CN105494098A - 一种快速繁殖金铁锁种苗的方法 - Google Patents

一种快速繁殖金铁锁种苗的方法 Download PDF

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    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01HNEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008Methods for regeneration to complete plants

Abstract

本发明提供了一种快速繁殖金铁锁种苗的方法,包括种籽处理、原球茎诱导、原球茎增殖培养、丛生芽诱导、丛生芽增殖培养、壮苗培养,其特征是:金铁锁种籽消毒处理后接种到原球茎诱导培养基培养,形成直径2~3mm的原球茎后,原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中培养,获得大量的直径2~3mm的原球茎,原球茎转接到丛生芽诱导培养基中培养,获得大量的长度1~2mm的从生芽,丛生芽转接到增殖培养基中培养,获得大量的长度为10~20mm的丛生芽,分成单芽转接入壮苗培养基上培养,获得大量的长度为80~100mm的脱毒金铁锁种苗。使用本发明繁殖金铁锁种苗育苗周期短、繁殖系数高、种苗质量好。

Description

一种快速繁殖金铁锁种苗的方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种快速繁殖金铁锁种苗的方法,特别涉及一种用金铁锁种籽快速繁殖金铁锁种苗的方法。
背景技术
[0002]金铁锁(Psammosi Iene tunicoi des ff.C.ffu etc.y.wu),又名独定子、娱蚁七、对叶七等、为石竹科金铁锁属植物,是我国西南地区特有的药用植物、金铁锁主要以根入药、临床上常用于治疗类风湿性关节炎等病,金铁锁主要化学成份是三萜、三萜旨苷、环肽以及内酰胺。药理试验表明,金铁锁总旨苷镇痛和抗炎效果明显。过去金铁锁主要是野生繁殖的,但近年来由于金铁锁的需求不断增加,野生植物资源急剧下降,已成为珍稀濒危物种,在《中国植物红皮书》中已被列为国家二级保护植物。
[0003]为了满足金铁锁的需求,近年来人们开始采用人工栽培方法种植金铁锁。但常规种子育苗方法一是育苗周期长,二是繁殖系数低,导致生产成本高,发展速度慢。为了解决常规种子育苗存在的问题,有的开始研究用嫩茎组织培养,如中国专利申请CN104255489A公开了 “金铁锁带腋芽嫩茎无性快速繁殖技术方法”,但嫩茎组织带有内生菌,组织培养时内生菌将造成组培苗的污染,使成苗率低并且种苗质量差。
发明内容
[0004]本发明的目的是针对上述不足之处,提供一种育苗周期短、繁殖系数高、种苗质量好的金铁锁种苗的繁殖方法。
[0005]本发明是这样实现的:包括种籽处理、原球茎诱导、原球茎增殖培养、丛生芽诱导、丛生芽增殖培养和壮苗培养步骤,具体如下:
1、种籽处理:选择成熟、饱满、干透的金铁锁种籽,用洗衣粉溶液浸泡20〜30min后,用清水冲洗3〜5次,再用70%〜75%酒精浸泡20〜30s后,用无菌水冲洗2〜3次,再用0.1%〜0.2%HgCl2浸泡6〜8min后,用无菌水冲洗5〜7次,最后用无菌滤纸吸干水分;
2、原球茎诱导:按步骤I处理的金铁锁种籽接种到原球茎诱导培养基,在昼温18〜23°C,夜温15〜20°C的温度下暗箱培养8〜10天后,萌动膨大的种籽在昼温24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜1500Lx,昼光照时长1〜12h的条件下再培养6〜8天,形成直径2〜3mm的原球茎,原球茎诱导培养茎为:1/2MS培养+6-BA(苄基腺嘌呤)0.5〜lmg/L+蔗糖25〜30g/L+琼脂6.1 〜6.5g/L,pH为5〜6;
3、原球茎增殖培养:取步骤2中得到的原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中,在昼温24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜1250Lx,昼光照时长12〜14h的条件下培养10〜15天,获得大量的直径2〜3mm的原球茎,原球茎的增殖培养基为:MS培养基+NAA(萘乙酸)0.15 〜0.19mg/L+2.4-D(2.4-二氯苯氧基乙酸)0.3 〜0.5mg/L+6_BA(苄基腺嘌呤)0.2 〜
0.5mg/L+活性炭0.3〜0.5g/L+鹿糖25〜30g/L+琼脂5.I 〜5.5g/L,pH为5〜6 ;
4、丛生芽诱导:将步骤3中得到的生长状态良好的原球茎转接到丛生芽诱导培养基上,在昼温24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜1250Lx,昼光照时长12〜14h的条件下培养30〜40天,获得大量的长度I〜2mm的从生芽,丛生芽诱导培养基为:MS培养基+NAA(萘乙酸)0.15 〜0.19mg/L+2.4-D(2.4-二氯苯氧基乙酸)0.3 〜0.5mg/L+6_BA(苄基腺嘌呤)0.2〜0.5mg/L+活性炭0.3〜0.5g/L+鹿糖25〜30g/L+琼脂5.1〜5.5g/L+香蕉泥30〜50g/L+土ϋ泥30 〜50g/L,pH为5 〜6 ;
5、丛生芽增殖培养:将步骤4得到的丛生芽转接到增殖培养基中,在昼温24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜1250Lx,昼光照时长12〜14h的条件下培养15〜25天,获得大量的长度为10〜20mm的丛生芽,丛生芽增殖培养基为:MS培养基+NAA(萘乙酸)0.15〜0.19mg/L+2.4-DC2.4-二氯苯氧基乙酸)0.3〜0.5mg/L+6_BA(苄基腺嘌呤)0.2〜0.5mg/L+活性炭0.3〜0.5g/L+鹿糖25〜30g/L+琼脂5.I〜5.5g/L+香蕉泥30〜50g/L+土豆泥30〜50g/L,pH为5〜6 ;
6、壮苗培养:将步骤5所得到的丛生芽,分成单芽转接入壮苗培养基上培养,在昼温24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜2000Lx,昼光照时长12〜14h的条件下培养25〜35天,获得大量的长度为80〜10mm的脱毒金铁锁种苗,壮苗培养基为:1/2MS培养基+NAA(萘乙酸)0.15〜0.19mg/L+2.4-D(2.4-二氯苯氧基乙酸)0.3〜0.5mg/L+6-BA(苄基腺嘌呤)
0.2〜0.5mg/L+活性炭0.3〜0.5g/L+鹿糖25〜30g/L+琼脂5.I 〜5.5g/L+香蕉泥30〜50g/L+土 ϋ泥30 〜50g/L,pH为5 〜6。
[0006]使用本发明繁殖金铁锁种苗,繁殖系数38以上,繁殖周期为3个月左右,为自然繁殖时间的三分之一,而且金铁锁种苗不带内生菌,培养时不会受内生菌的污染,种苗质量好,成活率高。使用本发明可以降低金铁锁种苗育苗成本,提高金铁锁人工栽培发展速度,满足金铁锁市场需求。
具体实施方式
[0007] 1、种籽处理:选择成熟、饱满、干透的金铁锁种籽,用洗衣粉溶液浸泡20〜30min后,用清水冲洗3〜5次,再用70%〜75%酒精浸泡20〜30s后,用无菌水冲洗2〜3次,再用0.1%〜0.2%HgCh浸泡6〜8min后,用无菌水冲洗5〜7次,最后用无菌滤纸吸干水分;
2、原球茎诱导:按步骤I处理的金铁锁种籽接种于原球茎诱导培养基,在昼温18〜23°C,夜温15〜20°C的温度下暗箱培养8〜10天后,种籽开始萌动膨大,此时调整培养环境,萌动膨大的种籽在昼温24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜1500Lx,昼光照时长10〜12h的条件下培养6〜8天,形成直径2〜3mm的原球茎,原球茎诱导培养茎为:1/2MS培养+6-BA(节基腺嘌呤)0.5〜lmg/L+鹿糖25〜30g/L+琼脂6.1〜6.5g/L,pH为5〜6 ;
3、原球茎增殖培养:取步骤2中得到的原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中,在昼温24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜1250Lx,昼光照时长12〜14h的条件下培养10〜15天,获得大量的直径2〜3mm的原球茎,原球茎的增殖培养基为:MS培养基+NAA(萘乙酸)0.15 〜0.19mg/L+2.4-D(2.4-二氯苯氧基乙酸)0.3 〜0.5mg/L+6_BA(苄基腺嘌呤)0.2 〜0.5mg/L+活性炭0.3〜0.5g/L+鹿糖25〜30g/L+琼脂5.I 〜5.5g/L,pH为5〜6 ;
4、丛生芽诱导:将步骤3中得到的生长状态良好的原球茎转接到丛生芽诱导培养基上,在昼温24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜1250Lx,昼光照时长12〜14h的条件下培养,12〜20天后可观察到原球茎开始分化芽点,继续培养10天左右,可观察到原球茎开始分叶,30〜40天可获得大量的长度I〜2mm的从生芽,丛生芽诱导培养基为:MS培养基+NAA(萘乙酸)0.15〜0.19mg/L+2.4-D(2.4-二氯苯氧基乙酸)0.3〜0.5mg/L+6-BA(苄基腺嘌呤)
0.2〜0.5mg/L+活性炭0.3〜0.5g/L+鹿糖25〜30g/L+琼脂5.I 〜5.5g/L+香蕉泥30〜50g/L+土 ϋ泥30 〜50g/L,pH为5 〜6 ;
5、丛生芽增殖培养:将步骤4得到的丛生芽转接到增殖培养基中,在昼温24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜1250Lx,昼光照时长12〜14h的条件下培养15〜25天,获得大量的长度为10〜20mm的丛生芽,丛生芽增殖培养基为:MS培养基+NAA(萘乙酸)0.15〜
0.19mg/L+2.4-DC2.4-二氯苯氧基乙酸)0.3〜0.5mg/L+6_BA(苄基腺嘌呤)0.2〜0.5mg/L+活性炭0.3〜0.5g/L+鹿糖25〜30g/L+琼脂5.I〜5.5g/L+香蕉泥30〜50g/L+土豆泥30〜50g/L,pH为5〜6 ;
6、壮苗培养:将步骤5所得到的丛生芽,分成单芽转接入壮苗培养基上培养,在昼温24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜2000Lx,昼光照时长12〜14h的条件下培养25〜35天,获得大量的长度为80〜10mm的脱毒金铁锁种苗,壮苗培养基为:1/2MS培养基+NAA(萘乙酸)0.15〜0.19mg/L+2.4-D(2.4-二氯苯氧基乙酸)0.3〜0.5mg/L+6-BA(苄基腺嘌呤)
0.2〜0.5mg/L+活性炭0.3〜0.5g/L+鹿糖25〜30g/L+琼脂5.I 〜5.5g/L+香蕉泥30〜50g/L+土 ϋ泥30 〜50g/L,pH为5 〜6。

Claims (1)

1.一种快速繁殖金铁锁种苗的方法,其特征是包括如下步骤: (1)种籽处理:选择成熟、饱满、干透的金铁锁种籽,用洗衣粉溶液浸泡20〜30min后,用清水冲洗3〜5次,再用70%〜75%酒精浸泡20〜30s后,用无菌水冲洗2〜3次,再用0.1%〜.0.2%HgCh浸泡6〜8min后,用无菌水冲洗5〜7次,最后用无菌滤纸吸干水分; (2)原球茎诱导:按步骤(I)处理的金铁锁种籽接种到原球茎诱导培养基,在昼温18〜.23°C,夜温15〜20°C的温度下暗箱培养8〜10天后,萌动膨大的种籽在昼温24〜26°C、夜温.19〜21°C的温度,光照1200〜1500Lx,昼光照时长10〜12h的条件下再培养6〜8天,形成直径2〜3mm的原球茎,原球茎诱导培养茎为:1/2MS培养+6-BA(苄基腺嘌呤)0.5〜lmg/L+蔗糖.25〜30g/L+琼脂6.I 〜6.5g/L,pH为5〜6 ; (3)原球茎增殖培养:取步骤(2)中得到的原球茎切割后转接到原球茎增殖培养基中,在昼温24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜1250Lx,昼光照时长12〜14h的条件下培养10〜15天,获得大量的直径2〜3mm的原球茎,原球茎的增殖培养基为:MS培养基+NAA(萘乙酸)0.15〜0.19mg/L+2.4-D(2.4-二氯苯氧基乙酸)0.3〜0.5mg/L+6-BA(苄基腺嘌呤).0.2〜0.5mg/L+活性炭0.3〜0.5g/L+蔗糖25〜30g/L+琼脂5.I 〜5.5g/L,pH为5〜6 ; (4)丛生芽诱导:将步骤(3)中得到的生长状态良好的原球茎转接到丛生芽诱导培养基上,在昼温24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜1250Lx,昼光照时长12〜14h的条件下培养30〜40天,获得大量的长度I〜2mm的从生芽,丛生芽诱导培养基为:MS培养基+NAA(萘乙酸)0.15〜0.19mg/L+2.4-D(2.4-二氯苯氧基乙酸)0.3〜0.5mg/L+6-BA(苄基腺嘌呤).0.2〜0.5mg/L+活性炭0.3〜0.5g/L+鹿糖25〜30g/L+琼脂5.I 〜5.5g/L+香蕉泥30〜50g/L+土 ϋ泥30 〜50g/L,pH为5 〜6 ; (5)丛生芽增殖培养:将步骤(4)得到的丛生芽转接到增殖培养基中,在昼温24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜1250Lx,昼光照时长12〜14h的条件下培养15〜25天,获得大量的长度为10〜20mm的丛生芽,丛生芽增殖培养基为:MS培养基+NAA(萘乙酸)0.15〜.0.19mg/L+2.4-DC2.4-二氯苯氧基乙酸)0.3〜0.5mg/L+6_BA(苄基腺嘌呤)0.2〜0.5mg/L+活性炭0.3〜0.5g/L+鹿糖25〜30g/L+琼脂5.I〜5.5g/L+香蕉泥30〜50g/L+土豆泥30〜.50g/L,pH为5〜6 ; (6)壮苗培养:将步骤(5)所得到的丛生芽,分成单芽转接入壮苗培养基上培养,在昼温.24〜26°C、夜温19〜21°C的温度,光照1200〜2000Lx,昼光照时长12〜14h的条件下培养25〜35天,获得大量的长度为80〜10mm的脱毒金铁锁种苗,壮苗培养基为:1/2MS培养基+NAA(萘乙酸)0.15〜0.19mg/L+2.4-D(2.4-二氯苯氧基乙酸)0.3〜0.5mg/L+6-BA(苄基腺嘌呤).0.2〜0.5mg/L+活性炭0.3〜0.5g/L+鹿糖25〜30g/L+琼脂5.I 〜5.5g/L+香蕉泥30〜50g/L+土 ϋ泥30 〜50g/L,pH为5 〜6。
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