減壓下濃縮(40±5℃，50~250毫巴)。藉由矽石急驟層析用庚烷及乙酸乙酯之混合物(100：1)溶離來純化，生成呈無色油狀物之( 1R,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己烷甲酸乙酯(20.6g，產率75.7%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：4.38~4.52(m,1 H),4.03~4.08(dd,J=12Hz,J=8Hz,2 H),3.77~3.81(m,1 H),2.54~2.60(m,1 H),1.93~2.06(m,1 H),1.58~1.86(m,4 H),1.46~1.50(m,1 H),1.17~1.20(t,J=12Hz,J=6Hz,3 H),0.85(s,9 H),0.03~0.04(d,J=4Hz,8 H),[M+H]+=305.1，經由GC-MS(儀器：Agilent Technologies,GC 6890N,MS 5975C。GC條件：管柱：HP-5 MS，毛細管：30.0m×250μm×0.25μm，偵測器參數：溫度：350℃，流動H2：40mL/min，空氣流動：400mL/min，補充(He)：40mL/min。注射器參數：溫度：200℃。分流比：100：1。載氣：He，流動：2.0mL/min，模式：恆定流動。烘箱參數：0min，50℃；2.0min，50℃；5.33min，100℃；15.83min，270℃。注射體積：1μL，注射器洗滌溶劑：乙腈。MS條件：伏特：70 EV，掃描範圍：m/z=50~550)
2-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪
向1L燒瓶中添加2-溴-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪(23g，67mmol)、(1R,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己烷甲酸乙酯(28g，83mmol)、{[P(t-Bu)3]PdBr}2(800mg，1mmol)，繼而添加甲苯(250mL)。反應混合物藉由用氮氣吹掃脫氣三次且接著冷卻至-35±5℃。向反應混合物中逐滴添加NaHMDS(47mL，2M於THF中，94mmol)。溫度經一小時時期升至室溫且再攪拌30分鐘。反應混合物用8%氯化銨水溶液(200mL)淬滅，分離各相，且水層用庚烷(300mL)萃取。經組合之有機層用10%鹽水(400mL)洗滌，在減壓下濃縮(45±5℃，50~100毫巴)，生成48g呈1R及1S非對映異構體之混合物形式的(1RS,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-(5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪-2-基)-3-氟環己烷甲酸乙酯。此材料無需進一步純化即用於下一步驟。HPLC滯留時間=8.274min，HPLC方法d：儀器：Agilent Technologies 1200系列。管柱：Waters Xbridge C18,150*3.0mm,3um。管柱溫度：35℃。流動速率：0.70mL/min。偵測：210nm/DAD。移動相組成：A：0.1% H3PO4於水中；B：乙腈。梯度：0min：90% A，10% B；5min：100% B；11min 100% B。LC-MS方法：[M+H]+=476.2706,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.47(s.1 H),8.43(s,1 H),5.85(s,2 H),4.39~4.52(m,1 H),4.14(dd,J=12Hz,J=8Hz,2 H),3.59~3.66(m,1 H),2.28~2.94(m,1H),2.06(s,6 H),1.84~1.97(m,3 H),1.46~1.52(m,3 H),1.14~1.17(t,J=12Hz,J=8Hz,2H),0.81(s,9 H),0.01(d,J=4Hz,6 H)。
向1L燒瓶中添加(1R,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-(5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪-2-基)-3-氟環己烷甲酸乙酯(48g,67mmol)、乙醇(250mL)，繼而添加11% NaOH水溶液(112g，300mmol)。反應混合物在30±5℃下攪拌16小時，且接著用10% HCl水溶液(70mL)淬滅至pH=6~7。在乙醇在減壓下蒸餾之後(50±5℃，50~100毫巴)，所得混合物之pH用10% HCl調節至4與5之間。水溶液用IPAc(200mL×2)萃取兩次。經組合之有機層用10%鹽水(200mL)洗滌且在減壓下濃縮(50±5℃，50~100毫巴)，生成46g(1RS,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-(5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪-2-基)-3-氟環己烷甲酸，其無需進一步純化即用於下一步驟。HPLC滯留時間=7.390min(儀器：Agilent Technologies 1200系列。管柱：Waters Xbridge C18,150*3.0mm,3um。管柱溫度：35℃。流動速率：0.70mL/min。偵測：210nm/DAD。移動相組成：A：0.1% H3PO4於水中；B：乙腈。梯度：0min：90% A，10% B；5min：100% B；11min 100% B),LC-MS：[M+H]+=448.2415。
在氮氣下向500mL燒瓶中添加(1RS,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-(5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪-2-基)-3-氟環己烷甲酸(46g)、甲苯(250mL)及HOAc(0.8g，13.3mmol)。反應混合物回流1小時且接著冷卻至室溫，接著添加6% NaHCO3水溶液(200mL)。分離各相且水層用庚烷(250mL)萃取。經組合之有機層用10%鹽水(200mL)洗滌且在減壓下濃縮(50±5℃，50~100毫巴)，生成油狀物。在向殘餘物中添加80mL甲醇之後，該混合物加熱至55±5℃且攪拌1小時。溫度經2小時時期冷卻至25±5℃且再攪拌2-3小時。所得懸浮液過濾且濕濾餅在減壓下乾燥(50±5℃，50~100毫巴)持續3小時，生成8.6g呈結晶固體狀之2-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪(dr>99：1)。母液在減 壓下濃縮(50±5℃，50~100毫巴)，生成34.5g(71mmol)黑色油狀物。向此殘餘物中添加 t BuOH(200mL)，繼而添加 t BuOK(8.0g，71mmol)。反應混合物加熱至90±5℃且攪拌3小時。在溫度冷卻至室溫之後，添加10% NaHCO3水溶液(150mL)，繼而添加庚烷(200mL)且該混合物再攪拌10分鐘。分離各相且水層用庚烷(200mL)洗滌。經組合之有機層用10%鹽水(150mL)洗滌且在減壓下濃縮(50±5℃，50~100毫巴)，生成油狀殘餘物。向此殘餘物中添加甲醇(60mL)，且混合物加熱至55±5℃。在攪拌1小時之後，溫度經2小時時期冷卻至25±5℃，繼而再攪拌2小時。過濾懸浮液且所得濕濾餅在減壓下乾燥(50±5℃，50~100毫巴)持續3小時，生成第二批呈結晶固體狀之2-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪(5.6g，dr=98：2)。以2-溴-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪為起始物之4個步驟的總體產率為51.8%。mp=100.6℃~102.9℃。LC/MS：[M+H]+=404.2459,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.53(s,1 H),8.50(s,1 H),5.75(s,2 H),4.25~4.43(m,1 H),3.60~3.69(m,1 H),3.25(s,6 H),2.93~3.00(m,1 H),2.19~2.27(m,1 H),1.98(s,6 H),1.72~1.90(m,3 H),1.39~1.61(m,2 H),0.80(s,9H),0.01(d,J=4Hz,6 H),HPLC(儀器：Agilent Technologies 1200系列。管柱：Waters Xbridge C18,150*3.0mm,3um。管柱溫度：35℃。流動速率：0.70mL/min。偵測：210nm/DAD。移動相組成：A：0.1% H3PO4於水中；B：乙腈。梯度：0min：90% A，10% B；5min：100% B；11min 100% B)，滯留時間：8.084min(關於2-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪)，8.324min(關於2-((1R,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪)。
2-溴-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪
向250mL燒瓶中添加5-溴吡嗪-2-胺(18g，10.35mmol)、己烷-2,5-二酮(14.5g,12.41mmol)及PPTS(0.9g，0.36mmol)於甲苯(60mL)。反應混合物在Dean-Stark分水器加熱至回流持續16小時。反應混合物冷卻至室溫且接著在減壓下濃縮(55±5℃，50~100毫巴)，生成呈油狀物之2-溴-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪(28g，含有約10%甲苯，分析產率：95%)。此材料無需進一步純化即使用。LC/MS：[M+H]+=252.0139,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.87(s,1H),8.63(s,1 H),5.86(s,2 H),2.10(s,6 H)。HPLC滯留時間=6.21min，儀器：Agilent Technologies 1200系列。管柱：Waters Xbridge C18,150*3.0mm,3um。管柱溫度：35℃。流動速率：0.70mL/min。偵測：210nm/DAD。移動相組成：A：0.1% H3PO4於水中；B：乙腈。梯度：0min：90% A，10% B；5min：100% B；11min 100% B。
5-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)吡嗪-2-胺
向2-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪(1250g，3097mmol)於乙醇(7.5kg)中之攪拌懸浮液中添加羥基胺鹽酸鹽(860.9g，12388.2mmol)，繼而添加三乙胺(642.5g，6349.0mmol)。反應混合物加熱至回流(77-78℃)持續42小時，且接著冷卻至約40℃。在6kg乙醇在真空下(<100毫巴)在40℃下蒸餾之後，該混合物冷卻至室溫，用MTBE(7.0kg)及水(8.0 kg)稀釋。在攪拌10分鐘之後，分離有機層且水層用MTBE(6.0Kg)萃取。經組合之有機層相繼用2×12kg水及8kg 10%鹽水洗滌。MTBE層在真空下(<100毫巴)濃縮，生成1.2kg黃色固體作為粗產物。粗產物溶解於2kg DCM中且進一步經由矽石管柱層析用EtOAc及庚烷(1/6,v/v)溶離來純化以回收2-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)-5-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡嗪(310g)，接著用EtOAc及庚烷(1/3,v/v)溶離，生成呈淺黃色固體狀之5-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)吡嗪-2-胺(650g，64.5%產率)，mp 113-116℃。ESI-MS(m/z)：326.1940([M+H]+,100)。HPLC(方法A)，滯留時間12.26min。1H NMR(400MHz,CDCl3)：7.93(s,1H),7.86(s,1H),4.50(br.s,2H),4.41-4.46,4.27-4.31(m,1H),3.65-3.74(m,1H),2.68-2.74(m,1H),2.24-2.30(m,1H),1.97-2.02(m,1H),1.74-1.87(m,2H),1.44-1.63(m,2H),0.91(s,9H),0.10(d,J=8Hz,6H)。
4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
5-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)吡嗪-2-胺(620.0g，1904.8mmol)於DMSO(5L)及水(400mL)中之溶液冷卻至約4℃。NBS(389.8g，2190.5mmol)在1小時內分成10個部分添加且反應溫度藉由連續攪拌30分鐘控制在5℃下。在添加0.3M Na2CO3水溶液(8.5kg)之後，反應溫度增至35℃。添加MTBE(4.5kg) 且該混合物再攪拌10分鐘。在相分離之後，水層用MTBE(4kg)萃取。經組合之有機層相繼用0.3M Na2CO3水溶液(8.5kg)及水(8kg)洗滌，且在30-40℃下在真空下濃縮，生成呈泡沫狀之粗產物3-溴-5-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)吡嗪-2-胺(770g)。此粗產物無需進一步純化即用於下一步驟。ESI-MS(m/z)：404.1105,406.1093([M+H]+,100)。HPLC(方法A)，滯留時間=14.38min。1H NMR(400MHz,CDCl3)：7.81(s,1H),4.99(br.s,2H),4.37-4.42,4.25-4.30(m,1H),3.66-3.72(m,1H),2.67-2.73(m,1H),2.26-2.29(m,1H),1.97-2.02(m,1H),1.74-1.87(m,2H),1.44-1.63(m,2H),0.91(s,9H),0.10(d,J=8Hz,6H)。
向3-溴-5-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)吡嗪-2-胺(760.0g，1879.4mmol)及2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲酸第三丁酯(605.5g，1879.4mmol)於DME(3.0kg)中之溶液中添加2.0M Na2CO3水溶液(1880mL，3760mmol)及Pd(dppf)Cl2．DCM(38.4g，47.0mmol)。在用N2脫氣三次之後，反應混合物加熱至回流(79-80℃)且在此溫度下攪拌3小時。反應溫度冷卻至室溫且添加MTBE(2.5kg)，繼而添加水(4.0kg)。該混合物攪拌10分鐘，接著相分離，且水層用MTBE(1.8kg)萃取。組合之有機層用水(2×4kg)洗滌，且在真空下在30-40℃下濃縮，生成粗產物4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(約1kg)。此粗產物及EtOH(95%,3.2kg)之混合物加熱至回流(78-80℃)持續30分鐘，生成溶液。溫度在100分鐘內冷卻至40℃，繼而在30分鐘內添加水(800g)。溫度在100分鐘內冷卻至約5℃且繼續在此溫度下攪拌再持續60分鐘。過濾固體沈澱且濕濾餅用EtOH/水(1.2L,5/1,vol/vol)洗滌。在真空下在50℃下乾燥5小時之後，獲得呈棕色粉末狀之4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基 二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(755g，76.4%產率，經2個步驟，分析純度為98.8%)。mp 169-172℃。ESI-MS(m/z)：520.2739([M+H]+,100)。HPLC(方法A)滯留時間15.76min。1H NMR(400MHz,CDCl3)：7.98(t,J=8Hz,1H),7.91(s,1H),7.61(d,J=8Hz,1H),7.55(d,J=8Hz,1H),4.68(br.s,2H),4.42-4.48,4.30-4.36(m,1H),3.67-3.76(m,1H),2.75-2.83(m,1H),2.28-2.36(m,1H),1.98-2.05(m,1H),1.83-1.92(m,2H),1.46-1.68(m,2H),1.62(s,9H),0.92(s,9H),0.11(d,J=8Hz,6H)。
4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-3-氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(685.0g，1318.0mmol)於EtOH(3.6kg)中之懸浮液中添加HCl水溶液(36%,400.5g，3954.2mmol)。反應混合物加熱至30℃且攪拌4小時。反應溫度降低至5℃且添加NaOH(342.7g,8567.5mmol)於水(1.6kg)中之溶液。反應混合物加熱至30℃且在此溫度下攪拌18小時。反應混合物之pH使用4N HCl水溶液調節至5以形成固體沈澱。在EtOH在真空下在40-50℃下蒸餾之後，水(2.5kg)添加至殘餘物中且溫度在1小時內冷卻至5℃。過濾懸浮液，收集固體且在真空下(<100毫巴)在50-60℃下乾燥24小時，生成呈棕色粉末狀之4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(460g，在230nm下之HPLC純度為98.2%，定量產率)。Mp 226-228℃。ESI-MS(m/z)：350.1282([M+H]+,100)。HPLC (方法A)，滯留時間5.93min。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)：13.32(br.s,1H),8.00(t,J=8Hz,1H),7.99(s,1H),7.70(d,J=8Hz,1H),7.65(d,J=8Hz,1H),6.24(br.s,2H),5.16(br.s,1H),4.44-4.49,4.30-4.35(m,1H),3.50-3.60(m,1H),2.79-2.84(m,1H),2.20-2.25(m,1H),1.92-1.99(m,1H),1.72-1.83(m,2H),1.50-1.60(m,1H),1.36-1.46(m,1H)。
4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(300g，95%分析，815.8mmol)及(S)-N-(2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙基)-N-甲基-2-硝基苯磺醯胺鹽酸鹽(397.7g，848.5mmol)於DMF(2.5kg)中之溶液中添加DIPEA(421.8g，3263.4mmol)，繼而添加EDCI(312.8g，1631.7mmol)及HOAt(222.1g,1631.7mmol)。在反應混合物在25℃下攪拌18小時之後，反應溫度降低至10℃，接著添加IPAC(3.5kg)及水(4.0kg)。該混合物攪拌10分鐘且接著分離各層。水層用IPAC(2.5kg)萃取。經組合之有機層相繼用10% Na2CO3水溶液(4.5kg)及水(2×4kg)洗滌，且接著在真空下(<100毫巴)在40-45℃下濃縮，生成呈泡沫狀之4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基磺醯胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺(670g，分析純度為93%)，其無需進一步純化即用於下一步驟。ESI-MS(m/z)：763.1216,765.1161([M+H]+,100)。Mp=115- 117℃。HPLC(方法A)，滯留時間=10.57min。1H NMR(400MHz,CDCl3)：8.11(t,J=8Hz,1H),7.99(m,1H),7.91(s,1H),7.59-7.72(m,5H),7.35(s,1H),7.19(d,J=8Hz,1H),7.09(d,J=8Hz,1H),5.46(br.s,1H),4.77(br.s,2H),4.48-4.55,4.35-4.42(m,1H),3.93(q,J1=12Hz,J1=16Hz,1H),3.73-3.82(m,1H),3.33(q,J1=4Hz,J1=12Hz,1H),3.00(s,3H),2.78-2.85(m,1H),2.31-2.37(m,1H),2.12-2.20(m,1H),1.84-1.96(m,2H),1.60-1.71(m,1H),1.47-1.56(m,1H)。
向4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)-吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(N-甲基-2-硝基苯基-磺醯胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺(500g粗產物，來自前一步驟)於DMF(2.0kg)中之懸浮液中添加4-巰基苯甲酸(161.5g，1047.7mmol)。反應混合物在5分鐘之後變為溶液且接著冷卻至10℃。在一次性添加LiOH．H2O(137.3g，3274.0mmol)之後，該混合物在25℃下攪拌3小時，接著溫度冷卻至10℃。反應混合物用水(3.0kg)稀釋且用IPAC(3*2.5kg)萃取。IPAC層首先用15% Na2CO3水溶液(2*3.0kg)洗滌，繼而用水(2*3.0kg)洗滌，且接著在真空下(<100毫巴)在40-45℃下濃縮。向所得殘餘物中添加MeCN(1.8kg)，生成澄清溶液，其加熱至50℃且攪拌30分鐘。該混合物進一步在2小時內冷卻至10℃且在此溫度下再攪拌1小時。在過濾所得懸浮液之後，固體濾餅用預冷卻之MeCN(400g，5℃)洗滌。濕濾餅在真空下(<100毫巴)在80℃下乾燥18小時，生成呈結晶固體狀之4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺(245g，2個步驟之總體產率為66%，HPLC純度=98.3%，對掌性純度=99.0%)。Mp 115-117℃。ESI-MS(m/z)：578.1381,580.1381([M+H]+,100)。HPLC(方法A)，滯留時間=7.24min。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)：8.82(d,J=8Hz,1H),8.0(s,1H),8.82(t,J=8Hz,1H),7.70(d,J=8Hz,1H),7.67(d,J =8Hz,1H),7.53(s,1H),7.48(d,J=8Hz,1H),7.34(d,J=8Hz,1H),6.21(br.s,2H),5.18(m,2H),4.46-4.52,4.32-4.37(m,1H),3.52-3.60(m,1H),2.80-2.94(m,3H),2.36(s,3H),2.23-2.25(m,1H),1.95-1.98(m,1H),1.76-1.86(m,3H),1.51-1.62(m,1H),1.39-1.48(m,1H)。
4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺之游離鹼形式藉由在室溫下使4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺(200mg)懸浮於4ml硝基甲烷中來製備。懸浮液加熱至55℃，直至溶液澄清。8個加熱-冷卻循環在溫度範圍55℃至5℃內進行。固體藉由過濾產生且在真空下在40℃下乾燥隔夜。游離鹼形式之X射線粉末繞射圖案在圖1中測定。4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺之游離鹼之DSC/TGA熱圖提供於圖2中。
4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺之HCl鹽形式藉由在室溫下在攪拌下將非晶形4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺(120mg)溶解於0.5N HCl乙醇溶液(414μL)中來製備。在攪拌5分鐘之後觀察到沈澱物。4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲基胺基)乙基)-2-氟苯甲醯胺之高度結晶HCl鹽形式之DSC/TGA熱圖提供於圖4中。游離鹼形式之X射線粉末繞射圖案在圖3中測定。圖3之XRPD之最顯著峰顯示於下表中：
實例185及186 4-(3-胺基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺及4-(3-胺基-6-((1S,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. 4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
4-(3-胺基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(154mg，0.38mmol)經受對掌性分離(ChiralPak 5mic AD管柱，4.6x100(mm),CO2/IPA+0.1% DEA=75/25,SFC=5ml/min)以提供極性對映異構體4-(3-胺基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(Rt=1.86min,63mg，0.155mmol，41%)及較少極性對映異構體4-(3-胺基-6-((1S,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(Rt=2.91,70mg，0.173mmol，46%)。絕對立體化學經任意指派。
步驟2及3. 4-(3-胺基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸及4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向各酯(1mmol)於DCM(2mL)中之溶液中添加含4M HCl之二噁烷(30mL)。反應混合物在室溫下攪拌2天。在真空中蒸發揮發性材料之後，反應混合物用Et2O濕磨且過濾以分別提供呈HCl鹽之4-(3-胺基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(60mg，來自63mg酯)及4-(3-胺基-6-((1S,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)- 2-氟苯甲酸(59mg，來自70mg酯)，其無需任何進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：350.2(MH+),0.5min(關於各酸)。
步驟4及5. 4-(3-胺基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺及4-(3-胺基-6-((1S,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
向各酸(20mg，0.057mmol)於DMF(573μL)中之溶液中添加(S)-2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇HCl鹽(18.59mg，0.069mmol)、aza-HOBt(11.69mg，0.086mmol)、EDC(21.95mg，0.115mmol)及DIEA(30.0μl，0.172mmol)。反應混合物攪拌15小時。添加水，且反應混合物用EtOAc萃取三次。有機層經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗產物藉由HPLC來純化。凍乾純溶離份以分別提供呈TFA鹽之所需產物(11mg，0.016mmol，28%)。關於4-(3-胺基-6-((1R,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺，LCMS(m/z)：565.1/567(MH+),0.74min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.95-7.79(m,1H),7.76-7.59(m,1H),7.46(s,1H),7.33-7.14(m,2H),5.24-5.10(m,1H),4.75-4.49(m,1H),4.16(br.s.,2H),3.96-3.77(m,4H),2.80(t,J=12.5Hz,2H),2.25(dq,J=7.6,11.9Hz,2H),2.08-1.78(m,7H),1.76-1.55(m,4H)。關於4-(3-胺基-6-((1S,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺，LCMS(m/z)：565.1/567.1(MH+),0.74min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.84-7.70(m,2H),7.66-7.49(m,2H),7.37(s,1H),7.24-7.05(m,2H),5.09(d,J=5.5Hz,1H),4.66-4.41(m,1H),4.07(br.s.,1H),3.88-3.65(m,2H),2.71(t,J=12.9Hz,1H),2.16(dq,J=7.4,12.0Hz,1H),1.99-1.70(m,3H),1.66-1.47(m,2H)。絕對立體化學尚未測定。
實例187及188 4-(3-胺基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺及4-(3-胺基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. 4-(3-胺基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)-第三丁酯
在0℃下向4-(3-胺基-6-((1R,3S)-3-氟-4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)-第三丁酯(208mg，0.516mmol)於MeOH(3.017mL)中之溶液中添加NaBH4(29.3mg，0.773mmol)。反應混合物攪拌2小時。LCMS顯示約4：1比率之兩種非對映異構體。在用NaHCO3溶液淬滅之後，反應混合物用EtOAc萃取。有機層用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。主要非對映異構體藉由中性製備型HPLC分離。在凍乾之後，獲得4-(3-胺基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羥基 環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)-第三丁酯，35.8%產率。(74.9mg)。LCMS(m/z)：406.3(MH+),0.80min。4-(3-胺基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)-第三丁酯之相對立體化學藉由NMR確認。
步驟2. 4-(3-胺基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯及4-(3-胺基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
4-(3-胺基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)-第三丁酯(74.9mg，0.185mmol)經受對掌性SFC(ChiralPak 5mic AD管柱，4.6x100(mm),CO2/EtOH+0.1%,DEA=80/20,SFC=5mL/min)以提供極性對映異構體4-(3-胺基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(Rt=1.95min,33mg，44%)及較少極性對映異構體4-(3-胺基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(Rt=3.17,35mg，46%)。絕對立體化學經任意指派。
步驟3及4. 4-(3-胺基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸及4-(3-胺基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向各酯(1mmol)之溶液中添加含4M HCl之二噁烷(111mL)。反應混合物在室溫下攪拌2天。在真空中蒸發揮發性材料之後，反應混合物用Et2O濕磨且過濾以分別提供呈HCl鹽之4-(3-胺基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(31mg，來自33mg酯)，LCMS(m/z)：350.2(MH+),0.47min，及4-(3-胺基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(33mg，來自35mg酯)，LCMS(m/z)：350.2(MH+),0.48min，其無需任何進一步純化即用於下一步驟。
步驟5及6. 4-(3-胺基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺及4-(3-胺基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
根據流程85中之步驟8，使用4-(3-胺基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸，獲得4-(3-胺基-6-((1R,3S,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：565.0/567.1(MH+),0.71min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.93-7.78(m,2H),7.73-7.55(m,2H),7.46(s,1H),7.33-7.13(m,2H),5.17(t,J=5.9Hz,1H),3.95-3.78(m,2H),3.75-3.42(m,1H),3.09-2.93(m,1H),2.32-2.14(m,1H),2.05-1.79(m,5H),1.80-1.59(m,1H)。使用4-(3-胺基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸，獲得4-(3-胺基-6-((1S,3R,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：565.0/567.1(MH+),0.71min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.95-7.80(m,2H),7.75-7.56(m,2H),7.46(s,1H),7.33-7.12(m,2H),5.17(t,J=5.9Hz,1H),3.96-3.78(m,2H),3.76-3.55(m,1H),3.10-2.95(m,1H),2.31-2.12(m,1H),2.08-1.82(m,5H),1.79-1.62(m,1H)。
實例189 4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺之合成
流程89
步驟1. (S)-2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇鹽酸鹽
(S)-(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁酯(2.507g，6.58mmol)溶解於DCM(60mL)中且用含4N HCl之二噁烷(4.93mL，19.73mmol)處理。該混合物在室溫下攪拌隔夜。在真空中小心地蒸發大多數溶劑之後，漿料用Et2O濕磨，提供1.525g(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇(72%)之精細白色HCl鹽，其藉由抽吸過濾來分離。LCMS(m/z)：282.4(MH+),0.46min。
步驟2. 4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(16mg，0.046mmol)於DMF(0.46mL)中之溶液中添加(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇鹽酸鹽(17.5mg，0.055mmol)、HOAt(9.35mg，0.069mmol)、EDC(17.6mg，0.092mmol)及DIEA(24μl，0.137mmol)。反應混合物攪拌15小時。在添加水之後，反應混合物用EtOAc萃取且有機層用水洗滌兩次。分離有機層且經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供粗產物，其用70% DCM/乙醚濕磨以提供9.3mg呈TFA鹽之4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺(28%)。LCMS(m/z)：613.1(MH+),0.74min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.93-7.78(m,2H),7.76-7.57(m,3H),7.73-7.56(m,3H),7.43(d,J=7.8Hz,1H),7.21(d,J=9.4Hz,1H),5.15(t,J=5.9Hz,1H),4.37(m,1H),3.83 (m,2H),3.63(m,1H),2.84(t,J=11.7Hz,1H),2.27(dd,J=2.9,9.2Hz,1H),2.14-1.98(m,1H),1.96-1.75(m,2H),1.65(dq,J=3.3,13.0Hz,1H),1.56-1.34(m,1H)。
磷酸二氫(S)-2-(4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙酯之合成
步驟1. (1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸(S)-(9H-茀-9-基)甲酯：向(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇(4500mg，14.17mmol)中添加THF(體積：40mL，比率：2.67)及水(體積：15mL，比率：1.000)，繼而添加NaHCO3(4762mg，56.7mmol)。該混合物攪拌2分鐘，接著在冰浴中冷卻至0℃。向反應物中添加氯甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(5499mg，21.26mmol)且反應物在0℃下攪拌30分鐘，使其溫至室溫且再攪拌60分鐘，接著進行LCMS。乙酸乙酯添加至粗反應混合物中。該混合物用水(2x)、飽和鹽溶液洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至殘餘物。粗產物藉由矽膠層析使用300g管柱(固體負載)自0-60%乙 酸乙酯/庚烷溶離來純化。所需溶離份濃縮至恆定質量，生成呈白色固體狀之5375mg呈游離鹼形式之所需產物，原樣使用，(73%產率)。LCMS(m/z)：504.1(MH+),1.05min。1H NMR(<cd3od>)d：7.78(d,J=7.4Hz,2H),7.64(d,J=7.2Hz,2H),7.53(s,1H),7.33-7.43(m,3H),7.25-7.33(m,2H),7.07(d,J=9.2Hz,1H),4.64(t,J=5.9Hz,1H),4.31-4.46(m,2H),4.21(t,J=6.3Hz,1H),3.66(d,J=3.1Hz,2H)。
步驟2. (2-((二第三丁氧基磷醯基)氧基)-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)胺基甲酸(S)-(9H-茀-9-基)甲酯：向(1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)胺基甲酸(S)-(9H-茀-9-基)甲酯(5260mg，10.45mmol)中添加咪唑(818mg，12.02mmol)、咪唑HCl(1857mg，17.77mmol)及DMF(體積：50mL)。反應物經攪拌以在氬氣下溶解2-3分鐘。接著經2-3分鐘逐滴添加二異丙基胺基磷酸二第三丁酯(4928mg，17.77mmol)且在室溫下攪拌2小時。該反應之後進行中性LCMS及用1：1乙酸乙酯/庚烷溶離之TLC。粗反應物置於水浴中，緩慢添加過氧化氫30%(5.34mL，52.3mmol)，且該混合物在室溫下攪拌30分鐘，繼而LCMS。粗反應物置於冰浴中且經5-10分鐘逐滴添加(小心地)過量飽和硫代硫酸鈉。向粗反應混合物中添加800mL乙酸乙酯，用水(3x)、飽和鹽溶液洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至殘餘物。粗物質藉由矽膠層析使用300g管柱自0-55%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化。所需峰濃縮至恆定質量，生成6560mg呈游離鹼形式之所需產物，原樣使用，(86%產率)。LCMS(m/z)：696.3(MH+)弱，1.25min。注意：-112片段(在584.2處)為LCMS中之主要離子，如自兩個第三丁基保護基損失所預期。1H NMR(<cd3od>)d：7.79(d,J=7.3Hz,2H),7.64(d,J=7.3Hz,2H),7.58(s,1H),7.45(d,J=7.6Hz,1H),7.34-7.42(m,2H),7.22-7.32(m,2H),7.12(d,J=9.1Hz,1H),4.90(t,J=6.0Hz,1H),4.41-4.48(m,1H),4.31-4.40(m,1H),4.21(t,J=6.6Hz,1H),4.08(t,J=6.3Hz,2H),1.42(s,9H), 1.40(s,9H)。
步驟3. 二第三丁基磷酸(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙酯：向(2-((二第三丁氧基磷醯基)氧基)-1-(3-氟-5-碘苯基)乙基)胺基甲酸(S)-(9H-茀-9-基)甲酯(6450mg，9.27mmol)中添加DMF(體積：90mL)，繼而添加哌啶(25mL，253mmol)且在室溫下攪拌30分鐘，繼而LCMS。向粗反應混合物中添加750mL乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉(2x)、水(5x)、飽和鹽溶液洗滌，硫酸鈉乾燥，且過濾。溶劑在高真空下濃縮至恆定質量，生成所需粗產物，其包括FMOC哌啶雜質，原樣使用。LCMS(m/z)：474.2(MH+),0.80min。
步驟4. 二第三丁基磷酸(S)-2-(4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙酯：向4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(3927mg，9.3mmol)於NMP(體積：60mL)中之溶液中添加二第三丁基磷酸(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙酯(4740mg，9.30mmol)、DIEA(9.75mL，55.8mmol)，且接著添加HATU(5304mg，13.95mmol)。反應混合物在室溫下攪拌2小時，繼而LCMS。向粗反應物中添加850mL乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鹽(2x)、水(3x)、飽和鹽溶液洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾且乾燥至殘餘物。粗產物藉由矽膠層析330g管柱用0-70%(具有10% MeOH之EtOAc)/庚烷溶離來純化。所需峰濃縮至恆定質量，生成5.75g粗產物。材料藉由矽膠層析330g管柱用0-60%(具有10% MeOH之EtOAc)/庚烷溶離再純化，生成5.03g粗產物。材料進一步藉由添加1200ml乙酸乙酯以溶解及200ml庚烷來純化，用200ml 0.5N HCl(5x)、水、飽和碳酸氫鈉、水(3x)、飽和鹽溶液洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至恆定質量，生成4.70g所需產物，產率，按原樣使用。(61%產率，經2個步驟)。LCMS(m/z)：805.4(MH+),0.99min。1H NMR(<cd3od>)d：7.90(s,1H),7.77-7.86(m,1H),7.68-7.73 (m,2H),7.63(dd,J=11.8,1.2Hz,1H),7.42-7.52(m,1H),7.26(d,J=9.5Hz,1H),5.43(t,J=5.7Hz,1H),4.30-4.49(m,1H),4.28(t,J=6.3Hz,2H),3.58-3.72(m,1H),2.83(t,J=11.6Hz,1H),2.27(dt,J=6.2,3.1Hz,1H),2.02-2.13(m,1H),1.77-1.94(m,2H),1.58-1.74(m,1H),1.48-1.55(m,1H),1.45(d,J=5.8Hz,18H)。
步驟5. 磷酸二氫(S)-2-(4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙酯：二第三丁基磷酸(S)-2-(4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙酯(4600mg，5.72mmol)完全溶解於MeOH(體積：70mL)中。接著添加含HCl 4M之二噁烷(14.29mL，57.2mmol)且在室溫下攪拌3小時，繼而LCMS。溶劑大部分經濃縮。接著添加MeOH(體積：70mL)且溶劑濃縮至殘餘物，添加額外MeOH(體積：70mL)且殘餘物濃縮至恆定質量。產物溶解於90mL 1：1 ACN/水中且凍乾，生成3.99g呈HCl鹽之所需產物。(94%產率)。LCMS(m/z)：692.9(MH+),0.63min。1H NMR(<cd3od>)d：7.84-7.93(m,1H),7.75(s,1H),7.60-7.71(m,3H),7.45-7.51(m,1H),7.26(dt,J=9.7,1.6Hz,1H),5.40(t,J=5.9Hz,1H),4.31-4.50(m,1H),4.22-4.30(m,2H),3.64(tdd,J=11.7,8.6,5.1Hz,1H),2.82-2.98(m,1H),2.32(ddt,J=11.7,5.8,2.8Hz,1H),2.01-2.15(m,1H),1.89-1.97(m,1H),1.75-1.89(m,1H),1.58-1.72(m,1H),1.42-1.55(m,1H)。31P NMR(<cd3od>)d：0.00(s,1P)。
HCl鹽轉化為二鈉鹽：向呈HCl鹽之以上所需產物(24mg，0.035mmol)中添加水(體積：17mL)，接著用2M碳酸鈉濕磨至pH10-11且接著用15mL DCM(4x)萃取。鹼性水直接負載於12g Grace Reveleris C18逆相管柱上，經18分鐘用0-20% ACN/水以15ml/min之流動速率溶離，無緩衝液。凍乾所需溶離份，生成18mg呈二鈉鹽之所需產物磷 酸二氫(S)-2-(4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙酯，藉由相對離子分析來測定。(70%產率)。LCMS(m/z)：692.9(MH+),0.64min。1H NMR(<cd3od>)d：7.82-7.92(m,2H),7.64-7.72(m,2H),7.58(dd,J=11.4,1.2Hz,1H),7.39(d,J=7.6Hz,1H),7.28(d,J=9.5Hz,1H),5.17(dd,J=6.9,4.1Hz,1H),4.25-4.49(m,1H),4.02-4.20(m,2H),3.57-3.73(m,1H),2.83(t,J=11.6Hz,1H),2.27(dd,J=6.1,3.6Hz,1H),1.98-2.14(m,1H),1.78-1.94(m,2H),1.59-1.73(m,1H),1.40-1.55(m,1H)。
實例190 4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺之合成
向4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(18mg，0.052mmol)於DMF(0.52mL)中之溶液中添加(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇鹽酸鹽(19.6mg，0.062mmol)、HOAt(10.52mg，0.077mmol)、EDC(19.76mg，0.103mmol)及DIEA(27μl，0.155mmol)。反應混合物攪拌15小時。在添加水之後，反應混合物用EtOAc萃取且有機層用水洗滌兩次。分離有機層且經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供15.8mg呈游離鹼之4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺(50%)。LCMS(m/z)：613.1(MH+),0.74min；1H NMR(400MHz, CD3OD)δ ppm 7.89-7.69(m,2H),7.66-7.47(m,3H),7.39-7.26(m,1H),7.12(d,J=9.4Hz,1H),5.05(t,J=5.9Hz,1H),4.43-4.14(m,1H),3.84-3.66(m,2H),3.64-3.45(m,1H),2.74(t,J=11.7Hz,1H),2.17(td,J=3.1,6.0Hz,1H),2.05-1.87(m,1H),1.84-1.66(m,2H),1.65-1.47(m,1H),1.47-1.27(m,1H)。
磷酸二氫(S)-2-(4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙酯之合成
步驟1. 二第三丁基磷酸(S)-2-(4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙酯：向4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(215mg，0.509mmol)於NMP(體積：4mL)中之溶液中添加二第三丁基磷酸(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙酯(260mg，0.509mmol)、DIEA(0.534mL，3.06mmol)及接著HATU(290mg，0.764mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時，繼而LCMS。向粗反應物中添加150mL乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鹽(2x)、水(3x)、飽和鹽溶液洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾且乾燥至殘餘物。粗產物藉由矽膠層析24g管柱 (DCM負載)用0-80%(具有10% MeOH之EtOAc)/庚烷溶離來純化。所需溶離份濃縮至恆定質量，生成315mg呈游離鹼之所需產物。(77%產率)。LCMS(m/z)：805.3(MH+),1.01min。
步驟2. 磷酸二氫(S)-2-(4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙酯：向二第三丁基磷酸(S)-2-(4-(3-胺基-6-((1R,3R,4R)-3-氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氟-5-碘苯基)乙酯(315mg，0.392mmol)之溶液中添加含HCl 4M之二噁烷(5mL，20.00mmol)及甲醇(體積：0.5mL)。反應混合物在室溫下攪拌1小時，繼而LCMS。溶劑經濃縮。粗材料用具有最少量之所添加MeOH的3M NaOH溶液鹼化且溶解。材料藉由12g Grace Reveleris C18逆相管柱用0-15% ACN/水經18分鐘以15ml/min之流動速率溶離來純化，無緩衝液。收集所需溶離份，用1M HCl酸化至pH 1且用乙酸乙酯(5x)萃取。經組合之有機層(800ml)用最少量之水(3x 25ml)洗滌以移除鹽。溶劑經濃縮，溶解於1：1 ACN/水中且凍乾，生成207mg呈HCL鹽之所需產物。(72%產率)。LCMS(m/z)：693.2(MH+),0.64min。1H NMR(<cd3od>)d：7.87(s,1H),7.81-7.86(m,1H),7.65-7.72(m,2H),7.61(dd,J=11.7,1.6Hz,1H),7.46(ddd,J=8.0,2.3,1.4Hz,1H),7.26(dt,J=9.5,1.9Hz,1H),5.38(t,J=5.7Hz,1H),4.29-4.49(m,1H),4.18-4.29(m,2H),3.64(tdd,J=11.6,8.6,4.9Hz,1H),2.76-2.92(m,1H),2.27(ddd,J=8.8,5.9,2.5Hz,1H),2.01-2.13(m,1H),1.76-1.94(m,2H),1.58-1.71(m,1H),1.39-1.55(m,1H)。31PNMR(<cd3od>)d：0.16(br.s.,1P)。
實例191及192 4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-胺基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺及4-(3-胺基-6-((1s,4R)-4-胺基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1. 4-(3-胺基-6-(4-(苯甲基胺基)環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(300mg，0.874mmol)中添加MeOH(4mL)、苯基甲胺(112mg，1.048mmol)及最後乾燥4Å分子篩。反應物在室溫下攪拌16小時。接著添加NaBH4(165mg，4.37mmol)且在室溫下攪拌2h，繼而LCMS。向反應物中添加150mL乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉、水(2x)、飽和鹽溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至殘餘物，生成352mg所需產物，2：1反式：順式比率，原樣使用(93%)。LCMS(m/z)：435.3(MH+),0.68min及0.72min。
步驟2. 4-(3-胺基-6-(4-胺基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向用氬氣沖洗之圓底燒瓶中的4-(3-胺基-6-(4-(苯甲基胺基)環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(350mg，0.806mmol)中添加濕Pd-C10% degaussa(171mg，0.161mmol)。接著在氬氣下用注射器添加MeOH(5mL)及最後氫氣球。將燒瓶抽真空且用氫氣再填充6次。反應物在室溫下攪拌14小時。反應物用氬氣吹掃，接著小心地添加濕Pd-C 10% degaussa(171mg，0.161mmol)。接著添加氫氣球，且將燒瓶抽真空且用氫氣再填充6次。反應物再攪拌10h，總計24h，繼而LCMS。反應用氬氣沖洗且添加35mL DCM。粗物質混合物經矽藻土插塞過濾，且濃縮至恆定質量，生成230mg所需產物(其為2：1反式：順式比率)，原樣使用(83%)。LCMS(m/z)：345.2(MH+),0.48min及0.51min。
步驟3. 4-(3-胺基-6-(4-((第三丁氧基羰基)胺基)環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向4-(3-胺基-6-(4-胺基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(230mg，0.668mmol)中添加DCM(5mL)、TEA(0.233mL，1.670mmol)及Boc-酐(0.186mL，0.801mmol)。反應物在室溫下攪拌1h，繼而LCMS。向反應物中添加150mL乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉、水(兩次)、飽和鹽溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至恆定質量，生成233mg所需產物(其為2：1反式：順式比率)，原樣使用(78%)。LCMS(m/z)：445.2(MH+),0.92min(關於兩者)。
步驟4. 4-(3-胺基-6-(4-((第三丁氧基羰基)胺基)環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-胺基-6-(4-((第三丁氧基羰基)胺基)環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(230mg，0.517mmol)中添加MeOH(2mL)、THF(2mL)且接著添加氫氧化鋰1M水溶液(1.552mL，1.552mmol)。反應物 在室溫下攪拌1小時。溶劑濃縮至殘餘物，接著添加THF(20mL)且濃縮至殘餘物。接著再添加THF(20mL)且再濃縮至殘餘物，至恆定質量，生成所需產物(其為2：1反式：順式比率)，原樣使用。假定定量產率(0.517mmol)。LCMS(m/z)：431.2(MH+),0.78min(關於兩者)。
步驟5. (S)-(4-(5-胺基-6-(4-((1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)環己基)胺基甲酸第三丁酯
向4-(3-胺基-6-(4-((第三丁氧基羰基)胺基)環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(222mg，0.516mmol)中添加DMSO(4mL)、胡尼希鹼(0.450mL，2.58mmol)、(S)-2-胺基-2-(3-氯苯基)乙醇(133mg，0.774mmol)且接著添加HATU(392mg，1.031mmol)。反應物在室溫攪拌1小時。向反應物中添加50mL乙酸乙酯，用水(兩次)、飽和鹽溶液洗，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮成殘餘物。粗物質藉由急驟層析使用12g管柱(固體負載)用10-95%乙酸乙酯於庚烷中溶離純化。所需溶離份濃縮至恆定質量，生成252mg產物(其為2：1反式：順式比率)，原樣使用(83%，經2個步驟)。LCMS(m/z)：584.3(MH+),0.91min(關於兩者)。
步驟6. 4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-胺基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺及4-(3-胺基-6-((1s,4R)-4-胺基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
向(S)-(4-(5-胺基-6-(4-((1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)環己基)胺基甲酸第三丁酯(252mg，0.431mmol)中添加DCM(8mL)且接著添加TFA(2mL，26.0mmol)。反應物在室溫攪拌1小時。濃縮溶劑，再溶解於DMSO中，過濾，且藉由製備型HPLC純化，收集兩種異構體。主要異構體反式先溶離出，次要順式異構體接著溶離出。在凍乾之後，獲得87mg呈TFA鹽之反式產物4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-胺基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺，34%產率。LCMS(m/z)：484.2(MH+),0.58min；1H NMR(CD3OD)δ ppm 7.79(s,1H),7.76(t,J=7.8Hz,1H),7.58(dd,J=7.8,1.6Hz,1H),7.52(dd,J=11.9,1.4Hz,1H),7.36(s,1H),7.30-7.23(m,2H),7.22-7.16(m,1H),5.10(t,J=5.9Hz,1H),3.83-3.70(m,2H),3.08(tt,J=11.7,3.9Hz,1H),2.69-2.49(m,1H),2.06(d,J=10.6Hz,2H),1.97(d,J=12.9Hz,2H),1.75-1.57(m,2H),1.55-1.31(m,2H)。
此外，在凍乾之後，獲得43mg呈TFA鹽之順式產物4-(3-胺基-6-((1s,4R)-4-胺基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺，17%產率。LCMS(m/z)：484.2(MH+),0.61min；1H NMR(CD3OD)δ ppm 7.87(s,1H),7.81-7.72(m,1H),7.60(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.55(d,J=11.7Hz,1H),7.36(s,1H),7.26(d,J=5.9Hz,2H),7.22-7.16(m,1H),5.10(t,J=5.7Hz,1H),3.87-3.67(m,2H),2.91-2.80(m,1H),1.98(q,J=8.9Hz,2H),1.90-1.71(m,6H)。
實例193 4-(6-((1r,4S)-4-乙醯胺基環己基)-3-胺基吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
在0℃下向4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-胺基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(15mg，0.025mmol)中添加DCM(0.25mL)、THF(0.75mL)及TEA(10.49μl，0.075mmol)。接著添加乙酸酐(2.367μl，0.025mmol)。反應物在0℃下攪拌30分鐘。濃 縮反應物，溶解於1mL DMSO中，過濾，藉由製備型HPLC純化，且凍乾，生成5.4mg呈TFA鹽之所需產物4-(6-((1r,4S)-4-乙醯胺基環己基)-3-胺基吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(33%產率)。LCMS(m/z)：526.3(MH+),0.67min；1H NMR(CD3OD)δ ppm 7.71-7.82(m,2H),7.58(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.53(d,J=11.7Hz,1H),7.37(s,1H),7.22-7.29(m,2H),7.15-7.22(m,1H),5.10(t,J=5.9Hz,1H),3.71-3.84(m,2H),3.52-3.66(m,1H),2.51-2.65(m,1H),1.86-2.02(m,4H),1.83(s,3H),1.53-1.69(m,2H),1.22-1.39(m,2H)。
實例194 4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-(甲基磺醯胺基)環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
向4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-胺基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(15mg，0.025mmol)中添加DCM(0.25mL，比率：1.000)、THF(0.250mL)、TEA(10.49μl，0.075mmol)，攪拌以溶解且冷卻至0℃，且接著添加甲烷磺醯氯(1.955μl，0.025mmol)。反應物在0℃下攪拌30分鐘，繼而LCMS。濃縮反應物，溶解於1mL DMSO中，過濾，藉由製備型HPLC純化，且凍乾，生成1.6mg呈TFA鹽之所需產物4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-(甲基磺醯胺基)環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(9%產率)。LCMS(m/z)：562.2(MH+),0.69min。1H NMR(CD3OD)δ ppm 7.70-7.82(m,2H),7.59(d,J=7.8Hz,1H),7.53(d,J=11.7Hz,1H),7.37(s,1H),7.22-7.30(m,2H),7.13-7.21(m,1H),5.09(t,J=5.9Hz,1H),3.68-3.89(m,2H),2.87(s,3H),2.48-2.60(m,1H),2.05(d,J=14.9Hz,2H),1.84-1.95(m,2H),1.54-1.74(m,2H),1.38(q,J=12.9Hz,2H)。
實例195 ((1S,4r)-4-(5-胺基-6-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)環己基)胺基甲酸甲酯之合成
向4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-胺基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(15mg，0.025mmol)中添加DCM(0.25mL)、THF(0.250mL)、TEA(10.49μl，0.075mmol)，攪拌以溶解且冷卻至0℃，且接著添加氯甲酸甲酯(1.943μl，0.025mmol)。反應物在0℃下攪拌30分鐘，繼而LCMS。濃縮反應物，溶解於1mL DMSO中，過濾，藉由製備型HPLC純化，且凍乾，生成4.5mg呈TFA鹽之所需產物((1S,4r)-4-(5-胺基-6-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)環己基)胺基甲酸甲酯(27%產率)。LCMS(m/z)：542.3(MH+),0.75min。1H NMR(CD3OD)δ：7.73-7.81(m,2H),7.58(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.48-7.55(m,1H),7.37(s,1H),7.23-7.30(m,2H),7.15-7.22(m,1H),5.10(t,J=5.9Hz,1H),3.69-3.84(m,2H),3.53(s,3H),3.31-3.36(m,1H),2.48-2.62(m,1H),1.84-2.00(m,4H),1.51-1.68(m,2H),1.21-1.44(m,2H)
實例196 4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-(2-羥基乙醯胺基)環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
向4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-胺基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(11mg，0.018mmol)中添加NMP(0.4mL)、2-羥基乙酸(2.80mg，0.037mmol)、胡尼希鹼(0.013mL，0.074mmol)且接著添加HATU(17.49mg，0.046mmol)。反應物在室溫下攪拌30分鐘。濃縮反應物，溶解於0.75mL DMSO中，過濾，藉由製備型HPLC純化，且凍乾，生成3.6mg呈TFA鹽之所需產物4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-(2-羥基乙醯胺基)環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(29%)。LCMS(m/z)：542.2(MH+),0.63min。1H NMR(CD3OD)δ ppm 7.83-7.72(m,2H),7.59(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.53(d,J=11.7Hz,1H),7.37(s,1H),7.32-7.23(m,2H),7.22-7.16(m,1H),5.10(t,J=5.9Hz,1H),3.86(s,2H),3.82-3.63(m,3H),2.65-2.50(m,1H),2.02-1.86(m,4H),1.72-1.56(m,2H),1.48-1.33(m,2H)。
實例197 (S)-N-(2-胺基-1-(3-氯苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(4,4-二氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺之合成
流程91
步驟1. 4-(3-胺基-6-(4,4-二氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(250mg，0.728mmol)中添加DCM(10mL)且溶液在冰浴中冷卻至0℃。接著在0℃下添加含Deoxo-氟溶液之甲苯50%(805mg，1.820mmol)。使反應物溫至室溫且攪拌2小時。為淬滅反應，添加TEA(1.522mL，10.92mmol)且在室溫下攪拌1h。濃縮溶劑至殘餘物且粗物質藉由急驟層析(乾負載)使用12g管柱用5-75%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化。所需溶離份濃縮至恆定質量，生成83mg呈游離鹼之所需產物，原樣使用(31%產率)。LCMS(m/z)：366.2(MH+),0.87min。
步驟2. 4-(3-胺基-6-(4,4-二氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-胺基-6-(4,4-二氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(83mg，0.227mmol)中添加MeOH(1.5mL)、THF(1.5mL)且接著添加1M水溶液NaOH(0.909mL，0.909mmol)。反應物在室溫下攪拌6小時。濃縮反應物至殘餘物。添加THF且再次濃縮至殘餘物。接著該混合物溶解於1：1 ACN/水中，用6M HCl酸化且凍乾，生成呈HCl鹽之所需產物，原樣使用。假定定量產率，(0.227mmol)。LCMS(m/z)： 352.1(MH+),0.71min。
步驟3. (S)-(2-(4-(3-胺基-6-(4,4-二氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯
向4-(3-胺基-6-(4,4-二氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(48mg，0.124mmol)中添加DMSO(1mL)、胡尼希鹼(0.108mL，0.619mmol)、S)-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(50.3mg，0.186mmol)且接著添加HATU(94mg，0.248mmol)。反應物在室溫下攪拌1小時。向反應物中添加0.5mL DMSO，過濾，藉由製備型HPLC純化，且凍乾，生成11mg所需產物，原樣使用(12%產率)。LCMS(m/z)：604.2(MH+),1.05min。
步驟4. (S)-N-(2-胺基-1-(3-氯苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(4,4-二氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺
向(S)-(2-(4-(3-胺基-6-(4,4-二氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺基)-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(11mg，0.018mmol)中添加含HCl 4M之二噁烷(1mL，4.00mmol)。反應物在室溫下攪拌1小時。移除溶劑且濃縮至殘餘物，其溶解於1：1乙腈/水中，過濾且凍乾成HCl鹽。粗鹽殘餘物溶解於1mL DMSO中，藉由製備型HPLC純化且凍乾，生成3.8mg呈TFA鹽之所需產物(S)-N-(2-胺基-1-(3-氯苯基)乙基)-4-(3-胺基-6-(4,4-二氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺(33%)。LCMS(m/z)：504.2(MH+),0.74min；1H NMR(CD3OD)δ ppm 7.85-7.73(m,2H),7.62(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.54(dd,J=12.1,1.2Hz,1H),7.46(s,1H),7.38-7.28(m,3H),5.39(dd,J=9.0,5.9Hz,1H),3.40-3.33(m,2H),2.72(br.s.,1H),2.12-1.98(m,2H),1.96-1.73(m,6H)。
實例198及199 順式-4-(3-胺基-6-(3-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥 基乙基)-2-氟苯甲醯胺的對映異構體增濃之非對映異構體之合成
步驟1. 極性及較少極性對映異構體增濃之順式-5-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-胺
自流程29製備之5-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-胺(500mg，1.626mmol)藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic OD管柱，4.6x100(mm),CO2/IPA+0.1% DEA=90/10,SFC=5mL/min)解析。關於極性對映異構體(峰1)(230mg，0.748mmol，46.0%產率)，Rt=1.58min。關於較少極性對映異構體(峰2)(230mg，0.748mmol，46.0%產率)，Rt=2.36min。
步驟2、3、4、5及6. 順式-4-(3-胺基-6-(3-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺非對映異構體
根據流程75中之步驟2、3及7，各對映異構體增濃之順式-5-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)環己基)吡嗪-2-胺經歷溴化，繼而與3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)酸發生鈴木偶合。在水解之後，根據流程 75中之步驟8，使用(S)-2-胺基-2-(3-氯苯基)乙醇及各對映異構體，分別獲得順式-4-(3-胺基-6-(3-羥基環己基)吡嗪-2-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之各非對映異構體。關於來自極性前驅體之順式非對映異構體，LCMS(m/z)：485.0(MH+),0.70min；1H NMR(400MHz，甲醇-d 4 )δ ppm 7.90-7.69(m,2 H)7.64-7.48(m,2 H)7.37(s,1 H)7.30-7.09(m,3 H)5.10(t,J=6.06Hz,1 H)3.89-3.69(m,2 H)3.66-3.47(m,1 H)2.79-2.60(m,1 H)2.06(d,J=11.74Hz,1 H)1.97-1.68(m,3 H)1.52-1.26(m,3 H)1.24-0.99(m,1 H)。關於來自較少極性前驅體之順式非對映異構體，LCMS(m/z)：485.0(MH+),0.70min。1H NMR(400MHz，甲醇-d 4 )δ ppm 7.88-7.70(m,2 H)7.65-7.49(m,2 H)7.37(s,1 H)7.32-6.98(m,3 H)5.10(s,1 H)3.76(t,J=6.06Hz,2 H)3.58(s,1 H)2.79-2.59(m,1 H)2.06(d,J=12.13Hz,1 H)1.97-1.61(m,3 H)1.54-1.30(m,3 H)1.25-0.96(m,1 H)。
關於兩種非對映異構體，在環己烷環上之絕對立體化學尚未測定。
實例200及201 4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺及4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺之合成
根據流程89中之步驟2，使用(+/-)-反式-2-苯基環丙胺、EDC (30.2mg，0.158mmol)、HOAt(17.2mg，0.126mmol)及DIEA(0.033mL，0.189mmol)，獲得(+/-)-反式-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-苯基環丙基)苯甲醯胺(19mg，70%)。LCMS(m/z)：433.2(MH+),0.82min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.29-8.22(m,1 H),7.94(s,1 H),7.76-7.71(m,1 H),7.63-7.56(m,1 H),7.35-7.18(m,4 H),7.04-6.94(m,1 H),4.67(s,2 H),4.09(m,2 H),3.35(m,2 H),3.15(m,1 H),2.93(m,1 H),2.22(m,1 H),2.90-1.8(m,4 H),1.43-1.23(m,3 H)。
外消旋產物藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic AD-H管柱，4.6x100(mm)，庚烷：EtOH=50/50,1mL/min)解析。關於極性4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺(27%)，在Rt=11.0min下，LCMS(m/z)：433.2(MH+),0.81min。關於較少極性4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺(+/-)-反式-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-苯基環丙基)苯甲醯胺(27%)，在Rt=15.8min下，LCMS(m/z)：433.2(MH+),0.81min。絕對立體化學基於生物化學資料及對接模型來指派。
實例202及203 4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺及4-(3-胺基-6-((1r,4R)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺之合成
根據流程89中之步驟2，使用(+/-)-反式-2-苯基環丙胺(48.6mg，0.37mmol)、EDC(127mg，0.66mmol)、HOAt(67.8mg，0.498mmol)及DIEA(0.174mL，0.996mmol)，獲得(+/-)-反式-4-(3-胺基-6-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-苯基環丙基)苯甲醯胺(40mg，97%)，其藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic OJ管柱，4.6x100(mm),CO2/IPA+0.1% DEA=60/40,SFC=5ml/min)分離。極性非對映異構體為4-(3-胺基-6-((1r,4S)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1S,2R)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺(Rt=1.38min)。LCMS(m/z)：447.3(MH+),0.76min；1H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 7.89-7.78(m,2H),7.72-7.53(m,2H),7.33-7.23(m,2H),7.24-7.10(m,3H),3.68-3.53(m,1H),3.14-3.03(m,1H),2.74-2.56(m,1H),2.27-2.13(m,1H),2.12-1.88(m,4H),1.77-1.57(m,2H),1.52-1.29(m,4H)。較少極性非對映異構體為4-(3-胺基-6-((1r,4R)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((1R,2S)-2-苯基環丙基)苯甲醯胺(Rt=1.82min)。LCMS(m/z)：447.3(MH+),0.75min；1H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 7.89-7.78(m,2H),7.72-7.53(m,2H),7.33-7.23(m,2H),7.24-7.10(m,3H),3.68-3.53(m,1H),3.14-3.03(m,1H),2.74-2.56(m,1H),2.27-2.13(m,1H),2.12-1.88(m,4H),1.77-1.57(m,2H),1.52-1.29(m,4H)。絕對立體化學基於生物化學資料及對接模型來指派。
實例204 4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-N-苯甲基-2-氰基-6-氟苯甲醯胺之合成
流程95
步驟1. 4-氯-2-氟-6-碘苯甲酸
向250mL燒瓶中添加4-氯-2-氟苯甲酸(4g，22.92mmol)、Pd(OAc)2(0.257g，1.146mmol)、二乙酸碘苯(8.12g，25.2mmol)、碘(6.40g，25.2mmol)及DMF(60mL)。溶液在氮氣氛圍下在100℃下加熱20小時。LCMS顯示約一半之4-氯-2-氟苯甲酸轉化為產物(LCMS滯留時間0.98min，無MH+峰)。在冷卻至室溫之後，溶液用EtOAc稀釋且用1N HCl洗滌三次。組合水層且用EtOAc萃取一次。組合有機層，經Na2SO4乾燥且濃縮，生成深棕色油狀物(16.4g，42%純)，其無需純化即用於下一步驟。
步驟2. 4-氯-2-氟-6-碘苯甲酸甲酯
4-氯-2-氟-6-碘苯甲酸(16.4g，22.93mmol，連同4-氯-2-氟苯甲酸)溶解於DMF(30mL)中。添加Cs2CO3(8.96g，27.5mmol)，繼而添加MeI(1.577mL，25.2mmol)。在室溫下90min之後，LCMS顯示反應完成(滯留時間1.06min，無MH+峰)。其用EtOAc稀釋且經一張濾紙過濾。濾液用水洗滌三次。組合水層且用EtOAc萃取一次。組合有機層，經Na2SO4乾燥且濃縮。殘餘物在矽膠管柱(庚烷：EtOAc 1：0-9：1)上純化，生成4-氯-2-氟-6-碘苯甲酸甲酯及4-氯-2-氟苯甲酸甲酯呈約1：1比率之混合物(1.99g)。
步驟3. 4-氯-2-氰基-6-氟苯甲酸甲酯
4-氯-2-氟-6-碘苯甲酸甲酯(1.99g，10.6mmol)溶解於DMF(12 mL)中。添加CuCN(2.84g，31.7mmol)且懸浮液在微波下在110℃下加熱18min。添加EtOAc且懸浮液經一張濾紙過濾。濾液用水洗滌三次。組合水層且用EtOAc萃取一次。組合有機層，經Na2SO4乾燥且濃縮。殘餘物在矽膠管柱(庚烷：EtOAc 1：0-9：1)上純化，生成呈無色固體狀之產物(505mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.56(s,1H),7.40(d,1H,J=8Hz),4.00(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ ppm 161.78(d,J=58Hz),159.44,139.16(d,J=11Hz),129.96,121.99,121.74,115.48,114.72,53.04。
步驟4. 4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氰基-6-氟苯甲酸甲酯
向2mL微波小瓶中添加5-(四氫-2H-哌喃-4-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-2-胺(638mg，1.049mmol)、4-氯-2-氰基-6-氟苯甲酸甲酯(140mg，0.655mmol)、Pd2(dba)3(30.0mg，0.033mmol)、XPhos(31.2mg，0.066mmol)、NaHCO3(275mg，3.28mmol)、DME(3mL)及H2O(1.5mL)。溶液在微波下在100℃下加熱15min。添加水及EtOAc且水層用EtOAc萃取三次。組合有機層，經Na2SO4乾燥且濃縮。殘餘物在矽膠管柱(庚烷：EtOAc 1：0-1：4)上純化，生成呈黃色泡沫狀之產物(85mg)。LCMS(m/z)356.1(MH+),0.58min。
步驟5. 4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氰基-6-氟苯甲酸
向4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氰基-6-氟苯甲酸甲酯(85mg，0.239mmol)及氫氧化鋰單水合物(11.04mg，0.263mmol)中添加THF(1mL)及H2O(1.000mL)。溶液在室溫下攪拌3小時。所有溶劑均蒸發，生成呈黃色固體狀之粗產物之鋰鹽(92mg)，其無需純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)342.0(MH+),0.42min。
步驟6. 4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-N-苯甲基-2-氰基-6-氟苯甲醯胺
向4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氰基-6-氟苯甲酸中添加DCM(1mL)，繼而添加苯甲胺(0.017mL，0.153mmol)、三乙胺(0.053mL，0.383mmol)及T3P(50%於EtOAc中，0.084mL，0.141mmol)。1小時之後，添加更多苯甲胺(0.017mL，0.153mmol)及T3P(50%於EtOAc中，0.084mL，0.141mmol)且在2小時之時，反應完成。添加飽和NaHCO3溶液且用EtOAc萃取兩次。組合有機層，經Na2SO4乾燥且濃縮。殘餘物在矽膠管柱(庚烷：EtOAc 1：0-0：1)上純化，生成呈無色固體狀之產物(17mg)。LCMS(m/z)431.1(MH+),0.65min。1H NMR(400MHz,CDCl3))δ ppm 8.03(s,1 H),7.74(s,1 H),7.54(d,1 H,J 12Hz),7.43-7.30(m,4 H)7.26(s,1 H),7.23(s,1 H)6.57(br s,1 H),4.74(d,J 5.53Hz,2 H),4.10-4.06(m,2 H),3.55-3.46(m,2 H),2.77-2.67(m,1H),1.80-1.70(m,4 H)。
實例205 4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)苯甲醯胺之合成
流程96
步驟1. (E)-3-(6-胺基吡啶-3-基)丙烯酸乙酯
向玻璃彈形容器中饋入含5-溴吡啶-2-胺(10.0g，57.8mmol)、丙烯酸乙酯(8.14mL，75mmol)及DIEA(25.2mL，144mmol)之DMF(40mL)。該混合物用氬氣吹掃，繼而添加Pd(OAc)2(0.649g，2,89mmol)及(o-Tol)3P(3.87g，12.72mmol)，且最終用氬氣充分吹掃。密封該混合物，且用100℃油浴加熱隔夜。反應混合物冷卻至室溫，且沈澱物藉由經矽藻土薄層過濾來移除。濾液經由旋轉蒸發器儘可能多地濃縮，且殘餘物分配於EtOAc/水(150mL/100mL)之間。EtOAc層用水(2 x 100mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，且濃縮。獲得作為粗產物之棕色固體。粗產物用EtOAc(40mL)濕磨且經由過濾收集黃色固體。濾餅用少量EtOAc沖洗且在真空下乾燥為第一批產物(5.0g)。來自濕磨之母 液藉由稀1N HCl水溶液(30mL)及水(70mL)汽提。水層轉移至潔淨分液漏斗中，用20mL飽和Na2CO3鹼化，且用EtOAc(60mL)萃取。EtOAc層經Na2SO4乾燥，濃縮且提供第二部分產物(4.0g)。組合兩批產物，提供81%產率。LCMS(m/z)193.2(MH+),0.39min。
步驟2. (E)-3-(6-(雙(第三丁氧基羰基)胺基)吡啶-3-基)丙烯酸乙酯
向(E)-3-(6-胺基吡啶-3-基)丙烯酸乙酯(6.6g，34.3mmol)及DMAP(0.21g，1.7mmol)於THF(150mL)中之溶液中添加二碳酸二第三丁酯(15.7g，71.9mmol)。該混合物在室溫下攪拌隔夜。濃縮反應物且獲得棕色固體作為粗(E)-3-(6-(雙(第三丁氧基羰基)胺基)吡啶-3-基)丙烯酸乙酯(12.5g，93%)。LCMS(m/z)237.4(MH+)0.98min。
步驟3. 2-(6-(第三丁氧基羰基胺基)吡啶-3-基)丙烷-1,1,3-三甲酸三甲酯及2-(6-胺基吡啶-3-基)丙烷-1,1,1,3-四甲酸四甲酯
向有焰燒瓶中饋入無水MeOH(50mL)，且內含物冷卻至0℃。向燒瓶中添加氫化鈉(3.18g，60%於分散礦物油中，80mmol)，其中氣體在控制下析出。反應混合物在室溫下攪拌，直至氣體析出停止。向此新鮮製備之NaOMe/MeOH溶液中添加丙二酸二甲酯(10.52g，80mmol)，且該混合物在室溫下攪拌20min。該混合物變為乳狀漿液。乳狀漿液用25mL無水MeOH稀釋，且傾析至具有氫化鈉(12.5g，31.9mmol)之燒瓶中。反應混合物漿液在室溫下攪拌15min，且接著加熱至回流隔夜。反應混合物冷卻至室溫，且濃縮。殘餘物分配於EtOAc/H2O(100mL/100mL)之間。EtOAc層用1N NaOH(3 x 30mL)、鹽水(30mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，且濃縮。獲得作為粗產物之淺棕色油狀物。粗產物藉由急驟層析用梯度EtOAc/CH2Cl2溶離來純化。分離兩個主要峰且作為2-(6-(第三丁氧基羰基胺基)吡啶-3-基)丙烷-1,1,3-三甲酸三甲酯(2.65g，20.3%產率)及2-(6-胺基吡啶-3-基)丙烷-1,1,1,3-四甲酸四甲酯(1.89g，16%產率)收集。兩種產物藉由 LCMS及1H NMR表徵且確認。關於2-(6-(第三丁氧基羰基胺基)吡啶-3-基)丙烷-1,1,3-三甲酸三甲酯。LCMS(m/z)411.5(MH+),0.64min；1H NMR(CDCl3)δ ppm 8.15(d,J=2.0Hz,1H),7.88(d,J=8.6Hz,1H),7.60-7.52(m,2H),3.90(td,J=9.8,4.7Hz,1H),3.76(s,3H),3.56(s,3H),3.55(s,3H),2.92-2.81(m,1H),2.80-2.69(m,1H),1.53(s,9H)。關於2-(6-胺基吡啶-3-基)丙烷-1,1,1,3-四甲酸四甲酯：LCMS(m/z)369.5(MH+)0.47min；1H NMR(CDCl3)δ ppm 8.31(s,1H),8.19(d,J=2.3Hz,1H),7.93(d,J=8.6Hz,1H),7.60(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),3.92(td,J=9.7,4.9Hz,1H),3.82(s,3H),3.76(s,3H),3.57(s,3H),3.55(s,3H),2.93-2.82(m,1H),2.81-2.70(m,1H)。
步驟4. 3-(6-胺基吡啶-3-基)戊二酸二甲酯
向2-(6-(第三丁氧基羰基胺基)吡啶-3-基)丙烷-1,1,3-三甲酸三甲酯(2.5g，6.1mmol)及2-(6-胺基吡啶-3-基)丙烷-1,1,1,3-四甲酸四甲酯(1.8g，4.9mmol)於MeOH(30mL)中之混合物中添加NaOH水溶液(2.44g NaOH於5mL水中，60.9mmol)。所得混合物藉由油浴加熱至回流持續1小時。反應混合物冷卻至室溫，且在減壓下經由旋轉蒸發器濃縮。向濃縮之殘餘物中添加水(15mL)及濃HCl(3mL)。所得混合物加熱至回流隔夜。冷卻反應混合物，且在減壓下經由旋轉蒸發器濃縮，且獲得固體。所獲得之固體殘餘物用甲醇(100mL)濕磨且沈澱物藉由過濾移除，且獲得淺色濾液。向濾液中添加濃HCl(200μL)且所得混合物經由外部油浴加熱至回流持續1小時。冷卻反應混合物，且濃縮。殘餘物分配於EtOAc/飽和NaHCO3(50mL/50mL)之間。水層用EtOAc(50mL)萃取。組合EtOAc萃取物，用鹽水(50mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，且濃縮。獲得白色固體作為所需3-(6-胺基吡啶-3-基)戊二酸二甲酯(2.6g，10.31mmol，93.9%產率)。LCMS(m/z)253.2(MH+)0.38min；1H NMR(CDCl3)δ ppm 7.95(d,J=2.3Hz,1H),7.32 (dd,J=8.2,2.3Hz,1H),6.46(d,J=8.6Hz,1H),4.37(br.s.,2H),3.61(s,6H),3.55(五重峰，J=7.5Hz,1H),2.80-2.66(m,2H),2.65-2.51(m,2H)。
步驟5. 3-(6-胺基吡啶-3-基)戊烷-1,5-二醇
在0℃下經約10分鐘向氫化鋁(III)鋰/THF漿液(0.94g於60mL THF中，25mmol)中添加3-(6-胺基吡啶-3-基)戊二酸二甲酯/THF溶液(2.5g，9.9mmol於30mL THF中)。漿液在0℃下攪拌40min，且接著在室溫下攪拌45min。該混合物冷卻至0℃，且藉由依序添加水(0.96mL)(其中氣體在控制下析出)、接著15% NaOH水溶液(0.96mL)及水(2.9mL)淬滅。經淬滅之混合物在室溫下攪拌30min。沈澱物經由過濾移除。濃縮濾液，且獲得淺黃色固體(1.97g，定量產率)作為3-(6-胺基吡啶-3-基)戊烷-1,5-二醇。LCMS(m/z)197.2(MH+)0.22min。
步驟6. 5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺
向3-(6-胺基吡啶-3-基)戊烷-1,5-二醇/甲苯混合物(1.96g，10mmol於40mL中)中添加1mL水以有助於溶解，且接著添加濃H2SO4(98%,1.6mL，30mmol)。所得混合物用Dean-Stark加熱至回流以自反應混合物移除水持續1小時20分鐘。反應混合物冷卻至室溫，且濃縮。殘餘物用冰冷水(15mL)稀釋，藉由固體Na2CO3(4g)中和，且用EtOAc(3 x 30mL)萃取。組合EtOAc萃取物，用鹽水(30mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，且濃縮。獲得淺黃色固體作為粗5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺。LCMS(m/z)179.2(MH+)0.33min；1H NMR(CDCl3)δ ppm 7.95(d,J=2.0Hz,1H),7.32(dd,J=8.2,2.3Hz,1H),6.49(d,J=8.2Hz,1H),4.34(br.s.,2H),4.11-3.99(m,2H),3.51(td,J=11.2,3.3Hz,2H),2.73-2.56(m,1H),1.75-1.69(m,4H)。
步驟7. 3-溴-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺
在0-5℃下向5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺/乙腈溶液(1.4g， 7.85mmol/30mL)中逐份添加NBS(1.4g，7.85mmol)，其中內部溫度經控制低於5℃。所得混合物在0℃下攪拌1小時40分鐘。反應混合物在減壓下濃縮，且殘餘物用稀NaOH水溶液/H2O(1g/30mL)濕磨。經由過濾收集固體懸浮液。濾餅用冰冷水(約10mL)洗滌，且組合濾液，且用EtOAc(20mL)萃取。EtOAc萃取物用鹽水(20mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，且濃縮。淺黃色固體與濾餅組合，且在高真空下乾燥作為粗3-溴-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺。LCMS(m/z)257.1/259.1(MH+)0.39min。1H NMR(CDCl3)δ ppm 7.90(d,J=1.6Hz,1H),7.54(d,J=2.0Hz,1H),4.80(br.s.,1H),4.12-4.02(m,2H),3.54-3.44(m,2H),2.71-2.61(m,1H),1.78-1.68(m,4H)。
步驟8. 4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸
向微波小瓶中饋入3-溴-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-2-胺(500mg，1.95mmol)、4-二羥硼基-2-氟苯甲酸(1.07g，5.83mmol)、Na2CO3水溶液(2M，4.86mL)及DME(10mL)。該混合物用氬氣吹掃，接著繼而添加Pd(PPh3)4(225mg，0.194mmol)。該混合物用氬氣吹掃，密封且經由微波反應器在125℃下加熱20分鐘，且接著在130℃下再加熱40分鐘。收集反應混合物之DME層，且固體沈澱物用甲醇(2 x 10mL)濕磨。甲醇上清液與DME層組合，且濃縮。所獲得之殘餘物與Et2O(2 x 60mL)一起攪拌，且棄去Et2O上清液。固體殘餘物分配於EtOAc(20mL)與HCl水溶液(1N,20mL)之間。EtOAc層用1N HCl(2 x 5mL)汽提且組合水層。水層在減壓下濃縮，且所獲得之淺黃色固體用甲醇(8mL)濕磨。上清液經由過濾分離且濃縮。獲得呈淺黃色泡沫狀之4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(0.844g，2.67mmol，137%產率)。LCMS(m/z)317.2(MH+)0.46min。
步驟9. (E)-6-甲基吡啶甲醛肟
向6-甲基吡啶甲醛乙醇溶液(642mg，5.3mmol/2.1mL)中添加羥 基胺鹽酸鹽(368mg，5.3mmol)及K2CO3水溶液(0.88g/4.2mL)。所得溶液接著經由外部油浴加熱至回流持續30min。反應混合物冷卻至0℃，且攪拌30分鐘。經由過濾收集白色固體懸浮液，且濾餅用一些冰冷水洗滌。濾餅經空氣乾燥，且進一步在高真空下乾燥作為第一批產物(0.565g)。組合濾液，且濃縮至乾。殘餘物再溶解於水(2mL)中，冷卻至0℃且攪拌20分鐘。經由過濾收集呈淺黃色固體狀之固體產物，作為第二批產物(70mg)。組合兩批產物以提供(E)-6-甲基吡啶甲醛肟(88%)。LCMS(m/z)136.9(MH+)0.21min。
步驟10. (6-甲基吡啶-2-基)甲胺
經30分鐘向(E)-6-甲基吡啶甲醛肟(0.635g，4.66mmol)/乙酸(267μL，4.66mmol)/乙醇(10mL)溶液中逐份添加鋅塵(5.19g，79mmol)。所得混合物再攪拌30min。反應等分試樣之LCMS指示反應完成。反應混合物中之鋅沈澱物藉由過濾移除，且濃縮濾液。殘餘物用過量飽和KOH(約7mL)鹼化至pH>12，且與Et2O(30mL)一起攪拌。收集Et2O層，經Na2SO4乾燥，且濃縮。殘餘物再溶解於EtOAc(15mL)中，經Na2SO4乾燥，且濃縮。獲得呈無色油狀物之(6-甲基吡啶-2-基)甲胺(385mg，3.15mmol，67.6%)。LCMS(m/z)123.2(MH+)0.15min。
步驟11. 4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)苯甲醯胺
向小瓶中饋入4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(20mg，0.063mmol)、(6-甲基吡啶-2-基)甲胺(11.6mg，0.095mmol)、DIEA(28μL，0.158mmol)、PyBOP(65.8,0.126mmol)及DMF(0.5mL)。該混合物在室溫下攪拌10min。反應混合物接著藉由製備型HPLC純化，且組合產物溶離份，冷凍且凍乾以提供呈白色粉末狀之4-(2-胺基-5-(四氫-2H-哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((6-甲基吡 啶-2-基)甲基)苯甲醯胺。LCMS(m/z)421.3(MH+)0.41min。1H NMR(DMSO-d6)δ ppm 8.99(d,J=3.1Hz,1H),7.95-7.83(m,3H),7.79(t,J=7.6Hz,1H),7.53(d,J=11.7Hz,2H),7.44(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.24(d,J=7.4Hz,2H),4.60(d,J=5.5Hz,2H),4.02-3.88(m,2H),3.40(td,J=11.2,2.7Hz,3H),2.88-2.71(m,1H),2.51(br.s.,3H),1.82-1.58(m,4H)。
實例206 (S)-4-(2-胺基-5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺之合成
步驟1. 4-(2-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯：
4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯(2g，6.15mmol)、B2(PIN)2(3.12g，12.30mmol)、PdCl2(dppf)(0.225g，0.308mmol)、KOAc(1.811g，18.45mmol)及二噁烷(30.8mL)之混合物在油浴中在100℃下加熱隔夜。反應混合物用EtOAc萃取。有機層用水及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。向粗產物中添加乙醚。過濾不溶性材料以提供呈棕色固體狀之4-(2-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基- 1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯(79%)。LCMS(m/z)：291.2(MH+),0.44min(關於酸)。
步驟2. 4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯
粗4-(2-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯(712mg，1.912mmol)、1-(二氟甲基)-4-碘-3-甲基-1H-吡唑(740mg，2.87mmol)、PdCl2(dppf)(70.0mg，0.096mmol)、DME(7.899mL)及2M Na2CO3(3.95mL)之混合物在100℃下加熱隔夜。在添加Na2SO4，繼而用EtOAc稀釋之後，過濾反應混合物且所得揮發性材料在真空中濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc/DCM溶離來純化。LCMS(m/z)：491.1(MH+),0.64min
步驟3. 4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸
向4-(2-胺基-5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯(352mg，0.935mmol)於THF(6236μL)及MeOH(3118μL)中之溶液中添加LiOH(1M溶液)(1684μL，1.684mmol)。反應混合物在室溫下攪拌。向反應混合物中添加1N HCl至pH 5。反應混合物用EtOAc萃取。有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮以提供粗4-(2-胺基-5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(88%)。LCMS(m/z)：363.3(MH+),0.51min。
步驟4. (S)-4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
向4-(2-胺基-5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(25mg，0.069mmol)於DMF中之溶液中添加(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)乙醇(15.50mg，0.083mmol)、EDC、HOAt及DIEA。反應混合物攪拌15小時。在添加水之後，反應混合物用EtOAc處理。有機層經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗產物藉由逆相製備型HPLC來純化。凍乾純溶離份以提供呈TFA鹽之(S)-4-(2-胺基- 5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-(1-(3-氟-5-(氟甲基)苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺(50%)。LCMS(m/z)：532.2(MH+),0.65min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.23(m,1H),7.97(m,1H),7.93(m,1H),7.82(m,1H),7.51-7.30(m,3H),7.2(m,1H),7.09(d,J=8Hz,1H),6.98(d,J=12Hz,1H),5.30(d,J=44Hz,2H),5.14(m,1H),3.8(m,2H),2.32(s,3H)。
4-(2-胺基-5-(1-(二氟甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸之合成
根據流程97中之步驟2及3，使用1,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1H-吡唑，獲得4-(2-胺基-5-(1-(二氟甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z)：363.1(MH+),0.53min。
4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸之合成
根據流程97中之步驟2及3，使用5-碘-1-甲基-1H-1,2,3-三唑，獲 得4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z)：314.3(MH+),0.38min。
4-(2-胺基-5-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸之合成
根據流程97中之步驟1及2，使用4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯及1,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1H-吡唑，獲得4-(2-胺基-5-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z)：327.1(MH+),0.45min。
4-(2-胺基-5-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸之合成
根據流程97中之步驟2及3，使用4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯及1,3-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1H-吡唑，獲得4-(2-胺基-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z)：327.2(MH+),0.47min。
4-(2-胺基-5-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸之合成
根據流程97中之步驟2及3，使用4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯及4-溴-1-(二氟甲基)-5-甲基-1H-吡唑，獲得4-(2-胺基-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z)：341.2(MH+),0.47min。
(3S,4R)-4-(4-氯-3-氟苯基)-1-甲基吡咯啶-3-胺之合成
步驟1. (E)-1-氯-2-氟-4-(2-硝基乙烯基)苯
向4-氯-3-氟苯甲醛(8g，50.5mmol)及乙酸銨(9.72g，126mmol)於乙酸(168mL)中之溶液中添加硝基甲烷(8.16mL，151mmol)。反應混合物在回流下加熱5h且冷卻。添加水(100mL)，且該混合物在室溫下攪拌1小時。過濾固體，藉由水洗滌，且在真空下乾燥。固體藉由急驟層析(0-20% EtOAc/庚烷)來純化以生成純產物4.2g，41%產率。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.92(d,J=13.7Hz,1H),7.54(d,J=13.8Hz,1H),7.49(d,J=7.5Hz,1H),7.33(dd,J=2.0,9.3Hz,1H),7.31-7.28(m,1H)。
步驟2. (+/-)-(3R,4S)-3-(4-氯-3-氟苯基)-1-甲基-4-硝基吡咯啶
(E)-1-氯-2-氟-4-(2-硝基乙烯基)苯(4.2g，20.84mmol)、2-(甲基胺基)乙酸(4.64g，52.1mmol)、多聚甲醛(3.75g，125mmol)在無水 甲苯(104mL)中混合。反應混合物使用Dean-stark在回流下加熱隔夜。反應混合物分配於EtOAc與水之間。有機物藉由飽和NaCl洗滌，經Na2SO4乾燥且濃縮。粗材料藉由急驟層析來純化以生成(+/-)-(3R,4S)-3-(4-氯-3-氟苯基)-1-甲基-4-硝基吡咯啶，45%產率。LCMS(m/z)：259.2(MH+),0.52min；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.37(t,J=8.0Hz,1H),7.15(dd,J=2.0,10.2Hz,1H),7.09-7.01(m,1H),4.91-4.82(m,1H),3.98(d,J=5.1Hz,1H),3.34(dd,J=4.1,10.8Hz,1H),3.23(t,J=8.6Hz,1H),3.10(dd,J=7.8,10.6Hz,1H),2.63(dd,J=7.0,9.4Hz,1H),2.44(s,3H)。
步驟3. (+/-)-(3S,4R)-4-(4-氯-3-氟苯基)-1-甲基吡咯啶-3-胺
鋅塵(5.76g，88mmol)添加至(+/-)-(3R,4S)-3-(4-氯-3-氟苯基)-1-甲基-4-硝基吡咯啶(2.28g，8.81mmol)於MeOH(29.4mL)及乙酸(30mL，524mmol)中之混合物中。反應混合物在室溫下攪拌5h且過濾。在真空下移除溶劑。殘餘物經中和至pH 9，接著藉由IPA：CHCl3(3：7)萃取。有機物經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析(DCM/甲醇/NH3 90：9：1)來純化以獲得(+/-)-(3S,4R)-4-(4-氯-3-氟苯基)-1-甲基吡咯啶-3-胺，40%產率。LCMS(m/z)：229.2(MH+),0.25min。
(+/-)-(3S,4R)-4-(3-氯-4-氟苯基)-1-甲基吡咯啶-3-胺之合成
根據流程97b，使用3-氯-4-氟苯甲醛(3.92g，24.72mmol)，獲得(+/-)-(3S,4R)-4-(3-氯-4-氟苯基)-1-甲基吡咯啶-3-胺。LCMS(m/z)： 229.0(MH+),0.32min。
實例207及208 反式-4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-((3S,4R)-4-(3-氯-4-氟苯基)-1-甲基吡咯啶-3-基)-2-氟苯甲醯胺及反式-4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-((3R,4S)-4-(3-氯-4-氟苯基)-1-甲基吡咯啶-3-基)-2-氟苯甲醯胺之合成
根據流程89中之步驟2，使用(+/-)-(3S,4R)-4-(3-氯-4-氟苯基)-1-甲基吡咯啶-3-胺，獲得4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-((3S,4R)-4-(3-氯-4-氟苯基)-1-甲基吡咯啶-3-基)-2-氟苯甲醯胺，70%產率。LCMS(m/z)：523.3(MH+),0.56min。粗外消旋混合物藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic OD管柱，4.6x100(mm),IPA+0.1% DEA=30%,5mL/min)解析。關於極性非對映異構體(Rt=2.37min)，LCMS(m/z)：523.2(MH+),0.57min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.19(d,J=2.0Hz,1H),7.91(s,1H),7.79-7.73(m,2H),7.63(d,J=2.3Hz,1H),7.52(dd,J=2.3,7.0Hz,1H),7.46-7.29(m,3H),7.26-7.13(m,1H),4.66(d,J=6.3Hz,1H),3.45-3.37(m,1H),3.21(t,J=9.0Hz,1H),3.16-3.08(m,1H),2.82(dd,J=5.7,10.0Hz,1H),2.70(t,J=9.2Hz,1H),2.54-2.41(m,3H),1.27(d,J=17.6Hz,1H)。關於較少極性非對映異構體(Rt=3.96min)，LCMS(m/z)：523.2(MH+),0.58min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.19(d,J=2.0 Hz,1H),7.91(s,1H),7.79-7.73(m,2H),7.63(d,J=2.3Hz,1H),7.52(dd,J=2.3,7.0 Hz,1H),7.46-7.29(m,3H),7.26-7.13(m,1H),4.66(d,J=6.3Hz,1H),3.45-3.37(m,1H),3.21(t,J=9.0Hz,1H),3.16-3.08(m,1H),2.82(dd,J=5.7,10.0Hz,1H),2.70(t,J=9.2Hz,1H),2.54-2.41(m,3H),1.27(d,J=17.6Hz,1H)。
實例209及210 反式-4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-((3S,4R)-4-(4-氯-3-氟苯基)-1-甲基吡咯啶-3-基)-2-氟苯甲醯胺及反式-4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-((3R,4S)-4-(4-氯-3-氟苯基)-1-甲基吡咯啶-3-基)-2-氟苯甲醯胺之合成
根據流程86中之步驟2，使用(3S,4R)-4-(4-氯-3-氟苯基)-1-甲基吡咯啶-3-胺，獲得(+/-)-4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-N-((3S,4R)-4-(4-氯-3-氟苯基)-1-甲基吡咯啶-3-基)-2-氟苯甲醯胺，79%產率。LCMS(m/z)：523.2(MH+),0.57min。粗外消旋混合物藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic OD管柱，4.6x100(mm),IPA+0.1% DEA=30%,5mL/min)解析。關於極性非對映異構體(Rt=2.45min)，LCMS(m/z)：523.2(MH+),0.58min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.18(d,J=2.2Hz,1H),7.90(s,1H),7.80-7.72(m,2H),7.66-7.61(m,1H),7.44-7.36(m,3H),7.33-7.29(m,1H),7.19(dd,J=1.8,8.3Hz,1H),4.71-4.62(m,1H),3.90(s,3H),3.44-3.37(m,1H),3.22(d,J=9.6Hz,1H),3.12(dd,J=7.9,10.0Hz,1H),2.86-2.80(m,1H),2.74-2.67(m,1H),2.51-2.44(m,3H)。關於較少極性非對映異構體(Rt= 3.92min)，LCMS(m/z)：523.2(MH+),0.58min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.19(d,J=2.2Hz,1H),7.90(s,1H),7.80-7.70(m,2H),7.63(d,J=2.2Hz,1H),7.46-7.36(m,3H),7.30(dd,J=2.0,10.6Hz,1H),7.19(dd,J=1.8,8.4Hz,1H),4.66(d,J=5.9Hz,1H),3.91(s,3H),3.44-3.36(m,1H),3.19(t,J=9.0Hz,1H),3.11(dd,J=7.8,10.0Hz,1H),2.83-2.78(m,1H),2.69(dd,J=8.4,9.5Hz,1H),2.45(s,3H)。
4-(3-胺基-6-環丙基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸之合成
步驟1. 4-(3-胺基-6-環丙基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向含4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(關於合成，參見實例34步驟2)(300mg，0.920mmol)之甲苯(10mL)及水(1mL)中添加環丙基三氟硼酸鉀(408mg，2.76mmol)、二(1-金剛烷基)-正丁基膦(66.0mg，0.184mmol)、碳酸銫(1499mg，4.60mmol)及乙酸鈀(II)(20.65mg，0.092mmol)。反應混合物在加熱塊中在100℃下加熱隔夜。反應混合物用飽和NH4Cl淬滅且用乙酸乙酯萃取。組合有機萃取物，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗物質藉由急驟層析(0-80% EtOAc/庚烷)來純化，生成4-(3-胺基-6-環丙基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(250mg，90%)。LCMS(m/z)：288.2(MH+),0.756min。
步驟2. 4-(3-胺基-6-環丙基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向含4-(3-胺基-6-環丙基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(250mg，0.870mmol)之THF(6mL)及MeOH(3mL)中添加1M LiOH(1.740mL，1.740mmol)。反應混合物在室溫下攪拌2小時。反應混合物之 pH藉由2N HCl水溶液調節至約4。反應混合物分配於EtOAc與水之間。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發以生成呈淺黃色固體狀之4-(3-胺基-6-環丙基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(230mg，97%)。LCMS(m/z)：274.2(MH+),0.621min。
4-(2-胺基-5-環丙基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸之合成
根據流程100，使用4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸甲酯，獲得4-(2-胺基-5-環丙基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(80%)。LCMS(m/z)：273.0(MH+),0.515min。
4-(3-胺基-6-環己基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸之合成
根據流程66中之步驟1、2及3，使用2-(環己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼，獲得4-(3-胺基-6-環己基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z)：316.3(MH+),0.79min。
實例211 4-(2-胺基-5-((1S,4r)-1-氧離子基四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
流程101
步驟1. 4-(2-胺基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-2-胺(2.4g，10.91mmol)、4-溴-2-氟苯甲酸第三丁酯(3.30g，12.00mmol)、Pd(PPh3)4(0.63mg，0.0.545mmol)、2.0M Na2CO3水溶液(10.91mL)於正丁醇(26mL)中之脫氣混合物經微波加熱至130℃持續10min。反應物用乙酸乙酯(30mL)稀釋，且接著用水(10mL)及鹽水(10mL)洗滌。有機物經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，且接著藉由急驟層析(10-60%乙酸乙酯/庚烷溶離劑)純化以提供4-(2-胺基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(1.35g，43%產率)。LCMS(m/z)：289.4(MH+),0.67min。
步驟2. 4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
4-(2-胺基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(700mg，2.43mmol)於乙腈(10mL)中之溶液用NBS(453mg，2.55mmol)處理。10分鐘之後，反應完成。反應物用1：1飽和NaHCO3水溶液：飽和Na2S2O3水溶液(10mL)處理。該混合物劇烈攪拌10分鐘。該混合物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且分離各層。有機物用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以提供4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(803mg，90%產率)。LCMS(m/z)：367.2,369.2(MH+),0.75min。
步驟3. 4-(2-胺基-5-(3,6-二氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(400mg，1.09mmol)、2-(3,6-二氫-2H-硫哌喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(296mg，1.31mmol)、Pd(PPh3)4(126mg，0.109mmol)於2.0M Na2CO3水溶液(1.63mL)及正丁醇(5mL)中之脫氣混合物經微波加熱至130℃持續15分鐘。反應用乙酸乙酯(20mL)稀釋，且接著用水(10mL)及鹽水(10mL)洗滌。有機物經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，且接著藉由急驟層析(10-60%乙酸乙酯/庚烷溶離劑)純化以提供4-(2-胺基-5-(3,6-二氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(400mg，95%產率)。LCMS(m/z)：387.1(MH+),0.87min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.83-7.76(m,2H),7.68(d,J=1.96Hz,1H),7.37-7.34(m,1H),7.33-7.29(m,2H),7.28-7.24(m,2H),7.24-7.18(m,1H),5.10(t,J=5.87Hz,1H),3.83-3.69(m,2H),2.81-2.70(m,2H),2.63-2.49(m,3H),2.08(dd,J=2.74,13.30Hz,2H),1.72(dq,J=2.93,12.59Hz,2H)。
步驟4. 4-(2-胺基-5-(1-氧離子基-3,6-二氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
4-(2-胺基-5-(3,6-二氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸酯於丙酮(20mL)中之0℃溶液用臭氧(227mg，0.369mmol)於水(5mL)中之溶液處理。在20min之後，反應物用乙酸乙酯(50mL)及水(50mL)稀釋。分離各層且水層用乙酸乙酯(50mL)洗滌。組合之有機物用水(30mL)及鹽水(30mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮以提供4- (2-胺基-5-(1-氧離子基-3,6-二氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(220mg，74%產率)。LCMS(m/z)：403.5(MH+),0.66min。
步驟5. 4-(2-胺基-5-((1r,4r)-1-氧離子基四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
4-(2-胺基-5-(1-氧離子基-3,6-二氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(220mg，0.547mmol)於甲醇(15mL)中之脫氣漿液用1.0N HCl水溶液(0.82mL)及10% Pd(OH)2處理。向該容器饋入氫氣至250 PSI。2小時之後，反應完成。漿料脫氣，經矽藻土過濾且濃縮以提供4-(2-胺基-5-((1r,4r)-1-氧離子基四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(150mg，68%產率)。LCMS(m/z)：405.6(MH+),0.63min。
步驟6. 4-(2-胺基-5-((1r,4r)-1-氧離子基四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸-TFA
4-(2-胺基-5-((1r,4r)-1-氧離子基四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(50mg，0.124mmol)於DCM(2mL)中之室溫溶液用TFA(1mL)處理。1小時之後，濃縮反應物。所得材料在苯中藉由音波處理成漿，且接著再次濃縮以提供4-(2-胺基-5-((1r,4r)-1-氧離子基四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸-TFA(57mg，100%產率)。LCMS(m/z)：349.2(MH+),0.37min。
步驟7. 4-(2-胺基-5-((1S,4r)-1-氧離子基四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
4-(2-胺基-5-((1r,4r)-1-氧離子基四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸-TFA(57mg，0.123mmol)及(S)-2-胺基-2-(3-氯苯基)乙醇(25mg，0.148mmol)於DMF(1mL)中之溶液用HATU(61mg，0.160mmol)及DIEA(129μL，0.738mmol)處理。1小時之後，反應物用水(5 mL)稀釋且萃取至乙酸乙酯(2 x 10mL)中。產物存在於兩層中。因此，水層及有機層均濃縮且藉由逆相製備型HPLC純化以提供呈TFA鹽之4-(2-胺基-5-((1S,4r)-1-氧離子基四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-N-((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺(20mg，26%產率)。LCMS(m/z)：502.1,504.1(MH+),0.57min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.63(dd,J=4.11,7.24Hz,1H),7.90(d,J=1.96Hz,1H),7.80(t,J=7.83Hz,1H),7.76(d,J=1.57Hz,1H),7.38-7.31(m,3H),7.29-7.25(m,2H),7.24-7.17(m,1H),5.14-5.06(m,1H),3.83-3.70(m,2H),3.06(d,J=12.91Hz,2H),2.85-2.70(m,3H),2.38-2.24(m,2H),1.83(d,J=12.13Hz,2H)。
實例212 (S)-4-(2-胺基-5-(四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
描繪於流程101步驟5、6及7中之反應順序應用於4-(2-胺基-5-(3,6-二氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯以獲得(S)-4-(2-胺基-5-(四氫-2H-硫哌喃-4-基)吡啶-3-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：486.0,488.0(MH+),0.73min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.83-7.76(m,2H),7.68(d,J=1.96Hz,1H),7.37-7.34(m,1H),7.33-7.29(m,2H),7.28-7.24(m,2H),7.24-7.18(m,1H),5.10(t,J=5.87Hz,1H),3.83-3.69(m,2H),2.81-2.70(m,2H),2.63-2.49(m,3H),2.08(dd,J=2.74,13.30Hz,2H), 1.72(dq,J=2.93,12.59Hz,2H)。
4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸之合成
步驟1. 4-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
4-溴-2-甲基苯甲酸(6g，27.9mmol)、碘甲烷(5.21mL，84mmol)及碳酸鉀(11.57g，84mmol)於DMF(60mL)中之攪拌混合物在室溫下攪拌隔夜。反應混合物分配於水(250mL)與4：1己烷：乙酸乙酯(650mL)之間。有機層用水洗滌且經Na2SO4乾燥。在真空下移除溶劑，生成6.39g呈油狀物之所需產物，100%產率。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.86-7.65(m,7 H)7.50(br.s.,2 H)3.88(s,3 H)2.56(s,3 H)。
步驟2. 3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)吡啶-2-胺
向3-溴吡啶-2-胺(6g，34.7mmol)於1,4-二噁烷(87mL)中之懸浮 液中添加Bispin(13.21g，52.0mmol)及乙酸鉀(10.21g，104mmol)。該混合物用氮氣吹掃10min，且接著添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(2.83g，3.47mmol)。反應混合物在油浴中加熱至108℃持續2-3小時。反應混合物用乙酸乙酯稀釋，經矽藻土過濾且濃縮。殘餘物無需進一步純化即用於下一步驟鈴木偶合。LCMS(m/z)：139(MH+)0.22min(關於酸)。
步驟3. 4-(2-胺基吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸甲酯
向500mL圓底燒瓶中之3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-2-胺(7.37g，33.5mmol)中添加4-溴-2-甲基苯甲酸甲酯(6.390g，27.9mmol)、PdCl2(dppf)-DCM(2.041g，2.79mmol)、DME(209mL)及2M Na2CO3溶液(69.7mL)。使N2鼓泡通過反應混合物持續20min且在油浴中在108℃下加熱1.5小時。反應混合物用EtOAc稀釋，用水洗滌三次，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離來純化以提供粗產物約8g，其含有大量來自前一實驗之B2(PIN)2。添加乙醚以溶解粗混合物，且接著添加庚烷以榨出(crush out)所需產物。濾出固體以由高純度提供4.2g所需產物，62.1%產率。LCMS(m/z)：243.5(MH+),0.56min。
步驟4. 4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸甲酯
在0℃下分兩部分向4-(2-胺基吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸甲酯(4.2g，17.34mmol)於乙腈(173mL)中之溶液中添加NBS(3.15g，17.68mmol)。反應混合物在0℃下攪拌20min。LCMS顯示反應完成。在用飽和Na2SO3及NaHCO3淬滅之後，反應混合物攪拌30分鐘。反應混合物用EtOAc萃取3次，藉由飽和NaHCO3、水及鹽水洗滌。有機物經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗材料用乙醚濕磨且無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：323.1(MH+),0.68min。
步驟5. 4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸甲 酯
向20mL MW小瓶中之4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸甲酯(500mg，1.557mmol)中添加1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1H-吡唑(421mg，2.024mmol)、PdCl2(dppf)DCM(114mg，0.156mmol)、DME(11.7mL)及2M Na2CO3溶液(3.892mL)。反應混合物在微波合成器處(12min,120℃)加熱。反應混合物用EtOAc稀釋且用水洗滌三次，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。粗產物藉由急驟層析用0-100% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離來純化以提供粗產物，其用乙醚濕磨以提供400mg純產物，80%產率。LCMS(m/z)：323.4(MH+),0.60min。
步驟6. 4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸
向4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-甲基苯甲酸甲酯(1.20g，3.72mmol)於THF/MeOH/H2O(1：1：1，36mL)中之溶液中添加LiOH-H2O(0.234g，5.58mmol)。溶液在室溫下攪拌隔夜。pH調節至3-5，最佳為4。所有有機溶劑均藉由減壓移除。添加EtOAc以濕磨出所有雜質。添加水且該混合物攪拌30分鐘。過濾固體且用50%乙醚及水充分洗滌。固體接著在旋轉蒸發器上與甲苯共沸以提供約800mg所需酸，69.7%產率。LCMS(m/z)：309.2(MH+),0.50min。
4-(2-胺基-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸之合成
流程103
步驟1. 4-溴-2-氟苯甲酸第三丁酯
4-溴-2-氟苯甲酸(20.16g，92mmol)於二噁烷(90mL)及濃H2SO4(5mL)中之漿液冷卻至0℃，且接著使異丁烯鼓泡通過持續2小時。使反應物逐漸溫至室溫隔夜。固體NaHCO3(40g)小心地添加至反應物中且該混合物攪拌1小時。該混合物濃縮，且接著再溶解於水及乙酸乙酯中。分離各層。水相用乙酸乙酯洗滌。組合之有機物用飽和NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，接著經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。所得油性4-溴-2-氟苯甲酸第三丁酯無需進一步純化即使用。1H NMR(400MHz,MeOH-d 4 )δ ppm 7.79-7.70(m,1H),7.42-7.23(m,3H),1.59(s,11H)。
步驟2. 2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)苯甲酸第三丁酯
4-溴-2-氟苯甲酸第三丁酯(5.55g，20.17mmol)、BISPIN(7.68g，30.3mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(1.153g，1.412mmol)及乙酸鉀(5.94g，60.5mmol)於DMF(75mL)中之漿液脫氣，且接著加熱至100℃隔夜。濃縮反應物，接著溶解於DCM中，經矽藻土過濾，且 接著用水及鹽水洗滌。有機物經矽藻土過濾，濃縮，且接著藉由急驟層析用0-20%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化以提供5.2g2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲酸第三丁酯，80%產率。
步驟3. 4-(2-胺基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲酸第三丁酯(5.1g，15.83mmol)、3-溴胺基吡啶(3.01g，17.41mmol)及Pd(PPh3)4(0.732g，0.633mmol)於正丁醇(50mL)及2.0M Na2CO3水溶液(19.79mL，39.6mmol)中之漿液脫氣，且接著加熱至100℃隔夜。反應物經冷卻，且用乙酸乙酯稀釋。分離各層，且有機物用鹽水洗滌，經矽藻土過濾且濃縮。粗物質藉由急驟層析用10-50%乙酸乙酯/庚烷溶離來純化以提供3.41g 4-(2-胺基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯，75%產率。
步驟4. 4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
NBS(2.145g，12.05mmol)添加至4-(2-胺基吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(3.31g，11.48mmol)於MeCN(60mL)中之室溫溶液中。所得混合物攪拌10分鐘。反應用1：1飽和Na2S2O3水溶液：飽和NaHCO3水溶液淬滅，且接著萃取至乙酸乙酯中。組合之有機物用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且在真空中濃縮，生成4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯。材料無需進一步純化即使用。LCMS(m/z)：369.0(MH+),0.85min。
步驟5. 4-(2-胺基-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
向含4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(200mg，0.544mmol)(參見流程101步驟2，關於合成)之DME(3mL)及2M碳酸鈉(1.5mL，3.0mmol)中添加1-乙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1H-吡唑(182mg，0.816mmol)，繼而添加PdCl2(dppf)- CH2Cl2加合物(44.5mg，0.054mmol)。反應混合物在120℃下經微波加熱持續20min。反應混合物分配於乙酸乙酯與水之間。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗物質藉由急驟層析用0-50% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離來純化，生成4-(2-胺基-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(160mg，77%)。LCMS(m/z)：383.2(MH+),0.782min。
步驟6. 4-(2-胺基-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸
向含4-(2-胺基-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(160mg，0.418mmol)之DCM(0.5mL)中添加TFA(2mL，26mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。反應混合物在真空中與甲苯共蒸發。粗4-(2-胺基-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸用於下一步驟。LCMS(m/z)：327.2(MH+),0.509min。
實例213 4-(2-胺基-5-(1-(甲基磺醯基)吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
流程104
步驟1. 4-(3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向3-氯吡嗪-2-胺(5g，38.6mmol)於DME(160mL)及2M碳酸鈉水溶液(40mL，80mmol)中之混合物中添加2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲酸甲酯(12.97g，46.3mmol)，繼而添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(3.15g，3.86mmol)。反應混合物用N2吹掃且在油浴中在100℃下加熱3-4小時。反應混合物分配於乙酸乙酯與水之間。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗物質用DCM濕磨。過濾觀察到之固體，用乙醚洗滌且在減壓下乾燥以提供呈灰白色固體狀之產物。濾液藉由急驟層析用0-50-80% EtOAc/庚烷溶離來純化以提供10.6g產物，93%產率。LCMS(m/z)：248.1(MH+),0.563min。
步驟2. 4-(3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
在冰浴中向4-(3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(8.9g，36.0mmol)於乙腈(300mL)中之混合物中添加NBS(5.77g，32.4mmol)。反應混合物在0℃下攪拌1小時。添加NBS(0.05當量)且所得混合物再攪拌30min。向反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉溶液。該混合物攪拌30分鐘且產物用EtOAc萃取。組合有機萃取物，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。殘餘物在高真空下乾燥以提供棕色固體(12.2g,94%)。LCMS(m/z)：326.0/328.0(MH+),0.846min。
步驟3. 5-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-3,4-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯
3-側氧基哌啶-1-甲酸第三丁酯(1.1g，5.52mmol)溶解於THF(10mL)中且冷卻至-78℃。向其中添加雙(三甲基矽烷基)胺化鋰(6.07mL，6.07mmol)(1M溶液於THF中)。反應混合物在-78℃下攪拌20min，且接著逐滴添加1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺醯基)甲烷磺醯胺(2.071g，5.80mmol)於THF(10mL)中之溶液。反應混合物在-78℃下攪拌15min，接著溫至0℃且在0℃下攪拌3小時。反應混合物用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅且接著用乙酸乙酯萃取。經組合之萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗物質經具有含10% EtOAc之庚烷的中性氧化鋁插塞純化。蒸發溶劑且乾燥殘餘物以提供呈黃色液體狀之所需產物(2g，98%)。
步驟4. 5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)-3,4-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯
燒瓶中4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(1.223g，4.81mmol)、乙酸鉀(1.289g，13.13mmol)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.107g，0.131mmol)之混合物用N2沖洗，且接著添加二噁烷(12mL)，繼而添加5-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-3,4-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯(1.45g，4.38mmol)於二噁烷(12mL)中之溶液。反應混合物 用N2吹掃5min，且接著在油浴中在80℃下加熱隔夜。反應混合物分配於乙酸乙酯與水之間。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。殘餘物藉由急驟層析用0-30% EtOAc/庚烷溶離來純化以生成呈高度黏性液體之所需產物(1.2g，89%)。LCMS(m/z)：254.1(MH+-tBu),1.21min。
步驟5. 5-(5-胺基-6-(3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)吡嗪-2-基)-3,4-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯
向4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(240mg，0.70mmol)於DME(6mL)及2M碳酸鈉(1.0mL，2.0mmol)中之混合物中添加5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-3,4-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯(180mg，0.582mmol)，繼而添加PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(14.4mg，17.5μmol)。反應混合物在微波中在110℃下加熱20min。反應混合物分配於乙酸乙酯與水之間。分離有機層，且用水及鹽水洗滌。有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。殘餘物藉由急驟層析用0-50-80% EtOAc/庚烷溶離來純化以生成呈黃色固體狀之所需產物(150mg，60%)。LCMS(m/z)：429.2(MH+),1.03min。
步驟6. 4-(3-胺基-6-(1,4,5,6-四氫吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向含5-(5-胺基-6-(3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)吡嗪-2-基)-3,4-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯(150mg，0.350mmol)(不可分離混合物)之DCM(4mL)中添加TFA(1mL，12.98mmol)。反應混合物在室溫下攪拌30-45min。在旋轉蒸發器上蒸發反應混合物，且與甲苯共沸。粗產物繼續用於下一步驟而無需純化。LCMS(m/z)：329.2(MH+),0.502min。
步驟7. 4-(3-胺基-6-(哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向含4-(3-胺基-6-(1,4,5,6-四氫吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸 甲酯(115mg，0.350mmol)之MeOH(10mL)中添加Pd/C(93mg，0.088mmol)。反應混合物在室溫下在H2氣球下攪拌24h。反應混合物經矽藻土過濾且用DCM洗滌。蒸發濾液且乾燥以生成所需產物。粗產物繼續用於下一步驟(115mg，95%)。LCMS(m/z)：331.2(MH+),0.492min。
步驟8. 4-(3-胺基-6-(1-(甲基磺醯基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
在冰浴中向粗4-(3-胺基-6-(哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(38mg，0.114mmol)於DCM(2mL)中之混合物中添加DIEA(79μL，0.454mmol)，繼而添加甲烷磺醯氯(9.73μL，0.125mmol)。反應混合物在0℃下攪拌30min。反應混合物分配於DCM與水之間。分離DCM層且用鹽水洗滌。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗產物(50%純度)繼續用於下一步驟。LCMS(m/z)：409.1(MH+),0.721min。
步驟9. 4-(3-胺基-6-(1-(甲基磺醯基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向含4-(3-胺基-6-(1-(甲基磺醯基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(60mg，0.147mmol)之THF(4mL)及MeOH(2mL)中添加1M LiOH(400μL，0.400mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。反應混合物之pH用2N HCl調節至約3-4，且產物用乙酸乙酯萃取。有機層與水分離且用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，且蒸發以提供粗產物，其無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：395.1(MH+),0.573min。
步驟10. 4-(3-胺基-6-(1-(甲基磺醯基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
向4-(3-胺基-6-(1-(甲基磺醯基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(40mg，0.101mmol)於DMF(1mL)中之混合物中添加(S)-2-胺基-2-苯基乙醇(13.91mg，0.101mmol)，繼而添加HATU(57.8mg，0.152 mmol)及DIEA(0.089mL，0.507mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。反應混合物用DMF稀釋且經注射器式過濾器過濾，其接著藉由製備型HPLC純化以生成呈TFA鹽之所需產物(33.4%)。LCMS(m/z)：514.2(MH+),0.687min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm7.95(s,1 H)7.85(t,J=7.83Hz,1 H)7.73-7.57(m,2 H)7.49-7.21(m,5 H)5.22(d,J=6.65Hz,1 H)3.94-3.78(m,3 H)3.71(d,J=11.74Hz,1 H)3.03-2.93(m,2 H)2.87-2.74(m,4 H)2.07-1.97(m,1 H)1.92(d,J=12.13Hz,1 H)1.85-1.68(m,1 H)1.37-1.25(m,1 H)。
實例214 3-(5-胺基-6-(3-氟-4-(((S)-2-羥基-1-苯基乙基)胺甲醯基)苯基)吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲酯
步驟1. 3-(5-胺基-6-(3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲酯
在冰浴中向含4-(3-胺基-6-(哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(55mg，0.166mmol)(關於合成，參見實例34步驟7)之DCM(3mL)中添加DIEA(0.116mL，0.666mmol)及氯甲酸甲酯(0.013mL，0.166mmol)。反應混合物在冰浴中攪拌30min。反應混合物分配於DCM與水之間。分離DCM層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。殘餘物(50mg，77%)無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：389.2(MH+),0.785min。
步驟2. 4-(3-胺基-6-(1-(甲氧基羰基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向含3-(5-胺基-6-(3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基)吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲酯(50mg，0.129mmol)之THF(4mL)及MeOH(2mL)中添加1M LiOH(0.500mL，0.500mmol)。反應混合物在室溫下攪拌4小時。反應混合物pH用2N HCl調節至約3，且產物用乙酸乙酯萃取。分離EtOAc層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。殘餘物繼續用於下一步驟而無需純化(40mg，83%)。LCMS(m/z)：375.2(MH+),0.637min。
步驟3. 3-(5-胺基-6-(3-氟-4-(((S)-2-羥基-1-苯基乙基)胺甲醯基)苯基)吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲酯
向4-(3-胺基-6-(1-(甲氧基羰基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(28mg，0.06mmol)於DMF(1mL)中之混合物中添加(S)-2-胺基-2-苯基乙醇(12.31mg，0.090mmol)，繼而添加HATU(34.1mg，0.090mmol)及DIEA(0.052mL，0.299mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。反應混合物用DMF稀釋，經注射器式過濾器過濾且藉由製備型HPLC純化以生成呈TFA鹽之所需產物(10.9mg，29.4%)LCMS(m/z)：494.2(MH+),0.733min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm7.82-7.72(m,2 H)7.63-7.48(m,2 H)7.38-7.11(m,5 H)5.12(t,J=6.06Hz,1 H)4.09(d,J=12.91Hz,1 H)3.97(d,J=12.13Hz,1 H)3.87-3.68(m,2 H)3.59(s,3 H)3.11-2.66(m,3 H)2.00-1.88(m,1 H))1.85-1.65(m,2 H)1.58-1.40(m,1 H)
實例215 4-(6-(1-乙醯基哌啶-3-基)-3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
流程106
步驟1. 4-(6-(1-乙醯基哌啶-3-基)-3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
在冰浴中向4-(3-胺基-6-(哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(55mg，0.166mmol)(關於合成，參見實例34步驟7)於DCM(3mL)中之混合物中添加DIEA(0.116mL，0.666mmol)，繼而添加乙醯氯(0.012mL，0.166mmol)。反應混合物在0℃下攪拌30min。反應混合物分配於DCM與水之間。分離DCM層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。殘餘物繼續用於下一步驟而無需純化(50mg，81%)。LCMS(m/z)：373.3(MH+),0.666min。
步驟2. 4-(6-(1-乙醯基哌啶-3-基)-3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(6-(1-乙醯基哌啶-3-基)-3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(50mg，0.134mmol)於THF(4mL)及MeOH(2mL)中之混合物中添加1M LiOH(0.500mL，0.500mmol)。反應混合物在室溫下攪拌4小時。反應混合物之pH用2N HCl調節至約3，且產物用乙酸乙酯萃取。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。殘餘物繼續用於下一步驟無需純化(34mg，70.7%)。LCMS(m/z)：359.1(MH+),0.534min。
步驟3. 4-(6-(1-乙醯基哌啶-3-基)-3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
向4-(6-(1-乙醯基哌啶-3-基)-3-胺基吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(34mg，0.076mmol)於DMF(1.5mL)中之混合物中添加(S)-2-胺基-2-苯基乙醇(15.62mg，0.114mmol)，繼而添加HATU(43.3mg，0.114mmol)及DIEA(0.066mL，0.379mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。反 應混合物用DMF稀釋，經注射器式過濾器過濾且藉由製備型HPLC純化以生成呈TFA鹽之所需產物(13.9mg，30%)。LCMS(m/z)：478.2(MH+),0.641min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.98-7.97(m,2 H)7.73-7.58(m,2 H)7.47-7.23(m,5 H)5.22(t,J=6.06Hz,1 H)4.62-4.37(m,1 H)4.08-3.75(m,3 H)3.27-3.08(m,1 H)3.03-2.71(m,2 H)2.11(d,J=11.35Hz,3 H)2.04(d,J=8.22Hz,1 H)2.00-1.75(m,2 H)1.73-1.46(m,1 H)
實例216 3-(5-胺基-6-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸甲酯
向含4-(3-胺基-6-(1-(甲氧基羰基)哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(12mg，0.026mmol)(關於合成，參見實例35步驟2)之DMF(1mL)中添加(S)-2-胺基-2-(3-氯苯基)乙醇(6.60mg，0.038mmol)，繼而添加HATU(14.63mg，0.038mmol)及DIEA(0.022mL，0.128mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。反應混合物用DMF稀釋，經注射器式過濾器過濾且藉由製備型HPLC純化以生成呈TFA鹽之所需產物(6.5mg，38%)。LCMS(m/z)：528.1/530.1(MH+),0.798min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm7.96-7.80(m,2 H)7.75-7.58(m,2 H)7.50-7.23(m,4 H)5.19(t,J=5.87Hz,1 H)4.25-4.01(m,2 H)3.92-3.79(m,2 H)3.68(s,3 H)3.20-2.74(m,3 H)2.08-1.97(m,1 H)1.91-1.73(m,2 H)1.67-1.51(m,1 H)
實例217 (S)-4-(3-胺基-6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
步驟1. 4-(3-胺基-6-(1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯)
向含4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(關於合成，參見實例34步驟2)(100mg，0.307mmol)之DME(3mL)及2M碳酸鈉(0.75mL，1.5mmol)中添加4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1H-吡唑-1-甲酸第三丁酯(90mg，0.307mmol)，繼而添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(25.04mg，0.031mmol)。反應混合物在微波中在120℃下加熱15min。反應混合物分配於乙酸乙酯與水之間。分離有機層，用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。殘餘物繼續用於下一步驟而無需純化(90mg，74%,80%純度)。LCMS(m/z)：314.1(MH+),0.595min。
步驟2. 4-(3-胺基-6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向含4-(3-胺基-6-(1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(45mg，0.115mmol)之DMF(2mL)中添加碳酸鉀(47.6mg，0.345mmol)，繼而添加溴乙烷(0.017mL，0.230mmol)。反應混合物在室溫 下攪拌48小時。反應混合物分配於乙酸乙酯與水之間。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，蒸發且藉由急驟層析用0-60% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷溶離來純化以生成所需產物(25mg，64%,80%純度)。LCMS(m/z)：342.0(MH+),0.73min。
步驟3. 4-(3-胺基-6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向含4-(3-胺基-6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(25mg，0.073mmol)之MeOH(1mL)及THF(2mL)中添加1M LiOH(0.220mL，0.220mmol)。反應混合物在室溫下攪拌4小時。反應混合物之pH藉由2N HCl調節至約4。產物用乙酸乙酯萃取兩次。組合之有機萃取物用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，且蒸發。殘餘物繼續用於下一步驟無需進一步純化。LCMS(m/z)：328.1(MH+),0.607min。
步驟4. (S)-4-(3-胺基-6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
向含4-(3-胺基-6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(25mg，0.076mmol)之DMF(1mL)中添加EDC.HCl(21.96mg，0.115mmol)，繼而添加HOAt(15.60mg，0.115mmol)、(S)-2-胺基-2-苯基乙醇(15.92mg，0.092mmol)及DIEA(0.040mL，0.229mmol)。反應混合物在室溫下攪拌6小時。反應混合物用DMF稀釋且經注射器式過濾器過濾。粗物質藉由製備型HPLC來純化以生成呈TFA鹽之所需產物(9.1mg,17%)。LCMS(m/z)：447.2(MH+),0.699min。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.67-8.41(m,1 H),8.17(s,1 H),8.03(s,1 H),7.86(s,1 H),7.78(t,J=7.63Hz,1 H),7.67-7.53(m,2 H),7.40-7.09(m,5 H),5.21-5.03(m,1 H),4.13(q,J=7.30Hz,2 H),3.86-3.65(m,2 H),1.39(t,J=7.24Hz,3 H)。
實例218 4-(2-胺基-5-(5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺之合成
步驟1. 4-羥基-2-側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯
在N2氛圍下在0℃下向含Boc-Gly-OH(1g，5.71mmol)之DCM(12mL)添加DMAP(1.743g，14.27mmol)及米氏酸(Meldrum's acid)(0.987g，6.85mmol)。逐滴添加氯甲酸異丙酯(8.56mL，8.56mmol)於甲苯中之溶液。反應混合物在0℃下攪拌3小時。反應混合物用15% KHSO4洗滌兩次，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗產物溶解於50mL EtOAc中且回流1小時。在揮發性材料蒸發之後，粗產物用EtOAC濕磨且過濾所得固體且乾燥以提供黃色固體(75%)。LCMS(m/z)：200.1(MH+),0.504min。
步驟2. 2-側氧基-4-(甲苯磺醯基氧基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯
向含4-羥基-2-側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(680mg，3.41mmol)之DCM(12mL)中添加DIEA(1.192mL，6.83mmol)及甲苯磺醯氯(651mg，3.41mmol)。反應混合物在室溫下攪拌6小時。反應混合物用DCM稀釋且用飽和碳酸氫鈉洗滌。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗產物藉由急驟層析(0-50% EtOAc/庚烷)來純化。組合純溶離份，蒸發且乾燥，生成呈白色固體狀之所需產物(0.98g，81%)。LCMS(m/z)：354.1(MH+),0.97min；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.99(d,J=8.22Hz,2 H)7.54(d,J=7.83Hz,2 H)5.77(s,1 H)4.33(s,2 H)2.43(s,3 H)1.41(s,9 H)。
步驟3. 4-(2-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2..二氧硼 -2-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯
向含4-(2-胺基-5-溴吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(400mg，1.089mmol)之DME(12mL)中添加4,4,4',4',5,5,5'-七甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(523mg，2.179mmol)、乙酸鉀(321mg，3.27mmol)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2(89mg，0.109mmol)。反應混合物用N2吹掃且在微波小瓶中在加熱塊中在110℃下加熱隔夜。反應混合物分配於乙酸乙酯與水之間。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗物質溶解於乙醚中且音波處理持續10min且濾出黑色固體。蒸發濾液以提供呈淺黃色固體狀之產物(300mg，66.5%)。LCMS(m/z)：333.2(MH+),0.672min(關於酸)。
步驟4. 4-(6-胺基-5-(4-(第三丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯
向含4-(2-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-3- 基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(158mg，0.382mmol)之DME(3mL)及碳酸鈉(0.509mL，1.019mmol)中添加2-側氧基-4-(甲苯磺醯基氧基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(90mg，0.255mmol)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2(41.6mg，0.051mmol)。反應混合物在微波中在90℃下加熱30min。LCMS顯示起始材料剩餘。添加更多催化劑且再次在90℃下加熱20min。反應混合物分配於乙酸乙酯與水之間。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗產物藉由急驟層析使用0-50% EtOAc(含有10% MeOH)/庚烷來純化以提供呈黃色固體狀之產物(66%)。LCMS(m/z)：470.2(MH+),0.846min。
步驟5. 4-(2-胺基-5-(5-側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸
向4-(6-胺基-5-(4-(第三丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-2-側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(158mg，0.337mmol)中添加TFA(2mL，26.0mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。在添加甲苯之後，揮發性溶劑蒸發。粗產物用於下一步驟。LCMS(m/z)：314.2(MH+),0.382min。
步驟6. 4-(2-胺基-5-(5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸
在N2氛圍下向含4-(2-胺基-5-(5-側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(100mg，0.319mmol)之MeOH(15mL)中添加Pd-C(67.9mg，0.064mmol)。反應混合物在室溫下在H2氣球下攪拌24h。反應混合物經矽藻土過濾且用甲醇洗滌。蒸發濾液。粗物質繼續用於下一步驟。LCMS(m/z)：316.2(MH+),0.338min。
步驟7. (+/-)-4-(2-胺基-5-(5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
向含4-(2-胺基-5-(5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸(30mg，0.076mmol)之DMF(1mL)中添加(S)-2-胺基-2-苯基乙醇 (12.53mg，0.091mmol)、EDC-HCl(21.89mg，0.114mmol)、HOAt(15.54mg，0.114mmol)及DIEA(0.040mL，0.228mmol)。反應混合物在室溫下攪拌5小時。反應混合物用DMF稀釋且直接藉由製備型HPLC純化以提供呈TFA鹽之(+/-)-4-(2-胺基-5-(5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺(20.2%)。LCMS(m/z)：435.2(MH+),0.476min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.88(s,1 H),7.84-7.74(m,2 H),7.38-7.30(m,4 H),7.27(t,J=7.43Hz,2 H),7.22-7.13(m,1 H),5.18-5.05(m,1 H),3.85-3.56(m,4 H),3.39-3.26(m,1 H),2.62(dd,J=16.82,8.61Hz,1 H),2.48-2.33(m,1 H)。
實例219及220 4-(2-胺基-5-((R)-5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺及4-(2-胺基-5-((S)-5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺之合成
(+/-)-4-(2-胺基-5-(5-側氧基吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺藉由對掌性SFC(Chiral Pak 5mic C10=AD-H管柱，4.6x100(mm),5mL/min,MeOH=50%)解析。極性化合物(峰1)在Rt=1.36min下獲得(24.5%)。LCMS(m/z)：435.2(MH+),0.485分鐘。較少極性化合物(峰2)在Rt=2.20min下獲得(22%)。LCMS(m/z)：435.2(MH+),0.482分鐘。環狀內醯胺上之絕對立體化學經任意指派。
實例221 (2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-2-甲酸甲酯之合成
步驟1. (S)-4-(6-胺基-5-(4-(第三丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸1-第三丁基2-甲酯
4-(2-胺基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(400mg，0.966mmol)、(S)-4-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(1.087g，2.90mmol、Pd(PPh3)4(112mg，0.097mmol)及碳酸銫(1.258g，3.86mmol)於THF(10mL)及水(2mL)中之混合物脫氣，接著微波加熱至90℃持續10min。在完成時，反應物用乙酸乙酯稀釋。有機物用鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥且濃縮。粗物質混合物藉由矽膠急驟層析(20-90%乙酸乙酯/庚烷)來純化以提供(S)-4-(6-胺基-5-(4-(第三丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-1H-吡咯-1,2(2H,5H)-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(470mg，95%)。LCMS(m/z)：514.3(MH+),0.92min。
步驟2. (2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(第三丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯
(S)-4-(6-胺基-5-(4-(第三丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)-1H-吡 咯-1,2(2H,5H)-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(470mg，0.915mmol)於甲醇(40mL)中之脫氣溶液用10wt.% Pd/C(3.214g，3.02mmol)處理。系統再次脫氣，接著饋入1atm氫氣隔夜。在完成時，反應物脫氣，接著氨氣處理，接著經矽藻土過濾。濾餅在甲醇中再成漿，用氨氣處理，且過濾以收回額外產物。重複該過程直至再無產物自濾餅溶離。組合之有機物濃縮以提供(2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(第三丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(300mg，64%)。LCMS(m/z)：516.1(MH+),0.89min。
步驟3. 4-(2-胺基-5-((3R,5S)-5-(甲氧基羰基)吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸-2TFA
(2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(第三丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(300mg，0.58mmol)於DCM(6mL)中之溶液用TFA(3mL)處理。在1h之後，濃縮反應物，接著殘餘物在苯中成漿，音波處理，接著濃縮以提供4-(2-胺基-5-((3R,5S)-5-(甲氧基羰基)吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸-2TFA(345mg，100%產率)。LCMS(m/z)：360.2(MH+),0.34min。
步驟4. (2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-2-甲酸甲酯
4-(2-胺基-5-((3R,5S)-5-(甲氧基羰基)吡咯啶-3-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸-2TFA(35mg，0.060mmol)、HATU(34mg，0.089mmol)及DIEA(0.104mL，0.596mmol)於DMF(2mL)中之混合物用(S)-2-胺基-2-(3-氯苯基)乙醇(51mg，0.348mmol)處理。在完成時，反應物用水及鹽水洗滌，接著經MgSO4乾燥且濃縮。粗材料藉由逆相製備型HPLC來純化以提供(2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-2-甲酸甲酯(4.2mg，9%)。LCMS(m/z)：513.2,515.2(MH+),0.58min；1H NMR(400MHz, CD3OD)δ ppm 7.97-7.86(m,3H),7.49-7.40(m,3H),7.39-7.34(m,2H),7.33-7.26(m,1H),5.19(t,J=5.87Hz,1H),4.62(dd,J=7.63,10.76Hz,1H),3.93-3.77(m,6H),3.74-3.61(m,1H),2.87(td,J=6.90,13.21Hz,1H),2.33-2.21(m,1H)。
實例222及223 (2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-2-甲酸及(2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-2-甲酸甲酯之合成
步驟1. (2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-2-甲酸
(2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-2-甲酸甲酯(120mg，0.234mmol)於MeOH(4mL)中之溶液用1.0M LiOH水溶液(0.468mL)處理，接著加熱至70℃。1小時之後，濃縮反應物，接著溶解於水(2mL)中且用1.0N HCl水溶液(0.468mL)處理。反應混合物用乙酸乙酯(20mL)萃取。有機層用水及鹽水洗滌，接著經MgSO4乾燥且濃縮以提供粗產物(97mg，57%)。一部分此材料藉由逆相製備型HPLC來純化，生成(2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-2-甲酸。LCMS(m/z)：499.1/501.1(MH+),0.49min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.56-8.64(m,1H),7.75-7.87 (m,4H),7.31-7.38(m,4H),7.24-7.29(m,3H),7.17-7.24(m,1H),5.07-5.14(m,1H),4.36(dd,J=7.63,9.98Hz,1H),3.64-3.83(m,4H),3.52-3.62(m,1H),3.27-3.34(m,1H),2.72-2.81(m,1H),2.56(s,1H),2.15(td,J=10.42,13.21Hz,1H)。
步驟2. (2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-2-甲酸甲酯
(2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-2-甲酸(25mg，0.050mmol)於THF(2mL)及DMF(2mL)中之溶液依序用甲胺於THF(1.25mL，2.5mmol)中之2.0M溶液及HATU(95mg，0.25mmol)處理。2小時之後，反應物用乙酸乙酯稀釋且用水及鹽水洗滌。有機物經硫酸鎂乾燥且濃縮，在藉由逆相製備型HPLC純化之後提供(2S,4R)-4-(6-胺基-5-(4-(((S)-1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡啶-3-基)吡咯啶-2-甲酸甲酯(1.8mg，5%)。LCMS(m/z)：512.2,514.2(MH+),0.54min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 8.64-8.73(m,1H),7.84-7.96(m,2H),7.45(s,1H),7.40-7.44(m,1H),7.35-7.38(m,1H),7.27-7.34(m,1H),5.16-5.24(m,1H),4.38(dd,J=7.83,10.17Hz,1H),3.75-3.92(m,2H),3.60-3.72(m,1H),2.78-2.89(m,3H)。
4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸之合成
根據流程109中之步驟4及5，使用5-溴-1-甲基-1H-咪唑，獲得4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS (m/z)：313.1(MH+),0.3min。
4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸之合成
根據流程109中之步驟4及5，使用1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1H-吡唑，獲得4-(2-胺基-5-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z)：313.4(MH+),0.44min。
4-(2-胺基-5-(1-異丙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸之合成
根據流程109中之步驟4及5，使用1-異丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1H-吡唑，獲得4-(2-胺基-5-(1-異丙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z)：341(MH+),0.56min。
實例224 (S)-4-(3-胺基-6-(氧雜環丁烷-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺之合成
流程113
步驟1. 4-(3-胺基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向含4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(400mg，1.227mmol)之DME(12mL)中添加4,4,4',4',5,5,5'-七甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼(589mg，2.453mmol)、乙酸鉀(361mg，3.68mmol)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2(100mg，0.123mmol)。反應混合物用N2吹掃且在微波中在120℃下加熱15min。反應混合物分配於乙酸乙酯與水之間。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗產物溶解於乙醚中且音波處理持續20分鐘。濾出黑色固體。向濾液中添加庚烷。沈澱物過濾且乾燥以提供淺黃色固體。(250mg,54.6%)。LCMS(m/z)：292.2(MH+),0.47min(關於酸)。
步驟2. 4-(3-胺基-6-(氧雜環丁烷-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
向含4-(3-胺基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(150mg，0.402mmol)之DME(6mL)及碳酸鈉(1.5mL，3.0mmol)中添加3-碘氧雜環丁烷(370mg，2.01mmol)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2(32.8mg，0.042mmol)。反應混合物在微波中在100℃下加熱15min。反應混合物分配於乙酸乙酯與水之間。分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且蒸發。粗產物藉由製備型HPLC來純化以分離產物(13.5mg，11.0%)。LCMS(m/z)：304.2 (MH+),0.61min。
步驟3. 4-(3-胺基-6-(氧雜環丁烷-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向含4-(3-胺基-6-(氧雜環丁烷-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(13mg，0.043mmol)之MeOH(1mL)及THF(2mL)中添加LiOH(0.128mL，0.128mmol)。反應混合物在室溫下攪拌2h。反應混合物調節至酸性(約pH 3)且在旋轉蒸發器上蒸發溶劑。粗物質與甲苯共沸且繼續用於下一步驟。LCMS(m/z)：290.1(MH+),0.46min。
步驟4. (S)-4-(3-胺基-6-(氧雜環丁烷-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-(2-羥基-1-苯基乙基)苯甲醯胺
向含4-(3-胺基-6-(氧雜環丁烷-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸-粗物質(10mg，0.035mmol)之DMF(1mL)中添加(S)-2-胺基-2-苯基乙醇(14.22mg，0.104mmol)、DIEA(0.030mL，0.173mmol)、EDC(13.25mg，0.069mmol)及aza-HOBt(7.06mg，0.052mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。粗物質藉由製備型HPLC來純化以提供呈TFA鹽之所需產物(11.5%)。LCMS(m/z)：409.2(MH+),0.597min；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 7.92-7.82(m,2H)7.78-7.64(m,2 H)7.48-7.32(m,5 H)7.23-7.31-7.23(m,1 H)5.28-5.17(m,1 H)5.03-4.90(m,5 H)4.47-4.34(m,1 H)3.96-3.76(m,3 H)。
實例225、226及227 (+/-)-N-(2-胺基-1-(3-氯苯基)乙基)-4-(2-胺基-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲醯胺之合成
流程114
根據流程82中之步驟1及2、流程102中之步驟5及6，使用(+/-)-(2-胺基-2-(3-氯苯基)乙基)胺基甲酸第三丁酯，獲得(+/-)-N-(2-胺基-1-(3-氯苯基)乙基)-4-(2-胺基-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲醯胺。LCMS(m/z)：479.3(MH+),0.54min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.16(m,2H),7.87(m,1H),7.47-7.18(m,7H),5.23(m,1H),4.58(bs,2H),3.88(s,3H),3.19(m,2H),2.36(s,3H)。外消旋混合物藉由對掌性SFC(ChiralPak 5mic AD管柱，4.6x100(mm),5mL/min,EtOH+0.1%,DEA=30%)解析。極性對映異構體(S)-N-(2-胺基-1-(3-氯苯基)乙基)-4-(2-胺基-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲醯胺在Rt=2.6min下獲得。LCMS(m/z)：479.1(MH+),0.57min。較少極性對映異構體(R)-N-(2-胺基-1-(3-氯苯基)乙基)-4-(2-胺基-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-2-氟苯甲醯胺在Rt=3.22min下獲得。LCMS(m/z)：479.1(MH+),0.57min。絕對立體化學基於生物化學資料及對接模型來指派。
4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-氘離子基-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸之合成
步驟1. 4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-氘離子基-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸乙酯(98mg，0.285mmol)於甲醇(1.903mL)、THF(0.952mL)中之溶液冷卻至-78℃。向其中一次性緩慢添加NaBD4(32.4mg，0.856mmol)。使反應混合物溫至室溫持續1小時。反應混合物用NH4Cl溶液，接著繼而Na2CO3溶液淬滅且攪拌1小時。反應混合物藉由EtOAc萃取。經組合之有機層用水及鹽水洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾，且在真空中濃縮以提供粗4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-氘離子基-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(81.4mg，反式：順式=約4：1,82%)，其用於下一步驟。LCMS(m/z)：347.1(MH+),0.61min(主要，反式)及0.64min(順式)。
步驟2. 4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-氘離子基-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
向4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-氘離子基-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(81mg，0.234mmol)於THF(1559μl)及MeOH(780μl)中之溶液中添加LiOH(1M溶液)(421μl，0.421mmol)。反應混合物在室溫下攪拌1小時。在pH調節至5之後，反應混合物用EtOAc萃取。經組合之有機層用水及鹽水洗滌，過濾，且在真空中濃縮。粗4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-氘離子基-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(99%)無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：333.1(MH+),0.47min(主要，反式)及0.51min(順式)。
(S)-2-胺基-2-氘離子基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇之合成
流程116
步驟1. (3-溴-5-氟苯基)-1,1-二-氘離子基-甲醇
3-溴-5-氟苯甲酸(5.3g，24.20mmol)溶解於THF(81mL)中。在0℃下向其中添加LiAlD4(1.102g，29.0mmol)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。在反應混合物冷卻至0℃之後，添加1.1mL水，繼而添加1.1mL 15% NaOH及3.2mL水。懸浮液在室溫下攪拌2h，接著經矽藻土過濾且用Et2O沖洗，濃縮濾液以生成粗產物，其藉由急驟層析(0-30% EtOAc/庚烷)純化以生成(3-溴-5-氟苯基)-1,1-二-氘離子基-甲醇，64%產率。LCMS(m/z)：232.0(MNa+),0.69min。
步驟2. 3-溴-5-氟苯甲醛-d1
(3-溴-5-氟苯基)-1,1-二-氘離子基-甲醇(3.2g，15.4mmol)溶解於DCM(51.5mL)中且冷卻至0℃。戴斯-馬丁高碘烷(9.83g，23.18mmol)添加至反應混合物中，其在0℃下攪拌3小時。飽和Na2S2O3/NaHCO3(8：1)溶液添加至該混合物中，其在室溫下攪拌1小時。反應混合物接著用DCM萃取。經組合之有機層用水及鹽水洗滌，過濾，且在真空中濃縮。粗材料藉由急驟層析來純化以生成呈白色固體狀之3-溴-5-氟苯甲醛-d1(2.6g，82%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.83(s,1H),7.57-7.50(m,2H)。
步驟3. (S)-2-胺基-2-氘離子基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇
根據流程74中之步驟4至9，使用3-溴-5-氟苯甲醛-d1，獲得呈HCl鹽之(S)-2-胺基-2-氘離子基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇。LCMS(m/z)：235.0/237.0(MH+),0.40min。
(R)-2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)-2,2-二-氘離子基-乙醇鹽酸鹽之合成
流程117
步驟1. (R)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙酸
(S)-(1-(3-溴-5-氟苯基)烯丙基)胺基甲酸第三丁酯(1.235g，3.74mmol)於CCl4(4mL)、乙腈(4mL)及水(6mL)中之溶液用過碘酸鈉(1.680g，7.85mmol)及RuCl3(16mg，0.075mmol)處理。1小時之後，反應完成。反應物分配於乙酸乙酯與水之間。有機物用鹽水洗滌，接著經矽藻土過濾且濃縮。粗物質再溶解於苯中，接著過濾且再次濃縮以提供粗(R)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙酸(1.30g，99%產率)，其直接使用。LCMS(m/z)：348.2(MH+),0.52min。
步驟2. (R)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基-2,2-氘離子基-乙基)胺基甲酸第三丁酯
(R)-2-(3-溴-5-氟苯基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙酸(1.30g，3.73mmol)於DME(6mL)中之-10℃溶液用N-甲基嗎啉(0.431mL，3.92mmol)處理。在5min之後，反應物用氯甲酸異丁酯(0.515mL，3.92mmol)處理。在額外5min之後，反應物過濾且濾餅用DME(4mL)洗滌。組合之有機物用NaBD4(0.251g，5.97mmol)於水(1mL)中之溶液處理。在完成時，反應物分配於乙酸乙酯與水之間。有機物用鹽水洗滌，接著經硫酸鈉乾燥且濃縮。粗材料藉由製備型HPLC來純化以提供標題化合物(R)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基-2,2-氘離子基-乙基)胺基甲酸第三丁酯(55mg，4.4%產率)。LCMS(m/z)：337.3(MH+),1.03min。
步驟3. (R)-2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)-2,2-二-氘離子基-乙醇鹽酸鹽
(R)-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基-2,2-氘離子基-乙基)胺基甲酸第三丁酯(46mg，0.137mmol)於含4M HCl之二噁烷(1368μl)中之溶液攪拌隔夜。揮發性材料在真空中移除。粗產物無需進一步純化即用於下一步驟。LCMS(m/z)：236/238(MH+),0.4min。
4-(3-胺基-6-(4-(羥基甲基)環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸之合成
步驟1. 1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸乙酯
4-側氧基環己烷甲酸乙酯(15.01g，88.16mmol)與乙二醇(21mL，4.27eq)及對甲苯磺酸單水合物(0.2g，0.012當量)於無水甲苯(50mL)中組合，且該混合物在室溫下攪拌14h。反應物用乙醚(200mL)稀釋且用H2O(2×200mL)、飽和碳酸氫鈉(100mL)及鹽水(80mL)洗滌。有機層經乾燥(Na2SO4)，過濾且在減壓下濃縮以生成18.15g 4-側氧基環己烷甲酸乙酯伸乙基縮酮(96%產率)。LCMS(m/z)：214.8 (MH+),0.74min。
步驟2. 1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基甲醇
LiAlH4(2.51g，66.3mmol)懸浮於THF(60mL)中且接著在冰浴中冷卻。向懸浮液中逐滴添加溶解於THF(40mL)中之1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸乙酯(11.357g，53.0mmol)且反應混合物經1h逐漸溫至室溫，此時LCMS指示SM完全還原。反應混合物用乙醚(200mL)稀釋且用2.5mL水且接著5mL(10% NaOH)且接著7.5mL水淬滅。向其中添加無水MgSO4，其接著攪拌30min且經矽藻土過濾。在真空中濃縮濾液，提供所需產物，定量產率。LCMS(m/z)：173.1(MH+),0.41min。
步驟3. 4-((苯甲基氧基)甲基)環己酮
1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基甲醇(1.33g，7.72mmol)溶解於DMF(14mL)中且接著冷卻至0℃。分成數份向溶液中添加NaH(0.402g，10.04mmol)且該混合物在10℃下攪拌1h且接著添加苯甲基溴(1.194mL，10.04mmol)且該混合物經72小時攪拌。反應混合物用水淬滅且用乙醚萃取且組合之有機萃取物乾燥(MgSO4)，過濾且在真空中濃縮且粗產物8-((苯甲基氧基)甲基)-1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷溶解於乙腈(35mL)及水(25mL)中且用3N HCl(13mL)處理且在室溫下攪拌20min，此時LCMS指示所需產物。反應混合物用40mmol NaOH水溶液淬滅且接著用EtOAc(200mL)萃取且有機層用水洗滌且乾燥(MgSO4)，過濾且在真空中濃縮且殘餘物藉由急驟層析(0-50% EtOAc/庚烷)純化，提供1.23g呈無色糖漿狀之所需產物(73%)。LCMS(m/z)：329.2(MH+),1.33min。
步驟4. 2-(4-((苯甲基氧基)甲基)環己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基甲醇(1.23g，5.63mmol)溶解於THF (22.5mL)中且冷卻至-78℃。接著逐滴添加LiHMDS(6.20mL，6.20mmol)且該混合物在此溫度下攪拌1h，此時一次性添加1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺醯基)甲烷磺醯胺(2.214g，6.20mmol)且使反應混合物溫至室溫且攪拌隔夜。次日早晨，反應混合物用1.0M NaHSO4淬滅且溶劑在真空中蒸發。殘餘物分配於NaOH/乙醚之間且分離有機層且用1.0M NaOH洗滌兩次，且用鹽水且接著MgSO4乾燥，過濾且在真空中濃縮，以定量產率提供所需產物三氟甲烷磺酸4-((苯甲基氧基)甲基)環己-1-烯-1-基酯，其無需任何進一步純化即用於下一步驟。中間體4-((苯甲基氧基)甲基)環己-1-烯-1-基(1000mg，2.85mmol)、B2(PIN)2(1087mg，4.28mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(233mg，0.285mmol)及KOAc(560mg，5.71mmol)饋入微波小瓶中且接著添加二噁烷(9.5mL)。該混合物抽真空且用N2吹掃且接著在微波中加熱至100℃持續22min。粗物質混合物用乙醚及水稀釋且分離有機層且乾燥(MgSO4)，過濾且在真空中濃縮且殘餘物藉由急驟層析(0-10% EtOAc/庚烷)純化，提供所需產物(51%)。LCMS(m/z)：219.2(MH+),0.88min。
步驟5. 4-(3-胺基-6-(4-((苯甲基氧基)甲基)環己-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(343mg，1.051mmol)、2-(4-((苯甲基氧基)甲基)環己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(414mg，1.261mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(86mg，0.105mmol)置於微波小瓶中且接著添加DME(3.5mL)。接著添加2.0M Na2CO3(1261μL，2.52mmol)且該混合物脫氣且用氮氣吹掃且接著在115℃下加熱30min，此時反應完成。反應混合物用EtOAc稀釋且用水洗滌且分離有機層且乾燥(MgSO4)，過濾且濃縮且殘餘物藉由急驟層析(0-100% EtOAc/庚烷)純化，提供381mg呈黃色固體狀 之所需產物(81%)。LCMS(m/z)：448.2(MH+),1.16min。
步驟6. 4-(3-胺基-6-(4-(羥基甲基)環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
4-(3-胺基-6-(4-((苯甲基氧基)甲基)環己-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(381mg，0.851mmol)溶解於THF(5mL)中且接著添加MeOH(15mL)且接著添加Pd-C(10%濕式)(550mg，0.517mmol)。該混合物置於真空下且用氫氣吹掃且此循環重複三次且接著最終在氫氣下隔夜。在14h之後，LCMS指示烯烴飽和，但僅部分苯甲基保護基脫除，且因此再添加Pd-C(10%濕)(700mg)且該混合物在室溫下再攪拌5h，之後觀察到完全苯甲基保護基脫除。過濾反應混合物且在真空中濃縮，提供215.6mg呈非對映異構體之混合物形式的所需產物(順式/反式未規定)(70%)。LCMS(m/z)：360.2(MH+),0.71,0.72min。
步驟7. (S)-4-(3-胺基-6-(4-(羥基甲基)環己基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-氯苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺
4-(3-胺基-6-(4-(羥基甲基)環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(215.6mg，0.600mmol)溶解於THF(3mL)中且接著添加MeOH(3mL)且接著添加1.0M LiOH(2400μL，2.400mmol)。反應混合物攪拌隔夜且次日早晨，LCMS指示所需產物形成。在真空中濃縮反應混合物且接著與THF(各10mL)共沸兩次且接著用1.5mL含4.0N HCl之二噁烷酸化且在真空中濃縮。殘餘物溶解於DMSO(5mL)中且原樣用於下一步驟。LCMS(m/z)：346.2(MH+),0.57,0.58min。
4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸之合成
流程119
步驟1. 4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
4-(3-胺基-6-(4-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(401.4mg，1.169mmol)懸浮於MeOH中且冷卻至0℃。向該混合物中添加溶解於MeOH(5mL)中之NaBH4(133mg，3.51mmol)且該混合物逐漸溫至室溫且攪拌30min，此時反應完全。反應混合物用EtOAc及飽和NaHCO3稀釋且有機層用水洗滌兩次且乾燥(MgSO4)，過濾且在真空中濃縮，提供339.4mg所需產物(84%)。LCMS(m/z)：346.2(MH+),0.63min。
步驟2. 4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯
含有4-(3-胺基-6-((1r,4r)-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(339.4mg，0.983mmol)於乙腈(3.2mL)中之溶液之燒瓶在冰/鹽水浴中冷卻至0℃且添加全氟丁烷磺醯氟(530μl，2.95mmol)，繼而添加三乙胺三氟化氫(480μl，2.95mmol)及三乙胺(1233μl，8.84mmol)且使所得反應混合物在0℃下攪拌90min。在經過時間之後，LCMS指示消除對所需產物之2.5：1比率。反應混合物用水淬滅且用EtOAc萃取且有機萃取物用水洗滌兩次且乾燥(MgSO4)，過濾且在真空中濃縮，提供粗產物混合物，其小心地層析(0-60% EtOAc/庚烷)，提供67.5mg所需產物。(19.8%)。LCMS(m/z)：348.2(MH+),0.86min。
步驟3. 4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
4-(3-胺基-6-((1s,4s)-4-氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(67.5mg，0.194mmol)溶解於THF(1mL)及MeOH(1mL)中且接著添加1.0 M LiOH(0.777mL，0.777mmol)。反應混合物在室溫下攪拌。1小時之後，LCMS指示形成所需酸。LCMS(m/z)：334.2(MH+),0.70min。
3-溴-5-((1r,4r)-4-氟環己基)吡嗪-2-胺之合成
步驟1. (1s,4s)-4-(5-胺基吡嗪-2-基)環己醇
4-(5-胺基吡嗪-2-基)環己酮(1.049g，5.48mmol)溶解於THF(10mL)中且冷卻至0℃。逐滴添加三第二丁基硼氫化鋰(12.06mL，12.06mmol)且該混合物攪拌20min，此時反應完成。反應混合物用5N NaOH(40mmol)且接著MeOH(5mL)淬滅。反應混合物用2-甲基THF稀釋且分離水層且有機層用鹽水洗滌且乾燥(MgSO4)，過濾且在真空中濃縮，提供所需產物，95：5順式/反式比率，其接著用乙醚濕磨以獲得586.3mg淡黃色沈澱物作為所需產物(55%)。LCMS(m/z)：194.1(MH+),0.32min。
步驟2及3. 3-溴-5-((1r,4r)-4-氟環己基)吡嗪-2-胺
根據流程119中之步驟2及3，獲得3-溴-5-((1r,4r)-4-氟環己基)吡嗪-2-胺。LCMS(m/z)：276.0(MH+),0.81min。
4-(3-胺基-6-(4-氰基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸之合成
根據流程118中之步驟4至7，獲得4-(3-胺基-6-(4-氰基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸。LCMS(m/z)：341.2(MH+),0.64,0.66min(反式，順式)。
實例453 4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺之合成
步驟1. 4-(3-胺基-6-(3-側氧基環戊-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯：4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(1g，2.72mmol)、環戊-2-烯酮(0.892g，10.86mmol)、N-環己基-N-甲基環己胺(1.061g，5.43mmol)、雙(三-第三丁基膦)鈀(0)(0.069g，0.136mmol)、TBAC(0.075g，0.272mmol)於二噁烷(7mL)中之混合物在135℃下經微波處理持續25min。在冷卻之後，該混合物濃縮且殘餘物用10mL DCM稀釋，音波處理持續5min，過濾且固體用3ml DCM洗滌。組合之DCM溶液直接應用於ISCO矽石管柱分離。(40g管柱，10-90% EtOAc/庚烷)。獲得400mg呈淺黃色固體狀之所需產物。LCMS(m/z)：(MH+)370.0,0.903min。1H NMR(400MHz,DMSO)δ ppm 1.12-1.26(m,5 H)1.55(s,10 H)1.59-1.72(m,5 H)2.41(dt, J=5.09,2.15Hz,3 H)2.48(dt,J=3.62,1.91Hz,3 H)3.00(dd,J=5.09,2.35Hz,2 H)3.30(s,3 H)6.66(t,J=1.76Hz,1 H)7.09(s,H)7.55-7.69(m,H)7.83-7.95(m,1 H)8.57(s,1 H)。
步驟2：4-(3-胺基-6-(3-側氧基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯：在攪拌下向含4-(3-胺基-6-(3-側氧基環戊-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(650mg，1.760mmol)之MeOH(15ml)中添加15mL DCM，直至獲得澄清溶液。溶液藉由氮氣吹掃5min，接著添加Pd/C(300mg，10%，Degussa類型)，且所得混合物藉由N2流脫氣持續15min。在配備有氫氣球之後，反應混合物在室溫下攪拌16小時。過濾反應混合物，且濃縮濾液，且粗材料藉由ISCO(24g矽膠，20-80% EtOAc/庚烷)來純化，提供380mg呈淺黃色固體狀之所需產物。58.1%產率。LC-MS(m/z)：(MH+)372.1,0.829min。
步驟3：4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)第三丁酯及4-(3-胺基-6-((1R,3S)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)第三丁酯：在-78℃下向4-(3-胺基-6-(3-側氧基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(200mg，0.538mmol)於MeOH(4mL)中之溶液中添加NaBH4(61.1mg，1.615mmol)。反應混合物在-78℃下攪拌1小時。在-78℃下，反應混合物用飽和NH4Cl(4ml)淬滅，且移除冷卻浴，且該混合物逐漸溫至RT，接著添加飽和NaHCO3溶液(4ml)。反應混合物用EtOAc(30ml x 2)萃取。有機層用水及鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。獲得約210mg粗產物。粗產物溶解於4ml DMSO中，過濾且藉由製備型HPLC純化。更具極性化合物為反式(所需，較早出現)，較少極性化合物為順式，稍後出現。在用1N NaOH中和之後，反式及順式化合物作為游離鹼化合物獲得。
4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)第三丁酯：40mg，19.9%產率)，反式。LC-MS(m/z)：(MH+)374.1, 0.81min,NMR(400MHz,CD3CN)δ ppm 1.61(s,9 H)1.69-1.82(m,1 H)1.88-2.25(m,6 H)2.59-2.77(m,1 H)3.32-3.56(m,1 H)4.31-4.48(m,1 H)5.07(br.s.,2 H)7.59(dd,J=12.13,1.56Hz,1 H)7.66(dd,J=8.02,1.76Hz,1 H)7.88-8.03(m,2 H)。
4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(+/-)第三丁酯：150mg，74.6%產率，順式。LC-MS(m/z)：(MH+)374.1,0.81min。1H NMR(400MHz,CD3CN)δ ppm：1.55-1.67(m,9 H)1.69-1.89(m,2 H)1.91-2.03(m,4 H)2.05-2.13(m,1 H)2.21-2.33(m,1 H)3.21-3.41(m,1 H)3.99(s,1 H)4.20-4.34(m,1 H)5.04-5.23(m,2 H)7.50-7.58(m,1 H)7.58-7.67(m,1 H)7.90-8.05(m,2 H)。
步驟4：4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯及4-(3-胺基-6-((1S,3S)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯：兩種反式異構體(總計160mg)藉由對掌性管柱分離：OJ管柱(21 X250mm)，SFC=100ml/min，CO2/EtOH=85/15，負載：70mg/7ml EtOH，274巴。獲得80mg各對映異構體。
4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯：NMR(400MHz,DMSO)δ ppm：1.04(t,J=6.85Hz,1 H)1.47-1.73(m,11 H)1.75-1.86(m,2 H)1.89-2.18(m,2 H)3.15(s,1 H)3.30(s,4H)3.97-4.16(m,1 H)4.19-4.39(m,1 H)4.44-4.59(m,1 H)6.10(s,2 H)7.57(d,J=12.13Hz,1 H)7.63(dd,J=8.02,1.76Hz,1 H)7.77-8.01(m,2 H)。
4-(3-胺基-6-((1S,3S)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯：NMR(400MHz,DMSO)δ ppm：1.04(t,J=6.85Hz,1 H)1.14-1.28(m,1 H)1.50-1.57(m,10 H)1.59-1.71(m,1 H)1.75-1.87(m,2 H)1.89-2.14(m,2 H)3.15(s,1 H)3.30(s,4 H)4.18-4.37(m,1 H) 4.42-4.55(m,1 H)6.10(s,2 H)7.51-7.60(m,1 H)7.63(dd,J=8.02,1.76Hz,1 H)7.81-7.95(m,2 H)。
步驟5. 4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸
程序：在RT下向4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-羥基環戊基)-吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(7mg，0.019mmol)於DCM(2mL)中之溶液中添加TFA(0.361mL，4.69mmol)。所得溶液在RT下攪拌2小時。濃縮溶液，且進一步藉由高真空乾燥，提供呈TFA鹽之所需產物，其直接用於下一步驟。(6mg，100%產率)LC-MS(m/z)：318.1(MH+),0.46min。
步驟6：4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺：向(4-(3-胺基-6-((1R,3R)-3-羥基環戊基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸)(6mg，0.019mmol)、(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇(8.96mg，0.028mmol)、HOAt(5.15mg，0.038mmol)及EDC(7.25mg，0.038mmol)於DMF(1ml)中之混合物中添加DIEA(0.036mL，0.208mmol)。所得混合物在RT下攪拌隔夜。該混合物用EtOAc稀釋，用水(三次)及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，提供呈淺黃色黏性液體之粗產物。此粗物質藉由製備型HPLC來純化，提供呈淺黃色固體狀之所需產物(6mg，45.2%產率)，TFA鹽。LC-MS：(MH+)581.0，在0.726min處。1H NMR(400MHz,CD3CN)δ ppm 1.56-1.82(m,2 H)2.01-2.30(m,3 H)3.47(t,J=8.61Hz,1 H)3.73-3.92(m,3 H)4.32-4.45(m,2 H)5.05-5.19(m,1 H)7.16-7.27(m,1 H)7.48(dt,J=8.12,1.81Hz,1 H)7.56-7.71(m,4 H)7.74-7.81(m,1 H)7.97(t,J=7.83Hz,1 H)。
實例456 4-(3-胺基-6-((1S,4S)-3,3-二氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)- 1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺之合成
步驟1：三氟甲烷磺酸3-側氧基環己-1-烯-1-基酯：在0℃下(冰水浴)在氮氣下向環己烷-1,3-二酮(8g，71.3mmol)於CH2Cl2(120ml)中之溶液中添加碳酸鈉(8.32g，78mmol)。所得混合物在0℃下攪拌10min。經1小時逐滴添加三氟甲烷磺酸酐(12.05mL，71.3mmol)於35ml DCM中之溶液。該混合物在0℃下攪拌1.5小時。該混合物經燒結玻璃漏斗過濾，且緩慢添加60ml飽和NaHCO3。有機層接著分離且用40ml鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮以提供9g(52%產率)呈淺黃色液體之所需產物。LC-MS(m/z)：(MH+)244.9,0.72min。
步驟2：3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)環己-2-烯酮，(3-側氧基環己-1-烯-1-基)酸：三氟甲烷磺酸3-側氧基環己-1-烯-1-基酯(9g，36.9mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(14.04g，55.3mmol)、乙酸鉀(10.85g，111mmol)及Pd(dppf)Cl2.DCM(0.808g，1.106mmol)於二噁烷(80mL)中之混合物 用氮氣沖洗持續5min且接著在90℃下加熱隔夜。在冷卻之後，該混合物過濾，且固體用3x20mL溫二噁烷洗滌。濃縮組合之溶液，直至約70ml二噁烷剩餘。此產物(於二噁烷中)直接用於下一步驟。LCMS(m/z)：MH+=140.8(酸)，0.284min。
步驟3：4-(3-胺基-6-(3-側氧基環己-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯：向250ml RB中饋入3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)環己-2-烯酮(7.00g，31.5mmol)(於約70ml二噁烷中)、4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(5.8g，15.75mmol))、Pd(dppf)Cl2.DCM(0.576g，0.788mmol)，且接著饋入飽和Na2CO3(25mL)。所得混合物用氮氣沖洗持續15min。接著添加DME(10mL)。該混合物在100℃下攪拌隔夜。添加乙酸乙酯(150ml)及水(50ml)，且所得混合物攪拌30分鐘。分離有機物且水層用乙酸乙酯(30ml x3)萃取。組合有機層且經Na2SO4乾燥，過濾且蒸發以提供呈黏性黑色半固體狀之粗所需材料。此固體用於約30ml乙醚，音波處理持續10min，且過濾沈澱之黃色固體，且用冷乙醚(5ml x 3)洗滌，在高真空下乾燥，提供呈黃色固體狀之所需產物(3.1g，51.3%)。LC-MS(m/z)：(MH+)384.2,0.92min。
步驟4：4-(3-(雙(第三丁氧基羰基)胺基)-6-(3-側氧基環己-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯：在RT下向4-(3-胺基-6-(3-側氧基環己-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(3g，7.82mmol)於乙腈(25mL)中之懸浮液添加DMAP(0.048g，0.391mmol)，繼而添加Boc-酐(6.36mL，27.4mmol)。所得混合物在RT下攪拌25min。溶液用EtOAc稀釋，用飽和NaHCO3及水洗滌，乾燥且濃縮。粗產物藉由ISCO分離(80g矽石，30min，5-60% EtOAc/庚烷)來純化。獲得呈淺黃色黏性液體之所需產物，其靜置凝固隔夜。(3.5g，6.00mmol，77%產率)。LC-MS(m/z)：(MH+)584.2,1.286min。1H NMR(400 MHz，乙腈-d3)δ ppm 0.91(s,1 H)1.31(s,16 H)1.61(s,7 H)1.88-2.03(m,1 H)2.16(s,2 H)2.50(d,J=7.04Hz,2H)2.85-3.09(m,2 H)6.90(s,1 H)7.51-7.71(m,2 H)7.91-8.11(m,1 H)8.92(s,1 H)。
步驟5：4-(3-(雙-(第三丁氧基羰基)胺基)-6-(3-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯：在RT下向4-(3-(雙(第三丁氧基羰基)胺基)-6-(3-側氧基環己-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(3g，5.14mmol)於MeOH(15mL)及DCM(10mL)中之溶液添加中Pd-C(10%，degauss，1.094g，1.028mmol)。所得混合物用氫氣沖洗持續10min，接著在RT下在氫氣氛圍下攪拌5小時。過濾懸浮液且濃縮溶液。ISCO矽石管柱分離(80g矽石，30min，5-60% EtOAc/庚烷)提供呈淺黃色黏性液體之所需產物，其靜置凝固隔夜。(1.485g，2.54mmol，49.3%產率)。LC-MS(m/z)：(MH+)586.3,1.17min。
步驟6：4-(6-((1S,4S)-4-(苯甲醯基氧基)-3-側氧基環己基)-3-(雙(第三丁氧基羰基)胺基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯及4-(6-((1R,4R)-4-(苯甲醯基氧基)-3-側氧基環己基)-3-(雙(第三丁氧基羰基)胺基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯：
A：游離鹼催化劑之製備：300mg(S)-(6-甲氧基喹啉-4-基)((1S,2R,4S,5R)-5-乙烯基啶-2-基)甲胺(tri.HCl鹽)溶解於20ml DCM中，接著用1N NaOH(5ml)中和，分離有機層用鹽水(5ml x2)及水(5ml x2)洗滌，乾燥，過濾且濃縮，提供呈游離鹼之產物。(200mg游離鹼胺於4ml二噁烷中)。
B：向配備有磁性攪拌棒之10mL微波小瓶中饋入4-(3-(雙-(第三丁氧基羰基)胺基)-6-(3-側氧基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(1.485g，2.54mmol)、BHT(丁基化羥基甲苯，0.067g，0.304mmol)、(S)-(6-甲氧基喹啉-4-基)((1S,2R,4S,5R)-5-乙烯基啶-2-基)甲胺(0.098g，0.304mmol)(於2mL二噁烷中)及三氯乙酸(0.050g， 0.304mmol)。接著添加二噁烷(1ml)，且所得混合物攪拌5分鐘，接著添加過氧苯甲酸酐(0.983g，4.06mmol)。反應混合物在30℃下攪拌16小時。反應混合物用二氯甲烷稀釋，用NaHCO3之飽和水溶液處理，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，濃縮至約3ml DCM。粗物質(於3ml DCM中)藉由ISCO急驟管柱層析用EtOAc/庚烷(10-45% EtOAc/庚烷，120g矽膠管柱，35min)溶離來純化。在此階段無法藉由對掌性-相HPLC分析來測定對映體選擇性。藉由所有可用之管柱/方法均未觀察到分離。此產物直接用於下一步驟反應。(730mg，40.8%產率)LC-MS(m/z)：(MH+)706.3，在1.38min處。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 1.26-1.41(m,19 H)1.46-1.67(m,11 H)2.08-2.22(m,1 H)2.26-2.42(m,2 H)2.50-2.67(m,1 H)2.70-2.91(m,1 H)3.08(s,1 H)3.26-3.49(m,1 H)4.03-4.19(m,1 H)5.49-5.67(m,1 H)7.26(d,J=0.78Hz,2 H)7.40-7.66(m,5 H)7.97(t,J=7.83Hz,1 H)8.07-8.19(m,2 H)8.41(s,1 H)。
步驟7：4-(6-(4-(苯甲醯基氧基)-3,3-二氟環己基)-3-(雙(第三丁氧基羰基)胺基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯：在RT下向4-(6-((1S,4S)-4-(苯甲醯基氧基)-3-側氧基環己基)-3-(雙(第三丁氧基羰基)胺基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(730mg，1.034mmol)於DCM(7mL)中之溶液中添加XtalFlour-E(939mg，4.14mmol)，繼而添加三乙胺三氟化氫(0.674mL，4.14mmol)。所得混合物在RT下攪拌5小時。過濾該混合物且經過濾之溶液直接應用於ISCO分離：24g矽膠，0-70% EtOAc/庚烷，30min。獲得淺黃色固體(670mg，0.902mmol，87%產率)。LC-MS(m/z)：(MH+)728.0，在0.95min處(非極性MS方法)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 0.88(s,2 H)1.19-1.39(m,21 H)1.48-1.68(m,11 H)1.86-2.08(m,2 H)2.08-2.21(m,1 H)2.26-2.47(m,2 H)2.47-2.63(m,1 H)3.21-3.44(m,1 H)5.22-5.51(m,1 H)7.41-7.55(m,4 H)7.60(s,1 H)7.96(d,J=7.82Hz,1 H)8.06-8.19(m,2H)8.42(s,1 H)。
步驟8：4-(3-胺基-6-(4-(苯甲醯基氧基)-3,3-二氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸：在RT下向4-(6-(4-(苯甲醯基氧基)-3,3-二氟環己基)-3-(雙(第三丁氧基羰基)胺基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸第三丁酯(670mg，0.921mmol)於DCM(12mL)中之溶液中添加TFA(4.96mL，64.4mmol)。所得混合物在RT下攪拌2小時。濃縮該混合物，用EtOAc稀釋，用NaHCO3(兩次)、接著鹽水中和，分離有機層，乾燥且濃縮以提供粗產物，其直接用於下一步驟。(434mg，0.921mmol，100%產率)。LC-MS(m/z)：(MH+)472.1，在0.942min處。1H NMR(400MHz,DMSO)δ ppm：1.07(t,J=7.04Hz,2 H)1.83(t,J=10.17Hz,2 H)2.16(d,J=5.09Hz,1 H)2.29-2.45(m,2 H)3.02(br.s.,1H)3.16-3.44(m,9 H)5.22-5.52(m,1 H)5.73(s,1 H)6.24(s,2 H)7.44-7.75(m,5 H)7.89(t,J=7.83Hz,1 H)7.94-8.07(m,3 H)。
步驟9：苯甲酸4-(5-胺基-6-(3-氟-4-(((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)苯基)吡嗪-2-基)-2,2-二氟環己酯：向4-(3-胺基-6-(4-(苯甲醯基氧基)-3,3-二氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(434mg，0.92mmol)、(4-(3-胺基-6-((4R)-4-(苯甲醯基氧基)-3,3-二氟環己基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸)、(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇(320mg，1.012mmol)、HOAt(250mg，1.840mmol)及EDC(353mg，1.840mmol)於DMF(5mL)中之混合物中添加DIEA(1.607mL，9.20mmol)。所得混合物在RT下攪拌隔夜。該混合物用EtOAc稀釋，用水(三次)及鹽水洗滌，乾燥，濃縮，提供呈淺黃色黏性液體之粗產物。
在ISCO純化(24g矽石，10-80% EtOAc/庚烷，35min)之後，獲 得呈淺黃色液體之所需產物，其含有兩種可能異構體。(601mg，0.818mmol，89%產率)LC-MS(m/z)：(MH+)735.0，在1.09min處。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 1.71(br.s.,1 H)1.80-2.00(m,2 H)2.18-2.39(m,2 H)2.39-2.52(m,1 H)2.53-2.70(m,1 H)3.13(br.s.,1 H)3.82-4.07(m,2 H)4.78(s,2 H)5.23(d,J=5.09Hz,2 H)7.02-7.16(m,1 H)7.31-7.39(m,1 H)7.41-7.50(m,2 H)7.50-7.76(m,5 H)7.87-8.03(m,2 H)8.07-8.23(m,3 H)。
步驟10：4-(3-胺基-6-(3,3-二氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺：在RT下向含苯甲酸4-(5-胺基-6-(3-氟-4-(((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)苯基)吡嗪-2-基)-2,2-二氟環己酯(600mg，0.817mmol)之MeOH(8ml)、THF(8ml)及水(8ml)中添加LiOH.H2O(206mg，4.90mmol)。所得混合物在25℃下攪拌2小時。濃縮反應混合物且向殘餘物中添加30ml EtOAc，用水(10ml x3)洗滌，乾燥，過濾且濃縮，提供呈淺黃色黏性液體之粗產物，其在隔夜靜置之後變為灰白色固體。(515mg，100%產率)。LC-MS(m/z)：(MH+)631.1，在0.771min處。
步驟11：4-(3-胺基-6-((1S,4S)-3,3-二氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺：獲自步驟10之化合物藉由對掌性分離管柱(OJ管柱(21 X250mm)，SFC=100ml/min，CO2/EtOH=85/15，負載：70mg/7ml EtOH，274巴)來純化，提供兩種對掌性純化合物：4-(3-胺基-6-((1S,4S)-3,3-二氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺(255mg，27.8%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ ppm 1.46-1.69(m,2 H)1.71-2.26(m,4 H)2.79-3.02(m,1 H)3.58-3.83(m,2 H)4.94-5.15(m,2 H)5.25-5.45(m,1 H)6.11-6.26(m,1 H)7.19-7.34(m,1 H)7.46-7.56(m,1 H)7.56-7.66(m,2 H)7.66-7.77(m,1 H)7.95(s,1 H)8.66-8.79(m,1H)。
4-(3-胺基-6-((1R,4R)-3,3-二氟-4-羥基環己基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺(53mg，5.77%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ ppm 1.15-1.30(m,1 H)1.48-1.69(m,2 H)1.72-2.25(m,5 H)2.77-2.97(m,2 H)3.57-3.84(m,3 H)4.92-5.14(m,2 H)5.27-5.42(m,1 H)6.10-6.24(m,2 H)7.16-7.34(m,1 H)7.46-7.57(m,1 H)7.57-7.67(m,2 H)7.67-7.77(m,1 H)7.95(s,1H)8.63-8.80(m,1 H)。
實例473 (S)-4-(3-胺基-6-(嗎啉-4-羰基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺之合成
步驟1：5-胺基-6-溴吡嗪-2-甲酸乙酯：在RT下向5-胺基吡嗪-2- 甲酸乙酯(880mg，5.26mmol)於乙腈(20mL)中之溶液中添加NBS(984mg，5.53mmol)，所得溶液在RT下攪拌1小時。反應混合物用EtOAc稀釋，用飽和NaHCO3、鹽水及水洗滌，乾燥，過濾且濃縮以提供粗產物，其藉由ISCO(24g矽膠管柱，0-50% EtOAc/庚烷，30min)來純化。1.01g，78%產率。LC-MS(m/z)：247.9(MH+),0.51min。
步驟2：5-胺基-6-(4-(第三丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-甲酸乙酯：5-胺基-6-溴吡嗪-2-甲酸乙酯(210mg，0.853mmol)、2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯甲酸第三丁酯(357mg，1.109mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(69.7mg，0.085mmol)及Na2CO3(362mg，3.41mmol)(使用2M溶液)於DME(5mL)中之混合物置於20ml小瓶中且密封。該混合物在110℃下經微波處理持續15分鐘。該混合物用EtOAc稀釋，用水(兩次)及鹽水洗滌，乾燥，過濾且濃縮，提供呈淺黃色固體狀之粗物質。粗產物藉由ISCO(12g，10-55% EtOAc/庚烷，30min)來純化，提供228mg(74%產率)淺黃色固體。LC-MS(m/z)：362.1(MH+),0.89min。
步驟3：4-(3-胺基-6-(乙氧基羰基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸：在RT下向5-胺基-6-(4-(第三丁氧基羰基)-3-氟苯基)吡嗪-2-甲酸乙酯(0.253g，0.7mmol)於DCM(4mL)中之溶液中添加TFA(2.157mL，28.0mmol)。所得溶液在RT下攪拌2小時。濃縮反應溶液且進一步乾燥以提供呈TFA鹽之粗所需產物。此產物直接用於下一步驟。獲得0.214g(100%產率)淺黏性液體。LC-MS(m/z)：306.1(MH+),0.563min。
步驟4：(S)-5-胺基-6-(4-((1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡嗪-2-甲酸乙酯：向4-(3-胺基-6-(乙氧基羰基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(0.214g，0.7mmol)、(S)-2-胺基-2-(3-溴-5-氟苯基)乙醇(272mg，1.009mmol)、HOAt(187mg，1.376mmol)及EDC(264 mg，1.376mmol)於DMF(2.5mL)之混合物中添加DIEA(0.961mL，5.50mmol)。所得混合物在RT下攪拌隔夜。該混合物用EtOAc稀釋，用水(三次)及鹽水洗滌，乾燥，濃縮，提供呈淺黃色黏性液體之粗產物。ISCO純化(12g矽石，10-90% EtOAc/庚烷，30min)提供呈淺黃色液體之所需產物(200mg，84%產率)。LC-MS(m/z)：522.9(MH+),0.787min。
步驟5：(S)-5-胺基-6-(4-((1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡嗪-2-甲酸：(S)-5-胺基-6-(4-((1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡嗪-2-甲酸乙酯(220mg，0.422mmol)及LiOH.H2O(142mg，3.38mmol)於MeOH(2ml)、THF(2mL)及水(2mL)中之混合物在RT下攪拌3小時。濃縮該混合物，向殘餘物中添加2ml水，接著在攪拌下添加3N HCl，直至最終pH為約4。所得混合物接著濃縮且進一步乾燥以提供呈淺黃色固體狀之粗產物。(208mg，0.422mmol，100%產率)。LC-MS(m/z)：494.9(MH+),0.653min。
步驟6：(S)-4-(3-胺基-6-(嗎啉-4-羰基)吡嗪-2-基)-N-(1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)-2-氟苯甲醯胺：向(S)-5-胺基-6-(4-((1-(3-溴-5-氟苯基)-2-羥基乙基)胺甲醯基)-3-氟苯基)吡嗪-2-甲酸(40mg，0.081mmol)、嗎啉(28.3mg，0.324mmol)、HOAt(33.1mg，0.243mmol)及EDC(46.6mg，0.243mmol)於DMF(0.5mL)中之混合物中添加DIEA(0.170mL，0.973mmol)。所得混合物在RT下攪拌隔夜。該混合物用EtOAc稀釋，用水(三次)及鹽水洗滌，乾燥，濃縮，提供呈淺黃色黏性液體之粗產物。粗產物溶解於1.5ml DMSO中，過濾，且藉由製備型HPLC來純化。(14mg，25.3%產率)。LC-MS(m/z)：563.9(MH+),0.707min。1H NMR(500MHz，乙腈-d3)δ ppm 3.56-3.99(m,13 H)5.06-5.23(m,1 H)5.78-6.13(m,2 H)7.22(d,J=8.20Hz,1 H)7.27-7.36(m,1 H)7.41-7.79(m,5 H)7.89-8.05(m,1 H)8.25-8.43(m,1 H)。
實例478a及478b 4-(3-胺基-6-((R)-6-側氧基哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺(實例478a)及4-(3-胺基-6-((S)-6-側氧基哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺(實例478b)。
1-(4-甲氧基苯甲基)哌啶-2,6-二酮： 戊二醯亞胺(5g，44.2mmol)懸浮於丙酮(體積：100mL)中且接著添加K2CO3(12.22g，88mmol)、Bu4NI(3.27g，8.84mmol)及4-甲氧基苯甲基氯(6.02mL，44.2mmol)。該混合物在室溫下攪拌隔夜且經矽藻土過濾且接著在真空中濃縮且殘餘物藉由急驟層析(0-50% EtOAc/庚烷)純化，提供8.99g呈無色固體狀之所需產物。LCMS(m/z)：(MH+),234.2,0.66min。
1-(4-甲氧基苯甲基)-3,4-二氫吡啶-2(1H)-酮：1-(4-甲氧基苯甲基)哌啶-2,6-二酮(8.99g，38.5mmol)溶解於甲苯(體積：128ml)中且冷卻至-78℃。逐滴添加三第二丁基硼氫化鋰(42.4mL，42.4mmol)且該混合物攪拌1小時。1小時之後，觀察到稠漿液連同沈澱物。將反應混 合物暫時拉到冷卻浴外部以均質化該混合物。接著一次性添加DMAP(0.047g，0.385mmol)且接著添加DIEA(38.4mL，220mmol)且接著添加TFAA(6.53mL，46.2mmol)。接著移除冷卻燒瓶且該混合物在室溫下攪拌2h且接著用水淬滅且產物用EtOAc萃取。經組合之有機層經乾燥(MgSO4)，過濾且在真空中濃縮，提供粗物質殘餘物，其藉由急驟層析來純化以提供7.66g呈黃色糖漿狀之所需產物。LCMS(m/z)：(MH+),234.2,0.73min。
5-碘-1-(4-甲氧基苯甲基)-3,4-二氫吡啶-2(1H)-酮：1-(4-甲氧基苯甲基)-3,4-二氫吡啶-2(1H)-酮(2g，9.21mmol)溶解於MeOH(90mL)中且冷卻至-78℃。緩慢添加ICl(13.81mL，13.81mmol)且該混合物攪拌1h且接著添加飽和Na2S2O3且攪拌該混合物，直至觀察到室溫。溶劑在真空中蒸發。殘餘物溶解於DCM中且用飽和Na2S2O3且接著用水洗滌且乾燥(MgSO4)，過濾且在真空中濃縮。殘餘物溶解於甲苯(40mL)中且用三氟乙酸(100uL)處理且直接加熱至145℃持續15min且接著冷卻至0℃且添加ET3N(5mL)。該混合物攪拌1h且在真空中濃縮且接著殘餘物藉由急驟層析(0-20% EtOAc/庚烷)純化，提供呈黏性糖漿狀之所需產物。LCMS(m/z)：(MH+),344.1,0.88min。
4-(3-胺基-6-(1-(4-甲氧基苯甲基)-6-側氧基-1,4,5,6-四氫吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯：5-碘-1-(4-甲氧基苯甲基)-3,4-二氫吡啶-2(1H)-酮(630mg，1.836mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(150mg，0.184mmol)、4-(3-胺基-6-溴吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(1028mg，2.75mmol)及Na2CO3(2754μl，5.51mmol)組合於燒瓶中且接著添加DME(體積：6120μl)。該混合物脫氣且用氮氣吹掃且接著最終在90℃下加熱2h，此時觀察到起始材料完全消耗。反應混合物用EtOAc及水稀釋且分離有機層且乾燥(MgSO4)，過濾且在真空中濃縮且殘餘物藉由急驟層析(0-60% EtOAc/DCM)純化，提供361mg呈黃色 固體狀之所需產物。LCMS(m/z)：(MH+),463.1,0.88min。
4-(3-胺基-6-(6-側氧基哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯：4-(3-胺基-6-(1-(4-甲氧基苯甲基)-6-側氧基-1,4,5,6-四氫吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(361mg，0.781mmol)溶解於MeOH(體積：7mL)中且接著添加Pd-C(400mg，3.76mmol)。該混合物抽真空且用氫氣吹掃三次且最終，該混合物在1atm氫氣下攪拌隔夜。次日早晨，獲得所需產物連同過度還原之胺基-吡嗪。該混合物經矽藻土過濾且濾液在真空中濃縮且殘餘物溶解於DCM中且在空氣中攪拌1天且接著濃縮且藉由急驟層析(0-50% DCM/EtOAc)純化，提供144mg呈黃色固體狀之所需產物。LCMS(m/z)：(MH+),465.1,0.81min。
4-(3-胺基-6-(6-側氧基哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸：4-(3-胺基-6-(6-側氧基哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸甲酯(144mg，0.310mmol)溶解於TFA(體積：3mL)中且在150℃下在微波中加熱30min。溶劑在真空中蒸發且殘餘物與甲苯共沸三次，提供粗脫苯甲基化內醯胺。此粗產物溶解於THF(體積：3mL，比率：3)及MeOH(體積：1.500mL，比率：1.5)中且向該混合物中添加溶解於水(體積：1.500mL，比率：1.5)中之LiOH(0.037g，1.550mmol)。該混合物在室溫下攪拌30min且在真空中濃縮且殘餘物用2mL(4.0N HCl)中和且溶劑蒸發。殘餘物與THF共沸一次且與甲苯共沸一次以提供粗酸，其無需任何進一步純化即用於下一步驟(假定定量產率)。LCMS(m/z)：(MH+),331.2,0.44min。
4-(3-胺基-6-(6-側氧基哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺：4-(3-胺基-6-(6-側氧基哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲酸(41.0mg，0.124mmol),DIEA(0.108mL，0.620mmol)及HATU(94mg，0.248mmol)組合於DMF(1.0mL)中且接著添加(S)-2-胺基-2-(3-氟-5-碘苯基)乙醇(39.4mg，0.124mmol)。該混合 物在室溫下攪拌1h且接著直接藉由逆相HPLC經受純化，提供呈TFA加合物之標題化合物。在凍乾時所獲得之固體溶解於MeOH中且通過含有鹼性碳酸鈉之矽石筒且在真空中濃縮濾液，提供28.5mg非對映異構體之混合物。殘餘物藉由對掌性SFC來純化以提供兩種非對映異構體：非對映異構體1(實例478a)：4-(3-胺基-6-((R)-6-側氧基哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺(8.8mg)。1H NMR(CD3OD)：7.88(s,1H),7.75(t,J=7.8Hz,1H),7.48-7.64(m,3H),7.34(d,J=7.4Hz,1H),7.11(d,J=9.8Hz,1H),5.05(t,J=5.7Hz,1H),3.67-3.83(m,2H),3.43(d,J=7.8Hz,2H),3.00-3.15(m,1H),2.28-2.46(m,2H),1.88-2.16(m,2H)；LCMS(m/z)：(MH+),594.1,0.71min。
非對映異構體2(實例478b)：4-(3-胺基-6-((R)-6-側氧基哌啶-3-基)吡嗪-2-基)-2-氟-N-((S)-1-(3-氟-5-碘苯基)-2-羥基乙基)苯甲醯胺(8.2mg)1H NMR(CD3OD)：7.89(s,1H),7.75(t,J=7.6Hz,1H),7.50-7.65(m,3H),7.35(d,J=7.8Hz,1H),7.12(d,J=9.8Hz,1H),5.06(t,J=5.7Hz,1H),3.65-3.89(m,2H),3.37-3.53(m,2H),2.96-3.16(m,1H),2.31-2.59(m,2H),1.88-2.20(m,2H)；LCMS(m/z)：(MH+),594.1,0.71min。
生物活性
ERK1及ERK2之抑制作用使用以下方法來量測。
經活化之ERK2(20pM)激酶分析：
針對經活化ERK2之化合物效能使用量測生物素化ERKtide肽基質([生物素]-AHA-K-R-E-L-V-E-P-L-T-P-S-G-E-A-P-N-Q-A-L-L-R-[NH2]，源於EGF受體之肽序列：SEQ ID NO：1)之ERK2催化磷酸化作用的激酶分析來測定。該分析在20mM HEPES[pH 7.5]、5mM MgCl2、1 mM DTT、0.01% Tween-20、0.05% BSA中使用0.02nM ERK2、400nM ERKtide肽及35μM ATP(所有濃度均為反應中之最終濃度)以10.25μL總體積進行。化合物之16點、半log稀釋系列(41x最終濃度)用於產生IC50曲線。化合物稀釋系列在100% DMSO中製備。在環境溫度下，ERK2用化合物預培育30分鐘。反應藉由添加ERKtide肽及ATP之基質混合液而起始且使其在環境溫度下繼續進行4小時。反應藉由添加10μL 2x停止緩衝液而終止，該停止緩衝液由100mM Tris-Cl[pH 7.5]、25mM EDTA、0.01% Tween 20、20μg/mL AlphaScreen蛋白A受體珠粒、20μg/mL抗生蛋白鏈菌素供體珠粒(PerkinElmer,Waltham,MA)及1：1000稀釋phospho-EGF受體(Thr669)抗體(目錄號8808，Cell Signaling Technology,Danvers,MA)組成。在暗處隔夜培育之後，在EnVision Multilabel板式讀取器(PerkinElmer,Waltham,MA)上對終止之反應讀數，其中激發及發射波長分別設定為680nm及570nm。IC50值使用四參數擬合來測定。
以下分析條件(ERK2 New)用於下表中之一些化合物，且提供實質上類似於上述分析之IC50，IC50為約0.1μM或0.1μM以上。當達到此分析之限制時，使用上述分析。
針對經活化ERK2之化合物效能使用量測生物素化ERKtide肽基質([生物素]-AHA-K-R-E-L-V-E-P-L-T-P-S-G-E-A-P-N-Q-A-L-L-R-[NH2]，源於EGF受體之肽序列：SEQ ID NO：1)之ERK2催化磷酸化作用的激酶分析來測定。該分析在50mM HEPES[pH 7.5]、5mM MgCl2、1mM DTT、0.01% Tween-20、0.05% BSA中使用0.25nM ERK2、200nM ERKtide肽及35μM ATP(所有濃度均為反應中之最終濃度)以10.25μL總體積進行。化合物之16點、半log稀釋系列(41x最終濃度)用於產生IC50曲線。化合物稀釋系列在100% DMSO中製備。在環境溫度下，ERK2用化合物預培育30分鐘。反應藉由添加ERKtide肽及ATP之 基質混合液而起始且使其在環境溫度下繼續進行2-3小時。反應藉由添加10μL 2x停止緩衝液而終止，該停止緩衝液由100mM Tris-Cl[pH 7.5]、25mM EDTA、0.01% Tween 20、10μg/mL AlphaScreen蛋白A受體珠粒、10μg/mL抗生蛋白鏈菌素供體珠粒(PerkinElmer,Waltham,MA)及1.4μg/mL phospho-EGF受體(Thr669)抗體(目錄號3056，Cell Signaling Technology,Danvers,MA)組成。在暗處隔夜培育之後，在EnVision Multilabel板式讀取器(PerkinElmer,Waltham,MA)上對終止之反應讀數，其中激發及發射波長分別設定為680nm及570nm。IC50值使用四參數擬合來測定。
經活化之ERK1激酶分析：
針對經活化ERK1之化合物效能使用量測生物素化ERKtide肽基質([生物素]-AHA-K-R-E-L-V-E-P-L-T-P-S-G-E-A-P-N-Q-A-L-L-R-[NH2]，源於EGF受體之肽序列：SEQ ID NO：1)之ERK1催化磷酸化作用的激酶分析來測定。該分析在20mM HEPES[pH 7.5]、5mM MgCl2、1mM DTT、0.01% Tween-20、0.05% BSA中使用0.2nM ERK1、200nM ERKtide肽及45μM ATP(所有濃度均為反應中之最終濃度)以10.25μL總體積進行。化合物之16點、半log稀釋系列(41x最終濃度)用於產生IC50曲線。化合物稀釋系列在100% DMSO中製備。在環境溫度下，ERK1用化合物預培育30分鐘。反應藉由添加ERKtide肽及ATP之基質混合液而起始且使其在環境溫度下繼續進行4小時。反應藉由添加10μL 2x停止緩衝液而終止，該停止緩衝液由100mM Tris-Cl[pH7.5]、25mM EDTA、0.01% Tween 20、10μg/mL AlphaScreen蛋白A受體珠粒、10μg/mL抗生蛋白鏈菌素供體珠粒(PerkinElmer,Waltham,MA)及1.4μg/mL phospho-EGF受體(Thr669)抗體(目錄號3056，Cell Signaling Technology,Danvers,MA)組成。在暗處隔夜培育之後，在EnVision Multilabel板式讀取器(PerkinElmer,Waltham,MA)上對終止 之反應讀數，其中激發及發射波長分別設定為680nm及570nm。IC50值使用四參數擬合來測定。
所有IC50均以科學記數法提供，其中『E』指示冪10；例如1.63E-03表示1.63 x 10-3或0.00163。

Claims (20)

  1. 一種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，
    Figure TWI663153B_C0001
    其中：R1為視情況經取代之選自以下之基團：C3-8環烷基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子作為環成員的5-8員雜環基、苯基、-SO2-苯基、-C(O)-苯基、-C(R8)2-苯基及5-6員雜芳基環，其中該雜環基及雜芳基含有1-2個選自N、O及S之雜原子作為環成員，且其中R1之視情況之取代基為1-3個獨立地選自D、鹵基、羥基、胺基、-N(R8)2、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-S(C1-4烷基)、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子的3-6員雜環基、側氧基(oxo)(除在芳環上)、COOR8、CON(R8)2、-NR8-C(O)R8、-NR8-C(O)OR8-SO2R8、-NR8SO2R8及SO2N(R8)2之基團，其中各R8獨立地為H或C1-4烷基；L為
    Figure TWI663153B_C0002
    其中R"為甲基或乙基，且視情況經氟、胺基、羥基、甲基胺基、乙基胺基、二甲基胺基、-OP(O)(OH)2、甲氧基或乙氧基取代；X及Y獨立地選自H、D、鹵基、CN、胺基、羥基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4烷氧基及C1-4鹵烷氧基；R2為H、C1-4烷基或芳基-C1-2烷基-，其中該芳基及C1-4烷基視情況經鹵基、CN、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C3-6環烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷氧基或C1-4烷基磺醯基取代；或R2及L鍵聯在一起以形成選自嗎啉、哌啶、硫嗎啉、哌嗪及吡咯啶之雜環基團，該雜環基團連接至R1且亦視情況經一或兩個獨立地選自C1-4烷基、C1-4烷氧基、側氧基、CN、COOR7、CON(R7)2及-SO2R7之基團取代，其中各R7獨立地為H或C1-4烷基；Z為N或CR4；R4為H、D、鹵基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基或C1-4烷氧基；R5係選自-C(O)-R5a及R5a；其中R5a為視情況經取代之C3-8環烷基、C3-8環烯基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子之飽和或不飽和3-8員雜環、苯基或含有1-3個選自N、O及S之雜原子之5-6員雜芳基環，其中R5之視情況之取代基為1-4個獨立地選自D、鹵基、羥基、胺基、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4鹵烷氧基、C3-6環烷基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子的3-6員雜環基、側氧基(除在芳環上)、-COOR9、-C(O)R9、CON(R9)2、-NR9C(O)R9、-NR9CO2R9、-SO2R9、-NR9SO2R9及-SO2N(R9)2之基團，其中各R9獨立地為H或視情況經1-3個獨立地選自D、鹵基、OH、NH2、NHMe及NMe2之基團取代的C1-4烷基；且在R5之相同或相鄰碳原子上的兩個取代基可視情況一起形成5-6員環，其可為飽和或芳族且含有1-2個選自N、O及S之雜原子且可視情況經1-2個獨立地選自D、Me、鹵基、OH、側氧基、O(C1-4烷基)、NH2、C1-4烷基胺基、二(C1-4烷基)胺基之基團取代；及R6為H、D、鹵基、C1-4烷基或C1-4鹵烷基。
  2. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Z為N。
  3. 如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R2為H或Me。
  4. 如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R6為H。
  5. 如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R5係選自-C(O)-R5a及R5a；其中R5a係選自C3-8環烷基、含有1-2個選自N、O及S之雜原子之5-8員雜環基、苯基及5-6員雜芳基，且視情況經1-3個獨立地選自D、鹵基、CN、羥基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4鹵烷氧基、-SO2R'、-NR'-C(O)-R'及-SO2NR'2之基團取代，其中各R'獨立地為H或C1-4烷基。
  6. 如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R5係選自-C(O)-R5a及R5a；其中R5a係選自環丁基、環戊基、環己基、環己烯基、四氫哌喃、二氫哌喃、四氫呋喃、氧雜環丁烷、氮雜環丁烷、吡咯啶、哌啶、哌嗪、嗎啉、四氫硫哌喃(硫雜環己烷)及四氫硫呋喃(硫雜環戊烷)，各視情況經1-3個獨立地選自鹵基、D、CN、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4羥基烷基、C1-4鹵烷氧基、側氧基、COOR9、CON(R9)2、-NHC(O)R9、-NHCOOR9、-NHSO2R9及-SO2R9之基團取代，其中各R9獨立地為H或C1-4烷基。
  7. 如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1為苯基且視情況經1至3個獨立地選自鹵基、D、CN、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、-SO2R'、-N(R')2、-NR'-C(O)-R'及-SO2NR'2之基團取代，其中各R'獨立地為H或C1-4烷基。
  8. 如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Y為H、甲基或鹵基。
  9. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物具有式IB：
    Figure TWI663153B_C0003
    其中R5為4-7員環醚或C5-6環烷基，且R5可經多達4個獨立地選自D、F、Cl、CN、胺基、-CH2OH、-NHC(O)Me、-NHCOOMe、-NHSO2Me、Me、OMe、OH、側氧基、Et、iPr、OEt及CF3之基團取代；Y為H、F、Cl或Me；R10為-CH2-R*，其中R*為H、-OH、F、-NH2、-NHMe、-OP(O)(OH)2、-NMe2或-OMe；及R1為苯基，視情況經1-2個獨立地選自鹵基、CN、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4鹵烷基、C1-4鹵烷氧基、COOR8、CON(R8)2及-SO2R8之基團取代，其中各R8獨立地為H或C1-4烷基。
  10. 如請求項1、2或9之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R5為經1-3個獨立地選自D、F、Cl、CN、胺基、Me、NHSO2Me、NHCOMe、OMe、OH、Et、CN、-CH2OH及CF3之基團取代的環己基。
  11. 如請求項1、2或9之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1為經0、1或2個獨立地選自F、Cl、Br、I、SMe、SO2Me及CH3之基團取代的苯基。
  12. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係選自由以下組成之群：
    Figure TWI663153B_C0004
    Figure TWI663153B_C0005
    Figure TWI663153B_C0006
    Figure TWI663153B_C0007
    Figure TWI663153B_C0008
    Figure TWI663153B_C0009
    Figure TWI663153B_C0010
    Figure TWI663153B_C0011
    Figure TWI663153B_C0012
    Figure TWI663153B_C0013
    Figure TWI663153B_C0014
    Figure TWI663153B_C0015
    Figure TWI663153B_C0016
    Figure TWI663153B_C0017
    Figure TWI663153B_C0018
    Figure TWI663153B_C0019
    Figure TWI663153B_C0020
    Figure TWI663153B_C0021
    Figure TWI663153B_C0022
    Figure TWI663153B_C0023
    Figure TWI663153B_C0024
    Figure TWI663153B_C0025
    Figure TWI663153B_C0026
    Figure TWI663153B_C0027
    Figure TWI663153B_C0028
    Figure TWI663153B_C0029
    Figure TWI663153B_C0030
    Figure TWI663153B_C0031
    Figure TWI663153B_C0032
    Figure TWI663153B_C0033
    Figure TWI663153B_C0034
    Figure TWI663153B_C0035
    Figure TWI663153B_C0036
    Figure TWI663153B_C0037
    Figure TWI663153B_C0038
    Figure TWI663153B_C0039
    Figure TWI663153B_C0040
    Figure TWI663153B_C0041
    Figure TWI663153B_C0042
    Figure TWI663153B_C0043
    Figure TWI663153B_C0044
  13. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物係：
    Figure TWI663153B_C0045
  14. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物係：
    Figure TWI663153B_C0046
  15. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物係：
    Figure TWI663153B_C0047
  16. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，該化合物係：
    Figure TWI663153B_C0048
  17. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至16中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其與至少一種醫藥學上可接受之賦形劑混合。
  18. 如請求項17之醫藥組合物，其進一步包含治療輔劑。
  19. 一種如請求項1至16中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如請求項17或18之醫藥組合物的用途，其用於製造供治療癌症之藥劑。
  20. 如請求項19之用途，其中該癌症係選自腺瘤、膀胱癌、腦癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、結腸癌、表皮癌、濾胞癌、泌尿生殖癌、神經膠母細胞瘤、頭頸癌、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、非霍奇金氏淋巴瘤、肝癌、腎癌、肺癌(諸如小細胞或非小細胞肺癌)、白血病(諸如AML或CML)、多發性骨髓瘤、淋巴病症、皮膚癌(包括黑色素瘤)、神經母細胞瘤、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、直腸癌、肉瘤、睾丸癌及甲狀腺癌。
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