CN103548695A - 一种岩黄连组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
一种岩黄连的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：（1）取岩黄连侧芽作为外植体进行消毒；（2）将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到丛生芽；（3）将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；（4）将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗；（5）取完整的带根苗进行炼苗后移植于沙土壤生长一个半月，再移栽至大田。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量岩黄连的优质种苗，有效解决了岩黄连的规模化育苗问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种岩黄连组织培养快速繁殖方法。
背景技术
岩黄连(Corydalis saxicola Bunting)亦名石生黄堇，为紫堇科紫堇属多年生草本植物。全草含脱氢卡维丁(岩黄连碱)等活性成分；具有显著的抗菌、消炎、镇痛和强安定作用，并观察到有抑制肿瘤细胞作用；主治疮疖肿毒、肝炎、肝硬化、肝癌等症。岩黄连植物分布局限于石灰岩山区，属石山特有种。由于生境条件恶劣，其自然繁殖率很低，种群发展困难，资源蕴藏量十分有限。而岩黄连药材随着人们认识的不断提高，用量逐年增加。在桂西北山区，它已成为当地民众用于消炎止痛、拔毒、治疗疥疮肿毒以及治疗肝炎、肝硬化等疾病的常用中草药；岩黄连总生物碱注射剂和片剂等中药制剂和产品也已由相关单位研制出来，并批量投产。多年来由于人们大量采挖和收购，导致了野生资源的供不应求，野生岩黄连资源濒临枯竭。
在，岩黄连主要依靠种子进行繁育，但种子发芽率低，生产上难以实现大面积栽培。
发明内容
为了解决岩黄连在自然条件下种子发芽率低，生产上难以实现大面积栽培的问题，本发明提供一种岩黄连组织培养快速繁殖方法，采用生物技术组织培养技术，能够快速有效快速地提高岩黄连种苗的繁殖速度和质量，实现岩黄连优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种岩黄连组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
（1）外植体的选择与消毒：取岩黄连侧芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5-15min、线状自来水冲洗10-20min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
（2）侧芽分化获得丛生芽快速繁殖培养：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养30天，侧芽分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.1-0.5mg/L的NAA、0.1-0.5mg/L的KT、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，
（3）丛生芽壮苗培养：将步骤（2）中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.1-0.5mg/L的IAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
（4）健壮植株生根培养：将步骤（3）中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到带根的完整植株，其中MS生根培养基中含0.5-1.5mg/L的IAA、0.5-1.5mg/L的IBA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
（5）炼苗与移栽：步骤（4）获得带根的完整植株后，在室温为25°的室内打开瓶盖，炼苗2-4天，洗净根部培养基，立即移栽到通风良好且弱光的沙土壤中，在沙土壤中生长一个半月后移栽大田。移栽后一个星期内，每天早8点到晚6点喷雾3-5次，每次10min，此后每天早8点、晚6点各喷雾1次，每次10min；移栽时的温度条件为20-28℃，相对湿度75-80%，遮阳率为75%。
本发明的突出优点在于：
（1）通过生物技术对岩黄连进行组织培养快速繁殖，在短时间内培育出大量可供大田栽培的岩黄连幼苗，显著提高了岩黄连种苗的繁殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
（2）在MS繁殖培养基中添加0.5-1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA和0.1-0.5mg/L的激动素KT可促进丛生芽的分化；添加浓度为0.1-0.5mg/L的生长激素萘乙酸NAA可促进丛生芽的生长；
在MS壮苗培养基中添加浓度为1.0mg/L的6-BA和0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA可促进丛生芽叶片的展开；
在1/2MS生根培养基上组合使用浓度为1.0mg/L的吲哚丁酸IBA和0.1-0.5mg/L的生长素IAA，可获得带根的完整植株，这些植株经炼苗后可直接移栽沙床。
（3）采用本发明所述的培养方法，得到的单芽增殖系数达到5-8倍，获得的组培苗生根率在95%以上，每株平均带3-4个根，根长为3-5厘米，移栽沙床成活率在98%以上；快速、便捷、高效地进行岩黄连组织培养，实现岩黄连组培种苗的规模化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
本发明所述的岩黄连组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
（1）外植体的选择与消毒：取岩黄连侧芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5-15min、线状自来水冲洗10-20min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
（2）侧芽分化获得丛生芽快速繁殖：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12h/d的条件下培养30天，侧芽分化后获得大量丛生芽，其中MS培养基中添加不同浓度的6-BA、NAA和KT（表1），30g/L蔗糖和4.0g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，数据分析发现，6-BA对岩黄连丛生芽增殖倍率具有极显著影响，NAA对岩黄连丛生芽增殖倍率具有显著影响，根据繁殖倍率指标确定的最适培养基激素浓度为1.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA和0.2mg/L的KT；
表1 不同激素对岩黄连组织培养快速繁殖效果的影响
注：芽增殖倍数=（30天后芽数－接种时芽数）/接种时芽数
（3）丛生芽壮苗培养：将步骤（3）中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中培养30天得到健壮植株，培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为12-14小时/天；其中MS壮苗培养基中分别含1.0mg/L的6-BA和不同浓度的IAA（表2）、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。观察发现，壮苗培养基中IAA浓度增加，岩黄连植株的高度和分枝数均增加，而且经过壮苗后得到的植株叶片舒展，适合进行生根培养；
表2 不同激素水平对岩黄连丛生芽壮苗效果的影响
（4）试管苗生根培养：将步骤（4）中得到的丛生芽置于1/2MS生根培养基中培养20天得到带根的完整植株，培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为12-14小时/天；其中MS生根培养基中分别含1.0mg/L的IBA和不同浓度的IAA（表3）、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；观察发现，培养基中IAA浓度增加，组培苗的生根率也增加；培养基中添加1.0mg/L的IBA和0.5mg/L的IAA生根效果最好，生根率达98.8%；
表3 不同激素水平对岩黄连组培苗生根效果的影响
（5）炼苗与移栽：获得带根的完整植株后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到通风良好且弱光的沙土壤中，在沙土壤中生长一个半月后移栽大田。移栽后一个星期内，每天早8点到晚6点喷雾3-5次，每次8-10min，此后每天早8点、晚6点各喷雾1次，每次10min；移栽时温度条件为18-28℃，相对湿度75-80%，遮阳率75%。
Claims (1)
1.一种岩黄连组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
（1）外植体的选择与消毒：取岩黄连侧芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5-15min，线状自来水冲洗10-20min，添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min，无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
（2）侧芽分化获得丛生芽快速繁殖培养：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养30天，侧芽分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.1-0.5mg/L的NAA、0.1-0.5mg/L的KT、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
（3）丛生芽壮苗培养：将步骤（2）中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.1-0.5mg/L的IAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
（4）健壮植株生根培养：将步骤（3）中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-26℃，光照强度1400-2000lux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到带根的完整植株，其中MS生根培养基中含0.5-1.5mg/L的IAA、0.5-1.5mg/L的IBA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
（5）炼苗与移栽：步骤（4）获得带根的完整植株后，在室温为25°的室内打开瓶盖，炼苗2-4天，洗净根部培养基，立即移栽到通风良好且弱光沙土壤中，在沙土壤中生长一个半月后移栽大田。
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2013
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