CN105475137B - 一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法 - Google Patents

一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105475137B
CN105475137B CN201510941910.4A CN201510941910A CN105475137B CN 105475137 B CN105475137 B CN 105475137B CN 201510941910 A CN201510941910 A CN 201510941910A CN 105475137 B CN105475137 B CN 105475137B
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
lotus
culture medium
taken
concentration
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510941910.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105475137A (zh
Inventor
唐宇力
诸葛菲
张海珍
钱萍
范丽琨
周虹
杨丽丽
臧巧路
林新春
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Gardens Cultural Relics Bureau Lingyin Management Department (hangzhou Flower Nursery)
Zhejiang A&F University ZAFU
Original Assignee
Hangzhou Gardens Cultural Relics Bureau Lingyin Management Department (hangzhou Flower Nursery)
Zhejiang A&F University ZAFU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Gardens Cultural Relics Bureau Lingyin Management Department (hangzhou Flower Nursery), Zhejiang A&F University ZAFU filed Critical Hangzhou Gardens Cultural Relics Bureau Lingyin Management Department (hangzhou Flower Nursery)
Priority to CN201510941910.4A priority Critical patent/CN105475137B/zh
Publication of CN105475137A publication Critical patent/CN105475137A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105475137B publication Critical patent/CN105475137B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法，属于植物组织培养技术领域。其包括以下步骤：取完全成熟种子，取成熟胚为外植体，经清洗和消毒后取出胚，并接种到已经灭好菌的pH值为5.7的MS固体培养基上，在温度为25±2℃，光周期16/8h，光强2400lux的培养室中培养；初代培养4周后，选生长状况良好未褐化的无菌苗转入增殖培养基中进行培养，增殖培养基以MS培养基为基础培养基，添加浓度为0.3～3mg/L的6‑BA，浓度为0.3～1mg/L的NAA，浓度为30g/L的蔗糖和0.3%的琼脂，pH值5.7。本发明在增殖培养过程中能做到快速获得芽增殖的同时诱导生根获得大量荷花组培苗，缩短了扩繁时间，降低成本。

Description

一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法。
背景技术
荷花（Nelumbo nucifera）属睡莲科莲属多年水生草本花卉，又名莲花、水芙蓉等，其花大色艳，观赏价值极高，分布广泛，为人们所喜爱，是我国十大名花之一，在环境美化、药用、食用、以及外贸出口等方面都有很大的应用和开发潜力。目前，我国荷花仍采用分藕繁殖和大面积池栽或缸栽的传统繁殖方法。然而，用传统方法繁育，荷花的分藕繁殖系数较低（1：10），用种量大，生产成本高，而且长期用种藕进行无性繁殖，会造成种性的退化和病毒的积累，加上一些珍稀品种生长势弱，种质资源保存困难，这些问题都在一定程度上阻碍了荷花种植业的发展。采用荷花组织培养技术在无菌的条件下以荷花成熟胚、未成熟胚、地下茎的茎尖为外植体建立无菌体系，再对它进行增殖生根培养，进而得到大量荷花无菌苗，对无菌苗进行驯化移栽能很好的解决在分藕繁殖中存在的成本高、种性退化和病毒积累等问题。为了寻找方便、快捷和低成本的快速增殖方法，前人已经做了较多研究，但目前，荷花组织培养所用的培养基大多数是单一的增殖培养基或生根培养基，都是进行先增殖后生根，这种增殖方式所花费的时间较长，成本较高，不能很好的达到快速繁殖的目的。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法的技术方案。
所述的一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法，其特征在于包括以下步骤：
1）成熟胚莲子芽的诱导培养
取完全成熟种子，取成熟胚为外植体，经清洗和消毒后取出胚，并接种到已经灭好菌的pH值为5.7的MS固体培养基上，在温度为25±2℃，光周期16/8h，光强2400lux的培养室中培养；
2）增殖培养
初代培养4周后，选生长状况良好未褐化的无菌苗转入增殖培养基中，增殖培养基以MS培养基为基础培养基，添加浓度为0.3～3mg/L的6-BA，浓度为0.3～1mg/L的NAA，浓度为30g/L的蔗糖和0.3%的琼脂，pH值5.7，在温度25±2℃，光周期16/8h，光强2400lux的培养室中培养。
所述的一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法，其特征在于所述的步骤1）中清洗和消毒具体为：用自来水冲洗干净后用浓硫酸酸蚀4h，流水冲洗0.5h后剥去外壳，浸泡15～18.5h，将浸泡过的莲子用1%的次氯酸钠溶液消毒10min，对消毒完的莲子用无菌水冲洗5遍。
所述的一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法，其特征在于所述的步骤2）中增殖培养基为MS培养基+0.3 mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA。
采用本发明的有益效果是：本发明通过初代培养、增殖、生根，实现了荷花的高效再生。本发明通过特殊增殖培养基的使用，在增殖培养过程中能做到快速获得芽增殖的同时诱导生根获得大量荷花组培苗，缩短了扩繁时间，降低成本。这些组培苗可用于荷花的栽培繁殖，成本低，具有很高的经济价值。现有技术中荷花组培苗增殖的研究中都是先增殖后生根，而本发明一步完成增殖与生根，节省了培养基更换的步骤，实施步骤更简单易行，实施条件更宽松，节约了时间和成本，且效果非常显著。
具体实施方式
为了使本发明更加容易理解，下面结合具体实施案例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1：一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法
1）成熟胚莲子芽的诱导培养
取完全成熟种子，取成熟胚为外植体，用自来水冲洗干净后用浓硫酸酸蚀4h，流水冲洗0.5h后剥去外壳，浸泡15～18.5h，将浸泡过的莲子用1%的次氯酸钠溶液消毒10min，对消毒完的莲子用无菌水冲洗5遍从中取出胚，并接种到已经灭好菌的pH值为5.7的MS（Murashige and Skoog）固体培养基上，在温度为25±2℃，光周期16/8h，光强2400lux的培养室中培养；
2）增殖培养
初代培养4周后，选生长状况良好未褐化的无菌苗转入增殖培养基中，增殖培养基以MS培养基为基础培养基，添加浓度为0.3～3mg/L的6-BA即6-苄基腺嘌呤，浓度为0.3～1mg/L的NAA即萘乙酸，浓度为30g/L的蔗糖和0.3%的琼脂（gelrite)，pH值5.7，在温度25±2℃，光周期16/8h，光强2400lux的培养室中培养。
试验例1
在MS基础培养基中加入不同浓度的BA、NAA配成6种不同培养基。通过实施例1的方法进行培养，增殖培养4周后统计芽增殖系数、根数、生根率和平均根长，统计结果如表1所示。由表1可知，芽增殖系数最高的培养基为培养基4（MS+3mg/LBA+0.3mg/LNAA)，增殖系数为3.15，与其他培养基差异显著；从生根情况来看，培养基1（MS+3mg/LBA+0.3mg/LNAA）生根率最高为95%；根数最多的培养基为培养基2（MS+0.3mg/LBA+1mg/LNAA)为5.15条，与培养基1（MS+3mg/LBA+0.3mg/LNAA）差异不显著，与其他培养基差异显著；平均根长最长的培养基为培养基1（MS+0.3mg/LBA+0.3mg/LNAA）为0.395cm，与培养基2（MS+0.3mg/LBA+1mg/LNAA）差异不显著但与其他培养基差异显著。
如果只考虑芽增殖，培养基4：MS+3mg/LBA+0.3mg/LNAA为最适培养基，如果只考虑生根，培养基1、2都适合荷花组培苗的根的诱导。综合考虑芽快速增殖与生根，我们可以得出，培养基1：MS+0.3mg/LBA+0.3mg/LNAA最为适合。
表1 不同激素水平的培养基对根、芽产生的影响
注：表中芽增殖系数表示芽数平均值±标准误；多重比较采用Duncan法，同一栏中不同字母表示存在显著性差异（P<0.05）。

Claims (1)

1.一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法，其特征在于包括以下步骤：
1）成熟胚莲子芽的诱导培养
取完全成熟种子，取成熟胚为外植体，用自来水冲洗干净后用浓硫酸酸蚀4h，流水冲洗0.5h后剥去外壳，浸泡15～18.5h，将浸泡过的莲子用1%的次氯酸钠溶液消毒10min，对消毒完的莲子用无菌水冲洗5遍，经清洗和消毒后取出胚，并接种到已经灭好菌的pH值为5.7的MS固体培养基上，在温度为25±2℃，光周期16/8h，光强2400lux的培养室中培养；
2）增殖培养
初代培养4周后，选生长状况良好未褐化的无菌苗转入增殖培养基中，增殖培养基以MS培养基为基础培养基，添加浓度为0.3mg/L的6-BA，浓度为0.3mg/L的NAA，浓度为30g/L的蔗糖和0.3%的琼脂，pH值5.7，在温度25±2℃，光周期16/8h，光强2400lux的培养室中培养。
CN201510941910.4A 2015-12-16 2015-12-16 一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法 Active CN105475137B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510941910.4A CN105475137B (zh) 2015-12-16 2015-12-16 一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510941910.4A CN105475137B (zh) 2015-12-16 2015-12-16 一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105475137A CN105475137A (zh) 2016-04-13
CN105475137B true CN105475137B (zh) 2017-09-19

Family

ID=55662720

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510941910.4A Active CN105475137B (zh) 2015-12-16 2015-12-16 一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105475137B (zh)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108207633B (zh) * 2018-02-07 2021-07-16 南京农业大学 一种荷花无菌苗获取的构建方法
CN108739370B (zh) * 2018-03-30 2020-12-15 上海辰山植物园 一种利用成熟莲胚进行快繁的方法
CN108541591A (zh) * 2018-05-14 2018-09-18 山东组培农业发展有限公司 一种莲藕脱毒组织培养方法
CN109362563B (zh) * 2018-10-31 2021-09-14 杭州晨航环境工程有限公司 路易斯安娜鸢尾红瑞特的快速繁殖方法
CN111557242B (zh) * 2020-05-26 2022-10-04 中国科学院武汉植物园 一种莲组培苗培养与快速扩繁的方法
CN112314437B (zh) * 2020-11-05 2022-06-07 苏州市农业科学院 一种荷花组织培养的初代培养方法
CN114467760B (zh) * 2022-04-15 2022-07-26 三亚南京农业大学研究院 一种睡莲成熟胚愈伤组织诱导及增殖的方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0466032A (ja) * 1990-07-04 1992-03-02 Mamoru Yamabe ウイルスフリー化された蓮根苗の順化、大量製造方法
CN102067783B (zh) * 2010-11-19 2012-06-20 武汉市蔬菜科学研究所 一种莲藕的微型种藕繁殖方法
CN102640705B (zh) * 2012-04-12 2013-04-10 上海孙桥现代农业联合发展有限公司 一种水生植物莲花的快速繁殖方法
CN103461134A (zh) * 2013-09-22 2013-12-25 镇江瑞繁农艺有限公司 睡莲实生无菌苗的培育方法
CN104823844A (zh) * 2015-01-27 2015-08-12 江苏省中国科学院植物研究所 一种莲属植物的组织培养方法
CN104813939B (zh) * 2015-02-05 2017-01-25 南京农业大学 一种荷花再生体系的构建方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN105475137A (zh) 2016-04-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105475137B (zh) 一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法
WO2015003408A1 (zh) 一种石斛兰试管内杂交育种方法
CN103609224B (zh) 一种路易斯安娜鸢尾杂交种子萌发的方法
CN105340747A (zh) 一种甘草无性快速繁殖方法
CN111758559B (zh) 一种蝴蝶兰与钻喙兰远缘杂交种子无菌播种及其育苗的方法
CN103461134A (zh) 睡莲实生无菌苗的培育方法
CN103960133A (zh) 一种食用玫瑰组培快繁的方法
CN102232360B (zh) 大水榕、小水榕、尖叶榕、燕尾榕离体快繁体系构建方法
CN103461118A (zh) 一种金线莲种苗的工厂化生产方法
CN105265316B (zh) 一种葱属植物鳞茎盘快速繁殖方法
CN105918128B (zh) 一种美国红枫快速繁殖的方法
CN103583357B (zh) 一种生石花无菌播种及再生体系建立的方法
CN103891613A (zh) 一种绿风藤茶品种复壮的快速繁殖方法
Iqbal et al. Optimization of in vitro micropropagation protocol for banana (Musa sapientum L.) under different hormonal concentrations and growth media.
CN106106147B (zh) 一种荷花未成熟子叶体细胞胚胎发生途径的再生方法
CN102138532A (zh) 太和贡椿组织培养繁殖种苗技术
CN1934933A (zh) 何首乌的组织培养快繁方法
CN105309312B (zh) 一种中华石蝴蝶组织培养快速繁殖的方法
CN103548695A (zh) 一种岩黄连组织培养快速繁殖方法
CN104488718B (zh) 一种黄花马铃苣苔的快速繁殖方法
CN105409773A (zh) 一种乌羽玉无菌播种及再生体系建立的方法
CN104604686B (zh) 一种金边虎尾兰离体培养一步成苗培养方法
CN110150146B (zh) 一种血叶兰组培繁殖方法
KR101971978B1 (ko) 체세포배 발생 및 식물의 재분화 기술을 이용한 모과나무의 무성번식 방법
CN105104197A (zh) 一种滇桂石斛组织培养繁育方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant